PRACTICA N°3-INFLUENCIA DE PH Y TEMPERATURA EN ENZIMAS

FACULTAD DE ENFERMERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERIA
PRACTICA N°3
INFLUENCIA DE pH Y TEMPERATURA EN ENZIMAS
ASIGNATURA: Bioquímica
DOCENTE: Maria J. Del Aguila
ESTUDIANTE: Valeria Marcela, Cisneros Vizcarra.
IQUITOS-PERU
2021
INTRODUCCION:
Las enzimas, al ser proteínas globulares, tienen los niveles de organización de estructura
primaria, secundaria y terciaria que se han descrito en el capítulo anterior. Algunas,
además, tienen estructura cuaternaria. La actividad catalítica de las enzimas es
altamente dependiente de la estructura tridimensional que tenga la cadena polipeptídica.
Generalmente hay una conformación nativa, que es la que tiene la enzima en el sitio en
donde se encuentra de manera natural (citoplasma, sangre etc.). El investigador al
transferir estas proteínas de su medio natural al tubo de ensayo, debe de ser muy
cuidadoso de no modificar las condiciones del medio en que se encuentra la enzima,
pues de otra forma pierde su actividad.
En el capítulo anterior se vio como el pH y la temperatura del medio afectan la
estructura terciaria de una proteína produciendo su desnaturalización.
Para observar en el laboratorio el efecto que produce un cambio de pH sobre la

actividad de una enzima, se puede disponer una serie de tubos en los que se mantienen
constantes los siguientes parámetros: temperatura, [E], [S], y el tiempo en el que se
lleva a cabo la reacción (tiempo de incubación); lo que varía en cada tubo es el pH. Al
haber detenido la reacción después de un tiempo determinado, se mide la cantidad de
producto obtenido con lo que se puede obtener la velocidad de reacción de cada tubo.
Con este experimento se tienen parejas de puntos de pH y velocidad: (pH, v0)
Al pH en donde la enzima presenta máxima actividad se le conoce con el nombre de pH

óptimo. Estos resultados se pueden interpretar pensando que en el pH óptimo la enzima
tiene la conformación tridimensional que le permite la mayor actividad catalítica. Si se
modifica este pH, la conformación nativa se pierde y la enzima ya no puede catalizar
adecuadamente.
MATERIALES, REACTIVOS Y OTROS:
Supensión de enzima (catalasa)
Solución de HCl 0.1 N
Solución de NaOH 0.05 M
Solución de H2O2 (agua oxigenada)
5 Tubos de ensayo
Pipetas de 0.25, 1.0 y 5.0 ml
EFECTO DE LA VARIACION DE LA TEMPERATURA Y EL pH SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMATICA
---------------------------------------------------------------------------------------
TUBOS. Cont en ml. 1 2 3 4 5
---------------------------------------------------------------------------------------
SUSPENSION DE ENZIMA -- 1.0 1.0 1.0 1.0
HCl 0.1 N -- -- 0.25 -- --
NaOH 0.05 M -- -- -- 0.25 --
H2O2 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
---------------------------------------------------------------------------------------
 Incubar el tubo 2 a 60°C., durante 5 minutos.

 Al tubo 3 agregar 0.25 ml de ácido clorhídrico y homogenizar
 Al tubo 4 agregar 0.25 ml de solución de hidróxido de sodio y homogenizar
 Agregar 5 ml de peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) a los tubos 1, 3, 4, 5
 Luego de haber transcurrido el tiempo de incubación, con la ayuda de una pinza
metálica retirar el tubo 2 del baño maría y agregar 5 ml de peróxido de
hidrógeno
 Posteriormente homogenizar todos los tubos.
OBSERVACION E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:
TUBO N°1:
Se utilizo:
-Agua Oxigenada 5 ml.
Observaciones:
-No hay acción enzimática ya que no tiene la enzima catalasa.
TUBO N°2:
Se utilizo:
-Enzima 1 ml
Observaciones:
-Fue llevado a baño María x 5 min a 60° (sometido a altas temperaturas)
-Se desnaturalizo, es por eso que no hubo acción enzimática.
TUBO N°3:
Se Utilizo:
-Enzima 1 ml.
- 5 gotitas de Ácido Clorhídrico.
- Agua Oxigenada 5 ml.
Observaciones:
-Primero se coloca 1 ml de enzima.
- Se coloco 5 gotitas de Ácido Clorhídrico.
-Luego se procedió a homogenizar.
- Se homogenizó y se aplicó 5 ml de Agua Oxigenada.
-Se desnaturalizó, es por eso que no hubo acción enzimática.
-No hay acción enzimática, por que la enzima catalasa actúa a un Ph de 6,8 a 7,5 y a una
temperatura de 30 a 40 C°.
TUBO N°4:
Se utilizó:
-Enzima 1 ml.
-Solucion de hidróxido de Sodio 5 gotitas.
Observaciones:
-Primero se coloca 1 ml de enzima.
- Se coloco Solucion de hidróxido de Sodio 5 gotitas.
-Luego se procedió a homogenizar.
- Se homogenizó y se aplicó 5 ml de Agua Oxigenada.
-Se desnaturalizó, es por eso que no hubo acción enzimática.
TUBO N°5:
Se utilizo:
-Enzima 1 ml.
Observaciones:
-Hay acción enzimática de la catalasa en presencia del peróxido.
-La catalasa descompone el peróxido de hidrogeno en agua más oxígeno.
-El oxigeno se presenta a través del burbujeo.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
1. Guerra JJM. Efecto del pH y la temperatura sobre la actividad de las enzimas

[Internet]. Uaa.mx. [cited 2021 Sep 17]. Available from:
https://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-6-enzimas/efecto-del-ph-y-la-
temperat.html

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