UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PATAGONIA SAN JUAN BOSCO

Facultad de Ciencias Naturales

Dpto. Biologa General
BOTANICA GENERAL

Alumno/a:.................................
Fecha: ......................................

MICROSCOPIA
Trabajo Prctico N 2

Objetivos:
- Reconocer el material ptico a utilizar.
- Adquirir la capacidad adecuada para dibujar, ordenar e interpretar lo observado.

Palabras clave: lupa, microscopio ptico, poder de resolucin, microscopios electrnicos de barrido y de
transmisin, dimensiones, unidades.

ACTIVIDAD N 1
En la siguiente figura, identifica cada una de las partes que componen al Microscopio ptico, colocando los
correspondientes nombres.
MICROSCOPIO PTICO

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Componentes del Microscopio ptico y sus funciones.

Lente Ocular Lente ubicada cerca de los ojos del observador, Aumenta
el tamao del objeto, generalmente es de 10x.
Parte ptica Lente objetivo Lente ubicado cerca del preparado, aumentan el
tamao del objeto, se encuentran generalmente 4 lentes
de: 4x, 10x, 40x y 100x.
Condensador Lente que concentra los rayos luminosos sobre el
preparado.
Sistema de
Diafragma Regula la cantidad de luz que entra por el condensador.
iluminacin
Fuente de luz Encargado de iluminar el preparado, llevando la imagen
hasta el lente ocular.
Base o Pie Es la base del MO y all se encuentra el sistema de
iluminacin.
Columna o Continua a la base y sobre l se encuentran los tornillos de
Brazo enfoque.
Cabezal o Parte superior del Microscopio ptico donde se ubican las
Cuerpo lentes oculares.
Platina Base plana, con un orificio, sobre el cual se ubica el
preparado. Posee unos tornillos que permiten el
Parte desplazamiento del preparado hacia los costados y hacia
Mecnica adelante y atrs.
Revolver Dispositivo donde se disponen las lentes objetivo. Permite
al girarlo cambiar los lentes objetivos.
Tornillo Tornillo ubicado al costado de la columna, con el cual se
macromtrico desplaza verticalmente la platina, logrando un enfoque
rpido.
Tornillo Tornillo ubicado al costado de la columna, con el cual se
micromtrico desplaza verticalmente la platina, mediante un
movimiento casi imperceptible; para lograr el enfoque
exacto.

ACTIVIDAD N 2
Analice las siguientes imgenes y teniendo en cuenta el fundamento terico dado, complete:

Fig.1 Fig.2

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a. Cul de ellas resulta ms completa?. Fundamente.
b. Qu material ptico fue utilizado?

ACTIVIDAD N 3
Segn el soporte terico dado:

1. Observe las figuras que a continuacin se le presentan.

2. Reflexione.
3. Compare y determine en el espacio previsto, si las mismas corresponden a la observacin con:
- MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO (M.E.B.)
- MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (M.E.T.)
- MICROSCOPIO PTICO (M.O.)
4. Fundamente en cada caso

. .. ........
. . .
. . ..
. . ..

ACTIVIDAD N 4:
Prctica de enfoque:
Antes de emplear el microscopio ptico lea las siguientes recomendaciones:
a. Comience siempre las observaciones con el lente objetivo de aumento menor (Fig.3). Esto le dar una
visin integral del preparado y le permitir seleccionar las mejores reas y las de especial inters, que
luego observara con mayor aumento (Fig.4).
b. La iluminacin debe ser homognea y de buena intensidad, pero no excesiva.
c. Nunca acerque el lente objetivo al preparado si no est mirando por el costado del microscopio. As
evitara la destruccin de muestras y lentes.
d. Siempre que haga una observacin ajuste el enfoque con el tornillo micromtrico. Aunque el preparado
haya sido enfocado por el operador ms hbil, es usual que haya diferencias con respecto a otro
observador.
e. Recuerde que el microscopio ptico proporciona imgenes invertidas del objeto. Cuando un detalle se
encuentra a la derecha del preparado, debe mover la platina hacia la izquierda y si est arriba, debe
moverla hacia abajo (y a la inversa).
f. Haga siempre un dibujo de la observacin (Ver instrucciones para dibujar). Dibuje pocas clulas, en
forma esquemtica y respetando las relaciones de tamao entre los distintos componentes que visualice.
El esquema debe ser grande y claro. Evite sobrecargar en detalles de cuyo origen no est seguro. Es

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 preferible que no se registre alguna estructura, a que oscurezca su interpretacin especificando grumos
de colorante, burbuja de aire u otras imperfecciones del preparado

Fig. 3. Catfila de cebolla 40X Fig. 4. Catfila de cebolla 100X

INSTRUCCIONES PARA DIBUJAR

Se exige un buen dibujo para:
- realizar una buena observacin
- poder ser corregido por otra persona
- dejar un registro de la observacin realizada y que pueda ser consultado con posterioridad.

1. Antes de realizar los dibujos, observar bien los preparados e interpretar.

2. Dibujar con lpiz negro en un slo lado de la hoja (blanca tamao oficio).
3. Completar los datos requeridos, en tinta.
4. Dejar un margen de 2 cm. por lo menos sobre el margen izquierdo para poder encarpetarlo.
5. Titular los dibujos y colocar el aumento con que se trabaj.
* No llenar la hoja con dibujos, dejar espacios que faciliten la comprensin.
6. Resolver las conclusiones que cada trabajo prctico requiera, con la ayuda de bibliografa.

Dibujo realizado utilizando un aumento total de 100x (Fig. 4)

Pared celular

Ncleo

100X

Procedimiento para el enfoque de preparados histolgicos:

1. Encender la fuente de luz, para que el campo ptico quede iluminado.
2. Colocar el preparado sobre la platina sujetndolo con las pinzas.
3. Ubicar el lente objetivo de menor aumento en posicin de observacin, es decir, por encima del
preparado.
4. Subir la platina haciendo girar el tornillo macromtrico, mientras controlas que se acerque al lente
objetivo, sin tocarlo.
5. Mirar por los lentes oculares y bajar lentamente la platina con el tronillo macromtrico hasta observar el
preparado, mover lentamente el tornillo micromtrico hasta lograr una imagen ntida.
6. Para observar la misma imagen con mayor aumento, bajar la platina con el tornillo macromtrico y
cambiar el lente objetivo haciendo girar el revlver.

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 7. Subir nuevamente la platina observando que el lente objetivo no toque al preparado, mirar por los lentes
oculares y proceder nuevamente a enfocar.
8. Al terminar de observar, bajar la platina, colocar el lente objetivo de menor aumento, retirar el
preparado y apagar la fuente de luz.

A- Materiales: - Agua estancada

Procedimiento
- Coloque una gota de agua estancada, en el centro del portaobjeto.
- Cubra con un cubreobjeto.
- Extraiga el excedente de agua con la ayuda de un papel absorbente.
- Observe con el menor aumento.
- Observe con el mayor aumento.
- Haga un esquema de lo observado.

B- Enfoque el material presentado (Preparado de Histologa vegetal)

- Esquematice

ACTIVIDAD N 5
- Enfoque el material presentado por la ctedra, en la lupa binocular.
- Realice el dibujo correspondiente.

ACTIVIDAD N 6
- En la columna de la izquierda figuran una serie de elementos.
En el espacio punteado aclare si la observacin de dicho objeto la realizara con:
(a) M.E.T. (b) M.E.B. (c) M.O. (d) LUPA

1) Detalle de la superficie celular ...........

2) Ojos de insectos ............
3) Ribosomas aislados ............
4) Partes florales de una flor ............
5) Estructura interna de una clula procarionte ............

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Anexo Terico: MICROSCOPIA
INTRODUCCIN:
La principal limitacin que presenta el estudio de las clulas y sus partes integrantes, es el
reducido tamao que poseen. Esta caracterstica dificulta tanto el anlisis a nivel de la estructura
como del funcionamiento celular. De acuerdo con determinaciones pticas, las clulas que pueden
ser observadas a simple vista son aquellas cuyo dimetro sea mayor a 0,1 mm., porque estn en el
lmite por debajo del cual un ojo normal en condiciones ptimas no alcanza a visualizar ni siquiera un
punto.
Las limitaciones determinaron que se recurriera a elementos pticos con el fin de magnificar la
imagen del objeto para su observacin.

A. INSTRUMENTOS OPTICOS

A.a. MICROSCOPIO PTICO

El MICROSCOPIO PTICO (del griego micro: pequeo y skopein: observar) es el instrumento que
sirve para visualizar estructuras pequeas, cuyas dimensiones son inferiores al lmite del poder de resolucin
del ojo humano. El poder de resolucin es la capacidad de poder separar 2 puntos muy prximos y dar de ellos
imgenes claras y definidas. El ojo humano tiene un poder de resolucin de 100 m (0,1mm) es decir que 2
puntos que se encuentran separados entre s por una distancia menor que 0,1 mm se ven como uno solo.

En sntesis, el microscopio acta como un separador de puntos. El poder de resolucin de un buen

microscopio ptico es aproximadamente igual a 0,2 m. Un microscopio ptico est formado por una parte
mecnica, una parte ptica y un sistema de iluminacin. La parte mecnica consta del pie, de la columna, de
la platina, de los tornillos macro y micromtricos, del revolver. El sistema ptico est formado por las lentes
oculares, las lentes objetivos.

Tanto los oculares como los objetivos

tienen distintos aumentos, siendo de 10X para los
oculares y de 4X, 10X, 40X y 100X, para los
objetivos; este ltimo objetivo es el llamado
objetivo de inmersin. El objetivo de inmersin
debe ser utilizado con aceite de cedro (por eso se
llama de inmersin", a diferencia con los otros
objetivos de menor aumento que utilizan aire, por
lo que se denominan objetivos "secos") y al
enfocar la imagen la lente frontal del objetivo esta
casi tocando el cubreobjeto, a diferencia de los
otros objetivos donde las distancia frontal es
mayor.
Debajo de la platina se encuentra el
sistema de iluminacin: la lmpara, el diafragma y
el condensador.

La imagen se forma debido a los rayos

luminosos provenientes de la lmpara que
atraviesa el diafragma, llegan al condensador que
los concentra y proyecta sobre el objeto a
observar a travs de la abertura de la platina. El
objetivo recoge estos haces y proyecta una
imagen aumentada, real e invertida que se forma
dentro del tubo la cual es captada por la lente
ocular y finalmente se forma en la retina del
observador la imagen del objeto de estudio.
El lmite de resolucin del microscopio es
la distancia mnima a partir de la cual ya no es
posible distinguir la separacin entre 2 puntos.

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A.b. MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (M.E.T.)

El M.E.T. es el nico instrumento que permite conocer directamente la ultraestructura biolgica ya que
posee un poder de resolucin mucho mayor que el M.O. Utiliza como fuente luminosa un haz de electrones.
El poder de resolucin es tan alto que la imagen del objeto puede aumentarse muchsimo. Actualmente
se logran resoluciones hasta 1,4 y se obtienen aumentos entre 750.000 y 1.000.000.

A.c. MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO (M.E.B.)

Su utilidad es semejante a la de la lupa pero muy superior en cuanto a poder de resolucin,

profundidad de campo y magnificacin de la imagen. Permite la observacin y el anlisis de superficies por
medio de imgenes que se obtienen mediante un sistema ptico electrnico. La visualizacin de las
imgenes es en una pantalla de TV o a travs de fotografas.

CUADRO COMPARATIVO ENTRE EL M.O. Y EL M.E.

MICROSCOPIO OPTICO MICROSCOPIO ELECTRONICO

Fuente luminosa Rayos luminosos (haz natural o Haz de electrones
artificial )
Preparado Material biolgico entre porta y Material biolgico ultrafino sobre
cubreobjeto una grilla
Condensador, Sistema de lentes de cristal Bobinas electromagnticas
objetivo, ocular (generan campos magnticos)
Imagen Se ve directamente a travs del Se v en una pantalla o en una
ocular placa fotogrfica
Entre las estructuras Aire Vaco
hay
Obtencin de la pieza 2 cm. de lado y 4-5 cm. de ancho No ms de 1 mm. de ancho

Fijacin F.A.A. Glutaraldehido y/o tetrxido de

osmio
Inclusin Parafina Resinas de Epoxi

Corte Micrtomos (cortes de un espesor Ultramicrtomo (cortes de 0,1 a

de 2 a 15 m.). Se utilizan 0,02 m). Se utilizan cuchillas de
cuchillas de acero diamante o cristal.
Montaje Portaobjeto de vidrio Grilla de cobre

Coloracin Colorantes naturales o sintticos. No existe coloracin. Es un

mtodo de contraste con metales
pesados.
Condicin del material Vivo o muerto Muerto.
biolgico

A.d. LUPA - MICROSCOPIO ESTEREOSCOPICO

Se emplea para objetos macroscpicos. No invierte la imagen. Puede usarse para objetos opacos
que no vayan montados sobre portaobjetos. Siempre que se estudia un objeto determinado debe hacerse
en forma progresiva desde lo macroscpico a lo microscpico; es decir primero a simple vista, luego con
lupa o con microscopio ptico y finalmente si es necesario con microscopio electrnico.
Con la lupa slo se observan superficies, sta permite una visin tridimensional de los objetos y la
diferenciacin de sus colores, pero no se obtienen aumentos mayores de 100 m.

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ESCALA LOGARTMICA DE LAS DIMENSIONES MICROSCPICAS

Cada divisin principal representa un tamao diez veces menor que la precedente. A la izquierda se indica
la posicin de las diferentes longitudes de onda del espectro electromagntico y los lmites del ojo humano,
la luz y el microscopio electrnico. A la derecha se da el tamao de diferentes clulas y tomos (segn De
Robertis y otros, 1977).

UNIDADES DE USO CORRIENTE EN MICROSCOPA

FACTOR PREFIJO ABREVIATURA

10 -3 mili mm
10 -6 micro m
10 -9 nano nm

Equivalencias en el sistema mtrico para longitud

1n= 101 dm = 102 cm = 103 mm = 106 m = 109 nm = 1010
1 dm = 10 cm = 102 mm = 105 m = 108 nm = 109
1 cm = 10 mm = 104 m = 107 nm = 108
1 mm = 103 m = 106 nm = 107
1 m = 103 nm = 104
1nm = 10

Inversamente:
1 = 0.1 nm (10-1nm) = 10-4 m = 10-7 mm = 10-10 m
1 nm = 10-3 m = 10-6 mm = 10-9 m
1 m = 10-3 mm = 10-6 m
-3
1 mm = 10 m

BIBLIOGRAFIA
- Castro R. C. et al. Actualizaciones en Biologa. 1.983. Ed. EUDEBA
- www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm

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