UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ

CARRIÓN
FACULTAD DE BROMATOLOGÍA Y NUTRICIÓN

ASIGNATURA: BIOQUIMICA GENERAL

(Practica de Laboratorio / Grupo 2)

DETERMINACIÓN DE
COLESTEROL
PRACTICA N9
PROFESORA:
· Lic. Solano Timoteo, Maria
Luisa Socorro

Integrantes:

l Bardales Alberto,
Yessenia
 I. INTRODUCCION
El colesterol es un lípido (grasa). Se forma en el hígado a partir de alimentos grasos y es
necesario para el funcionamiento normal del organismo. El colesterol está presente en la
membrana plasmática (capa exterior) de todas las células del organismo. El colesterol se
desplaza por la sangre mediante unas moléculas denominadas lipoproteínas. Los tres
tipos principales son: Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) o “colesterol malo”; se
cree que causan enfermedades arteriales. Las LDL transportan el colesterol desde el
hígado a las células y pueden causar una acumulación nociva si hay más de lo que las
células pueden usar. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) o “colesterol bueno”; se
cree que previenen las enfermedades arteriales. Las HDL se llevan el colesterol de las
células y lo devuelven al hígado donde se descompone y se elimina como residuo
corporal. Los triglicéridos se forman en el hígado y están presentes en productos
lácteos, carne y aceites culinarios. La obesidad y la alimentación rica en grasas
aumentan el riesgo de tener niveles altos de triglicéridos.
Existen diversos tipos de Lps. Las principales Lps del plasma son: Quilomicrones
(QM), lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), lipoproteínas de densidad
intermedia (IDL) lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de alta densidad
(HDL).

Una concentración elevada de QM y/o VLDL por encima de valores normales, se asocia
a una elevación en la concentración de triacilgliceroles.
 II. FUNDAMENTO TEORICO:

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL

El análisis de colesterol sirve para determinar el riesgo de acumulación de depósitos de grasa

(placas) en las arterias, lo que puede provocar arterias estrechas u obstruidas en todo el cuerpo
(ateroesclerosis).

¿Qué es el colesterol?
El colesterol es una sustancia cerosa y parecida a la grasa que se encuentra en todas las células
de su cuerpo. Su hígado produce colesterol. También se encuentra en algunos alimentos, como
la carne y los productos lácteos. Su cuerpo necesita algo de colesterol para funcionar bien. Pero
si tiene demasiado colesterol en la sangre, tiene un mayor riesgo de enfermedad arterial
coronaria.

¿Cómo se miden sus niveles de colesterol?

Si tiene 20 años o más, debe medir su colesterol al menos una vez cada cinco años. Una prueba
de sangre llamada panel de lipoproteínas puede medir sus niveles de colesterol. Antes de la
prueba, necesitará ayunar (no comer ni beber nada excepto agua) por nueve a 12 horas. La
prueba brinda información sobre su:
· Colesterol total: Cantidad total de colesterol en la sangre. Incluye ambos tipos: El
colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL, por su sigla en inglés) y el colesterol
de lipoproteína de alta densidad (HDL, por su sigla en inglés)
· Colesterol malo (LDL): El que se acumula en sus arterias y las obstruye
· Colesterol bueno (HDL): Ayuda a eliminar el colesterol de sus arterias
· No-HDL: Este número es su colesterol total menos su colesterol bueno (HDL). Su
colesterol no-HDL incluye el colesterol malo (LDL) y otros tipos de colesterol, como la
lipoproteína de muy baja densidad (VLDL)
· Triglicéridos: Otro tipo de grasa en su sangre que puede aumentar su riesgo de
enfermedad cardíaca (del corazón), especialmente en mujeres.

¿Qué significan sus niveles de colesterol?

Los niveles de colesterol se miden en miligramos por decilitro (mg / dL). Estos son los niveles
saludables de colesterol:
Personas de 19 años o menores:
Tipo de colesterol Nivel saludable
Colesterol total Menos de 170 mg/dL
No-HDL Menos de 120 mg/dL
LDL Menos de 100 mg/dL
HDL Más de 45 mg/dL

Hombres de 20 años o mayores

Tipo de colesterol Nivel saludable
Colesterol total 125 a 200 mg/dL
No-HDL Menos de 130 mg/dL
LDL Menos de 100 mg/dL
HDL 40 mg/dL o mayor

Mujeres de 20 años o mayores:

Tipo de colesterol Nivel saludable
Colesterol total 125 a 200 mg/dL
No-HDL Menos de 130 mg/dL
LDL Menos de 100 mg/dL
HDL 50 mg/dL o mayor

Los triglicéridos no son un tipo de colesterol, pero son parte del panel de lipoproteínas (la
prueba que mide los niveles de colesterol). Un nivel normal de triglicéridos es menor a 150 mg /
dL. Es posible que necesite tratamiento si tiene niveles de triglicéridos que están en el límite
alto (150- 199 mg / dL) o alto (200 mg / dL o más).

III. OBJETIVO:

Ø Determinar y cuantificar a través de método enzimático los valores de Colesterol Total

Y HDLc sanguíneo.
Ø Analizar los factores necesarios para una correcta práctica científica de la
determinación de colesterol
Ø Observar el fundamento bioquímico comprobable para los resultados que
obtendremos al finalizar.
IV. MATERIALES Y REACTIVOS:

Ø MATERIALES

Pipeta

Cubetas

Espectrofotómetro

Ø MUESTRAS

ü Muestra de sangre no
ü Plasma
ü Suero
 Ø REACTIVOS PARA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE COLESTEROL

Ø REACTIVOS PARA DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL:

ü Solución Estándar de Colesterol: 2 g/litro

ü Solución de Enzimas:
ü Lipasa Fungal (300 U/ml)
ü Colesterol-oxidasa (34 U/ml)
ü Peroxidasa (20 U/ml)
ü Solución 4-aminofenazona: 25 mmol/litro
ü Solución de Fenol: 55 mmol/litro.

V. PROCEDIMIENTO:

Ø DETERMINACION CUANTITATIVA DE COLESTEROL(video)

§ Antes de empezar la práctica debemos tener preparados nuestros reactivos a

utilizar.
R1, Reactivo de trabajo PIPES pH 6,9 90 mmol/L
fenol 26 mmol/L
R2, Enzimas Colesterol esterasa 300 U/L
Colesterol oxidasa 300 U/L
Peroxidasa 1250U/L
4-Aminofenazona 0,4 mmol/lL
Colesterol Patrón primario acuoso de colesterol 200 mg/dl

§ Pipetear los reactivos y muestra (suero) en las cubetas.

BLANCO PATRON MUESTRA
RT (ml) 1 1 1
Patron - 10 -
(microlitos) - - 10
Muestra
(microlitros)
PROCEDIMIENTO

1. Echar el reactivo de trabajo en las tres muestras.

2. Enseguida echamos el patrón de colesterol de 200 mg/dl

3. Echamos la muestra (suero)

4. Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente comenzaremos a observar un

color rosado.
 5. Pasamos a medir en el espectrofotómetro.

CONDICIONES DEL ENSAYO

Longitud de onda 505 nm
Cubeta 1 cm paso de luz
temperatura 37° C

CALCULOS Y RESULTADOS (video)

𝐀𝐛𝐬.
𝐦𝐮𝐞𝐬𝐭𝐫𝐚 × 𝐜𝐨𝐧𝐜. 𝐬𝐭𝐚𝐧𝐝𝐚𝐫
𝐂𝐨𝐥𝐞𝐬𝐭𝐞𝐫𝐨𝐥 =
𝐀𝐛𝐬. 𝐩𝐚𝐭𝐫𝐨𝐧
0,246
Colesterol = × 200 mg/dl
0,345
colesterol = 142.60 mg/dl

Interpretación: El valor del colesterol obtenido por cálculo nos da 142.60 mg/dl el cual
según los valores de referencia mostrados en el video la muestra está entre las
concentraciones normales del Colesterol en una persona.

VALORES REFERENCIALES (video)

Normal= menos de 200

mg/dl Moderado=200-239
mg/dl Alto=240 a más mg/dl

Ø DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL

REACTIVOS:

ü Solución Estándar de Colesterol: 2 g/litro

ü Solución de Enzimas:
ü Lipasa Fungal (300 U/ml)
ü Colesterol-oxidasa (34 U/ml)
ü Peroxidasa (20 U/ml)
ü Solución 4-aminofenazona: 25 mmol/litro
ü Solución de Fenol: 55 mmol/litro.
PROCEDIMIENTO:

Toma de muestra: Paciente en Ayuno por 12 – 16 Horas

· Se debe proceder a la extracción de 5 cc. de sangre, tomada en un tubo de 13 x

100 mm.

· Cada muestra será centrifugada a 2500 rpm x 5 min. y se separará el suero, en

otro tubo.

NOTA: Si se trabaja con plasma, la muestra de sangre debe haber sido tratada
solamente con Heparina como anticoagulante.

Seguir las indicaciones de la tabla:

Tubos Blanco (B) Estandard (S) Muestra

Rvo. Trabajo (ml) 1.0 1.0 1,0

Estandard (ul) ---- 10 ---

Muestra (ul) ---- ---- 10

· Incubar a 37C por 15 minutos o 30 min a temperatura ambiente.

· Retirar de B.M. y enfriar a chorro de agua fría por 1-3 min.
· Llevar a lectura espectrofotométrica a 505 nm., llevando el aparato a CERO con
el BLANCO.

CÁLCULOS:

CALCULOS Y RESULTADOS:

ü DETERMINACION DEL FACTOR (F):

𝑪𝒐𝒏𝒄. 𝒅𝒆𝒍 𝑷𝒂𝒕𝒓ó𝒏

𝑭𝑨𝑪𝑻𝑶𝑹 =
𝑨𝑩𝑺 𝒅𝒆𝒍 𝑷𝒂𝒕𝒓ó𝒏

Ø 2.0 𝑔/𝐿
𝐹= 0,345

𝑭 = 𝟓, 𝟕𝟗𝟕
 ü DETERMINACION DEL COLESTEROL TOTAL (g/L)

𝐶𝑂𝐿𝐸𝑆𝑇𝐸𝑅𝑂𝐿 (𝑔/𝐿) = 𝐿𝑒𝑐𝑡. 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥 𝐹

𝐶𝑂𝐿𝐸𝑆𝑇𝐸𝑅𝑂𝐿 (𝑔⁄𝐿) = 0,246 × 5,797

𝐶𝑂𝐿𝐸𝑆𝑇𝐸𝑅𝑂𝐿 (𝑔⁄𝐿) = 1,426 𝑔⁄𝐿

Interpretación: El valor del colesterol obtenido por cálculo nos da 1,426 g/L que es
igual a 142,6 mg/dl y según los valores de referencia está entre las concentraciones
normales del Colesterol total

VALORES DE REFERENCIA:

SUERO o PLASMA: HOMBRES: 1,40 a 2,00

g/L. MUJERES: 1,25 a 2,00 g/L.

Ø DETRMINACIÓN DE HDL

REACTIVOS PARA DETRMINACIÓN DE HDL

• Reactivo precipitante: Acido

fosfotúngstico 0,63 mmol/L, cloruro de
magnesio 25 mmol/L. Estabilizantes.

• Estándar de Colesterol HDL: 50

mg/dL (1,30 mmol/L). Patrón primario
de matriz orgánica. El valor de
concentración es trazable al Material
de Referencia Certificado 1951a. No
incluido.
PROCEDIMIENTO

1. Medir 0,2 ml (200 μl) de suero muestra) en un eppendorf limpio.

2. Medir 0,4ml (400 μl) del agente precipitante en el eppendorf que contiene la muestra
3. Mezclar y dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente
4. Centrifugar a 4000 rpm durante 10 o a 12000 rpm por 2 minutos
5. Separar el sobrenadante resultante en otro tubo marcado como HDL1

Tubos Blanco Estándar Muestra

Rvo. Trabajo (µl) 1000 1000 1000

Estándar (µl) - 50
Sobrenadante (µl) - 50

Mezclar y reposar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente ó 5 minutos a 37ºC.

Leer la absorbancia (A) del sobrenadante y el patrón a 505 nm

TG Colesterol TOTAL Col. HDL

135 mg/dl 142,60 mg/dl 64 mg/dl

CALCULOS PARA DETERMINACION DEL COLESTEROL VLDL

Colesterol VLDL = Triglicéridos / 5

Colesterol VLDL = 135 / 5
Colesterol VLDL = 27 mg/dl

Interpretación: El valor del colesterol VLDL obtenido por cálculo nos da 27 mg/dl el
cual según los valores de referencia está entre el intervalo de las concentraciones
normales del colesterol VLDL.

CALCULOS PARA DETERMINACION DEL COLESTEROL LDL

Colesterol LDL = Colesterol total - ( Colesterol VLDL + Colesterol HDL)

Colesterol LDL = 142,60 – ( 27 + 64)

Colesterol LDL = 51,6 mg/dl

Interpretación: El valor del colesterol LDL obtenido por cálculo nos da 51.6mg/dl el
cual según los valores de referencia está dentro de las concentraciones normales del
colesterol-LDL.
CALCULOS PARA DETERMINACION DEL COLESTEROL HDL

Tomando como datos del paciente (varón) los valores de:

C. total = 142,60 mg/dl
C. LDL = 51,6 mg/dl
C. VLDL = 27 mg/dl

𝑯𝑫𝑳 𝒎𝒈⁄𝒅𝒍 = ( 𝑪𝒐𝒍𝒆𝒔𝒕𝒆𝒓𝒐𝒍 𝑻𝒐𝒕𝒂𝒍 − 𝑪𝒐𝒍𝒆𝒔𝒕𝒆𝒓𝒐𝒍 𝑳𝑫𝑳) − 𝑪𝒐𝒍𝒆𝒔𝒕𝒆𝒓𝒐𝒍 𝑽𝑳𝑫𝑳

𝐻𝐷𝐿 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = (142,60 − 51,6) − 27
𝐻𝐷𝐿 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 64 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙

Interpretación: El valor del colesterol HDL obtenido por cálculo nos da 64 mg/dl el
cual según los valores de referencia está entre las concentraciones normales del C-HDL
en varones, dicho valor también se tiene que ver observado en la determinación
experimental.

VALORES DE REFERENCIA:

Los valores de referencia son:

Magnitud Referencia (mg/dl)

CT < 200
Col-HDL ≥ 40 hombres
Col-HDL ≥ 60 mujeres
Col-LDL < 100 (100 – 129)
TG < 150
VLDL son de entre 2 y 30 mg/Dl

RESULTADOS DEL CUADRO (PPT)

En el laboratorio se tienen que determinar TG de 10 pacientes. Después de procesar
la sangre y aplicar el protocolo para el análisis correspondiente, los resultados de
la lectura fueron: DEL PPT
- Patrón: 200mg/dl
- Lectura del patrón: 0,345
N° % TG
Paciente VLDL Lectura Fecha Solicitado
por mg/dl
Lara Jacinto María Dr. Ruslan
1 41,738 0,360 208,69
José 05/01/2021 Golovliov Balbín
2 Vega Retuerto Analy 39,42 0,340 197,10 09/01/2021 Dr. Enrique Ferrer
Guimaray Huamán
3 48,694 0,420 243,47
Diego 14/02/2021 Dr. Enrique Ferrer
Rodríguez Ardían Dra. Jenny Vargas
4 63.998 0,552 319,99
Luis 05/03/2021 Bravo
Solís Chávez Dr. Ruslan Golovliov
5 49,392 0,426 246,96
Gabriela 30/03/2021 Balbín
6 Vega Rafael Micaela 50,434 0,435 252,17 04/04/2021 Dr. Enrique Ferrer
Palomo Moreno Dra. Jenny Vargas
7 41,28 0,356 206,4
Erika 24/04/2021 Bravo
Dr. Ruslan
8 41,86 0,361 209,3
Sánchez Serna José 25/04/2021 Golovliov Balbín
Gonzales Ruiz, Dra. Jenny Vargas
9 62,956 0,543 314,78
mercedes 15/05/2021 Bravo.
Cruz Francia, Dr. Ruslan
10 61,68 0,532 308,4
Alexandra 16/06/2021 Golovliov Balbín

CALCULOS TEÓRICOS DE LOS RESULTADOS DE VLDL (PPT)

𝑽𝑳𝑫𝑳 = 𝑻𝒓𝒊𝒈𝒍𝒊𝒄é𝒓𝒊𝒅𝒐/𝟓

1) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,360 = 208,69 𝑚𝑔/𝑑𝑙

VLDL = 208,69 / 5 = 41,738

2) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,340 = 197,10 𝑚𝑔/𝑑𝑙

VLDL = 197,10 / 5 = 39,42

3) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,420 = 243,47 𝑚𝑔/𝑑𝑙

VLDL = 243,47 / 5 = 48,694

4) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,552 = 319,99 𝑚𝑔/𝑑𝑙

VLDL = 319,99 / 5 = 63,998

5) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,426 = 246,96 𝑚𝑔/𝑑𝑙

VLDL = 246,96 / 5 = 49,392

6) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,435 = 252,17 𝑚𝑔/𝑑𝑙

VLDL = 252,17 / 5 = 50,434

7) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,356 = 206,4 𝑚𝑔/𝑑𝑙

VLDL = 206,4 / 5 = 41,28

8) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,361 = 209,3 𝑚𝑔/𝑑𝑙

VLDL = 209,3 /5 = 41,86
 9) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,543 = 314,78 𝑚𝑔/𝑑𝑙
VLDL = 314,78 / 5 = 62,956

10) 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝐺 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 579,71 × 0,532 = 308,4 𝑚𝑔/𝑑𝑙

𝑉𝐿𝐷𝐿 = 308,4 / 5 = 𝟔𝟏, 𝟔𝟖

VI. CONCLUSIONES

Ø Una concentración elevada de colesterol malo en el cuerpo tiene un impacto negativo en

la salud ya que aumenta el riesgo de padecer cardiopatías y accidentes
cerebrovasculares, mientras el colesterol HDL conocido como “colesterol bueno” al
circular a través del torrente sanguíneo es capaz de recolectar el colesterol malo
transportarlo al hígado y evitar su acumulación en las paredes de venas y arterias.

VII. BIBLIOGRAFIA
ü Queen’s Printer and Controller of HMSO 2008, Cholesterol. Obtenido de:
https://www.nhs.uk/translationspanish/documents/cholesterol_spanish_final.pdf
ü https://medlineplus.gov/spanish/cholesterollevelswhatyouneedtoknow.html