Practica Inhibidores

INSTITUTO POLITÉNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Efecto de la concentración de sustrato y de los
inhibidores sobre la velocidad de reacción
Cisneros Martínez Mitzi Janet, Lorenzana Pérez Daniela
3IV1, Sección IV
INTRODUCCIÓN:
inhibidor: competitivo, incompetitivo o
En las reacciones no catalizadas por enzimas acompetitivo y no competitivo.
la formación de productos depende
linealmente de la concentración de sustrato
OBJETIVOS:
añadido, entonces a bajas concentraciones de
• Analizar el efecto de la
sustrato la velocidad es proporcional a la concentración del sustrato sobre la
concentración de sustrato, entonces si se velocidad de la reacción
enzimática.
duplica la concentración se duplica la • Determinar la constante de
velocidad (reacción de primer orden). En las Michaelis-Menten (Km) de forma
gráfica por los métodos de
reacciones catalizadas por enzimas, se
Michaelis-Mentes y Lineweaver-
obtiene una dependencia hiperbólica de la Burk.
velocidad respecto a la concentración de • Determinar el tipo de inhibición
producido por la anilina sobre la
sustrato, en la curva a concentraciones actividad de la invertasa.
intermedias de sustrato, la velocidad es
RESULTADOS:
independiente de la concentración de sustrato
Efecto de la concentración de sustrato sobre la
(reacción de orden cero), la velocidad velocidad de reacción.
alcanzada es cercana la Vmax. La interacción
de un inhibidor y una enzima varía Tabla 1. Resultados del efecto de la
dependiendo de la naturaleza química del concentración de sustrato sobre la actividad de la
invertasa.
inhibidor y de la reacción química que
cataliza la enzima, para dilucidar el tipo de
interacción entre ambas moléculas se
determina el efecto del inhibidor en las
constantes cinéticas de la enzima. Tipo de
Tubo Testigo Problemas
T 1 2 3 4 5 6
Sacarosa 0.5 0.1 0.2 0.3 0.5 0.8 1.0

0.2M (mL)
Regulador 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
de acetatos
0.005M, pH
4.7 (mL)
Agua (mL) 0.5 0.9 0.8 0.7 0.5 0.2 0
Enzima 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

10µg/mL
(mL)
Inactivación 0.5 mL de 3,5-DNS + 0.5 mL de 3.5-DNS a
0.5 mL de enzima cada tubo
Tabla 2. Resultados de la absorbancia frente a [A.R], U.I y concentración de sustrato.

Tubo Absorbancia [A.R] Velocidad Concentración de
mol/2mL (U.I) sustrato
(moles/L=M)
T 0.000 0 0 0.0
1 0.249 2.8632 0.2863 0.01
2 0.814 9.5259 0.9525 0.02
3 0.950 11.1297 1.1129 0.03
4 0.782 9.1485 0.9148 0.05
5 1.606 18.8655 1.8865 0.08
6 1.269 14.8915 1.4891 0.10

[S]
1.8
1.6
1.4
1.2
0.8
0.6
0.4
Efecto
0.2 de los inhibidores sobre la velocidad de reacción.
0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12
Grafica 1. Resultados de la absorbancia frente a [A.R], U.I y concentración de sustrato en el sustrato
Tabla 3. Resultados del efecto de los inhibidores sobre la velocidad de reacción.

Tubo Testigo Problemas
T 1 2 3 4 5 6
Sacarosa 0.5 0.1 0.2 0.3 0.5 0.8 1.0

0.2M (mL)
Inhibidor en 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Regulador
de acetatos
0.005M, pH
4.7 (mL)
Agua (mL) 0.5 0.9 0.8 0.7 0.5 0.2 0
Enzima 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

10µg/mL
(mL)
Inactivación 0.5 mL de 3,5-DNS + 0.5 mL de 3.5-DNS a
0.5 mL de enzima cada tubo
Tabla 4. Resultados de la absorbancia frente a [A.R], U.I y concentración de sustrato
Tubo Absorbancia [A.R] Velocidad Concentración de
mol/2mL (U.I) sustrato
(moles/L=M)
T 0.0 0 0 0.0
1 0.940 11.011 1.1011 0.01
2 0.490 5.7051 0.5705 0.02
3 1.202 14.1014 1.4101 0.03
4 1.115 13.0754 1.3075 0.05
5 1.329 15.5990 1.5599 0.08
6 1.303 15.2924 1.5292 0.10
[INH]
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 20 40 60 80 100 120
Grafica 2. Resultados de la absorbancia frente a [A.R], U.I y concentración de sustrato en los inhibidores
de km son iguales, no se modifican con
inhibidor Acompetitivo. Con o sin inhibidor hay
DISCUSIÓN:
diferentes valores de Vmax y Km>Km con
Lo que medimos es aparición de productos por inhibidor. En nuestro caso al obtener la gráfica,
minuto. Con la cantidad de producto obtenido observamos que se mostró un inhibidor
podemos medir la actividad de una enzima. El competitivo en donde la línea de color azul es
regulador como acetatos mantiene el pH a 4.7 cuando está ausente el inhibidor y la línea de
por zona amortiguadora, el agua ajusta el color naranja es la que va a ir presentando con
volumen, la pre-incubación sirve para que los inhibidor, entonces podemos determinar que sus
reactivos tomen la temperatura ambiente para Vmax es igual o casi similar con el Vmax del
hacer que el tiempo (los 5min) sean constantes, inhibidor (Vmax=Vmax con inhibidor), y que el
se hace mediante intervalos conocidos de Km es menor al Km del inhibidor (Km
tiempo, adicionando la enzima cada 30 segundos
CONCLUSIÓN:
por cada tubo. La enzima no tiene activación en
el tubo testigo porque ya tiene pH alcalino, y De la práctica podemos ver que la velocidad de
tiene desnaturalización por lo cual pierde su la reacción enzimática es directamente
estructura terciaria y secundaria. Se ve color proporcional a la concentración de sustrato,
amarillo el color testigo porque no hay también la velocidad máxima de la invertasa
activación enzimática ya que no hay producción para la sacarosa sin inhibidor fue de 0.6896 UI y
de glucosa, la glucosa es la que reduce el DNS con inhibidor es de 0.6944 UI y que la anilina es
haciéndolo de color rojo. Con nuestro inhibidor un inhibidor de tipo reversible competitivo y
habrá poco color, el inhibidor que utilizamos es puede fijarse tanto a la invertasa como el
anilina. Un inhibidor hace que los sustratos no se complejo-enzima sustrato
peguen a la enzima y disminuyen la velocidad.
REFERENCIAS:
Una enzima no sufre transformación química
durante la reacción que estén catalizando, eso • Rodwell W. Víctor. (2016). “Harper
hace que sean muy eficientes. El complejo Bioquímica Ilustrada” 30ª edición,
enzima-sustrato se unen mediante la regla editorial Mc Graw Hill education Lange.
dictada por la estructura, la estructura debe México. D.F. pág. (58, 68-75, 82-85).
interactuar de la estructura del sustrato, eso le da • Horton, H. (2008). “Principios de
especificidad, tiene una estructura bioquímica” 4ta edición, editorial
complementaria. interactúan en el sitio activo de Pearson educación, México, pág. (226,
la enzima y forman este completo por 234-239)
interacciones débiles.
EFECTO DEL INHIBIDOR
La anilina es reversible interacciona con la
enzima por enlaces débiles Vmax con el
inhibidor competitivo sí está o no el mismo
inhibidor la Vmax cambia con un valor mayor si
se encuentra el inhibidor y es menor al km
cuando no está presente el inhibidor, los valores

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Sacarosa 0.5 0.1 0.2 0.3 0.5 0.8 1.0

Enzima 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Tabla 2. Resultados de la absorbancia frente a [A.R], U.I y concentración de sustrato.

1 0.249 2.8632 0.2863 0.01

2 0.814 9.5259 0.9525 0.02

3 0.950 11.1297 1.1129 0.03

4 0.782 9.1485 0.9148 0.05

5 1.606 18.8655 1.8865 0.08

6 1.269 14.8915 1.4891 0.10

Grafica 1. Resultados de la absorbancia frente a [A.R], U.I y concentración de sustrato en el sustrato

Tabla 3. Resultados del efecto de los inhibidores sobre la velocidad de reacción.

Sacarosa 0.5 0.1 0.2 0.3 0.5 0.8 1.0

Enzima 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

1 0.940 11.011 1.1011 0.01

2 0.490 5.7051 0.5705 0.02

3 1.202 14.1014 1.4101 0.03

4 1.115 13.0754 1.3075 0.05

5 1.329 15.5990 1.5599 0.08

6 1.303 15.2924 1.5292 0.10

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