Este documento proporciona instrucciones para estudiantes sobre cómo realizar prácticas de laboratorio de microbiología de manera segura. Incluye recomendaciones de bioseguridad, cómo manipular cultivos y usar el microscopio, así como procedimientos detallados para observar bacterias en fresco, teñir muestras y detectar cápsulas y esporas bacterianas. El objetivo es enseñar técnicas microbiológicas básicas y promover la seguridad en el laboratorio.
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Este documento proporciona instrucciones para estudiantes sobre cómo realizar prácticas de laboratorio de microbiología de manera segura. Incluye recomendaciones de bioseguridad, cómo manipular cultivos y usar el microscopio, así como procedimientos detallados para observar bacterias en fresco, teñir muestras y detectar cápsulas y esporas bacterianas. El objetivo es enseñar técnicas microbiológicas básicas y promover la seguridad en el laboratorio.
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Este documento proporciona instrucciones para estudiantes sobre cómo realizar prácticas de laboratorio de microbiología de manera segura. Incluye recomendaciones de bioseguridad, cómo manipular cultivos y usar el microscopio, así como procedimientos detallados para observar bacterias en fresco, teñir muestras y detectar cápsulas y esporas bacterianas. El objetivo es enseñar técnicas microbiológicas básicas y promover la seguridad en el laboratorio.
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GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS
Dr. Nicanor Domnguez Navarrete
Coorinaor e! cur"o A#O $%&$ A!umno' ......................................................... URP. Facultad de Medicina INSTRUCCIONES GENERA(ES &.) Recomenacione" Las personas que tienen que desarrollar alguna actividad dentro de un laboratorio manipulando materiales biolgicos, tejidos o microorganismos, deben observan un comportamiento denominado Normas de Bioseguridad, que son un conjunto de disposiciones orientadas a proteger la salud evitar la contaminacin de las personas. La contencin primaria es la proteccin del personal del medio ambiente inmediato contra la e!posicin de agentes in"ecciosos, lo que se logra con el manejo de buena t#cnica microbiolgica, el uso apropiado de equipos de seguridad la prevencin con vacunas. La contencin secundaria se re"iere a reducir la e!posicin del personal del laboratorio de otras personas a agentes potencialmente peligrosos prevenir el escape de #stos al e!terior. a.$ Usar mandil de mangas largas, que cubra la ropa de vestir b.$ %o est& permitido comer, beber, "umar ni aplicarse cosm#ticos. c.$ 'esarrollar el (&bito de mantener las manos lejos de la boca, nari), ojos cara, para evitar la autoinoculacin. d.$ Utili)ar guantes cuando se manipulan l*quidos org&nicos. e.$ +obre la mesa de trabajo slo se podr& ubicar el cuaderno de notas. ".$ 'isponer siempre de un bocal con desin"ectante ,Fenol al - ./ para descartar el material de vidrio reusable. g.$ 0l "inali)ar los trabajos pr&cticos, lavarse las manos con jabn. $.) *ane+o e! micro"co,io 1n microbiolog*a el manejo del microscopio es de gran auda para el reconocimiento de los microorganismos. 1n preparaciones en "resco se utili)an los objetivos secos de 234 534 en preparaciones coloreadas el objetivo de inmersin de 2334, el cual necesita de aceite de cedro en la inter"ase objetivo6portaobjeto. 'espu#s de usar el microscopio debe (acerse una limpie)a con alco(ol isoprop*lico.
-.) *ani,u!aci.n e cu!tivo" Los cultivos bacterianos deben ser tratados con el maor cuidado, para evitar tanto la contaminacin del operador como la de los cultivos mismos, recomendando7 a.$ 8rabajar siempre "rente a la llama de un mec(ero b.$ Mantener los tubos en posicin vertical tapados c.$ 9olocar las placas petri en posicin invertida, para evitar que el agua de condensacin contamine la super"icie mantenerlas cerradas. d.$ 1liminar los portaobjetos laminillas en soluciones desin"ectantes. e.$ 1l asa de siembra debe ser esterili)ada antes despu#s de su uso : URP. Facultad de Medicina ".$ 8odos los cultivos deben tener las anotaciones siguientes7 nombre del germen, nombre del alumno, n;mero de mesa "ec(a. g.$ 1n caso de accidente durante el trabajo, avisar al pro"esor. TE*A %& ' E/A*EN EN 0RESCO Introucci.n7 1l e!amen en "resco tiene por "inalidad apreciar el tama<o de las bacterias, que es del orden de la micra ,mil#sima de mil*metro/, su relacin con las c#lulas (umanas algunas caracter*sticas de inter#s para su identi"icacin, como la movilidad o presencia de c&psula. 1ste estudio se reali)a mientras las bacterias se encuentran viables, en cultivos l*quidos jvenes ,menos de 2= (oras de incubacin/ o en muestras biolgicas reci#n obtenidas. *ateria!e"7 +uspensin de me)cla de bacterias, levaduras (emat*es L&minas portaobjetos laminillas cubreobjetos +uero "isiolgico ,9l%a =.- .o/ en gotero 0sa de siembra o microgotero Proceimiento' 8omar dos a tres asadas o una microgota de la me)cla bacteriana depositarla en un Porta objetos. 9ubrir la preparacin con un cubreobjetos. >bservar al microscopio, utili)ando objetivo de 53 4 Re"u!tao"7 0notar la proporcin del tama<o de las c#lulas (umanas las bacterias. 0preciar el tipo de movimiento bacteriano7 vibratorio, polar o peritrico.
? URP. Facultad de Medicina TE*A %$ ' OBSER1ACI2N DE CAPSU(A Introucci.n7 0lgunos microorganismos tienen la capacidad de producir una estructura que rodea a la bacteria, denominada c&psula, que le otorga un "actor de virulencia al germen, a que impide la "agocitosis. 1sta estructura se puede observar con "acilidad en "orma indirecta utili)ando tinta c(ina, que no penetra en las bacterias capsuladas, dejando un (alo transparente alrededor del microorganismo. *ateria!e"7 2. +uspensin de cultivo de Cyptococcus n. :. +olucin de tinta c(ina ?. L&minas portaobjetos laminillas cubreobjetos Proceimiento7 2. 'epositar una microgota o asada de tinta c(ina sobre un portaobjetos. :. 'epositar mu junto a la anterior una microgota o asada de la suspensin del cultivo de Ciptococcus.n ?. +eguidamente colocar una laminilla cubreobjetos sobre ambas muestras, de tal manera que se junten obtener una gradiente de la me)cla. 5. >bservar al microscopio con objetivo de 53 4 Re"u!tao"' Registrar las levaduras redondeadas o gemadas de los 9rptococcus n., el (alo transparente que los rodea en un "ondo oscuro proporcionado por las part*culas de tinta c(ina. 5 URP. Facultad de Medicina TE*A %- ' CO(ORACI2N DE A3U( DE *ETI(ENO Introucci.n7 La coloracin de las bacterias permite estudiar la mor"olog*a ,bacilar, redondeada o espirilar/ las di"erentes agrupaciones de ellas ,pares, tetradas, racimos, cadenas/, caracter*sticas que son ;tiles para su identi"icacin. Los colorantes con radical &cido coloreado ,eosina, "ucsina &cida, a)ul de anilina "luoresce*na/ colorean el protoplasma de las c#lulas. 1n cambio los colorantes con radical b&sico coloreado ,a)ul de metileno, violeta de genciana, "ucsina b&sica, sa"ranina/ ti<en el n;cleo de las c#lulas. La c#lula bacteriana es rica en &cido nucleico, el que se combina con colorantes b&sicos. Los colorantes &cidos no ti<en a las c#lulas bacterianas, son usados como contraste. Para proceder a colorear a las bacterias es necesario (acer un frotis, que es el resultado de depositar la muestra sobre un portaobjetos "ijarla con calor suave. 9uando el material es l*quido se deposita una microgota o asada cuando es slido ,agar/ se debe reali)ar una suspensin ligera de la colonia en solucin salina luego "ijarla. +e denomina coloracin simple cuando se emplea un slo colorante compuesta cuando se emplean varios colorantes. *ateria!e"7 2. +uspensin de me)cla bacteriana :. L&minas portaobjetos ?. 0sa de siembra 5. +olucin de colorante 0)ul de metileno -. Microscopio con objetivo de inmersin Proceimiento7 2. Preparar un "rotis a partir de la me)cla bacteriana. Fijarlo con calor suave :. 9ubrir la preparacin con 0)ul de Metileno dejarlo actuar durante 23 minutos ?. Lavar la preparacin con agua corriente. +ecar la l&mina con calor suave 5. >bservar al microscopio con objetivo 233!, a<adiendo una peque<a gota de aceite de inmersin. Re"u!tao" 7 @acer esquema de las diversas "ormas bacterianas agrupaciones observadas. - URP. Facultad de Medicina TE*A %4 ' CO(ORACI2N DE 1AGO Introucci.n7 Las espiroquetas no toman con "acilidad los colorantes usados con "recuencia en microbiolog*a. Para colorearlas se emplean las t#cnicas de Aiemsa o impregnacin arg#ntica. Una t#cnica sencilla es la de 1ago, que se describe. *ateria!e"7 2. Mondadientes :. +olucin de Mercuro cromo al : . , mertiolate coloreado / ?. +olucin de Bioleta de Aenciana al 2 . 5. L&minas portaobjetos. Proceimiento7 2. 9on la auda de un mondadientes obtener una muestra de sarro dental (acer un "rotis. :. 'ejar secar al ambiente. 9ubrir con mercuro cromo dejar actuar durante ? minutos ?. Lavar con agua corriente. 9ubrir con Bioleta de Aenciana dejar actuar durante ? minutos. 5. Lavar con agua corriente secar. -. >bservar al microcopio con objetivo de inmersin. Re"u!tao"7 @acer esquema de las diversas mor"olog*as bacterianas observadas, buscar en especial las "usi"ormes espirilares.
C URP. Facultad de Medicina >D+1RB09EF% '1 1+P>R0+7 0lgunos grupos bacterianos, como el 9lostridium, tienen la capacidad de "ormar esporas, estructura que le otorga resistencia supervivencia en condiciones ambientales adversas ,temperatura, nutricionales, etc./. >bservaremos "rotices de (eces de pacientes con diarrea, coloreados con Aram.
CUESTIONARIO' 2. GHu# bacterias poseen c&psula cu&l es su "uncinI. Procedimientos para observarla. :. +e<ale los tipos de movilidad bacteriana su relacin a la posicin de los "lagelos. ?. 1squematice las di"erentes agrupaciones de los cocos. 5. Las espiroquetas, Ga que g#neros agrupaI -. G'e qu# color se ti<eron las espora qu# ubicacin tuvieronI. '1+0RR>LL>
J URP. Facultad de Medicina TE*A %5 ' CO(ORACI2N DE GRA* Introucci.n7 1s la coloracin mas empleada en bacteriolog*a, puesto que permite agrupar a las bacterias en dos categor*as, las Aram Positivas que son las que retienen el colorante violeta de genciana las Aram %egativas que pierden el colorante primario por accin del decolorante, para luego te<irse con un colorante b&sico de contraste ,rojo/. 1sta coloracin tiene relacin con la composicin qu*mica de la pared se describen varias modi"icaciones. *ateria!e"7 2. +uspensin de me)cla bacteriana :. Kuego de colorantes para Aram 7 a. Bioleta de Aenciana al 2 . b. +olucin de Lodo c. 'ecolorante 7 alco(ol$acetona al -3. d. Fucsina b&sica al 3.2 . ?. L&minas portaobjetos Proceimiento7 2. @acer un "rotis a partir de la me)cla bacteriana. Fijarla con calor suave. :. 9ubrir la l&mina con violeta de genciana. 'ejar actuar por ?3 segundos ?. Lavar con agua. 9ubrir con solucin Lodo. 'ejar actuar por ?3 segundos 5. 'ecolorar con 0lco(ol$0cetona (aciendo movimientos de vaiven durante die) segundos -. Lavar con agua. 9ubrir con solucin de Fucsina. 'ejar actuar durante ?3 segundos C. Lavar la l&mina con agua +ecar. J. >bservar al microscopio con objetivo de inmersin. Re"u!tao"7 @acer esquema de la mor"olog*a coloracin de las bacterias. Las Aram positivas se ti<en de color a)ul violeta las Aram negativas de color rojo.
= URP. Facultad de Medicina TE*A %6 ' CO(ORACI2N DE 3IE7()NEE(SEN Introucci.n7 0lgunos grupos bacterianos poseen un elevado contenido de l*pidos en su estructura, que impide tomar los colorantes en soluciones acuosas. Las Mycobacterias las Nocardias tienen #sta propiedad. La coloracin de Mie(l$%eelsen utili)a "ucsina con "enol la auda del calor para que el colorante penetre en la pared celular. 9omo decolorante emplea una me)cla de alco(ol con &cido clor(*drico. Luego las bacterias que retienen el colorante se les denomina &cido alco(ol resistentes. 9oloracin ;til para el diagnstico de en"ermedades como la tuberculosis y la lepra. *ateria!e"7 2. Kuego de colorantes para Mie(l$%eelsen a. +olucin de Fucsina "enicada b. +olucin de alco(ol$&cido al ? . c. +olucin de 0)ul de metileno -. d. Mec(ero de alco(ol :. Muestra de esputo Proceimiento7 2. @acer un "rotis a partir de la muestra de esputo. Fijarlo al calor suave. :. 9olocar el portaobjetos con "rotis sobre un soporte en el lavatorio ?. 9ubrir la l&mina con colorante Fucsina "enicada 5. 9on la auda del mec(ero de alco(ol, calentar suavemente la preparacin (asta que se desprendan vapores, retirar la llama repetir por tres veces #ste procedimiento. 1l colorante %> debe (ervir ni secarse. -. 1liminar el colorante lavar la l&mina con agua. C. 'ecolorar con alco(ol$&cido, cubriendo la preparacin (acer movimientos de vaiven durante 2- a ?3 segundos, (asta que no se desprenda colorante. J. Lavar con agua cubrir la l&mina con solucin 0)ul de metileno. 'ejar actuar durante 23 minutos. =. Lavar con agua +ecar. N. >bservar al microscopio con objetivo de inmersin Re"u!tao"7 @acer esquema de las estructuras celulares observadas de color a)ul resaltar los bacilos &cido resistentes de color rojo con mor"olog*a caracter*stica. N URP. Facultad de Medicina
CUESTIONARIO7 2. 'esarrolle el "undamento de la coloracin de Aram :. +e<ale cuatro g#neros bacterianos Aram positivos cuatro Aram negativos ?. Hu# bacterias no toman la coloracin de AramI 5. +e<ale las di"erencias entre la coloracin de Aram de Mie(l %eelsenI -. 'escriba usted la mor"olog*a del bacilo tuberculoso observado7 '1+0RR>LL> 23 URP. Facultad de Medicina TE*A %8 ' *ETODOS DE ESTUDIO DE (AS BACTERIAS Introucci.n7 Las bacterias son capaces de desarrollar en medios inertes provistos de sustancias nutritivas como compuestos nitrogenados, inorg&nicos, energ#ticos, concentracin apropiada de (idrogeniones, (umedad, condiciones ambientales de temperatura, o!*geno, an(*drido carbnico, etc. 'e acuerdo a la consistencia los medios de cultivo se agrupan en l*quidos, slidos semislidos. Los medios l*quidos se emplean como enriquecimiento para incrementar la poblacin bacteriana el desarrollo se observa por turbide). 1n cambio el medio de cultivo slido se obtiene a<adiendo el compuesto agar, que a temperatura de -3O 9 mantiene la consistencia l*quida se dispensa en placas petri, que luego a temperatura ambiente se solidi"ica. 1stas se utili)an para separar las bacterias obtener colonias, cuas caracter*sticas son propias de cada g#nero bacteriano. +eg;n la necesidad de o!*geno las bacterias pueden ser 0erobias estrictas que desarrollan slo en presencia de o!*geno, 0naerobias "acultativas que crecen en presencia o ausencia de o!*geno, 0naerobias estrictas que crecen slo en ausencia de o!*geno las Microaer"ilas que desarrollan en tensiones bajas de o!*geno. T9cnica e "iem:ra7 es el procedimiento por el cual se pone en contacto el microorganismo con el medio de cultivo, para que en condiciones ptimas de nutricin, temperatura tiempo pueda desarrollarse la bacteria in vitro. 1l dispositivo empleado se denomina asa de siembra, asa de platino o asa de Polle se usan diversos m#todos7 puntura, estr*a, agotamiento, etc. *eta:o!i"mo :acteriano7 Los microorganismos reali)an diversas reacciones bioqu*micas para su crecimiento. 0lgunas de estas reacciones corresponden a sistemas en)im&ticos codi"icados por genes cromosmicos, que permite la identi"icacin del g#nero o especie bacteriano. >tras veces e!cretan compuestos, en)imas o to!inas, que son da<inos para el organismo (umano amerita demostrar su presencia, para identi"icar la especie patgena. La ubicacin de un grupo bacteriano como Familia, A#nero o 1specie depende en gran medida de la capacidad metablica "rente a sustratos de"inidos ,marcadores/ la "ormacin de compuestos qu*micos intermediarios espec*"icos. 0 #ste estudio se denomina biotipo bacteriano. 1n la pr&ctica se demostrar& algunas reacciones bioqu*micas7 22 URP. Facultad de Medicina Utili)acin del carbo(idrato lactosa, la bacteria lo trans"orma en &cido pir;vico, que acidi"ica el medio, cambio de p@ que puede ser demostrado a su ve), por cambio de color a amarillo del indicador Rojo de "enol. Utili)acin del amino&cido tripto"ano, produciendo &cido pir;vico, amon*aco, otros metabolitos como Endol, #ste ;ltimo se demuestra su presencia porque reacciona con el p$dimetilamino ben)alde(ido originando un compuesto de color rojo soluble en alco(ol am*lico. Produccin de to!inas7 algunas bacterias elaboran en)imas o sustancias que destruen c#lulas, cemento intercelular o alteran la coagulacin, acciones que "avorecen la virulencia. La actividad (emol*tica se puede demostrar in vitro, a<adiendo sangre al medio de cultivo, observando (alos de (emlisis alrededor de las colonias.
*ateria!e"7 2. Placas petri con cultivos de Bacillus subtilis, Escherichia coli Staphylococcus :. 8ubos con medio de cultivo l*quido de Staphylococcus sp. Bacillus subtilis. ?. 8ubos con medio semislido sembrados por puntura con Escherichia coli Pseudomona . 5. 8ubos con Lactosa e indicador, sembrado con Escherichia coli y Pseudomonas -. 8ubos con caldo peptonado ,tripto"ano/ sembrados con Escherichia coli y Pseudomonas C. Placas petri sembradas con bacteria (emol*tica J. L&minas portaobjetos =. Kuego de colorantes para Aram Proceimiento7 2. >bservar registrar las caracter*sticas de las colonias desarrolladas en los medios de cultivo slidos7 "ormacin de colonia :. 8ama<o7 medido en mil*metros. Forma7 circular, el*ptica, punti"orme, "ilamentosa. +uper"icie7 lisa, rugosa, granular. 1levacin7 plana, conve!a, umbilicada. Dorde7 entero, ondulado, dentado, "ilamentoso. 9onsistencia7 cremosa, membranosa, mucosa. 9romog#nesis7 amarillo, rojo, verde, negro ?. +eleccionar dos o tres colonias di"erentes, preparar un "rotis de ellas colorearlas con Aram. >bservar al microscopio con objetivo de inmersin. 5. >bservar las caracter*sticas del desarrollo en los medios l*quidos7 turbide), sedimento, presencia de nata. -. >bservar las caracter*sticas del desarrollo en los medios semi slidos7 turbide) uni"orme ,aero anaerbico "acultativo/, turbide) slo en super"icie ,aerobio/ o slo en el "ondo ,anaerobio/ C. >bservar el cambio de color en el medio con lactosa J. 0<adir al caldo peptonado, gotas de reactivo 1rlic( o Povac, apreciar el cambio de color 2: URP. Facultad de Medicina =. >bservar las placas de agar sangre apreciar la ausencia de (emat*es en el &rea circundante a las colonias. Re"u!tao"7 2. 'escribir las colonias observadas.
9>L>%E0 D09ELLU+ 1+9@1RE9@E0 +80P@LL>9>99U+ 8ama<o Forma +uper"icie 1levacin Dorde 9onsistencia 9romog#nesis :. >bservar la movilidad en agar blando ?. >bservar el metabolismo de Alucosa 2? URP. Facultad de Medicina 5. >bservar el metabolismo del tripto"ano -. >bservar el desarrollo de una bacteria aerobia anaerobia
0erobio 0naerobio 0naerobio "acultativo C. >bservar al microscopio la (emlisis en el medio agar con sangre.
CUESTIONARIO7 2. Para agrupar a las bacterias por el biotipo, qu# procedimiento debo seguirI :. GHu# inter#s tiene para el campo m#dico evaluar la capacidad de una bacteria en producir en)imas, to!inas o metaboli)ar determinado sustratoI ?. G9u&l es la "inalidad de conocer las caracter*sticas de una colonia bacterianaI 5. 'e"ina usted el concepto de colonia bacteriana. -. 'escriba usted su concepto de una medio de cultivo ,caracter*sticas utilidad/
'1+0RR>LL> 25 URP. Facultad de Medicina TE*A %; ' ESTERI(I3ACI2N' AGENTES 0<SICOS Introucci.n7 1l t#rmino esterili)acin implica un procedimiento por el cual un material determinado queda libre de microorganismos. 1l comportamiento de los microorganismos "rente a diversos agentes "*sicos es variable, en algunas condiciones puede estimular la multiplicacin bacteriana, en otros inactiva su metabolismo e incluso logra destruirlos. 1ste ;ltimo e"ecto es utili)ado para obtener la esterili)acin de instrumentos m#dicos material biolgico. E! ca!or "eco ,(orno/ necesita temperaturas de 2=3 o9 durante C3 minutos de e!posicin para obtener esterilidad. E! ca!or =>meo ,ba<o mar*a (irviendo/ necesita periodos superiores a :3 minutos para destruir a las bacterias. E! ca!or =>meo a ,re"i.n ,autoclave/ es el procedimiento de esterili)acin m&s con"iable. 0 una presin de 2- libras por pulgada cuadrada se obtiene 2:2 o9 de temperatura, que por un periodo de 2- minutos se consigue la esterili)acin total, libre de bacterias patgenas o no, esporuladas e incluso de virus. Raiacione" u!travio!eta. +on radiaciones de una longitud de onda de ?33 nm que tienen propiedad bactericida cuando act;an directamente sobre las bacterias se le emplean en ambientes quir;rgicos, cub*culos de laboratorio, para eliminar las bacterias suspendidas en el aire. 0i!traci.n. 'emostracin de "iltro de 9(amberland ,porcelana/ Millipore ,sint#tico/. *ateria!e"7 2. +uspensin de un cultivo de Staphylococcus sp, Bacillus subtilis, Escherichia coli y Pseudomonas sp. :. Placas petri con 0gar nutritivo ?. 'ispositivo para calentar agua (asta (ervir 5. L&mpara de mercurio que emite radiaciones UB 2- URP. Facultad de Medicina -. 0sas de siembra Proceimiento7 07 90L>R @QM1'> 2. 9alentar agua (asta (ervir :. 'ividir la placa petri con agar nutritivo en cuatro partes rotular con7 3, 2, -, 23. que son los tiempos de e!posicin. ?. 8omar de la suspensin bacteriana una asada sembrar en la placa petri con 0gar, en el &rea marcada con 3, que ser& el control de viabilidad de la bacteria de re"erencia. 5. 9olocar la suspensin bacteriana en el ba<o mar*a (irviendo durante 2 minutos, seguidamente sembrar una asada en la )ona rotulada con 2 -. Bolver a colocar la suspensin bacteriana en el ba<o mar*a (irviendo completar el tiempo de e!posicin de : minutos. Luego sembrar una asada en la )ona rotulada con : C. Bolver a colocar la suspensin bacteriana en el ba<o maria (irviendo (asta completar el tiempo de - minutos. Luego sembrar una asada en la )ona de la placa rotulada con - J. Encubar la placa petri a ?J o9 durante :5 6 5= (oras Re"u!tao"7 La presencia de colonias indica desarrollo bacteriano ,viabilidad/. Las )onas marcadas con 3, son los controles de viabilidad, donde siempre debe (aber desarrollo. Registrar el desarrollo bacteriano ,presencia de colonias/7 a/ 1scaso 2R ,menos de 23 colonias/. b/ Moderado :R ,23 a -3 colonias/ c/ 0bundante ?R ,colonias incontables/
8iempo de e!posicin a 233O9 +80P@LL>$ 9>99U+ D09ELLU+ +UD8ELE+ 1+9@1RE9@E0 9>LE
9ero minutos 2 minuto : minutos 2C URP. Facultad de Medicina - minutos 0notar el n;mero de colonias presentes en cada area D. R0'E09E>%1+ UL8R0 BE>L180 2. 9on una asa de platino (umedecida en la suspensin bacteriana de Pseudomonas sp. sembrar por agotamiento toda la super"icie del agar. :. Llevar la placa sembrada al cub*culo que tiene una l&mpara de mercurio ,UB/ ?. 'estapar la placa e!ponerla a las radiaciones, pero cubrir la mitad de la super"icie sembrada con un papel. 'ejar en e!posicin durante 23 minutos 5. Retirar la placa del cub*culo, rotularla e incubarla a ?J O9 durante :5 6 5= (oras. Re"u!tao"7 0. Leer las placas de cultivo, la presencia de colonias indica desarrollo bacteriano ,viabilidad/, en cambio la ausencia de colonias es e!presin de muerte bacteriana. D. >bservar (acer un esquema de la presencia de colonias en la )ona e!puesta las radiaciones UB la )ona cubierta con el papel. 0rea cubierta de las radiaciones Comentario" e !o" re"u!tao" o:tenio" en !a ,re"ente ,r?ctica7 2J URP. Facultad de Medicina TE*A %@ ' ACCION DE AGENTES AU<*ICOS Introucci.n' %umerosos compuestos qu*micos inorg&nicos como org&nicos son t!icos para los microorganismos. Los agentes qu*micos que destruen g#rmenes patgenos suelen denominarse e"inBectante" a los que se aplican tpicamente se les denomina anti"9,tico"C. 1l e"ecto biolgico de #stos agentes puede ser bactericida o bacteriost&tico. 1n la pr&ctica se demostrar& comparativamente la actividad de los compuestos qu*micos mas empleados en medicina. *ateria!e"7 2. +uspensin bacteriana de Staphylococcus sp Escherichia coli :. +olucin de desin"ectante Mertiolate, 0septil rojo 0lco(ol J3O, ,- ml cada uno/ ?. Placas petri con 0gar nutritivo, divididas en cuatro areas. Una para cada bacteria. 5. Pipetas Pasteur est#riles , goteros / Proceimiento7 2. 'ividir la placa petri con 0gar en cuatro areas 7 Control, *ertiolate , Aseptil Rojo Alco(ol :. 9on la auda de un gotero depositar una gota de la suspensin bacteriana en la )ona marcada con 9 control de viabilidad ?. 0 cada solucin de desin"ectante, a<adirle - gotas de la suspensin bacteriana. 'ejar actuar durante 23 minutos. 5. +eguidamente tomar una gota de cada me)cla depositarla en la super"icie del agar rotuladas con M, 0R 0, respectivamente. 2= URP. Facultad de Medicina -. 1sperar unos minutos (asta que el inculo se seque e incubar la placa a ?J o9 durante :5 a 5= (oras. Re"u!tao"7 Registrar el desarrollo bacteriano por la "ormacin de colonias. 9omparar el desarrollo n;mero de colonias de la )ona de control con los de la me)cla con desin"ectantes. Microorganismo7 Staphylococcus sp 9>%8R>L 0+1P8EL R>K> M1R8E>L081 0L9>@>L
Microorganismo7 Escherichia coli 9>%8R>L 0+1P8EL R>K> M1R8E>L081 0L9>@>L Comentario $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ 1B0LU0R 9>%91%8R09EF% '1L 0%8E+SP8E9> L 8E1MP> '1 14P>+E9EF% 2. Utili)ar el Mertiolate7 9oncentrado, 'iluido 2T-, 2T:- 2T2:- :. 5 8ubos que contienen 5 ml de la solucin de Mertiolate ,concentrado diluidos/ ?. 0<adir 3-.ml de un cultivo de 2= (oras de incubacin ,1sc(eric(ia coli o +tap(lococcus sp/ 5. Luego de 2 minuto - minutos de e!posicin, sembrar una asada a tubos con caldo nutritivo respectivamente. ,= tubos/ 2N URP. Facultad de Medicina -. Encubar a ?J O9 durante :5 a 5= (oras. >bservar turbide) ,desarrollo bacteriano/ Re"u!tao"7 9oncentrado 'ilucido 2T- 'iluido 2T:- 'iluido 2T2:- 2 minuto - minutos Comentario $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$ TE*A &% ' ACCION DE AGENTES AUI*IOTERAPICOS ANTIBIOGRA*A Introucci.n7 La actividad de los antibiticos quimioter&picos debe ser evaluada in vitro para obtener la in"ormacin que permita decir si un microorganismo es susceptible o resistente a determinado producto. La determinacin de la concentracin m*nima in(ibitoria ,ME9/ nos proporciona la dosis m*nima necesaria del quimioter&pico para impedir el desarrollo bacteriano, lo que permite (acer estudios de uso cl*nico detectar mutantes resistentes. 'os son los procedimientos empleados para conocer #sta in"ormacin, el m#todo del tubo dilucin el del disco di"usin en agar, a #ste ;ltimo se le denomina antibiograma. *9too e! Tu:o i!uci.n' *ateria!e"7 2. +e presenta una gradilla con die) tubos en los que se (an reali)ado diluciones sucesivas al medio, a partir de una solucin de antibitico con :33 microgramos, obteniendo concentraciones decrecientes de 233 6 -3 6 :- 6 2:,- 6 C,:- 6 ?.2: 6 :3 URP. Facultad de Medicina 2.-C 6 3.J= 6 3.?N mcgTml. 1l ;ltimo tubo no contiene antibitico, es control de viabilidad de la bacteria en estudio. 0 cada tubo se (a a<adido 3.- ml de un cultivo de 2= (oras de la bacteria en estudio. 8oda la gradilla de tubos (a sido incubada a ?J o9 durante :5 (oras. (ectura7 2. Leer el desarrollo bacteriano como turbide), por lo tanto resistencia bacteriana al quimioter&pico. :. Los tubos que permanecen transparentes indican ausencia de desarrollo, luego susceptibilidad bacteriana al quimioter&pico. ?. Eniciar la lectura por el tubo que contiene maor concentracin de quimioter&pico 5. 1l ;ltimo tubo transparente ,ausencia de desarrollo/ representa la dilucin de quimioter&pico denominada ME9 -. 1l ;timo tubo, que no contiene quimioter&pico, debe estar siempre turbio, control de viabilidad bacteriana. Re"u!tao"7 @acer esquema de lo observado 8ubo 2 : ? 5 - C J = N 23 9oncentracin de antibitico 233 -3 :- 2:.- C.:- ?.2: 2.-C 3.J= 3.?N $$$$ ME9 *9too e Di"co iBu"i.n en agar' *ateria!e"' 2. Placas petri con 0gar Mueller @inton :. +uspensin bacteriana a probar, con turbide) 5 de escala Mac Farland. ,233,333Tml/ ?. @isopo de algodn est#ril. 5. 'iscos de papel de "iltro embebidos en antibiticos7 Penicilina ,P/, 0mpicilina ,0M/, 9e"alotina ,9F/, 9e"tria!ona ,984/, +ul"atrimetoprim ,+48/, Panamicina ,P/, 0miUacina ,0P/, %itro"uranos ,F'/, 0cido nalid*!ico ,0%/, etc. Proceimiento7 2. @umedecer el (isopo est#ril en la suspensin bacteriana. :. Frotar el (isopo en la super"icie del agar Mueller @inton en "orma radiada, de tal manera que toda la super"icie reciba el inculo uni"ormemente. ?. 9on la auda de una pin)a, depositar los discos con antibiticos en la super"icie del agar, con una separacin superior a : cm. 5. Encubar el cultivo a ?J o9 durante :5 (oras. :2 URP. Facultad de Medicina (ectura7 2. 1l desarrollo bacteriano se lee por la presencia de colonias. :. >bservar alrededor de los discos la "ormacin de (alos transparentes sin desarrollo bacteriano, indica que la bacteria es sensible a dic(o producto. ?. 1l di&metro de los (alos de ausencia de desarrollo deben ser medidos llevados a la tabla de Dauer Pirb para catalogar los resultados. 5. +i (a desarrollo bacteriano alrededor del disco, se deduce que es resistente a dic(o antibitico. ,no v&lido para uso cl*nico/ Re"u!tao"7 @acer esquema de lo observado
8abla de Dauer Pirb7 :: URP. Facultad de Medicina CUESTIONARIO7 2. 9u&l es el procedimiento temperatura conveniente para esterili)ar los medios de cultivoI :. 0l esterili)ar en ba<o de mar*a (irviendo, G9u&l es la duda de la esterilidadI ?. 1nuncie el concepto de ME9 cual es la utilidadI 5. +e<ale los "actores que pueden alterar el resultado en un antibiograma. -. 1n la pr&ctica dnde se utili)an las radiaciones ultravioletasI '1+0RR>LL> Huimioter&pico 9oncentracin del disco mcg @alo de in(ibicin de desarrollo Resistente Entermedio +ensible 0mpicilina 0M 0miUacina 0P 0c nalid*!ico 0% 9e"alotina 9F 9e"o!itina 984 9e"tria!ona 9R> 9loran"enicol 9 Panamicina P %itro"uranos F' +ul"atrimetoprim+48 9ipro"lo!acina 9EP 8etraciclina 8 23 ?3 ?3 ?3 ?3 ?3 ?3 ?3 ?33 :?2 - ?3 $ 2? 25 6 2C R 2J $ 2- 2C 6 2C R 2J $ 2? 25 $ 2= R 2N $ 25 2- 6 2J R 2= $ 2- 2C 6 :3 R :2 $ 2? 25 6 :3 R :2 $ 25 2- 6 2J R 2= $ 2? 25 6 2J R 2= $ 25 2- 6 2C R 2J $ 23 22 6 2- R 2C $ 2- 2C 6 :3 R :2 $ 25 2- 6 2= R 2N :? URP. Facultad de Medicina TE*A && ' STAP7D(OCOCCUS Introucci.n7 1ste microorganismo se encuentra mu distribuido en la naturale)a "orma parte de la "lora normal del (ombre. La especie +tap(lococcus aureus es causante de diversos procesos in"ecciosos como la "orunculosis, imp#tigo, abscesos, into!icaciones alimentarias, etc. Las caracter*sticas que permiten identi"icar al A#nero son la mor"olog*a de cocos agrupados en racimos, que se ti<en como Aram positivos, en los cultivos desarrollan en medios (ipertnicos producen una potente en)ima catalasa. 1studiaremos las especies de inter#s m#dico7 aureus, saprop(ticus epidermidis *atera!e"7 2. 9ultivo de Staphylococcus en caldo nutritivo :. 9ultivo de +tp(.. aureus en medio (ipertnico con manitol ,M@/ 0gar nutritivo con disco de %ovobiocina. ?. 9ultivo de +tp(. epidermidis en medio (ipertnico con manitos ,M@/ 0gar nutritivo con disco de %ovobiocina 5. 9ultivo de +tp(. saprop(ticus en medio (ipertnico con manitol ,M@/ 0gar nutritivo con disco de %ovobiocina. - Plasma (umano diluido al -3 . C. 0gua o!igenada ?3 vol. J. Kuego de colorantes para Aram. Proceimiento7 :5 URP. Facultad de Medicina 2. >bservar el desarrollo del Staphylococcus en caldo con turbide) uni"orme. @acer un "rotis colorearlo con Aram. :. >bservar las caracter*sticas de las colonias de las tres especies de Staphylococcus desarrolladas en medio (ipertnico apreciar el metabolismo del manitol. ?. >bservar el comportamiento de las tres especies "rente a la %ovobiocina. 5. 'epositar una gota de agua o!igenada sobre un portaobjetos. 9on el asa de siembra tomar una peque<a colonia de Staphylococcus ponerla en contacto con el agua o!igenada, apreciar la "ormacin de burbujas, por accin de la en)ima catalasa. -. 'epositar 2 ml de plasma en tubo peque<o. 9on el asa de siembra tomar una peque<a colonia del cultivo depositarla en el plasma. Encubar a ?J o9 durante : (oras. >bservar la "ormacin de co&gulo por accin de la en)ima coagulasa. Proceder por separado con cada especie bacteriana.
Re"u!tao"7 Registrar las observaciones 'esarrollo 9aldo Aram 9oagulasa 9atalasa en 9aldo %utritivo :- URP. Facultad de Medicina Medio @ipertnico con manitol 0gar nutritivo %ovobiocina TE*A &$ ' STREPTOCOCCUS Introucci.n7 1ste g#nero comprende un grupo numeroso de microorganismos, muc(os viven como comensales, algunos son patgenos para el (ombre, como el pygenes, agalactiae, pneumoniae. Producen in"ecciones "ocales como "aringitis, imp#tigo, endocarditis, escarlatina, neumon*a, meningitis, otitis s*ndromes posin"ecciosos como la cardiopat*a reum&tica la glomerulo ne"ritis aguda. 1stos microorganismos son cocos es"#ricos o lanceolados que se orientan en cadenas o pares, Aram positivos. La clasi"icacin mas pr&ctica es la basada en el tipo de (emlisis que se produce en la placa con agar sangre. 1l +t. pgenes produce (emolisina tipo beta o total es sensible a la bacitracina 1l +t viridans produce (emlisis tipo al"a o parcial, 1l +t pneuminae tambi#n produce (emlisis tipo al"a, pero es "ormador de c&psula sensible a la etil(idrocupreina ,optoc(in/ 1l 1nterococo tiene la capacidad de desarrollar en medio salino ,C.- . de 9l %a/ *ateria!e"7 2. 9ultivo de Streptococcus sp.en caldo nutritivo :. 9ultivo de Streptococcus pygenes en agar sangre , con disco de bacitracina ?. 9ultivo de Streptococcus viridans en agar sangre con disco de optoc(in 5. 9ultivo de Streptococcus pneumoniae en agar sangre con disco de optoc(in -. 9ultivo de Enterococcus en agar sangre caldo salino :C URP. Facultad de Medicina C. Kuego de colorantes para Aram Proceimiento7 2. >bservar la caracter*stica de desarrollo del +treptococcus en caldo nutritivo, con "ormacin de sedimento transparencia en el sobrenadante Me)clar el tubo (acer un "rotis, colorearlo con Aram :. >bservar las placas de agar sangre, estudiar las caracter*sticas de las colonias su comportamiento con la sangre. 8ipo de (emlisis alrededor de ellas. ?. >bservar el comportamiento de cada especie bacteriana "rente a la bacitracina el optoc(in 5. 0preciar el desarrollo uni"orme del 1nterococcus en el caldo salino. Re"u!tao"7 Registrar lo observado 9aldo nutritivo +treptococcus +treptococcus 9oloracin Aram +treptococcus +treptococcus %eumococo beta Cu!tivo Agar "angre viridans (emol*tico :J URP. Facultad de Medicina
1nterococcus
9aldo %utritivo 0gar nutritivo +in sangre
TE*A &- ' CORDNEBACTERIU* Introucci.n7 1l Corynebacterium dip(t h eriae es la ;nica especie patgena de #ste grupo, su rol patgeno est& *ntimamente relacionado con la produccin de e!oto!ina la transmisin es inter$(umana. @a varias especies sapro"itas. +on microorganismos de "orma bacilar, pleomr"ica, que se agrupan en letras c(inas, Aram positivas. 'esarrollan con "acilidad en los medios de cultivo que contengan plasma o sangre. *ateria!e"7 2. Frotis de cultivo de Corynebacterium sp para colorear con Aram :. 9ultivo de Corynebacterium sp. en 0gar sangre ?. Kuego de colorantes para Aram Proceimiento7 2. 9olorear los "rotices presentados con Aram observar con lente de inmersin. 0preciar la "orma bacilar corta , gruesa en empali)ada :. 'escribir las colonias del cultivo en 0gar sangre := URP. Facultad de Medicina Re"u!tao"7 @acer esquema de lo observado en el microscopio CUESTIONARIO' 2. +e<ale oc(o caracter*sticas principales que aseguran que estamos "rente a un Staphylococcus aureus. :. Hu# in"ecciones produce mas "recuentemente el Staphylococcus saprophyticusI ?. 1n pacientes con "aringo amigdalitis aguda Gqu# "inalidad tiene (acer un cultivo de e!udado "aringeoI L porqu#I 5. 1n las (eces puede (aber +treptococcusI -. 9aracter*sticas principales para diagnosticar Streptococcus pneumoniae. '1+0RR>LL> :N URP. Facultad de Medicina TE*A &4 ' ENTEROBACTERIAS Introucci.n7 +on un grupo de microorganismos que (abitan el suelo, agua, materia en descomposicin e intestino del (ombre de los animales. La maor*a de las especies son sapro"itas oportunistas, producen in"ecciones nosocomiales, pero algunas son agentes causales de en"ermedades gastrointestinales, la Fiebre ti"oidea la disenter*a bacilar. 1stos g#rmenes son bacilos Aram negativos, no esporulados, que desarrollan "&cilmente en los medios de cultivo. 8odos "ermentan la glucosa poseen una diversidad de en)imas que permite clasi"icarlos en di"erentes g#neros de acuerdo al substrato utili)ado al producto terminal del metabolismo. 9arecen de la en)ima citocromo o!idasa. Para la identi"icacin se emplean estudios del metabolismo ,biotipo/ e inmunoserolgicos ,serotipo/. *ateria!e"7 2. +uspensin de (eces en solucin salina :. Placas petri con medio de Mac 9onUe, sembradas con cepas de Escherichia coli, Klebsiella, Proteus, Salmonella y Shigella. ?3 URP. Facultad de Medicina ?. Placas petri con medio de ++ agar, sembradas con cepas de Escherichia coli, Klebsiella, Proteus, Salmonella Shigella. 5. 8ubos con medios di"erenciales7 8+E ,tres a);cares (ierro/, LE0 ,lisina (ierro agar/, 9itrato Urea, todos sembrados con las cepas de Escherichia coli, Klebsiella, Proteus, Salmonella y Shigella. -. Kuego de colorantes para Aram. Proceimiento7 2. @acer un "rotis de la suspensin de (eces colorearlo con Aram. :. @acer un "rotis de cada una de la cepas presentadas colorearlo con Aram. ?. 1studiar comparativamente las caracter*sticas de desarrollo de las diversas especies bacterianas en los medios de Mac conUe agar ++. 5. 1studiar las reacciones bioqu*micas, producto del metabolismo bacteriano en los medios di"erenciales. 8+E LE0 Lactosa sacarosa ,pico/ Bia o!idativa7 acide) amarillo 'ecarbo!ilacin, color lila al "ondo Por alcalinidad de aminas libres Produccin de +@: 9olor negro ,sul"uro de (ierro/ 'esaminacin, color guinda por acide) de los radicales carbo!ilos libres. Alucosa ,"ondo/ %o utili)acin del amino&cido Bia "ermentativa7 acide) amarillo Encoloro al "ondo
Re"u!tao" ' Registrar los cambios observados producto de la actividad metablica de la especie bacteriana.
1sc(eric(ia coli Plebsiella Proteus +almonella +(igella Mac 9onUe ++ agar Alucosa Aas ?2 URP. Facultad de Medicina Lactosa @:+ 'esami$ nacin 'ecarbo!i lacin 9itrato Urea 8.+.E. TE*A &5 ' CA*PD(OBACTER ) 7E(ICOBACTER Introucci.n7 1stos g#neros agrupan a microorganismos con "orma (elicoidal, coma, en +, e!igentes para desarrollar en medios de cultivo. 1l Campylobacter se asocia con in"ecciones intestinales, para su aislamiento se requiere de medios de cultivo selectivos, enriquecidos, e incubados en ambiente con -. de 9>: a 5: o9 . >tra metodolog*a es (acer uso del lo delgado que el germen "iltrar la muestra por milipore de 3.5- mu. 1l Helycobacter pylori se asocia con gastritis ;lcera g&strica, para su diagnstico se debe investigar la produccin de ureasa la mor"olog*a t*pica en biopsias de la mucosa. *ateria!e" 7 2. Frotis de (eces de lactante, coloreados con Aram Bag :. 9orte (istolgico de mucosa g&strica , coloreados con @$1 ?. 9ultivo de Campylobacter sp. en 0gar sangre. ?: URP. Facultad de Medicina Proceimiento' 2. >bservar al microscopio con objetivo de inmersin las l&minas presentadas. Re"u!tao"7 Frotis de (eces Aram Bag 9amplobacter j, 9orte (istolgico de mucosa g&strica @elicobacter p. CUESTIONARIO7 2. 9u&l es el sustrato que divide a las enterobacterias en dos categor*asI :. +e<ale las enterobacterias productoras de +@:, evidenciado por el ennegrecimiento del medio. ?. +e<ale el agente de ;lceras gastro duodenales la en)ima ;til para identi"icarlo 5. GHu# ocasiona el Campylobacter euni cmo lo identi"icaI -. Hu# utilidad tiene el estudiar el metabolismo de la enterobacteriasI '1+0RR>LL> ?? URP. Facultad de Medicina TE*A &6 ' 1IBRIOS Introucci.n7 La "amilia Bibrionaceae comprende tres g#neros de importancia m#dica! "ibrio, #eromonas Plesiomonas. 8odos son de origen acu&tico, luego la contaminacin (umana es consecuencia de la ingesta de alimentos o agua con grandes cantidades de microorganismos. Los agentes patgenos mas importantes son "ibrio cholerae, "ibrio parahemol$ticus #eromonas. 8odos ellos son de "orma bacilar o curvada, Aram negativos, con movilidad polar. 'esarrollan con "acilidad en los medios de cultivo, "ermentan glucosa poseen una potente en)ima citocromo o!idasa. ?5 URP. Facultad de Medicina *ateria!e" 7 2. 9ultivo de "ibrio cholerae en caldo tripticase agar 89D+ ,sacarosa, bilis, citrato t(isul"ato/ :. 9ultivo de "ibrio parahemol$ticus en caldo tripticase agar 89D+ ?. Reactivo para detectar o!idasa. 5. Kuego de colorantes para Aram. Proceimiento7 2. @acer un "rotis de los cultivos en medio l*quido, de todas las cepas presentadas, colorearlos con Aram. >bservar con objetivo de inmersin. :. >bservar comparativamente el desarrollo de las cepas presentadas sembradas en 0gar 89D+, apreciar el cambio de color por la utili)acin de la "acaro"a. ?. Reali)ar la reaccin de o!idasa de las cepas presentadas. Re"u!tao"7 1i:rio c=o!erae 1i:rio ,ara=emo!itico Aram 0gar 89D+ ,sacarosa/ ?- URP. Facultad de Medicina TE*A &8 ' BACI(OS GRA* NEGATI1OS NO 0ER*ENTADORES Introucci.n7 9on #ste t#rmino se agrupa a microorganismos de di"erentes "amilias que (abitan en el medio ambiente o "orman parte de la "lora normal del cuerpo. +on patgenos oportunistas, que tienen en com;n la incapacidad para metaboli)ar los carbo(idratos por v*a "ermentativa. Enclue a las Pseudomonas, #cinetobacter #lcal$genes, , Cromobacterias, %lavobacterias, etc. 1n la pr&ctica estudiaremos los dos primeros. *ateria!e"7 2. 9ultivo de Pseudomonas aeruginosa en 9aldo nutritivo, 0gar Mac conUe, 0gar nutritivo. :. 9ultivo de Pseudomonas aeruginosa sembrado en medio 8+E 0gar movilidad ?C URP. Facultad de Medicina ?. 9ultivo de #cinetobacter en 9aldo nutritivo, 0gar Mac conUe 0gar nutritivo 5. 9ultivo de 0cinetobacter en medio 8+E 0gar movilidad -. Reactivo para reaccin de o!idasa C. Kuego de colorantes para Aram Proceimiento7 2. >bservar el desarrollo en super"icie de la Pseudomonas a. en caldo nutritivo. :. @acer "rotis a partir del caldo con Pseudomonas colorearlo con Aram ?. 1studiar comparativamente las colonias de Pseudomonas 0cinetobacter en los medios de Mac 9onUe 0gar nutrtivo. 0preciar "ormacin de pigmento verde que di"unde en el medio de 0gar nutrtivo sembrado con Pseudomonas. 5. >bservar el comportamiento de ambas cepas en el medio de 8+E , desarrollo slo en super"icie / en el medio movilidad -. Reali)ar la reaccin para >!idasa. Re"u!tao"7 Pseudomonas 0cinetobacter 9oloracin Aram
0gar Mac %utritivo 9aldo %utritivo ?J URP. Facultad de Medicina
8+E 9itocromo >!idasa CUESTIONARIO7 2. 'e los vibrios estudiados, Gcu&l es de origen marino cmo lo di"erencia del otroI :. Para in"ectarme con clera Gcu&l es la dosis m*nima in"ectanteI ?. +e<ale las bacterias productoras de citocromo e!idasa. 5. 'escriba las caracter*sticas de cultivo de la Pseudomonas ;tiles para su diagnstico -. GHu# utilidad tiene estudiar 0cinetobacterI '1+0RR>LL> TE*A &; ' (ISTERIA Introucci.n7 La &isteria monocitgenes, especie bacteriana sapro"ita, (abita en los vegetales en el intestino de los animales. La in"eccin (umana est& relacionada a la ingesta de alimentos a la contaminacin de los genitales "emeninos, con riesgo en la gestante producir sepsis neonatal, en adultos inmunocomprometidos puede producir meningitis. La identi"icacin se orienta por la mor"olog*a bacilar corta, Aram positivo, desarrolla en 0gar sangre produciendo una discreta (emlisis. Lo m&s caracter*stico es la capacidad de desarrollar a bajas temperaturas poseer movilidad slo a :: o9
*ateria!e"7 2. Frotis de cultivo de &isteria m, para colorear con Aram. ?= URP. Facultad de Medicina :. 9ultivo de &isteria m. en 0gar angre ?. 9ultivo de &isteria m. en 0gar blando movilidad, incubado a :: o9 a ?J o9 Proceimiento7 2. 9olorear el "rotis con Aram observar con lente de inmersin. :. >bservar las caracter*sticas de las colonias del cultivo en 0gar sangre ?. >bservar el desarrollo mvil en agar blando a :: o9, por la presencia de turbide) en el tercio superior del tubo dando una imagen de paraguas. Re"u!tao"' @acer esquema de lo observado 9oloracin de Aram 0gar movilidad ?J V9 :: V9 TE*A &@ ' BRUCE((A Introucci.n7 La brucelosis es una )oonosis. 1n los animales la in"eccin es sist#mica de locali)acin en los rganos genitales gl&ndulas mamarias. Produce aborto en animales 1ste microorganismo tiene cierta especi"icidad de especie animal, asi Brucella abortus es selectiva para ganado vacuno, Brucella mellitensis para ganado caprino lanar, Brucella suis para el porcino. 1l (umano se in"ecta ingiriendo productos l&cteos contaminados, luego (ace septicemia con locali)acin en el tejido ret*culo endotelial ,(*gado, m#dula sea ba)o/. ?N URP. Facultad de Medicina 1ste microorganismo es mu peque<o, tipo coco$bacilar, Aram negativo, que desarrolla con lentitud en los medios de cultivo ,? a J d*as/ dando colonias caracter*sticas. *ateria!e"7 2. Frotis de cultivo de Brucella mellitensis, para colorear con Aram :. @emocultivo en medio bi"&sico ,Rui) 9asta<eda/ para aislar Drucella ?. Kuego de colorantes para Aram 5. +uero de paciente con brucelosis -. 0nt*geno de Drucella para aglutinacin en l&mina Proceimiento7 2. 9olorear con Aram el "rotis de cultivo. >bservarlo al microscopio apreciar el diminuto tama<o de #ste microorganismo. :. >bservar el sistema bi"&sico para aislar la Drucella a partir de l*quidos org&nicos, asi como las caracter*sticas de las colonias. ?. +obre un portaobjetos depositar una microgota ,3.35/ del suero del paciente a<adirle una microgota del ant*geno. Me)clar por rotacin durante ? minutos, apreciar la presencia de aglutinacin ,grumos/, cuando (a anticuerpos. Re"u!tao"7 Registrar lo observado 9oloracin Aram Medio bi"&sico @emocultivo TE*A $% ' (ACTOBACI((US ) 1AGINOSIS Introucci.n7 Los &actobacillus son un grupo de g#rmenes sapro"itos que tienen la capacidad de producir &cido l&ctico como producto "inal del metabolismo de los (idratos de carbono. La especie &actobacillus acidphilus (abita las v*as genitales "emeninas ,bacilo de 'oderlein/ metaboli)a el glucgeno manteniendo el p@ &cido de la )ona vaginal, evitando la sobrecontaminacin. 53 URP. Facultad de Medicina 9uando las de p@ se modi"ican (acia la neutralidad se crean condiciones que permiten la proli"eracin de algunos microorganismos patgenos oportunistas. Un ejemplo t*pico es el cuadro cl*nico denominado vaginosis, que se inicia con la disminucin de la produccin estrog#nica que condiciona la elevacin del p@ vaginal (acia la neutralidad, permitiendo la proli"eracin de microorganismos como 'ardnerella, (obiluncus, etc. 'ardnerella, bacilo que colorea variablemente con el Aram, anaerobio "acultativo, que invade las c#lulas vaginales dando una imagen caracter*stica denominada c#lulas clave ,clu cells/. (obiluncus, bacilo curvado, en (o), Aram variable, anaerobio. *ateria!e"7 2. Frotis de "lujo vaginal normal, coloreado con Aram :. Frotis de "lujo vaginal con vaginosis coloreado con Aram Proceimiento7 2. >bservar con objetivo de inmersin el "rotis coloreado Re"u!tao"' @acer esquema de lo observado en el microscopio TE*A $& ' BARTONE((A Introucci.n7 +iendo el Per; un pa*s end#mico de bartonelosis estamos obligados a pensar en #sta en"ermedad cuando un paciente proviene de )onas verrucgenas. 1n la "ase (em&tica el diagnstico se (ace mediante la b;squeda de los microorganismos en los (emat*es, por estudios microscpicos de "rotices sangu*neos coloreados con Wrig(t o Aiemsa , o mediante cultivos incubados a :: o9. 52 URP. Facultad de Medicina 1n la "ase (istioide el diagnstico es slo por cultivo, asociado a datos epidemiolgicos caracter*sticas (istolgicas de la verruga. *ateria!e"7 2. Frotices sangu*neos de pacientes con bartonelosis, coloreados con Wrig(t. Proceimiento7 2. >bservar al microscopio con objetivo de inmersin, apreciar la variacin del tama<o de los glbulos rojos ,anisocitosis/, el di"erente tono de color de los (emat*es ,policromato"ilia/ la presencia de microorganismos coco$bacilares dentro de los glbulos rojos. Re"u!tao"7
CUESTIONARIO7 2. GHu# grupo (umano es proclive a la listeriosisI :. G9u&les son las muestras ideales para aislar la DrucellaI L que medio se utili)aI ?. 'escriba el concepto de vaginosis agentes condicionantes. 5. G0 qu# se denomina )ona verrucgenaI. +e<ale el agente transmisor de D. bacilli"ormis de D quintana. -. +e<ale las di"erentes especies de Drucella su (ospedero. '1+0RR>LL> 5: URP. Facultad de Medicina TE*A $$ ' BACI((US Introucci.n7 1ste g#nero agrupa a un gran n;mero de especies bacterianas que (abitan en el medio ambiente, algunas son utili)adas en el campo de la biotecnolog*a como productoras de antibiticos ,polimi!ina, bacitracina/, alco(oles, en)imas vitaminas. +lo una especie, el Bacillus anthracis , es causante de en"ermedad en (umanos animales, denominado carbunco. 5? URP. Facultad de Medicina 1n la pr&ctica estudiaremos la especie Bacillus subtilis, sapro"ito contaminante ambiental, para apreciar sus caracter*sticas de bacilo grande, Aram positivo, "ormador de espora no de"ormante que cultiva en condiciones aerbicas. *ateria!e"7 2. 9ultivo de Bacillus subtilis en caldo nutritivo :. 9ultivo de Bacillus subtilis en 0gar nutritivo ?. 9ultivo de Bacillus subtilis en tubo con 0gar blando 5. Kuego de colorantes para Aram Proceimiento7 2. >bservar las caracter*sticas de desarrollo del D subtilis en la super"icie de los medios l*quidos agar blando. :. 1studiar las caracter*sticas de las colonias en agar nutritivo ?. @acer un "rotis a partir del caldo nutritivo colorearlo con Aram
Re"u!tao"' @acer esquema de lo observado. 'esarrollo en 8(ioglico lato >bservacin de esporas
TE*A $- ' C(OSTRIDIU* Introucci.n7 +on microorganismos ampliamente distribuidos en la naturale)a en el intestino de los animales (erb*voros. La in"eccin (umana es circunstancial a un trauma, a la ingesta de alimento contaminado a la presencia de e!oto!ina espec*"ica. +e pueden agrupar en citot!icos, enterot!icos los productores de into!icaciones espec*"icas como el t#tanos el botulismo. 55 URP. Facultad de Medicina 8odos los 9lostridium son bacilos, Aram positivos, "ormadores de esporas que de"orman al bacilo desarrollan en condiciones de anaerobiosis. *ateria!e"7 2. Frotis de secrecin de (erida gangrenosa coloreada con Aram. :. 9ultivo de Clostridium sp, en medio de t(ioglicolato agar semislido ?. +istemas para obtener anaerobiosis Proceimiento7 2. >bservar con objetivo de inmersin los "rotices coloreados, anotar las caracter*sticas de los bacilos. :. >bservar la "orma de desarrollo, alejada de la super"icie, en el medio de t(ioglicolato. ?. 1valuar los sistemas para obtener anaerobiosis. Re"u!tao"7
'esarrollo en 8(ioglico lato >bservacin de esporas TE*A $4 ' NEISSERIAS Introucci.n7 1l (umano es el ;nico reservorio de g#nero Neisseria, (abitan el tracto respiratorio alto sus mucosas. 'os especies tiene un rol patgeno de"inido, la Neisseria gonorrhoeae la Neisseria meningitidis . 5- URP. Facultad de Medicina Las neisserias son cocos Aram negativos que se agrupan en pares, son mu sensibles a las condiciones adversas para su desarrollo en medios de cultivo, requiriendo medios enriquecidos ,8aer Mart*n/ , producen una en)ima respiratoria que las identi"ica , la citocromo o!idasa. *ateria!e"7 2. Frotis de secrecin uretral de paciente con Aonorrea, coloreado con Aram 0)ul de metileno. :. 9ultivo de %eisseria sp en 0gar 8aer Mart*n, incubado a ?J o9 en ambiente con 9>:. ?. Reactivo tetrametil para "enil diamino al 2 . para detectar la en)ima o!idasa 5. Kuego de colorantes para Aram Proceimiento7 2. >bservar con objetivo de inmersin los "rotices de secrecin uretral. 0preciar la "orma de diplococo su ubicacin intracelular. :. >bservar las caracter*sticas de las colonias del cultivo de %eisseria ?. Reali)ar la reaccin de o!idasa7 tomar una peque<a porcin de colonias ponerla en contacto con el reactivo, observar de inmediato el cambio del color por la o!idacin del reactivo. Re"u!tao"7 Registrar lo observado. 9itocromo o!idasa Aram 0)ul de metileno Frotis de secrecin uretral TE*A $5 ' TREPONE*A Introucci.n7 1l )reponema pallidum es agente causal de la s*"ilis o Lues. 1s una espiroqueta que no cultiva en medios inertes, luego el estudio de #ste microorganismos debe (acerse en base a e!&menes microscpicos de la muestra o a la demostracin de anticuerpos en sangre. 5C URP. Facultad de Medicina 1l e!amen microscpico con condensador de campo oscuro, se reali)a a partir de las lesiones d#rmicas, en la )ona de inoculacin, denominados c(ancro duro ,en la primera etapa/ en las "ormaciones papulosas en toda la piel, denominada roseola ,en la segunda etapa/. Para la demostracin de anticuerpos se dispone de dos categor*as de pruebas, las que usan ant*geno %> trepon#mico7 B'RL, RPR, Pa(n, Wasserman, de gran sensibilidad pero poca especi"icidad las que utili)an un treponema como ant*geno7 Reiter, F80, E8P, denominadas con"irmatorias. *ateria!e"7 2. +uero pacientes con Lues :. 0nt*geno no trepon#mico 7B'RL o RPR ?. L&minas portaobjetos. Proceimiento7 2. 'epositar una gota ,3.3- ml/ de suero problema en una l&mina o tarjeta. :. 0<adir una gota de ant*geno me)clar por rotacin durante ? minutos ?. >bservar la "ormacin de grumos o p#rdida de la (omogeneidad de la suspensin cuando la reaccin es positiva ,precipitacin/ Re"u!tao"7
%egativo Positivo CUESTIONARIO' 2. 'escriba las condiciones para aislar un 9lostridium. G9mo lo apreci en la pr&cticaI :. +i un paciente tiene B'RL positivo : diluciones. '# su opinin recomendaciones. ?. +i todas la %eisserias ,sapro"itas patgenas/ mor"olgicamente son iguales, qu# debo (acer para identi"icar a las especies patgenasI 5J URP. Facultad de Medicina 5. Porqu# es tan ;til el "rotis coloreado con Aram para diagnosticar in"eccin por gonorreaI -. Hu# signi"ica F80, se<ale la utilidad. '1+0RR>LL> TE*A $6 ' *DCOBACTERIU* Introucci.n7 5= URP. Facultad de Medicina 1ste g#nero inclue a dos especies patgenas para el (ombre, que producen en"ermedades de importancia en +alud P;blica, son la 8uberculosis la Lepra. 1stos micoorganismos ti<en con una coloracin espec*"ica, la de Mie(l$%eelsen. 1l (ycobacterium tuberculosis ,bacilo de Poc(/ desarrolla en medios de cultivo mu nutritivos como el LoXenstein Kensen, >gaXa, MiddlebrooU tarda mas de 2- dias en "ormar colonias. 1stas caracter*sticas obligan, a que las muestras que van a ser cultivadas ,esputo, contenido g&strico/ para aislar Mcobacterium, deban seguir un proceso de (omogeni)acin decontaminacin de g#rmenes comunes de desarrollo r&pido, lo que se consigue a<adiendo a la muestra (idr!ido de sodio, "os"ato trisdico o % acetil cisteina, seguidamente se neutrali)a la muestra con &cido (asta obtener un p@ de J.: . 0dem&s del Mcobacterium tuberculosis bovis se describen los at*picos, Runon los clasi"ica de acuerdo a la velocidad de desarrollo "ormacin de pigmento en cuatro grupos7 E 'esarrollo lento "oto cromgenos ,Pansasii, simiae/, EE 'esarrollo lento escoto cromgenos ,gordonae, scro"ulaceum/, EEE 'esarrollo lento no cromgeno ,avium, t#rrea/ EB 'esarrollo r&pido antes de los siete d*as ,"ortuitum, smegmatis, p(lei/ 1l diagnstico microscpico de la tuberculosis se reali)a mediante la baciloscop*a, procedimiento de bajo costo, de elevada especi"icidad de gran utilidad en el diagnstico evolucin del tratamiento. *ateria!e"7 2. Frotices de esputo para colorear con Mie(l$%eelsen :. 9ultivo de (ycobacterium tuberculosis en medio LoXenstein Kensen ?. 9ultivo de (ycobacterium at$picos en medio LoXenstein Kensen Proceimiento7 2. 9olorear los "rotices con el m#todo de Mie(l$%eelsen. >bservarlos con objetivo de inmersin. :. 9ontar los bacilos &cido resistentes observados en 233 campos microscpicos. ?. 9ali"icar la l&mina de acuerdo a la siguiente tabla 7 %egativo7 no se observan bacilos Positivo 2 R 2 a 23 bacilos en 233 campos observados Positivo : R de 23 a 233 bacilos en 233 campos observados Positivo ? R mas de 233 bacilos en 233 campos observados. 5. Registrar las caracter*sticas de las colonias del (ycobacterium tuberculosis -. Registrar las car&cter*sticas de las colonias de los (ycobacterium at$picos
Re"u!tao"7 D09EL>+9>PE0 7 5N URP. Facultad de Medicina
9UL8EB>+7 Revisar el "undamento de la (omgeni)acin, decontaminacin concentracin previa de la muestra para ser cultivada. >bservar la caracter*stica de las colonias el pigmento en el medio de LoXenstein de cepas de Mcobacterium tuberculosis Mcobacterium at*picos. +ensibilidad o resistencia a los "&rmacos7 La utilidad de estudiar #ste comportamiento in Bitro es de vigilancia en paciente que no (an recibido tratamiento previo ,resistencia primaria/ en los paciente con recaidas o abandono del tratamiento ,resistencia secundaria/ como indicador de multidrogoresistencia ,M'R/ Para ello se utili)a el concepto de las proporciones, se emplean diluciones 2T2,333, 2T23,333 2T233,333 de una suspensin de las colonias problemas que luego se siembran en medios de LoXenstein sin antibitico con "&rmaco individual en concentraciones equivalentes al ME9. Luego se incuban a ?JO9 cuando (a desarrollo se cuentan las colonias, considerando como 233 . el tubo sin "&rmaco se obtiene as* la proporcin denominada cr*tica de resistencia a cada droga. -3 URP. Facultad de Medicina TE*A $8 ' 0(ORA BACTERIANA NOR*A( Introucci.n7 Los microorganismos que (abitan el medio ambiente ,suelo, agua, aire, residuos org&nicos/ est&n en relacin constante con los organismos vivientes. 1l cuerpo (umano est& poblado de microorganismos en las )onas e!puestas al ambiente, asi como en la lu) intestinal. 1sta "lora residente cumple una "uncin determinada para conservar la salud como sinteti)ar vitamina P, completar el catabolismo de los alimentos, contribuir a su absorcin, prevenir la coloni)acin de bacterias patgenas, etc. 1n determinadas circunstancias como traumatismos, (eridas, sistema inmune deprimido, o sobrepoblacin bacteriana, la "lora residente puede producir en"ermedades. 1n la pr&ctica se va a demostrar la presencia de microorganismos en diversas &reas del cuerpo para comprobar la presencia de bacterias autctonas. 2. 1!udado "ar*ngeo :. Regin interdigital de la mano ?. Regin a!ilar 5. Regin conducto auditivo e!terno -. 0mbiente del dormitorio de un alumno *ateria!e"7 2. @isopos de algodn est#ril :. Daja lengua ?. Placas petri con agar sangre 0gar +abouraud 5. 8ubos con ? ml de caldo %utritivo -. Kuego de colorantes para Aram Proceimiento7 2. +eguir las instrucciones del Pro"esor para la toma de las di"erentes muestras7 :. 9on auda del (isopo baja lengua tomar una muestra de e!udado "ar*ngeo. ?. @umedecer un (isopo en 9aldo nutritivo para cada una de las regiones se<aladas 5. +embrar el (isopo en la super"icie de 0gar sangre e Encubar a ?J o9 T:5 (oras. -. La placa de 0gar +abouraud usada por el alumno en su dormitorio, se incubar& a temperatura ambiente. C. >bservar el tipo de colonias aisladas, presencia de (emlisis, pigmento, etc. J. Reali)ar "rotices coloraciones de Aram para (acer una identi"icacin primaria. -2 URP. Facultad de Medicina Re"u!tao"7 Muestra 9ultivoTcolonias 9oloracin de Aram Posibilidad diagnstica Regin interdigital de mano Regin a!ilar 9onducto auditivo e!terno 0mbiente
-: URP. Facultad de Medicina CUESTIONARIO7 2. GPorqu# los Mcobacterium no toman "&cilmente los colorantes acuososI :. +e<ale las ventajas de la bacilosocop*a en el diagnstico de la tuberculosis. ?.GHu# microorganismos se encontraron en los cultivos tomados en las diversas regiones del cuerpoI 5.GHu# microorganismos in"ectan con mas "recuencia a pacientes de cuidados intensivos o neonatos prematurosI L porqu#I '1+0RR>LL> -? URP. Facultad de Medicina PROTOCOLO I. : CULTIVO DE EXUADO NASAL Materiales: Hisopo de algod! de " p#lgadas$ est%ril &'( Pla)as petri )o! Agar sa!gre * agar +ipert!i)o &'( Pro)edi,ie!to: Se to,ar- a #! al#,!o ,#estra de e.#dado !asal$ para lo )#al el pro/esor +ar- la de,ostra)i! respe)ti0a. 1rotar &sie,2ra( el +isopo e! #! ter)io de la s#per/i)ie de los ,edios de )#lti0o$ l#ego )o! a*#da del asa de plati!o )o!)l#ir la sie,2ra por agota,ie!to. Rot#lar e i!)#2ar a 345C d#ra!te 67 +oras. I!terpreta)i!: E! el ,edio Hipert!i)o$ sele)ti0o para el desarrollo del Stap+*lo)o))#s$ sele))io!ar )olo!ias *: o A partir de ellas +a)er #! /rotis * )olorearlo )o! 8ra,$ o2ser0ar al ,i)ros)opio. o So2re #! portao29etos$ po!erlas e! )o!ta)to )o! #!a gota de Ag#a o.ige!ada. Apre)iar la /or,a)i! de 2#r2#9as por la a)ti0idad de la )atalasa. o Sele))io!ar las )olo!ias :#e +a! )a,2iado de )olor a a,arillo &,eta2olis,o del ,a!itol( * se,2rarlas e! plas,a +#,a!o$ para dete)tar la prod#))i! de la e!;i,a )oag#lasa. &i!)#2ar 345C . <6 +oras. E! el agar sa!gre$ sele))io!ar )olo!ias pe:#e=as apla!adas )o! al/a +e,lisis$ a partir de las )#ales +a)er /roti)es para )olorear )o! 8ra,$ e! 2#s)a de diplo)o)os la!)eolados 8ra, positi0os e! )ade!as )ortas. Correspo!die!tes a !e#,o)o)o. -5 URP. Facultad de Medicina PR>8>9>L> EE. 9UL8EB> '1 14U'0'> F0RE%A1> Materiales: Hispo de algod! de " p#lgadas$ est%ril &'( T#2o )o! '> ,l de agar !#triti0o li)#ado &>?5C( &'( 1ras)o )o! > ,l de )aldo !#triti0o est%ril &'( T#2o )o! '.? ,l de sa!gre est%ril &'( Pla)a de petri est%ril &'( Pro)edi,ie!to: Se to,ar- a #! al#,!o ,#estra de e.#dado /ar@!geo$ para lo )#al de2er- a2rir la 2o)a * pro!#!)iar la letra AAB$ para e.po!er la ;o!a /ari!goC a,igdalia!a. Co! la a*#da del +isopo /rotar la ;o!a e.p#esta * l#ego depositar el +ispo e! el /ras)o )o! > ,l de )aldo !#triti0o$ rotarlo e!%rgi)a,e!te &,#estra(. Dese)+ar el +ispo. Retirar del 2a=o ,ar@a el t#2o )o! agar li)#ado$ a=adirle dos AasadasB de la ,#estra. Taparlo * rotarlo e!tre las ,a!os. I!,ediata,e!te a=adir '.? ,l de sa!gre al t#2o )o! agar li)#ado * ,#estra. Taparlo. Rotarlo e!%rgi)a,e!te e!tre las ,a!os$ +asta la +o,oge!i;a)i!. E! )o!di)io!es ade)#adas &9#!to al ,e)+ero$ si! +a2lar !i toser$ et).($ destapar la pla)a de petri 0a)@a est%ril * 0erter e! ella el agar li)#ado )o! sa!gre * ,#estra. Tapar * esperar :#e se solidi/i:#e. Rot#lar e I!)#2ar a 345C d#ra!te 67 +oras. I!terpreta)i!: O2ser0ar el desarrollo de )olo!ias de!tro de agar. D#s)ar las )olo!ias aisladas$ des)ri2irlas * apre)iar el )o,porta,ie!to )o! la sa!gre$ si +a* +e,lisis total &2eta( o par)ial &al/a(. Ha)er #so del ,i)ros)opio estereos)pi)o. -- URP. Facultad de Medicina PROTOCOLO III. : ESTUDIO DACTERIOLE8ICO DE HECES &Copro)#lti0o( Materiales: 1ras)o pe:#e=o )o! s#spe!si! de +e)es e! sol#)i! sali!a &'( L-,i!as portao29etos &<( Pla)as de petri )o!te!ie!do ,edios de )#lti0o sele)ti0os: Agar Ma) )o!Fe* * Agar SS. &D#s)ar )o,posi)i!( &'( Pro)edi,ie!to: Co! a*#da del asa de plati!o +a)er #! /rotis de la s#spe!si! de +e)es$ /i9arla al )alor * )olorearla )o! 8ra,. O2ser0ar al ,i)ros)opio la di0ersidad 2a)teria!a. Ha)er es:#e,a e! la g#@a de pr-)ti)as. Co! el asa de plati!o$ se,2rar por estr@a * agota,ie!to #!a asada de la s#spe!si! de +e)es e! la s#per/i)ie de los ,edios sele)ti0os. Rot#lar la pla)a petri e i!)#2arla a 345C d#ra!te 67 +oras. I!terpreta)i!: E! los ,edios de )#lti0o #tili;ados el s#strato 2ase e,pleado es la La)tosa * el i!di)ador de pH ro9o !e#tro. L#ego las )olo!ias de )olor ro9o so! a:#ellas :#e +a! ,eta2oli;ado la la)tosa &Es)+eri)+ia$ GHe2siella$ E!tero2a)ter $ Citro2a)ter(. E! )a,2io las )olo!ias i!)oloras so! las :#e !o +a! ,eta2oli;ado la la)tosa &Prote#s$ Sal,o!ella$ S+igella(. El ,edio de SS )o!tie!e ade,-s +ierro$ para dete)tar a:#ellas 2a)terias )apa)es de ,eta2oli;ar el A;#/re de los a,!io-)idos$ &Sal,o!ella$ Citro2a)ter * Prote#s($ /or,a!do s#l/#ro de +ierro :#e es de )olor !egro$ l#ego las )olo!ias se te=ir-! de !egro. Se de2e sele))io!ar #!a )olo!ia aislada para reali;ar las di0ersas pr#e2as ,eta2li)as &TSI$ LIA$ Citrato$ #rea$ ,o0ilidad$ et)( para ide!ti/i)ar el A2iotipoB o g%!ero. &DEMOSTRATIVO(. -C URP. Facultad de Medicina PR>8>9>L> EB7 0AU0 P>80DL1 &. Introucci.n 7 Muc(os procesos in"ecciosos son transmitidos por v*a oral, siendo el agua el ve(*culo principal. +e puede se<alar in"ecciones como la @epatitis 0 ,in"ecciosa/, 1nterovirus ,polio/, Rotavirus, Bibrio c(olerae, +almonelosis, entre otras. 1l agua de bebida debe tener caracter*sticas organol#pticas, qu*micas bacteriolgicas aceptables para no producir da<o al (umano, denomin&ndole potable. 'esde el punto de vista microbiolgico el agua potable debe reunir las siguientes caracter*sticas7 2. Dacterias mes"ilas 7 1n n;mero in"erior a -33 UF9 en 233 ml de agua :. Dacterias coli"ormes7 1n n;mero in"erior a ? UF9 en 233 ml de agua ?. 1sc(eric(ia coli7 0usente en 233 ml de agua 5. Pseudomonas aeruginosa7 0usente en 233 ml de agua %ota7 UF9 unidades "ormadoras de colonias $. Proceimiento' para demostrar el n;mero m&s probable de bacterias contenidas en una muestra de agua, se siembra por triplicado, en medio l*quido, tres vol;menes de agua ,23 ml, 2.3 ml 3.2 ml/. Encubar a ?JO9 por :5 (oras. >bservar la turbide) de los cultivos re"erirlos a la 8abla de @osUins. 23 ml agua 2.3 ml agua 3.2 ml agua %MP en 233 ml 0AU0 23 ml agua 2.3 ml agua 3.2 ml agua %MP en 233 ml 0AU0 $$$ $$$ 2 ? ? $$$ $$$ :? $$$ 2 $$$ ? ? $$$ 2 ?N 2 $$$ $$$ 5 ? $$$ : C5 2 $$$ 2 J ? 2 $$$ 5? 2 2 $$$ J ? 2 2 J- 2 2 2 22 ? 2 : 2:3 2 : $$$ 22 ? : $$$ N? : $$$ $$$ N ? : 2 2-3 : 3 2 25 ? : : :23 : 2 $$$ 2- ? ? $$$ :53 : 2 2 :3 ? ? 2 5C3 : : 3 :2 ? ? : 2,233 -J URP. Facultad de Medicina : : 2 := +e anota el n;mero de tubos positivos ,turbios/ con cada volumen de agua se obtiene el n;mero de bacterias m&s probable en 233 ml de agua. PROTOCOLO V : CULTIVO DE ORINA &UROCULTIVO( Materiales: 1ras)os est%riles de 2o)a a!)+a$ de >? ,l de )apa)idad Pla)as petri )o! ,edios de Agar Ma) Co!Fe* &MC(* Agar sa!gre&AS( Asa de sie,2ra )ali2rada$ de ?.?' ,l Pro)edi,ie!to: To,a de la ,#estra: o Co!di)io!es del pa)ie!te: si! terapia a!ti2iti)a tres d@as pre0ios al est#dio e +igie!e ge!ital a!tes de e,itir la ori!a dire)ta,e!te e! el /ras)o. o La ,#estra de2e ser pro)esada e! las dos pri,eras +oras de re)ep)io!ada$ de !o ser posi2le )o!ser0arla a > IC +asta por 67 +oras. Sie,2ra: To,ar #!a asada &?.?',l( de ori!a e i!o)#larla e! la s#per/i)ie de )ada #!o de los ,edios de Agar MC$ AS$ sie,2ra por estr@as paralelas. To,ar #!a asada * depositarla e! #! portao29etos$ /i9arla * )olorearla )o! 8ra,. O2ser0ar al ,i)ros)opio. I!terpreta)i!: Est#diar las )olo!ias desarrolladas: o Co!tarlas$ )ada )olo!ia represe!ta '$??? 2a)terias por ,l. C#e!tas i!/eriores a '?$??? J,l se )o!sidera! )o!ta,i!a!tes de #retra *Jo ge!itales. o Ide!ti/i)ar las )olo!ias desarrolladas E! el /rotis de ori!a )oloreado )o! 8ra, ge!eral,e!te !o se o2ser0a g%r,e!es. La prese!)ia de le#)o)itos * a2#!da!tes g%r,e!es es i!di)ati0o de i!/e))i!. -= URP. Facultad de Medicina La prese!)ia de #! solo tipo de )olo!ias * desarrollo +o,og%!eo so! i!di)ati0os de :#e el ger,e! aislado es el )a#sa!te de la i!/e))i!. Ha)er la sie,2ra para el a!ti2iogra,a. CCCCCCCCCCCCCCCCC PROTOCOLO VI: CULTIVO DE SAN8RE &HEMOCULTIVO( Materiales Heri!ga des)arta2le de '? > ,l Ligad#ra Material desi!/e)ta!te &algod!$ al)o+olC*odado( 8#a!tes des)arta2les 1ras)o )o! ,edio de )#lti0o l@:#ido &I!/#si! de )ere2ro * )ora;!$ Caldo Tripti)ase so*a$ Caldo !#triti0o K e.tra)to de le0ad#ra K a!ti)oag#la!te(. Pro)edi,ie!to Lo ideal es :#e el pa)ie!te est% e! el i!i)io /e2ril * :#e !o est% to,a!do a!ti2iti)os. La a#se!)ia de estas dos )o!di)io!es !o i,pide la to,a de ,#estra. Desi!/e)tar proli9a,e!te la ;o!a de p#!)i!. O2te!er sa!gre e! 0ol#,e! &> a '? ,l( e:#i0ale!te al '?L del )o!te!ido del /ras)o de )#lti0o. Verter la sa!gre e! el ,edio de )#lti0o$ p#!;a!do el tap! del /ras)o$ pre0ia,e!te desi!/e)tado * si! to)ar la ag#9a. Rot#lar: No,2re$ 1e)+a * Hora de to,a de ,#estra. SegM! el )#adro )l@!i)o se p#ede! to,ar 0arias ,#estras s#)esi0as. I!)#2a)i!: el /ras)o +e,o)#lti0o se )o!ser0ar- e! i!)#2a)i! a 34IC para la ,a*or@a de 2a)terias :#e +a)e! 2a)terie,ias * a <"IC )#a!do se sospe)+a de Darto!elosis. I!terpreta)i!: -N URP. Facultad de Medicina Le)t#ra: Todos los d@as se o2ser0a si +a* )a,2ios es el aspe)to ,a)ros)pi)o del +e,o)#lti0o &t#r2ide;$ )olor g#i!da e! el /o!do$ o prese!)ia de gr#,os e! la s#per/i)ie del sedi,e!to de +e,at@es(. Ha)er #! /rotis * )olorearlo )o! 8ra,. E! /#!)i! de lo o2ser0ado e! el 8ra, se reali;ar-! los s#2)#lti0os e! di0ersos ,edios de )#lti0o$ para ide!ti/i)ar el ,i)roorga!is,o aislado. Reali;ar el a!ti2iogra,a respe)ti0o. PROTOCOLO VII: CULTIVO DE SECRECION DE HERIDAS. Materiales: Hisopo de algod! o si!t%ti)o est%ril T#2o )o! tapa de ros)a est%ril )o!te!ie!do ,edio de tra!sporte Medios de )#lti0o: Caldo T+iogli)olato &CT+($ Agar Sa!gre &AS($ Agar Ma) Co!Fe* &MC($ Medio Hipert!i)o &MH( * Agar Sa2o#ra#d &SAD( L-,i!a porta o29etos Pro)edi,ie!to: Es re)o,e!da2le :#e el pa)ie!te !o est% to,a!do a!ti2iti)os La lesi! do!de se 0a a to,ar la ,#estra !o de2e te!er )re,as o a!ti,i)ro2ia!os H#,ede)er el +isopo )o! la se)re)i!$ te!ie!do )#idado de !o to)ar s#per/i)ie de piel sa!a. Ha)er #! pe:#e=o /rotis e! el portao29etos e i!trod#)ir el +isopo e! el t#2o )o! ,edio de tra!sporte. La sie,2ra de2e ser i!,ediata$ de !o ser posi2le el t#2o )o! ,edio tra!sporte * ,#estra de2e! )o!ser0arse a >IC +asta s# pro)esa,ie!to &!o ,as de 67 +oras( Sie,2ra: Co! el +isopo +a)er #! pe:#e=o /rotis e! #! -!g#lo de )ada ,edio de )#lti0o$ para l#ego )o! el asa de sie,2ra distri2#ir la ,#estra por agota,ie!to. I!)#2ar las pla)as a C3 URP. Facultad de Medicina 34IC por <6 a 67 +oras. A=adir al t#2o )o! ,edio de tra!sporte KJC 3 ,l de )aldo t+iogli)olato e i!)#2ar a 34IC. I!terpreta)i!: La o2ser0a)i! del /rotis de la se)re)i! )oloreado )o! 8ra, es de s#,a i,porta!)ia para i!terpretar el )#lti0o. La le)t#ra de los )#lti0os se +ar- )o! la a*#da del Pro/esor Ide!ti/i)ar las )olo!ias aisladas$ )o! a*#da de la g#@a de pr-)ti)as$ reali;ar las pr#e2as 2io:#@,i)as o e!;i,-ti)as !e)esarias. Ha)er la sie,2ra parta el a!ti2iogra,a. 81M0 := 7 @>%A>+ 0MDE1%80L1+ Introucci.n7 Los (ongos ambientales son los que viven a e!pensas de la materia inerte. La maor*a son sapro"itos, algunas especies son productoras de antibiticos otros pueden actuar como alergenos ocasionando sensibili)acin. 1stos (ongos pueden ser oportunistas producir in"ecciones secundarias en pacientes con inmunode"iciencias, con in"ecciones crnicas 1n los medios de cultivo desarrollan con gran "acilidad en :5 a 5= (oras. *ateria!e"7 2. 9ultivo de Penicillium, 0spergillus, Fusarium R)opus en medio de +abouraud :. Microcultivos en l&mina de cada una de los (ongos en estudio. ?. 9ultivo de R(odotrula en medio +abouraud. Proceimiento7 2, 1studiar las caracter*sticas macroscpicas de las colonias ,aspecto, color, consistencia, pigmento di"undido etc./ :. 9on objetivo de menor aumento ,234/ observar los microcultivos describir la caracter*stica de los micelios, conidias conidi"oros. Re"u!tao"7 PEN*C*&&*+(7 colonias pulverulentas de color a)ul verdoso. @i"as tabicadas con conidi"oros rami"icados C2 URP. Facultad de Medicina en su e!tremo distal con la apariencia de pincel conidias dispuestas en cadena .
#SPE,'*&&+S7 colonias "ilamentosas de color blanco, amarillo, verde, marrn o negro. @i"as tabicadas con ensanc(amiento en su e!tremo distal que da origen a esterigmas de donde nacen las conidias en cadena. %+S#,*+(7 colonias algodonosas de color rosado . @i"as tabicadas que dan origen a conidi"oros macroconidias multiseptadas "usi"ormes, curvadas. ,H*-.P+S 7 colonias algodonosas blanco grisaceas con puntos negros ,esporangios/. @i"as no septadas agrupadas como raices, a partir de las cuales se proectan "ilamentos largos ,esporangi"oro/ "ormando en su e!tremo una estructura redonda oscura que contiene gran cantidad de esporas. C: URP. Facultad de Medicina ,H./.)0,+&# 7 colonias cremosas de color rosado. 0l microscopio se observan c#lulas ovoides o redondas. TE*A $@ ' 7ONGOS DER*ATO0ITOS Introucci.n7 +on (ongos "ilamentosos que tienen predileccin por la queratina, por lo que a"ectan piel, pelo u<a. Por su (abitat pueden clasi"icarse en Aeo"*licos, Moo"*licos 0ntropo"*licos, pueden in"ectar al (ombre a los animales. 8res g#neros patgenos son de inter#s7 8ric(op(ton, Microsporum 1pidermop(ton que producen ti<a corpis, capitis, cruris, pedis onicomicosis. La identi"icacin de cada uno est& basada en la mor"olog*a de la colonia de las estructuras de reproduccin ,microconidias o macroconidias/ *ateria!e"7 2. Muestras patolgicas de piel pelo u<a en preparaciones en "resco con P>@ :. 9ultivo de ). rubrum, ) mentagrophytes, ) tonsurans, ( canis, ( gypseum y E 1loccosum en agar sabouraud glucosado ?. Microcultivos de los mismos (ongos con a)ul de lacto"enol Proceimiento7 8oma de muestra7 1n lesiones de piel se obtiene por raspado de los bordes de la lesin 1n cuero cabelludo se retiran los pelos de la )ona a"ectada. Las u<as son previamente (umedecidas con alco(ol luego recortadas asi como raspado del lec(o ungueal. 1!amen directo7 +e prepara un e!amen en "resco con (idr!ido de potasio al :3.. +e observa al microscopio con objetivo 534 buscando la presencia de esporas redondeadas aisaladas o agrupadas en racimos re"ringentes, (i"as cortas o largas C? URP. Facultad de Medicina cil*ndricas con los e!tremos redondeados. 1n los pelos se puede observar esporas ubicadas en el interior ,endotri!/ o alrededor del pelo ,e!otri!/. 9ultivo7 1l medio de cultivo de eleccin es el +abouraud que contiene 53 gTL de de!trosa. La siembra se (ace por puntura e incuba a medio ambiente, esperando desarrollo entre el -O l-vo d*a. Re"u!tao"' 0/ 1!amen en "resco de D/ 1!amen en "resco de escamas de piel pelo in"ectado
),*CH.PH2).N ,+B,+( 7 9olonias algodonosas de color blanco con pigmento rojo en el reverso del tubo. @i"as septadas con microconidias piri"ormes s#siles. ),*CH.PH2).N (EN)#',.PH2)ES! 9olonias pulverulentas granulosas esosas, blanquecinas con pigmento amarillo pardusco en el reverso. @i"as septadas con abundantes microconidias es"#ricas en racimos C5 URP. Facultad de Medicina ),*CH.PH2).N ).NS+,#NS ! 9olonias membranosas crateri"ormes, acartonadas. @i"as septadas en raqueta, microconidias piri"ormes clamidosporas. (*C,.SP.,+( C#N*S! 9olonia blanquecina con pigmento amarillo naranja en el reverso. @i"as septadas con macroconidias el*pticas o "usi"ormes con tabiques transversales e!crecencias en la super"icie. (*C,.SP.,+( '2PSE+(! 9olonia algodonosa o "inamente pulverulenta de color blanco cremoso. @i"as septadas con macroconidias de super"icie lisa con tabiques transversales. EP*/E,(.PH2).N %&.CC.S+( ! 9olonias aterciopeladas o "inamente pulverulentas, con pliegues en el centro, de color amarillo a)u"re. @i"as septadas con macroconidias grandes con el e!tremo distal romo anc(o, tabicadas transversalmente. C- URP. Facultad de Medicina TE*A -% ' 7ONGOS (E1ADURI0OR*ES Introucci.n7 Las levaduras son (abitantes del medio ambiente "orman parte de la "lora normal. +ituaciones del (u#sped como terapia antibitica prolongada, corticoterapia, radiaciones, diabetes, inmunode"iciencias, etc pueden permitir la coloni)acin de las levaduras oportunistas producir in"eccin. Las levaduras mas importantes en patolog*a (umana son la C3ndida albicans, que produce micosis super"iciales sist#micas, el Criptococcus neo1ormans ,torula/ que produce meningoence"alitis el Pityrosporum ovale, causante de la pitiriasis versicolor. *ateria!e"7 2. Frotis de "lujo vaginal coloreado con Aram :. 9ultivo de C3ndida albicans en medio +abouraud. ?. +uspensin de C3ndida albicans en suero incubado a ?J o9 T : (oras 5. 9ultivo de Critococcus neo1ormans en medio +abouraud -. 9ultivo de Criptococcus neo1ormans en agar urea. C. Preparaciones en "resco con tinta c(ina l*quido ce"aloraquideo de paciente con 9riptococosis. J. 1!amen directo con P>@ de escamas de piel con pitiriasis versicolor ,Malasse)ia "ur"ur/ Proceimiento7 CC URP. Facultad de Medicina 2. >bservar con objetivo de inmersin el "rotis de "lujo vaginal. 0preciar las "ormaciones levaduri"ormes pseudomicelios de 9&ndida albicans. :. 'escribir las caracter*sticas del cultivo de 9&ndida albicans. ?. @acer una preparacin en "resco a partir de la suspensin de c&ndida en suero. >bservar con objetivo 534 apreciar las prolongaciones digiti"ormes, caracter*stico de la 9&ndida albicans ,tubo germinativo/ 5. 'escribir las caracter*sticas del cultivo de 9riptococcus apreciar el metabolismo de la urea. -. >bservar las preparaciones en "resco con tinta c(ina, apreciar la presencia de c&psula del 9ritococcus neo"ormans como un (alo transparente alrededor de las esporas. Re"u!tao"7 8ubo germinativo 9ultivo de 9&ndida Frotis de secrecin vaginal
9ultivo de 9riptococcus neo"ormans >bservacin de c&psula
CUESTIONARIO7 2. Emportancia de llegar a un diagnstico etiolgico mictico de una lesin d#rmica. :. +iendo la 9&ndida una levadura que "orma parte de la "lora microbiana del cuerpo (umano, Gcu&ndo le dar*a importancia cl*nica que amerite tratamientoI ?. +e<ale los (ongos sapro"itos productores de antibiticos 5. Hu# (ongo produce meningo ence"alitis se<ale un m#todo pr&ctico r&pido para diagnosticarloI -. Hu# "uncin tiene el P>@ al :3 . en las preparaciones en "resco para investigar (ongosI CJ URP. Facultad de Medicina '1+0RR>LL> TE*A -& ' *ICOSIS SISTE*ICAS E7ongo" im.rBico"F *ICOSIS SUBCUTANEAS Introucci.n7 1stos (ongos se encuentran distribuidos en la naturale)a ,suelo, "ragmentos de vegetales, e!cretas de aves murci#lagos/. +e les denomina dimr"icos por su doble comportamiento, en el (u#sped a temperatura de incubacin de ?J o9 son levaduri"ormes, en cambio a temperatura ambiental se comportan como "ilamentosos. Las personas animales se contaminan con los (ongos dimr"icos por in(alacin produciendo in"ecciones sist#micas. Representan a #ste grupo el Paracoccidioides brasiliensis 4blastomyces br5 el Hystoplasma capsulatum. Las micosis subcut&neas son producidas por diversos (ongos, siendo el mas "recuente el Sporothri6 schenc7ii, que se transmite por inoculacin traum&tica con espinas o restos de plantas produciendo in"eccin crnica del sistema lin"&tico. *ateria!e"7 9ultivo de Paracoccidiodes br. en 0gar +abouraud en 0gar cerebro cora)n ,D@E/ Preparaciones en "resco con a)ul de lacto"enol de Paracoccidioides br en D@E Frotis de esputo de paciente in"ectado con Paracoccidiodes br. 9ultivo de @istoplasma c. en 0gar sabouraud en 0gar cerebro cora)n ,D@E/ Preparaciones en "resco con a)ul de lacto"enol de @istoplasma c. en sabouraud. C= URP. Facultad de Medicina Preparaciones (istolgicas de tejidos in"ectados con @istoplasma c. 9ultivo de +porotri! sc(. en 0gar +abouraud en D@E incubado a ?J O9 Preparaciones coloreadas con Aram de cultivo de +porotri! sc(. en D@E. Proceimiento7 2. >bservar las caracter*sticas de las colonias de cada una de las tres especies de (ongos dimr"icos presentados tanto en agar sabouraud como en agar D@E :. >bservar al microscopio, con objetivo de 534, las preparaciones en "resco presentadas. ?. >bservar con objetivo de inmersin las preparaciones (istolgicas presentadas Re"u!tao"7 Registrar las observaciones macroscpicas microscpicas. Paracocciioie" :ra"i!ien"i" 1sputo coloreado con Wrig(t >bservar las esporas grandes de 23$C3 mu de pared gruesa con varias gemaciones 9ultivo a ?J o9 9ultivo a :: o9
1sporas multigemadas en timn de barco u orejas de MicUe $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$ 7i"to,!a"ma ca,"u!atum 9orte (istolgico ,(*gado/7 >bservar levaduras peque<as de 2 a ? micras en el citoplasma de los (istiocitos. CN URP. Facultad de Medicina 9ultivo a ?J o9 9ultivo a :: o9
@i"as con macroconidias tuberculadas $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $ S,orotriG "c=enHii 7 9ultivo a ?J o9 9ultivo a :: o9 ,(i"as con conidias distribuidas en margarita/ TE*A -$ ' ESTUDIO DE (OS 1IRUS Introucci.n7 1l diagnstico de las en"ermedades virales se (a "ortalecido con los avances en los conocimientos t#cnicas en inmunolog*a, pero nunca se puede obviar la con"eccin de la (istoria cl*nica del paciente, la que nos da in"ormacin mu importante como tiempo de en"ermedad, sintomatolog*a, entorno epidemiolgico, etc., datos que permiten llegar a un diagnstico presuntivo, necesario para orientar los estudios en el laboratorio. Para "acilitar la interpretacin de los estudios inmunolgicos muc(as veces es recomendable obtener dos muestras de sangre con intervalo de ? semanas, que permite establecer si la en"ermedad est& en sus inicios, periodo de estado o convalecencia. EGamen micro"c.,ico7 +i bien los virus tienen un tama<o mu peque<o que no pueden ser observados con el microscopio de lu), algunos virus tienen la capacidad de "ormar estructuras intracelulares denominadas cuerpos de inclusin que se pueden reconocer con el microscopio corriente, estructuras patognomnicas de ciertos virus. J3 URP. Facultad de Medicina 1iru" Nom:re U:icaci.n Caracter"tica Viruela /Vacuna Auarnieri citoplasma 0cid"ilo Rabia %egri citoplasma 0cid"ilo Molusco contaioso @enderson Paterson citoplasma Das"ilo Con!unti"itis de inclusi#n $$ citoplasma Das"ilo $iebre amarilla Margarino 8orres nuclear 0cid"ilo %erpes simples Lipsc(ut) nuclear 0cid"ilo Citomealo"irus $$ nuclear 0cid"ilo
Ai"!amiento7 Para aislar los virus se requiere previamente preparar cultivos de c#lulas donde se puedan multiplicar observar los cambios celulares producto de la in"eccin viral, denominado e"ecto citop&tico, caracteri)ado por disminucin del tama<o celular, redondeamiento, picnosis por ;ltimo lisis celular. Los cultivos celulares pueden ser primarios, que slo duran uno o dos pasajes, como los que provienen de "ibroblastos de embrin de pollo, ri<n de mono, etc los de l*nea, que son c#lulas tumorales adaptadas en el laboratorio de multiplicacin inde"inida ,@ela, @ep:, etc/. %o olvidemos que el primer cultivo celular "u# la membrana corio alantoidea del embrin de pollo ,(uevo/. IentiBicaci.n7 Para identi"icar un virus que (a producido e"ecto citop&tico en un cultivo celular, debemos disponer de los sueros espec*"icos de las diversas especies de la "amilia viral que se sospec(a, ra)n por la cual necesitamos tener un diagnstico presuntivo que oriente el estudio. Los anticuerpos contenidos en dic(o suero in(ibir&n en "orma espec*"ica el e"ecto citop&tico u otra propiedad ,(emaglutinacin o (emadsorcin/ de dic(o virus. Las t#cnicas inmunolgicas permiten reconocer en el paciente la presencia de anticuerpos, tipo de inmunoglobulina medir el nivel. La presencia de anticuerpos no siempre nos indica in"eccin viral, en in"ecciones crnicas o end#micas es mu ;til investigar la presencia de inmunoglobulinas M que son e!presin de in"eccin aguda o periodo de estado. Los procedimientos inmunolgicos ant*geno$anticuerpo en sus diversas "ormas7 0glutinacin de late!, Enmuno"luorescencia, 1n)ima inmuno ensao, Radio inmuno ensao 1lectro"oresis e Enmunoprecipitacin son empleados en virolog*a. 9on #stas t#cnicas se puede investigar tanto la presencia de ant*geno viral como la de anticuerpos "ormados por el (u#sped. J2 URP. Facultad de Medicina 9uando se investiga la presencia de anticuerpos es necesario obtener dos muestras de sangre al paciente, con intervalo de 2- a :3 d*as, para demostrar conversin serolgica La titulacin de anticuerpos contra los diversas in"ecciones virales en la poblacin es el par&metro que las entidades de +alud P;blica emplean para establecer sus pol*ticas de vacunacin. $$$$$$$$$ E. +1ME%0RE> 8emario7 Re"i"tencia :acteriana a !o" anti:acteriano". ARUP> 27 +e<alar la estructura bacteriana el mecanismo de accin de los anti microbianos a/ 'e la s*ntesis de la pared, ejemplos b/ 0 nivel de la membrana citoplasm&tica, ejemplos c/ +obre las mol#culas de &cido nucleico, ejemplos d/ 1n la s*ntesis de las proteinas, ejemplos e/ Mecanismos competitivos, ejemplos ARUP> :7 'escribir los mecanismos %o gen#ticos mediante los cuales las bacterias resisten la accin antibacteriana. a/ Ubicacin de la in"eccin, ejemplos J: URP. Facultad de Medicina b/ 1stado de la bacteria, ejemplos c/ 9aracter*stica qu*mica del antibacteriano, ejemplos ARUP> ?7 'escribir los mecanismos gen#ticos de resistencia bacteriana a/ +eleccin de mutante7 cromosmico, ejemplos b/ Entercambio gen#tico7 e!tra cromosmico, ejemplos ARUP> 57 Mecanismos bioqu*micos de resistencia a/ Permeabilidad celular a la droga, ejemplos b/ Enactivacin de la droga, ejemplos c/ Modi"icacin del receptor ,)ona blanco/, ejemplos d/ +*ntesis de metabolito, ejemplos 9>%91P8>+7 2. 0ntibitico :. Huimioter&pico ?. Dactericida 5. Dacteriost&tico -. Resistencia cru)ada EE. +1ME%0RE> 8emario7 1ACUNAS 2. @istoria, 'e"inicin Finalidad :. 9lasi"icacin. 9adena de "r*o 5. Endicaciones. 9ontraindicaciones. Riesgos de la vacunacin -. 1squema de vacunacin del Ministerio de +alud J? URP. Facultad de Medicina C. Bacunas preparadas con agente vivo ,atenuadas/, caracter*sticas ejemplos. . J. Bacunas preparadas con agente muerto ,inactivadas/, caracter*sticas ejemplos. =. Bacunas preparadas con "racciones antig#nicas conjugadas, caracter*sticas ejemplos. -. Bacunas elaboradas a partir de to!inas, caracter*sticas ejemplos. 23. Bacunas elaboradas por ingenier*a gen#tica, caracter*sticas ejemplos. $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ EEE. +1ME%0RE>
8emario7 E! 1iru" e !a InmunoeBiciencia 7umana E1I7F 2. 'e"inicin clasi"icacin de los Retrovirus. :. 'escriba la estructura del virus de inmunode"iciencia (umana. ,BE@/. ?. Emportancia del conocimiento de los ant*genos del virus 5. @aga un resumen de la patogenia de la en"ermedad por BE@ J5 URP. Facultad de Medicina -. 'e"inicin de +E'0. C. B*as de transmisin del BE@. J. Pruebas de laboratorio para diagnosticar una in"eccin por BE@. =. @aga un esquema de la reaccin 1LE+0 N. Marcadores serolgicos para diagnosticar in"eccin por BE@ 23 GHu# investigamos en la prueba de Western blottI $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ P08>A1%>+ $ D0981RE0%>+ Re".7 Murra, PatricU et al. *icroorgani"mo C!nica E,iemio!oga 2. 1nterococcus Dacteriemia, abscesos, Pacientes (ospitali)ados "aecalis, "aecium En". urinaria, endocarditis :. +tap(lococcus En"ecciones cut&neas, 9oloni)a piel mucosas, aureus diseminadas, s(ocU t!ico, proli"era a temperaturas e!tre$ Ento!icacin alimentaria. mas en &reas (ipertnicas. ?. +tap(lococcus Patgeno oportunista con 9oloni)a piel mucosas, coagulasa negat. cuerpo e!tra<o e in"ec. proli"era a temperaturas e!tre$ urinarias. mas en &reas (ipertnicas. J- URP. Facultad de Medicina 5. +treptococcus En"ecciones supurativas Poblaciones diversas pgenes de piel, mucosas, partes blandas, s(ocU t!ico. %o supurativa7 "iebre reum&tica -. +treptococcus En"ecciones urinarias, Aestantes. %eonatos, agalactiae 1n"ermedad neonatal Pacientes con a"ecciones Dacteriemias. crnicas. C. +treptococcus En"ecciones cut&neas, Poblaciones diversas beta (emol*ticos partes blandas >RL J. +treptococcus Dacteriemias, endocarditis 0dultos con 9a. de colon bovis =. +treptococcus 1ndocarditis subaguda. Pacientes con alteraciones viridans abscesos, septicemias, en v&lvulas cardiacas. En"ecciones odontgenas N. +treptococcus %eumon*a. Meningitis. Poblaciones diversas Pneumoniae Dacteriemia. En"ecciones %eonatos, adultos, ancianos respiratorias. 1ndocarditis. $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ 23. Dacillus 9arbunco cut&neo, Poblacin que trabaja con ant(racis respiratorio digestivo ganado, consumo de carne terrorismo. 22. Dacillus cereus Aastroenteritis, 0limentos contaminados, En"ecciones oculares trauma ocular con tierra *icroorgani"mo C!nica E,iemio!oga 2:. 9ornebacterium 'i"teria 9ontagio v*a respiratoria dip(teriae 2?. 9ornebacterium En"eccin de (eridas a Pacientes inmunodeprimidos jeiUeium cuerpo e!tra<o. con maor riesgo. +epticemias. 25. 9ornebacterium En"ecciones urinarias. Pacientes inmunodeprimidos, urealticum +epticemia. con "actores de riesgo, o post quir;rgicos. JC URP. Facultad de Medicina 2-. 1rsipelot(ri! Lesin cut&nea in"lama$ Manipuladores de carne, R(usiopat(ie toria prur*tica. pescado. Aranjeros. Beterinarios. 2C. Listeria 1n"ermedad neonatal. %eonatos. Aestantes. 0ncianos monoctgenes Dacteriemia en adultos. Enmunodeprimidos. ,gestantes/ $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ 2J. Mcobacterium 1n"ermedad pulmonar Pacientes con en"ermedad aviumTintracelular diseminada. cnica ,BE@, Enmunde"icien./ 2=. Mcobacterium Lepra tuberculoide o 9ontacto *ntimo con en"ermo leprae lepromatosa 2=. %ocardia sp. En"ecciones cut&neas, Patgeno oportunista broco pulmonares abscesos. $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ 2N. %eisseria Aonorrea. 1n"ermedad 8ransmisin se!ual. gonorr(oeae in"lamatoria p#lvica. +intom&tica T 0sintom&tica 0rtritis. :3. %eisseria Meningitis. Dacteriemia 1stado de portador sano. meningitidis 9ontagio via respiratoria. %i<os adultos jvenes. $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ :2. 0cinetobacter %eumon*a. +epticemia. Patgeno oportunista. En"ecciones diversas En"ecciones nosocomiales ::. 0eromonas Aastroenteritis. Patgeno oportunista En"eccin de (eridas. :?. Dartonella Fiebre anemia aguda 1!posicin en )ona bacilli"ormis verruga numular verrucgena *icroorgani"mo C!nica E,iemio!oga :5. Dartonella 1n"ermedad del ara<a)o Poblaciones diversas (enselae del gato. 0ngiomatosis bacilar. 1ndocarditis. :-. Dartonella 0ngiomatosis bacilar Poblaciones diversas quintana Fiebre de las trinc(eras :C. Dordetella 8os "erina 9ontagio v*a respiratoria pertussis JJ URP. Facultad de Medicina :J. Drucella sp. Drucelosis Engesta de lec(e o derivados de vaca, cabra u ovejas in"ectados. ,)oonosis/ :=. 9amplobacter Aastroenteritis Moonosis. Engesta de alimentos jejuni T coli o agua contaminados. :N. 9amplobacter +epticemia. 0borto. Paciente anciano e "etus inmuno deprimidos ?3. 9ardiobacterium 1ndocarditis sub aguda Patgeno oportunista (ominis. Pacientes con da<o valvular 1iUenella corrodens Pingella Uingae ?2. 1sc(eric(ia coli En"ecciones urinarias %i<os, adultos, gestantes, uropatgena 9istitis, pielone"ritis ?:. 1sc(eric(ia coli 0limentos aguas contaminadas a/ enteropatgena 'iarrea acuosa vmitos de pre"erencia en ni<os. b/ entero(emorr&gica 'iarrea acuosa con sangre Uremia c/ enteroto!ig#nica 'iarrea acuosa Y. 'iarrea en viajeros. d/ enteroagregadora 'iarrea con moco e/ enteroinvasiva 'iarrea acuosa con sangre ??. Francisella 8ularemia ulcero glandular Picadura de garrapata tularensis neumon*a. 9ontaminacin con conejos En"ectados. ?5. @aemp(ilus 9apsuladas7 septicemia 9ontagio via respiratria En"luen)ae meningitis %o capsuladas7 sinusitis, otitis, bronquitis, neumon*a. ?-. @elicobacter Aastritis. Zlcera duodenal Frecuente. plori *icroorgani"mo C!nica E,iemio!oga ?C. Plebsiella %eumon*a. En"ecciones nosocomiales pneumoniae En"ecciones urinarias ?J. Legionella %eumon*a Pacientes ancianos, pneumop(ila Proceso seudo gripal inmuno deprimidos. ?=. Mora!ella En"ecciones de ojo, oido %i<os adultos J= URP. Facultad de Medicina 9atarr(alis respiratorias. ?N. Proteus En"ecciones urinarias 9ontaminacinI de (eridas. 0nomal*a del tracto 53. Pseudomonas En"ecciones cut&neas, En"ecciones nosocomiales aeruginosa ticas, oculares, urinarias, bacteriemia. 52. +almonella7 0limentos contaminados tp(i Fiebre ti"oidea enteritidis 'iarrea 5:. +erratia T En"eccions urinarias En"ecciones nosocomiales 1nterobacter de (eridas
5?. +(igella 'isenter*a bacilar 0limentos contaminados 55. +treptobacillus Fiebre por mordedura Mordedura de roedor monili"ormis Engesta de alimento contaminado 5-. Bibrio c(olerae 'iarrea acuosa intensa 0gua alimentos contaminados 5C. Bibrio 'iarrea acuosa Engesta de mariscos par(aemol*ticos 5J. Bibrio En"eccin de (eridas Pacientes con en"ermedades vulni"icus +epticemia. crnicas. $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$ 5=. 0ctinomces 0ctinomicosis c#rvico$ 9oloni)a mucosas "acial, tor&cica, abdominal, p#lvica. 5N. Dacteroides En"ecciones en abdomen, @abitante normal del "ragilis )ona pelviana cut&nea. Entestino. -3. 9lostridium Dotulismo alimentario Ubicuitario de aguas residuales botulinum *icroorgani"mo C!nica E,iemio!ogia -2. 9lostridium 'iarrea asociada a uso de 9oloni)a tracto intestinal JN URP. Facultad de Medicina di""icile antibiticos. -:. 9lostridium En"ecciones de partes blandas @abitat7 suelo, aguas residuales per"ringes Mionecrosis. +epticemia. Entestino de animales (ombre Ento!icacin alimentaria. -?. 9lostridium 8#tanos @abitat7 suelo, aguas residuales tetani Entestino de animales (ombre -5. Propinibacterium 0cn#. Prtesis 9oloni)a piel mucosas $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ $$ --. 9(lamdia %eumon*a %i<os adultos pneumoniae -C. 9(lamdia %eumon*a 1!posicin a p&jaros psitaci -J. 9(lamdia 8racoma7 conjuntiva, uretra, 8racoma. 8rac(omatis c#rvi!, trompas. Lin"ogranuloma ven#reo 8ransmisin se!ual. -=. 9o!iella burnetii Fiebre H Personas e!puestas a ganado En"ectado. -N. Micoplasma %eumon*a at*pica %i<os adultos pneumoniae C3. RicUettsia 8i"us e!antem&tico 8ransmitido por picadura del proXat)eUii piojo in"ectado. C2. RicUetrsia Fiebre manc(ada Por mordedura de garrapata ricUettsii $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ C:. Dorrelia 1ritema migratrio 8ransmitido por garrapatas bugdor"eri compromisos diversos C?. Dorrelia Fiebre recidivante 8ransmitida por el piojo recurrentis C5. Lepstospira 1n"ermedad de Weil 1!posicin a orina de roedores interrogans "iebre e ictericia perros, animales salvajes. =3 URP. Facultad de Medicina C-. 8reponema +*"ilis 8ransmisin se!ual cong#nita pallidum $$$$$$$$$$$ =2