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Aloe Vera Medios de Cultivo
Aloe Vera Medios de Cultivo
Aloe Vera Medios de Cultivo
en la preparación
de medios de cultivo
AUTORES: MSc. María Jó García1, Msc. René Hernández Gonzalo2 ,Dr. Santos Bustios
Dios2. Ing. Maylin Esteves3; Ing. Yusbel Echevarria3; MSc Ricardo Cruz Lazo2; MSc. Luis
E. León2; MSc. Armando del Busto2
Departamento de Biología1, Departamento Agropecuario2 de la Universidad de Pinar del
Río; Biofábrica de Pinar del Río3.
E-mail mary@af.upr.edu.cu
Introducción
La sábila (Aloe vera (L) N.L. Burm
Historia, importancia y utilización del extracto de la sábila (Aloe vera (L) N.L.Burm)
Bibliografía
INTRODUCCIÓN
Se dice que la preparación del medio para el cultivo de vitroplantas es más un arte que
una disciplina, la experiencia es el mejor maestro en este tipo de trabajo. Sin embargo, es
un problema mayor el estudio de todas las interrelaciones de los componentes orgánicos e
inorgánicos. No obstante, se puede utilizar también un medio sencillo y luego suplir de
diferentes formas; el resultado consiste en llegar a la fórmula que le brinde a la vitro planta
la mejor oportunidad de despertar su capacidad para crecer de forma empírica. Los
investigadores han realizado múltiples estudios con el objetivo de optimizar la
micropropagación mediante el perfeccionamiento de los medios de cultivo para especies
de importancia comercial; estudios que se han volcado hacia la determinación de las
concentraciones de sales, hormonas, vitaminas y demás componentes, estado físico del
medio, pH, y otros factores determinantes en la obtención de explantes ¨ in vitro ¨ en las
diferentes etapas de su desarrollo (Pérez Ponce, 1998).
El proceso de rizogenésis está íntimamente ligado con la división celular, siendo práctica
normal en horticultura y, sobre todo, en los viveros, aplicar auxinas a los esquejes para
favorecer el enraizamiento. (Rojas 1993)
La planta de sábila y otras del género Aloe ha sido utilizada desde tiempos muy remotos y
han figurado en las civilizaciones de África, Asia, Europa y en el Medio Oriente, durante
miles de años. En nuestro país, a pesar de que es conocida hace menos de 500 años,
existen muchos y muy diversos usos populares para esta planta, principalmente de tipo
medicinal. También es utilizado en el cuidado facial y capilar mediante aplicación directa.
Otro uso menos extendido es para preservar los vegetales de los insectos y animales
domésticos.
Las propiedades de esta planta la hacen el sustituto ideal de los productos enzimáticos de
la industria farmacéutica; el acíbar funciona como catalizador de las células vivas, ya que
influye en las reacciones metabólicas de los tejidos proteicos gracias a la acción de sus
enzimas, lo que permite disminuir la energía de activación de tal manera que la reacción
se lleva acabo en menor tiempo. (Vickery A.R. 1994)
La Sábila (Aloe vera), es una planta que pertenece a la familia de las liliáceas.
El Aloe vera es una planta de las menos extendidas, y sin embargo la más fascinante
del mundo. Posee una larga e ilustrada historia que data desde los años bíblicos. Una
anécdota puede ser que la reina Cleopatra tomaba baños de Aloe vera para mantener su
juventud. Dioscórides trata de unos y otros, y da los caracteres de las mejores suertes de
acíbar en el capítulo 23 del Libro III. A mediados del siglo XVI, en los comentarios a
dicho capítulo, la planta llamada Aloe vera común en gran parte de Italia, y se hallaba
a cada paso plantada por los jardines y en los tiestos. En Andalucía existían grandes
plantaciones de áloes en tiempo de los árabes, entusiastas propagadores del uso
medicinal del acíbar.
Se tiene conocimiento que la sábila apareció por primera vez en la historia, alrededor del
año 1500 a.c., en este primer registro se hace mención de una planta milagrosa de usos
variados, conocida hoy en día en el mundo occidental como sábila ( Aloe ) por su gran
potencial y sus aplicaciones al cuidado de la salud. Desde siglos el Aloe vera y sus
poderes curativos han sido utilizados extensamente entre muchas culturas a causa de su
eficacia en el tratamiento de quemaduras y la cura de heridas.
El uso de los áloes es muy antiguo, tanto en su utilización como catártica, como en
relación con sus efectos regenerativos, antiinflamatorios, analgésico y bactericida
externo. Generalmente se cita al Papiro de Ebers como la primera referencia al uso del
Aloe, aunque existen otras anteriores en los Ayurveda, los Códices Chinos y las Tablas
Babilónicas.
Los científicos han estudiado la sábila y ahora se sabe que contiene aminoácidos
esenciales, minerales, vitaminas, enzimas, proteínas, polisacáridos y estimulantes
biológicos. Está demostrado que consumir jugo de sábila ayuda al organismo a
digerir completamente los alimentos, especialmente las proteínas en nutrientes que el
organismo puede utilizar tanto externa como internamente.
Las propiedades de esta planta la hacen el sustituto ideal de los productos enzimáticos de
la industria farmacéutica; el acíbar funciona como catalizador de las células vivas, ya que
influye en las reacciones metabólicas de los tejidos proteicos gracias a la acción de sus
enzimas, lo que permite disminuir la energía de activación de tal manera que la reacción
se lleva acabo en menor tiempo.
Conaza (1991) Recientemente se está haciendo uso del jugo para la preparación de
bebidas refrescante y saludable, dado su contenido en proteínas, aminoácidos, minerales,
enzimas y otros complementos que le dan cualidades aperitivas, nutritivas, tónicas y
reconstituyentes.
Se escogen las hojas más grandes procurando al hacer el corte, de no lastimar las más
jóvenes. Se deben cortar de 8 a 12 hojas de la planta en forma transversal y se cuelgan
de manera que la parte seccionada quede hacia abajo, con el objeto de que escurra el
acíbar por 24 horas, de esta manera se recibe el jugo en un recipiente de lámina
galvanizada cubierta de resina epóxica, colocando sobre baños de agua fría. Después de
esto se envasa.
Según Vickery, A R. (1994) Otro método de extracción consiste en moler las hojas por
cualquier medio, centrifugar los residuos, filtrar el jugo y envasarlo.
El jugo contiene dos fracciones: una fase acuosa llamada gel de Aloe y otra liposoluble
denominada aceite de Aloe, a partir de estas dos mezclas se obtienen productos entre los
que destacan los fármacos, cosméticos, solventes y perfumes.
El proceso moderno para la elaboración del jugo, consiste en someter a las hojas de Aloe
a un tratamiento de corte y comprensión simultánea para extraer la mayor cantidad de jugo
posible, después el extracto crudo pasa por las fases de desinfección, calentamiento,
estabilización y envasado.
En Cuba el CIDEM (1996) tiene las especificaciones del extracto acuoso de Aloe vera
siendo la metodología la siguiente.
Después de cosechadas las hojas fresca se lavan con agua corriente, deben ser
almacenadas en frío antes 24 horas. Se someten a un proceso de bioestimulación durante
9 – 15 días protegiéndose de la luz.
Se lavan las hojas con agua corriente y posteriormente se lavan con agua desionizada.
Se recogen las hojas limpias en un tanque de acero inoxidable y se procede a su molí
nación.
Se mezcla con agua desionizada (relación 1: 1.5) con el reactor se extrae con agitación
suave a temperatura ambiente durante 1 hora, Posteriormente se calienta hasta la
temperatura de ebullición y se refluja durante 30 mim.
Minerales: calcio, magnesio, potasio, cloro, hierro, zinc, cobre, cromo, azufre,
aluminio, sodio y germanio.
Vitaminas: A, B1, B2, B5, B12, C, ácido fólico y ácido nicotínico (niacina).
Polisacáridos: celulosa.
Los restantes sólidos que componen el gel de Aloe vera, que también pueden contribuir a
su actividad terapéutica, son sales orgánicas y ácidos (glutámico, málico, salicílico, cítrico,
lactato magnésico, oxalato cálcico, ...), enzimas (celulosa, carboxipeptidasa, bradikininasa,
catalasa, amilasa, oxidasa, tirosinasa), sapogénicas, taninos, esteroles, triglicéridos,
aminoácidos (lisina, histidina, glutamina, arginina, ácido aspártico, asparagina, treonina,
serina, ácido glutámico, glicina, alanina, valina, metionina, isoleucina, leucina, tiroxina,
fenilalanina y triptófano), RNA y trazas de alcaloides, de vitaminas (betacaroteno, B1, B2,
B3, B6, C, E, colina, ácido fólico) y de minerales (aluminio, boro, bario, calcio, cromo,
cobre, hierro, potasio, magnesio, sodio, fósforo, estroncio, silicio). No debe contener nunca
en cantidades apreciables derivados hidroxiantracénicos o antraquinonas de acción
laxante. ( Granados, S. y Castañeda, A. 1998)
Nutritivo
Regenerador celular
Antioxidante
Nutritivo.
Los polisacáridos contenidos en el gel de Aloe, entre los que se encuentran los
glucomananos, los cuales constituyen alrededor del 0.2 – 0.3 % del gel fresco y otros con
elevados contenidos de galactosa, pentosa y ácidos urónicos, los hacen casi
insustituibles como regeneradores titulares.
Antioxidante.
Antimicrobiano.
Los áloes muestran una actividad inhibitoria de algunos Bacillus, bloqueando la síntesis
de los ácidos nucleicos en las bacterias, acción debida probablemente a las
antraquinonas. El conjunto de antraquinonas (aloin, barbaloin y ácido aloético) produce
un efecto antibiótico y antiviral. La saponina y aloetina presentan un carácter antiséptico
y un amplio espectro antimicrobiano (bactericida y antivirosa) estos compuestos
neutralizan el efecto de las toxinas microbianas. Se ha demostrado que desde el punto
de vista biológico los taninos están relacionados con la resistencia de las plantas a las
infecciones y se consideran potentes agentes antifúngicos. (Castillo E. N 2002)
Con todos estos conceptos fundamentales White, (1934) demostró que era factible
cultivar con éxito órganos vegetales; demostró además que los tejidos vegetales en
cultivo, ya sean células somáticas aisladas o formando agregados podían vivir
normalmente in vitro y sin diferenciación.
Gautheret, (1955) como citólogo observó las células en cultivo y describió en detalle, el
crecimiento in vitro de las células del cambium y la fisiología de células de zanahoria. Usó
principalmente la solución de Knops como medio básico, suplementado con glucosa,
extracto de levadura y cisteína.
Después de 1935, cuando conocieron las condiciones del crecimiento y la división de
células homogéneas, aparecieron numerosos artículos en los que se experimentaban
mejores condiciones para una rápida división celular, mayor velocidad del crecimiento y
otros componentes del medio de cultivo. Así, Robbins, (1936), estudió el efecto de
microelementos inorgánicos y señaló que el zinc, manganeso y el boro eran necesarios
para el cultivo de ápices radicales. Murashige y Skoog, (1962), estudiaron y propusieron
la composición de los medios de cultivo al medio revisado para obtener una velocidad
mayor en el crecimiento de células de Nicotiana tabacum in vitro.
Al finalizar la década de 1930, la ciencia fue estableciendo los nutrientes esenciales para
elaborar medios de cultivo, como consecuencia, se determinó que los aminoácidos y las
vitaminas desempeñaban un importante papel en la organogénesis.
En los años 1957 y 1958 se elaboraron los medios de cultivo necesarios para que a partir
de grupos de células se pudieran regenerar nuevas plantas por procesos conocidos por
morfogénesis y embriogénesis.
El medio de White, (1934), citado por Orellana, (1994), fue el más utilizado en los primeros
tiempos de la micropropagación, muchas mejoras han sido hechas desde entonces,
siendo las más notables el mejoramiento de los niveles de N, P, K, la reducción del nivel
de calcio y la precipitación de hierro a pH altos( Hu y Wang, 1983)
Medio de cultivo
Componentes minerales.
Los componentes minerales esenciales para la vida de las plantas se dividen en:
Macro elementos
Micro elementos
Aunque son necesarios en menor cantidad, juegan un papel esencial en los mecanismos
enzimáticos como activadores o constituyentes de las coenzimas.
Los principales micro elementos son: hierro, cobre, zinc, manganeso, molibdeno, cobalto y
boro. Los micro elementos resultan indispensables para el crecimiento, intervienen como
activadores de sistemas enzimáticos. Se suministran al medio de cultivo bien con el
objetivo de evitar cualquier carencia o se utilizan a concentraciones mas elevadas con el
objetivo de provocar una activación del crecimiento.
Las exigencias minerales varían con la especie, la naturaleza del tejido y su estado
fisiológico, también varían con el método de cultivo y el tipo de órgano génesis estudiado.
Componentes orgánicos.
Azúcares.
Los tejidos y células cultivadas “in vitro” son ampliamente heterótrofos con respecto al
carbono debido a la ausencia o insuficiencia de asimilación clorofílica. Luego,
resulta indispensable añadir azúcares a los medios de cultivo, siendo los dos más
utilizados la sacarosa y la glucosa.
La concentración óptima del azúcar en los medios de cultivo varía entre 20 – 80 g/L, en
dependencia del tipo de cultivo, material vegetal, etc. Los azúcares presentan una acción
metabólica y energética.
Vitaminas.
Las vitaminas favorecen el crecimiento de los tejidos en cultivos “in vitro” y no se excluye
que la falta de alguna de ellas pueda ser un factor limitante de los fenómenos de
organogénesis. (Dr. González, S )
El ácido ascórbico (1 – 10 mg/L) y el ácido cítrico (50 –100 mg/L) se utilizan en ocasiones
no como vitaminas sino como antioxidantes para evitar el oscurecimiento de determinados
tejidos.
Aminoácidos.
Según Drew, R.A. (2003): Los reguladores del crecimiento y el desarrollo de las plantas
actualmente se agrupan en cinco categorías: auxinas, giberalinas, citoquininas, ácido
abscísico y etileno. Además de estas sustancias naturales (reguladores endógenos)
existen numerosos productos de síntesis que pueden utilizarse como reguladores del
crecimiento en el cultivo “in vitro”.
El ABA (ácido abscísico) y los compuestos que desprenden etileno se utilizan con menor
frecuencia en casos más específicos. aminopurina o N6-benciladenina). Recientemente se
ha descrito que la N-6- bencil aminopurina (BAP) o N6-benciladenina (BA) ha sido aislada
de plantas y constituye también una citoquinina natural. En cultivos de tejidos, el BAP y las
citoquininas sintéticas Kinetina y TDZ (thidiazuron) son las más frecuentemente usadas.
Las citóquininas que se usan con mayor frecuencia en los medios de cultivo son: la
kinetina (KIN), la 6-bencil aminopurina (BAP), la 2-isopenteniladenina (IP) y la zeatina. El
BAP se emplea con frecuencia debido a su gran actividad y su bajo costo. Generalmente
las citoquininas se evitan o se emplean en dosis muy débiles en los medios de
enraizamiento porque presentan un efecto inhibidor sobre la rizogénesis.
Los aspectos relacionados con la luz que son importantes en los cultivos “in Vitro” son: La
cantidad de luz: (irradiación) y la calidad de la luz:( espectro).
La alternancia de los ciclos de luz con los de oscuridad:( El foto período). Considerando
estos aspectos, los tubos con los meristemos se ponen bajo luz fluorescente (en general
de 1,000 a 3,000 Kw./m2) - en ocasiones es necesario utilizar una irradiación menor en los
primeros días después del aislamiento- bajo un foto período de 14-16 horas y a una
temperatura de 23-25ºC para el desarrollo adecuado de las Vitro plantas.( Pérez L. 1992)
Así, temperaturas bajas (del orden de 4--50C) permiten superar los periodos de dormición
de algunas leñosas y la conservación prolongada de determinados cultivos “in vitro”
mientras que una temperatura constante de 200 C induce la formación de raíces en la
mayoría de coníferas. (Grattopaglia, D y Machado, M.A. 1990)
La luz, definida como una forma de energía radiante que se nos manifiesta mediante la
visión es, en realidad, parte de un fenómeno físico más amplio: la energía radiante
(radiación), que puede ser descrito según dos modelos diferentes: el modelo ondulatorio
(radiación electromagnética) y el modelo corpuscular.
La luz es uno de los factores principales que determinan el desarrollo de los organismos
autótrofos, en ello radica la importancia de controlar el factor luz en los cultivos in vitro.
Fenómenos propios del desarrollo de las plantas (germinación, floración, tuberización,...)
pueden ser activados por el número de horas diarias de luz que recibe la planta. De forma
análoga, el número de horas de luz que recibe el explante cultivado in vitro puede afectar
a su desarrollo. En general, el mejor foto período in vitro. ( Crops Research Institute (CRI).
1995).
El uso del medio para el enraizamiento es un asunto muy debatido, pues algunos autores
prefieren el medio sólido y otros el medio líquido; el medio liquido al menos para las
plantas leñosas han dado mejores resultados porque el mismo favorecen la difusión de las
exudaciones toxicas que producen las plantas en cultivo, fundamentalmente los
compuestos fenológicos permite una mayor aeración y una mejor absorción de los
nutrientes presentes en el medió. (García, 2000).
El medio para el cultivo de raíces in vitro puede ser en forma liquida o sólida, a merced del
tipo de cultivo estando crecido para cualquier cultivo que requiera que los tejidos o las
células de la planta a ser crecidas en la superficie del medio, debe ser salificado (mas
concretamente llamado ¨ galled¨ agar producido de algas marinas, es el tipo mas común
del agente gelatinoso y es el ideal para estas aplicaciones. (Gamborg, 1968).
Organogénesis
Rizogénesis.
b) Los meristemos adventicios son producidos por órganos diversos, (tallo, tubérculo,
bulbo. hoja, etc.,) ya sea espontánea o accidentalmente, como consecuencia de
una herida.
c) Los meristemos neoformados en el seno de un callo, en cultivo in vitro pueden ser
considerados como un caso particular de meristemos adventicios.
Estas raíces son entonces denominadas como exógenas en oposición al caso más
general de las raíces endógenas.
Etapas de la rizogénesis
Desdiferenciación
celular (por etapas) Auxinas, citoquininas, etc
sucesivas
(Eventualmente células
del tipo cambial)
Meristemo de raíz
Auxinas y Rizogénesis.
Las más eficaces son generalmente el ANA, AIB AIP y el AIA, estas sustancias son
ampliamente utilizadas en horticultura y en arboricultura.
Se puede concluir que los lugares más importantes de síntesis de auxina son: las hojas
jóvenes en expansión, el tejido cambial, los ovarios inmaduros y semillas en desarrollo.
Sin embargo, otros tejidos también tienen la capacidad de sintetizar AIA (hojas maduras,
tallos y raíces). (Rojas Gardenias, 1993)
Interacciones de factores.
después de ablación de las raíces neoformadas una segunda aplicación queda sin efecto.
Un cierto número de hechos sugieren que compuestos fenólicos podrían tomar parte del
complejo rizocalínico. La aplicación de ortodifenoles exógenos sobre esquejes ha podido
estimular la Rizogénesis en algunos casos. Numerosos trabajos han demostrado que
compuestos difenólicos, tales como el ácido clorogénico y el ácido cafeico, son inhibidores
de la axina-oxidasa. La acción de los compuestos fenólicos podría ser directa o indirecta
por protección de la auxina o estimulación de la síntesis de auxina.
Existen una lógica bien documentada tras el uso de sustancias líquidas que se encuentran
en forma natural, con el uso individual de estas sustancias se obtiene poco efecto por
encima del esperado, parece que las sustancias de
Se puede anticipar que los investigadores en los trópicos y subtrópicos tendrán acceso a
una gama de líquidos estimuladores del crecimiento que son de origen novedoso,
distintivos o incluso morfológicamente únicos (Steward, 1959; Shantz, 1966).
Después de que Gautheret observó que el extracto de levadura tenía efectos sobre las
células cultivadas in vitro, muchos investigadores empezaron a buscar sustancias
orgánicas que pudieran ejecutar algún efecto morfogenético.
Agua de coco.
Caseína hidrolizada.
Posiblemente el evento más significativo ante los avances de la década de los 40, fue el
descubrimiento de las cualidades nutricionales del endospermo líquido del coco. Existe
una larga lista de componentes que se han adicionado ocasionalmente a los medios de
cultivo, como fuente de nitrógeno reducido, factores de crecimiento, carbohidratos, y otros.
El agua de coco es un medio muy completo, con una amplia gama de componentes
orgánicos e inorgánicos, tiene buena capacidad de amortiguación (buffer) y no es raro
encontrar, es rica en magnesio y fosfato, no todos los elementos minerales que contiene
son indispensables, y se puede reemplazar por un medio salino basal.
Un medio de cultivo general preparado con reactivos analíticos, con un suplemento de
agua de coco, muy raras veces resulta tóxico o deficiente a causa de los micronutrientes.
El uso del agua de coco y de 2,4-D en tubérculos de papa por Steward, (1951) y del agua
de coco con ANA por Morel (1951) en las monocotiledóneas, fueron otros progresos
importantes. Estas observaciones constituyen la base para el uso del agua de coco y sus
sinergias en la nutrición de células y tejidos cultivados in vitro.
Muchos investigadores encontraron que el extracto de malta de cebada era benéfico como
un suplemento, ya que ha demostrado ser una fuente estimuladora de algunos tejidos.
El uso del medio para el enraizamiento es un asunto muy debatido, pues algunos autores
prefieren el medio sólido y otros el medio líquido; el medio liquido al menos para las
plantas leñosas han dado mejores resultados porque el mismo favorecen la difusión de las
exudaciones tóxicas que producen las plantas en cultivo, fundamentalmente los
compuestos fenólicos permiten una mayor aeración y una mejor absorción de los
nutrientes presentes en el medio. (García, 2000).
El medio para el cultivo de raíces in vitro puede ser en forma liquida o sólida, a merced del
tipo de cultivo estando crecido para cualquier cultivo que requiera que los tejidos o las
células de la planta a ser crecidas en la superficie del medio, debe ser solificado (mas
concretamente llamado ¨galled¨ agar producido de algas marinas, es al tipo mas común
del agente gelatinoso y es al ideal para estas aplicaciones. ( Gamborg, 1968).
Utilización del gel o extracto del Aloe vera (L) N.L Burm.
Por su parte, el gel de Aloe vera (L.) N.L. Burm., ha demostrado su eficacia en la
sustitución de reguladores sintéticos en medios de cultivos para el enraizamiento in vitro
de plantas medicinales y frutales en condiciones de campo, también, potencialmente por
sus características, podría ser utilizado para estos fines. (Rodríguez H., 2006).
Rodríguez H.,(2004) Señala que se encontraron efectos estimulantes del crecimiento en
los extractos líquidos de plantas medicinales estudiados., correspondiéndole al extracto
del gel de A. vera el mejor comportamiento, particularmente con relación a la formación de
raíces, superando incluso a los reguladores usados tradicionalmente como control, lo que
demuestra la posible presencia de actividad auxinica en el mismo.
Jó María y col ( 2005 y 2006) señala que se encontraron respuestas fisiológicas en la fase
de enraizamiento en la micropropagación del plátano FIAH 18 en la Biofábrica de Pinar del
Río, utilizando diferentes concentraciones de MS adicionando 20 y 40 mL/L del extracto
de Aloe vera.
Se caracteriza por tener la capacidad de generar gran cantidad de plantas para la siembra
en mediano plazo, en estado fitosanitario relativamente óptimo, en relación con algunas
enfermedades. A partir de un ápice es posible lograr en el lapso de un año, centenares de
plantas libres de nemátodos, hongos y de algunos virus y bacterias en comparación con el
sistema tradicional Sandoval (1991). En el ámbito comercial se basa en el uso exclusivo
del meristema o yema central para la propagación “in vitro”.
Este sistema presenta gran ventaja cuando se desea realizar intercambio de plantas
(germoplasma) o siembra de musáceas en áreas relativamente nuevas. Pero el tipo,
cantidad de insumos e infraestructura necesaria para garantizar un ambiente aséptico,
incrementan los costos operativos y, consecuentemente, los costos del producto
(plántulas) en relación con los sistemas de propagación antes mencionados. Ello
constituye una de las principales desventajas para su uso masificado, principalmente entre
los pequeños y medianos productores. (Grisales, 1994).
Esta técnica ha sido utilizada en diferentes países (Cordeiro y Dos Santos, 1991; Crops
Research Institute, 1995, Adaleja, 1995), y en Venezuela fue aplicada por primera vez por
Hadad (1994) con notable éxito. A partir de este momento ha sido adoptada como
alternativa de propagación rápida y masiva, pudiendo ser aplicada a cormos provenientes
de plantas jóvenes o recién cosechadas.
Para obtener estos explantes es recomendable mantener a las plantas madre un período
de tiempo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses, en un invernadero, en
que se va a intentar cultivar la planta en condiciones sanitarias óptimas y con un control de
la nutrición, del fotoperíodo y de la irradiancia recibida.
Una vez escogida la planta madre, se extraerán los fragmentos a partir de los cuales se
obtendrán los explantos.
Antes de extraer los explantes se hará una desinfección de los fragmentos de planta
madre para eliminar los contaminantes externos. Una vez desinfectado el material vegetal,
se debe mantener en condiciones de asepsia.
Durante esta fase se espera que los explantes que sobre vivieron de la FASE I originen
brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varios entrenudos. Periódicamente estos
nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras
en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la
cámara de flujo laminar.
ENRAIZAMIENTO IN VITRO
ENRAIZAMIENTO EX VITRO
Con este método es necesario que el medio de enraizamiento esté libre de organismos
patógenos y que los brotes tengan las hojas bien desarrolladas, ya que deben realizar
fotosíntesis para que la planta tenga una fuente de energía para enraizar y desarrollarse.
Los explantes recién enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales, de manera
que el éxito o el fracaso de todo el proceso dependen de la aclimatación.
Tanto si los explantes fueron enraizados in vitro como ex vitro, en el momento en que se
extraen los explantes de los recipientes de enraizamiento están poco adaptados a crecer
en un invernadero, ya que estos explantes han enraizado y crecido en ambientes con una
humedad relativa muy elevada y generalmente tienen estomas perezosos para responder
al descenso de la humedad relativa, demasiado lentos para evitar la desecación del
explante.
Los explantes deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del invernadero
disminuyendo progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la
intensidad de luz.
Por otra parte crecer en ambientes tan húmedos también suele implicar la falta de una
cutícula cérea bien desarrollada, la barrera para evitar la perdida de agua a lo largo de
toda la superficie de la planta. (Alves E; Oliveira M. 1993).
Este es el cultivo de mayor volumen de propagación en el país, siendo así una de las
especies que está en todas las Biofábricas, por lo cual ha sido una de las más estudiadas.
Siendo hoy la micro propagación el principal sistema de reproducción para los clones
cultivados de esta especie con producciones anuales entre 15 y 20 millones de vitro
plantas.( Pérez P. 2000)
El clon de mayor área plantada es al FHIA 03 con 3783ha y FHIA 18 y FHIA23 con 2822ha
y 2877ha respectivamente, distribuidos en todas las Provincias. (Ponce, et al 2000).
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