Práctica 8. 2018-2
Práctica 8. 2018-2
Práctica 8. 2018-2
PRÁCTICA 8
PRUEBAS CRUZADAS
I. INTRODUCCIÓN
I INMUNOLÓGICAS
1. No hemolíticas Ab anti-HLA preformados
Inmediatas: sistemas ABO
2. Hemolíticas
Tardías: sistemas Rh, Kidd y Duffy
II METABÓLICAS
1. Toxicidad por citrato 4. Hipercalcemia
2. Hipotermia 5. Hemorragia por efecto dilucional
3. Sobrecarga circulatoria
III INFECCIOSAS
1. Hepatitis viral 5. Paludismo
2. HIV 6. Tripanosomiasis
3. Sífilis 7. Otras
4. Otras virosis
Un requisito indispensable, entre otros, para una adecuada transfusión son las pruebas de
compatibilidad. Estas se realizan haciendo mezcla de eritrocitos y suero entre donador y
receptor, con el fin de detectar una posible reacción Ag–Ab, la cual en caso de ser
positiva, indica una incompatibilidad.
Si una persona del grupo sanguíneo A (receptor) recibe una transfusión de eritrocitos del
grupo B (donador), experimenta una reacción pos transfusional en la que los Ab´s anti-
B del receptor se fijan en los eritrocitos del donador y se induce su lisis mediada por
complemento, provocando la liberación de hemoglobina (Hb) e inducción de inflamación
sistémica por la liberación de las anafilotoxinas C3a, C4a y C5a. Esta reacción es un
mecanismo de daño de hipersensibilidad tipo II (HS-II) mediada por activación de
complemento y/o citotoxicidad.
Las reacciones inmediatas y tardías comparten signos y síntomas como fiebre, diaforesis,
náuseas y aumento de las bilirrubinas. En cambio, la lisis intravascular produce Hb libre en
el plasma y en la orina, que es característico de las reacciones inmediatas.
Otros ejemplos de enfermedades con mecanismo de daño por HS-II citotóxica que
involucra antígenos eritrocitarios son la enfermedad hemolítica del recién nacido y las
anemias hemolíticas autoinmunitarias.
El paso inicial de la prueba cruzada se da en medio salino (solución salina), en este medio
los Ab´s que aglutinan son principalmente IgM. La segunda etapa se da en un medio
proteico (albúmina bovina), el cual favorece la detección de Ab clase IgG que reaccionan a
una temperatura de 37°C. De no observarse una reacción macroscópica se utiliza el suero
de Coombs para evidenciar una reacción microscópica. La prueba cruzada consta de los
siguientes pasos:
a) Prueba cruzada mayor: consiste en la mezcla del suero del receptor (Ab) con los
eritrocitos del donador (Ag). Esta prueba in vitro es fundamental, por ser la mejor
forma de detectar Ab´s fijadores de complemento contra los glóbulos rojos
transfundidos; la existencia de aglutinación o hemólisis indica que algún Ab del suero
del receptor se ha unido a los hematíes del donador, en este caso se afirma, que la
prueba cruzada es positiva indicando incompatibilidad. Cuando no hay aglutinación o
hemólisis significa que no hay anticuerpos en el suero del receptor, considerándose
compatible el hemoderivado.
b) Prueba cruzada menor: es la prueba, donde el suero del donador (Ab) se mezcla
con los eritrocitos del receptor (Ag); la incompatibilidad puede demostrarse in vitro
por aglutinación o hemólisis de los eritrocitos.
c) Autotestigo: c onsiste en la mezcla de suero (Ab) y eritrocitos (Ag) del receptor, es
útil para la identificación de autoanticuerpos o isoinmunización.
d) Prueba de Coombs: el reactivo de Coombs es un suero con Ab anti-IgG o anti-C3d,
con este reactivo se puede evidenciar la presencia de microaglutinaciones no
perceptibles a simple vista.
Al término de las pruebas de compatibilidad se establece el resultado que puede ser:
• Compatible: sólo cuando en las pruebas cruzadas del paquete eritrocitario o
plasma, no se observe aglutinación o hemólisis en las pruebas rápidas,
atemperadas a 37ºC y d e Coombs, se considera que se puede transfundir el
hemoderivado.
• Incompatible: cuando las pruebas cruzadas del paquete eritrocitario o plasma
presentan, aglutinación o hemólisis en las pruebas rápidas, atemperadas a
37ºC y de Coombs, el hemoderivado es incompatible y esto es una contraindicación
para su transfusión.
II. OBJETIVOS
IV. PROCEDIMIENTO
Prueba Directa
Anti-D RESULTADO
Suero Anti-
A B AB AT Rh Grupo Factor Rh
Grupo sanguíneo y Rh
Donante de elección
Donante alternativo
PMs PMa pms pma PMs PMa pms pma ATs ATa
ER 1 1 1 1 1 1
SR 1 1 1 1 1 1
EDE 1 1
SDE 1 1
EDA 1 1
SDA 1 1
PRUEBAS RÁPIDAS
10. Agitar los tubos y centrifugar a 1,500 rpm durante un minuto.
11. Resuspender la muestra e interpretar el resultado. Descartar los tubos en donde
haya observado aglutinación.
12. Reportar los resultados en la tabla 6.
PRUEBA DE COOMBS
16. Lavar los eritrocitos adicionando a los tubos 2 mL de SSI.
17. Centrifugar a 1500 rpm durante un minuto.
18. Decantar el sobrenadante y resuspender el botón celular
19. Adicionar 2 gotas del suero de Coombs.
20. Agitar y centrifugar a 1500 rpm durante un minuto.
21. Observar si existe o no aglutinación, interpretar y reportar sus resultados en la
tabla 6
22. Concluir sus resultados en la tabla 7.
V. RESULTADOS
Pruebas rápidas
Pruebas atemperadas a
37ºC
Prueba de Coombs
VII. BIBLIOGRAFÍA
1. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993. Para la disposición de sangre
humana y sus componentes con fines terapéuticos.
2. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-017-SSA-1993. De los reactivos
hemoclasificadores para determinar grupos del Sistema ABO.
3. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-018-SSA-1993. Del reactivo anti-Rh para
identificar el antígeno D.
4. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-019-SSA-1993. Del reactivo de Coombs
antiglobulina humana.
5. Beutler, E. Preservation and clinical use of erythrocytes and whole blood. Ed.
Williams Hematology. 2001. Sixth Ed. Editores: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps
TJ, SeligsohnU. Ed. McGraw Hill.pp.1879-1892.
6. Calhoun L, Petz LD. Erythrocyte antigens and antibodies. En Williams Hematology.
2 0 0 1 . Sixth Ed. Editores: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps TJ, Seligsohn
U. Ed. McGraw Hill. 1843-1858 p.
7. Jaime Pérez, JC., Gómez Almaguer, D. Hematología: la sangre y sus enfermedades. 3ª
ed. México: McGraw-Hill-Interamericana., 2012. 338 p. ISBN: 978-607-15-0748-8
8. Parham P. El sistema inmune. 4ª ed. México: Manual Moderno., 2016. 600 p. ISBN:
9786074485646.