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TWI793294B - Sting促效劑化合物 - Google Patents

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TWI793294B
TWI793294B TW108111487A TW108111487A TWI793294B TW I793294 B TWI793294 B TW I793294B TW 108111487 A TW108111487 A TW 108111487A TW 108111487 A TW108111487 A TW 108111487A TW I793294 B TWI793294 B TW I793294B
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布蘭登 D 凱許
馬修 洛伊德 喬得思
傑瑞 N 卡門
杜恩 Ｅ 迪蒙
安德魯 馬可 海朵
堤摩西 J 韓德森
詹姆士 P 喬維爾
馬修 A 拉森
鍾元 林
盧旻
萊恩 D 奧特
班傑明 衛斯里 特洛特
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美商默沙東有限責任公司
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Abstract

本發明提供通式(I)、通式(II)、通式(III)、通式(IV)、通式(V)、通式(VI)之化合物及其醫藥上可接受之鹽，其中所有變數定義於本文中，其可用作I型干擾素產生之誘導劑，特定用作STING活性劑。本發明亦提供包含此等化合物之組合物、用於合成此等化合物之製程，及此等化合物之用途，包括投與此等化合物以誘導免疫反應、誘導STING依賴性I型干擾素產生，及/或治療細胞增殖病症，諸如癌症。

Description

STING促效劑化合物
本揭示係關於可用作使STING路徑活化之STING (干擾素基因刺激物)促效劑之化合物及其衍生物。本揭示亦關於包含此等化合物之組合物、用於合成此等化合物之製程及此等化合物之用途，包括投與此等化合物以誘導免疫反應、誘導STING依賴性I型干擾素產生及/或治療諸如癌症等細胞增殖病症。
免疫系統已進化為識別且中和不同類型之威脅以維持宿主之穩態，且其通常分成兩組：適應性及先天性。適應性免疫系統專門識別並不天然表現於宿主中之彼等外來抗原且經由許多白血球子組之協同作用建立抗抗原反應。適應性免疫反應之標誌係其能夠提供針對所遇抗原之「記憶」或持久免疫性。儘管此特定及持久效應對於宿主健康及存活至關重要，但適應性免疫反應需要時間來產生完全型(full-blown)反應。
先天性免疫系統補償此時間延遲且專門快速作用於不同損傷或危險信號。其提供針對細菌、病毒、寄生蟲及其他感染性威脅之一線防禦，但其亦對某些與細胞或組織損害相關之危險信號具有強烈反應。先天性免疫系統不具有抗原特異性，但對多種效應機制具有反應。調理作用、吞噬作用、補體系統之活化及可溶性生物活性分子(例如細胞介素或趨化介素)之產生均係先天性免疫系統調介其反應之機制。藉由對該等損害相關分子模式(DAMP)或病原體相關分子模式(PAMP)作出反應，先天性免疫系統能夠向宿主提供針對寬範圍威脅之寬廣保護。
游離胞質DNA及RNA屬該等PAMP及DAMP。最近已證實，胞質DNA之主要感測器係cGAS (環狀GMP-AMP合酶)。在識別胞質DNA後，cGAS催化產生環狀二核苷酸2’3’-cGAMP，其係強烈結合至ER-跨膜轉接蛋白STING之非典型第二傳訊者。結合cGAMP之STING經歷構形變化，其易位至核周區室且誘導關鍵轉錄因子IRF-3及NF-κB之活化。此引起I型干擾素之強烈誘導及促發炎細胞介素(例如IL-6、TNF-α及IFN-γ)之產生。
I型干擾素及促發炎細胞介素對免疫系統之各種細胞之重要性已得到極充分地確立。特定而言，該等分子藉由增強樹突細胞及巨噬細胞攝取、處理、呈遞且交叉呈遞抗原至T細胞之能力來強烈地強化T細胞活化。藉由上調關鍵共刺激分子(例如CD80或CD86)來增大該等抗原呈遞細胞之T細胞刺激能力。最後，I型干擾素可快速地接合其同源受體且觸發干擾素反應基因之活化，此可顯著有助於適應性免疫細胞活化。
自治療角度考慮，已顯示，I型干擾素藉由直接抑制人類B型肝炎病毒及C型肝炎病毒複製且藉由刺激對病毒感染細胞之免疫反應而具有抗病毒活性。可誘導I型干擾素產生之化合物可用於疫苗中，其中其用作佐劑，從而藉由降低劑量且擴大免疫反應來增強對抗原之特異性免疫反應且使副作用最小化。
另外，干擾素及可誘導干擾素產生之化合物具有治療人類癌症之潛在用途。此等分子可用作具有多條活性路徑之抗癌劑。干擾素可直接抑制人類腫瘤細胞增殖且可與各種經批准之化學治療劑具有協同作用。I型干擾素可藉由誘導適應性及先天性免疫細胞二者之活化來顯著增強抗腫瘤免疫反應。最後，干擾素可藉由調節與組織重建相關之酶表現來抑制腫瘤侵襲。
鑒於I型干擾素及I型干擾素誘導化合物作為抗病毒劑及抗癌劑之潛力，業內仍需要可誘導強效I型干擾素產生之新穎藥劑。隨著愈來愈多之數據證實cGAS-STING胞質DNA感測路徑具有誘導I型干擾素之顯著能力，STING活化劑之開發在當前抗腫瘤療法領域中正快速佔據重要位置。
本揭示內容包括通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及其醫藥上可接受之鹽。該等化合物及其醫藥上可接受之鹽可用作誘導免疫反應、誘導STING依賴性I型干擾素產生及/或治療細胞增殖病症之藥劑。
本揭示內容係關於新穎通式(I)化合物。特定而言，本揭示內容係關於如本文所闡述之具有一般結構式(I)之化合物：
Figure 02_image006
或其醫藥上可接受之鹽。亦揭示通式(I)化合物之用途及用於製備通式(I)化合物之製程。
本揭示內容亦係關於新穎通式(II)化合物。特定而言，本揭示內容係關於如本文所闡述之具有一般結構式(II)之化合物：
Figure 02_image008
或其醫藥上可接受之鹽。亦揭示通式(II)化合物之用途及用於製備通式(II)化合物之製程。
本揭示內容亦係關於新穎通式(III)化合物。特定而言，本揭示內容係關於如本文所闡述之具有一般結構式(III)之化合物：
Figure 02_image010
或其醫藥上可接受之鹽。亦揭示通式(III)化合物之用途及用於製備通式(III)化合物之製程。
本揭示內容亦係關於新穎通式(IV)化合物。特定而言，本揭示內容係關於如本文所闡述之具有一般結構式(IV)之化合物：
Figure 02_image012
或其醫藥上可接受之鹽。亦揭示通式(IV)化合物之用途及用於製備通式(IV)化合物之製程。
本揭示內容亦係關於新穎通式(V)化合物。特定而言，本揭示內容係關於如本文所闡述之具有一般結構式(V)之化合物：
Figure 02_image014
或其醫藥上可接受之鹽。亦揭示通式(V)化合物之用途及用於製備通式(V)化合物之製程。
本揭示內容亦係關於新穎通式(V)化合物。特定而言，本揭示內容係關於如本文所闡述之具有一般結構式(VI)之化合物：
Figure 02_image016
或其醫藥上可接受之鹽。亦揭示通式(VI)化合物之用途及用於製備通式(VI)化合物之製程。
本發明之其他實施例、態樣及特徵進一步闡述於下文說明、實例及隨附申請專利範圍中或將自其顯而易見。
以電子方式提交之序列表參考 本申請案之序列表係以電子方式經由EFS-Web作為ASCII格式化序列表來提交，其中檔案名稱為「24578_SEQLIST-FEB2019」，創建日期為2019年3月1日，且大小為25 KB。經由EFS-Web提交之此序列表係本說明書之一部分且係以全文引用的方式併入本文中。
本揭示內容包括通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及其醫藥上可接受之鹽。該等化合物及其醫藥上可接受之鹽可用作誘導免疫反應、誘導STING依賴性I型干擾素產生及/或治療細胞增殖病症之藥劑。
第一實施例係關於通式(I)化合物：
Figure 02_image018
或其醫藥上可接受之鹽，其中各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群；各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 ；各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6 、N(R6 )2 、COOR6 、C(O)N(R6 )2 、SO2 R6 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 鹵烯基、經OR6 取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C2 -C6 鹵炔基、經OR6 取代之C2 -C6 炔基、C3 -C6 環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6 )組成之群之環成員；R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R3 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基；各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基；各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、 -CHF-及-CF2 -；各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image020
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN；且各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。
在第一實施例之第一態樣中，各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群。在此態樣之特定實例中，各
Figure 02_image022
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image024
Figure 02_image026
及
Figure 02_image028
。在此態樣之更特定實例中，各
Figure 02_image030
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image032
Figure 02_image034
及
Figure 02_image036
。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第一實施例之通式(I)中所提供。
在第一實施例之第二態樣中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 。在此態樣之實例中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R1 獨立地選自由H及鹵素組成之群。在此態樣之更特定實例中，各R1 獨立地選自由H及F組成之群。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第一實施例之通式(I)中或上文第一態樣中所提供。
在第一實施例之第三態樣中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6 、N(R6 )2 、COOR6 、C(O)N(R6 )2 、SO2 R6 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 鹵烯基、經OR6 取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C2 -C6 鹵炔基、經OR6 取代之C2 -C6 炔基、C3 -C6 環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6 )組成之群之環成員。在此態樣之實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基、C1 -C3 鹵烷基、OC1 -C3 烷基、C2 -C3 烯基及N(R6 )2 。在此態樣之特定實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、Br、Cl、CH3 、CH2 CH3 、CH=CH2 、OCH3 、OCFH2 、OCF2 H、OCF3 及N(R6 )2 。在此態樣之更特定實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 、OCH3 及OCF2 H。在此態樣中，所有其他基團均係如第一實施例之通式(I)中或上文所闡述之第一或第二態樣中所提供。
在第一實施例之第四態樣中，R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R3 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此第四態樣之實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2-8 -、-O(CH2 )1-7 -、 -O(CH2 )1-6 O-、-NH(CH2 )1-7 -及-NH(CH2 )1-6 O-。在此第四態樣之特定實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-(CH2 )4 -、 -O(CH2 )2 -、-O(CH2 )3 -、-O(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 O-、-O(CH2 )3 O-、 -OCH2 CH(CH3 )CH2 O-、-O(CH2 )4 O-、-O(CH2 )5 O-、-NH(CH2 )2 -、 -NH(CH2 )3 -及-NH(CH2 )3 O-。在此第四態樣之具體實例中，R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R3 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此實例中，通式(I)之結構係式(Ia)：
Figure 02_image038
其中所有基團均係如通式(I)中所提供。在此態樣中，所有其他基團均係如第一實施例之通式(I)中或上文所闡述之第一至第三態樣中所提供。
在第一實施例之第五態樣中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基。在此態樣之實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 及CHF2 。在此態樣中，所有其他基團均係如第一實施例之通式(I)中或上文所闡述之第一至第四態樣中所提供。
在第一實施例之第六態樣中，各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -。在此態樣之實例中，X1 係選自由C=O及-CH2 -組成之群。在此態樣之特定實例中，X1 係C=O。在此實施例中，所有其他基團均係如第一實施例之通式(I)中或上文所闡述之第一至第五態樣中所提供。
在第一實施例之第七態樣中，各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣之第一實例中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基。在此第一實例之特定情形中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、CH3 、CH2 OH、CH2 CH3 、CH2 CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CH2 OCH3 及環丙基。在此態樣之第二實例中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此第二實例之特定情形中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此態樣之第三實例中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此第三實例之特定情形中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣中，所有其他基團均係如第一實施例之通式(I)中或上文所闡述之第一至第六態樣中所提供。
在第一實施例之第八態樣中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image040
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、
Figure 02_image042
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之甚至更特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOH、COOCH3 、CONH2 及CN。在此態樣中，所有其他基團均係如第一實施例之通式(I)中或上文所闡述之第一至第七態樣中所提供。
在第一實施例之第九態樣中，各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。在此態樣之實例中，各R9 獨立地係H。在此態樣中，所有其他基團均係如第一實施例之通式(I)中或上文所闡述之第一至第八態樣中所提供。
第一實施例之第十態樣係關於醫藥組合物，該醫藥組合物包含(a) 根據上文所闡述之第一實施例或第一至第九態樣之上文通式(I)之化合物或其醫藥上可接受之鹽；及(b) 醫藥上可接受之載劑。
第一實施例之第十一態樣係關於誘導需要治療患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所述之第一實施例或第一至第九態樣之上文通式(I)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第一實施例之第十二態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第一實施例之第十三態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第一實施例或上文所闡述之第一至第九態樣之通式(I)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第一實施例之第十四態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第一實施例之第十五態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第一實施例或上文所闡述之第一至第九態樣之通式(I)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第一實施例之第十六態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第一實施例之第十七態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，其包含向該患者投與治療有效量之通式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第一實施例之此第十七態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第一實施例之第十八態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十一態樣之組合物。在第一實施例之此第十八態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
在本文所闡述第一實施例之各態樣中，第一實施例以及其各個態樣及實例之通式(I)之變量R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 、R9 、A、X1 、X2 及X3 各自獨立地選自彼此，前提係R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 及R9 中之至少一者不係H。
第二實施例係關於通式(II)化合物：
Figure 02_image044
或其醫藥上可接受之鹽，其中各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群；各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 ；各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6 、N(R6 )2 、COOR6 、C(O)N(R6 )2 、SO2 R6 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 鹵烯基、經OR6 取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C2 -C6 鹵炔基、經OR6 取代之C2 -C6 炔基、C3 -C6 環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6 )組成之群之環成員；R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R3 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基；各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基；各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、 -CHF-及-CF2 -；各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image046
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN；且各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。
在第二實施例之第一態樣中，各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群。在此態樣之特定實例中，各
Figure 02_image048
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image050
Figure 02_image052
及
Figure 02_image054
。在此態樣之更特定實例中，各
Figure 02_image056
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image058
Figure 02_image060
及
Figure 02_image062
。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第二實施例之通式(II)中所提供。
在第二實施例之第二態樣中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 。在此態樣之實例中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R1 獨立地選自由H及鹵素組成之群。在此態樣之更特定實例中，各R1 獨立地選自由H及F組成之群。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第二實施例之通式(II)中或上文第一態樣中所提供。
在第二實施例之第三態樣中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6 、N(R6 )2 、COOR6 、C(O)N(R6 )2 、SO2 R6 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 鹵烯基、經OR6 取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C2 -C6 鹵炔基、經OR6 取代之C2 -C6 炔基、C3 -C6 環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6 )組成之群之環成員。在此態樣之實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基、C1 -C3 鹵烷基、OC1 -C3 烷基、C2 -C3 烯基及N(R6 )2 。在此態樣之特定實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、Br、Cl、CH3 、CH2 CH3 、CH=CH2 、OCH3 、OCFH2 、OCF2 H、OCF3 及N(R6 )2 。在此態樣之更特定實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 、OCH3 及OCF2 H。在此態樣中，所有其他基團均係如第二實施例之通式(II)中或上文所闡述之第一或第二態樣中所提供。
在第二實施例之第四態樣中，R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R3 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此第四態樣之實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2-8 -、-O(CH2 )1-7 -、 -O(CH2 )1-6 O-、-NH(CH2 )1-7 -及-NH(CH2 )1-6 O-。在此第四態樣之特定實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-(CH2 )4 -、 -O(CH2 )2 -、-O(CH2 )3 -、-O(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 O-、-O(CH2 )3 O-、-OCH2 CH(CH3 )CH2 O-、-O(CH2 )4 O-、-O(CH2 )5 O-、-NH(CH2 )2 -、-NH(CH2 )3 -及-NH(CH2 )3 O-。在此第四態樣之具體實例中，R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R3 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此實例中，通式(II)之結構係式(IIa)：
Figure 02_image064
其中所有基團均係如通式(II)中所提供。在此態樣中，所有其他基團均係如第二實施例之通式(II)中或上文所闡述之第一至第三態樣中所提供。
在第二實施例之第五態樣中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基。在此態樣之實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 及CHF2 。在此態樣中，所有其他基團均係如第二實施例之通式(II)中或上文所闡述之第一至第四態樣中所提供。
在第二實施例之第六態樣中，各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -。在此態樣之實例中，X1 係選自由C=O及-CH2 -組成之群。在此態樣之特定實例中，X1 係C=O。在此實施例中，所有其他基團均係如第二實施例之通式(II)中或上文所闡述之第一至第五態樣中所提供。
在第二實施例之第七態樣中，各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣之第一實例中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基。在此第一實例之特定情形中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、CH3 、CH2 OH、CH2 CH3 、CH2 CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CH2 OCH3 及環丙基。在此態樣之第二實例中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此第二實例之特定情形中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此態樣之第三實例中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此第三實例之特定情形中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣中，所有其他基團均係如第二實施例之通式(II)中或上文所闡述之第一至第六態樣中所提供。
在第二實施例之第八態樣中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image066
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、
Figure 02_image068
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之甚至更特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOH、COOCH3 、CONH2 及CN。在此態樣中，所有其他基團均係如第二實施例之通式(II)中或上文所闡述之第一至第七態樣中所提供。
在第二實施例之第九態樣中，各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。在此態樣之實例中，各R9 獨立地係H。在此態樣中，所有其他基團均係如第二實施例之通式(II)中或上文所闡述之第一至第八態樣中所提供。
第二實施例之第十態樣係關於醫藥組合物，該醫藥組合物包含(a) 根據上文所闡述之第二實施例或第一至第九態樣之上文通式(II)之化合物或其醫藥上可接受之鹽；及(b) 醫藥上可接受之載劑。
第二實施例之第十一態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第二實施例或第一至第九態樣之上文通式(II)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第二實施例之第十二態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第二實施例之第十三態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第二實施例或上文所闡述之第一至第九態樣之通式(II)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第二實施例之第十四態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第二實施例之第十五態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第二實施例或上文所闡述之第一至第九態樣之通式(II)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第二實施例之第十六態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第二實施例之第十七態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，其包含向該患者投與治療有效量之通式(II)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第二實施例之此第十七態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第二實施例之第十八態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十一態樣之組合物。在第二實施例之此第十八態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
在本文所闡述之第二實施例之各態樣中，第二實施例以及其各個態樣及實例之通式(II)之變量R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 、R9 、A、X1 、X2 及X3 各自獨立地選自彼此，前提係R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 及R9 中之至少一者不係H。
第三實施例係關於通式(III)化合物：
Figure 02_image070
或其醫藥上可接受之鹽，其中各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群；各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 ；各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6 、N(R6 )2 、COOR6 、C(O)N(R6 )2 、SO2 R6 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 鹵烯基、經OR6 取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C2 -C6 鹵炔基、經OR6 取代之C2 -C6 炔基、C3 -C6 環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6 )組成之群之環成員；R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R3 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環G，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環G與R3 之鍵係來自該環G上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基；視情況R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R4 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基；各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基；各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -；各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image072
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN；且各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。
在第三實施例之第一態樣中，各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群。在此態樣之特定實例中，各
Figure 02_image074
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image076
Figure 02_image078
及
Figure 02_image080
；且
Figure 02_image082
係選自由以下組成之群：
Figure 02_image084
,
Figure 02_image086
及
Figure 02_image088
。在此態樣之更特定實例中，各
Figure 02_image090
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image092
Figure 02_image094
及
Figure 02_image096
，且各
Figure 02_image098
係選自由以下組成之群：
Figure 02_image100
Figure 02_image102
及
Figure 02_image104
。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第三實施例之通式(III)中所提供。
在第三實施例之第二態樣中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 。在此態樣之實例中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R1 獨立地選自由H及鹵素組成之群。在此態樣之更特定實例中，各R1 獨立地選自由H及F組成之群。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第三實施例之通式(III)中或上文第一態樣中所提供。
在第三實施例之第三態樣中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6 、N(R6 )2 、COOR6 、C(O)N(R6 )2 、SO2 R6 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 鹵烯基、經OR6 取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C2 -C6 鹵炔基、經OR6 取代之C2 -C6 炔基、C3 -C6 環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6 )組成之群之環成員。在此態樣之實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基、C1 -C3 鹵烷基、OC1 -C3 烷基、C2 -C3 烯基及N(R6 )2 。在此態樣之特定實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、Br、Cl、CH3 、CH2 CH3 、CH=CH2 、OCH3 、OCFH2 、OCF2 H、OCF3 及N(R6 )2 。在此態樣之更特定實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 、OCH3 及OCF2 H。在此態樣中，所有其他基團均係如第三實施例之通式(III)中或上文所闡述之第一或第二態樣中所提供。
在第三實施例之第四態樣中，R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R3 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環G，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環G與R3 之鍵係來自該環G上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基；視情況R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R4 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此第四態樣之實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群： -(CH2 )2-8 -、-O(CH2 )1-7 -、-O(CH2 )1-6 O-、-NH(CH2 )1-7 -及-NH(CH2 )1-6 O-。在此第四態樣之特定實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 -、-O(CH2 )3 -、-O(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 O-、-O(CH2 )3 O-、-OCH2 CH(CH3 )CH2 O-、-O(CH2 )4 O-、-O(CH2 )5 O-、-NH(CH2 )2 -、-NH(CH2 )3 -及-NH(CH2 )3 O-。在此第四態樣之具體實例中，R3 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環G，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環G與R4 之鍵係來自該環G上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此實例中，通式(III)之結構係式(IIIa)：
Figure 02_image106
其中所有基團均係如通式(III)中所提供。在此第四態樣之其他具體實例中，R4 可與毗鄰C-R1 及其所連接之原子一起形成選自苯基或5員或6員雜環之稠環E，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6 )組成之群之環成員，其中該環E與R3 之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此實例中，通式(III)之結構係式(IIIb)：
Figure 02_image108
； 其中所有基團均係如通式(III)中所提供。在此態樣中，所有其他基團均係如第一實施例之通式(III)中或上文所闡述之第一至第三態樣中所提供。
在第三實施例之第五態樣中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基。在此態樣之實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 及CHF2 。在此態樣中，所有其他基團均係如第三實施例之通式(III)中或上文所闡述之第一至第四態樣中所提供。
在第三實施例之第六態樣中，各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -。在此態樣之實例中，X1 係選自由C=O及-CH2 -組成之群。在此態樣之特定實例中，X1 係C=O。在此實施例中，所有其他基團均係如第三實施例之通式(III)中或上文所闡述之第一至第五態樣中所提供。
在第三實施例之第七態樣中，各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣之第一實例中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基。在此第一實例之特定情形中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、CH3 、CH2 OH、CH2 CH3 、CH2 CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CH2 OCH3 及環丙基。在此態樣之第二實例中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此第二實例之特定情形中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此態樣之第三實例中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此第三實例之特定情形中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣中，所有其他基團均係如第三實施例之通式(III)中或上文所闡述之第一至第六態樣中所提供。
在第三實施例之第八態樣中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image110
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、
Figure 02_image112
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之甚至更特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOH、COOCH3 、CONH2 及CN。在此態樣中，所有其他基團均係如第三實施例之通式(III)中或上文所闡述之第一至第七態樣中所提供。
在第三實施例之第九態樣中，各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。在此態樣之實例中，各R9 獨立地係H。在此態樣中，所有其他基團均係如第三實施例之通式(III)中或上文所闡述之第一至第六態樣中所提供。
第三實施例之第十態樣係關於醫藥組合物，該醫藥組合物包含(a) 根據上文所闡述之第三實施例或第一至第九態樣之通式(III)之化合物或其醫藥上可接受之鹽；及(b) 醫藥上可接受之載劑。
第三實施例之第十一態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第三實施例或第一至第九態樣之通式(III)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第三實施例之第十二態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第三實施例之第十三態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第三實施例或上文所闡述之第一至第九態樣之通式(III)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第三實施例之第十四態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第三實施例之第十五態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第三實施例或上文所闡述之第一至第九態樣之通式(III)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第三實施例之第十六態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第三實施例之第十七態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，其包含向該患者投與治療有效量之通式(III)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第三實施例之此第十七態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第三實施例之第十八態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十一態樣之組合物。在第三實施例之此第十八態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
在本文所闡述之第三實施例之各態樣中，第三實施例以及其各個態樣及實例之通式(III)之變量R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 、R9 、A、X1 、X2 及X3 各自獨立地選自彼此，前提係R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 及R9 中之至少一者不係H。
第四實施例係關於通式(IV)化合物：
Figure 02_image114
或其醫藥上可接受之鹽，其中各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群；各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 ；各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6 、N(R6 )2 、COOR6 、C(O)N(R6 )2 、SO2 R6 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 鹵烯基、經OR6 取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C2 -C6 鹵炔基、經OR6 取代之C2 -C6 炔基、C3 -C6 環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6 )組成之群之環成員；R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基；各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -；各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image116
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN；且各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。
在第四實施例之第一態樣中，各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群。在此態樣之特定實例中，各
Figure 02_image118
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image120
Figure 02_image122
及
Figure 02_image124
；且
Figure 02_image126
係選自由以下組成之群：
Figure 02_image128
,
Figure 02_image130
及
Figure 02_image132
。在此態樣之更特定實例中，各
Figure 02_image134
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image136
Figure 02_image138
及
Figure 02_image140
；且
Figure 02_image142
係選自由以下組成之群：
Figure 02_image144
Figure 02_image146
及
Figure 02_image148
。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第四實施例之通式(IV)中所提供。
在第四實施例之第二態樣中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 。在此態樣之實例中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R1 獨立地選自由H及鹵素組成之群。在此態樣之更特定實例中，各R1 獨立地選自由H及F組成之群。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第四實施例之通式(IV)中或上文第一態樣中所提供。
在第四實施例之第三態樣中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6 、N(R6 )2 、COOR6 、C(O)N(R6 )2 、SO2 R6 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 鹵烯基、經OR6 取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C2 -C6 鹵炔基、經OR6 取代之C2 -C6 炔基、C3 -C6 環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6 )組成之群之環成員。在此態樣之實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基、C1 -C3 鹵烷基、OC1 -C3 烷基、C2 -C3 烯基及N(R6 )2 。在此態樣之特定實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、Br、Cl、CH3 、CH2 CH3 、CH=CH2 、OCH3 、OCFH2 、OCF2 H、OCF3 及N(R6 )2 。在此態樣之更特定實例中，各R2 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 、OCH3 及OCF2 H。在此態樣中，所有其他基團均係如第四實施例之通式(IV)中或上文所闡述之第一或第二態樣中所提供。
在第四實施例之第四態樣中，R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)。在此第四態樣之實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2-8 -、-O(CH2 )1-7 -、-O(CH2 )1-6 O-、-NH(CH2 )1-7 -及 -NH(CH2 )1-6 O-。在此第四態樣之特定實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 -、-O(CH2 )3 -、 -O(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 O-、-O(CH2 )3 O-、-OCH2 CH(CH3 )CH2 O-、-O(CH2 )4 O-、-O(CH2 )5 O-、-NH(CH2 )2 -、-NH(CH2 )3 -及-NH(CH2 )3 O-。在此態樣中，所有其他基團均係如第四實施例之通式(IV)中或上文所闡述之第一至第三態樣中所提供。
在第四實施例之第五態樣中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基。在此態樣之實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 及CHF2 。在此態樣中，所有其他基團均係如第四實施例之通式(IV)中或上文所闡述之第一至第四態樣中所提供。
在第四實施例之第六態樣中，各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -。在此態樣之實例中，X1 係選自由C=O及-CH2 -組成之群。在此態樣之特定實例中，X1 係C=O。在此實施例中，所有其他基團均係如第四實施例之通式(IV)中或上文所闡述之第一至第五態樣中所提供。
在第四實施例之第七態樣中，各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣之第一實例中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基。在此第一實例之特定情形中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、CH3 、CH2 OH、CH2 CH3 、CH2 CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CH2 OCH3 及環丙基。在此態樣之第二實例中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此第二實例之特定情形中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此態樣之第三實例中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此第三實例之特定情形中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣中，所有其他基團均係如第四實施例之通式(IV)中或上文所闡述之第一至第六態樣中所提供。
在第四實施例之第八態樣中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image150
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、
Figure 02_image152
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之甚至更特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOH、COOCH3 、CONH2 及CN。在此態樣中，所有其他基團均係如第四實施例之通式(IV)中或上文所闡述之第一至第七態樣中所提供。
在第四實施例之第九態樣中，各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。在此態樣之實例中，各R9 獨立地係H。在此態樣中，所有其他基團均係如第四實施例之通式(IV)中或上文所闡述之第一至第八態樣中所提供。
第四實施例之第十態樣係關於醫藥組合物，該醫藥組合物包含(a) 根據上文所闡述之第四實施例或第一至第九態樣之通式(IV)之化合物或其醫藥上可接受之鹽；及(b) 醫藥上可接受之載劑。
第四實施例之第十一態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第四實施例或第一至第九態樣之通式(IV)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第四實施例之第十二態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第四實施例之第十三態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第四實施例或上文所闡述之第一至第九態樣之通式(IV)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第四實施例之第十四態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第四實施例之第十五態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第四實施例或上文所闡述之第一至第九態樣之通式(IV)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第四實施例之第十六態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十態樣之組合物。
第四實施例之第十七態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，其包含向該患者投與治療有效量之通式(IV)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第四實施例之此第十七態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第四實施例之第十八態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第十一態樣之組合物。在第四實施例之此第十八態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
在本文所闡述之第四實施例之各態樣中，第四實施例以及其各個態樣及實例之通式(IV)之變量R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 、R9 、A、X1 、X2 及X3 各自獨立地選自彼此，前提係R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 及R9 中之至少一者不係H。
第五實施例係關於通式(V)化合物：
Figure 02_image154
或其醫藥上可接受之鹽，其中各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群；各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 ；R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -；各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image156
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN；且各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。
在第五實施例之第一態樣中，各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群。在此態樣之特定實例中，各
Figure 02_image158
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image160
Figure 02_image162
及
Figure 02_image164
。在此態樣之更特定實例中，各
Figure 02_image166
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image168
Figure 02_image170
及
Figure 02_image172
。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第五實施例之通式(V)中所提供。
在第五實施例之第二態樣中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 。在此態樣之實例中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R1 獨立地選自由H及鹵素組成之群。在此態樣之更特定實例中，各R1 獨立地選自由H及F組成之群。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第五實施例之通式(V)中或上文第一態樣中所提供。
在第五實施例之第三態樣中，R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)。在此第四態樣之實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2-8 -、-O(CH2 )1-7 -、-O(CH2 )1-6 O-、-NH(CH2 )1-7 -及-NH(CH2 )1-6 O-。在此第四態樣之特定實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 -、-O(CH2 )3 -、-O(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 O-、-O(CH2 )3 O-、-OCH2 CH(CH3 )CH2 O-、-O(CH2 )4 O-、-O(CH2 )5 O-、-NH(CH2 )2 -、-NH(CH2 )3 -及-NH(CH2 )3 O-。在此態樣中，所有其他基團均係如第五實施例之通式(V)中或上文所闡述之第一及第二態樣中所提供。
在第五實施例之第四態樣中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基。在此態樣之實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 及CHF2 。在此態樣中，所有其他基團均係如第五實施例之通式(V)中或上文所闡述之第一至第三態樣中所提供。
在第五實施例之第五態樣中，各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -。在此態樣之實例中，X1 係選自由C=O及-CH2 -組成之群。在此態樣之特定實例中，X1 係C=O。在此實施例中，所有其他基團均係如第五實施例之通式(V)中或上文所闡述之第一至第四態樣中所提供。
在第五實施例之第六態樣中，各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣之第一實例中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基。在此第一實例之特定情形中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、CH3 、CH2 OH、CH2 CH3 、CH2 CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CH2 OCH3 及環丙基。在此態樣之第二實例中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此第二實例之特定情形中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此態樣之第三實例中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此第三實例之特定情形中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣中，所有其他基團均係如第五實施例之通式(V)中或上文所闡述之第一至第五態樣中所提供。
在第五實施例之第七態樣中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image174
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、
Figure 02_image176
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之甚至更特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOH、COOCH3 、CONH2 及CN。在此態樣中，所有其他基團均係如第五實施例之通式(V)中或上文所闡述之第一至第六態樣中所提供。
在第五實施例之第八態樣中，各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。在此態樣之實例中，各R9 獨立地係H。在此態樣中，所有其他基團均係如第五實施例之通式(V)中或上文所闡述之第一至第七態樣中所提供。
第五實施例之第九態樣係關於醫藥組合物，該醫藥組合物包含(a) 根據上文所闡述之第五實施例或第一至第八態樣之通式(V)之化合物或其醫藥上可接受之鹽；及(b) 醫藥上可接受之載劑。
第五實施例之第十態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第五實施例或第一至第八態樣之通式(V)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第五實施例之第十一態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第九態樣之組合物。
第五實施例之第十二態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第五實施例或上文所闡述之第一至第八態樣之通式(V)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第五實施例之第十三態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第九態樣之組合物。
第五實施例之第十四態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第五實施例或上文所闡述之第一至第八態樣之通式(V)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第五實施例之第十五態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第九態樣之組合物。
第五實施例之第十六態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第五實施例或上文所闡述之第一至第八態樣之通式(V)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第五實施例之此第十六態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第五實施例之第十七態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第九態樣之組合物。在第五實施例之此第十七態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
在本文所闡述之第五實施例之各態樣中，第五實施例以及其各個態樣及實例之通式(V)之變量R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 、R9 、A、X1 、X2 及X3 各自獨立地選自彼此，前提係R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 及R9 中之至少一者不係H。
第六實施例係關於通式(VI)化合物：
Figure 02_image178
或其醫藥上可接受之鹽，其中各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群；各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 ；R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)；各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基；各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -；各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image180
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN；且各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。
在第六實施例之第一態樣中，各A-R1 獨立地選自由C-R1 及N組成之群。在此態樣之特定實例中，各
Figure 02_image182
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image184
Figure 02_image186
及
Figure 02_image188
。在此態樣之更特定實例中，各
Figure 02_image190
獨立地選自由以下組成之群：
Figure 02_image192
Figure 02_image194
及
Figure 02_image196
。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第六實施例之通式(VI)中所提供。
在第六實施例之第二態樣中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 烷基、C1 -C6 鹵烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基、經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基、COOR6 及C(O)N(R6 )2 。在此態樣之實例中，各R1 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R1 獨立地選自由H及鹵素組成之群。在此態樣之更特定實例中，各R1 獨立地選自由H及F組成之群。在此態樣中，所有其他基團均係如上文第六實施例之通式(VI)中或上文第一態樣中所提供。
在第六實施例之第三態樣中，R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：O-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)、C1 -C5 伸烷基或鹵伸烷基及N(R6 )-(C1 -C4 伸烷基或鹵伸烷基)。在此第四態樣之實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2-8 -、-O(CH2 )1-7 -、-O(CH2 )1-6 O-、-NH(CH2 )1-7 -及 -NH(CH2 )1-6 O-。在此第四態樣之特定實例中，R3 至R4 係選自由以下組成之群：-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 -、-O(CH2 )3 -、-O(CH2 )4 -、-O(CH2 )2 O-、-O(CH2 )3 O-、-OCH2 CH(CH3 )CH2 O-、-O(CH2 )4 O-、-O(CH2 )5 O-、-NH(CH2 )2 -、-NH(CH2 )3 -及-NH(CH2 )3 O-。在此態樣中，所有其他基團均係如第六實施例之通式(VI)中或上文所闡述之第一及第二態樣中所提供。
在第六實施例之第四態樣中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C6 烷基及C1 -C6 鹵烷基。在此態樣之實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基及C1 -C3 鹵烷基。在此態樣之特定實例中，各R6 獨立地選自由以下組成之群：H、CH3 及CHF2 。在此態樣中，所有其他基團均係如第六實施例之通式(VI)中或上文所闡述之第一至第三態樣中所提供。
在第六實施例之第五態樣中，各X1 獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2 -、-CHF-及-CF2 -。在此態樣之實例中，X1 係選自由C=O及-CH2 -組成之群。在此態樣之特定實例中，X1 係C=O。在此實施例中，所有其他基團均係如第六實施例之通式(VI)中或上文所闡述之第一至第四態樣中所提供。
在第六實施例之第六態樣中，各X2 獨立地選自(C(R8 )2 )(1-3) ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1 -C6 烷基、CN、OR6 、N(R6 )2 、C1 -C6 鹵烷基、C3 -C6 環烷基、經OR6 取代之C1 -C6 烷基及經N(R6 )2 取代之C1 -C6 烷基；視情況不同碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8 可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣之第一實例中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基。在此第一實例之特定情形中，各X2 係CH2 CHR8 ，其中R8 係選自由以下組成之群：H、CH3 、CH2 OH、CH2 CH3 、CH2 CH2 CH3 、CH(CH3 )2 、CH2 OCH3 及環丙基。在此態樣之第二實例中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此第二實例之特定情形中，各X2 係CHR8 CHR8 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況不同碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環。在此態樣之第三實例中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由以下組成之群：H、C1 -C3 烷基、經OH取代之C1 -C3 烷基、經OC1 -C3 烷基取代之C1 -C3 烷基及C3 -C6 環烷基，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此第三實例之特定情形中，各X2 係CH2 C(R8 )2 ，其中各R8 獨立地選自由H及C1 -C3 烷基組成之群，且視情況單一碳原子上之2個R8 連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環。在此態樣中，所有其他基團均係如第六實施例之通式(VI)中或上文所闡述之第一至第五態樣中所提供。
在第六實施例之第七態樣中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)SR6 、C(S)OR6 、
Figure 02_image198
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、
Figure 02_image200
、SO2 R6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOR6 、C(O)N(R9 )2 及CN。在此態樣之甚至更特定實例中，各X3 獨立地選自由以下組成之群：COOH、COOCH3 、CONH2 及CN。在此態樣中，所有其他基團均係如第六實施例之通式(VI)中或上文所闡述之第一至第六態樣中所提供。
在第六實施例之第八態樣中，各R9 獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6 及SO2 R6 。在此態樣之實例中，各R9 獨立地係H。在此態樣中，所有其他基團均係如第五實施例之通式(V)中或上文所闡述之第一至第七態樣中所提供。
第六實施例之第九態樣係關於醫藥組合物，該醫藥組合物包含(a) 根據上文所闡述之第六實施例或第一至第八態樣之通式(VI)之化合物或其醫藥上可接受之鹽；及(b) 醫藥上可接受之載劑。
第六實施例之第十態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第六實施例或第一至第八態樣之通式(VI)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第六實施例之第十一態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第九態樣之組合物。
第六實施例之第十二態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第六實施例或上文所闡述之第一至第八態樣之通式(VI)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第六實施例之第十三態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第九態樣之組合物。
第六實施例之第十四態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第六實施例或上文所闡述之第一至第八態樣之通式(VI)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第六實施例之第十五態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第九態樣之組合物。
第六實施例之第十六態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第六實施例或上文所闡述之第一至第八態樣之通式(VI)之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第六實施例之此第十六態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第六實施例之第十七態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之根據上文所闡述之第九態樣之組合物。在第六實施例之此第十七態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
在本文所闡述之第六實施例之各態樣中，第六實施例以及其各個態樣及實例之通式(VI)之變量R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 、R9 、A、X1 、X2 及X3 各自獨立地選自彼此，前提係R1 、R2 、R3 、R4 、R6 、R8 及R9 中之至少一者不係H。
第七實施例係關於選自由以下組成之群之化合物：
Figure 02_image202
Figure 02_image204
Figure 02_image206
Figure 02_image208
Figure 02_image210
Figure 02_image212
Figure 02_image214
Figure 02_image216
Figure 02_image218
Figure 02_image220
Figure 02_image222
Figure 02_image224
Figure 02_image226
Figure 02_image228
Figure 02_image230
Figure 02_image232
Figure 02_image234
Figure 02_image236
及
Figure 02_image238
以及其醫藥上可接受之鹽。此第七實施例之特定態樣係關於選自由以下組成之群之化合物：
Figure 02_image240
Figure 02_image242
Figure 02_image244
Figure 02_image246
Figure 02_image248
Figure 02_image250
Figure 02_image252
及
Figure 02_image254
，以及其醫藥上可接受之鹽。
第七實施例之第一態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第七實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第七實施例之第二態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之包含根據上文第七實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽之組合物。
第七實施例之第三態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第七實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第七實施例之第四態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之包含根據上文第七實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽之組合物。
第七實施例之第五態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第七實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第七實施例之第六態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之包含根據上文第七實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽之組合物。
第七實施例之第七態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第七實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第七實施例之第七態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第七實施例之第八態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之包含根據上文第七實施例之化合物之組合物。在第七實施例之此第八態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第八實施例係關於選自下文所示實例1至190中所繪示之例示性物質之化合物。
第八實施例之第一態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第八實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第八實施例之第二態樣係關於誘導需要療法之患者的免疫反應之方法，其包含向該患者投與治療有效量之包含根據上文第八實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽之組合物。
第八實施例之第三態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第八實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第八實施例之第四態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之包含根據上文第八實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽之組合物。
第八實施例之第五態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第八實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
第八實施例之第六態樣係關於誘導需要療法之患者的STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向該患者投與治療有效量之包含根據上文第八實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽之組合物。
第八實施例之第七態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，其包含向該患者投與治療有效量之根據上文第八實施例之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第八實施例之第七態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
第八實施例之第八態樣係關於治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之包含根據上文第八實施例之化合物之組合物。在第八實施例之此第八態樣之實例中，細胞增殖病症係癌症。
本揭示內容之其他實施例包括以下： (a) 一種醫藥組合物，其包含有效量之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑。 (b) 如(a)之醫藥組合物，其進一步包含選自由以下組成之群之活性劑：STING促效劑化合物、抗病毒化合物、抗原、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑。 (c) 一種醫藥組合，其為(i) 通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽，及(ii) 選自由以下組成之群之活性劑：STING促效劑化合物、抗病毒化合物、抗原、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑；其中該通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽及該活性劑各自係以使得該組合有效用於誘導患者之免疫反應之量採用。 (d) 一種誘導患者之免疫反應之方法，其包含向需要療法之該患者投與治療有效量之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽。 (e) 一種誘導患者之免疫反應之方法，其包含向需要療法之該患者投與治療有效量之如(a)之組合物、如(b)之組合物或如(c)之組合。 (f) 一種誘導患者之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向需要療法之該患者投與治療有效量之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽。 (g) 一種誘導患者之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包含向需要療法之該患者投與治療有效量之如(a)之組合物、如(b)之組合物或如(c)之組合。 (h) 一種誘導患者之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向需要療法之該患者投與治療有效量之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽。 (i) 一種誘導患者之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包含向需要療法之該患者投與治療有效量之如(a)之組合物、如(b)之組合物或如(c)之組合。 (j) 一種治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽； (k) 如(j)之方法，其中該細胞增殖病症係癌症。 (l) 一種治療需要療法之患者的細胞增殖病症之方法，該方法包含向該患者投與治療有效量之如(a)之組合物、如(b)之組合物或如(c)之組合。 (m) 如(l)之方法，其中該細胞增殖病症係癌症。
本揭示內容亦包括本揭示內容之化合物，其(i) 用於以下各項、(ii) 作為藥劑用於以下各項或(iii) 用於製備用於以下各項之藥劑：(a) 誘導患者之免疫反應，或(b) 誘導患者之STING依賴性細胞介素產生。在該等用途中，本揭示內容之化合物可視情況與一或多種選自以下之活性劑組合採用：STING促效劑化合物、抗病毒化合物、抗原、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑。
本揭示內容之其他實施例包括上文(a)至(m)中所陳述之醫藥組合物、組合及方法以及前段中所陳述之用途，其中，其中所採用之本揭示內容之化合物係上文所闡述化合物之實施例、態樣、實例、情形或特徵中之一者之化合物。在所有該等實施例中，若適當，則化合物可視情況以醫藥上可接受之鹽形式使用。
在上文所提供化合物之實施例中，應理解，各實施例可與一或多個其他實施例組合，其組合程度使得此一組合提供穩定化合物且與實施例之描述一致。應進一步理解，如上文(a)至(m)所提供組合物及方法之實施例應理解為包括化合物之所有實施例，包括因實施例之組合而獲得之此等實施例。
如本文所使用之術語「個體」(或者「患者」)係指作為治療、觀察或實驗之對象之哺乳動物。哺乳動物可係雄性或雌性。哺乳動物可為一或多種選自由以下組成之群者：人類、牛類(例如牛)、豬類(例如豬)、羊類(例如綿羊)、山羊類(例如山羊)、馬類(例如馬)、犬類(例如家養狗)、貓類(例如家貓)、兔形目(Lagomorpha) (兔)、齧齒類動物(例如大鼠或小鼠)、普通浣熊(Procyon lotor) (例如浣熊)。在特定實施例中，個體係人類。
如本文所使用，術語「免疫反應」係指以下中之任一或多者：特異性免疫反應、非特異性免疫反應、特異性及非特異性反應二者、先天性反應、初級免疫反應、適應性免疫性、次級免疫反應、記憶免疫反應、免疫細胞活化、免疫細胞增殖、免疫細胞分化及細胞介素表現。在某些實施例中，將通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽與一或多種包括以下之其他治療劑聯合投與：抗病毒化合物、意欲刺激對一或多種預定抗原之免疫反應之疫苗、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑等。在某些實施例中，將通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽與一或多種包括以下之其他組合物聯合投與：抗病毒化合物、意欲刺激對一或多種預定抗原之免疫反應之疫苗、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑等。
化合物 如本文所使用，術語「烷基」係指具有指定範圍內之碳原子數之單價直鏈或具支鏈、飽和脂肪族烴基團。因此，舉例而言，「C1-6 烷基」(或「C1 -C6 烷基」)係指以下中之任一者：己基烷基及戊基烷基異構物以及正丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基、正丙基及異丙基、乙基及甲基。作為另一實例，「C1-4 烷基」係指正丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基、正丙基及異丙基、乙基及甲基。
如本文所使用，術語「伸烷基」係指具有指定範圍內之碳原子數之二價直鏈、飽和脂肪族烴基團。
如本文所使用，術語「烯基」係指具有指定範圍內之碳原子數且包括一或多個雙鍵之單價直鏈或具支鏈、不飽和脂肪族烴基團。
如本文所使用，術語「伸烯基」係指具有指定範圍內之碳原子數且包括一或多個雙鍵之二價直鏈、不飽和脂肪族烴基團。
如本文所使用，術語「炔基」係指具有指定範圍內之碳原子數且包括一或多個三鍵之單價直鏈或具支鏈、不飽和脂肪族烴基團。
如本文所使用，術語「伸炔基」係指具有指定範圍內之碳原子數且包括一或多個三鍵之二價直鏈、不飽和脂肪族烴基團。
如本文所使用，術語「鹵素」(或「鹵基」)係指氟、氯、溴及碘(或者氟、氯、溴及碘或F、Cl、Br及I)。
如本文所使用，術語「鹵烷基」係指其中一或多個氫原子已經鹵素替代之如上文所定義之烷基。因此，舉例而言，「C1-6 鹵烷基」(或「C1 -C6 鹵烷基」)係指具有一或多個鹵素取代基之如上文所定義之C1 至C6 直鏈或具支鏈烷基。術語「氟烷基」具有類似含義，只是鹵素取代基限於氟。適宜氟烷基包括(CH2 )0-4 CF3 系列(即，三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟-正丙基等。)。
如本文所使用，術語「鹵伸烷基」係指其中一或多個氫原子已經鹵素替代之如上文所定義之伸烷基，如在上文所定義之鹵烷基中。
如本文所使用，術語「鹵烯基」係指其中一或多個氫原子已經鹵素替代之如上文所定義之烯基。
如本文所使用，術語「鹵伸烯基」係指其中一或多個氫原子已經鹵素替代之如上文所定義之伸烯基。
如本文所使用，術語「鹵炔基」係指其中一或多個氫原子已經鹵素替代之如上文所定義之炔基。
如本文所使用，術語「鹵伸炔基」係指其中一或多個氫原子已經鹵素替代之如上文所定義之伸炔基。
如本文所使用，如本文所單獨或組合使用之術語「烷氧基」包括連結至氧基連結原子之烷基。術語「烷氧基」亦包括烷基醚基團，其中術語「烷基」定義於上文中，且「醚」意指中間具有氧原子之兩個烷基。適宜烷氧基之實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、甲氧基甲烷(亦稱為「二甲醚」)及甲氧基乙烷(亦稱為「乙基甲醚」)。
如本文所使用，術語「環烷基」係指含有一個具有指定碳原子數之環之飽和烴。環烷基之實例包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。
如本文所使用，如本文所使用之術語「雜環」、「雜環基」或「雜環」代表飽和或不飽和且由碳原子及一至兩個選自由N、O及S組成之群之雜原子組成之穩定3員至6員單環。雜環可連接在使得產生穩定結構之任一雜原子或碳原子處。該術語包括雜芳基部分。此等雜環元件之實例包括(但不限於)氮呯基、苯并咪唑基、苯并異噁唑基、苯并呋呫基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、𠳭烷基、㖕啉基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噻喃基、二氫苯并噻喃基碸、1,3-二氧戊環基、呋喃基、咪唑啶基、咪唑啉基、咪唑基、吲哚啉基、吲哚基、異𠳭烷基、異吲哚啉基、異喹啉基、異噻唑啶基、異噻唑基、嗎啉基、萘啶基、噁二唑基、2-側氧基氮呯基、噁唑基、2-側氧基六氫吡嗪基、2-側氧基六氫吡啶基、2-側氧基吡咯啶基、六氫吡啶基、六氫吡嗪基、吡啶基、吡嗪基、吡唑啶基、吡唑基、嗒嗪基、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喏啉基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、硫嗎啉基、硫嗎啉基亞碸、噻唑基、噻唑啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基、三唑基及噻吩基。
如本文所使用，術語「稠環」係指藉由直鏈或具支鏈烷烴中之單獨原子上之取代基形成之環狀基團，或係指藉由另一環中之單獨原子上之取代基形成之環狀基團。
如本文所使用，術語「螺環(spirocycle或spirocyclic ring)」係指藉由單一原子上之取代基形成之懸垂環狀基團。
除非明確陳述相反之情形，否則本文所引用之所有範圍均係包括性的；即，該範圍包括範圍之上限值及下限值以及其間之所有值。作為實例，本文所闡述之溫度範圍、百分比、當量範圍及諸如此類包括範圍之上限值及下限值以及其間之任一連續值。本文所提供之數值及術語「約」之使用可包括± 1%、± 2%、±3%、± 4%、± 5%、± 10%、± 15%及± 20%及其數值當量之變化。
如本文所使用，術語「一或多種」物項包括選自列表之單一物項以及兩種或更多種選自列表之物項之混合物。
在通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及前述化合物之醫藥上可接受之鹽中，原子可展現其天然同位素豐度，或可以人工方式使一或多種原子富含具有相同原子序數但原子質量或質量數不同於在自然界中主要發現之原子質量或質量數的特定同位素。本揭示內容意欲包括通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及前述化合物之醫藥上可接受之鹽之所有適宜同位素變化形式。舉例而言，氫(H)之不同同位素形式包括氕(1 H)、氘(2 H)及氚(3 H)。氕係自然界中發現之主要氫同位素。富含氘可提供某些治療優點，例如，延長活體內半衰期或降低劑量需求；或可提供可用作表徵生物樣品之標準的化合物。同位素富集型通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及前述化合物之醫藥上可接受之鹽可在無需過多實驗之情形下藉由熟習此項技術者熟知之習用技術或藉由與本文方案及實例中所闡述之彼等類似之製程使用適當同位素富集型試劑及/或中間體來製備。
在通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及前述化合物之醫藥上可接受之鹽之特定實施例中，化合物同位素富含氘。在該等實施例之態樣中，R1 、R2 、R3 、R6 、R8 及R9 中之一或多者可包括氘。
如一般結構式及如本文所提供之具體化合物之結構中所示，手性中心處之直線包括(R)及(S)立體異構物二者及其混合物 此外，除非另外規定(例如100%純之化合物)，否則對某一位置之特定立體化學之提及提供具有所指示立體化學之化合物，但不排除在指示位置處具有不同立體化學之立體異構物之存在。
申請專利範圍中在不指示具體立體構形或此一指示針對少於所有手性中心之情形下對具體化合物(即物質)之列舉或繪示意欲涵蓋(對於此等未指示手性中心)化合物之外消旋物、外消旋混合物、各個別鏡像異構物、非鏡像異構物混合物及各個別非鏡像異構物，其中此等形式因存在一或多個不對稱中心係可能的。立體異構物混合物之分離可在通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽之合成期間以中間步驟實施，或其可在最終外消旋產物上進行。絕對立體化學可藉由結晶產物或結晶中間體(若需要，其係用含有已知構形之立體性中心之試劑衍生)之X射線結晶學確定。或者，可藉由振動圓二色性(VCD)光譜學分析來測定絕對立體化學。本發明包括所有此等異構物以及此等外消旋物、鏡像異構物、非鏡像異構物、互變異構物及其混合物之鹽、溶劑合物(包括水合物)及溶劑化鹽。
本發明包括所有可能的鏡像異構物及非鏡像異構物以及兩種或更多種立體異構物之混合物(例如鏡像異構物及/或非鏡像異構物以所有比率之混合物)。因此，鏡像異構物係呈鏡像異構純形式、呈左旋及右旋鏡像體形式二者、呈外消旋物形式及呈所有比率之兩種鏡像異構物之混合物形式的本發明標的物。在順式/反式異構現象之情形中，本發明包括順式形式及反式形式二者以及該等形式以所有比率之混合物。若期望，則可藉由習用方法(例如藉由層析或結晶，藉由使用立體化學均勻起始材料進行合成或藉由立體選擇性合成)分離混合物來實施個別立體異構物之製備。視情況，可在分離立體異構物之前實施衍生化。立體異構物混合物之分離可在通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽之合成期間以中間步驟實施，或其可在最終外消旋產物上進行。絕對立體化學可藉由結晶產物或結晶中間體(若需要，其係用含有已知構形之立體性中心之試劑衍生)之X射線結晶學確定。除非指示此外消旋物、鏡像異構物或非鏡像異構物之特定異構物、鹽、溶劑合物(包括水合物)或溶劑化鹽，否則本發明包括所有此等異構物以及此等外消旋物、鏡像異構物、非鏡像異構物之鹽、溶劑合物(包括水合物)及溶劑化鹽及其混合物。
術語「化合物」係指該化合物且在某些實施例中其任一水合物或溶劑合物(就其係穩定的而言)。水合物係與水複合之化合物，且溶劑合物係與溶劑複合之化合物，溶劑可為有機溶劑或無機溶劑。
「穩定」化合物係可製備並分離之化合物，且其結構及性質在足夠長時間內基本保持不變或可使其基本保持不變以容許將該化合物用於本文所闡述之目的(例如治療性投與患者)。本發明之化合物限於由通式(I)、通式(II)、通式(III)、通式(IV)、通式(V)、通式(VI)或其醫藥上可接受之鹽囊括之穩定化合物。
鹽 如上文所指示，本發明之化合物可以醫藥上可接受之鹽之形式採用。熟習此項技術者將認識到其中本發明之化合物可形成鹽之彼等實例。此等化合物之實例藉由參考可能鹽闡述於本文中。此參考僅用於說明。醫藥上可接受之鹽可與用於治療患者之化合物一起使用。然而，非醫藥鹽可用於製備中間體化合物。
術語「醫藥上可接受之鹽」係指具有類似於母體化合物之有效性且不在生物上或其他方面不期望(例如有毒或在其他方面對其接受者有害)之鹽(包含內鹽，例如兩性離子)。因此，本發明之一實施例提供本發明化合物之醫藥上可接受之鹽。如本文所採用之術語「鹽」表示以下中之任一者：利用無機及/或有機酸形成之酸性鹽以及利用無機及/或有機鹼形成之鹼性鹽。本發明化合物之鹽可藉由熟習此項技術者已知之方法例如藉由使本發明化合物與一定量(例如等量)酸或鹼在諸如可沈澱鹽之介質等介質中或在水性介質中反應、之後凍乾來形成。
例示性酸加成鹽包括乙酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲烷磺酸鹽(「甲磺酸鹽」)、萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽、柳酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽(toluenesulfonate)(甲苯磺酸鹽(「tosylate」))及諸如此類。適宜鹽包括可(例如)藉由將化合物之溶液與醫藥上可接受之酸(例如鹽酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸或苯甲酸)之溶液混合所形成之酸加成鹽。另外，通常視為適於自鹼性醫藥化合物形成醫藥上可用鹽之酸論述於(例如)以下文獻中：P. Stahl等人 ，Camille G. (編輯)，Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH；S. Berge等人 ，Journal of Pharmaceutical Sciences (1977)66(1) 1-19；P. Gould，International J. of Pharmaceutics (1986)33 201-217；Anderson等人 ，The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York；及The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C.，在其網站上)。該等揭示內容係以引用的方式併入本文中。
例示性鹼性鹽包括銨鹽、鹼金屬鹽(例如鈉鹽、鋰鹽及鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如鈣鹽及鎂鹽)、利用有機鹼(例如有機胺，例如二環己基胺、第三丁基胺、膽鹼)形成之鹽及利用胺基酸(例如精胺酸、離胺酸及諸如此類)形成之鹽。可利用諸如以下等試劑使鹼性含氮基團四級銨化：低碳數烷基鹵化物(例如，甲基、乙基及丁基之氯化物、溴化物及碘化物)、硫酸二烷基酯(例如，硫酸二甲酯、硫酸二乙酯及硫酸二丁酯)、長鏈鹵化物(例如，癸基、月桂基及硬脂基之氯化物、溴化物及碘化物)、芳烷基鹵化物(例如，苄基及苯乙基之溴化物)及其他者。可將攜帶酸性部分之化合物與適宜醫藥上可接受之鹽混合以提供(例如)鹼金屬鹽(例如鈉鹽或鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如鈣鹽或鎂鹽)及利用適宜有機配體形成之鹽(例如四級銨鹽)。此外，在存在酸(-COOH)或醇基團之情形下，可採用醫藥上可接受之酯來改變化合物之溶解性或水解特性。
所有此等酸式鹽及鹼式鹽均意欲成為本發明範圍內之醫藥上可接受之鹽，且出於本發明之目的，所有酸式及鹼式鹽均可視為等效於相應化合物之游離形式。
另外，當本發明之化合物含有鹼性部分(例如(但不限於)脂肪族一級、二級、三級或環狀胺、芳香族或雜芳基胺、吡啶或咪唑)及酸性部分(例如(但不限於)四唑或羧酸)時，可形成兩性離子(「內鹽」)，且其包括在如本文所使用之術語「鹽」內。應理解，本發明之某些化合物可以兩性離子形式存在，其在同一化合物內具有陰離子及陽離子中心二者及淨中性電荷。此等兩性離子包括在本發明內。
製備化合物之方法 製備通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及前述化合物之醫藥上可接受之鹽之若干方法闡述於以下方案及實例中。起始材料及中間體係自商業來源購得，自已知程序製得，或另外加以說明。在一些情形下，實施反應方案之步驟之順序可經改變以促進反應或避免不期望之反應產物。
在以下方法及方案中，LG代表脫離基，其可係鹵化物或三氟甲磺酸酯基團。方法及方案中所包括之變量具有所提供之含義；例示性觸媒定義於縮寫(下文)中。
方法 1 苯并噻吩二聚體1D 及1E 及其醫藥上可接受之鹽可以多種方式來製備。一種方式示於方案1中。次序以烯丙基-苯并噻吩1A 開始。利用第2代格拉布觸媒(Grubbs catalyst 2G)進行交叉歧化提供烯烴二聚體1B 及1C 。氫化且然後水解提供具有不同系鏈長度之二聚體1D 及1E 。
方案 1
Figure 02_image256
方法 2 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥鹽之另一方法詳述於方案2中。次序以適當經取代之芳基鹵2A 開始。使用RockPhos Pd G3與含有苯并噻吩之一級醇(2B )交叉偶合，之後水解，提供二聚體2C 。
方案 2
Figure 02_image258
方法 3 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案3中。烷基溴苯并噻吩3A 與芳基溴3B 之交叉偶合提供酯腈二聚體3C 。利用氫氧化鈉水溶液進行水解提供二聚體3D 。
方案 3
Figure 02_image260
方法 4 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案4中。在鈀觸媒存在下，芳基溴4a 與烷基
Figure 108111487-A0304-12-01
酸酯4B 之間進行烷基鈴木(Suzuki)反應，之後使酯水解，提供二聚體4C 。
方案 4
Figure 02_image262
方法 5 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案5中。烷基溴苯并噻吩5A 與芳基溴5B 之交叉偶合提供二聚體5C 。水解提供二聚體5D 。類似地，可使芳基鹵5E 與烷基溴5F 偶合以產生中間體5G 。水解提供酸5H 。
方案 5
Figure 02_image264
方法 6 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案6中。次序以鹵烷6A 開始。在鹼性條件下用適當經取代之酚6B 置換鹵化物，之後水解，提供二聚體6C 。類似地，烷基氯6D 可在鹼性條件下經酚6E 置換以在轉化成二酸後提供6F 。酚6G 亦可用於置換烷基氯6D 以在轉化成二酸後提供期望6H 。最後，烷基溴6I 可經酚6J 置換以在轉化成二酸後提供6K 。
方案 6
Figure 02_image266
方法 7 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案7中。次序以一級醇7A 與酚7B 之間的光延(Mitsunobu)反應開始以在將二酯水解後提供7C 。或者，可在光延條件下使酚7D 與醇7E 反應。隨後皂化提供二酸7F 。酚7G 亦可用於與7H 之光延反應中以在將二酯轉化成二酸後提供7I 。 類似地，可使雙-酚苯并噻吩7J 及適當經取代之二醇(7K )經受光延條件以提供7L 及7M 之混合物。水解提供二酸7N 及7O 之混合物。
方案 7
Figure 02_image268
方法 8 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案8中。次序以適當經取代之芳基溴8A 開始。在鈀觸媒存在下與烷基胺8B 反應提供烷基胺基二聚體二酯8C 。水解提供期望之二酸8D 。
方案 8
Figure 02_image270
方法 9 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案9中。次序以在三乙醯氧基硼氫化鈉存在下醛9A 及胺基氮雜苯并噻吩9B 之間的還原胺化開始。向粗製混合物添加TFA提供期望之二酸9C 。
方案 9
Figure 02_image272
方法 10 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案10中。次序以利用適當經取代之酚系苯并噻吩10A 使二鹵烷雙-烷基化開始以提供二聚體二酯10B 。水解提供期望之二酸10C 。類似地，二鹵化物可利用10D 雙烷基化以在將二酯轉化成二酸後提供二酸10E 。
方案 10
Figure 02_image274
方法 11 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案11中。次序以利用烷基溴11A使苯胺11B烷基化開始以提供11C。將二酯水解提供11D。
方案 11
Figure 02_image276
方法 12 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案12中。次序以利用烷基溴12A使酚12B烷基化開始以提供12C。選擇性鹼介導之水解提供單酸12D。使12D與磺醯胺或硫醯胺偶合提供12E。酸介導之水解提供12F。
方案 12
Figure 02_image278
方法 13 用於製備苯并噻吩二聚體及其醫藥上可接受之鹽之另一方法詳述於方案13中。次序以利用烷基溴13A使酚13B烷基化開始以提供13C。將二酯水解，之後對經甲氧基甲基縮醛(MOM)保護之酚進行酸介導之去保護提供13D。
方案 13
Figure 02_image280
使用方法 可出於誘導免疫反應、誘導STING依賴性細胞介素產生及/或誘導抗腫瘤活性之目的，將本文所闡述具有治療應用之化合物(例如通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物、實例1至190之化合物及前述化合物之醫藥上可接受之鹽)投與患者。術語「投與(administration)」及其變體(例如「投與(administering)」化合物)意指向需要治療之個體提供化合物。當化合物與一或多種其他活性劑(例如可用於治療HCV感染之抗病毒劑或用於治療癌症之抗腫瘤劑)組合提供時，「投與」及其變體各自應理解為包括同時及依序提供化合物或鹽及其他藥劑。
本文所揭示之化合物可係STING促效劑。該等化合物潛在地可用於治療包括(但不限於)細胞增殖病症之疾病或病症。細胞增殖病症包括(但不限於)癌症、良性乳頭狀瘤病、妊娠滋養細胞疾病及良性贅瘤性疾病，例如皮膚乳頭狀瘤(疣)及生殖器乳頭狀瘤。
在具體實施例中，欲治療之疾病或病症係細胞增殖病症。在某些實施例中，細胞增殖病症係癌症。在特定實施例中，癌症係選自腦癌及脊柱癌、頭頸癌、白血病及血液癌、皮膚癌、生殖系統癌症、胃腸系統癌症、肝癌及膽管癌、腎癌及膀胱癌、骨癌、肺癌、惡性間皮瘤、肉瘤、淋巴瘤、腺癌、甲狀腺癌、心臟腫瘤、生殖細胞瘤、惡性神經內分泌(類癌)腫瘤、中線道癌及原發灶不明之癌症(即，發現轉移癌症但原始癌症位點未知之癌症)。在特定實施例中，癌症存在於成年患者中；在其他實施例中，癌症存在於兒科患者中。在特定實施例中，癌症與AIDS有關。
在具體實施例中，癌症係選自腦癌及脊柱癌。在特定實施例中，癌症係選自由以下組成之群：間變性星細胞瘤、神經膠母細胞瘤、星細胞瘤及嗅神經母細胞瘤(亦稱為嗅覺母細胞瘤)。在特定實施例中，腦癌係選自由以下組成之群：星形細胞瘤(例如毛狀細胞星細胞瘤、室管膜下巨細胞星細胞瘤、瀰漫性星細胞瘤、多形性黃色瘤型星細胞瘤、間變性星細胞瘤、星細胞瘤、巨細胞神經膠母細胞瘤、神經膠母細胞瘤、繼發性神經膠母細胞瘤、原發性成人神經膠母細胞瘤及原發性兒科神經膠母細胞瘤)、寡樹突膠質細胞腫瘤(例如寡樹突神經膠細胞瘤及間變性寡樹突神經膠細胞瘤)、寡樹突星形細胞瘤(例如寡星細胞瘤及間變性寡星細胞瘤)、室管膜瘤(例如黏液乳頭狀室管膜瘤及間變性室管膜瘤)；髓母細胞瘤、原始神經外胚層瘤、神經鞘瘤、腦脊髓膜瘤、非典型腦脊髓膜瘤、間變性腦脊髓膜瘤、垂體腺瘤、腦幹膠質瘤、小腦星細胞瘤、腦星形細胞瘤/惡性神經膠質瘤、視通路及下丘腦神經膠質瘤及原發性中樞神經系統淋巴瘤。在該等實施例之具體實例中，腦癌係選自由以下組成之群：神經膠質瘤、多形性神經膠母細胞瘤、副神經節瘤及幕上原始神經外胚層瘤(sPNET)。
在具體實施例中，癌症係選自頭頸癌，包括鼻咽癌、鼻腔癌及鼻旁竇癌、下咽癌、口腔癌(例如鱗狀細胞癌、淋巴瘤及肉瘤)、唇癌、口咽癌、唾液腺腫瘤、喉癌(例如喉鱗狀細胞癌、橫紋肌肉瘤)及眼癌或眼部癌症。在特定實施例中，眼部癌症係選自由眼內黑色素瘤及視網膜母細胞瘤組成之群。
在具體實施例中，癌症係選自白血病及血液癌。在特定實施例中，癌症係選自由以下組成之群：骨髓增殖性贅瘤、骨髓發育不良症候群、骨髓發育不良/骨髓增殖性贅瘤、急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、慢性骨髓性白血病(CML)、骨髓增殖性贅瘤(MPN)、MPN後AML、MDS後AML、del(5q)相關之高風險MDS或AML、急性期慢性骨髓性白血病、血管免疫母細胞淋巴瘤、急性淋巴母細胞性白血病、蘭格罕氏細胞組織球增生症(Langerans cell histiocytosis)、毛細胞白血病及漿細胞贅瘤(包括漿細胞瘤及多發性骨髓瘤)。本文所提及之白血病可係急性或慢性的。
在具體實施例中，癌症係選自皮膚癌。在特定實施例中，皮膚癌係選自由以下組成之群：黑色素瘤、鱗狀細胞癌及基底細胞癌。
在具體實施例中，癌症係選自生殖系統癌症。在特定實施例中，癌症係選自由以下組成之群：乳癌、子宮頸癌、陰道癌、卵巢癌、前列腺癌、陰莖癌及睪丸癌。在該等實施例之具體實例中，癌症係選自由導管癌及葉狀腫瘤組成之群之乳癌。在該等實施例之具體實例中，乳癌可係雄性乳癌或雌性乳癌。在該等實施例之具體實例中，癌症係選自由鱗狀細胞癌及腺癌組成之群之子宮頸癌。在該等實施例之具體實例中，癌症係選自由上皮癌組成之群之卵巢癌。
在具體實施例中，癌症係選自胃腸系統之癌症。在特定實施例中，癌症係選自由以下組成之群：食管癌、胃癌(gastric cancer)(亦稱為胃癌(stomach cancer))、胃腸類癌瘤、胰臟癌、膽囊癌、結腸直腸癌及肛門癌。在該等實施例之實例中，癌症係選自由以下組成之群：食管鱗狀細胞癌、食管腺癌、胃腺癌、胃腸類癌瘤、胃腸基質瘤、胃淋巴瘤、胃腸淋巴瘤、胰臟之實性假乳頭狀瘤、胰母細胞瘤、胰島細胞腫瘤、胰臟癌(包括腺泡細胞癌及導管腺癌)、膽囊腺癌、結腸直腸腺癌及肛門鱗狀細胞癌。
在具體實施例中，癌症係選自肝癌及膽管癌。在特定實施例中，癌症係肝癌(亦稱為肝細胞癌)。在特定實施例中，癌症係膽管癌(亦稱為膽道癌)；在該等實施例之實例中，膽管癌係選自由肝內膽道癌及肝外膽道癌組成之群。
在具體實施例中，癌症係選自腎癌及膀胱癌。在特定實施例中，癌症係選自由以下組成之群之腎癌：腎細胞癌、威爾姆氏瘤(Wilms tumor)及移行細胞癌。在特定實施例中，癌症係選自由以下組成之群之膀胱癌：尿路上皮癌(移行細胞癌)、鱗狀細胞癌及腺癌。
在具體實施例中，癌症係選自骨癌。在特定實施例中，骨癌係選自由以下組成之群：骨肉瘤、骨之惡性纖維性組織細胞瘤、尤恩氏肉瘤(Ewing sarcoma)、脊索瘤(沿脊柱之骨之癌症)。
在具體實施例中，癌症係選自肺癌。在特定實施例中，肺癌係選自由以下組成之群：非小細胞肺癌、小細胞肺癌、支氣管腫瘤及胸膜肺母細胞瘤。
在具體實施例中，癌症係選自惡性間皮瘤。在特定實施例中，癌症係選自由上皮間皮瘤及肉瘤樣間皮瘤組成之群。
在具體實施例中，癌症係選自肉瘤。在特定實施例中，肉瘤係選自由以下組成之群：中心性軟骨肉瘤、中心性及骨膜軟骨瘤、纖維肉瘤、腱鞘之透明細胞肉瘤及卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)。
在具體實施例中，癌症係選自淋巴瘤。在特定實施例中，癌症係選自由以下組成之群：霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)(例如裡德-斯藤伯格細胞(Reed-Sternberg cell))、非霍奇金氏淋巴瘤(例如瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、蕈樣肉芽腫病、塞紮裡症候群(Sezary syndrome)、原發性中樞神經系統淋巴瘤)、皮膚T細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤。
在具體實施例中，癌症係選自腺癌。在特定實施例中，癌症係選自由以下組成之群：腎上腺皮質癌(亦稱為腎上腺皮質癌瘤(adrenocortical carcinoma或adrenal cortical carcinoma))、嗜鉻細胞瘤、副神經節瘤、垂體瘤、胸腺瘤及胸腺癌。
在具體實施例中，癌症係選自甲狀腺癌。在特定實施例中，甲狀腺癌係選自由以下組成之群：髓質甲狀腺癌、乳頭狀甲狀腺癌及濾泡性甲狀腺癌。
在具體實施例中，癌症係選自生殖細胞腫瘤。在特定實施例中，癌症係選自由惡性顱外生殖細胞瘤及惡性性腺外生殖細胞瘤組成之群。在該等實施例之具體實例中，惡性性腺外生殖細胞瘤係選自由非精原細胞瘤及精原細胞瘤組成之群。
在具體實施例中，癌症係選自心臟腫瘤。在特定實施例中，心臟腫瘤係選自由以下組成之群：惡性畸胎瘤、淋巴瘤、橫紋肌肉瘤、血管肉瘤、軟骨肉瘤、嬰兒型纖維肉瘤及滑膜肉瘤。
在具體實施例中，細胞增殖病症係選自良性乳頭狀瘤病、良性贅瘤性疾病及妊娠滋養細胞疾病。在特定實施例中，良性贅瘤性疾病係選自皮膚乳頭狀瘤(疣)及生殖器乳頭狀瘤。在特定實施例中，妊娠滋養細胞疾病係選自由以下組成之群：葡萄胎及妊娠滋養細胞贅瘤形成(例如侵襲性葡萄胎、絨毛膜癌、胎盤部位滋養細胞腫瘤及上皮樣滋養細胞腫瘤)。
如本文所使用，術語「治療(treatment及treating)」係指可減緩、中斷、阻止、控制或停止本文所闡述疾病或病症之進展之所有過程。該等術語不一定指示完全消除所有疾病或病症症狀。
術語「投與(administration of及或administering)」化合物應理解為包括向患者提供本文所闡述之化合物或其醫藥上可接受之鹽及前者之組合物。
投與患者之化合物之量係足以在患者中誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生之量。在一實施例中，化合物之量可係「有效量」或「治療有效量」，從而使得本發明化合物係以分別將在組織、系統、動物或人類中引發研究者、獸醫師、醫師或其他臨床醫師所尋求之生物或醫學(即意欲治療)反應之量來投與。有效量不一定包括對於與化合物之投與有關之毒性及安全性之考慮。
化合物之有效量將隨以下而變化：所選擇之特定化合物(例如考慮化合物之功效、效能及/或半衰期)；所選擇之投與途徑；所治療之病狀；所治療病狀之嚴重程度；所治療患者之年齡、個頭、體重及身體狀況；所治療患者之病史；治療之持續時間；並行療法之性質；期望治療效應；及類似因素；且可由熟習此項技術者以常規方式來確定。
本文所揭示之化合物可藉由任一適宜途徑來投與，包括經口及非經腸投與。非經腸投與通常藉由注射或輸注來實施，且包括靜脈內、肌內及皮下注射或輸注。
本文所揭示之化合物可一次性投與或根據投藥方案來投與，其中在給定時間段內以不同時間間隔來投與多個劑量。舉例而言，劑量可每天投與一次、兩次、三次或四次。可投與劑量直至達成期望治療效應為止或無限投與以維持期望治療效應。本文所揭示化合物之適宜投藥方案取決於該化合物之藥物動力學性質，例如吸收、分佈及半衰期，其可由熟習此項技術者測定。另外，本文所揭示化合物之適宜投藥方案(包括投與此等方案之持續時間)取決於所治療之疾病或病狀、疾病或病狀之嚴重程度、所治療患者之年齡及身體狀況、所治療患者之病史、並行療法之性質、期望治療效應及熟習此項技術者之知識及技能內之類似因素。此等熟習此項技術者將進一步理解，適宜投藥方案可需要根據個別患者對投藥方案之反應或隨時間變化在個別患者需要改變時進行調整。典型日劑量可端視於所選擇之特定投與途徑而變化。
本揭示內容之一個實施例提供治療細胞增殖病症之方法，其包含向需要治療之患者投與治療有效量之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及前述化合物之醫藥上可接受之鹽。在實施例中，欲治療之疾病或病症係細胞增殖病症。在該等實施例之態樣中，細胞增殖病症係癌症。在該等實施例之其他態樣中，癌症係選自腦癌及脊柱癌、頭頸癌、白血病及血液癌、皮膚癌、生殖系統癌症、胃腸系統癌症、肝癌及膽管癌、腎癌及膀胱癌、骨癌、肺癌、惡性間皮瘤、肉瘤、淋巴瘤、腺癌、甲狀腺癌、心臟腫瘤、生殖細胞瘤、惡性神經內分泌(類癌)腫瘤、中線道癌及原發灶不明之癌症。
在一個實施例中，本文揭示通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽之用途，其用於療法中。該化合物可用於誘導患者(例如需要此抑制之哺乳動物)之免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生之方法中，該方法包含向該患者投與有效量之該化合物。
在一個實施例中，本文揭示醫藥組合物，其包含至少一種通式(I)化合物、至少一種通式(II)化合物、至少一種通式(III)化合物、至少一種通式(IV)化合物、至少一種通式(V)化合物、至少一種通式(VI)化合物或前述化合物之至少一種醫藥上可接受之鹽，其用於潛在治療以誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生。
本文所揭示之一個實施例係通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造藥劑以誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生。在實施例中，欲治療之疾病或病症係細胞增殖病症。在該等實施例之態樣中，細胞增殖病症係癌症。在該等實施例之其他態樣中，癌症係選自腦癌及脊柱癌、頭頸癌、白血病及血液癌、皮膚癌、生殖系統癌症、胃腸系統癌症、肝癌及膽管癌、腎癌及膀胱癌、骨癌、肺癌、惡性間皮瘤、肉瘤、淋巴瘤、腺癌、甲狀腺癌、心臟腫瘤、生殖細胞瘤、惡性神經內分泌(類癌)腫瘤、中線道癌及原發灶不明之癌症。
組合物 如本文所使用之術語「組合物」意欲涵蓋以指定量包含指定化合物之劑型，以及直接或間接源自指定量之指定化合物之組合的任一劑型。此術語意欲涵蓋包含通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑之劑型。因此，本揭示內容之組合物涵蓋藉由混合本揭示內容之化合物及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑製得之任一組合物。「醫藥上可接受」意味著載劑或賦形劑與本文所揭示之化合物及組合物之其他成分相容。
出於誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生之目的，可藉由使活性劑與藥劑作用部位產生接觸之方式投與通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽。該等化合物可藉由可與醫藥聯合使用之習用方式以個別治療劑或治療劑之組合形式來投與。該等化合物可單獨投與，但通常與基於所選投與途徑及標準醫藥實踐而選擇之醫藥載劑一起投與。
在一個實施例中，本文揭示組合物，其包含通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。可以散裝形式製備且包裝該組合物，其中可提取治療有效量之本揭示內容之化合物且然後(例如)以粉末或糖漿給予患者。或者，可以單位劑型來製備且包裝組合物，其中各物理離散單元含有治療有效量之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽。
本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之載劑或賦形劑通常將調配成適用於藉由期望投與途徑投與患者之劑型。舉例而言，劑型包括適用於以下情形之彼等：(1) 經口投與，例如錠劑、膠囊、囊片、丸劑、糖錠劑、粉末、糖漿、酏劑、懸浮液、溶液、乳液、小藥囊及扁囊劑；及(2) 非經腸投與，例如無菌溶液、懸浮液及重構用粉末。適宜醫藥上可接受之載劑或賦形劑將端視於所選擇之特定劑型而變化。另外，適宜醫藥上可接受之載劑或賦形劑可針對其可在組合物中所起之特定功能來選擇。舉例而言，某些醫藥上可接受之載劑或賦形劑可針對其促進均勻劑型之產生之能力來選擇。某些醫藥上可接受之載劑或賦形劑可針對其促進穩定劑型之產生之能力來選擇。某些醫藥上可接受之載劑或賦形劑可針對在將本文所揭示之化合物投與患者後，其促進將本文所揭示之化合物自身體之一個器官或部分攜載或運輸至身體之另一器官或另一部分的能力來選擇。某些醫藥上可接受之載劑或賦形劑可針對其增強患者順從性之能力來選擇。
適宜醫藥上可接受之賦形劑包括以下類型之賦形劑：稀釋劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑、填充劑、助流劑、造粒劑、包衣劑、潤濕劑、溶劑、共溶劑、懸浮劑、乳化劑、甜味劑、矯味劑、氣味遮蔽劑、著色劑、抗結塊劑、保濕劑、螯合劑、塑化劑、增黏劑、抗氧化劑、防腐劑、穩定劑、表面活性劑及緩衝劑。
熟習此項技術者具有此項技術中以適當量選擇適宜醫藥上可接受之載劑及賦形劑以用於本揭示內容之組合物中之知識及技能。另外，存在多種熟習此項技術者可獲得之資源，其闡述醫藥上可接受之載劑及賦形劑且可用於選擇適宜醫藥上可接受之載劑及賦形劑。實例包括REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Publishing Company)、THE HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL ADDITIVES (Gower Publishing Limited)及THE HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL EXCIPIENTS (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)。
本揭示內容之組合物係使用熟習此項技術者已知之技術及方法來製備。此項技術中常用之一些方法闡述於REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Publishing Company)中。
在一個實施例中，本揭示內容係關於固體經口劑型(例如錠劑或膠囊)，其包含治療有效量之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽及稀釋劑或填充劑。適宜稀釋劑及填充劑包括乳糖、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨醇、澱粉(例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉及預膠化澱粉)、纖維素及其衍生物(例如微晶纖維素)、硫酸鈣及磷酸氫鈣。固體經口劑型可進一步包含黏合劑。適宜黏合劑包括澱粉(例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉及預膠化澱粉)、明膠、阿拉伯樹膠、海藻酸鈉、海藻酸、黃蓍膠、瓜爾膠(guar gum)、聚維酮(povidone)及纖維素及其衍生物(例如微晶纖維素)。固體經口劑型可進一步包含崩解劑。適宜崩解劑包括交聚維酮(crospovidone)、乙醇酸澱粉鈉、交聯羧甲基纖維素、海藻酸及羧甲基纖維素鈉。固體經口劑型可進一步包含潤滑劑。適宜潤滑劑包括硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣及滑石。
若適當，則供經口投與之劑量單位調配物可經微膠囊化。組合物亦可如(例如)藉由將微粒材料包覆或包埋於聚合酶、蠟或諸如此類中來製備以延長或維持釋放。
本文所揭示之化合物亦可與作為可靶向藥物載劑之可溶性聚合物偶合。此等聚合物可包括經棕櫚醯基殘基取代之聚乙烯基吡咯啶酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯醯胺酚、聚羥乙基天門冬醯胺酚或聚環氧乙烷聚離胺酸。此外，本揭示內容之化合物可與一類可用於達成藥物受控釋放之生物可降解聚合物偶合，例如聚乳酸、聚ε己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝膠之交聯或兩親性嵌段共聚物。
在一個實施例中，本揭示內容係關於液體經口劑型。諸如溶液、糖漿及酏劑等口服液體可以劑量單位形式製備，使得給定量含有預定量之本文所揭示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。糖漿可藉由將本揭示內容之化合物溶解於適宜矯味之水溶液中來製備；酏劑係經由使用無毒醇系媒劑來製備。可藉由將本文所揭示之化合物分散於無毒媒劑中來調配懸浮液。亦可添加增溶劑及乳化劑(例如乙氧基化異硬脂醇及聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(例如薄荷油或其他天然甜味劑或糖精或其他人工甜味劑及諸如此類)。
在一個實施例中，本揭示內容係關於用於非經腸投與之組合物。適於非經腸投與之組合物包括水性及非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及可使調配物與預期接受者之血液等滲之溶質；以及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。該等組合物可以單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)呈遞，且可儲存於冷凍乾燥(凍乾)條件下，僅需在即將使用前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。臨時配製之注射溶液及懸浮液可自無菌粉末、顆粒及錠劑製備。
組合 通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物及/或前述化合物之醫藥上可接受之鹽可與一或多種其他活性劑組合投與。在實施例中，可共投與一或多種通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之一或多種醫藥上可接受之鹽及一或多種其他活性劑。該(等)其他活性劑可與通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽以單一劑型投與，或該(等)其他活性劑可以與含有通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽之劑型分開之劑型投與。
若適當，則該(等)其他活性劑可作為醫藥上可接受之鹽提供。
該(等)其他活性劑可係一或多種選自由以下組成之群之試劑：STING促效劑化合物、抗病毒化合物、抗原、佐劑、抗癌劑、CTLA-4、LAG-3及PD-1路徑拮抗劑、脂質、脂質體、肽、細胞毒性劑、化學治療劑、免疫調節細胞系、檢查點抑制劑、血管內皮生長因子(VEGF)受體抑制劑、拓撲異構酶II抑制劑、平滑抑制劑、烷基化劑、抗腫瘤抗生素、抗代謝物、類視色素及免疫調節劑(包括(但不限於)抗癌症疫苗)。應理解，此(等)其他活性劑可作為醫藥上可接受之鹽提供。應理解，上述其他活性劑之闡述可具有重疊性。亦應理解，對治療組合實施最佳化，且應理解，基於個別患者之需要來確定使用通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽及一或多種其他活性劑之最佳組合。
本文所揭示之化合物可與一或多種其他活性劑組合使用，該(等)其他活性劑包括(但不限於)用於預防、治療、控制、改善特定疾病或病狀(例如細胞增殖病症)或降低其風險之其他抗癌劑。在一個實施例中，將本文所揭示之化合物與一或多種其他抗癌劑組合以用於預防、治療、控制、改善本文所揭示之化合物對其有用之特定疾病或病狀或降低其風險。此等其他活性劑可藉由其常用途徑及用量與本揭示內容之化合物同時或依序投與。
當本文所揭示之化合物與一或多種其他活性劑同時使用時，涵蓋除本文所揭示之化合物以外亦含有此等其他活性劑之組合物。因此，本揭示內容之組合物包括除本文所揭示之化合物以外亦含有一或多種其他活性成分之彼等組合物。本文所揭示之化合物可與一或多種其他活性劑同時或在其之前或之後投與。本文所揭示之化合物可藉由相同或不同投與途徑分開投與，或以相同醫藥組合物與其他藥劑一起投與。
作為組合提供之產品可包括包含通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽及一或多種其他活性劑之組合物(一起呈同一醫藥組合物形式)，或可包括包含通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽之組合物及包含一或多種其他活性劑之組合物(以分開形式，例如以套組形式或以經設計以使得能夠分開投與(同時或以分開投藥時間表)之任一形式)。
通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽對第二活性劑之重量比可變化且將取決於各藥劑之治療有效劑量。通常，將使用各成分之治療有效劑量。本文所揭示之化合物及其他活性劑之組合通常亦將在上文所提及之範圍內，但在各情形下，應使用各活性劑之治療有效劑量。在此等組合中，本文所揭示之化合物與其他活性劑可分開或聯合投與。另外，一種要素可在其他藥劑投與之前、與其同時或之後投與。
在一個實施例中，本揭示內容提供包含通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽及至少一種其他活性劑之組合物，其作為組合製劑同時、分開或依序用於療法中。在一個實施例中，該療法係對細胞增殖病症(例如癌症)之治療。
在一個實施例中，本揭示內容提供套組，其包含兩種或更多種分開之醫藥組合物，其中之至少一者含有通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽。在一個實施例中，該套組包含分開保留該等組合物之構件，例如容器、分開式瓶或分開式箔包。此一套組之實例係如包裝錠劑、膠囊及諸如此類通常使用之泡罩包裝。
本揭示內容之套組可用於投與不同劑型(例如經口及非經腸劑型)、用於以不同劑量間隔投與分開之組合物或用於分開之組合物針對彼此進行滴定。為有助於順從性，本揭示內容之套組通常包含投與說明書。
本文揭示通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽之用途，其用於治療細胞增殖病症，其中製備該藥劑以用於與另一活性劑一起投與。本揭示內容亦提供另一活性劑用於治療細胞增殖病症之用途，其中將該藥劑與通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽一起投與。
本揭示內容亦提供通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽之用途，其用於治療細胞增殖病症，其中患者先前(例如在24 h內)已利用另一活性劑進行治療。本揭示內容亦提供另一活性劑用於治療細胞增殖病症之用途，其中患者先前(例如在24 h內)已利用通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽進行治療。可在投與本文所揭示之化合物之後一週、若干週、一個月或若干月投與第二藥劑。
可與本文所揭示之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽組合使用之STING促效劑化合物包括(但不限於)環狀二-核苷酸化合物，例如以下國際專利申請公開案中所揭示之彼等化合物：第WO2014093936號、第WO2014189805號、第WO2014189806號、第WO2015185565號、第WO2016120305號、第WO2016096174號、第WO2016096577號、第WO2017027645號、第WO2017027646號、第WO2017075477號、第WO2017093933號及第WO2018009466號。
可與本文所揭示之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽組合使用之抗病毒化合物包括B型肝炎病毒(HBV)抑制劑、C型肝炎病毒(HCV)蛋白酶抑制劑、HCV聚合酶抑制劑、HCV NS4A抑制劑、HCV NS5A抑制劑、HCV NS5b抑制劑及人類免疫缺失病毒(HIV)抑制劑。若適當，則此等抗病毒化合物可作為醫藥上可接受之鹽提供。
可與通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽組合使用之抗原及佐劑包括B7共刺激分子、介白素-2、干擾素-y、GM-CSF、CTLA-4拮抗劑、OX-40/0X-40配體、CD40/CD40配體、沙格司亭(sargramostim)、左旋咪唑(levamisol)、牛痘病毒、卡介苗(Bacille Calmette-Guerin，BCG)、脂質體、明礬、弗氏完全或不完全佐劑(Freund’s complete or incomplete adjuvant)、去毒內毒素、礦物油、表面活性物質，例如脂卵磷脂、普朗尼克(pluronic)多元醇、多陰離子、肽，及油或烴乳液。可添加佐劑(例如氫氧化鋁或磷酸鋁)以增加疫苗觸發、增強或延長免疫反應之能力。各別使用或與所述組合物組合使用之其他物質，例如細胞介素、趨化介素，及細菌核酸序列(如CpG)、類鐸受體(TLR) 9促效劑，以及用於TLR 2、TLR 4、TLR 5、TLR 7、TLR 8、TLR9之其他促效劑，包括脂蛋白、LPS、單磷醯脂質A、脂磷壁酸、咪喹莫特(imiquimod)、雷西莫特(resiquimod)，及另外視黃酸可誘導基因I (RIG-I)促效劑(例如聚I:C)，亦係潛在佐劑。若適當，此等抗原及佐劑可提供作為醫藥上可接受之鹽。
CLTA-4及PD-1路徑係免疫反應之重要負調節劑。經活化之T細胞上調CLTA-4，其結合在抗原呈遞細胞上且抑制T細胞刺激、IL-2基因表現及T細胞增殖；該等抗腫瘤效應已在結腸癌、轉移前列腺癌及轉移黑色素瘤之小鼠模型中觀察到。PD-1結合至活性T細胞且抑制T細胞活化；PD-1拮抗劑亦已展示抗腫瘤效應。可與本文揭示之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽組合使用之CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑包括伊匹單抗(ipilimumab)、曲美目單抗(tremelimumab)、尼沃魯單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、CT-011、AMP-224及MDX-1106。
「PD-1拮抗劑」或「PD-1路徑拮抗劑」意指阻斷癌細胞上所表現之PD-L1與免疫細胞(T細胞、B細胞或NKT細胞)上所表現之PD-1之結合且較佳亦阻斷癌細胞上所表現之PD-L2與免疫細胞所表現之PD-1之結合的任一化合物或生物分子。PD-1及其配體之替代名稱或同義詞包括：對於PD-1，PDCD1、PD1、CD279及SLEB2；對於PD-L1，PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274及B7-H；及對於PD-L2，PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc及CD273。在本揭示之治療方法、藥劑及用途之任一者(其中治療人類個體)中，PD-1拮抗劑阻斷人類PD-L1與人類PD-1之結合，且較佳阻斷人類PD-L1及PD-L2與人類PD-1之結合。人類PD-1胺基酸序列可參見NCBI基因座編號：NP_005009。人類PD-L1及PD-L2胺基酸序列可分別參見NCBI基因座編號：NP_054862及NP_079515。
可用於本揭示內容之治療方法、藥劑及用途中之任一者中之PD-1拮抗劑包括特異性結合至PD-1或PD-L1且較佳地特異性結合至人類PD-1或人類PD-L1之單株抗體(mAb)或其抗原結合片段。mAb可為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體，且可包括人類恆定區。在一些實施例中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG3及IgG4恆定區，且在較佳實施例中，人類恆定區係IgG1或IgG4恆定區。在一些實施例中，抗原結合片段係選自由以下組成之群：Fab、Fab'-SH、F(ab')2 、scFv及Fv片段。
結合至人類PD-1且可用於本揭示內容之治療方法、藥劑及用途中之mAb之實例闡述於美國專利第US7488802號、第US7521051號、第US8008449號、第US8354509號及第US8168757號、PCT國際專利申請公開案第WO2004/004771號、第WO2004/072286號及第WO2004/056875號及美國專利申請公開案第US2011/0271358號中。
結合至人類PD-L1且可用於本揭示內容之治療方法、藥劑及用途中之mAb之實例闡述於PCT國際專利申請案第WO2013/019906號及第WO2010/077634 A1號及美國專利第US8383796號中。可用作本揭示內容之治療方法、藥劑及用途中之PD-1拮抗劑之具體抗人類PD-L1 mAb包括MPDL3280A、BMS-936559、MEDI4736、MSB0010718C及分別包含WO2013/019906中SEQ ID NO:24及SEQ ID NO:21之重鏈及輕鏈可變區之抗體。
可用於本揭示之治療方法、藥劑及用途之任一者中之其他PD-1拮抗劑包括特異性結合至PD-1或PD-L1且較佳地特異性結合至人類PD-1或人類PD-L1之免疫黏附分子，例如含有融合至免疫球蛋白分子之恆定區(例如Fc區)之PD-L1或PD-L2之細胞外或PD-1結合部分的融合蛋白。特異性結合至PD-1之免疫黏附分子之實例闡述於PCT國際專利申請公開案第WO2010/027827號及第WO2011/066342號中。可用作本揭示內容之治療方法、藥劑及用途中之PD-1拮抗劑之特異性融合蛋白包括AMP-224 (亦稱為B7-DCIg)，其係PD-L2-FC融合蛋白且結合至人類PD-1。
本揭示內容進一步係關於 治療人類患者之癌症之方法，其包含向該患者投與本文所揭示之化合物(即，通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽)及PD-1拮抗劑。本揭示內容之化合物及PD-1拮抗劑可同時或依序投與。
在特定實施例中，PD-1拮抗劑係抗PD-1抗體或其抗原結合片段。在替代實施例中，PD-1拮抗劑係抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，PD-1拮抗劑係派姆單抗(KEYTRUDA™, Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA)、尼沃魯單抗(OPDIVO™, Bristol-Myers Squibb Company, Princeton, NJ, USA)、塞米匹單抗(cemiplimab) (LIBTAYO™, Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY, USA)、阿替珠單抗(atezolizumab) (TECENTRIQ™, Genentech, San Francisco, CA, USA)、德瓦魯單抗(durvalumab) (IMFINZI™, AstraZeneca Pharmaceuticals LP, Wilmington, DE)或阿維魯單抗(avelumab) (BAVENCIO™, Merck KGaA, Darmstadt, Germany)。
在一些實施例中，PD-1拮抗劑係派姆單抗。在特定子實施例中，該方法包含約每三週向患者投與200 mg派姆單抗。在其他子實施例中，該方法包含約每六週向患者投與400 mg派姆單抗。
在其他子實施例中，該方法包含約每三週向患者投與2 mg/kg派姆單抗。在特定子實施例中，患者係兒科患者。
在一些實施例中，PD-1拮抗劑係尼沃魯單抗。在特定子實施例中，該方法包含約每兩週向患者投與240 mg尼沃魯單抗。在其他子實施例中，該方法包含約每四週向患者投與480 mg尼沃魯單抗。
在一些實施例中，PD-1拮抗劑係塞米匹單抗。在特定實施例中，該方法包含約每3週向患者投與350 mg塞米匹單抗。
在一些實施例中，PD-1拮抗劑係阿替珠單抗。在特定子實施例中，該方法包含約每三週向患者投與1200 mg阿替珠單抗。
在一些實施例中，PD-1拮抗劑係德瓦魯單抗。在特定子實施例中，該方法包含約每兩週向患者投與10 mg/kg德瓦魯單抗。
在一些實施例中，PD-1拮抗劑係阿維魯單抗。在特定子實施例中，該方法包含約每兩週向患者投與800 mg阿維魯單抗。
可與通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽組合使用之細胞毒性劑之實例包括(但不限於)三氧化砷(以商標名TRISENOX® 出售)、天冬醯胺酶(亦稱為L-天冬醯胺酶及歐文氏菌屬(Erwinia) L-天冬醯胺酶，以商標名ELSPAR® 及KIDROLASE® 出售)。
可與本文所揭示之通式(I)化合物、通式(II)化合物、通式(III)化合物、通式(IV)化合物、通式(V)化合物、通式(VI)化合物或前述化合物之醫藥上可接受之鹽組合使用之化學治療劑包括乙酸阿比特龍(abiraterone acetate)、六甲蜜胺(altretamine)、脫水長春鹼(anhydrovinblastine)、奧裡斯他汀(auristatin)、貝沙羅汀(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、BMS 184476、2,3,4,5,6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺醯胺、博來黴素(bleomycin)、N,N-二甲基-L-纈胺醯基-L-纈胺醯基-N-甲基-L-纈胺醯基-L-脯胺醯基-1-L脯胺酸-第三丁基醯胺、惡病質素(cachectin)、西馬多汀(cemadotin)、氮芥苯丁酸、環磷醯胺、3’,4’-二去氫-4’去氧-8’-去甲-長春花鹼(3’,4’-didehydro-4’deoxy-8’-norvin-caleukoblastine)、多西紫杉醇(docetaxol)、多西他賽(doxetaxel)、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、順鉑(cisplatin)、念珠藻素(cryptophycin)、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴嗪(dacarbazine，DTIC)、放線菌素D (dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地西他濱(decitabine)、尾海兔素(dolastatin)、多柔比星(doxorubicin) (阿德力黴素(adriamycin))、依託泊苷(etoposide)、5-氟尿嘧啶、非那雄胺(finasteride)、氟他胺(flutamide)、羥基脲及紫杉烷、異環磷醯胺(ifosfamide)、利阿唑(liarozole)、氯尼達明(lonidamine)、洛莫司汀(lomustine，CCNU)、MDV3100、甲基二氯乙基胺(氮芥)、美法侖(melphalan)、羥乙基磺酸米伏布林(mivobulin isethionate)、利索新(rhizoxin)、色替納弗(sertenef)、鏈脲黴素(streptozocin)、絲裂黴素(mitomycin)、胺甲喋呤(methotrexate)、紫杉烷、尼魯米特(nilutamide)、尼沃魯單抗、奧那司酮(onapristone)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、派姆單抗、潑尼莫司汀(prednimustine)、丙卡巴肼(procarbazine)、RPR109881、磷酸雌莫司汀(stramustine phosphate)、他莫昔芬(tamoxifen)、他索那敏(tasonermin)、紫杉醇、維A酸(tretinoin)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、硫酸長春地辛(vindesine sulfate)及長春氟寧(vinflunine)。若適當，則此等化學治療劑可作為醫藥上可接受之鹽提供。
血管內皮生長因子(VEGF)受體抑制劑之實例包括(但不限於)貝伐珠單抗(bevacizumab) (以商標AVASTIN出售)、阿西替尼(axitinib) (闡述於PCT國際專利公開案第WO01/002369號中)、丙胺酸布立尼布(Brivanib Alaninate) (2-胺基丙酸(S)-((R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基氧基)丙烷-2-基)酯，亦稱為BMS-582664)、莫替沙尼(motesanib) (N-(2,3-二氫-3,3-二甲基 -1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)胺基]-3-吡啶甲醯胺且闡述於PCT國際專利申請案公開案第WO02/068470號中)、帕瑞肽(pasireotide) (亦稱為SO 230且闡述於PCT國際專利公開案第WO02/010192號中)及索拉菲尼(sorafenib) (以商標名NEXAVAR出售)。若適當，則此等抑制劑可作為醫藥上可接受之鹽提供。
拓撲異構酶II抑制劑之實例包括(但不限於)依託泊苷(亦稱為VP-16及磷酸依託泊苷(Etoposide phosphate)，以商標名TOPOSAR、VEPESID及ETOPOPHOS出售)及替尼泊苷(teniposide) (亦稱為VM-26，以商標名VUMON出售)。若適當，則此等抑制劑可作為醫藥上可接受之鹽提供。
烷基化劑之實例包括(但不限於) 5-氮胞苷(5-azacytidine) (以商標名VIDAZA出售)、地西他濱(decitabine) (以商標名DECOGEN出售)、替莫唑胺(temozolomide) (以商標名TEMCAD、TEMODAR及TEMODAL出售)、放線菌素D (亦稱為放線菌素-D (actinomycin-D)且以商標名COSMEGEN出售)、美法侖(亦稱為L-PAM、L-溶肉瘤素及苯丙胺酸氮芥，以商標名ALKERAN出售)、六甲蜜胺(亦稱為六甲基三聚氰胺(HMM)，以商標名HEXALEN出售)、卡莫司汀(以商標名BCNU出售)、苯達莫司汀(bendamustine) (以商標名TREANDA出售)、白消安(busulfan) (以商標名BUSULFEX® 及MYLERAN® 出售)、卡鉑(以商標名PARAPLATIN® 出售)、洛莫司汀(亦稱為CCNU，以商標名CEENU® 出售)、順鉑(亦稱為CDDP，以商標名PLATINOL® 及PLATINOL® -AQ出售)、氮芥苯丁酸(以商標名LEUKERAN® 出售)、環磷醯胺(以商標名CYTOXAN® 及NEOSAR® 出售)、達卡巴嗪(亦稱為DTIC、DIC及咪唑甲醯胺，以商標名DTIC-DOME® 出售)、六甲蜜胺(亦稱為六甲基三聚氰胺(HMM)，以商標名HEXALEN® 出售)、異環磷醯胺(以商標名IFEX® 出售)、丙卡巴肼(以商標名MATULANE® 出售)、甲基二氯乙基胺(mechlorethamine) (亦稱為氮芥(nitrogen mustard)、氮芥(mustine)及鹽酸氮芥(mechloroethamine hydrochloride)，以商標名MUSTARGEN® 出售)、鏈脲黴素(以商標名ZANOSAR® 出售)、噻替派(thiotepa) (亦稱為硫代磷醯胺、TESPA及TSPA，且以商標名THIOPLEX® 出售)。若適當，則此等烷基化劑可作為醫藥上可接受之鹽提供。
抗腫瘤抗生素之實例包括(但不限於)多柔比星(以商標名ADRIAMYCIN® 及RUBEX® 出售)、博來黴素(以商標名LENOXANE® 出售)、柔紅黴素(亦稱為鹽酸柔紅黴素(dauorubicin hydrochloride)、道諾黴素及鹽酸紅比黴素(rubidomycin hydrochloride)，以商標名CERUBIDINE® 出售)、柔紅黴素脂質體(檸檬酸柔紅黴素(daunorubicin citrate)脂質體，以商標名DAUNOXOME® 出售)、米托蒽醌(mitoxantrone) (亦稱為DHAD，以商標名NOVANTRONE® 出售)、泛艾黴素(epirubicin) (以商標名ELLENCE™出售)、艾達比星(idarubicin) (以商標名IDAMYCIN® 、IDAMYCIN PFS® 出售)及絲裂黴素C (以商標名MUTAMYCIN® 出售)。若適當，則此等抗腫瘤抗生素可作為醫藥上可接受之鹽提供。
抗代謝劑之實例包括(但不限於)克拉屈濱(cladribine) (2-氯去氧腺苷，以商標名LEUSTATIN® 出售)、5-氟尿嘧啶(以商標名ADRUCIL® 出售)、6-硫鳥嘌呤(以商標名PURINETHOL® 出售)、培美曲塞(pemetrexed) (以商標名ALIMTA® 出售)、阿糖胞苷(亦稱為阿糖胞嘧啶(Ara-C)，以商標名CYTOSAR-U® 出售)、阿糖胞苷脂質體(亦稱為脂質體Ara-C，以商標名DEPOCYT™出售)、地西他濱(以商標名DACOGEN® 出售)、羥基脲(以商標名HYDREA® 、DROXIA™及MYLOCEL™出售)、氟達拉濱(fludarabine) (以商標名FLUDARA® 出售)、氟尿苷(floxuridine) (以商標名FUDR® 出售)、克拉屈濱(亦稱為2-氯去氧腺苷(2-CdA)，以商標名LEUSTATIN™出售)、胺甲蝶呤(亦稱為甲胺蝶呤(amethopterin)、胺甲蝶呤鈉(MTX)，以商標名RHEUMATREX® 及TREXALL™出售)及噴司他丁(pentostatin) (以商標名NIPENT® 出售)。若適當，則此等抗代謝物可作為醫藥上可接受之鹽提供。
類視色素之實例包括(但不限於)阿利維A酸(alitretinoin) (以商標名PANRETIN® 出售)、維A酸(全反視黃酸，亦稱為ATRA，以商標名VESANOID® 出售)、異維甲酸(Isotretinoin) (13-順式-視黃酸，以商標名ACCUTANE® 、AMNESTEEM® 、CLARAVIS® 、CLARUS® 、DECUTAN® 、ISOTANE® 、IZOTECH® 、ORATANE® 、ISOTRET® 及SOTRET® 出售)及貝沙羅汀(bexarotene) (以商標名TARGRETIN® 出售)。若適當，則此等化合物可作為醫藥上可接受之鹽提供。
活性： STING 生物化學 [3H]cGAMP 競爭分析 根據以下將本文實例中所闡述之個別化合物定義為STING促效劑：(i) 結合至STING蛋白，如藉由在STING生物化學[3H]cGAMP競爭分析中在20 uM (所測試化合物之濃度)下氚化cGAMP配體與STING蛋白之結合降低至少20%所證實，及/或(ii) 在THP1細胞分析中在30 uM下展示干擾素產生且誘導6%或更大之IFN-β分泌(其中將30 uM cGAMP引起之誘導設定為100%)。
使用放射性過濾-結合分析，藉由與氚化cGAMP配體競爭人類STING受體膜之能力來量化化合物結合STING之能力。該結合分析採用自過表現內部製備之全長HAQ STING及亦內部純化之氚化cGAMP配體之Hi-Five細胞膜獲得的STING受體。
以下實驗程序詳述本揭示內容之具體實例之製備。該等實例之化合物以其中性形式繪製於下文之程序及表格中。在一些情形下，端視於用於最終純化之方法及/或固有分子性質，將化合物分離為鹽。該等實例僅出於說明性目的且不意欲以任何方式限制本揭示內容之範圍。
實例 縮寫
Figure 108111487-A0304-0001
製備 1 ： 3-( 第三丁氧基 )-3- 側氧基丙酸鎂
Figure 02_image282
Figure 02_image284
在20℃下將乙醇鎂(3.57 g, 31.2 mmol)添加至3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙酸(10.0 g, 62.4 mmol)於THF (100 mL)中之混合物。將反應混合物在Ar下在20℃下攪拌18 h。然後將反應混合物在減壓下濃縮。使殘餘物在減壓下乾燥，以提供3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙酸鎂。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.96 (s, 4H), 1.39 (s, 18H)。
製備 2 ： 3-(2,3- 二甲氧基噻吩并 [2,3-b ] 吡嗪 -6- 基 )-3- 側氧基丙酸第三丁基酯
Figure 02_image286
步驟 1 ： 3- 溴 -5,6- 二甲氧基吡嗪 -2- 甲醛
Figure 02_image288
在-78℃下向2,2,6,6-四甲基六氫吡啶(5.12 mL, 30.1 mmol)於THF (40 mL)中之溶液逐滴添加n- BuLi溶液(2.5 M於Hex中，11.5 mL, 28.8 mmol)。將反應混合物在-78℃下攪拌10 min，且然後升溫至0℃並攪拌20 min。然後將反應混合物冷卻回至-78℃，且經5 min添加5-溴-2,3-二甲氧基吡嗪(3.00 g, 13.7 mmol)於THF (10 mL)中之溶液。將反應混合物在-78℃下攪拌1 h，且然後利用DMF (1.06 mL, 13.7 mmol)淬滅。使反應混合物升溫至0℃且再攪拌20 min。在0℃下添加AcOH (3.0 mL)，且使反應混合物升溫至室溫並攪拌過夜。用EtOAc (300 mL)稀釋該混合物，且然後用H2 O (2×150 mL)及飽和NaCl水溶液洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之EtOAc進行溶析)純化殘餘物，以提供3-溴-5,6-二甲氧基吡嗪-2-甲醛。LCMS (C7 H8 BrN2 O3 ) (ES, m/z): 247, 249 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 10.19 (s, 1H), 4.17 (s, 3H), 4.14 (s, 3H)。
步驟 2 ： 2,3- 二甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡嗪 -6- 甲酸第三丁基酯
Figure 02_image290
在室溫下將2-硫基乙酸第三丁基酯(424 µL, 2.92 mmol)及DMF (2.9 mL)添加至3-溴-5,6-二甲氧基吡嗪-2-甲醛(650 mg, 2.63 mmol)。然後在室溫下將K2 CO3 (1090 mg, 7.89 mmol)逐份添加至反應混合物。將反應混合物加熱至80℃並攪拌過夜。然後使反應混合物冷卻至室溫，用Et2 O稀釋，且用H2 O淬滅。用Et2 O萃取反應混合物，且將合併之有機層用飽和NaCl水溶液洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之EtOAc進行溶析)純化殘餘物，產生2,3-二甲氧基噻吩并[2,3-b ]吡嗪-6-甲酸第三丁基酯。LCMS (C13 H17 N2 O4 S) (ES, m/z): 297 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.89 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 1.55 (s, 9H)。
步驟 3 ： 2,3- 二甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡嗪 -6- 甲酸
Figure 02_image292
在室溫下向2,3-二甲氧基噻吩并[2,3-b ]吡嗪-6-甲酸第三丁基酯(400 mg, 1.35 mmol)於DCM (6.0 mL)中之攪拌溶液添加HCl (4.0 M於二噁烷中，1.7 mL，6.8 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，且然後藉由逐滴添加Hex (50 mL)進行稀釋並在室溫下攪拌1 h。將反應混合物過濾，且將所收集之材料用Hex (2×10 mL)洗滌並在減壓下乾燥，以提供2,3-二甲氧基噻吩并[2,3-b ]吡嗪-6-甲酸。LCMS (C9 H9 N2 O4 S) (ES, m/z): 241 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.71 (br s, 1H), 7.90 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.99 (s, 3H)。
步驟 4 ： 3-(2,3- 二甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡嗪 -6- 基 )-3- 側氧基丙酸第三丁基酯
Figure 02_image294
將2,3-二甲氧基噻吩并[2,3-b ]吡嗪-6-甲酸(80 mg, 0.33 mmol)及CDI (324 mg, 2.00 mmol)於THF (5.5 mL)中之混合物在室溫下攪拌3 h。將雙(3-第三丁氧基-3-側氧基丙酸鎂) (628 mg, 1.83 mmol)添加至該混合物，且將所得混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之(於EtOAc中之25% EtOH)進行溶析)純化殘餘物，以提供3-(2,3-二甲氧基噻吩并[2,3-b ]吡嗪-6-基)-3-側氧基丙酸第三丁基酯。LCMS (C15 H19 N2 O5 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 4.13 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 1.41 (s, 9H)。
製備 3 ： 5,6- 二甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 甲酸
Figure 02_image296
步驟 1 ： 5,6- 二甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 甲酸第三丁基酯
Figure 02_image298
在室溫下將K2 CO3 (1180 mg, 8.56 mmol)添加至3-氯-5,6-二甲氧基吡啶甲醛(575 mg, 2.86 mmol)及2-硫基乙酸第三丁基酯(0.456 mL, 3.14 mmol)於DMF (8.3 mL)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至60℃持續3天。使反應混合物冷卻至室溫，且然後用Et2 O及H2 O稀釋。將有機層分離，用飽和NaCl水溶液洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之EtOAc進行溶析)純化殘餘物，以提供5,6-二甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6) δ 7.95 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 1.54 (s, 9H)。
步驟 2 ： 5,6- 二甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 甲酸
Figure 02_image300
在室溫下將HCl (4.0 M於H2 O中，2.1 mL，8.4 mmol)添加至5,6-二甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯(493 mg, 1.67 mmol)於DCM (7.4 mL)中之溶液。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，且然後藉由逐滴添加Hex (50 mL)進行稀釋。將混合物攪拌1 h，且然後過濾。將所收集之材料用Hex (2×10 mL)洗滌，且然後在減壓下乾燥，以提供5,6-二甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸。LCMS (C10 H10 NO4 S) (ES, m/z): 240 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 3H)。
製備 4 ： 3-(5,6- 二甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-3- 側氧基丙酸第三丁基酯
Figure 02_image302
將CDI (508 mg, 3.13 mmol)添加至5,6-二甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(500 mg, 2.09 mmol)於THF (5 mL)中之混合物。將反應混合物在室溫下攪拌3 h。將反應混合物添加至含有3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙酸鎂(1220 mg, 3.55 mmol)之單獨燒瓶。用額外之THF (4 mL)稀釋該反應混合物且在室溫下攪拌過夜。然後將反應混合物加熱至50℃持續1 h。使反應混合物冷卻至室溫並用H2 O (20 mL)稀釋。添加檸檬酸三鈉二水合物(2 g)及EtOAc (50 mL)。將有機層分離，且用EtOAc萃取水層。將有機層合併，用飽和NaCl水溶液洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。經由矽膠層析(於Hex中之EtOAc進行溶析)純化殘餘物，以提供 3-(5,6-二甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-3-側氧基丙酸第三丁基酯。LCMS (C16 H20 NO5 S) (ES, m/z): 338 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.97 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 3.92 (s, 2H), 1.48 (s, 9H)。
製備 5 ： C-Phos Pd G4
Figure 02_image304
Figure 02_image306
將(2’-甲基胺基-1,1’-聯苯-2-基)甲烷磺酸根基鈀(II)二聚體(439 mg, 0.573 mmol)及2’-(二環己基膦基)-N 2,N 2,N 6,N 6-四甲基-[1,1’-聯苯]-2,6-二胺(500 mg, 1.15 mmol)於DCM (6 mL)中之混合物在室溫下攪拌2h。然後將溶液用Et2 O (30 mL)稀釋。將溶液過濾且在減壓下濃縮。然後使殘餘物於戊烷中漿化且再次在減壓下濃縮，以提供C-Phos Pd G4。參見 Bruno, N. C.; Niljianskul, N.; Buchwald, S. L.J. Org. Chem. 2014 ,79 , 4161。
中間體 1 ： (S)-4-(5- 氯 -6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image308
步驟 1 ： 5- 氯 -6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 甲醯氯
Figure 02_image310
在N2 下在0℃下將POCl3 (1.17 mL, 12.5 mmol)逐滴添加至5,6-二甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(1.00 g, 4.1 mmol)於DMF (10.45 ml)中之攪拌混合物。10 min後，使反應混合物升溫至室溫。然後將反應混合物加熱至100℃並攪拌45 min。向反應混合物添加冰水(100 mL)並攪拌。將混合物過濾，且將所收集之材料用水(2×30 mL)及Hex (50 mL)洗滌。將所收集之材料用Et2 O (50 mL)稀釋並過濾。將所收集之材料溶解於CH2 Cl2 (60 mL)中，且使混合物經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲醯氯。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.06 (s, 3H)。
步驟 2 ： (S)-4-(5- 氯 -6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image312
將CuI (0.073 g, 0.38 mmol)置於真空下且利用熱槍加熱1 min。使燒瓶冷卻至室溫，且然後向N2 開放。再將燒瓶抽真空兩次，然後用N2 回填。利用所附接之橡膠隔片及N2 入口使燒瓶保持在N2 正壓下。將THF (2 mL)添加至燒瓶，且使反應混合物於冰水浴中冷卻。將(R )-(3-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II)於THF中之溶液(0.50 M, 1.68 mL, 0.84 mmol)經5 min之時期逐滴添加至反應混合物。將反應混合物在0℃下攪拌105 min。然後經5 min逐滴添加5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲醯氯(0.200 g, 0.763 mmol)於NMP (3 mL)中之混合物。然後將反應混合物在0℃下攪拌3 h。然後將該反應混合物添加至乙酸異丙酯(50 mL)及檸檬酸鈉(20% w/v於水中，50 mL)之攪拌混合物。攪拌20 min後，分離各層，且將水層用乙酸異丙酯(30 mL)萃取。將有機層合併，用飽和NaCl水溶液(2×50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之EtOAc進行溶析)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H15 ClNO4 S) (ES, m/z): 328 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.99 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.51 (dd,J =17.2, 7.9Hz, 1H), 3.21-3.12 (m, 1H), 3.06 (dd,J =17.2, 5.2Hz, 1H), 1.32 (d,J =7.1Hz, 3H)。
中間體 2 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image314
步驟 1 ： 4-(5-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image316
將4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(1.75 g, 4.38 mmol；81%純)及C-Phos Pd G3 (0.177 g, 0.219 mmol)添加至具有含隔片螺旋蓋之40 mL小瓶。將小瓶抽真空且用N2 回填三次。將THF (15.7 mL)在N2 下添加至小瓶並攪拌。當在室溫下攪拌所得懸浮液時，在攪拌下逐滴添加(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，17.5 mL，8.75 mmol)。將混合物在室溫下攪拌18 h。然後將反應在EtOAc (75 mL)與10%檸檬酸鈉水溶液(75 mL)之間分配，且劇烈攪拌5 min。分離各層，且將水層用EtOAc (20 mL)萃取。將有機層合併，用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→40% EtOAc梯度)純化殘餘物，以提供4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C26 H40 NaO5 SSi) (ES, m/z): 515 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.89 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.67 (t,J =6.3Hz, 2H), 3.28 (t,J =6.8Hz, 2H), 2.76 (t,J =7.2Hz, 2H), 2.72 (t,J =7.2Hz, 2H), 1.85 (p,J =6.5Hz, 2H), 1.46 (s, 9H), 0.94 (s, 9H), 0.08 (s, 6H)。
步驟 2 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image318
向4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩 -2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(1.45 g, 2.94 mmol)於MeOH (5.0 mL)中之混合物添加水(5.0 mL)及HOAc (5.0 mL)。將所得懸浮液在室溫下攪拌18 h。將反應在EtOAc與NaCl水溶液之間分配。分離各層，且將水層用EtOAc萃取。將有機層合併，用飽和NaCl水溶液洗滌兩次，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供粗製殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C20 H26 NaO5 S) (ES, m/z): 401 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.89 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.68 (t,J =5.5Hz, 2H), 3.28 (t,J =6.6Hz, 2H), 2.82 (t,J =7.3Hz, 2H), 2.72 (t,J =6.6Hz, 2H), 1.96-1.83 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 3 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image320
將三苯基膦(0.24 g, 0.91 mmol)添加至4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(0.22 g, 0.57 mmol)於THF (2.8 mL)中之混合物。使所得混合物冷卻至0℃，且一次性添加NBS (0.15 g, 0.85 mmol)。在0℃下攪拌30 min後，將反應用飽和AlCl3 水溶液及EtOAc稀釋。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。然後藉由矽膠層析純化所得產物，以提供4-(5-(3-溴丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C16 H18 BrO4 S) (ES, m/z): 385, 387 [M-C4 H8 ]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.27 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.60-3.49 (m, 2H), 3.30-3.21 (m, 2H), 2.88-2.75 (m, 2H), 2.67-2.56 (m, 2H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.38 (s, 9H)。
中間體 4 ： 4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁腈
Figure 02_image322
步驟 1 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸甲基酯
Figure 02_image324
將濃H2 SO4 (3.0 mL, 56 mmol)添加至5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(5.0 g, 17 mmol)於MeOH (60 mL)中之懸浮液。將反應混合物加熱至70℃持續4.5天。然後使混合物冷卻至室溫並用水稀釋。向該混合物添加於CHCl3 中之30% IPA。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 3H)。
步驟 2 ： (5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 ) 甲醇
Figure 02_image326
在0℃下將LAH (1.0 M於THF中，2.8 mL，2.8 mmol)緩慢添加至5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯(0.78 g, 2.3 mmol)於THF (9.0 mL)中之混合物。40 min後，用飽和AlCl3 水溶液稀釋反應混合物。添加EtOAc，且將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析純化所得材料，以提供(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)甲醇。LCMS (C10 H8 BrOS) (ES, m/z): 255, 257 [M-OH]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.01 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.69-5.59 (m, 1H), 4.73-4.64 (m, 2H), 3.89 (s, 3H)。
步驟 3 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醛
Figure 02_image328
將二氧化錳(6.3 g, 73 mmol)添加至(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)甲醇(4.0 g, 15 mmol)於DCM (97 mL)中之混合物。將反應混合物在室溫下攪拌20 h，然後經由矽藻土塞過濾。將濾液在減壓下濃縮。將所得產物於MeOH中研磨，且使混合物穿過玻璃釉料以收集5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醛。LCMS (C10 H8 BrO2 S) (ES, m/z): 271, 273 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.07 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 3.97 (s, 3H)。
步驟 4 ： 4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁腈
Figure 02_image330
將ACN (0.15 mL, 2.2 mmol)添加至5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醛(0.30 g, 1.1 mmol)、氯化2-均三甲苯基-2,5,6,7-四氫-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-4-鎓鹽(0.029 g, 0.11 mmol)及K3 PO4 (0.24 g, 1.1 mmol)於甲苯(2.2 mL)中之懸浮液。將反應混合物置於Ar下，且在室溫下攪拌18 h。然後將反應混合物在減壓下濃縮，且藉由矽膠層析純化所得殘餘物，以提供4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁腈。LCMS (C13 H11 BrNO2 S) (ES, m/z): 324, 326 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.33-8.22 (m, 2H), 7.84 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.59-3.44 (m, 2H), 2.88-2.73 (m, 2H)。
中間體 5 ： 4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image332
步驟 1 ： 5- 溴 -2- 氟 -4- 甲氧基苯甲醛
Figure 02_image334
在0℃下將2-氟-4-甲氧基苯甲醛(9.0 g, 58 mmol)緩慢(逐份)添加至Br2 (6.0 mL, 120 mmol)於MeOH (40 mL)中之溶液。將反應混合物在0℃下攪拌2 h。在0℃下將NaHSO3 (24.3 g, 234 mmol)於H2 O (300 mL)中之溶液緩慢添加至反應混合物。然後將所得懸浮液在0℃下攪拌30 min。將反應混合物過濾，且將濾液用額外之H2 O (3×25 mL)洗滌。然後將濾液在減壓下乾燥，以提供5-溴-2-氟-4-甲氧基苯甲醛。產物不經純化即使用。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 10.02 (s, 1H), 7.98 (d,J =7.5Hz, 1H), 7.26 (d,J =13.0Hz, 1H), 3.97 (s, 3H)。
步驟 2 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸第三丁基酯
Figure 02_image336
在Ar下在20℃下將K2 CO3 (19.0 g, 137 mmol)緩慢(逐份)添加至5-溴-2-氟-4-甲氧基苯甲醛(10.7 g, 45.8 mmol)及2-巰基乙酸第三丁基酯(6.65 mL, 45.8 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液。攪拌反應混合物並加熱至100℃持續16 h。然後使反應混合物冷卻至室溫並用Et2 O (1000 mL)稀釋。然後用H2 O (500 mL，然後2×250 mL)洗滌該混合物，且用Et2 O (2×200 mL)萃取合併之水層。然後將有機層合併，並用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸第三丁基酯。產物不經純化即使用。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 8.26 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 1.55 (s, 9H)。
步驟 3 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸
Figure 02_image338
在20℃下將HCl (56 mL，4.0 M於1,4-二噁烷中，230 mmol)添加至5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸第三丁基酯(15.5 g, 45.0 mmol)於DCM (200 mL)中之溶液。將反應混合物在20℃下攪拌3天。然後藉由逐滴添加Hex (500 mL)稀釋反應混合物。添加後將所得懸浮液在室溫下再攪拌2 h。將反應混合物過濾，且將所收集之材料用Hex (2×50 mL)洗滌並在減壓下乾燥，以提供5-溴-6-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸，其不經純化即使用。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 13.42 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 3.93 (s, 3H)。
步驟 4 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醯氯
Figure 02_image340
在Ar下在0℃下將DMF (0.049 mL, 0.63 mmol)緩慢(逐滴)添加至5-溴-6-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸( 6.0 g, 21 mmol)及(COCl)2 (5.5 mL, 63 mmol)於THF (100 mL)中之溶液。將反應混合物在0℃下攪拌2 h，且然後使其升溫至室溫。將反應混合物在室溫下攪拌18 h。然後將反應混合物在減壓下濃縮，以提供5-溴-6-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲醯氯。產物不經純化即使用。
步驟 5 ： 4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image342
在Ar下在0℃下將(3-乙氧基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II)溶液(13.8 mL，0.50 M於THF中，6.9 mmol)添加至經烘箱乾燥之含有((噻吩-2-羰基)氧基)銅(1.31 g, 6.87 mmol)之燒瓶。將反應混合物在Ar下在0℃下攪拌20 min。然後在0℃下經由套管將5-溴-6-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲醯氯(1.52 g, 4.98 mmol)於THF (25.0 mL)中之經Ar脫氣之溶液添加至反應混合物；使所得懸浮液升溫至室溫並攪拌3 h。將反應混合物冷卻至0℃並用飽和NH4 Cl水溶液(50 mL)淬滅。使混合物升溫至室溫並攪拌10 min。將混合物過濾，且將濾液用EtOAc (500 mL)及飽和NaCl水溶液(50 mL)稀釋。將有機層分離，用飽和NaCl水溶液(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於DCM中之EtOAc)純化殘餘物，以提供4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯。LCMS (C15 H16 BrO4 S) (ES, m/z): 371, 373 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 8.27 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 4.07-4.02 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.35-3.25 (m, 2H), 2.68-2.64 (m, 2H), 1.20-1.14 (m, 3H)。
中間體 6 ： 4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image344
中間體6可根據與針對上文中間體5所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自市售來源獲得之適當起始材料來製備。
中間體 7 ： 4-(6- 甲氧基 -5-(3-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼雜環戊烷 -2- 基 ) 丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image346
步驟 1 ： 4-(5- 烯丙基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image348
向含有4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(5.0 g, 13 mmol)、Pd(Ph3 P)4 (1.6 g, 1.3 mmol)及二噁烷(15 mL)之小瓶添加烯丙基三-正丁基錫(5.4 mL, 18 mmol)。將反應加熱至90℃持續18 h。在冷卻至室溫後，用DCM稀釋混合物，經由矽藻土過濾且添加至含有KF水溶液(0.5 M, 200 mL)之燒瓶。攪拌混合物，且然後將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之0→30% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-烯丙基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯。LCMS (C18 H21 O4 S) (ES, m/z): 333 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.23 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 5.96 (dq,J =15.9, 6.6Hz, 1H), 5.04 (d,J =4.5Hz, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.01 (q,J =7.0Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.37 (d,J =6.3Hz, 2H), 3.27 (dd,J =11.0, 4.3Hz, 2H), 2.62 (t,J =6.1Hz, 2H), 1.13 (t,J =7.1Hz, 3H)。
步驟 2 ： 4-(6- 甲氧基 -5-(3-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼雜環戊烷 -2- 基 ) 丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image350
向1,4-雙(二苯基膦基)丁烷(0.45 g, 1.1 mmol)、氯(1,5-環辛二烯)銥(i)二聚體(0.35 g, 0.53 mmol)、4-(5-烯丙基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基) -4-側氧基丁酸乙基酯(3.5 g, 11 mmol)及THF (20 mL)之混合物添加頻哪醇硼烷(1.0 M於THF中，15.8 mL，15.8 mmol)。將反應在室溫下攪拌4 h。然後將溶劑在減壓下去除，且藉由矽膠管柱層析(於Hex中之0→20% EtOAc梯度)純化殘餘物，以提供4-(6-甲氧基-5-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.02 (q,J =7.0Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.27 (t,J =6.2Hz, 2H), 2.62 (t,J =6.1Hz, 2H), 2.58 (t, J=7.4Hz, 2H), 1.58 (p,J =7.4Hz, 2H), 1.16-1.11 (m, 15H), 0.67 (t,J =7.6Hz, 2H)。
中間體 8 ： 4-(6-(3- 溴丙基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image352
步驟 1 ： 6- 溴 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸甲基酯
Figure 02_image354
向4-溴-2-氟-5-甲氧基苯甲醛(5.00 g, 21.5 mmol)於DMF (100 mL)中之攪拌溶液添加2-巰基乙酸甲基酯(2.51 g, 23.6 mmol)及K2 CO3 (8.90 g, 64.4 mmol)。將反應混合物用N2 脫氣3次。然後將所得混合物在室溫下攪拌15 h。將EtOAc (500 mL)及H2 O (1200 mL)添加至反應混合物。將有機層分離，且用飽和NaCl水溶液(2×200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於PE中之EtOAc)純化殘餘物，以得到6-溴-5-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸甲基酯。LCMS (C11 H10 BrO3 S) (ES, m/z): 301, 303 [M+H]+ 。1 H NMR (400MHz, CDCl3 ):δ =8.01 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.94 (s, 3H)。
步驟 2 ： 6- 溴 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸
Figure 02_image356
向6-溴-5-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸甲基酯(1.45 g, 4.81 mmol)於MeOH (20 mL)、THF (20 mL)及H2 O (20 mL)中之懸浮液添加NaOH (1.93 g, 48.1 mmol)。將所得懸浮液加熱至50℃持續0.5 h。將反應混合物在減壓下濃縮以去除溶劑。將H2 O (200 mL)添加至殘餘物，且添加檸檬酸以將溶液調整至pH=6。用EtOAc (3×50 mL)萃取剩餘水性懸浮液。將合併之有機層用飽和NaCl水溶液(100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以得到6-溴-5-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸，其不經進一步純化即使用。1 H NMR (400MHz, DMSO-d6 ):δ =13.52 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 3.90 (s, 3H)。
步驟 3 ： 6- 溴 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醯氯
Figure 02_image358
在0℃下向6-溴-5-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸(800 mg, 2.79 mmol)於無水THF (6 mL)中之攪拌溶液逐滴添加(COCl)2 (1.06 g, 8.36 mmol)。然後將混合物在75℃下加熱15 h，且然後冷卻至室溫。將溶劑在減壓下去除，以得到粗製6-溴-5-甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲醯氯，其不經進一步純化即使用。
步驟 4 ： 4-(6- 溴 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image360
向圓底燒瓶添加CuI (0.24 g, 2.4 mmol)。將燒瓶抽真空，且然後向N2 開放。將此重複三次。添加THF (4.0 mL)，且使混合物冷卻至0℃。在0℃下經10 min逐滴添加(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)溴化鋅(II)之混合物(0.50 M於THF中，9.6 mL，4.8 mmol)。將所得混合物攪拌30 min。添加6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醯氯(0.73 g, 2.4 mmol)。將混合物自冰浴移除且使其升溫至室溫。將混合物攪拌2 h。然後使該混合物冷卻至0℃，且添加濃NH4 OH (4.5 mL)。向所得懸浮液添加水(240 mL)及MeOH (60 mL)。將混合物攪拌5 min且於浴音波發生器中進行音波處理。然後用EtOAc稀釋混合物，且將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析純化粗產物殘餘物，以提供4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C17 H19 BrO4 S) (ES, m/z): 421, 423 [M+Na]+ 。
步驟 5 ： 4-(6-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image362
向含有4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(0.16 g, 0.40 mmol)及THF (2.0 mL)之燒瓶添加甲烷磺酸[(2-二環己基膦基-2′,6′-雙(N,N -二甲基胺基)-1,1′-聯苯)-2-(2′-胺基-1,1′-聯苯)]鈀(II) (C-Phos Pd G3, 16 mg, 0.020 mmol)。將燒瓶抽真空且用N2 回填3次。添加(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，2.4 mL，1.2 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌2.5 h。然後將該混合物用EtOAc及10%檸檬酸鈉水溶液之混合物淬滅。將有機層分離，用飽和NaCl水溶液洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析純化粗製殘餘物，以提供4-(6-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C26 H41 O5 SSi-C4 H8 ) (ES, m/z): 437 [M-C4 H8 ]+ 。
步驟 6 ： 4-(6-(3- 羥基丙基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image364
向含有4-(6-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(0.11 g, 0.23 mmol)之燒瓶添加MeOH (1.5 mL)、水(1.5 mL)及HOAc (1.5 mL)。將混合物攪拌4 h。用EtOAc稀釋該混合物，且然後用水(3×50 mL)洗滌。使有機層經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化粗製殘餘物，以提供4-(6-(3-羥基丙基)-5-甲氧基-苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C20 H27 O5 S-C4 H8 ) (ES, m/z): 323 [M-C4 H8 ]+ 。
步驟 7 ： 4-(6-(3- 溴丙基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image366
在0℃下向4-(6-(3-羥基丙基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(74 mg, 0.20 mmol)及三苯基膦(82 mg, 0.31 mmol)於THF (1.0 mL)中之混合物添加NBS (52 mg, 0.29 mmol)。在0℃下15 min後，將混合物用飽和NH4 Cl水溶液淬滅並用EtOAc稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化粗製殘餘物，以提供4-(6-(3-溴丙基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C20 H26 BrO4 S-C4 H8 ) (ES, m/z): 385, 387 [M-C4 H8 ]。
中間體 9 ： 4-(4- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image368
步驟 1 ： 2- 溴 -6- 氟 -4- 甲氧基苯甲醛
Figure 02_image370
在-78℃下向1-溴-3-氟-5-甲氧基苯(7.5 g, 37 mmol)於THF (120 mL)中之混合物添加LDA (2.0 M於THF中，22 mL，44 mmol)，且將混合物在-78℃下攪拌30 min。30 min後，逐滴添加DMF (3.4 mL, 44 mmol)，且然後將混合物攪拌30 min。然後用水淬滅該混合物，升溫至室溫，且然後添加EtOAc。分離各層，且將水層用EtOAc再萃取兩次。使合併之有機層經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析純化粗產物殘餘物，以提供2-溴-6-氟-4-甲氧基苯甲醛。LCMS (C8 H7 BrFO2 ) (ES, m/z): 233, 235 [M+H]+ 。
步驟 2 ： 4- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸甲基酯
Figure 02_image372
向2-溴-6-氟-4-甲氧基苯甲醛(2.5 g, 11 mmol)於DMSO (54 mL)中之混合物添加TEA (3.0 mL, 21 mmol)。10 min後，添加巰基乙酸甲酯(3.1 mL, 32 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌30 min。30 min後，將混合物加熱至60℃持續1 h。在冷卻至室溫後，用飽和NaHCO3 水溶液及EtOAc稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→15% EtOAc梯度)純化粗產物殘餘物，以提供4-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯。LCMS (C11 H10 BrO3 S) (ES, m/z): 301, 303 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.93 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.44-7.37 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.87 (s, 3H)。
步驟 3 ： 4- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸
Figure 02_image374
向4-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯(1.7 g, 5.5 mmol)於THF (14 mL)、MeOH (7.0 mL)及水(7.0 mL)中之混合物添加LiOH (0.66 g, 28 mmol)，且將混合物加熱至40℃持續2 h。2 h後，使該混合物冷卻至室溫。用HCl水溶液(2.0 M於水中，14 mL，28 mmol)使該混合物淬滅。過濾該混合物，且將殘餘物用EtOAc洗滌。然後將殘餘物在真空下乾燥，且不經進一步純化即使用。LCMS (C10 H8 BrO3 S) (ES, m/z): 287, 289 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.57 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.38 (d,J =1.7Hz, 1H), 3.86 (s, 3H)。
中間體 10 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image376
步驟 1 ： 4-(6- 甲氧基 -5-(3-(( 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 氧基 ) 丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image378
向4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(13 g, 35 mmol)及C-Phos Pd G4 (1.4 g, 1.7 mmol)之混合物一次性添加(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，100 mL，50 mmol)。將反應加熱至40℃持續2 h。然後使混合物冷卻至室溫且經由矽藻土過濾。將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之0→30% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯。LCMS (C23 H31 O6 S) (ES, m/z): 435 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.02 (q,J =7.0Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.70 (t,J =8.1Hz, 1H), 3.65-3.58 (m, 1H), 3.40-3.34 (m, 1H), 3.33-3.29 (m, 3H), 2.73-2.59 (m, 4H), 1.79 (p,J =6.7Hz, 2H), 1.69 (d,J =8.7Hz, 1H), 1.58 (t,J =7.9Hz, 1H), 1.48-1.34 (m, 4H), 1.14 (t,J =7.1Hz, 3H)。
步驟 2 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image380
在0℃下向4-(6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(6.2 g, 14 mmol)及DCM (100 mL)之混合物逐份添加二溴化三苯基膦(9.03 g, 21.4 mmol)。使混合物升溫至室溫，且然後攪拌1 h。然後用水使該混合物淬滅並用DCM稀釋。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之0→30% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-(3-溴丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯LCMS (C18 H22 BrO4 S) (ES, m/z): 413, 415 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.23 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.02 (q,J =7.0Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.50 (t,J =6.5Hz, 2H), 3.27 (d,J =6.4Hz, 2H), 2.75 (t,J =7.3Hz, 2H), 2.63 (t,J =6.2Hz, 2H), 2.07 (p,J =6.7Hz, 2H), 1.14 (t,J =7.1Hz, 3H)。
中間體 11 ： 4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image382
步驟 1 ： 4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸甲基酯
Figure 02_image384
在室溫下將1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮陽離子二環[2.2.2]辛烷雙(四氟硼酸鹽) (SELECTFLUOR™, 77 mg, 0.22 mmol)添加至5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸甲基酯(50 mg, 0.20 mmol)於ACN (1 ml)中之混合物。將所得混合物在45℃下攪拌15 h。將混合物冷卻至室溫，用飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)稀釋，且用EtOAc (3×10 mL)萃取。將合併之有機層用飽和NaCl水溶液(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由製備型TLC (SiO2 ，於PE中之EtOAc)純化殘餘物，以得到4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸甲基酯。LCMS (C12 H12 FO4 S) (ES, m/z): 293 [M+H]+ 。1 H NMR (400MHz, CDCl3 ): δ 8.05 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.94 (s, 3H)。
步驟 2 ： 4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸
Figure 02_image386
在室溫下將LiOH·H2 O (71.4 mg, 1.70 mmol)逐份添加至4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸甲基酯(46 mg, 0.170 mmol)於THF (3 ml)、MeOH (1 ml)及H2 O (1 ml)中之混合物。然後，將混合物攪拌15 h。利用1 N HCl將混合物調整至pH=5，且用EtOAc (3×10 ml)萃取。將合併之有機層用飽和NaCl水溶液(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由製備型HPLC (ACN/含有0.1% TFA之H2 O)純化殘餘物，以得到4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸。LCMS (C11 H9 FO4 S) (ES, m/z): 257 [M+H]+ 。1 H NMR (400MHz, CDCl3 ): δ 8.12 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H)。
步驟 3 ： 4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醯氯
Figure 02_image388
在0℃下向4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸(153 mg, 0.60 mmol)於無水THF (5 mL)中之攪拌溶液逐滴添加(COCl)2 (0.21 mL, 2.40 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1 h，且然後在室溫下攪拌1 h。將溶劑在減壓下去除，以得到4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲醯氯，其不經進一步純化即使用。
步驟 4 ： 4-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image390
將噻吩-2-甲酸銅(I)之懸浮液(125 mg, 0.65 mmol)用N2 吹掃5 min，且然後冷卻至0℃。在N2 下在0℃下添加(3-乙氧基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II)之溶液(17.7 mL，0.5 M於THF中，8.83 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌20 min。然後在0℃下添加4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲醯氯(130 mg, 0.47 mmol)於THF (3 mL)中之經N2 脫氣之溶液。使所得懸浮液升溫至室溫並攪拌8 h。將混合物在攪拌下傾倒至飽和NH4 Cl水溶液(20 mL)中。用EtOAc (2×20 mL)萃取該混合物。將合併之有機層用H2 O及飽和NaCl水溶液洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之EtOAc)純化殘餘物，以得到4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯。LCMS (C16 H18 FO5 S) (ES, m/z): 341 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.02 (d,J =0.7Hz, 1H), 7.10 (t,J =1.0Hz, 1H), 4.19 (q,J =7.2Hz, 2H), 4.05-3.97 (m, 6H), 3.36 (t,J =6.7Hz, 2H), 2.81 (t,J =6.7Hz, 2H), 1.29 (t,J =7.2Hz, 3H)。
步驟 5 ： 4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image392
向4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(3.6 g, 11 mmol)及DCM (50 mL)之混合物添加AlCl3 (5.64 g, 42.3 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18 h。然後將加料漏斗連接至反應容器，且將水(50 mL)在劇烈攪拌下緩慢添加至混合物，之後添加HCl水溶液(1 N, 50 mL)。然後將混合物用20% IPA/DCM稀釋。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(100% DCM)純化所得殘餘物，以提供4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸酯。LCMS (C15 H16 FO5 S) (ES, m/z): 327 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 4.06 (q,J =7.1Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.39-3.34 (m, 2H), 2.68-2.63 (m, 2H), 1.18 (t,J =7.1Hz, 3H)。
中間體 12 ： (S)-4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image394
步驟 1 ： (2S)- 甲基 -4-(6- 甲氧基 -5-(3-(( 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 氧基 ) 丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸酯
Figure 02_image396
向(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(7.0 g, 19 mmol)及C-Phos Pd G4 (0.76 g, 0.94 mmol)之混合物添加(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，100 mL，50 mmol)。將混合物加熱至40℃持續2 h。然後使該混合物冷卻至室溫且經由矽藻土過濾。將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之0→30% EtOAc梯度)純化殘餘物，以提供(2S)-甲基-4-(6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸酯。LCMS (C23 H31 O6 S) (ES, m/z): 435 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.70 (dd,J =13.2, 5.3Hz, 1H), 3.64-3.58 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.42-3.35 (m, 2H), 3.35-3.29 (m, 1H), 3.15 (dd,J =17.4, 4.9Hz, 1H), 2.94 (dt,J =12.9, 7.1Hz, 1H), 2.67 (hept,J =7.6, 7.1Hz, 2H), 1.79 (p,J = 6.7Hz, 2H), 1.69 (d,J =8.7Hz, 1H), 1.58 (t,J =7.9Hz, 1H), 1.48-1.35 (m, 4H), 1.18-1.11 (m, 3H)。
步驟 2 ： (S)-4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image398
向(2S)-甲基-4-(6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸酯(2.62 g, 6.03 mmol)及MeOH (50 mL)之混合物添加pTsOH (1.72 g, 9.04 mmol)。使混合物在室溫下攪拌1 h。然後用水使該混合物淬滅，且用DCM稀釋。將有機層分離，且然後用飽和NaHCO3 水溶液洗滌。然後使有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，提供(S)-4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H23 O5 S) (ES, m/z): 351 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 4.44 (t,J =5.0Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.42-3.35 (m, 3H), 3.15 (dd,J =17.4, 4.9Hz, 1H), 2.93 (h,J =7.0Hz, 1H), 2.64 (t,J =7.6Hz, 2H), 1.68 (p,J =6.6Hz, 2H), 1.15 (d,J =7.1Hz, 3H)。
中間體 13 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image400
步驟 1 ： 5- 溴 -6- 甲基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸甲基酯
Figure 02_image402
向5-溴-2-氟-4-甲基苯甲醛(5.0 g, 23 mmol)於DMSO (120 mL)中之混合物添加TEA (6.4 mL, 46 mmol)。10 min後，添加巰基乙酸甲酯(6.7 mL, 69 mmol)，且然後將混合物加熱至60℃持續18 h。18 h後，使該混合物冷卻至室溫，且用EtOAc及水稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將混合物用DCM稀釋。過濾混合物，且將殘餘物在真空下乾燥。向母液添加矽膠(50 g)，且將混合物濃縮。然後藉由矽膠層析純化該混合物，以提供5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.31 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.48 (s, 3H)。
步驟 2 ： 5- 溴 -6- 甲基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸
Figure 02_image404
向5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯(2.76 g, 9.68 mmol)於THF (24 ml)、水(12 ml)及MeOH (12 ml)中之混合物添加LiOH (1.16 g, 48.4 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌30 min。然後利用HCl (1.0 M於水中，48 ml，48 mmol)將混合物酸化至接近中性。然後用EtOAc及水稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並濃縮，以提供5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩-2-甲酸。產物不經純化即使用。LCMS (C10 H8 BrO2 S) (ES, m/z): 271, 273 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.56 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 2.47 (s, 3H)。
步驟 3 ： 5- 溴 -6- 甲基苯并 [b] 噻吩
Figure 02_image406
向5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩-2-甲酸(5.7 g, 21 mmol)添加DMA (100 mL)。然後將混合物在5個小瓶中均勻分開。將DBU (1.6 mL)添加至各小瓶，且然後將各小瓶在微波中輻照至200℃持續2 h。完成後，將5個小瓶合併，且然後用EtOAc及飽和NaHCO3 水溶液稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析純化殘餘物，以提供5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.15 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.75 (d,J =5.4Hz, 1H), 7.39 (d,J =5.3Hz, 1H), 2.45 (s, 3H)。
步驟 4 ： 4-(5- 溴 -6- 甲基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image408
在0℃下向5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩(2.0 g, 8.8 mmol)於DCM (88 mL)中之混合物添加琥珀酸酐(1.1 g, 11 mmol)，且然後添加AlCl3 (2.3 g, 18 mmol)。將混合物升溫至室溫並攪拌18 h。然後用EtOAc及HCl (1.0 N於水中)稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥並過濾。向濾液添加矽膠(10 g)，且將混合物在減壓下濃縮。將混合物置於真空下18 h，且然後藉由矽膠層析(於Hex中之0→50% EtOAc梯度)進行純化，以提供 4-(5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸。LCMS (C13 H12 BrO3 S) (ES, m/z): 327, 329 [M+H]+ 。
步驟 5 ： 4-(5- 溴 -6- 甲基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image410
向4-(5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸(0.99 g, 3.0 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物添加K2 CO3 (1.0 g, 7.6 mmol)。10 min後，添加CH3 I (0.95 mL, 15 mmol)，且攪拌混合物直至藉由LCMS完成為止。然後用EtOAc及水稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析純化所得殘餘物，以提供4-(5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H14 BrO3 S) (ES, m/z): 341, 343 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ) δ 8.32 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.37 (t,J= 6.3Hz, 2H), 2.70 (t,J =6.3Hz, 2H), 2.48 (s, 3H)。
步驟 6 ： 4-(5-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 )-6- 甲基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image412
向含有4-(5-溴-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(0.40 g, 1.2 mmol)及THF (5.9 mL)之燒瓶添加C-Phos Pd G3 (47 mg, 0.059 mmol)，且將混合物抽真空並用N2 回填三次。添加(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，7.0 mL，3.5 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌2.5 h。然後用EtOAc及10%檸檬酸鈉水溶液之混合物將混合物淬滅。將有機層分離，用飽和NaCl水溶液洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析純化殘餘物，以提供4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C23 H35 O4 SSi) (ES, m/z): 435 [M+H]+ 。
步驟 7 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image414
向4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲基-苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(0.23 g, 0.54 mmol)於THF (2.7 mL)中之混合物添加TBAF (1.0 M於THF中，1.0 mL，1.0 mmol)。1.5 h後，用EtOAc及飽和NH4 Cl水溶液稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→70% EtOAc梯度)純化殘餘物，以提供4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C17 H21 O4 S) (ES, m/z): 321 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.55 (t,J =5.1Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.51-3.46 (m, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 2.77-2.66 (m, 4H), 2.41 (s, 3H), 1.79-1.67 (m, 2H)。
步驟 8 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image416
在0℃下向4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(97 mg, 0.30 mmol)及Ph3 P (130 mg, 0.48 mmol)於THF (1.5 mL)中之攪拌混合物一次性添加NBS (81 mg, 0.45 mmol)。30 min後，用飽和NH4 Cl水溶液及EtOAc將反應淬滅。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→25% EtOAc梯度)純化殘餘物，以提供4-(5-(3-溴丙基)-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C17 H20 BrO3 S) (ES, m/z): 383, 385 [M+H]+ 。
中間體 14 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image418
步驟 1 ： 4-(5- 氯 -6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image420
利用攪拌棒將CuCl (0.721 g, 7.29 mmol)添加至250 mL圓底燒瓶。將燒瓶抽真空，且然後用N2 吹掃三次。將THF (14.6 mL)添加至燒瓶，然後攪拌並利用冰水浴冷卻至0℃。然後在0℃下經10 min逐滴添加(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)鋅(II) (0.50 M THF, 30 mL, 15 mmol)，同時攪拌。將所得混合物在0℃下攪拌35 min。添加5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲醯氯(1.91 g, 7.29 mmol)，之後添加NMP (14.6 mL)。將所得混合物在0℃下攪拌7 h。在0℃下將濃NH4 OH (4 mL)添加至反應並快速攪拌。向此懸浮液添加水:MeOH (4:1 140 mL)以及約20 g檸檬酸三鈉二水合物。將混合物攪拌20 min。將所得懸浮液過濾，且將濾餅用水洗滌。然後使濾餅於Hex中漿化並過濾兩次。將濾餅抽真空，同時N2 吹掃72 h，以提供4-(5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C16 H19 ClNO4 S) (ES, m/z): 356 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.03 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.30 (t,J =6.5Hz, 2H), 2.87-2.59 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
步驟 2 ： 4-(5-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image422
將4-(5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(1.00 g, 2.81 mmol)及CPhos Pd G3 (0.113 g, 0.141 mmol)添加至具有含隔片螺旋蓋之40 mL小瓶。將小瓶抽真空且用N2 回填三次。在N2 下將THF (10.0 mL)添加至小瓶並攪拌。當在室溫下攪拌所得懸浮液時，逐滴添加(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，11.2 mL，5.60 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌3 h。將混合物在EtOAc (75 mL)與10%檸檬酸鈉水溶液(75 mL)之間分配，且劇烈攪拌5 min。分離各層，且將水層用EtOAc (20 mL)萃取。將有機層合併，用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，在減壓下濃縮，以提供粗製殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→40% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C25 H40 NO5 SSi) (ES, m/z): 494 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.08 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.75 (t,J =6.5Hz, 2H), 3.30 (t,J =6.6Hz, 2H), 3.02-2.95 (m, 2H), 2.73 (t,J =6.6Hz, 2H), 2.03-1.96 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 0.92 (s, 9H), 0.07 (s, 6H)。
步驟 3 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image424
向4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(0.735 g, 1.49 mmol)於MeOH (3.0 mL)中之混合物添加水(3.0 mL)，且然後添加HOAc (3.0 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌18 h。然後將混合物在EtOAc (50 mL)、水(25 mL)及飽和NaCl水溶液(25 mL)之間分配。分離各層，且將水層用EtOAc (50 mL)萃取。將有機層合併，用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度然後在100% EtOAc下等梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C19 H26 NO5 S) (ES, m/z): 380 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.06 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.73 (t,J =5.8Hz, 2H), 3.28 (t,J =6.6Hz, 2H), 3.10 (t,J =6.9Hz, 2H), 2.72 (t,J =6.6Hz, 2H), 2.06 (p,J =6.5Hz, 2H), 1.45 (s, 9H)。
中間體 15 ： 4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image426
步驟 1 ： 2-((3- 溴 -4- 甲氧基苯基 ) 胺基 )-2- 側氧基乙酸甲基酯
Figure 02_image428
向經N2 惰性氣氛吹掃並維持之5-L 4頸圓底燒瓶中放置3-溴-4-甲氧基苯胺(232 g, 1.15 mol)於DCM (3.0L)中之混合物、DIPEA (171 g, 1.32 mol)及2-氯-2-側氧基乙酸甲基酯(148 g, 1.21mol)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。然後藉由添加水/冰(2 L)使混合物淬滅。用DCM (3×1 L)萃取所得混合物。將有機層合併且在減壓下濃縮，以提供2-((3-溴-4-甲氧基苯基)胺基)-2-側氧基乙酸甲基酯，其不經純化或表徵即使用。
步驟 2 ： 2-((3- 溴 -4- 甲氧基苯基 ) 胺基 )-2- 側氧基硫代乙酸 O- 甲基酯
Figure 02_image430
向經N2 惰性氣氛吹掃並維持之3-L 4頸圓底燒瓶中放置2-((3-溴-4-甲氧基苯基)胺基)-2-側氧基乙酸甲基酯(111 g, 386 mmol)於甲苯(1.5L)中之混合物及勞森試劑(86.4 g, 214 mmol)。將所得混合物加熱至85℃持續16 h。然後使反應混合物冷卻至室溫。藉由過濾移除所得材料，且用DCM (3×500 mL)洗滌。將濾液在減壓下濃縮，且藉由矽膠層析(EtOAc/PE (1:20))純化殘餘物，以提供2-((3-溴-4-甲氧基苯基)胺基)-2-側氧基硫代乙酸O-甲基酯，其不經表徵即使用。
步驟 3 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 甲酸鉀鹽及 7- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 甲酸鉀鹽 ( 異構物之 2:1 混合物 )
Figure 02_image432
向經N2 惰性氣氛吹掃並維持之2-L 4頸圓底燒瓶中放置2-((3-溴-4-甲氧基苯基)胺基)-2-側氧基硫代乙酸O-甲基酯(84.5 g, 278 mmol)。經10 min之時期將KOH (50 g, 90 mmol)於H2 O (500 mL)中之混合物添加至反應混合物。然後經10 min之時期將鐵(III)氰化鉀水合物(242 g, 735 mmol)於H2 O (2 L)中之混合物添加至反應混合物。利用HCl水溶液(2.0 M)將所得混合物之pH調整至2。然後添加水(500 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。然後藉由過濾收集所得產物，且用DCM (1 L)洗滌。使濾餅於KOH水溶液(2.0 M, 500 mL, 1 mol)中漿化0.5 h。然後藉由過濾收集所得產物，且用H2 O (2×500 mL)洗滌，以提供5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸鉀鹽及7-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸鉀鹽之2:1混合物。5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸鉀鹽(主要異構物)之表徵數據：1 H NMR (400MHz, DMSO-d6 , ppm) δ 8.13 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 3.80 (s, 3H)。7-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸鉀鹽(次要異構物)之表徵數據：1 H NMR (400MHz, DMSO-d6 , ppm) 7.90 (d, J=8.9Hz, 1H), 7.26 (d, J=8.9Hz, 1H), 3.91 (s, 3H)。
步驟 4 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 甲酸及 7- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 甲酸 ( 異構物之 2:1 混合物 )
Figure 02_image434
向1 L燒瓶添加5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸鉀鹽及7-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸鉀鹽(異構物之2:1混合物) (22.4 g, 49.4 mmol)、水(300 mL)、ACN (180 mL)、MeOH (120 mL)及TFA (11.4 mL, 148 mmol)。將混合物在室溫下劇烈攪拌15 min。藉由過濾收集所得產物，且用水(2×20 mL)、MeOH (2×5 mL)及Et2 O (2×10 mL)洗滌，以提供5-溴 -6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸及7-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸之2:1混合物。5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸(主要異構物)之表徵數據：1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.45 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 3.96 (s, 3H)。7-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸(次要異構物)之表徵數據：1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (d,J =9.0Hz, 1H), 7.51 (d,J =9.0Hz, 1H), 4.00 (s, 3H)。
步驟 5 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 甲酸甲基酯
Figure 02_image436
向250 mL燒瓶添加5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸及7-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸(異構物之2:1混合物) (17.2 g, 41.8 mmol)及MeOH (150 mL)。將混合物劇烈攪拌並冷卻至0℃。經10 min之時期向攪拌混合物逐滴添加SOCl2 (6.1 mL, 84 mmol)。然後將混合物加熱至回流持續18 h。在冷卻至室溫後，藉由過濾收集所得產物，且用MeOH (2×20 mL)洗滌。藉由矽膠層析(於DCM中之0→30% EtOAc梯度)純化產物，以提供呈單一異構物形式之5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸甲基酯。LCMS (C10 H9 BrNO3 S) (ES, m/z): 302, 304 (M+H)+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.42 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.09 (s, 3H), 4.02 (s, 3H)。
步驟 6 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 甲酸
Figure 02_image438
向500 mL圓底燒瓶添加5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸甲基酯(7.3 g, 24 mmol)及MeOH (150 mL)。向劇烈攪拌之混合物添加NaOH水溶液(2.0 M, 37 mL, 74 mmol)。將混合物加熱至回流持續30 min。在冷卻至室溫後，逐滴添加HCl水溶液(2.0 M, 37 mL, 74 mmol)。將混合物在室溫下劇烈攪拌18 h。藉由過濾收集所得產物，且用水(2×50 mL)及MeOH (2×20 mL)洗滌，以提供5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸。LCMS (C9 H7 BrNO3 S) (ES, m/z): 288, 290 (M+H)。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.45 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 3.96 (s, 3H)。
步驟 7 ： 5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 甲醯氯
Figure 02_image440
向100 mL圓底燒瓶添加5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲酸(1.46 g, 5.07 mmol)、DCM (25 mL)及DMF (0.080 mL, 1.0 mmol)。經1 min向混合物逐滴添加(COCl)2 (5.32 mL, 10.6 mmol)，且將混合物在室溫下劇烈攪拌15 min。然後經由矽藻土過濾該混合物。將濾液在減壓下濃縮，以提供5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-甲醯氯，其不經進一步純化或表徵即使用。
步驟 8 ： 4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image442
向250 mL圓底燒瓶添加CuCl (0.45 g, 4.6 mmol)。將燒瓶抽真空且用N2 再填充三次。添加THF (10 mL)，且攪拌混合物並冷卻至0℃。向該混合物添加(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，18 mL，9.0 mmol)。10 min後，經5 min之時期逐滴添加5-溴-6-甲氧基-苯并[d]噻唑-2-甲醯氯(1.4 g, 4.6 mmol)於NMP (30 mL)中之混合物。5 min後，使混合物升溫至室溫且然後攪拌1 h。向該混合物添加水(30 mL)及濃NH4 OH水溶液(15 mL)。用EtOAc (125 mL)萃取混合物，且將有機層用水(2×75 mL)洗滌。使有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→75% EtOAc梯度)純化殘餘物，以提供4-(5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C16 H18 BrNO4 S + Na) (ES, m/z): 422, 424 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.38 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.51 (t,J =6.6Hz, 2H), 2.75 (t,J =6.6Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 16 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image444
步驟 1 ： 4-(5-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image446
向4 mL小瓶添加4-(5-溴-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(233 mg, 0.581 mmol)及C-Phos Pd G3 (14 mg, 0.018 mmol)。將小瓶抽真空且用N2 再填充三次。向小瓶添加THF (0.60 mL)，之後添加(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，2.90 mL，1.45 mmol)。將混合物在室溫下攪拌20 min。向該混合物添加額外之(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，1.4 mL，0.73 mmol)。30 min後，使混合物於EtOAc (30 mL)中稀釋，並用10%檸檬酸三鈉水溶液(30 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→40% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C25 H40 NO5 SSi) (ES, m/z): 494 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.93 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.70 (t, J=6.3Hz, 2H), 3.53 (t, J=6.6Hz, 2H), 2.86-2.78 (m, 2H), 2.74 (t, J=6.6Hz, 2H), 1.94-1.84 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 0.93 (s, 9H)。
步驟 2 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image448
向100 mL燒瓶添加4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(229 mg, 0.464 mmol)、MeOH (5.0 mL)、水(5.0 mL)及AcOH (5.0 mL)。將混合物在室溫下攪拌4 h。然後用EtOAc (50 mL)稀釋該混合物，並用水(3×50 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C19 H26 NO5 S) (ES, m/z): 380 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.70 (t,J =6.3Hz, 2H), 3.52 (t,J =6.7Hz, 2H), 2.87 (t,J =7.5Hz, 2H), 2.75 (t,J =6.6Hz, 2H), 2.00-1.90 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
步驟 3 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [d] 噻唑 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image450
向4 mL小瓶添加CBr4 (72 mg, 0.22 mmol)、三苯基膦(62 mg, 0.24 mmol)及4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(69 mg, 0.18 mmol)。將小瓶冷卻至0℃，且添加DCM (1.0 mL)。使混合物升溫至室溫持續90 min。然後藉由矽膠層析(於Hex中之0→30% EtOAc梯度)直接純化混合物，以提供4-(5-(3-溴丙基)-6-甲氧基苯并[d]噻唑-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C19 H25 BrNO4 S) (ES, m/z): 442, 444 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, CDCl3 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 3.52 (t,J =6.6Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.45 (t,J =6.6Hz, 2H), 2.93 (t,J =7.2Hz, 2H), 2.75 (t,J =6.6Hz, 2H), 2.30-2.19 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 17 ： 4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image452
向RockPhos Pd G3 (0.105 g, 0.125 mmol)、苯甲醛肟(3.03 g, 25.0 mmol)、4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(5.0 g, 13 mmol)及Cs2 CO3 (12.2 g, 37.6 mmol)之混合物添加DMF (40 mL)。將反應加熱至80℃持續18 h。然後使反應混合物冷卻至室溫且傾倒至含有HCl水溶液(0.5 M, 100 mL)之燒瓶中。用DCM萃取所得混合物。然後使有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之0→50% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C17 H20 O5 SNa) (ES, m/z): 359 [M+Na]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.35 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.18 (t,J =6.2Hz, 2H), 2.52 (t,J =6.2Hz, 2H), 1.33 (s, 9H)。
中間體 18 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image454
向混合物4-(6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(5.0 g, 12 mmol)及EtOH (100 mL)添加pTsOH (4.4 g, 23 mmol)。將反應在室溫下攪拌1 h。然後用水使反應淬滅並用DCM稀釋。將有機層分離，且然後用飽和NaHCO3 水溶液洗滌。然後使有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯。LCMS (C18 H23 O5 S) (ES, m/z): 351 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.44 (t,J =5.0Hz, 1H), 4.02 (q,J =7.0Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.40 (q,J =6.0Hz, 2H), 3.27 (d,J =6.4Hz, 2H), 2.63 (q,J =7.0, 5.9Hz, 4H), 1.68 (p,J =6.6Hz, 2H), 1.14 (t,J =7.1Hz, 3H)。
中間體 19 ： (2S)-4-[5-(2- 胺基乙基 )-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 ]-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image456
步驟 1 ： (2S)-4-(5-{2-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 乙基 }-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image458
在N2 下向(2S)-4-(5-溴-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(124 mg, 0.334 mmol)、參(三甲基矽基)矽烷(103 µL, 0.334 mmol)及無水Na2 CO3 (71 mg, 0.67 mmol)於經脫氣DME (1.7 mL)中之攪拌混合物添加Ir(2-(2,4-二氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶)2 (4,4’-二-第三丁基 -2,2’-聯吡啶)PF6 (3.8 mg, 3.3 µmol)於經脫氣DME (1.2 mL)中之混合物。添加氯化鎳(II)乙二醇二甲醚錯合物(0.37 mg, 1.7 µmol)及4,4’-二-第三丁基-2,2’-聯吡啶(0.45 mg, 1.7 µmol)於經脫氣DME (445 µL)中之懸浮液，且將所得混合物在N2 下在室溫下攪拌15 min。在N2 下一次性添加 N-(2-溴乙基)胺基甲酸第三丁基酯(150 mg, 0.67 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物並用兩個34 W藍色LED燈(在各側上，相距7 cm)輻照18 h。然後藉由矽膠急速管柱層析(於Hex中之EtOAc)直接純化混合物，以提供(2S)-4-(5-{2-[(第三丁氧基羰基)胺基]乙基}-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基) -2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C22 H30 NO6 S) (ES, m/z): 436 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 8.25 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.86 (br, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.43 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 1H), 3.19 (dd,J =17.5, 5.0Hz, 1H), 3.15 (t,J =7.0Hz, 2H), 3.01-2.93 (m, 1H), 2.77 (t,J =7.0Hz, 2H), 1.34 (s, 9H), 1.19 (d,J= 7.1Hz, 3H)。
步驟 2 ： (2S)-4-[5-(2- 胺基乙基 )-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 ]-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image460
在室溫下向(2S)-4-(5-{2-[(第三丁氧基羰基)胺基]乙基}-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(54 mg, 0.12 mmol)於CH2 Cl2 (2.8 mL)中之攪拌溶液一次性添加TFA (476 µL, 6.18 mmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌2 h。將混合物濃縮，且將殘餘物溶解於CH3 CN及水中並凍乾過夜，以提供(2S)-4-[5-(2-胺基乙基)-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C17 H22 NO4 S) (ES, m/z): 336 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 8.29 (s, 1H), 7.80 (br, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.45-3.39 (m, 1H), 3.20 (dd,J =17.5, 5.0Hz, 1H), 3.10-3.01 (m, 2H), 3.01-2.93 (m, 1H), 2.95 (t,J =7.0Hz, 2H), 1.20 (d,J= 7.1Hz, 3H)。
中間體 20 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸乙基酯
Figure 02_image462
向4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(0.065 g, 0.2 mmol)、Cs2 CO3 (0.326 g, 1.00 mmol)及ACN (2 mL)之混合物添加1,3-二溴丙烷(1.0 mL, 9.9 mmol)。將混合物加熱至65℃持續2 h。在冷卻至室溫後，將混合物過濾，且用THF洗滌經過濾之材料。用Hex稀釋濾液，且然後將混合物在減壓下濃縮，以提供4-(6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯。LCMS (C18 H21 BrFO5 S) (ES, m/z): 447, 449 [M+H]+ 。
如下表1中所示之中間體21直至23及62直至86係根據與上文中間體20中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體20中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 1
Figure 108111487-A0304-0002
中間體 24 ： (S)-4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image520
步驟 1 ： (S)-4-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image522
向4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醯氯(4.3 g, 16 mmol)、C-Phos Pd G4 (0.26 g, 0.31 mmol)及THF (25 mL)之混合物添加(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，25.0 mL，12.5 mmol)。將反應在室溫下攪拌2 h。然後用飽和NH4 Cl水溶液使反應淬滅，並用DCM稀釋。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之0→50% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H18 FO5 S) (ES, m/z): 341 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.33 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 (dd,J =17.7, 8.7Hz, 1H), 3.25 (dd,J =17.7, 5.0Hz, 1H), 3.00-2.92 (m, 1H), 1.20 (d,J =7.3Hz, 3H)。
步驟 2 ： (S)-4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image524
向(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(4.0 g, 12 mmol)及DCM (50 mL)之混合物添加AlCl3 (6.27 g, 47.0 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18 h。然後向反應添加加料漏斗，且在劇烈攪拌下將水(50 mL)緩慢添加至混合物，之後添加HCl水溶液(1 N, 50 mL)。然後將混合物傾倒至分液漏斗中，且添加20% IPA/DCM。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(100% DCM)純化所得殘餘物，以提供(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H16 FO5 S) (ES, m/z): 327 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.48 (dd,J =17.7, 8.7Hz, 1H), 3.24 (dd,J =17.7, 5.0Hz, 1H), 3.01-2.89 (m, 1H), 1.19 (d,J =7.2Hz, 3H)。
中間體 25 ： (R)-4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image526
步驟 1 ： 5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醯氯
Figure 02_image528
在Ar下在0℃下向5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲酸(5.0 g, 21 mmol)於THF (200 mL)中之攪拌溶液添加(COCl)2 (5.5 ml, 63 mmol)，之後添加DMF (0.1 ml, 1.3 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌1 h，且然後使其升溫至室溫並攪拌過夜。將反應混合物在減壓下濃縮，且所得5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲醯氯不經純化即使用。1 H NMR (600MHz, CH3 CN-d3 ): δ 8.25 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.88 (s, 3H)。
步驟 2 ： (S)-4-(5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image530
在0℃下向含有噻吩-2-甲酸銅(I) (797 mg, 4.2 mmol)之經烘箱乾燥、Ar吹掃之圓底燒瓶逐滴添加(R )-(3-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II) (7.8 mL，0.5 M於THF中，3.9 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌20 min。將5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-甲醯氯(777 mg, 3.0 mmol)於THF (15 mL)中之懸浮液逐滴添加至反應混合物。使反應混合物升溫至室溫並攪拌6 h。用飽和NH4 Cl水溶液(15 mL)、之後DCM (30 mL)稀釋該反應混合物。藉由過濾去除沈澱物，之後萃取。分離各層，且將水層用DCM (3×30 mL)萃取。將合併之有機層在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之(於EtOAc中之25% EtOH))純化殘餘物，以提供(S )-4-(5,6-二甲氧基苯并[b ]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H19 O5 S) (ES, m/z): 323 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ): δ 7.89 (s, 1H), 7.26 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.48 (dd,J =16.9, 7.6Hz, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 3.05 (dd,J =16.9, 6.0Hz, 1H), 1.31 (d,J =7.2Hz, 3H)。
步驟 3 ： (R)-4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image532
在0℃下將AlCl3 (1.0 g, 7.5 mmol)添加至於CH2 Cl2 (40 mL)中之(R)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.0 g, 3.0 mmol)。使反應混合物升溫至室溫持續18 h。然後將反應混合物冷卻至0℃，且添加MeOH (85 mL)。將混合物在0℃下攪拌30 min。然後使混合物升溫至室溫並在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供不純之(R)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。然後藉由手性-SFC (管柱AD-H (21×250 mm)，於CO2 中之含有0.25% DMEA之30% MeOH)純化混合物，以提供(R)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯，滯留時間為4.7 min。LCMS (C15 H17 O5 S) (ES, m/z): 309 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 ) δ: 9.41 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.40 (dd, J=17.4, 8.6Hz, 1H), 3.17 (dd, J=17.5, 5.1Hz, 1H), 3.02-2.91 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.1Hz, 3H)。
如下表2中所示之中間體26直至27係根據與上文中間體25中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體25中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 2
Figure 108111487-A0304-0003
中間體 28 ： (S)-4-(5-(2- 氯乙氧基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image538
步驟 1 ： (S)-4-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image540
用Ar吹掃含有CuCl (2.5 g, 25 mmol)之燒瓶，且然後冷卻至0℃。逐滴添加3-甲氧基-(2R)-(+)-甲基-3-側氧基丙基溴化鋅(0.50 M於THF中，50 mL，25 mmol)。將4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醯氯(5.0 g, 20 mmol)於THF (25 mL)及NMP (25 mL)中之混合物逐滴添加至攪拌中之反應混合物。然後使反應混合物升溫至室溫持續18 h。然後用飽和NH4 Cl水溶液(100 mL)使反應混合物淬滅並用EtOAc (3×100 mL)萃取。使合併之有機層經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由正相二氧化矽管柱層析(於Hex中之EtOAc)純化所得殘餘物，以提供(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H18 FO5 S) (ES, m/z): 341 [M+H]+ 。1 H NMR (CDCl3 ) δ: 7.99 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.51 (dd, J=17.0, 7.9Hz, 1H), 3.24-3.12 (m, 1H), 3.06 (dd, J=17.0, 5.6Hz, 1H), 1.32 (d, J=7.1Hz, 3H)。
步驟 2 ： (S)-4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image542
向(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.0 g, 2.9 mmol)及CH=CCl2 (40 mL)之混合物添加AlCl3 (1.0 g, 7.5 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18 h。然後將反應混合物冷卻至0℃並用MeOH (40 mL)稀釋。然後使混合物升溫至室溫，且然後在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之EtOAc)純化所得殘餘物，以提供(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H16 FO5 S) (ES, m/z): 327 [M+H]+ 。1 H NMR (甲醇-d4 ) δ: 8.11 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.50 (dd, J=17.5, 8.6Hz, 1H), 3.23-3.16 (m, 1H), 3.11-3.02 (m, 1H), 1.28 (d, J=7.2Hz, 3H)。
步驟 3 ： (S)-4-(5-(2- 氯乙氧基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image544
將K2 CO3 (170 mg, 1.2 mmol)添加至(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(200 mg, 0.61 mmol)及DMF (2.7 mL)之攪拌中之混合物。將1-溴-2-氯乙烷(50 µL, 0.6 mmol)添加至攪拌中之反應混合物，且然後將反應混合物加熱至80℃持續18 h。在冷卻至室溫後，將反應混合物在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(於Hex中之EtOAc)純化所得殘餘物，以提供(S)-4-(5-(2-氯乙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C17 H19 ClFO5 S) (ES, m/z): 389 [M+H]+ 。
如下表3中所示之中間體29直至31及87係根據與上文中間體28中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體28中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 3
Figure 108111487-A0304-0004
中間體 32 ： 4-(5-(2- 羥基乙基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯乙酸鹽
Figure 02_image554
步驟 1 ： 4-(6- 甲氧基 -5-(2-(( 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 氧基 ) 乙基 ) 噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image556
向4 mL小瓶添加雙(二-第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯-鈀(II) (5.0 mg, 7.0 µmol)、Cs2 CO3 (137 mg, 0.422 mmol)、4-(5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(50.0 mg, 0.141 mmol)及三氟(2-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)硼酸鉀(39.8 mg, 0.169 mmol)。向小瓶添加甲苯(0.50 mL)及水(0.10 mL)。將小瓶用N2 脫氣5 min。將混合物加熱至100℃持續18 h。在冷卻至室溫後，經由矽藻土過濾該混合物，且將矽藻土用EtOAc洗滌。將濾液在減壓下濃縮，且藉由矽膠層析(於Hex中之0→75% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(6-甲氧基-5-(2-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C23 H32 NO6 S) (ES, m/z): 450 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.45 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.26-4.15 (m, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.78 (t,J =8.3Hz, 1H), 3.65-3.42 (m, 4H), 3.33 (t,J =6.3Hz, 2H), 2.73 (t,J =6.3Hz, 2H), 1.64-1.48 (m, 6H), 1.46 (s, 9H)。
步驟 2 ： 4-(5-(2- 羥基乙基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯乙酸鹽
Figure 02_image558
向4 mL小瓶添加4-(6-甲氧基-5-(2-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(28 mg, 0.062 mmol)、HOAc (0.50 mL)、MeOH (0.50 mL)及水(0.5 mL)。將混合物加熱至50℃持續75 min。在冷卻至室溫後，用EtOAc (30 mL)稀釋該混合物，且用水(2×30 mL)洗滌。使有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供4-(5-(2-羥基乙基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯乙酸鹽。LCMS (C18 H24 NO5 S) (ES, m/z): 366 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 4.13 (t,J =5.4Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.39-3.22 (m, 4H), 2.74 (t,J =6.5Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 33 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image560
步驟 1 ： 4-(5-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image562
利用磁力攪拌棒將4-(5-溴苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(0.207 g, 0.561 mmol)及氯(2-二環己基膦基-2’,4’,6’-三異丙基-1,1’-聯苯)[2-(2’-胺基-1,1’-聯苯)]鈀(II) (0.022 g, 0.028 mmol)置於20 mL螺旋蓋小瓶中。將小瓶抽真空且用N2 回填3次。將小瓶用N2 入口蓋上，且然後添加THF (2.0 mL)。在攪拌下逐滴添加(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，3.4 mL，1.7 mmol)。在添加完成後，將反應在N2 下在室溫下攪拌1.5 h。然後將反應在EtOAc (50 mL)與10%檸檬酸鈉水溶液(10 mL)之間分配並攪拌30 min。然後分離各層，且將有機層用飽和NaCl水溶液洗滌，經無水MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→55% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供 4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C25 H38 NaO4 SSi) (ES, m/z): 485 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.78 (d, J=8.2Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.33 (d, J=8.2Hz, 1H), 3.66 (t, J=5.8Hz, 2H), 3.31 (t, J=6.5Hz, 2H), 2.82 (t, J=7.5Hz, 2H), 2.73 (t, J=6.5Hz, 2H), 1.93-1.86 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.94 (s, 9H), 0.08 (s, 6H)。
步驟 2 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image564
在N2 下在室溫下將TBAF (1.0 M於THF中，0.44 mL，0.44 mmol)添加至4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(102 mg, 0.220 mmol)於THF (1.3 mL)中之攪拌混合物。將所得混合物在室溫下攪拌4.5小時。然後將反應在Et2 O與飽和NH4 Cl水溶液之間分配，且在室溫下攪拌1 h。分離各層，且將有機層用飽和NaCl水溶液洗滌，經無水MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供粗製殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→60% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-(3-羥基丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C19 H24 NaO4 S) (ES, m/z): 371 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.77 (d,J =8.3Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.33 (d,J =8.3Hz, 1H), 3.71 (t,J =6.3Hz, 2H), 3.30 (t,J =6.7Hz, 2H), 2.84 (t,J =7.7Hz, 2H), 2.72 (t,J =6.7Hz, 2H), 1.98-1.91 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 34 ： (S)-4-(4- 氟 -5-(3- 羥基丙氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image566
向(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(0.065 g, 0.2 mmol)及Cs2 CO3 (0.33 g, 1.0 mmol)於ACN (2.0 mL)中之混合物添加(3-溴丙氧基)(第三丁基)二甲基矽烷(0.10 mL, 0.20 mmol)。然後將反應加熱至65℃持續2 h。在冷卻至室溫後，然後將混合物過濾，且用THF (5 mL)洗滌。將水(2 mL)添加至所得濾液，之後添加MP-TsOH (4.38 mmol/g載量，1.00 g，4.38 mmol)。然後將混合物加熱至60℃持續30 min。在冷卻至室溫後，將混合物過濾並用THF洗滌。將濾液在減壓下濃縮，以提供(S)-4-(4-氟-5-(3-羥基丙氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯，其不經進一步純化即使用。LCMS (C18 H22 FO6 S) (ES, m/z): 385 [M+H]+ 。
如下表4中所示之中間體35直至36係根據與上文中間體34中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體34中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 4
Figure 108111487-A0304-0005
中間體 37 ： (2S)-4-[5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 ]-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image572
在N2 下在0℃下向(2S)-4-[5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(187 mg, 0.534 mmol)及Ph3 P (224 mg, 0.854 mmol)於THF (2.7 mL)中之攪拌混合物一次性添加NBS (142 mg, 0.800 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌20 min。藉由矽膠急速管柱層析(於Hex中之EtOAc)直接純化該混合物，以提供(2S)-4-[5-(3-溴丙基)-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H22 BrO4 S) (ES, m/z): 413, 415 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 8.27 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.54 (t,J =6.8Hz, 2H), 3.43 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 1H), 3.19 (dd,J =17.5, 5.0Hz, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 2.79 (t,J =7.0Hz, 2H), 2.10 (五重峰，J =6.9Hz, 2H), 1.19 (d,J= 7.1Hz, 3H)。
中間體 38 ： 4-(5-(3- 羥基丙氧基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image574
步驟 1 ： 4-(5-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image576
利用磁力攪拌棒將4-(5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(265 mg, 0.745 mmol)、3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙-1-醇(156 mg, 0.819 mmol)、RockPhos Pd G3 (31 mg, 0.037 mmol)及Cs2 CO3 (364 mg, 1.12 mmol)添加至20 mL螺旋蓋小瓶。將小瓶加蓋，且插入N2 入口針。經由此針將小瓶抽真空且用N2 回填三次。在N2 下，添加甲苯(2.5 mL)，將N2 入口移除，且將密封小瓶加熱至110℃持續18 h。使反應冷卻至室溫，且添加MeOH (3.0 mL)、水(3.0 mL)及HOAc (3.0 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌7 h，然後在EtOAc與飽和NaCl水溶液之間分配。分離各層，且將水層用EtOAc萃取。將有機層合併，用NaCl水溶液洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，提供粗製殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% 3:1 EtOAc:EtOH梯度)純化殘餘物，以提供4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙氧基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C25 H40 NO6 SSi) (ES, m/z): 510 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 4.56 (t,J =6.5Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.83 (t,J =6.0Hz, 2H), 3.26 (t,J =6.7Hz, 2H), 2.70 (t,J =6.7Hz, 2H), 2.12-2.05 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.07 (s, 6H)。
步驟 2 ： 4-(5-(3- 羥基丙氧基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image578
向含有4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙氧基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(83 mg, 0.16 mmol)之小瓶添加MeOH (1.0 mL)、水(1.0 mL)，且然後添加HOAc (1.0 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌30 min。添加MeOH (1.0 mL)且繼續攪拌。30 min後，添加THF (1.0 mL)，且將混合物在室溫下攪拌18 h。將混合物在EtOAc (25 mL)與NaCl水溶液(25 mL)之間分配並攪拌。分離各層，且將水層用EtOAc萃取。將有機層合併，用飽和NaCl水溶液洗滌兩次，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供粗製殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度，然後在100% EtOAc下等梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-(3-羥基丙氧基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C19 H26 NO6 S) (ES, m/z): 396 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 7.93 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.69 (t,J =5.6Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.80-3.76 (m, 2H), 3.31-3.20 (m, 2H), 2.71 (t, J=6.5Hz, 2H), 2.14-2.07 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
如下表5中所示之中間體39係根據與上文中間體38中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體38中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 5
Figure 108111487-A0304-0006
中間體 40 ： 4-(6- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image582
步驟 1 ： 6-( 苄基氧基 ) 苯并 [b] 噻吩
Figure 02_image584
在Ar下在20℃下將K2 CO3 (2.62 g, 19.0 mmol)添加至苯并[b]噻吩-6-醇(1.9 g, 13 mmol)及苄基溴(1.51 mL, 12.7 mmol)於DMF (10.0 mL)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至50℃持續18 h。在冷卻至室溫後，然後用EtOAc (500 mL)及水(100 mL)稀釋該反應混合物。將有機層分離，用水(50 mL)且然後飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度)純化粗產物殘餘物，以提供6-(苄基氧基)苯并[b]噻吩。LCMS (C15 H13 OS) (ES, m/z): 241 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.77 (d,J =8.6Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.54 (d,J =5.2Hz, 1H), 7.49 (d,J =7.2Hz, 2H), 7.44-7.38 (m,2H), 7.37-7.32 (m, 2H), 7.08 (d,J =8.5Hz, 1H), 5.17 (s, 2H)。
步驟 2 ： 6-( 苄基氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醛
Figure 02_image586
在Ar下在-78℃下將LDA (2.0 M於THF中，7.3 mL，15 mmol)添加至6-(苄基氧基)苯并[b]噻吩(2.92 g, 12.2 mmol)於THF (10.0 mL)中之混合物。將反應混合物在-78℃下攪拌20 mim。在-78℃下將DMF (2.4 mL, 30 mmol)添加至反應混合物，且然後使反應混合物緩慢升溫至室溫。將反應混合物在室溫下攪拌15 min。在0℃下用檸檬酸(1.0 M於水中，24 mL，24 mmol)使反應混合物淬滅，且然後用EtOAc (200 mL)稀釋。將懸浮液攪拌15 min。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供粗製殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度)純化粗製殘餘物，以提供6-(苄基氧基)苯并[b]噻吩-2-甲醛。LCMS (C16 H13 O2 S) (ES, m/z): 269 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.05 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.01 (d,J =8.8Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.50 (d,J =7.3Hz, 2H), 7.42 (t,J =7.3Hz, 2H), 7.40-7.33 (m, 1H), 7.20 (d,J =8.4Hz, 1H), 5.23 (s, 2H)。
步驟 3 ： 4-(6-( 苄基氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image588
用Ar將6-(苄基氧基)苯并[b]噻吩-2-甲醛(2.02 g, 7.53 mmol)、氯化2-均三甲苯基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-2-鎓鹽(0.099 g, 0.38 mmol)及磷酸鉀(1.6 g, 7.5 mmol)之混合物在20℃下吹掃5 min。然後在20℃下添加甲苯(15 mL)及丙烯酸第三丁基酯(2.2 mL, 15 mmol)。將反應混合物在20℃下攪拌18 h。然後用EtOAc (200 mL)稀釋該反應混合物並過濾以去除無機鹽。將濾液在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度)純化粗產物殘餘物，以提供4-(6-(苄基氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C23 H25 O4 S) (ES, m/z): 397 [M+H]+ .1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.35 (s, 1H), 7.96 (d,J =7.0Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.56-7.39 (m, 2H), 7.47-7.33 (m, 3H), 7.25-7.15 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 3.34-3.23 (m, 2H), 2.65-2.55 (m, 2H), 1.40 (s, 9H)。
步驟 4 ： 4-(6- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image590
將HCl (37%於水中，19.6 mL，238 mmol)添加至4-(6-(苄基氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(2.36 g, 5.96 mmol)於二噁烷(100 mL)中之混合物。將反應混合物加熱至90℃持續2天。使反應混合物冷卻至室溫並用EtOAc (500 mL)稀釋。將有機層分離，用水(3×100 mL)且然後飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供4-(6-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸，其不經進一步純化即使用。LCMS (C12 H11 O4 S) (ES, m/z): 251 [M+H]+ 。
步驟 5 ： 4-(6- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image592
在0℃下將TMS-重氮甲烷(2.0 M於Hex中，3.0 mL，6.0 mmol)添加至4-(6-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸(1.5 g, 6.0 mmol)於DCM (25 mL)及MeOH (25 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌15 min (直至氣體逸出停止為止)。添加HOAc (若干滴)以淬滅任何剩餘之TMS-重氮甲烷。然後將反應混合物在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度)純化粗產物殘餘物，以提供4-(6-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C13 H13 O4 S) (ES, m/z): 265 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.17 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.84 (d,J =8.7Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.97 (d,J =8.2Hz, 1H), 3.76-3.65 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.54-3.44 (m, 1H), 2.72-2.67 (m, 2H)。
如下表6中所示之中間體41係根據與上文中間體40中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體40中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 6
Figure 108111487-A0304-0007
中間體 42 ： (S)-4-(6-(3- 氯丙氧基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image596
步驟 1 ： 6-( 苄基氧基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲酸
Figure 02_image598
將4-(苄基氧基)-2-溴-5-甲氧基苯甲醛(13 g, 41 mmol)、K2 CO3 (11 g, 81 mmol)、18-冠-6 (2.1 g, 8.1 mmol)及2-巰基乙酸甲基酯(6.0 mL, 67 mmol)於DMF (150 mL)中之混合物在Ar下加熱至90℃持續14 h。在冷卻至室溫後，用水(400 mL)使反應混合物淬滅，利用1 N HCl酸化至pH約5，且用EtOAc (3×250 mL)萃取。將合併之有機層用10% LiCl水溶液(3×50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將殘餘物用EtOAc/MeOH (50 mL/50 mL)稀釋，且用LiOH水溶液(2.0 M, 80 mL, 160 mmol)在20℃下處理。將反應混合物加熱至60℃持續2 h。在冷卻至室溫後，將混合物在減壓下濃縮。將殘餘物用NaOH水溶液(1.0 M, 50 mL, 50 mmol)、水(300 mL)及EtOAc (300 mL)稀釋。分離各層，且將水層用EtOAc (3×200 mL)洗滌。然後利用6 N HCl使水層酸化至pH約5，且用EtOAc (3×300 mL)萃取。將有機層合併，用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將殘餘物與1:1 EtOAc/PE (3×30 mL)及1:1 DCM/PE (3×30 mL)一起研磨，以提供6-(苄基氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸。LCMS (C17 H15 O4 S) (ES, m/z): 315 [M+H]+ .1 H NMR (400MHz, DMSO-d6 ) δ 13.16 (br s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.50-7.46 (m, 2H), 7.44-7.32 (m, 3H), 5.17 (s, 2H), 3.83 (s, 3H)。
步驟 2 ： 6-( 苄基氧基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醯氯
Figure 02_image600
在Ar下在0℃下將DMF (0.023 mL, 0.29 mmol)添加至6-(苄基氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(3.05 g, 9.70 mmol)及(COCl)2 (2.55 mL, 29.1 mmol)於THF (50 mL)中之混合物。將混合物在0℃下攪拌30 min，且然後升溫至室溫。然後將反應混合物在室溫下攪拌2 h。將反應混合物在減壓下濃縮，以提供6-(苄基氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醯氯，其不經純化即使用。
步驟 3 ： (S)-4-(6-( 苄基氧基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image602
在Ar下在0℃下將(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II)之混合物(0.50 M於THF中，25 mL，13 mmol)緩慢添加至含有((噻吩-2-羰基)氧基)銅(2.38 g, 12.5 mmol)之燒瓶。將反應混合物在Ar下在0℃下攪拌20 min。然後在0℃下經由套管將6-(苄基氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醯氯(3.2 g, 9.6 mmol)於THF (50 mL)中之經Ar脫氣之混合物緩慢添加至該混合物。使混合物升溫至室溫，且然後在室溫下攪拌16 h。將反應混合物冷卻至0℃，且藉由添加飽和NH4 Cl水溶液(50 mL)、水(100 mL)及EtOAc (500 mL)來淬滅。使所得雙相混合物升溫至室溫並在室溫下攪拌1 h。然後經由矽藻土釉料過濾該混合物，且將濾液於分液漏斗中分配。將有機層分離，用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→50% EtOAc梯度)純化殘餘物以提供期望產物，藉由矽膠層析(於DCM中之0-50% EtOAc進行溶析)對該產物進行再純化，以提供(S)-4-(6-(苄基氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C22 H23 O5 S) (ES, m/z): 399 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.52-7.47 (m, 3H), 7.42 (t,J =7.3Hz, 2H), 7.38-7.34 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.42 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 1H), 3.19 (dd,J =17.4, 4.9Hz, 1H), 3.04-2.91 (m, 1H), 1.20 (d,J =7.1Hz, 3H)。
步驟 4 ： (S)-4-(6- 羥基 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image604
將(S)-4-(6-(苄基氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.60 g, 4.02 mmol)及Pd/C (1.07 g, 1.00 mmol)之混合物用Ar脫氣。在Ar流下將EtOAc (50 mL)、MeOH (50 mL)及HCl (37%於水中，0.66 mL，8.0 mmol)緩慢添加至該混合物。將反應混合物上方之頂隙經由真空脫氣且用H2 回填。將反應混合物在H2 下攪拌3 h。經由矽藻土過濾該反應混合物，用EtOAc洗滌。將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0-100% EtOAc進行溶析)純化殘餘物，以提供(S)-4-(6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H17 O5 S) (ES, m/z): 309 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.93 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.44-3.38 (m, 1H), 3.16 (dd,J =17.3, 4.7Hz, 1H), 3.01-2.92 (m, 1H), 1.19 (d,J =7.0Hz, 3H)。
步驟 5 ： (S)-4-(6-(3- 氯丙氧基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image606
將(S)-4-(6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(141 mg, 0.457 mmol)、1-溴-3-氯丙烷(360 mg, 2.3 mmol)及K2 CO3 (379 mg, 2.74 mmol)之混合物用Ar脫氣。將ACN (4.0 mL)添加至該混合物，且將反應混合物加熱至50℃持續18 h。在冷卻至室溫後，然後用DCM (25 mL)稀釋該反應混合物並過濾。將濾液在減壓下濃縮，且然後藉由矽膠層析(於DCM中之0→100% EtOAc梯度)純化，以提供(S)-4-(6-(3-氯丙氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H22 ClO5 S) (ES, m/z): 385 [M+H]+ 。
如下表7中所示之中間體43係根據與上文中間體42中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體42中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 7
Figure 108111487-A0304-0008
中間體 44 ： (2S)-4-[5-(2- 羥基乙基 )-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 ]-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image610
在N2 下向(2S)-4-(5-溴-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.24 g, 3.34 mmol)、參(三甲基矽基)矽烷(1.0 mL, 3.3 mmol)及無水Na2 CO3 (708 mg, 6.68 mmol)於經脫氣DME (16.5 mL)中之攪拌混合物添加Ir(2-(2,4-二氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶)2 (4,4’-二-第三丁基-2,2’-聯吡啶)PF6 (38 mg, 33 µmol)於經脫氣DME (12 mL)中之混合物。添加氯化鎳(II)乙二醇二甲醚錯合物(3.7 mg, 17 µmol)及4,4’-二-第三丁基-2,2’-聯吡啶(4.5 mg, 17 µmol)於經脫氣DME (4.5 mL)中之懸浮液，且將所得混合物在N2 下在室溫下攪拌15 min。在N2 下一次性添加2-溴乙醇(835 mg, 6.68 mmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌並在光反應器中利用20%光強度輻照24 h。然後將混合物過濾，且將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠急速管柱層析(於Hex中之EtOAc)純化殘餘物，以提供(2S)-4-[5-(2-羥基乙基)-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C17 H21 O5 S) (ES, m/z): 337 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 8.26 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.64 (t,J =5.2Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.64-3.55 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.42 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 1H), 3.19 (dd,J =17.5, 5.0Hz, 1H), 3.01-2.92 (m, 1H), 2.81 (t,J =6.9Hz, 2H), 1.19 (d,J= 7.1Hz, 3H)。
中間體 45 ： 4-(6- 甲氧基 -5-(3- 側氧基丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image612
向4 mL小瓶添加4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(30 mg, 0.079 mmol)、戴斯-馬丁(Dess-Martin)過碘烷(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯碘醯-3(1H)-酮；50 mg, 0.1 mmol)及DCM (1.0 mL)。將混合物在室溫下攪拌1 h。藉由矽膠層析(於Hex中之0→55% EtOAc梯度)純化該混合物，以提供4-(6-甲氧基-5-(3-側氧基丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C20 H24 O5 SNa) (ES, m/z): 399 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 9.85 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 3.27 (t,J =6.8Hz, 2H), 3.05 (t,J =7.4Hz, 2H), 2.80 (t,J =7.2Hz, 2H), 2.72 (t,J =6.7Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 46 ： 4-(5- 胺基 -6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image614
步驟 1 ： 4-(5-(( 二苯基亞甲基 ) 胺基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image616
向4 mL小瓶添加Cs2 CO3 (252 mg, 0.773 mmol)、二苯基甲亞胺(129 µL, 0.773 mmol)、4-(5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(138 mg, 0.387 mmol)、Rac BINAP Pd G3 (19 mg, 0.019 mmol)及甲苯(2.0 mL)。將混合物加熱至120℃持續3.5 h。在冷卻至室溫後，藉由矽膠層析(於Hex中之0→50% EtOAc梯度)直接純化該混合物，以提供4-(5-((二苯基亞甲基)胺基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C29 H29 N2 O4 S) (ES, m/z): 501 [M+H]+ 。
步驟 2 ： 4-(5- 胺基 -6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image618
向20 mL小瓶添加4-(5-((二苯基亞甲基)胺基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(146 mg, 0.291 mmol)、AcOH (2.0 mL)、MeOH (2.0 mL)、水(2.0 mL)及THF (6.0 mL)。將混合物加熱至50℃持續1 h。在冷卻至室溫後，然後將混合物在室溫下攪拌24 h。然後用EtOAc (50 mL)稀釋該混合物，且用飽和NaHCO3 水溶液(50 mL)及水(50 mL)洗滌。使有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→50% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供4-(5-胺基-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C16 H21 N2 O4 S) (ES, m/z): 337 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.02 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.24 (t,J =6.4Hz, 2H), 2.74-2.70 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 47 ： (S)-4-(6-(3- 羥基丙氧基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image620
將(S)-4-(6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(25 mg, 0.081 mmol)、3-氯丙-1-醇(10 mg, 0.1 mmol)及K2 CO3 (22 mg, 0.16 mmol)之混合物用Ar脫氣。將DMF (0.50 mL)添加至該混合物，且於微波中將反應混合物輻照至100℃持續1 h。使反應混合物冷卻至室溫，且然後用EtOAc (25 mL)及水(5 mL)稀釋。將有機層分離，用額外之水(5 mL)且然後飽和NaCl水溶液(5 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析純化粗產物殘餘物(於DCM中之0-100% [於EtOAc中之5% MeOH]進行溶析)，以提供(S)-4-(6-(3-羥基丙氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H23 O6 S) (ES, m/z): 367 [M+H]+ 。
如下表8中所示之中間體48係根據與上文中間體47中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體47中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 8
Figure 108111487-A0304-0009
中間體 49 ： 4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image624
步驟 1 ： 4-(6- 甲氧基 -5-(3-(( 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image626
向4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(3.0 g, 8.9 mmol)、K2 CO3 (7.4 g, 54 mmol)及ACN (20 mL)之混合物添加2-(3-溴丙氧基)四氫-2H-吡喃(3.8 mL, 22 mmol)。將反應加熱至65℃持續4 h。在冷卻至室溫後，將混合物過濾，用ACN洗滌，且然後將溶劑在減壓下去除。將所得殘餘物溶解於DCM (10 mL)中，且緩慢添加Hex (100 mL)。將所得沈澱物過濾，用Hex洗滌且經空氣乾燥，以提供4-(6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C25 H34 O7 SNa) (ES, m/z): 501 [M+Na]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.16 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.06 (t,J =6.2Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.78 (dt,J =9.6, 6.4Hz, 1H), 3.69 (dd,J =13.5, 5.5Hz, 1H), 3.52-3.45 (m, 1H), 3.41-3.35 (m, 1H), 3.20 (t,J =6.2Hz, 2H), 2.54 (t,J =6.2Hz, 2H), 2.02-1.95 (m, 2H), 1.71-1.62 (m, 1H), 1.58 (t,J =7.8Hz, 1H), 1.47-1.39 (m, 3H), 1.36 -1.33 (m, 10H)。
步驟 2 ： 4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image628
向4-(6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(3.78 g, 7.90 mmol)及EtOH (50 mL)之混合物添加pTsOH (2.2 g, 12 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌2 h。然後用DCM稀釋該混合物，且用飽和NaHCO3 水溶液淬滅。然後將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C20 H26 O6 SNa) (ES, m/z): 417 [M+Na]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.15 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.53 (t,J =4.7Hz, 1H), 4.05 (t,J =6.2Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.55 (q,J =5.4Hz, 2H), 3.20 (t,J =6.1Hz, 2H), 2.54 (t,J =6.1Hz, 2H), 1.88 (p,J =5.8Hz, 2H), 1.33 (s, 9H)。
如下表9中所示之中間體50係根據與上文中間體49中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體49中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 9
Figure 108111487-A0304-0010
中間體 51 ： 4-(5- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image632
將4-(5-(苄基氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(1.43 g, 3.60 mmol)及Pd/C (10% w/w, 1.5 g, 1.4 mmol)之混合物用Ar脫氣。在Ar流下將MeOH (25 mL)、EtOAc (25 mL)及HCl (37%於水中，0.59 mL，7.2 mmol)緩慢添加至該混合物。將反應混合物上方之頂隙經由真空脫氣且用H2 回填。將所得混合物在H2 下攪拌24 h。然後經由矽藻土過濾反應混合物，且將矽藻土用EtOAc洗滌。將濾液在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度)純化粗產物殘餘物，以提供4-(5-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C13 H13 O4 S) (ES, m/z): 265 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.74 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.85 (d,J =8.5Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.07 (d,J =8.0Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.75-2.67 (m, 2H)；2個脂肪族質子隱藏在溶劑峰下且不明顯。
中間體 52 ： (2S)-4-(5,6- 二羥基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image634
步驟 1 ： (2S)-4-(5,6- 二羥基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image636
在0℃下向(2S )-4-(5,6-二甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸(2.0 g, 6.5 mmol)於DCM (65 mL)中之攪拌溶液添加BBr3 (1 M於DCM中，19.5 mL，19.5 mmol)。使反應混合物升溫至室溫持續2.5 h。然後將混合物冷卻至0℃，用水處理並在減壓下濃縮。將殘餘物過濾，用水洗滌且在真空下乾燥，以提供(2S )-4-(5,6-二羥基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸，其不經進一步純化即使用。LCMS (C13 H13 O5 S) (ES, m/z): 281 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.18 (s, 1H), 9.78 (brs, 1H), 9.49 (brs, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.39-3.33 (m, 1H), 3.03 (dd,J =17.2, 5.2Hz, 1H), 2.91-2.84 (m, 1H), 1.16 (d,J =7.1Hz, 3H)。
步驟 2 ： (2S)-4-(5,6- 二羥基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image638
向(2S )-4-(5,6-二羥基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸(1.35 g, 4.82 mmol)於DCM (24 mL)及MeOH (24 mL)中之攪拌溶液添加TMS-重氮甲烷(2 M於Hex中，3.6 mL，7.2 mmol)。將混合物攪拌30 min，用HOAc (0.28 mL, 4.8 mmol)處理並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於DCM中之0→10% MeOH梯度)純化殘餘物，以提供(2S )-4-(5,6-二羥基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H15 O5 S) (ES, m/z): 295 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.85 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.41-3.34 (m, 1H), 3.17-3.11 (m, 1H), 2.98-2.91 (m, 1H), 1.17 (d,J =7.1Hz, 3H)。
中間體 53 ： (2S)-4-[5,6- 雙 (3- 羥基丙氧基 )-1- 苯并噻吩 -2- 基 ]-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image640
於微波中將(2S )-4-(5,6-二羥基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(230 mg, 0.78 mmol)、3-氯-1-丙醇(196 µL, 2.34 mmol)及K2 CO3 (432 mg, 3.13 mmol)於DMF (7.8 mL)中之混合物輻照至100℃持續1 h。在冷卻至室溫後，用EtOAc及飽和NaCl水溶液稀釋該混合物。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且然後在減壓下濃縮。藉由急速層析(於DCM中之0→10% MeOH梯度)純化所得殘餘物，以提供(2S )-4-[5,6-雙(3-羥基丙氧基)-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C20 H27 O7 S) (ES, m/z): 411 [M+H]+
中間體 54 ： (2S)-4-[6-( 二氟甲氧基 )-5- 羥基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 ]-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image642
在-78℃下向(2S )-4-(5,6-二羥基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(177 mg, 0.601 mmol)及KOH (1.0 M於水中，120 µL，1.2 mmol)於ACN (5.5 mL)及水(0.55 mL)中之冷凍混合物添加(溴二氟甲基)膦酸二乙基酯(170 µL, 0.96 mmol)。將冷卻浴移除，且將反應混合物攪拌4 h。用EtOAc及水稀釋該混合物。分離各層，且用EtOAc (×3)再萃取水層。使合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且然後在減壓下濃縮。藉由急速層析(於DCM中之0-50% EtOAc)純化所得混合物，以提供粗製(2S )-4-[6-(二氟甲氧基)-5-羥基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。藉由SFC (於CO2 中之15% MeOH (+0.25% DMEA))純化期望流份，以提供(2S )-4-[6-(二氟甲氧基)-5-羥基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯，滯留時間為4.4 min。LCMS (C15 H15 F2 O5 S) (ES, m/z): 345 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.25 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.18 (t,J =74.4Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.44 (dd,J =17.6, 8.7Hz, 1H), 3.20 (dd,J =17.6, 4.9Hz, 1H), 3.01-2.94 (m, 1H), 1.19 (d,J =7.1Hz, 3H)。
中間體 55 ： 4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2,2- 二甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image644
步驟 1 ： 4-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2,2- 二甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image646
在Ar下在0℃下將3,3-二甲基二氫呋喃-2,5-二酮(4.6 g, 36 mmol)添加至4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩(3.8 g, 18 mmol)及AlCl3 (3.1 g, 23 mmol)於DCM (100 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌2 h，且然後升溫至室溫並攪拌16 h。然後藉由在0℃下將反應混合物緩慢添加至水(200 mL)及EtOAc (500 mL)之混合物來使反應混合物淬滅。將所得混合物在20℃下攪拌1 h，且然後用HCl (2.0 M於水中，36 mL，72 mmol)稀釋。將有機層分離，用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。然後藉由矽膠層析純化混合物，以提供4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2,2-二甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C16 H18 FO5 S) (ES, m/z): 341 [M+H]+ 。
步驟 2 ： 4-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2,2- 二甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image648
向4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2,2-二甲基-4-側氧基丁酸(2.3 g, 6.8 mmol)於DMF (45 mL)中之混合物添加K2 CO3 (2.3 g, 17 mmol)。10 min後，添加CH3 I (2.1 mL, 34 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌18 h。然後用水及Et2 O稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。然後藉由矽膠層析純化混合物，以提供4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2,2-二甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C17 H20 FO5 S) (ES, m/z): 355 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.44 (s, 2H), 1.23 (s, 6H)。
步驟 3 ： 4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2,2- 二甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image650
向4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2,2-二甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.1 g, 3.1 mmol)及DCM (20 mL)之混合物添加AlCl3 (1.7 g, 12 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18 h。將反應混合物傾倒至含有冰及1 N HCl之燒瓶中並攪拌5 min。然後添加EtOAc。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。然後藉由矽膠層析純化混合物，以提供4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2,2-二甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H18 FO5 S) (ES, m/z): 341 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ) δ 9.55 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.43 (s, 2H), 1.23 (s, 6H)。
中間體 56 ： (1S,2R 及 1R,2S)-2-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丙烷 -1- 甲酸第三丁基酯
Figure 02_image652
步驟 1 ： (1S,2R 及 1R,2S)-2-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丙烷 -1- 甲酸
Figure 02_image654
在Ar下在0℃下將3-氧雜二環[3.1.0]己烷-2,4-二酮(3.78 g, 33.7 mmol)添加至5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩(4.1 g, 17 mmol)及AlCl3 (2.92 g, 21.9 mmol)於DCM (100 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌2 h，且然後使其升溫至室溫。將反應混合物在室溫下攪拌16 h。然後藉由在0℃下將反應混合物緩慢添加至水(200 mL)及EtOAc (500 mL)之混合物來使反應混合物淬滅。使所得混合物升溫至室溫並攪拌1 h。然後用HCl (2.0 M於水中，34 mL，68 mmol)稀釋該混合物。將有機層分離，用飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於DCM中之0-100% [於EtOAc中之5% MeOH]進行溶析)純化粗產物殘餘物，以提供(1S,2R及1R,2S)-2-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸。LCMS (C14 H12 BrO4 S) (ES, m/z): 355, 357 [M+H]+ 。
步驟 2 ： (1S,2R 及 1R,2S)-2-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丙烷 -1- 甲酸第三丁基酯
Figure 02_image656
在Ar下在室溫下將第三丁醇(25.8 mL, 270 mmol)添加至BOC-酸酐(6.3 mL, 27 mmol)、DMAP (0.33 g, 2.7 mmol)及(1S,2R及1R,2S)-2-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸(4.8 g, 14 mmol)於DCE (30 mL)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至50℃持續2 h。然後使反應混合物冷卻至室溫並在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→100% EtOAc梯度)純化粗產物殘餘物，以提供(1S,2R及1R,2S)-2-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸第三丁基酯。LCMS (C18 H20 BrO4 S-C4 H8 ) (ES, m/z): 355, 357 [M+H-tBu]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.33 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.10-3.03 (m, 1H), 2.32-2.25 (m, 1H), 1.57-1.52 (m, 1H), 1.32-1.28 (m, 1H), 1.14 (s, 9H)。
步驟 3 ： (1S,2R 及 1R,2S)-2-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丙烷 -1- 甲酸第三丁基酯
Figure 02_image658
將(1S,2R及1R,2S)-2-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸第三丁基酯(1.64 g, 3.99 mmol)、RockPhos Pd G3 (0.100 g, 0.120 mmol)、Cs2 CO3 (3.90 g, 12.0 mmol)及(E )-苯甲醛肟(0.725 g, 5.98 mmol)之混合物用Ar脫氣5 min。在Ar下添加DMF (10.0 mL)，且然後將混合物用Ar脫氣5 min。攪拌反應混合物並加熱至80℃持續18 h。使反應混合物冷卻至室溫並用水(100 mL)及EtOAc (250 mL)稀釋。將有機層分離，用水(50 mL)且然後飽和NaCl水溶液(50 mL)洗滌。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0→75% EtOAc梯度)純化粗產物殘餘物，以提供(1S,2R及1R,2S)-2-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸第三丁基酯。LCMS: (C18 H20 O5 SNa) (ES, m/z): 371 [M+Na]+ 。
中間體 57 ： (S)-4-(5- 胺基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image660
步驟 1 ： (S)-4-(5-(( 二苯基亞甲基 ) 胺基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image662
將(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(0.50 g, 1.4 mmol)、二苯甲酮亞胺(0.45 mL, 2.7 mmol)、Rac BINAP Pd G3 (0.067 g, 0.067 mmol)及Cs2 CO3 (0.878 g, 2.69 mmol)之混合物用Ar脫氣5 min。在Ar下在20℃下添加甲苯(10.0 mL)，且然後將混合物用Ar脫氣5 min。在Ar下攪拌反應混合物並加熱至110℃持續18 h。然後使反應混合物冷卻至室溫並用DCM (25 mL)稀釋。將混合物過濾，且將濾液在減壓下濃縮，以提供(S)-4-(5-((二苯基亞甲基)胺基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯，其不經純化即使用。LCMS (C28 H26 NO4 S) (ES, m/z): 472 [M+H]+ 。
步驟 2 ： (S)-4-(5- 胺基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image664
在20℃下將TFA (2.1 mL, 27 mmol)添加至(S)-4-(5-((二苯基亞甲基)胺基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(635 mg, 1.35 mmol)於DCM (5.0 mL)中之混合物。將所得混合物在20℃下攪拌30 min。然後將反應混合物在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於DCM中之0→100% EtOAc梯度)純化粗產物殘餘物，以提供(S)-4-(5-胺基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H18 NO4 S) (ES, m/z): 308 [M+H]+ 。
中間體 58 ： 4-(6- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image666
將4-(6-(苄基氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(256 mg, 0.646 mmol)及Pd/C (172 mg, 0.161 mmol)之混合物用Ar脫氣。在Ar下將EtOAc (5.0 mL)、MeOH (5.0 mL)及HCl (37%於水中，0.053 mL，0.65 mmol)緩慢添加至該混合物。將反應混合物上方之頂隙經由真空脫氣且用H2 回填。將所得混合物在H2 下攪拌24 h。然後經由矽藻土過濾反應混合物，用EtOAc洗滌。將濾液在減壓下濃縮，以提供粗產物殘餘物。藉由矽膠層析(於Hex中之0-100% EtOAc進行溶析)純化粗產物殘餘物，以提供4-(6-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C16 H19 O4 S-C4 H8 ) (ES, m/z): 251 [M+H-tBu]+ 。
中間體 59 ： 4-(5- 溴苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image668
步驟 1 ： 5- 溴苯并 [b] 噻吩 -2- 甲醯氯
Figure 02_image670
在攪拌下經3 min將(COCl)2 (0.30 mL, 3.4 mmol)逐滴添加至0℃之5-溴苯并[b]噻吩-2-甲酸(0.750 g, 2.92 mmol)於CH2 Cl2 (15 mL)中之混合物。向反應添加DMF (0.023 mL, 0.29 mmol)，之後添加額外之(COCl)2 (0.20 mL, 2.3 mmol)。然後將反應混合物在0℃下攪拌1 h。自冰水浴移除反應燒瓶，且在室溫下繼續攪拌1.5 h。將反應濃縮以提供5-溴苯并[b]噻吩-2-甲醯氯，其不經進一步純化或表徵即使用。
步驟 2 ： 4-(5- 溴苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image672
利用攪拌棒將CuCl (0.269 g, 2.72 mmol)添加至100 mL圓底燒瓶。將燒瓶抽真空，且然後用N2 回填三次。將THF (6.0 mL)添加至燒瓶，然後攪拌並利用冰水浴冷卻至0℃。在0℃下將(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，11 mL，5.5 mmol)在攪拌下經3 min之時期逐滴添加至CuCl混合物。將所得混合物在0℃下攪拌30 min。在0℃下在攪拌下將5-溴苯并[b]噻吩-2-甲醯氯(0.75 g, 2.7 mmol)於NMP (24 mL)中之混合物經7 min之時期逐滴添加至該混合物。將所得混合物在0℃下攪拌2 h。然後將反應混合物在乙酸異丙酯(300 mL)與10%檸檬酸鈉水溶液(300 mL)之間分配。將所得混合物攪拌20 min。分離各層，且將水層用乙酸異丙酯(150 mL)萃取。將有機層合併，用NaCl水溶液、然後飽和NaCl水溶液洗滌，經無水MgSO4 乾燥並過濾，且使濾液靜置過夜。然後將濾液過濾，且將濾液濃縮以提供粗製殘餘物。利用丙酮將粗製殘餘物裝載至矽膠管柱上。藉由將加壓之N2 吹入其中來乾燥管柱。然後使經乾燥之管柱經受0→30% EtOAc梯度/Hex。收集所有含有產物之流份，濃縮，且藉由矽膠層析(於Hex中之0→25% EtOAc梯度)進行純化。將含有產物之流份濃縮且藉由非手性SFC (Phenomenex biphenyl，21mm×250 mm管柱，90:10 CO2 :MeOH w/ 0.25% DMEA，70 mL/min，100巴出口壓力，以MeOH/MeCN負載濃度計18.5 mg/mL，1.6 mL注射體積，215 nm檢測)進行純化，以提供4-(5-溴苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C16 H17 BrNaO3 S) (ES, m/z): 391, 393 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.05 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.75 (d,J =8.6Hz, 1H), 7.57 (d,J =8.6Hz, 1H), 3.31 (t,J =6.6Hz, 2H), 2.74 (t,J =6.6Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 60 ： 4-(5- 氯 -6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image674
將含有CuCl (0.76 g, 7.6 mmol)之燒瓶抽真空，且然後用N2 吹掃三次。添加THF (15 mL)，且使混合物冷卻至0℃。經10 min逐滴添加(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，31 mL，16 mmol)。30 min後，添加5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲醯氯(2.0 g, 7.6 mmol)，之後添加NMP (15 mL)。然後使混合物升溫至室溫。1 h後，將混合物冷卻至0℃，且添加濃NH4 OH水溶液(4.5 mL)。向此混合物添加水(240 mL)及MeOH (60 mL)。將混合物攪拌5 min且於水浴音波發生器中進行音波處理。將所得混合物過濾，且將沈澱物用水且然後Hex洗滌。將沈澱物分離並在真空下乾燥。然後將沈澱物在EtOAc與10%檸檬酸鈉水溶液之間分配。分離各層，且將水層用EtOAc洗滌。使合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。在濃縮期間發生沈澱，且經由過濾收集沈澱物，用EtOAc洗滌並在真空下乾燥，以提供4-(5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C16 H19 ClNO4 S) (ES, m/z): 356 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.03 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.30 (t,J =6.4Hz, 2H), 2.74 (t,J =6.4Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)。
中間體 61 ： (S)-4-(2-(3- 溴丙基 )-4- 甲氧基噻吩并 [2’,3’:5,6] 苯并 [1,2-d] 噁唑 -7- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image676
步驟 1 ： (S)-4-(5- 羥基 -6- 甲氧基 -4- 硝基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image678
向20 mL小瓶添加(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(100 mg, 0.21 mmol)及EtOAc (3.0 mL)。添加HNO3 (0.017 mL, 0.27 mmol)，且將混合物攪拌1 h。1 h後，將混合物在減壓下濃縮，且然後與Et2 O (3.0 mL)一起研磨。藉由過濾收集所得材料，以提供(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基-4-硝基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。1 H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 12.08 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.59 (dd,J =17.1, 7.9Hz, 1H), 3.23-3.16 (m, 1H), 3.16-3.09 (m, 1H), 1.35 (d,J =7.1Hz, 3H)。
步驟 2 ： (S)-4-(2-(3- 溴丙基 )-4- 甲氧基噻吩并 [2’,3’:5,6] 苯并 [1,2-d] 噁唑 -7- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image680
向4 mL小瓶添加(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基-4-硝基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(45 mg, 0.13 mmol)、Pd (0.040 g, 0.038 mmol)及MeOH (0.60 mL)。向混合物添加4-溴-1,1,1-三甲氧基丁烷(0.61 mL, 3.8 mmol)。將混合物在H2 下攪拌1 h。然後將混合物過濾，且將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之0→70% EtOAc梯度)純化所得殘餘物，以提供(S)-4-(2-(3-溴丙基)-4-甲氧基噻吩并[2’,3’:5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C19 H21 BrNO5 S) (ES, m/z): 454, 456 [M+H]+ 。1H NMR (500MHz, CDCl3 ) δ 8.36 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.62 (t,J =6.4Hz, 2H), 3.55 (dd,J =16.7, 7.5Hz, 1H), 3.24 (t,J =7.3Hz, 2H), 3.18 (dd,J =13.5, 6.8Hz, 1H), 3.12 (dd,J =16.7, 5.8Hz, 1H), 2.53 (p,J =6.8Hz, 2H), 1.32 (d,J =7.0Hz, 3H)。
中間體 88 ： (S)-4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基丁酸甲基酯
Figure 02_image682
向(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(0.637 g, 1.72 mmol)於ACN (15 mL)中之冷卻溶液添加TMS-Cl (1.32 mL, 10.3 mmol)。添加氰基硼氫化鈉(0.65 g, 10 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌2 h。用飽和NH4 Cl水溶液使反應混合物淬滅，且用DCM萃取。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/己烷)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基丁酸甲基酯。1 H NMR (600MHz, DMSO-δ6 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 2.87-2.83 (m, 2H), 2.57-2.52 (m, 1H), 2.00-1.94 (m, 1H), 1.82-1.73 (m, 1H), 1.14 (d, J=7.0Hz, 3H)。 如下表10中所示之中間體89直至93係根據與上文中間體88中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文中間體88中所概述之彼等類似之程序，使用描述為製備或自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 10
Figure 108111487-A0304-0011
中間體 94 ： (2S)-4-(5-(3- 羥基 -2- 甲基丙氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image694
將2-甲基丙烷-1,3-二醇(146 mg, 1.62 mmol)、(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(50 mg, 0.16 mmol)、(E)-二氮烯-1,2-二甲酸雙(4-氯苄基)酯(60 mg, 0.16 mmol)及三苯基膦(43 mg, 0.16 mmol)於NMP (0.30 mL)中之混合物用Ar脫氣，且然後攪拌並加熱至100℃持續3 h。使反應混合物冷卻至室溫且藉由反相HPLC (含有0.1% TFA之ACN/水)直接純化，以提供(2S)-4-(5-(3-羥基-2-甲基丙氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C19 H25 O6 S) (ES, m/z): 381 [M+H]+ 。
中間體 95 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁腈
Figure 02_image696
步驟 1 ： 4-(5-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁腈
Figure 02_image698
將4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁腈(161 mg, 0.496 mmol)及CPhos Pd G3 (20 mg, 0.025 mmol)添加至THF (2.5 mL)。將反應混合物密封，且將反應混合物上方之頂隙抽真空並用氮(3×)回填。將3-(第三丁基二甲基矽氧基)丙基溴化鋅(0.50 M於THF中，3.0 mL，1.5 mmol)添加至反應混合物，且將反應混合物在室溫下攪拌96 h。將反應混合物用EtOAc稀釋，且然後用NaHCO3 水溶液萃取。將水層分離並用EtOAc (3×)萃取。將有機層合併，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基-苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁腈。LCMS (C22 H32 NO3 SSi) (ES, m/z): 418 [M+H]+ 。
步驟 2 ： 4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁腈
Figure 02_image700
將4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩 -2-基)-4-側氧基丁腈(165 mg, 0.395 mmol)懸浮於MeOH (2.0 mL)、水(2.0 mL)及HOAc (2.0 mL)之混合物中。將所得懸浮液在室溫下攪拌19 h。將反應混合物用NaHCO3 水溶液稀釋，且然後用EtOAc (3×)萃取。將有機層合併，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁腈。LCMS (C16 H18 NO3 S) (ES, m/z): 304 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.27 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 4.50-4.47 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.53-3.40 (m, 4H), 2.79 (t,J =6.5Hz, 2H), 2.68 (t,J =7.4Hz, 2H), 1.79-1.66 (m, 2H)。
步驟 3 ： 4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁腈
Figure 02_image702
將三苯基膦(39 mg, 0.15 mmol)添加至4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁腈(45 mg, 0.15 mmol)於THF (1.0 mL)中之溶液。將混合物冷卻至0℃，且然後添加NBS (26 mg, 0.15 mmol)。1 h後，將額外之三苯基膦(23 mg, 0.089 mmol)及NBS (13 mg, 0.074 mmol)添加至反應混合物。將混合物在0℃下再攪拌10 min。用飽和NH4 Cl水溶液使反應混合物淬滅，且然後用EtOAc稀釋。將有機層分離，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供4-(5-(3-溴丙基)-6-甲氧基-苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁腈。LCMS (C16 H17 BrNO2 SNa) (ES, m/z): 388, 390 [M+Na]+ 。
中間體 96 ： (S)-4-(6-(3- 氯丙氧基 )-5- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image704
步驟 1 ： 6- 溴噻吩并 [3,2-b] 吡啶
Figure 02_image706
在空氣氣氛下在室溫下將AcOH (50 mL)添加至2-溴丙二醛(3.56 g, 23.6 mmol)及噻吩-3-基胺基甲酸第三丁基酯(4.70 g, 23.6 mmol)之混合物。攪拌反應混合物並加熱至100℃持續24 h。然後使反應混合物冷卻至室溫並用EtOAc (300 mL)稀釋。添加飽和NaHCO3 水溶液直至氣體逸出停止為止。將有機層分離，用鹽水(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於Hex中之EtOAc進行溶析)純化殘餘物，以提供6-溴噻吩并[3,2-b]吡啶。LCMS (C7 H5 BrNS) (ES, m/z): 214, 216 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.86 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.18 (d,J =5.4Hz, 1H), 7.58 (d,J =5.4Hz, 1H)。
步驟 2 ： 6- 溴噻吩并 [3,2-b] 吡啶 4- 氧化物
Figure 02_image708
在Ar下在0℃下將mCPBA (1.49 g, 6.63 mmol)添加至6-溴噻吩并[3,2-b]吡啶(1.42 g, 6.63 mmol)於DCM (50 mL)中之混合物。然後使反應混合物升溫至室溫且再攪拌24 h。然後將反應混合物在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於DCM中之[於EtOAc中之5% MeOH]進行溶析)純化殘餘物，以提供6-溴噻吩并[3,2-b]吡啶4-氧化物。LCMS (C7 H5 BrNOS) (ES, m/z): 230, 232 [M+H]+ 。
步驟 3 ：乙酸 6- 溴噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -5- 基酯
Figure 02_image710
在N2(g) 下在室溫下將乙酸酐(20 mL, 210 mmol)添加至6-溴噻吩并[3,2-b]吡啶4-氧化物(1.38 g, 6.00 mmol)。然後將反應混合物加熱至140℃並攪拌4 h。然後使反應混合物冷卻至室溫並用EtOAc (200 mL)及H2 O (200 mL)稀釋。將NaHCO3 逐份緩慢添加至反應混合物直至所有氣體逸出停止為止。將有機層分離，用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於DCM中之[於EtOAc中之5% MeOH]進行溶析)純化殘餘物，以提供乙酸6-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-5-基酯。LCMS (C9 H7 BrNO2 S-C2 H2 O) (ES, m/z): 230, 232 [M+H-乙酸酯]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.04 (s, 1H), 8.29 (d,J =5.2Hz, 1H), 7.54 (d,J =5.4Hz, 1H), 2.41 (s, 3H)。
步驟 4 ： 6- 溴噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -5- 醇
Figure 02_image712
在N2(g) 下在20℃下將NaOH (2.0 M於H2 O中，4.0 mL，8.0 mmol)添加至乙酸6-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-5-基酯(431 mg, 1.58 mmol)於MeOH (5.0 mL)中之溶液。然後將反應混合物在20℃下攪拌1 h。用HCl (1.0 M於H2 O中，8.0 mL，8.0 mmol)使反應混合物淬滅，且然後藉由添加H2 O (10 mL)進行稀釋。將反應混合物攪拌30 min且然後過濾。將所收集之材料用額外之H2 O (10 mL)洗滌，且然後在減壓下乾燥以提供6-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-5-醇。LCMS (C7 H5 BrNOS) (ES, m/z): 230, 232 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.65 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.91 (d,J =5.3Hz, 1H), 6.99 (d,J =5.1Hz, 1H)。
步驟 5 ： 6- 溴 -5- 氯噻吩并 [3,2-b] 吡啶
Figure 02_image714
在N2(g) 下在20℃下將磷醯氯(15.2 mL, 163 mmol)添加至6-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-5-醇(375 mg, 1.63 mmol)。然後攪拌反應混合物並加熱至100℃持續2天。使反應混合物冷卻至室溫，且藉由將反應混合物逐滴添加至飽和NaHCO3 水溶液中淬滅。用EtOAc (250 mL)進一步稀釋反應混合物並攪拌。將有機層分離，用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供6-溴-5-氯噻吩并[3,2-b]吡啶，其不經純化即使用。LCMS (C7 H4 BrClNS) (ES, m/z): 248, 250 [M+H]+ 。
步驟 6 ： 6- 溴 -5- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶
Figure 02_image716
在N2(g) 下在20℃下將NaOMe (25%於MeOH中，3.24 mL，14 mmol)添加至6-溴-5-氯噻吩并[3,2-b]吡啶(352 mg, 1.42 mmol)於MeOH (10 mL)中之混合物。於微波反應器中攪拌反應混合物並加熱至100℃持續1 h。用檸檬酸(1.0 M於H2 O中，28 mL，28 mmol)使反應混合物淬滅並用EtOAc (250 mL)稀釋。將有機層分離，用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(於DCM中之[於EtOAc中之5% MeOH]進行溶析)純化殘餘物，以提供6-溴-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶。LCMS (C8 H7 BrNOS) (ES, m/z): 244, 246 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.78 (s, 1H), 8.09 (d,J =5.3Hz, 1H), 7.44 (d,J =5.2Hz, 1H), 3.99 (s, 3H)。
步驟 7 ： 6- 溴 -5- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 甲酸
Figure 02_image718
在-78℃下將LDA (2.0 M於THF中，12.3 mL，24.6 mmol)添加至6-溴-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶(5.0 g, 20 mmol)於THF (100 mL)中之溶液。使混合物老化15 min，且然後藉由在-78℃下添加CO2(g) 來淬滅。然後經10 min使反應混合物升溫至0℃。在0℃下用HCl (2.0 M於水中，12.3 mL，24.6 mmol)使反應混合物淬滅，且然後用EtOAc (500 mL)稀釋。將有機層分離，用鹽水(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將殘餘物懸浮於DCM (90 mL)中並攪拌1 h。然後在室溫下經由加料漏斗經約4 h之時期逐滴添加Hex (250 mL)。然後將所得懸浮液在室溫下再攪拌16 h。然後過濾該懸浮液，且將殘餘物用Hex/DCM之4:1混合物(50 mL)洗滌。將殘餘物在真空下乾燥，以提供6-溴-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸。LCMS (C9 H7 BrNO3 S) (ES, m/z): 288, 290 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.79 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.01 (s, 3H)。
步驟 8 ： 6- 溴 -5- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 甲醯氯
Figure 02_image720
在Ar下在0℃下將DMF (8 µl, 0.1 mmol)添加至6-溴-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(1.05 g, 3.64 mmol)及草醯氯(0.64 mL, 7.3 mmol)於THF (40 mL)中之溶液。將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將反應混合物在減壓下濃縮，以提供6-溴-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲醯氯，其直接用於後續步驟中。
步驟 9 ： (S)-4-(6- 溴 -5- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image722
在Ar下在0℃下將(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II)溶液(0.5 M於THF中，14.6 mL，7.29 mmol)緩慢添加至經烘箱乾燥之含有氯化銅(I) (0.361 g, 3.64 mmol)之燒瓶。將反應混合物在Ar下在0℃下攪拌20 min。然後在0℃下經由套管將6-溴-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲醯氯(1.12 g, 3.64 mmol)於THF (10 mL)及NMP (5.0 mL)中之經Ar脫氣之溶液緩慢添加至反應混合物；使所得溶液升溫至室溫並在室溫下再攪拌18 h。將反應混合物冷卻至0℃，且藉由添加飽和NH4 Cl水溶液(50 mL)及EtOAc (100 mL)來淬滅。使所得雙相混合物升溫至室溫且再攪拌1 h。然後將混合物過濾，且將濾液用額外之EtOAc (250 mL)及鹽水(50 mL)稀釋。將有機層分離，用額外之鹽水(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(6-溴-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H15 BrNO4 S) (ES, m/z): 372, 374 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.87 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.52 (dd,J =17.9, 8.7Hz, 1H), 3.27 (dd,J =18.0, 4.5Hz, 1H), 3.03-2.91 (m, 1H), 1.20 (d,J =7.1Hz, 3H)。
步驟 10 ： (S)-(5- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 -3- 甲基 -4- 側氧基丁醯基 ) 噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -6- 基 )
Figure 108111487-A0304-12-01
酸
Figure 02_image724
將(S)-4-(6-溴-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(700 mg, 1.88 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷) (597 mg, 2.351 mmol)、Pd2 (dba)3 (43 mg, 0.047 mmol)、三環己基膦(53 mg, 0.19 mmol)及乙酸鉀(經烘箱乾燥) (295 mg, 3.01 mmol)之混合物用Ar脫氣5 min。在室溫下添加二噁烷(15 mL)，且將所得混合物用Ar脫氣5 min。然後將反應混合物加熱至80℃並在Ar下攪拌18 h。使反應混合物冷卻至室溫，且然後用EtOAc (20 mL)稀釋。將懸浮液在室溫下攪拌10 min，且然後經由矽藻土過濾，用EtOAc (20 mL)洗滌。將濾液在減壓下濃縮，以提供(S)-(5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-甲基-4-側氧基丁醯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-6-基)
Figure 108111487-A0304-12-01
酸，其不經純化即用於後續步驟中。LCMS (C14 H17 BNO6 S) (ES, m/z): 338 [M+H]+ 。
步驟 11 ： (S)-4-(6- 羥基 -5- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image726
在室溫下將OXONE®溶液(KHSO5 •½KHSO4 •½K2 SO4 ；0.2 M於水中，14.10 mL，2.82 mmol)添加至(S)-(5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-甲基-4-側氧基丁醯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-6-基)
Figure 108111487-A0304-12-01
酸(634 mg, 1.88 mmol)於丙酮(20 mL)中之混合物。將反應混合物在室溫下攪拌30 m。藉由添加亞硫酸氫鈉(587 mg, 5.64 mmol)於水(5 mL)中之溶液使反應混合物淬滅，且然後攪拌5 min。用DCM (200 mL)稀釋反應混合物。將有機層分離，且將水層用額外之DCM (2×50 mL)洗滌。將有機層合併，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)純化殘餘物，以提供(S)-4-(6-羥基-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H16 NO5 S) (ES, m/z): 310 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.46 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.44 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 1H), 3.20 (dd,J =17.5, 5.0Hz, 1H), 3.00-2.92 (m, 1H), 1.19 (d,J =7.2Hz, 3H)。
步驟 12 ： (S)-4-(6-(3- 氯丙氧基 )-5- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 ) -2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image728
在室溫下將1-溴-3-氯丙烷(244 mg, 1.55 mmol)添加至(S)-4-(6-羥基 -5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(96 mg, 0.31 mmol)及碳酸鉀(257 mg, 1.86 mmol)於DMF (1.0 mL)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至50℃持續4 h。使反應混合物冷卻至室溫並過濾，且然後藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)直接純化溶劑合物，以提供(S)-4-(6-(3-氯丙氧基)-5-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C17 H21 ClNO5 S) (ES, m/z): 386 [M+H]+ 。
中間體 97 ： (S)-4-(5-(3- 溴丙基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image730
步驟 1 ： (S)-4-(4- 氟 -6- 甲氧基 -5-((( 三氟甲基 ) 磺醯基 ) 氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image732
將(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(750 mg, 2.30 mmol)、DCM (10 mL)、休尼格鹼(Hunig’s base) (2.0 mL, 11 mmol)及三氟甲烷磺酸酐(1.0 M於DCM中，3.5 mL，3.5 mmol)合併。將反應混合物在室溫下攪拌20 min。然後用水使反應混合物淬滅，且用DCM稀釋。將有機層分離，用飽和NaHCO3 洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(4-氟-6-甲氧基-5-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H15 F4 O7 S2 ) (ES, m/z): 459 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.52 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.53 (dd,J =17.8, 8.7Hz, 1H), 3.27 (dd,J =17.8, 5.0Hz, 1H), 3.05-2.92 (m, 1H), 1.21 (d,J =7.2Hz, 3H)。
步驟 2 ： (2S)-4-(4- 氟 -6- 甲氧基 -5-(3-(( 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 氧基 ) 丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image734
將(S)-4-(4-氟-6-甲氧基-5-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)苯并-[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.00 g, 2.18 mmol)、CPhos Pd G4 (0.088 g, 0.11 mmol)及(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，8.7 mL，4.4 mmol)合併於小瓶中。將反應混合物在40℃下加熱2 h。經由矽藻土過濾反應混合物，且然後在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(2S)-4-(4-氟-6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C23 H30 FO6 S) (ES, m/z): 453 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.31 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 4.54 (t,J =3.4Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.75-3.70 (m, 1H), 3.69-3.62 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.49 (dd,J =17.7, 8.7Hz, 1H), 3.44-3.39 (m, 1H), 3.38-3.28 (m, 1H), 3.25 (dd,J =17.6, 5.0Hz, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 2H), 1.84-1.76 (m, 2H), 1.76-1.67 (m, 1H), 1.63-1.57 (m, 1H), 1.50-1.40 (m, 4H), 1.20-1.17 (m, 3H)。
步驟 3 ： (S)-4-(5-(3- 溴丙基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image736
將(2S)-4-(4-氟-6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(350 mg, 0.773 mmol)及DCM (5 mL)合併於小瓶中。將二溴化三苯基膦(653 mg, 1.55 mmol)添加至反應混合物並攪拌30 min。用水使反應混合物淬滅。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-(3-溴丙基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基 -4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H21 BrFO4 S) (ES, m/z): 431, 433 [M+H]+ 。
中間體 98 ： (S)-4-(4- 氟 -5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image738
將(2S)-4-(4-氟-6-甲氧基-5-(3-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(350 mg, 0.773 mmol)、MeOH (5 mL)及Mp-TsOH (1.00 g, 4.33 mmol)合併於小瓶中。將反應混合物振盪2 h。然後將反應混合物過濾，用MeOH洗滌並在減壓下濃縮，以提供(S)-4-(4-氟-5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H22 FO5 S) (ES, m/z): 369 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.31 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 (dd,J =17.7, 8.7Hz, 1H), 3.44 (t,J =6.5Hz, 2H), 3.25 (dd,J =17.4, 4.7Hz, 1H), 3.02-2.93 (m, 1H), 2.71 (t,J =7.4Hz, 2H), 1.69-1.63 (m, 2H), 1.20 (d,J =7.0Hz, 3H)。
中間體 99 ： 2-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丙烷 -1- 甲酸甲基酯
Figure 02_image740
步驟 1 ： 2-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丙烷 -1- 甲酸
Figure 02_image742
在0℃下將氯化鋁(0.923 g, 6.92 mmol)添加至4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩(1.13 g, 5.32 mmol)及3-氧雜二環[3.1.0]己烷-2,4-二酮(1.19 g, 10.7 mmol)於DCM (20.0 mL)中之混合物。使反應混合物升溫至室溫，且然後攪拌18 h。將反應混合物冷卻至0℃，且用水(50 mL)淬滅。然後用EtOAc (500 mL)稀釋混合物。將有機層分離，用鹽水洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷-1-甲酸，其不經純化即用於後續步驟中。LCMS (C15 H14 FO5 S) (ES, m/z): 325 [M+H]+ 。
步驟 2 ： 2-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丙烷 -1- 甲酸甲基酯
Figure 02_image744
在0℃下將TMS-重氮甲烷(2.0 M於二乙醚中，4.3 mL，8.6 mmol)逐滴添加至2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸(1.40 g, 4.32 mmol)於DCM (20 mL)及MeOH (20 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌15 min。用HOAc使反應混合物淬滅。然後將反應混合物在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)純化殘餘物，以提供2-(4-氟 -5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸甲基酯。LCMS (C16 H16 FO5 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.37 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.48 (s, 3H), 3.31-3.25 (m, 1H), 2.47-2.41 (m, 1H), 1.62-1.58 (m, 1H), 1.44-1.40 (m, 1H)。
步驟 3 ： 2-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丙烷 -1- 甲酸甲基酯
Figure 02_image746
在室溫下將氯化鋁(2.66 g, 20.0 mmol)逐份添加至2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸甲基酯(1.50 g, 4.43 mmol)於DCM (40 mL)中之混合物。將反應混合物在Ar下在室溫下攪拌6 h。將反應混合物冷卻至0℃，且然後用水(50 mL)緩慢地淬滅。用額外之DCM (250 mL)稀釋反應混合物。將有機層分離，用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)純化殘餘物，以提供2-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丙烷甲酸甲基酯。LCMS (C15 H14 FO5 S) (ES, m/z): 325 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.55 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.48 (s, 3H), 3.30-3.23 (m, 1H), 2.45-2.39 (m, 1H), 1.61-1.57 (m, 1H), 1.43-1.38 (m, 1H)。
中間體 100 ： (R)-4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image748
步驟 1 ： (R)-4-(5- 溴 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image750
將5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醯氯(3.00 g, 9.82 mmol)及THF (98 ml)合併。然後將反應混合物用Ar脫氣10 min。將CPhos Pd G4 (0.081 g, 0.098 mmol)添加至反應混合物，且使混合物冷卻至0℃。然後經由加料漏斗將(S)-(3-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，21 mL，11 mmol)添加至反應混合物。將混合物在0℃下攪拌1 h。用飽和NH4 Cl水溶液使反應混合物淬滅並用EtOAc稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(R)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H16 BrO4 S) (ES, m/z): 371, 373 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.28-8.26 (m, 2H), 7.82 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.44 (dd,J =17.6, 8.6Hz, 1H), 3.21 (dd,J =17.6, 5.1Hz, 1H), 3.03-2.93 (m, 1H), 1.20 (d,J =7.2Hz, 3H)。
步驟 2 ： (R)-4-(5-(3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image752
將CPhos Pd G3 (174 mg, 0.215 mmol)且然後(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，9.7 mL，4.9 mmol)添加至(R)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.00 g, 2.69 mmol)於THF (13.5 mL)中之混合物。將反應混合物在40℃下加熱3 h。使反應混合物冷卻至室溫，用水淬滅，並用EtOAc稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(R)-4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C24 H37 O5 SSi) (ES, m/z): 465 [M+H]+ 。
步驟 3 ： (R)-4-(5-(3- 羥基丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image754
將(R)-4-(5-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.04 g, 2.24 mmol)懸浮於MeOH (4 mL)、水(4 mL)及HOAc (4 mL)之混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌3.5小時。用EtOAc及水稀釋該反應混合物。將水層分離，且用額外之EtOAc (3×)萃取。將有機層合併，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(R)-4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H23 O5 S) (ES, m/z): 351 [M+H]+ 。
步驟 4 ： (R)-4-(5-(3- 溴丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image756
在0℃下將NBS (518 mg, 2.91 mmol)添加至(R)-4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(680 mg, 1.94 mmol)及三苯基膦(814 mg, 3.10 mmol)於THF (9.7 mL)中之混合物。1.5 h後，用飽和NH4 Cl水溶液使反應混合物淬滅，且然後用EtOAc稀釋。將有機層分離，用鹽水洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(R)-4-(5-(3-溴丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H22 BrO4 S) (ES, m/z): 413, 415 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.27 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.55 (t,J =6.6Hz, 2H), 3.43 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 1H), 3.20 (dd,J =17.5, 5.1Hz, 1H), 3.04-2.94 (m, 1H), 2.83-2.77 (m, 2H), 2.14-2.08 (m, 2H), 1.20 (d,J =7.2Hz, 3H)。
中間體 101 、 102 、 103 及 104 ： (1R,2R 或 1S,2S)-2-(4- 氟 -6- 羥基 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯、 (1R,2R 或 1S,2S)-2-(4- 氟 -6- 羥基 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯、 (1R,2R 或 1S,2S)-2-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯、 (1R,2R 或 1S,2S)-2-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯
Figure 02_image758
步驟 1 ： ( 順式 )-2-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸
Figure 02_image760
在0℃下將氯化鋁(776 mg, 5.82 mmol)添加至4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩(950 mg, 4.48 mmol)及3-氧雜二環[3.2.0]庚烷-2,4-二酮(1130 mg, 8.95 mmol)於DCM (20.0 mL)中之混合物。使反應混合物升溫至室溫，且然後攪拌18 h。將反應混合物冷卻至0℃，且然後藉由逐滴添加水(50 mL)來淬滅。然後將混合物用額外之DCM (200 mL)稀釋。將有機層分離，用鹽水洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供(順式)-2-(4-氟 -5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷-1-甲酸，其不經純化即用於下一步驟中。LCMS (C16 H16 FO5 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。
步驟 2 ： ( 順式 )-2-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯
Figure 02_image762
在0℃下將TMS-重氮甲烷(2.0 M於二乙醚中，4.0 mL，8.0 mmol)逐滴添加至(順式)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷甲酸(1.35 g, 3.99 mmol)於DCM (20 mL)及MeOH (20 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌15 min。用HOAc使反應混合物淬滅。然後將反應混合物在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)純化殘餘物，以提供(順式)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷甲酸甲基酯。LCMS (C17 H18 FO5 S) (ES, m/z): 353 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.15 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.59-4.50 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.68 (q,J =8.9, 8.5Hz, 1H), 3.41 (s, 3H), 2.34-2.10 (m, 4H)。
步驟 3 ： ( 反式 )-2-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸
Figure 02_image764
在室溫下將NaOH (5.0 M, 1.8 mL, 9.0 mmol)添加至(順式)-2-(4-氟 -5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷甲酸甲基酯(650 mg, 1.85 mmol)於MeOH (25 mL)中之混合物。將反應混合物在室溫下攪拌4 h。用TFA (0.85 mL, 11 mmol)使反應混合物淬滅，且然後用DCM (250 mL)稀釋。將有機層分離，用鹽水(50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(MeOH/DCM)純化殘餘物，以提供(反式)-2-(4-氟 -5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷甲酸。LCMS (C16 H16 FO5 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。
步驟 4 ： ( 反式 )-2-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯
Figure 02_image766
在0℃下將TMS-重氮甲烷(2.0 M於二乙醚中，1.7 mL，3.4 mmol)逐滴添加至(反式)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷甲酸(570 mg, 1.69 mmol)於DCM (20 mL)及MeOH (20 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌15 min。用HOAc使反應混合物淬滅。然後將反應混合物在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)純化殘餘物，以提供(反式)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷甲酸甲基酯。LCMS (C17 H18 FO5 S) (ES, m/z): 353 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.42 (q,J =9.0Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.58-3.48 (m, 1H), 2.38-2.30 (m, 1H), 2.26-2.18 (m, 1H), 2.17 -2.10 (m, 2H)。
步驟 5 ： (1R,2R 或 1S,2S)-2-(4- 氟 -6- 羥基 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯、 (1R,2R 或 1S,2S)-2-(4- 氟 -6- 羥基 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯、 (1R,2R 或 1S,2S)-2-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯、 (1R,2R 或 1S,2S)-2-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 羰基 ) 環丁烷 -1- 甲酸甲基酯
Figure 02_image768
在室溫下將AlCl3 (1.10 g, 8.27 mmol)添加至(反式)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷甲酸甲基酯(530 mg, 1.50 mmol)於DCM (40 mL)中之混合物。將反應混合物在Ar下在室溫下攪拌6 h。將反應混合物冷卻至0℃，且然後用水(50 mL)緩慢地淬滅。然後將反應混合物用額外之DCM (250 mL)稀釋。將有機層分離，用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)純化殘餘物，以提供(+/-反式)-2-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷-1-甲酸甲基酯及(+/-反式)-2-(4-氟-6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷-1-甲酸甲基酯之混合物。藉由手性SFC (CCA管柱，於CO2 中之20% [含有0.25% DMEA之MeOH])純化外消旋區域異構物之混合物，以提供： 峰1 (3.0 min)：(1R,2R或1S,2S)-2-(4-氟-6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷-1-甲酸甲基酯。LCMS (C16 H16 FO5 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.58 (br s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 4.45-4.34 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.56-3.47 (m, 1H), 2.36-2.24 (m, 1H), 2.25-2.16 (m, 1H), 2.16-2.07 (m, 2H)。 峰2 (3.5 min)：(1R,2R或1S,2S)-2-(4-氟-6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷-1-甲酸甲基酯。LCMS (C16 H16 FO5 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。 峰3 (3.9 min)：(1R,2R或1S, 2S)-2-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷-1-甲酸甲基酯。LCMS (C16 H16 FO5 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.55 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 4.45-4.38 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.58-3.49 (m, 1H), 2.38-2.27 (m, 1H), 2.25-2.19 (m, 1H), 2.17-2.09 (m, 2H)。 峰4 (5.0 min)：(1R,2R或1S, 2S)-2-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-羰基)環丁烷-1-甲酸甲基酯。LCMS (C16 H16 FO5 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.54 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 4.44-4.38 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.55-3.49 (m, 1H), 2.38-2.26 (m, 1H), 2.26-2.17 (m, 1H), 2.17-2.10 (m, 2H)。
中間體 105 ： (R)-4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image770
步驟 1 ： (R)-4-(4- 氟 -5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image772
將4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醯氯(1.00 g, 3.64 mmol)及THF (36.4 mL)之混合物用Ar脫氣10 min。將CPhos Pd G4 (0.030 g, 0.036 mmol)添加至混合物，且將反應混合物冷卻至0℃。然後經由加料漏斗將(S)-(3-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，8.0 mL，4.0 mmol)添加至反應混合物。將混合物在0℃下攪拌1 h。用飽和NH4 Cl水溶液使反應混合物淬滅，且然後用EtOAc稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(R)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H18 FO5 S) (ES, m/z): 341 [M+H]+ 。
步驟 2 ： (R)-4-(4- 氟 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image774
在室溫下將AlCl3 (1.16 g, 8.72 mmol)添加至(R)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(0.742 g, 2.18 mmol)於DCM (22 mL)中之混合物。將反應混合物攪拌18 h。然後將反應混合物冷卻至0℃，且藉由添加水(50 mL)及HCl (1.0 M於水中，50 mL，50 mmol)來淬滅。然後用EtOAc稀釋反應混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供(R)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩 -2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯，其不經純化即使用。LCMS (C15 H16 FO5 S) (ES, m/z): 327 [M+H]+ 。
中間體 106 ： (S)-4-(4- 氯 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image776
在室溫下將NCS (11 mg, 0.081 mmol)添加至(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(25 mg, 0.081 mmol)於DMF (0.25 mL)中之混合物。然後將反應混合物加熱至40℃並攪拌2 h。使反應混合物冷卻至室溫且藉由矽膠層析(EtOAC/Hex)直接純化，以提供(S)-4-(4-氯-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H16 ClO5 S) (ES, m/z): 343 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.78 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 (dd,J =17.8, 8.7Hz, 1H), 3.31-3.23 (m, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 1.20 (d,J =7.2Hz, 3H)。
中間體 107 ： (S)-4-(4- 溴 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image778
在室溫下將NBS (14 mg, 0.081 mmol)添加至(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(25 mg, 0.081 mmol)於DMF (0.25 mL)中之混合物。然後將反應混合物加熱至40℃並攪拌2 h。使反應混合物冷卻至室溫且藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)直接純化，以提供(S)-4-(4-溴-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H16 BrO5 S) (ES, m/z): 387, 389 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.82 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 (dd,J =17.8, 8.7Hz, 1H), 3.31-3.24 (m, 1H), 3.03-2.92 (m, 1H), 1.21 (d,J =7.2Hz, 3H)。
中間體 108 ： 4-(6- 羥基 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image780
步驟 1 ： 4-(5,6- 二甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image782
在0℃下將TMS-重氮甲烷(2.0 M於二乙醚中，5.5 mL，11 mmol)逐滴添加至4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸(2.15 g, 7.30 mmol)於DCM (50 mL)及MeOH (50 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌1 h。用HOAc使反應混合物淬滅。將反應混合物在減壓下濃縮，以提供4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯，其不經純化即用於下一步驟中。LCMS (C15 H17 O5 S) (ES, m/z): 309 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.35-3.30 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H)。
步驟 2 ： 4-(6- 羥基 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸酯及甲基 4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image784
在室溫下將AlCl3 (5.71 g, 42.8 mmol)添加至4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(2.20 g, 7.13 mmol)於DCM (250 mL)中之混合物。將反應混合物在室溫下攪拌24 h。將反應混合物冷卻至0℃且用水(50 mL，經由加料漏斗逐滴添加)淬滅。然後使反應混合物升溫至室溫，且用額外之DCM (250 mL)稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)純化殘餘物，以提供 4-(6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(77%)及4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(23%)之不可分離之混合物。LCMS (C14 H15 O5 S) (ES, m/z): 295 [M+H]+ 。
步驟 3 ： 4-(5-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯及 4-(6-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 氧基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image786
在0℃下將CBZ-Cl (1.06 mL, 7.42 mmol)添加至4-(6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(77%)及4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(23%) (1.82 g, 6.18 mmol)及TEA (1.29 mL, 9.28 mmol)於DCM (30 mL)中之混合物。然後使反應混合物升溫至室溫並再攪拌2 h。將反應混合物在減壓下濃縮且藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供： 峰1：4-(5-(((苄基氧基)羰基)氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C22 H21 O7 S) (ES, m/z): 429 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.48-7.38 (m, 5H), 5.30 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.40-3.33 (m, 2H), 2.69 (t,J =6.4Hz, 2H)。 峰2：4-(6-(((苄基氧基)羰基)氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C22 H21 O7 S) (ES, m/z): 429 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.47-7.37 (m, 5H), 5.31 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 2H)。
步驟 4 ： 4-(6- 羥基 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image788
在室溫下將1-甲基六氫吡嗪(1.4 mL, 13 mmol)添加至4-(6-(((苄基氧基)羰基)氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(1.84 g, 4.29 mmol)於DMF (5 mL)及MeOH (5 mL)中之混合物。然後將反應混合物加熱至50℃並再攪拌30 min。使反應混合物冷卻至室溫並在減壓下部分濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)純化粗製混合物，以提供4-(6-羥基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H15 O5 S) (ES, m/z): 295 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.88 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.33-3.29 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H)。
中間體 109 ： (S)-4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image790
步驟 1 ： (S)-4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image792
向(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(3.00 g, 9.73 mmol)於MeOH (97 mL)及THF (97 mL)中之混合物添加NaOH (5.0 M於水中，39 mL，200 mmol)。將混合物加熱至50℃持續1.5 h。使反應混合物冷卻至室溫，且利用HCl (2.0 M於水中，100 ml，200 mmol)酸化至pH約3。用EtOAc及水稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C14 H15 O5 S) (ES, m/z): 295 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.18 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.38 (dd,J =17.3, 8.5Hz, 1H), 3.07 (dd,J =17.3, 5.3Hz, 1H), 2.94-2.83 (m, 1H), 1.18 (d,J =7.2Hz, 3H)。
步驟 2 ： (S)-4-(5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image794
在室溫下將2-第三丁基-1,3-二異丙基異脲(2.3 mL, 10 mmol)添加至(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸(1.00 g, 3.40 mmol)於DMF (6.8 mL)中之混合物。將反應混合物在室溫下攪拌2 h。用EtOAc及水稀釋該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C18 H23 O5 S + Na) (ES, m/z): 373 [M+Na]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.40 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.36-3.30 (m, 1H), 3.05 (dd,J =17.1, 5.0Hz, 1H), 2.90-2.79 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.16 (d,J =7.2Hz, 3H)。
中間體 110 ： (S)-4-(4,7- 二氯 -5- 羥基 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image796
在20℃下將NCS (433 mg, 3.24 mmol)添加至(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(500 mg, 1.62 mmol)於DMF (4.0 mL)中之混合物。然後將反應混合物加熱至40℃並攪拌2 h。使反應混合物冷卻至室溫並用EtOAc (100 mL)稀釋。用水(3×25 mL)及鹽水(1×25 mL)洗滌該混合物。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，之後藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)進行額外純化，以提供(S)-4-(4,7-二氯-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H15 Cl2 O5 S) (ES, m/z): 377, 379 [M+H]+ 。
中間體 111 ： (S)-4-(5-(3- 溴 -2,2- 二甲基丙氧基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image798
在室溫下將1,3-二溴-2,2-二甲基丙烷(176 mg, 0.766 mmol)添加至(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(25 mg, 0.077 mmol)及碳酸鉀(42 mg, 0.31 mmol)於DMF (0.5 mL)中之混合物。然後攪拌反應混合物並加熱至100℃持續24 h。使反應混合物冷卻至室溫，用DCM (2 mL)稀釋並過濾。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)直接純化濾液，以提供(S)-4-(5-(3-溴-2,2-二甲基丙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C20 H25 BrFO5 S) (ES, m/z): 475, 477 [M+H]+ 。
中間體 112 ： (S)-4-(5-((1-( 溴甲基 ) 環丙基 ) 甲氧基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image800
在室溫下將1,1-雙(溴甲基)環丙烷(175 mg, 0.766 mmol)添加至(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(25 mg, 0.077 mmol)及碳酸鉀(42 mg, 0.31 mmol)於DMF (0.5 mL)中之混合物。然後攪拌反應混合物並加熱至40℃持續4 h。使反應混合物冷卻至室溫，用DCM (2 mL)稀釋並過濾。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)直接純化濾液，以提供(S)-4-(5-((1-(溴甲基)環丙基)甲氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C20 H23 BrFO5 S) (ES, m/z): 473, 475 [M+H]+ 。
中間體 113 ： (S)-4-(5- 羥基 -6-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image802
步驟 1 ： (S)-4-(5- 溴 -6- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image804
在室溫下將AlCl3 (3.23 g, 24.2 mmol)添加至(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.50 g, 4.04 mmol)於DCM (35 mL)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至35℃持續24 h。將反應混合物冷卻至0℃，且然後藉由緩慢添加水(10 mL)來淬滅。然後使混合物升溫至室溫並再攪拌15 min。用DCM (250 mL)稀釋反應混合物，且將有機層分離。用鹽水(50 mL)洗滌有機層。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-溴-6-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H14 BrO4 S) (ES, m/z): 357, 359 [M+H]+ 。
步驟 2 ： (S)-4-(5- 溴 -6-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image806
在0℃下將MOM-Cl (0.91 mL, 12 mmol)添加至(S)-4-(5-溴-6-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.42 g, 3.98 mmol)及休尼格鹼(4.2 mL, 24 mmol)於DCM (25 mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌1 h，且然後升溫至室溫並再攪拌24 h。藉由添加飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)使反應混合物淬滅，且然後用EtOAc (250 mL)及水(50 mL)稀釋。將有機層分離，用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-溴-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H18 BrO5 S) (ES, m/z): 401, 403 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 5.41 (s, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.48-3.42 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.22 (dd,J =17.6, 5.1Hz, 1H), 3.04-2.93 (m, 1H), 1.20 (d,J =7.4Hz, 3H)。
步驟 3 ： (S)-4-(6-( 甲氧基甲氧基 )-5-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼雜環戊烷 -2- 基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image808
將(S)-4-(5-溴-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.57 g, 3.91 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷) (1.19 g, 4.70 mmol)、Pd2 (dba)3 (0.179 g, 0.196 mmol)、三環己基膦(0.219 g, 0.783 mmol)及乙酸鉀(0.614 g, 6.26 mmol)之混合物用Ar脫氣5 min。在室溫添加二噁烷(20 mL)，且將所得混合物用Ar脫氣5 min。然後將反應混合物加熱至90℃並在Ar下攪拌6 h。使反應混合物冷卻至室溫，且然後用EtOAc (50 mL)稀釋。將懸浮液在室溫攪拌10 min，且然後經由矽藻土過濾，用EtOAc (50 mL)洗。將濾液在減壓下濃縮，提供(S)-4-(6-(甲氧基甲氧基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯，其不經純化即用於後續步驟中。LCMS (C22 H30 BO7 S) (ES, m/z): 449 [M+H]+ 。
步驟 4 ： (S)-4-(5- 羥基 -6-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image810
在室溫將OXONE®溶液(0.20 M於水中，21 mL，4.3 mmol)添加至(S)-4-(6-(甲氧基甲氧基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(1.75 g, 3.90 mmol)於丙酮(50 mL)中之溶液中。將反應混合物在室溫攪拌60 min。藉由添加亞硫酸氫鈉(0.81 g, 7.8 mmol)於水(5 mL)中之溶液使反應混合物淬滅，且然後攪拌5 min。用EtOAc (250 mL)稀釋反應混合物。將有機層分離，且將水層用另外之EtOAc (2×100 mL)洗。將有機層合併，用鹽水(25 mL)洗，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，提供頻哪醇(pinacol)副產物污染之(S)-4-(5-羥基-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。藉由矽膠層析(EtOAc/DCM)對分離之物質再純化，提供(S)-4-(5-羥基-6-(甲氧基甲氧基)-苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H19 O6 S) (ES, m/z): 339 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.52 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 5.29 (s, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.43-3.38 (m, 1H), 3.18 (dd,J =17.5, 5.1Hz, 1H), 3.03-2.91 (m, 1H), 1.19 (d,J =7.2Hz, 3H)。
中間體 114 ： (S)-4-(4- 氯 -5- 羥基 -6-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image812
在室溫下將NCS (99 mg, 0.74 mmol)添加至(S)-4-(5-羥基-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(250 mg, 0.74 mmol)於DMF (2.0 mL)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至40℃持續2 h。使反應混合物冷卻至室溫，且然後藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)直接純化，以提供(S)-4-(4-氯-5-羥基-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H18 ClO6 S) (ES, m/z): 373 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.83 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 5.35 (s, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.51 (dd,J =17.8, 8.7Hz, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.27 (dd,J =17.8, 5.0Hz, 1H), 3.02-2.91 (m, 1H), 1.20 (d,J =7.2Hz, 3H)。
中間體 115 ： (S)-4-(5-(3- 溴丙氧基 )-4- 氟 -6-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image814
步驟 1 ： (S)-4-(4- 氟 -5,6- 二羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image816
在0℃下將三溴化硼(1.0 M於DCM中，31 ml，31 mmol)添加至(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(2.0 g, 6.1 mmol)於DCM (100 ml)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至30℃持續2 h。將反應混合物冷卻至0℃，且然後藉由逐滴添加MeOH (10 ml)來淬滅。將反應混合物再攪拌15 min。然後用水(100 ml)及額外之DCM (500 ml)稀釋該反應混合物。將有機層分離，用鹽水(50 ml)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供(S)-4-(4-氟-5,6-二羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸，其不經純化即用於後續步驟中。LCMS (C13 H12 FO5 S) (ES, m/z): 299 [M+H]+ 。
步驟 2 ： (S)-4-(4- 氟 -5,6- 二羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image818
在0℃下將TMS-重氮甲烷(2.0 M於二乙醚中，3.1 ml，6.2 mmol)添加至(S)-4-(4-氟-5,6-二羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸(1.83 g, 6.14 mmol)於DCM (10 ml)及MeOH (10 ml)中之混合物。然後將反應混合物在0℃下攪拌15 min。用HOAc使反應混合物淬滅，且然後在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供期望產物。藉由矽膠層析([於EtOAc中之25% EtOH]/Hex)純化經分離之材料，以提供(S) -4-(4-氟-5,6-二羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H14 FO5 S) (ES, m/z): 313 [M+H]+ 。
步驟 3 ： (S)-4-(4- 氟 -5- 羥基 -6-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯及 (S)-4-(4- 氟 -6- 羥基 -5-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image820
在0℃下將MOM-Cl (0.12 ml, 1.6 mmol)添加至(S)-4-(4-氟-5,6-二羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(460 mg, 1.47 mmol)及休尼格鹼(0.52 ml, 3.0 mmol)於DCM (25 ml)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌1 h，且然後升溫至室溫並再攪拌24h。藉由添加飽和NaHCO3 水溶液(10 ml)使反應混合物淬滅，且然後用EtOAc (250 ml)及水(50 ml)稀釋。將有機層分離，用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯及(S)-4-(4-氟-6-羥基-5-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基 -4-側氧基丁酸甲基酯之不可分離之混合物。該混合物不經進一步純化即用於後續反應中。LCMS (C18 H18 FO6 S) (ES, m/z): 357 [M+H]+ 。
步驟 4 ： (S)-4-(6-(3- 溴丙氧基 )-4- 氟 -5-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯及 (S)-4-(5-(3- 溴丙氧基 )-4- 氟 -6-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image822
在室溫下將1,3-二溴丙烷(0.58 ml, 5.6 mmol)添加至(S)-4-(4-氟-5-羥基-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯及(S)-4-(4-氟-6-羥基-5-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(270 mg, 0.75 mmol)以及碳酸鉀(260 mg, 1.9 mmol)於DMF (2.0 ml)中之混合物。將混合物在室溫下攪拌18 h。用EtOAc (250 ml)及水(50 ml)稀釋反應混合物。將有機層分離，用鹽水(50 ml)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/己烷)純化殘餘物，以提供區域異構物混合物。藉由反相HPLC (含有0.1% TFA之ACN/水)純化區域異構物混合物，以提供： HPLC上之第一溶析峰：(S)-4-(6-(3-溴丙氧基)-4-氟-5-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C19 H23 BrFO6 S) (ES, m/z): 477, 479 [M+H]+ 。 HPLC上之第二溶析峰：(S)-4-(5-(3-溴丙氧基)-4-氟-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C19 H23 BrFO6 S) (ES, m/z): 477, 479 [M+H]+ 。
中間體 116 ： (S)-4-(5- 羥基 -6-( 甲基胺基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image824
步驟 1 ： (S)-4-(6- 溴 -5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image826
將6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲醯氯(5.96 g, 19.5 mmol)及CPhos Pd G4 (0.160 g, 0.195 mmol)合併於燒瓶中，且利用Ar脫氣5 min。在Ar流下添加THF (75 ml)，且使混合物冷卻至0℃。然後逐滴添加(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)溴化鋅(II) (0.50 M於THF中，40 ml，20 mmol)，且將所得混合物在0℃下攪拌2h，且然後升溫至室溫。將混合物在室溫下攪拌3天。 用飽和NH4 Cl水溶液(25 ml)使反應混合物淬滅，且然後用EtOAc (500 ml)稀釋。將有機層分離，用鹽水(50 ml)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/己烷)純化殘餘物，以提供(S) -4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H16 BrO4 S) (ES, m/z): 371, 373 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.39 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.52-3.43 (m, 1H), 3.28-3.18 (m, 1H), 3.05-2.95 (m, 1H), 1.23-1.18 (m, 3H)。
步驟 2 ： (S)-4-(6- 溴 -5- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image828
在室溫下將AlCl3 (366 mg, 2.75 mmol)添加至(S)-4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(170 mg, 0.458 mmol)於DCM (35 ml)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至45℃持續3天。將反應混合物冷卻至0℃，且然後藉由緩慢添加水(10 ml)來淬滅。然後使混合物升溫至室溫並再攪拌15 min。用DCM (250 ml)稀釋反應混合物，且將有機層分離。用鹽水(50 ml)洗滌有機層。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(6-溴-5-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C14 H14 BrO4 S) (ES, m/z): 357, 359 [M+H]+ 。
步驟 3 ： (S)-4-(6- 溴 -5-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image830
在0℃下將休尼格鹼(0.44 ml, 2.5 mmol)添加至(S)-4-(6-溴-5-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(150 mg, 0.42 mmol)及MOM-Cl (0.096 ml, 1.3 mmol)於DCM (5.0 ml)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌1 h。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)直接純化反應混合物，以提供(S)-4-(6-溴-5-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C16 H18 BrO5 S) (ES, m/z): 401, 403 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.42 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 3.61 (s, 3H), 3.53-3.42 (m, 4H), 3.23 (dd,J =17.7, 3.0Hz, 1H), 3.07-2.95 (m, 1H), 1.21 (d,J =5.0Hz, 3H)。
步驟 4 ： (S)-4-(6-(( 第三丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-5-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image832
在室溫下向(S)-4-(6-溴-5-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基 -4-側氧基丁酸甲基酯(144 mg, 0.359 mmol)、甲基胺基甲酸第三丁基酯(71 mg, 0.54 mmol)、Pd2 (dba)3 (16 mg, 0.018 mmol)、XANTPHOS (31 mg, 0.054 mmol)及碳酸銫(234 mg, 0.718 mmol)之經Ar脫氣之混合物添加二噁烷(4.0 ml)，同時利用Ar進行脫氣。將混合物攪拌5 min，同時利用Ar進行脫氣，之後將該混合物加熱至90℃並在Ar下攪拌18 h。使反應混合物冷卻至室溫並用EtOAc (20 ml)稀釋。經由矽藻土過濾所得懸浮液。將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物以提供產物。LCMS (C22 H30 NO7 S) (ES, m/z): 452 [M+H]+ 。
步驟 5 ： (S)-4-(5- 羥基 -6-( 甲基胺基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image834
在室溫下將TFA (1.0 ml, 13 mmol)添加至(S)-4-(6-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)-5-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(18 mg, 0.040 mmol)於DCM (2.0 ml)中之混合物。將反應混合物在室溫下攪拌2 h。用EtOAc (10 ml)稀釋該反應混合物，且藉由添加飽和NaHCO3 水溶液(10 ml)緩慢地淬滅。將所得混合物攪拌10 min。將有機層分離，用鹽水(5 ml)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-羥基-6-(甲基胺基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C15 H18 NO4 S) (ES, m/z): 308 [M+H]+ 。
實例 1 (2S,2’S)-4,4’-[ 丁烷 -1,4- 二基雙 (6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 )] 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 ) 及實例 2 ： (2S,2’S)-4,4’-[ 丙烷 -1,3- 二基雙 (6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 )] 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image836
步驟 1 ： (2S)-4-[6- 甲氧基 -5-( 丙 -2- 烯 -1- 基 )-1- 苯并噻吩 -2- 基 ]-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image838
在N2 下向(2S)-4-(5-溴-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(120 mg, 0.32 mmol)、雙(二亞苄基丙酮)鈀(7.1 mg, 12 µmol)及烯丙基三丁基錫烷(120 µL, 0.39 mmol)於甲苯(0.49 mL)中之攪拌混合物添加三-第三丁基膦(1.0 m於甲苯中，26 µL，26 µmol)。將反應混合物加熱至65℃持續18 h。在冷卻至室溫後，用Et2 O稀釋該混合物，且然後添加CsF。將粗製混合物在室溫下攪拌5 min。然後過濾該混合物，且藉由矽膠管柱層析(於Hex中之EtOAc)直接純化濾液，以提供(2S)-4-[6-甲氧基-5-(丙-2-烯-1-基)-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C18 H21 O4 S) (ES, m/z): 333 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 8.27 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.06-5.94 (m, 1H), 5.07 (d,J =12.5Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.46-3.38 (m, 3H), 3.19 (dd,J =17.5, 5.0Hz, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 1.19 (d,J= 7.1Hz, 3H)。
步驟 2 ： (2S,2’S)-4,4’-[ 丁 -2- 烯 -1,4- 二基雙 (6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 )] 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸二甲基酯 ) 及 (2S,2’S)-4,4’-[ 丙 -1- 烯 -1,3- 二基雙 (6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 )] 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸二甲基酯 )
Figure 02_image840
在N2 下向(2S)-4-[6-甲氧基-5-(丙-2-烯-1-基)-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(44 mg, 0.13 mmol)於CH2 Cl2 (1.3 mL)中之混合物一次性添加於CH2 Cl2 (1.3 mL)中之第2代格拉布觸媒(11 mg, 0.013 mmol)。將反應混合物加熱至65℃持續18 h。在冷卻至室溫後，藉由矽膠管柱層析(於Hex中之EtOAc)直接純化該混合物，以提供(2S,2’S)-4,4’-[丁-2-烯-1,4-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)及(2S,2’S)-4,4’-[丙-1-烯-1,3-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩 -5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)之混合物。(2S,2’S)-4,4’-[丁-2-烯-1,4-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)之表徵：LCMS (C34 H37 O8 S2 ) (ES, m/z): 637 [M+H]+ 。(2S,2’S)-4,4’-[丙-1-烯-1,3-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)之表徵：LCMS (C33 H35 O8 S2 ) (ES, m/z): 623 [M+H]+ 。
步驟 3 ： (2S,2’S)-4,4’-[ 丁烷 -1,4- 二基雙 (6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 )] 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸二甲基酯 ) 及 (2S,2’S)-4,4’-[ 丙烷 -1,3- 二基雙 (6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 )] 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸二甲基酯 )
Figure 02_image842
在N2 下在室溫下向(2S,2’S)-4,4’-[丁-2-烯-1,4-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)及(2S,2’S)-4,4’-[丙 -1-烯-1,3-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯) (57.0 mg，藉由1 H-NMR約3/2混合物)於EtOAc (0.5 mL)中之混合物一次性添加10% Pd/C (6.0 mg, 5.4 µmol)。將反應混合物脫氣且用H2 回填(三次)，並在H2 (氣囊)下在室溫下攪拌18 h。然後將混合物在減壓下濃縮，以提供(2S,2’S)-4,4’-[丁烷-1,4-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩 -5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)及(2S,2’S)-4,4’-[丙烷-1,3-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)之粗製混合物。該混合物不經進一步純化或表徵即使用。
步驟 4 ： (2S,2’S)-4,4’-[ 丁烷 -1,4- 二基雙 (6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 )] 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 ) 及 (2S,2’S)-4,4’-[ 丙烷 -1,3- 二基雙 (6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 )] 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image844
在室溫下向(2S,2’S)-4,4’-[丁烷-1,4-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)及(2S,2’S)-4,4’-[丙烷-1,3-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯) (57 mg)於THF (1.0 mL)、MeOH (1.0 mL)及水(0.20 mL)中之混合物一次性添加LiOH (26 mg, 1.1 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1 h，且然後用HCl水溶液(2 N, 0.52 mL)淬滅。用DMSO稀釋該混合物，且將所得混合物過濾。藉由RP-HPLC [C18管柱，水(0.1% TFA)-CH3 CN]純化濾液，以提供(2S,2’S)-4,4’-[丁烷-1,4-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸)及(2S,2’S)-4,4’-[丙烷-1,3-二基雙(6-甲氧基 -1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸)。 (2S,2’S)-4,4’-[丁烷-1,4-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸)之表徵數據：LCMS (C32 H34 O8 S2 Na) (ES, m/z): 633 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 12.20 (br, 2H), 8.21 (s, 2H), 7.72 (s, 2H), 7.57 (s, 2H), 3.87 (s, 6H), 3.39 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 2H), 3.07 (dd,J =17.5, 5.0Hz, 2H), 2.94-2.84 (m, 2H), 2.69 (br, 4H), 1.62 (br, 4H), 1.18 (d,J= 7.1Hz, 6H)。 (2S,2’S)-4,4’-[丙烷-1,3-二基雙(6-甲氧基-1-苯并噻吩-5,2-二基)]雙(2-甲基-4-側氧基丁酸)之表徵數據：LCMS (C31 H32 O8 S2 Na) (ES, m/z): 619 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 12.21 (br, 2H), 8.23 (s, 2H), 7.76 (s, 2H), 7.59 (s, 2H), 3.88 (s, 6H), 3.40 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 2H), 3.08 (dd,J =17.5, 5.0Hz, 2H), 2.94-2.85 (m, 2H), 2.71 (t,J =7.1Hz, 4H), 1.91 (五重峰，J =7.1Hz, 2H), 1.18 (d,J= 7.1Hz, 6H)。
實例 3 ： (S)-4-(5-(3-(2-(3- 羧基丙醯基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 丙氧基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image846
向具有磁力攪拌棒之1打蘭螺旋蓋小瓶中裝填(S)-4-(5-氯-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(60 mg, 0.18 mmol)、4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(76 mg, 0.20 mmol)、RockPhos Pd G3 (7.7 mg, 9.2 µmol)及Cs2 CO3 (89 mg, 0.28 mmol)，將其用含有隔片之蓋密封。將小瓶抽真空且用N2 回填3次。添加甲苯(0.61 mL)，並將懸浮液渦旋，音波處理，且然後加熱至110℃並攪拌2.25 h。然後使反應冷卻至室溫。添加TFA (0.60 mL, 7.8 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌1.5 h。然後將混合物在減壓下濃縮。向所得殘餘物添加THF (1.0 mL)及MeOH (0.50 mL)。添加NaOH水溶液(2.0 M, 0.50 mL, 1.0 mmol)，且將所得混合物加熱至40℃持續5 h。在冷卻至室溫後，添加額外之NaOH水溶液(2.0 M, 0.50 mL, 1.0 mmol)，且將混合物加熱至40℃持續額外2.5 h。然後使反應冷卻至室溫並在減壓下濃縮。添加DMSO (1.0 mL)，且經由注射器式過濾器過濾所得混合物。然後藉由RP-HPLC (C18，MeCN/水梯度，NH4 OH調節劑)純化濾液。將含有產物之流份在減壓下濃縮，且然後藉由RP-HPLC (C18，MeCN/水梯度，TFA調節劑)進一步純化，以提供(S)-4-(5-(3-(2-(3-羧基丙醯基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)丙氧基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C29 H30 NO9 S2 ) (ES, m/z): 600 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ) δ 12.18 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.39 (t,J =6.3Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.43 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 1H), 3.29-3.22 (m, 2H), 3.15-3.06 (m, 1H), 2.91-2.80 (m, 3H), 2.63-2.56 (m, 2H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.17 (d,J =7.2Hz, 3H)。
如下表11中所示之實例4直至23及81至83係根據與上文實例3中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例3中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 11
Figure 108111487-A0304-0012
實例 24 ： 4-(5-(3-(2-(3- 氰基丙醯基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image894
步驟 1 ： 4-(5-(3-(2-(3- 氰基丙醯基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image896
向小瓶添加4-(5-(3-溴丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(45 mg, 0.10 mmol)、4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基) -4-側氧基丁腈(33 mg, 0.10 mmol)、NaI (7.6 mg, 0.051 mmol)、溴化鎳(II)乙二醇二甲醚錯合物(9.4 mg, 0.031 mmol)、Mn (22 mg, 0.41 mmol)及4,4’-二甲氧基-2,2’-聯吡啶(6.6 mg, 0.031 mmol)。向小瓶添加DMPU (1.0 mL)，之後添加Py (82 µl, 0.051 mmol)及TMS-Cl (78 µl, 0.031 mmol)於DMPU中之5% v/v溶液。將小瓶用Ar脫氣5 min。將混合物加熱至90℃持續2 h。2 h後，使該混合物冷卻至室溫且藉由製備型HPLC (ACN/含有0.1% TFA之H2 O)直接純化，以提供4-(5-(3-(2-(3-氰基丙醯基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C33 H35 NO6 S2 Na) (ES, m/z): 628 [M+Na]+ 。
步驟 2 ： 4-(5-(3-(2-(3- 氰基丙醯基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image898
向4-(5-(3-(2-(3-氰基丙醯基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(8.5 mg, 0.014 mmol)、MeOH (500 µL)及ACN (500 µL)之混合物添加NaOH (5.0 M於水中，0.56 µL，0.28 mmol)。將混合物加熱至40℃持續4 h。在冷卻至室溫後，藉由製備型HPLC (ACN/含有0.1% TFA之H2 O)純化該混合物，以提供4-(5-(3-(2-(3-氰基丙醯基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸。LCMS (C29 H28 NO6 S2 ) (ES, m/z): 550 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.20 (s, 1H), 8.30-8.20 (m, 2H), 7.82-7.75 (m, 2H), 7.65-7.56 (m, 2H), 3.89 (s, 6H), 3.54-3.46 (m, 2H), 2.82-2.76 (m, 2H), 2.76-2.58 (m, 8H), 1.99-1.86 (m, 2H)。
實例 25 ： 4,4’-(5,5’-( 丙烷 -1,3- 二基 ) 雙 (6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5,2- 二基 )) 雙 (4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image900
向4-(6-甲氧基-5-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(69 mg, 0.15 mmol)、4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(84 mg, 0.23 mmol)、PdCl2 (dppf)-CH2 Cl2 (25 mg, 0.030 mmol)及Cs2 CO3 (195 mg, 0.600 mmol)之混合物添加二噁烷(0.80 mL)及水(0.2 mL)。將反應加熱至100℃持續18 h。在冷卻至室溫後，然後將混合物過濾，且將殘餘材料用二噁烷洗滌。將濾液在減壓下濃縮。然後經由製備型HPLC (ACN/含有0.1% NH4 OH之H2 O)純化所得殘餘物，以提供4,4’-(5,5’-(丙烷-1,3-二基)雙(6-甲氧基苯并[b]噻吩-5,2-二基))雙(4-側氧基丁酸)。LCMS (C29 H27 O8 S2 ) (ES, m/z): 566 [M-H]- 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.11 (s, 2H), 7.68 (s, 2H), 7.50 (s, 2H), 3.82 (s, 6H), 3.16-3.09 (m, 4H), 2.66 (t,J =6.6Hz, 4H), 2.40 (s, 4H), 1.93-1.83 (m, 2H)。
實例 26 ： 4-(4-(3-(2-(3- 羧基丙醯基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -6- 基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image902
步驟 1 ： 4-(5- 甲氧基 -6-(3-(6- 甲氧基 -2-(4- 甲氧基 -4- 側氧基丁醯基 ) 苯并 [b] 噻吩 -4- 基 ) 丙基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image904
向小瓶添加4-(6-(3-溴丙基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(72 mg, 0.16 mmol)、4-(4-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基) -4-側氧基丁酸甲基酯(58 mg, 0.16 mmol)、NaI (12 mg, 0.082 mmol)、溴化鎳(II)乙二醇二甲醚錯合物(15 mg, 0.049 mmol)、Mn (36 mg, 0.65 mmol)及4,4’-二甲氧基-2,2’-聯吡啶(11 mg, 0.049 mmol)。向小瓶添加DMPU (1.6 mL)，之後添加Py (130 µl, 0.082 mmol)及TMS-Cl (130 µl, 0.049 mmol)於DMPU中之5% v/v溶液。將小瓶用Ar脫氣5 min。將混合物加熱至90℃持續1 h。1 h後，使該混合物冷卻至室溫，且然後用EtOAc及水稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。所得混合物不經進一步純化或表徵即使用。
步驟 2 ： 4-(4-(3-(2-(3- 羧基丙醯基 )-5- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -6- 基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image906
向4-(5-甲氧基-6-(3-(6-甲氧基-2-(4-甲氧基-4-側氧基丁醯基)苯并[b]噻吩-4-基)丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(100 mg, 0.16 mmol)及MeOH (1.6 mL)之混合物添加NaOH (5 M於水中，0.65 mL，3.3 mmol)，且將混合物加熱至50℃持續1 h。在冷卻至室溫後，藉由製備型HPLC (ACN/含有0.1% TFA之H2 O)純化該混合物，以提供4-(4-(3-(2-(3-羧基丙醯基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-6-基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸。LCMS (C29 H29 O8 S2 ) (ES, m/z): 569 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.23 (s, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 3.89-3.79 (m, 6H), 3.34-3.19 (m, 4H), 3.03 (t,J =7.3Hz, 2H), 2.82-2.74 (m, 2H), 2.66-2.55 (m, 4H), 2.06-1.96 (m, 2H)。
如下表12中所示之實例27直至31係根據與上文實例26中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例26中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 12
Figure 108111487-A0304-0013
實例 32 ： 4-(5-(3-((2-(3- 羧基丙醯基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image918
向4-(5-(3-溴丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(83 mg, 0.20 mmol)、4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(78 mg, 0.24 mmol)及K2 CO3 (28 mg, 0.20 mmol)之混合物添加ACN (1 mL)。將反應加熱至65℃持續18 h。在冷卻至室溫後，用ACN (4 mL)稀釋混合物並過濾。然後將濾液在減壓下濃縮。然後添加THF (2.0 mL)、MeOH (0.50 mL)、水(1.0 mL)及LiOH (48 mg, 2.0 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌2 h。然後用AcOH (0.40 mL)使混合物淬滅，且將混合物在減壓下濃縮。然後經由製備型HPLC (ACN/含有0.1% TFA之H2 O)純化所得殘餘物，以提供4-(5-(3-((2-(3-羧基丙醯基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸。LCMS (C29 H28 FO9 S2 ) (ES, m/z): 603 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.28 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.73 (d,J =13.7Hz, 1H), 7.55 (d,J =11.4Hz, 2H), 4.06-4.00 (m, 2H), 3.90-3.81 (m, 6H), 3.28 (t,J =6.1Hz, 2H), 3.23 (t,J =6.2Hz, 2H), 2.82 (s, 2H), 2.58-2.56 (m, 4H), 1.95-193 (m, 2H)。
如下表13中所示之實例33直至40及84直至157係根據與上文實例32中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例32中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 13
Figure 108111487-A0304-0014
實例 41 ： (2S)-4-{5-[3-({2-[(3S)-3- 羧基丁醯基 ]-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5- 基 } 氧基 ) 丙基 ]-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 }-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1084
在N2 下向(2S)-4-(5-溴-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(107 mg, 0.287 mmol)、RockPhos Pd G3 (11 mg, 0.013 mmol)及Cs2 CO3 (128 mg, 0.392 mmol)之混合物添加(2S)-4-[5-(3-羥基 -丙基)-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(92 mg, 0.26 mmol)於甲苯(870 µL)中之混合物。將反應混合物用N2 吹掃5 min，且然後加熱至110℃持續2 h。在冷卻至室溫後，在室溫下添加THF (1.0 mL)、MeOH (1.0 mL)及水(0.25 mL)，之後一次性添加LiOH·H2 O (157 mg, 3.75 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4 h，然後用HCl水溶液(2.0 N, 1.35 mL)淬滅。添加DMSO，且將所得混合物過濾。藉由RP-HPLC [C18管柱，水(0.1% TFA)-CH3 CN]純化濾液，以提供(2S)-4-{5-[3-({2-[(3S)-3-羧基丁醯基]-6-甲氧基-1-苯并噻吩-5-基}氧基)丙基]-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基}-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C31 H32 O9 S2 Na) (ES, m/z): 635 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 12.19 (br, 2H), 8.23 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.05 (d,J =6.2Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.06 (dt,J =17.5, 4.3Hz, 2H), 2.94-2.80 (m, 4H), 2.10 (五重峰，J= 6.9Hz, 2H), 1.17 (d,J= 7.1Hz, 6H)。
如下表14中所示之實例42、158及159係根據與上文實例41中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例41中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 14
Figure 108111487-A0304-0015
實例 43 ： (S)-4-(5-(3-((2-(3- 羧基丙醯基 ) 苯并 [b] 噻吩 -6- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1092
步驟 1 ： (S)-4-(6- 甲氧基 -5-(3-((2-(4- 甲氧基 -4- 側氧基丁醯基 ) 苯并 [b] 噻吩 -6- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image1094
將(S)-4-(5-(3-羥基丙氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(16 mg, 0.044 mmol)、4-(6-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸甲基酯(14 mg, 0.052 mmol)、(E)-二氮烯-1,2-二基雙(六氫吡啶-1-基甲酮) (28 mg, 0.11 mmol)及Ph3 P (29 mg, 0.11 mmol)於THF (1.0 mL)中之混合物用Ar脫氣，且然後在20℃下攪拌18 h。然後用DMSO (1.0 mL)稀釋反應混合物並過濾。然後藉由反相HPLC (ACN於水中，0.1% TFA調節劑，C-18固定相)直接純化混合物，以提供(S)-4-(6-甲氧基-5-(3-((2-(4-甲氧基-4-側氧基丁醯基)苯并[b]噻吩-6-基)氧基)丙氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C31 H33 O9 S2 ) (ES, m/z): 613 [M+H]+ 。
步驟 2 ： (S)-4-(5-(3-((2-(3- 羧基丙醯基 ) 苯并 [b] 噻吩 -6- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1096
在室溫下將NaOH (5.0 M於水中，21 μL，0.11 mmol)添加至(S)-4-(6-甲氧基-5-(3-((2-(4-甲氧基-4-側氧基丁醯基)苯并[b]噻吩-6-基)氧基)丙氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(6.3 mg, 10 µmol)於MeOH (1.0 mL)中之混合物。攪拌反應混合物並加熱至50℃持續2 h。使粗製反應混合物冷卻至室溫，用TFA (16 μL, 0.21 mmol)淬滅，用DMSO (1.0 mL)稀釋，且然後過濾。然後藉由反相HPLC (ACN於水中，0.1% TFA調節劑，C-18固定相)直接純化濾液，以提供(S)-4-(5-(3-((2-(3-羧基丙醯基)苯并[b]噻吩-6-基)氧基)丙氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C29 H29 O9 S2 ) (ES, m/z): 585 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.22 (s, 2H), 8.33 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.94 (d,J =7.8Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.15 (d,J =7.6Hz, 1H), 4.34-4.18 (m, 4H), 3.89 (s, 3H), 3.44-3.25 (m, 3H), 3.13-3.05 (m, 1H), 2.95-2.87 (m, 1H), 2.66-2.60 (m, 2H), 2.34-2.27 (m, 2H), 1.25-1.14 (m, 3H)。
如下表15中所示之實例44直至59及160係根據與上文實例43中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例43中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 15
Figure 108111487-A0304-0016
實例 60 ： (2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3- 羧基丁醯基 ]-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5- 基 } 胺基 ) 乙基 ]-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 }-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1132
步驟 1 ： (2S)-4-{6- 甲氧基 -5-[2-({6- 甲氧基 -2-[(3S)-4- 甲氧基 -3- 甲基 -4- 側氧基丁醯基 ]-1- 苯并噻吩 -5- 基 } 胺基 ) 乙基 ]-1- 苯并噻吩 -2- 基 }-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image1134
在N2 下向(2S)-4-(5-溴-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(54 mg, 0.14 mmol)、Rac BINAP Pd G3 (12 mg, 0.012 mmol)及Cs2 CO3 (117 mg, 0.360 mmol)之混合物添加(2S)-4-[5-(2-胺基乙基)-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(54 mg, 0.120 mmol)於甲苯(1.6 mL)中之懸浮液。將反應混合物用N2 吹掃45 min，然後加熱至110℃持續12 h。在冷卻至室溫後，藉由矽膠管柱層析(於Hex中之EtOAc)純化該混合物，以提供(2S)-4-{6-甲氧基-5-[2-({6-甲氧基-2-[(3S)-4-甲氧基-3-甲基-4-側氧基丁醯基]-1-苯并噻吩-5-基}胺基)乙基]-1-苯并噻吩-2-基}-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯。LCMS (C32 H35 NO8 S2 Na) (ES, m/z): 648 [M+Na]+ 。
步驟 2 ： (2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3- 羧基丁醯基 ]-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -5- 基 } 胺基 ) 乙基 ]-6- 甲氧基 -1- 苯并噻吩 -2- 基 }-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1136
在室溫下向(2S)-4-{6-甲氧基-5-[2-({6-甲氧基-2-[(3S)-4-甲氧基-3-甲基-4-側氧基丁醯基]-1-苯并噻吩-5-基}胺基)乙基]-1-苯并噻吩-2-基}-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(20 mg, 0.03 mmol)於THF (280 µL)、MeOH (280 µL)及水(70 µL)中之混合物一次性添加LiOH·H2 O (13 mg, 0.32 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2 h，然後用HCl水溶液(2 N, 170 uL)淬滅。用DMSO稀釋該混合物，且將所得混合物過濾。藉由RP-HPLC [C18管柱，水(0.1% TFA)-CH3 CN]純化濾液，以提供(2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3-羧基丁醯基]-6-甲氧基-1-苯并噻吩-5-基}胺基)乙基]-6-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基}-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C30 H32 NO8 S2 ) (ES, m/z): 598 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ): δ 12.12 (br, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.41 (dd,J =17.5, 8.6Hz, 2H), 3.36 (t,J =6.5Hz, 2H), 3.14-2.96 (m, 4H), 2.94-2.84 (m, 2H), 1.18 (d,J= 7.1Hz, 6H)。
如下表16中所示之實例61係根據與上文實例60中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例60中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 16
Figure 108111487-A0304-0017
實例 62 ： 4,4’-(( 丙烷 -1,3- 二基雙 ( 氧基 )) 雙 (4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5,2- 二基 )) 雙 (4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image1140
向4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(0.024 g, 0.073 mmol)、4-(5-(3-溴丙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(0.025 g, 0.056 mmol)及Cs2 CO3 (0.091 g, 0.28 mmol)之混合物添加ACN (1.0 mL)。然後將反應混合物加熱至65℃持續1 h。在冷卻至室溫後，用THF稀釋該混合物，過濾，且將濾液在減壓下濃縮。向所得殘餘物添加THF (1.0 mL)、MeOH (0.20 mL)、水(0.5 mL)及LiOH (0.013 g, 0.56 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2 h。然後用AcOH使混合物淬滅，且將混合物在減壓下濃縮。經由製備型HPLC (ACN/含有0.1% TFA之H2 O)純化所得殘餘物，以提供4,4’-((丙烷-1,3-二基雙(氧基))雙(4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5,2-二基))雙(4-側氧基丁酸)。LCMS (C29 H27 F2 O10 S2 ) (ES, m/z): 637 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.26 (s, 2H), 7.55 (s, 2H), 4.31-4.24 (m, 4H), 3.99-3.80 (m, 6H), 3.34-3.32 (m, 4H), 2.60 (q,J =6.4Hz, 4H), 2.09 (dt,J =11.5, 5.8Hz, 2H)。
如下表17中所示之實例63直至65及161直至164係根據與上文實例62中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例62中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 17
Figure 108111487-A0304-0018
實例 66 ： (R)-4-(5-(2-((2-((S)-3- 羧基丁醯基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 乙氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1156
將(R)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(0.20 M於DMF中，500 µL，0.11 mmol)添加至(S)-4-(5-(2-氯乙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(0.20 M於DMF中，500 µL，0.11 mmol)及K2 CO3 (30 mg, 0.2 mmol)之攪拌懸浮液。將反應混合物加熱至100℃持續18 h。在冷卻至室溫後，添加DMSO (500 µL)，且將反應混合物過濾。添加水(500 µL)，之後添加LiOH·H2 O (30 mg, 0.7 mmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌18 h。過濾該混合物，且藉由質量導向反相C-18管柱層析(ACN/水+ 0.1% TFA)純化產物，以提供(R)-4-(5-(2-((2-((S)-3-羧基丁醯基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)氧基)乙氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C30 H29 FO10 S2 Na) (ES, m/z): 655 [M+Na]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 ) δ: 12.18 (s, 2H), 8.31 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.50 (s, 1H), 4.50-4.41 (m, 2H), 4.36-4.30 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.46 (dd, J=18, 9Hz, 1H), 3.40 (dd, J=17, 9Hz, 1H), 3.10 (ddd, J=22, 18, 5Hz, 2H), 2.95-2.81 (m, 2H), 1.24-1.14 (m, 6H)。
如下表18中所示之實例67直至74及165直至171係根據與上文實例66中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例66中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 18
Figure 108111487-A0304-0019
實例 75 ： 4-(5-((3-(2-(3- 羧基丙醯基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 丙基 ) 胺基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1188
向4 mL小瓶添加4-(6-甲氧基-5-(3-側氧基丙基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(10 mg, 0.03 mmol)、4-(5-胺基-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(8.9 mg, 0.027 mmol)及THF (0.50 mL)。向漿液添加AcOH (0.015 mL, 0.27 mmol)。將混合物加熱至55℃持續10 min。在冷卻至室溫後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉(17 mg, 0.080 mmol)。然後將混合物加熱至55℃持續3 h。在冷卻至室溫後，添加TFA (1 mL)，且將混合物在室溫下攪拌1 h。然後將混合物在減壓下濃縮，且然後用DMSO (1 mL)稀釋。藉由製備型HPLC (ACN/H2 O w/ 0.1% TFA)純化該混合物，以提供4-(5-((3-(2-(3-羧基丙醯基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)丙基)胺基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸。LCMS (C28 H29 N2 O8 S2 ) (ES, m/z): 585 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.18 (br, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.55 (br s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.48-3.43 (m, 2H), 3.27-3.24 (m, 4H), 2.73 (t,J =7.3Hz, 2H), 2.61-2.56 (m, 4H), 1.98-1.91 (m, 2H)。
實例 76 ： (2S,2’S)-4,4’-(( 乙烷 -1,2- 二基雙 ( 氧基 )) 雙 (6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5,2- 二基 )) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image1190
步驟 1 ： 4,4’-(( 乙烷 -1,2- 二基雙 ( 氧基 )) 雙 (6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5,2- 二基 ))(2S,2’S)- 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸二甲基酯 )
Figure 02_image1192
將(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(50 mg, 0.17 mmol)及K2 CO3 (47 mg, 0.34 mmol)之混合物用DMF (750 µL)稀釋。添加1-溴-2-氯乙烷(18 µL, 0.22 mmol)，且將反應混合物加熱至100℃持續18 h。將反應混合物在減壓下濃縮且不經進一步純化或表徵即使用。
步驟 2 ： (2S,2’S)-4,4’-(( 乙烷 -1,2- 二基雙 ( 氧基 )) 雙 (6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5,2- 二基 )) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image1194
將LiOH (16 mg, 0.67 mmol)添加至4,4’-((乙烷-1,2-二基雙(氧基))雙(6-甲氧基苯并[b]噻吩-5,2-二基))(2S,2’S)-雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯) (50 mg, 0.08 mmol)於THF (340 µl)/水(80 µl)中之攪拌溶液。將反應混合物在室溫下攪拌4 h。將該反應混合物過濾且在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於DMSO (4 mL)中並過濾。藉由質量導向反相C18 管柱層析(含有0.1% TFA之ACN/水)純化產物，以提供(2S,2’S)-4,4’-(5,5’-(乙烷-1,2-二基雙(氧基))雙(6-甲氧基苯并[b]噻吩-5,2-二基))雙(2-甲基-4-側氧基丁酸)。LCMS (C30 H30 O10 S2 Na) (ES, m/z): 637 [M+Na]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d6 ) δ: 12.21 (br s, 2H), 8.20 (s, 2H), 7.64 (s, 2H), 7.59 (s, 2H), 4.44 (s, 4H), 3.87 (s, 6H), 3.41 (dd, J=17, 9Hz, 2H), 3.09 (dd, J=17, 5Hz, 2H), 3.05-2.58 (m, 2H), 1.19 (d, J=7Hz, 6H)。
實例 77 ： (2S ,2’S )-4,4’-(7,8,17,18- 四氫 -6H ,16H - 雙 [1] 苯并噻吩并 [5,6-b :6’,5’-i ][1,4,8,11] 四氧雜環十四炔 -2,12- 二基 ) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 ) 及實例 78 ： (2S ,2’S )-4,4’-(7,8,17,18- 四氫 -6H ,16H - 雙 [1] 苯并噻吩并 [5,6-b :5’,6’-i ][1,4,8,11] 四氧雜環十四炔 -2,12- 二基 ) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image1196
步驟 1 ： (2S,2’S)-4,4’-(7,8,17,18- 四氫 -6H,16H- 雙 [1] 苯并噻吩并 [5,6-b:5’,6’-i][1,4,8,11] 四氧雜環十四炔 -2,12- 二基 ) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸二甲基酯 ) 及 (2S,2’S)-4,4’-(7,8,17,18- 四氫 -6H,16H- 雙 [1] 苯并噻吩并 [5,6-b:6’,5’-i][1,4,8,11] 四氧雜環十四炔 -2,12- 二基 ) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸二甲基酯 )
Figure 02_image1198
將(2S )-4-(5,6-二羥基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(60 mg, 0.20 mmol)、(2S )-4-[5,6-雙(3-羥基丙氧基)-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(120 mg, 0.20 mmol)、Ph3 P (193 mg, 0.737 mmol)及1,1’-(偶氮二羰基)二六氫吡啶(186 mg, 0.737 mmol)於THF (2.0 mL)中之混合物在室溫下攪拌18 h。然後將混合物過濾且藉由反相HPLC (含有0.1% TFA之MeCN/水梯度)進行純化，以提供(2S ,2’S )-4,4’-(7,8,17,18-四氫-6H ,16H -雙[1]苯并噻吩并[5,6-b :5’,6’-i ][1,4,8,11]四氧雜環十四炔-2,12-二基)雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)及(2S ,2’S )-4,4’-(7,8,17,18-四氫-6H ,16H -雙[1]苯并噻吩并[5,6-b :6’,5’-i ][1,4,8,11]四氧雜環十四炔-2,12-二基)雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)之1:1混合物。LCMS (C34 H36 O10 S2 Na) (ES, m/z): 691 [M+Na]+ 。
步驟 2 ： (2S,2’S)-4,4’-(7,8,17,18- 四氫 -6H,16H- 雙 [1] 苯并噻吩并 [5,6-b:5’,6’-i][1,4,8,11] 四氧雜環十四炔 -2,12- 二基 ) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 ) 及 (2S,2’S)-4,4’-(7,8,17,18- 四氫 -6H,16H- 雙 [1] 苯并噻吩并 [5,6-b:6’,5’-i][1,4,8,11] 四氧雜環十四炔 -2,12- 二基 ) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image1200
向(2S ,2’S )-4,4’-(7,8,17,18-四氫-6H ,16H -雙[1]苯并噻吩并[5,6-b :5’,6’-i ][1,4,8,11]四氧雜環十四炔-2,12-二基)雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)及(2S ,2’S )-4,4’-(7,8,17,18-四氫-6H ,16H -雙[1]苯并噻吩并[5,6-b :6’,5’-i ][1,4,8,11]四氧雜環十四炔-2,12-二基)雙(2-甲基-4-側氧基丁酸二甲基酯)之1:1混合物(67 mg, 0.10 mmol)於MeOH (1.0 mL)、THF (1.0 mL)及水(0.2 mL)中之攪拌溶液添加LiOH (24 mg, 1.0 mmol)。將反應混合物攪拌4 h，且然後藉由反相HPLC (含有0.1% TFA之MeCN/水梯度)進行純化，以提供(2S , 2’S )-4,4’-(7,8,17,18-四氫-6H ,16H -雙[1]苯并噻吩并[5,6-b :5’,6’-i ][1,4,8,11]四氧雜環十四炔-2,12-二基)雙(2-甲基-4-側氧基丁酸)及(2S ,2’S )-4,4’-(7,8,17,18-四氫-6H ,16H -雙[1]苯并噻吩并[5,6-b :6’,5’-i ][1,4,8,11]四氧雜環-十四炔-2,12-二基)雙(2-甲基-4-側氧基丁酸)之1:1混合物。LCMS (C32 H33 O10 S2 ) (ES, m/z): 641 [M+H]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.20 (brs, 2H), 8.18 (s, 2H), 7.52 (s, 2H), 7.40 (s, 2H), 4.27-4.18 (m, 8H), 3.42-3.34 (m, 2H), 3.10-3.03 (m, 2H), 2.92-2.85 (m, 2H), 2.29 (brs, 4H), 1.17 (d,J =6.8Hz, 6H)。
實例 79 ： (2S ,2’S )-4,4’-(1,3- 丙烷二基雙 { 氧基 [6-( 二氟甲氧基 )-1- 苯并噻吩 -5,2- 二基 ]}) 雙 (2- 甲基 -4- 側氧基丁酸 )
Figure 02_image1202
向(2S )-4-[6-(二氟甲氧基)-5-羥基-1-苯并噻吩-2-基]-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(54 mg, 0.16 mmol)及K2 CO3 (109 mg, 0.788 mmol)於DMF (0.8 mL)中之攪拌溶液添加1,3-二溴丙烷(8 µL, 0.08 mmol)。將混合物加熱至50℃持續4 h。在冷卻至室溫後，利用LiOH (2 M於水中，790 µL，1.58 mmol)處理該混合物且在室溫下攪拌4 h。然後將混合物在減壓下濃縮且藉由RP-HPLC (含有0.1% TFA之MeCN/水梯度)進行純化，以提供(2S ,2’S )-4,4’-(1,3-丙烷二基雙{氧基[6-(二氟甲氧基)-1-苯并噻吩-5,2-二基]})雙(2-甲基-4-側氧基丁酸)。LCMS (C31 H28 F4 O10 S2 Na) (ES, m/z): 723 [M+23]+ 。1 H NMR (500MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.25 (s, 2H), 8.27 (s, 2H), 7.94 (s, 2H), 7.73 (s, 2H), 7.20 (t,J =74.0Hz, 2H), 4.33-4.29 (m, 4H), 3.46-3.40 (m, 2H), 3.12 (dd,J =17.5, 4.9Hz, 2H), 2.94-2.87 (m, 2H), 2.37-2.32 (m, 2H), 1.19 (d,J =7.1Hz, 6H)。
如下表19中所示之實例80及172係根據與上文實例79中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例79中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 19
Figure 108111487-A0304-0020
實例 173 ： (4-(5-(3-((2-(3- 羧基丙醯基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙基 )-6- 甲氧基噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 )-4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1208
將4-(5-(3-羥基丙基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸第三丁基酯(76 mg, 0.20 mmol)添加至含有4-(4-氟-5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁酸乙基酯(250 mg, 0.77 mmol)、PS-TPP (319 mg, 0.600 mmol)、DIAD (0.117 ml, 0.600 mmol)及THF (3 ml)之小瓶。將反應混合物在室溫下攪拌3 h。過濾該反應混合物，用THF (5 ml)洗滌。添加MeOH (2 ml)、水(3 ml)及LiOH (48 mg, 2.0 mmol)，且將反應混合物再攪拌2 h。然後用HOAc使反應混合物淬滅並在減壓下濃縮。將殘餘物懸浮於DCM (5 ml)中，且添加TFA (1 mL)。將反應混合物攪拌1 h。然後將反應混合物在減壓下濃縮，且藉由反相HPLC (含有0.1% TFA之乙腈/水梯度)純化殘餘物，以提供(4-(5-(3-((2-(3-羧基丙醯基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙基)-6-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基)-4-側氧基丁酸。LCMS (C28 H27 FNO9 S2 ) (ES, m/z): 604 [M+H]+ 。1 H NMR (600MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.34 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 4.17 (t,J =6.3Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.35-3.29 (m, 4H), 3.10-3.04 (m, 2H), 2.63-2.58 (m, 4H), 2.18-2.13 (m, 2H)。
如下表20中所示之實例174係根據與上文實例173中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例173中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 20
Figure 108111487-A0304-0021
實例 175 ： 4,4'-( 丙烷 -1,3- 二基雙 (6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5,2- 二基 )) 雙 (4- 側氧基丁腈 )
Figure 02_image1212
將4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁腈(35 mg, 0.11 mmol)、溴化鎳(II)乙二醇二甲醚錯合物(10 mg, 0.033 mmol)、錳(24 mg, 0.44 mmol)、NaI (8 mg, 0.06 mmol)及4,4'-二甲氧基-2,2'-聯吡啶(7 mg, 0.03 mmol)合併於小瓶中。將4-(5-(3-溴丙基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-側氧基丁腈(40 mg, 0.11 mmol)於DMPU (1.1 ml)中之溶液添加至小瓶。將Py (88 µl, 0.055 mmol)及TMS-Cl (84 µl, 0.033 mmol)於DMPU中之5% v/v溶液添加至反應混合物。將反應混合物用Ar脫氣5 min，且然後攪拌並在90℃下加熱2 h。使反應混合物冷卻至室溫，用DMSO (2 ml)稀釋並過濾。藉由反相HPLC (含有TFA調節劑之ACN/水)純化濾液，以提供4,4'-(丙烷-1,3-二基雙(6-甲氧基苯并[b]噻吩-5,2-二基))雙(4-側氧基丁腈)。LCMS (C29 H27 N2 O4 S2 ) (ES, m/z): 531 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.26 (s, 2H), 7.78 (s, 2H), 7.61 (s, 2H), 3.89 (s, 6H), 3.55-3.45 (m, 4H), 2.81-2.76 (m, 4H), 2.74-2.69 (m, 4H), 1.95-1.90 (m, 2H)。
實例 176 ： (S)-4-(5-((3-((2-((S)-3- 羧基丁醯基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙基 ) 胺基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1214
將(S)-4-(5-胺基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(37 mg, 0.12 mmol)、(S)-4-(5-(3-溴丙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(54 mg, 0.12 mmol)及碳酸鉀(67 mg, 0.48 mmol)之混合物用Ar脫氣。將DMF (1.0 ml)添加至混合物，且攪拌反應混合物並在60℃下加熱2天。使反應混合物冷卻至室溫，且然後將NaOH (1.0 M於水中，0.48 ml，0.48 mmol)添加至該反應混合物。將混合物用DMSO (1.5 ml)進一步稀釋，且然後在室溫下攪拌1 h。用TFA (0.056 ml, 0.72 mmol)使反應混合物淬滅並過濾。藉由反相HPLC (含有0.1% TFA之ACN/水)純化濾液，以提供(S)-4-(5-((3-((2-((S)-3-羧基丁醯基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙基)胺基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C31 H33 FNO9 S2 ) (ES, m/z): 646 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.17 (t,J =5.9Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.47 (dd,J =17.6, 8.6Hz, 1H), 3.43-3.34 (m, 3H), 3.17-3.05 (m, 2H), 2.94-2.95 (m, 2H), 2.09-2.02 (m, 2H), 1.20-1.15 (m, 6H)。 如下表21中所示之實例177係根據與上文實例176中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例176中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 21
Figure 108111487-A0304-0022
實例 178 ： (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-((N,N- 二甲基胺磺醯基 ) 胺基 )-3- 甲基 -4- 側氧基丁醯基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1218
步驟 1 ： (S)-4-(5-(3-((4- 氟 -6- 甲氧基 -2-((S)-4- 甲氧基 -3- 甲基 -4- 側氧基丁醯基 ) 苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸第三丁基酯
Figure 02_image1220
將(S)-4-(5-(3-溴丙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(111 mg, 0.248 mmol)、(S)-4-(5-羥基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸第三丁基酯(87 mg, 0.25 mmol)及碳酸鉀(137 mg, 0.993 mmol)之混合物用Ar脫氣。將DMF (1.Ar)添加至混合物，且攪拌反應混合物並在40℃下加熱18 h。使反應混合物冷卻至室溫，且然後用EtOAc及水稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc/Hex)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-(3-((4-氟-6-甲氧基-2-((S)-4-甲氧基-3-甲基-4-側氧基丁醯基)苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸第三丁基酯。LCMS (C36 H42 FO10 S2 ) (ES, m/z): 739 [M+Na]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 4.26 (q,J =5.9Hz, 4H), 3.86 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.48 (dd,J =17.7, 8.7Hz, 1H), 3.39-3.33 (m, 1H), 3.23 (dd,J =17.7, 5.0Hz, 1H), 3.07 (dd,J =17.1, 5.0Hz, 1H), 3.02-2.93 (m, 1H), 2.91-2.81 (m, 1H), 2.23-2.18 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.20-1.15 (m, 6H)。
步驟 2 ： (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-( 第三丁氧基 )-3- 甲基 -4- 側氧基丁醯基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1222
將NaOH (1.0 M於水中，0.94 ml，0.94 mmol)添加至(S)-4-(5-(3-((4-氟-6-甲氧基-2-((S)-4-甲氧基-3-甲基-4-側氧基丁醯基)-苯并[b]噻吩 -5-基)氧基)丙氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸第三丁基酯(135 mg, 0.188 mmol)於THF (0.94 ml)及MeOH (0.94 ml)中之混合物。將混合物在室溫下攪拌1 h。用HCl (2.0 M於水中，0.47 ml，0.94 mmol)使反應混合物淬滅，並用EtOAc及水稀釋。將有機層分離，經MgSO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以提供(S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-(第三丁氧基)-3-甲基-4-側氧基丁醯基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C35 H40 FO10 S2 ) (ES, m/z): 725 [M+Na]+ 。
步驟 3 ： (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-((N,N- 二甲基胺磺醯基 ) 胺基 )-3- 甲基 -4- 側氧基丁醯基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1224
將休尼格鹼(0.062 ml, 0.36 mmol)及TBTU (23 mg, 0.071 mmol)添加至(S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-(第三丁氧基)-3-甲基-4-側氧基丁醯基)-6-甲氧基-苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸(50 mg, 0.071 mmol)於DCM (0.7 ml)中之混合物。將混合物在室溫下攪拌30 min。添加N,N-二甲基硫醯胺(11 mg, 0.085 mmol)，且將混合物再攪拌4 h。然後添加TFA (0.055 ml, 0.71 mmol)，且攪拌混合物並加熱至45℃持續2 h。使混合物冷卻至室溫並在減壓下濃縮。藉由反相HPLC (含有0.1% TFA之ACN/水)純化殘餘物，以提供(S) -4-(5-(3-((2-((S)-4-((N,N-二甲基胺磺醯基)胺基)-3-甲基-4-側氧基丁醯基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙氧基)-6-甲氧基苯并[b]噻吩 -2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C33 H38 FN2 O11 S3 ) (ES, m/z): 775 [M+Na]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.50 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 4.26 (q,J =5.9Hz, 4H), 3.87 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.48 (dd,J =17.8, 9.8Hz, 1H), 3.40 (dd,J =17.3, 8.4Hz, 1H), 3.16 (dd,J =17.8, 4.4Hz, 1H), 3.09 (dd,J =17.3, 5.3Hz, 1H), 3.00-2.94 (m, 1H), 2.94-2.87 (m, 1H), 2.79 (s, 6H), 2.23-2.17 (m, 2H), 1.21-1.15 (m, 6H)。
如下表22中所示之實例179係根據與上文實例178中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例178中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 22
Figure 108111487-A0304-0023
實例 180 ： (S)-4-(5-(3-((2-((S)-3- 羧基丁醯基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1228
步驟 1 ： (S)-4-(5-(3-((4- 氟 -6- 甲氧基 -2-((S)-4- 甲氧基 -3- 甲基 -4- 側氧基丁醯基 ) 苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6-( 甲氧基甲氧基 ) 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸甲基酯
Figure 02_image1230
將(S)-4-(5-(3-溴丙氧基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(30 mg, 0.068 mmol)、(S)-4-(5-羥基-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(23 mg, 0.068 mmol)及碳酸鉀(38 mg, 0.27 mmol)之混合物用Ar脫氣。將DMF (0.5 ml)添加至混合物，且攪拌反應混合物並在40℃下加熱24 h。使反應混合物冷卻至室溫，且然後不經後處理或純化即用於後續反應中。LCMS (C34 H38 FO11 S2 ) (ES, m/z): 705 [M+H]+ 。
步驟 2 ： (S)-4-(5-(3-((2-((S)-3- 羧基丁醯基 )-4- 氟 -6- 甲氧基苯并 [b] 噻吩 -5- 基 ) 氧基 ) 丙氧基 )-6- 羥基苯并 [b] 噻吩 -2- 基 )-2- 甲基 -4- 側氧基丁酸
Figure 02_image1232
在20℃下將NaOH (0.55 ml，1.0 M於水中，0.55 mmol)添加至(S)-4-(5-(3-((4-氟-6-甲氧基-2-((S)-4-甲氧基-3-甲基-4-側氧基丁醯基)苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙氧基)-6-(甲氧基甲氧基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸甲基酯(48 mg, 0.068 mmol)於DMSO (2.5 ml)中之溶液。然後將反應混合物在20℃下攪拌15 min。用HCl (0.280 ml，37%於水中，3.41 mmol)使反應混合物淬滅。將反應混合物在20℃下攪拌20 h。過濾該反應混合物。藉由反相HPLC (含有0.1% TFA之ACN/水)純化殘餘物，以提供(S)-4-(5-(3-((2-((S)-3-羧基丁醯基)-4-氟-6-甲氧基苯并[b]噻吩-5-基)氧基)丙氧基)-6-羥基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-側氧基丁酸。LCMS (C30 H30 FO10 S2 ) (ES, m/z): 633 [M+H]+ 。1 H NMR (499MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.17 (s, 2H), 9.70 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 4.31-4.26 (m, 4H), 3.87 (s, 3H), 3.46 (dd,J =17.6, 8.6Hz, 1H), 3.38 (dd,J =17.2, 8.4Hz, 1H), 3.13 (dd,J =17.6, 5.1Hz, 1H), 3.06 (dd,J =17.2, 5.3Hz, 1H), 2.91-2.85 (m, 2H), 2.24-2.18 (m, 2H), 1.19 (d,J =7.2Hz, 6H)。
如下表23中所示之實例181直至190係根據與上文實例180中所概述之彼等類似之程序或可根據與上文實例180中所概述之彼等類似之程序，使用在上文製備或中間體中所闡述或如自商業來源獲得之適當起始材料來製備。表 23
Figure 108111487-A0304-0024
生物學評估 根據以下將本文實例中所闡述之個別化合物定義為STING促效劑：(i) 結合至STING蛋白，如藉由在STING生物化學[3H]cGAMP競爭分析中在20 uM (所測試化合物之濃度)下氚化cGAMP配體與STING蛋白之結合降低至少20%所證實，及(ii) 在THP1細胞分析中在30 uM下展示干擾素產生且誘導6%或更大之IFN-β分泌(其中將30 uM cGAMP引起之誘導設定為100%)。
[3 H]-cGAMP 合成 將2.3 mL含有80 mM TrisCl、200 mM MgCl2 及20 mM NaCl之緩衝溶液、之後0.32 mL之10 mM GTP水溶液添加至塑膠50 mL AMICON管。然後添加[3 H]ATP (21 Ci/mmol, 45 mCi)於0.5 mL H2 O中之溶液，之後添加1 mL之1 mg/mL DNA溶液(鯡魚睪丸活化劑DNA，Sigma，編號D6898)及53 uL之47 mM cGAS酶溶液。添加額外之H2 O以使總體積達到10 mL。 將反應在37℃下攪拌2 h，且然後直接添加至Amicon Ultra-15 10K離心管中並在4,000 g下旋轉1 h。然後在半製備型Mono Q管柱上使用以下移動相來純化所收集之溶液： A：0.05 M TrisCl，pH 8.5，利用1 M NaOH調整 B：0.05 M TrisCl、0.5 M NaCl，pH 8.5，利用1 M NaOH調整 梯度：100% A持續5 min，之後線性梯度至50:50 (A:B)經25 min，3 mL/min，254 nm。 將所收集之產物流份合併，且利用緩衝液A調整至30 mL之總體積。以98.0%之放射化學純度在21.5 Ci/mmol之比活性下分離出總產量為15.5 mCi之[3 H]cGAMP。
cGAS 酶 以化學方式合成重組DNA載體以表現截短之人類cGAS酶(殘基161-522)。為幫助表現及純化，胺基末端含有六組胺酸標籤、SUMO標籤及TEV裂解位點。使重組酶於ROSETTA™ 2(DE3)單一勝任細胞(Novagen)中過表現。使用HIS-Select HF鎳親和凝膠(Sigma)實施親和純化，之後使用Hi-Load 26/60 SUPERDEX200製備級管柱(GE Healthcare)實施粒徑篩析層析。將流份合併，濃縮，於液氮中急凍且在-80℃下儲存直至需要。
3 H-cGAMP 過濾結合分析 (HAQ STING) 使用放射性過濾-結合分析，藉由與氚化cGAMP配體競爭人類STING受體膜之能力來量化化合物結合STING之能力。該結合分析採用自過表現全長HAQ STING及氚化cGAMP配體之粉紋夜蛾(Trichoplusia ni )細胞膜(T.ni ；Expression Systems，目錄號94-002F，www.expressionsystems.com )獲得之STING受體。 基本HAQ STING過濾分析方案係如下： 藉由Hamilton STARPlus CORE在96孔板(Greiner，編號651201)中使用1:3十點劑量反應格式連續滴定化合物。在化合物製備之後，藉由將濃縮膜稀釋至分析緩衝液(1× PBS；Invitrogen編號SH30028.02)中且使用手動組織均質器(Wheaton，編號357546)均質化(douncing)7次來製備2.2 ug/ml工作濃度之STING膜(SEQ. ID. No. 1)。然後將148 uL所製備膜手動添加至96孔深孔聚丙烯板(Fisher Scientific，編號12-566-121)之各孔。在膜添加後，使用BIOMEK FX將2 uL經滴定之測試化合物、DMSO對照(Sigma編號276855)或冷的cGAMP對照添加至適當孔。然後將化合物及膜在室溫下預培育60 min以使化合物結合達到平衡。在平衡後，藉由稀釋至分析緩衝液中來製備8 nM [3 H] c-GAMP配體，且然後將50 uL此工作儲備液手動添加至分析板之各孔。然後將板在室溫下培育60 min，且然後經由96孔GF/B濾板(PerkinElmer，編號6005250)使用配備有20 mM HEPES緩衝液(Fisher Scientific，編號BP299500)之TOMTEC MACH III細胞收穫器過濾各分析板之內容物。然後使用加壓烘箱將濾板在55℃下乾燥30 min，之後將30 uL ULTIMA GOLD F閃爍液添加至各孔。然後使用PerkinElmer TopCount讀板儀量測各反應孔之氚含量。 在正規化至對照之後，藉由量測剩餘放射性之量來計算各化合物濃度之活性百分比。利用4參數劑量反應方程式使活性百分比對log化合物濃度之曲線擬合來計算EC50 值。 最終反應條件如下：
Figure 108111487-A0304-0025
 所測試之化合物濃度係20.000 μM、637.00 μM、2.200 μM、0.740 μM、0.247 μM、0.082 μM、0.027 μM、0.009 μM、0.003 μM及0.001 μM，其含有1.0%殘餘DMSO。
全長 STING (HAQ) 病毒產生 使用昆蟲細胞桿狀病毒系統產生STING病毒。將草地貪夜蛾Sf21 (Spodoptera frugiperda Sf21 )細胞(Kempbio, Inc.)在不含抗生素之Sf-900II SFM培養基(LifeTechnologies編號10902088)中稀釋至5e5個細胞/ml。將細胞懸浮液添加至經處理6孔板之各孔(2 mL/孔，總計1e6個細胞)，且使細胞黏附至少30 min。同時，藉由將500 ng HAQ STING [STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1] DNA (Genewiz custom synthesis)與1 mL含有10 µL Cellfectin® II試劑(Invitrogen編號10362100)及100 ng病毒主鏈BestBac 2.0, v-cath/chiA缺失線性化桿狀病毒DNA (Expression Systems編號91-002)之Sf-900II SFM培養基組合來彙集1 mL共轉染混合物。使轉染混合物培育30 min。在培育之後，自6孔板中之黏附細胞輕輕地去除培養基，添加1 mL轉染混合物(1 mL/孔)，且將板置於27℃下之加濕培育器中。第二天，將1 mL Sf-900II SFM培養基(無抗生素)添加至6孔板之各孔。在添加培養基之後，使細胞與DNA (SEQ. ID. No. 2)一起在27℃下培育5-7天以產生P0病毒儲備液。為產生P1病毒儲備液，將0.5 mL P0病毒上清液添加至於含有5 µg/mL慶大黴素(gentamicin) (Invitrogen編號15710072)之Sf-900II SFM培養基中之50 mL未受感染Sf21 細胞(在感染前一天以5×105 個細胞/mL之密度接種以進行一個過夜倍增)。然後將受感染之細胞在110 rpm下振盪的同時在27℃下培育3天(ATR Biotech Multitron Infors HT編號AJ118)。在第3天，使用ViCell XR (Beckman Coulter Life Sciences編號383556)對P1培養物進行計數以確認已發生感染(細胞大小大於未受感染細胞≥3 µm且存活率大約為85%-95%)。在50 mL圓錐管中收穫培養物且在4℃下以2000×g離心10 min。將P1病毒上清液傾倒至清潔50 ml離心管中，且使用剩餘P1細胞糰粒來產生受桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC)。製備含有Sf-900II SFM培養基(含有10%熱不活化FBS、10% DMSO (Sigma編號D2650)及5 µg/ml慶大黴素)之冷凍保藏培養基，且在即將使用之前經由0.22 µM過濾器滅菌。將P1細胞糰粒重新懸浮至密度為2e7個細胞/ml且等分至冷凍小瓶中(1 mL/小瓶)。將冷凍小瓶置於-80℃下之MR. FROSTY™細胞冷凍器O/N中且在第二天轉移至液氮中以用於長期儲存。為產生P2病毒儲備液，將0.5 mL P1病毒上清液添加至於含有5 µg/mL慶大黴素之Sf-900II SFM培養基中之50 mL未受感染Sf21 細胞(在感染前一天以5×105 個細胞/mL之密度接種以進行一個過夜倍增)。將該等細胞在110 rpm下振盪的同時在27℃下培育3天，之後利用在4℃下以2000×g離心10 min來收穫P2儲備液。將P2病毒上清液傾倒出並棄除，同時遵循上文所闡述之相同方案使用P2細胞糰粒來產生P2 BIIC。桿狀病毒產生方案經驗證始終以2e9 pfu/mL (2e7個細胞/mL×100 pfu/細胞)之效價產生P1/P2 BIIC。
全長 STING (HAQ) 表現 為產生STING膜，藉由將解凍之BIIC添加至以1.0×106 個細胞/mL之密度接種之Sf21 細胞來過夜擴增P1/P2 BIIC。使用2e9 pfu/ml之假定BIIC效價計算用於感染培養物之BIIC之體積以在過夜擴增中達成MOI為10。在培養過夜之後，在ViCell XR上對細胞進行計數以確認已發生感染(細胞大小大於未受感染細胞≥3 µm且存活率大約為80%-90%)。基於(100 pfu/受感染Sf21 細胞)來計算來自過夜擴增且用於感染大規模表現之粉紋夜蛾(T.ni ；Expression Systems，目錄號94-002F，www.expressionsystems.com ，以1.0×106 之密度在MOI = 2.0下接種於細胞培養基(含有5 µg/mL慶大黴素之ESF921 SFM)中)之受感染Sf21 細胞之體積。使細胞在27℃下表現48 h，之後藉由在4℃下以3,400×g離心10 min來收穫細胞糰粒。在ViCell XR上對T. ni 細胞進行計數以確認已發生感染(細胞大小大於未受感染細胞≥3 µm且存活率大約為80%-90%)，之後進行收穫。
全長 STING (HAQ) 膜產生 緩衝儲備液試劑： 1) 1 M HEPES pH 7.5, Teknova，目錄號H1035 2) 5 M NaCl, Sigma Aldrich，目錄號S5150-1L 3) KCl, Sigma Aldrich，目錄號319309-500 mL 4) 完全無EDTA蛋白酶抑制劑錠劑，Roche Diagnostics，目錄號11873580001 5) Benzonase, Universal Nuclease, Pierce，目錄號88702 將溶解緩衝液[25 mM pH 7.5 HEPES、10 mM MgCl2 、20 mM KCl、(Benzonase 1:5000，全蛋白酶抑制劑錠劑/50 mL)]以每g細胞糰粒5 mL溶解緩衝液添加至表現上文製備之全長STING (HAQ)之細胞糰粒。將糰粒重新懸浮且使用Wheaton Dounce均質器均質化20次以破壞細胞膜。然後使均質化溶解物在接近5000 PSI之壓力下穿過EMULSIFLEX-C5細流體均質機。將重新懸浮之糰粒在4℃下以36,000 rpm (100,000×g)於45Ti轉子超高速離心機中離心45 min。去除上清液。然後將糰粒以50 mL糰粒/離心管之體積重新懸浮於洗滌緩衝液[(25 mM pH7.5 HEPES、1 mM MgCl2 、20 mM KCl、1 M NaCl (全蛋白酶抑制劑錠劑/50 mL)]中。然後使用玻璃均質器在冰上(20次拍擊)將糰粒/洗滌緩衝液混合物均質化，之後在4℃下以36,000 rpm離心45 min。去除上清液。將洗滌步驟再重複一次。將所得膜重新懸浮於20 mM HEPES pH 7.5、500 mM NaCl、10%甘油、無EDTA蛋白酶抑制劑(1個錠劑/50 mL)中。藉由Bradford分析(Bio-Rad Protein Assay，目錄號500-0006)量測蛋白質濃度，且藉由SDS-PAGE測定蛋白質富集並藉由西方墨點(Western blot)來確認。將重新懸浮之膜儲存在-80℃下。全長 HAQ STING [STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8] 胺基酸序列： MPHSSLHPSIPCPRGHGAQKAALVLLSACLVTLWGLGEPPEHTLRYLVLHLASLQLGLLLNGVCSLAEELHHIHSRYRGSYWRTVRACLGCPLRRGALLLLSIYFYYSLPNAVGPPFTWMLALLGLSQALNILLGLKGLAPAEISAVCEKGNFNVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTADRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCQTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQEEKEEVTVGSLKTSAVPSTSTMSQEPELLISGMEKPLPLRTDFSGGGLNDIFEAQKIEWHEGSLEVLFQGPHHHHHHHH (SEQ. ID. No. 1)全長 HAQ [STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1] 質體 DNA 序列： GGAACGGCTCCGCCCACTATTAATGAAATTAAAAATTCCAATTTTAAAAAACGCAGCAAGAGAAACATTTGTATGAAAGAATGCGTAGAAGGAAAGAAAAATGTCGTCGACATGCTGAACAACAAGATTAATATGCCTCCGTGTATAAAAAAAATATTGAACGATTTGAAAGAAAACAATGTACCGCGCGGCGGTATGTACAGGAAGAGGTTTATACTAAACTGTTACATTGCAAACGTGGTTTCGTGTGCCAAGTGTGAAAACCGATGTTTAATCAAGGCTCTGACGCATTTCTACAACCACGACTCCAAGTGTGTGGGTGAAGTCATGCATCTTTTAATCAAATCCCAAGATGTGTATAAACCACCAAACTGCCAAAAAATGAAAACTGTCGACAAGCTCTGTCCGTTTGCTGGCAACTGCAAGGGTCTCAATCCTATTTGTAATTATTGAATAATAAAACAATTATAAATGCTAAATTTGTTTTTTATTAACGATACAAACCAAACGCAACAAGAACATTTGTAGTATTATCTATAATTGAAAACGCGTAGTTATAATCGCTGAGGTAATATTTAAAATCATTTTCAAATGATTCACAGTTAATTTGCGACAATATAATTTTATTTTCACATAAACTAGACGCCTTGTCGTCTTCTTCTTCGTATTCCTTCTCTTTTTCATTTTTCTCTTCATAAAAATTAACATAGTTATTATCGTATCCATATATGTATCTATCGTATAGAGTAAATTTTTTGTTGTCATAAATATATATGTCTTTTTTAATGGGGTGTATAGTACCGCTGCGCATAGTTTTTCTGTAATTTACAACAGTGCTATTTTCTGGTAGTTCTTCGGAGTGTGTTGCTTTAATTATTAAATTTATATAATCAATGAATTTGGGATCGTCGGTTTTGTACAATATGTTGCCGGCATAGTACGCAGCTTCTTCTAGTTCAATTACACCATTTTTTAGCAGCACCGGATTAACATAACTTTCCAAAATGTTGTACGAACCGTTAAACAAAAACAGTTCACCTCCCTTTTCTATACTATTGTCTGCGAGCAGTTGTTTGTTGTTAAAAATAACAGCCATTGTAATGAGACGCACAAACTAATATCACAAACTGGAAATGTCTATCAATATATAGTTGCTGATCAGATCTGATCATGGAGATAATTAAAATGATAACCATCTCGCAAATAAATAAGTATTTTACTGTTTTCGTAACAGTTTTGTAATAAAAAAACCTATAAATATAGGATCCATGCCCCACTCCAGCCTGCATCCATCCATCCCGTGTCCCAGGGGTCACGGGGCCCAGAAGGCAGCCTTGGTTCTGCTGAGTGCCTGCCTGGTGACCCTTTGGGGGCTAGGAGAGCCACCAGAGCACACTCTCCGGTACCTGGTGCTCCACCTAGCCTCCCTGCAGCTGGGACTGCTGTTAAACGGGGTCTGCAGCCTGGCTGAGGAGCTGCACCACATCCACTCCAGGTACCGGGGCAGCTACTGGAGGACTGTGCGGGCCTGCCTGGGCTGCCCCCTCCGCCGTGGGGCCCTGTTGCTGCTGTCCATCTATTTCTACTACTCCCTCCCAAATGCGGTCGGCCCGCCCTTCACTTGGATGCTTGCCCTCCTGGGCCTCTCGCAGGCACTGAACATCCTCCTGGGCCTCAAGGGCCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTGCAGTGTGTGAAAAAGGGAATTTCAACGTGGCCCATGGGCTGGCATGGTCATATTACATCGGATATCTGCGGCTGATCCTGCCAGAGCTCCAGGCCCGGATTCGAACTTACAATCAGCATTACAACAACCTGCTACGGGGTGCAGTGAGCCAGCGGCTGTATATTCTCCTCCCATTGGACTGTGGGGTGCCTGATAACCTGAGTATGGCTGACCCCAACATTCGCTTCCTGGATAAACTGCCCCAGCAGACCGCTGACCGTGCTGGCATCAAGGATCGGGTTTACAGCAACAGCATCTATGAGCTTCTGGAGAACGGGCAGCGGGCGGGCACCTGTGTCCTGGAGTACGCCACCCCCTTGCAGACTTTGTTTGCCATGTCACAATACAGTCAAGCTGGCTTTAGCCGGGAGGATAGGCTTGAGCAGGCCAAACTCTTCTGCCAGACACTTGAGGACATCCTGGCAGATGCCCCTGAGTCTCAGAACAACTGCCGCCTCATTGCCTACCAGGAACCTGCAGATGACAGCAGCTTCTCGCTGTCCCAGGAGGTTCTCCGGCACCTGCGGCAGGAGGAAAAGGAAGAGGTTACTGTGGGCAGCTTGAAGACCTCAGCGGTGCCCAGTACCTCCACGATGTCCCAAGAGCCTGAGCTCCTCATCAGTGGAATGGAAAAGCCCCTCCCTCTCCGCACGGATTTCTCTGGCGGTGGCCTGAACGACATCTTCGAAGCCCAGAAAATCGAATGGCATGAAGGCAGCCTGGAAGTGCTGTTCCAGGGCCCACACCACCATCATCACCATCACCATTAATGAGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTAACCTAGGTAGCTGAGCGCATGCAAGCTGATCCGGGTTATTAGTACATTTATTAAGCGCTAGATTCTGTGCGTTGTTGATTTACAGACAATTGTTGTACGTATTTTAATAATTCATTAAATTTATAATCTTTAGGGTGGTATGTTAGAGCGAAAATCAAATGATTTTCAGCGTCTTTATATCTGAATTTAAATATTAAATCCTCAATAGATTTGTAAAATAGGTTTCGATTAGTTTCAAACAAGGGTTGTTTTTCCGAACCGATGGCTGGACTATCTAATGGATTTTCGCTCAACGCCACAAAACTTGCCAAATCTTGTAGCAGCAATCTAGCTTTGTCGATATTCGTTTGTGTTTTGTTTTGTAATAAAGGTTCGACGTCGTTCAAAATATTATGCGCTTTTGTATTTCTTTCATCACTGTCGTTAGTGTACAATTGACTCGACGTAAACACGTTAAATAGAGCTTGGACATATTTAACATCGGGCGTGTTAGCTTTATTAGGCCGATTATCGTCGTCGTCCCAACCCTCGTCGTTAGAAGTTGCTTCCGAAGACGATTTTGCCATAGCCACACGACGCCTATTAATTGTGTCGGCTAACACGTCCGCGATCAAATTTGTAGTTGAGCTTTTTGGAATTATTTCTGATTGCGGGCGTTTTTGGGCGGGTTTCAATCTAACTGTGCCCGATTTTAATTCAGACAACACGTTAGAAAGCGATGGTGCAGGCGGTGGTAACATTTCAGACGGCAAATCTACTAATGGCGGCGGTGGTGGAGCTGATGATAAATCTACCATCGGTGGAGGCGCAGGCGGGGCTGGCGGCGGAGGCGGAGGCGGAGGTGGTGGCGGTGATGCAGACGGCGGTTTAGGCTCAAATGTCTCTTTAGGCAACACAGTCGGCACCTCAACTATTGTACTGGTTTCGGGCGCCGTTTTTGGTTTGACCGGTCTGAGACGAGTGCGATTTTTTTCGTTTCTAATAGCTTCCAACAATTGTTGTCTGTCGTCTAAAGGTGCAGCGGGTTGAGGTTCCGTCGGCATTGGTGGAGCGGGCGGCAATTCAGACATCGATGGTGGTGGTGGTGGTGGAGGCGCTGGAATGTTAGGCACGGGAGAAGGTGGTGGCGGCGGTGCCGCCGGTATAATTTGTTCTGGTTTAGTTTGTTCGCGCACGATTGTGGGCACCGGCGCAGGCGCCGCTGGCTGCACAACGGAAGGTCGTCTGCTTCGAGGCAGCGCTTGGGGTGGTGGCAATTCAATATTATAATTGGAATACAAATCGTAAAAATCTGCTATAAGCATTGTAATTTCGCTATCGTTTACCGTGCCGATATTTAACAACCGCTCAATGTAAGCAATTGTATTGTAAAGAGATTGTCTCAAGCTCGGATCGATCCCGCACGCCGATAACAAGCCTTTTCATTTTTACTACAGCATTGTAGTGGCGAGACACTTCGCTGTCGTCGAGGTTTAAACGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCA (SEQ. ID. No. 2)
本揭示內容之某些化合物係在如上文所闡述之HAQ STING活體外結合分析中進行評估。下表將該等化合物之生物學數據以EC50 值製表。表 24 ： HAQ STING 之 3 H-cGAMP 過濾結合分析
Figure 108111487-A0304-0026
3 H-cGAMP 過濾結合分析 (WT STING) 使用放射性過濾-結合分析，藉由與氚化cGAMP配體競爭人類STING受體膜之能力來量化化合物結合STING之能力。該結合分析採用自過表現全長WT STING及氚化cGAMP配體之粉紋夜蛾細胞膜(T.ni ；Expression Systems，目錄號94-002F，www.expressionsystems.com )獲得之STING受體。 基本WT STING過濾分析方案係如下： 藉由稀釋至分析緩衝液中來製備16 nM [3 H] c-GAMP配體，且將50 uL此工作儲備液手動添加至分析板之各孔。在添加配體之後，使用BIOMEK FX將2 uL經滴定之測試化合物、DMSO對照(Sigma編號276855)或冷的cGAMP對照添加至適當孔。在Hamilton STARPlus CORE上於96孔板(Greiner，編號651201)中使用1:3十點劑量反應格式來製備連續滴定之化合物。在添加化合物後，藉由將濃縮膜稀釋至分析緩衝液(1× PBS；Invitrogen編號SH30028.02)中且使用手動組織均質器(Wheaton，編號357546)均質化7次來製備2.2 ug/ml工作濃度之STING膜(SEQ. ID. No. 3)。然後將148 uL此製備膜手動添加至96孔深孔聚丙烯板(Fisher Scientific，編號12-566-121)之各孔。然後將化合物、配體及膜在室溫下培育60 min，之後經由96孔GF/B濾板(PerkinElmer，編號6005250)使用配備有20 mM HEPES緩衝液(Fisher Scientific，編號BP299500)之TOMTEC MACH III細胞收穫器過濾各分析板之內容物。然後使用加壓VWR烘箱將濾板在55℃下乾燥30 min，之後將30 uL ULTIMA GOLD F閃爍液添加至各孔。然後使用PerkinElmer TopCount讀板儀量測各反應孔之氚含量。 在正規化至對照之後，藉由量測剩餘放射性之量來計算各化合物濃度之活性百分比。利用4參數劑量反應方程式使活性百分比對log化合物濃度之曲線擬合來計算EC50 值。 最終反應條件如下：
Figure 108111487-A0304-0027
 所測試之化合物濃度係20.000 μM、637.00 μM、2.200 μM、0.740 μM、0.247 μM、0.082 μM、0.027 μM、0.009 μM、0.003 μM及0.001 μM，其含有1.0%殘餘DMSO。
全長 STING (WT) 病毒產生 使用昆蟲細胞桿狀病毒系統產生STING病毒。將草地貪夜蛾Sf21 細胞(Kempbio, Inc.)在不含抗生素之Sf-900II SFM培養基(LifeTechnologies編號10902088)中稀釋至5e5個細胞/ml。將細胞懸浮液添加至經處理6孔板之各孔(2 mL/孔，總計1e6個細胞)，且使細胞黏附至少30 min。同時，藉由將500 ng WT STING[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1] (Genewiz custom synthesis)與1 mL含有10 µL CELLFECTIN® II試劑(Invitrogen編號10362100)及100 ng病毒主鏈BestBac 2.0, v-cath/chiA缺失線性化桿狀病毒DNA (Expression Systems編號91-002)之Sf-900II SFM培養基組合來彙集1 mL共轉染混合物。使轉染混合物培育30 min。在培育之後，自6孔板中之黏附細胞輕輕地去除培養基，添加1 mL轉染混合物(1 mL/孔)，且將板置於27℃下之加濕培育器中。第二天，將1 mL Sf-900II SFM培養基(無抗生素)添加至6孔板之各孔。在添加培養基之後，使細胞與DNA [(SEQ. ID. No. 4)及線性化病毒主鏈BestBac 2.0]一起在27℃下培育5-7天以產生P0病毒儲備液。為產生P1病毒儲備液，將0.5 mL P0病毒上清液添加至於含有5 µg/mL慶大黴素(Invitrogen編號15710072)之Sf-900II SFM培養基中之50 mL未受感染Sf21 細胞(在感染前一天以5×105 個細胞/mL之密度接種以進行一個過夜倍增)。然後將受感染之細胞在110 rpm下振盪的同時在27℃下培育3天(ATR Biotech Multitron Infors HT編號AJ118)。在第3天，使用ViCell XR (Beckman Coulter Life Sciences編號383556)對P1培養物進行計數以確認已發生感染(細胞大小大於未受感染細胞≥3 µm且存活率大約為85%-95%)。在50 mL圓錐管中收穫培養物且在4℃下以2000×g離心10 min。將P1病毒上清液傾倒至清潔50 ml離心管中，且使用剩餘P1細胞糰粒來產生受桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC)。製備含有Sf-900II SFM培養基(含有10%熱不活化FBS、10% DMSO (Sigma編號D2650)及5 µg/ml慶大黴素)之冷凍保藏培養基，且在即將使用之前經由0.22 µM過濾器滅菌。將P1細胞糰粒重新懸浮至密度為2e7個細胞/ml且等分至冷凍小瓶中(1 mL/小瓶)。將冷凍小瓶置於-80℃下之MR. FROSTY™細胞冷凍器O/N中且在第二天轉移至液氮中以用於長期儲存。為產生P2病毒儲備液，將0.5 mL P1病毒上清液添加至於含有5 µg/mL慶大黴素之Sf-900II SFM培養基中之50 mL未受感染Sf21 細胞(在感染前一天以5×105 個細胞/mL之密度接種以進行一個過夜倍增)。將該等細胞在110 rpm下振盪的同時在27℃下培育3天，之後利用在4℃下以2000×g離心10 min來收穫P2儲備液。將P2病毒上清液傾倒出並棄除，同時遵循上文所闡述之相同方案使用P2細胞糰粒來產生P2 BIIC。桿狀病毒產生方案經驗證始終以2e9 pfu/mL (2e7個細胞/mL×100 pfu/細胞)之效價產生P1/P2 BIIC。
全長 STING (WT) 表現 為產生STING膜，藉由將解凍之BIIC添加至以1.0×106 個細胞/mL之密度接種之Sf21 細胞來過夜擴增P1/P2 BIIC。使用2e9 pfu/ml之假定BIIC效價計算用於感染培養物之BIIC之體積以在過夜擴增中達成MOI為10。在培養過夜之後，在ViCell XR上對細胞進行計數以確認已發生感染(細胞大小大於未受感染細胞≥3 µm且存活率大約為80%-90%)。基於(100 pfu/受感染Sf21 細胞)來計算來自過夜擴增且用於感染大規模表現之粉紋夜蛾(T.ni ；Expression Systems，目錄號94-002F，www.expressionsystems.com ，以1.0×106 之密度在MOI = 2.0下接種於細胞培養基(含有5 µg/mL慶大黴素之ESF921 SFM)中)之受感染Sf21 細胞之體積。使細胞在27℃下表現48 h，之後藉由在4℃下以3,400×g離心10 min來收穫細胞糰粒。在ViCell XR上對T. ni 細胞進行計數以確認已發生感染(細胞大小大於未受感染細胞≥3 µm且存活率大約為80%-90%)，之後進行收穫。
全長 STING (WT) 膜產生 緩衝儲備液試劑： 1) 1 M HEPES pH 7.5, Teknova，目錄號H1035 2) 5 M NaCl, Sigma Aldrich，目錄號S5150-1L 3) KCl, Sigma Aldrich，目錄號319309-500 mL 4) 完全無EDTA蛋白酶抑制劑錠劑，Roche Diagnostics，目錄號11873580001 5) Benzonase, Universal Nuclease, Pierce，目錄號88702 將溶解緩衝液[25 mM pH 7.5 HEPES、10 mM MgCl2 、20 mM KCl、(Benzonase 1:5000，全蛋白酶抑制劑錠劑/50 mL)]以每g細胞糰粒5 mL溶解緩衝液添加至表現上文製備之全長STING (WT)之細胞糰粒。將糰粒重新懸浮且使用Wheaton Dounce均質器均質化20次以破壞細胞膜。然後使均質化溶解物在接近5000 PSI之壓力下穿過emulsiflex-C5細流體均質機。將重新懸浮之糰粒在4℃下以36,000 rpm (100,000×g)於45Ti轉子超高速離心機中離心45 min。去除上清液。然後將糰粒以50 mL糰粒/離心管之體積再懸浮於洗滌緩衝液[(25 mM HEPES pH 7.5、1mM MgCl2 、20 mM KCl、1 M NaCl (全蛋白酶抑制劑錠劑/50 mL)]中。然後使用玻璃均質器在冰上(20次拍擊)將糰粒/洗滌緩衝液混合物均質化，之後在4℃以36,000 rpm離心45 min。去除上清液。將洗滌步驟再重複一次。將所得膜重新懸浮於20 mM HEPES pH 7.5、500 mM NaCl、10%甘油、無EDTA蛋白酶抑制劑(1個錠劑/50 mL)中。藉由Bradford分析(Bio-Rad Protein Assay，目錄號500-0006)量測蛋白質濃度，且藉由SDS-PAGE測定蛋白質富集並藉由西方墨點來確認。將重新懸浮之膜儲存在-80℃下。全長 STING WT [STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8] 胺基酸序列： MPHSSLHPSIPCPRGHGAQKAALVLLSACLVTLWGLGEPPEHTLRYLVLHLASLQLGLLLNGVCSLAEELRHIHSRYRGSYWRTVRACLGCPLRRGALLLLSIYFYYSLPNAVGPPFTWMLALLGLSQALNILLGLKGLAPAEISAVCEKGNFNVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTGDRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCRTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQEEKEEVTVGSLKTSAVPSTSTMSQEPELLISGMEKPLPLRTDFSGGGLNDIFEAQKIEWHEGSLEVLFQGPHHHHHHHH (SEQ. ID. No. 3)全長 WT STING [STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1] 質體序列： GGAACGGCTCCGCCCACTATTAATGAAATTAAAAATTCCAATTTTAAAAAACGCAGCAAGAGAAACATTTGTATGAAAGAATGCGTAGAAGGAAAGAAAAATGTCGTCGACATGCTGAACAACAAGATTAATATGCCTCCGTGTATAAAAAAAATATTGAACGATTTGAAAGAAAACAATGTACCGCGCGGCGGTATGTACAGGAAGAGGTTTATACTAAACTGTTACATTGCAAACGTGGTTTCGTGTGCCAAGTGTGAAAACCGATGTTTAATCAAGGCTCTGACGCATTTCTACAACCACGACTCCAAGTGTGTGGGTGAAGTCATGCATCTTTTAATCAAATCCCAAGATGTGTATAAACCACCAAACTGCCAAAAAATGAAAACTGTCGACAAGCTCTGTCCGTTTGCTGGCAACTGCAAGGGTCTCAATCCTATTTGTAATTATTGAATAATAAAACAATTATAAATGTCAAATTTGTTTTTTATTAACGATACAAACCAAACGCAACAAGAACATTTGTAGTATTATCTATAATTGAAAACGCGTAGTTATAATCGCTGAGGTAATATTTAAAATCATTTTCAAATGATTCACAGTTAATTTGCGACAATATAATTTTATTTTCACATAAACTAGACGCCTTGTCGTCTTCTTCTTCGTATTCCTTCTCTTTTTCATTTTTCTCTTCATAAAAATTAACATAGTTATTATCGTATCCATATATGTATCTATCGTATAGAGTAAATTTTTTGTTGTCATAAATATATATGTCTTTTTTAATGGGGTGTATAGTACCGCTGCGCATAGTTTTTCTGTAATTTACAACAGTGCTATTTTCTGGTAGTTCTTCGGAGTGTGTTGCTTTAATTATTAAATTTATATAATCAATGAATTTGGGATCGTCGGTTTTGTACAATATGTTGCCGGCATAGTACGCAGCTTCTTCTAGTTCAATTACACCATTTTTTAGCAGCACCGGATTAACATAACTTTCCAAAATGTTGTACGAACCGTTAAACAAAAACAGTTCACCTCCCTTTTCTATACTATTGTCTGCGAGCAGTTGTTTGTTGTTAAAAATAACAGCCATTGTAATGAGACGCACAAACTAATATCACAAACTGGAAATGTCTATCAATATATAGTTGCTGATCAGATCTGATCATGGAGATAATTAAAATGATAACCATCTCGCAAATAAATAAGTATTTTACTGTTTTCGTAACAGTTTTGTAATAAAAAAACCTATAAATATAGGATCCATGCCCCACTCCAGCCTGCATCCATCCATCCCGTGTCCCAGGGGTCACGGGGCCCAGAAGGCAGCCTTGGTTCTGCTGAGTGCCTGCCTGGTGACCCTTTGGGGGCTAGGAGAGCCACCAGAGCACACTCTCCGGTACCTGGTGCTCCACCTAGCCTCCCTGCAGCTGGGACTGCTGTTAAACGGGGTCTGCAGCCTGGCTGAGGAGCTGCGCCACATCCACTCCAGGTACCGGGGCAGCTACTGGAGGACTGTGCGGGCCTGCCTGGGCTGCCCCCTCCGCCGTGGGGCCCTGTTGCTGCTGTCCATCTATTTCTACTACTCCCTCCCAAATGCGGTCGGCCCGCCCTTCACTTGGATGCTTGCCCTCCTGGGCCTCTCGCAGGCACTGAACATCCTCCTGGGCCTCAAGGGCCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTGCAGTGTGTGAAAAAGGGAATTTCAACGTGGCCCATGGGCTGGCATGGTCATATTACATCGGATATCTGCGGCTGATCCTGCCAGAGCTCCAGGCCCGGATTCGAACTTACAATCAGCATTACAACAACCTGCTACGGGGTGCAGTGAGCCAGCGGCTGTATATTCTCCTCCCATTGGACTGTGGGGTGCCTGATAACCTGAGTATGGCTGACCCCAACATTCGCTTCCTGGATAAACTGCCCCAGCAGACCGGTGACCGTGCTGGCATCAAGGATCGGGTTTACAGCAACAGCATCTATGAGCTTCTGGAGAACGGGCAGCGGGCGGGCACCTGTGTCCTGGAGTACGCCACCCCCTTGCAGACTTTGTTTGCCATGTCACAATACAGTCAAGCTGGCTTTAGCCGGGAGGATAGGCTTGAGCAGGCCAAACTCTTCTGCCGGACACTTGAGGACATCCTGGCAGATGCCCCTGAGTCTCAGAACAACTGCCGCCTCATTGCCTACCAGGAACCTGCAGATGACAGCAGCTTCTCGCTGTCCCAGGAGGTTCTCCGGCACCTGCGGCAGGAGGAAAAGGAAGAGGTTACTGTGGGCAGCTTGAAGACCTCAGCGGTGCCCAGTACCTCCACGATGTCCCAAGAGCCTGAGCTCCTCATCAGTGGAATGGAAAAGCCCCTCCCTCTCCGCACGGATTTCTCTGGCGGTGGCCTGAACGACATCTTCGAAGCCCAGAAAATCGAATGGCATGAAGGCAGCCTGGAAGTGCTGTTCCAGGGCCCACACCACCATCATCACCATCACCATTAATGAGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTAACCTAGGTAGCTGAGCGCATGCAAGCTGATCCGGGTTATTAGTACATTTATTAAGCGCTAGATTCTGTGCGTTGTTGATTTACAGACAATTGTTGTACGTATTTTAATAATTCATTAAATTTATAATCTTTAGGGTGGTATGTTAGAGCGAAAATCAAATGATTTTCAGCGTCTTTATATCTGAATTTAAATATTAAATCCTCAATAGATTTGTAAAATAGGTTTCGATTAGTTTCAAACAAGGGTTGTTTTTCCGAACCGATGGCTGGACTATCTAATGGATTTTCGCTCAACGCCACAAAACTTGCCAAATCTTGTAGCAGCAATCTAGCTTTGTCGATATTCGTTTGTGTTTTGTTTTGTAATAAAGGTTCGACGTCGTTCAAAATATTATGCGCTTTTGTATTTCTTTCATCACTGTCGTTAGTGTACAATTGACTCGACGTAAACACGTTAAATAGAGCTTGGACATATTTAACATCGGGCGTGTTAGCTTTATTAGGCCGATTATCGTCGTCGTCCCAACCCTCGTCGTTAGAAGTTGCTTCCGAAGACGATTTTGCCATAGCCACACGACGCCTATTAATTGTGTCGGCTAACACGTCCGCGATCAAATTTGTAGTTGAGCTTTTTGGAATTATTTCTGATTGCGGGCGTTTTTGGGCGGGTTTCAATCTAACTGTGCCCGATTTTAATTCAGACAACACGTTAGAAAGCGATGGTGCAGGCGGTGGTAACATTTCAGACGGCAAATCTACTAATGGCGGCGGTGGTGGAGCTGATGATAAATCTACCATCGGTGGAGGCGCAGGCGGGGCTGGCGGCGGAGGCGGAGGCGGAGGTGGTGGCGGTGATGCAGACGGCGGTTTAGGCTCAAATGTCTCTTTAGGCAACACAGTCGGCACCTCAACTATTGTACTGGTTTCGGGCGCCGTTTTTGGTTTGACCGGTCTGAGACGAGTGCGATTTTTTTCGTTTCTAATAGCTTCCAACAATTGTTGTCTGTCGTCTAAAGGTGCAGCGGGTTGAGGTTCCGTCGGCATTGGTGGAGCGGGCGGCAATTCAGACATCGATGGTGGTGGTGGTGGTGGAGGCGCTGGAATGTTAGGCACGGGAGAAGGTGGTGGCGGCGGTGCCGCCGGTATAATTTGTTCTGGTTTAGTTTGTTCGCGCACGATTGTGGGCACCGGCGCAGGCGCCGCTGGCTGCACAACGGAAGGTCGTCTGCTTCGAGGCAGCGCTTGGGGTGGTGGCAATTCAATATTATAATTGGAATACAAATCGTAAAAATCTGCTATAAGCATTGTAATTTCGCTATCGTTTACCGTGCCGATATTTAACAACCGCTCAATGTAAGCAATTGTATTGTAAAGAGATTGTCTCAAGCTCGGATCGATCCCGCACGCCGATAACAAGCCTTTTCATTTTTACTACAGCATTGTAGTGGCGAGACACTTCGCTGTCGTCGAGGTTTAAACGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCA (SEQ. ID. No. 4)
本揭示內容之某些化合物係在如上文所闡述之WT STING活體外結合分析中進行評估。下表將該等化合物之生物學數據以EC50 值製表。表 25 ： WT STING 之 3 H-cGAMP 過濾結合分析
Figure 108111487-A0304-0028
THP1 細胞培養中之 IFN-β 分泌 (5 h) 使用人類IFN-β AlphaLISA套組(Perkin Elmer，目錄號AL265F)量測化合物刺激干擾素-β自THP1細胞分泌之能力。基本方案如下： 使用Labcyte Echo 550聲學分配器將溶解於DMSO中之120 nL化合物轉移至空的無菌384孔微量板(Corning，目錄號3712)之孔中。將先前冷凍於恢復培養基(Life Technologies，目錄號12648-010)中之THP1細胞(美國模式培養物保藏所(American Type Culture Collection)，目錄號TIB202)解凍且立即在37℃分析培養基(RPMI 1640 + L-麩醯胺酸及酚紅，Life Technologies，目錄號11875-085；0.5%熱不活化胎牛血清，Sigma Aldrich，目錄號F4135；1 mM丙酮酸鈉，Life Technologies，目錄號11360-070；1×非必需胺基酸；Life Technologies，目錄號11140-050)中稀釋10倍。使用Beckman Coulter V-Cell XR細胞計數器來確定細胞存活率及計數。將細胞懸浮液在室溫下以200×g離心5min。將細胞以0.8×106 /mL之密度重新懸浮於37℃分析培養基中。隨後使用Matrix電子多通道吸量管或Agilent Bravo自動化液體處置平臺實施液體轉移。 藉由將40 μL先前製備之細胞懸浮液分配至含有化合物之板孔中來開始分析。在37℃、5% CO2 下於濕潤氣氛中培育5 h之後，將細胞及化合物之板在室溫下以200×g離心5 min。自各孔將5 μL上清液轉移至白色384孔板(Perkin Elmer，目錄號6005620)之相應孔中。向該等含上清液之孔中添加10 μL 5×抗分析物受體珠粒(50 μg/mL AlphaLISA HiBlock緩衝液)，且在室溫下培育30 min，同時在回轉式盤振盪器上振盪。向各孔中添加10 μL 5×生物素化抗分析物抗體(5 nM於AlphaLISA HiBlock緩衝液中)，且在回轉式盤振盪器上在室溫下培育60 min或在4℃下培育過夜。向各孔中添加25 μL 2× SA-供體珠粒(80 μg/mL於AlphaLISA HiBlock緩衝液中)，且在室溫下於暗處培育30-45 min，同時在回轉式盤振盪器上振盪。然後在Perkin Elmer Envision (λex =680 nm, λem =570 nm)上讀板。基於30 uM cGAMP陽性對照及0.3% DMSO陰性對照來計算在各化合物濃度下AlphaLISA信號之效應百分比。利用4參數濃度反應方程式使效應百分比對log化合物濃度之曲線擬合來計算EC50 值。測試化合物係在含有0.3%殘餘DMSO之以下濃度下進行測試：30000 nM、10000 nM、3333 nM、1111 nM、370.4 nM、123.4 nM、41.2 nM、13.7 nM、4.6 nM及1.5 nM。對照化合物cGAMP係在含有0.3%殘餘DMSO之以下濃度下進行測試：100000 nM、33333 nM、11111 nM、3704 nM、1235 nM、412 nM、137 nM、46 nM及15 nM。
在如上文所闡述之THP1細胞培養中評估本揭示內容之化合物之IFN-β分泌。下表將該等化合物之生物學數據以在30 µM濃度下相對於2’3’-cGAMP之活化百分比製表。表 26 ： THP1 細胞培養中之 IFN-β 分泌 (5 h)
Figure 108111487-A0304-0029
應瞭解，可將各種上文所論述以及其他特徵及功能或其替代形式期望地組合至許多其他不同系統或應用中。此外，應瞭解，熟習此項技術者可隨後作出其中各種目前無法預測或未曾預料到之替代形式、修改、變化形式或改良，且其亦意欲由以下申請專利範圍涵蓋。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 108111487-A0101-11-0002-1

Claims (33)

  1. 一種通式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 108111487-A0305-02-0389-1
     其中各A-R1獨立地選自由C-R1及N組成之群，其中各R1獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、經N(R6)2取代之C1-C6烷基、COOR6及C(O)N(R6)2；各R2獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6鹵烯基、經OR6取代之C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6鹵炔基、經OR6取代之C2-C6炔基、C3-C6環烷基，及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6)組成之群之環成員；R3及R4獨立地選自由以下組成之群：O-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)、C1-C5伸烷基或鹵伸烷基，及N(R6)-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R4可與毗鄰C-R1及其所連接之原子一起形成稠環E，其選自苯基或5員或6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6)組成之群之環成員，其中該環E與R3之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子，且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1-C3烷基及C1-C3鹵烷基； 各R6獨立地選自由以下組成之群：H、C1-C6烷基及C1-C6鹵烷基；各X1獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2-、-CHF-及-CF2-；各X2獨立地選自(C(R8)2)(1-3)，其中各R8獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6鹵烷基、C3-C6環烷基、經OR6取代之C1-C6烷基，及經N(R6)2取代之C1-C6烷基；視情況不同碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3獨立地選自由以下組成之群：COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、
    Figure 108111487-A0305-02-0390-8
    、SO2R6、C(O)N(R9)2及CN；且 各R9獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6及SO2R6。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 各
    Figure 108111487-A0305-02-0390-10
    獨立地選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0390-11
  3. 一種通式(II)化合物或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 108111487-A0305-02-0391-2
     其中各A-R1獨立地選自由C-R1及N組成之群，其中各R1獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、經N(R6)2取代之C1-C6烷基、COOR6及C(O)N(R6)2；各R2獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6鹵烯基、經OR6取代之C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6鹵炔基、經OR6取代之C2-C6炔基、C3-C6環烷基，及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6)組成之群之環成員；R3及R4獨立地選自由以下組成之群：O-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)、C1-C5伸烷基或鹵伸烷基，及N(R6)-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R4可與毗鄰C-R1及其所連接之原子一起形成稠環E，其選自苯基或5員或6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6)組成之群之環成員，其中該環E與R3之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之原子，且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1-C3烷基及C1-C3鹵烷基；各R6獨立地選自由以下組成之群：H、C1-C6烷基及C1-C6鹵烷基；各X1獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2-、-CHF-及-CF2-； 各X2獨立地選自(C(R8)2)(1-3)，其中各R8獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6鹵烷基、C3-C6環烷基、經OR6取代之C1-C6烷基，及經N(R6)2取代之C1-C6烷基；視情況不同碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3獨立地選自由以下組成之群：COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、
    Figure 108111487-A0305-02-0392-12
    、SO2R6、C(O)N(R9)2及CN；且 各R9獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6及SO2R6。
  4. 如請求項3之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 各
    Figure 108111487-A0305-02-0392-14
    獨立地選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0392-15
  5. 一種通式(III)化合物或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 108111487-A0305-02-0393-3
     其中各A-R1獨立地選自由C-R1及N組成之群，其中各R1獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、經N(R6)2取代之C1-C6烷基、COOR6及C(O)N(R6)2；各R2獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6鹵烯基、經OR6取代之C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6鹵炔基、經OR6取代之C2-C6炔基、C3-C6環烷基及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6)組成之群之環成員；R3及R4獨立地選自由以下組成之群：O-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)、C1-C5伸烷基或鹵伸烷基，及N(R6)-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)；視情況R3可與毗鄰C-R1及其所連接之原子一起形成稠環G，其選自苯基或5員或6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6)組成之群之環成員，其中該環G與R3之鍵係來自該環G上具有用於取代之開放價之原子，且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1-C3烷基及C1-C3鹵烷基；視情況R4可與毗鄰C-R1及其所連接之原子一起形成稠環E，其選自苯基或5員或6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S、N及N(R6)組成之群之環成員，其中該環E與R4之鍵係來自該環E上具有用於取代之開放價之 原子，且其中該苯基或雜環視情況經一或多個由以下組成之群之成員取代：鹵素、C1-C3烷基及C1-C3鹵烷基；各R6獨立地選自由以下組成之群：H、C1-C6烷基及C1-C6鹵烷基；各X1獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2-、-CHF-及-CF2-；各X2獨立地選自(C(R8)2)(1-3)，其中各R8獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6鹵烷基、C3-C6環烷基、經OR6取代之C1-C6烷基，及經N(R6)2取代之C1-C6烷基；視情況不同碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3獨立地選自由以下組成之群：COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、
    Figure 108111487-A0305-02-0394-16
    、SO2R6、C(O)N(R9)2及CN；且 各R9獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6及SO2R6。
  6. 如請求項5之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中：
    Figure 108111487-A0305-02-0394-18
    獨立地選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0394-19
    Figure 108111487-A0305-02-0395-28
    ，及
    Figure 108111487-A0305-02-0395-27
    ；且
    Figure 108111487-A0305-02-0395-21
    係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0395-23
    、
    Figure 108111487-A0305-02-0395-26
  7. 一種通式(IV)化合物或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 108111487-A0305-02-0395-4
     其中各A-R1獨立地選自由C-R1及N組成之群，其中各R1獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、經N(R6)2取代之C1-C6烷基、COOR6及C(O)N(R6)2；各R2獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之 C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6鹵烯基、經OR6取代之C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6鹵炔基、經OR6取代之C2-C6炔基、C3-C6環烷基，及3員至6員雜環，該雜環包括1至2個選自由O、S及N(R6)組成之群之環成員；R3及R4獨立地選自由以下組成之群：O-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)、C1-C5伸烷基或鹵伸烷基，及N(R6)-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)；各R6獨立地選自由以下組成之群：H、C1-C6烷基及C1-C6鹵烷基；各X1獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2-、-CHF-及-CF2-；各X2獨立地選自(C(R8)2)(1-3)，其中各R8獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6鹵烷基、C3-C6環烷基、經OR6取代之C1-C6烷基，及經N(R6)2取代之C1-C6烷基；視情況不同碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3獨立地選自由以下組成之群：COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、
    Figure 108111487-A0305-02-0396-29
    、SO2R6、C(O)N(R9)2及CN；且 各R9獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6及SO2R6。
  8. 如請求項7之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中
    Figure 108111487-A0305-02-0396-30
    獨立地選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0397-31
    Figure 108111487-A0305-02-0397-34
    ，及
    Figure 108111487-A0305-02-0397-38
    ；且
    Figure 108111487-A0305-02-0397-36
    係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0397-37
    、
    Figure 108111487-A0305-02-0397-33
  9. 一種通式(V)化合物或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 108111487-A0305-02-0397-6
     其中各A-R1獨立地選自由C-R1及N組成之群，其中各R1獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、經N(R6)2取代之C1- C6烷基、COOR6及C(O)N(R6)2；R3及R4獨立地選自由以下組成之群：O-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)、C1-C5伸烷基或鹵伸烷基，及N(R6)-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)；各X1獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2-、-CHF-及-CF2-；各X2獨立地選自(C(R8)2)(1-3)，其中各R8獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6鹵烷基、C3-C6環烷基、經OR6取代之C1-C6烷基，及經N(R6)2取代之C1-C6烷基；視情況不同碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環；各X3獨立地選自由以下組成之群：COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、
    Figure 108111487-A0305-02-0398-39
    、SO2R6、C(O)N(R9)2及CN；且 各R9獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6及SO2R6。
  10. 如請求項9之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 各
    Figure 108111487-A0305-02-0398-87
    獨立地選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0398-41
    Figure 108111487-A0305-02-0399-42
  11. 一種通式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 108111487-A0305-02-0399-7
     其中各A-R1獨立地選自由C-R1及N組成之群，其中各R1獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、經OR6取代之C1-C6烷基、經N(R6)2取代之C1-C6烷基、COOR6及C(O)N(R6)2；R3及R4獨立地選自由以下組成之群：O-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)、C1-C5伸烷基或鹵伸烷基，及N(R6)-(C1-C4伸烷基或鹵伸烷基)；各R6獨立地選自由以下組成之群：H、C1-C6烷基及C1-C6鹵烷基；各X1獨立地選自由以下組成之群：C=O、-CH2-、-CHF-及-CF2-；各X2獨立地選自(C(R8)2)(1-3)，其中各R8獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6鹵烷基、C3-C6環烷基、經OR6取代之C1-C6烷基，及經N(R6)2取代之C1-C6烷基；視情況不同碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員稠環；且視情況單一碳原子上之2個R8可連同其所連接之原子一起形成3員至6員螺環； 各X3獨立地選自由以下組成之群：COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、
    Figure 108111487-A0305-02-0400-44
    、SO2R6、C(O)N(R9)2及CN；且 各R9獨立地選自由以下組成之群：H、COOR6及SO2R6。
  12. 如請求項11之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 各
    Figure 108111487-A0305-02-0400-45
    獨立地選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0400-47
  13. 一種化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0400-48
    Figure 108111487-A0305-02-0401-49
    Figure 108111487-A0305-02-0402-50
    Figure 108111487-A0305-02-0403-51
    Figure 108111487-A0305-02-0404-52
    Figure 108111487-A0305-02-0405-53
    Figure 108111487-A0305-02-0406-54
    Figure 108111487-A0305-02-0407-55
    Figure 108111487-A0305-02-0408-56
    Figure 108111487-A0305-02-0409-57
    Figure 108111487-A0305-02-0410-58
    Figure 108111487-A0305-02-0411-59
    Figure 108111487-A0305-02-0412-60
    Figure 108111487-A0305-02-0413-61
    Figure 108111487-A0305-02-0414-62
    Figure 108111487-A0305-02-0415-63
    Figure 108111487-A0305-02-0416-64
    Figure 108111487-A0305-02-0417-67
    Figure 108111487-A0305-02-0417-68
    ，以及其醫藥上可接受之鹽。
  14. 一種化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0417-71
    及其醫藥上可接受之鹽。
  15. 如請求項14之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係
    Figure 108111487-A0305-02-0417-70
  16. 一種化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0418-72
    及其醫藥上可接受之鹽。
  17. 如請求項16之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係
    Figure 108111487-A0305-02-0418-73
  18. 一種化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0418-77
    及其醫藥上可接受之鹽。
  19. 如請求項18之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係
    Figure 108111487-A0305-02-0418-79
  20. 一種化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0418-80
    及其醫藥上可接受之鹽。
  21. 如請求項20之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係
    Figure 108111487-A0305-02-0418-81
  22. 一種化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0418-83
    及其醫藥上可接受之鹽。
  23. 如請求項22之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係
    Figure 108111487-A0305-02-0419-84
  24. 一種化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
    Figure 108111487-A0305-02-0419-85
    及其醫藥上可接受之鹽。
  25. 如請求項24之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係
    Figure 108111487-A0305-02-0419-86
  26. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至25中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽以及醫藥上可接受之載劑。
  27. 一種如請求項1至25中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於誘導個體免疫反應之藥劑。
  28. 一種如請求項26之醫藥組合物之用途，其係用於製造用於誘導個體免疫反應之藥劑。
  29. 一種如請求項1至25中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於誘導個體之STING依賴性I型干擾素產生之藥劑。
  30. 一種如請求項26之醫藥組合物之用途，其係用於製造用於誘導個體之STING依賴性I型干擾素產生之藥劑。
  31. 一種如請求項1至25中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造用於治療個體之細胞增殖病症之藥劑。
  32. 一種如請求項26之醫藥組合物之用途，其係用於製造用於治療個體之細胞增殖病症之藥劑。
  33. 如請求項31或32之用途，其中該細胞增殖病症係癌症。
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