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    RochinRivera 219204988-6

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    El documento describe una práctica de laboratorio sobre la limpieza y montaje de preparaciones de diatomeas y silicoflagelados. El objetivo era limpiar muestras y realizar montajes permanentes y semipermanentes utilizando métodos como digestión con ácido y peróxido de hidrógeno, lavados y centrifugación, para luego montar en portaobjetos con resina sintética y observar al microscopio.

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    El documento describe una práctica de laboratorio sobre la limpieza y montaje de preparaciones de diatomeas y silicoflagelados. El objetivo era limpiar muestras y realizar montajes permanentes y semipermanentes utilizando métodos como digestión con ácido y peróxido de hidrógeno, lavados y centrifugación, para luego montar en portaobjetos con resina sintética y observar al microscopio.

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    El documento describe una práctica de laboratorio sobre la limpieza y montaje de preparaciones de diatomeas y silicoflagelados. El objetivo era limpiar muestras y realizar montajes permanentes y semipermanentes utilizando métodos como digestión con ácido y peróxido de hidrógeno, lavados y centrifugación, para luego montar en portaobjetos con resina sintética y observar al microscopio.

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    Universidad de Sonora

    Departamento de investigaciones científicas y tecnológicas

    Licenciatura en Biología

    Laboratorio de Protistas y Algas

    M.C Erick José Ponce

    Silvia María Rochín Rivera

    Práctica 4: Limpieza y montaje de preparaciones permanentes


    y semipermanentes de Heterokontophyta (diatomeas y
    silicoflagelados)

    Entrega: 22 de Septiembre del 2022


    Limpieza y montaje de preparaciones permanentes y semipermanentes de
    Heterokontophyta (diatomea y silicoflagelados)

    Diatomeas (clase Bacillariophyceae) son algas microscópicas únicas que contienen


    sílice y tienen una distintiva figura geométrica. Son unicelulares, organismos
    eucarióticos y fotosintéticos. Su tamaño celular es entre 5 μm -- 0.5 mm. Ocurren en
    áreas mojadas o húmedas donde la fotosíntesis es posible. Las diatomeas son
    planctónicas (flotan libremente) o bentónicas (adherido a un sustrato) en la
    naturaleza. Los individuos son solitarios o a veces de colonias. Las diatomeas son
    mayormente inmóviles, sin embargo, algunas diatomeas bentónicas tienen un
    sistema de rafe especializado que segrega mucílago para adherirse o deslizarse a lo
    largo de una superficie. También son conocidas por formar biopelículas, por
    ejemplo, capas de células unidas fuertemente de microorganismos. Las biopelículas
    están formadas en una superficie sólida y están usualmente rodeadas de fluidos
    extracelulares. (Kale & Karthick 2015)

    Para una identificación adecuada de las diatomeas es necesario eliminar todo el


    contenido de materia orgánica celular o extracelular. Esto puede realizarse
    exponiendo la muestra a agentes oxidantes fuertes. En aguas ricas en carbonato
    cálcico se recomienda eliminar previamente los carbonatos con HCl diluido. Para
    limpiar los frústulos de las diatomeas se debe tratar la muestra con reactivos que
    permitan la digestión de la materia orgánica. Aunque hay diversas posibilidades, se
    recomienda digerir la materia orgánica mediante solución peróxido de hidrógeno
    (H202) al 30% (100 volúmenes). En caso de materia orgánica difícilmente digerible,
    como filamentosas, se puede optar por una digestión más energética mediante
    ácido sulfúrico concentrado (H2SO4) y permanganato potásico (KMnO4) en
    cristales, añadiendo peróxido de hidrógeno como catalizador.

    En los dos casos hay que limpiar los restos de reactivo mediante lavados sucesivos
    con agua destilada o desionizada. Los lavados pueden realizarse mediante filtros
    (0,4 micras de poro) o mediante centrifugación suave. (Gómez et. al., 2009)
    Objetivos:

    - Limpiar muestras de preparaciones semipermanentes de diatomeas y


    silicoflagelados.
    - Realizar el montaje de preparaciones permanentes de diatomeas y
    silicoflagelados, utilizando resina sintética.
    - Realizar el montaje de preparaciones semipermanentes de diatomeas y
    silicoflagelados.

    Materiales:

    - Microscopio óptico.
    - Micropipetas.
    - Portaobjetos.
    - Cubreobjetos.
    - Muestra en fresco.
    - Tubos de ensaye.
    - Centrífuga.
    - Mechero de alcohol.
    - Pipeta.
    - Placa para calentar.

    Métodos:

    - Con una micropipeta, tomar 1ml de la muestra en fresco proporcionada por el


    maestro y verter en tubo de ensayo.
    - Añadir 1ml de ácido clorhídrico a la muestra, dentro de la campana.
    - Pasar lentamente el tubo de ensayo por el fuego, hasta que se convierta en
    un color cristalino verdoso-amarillento.
    - Pasar la muestra del tubo de ensayo a tubo de centrífuga. Después, añadir
    5ml de agua desionizada.
    - Meter el tubo a la centrífuga y dejar actuar por cinco minutos.
    - Sacar el tubo de ensayo, veremos al fondo del tubo, una especie de nata
    color blanca y con una pipeta, sólo sacar la mezcla de agua desionizada y
    ácido clorhídrico.
    - Volvemos a añadir 5ml de agua desionizada y metemos a centrifugar por
    cinco minutos.
    - Nuevamente, retiramos sólamente el agua del tubo.
    - Tomamos un poco de la muestra que quedó, y ponemos una gota en el
    portaobjetos.
    - Dejamos el portaobjetos secar en la placa.
    - Una vez seca la muestra, añadimos una gota de resina y con mucho cuidado,
    colocamos el cubreobjetos en la muestra, y dejamos secar.

    Resultados:

    (fig. 1) (Fig. 2)

    (Fig. 3)
    (Fig. 4)
    (Fig. 6)
    (Fig. 5)

    (Fig. 6)
    fi (Fig. 7)
    RESULTADO FINAL

    Discusión:

    Se describe el tratamiento de muestras de diatomeas para eliminar la materia


    orgánica, y su posterior montaje en resina para su observación al microscopio.

    Una vez digerido el material, se coloca en un vial limpio con un volumen conocido
    de agua destilada. Se agita el vial y, con una pipeta Pasteur, se deposita el material
    en un cubreobjetos. Una vez evaporado el líquido, se procede al montaje con resina.
    (Gómez et. al., 2009)

    Con este artículo, podemos avalar lo que se hizo en la práctica cuatro de limpieza y
    montaje permanente de diatomeas.
    Conclusión:

    - Se entendió el tema de limpieza y montaje de diatomeas.


    - Se logró la limpieza correcta de diatomeas.
    - Se logró crear un montaje en buen estado y calidad.

    Bibliografía:

    Gómez, N., Charles, J., Giorgi, A., Guasch, H., Sabater, P. y Sabater, S. (2009). Conceptos y
    técnicas en ecología fluvial. Rubes Editorial.

    Kale, A. y Karthick, B. (2015). The Diatoms: Big Significance of Tiny Glass Houses.
    RESONANCE, 919.

    Cuestionario:

    1. ¿Qué es el índice de refracción y cuál es su importancia en el montaje


    de preparaciones permanentes para microscopía?

    Es la relación que existe entre la velocidad de la luz en el aire y su velocidad en el


    medio transparente utilizado. Se pueden obtener los índices de refracción de una
    serie de sustancias que se utilizan en la construcción y tallado de las lentes de los
    objetivos.

    2. Mencionar los tipos de resinas sintéticas que existen y cuáles son más
    recomendables para el estudio de diatomeas y silicoflagelados.
    ● Acrílica
    ● Alquídica
    ● Polivinilo
    ● Ureal formaldehído
    ● Viniléster
    ● Epoxi

    Las resinas recomendable serían, las cuales serían Naphrax o Hyrax, ya que tienen
    alto índice de refracción.
    Ensayo

    La importancia de las algas

    Las algas bentónicas manejan un papel importante en los ambientes lóticos, pues
    estas participan significativamente en los ciclos biogeoquímicos, con la retención de
    nutrientes, en la formación y estabilidad de los sedimentos y en la modificación de
    velocidad de la corriente, generando así microhábitats que son utilizados por otros
    organismos acuáticos como zonas de refugio, para el depósito de huevos o también,
    como alimento.

    Las algas, también son consideradas los productores primarios con más importancia
    en los sistemas lóticos porque son más abundantes y permanentes que las plantas
    que viven en los medios acuáticos, y tienen la capacidad de transformar elementos
    químicos inorgánicos de diversas fuentes que se encuentran en compuestos
    orgánicos, que pueden ser empleados por organismos de otros niveles tróficos.

    La incorporación de energía en las redes tróficas de los ambientes lóticos pueden


    venir de un origen alóctono, gracias al ingreso de materia orgánica de origen
    terrestre, por ejemplo, la vegetación primaria. O autóctono, por los autótrofos que
    habitan en el agua, como algas, musgos y plantas vasculares.

    La importancia que tiene la fuente de energía autóctona para satisfacer la demanda


    energética ha sido avalada por estudios hechos con isótopos estables.

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