Lot 18 Cvab - Ce-.Semnat

Doc.: INS CVAB.CE/Eng Page 1 of 10 Rev.
: 7 Date: 2019/10
HCV Ab
Version 4.0 Enzyme Immunoassay
for the determination of
anti Hepatitis C Virus antibody
in human serum and plasma
- for “in vitro” diagnostic use only -
DIA.PRO
Diagnostic Bioprobes Srl
Via G. Carducci n° 27
20099 Sesto San Giovanni
(Milano) - Italy
Phone +39 02 27007161
Fax +39 02 44386771
e-mail: info@diapro.it
REF CVAB.CE
96,192,480,960 Tests
Doc.: INS CVAB.CE/Eng Page 2 of 10 Rev.: 7 Date: 2019/10
alcoholic liver disease and HCV infection. HCV is spread

HCV Ab primarily by direct contact with human blood. Transmission
through blood transfusions that are not screened for HCV
infection, through the reuse of inadequately sterilized
needles, syringes or other medical equipment, or through
A. INTENDED USE needle-sharing among drug-users, is well documented.
Version 4.0 Enzyme ImmunoAssay (ELISA) for the Sexual and perinatal transmission may also occur, although
determination of antibodies to Hepatitis C Virus in human less frequently. Other modes of transmission such as social,
plasma and sera. The kit is intended for the screening of blood cultural, and behavioural practices using percutaneous
units and the follow-up of HCV-infected patients. procedures (e.g. ear and body piercing, circumcision,
For “in vitro” diagnostic use only. tattooing) can occur if inadequately sterilized equipment is
used. HCV is not spread by sneezing, hugging, coughing, food
or water, sharing eating utensils, or casual contact.
B. INTRODUCTION
The World Health Organization (WHO) define Hepatitis C
In both developed and developing countries, high risk groups
infection as follows:
include injecting drug users, recipients of unscreened blood,
“Hepatitis C is a viral infection of the liver which had been haemophiliacs, dialysis patients and persons with multiple
referred to as parenterally transmitted "non A, non B sex partners who engage in unprotected sex. In developed
hepatitis" until identification of the causative agent in 1989. countries, it is estimated that 90% of persons with chronic
The discovery and characterization of the hepatitis C virus HCV infection are current and former injecting drug users
(HCV) led to the understanding of its primary role in post- and those with a history of transfusion of unscreened blood or
transfusion hepatitis and its tendency to induce persistent blood products. In many developing countries, where
infection. unscreened blood and blood products are still being used, the
major means of transmission are unsterilized injection
HCV is a major cause of acute hepatitis and chronic liver equipment and unscreened blood transfusions. In addition,
disease, including cirrhosis and liver cancer. Globally, an people who use traditional scarification and circumcision
estimated 170 million persons are chronically infected with practices are at risk if they use or re-use unsterilized tools.
HCV and 3 to 4 million persons are newly infected each year.
HCV is spread primarily by direct contact with human blood. WHO estimates that about 170 million people, 3% of the
The major causes of HCV infection worldwide are use of world’s population, are infected with HCV and are at risk of
unscreened blood transfusions, and re-use of needles and developing liver cirrhosis and/or liver cancer. The prevalence
syringes that have not been adequately sterilized. No of HCV infection in some countries in Africa, the Eastern
vaccine is currently available to prevent hepatitis C and Mediterranean, South-East Asia and the Western Pacific
treatment for chronic hepatitis C is too costly for most (when prevalence data are available) is high compared to
persons in developing countries to afford. Thus, from a global some countries in North America and Europe.
perspective, the greatest impact on hepatitis C disease
burden will likely be achieved by focusing efforts on reducing Diagnostic tests for HCV are used to prevent infection
the risk of HCV transmission from nosocomial exposures (e.g. through screening of donor blood and plasma, to establish the
blood transfusions, unsafe injection practices) and high-risk clinical diagnosis and to make better decisions regarding
behaviours (e.g. injection drug use). medical management of a patient. Diagnostic tests
commercially available today are based on Enzyme
Hepatitis C virus (HCV) is one of the viruses (A, B, C, D, and immunosorbent assays (EIA) for the detection of HCV
E), which together account for the vast majority of cases of specific antibodies. EIAs can detect more than 95% of
viral hepatitis. It is an enveloped RNA virus in the chronically infected patients but can detect only 50% to 70%
flaviviridae family which appears to have a narrow host of acute infections. A recombinant immunoblot assay (RIBA)
range. Humans and chimpanzees are the only known species that identifies antibodies which react with individual HCV
susceptible to infection, with both species developing similar antigens is often used as a supplemental test for
disease. An important feature of the virus is the confirmation of a positive EIA result. Testing for HCV
relative mutability of its genome, which in turn is probably circulating by amplification tests RNA (e.g. polymerase chain
related to the high propensity (80%) of inducing chronic reaction or PCR, branched DNA assay) is also being utilized
infection. HCV is clustered into several distinct genotypes for confirmation of serological results as well as for assessing
which may be important in determining the severity of the the effectiveness of antiviral therapy. A positive result
disease and the response to treatment. indicates the presence of active infection and a potential for
spread of the infection and or/the development of chronic
The incubation period of HCV infection before the onset of liver disease.
clinical symptoms ranges from 15 to 150 days. In acute
infections, the most common symptoms are fatigue and Antiviral drugs such as interferon taken alone or in
jaundice; however, the majority of cases (between 60% and combination with ribavirin, can be used for the treatment of
70%), even those that develop chronic infection, are a persons with chronic hepatitis C, but the cost of treatment is
symptomatic. About 80% of newly infected patients progress very high. Treatment with interferon alone is effective in
to develop chronic infection. Cirrhosis develops in about 10% about 10% to 20% of patients. Interferon combined with
to 20% of persons with chronic infection, and liver cancer ribavirin is effective in about 30% to 50% of patients.
develops in 1% to 5% of persons with chronic infection over a Ribavirin does not appear to be effective when used alone.
period of 20 to 30 years. Most patients suffering from liver
cancer who do not have hepatitis B virus infection have There is no vaccine against HCV. Research is in progress but
evidence of HCV infection. The mechanisms by which HCV the high mutability of the HCV genome complicates vaccine
infection leads to liver cancer are still unclear. Hepatitis C development. Lack of knowledge of any protective immune
also exacerbates the severity of underlying liver disease response following HCV infection also impedes vaccine
when it coexists with other hepatic conditions. In particular, research. It is not known whether the immune system is able
liver disease progresses more rapidly among persons with to eliminate the virus.
Some studies, however, have shown the presence of virus Note: The volume necessary to dissolve the content of the
neutralizing antibodies in patients with HCV infection. In vial may vary from lot to lot. Please use the right volume
the absence of a vaccine, all precautions to prevent infection reported on the label .
must be taken including (a) screening and testing of blood
and organ donors; (b) Virus inactivation of plasma derived 5. Wash buffer concentrate WASHBUF 20X
products; (c) implementation and maintenance of infection 2x60ml/bottle. 20x concentrated solution. Once diluted, the
control practices in health care settings, including wash solution contains 10 mM phosphate buffer pH 7.0+/-0.2,
appropriate sterilization of medical and dental equipment; 0.05% Tween 20 and 0.045% ProClin 300.
(d) promotion of behaviour change among the general public
and health care workers to reduce overuse of injections and 6. Enzyme Conjugate CONJ
to use safe injection practices; and (e) Risk reduction 2x16ml/vial. Ready to use and pink/red colour coded
counselling for persons with high-risk drug and sexual reagent. It contains Horseradish Peroxidase conjugated goat
practices. “ polyclonal antibodies to human IgG and IgM, 5% BSA, 10 mM
Tris buffer pH 6.8+/-0.1, 0.045% ProClin 300 and 0.02%
gentamicine sulphate as preservatives.
The genome encodes for structural components, a nucleocapsid
protein and two envelope glycoproteins, and functional 7. Chromogen/Substrate SUBS TMB
constituents involved in the virus replication and protein 2x16ml/vial. Ready-to-use component. It contains 50
processing. mM citrate-phosphate buffer pH 3.5-3.8, 4% dimethylsulphoxide,
The nucleocapsid-encoding region seems to be the most 0.03% tetra-methyl-benzidine or TMB and 0.02% hydrogen
conservative among the isolates obtained all over the world. peroxide or H2O2.
Note: To be stored protected from light as sensitive to
strong illumination.
C. PRINCIPLE OF THE TEST
Microplates are coated with HCV-specific antigens derived from 8. Assay Diluent DILAS
“core” and “ns” regions encoding for conservative and 1x15ml/vial. 10 mM tris buffered solution pH 8.0 +/-0.1
immunodominant antigenic determinants (Core peptide, containing 0.045% ProClin 300 for the pre-treatment of samples
recombinant NS3, NS4 and NS5 peptides). and controls in the plate, blocking interference.
The solid phase is first treated with the diluted sample and HCV
Ab are captured, if present, by the antigens. 9. Sulphuric Acid H2SO4 O.3 M
After washing out all the other components of the sample, in the 1x32ml/bottle. It contains 0.3 M H2SO4 solution.
2nd incubation bound HCV antibodies, IgG and IgM as well, are Attention: Irritant (H315; H319; P280; P302+P352; P332+P313;
detected by the addition of polyclonal specific anti hIgG&M P305+P351+P338; P337+P313; P362+P363)
antibodies, labelled with peroxidase (HRP).
The enzyme captured on the solid phase, acting on the 10. Sample Diluent: DILSPE
substrate/chromogen mixture, generates an optical signal that is 2x50ml/bottle. It contains 1% goat serum proteins, 10 mM
proportional to the amount of anti HCV antibodies present in the Na-citrate buffer pH 6.0 +/-0.1, 0.5% Tween 20, 0.09% Na-azide
sample. A cut-off value let optical densities be interpreted into and 0.045% ProClin 300 as preservatives. To be used to dilute
HCV antibody negative and positive results. the sample.
Note: The diluent changes colour from olive green to dark
bluish green in the presence of sample.
D. COMPONENTS
Code CVAB.CE contains reagents for 192 tests. 11. Plate sealing foils n° 4
12. Package insert n° 1

1. Microplate MICROPLATE
n° 2 microplates
12 strips of 8 microwells coated with Core peptide, recombinant Important note: Only upon specific request , Dia.Pro can
NS3, NS4 and NS5 peptides. Plates are sealed into a bag with supply reagents for 96, 480, 960 tests , as reported below:
desiccant.
2. Negative Control CONTROL - 1. Microplate n°1 n°5 n°10

1x4.0ml/vial. Ready to use control. It contains 1% goat serum 2.NegativeControl 1x2.0ml/vial 1x10ml/vial 1x20.ml/vial
proteins, 10 mM Na-citrate buffer pH 6.0 +/-0.1, 0.5% Tween 20, 3.PositiveControl 1x2.0ml/vial 1x10ml/vial 1x20.ml/vial
4.Calibrator n° 1 vial n° 5 vials n° 10 vials
0.09% Na-azide and 0.045% ProClin 300 as preservatives. The 5.Wash buff conc 1x60ml/bottle 5x60ml/bottles 4x150ml/bottles
negative control is olive green colour coded. 6.Enz. Conjugate 1x16ml/vial 2x40ml/bottles 4x40ml/bottles
7.Chromog/Subs 1x16ml/vial 2x40ml/bottles 4x40ml/bottles
3. Positive Control CONTROL + 8.Assay Diluent 1x8ml/vial 1x40ml/bottle 1x80ml/bottle
1x4.0ml/vial. Ready to use control. It contains 1% goat serum 9.Sulphuric Acid 1x15ml/vial 2x40ml/bottle 2x80ml/bottles
proteins, human antibodies positive to HCV, 10 mM Na-citrate 10.SampleDiluent 1x50ml/vial 5x50ml/bottles 4x125ml/bottles
11.Plate seal foils n° 2 n° 10 n° 20
buffer pH 6.0 +/-0.1, 0.5% Tween 20, 0.09% Na-azide and 12. Pack. insert n° 1 n° 1 n° 1
0.045% ProClin 300 as preservatives. The Positive Control is
blue colour coded.
4. Calibrator CAL …. Number of tests 96 480 960

n° 2 vials. Lyophilized calibrator. To be dissolved with the Code CVAB.CE.96 CVAB.CE.480 CVAB.CE.960
volume of EIA grade water reported on the label. It contains
foetal bovine serum proteins, human antibodies to HCV whose
content is calibrated on the NIBSC Working Standard code
99/588-003-WI, 10 mM Na-citrate buffer pH 6.0 +/-0.1, 0.3
mg/ml gentamicine sulphate and 0.045% ProClin 300 as
preservatives.
E. MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED before waste. Suggested procedures of inactivation are
1. Calibrated Micropipettes (200ul and 10ul) and disposable treatment with a 10% final concentration of household bleach for
plastic tips. 16-18 hrs or heat inactivation by autoclave at 121°C for 20 min..
2. EIA grade water (bidistilled or deionised, charcoal treated to 15. Accidental spills from samples and operations have to be
remove oxidizing chemicals used as disinfectants). adsorbed with paper tissues soaked with household bleach and
3. Timer with 60 minute range or higher. then with water. Tissues should then be discarded in proper
4. Absorbent paper tissues. containers designated for laboratory/hospital waste.
5. Calibrated ELISA microplate thermostatic incubator capable 16. The Sulphuric Acid is an irritant. In case of spills, wash the
to provide a temperature of +37°C. surface with plenty of water
6. Calibrated ELISA microwell reader with 450nm (reading) 17. Other waste materials generated from the use of the kit
and with 620-630nm (blanking) filters. (example: tips used for samples and controls, used microplates)
7. Calibrated ELISA microplate washer. should be handled as potentially infective and disposed
8. Vortex or similar mixing tools. according to national directives and laws concerning laboratory
wastes.
F. WARNINGS AND PRECAUTIONS

1. The kit has to be used by skilled and properly trained G. SPECIMEN: PREPARATION AND RECOMMANDATIONS
technical personnel only, under the supervision of a medical 1. Blood is drawn aseptically by venipuncture and plasma or
doctor responsible of the laboratory. serum is prepared using standard techniques of preparation of
2. When the kit is used for the screening of blood units and samples for clinical laboratory analysis. No influence has been
blood components, it has to be used in a laboratory certified and observed in the preparation of the sample with citrate, EDTA
qualified by the national authority in that field (Ministry of Health and heparin.
or similar entity) to carry out this type of analysis. 2. Avoid any addition of preservatives to samples; especially
3. All the personnel involved in performing the assay have to sodium azide as this chemical would affect the enzymatic
wear protective laboratory clothes, talc-free gloves and glasses. activity of the conjugate, generating false negative results.
The use of any sharp (needles) or cutting (blades) devices 3. Samples have to be clearly identified with codes or names in
should be avoided. All the personnel involved should be trained order to avoid misinterpretation of results. When the kit is
in biosafety procedures, as recommended by the Center for used for the screening of blood units, bar code labeling and
Disease Control, Atlanta, U.S. and reported in the National electronic reading is strongly recommended.
Institute of Health’s publication: “Biosafety in Microbiological and 4. Haemolysed (red) and visibly hyperlipemic (“milky”) samples
Biomedical Laboratories”, ed. 1984. have to be discarded as they could generate false results.
4. All the personnel involved in sample handling should be Samples containing residues of fibrin or heavy particles or
vaccinated for HBV and HAV, for which vaccines are available, microbial filaments and bodies should be discarded as they
safe and effective. could give rise to false results.
5. The laboratory environment should be controlled so as to 5. Sera and plasma can be stored at +2°…+8°C in primary
avoid contaminants such as dust or air-born microbial agents, collection tubes for up to five days after collection.
when opening kit vials and microplates and when performing the Do not freeze primary tubes of collection. For longer storage
test. Protect the Chromogen/Substrate from strong light and periods, sera and plasma samples, carefully removed from the
avoid vibration of the bench surface where the test is primary collection tube, can be stored frozen at –20°C for
undertaken. several months. Any frozen samples should not be
6. Upon receipt, store the kit at 2..8°C into a temperature frozen/thawed more than once as this may generate particles
controlled refrigerator or cold room. that could affect the test result.
7. Do not interchange components between different lots of 6. If particles are present, centrifuge at 2.000 rpm for 20 min or
the kits. It is recommended that components between two kits filter using 0.2-0.8u filters to clean up the sample for testing.
of the same lot should not be interchanged.
8. Check that the reagents are clear and do not contain
visible heavy particles or aggregates. If not, advise the
laboratory supervisor to initiate the necessary procedures for kit H. PREPARATION OF COMPONENTS AND WARNINGS
replacement. A study conducted on an opened kit has not pointed out any
9. Avoid cross-contamination between serum/plasma relevant loss of activity up to 6 re-use of the device and up to 6
samples by using disposable tips and changing them after each months.
sample. Do not reuse disposable tips.
10. Avoid cross-contamination between kit reagents by using 1. Microplates:
disposable tips and changing them between the use of each Allow the microplate to reach room temperature (about 1 hr)
one. Do not reuse disposable tips. before opening the container. Check that the desiccant is not
11. Do not use the kit after the expiration date stated on the turned to dark green, indicating a defect of manufacturing.
external container and internal (vials) labels. In this case call Dia.Pro’s customer service.
12. Treat all specimens as potentially infective. All human Unused strips have to be placed back into the aluminium pouch,
serum specimens should be handled at Biosafety Level 2, as in presence of desiccant supplied, firmly zipped and stored at
recommended by the Center for Disease Control, Atlanta, U.S. +2°..8°C.
in compliance with what reported in the Institutes of Health’s When opened the first time, residual strips are stable till the
publication: “Biosafety in Microbiological and Biomedical indicator of humidity inside the desiccant bag turns from yellow
Laboratories”, ed. 1984. to green.
13. The use of disposable plastic-ware is recommended in the
preparation of the liquid components or in transferring 2. Negative Control:
components into automated workstations, in order to avoid Ready to use. Mix well on vortex before use.
cross contamination.
14. Waste produced during the use of the kit has to be 3. Positive Control:
discarded in compliance with national directives and laws Ready to use. Mix well on vortex before use. Handle this
concerning laboratory waste of chemical and biological component as potentially infective, even if HCV, eventually
substances. In particular, liquid waste generated from the present in the control, has been chemically inactivated.
washing procedure, from residuals of controls and from samples
has to be treated as potentially infective material and inactivated
4. Calibrator: baths are suitable for the incubations, provided that the
Dissolve carefully the content of the lyophilised vial with the instrument is validated for the incubation of ELISA tests.
volume of EIA grade water reported on its label. 3. The ELISA washer is extremely important to the overall
Mix well on vortex before use. performances of the assay. The washer must be carefully
Handle this component as potentially infective, even if HCV, validated in advance, checked for the delivery of the right
eventually present in the control, has been chemically dispensation volume and regularly submitted to
inactivated. maintenance according to the manufacturer’s instructions
Note: When dissolved the Calibrator is not stable. Store in for use. In particular the washer, at the end of the daily
aliquots at –20°C. workload, has to be extensively cleaned out of salts with
deionized water. Before use, the washer has to be
5. Wash buffer concentrate: extensively primed with the diluted Washing Solution.
The 20x concentrated solution has to be diluted with EIA grade The instrument weekly has to be submitted to
water up to 1200 ml and mixed gently end-over-end before use. decontamination according to its manual (NaOH 0.1 M
As some salt crystals may be present into the vial, take care to decontamination suggested).
dissolve all the content when preparing the solution. 5 washing cycles (aspiration + dispensation of 350ul/well of
In the preparation avoid foaming as the presence of bubbles washing solution + 20 sec soaking = 1 cycle) are sufficient
could give origin to a bad washing efficiency. to ensure the assay with the declared performances. If
Note: Once diluted, the wash solution is stable for 1 week at soaking is not possible add one more cycle of washing.
+2..8° C. An incorrect washing cycle or salt-blocked needles are the
major cause of false positive reactions.
6. Enzyme conjugate: 4. Incubation times have a tolerance of +5%.
Ready to use. Mix well on vortex before use. 5. The ELISA microplate reader has to be equipped with a
Be careful not to contaminate the liquid with oxidizing chemicals, reading filter of 450nm and with a second filter of 620-
air-driven dust or microbes. 630nm, mandatory for blanking purposes. Its standard
If this component has to be transferred use only plastic, possibly performances should be (a) bandwidth < 10 nm; (b)
sterile disposable containers. absorbance range from 0 to > 2.0; (c) linearity to > 2.0; (d)
repeatability > 1%. Blanking is carried out on the well
7. Chromogen/Substrate: identified in the section “Assay Procedure”. The optical
Ready to use. Mix well on vortex before use. system of the reader has to be calibrated regularly to ensure
Be careful not to contaminate the liquid with oxidizing chemicals, that the correct optical density is measured. It should be
air-driven dust or microbes. regularly maintained according to the manufacturer ‘s
Do not expose to strong illumination, oxidizing agents and instructions.
metallic surfaces. 6. When using an ELISA automated work station, all critical
If this component has to be transferred use only plastic, possible steps (dispensation, incubation, washing, reading, data
sterile disposable container. handling) have to be carefully set, calibrated, controlled and
regularly serviced in order to match the values reported in
8. Assay Diluent: the section O “Internal Quality Control”. The assay protocol
Ready to use. Mix well on vortex before use. has to be installed in the operating system of the unit and
validated as for the washer and the reader. In addition, the
9. Sulphuric Acid: liquid handling part of the station (dispensation and
Ready to use. Mix well on vortex before use. washing) has to be validated and correctly set. Particular
Attention: Irritant (H315; H319; P280; P302+P352; P332+P313; attention must be paid to avoid carry over by the needles
P305+P351+P338; P337+P313; P362+P363). used for dispensing and for washing. This must be studied
and controlled to minimize the possibility of contamination of
Precautionary P statements: adjacent wells. The use of ELISA automated work stations
P280 – Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face is recommended for blood screening when the number of
protection. samples to be tested exceed 20-30 units per run.
P302 + P352 – IF ON SKIN: Wash with plenty of soap and water.
P332 + P313 – If skin irritation occurs: Get medical advice/attention.
7. When using automatic devices, in case the vial holder of the
P305 + P351 + P338 – IF IN EYES: Rinse cautiously with water for instrument does not fit with the vials supplied in the kit,
several minutes. Remove contact lenses, if present and easy to do. transfer the solution into appropriate containers and label
Continue rinsing. them with the same label peeled out from the original vial.
P337 + P313 – If eye irritation persists: Get medical advice/attention. This operation is important in order to avoid mismatching
P362 + P363 - Take off contaminated clothing and wash it before reuse. contents of vials, when transferring them. When the test is
over, return the secondary labeled containers to 2..8°C,
10. Sample Diluent: firmly capped.
Ready to use. Mix well on vortex before use. 8. Dia.Pro’s customer service offers support to the user in the
setting and checking of instruments used in combination
with the kit, in order to assure compliance with the
requirements described. Support is also provided for the
I. INSTRUMENTS AND TOOLS USED IN COMBINATION installation of new instruments to be used with the kit.
WITH THE KIT
1. Micropipettes have to be calibrated to deliver the correct
volume required by the assay and must be submitted to
regular decontamination (household alcohol, 10% solution L. PRE ASSAY CONTROLS AND OPERATIONS
of bleach, hospital grade disinfectants) of those parts that 1. Check the expiration date of the kit printed on the external
could accidentally come in contact with the sample. They label of the kit box. Do not use if expired.
should also be regularly maintained in order to show a 2. Check that the liquid components are not contaminated by
precision of 1% and a trueness of +/-2%. Decontamination naked-eye visible particles or aggregates. Check that the
of spills or residues of kit components should also be carried Chromogen/Substrate is colorless or pale blue by aspirating
out regularly. a small volume of it with a sterile transparent plastic pipette.
2. The ELISA incubator has to be set at +37°C (tolerance of +/- Check that no breakage occurred in transportation and no
0.5°C) and regularly checked to ensure the correct spillage of liquid is present inside the box. Check that the
temperature is maintained. Both dry incubators and water
aluminum pouch, containing the microplate, is not punctured 4. Dispense 50 ul Assay Diluent (DILAS) into all the
or damaged. controls/calibrator and sample wells. Check that the color
3. Dilute all the content of the 20x concentrated Wash Solution of samples has turned to dark blue.
as described above. 5. Incubate the microplate for 45 min at +37°C.
4. Dissolve the Calibrator as described above.
5. Allow all the other components to reach room temperature Important note: Strips have to be sealed with the adhesive
(about 1 hr) and then mix as described. sealing foil, supplied, only when the test is carried out manually.
6. Set the ELISA incubator at +37°C and prepare the ELISA Do not cover strips when using ELISA automatic instruments.
washer by priming with the diluted washing solution,
according to the manufacturers instructions. Set the right 6. Wash the microplate with an automatic washer by
number of washing cycles as reported in the specific delivering and aspirating 350ul/well of diluted washing
section. solution as reported previously (section I.3).
7. Check that the ELISA reader has been turned on at least 20 7. Pipette 100µl Enzyme Conjugate into each well, except the
minutes before reading. 1st blanking well, and cover with the sealer. Check that this
8. If using an automated workstation, turn it on, check settings pink/red coloured component has been dispensed in all the
and be sure to use the right assay protocol. wells, except A1.
9. Check that the micropipettes are set to the required volume.
10. Check that all the other equipment is available and ready Important note: Be careful not to touch the plastic inner
to use. surface of the well with the tip filled with the Enzyme Conjugate.
11. In case of problems, do not proceed further with the test and Contamination might occur.
advise the supervisor.
8. Incubate the microplate for 45 min at +37°C.
9. Wash microwells as in step 6.
10. Pipette 100µl Chromogen/Substrate mixture into each well,
M. ASSAY PROCEDURE the blank well included. Then incubate the microplate at
The assay has to be carried out according to what reported room temperature (18-24°C) for 15 minutes.
below, taking care to maintain the same incubation time for all
the samples in testing. Important note: Do not expose to strong direct illumination.
High background might be generated.
Automated assay: 11. Pipette 100µl Sulphuric Acid into all the wells using the
In case the test is carried out automatically with an ELISA same pipetting sequence as in step 10 to stop the
system, we suggest to make the instrument aspirate 200 ul enzymatic reaction. Addition of acid will turn the positive
Sample Diluent and then 10 ul sample. control and positive samples from blue to yellow/brown.
All the mixture is then carefully dispensed directly into the 12. Measure the colour intensity of the solution in each well, as
appropriate sample well of the microplate. Before the next described in section I.5, at 450nm filter (reading) and at 620-
sample is aspirated, needles have to be duly washed to avoid 630nm (background subtraction), blanking the instrument on
any cross-contamination among samples. A1 (mandatory).
Do not dilute controls/calibrator as they are ready to use.
Dispense 200 ul controls/calibrator in the appropriate
control/calibration wells.
Important notes:
Important Note: Visually monitor that samples have been 1. Ensure that no finger prints are present on the bottom of the
diluted and dispensed into appropriate wells. This is simply microwell before reading. Finger prints could generate false
achieved by checking that the colour of dispensed samples has positive results on reading.
turned to dark bluish-green while the colour of the negative 2. Reading has to be carried out just after the addition of the
control has remained olive green. Stop Solution and anyway not any longer than 20 minutes
after its addition. Some self oxidation of the chromogen can
For the next operations follow the operative instructions reported occur leading to high background.
below for the Manual Assay. 3. Shaking at 350 +150 rpm during incubation has been
It is strongly recommended to check that the time lap between proved to increase the sensitivity of the assay of about 20%.
the dispensation of the first and the last sample will be 4. The Calibrator (CAL) does not affect the cut-off calculation
calculated by the instrument and taken into consideration by and therefore the test results calculation. The Calibrator
delaying the first washing operation accordingly. may be used only when a laboratory internal quality control
is required by the management.
Manual assay:
1. Place the required number of Microwells in the microwell
holder. Leave the 1st well empty for the operation of
blanking.
2. Dispense 200 ul of Negative Control in triplicate, 200 ul
Calibrator in duplicate and 200 ul Positive Control in single
in proper wells. Do not dilute Controls and Calibrator as
they are pre-diluted, ready to use !
3. Add 200 ul of Sample Diluent (DILSPE) to all the sample
wells; then dispense 10 ul sample in each properly
identified well. Mix gently the plate, avoiding overflowing
and contaminating adjacent wells, in order to fully disperse
the sample into its diluent.
Important note: Check that the colour of the Sample Diluent,

upon addition of the sample, changes from light green to dark
bluish green, monitoring that the sample has been really added.
N. ASSAY SCHEME samples, to spills or to the enzyme conjugate;

5. that micropipettes haven’t got contaminated
with positive samples or with the enzyme
Method Operations conjugate
Controls & Calibrator 200 ul 6. that the washer needles are not blocked or
Samples 200ul dil.+10ul partially obstructed.
Assay Diluent (DILAS) 50 ul Calibrator 1. that the procedure has been correctly
1st incubation 45 min executed;
S/Co < 1.1 2. that no mistake has been done in its
Temperature +37°C
distribution (ex.: dispensation of negative
Wash step n° 5 cycles with 20’’ of soaking control instead of control serum)
OR 3. that the washing procedure and the washer
n° 6 cycles without soaking settings are as validated in the pre qualification
Enzyme conjugate 100 ul study;
2nd incubation 45 min 4. that no external contamination of the
calibrator has occurred.
Temperature +37°C
Positive Control 1. that the procedure has been correctly
Wash step n° 5 cycles with 20’’ of soaking < 1.000 OD450nm executed;
OR 2. that no mistake has been done in the
n° 6 cycles without soaking distribution of controls (dispensation of negative
TMB/H2O2 100 ul control instead of positive control. In this case,
3rd incubation 15 min the negative control will have an OD450nm
value > 0.150, too.
Temperature r.t. 3. that the washing procedure and the washer
Sulphuric Acid 100 ul settings are as validated in the pre qualification
Reading OD 450nm / 620-630nm study;
4. that no external contamination of the positive
control has occurred.
An example of dispensation scheme is reported below:

Should these problems happen, after checking, report any
residual problem to the supervisor for further actions.
Microplate
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A BLK S2
B NC S3 P. CALCULATION OF THE CUT-OFF
C NC S4 The tests results are calculated by means of a cut-off value
D NC S5 determined with the following formula on the mean OD450nm
E CAL S6 value of the Negative Control (NC):
F CAL S7
G PC S8 NC + 0.350 = Cut-Off (Co)
H S1 S9
Legenda: BLK = Blank NC = Negative Control The value found for the test is used for the interpretation of
CAL = Calibrator PC = Positive Control S = Sample results as described in the next paragraph.
Important note: When the calculation of results is done by the

operative system of an ELISA automated work station be sure
O. INTERNAL QUALITY CONTROL that the proper formulation is used to calculate the cut-off value
A check is carried out on the controls and the calibrator any time and generate the right interpretations of results.
the kit is used in order to verify whether their OD450nm values
are as expected and reported in the table below.
Check Requirements Q. INTERPRETATION OF RESULTS

Blank well < 0.100 OD450nm value Test results are interpreted as ratio of the sample OD450nm
Negative Control < 0.050 mean OD450nm value after and the Cut-Off value (or S/Co) according to the following table:
(NC) blanking
Calibrator S/Co > 1.1 S/Co Interpretation
Positive Control > 1.000 OD450nm value
< 0.9 Negative
If the results of the test match the requirements stated above, 0.9 - 1.1 Equivocal
proceed to the next section. > 1.1 Positive
If they do not, do not proceed any further and operate as
follows:
A negative result indicates that the patient has not been infected
Problem Check by HCV or that the blood unit may be transfused.
Blank well 1. that the Chromogen/Sustrate solution has not Any patient showing an equivocal result should be tested again
> 0.100 OD450nm got contaminated during the assay on a second sample taken 1-2 weeks later from the patient and
Negative Control 1. that the washing procedure and the washer examined. The blood unit should not be transfused.
(NC) settings are as validated in the pre qualification A positive result is indicative of HCV infection and therefore the
> 0.050 OD450nm study; patient should be treated accordingly or the blood unit should be
after blanking 2. that the proper washing solution has been discarded.
used and the washer has been primed with it
before use;
3. that no mistake has been done in the assay
procedure (dispensation of positive control
instead of negative control;
4. that no contamination of the negative control
or of their wells has occurred due to positive
Important notes: CVAB.CE Accurun 1 S/Co

1. Interpretation of results should be done under the Lot ID Series
supervision of the responsible of the laboratory to reduce 1201 3000 1.5
the risk of judgment errors and misinterpretations. 0602 3000 1.5
2. Any positive result should be confirmed by an alternative 1202 3000 1.9
method capable to detect IgG and IgM antibodies
(confirmation test) before a diagnosis of viral hepatitis is
In addition, n° 7 samples, tested positive for HCV Ab with Ortho
formulated.
HCV 3.0 SAVe, code 930820, lot. # EXE065-1, were diluted in
3. As proved in the Performance Evaluation of the product, the
HCV Ab negative plasma in order to generate limiting dilutions
assay is able to detect seroconversion to anti HCV core
and then tested again on CVAB.CE, lot. # 1202, and Ortho.
antibodies earlier than some other commercial kits.
The following table reports the data obtained.
Therefore a positive result, not confirmed with these
commercial kits, does not have to be ruled out as a false
positive result ! The sample has to be anyway submitted to Sample Limit CVAB.CE Ortho 3.0
a confirmation test (supplied upon request by DiaPro srl, n° Dilution S/Co S/Co
code CCONF). 1 256 X 1.9 1.3
4. As long as the assay is able to detect also IgM antibodies 2 256 X 1.9 0.7
some discrepant results with other commercial products for 3 256 X 2.4 1.0
the detection of anti HCV antibodies - lacking anti hIgM 4 128 X 2.5 3.2
conjugate in the formulation of the enzyme tracer and 5 85 X 3.3 1.4
therefore missing IgM reactivity - may be present. The real 6 128 X 2.2 0.8
positivity of the sample for antibodies to HCV should be then 7 135 X 3.2 2.2
confirmed by examining also IgM reactivity, important for the
diagnosis of HCV infection.
5. When test results are transmitted from the laboratory to an
informatics centre, attention has to be done to avoid
2. DIAGNOSTIC SPECIFICITY AND SENSITIVITY
erroneous data transfer.
The Performance Evaluation of the device was carried out in a
6. Diagnosis of viral hepatitis infection has to be done and
trial conducted on more than total 5000 samples.
released to the patient only by a qualified medical doctor.
An example of calculation is reported below:
2.1 Diagnostic specificity:
The following data must not be used instead or real figures
It is defined as the probability of the assay of scoring negative in
obtained by the user.
the absence of specific analyte. In addition to the first study,
Negative Control: 0.019 – 0.020 – 0.021 OD450nm
where a total of 5043 unselected blood donors,( including 1st
Mean Value: 0.020 OD450nm
time donors), 210 hospitalized patients and 162 potentially
Lower than 0.050 – Accepted
interfering specimens (other infectious diseases, E.coli antibody
Positive Control: 2.189 OD450nm
positive, patients affected by non viral hepatic diseases, dialysis
Higher than 1.000 – Accepted
patients, pregnant women, hemolized, lipemic, etc.) were
Cut-Off = 0.020+0.350 = 0.370
examined, the diagnostic specificity was recently assessed by
Calibrator: 0.550 - 0.530 OD450nm
testing a total of 2876 negative blood donors on six different
Mean value: 0.540 OD450nm S/Co = 1.4
lots. A value of specificity of 100% was found.
S/Co higher than 1.1 – Accepted
No false reactivity due to the method of specimen preparation
Sample 1: 0.070 OD450nm
has been observed. Both plasma, derived with different
Sample 2: 1.690 OD450nm
standard techniques of preparation (citrate, EDTA and heparin),
Sample 1 S/Co < 0.9 = negative
and sera have been used to determine the value of specificity.
Sample 2 S/Co > 1.1 = positive
Frozen specimens have been tested, as well, to check for
interferences due to collection and storage.
No interference was observed.
R. PERFORMANCES
Evaluation of Performances has been conducted in accordance
2.2 Diagnostic Sensitivity
to what reported in the Common Technical Specifications or
It defined as the probability of the assay of scoring positive in
CTS (art. 5, Chapter 3 of IVD Directive 98/79/EC).
the presence of specific analyte.
The diagnostic sensitivity has been assessed externally on a
1. LIMIT OF DETECTION
total number of 359 specimens; a diagnostic sensitivity of 100%
The limit of detection of the assay has been calculated by
was found. Internally more than other 50 positive samples were
means of the British Working Standard for anti-HCV, NIBSC
tested, providing a value of diagnostic sensitivity of again 100%.
code 99/588-003-WI. The table below reports the mean
Positive samples from infections carried out by different
OD450nm values of this standard when diluted in negative
genotypes of HCV were tested as well.
plasma and then examined.
Furthermore, most of seroconversion panels available from
Boston Biomedica Inc., USA, (PHV) and Zeptometrix, USA,
Dilution Lot # 1 Lot # 2
(HCV) have been studied.
Factor S/Co S/Co Results are reported below for some of them.
1X 2.0 2.0
2X 1.1 1.2
4X 0.7 0.8
8X 0.5 0.5
Negative plasma 0.3 0.3
In addition the sample coded Accurun 1 – series 3000 -

supplied by Boston Biomedica Inc., USA, has been evaluated
“in toto” showing the results below:
Panel N° samples DiaPro* Ortho* ** Lot # 0602

PHV 901 11 9 9
PHV 904 7 2 4 Negative Sample (N = 16)
PHV 905 9 3 4 Mean values 1st run 2nd run 3rd run Average
PHV 906 7 7 7 OD 450nm 0.097 0.096 0.094 0.096
PHV 907 7 3 2 Std.Deviation 0.009 0.010 0.008 0.009
PHV 908 13 10 8 CV % 8.9 10.1 8.4 9.1
PHV 909 3 2 2
PHV 910 5 3 3 Cal # 2 – 7K (N = 16)
PHV 911 5 3 3 Mean values 1st run 2nd run 3rd run Average
PHV 912 3 1 1 value
PHV 913 4 2 2 OD 450nm 0.400 0.395 0.393 0.396
PHV 914 9 5 5 Std.Deviation 0.021 0.025 0.026 0.024
PHV 915 4 3 0 CV % 5.4 6.2 6.6 6.1
PHV 916 8 4 3 S/Co 1.2 1.2 1.1 1.2
PHV 917 10 6 6
PHV 918 8 2 0
PHV 919 7 3 3 Lot # 0602/2
PHV 920 10 6 6
Negative Sample (N = 16)
HCV 10039 5 2 0
Mean values 1st run 2nd run 3rd run Average
HCV 6212 9 6 7
OD 450nm 0.087 0.091 0.088 0.089
HCV 10165 9 5 4
Std.Deviation 0.009 0.007 0.008 0.008
Note: * Positive samples detected ** HCV v.3.0 CV % 10.0 8.2 8.6 8.9
Cal # 2 – 7K (N = 16)
Mean values 1st run 2nd run 3rd run Average
Finally the Product has been tested on the panel EFS Ac HCV, OD 450nm 0.386 0.390 0.391 0.389
lot n° 01/08.03.22C/01/A, supplied by the Etablissement Std.Deviation 0.023 0.021 0.023 0.022
Francais Du Sang (EFS), France, with the following results: CV % 6.0 5.3 5.8 5.7
S/Co 1.1 1.2 1.2 1.2
The variability shown in the tables above did not result in

EFS Panel Ac HCV sample misclassification.
Lot # 1 Lot # 2 Lot # 2 Results

Sample S/Co S/Co S/Co expected S. LIMITATIONS
Repeatable false positive results, not confirmed by RIBA or
HCV 1 2.2 2.4 2.6 positive similar confirmation techniques, were assessed as less than
HCV 2 1.6 2.0 2.1 positive 0.1% of the normal population.
Frozen samples containing fibrin particles or aggregates after
HCV 3 1.5 1.7 1.6 positive thawing have been observed to generate some false results.
HCV 4 5.2 6.5 5.5 positive
HCV 5 1.6 1.8 1.6 positive
HCV 6 0.4 0.4 0.4 negative REFERENCES
1. CDC. Public Health Service inter-agency guidelines for screening

donors of blood, plasma, organs, tissues, and semen for evidence of
3. PRECISION: hepatitis B and hepatitis C. MMWR 1991;40(No. RR-4):1-17.
It has been calculated on two samples, one negative and one
low positive, examined in 16 replicates in three separate runs. 2. Alter MJ. Epidemiology of hepatitis C. Hepatology 1997;26:62S-5S.
Results are reported as follows:
3. McQuillan GM, Alter MJ, Moyer LA, Lambert SB, Margolis HS. A
Lot # 1202 population based serologic study of hepatitis C virus infection in the
United States. In Rizzetto M, Purcell RH, Gerin JL, Verme G, eds.
Negative Sample (N = 16) Viral Hepatitis and Liver Disease, Edizioni Minerva Medica, Turin,
Mean values 1st run 2nd run 3rd run Average 1997, 267-70.
value
OD 450nm 0.094 0.099 0.096 0.096 4. Dufour MC. Chronic liver disease and cirrhosis. In Everhart JE, ed.
Digestive diseases in the United States: epidemiology and impact.
Std.Deviation 0.008 0.007 0.008 0.007
US Department of Health and Human Services, Public Health
CV % 8.7 6.6 7.9 7.7 Service, National Institutes of Health, National Institute of Diabetes
and Digestive and Kidney Diseases. Washington, DC: US
Cal # 2 – 7K (N = 16) Government Printing Office, 1994; NIH publication no. 94-1447, 615-
Mean values 1st run 2nd run 3rd run Average 45.
value
OD 450nm 0.396 0.403 0.418 0.406 5. Alter MJ, Hadler SC, Judson FN, et al. Risk factors for acute non-A,
non-B hepatitis in the United States and association with hepatitis C
Std.Deviation 0.023 0.029 0.027 0.026 virus infection. JAMA 1990;264:2231-35.
CV % 5.9 7.1 6.4 6.5
S/Co 1.1 1.1 1.2 1.1 6. Alter HJ, Holland PV, Purcell RH, et al. Posttransfusion hepatitis
after exclusion of commercial and hepatitis-B antigen-positive
donors. Ann Intern Med 1972;77:691-9.
7. Alter HJ, Purcell RH, Holland PV, Feinstone SM, Morrow AG, 26. Thomas DL, Cannon RO, Shapiro CN, Hook EW III, Alter MJ.
Moritsugu Y. Clinical and serological analysis of transfusion- Hepatitis C, hepatitis B, and human immunodeficiency virus
associated hepatitis. Lancet 1975;2:838-41. infections among non-intravenous drug-using patients attending
clinics for sexually transmitted diseases. J Infect Dis 1994;169:990-5.
8. Seeff LB, Wright EC, Zimmerman HJ, McCollum RW, VA
Cooperative Studies Group. VA cooperative study of post-transfusion 27. Buchbinder SP, Katz MH, Hessol NA, Liu J, O'Malley PM, Alter, MJ.
hepatitis and responsible risk factors. Am J Med Sci 1975;270:355- Hepatitis C virus infection in sexually active homosexual men. J
62. Infect 1994;29:263-9.
9. Feinstone SM, Kapikian AZ, Purcell RH, Alter HJ, Holland PV. 28. Thomas DL, Zenilman JM, Alter HJ, et al. Sexual transmission of
Transfusion-associated hepatitis not due to viral hepatitis type A or hepatitis C virus among patients attending sexually transmitted
B. N Engl J Med 1975;292:767-70. diseases clinics in Baltimore--an analysis of 309 sex partnerships. J
Infect Dis 1995;171:768-75.
10. Choo QL, Kuo G, Weiner AJ, Overby LR, Bradley DW. Isolation of a
cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis 29. Thomas DL, Factor SH, Kelen GD, Washington AS, Taylor E Jr,
genome. Science 1989;244:359-62. Quinn TC. Viral hepatitis in health care personnel at The Johns
Hopkins Hospital. Arch Intern Med 1993;153:1705-12.
11. Kuo G, Choo QL, Alter HJ, et al. An assay for circulating antibodies
to a major etiologic virus of human non-A, non-B hepatitis. Science 30. Cooper BW, Krusell A, Tilton RC, Goodwin R, Levitz RE.
1989;244:362-4. Seroprevalence of antibodies to hepatitis C virus in high-risk hospital
personnel. Infect Control Hosp Epidemiol 1992;13:82-5.
12. Alter HJ, Purcell RH, Shih JW, et al. Detection of antibody to
hepatitis C virus in prospectively followed transfusion recipients with
acute and chronic non-A, non-B hepatitis. N Engl J Med
1989;321:1494-1500.
13. Aach RD, Stevens CE, Hollinger FB, et al. Hepatitis C virus infection
in post-transfusion hepatitis. An analysis with first- and second-
generation assays. N Engl J Med 1991;325:1325-9.
14. Alter MJ, Margolis HS, Krawczynski K, Judson, FN, Mares A,

Alexander WJ, et al. The natural history of community-acquired
hepatitis C in the United States. N Engl J Med 1992;327:1899-1905.
15. Alter, MJ. Epidemiology of hepatitis C in the west. Semin Liver Dis All the IVD Products manufactured by the company are
1995;15:5-14. under the control of a certified Quality Management
System approved by an EC Notified Body. Each lot is
16. Donahue JG, Nelson KE, Muåoz A, et al. Antibody to hepatitis C
virus among cardiac surgery patients, homosexual men, and
submitted to a quality control and released into the
intravenous drug users in Baltimore, Maryland. Am J Epidemiol market only if conforming with the EC technical
1991;134:1206-11. specifications and acceptance criteria.
17. Zeldis JB, Jain S, Kuramoto IK, et al. Seroepidemiology of viral
infections among intravenous drug users in northern California. West
J Med 1992;156:30-5.
18. Fingerhood MI, Jasinski DR, Sullivan JT. Prevalence of hepatitis C in Manufacturer:
a chemically dependent population. Arch Intern Med 1993;153:2025- Dia.Pro Diagnostic Bioprobes Srl.
30. Via G. Carducci n° 27 – Sesto San Giovanni (MI) - Italy
19. Garfein RS, Vlahov D, Galai N, Doherty, MC, Nelson, KE. Viral
infections in short-term injection drug users: the prevalence of the
hepatitis C, hepatitis B, human immunodeficiency, and human T-
lymphotropic viruses. Am J Pub Health 1996;86:655-61.
20. Brettler DB, Alter HJ, Deinstag JL, Forsberg AD, Levine PH.
Prevalence of hepatitis C virus antibody in a cohort of hemophilia
patients. Blood 1990;76:254-6.
0318
21. Troisi CL, Hollinger FB, Hoots WK, et al. A multicenter study of viral
hepatitis in a United States hemophilic population. Blood
1993;81:412-8.
22. Kumar A, Kulkarni R, Murray DL, et al. Serologic markers of viral

hepatitis A, B, C, and D in patients with hemophilia. J Med Virology
1993;41:205-9.
23. Tokars JI, Miller ER, Alter MJ, Arduino MJ. National surveillance of
dialysis associated diseases in the United States, 1995. ASAIO
Journal 1998;44:98-107.
24. Osmond DH, Charlebois E, Sheppard HW, et al. Comparison of risk

factors for hepatitis C and hepatitis B virus infection in homosexual
men. J Infect Dis 1993;167:66-71.
25. Weinstock HS, Bolan G, Reingold AL, Polish LB: Hepatitis C virus
infection among patients attending a clinic for sexually transmitted
diseases. JAMA 1993;269:392-4.
Doc.: INS CVAB.CE/esp Página 1 de 11 Rev.: 7 Fecha: 2019/10
HCV Ab
Versión 4.0 del Ensayo
Inmunoenzimático para la determinación
de anticuerpos frente Virus de la
Hepatitis C
en plasma y suero humanos.
Uso exclusivo para diagnóstico “in vitro”
DIA.PRO
Diagnostic Bioprobes Srl
Via G. Carducci n° 27
20099 Sesto San Giovanni
(Milán) - Italia
Teléfono +39 02 27007161
Fax +39 02 44386771
e-mail: info@diapro.it
REF CVAB.CE
96/192/480/960 pruebas
del hígado cuando coexiste con otras disfunciones hepáticas;

HCV Ab particularmente la enfermedad progresa más rápidamente en
personas alcohólicas e infectadas por HCV. Las formas de
transmisión más frecuentes son a través de transfusiones
sanguíneas sin controlar y por la reutilización de agujas,
A. OBJETIVO DEL EQUIPO. jeringuillas y material médico contaminados. La transmisión
Versión 4.0 del Ensayo Inmunoenzimático (ELISA) para la sexual y perinatal puede suceder aunque es menos frecuente.
determinación de anticuerpos al virus de la Hepatitis C en Determinadas prácticas y comportamientos sociales y culturales
plasma y suero humanos. (perforaciones en orejas y otras partes del cuerpo (piercing),
El equipo está diseñado para el cribado en unidades de sangre circuncisiones y tatuajes) pueden constituir modos de
así como para el seguimiento de pacientes infectados con HCV. transmisión si existe una inadecuada esterilización de los
Uso exclusivo para diagnóstico “in vitro”. instrumentos usados. El HCV no se transmite por estornudos,
tos, abrazos, agua o alimentos, estrechar la mano, compartir
cubiertos o en general por contactos casuales. Tanto en países
desarrollados como en aquellos en vías de desarrollo, los
grupos de alto riesgo incluyen drogadictos, receptores de
transfusiones sin analizar, hemofílicos, pacientes sometidos a
B. INTRODUCCIÓN. diálisis y personas con actividad sexual promiscua y sin la
La Organización Mundial de la Salud (OMS) define la infección debida protección. En los países desarrollados, se ha estimado
por el virus de la Hepatitis C como: que el 90% de las personas con infección crónica por HCV son
“La Hepatitis C es una infección viral del hígado, definida o han sido drogadictos o han recibido donaciones de sangre o
hemoderivados contaminados. En muchos países en vías de
como hepatitis de transmisión parenteral “no A no B” hasta el
desarrollo, donde aún se utilizan transfusiones o
descubrimiento del agente causal en 1989. El descubrimiento y
hemoderivados sin analizar, los principales medios de
la caracterización del virus de la hepatitis C (HCV) ha permitido
transmisión son los instrumentos para inyecciones y las
comprender su papel primario en la hepatitis post-transfusional
transfusiones sin analizar.
y su tendencia a inducir la infección persistente. El virus de la
hepatitis C es la causa principal de hepatitis aguda y La OMS estima que cerca de 170 millones de personas, es
enfermedad hepática crónica, incluyendo cirrosis y cáncer de decir el 3% de la población mundial, están infectadas por el
hígado. A nivel mundial se estima que 170 millones de HCV y bajo riesgo de desarrollar cirrosis y/o cáncer hepático. La
personas estén infectadas de forma crónica con HCV y que de prevalencia de la infección por HCV en países de África, el
3 a 4 millones se infecten cada año. Mediterráneo oriental, Sudeste Asiático y el Pacífico Occidental
es alta, comparada con países de Norteamérica y Europa.
El virus se transmite por contacto directo con sangre humana. Las pruebas de diagnóstico para el HCV contribuyen a prevenir
Las causas principales de infección por HCV en el mundo son la infección mediante el cribado de la sangre y plasma del
las transfusiones sanguíneas no controladas y la reutilización donante, son útiles para establecer un diagnóstico clínico y en
de jeringuillas y agujas sin una correcta esterilización previa. En el seguimiento de los pacientes. Las pruebas de diagnóstico
la actualidad aún no existe una vacuna eficaz contra el virus y el comerciales disponibles en la actualidad, se basan en ensayos
tratamiento para la hepatitis C crónica es demasiado costoso enzimáticos de imnunoabsorción (EIA) para la detección de
para la mayoría de las personas en países en vías de anticuerpos específicos contra HCV. Estos métodos pueden
desarrollo. Desde una perspectiva global, el mayor impacto detectar más del 95% de los pacientes con infección crónica,
contra la hepatitis C puede lograrse a través de esfuerzos pero solo entre el 50 y el 70% de las infecciones agudas. Para
orientados hacia la prevención y el control de la transmisión por confirmar los resultados positivos por EIA se usa
exposiciones nosocomiales (como las transfusiones sanguíneas frecuentemente el sistema inmunoblot recombinante (RIBA), el
y las prácticas invasoras inseguras) y los comportamientos que cual identifica anticuerpos contra los antígenos individuales del
conllevan alto riesgo (como el consumo de drogas inyectables). HCV. Por otra parte, algunas técnicas de biología molecular
(amplificación de ácidos nucleicos: Reacción en Cadena de la
El virus de la hepatitis C aparece en la mayoría de los casos de Polimerasa (PCR) y DNA ramificado) han sido utilizadas para
hepatitis viral. Es un virus RNA envuelto, perteneciente a la confirmar los resultados serológicos así como para determinar
familia Flaviviridae y que parece tener un estrecho margen de la efectividad de la terapia antiviral. Un resultado positivo indica
huéspedes. Humanos y chimpancés son las únicas especies la presencia de una infección activa, de una fuente potencial de
susceptibles conocidas y ambas desarrollan una enfermedad transmisión y/o del desarrollo de una enfermedad hepática
similar. Una característica importante del virus es su crónica.
variabilidad genómica, la cual pudiera estar relacionada a su Para el tratamiento de personas con hepatitis C crónica se
elevada capacidad (80%) de inducir infección crónica. El HCV emplean fármacos antivirales como el interferón (administrado
ha sido agrupado por genotipos, lo cual puede ser útil para solo o en combinación con la ribavirina), pero el costo del
determinar la gravedad de la enfermedad y la respuesta al tratamiento es elevado. Si se emplea solo el tratamiento con
tratamiento. interferón, la eficacia en los pacientes es de 10 a 20%, mientras
que en combinación con la ribavirina es eficaz en cerca del 30-
El periodo de incubación varía desde 15 hasta 150 días. En la 50% de los casos. El tratamiento solo con ribavirina no parece
infección aguda los síntomas más comunes son fatiga e ser efectivo.
ictericia, sin embargo la mayoría de los casos (entre el 60% y el No existe en la actualidad una vacuna contra HCV, debido en
70%), incluso aquellos que desarrollan la infección crónica, son parte, a la alta frecuencia de mutaciones del virus. El escaso
asintomáticos. Cerca del 80% de los nuevos pacientes conocimiento de la respuesta inmune protectora que sigue a la
infectados progresan a la infección crónica. Del 10 al 20% de infección por HCV ha dificultado el desarrollo de la vacuna. No
las personas con infección crónica desarrollan cirrosis, mientras se conoce tampoco acerca de los mecanismos del sistema
que el cáncer de hígado lo presentan entre el 1 y el 5% de las inmune para la eliminación del virus. Algunos estudios, sin
personas con este tipo de infección, en un periodo de 20 a 30 embargo, han demostrado la aparición de anticuerpos
años. Muchos pacientes que padecen cáncer de hígado y no neutralizantes en pacientes con infección HCV. En ausencia de
están infectados por el virus de la hepatitis B, presentan la vacuna, es conveniente tomar todas las medidas posibles
evidencias de infección por el virus de la hepatitis C. Los para prevenir la infección (a) cribado y análisis de sangre y
mecanismos que relacionan la infección por HCV y el desarrollo órganos de donantes; (b) inactivación del virus en productos
de cáncer hepático no han sido aún esclarecidos. La hepatitis C derivados del plasma; (c) implementación y mantenimiento de
puede exacerbar la gravedad de una enfermedad subyacente las prácticas para el control de la infección incluyendo la
esterilización del material médico y dental; (d) promover Nota: El volumen necesario para disolver el contenido del
cambios en la conducta entre el público en general y el personal frasco varía en cada lote. Se recomienda usar el volumen
sanitario para evitar las prácticas incorrectas y (e) vigilancia de indicado en la etiqueta.
los grupos de riesgo (personas con promiscuidad sexual y
drogadictos).” 5. Tampón de Lavado Concentrado: WASHBUF 20X
2x60ml/botella. Solución concentrada 20x.
El genoma codifica para componentes estructurales: una Una vez diluida, la solución de lavado contiene tampón fosfato
proteína de la nucleocápside y dos glicoproteínas de la 10 mM a pH 7.0 +/- 0.2, Tween 20 al 0.05% y ProClin 300 al
envoltura, así como para proteinas funcionales involucradas en 0,045%.
la replicación viral y la síntesis de proteinas. La región que
codifica para la nucleocápside parece estar altamente 6. Conjugado CONJ
conservada entre los aislamientos obtenidos en todo el mundo. 2x16ml/vial. Solución lista para el uso. Contiene 5% de
albúmina de suero bovino, tampón Tris 10mM a pH 6.8 +/- 0.1,
anticuerpo policlonal de cabra anti-IgM/IgG humanos conjugado
C. PRINCIPIOS DEL ENSAYO. con peroxidasa (HPR) en presencia de 0.2 % de sulfato de
Las microplacas están recubiertas con antígenos específicos gentamicina y ProClin 300 al 0,045% como conservantes. El
del HCV correspondientes a las regiones del “core” y “ns” que conjugado está codificado con el color rosa/rojo.
codifican para determinantes antigénicos inmunodominantes y
conservados (péptido del core y péptidos recombinantes NS3, 7. Cromógeno/Substrato SUBS TMB
NS4 y NS5). 2x16ml/vial. Contiene una solución tamponada citrato-fosfato
Se añade la muestra diluida y los anticuerpos contra HCV, 50mM pH 3.5-3.8, tetra-metil-benzidina (TMB) 0.03% y peróxido
presentes en la muestra, son capturados por los antígenos de la de hidrógeno (H2O2) 0.02% así como dimetilsulfóxido 4%.
fase sólida. Nota: Evitar la exposición a la luz, la sustancia es
Después del lavado, en la 2ª incubación, los anticuerpos IgG e fotosensible.
IgM son detectados mediante anticuerpos policlonales
específicos anti-IgG/IgM humanos, conjugados con Peroxidasa 8. Diluente de ensayo: DILAS
(HPR). 1x15ml/vial. Contiene una solución tamponada Tris 10 mM pH
La enzima capturada en la fase sólida, combinada con la 8.0 +/- 0.1 y 0.1% de ProClin 300 al 0,045% para el pre-
mezcla substrato/cromógeno, genera una señal óptica tratamiento de muestras y controles, bloquea posibles
proporcional a la cantidad de anticuerpos anti-HCV presentes interferencias.
en la muestra. Posteriormente, mediante un valor de corte Nota: Usar todo el contenido del vial antes de abrir un
calculado, las densidades ópticas pueden interpretarse como segundo. El reactivo es sensible a oxidación.
resultados negativos o positivos a la presencia de anticuerpos
al HCV. 9. Ácido Sulfúrico: H2SO4 O.3 M
1x32ml/vial. Contiene solución de H2SO4 0.3M
Atención: Irritante (H315, H319; P280, P302+P352,
D. COMPONENTES. P332+P313, P305+P351+P338, P337+P313, P362+P363).
Cada equipo (Código CVAB.CE) contiene reactivos suficientes
para realizar 192 pruebas. 10. Diluente de muestras DILSPE
2x50ml. Contiene una solución tamponada citrato sódico 10 mM
1. Microplaca: MICROPLATE pH 6.0 +/- 0.1, 1% de proteinas del suero de cabra, 0.5% de
n° 2 microplacas Tween 20, azida sódica 0.09% y ProClin 300 al 0,045% como
12 tiras de 8 pocillos recubiertos con péptidos recombinantes conservantes. Se usa para diluir las muestras.
para el “core” y para NS3, NS4 y NS5. Las placas están
empaquetadas en bolsas selladas con desecante.
11. Sellador adhesivo, n° 4
2. Control Negativo: CONTROL -
1x4.0ml/vial 12. Manual de instrucciones, n° 1
Listo para el uso. Contiene 1% de proteinas del suero de cabra,
tampón Citrato sódico 10mM pH 6.0 +/-0.1, 0.5% de Tween 20,
además de azida sódica 0.09% y ProClin 300 al 0,045% como Nota importante: A solicitud del cliente, Dia.Pro puede
conservantes. El control negativo está codificado con el color suministrar reactivos para realizar 96, 480 ó 960 pruebas,
verde olivo. según se reporta a continuación:
3. Control Positivo: CONTROL +

1.Microplaca n°1 n°5 n°10
1x4.0ml/vial 2.ControlNegativo 1x2.0ml/vial 1x10ml/vial 1x20.ml/vial
Listo para el uso. Contiene 1% de proteinas del suero de cabra, 3.ControlPositivo 1x2.0ml/vial 1x10ml/vial 1x20.ml/vial
anticuerpos humanos anti-HCV, tampón Citrato sódico10mM pH 4.Calibrador n° 1 vial n° 5 vials n° 10 vials
6.0 +/-0.1, 0.5% de Tween 20, así como azida sódica 0.09% y 5.Soluc. Lav. conc 1x60ml/bot. 5x60ml/frasc. 4x150ml/frasc.
ProClin 300 al 0,045% como conservantes. El control positivo 6.Conjugado 1x16ml/vial 2x40ml/frasc. 4x40ml/frasc.
está codificado con el color azul. 7.Cromóg/Subs 1x16ml/vial 2x40ml/frasc. 4x40ml/frasc.
8.Diluent. ensayo 1x8ml/vial 1x40ml/ frasc. 1x80ml/frasc.
9.Acido Sulfúrico 1x15ml/vial 2x40ml/ frasc. 2x80ml/frasc.
4. Calibrador CAL …. 10.Diluent.muestr. 1x50ml/vial 5x50ml/frasc. 4x125ml/frasc.
n° 2 viales 11.Sellador adhes. n° 2 n° 10 n° 20
Liofilizado. Para disolver en agua calidad EIA como se indica en 12.Manual de n° 1 n° 1 n° 1
la etiqueta. Contiene suero fetal bovino, anticuerpos humanos al instrucciones
HCV, calibrados según el código Estándar de Trabajo de
NIBSC 99/588-003-WI, tampón Citrato sódico10mM pH 6.0 +/-
Número de 96 480 960
0.1, además de sulfato de gentamicina 0.3 mg/ml y ProClin 300 pruebas
al 0,045% como conservantes. Código CVAB.CE.96 CVAB.CE.480 CVAB.CE.960
E. MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS. 14. Los desechos producidos durante el uso del equipo deben
1. Micropipetas calibradas (200l y 10l) y puntas plásticas ser eliminados según lo establecido por las directivas
desechables. nacionales y las leyes relacionadas con el tratamiento de
2. Agua de calidad EIA (bidestilada o desionizada, tratada con los residuos químicos y biológicos de laboratorio. En
carbón para remover químicos oxidantes usados como particular, los desechos líquidos provenientes del proceso
desinfectantes). de lavado deben ser tratados como potencialmente
3. Timer con un rango de 60 minutos como mínimo. infecciosos y deben ser inactivados. Se recomienda la
4. Papel absorbente. inactivación con lejía al 10% de 16 a 18 horas o el uso de la
5. Incubador termostático de microplacas ELISA, calibrado (en autoclave a 121°C por 20 minutos.
seco o húmedo) fijo a 37ºC. 15. En caso de derrame accidental de algún producto, se debe
6. Lector calibrado de microplacas de ELISA con filtros de utilizar papel absorbente embebido en lejía y
450nm (lectura) y de filtros de 620-630 nm. posteriormente en agua. El papel debe eliminarse en
7. Lavador calibrado de microplacas ELISA. contenedores designados para este fin en hospitales y
8. Vórtex o similar. laboratorios.
16. El ácido sulfúrico es irritante. En caso de derrame, se debe
lavar la superficie con abundante agua.
17. Otros materiales de desecho generados durante la
utilización del equipo (por ejemplo: puntas usadas en la
F. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES. manipulación de las muestras y controles, microplacas
1. El equipo debe ser usado por personal técnico usadas) deben ser manipuladas como fuentes potenciales
adecuadamente entrenado, bajo la supervisión de un doctor
de infección de acuerdo a las directivas nacionales y leyes
responsable del laboratorio. para el tratamiento de residuos de laboratorio.
2. Cuando el equipo es usado para cribado en unidades de
sangre, el laboratorio debe estar certificado y calificado para
realizar este tipo de análisis (Ministerio de Salud o entidad
similar). G. MUESTRA: PREPARACIÓN Y RECOMENDACIONES.
3. Todas las personas encargadas de la realización de las
1. Extraer la sangre asépticamente por punción venosa y
pruebas deben llevar las ropas protectoras adecuadas de preparar el suero o plasma según las técnicas estándar de
laboratorio, guantes y gafas. Evitar el uso de objetos los laboratorios de análisis clínico. No se ha detectado que
cortantes (cuchillas) o punzantes (agujas). El personal debe
el tratamiento con citrato, EDTA o heparina afecte las
ser adiestrado en procedimientos de bioseguridad, según muestras.
ha sido recomendado por el Centro de Control de 2. Evitar el uso de conservantes, en particular azida sódica, ya
Enfermedades de Atlanta, Estados Unidos, y publicado por
que pudiera afectar la actividad enzimática del conjugado,
el Instituto Nacional de Salud: “Biosafety in Microbiological generando resultados falsos negativos.
and Biomedical Laboratories”, ed.1984. 3. Las muestras deben estar identificadas claramente
4. Todo el personal involucrado en el manejo de muestras
mediante código de barras o nombres, a fin de evitar
debe estar vacunado contra HBV y HAV, para lo cual errores en los resultados. Cuando el equipo se emplea para
existen vacunas disponibles, seguras y eficaces. el cribado en unidades de sangre, se recomienda el uso del
5. Se debe controlar el ambiente del laboratorio para evitar la código de barras.
contaminación de los componentes con polvo o agentes 4. Las muestras hemolizadas (color rojo) o hiperlipémicas
microbianos cuando se abran los equipos, así como durante
(aspecto lechoso) deben ser descartadas para evitar falsos
la realización del ensayo. Evitar la exposición del substrato resultados, al igual que aquellas donde se observe la
a la luz y las vibraciones de la mesa de trabajo durante el presencia de precipitados, restos de fibrina o filamentos
ensayo.
microbianos.
6. Conservar el equipo a temperaturas entre 2-8 ºC, en un 5. El suero y el plasma pueden conservarse a una
refrigerador con temperatura regulada o en cámara fría. temperatura entre +2° y +8°C en tubos de recolección
7. No intercambiar reactivos de diferentes lotes ni tampoco de
principales hasta cinco días después de la extracción. No
diferentes equipos. congelar tubos de recolección principales. Para periodos de
8. Comprobar que los reactivos no contienen precipitados ni almacenamiento más prolongados, las muestras de plasma
agregados en el momento del uso. De darse el caso,
o suero, retiradas cuidadosamente del tubo de extracción
informar al responsable para realizar el procedimiento principal, pueden almacenarse congeladas a –20°C durante
pertinente y reemplazar el equipo. varios meses, evitando luego descongelar cada muestra
9. Evitar contaminación cruzada entre muestras de suero/
más de una vez, ya que se pueden generar partículas que
plasma usando puntas desechables y cambiándolas podrían afectar al resultado de la prueba.
después de cada uso. No reutilizar puntas desechables 6. Si hay presencia de agregados, la muestra se puede aclarar
10. Evitar contaminación cruzada entre los reactivos del equipo
mediante centrifugación a 2000 rpm durante 20 minutos o
usando puntas desechables y cambiándolas después de por filtración con un filtro de 0,2-0,8 micras.
cada uso. No reutilizar puntas desechables
11. No usar el producto después de la fecha de caducidad
indicada en el equipo e internamente en los reactivos. H. PREPARACIÓN DE LOS COMPONENTES Y
Según estudios realizados, no se ha detectado pérdida PRECAUCIONES.
relevante de actividad en equipos abiertos, en uso por un
Según estudios realizados, no se ha detectado pérdida
período de hasta 6 meses. relevante de actividad en equipos abiertos, utilizados hasta 6
12. Tratar todas las muestras como potencialmente infecciosas. veces, en un período de hasta 6 meses.
Las muestras de suero humano deben ser manipuladas al
nivel 2 de bioseguridad, según ha sido recomendado por el 1. Microplacas:
Centro de Control de Enfermedades de Atlanta, Estados Dejar la microplaca a temperatura ambiente (aprox. 1 hora)
Unidos y publicado por el Instituto Nacional de Salud:
antes de abrir el envase. Compruebe que el desecante no esté
“Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories”, de un color verde oscuro, lo que indicaría un defecto de
ed.1984. fabricación. De ser así, debe solicitar el servicio de Dia.Pro:
13. Se recomienda el uso de material plástico desechable para
atención al cliente.
la preparación de las soluciones de lavado y para la Las tiras de pocillos no utilizadas, deben guardarse
transferencia de los reactivos a los diferentes equipos herméticamente cerradas en la bolsa de aluminio con el
automatizados a fin de evitar contaminaciones.
desecante a 2-8ºC. Una vez abierto el envase, las tiras P305 + P351 + P338 – EN CASO DE CONTACTO CON LOS
sobrantes, se mantienen estables hasta que el indicador de OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios
humedad dentro de la bolsa del desecante cambie de amarillo a minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil.
verde. Seguir aclarando.
P337 + P313 – Si persiste la irritación ocular: Consultar a un
2. Control Negativo: médico.
Listo para el uso. Mezclar bien con la ayuda de un vórtex, antes P362 + P363 – Quitarse las prendas contaminadas y lavarlas
de usar. antes de volver a usarlas.
3. Control Positivo: 10. Diluente de muestras :

Listo para el uso. Mezclar bien con la ayuda de un vórtex, Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex antes de usar.
antes de usar. Manipule este reactivo como potencialmente
infeccioso, aunque las partículas virales presentes en el control
han sido inactivadas quimicamente.
4. Calibrador: I. INSTRUMENTOS Y EQUIPAMIENTO UTILIZADOS EN

Disolver cuidadosamente el contenido del vial en el volumen de COMBINACIÓN CON EL EQUIPO.
agua de calidad EIA indicado en la etiqueta. Mezclar bien con el 1. Las micropipetas deben ser calibradas para dispensar
vórtex antes de usar. correctamente el volumen requerido en el ensayo y
Manipule este reactivo como potencialmente infeccioso, aunque sometidas a una descontaminación periódica de las partes
las partículas virales presentes en el control han sido que pudieran entrar accidentalmente en contacto con la
inactivadas quimicamente. muestra o los reactivos (lejía 10%, de calidad de los
Nota: Una vez reconstituida, la solución no es estable. Se desinfectantes hospitalarios). Deben además, ser
recomienda mantenerla congelada en alícuotas a –20ºC. regularmente revisadas para mantener una precisión del
1% y una confiabilidad de +/- 2%. Deben descontaminarse
5. Solución de Lavado Concentrada: periodicamente los residuos de los componentes del
Todo el contenido de la solución concentrada 20x debe diluirse equipo.
con agua bidestilada fino a 1200 ml y mezclarse suavemente 2. La incubadora de ELISA debe ser ajustada a 37ºC (+/-
antes de usarse. 0.5ºC) y controlada periódicamente para mantener la
Por que en los frascos pueden estar presente los cristales, temperatura correcta. Pueden emplearse incubadoras
cuando se prepara la solucion prestar mucha atencion en diluir secas o baños de agua siempre que estén validados para la
todo el contenido. Durante la preparación evitar la formación incubación de pruebas de ELISA.
de espuma y burbujas, lo que podría influir en la eficiencia de 3. El lavador ELISA es extremadamente importante para el
los ciclos de lavado. rendimiento global del ensayo.El lavador debe ser validado
Nota: Una vez diluida, la solución es estable por una semana a de forma minuciosa previamente, revisado para comprobar
temperaturas entre +2 y 8ºC. que suministra el volumen de dispensación correcto y
enviado regularmente a mantenimiento de acuerdo con las
6. Conjugado: instrucciones de uso del fabricante. En particular, deben
Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex antes de usar. lavarse minuciosamente las sales con agua desionizada del
Evitar posible contaminación del líquido con oxidantes lavador al final de la carga de trabajo diaria. Antes del uso,
químicos, polvo o microbios. En caso de que deba transferirse debe suministrarse extensivamente solución de lavado
el reactivo, usar contenedores de plástico, estériles y diluida al lavador. Debe enviarse el instrumento
desechables, siempre que sea posible. semanalmente a descontaminación según se indica en su
manual (se recomienda descontaminación con NaOH 0.1
7. Cromógeno/ Substrato: M). Para asegurar que el ensayo se realiza conforme a los
Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex antes de usar. rendimientos declarados, basta con 5 ciclos de lavado
Evitar posible contaminación del líquido con oxidantes (aspiración + dispensado de 350 µl/pocillo de solución de
químicos, polvo o microbios. Evitar la exposición a la luz, lavado + 20 segundos de remojo = 1 ciclo). Si no es posible
agentes oxidantes y superficies metálicas. En caso de que deba remojar, añadir un ciclo de lavado adicional. Un ciclo de
transferirse el reactivo, usar contenedores de plástico, estériles lavado incorrecto o agujas obstruidas con sal son las
y desechables, siempre que sea posible. principales causas de falsas reacciones positivas.
4. Los tiempos de incubación deben tener un margen de +5%.
8. Diluente de ensayo: 5. El lector de microplacas ELISA debe estar provisto de un
Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex antes de usar. filtro de lectura de 450 nm y de un segundo filtro de 620-
630 nm, obligatorio para el blanco. El procedimiento
9. Ácido Sulfúrico: estándar debe contemplar: a) Ancho de banda < 10 nm; b)
Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex antes de usar. Rango de absorbancia de 0 a > 2,0; c) Linealidad > 2,0; d)
Atención: Irritante (H315, H319; P280, P302+P352, Reproducibilidad > 1%. El blanco se prueba en el pocillo
P332+P313, P305+P351+P338, P337+P313, P362+P363). indicado en la sección “Procedimiento del ensayo”. El
sistema óptico del lector debe calibrarse periódicamente
Leyenda: para garantizar que se mide la densidad óptica correcta.
Periódicamente se debe proceder al mantenimiento según
Indicación de peligro, Frases H las instrucciones del fabricante.
H315 – Provoca irritación cutánea. 6. En caso de usar un sistema automatizado de ELISA, los
H319 – Provoca irritación ocular grave. pasos críticos (dispensado, incubación, lavado, lectura,
agitación y procesamiento de datos) deben ser
Consejo de prudencia, Frases P cuidadosamente fijados, calibrados, controlados y
P280 – Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección. periódicamente ajustados, para garantizar los valores
P302 + P352 – EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar indicados en la seccione “Control interno de calidad”. El
con agua y jabón abundantes. protocolo del ensayo debe ser instalado en el sistema
P332 + P313 – En caso de irritación cutánea: Consultar a un operativo de la unidad y validado tanto para el lavador como
médico. para el lector. Por otro lado, la parte del sistema que
maneja los líquidos (dispensado y lavado) debe ser
validada y fijada correctamente. Debe prestarse particular
atención a evitar el arrastre por las agujas de dispensación La mezcla debe ser dispensada cuidadosamente en los pocillos
y de lavado, a fin de minimizar la posibilidad de ocurrencia correspondientes a cada muestra. Antes de aspirar la muestra
de falsos positivos por contaminación de los pocillos siguiente, las agujas deben lavarse debidamente para evitar
adyacentes por muestras fuertemente reactivas. Se cualquier contaminación cruzada entre las muestras.
recomienda el uso de sistemas automatizados para el No diluir el Calibrador ni los controles ya que están listos para el
cribado en unidades de sangre y cuando la cantidad de uso.
muestras supera las 20-30 unidades por ensayo. Dispensar 200µl de controles/Calibrador en los pocillos
7. Cuando se utilizan instrumentos automaticos, en el caso en correspondientes.
que los contenedores para los frascos del in strumento no
sean adecuados a los frascos del kit, transferir la solucion Nota importante: Controle a simple vista que las muestras han
en ellos contenida en frascos idoneos al instrumento y sido diluidas y dispensadas en los pocillos adecuados, para lo
etiquetarlos con la misma etiqueta utilizada en el frasco cual el color de las muestras dispensadas debe ser verde azul
original. Esta operacion es importante para evitar el cambio oscuro, mientras que el del control negativo debe permanecer
del contenido de los frascos durante el transferimiento. verde olivo.
Cuando el test a terminado colocar los contenedores
secundarios etiquetados y tapados a 2..8°C. Para las operaciones siguientes, consulte las instrucciones que
8. El servicio de atención al cliente en Dia.Pro, ofrece apoyo al aparecen debajo para el Ensayo Manual.
usuario para calibrar, ajustar e instalar los equipos a usar Es muy importante comprobar que el tiempo entre el
en combinación con el equipo, con el propósito de asegurar dispensado de la primera y la última muestra sea calculado por
el cumplimiento de los requerimientos descritos. el instrumento y considerado para los lavados.
Ensayo Manual.
1. Poner el número de tiras necesarias en el soporte de
plástico. Dejar el primer pocillo vacío para el blanco.
L. OPERACIONES Y CONTROLES PREVIOS AL ENSAYO. 2. Dispensar 200l del Control Negativo, por triplicado, 200l
1. Compruebe la fecha de caducidad indicada en la parte de Calibrador por duplicado y 200l del Control Positivo. No
externa del equipo (envase primario). No usar si ha diluir el Calibrador ni los controles ya que están listos para
caducado. el uso!
2. Compruebe que los componentes líquidos no están 3. Dispensar 200l del Diluente de muestras (DILSPE) a todos
contaminados con partículas o agregados visibles.
los pocillos de muestras, después dispensar 10 µl de cada
Asegúrese de que el cromógeno (TMB) es incoloro o azul
muestra en su pocillo correspondiente. Resuspender
pálido, aspirando un pequeño volumen de este con una
suavemente evitando la formación de espuma y la
pipeta estéril de plástico. Compruebe que no han ocurrido
contaminación de los pocillos adyacentes.
rupturas ni derrames de líquido dentro de la caja (envase
primario) durante el transporte. Asegurarse de que la bolsa
Nota importante: Comprobar que el color del Diluente de
de aluminio que contiene la microplaca no esté rota o
muestras, después de adicionada la misma, cambia de verde a
dañada.
verde azul oscuro.
3. Diluir totalmente la solución de lavado concentrada 20X,
como se ha descrito anteriormente.
4. Dispensar 50 ul de Diluente de ensayo (DILAS) en los
4. Disolver el Calibrador como se ha descrito anteriormente y
pocillos de los controles/Calibrador y muestras. Compruebe
mezclar suavemente.
que el color de las muestras sea azul oscuro.
5. Dejar los componentes restantes alcanzar la temperatura
5. Incubar la microplaca 45 min a +37°C.
ambiente (aprox. 1 hora), mezclar luego suavemente en el
vórtex todos los reactivos líquidos.
Nota importante: Las tiras se deben sellar con el adhesivo
6. Ajustar la incubadora de ELISA a 37ºC y cebar el lavador
suministrado solo cuando se hace el test manualmente. No
de ELISA utilizando la solución de lavado, según las
sellar cuando se emplean equipos automatizados de ELISA.
instrucciones del fabricante. Fijar el número de ciclos de
lavado según se indica en la sección específica.
6. Lavar la microplaca con el lavador automático dispensando
7. Comprobar que el lector de ELISA esté conectado al menos
y aspirando 350 µl/pocillo de solución de lavado diluída,
20 minutos antes de realizar la lectura.
segun según se indica (section I.3).
8. En caso de trabajar automáticamente, conectar el equipo y
7. Dispensar 100µl del Conjugado en todos los pocillos,
comprobar que los protocolos estén correctamente
excepto en el A1 y cubrir con el sellador. Compruebe que
programados.
este reactivo de color rosa/rojo ha sido añadido en todos los
9. Comprobar que las micropipetas estén fijadas en el
pocillos excepto el A1.
volumen requerido.
10. Asegurarse de que el equipamiento a usar esté en perfecto
Nota importante: Tener cuidado de no tocar la pared interna
estado, disponible y listo para el uso.
del pocillo con la punta de la pipeta al dispensar el conjugado.
11. En caso de surgir algún problema, se debe detener el
Podría producirse contaminación.
ensayo y avisar al responsable.
8. Incubar la microplaca 45 min a +37°C.
9. Lavar la microplaca, de igual forma que en el paso 6.
10. Dispensar 100µl del Cromógeno/Substrato en todos los
M. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO.
pocillos, incluido el A1. Incubar la microplaca a
El ensayo debe realizarse según las instrucciones que siguen a
temperatura ambiente (18-24°C) durante 15 minutos.
continuación, es importante mantener en todas las muestras el
mismo tiempo de incubación.
Nota importante: No exponer directamente a fuerte
iluminación, de lo contrario se generan interferencias.
Ensayos Automatizados.
En el caso de que el ensayo se realice de manera automatizada
11. Dispensar 100l de ácido sulfúrico en todos los pocillos
con un sistema ELISA, se recomienda programar al equipo para
para detener la reacción enzimática, usar la misma
aspirar 200l de Diluente de Muestras, y posteriormente 10l de
secuencia que en el paso 10. La adición de la solución de
muestra.
parada cambia el color del Control Positivo y las muestras
positivas de azul a amarillo/marrón.
12. Medir la intensidad del color de la solución en cada Parámetro Exigencia

pocillo, según se indica en la sección I.5, con un filtro de Pocillo Blanco Valor < 0.100 DO450nm
450 nm (lectura) y, otro de 620-630 nm (substracción del Control Negativo Valor medio < 0.050 DO450nm después
fondo), calibrando el instrumento con el pocillo A1 (blanco, (CN) de leer el blanco
obligatorio).
Calibrador M/Co > 1.1
Notas importantes:
Control Positivo Valor > 1.000 DO450nm
1. Asegurarse de que no hay impresiones digitales ni polvo en
el fondo de los pocillos antes de leer. Podrían generarse
falsos positivos en la lectura. Si los resultados del ensayo coinciden con lo establecido
2. La lectura debe hacerse inmediatamente después de añadir anteriormente, pase a la siguiente sección.
la solución de parada y, en cualquier caso, nunca
transcurridos 20 minutos después de su adición. Se podría En caso contrario, detenga el ensayo y compruebe:
producir auto oxidación del cromógeno causando un
elevado fondo. Problema Compruebe que
3. Se ha probado que la agitación a 350 +/- 150 rpm, durante Pocillo blanco la solución cromógeno/substrato no se ha
la incubación, aumenta en un 20% la sensibilidad del > 0.100DO450nm contaminado durante el ensayo.
ensayo.
4. El calibrador (CAL) no afecta al cálculo del valor de corte y, Control 1. el proceso de lavado y los parámetros
por lo tanto, no afecta al cálculo de los resultados de la Negativo (CN) > del lavador estén validados según los
prueba. El calibrador (CAL) se usa solo si la gestión 0.050 DO450nm estudios previos de calificación.
requiere un control interno de calidad del laboratorio. después de leer 2. se ha usado la solución de lavado
el blanco apropiada y que el lavador ha sido
cebado con la misma antes del uso.
3. no se han cometido errores en el
N. ESQUEMA DEL ENSAYO. procedimiento (dispensar el control
positivo en lugar del negativo).
4. no ha existido contaminación del
Método Operaciones
control negativo o de sus pocillos debido
Controles & Calibrador 200 µl
a muestras positivas derramadas, o al
Muestras 200µl dil.+10µl
conjugado.
Diluente de ensayo (DILAS) 50 µl
5. las micropipetas no se han
1ra incubación 45 min
contaminado con muestras positivas o
Temperatura +37°C con el conjugado.
Lavado 5 ciclos con 20’’de remojo 6. las agujas del lavador no estén parcial
o o totalmente obstruidas.
6 ciclos sin remojo Calibrador 1. el procedimiento ha sido realizado
Conjugado 100 µl correctamente.
2da incubación 45 min M/Co < 1.1 2. no ha habido errores durante su
Temperatura +37°C distribución (dispensar el control negativo
Lavado 5 ciclos con 20’’de remojo en lugar del calibrador).
o 3. el proceso de lavado y los parámetros
6 ciclos sin remojo del lavador estén validados según los
TMB/H2O2 100 µl estudios previos de calificación.
3ra incubación 15 min 4. no ha ocurrido contaminación externa
Temperatura 18-24°C del calibrador.
Acido Sulfúrico 100 µl Control Positivo 1. el procedimiento ha sido realizado
Lectura D.O. 450nm / 620-630nm < 1.000 correctamente.
DO450nm 2. no se han cometido errores en el
A continuación se describe un ejemplo del esquema de procedimiento (dispensar el control
dispensado. negativo en lugar del positivo). En este
caso el control negativo debe tener un
Microplaca valor de DO450nm > 0.150.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 3. el proceso de lavado y los parámetros
A BL M2 del lavador estén validados según los
estudios previos de calificación.
B CN M3
4. no ha ocurrido contaminación externa
C CN M4
del control positivo.
D CN M5
E CAL M6
F CAL M7 Si ocurre alguno de los problemas anteriores, después de
G CP M8 comprobar, informe al responsable para tomar las medidas
pertinentes.
H M1 M9
Leyenda: BL = Blanco CN = Control Negativo CAL =
Calibrador CP = Control Positivo M = Muestra
P. CÁLCULO DEL VALOR DE CORTE.
Los resultados se calculan por medio de un valor de corte (cut-
off) hallado con la siguiente fórmula:
O. CONTROL DE CALIDAD INTERNO.
Se realiza un grupo de pruebas con los controles/calibrador
cada vez que se usa el equipo para verificar si los valores Valor de corte = CN medio DO450nm + 0.350
DO450nm son los esperados.
Asegurar el cumplimiento de los siguientes parámetros:
El valor encontrado para el ensayo se usa para la interpretación

de los resultados, según se describe a continuación: Control Positivo: 2.189 DO450nm
Mayor de 1.000 – Válido
Nota Importante: Cuando el cálculo de los resultados se halla Valor de corte = 0.020+0.350 = 0.370
mediante el sistema operativo de un equipo de ELISA
automático, asegurarse de que la formulación usada para el Calibrador: 0.550 - 0.530 DO450nm
cálculo del valor de corte, y para la interpretación de los Valor medio: 0.540 DO450nm M/Co = 1.4
resultados sea correcta. M/Co Mayor de 1.1 – Válido
Q. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS. Muestra 1: 0.070 DO450nm

La interpretación de los resultados se realiza mediante la razón Muestra 2: 1.690 DO450nm
entre las DO a 450nm de las muestras y el Valor de corte Muestra 1 M/Co < 0.9 = negativa
(M/Co). Muestra 2 M/Co > 1.1 = positiva
Los resultados se interpretan según la siguiente tabla:
R. FUNCIONAMIENTO.
(M/Co) Interpretación La evaluación del funcionamiento ha sido realizada según lo
< 0.9 Negativo reportado en las Especificaciones Técnicas Comunes (ETC)
0.9 – 1.1 Equívoco (art. 5, Capítulo 3 de las Directivas IVD 98/79/EC).
> 1.1 Positivo
1. LÍMITE DE DETECCIÓN.
El límite de detección ha sido calculado por medio del estándar
Un resultado negativo indica que el paciente no está infectado de trabajo británico anti-HCV NIBSC, código 99/558-003-WI).
por HCV y la unidad de sangre se puede transfundir. La siguiente tabla muestra los valores medios de DO450nm de
Cualquier paciente, cuya muestra resulte equívoca debe este estándar diluído en plasma negativo y examinado:
someterse a una nueva prueba con una segunda muestra de
sangre colectada 1 ó 2 semanas después de la inicial. En este
caso la unidad de sangre no debe ser transfundida. Dilución Lote # 1 Lote # 2
Un resultado positivo es indicativo de infección por HCV y por
Factor M/Co M/Co
consiguiente el paciente debe ser tratado adecuadamente. La
1X 2.0 2.0
unidad de sangre debe ser descartada.
2X 1.1 1.2
Notas importantes: 4X 0.7 0.8
1. La interpretación de los resultados debe hacerse bajo la 8X 0.5 0.5
vigilancia del responsable del laboratorio para reducir el Plasma Negativo 0.3 0.3
riesgo de errores de juicio y de interpretación.
2. Antes de formular un diagnóstico de hepatitis viral, los
resultados positivos deben comprobarse a través de un Se evaluó además la muestra Accurun 1 –serie 3000-
método alternativo, capaz de detectar anticuerpos IgG e suministrado por Boston Biomedica Inc., Estados Unidos.
IgM ( prueba confirmatoria).
3. Según se demuestra en la Evaluación del Performance del Los resultados son los siguientes:
producto, el ensayo es capaz de detectar los anticuerpos
anti HCV core, en etapas más tempranas en comparación
con otros equipos comerciales. Sin embargo, un resultado CVAB.CE Accurun 1 M/Co
positivo, no confirmado con estos equipos comerciales, no Lote ID Serie
debe necesariamente considerarse como falso positivo! Es 1201 3000 1.5
necesario realizar una prueba de confirmación 0602 3000 1.5
(suministrada, bajo solicitud del cliente, por Dia.pro srl. 1202 3000 1.9
Codificada CCONF).
4. Como el ensayo es capaz de detectar además anticuerpos
IgM, pueden presentarse resultados discrepantes (pérdida Por otra parte, un total de 7 muestras, positivas para HCVAb
de reactividad IgM) con respecto a otros productos según Ortho HCV 3.0 SAVe, código 930820, lote # EXE065-1,
comerciales para la detección de anticuerpos anti-HCV. La fueron diluídas en plasma negativo a HCVAb con el fin de
positividad real de una muestra debe confirmarse probando obtener diluciones limitantes y luego fueron probadas
la reactividad IgM, lo cual resulta muy importante para el nuevamente en CVAB.CE, lote # 1202, y Ortho.
diagnóstico de infección por HCV.
5. Cuando se transmiten los resultados de la prueba, del
laboratorio a otras instalaciones, debe ponerse mucha Las tablas siguientes reflejan los resultados obtenidos:
atención para evitar el traslado de datos erróneos.
6. El diagnóstico de infección con un virus de la hepatitis debe
ser evaluado y comunicado al paciente por un médico
calificado. Muestra Dilución CVAB.CE Ortho 3.0
n° Límite M/Co M/Co
1 256 X 1.9 1.3
A continuación, un ejemplo de los cálculos a realizar: 2 256 X 1.9 0.7
3 256 X 2.4 1.0
Los siguientes datos no deben usarse en lugar de los valores 4 128 X 2.5 3.2
reales obtenidos en el laboratorio. 5 85 X 3.3 1.4
6 128 X 2.2 0.8
Control Negativo: 0.019 – 0.020 – 0.021 DO450nm 7 135 X 3.2 2.2
Valor medio: 0.020 DO450nm
Menor de 0.050 – Válido
2. ESPECIFICIDAD Y SENSIBILIDAD DIAGNÓSTICAS. EFS Panel Ac HCV

La evaluación del procedimiento diagnóstico se realizó
mediante un ensayo con más de 5000 muestras. Lote # 1 Lote # 2 Lote# 3 Resultados
Muestra M/Co M/Co M/Co esperados
2.1 Especificidad Diagnóstica:
Se define como la probabilidad del ensayo de detectar HCV 1 2.2 2.4 2.6 positivo
negativos en ausencia del analito específico. HCV 2 1.6 2.0 2.1 positivo
Además del primer estudio, donde se examinaron en total 5043 HCV 3 1.5 1.7 1.6 positivo
muestras de donantes de sangre no seleccionados, (incluyendo HCV 4 5.2 6.5 5.5 positivo
donantes por 1ª vez), 210 muestras de pacientes hospitalizados
y 162 muestras que pudieran provocar interferencia (otras HCV 5 1.6 1.8 1.6 positivo
enfermedades infecciosas, positivas para anticuerpos de E. coli, HCV 6 0.4 0.4 0.4 negativo
pacientes con enfermedades hepáticas no virales, pacientes en
diálisis, mujeres embarazadas, hemolizadas, lipémicas, etc.), la
especificidad diagnóstica se evaluó recientemente examinando
un total de 2876 muestras de donantes de sangre negativas en
seis lotes distintos. Se observó un valor de especificidad de 3. PRECISIÓN.
100%. Ha sido calculada utilizando dos muestras, una negativa y una
Se emplearon además, plasma sometido a métodos de débil positiva, examinadas en 16 réplicas en tres corridas
tratamiento estándar (citrato, EDTA y heparina) y suero separadas.
humanos. No se ha observado falsa reactividad debida a los Los resultados se muestran a continuación:
métodos de tratamiento de muestras.
Por último se analizaron muestras congeladas, para determinar
posibles interferencias debidas a la toma de muestra y al Lote # 1202
almacenamiento. No se observaron interferencias.
Muestra Negativa (N = 16)
Valores medios 1ra 2da 3ra Valor
2.2 Sensibilidad Diagnóstica. corrida corrida corrida Promedio
Se define como la probabilidad del ensayo de detectar positivos DO 450nm 0.094 0.099 0.096 0.096
en presencia del analito específico. Desviación 0.008 0.007 0.008 0.007
La sensibilidad diagnóstica ha sido estimada de forma externa estándar
en un total de 359 muestras, el valor obtenido fue de 100%. CV % 8.7 6.6 7.9 7.7
Más de 50 muestras positivas fueron probadas de forma
interna, en este caso el resultado fue también de 100%. Cal # 2 – 7K (N = 16)
Se evaluaron además, muestras positivas producto de Valores medios 1ra 2da 3ra Valor
infecciones por diferentes genotipos de HCV, así como también corrida corrida corrida Promedio
se estudió gran parte de los paneles de seroconversión de DO 450nm 0.396 0.403 0.418 0.406
Boston Biomedica Inc (PHV) y Zeptometrix, USA (HCV). Desviación 0.023 0.029 0.027 0.026
disponibles. estándar
Los resultados para algunos de ellos se describen a CV % 5.9 7.1 6.4 6.5
continuación:
M/Co 1.1 1.1 1.2 1.1
Panel N° samples DiaPro* Ortho* **

PHV 901 11 9 9
Lote # 0602
PHV 904 7 2 4
PHV 905 9 3 4 Muestra Negativa (N = 16)
PHV 906 7 7 7 Valores medios 1ra 2da 3ra Valor
PHV 907 7 3 2 corrida corrida corrida Promedio
PHV 908 13 10 8 DO 450nm 0.097 0.096 0.094 0.096
PHV 909 3 2 2 Desviación 0.009 0.010 0.008 0.009
PHV 910 5 3 3 estándar
PHV 911 5 3 3
CV % 8.9 10.1 8.4 9.1
PHV 912 3 1 1
PHV 913 4 2 2
PHV 914 9 5 5 Cal # 2 – 7K (N = 16)
PHV 915 4 3 0 Valores medios 1ra 2da 3ra Valor
PHV 916 8 4 3 corrida corrida corrida Promedio
PHV 917 10 6 6 DO 450nm 0.400 0.395 0.393 0.396
PHV 918 8 2 0 Desviación 0.021 0.025 0.026 0.024
PHV 919 7 3 3 estándar
PHV 920 10 6 6 CV % 5.4 6.2 6.6 6.1
HCV 10039 5 2 0
M/Co 1.2 1.2 1.1 1.2
HCV 6212 9 6 7
HCV 10165 9 5 4
Note: * Positive samples detected ** HCV v.3.0
Por último, el producto ha sido probado contra el panel EFS Ac

HCV, lote n° 01/08.03.22C/01/A, suministrado por
Etablissement Francais Du Sang (EFS), Francia, obteniéndose
los siguientes resultados:
Lote # 0602/2 9. Feinstone SM, Kapikian AZ, Purcell RH, Alter HJ, Holland PV.
Transfusion-associated hepatitis not due to viral hepatitis type A or
Muestra Negativa (N = 16) B. N Engl J Med 1975;292:767-70.
10. Choo QL, Kuo G, Weiner AJ, Overby LR, Bradley DW. Isolation of a
corrida corrida corrida Promedio cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis
DO 450nm 0.087 0.091 0.088 0.089 genome. Science 1989;244:359-62.
Desviación 0.009 0.007 0.008 0.008
estándar 11. Kuo G, Choo QL, Alter HJ, et al. An assay for circulating antibodies
CV % 10.0 8.2 8.6 8.9 to a major etiologic virus of human non-A, non-B hepatitis. Science
1989;244:362-4.
Cal # 2 – 7K (N = 16) 12. Alter HJ, Purcell RH, Shih JW, et al. Detection of antibody to
hepatitis C virus in prospectively followed transfusion recipients with
acute and chronic non-A, non-B hepatitis. N Engl J Med
corrida corrida corrida Promedio 1989;321:1494-1500.
DO 450nm 0.386 0.390 0.391 0.389
Desviación 0.023 0.021 0.023 0.022 13. Aach RD, Stevens CE, Hollinger FB, et al. Hepatitis C virus infection
estándar in post-transfusion hepatitis. An analysis with first- and second-
CV % 6.0 5.3 5.8 5.7 generation assays. N Engl J Med 1991;325:1325-9.
M/Co 1.1 1.2 1.2 1.2
14. Alter MJ, Margolis HS, Krawczynski K, Judson, FN, Mares A,
Alexander WJ, et al. The natural history of community-acquired
La variabilidad mostrada en las tablas no dió como resultado
hepatitis C in the United States. N Engl J Med 1992;327:1899-1905.
una clasificación errónea de las muestras.
15. Alter, MJ. Epidemiology of hepatitis C in the west. Semin Liver Dis
1995;15:5-14.
S. LIMITACIONES.
Los falsos positivos repetibles, no confirmados por RIBA o 16. Donahue JG, Nelson KE, Muåoz A, et al. Antibody to hepatitis C
similares técnicas de confirmación, fueron estimados como virus among cardiac surgery patients, homosexual men, and
menos del 0.1% de la población normal. intravenous drug users in Baltimore, Maryland. Am J Epidemiol
Las muestras que después de ser descongeladas presentan 1991;134:1206-11.
partículas de fibrina o partículas agregadas, generan algunos
resultados falsos positivos. 17. Zeldis JB, Jain S, Kuramoto IK, et al. Seroepidemiology of viral
infections among intravenous drug users in northern California. West
J Med 1992;156:30-5.
18. Fingerhood MI, Jasinski DR, Sullivan JT. Prevalence of hepatitis C in

a chemically dependent population. Arch Intern Med 1993;153:2025-
BIBLIOGRAFÍA 30.
1. CDC. Public Health Service inter-agency guidelines for screening
donors of blood, plasma, organs, tissues, and semen for evidence of 19. Garfein RS, Vlahov D, Galai N, Doherty, MC, Nelson, KE. Viral
hepatitis B and hepatitis C. MMWR 1991;40(No. RR-4):1-17. infections in short-term injection drug users: the prevalence of the
hepatitis C, hepatitis B, human immunodeficiency, and human T-
lymphotropic viruses. Am J Pub Health 1996;86:655-61.
2. Alter MJ. Epidemiology of hepatitis C. Hepatology 1997;26:62S-5S.
20. Brettler DB, Alter HJ, Deinstag JL, Forsberg AD, Levine PH.
3. McQuillan GM, Alter MJ, Moyer LA, Lambert SB, Margolis HS. A
Prevalence of hepatitis C virus antibody in a cohort of hemophilia
population based serologic study of hepatitis C virus infection in the
patients. Blood 1990;76:254-6.
United States. In Rizzetto M, Purcell RH, Gerin JL, Verme G, eds.
Viral Hepatitis and Liver Disease, Edizioni Minerva Medica, Turin,
1997, 267-70. 21. Troisi CL, Hollinger FB, Hoots WK, et al. A multicenter study of viral
hepatitis in a United States hemophilic population. Blood
1993;81:412-8.
4. Dufour MC. Chronic liver disease and cirrhosis. In Everhart JE, ed.
Digestive diseases in the United States: epidemiology and impact.
US Department of Health and Human Services, Public Health 22. Kumar A, Kulkarni R, Murray DL, et al. Serologic markers of viral
Service, National Institutes of Health, National Institute of Diabetes hepatitis A, B, C, and D in patients with hemophilia. J Med Virology
and Digestive and Kidney Diseases. Washington, DC: US 1993;41:205-9.
Government Printing Office, 1994; NIH publication no. 94-1447, 615-
45. 23. Tokars JI, Miller ER, Alter MJ, Arduino MJ. National surveillance of
dialysis associated diseases in the United States, 1995. ASAIO
5. Alter MJ, Hadler SC, Judson FN, et al. Risk factors for acute non-A, Journal 1998;44:98-107.
non-B hepatitis in the United States and association with hepatitis C
virus infection. JAMA 1990;264:2231-35. 24. Osmond DH, Charlebois E, Sheppard HW, et al. Comparison of risk
factors for hepatitis C and hepatitis B virus infection in homosexual
6. Alter HJ, Holland PV, Purcell RH, et al. Posttransfusion hepatitis men. J Infect Dis 1993;167:66-71.
after exclusion of commercial and hepatitis-B antigen-positive
donors. Ann Intern Med 1972;77:691-9. 25. Weinstock HS, Bolan G, Reingold AL, Polish LB: Hepatitis C virus
infection among patients attending a clinic for sexually transmitted
7. Alter HJ, Purcell RH, Holland PV, Feinstone SM, Morrow AG, diseases. JAMA 1993;269:392-4.
Moritsugu Y. Clinical and serological analysis of transfusion-
associated hepatitis. Lancet 1975;2:838-41. 26. Thomas DL, Cannon RO, Shapiro CN, Hook EW III, Alter MJ.
Hepatitis C, hepatitis B, and human immunodeficiency virus
8. Seeff LB, Wright EC, Zimmerman HJ, McCollum RW, VA infections among non-intravenous drug-using patients attending
Cooperative Studies Group. VA cooperative study of post-transfusion clinics for sexually transmitted diseases. J Infect Dis 1994;169:990-5.
hepatitis and responsible risk factors. Am J Med Sci 1975;270:355-
62. 27. Buchbinder SP, Katz MH, Hessol NA, Liu J, O'Malley PM, Alter, MJ.
Hepatitis C virus infection in sexually active homosexual men. J
Infect 1994;29:263-9.
28. Thomas DL, Zenilman JM, Alter HJ, et al. Sexual transmission of
hepatitis C virus among patients attending sexually transmitted
diseases clinics in Baltimore--an analysis of 309 sex partnerships. J
Infect Dis 1995;171:768-75.
29. Thomas DL, Factor SH, Kelen GD, Washington AS, Taylor E Jr,
Quinn TC. Viral hepatitis in health care personnel at The Johns
Hopkins Hospital. Arch Intern Med 1993;153:1705-12.
30. Cooper BW, Krusell A, Tilton RC, Goodwin R, Levitz RE.

Seroprevalence of antibodies to hepatitis C virus in high-risk hospital
personnel. Infect Control Hosp Epidemiol 1992;13:82-5.
Todos los productos de diagnóstico in vitro fabricados por la

empresa son controlados por un sistema certificado de control
de calidad aprobado por un organismo notificado para el
marcado CE. Cada lote se somete a un control de calidad y se
libera al mercado únicamente si se ajusta a las especificaciones
técnicas y criterios de aceptación de la CE.
Fabricante:
Dia.Pro Diagnostic Bioprobes S.r.l.
Via G. Carducci n° 27 – Sesto San Giovanni
(Milán) – Italia
0318
Doc.: Libretto Kit CVAB.CE/en/es Rev.: 7 Data: 2019/10

Lot 18 Cvab - Ce-.Semnat

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Lot 18 Cvab - Ce-.Semnat

Uploaded by

Document Information

Original Description:

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Lot 18 Cvab - Ce-.Semnat

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Doc.: INS CVAB.CE/Eng Page 1 of 10 Rev.

- for “in vitro” diagnostic use only -

alcoholic liver disease and HCV infection. HCV is spread

12. Package insert n° 1

2. Negative Control CONTROL - 1. Microplate n°1 n°5 n°10

4. Calibrator CAL …. Number of tests 96 480 960

F. WARNINGS AND PRECAUTIONS

Important note: Check that the colour of the Sample Diluent,

N. ASSAY SCHEME samples, to spills or to the enzyme conjugate;

An example of dispensation scheme is reported below:

Important note: When the calculation of results is done by the

Check Requirements Q. INTERPRETATION OF RESULTS

Important notes: CVAB.CE Accurun 1 S/Co

In addition the sample coded Accurun 1 – series 3000 -

Panel N° samples DiaPro* Ortho* ** Lot # 0602

The variability shown in the tables above did not result in

Lot # 1 Lot # 2 Lot # 2 Results

1. CDC. Public Health Service inter-agency guidelines for screening

14. Alter MJ, Margolis HS, Krawczynski K, Judson, FN, Mares A,

22. Kumar A, Kulkarni R, Murray DL, et al. Serologic markers of viral

24. Osmond DH, Charlebois E, Sheppard HW, et al. Comparison of risk

del hígado cuando coexiste con otras disfunciones hepáticas;

3. Control Positivo: CONTROL +

3. Control Positivo: 10. Diluente de muestras :

4. Calibrador: I. INSTRUMENTOS Y EQUIPAMIENTO UTILIZADOS EN

12. Medir la intensidad del color de la solución en cada Parámetro Exigencia

El valor encontrado para el ensayo se usa para la interpretación

Q. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS. Muestra 1: 0.070 DO450nm

2. ESPECIFICIDAD Y SENSIBILIDAD DIAGNÓSTICAS. EFS Panel Ac HCV

Panel N° samples DiaPro* Ortho* **

Note: * Positive samples detected ** HCV v.3.0

Por último, el producto ha sido probado contra el panel EFS Ac

18. Fingerhood MI, Jasinski DR, Sullivan JT. Prevalence of hepatitis C in

30. Cooper BW, Krusell A, Tilton RC, Goodwin R, Levitz RE.

Todos los productos de diagnóstico in vitro fabricados por la

You might also like