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TW202317612A - 用於治療癌症的ｃｔｌａ４及ｐｄ１／ｐｄｌ１抗體之組合 - Google Patents

用於治療癌症的ｃｔｌａ４及ｐｄ１／ｐｄｌ１抗體之組合 Download PDF

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TW202317612A
TW202317612A TW111107426A TW111107426A TW202317612A TW 202317612 A TW202317612 A TW 202317612A TW 111107426 A TW111107426 A TW 111107426A TW 111107426 A TW111107426 A TW 111107426A TW 202317612 A TW202317612 A TW 202317612A
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seq
antibody
cancer
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珍妮佛 歐尼爾
烏戈爾 埃斯基奧克
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美商艾希利歐發展股份有限公司
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Abstract

本發明提供抗CTLA4結合蛋白(例如，抗體、雙特異性抗體及嵌合受體)及其與PD-1傳訊劑(例如，PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑)組合用於治療及預防癌症的用途，以及包含抗CTLA4結合蛋白及PD-1傳訊劑之組合物及套組。

Description

用於治療癌症的CTLA4及PD1/PDL1抗體之組合
本發明係關於抗細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)結合蛋白(例如抗CTLA4抗體)及與使用其與PD-1傳訊劑(例如，PD-1或PD-L1抑制劑)組合相關之方法。
癌症在美國為第二主要死亡原因，其導致之死亡比後五種主要原因(慢性呼吸道疾病、中風、事故、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)及糖尿病)更多。儘管已取得巨大進步，尤其係利用靶向療法，但此領域中仍需進行大量工作。免疫療法及此領域之分支，免疫腫瘤學正在為治療惡性病建立可行且振奮人心的治療選項。具體言之，現發現癌症之一個標誌為免疫逃避且已進行大量工作以鑑別目標及研發針對此等目標之療法，從而使免疫系統再活化以識別及治療癌症。抗細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)抗體伊匹單抗(ipilimumab)已引起罹患III期/IV期惡性黑色素瘤之患者之長期存活。伊匹單抗為一種免疫檢查點拮抗劑，其藉由阻斷CTLA4來中斷T細胞之抑制，且可引起T調節細胞(Treg)之耗乏(Korman, A.等人，2005.Tumor immunotherapy: preclinical and clinical activity of anti-CTLA4 antibodies. Current Opinion in Investigational Drugs 6:582-591；Quezada等人, J. Exp. Med., 206(8):1717-1725, 2009；Selby等人. Cancer Immunol Res., 1(1);32-42, 2013)。不利的是，伊匹單抗引起T細胞依賴性免疫反應之全身性(非腫瘤特異性)活化，其會引起可危及生命之免疫相關副作用且通常具有劑量及治療持續時間限制(Weber, J.S.等人, 2008. Phase I/II study of ipilimumab for patients with metastatic melanoma. Journal of Clinical Oncology 26:5950-5956)。此等副作用包括小腸結腸炎、皮膚炎、垂體炎、眼色素層炎、肝炎、腎炎及死亡。小腸結腸炎為最常見的主要毒性(影響大致20%之患者)。與免疫介導性不良反應相關之嚴重安全性風險促使FDA批准伊匹單抗之風險評估及減輕策略(REMS)。近年來，共同投與伊匹單抗及靶向PD1之第二免疫檢查點調節劑(例如，納武單抗(nivolumab))已顯示與單獨的伊匹單抗相比時，顯著增加黑色素瘤之免疫療法的功效。然而，此增益與3級/4級副作用之頻率增加相關聯，其影響超過50%之接受組合治療的患者(Wolchok, J.D.等人，2013. Nivolumab plus Ipilimumab in Advanced Melanoma. N Engl J Med)。
此等結果說明需要研發可有效靶向腫瘤而不具有與某些抗CTLA4抗體(諸如伊匹單抗)相關聯之副作用的抗CTLA4蛋白治療劑。本文提供抗CTLA結合蛋白、其組合物及其用於解決此需要之使用方法。
本文中所引用之所有參考文獻，包括專利申請案、專利公開案及科學文獻均以全文引用之方式併入本文中，如同各個別參考文獻特定地且個別地指示以引用之方式併入一般。
本文提供與PD-1傳訊劑(例如，PD-1或PD-L1抑制劑)組合使用之抗細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)結合蛋白，及其組合物以及其使用方法。
在一個態樣中，本發明提供一種治療受試者之癌症的方法，該方法包含向該受試者投與：(a)抗CTLA4抗體，其包含：包含NYFMN之重鏈可變區(vH) CDR1、包含RVDPEQGRADYAEKFKK之vH CDR2、包含RAMDNYGFAY之vH CDR3；及包含SANSALSYMY之輕鏈可變區(vL) CDR1、包含GTSNLAS之vL CDR2、包含HHWSNTQWT之vL CDR3；及(b) PD-1或PD-L1抑制劑。
在一些實施例中，抗CTLA4抗體係以約0.1至20mg/kg之間的有效劑量投與。在一些實施例中，抗CTLA4抗體係以約0.1至15 mg/kg、0.1至10 mg/kg、0.3至10 mg/kg或0.3至15 mg/kg之間的有效劑量投與。在一些實施例中，抗CTLA4抗體之有效劑量係選自0.3 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg及20 mg/kg。
在一些實施例中，抗CTLA4抗體係以低劑量投與。在一些實施例中，抗CTLA4抗體係以0.01至1 mg/kg之間的劑量投與。在一些實施例中，抗CTLA4抗體係以0.01至3 mg/kg之間的劑量投與。在一些實施例中，抗CTLA4抗體係以選自以下之劑量投與：0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.07 mg/kg、0.08 mg/kg、0.09 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.7 mg/kg、0.8 mg/kg、0.9 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg。
在一些實施例中，抗CTLA4抗體之有效劑量為0.01至1 mg/kg、0.01至3 mg/kg、1至100 mg、10至100 mg、20至100 mg、30至100 mg、50至100 mg、4至100 mg、4至200 mg、4至300 mg、4至400 mg、4至500 mg、4至600 mg、4至700 mg、4至800 mg、4至900 mg、10至100 mg、10至200 mg、10至300 mg、10至400 mg、10至500 mg、10至600 mg、10至700 mg、10至800 mg、10至900 mg、10至1000 mg、100至300 mg、300至500 mg、500至700 mg、700至900 mg或800至1000 mg。
在一些實施例中，抗CTLA4抗體包含含有胺基酸取代S239D或I332E或兩者之重鏈恆定域，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。
在一些實施例中，抗CTLA4抗體包含與SEQ ID NO: 31至少90%一致之vH。
在一些實施例中，抗CTLA4抗體包含與SEQ ID NO: 30至少90%一致之vL。
在一些實施例中，抗CTLA4抗體為去岩藻糖基化的或岩藻糖缺乏的。
在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段與藥劑結合。在一些實施例中，該藥劑為微管蛋白聚合抑制劑、DNA損傷劑或DNA合成抑制劑。在一些實施例中，該藥劑為類美登素(maytansinoid)、奧瑞他汀(auristatin)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚體、卡奇黴素(calicheamicin)、倍癌黴素(duocarmycin)、引多-萊諾苯并二氮呯(indo-linobenzodiazepine)二聚體或依昔替康(exatecan)衍生物Dxd。
在一些實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑為抗體。
在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑為PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係選自納武單抗、帕博利珠單抗(pembrolizumab)及西米普利單抗(cemiplimab)。
在一些實施例中，PD-1抗體係以1至10 mg/kg之間的有效劑量投與。在一些實施例中，PD-1抗體之有效劑量為10 mg/kg。在一些實施例中，PD-1抗體之有效劑量為4至1000mg。在一些實施例中，PD-1抗體之有效劑量為4至100 mg、4至200 mg、4至300 mg、4至400 mg、4至500 mg、4至600 mg、4至700 mg、4至800 mg、4至900 mg、10至100 mg、10至200 mg、10至300 mg、10至400 mg、10至500 mg、10至600 mg、10至700 mg、10至800 mg、10至900 mg、10至1000 mg、100至300 mg、300至500 mg、500至700 mg、700至900 mg或800至1000 mg。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係以200 mg之有效劑量投與。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係每週、每隔一週、每3週、每4週、每5週、每6週或每月投與。
在一些實施例中，每3週投與抗PD-1抗體。
在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑為PD-L1抗體。
在一些實施例中，抗PD-L1抗體係選自阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)。
在一些實施例中，抗PD-L1抗體係以200至2000 mg之間的有效劑量投與。
在一些實施例中，抗PD-L1抗體係每週、每隔一週、每3週、每4週、每6週或每月投與。
在一些實施例中，抗PD-1及抗CTLA4抗體經調配用於靜脈內投與。
在一些實施例中，抗PD-1及抗CTLA4抗體一起調配於同一組合物中。在一些實施例中，抗PD-1及抗CTLA4抗體經單獨地調配。
在一些實施例中，抗PD-1抗體與抗CTLA4抗體同時投與。
在一些實施例中，癌症為白血病、淋巴瘤、頭頸癌、大腸直腸癌、前列腺癌、胰臟癌、黑色素瘤、骨髓瘤、乳癌、神經母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、子宮頸癌、肝癌、腎癌、皮膚癌、睪丸癌或皮膚鱗狀細胞癌(CSCC)。
在一些實施例中，癌症是肺癌。在一些實施例中，肺癌為小細胞肺癌(SCLC)或非小細胞肺癌(NSCLC)。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤。
在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、胸膜間皮瘤、腎癌、肝癌或大腸直腸癌。
本文提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域，其中：VL域包含：包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的CDR-H3；或VL域包含：包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的CDR-H3；或VL域包含：包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的CDR-H3；或VL域包含：包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的CDR-H3。
本文提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域，其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的CDR-H3。
本文提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域，其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的CDR-H3。
本文提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域，其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的CDR-H3。
本文提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域，其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的CDR-H3。
在所提供之實施例的一些中，VL域包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列；或VL域包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。
在所提供之實施例的一些中，VL域包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在所提供之實施例的一些中，VL域包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。
在所提供之實施例的一些中，VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，且VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列；或VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且VH域包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
本文提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域，其中：VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列及/或VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列；或VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列及/或VH域包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在所提供之實施例的一些中，VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，且VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。在所提供之實施例的一些中，VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且VH域包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列。
在所提供之實施例的一些中，抗體或其抗原結合片段包含重鏈恆定域(CH)。在所提供之實施例的一些中，抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO: 35至38組成之群的CH序列。在所提供之實施例的一些中，CH包含胺基酸取代S239D或I332E或兩者，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在所提供之實施例的一些中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 38之CH序列。
在任何實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈恆定域(CL)。在任何實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 39之CL序列。
在任何實施例中之一些中，輕鏈包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，且重鏈包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；或輕鏈包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，且重鏈包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。
本文提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈及包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的重鏈。
本文提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈及包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的重鏈。
在任何實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段為去岩藻糖基化的或岩藻糖缺乏的。
在任何實施例中之一些中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段與藥劑結合。在任何實施例中之一些中，該藥劑為微管蛋白聚合抑制劑、DNA損傷劑或DNA合成抑制劑。在任何實施例中之一些中，該藥劑為類美登素、奧瑞他汀、吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚體、卡奇黴素、倍癌黴素、引多-萊諾苯并二氮呯二聚體或依昔替康衍生物Dxd。
本文提供雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈；其中第一對之輕鏈包含VL域且第一對之重鏈包含VH域且其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的CDR-H3；或VL域包含：包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的CDR-H3；或VL域包含：包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的CDR-H3；或VL域包含：包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的CDR-H3。
本文提供雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈；其中第一對之輕鏈包含VL域且第一對之重鏈包含VH域且其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的CDR-H3。
本文提供雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈；其中第一對之輕鏈包含VL域且第一對之重鏈包含VH域且其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的CDR-H3。
本文提供雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈；其中第一對之輕鏈包含VL域且第一對之重鏈包含VH域且其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的CDR-H3。
本文提供雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈；其中第一對之輕鏈包含VL域且第一對之重鏈包含VH域且其中VL域包含：包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含：包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的CDR-H3。
在任何實施例中之一些中，VL域包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列；或VL域包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。
本文提供雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈；其中第一對之輕鏈包含VL域且第一對之重鏈包含VH域且其中：VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列及/或VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列；或VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列及/或VH域包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在任何實施例中之一些中，VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，且VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列；或VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且VH域包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在任何實施例中之一些中，雙特異性抗體或其抗原結合片段包含重鏈恆定域(CH)。在任何實施例中之一些中，雙特異性抗體或其抗原結合片段包含選自由SEQ ID NO: 35至38組成之群的CH序列。在任何實施例中之一些中，CH包含胺基酸取代S239D或I332E或兩者，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在任何實施例中之一些中，雙特異性抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 38之CH序列。
在任何實施例中之一些中，雙特異性抗體或其抗原結合片段包含輕鏈恆定域(CL)。在任何實施例中之一些中，雙特異性抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 39之CL序列。
在任何實施例中之一些中，輕鏈包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，且重鏈包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；或輕鏈包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，且重鏈包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。
本文提供雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈；其中第一對包含：包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈及包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的重鏈。
本文提供雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈；其中第一對包含：包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈及包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的重鏈。
在任何實施例中之一些中，雙特異性抗體或其抗原結合片段為去岩藻糖基化的或岩藻糖缺乏的。
在任何實施例中之一些中，雙特異性抗體或其抗原結合片段與藥劑結合。在任何實施例中之一些中，該藥劑為微管蛋白聚合抑制劑、DNA損傷劑或DNA合成抑制劑。在任何實施例中之一些中，該藥劑為類美登素、奧瑞他汀、吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚體、卡奇黴素、倍癌黴素、引多-萊諾苯并二氮呯二聚體或依昔替康衍生物Dxd。
本文中亦提供編碼所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段中之任一者或所提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段中之任一者的核酸。
亦提供包含本文所提供之核酸中之任一者的載體。
亦提供宿主細胞，其包含所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段中之任一者、所提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段中之任一者或本文所提供之核酸中之任一者。
在任何此類實施例中之一些中，宿主細胞能夠產生去岩藻糖基化或岩藻糖缺乏的抗體或其抗原結合片段。在任何此類實施例中之一些中，宿主細胞具有α1,6-岩藻糖基轉移酶(Fut8)基因剔除。在任何此類實施例中之一些中，宿主細胞過度表現β1,4-N-乙醯基糖胺多糖基轉移酶III (GnT-III)。在任何此類實施例中之一些中，宿主細胞過度表現高爾基體(Golgi) μ-甘露糖苷酶II (ManII)。
亦提供產生抗體或其抗原結合片段之方法，其涉及在產生抗體或其抗原結合片段之條件下培養所提供之宿主細胞中之任一者。
亦提供產生去岩藻糖基化或岩藻糖缺乏的抗體或其抗原結合片段之方法，其涉及在產生抗體或其抗原結合片段之條件下培養所提供之宿主細胞中之任一者。
在任何此類實施例中之一些中，該等方法亦涉及回收由宿主細胞產生之抗體或其抗原結合片段。
亦提供由產生本文所提供之抗體或其抗原結合片段之方法中之任一者產生的抗體或其抗原結合片段。
亦提供組合物，其包含所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段中之任一者、所提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段中之任一者或所提供之抗體或其抗原結合片段中之任一者。
亦提供醫藥組合物，其包含所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段中之任一者、所提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段中之任一者或所提供之抗體或其抗原結合片段中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。
亦提供用於治療或預防受試者之贅生性疾病的醫藥組合物，其包含所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段中之任一者、所提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段中之任一者或所提供之抗體或其抗原結合片段中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。
亦提供醫藥組合物用於製造用於治療或預防受試者之贅生性疾病之藥劑的用途，該醫藥組合物包含所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段中之任一者、所提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段中之任一者或所提供之抗體或其抗原結合片段中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。
亦提供套組，其包含所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段中之任一者、所提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段中之任一者或所提供之抗體或其抗原結合片段中之任一者。
亦提供治療或預防受試者之贅生性疾病的方法，該方法涉及向該受試者投與有效量的所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段中之任一者、所提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段中之任一者、所提供之抗體或其抗原結合片段中之任一者或所提供之組合物中之任一者。
應理解，可組合本文所描述之各種實施例的一種、一些或所有特性以形成本發明之其他實施例。本發明之此等及其他態樣對於熟習此項技術者將變得顯而易見。本發明之此等及其他實施例藉由隨後之實施方式進一步描述。
交叉參考之申請案
本申請案主張2021年3月1日申請之美國臨時申請案第63/155,180號之優先權及權益，該申請案之內容以全文引用之方式併入本文中。
諸如檢查點抑制劑之治療劑在癌症中顯示前所未有的反應，但其用途受免疫相關不良事件(irAE)及其他毒性(例如，垂體炎)限制。本文提供蛋白質治療劑，其在例如腫瘤微環境中結合CTLA4以達成增加之持久反應率及改良之安全性概況。所提供之CTLA4結合蛋白(諸如抗體、雙特異性抗體或其抗原結合片段)的提高之結合親和力、增加的諸如ADCC之功能活性及如本文所描述之其他優勢可引起對療法之反應改良及安全性概況改善，諸如降低或最小化可與某些免疫療法相關之不良事件。 I. 定義
在詳細描述本發明之前，應理解本發明並不限於特定組合物或生物系統，其可理所當然有所變化。亦應理解，本文所使用之術語僅出於描述特定實施例之目的，且不意欲為限制性的。除非上下文另外明確指示，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個指示物。因此，舉例而言，提及「抗體」視情況包括兩種或更多種此類抗體之組合及其類似者。
如本文中所使用之術語「約」係指此技術領域中熟習此項技術者易於知曉之各別值的常見誤差範圍。在本文中提及「約」一值或參數包括(且描述)針對該值或參數本身之實施例。
應理解，本文所描述之本發明之態樣及實施例包括「包含」態樣及實施例、「由態樣及實施例組成」及「基本上由態樣及實施例組成」。
術語「抗體」包括多株抗體、單株抗體(包括具有免疫球蛋白Fc區之全長抗體)、具有多抗原決定基特異性之抗體組合物、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體、雙功能抗體及單鏈分子，以及抗體片段(例如，Fab、F(ab')2及Fv)。術語「免疫球蛋白」(Ig)在本文中可與「抗體」互換使用。
基礎4鏈抗體單元為由兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈構成的雜四聚體醣蛋白。IgM抗體由5個基礎雜四聚體單元以及稱為J鏈之額外多肽組成，且含有10個抗原結合位點，而IgA抗體包含2至5個基礎4鏈單元，其可聚合以與J鏈組合形成多價集聚物。在IgG之情況下，4鏈單元通常為約150,000道爾頓。各L鏈藉由一個共價二硫鍵連接至H鏈，而兩條H鏈藉由一或多個二硫鍵彼此連接，此視H鏈同型而定。各H鏈及L鏈亦具有規律間隔之鏈內二硫橋鍵。各H鏈在N端具有可變域(VH)，隨後為各α鏈及γ鏈之三個恆定域(CH)以及µ及ε同型之四個CH域。各L鏈在N端具有可變域(VL)，隨後在其另一端具有恆定域。VL與VH對準且CL與重鏈之第一恆定域(CH1)對準。咸信特定胺基酸殘基在輕鏈與重鏈可變域之間形成界面。將VH與VL配對一起形成單一抗原結合位點。對於不同類別之抗體之結構及特性，參見例如Basic and Clinical Immunology, 第8版, Daniel P. Sties, Abba I. Terr及Tristram G. Parsolw (編), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 第71頁及第6章。
來自任何脊椎動物物種之L鏈可基於其恆定域之胺基酸序列而歸為兩種顯著不同類型(稱為κ及λ)中之一者。視免疫球蛋白之重鏈(CH)之恆定域的胺基酸序列而定，其可歸為不同類別或同型。存在五種類別之免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，其分別具有命名為α、δ、ε、γ及μ之重鏈。γ及α類別基於CH序列及功能之相對較小差異而進一步劃分成子類，例如人類表現以下子類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。IgG1抗體可以多個稱為同種異型之多態變異體形式存在(綜述於Jefferis及Lefranc 2009. mAbs 第1卷, 第4期1-7中)，其中任一者均適用於本發明。人類群體中之常見同種異型變異體為由字母a、f、n、z命名之變異體。
「經分離之」抗體為已自其產生環境之組分鑑別、分離及/或回收(例如以天然或重組方式)之抗體。在一些實施例中，經分離之多肽與來自其產生環境之全部其他組分無關聯。其產生環境之污染物組分(諸如由重組轉染細胞產生的組分)為通常將干擾抗體之研究、診斷或治療用途的物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在一些實施例中，將多肽純化至：(1)大於抗體之95重量%，如藉由例如勞立法(Lowry method)所測定，且在一些實施例中，純化至大於99重量%；(1)足以藉由使用例如旋轉杯式定序儀獲得N端或內部胺基酸序列之至少15個殘基的程度；或(3)均質，此係使用考馬斯藍(Coomassie blue)或銀染料在非還原或還原條件下藉由SDS-PAGE進行。由於抗體之天然環境中之至少一種組分將不存在，因此經分離之抗體包括原位位於重組細胞內之抗體。然而，通常，經分離之多肽或抗體係藉由至少一個純化步驟來製備。
如本文中所使用，術語「單株抗體」係指一種自實質上均質的抗體群獲得之抗體，亦即除可能天然存在之突變及/或可能少量存在之轉譯後修飾(例如，異構化、醯胺化)之外，構成該群體之個別抗體為相同的。在一些實施例中，單株抗體在重鏈及/或輕鏈處具有C端裂解。舉例而言，1、2、3、4或5個胺基酸殘基在重鏈及/或輕鏈之C端處裂解。在一些實施例中，C端裂解自重鏈移除C端離胺酸。在一些實施例中，單株抗體在重鏈及/或輕鏈處具有N端裂解。舉例而言，1、2、3、4或5個胺基酸殘基在重鏈及/或輕鏈之N端處裂解。
在一些實施例中，可藉由重組技術製得單株抗體之截短形式。在一些實施例中，單株抗體針對單一抗原位點具有高度特異性。在一些實施例中，單株抗體針對多個抗原位點具有高度特異性(諸如雙特異性抗體或多特異性抗體)。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質的抗體群獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法產生該抗體。舉例而言，待根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製得，該等技術包括例如融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體呈現技術及用於在具有編碼人類免疫球蛋白序列之部分或全部人類免疫球蛋白基因座或基因的動物中產生人類抗體或人類樣抗體之技術。
術語「裸抗體」係指未與細胞毒素部分或放射性標記結合之抗體。
術語「親本抗體」係指在修飾之前的抗體。
「抗體-藥物結合物」或「ADC」係指與一或多種異種分子，包括但不限於細胞毒性劑結合之抗體。
術語「全長抗體」、「完整抗體」或「全抗體」可互換使用以指代相較於抗體片段呈其實質上完整形式之抗體。具體言之，全抗體包括具有重鏈及輕鏈，包括Fc區之彼等抗體。恆定域可為原生序列恆定域(例如人類原生序列恆定域)或其胺基酸序列變異體。在一些情況下，完整抗體可具有一或多種效應功能。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分、完整抗體之抗原結合區及/或可變區。抗原結合抗體片段之實例包括域抗體(dAb)、Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段；雙功能抗體；線性抗體(參見美國專利第5,641,870號，實例2；Zapata等人, Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995])；單鏈抗體分子，及由抗體片段形成之多特異性抗體。單重鏈抗體或單輕鏈抗體可經工程改造，或在重鏈之情況下可自經工程改造以產生單重鏈分子之駱駝、鯊魚、文庫或小鼠分離。
木瓜蛋白酶消化抗體產生兩個相同的抗原結合片段，稱為「Fab」片段，及殘餘「Fc」片段，該名稱反映容易結晶之能力。Fab片段由整個L鏈以及H鏈之可變區結構域(VH)及一條重鏈之第一恆定域(CH1)組成。各Fab片段關於抗原結合為單價的，亦即其具有單一抗原結合位點。胃蛋白酶處理抗體產生單一大F(ab')2片段，其大致對應於具有不同抗原結合活性之兩個二硫鍵連接的Fab片段且仍能夠交聯抗原。Fab'片段與Fab片段的不同之處在於在CH1域之羧基端處具有若干額外殘基，包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸。Fab'-SH為本文中針對Fab'之名稱，其中恆定域之半胱胺酸殘基攜帶游離硫醇基。F(ab')2抗體片段最初係以成對的Fab'片段產生，該等片段在其間具有鉸鏈半胱胺酸。亦已知抗體片段之其他化學偶聯。
Fc片段包含藉由二硫鍵結合在一起的兩條H鏈之羧基端部分。抗體之效應功能由Fc區中之序列及聚醣判定，該區域亦由在某些類型之細胞上發現之Fc受體(FcR)識別。
「Fv」為含有完整抗原識別及抗原結合位點之最小抗體片段。此片段由緊密非共價締合之一個重鏈可變區結構域及一個輕鏈可變區結構域之二聚體組成。由此等兩個結構域之折迭產生六個高變環(各來自H鏈及L鏈之3個環)，其提供用於抗原結合之胺基酸殘基且賦予抗體抗原結合特異性。然而，即使單一可變域(或僅包含對抗原具有特異性之三個HVR的半個Fv)能夠識別且結合抗原，但其親和力低於完整結合位點。
亦縮寫為「sFv」或「scFv」之「單鏈Fv」為包含連接至單一多肽鏈中之VH及VL抗體域的抗體片段。在一些實施例中，sFv多肽進一步包含介於VH域與VL域之間的多肽連接子，其使得sFv能夠形成用於抗原結合之所需結構。關於sFv之綜述，參見Pluckthun的The Pharmacology of Monoclonal Antibodies， 第 113卷, Rosenburg及Moore編, Springer-Verlag, New York, 第269-315頁(1994)。
本發明抗體之「功能片段」包含完整抗體之一部分，通常包括完整抗體之抗原結合區或可變區或保留或具有經修飾之FcR結合能力的抗體之Fv區。抗體片段之實例包括線性抗體、單鏈抗體分子及由抗體片段形成之多特異性抗體。
在本文中，單株抗體特定包括「嵌合」抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或子類別之抗體中之對應序列一致或同源，而該等鏈之其餘部分與衍生自另一物種或屬於另一種抗體類別或子類別之抗體中之對應序列一致或同源，以及此類抗體之片段，只要其展現所需生物活性即可(美國專利第4,816,567號；Morrison等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。本文中所關注之嵌合抗體包括PRIMATIZED®抗體，其中抗體之抗原結合區來源於藉由例如用相關抗原使獼猴免疫而產生之抗體。如本文中所使用，「人類化抗體」係作為「嵌合抗體」之子集使用。
非人類(例如鼠類)抗體之「人類化」形式為含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列之嵌合抗體。在一個實施例中，人類化抗體為其中來自受體之HVR的殘基經來自非人類物種(供體抗體)之HVR的殘基置換之人類免疫球蛋白(受體抗體)，該等非人類物種諸如小鼠、大鼠、兔或具有所需特異性、親和力及/或能力之非人類靈長類動物。在一些情況下，人類免疫球蛋白之FR殘基經對應非人類殘基置換。此外，人類化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中未發現之殘基。可進行此等修飾以進一步改進抗體效能，諸如結合親和力。一般而言，人類化抗體將基本上包含至少一個且通常兩個可變域之全部，其中全部或基本上全部高變環對應於非人類免疫球蛋白序列之高變環，且全部或基本上全部FR區為人類免疫球蛋白序列之FR區，但該等FR區可包括一或多種改良抗體效能(諸如結合親和力、異構化、免疫原性等)的個別FR殘基取代。在一些實施例中，FR中之此等胺基酸取代之數目在H鏈中不超過6個，且在L鏈中不超過3個。人類化抗體視情況亦將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，通常人類免疫球蛋白恆定區之至少一部分。關於其他細節，參見例如Jones等人, Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann等人, Nature 332:323-329 (1988)；及Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。亦參見例如Vaswani及Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)；Hurle及Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)；及美國專利 第6,982,321號及第7,087,409號。在一些實施例中，人類化抗體係針對單一抗原位點。在一些實施例中，人類化抗體係針對多個抗原位點。替代性人類化方法描述於美國專利 第7,981,843號及美國專利申請公開案第2006/0134098號中。
抗體之「可變區」或「可變域」係指抗體之重鏈或輕鏈之胺基端域。因此，如本文中所使用之術語「可變區」及「可變域」可互換使用。重鏈及輕鏈之可變域可分別稱為「VH」及「VL」。此等域通常係抗體中變化最大的部分(相對於同一類別之其他抗體)且含有抗原結合位點。重鏈及輕鏈之可變域可使用任何可用的方法或編號方案判定且可包括如例如WO 2018/207701中所描述之可變域，其內容以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，重鏈及/或輕鏈之可變域可缺乏可變域之羧基端上(亦即，在第四構架域之羧基端處)之一或多個胺基酸殘基，該一或多個胺基酸殘基可另外包括於基於某些編號方案之可變域之描述中。在一些實施例中，重鏈及/或輕鏈之可變域可包括可變域之羧基端上(亦即，在第四構架域之羧基端處)之一或多個胺基酸殘基，該一或多個胺基酸殘基可另外不包括於基於某些編號方案之可變域之描述中。
當在本文中使用時，術語「高變區」、「HVR」或「HV」係指抗體可變域中序列具有高變性及/或形成結構上界定之環的區域。一般而言，抗體包含六個HVR；三個在VH (H1、H2、H3)中，且三個在VL (L1、L2、L3)中。在原生抗體中，H3及L3顯示六個HVR之大部分多樣性，且尤其咸信H3在賦予抗體精細特異性中發揮獨特作用。參見例如Xu等人 Immunity 13:37-45 (2000)；Johnson及Wu的Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo編, Human Press, Totowa, NJ, 2003)。實際上，由重鏈組成之天然存在之駱駝抗體僅在不存在輕鏈之情況下具有功能性且穩定。參見例如Hamers-Casterman等人, Nature 363:446- 448 (1993)及Sheriff等人, Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)。
本文中已使用且涵蓋多種HVR描述。作為Kabat互補決定區(CDR)之HVR係基於序列可變性且為最常用的(Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991))。Chothia HVR實際上係指結構環之位置(Chothia及Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。「接觸」HVR係基於對可用複合晶體結構之分析。下文標註來自此等HVR中之每一者之殘基。 環 Kabat                Chothia 接觸
L1 L24-L34 L26-L34 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L46-L55
L3 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H32 H30-H35B (Kabat編號)
H1 H31-H35 H26-H32 H30-H35      (Chothia編號)
H2 H50-H65 H53-H56 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H93-H101
除非另外指示，否則可變域殘基(HVR殘基及構架區殘基)係根據Kabat等人，見上文進行編號。
「構架」或「FR」殘基為除如本文所定義之HVR殘基以外的可變域殘基。
表述「如Kabat中之可變域殘基編號」或「如Kabat中之胺基酸位置編號」及其變化形式係指Kabat等人，見上文中用於抗體之編譯之重鏈可變域或輕鏈可變域的編號系統。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可含有較少或額外胺基酸，其對應於可變域之FR或HVR之縮短或其中之插入。舉例而言，重鏈可變域可在H2之殘基52後包括單個胺基酸插入(根據Kabat之殘基52a)且在重鏈FR殘基82後包括插入之殘基(例如根據Kabat之殘基82a、82b及82c等)。對於既定抗體，可藉由將抗體序列之同源區與「標準」Kabat編號序列比對來判定殘基之Kabat編號。
對於本文中之目的，「受體人類構架」為包含衍生自人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之VL或VH構架的胺基酸序列之構架。「衍生自」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之受體人類構架可包含與人類免疫球蛋白構架或人類共同構架相同的胺基酸序列，或其可含有預先存在的胺基酸序列變化。在一些實施例中，預先存在之胺基酸變化之數目為10個或更少、9個或更少、8個或更少、7個或更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少或2個或更少。
關於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對參考多肽序列與候選序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將保守性取代視為序列一致性之一部分的情況下，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。出於判定胺基酸序列一致性百分比之目的之比對可以此項技術之技能範圍內的各種方式達成，例如使用公開可用之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可判定用於比對序列之適當參數，包括在用於所比較之序列之全長內達成最大比對所需的任何演算法。舉例而言，既定胺基酸序列A相對於既定胺基酸序列B、與既定胺基酸序列B或針對既定胺基酸序列B的胺基酸序列一致性% (其可替代地表述為相對於既定胺基酸序列B、與既定胺基酸序列B或針對既定胺基酸序列B具有或包含一定胺基酸序列一致性%的既定胺基酸序列A)如下計算： 100乘以分數X/Y 其中X為在A與B之該程式比對中序列評為一致匹配的胺基酸殘基之數目，且其中Y為B中胺基酸殘基之總數目。應瞭解，當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A與B之胺基酸序列一致性%將不等於B與A之胺基酸序列一致性%。
「結合於」、「特異性結合於」特定多肽或特定多肽上之抗原決定基或「對特定多肽或特定多肽上之抗原決定基具有特異性」的抗體為結合於該特定多肽或特定多肽上之該抗原決定基而實質上不結合於任何其他多肽或多肽抗原決定基的抗體。在一些實施例中，本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)與不相關、非CTLA4多肽的結合小於該抗體與CTLA4之結合之約10%，如藉由此項技術中已知之方法(例如酶聯結免疫吸附分析(ELISA))所量測。在一些實施例中，結合於CTLA4 (例如鼠類CTLA4及/或人類CTLA4)之結合蛋白(例如抗體)具有≤1 μM、≤100 nM、≤10 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤0.7 nM、≤0.6 nM、≤0.5 nM、≤0.1 nM、≤0.01 nM或≤0.001 nM (例如10 -8M或更低，例如10 -8M至10 -13M，例如10 -9M至10 -13M)的平衡解離常數(K D)。
如本文所提供之術語「CTLA4」或「CTLA4蛋白質」包括細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)之重組形式或天然存在之形式中之任一者，或其維持CTLA4蛋白質活性(例如相較於CTLA4在至少50%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%活性內)之變異體或同源物。在一些態樣中，相較於天然存在之CTLA4多肽，變異體或同源物跨越整個序列或一部分序列(例如50、100、150或200個連續胺基酸部分)具有至少90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性。在一些實施例中，CTLA4為如藉由NCBI序列參考GI：83700231鑑別之蛋白質、其同源物或功能片段。在一些實施例中，CTLA4為人類CTLA4。在一些實施例中，CTLA4為鼠類CTLA4。
抗體「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區(例如原生序列Fc區或胺基酸序列變異Fc區)的彼等生物活性，且隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指一種細胞毒性形式，其中所分泌的Ig結合於存在於某些細胞毒性細胞(例如自然殺手(NK)細胞、嗜中性球及巨噬細胞)上之Fc受體(FcR)，使得此等細胞毒性效應細胞能夠特異性結合於攜帶抗原之目標細胞且隨後用細胞毒素殺死目標細胞。抗體「武裝」細胞毒性細胞，且需要藉由此機制殺死標靶細胞。用於介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核球則表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。造血細胞上之Fc表現概述於Ravetch及Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:  457-92 (1991)之第464頁的表3中。在一些實施例中，本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)在缺乏使Fc聚醣岩藻糖基化之能力以具有增強之ADCC的細胞中經工程改造或表現。為評定所關注分子之ADCC活性，可進行活體外ADCC分析，諸如美國專利 第5,500,362號或第5,821,337號中所描述之分析。適用於此類分析之效應細胞包括外周血單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。替代地或另外地，可活體內評定所關注分子之ADCC活性，例如在動物模型中，諸如Clyneset等人, PNAS USA 95:652-656 (1998)中所揭示之動物模型。改變ADCC活性及其他抗體特性之其他Fc變異體包括藉由以下揭示之彼等變異體：Ghetie等人, Nat Biotech. 15:637-40, 1997；Duncan等人, Nature 332:563-564, 1988；Lund等人, J. Immunol 147:2657-2662, 1991；Lund等人, Mol Immunol 29:53-59, 1992；Alegre等人, Transplantation 57:1537-1543, 1994；Hutchins等人, Proc Natl. Acad Sci USA 92:11980- 11984, 1995；Jefferis等人, Immunol Lett. 44:111-117, 1995；Lund等人, FASEB J9:115-119, 1995；Jefferis等人, Immunol Lett 54:101-104, 1996；Lund等人, J Immunol 157:4963-4969, 1996；Armour等人, Eur J Immunol 29:2613-2624, 1999；Idusogie等人, J Immunol 164:4178-4184, 200；Reddy等人, J Immunol 164:1925-1933, 2000；Xu等人, Cell Immunol 200:16-26, 2000；Idusogie等人, J Immunol 166:2571-2575, 2001；Shields等人, J Biol Chem 276:6591-6604, 2001；Jefferis等人, Immunol Lett 82:57-65. 2002；Presta等人, Biochem Soc Trans 30:487-490, 2002；Lazar等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005-4010, 2006；美國專利 第5,624,821號；第5,885,573號；第5,677,425號；第6,165,745號；第6,277,375號；第5,869,046號；第6,121,022號；第5,624,821號；第5,648,260號；第6,194,551號；第6,737,056號；第6,821,505號；第6,277,375號；第7,335,742號；及第7,317,091號。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區域，包括原生序列Fc區及變異Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區之邊界可變化，但人類IgG重鏈Fc區通常定義為自位置Cys226處之胺基酸殘基或自Pro230延伸至其羧基端。用於本發明之抗體之適合原生序列Fc區包括人類IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
如本文中所使用，「結合親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之強度。在一些實施例中，結合蛋白(例如抗體)對CTLA4之親和力通常可由平衡解離常數(K D)表示。可藉由此項技術中已知之常用方法，包括本文所描述之彼等方法來量測親和力。
如本文中所使用，「結合親合力」係指分子(例如抗體)之多個結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之結合強度。
在本文中，編碼抗體之「經分離之」核酸分子為經鑑別且與至少一種在其產生之環境中通常與其相關的污染性核酸分子分離之核酸分子。在一些實施例中，經分離之核酸與所有與產生環境相關之組分無關。在本文中，編碼多肽及抗體之經分離之核酸分子呈與其在自然界中發現的形式或環境不同之形式。因此，經分離之核酸分子與本文中天然存在於細胞中的編碼多肽及抗體之核酸不同。
術語「醫藥調配物」係指呈准許活性成分之生物活性有效之形式，且不含對調配物將投與之受試者具有不可接受的毒性之額外組分之製劑。此類調配物為無菌的。
如本文中所使用，「載劑」包括醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑，其在所採用之劑量及濃度下對暴露於其之細胞或哺乳動物無毒性。通常，生理學上可接受之載劑為水性pH緩衝溶液。生理學上可接受之載劑的實例包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN™、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS™。
如本文中所使用，術語「治療」係指經設計以改變所治療之個體或細胞在臨床病理學之病程期間的自然病程的臨床干預。所要治療效果包括降低疾病進展之速率、改善或緩和疾病狀態及緩解或改良預後。舉例而言，若與病症(例如贅生性疾病)相關之一或多種症狀得以緩解或消除，則成功「治療」個體。舉例而言，若治療使得提高罹患疾病之個體之生活品質、降低治療疾病所需之其他藥物之劑量、降低疾病之復發率、減輕疾病之嚴重程度、延緩疾病之發展或進展及/或延長個體之存活期，則成功「治療」個體。
如本文中所使用，「與……結合」或「與……組合」係指除一種治療模式以外亦投與另一種治療模式。因此，「與……結合」或「與……組合」係指在向個體投與一種治療模式之前、期間或之後投與另一種治療模式。
如本文中所使用，術語「預防」包括提供關於個體之疾病之發生或復發的防治。個體可能易患病症、對病症敏感或具有罹患病症之風險，但尚未診斷患有病症。在一些實施例中，本文中所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體)用於延緩病症之發展。
如本文中所使用，「具有罹患病症之風險」的個體可具有或不具有可偵測之疾病或疾病症狀，且在本文所描述之治療方法之前可能已顯示或尚未顯示可偵測之疾病或疾病症狀。「具有風險」表示個體具有一或多種風險因素，其為與疾病之發展相關的可量測之參數，如此項技術中所已知。具有此等風險因素中之一或多者的個體比不具有此等風險因素中之一或多者的個體具有更高的罹患病症之機率。
「有效量」係指在所需之劑量下及在所需之時間段內至少有效達成所要或所指示作用，包括治療或防治結果之量。有效量可以一或多次投與形式提供。「治療有效量」為至少實現特定病症之可量測的改善所需之最小濃度。本文中之治療有效量可根據諸如以下之因素而變化：患者之疾病狀態、年齡、性別及體重，及抗體引發個體中之所需反應的能力。治療有效量亦可為抗體之治療有益效果超過任何毒性或有害效果的量。「防治有效量」係指在所需之劑量下及在所需時間段內有效達成所要防治結果的量。通常但未必，由於受試者疾病之前或在疾病早期階段使用防治劑量，因此防治有效量可小於治療有效量。
「慢性」投與係指與急性模式相反，以持續形式投與藥劑，以便長時間保持初始治療效果(活性)。「間歇」投與為在不中斷之情況下不連續進行，而實際上循環進行之治療。
如本文中所使用，「個體(individual)」或「受試者(subject)」為哺乳動物。出於治療之目的，「哺乳動物」包括人類、馴養動物及農畜，以及動物園、運動或寵物動物，諸如犬、馬、兔、牛、豬、倉鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、貓等。在一些實施例中，個體或受試者為人類。 I. 治療方法
本文提供用於治療或預防受試者之疾病之方法，其包含向該受試者投與有效量的本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，例如抗體B或其組合物)及PD-1傳訊劑(例如，PD-1或PD-L1抑制劑)。在一些實施例中，受試者(例如人類患者)已診斷患有贅生性病症(例如癌症)或具有罹患此類病症之風險。
對於疾病之預防或治療，活性劑之適當劑量將視所治療之疾病之類型(如上文所定義)、疾病之嚴重程度及病程、是否出於預防或治療目的而投與藥劑、先前療法、受試者之臨床病史及對藥劑之反應以及主治醫師之判斷而定。一次性或經一系列治療向受試者適當地投與藥劑。在本文所描述之方法之一些實施例中，投與抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)與PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)之間的時間間隔為約一個月或更長時間。在一些實施例中，投藥之間的時間間隔為約兩個月、約三個月、約四個月、約五個月、約六個月或更長時間。
在本文所描述之方法之一些實施例中，投與抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)與PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)之間的時間間隔為約每3週。在本文所描述之方法之一些實施例中，投與抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)與PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)之間的時間間隔為每週、每2週、每3週或每4週。在一些實施例中，每3週投與PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)。
如本文中所使用，投藥之間的時間間隔係指一次抗體投藥與下一次抗體投藥之間的時間段。如本文中所使用，約一個月之時間間隔包括四週。在一些實施例中，投藥之間的時間間隔為約兩週、約三週、約四週、約八週、約十二週、約十六週、約二十週、約二十四週或更長時間。在一些實施例中，治療包括抗體之多次投藥，其中投藥之間的時間間隔可變化。舉例而言，第一次投藥與第二次投藥之間的時間間隔為約一個月，且後續投藥之間的時間間隔為約三個月。在一些實施例中，第一次投藥與第二次投藥之間的時間間隔為約一個月，第二次投藥與第三次投藥之間的時間間隔為約兩個月，且後續投藥之間的時間間隔為約三個月。在一些實施例中，本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)係以均一劑量投與。視疾病之類型及嚴重程度而定，約1 µg/kg至15 mg/kg (例如0.1 mg/kg-10 mg/kg)之抗體可為投與患者之初始候選劑量，無論例如藉由一或多次分開投與還是藉由連續輸注。一種典型日劑量可在約1 μg/kg至100 mg/kg或更多之範圍內，視上文所提及之因素而定。對於歷經數日或更長時間之重複投藥，視病狀而定，治療通常將持續至疾病症狀之所需抑制發生為止。抗體之一個例示性劑量將在約0.05 mg/kg至約10 mg/kg範圍內。因此，可向患者投與約0.5 mg/kg、2.0 mg/kg、4.0 mg/kg或10 mg/kg (或其任何組合)之一或多種劑量。在一些實施例中，以每次給藥約25 mg至約500 mg之劑量向受試者投與本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)。在一些實施例中，以約0.1 mg/kg至約10 mg/kg或約1.0 mg/kg至約10 mg/kg之劑量向受試者投與本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)。在一些實施例中，以約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg、2.0 mg/kg、2.5 mg/kg、3.0 mg/kg、3.5 mg/kg、4.0 mg/kg、4.5 mg/kg、5.0 mg/kg、5.5 mg/kg、6.0 mg/kg、6.5 mg/kg、7.0 mg/kg、7.5 mg/kg、8.0 mg/kg、8.5 mg/kg、9.0 mg/kg、9.5 mg/kg或10.0 mg/kg中之任一者之劑量向受試者投與本文中所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)。在一些實施例中，以0.1 mg/kg與10 mg/kg之間或約0.1 mg/kg與10 mg/kg之間、10 mg/kg與20 mg/kg之間或約10 mg/kg與20 mg/kg之間、20 mg/kg與30 mg/kg之間或約20 mg/kg與30 mg/kg之間、30 mg/kg與40 mg/kg之間或約30 mg/kg與40 mg/kg之間、40 mg/kg與50 mg/kg之間或約40 mg/kg與50 mg/kg之間、50 mg/kg與60 mg/kg之間或約50 mg/kg與60 mg/kg之間、60 mg/kg與70 mg/kg之間或約60 mg/kg與70 mg/kg之間、70 mg/kg與80 mg/kg之間或約70 mg/kg與80 mg/kg之間的劑量向受試者投與本文中所描述之抗CTLA4結合蛋白（例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段）。可使用上文所描述之給藥頻率中之任一者。
本文中涵蓋之治療方法為用本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)治療病症或疾病。可用本發明之調配物治療之病症或疾病包括白血病、淋巴瘤、頭頸癌、大腸直腸癌、前列腺癌、胰臟癌、黑色素瘤、乳癌、神經母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、子宮頸癌、肝癌、腎癌、皮膚癌(例如梅克爾細胞癌(Merkel cell carcinoma))或睪丸癌。
在一些實施例中，本文提供一種藉由投與抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)治療或預防癌症的方法。如本文中所使用，術語「癌症」係指在哺乳動物中發現之所有類型之癌症、贅瘤或惡性腫瘤，包括白血病、淋巴瘤、黑色素瘤、神經內分泌腫瘤、癌瘤及肉瘤。可用本文所提供之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)、醫藥組合物或方法治療的例示性癌症包括淋巴瘤、肉瘤、膀胱癌、骨癌、腦瘤、子宮頸癌、結腸癌、食道癌、胃癌、頭頸癌、腎癌、骨髓瘤、甲狀腺癌、白血病、前列腺癌、乳癌(例如，三陰性、ER陽性、ER陰性、抗化學療法(chemotherapy resistant)、抗赫賽汀(Herceptin resistant)、HER2陽性、抗小紅莓(doxorubicin resistant)、抗他莫昔芬(tamoxifen resistant)、導管癌、小葉癌、原發性、轉移性)、卵巢癌、胰臟癌、肝癌(例如肝細胞癌)、肺癌(例如，非小細胞肺癌、鱗狀細胞肺癌、腺癌、大細胞肺癌、小細胞肺癌、類癌、肉瘤)、多形性神經膠質母細胞瘤、神經膠質瘤、黑色素瘤、前列腺癌、去勢抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer)、乳癌、三陰性乳癌、神經膠質母細胞瘤、卵巢癌、肺癌、鱗狀細胞癌(例如頭部、頸部或食道)、大腸直腸癌、白血病、急性骨髓性白血病、淋巴瘤、B細胞淋巴瘤或多發性骨髓瘤。額外實例包括甲狀腺癌、內分泌系統癌症、腦癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、頭頸癌、食道癌、肝癌、腎癌、肺癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、間皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宮癌或神經管母細胞瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、非霍奇金氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤、神經母細胞瘤、神經膠質瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、卵巢癌、橫紋肌肉瘤、原發性血小板增多症、原發性巨球蛋白血症、原發性腦腫瘤、癌症、惡性胰島瘤、惡性類癌、膀胱癌、癌前皮膚病變、睪丸癌、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經母細胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌、惡性高鈣血症、子宮內膜癌、腎上腺皮質癌、內分泌或外分泌胰臟贅瘤、甲狀腺髓樣癌症、甲狀腺髓樣癌、黑色素瘤、大腸直腸癌、乳頭狀甲狀腺癌、肝細胞癌、乳頭佩吉特氏病(Paget's Disease of the Nipple)、葉狀腫瘤(Phyllodes Tumor)、小葉癌、導管癌、胰臟星形細胞癌、肝臟星形細胞癌或前列腺癌。
在一些實施例中，本文提供一種藉由投與本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)治療或預防白血病的方法。術語「白血病」廣泛地指造血器官之進行性、惡性疾病，且其特徵通常在於血液及骨髓中之白血球及其前驅體之畸變增殖及發育。白血病通常在臨床上基於以下進行分類：(1)疾病之持續時間及特徵，即急性或慢性；(2)所涉及之細胞的類型；骨髓(骨髓性)、淋巴(淋巴生成)或單核球性；及(3)血液中之異常細胞數目之增加或不增加，即白血病或白血球缺乏(亞白血病)。可用本文所提供之化合物、醫藥組合物或方法治療之例示性白血病包括例如急性非淋巴球性白血病、慢性淋巴球性白血病、急性粒細胞性白血病、慢性粒細胞性白血病、急性前髓細胞性白血病、成年人T細胞白血病、白血球缺乏性白血病、白血球性白血病、嗜鹼性白血病、母細胞白血病、牛白血病、慢性骨髓細胞性白血病、皮膚白血病、胚胎白血病、嗜酸性球性白血病、格羅斯白血病(Gross'leukemia)、毛細胞白血病、血母細胞性白血病、血胚細胞白血病、組織細胞白血病、幹細胞白血病、急性單核球性白血病、白血球減少性白血病、淋巴性白血病、淋巴母細胞白血病、淋巴球性白血病、淋巴生成白血病、淋巴白血病、淋巴肉瘤細胞白血病、肥大細胞白血病、巨核細胞白血病、小骨髓母細胞性白血病(micromyeloblastic leukemia)、單核球性白血病、骨髓母細胞性白血病、骨髓細胞性白血病、骨髓粒細胞性白血病、骨髓單核球性白血病、內格利白血病(Naegeli leukemia)、漿細胞白血病、多發性骨髓瘤、漿球性白血病、前髓細胞性白血病、里德爾細胞白血病(Rieder cell leukemia)、希林氏白血病(Schilling's leukemia)、幹細胞白血病、亞白血性白血病或未分化細胞白血病。
在一些實施例中，本文提供一種藉由投與本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)治療或預防肉瘤的方法。術語「肉瘤」通常係指由如胚胎結締組織之物質組成且通常由包埋於纖維狀或均質物質中之緊密堆積的細胞構成之腫瘤。可用本文所提供之化合物、醫藥組合物或方法治療之肉瘤包括軟骨肉瘤、纖維肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤、黏液肉瘤、骨肉瘤、艾伯內西氏肉瘤(Abemethy's sarcoma)、脂肉瘤(adipose sarcoma)、脂肪肉瘤(liposarcoma)、軟組織肺泡狀肉瘤、釉質母細胞肉瘤、葡萄樣肉瘤、綠色瘤肉瘤、絨膜癌瘤、胚胎肉瘤、威耳姆氏腫瘤肉瘤(Wilms'tumor sarcoma)、子宮內膜肉瘤、基質肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、筋膜肉瘤、纖維母細胞肉瘤、巨細胞肉瘤、粒細胞肉瘤、霍奇金氏肉瘤(Hodgkin's sarcoma)、特發性多發性色素沉著出血性肉瘤、B細胞之免疫母細胞肉瘤、淋巴瘤、T細胞之免疫母細胞肉瘤、詹恩遜氏肉瘤(Jensen's sarcoma)、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、庫普弗細胞肉瘤(Kupffer cell sarcoma)、血管肉瘤、白血病性肉瘤、惡性間質瘤肉瘤、骨膜外肉瘤、網狀細胞肉瘤、勞斯肉瘤(Rous sarcoma)、漿液囊性肉瘤、滑膜肉瘤或毛細管擴張性肉瘤。
在一些實施例中，本文提供一種藉由投與本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)治療或預防黑色素瘤的方法。術語「黑色素瘤」用以意謂由皮膚及其他器官之黑色素細胞系統產生之腫瘤。可用本文所提供之化合物、醫藥組合物或方法治療之黑色素瘤包括例如肢端-雀斑黑色素瘤、無黑色素性黑色素瘤、良性青少年黑色素瘤、克勞德曼氏黑色素瘤(Cloudman's melanoma)、S91黑色素瘤、哈-帕二氏黑色素瘤(Harding-Passey melanoma)、青少年黑色素瘤、惡性雀斑樣痣黑色素瘤、惡性黑色素瘤、結節性黑色素瘤、陰囊黑色素瘤或淺表擴散性黑色素瘤。
在一些實施例中，本文提供一種藉由投與本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)治療或預防癌瘤的方法。術語「癌瘤」係指由傾向於浸潤周圍組織且引起轉移之上皮細胞構成的惡性新生長。可用本文所提供之化合物、醫藥組合物或方法治療之例示性癌瘤包括例如甲狀腺髓樣癌、家族性甲狀腺髓樣癌、腺泡癌、腺泡狀癌、腺囊癌、腺樣囊性癌瘤、腺癌(carcinoma adenomatosum)、腎上腺皮質癌、肺泡癌、肺泡細胞癌、基底細胞癌、基底樣細胞癌、基底樣癌瘤、基底鱗狀細胞癌、細支氣管肺泡癌、細支氣管癌、支氣管癌、腦狀癌、膽管細胞癌、絨毛膜癌、膠樣癌(colloid carcinoma)、粉刺癌、子宮體癌、篩狀癌、鎧甲狀癌、皮膚癌、柱狀癌、柱狀細胞癌、導管癌、導管癌、硬癌(carcinoma durum)、胚胎性癌、髓樣癌、表皮樣癌、腺狀上皮癌、外生性癌、潰瘍性癌、纖維癌、膠樣癌(gelatiniforni carcinoma)、膠狀癌、巨細胞癌(giant cell carcinoma)、巨細胞癌(carcinoma gigantocellulare)、腺癌(glandular carcinoma)、粒層細胞癌、毛髮-基質癌(hair-matrix carcinoma)、血樣癌、肝細胞癌、許特萊氏細胞癌(Hurthle cell carcinoma)、透明細胞癌(hyaline carcinoma)、腎上腺樣癌、幼稚型胚胎性癌(infantile embryonal carcinoma)、原位癌、表皮內癌、上皮內癌、克隆佩徹氏癌(Krompecher's carcinoma)、庫爾奇茨基細胞癌(Kulchitzky-cell carcinoma)、大細胞癌、豆狀癌(lenticular carcinoma)、豆狀癌(carcinoma lenticulare)、脂肪瘤樣癌、小葉癌、淋巴上皮癌、髓樣癌(carcinoma medullare)、髓質癌(medullary carcinoma)、黑色素癌、軟癌、黏液性癌、黏液癌(carcinoma muciparum)、黏液細胞癌、黏液表皮樣癌、黏膜癌、黏液癌(mucous carcinoma)、黏液瘤樣癌、鼻咽癌、燕麥細胞癌、骨化性癌、骨樣癌、乳頭狀癌、門脈周性癌、浸潤前癌(preinvasive carcinoma)、棘細胞癌、腦樣癌、腎臟之腎細胞癌、儲備細胞癌(reserve cell carcinoma)、肉瘤樣癌、施耐德癌(schneiderian carcinoma)、乳腺硬癌(scirrhous carcinoma)、陰囊癌、印戒細胞癌(signet-ring cell carcinoma)、單純癌(carcinoma simplex)、小細胞癌、馬鈴薯狀癌、球狀細胞癌、梭狀細胞癌、髓狀癌、鱗狀癌、鱗狀細胞癌、串癌(string carcinoma)、毛細管擴張癌、血管擴張性癌、移行細胞癌、塊狀癌、管狀癌、結節性癌、疣狀癌或絨毛狀癌。
在一些實施例中，本文提供一種藉由投與本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)治療或預防轉移性癌症的方法。如本文中所使用，術語「轉移」、「轉移性」及「轉移性癌症」可互換使用且係指贅生性疾病或病症(例如癌症)自一個器官擴散至另一個不相鄰的器官或身體部分。癌症在起始位點(例如乳房)處發生，該位點稱為原發性腫瘤，例如原發性乳癌。原發性腫瘤或起始位點中之一些癌細胞獲取滲透及浸潤局部區域中之周圍正常組織的能力及/或滲透淋巴系統或血管系統之障壁的能力，經由該系統循環至身體內之其他位點及組織。由原發性腫瘤之癌細胞形成之第二臨床可偵測腫瘤稱為轉移性或繼發性腫瘤。當癌細胞轉移時，假設轉移性腫瘤及其細胞類似於原始腫瘤之細胞。因此，若肺癌轉移至乳房，則乳房位點處之繼發性腫瘤由異常肺細胞及非異常乳房細胞組成。乳房中之繼發性腫瘤稱為轉移性肺癌。因此，片語轉移性癌症係指其中受試者患有或曾患有原發性腫瘤且患有一或多種繼發性腫瘤之疾病。片語非轉移性癌症或患有非轉移性癌症之受試者係指其中受試者患有原發性腫瘤，但不患有一或多種繼發性腫瘤之疾病。舉例而言，轉移性肺癌係指患有原發性肺腫瘤或具有原發性肺腫瘤之病史且在第二位置或多個位置(例如在乳房中)患有一或多種繼發性腫瘤之受試者的疾病。
在一些實施例中，可受益於本文所描述的CTLA4結合蛋白(例如抗體B)與PD-1傳訊劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)組合的疾病或病症包括(完全或部分地)由CTLA4或CTLA4活性或功能及/或PD-1傳訊活性或功能所引起之疾病(例如糖尿病、癌症(例如，前列腺癌、腎癌、轉移性癌症、黑色素瘤、去勢抵抗性前列腺癌、乳癌、三陰性乳癌、神經膠質母細胞瘤、卵巢癌、肺癌、鱗狀細胞癌(例如頭部、頸部或食道)、大腸直腸癌、白血病、急性骨髓性白血病、淋巴瘤、B細胞淋巴瘤或多發性骨髓瘤))，或疾病之症狀係(完全或部分地)由CTLA4或CTLA4活性或功能及/或PD-1傳訊活性或功能所引起。
本文描述治療受試者之病症(例如，受益於投與抗PD-1療法之病症)的方法。舉例而言，本文所描述之抗PD-1療法可例如以與CTLA-4抗體之組合療法形式投與，持續足以達成臨床益處之時段，或根據如由醫師所判定之方案投與(例如，抗PD-1療法係以由醫師所判定之劑量及治療週期數投與)。
在實施例中，本文所描述之方法適用於治療T細胞功能障礙病症(例如癌症)。在實施例中，本文所描述之方法適用於在受試者中減小腫瘤或抑制腫瘤細胞生長。
在實施例中，本文所描述之方法適用於增加受試者中之T細胞活化或T細胞效應功能。
在實施例中，本文所描述之方法適用於誘導受試者之免疫反應。
在實施例中，本文所描述之方法適用於在受試者中增強免疫反應或增加免疫細胞之活性。
本發明方法可用於治療任何類型之自體免疫疾病(亦即，如由免疫系統過度活動引起之身體攻擊且損害其自身組織的疾病或病症)，諸如MacKay I.R.及Rose N.R.編, The Autoimmune Diseases, 第五版, Academic Press, Waltham, MA (2014)中所描述之彼等自體免疫疾病。可藉由本發明方法治療之自體免疫疾病的實例包括但不限於多發性硬化症、1型糖尿病、類風濕性關節炎、硬皮病、克羅恩氏病(Crohn's disease)、牛皮癬、全身性紅斑狼瘡(SLE)及潰瘍性結腸炎。當本發明方法治療自體免疫疾病時，PD-1抗體藥劑可與抗炎劑，包括例如皮質類固醇(例如普賴松(prednisone)及氟替卡松(fluticasone))及非類固醇抗炎藥(NSAID) (例如阿司匹靈(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)及萘普生(naproxen))組合使用。
PD-1在各種癌症中異常表現(參見例如Brown等人, J. Immunol., 170: 1257-1266 (2003)；及Flies等人, Yale Journal of Biology and Medicine, 84: 409-421 (2011))，且在一些腎細胞癌患者中之PD-L1表現與腫瘤侵襲性相關。本發明方法可用於治療此項技術中已知的任何類型之癌症。
在實施例中，腺癌之癌症，肺腺癌、急性骨髓性白血病(「AML」)、急性淋巴母細胞性白血病(「ALL」)、腎上腺皮質癌瘤、肛門癌、闌尾癌、B細胞衍生之白血病、B細胞衍生之淋巴瘤、膀胱癌、腦癌、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC))、輸卵管癌、睪丸癌、大腦癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、慢性骨髓性白血病、CNS腫瘤、結腸腺癌、結腸癌、大腸直腸癌、彌漫性內因性腦橋神經膠質瘤(diffuse intrinsic pontine glioma；DIPG)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(「DLBCL」)、胚胎性橫紋肌肉瘤(ERMS)、子宮內膜癌、上皮癌、食道癌、尤文氏肉瘤、濾泡性淋巴瘤(「FL」)、膽囊癌、胃癌、胃腸癌、神經膠質瘤、頭頸癌、血液癌、肝細胞癌、霍奇金氏淋巴瘤/原發性縱隔B細胞淋巴瘤、腎癌、腎透明細胞癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、梅克爾細胞癌、間皮瘤、單核球性白血病、多發性骨髓瘤、骨髓瘤、神經母細胞衍生之CNS腫瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、非小細胞肺癌(NSCLC)、口腔癌、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢癌瘤、胰臟癌、腹膜癌、原發性腹膜癌、前列腺癌、復發性或難治性經典霍奇金氏淋巴瘤(cHL)、腎細胞癌、直腸癌、唾液腺癌(例如唾液腺腫瘤)、肉瘤、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、肛門生殖器區之鱗狀細胞癌(例如肛門、陰莖、子宮頸、陰道或外陰之鱗狀細胞癌)、食道鱗狀細胞癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCHNC)、肺鱗狀細胞癌、胃癌、T細胞衍生之白血病、T細胞衍生之淋巴瘤、胸腺癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、葡萄膜黑色素瘤、尿道上皮細胞癌、子宮癌、子宮的子宮內膜癌(uterine endometrial cancer)、子宮肉瘤、陰道癌、外陰癌或威爾姆斯腫瘤(Wilms tumor)。
在其他實施例中，癌症為頭頸癌、肺癌(例如非小細胞肺癌(NSCLC))、腎癌、膀胱癌、黑色素瘤、梅克爾細胞癌(參見例如Bhatia等人, Curr. Oncol. Rep., 13(6): 488-497 (2011))、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、子宮癌、子宮內膜癌、卵巢癌、輸卵管癌、乳癌、前列腺癌、唾液腺腫瘤、胸腺瘤、腎上腺皮質癌、食道癌、胃癌、大腸直腸癌、闌尾癌、尿道上皮細胞癌或鱗狀細胞癌(例如肺鱗狀細胞癌；肛門生殖器區之鱗狀細胞癌，包括肛門、陰莖、子宮頸、陰道或外陰之鱗狀細胞癌；或食道鱗狀細胞癌)。在一些實施例中，用於在本發明之情形下治療的癌症為黑色素瘤、腎細胞癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、膽囊癌、喉癌、肝癌、甲狀腺癌、胃癌、唾液腺癌、前列腺癌、胰臟癌或梅克爾細胞癌。
在一些實施例中，患者或患者群體患有血液癌。在一些實施例中，患者患有血液癌，諸如彌漫性大B細胞淋巴瘤(「DLBCL」)、霍奇金氏淋巴瘤(「HL」)、非霍奇金氏淋巴瘤(「NHL」)、濾泡性淋巴瘤(「FL」)、急性骨髓性白血病(「AML」)、急性淋巴母細胞性白血病(「ALL」)或多發性骨髓瘤(「MM」)。在實施例中，癌症為血源性癌症，諸如急性淋巴母細胞性白血病(「ALL」)、急性淋巴母細胞性B細胞白血病、急性淋巴母細胞性T細胞白血病、急性骨髓母細胞性白血病(「AML」)、急性前髓細胞性白血病(「APL」)、急性單核母細胞性白血病、急性紅白血病性白血病、急性巨核母細胞性白血病、急性骨髓單核球性白血病、急性非淋巴球性白血病、急性未分化性白血病、慢性骨髓細胞性白血病(「CML」)、慢性淋巴球性白血病(「CLL」)、毛細胞白血病及多發性骨髓瘤；急性及慢性白血病，諸如淋巴母細胞性白血病、骨髓性白血病、淋巴球性白血病及骨髓細胞性白血病。
在實施例中，癌症為淋巴瘤，諸如霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、重鏈病及真性紅血球增多症。
在實施例中，癌症為鱗狀細胞癌。在實施例中，癌症為肺鱗狀細胞癌。在實施例中，癌症為食道鱗狀細胞癌。在實施例中，癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。
在實施例中，癌症為肛門生殖器區鱗狀細胞癌(例如肛門、陰莖、子宮頸、陰道或外陰之鱗狀細胞癌)。
在實施例中，癌症為膀胱癌、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC))、輸卵管癌、膽管癌、結腸腺癌、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤、胃癌、腎透明細胞癌、肺癌(例如肺腺癌或肺鱗狀細胞癌)、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、腹膜癌、前列腺癌、子宮的子宮內膜癌或葡萄膜黑色素瘤。在實施例中，癌症為卵巢癌、輸卵管癌或腹膜癌。在實施例中，癌症為乳癌(例如TNBC)。在實施例中，癌症為肺癌(例如非小細胞肺癌)。在實施例中，癌症為前列腺癌。
在實施例中，癌症為CNS或腦癌，諸如神經母細胞瘤(NB)、神經膠質瘤、彌漫性內因性腦橋神經膠質瘤(DIPG)、毛細胞型星形細胞瘤、星形細胞瘤、退行性星形細胞瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、神經管母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、寡樹突神經膠質瘤、腦膜瘤、前庭神經鞘瘤、腺瘤、轉移性腦腫瘤、腦膜瘤、脊椎腫瘤或神經管母細胞瘤。在實施例中，癌症為CNS腫瘤。
在一些實施例中，患者或患者群體患有實體腫瘤。在實施例中，癌症為實體腫瘤，諸如纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤文氏腫瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤、結腸癌、大腸直腸癌、腎癌、胰臟癌、骨癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓質癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎性癌、威爾姆斯腫瘤、子宮頸癌、子宮癌、睪丸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、皮膚癌、黑色素瘤、神經母細胞瘤(NB)或視網膜母細胞瘤。在一些實施例中，腫瘤為晚期實體腫瘤。在一些實施例中，腫瘤為轉移性實體腫瘤。在一些實施例中，患者患有MSI-H實體腫瘤。
在一些實施例中，待藉由本發明之方法治療的患者或患者群體患有或易患癌症，諸如頭頸癌、肺癌(例如非小細胞肺癌(NSCLC))、腎癌、膀胱癌、黑色素瘤、梅克爾細胞癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、子宮癌、子宮內膜癌、卵巢癌、輸卵管癌、乳癌、前列腺癌、唾液腺腫瘤、胸腺瘤、腎上腺皮質癌、食道癌、胃癌、大腸直腸癌、闌尾癌、尿道上皮細胞癌或鱗狀細胞癌(例如肺鱗狀細胞癌；肛門生殖器區鱗狀細胞癌，包括肛門、陰莖、子宮頸、陰道或外陰之鱗狀細胞癌；或食道鱗狀細胞癌)。在一些實施例中，待藉由本發明之方法治療的患者或患者群體患有或易患肺癌(例如NSCLC)、腎癌、黑色素瘤、子宮頸癌、大腸直腸癌或子宮內膜癌(例如MSS子宮內膜癌或MSI-H子宮內膜癌)。
在一些實施例中，癌症為婦科癌症(亦即，女性生殖系統之癌症，諸如卵巢癌、輸卵管癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、子宮癌或原發性腹膜癌，或乳癌)。在一些實施例中，女性生殖系統之癌症包括但不限於卵巢癌、輸卵管癌、腹膜癌及乳癌。
在實施例中，癌症為卵巢癌(例如漿液性或透明細胞卵巢癌)。在實施例中，癌症為輸卵管癌(例如漿液性或透明細胞輸卵管癌)。在實施例中，癌症為原發性腹膜癌(例如漿液性或透明細胞原發性腹膜癌)。
在一些實施例中，卵巢癌為上皮癌。上皮癌占卵巢癌之85%至90%。雖然歷史上認為在卵巢表面上開始，但新證據表明至少一些卵巢癌在輸卵管之一部分中之特殊細胞中開始。輸卵管為將女性卵巢連接至其子宮的小導管，其為女性生殖系統之一部分。在正常女性生殖系統中，存在兩個輸卵管，一個位於子宮之各側。在輸卵管中開始之癌細胞可能在早期到達卵巢表面。術語『卵巢癌』通常用於描述在卵巢中、在輸卵管中及自稱為腹膜之腹腔內層開始的上皮癌。在一些實施例中，癌症為或包含生殖細胞腫瘤。生殖細胞腫瘤為在卵巢之產生卵子之細胞中發展的一種類型之卵巢癌。在一些實施例中，癌症為或包含基質腫瘤。基質腫瘤在將卵巢固定在一起之結締組織細胞中發展，該組織有時為製造稱為雌激素之女性激素的組織。在一些實施例中，癌症為或包含粒層細胞腫瘤。粒層細胞腫瘤可分泌雌激素，在診斷時導致反常陰道出血。在一些實施例中，婦科癌症與同源重組修復缺陷/同源修復缺陷(「HRD」)及/或BRCA1/2突變相關。在一些實施例中，婦科癌症為鉑敏感的。在一些實施例中，婦科癌症已對基於鉑之療法有反應。在一些實施例中，婦科癌症已對基於鉑之療法產生抗性。在一些實施例中，婦科癌症曾經對基於鉑之療法示出部分或完全反應(例如，對最後一次基於鉑之療法或對倒數第二次基於鉑療法的部分或完全反應)。在一些實施例中，婦科癌症現在對基於鉑之療法具有抗性。
在實施例中，癌症為乳癌。通常乳癌在稱為小葉之產乳腺體的細胞中開始，或在導管中開始。較不常見之乳癌可在基質組織中開始。此等組織包括乳房之脂肪及纖維結締組織。隨時間推移，乳癌細胞可在稱為癌轉移之過程中侵入鄰近組織，諸如手臂下方淋巴結或肺。乳癌之分期、腫瘤之大小及其生長速率均為判定所提供之治療之類型的因素。治療選項包括移除腫瘤之手術、包括化學療法及激素療法之藥物治療、放射療法及免疫療法。預後及存活率廣泛變化；視所發生之乳癌之類型而定，五年相對存活率在98%至23%之間變化。乳癌為全球第二大常見癌症，其中在2012年有大致170萬新病例，且為第五大常見癌症死亡原因，其中大致521,000人死亡。在此等病例中，大致15%為三陰性的，其不表現雌激素受體、孕酮受體(PR)或HER2。在一些實施例中，三陰性乳癌(TNBC)表徵為雌激素受體表現陰性(＜1%細胞)、孕酮受體表現陰性(＜1%細胞)且HER2陰性之乳癌細胞。
在實施例中，癌症為ER陽性乳癌、ER陰性乳癌、PR陽性乳癌、PR陰性乳癌、HER2陽性乳癌、HER2陰性乳癌、BRCA1/2陽性乳癌、BRCA1/2陰性癌症或三陰性乳癌(TNBC)。在實施例中，癌症為三陰性乳癌(TNBC)。
在一些實施例中，乳癌為轉移性乳癌。在一些實施例中，乳癌為晚期乳癌。在一些實施例中，癌症為II期、III期或IV期乳癌。在一些實施例中，癌症為IV期乳癌。在一些實施例中，乳癌為三陰性乳癌。
在一些實施例中，待藉由本發明之方法治療的患者或患者群體患有或易患子宮內膜癌(「EC」)。子宮內膜癌為女性生殖道最常見之癌症，占每年每100,000人10-20人。全球每年子宮內膜癌(EC)新病例之數目估算為約32.5萬。此外，EC為在絕經後女性中最常發生之癌症。約53%之子宮內膜癌病例發生在已開發國家中。在2015年，在美國診斷出大致55,000例EC，並且目前沒有批准用於EC之靶向療法。需要改善1L及2L環境下之晚期及復發性EC之存活率的藥劑及方案。在2016年，預測在美國大致10,170人死於EC。最常見組織學形式為子宮內膜樣腺癌，代表約75%-80%之診斷病例。其他組織學形式包括子宮乳頭狀漿液性(少於10%)、透明細胞4%、黏液性1%、鱗狀少於1%及混合約10%。
自病原性觀點看，EC屬於兩種不同類型，所謂的I型及II型。I型腫瘤為低級別且雌激素相關之子宮內膜樣癌瘤(EEC)，而II型為非子宮內膜樣(NEEC) (主要漿液性及透明細胞)癌瘤。世界衛生組織(World Health Organization)最近已更新EC之病理性分類，識別出九種不同EC亞型，但EEC及漿液性癌(serous carcinoma；SC)占絕大部分病例。EEC為雌激素相關癌瘤，其在圍絕經期患者中發生，且在此之前為前驅體病灶(子宮內膜增生/子宮內膜樣上皮內贅瘤形成)。在顯微鏡下，低級別EEC (EEC 1-2)含有管狀腺體，在某種程度上類似於增生性子宮內膜，其中架構複雜且具有腺體融合及篩狀圖案。高級別EEC示出實心生長圖案。相比之下，SC在不存在高雌激素症之絕經後患者中發生。在顯微鏡下，SC示出較厚、纖維化或水腫之乳頭，伴隨腫瘤細胞顯著分層、細胞出芽及具有大嗜酸性球性細胞質之退行性細胞。絕大部分EEC為低級別腫瘤(1級及2級)，且當其受限於子宮時與良好預後相關。3級EEC (EEC3)為侵襲性腫瘤，其中淋巴結癌轉移之頻率增加。SC極具侵襲性，與雌激素刺激無關，主要發生在老年女性中。EEC 3及SC視為高級別腫瘤。SC及EEC3已使用來自1988年至2001年之監測、流行病學與最終結果(surveillance, epidemiology and End Results；SEER)程式資料進行比較。其分別代表10%及15%之EC，但分別占癌症死亡之39%及27%。
子宮內膜癌亦可分類為四個分子子組：(1)超突變/POLE突變；(2)超突變MSI+ (例如MSI-H或MSI-L)；(3)複本數低/微衛星穩定(microsatellite stable；MSS)；及(4)拷貝數高/漿液樣。大致28%之病例為MSI-高。(Murali, Lancet Oncol. (2014))。在一些實施例中，患者具有2L子宮內膜癌之錯配修復缺陷子集。
在實施例中，子宮內膜癌為轉移性子宮內膜癌。
在實施例中，患者患有MSS子宮內膜癌。
在實施例中，患者患有MSI-H子宮內膜癌。
在實施例中，癌症為肺癌。在實施例中，肺癌為肺鱗狀細胞癌。在實施例中，肺癌為小細胞肺癌(SCLC)。在實施例中，肺癌為非小細胞肺癌(NSCLC)，諸如鱗狀NSCLC。在實施例中，肺癌為ALK易位型肺癌(例如ALK易位型NSCLC)。在實施例中，肺癌為EGFR突變型肺癌(例如EGFR突變型NSCLC)。
在實施例中，癌症為大腸直腸(CRC)癌(例如實體腫瘤)。在實施例中，大腸直腸癌為晚期大腸直腸癌。在實施例中，大腸直腸癌為轉移性大腸直腸癌。在實施例中，大腸直腸癌為MSI-H大腸直腸癌。在實施例中，大腸直腸癌為MSS大腸直腸癌。在實施例中，大腸直腸癌為POLE突變型大腸直腸癌。在實施例中，大腸直腸癌為POLD突變型大腸直腸癌。在實施例中，大腸直腸癌為高TMB大腸直腸癌。
在實施例中，癌症為黑色素瘤。在實施例中，黑色素瘤為晚期黑色素瘤。在實施例中，黑色素瘤為轉移性黑色素瘤。在實施例中，黑色素瘤為MSI-H黑色素瘤。在實施例中，黑色素瘤為MSS黑色素瘤。在實施例中，黑色素瘤為POLE突變型黑色素瘤。在實施例中，黑色素瘤為POLD突變型黑色素瘤。在實施例中，黑色素瘤為高TMB黑色素瘤。
在實施例中，癌症為晚期癌症。
在實施例中，癌症為轉移性癌症。
在實施例中，癌症為復發性癌症(例如復發性婦科癌症，諸如復發性上皮卵巢癌、復發性輸卵管癌、復發性原發性腹膜癌或復發性子宮內膜癌)。
可用本文所描述之方法治療的癌症包括與高腫瘤突變負荷(tumor mutation burden；TMB)相關之癌症、微衛星穩定(MSS)之癌症、由微衛星不穩定性表徵之癌症、具有高微衛星不穩定性狀態(MSI-H)之癌症、具有低微衛星不穩定性狀態(MSI-L)之癌症、與高TMB及MSI-H相關之癌症(例如與高TMB及MSI-L或MSS相關之癌症)、具有缺陷性DNA錯配修復系統之癌症、在DNA錯配修復基因中具有缺陷之癌症、超突變性癌症、具有同源重組修復缺陷/同源修復缺陷(「HRD」)之癌症、包含聚合酶δ (POLD)中之突變的癌症及包含聚合酶ε (POLE)中之突變的癌症。
在一些實施例中，所治療之腫瘤的特徵在於微衛星不穩定性。在一些實施例中，腫瘤之特徵在於微衛星不穩定性高狀態(MSI-H)。微衛星不穩定性(「MSI」)為或包含某些細胞(諸如腫瘤細胞)之DNA中的變化，其中微衛星(短的DNA重複序列)之重複數目與其遺傳之DNA中所含有的重複數目不同。約15%之偶發性大腸直腸癌(CRC)在微衛星(MS)序列之長度中具有廣泛改變，稱為微衛星不穩定性(MSI) (Boland及Goel, 2010)。偶發性MSI CRC腫瘤顯示獨特臨床病理學特徵，包括近似二倍體核型、在老年群體及女性中較高出現率及較好預後(de la Chapelle及Hampel, 2010；Popat等人, 2005)。MSI亦存在於其他腫瘤中，諸如子宮之子宮內膜癌(EC)中，子宮內膜癌為最常見婦科惡性病(Duggan等人, 1994)。最初研發以篩選遺傳性基因病症(林赤症候群(Lynch syndrome))之相同參考Bethesda小組(Umar等人, 2004)目前應用於測試CRC及EC之MSI。然而，通常由CRC基因體中之MSI靶向的基因在EC基因體中很少具有DNA滑移(slippage)事件(Gurin等人, 1999)。
微衛星不穩定性係由因缺陷性DNA錯配修復(MMR)系統所致的修復複製失敗相關之誤差引起。此失敗允許在全部基因體中，但尤其在稱為微衛星之重複DNA之區域中保留錯配突變，導致突變負荷增加。已證實，特徵在於MSI-H之至少一些腫瘤已改善對某些抗PD-1藥劑之反應(Le等人, (2015) N. Engl. J. Med. 372(26):2509-2520；Westdorp等人, (2016) Cancer Immunol. Immunother. 65(10):1249-1259)。在一些實施例中，癌症之微衛星不穩定性為高微衛星不穩定性(例如MSI-H狀態)。在一些實施例中，癌症之微衛星不穩定性狀態為低微衛星不穩定性(例如MSI-低)。在一些實施例中，癌症之微衛星不穩定性狀態為微衛星穩定(例如MSS狀態)。在一些實施例中，藉由基於下一代定序(NGS)之分析、基於免疫組織化學(IHC)之分析及/或基於PCR之分析來評定微衛星不穩定性狀態。在一些實施例中，藉由NGS偵測微衛星不穩定性。在一些實施例中，藉由IHC偵測微衛星不穩定性。在一些實施例中，藉由PCR偵測微衛星不穩定性。
在實施例中，患者患有MSI-L癌症。
在實施例中，患者患有MSI-H癌症。在一些實施例中，患者患有MSI-H實體腫瘤。在實施例中，MSI-H癌症為MSI-H子宮內膜癌。在實施例中，MSI-H癌症為實體腫瘤。在實施例中，MSI-H癌症為轉移性腫瘤。在實施例中，MSI-H癌症為子宮內膜癌。在實施例中，MSI-H癌症為非子宮內膜癌。在實施例中，MSI-H癌症為大腸直腸癌。
在實施例中，患者患有MSS癌症。在實施例中，MSS癌症為MSS子宮內膜癌。
在實施例中，癌症與POLE (DNA聚合酶ε)突變相關(亦即，癌症為POLE突變型癌症)。在實施例中，POLE突變為核酸外切酶域中之突變。在實施例中，POLE突變為生殖系突變。在實施例中，POLE突變為偶發性突變。在實施例中，MSI癌症亦與POLE突變相關。在實施例中，MSS癌症亦與POLE突變相關。在實施例中，使用定序鑑別POLE突變。在實施例中，POLE突變型癌症為子宮內膜癌。在實施例中，POLE突變型癌症為結腸癌。在實施例中，POLE突變型癌症為胰臟癌、卵巢癌或小腸癌。
在實施例中，癌症與POLD (DNA聚合酶δ)突變相關(亦即，癌症為POLD突變型癌症)。在實施例中，POLD突變為核酸外切酶域中之突變。在實施例中，POLD突變為體細胞突變。在實施例中，POLD突變為生殖系突變。在實施例中，使用定序鑑別POLD突變型癌症。在實施例中，POLD突變型癌症為子宮內膜癌。在實施例中，POLD突變型癌症為大腸直腸癌。在實施例中，POLD突變型癌症為腦癌。
在一些實施例中，患者患有錯配修復缺陷(MMRd)癌症。
在實施例中，MMRd癌症為大腸直腸癌。
微衛星不穩定性可由因缺陷性DNA錯配修復(MMR)系統所致的修復複製失敗相關之誤差引起。此失敗允許在全部基因體中，但尤其在稱為微衛星之重複DNA之區域中保留錯配突變，導致可改善對某些抗PD-1藥劑之反應的突變負荷增加。同上。在一些實施例中，藉由基於NGS之分析及/或基於PCR之MSI分析來評定MSI-H狀態。在一些實施例中，藉由下一代定序偵測微衛星不穩定性。在實施例中，使用免疫組織化學(IHC)測試偵測微衛星不穩定性。
在實施例中，癌症(例如MMRd癌症)之特徵在於高腫瘤突變負荷(亦即，癌症為高TMB癌症)。在一些實施例中，癌症與高TMB及MSI-H相關。  在一些實施例中，癌症與高TMB及MSI-L或MSS相關。  在一些實施例中，癌症為與高TMB相關之子宮內膜癌。  在一些相關實施例中，子宮內膜癌與高TMB及MSI-H相關。  在一些相關實施例中，子宮內膜癌與高TMB及MSI-L或MSS相關。在實施例中，高TMB癌症為大腸直腸癌。在實施例中，高TMB癌症為肺癌(例如小細胞肺癌(SCLC)或非小細胞肺癌(NSCLC)，諸如鱗狀NSCLC或非鱗狀NSCLC)。在實施例中，高TMB癌症為黑色素瘤。在實施例中，高TMB癌症為尿道上皮癌。
在實施例中，患者患有腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)之表現升高之癌症，亦即，患者患有高TIL癌症。在實施例中，高TIL癌症為乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)或HER2陽性乳癌)。在實施例中，高TIL癌症為轉移性癌症(例如轉移性乳癌)。
在實施例中，免疫相關基因表現標記可預測對用於如本文中所描述之癌症之抗PD-1療法的反應。舉例而言，包括與IFN-γ傳訊相關之基因的基因小組可適用於鑑別將受益於抗PD-1療法之癌症患者。例示性基因小組描述於Ayers等人, J. Clin. Invest., 127(8):2930-2940, 2017中。在實施例中，癌症患者所患癌症為乳癌(例如TNBC)或卵巢癌。在實施例中，癌症患者所患癌症為膀胱癌、胃癌、膽管癌、食道癌或頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。在實施例中，癌症患者所患癌症為肛門癌或大腸直腸癌。
在一些實施例中，患者患有表現PD-L1之腫瘤。在一些實施例中，在患者或患者群體中對PD-L1狀態進行評估。在一些實施例中，在用抗PD-1抗體藥劑治療之前、期間及/或之後，對檔案中或新治療前活檢體中之突變負荷及基線基因表現概況進行評估。在一些實施例中，在患者中對TIM-3及/或LAG-3之狀態及/或表現進行評估。
在一些實施例中，癌症患者群體中之至少一些患者先前尚未用一或多種不同的癌症治療模式加以治療。
在一些實施例中，患者先前已用一或多種不同癌症治療模式(例如，手術、放射療法、化學療法或免疫療法中之一或多者)加以治療。在實施例中，受試者先前已用兩種或更多種不同癌症治療模式(例如，手術、放射療法、化學療法或免疫療法中之一或多者)加以治療。在實施例中，受試者先前已用細胞毒性療法加以治療。在實施例中，受試者先前已用化學療法加以治療。在實施例中，受試者先前已用兩種不同癌症治療模式(例如，手術、放射療法、化學療法或免疫療法中之一或多者)加以治療。在實施例中，受試者先前已用三種不同癌症治療模式(例如，手術、放射療法、化學療法或免疫療法中之一或多者)加以治療。
在本文所描述之方法之實施例中，方法進一步包含投與手術、放射療法、化學療法、免疫療法、抗血管生成劑或抗炎劑中之一或多者。在實施例中，方法進一步包含投與化學療法。
在一些實施例中，癌症患者群體中之至少一些患者先前已用化學療法(例如基於鉑之化學療法)加以治療。舉例而言，已接受兩種路線之癌症治療的患者可鑑別為2L癌症患者(例如，2L NSCLC患者)。在實施例中，患者已接受兩種路線或更多種路線之癌症治療(例如2L+癌症患者，諸如2L+子宮內膜癌患者)。在實施例中，患者先前尚未用抗PD-1療法加以治療。在實施例中，患者先前接受至少一種路線之癌症治療(例如，患者先前接受至少一種路線或至少兩種路線之癌症治療)。在實施例中，患者先前接受至少一種路線之轉移性癌症治療(例如，患者先前接受一種或兩種路線之轉移性癌症治療)。
在實施例中，受試者對用抑制PD-1之藥劑治療具有抗性。
在實施例中，受試者難以用抑制PD-1之藥劑治療。
在實施例中，本文所描述之方法使受試者對用抑制PD-1之藥劑治療敏感。
在實施例中，受試者包含耗竭之免疫細胞(例如，本身為耗竭之T細胞的耗竭之免疫細胞)。
在本文所描述之方法之實施例中，受試者為動物(例如哺乳動物)。在實施例中，受試者為人類。在實施例中，受試者為非人類哺乳動物(例如，小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)。因此，本文所描述之方法可適用於人類治療及獸醫學兩者中。
在實施例中，PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體)係靜脈內(例如，藉由靜脈內輸注)投與。 量測腫瘤反應
在一些實施例中，臨床益處為完全反應(「CR」)、部分反應(「PR」)或穩定疾病(「SD」)。在一些實施例中，臨床益處對應於至少SD。在一些實施例中，臨床益處對應於至少PR。在一些實施例中，臨床益處對應於CR。在一些實施例中，至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之患者達成臨床益處。在一些實施例中，至少5%之患者達成臨床益處。在一些實施例中，至少5%之患者達成SD。在一些實施例中，至少5%之患者達成至少PR。在一些實施例中，至少5%之患者達成CR。在一些實施例中，至少20%之患者達成臨床益處。在一些實施例中，至少20%之患者達成SD。
在一些實施例中，根據實體腫瘤反應評估標準(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors；RECIST)判定臨床益處(例如SD、PR及/或CR)。在一些實施例中，根據RECIST指南判定臨床益處(例如SD、PR及/或CR)。
在一些實施例中，可藉由例如RECIST第1.1版指南量測腫瘤反應。指南由E.A. Eisenhauer等人, 「New response evaluation criteria in solid tumors:  Revised RECIST guideline (version 1.1.)」, Eur. J. of Cancer, 45: 228-247 (2009)提供，該文獻以全文引用之方式併入。在一些實施例中，RECIST指南可充當與疾病狀態有關之所有方案指南的基礎。在一些實施例中，RECIST指南用於評定腫瘤對治療之反應及/或疾病進展之日期。
RECIST指南要求，首先，估計在基線處之整體腫瘤負荷，其用作用於後續量測之比較物(comparator)。腫瘤可經由使用此項技術中已知之任何成像系統，例如藉由CT掃描或X射線來進行量測。可量測之疾病由存在至少一個可量測病灶定義。在主要終點為腫瘤進展(達至進展之時間或固定日期時之進展比例)的研究中，方案必須指定準入是否受限於具有可量測之疾病的彼等患者或僅具有不可量測之疾病之患者是否亦符合條件。
當在基線處存在超過一個可量測之病灶時，應將代表全部受累器官的高達總計最多五個病灶(且每個器官最多兩個病灶)之所有病灶標識為目標病灶，且將在基線處對其進行記錄及量測(此意謂在其中患者僅具有一個或兩個受累之器官位點的情況下，將分別記錄最多兩個及四個病灶)。
目標病灶應基於其大小進行選擇(具有最長直徑之病灶)，代表全部受累器官，但另外應為適宜於可再現重複量測之彼等病灶。
淋巴結值得特別提及，此係因為其為即使不被腫瘤累及但仍可藉由成像可見之正常解剖學結構。定義為可量測且可標識為目標病灶之病理性結節必須滿足藉由CT掃描得到之短軸為P15 mm的標準。僅此等結節之短軸將促成基線總和。結節之短軸為通常由放射學家用於判斷結節是否被實體腫瘤累及的直徑。結節大小通常係以獲得影像之平面中的二維形式報導(對於CT掃描，此幾乎始終為軸向平面；對於MRI，採集平面可為軸向、矢狀或冠狀)。此等量測結果中之較小者為短軸。
舉例而言，報導為20 mm·30 mm之腹部結節的短軸為20 mm，且該結節符合惡性可量測結節。在此實例中，20 mm應記錄為結節量測結果。所有其他病理性結節(短軸P10 mm但＜15 mm之彼等結節)應視為非目標病灶。短軸＜10 mm之結節視為非病理性結節且不應對其進行記錄或跟蹤。
將計算所有目標病變之直徑總和(對於非結節病灶為最長直徑，對於結節病灶為短軸)，且將其報導為基線直徑總和。若淋巴結包括於總和中，則如上文所指出，僅將短軸相加至總和中。基線直徑總和將用作參考以進一步在可量測之疾病維度中表徵任何客觀腫瘤消退。
包括病理性淋巴結之所有其他病灶(或疾病位點)應標識為非目標病灶，且亦應在基線處對其進行記錄。量測並非必要的，且此等病灶應跟蹤為『存在』、『不存在』，或在罕見情況下，『明確進展』。另外，有可能將涉及相同器官之多個非目標病灶記錄為病例記錄表上之單個項目(例如『多個增大骨盆淋巴結』或『多個肝臟癌轉移』)。
在一些實施例中，腫瘤反應可藉由例如免疫相關RECIST (irRECIST)指南來量測，該指南包括免疫相關反應標準(irRC)。在irRC中，量測可量測之病灶，其具有至少一個維度，其中最小大小對於非結節病灶為10 mm (呈藉由CT或MRI掃描得到的最長直徑形式)且對於結節病灶大於或等於15 mm，或藉由胸部X射線得到最小大小為至少20 mm。
在一些實施例中，免疫相關反應標準包括CR (所有病灶完全消失(不論可量測或不可量測，且無新病灶))；PR (腫瘤負荷相對於基線降低50%或更多)；SD (在不存在PD之情況下，不符合CR或PR標準)；或PD (腫瘤負荷相對於最低點增加25%或更多)。irRECIST之詳細描述可見於Bohnsack等人, (2014) ESMO, 摘要4958及Nishino等人, (2013) Clin. Cancer Res. 19(14):  3936-43。
在一些實施例中，可藉由irRECIST或RECIST第1.1版評定腫瘤反應。在一些實施例中，可藉由irRECIST及RECIST第1.1版兩者評定腫瘤反應。 II.  抗CTLA4結合蛋白
本文提供結合細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)之蛋白質。在一些實施例中，所提供之CTLA4結合蛋白為包含CTLA4結合域之抗體或其抗原結合片段，或為包含CTLA4結合域之蛋白質。在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為抗CTLA4抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為結合於CTLA4之雙特異性抗體或其抗原結合片段。舉例而言，雙特異性抗體含有CTLA結合域。在一個態樣中，提供一種包含CTLA4結合域之CTLA4結合蛋白，諸如包含本文所描述之CTLA4結合域的融合蛋白。在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為例如藉助於可結合CTLA4之抗原結合域結合於CTLA4的嵌合受體。
本文所提供之CTLA4結合蛋白可結合於來自各種物種之CTLA4，例如，一些結合於人類CTLA4及/或鼠類CTLA4或食蟹獼猴CTLA4。在一些實施例中，本文所描述之抗CTLA4結合蛋白具有以下特徵中之一或多者：(1)結合CTLA4 (例如，人類CTLA4)；及(2)結合腫瘤部位處之活體內CTLA4。
在一個態樣中，本文提供尤其適用於治療其中CTLA4起作用之贅生性疾病的CTLA4結合蛋白。如本文所提供之CTLA4結合蛋白包括結合域，該結合域能夠與表現於細胞(例如癌細胞或T細胞)表面上之CTLA4蛋白質相互作用(例如結合)。
在一些實施例中，本文亦提供一種CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)，其包含CTLA4結合蛋白(例如包含第一鏈及第二鏈的抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)。在一些實施例中,CTLA4結合蛋白為二聚體。在一些實施例中,CTLA4結合蛋白為均二聚體。在一些實施例中,CTLA4結合蛋白為雜二聚體。在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為包含第一鏈及第二鏈之雜二聚體，諸如包含重鏈及輕鏈之雜二聚體。在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為包含第一鏈及第二鏈之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，第一鏈為或包含重鏈，且第二鏈為或包含輕鏈；或第一鏈為或包含輕鏈，且第二鏈為或包含重鏈。在一些實施例中，第一鏈為或包含重鏈可變區，且第二鏈為或包含輕鏈可變區；或第一鏈為或包含輕鏈可變區，且第二鏈為或包含重鏈可變區。在一些實施例中,CTLA4結合蛋白為單鏈蛋白，諸如包含重鏈及輕鏈兩者之單鏈蛋白。
亦提供一種核酸，其編碼如前述實施例中任一項之抗體、雙特異性抗體或其任一抗原結合片段，或嵌合受體。亦提供一種載體，其包含如前述實施例之核酸。在一些實施例中，該載體為表現載體。亦提供一種宿主細胞，其包含前述核酸實施例。
亦提供一種產生抗體、雙特異性抗體或其任一抗原結合片段，或嵌合受體的方法，其包含在產生抗體、雙特異性抗體或嵌合受體的條件下培養前述宿主細胞。在一些實施例中，宿主細胞具有α1,6-岩藻糖基轉移酶(Fut8)基因剔除。在一些實施例中，其中宿主細胞過度表現β1,4-N-乙醯基葡糖胺基轉移酶III (GnT-III)。在一些實施例中，宿主細胞另外過度表現高爾基體(Golgi) μ-甘露糖苷酶II (ManII)。任何此類實施例中之一些進一步包括回收由宿主細胞產生的抗體、雙特異性抗體或其任一抗原結合片段，或嵌合受體。在一些實施例中，藉由前述方法產生雙特異性抗體或嵌合受體。
亦提供一種組合物，其含有如前述實施例中任一項之抗體、雙特異性抗體或其任一抗原結合片段，或嵌合受體。一些實施例涵蓋一種組合物，其包含如前述實施例之抗體、雙特異性抗體或其任一抗原結合片段，或嵌合受體。在一些實施例中，組合物為醫藥組合物。
亦提供一種套組，其含有如前述實施例中任一項之抗體、雙特異性抗體或其任一抗原結合片段、嵌合受體或組合物。
亦提供一種治療或預防受試者之贅生性疾病之方法，該方法包含向該受試者投與有效量的如前述實施例中任一項之抗體、雙特異性抗體或其任一抗原結合片段、嵌合受體或組合物。在一個實施例中，贅生性疾病為癌症。在一些實施例中，癌症為白血病、淋巴瘤、頭頸癌、大腸直腸癌、前列腺癌、胰臟癌、黑色素瘤、乳癌、神經母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、子宮頸癌、肝癌、腎癌、皮膚癌或睪丸癌。 CTLA4 結合蛋白
如本文所提供之術語「CTLA4結合蛋白」係指包含能夠結合於CTLA4蛋白質或以其他方式對其展現親和力之CTLA4結合域之多肽。在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為抗CTLA4抗體或其抗原結合片段、雙特異性抗體、抗原結合片段、單鏈抗體等。在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為結合於CTLA4之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，結合於CTLA4之抗體或其抗原結合片段為抗CTLA4抗體或其抗原結合片段。因此，在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為抗CTLA4抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，CTLA4結合蛋白為結合CTLA4之嵌合抗原受體之組分。
術語「CTLA4結合域」係指重組表現之多肽域，其能夠結合於在細胞中或上發現之CTLA4蛋白質或以其他方式對其展現親和力。用於測定CTLA4結合域與CTLA4之結合程度之方法為此項技術中熟知的。
在一些實施例中，本文所提供之CTLA4結合域為能夠結合於CTLA4之抗體。在一些實施例中，CTLA4為人類CTLA4。在一些實施例中，CTLA4為鼠類CTLA4。在一些實施例中，抗體為鼠類抗體。
在一些實施例中，抗體為人類化抗體、嵌合抗體或人類抗體。在一些實施例中，本文所描述之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段為單株抗體。在一些實施例中，本文所描述之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段為抗體片段(包括抗原結合片段)，例如dAb、Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段為二聚體。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段為均二聚體。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段為雜二聚體。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段為包含第一鏈及第二鏈之雜二聚體，諸如包含重鏈及輕鏈之雜二聚體。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含第一鏈及第二鏈。在一些實施例中，第一鏈為或包含重鏈，且第二鏈為或包含輕鏈；或第一鏈為或包含輕鏈，且第二鏈為或包含重鏈。在一些實施例中，第一鏈為或包含重鏈可變區，且第二鏈為或包含輕鏈可變區；或第一鏈為或包含輕鏈可變區，且第二鏈為或包含重鏈可變區。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含第一鏈及第二鏈(例如輕鏈及重鏈)。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含兩條第一鏈及兩條第二鏈(例如兩條輕鏈及兩條重鏈)。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:1或13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2或14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3或15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:4或16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5或17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6或18之胺基酸序列的CDR-H3。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列的CDR-H3。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的CDR-L3；且重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列的CDR-H3。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H3。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的CDR-L3；且重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H3。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列的CDR-H3。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L3；且重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列的CDR-H3。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-H3。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-L3；且重鏈可變區包含(i)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-H3。
在一些實施例中，VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列內含有的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3，且VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列內含有的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。在一些實施例中，VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列內含有的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3，且VH域包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列內含有的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在一些實施例中，第一鏈為輕鏈；且第二鏈為重鏈。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段含有兩條第一鏈及兩條第二鏈。在一些實施例中，第一鏈為輕鏈可變域；且第二鏈為重鏈可變域。在任何此類實施例中之一些中，抗原結合片段為dAb、Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。
在任何此類實施例中之一些中，抗體為鼠類抗體。
在任何此類實施例中之一些中，抗體為人類化抗體、嵌合抗體或人類抗體。在任何此類實施例中之一些中，抗體具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。在任何此類實施例中之一些中，IgG1含有胺基酸取代S298A、E333A及K334A；S239D及I332E；S239D、A330L及I332E；P247I及A339D或A339Q；D280H、K290S (具有或不具有S298D或S298V)；F243L、R292P及Y300L；F243L、R292P、Y300L及P396L；F243L、R292P、Y300L、V305I及P396L；G236A、S239D及I332E；K326A及E333A；K326W及E333S；或K290E或K290N、S298G、T299A及/或K326E；其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。
在任何此類實施例中之一些中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO:25或30之胺基酸序列之輕鏈可變區；及/或包含SEQ ID NO:26或31之胺基酸序列之重鏈可變區。
在任何實施例中之一些中，VL域包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在任何此類實施例中之一些中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列之輕鏈可變區；及/或包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之重鏈可變區。
在任何實施例中之一些中，VL域包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在任何此類實施例中之一些中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列之輕鏈可變區；及/或包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 27之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或包含重鏈，其包含與SEQ ID NO: 28之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 27之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；且包含重鏈，其包含與SEQ ID NO: 28之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；及/或包含重鏈，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；且包含重鏈，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 27之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或包含重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 27之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；且包含重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；及/或包含重鏈，其包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；且包含重鏈，其包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 32之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或包含重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 32之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；且包含重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列；及/或包含重鏈，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列；且包含重鏈，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 32之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或包含重鏈，其包含與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 32之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；且包含重鏈，其包含與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列；及/或包含重鏈，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列；且包含重鏈，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其包含選自SEQ ID NO:27及32之胺基酸序列；及/或重鏈，其包含選自SEQ ID NO:28、29、33及34之胺基酸序列。
在任何此類實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈；及/或包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈；及/或包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的重鏈。
在任何此類實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈；及/或包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈；及/或包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，抗體或其抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的重鏈。
本文亦提供一種雙特異性抗體，其含有特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈，及特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈，例如為腫瘤抗原的抗原。
在任何此類實施例中之一些中，雙特異性抗體為鼠類抗體。
在任何此類實施例中之一些中，雙特異性抗體為人類化抗體、嵌合抗體或人類抗體。在任何此類實施例中之一些中，雙特異性抗體具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。在任何此類實施例中之一些中，IgG1含有胺基酸取代，諸如S298A、E333A及K334A；S239D及I332E；S239D、A330L及I332E；P247I及A339D或A339Q；D280H、K290S (具有或不具有S298D或S298V)；F243L、R292P及Y300L；F243L、R292P、Y300L及P396L；F243L、R292P、Y300L、V305I及P396L；G236A、S239D及I332E；K326A及E333A；K326W及E333S；或K290E或K290N、S298G、T299A及/或K326E，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。
在任何此類實施例中之一些中，第一對含有輕鏈可變區及重鏈可變區，其中輕鏈可變區含有(i)包含SEQ ID NO:1或13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2或14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3或15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中重鏈可變區含有(i)包含SEQ ID NO:4或16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5或17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6或18之胺基酸序列的CDR-H3。
在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO:25或30之胺基酸序列之輕鏈可變區；及/或包含SEQ ID NO:26或31之胺基酸序列之重鏈可變區。
在任何此類實施例中之一些中，第一對含有VL域，其包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，及VH域，其包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列之輕鏈可變區；及包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之重鏈可變區。
在任何此類實施例中之一些中，第一對含有VL域，其包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，及VH域，其包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列之輕鏈可變區；及包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之重鏈可變區。
在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含選自SEQ ID NO:27及32之胺基酸序列之輕鏈；及/或包含選自SEQ ID NO:28、29、33及34之胺基酸序列之重鏈。
在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈；及/或包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈；及/或包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的重鏈。
在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈；及/或包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈；及/或包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列的重鏈。在任何此類實施例中之一些中，第一對含有包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的重鏈。
在任何此類實施例中之一些中，雙特異性抗體含有第一鏈及第二鏈，其中第一鏈含有(i)包含SEQ ID NO:1或13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2或14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3或15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中第二鏈含有(i)包含SEQ ID NO:4或16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5或17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6或18之胺基酸序列的CDR-H3。
在任何此類實施例中之一些中，第一鏈含有包含SEQ ID NO:25或30之胺基酸序列之輕鏈可變區；及/或包含SEQ ID NO:26或31之胺基酸序列之重鏈可變區。
在任何此類實施例中之一些中，第一鏈含有VL域：其包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，及VH域，其包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在任何此類實施例中之一些中，第一鏈含有包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列之輕鏈可變區；及包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之重鏈可變區。
在任何此類實施例中之一些中，第一鏈含有VL域，其包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，及VH域，其包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在任何此類實施例中之一些中，第一鏈含有包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列之輕鏈可變區；及包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO:25或30之胺基酸序列；及/或重鏈可變區，其包含SEQ ID NO:26或31之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或包含重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；且包含重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或包含重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；且包含重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；及/或包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；且包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段具有IgG1同型，其包含增強如本文中所描述之效應功能之胺基酸取代。
在一些實施例中，CTLA4結合域包含雙特異性抗體之抗原結合臂之輕鏈及重鏈。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含(i)包含SEQ ID NO:1或13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2或14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3或15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中重鏈包含(i)包含SEQ ID NO:4或16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5或17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6或18之胺基酸序列的CDR-H3。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含(i)包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的CDR-L3；且重鏈包含(i)包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列的CDR-H3。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含(i)包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的CDR-L3；且重鏈包含(i)包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H3。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含(i)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L3；且重鏈包含(i)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列的CDR-H3。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含(i)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-L3；且重鏈包含(i)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-H3。
在雙特異性抗體之一些實施例中，VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列內含有的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3，且VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列內含有的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。在雙特異性抗體之一些實施例中，VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列內含有的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3，且VH域包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列內含有的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。
在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或重鏈包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或重鏈包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。
在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 25或30之胺基酸序列；及/或重鏈可變區包含SEQ ID NO: 26或31之胺基酸序列。
在雙特異性抗體之任何實施例中之一些中，VL域包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在雙特異性抗體之任何此類實施例中之一些中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列之輕鏈可變區；及包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之重鏈可變區。
在雙特異性抗體之任何實施例中之一些中，VL域包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列至少約至少約90%序列一致性的胺基酸序列。在雙特異性抗體之任何此類實施例中之一些中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列之輕鏈可變區；及包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之重鏈可變區。
在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含與選自由SEQ ID NO: 27及32組成之群之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或重鏈包含與選自由SEQ ID NO: 28、29、33及34組成之群之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含選自SEQ ID NO:27及32之胺基酸序列；及/或重鏈包含選自SEQ ID NO:28、29、33及34之胺基酸序列。
在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 27之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或重鏈包含與SEQ ID NO: 28之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，且重鏈包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列。
在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 27之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或重鏈包含與SEQ ID NO: 29之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，且重鏈包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。
在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 32之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或重鏈包含與SEQ ID NO: 33之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，且重鏈包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。
在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 32之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或重鏈包含與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在雙特異性抗體之一些實施例中，輕鏈包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，且重鏈包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。
在雙特異性抗體之一些實施例中，CTLA4為人類CTLA4。在雙特異性抗體之一些實施例中，CTLA4為鼠類CTLA4。在一些實施例中，雙特異性抗體為鼠類抗體。
在一些實施例中，雙特異性抗體為人類化抗體、嵌合抗體或人類抗體。在一些實施例中，雙特異性抗體具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。在一些實施例中，雙特異性抗體具有IgG1同型，其包含增強如本文中所描述之效應功能之胺基酸取代。
在一些實施例中，雙特異性抗體或其抗原結合片段為二聚體。在一些實施例中，雙特異性抗體或其抗原結合片段為均二聚體。在一些實施例中，雙特異性抗體或其抗原結合片段為雜二聚體。在一些實施例中，雙特異性抗體或其抗原結合片段為包含第一鏈及第二鏈之雜二聚體，諸如包含重鏈及輕鏈之雜二聚體。在一些實施例中，雙特異性抗體或抗原結合片段包含第一鏈及第二鏈。在一些實施例中，第一鏈為或包含重鏈，且第二鏈為或包含輕鏈；或第一鏈為或包含輕鏈，且第二鏈為或包含重鏈。在一些實施例中，第一鏈為或包含重鏈可變區，且第二鏈為或包含輕鏈可變區；或第一鏈為或包含輕鏈可變區，且第二鏈為或包含重鏈可變區。
在一些實施例中，CTLA4結合域包含結合於CTLA4之第一鏈及第二鏈，諸如作為用於嵌合受體之配位體結合域之一部分。在嵌合受體之一些實施例中，第一鏈為輕鏈可變域。在一些實施例中，第二鏈為重鏈可變域。在嵌合受體之一些實施例中，第一鏈包含(i)包含SEQ ID NO:1或13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2或14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3或15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或其中第二鏈包含(i)包含SEQ ID NO:4或16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5或17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6或18之胺基酸序列的CDR-H3。在嵌合受體之一些實施例中，第一鏈包含(i)包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的CDR-L3；且第二鏈包含(i)包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列的CDR-H3。在嵌合受體之一些實施例中，第一鏈包含(i)包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的CDR-L3；且第二鏈包含(i)包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H3。在嵌合受體之一些實施例中，第一鏈包含(i)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L3；且第二鏈包含(i)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列的CDR-H3。在嵌合受體之一些實施例中，第一鏈包含(i)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-L2，及(iii)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-L3；且第二鏈包含(i)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-H3。
在嵌合受體之一些實施例中，第一鏈包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列；及/或第二鏈包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有或具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性之胺基酸序列。在本文所描述之嵌合受體之一些實施例中，第一鏈包含SEQ ID NO:25或30之胺基酸序列；及/或第二鏈包含SEQ ID NO:26或31之胺基酸序列。在嵌合受體之一些實施例中，第一鏈包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且第二鏈包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
CTLA4結合蛋白可藉由此項技術中熟知之各種方法與額外分子結合。術語「結合」及「結合化學反應」係指在相對溫和條件下進行的與已知反應性基團之反應。此等反應包括但不限於親核取代(例如胺及醇與醯基鹵化物、活性酯之反應)、親電子取代(例如烯胺反應)及與碳-碳及碳-雜原子多重鍵之加成(例如邁克爾反應(Michael reaction)、狄爾斯-阿德爾加成(Diels-Alder addition))。此等及其他適用反應論述於例如March, Advanced Organic Chemistry, 第3版, John Wiley & Sons, New York, 1985；Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego, 1996；及Feeney等人, Modification of Proteins; Advances in Chemistry Series, 第 198卷, American Chemical Society, Washington, D.C., 1982中。
用於結合化學反應之適用反應性官能基在本文中包括例如：(a)羧基及其各種衍生物，包括但不限於N-羥基丁二醯亞胺酯、N-羥基苯并三唑酯、酸鹵化物、醯基咪唑、硫酯、對硝基苯基酯、烷基、烯基、炔基及芳族酯；(b)羥基，其可轉化為酯、醚、醛等；(c)鹵烷基，其中鹵化物可隨後經親核性基團，諸如胺、羧酸根陰離子、硫醇陰離子、碳陰離子或醇鹽離子取代，藉此在鹵素原子之位點處產生新基團之共價連接；(d)能夠參與狄爾斯-阿德爾反應(Diels-Alder reaction)之親二烯物基團，諸如順丁烯二醯亞胺基；(e)醛基或酮基，使得後續衍生化經由形成羰基衍生物，諸如亞胺、腙、半卡腙或肟，或經由如格氏加成(Grignard addition)或烷基鋰加成之此類機制為可能的；(f)用於與胺之後續反應的磺醯鹵基，例如以形成磺醯胺；(g)硫醇基，其可轉化為二硫化物，與醯基鹵反應或鍵結至諸如金之金屬；(h)胺基或硫氫基，其可例如經醯基化，烷基化或氧化；(i)烯烴，其可經歷例如環加成、醯基化、邁克爾加成(Michael addition)等；(j)環氧化物，其可與例如胺及羥基化合物反應；(k)胺基亞磷酸酯及適用於核酸合成之其他標準官能基；(i)金屬氧化矽鍵結；及(l)鍵結至反應性磷基團(例如膦)以形成例如磷酸二酯鍵之金屬。
可選擇反應性官能基以使得其不參與或干擾本文所描述之組合物之化學穩定性。替代地，可藉由存在保護基來保護反應性官能基免於參與交聯反應。
在一些實施例中，可藉由此項技術中熟知之各種方法來工程改造連接子以與額外分子及/或CTLA4結合蛋白融合。舉例而言，當由宿主細胞重組表現時，核酸可經工程改造以編碼連接子以及額外分子及/或CTLA4結合蛋白，以產生融合蛋白。 例示性 CTLA4 結合蛋白
以下描述含有如上文所描述之某些特徵的CTLA4結合蛋白之某些例示性實施例。此等實施例僅為例示性的且不應解釋為限制性的。
在一些實施例中，本文提供結合CTLA4(例如，人類CTLA4)的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含第一鏈及第二鏈。在一些實施例中，結合於CTLA4之抗體或其抗原結合片段為本文所描述之任何抗CTLA4抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含兩條第一鏈及兩條第二鏈。在一些實施例中，第一鏈為輕鏈且第二鏈為重鏈。在一些實施例中，第一鏈為輕鏈可變域且第二鏈為重鏈可變域。在一些實施例中，a)抗體之第一鏈為輕鏈且抗體之第二鏈為輕鏈；b)抗體之第一鏈為重鏈且抗體之第二鏈為重鏈；或c)抗體之第一鏈為輕鏈且抗體之第二鏈為重鏈。
在一些實施例中，本文亦提供抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含：包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-L2及包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-L3；及重鏈可變區，該重鏈可變區包含：包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-H2及包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-H3。
在一些實施例中，輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且重鏈可變區包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈。
在一個態樣中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO:25或30之胺基酸序列的輕鏈可變區及/或包含SEQ ID NO:26或31之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列的輕鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列的重鏈可變區。
在又另一態樣中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含含有選自SEQ ID NO:27及32之胺基酸序列的輕鏈及/或包含含有選自SEQ ID NO:28、29、33及34之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈及包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的輕鏈及包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈及包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列重鏈。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的輕鏈及包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的重鏈。
在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與選自SEQ ID NO:26及31之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:26之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:31之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列相對於參考序列含有取代、插入或缺失，但包含該胺基酸序列之抗體保留結合於CTLA4 (例如人類CTLA4)之能力。在一些實施例中，取代、插入或缺失(例如，1、2、3、4或5個胺基酸)發生在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:26或31之胺基酸序列的重鏈可變域。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的重鏈可變域。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的重鏈可變域。
在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:25或30之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:30之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列相對於參考序列含有取代、插入或缺失，但包含該胺基酸序列之抗體保留結合於CTLA4 (例如人類CTLA4)之能力。在一些實施例中，取代、插入或缺失(例如，1、2、3、4或5個胺基酸)發生在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:25或30之胺基酸序列的重鏈可變域。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:25之胺基酸序列的重鏈可變域。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:30之胺基酸序列的重鏈可變域。
存在五種類別之免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，其分別具有命名為α、δ、ε、γ及μ之重鏈。γ及α類別進一步劃分成子類，例如人類表現以下子類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。IgG1抗體可以多個稱為同種異型之多態變異體形式存在(綜述於Jefferis及Lefranc 2009. mAbs 第1卷, 第4期1-7中)，其中任一者均適用於本文中之一些實施例。人類群體中之常見同種異型變異體為由字母a、f、n、z或其組合命名之變異體。在本文中之一些實施例中，抗體具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。在一些實施例中，本文所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段具有IgG1同型(例如人類IgG1同型)。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含含有SEQ ID NO:35之胺基酸序列的重鏈恆定域。在一些實施例中，本文所提供之抗體包含含有SEQ ID NO: 38之胺基酸序列的重鏈恆定域。
在本發明之一個態樣中，提供編碼抗CTLA4抗體或其抗原結合片段之聚核苷酸。在某些實施例中，提供包含編碼抗CTLA4抗體或其抗原結合片段之聚核苷酸的載體。在某些實施例中，提供包含此類載體之宿主細胞。在本發明之另一態樣中，提供組合物，其包含本文所描述之抗CTLA4抗體或編碼本文所描述之抗CTLA4抗體之聚核苷酸。在某些實施例中，本發明之組合物為醫藥調配物，其用於治療其中CTLA4起作用之贅生性疾病，諸如本文中所列舉之彼等疾病。
在一些實施例中，本文所提供之CTLA4結合蛋白為能夠結合於CTLA4之雙特異性抗體。雙特異性抗體為對至少兩種不同抗原具有結合特異性之單株抗體。在一些實施例中，結合特異性中之一者係針對CTLA4且另一者係針對任何其他抗原。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合於CTLA4之兩個不同抗原決定基。
在一些態樣中，本文提供一種雙特異性抗體，其包含a)特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈及b)特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈。在一些態樣中，本文提供一種雙特異性抗體，其包含a)特異性結合於CTLA4之第一對的輕鏈及重鏈；及b)特異性結合於抗原之第二對的輕鏈及重鏈。在一些實施例中，抗原為不同於CTLA4之抗原。在一些實施例中，第一對或第二對之輕鏈為本文所描述之任何輕鏈。在一些實施例中，第一對或第二對之重鏈為本文所描述之任何重鏈。在一些實施例中，第一對之輕鏈包含：包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-L3；且第一對之重鏈包含：包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-H3。在一些實施例中，第二對之輕鏈包含：包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之CDR-L1、包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之CDR-L2及包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之CDR-L3；且第二對之重鏈包含：包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之CDR-H1、包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR-H2及包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR-H3。在一些實施例中，抗原為CTLA4之不同抗原決定基。
本文中所涵蓋之雙特異性抗體的雙特異性抗體包括鼠類雙特異性抗體、人類化雙特異性抗體、嵌合雙特異性抗體及人類雙特異性抗體。在本文中之一些實施例中，雙特異性抗體具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型。在一些實施例中，本文所提供之雙特異性抗體具有IgG1同型(例如人類IgG1同型)。在一些實施例中，抗體具有IgG1同型，其包含胺基酸取代或由不能夠使Fc聚醣岩藻糖基化之能力降低之細胞表現，該Fc聚醣增強如本文中所描述之效應功能。在一些實施例中，本文所提供之雙特異性抗體包含含有SEQ ID NO:35之胺基酸序列的重鏈恆定域。在一些實施例中，本文所提供之雙特異性抗體包含含有SEQ ID NO:38之胺基酸序列的重鏈恆定域。
在一個態樣中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體，其包含：包含選自SEQ ID NO:25及30之胺基酸序列的輕鏈可變區及/或包含選自SEQ ID NO:26及31之胺基酸序列的重鏈可變區。在又一態樣中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體，其包含含有選自SEQ ID NO:27及32之胺基酸序列的輕鏈及/或包含含有選自SEQ ID NO:28、29、33及34之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之輕鏈，及包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之輕鏈，及包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之輕鏈，及包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之輕鏈，及包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之重鏈。
在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與選自SEQ ID NO:26及31之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:26之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:31之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列相對於參考序列含有取代、插入或缺失，但包含該胺基酸序列之抗體保留結合於CTLA4 (例如人類CTLA4)之能力。在一些實施例中，取代、插入或缺失(例如，1、2、3、4或5個胺基酸)發生在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)。在一些實施例中，抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段包含含有選自SEQ ID NO:26及31之胺基酸序列的重鏈可變域。在一些實施例中，抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的重鏈可變域。在一些實施例中，抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的重鏈可變域。
在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與選自SEQ ID NO:25及30之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供一種抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含與SEQ ID NO:30之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列相對於參考序列含有取代、插入或缺失，但包含該胺基酸序列之抗體保留結合於CTLA4 (例如人類CTLA4)之能力。在一些實施例中，取代、插入或缺失(例如，1、2、3、4或5個胺基酸)發生在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)。在一些實施例中，抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段包含含有選自SEQ ID NO:25及30之胺基酸序列的重鏈可變域。在一些實施例中，抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:25之胺基酸序列的重鏈可變域。在一些實施例中，抗CTLA4雙特異性抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO:30之胺基酸序列的重鏈可變域。
在一些實施例中，本文所提供之CTLA4結合蛋白為能夠結合於CTLA4之嵌合受體(例如嵌合抗原受體(CAR))。CAR為將基於抗體之對所需抗原(例如CTLA4)之特異性與T細胞受體活化胞內域組合以產生展現特異性抗腫瘤細胞活性之嵌合蛋白的分子。在一個實施例中，本文提供一種嵌合受體，其經工程改造以包含具有與T細胞抗原受體複合物ζ鏈(例如CD3 ζ)之胞內傳訊域融合的本文所描述之CTLA4結合域之胞外域。本文中提供之嵌合受體表現於T細胞中時憑藉胞外域能夠基於抗原結合特異性再引導抗原識別。在一些實施例中，CTLA4結合域較佳與來自共刺激性分子及ζ鏈中之一或多者的胞內域融合。在一些實施例中，CTLA4結合域與一或多個選自以下之群之胞內域融合：CD137 (4-1BB)傳訊域、CD28傳訊域、CD3ζ傳訊域及其任何組合。
在一些態樣中，本文提供一種嵌合受體，其包含a)包含結合於CTLA4之第一鏈及第二鏈的配位體結合域；b)跨膜域；及c)包含傳訊域之胞內傳訊域。在一些實施例中，第一鏈為輕鏈可變域且第二鏈為重鏈可變域。在一些實施例中，第一鏈包含選自SEQ ID NO:25及30之胺基酸序列；及/或第二鏈包含選自SEQ ID NO:26及31之胺基酸序列。
在一些態樣中，本文提供一種嵌合受體，其包含a)包含結合於CTLA4之第一鏈及第二鏈的配位體結合域；b)跨膜域；及d)包含傳訊域之胞內傳訊域。在一些實施例中，第一鏈為輕鏈可變域且第二鏈為重鏈可變域。在一些實施例中，第一鏈包含選自SEQ ID NO:25及30之胺基酸序列；及/或第二鏈包含選自SEQ ID NO:26及31之胺基酸序列。
在一些態樣中，本文提供一種嵌合受體，其包含1)包含結合於CTLA4之VL域及VH域的配位體結合域，其中：a)VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列內含有的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3且VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列內含有的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；或b)VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列內含有的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3且VH域包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列內含有之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；2)跨膜域；及3)包含傳訊域之胞內傳訊域。
在一些態樣中，本文提供一種嵌合受體，其包含1)包含結合於CTLA4之VL域及VH域的配位體結合域，其中：a)VL域包含(i)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的CDR-L2及(iii)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含(i)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的CDR-H2及(iii)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的CDR-H3；或b)VL域包含(i)包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的CDR-L2及(iii)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含(i)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的CDR-H2及(iii)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的CDR-H3；或c)VL域包含(i)包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的CDR-L2及(iii)包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含(i)包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的CDR-H2及(iii)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的CDR-H3；或d)VL域包含(i)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的CDR-L2及(iii)包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的CDR-L3；及/或VH域包含(i)包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的CDR-H2及(iii)包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的CDR-H3；2)跨膜域；及3)包含傳訊域之胞內傳訊域。
在一些態樣中，在所提供之嵌合受體中之任一者中，a) VL域包含與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列，且VH域包含與SEQ ID NO: 26之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列；或b) VL域包含與SEQ ID NO: 30之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列且VH域包含與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列。
在一些態樣中，在所提供之嵌合受體中之任一者中，a) VL域包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列且VH域包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列；或b) VL域包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列且VH域包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
本文所描述之例示性抗CTLA抗體為抗體B。抗體B包含以下CDR序列：
抗體 B IMGT Kabat
HCDR1 GYTFTNYF NYFMN
HCDR2 VDPEQGRAD RVDPEQGRADYAEKFKK
HCDR3 RRAMDNYGFAY RAMDNYGFAY
LCDR1 SALSYM SANSALSYMY
LCDR2 GTS GTSNLAS
LCDR3 HHWSNTQ HHWSNTQWT
抗體B可變輕鏈： EIVLTQSPDF QSVTPKEKVT ITCSANSALS YMYWYQQKPD QSPKLWVHGT SNLASGVPSR FSGSGSGTDF TLTINSLEAE DAATYYCHHW SNTQWTFGGG TKVEIK (SEQ ID NO: 30)
抗體B輕鏈 EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCSANSALSYMYWYQQKPDQSPKLWVHGTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCHHWSNTQWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 32)
抗體B可變重鏈： QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT NYFMNWVRQA PGQGLEWMGR VDPEQGRADY AEKFKKRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARRA MDNYGFAYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 31)
抗體B重鏈： QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT NYFMNWVRQA PGQGLEWMGR VDPEQGRADY AEKFKKRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARRA MDNYGFAYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPELLGGP DVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPEEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK 1.  結合親和力
免疫結合相互作用(諸如在抗體與抗體對其具有特異性之抗原之間)之強度或親和力可由相互相用之平衡解離常數(K D)表示，其中較小的Kd表示較大的親和力。可使用此項技術中熟知之方法定量蛋白質之免疫結合特性。舉例而言，一種方法包含量測抗原結合蛋白(例如抗體)/抗原複合物形成及解離之速率，其中彼等速率視複合搭配物之濃度、相互作用之親和力及同等地影響兩個方向上之速率的幾何結構參數而定。「締合速率常數」 (Kon)及「解離速率常數」 (Koff)兩者可藉由計算濃度以及締合及解離之實際速率來測定。Koff/Kon之比率使得能夠消除所有與親和力無關之參數，且等於平衡解離常數K D。參見Davies等人, Annual Rev Biochem. 59:439-473, (1990)。
在一些態樣中，本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)以與不同抗CTLA4結合蛋白相比大約相同或更高的親和力結合於CTLA4。在某些實施例中，本文所提供之抗CTLA4結合蛋白具有≤1μM、≤150 nM、≤100 nM、≤50 nM、≤10 nM、≤1 nM、≤0.1 nM、≤0.01 nM或≤0.001 nM (例如10 -8M或更低，例如10 -8M至10 -13M，例如10 -9M至10 -13M)的平衡解離常數(K D)。在一些實施例中，本文所提供之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)以約50 pM至約5 nM之平衡解離常數(K D)結合於目標蛋白質(例如CTLA4蛋白質)。用於評定結合親和力之分析為此項技術中熟知的，例如(諸如) ELISA及表面電漿共振(SPR)。 2. 生物活性分析
在一些態樣中，本文所描述之抗CTLA4結合蛋白在活體內鼠類腫瘤模型中降低腫瘤體積。用於評估腫瘤體積降低之分析法為此項技術中所熟知的。 III.  抗CTLA4結合蛋白製備
使用此項技術中可獲得的技術製備本文所描述之抗CTLA4結合蛋白，其例示性方法更詳細地描述於以下章節中。 1.  抗CTLA4結合蛋白：抗體片段
本發明涵蓋作為抗CTLA4結合蛋白之抗體片段。可藉由傳統手段(諸如酶消化)或藉由重組技術產生抗體片段。在某些情形中，使用抗體片段而非完全抗體可具有優點。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等人 (2003) Nat. Med. 9:129-134。
已研發出多種用於產生抗體片段之技術。傳統上，此等片段經由完整抗體之蛋白分解消化來衍生(參見例如Morimoto等人, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992))；及Brennan等人, Science, 229:81 (1985))。然而，此等片段現可藉由重組宿主細胞直接產生。Fab、Fv及ScFv抗體片段均可在大腸桿菌(E. coli)及其他細胞類型中表現且由其分泌，因此允許可容易地產生大量此等片段。替代地，可直接自培養基回收Fab'-SH片段且以化學方式偶合以形成F(ab')2片段(Carter等人, Bio/Technology 10: 163-167 (1992))。根據另一方法，可自重組宿主細胞培養物直接分離出F(ab')2片段。包含FcRN/救助受體結合抗原決定基殘基之具有延長之活體內半衰期的Fab及F(ab′)2片段描述於美國專利 第5,869,046號中。用於產生抗體片段之其他技術將為熟習此項技術者顯而易見的。在某些實施例中，抗體為單鏈Fv片段(scFv)。參見WO 93/16185；美國專利 第5,571,894號；及第5,587,458號。Fv及scFv為具有不含恆定區之完整組合位點之唯一種類；因此，其可適用於活體內使用期間降低之非特異性結合。可構築scFv融合蛋白以在scFv之胺基端或羧基端產生效應蛋白之融合。參見Antibody Engineering, Borrebaeck編, 見上文。另外，可使用包含兩個經由多肽連接子連接之scFv之雙重scFv作為雙特異性抗體。替代地，可使用包含三個或更多個scFv之多重scFv作為多特異性抗體。
本發明包括線性抗體(例如，如美國專利第5,641,870號中所描述)或包含經由適當連接子連接之抗體之重鏈及輕鏈序列的單鏈免疫球蛋白。此類線性抗體或免疫球蛋白可為單特異性的或雙特異性的。此類單鏈免疫球蛋白可經二聚以藉此維持結構及與抗體(其最初為四聚體)類似之活性。另外，本發明之抗體可為具有單一重鏈可變區且不具有輕鏈序列之抗體。此類抗體稱為單域抗體(sdAb)或奈米抗體。此等抗體亦涵蓋於根據本發明之抗體之功能片段的含義中。 2.  抗CTLA4結合蛋白：人類化抗體
本發明涵蓋人類化抗體。根據本文所提供之指導來產生人類化抗體。用於使非人類抗體人類化之各種方法為此項技術中已知的。舉例而言，人類化抗體可具有一或多個引入其中之自非人類來源的胺基酸殘基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入」殘基，其通常獲自「輸入」可變域。人類化可基本上遵循Winter之方法(Jones等人(1986) Nature 321:522-525；Riechmann等人(1988) Nature 332:323-327；Verhoeyen等人(1988) Science 239:1534-1536)，藉由用高變區序列取代人類抗體之對應序列來進行。因此，此類「人類化」抗體為嵌合抗體(美國專利第4,816,567號)，其中實質上小於完整人類可變域已經來自非人類物種之對應序列取代。實際上，人類化抗體通常為其中一些高變區殘基及可能的一些FR殘基經來自嚙齒動物抗體中之類似位點的殘基取代之人類抗體。 3.  抗CTLA4結合蛋白：人類抗體
本發明之人類抗CTLA4抗體可藉由將選自人類衍生之噬菌體呈現文庫之Fv純系可變域序列與已知的人類恆定域序列組合來構築。替代地，本發明之人類單株抗CTLA4抗體可藉由融合瘤方法製得。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類融合骨髓瘤細胞株已例如由以下所描述：Kozbor J. Immunol., 133:  3001 (1984)；Brodeur等人, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, 第51-63頁(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及Boerner等人, J. Immunol., 147: 86 (1991)。根據本文所提供之指導來產生人類抗體。 4.  抗CTLA4結合蛋白：雙特異性抗體
雙特異性抗體為對至少兩種不同抗原具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，雙特異性抗體為人類或人類化抗體。在某些實施例中，結合特異性中之一者係針對CTLA4且另一者係針對任何其他抗原。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合於CTLA4之兩個不同抗原決定基。雙特異性抗體亦可用於使細胞毒素劑定位至表現CTLA4之細胞。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段(例如F(ab')2雙特異性抗體)。根據本文所提供之指導來產生雙特異性抗體。
用於製備雙特異性抗體之方法為此項技術中已知的。參見Milstein及Cuello, Nature, 305:  537 (1983)；1993年5月13日公佈之WO 93/08829；Traunecker等人, EMBO J., 10: 3655 (1991)；Kontermann及Brinkmann, Drug Discovery Today, 20(7):838- 847。關於產生雙特異性抗體之其他細節，參見例如Suresh等人, Methods in Enzymology, 121:210 (1986)。雙特異性抗體包括交聯或「異結合(heteroconjugate)」抗體。舉例而言，異結合物中之抗體中之一者可與抗生素蛋白偶合，另一者與生物素偶合。異結合抗體可使用任何適宜之交聯方法製得。適合交聯劑為此項技術中熟知的，且連同多種交聯技術一起揭示於美國專利 第4,676,980號中。 5.  抗CTLA4結合蛋白：單域抗體
在一些實施例中，根據本文所提供之指導來產生單域抗體。單域抗體為包含抗體之全部或一部分重鏈可變域或全部或一部分輕鏈可變域的單一多肽鏈。在某些實施例中，單域抗體為人類單域抗體(Domantis, Inc., Waltham, Mass.；參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。在一個實施例中，單域抗體由抗體之全部或一部分重鏈可變域組成。 6.  抗CTLA4結合蛋白：抗體變異體
在一些實施例中，涵蓋本文所描述之抗體之一或多個胺基酸序列修飾。例如，可能希望增進抗體的結合親和力及/或其他生物學特性。可藉由將適合的變化引入編碼抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備抗體之胺基酸序列變異體。此類修飾包括例如抗體之胺基酸序列內之殘基的缺失及/或插入及/或取代。可進行缺失、插入及取代之任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為該最終構築體具有所需特徵。可在製備該序列時，在標的抗體胺基酸序列中引入胺基酸變化。
適用於鑑別抗體中作為用於突變誘發之較佳位置的某些殘基或區域之方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如由Cunningham及Wells (1989) Science, 244:1081-1085所描述。本文中，鑑別一個殘基或一組目標殘基(例如帶電殘基，諸如Arg、Asp、His、Lys及Glu)且由中性或帶負電的胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)置換，以影響胺基酸與抗原之相互相用。接著，藉由在取代位點處或為取代位點引入另外的或其他變異體來改進對取代呈現功能敏感性之彼等胺基酸位置。因此，雖然用於引入胺基酸序列變異之位點為預定的，但突變本身之性質無需預定。舉例而言，為了分析既定位點處之突變效能，在目標密碼子或區域進行Ala掃描或隨機突變誘發且針對所需活性篩選經表現之免疫球蛋白。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或超過一百個殘基之多肽範圍內的胺基端及/或羧基端融合，以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N端或C端與酶或延長抗體之血清半衰期之多肽的融合物。
在一些實施例中，改良藥物動力學之FcRn突變包括但不限於M428L、T250Q/M428L、M252Y/S254T/T256E、P257I/N434H、D376V/N434H、P257I/Q3111、N434A、N434W、M428L/N434S、V259I/V308F、M252Y/S254T/T256E、V259I/V308F/M428L、T307Q/N434A、T307Q/N434S、T307Q/E380A/N434A、V308P/N434A、N434H、V308P。在一些實施例中，此類突變在低pH值下增強抗體與FcRn之結合，但在中性pH值下不改變抗體親和力。
在某些實施例中，改變本發明之抗體以增加或降低抗體經糖基化之程度。多肽之糖基化通常為N連接或O連接。N連接係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基之側鏈的連接。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-蘇胺酸(其中X為除脯胺酸以外之任何胺基酸)為用於碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈之酶促連接的識別序列。因此，在多肽中此等三肽序列中之任一者的存在產生潛在糖基化位點。O連接之糖基化係指糖N-乙醯基半乳胺糖、半乳糖或木糖中之一者與羥胺基酸(最通常為絲胺酸或蘇胺酸)的連接，但亦可使用5-羥脯胺酸或5-羥離胺酸。
宜藉由改變胺基酸序列，使得產生或移除上述三肽序列(對於N連接之糖基化位點)中之一或多者來達成針對抗體之糖基化位點之添加或缺失。亦可藉由針對原始抗體之序列的一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基之添加、缺失或取代來進行改變(對於O連接之糖基化位點)。
在抗體包含Fc區之情況下，可改變連接於其上之碳水化合物。舉例而言，具有成熟碳水化合物結構(其缺乏連接至抗體之Fc區之岩藻糖)的抗體描述於美國專利申請案第US 2003/0157108號(Presta, L.)中。亦參見US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)。在連接至抗體之Fc區之碳水化合物中具有等分N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)的抗體提及於Jean-Mairet等人之WO 2003/011878及Umana等人之美國專利 第6,602,684號中。在連接至抗體之Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基的抗體報導於Patel等人之WO 1997/30087中。關於具有連接至抗體之Fc區的經改變之碳水化合物之抗體，亦參見WO 1998/58964 (Raju, S.)及WO 1999/22764 (Raju, S.)。關於具有經修飾之糖基化之抗原結合分子，亦參見US 2005/0123546 (Umana等人)。
在某些實施例中，糖基化變異體包含Fc區，其中連接至Fc區之碳水化合物結構缺乏岩藻糖或具有減少之岩藻糖。此類變異體具有改良之ADCC功能。視情況，Fc區進一步包含一或多個胺基酸取代，其進一步改良ADCC，例如Fc區之位置298、333及/或334 (殘基之Eu編號)處之取代。關於「去岩藻糖基化(afucosylated/defucosylated)」或「岩藻糖缺乏的(fucose-deficient)」抗體變異體之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；Okazaki等人, J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki等人, Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)。產生去岩藻糖基化抗體之細胞株之實例包括蛋白質岩藻糖基化缺乏之Lec13 CHO細胞(Ripka等人, Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號, Presta, L；及WO 2004/056312 A1, Adams等人，尤其在實例11中)，及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因(FUT8)基因剔除CHO細胞(Yamane-Ohnuki等人, Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004))，及過度表現β1,4-N-乙醯基糖胺多糖基轉移酶III (GnT-III)及高爾基體μ-甘露糖苷酶II (ManII)之細胞。
在本文中之任何實施例中，抗CTLA4結合蛋白可經工程改造以改良抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)活性。在一些實施例中，可在具有α1,6-岩藻糖基轉移酶(Fut8)基因剔除之細胞株中產生抗CTLA4結合蛋白。在一些其他實施例中，可在過度表現β1,4-N-乙醯基糖胺多糖基轉移酶III (GnT-III)之細胞株中產生抗CTLA4結合蛋白。在其他實施例中，細胞株另外過度表現高爾基體μ-甘露糖苷酶II (ManII)。在本文中之一些實施例中，抗CTLA4結合蛋白可在Fc區中包含至少一個改良ADCC活性之胺基酸取代。
在一個實施例中，抗體經改變以改良其血清半衰期。為延長抗體之血清半衰期，吾人可將FcRN/救助受體結合抗原決定基併入抗體(尤其抗體片段)中，例如如美國專利 第5,739,277號中所描述。如本文中所使用，術語「救助受體結合抗原決定基」係指IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)之Fc區之抗原決定基，其負責延長IgG分子之活體內血清半衰期(US 2003/0190311、美國專利第6,821,505號；美國專利第6,165,745號；美國專利第5,624,821號；美國專利第5,648,260號；美國專利第6,165,745號；美國專利第5,834,597號)。
另一類型之變異體為胺基酸取代變異體。此等變異體在抗體分子中具有至少一個經不同殘基置換之胺基酸殘基。取代型突變誘發之所關注位點包括高變區，但亦涵蓋FR變化。保守性取代顯示於表1中「較佳取代」標題下。若此類取代引起生物活性之合乎需要的變化，則可引入表1中稱為「例示性取代」或如下文參考胺基酸類別進一步描述之更多實質性變化，且篩選產物。 表1. 胺基酸取代
初始殘基 例示性取代 較佳取代
Ala (A) Val; Leu; Ile Val
Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys
Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln
Asp (D) Glu; Asn Glu
Cys (C) Ser; Ala Ser
Gln (Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp; Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg
Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; Norleucine Leu
Leu (L) Norleucine; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile
Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg
Met (M) Leu; Phe; Ile Leu
Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val; Ser Ser
Trp (W) Tyr; Phe Tyr
Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Norleucine Leu
抗體之生物特性之實質性修飾係藉由選擇取代來達成，該等取代在其對維持以下的作用上顯著不同：(a)取代區域中多肽主鏈之結構，例如呈薄片或螺旋構形形式，(b)目標位點處之分子之電荷或疏水性，或c)側鏈之體積。胺基酸可根據其側鏈之特性的相似性來分組(A. L. Lehninger, Biochemistry, 第二版, 第73-75頁, Worth Publishers, New York (1975))： (1)    非極性：Ala (A)、Val (V)、Leu (L)、Ile (I)、Pro (P)、Phe (F)、Trp (W)、Met (M) (2)    不帶電極性：Gly (G)、Ser (S)、Thr (T)、Cys (C)、Tyr (Y)、Asn (N)、Gln (Q) (3)    酸性：Asp (D)、Glu (E) (4)    鹼性：Lys (K)、Arg (R)、His (H)
替代地，天然存在之殘基可基於共同的側鏈特性劃分成各組： (1)    疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2)    中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3)    酸性：Asp、Glu； (4)    鹼性：His、Lys、Arg； (5)    影響鏈取向之殘基：Gly、Pro； (6)    芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將引起此等類別中之一者之成員更換成另一個類別。此類經取代之殘基亦可引入保守性取代位點中或引入其餘(非保守性)位點中。
一種類型之取代型變異體涉及取代親本抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，選擇用於進一步研發之所得變異體相對於產生其的親本抗體將具有經修飾(例如改良)之生物特性。用於產生此類取代型變異體之適宜方式涉及使用噬菌體呈現之親和力成熟。簡言之，對若干高變區位點(例如6至7個位點)進行突變以在各位點處產生所有可能的胺基酸取代。由此產生的抗體係以與封裝於各粒子內之噬菌體鞘蛋白(例如M13的基因III產物)之至少一部分的融合物形式自絲狀噬菌體粒子呈現。接著，針對噬菌體呈現變異體之生物活性(例如結合親和力)對其進行篩選。為了鑑別用於修飾之候選高變區位點，可進行掃描突變誘發(例如丙胺酸掃描)以鑑別顯著有助於抗原結合之高變區殘基。替代地或另外地，分析抗原-抗體複合物之晶體結構以鑑別抗體與抗原之間的接觸點可為有益的。此類接觸殘基及鄰近殘基為根據此項技術中已知之技術(包括本文中詳述之彼等技術)取代的候選物。在此類變異體產生後，使用此項技術中已知之技術(包括本文所描述之彼等技術)對該組變異體進行篩選，且可選擇在一或多種相關分析中具有優良特性的抗體用於進一步研發。
藉由此項技術中已知之多種方法製備編碼抗體之胺基酸序列變異體的核酸分子。此等方法包括但不限於自天然來源分離(在天然存在之胺基酸序列變異體的情況下)或藉由對抗體的早期製備變異體或非變異型式進行寡核苷酸介導(或定點)之突變誘發、PCR突變誘發及卡匣突變誘發來製備。
可能需要將一或多個胺基酸修飾引入本發明抗體的Fc區中，藉此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含人類Fc區序列(例如，人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)，其在一或多個胺基酸位置(包括鉸鏈半胱胺酸之胺基酸位置)處包含胺基酸修飾(例如取代)。
在一些實施例中，本文所提供之抗CTLA4結合蛋白(例如抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，或抗CTLA4雙特異性抗體)具有效應功能增強之IgG1同型。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段為去岩藻糖基化的。在一些實施例中，抗CTLA4雙特異性抗體為去岩藻糖基化的。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段具有增加之甘露糖部分含量。在一些實施例中，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段具有增加之等分聚醣部分含量。在一些實施例中，抗CTLA4雙特異性抗體具有增加之甘露糖部分含量。在一些實施例中，IgG1包含胺基酸突變。
在一些實施例中，本文所提供之抗CTLA4抗體或其抗原結合片段，或抗CTLA4雙特異性抗體具有IgG1同型(例如人類IgG1同型)。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代S298A、E333A及K334A，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代S239D及I332E，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代S239D、A330L及I332E，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代P247I及A339D或A339Q，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代D280H、K290S (具有或不具有S298D或S298V)，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代F243L、R292P及Y300L，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代F243L、R292P、Y300L及P396L，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代F243L、R292P、Y300L、V305I及P396L，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代G236A、S239D及I332E，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代K326A及E333A，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代K326W及E333S，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一個實施例中，IgG1包含胺基酸取代K290E或K290N、S298G、T299A及/或K326E，其中胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。在一些態樣中，包含於所提供之CTLA4結合蛋白(諸如抗體或其抗原結合片段)中之例示性重鏈恆定區包括SEQ ID NO:35至38中闡述之重鏈恆定區序列。在一些態樣中，包含於所提供之CTLA4結合蛋白(諸如抗體或其抗原結合片段)中之例示性輕鏈恆定區包括SEQ ID NO: 39中闡述之輕鏈恆定區序列。
在一些態樣中，所提供之CTLA4結合蛋白，諸如抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO: 38中所闡述之重鏈恆定區序列。在一些態樣中，所提供之CTLA4結合蛋白，諸如抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO: 35中所闡述之重鏈恆定區序列。在一些態樣中，所提供之CTLA4結合蛋白，諸如抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO: 39中所闡述之輕鏈恆定區序列。
在一些態樣中，所提供之CTLA4結合蛋白，諸如抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO: 38中所闡述之重鏈恆定區序列及包含SEQ ID NO: 39中所闡述之輕鏈恆定區序列。在一些態樣中，所提供之CTLA4結合蛋白，諸如抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO: 35中所闡述之重鏈恆定區序列及包含SEQ ID NO: 39中所闡述之輕鏈恆定區序列。
根據本說明書及此項技術之教示內容，經考慮在一些實施例中，本發明之抗體與野生型對應抗體相比可例如在Fc區中包含一或多個改變。此等抗體與其野生型對應物相比將仍然保留治療效用所需的實質上相同之特徵。舉例而言，咸信可在Fc區中進行某些改變，其將引起C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)之改變(亦即，改良或減弱)，例如如WO99/51642中所描述。關於Fc區變異體之其他實例，亦參見Duncan & Winter Nature 322:738-40 (1988)；美國專利 第5,648,260號；美國專利 第5,624,821號；及WO94/29351。WO00/42072 (Presta)及WO 2004/056312 (Lowman)描述與FcR之結合改良或減弱之抗體變異體。此等專利公開案之內容特定地以引用之方式併入本文中。亦參見Shields等人 J. Biol. Chem. 9(2):  6591-6604 (2001)。半衰期延長且與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc受體(FcRn) (Guyer等人, J. Immunol. 117:587 (1976)及Kim等人, J. Immunol. 24:249 (1994))之結合改良的抗體描述於US 2005/0014934A1 (Hinton等人)中。此等抗體包含具有一或多個取代之Fc區，該等取代改良Fc區與FcRn之結合。具有改變之Fc區胺基酸序列及增加或降低之C1q結合能力的多肽變異體描述於美國專利 第6,194,551B1號、WO99/51642中。彼等專利公開案之內容特定地以引用之方式併入本文中。亦參見Idusogie等人 J. Immunol. 164:  4178-4184 (2000)。 7.  抗體-藥物結合物
本發明亦提供抗體-藥物結合物(ADC)，其包含與一或多種細胞毒性劑，諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如，蛋白質毒素、細菌、真菌、植物或動物來源之酶活性毒素，或其片段)或放射性同位素結合的本文所提供之抗CTLA4結合蛋白。
在一個實施例中，與抗體-藥物結合物結合之一或多種藥物包括但不限於類美登素(參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1)；奧瑞他汀，諸如單甲基奧瑞他汀藥物部分DE及DF (MMAE及MMAF) (參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號及第7,498,298號)；海兔毒素(dolastatin)；卡奇黴素或其衍生物(參見美國專利第5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號及第5,877,296號；Hinman等人, Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)；及Lode等人, Cancer Res. 58:2925-2928 (1998))；蒽環黴素(anthracycline)，諸如柔紅黴素(daunomycin)或小紅莓(doxorubicin) (參見Kratz等人, Current Med. Chem. 13:477-523 (2006)；Jeffrey等人, Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006)；Torgov等人, Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005)；Nagy等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000)；Dubowchik等人, Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002)；King等人, J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)；及美國專利第6,630,579號)；甲胺喋呤(methotrexate)；長春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)，諸如多西他賽(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、拉洛他賽(larotaxel)、替司他賽(tesetaxel)及奧他賽(ortataxel)；新月毒素(trichothecene)；及CC1065。
在另一實施例中，與抗體-藥物結合物結合之一或多種藥物包括但不限於微管蛋白聚合抑制劑(例如，類美登素及奧瑞他汀)、DNA損傷劑(例如，吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚體、卡奇黴素、倍癌黴素及引多-萊諾苯并二氮呯二聚體)及DNA合成抑制劑(例如，依昔替康衍生物Dxd)。
在另一實施例中，抗體-藥物結合物包含與酶活性毒素或其片段結合之如本文所描述之抗體，該酶活性毒素或其片段包括但不限於白喉A鏈(diphtheria A chain)、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈(ricin A chain)、相思子毒素A鏈(abrin A chain)、莫迪素A鏈(modeccin A chain)、α-帚麴菌素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白、康乃馨(dianthin)蛋白、洋商陸(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹素(gelonin)、有絲分裂素(mitogellin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)及新月毒素。
在另一實施例中，抗體-藥物結合物包含與放射性原子結合以形成放射性結合物的如本文所描述之抗體。多種放射性同位素可用於產生放射性結合物。實例包括At 211、I 131、I 125、Y 90、Re 186、Re 188、Sm 153、Bi 212、P 32、Pb 212及Lu之放射性同位素。當放射性結合物用於偵測時，其可包含用於閃爍攝影研究之放射性原子，例如tc99m或I123；或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，MRI)之自旋標記，又諸如碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。
可使用多種雙功能蛋白質偶合劑製得抗CTLA4結合蛋白(例如，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)與細胞毒性劑之結合物，該等雙功能蛋白質偶合劑諸如N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、醯亞胺酯之雙功能衍生物(諸如鹽酸己二醯亞胺酸二甲酯)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙迭氮基化合物(諸如雙(對迭氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙-(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人, Science 238:1098 (1987)中所描述來製備。碳-14標記之1-異硫氰基苯甲基-3-甲基二伸乙三胺五乙酸(MX-DTPA)為用於使放射性核苷酸與抗體結合之例示性螯合劑。參見WO94/11026。連接子可為有助於細胞毒性藥物在細胞中釋放之「可裂解連接子」。舉例而言，可使用酸不穩定連接子、肽酶敏感性連接子、光不穩定連接子、二甲基連接子或含二硫鍵之連接子(Chari等人, Cancer Res. 52:127-131 (1992)；美國專利第5,208,020號)。
本文中之ADC明確涵蓋(但不限於)用交聯劑製備之此類結合物，該等交聯劑包括但不限於BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC及磺基-SMPB，以及SVSB (丁二醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯)，該等交聯劑可商購(例如購自Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A)。 8.  載體、宿主細胞及重組方法
為了重組產生本發明之抗CTLA4結合蛋白，分離編碼其之核酸且將其插入至可複製的載體中以用於進一步選殖(DNA之擴增)或用於表現。使用習知程序(例如，藉由使用能夠特異性結合至編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)容易地分離及定序編碼抗體的DNA。可使用許多載體。載體之選擇部分地視所使用之宿主細胞而定。一般而言，宿主細胞具有原核或真核(通常哺乳動物)來源。應瞭解，任何同型之恆定區可用於此目的，包括IgG、IgM、IgA、IgD及IgE恆定區，且此類恆定區可獲自任何人類或動物物種。 9.  使用原核宿主細胞產生結合蛋白 a)  載體構築
可使用標準重組技術獲得編碼本發明之抗CTLA4結合蛋白之多肽組分的聚核苷酸序列。所要聚核苷酸序列可自產抗體細胞(諸如融合瘤細胞)中分離及定序。替代地，可使用核苷酸合成儀或PCR技術合成聚核苷酸。在獲得之後，將編碼多肽之序列插入至能夠在原核宿主中複製及表現異源聚核苷酸之重組載體中。此項技術中可獲得且已知的許多載體可用於本發明之目的。選擇適當載體將主要視插入至載體中之核酸的大小及經載體轉型的特定宿主細胞而定。各載體含有不同組分，此視其功能(異源聚核苷酸之擴增或表現，或兩者)及與其存在於其中之特定宿主細胞的相容性而定。載體組分通常包括但不限於：複製起點、選擇標記基因、啟動子、核糖體結合位點(RBS)、信號序列、異源核酸插入物及轉錄終止序列。
一般而言，將含有衍生自與宿主細胞相容之物種之複製子及控制序列的質體載體與此等宿主結合使用。載體通常攜帶複製位點以及能夠在轉型細胞中提供表型選擇的標記序列。舉例而言，大腸桿菌通常使用pBR322 (一種衍生自大腸桿菌物種之質體)轉型。pBR322含有編碼氨苄西林(ampicillin；Amp)及四環素(Tet)抗性之基因且因此提供用於鑑別經轉型細胞之簡單手段。pBR322、其衍生物或其他微生物質體或噬菌體亦可含有或經修飾以含有可由用於表現內源性蛋白質之微生物體使用的啟動子。用於特定抗體之表現之pBR322衍生物的實例詳細地描述於Carter等人之美國專利 第5,648,237號中。
另外，含有與宿主微生物相容之複製子及控制序列的噬菌體載體可作為轉型載體與此等宿主結合使用。舉例而言，諸如λGEM.TM.-11之噬菌體可用於製備重組載體，其可用於使諸如大腸桿菌LE392之敏感宿主細胞轉型。
本發明之表現載體可包含兩個或更多個編碼多肽組分中之每一者的啟動子-順反子對。啟動子為位於順反子上游(5')的調節其表現之非轉譯調節序列。原核啟動子通常分為兩類：誘導型及組成型。誘導型啟動子為在其控制下，回應於培養條件之變化(例如存在或不存在營養物或溫度變化)而起始順反子之轉錄量增加的啟動子。
由多種潛在宿主細胞識別之許多啟動子為熟知的。所選擇的啟動子可操作地連接至編碼輕鏈或重鏈之順反子DNA，此係藉由經由限制酶消化來移除源DNA中之啟動子且將經分離之啟動子序列插入至本發明之載體中來達成。原生啟動子序列及許多異源啟動子均可用於引導目標基因之擴增及/或表現。在一些實施例中，由於異源啟動子與原生目標多肽啟動子相比通常准許經表現之目標基因之轉錄更多及產率更高，因此使用異源啟動子。
適合於與原核宿主一起使用的啟動子包括PhoA啟動子、β-半乳糖酶及乳糖啟動子系統、色胺酸(trp)啟動子系統及雜交啟動子，諸如tac或trc啟動子。然而，在細菌(諸如其他已知的細菌或噬菌體啟動子)中發揮功能之其他啟動子亦適合。其核苷酸序列已公開，藉此使得熟悉此項技術者能夠可操作地使用連接子或轉接子將該等核苷酸序列與編碼目標輕鏈及重鏈的順反子接合(Siebenlist等人(1980) Cell 20: 269)，以提供任何必需的限制位點。
在本發明之一個態樣中，重組載體內之各順反子包含分泌信號序列組分，其引導跨越膜之經表現之多肽的易位。一般而言，信號序列可為載體之組分，或其可為插入至載體中之目標多肽DNA的一部分。出於本發明之目的而選擇之信號序列應為由宿主細胞識別及處理(亦即，由信號肽酶裂解)之信號序列。對於不識別及處理異源多肽之原生信號序列的原核宿主細胞，信號序列經選自例如由以下組成之群的原核信號序列取代：鹼性磷酸酶、青黴素酶、Ipp或熱穩定性腸毒素II (STII)前導子、LamB、PhoE、PelB、OmpA及MBP。在本發明之一個實施例中，用於表現系統之兩個順反子中的信號序列為STII信號序列或其變異體。
在另一態樣中，根據本發明之免疫球蛋白的產生可在宿主細胞之細胞質中進行，且因此不需要各順反子內存在分泌信號序列。就此而言，免疫球蛋白輕鏈及重鏈在具有或不具有額外分子之序列等之情況下表現、摺疊及組裝以在細胞質內形成功能性免疫球蛋白。某些宿主菌株(例如大腸桿菌trxB-菌株)提供有利於二硫鍵形成之細胞質條件，藉此准許經表現之蛋白質子單元之正確的折迭及組裝。Proba及Pluckthun Gene, 159:203 (1995)。
本發明之抗CTLA4結合蛋白亦可使用表現系統產生，其中經表現之多肽組分之定量比率可調節以最大化本發明之分泌及適當組裝之抗體的產率。此類調節係至少部分地藉由同時調節多肽組分之轉譯強度來達成。
適用於表現本發明之抗CTLA4結合蛋白的原核宿主細胞包括太古細菌(Archaebacteria)及真細菌(Eubacteria)，諸如革蘭氏陰性(Gram-negative)或革蘭氏陽性(Gram-positive)生物體。適用細菌之實例包括埃希氏菌(Escherichia) (例如大腸桿菌)、桿菌(例如枯草芽孢桿菌(B. subtilis))、腸內細菌(Enterobacteria)、假單胞菌種(例如綠膿假單胞菌(P. aeruginosa))、鼠傷寒沙門桿菌(Salmonella typhimurium)、黏質沙雷氏菌(Serratia marcescans)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、變形桿菌(Proteus)、志賀桿菌屬(Shigella)、根瘤菌屬(Rhizobia)、透明顫菌屬(Vitreoscilla)或副球菌屬(Paracoccus)。在一個實施例中，使用革蘭氏陰性細胞。在一個實施例中，使用大腸桿菌細胞作為本發明之宿主。大腸桿菌菌株之實例包括菌株W3110 (Bachmann, Cellular及Molecular Biology, 第2卷 (Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1987),第1190-1219頁;ATCC寄存編號27,325)及其衍生物，包括菌株33D3，其具有基因型W3110 ΔfhuA (ΔtonA) ptr3 lac Iq lacL8 ΔompTΔ(nmpc-fepE) degP41 kanR (美國專利第5,639,635號）。其他菌株及其衍生物，諸如大腸桿菌294 (ATCC 31,446)、大腸桿菌B、大腸桿菌λ1776 (ATCC 31,537)及大腸桿菌RV308 (ATCC 31,608)亦為合適的。此等實例為說明性而非限制性的。用於構築具有限定基因型之上述細菌中之任一者之衍生物的方法為此項技術中已知的且描述於例如Bass等人, Proteins, 8:309-314 (1990)中。考慮複製子在細菌細胞中之可複製性，通常需要選擇適當細菌。舉例而言，當使用熟知質體(諸如pBR322、pBR325、pACYC177或pKN410)以供應複製子時，可適當地使用大腸桿菌、沙雷氏菌屬(Serratia)或沙門氏菌屬(Salmonella)物種作為宿主。典型地，宿主細胞應分泌最少量的蛋白水解酶，且可宜將額外蛋白酶抑制劑併入於細胞培養物中。 b)  結合蛋白產生
宿主細胞用上述表現載體轉型且在適當時調節之習知營養物培養基中培養以誘導啟動子、選擇轉型體或擴增編碼所要序列之基因。
轉型意謂將DNA引入至原核宿主中，使得DNA可以染色體外元件形式或由染色體整合體複製。視所使用之宿主細胞而定，轉型係使用適於此類細胞之標準技術進行。採用氯化鈣之鈣處理通常用於含有實質性細胞壁障壁之細菌細胞。另一種轉型方法採用聚乙二醇/DMSO。又一種所用技術為電穿孔。
用於產生本發明之抗CTLA4結合蛋白之原核細胞在此項技術中已知且適用於培養所選宿主細胞之培養基中生長。適合培養基之實例包括魯利亞培養液(luria broth；LB)加必需之營養補充劑。在一些實施例中，培養基亦含有基於構築表現載體選擇之選擇劑，以選擇性地准許含有表現載體之原核細胞生長。舉例而言，將氨苄西林添加至培養基中以用於表現氨苄西林抗性基因之細胞之生長。
除碳、氮及無機磷酸鹽來源之外，亦可包括適當濃度下之任何必需補充劑，其單獨引入或與諸如複合氮源之其他補充劑或培養基混合引入。視情況，培養基可含有一或多種選自由以下組成之群的還原劑：麩胱甘肽、半胱胺酸、胱胺、巰基乙酸鹽、二硫赤蘚糖醇及二硫蘇糖醇。
在適合溫度下培養原核宿主細胞。在某些實施例中，對於大腸桿菌生長，生長溫度範圍介於約20℃至約39℃；約25℃至約37℃；或約30℃。培養基之pH可為範圍介於約5至約9之任何pH，主要視宿主生物體而定。在某些實施例中，對於大腸桿菌，pH值為約6.8至約7.4，或約7.0。
若本發明之表現載體中使用誘導型啟動子，則在適用於活化啟動子之條件下誘導蛋白質表現。在本發明之一個態樣中，PhoA啟動子用於控制多肽之轉錄。因此，經轉型之宿主細胞在用於誘導之磷酸鹽限制性培養基中培養。在某些實施例中，磷酸鹽限制性培養基為C.R.A.P.培養基(參見例如Simmons等人, J. Immunol. Methods (2002), 263:133-147)。根據所採用之載體構築體，可使用多種其他誘導劑，如此項技術中所已知。
在一個實施例中，本發明之經表現之抗CTLA4結合蛋白分泌至宿主細胞之周質中且自宿主細胞之周質中回收。蛋白質回收通常涉及破壞微生物，通常藉由諸如滲壓衝擊、音波處理或裂解之手段。在細胞破壞後，可藉由離心或過濾來移除細胞碎片或完全細胞。可進一步純化蛋白質，例如藉由親和樹脂層析。替代地，可將蛋白質轉運至培養基中且自其中分離。可自培養物移除細胞，且過濾並且濃縮培養物上清液以進一步純化所產生之蛋白質。所表現之多肽可使用通常已知之方法(諸如聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)及西方墨點分析)進一步分離及鑑別。
在本發明之一個態樣中，藉由醱酵製程大量進行抗CTLA4結合蛋白產生。各種大規模分批進料醱酵程序可用於產生重組蛋白。大規模醱酵具有至少1000公升之容量且在某些實施例中，具有約1,000至100,000公升之容量。此等醱酵槽使用攪拌器葉輪來分配氧氣及營養物，尤其葡萄糖。小規模醱酵通常係指在體積容量不超過約100公升且可在約1公升至約100公升範圍內之醱酵槽中醱酵。
在醱酵製程中，通常在細胞已在適合條件下生長至所要密度(例如約180至220之OD550)之後開始誘導蛋白質表現，在此階段，細胞處於早期生長停滯期(early stationary phase)。根據所採用之載體構築體，可使用多種誘導劑，如此項技術中所已知及上文所描述。細胞在誘導之前可生長更短的時段。細胞通常誘導約12至50小時，但可使用更長或更短的誘導時間。
為了改良本發明之多肽之產量及品質，可修改各種醱酵條件。舉例而言，為了改良所分泌抗體多肽之正確組裝及折迭，可使用過度表現伴隨蛋白之額外載體(諸如Dsb蛋白質(DsbA、DsbB、DsbC、DsbD及/或DsbG)或FkpA (具有伴隨蛋白活性之肽基脯胺醯基順式,反式-異構酶))使宿主原核細胞共轉型。已證實伴隨蛋白促進細菌宿主細胞中產生之異源蛋白質之正確折迭及溶解性。Chen等人 (1999) J. Biol. Chem.  274:19601-19605；Georgiou等人, 美國專利 第6,083,715號；Georgiou等人, 美國專利 第6,027,888號；Bothmann及Pluckthun (2000) J. Biol.  Chem.  275:17100-17105；Ramm及Pluckthun (2000) J. Biol.  Chem. 275:17106-17113；Arie等人 (2001) Mol. Microbiol. 39:199-210。
為了使所表現異源蛋白質(尤其對蛋白水解敏感之異源蛋白質)的蛋白水解最小化，本發明可使用缺乏蛋白水解酶之某些宿主菌株。舉例而言，宿主細胞菌株可經修飾以在編碼已知的細菌蛋白酶(諸如蛋白酶III、OmpT、DegP、Tsp、蛋白酶I、蛋白酶Mi、蛋白酶V、蛋白酶VI及其組合)之基因中實現基因突變。一些大腸桿菌蛋白酶缺乏型菌株可獲得且描述於例如Joly等人(1998), 見上文；Georgiou等人, 美國專利 第5,264,365號；Georgiou等人, 美國專利 第5,508,192號；Hara等人, Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996)中。
在一個實施例中，缺乏蛋白水解酶且經過度表現一或多種伴隨蛋白之質體轉型的大腸桿菌菌株用作本發明之表現系統中之宿主細胞。 c)  結合蛋白純化
在一個實施例中，進一步純化本文中產生的抗體蛋白質以獲得實質上均質之製劑，以用於其他分析及使用。可採用此項技術中已知之標準蛋白質純化方法。以下程序舉例說明適合的純化程序：免疫親和或離子交換管柱上之分級分離、乙醇沈澱、逆相HPLC、二氧化矽或陽離子交換樹脂(諸如DEAE)上之層析、層析聚焦、SDS-PAGE、硫酸銨沈澱及使用例如Sephadex G-75之凝膠過濾。
在一個態樣中，固定於固相上之蛋白質A用於免疫親和力純化本發明之抗體產物。蛋白質A為來自金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureas)之41 kD細胞壁蛋白質，其以高親和力結合於抗體之Fc區。Lindmark等人(1983) J. Immunol. Meth. 62:1-13。固定蛋白質A之固相可為包含玻璃或二氧化矽表面之管柱，或受控微孔玻璃管柱或矽酸管柱。在一些應用中，管柱經諸如甘油之試劑塗佈，以可能防止污染物之非特異性黏附。
作為純化之第一步驟，可將衍生自如上文所描述之細胞培養物的製劑施加至蛋白質A固定之固相上以允許所關注抗體與蛋白質A的特異性結合。隨後將洗滌固相以移除非特異性結合至固相之污染物。最後，藉由溶離自固相回收所關注抗體。 10.  使用真核宿主細胞產生結合蛋白
用於真核宿主細胞中之載體通常包括以下非限制性組分中之一或多者：信號序列、複製起點、一或多個標記基因、強化子元件、啟動子及轉錄終止序列。 a)  信號序列組分
用於真核宿主細胞中之載體亦可含有信號序列或在所關注之成熟蛋白質或多肽之N端處具有特定裂解位點的其他多肽。所選擇之異源信號序列可為由宿主細胞識別及處理(亦即，由信號肽酶裂解)之信號序列。在哺乳動物細胞表現時，可使用哺乳動物信號序列以及病毒分泌性前導子，例如單純疱疹gD信號。此類前驅體區域之DNA在閱讀框架中接合至編碼抗體之DNA。 b)  複製起點
一般而言，哺乳動物表現載體不需要複製起點組分。舉例而言，通常可使用SV40起點，僅因為其含有早期啟動子。 c)  選擇基因組分
表現載體及選殖載體可含有選擇基因，亦稱為可選標記物。典型之選擇基因編碼如下蛋白質：(a)賦予針對抗生素或其他毒素(例如氨苄西林、新黴素(neomycin)、甲胺喋呤或四環素(tetracycline))之抗性，(b)補體營養缺陷性不足(若有關)，或(c)提供無法自複合培養基獲得之關鍵營養物。
選擇方案之一個實例係利用藥物來遏制宿主細胞之生長。經異源基因成功轉型之彼等細胞產生賦予耐藥性之蛋白質且因此在選擇療法中存活下來。此類顯性選擇之實例使用藥物新黴素、黴酚酸(mycophenolic acid)及潮黴素(hygromycin)。
適用於哺乳動物細胞之可選標記物之另一實例為使得能夠鑑別有能力吸收抗CTLA4結合蛋白編碼核酸之細胞的標記物，諸如DHFR、胸苷激酶、金屬硫蛋白-I及金屬硫蛋白-II、靈長類動物金屬硫蛋白基因、腺苷去胺酶、鳥胺酸去羧酶等。
舉例而言，在一些實施例中，首先藉由將所有轉型體在含有甲胺喋呤(Mtx) (DHFR之競爭性拮抗劑)的培養基中培養來鑑別經DHFR選擇基因轉型之細胞。在一些實施例中，當採用野生型DHFR時，適合的宿主細胞為缺乏DHFR活性之中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株(例如ATCC CRL-9096)。
替代地，可藉由在含有用於可選標記物之選擇劑(諸如胺基糖苷抗生素，例如卡那黴素(kanamycin)、新黴素或G418)之培養基中之細胞生長來選擇用編碼抗CTLA4結合蛋白、野生型DHFR蛋白質及另一可選標記物(諸如胺基糖苷3'-磷酸轉移酶(APH))之DNA序列轉型或共轉型之宿主細胞(尤其含有內源性DHFR之野生型宿主)。參見美國專利 第4,965,199號。宿主細胞可包括NS0，包括缺乏麩醯胺酸合成酶(GS)之細胞株。使用GS作為哺乳動物細胞之可選標記物的方法描述於美國專利 第5,122,464號及美國專利 第5,891,693號中。 d)  啟動子組分
表現載體及選殖載體通常含有啟動子，其由宿主生物體識別且可操作地連接至編碼所關注之抗CTLA4結合蛋白的核酸。真核生物之啟動子序列為已知的。舉例而言，幾乎所有真核基因皆具有富含AT之區域，其位於開始轉錄之位點上游約25至30個鹼基處。在許多基因之轉錄起點上游70至80個鹼基處發現的另一序列為CNCAAT區，其中N可為任何核苷酸。在大多數真核基因之3'端處為AATAAA序列，其可為將聚A尾(poly A tail)添加至編碼序列之3'端的信號。在某些實施例中，任何或全部此等序列可適當地插入至真核表現載體中。
哺乳動物宿主細胞中自載體之轉錄係例如藉由自以下獲得之啟動子控制：病毒之基因體，該等病毒諸如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(諸如腺病毒2)、牛乳頭狀瘤病毒、禽類肉瘤病毒、巨細胞病毒、逆轉錄病毒、B型肝炎病毒及猿猴病毒40 (SV40)；異源哺乳動物啟動子，例如肌動蛋白啟動子或免疫球蛋白啟動子；熱休克啟動子，其限制條件為此類啟動子與宿主細胞系統相容。
SV40病毒之早期及晚期啟動子適宜以亦含有SV40病毒複製起點之SV40限制性片段形式獲得。人類巨細胞病毒之即刻早期啟動子(immediate early promoter)適宜以HindIII E限制性片段形式獲得。在哺乳動物宿主中使用牛乳頭狀瘤病毒作為載體表現DNA之系統揭示於美國專利 第4,419,446號。此系統之修改描述於美國專利 第4,601,978號。亦參見Reyes等人, Nature 297:598-601 (1982)，其描述在來自單純疱疹病毒之胸苷激酶啟動子之控制下，在鼠類細胞中表現人類β-干擾素cDNA。替代地，可使用勞氏肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus)長末端重複序列作為啟動子。 e)  增強子元件組分
藉由高級真核生物對編碼本發明之抗體之DNA進行的轉錄通常藉由將強化子序列插入至載體中來增加。現已知來自哺乳動物基因(球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白及胰島素)之許多強化子序列。然而，典型地，吾人將使用來自真核細胞病毒之強化子。實例包括複製起點後側(bp 100-270)上之SV40強化子、人類巨細胞病毒早期啟動子強化子、鼠類巨細胞病毒早期啟動子強化子、複製起點後側上之多瘤病毒強化子，及腺病毒強化子。亦參見Yaniv, Nature 297:17-18 (1982)，其描述用於活化真核啟動子之強化子元件。強化子可在抗體多肽編碼序列之5'或3'位置處剪接至表現載體中，但通常位於相對於啟動子之5'位點。 f)  轉錄終止組分
用於真核宿主細胞中之表現載體亦可含有終止轉錄及穩定mRNA所必需之序列。此類序列通常可獲自真核或病毒DNA或cDNA之5'及偶爾3'非轉譯區。此等區域在編碼抗體之mRNA的非轉譯部分中含有以聚腺苷酸化片段形式轉錄之核苷酸區段。一種適用的轉錄終止組分為牛生長激素聚腺苷酸化區域。參見WO94/11026及其中所揭示之表現載體。 g)  宿主細胞之選擇及轉型
本文中適用於在載體中選殖或表現DNA之宿主細胞包括本文所描述之高級真核生物細胞，包括脊椎動物宿主細胞。脊椎動物細胞在培養物(組織培養物)中之繁殖已變成常規程序。適用的哺乳動物宿主細胞株之實例為經SV40轉型之猴腎臟CV1細胞株(COS-7，ATCC CRL 1651)；人類胚腎細胞株(經次選殖以在懸浮培養物中生長之293或293細胞，Graham等人, J. Gen Virol. 36:59 (1977))；幼倉鼠腎細胞(BHK，ATCC CCL 10)；中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR (CHO，Urlaub等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))；鼠類塞特利氏細胞(sertoli cell) (TM4，Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980))；猴腎細胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人類子宮頸癌細胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬腎細胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠肝細胞(buffalo rat liver cell)(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人類肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人類肝細胞(Hep G2，HB 8065)；鼠類乳房腫瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI細胞(Mather等人, Annals N. Y Acad. Sci. 383:44-68 (1982))；MRC 5細胞；FS4細胞；及人類肝腫瘤細胞株(Hep G2)。
宿主細胞經用於抗CTLA4結合蛋白產生之上述表現載體或選殖載體轉型且視需要改良之習知營養物培養基中培養，以誘導啟動子、選擇轉型體或擴增編碼所需序列之基因。 h)  培養宿主細胞
用於產生本發明之抗CTLA4結合蛋白之宿主細胞可在多種培養基中培養。諸如Ham's F10 (Sigma)、最小必需培養基((MEM)，Sigma)、RPMI-1640 (Sigma)及杜爾貝科氏改良伊格爾氏培養基((Dulbecco's Modified Eagle's Medium；DMEM)，Sigma)之市售培養基適用於培養宿主細胞。另外，以下中所描述之培養基中之任一者可用作宿主細胞之培養基：Ham等人, Meth. Enz. 58:44 (1979)、Barnes等人, Anal. Biochem. 102:255 (1980)、美國專利 第4,767,704號；第4,657,866號；第4,927,762號；第4,560,655號；或第5,122,469號；WO 90/03430；WO 87/00195；或美國 再頒專利30,985。此等培養基中之任一者可視需要補充有激素及/或其他生長因子(諸如胰島素、運鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽(諸如氯化鈉、鈣鹽、鎂鹽及磷酸鹽)、緩衝液(諸如HEPES)、核苷酸(諸如腺苷及胸苷)、抗生素(諸如GENTAMYCIN™藥物)、痕量元素(定義為通常以微莫耳濃度範圍內之最終濃度存在的無機化合物)及葡萄糖或等效能量來源。亦可以熟習此項技術者已知之適當濃度包括任何其他補充劑。培養條件(諸如溫度、pH及其類似者)為先前用於經選擇用於表現之宿主細胞之培養條件，且對於一般熟習此項技術者將為顯而易見的。 i)  結合蛋白之純化
當使用重組技術時，抗CTLA4結合蛋白可在細胞內產生，或直接分泌至培養基中。若抗體在細胞內產生，則作為第一步驟，可例如藉由離心或超濾來移除宿主細胞或所裂解片段之微粒碎片。在將抗CTLA4結合蛋白分泌至培養基中之情況下，可首先使用市售蛋白質濃縮過濾器(例如Amicon或Millipore Pellicon超濾單元)濃縮來自此類表現系統之上清液。在任何前述步驟中可包括諸如PMSF之蛋白酶抑制劑以抑制蛋白水解，且可包括抗生素以防止外來污染物之生長。
由細胞製備之抗體組合物可使用例如羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析及親和層析來純化，其中親和層析為適宜技術。蛋白質A作為親和配位體之適合性視抗體中存在之任何免疫球蛋白Fc域之種類及同型而定。蛋白質A可用於純化基於人類γ1、γ2或γ4重鏈之抗體(Lindmark等人, J. Immunol. Methods 62:1-13 (1983))。建議將蛋白質G用於所有鼠類同型及人類γ3 (Guss等人, EMBO J. 5:15671575 (1986))。親和配位體所連接之基質可為瓊脂糖，但可使用其他基質。與瓊脂糖可達成者相比，機械穩定性基質(諸如受控微孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯)可使得流速更快及處理時間更短。在抗體包含CH3域之情況下，Bakerbond ABX™樹脂(J.T. Baker, Phillipsburg, N.J.)適用於純化。視所回收之抗體而定，亦可使用其他蛋白質純化技術，諸如離子交換管柱上之分級分離、乙醇沈澱、逆相HPLC、二氧化矽層析、肝素SEPHAROSE™層析、陰離子或陽離子交換樹脂(諸如聚天冬胺酸管柱)層析、層析聚焦、SDS-PAGE及硫酸銨沈澱。
在任何初步純化步驟之後，包含所關注的結合蛋白及污染物之混合物可經歷進一步純化，例如藉由在低鹽濃度(例如約0至0.25 M鹽)下進行之使用pH在約2.5至4.5之間的溶離緩衝液之低pH疏水性相互作用層析。
一般而言，用於製備用於研究、測試及臨床用途之抗體之各種方法為此項技術中公認的，符合上述方法及/或被熟習此項技術者視為適用於特定所關注抗體。 IV.  Pd1計劃性死亡1 (PD-1)
計劃性死亡1 (PD-1) (亦稱為計劃性細胞死亡1)為最初藉由經歷細胞雕亡之小鼠T細胞株之消減雜交鑑定的具有268個胺基酸之I型跨膜蛋白(Ishida等人, Embo J., 11: 3887-95 (1992))。PD-1為T細胞調節因子之CD28/CTLA-4家族的成員且在活化的T細胞、B細胞及骨髓譜系細胞上表現(Greenwald等人, Annu. Rev. Immunol., 23: 515-548 (2005)；及Sharpe等人, Nat. Immunol., 8: 239-245 (2007))。PD-1為CD28受體家族之抑制成員，該受體家族亦包括CD28、CTLA-4、ICOS及BTLA。PD-1在活化的B細胞、T細胞及骨髓細胞上表現(Agata等人, 見上文；Okazaki等人(2002) Curr. Opin. Immunol 14:391779-82；Bennett等人(2003) J Immunol 170:711-8)。
已鑑別出PD-1之兩種配位體，PD配位體1 (PD-L1)及PD配位體2 (PD-L2)，其均屬於B7蛋白質超家族(Greenwald等人，見上文)。PD-Ll在多種細胞類型，包括肺、心臟、胸腺、脾臟及腎臟之細胞中表現(參見例如Freeman等人, J. Exp. Med., 192(7): 1027-1034 (2000)；及Yamazaki等人, J. Immunol., 169(10): 5538-5545 (2002))。在回應於脂多醣(LPS)及GM-CSF處理之巨噬細胞及樹突狀細胞(DC)上，以及在經由T細胞及B細胞受體傳訊後之T細胞及B細胞上上調PD-L1表現。PD-L1亦在多種鼠類腫瘤細胞株中表現(參見例如Iwai等人, Proc. Nat.l Acad. Sci. USA, 99(9): 12293-12297 (2002)；及Blank等人, Cancer Res., 64(3): 1140-1145 (2004))。相比之下，PD-L2展現更受限之表現模式且主要由抗原呈遞細胞(例如樹突狀細胞及巨噬細胞)及一些腫瘤細胞株表現(參見例如Latchman等人, Nat. Immunol., 2(3): 261-238 (2001))。無論在腫瘤細胞、基質或腫瘤微環境內之其他細胞上，腫瘤中之高PD-L1表現與不良臨床預後相關，可能係藉由在腫瘤中抑制效應T細胞及上調調節T細胞(Treg)所致。
PD-1負調節T細胞活化，且此抑制功能與細胞質域中基於免疫受體酪胺酸之轉換模體(immunoreceptor tyrosine-based switch motifITSM)有關(參見例如Greenwald等人, 見上文；及Parry等人, Mol. Cell. Biol., 25: 9543-9553 (2005))。PD-1缺陷可導致自體免疫。舉例而言，C57BL/6 PD-1基因剔除小鼠已顯示罹患狼瘡樣症候群(參見例如Nishimura等人, Immunity, 11: 141-1151 (1999))。在人類中，PD-1基因中之單核苷酸多形現象與全身性紅斑狼瘡、1型糖尿病、類風濕性關節炎之較高發病率及多發性硬化症之進展相關(參見例如Nielsen等人, Tissue Antigens, 62(6): 492-497 (2003)；Bertsias等人, Arthritis Rheum., 60(1): 207-218 (2009)；Ni 等人, Hum. Genet., 121(2): 223-232 (2007)；Tahoori等人, Clin. Exp. Rheumatol., 29(5): 763-767 (2011)；及Kroner等人, Ann. Neurol., 58(1): 50-57 (2005))。異常PD-1表現亦已涉及若干病變之T細胞功能障礙，諸如腫瘤免疫逃避及慢性病毒感染(參見例如Barber等人, Nature, 439: 682-687 (2006)；及Sharpe等人, 見上文)。
近期研究表明，由PD-1誘導之T細胞抑制亦在抑制抗腫瘤免疫中起作用。舉例而言，PD-L1在多種人類及小鼠腫瘤上表現，且PD-1與腫瘤上之PD-L1的結合導致T細胞抑制及腫瘤免疫逃避及保護(Dong等人, Nat. Med., 8: 793-800 (2002))。由腫瘤細胞表現PD-L1已直接與其對活體外抗腫瘤T細胞溶解之抗性相關(Dong等人, 見上文；及Blank等人, Cancer Res., 64: 1140-1145 (2004))。PD-1基因剔除小鼠對腫瘤攻擊具有抗性(Iwai等人, Int. Immunol., 17: 133-144 (2005))，且來自PD-1基因剔除小鼠之T細胞在授受性轉移至攜帶腫瘤之小鼠時在腫瘤排斥反應中高度有效(Blank等人, 見上文)。使用單株抗體阻斷PD-1抑制信號可增強小鼠中之宿主抗腫瘤免疫(Iwai等人, 見上文；及Hirano等人, Cancer Res., 65: 1089-1096 (2005))，且腫瘤中之高水準PD-L1表現與許多人類癌症類型之不良預後相關(Hamanishi等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104: 3360-335 (2007), Brown 等人, J. Immunol., 170: 1257-1266 (2003)；及Flies等人, Yale Journal of Biology and Medicine, 84(4): 409-421 (2011))。
鑒於前述內容，已開發用於抑制PD-1活性以治療各種類型之癌症及用於免疫增強(例如以治療感染性疾病)的策略(參見例如Ascierto等人, Clin. Cancer. Res., 19(5): 1009-1020 (2013))。就此而言，已研發靶向PD-1之單株抗體用於治療癌症(參見例如Weber, Semin. Oncol., 37(5): 430-4309 (2010)；及Tang等人, Current Oncology Reports, 15(2): 98-104 (2013))。舉例而言，在I期臨床試驗中，納武單抗(亦稱為BMS-936558)在非小細胞肺癌、黑色素瘤及腎細胞癌中產生完全或部分反應(參見例如Topalian, New England J. Med., 366: 2443-2454 (2012))，且目前處於III期臨床試驗中。MK-3575為針對PD-1之人類化單株抗體，其在I期臨床試驗中已顯示抗腫瘤活性之證據(參見例如Patnaik等人, 2012 American Society of Clinical Oncology (ASCO) Annual Meeting, Abstract # 2512)。另外，最新證據表明，靶向PD-1之療法可增強針對諸如HIV之病原體的免疫反應(參見例如Porichis等人, Curr. HIV/AIDS Rep., 9(1): 81-90 (2012))。然而，儘管取得此等進展，但此等潛在療法在人類中之功效可能有限。 抑制 PD-1 傳訊之藥劑
本發明提供治療癌症之方法，其包括根據可達成臨床益處之方案投與遞送計劃性死亡-1蛋白質(PD-1)傳訊劑之組合物。
用於本發明之療法中的抑制PD-1傳訊之藥劑包括結合且阻斷T細胞上之PD-1受體而不觸發抑制信號轉導之彼等藥劑、結合於PD-1配位體以防止其與PD-1之結合的藥劑、兼顧兩者之藥劑及防止編碼PD-1或PD-1之天然配位體之基因表現的藥劑。結合於PD-1之天然配位體的化合物包括PD-1本身，以及PD-1之活性片段，及在B7-H1配位體之情況下，B7.1蛋白質及片段。此類拮抗劑包括蛋白質、抗體、反義分子及小有機物。
本發明至少部分地描述PD-1藥劑(例如PD-1藥劑或PD-L1藥劑)及與其相關之各種組合物及方法。在一些實施例中，PD-1傳訊劑(例如抗PD-1抗體藥劑)結合PD-1之抗原決定基，此阻斷PD-1與其推定配位體中之任一或多者的結合。
在一些實施例中，用於本發明之組合療法中的抑制PD-1傳訊劑之藥劑為抗體藥劑。在一些實施例中，PD-1抗體藥劑結合PD-1之抗原決定基，此阻斷PD-1與其推定配位體中之任一或多者的結合。在一些實施例中，PD-1抗體藥劑結合PD-1之抗原決定基，此阻斷PD-1與其推定配位體中之兩者或更多者的結合。在實施例中，PD-1抗體藥劑結合PD-1蛋白之抗原決定基，此阻斷PD-1與PD-Ll及/或PD-L2之結合。本發明之PD-1抗體藥劑可包含任何適合類別之重鏈恆定區(Fc)。在一些實施例中，PD-1抗體藥劑包含基於野生型IgGl、IgG2或IgG4抗體，或其變異體之重鏈恆定區。
在一些實施例中，抑制PD-1傳訊之藥劑為單株抗體或其片段。在一些實施例中，抑制PD-1傳訊之抗體藥劑為PD-1抗體或其片段。靶向PD-1之單株抗體已在臨床研究中測試及/或在美國獲得上市批准。靶向PD-1傳訊之抗體藥劑之實例包括例如以下表2中所列之抗體藥劑中之任一者： 表2. 抗PD-1抗體藥劑
抗體藥劑目標 ( 格式 )
歐狄沃納武單抗 (Opdivo Nivolumab)PD-1 (人類IgG4)
可瑞達帕博利珠單抗 (Keytruda Pembrolizumab)PD-1 (人類化IgG4)
泰聖奇阿特珠單抗 (Tecentriq Atezolizumab)PD-L1 (人類IgG1)
英飛凡德瓦魯單抗 (Imfinzi Durvalumab)PD-L1 (人類IgG1)
巴文西亞阿維魯單抗 (Bavencio Avelumab)PD-L1 (人類IgG1)
PDR001PD-1 (人類化IgG4)
西米普利單抗PD-1 (完全人類IgG4)
BGB-A317經工程改造以不結合FcγRI之PD-1 (人類化IgG4)
LY3300054PD-L1
BI 754091(抗PD-1)
IBI308(抗PD-1)
INCSHR-1210(抗PD-1)
JNJ-63723283(抗PD-1)
JS-001(抗PD-1)
MEDI0680 (AMP-514)抗PD-1 (人類化IgG4)
MGA-012(抗PD-1)
PF-06801591(抗PD-1)
多斯利單抗 (TSR-042)抗PD-1 (人類化IgG4)
CX-072抗PD-L1
FAZ053抗PD-L1
PD-L1米拉分子(millamolecule)
在一些實施例中，PD-1藥劑係選自表2中提供之PD-1藥劑。
在一些實施例中，抑制PD-1傳訊之抗體藥劑為阿特珠單抗、阿維魯單抗、BGB-A317、BI 754091、CX-072、德瓦魯單抗、FAZ053、IBI308、INCSHR-1210、JNJ-63723283、JS-001、MEDI-0680、MGA-012、納武單抗、PDR001、帕博利珠單抗、PF-06801591、西米普利單抗、多斯利單抗、WO2014/179664中所揭示之任一抗體，或其衍生物。在一些實施例中，抑制PD-1傳訊之抗體藥劑為選自由以下組成之群的PD-1抗體：BGB-A317、BI 754091、CX-072、FAZ053、IBI308、INCSHR-1210、JNJ-63723283、JS-001、LY3300054、MEDI-0680、MGA-012、納武單抗、PD-L1米拉分子、PDR001、帕博利珠單抗、PF-06801591、西米普利單抗及多斯利單抗。在一些實施例中，抑制PD-1傳訊之抗體藥劑為選自由納武單抗、帕博利珠單抗及多斯利單抗組成之群的PD-1抗體。
在一些實施例中，PD-1傳訊劑為帕博利珠單抗、納武單抗、阿特珠單抗、德瓦魯單抗、阿維魯單抗、多斯利單抗、PDR-001、緹勒珠單抗(tislelizumab) (BGB-A317)、西米普利單抗(REGN2810)、LY-3300054、JNJ-63723283、MGA012、BI-754091、IBI-308、卡瑞利珠單抗(camrelizumab) (HR-301210)、BCD-100、JS-001、CX-072、BGB-A333、AMP-514 (MEDI-0680)、AGEN-2034、CS1001、Sym-021、SHR-1316、PF-06801591、LZM009、KN-035、AB122、傑諾珠單抗(genolimzumab) (CBT-501)、FAZ-053、CK-301、AK 104或GLS-010，或WO2014/179664中所揭示之任一PD-1抗體。在實施例中，免疫檢查點抑制劑為PD-1抑制劑。在實施例中，PD-1抑制劑為PD-1傳訊劑(例如，抗體、抗體結合物或其抗原結合片段)。在實施例中，PD-1抑制劑為PD-L1或PD-L2結合劑，其為德瓦魯單抗、阿特珠單抗、阿維魯單抗、BGB-A333、SHR-1316、FAZ-053、CK-301或PD-L1米拉分子，或其衍生物。
在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體藥劑)結合PD-1之抗原決定基，此阻斷PD-1與其推定配位體中之兩者或更多者的結合。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體藥劑)結合PD-1蛋白之抗原決定基，此阻斷PD-1與PD-L1及/或PD-L2之結合。本發明之PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體藥劑)可包含任何適合類別之重鏈恆定區(Fc)。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體藥劑)包含基於野生型IgG1、IgG2或IgG4抗體，或其變異體之重鏈恆定區。在一些實施例中，PD-1結合劑為單株抗體。
在一些實施例中，PD-1結合劑為或包含免疫球蛋白G4 (IgG4)人類化單株抗體(mAb)。在一些實施例中，PD-1結合劑包含人類IGHG4*01多肽。在一些實施例中，PD-1結合劑包含IgG重鏈區內之一或多個突變。在一些實施例中，PD-1結合劑包含在重鏈恆定區中具有一或多個突變之IgG4重鏈恆定區。在一些實施例中，PD-1結合劑包含在鉸鏈區中具有一或多個突變之IgG4重鏈恆定區。設想在一些實施例中，IgG4鉸鏈區中之突變可防止與其他IgG4分子之半分子交換。在一些實施例中，IgG4之鉸鏈區中的一或多個突變可包括絲胺酸至脯胺酸穩定突變，其防止與其他IgG4分子之半分子交換。在一些實施例中，IgG4之鉸鏈區中的一或多個突變可包括S228P突變。參見例如J. Biol. Chem. 2015; 290(9):5462-5469。在不希望受理論束縛之情況下，設想此點突變用以使抗體重鏈之鉸鏈穩定。
在一些實施例中，PD-1結合劑為納武單抗、帕博利珠單抗、阿特珠單抗、德瓦魯單抗、阿維魯單抗或WO2014/179664中所揭示之任一抗體。
帕博利珠單抗為抗PD-1單株抗體(「mAb」) (亦稱為MK-3475、SCH 9000475、可瑞達(Keytruda))。帕博利珠單抗為免疫球蛋白G4/κ同型人類化mAb。帕博利珠單抗之機制由mAb與淋巴球之PD-1受體結合以阻斷PD-1與由體內其他細胞(包括某些癌症之腫瘤細胞)產生之PD-L1及PD-L2配位體的相互作用組成。
類似於帕博利珠單抗，納武單抗(亦稱為BMS-936558、歐狄沃(Opdivo))首先在2014年由FDA批准用以在適當時治療不能以手術方式移除或在用伊匹單抗及BRAF抑制劑進行治療後已轉移的黑色素瘤。
在一些實施例中，PD-1抗體藥劑如國際專利申請公開案WO2014/179664中所揭示，其全文併入本文中。
例示性PD-1藥劑描述於表3中。
在實施例中，PD-1藥劑為表3之PD-1藥劑編號1至94中之任一者。
在一些實施例中，抑制PD-1傳訊之藥劑結合於人類PD-1。在一些實施例中，抑制PD-1傳訊之藥劑結合於人類PD-L1。
例示性PD-L1藥劑描述於表4中。
在實施例中，PD-L1藥劑為表4之PD-L1藥劑編號1至89中之任一者。 表3：PD-1藥劑
PD-1 藥劑編號 藥物名稱及同義語
1 帕博利珠單抗 可瑞達 蘭利珠單抗(lambrolizumab) MK 3475 MK-3475 MK3475 SCH 900475 SCH-900475 SCH900475
2 納武單抗 抗PD-1 MAb, Medarex 抗PD-1 MAb, Ono BMS 936558 BMS-936558 MDX-1106 NSC 748726 NSC-748726 ONO 4538 ONO-4538 歐狄沃
3 替博利單抗(Tripolibamab) 抗PD-1單株抗體，Shanghai Junshi Biosciences JS 001 JS-001 JS001 TAB 001 TAB-001 TAB001
4 斯迪利單抗(sintilimab) 抗PD1 MAb, Innovent Biologics IBI-308 IBI308
5 西米普利單抗 REGN 2810 REGN-2810 REGN2810 SAR-439684 SAR439684
6 斯巴達珠單抗(spartalizumab) 抗PD-1抗體, CoStim 抗PD-1抗體, Novartis 癌症免疫療法, CoStim PDR-001 PDR001
7 卡瑞利珠單抗 HR-301210 HR301210 INCSHR-1210 INCSHR1210 SHR-1210 SHR1210
8 BGB-A317 BGB A317 BGBA317 PD-1 MAb, BeiGene 緹勒珠單抗
9 BCD-100, Biocad 抗PD1單株抗體, Biocad BCD100, Biocad
10 MGA-012 INCMGA 00012 INCMGA 0012 INCMGA-00012 INCMGA-0012 INCMGA00012 INCMGA0012 MGA 012 MGA012
11 MEDI-0680 AMP-514 AMP514 MEDI0680
12 JNJ-63723283 JNJ-3283 JNJ3283 JNJ63723283
13 傑諾珠單抗 CBT-501 CBT501 GB-226 GB226 重組PD-1人類化單株抗體, Genor Biopharma
14 AGEN-2034 AGEN 2034 AGEN2034 PD-1拮抗劑, Agenus
15 XmAb-20717 PD-1/CTLA -4雙特異性抗體, Xencor XmAb20717
16 多斯利單抗(TSR-042)
17 Sym-021 抗PD-1, Symphogen Sym021
18 PF-06801591 抗PD-1抗體, Pfizer PF06801591
19 MGD-013 MGD013
20 LZM-009 LZM009
21 iPD1 CD19 eCAR T細胞, Marino Biotechnology 自體抗CD19 4-1BBCAR T細胞, Marino Biotechnology
22 HX-008 HX008 重組人類化抗PD-1單株抗體
23 HLX-10 抗PD-1單株抗體, Henlius HLX10
24 GLS-010 AB 122 AB-122 AB122 GLS 010 GLS010
25 細胞質活化PD-1 CAR19 T細胞療法, Pregene 攜帶CAR19 T細胞之細胞質活化PD1療法, Pregene
26 CS-1003 CS1003
27 BI-754091 抗PD-1單株抗體, Boehringer Ingelheim BI 754091
28 AK-105, Akeso Biopharma AK105, Akeso Biopharma
29 AK-104 AK104 PDCD1抗體, Akeso
30 AK-103 AK103
31 ABBV-181 ABBV 181 ABBV181
32 XmAb-23104 CD278/PDCD1抗體, Xencor XmAb 23104 XmAb23104
33 SNA-01 SNA 01 SNA01
34 sd-rxRNA抗癌療法, RXi Pharmaceuticals SD-RXRNA, RXi Pharmaceuticals
35 RXI-762 癌症免疫療法, MirImmune 癌症免疫療法, RXi Pharmaceuticals RXI762
36 RB-M1 抗間皮素CAR-T療法, Refuge Biotech RB M1 RBM1
37 RB-H21 抗HER2 CAR-T療法, Refuge Biotech RB H21 RBH21
38 RB-1916 RB 1916 RB1916
39 PRS-332 PDCD1抗體, Pieris PRS 332 PRS332
40 PEG-干擾素-α2b + PD-1抑制劑, PharmaEssentia P-1101 + PD-1抑制劑, PharmaEssentia P1101 + PD-1抑制劑, PharmaEssentia
41 PD-1/PD-L1免疫檢查點抑制劑, ImmunoBrain Checkpoint PD-1/PD-L1免疫檢查點抑制劑, Lundbeck
42 PD-1基因剔除CAR, Cellular Biomedicine Group PD-1基因剔除嵌合抗原受體, Cellular Biomedicine Group
43 PD-1抑制劑, Globavir
44 模擬抗原決定基(mimotope)疫苗, Imugene
45 MGD-019 MGD019 PD-1/CTLA4, MacroGenics
46 MCLA-134 MCLA134 PDCD1/HAVCR1抗體, Merus
47 MAX-10129 MAX 10129 MAX10129
48 KF-082 KF 082 KF082 PD1抗體, Akeso
49 JTX-4014 JTX4014
50 JBI-426 JBI 426 JBI426
51 免疫腫瘤學療法, Olipass
52 IKT-202 IKT202
53 ENUM-388D4 抗PD-1抗體, Enumeral Biomedical ENUM 388D4
54 DARPin抗癌療法, Molecular Partners PD-1/VEGF多重DARPin癌症療法, Molecular Partners
55 CX-188 CX188 PD-1前抗體(probodies), CytomX Therapeutics
56 CS-4100 CS 4100 CS4100
57 CAB-PD-1 CAB-PD 1 CABPD1
58 BH-2950 BH2950 PD-1/ERRB2抗體, Hanmi
59 BH-2941 抗PD-1/PD-L1 BsAb, Hanmi BH2941 PD-1/PD-L1抗體, Hanmi
60 AT-16201 AT 16201 AT16201
61 抗癌治療劑, Bristol-Myers Squibb 抗癌治療劑, Halozyme 納武單抗, Bristol-Myers Squibb 納武單抗, Halozyme
62 抗PD1 MAb, Aduro BioTech
63 抗PD-1 scFv +抗CTLA4 scFv, Anaeropharma 抗CTLA4 scFv +抗PD-1 scFv, Anaeropharma
64 抗PD-1抗體, Tikcro
65 抗PD-1/TAA-3抗體, Hanmi 抗TAA-3/PD-1抗體, Hanmi PD1/TAA3抗體, Hanmi
66 抗PD-1/TAA-2抗體, Hanmi 抗TAA-2/PD-1抗體, Hanmi PD1/TAA2抗體, Hanmi
67 抗PD-1/TAA-1抗體, Hanmi 抗PD-1/TAA-1抗體, Innovent 免疫腫瘤學程式, Hanmi
68 AM-0001 AM 0001 抗PD1抗體, ARMO BioSciences
69 AK-123 AK 123 AK123 PD1雙特異性抗體, Akeso
70 AK-112 AK112 PD-1雙特異性抗體, Akeso
71 ENUM-244C8 抗癌MAb, Enumeral Biomedical ENUM 244C8
72 Sym-016 抗癌療法, Symphogen-2 Sym016
73 STI-A1110 STI-1110 STI-A110X STI1110 STIA110X STIA1110
74 PEG-MP7 PEGMP7
75 PD-1肽拮抗劑, Aurigene Discovery Technologies
76 mAb B60-55 B60 55 B60-55 mAb B60 55
77 INDUS-903 INDUS903
78 免疫檢查點抑制劑, TheraVectys
79 IMM-1802 IMM 1802 IMM1802
80 癌症免疫療法, Immunotherapy Nantibody
81 雙特異性PD-1/OX40抗體, Immune Pharmaceuticals TNFRSF4/PD1抗體, Immune Pharmaceuticals
82 BH-2922 BH 2922 BH2922 EGFR/PD-1抗體, Hanmi
83 AUNP-12 AUNP 12 AUNP12 AUR 012 AUR-012 W-014A W014A
84 AP-106 AP106
85 抗癌劑, ArQule 抗癌劑, Beryllium
86 抗PD1抗體, Premier Biomedical
87 抗PD-1 MAb, PxRadia 抗癌免疫療法, PxRadia
88 抗PD-1 MAb, Kadmon Pharmaceuticals
89 抗PD-1 MAb, Immunovo
90 抗PD-1雙特異性抗體, Innovent Biologics 抗PD-1雙特異性抗體, Eli Lilly 雙特異性分子, Eli Lilly 雙特異性分子, Innovent Biologics PD-1雙特異性抗體, Innovent Biologics
91 抗PD-1 MAb, Mabquest 抗PD-1 MAb, Cellectis
92 ANB-011 ANA-011 ANA011 ANB011
93 AN-2005 AN2005
94 AMP-224 AMP224 GSK 2661380 GSK-2661380 GSK2661380
在一些實施例中，PD-1傳訊劑為表4中提供之PD-L1抑制劑。 表4：PD-L1抑制劑
PD-L1 藥劑編號 藥物名稱及同義語
1 德瓦魯單抗 英飛凡(Imfinzi) MEDI 4736 MEDI-4736 MEDI4736
2 阿維魯單抗 抗PD-L1, Merck KGaA 巴文西亞(Bavencio) MSB-0010718C MSB0010718C PF 06834635 PF-06834635
3 阿特珠單抗 MPDL-3280A MPDL3280A RG 7446 RG-7446 RG7446 RG7746 RO-5541267 RO5541267 泰聖奇(Tecentriq)
4 WBP- 3155 CS 1001 CS-1001 CS1001 WBP 3155
5 IO-103 IO 103 IO103
6 CX-072 CX072 PD-L1前抗體, CytomX Therapeutics
7 CA-170 AUPM-170 AUPM170 PD-L1抑制劑, Aurigene Discovery Technologies PD-L1抑制劑, Curis
8 BGB-A333 抗PD-L1 MAb, BeiGene BGB A333 BGBA333
9 SHR-1316 HTI-1088 HTI1088 SHR1316
10 MSB-2311 MSB 2311 MSB2311
11 M-7824 M7824 MSB0011359C
12 LY-3300054 抗PD-L1 Mab, Eli Lilly LY 3300054 LY3300054
13 KN-035 3D-2-02-0015 KN035
14 FS-118 FS118 LAG3/CD274抗體, f-star
15 FAZ-053 抗PD-L1抗體, Novartis-2 FAZ053
16 CK-301 抗PD-L1抗體, Checkpoint Therapeutics 抗PD-L1抗體, TG Therapeutics CK301
17 BMS-936559 抗PD-L1抗體, Bristol-Myers Squibb BMS936559 MDX-1105 MDX1105
18 BCD-135 BCD135
19 AK-106, Akeso AK106, Akeso
20 曲妥珠單抗(trastuzumab)/PD-L1融合蛋白, Avacta
21 STI-A1014 STI-1014 STI1014 STIA1014 ZKAB-001 ZKAB001
22 SNA-02 抗PD-L1適體, Fountain BioPharma SNA 02 SNA02
23 sd-rxRNA抗癌療法, RXi Pharmaceuticals SD-RXRNA, RXi Pharmaceuticals
24 利妥昔單抗(rituximab)/PD-L1融合蛋白, Avacta
25 PD-L1/LAG-3雙特異性程式, Avacta
26 PD-L1抑制劑, Hitgen PDL1抑制劑, Hitgen
27 PD-L1基因療法, enGene
28 PD-L1 CAR.TNK, Sorrento Therapeutics PDL1.taNK, NantKwest PDL1.taNK, Sorrento Therapeutics
29 PD-L1拮抗劑, Arbutus Biopharma 檢查點抑制劑, Arbutus Biopharma
30 PD-1/PD-L1免疫檢查點抑制劑, ImmunoBrain Checkpoint PD-1/PD-L1免疫檢查點抑制劑, Lundbeck
31 OT-2 OT 2 OT2
32 ND-021 ND 021 ND021 PD-L1抗體, Numab
33 MT-5050 MT 5050 MT5050
34 MEDI-1109 MEDI 1109 MEDI1109 TNFRSF4/PD-L1抗體, AstraZeneca
35 MCLA-145 CD274抗體, Merus MCLA145
36 MAX-10129 MAX 10129 MAX10129
37 KY-1043 KY1043
38 KY-1003 KY1003
39 KD-033 KD033
40 JS-003 CD274抗體, Shanghai JS003
41 JBI-426 JBI 426 JBI426
42 伊匹單抗/PD-L1, Avacta 伊匹單抗/PD-L1融合蛋白, Avacta
43 免疫腫瘤學療法, Olipass
44 免疫腫瘤學程式, Avacta
45 IMM-25 IMM 25 IMM25
46 IMC-2102 CD274抗體, ImmuneOncia-2 IMC 2102
47 IMC-2101 CD274/U1雙特異性抗體, ImmuneOncia IMC 2101
48 IMC-001 IMC 001 IMC001 STI-A 1015 STI-A-1015 STI-A1015 STIA1015
49 IKT-703 IKT 703 IKT703
50 IKT-201 IKT201
51 HLX-20 HLX20
52 GX-P2 GXP2
53 FPT-155 CD80-Fc, Five Prime FPT155
54 CS-4100 CS 4100 CS4100
55 CBT-502 CBT502 TQB-2450 TQB2450
56 癌症療法, VLP Therapeutics
57 BH-2941 抗PD-1/PD-L1 BsAb, Hanmi BH2941 PD-1/PD-L1抗體, Hanmi
58 貝伐單抗(bevacizumab)/PD-L1, Avacta 貝伐單抗/PD-L1融合蛋白, Avacta
59 AVA-004 抗PD-L1親和體, Avacta AVA004 PDL1-182 Fc, Avacta
60 AUPM-327 AUPM327 CA-327 CA327 PD-L1/TIM3雙重抑制劑, Aurigene PD-L1/TIM3雙重抑制劑, Curis TIM3/PD-L1雙重抑制劑, Aurigene TIM3/PD-L1雙重抑制劑, Curis
61 AP-105, AP Biosciences AP105, AP Biosciences
62 抗PD-L1 RRV, Tacogen 癌症選擇性RRV, Tocagen
63 抗PD-L1抗體, Tikcro
64 ALPN-202 ALPN202
65 ALN-PDL PD-L1 siRNA, Alnylam
66 三重調節劑, Fate Therapeutics
67 Toca-531 Toca 531
68 STI-B010X STIB010X
69 STI-A1010 STI-A100X STI-A1011 STI-A1012 STIA100X STIA1010 STIA1011 STIA1012
70 計劃性死亡配位體(PD-L1)抑制劑, Regeneron 計劃性死亡配位體(PD-L1)抑制劑, Sanofi
71 PD-L1×CTLA -4免疫檢查點抗體, IGM Biosciences
72 PD-L1 MAb, Kadmon Corporation PD-L1 MAb，Nantong Jinghua Pharmaceuticals
73 PD-L1 MAb, Abeome
74 PD-L1抑制劑, Bristol-Myers Squibb
75 PD-L1免疫檢查點抗體, IGM Biosciences
76 mAb B60-55 B60 55 B60-55 mAb B60 55
77 免疫檢查點抑制劑, TheraVectys
78 IMM-2504 IMM 2504 IMM2504
79 IMM-2503 IMM 2503 IMM2503
80 IMM-2502 IMM 2502 IMM2502
81 HTI-1316 HTI1316
82 癌症免疫療法, Immunotherapy Nantibody
83 雙特異性PD-L1/BCMA抗體, Immune Pharmaceuticals
84 BIPI 阿特珠單抗/IL-2免疫細胞介素，Shanghai Zhangjiang Biotech
85 BGB-108 BGB108 PD-L1 MAb PDL1 MAb
86 BBI-801 BBI801
87 抗癌劑, ArQule 抗癌劑, Beryllium
88 抗PD-L1抗體, CoStim 抗PD-L1抗體, Novartis
89 抗c-Met/PD-L1雙特異性抗體, Sorrento Therapeutics MET/PD-L1抗體, Sorrento
在一些實施例中，PD-1結合劑經糖基化且一或多個位點。如本文中所使用，「聚醣」為醣蛋白之糖聚合物(部分)組分。術語「聚醣」涵蓋游離聚醣，包括已自醣蛋白裂解或以其他方式釋放之聚糖。在一些實施例中，本發明提供一種組合物，其包含如本文中所描述之重鏈、輕鏈及/或抗體藥劑的一或多個糖型。在一些實施例中，聚醣與Fc區N-連接。在一些實施例中，PD-1結合劑在Asn297 (Kabat編號)處經糖基化。
術語「糖型」在本文中用於指醣蛋白之特定形式。亦即，當醣蛋白包括具有與不同聚醣或聚醣組連接之潛力的特定多肽時，則醣蛋白之各不同形式(亦即，當多肽與特定聚醣或聚醣組連接時)稱為「糖型」。在一些實施例中，所提供之組合物包含如本文中所描述之重鏈、輕鏈及/或抗體藥劑中之一或多者的複數個糖型。
在一些實施例中，PD-1結合劑以高親和力結合於人類及食蟹獼猴PD-1。在一些實施例中，PD-1結合劑之結合可藉由表面電漿共振(SPR)表徵。在一些實施例中，SPR量測可展現或確認PD-1傳訊劑與人類及/或食蟹獼猴PD-1 Fc融合物之結合。在一些實施例中，PD-1結合劑以快締合速率、慢解離速率及高親和力結合人類及食蟹獼猴PD-1。
在一些實施例中，PD-1結合劑在阻斷PD-1/PD-L1或PD-L2相互作用中之拮抗劑活性可使用基於流式細胞測量術之分析來確認或判定，該分析量測表現為小鼠IgG1 Fc融合蛋白之經標記PD-L1及PD-L2 (PD-L1 mFc或PD-L2 mFc)與表現PD-1之細胞的結合。在一些實施例中，相較於IgG4同型對照，PD-1結合劑可有效地阻斷PD-1/PD-L1及PD-1/PD-L2結合。
在一些實施例中，PD-1結合劑可有效地中和PD-1活性(例如，可抑制PD-1與PD-L1及PD-L2之結合)。在一些實施例中，PD-1結合劑之功能性拮抗劑活性可在混合淋巴球反應(mixed lymphocyte reaction；MLR)中確認或判定，該反應在添加PD-1結合劑後展現介白素(IL)-2產生增強。在一些實施例中，MLR分析可使用原代人類CD4+ T細胞作為反應子(responder)且使用人類樹突狀細胞作為刺激子(stimulator)來進行。
在一些實施例中，PD-1傳訊劑係由包含一或多個編碼結合PD-1之免疫球蛋白重鏈可變域多肽及/或結合PD-1之免疫球蛋白輕鏈可變域多肽之核酸序列的載體表現。在一些實施例中，PD-1傳訊劑係由包含一或多個編碼結合PD-1之免疫球蛋白重鏈多肽及/或結合PD-1之免疫球蛋白輕鏈多肽之核酸序列的載體表現。載體可為例如質體、游離基因體、黏質體、病毒載體(例如逆轉錄病毒或腺病毒)或噬菌體。適合之載體及載體製備之方法為此項技術中熟知的(參見例如Sambrook等人, Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 第3版, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)及Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1994))。
在一些實施例中，用於表現PD-1結合劑之載體進一步包含提供編碼序列在宿主細胞中之表現的表現控制序列，諸如啟動子、強化子、聚腺苷酸化信號、轉錄終止子、內部核糖體入口位點(IRES)及其類似者。例示性表現控制序列為此項技術中已知的且描述於例如Goeddel, Gene Expression Technology:  Methods in Enzymology, 第 185卷, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)。
可將包含編碼本發明之PD-1結合劑之核酸的載體引入至能夠表現由其編碼之多肽的宿主細胞，包括任何適合之原核或真核細胞中。宿主細胞之一些較佳品質包括容易且可靠生長、生長速率適當快速、具有充分表徵之表現系統及/或容易/高效轉型或轉染。
在一些實施例中，利用哺乳動物細胞。許多適合之哺乳動物宿主細胞為此項技術中已知的，且許多可自美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection；ATCC, Manassas, VA)獲得。適合之哺乳動物細胞的實例包括但不限於中國倉鼠卵巢細胞(CHO) (ATCC編號CCL61)、CHO DHFR細胞(Urlaub等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 4216-4220 (1980))、人胚腎(HEK) 293或293T細胞(ATCC編號CRL1573)及3T3細胞(ATCC編號CCL92)。其他適合之哺乳動物細胞株為猴COS-1 (ATCC編號CRL1650)及COS-7細胞株(ATCC編號CRL1651)以及CV-1細胞株(ATCC編號CCL70)。
其他例示性哺乳動物宿主細胞包括靈長類細胞株及嚙齒動物細胞株，包括轉型細胞株。正常的二倍體細胞、衍生自原代組織之活體外培養物的細胞品系以及原代外植體亦為適合的。其他適合之哺乳動物細胞株包括但不限於小鼠神經母細胞瘤N2A細胞、HeLa、小鼠L-929細胞及BHK或HaK倉鼠細胞株，其均可自ATCC獲得。用於選擇適合之哺乳動物宿主細胞的方法及用於細胞之轉型、培養、擴增、篩選及純化的方法為此項技術中已知的。
在一些實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞。舉例而言，哺乳動物細胞可為人類淋巴細胞株或淋巴衍生之細胞株，諸如前B淋巴球來源之細胞株。人類淋巴細胞株之實例包括但不限於RAMOS (CRL-1596)、Daudi (CCL-213)、EB-3 (CCL-85)、DT40 (CRL-2111)、18-81 (Jack等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 1581-1585 (1988))、Raji細胞(CCL-86)及其衍生物。
在一些實施例中，將PD-1結合劑調配為與醫藥學上可接受之載劑一起調配的含有一種單株抗體或單株抗體組合或其抗原結合部分的醫藥組合物。抗PD-1抗體藥劑可單獨或與其他藥物(例如作為佐劑)組合調配。舉例而言，PD-1結合劑可與其他藥劑組合投與用於治療或預防本文所揭示之疾病(例如癌症)。
治療組合物通常必須在製造及儲存之條件下無菌且穩定。組合物可調配為溶液、微乳液、分散液、脂質體或適合於較高藥物濃度之其他有序結構。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇，及其類似者)及其適合混合物之溶劑或分散介質。可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣、藉由在分散液之情況下維持所需粒度及藉由使用界面活性劑來維持適當流動性。在許多情況下，在組合物中包括等張劑，例如糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化鈉可為有用的。可注射組合物之延長吸收可藉由在組合物中包括延遲吸收之藥劑(例如,單硬脂酸鹽及明膠)來達成。
可藉由視需要將所需量之活性化合物與上文所列舉之一種成分或成分組合併入適當溶劑中，隨後滅菌微過濾來製備無菌可注射溶液。一般而言，藉由將活性化合物併入含有鹼性分散介質及來自上文所列舉之成分的所需其他成分的無菌媒劑中來製備分散液。為了易於使用無菌粉末製備無菌可注射溶液，此類製備方法可包括真空乾燥及冷凍乾燥(凍乾)，以自活性成分的預先無菌過濾之溶液產生該活性成分之粉末加任何額外之所要成分。
在一些實施例中，將治療組合物調配為無菌液體。在一些實施例中，組合物不含可見粒子。在一些實施例中，將組合物調配於緩衝液(例如檸檬酸鹽緩衝液)中。在一些實施例中，組合物包含PD-1結合劑及以下中之兩者或更多者：檸檬酸鹽、精胺酸、氯化鈉及聚山梨醇酯80。
在一些實施例中，將本發明之治療組合物(例如PD-1結合劑)無菌填充至透明玻璃小瓶中。在一些實施例中，此類玻璃小瓶用與氟聚合物層合之氯丁基彈性體塞子塞住且用鋁外封件密封。
在一些實施例中，PD-1傳訊劑儲存於2至8℃下。在一些實施例中，本發明之藥品不含防腐劑。 投與 PD-1 傳訊劑
如本文中所描述，所提供方法包含根據達成臨床益處之方案向患者、受試者或受試者群體投與PD-1傳訊劑。
所提供方法可提供各種益處(例如臨床益處)。在實施例中，本文所描述之方法達成臨床益處。在實施例中，臨床益處為穩定疾病(SD)。在實施例中，臨床益處為部分反應(PR)。在實施例中，臨床益處為完全反應(CR)。
在實施例中，對於向患者投與之各療法，組合療法達成臨床益處。舉例而言，組合療法可改善使用PD-1抑制劑(例如本文所描述之任何抗PD-1抗體)所獲得之臨床益處。
在實施例中，患者或受試者為動物。在實施例中，患者或受試者為人類。
在一些實施例中，該方案包含至少一次親本劑量之PD-1結合劑。在一些實施例中，該方案包含複數次親本劑量。
在一些實施例中，親本劑量為PD-1傳訊劑之量，其在約5至約5000 mg範圍內(例如，約5 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約2000 mg、約3000 mg、約4000 mg、約5000 mg或由前述值中之任兩者界定的範圍)。在一些實施例中，PD-1傳訊劑之親本劑量為500 mg或1000 mg。
在一些實施例中，劑量呈相對於體重之量。在一些實施例中，PD-1傳訊劑之親本劑量在約0.01毫克/公斤至100毫克/公斤動物或人類體重之範圍內；然而，低於或高於此例示性範圍之劑量在本發明之範疇內。每日非經腸劑量可為約0.01毫克/公斤至約50毫克/公斤總體重(例如約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約2 mg/kg、約3 mg/kg、約4 mg/kg、約5 mg/kg、約6 mg/kg、約7 mg/kg、約8 mg/kg、約9 mg/kg、約10 mg/kg、約12 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg或由前述值中之任兩者界定的範圍)。
在一些實施例中，遞送PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)之組合物係以約1、3或10 mg/kg之劑量向患者投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每兩週遞送約1、3或10 mg/kg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約1、3或10 mg/kg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每四週遞送約1、3或10 mg/kg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約1 mg/kg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約3 mg/kg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約10 mg/kg之劑量的方案投與。
在一些實施例中，遞送PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)之組合物係以約400 mg之劑量向患者投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每兩週遞送約400 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約400 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每四週遞送約400 mg之劑量的方案投與。
在一些實施例中，遞送PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)之組合物係以約500 mg之劑量向患者投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每兩週遞送約500 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約500 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每四週遞送約500 mg之劑量的方案投與。
在一些實施例中，遞送PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)之組合物係以約800 mg之劑量向患者投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約800 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每四週遞送約800 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每六週遞送約800 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每八週遞送約800 mg之劑量的方案投與。
在一些實施例中，遞送PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)之組合物係以約1,000 mg之劑量向患者投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約1,000 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每四週遞送約1,000 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每五週遞送約1,000 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每六週遞送約1,000 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每七週遞送約1,000 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每八週遞送約1,000 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每九週遞送約1,000 mg之劑量的方案投與。
在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週遞送約500 mg之劑量的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每六週遞送約1000 mg之劑量的方案投與。
在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據遞送第一劑量之PD-1結合劑持續前2-6個給藥週期(例如前3、4或5個給藥週期)，且隨後遞送第二劑量之PD-1結合劑持續後續給藥週期直至中斷療法(例如，由於疾病進展或不良作用或如由醫師所指導)為止的方案投與。在一些實施例中，第一組2-6個給藥週期(例如前3、4或5個給藥週期)之持續時間不同於後續給藥週期之持續時間。在實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週一次遞送第一劑量之PD-1結合劑持續前三個給藥週期，且隨後每六週或長於六週一次遞送第二劑量之PD-1結合劑持續剩餘給藥週期(例如，每六週一次遞送第二劑量之PD-1結合劑持續剩餘給藥週期)的方案投與。在實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週一次遞送第一劑量之PD-1結合劑持續前四個給藥週期，且隨後每六週或長於六週一次遞送第二劑量之PD-1結合劑持續剩餘給藥週期(例如，每六週一次遞送第二劑量之PD-1結合劑持續剩餘給藥週期)的方案投與。在實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週一次遞送第一劑量之PD-1結合劑持續前五個給藥週期，且隨後每六週或長於六週一次遞送第二劑量之PD-1結合劑持續剩餘給藥週期(例如，每六週一次遞送第二劑量之PD-1結合劑持續剩餘給藥週期)的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週一次遞送第一劑量之PD-1結合劑持續前2-6個給藥週期(例如前3、4或5個給藥週期)，且隨後每六週一次遞送第二劑量之PD-1結合劑或直至中斷療法(例如，由於疾病進展或不良作用或如由醫師所指導)為止的方案投與。在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據每三週一次遞送第一劑量之PD-1結合劑持續前3、4或5個給藥週期(例如前4個給藥週期)，且隨後每六週或長於六週一次遞送第二劑量之PD-1結合劑直至中斷療法(例如，由於疾病進展或不良作用或如由醫師所指導)為止的方案投與。在實施例中，該方法包含每六週一次遞送第二劑量之PD-1傳訊劑直至中斷療法為止。
在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)之第一及/或第二劑量為約100 mg至約2,000 mg (例如，約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg或約2000 mg)。在一些實施例中，第一劑量與第二劑量相同。在一些實施例中，第一劑量與第二劑量不同。在實施例中，第一劑量為約500 mg之PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)。在實施例中，第一劑量為約1000 mg之PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)。
在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據包含每3週投與約500 mg劑量持續四次劑量，隨後在約500 mg之第四次劑量之後每六週投與至少一次約1,000 mg劑量的方案投與。在一些實施例中，額外約1,000 mg劑量在約1000 mg第一劑量之後每六週進行投與，直至不達成其他臨床益處為止。在一些特定實施例中，PD-1傳訊劑(例如，抗PD1抗體)係根據包括Q3W 500 mg持續4個週期，隨後Q6W 1000 mg之給藥方案投與。
在一些實施例中，PD-1結合劑(例如抗PD-1抗體)係根據包含每3週投與400 mg劑量持續四次劑量，隨後在第四次400 mg劑量之後每六週投與至少一次800 mg劑量的方案投與。在一些實施例中，額外800 mg劑量在800 mg第一劑量之後每六週進行投與，直至不達成其他臨床益處為止。在一些特定實施例中，PD-1傳訊劑(例如，抗PD1抗體)係根據包括Q3W 400 mg持續4個週期，隨後Q6W 800 mg之給藥方案投與。
可藉由定期評定所治療患者來監測治療或預防功效。對於經數天或更長時間之重複投與，視病狀而定，可重複治療直至出現所期望之疾病症狀抑制。然而，其他劑量方案可適用且在本發明之範疇內。
可藉由單次彈丸注射(bolus)投與組合物、藉由多次彈丸注射投與組合物或藉由連續輸注投與組合物來遞送所需劑量。
在一些實施例中，向已展現對先前療法之反應的患者或受試者群體投與PD-1傳訊劑。在一些實施例中，患者或受試者群體已展現對先前癌症療法之反應。
在一些實施例中，向尚未展現對先前療法之反應的患者或受試者群體投與PD-1傳訊劑。在一些實施例中，患者或受試者群體尚未接受先前癌症療法或尚未展現對先前癌症療法之反應。
在實施例中，受試者對用抑制PD-1之藥劑治療具有抗性。在實施例中，受試者難以用抑制PD-1之藥劑治療。在實施例中，本文所描述之方法使受試者對用抑制PD-1之藥劑治療敏感。 組合療法
本文提供包含投與第一治療劑(例如免疫檢查點抑制劑)與一或多種額外治療劑之組合的方法。
在實施例中，如本文中所描述之抗PD-1療法係與一或多種額外療法(例如，如本文中所描述之療法)組合投與。亦即，受試者用抗PD-1療法治療，且向受試者投與一或多種額外療法以使得該受試者接受各療法。
在實施例中，額外療法為手術。在實施例中，額外療法為放射療法。在實施例中，額外療法為化學療法。在實施例中，額外療法為免疫療法。
在一些實施例中，PD-1傳訊劑係與額外治療劑，諸如另一抗體藥劑(例如結合檢查點抑制劑及/或化學治療劑之抗體藥劑)同時或依序投與。在一些實施例中，PD-1傳訊劑係在投與額外治療劑之前、期間或之後投與。在一些實施例中，PD-1傳訊劑係在投與化學治療劑之前、期間或之後投與。
抗PD-1抗體藥劑可單獨或與其他藥物(例如作為佐劑)組合投與。舉例而言，PD-1結合劑可與其他藥劑組合投與用於治療或預防本文所揭示之疾病(例如癌症)。就此而言，PD-1結合劑可與至少一種其他抗癌劑組合使用，包括例如此項技術中已知的任何化學治療劑、電離輻射、小分子抗癌劑、癌症疫苗、生物療法(例如，其他單株抗體、殺癌病毒、基因療法及授受性T細胞轉移)及/或手術。
同時或依序投與PD-1傳訊劑與額外治療劑在本文中稱為「組合療法」。在組合療法中，PD-1傳訊劑可在向有需要之受試者投與額外治療劑之前(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之前)、與其同時或在其之後(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之後)進行投與。在一些實施例中，PD-1傳訊劑與額外治療劑係相隔1分鐘、相隔10分鐘、相隔30分鐘、相隔短於1小時、相隔1小時至2小時、相隔2小時至3小時、相隔3小時至4小時、相隔4小時至5小時、相隔5小時至6小時、相隔6小時至7小時、相隔7小時至8小時、相隔8小時至9小時、相隔9小時至10小時、相隔10小時至11小時、相隔11小時至12小時、相隔不超過24小時或相隔不超過48小時進行投與。 檢查點抑制劑
在實施例中，額外療法為免疫療法。在實施例中，免疫療法包含投與一或多種其他免疫檢查點抑制劑(例如，投與一種、兩種、三種、四種或更多種其他免疫檢查點抑制劑)。
用於抑制之例示性免疫檢查點目標包括：PD-1 (例如，經由抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2療法抑制)、CTLA-4、TIM-3、TIGIT、LAG (例如LAG-3)、CEACAM (例如CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、VISTA、BTLA、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3 (CD276)、B7-H4 (VTCN1)、HVEM (TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I類、MHC II類、GALS、腺苷、TGFR (例如TGFR β)、B7-H1、B7-H4 (VTCN1)、OX-40、CD137、CD40、IDO及CSF-1R。因此，抑制此等分子中之任一者的藥劑可與本文所描述之抗PD-1療法組合使用。
在實施例中，免疫檢查點抑制劑為CTLA-4抑制劑(例如抗體、抗體結合物或其抗原結合片段)。在實施例中，CTLA-4抑制劑為小分子、核酸、多肽(例如抗體)、碳水化合物、脂質、金屬或毒素。在實施例中，CTLA-4抑制劑為小分子。在實施例中，CTLA-4抑制劑為CTLA-4結合劑。在實施例中，CTLA-4抑制劑為抗體、抗體結合物或其抗原結合片段。
在實施例中，CTLA-4抑制劑為本文所描述之CTLA-4抗體。在實施例中，CTLA-4抑制劑為伊匹單抗(Yervoy)、AGEN1884或曲美單抗(tremelimumab)。
在實施例中，檢查點抑制劑為小分子、核酸、多肽(例如抗體)、碳水化合物、脂質、金屬、毒素或結合劑。在實施例中，檢查點抑制劑為抗體、抗體結合物或其抗原結合片段。
在實施例中，免疫檢查點抑制劑為抑制TIM-3、CTLA-4、LAG-3、TIGIT、IDO或CSF1R之藥劑。
對於具有生育潛能之女性患者，較佳地，該患者在投與第一劑量之抗PD-1結合劑當天之前72小時內的血清驗孕測試呈陰性。亦較佳地，具有生育潛能之女性患者及男性患者同意與其伴侶使用2種恰當的避孕方法。在一些實施例中，患者同意自篩檢就診開始直至研究療法最後一次給藥之後150天時使用2種避孕方法。 V.  組合物
在一些態樣中，本文亦提供組合物(例如醫藥組合物)，其包含本文所描述之抗CTLA4結合蛋白中之任一者。在一些態樣中，本文亦提供組合物(例如醫藥組合物)，其包含本文所描述之PD-1傳訊劑中之任一者。在一些實施例中，本文所描述之抗CTLA4結合蛋白及本文所描述之PD-1傳訊劑經調配於相同組合物中。
藉由將具有所需純度之活性成分與視情況選用之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑混合來製備用於儲存之治療性調配物(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, Lippincott Williams & Wiklins出版, Gennaro編, Philadelphia, Pa. 2000)。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所採用之劑量及濃度下對接受者無毒性，且包括緩衝劑、抗氧化劑(包括抗壞血酸、甲硫胺酸、維生素E、偏亞硫酸氫鈉)；防腐劑、等張劑、穩定劑、金屬錯合物(例如Zn-蛋白質複合物)；螯合劑，諸如EDTA及/或非離子界面活性劑。
緩衝液可用於將pH控制在最佳化治療有效性之範圍內，尤其在穩定性為pH依賴性之情況下。緩衝液可以範圍介於約20 mM至約250 mM之濃度存在。適用於本發明之緩衝劑包括有機酸及無機酸以及其鹽。舉例而言，檸檬酸鹽、磷酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、乙酸鹽。另外，緩衝液可包含組胺酸及三甲胺鹽，諸如Tris。
可添加防腐劑以防止微生物生長，且通常以約0.2%至1.0% (w/v)之範圍存在。適用於本發明之防腐劑包括十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；苯甲烴銨鹵化物(例如氯化物、溴化物、碘化物)、苄索氯銨(benzethonium chloride)；硫柳汞、苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇、3-戊醇及間甲酚。
可存在張力劑(有時稱為「穩定劑」)以調節或維持液體在組合物中之張力。當與大帶電生物分子(諸如蛋白質及抗體)一起使用時，其通常稱為「穩定劑」，因為其可與胺基酸側鏈之帶電基團相互作用，藉此減小分子間及分子內相互作用之可能性。考慮其他成分之相對量，張力劑可以約0.1重量%至約25重量%之間或約1重量%至約5重量%之間的任何量存在。在一些實施例中，張力劑包括多羥基糖醇、三元醇或高級糖醇，諸如甘油、赤藻糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇及甘露糖醇。
額外賦形劑包括可充當以下中之一或多種之試劑：(1)增積劑、(2)溶解增強劑、(3)穩定劑及(4)防止變性或黏著於容器壁之試劑。此類賦形劑包括：多羥基糖醇(上文所列舉)；胺基酸，諸如丙胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸、離胺酸、鳥胺酸、白胺酸、2-苯丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等；有機糖或糖醇，諸如蔗糖、乳糖、乳糖醇、海藻糖、水蘇糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、核糖醇、肌肉肌糖(myoinisitose)、肌肉肌醇(myoinisitol)、半乳糖、半乳糖醇、甘油、環醇(例如肌醇)、聚乙二醇；含硫還原劑，諸如脲、麩胱甘肽、硫辛酸、硫代乙酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油及硫代硫酸鈉；低分子量蛋白質，諸如人類血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或其他免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；單醣(例如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；雙醣(例如乳糖、麥芽糖、蔗糖)；三醣，諸如棉子糖；及多醣，諸如糊精或聚葡萄糖。
可存在非離子界面活性劑或清潔劑(亦稱為「潤濕劑」)以幫助溶解治療劑以及保護治療性蛋白質避免攪拌誘導之聚集，其亦准許調配物暴露於剪切表面應力而不引起活性治療性蛋白質或抗體之變性。非離子界面活性劑係以約0.05 mg/ml至約1.0 mg/ml或約0.07 mg/ml至約0.2 mg/ml之範圍存在。在一些實施例中，非離子界面活性劑係以約0.001%至約0.1% w/v或約0.01%至約0.1% w/v或約0.01%至約0.025% w/v之範圍存在。
適合的非離子界面活性劑包括聚山梨醇酯(20、40、60、65、80等)、聚氧化物(polyoxamer) (184、188等)、PLURONIC®多元醇、TRITON®、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單醚(TWEEN®-20、TWEEN®-80等)、聚桂醇400、聚乙二醇40硬脂酸酯、聚氧化乙烯氫化蓖麻油10、聚氧化乙烯氫化蓖麻油50及聚氧化乙烯氫化蓖麻油60、甘油單硬脂酸酯、蔗糖脂肪酸酯、甲基纖維素及羧甲基纖維素。可使用之陰離子清潔劑包括月桂基硫酸鈉、二辛基磺基丁二酸鈉及二辛基磺酸鈉。陽離子清潔劑包括苯紮氯銨(benzalkonium chloride)或苄索氯銨。
為了使調配物用於活體內投與，其必須為無菌的。可藉由經由無菌過濾膜過濾而使調配物為無菌的。本文中之治療性組合物通常置放於具有無菌存取口之容器中，例如具有可藉由皮下注射針刺穿之塞子之靜脈內溶液袋或小瓶。
投藥途徑係根據已知及可接受之方法，諸如藉由以適合的方式在長時段內之單次或多次彈丸注射或輸注，例如藉由皮下、靜脈內、腹膜內、肌肉內、動脈內、病灶內或關節內途徑之注射或輸注，局部投與，吸入或藉由持續釋放或延長釋放手段。
本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)可單獨或與其他治療劑組合使用，諸如在本文所描述之方法中。術語「與…組合」涵蓋包括於相同或單獨調配物中之兩種或更多種治療劑(例如，抗CTLA4結合蛋白及治療劑)。在一些實施例中，「與…組合」係指「同時」投與，在此情況下，投與本發明之抗CTLA4結合蛋白與投與一或多種額外治療劑同時進行(例如，在相同時間或在投與抗CTLA4結合蛋白與投與一或多種額外治療劑之間的間隔在一小時內)。在一些實施例中，「與…組合」係指依序投與，在此情況下，投與本發明之可抗CTLA4結合蛋白在投與一或多種額外治療劑之前及/或之後進行(例如，投與抗CTLA4結合蛋白與投與一或多種額外治療劑之間的間隔大於一小時)。本文中涵蓋之藥劑包括但不限於細胞毒性劑、細胞介素、靶向免疫檢查點分子之藥劑、靶向免疫刺激分子之藥劑，或生長抑制劑。
本文中之調配物亦可含有超過一種為所治療之特定適應症所必需的活性化合物，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之互補活性的活性化合物。替代地或另外地，組合物可包含細胞毒性劑、細胞介素、靶向免疫檢查點分子或刺激分子之藥劑，或生長抑制劑。此類分子適當地以對預期目的有效之量組合存在。 VI.  製品或套組
在另一態樣中，提供一種製品或套組，其包含本文所描述之抗CTLA4結合蛋白(例如，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑)。製品或套組可進一步包含結合蛋白在本發明之方法中之使用說明書。因此，在某些實施例中，製品或套組包含在用於治療或預防個體之病症(例如，癌症)之方法中使用抗CTLA4結合蛋白(例如，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如，PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑)的說明書，該方法包含向該個體投與有效量之抗CTLA4結合蛋白(例如，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)及PD-1傳訊劑(例如，PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑)。在某些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體患有選自由以下組成之群的疾病：白血病、淋巴瘤、頭頸癌、大腸直腸癌、前列腺癌、胰臟癌、黑色素瘤、乳癌、神經母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、子宮頸癌、肝癌、腎癌、皮膚癌或睪丸癌。
製品或套組可進一步包含容器。適合容器包括例如瓶子、小瓶(例如雙腔室小瓶)、注射器(諸如單腔室注射器或雙腔室注射器)及試管。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器容納調配物。在一些實施例中，調配物為凍乾調配物。
製品或套組可進一步包含位於容器上或與容器締合之標籤或藥品說明書，其可指示復原及/或使用調配物之指導。標籤或藥品說明書可進一步指示調配物適用於或意欲用於皮下、靜脈內或其他投與模式，以治療或預防個體之病症(例如癌症)。容納調配物之容器可為單次使用型小瓶或多次使用型小瓶，其允許重複投與經復原之調配物。製品或套組可進一步包含第二容器，其包含適合稀釋劑。製品或套組可進一步包括自商業、治療性及使用者觀點來看所需之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針、注射器及具有使用說明之藥品說明書。
在一特定實施例中，本發明提供用於單次給藥型投與單元之套組。此類套組包含治療性抗體之水性調配物之容器，包括單腔室或多腔室預填充注射器。例示性預填充注射器可獲自Vetter GmbH, Ravensburg, Germany。
本文中之製品或套組視情況進一步包含含有第二藥劑之容器，其中抗CTLA4結合蛋白(例如，抗CTLA4抗體或其抗原結合片段)為第一藥劑，且該製品或套組進一步包含標籤或包裝說明書上的用有效量的第二藥劑(例如，PD-1傳訊劑(例如，PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑))治療受試者的說明。
在另一實施例中，本文提供一種製品或套組，其包含用於在自動注射器裝置中投與之本文所描述之調配物。自動注射器可描述為注射裝置，其在啟動後將在無來自患者或投與者之額外必需操作的情況下遞送其內含物。其在遞送速率必須恆定且遞送時間需要持續一段時間時尤其適用於治療性調配物之自行用藥。 實例
將參考以下實例更充分地理解本發明。然而，其不應解釋為限制本發明之範疇。應理解，本文所描述之實例及實施例僅出於說明之目的，且根據其之各種修改或變化將由熟習此項技術者提出且包括在本申請案之精神及範圍內以及所附申請專利範圍之範疇內。 實例1：抗CTLA4抗體與抗PD-1抗體之組合
本發明實例證實抗CTLA-4 (例如抗體B)及PD-1傳訊劑在攜帶晚期MC38腫瘤之B-hCTLA4小鼠中的組合療法。
將MC38鼠類結腸癌細胞在37℃下在具有5% CO2之氛圍中，在無菌條件下維持在含濕氣培育箱中之補充有10%胎牛血清(FBS)、0.1 mM非必需胺基酸、1 mM丙酮酸鈉及10 mM HEPES之杜爾貝科氏改良伊格爾氏培養基(DMEM)中。在達至50%至70%融合時，使細胞在活體內植入之前傳代總共三代。
將雌性B-hCTLA4小鼠(13至14週齡)在右側腹中皮下注射有含MC38腫瘤細胞(0.5×10 6)之0.1 mL無血清培養基中以用於腫瘤發展。當平均腫瘤大小達至約150 mm 3時，將攜帶腫瘤之動物隨機分為研究組。各組為同型對照(G1: 10 mg/kg)、抗體B單藥療法(G2:0.3 mg/kg、G3:1.0 mg/kg、G7:0.1 mg/kg、G8:0.03 mg/kg、G9:0.01 mg/kg)、抗PD-1單藥療法(G4:10 mg/kg)、與抗PD-1 (10 mg/kg)及抗體B之組合療法(G5：0.3 mg/kg、G6：1.0 mg/kg、G10：0.1 mg/kg、G11：0.03 mg/kg、G12：0.01 mg/kg)。以單一IV注射形式向動物給與同型對照及抗體B，而藉由IP注射Q3D三次給與抗PD-1劑量。
量測腫瘤體積(TV)及體重(BW)，且在整個研究中一週記錄2至3次。除給藥期以外，監測動物直至研究終點且在各動物達至TV 2000 mm3或任何其他人道終點時使個別動物安樂死。記錄各動物之結束日期以用於存活分析。
在用抗CTLA4抗體B及抗PD1抗體進行組合治療之後量測免疫活化。
SEQ ID NO    SEQUENCE
CDR‐L1 Antibody 1    Gln Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
1      
CDR‐L2 Antibody 1    Leu Val Ser
2      
CDR‐L3 Antibody 1    Val Gln Gly Thr His Asp Pro
3      
CDR‐H1 Antibody 1    Tyr His Thr Ile Thr Ser Gly Tyr
4      
CDR‐H2 Antibody 1    Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr
5      
CDR‐H3 Antibody 1    Ala Ser Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala
6      
 CDR‐L1 (Kabat) Antibody 1    Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
7      
 CDR‐L2  (Kabat) Antibody 1    Leu Val Ser Lys Leu Gly Ser
8      
CDR‐L3 (Kabat) Antibody 1    Val Gln Gly Thr His Asp Pro Trp Thr
9      
CDR‐H1 (Kabat) Antibody 1    Ser Gly Tyr Asp Trp Thr
10      
CDR‐H2 (Kabat) Antibody 1    Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
11      
CDR‐H3(Kabat) Antibody 1    Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala
12      
CDR‐L1 Antibody 2    Ser Ala Leu Ser Tyr Met
13      
CDR‐L2 Antibody 2    Gly Thr Ser
14      
CDR‐L3 Antibody 2    His His Trp Ser Asn Thr Gln
15      
CDR‐H1 Antibody 2    Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Phe
16      
CDR‐H2 Antibody 2    Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp
17      
CDR‐H3 Antibody 2    Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr
18      
CDR‐L1 (Kabat) Antibody 2    Ser Ala Asn Ser Ala Leu Ser Tyr Met Tyr
19      
CDR‐L2 (Kabat) Antibody 2    Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser
20      
CDR‐L3 (Kabat) Antibody 2    His His Trp Ser Asn Thr Gln Trp Thr
21      
CDR‐H1 (Kabat) Antibody 2    Asn Tyr Phe Met Asn
22      
CDR‐H2 (Kabat) Antibody 2    Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe Lys
23    Lys
CDR‐H3 (Kabat) Antibody 2    Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr
24    (Antibody 1)
VL domain      
25    Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Gly Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly Thr His Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg (Antibody 1)
VH domain      
26    Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Tyr His Thr Ile Thr Ser Gly  Tyr Asp Trp Thr Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Gly Met Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe     Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
Light chain (Antibody 1)    Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
27    Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Gly Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly Thr His Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys (Antibody 1)
Heavy chain      
28    Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Tyr His Thr Ile Thr Ser Gly  Tyr Asp Trp Thr Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Gly Met Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe     Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu  Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp       Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys (Antibody 1‐S239D, I332E)
Heavy chain      
29    Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Tyr His Thr Ile Thr Ser Gly  Tyr Asp Trp Thr Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Gly Met Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe     Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys (Antibody 2)
VL domain    Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 
30    Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Asn Ser Ala Leu Ser Tyr Met  Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Val His  Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser  Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu  Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Trp Ser Asn Thr Gln Trp Thr   Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (Antibody B)
VH domain    Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
31    Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe Lys Lys Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (Antibody B)
Light chain    Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
32    Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Asn Ser Ala Leu Ser Tyr Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Val His Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Trp Ser Asn Thr Gln Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys (Antibody 2)
Heavy chain      
33    Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe Lys Lys Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys (Antibody 2‐S239D, I332E)
Heavy chain      
34    Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe Lys Lys Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr   Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu         Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser  Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro  Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
Heavy  Chain Constant Domain      
35    Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys   Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro     Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
Heavy Chain Constant Domain S239    Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
36    Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys  Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys\ I332E
Heavy Chain Constant Domain      
37    Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys   Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys S239D, I332E
Heavy Chain Constant Domain      
38    Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys  Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
Light chain Constant Domain    Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
39    Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
VL domain    Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
40    Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Asn Ser Ala Leu Ser Tyr Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Val His Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Trp Ser Asn Thr Gln Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg (Antibody 2)
VH domain    Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
41    Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe Lys Lys Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala (Antibody 2) 

          <![CDATA[<110> 美商艾希利歐發展股份有限公司(XILIO DEVELOPMENT, INC.)]]>
          <![CDATA[<120> 用於治療癌症之CTLA4及PD1/PDL1抗體之組合]]>
          <![CDATA[<130> XTX_CTLA4_04WO1]]>
          <![CDATA[<140> TW 111107426]]>
          <![CDATA[<141> 2022-03-01]]>
          <![CDATA[<150> US 63/155,180]]>
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          <![CDATA[<160> 41    ]]>
          <![CDATA[<170> PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
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          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-L1抗體1」]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          Gln Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 
          1               5                   10      
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          <![CDATA[<400> 2]]>
          Leu Val Ser 
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          Val Gln Gly Thr His Asp Pro 
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          Tyr His Thr Ile Thr Ser Gly Tyr 
          1               5               
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          <![CDATA[<211> 7]]>
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          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-H2抗體1」]]>
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr 
          1               5           
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          Ala Ser Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala 
          1               5                   10              
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          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
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          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-L1 (Kabat)抗體1」]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
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          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-L2 (Kabat)抗體1」]]>
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          Leu Val Ser Lys Leu Gly Ser 
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          <![CDATA[<210> 9]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
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          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-L3 (Kabat)抗體1」]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Val Gln Gly Thr His Asp Pro Trp Thr 
          1               5                   
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          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-H1 (Kabat)抗體1」]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Ser Gly Tyr Asp Trp Thr 
          1               5       
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          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-H2 (Kabat)抗體1」]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
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          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-H3 (Kabat)抗體1」]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
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          <![CDATA[<400> 13]]>
          Ser Ala Leu Ser Tyr Met 
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          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-L2抗體2」]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Gly Thr Ser 
          1           
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-L3抗體2」]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          His His Trp Ser Asn Thr Gln 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-H1抗體2」]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Phe 
          1               5               
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223]]>> /註釋=「CDR-H2抗體2」]]&gt;
          <br/>
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;400&gt; 17]]&gt;
          <br/><![CDATA[Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp 
          1               5                   
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          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr 
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 19]]>
          Ser Ala Asn Ser Ala Leu Ser Tyr Met Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<22]]>0>]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;221&gt; source]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;223&gt; /註釋=「CDR-L1 (Kabat)抗體2」]]&gt;
          <br/>
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;400&gt; 20]]&gt;
          <br/><![CDATA[Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser 
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          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-L1 (Kabat)抗體2」]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          His His Trp Ser Asn Thr Gln Trp Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-H1 (Kabat)抗體2」]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Asn Tyr Phe Met Asn 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-H2 (Kabat)抗體2」]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Lys 
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「CDR-H3 (Kabat)抗體2」]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 113]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「VL域(抗體1)」]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Gly Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr His Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg 
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 121]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「VH域(抗體1)」]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Tyr His Thr Ile Thr Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Tyr Asp Trp Thr Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Gly Met Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 219]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「輕鏈(抗體1)」]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Gly Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr His Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 450]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「重鏈(抗體1)」]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Tyr His Thr Ile Thr Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Tyr Asp Trp Thr Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Gly Met Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly Lys 
              450 
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 450]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「重鏈(抗體1-S239D、I332E)」]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Tyr His Thr Ile Thr Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Tyr Asp Trp Thr Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Gly Met Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Met Met Val Pro His Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly Lys 
              450 
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 106]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「抗體B可變輕鏈」]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Asn Ser Ala Leu Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Val His 
                  35                  40                  45              
          Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Trp Ser Asn Thr Gln Trp Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 119]]>
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          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「抗體B可變重鏈」]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Lys Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210> 32]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「輕鏈(抗體2)」]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Asn Ser Ala Leu Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Val His 
                  35                  40                  45              
          Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Trp Ser Asn Thr Gln Trp Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 
                      180                 185                 190         
          Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Gly Glu Cys 
              210             
          <![CDATA[<210> 33]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「重鏈(抗體2)」]]>
          <![CDATA[<400> 33]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Lys Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                  115                 120                 125             
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
              130                 135                 140                 
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                  195                 200                 205             
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  275                 280                 285             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 
                          325                 330                 335     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 
                  355                 360                 365             
          Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              370                 375                 380                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          405                 410                 415     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      420                 425                 430         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  435                 440                 445             
          Lys 
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 449]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
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          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「重鏈(抗體2-S239D、I332E)」]]>
          <![CDATA[<400> 34]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Lys Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                  115                 120                 125             
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
              130                 135                 140                 
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                  195                 200                 205             
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  275                 280                 285             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys 
                          325                 330                 335     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 
                  355                 360                 365             
          Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              370                 375                 380                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          405                 410                 415     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      420                 425                 430         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  435                 440                 445             
          Lys 
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 329]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「重鏈恆定域」]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 
                  35                  40                  45              
          Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys 
                          85                  90                  95      
          Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 
              130                 135                 140                 
          Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 
                          165                 170                 175     
          Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 
              210                 215                 220                 
          Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 
                          245                 250                 255     
          Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 
                      260                 265                 270         
          Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 
                  275                 280                 285             
          Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 
              290                 295                 300                 
          Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 329]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「重鏈恆定域S239D」]]>
          <![CDATA[<400> 36]]>
          Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 
                  35                  40                  45              
          Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys 
                          85                  90                  95      
          Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 
              130                 135                 140                 
          Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 
                          165                 170                 175     
          Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 
              210                 215                 220                 
          Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 
                          245                 250                 255     
          Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 
                      260                 265                 270         
          Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 
                  275                 280                 285             
          Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 
              290                 295                 300                 
          Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 329]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「重鏈恆定域I332E」]]>
          <![CDATA[<400> 37]]>
          Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 
                  35                  40                  45              
          Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys 
                          85                  90                  95      
          Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 
              130                 135                 140                 
          Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 
                          165                 170                 175     
          Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 
              210                 215                 220                 
          Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 
                          245                 250                 255     
          Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 
                      260                 265                 270         
          Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 
                  275                 280                 285             
          Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 
              290                 295                 300                 
          Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<211> 329]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「重鏈恆定域S239D、I332E」]]>
          <![CDATA[<400> 38]]>
          Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 
                  35                  40                  45              
          Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys 
                          85                  90                  95      
          Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 
              130                 135                 140                 
          Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 
                          165                 170                 175     
          Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 
              210                 215                 220                 
          Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 
                          245                 250                 255     
          Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 
                      260                 265                 270         
          Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 
                  275                 280                 285             
          Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 
              290                 295                 300                 
          Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 
          <![CDATA[<210> 39]]>
          <![CDATA[<211> 106]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「輕鏈恆定域」]]>
          <![CDATA[<400> 39]]>
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
          1               5                   10                  15      
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
                      20                  25                  30          
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
              50                  55                  60                  
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 107]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「VL域(抗體2)」]]>
          <![CDATA[<400> 40]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Asn Ser Ala Leu Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Val His 
                  35                  40                  45              
          Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Trp Ser Asn Thr Gln Trp Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 120]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「人工序列之描述：合成多肽」]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> source]]>
          <![CDATA[<223> /註釋=「VH域(抗體2)」]]>
          <![CDATA[<400> 41]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Val Asp Pro Glu Gln Gly Arg Ala Asp Tyr Ala Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Lys Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Ala Met Asp Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 
                  115                 120
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037

Claims (31)

  1. 一種治療受試者之癌症的方法，該方法包含向該受試者投與： (a) 抗CTLA4抗體，其包含：包含NYFMN之重鏈可變區(vH) CDR1、包含RVDPEQGRADYAEKFKK之vH CDR2、包含RAMDNYGFAY之vH CDR3；及 包含SANSALSYMY之輕鏈可變區(vL) CDR1、包含GTSNLAS之vL CDR2、包含HHWSNTQWT之vL CDR3；及 (b) PD-1或PD-L1抑制劑。
  2. 如請求項1之方法，其中該抗CTLA4抗體係以約0.1至20mg/kg之間的有效劑量投與。
  3. 如請求項2之方法，其中該抗CTLA4抗體之有效劑量係選自0.3 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg及20 mg/kg。
  4. 如請求項1之方法，其中該抗CTLA4抗體包含含有胺基酸取代S239D或I332E或兩者之重鏈恆定域，其中該等胺基酸殘基係根據如Kabat中之EU索引編號。
  5. 如請求項1之方法，其中該抗CTLA4抗體包含與SEQ ID NO: 31至少90%一致之vH。
  6. 如請求項1之方法，其中該抗CTLA4抗體包含與SEQ ID NO: 30至少90%一致之vL。
  7. 如前述請求項之方法，其中該抗體經去岩藻糖基化或為岩藻糖缺乏的。
  8. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗CTLA4抗體或其抗原結合片段與藥劑結合。
  9. 如請求項8之方法，其中該藥劑為微管蛋白聚合抑制劑、DNA損傷劑或DNA合成抑制劑。
  10. 如請求項8之方法，其中該藥劑為類美登素(maytansinoid)、奧瑞他汀(auristatin)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚體、卡奇黴素(calicheamicin)、倍癌黴素(duocarmycin)、引多-萊諾苯并二氮呯(indo-linobenzodiazepine)二聚體或依昔替康(exatecan)衍生物Dxd。
  11. 如前述請求項中任一項之方法，其中該PD-1或PD-L1抑制劑為抗體。
  12. 如請求項11之方法，其中該PD-1/PD-L1抑制劑為PD-1抗體。
  13. 如請求項12之方法，其中該抗PD-1抗體係選自納武單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)及西米普利單抗(cemiplimab)。
  14. 如請求項12或13之方法，其中該PD-1抗體之有效劑量在1至10 mg/kg之間。
  15. 如請求項13之方法，其中該PD-1抗體之有效劑量為10 mg/kg。
  16. 如請求項12或13之方法，其中該抗PD-1抗體係以4至1000 mg之有效劑量投與。
  17. 如請求項16之方法，其中該抗PD-1抗體係以200 mg之有效劑量投與。
  18. 如前述請求項中任一項之方法，其中該抗PD-1抗體係每週、每隔一週、每3週、每4週、每5週、每6週或每月投與。
  19. 如前述請求項中任一項之方法，其中每3週投與該抗PD-1抗體。
  20. 如請求項1之方法，其中該PD-1/PD-L1抑制劑為PD-L1抗體。
  21. 如請求項20之方法，其中該抗PD-L1抗體係選自阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)。
  22. 如請求項21之方法，其中該抗PD-L1抗體係以200至2000 mg之間的有效劑量投與。
  23. 如請求項20至22中任一項之方法，其中該抗PD-L1抗體係每週、每隔一週、每3週、每4週、每6週或每月投與。
  24. 如請求項1之方法，其中該抗-PD-1及抗CTLA4抗體經調配用於靜脈內投與。
  25. 如請求項1之方法，其中該抗-PD-1及抗CTLA4抗體一起調配於同一組合物中。
  26. 如請求項1之方法，其中該抗PD-1及抗CTLA4抗體經單獨地調配。
  27. 如請求項1之方法，其中該抗PD-1抗體與該抗CTLA4抗體同時投與。
  28. 如前述請求項中任一項之方法，其中該癌症為白血病、淋巴瘤、頭頸癌、大腸直腸癌、前列腺癌、胰臟癌、黑色素瘤、骨髓瘤、乳癌、神經母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、子宮頸癌、肝癌、腎癌、皮膚癌、睪丸癌或皮膚鱗狀細胞癌(CSCC)。
  29. 如請求項28之方法，其中該癌症為肺癌。
  30. 如請求項29之方法，其中該肺癌為小細胞肺癌(SCLC)或非小細胞肺癌(NSCLC)。
  31. 如請求項28之方法，其中該癌症為黑色素瘤。
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