Este documento presenta los objetivos y resultados de un trabajo práctico sobre el ciclo celular y la mitosis. El primer objetivo fue observar las distintas fases de la mitosis en células de raíces de ajo teñidas. El segundo objetivo fue determinar la concentración de proteínas en diferentes soluciones usando el método de Bradford. Se describen las observaciones microscópicas realizadas y los resultados obtenidos en la determinación de proteínas se presentan en una tabla.
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Este documento presenta los objetivos y resultados de un trabajo práctico sobre el ciclo celular y la mitosis. El primer objetivo fue observar las distintas fases de la mitosis en células de raíces de ajo teñidas. El segundo objetivo fue determinar la concentración de proteínas en diferentes soluciones usando el método de Bradford. Se describen las observaciones microscópicas realizadas y los resultados obtenidos en la determinación de proteínas se presentan en una tabla.
Este documento presenta los objetivos y resultados de un trabajo práctico sobre el ciclo celular y la mitosis. El primer objetivo fue observar las distintas fases de la mitosis en células de raíces de ajo teñidas. El segundo objetivo fue determinar la concentración de proteínas en diferentes soluciones usando el método de Bradford. Se describen las observaciones microscópicas realizadas y los resultados obtenidos en la determinación de proteínas se presentan en una tabla.
Este documento presenta los objetivos y resultados de un trabajo práctico sobre el ciclo celular y la mitosis. El primer objetivo fue observar las distintas fases de la mitosis en células de raíces de ajo teñidas. El segundo objetivo fue determinar la concentración de proteínas en diferentes soluciones usando el método de Bradford. Se describen las observaciones microscópicas realizadas y los resultados obtenidos en la determinación de proteínas se presentan en una tabla.
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Trabajo practico N5
Ciclo Celular y Mitosis
Determinacin de Concentracin de Protenas
Integrantes: Humberto Cuadra Andrea Bustos Valentina Cortinez Carrera: Lic. Biologa Fecha: 10/06/2014 Profesor: Julio Alcayaga
Introduccin
La caracterstica ms fundamental de las clulas y por lo tanto, tambin de los seres vivos es su capacidad de auto replicarse. Todas las clulas, ya sea en mayor o menos grado, utilizan una serie de mecanismos para reproducirse; donde de una clula parental nacen dos celular hijas exactamente iguales a su progenitora, las cuales deben crecer para duplicarse nuevamente. Estos procesos de crecimiento y divisin incluyen una serie de etapas bien definidas y ordenadas denominadas ciclo celular. Tanto las clulas progenitoras, como las clulas hijas, disponen de cierta carga gentica representada por molculas de ADN, lo que implica que para una divisin exitosa el material gentico o ADM debe duplicarse si o si en una de las etapa del ciclo. En la mayora de las clulas eucariontes el ciclo celular est divido en 4 faces conocidas como: Fase G1, S, G2 y M, esta ltima representa la mitosis la cual a su vez de divide en 4 procesos: Profase, Metafase, Anafase y Telofase, donde posterior a estas la clula pasa por la citocinesis para dar como resultado dos clulas hijas con contenidos genticos y citoplasmticos equivalentes.
Objetivos
En este trabajo prctico se pueden mencionar dos objetivos claros. El de la primera actividad es evidenciar el comportamiento cromosmico para reconocer las distintas fases de la mitosis. Y el de la segunda es manipular cuidadosamente distintas soluciones y determinar la concentracin de protenas en estas, aprendiendo de manera prctica los mtodos ms usados para este objetivo.
Actividad 1: Preparacin para observar clulas en mitosis
Observaciones:
Se tomaron 2 trozos de raicillas de ajo desde una solucin de metanol: cido acetifico y se depositaron dentro de una placa de Petri con solucin carnoy durante 6 minutos. Cumplido el tiempo se tomaron las raicillas de ajo y se depositaron sobre un porta objetos para aplicarles una tincin de orcina actica al 2% a una y azul de toluidina a la otra. Luego de esto, se puso el porta objetos sobre una plancha tibia por 15 min. donde se hidrataron con gotas de agua mientras se sacaba el exceso de tincin. Posteriormente las raicillas ya teidas fueron cubiertas con otro porta objetos y firmemente aplastadas para obtener una visin ntida con la menor cantidad posible de capas celulares. Se realiz luego, la observacin de las muestras al microscopio. Presentando las muestras de los tres estudiantes una visin no clara de clulas en mitosis, por encontrarse una gran cantidad de capas celulares. Sin embargo tomando una o dos muestras ntidas de otros grupos de estudiantes, se logr presenciar la metafase con los cromosomas situados al ecuador y la anafase con los cromosomas situados claramente en los polos.
Preguntas:
1) Explique brevemente las faces G0, G1, S, G2 y M del ciclo celular. Resp. G0: Es un periodo del ciclo celular donde las clulas permanecen en un estado quieto o de reposo y por lo tanto no dispone de divisin celular y se encuentra fuera de este ciclo. G1: Es la primera fase del ciclo celular, en la que existe crecimiento celular con sntesis de protenas y de ARN. Es el perodo que trascurre entre el fin de una mitosis y el inicio de la sntesis de ADN. S: Es la segunda fase del ciclo, en la que se produce la replicacin o sntesis del ADN, como resultado cada cromosoma se duplica y queda formado por dos cromtidas idnticas. G2: Es la segunda fase de crecimiento del ciclo celular en la que contina la sntesis de protenas y ARN. Al final de este perodo se observa al microscopio cambios en la estructura celular, que indican el principio de la divisin celular. Termina cuando los cromosomas empiezan a condensarse al inicio de la mitosis.
2) Qu entiende Ud. Por checkpoint durante el ciclo celular? Resp. Se entiende este trmino como los puntos de control del ciclo celular, los cuales son mecanismos que aseguran la veracidad del ciclo celular. Estos puntos de control se aseguran de verificar si los procesos de cada fase del ciclo han sido completados con xito para progresar a la siguiente fase.
Correcto. S, las quinasas agregan fosfatos a molculas, y la modificacin puede servir como una llave para encender o apagar los eventos en la clula. QdC o quinasas dependientes de ciclnas regulan el ciclo celular.
3) La particin de que tipo(s) de enzimas le parece a Ud. que es (son) de gran importancia durante el ciclo celular? Por qu? Resp. Los complejos de enzimas Cdk-ciclinas son esenciales durante el ciclo celular, su funcin es servir de interruptor molecular para regular las distintas etapas o fases del ciclo. LASSSSSSSSS DEL POWEEEEEERE COTMTMTMT
El sistema de control del ciclo celular est regulado principalmente por el proceso de unin o particin del complejo Cdk-ciclina. Cuando la protena Cdk (quinasa dependiente de ciclina) une a una ciclina, se forma un complejo de Cdk-ciclina activado. Si las Cdk no est unida a una ciclina, la protena quinasa se encuentra inhibida
4) Por qu es necesario fijar y teir las clulas de la raz antes de hacer la observacin? Resp. Es necesaria la fijacin de las clulas de raz porque de esta forma se logra mantener toda la arquitectura tanto estructural como qumica lo ms inalterada posible, de tal forma que sus componentes celulares mantengan las mismas caractersticas que cuando dicho ser o tejido estaban vivos. Por otra parte la necesidad de la tincin comprende la mejora del contraste en la imagen vista al microscopio para resaltar estructuras en tejidos biolgicos que de otra manera no se podran estudiar con claridad.
5) Qu sabe Ud. Acerca de la razn por la cual en un mismo tejido, algunas clulas entran en mitosis y otras no? Resp. Durante el ciclo celular, algunas clulas de un mismo tejido son capaces de salir del ciclo celular (en G1) y entrar en un estado de reposo proliferativo, denominado G0, que es desencadenado por la
actividad de los complejos proteicos cdk-ciclinas, que se encarga de regular las etapas de ciclo celular (sistema de control del ciclo celular), verificando que el ambiente de la clula sea favorable para continuar con el ciclo (cantidad de nutriente y estructuras necesarios). Un ejemplo de lo expuesto, es que las clulas del hgado por lo general se encuentran en G0, pero si el hgado sufre algn tipo de dao, estas clulas pueden ser estimuladas para proliferar y as reparar el dao.
6) Cmo es el huso mittico en las clulas vegetales? Qu otras diferencias hay entre la mitosis de las clulas animales y vegetales? Resp.
El huso mittico de las clulas animales y vegetales es distinto. En ambos casos el huso mittico est constituido por miles de microtbulos y otras protenas asociadas. El huso mittico tiene dos polos que definen el lugar donde quedaran los cromosomas tras su separacin. En el caso de las clulas animales la polaridad es muy potencializada debido a la presencia de centriolos o centrosomas que son los que originan los microtbulos que van a constituir el huso. En el caso de las clulas vegetales la polaridad es ms difusa. No hay centriolos, el huso es ms achatado y parece que ste est formado por varios husos ms pequeos debido a que existen numerosos focos de microtbulos.
Tabulacin diferencias en mitosis de clulas animales y vegetales
Clula Animal Clula Vegetal -Dos centriolos en los polos de la clula que dirigen la separacin de las cromtidas. - Los microtbulos estn formados por protenas que se polimerizan y se despolimerizan en sus extremos. --Los microtubulos cinetocoricos son los que durante la anafase separan las cromatidas --La separacin de las clulas hijas se realiza por estrangulamiento (se forma un surco de segmentacin gracias a la actina y la miosina fundamentalmente) --Las clulas hijas se separan al separar sus membranas -Como no tiene centriolos, se forma en los polos de la clula una franja preprofasica de microtbulos (una en cada polo) y de ella parten fibras que ayudan a la separacin de las cromtidas --La pared celular es rgida y por eso no se pueden dividir las clulas hijas como en los animales. Entonces se forma el fragmoplasma en la mitad de la clula "madre" y hace que se separen las clulas hijas. --La separacin de las clulas hijas no suele ser completa, sino que pueden formarse plasmodesmos
(pequeos canales por las que se comunican las clulas hijas y pueden intercambiar nutrientes)
Actividad 2: Determinacin de la concentracin de protenas
Tabulacin de los resultados obtenidos
Tubo N ul BSA 0.2 mg/ml
ul M-1
ul M-2 ul buffer
ul agua ml Reactivo Bradford A595 Ledo A595 Corregido
1) Cul es el sentido del tubo blanco en el ensayo de Bradford? Resp. 2) Se necesita una muestra blanco en el ensayo de mancha?; explique sus razones. Si lo considera necesario, Cmo la preparara? Resp. 3) Averige sobre otros mtodos para determinar concentracin de protenas y compare sus ventajas y desventajas con los que Ud. Uso en este trabajo practico. Resp.
