Catedra de Inmunología - Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí.

Técnicas de diagnóstico en Inmunología

(Jordan Pico Moreira)1, (Nieve Cevallos Delgado)1, (Florencio Tigrero Intriago)1, Jorge Cañarte
Alcívar2-3
1Estudiantede la Escuela de Laboratorio clínico. Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí, Portoviejo
– Manabí – Ecuador
2Docente Investigador. Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí. Portoviejo – Manabí – Ecuador

3Medico especialista en Inmunología Clínica, StemMedic, Manta – Manabí – Ecuador.

Resumen. Introducción.

Durante los últimos años el avance tecnológico ha El estudio de enfermedades cuya alteración
permitido desarrollar técnicas que ayudan al primaria está en el sistema inmunológico
diagnóstico de múltiples enfermedades. Las representa un desafío importante para el médico,
técnicas que se utilizan en los laboratorios de pues muchas veces requiere de exámenes
inmunología para diagnosticar, constituyen un complementarios específicos y de elevado costo.
compendio de métodos fiables, robustos, En este sentido, resulta práctico dividir las
reproducibles y mesurables de espectro enfermedades de origen inmunológico en cuatro
disponible para el inmunólogo. Se les incorpora grandes grupos: inmunodeficiencias,
más componentes específicos, que a veces enfermedades autoinmunes, enfermedades
constituye desarrollos adicionales muy ingeniosos alérgicas y enfermedades oncológicas1. Por esto
para conseguir un protocolo de respuesta más se debe dirigir el estudio de laboratorio desde un
rápido y una automatización del proceso. enfoque clínico apropiado y preciso, para ello
existe un amplio repertorio de pruebas de
Las diferentes pruebas inmunológicas existentes
diagnóstico inmunológicas distribuidas en las
son llevadas a cabo para diagnosticas entre las
siguientes categorías: Técnicas basadas en
principales cuatro enfermedades del sistema
reacciones antígeno-anticuerpo secundarias,
inmune: enfermedades autoinmunes,
técnicas basadas en reacciones de antígeno-
inmunodeficiencias, enfermedades oncológicas y
anticuerpo primaria, técnicas de detección de
enfermedades alérgicas
anticuerpos, técnicas de estudio de
Palabras claves. hipersensibilidad, técnicas de identificación de

Técnicas inmunológicas, diagnóstico, antígeno, poblaciones celulares por citometría de flujo,

ELISA, IgM. técnicas para valoración de la funcionalidad de la

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inmunidad celular y aplicación de estudios de para la detección de los anticuerpos antinucleares

tipificación HLA. es la inmunofluorescencia indirecta.

Cada una de estas categorías tiene entre cuatro a La técnica de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI),
seis técnicas diferentes, es decir, una amplia gama emplea cortes de varios tejidos o la línea celular
de información. Es por esto que los argumentos a tumoral de epitelioma laríngeo humano como
continuación se enfocarán en algunas de las fuente antigénica, se utiliza ampliamente para el
técnicas basadas en reacciones antígeno- diagnóstico de enfermedades autoinmunes de
anticuerpo secundarias y las técnicas de detección muchos laboratorios. En la inmunofluorescencia
de anticuerpos. Indirecta, los antígenos no definidos son
reconocidos por los anticuerpos en el suero del
Desarrollo.
paciente y ofrecen determinados patrones que
Dentro de las principales técnicas de detección de son interpretados en relación con su asociación a
anticuerpo están las pruebas de: Determinación enfermedades3.
de anticuerpos por inmunofluorescencia indirecta
Otras de las enfermedades en la cual se utiliza la
y determinación de anticuerpos mediante ELISA,
técnica de diagnóstico de inmunofluorescencia
ambas técnicas utilizadas principalmente para la
indirecta son las vasculitis asociadas a anticuerpos
detección de enfermedades autoinmunes pero
anticitoplasma de neutrófilos, en la cual los
también usadas de manera rutinaria en la
biomarcadores más importantes son los
detección de otro tipo de enfermedades.
anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA).
Las enfermedades autoinmunes (EA) son causadas Los ANCA son autoanticuerpos dirigidos contra
cuando un daño intrínseco del sistema proteínas de los gránulos citoplasmáticos de
inmunológico, que trae como consecuencia la neutrófilos y monocitos. Se determinan mediante
pérdida de la autotolerancia, condiciona inmunofluorescencia indirecta y por el método de
respuestas anormales frente a estructuras inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)4. Para
propias, lo que genera un daño tisular que perdura el diagnóstico de esta enfermedad es
en el tiempo2. Uno de los factores más comunes recomendable realizar en primer lugar la prueba
entre las enfermedades autoinmunes es la de inmunofluorescencia indirecta y luego la
frecuencia de anticuerpos antinucleares (ANA), prueba de ELISA, de esta manera se puede
presente principalmente en la enfermedad de obtener una mayor sensibilidad y especificidad.
Lupus, esclerodermia, enfermedad del tejido
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
conectivo, entre otras. La técnica más utilizada
(ELISA) usa una enzima como marcador para

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mediar la formación de complejos antígeno- inhibir la formación de grumos, inmediatamente la

anticuerpo. Hay diversas variaciones al método de saturación de antígenos impedirá la formación de
ELISA para detectar y cuantificar ligandos de alto puentes entre las partículas.
peso molecular, el marcador enzimático que se
Se pueden clasificar directamente, es decir que un
utiliza en estos análisis se conjuga con un ligando,
antígeno es aglutinado directo por el anticuerpo,
el cual puede ser un antígeno, un anticuerpo
como también indirectamente, esto se refiere a la
específico para el antígeno de interés o un
aglutinación de las células que son recubiertas de
anticuerpo para el anticuerpo primario. Hay
antígeno o a las partículas inertes que son
diversos tipos de ELISA que se clasifican en dos
portadoras pasivas de antígenos solubles, también
grupos, los competitivos y no competitivos, de
pruebas de antiglobulina, inhibición de la
manera general los métodos competitivos tienen
aglutinación y fijación del complemento.
sensibilidad y detectabilidad menor comparados a
otros métodos. La técnica de precipitado líquido, el Ag que se usa
en esta técnica debe ser soluble y multivalente
El ELISA tipo sándwich doble anticuerpo es el
para que forme un entrecruzamiento o red con los
ejemplo clásico de métodos para la detección de
Ac y se produzca el precipitado.
antígenos, el primer anticuerpo captura el
antígeno de la muestra que es detectado a través Existen diferentes métodos entre ellas están la
del conjugado anticuerpo-enzima o amplificado cualitativa, aunque es uno de los métodos menos
con un conjugado dirigido contra el segundo usado debido a que es un poco más complejo,
anticuerpo u otros procedimientos5. Y los ELISA para utilizar este método hay que asegurar de que
tipo sándwich doble antígeno son utilizados para uno de los reactivos sea puro, la cuantitativa es la
la detección de anticuerpos y tienen gran utilidad técnica que en se permite medir la cantidad de Ag
para la evaluación de la respuesta inmune o Ac presente en solución.
inducida por vacunas. Se dan dos etapas, en la primera se desarrollan
Cabe destacar que la técnica de tiene una gran rápidamente los complejos Ag y Ac, influenciada
importancia, al igual que otras técnicas muy poco por la temperatura, en la segunda, los
inmunológicas ya que son útiles por su principio, complejos se agregan formando micelas o redes
el cual se basa en la reacción del antígeno o de que al alcanzar un determinado tamaño, se
anticuerpos y por lo general las partículas del precipitan7.
antígeno y anticuerpo forman los puentes6. En Mientras que la precipitación en gel no solo puede
esta técnica si se obtiene exceso de anticuerpos formarse en solución sino también en matriz de
contra las partículas indicadoras, puede llegarse a

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agar, cuando el Ag y el Ac se difunden uno a otro Las técnicas serológicas detectan anticuerpos
en agar o también cuando el anticuerpo se totales, por lo que no proporcionan un diagnóstico
incorpora dentro del agar y el antígeno hacia la rápido, por lo general requieren de procesos
matriz que contiene los anticuerpos, se forma una preanalíticos para eliminar reactantes
8 10
línea visible de precipitación . inespecíficos . Las técnicas ELISA, IF, IQL permiten
la identificación para un diagnostico rápidamente.
La prueba de fijación del complemento se basa en
la capacidad para unir el complejo antígeno y En los ensayos de captura, la IgM de la muestra se
anticuerpo, mide la cantidad de anticuerpos une a un antisuero anti-IgM. Si la muestra tiene
consumidores de complemento de una muestra IgM específica, es reconocida mediante la adición
de suero o líquido cefalorraquídeo9. Se usa para el de un antígeno conjugado, o de un antígeno viral
diagnóstico de algunas infecciones virales o junto con, seguido de, un antisuero conjugado.
micóticas, especialmente para la Directamente proporcional a la concentración de
coccidioidomicosis. La prueba permite medir los IgM específica.
títulos de anticuerpos IgM e IgG, o puede
La mayoría de las mediciones serológicas están
modificarse para detectar determinados
disponibles en un formato automatizado y son
antígenos. Es precisa, pero tiene aplicaciones
particularmente útiles para mediciones exigentes.
limitadas, es laboriosa y requiere muchos
Los beneficios son: un mejor rendimiento,
controles.
precisión, tiempos de respuesta más rápidos y
Se desarrolla en dos fases, la primera consiste en menor trabajo manual.
la colocación de Ag y de suero, la segunda implica
Conclusión.
la adición de complemento dependiente del
complemento y eritrocitos. Conocer sobre técnicas de diagnóstico en
inmunología es de suma importancia en el ámbito
El diagnóstico serológico de las infecciones en fase
profesional y académico, mediante el cual
aguda implica la detección de la respuesta IgM
conocemos sus diferentes aspectos, su función y
específica, marcador eficaz de infección primaria,
acción de cada una de los grupos en los que se
aunque con menos validez en las reactivaciones o
clasifica, además en como ayuda cada grupo a
reinfecciones. Las muestras clínicas en las que
seguir buscando el diagnóstico correcto para cada
principalmente se basan los estudios serológicos
enfermedad el sistema inmune.
son suero o plasma, en general otros fluidos
corporales. En la actualidad algunas de las pruebas
diagnósticas inmunológicas tienen costos altos o

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