Uji Deteksi Biofilm Dari Isolat Klinik Kateter Urin Bakteri Entercoccus Dibandingkan Dengan Tube Method
Uji Deteksi Biofilm Dari Isolat Klinik Kateter Urin Bakteri Entercoccus Dibandingkan Dengan Tube Method
Uji Deteksi Biofilm Dari Isolat Klinik Kateter Urin Bakteri Entercoccus Dibandingkan Dengan Tube Method
6-14% Infeksi nosokomial berasal dari perangkat medis invasif (Jass, 2003)
Fungsi biofilm:
1. Resistensi antibiotik
2. Pertukaran material genetik
• Van Tyne D, Martin MJ, Gilmore MS. Structure, function, and biology of the Enterococcus faecalis cytolysin. Toxins (Basel). 2013;5(5):895–911.
• Jass J, Surman S, Walker J. Medical Biofilms: Detection, Provention and Control [Internet]. Vol. 100, John Wiley & Sons, Ltd. 2003. Available from:
http://doi.wiley.com/10.1002/0470867841
• Hassan A, Usman J, Kaleem F, Omair M, Khalid A, Iqbal M. Evaluation of different detection methods of biofilm formation in the clinical isolates. Braz J Infect
Dis [Internet]. 2011;15(4):305–11. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/S1413-8670(11)70197-0
: 109 Isolat enterococcal= 100% E. faecalis
(Mohamed, 2007) 50% E. faecium + Biofilm
Tujuan Khusus :
1. Mengetahui prevalensi biofilm dari bakteri
Enterococcus faecalis hasil isolasi kateter
urin
2. Membandingkan Tube method dengan CRA
dalam mendeteksi biofilm
Manfaat Penelitian
1. Mendapatkan metode deteksi biofilm
yang cepat dan mudah
2. Manfaat akademika
Tinjauan Pustaka
1. Gambaran E. faecalis
Kingdom Bacteria ≈ Filum Firmicutes ≈ Famili Enterococcaceae ≈ Genus
Enterococcus ≈ Spesies Enterococcus faecalis
(-) spora, Fakultatif anaerob , Kokus gram (+), (-) Reaksi katalase hidrogen
peroksida, Ovoid, 0,5-1 μm, Rantai pendek, berpasangan / tunggal
Gen-gen (agg, gelE, Ace, cyILLS, Esp cpd, fsrB) mengkode faktor virulensi
• Fraser SL. Enterococcal Infections: Background, Pathophysiology, Epidemiology [Internet]. Medscape. 2015.
• Suchitra U, Kundabala M. Enterococcus Faecalis-An Endodontic Pathogen. Endodontology [Internet]. 2006;11–3.
2. Enterococcus faecalis dengan Kateter
Urin
Infeksi enterococci : ISK, infeksi intra-abdominal, dan infeksi luka
bedah
• O`Toole G, Kaplan HB, Kolter R. Biofilm Formation As Microbial Development. Annu Rev Microbiol. 2000;49–79.
• Gunardi WD. Peranan Biofilm dalam Kaitannya dengan Penyakit Infeksi. J Kedokt Meditek. 2014;15 No. 39a(6).
• Mohamed JA, Huang DB. Biofilm formation by enterococci. J Med Microbiol. 2007;56(12):1581–8.
Mekanisme Pembentukan Biofilm
1. Perlekatan reversibel bakteri planktonik
ke permukaan
2. Perlekatan ireversibel
3. Pembentukan lapisan kompleks
biomolekul dan sekresi EPS
4. Biofilm memperoleh struktur tiga
dimensi
5. Detachment
• Soto SM, Soto SM. Importance of Biofilms in Urinary Tract Infections: New Therapeutic Approaches. Adv Biol
[Internet]. 2014;2014:1–13.
Struktur Biofilm
Matriks : 90% air + 2% EPS + 2-5% mikroba + 2% zat lain
Monolayer : Linking film > Menebal > Membentuk bentuk ‘jamur’
• Jass J, Surman S, Walker J. Medical Biofilms: Detection, Provention and Control [Internet]. Vol. 100, John Wiley & Sons,
Ltd. 2003.
• Gunardi WD. Peranan Biofilm dalam Kaitannya dengan Penyakit Infeksi. J Kedokt Meditek. 2014;15 No. 39a(6).
Kemampuan E. faecalis Membentuk
Biofilm
Faktor virulensi, genetik pada saat perlekatan maupun maturasi.
4. Pili
5. Polisakarida
• Dunny GM, Hancock LE, Shankar N. Enterococcal Biofilm Structure and Role in Colonization and Disease.
Enterococci From Commensals to Lead Causes Drug Resist Infect [Internet]. 2014;1–17.
• Garsin D a., Frank KL, Silanpää J, Ausubel FM, Hartke A, Shankar N, et al. Pathogenesis and Models of Enterococcal
Infection. Enterococci From Commensals to Lead Causes Drug Resist Infect [Internet]. 2014;1–57.
Faktor yang Mempengaruhi
Pembentukan Biofilm E. faecalis
1. Efek Permukaan (Substratum)
2. Conditioning Film
3. Hidrodinamik
• Trautner BW, Darouiche RO. Role of biofilm in catheter-associated urinary tract infection. Vol. 32, American Journal
of Infection Control. 2004. p. 177–83.
• Choong S, Wood S, Fry C, Whitfield H. Catheter associated urinary tract infection and encrustation. In:
International Journal of Antimicrobial Agents. 2001. p. 305–10.
5. Deteksi dari Perlekatan Bakterial dan
Biofilm
Perlekatan bakteri :
1. Mikroskop Cahaya
Biofilm :
1. TCP
2. Tube Method
3. Congo Red Agar (CRA)
• Jass J, Surman S, Walker J. Medical Biofilms: Detection, Provention and Control [Internet]. Vol. 100, John Wiley &
Sons, Ltd. 2003.
• Hassan A, Usman J, Kaleem F, Omair M, Khalid A, Iqbal M. Evaluation of different detection methods of biofilm
formation in the clinical isolates. Braz J Infect Dis [Internet]. 2011;15(4):305–11.
• Kour M, Soni I, Sharma R. Assessment of biofilm formation by Enterococcus faecalis causing nosocomial infections
and their statistical analysis. 2014;77–9.
6. Deteksi Biofilm dengan Tube Method dan
Congo Red Agar
Deteksi Polisakarida
Kerangka Teori
Kerangka Konsep
4. Sampling
Total sampling :
Tiga belas isolat bakteri Enterococcus faecalis
yang terkumpul dari hasil kultur kateter
urin periode Agustus - November 2016 di
rumah sakit swasta di Tangerang
5. Bahan, alat, dan cara penelitian
Tube Method (Devaraj, 2015)
I. 10 ml dari trypticase soy broth dengan glukosa 1% diinokulasi
dengan kumpulan mikroorganisme dari cawan yang dikultur
dalam jangka waktu semalam
II. Diinkubasi pada suhu 37˚C selama 24-48 jam.
III. Tabung dituang dan dicuci dengan garam buffer fosfat (pH
7,3) dan dikeringkan.
IV. Tabung kering diwarnai dengan kristal ungu violet 0,1%.
Kelebihan noda dicuci dengan air deionisasi. Tabung
dikeringkan dalam posisi terbalik.
V. Skor untuk metode tabung dilakukan sesuai dengan hasil
strain kontrol. Pembentukan biofilm dianggap positif saat
film yang terlihat melapisi dinding dan bagian bawah tabung.
Jumlah biofilm yang terbentuk dinilai 1-lemah / tidak ada, 2-
sedang dan tinggi-3 / kuat, dibaca menggunakan
spektrofotometer.
VI. Percobaan dilakukan secara rangkap tiga dan diulang
sebanyak tiga kali.
• Devaraj C, Sajjan AG. Comparision of three different methods for the detection of biofilm in gram positive cocci
and gram negative bacilli isolated from clinical specimens. J Pharm Sci Res. 2015;7(11):952–5.
Congo Red Agar (Deshpande, 2012)
I. Media CRA disiapkan dengan brain heart infusion broth 37 g
/ L, sukrosa 50 g / L, agar No. 1 (Oxoid, UK) 10 g / L dan
indikator Congo Red 8 g / L. Pewarna Red Congo disiapkan
sebagai solusi aquoeus terkonsentrasi
II. Diautoclav (121˚C selama 15 menit) secara terpisah dari
unsur penyusun media lainnya.
III. Kemudian ditambahkan ke medium agar yang telah
didinginkan sampai 55 ° C.
IV. Cawan diinokulasi dan diinkubasi secara aerobik selama 24-
48 jam pada suhu 37 ° C.
V. Hasil positif ditunjukkan oleh koloni hitam dengan
konsistensi kristal kering.
VI. Produsen biofilm lemah biasanya tetap merah muda, meski
kadang-kadang terjadi penggelapan di pusat koloni diamati.
Semakin gelap koloni, dengan tidak adanya morfologi
kolonial kristal kering, menunjukkan hasil yang tidak pasti.
VII. Percobaan dilakukan secara rangkap tiga dan diulang
sebanyak 3 kali.
• De A, Deshpande D, Baveja S, Taklikar S. Detection of biofilm formation in bacteria from cases of urinary tract
infections, septicemia, skin and soft tissue infections and post-operative infections by Congo Red Agar method. J
Acad Med Sci [Internet]. 2012
6. Parameter yang diperiksa :
Parameter yang diperiksa disini adalah angka
pertumbuhan biofilm bakteri Enterococcus
faecalis pada metode CRA dan metode
tube.
7. Dana Penelitian
Perkiraan Dana penelitian
Trypticase Soy Broth : Rp. 300.000,00-
Brain heart infusion : Rp. 955.000,00-
Cawan petri x 30 : Rp. 90.000,00-
Tabung reaksi x 30 : Rp. 90.000,00-
Total : Rp. 1.435.000,00-