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Extraccion y Purificacion de Dna de Celulas Eucariontes
Extraccion y Purificacion de Dna de Celulas Eucariontes
Extraccion y Purificacion de Dna de Celulas Eucariontes
Campus IV
PRACTICA NO. 5
El tejido linfoide, y en este caso el timo y el bazo representan materiales biológicos que
son utilizados con mucha frecuencia como fuente de cantidades considerables de ADN
para diferentes estudios.
Después de extraído el ADN suele ser rápidamente desnaturalizado y por lo tanto se debe
tener mucho cuidado en su remoción, aislamiento y purificación con el fin de obtener un
producto que conserve la identidad e integridad estructural con el ADN de la célula de la
cual proviene. El estrés o tensión mecánica o físico química, que acompañan los procesos
de purificación de las moléculas de ADN deben ser evitadas al máximo y las nucleasas
inhibidas.
Factores como los iones Ca2+ y Mg2 son importantes para la actividad del las
DNAasas .El citrato de sodio presente en las soluciones empleadas para la extracción y
purificación del ADN, atrapa estos iones e impide, de esta forma, la acción de las enzimas
que digieren estas moléculas. Con el fin de eliminar en forma definitiva la actividad de las
nucleasas, las etapas de remoción de las proteínas deben ser llevadas a cabo tan rápido
como sea posible y en frío.
Las nucleoproteínas, son proteínas que aparecen asociadas con los ácidos nucleicos de
las células eucariotas; son insolubles en agua y en soluciones de baja fuerza iónica pero
solubles en soluciones de alta fuerza iónica; propiedad que debe ser tenida en cuenta
durante los procesos de extracción inicial.
y se agrego TE no cambio.
Después de centrifugar 20 minutos salió color turbio, recuperamos la fase acuosa que
está en la parte superior del tubo y salió color café (muy bajo)
Volvimos a centrifugar por que nos salió el color muy bajo esto fue porque al momento de
extraer el DNA nos trajimos algo de proteínas; volvimos a extraer la fase acuosa de la
parte superior del tuvo para quedarnos con de las fases de color blanco. Nos quedo una
pastilla de ADN y agregamos etanol al 100% y observamos que se formo una hebra color
blanco por que se precipito el DNA.
Volvimos a centrifugar durante 5 minutos, lavamos la pastilla con etanol al 70% para
eliminar sales, centrifugamos y decantamos, después se agrego TE 1X pH 8.
Para hacer la cuantificación del DNA diluimos con agua milicu para poder separar la hebra
blanca (DNA), y extrajimos un poco de esta hebra para poder leerlo en el
espectrofotómetro, este dio un resultado de 35.6 ug / mL.
DISCUSIÓN
La cantidad de DNA obtenido fue muy variable entre diferentes equipos, y la purificación
de DNA está dada si se utiliza o se siguen los paso para la extracción y purificación de
manera muy correcta y precisa. El DNA que obtuvimos no estaba totalmente puro esto se
debió a que acarreamos proteínas y esto altero los resultados por lo que tuvimos que
centrifugar para que nos quedara un poco más puro por decirlo así.
CONCLUSION
Se practico la técnica para la preparación de DNA genómico, la electroforesis en
El valor C se defina como la cantidad de ADN por genoma haploide (un solo juego
cromosómico) en estado de un cromatidio (en fase G1). En el caso de la especie
humana con 2n=46 cromosomas, especie diploide (2n), con dos juegos de
cromosomas, uno recibido del padre y otro de la madre, cada uno formado por 23
cromosomas, el valor C sería la cantidad de ADN correspondiente a un juego de
23 cromosomas en estado de un solo cromatidio.
Una forma mucho más sencilla de definir el valor C, en el caso de las especies
diploides, con dos juegos cromosómicos, sería el contenido de ADN de un gameto
de la especie.
Un vector génico es un agente que transfiere información genética, por algún medio, de
un organismo a otro. Son utilizados en biotecnología para portar el ADN recombinante
desde una célula donadora hasta la célula receptora en los que se inserta el gen que se
quiere transferir. A continuación se infecta la célula hospedadora con ese vector
recombinante, obteniéndose la célula transgénica.
Un vector con el que los científicos experimentan son los plásmidos, con los que es
posible insertar genes foráneos al núcleo de una célula. Otros vectores génicos son los
bacteriófagos y cósmidos. También se puede considerar vectores genéticos a los virus,
puesto que en el curso de su ciclo insertan información genética en las células que
invaden.
Los vectores deben llevar, además del gen protagonista, otros genes llamados
marcadores, que puedan identificar a las células que sean resistentes al antibiótico
marcado o que emitan luz, según los casos, serán las portadoras del ADN recombinante.
La probabilidad de fracaso en la formación del transgénico es muy alta, debido al
descontrol en la inserción de ADN foráneo, de manera que la célula puede
desorganizarse y morir.
Clonación molecular
Ejemplo:
Para la extracción del ADN se siguió el procedimiento descrito por Miller, con algunas
modificaciones. Se transfirieron 2 cortes de 5µm de cada TEP a un tubo de 1.5 ml y se
adicionaron 200 μl de solución amortiguadora de digestión (Tris 0.05 M, pH 8.3, EDTA
1mM y Tween 20 0.5%). Las muestras se sometieron a dos ciclos de ebullición durante 10
min en baño maría y enfriamiento en nitrógeno líquido durante 1 min; seguido por una
ebullición final en baño maría durante 10 min y centrifugación a 3,000 x g durante 20 min
para remover la parafina. El ADN obtenido se cuantificó por fluorescencia.