Instituto Superior Populorum Progressio N.

º 7

Materia: Inmunología y Serología

 Ejemplos de Inmunoensayos Directos
Elementos en común
Secundaria Primaria ELEMENTOS

Aglutinación ELISA Inmunofluorescencia CMIA

Conjugado
Conjugado

Conjugado

Conjugado

Soporte Soporte Micropartícula

Vidrio con tejido
Soporte Soporte
Soporte de metal

Partícula de
Pocillo Imán
Látex
• Es una técnica Secundaria.
• Puede ser Directa (Ag) o Indirecta(Ac).
• El soporte es una partícula de látex, glóbulo rojo,
esferas de gelatina.
• Positividad: Solución Heterogénea. Látex
• Negatividad: Solución Homogénea.
• Utilidad: PCR, Artritest, RosRagan, Grupo Sanguíneo,
VDRL, Toxoplasmosis, Chagas
• Ventaja: de rápida realización y de bajo costo.
• Desventaja: Menor sensibilidad
• Pueden ser Cualitativas o Semicuantitativas
-Cualitativa:
Permiten determinar presencia o ausencia.
- Semicuantitativa:
Permiten determinar título (ultima dilución donde la reacción da positiva)
Explicación General:

• Aplicaciones: Las técnicas directas de aglutinación son utilizadas en las pruebas de

hemoclasificación (grupo sanguíneo) y para analizar por ejemplo la presencia de PCR.
• utilizan reactivos que contienen anticuerpos monoespecíficos producidos
comercialmente, que pueden o no estar adheridos a un soporte, el cual puede ser
GR/partícula de látex/gelatina, recubierta con un anticuerpo monoespecífico adherido
por su fracción Fc sobre la superficie de la partícula dejando libres la fracción FAB
especifica contra el antígeno que se desea buscar.
• Muestra: suero o sangre entera. Se determina la presencia o ausencia del det. antigénico
de interés a través de la manifestación de la aglutinación

• Pueden ser: Semicuantitativo o Cualitativo

• Ejemplos:
PCR: Aglutinación Directa, semicuantitava ( Aglutinación pasiva reversa)
Grupo ABO y RH: Aglutinación Directa, Cualitativa (aglutinación Activa)
 PCR:
( Aglutinación pasiva reversa)
• Significación Clínica: PCR es una proteína de fase aguda, sintetizada por los hepatocitos , que se incrementa en
suero, en una gran variedad de enfermedades inflamatorias e infecciosas por eso es un biomarcador utilizado con
fines diagnósticos.
Aumenta rápidamente al comienzo de la enfermedad (14 a 26 horas luego de la inflamación o injuria tisular), y
desaparece en la etapa de recuperación. Los niveles de PCR pueden aumentar antes de que aparezcan síntomas
Los niveles séricos elevados de PCR son frecuentes en pacientes con enfermedad por COVID-19.
• Muestra: suero. Se determina la presencia o ausencia del Antígeno PCR
• Reactivo: suspensión de partículas de Látex sensibilizadas con Anticuerpos anti PCR.
• Procedimiento:
-Colocar en un portaobjeto/plantilla comercial determinado volumen de suero y luego colocar det. Volumen de
reactivo (solución con látex). Evitar Burbujas.
-Homogeneizar con un palillo y por rotación.
-Si la solución es Uniforme, como al principio es Negativo. Si la solución es Heterogénea(grumos) es Positivo.
-En caso de positividad se procede a hacer una Dilución al suero, con solución fisiológica. Por esto es
Semicuantitativa.
 Explicación General:
Reactivo + Muestra
Reactivo Muestra Muestra con Ag Muestra sin Ag

Anticuerpo
adosado al
soporte

Antígeno de Ausencia de Ag
la muestra en la muestra

Partícula de
Látex
(soporte)
 Dilución del suero
*Los siguientes volúmenes son estimativos, cada determinación utiliza distintos
volúmenes*
-Colocar 100ul de solución fisiológica en distintos tubos.
-Agregar con pipeta 100ul de Suero al primer tubo de Solución Fisiológica ,
homogeneizar. Así obtendremos una dilución ½ del suero, ya que esta compuesta de
100ul de suero y 100ul de solución fisiológica.
-Cargar una pipeta de 100ul con la dilución del volumen 1/2, descargar en el
segundo tubo, homogeneizar y volver a cargar la pipeta con la dilución del segundo
tubo. En este punto el segundo tubo tiene una dilución 1/4.
-Con la pipeta cargada, de la dilución recién realizada, descargar 100ul en el tercer
tubo y homogeneizar. En este punto el tercer tubo posee una dilución 1/8.
-Continuar así hasta la dilución que corresponda. Recordar que al terminar la ultima
dilución la pipeta debe quedar cargada.
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 Paso 1: agregar S.F. a todos los tubos.
Todos los tubos graficados ya poseen
Paso 2: Agregar 100ul de Solución Fisiológica.
100ul de muestra al Paso2: Luego agrega 100 ul de
tubo que ya
contiene 100ul de muestra al primer tubo.
S.F. y homogeneizar Paso 3:posteriormente a partir del
primer tubo se hacen las demás
Cargar Pipeta con 100ul de Seguir
la dilución del tubo1 y diluyendo
Seguir
diluyendo
Seguir
diluyendo
Diluciones
descargar en el tubo 2
 Dilución del suero
- Luego Agregar 20 ul de cada una de las diluciones en cada circulo de la plantilla
-Agregar 20 ul de Reactivo de Látex a cada diluciones y observar hasta que dilución se observa
aglutinación/positividad.
-Multiplicar la dilución por el “limite de Dilución” especificado en el inserto, y así obtener un resultado
semicuantitativo.
 Determinación de
(generalidades)
Las aglutinaciones de acuerdo a las características de las partículas aglutinantes
pueden clasificarse en:
- Reacciones de aglutinación activa o directa: se basan en el empleo de la partícula
aglutinante como antígeno, el cual por si mismo posee los det. Antigenicos, esta
particulado por si mismo, no de forma artificial. Ejcomo un glóbulo rojo, parasito,
bacteria. Aplicacion: Grupo ABO y RH: Aglutinación Directa, Cualitativa
(aglutinación Activa/directa)

- Reacciones de aglutinación pasiva o indirecta: se basan en el empleo de una

partícula aglutinante inerte a la cual se la ha unido det antigénicos o Ac, es decir
la particula aglutinante esta particulada artificialmente
Ej: PCR: Aglutinación Directa, semicuantitativa ( Aglutinación pasiva reversa).
HAI-Chagatest: Hemoaglutinación Indirecta, semicuantitativa (aglutinación
Pasiva)
 : Aglutinación Directa, Cualitativa
(aglutinación Activa)
GENERALIDADES
La Partícula Aglutinante es el GR, el cual contiene
distintos Determinantes antigénicos, correspondiente
a los grupos sanguíneos A, B, AB, O, y al Factor Rh+ o-.
Esto permite enfrentar sangre entera de muestra,
donde se encuentran los glóbulos rojos, con los
Reactivos Hemoclasificadores que contienen
anticuerpos monoclonales contra los determinantes
antigénicos de los GR
Explicación General:

• Aplicaciones: Las técnicas Indirectas de aglutinación fueron introducidas como

herramientas diagnosticas para investigar la presencia de anticuerpos dirigidos
contra un determinado agente, visualizado por una reacción de
aglutinación/malla, confirmando que el agente estuvo o esta en el huésped. Una
de sus aplicaciones es la de HAI-Chagas y HAI-toxo, (HAI significa
Hemoaglutinacion indirecta).
• Utilizan Reactivos que contienen det. Antigenicos particulados, adheridos, en un
soporte, para HAI el soporte son GR.
• Muestra: suero del paciente. Se determina la presencia o ausencia de Ac
especifico de interés, a través de la manifestación de la aglutinación/formación
de malla
Ejemplo:
HAI-Chagatest, Hemoaglutinación Indirecta, semicuantitativa (aglutinación Pasiva)
• Significación Clínica: La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria producida por el Trypanosoma cruzi. El
diagnóstico de laboratorio depende del estadio en el cual se encuentre la enfermedad. Durante la fase aguda, el
diagnóstico se efectúa directamente mediante la comprobación de los parásitos en. Durante la fase crónica, se
pueden usar métodos inmunológicos como la reacción de aglutinación de látex, hemaglutinación Indirecta,
inmunofluorescencia y últimamente ELISA.
• Muestra: suero. Se determina la presencia o ausencia de Ac anti Tripanosoma Cruzi
• Reactivo:
-Suspensión de Gr de Carnero sensibilizados con det antigénicos citoplasmáticos de T. Cruzi .
-GR no sensibilizados: suspensión al 1% de eritrocitos de carnero no sensibilizados, para control de heterofilia.
-Buffer/diluyente
-Mercaptoetanol:elimina la capacidad aglutinante de los anticuerpos heterófilos,

• Procedimiento:
1- Con micropipeta de 25 ul, colocar Diluyente de Sueros HAI en todos los pocillos a usar de la policubeta.
2- Con micropipeta de 25 ul tomar una alícuota de suero a ensayar). Colocar la muestra en el primer pocillo y
homogeneizar 10 veces al menos para asegurar una correcta dilución de la muestra.
3- Realizar diluciones seriadas a partir del primer pocillo (dilución 1/2), pasando 25de la dilución ½ a la dilución ¼, y
así sucesivamente hasta la dilución que se desea investigar (por ejemplo: 1/8, 1/16, es decir transferir 25 ul de
pocillo a pocillo hasta la dilución que se desee investigar. Descartar los últimos 25 ul.
4- Colocar en los pocillos conteniendo las diluciones 1/2 y 1/4, una gota (25 ul) de GR no sensibilizados para control
de heterofilia.
5- En el resto de los pocillos, agregar una gota (25 ul) de Antígeno HAI.
6- Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta.
7- Dejar en reposo, a resguardo de vibraciones, durante 90 minutos.
8- Leer a partir de los 90 minutos.
 Explicación General:
Reactivo + Muestra
Reactivo Muestra Muestra con Ac Muestra sin Ac

Antígeno
GR adosado al
soporte Ac en la Ausencia de
muestra Ac en la
muestra
Partícula de GR
(soporte)
 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
-No reactivo: presencia de un sedimento en forma de botón o pequeño anillo de bordes
regulares.
-Reactivo: formación de una película o manto que cubre el 50% o más del fondo de los pocillos.

-Sueros con títulos mayores o iguales a 1/16, se consideran reactivos para anticuerpos anti-T.
cruzi. Esto es así por el Titulo de corte : Título a partir del cual se considera que un individuo está
infectado (según región geográfica, epidemiología y método utilizado). Para Chagas HAI según las
especificaciones del fabricante: 16 (títulos mayores o iguales a 16 se consideran reactivos para
T.cruzi )

-Cuando se observan resultados positivos (sueros reactivos) y además se presenta manto en los
pocillos destinados a control de heterofilia (diluciones 1/2 y 1/4), debe realizarse otra titulación
con los sueros correspondientes pero previamente tratados con 2-ME. El propósito de estos
tratamientos es eliminar la reacción inespecífica. El agente reductor (2-ME) elimina la capacidad
aglutinante de los anticuerpos heterófilos.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64

c
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

-Zona de Equivalencia: Es la concentración correcta de

anticuerpos y antígenos, logrando formar una red (malla o
aglutinación) formada por el entrelazamiento de moléculas(Ag-
Ac).
-Prozona (zona de exceso de anticuerpo) : Los
inmunocomplejos pueden disociarse a agregados de menor
tamaño que no forman aglutinación/malla ya que el exceso de
anticuerpo libres desplaza al anticuerpo unidos a los
determinantes antigénicos
-Postzona (zona de exceso de antígeno) Los inmunocomplejos
pueden disociarse en agregados de menor tamaño que no
forman aglutinación/malla ya que el exceso de concentración
de antígenos libres desplazan al antígeno unido al anticuerpo.
 Explicación Micro/Macroscópica de la Aglutinación
Directa e Indirecta Positiva

DIRECTA

INDIRECTA