Enzimas Virtual

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA GENERAL
INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO DE CINÉTICA ENZIMÁTICA
Introducción: En este laboratorio se hará uso de herramientas que permitan simular una practica de
cinética enzimática para comprender los conceptos implicados en el tema.
Idea central de la práctica y contexto: Uno de los simuladores permite evaluar la actividad de la
enzima 6-O-α-L-ramnosil-D-glucosidasa a diferentes pH y temperaturas, para luego medir por
espectrofotometría la absorbancia de uno de los productos de la reacción. Con las absorbancias
obtenidas se pueden hacer gráficas para identificar las condiciones optimas en las que funciona la
enzima de interés. Con otro simulador donde se esta evaluando la enzima de la lactasa se van a
repasar los conceptos relacionados de cinética enzimática.
Nota: Todo lo que esté en azul y cursiva debe ser desarrollado y entregado como el informe de la
práctica del día.
Instrucciones: Ingrese al siguiente enlace http://biomodel.uah.es/lab/abs/AE/inicio.htm#
i. Conociendo la enzima y la forma en que se mide la actividad
Al ingresar se le da una pequeña explicación del simulador y cómo utilizar los controles. Lea todo
atentamente. Antes de empezar a manipular el simulador debemos entender que hace la enzima,
cuál es su sustrato y como se obtiene la medición de la actividad de la enzima usando un
espectrofotómetro. Para medir la actividad de una enzima por lo general se puede hacer de dos
formas: midiendo la cantidad de sustrato consumido por la enzima, o midiendo la cantidad de
producto.
Con sus palabras responda las siguientes preguntas
1. ¿Cuál es el sustrato de la enzima 6-O-α-L-ramnosil-D-glucosidassa y que efecto provoca

la enzima en el mismo?
2. En el simulador para el estudio de la actividad enzimática ¿se está midiendo el sustrato
consumido por la enzima o el producto de la reacción? ¿cómo se está haciendo esa
medición?
3. Explique brevemente como la temperatura y el pH afectan la actividad de una enzima
ii. Identificando la temperatura a la que mejor funciona la enzima
Una vez se comprende como funciona la enzima y como se esta cuantificando en le laboratorio
vamos a identificar la temperatura optima a la que funciona la enzima.
Para ello va a fijar el pH en 7, variando la temperatura y registrando la absorbancia en la siguiente

tabla
pH T(°C) A540
7 30
7 40
7 50
7 60
7 70
7 80
4. Realice una gráfica de temperatura (°C) vs Absorbancia

5. ¿En cual de esas temperaturas la enzima tiene un mejor desempeño? ¿por qué?
iii. Identificando el pH al que mejor funciona la enzima
Una vez identificado la temperatura a la que mejor funciona la enzima ahora el siguiente paso es
cambiar el pH para identificar el óptimo. Para ello el parámetro de temperatura lo va a mantener fijo
en el encontrado en el punto anterior y va a variar el pH para registrar la absorbancia en la siguiente
tabla
pH A540
3
4
5
6
7
8
9
10
11
6. Realice una gráfica de pH vs absorbancia
7. ¿En cual pH la enzima tiene un mejor desempeño? ¿por qué?
8. ¿Cuáles son las condiciones de pH y temperatura óptimas para esta enzima?
Uno de los parámetros que más interesa al momento de estudiar las enzimas es la cinética. Esta
describe la velocidad de reacción que indica el número de moléculas de sustrato que se convierten
en producto por segundo.
9. ¿En los experimentos anteriores es posible conocer la velocidad máxima y el Km de la
enzima? En caso de responder no, ¿Qué hace falta para poder conocer esos parámetros?
Cinética enzimática
Para el estudio de cinética enzimática vamos a emplear otro simulador donde se estudia la enzima
lactasa que ayuda en la degradación de la lactosa. Puede acceder al simulador en el siguiente link:
https://sites.google.com/site/biologydarkow/lactase-enzyme-simulation
Antes de iniciar lea atentamente la información presente en las pestañas de Home, Background, y el
cuadro amarillo a la derecha que dice Experimental Setup
10. Indique como actúa la lactasa sobre la lactosa y cuales son los productos de la reacción.
En el simulador se pueden manipular 4 parámetros: cantidad inicial de lactosa, temperatura, pH y la

presencia o ausencia de la enzima lactasa. También tiene la opción de visualizar los resultados en
gráficas dos pestañas diferentes: “Glucose Production from Lactose Hydrolysis” y “Vmax”
Cada vez que manipule uno de estos parámetros y de clic en Run, se va a generar una curva en la
gráfica y se van a ir guardando.
En este caso siéntase libre de manipular los parámetros para responder las siguientes preguntas
11. ¿Cuál es la temperatura y pH óptimo para esta enzima? (adjunte un pantallazo de las
gráficas crean necesarias y explique)
12. ¿Cuál es la velocidad máxima de la enzima? (adjunte un pantallazo de las gráficas crean
necesarias y explique)
Ahora imagine que usted está en el laboratorio, conoce las condiciones de pH y temperatura
adecuadas e incuba la enzima a diferentes concentraciones de sustrato porque quiere conocer la
velocidad máxima de la enzima y el Km. Usted agrega la misma cantidad de enzima en cada
condición y obtiene la siguiente tabla
Concentración de sustrato (mg/dL) Velocidad (mg/dL/min)

1000 77,04
400 38,97
200 16,98
100 12,71
50 10,35
25 7,15
13. Haga una gráfica Lineweaver–Burk con los datos obtenidos

14. Determine la velocidad máxima de la enzima y el Km.

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i. Conociendo la enzima y la forma en que se mide la actividad

Con sus palabras responda las siguientes preguntas

1. ¿Cuál es el sustrato de la enzima 6-O-α-L-ramnosil-D-glucosidassa y que efecto provoca

Para ello va a fijar el pH en 7, variando la temperatura y registrando la absorbancia en la siguiente

4. Realice una gráfica de temperatura (°C) vs Absorbancia

iii. Identificando el pH al que mejor funciona la enzima

8. ¿Cuáles son las condiciones de pH y temperatura óptimas para esta enzima?

En el simulador se pueden manipular 4 parámetros: cantidad inicial de lactosa, temperatura, pH y la

Concentración de sustrato (mg/dL) Velocidad (mg/dL/min)

13. Haga una gráfica Lineweaver–Burk con los datos obtenidos

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