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Tesis Vargas Rodríguez
Tesis Vargas Rodríguez
Tesis Vargas Rodríguez
JURADO DICTAMINADOR
_______________________________
Dr. JOSÉ MOSTACERO LEÓN
Presidente
_____________________________________
Dr. MARCO SALAZAR CASTILLO
Secretario
_____________________________________
Dr. FEDERICO GONZALES VEINTIMILLA
Miembro
2
PRESENTACIÓN
3
EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y REOLÓGICA DE
HIDROCOLOIDE DE Opuntia spinulifera CON PERSPECTIVAS DE ADITIVO
EN LA INDUSTRIA DE ALIMENTOS
RESUMEN
El hidrocoloide de cladodios de Opuntias, es un metabolito secundario del que se
conoce poco respecto a sus propiedades físicas y químicas. El estudio contribuye a
revalorar al género Opuntia (nopal) como fuente de obtención de aditivos en la industria
de alimentos. Se estableció una metodología de extracción, que implicó la optimización
de varios parámetros de la materia prima y de las etapas para la extracción. Se
seleccionó Opuntia spinulifera debido a su mayor contenido de hidrocoloide;
obteniéndose porcentaje de extracción del 17 % en base fresca. La apariencia del
producto precipitado es de hebras blanquecinos, mientras que el hidrocoloide seco es un
polvo de color blanco aperlado de poco brillo y con una aw de 0,47 que lo protege del
ataque de microorganismos. Se trata de especies polianiónicas, básicamente de
composición carbohidratos. El 9,14 % de su peso son ácidos urónicos, su
comportamiento es de un ácido débil monoprótico (pKa de 7,04). En la caracterización
física, se demostró que las dispersiones acuosas del hidrocoloide son fluidos no
Newtonianos, con alto grado de pseudoplasticidad. Los valores de viscosidad fueron
estables, frente a cambios de pH (4,0, 7,0 y 10,0) y de temperatura (15-65 oC). Al
analizar el efecto de cationes mono y divalentes (I=0,05 M), se determinó que existe un
grupo de efectores negativos de alto impacto para la viscosidad (Cu+2 e Fe+2). Mientras
que otros (Ca+2, Na+1 y K+1) la incrementan ligeramente. El hidrocoloide obtenido tiene
grandes perspectivas de uso en alimentos, como resultado de sus propiedades
determinadas. La aplicación próxima recomendada para este hidrocoloide es de
estabilizante de emulsiones y suspensiones. Contribuciones adicionales son los análisis
químico proximales (AQP) de la O. spinulifera, de un parénquima medular de Opuntias,
de un hidrocoloide ácido no péctico de cladodio.
i
EXTRACTION AND CHEMICAL AND RHEOLOGICAL
CHARACTERIZATION OF Opuntia spinulifera HYDROCOLLOID ADDITIVE
PERSPECTIVE FOR FOOD INDUSTRY
ABSTRACT
The hydrocolloid at cladodes of Opuntia, is a molecule of secondary
metabolism, it´s little known about their physical and chemical properties. The study
developed in this work contributes to reassess the genus Opuntia (prickly pear) as a
source for obtaining from additive at the food industry. In this work were established a
methodology of extraction, which involved the optimization of several parameters of
the raw material stage to extract. The Opuntia spinulifera was selected due to their
higher content of hydrocolloid; it was obtained a extraction percentage of 17 % fresh
basis. The appearance of the precipitated product is whitish strands, while the dry
hydrocolloid powder is a pearly white and low brightness with aw 0.47 that protects it
from attack by microorganisms. The hydrocolloid structure is polyanionic species of
essentially carbohydrate composition. The 9.14% of its weight are uronic acids, their
behavior is a weak monoprotic acid (pKa of 7.04). In the physical characterization, it
was shown that the hydrocolloid dispersions are non-Newtonian fluids a high degree of
pseudoplasticity. The viscosity values were stable thereof to changes in pH (4.0, 7.0 and
10.0) and temperature (15-65 °C). In analyzing the effect of mono and divalent cations
(I=0.05 M), it was determined that a group of negative impact on the viscosity (Cu +2 e
Fe+2). And others cations (Ca+2, Na+1 y K+1) increase slightly. The hydrocolloid
obtained has great prospects for use in foods as a result of their properties determined.
The next recommended for this application hydrocolloid is stabilized emulsions and
suspensions. Additional contributions are the proximal chemical analysis of Opuntia
spinulifera, medullary parenchyma Opuntia, a hydrocolloid acid peptic not of the
cladode.
ii
ÍNDICE GENERAL
Página
RESUMEN i
ABSTRACT ii
NOTACIÓN iv
I. INTRODUCCIÓN 1
III. RESULTADOS 41
IV. DISCUSIÓN 61
V. PROPUESTA 88
VI. CONCLUSIONES 89
VII. BIBLIOGRAFÍA 90
iii
NOTACIÓN
Acido 3,5-dinitrosilisílico. DNS
Base fresca BF
Base seca BS
Constante de acidez Ka
Cromatografía de gases CG
Fibra cruda FC
Fibra dietaria FD
Fuerza iónica I
Peso molecular PM
Peso/peso p/p
Peso/volumen p/v
Tensión superficial TS
Velocidad de cizalla
Viscosidad
Volumen/volumen v/v
iv
I. INTRODUCCIÓN
Sin embargo, actualmente subsiste el término goma, para referirse a los polisacáridos de
plantas o microorganismos o sus derivados que son dispersos en agua fría o caliente
para producir mezclas o disoluciones viscosas que incluye derivados solubles en agua o
derivados con modificaciones de otros polisacáridos que son insolubles en la forma
natural Glicksman (1982); Whistler y BeMiller (1993) y Malone et al. (2003b) han
1
citado ciertas propiedades como pegajosidad, adhesividad, mucilaginosidad y
babosidad; adicionales a las características ampliamente reconocidas de espesar y
gelificar, sin olvidar la nutricional en casos específicos (algarrobo) (Glicksman, 1984;
Whistler y BeMiller, 1993).
El empleo de las gomas frecuentemente es como aditivo, para mejorar o controlar las
propiedades de los alimentos. En la industria de alimentos, las gomas deben ser
seleccionadas en base al valor agregado que confieren, por ejemplo, ser materiales no
calóricos, en alimentos fluidos tales como base de frutas (salsas, mermeladas y jugos
concentrados) o productos a base de leche (budines, yogurt), además también pueden
2
ser incorporados en productos cárnicos (Whistler y BeMiller, 1993; Macotte, 2001;
Yang et al., 2004).
El uso industrial de las gomas polisacáridas, es por su fácil hidratación que produce
disoluciones acuosas con altas viscosidades a bajas concentraciones de goma. Las
gomas también producen, bajo condiciones controladas, geles con diferente fuerza y
estabilidad. La mayoría de ellas son útiles como agentes de control de humedad y para
suministrar la consistencia requerida (Quemener et al., 2000b).
Cada goma tiene diversas propiedades que son consecuencia de su estructura molecular
única. La selección científica y exitosa de una goma para aplicaciones particulares en un
producto desarrollado depende esencialmente de la relación propiedad-estructura
molecular y la disponibilidad en el mercado (Malone et al., 2003).
I.1.2. Fuente de obtención de las gomas y clasificación de las gomas tipo hidrocoloide
Las gomas fueron identificadas por primera vez como exudados de árboles de bosques y
extractos de plantas o algas marinas, harinas de semillas o granos, gomosidades de
procesos de fermentación y muchos otros productos naturales (Whistler y BeMiller,
1993).
Se han descubierto nuevas gomas y han surgido otras como producto de modificación
química (derivatización) de gomas naturales, algunas desarrolladas por síntesis química
completa (Quemener et al., 2000 a y b). Una clasificación contemporánea completa de
las gomas comestibles o hidrocoloides basada en el origen y derivatización (Tabla 1).
Esta clasificación comprende “al término de hidrocoloide, definido como todo aquel
polisacárido o derivado que puede dispersarse en agua a bajo contenido de sustancia
seca y producir geles o dispersiones de alta viscosidad” (Whistler y BeMiller, 1993).
3
Tabla 1. Clasificación de hidrocoloides en alimentos
Categoría Hidrocoloide
1) Exudados de plantas Arábiga
Tragacanto
Karaya
Gati
2) Extractos De Algas
Agar
Alginatos
Carragenina
Furcelaran
De Plantas
Pectina
Arabinogalactana
De Animales
Gelatina
3) Harinas De Semillas
Guar
Algarrobo
De Cereales
Almidones
Celulosa microcristalina
4) Fermentación Dextrana
Xantana
Curdlan
5) Modificación química Derivados de celulosa
Carboximetilcelulosa
Metilcelulosa
Hidroxipropilcelucosa
Hidroxipropilmetilcelulosa
Otros derivados
Almidones modificados
Pectinas de bajo metoxilo
Propilenglicol
Alginato
6) Sintéticas Polivinilpirrolidona (PVP)
Polímeros de Carboxivinil (Carbopol)
Polímeros de Oxido de polietileno
4
I.1.3. Propiedades físicas, químicas y funcionalidad
Los hidrocoloides son polímeros de cadena larga que se disuelven o dispersan en agua
para dar un efecto viscoso o espesante. Esta propiedad es común en todas las gomas y es
la razón básica de sus usos. El grado de espesamiento varía, pero la mayoría ofrece altas
viscosidades a concentraciones del 1%, además el comportamiento al flujo también
difiere. El comportamiento al flujo de las soluciones de gomas, o sistema líquido
alimenticio, puede ser relacionado a las propiedades organolépticas de la solución y así
tener la aceptabilidad del producto. En este sentido las características reológicas de la
solución de goma son útiles para seleccionar la goma apropiada para una formulación o
aplicación específica (Malone et al., 2003a y b).
Mientras todas las gomas espesan e imparten viscosidad a soluciones acuosas, unas
tienen la capacidad de formar geles. La gelación es un fenómeno que involucra la
asociación o entrecruzamiento de cadenas poliméricas para formar una red
tridimensional continua, la cual atrapa o inmoviliza agua dentro de ella para formar una
rígida y firme estructura que es resistente al flujo bajo presión. Las características del
gel y textura varían ampliamente entre las gomas, lo que hace que se presenten
aplicaciones específicas y pocas veces puedan intercambiarse (Quemener et al., 2000 a
y b). Además del espesamiento y gelificación, los hidrocoloides tienen muchas
propiedades funcionales secundarias que son útiles en las aplicaciones de productos
alimenticios y desarrollo de formulaciones (Tabla 2). Estas son factores clave del éxito
o fracaso de un producto alimenticio, y en muchas aplicaciones más que una de estas
propiedades es utilizada (Yang et al., 2004).
5
Tabla 2
Hidrocoloides y su aplicación en alimentos
Hidrocoloide Aplicación
Guar Estabilizante, espesante y emulsificante
CMC Estabilizante, espesante
Arábiga Estabilizante, espesante y emulsificante
Xantana Estabilizante, espesante, emulsificante, agente
para dar cuerpo y agente espumante
Carragenina Estabilizante, espesante y emulsificante
Alginatos:
Alginato de sodio Estabilizante, espesante y emulsificante
Acido algínico Estabilizante, espesante y emulsificante
Alginato de propilenglicol Estabilizante, espesante y emulsificante
En estado sólido todos los polisacáridos tienen regiones donde sus moléculas o
segmentos de cadena están en arreglo desorganizado. Estas regiones amorfas,
consecuentemente tienen numerosas posiciones para enlaces de hidrógeno disponibles
los cuales pueden hidratarse fácilmente. Los polisacáridos secos tienen una pequeña
pero muy fuerte afinidad por agua. En humedades ambientales normales, los
polisacáridos contienen 8 a 10 % de agua (Glicksman, 1984; Whistler y BeMiller, 1993;
Yang et al., 2004).
6
compitiendo por las uniones que pueden darse entre polisacáridos (Whistler y BeMiller,
1993). Los segmentos de las cadenas de polisacáridos llegan a ser completamente
solvatados, y solubilizados, mientras que un número reducido de segmentos son unidos
a otras cadenas de polisacáridos que no han sido solvatados completamente (Díaz et al.,
2004).
7
Algunos hidrocoloides son ligeramente ramificados, frecuentemente con una sola
unidad glicosil constituyendo la rama (cadena lateral), como en goma guar o algarrobo,
donde una unidad D-galactopiranosil es conectada a la cadena principal de unidades D-
manopiranosil por enlaces 1 6 glicosídicos (Figura 1).
Los hidrocoloides lineales presentan una tendencia a formar estructuras helicoidales los
cuales son los más abundantes dado que existe enorme cantidad de uno de ellos, la
celulosa. En contra parte los hidrocoloides ramificados son en extremo los más
diversos, de inmensas formas ramificadas y con una variedad de tipos glicosilos en sus
estructuras (Figura 1). Sin embargo, tanto los lineales como ramificados pueden ser
homoglicanos.
8
En las glicanas ramificadas es bastante común que copolimericen dos o más residuos de
azúcar diferentes, por lo que se les ha llamado heteroglicanas. La composición
monosacáridas de los hidrocoloides más empleados en la industria de alimentos es
presentada en la Tabla 3.
En estructuras más complejas, las cadenas laterales deben contener otras cadenas
laterales para dar un complejo de estructura rama sobre rama, también conocido como
“arborescente o arbustiva”, como aparece en la Figura 1-d. Estas moléculas tienden a
ser más estables y menos viscosas que las estructuras lineales (Glicksman, 1984).
Es importante reconocer que una glicana lineal puede producir disoluciones más
viscosas que una glicana ramificada del mismo número de unidades, particularmente la
forma arbustiva. Esto puede ser visualizado considerando el diámetro de la esfera de
giro de una molécula extendida en disolución, como se muestra en la Figura 2.
Las colisiones que se presentan entre éstas moléculas son frecuentes y liberan energía
que contribuye a la viscosidad de la disolución (Whistler y BeMiller, 1993). A
diferencia de las moléculas altamente ramificadas (arbustivas) de peso molecular
equivalente que generan una esfera de giro mucho más pequeña y colisionan con menor
frecuencia, contribuyendo con menos viscosidad en la disolución.
9
Figura 2. Efecto comparativo de hidratación en polímeros lineales y ramificados de
igual peso molecular. Glicksman (1982)
Cuando existe la mitad de hidrólisis de una molécula lineal, esto puede disminuir la
viscosidad. Para explicar esto es útil considerar una molécula lineal (figura 2) como una
varilla que gira sobre su centro, puesto que el volumen de la esfera proyectada es una
función del cubo del radio, si la varilla se rota a la mitad, el tamaño o volumen de la
esfera de giro ahora será un octavo del tamaño del inicial (Gliksman, 1984). Por lo
tanto, la ruptura de una cadena de polisacárido lineal en el medio puede teóricamente
disminuir la viscosidad de la disolución en un 75 % (Glicksman, 1984). Por lo que se
debe considerar que si las glicanas son fáciles de hidrolizar por ácido, pueden
degradarse mientras permanecen en disoluciones o suspensiones de bajo pH por mucho
tiempo, y afectar con ello la viscosidad (Glicksman et al., 1984; Whistler y BeMiller,
1993).
Si las cadenas son ionizadas como en las moléculas lineales de pectato de sodio y
alginato de sodio, las moléculas nunca se asociarán por las cargas negativas en los
aniones carboxilatos. Las repulsiones coulómbicas permiten que las cadenas sean
extendidas completamente, produciendo disoluciones muy viscosas y lo segmentos
moleculares cargados se repelen uno con otro cuando se presenta la colisión,
proporcionando disoluciones estables. Pero si el pH de la solución es tres donde la
ionización del ácido carboxílico es disminuida, las moléculas aniónicas son convertidas
10
a neutras que se asocian y forman un gel o se precipitan de la disolución (Whistler y
BeMiller, 1993; Uruakpa y Arntfield, 2004).
Pectinas 1 2 1 4 52
Algarrobo 1 18 52
Guar 2 29 42
Arábiga 22 8 36 13
Tragacanto 8 24 2 3 7 8 23
Carragenina 29
Agar 41
Xantana 22 18 13
Alginato 38 15
11
Dentro de los factores que favorecen un bajo costo de hidrocoloide crudo están: que
cerca de las ¾ partes del peso de las plantas consiste de carbohidratos, no es
sorprendente que los polisacáridos se obtengan a bajo costo (Quemener et al., 2000 a y
b). También, muchos microorganismos producen polisacáridos, y algunos producen
polisacáridos extracelulares en cantidades, que es económicamente rentable el cultivo
de microorganismos para la producción del polímero (Díaz et al., 2004).
De los factores a señalar en contra, se tiene que en los tejidos de las plantas se tienen
mezclas de polisacáridos de los cuales los componentes individuales pueden ser
separados, pero usualmente el proceso de la separación es complicado. Por tal razón los
costos se elevan, por lo que solamente aquella parte de la plantas rica en un polisacárido
particular es la que conviene procesar (Quemener et al., 2000 b; Mesbahi et al., 2005).
Los hidrocoloides por sí mismos constituyen un producto terminado, pero son usados
más frecuentemente como aditivos para mejorar o controlar las propiedades de los
alimentos. En la industria de alimentos, las gomas son seleccionadas en base al valor
agregado que imparten, por ejemplo, como materiales no calóricos (Glicksman et al.,
1984). La mayoría de los hidrocoloides son útiles como agentes que controlan la
humedad, consistencia y textura que conllevan a una alta aceptación requerida en el
mercado (Malone et al., 2003 a).
12
I.2. Hidrocoloide de Opuntia sp.
13
Tabla 4. Composición porcentual promedio de monosacáridos constituyentes del
hidrocoloide de Opuntia spp.
Monosacárido Composición (%)
Arabinosa 42
Xilosa 22
Galactosa 21
Ramnosa 7
Ácido galacturónico 8
Fuente: McGarvie y Parolis, 1981; Trachtenberg y Fahn, 1981; Trachtenberg y Mayer,
1981; 1982; Gibson y Nobel, 1986
14
arabinosa). Los autores proponen que es un miembro de la familia de pectina pero que
presenta un 20 % de azúcares cargados. Esta evidencia para un tipo de pectina con
estructura cargada es referida a la capacidad potencial del polisacárido, para
interaccionar con cationes divalentes (Ca+2 y Mg+2), como es comúnmente descrito en la
literatura científica (Majdoub et al., 2001). El componente de bajo peso molecular en
ese trabajo fue descrito como una proteína.
Los mismos autores (Majdoub et al. 2001), destacan el potencial de las propiedades de
emulsificación y/o estabilización debido a la presencia de proteínas en el producto de
mayor peso molecular. Estudios realizados por Matsuhiro et al. (2001) usando diálisis
para la purificación de hidrocoloide, mostraron que está constituido por al menos 5
fracciones y que por tratamiento con cetrimida produjo 2 fracciones que se
caracterizaron por cromatografía de exclusión molecular. La fracción homogénea que
precipitó con cetrimida comprende un 26% de ácido urónico; pero que luego de una
hidrólisis química total y análisis espectroscópico indicó que no es pectina.
Las primeras estructuras descritas para la molécula del hidrocoloide la sugieren como
un núcleo de cadena lineal con unidades repetidas de (14) -D-ácido galaturónico y
(12) -L-ramnosa y cadenas laterales de (16)- -D-galactosa unidas en residuos de
ramnosa mediante O-4. Los residuos de galactosa presentan substituyentes en las
posiciones O-3, o doble sustitución en O-3 y O-4 (McGarvie y Parolis, 1981) (Figura 3).
15
La composición de las cadenas externas es compleja, al menos 20 diferentes tipos de
oligosacáridos han sido identificados, la mayoría disacárida o trisacárida.
Invariablemente contienen residuos (15) L-arabinosa y D-xilosa como grupos
terminales, dando una proporción de xilosa:arabinosa cercana a 1:2; ramnosa y ácido
galacturónico muestran ser restringidos al esqueleto del mucílago (McGarvie y Parolis,
1981).
16
Tabla 5. Peso molecular, azucares y presencia de ácido urónico en hidrocoloide de
Opuntia sp.
Autor PM Galactosa Ramnosa Arabinosa Xilosa Acido Galactosa/
Da urónico Arabinosa
Majdoub et 13 x 106 + + + + + ---
al., 2001
Goycoolea et --- + + + + --- 2/3
al. (2000)
Cárdenas et 3X106 ---- --- --- --- --- ---
al. (1997)
Sáenz y --- + + + --- + ---
Sepúlveda
(1993)
Sáenz et al. --- + + + --- + ---
(1992)
Trachtemberg 1.56X106 --- --- --- --- --- ---
y Mayer
(1982b)
McGarvie y --- + + + + + ---
Parolis
(1981a)
McGarvie y --- + --- + + --- 1.5/3
Parolis
(1981b)
Trachtemberg 4.3X106 + + + + + 4.9/3
y Mayer
(1981)
---
McGarvie y + + + + + 1.3/3
Parolis
(1979)
---
Paulsen y + + + + + 2.3/3
Lund (1979)
---
Saag et al. + + + + + 3.5/3
(1975)
---
Srivastava y + -- + -- --- 3/1
Pande (1974)
Amin et al. 55 residuos + + + + --- ---
(1970)
17
I.2.1.2. Carácter ácido o neutro y resistencia química
I.2.2.2. Viscosidad
Las propiedades físicas de los hidrocoloides son importantes ya que imparten ciertos
atributos organolépticos (textura, consistencia y fluidez) de los alimentos procesados,
incluyendo las de tipo reológico. Estas propiedades físicas son el resultado de la
interacción de las moléculas de polisacáridos y con las moléculas de su ambiente (las de
otros ingredientes, pero principalmente con las del agua) (Díaz et al., 2004).
18
concentración, temperatura, peso molecular, velocidad de cizalla, esfuerzo de corte, pH
e iones (Glicksman, 1984). El comportamiento al flujo (o bien, de la curva de
viscosidad) de las disoluciones de hidrocoloides, o del sistema líquido alimenticio,
puede ser relacionada a las propiedades organolépticas de la disolución y así tener la
aceptabilidad del producto. En este sentido las características reológicas de la solución
del hidrocoloide son útiles para seleccionar la goma o hidrocoloide apropiado para una
formulación o aplicación específica (Quemener et al., 2000 a). El hidrocoloide de
cladodio de Opuntia ficus indica en el agua forma dispersiones espesas o viscosas.
Dichas dispersiones han sido estudiados para su comportamiento al flujo, por Medina
et al. (2000) y revelaron un fluido de tipo no Newtoniano.
La fracción del hidrocoloide de esa misma especie que precipita con centrimida
obtenida por Matsuhiro et al. (2006) presenta dependencia de la viscosidad con el pH y
el ion calcio. Este hidrocoloide podría ser considerado una fuente potencial para la
industria, debido a esta capacidad de afectación (por pH y cargas) que resulta en alto
grado de interacciones.
19
agua; esto tiene un papel muy importante en la fisiología de la planta, considerando que
las especies de Opuntia crecen comúnmente bajo condiciones de estrés hídrico, por lo
que participa en la capacidad de resistencia a la sequía para esta planta (Nobel, et al,
1991).
Varios autores han realizado investigaciones sobre las técnicas de extracción y métodos
de purificación para el hidrocoloide o mucílago. En la mayoría de ellos se homogeniza
el cladodio de cactus con agua, usando etanol para su precipitación (Srivastava y Pande,
1974; Trachtemberg y Mayer, 1981, 1982; Saenz et al., 1992; Cárdenas y Goycoolea,
20
1997, Cárdenas et al., 1997). Nobel et al. (1992) cambiaron el agente precipitante
etanol por 2-propanol. Los resultados obtenidos muestran que al menos el 93 % de la
precipitación alcanzada por la técnica debe ser hidrocoloide. Medina-Torres et al.,
(2000) modificaron el procedimiento de extracción reportado por McGarvie y Parolis
(1979); maceraron la pulpa obtenida de los cladodios, centrifugaron, decantaron y
precipitaron con acetona. Majdoub et al., (2001), incluyeron un pretratamiento de
desengrasado con los cladodios mediante éter de petróleo, posteriormente maceraron en
agua desionizada y filtraron al vacío, no reportaron rendimiento de los productos.
El rendimiento de hidrocoloide seco reportado por Cárdenas et al., (1997) para Opuntia
ficus indica fue de 0.07 % en peso fresco del cladodio. A diferencia de Sáenz y
Sepúlveda (1993) con un valor de 1.2 % para la misma especie de Opuntia. Goldstein et
al., (1991) reportaron que el hidrocoloide constituye una fracción importante (9-19 %)
del peso seco de cladodios de Opuntia ficus indica. Fernández, citado por Bravo
(1978), reportó para las cactáceas en general un contenido de hidrocoloide entre 1.09 %
y 4.53 % en peso fresco. Srivastava y Pande (1974) obtuvieron un rendimiento de 0.5 %
también del peso fresco de cladodios de Opuntia dillenii.
Se han citado dos factores ambientales para estimular el incremento del contenido de
hidrocoloide en el cladodio, 1) las bajas temperaturas durante la aclimatación y 2) la
respuesta a la sequía de la planta como un mecanismo de protección que desarrolla la
misma planta (Goldstein et al., 1991). Un hallazgo más al respecto fue que en 1945
Roberts observó que el jugo extraído de cladodios de Opuntia variaba su viscosidad
dependiendo de la cantidad de agua que la planta recibe. Así la tierra que es
extremadamente seca, propicia un jugo más viscoso de hidrocoloide, que aquel derivado
de tierra semiárida. Por lo que la planta muestra un cambio en la producción de
hidrocoloide de acuerdo a la captación de lluvias. Así, podría esperarse jugo más
viscoso de plantas crecidas con precipitación pluvial escasa, por lo que esta idea debe
considerarse para el uso de cladodios como fuente de hidrocoloide.
21
I.2.5. Usos generales
Para la Opuntia sp. o comúnmente denominado nopal, a quienes los aztecas nombraban
como nochtli o nopalli, se tiene a nivel mundial 258 especies reconocidas. El nopal es
una cactácea nativa del norte y sur de América, que crece de manera silvestre en zonas
semiáridas y áridas. El género Opuntia comprende más de 181 especies, sobre las bases
de rasgos morfológicos (Labra et al., 2003). En México se tienen clasificadas 104
especies para el género Opuntia y 10 para el Nopalea y muchas otras dudosas (Bravo,
1978), de las cuales solo 3 son útiles o cultivables para nopal verdura, siendo dos de
ellas de Opuntia (ficus indica y robusta) y una del Nopalea (cochellinifera), sin
considerar las 6 para nopal tunero y las 15 para forraje. Se ha establecido que ninguna
especie de nopal es tóxica, todas son comestibles, sin embargo, se prefieren las
desprovistas de espinas por cuestión práctica (Bravo, 1978; Bravo y Scheinvar, 1985;
Nobel, 1991).
22
Cerca del 60 % (3 x 106 Ha) del territorio nacional corresponde a suelos pobres para
sostener un cultivo tradicional (como puede ser el maíz), pero no así para el cultivo de
nopal, que además se desarrolla ante bajas precipitaciones (Bravo, 1978; Bravo y
Scheinvar, 1985; Nobel, 1991) rindiendo en una excelente opción de ingreso
económico, y que conlleva a un considerable enriquecimiento de los suelos.
Por otra parte, existe una alta variabilidad en el número de cromosomas y la ploidia en
las especies de Opuntia que impiden el uso de un análisis de cariotipo para elucidar la
taxonomía de este género. Grandes esfuerzos se están realizando para identificar y
clasificar en base a marcadores moleculares, con ello incluso se ha sugerido que
Opuntia ficus indica puede ser una especie domesticada de Opuntia megacantha. Sin
embargo, señalan que aún se está en la insuficiencia científica y tecnológica para definir
diferencias genéticas entre especies estrechamente relacionadas, o para estimar
variabilidad genética entre individuos de la misma especie, por lo que la estrategia más
23
valiosa debe ser la que incluya también a los rasgos morfológicos y la distribución
biogeográfica.
24
Bravo (1978) cita que la Opuntia spinulifera estuvo mucho tiempo silvestre sin
conocerse, a pesar de ser muy común en el valle de México, pues fue confundida con
Opuntia Huajuapensis-Bravo, además que Briton y Rose agregaron a la sinonimia de
esta especie a Opuntia candelabriformis Martius.
25
En el estado de Hidalgo, crece entre los 2265 y 2295 m, coexistiendo con Opuntia
robusta, Opuntia streptacantha, Cilindropuntia imbricata, Zaluzaina augusta (vara
ceniza o cenicilla) y Mimosa biuncifera. En estas áreas el extracto herbáceo está
compuesto de Graminae (Rzedowski, 1978). También se tiene el dato de que a media
altura de los cerros de Ostol (2,460 m snm de altitud) y de Tepepan (2,320 m snm)
ubicados en el municipio de Tlaxcala existe vegetación abundante secundaria de tipo
matorral, en la que también se localiza Opuntia spinulifera (www.tlaxcala.gob.mx).
Las características fenotípicas citadas por Scheinvar (1986) y otros autores para Opuntia
spinulifera son citadas en la Tabla 6. Opuntia spinulifera es una especie “redescubierta”
de la que no se puede precisar mucho debido a la confusión con Opuntia oligacantha.
26
Tabla 6. Características fenotípicas de Opuntia spinulifera
Rasgo Descripción
Pilosidad en el tronco Con manchones de pelos cerdosos.
Pilosidad en cladodios Cladodios jóvenes totalmente cubiertos por largos pelos.
jóvenes
Hoja basal en cladodios Hasta 6mm de largo 0.3 mm de ancho en la base, de color rosa
jóvenes rojizo con la base verdosa.
Color, forma y tamaño de Verde grisáceo. *Verdes un poco galucos, orbicular a oblongo,
los cladodios adultos algunas veces obovate, 20-30 cm de longitud. a Robustos,
obovados hasta casi orbiculados, frecuentemente con el ápice
retuso pero no en forma simétrica, base atenuada, como de 20 a 25
cm de largo por 15 a 20 cm de ancho, a veces mayores, hasta del
doble de estas dimensiones, verde pálido algo glauco.
Tricomas Cónicos, sin lúmen, 4 veces más largos que anchos.
Haces vasculares Pentágonos irregulares de 1.8 cm de largo y 1.5 cm de ancho.
Areolas Distantes 1.5 cm entre sí. a Cercanas, la distancia entre sí de 8 a
18 mm, transversalmente elípticas, de 2 a 3 mm de largo, a veces
mayores, hundidas, provistas de escaso y corto fieltro.
Yema floral Abcónica totalmente recubierta de cerdas conniventes blancas.
Flor De 6.5 cm de largo de color amarillo verdoso brillante. *
Amarilla. a De 5 cm de longitud.
Areolas del pericarpelo Distantes 5 a 6 mm entre sí; glóquidas blancas, pelos setosos
numerosos, crespos, hasta 2 cm de largo; espinas setosas 4.5 una
ascendente de 7-8 mm de largo y las otras divergentes hasta 1.2 cm
de largo.
Segmentos exteriores De 8 a 1.2 mm de largo y de 1.6 a 4.1 mm de ancho en la base; de
color verdoso amarillo con banda mediana castaña.
Segmentos interiores Espátulados, borde aserrado hacia el ápice, 4 cm de largo y 2.2
cm de ancho.
Estambres De 1.7 cm de largo; anteras de 2 mm de largo.
Ovario Oboide.
Estilo De 2 mm de largo y 9 mm de ancho; de color verdoso amarillo
claro
Lóbulos del estigma 11 a 16; de color amarillo. * verdes.
Fruto Xoconostle subgloboso; cicatriz umbilical profunda; de 2.8 cm de
largo y 3 cm de ancho; de color verde grisáceo. *Verde a
amarillento-rojo, comestible, globoso corto, 4-6 cm de longitud
a
Fruto cortante cilíndrico-globoso a ovoide, de 4 a 5 cm de largo,
de color amarillento.
Semilla De 4 mm de largo y 3 mm de diámetro, arilo 0.5 mm de
ancho. a Discoideas, de 2.5 cm a 3 mm de diámetro.
Espinas *1-3 color hueso. a Espinas a veces ausentes en todas las aréolas de
la mitad superior del artículo; cuando presentes, generalmente 1 a 3
pero a veces más, hasta 9, delgadas, subsetáceas, subrígidas,
aplanadas en la base, de longitud desigual, de 5 a 13 mm de largo,
de color blanco a blanco amarillento, generalmente adpresas.
Tamaño de la planta *Como árbol. a Planta erecta, baja, como hasta 13 dm de altura,
muy ramificada desde la base.
*Labra et al. (2003); a Bravo (1978)
27
Por todo lo fundamentado surge una interrogante,
¿Existirá una Opuntia mexicana que brinde abundante hidrocoloide y que al ser extraído
con una metodología sencilla, pero eficaz mantenga propiedades funcionales de interés
para la industria?
28
II. MATERIALES Y MÉTODOS
El trabajo experimental fue dividido en tres etapas, las cuales se presentan en la Figura
5 y se describen a continuación.
Etapa II
A.Q.P
Etapa I
.
Composición
Parénquima Acida
Cladodio
medular Hidrocoloide
Reología
aaw
Figura 5. Estrategia experimental general para el desarrollo del trabajo. Se muestra la
Etapa que corresponde al análisis químico proximal de la Opuntia seleccionada, así
como de la fracción del vegetal que se utilizó para la extracción del hidrocoloide.
También aparecen las Etapas II y III que corresponden a las caracterizaciones química y
física del hidrocoloide respectivamente.
Etapa I
Método de extracción del hidrocoloide, selección de la Opuntia y análisis químico
proximal (AQP) del cladodio y la fracción útil.
29
especie de nopal, hasta que se logró un protocolo que garantizó el abastecimiento de
hidrocoloide para la investigación; todo esto, así como los AQP del cladodio y de su
fracción útil (parénquima) quedaron concluidos en la primera etapa de trabajo.
Etapa II
Caracterización química del hidrocoloide de Opuntia spinulifera.
Etapa III
Caracterización física del hidrocoloide de Opuntia spinulifera.
30
II.1. Reactivos
Los reactivos para las técnicas desarrolladas (ácidos, bases, solventes, sales y azúcares)
fueron grado analítico de las marcas Merck, Sigma y Baker. El etanol como agente
precipitante fue grado industrial de Distribuidora Hidalgo. Las gomas pectina cítrica y
xantana fueron grado práctico de Sigma.
El nopal verdura de Opuntia ficus indica variedad Milpa Alta que se abastece para los
centros comerciales en el D. F. fue adquirida, de 15 a 22 cm de largo. Este producto fue
cultivado y cosechado en los meses de febrero y marzo de 2004 con una edad de 8 a 10
semanas, fue limpiado del polvo con brocha, desespinado (desguatado) manualmente y
lavado con agua destilada se utilizó en la extracción del hidrocoloide, empleando
diversos métodos. Se probaron siete protocolos diferentes desarrollados en el
laboratorio con base en la información reportada en la literatura, denominados
secuencialmente de A a G, los cuales quedaron establecidos como aparece en la Figura
6, empleando en todos los casos 100 g de vegetal.
a) Tratamiento A.
El nopal verdura, se homogeneizó con agua en una relación 1:1.5 (p/v) para
posteriormente filtrar y lavar con agua; posteriormente se centrifugó a 10,000 rpm por
10 min y se separó el sobrenadante, el cual fue precipitado con acetona en una relación
1:3 (v/v), el material se secó con corriente de aire a temperatura ambiente.
b) Tratamiento B.
c) Tratamiento C.
31
Al homogenado de nopal verdura A, se le adicionó NaCl a una concentración de 1 %
(p/v); se agitó durante 12 h y el material se filtró y lavó con agua. El filtrado recuperado
se centrifugó a 10,000 rpm por 10 min y precipitó con etanol, de igual manera como
transcurrió en B.
d) Tratamiento D.
e) Tratamiento E.
Este tratamiento es similar a C, excepto que el NaCl se sustituyó por EDTA al 0.2%
(p/v).
32
f) Tratamiento F.
El homogenado vegetal A fue tratado con ácido acético (0.1 M), dejándose en agitación
a temperatura ambiente por 12 h. Al término, el líquido filtrado fue lavado con agua
destilada y centrifugado a 10,000 rpm por 10 min. Se precipitó el mucílago con etanol
igual a B.
g) Tratamiento G.
Las variables consideradas para seleccionar la fuente de nopal con mayor contenido de
hidrocoloide fueron, edad del cladodio, irrigación del vegetal y especie de nopal.
Para evaluar el efecto de la edad del cladodio o tejido vegetal, se colectaron cladodios
adyacentes (encimados) de una misma rama de la planta, con edad aproximada de tres
años.
33
(Opuntia ficus indica), pero con diferente grado de riego al suelo. Una vez realizada la
limpieza se procesaron para la extracción del hidrocoloide.
Los cladodios tiernos (nopalitos) de Opuntia ficus indica (L.) Miller var Milpa Alta
fueron adquiridos de los centros comerciales (D. F., México). Este material vegetal fue
tratado en las mismas condiciones que Opuntia spinulifera, para las determinaciones del
contenido de agua y extracción del hidrocoloide.
II.5. Extracción del hidrocoloide en Opuntia spinulifera y Opuntia ficus indica
Los cladodios limpios tanto de Opuntia spinulifera como Opuntia ficus indica fueron
pesados y cortados longitudinalmente. De las dos caras internas, se retiró
mecánicamente el parénquima medular (materia prima), para posteriormente luego ser
34
cuantificado. El protocolo de extracción presentado en la Figura 7, fue conveniente
realizarlo en lotes de 250 g de tejido vegetal.
La materia prima obtenida, fue homogenizada en agua destilada en una relación 1:1.5
(p/p), empleando un homogeneizador de la marca Osterizer (México) realizando cinco
pulsaciones de 10 seg con descanso de 10 seg. A continuación se puso a hervir durante
5 min el homogenado en un vaso de precipitados de 1 L, empleando una parrilla
eléctrica en el nivel medio de calentamiento y realizando agitaciones ocasionales con
una espátula tocando fondo. El material aun caliente se transfirió a un tamiz casero solo
para llevar a cabo lavados exhaustivos con agua destilada, hasta la apreciación de nula
viscosidad en el residuo. El filtrado y todos los líquidos de lavados se mezclaron y se
centrifugaron en una centrífuga Hettich (Alemana) a 10, 000 rpm (11,403.6 g) durante
10 min, el sobrenadante fue precipitado con etanol absoluto en una relación de 1:3 (v/v)
en vaso de precipitados de 4 L, para esto fue útil agitar de manera envolvente, luego se
35
retiró el producto del fondo del vaso para secarse durante 24 h en corriente de aire. El
hidrocoloide obtenido fue pesado para la determinación del porcentaje de extracción. El
material se pulverizó hasta un tamaño de partícula entre 250-125 m (con una humedad
del 8.75 %) en un tamiz de acero inoxidable Nework.
36
absorbancia es referida a mg de ácido urónico presente al ser interpolada en una curva
patrón de ácido galacturónico.
Se obtuvo una cinética de hidrólisis ácida química del hidrocoloide, para establecer el
tiempo requerido para una hidrólisis total, el cual resulta útil para la identificación y
cuantificación de azúcares por cromatografía líquida de alta resolución o bien de gases.
Dicha cinética se monitorea por la determinación de ARD. La hidrólisis ácida química,
se realizó en un tubo de vidrio de la marca pirex de 16 x 100 con tapa de rosca, para lo
cual se pesaron 30 mg de harina de hidrocoloide y se les adicionó 4.0 mL de ácido
trifluoroacético 0.5 M, posteriormente se colocó el tubo en una placa de calentamiento
tipo termoblock a 100 oC, durante el tiempo especificado (Lawrence, 1985).
37
fue llevada a sequedad a temperatura de 50-60 oC, para resuspenderse en agua
desionizada hervida.
La harina de hidrocoloide extraído de cladodios de Opuntia spinulifera de la colecta de enero del 2005, con un contenido de
humedad del 11.53 ± 0.5020 % fue tamizada a un tamaño de partícula <125 µm, y a partir de este polvo se prepararon las
dispersiones en agua desionizada y hervida un día anterior al análisis.
Se realizaron curvas de flujo para dispersiones de 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 y 3.0 % de
hidrocoloide de Opuntia spinulifera. Se realizaron también ajustes de los datos
experimentales para cada dispersión a varios modelos matemáticos descriptivos, Cross,
Bird Carreau, Sisko, Ley de la Potencia, Bingham y Herschel Bulkley, encontrando que
38
Cross y Bird Carreau. Son los que mejor se aproximan en todas las concentraciones
ensayadas del hidrocoloide.
39
las soluciones de las sales de NaCl, KCl, CaCl2, CuCl2, FeCl2 y Na2(CO3), todas ellas a
un valor de fuerza iónica de 0.05 y sin ajuste de pH. Las mediciones se efectuaron a 25
o
C.
II.7.2.1.Tensión superficial
Las dispersiones de hidrocoloide a concentraciones de 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 y 3.0 % (p/v)
fueron preparadas a su pH original. La determinación se realizó con el equipo novasina
(surface tensiometer 2141) a la temperatura de 25 o C.
Las dispersiones de hidrocoloide a concentraciones de 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 y 3.0 % (p/v)
fueron preparadas a su pH original. Esta determinación se realizó con el uso de novasina
(surface tensiometer 2141) a la temperatura de 25 oC.
40
III. RESULTADOS
A 0,21
B 0,16
C 0,23
D 0,33
E 0,24
F 0,39
G 0,89
41
Los tratamientos C y D, solo lograron valores de extracción del 0.23 % y 0.33 %
respectivamente, para las concentraciones ensayadas de 1.0 y 5.0 % de la sal.
Por último, el tratamiento G con una etapa de extracción con calor, logró el porcentaje
de extracción más alto de todos los tratamientos, con un valor de 0.89 %. Cuando la
extracción con calor se incrementó por 2 min, el material vegetal presentó
caramelización de los azúcares constituyentes; mientras que al retirar el calor 2 min
antes, esto resulta una condición insuficiente para lograr una extracción óptima del
hidrocoloide (siendo además el mismo valor del porcentaje de extracción que el
determinado para B, es decir 0.18).
42
Figura 8. Parénquima medular del cladodio de Opuntia spinulifera.
Con base a las variables documentadas: edad del cladodio y traspiración, irrigación de
la planta y la especie de Opuntia, que se sospecha tienen implicaciones en la producción
43
del hidrocoloide en el cladodio se determinaron los rendimientos de extracción del
mismo.
Tabla 9. Extracción del hidrocoloide en tres edades de cladodio de Opuntia ficus indica
Edad del cladodio Extracción (%)1
2 meses 0.35
2 años 0.71
3 años 0.92
1
BFP (Base Fresca de Parénquima)
44
Posterior a este resultado, fue decisivo realizar el muestreo de Opuntias, en
zonas semiáridas donde se presenta baja tasa de transpiración para la cactácea,
así como escasez en la irrigación esperando con ello mejorar el grado de
extracción del hidrocoloide respecto a su contenido total.
45
Tabla 10. Extracción del hidrocoloide en cladodios de Opuntias colectadas en zonas
semiáridas de México
Especie % de Extracción Lugar de
Opuntia
(BFP) origen
I 2.46 Nopal blanco Cortazar,
(denominado así por los
Gto.
locatarios)
IV 4.4 Apan,
Opuntia spinulifera*
Hgo.
V 1.04 NI, con desarrollo de la Tula, Hgo.
planta de forma rastrera
NI, No identificada
* Identificación en el Jardín Botánico de la UNAM
En todos los casos (I-VI), la referencia para homologar la edad adulta de los cladodios
fue tres fisuras en su base, que representan los ciclos o etapas de desarrollo para un
tejido parenquimatoso diferenciado.
46
Tabla 11. Análisis químico proximal de cladodio de Opuntia spinulifera
Determinación Composición (%)
Agua 90.5 0.06
% Base seca
1
Dubois et al., 1956; 2 Dreywood (1946)
47
Por último, la fracción de azúcares solubles o azúcares reductores directos (ARD) se
determinó en la Opuntia spinulifera con un valor de 14.09 %, que si lo referimos a base
fresca tiene un valor de 1.34 %.
Tabla 12. Composición química proximal del parénquima medular del cladodio de
Opuntia spinulifera
Determinación Composición (%)
48
nitrógeno (1.51 %) y proteína cruda de 8.66 % del parénquima son ligeramente
menores en relación a los respectivamente cuantificados en el cladodio.
La FD no pudo cuantificarse en esta fracción parenquimatosa mediante las técnicas
desarrolladas por Prosky (1988) y aplicadas en el cladodio completo de Opuntia
spinulifera. Dichas técnicas están limitadas, en el caso particular por el desarrollo de
altas viscosidades propias del tejido parenquimatoso, las cuales influyeron en la
filtración al vacío posterior a los tratamientos enzimáticos secuenciales.
49
Paralelo a la extracción del hidrocoloide de Opuntia spinulifera se extrajo el de Opuntia
ficus indica verdura colectada de un cultivo con desarrollo acelerado (abundancia de
agua) y también a partir de parénquima. El valor determinado en este caso fue de 0.03
% BFN (95.0 % humedad), o 0.67 % BS.
Tabla 14. Composición química proximal del hidrocoloide del cladodio de Opuntia
spinulifera
Determinación Composición (%)
Agua 8.75 0.03
% Base seca
Cenizas 1.21 0.01
Extracto etéreo (grasas) 0.05 0.01
Proteína cruda 9.80
Nitrógeno total 1.72 0.06
Proteína 6.30 0.39
Carbohidratos totales1 63.01 0.1.1
Carbohidratos totales2 33.93 1.93
Azúcares reductores directos 0.16 0.01
50
% BS, que por estimación con el factor de conversión a proteína cruda para vegetales
(5.7) se obtiene un valor de 9.23 %. Este segundo resultado obtenido investigado por el
método Bradford específico para la determinación de proteínas, encontrándose un valor
de 6.30 % BS.
Se realizó una cinética de hidrólisis química del hidrocoloide a 100 oC empleando ácido
trifluoroacético, con el propósito de precisar el tiempo requerido para alcanzar una
hidrólisis total, debido a que es un parámetro útil si se tiene contemplada la
identificación y cuantificación de azúcares (monosacáridos) por técnicas cromatografías
de CG y HPLC.
51
Durante el desarrollo de la técnica para la cuantificación de ARD, se presentó una
variabilidad (de lote a lote) con las determinaciones del hidrocoloide leídas en curva
patrón con glucosa (hexosa) como estándar, por lo que se realizaron otras dos curvas
patrón, una con arabinosa (pentosa) y la otra con cantidades equimolares de glucosa y
arabinosa; sin embargo, todos los valores (derivados de las tres curvas patrón) se
mantuvieron en el rango de las desviaciones estándar.
140
120
100
80
ARD (%)
60
ARD (Lote I)
ARD (Lote II)
40 ARD (Lote III)
20
52
III.2.3.3. Determinación del pKa y curva de valoración de pH
12
10
8
pH
53
12
10 Valor experimental
pH'
8 pH''
Ec. Botzman
6
pH
54
105
104 0.5 %
1.0 %
1.5 %
viscosidad (Pa.s)
103 2.0%
3.0 %
102
101
100
10-1
10-4 10-3 10-2 10-1 100 101 102 103 104
55
105
104
viscosidad (Pa.s)
103
102
O. ficus indica 5.0 %
O. ficus indica 3.0 %
101 O. ficus indica 1.5 %
O. spinulifera 2.0 %
O. spinulifera 3.0 %
100 Pectina citrica 3.0 %
Xantana 1.0 %
10-1
1e-3 1e-2 1e-1 1e+0 1e+1 1e+2 1e+3
56
105
M 0.5 % pH 4.0
M 0.5 % pH 7.0
104
M 0.5 % pH 10.0
M 1.5 % pH 4.0
M 1.5 % pH 7.0
viscosidad (Pa.s)
103
M 1.5 % pH 10.0
M 3.0 % pH 7.0
M 3.0 % pH 4.0
102
101
100
10-1
10-3 10-2 10-1 100 101 102 103 104
57
104
o
25 C
o
103 37 C
o
40 C
o
viscocidad (Pa.s)
55 C
o
15 C
102
101
58
100
Control
viscosidad (Pa.s)
NaCl
KCl
CaCl2
CuCl2
FeCl2
10 Na2CO3
59
Figura 18. Tensión superficial de dispersiones de hidrocoloide de Opuntia spinulifera a
25 °C
60
IV.- DISCUSIÓN
Tabla 15
Extracción del hidrocoloide en cladodio de Opuntias
Extracción Opuntia Referencia
(%)*
61
de nopal, es la etapa del desarrollo del cladodio de nopal, lo cual ha sido poco
considerado durante la presentación de la descripción del vegetal, frecuentemente
aparecen indefiniciones no comentadas sobre la edad del cladodio utilizado como fuente
de obtención. Las condiciones del cultivo de la planta, son otro de los factores
significativos para el rendimiento del hidrocoloide, por ejemplo, la disponibilidad de
agua en la irrigación (vs estrés hídrico), si la plantación es un cultivo intensivo o
nopalera silvestre, estación de año, etc. Por último, respecto a las metodologías
extractivas, se han realizado innumerables estrategias metodológicas únicas, que han
obstaculizado la posibilidad de comparación de resultados e incrementado la
inconsistencia y avances en las investigaciones sobre esta sustancia coloidal.
Los tratamientos C y D fueron establecidos sobre la base que en las células del
parénquima medular se produce y almacena el hidrocoloide del cladodio de las
Opuntias (Trachtenberg y Mayer, 1981), por lo que se diseñaron con el objetivo de
hacer disponible al hidrocoloide durante la extracción, mediante la ruptura de
membranas de dichas células empleando cloruro de sodio. Sin embargo, no fue
significativo el grado de extracción a través de este fundamento.
62
El tratamiento F fue el utilizado por Srivastava y Pande (1974) quienes lograron un 0.5
% de extracción sobre peso fresco de Opuntia dinelli; mientras que en este trabajo se
obtuvo un valor de 0.39 %, cuando se empleó una Opuntia diferente, la ficus indica.
Por último, el tratamiento G fue similar a B, con la única diferencia de haber incluido
una etapa de extracción con calor, lo cual influyó para lograr el porcentaje de extracción
más alto de todos los tratamientos (0.89 %, vs 4.6 veces mayor que B).
Por tanto, la metodología del tratamiento G quedo establecida para la extracción del
hidrocoloide de cladodio de Opuntia sp. como la más eficiente y útil.
63
(del grupo denominadas xerófitas) y a una edad adulta (a interpretarse del
cladodio para el caso de interés). Ambas condiciones conllevan a una
concentración de los metabolitos en los jugos celulares de los tejidos vegetales.
Fundamentado en esto, se efectúo la extracción del hidrocoloide en cladodios de
diferentes edades de la misma especie ficus indica, esperando verificar que
aquellos de mayor edad aportaran un porcentaje mayor de extracción.
b) Irrigación durante el desarrollo del cultivo de nopal: Existen reportes que hacen
aseveraciones sobre la relación del contenido de humedad en las plantas y la
concentración de metabolitos, por ejemplo Ruiz (1974). Este autor cita también,
que los vegetales que presentan mayor dificultad para la evaporación de agua y
mayor retención energética de la misma (es decir menor transpiración) contienen
un jugo celular rico en vacuolas con abundancia de glúcidos, mucílagos, grasas,
gomas y cristaloides. Con estos argumentos y con base a los resultados para
cladodios cultivados de la misma especie y variedad en condiciones de riego
diferente, se propone que un cultivo de nopal (Opuntia sp.) con escaso riego
durante su desarrollo, disminuye su tasa de transpiración respecto a otro con
abundancia de agua y por tanto concentre metabolitos como puede ser el caso
del mucilago.
64
más documentada (Bravo, 1978; Muñoz et al., 1996; Goldstein y Nobel, 1991; Barros y
Buen rostro, Zambrano et al, 1998; 1999; Malaine et al., 2003).
Las Opuntias almacenan alto contenido de agua en sus tallos modificados (cladodios),
de aquí que se les denomine también plantas suculentas (Bravo y Scheinvar, 1999).
Barros y Buenrostro (1999), han demostrado que las partes jóvenes y en proceso de
desarrollo de las Opuntias (brotes), pueden contener de 90 a 95 % de agua, valores por
arriba de los determinados para otras partes o tejidos ya diferenciados. Más aún ciertos
tejidos al envejecer se endurecen proporcionando la rigidez estructural, creando el
soporte que la planta necesita y por lo tanto el contenido de agua se minimiza.
El contenido de agua para varias frutas y verduras, ha sido reportado en las tablas de
valor nutritivo de los alimentos del Instituto Nacional de Nutrición Salvador Zubirán
(Muñoz et al., 1996) y se citan algunos valores en la Tabla 16.
65
Tabla 16
Contenido de agua en frutas y verduras
Fruta o verdura Contenido de agua (%)
Lechuga romana 96.00
Pepino 95.20
Jitomate 94.60
Sandía 91.50
Tuna 91.00
Nopal 90.10
Cebolla 90.00
Jícama 89.10
Chayote sin espinas 85.00
Xoconostle 86.30
Papa 81.20
Muñoz et al., 1996
66
Muñoz et al. (1996) en su tabla de valor nutritivo de los alimentos reporta un valor de
0.30 % BFN para la misma especie en edad verdura.
Los constituyentes principales de la fracción grasa en cladodios de nopal son los ácidos
orgánicos. Se ha citado al ácido oxálico como el más abundante para el caso de
cladodios viejos en las Opuntias, el cual se encuentra precipitado en forma de sal de
calcio y llega a ocupar hasta el 85 % de las cenizas totales (Malaine et al., 2003).
67
estos constituyentes, en este trabajo se tuvieron limitaciones técnicas por lo que solo se
reporta la diferencia al 100 % de composición.
Los azúcares solubles o azúcares reductores directos (ARD) para la Opuntia spinulifera
presentaron un valor (1.34 %), el cual es comparable con lo estimado por Chávez (1953,
citado por Bravo, 1978) en la especie Opuntia megacantha, quien reportó un valor de
3.93 % BF de nopal verdura; en ese mismo trabajo los azúcares totales fueron
determinados con un valor de 28.44 %. La interpretación del bajo contenido de azúcares
reductores o solubles es que existe poca cantidad de carbohidratos solubles en
contraparte con los de elevado peso molecular.
68
Respecto a la determinación de cenizas en el parénquima medular de Opuntia
spinulifera (15.04 %), se concluye que este tejido concentra 21.73 % del total de los
minerales y aniones del cladodio. Actualmente, la explicación fisiológica de la
presencia de este abundante contenido mineral, en el parénquima, aun no se conoce. Sin
embargo, se puede argumentar en términos de la función de almacenamiento de agua
para el parénquima, debe participar de las funciones de transporte de la misma, las
cuales implican también el movimiento de los iones (Amin et al., 1970).
Por otra parte de las determinaciones correspondientes (contenido de nitrógeno y
extracto etéreo), se concluye que este tejido presenta pobre contenido de proteínas y
grasas en este tejido diferencial.
Las especies de Opuntias reportadas para el estudio del hidrocoloide en cladodio han
sido dillenii, cholla, tomentosa, ficus indica, streptacantha (Amin, et al., 1970;
Srivastava y Pande, 1974; Moyna y Tubio, 1977; Smestad y Steinar, 1979;
Trachtenberg y Mayer, 1981b, 1982b; McGarvie y Parolis, 1979; 1981; Cárdenas et al.,
1998a, b; Goldstein et al., 1991; Medina et al., 2000; Majdoub, et al., 2001a, b), en
general el rango de los valores de extracción está entre 0.012 y 1.67 % en base a
producto fresco, empleando diferentes métodos.
Los valores porcentuales de extracción del hidrocoloide en todos los casos deben
reflejar un efecto complejo multifactorial debido a la especie, condiciones de desarrollo
del cultivo de la planta (temperatura, irrigación y nutrientes), o desarrollo (del ciclo de
vida de la planta y edad propia del cladodio), así como el método extractivo. Por lo que
69
las atribuciones de los efectos para cada factor son poco claras. Adicional a esta
complejidad, se tienen serias omisiones en la literatura sobre características útiles de las
Opuntias investigadas como contenido de agua en el tejido vegetal, edad del cladodio,
especie estudiada, condiciones de desarrollo de la planta básicamente en irrigación
(cultivada o silvestre), etapa del ciclo de desarrollo (floración, fructificación), lo cual
hace más difícil realizar comparaciones.
70
estrategia exitosa la propuesta de esta metodología “método-materia prima” para la
extracción del hidrocoloide en cladodios de Opuntias.
71
en él; por lo que resulta interesante investigar de manera individual los principales
minerales presentes en este residuo para establecer las formas tentativas de sales de
hidrocoloide prevalecientes.
La fracción grasa del hidrocoloide, se puede considerar a nivel de trazas(0.05 %), o bien
ser parte de los contaminantes obligados con el método de extracción poco selectivo.
Mientras que la presencia de proteínas no puede ser considerada como contaminante por
el valor determinado y verificado con 2 métodos ( Kjeldahl 9.23 % proteína cruda y
Bradford 6.30 % ambos BS).
Los carbohidratos de tipo soluble (ARD) en el hidrocoloide son escasos (0.16 % BS), es
decir la abundancia favorece a los no reductores o de alto peso molecular. Los azúcares
no reductores exclusivamente son los que presentan traslocación durante la
fotoasimilación del floema en vegetales, al parecer ésta es consecuencia de su gran
estabilidad química, de allí que su contenido sea elevado en este tipo de tejido que
funciona como reserva energética (Hopkins y Hüner, 2004). Es notable el menor
72
contenido de los azúcares reductores directos en el hidrocoloide de Opuntia. spinulifera,
respecto a su cladodio completo y parénquima medular, lo que conlleva por lo tanto a
un mayor contenido de la fracción de no reductores, sugiriendo con ello que el
hidrocoloide debe presentar una intensa actividad de traslocación de azúcares en el
parénquima del cladodio, confirmando su función de reservorio energético.
73
HPLC.El parámetro indicador del avance de hidrólisis fue cuantificar ARD según
metodología de Miller (1959).
Con el resultado obtenido de los 180 min necesarios para la hidrólisis química ácida
total del hidrocoloide de Opuntia spinulifera y las condiciones de reacción (ácido
trifluoroacético al 0.5M), se demuestra lo lábiles o frágiles que son las estructuras
presentes en el hidrocoloide (mezcla de compuestos) frente al carácter ácido, pues para
el correspondiente en Opuntia ficus indica, McGarvie y Parolis (1979) han utilizado un
tiempo muy superior (16 h) a la misma temperatura, incluso con una concentración
mayor de un ácido más fuerte (H2SO4 0.5 M); de manera similar Medina et al., (2000)
emplean 1 M de H2SO4 durante 24 h a 80 oC, para lograr el mismo resultado de
hidrólisis total, sin embargo, los anteriores autores no presentan cinética para justificar
el tiempo requerido, pudiendo ser el valor utilizado en extremo.
Tal vez esto tenga sentido sobre las condiciones limitadas o estrés nutricional del
desarrollo de la planta por ejemplo en Opuntia spinulifera silvestre colectada de su
hábitat natural semiárido, donde la economía o regulación energética suceda a base de
un mucílago o hidrocoloide (debido a su función de reserva energética) con poca
resistencia a la hidrólisis y cuyos enlaces glicosódicos sean lábiles al calor y pH para
mantener un sistema eficiente en cuanto a la disponibilidad, no obstaculizando el
abastecimiento de energía, en contra parte con lo que puede presentarse en un cultivo
con desarrollo óptimo (Opuntia ficus indica cultivada).
74
Además de los ácidos urónicos (galacturónico y glucurónico) identificados en general,
los posibles ácidos en el hidrocoloide de Opuntias responsables de la acidez, son los
orgánicos, acumulados en estas plantas a consecuencia de un metabolismo ácido
crasuláceo (Goldstein et al., 1991; Granados y Castañeda, 1991). Entre ellos se
describen a los ácidos ascórbico (azúcar ácido) y deshidroascórbico en Opuntia
vulgaris; málico y succínico en Opuntia dillenii; y cítrico y piscídico en Opuntia ficus
indica (Meyer y McLaughlin, 1981, citados en la obra de Granados y Castañeda, 1991).
75
De acuerdo a los resultados obtenidos se puede considerar la existencia de un tipo de
grupo ionizable, éste puede ser el carboxilo de ácidos urónicos disponible o libre para la
titulación, además éste puede estar en una posición (entorno configuracional)
extremadamente constante en todas las moléculas que estén presentes (las más
pequeñas, más grandes y/o con diferente composición) para garantizar que las
diferencias entre las Ka de todas las moléculas, fueran insignificantes y que en el
momento de ocurrir la disociación protónica la mezcla (hidrocoloide) se comporte como
una sola especie ácida, con un solo grupo ionizable, dando un único valor de Ka como
se aprecia en la Figura 12.
76
dicha velocidad, se establece que este biopolímero se comporta como un fluido
pseudoplástico o reofluidificante (Steffe, 1996; Núñez et al., 2001; Díaz et al., 2004).
77
utilizados para representar el comportamiento del flujo de fluidos no-Newtonianos
(Steffe, 1996).
ap=(o)/(1{KC*}2)N) (1)
Donde:
ap = viscosidad aparente
o = viscosidad inicial
= viscosidad límite
N = índice de comportamiento al flujo
K = índice de consistencia
= velocidad de cizalla
ap=(o)/(1KBC*M) (2)
78
calculada de acuerdo al modelo de Cross para el caso particular de la concentración al
3.0 % y 0.2 s1 de velocidad de cizalla fue de 1100 Pa.s. Mientras que Cárdenas et al.
(1997) empleando este mismo modelo para las curvas de viscosidad del hidrocoloide de
Opuntia ficus indica a diferentes concentraciones (5.8 a 0.5 %), determinan cerca de
300 Pa.s como el máximo valor para la viscosidad cuando la concentración de la
dispersión fue de 5.8 % y una velocidad de cizalla (0.2 s-1).
Se tiene una fuerte tendencia que a mayor concentración, mayor agregación (Cárdenas
et al., 1997). Esto debe tomarse en cuenta si se desea considerar usos en la industria,
para cuando se prefieren viscosidades extremas o no.
79
Se observó que el hidrocoloide de Opuntia spinulifera tuvo el mismo comportamiento
pseudoplástico presentado por xantana; mientras que la pectina cítrica presentó un
comportamiento Newtoniano y exhibió viscosidades en tres órdenes de magnitud
inferiores (7.5 Pa.s) a las de xantana (17,034.7 Pa.s) e hidrocoloide de Opuntia
spinulifera (12,241.6 Pa.s). Respecto al hidrocoloide de Opuntia ficus indica verdura,
sus valores de viscosidad son inferiores a los alcanzados para dispersiones de Opuntia
spinulifera o bien xantana, cuando se comparó a la misma o mayor concentración.
Xantana es una goma utilizada como aditivo, gracias a sus altas viscosidades en
disoluciones, por lo tanto el hidrocoloide de Opuntia spinulifera al obtener valores
cercanos a los de xantana puede presentar el mismo potencial de uso que dicha goma
comercial.
80
Medina et al. (2000) por su parte, han realizado curvas de viscosidad en función del pH
para el hidrocoloide de Opuntia ficus indica en dispersiones al 5.0 % (p/p) y han
determinado una dependencia de la viscosidad con el pH, no lineal de tipo sigmoidal,
siendo que a mayor pH mayor viscosidad. Justifican este efecto al suponer que, se están
ionizando los grupos carboxilos del hidrocoloide a un pH mayor de 7 por lo que los
carboxilatos deben ser los responsables del incremento en viscosidad. En este caso se
puede suponer una conformación del hidrocoloide de Opuntia ficus indica diferente al
de Opuntia spinulifera, por sus grupos ionizables más expuestos.
81
una temperatura específica; para efectuar este cálculo generalmente se emplea la
ecuación de Arrhenius (3),
K=Ae-Ea/RT (3)
Donde,
A = constante, físicamente se asocia a la viscosidad inicial (o)
R = constante ideal de los gases
K = valor de la viscosidad aparente
T = temperatura absoluta
82
Como parte de las aportaciones de este trabajo, se realizó un ajuste matemático
adicional para contrastar con la ecuación de Arrhenius, para el comportamiento no
Newtoniano de tipo pseudoplástico del hidrocoloide de Opuntia spinulifera.
= A + Be^(C/RT) (4)
con una aproximación de r2 = 0.9548; esto se aprecia en la Figura 20, donde también se
anexa una buena aproximación a una función polinomial más simple (segundo orden).
4400
4200
Lineal
Lorentz
4000 Exponencial de crcimiento
viscosidad (Pa.s)
3800
3600
3400
3200
3000
0.0030 0.0031 0.0032 0.0033 0.0034 0.0035
1/T (1/K)
83
Es apreciable que a diferencia de la ecuación de Arrhenius en la que la E a se calcula en
base a la pendiente (constante), para el caso particular de la ecuación de Lorentz no se
puede definir un solo valor de E a , dado que a cada par de coordenadas (1/T, In )
Nuevamente es útil considerar a la goma xantana que se distingue de otras gomas de uso
en alimentos por mostrar gran estabilidad en su viscosidad respecto a la temperatura
(Kang y Pettitt, 1983; Rajinder, 1995).
Esta propiedad se atribuye una vez más a su estructura bastante estable, cuya
conformación presenta alineamiento estrecho de las cadenas laterales al esqueleto de -
1,4-glucana, dando una rígida conformación molecular que parece permitir un alto
grado de interacciones entre las cadenas del biopolímero y manifestando por
consiguiente su alta estabilidad al calor y condiciones ácidas y/o básicas (Glicksman,
1982). Aunque no se tienen suficientes argumentos para evidenciar la o las estructuras
del hidrocoloide de Opuntia spinulifera, es claro que resulta útil y pertinente considerar
los avances que se tienen en la estructura de xantana, dadas las similitudes encontradas
en este trabajo para el comportamiento físico del hidrocoloide, sugiriéndose como una
buena referencia.
84
La fuerza iónica (I) expresada por la ecuación (6), es una medida de la concentración de
las cargas eléctricas y del número existente de éstas, aportados por una sal al medio
(Voet y Voet, 1995).
I= ½(mq) (6)
Entre los cationes estudiados se diferenciaron dos grupos de efectores, los efectores de
decremento e incremento. En el primer grupo están los cationes divalentes Fe+2 y Cu+2,
que mostraron disminución de 62.6 y 28.1 % de la viscosidad del hidrocoloide de
Opuntia spinulifera (respecto al control sin iones) respectivamente, para una velocidad
de cizalla de 126 s-1; sin embargo, Ca+2 que también es divalente mostró un ligero
incremento de la viscosidad de 10.0 %, comportándose de igual manera que el otro
grupo de iones (efectores de incremento).
Las explicaciones basadas en el efecto del radio iónico para los cambios de viscosidad,
no logran integrar los dos efectos, pues K+ y Ca+2 con radio diferente logran aumentar la
viscosidad en igual magnitud. El número de cargas soportadas en el ión tampoco aclara
en la totalidad tales efectos, pues mientras Ca+2 aumenta la viscosidad (10 %), Fe+2 y
Cu+2 la disminuyen significativamente (62.6 y 28.1 %). Fe+2 y Cu+2 pueden estar
interactuando con las especies del hidrocoloide, adelgazando el sistema
(reofluidificación).
85
La explicación más lógica puede estar en términos de los electrones de enlaces de
valencia. Así Na+, K+ y Ca+2 con orbitales “s” para sus electrones de valencia, pueden
tener interacciones o enlaces a este nivel con el hidrocoloide y explicar el espesamiento
que manifiesta el sistema (tal vez, desenmarañándolo, disgregándolo, dispersándolo o
liberándolo de sí mismo, a cadenas libres), mientras Fe+2 y Cu+2 con electrones de
valencia en orbitales “d” establece enlaces o interacciones con el hidrocoloide para dar
el efecto de adelgazamiento (quizás ayudando a enrollarse en sí mismo). Este enfoque
en la actualidad no ha sido reportado en la literatura y merece investigación minuciosa
posterior.
Sin embargo, una afirmación válida que se desprende para el hidrocoloide de Opuntia
spinulifera es que se trata de un polielectrolito de carga negativa, dadas las
modificaciones de la viscosidad frente a los cationes. Esto esta en acuerdo con lo
sugerido por Medina et al. (2000) para el hidrocoloide de Opuntia ficus indica, quienes
encuentran un efecto común de incrementar la viscosidad con los cationes Na+, K+, Ca+2
y Mg+2, siendo los divalentes los de mayor efecto.
86
cual se interpreta como menor presencia de interacciones intermoleculares que para el
caso del agua pura, (Lissant, 1974).
El agua disponible puede modificar las propiedades reológicas y de textura, así como
las reacciones químicas, enzimáticas y microbiológicas de un alimento las cuales
pueden ser la causa principal de deterioro. La actividad de agua (a w), es el término que
se utiliza para referirse al agua libre (o congelable) y con base a su valor se puede
predecir la estabilidad del producto o sustancia que se analiza. La aw, se define como la
relación de la presión de vapor en equilibrio de la muestra (P), dividida entre la presión
de vapor en el equilibrio del agua pura (Po) a la misma temperatura y presenta valores
de cero a uno. La humedad relativa en equilibrio (HRE) es un parámetro muy recurrente
que se relaciona con la aw en la expresión (7),
Muchos hidrómetros registran HRE para la determinación de la aw. Los alimentos secos
generalmente no corren riesgo fácilmente de deteriorarse por crecimiento de
microorganismos, pues presentan valores bajos de aw (<0.6). Para el hidrocoloide de
Opuntia spinulifera, su aw determinada (aw es de 0.463), está por abajo (27.3 %) del
crítico para el desarrollo de microorganismos, por lo que se concluye que la harina
obtenida del hidrocoloide de Opuntia spinulifera es potencialmente estable frente a la
actividad microbiana del ambiente y por tanto fue suficiente haberla almacenado en un
desecador por más de un año.
87
V.- PROPUESTA
88
VI. CONCLUSIONES
OTRAS APORTACIONES
1.- Establecimiento de un método de extracción para el hidrocoloide de cladodio de
Opuntia spinulifera eficaz (13.47 %), sencillo (molienda, extracción y precipitación) y
limpio (se utiliza solo un solvente de amplio uso en alimentos).
2.- Obtención de evidencias para la naturaleza química del hidrocoloide en su categoría
molecular, de lo cual se desprende la propuesta de una nueva denominación,
“hidrocoloide ácido no péctico” que precisa la identidad diferente con las pectinas
propias del mismo vegetal.
3.- Caracterización en la reología estática de dispersiones del hidrocoloide de cladodio
diferenciado de la Opuntia spinulifera y comparación con la goma industrial xantana,
respecto a la viscosidad equiparable, así como el análisis comentado del
comportamiento reológico y estructural entre ambos.
En la investigación mundial de las Opuntias, parénquima medular e hidrocoloide ácido
no péctico de cladodio las contribuciones son, los análisis químicos proximales de la
Opuntia spinulifera, parénquima medular de Opuntias e hidrocoloide de Opuntia.
89
VII. BIBLIOGRAFÍA
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