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TW202241962A - 分裂抗體及使用方法 - Google Patents

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TW202241962A
TW202241962A TW111101051A TW111101051A TW202241962A TW 202241962 A TW202241962 A TW 202241962A TW 111101051 A TW111101051 A TW 111101051A TW 111101051 A TW111101051 A TW 111101051A TW 202241962 A TW202241962 A TW 202241962A
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antibody
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acid sequence
antigen
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TW111101051A
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克里斯汀 克萊
亞歷山大 哈斯
俊 沙賓 因霍夫
蘇菲亞 佛洛斯特
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瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
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Abstract

本發明係關於結合於標靶細胞上之抗原且使效應部分靶向該等細胞的抗體，及使用該等抗體之方法。

Description

分裂抗體及使用方法
本發明係關於雙特異性抗體之新穎型式。在某些實施例中，本發明亦係關於具有此新穎型式之抗體，其結合於標靶細胞上之抗原且使放射性核種靶向該等細胞，及使用該等抗體之方法。
在各種臨床配置中通常需要選擇性破壞個別細胞或特定細胞類型。舉例而言，癌症療法之主要目標為特定地破壞腫瘤細胞，同時使健康細胞及組織完整且不受損害。
就此而言，設計出雙特異性抗體，其藉由一個「臂」結合於標靶細胞上之表面抗原，且藉由第二「臂」結合於諸如藥物之效應部分。雖然已研發出多種雙特異性型式，但研發雙特異性抗體之任務仍係重要的。
在預靶向放射免疫療法(PRIT)中，利用一方面對腫瘤相關抗原具有親和力且另一方面對放射性標記化合物具有親和力的抗體構築體。在第一步驟中，投與抗體且將其定位至腫瘤。隨後，投與放射性標記化合物。因為放射性標記化合物較小，所以其可迅速遞送至腫瘤，且未結合之化合物可快速清除，此減少腫瘤外之輻射暴露(Goldenberg等人, Theranostics 2012, 2(5), 523-540)。亦可使用類似程序進行成像。預靶向可利用使用抗生物素蛋白-生物素之雙特異性抗體或系統，但後者具有抗生物素蛋白/鏈黴抗生物素蛋白具有免疫原性之缺點。
預靶向放射免疫療法或成像之方法通常利用清除劑或阻斷劑，該清除劑或阻斷劑係在投與抗體之步驟與投與放射性標記化合物之步驟之間投與。其目的在於自血液清除抗體及/或阻斷針對放射性標記化合物之循環抗體的結合位點(參見例如Karacay等人, Bioconj. Chem., 13(5), 1054-1070 (2002))。使用清除劑或阻斷劑允許投與足夠水準之放射性以進行有效治療，同時限制不良毒性，但必須謹慎選擇時機及劑量，且存在清除劑有可能引入諸如免疫反應之不良作用的風險。因此，清除階段之使用為預靶向方法中之複雜態樣。
本發明提供雙特異性抗體之新穎型式及其使用方法，其中針對效應部分之VH域及VL域分為兩部分。
特定言之，本發明係關於抗體集合，其包含： i) 第一抗體，其包含： a) 抗原結合部分，其與表現於標靶細胞表面上之抗原結合； b) 多肽，其包含針對效應部分之抗原結合位點的抗體重鏈可變域(VH)或由其組成；及 c) 包含兩個子單元之Fc域， 其中(b)中之多肽由其N端與(a)中之抗體結合部分的C端融合，且由其C端與(c)中之Fc域之一個子單元的N端融合； 且其中第一抗體不包含針對效應部分之抗原結合位點的VL域；及 ii) 第二抗體，其包含： d) 抗原結合部分，其與表現於標靶細胞表面上之抗原結合； e) 多肽，其包含針對效應部分之抗原結合位點的抗體輕鏈可變域(VL)或由其組成；及 f) 包含兩個子單元之Fc域， 其中(e)中之多肽由其N端與(d)中之抗原結合部分的C端融合，且由其C端與(f)中之Fc域之一個子單元的N端融合； 且其中第二抗體不包含針對效應部分之抗原結合位點的VH域； 其中第一抗體之該VH域與第二抗體之該VL域共同能夠形成針對效應部分之功能性抗原結合位點。
第一抗體及第二抗體本身均不包含針對效應部分之功能性抗原結合位點。第一抗體僅具有來自針對效應部分之功能性結合位點的V H域，而非V L域。第二抗體僅具有V L域，而非V H域。
當第一抗體之V H域與第二抗體之V L域結合時，形成針對效應部分之功能性抗原結合位點。此種情況可例如在第一抗體及第二抗體結合於同一個別標靶細胞或結合於相鄰細胞時發生。
本文中所描述之第一抗體及第二抗體在本文中可稱為「單域分裂抗體」、「分裂抗體」、「SPLIT」或「半抗體(hemibody/demibody)」。共同形成能夠結合於效應部分之抗原結合位點的V H域及V L域在兩個抗體之間分裂，而不作為同一抗體之部分存在。
分裂域型式意謂效應部分不能獨自結合於第一抗體或獨自結合於第二抗體。在血液中，第一抗體與第二抗體之間存在很少或不存在穩定結合，且因此存在很少或不存在放射性標記化合物之穩定結合。
表現於標靶細胞表面上之抗原在本文中可稱為「標靶抗原」、「標靶細胞抗原」或「TA」。根據本發明，上文所描述之第一抗體及第二抗體可具有結合於不同標靶抗原或相同標靶抗原之抗原結合部分。(為避免疑問，在陳述抗體結合相同標靶抗原之情況下，此意謂其具有能夠結合於相同標靶抗原之結合位點，且包括抗體可結合於彼此相同之兩個單獨的抗原分子之可能性)。舉例而言，在一個實施例中，第一抗體及第二抗體均結合於CEA。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體可結合於相同標靶抗原之相同抗原決定基(具有針對相同標靶抗原之相同抗原決定基之結合位點)。在其他實施例中，第一抗體及第二抗體可結合於相同標靶抗原之不同抗原決定基(具有針對相同標靶抗原之不同抗原決定基之結合位點)。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體可包含針對標靶抗原之相同抗原結合位點。舉例而言，其可包含能夠結合於標靶抗原之抗原結合位點，該抗原結合位點包含V L序列及V H序列，其中在第一抗體及第二抗體中形成此抗原結合位點之V L序列及V H序列為相同的。
術語「效應部分」係指對標靶細胞上之所需效應負責的部分。在一個實施例中，所需效應為細胞殺傷。舉例而言，效應部分可為用於殺傷靶細胞之放射性核種、藥物或毒素。在一個實施例中，效應部分可為適用於放射線療法之放射性標記化合物。在另一實施例中，所需效應為標記且效應部分可為適用於成像之放射性標記化合物。
在一些實施例中，(a)及(d)中之抗原結合部分可為抗體片段，諸如Fv、Fab、交換型Fab (cross-Fab)、Fab'、Fab'-SH、F(ab') 2；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv或scFab)；或單域抗體(dAb)，諸如VHH；或非抗體結合骨架，諸如經設計之錨蛋白重複蛋白(DARPin；designed ankyrin repeat protein)；親和抗體；Sso7d；單功能抗體或抗運載蛋白(anticalin)。
在一些實施例中，(a)中之抗原結合部分及(d)中之抗原結合部分較佳為Fab。在此類實施例中，(b)中之多肽由其N端與(a)中之Fab片段之一條鏈的C端融合；且(e)中之多肽由其N端與(d)中之Fab片段之一條鏈的C端融合。同樣，在抗原結合部分包含超過一個鏈之其他實施例中，多肽可由其N端與一條鏈的C端融合。
在免疫療法及成像之情形下，Fc區之存在具有益處，例如延長蛋白之循環半衰期及/或引起比在較小片段之情況下可觀測到的腫瘤吸收更高的腫瘤吸收。在此情形下，本文中所描述之「分裂域」型式可為尤其有利的，因為其降低因循環抗體之長期存在而引起的較大的與效應部分/放射性標記化合物結合的可能性。在一些實施例中，Fc域經修飾以減弱或消除Fc效應功能。
本文中所描述之型式避免效應部分之VL及VH之大量脫靶結合。此外，根據本發明之抗體可在減弱之抗藥物抗體反應及/或穩定性方面具有優勢。
在另一態樣中，本發明提供包含如本文中所描述之抗體集合之醫藥組合物。在另一態樣中，本發明提供包含兩種各別醫藥組合物之套組，該兩種各別醫藥組合物各自包含本文中所描述之抗體中之一者(亦即，分別包含第一抗體及第二抗體)。
在另一態樣中，本發明係關於編碼本文中所描述之任何抗體或抗體集合之聚核苷酸或聚核苷酸集合。在另一態樣中，本發明係關於包含該一或多個聚核苷酸之載體或載體集合，視情況為表現載體或表現載體集合。在另一標的中，本發明係關於包含本發明之載體或載體集合之原核或真核宿主細胞或宿主細胞集合。此外，提供產生抗體之方法，該方法包含培養一或多個宿主細胞從而產生抗體。
在一些實施例中，在效應分子為放射性標記化合物之情況下，如本文中所描述之抗體可用於預靶向放射免疫療法(PRIT)之方法或預靶向放射成像之方法中。
在一個態樣中，本發明提供預靶向放射免疫療法之方法，該方法包含： i) 向個體投與如上文所描述之第一抗體及第二抗體；以及 ii) 隨後向該個體投與放射性標記化合物。
在另一態樣中，本發明提供上文中所描述之第一抗體及第二抗體，其係用於包含向個體投與第一抗體及第二抗體以及隨後向該個體投與放射性標記化合物的治療方法中。在另一態樣中，本發明提供上文中所描述之第一抗體，其係用於包含向個體投與第一抗體及第二抗體以及隨後向該個體投與放射性標記化合物的治療方法中。在另一態樣中，本發明提供上文所描述之第二抗體，其係用於包含向個體投與第一抗體及第二抗體以及隨後向該個體投與放射性標記化合物的治療方法中。
在另一態樣中，本發明提供放射成像方法，該方法包含： i) 向個體投與如本文中所描述之第一抗體及第二抗體，其中該等抗體結合於標靶抗原且定位至表現標靶抗原之細胞的表面； ii) 隨後投與放射性標記化合物；以及視情況 iii) 對其中定位有放射性核種之組織或器官進行成像。
在另一態樣中，本發明提供如本文中所描述之第一抗體及第二抗體，其係用於對人類或動物身體進行之診斷方法中，其中該方法包含： i) 向個體投與如本文中所描述之第一抗體及第二抗體，其中該等抗體結合於標靶抗原且定位至表現標靶抗原之細胞的表面； ii) 隨後投與放射性標記化合物；以及視情況 iii) 對其中定位有放射性核種之組織或器官進行成像。
成像步驟之後可為進行診斷之步驟且視情況為向個體遞送該診斷之步驟。在一些實施例中，該方法可進一步包含測定適當治療且視情況向個體投與該治療。
在上述各方法/用途中，第一抗體及第二抗體與相同或相鄰標靶細胞之結合引起針對放射性標記化合物之抗原結合位點之V H域及V L域的結合，及針對放射性標記化合物之功能性抗原結合位點的形成。因此，在投與放射性標記化合物之後，放射性標記化合物結合於藉由V H與V L之結合所形成之功能性抗原結合位點。
在本文中所描述之方法及用途中之任一者中，第一抗體及第二抗體可同時或以任何次序依序投與。
通常在此項技術中，PRIT或放射成像方法涉及清除步驟。清除步驟包含在投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與藥劑，其中藥劑可提高自血液移除抗體之速率及/或阻斷放射性標記化合物與抗體之結合。
在本文中所描述之方法及用途之實施例中，方法不包含清除步驟。亦即，其不包含在投與第一抗體及第二抗體與投與放射性標記化合物之間(亦即，在投與抗體之後，但在投與放射性標記化合物之前)投與清除劑或阻斷劑之步驟。在另一實施例中，在投與第一抗體及第二抗體與投與放射性標記化合物之間不投與除視情況存在之放射增敏劑、免疫治療劑及/或化學治療劑以外的藥劑。在另一實施例中，在投與第一抗體及第二抗體與投與放射性標記化合物之間不投與藥劑。
在一些實施例中，本文中所描述之抗體可作為組合療法之一部分投與。舉例而言，其可與一或多種放射增敏劑、免疫治療劑及/或化學治療劑組合投與：放射增敏劑、免疫治療劑或化學治療劑及抗體可同時或以任何次序依序投與。
本文中所描述之放射成像及放射免疫療法之方法可視情況如本文進一步論述來組合。
在另一態樣中，本發明提供套組，該套組包含： i) 如本文中所描述之第一抗體及第二抗體； ii) 結合於藉由第一抗體與第二抗體之結合所形成之抗原結合位點的放射性標記化合物。
套組可視情況排除(亦即不包含)如本文中所描述之清除劑或阻斷劑。
套組可視情況進一步包含放射增敏劑、免疫治療劑或化學治療劑。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體可存在於同一醫藥組合物中。在其他實施例中，第一抗體及第二抗體可存在於單獨的醫藥組合物中。在一些實施例中，放射性標記化合物存在於與抗體分開之醫藥組合物中。
在其他實施例中，如本文中所描述之抗體可用於選擇性殺傷標靶細胞之方法中，例如用於癌症治療。
I. 定義 出於本文之目的，「受體人類構架」為包含衍生自如下文所定義之人類免疫球蛋白構架或人類共有構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架之胺基酸序列的構架。「衍生自」人類免疫球蛋白構架或人類共有構架之受體人類構架可包含與人類免疫球蛋白構架或人類共有構架相同之胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些態樣中，胺基酸變化之數目為10個或更少、9個或更少、8個或更少、7個或更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少或2個或更少。在一些態樣中，VL受體人類構架與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共有構架序列具有序列一致性。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總和之強度。除非另外指示，否則如本文中所使用，「結合親和力」係指反映結合對(例如，抗體與抗原)成員之間1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可由解離常數(K D)表示。可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文中所描述之彼等方法)來量測親和力。用於量測結合親和力之特定說明性及例示性方法描述於下文中。
「親和力成熟」抗體係指與親本抗體相比，在一或多個互補決定區(CDR)中具有一或多個變化之抗體，該親本抗體不具有該等變化，此類變化引起抗體對抗原之親和力改良。
術語「與表現於標靶細胞表面上之抗原結合之抗體」係指能夠以足夠親和力結合該抗原之抗體，從而使得抗體可用作靶向該抗原之診斷劑及/或治療劑。在一個態樣中，如例如藉由表面電漿子共振(SPR)所量測，抗體與不相關非抗原蛋白之結合程度比抗體與抗原之結合程度小約10%。在某些態樣中，與表現於標靶細胞表面上之抗原結合之抗體的解離常數(K D)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 - 8M或更小，例如10 - 8M至10 - 13M，例如10 - 9M至10 - 13M)。據稱當抗體之K D為1 μM或更小時，抗體「特異性結合」於表現於標靶細胞表面上之抗原。在某些態樣中，抗體結合於該抗原之抗原決定基，該抗原決定基在來自不同物種之該抗原中為保守性的。
術語「針對效應部分之抗原結合位點」或「針對效應部分之功能性抗原結合位點」係指包含VH域及VL域之抗原結合位點，其能夠以足夠親和力結合於效應部分，從而使得抗體可用作診斷劑及/或治療劑以使效應部分與抗體結合。在一個態樣中，抗原結合位點與不相關非抗原化合物之結合程度比抗體與效應部分之結合程度小約10%，如例如藉由表面電漿子共振(SPR)所量測。在某些態樣中，結合於效應部分之抗原結合位點的解離常數(K D)為≤ 1μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 - 8M或更小，例如10 - 8M至10 - 13M，例如10 - 9M至10 - 13M)。其K D可較佳為100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小。舉例而言，功能性結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之K D結合效應部分。據稱當抗原結合位點之K D為1 μM或更小時，抗原結合位點「特異性結合」於效應部分。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所需抗原結合活性即可。如本文所使用之術語「抗體」亦涵蓋包含功能性抗原結合位點之VH域或VL域的個別半抗體。
「抗體片段」係指不同於完整抗體之分子，其包含完整抗體之一部分且結合完整抗體所結合之抗原。抗體片段之實例包括(但不限於) Fv、Fab、交換型Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab') 2；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv及scFab)；單域抗體(dAb)；以及由抗體片段形成之多特異性抗體。對於某些抗體片段之綜述，參見Holliger及Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136 (2005)。術語「Fab片段」係指由免疫球蛋白之重鏈之VH域及CH1域以及輕鏈之VL域及CL域組成的蛋白。「Fab'片段」與Fab片段之不同之處在於，在包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸的CH1域之羧基端處添加有殘基。關於包含結合抗原決定基殘基之救助受體及具有延長之活體內半衰期的Fab及F(ab') 2片段之論述，參見美國專利第5,869,046號。
如本文所使用，提及「Fab片段」意欲包括交換型Fab片段或scFab以及習知Fab片段(亦即，包含有包含VL域及CL域之輕鏈以及包含VH域及CH1域之重鏈片段的Fab片段)。
術語「交換型Fab片段」或「xFab片段」或「互換型Fab (crossover Fab)片段」係指其中重鏈及輕鏈之可變區或恆定區互換之Fab片段。交換型Fab片段包含由輕鏈可變區(VL)及重鏈恆定區1 (CH1)構成之多肽鏈以及由重鏈可變區(VH)及輕鏈恆定區(CL)構成之多肽鏈。為了清楚起見，在其中Fab輕鏈與Fab重鏈之可變區互換的互換型Fab分子中，包含重鏈恆定區之肽鏈在本文中稱為互換型Fab分子之「重鏈」。反之，在其中Fab輕鏈與Fab重鏈之恆定區互換的互換型Fab分子中，包含重鏈可變區之肽鏈在本文中稱為互換型Fab分子之「重鏈」。
如本文中所使用，術語「單鏈」係指包含由肽鍵線性連接之胺基酸單體的分子。單鏈Fab分子為其中Fab輕鏈與Fab重鏈由肽連接子連接以形成單一肽鏈之Fab分子。在特定的此類實施例中，在單鏈Fab分子中，Fab輕鏈之C端連接至Fab重鏈之N端。
不對稱Fab臂亦可藉由將帶電或不帶電胺基酸突變引入結構域介面中以引導正確Fab配對來進行工程改造。參見例如WO 2016/172485。
「單鏈可變片段」或「scFv」為藉由肽連接子連接的抗體之重鏈(VH)及輕鏈(VL)可變域之融合蛋白。特定言之，連接子為具有10至25個胺基酸之短多肽，且通常富含甘胺酸以獲得可撓性以及富含絲胺酸或蘇胺酸以獲得溶解度，且可連接VH之N端與VL之C端，或反之亦然。儘管移除恆定區及引入連接子，此蛋白仍保持初始抗體之特異性。關於scFv片段之綜述，參見例如Plückthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113卷, Rosenburg及Moore編, (Springer-Verlag, New York), 第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。
術語「阻斷劑」係指阻斷效應分子(特定言之，放射性標記化合物)與該效應分子之功能性結合位點之結合的藥劑。一般而言，該阻斷劑結合於效應分子之功能性結合位點，例如特異性結合於該功能性結合位點。
術語「清除劑」係指提高自個體之循環清除抗體之速率的藥劑。一般而言，清除劑結合於抗體，例如特異性結合於抗體。
如本文所使用之術語「清除步驟」或「清除階段」涵蓋阻斷劑或清除劑之使用。一些藥劑可既充當清除劑又充當阻斷劑。
術語「抗原決定基」指示抗體所結合之蛋白或非蛋白抗原上之位點。抗原決定基可由連續胺基酸伸長段(線性抗原決定基)形成或包含例如由於抗原摺疊，亦即因蛋白抗原之三級摺疊而在空間上鄰近之非連續胺基酸(構形抗原決定基)。線性抗原決定基通常在蛋白抗原暴露於變性劑之後仍與抗體結合，而構形抗原決定基通常在用變性劑處理之後被破壞。抗原決定基在獨特空間構形中包含至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個或8-10個胺基酸。
針對結合於特定抗原決定基之抗體(亦即，結合於相同抗原決定基之抗體)之篩選可使用此項技術中之常規方法來進行，該等方法例如(但不限於)丙胺酸篩選、肽墨點法(參見Meth. Mol. Biol. 248 (2004) 443-463)、肽裂解分析、抗原決定基切除、抗原決定基萃取、抗原化學修飾(參見Prot. Sci. 9 (2000) 487-496)以及交叉阻斷(參見「Antibodies」, Harlow及Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)。
基於抗原結構之抗體剖析(ASAP)亦稱為修飾輔助剖析(MAP)，其允許基於來自特異性結合於抗原之多種單株抗體中之各者與經化學修飾或經酶修飾之抗原表面的結合概況，來對多種單株抗體進行分組(參見例如US 2004/0101920)。各組中之抗體結合於相同抗原決定基，該抗原決定基可為與由另一組所表示之抗原決定基完全不同或部分重疊的獨特抗原決定基。
此外，可使用競爭性結合來容易地測定抗體是否結合於與參考抗體相同之抗原決定基，或是否與參考抗體競爭結合。舉例而言，與參考抗體「結合於相同抗原決定基之抗體」係指在競爭分析法中阻斷參考抗體與其抗原之結合達到50%或以上的抗體，且反之，參考抗體在競爭分析法中阻斷該抗體與其抗原之結合達到50%或以上。此外，舉例而言，為測定抗體是否與參考抗體結合於相同抗原決定基，使參考抗體在飽和條件下結合於抗原。在移除過量參考抗體之後，評估所討論之抗體結合於抗原之能力。若所討論之抗體能夠在參考抗體飽和結合之後結合於抗原，則可得出以下結論：所討論之抗體與參考抗體結合不同抗原決定基。然而，若所討論之抗體不能在參考抗體飽和結合之後結合於抗原，則所討論之抗體可能結合於與參考抗體所結合之抗原決定基相同的抗原決定基。為了確認所討論之抗體是結合於相同抗原決定基結合還是僅由於空間原因而結合受阻，可使用常規實驗(例如使用ELISA之肽突變及結合分析、RIA、表面電漿子共振、流式細胞量測術或在此項技術中可用之任何其他定量或定性抗體結合分析法)。此分析法應在兩種設定下進行，亦即，在兩個抗體均為飽和抗體之情況下進行。若在兩種設定下，僅第一(飽和)抗體能夠結合於抗原，則可得出以下結論：所討論之抗體與參考抗體競爭結合於抗原。
在一些態樣中，若如競爭性結合分析法中所量測，1倍、5倍、10倍、20倍或100倍過量之一種抗體抑制另一種抗體之結合達到至少50%、至少75%、至少90%或甚至99%或更高，則兩種抗體視為結合於相同或重疊抗原決定基(參見例如Junghans等人, Cancer Res. 50 (1990) 1495-1502)。
在一些態樣中，若抗原中基本上所有減弱或消除一種抗體之結合的胺基酸突變亦減弱或消除另一種抗體之結合，則兩種抗體被視為結合於相同抗原決定基。若減弱或消除一種抗體之結合的胺基酸突變僅有一個子集減弱或消除另一種抗體之結合，則認為兩種抗體具有「重疊抗原決定基」。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分衍生自特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分衍生自不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區的類型。存在五種主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干種類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG 1、IgG 2、IgG 3、IgG 4、IgA 1及IgA 2。在某些態樣中，抗體為IgG 1同型。在某些態樣中，抗體為具有用於減弱Fc區效應功能之P329G、L234A及L235A突變之IgG 1同型。在其他態樣中，抗體為IgG 2同型。在某些態樣中，抗體為在鉸鏈區中具有用於改良IgG 4抗體穩定性之S228P突變的IgG 4同型。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。抗體之輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列而歸為兩種類型之一，稱為κ (kappa)及λ (lambda)。
「Fc效應功能」係指可歸因於抗體Fc區之生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
藥劑(例如醫藥組合物)之「有效量」係指在劑量上及對於所需時段有效以達成所需治療性或預防性結果的量。
術語「串聯Fab」係指包含經由肽連接子/繫鏈(tether)連接之兩個Fab片段之抗體。在一些實施例中，串聯Fab可包含藉由肽連接子/繫鏈連接之一個Fab片段及一個交換型Fab片段。
在本文中，術語「Fc區」用以定義含有至少一部分恆定區的免疫球蛋白重鏈之C端區。在本文中，術語「Fc域」用以定義含有兩個重鏈之恆定區且不包括第一恆定區的免疫球蛋白之C端區。因此，Fc域係指IgA、IgD及IgG之最後兩個恆定區免疫球蛋白域，及IgE及IgM之最後三個恆定區免疫球蛋白域。該術語包括原生序列Fc區及變異Fc區。在一個態樣中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，宿主細胞所產生之抗體可能在重鏈之C端經歷一或多個(特定言之，一或兩個)胺基酸之轉譯後分裂。因此，宿主細胞藉由表現編碼全長重鏈之特定核酸分子而產生的抗體可包括全長重鏈，或其可包括全長重鏈之裂解變異體。此情況可為重鏈之最末兩個C端胺基酸為甘胺酸(G446)及離胺酸(K447，根據EU索引編號)之情況。因此，可存在或可不存在Fc區之C端離胺酸(Lys447)或C端甘胺酸(Gly446)及離胺酸(Lys447)。在一個態樣中，包括如本文所指定之Fc區且包含於本發明之抗體中之重鏈包含額外C端甘胺酸-離胺酸二肽(G446及K447，根據EU索引編號)。在一個態樣中，包括如本文所指定之Fc區且包含於本發明之抗體中之重鏈包含額外C端甘胺酸殘基(G446，根據EU索引編號)。除非本文另外指定，否則Fc區或恆定區中之胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所描述。如本文中所使用之Fc域之「子單元」係指形成二聚Fc域之兩個多肽中之一者，亦即能夠與形成二聚Fc域之兩個多肽中之另一者穩定結合的包含免疫球蛋白重鏈之C端恆定區的多肽。舉例而言，IgG Fc域之子單元包含IgG CH2及IgG CH3恆定域。
「構架」或「FR」係指除互補決定區(CDR)以外之可變域殘基。可變域之FR通常由四個FR域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，在VH (或VL)中，CDR及FR序列通常呈以下序列形式：FR1-CDR-H1(CDR-L1)-FR2-CDR-H2(CDR-L2)-FR3-CDR-H3(CDR-L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，係指具有與原生抗體結構實質上類似之結構或具有含有如本文中所定義之Fc區之重鏈的抗體。
「融合」意謂成分係藉由肽鍵直接連接或經由一或多個肽連接子連接。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入外源核酸之細胞，包括此類細胞之子代。宿主細胞包括「轉型體」及「轉型細胞」，其包括原代轉型細胞及由其衍生之子代，不考慮傳代數目。子代之核酸含量與母細胞可能不完全相同，但可能含有突變。本文包括針對原始轉型細胞篩選或選擇具有相同功能或生物活性之突變型子代。
「人類抗體」為所具有之胺基酸序列與由人類或人類細胞產生或利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列衍生自非人類來源的抗體之胺基酸序列對應的抗體。人類抗體之此定義特定排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類共有構架」為表示所選人類免疫球蛋白VL或VH構架序列中最常出現之胺基酸殘基的構架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之子組。一般而言，序列子組為如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), 第1-3卷中之子組。在一個態樣中，對於VL，該子組為如Kabat等人(同前文獻)中之子組κ I。在一個態樣中，對於VH，該子組為如Kabat等人(同前文獻)中之子組III。
「人類化」抗體係指包含來自非人類CDR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些態樣中，人類化抗體將包含實質上全部至少一個，且通常為兩個可變域，其中全部或實質上全部CDR對應於非人類抗體之CDR，且全部或實質上全部FR對應於人類抗體之FR。人類化抗體視情況可包含衍生自人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體(例如，非人類抗體)之「人類化形式」係指已經歷人類化之抗體。
如本文所用之術語「高變區」或「HVR」係指具序列高變性且測定抗原結合特異性的抗體可變域之區域，例如「互補決定區」(「CDR」)中之各者。
一般而言，抗體包含六個CDR：VH中之三個CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)及VL中之三個CDR (CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。本文之例示性CDR包括： (a) 出現在胺基酸殘基26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2)及96-101 (H3)處之高變環(Chothia及Lesk, J . Mol . Biol .196:901-917(1987))； (b) 出現在胺基酸殘基24-34 (L1)、50-56 (L2)、89-97 (L3)、31-35b (H1)、50-65 (H2)及95-102 (H3)處之CDR (Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))；及 (c) 出現在胺基酸殘基27c-36 (L1)、46-55 (L2)、89-96 (L3)、30-35b (H1)、47-58 (H2)及93-101 (H3)處之抗原觸點(MacCallum等人 J . Mol . Biol .262: 732-745 (1996))。
除非另外指示，否則CDR係根據Kabat等人(同前文獻)測定。熟習此項技術者應理解，CDR名稱亦可根據以下來測定：Chothia (同前文獻)；McCallum (同前文獻)；或任何其他科學上所接受之命名法系統。代替上文，如本文中所描述之CDR-H1之序列可自Kabat26延伸至Kabat35，例如對於Pb-DOTAM結合可變域而言。
在一個態樣中，CDR殘基包含在序列表中或本說明書中其他地方所鑑別之CDR殘基。
除非另外指示，否則可變域中之HVR/CDR殘基及其他殘基(例如FR殘基)係在本文中根據Kabat等人(同前文獻)來進行編號。
「免疫結合物」為結合於一或多個異源分子(包括(但不限於)細胞毒性劑)之抗體。
「個體(individual)」或「個體(subject)」為哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)家養動物(例如牛、羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。在某些態樣中，個體為人類。
如本文中所描述之分子可為「經分離」的。「經分離」之抗體為已與其天然環境之成分分離之抗體。在一些態樣中，如藉由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細電泳法)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)方法所測定，抗體經純化至大於95%或99%之純度。關於用於評估抗體純度之方法的綜述，參見例如Flatman等人, J . Chromatogr . B848:79-87 (2007)。
術語「核酸分子」或「聚核苷酸」包括包含核苷酸聚合物之任何化合物及/或物質。各核苷酸由鹼基，尤其嘌呤或嘧啶鹼基(亦即，胞嘧啶(C)、鳥嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U))、糖(亦即，去氧核糖或核糖)及磷酸酯基構成。通常用鹼基序列描述核酸分子，因此該等鹼基代表核酸分子之一級結構(線形結構)。通常自5'至3'表示鹼基序列。在本文中，術語核酸分子涵蓋去氧核糖核酸(DNA)，包括例如互補DNA (cDNA)及基因體DNA；核糖核酸(RNA)，尤其信使RNA (mRNA)；DNA或RNA之合成形式；及包含兩個或更多個此等分子之混合聚合物。核酸分子可呈線形或環狀。另外，術語核酸分子包括有義股與反義股，以及單股及雙股形式。此外，本文中描述之核酸分子可含有天然存在或非天然存在之核苷酸。非天然存在之核苷酸之實例包括具有衍生化糖或磷酸酯主鏈鍵或經化學修飾之殘基的經修飾之核苷酸鹼基。核酸分子亦涵蓋適用作載體以在活體外及/或活體內，例如在宿主或患者中直接表現本發明之抗體的DNA及RNA分子。此類DNA (例如cDNA)或RNA (例如mRNA)載體可為未經修飾或經修飾的。舉例而言，mRNA可經化學修飾以增強RNA載體之穩定性及/或經編碼之分子之表現，從而使得可將mRNA注射至個體中以活體內生成抗體(參見例如Stadler等人, Nature Medicine 2017, 2017年6月12日線上發佈, doi:10.1038/nm.4356或EP 2 101 823 B1)。
「經分離」之核酸係指已與其天然環境之成分分離之核酸分子。經分離之核酸包括通常含有核酸分子之細胞中所含之核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於與其天然染色體位置不同之染色體位置。
「編碼抗體的經分離之核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多種核酸分子，包括單一載體或各別載體中之此等核酸分子及存在於宿主細胞中之一或多個位置處之此等核酸分子。
如本文所用，術語「單株抗體」係指自實質上均質的抗體之群體獲得之抗體，亦即，除可能的變異抗體以外，構成該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原決定基，變異抗體例如含有天然存在之突變或在製造單株抗體製劑期間出現之變異抗體，此類變異體通常以較小量存在。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相比，單株抗體製劑之各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。因此，修飾語「單株」指示抗體之特徵為獲自實質上均質的抗體之群體，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。舉例而言，本發明之單株抗體可藉由多種技術製造，該等技術包括(但不限於)融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體呈現方法及利用含有全部或部分人類免疫球蛋白基因座之轉殖基因動物的方法、本文中所描述之用於製造單株抗體之此等方法及其他例示性方法。
「裸抗體」係指未與異源部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記結合之抗體。裸抗體可存在於醫藥組合物中。
「原生抗體」係指具有不同結構的天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言，原生IgG抗體為約150,000道爾頓之雜四聚體醣蛋白，其由二硫化物鍵結之兩個相同輕鏈及兩個相同重鏈構成。各重鏈自N端至C端具有可變域(VH)，該VH亦稱為可變重域或重鏈可變區，接著為三個恆定重域(CH1、CH2及CH3)。類似地，各輕鏈自N端至C端具有可變域(VL)，該VL亦稱為可變輕域或輕鏈可變區，接著為恆定輕(CL)域。
如本文中所使用，術語「藥品說明書」用以指通常包括於治療性產品之商業包裝中的說明書，其含有關於與使用此類治療性產品有關之適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症及/或警告的資訊。
關於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比且出於比對之目的不將任何保守取代視為序列一致性之一部分之後，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基具有一致性的胺基酸殘基之百分比。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目的而進行之比對可由此項技術內之各種方式達成，例如使用公開可獲得的電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign (DNASTAR)軟體或FASTA程式套裝。熟習此項技術者可測定適用於比對序列之參數，包括在所比較序列之全長內達成最大比對所需的任何演算法。或者，可使用序列比較電腦程式ALIGN-2生成一致性百分比值。ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech, Inc.所著，且源碼已與用戶文件一起提交至華盛頓哥倫比亞特區美國版權局(U.S. Copyright Office, Washington D.C.), 20559，其中其以美國版權登記號TXU510087註冊，且描述於WO 2001/007611中。
出於本文之目的，除非另外指示，否則胺基酸序列一致性百分比值係使用FASTA套裝軟體36.3.8c版或更新版之ggsearch程式，用BLOSUM50比較矩陣來生成。FASTA程式套裝軟體係由以下所著：W. R. Pearson及D. J. Lipman (1988)，「Improved Tools for Biological Sequence Analysis」，PNAS 85:2444-2448；W. R. Pearson (1996)「Effective protein sequence comparison」 Meth. Enzymol. 266:227-258；及Pearson等人(1997) Genomics 46:24-36，且公開獲自www.fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml或www.ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta。或者，可使用可在fasta.bioch.virginia.edu/ fasta_www2/index.cgi獲取之公共伺服器來比較序列，使用ggsearch (全域蛋白:蛋白)程式及預設選項(BLOSUM50；開端：-10；ext：-2；Ktup = 2)以確保進行全域比對而非局域比對。在輸出比對標題中給出胺基酸一致性百分比。
術語「醫藥組合物」或「醫藥調配物」係指呈准許其中所含活性組分之生物活性有效之形式的製劑，且其不含對將投與之醫藥組合物之個體具有不可接受毒性之額外成分。
「醫藥學上可接受之載劑」係指在醫藥組合物或調配物中除活性組分以外的對個體無毒之組分。醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝液、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
除非另外指示，否則所提及之如本文所使用之標靶抗原係指來自任何脊椎動物來源之任何原生標靶抗原，該任何脊椎動物來源包括諸如靈長類動物(例如人類)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)之哺乳動物。該術語涵蓋「全長」、未經處理之標靶抗原以及由細胞中之處理產生之標靶抗原之任何形式。該術語亦涵蓋標靶抗原之天然存在之變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。舉例而言，標靶抗原CEA可具有人類CEA，尤其癌胚抗原相關細胞黏附分子5 (CEACAM5)之胺基酸序列，其示於UniProt (www.uniprot.org)寄存編號P06731 (型號119)或NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_004354.2中。標靶抗原之另一實例為纖維母細胞活化蛋白(FAP)。人類FAP之胺基酸序列示於UniProt (www.uniprot.org)寄存編號Q12884 (型號149)或NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_004451.2中。標靶抗原之另一實例為GPRC5D (對於人類序列，參見UniProt編號Q9NZD1 (型號115)；NCBI RefSeq編號NP_061124.1)。
如本文中所提及之術語「分裂抗體(split antibody/split antibodies)」、「單域分裂抗體」或「SPLIT PRIT」意謂共同形成能夠結合於效應部分之抗原結合位點的VH域及VL域在兩個抗體之間分裂，而不作為同一抗體之部分存在(在活體內組裝之前)。「靶向CEA之SPLIT PRIT」係指靶向CEA之分裂抗體。術語「SPLIT PRIT」亦可與術語「TA-分裂-DOTAM-VH/VL」(例如其中「TA」(或標靶抗原)為CEA、FAP或GPRC5D)互換使用。術語「靶向CEA之SPLIT PRIT」可與術語「CEA-分裂-DOTAM-VH/VL」互換使用。
如本文所用，「治療(treatment)」(及其文法變化形式，諸如「治療(treat/treating)」)係指試圖改變所治療個體之疾病之自然過程的臨床介入，且可出於預防目的或在臨床病理學過程中進行。所需治療作用包括(但不限於)預防疾病發生或復發、緩解症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理性後果、預防轉移、降低疾病進展速率、改善或緩和疾病病狀及緩解或改良預後。在一些態樣中，本發明之抗體用於延緩疾病發展或用於減緩疾病進展。
術語「可變區」或「可變域」係指涉及抗體結合於抗原的抗體重鏈域或輕鏈域。原生抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中各域包含四個保守構架區(FR)及三個互補決定區(CDR)。(參見例如Kindt等人, Kuby Immunology, 第6版，W.H. Freeman and Co., 第91頁(2007))。單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特異性。此外，可使用VH域或VL域自結合抗原之抗體分離結合特定抗原之抗體，以分別篩選互補的VL或VH域之文庫。參見例如Portolano等人, J . Immunol .150:880-887 (1993)；Clarkson等人, Nature352:624-628 (1991)。
如本文所用，術語「載體」係指能夠傳播其所連接之另一核酸的核酸分子。該術語包括呈自我複製核酸結構形式之載體以及併入其已引入之宿主細胞之基因體中的載體。某些載體能夠引導可操作地連接其之核酸的表現。此等載體在本文中稱為「表現載體」。
如本文所使用之術語「Pb」或「鉛」包括其離子，例如Pb(II)。所提及之其他金屬亦包括其離子。因此，熟習此項技術之讀者瞭解例如術語鉛、Pb、 212Pb或 203Pb意欲涵蓋該元素之離子形式，尤其Pb(II)。
II. 組合物及方法 在一個態樣中，本發明部分基於抗體集合，其包含第一抗體及第二抗體，其中各抗體可結合於標靶細胞上之抗原，但其中針對效應部分之功能性抗原結合位點僅在第一抗體與第二抗體彼此結合時形成。在一個實施例中，本發明之抗體集合適用於細胞殺傷/癌症治療。在另一實施例中，本發明之抗體集合適用於例如預靶向免疫療法及/或預靶向成像之方法。在較佳態樣中，此等方法省略投與清除劑或阻斷劑之步驟。
分裂型式具有減少脫靶效應之優勢。在PRIT之情形下，如本文中所證實，其避免對清除劑之需要。此外，如本文所闡述之特定型式避免分裂抗原結合位點之VH域之游離C端，且因此降低涉及預先存在之人類抗VH (HAVH)自體抗體之抗藥物抗體反應的可能性。此外，且不希望受理論束縛，本發明人咸信如本文所闡述之型式有助於保護DOTAM VH/VL之疏水性介面，且因此有助於穩定性。
A. 抗體型式  如上文所描述，本發明提供雙特異性抗體之新穎型式及其使用方法，其中效應抗原之VH域及VL域在兩個部分之間分裂。
特定言之，本發明係關於抗體集合，其包含： i) 第一抗體，其包含： a) 抗原結合部分，其中該抗原結合部分與表現於標靶細胞表面上之抗原結合； b) 多肽，其包含針對效應部分之抗原結合位點的抗體重鏈可變域(VH)或由其組成；及 c) 包含兩個子單元之Fc域， 其中(b)中之多肽由其N端與(a)中之抗原結合部分的C端融合，且由其C端與(c)中之Fc域之一個子單元的N端融合； 且其中第一抗體不包含針對效應部分之抗原結合位點的VL域；及 ii) 第二抗體，其包含： d) 抗原結合部分，其中該抗原結合部分與表現於標靶細胞表面上之抗原結合； e) 多肽，其包含針對效應部分之抗原結合位點的抗體輕鏈可變域(VL)或由其組成；及 f) 包含兩個子單元之Fc域， 其中(e)中之多肽由其N端與抗原結合部分之C端融合，且由其C端與(f)中之Fc域之一個子單元的N端融合； 且其中第二抗體不包含針對效應部分之抗原結合位點的VH域； 其中第一抗體之該VH域與第二抗體之該VL域共同能夠形成針對效應部分之功能性抗原結合位點。
融合可為直接或間接的，例如經由肽連接子。
在一些實施例中，(a)及/或(d)中之抗原結合部分為Fab。
較佳地，(b)中之多肽由其N端與(a)中之Fab片段之重鏈的C端融合。在一些實施例中，(a)中之Fab片段包含有包含VL域及CL域之輕鏈以及包含VH域及CH1域之重鏈片段，且(b)中之多肽由其N端與CH1域之C端融合。
類似地，(e)中之多肽由其N端與(d)之中Fab片段之重鏈的C端融合可為較佳的。在一些實施例中，(d)中之Fab片段包含有包含VL域及CL域之輕鏈以及包含VH域及CH1域之重鏈片段，且(e)中之多肽由其N端與CH1域之C端融合。
較佳地，多肽(b)及(e)不包含恆定區(例如CH1或CL)。在一些實施例中，可能較佳的是，(b)中之多肽由針對效應部分之抗原結合位點的抗體重鏈可變域(VH)組成，及/或(e)中之多肽由針對效應部分之抗原結合位點的抗體輕鏈可變域(VL)組成。此可有助於校正形成(a)及(d)中之Fab片段之部分的輕鏈之組裝體及/或減少兩個部分在循環中形成結合勝任部分之趨勢。
可能較佳的是，第一抗體與第二抗體之結合使得針對效應部分僅形成一個功能性抗原結合，亦即，兩個結合之抗體針對效應部分提供單價結合。因此，第一抗體可包含針對效應部分之抗原結合位點的僅一個VH域，且第二抗體可包含針對效應部分之抗原結合位點的僅一個VL域，使得其共同形成針對效應部分的僅一個完整功能性結合位點。
在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體進一步包含結合於標靶抗原之另一抗原結合部分，例如另一抗體片段，諸如結合於標靶抗原之另一Fab片段。因此，在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體(通常兩者)各自包含兩個能夠結合於標靶抗原之抗原結合部分。兩個抗原結合部分較佳能夠結合於相同標靶抗原。視情況，第一抗體及第二抗體各自包含不超過兩個能夠結合於標靶抗原之抗原結合部分。在其他實施例中，第一抗體及第二抗體可各自包含超過兩個能夠結合於標靶抗原之抗原結合部分。
在一個實施例中，此另一抗原結合部分(例如Fab片段)由其C端與Fc域之另一子單元之N端融合。(在Fab或其他部分由超過一個鏈構成之情況下，其可由其一條鏈(例如其重鏈)之C端與Fc域之另一子單元之N端融合)。因此，在一個實施例中，第一抗體及/或第二抗體可為雙臂抗體，其中各臂攜有針對標靶抗原之結合位點。
因此，在一個實施例中，本發明係關於抗體集合，其包含： i) 第一抗體，其包含： a) 第一Fab片段，其中Fab片段與表現於標靶細胞表面上之抗原結合； b) 多肽，其包含針對效應部分之抗原結合位點的抗體重鏈可變域(VH)或由其組成；及 c) 包含第一及第二子單元之Fc域， 其中(b)中之多肽由其N端與(a)中之Fab片段之一條鏈的C端融合，且由其C端與(c)中之Fc域之第一子單元的N端融合； 且進一步包含與表現於標靶細胞表面上之抗原結合的第二Fab片段，其中第二Fab由其一條鏈的C端與(c)中之Fc域之第二子單元的N端融合； 其中第一抗體不包含針對效應部分之抗原結合位點的VL域；及 ii) 第二抗體，其包含： d) 第一Fab片段，其中Fab片段與表現於標靶細胞表面上之抗原結合； e) 多肽，其包含針對效應部分之抗原結合位點的抗體輕鏈可變域(VL)或由其組成；及 f) 包含第一及第二子單元之Fc域， 其中(e)中之多肽由其N端與(d)中之Fab片段之一條鏈的C端融合，且由其C端與(f)中之Fc域之第一子單元的N端融合； 且進一步包含與表現於標靶細胞表面上之抗原結合的第二Fab片段，其中第二Fab由其一條鏈的C端與(f)中之Fc域之第二子單元的N端融合； 其中第二抗體不包含針對效應部分之抗原結合位點的VH域；且 其中第一抗體之該VH域與第二抗體之該VL域共同能夠形成針對效應部分之功能性抗原結合位點。
可能較佳的是，第一抗體之第二Fab片段由其重鏈之C端與Fc域之第二子單元融合。可能較佳的是，第一抗體之第二Fab片段包含有包含VL域及CL域之輕鏈以及包含VH域及CH1域之重鏈片段，且第二Fab片段由其CH1域之C端與Fc域之第二子單元融合。類似地，第二抗體之第二Fab片段由其重鏈之C端與Fc域之第二子單元融合可為較佳的。可能較佳的是，第二抗體之第二Fab片段包含有包含VL域及CL域之輕鏈以及包含VH域及CH1域之重鏈片段，且第二Fab片段由其CH1域之C端與Fc域之第二子單元融合。
可能較佳的是，第一抗體之第一抗原結合部分與第二抗原結合部分(例如，Fab片段)彼此結合於相同標靶抗原，亦即，第一抗體對標靶抗原為二價的。類似地，可能較佳的是，第二抗體之第一抗原結合部分與第二抗原結合部分(例如，Fab片段)彼此結合於相同標靶抗原，亦即，第二抗體對標靶抗原為二價的。在一些實施例中，第一抗體與第二抗體亦彼此結合於相同標靶抗原。
在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體對標靶抗原之抗原決定基為多價(例如二價)及單特異性的。因此，在一些實施例中，第一抗體之第一抗原結合部分與第二抗原結合部分(例如Fab片段)彼此結合於標靶抗原之相同抗原決定基；及/或第二抗體之第一抗原結合部分與第二抗原結合部分(例如Fab片段)彼此結合於標靶抗原上之相同抗原決定基。較佳地，第一抗體與第二抗體所結合之標靶抗原相同。在一些實施例中，第一抗體與第二抗體亦彼此結合於該標靶抗體中之相同抗原決定基。因此，第一抗體之第一及第二Fab之可變域序列(VH及VL)，或第二抗體之第一及第二Fab，或全部四個Fab在一些實施例中可為相同的。
在其他實施例中，第一抗體與第二抗原結合於相同標靶抗原但各自結合於該標靶抗原上之不同抗原決定基，例如第一抗體之第一及第二Fab片段結合於標靶抗原之抗原決定基A且第二抗體之第一及第二Fab片段結合於該標靶抗原之抗原決定基B。
在一些實施例中，第一抗體可包含以下肽： i) 第一重鏈多肽，其自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VH域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； ii) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，其與(i)中之Fab重鏈配對以形成針對標靶抗原之結合位點； iii) 第二重鏈多肽，其自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)；以及 iv) 另一Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，其與(iii)中之Fab重鏈配對以形成針對標靶抗原之結合位點。
視情況，(i)中之Fab重鏈具有與(iii)中之Fab重鏈相同的序列，且(ii)與(iv)中之Fab輕鏈彼此具有相同的序列。
第二抗體可包含以下肽： v) 第一重鏈多肽，其自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VL域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； vi) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，其與(v)中之Fab重鏈配對以形成針對標靶抗原之結合位點； vii) 第二重鏈多肽，其自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)；以及 viii) 另一Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，其與(vii)中之Fab重鏈配對以形成針對標靶抗原之結合位點。
視情況，(v)中之Fab重鏈具有與(vii)中之Fab重鏈相同的序列，且(vi)與(viii)中之Fab輕鏈彼此具有相同的序列。
視情況，(i)、(iii)、(v)及(vii)中之Fab重鏈彼此具有相同的序列，且(ii)、(iv)、(vi)及(viii)中之Fab輕鏈彼此具有相同的序列。
在可在一些情況下為較佳的其他實施例中，第一抗體及/或第二抗體各自具有能夠特異性結合於標靶抗原之單一抗原結合部分。因此，第一抗體及/或第二抗體可對標靶抗原為單特異性及單價的。較佳地，第一抗體及第二抗體在相同或不同抗原決定基處彼此結合於相同標靶抗原。
在一個實施例中，第一抗體及/或第二抗體為單臂抗體。在此類實施例中，未與(b)中之多肽融合的第一抗體之Fc子單元亦不與任何其他抗原結合部分融合；及/或未與(e)中之多肽融合的第二抗體之Fc子單元亦不與任何其他抗原結合部分融合。因此，Fc域可包含不含Fd之子單元。在一些實施例中，構成抗體之多肽中之一者可由Fc子單元組成或基本上由其組成。
因此，在一些實施例中，第一抗體可包含以下多肽： i) 自N端至C端包含以下之多肽：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VH域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； ii) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)；及 iii) Fc子單元多肽(例如CH2-CH3)； 其中(i)中之Fab重鏈及(ii)中之Fab輕鏈形成能夠結合於標靶抗原之Fab片段。
第二抗體可包含以下多肽： iv) 自N端至C端包含以下之多肽：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VL域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； v) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，及 vi) Fc子單元多肽(例如CH2-CH3)； 其中(iv)中之Fab重鏈及(v)中之Fab輕鏈形成能夠結合於標靶抗原之Fab片段。
在此等單臂抗體之一些實施例中，(i)及(iv)中之Fab重鏈可彼此具有相同的序列；且ii)及(v)中之Fab輕鏈多肽可彼此具有相同的序列。
在抗體包含兩個具有不同互補位(例如結合不同抗原及/或抗原決定基)之Fab片段的任何實施例中，Fab中之一者為習知Fab (包含重鏈VH-CH1及輕鏈VL-CL)且另一者為交換型Fab或scFab可為較佳的。具有第一特異性/可變域序列之Fab可為習知Fab，且具有第二特異性/可變域序列之Fab可選自交換型Fab或scFab。此減少輕鏈之錯配的可能性。
在以上任一者中，抗原結合部分可直接或經由包含一或多個胺基酸之肽連接子與Fc域融合或彼此融合。肽連接子為此項技術中已知的且描述於本文中。連接子(例如Fab片段與針對效應部分之VH/VL之間及/或針對效應部分之VH/VL與Fc域之間的連接子)可為具有至少5個胺基酸或至少10個胺基酸，較佳5至100個，例如10至70個、10至60個或10至50個胺基酸的肽。在一些實施例中，可能較佳的是，連接子之長度為15-30個胺基酸，例如長度為15-25個，例如16、17、18、19、20、21、22、23或24個胺基酸。連接子可為剛性連接子或可撓性連接子。在一些實施例中，其為包含Thr、Ser、Gly及/或Ala殘基或由其組成之可撓性連接子。舉例而言，其可包含Gly及Ser殘基或由其組成。在一些實施例中，其可具有諸如(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n之重複模體，其中n為例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。適合的非免疫原性肽連接子包括例如(G 4S) n、(SG 4) n、(G 4S) n或G 4(SG 4) n肽連接子，其中「n」一般為1與10之間，通常為2與4之間的數字。在另一實施例中，該肽連接子為(GxS)n或(GxS)nGm，其中G=甘胺酸，S=絲胺酸，且(x=3，n=3、4、5或6，且m=0、1、2或3)或(x=4，n=2、3、4或5，且m=0、1、2或3)，例如x=4且n=2或3，例如其中x=4，n=2。在一些實施例中，連接子可為或可包含序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO.: 31)。在另一實施例中，連接子可為或包含GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO: 148)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 149)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 150)。另一例示性肽連接子為EPKSC(D)-(G 4S) 2。(SEQ ID NO: 151)另外，在抗原結合部分與Fc域子單元之N端融合之情況下，其可在存在或不存在另一肽連接子之情況下經由免疫球蛋白鉸鏈區或其部分融合。
本發明人已測定在由y個胺基酸組成之肽連接子中，y位置中之Ser (亦即，作為連接子之最末/C端胺基酸之Ser)可視y+2胺基酸(亦即，在C端方向上距離連接子中之最末胺基酸2個殘基處定位之胺基酸)之性質而定，誘導此y+2胺基酸之醣基化。因此，可能較佳的是，將連接子之最末絲胺酸殘基置於y-2或y-3位置中(亦即，連接子之最末絲胺酸殘基處於在N端方向上距離連接子中之最末胺基酸2或3個胺基酸之位置處)。在一些實施例中，連接子可由選自由Gly及Ser組成之群的y個連續胺基酸殘基組成，例如其中y等於至少5或至少10且小於或等於100，例如5至100、10至70、10至60或10至50，例如15至31或15至30，例如15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25，且其中最末絲胺酸處於y-2或y-3位置處。(因此，在y-2位置中可存在絲胺酸且在y-1及y位置中可存在甘胺酸；或在y-3位置中可存在絲胺酸且在y-2、y-1及y位置中可存在甘胺酸)。在一些實施例中，可能較佳的是，y=20或21。在一些實施例中，可能較佳的是，連接子為(GxS)n(GGSGG)或(GxS)n(GGSGGG)，其中G=甘胺酸，S=絲胺酸，x=4且n=1至20，例如1至10，例如2、3、4、5、6、7、8或9，例如n=2至4。舉例而言，連接子可為GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO: 148)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 150)。
在以上抗體集合中之任一者之特定實施例中，Fc域為IgG Fc域。在一個特定實施例中，Fc域為IgG1 Fc域。在另一特定實施例中，Fc域為IgG4 Fc域。在一個甚至更特定之實施例中，Fc域為包含胺基酸取代S228P (Kabat編號)的IgG4 Fc域。在特定實施例中，Fc域為人類Fc域。
可能較佳的是，Fc區經工程改造以減弱或消除Fc效應功能。此工程改造可包括Fc區殘基234、235、238、265、269、270、297、327及/或329中之一或多個取代，例如234、235及/或329中之一或多個之取代。在一些實施例中，Fc區可經工程改造以包括Pro 329經Gly、Leu 234經Ala及/或Leu 235經Ala取代(根據EU索引編號)。減弱Fc效應功能之修飾進一步論述於下文中。
已知用於製備多特異性抗體之技術亦可用於製備本文中所描述之雜二聚體中之任一者。此等技術包括(但不限於)具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之重組共同表現(參見Milstein及Cuello, Nature 305: 537 (1983))及「杵-臼(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號及Atwell等人, J. Mol. Biol. 270:26 (1997))。其他方法包括工程改造用於製備抗體Fc-雜二聚體分子之靜電轉向效應(參見例如WO 2009/089004)；交聯兩個或更多個抗體或片段(參見例如美國專利第4,676,980號及Brennan等人, Science, 229: 81 (1985))；使用白胺酸拉鏈(參見例如Kostelny等人, J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)及WO 2011/034605)；以及使用常用於規避輕鏈錯配問題之輕鏈技術(參見例如WO 98/50431)。
如上文所描述之全長抗體之CH3域可藉由「杵-臼」技術進行更改，該技術以若干實例詳細描述於例如WO 96/027011、Ridgway, J.B.,等人, Protein Eng 9 (1996) 617-621以及Merchant, A.M.,等人, Nat Biotechnol 16 (1998) 677-681中。在此方法中，改變兩個CH3域之相互作用表面以增加含有此兩個CH3域之兩個重鏈的雜二聚作用。(兩個重鏈之)兩個CH3域中之各者可為「杵」，而另一者為「臼」。舉例而言，根據EU索引編號，一個CH3域包含所謂之「杵突變」(T366W及視情況存在之S354C或Y349C中之一者)，且另一CH3域包含所謂之「臼突變」(T366S、L368A及Y407V以及視情況存在之Y349C或S354C)(參見例如Carter, P.等人, Immunotechnol. 2 (1996) 73)。
或者或另外，雙硫橋鍵之引入可用於使雜二聚體穩定(Merchant, A.M.,等人, Nature Biotech 16 (1998) 677-681；Atwell, S.,等人, J. Mol. Biol. 270 (1997) 26-35)且增加產率。
因此，在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體之特徵進一步在於：全長抗體之一個重鏈之CH3域及全長抗體之另一重鏈之CH3域各自在包含抗體CH3域之間的原始介面之介面處接合(meet)；其中該介面經更改以促進抗體形成，其中更改之特徵在於： a) 更改一個重鏈之CH3域，以使得在與抗體內另一重鏈之CH3域之原始介面接合的一個重鏈之CH3域原始介面內，胺基酸殘基經具有較大側鏈體積之胺基酸殘基置換，由此可在一個重鏈之CH3域之介面內生成隆凸，該隆凸定位於另一重鏈之CH3域之介面內的空腔中； 及 b) 更改另一重鏈之CH3域，以使得在與抗體內之第一CH3域之原始介面接合的第二CH3域之原始介面內，胺基酸殘基經具有較小側鏈體積之胺基酸殘基置換，由此在第二CH3域之介面內生成空腔，第一CH3域之介面內之隆凸可定位於該空腔內。
該具有較大側鏈體積之胺基酸殘基可視情況選自由以下組成之群：精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)。該具有較小側鏈體積之胺基酸殘基可視情況選自由以下組成之群：丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)、纈胺酸(V)。
視情況，在一些實施例中，兩個CH3域係藉由將半胱胺酸(C)作為胺基酸引入各CH3域之對應位置中以使得可在兩個CH3域之間形成雙硫橋鍵，來進行進一步更改。
在一些實施例中，多特異性(例如雙互補位)抗體亦可在其中包含之Fab分子(包括交換型Fab分子)中包含胺基酸取代，其在減少輕鏈與非匹配之重鏈(本瓊氏型(Bence-Jones-type)副產物)之錯配方面尤其有效，此錯配可能在產生基於Fab之雙/多特異性抗原結合分子時發生，該等分子之一個結合臂(或多個，在包含超過兩個結合抗原之Fab分子的分子之情況下)具有VH/VL交換(亦參見PCT公開案第2015/150447號，尤其其中之實例，其以全文引用之方式併入本文中)。所需多特異性抗體與非所需副產物(特定言之，存在於其一個結合臂中之本瓊氏型副產物)之比，可藉由在Fab分子之CH1域及CL域中之特定胺基酸位置處引入具有相反電荷之帶電胺基酸(有時在本文中稱為「電荷修飾」)來改良。
因此，在一些實施例中，包含Fab分子之本發明之抗體包含至少一個Fab，該Fab具有包含如本文中所描述之電荷修飾的重鏈恆定域CH1域以及包含如本文中所描述之電荷修飾的輕鏈恆定CL域。
電荷修飾可在本發明之抗體中所包含之一或多個習知Fab分子中或在本發明之抗體中所包含之一或多個互換型Fab分子中進行(但並非均在兩者中進行)。在特定實施例中，電荷修飾係在本發明之抗體中所包含之一或多個習知Fab分子中進行。
在一些實施例中，在包含有包含電荷修飾之輕鏈恆定域CL及包含電荷修飾之重鏈恆定域CH1的Fab或交換型Fab中，輕鏈恆定域CL中之電荷修飾在位置124處且視情況在位置123處(根據Kabat編號)，且重鏈恆定域CH1中之電荷修飾在位置147及/或213處(根據Kabat EU索引編號)。在一些實施例中，在輕鏈恆定域CL中，位置124處之胺基酸獨立地經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H)取代(根據Kabat編號)(在一個較佳實施例中，獨立地經離胺酸(K)取代)，且在重鏈恆定域CH1中，位置147處之胺基酸及/或位置213處之胺基酸獨立地經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D)取代(根據Kabat EU索引編號)。
B. 標靶抗原  在標靶細胞表面上表現之抗原在本文中亦稱為「標靶抗原」或「標靶細胞抗原」。此等術語在本文中可互換使用。
在本發明係關於治療方法且關於用於該等治療方法中之產品之情況下，其適用於可藉由靶向患者細胞(例如病變細胞)之細胞毒性活性治療的任何病狀。因此，標靶細胞為任何需要作為細胞毒性之目標的細胞，例如任何病變細胞。治療較佳為腫瘤或癌症治療。然而，本發明之適用性不限於腫瘤及癌症。舉例而言，治療亦可為病毒感染(藉由靶向經感染之細胞)或經T細胞驅動之自體免疫疾病(藉由靶向T細胞)治療。已針對諸如HIV、狂犬病及EBV之多種病毒感染，研究針對表現於感染細胞之表面上之病毒抗原的免疫毒素。Cai及Berger 2011 Antiviral Research 90(3):143-50使用含有PE38之免疫毒素對經卡波西氏肉瘤相關疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus)感染之細胞進行靶向殺傷。此外，Resimmune® (A-dmDT390-bisFv(UCHT1))選擇性殺傷人類惡性T細胞且短暫耗乏正常T細胞，且被視為有可能治療T細胞驅動之自體免疫疾病，諸如多發性硬化症及移植物抗宿主疾病，以及正在經歷臨床試驗之T細胞血癌。同樣地，本發明之方法可適用於需要成像之任何細胞類型，包括(但不限於)癌症或腫瘤細胞。
因此，適合的標靶抗原可包括癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原。
抗原通常為過度表現或在異常時間表現之正常細胞表面抗原。理想地，標靶抗原僅在病變細胞(諸如腫瘤細胞)上表現，然而，在實踐中很少觀測到此種情況。因此，通常基於病變組織與健康組織之間的差異表現來選擇標靶抗原。
舉例而言，細胞表面標記物或標靶抗原可為腫瘤相關抗原。
如本文所使用之術語「腫瘤相關抗原」或「腫瘤特異性抗原」係指僅由或主要由腫瘤細胞及/或癌細胞或由其他腫瘤基質細胞(諸如癌症相關纖維母細胞)表現或過度表現，以使得抗原與一或多種腫瘤及/或癌症相關聯的任何分子(例如蛋白、肽、脂質、碳水化合物等)。腫瘤相關抗原亦可由正常、非腫瘤或非癌細胞表現。然而，在此類情況下，由正常、非腫瘤或非癌細胞進行之腫瘤相關抗原表現不如由腫瘤細胞或癌細胞進行之表現穩定。在此方面，與由正常、非腫瘤或非癌細胞進行之抗原表現相比，腫瘤細胞或癌細胞可能會過度表現抗原或以顯著較高水準表現抗原。此外，腫瘤相關抗原亦可由發育或成熟之不同階段之細胞表現。舉例而言，腫瘤相關抗原亦可由胚胎或胎階段之細胞表現，該等細胞通常未現於成年宿主中。或者，腫瘤相關抗原可另外由幹細胞或前驅細胞表現，該等細胞通常未現於成年宿主中。
腫瘤相關抗原可為由任何癌症或腫瘤，包括本文中所描述之癌症及腫瘤之任何細胞表現的抗原。腫瘤相關抗原可為僅一種類型之癌症或腫瘤之腫瘤相關抗原，以使得腫瘤相關抗原僅與一種類型之癌症或腫瘤相關聯或僅表徵一種類型之癌症或腫瘤。或者，腫瘤相關抗原可為超過一種類型之癌症或腫瘤之腫瘤相關抗原(例如可表徵超過一種類型之癌症或腫瘤)。舉例而言，腫瘤相關抗原可由乳癌細胞及前列腺癌細胞表現，且完全不由正常、非腫瘤或非癌細胞表現。
本發明之抗體可結合之例示性腫瘤相關抗原包括(但不限於)：黑色素瘤相關硫酸軟骨素蛋白多醣(MCSP)、黏蛋白1 (MUCl；腫瘤相關上皮黏蛋白)、優先表現之黑色素瘤抗原(PRAME)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、PSCA、EpCAM、Trop2 (滋胚層-2，亦稱為EGP-1)、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子受體(GM-CSFR)、CD56、人類表皮生長因子受體2 (HER2/neu)(亦稱為erbB-2)、CDS、CD7、酪胺酸酶相關蛋白(TRP) I及TRP2。在另一實施例中，腫瘤抗原可選自由以下組成之群：分化叢集(CD) 19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD30、CD33 (唾液酸結合Ig樣凝集素3，骨髓細胞表面抗原)、CD79b、CD123 (介白素3受體α)、運鐵蛋白受體、EGF受體、間皮素、鈣黏蛋白、路易斯Y (Lewis Y)、磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3、FAP (纖維母細胞活化蛋白α)、GPRC5D (G蛋白偶合受體C類第5組成員D)、PSMA (前列腺特異性膜抗原)、CA9=CAIX (碳酸酐酶IX)、Ll CAM (神經細胞黏附分子L1)、內皮唾酸蛋白、HER3 (表皮生長因子受體家族成員3之活化構形)、Alkl/BMP9複合物(未分化淋巴瘤激酶1/骨形態生成蛋白9)、TPBG=5T4 (滋胚層醣蛋白)、ROR1 (受體酪胺酸激酶樣表面抗原)、HER1 (表皮生長因子受體之活化構形)及CLL1 (C型凝集素域家族12成員A)。間皮素表現於例如卵巢癌、間皮瘤、非小細胞肺癌、肺腺癌、輸卵管癌、頭頸癌、子宮頸癌及胰臟癌中。CD22表現於例如毛細胞白血病、慢性淋巴球性白血病(CLL)、前淋巴球白血病(PLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、小淋巴球淋巴瘤(SLL)及急性淋巴白血病(ALL)中。CD25表現於例如白血病及淋巴瘤，包括毛細胞白血病及霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)中。路易斯Y抗原表現於例如膀胱癌、乳癌、卵巢癌、大腸直腸癌、食道癌、胃癌、肺癌及胰臟癌中。CD33表現於例如急性骨髓白血病(AML)、慢性骨髓單核球性白血病(CML)及骨髓增生病中。
特異性結合於腫瘤相關抗原之例示性抗體包括(但不限於)抗運鐵蛋白受體抗體(例如HB21及其變異體)、抗CD22抗體(例如RFB4及其變異體)、抗CD25抗體(例如Tac抗體及其變異體)、抗間皮素抗體(例如SS1、MORAb-009、SS、HN1、HN2、MN、MB及其變異體)及抗路易斯Y抗原抗體(例如B3及其變異體)。在此方面，靶向部分(細胞結合劑)可為選自由B3、RFB4、SS、SS1、MN、MB、HN1、HN2、HB21及MORAb-009組成之群的抗體及其抗原結合部分。適用於本發明之嵌合分子中之其他例示性靶向部分揭示於例如以下各者中：美國專利5,242,824 (抗運鐵蛋白受體)；5,846,535 (抗CD25)；5,889,157 (抗路易斯Y)；5,981,726 (抗路易斯Y)；5,990,296 (抗路易斯Y)；7,081,518 (抗間皮素)；7,355,012 (抗CD22及抗CD25)；7,368,110 (抗間皮素)；7,470,775 (抗CD30)；7,521,054 (抗CD25)；及7,541,034 (抗CD22)；美國專利申請公開案2007/0189962 (抗CD22)；Frankel等人, Clin. Cancer Res., 6: 326-334 (2000)；及Kreitman等人, AAPS Journal, 8(3): E532-E551 (2006)，其中各者以引用之方式併入本文中。
已培養靶向特異性腫瘤相關抗原之其他抗體，該等抗原包括以下抗原：畸胎瘤衍化生長因子(Cripto)、CD30、CD19、CD33、醣蛋白NMB、CanAg、Her2 (ErbB2/Neu)、CD56 (NCAM)、CD22 (Siglec2)、CD33 (Siglec3)、CD79、CD138、PSCA、PSMA (前列腺特異性膜抗原)、BCMA、CD20、CD70、E-選擇素、EphB2、黑色素運鐵蛋白、Muc16及TMEFF2。此等抗體或其抗原結合片段中之任一者可適用於本發明，亦即可併入本文中所描述之抗體中。
在本發明之一些實施例中，可能較佳的是，腫瘤相關抗原為癌胚抗原(CEA)。
CEA在本發明之情形下為有利的，因為其內化相對緩慢，且因此在初始處理之後，有較高百分比之可用抗體將留在細胞表面上以用於與放射性核種結合。其他低內化標靶/腫瘤相關抗原亦可為較佳的。腫瘤相關抗原之其他實例包括CD20或HER2。在其他實施例中，標靶可為EGP-1 (上皮醣蛋白-1，亦稱為滋胚層-2)、結腸特異性抗原-p (CSAp)或胰臟黏蛋白MUC1。參見例如Goldenberg等人2012 (Theranostics 2(5))，其以引用之方式併入本文中。此參考文獻亦描述諸如以下之抗體：結合於CSAp之μ-9 (亦參見Sharkey等人, Cancer Res. 2003; 63: 354-63)、結合於MUC1之hPAM4 (亦參見Gold等人, Cancer Res. 2008: 68: 4819-26)、結合於CD20之維妥珠單抗(valtuzumab)(亦參見Sharkey等人, Cancer Res. 2008; 68: 5282-90)及結合於EGP-1之hRS7 (亦參見Cubas等人, Biochim Biophys Acta 2009; 1796: 309-14)。此等抗體或其抗原結合片段中之任一者可適用於本發明，亦即可併入本文中所描述之抗體中。已培養之針對CEA之抗體之一個實例為T84.66 (如NCBI寄存編號：CAA36980 (重鏈)及CAA36979 (輕鏈)中所示，或如WO2016/075278之SEQ ID NO 317及318中所示)以及其人類化及嵌合型式，諸如WO2016/075278 A1及/或WO2017/055389中所描述之T84.66-LCHA。另一實例為CH1A1a，其作為如WO2012/117002及WO2014/131712中所描述之抗CEA抗體；及CEA hMN-14 (亦參見US 6 676 924及US 5 874 540)。另一抗CEA抗體為如M.J. Banfield等人, Proteins 1997, 29(2), 161-171中所描述之A5B7。衍生自鼠類抗體A5B7之人類化抗體已揭示於WO 92/01059及WO 2007/071422中。亦參見同在申請中之申請案PCT/EP2020/067582。A5B7之人類化型式之實例為A5H1EL1(G54A)。針對CEA之另一例示性抗體為MFE23及其人類化型式，其描述於US7626011及/或同在申請中之申請案PCT/EP2020/067582中。針對CEA之抗體之另一實例為28A9。此等抗體或其抗原結合片段中之任一者可用於形成本發明中之CEA結合部分。
在一些實施例中，FAP (纖維母細胞活化蛋白α)或GPRC5D (G蛋白偶合受體C類第5組成員D)亦可為較佳的。由於FAP在例如胰臟癌、乳癌及肺癌之多個腫瘤類型之微環境中廣泛表現，因此其為成像及療法之確立標靶(Lindner, T., Loktev, A., Giesel, F.等人, Targeting of activated fibroblasts for imaging and therapy. EJNMMI radiopharm. chem. 4, 16 (2019))。在本發明之一個實施例中，SPLIT PRIT使用FAP作為標靶抗原，因此將預期產生 212Pb-DOTAM在經活化之癌症相關纖維母細胞上之特異性積聚。因此，預期除了對相鄰腫瘤細胞具有有限的直接腫瘤殺傷作用以外，所發射之α輻射將對表現FAP之惡性腫瘤的免疫抑制產生負面影響。G蛋白偶合受體家族C第5組成員D (GPRC5D)在多發性骨髓瘤漿細胞上過度表現(Atamaniuk J, Gleiss A, Porpaczy E, Kainz B, Grunt TW, Raderer M,等人, Overexpression of G protein-coupled receptor 5D in the bone marrow is associated with poor prognosis in patients with multiple myeloma. Eur J Clin Invest. 2012;42:953-60.)，且已確立之SC (皮下)活體內模型反映在多發性骨髓瘤患者中發現之表現，例如OPM-2及NCI-H929 (Kodama T, Kochi Y, Nakai W, Mizuno H, Baba T, Habu K,等人, Anti-GPRC5D/CD3 bispecific T-cell-redirecting antibody for the treatment of multiple myeloma. Mol Cancer Ther. (2019) 18:1555-64)。在本發明之一個實施例中，因此期望SPLIT PRIT使用GPRC5D作為標靶抗原，以產生 212Pb-DOTAM之腫瘤特異性累積，然後為放射線誘發之腫瘤細胞死亡。
在一些實施例中，本發明之抗體可特異性結合於標靶抗原(例如本文所論述之標靶抗原中之任一者)。在一些實施例中，其可以≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 - 7M或更小，例如10 - 7M至10 - 13M；10 - 8M或更小，例如10 - 8M至10 - 13M，例如10 - 9M至10 - 13M)之解離常數(K D)結合。
在一個實施例中，第一抗體及第二抗體可各自結合於相同標靶抗原，其可稱為「抗原A」(亦即，該等抗體對相同標靶抗原具有結合特異性)。該等抗體可各自對抗原A上之相同抗原決定基具有結合特異性。或者，第一抗體可結合於抗原A上之第一抗原決定基且第二抗體可結合於抗原A上之不同的第二抗原決定基。舉例而言，在一個實施例中，該等抗體中之一者可結合於CEA之T84.66抗原決定基且另一者可結合於CEA之A5B7抗原決定基。在一些實施例中，對抗原A而言，第一抗體及/或第二抗體中之一者或兩者可為雙互補位的-亦即，個別抗體中之各者可結合於抗原A之兩個不同抗原決定基。第一抗體可包含分別結合於抗原A之第一抗原決定基及第二抗原決定基的第一結合位點及第二結合位點，其中第一抗原決定基與第二抗原決定基彼此不同。或者或另外，第二抗體可包含結合於抗原A之第一抗原決定基及第二抗原決定基的第一結合位點及第二結合位點，其中第一抗原決定基與第二抗原決定基彼此不同。在一些實施例中，第一抗體所結合之抗原決定基中之一者或兩者可與第二抗體所結合之抗原決定基中之一者或兩者不同。在其他實施例中，第一抗體所結合之兩個抗原決定基可與第二抗體所結合之兩個抗原決定基相同。
在另一實施例中，第一抗體及第二抗體可分別結合於不同標靶抗原，該等不同標靶抗原可分別稱為抗原A及抗原B。
C. 效應部分  根據本發明，第一抗體與第二抗體之結合形成針對效應部分之功能性結合位點。
在一個特定實施例中，本發明之效應部分係選自藥物、細胞毒素、顯影劑及放射性標記化合物。
在一個特定實施例中，本發明之效應部分為放射性標記化合物，其包含放射性同位素，例如放射性標記半抗原。
在一些實施例中，效應分子可包含螯合放射性同位素。
在一些實施例中，針對效應分子之功能性結合位點可結合於包含螯合劑及放射性同位素之螯合物。在其他實施例中，抗體可結合於與經螯合放射性同位素接合之部分，該螯合放射性同位素例如組胺-丁二醯基-甘胺酸(HSG)、地穀新配質(digoxigenin)、生物素或咖啡鹼。
螯合劑可為例如多齒分子，諸如胺基多羧酸或胺基多硫羧酸或其鹽或功能變異體。舉例而言，螯合劑可為雙齒或三齒或四齒的。適合的金屬螯合劑之實例包括包含以下之分子：EDTA (乙二胺四乙酸，或諸如CaNa 2EDTA之鹽形式)、DTPA (二伸乙三胺五乙酸)、DOTA (1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、NOTA (2,2',2''-(1,4,7-三氮壬烷-1,4,7-三基)三乙酸)、IDA (亞胺二乙酸)、MIDA ((甲基亞胺基)二乙酸)、TTHA (3,6,9,12-肆(羧基甲基)-3,6,9,12-四-氮雜十四烷二酸)、TETA (2,2',2'',2'''-(1,4,8,11-四氮雜環十四烷-1,4,8,11-四基)四乙酸)、DOTAM 1,4,7,10-肆(胺甲醯基甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷、HEHA (1,4,7,10,13,16-六氮雜環十六烷-1,4,7,10,13,16-六乙酸，可獲自Macrocyclics, Inc., Plano, Texas)、NTA (氮基三乙酸)、EDDHA (乙二胺-N, N'-雙(2-羥基苯乙酸)、BAL (2,3-二巰基丙醇)、DMSA (2,3-二巰基丁二酸)、DMPS (2,3-二巰基-1-丙磺酸)、D-青黴胺(B-二甲基半胱胺酸)、MAG 3(巰基乙醯三甘胺酸)、肼基菸醯胺(Hynic) (6-肼基吡啶-3-甲酸)、對-異硫氰基苯甲基-去鐵胺(例如經鋯標記以用於成像)；及其能夠螯合金屬之鹽或功能變異體/衍生物。在一些實施例中，可能較佳的是，螯合劑為DOTA或DOTAM或其能夠螯合金屬之鹽或功能變異體/衍生物。因此，螯合劑可為或可包含具有與其螯合之放射性同位素的DOTA或DOTAM。
效應分子可包含上文螯合劑之功能變異體或衍生物以及放射性核種或由其組成。適合的變異體/衍生物具有在某種有限程度上有所不同之結構且保持充當螯合劑之能力(亦即，保持足以用於本文所描述之一或多個目的之活性)。功能變異體/衍生物亦可包括結合於一或多個額外部分或取代基的如上文所描述之螯合劑，包括小分子、多肽或碳水化合物。此連接可例如在螯合劑之主鏈部分中經由組份碳中之一者發生。舉例而言，適合的取代基可為烴基，諸如烷基、烯基、芳基或炔基；羥基；醇基；鹵素原子；硝基；氰基；磺醯基；硫醇基；胺基；側氧基；羧基；硫羧基；羰基；醯胺基；酯基；或雜環基，包括雜芳基。舉例而言，取代基可為下文針對基團「R 1」所定義之取代基中之一者。舉例而言，小分子可為染料(諸如Alexa 647或Alexa 488)、生物素或生物素部分或苯基或苯甲基部分。舉例而言，多肽可為寡肽，例如具有兩個或三個胺基酸之寡肽。例示性碳水化合物包括葡聚糖、直鏈或分支鏈聚合物或共聚物(例如聚亞烷基、聚(亞乙基-離胺酸)、聚甲基丙烯酸酯、聚胺基酸、多醣或寡醣、樹枝狀聚合物)。衍生物亦可包括螯合劑化合物之多聚體，其中如上文所闡述之化合物經由連接子部分連接。衍生物亦可包括保持螯合金屬離子之能力的以上化合物之功能片段。
衍生物之特定實例包括苯甲基-EDTA及羥乙基-硫脲基-苯甲基EDTA、DOTA-苯(例如(S-2-(4-胺基苯甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷四乙酸)、DOTA-生物素及DOTA-TyrLys-DOTA。
在本發明之一些實施例中，藉由第一抗體與第二抗體結合形成之功能性結合位點結合於包含DOTAM及例如鉛(Pb)之金屬的金屬螯合物。如上文所提及，「DOTAM」具有化學名稱： 1,4,7,10-肆(胺甲醯基甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷， 其為下式之化合物：
Figure 02_image001
。
在某些態樣及實施例中，本發明亦可利用合併有金屬離子之DOTAM之功能變異體或衍生物。適合的DOTAM之變異體/衍生物具有在某種有限程度上與DOTAM之結構有所不同的結構，且保持起作用之能力(亦即，保持足以用於本文所描述之一或多個目的之活性)。在該等態樣及實施例中，DOTAM或DOTAM之功能變異體/衍生物可為WO 2010/099536中所揭示之活性變異體中之一者。適合的功能變異體/衍生物可為下式之化合物：
Figure 02_image003
， 或其醫藥學上可接受之鹽；其中 R N為H、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基,苯基,苯基-C 1-4-烷基、C 1-7雜芳基、及C 1-7雜芳基-C 1-4-烷基；其中C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基、及C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R w基團取代；且其中該C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基,苯基,苯基-C 1-4-烷基、C 1-7雜芳基、及C 1-7雜芳基-C 1-4-烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R x基團取代； L 1獨立地為C 1-6亞烷基、C 1-6亞烯基或C 1-6亞炔基，其中之各者視情況經1、2或3個獨立地選自R 1基團之基團取代； L 2為C 2-4直鏈亞烷基，其視情況由經獨立選擇之R 1基團取代；且其視情況經1、2、3或4個獨立地選自C 1-4烷基及/或C 1-4鹵代烷基之基團取代； R 1獨立地選自D 1-D 2-D 3、鹵素、氫基、硝基、羥基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷基亞磺醯基、C 1-6烷基磺醯基、胺基、C 1-6烷胺基、二-C 1-6烷胺基、C 1-4烷基羰基,羧基、C 1-6烷氧羰基、C 1-6烷基羰基胺基、二-C 1-6烷基羰基胺基、C 1-6烷氧基羰基胺基、C 1-6烷氧羰基-(C 1-6烷基)胺基、胺甲醯基、C 1-6烷基胺甲醯基及二-C 1-6烷基胺甲醯基； 各D 1獨立地選自C 6-10芳基-C 1-4烷基、C 1-9雜芳基-C 1-4烷基、C 3-10環烷基-C 1-4烷基、C 2-9雜環烷基-C 1-4烷基、C 1-8亞烷基、C 1-8亞烯基及C 1-8亞炔基；其中該C 1-8亞烷基、C 1-8亞烯基及C 1-8亞炔基視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R 4基團取代；且其中該C 6-10芳基-C 1-4烷基、C 1-9雜芳基-C 1-4烷基、C 3-10環烷基-C 1-4烷基、C 2-9雜環烷基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R 5基團取代； 各D 2獨立地不存在或為C 1-20直鏈亞烷基，其中該C 1-20直鏈亞烷基之1至6個非相鄰亞甲基各自視情況由經獨立選擇之-D 4-部分置換，其條件為該C 1-20直鏈亞烷基中之至少一個亞甲基單元中未由-D 4-部分視情況置換；其中該C 1-20直鏈亞烷基視情況經獨立地選自以下之一或多個基團取代：鹵素、氫基、硝基、羥基、C 1-4烷基、C 1-4鹵代烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵代烷氧基、胺基、C 1-4烷胺基、二-C 1-4烷胺基、C 1-4烷基羰基,羧基、C 1-4烷氧羰基、C 1-4烷基羰基胺基、二-C 1-4烷基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基胺基、C 1-4烷氧羰基-(C 1-4烷基)胺基、胺甲醯基、C 1-4烷基胺甲醯基及二-C 1-4烷基胺甲醯基； 各D 3獨立地選自H、鹵素、氫基、硝基、羥基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-14環烷基、C 3-14環烷基-C 1-4烷基、C 2-14雜環烷基、C 2-14雜環烷基-C 1-4烷基、C 6-14芳基、C 6-14芳基-C 1-4烷基、C 1-13雜芳基、C 1-13雜芳基-C 1-4烷基；其中該C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R 6基團取代；且其中該C 3-14環烷基、C 3-14環烷基-C 1-4烷基、C 2-14雜環烷基、C 2-14雜環烷基-C 1-4烷基、C 6-14芳基、C 6-14芳基-C 1-4烷基、C 1-13雜芳基、C 1-13雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R 7基團取代； 各D 4獨立地選自-O-、-S-、-NR aC(=O)-、-NR aC(=S)-、-NR bC(=O)NR c-、-NR bC(=S)NR c-、-S(=O)-、-S(=O) 2-、-S(=O)NR a-、-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=O)O-、-OC(=O)NR a-、-OC(=S)NR a-、-NR a-、-NR bS(=O)NR c-及NR bS(=O) 2NR O-； 各R 4及R 6獨立地選自鹵素、氫基、硝基、羥基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵代烷氧基、C 1-4烷硫基、C 1-4烷基亞磺醯基、C 1-4烷基磺醯基、胺基、C 1-4烷胺基、二-C 1-4烷胺基、C 1-4烷基羰基,羧基、C 1-4烷氧羰基、C 1-4烷基羰基胺基、二-C 1-4烷基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基胺基、C 1-4烷氧羰基-(C 1-4烷基)胺基、胺甲醯基、C 1-4烷基胺甲醯基及二-C 1-4烷基胺甲醯基； 各R 5獨立地選自鹵素、氫基、氰酸根、異硫氰酸根、硝基、羥基、C 1-4烷基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵代烷氧基、C 1-4烷硫基、C 1-4烷基亞磺醯基、C 1-4烷基磺醯基、胺基、C 1-4烷胺基、二-C 1-4烷胺基、C 1-4烷基羰基、羧基、C 1-4烷氧羰基、C 1-4烷基羰基胺基、二-C 1-4烷基羰基胺基、C 1-4烷氧基羰基胺基、C 1-4烷氧羰基-(C 1-4烷基)胺基、胺甲醯基、C 1-4烷基胺甲醯基及二-C 1-4烷基胺甲醯基； 各R 7獨立地選自鹵素、氫基、硝基、羥基、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基,苯基,苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基、-OR O、-SR O、-S(=O)R P、-S(=O) 2R P、-S(=O)NR sR t、-C(=O)R P、-C(=O)OR P、-C(=O)NR sR t、-OC(=O)R P、-OC(=O)NR sR t、-NR sR t、-NR qC(=O)R r、-NR qC(=O)OR r、-NR qC(=O)NR r、-NR qS(=O) 2R r及-NR PS(=O) 2NR sR t；其中該C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R'基團取代；且其中該C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基、苯基、苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R''基團取代； 各R a、R b及R c獨立地選自H、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基,苯基,苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基；其中該C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R w基團取代；且其中該C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基,苯基,苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R x基團取代； 各R o、R p、R q、R r、R s及R t獨立地選自H、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基,苯基,苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基；其中該C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R y基團取代；且其中該C 3-7環烷基、C 3-7環烷基-C 1-4烷基、C 2-7雜環烷基、C 2-7雜環烷基-C 1-4烷基,苯基,苯基-C 1-4烷基、C 1-7雜芳基、C 1-7雜芳基-C 1-4烷基各自視情況經1、2、3或4個經獨立選擇之R z基團取代； 各R'、R w及R y獨立地選自羥基、氫基、硝基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵代烷氧基、胺基、C 1-4烷胺基及二-C 1-4烷胺基；且 各R''、R x及R z獨立地選自羥基、鹵素、氫基、硝基、C 1-4烷基、C 1-4鹵代烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵代烷氧基、胺基、C 1-4烷胺基及二-C 1-4烷胺基； 其限制條件為不超出視情況經取代之部分中之各原子之價數。
適當地，上式之功能變異體/衍生物對本發明之抗體的親和力與DOTAM類似或超過DOTAM，且對Pb之結合強度與DOTAM類似或超過DOTAM (「親和力」如藉由解離常數來量測，如上所述)。舉例而言，功能性/變異型衍生物對本發明之抗體/Pb的解離常數可為DOTAM對相同抗體/Pb之解離常數的1.1倍或更小、1.2倍或更小、1.3倍或更小、1.4倍或更小、1.5倍或更小或2倍或更小。
各R N可為H、C 1-6烷基或C 1-6鹵代烷基；較佳為H、C 1-4烷基或C 1-4鹵代烷基。最佳地，各R N為H。
對於DOTAM變異體，較佳為1、2、3，或最佳地各L 2為C 2亞烷基。有利地，DOTAM之C 2亞烷基變異體可對Pb具有尤其高之親和力。L 2之視情況存在之取代基可為R 1、C 1 - 4烷基或C 1 - 4鹵代烷基。適當地，L 2之視情況存在之取代基可為C 1 - 4烷基或C 1 - 4鹵代烷基。
視情況，各L 2可為未經取代之C 2亞烷基，-CH 2CH 2-。
各L 1較佳為C 1 - 4亞烷基，更佳為C 1亞烷基，諸如-CH 2-。
DOTAM之功能變異體/衍生物可為下式之化合物：
Figure 02_image005
， 其中各Z獨立地為如上文所定義之R 1；p、q、r及s為0、1或2；且p+q+r+s為1或更大。較佳地，p、q、r及s為0或1及/或p+q+r+s為1。舉例而言，該化合物可具有p+q+r+s=1，其中Z為對SCN-苯甲基部分-，此類化合物可商購自Macrocyclics, Inc. (Plano, Texas)。
適用於本發明中之放射性核種可包括諸如鉛(Pb)、鎦(Lu)或釔(Y)之金屬之放射性同位素。
尤其適用於成像應用中之放射性核種可為作為γ發射體之放射性核種。舉例而言，其可選自 203Pb或 205Bi。
尤其適用於治療應用中之放射性核種為作為α或β發射體之放射性核種。舉例而言，其可選自 212Pb、 212Bi、 213Bi、 90Y、 177Lu、 225Ac、 211At、 227Th、 223Ra。
在一些實施例中，可較佳地，DOTAM (或其鹽或功能變異體)與諸如上文所列之Pb或Bi放射性同位素中之一者之Pb或Bi螯合。在其他實施例中，可較佳地，DOTA (或其鹽或功能變異體)與諸如上文所列之Lu或Y放射性同位素中之一者之Lu或Y螯合。
在一些實施例中，方法及用途可包含利用例如適用於療法之放射性同位素及適用於成像之放射性同位素之放射性同位素混合物的組合療法及成像方法。舉例而言，以上放射性同位素可為藉由相同螯合劑螯合之相同金屬之不同放射性同位素。在一個實施例中，方法可包含投與呈混合物形式之 203Pb-DOTAM及 212Pb-DOTAM。在另一實施例中，方法可包含使用諸如 203Pb或 205Bi之γ發射體之劑量測定術之第一循環，接著為使用諸如 212Pb、 212Bi、 213Bi、 90Y、 177Lu、 225Ac、 211At、 227Th或 223Ra之α或β發射體之一或多輪治療。該等方法進一步描述於下文中。
在一些實施例中，藉由第一抗體與第二抗體結合形成之功能性結合位點可結合於Pb-DOTAM螯合物。
在一些實施例中，藉由結合第一抗體及第二抗體形成之功能性結合位點可特異性結合於放射性標記化合物。在一些實施例中，功能性結合位點可結合於諸如Pb-DOTAM螯合物之放射性標記化合物，其中對Pb-DOTAM及/或標靶之解離常數(K D)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 -7M或更小，例如10 -7至10 -13；10 -8M或更小，例如10 -8M至10 -13M，例如10 -9M至10 -13M)。在一些實施例中，可能較佳的是，其以100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小之結合親和力之K D值結合。舉例而言，功能性結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之K D結合金屬螯合物。
D. 針對DOTA之例示性抗原結合位點  在本發明之一個特定實施例中，第一抗體與第二抗體結合以形成針對DOTA (或其功能衍生物或變異體)之功能性結合位點，例如針對與Lu或Y (例如 177Lu或 90Y)螯合之DOTA。舉例而言，功能性結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之Kd結合放射性標記化合物。
C825為已知對與放射性金屬錯合(諸如 177Lu及 90Y)之DOTA-Bn (S-2-(4-胺基苯甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷四乙酸)具有高親和力的scFv (參見例如Cheal等人, 2018, Theranostics 2018及WO2010099536，其以引用之方式併入本文中)。本文提供C825之CDR序列以及VL及VH序列。在一個實施例中，形成針對放射性標記化合物之抗原結合位點之一部分的重鏈可變區可包含至少一個、兩個或全部三個選自以下之CDR：(a)包含35之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含36之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含37之胺基酸序列的CDR-H3。在一個替代性實施例中，CDR-H1可具有序列GFSLTDYGVH (SEQ ID NO.: 148)。形成針對放射性標記化合物之結合位點之一部分的輕鏈可變區可包含至少一個、兩個或全部三個選自以下之CDR：(d)包含38之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含39之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含40之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一實施例中，形成針對放射性標記化合物(在第一抗體上)之功能性抗原結合位點之一部分的重鏈可變域包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或其變異體，該變異體包含與SEQ ID NO: 41至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之結合位點仍保持較佳以如本文所描述之親和力結合於與Lu或Y錯合之DOTA的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:41中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在CDR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，抗體包含SEQ ID NO:41中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列或序列GFSLTDYGVH (SEQ ID NO.: 148)的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列的CDR-H3。
視情況，形成針對放射性標記化合物(在第二抗體上)之功能性抗原結合位點之一部分的輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列或其變異體，該變異體包含與SEQ ID NO: 42至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之結合位點保持較佳以如本文所描述之親和力結合於與Lu或Y錯合之DOTA的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO: 42中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在CDR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，抗體包含SEQ ID NO:42中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:39之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:40之胺基酸序列的CDR-L3。
明確涵蓋關於重鏈可變區及輕鏈可變區之實施例組合。因此，功能性抗原結合位點可分別在第一抗體及第二抗體上由如上文所定義之重鏈可變區及如上文所定義之輕鏈可變區形成。
在上文實施例中之任一個中，形成用於DOTA錯合物之結合位點之輕鏈可變區及重鏈可變區可為人類化的。在一個實施例中，輕鏈可變區及重鏈可變區包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。
在一些實施例中，如下文進一步論述，重鏈可變域可藉由諸如一或多個C端丙胺酸殘基之一或多個C端殘基或來自CH1域N端之一或多個殘基延伸。
E. 針對DOTAM之例示性抗原結合位點  在本發明之另一特定實施例中，第一抗體及第二抗體結合以形成針對Pb-DOTAM螯合物(Pb-DOTAM)之功能性抗原結合位點。例示性抗原結合位點描述於WO2019/201959中，其以全文引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，結合於Pb-DOTAM之功能性抗原結合位點可具有以下特性中之一或多者： • 特異性結合於Pb-DOTAM且特異性結合於Bi-DOTAM； • 與諸如Cu-DOTAM之其他螯合金屬相比，對Pb-DOTAM (及視情況存在之Bi-DOTAM)具有選擇性； • 以極高親和力結合於Pb-DOTAM； • 與WO2019/201959中所描述之抗體(例如PRIT-0213或PRIT-0214)結合於Pb-DOTAM上之相同抗原決定基及/或與該等抗體具有相同接觸殘基。
Pb之放射性同位素適用於診斷方法及療法中。可用於本發明中之鉛之特定放射性同位素包括 212Pb及 203Pb。
由於較短的路徑長度及較高的線性能量傳遞之組合，故與β-發射體相比，作為α-粒子發射體之放射性核種能夠在對周圍組織損傷更小之情況下更特異性地殺傷腫瘤細胞。 212Bi為α-粒子發射體，但其較短的半衰期妨礙其直接使用。 212Pb為 212Bi之母放射性核種且可充當 212Bi之活體內生成劑，由此有效地克服 212Bi之短半衰期(Yong及Brechbiel, Dalton Trans. 2001年6月21日; 40(23)6068-6076)。
203Pb可用作成像同位素。因此，結合於 203Pb-DOTAM之抗體可用於放射免疫成像(RII)。
一般而言，放射性金屬以螯合形式使用。在本發明之某些態樣中，DOTAM用作螯合劑。DOTAM為Pb(II)之穩定螯合劑(Yong及Brechbiel, Dalton Trans. 2001年6月21日; 40(23)6068-6076；Chappell等人, Nuclear Medicine and Biology, 第27卷, 第93-100頁, 2000)。因此，DOTAM尤其適用於與如上文所論述之鉛之同位素，諸如 212Pb及 203Pb結合使用。
在一些實施例中，可能較佳的是，抗體以100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小之結合親和力之Kd值結合Pb-DOTAM。舉例而言，功能性結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之Kd結合放射性標記化合物。
在某個實施例中，抗體亦結合於由DOTAM螯合之Bi。在一些實施例中，可能較佳的是，抗體以1 nM、500 pM、200 pM、100 pM、50 pM、10 pM或更小，例如9 pM、8 pM、7 pM、6 pM、5 pM或更小之結合親和力之Kd值結合Bi-DOTAM (亦即，包含與鉍錯合之DOTAM的螯合物，在本文中亦稱為「Bi-DOTAM螯合物」)。舉例而言，功能性結合位點可以約1 pM-1 nM，例如約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之Kd結合金屬螯合物。
在一些實施例中，抗體可以類似親和力結合於Bi-DOTAM且結合於Pb-DOTAM。舉例而言，可能較佳的是，對Bi-DOTAM/Pb-DOTAM之親和力之比率(例如Kd值之比率)在0.1-10之範圍內，例如1-10。
在一個實施例中，形成針對Pb-DOTAM之抗原結合位點之一部分的重鏈可變區可包含至少一個、兩個或全部三個選自以下之CDR：(a)包含GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)之胺基酸序列的CDR-H3。形成針對Pb-DOTAM之結合位點之一部分的輕鏈可變區可包含至少一個、兩個或全部三個選自以下之CDR：(d)包含QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含QASKLAS (SEQ ID NO:5)之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)之胺基酸序列的CDR-L3。
在一些實施例中，抗體可包含分別與SEQ ID NO: 1-6之胺基酸序列相比具有取代，例如具有1、2或3個取代之一或多個CDR-H1、CDR-H2及/或CDR-H3，或一或多個CDR-L1、CDR-L2及/或CDR-L3。
在一些實施例中，抗體可與本文所描述之接觸殘基共享相同的接觸殘基：例如此等殘基可為不變的。此等殘基可包括以下殘基： a) 重鏈CDR2中：Phe50、Asp56及/或Tyr58，以及此外視情況存在之Gly52及/或Arg 54； b) 重鏈CDR3中：Glu95、Arg96、Asp97、Pro98、Tyr99、Ala100C及/或Tyr100D，以及此外視情況存在之Pro100E； c) 輕鏈CDR1中：Tyr28及/或Asp32； d) 輕鏈CDR3中：Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c及/或Tyr96； e) 輕鏈CDR2中：視情況存在之Gln50； 所有殘基係根據Kabat編號。
舉例而言，在一些實施例中，CDR-H2可包含胺基酸序列FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)或在SEQ ID NO: 2中具有至多1、2或3個取代之其變異體，其中此等取代不包括Phe50、Asp56及/或Tyr58，且視情況亦不包括Gly52及/或Arg 54，所有殘基係根據Kabat編號。
在一些實施例中，CDR-H2可在如下文所示之一或多個位置經取代。此處及隨後之取代表中，取代係基於生殖系殘基(帶下劃線)或經理論上空間擬合且亦在結晶譜系中在位點處出現的胺基酸取代。在一些實施例中，如上文所提及之殘基可不變且其他殘基可根據下表取代：在其他實施例中，任何殘基之取代均可根據下表進行。
WolfGuy Kabat AA 取代
251 50 F Y、 H
252 51 I   
253 52 G   
254 53 S A 、 G 、 T、I、N
288 54 R A 、 D 、 G 、 N 、 S 、T、F、Y
289 55 G D、 S、Y、T、A、N、R、V
290 56 D   
291 57 T K、 I、A、P、S
292 58 Y F、W、H
293 59 Y N、F、H、L、S
294 60 A G、 N、 S、 T
295 61 S A、 G、 N、 Q、 T
296 62 W K、 P、 S、A、T、D、N、R、Q
297 63 A F、 L、 V、M、I
298 64 K N、 Q、R、E
299 65 G S、 T、D、N、A
視情況，CDR-H3可包含胺基酸序列ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)或在SEQ ID NO: 3中具有至多1、2或3個取代之其變異體，其中此等取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98且視情況亦不包括Ala100C、Tyr100D及/或Pro100E，及/或視情況亦不包括Tyr99。舉例而言，在一些實施例中，取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98、Tyr99、Ala100C及Tyr100D。
在某些實施例中，CDR-H3可在如下文所示之一或多個位置處經取代。在一些實施例中，如上文所提及之殘基可不變且其他殘基可根據下表取代：在其他實施例中，任何殘基之取代均可根據下表進行。
WolfGuy Kabat AA 取代
351 95 E   
352 96 R K、E
353 97 D   
354 98 P   
355 99 Y F、G、S、T、D
356 100 G   
392 100A G   
393 100B G   
394 100C A S、T
395 100D Y F
396 100E P   
397 100F P   
398 101 H A、T、V、D
399 102 L Y、V、I、H、F
視情況，CDR-L1可包含胺基酸序列QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)或在SEQ ID NO: 4中具有至多1、2或3個取代之其變異體，其中此等取代不包括Tyr28及/或Asp32 (Kabat編號)。
在某些實施例中，CDR-L1可在如下文所示之一或多個位置處經取代。同樣，在一些實施例中，如上文所提及之殘基可不變且其他殘基可根據下表取代：在其他實施例中，任何殘基之取代均可根據下表進行。
WolfGuy Kabat AA 取代
551 24 Q R、 K
552 25 S A、 G
554 26 S T
555 27 H Q、 S、R、K
556 27A S Q
557 27B V I、 D、 N
561 28 Y F
562 29 S T、 V
571 30 D R、 S、 N、 G
572 31 N K
597 32 D   
598 33 L I、 V、 M
599 34 A S
視情況，CDR-L3可包含胺基酸序列LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)或在SEQ ID NO: 6中具有至多1、2或3個取代之其變異體，其中此等取代不包括Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c及/或Tyr96 (Kabat)。
在某些實施例中，CDR-L3可在如下文所示之以下位置處經取代。(因為大部分殘基為暴露於溶劑的且不存在抗原接觸，故可設想許多取代)。同樣，在一些實施例中，如上文所提及之殘基可不變且其他殘基可根據下表取代：在其他實施例中，任何殘基之取代均可根據下表進行。
WolfGuy Kabat AA 取代
751 89 L A、V、Q
752 90 G A
753 91 G   
754 92 Y A、D、E、F、G、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V
755 93 D A、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W、Y
756 94 D A、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W、Y
794 95 E A、D、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W、Y
795 95A S A、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、T、V、W、Y
796 95B D A、E、F、G、H、I、L、M、N、Q、S、T、V、W、Y
797 95C T S
798 96 Y F、H、R
799 97 G A、E、I、K、L、M、N、Q、S、T、V
抗體可進一步包含視情況分別具有SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 5之序列或相對於其而言具有至少1、2或3個取代，視情況保守取代之其變異體的CDR-H1或CDR-L2。
因此，形成用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之一部分之重鏈可變域可至少包含： a) 包含胺基酸序列FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)或在SEQ ID NO: 2中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR2，其中此等取代不包括Phe50、Asp56及/或Tyr58，且視情況亦不包括Gly52及/或Arg54； b) 包含胺基酸序列ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)或在SEQ ID NO: 3中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR3，其中此等取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98，且視情況亦不包括Ala100C、Tyr100D及/或Pro100E，及/或視情況亦不包括Tyr99。
在一些實施例中，重鏈可變域另外包括視情況為以下之重鏈CDR1： c)包含胺基酸序列GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)或在SEQ ID NO: 1中具有至多1、2或3個取代之其變異體之重鏈CDR1。
在另一實施例中，形成用於Pb-DOTAM之抗原結合位點之一部分之輕鏈可變域至少包含： d) 包含胺基酸序列QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)或在SEQ ID NO: 4中具有至多1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR1，其中此等取代不包括Tyr28及Asp32； e) 包含胺基酸序列LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)或在SEQ ID NO: 6中具有至多1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR3，其中此等取代不包括Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c及Tyr96。
在一些實施例中，輕鏈可變域另外包括視情況為以下之輕鏈CDR2： f)包含胺基酸序列QASKLAS (SEQ ID NO: 5)或在SEQ ID NO: 5中具有至少1、2或3個取代之其變異體之輕鏈CDR2，該等取代視情況不包括Gln50。
在包括包含如上文所闡述之CDR (例如具有可變域)之序列變異體之本發明任何實施例中，蛋白可在如上文所闡述之CDR殘基中之一或多個中為不變異的。
視情況，形成針對Pb-DOTAM (在第一抗體上)之功能性抗原結合位點之一部分的重鏈可變域包含選自由SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO 9或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 9至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之結合位點保持較佳以如本文所描述之親和力結合於Pb-DOTAM的能力。VH序列可保留如上文所闡述之不變異殘基。在某些實施例中，SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO 9中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在CDR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，抗體包含SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 9中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的CDR-H3。
視情況，形成針對Pb-DOTAM(在第二抗體上)之功能性抗原結合位點之一部分的輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其變異體，該變異體包含與SEQ ID NO: 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗Pb-DOTAM結合位點保持較佳以如本文所描述之親和力結合於Pb-DOTAM的能力。VL序列可保留如上文所闡述之不變異殘基。在某些實施例中，SEQ ID NO:8中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在CDR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，抗Pb-DOTAM抗體包含SEQ ID NO:8中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列的CDR-L3。
明確地考慮關於重鏈可變區及輕鏈可變區之實施例組合。因此，針對Pb-DOTAM之功能性抗原結合位點可分別在第一抗體及第二抗體上由如上文所定義之重鏈可變區及如上文所定義之輕鏈可變區形成。
視情況，對Pb-DOTAM螯合物具有特異性之抗原結合位點可由如下重鏈可變域及輕鏈可變域形成：該重鏈可變域包含選自由SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 9或如上文所定義之其變異體組成之群的胺基酸序列，該輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或如上文所定義之其變異體。舉例而言，對Pb-DOTAM螯合物具有特異性之抗原結合位點可包含如下重鏈可變域及輕鏈可變域：包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列或其變異體的重鏈可變域，以及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其變異體的輕鏈可變域，包括該等序列之轉譯後修飾。在另一實施例中，該抗原結合位點可包含如下重鏈可變域及輕鏈可變域：包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列或其變異體的重鏈可變域，以及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其變異體的輕鏈可變域，包括該等序列之轉譯後修飾。
在任一以上實施例中，形成抗Pb-DOTAM結合位點之輕鏈可變區及重鏈可變區可為人類化的。在一個實施例中，輕鏈可變區及重鏈可變區包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。在另一實施例中，輕鏈可變區及/或重鏈可變區包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含衍生自vk 1 39及/或vh 2 26之構架區。在一些實施例中，對於vk 1 39，可不存在回復突變。對於vh 2 26，生殖系Ala49殘基可回復突變成Gly49。
F. 針對CEA之例示性抗原結合位點
在可與上文所論述之實施例組合的本發明之另一特定實施例中，第一抗體及/或第二抗體所結合之標靶抗原可為CEA (癌胚抗原)。已培養之抗CEA抗體包括T84.66以及其人類化及嵌合型式，諸如WO2016/075278 A1及/或WO2017/055389中所描述之T84.66-LCHA、CH1A1a、如WO2012/117002及WO2014/131712中所描述之抗CEA抗體以及CEA hMN -14或拉貝珠單抗(labetuzumab) (例如US 6 676 924及US 5 874 540中所描述)。另一例示性抗CEA抗體為A5B7 (例如M.J. Banfield等人, Proteins 1997, 29(2), 161-171中所描述)，或如WO 92/01059及WO 2007/071422中所描述之衍生自鼠類A5B7之人類化抗體。亦參見同在申請中之申請案PCT/EP2020/067582。A5B7之人類化型式之實例為A5H1EL1(G54A)。針對CEA之另一例示性抗體為MFE23及其人類化型式，其描述於US 7 626 011及/或同在申請中之申請案PCT/EP2020/067582中。抗CEA抗體之另一實例為28A9。此等抗體或其抗原結合片段中之任一者可用於形成本發明中之CEA結合部分。
視情況，對於單價結合而言，結合於CEA之抗原結合位點可以1 nM或更小、500 pM或更小、200 pM或更小或100 pM或更小之Kd值結合。
在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體可結合於CEA之CH1A1a抗原決定基、A5B7抗原決定基、MFE23抗原決定基、T84.66抗原決定基或28A9抗原決定基。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體中之至少一者結合於不存在於可溶CEA (sCEA)上之CEA抗原決定基。可溶CEA為藉由GPI磷脂酶裂解且釋放至血液中之CEA分子之一部分。在可溶CEA上找不到之抗原決定基之實例為CH1A1A抗原決定基。視情況，第一抗體及/或第二抗體中之一者結合於不存在於可溶CEA上之抗原決定基，且另一者結合於存在於可溶CEA上之抗原決定基。
針對CH1A1a及其親本鼠類抗體PR1A3之抗原決定基描述於WO2012/117002A1及Durbin H.等人, Proc. Natl. Scad. Sci. USA, 91:4313-4317, 1994中。結合於CH1A1a抗原決定基之抗體結合於CEA分子之B3域及GPI錨內之構形抗原決定基。在一個態樣中，該抗體結合於與具有本文中之具有SEQ ID NO: 25之VH及具有SEQ ID NO 26之VL之CH1A1a抗體相同的抗原決定基。A5B7抗原決定基描述於同在申請中之申請案PCT/EP2020/067582中。結合於A5B7抗原決定基之抗體結合於CEA之A2域，亦即，結合於包含SEQ ID NO: 141之胺基酸的域： PKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEPEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGP YECGIQNKLSVDHSDPVILN (SEQ ID NO: 141)。
在一個態樣中，抗體結合於與具有本文中之SEQ ID NO: 49之VH及SEQ ID NO: 50之VL之A5B7抗體相同的抗原決定基。
在一個態樣中，抗體與WO2016/075278中所描述之T84.66結合於相同抗原決定基。抗體可與具有本文中之SEQ ID NO: 17之VH及SEQ ID NO:18之VL的抗體結合於相同抗原決定基。
MFE23抗原決定基描述於同在申請中之申請案PCT/EP2020/067582中。結合於MFE23抗原決定基之抗體結合於CEA之A1域，亦即，結合於包含SEQ ID NO: 142之胺基酸之域： PKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPETQDATYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDTAS YKCETQNPVSARRSDSVILN (SEQ ID NO: 142)。
在一個態樣中，抗體可與具有本文中之SEQ ID NO: 127之VH域及SEQ ID NO: 128之VL域之抗體結合於相同抗原決定基。
在一些實施例中，第一抗體及/或第二抗體可結合於與本文所提供之抗體，例如P1AD8749、P1AD8592、P1AE4956、P1AE4957、P1AF0709、P1AF0298、P1AF0710或P1AF0711相同之CEA-抗原決定基。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體結合彼此相同之CEA之抗原決定基。因此，舉例而言，第一抗體及第二抗體均可結合於CH1A1a抗原決定基、A5B7抗原決定基、MFE23抗原決定基、T84.66抗原決定基或28A9抗原決定基。
在一些實施例中，第一抗體及第二抗體均可具有來自CH1A1A之CEA結合序列(亦即，CDR及/或VH域/VL域)；或第一抗體及第二抗體均可具有來自A5B7或其人類化型式之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自T84.66或其人類化型式之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自MFE23或其人類化型式之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自28A9或其人類化型式之CEA結合序列。例示性序列揭示於本文中。
在其他實施例中，第一抗體及第二抗體結合於CEA之不同抗原決定基。因此，舉例而言，i) 一個抗體可結合CH1A1A抗原決定基且另一抗體可結合A5B7抗原決定基、T84.66抗原決定基、MFE23抗原決定基或28A9抗原決定基；ii) 一個抗體可結合A5B7抗原決定基且另一抗體可結合CH1A1A抗原決定基、T84.66抗原決定基、MFE23抗原決定基或28A9抗原決定基；iii) 一個抗體可結合MFE23抗原決定基且另一抗體可結合CH1A1A抗原決定基、A5B7抗原決定基、T84.66抗原決定基或28A9抗原決定基；iv) 一個抗體可結合T84.66抗原決定基且另一抗體可結合CH1A1A抗原決定基、A5B7抗原決定基、MFE23抗原決定基或28A9抗原決定基；或v) 一個抗體可結合28A9抗原決定基且另一抗體可結合CH1A1a抗原決定基、A5B7抗原決定基、MFE23抗原決定基或T84.66抗原決定基。
在一些實施例中，i) 一個抗體可具有來自CH1A1A或其人類化型式之CEA結合序列(亦即CDR或VH域/VL域)且另一抗體可具有來自A5B7或其人類化型式、來自T84.66或其人類化型式、來自MFE23或其人類化型式或來自28A9或其人類化型式的CEA結合序列；ii) 一個抗體可具有來自A5B7或其人類化型式之CEA結合序列且另一抗體可具有來自CH1A1A、來自T84.66或其人類化型式、來自MFE23或其人類化型式或來自28A9或其人類化型式的CEA結合序列；iii) 一個抗體可具有來自MFE23或其人類化型式之CEA結合序列且另一抗體可具有來自CH1A1A、來自A5B7或其人類化型式、來自T84.66或其人類化型式或來自28A9或其人類化型式的CEA結合序列；iv) 一個抗體可具有來自T84.66或其人類化型式之CEA結合序列且另一抗體可具有來自CH1A1A、來自A5B7或其人類化型式、來自MFE23或其人類化型式或來自28A9或人類化型式的CEA結合序列；v) 一個抗體可具有來自28A9或其人類化型式之CEA結合序列且另一抗體可具有來自CH1A1A、來自A5B7或其人類化型式、來自T84.66或其人類化型式或來自MFE23或其人類化型式的CEA結合序列。
在一個特定實施例中，一個抗體可結合CH1A1A抗原決定基且另一抗體可結合A5B7抗原決定基。第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列且第二抗體可具有來自A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體可具有來自抗體A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列且第二抗體可具有來自CH1A1A之CEA結合序列。
在另一特定實施例中，一個抗體可結合CH1A1A抗原決定基且另一抗體可結合T84.66抗原決定基。第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列且第二抗體可具有來自T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體可具有來自抗體T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列且第二抗體可具有來自CH1A1A之CEA結合序列。在一些實施例中，第一抗體可結合T84.66抗原決定基及/或具有如下文(i)中所描述之抗原結合位點，且第二抗體可結合CH1A1A抗原決定基及/或具有如下文(ii)中所描述之抗原結合位點。
例示性CEA結合序列i)-v)揭示於下文中。該等例示性CEA結合序列提供來自i) T84.66，ii) CH1A1A，iii) A5B7，iv) 28A9及v) MFE23 (或來自其人類化型式)之CEA結合序列之實例。
i). 在一個實施例中，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-H3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含以下：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列的VH域：(i)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-H3；以及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(i)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L2，及(c)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一態樣中，結合於CEA之抗原結合位點包含：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-L3。
在上文實施例中之任一個中，多特異性抗體可為人類化的。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:17之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於CEA的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:17中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:17中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-H3。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:18之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點仍保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於CEA的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:18中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，針對CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:18中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含如以上提供之任一實施例中之VH及如以上提供之任一實施例中之VL。在一個實施例中，抗體包含SEQ ID NO:17及SEQ ID NO:18中對應的VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
ii). 在另一特定實施例中，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-H3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含以下：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列的VH域：(i)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-H3；以及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(i)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-L2，及(c)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一態樣中，結合於CEA之抗原結合位點包含：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-L3。
在上文實施例中之任一個中，多特異性抗體可為人類化的。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於CEA的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:25中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:25中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-H3。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:26之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點仍保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於CEA的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:26中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，針對CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:26中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含如以上提供之任一實施例中之VH及如以上提供之任一實施例中之VL。在一個實施例中，抗體包含SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中對應的VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
iii) 在其他實施例中，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列的CDR-L3。在一些實施例中，CDR-H1可具有序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 151)。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列的CDR-H3。在一些實施例中，CDR-H1可具有序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 151)。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含以下：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列的VH域：(i)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO:45之胺基酸序列的CDR-H3；以及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(i)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列的CDR-L2，及(c)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列的CDR-L3。在一些實施例中，CDR-H1可具有序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 151)。
在另一態樣中，結合於CEA之抗原結合位點包含：(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列的CDR-L3。在一些實施例中，CDR-H1可具有序列GFTFTDYYMN (SEQ ID NO.: 151)。
在上文實施例中之任一個中，多特異性抗體可為人類化的。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:49之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於CEA的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:49中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:49中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列或序列GFTFTDYMN (SEQ ID NO.: 151)的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列的CDR-H3。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:50之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點仍保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於CEA的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:50中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，針對CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:50中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含如以上提供之任一實施例中之VH及如以上提供之任一實施例中之VL。在一個實施例中，抗體包含SEQ ID NO:49及SEQ ID NO:50中對應的VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
iv) 在另一特定實施例中，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列的CDR-H3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含以下：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列的VH域：(i)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO:61之胺基酸序列的CDR-H3；以及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(i)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列的CDR-L2，及(c)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一態樣中，結合於CEA之抗原結合位點包含：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列的CDR-L3。
在上文實施例中之任一個中，多特異性抗體可為人類化的。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如任一以上實施例中之CDR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:65之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持結合於CEA的能力，較佳以如上文所述之親和力。在某些實施例中，SEQ ID NO:65中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，結合於CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:65中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列的CDR-H3。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:66之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點仍保持結合於CEA的能力，較佳以如上文所述之親和力。在某些實施例中，SEQ ID NO:66中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，針對CEA之抗原結合位點包含SEQ ID NO:66中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含如以上提供之任一實施例中之VH及如以上提供之任一實施例中之VL。在一個實施例中，抗體包含SEQ ID NO:65及SEQ ID NO:66中對應的VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
v). 在另一特定實施例中，結合於CEA之抗原結合位點可包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於CEA之抗原結合位點可包含： VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列的CDR-H3；及/或 VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列的CDR-L3。
在一個實施例中，針對CEA之抗原結合位點包含：包含SEQ ID NO: 127或(更佳)選自SEQ ID NO: 129、130、131、132、133或134之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)，以及其包含SEQ ID NO: 128或(更佳)選自SEQ ID NO: 135、136、137、138、139或140之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)。
在上文實施例中之任一個中，多特異性抗體可為人類化的。在一個實施例中，抗CEA抗原結合位點包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。
在一特定態樣中，能夠結合於CEA之抗原結合域包含： (a)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列的VL域，或 (b)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (c)包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之VL域，或 (d)包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (e)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (f)包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域，或 (g)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之VL域。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含重鏈可變域(VH)序列，其與如上文a)至g)中所提及之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於CEA的能力。在某些實施例中，總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含輕鏈可變域(VL)，其與如上文a)至g)中所提及之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點仍保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於CEA的能力。在某些實施例中，總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。
在另一實施例中，結合於CEA之抗原結合位點包含如以上提供之任一實施例中之VH及如以上提供之任一實施例中之VL。
G. 針對GPRC5D或FAP之例示性抗原結合位點  在可與上文所論述之實施例(例如針對DOTA或DOTAM之結合位點)組合之本發明之另一特定實施例中，第一抗體及第二抗體所結合之標靶抗原可為GPRC5D或FAP。
視情況，對於單價結合而言，結合於GPRC5D或FAP之抗原結合位點可以1 nM或更小、500 pM或更小、200 pM或更小或100 pM或更小之Kd值結合。
例示性GPRC5D結合序列描述於下文中。
在一個實施例中，結合於GPRC5D之抗原結合位點可包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR：(a)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於GPRC5D之抗原結合位點可包含選自以下之至少一個、至少兩個或全部三個VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列的CDR-H3。
視情況，結合於GPRC5D之抗原結合位點包含選自以下之至少一個、至少兩個或全部三個VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於GPRC5D之抗原結合位點包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列的VH域：(i)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列的CDR-H3；以及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(i)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列的CDR-L2，及(c)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一態樣中，結合於GPRC5D之抗原結合位點包含：(a)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列的CDR-L3。
在上文實施例中之任一個中，多特異性抗體可為人類化的。在一個實施例中，抗GPRC5D抗原結合位點包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。
在另一實施例中，結合於GPRC5D之抗原結合位點包含與SEQ ID NO: 73之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於GPRC5D的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:73中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，結合於GPRC5D之抗原結合位點包含SEQ ID NO:73中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:69之胺基酸序列的CDR-H3。
在另一實施例中，結合於GPRC5D之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:74之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於GPRC5D的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:74中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，針對GPRC5D之抗原結合位點包含SEQ ID NO:74中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:70之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:71之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:72之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一實施例中，結合於GPRC5D之抗原結合位點包含如以上提供之任一實施例中之VH及如以上提供之任一實施例中之VL。。在一個實施例中，抗體包含SEQ ID NO:73及SEQ ID NO:74中對應的VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
例示性FAP結合序列描述於下文中。
在一個實施例中，結合於FAP之抗原結合位點可包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR：(a)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於FAP之抗原結合位點可包含選自以下之至少一個、至少兩個或全部三個VH CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列的CDR-H3。
視情況，結合於FAP之抗原結合位點包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列的CDR-L3。
視情況，結合於FAP之抗原結合位點包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列的VH域：(i)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列的CDR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列的CDR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO:77之胺基酸序列的CDR-H3；以及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(i)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列的CDR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列的CDR-L2，及(c)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一態樣中，結合於FAP之抗原結合位點包含：(a)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列的CDR-L2；以及(f)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列的CDR-L3。
在上文實施例中之任一個中，多特異性抗體可為人類化的。在一個實施例中，抗FAP抗原結合位點包含如同任一以上實施例中之CDR，且進一步包含受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。
在另一實施例中，結合於FAP之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:81之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於FAP的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:81中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即，在FR中)。視情況，結合於FAP之抗原結合位點包含SEQ ID NO:81中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列的CDR-H2；以及(c)包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列的CDR-H3。
在另一實施例中，結合於FAP之抗原結合位點包含與SEQ ID NO:82之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參考序列而言，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有取代(例如保守取代)、插入或刪除，但包含該序列之抗原結合位點保持較佳以如上文所闡述之親和力結合於FAP的能力。在某些實施例中，SEQ ID NO:82中總共有1至10個胺基酸已經取代、插入及/或刪除。在某些實施例中，取代、插入或刪除發生在HVR外部區域中(亦即在FR中)。視情況，FAP之抗原結合位點包含SEQ ID NO:82中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含SEQ ID NO:78之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:79之胺基酸序列的CDR-L2；以及(c)包含SEQ ID NO:80之胺基酸序列的CDR-L3。
在另一實施例中，結合於FAP之抗原結合位點包含如以上提供之任一實施例中之VH及如以上提供之任一實施例中之VL。在一個實施例中，抗體包含SEQ ID NO:81及SEQ ID NO:82中對應的VH及VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。
H. 例示性抗體  明確考慮將關於標靶抗原結合(例如CEA、GPRC5D或FAP)之態樣及實施例與關於效應部分結合(例如DOTA、DOTAM)之態樣及實施例組合。上文所描述之任一例示性標靶抗原結合位點可與上文所描述之任一效應部分結合位點組合使用。
在一些特定實施例中，將關於標靶抗原結合(例如CEA、GPRC5D或FAP)之態樣及實施例與關於DOTAM結合之態樣及實施例組合。在一些實施例中，標靶抗原為CEA可為較佳的。
在一些實施例中，第一抗體可包含： a) Fab片段，其中Fab片段與表現於選自以下之標靶細胞表面上的抗原結合：CEA、GPRC5D或FAP，視情況為CEA； b) 多肽，其包含針對Pb-DOTAM之抗原結合位點的抗體重鏈可變域(VH)或由其組成，其中重鏈可變域包含SEQ ID NO 1-3之重鏈CDR，及/或其中重鏈可變域與SEQ ID NO 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致；以及 c) 包含兩個子單元之Fc域， 其中(b)中之多肽由其N端與(a)中之Fab片段之一條鏈的C端融合，且由其C端與(c)中之Fc域之一個子單元的N端融合； 且其中第一抗體不包含針對Pb-DOTAM之抗原結合位點的VL域。
第二抗體可包含： d) Fab片段，其中Fab片段與表現於選自以下之標靶細胞表面上的抗原結合：CEA、GPRC5D或FAP，視情況為CEA； e) 多肽，其包含針對Pb-DOTAM之抗原結合位點的抗體輕鏈可變域(VL)或由組成，其中輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 4-6之CDR及/或其中輕鏈可變域與SEQ ID NO 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致；以及 f) 包含兩個子單元之Fc域， 其中(e)中之多肽由其N端與(d)中之Fab片段之一條鏈的C端融合，且由其C端與(f)中之Fc域之一個子單元的N端融合； 且其中第二抗體不包含針對Pb-DOTAM之抗原結合位點的VH域。
第一抗體之該VH域與第二抗體之該VL域共同能夠形成針對Pb-DOTAM之功能性抗原結合位點。
在一個特定實施例中，第一抗體及/或第二抗體(例如第一及第二抗體中之各者)可包含結合於CEA、GPRC5D或FAP (視情況為CEA)之額外Fab片段。可能較佳的是，第一抗體中之結合標靶抗原之Fab中之各者彼此結合於相同靶抗原(例如在一些實施例中，結合於CEA)，且第二抗體中之結合標靶抗原之Fab中之各者彼此結合於相同標靶抗原(例如在一些實施例中，結合於CEA)，其可進一步與第一抗體所結合之標靶抗原相同。進一步可能較佳的是，第一抗體中之結合標靶抗原之Fab中之各者結合於標靶抗原(例如CEA)之相同抗原決定基(亦即，第一抗體對標靶抗原而言為單特異性的)，且第二抗體中之結合標靶抗原之Fab中之各者結合於標靶抗原(例如CEA)之相同抗原決定基(亦即，第二抗體對標靶抗原而言為單特異性的)。兩個抗體所結合之抗原決定基可為相同或不同的。
在一些實施例中，第一抗體可包含以下肽： i) 第一重鏈多肽，其自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對Pb-DOTAM之抗原結合位點的VH域，其中重鏈可變域包含SEQ ID NO 1-3之重鏈CDR，及/或其中重鏈可變域與SEQ ID NO 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致；視情況存在之連接子；以及Fc子單元(例如CH2-CH3)； ii) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，其與(i)中之Fab重鏈配對以形成針對選自以下之標靶抗原的結合位點：CEA、GPRC5D或FAP，視情況為CEA； iii) 第二重鏈多肽，其自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)；以及 iv) 另一Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，其與(iii)中之Fab重鏈配對以形成針對選自以下之標靶抗原的結合位點：CEA、GPRC5D或FAP，視情況為CEA。
視情況，(i)中之Fab重鏈具有與(iii)中之Fab重鏈相同的序列，且(ii)與(iv)中之Fab輕鏈彼此具有相同的序列。
第二抗體可包含以下肽： v) 第一重鏈多肽，其自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對Pb-DOTAM之抗原結合位點的VL域，其中輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 4-6之CDR，及/或其中輕鏈可變域與SEQ ID NO: 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； vi) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，其與(v)中之Fab重鏈配對以形成針對選自以下之標靶抗原的結合位點：CEA、GPRC5D或FAP，視情況為CEA； vii) 第二重鏈多肽，其自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)；以及 viii) 另一Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，其與(vii)中之Fab重鏈配對以形成針對選自以下之標靶抗原的結合位點：CEA、GPRC5D或FAP，視情況為CEA。
視情況，(v)中之Fab重鏈具有與(vii)中之Fab重鏈相同的序列，且(vi)與(viii)中之Fab輕鏈彼此具有相同的序列。視情況，此等序列亦與第一抗體之序列相同。
在一個特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(ii)及(iv)中之兩個Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 22-24之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 34至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。在一些實施例中，(ii)及(iv)中之兩個輕鏈彼此相同可為較佳的。
(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 19-21之CDR，及/或(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。在一些實施例中，(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈彼此相同可為較佳的。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(ii)及(iv)中之兩個Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 46-48之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 50至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 54至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。在一些實施例中，(ii)及(iv)中之兩個Fab輕鏈多肽彼此相同可為較佳的。
在一些實施例中，(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 43-45之CDR，及/或(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 49至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。在一些實施例中，(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈彼此相同可為較佳的。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(ii)及(iv)中之兩個Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 14-16之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 18至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 89至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 11-13之CDR，及/或(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 17至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。在一些實施例中，(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈彼此相同可為較佳的。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(ii)及(iv)中之兩個Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 62-64之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO: 66至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 96至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 59-61之CDR，及/或(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 65至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。在一些實施例中，(i)及(iii)中之兩個Fab重鏈彼此相同可為較佳的。
在一些實施例中，第二抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(vi)及(viii)中之兩個Fab輕鏈可包含SEQ ID NO 22-24之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 34至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈包含SEQ ID NO: 19-21之CDR，及/或(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈包含與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。在一些實施例中，(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈彼此相同可為較佳的。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(vi)及(viii)中之兩個Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 46-48之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 50至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 58至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈包含SEQ ID NO: 43-45之CDR，及/或(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈包含與SEQ ID NO 49至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。在一些實施例中，(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈彼此相同可為較佳的。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自抗體T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(vi)及(viii)中之兩個輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 14-16之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 18至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 89至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 11-13之CDR，及/或(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈包含與SEQ ID NO 17至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。在一些實施例中，(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈彼此相同可為較佳的。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自抗體28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(vi)及(vii)中之兩個Fab輕鏈可包含SEQ ID No 62-64之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 66至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 96至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 59-61之CDR，及/或(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈包含與SEQ ID NO 65至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。在一些實施例中，(v)及(vii)中之兩個Fab重鏈彼此相同可為較佳的。
在一些實施例中，第一抗體與第二抗體結合CEA之相同抗原決定基。因此，舉例而言，第一抗體及第二抗體均可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自MFE23 (包括其人類化型式)之CEA結合序列。在一些實施例中，可能較佳的是，(vi)及(viii)中之兩個輕鏈多肽與第一抗體之(ii)及(iv)中之輕鏈具有相同序列，例如所有該等輕鏈具有相同序列。
在一些實施例中，(ii)及(iv)中之第一抗體之兩個Fab輕鏈多肽可包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域；(i)及(iii)中之第一抗體之兩個Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的重鏈可變域；(vi)及(viii)中之第二抗體之兩個Fab輕鏈多肽可包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域；及(v)及(vii)中之第二抗體之兩個Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的重鏈可變域。
在一個特定實施例中，第一抗體包含： -SEQ ID NO: 146之第一重鏈多肽； -SEQ ID NO: 147之第二重鏈多肽； -SEQ ID NO: 143之第一及第二輕鏈多肽；及/或 第二抗體包含： --SEQ ID NO: 145之第一重鏈多肽； -SEQ ID NO: 147之第二重鏈多肽； -SEQ ID NO: 143之第一及第二輕鏈多肽。
在其他實施例中，第一抗體及第二抗體結合於CEA之不同抗原決定基，如上文所論述。因此，舉例而言，第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列，且第二抗體可具有來自A5B7之CEA結合序列；或第一抗體可具有來自抗體A5B7之CEA結合序列，且第二抗體可具有來自CH1A1A之CEA結合序列。
在其他實施例中，抗體為單臂抗體。舉例而言，在一些實施例中，第一抗體包含以下多肽： i) 自N端至C端包含以下之多肽：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對Pb-DOTAM之抗原結合位點的VH域，其中重鏈可變域包含SEQ ID NO 1-3之重鏈CDR，及/或其中重鏈可變域與SEQ ID NO 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； ii) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)；及 iii) Fc子單元多肽(例如CH2-CH3)； 其中(i)中之Fab重鏈及(ii)中之Fab輕鏈形成能夠結合於選自以下之標靶抗原的Fab片段：CEA、GPRC5D或FAP，視情況為CEA。
第二抗體可包含以下多肽： iv) 自N端至C端包含以下之多肽：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對Pb-DOTAM之抗原結合位點的VL域，其中輕鏈可變域包含SEQ ID NO: 4-6之CDR，及/或其中輕鏈可變域與SEQ ID NO 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； v) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，及 vi) Fc子單元多肽(例如CH2-CH3)； 其中(iv)中之Fab重鏈及(v)中之Fab輕鏈形成能夠結合於選自以下之標靶抗原的Fab片段：CEA、GPRC5D或FAP，視情況為CEA。
在此等單臂抗體之一些實施例中，(i)及(iv)中之Fab重鏈可彼此具有相同的序列；且(ii)及(v)中之Fab輕鏈多肽可彼此具有相同的序列。
在一個特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(ii)中之Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 22-24之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 34至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
(i)中之Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 19-21之CDR，及/或(i)中之Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(ii)中之Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 46-48之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 50至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 54至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(i)中之Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 43-45之CDR，及/或(i)中之Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 49至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(ii)中之Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 14-16之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 18至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 89至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(i)中之Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 11-13之CDR，及/或(i)中之Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 17至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在另一特定實施例中，第一抗體可具有來自抗體28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(ii)中之Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 62-64之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO: 66至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 96至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(i)中之Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 59-61之CDR，及/或(i)中之Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 65至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在一些實施例中，第二抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(v)中之Fab輕鏈可包含SEQ ID NO 22-24之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 34至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(iv)中之Fab重鏈包含SEQ ID NO: 19-21之CDR，及/或(iv)中之Fab重鏈包含與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(v)中之Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 46-48之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 50至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO 58至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(iv)中之Fab重鏈包含SEQ ID NO: 43-45之CDR，及/或(iv)中之Fab重鏈包含與SEQ ID NO 49至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自抗體T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(v)中之Fab輕鏈多肽可包含SEQ ID NO 14-16之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 18至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 89至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(iv)中之Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 11-13之CDR，及/或(iv)中之Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 17至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在另一特定實施例中，第二抗體可具有來自抗體28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列(亦即，CDR或VH域/VL域)。
舉例而言，(v)中之Fab輕鏈可包含SEQ ID NO 62-64之CDR，及/或可包含與SEQ ID NO 66至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域。在一些實施例中，其可與SEQ ID NO: 96至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
在一些實施例中，(iv)中之Fab重鏈可包含SEQ ID NO: 59-61之CDR，及/或(iv)中之Fab重鏈可包含與SEQ ID NO 65至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在一些實施例中，第一抗體與第二抗體結合CEA之相同抗原決定基。因此，舉例而言，第一抗體及第二抗體均可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自A5B7 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自T84.66 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自28A9 (包括其人類化型式)之CEA結合序列；或第一抗體及第二抗體均可具有來自MFE23 (包括其人類化型式)之CEA結合序列。在一些實施例中，(ii)中之輕鏈多肽與(v)中之輕鏈具有相同序列可為較佳的。
在一個特定實施例中，(ii)及(v)中之Fab輕鏈均包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域；且(i)及(iv)中之Fab重鏈包含與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的可變域。
在一個特定實施例中，第一抗體包含： - SEQ ID NO: 146之第一重鏈； - SEQ ID NO: 144之第二重鏈； - SEQ ID NO: 143之輕鏈；及/或 第二抗體包含： - SEQ ID NO: 145之第一重鏈； - SEQ ID NO: 144之第二重鏈； - SEQ ID NO: 143之輕鏈。
在其他實施例中，第一抗體及第二抗體結合於CEA之不同抗原決定基，如上文所論述。因此，舉例而言，第一抗體可具有來自抗體CH1A1A之CEA結合序列，且第二抗體可具有來自A5B7之CEA結合序列；或第一抗體可具有來自抗體A5B7之CEA結合序列，且第二抗體可具有來自CH1A1A之CEA結合序列。
I. 抗體變異體  在某些實施例中，考慮本文所提供之抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言，可能需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物特性。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入編碼該抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。此類修飾包括例如抗體之胺基酸序列內之殘基的刪除及/或插入及/或取代。可進行刪除、插入及取代之任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有例如抗原結合之所需特徵。
取代、插入及刪除變異體在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。用於取代型突變誘發之相關位點包括HVR (CDR)及FR。保守取代顯示於表1中之「較佳取代」標題下。更多實質性變化提供於表1中之標題「例示性取代」下，且如下文參考胺基酸側鏈類別進一步描述。可將胺基酸取代引入相關抗體中，且針對所需活性篩選產物，例如所保持/改良之抗原結合、降低之免疫原性或減弱或消除之ADCC或CDC。 表 1
初始殘基 例示性取代 較佳取代
Ala (A) Val；Leu；Ile Val
Arg (R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn (N) Gln；His；Asp, Lys；Arg Gln
Asp (D) Glu；Asn Glu
Cys (C) Ser；Ala Ser
Gln (Q) Asn；Glu Asn
Glu (E) Asp；Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile (I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸 Leu
Leu (L) 正白胺酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys (K) Arg；Gln；Asn Arg
Met (M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe (F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val；Ser Ser
Trp (W) Tyr；Phe Tyr
Tyr (Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val (V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正白胺酸 Leu
可根據常見側鏈特性對胺基酸進行分組： (1) 疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2) 中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3) 酸性：Asp、Glu； (4) 鹼性：His、Lys、Arg； (5) 影響鏈定向之殘基：Gly、Pro； (6) 芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代將引起此等類別中之一者的成員換成另一個類別。
一種類型之取代型變異體涉及取代親本抗體之一或多個高變區殘基(例如人類化抗體或人類抗體)。一般而言，選用於進一步研究之一或多個所得變異體相對於親本抗體將在某些生物特性方面具有修飾(例如改良)(例如親和力提高、免疫原性降低)及/或將實質上保留親本抗體之某些生物特性。一種例示性取代型變異體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所描述之技術)便利地產生。簡言之，使一或多個CDR殘基突變且在噬菌體上呈現變異抗體且針對特定生物活性(例如結合親和力)篩選。
更改(例如取代)可於CDR中進行以例如改良抗體親和力。可以在CDR「熱點」，亦即由在體細胞成熟過程期間經受高頻突變之密碼子編碼的殘基(參見例如Chowdhury, Methods Mol . Biol .207:179-196 (2008))及/或接觸抗原之殘基中進行此等更改，其中測試所得變異型VH或VL之結合親和力。藉由構築二級文庫及自二級文庫再選擇來達成親和力成熟已描述於例如Hoogenboom等人之 Methods in Molecular Biology178:1-37 (O'Brien等人編, Human Press, Totowa, NJ, (2001))中。在親和力成熟之一些態樣中，藉由各種方法(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸導引之突變誘發)中之任一種將多樣性引入經選擇以用於成熟之可變基因中。隨後產生二級文庫。隨後篩選該文庫以鑑別具有所需親和力之任何抗體變異體。引入多樣性之另一方法涉及CDR導引途徑，其中將若干CDR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機分組。可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化特異性地識別參與抗原結合之CDR殘基。常常尤其以CDR-H3及CDR-L3為標靶。
在某些態樣中，取代、插入或刪除可發生在一或多個CDR內，只要該等更改不實質上減弱抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，未實質上降低結合親和力之保守性更改(例如，如本文所提供之保守性取代)可以在CDR中進行。此等更改可在例如CDR中接觸抗原之殘基外部進行。在上文所提供之某些變異VH及VL序列中，各CDR未經更改或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
一種適用於可針對突變誘發進行靶向之抗體殘基或區域的方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如由Cunningham及Wells (1989) Science, 244:1081-1085所描述。在此方法中，鑑別出殘基或標靶殘基之群(例如，帶電殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)，且經中性或帶負電胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)置換以測定抗體與抗原之相互作用是否受影響。可在對初始取代展現功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代。可替代地或另外，抗原-抗體複合物之晶體結構可用於識別抗體與抗原之間的接觸點。該等接觸殘基及相鄰殘基可作為用於取代之候選物進行靶向或消除。可篩選變異體以確定其是否含有所需特性。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或更多個殘基之多肽範圍內的胺基端及/或羧基端融合，以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括與抗體之N端或C端至延長抗體血清半衰期之酶(例如針對ADEPT (抗體導引之酶前驅藥療法))或多肽的融合。
醣基化變異體在某些態樣中，本文所提供之抗體經更改以提高或降低抗體醣基化之程度。向抗體中添加醣基化位點或使抗體缺失醣基化位點可藉由改變胺基酸序列以便產生或移除一或多個醣基化位點來便利地實現。
在抗體包含Fc區之情況下，可更改與其連接之寡醣。由哺乳動物細胞產生之原生抗體通常包含分支鏈雙觸角寡醣，其通常藉由N鍵連接至Fc區之CH2域的Asn297。參見例如Wright等人, TIBTECH15:26-32 (1997)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及連接至雙觸寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻醣。在一些態樣中，可對本發明抗體中之寡醣進行修飾以便產生具有某些經改善特性之抗體變異體。
在一個態樣中，提供具有非岩藻醣基化寡醣之抗體變異體，亦即寡醣結構缺乏(直接地或間接地)連接至Fc區之岩藻醣。特定言之，此等非岩藻醣基化寡醣(亦稱為「去岩藻醣基化」寡醣)為缺少連接至雙觸寡醣結構之主幹中之第一GlcNAc的岩藻醣殘基之N連接寡醣。在一個態樣中，提供相較於原生或親本抗體而言具有經增加之比例之Fc區中非岩藻醣基化寡醣之抗體變異體。舉例而言，非岩藻醣基化寡醣之比例可為至少約20%、至少約40%、至少約60%、至少約80%或甚至約100% (亦即，不存在岩藻醣基化寡醣)。非岩藻醣基化寡醣之百分比為如例如WO 2006/082515中所描述，如藉由MALDI-TOF質譜分析所量測，相對於連接至Asn 297上之所有寡醣(例如複合、雜交及高甘露糖結構)的總和，不含岩藻醣殘基之寡醣的(平均)量。Asn297係指位於Fc區中約位置297處之天冬醯胺殘基(Fc區殘基之EU編號)；然而，歸因於抗體中微小序列變化，Asn297亦可位於位置297之上游或下游約±3個胺基酸處，亦即，位於位置294與300之間。Fc區中之非岩藻醣基化寡醣之比例增加的此類抗體可具有改良之FcγRIIIa受體結合及/或改良之效應功能，尤其改良之ADCC功能。參見例如，US 2003/0157108；US 2004/0093621。
能夠產生具有經減少之岩藻醣基化之抗體的細胞株之實例包括缺乏蛋白岩藻醣基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人, Arch . Biochem . Biophys .249:533-545 (1986)；US 2003/0157108；以及WO 2004/056312，尤其在實例11處)；及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-岩藻醣基轉移酶基因、FUT8、基因敲除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人, Biotech . Bioeng .87:614-622 (2004)；Kanda, Y.等人, Biotechnol . Bioeng ., 94(4):680-688 (2006)；以及WO 2003/085107)；或具有經減弱或消除之GDP-岩藻醣合成或轉運蛋白活性之細胞(參見例如US2004259150、US2005031613、US2004132140、US2004110282)。
在另一態樣中，提供具有對分寡醣之抗體變異體，例如其中連接至抗體之Fc區之雙觸角寡醣經GlcNAc對分。此等抗體變異體可具有降低之岩藻醣基化及/或改良之ADCC，如上文所描述。該等抗體變異體之實例描述於例如以下中：Umana等人, Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)；Ferrara等人, Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)；WO 99/54342；WO 2004/065540；WO 2003/011878。
亦提供寡醣中之至少一個半乳糖殘基與Fc區附接之抗體變異體。此類抗體變異體可具有經改良之CDC功能。該等抗體變異體描述於例如WO 1997/30087；WO 1998/58964；及WO 1999/22764中。
可較佳地，抗體經修飾以降低醣基化程度。在一些實施例中，抗體可為無醣基化或去醣基化的。抗體可包括例如N297D/A之N297處之取代。
Fc 區變異體
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文所提供之抗體的Fc區中，從而產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如，人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中，本發明考慮具有經減弱之Fc效應功能，例如經減弱或消除之CDC、ADCC及/或FcγR結合的抗體變異體。在某些態樣中，本發明考慮擁有一些但並非所有Fc效應功能之抗體變異體，該等效應功能使其成為抗體應用之所需候選，在該應用中抗體在活體內之半衰期至關重要且某些Fc效應功能(諸如補體依賴性細胞毒性(CDC)及抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC))為不必要或不利的。
可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析法以確認CDC及/或ADCC活性之降低/消耗。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析法以確保抗體缺乏FcγR結合(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet, Annu . Rev . Immunol .9:457-492 (1991)之第464頁之表3中。為評估相關分子之ADCC活性的活體外分析法之非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號(參見例如Hellstrom, I.等人 Proc . Nat' l Acad . Sci . USA83:7059-7063 (1986))及Hellstrom, I等人, Proc . Nat' l Acad . Sci . USA82:1499-1502 (1985)；5,821,337 (參見Bruggemann, M.等人, J . Exp . Med .166:1351-1361 (1987))中。或者，可採用非放射性分析法方法(參見例如用於流式細胞量測術之ACTI™非放射性細胞毒性分析法(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA)；及CytoTox 96 ®非放射性細胞毒性分析法(Promega, Madison, WI))。適用於此類分析法之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者或另外，相關分子之ADCC活性可活體內評估，例如在如揭示於Clynes等人 Proc . Nat ' l Acad . Sci . USA95:652-656 (1998)中之動物模型中。亦可進行C1q結合分析法以確認抗體不能結合C1q且因此不具有CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為了評估補體活化，可進行CDC分析法(參見例如Gazzano-Santoro等人, J . Immunol . Methods202:163 (1996)；Cragg, M.S.等人, Blood101:1045-1052 (2003)；及Cragg, M.S.及M.J. Glennie, Blood103:2738-2743 (2004))。亦可使用此項技術中已知之方法(參見例如Petkova, S. B.等人, Int ' l . Immunol .18(12):1759-1769 (2006)；WO 2013/120929 Al)進行FcRn結合及活體內清除率/半衰期測定。
具有經減弱之Fc效應功能的抗體包括具有Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多個之取代的抗體(美國專利第6,737,056號)，例如P329G。此類Fc突變體包括具有胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或兩者以上之取代的Fc突變體，包括殘基265及297取代為丙胺酸的所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
在某些態樣中，抗體變異體包含Fc區，該Fc區具有減少FcγR結合之一或多個胺基酸取代，例如在Fc區之位置234及235 (殘基之EU編號)處之取代。在一個態樣中，取代為L234A及L235A (LALA)。在某些態樣中，抗體變異體進一步在來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中包含D265A及/或P329G。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中之L234A、L235A及P329G (LALA-PG)。(參見例如 WO 2012/130831)。在另一態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中的L234A、L235A及D265A (LALA-DA)。替代性取代包括L234F及/或L235E以及視情況存在之D265A及/或P329G及/或P331S。
在其他實施例中，可能使用具有經減弱之Fc效應功能的IgG亞型，諸如IgG4或IgG2。
描述具有提高或降低之與FcR之結合的某些抗體變異體。(參見例如，美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312及Shields等人, J . Biol . Chem .9(2): 6591-6604 (2001))。
在一些實施例中，例如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642以及Idusogie等人, J . Immunol .164: 4178-4184 (2000)中所描述，在Fc區中進行更改，產生經更改(亦即，經改良或經減弱，較佳經減弱)之C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
在某些態樣中，抗體變異體包含具有一或多個減少FcRn結合之胺基酸取代，例如在Fc區之位置253及/或310及/或435處之取代的Fc區(殘基進行EU編號)。在某些態樣中，抗體變異體包含在位置253、310及435處具有胺基酸取代之Fc區。在一個態樣中，取代為衍生自人類IgG1 Fc區之Fc區中之I253A、H310A及H435A。參見例如Grevys, A.等人, J. Immunol. 194 (2015) 5497-5508。
在某些態樣中，抗體變異體包含Fc區，該Fc區具有減少FcRn結合之一或多個胺基酸取代，例如在Fc區之位置310及/或433及/或436 (殘基之EU編號)處之取代。在某些態樣中，抗體變異體包含在位置310、433及436處具有胺基酸取代之Fc區。在一個態樣中，取代為衍生自人類IgG1 Fc區之Fc區中之H310A、H433A及Y436A。(參見例如WO 2014/177460 Al)。舉例而言，在一些實施例中，可使用正常FcRn結合。
亦參見關於Fc區變異體之其他實例的Duncan及Winter, Nature322:738-40 (1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；以及WO 94/29351。
如本文所報導之全長抗體之重鏈之C端可為以胺基酸殘基PGK終止之完整C端。重鏈之C末端可為縮短C末端，其中已移除一或兩個C末端胺基酸殘基。重鏈之C端可為以PG終止之經縮短之C端。在如本文所報導之全部態樣中之一個態樣中，如本文所規定，包含包括C端CH3域之重鏈之抗體包含C端甘胺酸殘基(G446，胺基酸位置之EU索引編號)。如本文所使用之術語「全長抗體」或「全長重鏈」仍明確地涵蓋C端甘胺酸殘基。
抗體衍生物在某些態樣中，可對本文所提供之抗體進行進一步修飾以含有此項技術中已知且可易於獲得之額外非蛋白部分。適用於抗體之衍生作用之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三㗁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛因其於水中之穩定性而可在製造中具有優勢。聚合物可具有任何分子量，且可為分支鏈或未分支鏈。附接於抗體上之聚合物的數目可變化，且若附接超過一個聚合物，則其可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生作用之聚合物之數目及/或類型可基於包括(但不限於)待改善抗體之特殊特性或功能，抗體衍生物是否將用於指定病症下之療法等考慮因素來確定。
J. 重組方法及組合物  抗體可使用例如美國專利第4,816,567號中所描述之重組方法及組合物來產生。在一個實施例中，提供編碼本文所描述之抗體集合的經分離之核酸或經分離之核酸集合。
舉例而言，核酸集合可包含以下編碼第一抗體之核酸： i) 編碼第一重鏈多肽之核酸，該多肽自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VH域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； ii) 編碼Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)之核酸，該Fab輕鏈多肽與(i)中之Fab重鏈配對以形成針對標靶抗原之結合位點； iii) 編碼第二重鏈多肽之核酸，該第二重鏈多肽自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； iv) 編碼另一Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)之核酸，該另一Fab輕鏈多肽與(iii)中之Fab重鏈配對以形成針對標靶抗原之結合位點。
或者或另外，本發明之核酸集合可包含以下編碼第二抗體之核酸： v) 編碼第一重鏈多肽之核酸，該多肽自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VL域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； vi) 編碼Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)之核酸，該Fab輕鏈多肽與(v)中之Fab重鏈配對以形成標靶抗原之結合位點； vii) 編碼第二重鏈多肽之核酸，該第二重鏈多肽自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； viii) 編碼另一Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)之核酸，該另一Fab輕鏈多肽與(vii)中之Fab重鏈配對以形成針對標靶抗原之結合位點。
在一些實施例中，此等核酸中之某些核酸可彼此相同。舉例而言，(ii)中之核酸可與(iv)中之核酸相同，及/或(vi)中之核酸可與(viii)中之核酸相同，使得整個組包含8個以下之不同核酸序列。
在另一個實施例中，核酸集合可包含以下編碼第一抗體之核酸： i) 編碼多肽之核酸，該多肽自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VH域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； ii) 編碼Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)之核酸；及 iii) 編碼Fc子單元多肽(例如CH2-CH3)之核酸， 其中(i)中之Fab重鏈及(ii)中之Fab輕鏈形成能夠結合於標靶抗原之Fab片段。
或者或另外，本發明之核酸集合可包含以下編碼第二抗體之核酸： iv) 編碼多肽之核酸，該多肽自N端至C端包含：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VL域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； v) 編碼Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)之核酸；及 vi) 編碼Fc子單元多肽(例如CH2-CH3)之核酸； 其中(iv)中之Fab重鏈及(v)中之Fab輕鏈形成能夠結合於標靶抗原之Fab片段。
此外，在一些實施例中，此等核酸中之某些核酸可彼此相同。舉例而言，(ii)中之核酸可與(v)中之核酸相同以使得整個組僅包含5個不同核酸序列。
核酸可包含於一或多個核酸分子或表現載體中。
因此，在另一實施例中，提供包含該一或多個核酸之一或多個載體(例如表現載體)。在一個實施例中，各各別重鏈及輕鏈係由個別質體表現。
在另一實施例中，提供包含該一或多個核酸或一或多個載體之宿主細胞或宿主細胞集合。在一個實施例中，提供表現第一抗體之第一宿主細胞，且提供表現第二抗體之第二宿主細胞。
在一個此類實施例中，第一宿主細胞包含共同編碼第一抗體之核酸的一或多個載體。第二宿主細胞包含以下(例如已經以下轉型)：共同編碼第二抗體之核酸的一或多個載體。
在一個實施例中，宿主細胞為真核的，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞(例如，Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供一種製備本發明之抗體的方法，其中該方法包含在適合於抗體表現之條件下，培養如上文所提供之包含編碼抗體之核酸的宿主細胞，且視情況自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。
為重組產生抗體，分離例如上所述之編碼抗體之核酸且插入至一或多個載體中以在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此類核酸可容易使用習知程序(例如藉由使用能夠專一性結合於編碼抗體重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)分離及測序。
適合於選殖或表現編碼抗體之載體的宿主細胞包括本文所描述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可於細菌中產生，在不需要醣基化及Fc效應功能時尤其如此。抗體片段及多肽在細菌中之表現參見例如US 5,648,237、US 5,789,199及US 5,840,523。(亦參見Charlton, K.A., In: Methods in Molecular Biology,第248卷, Lo, B.K.C. (編), Humana Press, Totowa, NJ (2003), 第245-254頁，其描述抗體片段在大腸桿菌中之表現)。在表現之後，抗體可以可溶性溶離份自細菌細胞糊狀物分離在且可進一步進行純化。
除原核生物外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為抗體編碼載體之適合選殖或表現宿主，包括醣基化路徑已經「人類化」，從而使得所產生之抗體具有部分或完全人類醣基化型態的真菌及酵母菌株。參見Gerngross, T.U., Nat. Biotech. 22 (2004) 1409-1414；及Li, H.等人, Nat. Biotech. 24 (2006) 210-215。
適用於表現(經醣基化)抗體之宿主細胞亦衍生自多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出多種桿狀病毒株，其可與昆蟲細胞結合使用，尤其用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如US 5,959,177、US 6,040,498、US 6,420,548、US 7,125,978及US 6,417,429 (描述在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為經SV40轉型之猴腎CV1株(COS-7)；人類胚腎細胞株(如例如Graham, F.L.等人, J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74中所描述之293或293T細胞)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞特利氏細胞(mouse sertoli cell)(如例如Mather, J.P., Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252中所描述之TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；水牛鼠肝細胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞(如例如Mather, J.P.等人, Annals N.Y. Acad. Sci. 383 (1982) 44-68中所描述)；MRC 5細胞；以及FS4細胞。其他適用哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub, G.等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220)；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適用於產生抗體之某些哺乳動物宿主細胞株之綜述參見例如Yazaki, P.及Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, 第248卷, Lo, B.K.C. (編), Humana Press, Totowa, NJ (2004),第255-268頁。
在一個態樣中，宿主細胞為真核的，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞(例如，Y0、NS0、Sp20細胞)。
K. 分析法  可藉由此項技術中已知之各種分析法，針對其物理/化學特性及/或生物活性鑑別、篩選或表徵本文所提供之抗體。
在一個態樣中，(例如)藉由諸如ELISA、西方墨點法等之已知方法來測試本發明之抗體的抗原結合活性。
抗體親和力在某些實施例中，本文所提供之抗體針對標靶抗原之解離常數(K D)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10 - 8M或更小，例如10 - 8M至10 - 13M，例如10 - 9M至10 - 13M)或如本文在其他方面所陳述。
在某些實施例中，針對效應部分之抗原結合位點，例如放射性標記化合物對效應部分/放射性標記化合物之解離常數(K D)為≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM(例如10 - 8M或更小，例如10 - 8M至10 - 13M，例如10 - 9M至10 - 13M)。在一些實施例中，K D為1 nM或更小、500 pM或更小、200 pM或更小、100 pM或更小、50 pM或更小、20 pM或更小、10 pM或更小、5 pM或更小或1 pM或更小或如本文在其他方面所陳述。舉例而言，功能性結合位點可以約1 pM-1 nM，例如以約1-10 pM、1-100 pM、5-50 pM、100-500 pM或500 pM-1 nM之K D結合放射性標記化合物。
在一個實施例中，K D係藉由放射性標記抗原結合分析法(RIA)來量測。在一個實施例中，用相關抗體之Fab型式及其抗原進行RIA。舉例而言，Fab對抗原之溶液結合親和力係藉由以下來量測：在存在未標記抗原之連續滴定之情況下用最低濃度之( 125I)標記抗原平衡Fab，隨後用經抗Fab抗體塗佈之盤捕獲結合抗原(參見例如Chen等人, J . Mol . Biol .293:865-881(1999))。為了確立分析法之條件，將MICROTITER ®多孔盤(Thermo Scientific)用含5 μg/ml之捕獲抗Fab抗體(Cappel Labs)之50 mM碳酸鈉(pH 9.6)塗佈隔夜，且隨後在室溫(約23℃)下用含2% (w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷兩小時至五小時。在無吸附劑培養盤(Nunc #269620)中，將100 pM或26 pM [ 125I]-抗原與相關Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人, Cancer Res .57:4593-4599 (1997)中對抗VEGF抗體(Fab-12)之評估一致)。接著將相關Fab培育隔夜；然而，培育可持續較長時期(例如約65小時)以確保達到平衡。其後，在室溫下將混合物轉移至捕獲盤中以進行培育(例如持續一小時)。隨後移除溶液且用含0.1%聚山梨醇酯20 (TWEEN-20®)之PBS洗滌培養盤八次。當盤已經乾燥時，添加150微升/孔之閃爍體(MICROSCINT-20 ™；Packard)，且在TOPCOUNT ™ γ計數器(Packard)上對培養盤進行計數持續十分鐘。選擇提供小於或等於20%最大結合之各Fab的濃度以用於競爭性結合分析法。
根據另一實施例，使用BIACORE ®表面電漿子共振分析法來量測K D。舉例而言，使用BIACORE ®-2000或BIACORE ®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)，在25℃下用固定抗原CM5晶片以約10個反應單位(RU)進行分析法。在一個實施例中，根據供應商之說明書，用 N-乙基- N '-(3-二甲胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及 N-羥基丁二醯亞胺(NHS)來活化羧基甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5, BIACORE, Inc.)。用10 mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5 μg/ml (約0.2 μM)，之後以5微升/分鐘之流動速率注射以達成約10個反應單位(RU)之偶合蛋白。在注射抗原後，注射1 M乙醇胺以阻斷未反應之基團。關於動力學量測，在25℃下以約25 μl/min之流動速率注射含0.05 %聚山梨醇酯20 (TWEEN-20™)界面活性劑之PBS (PBST)中的Fab之兩倍連續稀釋物(0.78 nM至500 nM)。使用簡單的一比一朗格繆爾結合模型(one-to-one Langmuir binding model)(BIACORE ®評估軟體3.2版)，藉由同時擬合結合及解離感測圖譜來計算結合速率(k on)及解離速率(k off)。按k off/k on比率來計算平衡解離常數(K D)。參見例如，Chen等人， J . Mol . Biol .293:865-881 (1999)。若藉由上文表面電漿子共振分析法測定之結合速率(on-rate)超過10 6M - 1s - 1，則結合速率可藉由使用螢光淬滅技術測定，該技術在存在如光譜儀(諸如具有攪拌式光析槽之停流裝備型分光光度計(Aviv Instruments)或8000-系列SLM-AMINCO ™分光光度計(ThermoSpectronic))中所量測之濃度增加之抗原之情況下，在25℃下量測PBS (pH 7.2)中之20 nM抗抗原抗體(Fab形式)之螢光發射強度(激發=295 nm；發射=340 nm，16 nm帶通)的增加或減少。
在另一實施例中，K D使用SET (溶液平衡滴定)分析法來量測。根據此分析法，測試抗體通常以恆定濃度施用且與測試抗原之連續稀釋液混合。在進行培育以建立平衡之後，在經抗原塗佈表面上捕獲游離抗體之部分且一般使用電化學發光用經標記/加標籤之抗物種抗體對其進行偵測(例如Haenel等人Analytical Biochemistry 339 (2005) 182-184中所描述)。
舉例而言，在一個實施例中，將384孔鏈黴抗生物素蛋白盤(Nunc，Microcoat #11974998001)與25微升/孔之抗原-生物素-異構體混合物在濃度為20 ng/ml之PBS-緩衝液中在4℃下培育隔夜。對於用游離抗原進行之抗體樣品平衡：在以2500 nM、500 nM或100 nM抗原之濃度起始之1:3、1:2或1:1.7稀釋步驟中用相關抗原滴定0.01 nM-1 nM抗體。將樣品在密封REMP儲存聚丙烯微孔盤(Brooks)中在4℃下培育隔夜。在隔夜培育之後，將鏈黴抗生物素蛋白盤用每孔90 μl PBST洗滌3次。將15 μl來自平衡盤之各樣品轉移至分析盤且在室溫下培育15分鐘，接著用PBST緩衝液進行3×90 μl洗滌步驟。藉由添加25 μl山羊抗人類IgG抗體-POD結合物(Jackson，109-036-088，於OSEP中1:4000)，接著用PBST緩衝液進行6次90 μl洗滌步驟來進行偵測。將25 μl TMB受質(Roche Diagnostics GmbH，目錄號：11835033001)添加至各孔中。在Safire2讀取器(Tecan)上在370/492 nm處進行量測。
在另一實施例中，使用KinExA (動力學排除)分析法來量測K D。根據此分析法，通常將抗原滴定至恆定濃度之抗體結合位點中，使樣品平衡，且隨後快速抽吸通過流槽，在該流槽中在經抗原塗佈珠粒上捕獲游離抗體結合位點，同時將抗原飽和抗體複合物洗掉。隨後，用標記抗物種抗體，例如螢光標記抗物種抗體偵測珠粒捕獲抗體(Bee等人PloS One, 2012; 7(4): e36261)。舉例而言，在一個實施例中，在室溫(RT)下使用PBS (pH 7.4)作為操作緩衝液進行KinExA實驗。在補充有1 mg/ml BSA之操作緩衝液(「樣品緩衝液」)中製備樣品。使用0.25 ml/min之流動速率。藉由以100 pM起始之兩倍連續稀釋(濃度範圍0.049 pM-100 pM)用抗原滴定恆定量之具有5 pM結合位點濃度之抗體。一個不具有抗原之抗體樣品充當100%信號(亦即不具有抑制)。將抗原-抗體複合物在室溫下培育至少24小時以達到平衡。隨後，以5 ml之體積將經平衡混合物抽吸通過KinExA系統中之抗原偶合珠粒管柱，准許在不擾亂溶液平衡狀態之情況下由珠粒捕獲未結合抗體。使用含250 ng/ml Dylight 650©結合抗人類Fc片段特異性二級抗體的樣品緩衝液偵測所捕獲抗體。對於全部平衡實驗，一式兩份對各樣品進行量測。使用KinExA軟體(4.0.11版)內所含之單位點均質結合模型，使用「標準分析」法，由資料之非線性回歸分析獲得KD。
L. 治療方法及組合物  如本文所描述之抗體集合可用於治療方法中。在一個態樣中，提供用作藥劑之如本文所描述之抗體集合。在某些態樣中，提供用於治療方法中之抗體集合。
在一些態樣中，如本文所描述之抗體集合可用作免疫治療劑，例如用於治療增生性疾病，例如癌症。治療可誘導標靶細胞，尤其腫瘤細胞溶解。
如上文所論述，在一些態樣中，本發明之抗體集合適用於其中需要向個體中之標靶細胞遞送放射性核種之任何治療。舉例而言，提供用於預靶向放射免疫療法之方法中之抗體集合，例如以用於癌症治療之如本文所描述。
在某些態樣中，本發明提供用於個體中之免疫療法或預靶向放射免疫療法之方法中之抗體集合，該方法包含向個體投與有效量之抗體集合。如任一以上態樣中之「個體」較佳為人類。
如上文所提及，治療可屬於可藉由靶向患者病變細胞之細胞毒性活性治療之任何病狀。治療較佳為腫瘤或癌症治療。然而，本發明之適用性不限於腫瘤及癌症。舉例而言，治療亦可屬於病毒感染或例如原核生物之另一病原性生物體感染。視情況，亦可靶向T細胞以治療經T細胞驅動之自體免疫疾病或T細胞血癌。因此，待治療之病狀可包括諸如HIV、狂犬病、EBV及卡波西氏肉瘤相關疱疹病毒之病毒感染以及諸如多發性硬化症及移植物抗宿主疾病藥物之自體免疫疾病。
如本文中所使用之術語「癌症」包括實體癌及血液癌，諸如淋巴瘤、淋巴球性白血病、肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、骨癌、胰臟癌(包括胰管腺癌(PDAC))、皮膚癌、頭或頸部之癌症、皮膚或眼內黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、肛門區癌、胃部癌、胃癌、大腸直腸癌(其可為結腸癌及/或直腸癌)、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細胞癌、膽癌、中樞神經系統(CNS)腫瘤、脊柱腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、脊膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤(Ewings sarcoma)，包括以上癌症中之任一種之難治性版本、以上癌症中之任一種之經受檢查點-抑制劑版本或以上癌症中之一或多種之組合。
治療方法可以包含同時或依序投與第一抗體及第二抗體。
在一些實施例中，本文所描述之抗體可作為組合療法之部分來投與。舉例而言，其可與一或多種化學治療劑組合投與：化學治療劑及抗體可同時或以任一次序依序投與。或者或另外，其可與一或多種免疫治療劑組合投與：免疫治療劑及抗體可同時或以任一次序依序投與。
本發明抗體(及例如放射性標記化合物之任何額外治療劑)可藉由包括非經腸、肺內及鼻內之任何適合手段投與，且視需要用於局部治療、病灶內投與。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。給藥可藉由任何適合途徑，例如藉由諸如靜脈內或皮下注射之注射進行。
在一個實例中，使放射性同位素靶向細胞、組織或器官以用於療法之方法可包含： i) 向個體投與如本文所描述之第一抗體及第二抗體(同時或以任一次序依序)，其中抗體結合於標靶抗原且定位至表現標靶抗原之細胞表面；且其中第一抗體及第二抗體之結合形成針對放射性標記化合物之功能性結合位點； 及 ii) 隨後投與放射性標記化合物，其中該放射性標記化合物結合於用於該放射性標記化合物之功能性結合位點。
放射性標記化合物經對細胞具細胞毒性之放射性同位素標記。適合的放射性同位素包括如上文所論述之α及β發射體。
在利用雙特異性抗體(亦即非本發明之「分裂」抗體)之預靶向放射免疫療法方法中，慣例為在投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與清除劑或阻斷劑。清除劑結合於抗體且增強其自身體清除之速率。其包括抗個體基因型抗體。阻斷劑通常為結合於用於放射性標記化合物之抗原結合位點、但未經自身放射性標記之藥劑。舉例而言，在放射性標記化合物包含負載有特定化學元素(例如金屬)之放射性同位素之螯合劑情況下，阻斷劑可包含負載有相同元素(例如金屬)之非放射性同位素之相同螯合劑，或可包含非負載螯合劑或負載有不同非放射性部分(例如不同元素之非放射性同位素)之螯合劑，其限制條件為其仍可與抗原結合位點結合。在一些情況下，阻斷劑可另外包含增大分子之尺寸及/或流體動力學半徑之部分。阻斷劑在循環中阻礙分子接近腫瘤之能力，而不干擾分子結合於抗體之能力。例示性部分包括親水性聚合物。部分可為例如葡聚糖、糊精、PEG、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸、羥乙基澱粉(HES)或聚(2-乙基2-㗁唑啉) (PEOZ)之聚合物或共聚物。在其他實施例中，部分可為非結構化肽或蛋白，諸如XTEN多肽(非結構化親水性蛋白聚合物)、高胺基酸聚合物(HAP)、脯胺酸-丙胺酸-絲胺酸聚合物(PAS)、彈性蛋白樣肽(ELP)或明膠樣蛋白(GLK)。另外例示性部分包括諸如白蛋白(例如牛血清白蛋白)或IgG之蛋白。適用於部分/聚合物之分子量可介於例如至少50 kDa，例如50 kDa與2000 kDa之間的範圍內。舉例而言，分子量可為200-800 kDa，視情況大於300、350、400或450 kDa，且視情況小於700、650、600或550 kDa，視情況為約500 kDa。
根據本發明之某些態樣，不存在向個體投與清除劑或阻斷劑之步驟。在某些態樣中，不存在於投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與結合於第一抗體或第二抗體之任何藥劑的步驟。在某些態樣中，不存在於投與抗體與放射性標記化合物之間投與任何藥劑之步驟，選自化學治療劑、免疫治療劑及放射增敏劑之視情況存在之化合物除外。在一些實施例中，在投與抗體與投與放射性標記化合物之間不投與藥劑。在一些實施例中，在投與抗體與投與放射性標記化合物之間可不向個體注射或輸注任何其他藥劑。
在一些實施例中，該方法可為由以下步驟組成或基本上由以下步驟組成之預靶向放射免疫療法兩步法：i)投與抗體集合(其中第一抗體及第二抗體可同時或以任一次序依序投與)，及ii)隨後投與放射性標記化合物。治療可涉及該療法之多個循環，亦即此兩個步驟之多個循環。例示性治療循環持續時間為28天，其中抗體集合係在循環第1天投與，且放射性標記化合物視情況在循環第1、2、3、4、5、6、7或8天，例如在第7天投與。治療循環數可變化。在一個實施例中，可存在4、5或6個治療循環。
出乎意料地，本發明人測定使用本發明之抗體有可能獲得腫瘤對放射性標記化合物之治療上有效吸收，同時避免正常組織中放射性之過量積聚。實際上，在實例中，發現非目標組織中放射性積聚位準低於使用雙特異性抗體及清除步驟、同時亦利用較簡單程序之三步驟PRIT方法中之放射性積聚位準。
在一些實施例中，一旦已投與第一抗體及第二抗體適合時段以定位至標靶細胞，則可向個體投與放射性標記化合物。舉例而言，在一些實施例中，在第一抗體及第二抗體之後立即或在第一抗體及第二抗體之後至少4小時、8小時、1天或2天可向個體投與放射性標記化合物。視情況，其可在第一抗體及第二抗體之後不超過3天、5天或7天投與。在一個特定實施例中，在第一抗體及第二抗體之後2至7天可向個體投與放射性標記化合物。
在一些實施例中，另外或可替代地，本文所描述之抗體可與放射增敏劑組合投與。放射增敏劑及抗體可同時或以任一次序依序投與。
在一些實施例中，可在如上文所描述之一或多個治療循環之前使用一或多個劑量測定術循環。劑量測定術循環可包含以下步驟：i)投與抗體集合(其中第一抗體及第二抗體可同時或以任一次序依序投與)，及ii)隨後投與經γ-發射體放射性標記之適用於成像之化合物(其中該放射性標記化合物結合於用於放射性標記化合物之功能性結合位點)。該化合物可與後續治療循環中所使用之化合物相同，不同之處在於其經γ發射體而非α或β發射體標記。舉例而言，在一個實施例中，劑量測定術循環中所使用之放射性標記化合物可為 203Pb-DOTAM，且治療循環中所使用之放射性標記化合物可為 212Pb-DOTAM。患者可經受成像以測定腫瘤對化合物之吸收及/或以估計化合物之吸收劑量。此資訊可用於估計後續治療步驟中之預期輻射暴露且用於將治療步驟中所使用之放射性標記化合物之劑量調節至安全位準。
M. 醫藥調配物  本文所描述之第一抗體及第二抗體可在單一醫藥組合物中或在單獨醫藥組合物中調配。因此，在另一態樣中，本發明提供例如用於本文所描述之治療或診斷方法中之任一種中的包含本發明之第一抗體及第二抗體之醫藥組合物或包含本發明之第一抗體之第一醫藥調配物及包含本發明之第二抗體之第二醫藥組合物。在一個實施例中，醫藥組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥組合物進一步包含例如如下文所描述之至少一種額外治療劑。
具有如本文所描述之抗體的醫藥調配物可藉由混合具有所需純度之此抗體與一或多種視情況存在之醫藥學上可接受之載劑，以凍乾調配物或水溶液之形式來製備( Remington ' s Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A.編(1980))。
在所採用劑量及濃度下之醫藥學上可接受之載劑一般對接受者無毒，且包括(但不限於)：緩衝液，諸如組胺酸、磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；苯紮氯銨；氯化苯甲烴胺；酚類、丁醇或苯甲醇；對羥苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；以及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中之例示性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質藥物分散劑，諸如可溶中性-活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸如rHuPH20 (HYLENEX®, Halozyme, Inc.)。某些例示性sHASEGP (包括rHuPH20)及使用方法描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種其他葡萄糖胺聚糖酶，諸如軟骨素酶組合。
例示性凍乾抗體集合合物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體集合合物包括美國專利第6,171,586號及WO 2006/044908中所描述之水性抗體集合合物，後者組合物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
本文之調配物亦可含有一種以上為所治療之特定適應症所必需之活性組分，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之互補活性的彼等活性成分。舉例而言，可能需要進一步提供如上文所論述之化學治療劑、免疫治療劑及/或放射增敏劑。此類活性組分宜以有效達成預期目的之量組合存在。
活性組分可包覆於微膠囊中，例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合所製備之微膠囊，例如分別為羥基甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊；包覆於膠態藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或巨乳液中。此類技術揭示於 Remington ' s Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A.編(1980)中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放型製劑之適合的實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物之半滲透基質，該等基質呈成型物形式，例如膜或微膠囊。
用於活體內投藥之調配物通常為無菌的。無菌性可容易地藉由例如經由無菌過濾膜過濾來實現。
N. 用於診斷及偵測之方法及組合物  在效應劑為放射性標記部分之情況下，如本文所描述之抗體集合亦可用於診斷或成像方法，較佳為或包含預靶向放射免疫成像之方法。因此，本發明提供診斷及成像方法。其進一步提供抗體集合在如本文所描述之成像方法中之用途及如本文所描述之抗體集合(亦即如本文所描述之第一抗體及第二抗體)用於在個體上，例如在人類或動物身體上進行之診斷方法中的用途。
成像方法適用於對身體中之標靶抗原之存在及/或分佈進行成像。舉例而言，該方法可為對表現疾病相關抗原之細胞進行成像之方法，該疾病諸如上文所論述之疾病病狀中之任一者。視情況，該方法係用於對腫瘤或癌症進行成像。該方法可用於診斷疑似患有諸如癌症之增生性病症或感染性疾病之個體的目的。
在一些實施例中，可較佳地，個體為人類。
使放射性同位素靶向組織或器官以進行成像或診斷之方法可包含： i) 向個體投與如本文所描述之第一抗體及第二抗體(同時或以任一次序依序)，其中抗體結合於標靶抗原且定位至表現標靶抗原之細胞表面，其中第一抗體及第二抗體之結合形成用於放射性標記化合物之功能性結合位點； 及 ii) 隨後投與放射性標記化合物，其中該放射性標記化合物結合於用於該放射性標記化合物之該功能性結合位點。 視情況，該方法可進一步包含： iii) 對其中定位或期望定位放射性標記化合物之組織或器官進行成像。
視情況，該方法可進一步包含一或多個形成診斷、向個體遞送診斷及/或基於診斷確定及/或投與適合治療之步驟。
在另一實施例中，本發明之方法可包含使個體之組織或器官成像，其中該個體先前已投與： i) 如本文所描述之第一抗體及第二抗體(同時或以任一次序依序)，其中抗體結合於標靶抗原且定位至表現標靶抗原之細胞表面，且其中第一抗體及第二抗體之結合形成用於放射性標記化合物之功能性結合位點；以及 ii) 放射性標記化合物，其中放射性標記化合物結合於藉由第一抗體及第二抗體之結合形成之用於該放射性標記化合物之抗原結合位點。
在如本文所描述之成像及/或診斷方法中，放射性標記化合物經適用於成像之放射性同位素標記。適合放射性同位素包括如上文所論述之γ發射體。
在習知預靶向放射成像方法中，慣例為在投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與清除劑或阻斷劑，例如如上文所描述之清除劑或阻斷劑。
在本發明之某些實施例中，不存在投與清除劑或阻斷劑之步驟。在某些態樣中，不存在於投與抗體與投與放射性標記化合物之間投與結合於第一抗體或第二抗體之任何藥劑的步驟。在某些態樣中，不存在於投與抗體與放射性標記化合物之間投與任何藥劑之步驟，選自化學治療劑、免疫治療劑及放射增敏劑之視情況存在之化合物除外。在一些實施例中，在投與抗體與投與放射性標記化合物之間不投與藥劑。在一些實施例中，在投與抗體與投與放射性標記化合物之間可不向個體注射或輸注任何其他藥劑。
在一些實施例中，一旦已投與第一抗體及第二抗體適合時段以定位至標靶細胞，則可向個體投與放射性標記化合物。舉例而言，在一些實施例中，在第一抗體及第二抗體之後立即或在第一抗體及第二抗體之後至少4小時、8小時、1天或2天可向個體投與放射性標記化合物。視情況，其可在第一抗體及第二抗體之後不超過3天、5天或7天投與。在一個特定實施例中，在第一抗體及第二抗體之後2至7天可向個體投與放射性標記化合物。
在一些實施例中，成像方法可為由以下步驟組成或基本上由以下步驟組成之預靶向放射成像方法：i)投與抗體集合(其中第一抗體及第二抗體可同時或以任一次序依序投與)，ii)隨後投與放射性標記化合物，及iii)對所關注之組織或器官進行成像。診斷方法可由以下組成或基本上由以下組成：該步驟，接著為形成診斷之步驟，該步驟可隨後遞送至患者且可用作用於所選擇治療方案及/或投與治療方案之基礎。
標靶抗原可為如本文所論述之任何標靶抗原。在一些實施例中，標靶抗原可為如上文所論述之腫瘤特異性抗原，且成像可為對一或多種腫瘤進行成像之方法。個體可已知或疑似患有腫瘤。
舉例而言，方法可為在患有或疑似患有以下癌症之個體中進行腫瘤成像之方法：肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、骨癌、胰臟癌(包括PDAC)、皮膚癌、頭或頸部之癌症、皮膚或眼內黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、大腸直腸癌(其可為結腸癌及/或直腸癌)、肛門區癌、胃部癌、胃癌、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細胞癌、膽癌、中樞神經系統(CNS)腫瘤、脊柱腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、脊膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤，包括以上癌症中之任一種之難治性版本、以上癌症中之任一種之經受檢查點-抑制劑版本或以上癌症中之一或多種之組合。
III. 序列
SEQ ID NO 說明 序列
1 重鏈CDR1, ＜Pb-Dotam＞ GFSLSTYSMS
2 重鏈CDR2 ＜Pb-Dotam＞ FIGSRGDTYYASWAKG
3 重鏈CDR3 ＜Pb-Dotam＞ ERDPYGGGAYPPHL
4 輕鏈CDR1, ＜Pb-Dotam＞ QSSHSVYSDNDLA
5 輕鏈CDR2 ＜Pb-Dotam＞ QASKLAS
6 輕鏈CDR3 ＜Pb-Dotam＞ LGGYDDESDTYG
7 重鏈可變域＜Pb-Dotam＞ PRIT-0213 VTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
8 輕鏈可變域＜Pb-Dotam＞ PRIT-0213 IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
9 重鏈可變域＜Pb-Dotam＞ PRIT-0214 VQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGFSLSTYSMSWIRQPPGKGLEWIGFIGSRGDTYYASWAKGRVTISR DTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
10 輕鏈可變域＜Pb-Dotam＞ PRIT-0214 IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
11 重鏈CDR1 ＜CEA＞ T84.66 GFNIKDTYMH
12 重鏈CDR2 ＜CEA＞ T84.66 RIDPANGNSKYVPKFQG
13 重鏈CDR3 ＜CEA＞ T84.66 FGYYVSDYAMAY
14 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ T84.66 RAGESVDIFGVGFLH
15 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ T84.66 RASNRAT
16 輕鏈CDR3 ＜CEA＞ T84.66 QQTNEDPYT
17 重鏈可變域＜CEA＞ T84.66 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSS   
18 輕鏈可變域＜CEA＞ T84.66 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAGESVDIFGVGFLHWYQQKPGQAPRLLIYRASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQTNEDPYTFGQGTKLEIK
19 重鏈CDR1 ＜CEA＞ CH1A1A GYTFTEFGMN
20 重鏈CDR2 ＜CEA＞ CH1A1A WINTKTGEATYVEEFKG
21 重鏈CDR3 ＜CEA＞ CH1A1A WDFAYYVEAMDY
22 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ CH1A1A KASAAVGTYVA
23 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ CH1A1A SASYRKR
24 輕鏈CDR3 ＜CEA＞ CH1A1A HQYYTYPLFT
25 重鏈可變域＜CEA＞ CH1A1A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSS
26 輕鏈可變域＜CEA＞ CH1A1A DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK
27 不含連接子及＜DOTAM-VH＞的P1AD8749之重鏈＜CEA＞à與不含連接子及＜DOTAM＞之SeqID32相同的質體 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGW INTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWD FAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
28 P1AD8749重鏈臼＜CEA＞ CH1A1A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
29 不含連接子及＜DOTAM-VL＞的P1AD8592之重鏈＜CEA＞à與不含連接子及＜DOTAM＞之SeqID33相同的質體 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGW INTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWD FAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREP QVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
30 P1AD8592重鏈杵＜CEA＞CH1A1A    QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
31 連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
32 P1AD8749重鏈杵＜CEA＞CH1A1A＜Dotam-VH＞ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS VTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
33 P1AD8592重鏈臼＜CEA＞CH1A1A＜Dotam-VL＞ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
34 P1AD8749及P1AD8592輕鏈＜CEA＞ CH1A1A DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYS ASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFG QGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWK VDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ GLSSPVTKSFNRGEC
35 重鏈CDR 1, ＜C825＞ DYGVH
36 重鏈CDR 2, ＜C825＞ VIWSGGGTAYNTALIS
37 重鏈CDR 3, ＜C825＞ RGSYPYNYFDA
38 輕鏈CDR 1, ＜C825＞ GSSTGAVTASNYAN
39 輕鏈CDR 2, ＜C825＞ GHNNRPP
40 輕鏈CDR 3, ＜C825＞ ALWYSDHWV
41 重鏈可變域＜C825＞ HVKLQESGPGLVQPSQSLSLTCTVSGFSLTDYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRLNIYRDNSKNQVFLEMNSLQAEDTAMYYCARRGSYPYNYFDAWGQGTTVTVSS
42 輕鏈可變域, ＜C825＞ QAVVIQESALTTPPGETVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQEKPDHLFTGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLIGDKAALTIAGTQTEDEAIYFCALWYSDHWVIGGGTKLTVL
43 重鏈CDR1 ＜CEA＞ A5B7 DYYMN
44 重鏈CDR2 ＜CEA＞ A5B7 FIGNKANAYTTEYSASVKG
45 重鏈CDR3 ＜CEA＞ A5B7 DRGLRFYFDY
46 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ A5B7 RASSSVTYIH
47 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ A5B7 ATSNLAS
48 輕鏈CDR3 ＜CEA＞ A5B7 QHWSSKPPT
49 重鏈可變域＜CEA＞ A5B7 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSS
50 輕鏈可變域＜CEA＞ A5B7 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVTYIHWYQQKPGQAPRSWIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHWSSKPPTFGQGTKLEIK
51 P1AE4956重鏈臼 ＜CEA＞ A5B7    EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
52 P1AE4956重鏈杵＜CEA＞ A5B7 ＜Dotam-VH＞    EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS VTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSS
53 不含連接子及DOTAM-VH＞的P1AE4956之重鏈＜CEA＞à與不含連接子及＜DOTAM＞之SeqID 52相同的質體 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
54 P1AE4956輕鏈＜CEA＞ A5B7 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVTYIHWYQQKPGQAPRSWIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHWSSKPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
55 P1AE4957重鏈杵＜CEA＞ A5B7 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
56 P1AE4957重鏈臼＜CEA＞ A5B7 ＜Dotam-VL＞ EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
57 不含連接子及DOTAM-VL＞的P1AE4957之重鏈＜CEA＞à與不含連接子及＜DOTAM＞之SeqID 56相同的質體 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANAYTTEYSASVKGRFTISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
58 P1AE4957輕鏈＜CEA＞ A5B7 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVTYIHWYQQKPGQAPRSWIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHWSSKPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
59 重鏈CDR1 ＜CEA＞ 28A9 GGTFSYYAIS
60 重鏈CDR2 ＜CEA＞ 28A9 GILPAFGAANYAQKFQG
61 重鏈CDR3 ＜CEA＞ 28A9 LPPLPGAGLDY
62 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ 28A9 RASQSISSWLA
63 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ 28A9 DASSLES
64 輕鏈CDR3 ＜CEA＞ 28A9 QQNTQYPMT
65 重鏈可變域＜CEA＞ 28A9 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSS
66 輕鏈可變域＜CEA＞ 28A9 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC RASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIY DASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QQNTQYPMTFGQGTKVEIK   
67 重鏈CDR1 ＜GPRC5D＞ GFTFSKYAMA
68 重鏈CDR2 ＜GPRC5D＞    SISTGGVNTYYADSVKG
69 重鏈CDR3 ＜GPRC5D＞ HTGDYFDY
70 輕鏈CDR1 ＜GPRC5D＞ RASQSVSISGINLMN
71 輕鏈CDR2 ＜GPRC5D＞ HASILAS
72 輕鏈CDR3 ＜GPRC5D＞ QQTRESPLT
73 重鏈可變域＜GPRC5D＞ EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMAWVRQAPGKGLEWVASISTGGVNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATHTGDYFDYWGQGTMVTVSS
74 輕鏈可變域＜GPRC5D＞ EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSISGINLMNWYQQKPGQQPKLLIYHASILASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTRESPLTFGQGTRLEIK
75 重鏈CDR1 ＜FAP＞ 4B9 GFTFSSYAMS
76 重鏈CDR2 ＜FAP＞ 4B9 AIIGSGASTYYADSVKG
77 重鏈CDR3 ＜FAP＞ 4B9    GWFGGFNY
78 輕鏈CDR1 ＜FAP＞ 4B9 RASQSVTSSYLA
79 輕鏈CDR2 ＜FAP＞ 4B9 VGSRRAT
80 輕鏈CDR3 ＜FAP＞ 4B9 QQGIMLPPT
81 重鏈可變域＜FAP＞ 4B9 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIIGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWFGGFNYWGQGTLVTVSS
82 輕鏈可變域＜FAP＞ 4B9 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSSYLAWYQQKPGQAPRLLINVGSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQGIMLPPTFGQGTKVEIK
83 P1AF0709 HC杵＜CEA＞ T84.66 (D1AE4688) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
84 P1AF0709 HC臼＜CEA＞ T84.66 Dotam-VL (D1AA4920) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
85 P1AF0709 HC臼＜CEA＞ T84.66，不含連接子及DOTAM QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
86 PIAF0298 HC臼＜CEA＞ T84.66 (D1AE4687) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
87 PIAF0298 HC杵＜CEA＞ T84.66 Dotam-VH-AST (D1AE3668) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSAST
88 PIAF0298 HC杵＜CEA＞ T84.66，不含連接子及DOTAM QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANGNSKYVPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
89 P1AF0709及PIAF0298輕鏈(D1AA4120)    EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAGESVDIFGVGFLHWYQQKPGQAPRLLIYRASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQTNEDPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
90 P1AF0710 HC杵＜CEA＞ 28A9 (D1AE4690) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
91 P1AF0710 HC臼＜CEA＞ 28A9 Dotam-VL (D1AC3172) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
92 P1AF0710 HC臼＜CEA＞ 28A9，不含連接子或DOTAM QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
93 P1AF0711 HC臼＜CEA＞ 28A9 (D1AE4689) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
94 P1AF0711 HC杵＜CEA＞ 28A9 Dotam-VH-AST (D1AE3671) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSAST
95 P1AF0711 HC杵＜CEA＞ 28A9，不含連接子及DOTAM QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPAFGAANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLPPLPGAGLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
96 P1AF0710及P1AF0711輕鏈(D1AA2299) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQNTQYPMTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
97 P1AF0712 HC杵＜CEA＞ CH1A1A (D1AC4023) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
98 P1AF0712 HC臼＜CEA＞ CH1A1A DOTA-VL (D1AE4684) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVIQESALTTPPGETVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQEKPDHLFTGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLIGDKAALTIAGTQTEDEAIYFCALWYSDHWVIGGGTKLTVL
99 P1AF0712 HC臼＜CEA＞，不含連接子或DOTA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
100 P1AF0713 HC臼＜CEA＞ CH1A1A (D1AC4022) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
101 P1AF0713 HC杵＜CEA＞ CH1A1A DOTA-VH-AST (D1AE3670) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHVKLQESGPGLVQPSQSLSLTCTVSGFSLTDYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRLNIYRDNSKNQVFLEMNSLQAEDTAMYYCARRGSYPYNYFDAWGQGTTVTVSSAST
102 P1AF0713 HC杵＜CEA＞ CH1A1A，不含連接子及DOTA QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
103 P1AF0712及P1AF0713輕鏈(D1AA3384) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
104 P1AF8284及P1AF8285 HC杵＜GPRC5D＞ (D1AF6517) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMAWVRQAPGKGLEWVASISTGGVNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATHTGDYFDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
105 P1AF8284 HC臼Dotam-VL (D1AG3592) DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
106 P1AF8285 H臼Dotam-VHA (D1AG3591) DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSA
107 P1AF8284及P1AF8285輕鏈 (D1AF6469) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSISGINLMNWYQQKPGQQPKLLIYHASILASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTRESPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
108 P1AF8286及P1AF8287 HC杵＜FAP＞ 4B9 (D1AF6515) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIIGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWFGGFNYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
109 P1AF8286 HC臼Dotam-VL (D1AG3592) DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIK
110 P1AF8287 HC臼Dotam-VHA (D1AG3591) DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSA
111 P1AF8286及P1AF8287輕鏈(D1AB9974) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSSYLAWYQQKPGQAPRLLINVGSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQGIMLPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
112 P1AF7782及P1AF7784 HC杵＜CEA＞ CH1A1A (D1AD3419) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
113 P1AF7782 HC臼Dotam-VL (D1AG2237) SIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
114 P1AF7784 HC臼Dotam-VH (D1AG2236) GVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
115 P1AF7782及P1AF7784輕鏈(D1AD3421) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
116 重鏈CDR1 ＜CEA＞ MFE23 DSYMH
117 重鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23 WIDPENGDTEYAPKFQG
118 重鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23-H26 WIDPENGGTNYAQKFQG
119 重鏈CDR3 ＜CEA＞ MFE23 GTPTGPYYFDY
120 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ MFE23 SASSSVSYMH
121 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ MFE23-L24, L25 RASSSVSYMH
122 輕鏈CDR1 ＜CEA＞ MFE23-L26 RASQSISSYM
123 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23 STSNLAS
124 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23-L26 YTSNLAS
125 輕鏈CDR2 ＜CEA＞ MFE23-L29 STSSLQS
126 輕鏈CDR3 ＜CEA＞ MFE23 QQRSSYPLT
127 重鏈可變域＜CEA＞ MFE23 QVKLQQSGAELVRSGTSVKLSCTASGFNIKDSYMHWLRQGPEQGLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTTVTVSS
128 輕鏈可變域＜CEA＞ MFE23 ENVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPLTFGAGTKLELK
129 MFE-H24 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTMTTDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
130 MFE-H25 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTMTTDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
131 MFE-H26 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGGTNYAQKFQGRVTMTTDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
132 MFE-H27 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTMTTDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
133 MFE-H28 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
134 MFE-H29 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDSYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYAPKFQGRVTITTDESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS
135 MFE-L24 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
136 MFE-L25 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
137 MFE-L26 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
138 MFE-L27 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVPYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
139 MFE-L28 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVPYMHWLQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
140 MFE-L29 EIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVPYMHWLQQKPGKAPKLLIYSTSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK
141 CEA之A2域 PKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEPEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGP YECGIQNKLSVDHSDPVILN
142 CEA之A1域 PKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPETQDATYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDTAS YKCETQNPVSARRSDSVILN
143 D1AD3421 LC ＜CEA＞ CH1A1A DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
144 D1AC3981 HC臼 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
145 D1AF7527 HC杵＜CEA＞ CH1A1A Dotam-VL QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGSIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSHSVYSDNDLAWYQQKPGKAPKLLIYQASKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGYDDESDTYGFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
146 D1AF7526 HC杵＜CEA＞ CH1A1A Dotam-VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGGVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSTYSMSWIRQPPGKALEWLGFIGSRGDTYYASWAKGRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARERDPYGGGAYPPHLWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGSGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
147 D1AC6742 HC臼＜CEA＞ CH1A1A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IV. 實例 以下為本發明之方法及組合物的實例。應瞭解，考慮到上文提供之一般描述，可實施各種其他實施例。
縮寫詞彙表 ADA        抗藥物抗體 AST         丙胺酸、絲胺酸、蘇胺酸 BsAb       雙特異性抗體 CA           清除劑 CEA         癌胚抗原 DOTAM   1,4,7,10-肆(胺甲醯基甲基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷 ID           注射劑量 ELISA      酶聯免疫吸附分析法 FAP         纖維母細胞活化蛋白 GPRC5D  G蛋白偶合受體家族C第5組成員D IV           靜脈內 MW         分子量 PBS         磷酸鹽緩衝鹽水 p.i.          注射後 PK           藥物動力學 PRIT        預靶向放射免疫療法 RIT          放射免疫療法 RT           室溫 SC           皮下 SCID       嚴重組合型免疫缺陷 SD           標準差 SOPF       無特異性及機會性病原體 SPLIT      分離v域連接技術 TA           標靶抗原 TGI         腫瘤生長抑制 TR           腫瘤消退
實例1：生成CEA-分裂-DOTAM VH/VL抗體  使用具有用於標靶抗原之結合位點及用於放射性標記化合物之結合位點之雙特異性抗體之PRIT (預靶向放射免疫療法)方法通常在抗體與放射性配位體之投藥之間使用清除劑(CA)，以確保有效靶向及高腫瘤與正常組織吸收劑量比(參見圖3)。在一種此類方法之實例中，使所注射之BsAb具有足夠的時間(一般4-10天)滲透至腫瘤中，隨後使用Pb-DOTAM-葡聚糖-500 CA中和循環BsAb。CA在不滲透至腫瘤中之情況下阻斷 212Pb-DOTAM與未經靶向之BsAb之結合，由此阻斷預靶向位點。此預靶向方案允許隨後投與之放射性標記螯合物( 212Pb-DOTAM)之有效腫瘤積聚。
然而，在涉及清除劑之方法中，使用CA會在方法中引入另一個無效的步驟。此外，謹慎選擇CA投藥之時機及劑量可能重要，其為複雜因素。
為解決與使用清除劑相關之問題，本發明人提出分裂DOTAM VL域及VH域以使得彼等可存在於各別抗體上之策略。
下文進一步論述例示性分裂DOTAM VH/VL抗體之生成。
用於重組表現抗體重鏈或輕鏈之質體的生成  藉由短暫轉染人類胚腎細胞(HEK 293)來表現所需蛋白。為了表現所需基因/蛋白(例如全長抗體重鏈、全長抗體輕鏈，或含有另外結構域(例如在其C端之免疫球蛋白重鏈或輕鏈可變域)之全長抗體重鏈)，使用包含以下功能元件之轉錄單元： - 包括內含子A之人類巨細胞病毒之立即早期強化子及啟動子(P-CMV)， - 人類重鏈免疫球蛋白5'-非轉譯區(5'UTR)， - 鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列(SS)， - 欲表現之基因/蛋白，及 - 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
除包括待表現之所需基因之表現單元/卡匣以外，基礎/標準哺乳動物表現質體亦含有 - 允許在大腸桿菌中複製此質體之來自載體pUC18之複製起點，以及 - 在大腸桿菌中賦予安比西林(ampicillin)抗性之β-內醯胺酶基因。
a) 抗體重鏈之表現質體藉由使編碼各自由G4Sx4連接子分隔之各別序列元件(V-重鏈或V-輕鏈)的DNA片段與人類IgG分子之CH3域之C端融合來組裝抗體重鏈編碼基因，該等基因包括包含完整及功能性抗體重鏈及隨後的其他抗體V-重鏈或V-輕鏈域之C端融合基因(VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-連接子-VH或VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-連接子-VL)。使用杵-臼技術表現在兩個CH3域之C端分別負載一個VH及一個VL域的重組抗體分子。
除具有C端VH域或VL域表現卡匣之抗體重鏈片段以外，用於在HEK293細胞中短暫表現具有C端VH域或VL域之抗體重鏈的表現質體亦包含允許在大腸桿菌中複製此質體之來自載體pUC18之複製起點以及在大腸桿菌中賦予安比西林抗性之β-內醯胺酶基因。具有C端VH或VL域融合基因之抗體重鏈片段的轉錄單元包含以下功能元件： - 包括內含子A之人類巨細胞病毒之立即早期強化子及啟動子(P-CMV)， - 人類重鏈免疫球蛋白5'-非轉譯區(5'UTR)， - 鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列， - 抗體重鏈(VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-連接子-VH或VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-連接子-VL)編碼核酸，及 - 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
b) 抗體輕鏈之表現質體藉由使編碼各別序列元件之DNA片段融合來組裝包含完整及功能性抗體輕鏈之抗體輕鏈編碼基因。
除抗體輕鏈片段以外，用於短暫表現抗體輕鏈之表現質體亦包含允許在大腸桿菌中複製此質體之來自載體pUC18之複製起點以及在大腸桿菌中賦予安比西林抗性之β-內醯胺酶基因。抗體輕鏈片段之轉錄單元包含以下功能元件： - 包括內含子A之人類巨細胞病毒之立即早期強化子及啟動子(P-CMV)， - 人類重鏈免疫球蛋白5'-非轉譯區(5'UTR)， - 鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列， - 抗體輕鏈(VL-CL)編碼核酸，及 - 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
抗體分子之短暫表現  在經短暫轉染之HEK293細胞(人類胚腎細胞株293衍生型)中生成抗體分子，該等細胞係在F17培養基(Invitrogen Corp.)中培養。對於轉染，使用「293-Free」轉染劑(Novagen)。自個別表現質體表現如上文所描述之各別抗體重鏈及輕鏈分子。如製造商說明中所規定進行轉染。在轉染之後三至七(3-7)天，收集含有免疫球蛋白之細胞培養物上清液。將上清液儲存於降低之溫度(例如-80℃)下，直至純化。
關於人類免疫球蛋白在例如HEK293細胞中之重組表現之一般資訊提供於：Meissner, P.等人, Biotechnol. Bioeng. 75 (2001) 197-203中。
藉由MabSelect Sure (親和力層析法)且接著進行Superdex 200 (尺寸排阻層析法)來純化PRIT半抗體(分裂抗體)。
例示性抗體/半抗體之序列概述如下。
抗體名稱 第一重鏈 第二重鏈 輕鏈
P1AD8592 SEQ ID NO: 30 SEQ ID NO: 33 SEQ ID NO: 34
P1AD8749 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 32 SEQ ID NO: 34
P1AE4956 SEQ ID NO: 51 SEQ ID NO: 52 SEQ ID NO: 54
P1AE4957 SEQ ID NO 55 SEQ ID NO 56 SEQ ID NO: 58
製備5 mg具有DOTAM-VL-P1AD8592之PRIT分裂抗體，其濃度為1.372 mg/mL且純度＞96%，基於分析性SEC及CE-SDS。製備14 mg具有DOTAM-VH-P1AD8749之PRIT分裂抗體，其濃度為2.03 mg/mL且純度＞91%，基於分析性SEC及CE-SDS。
亦生成抗體P1AE4956及P1AE4957。製備19 mg具有DOTAM-VL-P1AE4957之PRIT分裂抗體，其濃度為2.6 mg/mL且純度＞81.6%，基於分析性SEC及CE-SDS。製備6.9 mg具有DOTAM-VH-P1AE4956之PRIT分裂抗體，其濃度為1.5 mg/mL且純度＞90%，基於分析性SEC及CE-SDS。使用ESI-MS以確認PRIT半抗體之一致性。
實例2：分裂抗體功能之FACS分析  為評估分裂抗體或半抗體之功能，在37℃下經10分鐘使用阿庫酶(accutase)自培養容器剝離MKN-45細胞。隨後，將細胞在PBS中洗滌兩次，且接種至96孔v形底盤中以達到4×10 6個細胞/孔之最終密度。
將半抗體P1AD8749及P1AD8592以及人類ISO對照物以1:1混合，以如圖5中所指示之濃度添加至細胞中。隨後，將細胞在冰上培育1小時且在PBS中洗滌兩次。使細胞集結粒再懸浮且添加40微升/孔之偵測試劑，亦即含＜人類IgG(H+L)＞FITC (10 μg/ml)或Pb_Dotam_FITC 1:100 =＞ (10 μg/ml)之PBS/5% FCS。在冰上培育60分鐘之後，將細胞在PBS中洗滌兩次且再懸浮於200 μl PBS/5% FCS中以使用FACS canto量測FITC螢光。
為評估半抗體與CEA在MKN-45細胞上之結合能力，使用抗體、使用人類IgG特異性二級抗體來偵測該等半抗體(圖5)。如所期望，未在此等細胞上觀測到大量人類ISO對照物之結合。當調節至相同IgG濃度時，兩種半抗體以及兩者之組合顯示與MKN-45細胞之劑量依賴性結合，其中如所期望在極高濃度下具有明顯鉤狀效應(hook effect)。此實驗證實，CEA結合在半抗體中具有功能性。
為評估半抗體對DOTAM之結合能力，在存在人類ISO對照物或其各別分裂抗體搭配物之情況下以1:1比率使該等半抗體結合於細胞。在其結合於MKN-45細胞之後，洗滌細胞以移除未結合之抗體。隨後，添加Pb-DOTAM-FITC (經螢光標記之Pb-DOTAM)以偵測DOTAM結合勝任細胞結合之抗體(圖6)。如所期望，當分裂抗體搭配物中之一者與人類ISO對照物組合時，未在此等細胞上觀測到大量FITC。僅呈1:1比率之兩種半抗體之組合顯示劑量依賴性FITC信號。此實驗顯示，當兩種半抗體共同存在於一個細胞上時，DOTAM結合位點變得具有功能性。
實例3：活體內研究  實例3a：材料及方法-概要  全部實驗方案均由地方當局(Comité Régional d'Ethique de l'Expérimentation Animale du Limousin [CREEAL], Laboratoire Départemental d'Analyses et de Recherches de la Haute-Vienne)審查及批准。根據倫理準則，將雌性嚴重合併性免疫缺乏症(SCID)小鼠(Charles River)維持在具有每日光/暗(12 h/12 h)循環之不含特異性及機會性病原體(SOPF)之條件下。在到達之後的前5天期間不進行操縱以使動物習慣新環境。每日針對臨床症狀來控制動物且偵測不良事件。
藉由皮下(SC)注射表現CEA之腫瘤細胞來建立實體異種移植物，該等細胞係在與Corning® Matrigel®基底膜基質(生長因子減少；目錄號354230)以1:1混合之細胞培養基中。腫瘤體積係經由每週3次手動測徑規量測來估測，且根據下式來計算： 體積 = 0 . 5× 長度 × 寬度 2 。視腫瘤生長速率而定，按需要進行額外腫瘤量測。
若小鼠由於腫瘤負荷、注射副作用或其他原因而顯示不可忍受之痛苦或疼痛徵象，則在預定的終點之前對其進行安樂死。疼痛、痛苦或不適之指示包括(但不限於)急性體重(BW)損失、毛皮不整潔(scruffy fur)、下痢、駝背姿勢及嗜睡。每週3次量測經處理動物之BW，其中視健康狀況而定，按需要進行額外量測。在放射性注射之後第二天開始向全部小鼠提供濕食，持續7天或直至全部個體自任何急性BW損失完全恢復為止。對BW損失超過其初始BW之20%或腫瘤體積達到3000 mm 3之小鼠立即進行安樂死。出於倫理原因考慮進行安樂死之其他因素為腫瘤狀態(例如壞死區域、血液/液體滲出、自傷徵象)及動物之一般外觀(例如毛皮、姿勢、動作)。
為將放射性尿液/糞便之再攝取減至最少，在投與 212Pb-DOTAM之後將全部功效研究小鼠置於具有格子地板之籠中保持4小時，隨後轉移至具有標準墊料之新籠子。隨後，在注射後(p.i.)24小時更換全部籠子。不對在放射性注射之後24小時內出於生物分佈目的而處死之小鼠進行此程序。
如由方案所指定，在進行安樂死時，對經麻醉之小鼠使用眼眶後採血自靜脈竇收集血液，隨後經由頸椎脫位術處死，接著進行額外組織收集以用於放射性量測及/或組織學分析。記載意外或異常狀況。將所收集之用於福馬林固定之組織立即置於10%中性緩衝福馬林(4℃)中，且隨後在5天之後轉移至磷酸鹽緩衝鹽水(PBS；4℃)中。將出於生物分佈之目的而收集之器官及組織稱重且使用2470 WIZARD 2自動γ計數器(PerkinElmer)量測放射性，且隨後計算每公克組織之注射劑量百分比(ID/g%)，包括針對衰變及背景進行之校正。
使用GraphPad Prism 7 (GraphPad Software, Inc.)及JMP 12 (SAS Institute Inc.)進行統計分析。基於平均腫瘤體積使用下式進行腫瘤生長抑制(TGI)之曲線分析：
Figure 02_image007
其中 d指示研究日且 0指示基線值。選擇媒劑作為參考組。腫瘤消退(TR)係根據以下計算：
Figure 02_image009
其中正值指示腫瘤消退，且低於-1之值指示超出雙倍基線值之生長。
測試化合物  用於所描述研究中之化合物分別針對雙特異性抗體、清除劑及放射性標記螯合物呈現於下表中。
CEA-DOTAM (RO7198427，PRIT-0213)為靶向CEA之T84.66抗原決定基之完全人類化BsAb (亦參見WO2019/201959)。PRIT-0213由以下構成： i) 如下文所示之第一重鏈； ii) 如下文所示之第二重鏈；及 iii) 如下文所示之兩個抗體輕鏈。
說明 序列
PRIT-00213之輕鏈 1 eivltqspat lslspgerat lscragesvd ifgvgflhwy qqkpgqaprl 51 liyrasnrat giparfsgsg sgtdftltis slepedfavy ycqqtnedpy 101 tfgqgtklei krtvaapsvf ifppsdeqlk sgtasvvcll nnfypreakv 151 qwkvdnalqs gnsqesvteq dskdstysls stltlskady ekhkvyacev 201 thqglsspvt ksfnrgec (SEQ ID NO: 89)
PRIT-0213之重鏈1 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgfnik dtymhwvrqa pgqglewmgr 51 idpangnsky vpkfqgrvti tadtststay melsslrsed tavyycapfg 101 yyvsdyamay wgqgtlvtvs sastkgpsvf plapssksts ggtaalgclv 151 kdyfpepvtv swnsgaltsg vhtfpavlqs sglyslssvv tvpssslgtq 201 tyicnvnhkp sntkvdkkve pkscdkthtc ppcpapeaag gpsvflfppk 251 pkdtlmisrt pevtcvvvdv shedpevkfn wyvdgvevhn aktkpreeqy 301 nstyrvvsvl tvlhqdwlng keykckvsnk algapiekti skakgqprep 351 qvytlppcrd eltknqvslw clvkgfypsd iavewesngq pennykttpp 401 vldsdgsffl yskltvdksr wqqgnvfscs vmhealhnhy tqkslslspg 451 ggggsggggs ggggsggggs vtlkesgpvl vkptetltlt ctvsgfslst 501 ysmswirqpp gkalewlgfi gsrgdtyyas wakgrltisk dtsksqvvlt 551 mtnmdpvdta tyycarerdp ygggaypphl wgrgtlvtvs s (SEQ ID NO: 152)
PRIT-0213之重鏈2 1 qvqlvqsgae vkkpgssvkv sckasgfnik dtymhwvrqa pgqglewmgr 51 idpangnsky vpkfqgrvti tadtststay melsslrsed tavyycapfg 101 yyvsdyamay wgqgtlvtvs sastkgpsvf plapssksts ggtaalgclv 151 kdyfpepvtv swnsgaltsg vhtfpavlqs sglyslssvv tvpssslgtq 201 tyicnvnhkp sntkvdkkve pkscdkthtc ppcpapeaag gpsvflfppk 251 pkdtlmisrt pevtcvvvdv shedpevkfn wyvdgvevhn aktkpreeqy 301 nstyrvvsvl tvlhqdwlng keykckvsnk algapiekti skakgqprep 351 qvctlppsrd eltknqvsls cavkgfypsd iavewesngq pennykttpp 401 vldsdgsffl vskltvdksr wqqgnvfscs vmhealhnhy tqkslslspg 451 ggggsggggs ggggsggggs iqmtqspssl sasvgdrvti tcqsshsvys 501 dndlawyqqk pgkapklliy qasklasgvp srfsgsgsgt dftltisslq 551 pedfatyycl ggyddesdty gfgggtkvei k (SEQ ID NO: 84)
DIG-DOTAM (RO7204012)為未結合CEA之BsAb，其用作陰性對照物。
P1AD8749、P1AD8592、P1AE4956及P1AE4957為靶向CEA之CH1A1A或A5B7抗原決定基之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體。其序列描述於上文中。將全部抗體構築體儲存於-80℃下直至注射之日為止，在注射之日將其解凍且在標準媒劑緩衝液(20 mM組胺酸、140 mM NaCl；pH 6.0)或0.9% NaCl中稀釋至其最終對應濃度以用於靜脈內(IV)或腹膜內(IP)投藥。
將Pb-DOTAM-葡聚糖-500 CA (RO7201869)儲存於-20℃下直至注射之日為止，在注射之日將其解凍且在PBS中稀釋以用於IV或IP投藥。
用於放射性標記之DOTAM螯合物係由Macrocyclics提供且在藉由Orano Med (Razès, France)進行放射性標記之前維持在-20℃下。 212Pb-DOTAM (RO7205834)係藉由用DOTAM溶離由釷生成劑生成，且隨後在標記之後用Ca淬滅。將 212Pb-DOTAM溶液用0.9% NaCl稀釋以獲得IV注射所需之 212Pb活性濃度。
媒劑對照組中之小鼠接受多次代替BsAb、CA及 212Pb-DOTAM之媒劑緩衝液注射。 雙特異性抗體
化合物 標靶 方案
CEA-DOTAM (RO7198427, PRIT-0213 ) T84.66 144、158、160
DIG-DOTAM (RO7204012) 地穀新配質 160
CEA-分裂-DOTAM-VH P1AD8749 CH1A1A 144、158
CEA-分裂-DOTAM-VH-AST P1AF0171 CH1A1A 175、185、189
CEA-分裂-DOTAM-VL P1AD8592 CH1A1A 144、158、175、185、189
CEA-分裂-DOTAM-VH P1AE4956 A5B7 158
CEA-分裂-DOTAM-VL P1AE4957 A5B7 158
CEA-分裂-DOTAM-VH-AST P1AF0298 T84.66 185、189
CEA-分裂-DOTAM-VL P1AF0709 T84.66 185、189
清除劑
化合物 方案
Ca-DOTAM-葡聚糖-500 (RO7201869) 144、158、160
放射性標記螯合物
化合物 淬滅 方案
212Pb-DOTAM (RO7205834) Ca 144、158、160、175、185、189
212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM Ca 160
腫瘤模型  用於小鼠中之接種之所用腫瘤細胞株及注射量描述於下表中。BxPC3為天然表現CEA之人類原代胰臟腺癌細胞株。在用10%胎牛血清(GE Healthcare Hyclone SH30088.03)增濃之RPMI 1640培養基、GlutaMAX™補充劑、HEPES (Gibco，參考編號72400-021)中培養細胞。在研究第0天，在各SCID小鼠中藉由將細胞皮下注射至右側腹中來建立實體異種移植物，該等細胞係在與Corning® Matrigel®基底膜基質(生長因子減少；目錄號354230)以1:1混合之RPMI培養基中。 腫瘤細胞株
細胞株 個細胞/ 小鼠 注射體積 方案 供應商
BxPC3 5×10 6 100 µL 144、158、160、175、185、189 ECACC*
*歐洲認證細胞培養物保藏中心(European Collection of Authenticated Cell Cultures) (Salisbury, UK)
實例3b：方案144  方案144之目標在於提供在使用CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb進行2步驟PRIT之後，攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之預靶向 212Pb-DOTAM之PK及活體內分佈資料。
藉由分開或一起注射CEA-分裂-DOTAM-VH及CEA-分裂-DOTAM-VL (P1AD8749及P1AD8592)，7天後接著注射 212Pb-DOTAM來進行兩步驟PRIT。在放射性注射之後6小時處死小鼠，且收集血液及器官以進行放射性量測。將2步驟流程與3步驟PRIT作比較，該3步驟PRIT使用標準CEA-DOTAM雙特異性抗體，7天後接著使用Ca-DOTAM-葡聚糖-500 CA且在CA之後24小時使用 212Pb-DOTAM。
藉由在抗體注射之後1小時至7天重複血液取樣且隨後藉由ELISA進行分析來收集CEA-分裂-DOTAM-VH/VL清除之PK資料。
研究概述示於圖7中。圖7a顯示2步驟PRIT方案之概述，該方案包括在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中針對CEA-分裂-DOTAM-VH/VL PK之血液取樣。圖7b顯示3步驟PRIT方案之概述，該方案係在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中進行(h=小時，d=天)。
研究設計  方案144之時程及設計示於下表中。 方案 144 之 時程
研究日 日期 實驗程序
0 2018-05-02 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 2018-05-02 SC注射BxPC3細胞
14 2018-05-16 IV注射CEA-DOTAM BsAb (D組)
15 2018-05-17 IV注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb (Aa、Ab、Ba、Bb、Ca、Cb組)
15 2018-05-17 眼眶後採血(1及4 h p.i.；分別為Aa、Ba、Ca及Ab、Bb、Cb組)
16 2018-05-18 眼眶後採血(24 h p.i.；Aa、Ba、Ca組)
18 2018-05-20 眼眶後採血(72 h p.i.；Ab、Bb、Cb組)
21 2018-05-23 IV注射CA (D組)
21 2018-05-23 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
22 2018-05-24 IV注射 212Pb-DOTAM (Aa、Ba、Ca、D組)
22 2018-05-24 眼眶後採血(168 h p.i.)且安樂死(Ab、Bb、Cb組)
22 2018-05-24 安樂死且收集組織，包括眼眶後採血(6 h p.i.) + γ計數(Aa、Ba、Ca、D組)
方案 144 中之 研究組
組 P1AD8749 (VH) CH1A1A(µg) P1AD8592 (VL) CH1A1A(µg) CEA-DOTAM BsAb(µg) PK(h p.i.) CA(µg) 212Pb (µCi) BD(h p.i.) n(小鼠)
Aa 100 0 0 1, 24, 168 0 10 6 4
Ab 100 0 0 4, 72, 168 0 0 — 4
Ba 0 100 0 1, 24, 168 0 10 6 4
Bb 0 100 0 4, 72, 168 0 0 — 4
Ca 100 100 0 1, 24, 168 0 10 6 4
Cb 100 100 0 4, 72, 168 0 0 — 4
D 0 0 100 — 25 10 6 4
在研究第0天，在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第26代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在注射腫瘤細胞之後十四天，以116 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第22天注射 212Pb-DOTAM；在第21天平均腫瘤體積為140 mm 3。
在CEA-分裂-DOTAM-VH/VL注射之後1 h (右眼)、24 h (左眼)及168 h (右眼，終止時)經由在麻醉下之眼眶後採血來收集來自Aa、Ba及Ca組中之小鼠之血液。類似地，在CEA-分裂-DOTAM-VH/VL注射之後4 h (右眼)、72 h (左眼)及168 h (右眼，終止時)自Ab、Bb及Cb組中之小鼠採集樣品。
在注射 212Pb-DOTAM之後6小時，將Aa、Ba、Ca及D組中之小鼠處死且進行屍體剖檢，且收集以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、膀胱、胃部、小腸、結腸、脾臟、胰臟、腎臟、肝臟、肺部、心臟、股骨、肌肉、腦部、尾部、耳部及腫瘤。
結果  圖8中展示在注射之後6小時所收集之全部組織中之平均 212Pb積聚及清除。用單獨的CEA-分裂-DOTAM-VH或CEA-分裂-DOTAM-VL進行之預靶向未引起腫瘤中之放射性積聚。與標準3步驟PRIT方案之87 ± 15% ID/g相比，經組合之兩種互補抗體在2步驟PRIT後引起65 ± 12% ID/g之腫瘤吸收。利用杜凱氏多重比較檢定(Tukey's multiple comparisons test)之雙向變異數分析(ANOVA)顯示，兩種PRIT治療之間的腫瘤吸收之差異以及膀胱中之差異(對於2步驟及3步驟PRIT，分別為1 ± 2% ID/g 及38 ± 17% ID/g)係顯著的；使用此檢定之組織積聚不存在其他統計顯著差異(p=0.05)。
如藉由酶聯結免疫吸附分析法(ELISA)所分析之IV注射之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL構築體的清除示於圖9中。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論  研究結果證實使用互補CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體進行之非CA依賴性2步驟預靶向之概念驗證。使用2步驟PRIT及標準3步驟PRIT達成 212Pb-DOTAM之較高及特異性腫瘤吸收，且在使用互補CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之正常組織中具有極少放射性積聚。
實例3c：方案158  方案158之目標在於評估小鼠中之 212Pb-DOTAM與皮下BxPC3腫瘤之結合，該等小鼠由用於非清除劑依賴性2步驟CEA-PRIT之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之雙互補位(CH1A1A及A5B7)對預靶向。將腫瘤吸收與標準3步驟CEA-PRIT之腫瘤吸收作比較。
向攜有皮下BxPC3腫瘤之小鼠注射 ●CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體，隨後在7天後為放射性標記 212Pb-DOTAM (2步驟PRIT)，或 ●CEA-DOTAM BsAb，隨後在7天後為CA，且最後在24小時後為放射性標記 212Pb-DOTAM (3步驟PRIT)。
在放射性注射之後6小時評估 212Pb-DOTAM之活體內分佈。研究概述示於圖10中。
研究設計  方案158之時程及設計示於下表中。 方案 158 之時程
研究日 日期 實驗程序
0 2018-11-26 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 2018-11-26 SC注射BxPC3細胞
15 2018-12-11 IV注射CEA-DOTAM BsAb (C組)
16 2018-12-12 IV注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb (A、B組)
22 2018-12-18 IV注射CA (C組)
22 2018-12-18 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
23 2018-12-19 IV注射 212Pb-DOTAM (所有組)
23 2018-12-19 安樂死且收集組織，包括眼眶後採血(6 h p.i.) + γ計數(所有組)
方案 158 中之研究組
組 P1AD8749 (VH) CH1A1A(µg) P1AD8592 (VL) CH1A1A(µg) P1AE4956 (VH) A5B7(µg) P1AE4957 (VL) A5B7(µg) CEA-DOTAM BsAb(µg) CA(µg) 212Pb (µCi) n(小鼠)
A 154* 0 0 100 0 0 10 4
B 0 100 167** 0 0 0 10 4
C 0 0 0 0 100 25 10 4
*P1AD8749劑量調整至154 μg以補償35%臼/臼雜質；**P1AD8592劑量調整至167 μg以補償40%臼/臼雜質。
在研究第0天，在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第27代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在注射腫瘤細胞之後十四天，以177 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第20天注射 212Pb-DOTAM；在第21天平均腫瘤體積為243 mm 3。
在注射 212Pb-DOTAM之後6小時，將所有組中之小鼠處死且進行屍體剖檢，且收集以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、膀胱、胃部、小腸、結腸、脾臟、胰臟、腎臟、肝臟、肺部、心臟、股骨、肌肉、腦部、尾部及腫瘤。
結果  圖11中展示在注射之後6小時所收集之全部組織中之平均 212Pb分佈。利用杜凱氏多重比較檢定之雙向ANOVA顯示，除膀胱以外，三種治療之間正常組織中不存在 212Pb吸收之顯著差異，其中兩個雙互補位CEA-分裂-DOTAM-VH/VL對產生低於標準3步驟PRIT之積聚。對於全部三種治療，腎吸收為3-4% ID/g。與3步驟PRIT之67% ID/g相比，雙互補位組合引起約56% ID/g之腫瘤積聚；2步驟與3步驟PRIT之間的差異為統計顯著的(p ＜ 0.0001)。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論  此研究評估與標準3步驟PRIT相比，藉由用於非CA依賴性2步驟CEA-PRIT之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之雙互補位對預靶向的小鼠中之 212Pb-DOTAM與SC BxPC3腫瘤的結合。對於2步驟及3步驟PRIT，注射之後6小時之 212Pb分佈為類似的，其中腫瘤中之積聚較高且健康組織中之放射性極少。此證實使用CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體進行之2步驟CEA-PRIT用於表現CEA之腫瘤的雙互補位預靶向之概念驗證。
實例3d：方案160  方案160之目標在於在攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠中，比較使用互補CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體的非CA依賴性2步驟CEA-PRIT之3個循環之後的治療功效與標準3步驟CEA-PRIT的治療功效。亦與使用BsAb (在注射之前與 212Pb-DOTAM一起預培育)之1步驟CEA-RIT進行比較。
向攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠注射 ●CEA-DOTAM BsAb，隨後在7天後為CA，且最後在24小時後為放射性標記 212Pb-DOTAM (3步驟PRIT)， ●CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體，隨後在7天後為放射性標記 212Pb-DOTAM (2步驟PRIT)，或 ● 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM BsAb (經預培育；1步驟RIT)。
在20 μCi 212Pb-DOTAM之3個重複循環中投與療法，該等循環亦包括與未結合CEA之對照抗體(DIG-DOTAM)及未經治療(媒劑)進行比較。出於生物分佈目的處死專用小鼠以確認各治療循環時之 212Pb-DOTAM靶向及清除。根據TGI及TR來評估治療功效，且在研究期間謹慎地監測小鼠以評估治療耐受性。研究概述示於圖12中。
方案160之時程及設計示於下表中。 方案 160 之時程
研究日 日期 實驗程序
0 2019-01-29 製備BxPC3細胞且填充注射器s
0 2019-01-29 SC注射BxPC3細胞
15 2019-02-13 IP注射BsAb或組胺酸緩衝液(A、B、C、F、G、H、I組)
16 2019-02-14 IP注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL或組胺酸緩衝液(D、J、K、L組)
22 2019-02-20 IP注射CA或PBS (A、B、C、F、G、H、I組)
23 2019-02-21 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
23 2019-02-21 IV注射 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM或組胺酸緩衝液(E、M組)
23 2019-02-21 IV注射 212Pb-DOTAM或0.9% NaCl (B、C、D、F、G、H、I、J、K、L組)
24 2019-02-22 安樂死及組織收集(24 h p.i.) + γ計數(F、G、J、M組)
29 2019-02-27 IP注射PRIT BsAb或PBS (A、B、C、H、I組)
30 2019-02-28 IP注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL或組胺酸緩衝液(D、K、L組)
36 2019-03-06 IP注射CA或PBS (A、B、C、H、I組)
37 2019-03-07 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
37 2019-03-07 IV注射 212Pb-DOTAM或0.9% NaCl (B、C、D、H、I、K、L組)
38 2019-03-08 安樂死及組織收集(24 h p.i.) + γ計數(H、K組)
43 2019-03-13 IP注射PRIT BsAb或PBS (A、B、C、I組)
44 2019-03-14 IP注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL或組胺酸緩衝液(D、L組)
50 2019-03-20 IP注射CA或PBS (A、B、C、I組)
51 2019-03-21 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
51 2019-03-21 IV注射 212Pb-DOTAM或0.9% NaCl (B、C、D、I、L組)
52 2019-03-22 安樂死及組織收集(24 h p.i.) + γ計數(I、L組)
方案 160 中之研究組
組 BsAb 每循環BsAb(µg) 每循環CA(µg) 每循環 212 Pb-DOTAM(µCi) 循環(#) n(小鼠)
A — 0 0 0 3 10
B DIG-DOTAM 100 25 20 3 10
C CEA-DOTAM 100 25 20 3 10
D CEA-分裂-DOTAM 154* + 100** 0 20 3 10
E 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM 100 0 20 1*** 10
F DIG-DOTAM 100 25 20 1 3
G CEA-DOTAM 100 25 20 1 3
H CEA-DOTAM 100 25 20 2 3
I CEA-DOTAM 100 25 20 3 3
J CEA-分裂-DOTAM 154* + 100** 0 20 1 3
K CEA-分裂-DOTAM 154* + 100** 0 20 2 3
L CEA-分裂-DOTAM 154* + 100** 0 20 3 3
M 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM 100 0 20 1 3
*P1AD8749：調節至154 μg以補償儲備溶液中之35%臼/臼雜質之劑量；**P1AD8592；***由於第一治療循環時之急劇輻射誘發毒性而將3個循環調節為1個循環。
在研究第0天，在SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第24代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在注射腫瘤細胞之後十五天，以122 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第23天注射 212Pb-DOTAM；在第22天平均腫瘤體積為155 mm 3。
根據上表(方案160中之研究組)，將CEA-DOTAM及DIG-DOTAM抗體在媒劑緩衝液中稀釋至100 μg/200 μL之最終濃度以用於IP投與。將CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體一起混合成一種單一注射溶液以用於IP投與，每200 μL含有100 μg各構築體。對於P1AD8749，將劑量調節至154 μg以補償儲備溶液中之35%臼/臼雜質(不攜有VH/VL之分子側)。根據圖12中之實驗時程，在注射BsAb之後7天IP投與CA-DOTAM-葡聚糖-500 CA (25 μg/200 μL PBS)，在24小時後接著為 212Pb-DOTAM (RO7205834)。向經PRIT處理之小鼠(2步驟及3步驟) IV注射100 μL經Ca淬滅之 212Pb-DOTAM溶液(20 μCi於100 μL 0.9% NaCl中)。
經1步驟RIT處理之小鼠僅接受一次注射：預結合 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM (用於IV注射之含20 μCi/20 μg BsAb之100 μL 0.9% NaCl)。藉由將 212Pb-DOTAM與CEA-DOTAM BsAb一起在37℃下培育10分鐘來製備經直接標記之抗體。
在安樂死時自A-E組中之小鼠收集以下器官及組織：血清、肝臟、脾臟、腎臟、胰臟及腫瘤。在安樂死之前，對活小鼠進行麻醉以收集眼眶後血液。在5分鐘期間以10 000 rcf離心所收集血液樣品，且將所得血清溶離份分離、冷凍且儲存於-20℃下。將所切除組織立即置於10%中性緩衝福馬林(4℃)中且隨後在24小時之後轉移至1× PBS (4℃)中。將經福馬林固定樣品運送至Roche Pharma Research and Early Development，Roche Innovation Center Basel以供進一步處理及分析。
在F、G、J及M組中之小鼠之唯一一次注射 212Pb-DOTAM或 212Pb-DOTAM-BsAb之後24小時處死小鼠且進行屍體剖檢；在H及K組中之小鼠之第二次注射 212Pb-DOTAM之後24小時處死小鼠且進行屍體剖檢；在I及L組中之小鼠之第三次注射 212Pb-DOTAM之後24小時處死小鼠且進行屍體剖檢。在安樂死時對經麻醉之小鼠使用眼眶後採血自靜脈竇收集血液，隨後經由頸椎脫位術處死。出於生物分佈目的亦收集以下器官及組織：膀胱、脾臟、腎臟、肝臟、肺部、肌肉、尾部、皮膚及腫瘤。
結果  圖13中展示針對各療法及治療循環的注射之後24小時所收集之全部組織中之平均 212Pb積聚及清除。陰性對照物在腫瘤中未引起吸收(0.4% ID/g)。利用杜凱氏多重比較檢定之雙向變異數分析(ANOVA)顯示，對於2步驟及3步驟PRIT，任何循環時之分佈均不存在顯著不同；然而，與陰性對照物及1步驟RIT相比，全部循環時之差異為統計顯著的(p ＜ 0.05)。腫瘤吸收對於3步PRIT為25-45% ID/g且對於2步PRIT為25-30% ID/g，其中任一治療或循環之間不存在任何統計顯著差異。對於1步驟RIT，在唯一一次治療循環時之腫瘤吸收為99%。對於兩種PRIT方案，正常組織中之吸收極低，但在1步RIT之後在全部器官及組織中明顯更高，此係由於經預培育抗體之循環時間比小型放射性標記DOTAM螯合物長得多。
平均腫瘤發展及個別腫瘤生長曲線分別示於圖14及圖15中。未經處理之媒劑組及DIG-DOTAM組中之腫瘤穩定地生長，但在第三次處理之後，後者中之倍增速率略微較低。相比之下，在PRIT及RIT組中，在第一處理循環之後腫瘤尺寸減小，且維持腫瘤控制直至接種之後約10週為止，此時腫瘤尺寸開始增大。2步驟及3步驟PRIT處理產生幾乎一致之腫瘤控制。未發生腫瘤完全消退。
在研究第83天，亦即可基於平均值分析全部處理組之最後一天，與媒劑對照物相比，對於使用CEA-DOTAM 之PRIT (3步驟)及使用CEA-分裂-DOTAM-VH/VL 之PRIT (2步驟)，TGI分別為91.7%及88.4%。對於1步驟RIT，對應數值為72.6%，而對於非特異性DIG-DOTAM對照物，TGI為-59.7%。在同一天，基於平均值之TR對於3步驟CEA-DOTAM PRIT為-1.9，對於2步驟CEA-分裂-DOTAM-VH/VL PRIT為-2.9，對於1步驟RIT為-4.7，對於DIG-DOTAM PRIT為-28.8，且對於媒劑對照物為-39.3。
歸因於下文所描述之不良事件，存活分析不視為統計學上相關的。
不良事件及毒性  圖16中顯示全部療法組中之BW發展。利用20 μCi 212Pb-DOTAM之2步驟及3步驟PRIT之多個循環具有良好耐受性，但在接受1步驟RIT之小鼠中出現急劇BW損失，其中在第一RIT循環之後(在 212Pb照射之後6-11天)由於20%或更多之BW下降而對E組中之8/10隻小鼠進行安樂死。不對剩餘2隻RIT小鼠進行任何另外 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM注射，但持續地追蹤以進行腫瘤生長評估。
此外，出於倫理原因，由於腫瘤狀態惡化(亦即，腫瘤破裂或滲漏)而處死多隻小鼠。在DIG-DOTAM組中，出於此原因，在腫瘤體積達到3000 mm 3之前對9/10小鼠進行安樂死；對於未經處理之媒劑對照物，對應數目為5/10。該問題在PRIT組及RIT組中不太明顯，其中出於此原因而分別在3步驟PRIT組、2步驟PRIT組及1步驟RIT組中對1/10、2/10及2/10隻小鼠進行安樂死。此情況反映於圖15中之個別腫瘤生長曲線中。
最後，由於肛門下創傷嚴重，對C組中之1隻小鼠進行安樂死。全部不良事件均列於下表中。 方案 160 中之 不良事件
組 處死之小鼠(n每組) 研究日 終止原因
A：媒劑 5(10) 53、71、71、73、75 腫瘤狀態惡化
B：DIG-DOTAM 9(10) 55、55、55、55、61、73、73、73、74 腫瘤狀態惡化
C：CEA-DOTAM 1(10) 83 肛門下創傷
C：CEA-DOTAM 1(10) 85 腫瘤狀態惡化
D：CEA-分裂-DOTAM 2(10) 83、83 腫瘤狀態惡化
E： 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM 8(10) 29、29、30、31、31、32、32、34 BW損失 ≥ 20%
E： 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM 2(10) 83、83 腫瘤狀態惡化
在研究第23天(循環1)、第37天(循環2)及第51天(循環3)進行 212Pb照射。
結論  在使用3步驟流程(CEA-DOTAM BsAb、CA及 212Pb-DOTAM)與2步驟流程(CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體及 212Pb-DOTAM)的CEA-PRIT之間未發現差異；兩種治療之TGI係顯著且幾乎一致的，且20 μCi之3個循環可在此兩種情況下安全地投與。相比之下，大部分經處理之小鼠對在注射之前預結合於CEA-DOTAM之20 μCi 212Pb-DOTAM (1步驟RIT)不耐受。
因此，研究證實使用所研發之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL構築體之非CA依賴性2步驟PRIT之耐受性及治療功效。
實例4：方案175  方案175之目標在於評估增加之預靶向抗體注射量對腫瘤及健康組織中之後續 212Pb積聚的影響。比較兩種不同劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體：標準量(100 μg)及高2.5倍之劑量(250 μg)。此外，對CEA-分裂-DOTAM-VH構築體進行修飾以延伸其VH，從而避免抗藥物抗體(ADA)形成(此ADA係與先前所測試之CEA-分裂-DOTAM-VL構築體一起使用)。VH經延伸以包含抗體CH1域之前三個胺基酸：丙胺酸、絲胺酸及蘇胺酸(AST)，且該構築體在下文中稱為CEA-分裂-DOTAM-VH-AST。
抗體P1AD8592已描述於以上實例1中。除了融合HC係藉由殘基AST延伸以外，P1AF0171與P1AD8749相同，因此，抗體P1AD0171由如上文所描述之輕鏈D1AA3384 (SEQ ID NO: 34)、如上文所描述之第一重鏈D1AC4022 (SEQ ID NO: 28)及如下文所示之第二重鏈D1AE3669組成： D1AE3669 (HC杵＜CEA＞ CH1A1A Dotam-VH-AST)
Figure 02_image011
向攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠注射 ●1×標準劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb，在7天後接著為放射性標記 212Pb-DOTAM，或 ●2.5×標準劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb，在7天後接著為放射性標記 212Pb-DOTAM。
在放射性注射之後24小時評估 212Pb-DOTAM之活體內分佈。研究概述示於圖17中。
研究設計方案175之時程及設計如下所示。 方案 175 之時程
研究日 實驗程序
0 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 SC注射BxPC3細胞
22 IP*注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb
29 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
29 IV注射 212Pb-DOTAM
30 安樂死及組織收集(24 h p.i.) + γ計數
*由於低化合物濃度(200 μL/構築體=總計400 μL)而需要IP注射 方案175中之研究組
組 P1AF0171 (VH-AST)(µg) P1AD8592 (VL)(µg) 212 Pb(µCi) BD(h p.i.) n(小鼠)
A 143* 100 10 24 4
B 357* 250 10 24 4
*P1AF0171劑量調節至143及357 μg以補償約30%臼/臼雜質。
在研究第0天，在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第24代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在注射腫瘤細胞之後二十一天，以310 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第29天注射 212Pb-DOTAM；在第30天平均腫瘤體積為462 mm 3。
在 212Pb-DOTAM注射之後24小時處死全部小鼠且進行屍體剖檢，且收集以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、脾臟、胰臟、腎臟、肝臟、肌肉、尾部及腫瘤。
結果  圖18中展示在注射之後24小時所收集之全部組織中之平均 212Pb分佈。在兩個劑量水準之間不存在 212Pb之腫瘤或正常組織吸收之顯著差異。對於兩個處理組，腫瘤積聚為30%-31% ID/g，且此時間點時腎吸收＜2% ID/g。一隻小鼠由於 212Pb-DOTAM注射問題而在尾部中具有約1% ID/g，但其他所收集健康組織未顯示任何可觀的 212Pb積聚。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論
在此活體內模型中，將預靶向CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之劑量增加2.5倍並未改良隨後投與之 212Pb-DOTAM之腫瘤積聚。然而，其亦未增加正常組織中之放射性積聚，突出了使用此2步預靶向方案達成之強特異性。最後，結果證實經延伸之-VH CEA-分裂-DOTAM-VH-AST構築體之功能。
實例5：方案185  方案185之目標在於評估靶向T84.66抗原決定基之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL。本文提供P1AF0709及P1AF0298之序列。P1AF0709具有D1AE4688 (SEQ ID NO: 83)之第一重鏈及D1AA4920 (SEQ ID NO: 84)之第二重鏈。P1AF0298具有D1AE4687 (SEQ ID NO: 86)之第一重鏈及D1AE3668 (SEQ ID NO: 87)之第二重鏈。兩者均具有D1AA4120 (SEQ ID NO: 89)之輕鏈。
向攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠注射標準劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb (100 μg/抗體)，隨後在6天後為放射性標記 212Pb-DOTAM。在放射性注射之後6小時評估 212Pb-DOTAM之活體內分佈。研究概述示於圖19中。
研究設計  方案185之時程及設計如下所示。 方案 185 之時程
研究日 日期 實驗程序
0 2020-03-04 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 2020-03-04 SC注射BxPC3細胞
22 2020-03-26 IV注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb
27 2020-03-31 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
28 2020-04-01 IV注射 212Pb-DOTAM
28 2020-04-01 安樂死及組織收集(6 h p.i.) + γ計數
方案 185 中之研究組
組 P1AF0298 T84.66 (VH-AST)(µg) P1AF0709 T84.66 (VL)(µg) P1AF0171 CH1A1A (VH-AST)(µg) P1AD8592 CH1A1A (VL)(µg) 212 Pb(µCi) BD(h p.i.) n(小鼠)
A 100 100 0 0 10 6 5
B 0 0 143* 100 10 6 5
*P1AF0171劑量調節至143 μg以補償約30%臼/臼雜質。
在研究第0天，在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第27代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在注射腫瘤細胞之後二十二天，以224 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第28天注射 212Pb-DOTAM，此時平均腫瘤體積達到385 mm 3。
在 212Pb-DOTAM注射之後6小時處死全部小鼠且進行屍體剖檢，且收集以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、脾臟、胰臟、腎臟、肝臟、肌肉、尾部及腫瘤。將所收集腫瘤分成兩塊：一塊用於量測放射性含量，且將另一塊置於含有Tissue-Tek®最佳切割溫度(OCT)嵌式培養基之冰凍模具中，且置於乾冰上以快速冷凍。將OCT中之冷凍樣品維持在-80℃下，隨後進行冷凍切片、免疫螢光染色，且使用Zeiss Axio Scope.A1模組顯微鏡進行分析。
結果  圖20中展示在注射之後6小時所收集之全部組織中之平均 212Pb分佈。腫瘤積聚為40% ID/g (CH1A1A)或44% ID/g (T84.66)。在腎臟中發現唯一其他可觀放射性積聚：對於兩個組，在6 h p.i.下為3%-5% ID/g。
圖21中顯示靶向T84.66 (A組)或CH1A1A (B組)之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL對之瘤內分佈之實例。小圖A及小圖C顯示BxPC3腫瘤中之CEA表現為高且均質的，且小圖B及小圖D說明注射之後7天之抗體分佈為類似分佈。然而，與來自B組之腫瘤樣品相比，來自A組之樣品展現總體更強信號，提供T84.66為比CH1A1A更強之結合子之證據。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論  結果證實靶向CEA之T84.66抗原決定基之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL構築體之功能。預靶向之表現CEA之腫瘤中之所得212Pb積聚為高且特異性的，且靶向CH1A1A或T84.66抗原決定基之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL對均勻地分佈於表現CEA之腫瘤內。
實例6：方案189  方案189之目標在於與靶向CH1A1A VH-AST/VL之陽性對照物對相比，評估靶向T84.66 VH-AST/CH1A1A VL及T84.66 VL/CH1A1 VH-AST之雙互補位CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體對。此雙互補位組合排除可溶CEA上之完全Pb-DOTAM結合子之形成，該可溶CEA僅表現兩種抗原決定基中之一者(例如T84.66)，由此減少其潛在副作用，諸如循環放射性增加及相關輻射誘發之毒性，以及與非腫瘤標靶之競爭功效降低。
向攜有SC BxPC3腫瘤之小鼠注射標準劑量之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb (100 μg/抗體)，隨後在7天後為放射性標記 212Pb-DOTAM。在放射性注射之後6小時評估 212Pb-DOTAM之活體內分佈。研究概述示於圖22中。
研究設計方案189之時程及設計如下所示。 方案189之時程
研究日 實驗程序
0 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 SC注射BxPC3細胞
15 IV注射CEA-分裂-DOTAM-VH/VL BsAb
21 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
22 IV注射 212Pb-DOTAM
22 安樂死及組織收集(6 h p.i.) + γ計數
方案189中之研究組
組 P1AF0298 T84.66 (VH-AST)(µg) P1AF0709 T84.66 (VL)(µg) P1AF0171 CH1A1A (VH-AST)(µg) P1AD8592 CH1A1A (VL)(µg) 212 Pb(µCi) BD(h p.i.) n(小鼠)
A 100 0 0 100 10 6 5
B 0 100 143* 0 10 6 5
C 0 0 143* 100 10 6 3
*P1AF0171劑量調節至143 μg以補償約30%臼/臼雜質。
在研究第0天，在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第31代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在注射腫瘤細胞之後十四天，以343 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第22天注射 212Pb-DOTAM；在第21天平均腫瘤體積達到557 mm 3。
在 212Pb-DOTAM注射之後6小時處死全部小鼠且進行屍體剖檢，且收集以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、脾臟、胰臟、腎臟、肝臟、肌肉、尾部及腫瘤。
結果  圖23中展示在注射之後6小時所收集之全部組織中之平均 212Pb分佈。對於T84.66 VH-AST + CH1A1A VL及T84.66 VL + CH1A1A VH-AST，雙互補位變異之腫瘤積聚分別為71% ID/g及46% ID/g。陽性CH1A1A對照物引起37% ID/g。利用杜凱氏多重比較檢定之雙向ANOVA顯示，就腫瘤吸收而言，全部三個組彼此顯著不同(相對於其他兩個組，對於T84.66 VH-AST + CH1A1A VL為p＜0.0001；僅相對於CH1A1A，對於T84.66 VL + CH1A1A VH-AST為p = 0.0020)。其他器官未顯示各組之間的統計顯著差異，但與其他兩個組相比，在T84.66 VH-AST + CH1A1A VL組合之情況下存在血液中之略高之滯留：2% ID/g對比＜1% ID/g。腎吸收亦略高，但並非統計顯著的：在T84.66 VH-AST + CH1A1A之情況下為4.5% ID/g，相比之下，在另兩者之情況下為3% ID/g。
不良事件及毒性  不存在與此研究相關之不良事件或毒性。然而，在此研究中與標準生長速率相比，BxPC3腫瘤生長明顯更快且具有較大變化性。在屍體剖檢後，得出以下結論：大型腫瘤(大部分)填充有液體，該液體在放射性量測之前將腫瘤切成兩半時清空；此液體有可能引起生長速率提高，但未以任何方式顯著影響% IA/g，此係因為腫瘤係在切開之後稱重且量測。
結論  結果證實使用所測試之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL構築體之CEA之T84.66及CH1A1A抗原決定基之雙互補位靶向功能，且展現與陽性CH1A1A對照物相比，此組合之功效意外更高。表現預靶向CEA之腫瘤中之所得 212Pb積聚較高且具有特異性，且指示T84.66 VH-AST + CH1A1A VL對之特定優勢。
實例7  此等實例研究藉由如本文所述之分裂抗體將Pb-DOTA募集至細胞。
P1AF0712具有SEQ ID NO:97之第一重鏈、SEQ ID NO: 98之第二重鏈及SEQ ID NO: 103之輕鏈。P1AF0713具有SEQ ID NO: 100之第一重鏈、SEQ ID NO: 101之第二重鏈及SEQ ID NO: 103之輕鏈。
使用胰蛋白酶自培養瓶分離MKN-45細胞且使用Casy細胞計數器進行計數。在4℃下粒化之後，使300 g細胞再懸浮於FACS緩衝液(含2.5% FCS之PBS)中，調節至2.0E+06個細胞/毫升，分配至96孔V形底PP盤(25微升/孔 = 5.0E+04Zellen/孔)。
使用 DOTA - FITC 進行之 FACS 染色將CEA特異性SPLIT抗體(分別為P1AF0712或P1AF0713)在FACS緩衝液中調節至40 μg/mL，使得最終濃度為10 μg/mL。以組合或單獨形式將兩種抗體添加至細胞中，接著添加緩衝液且在4℃下培育1小時。隨後，將經FITC標記之Pb-DOTA以與抗體等莫耳比之形式添加至細胞中，且在4℃下培育1小時。隨後將細胞在FACS緩衝液中洗滌兩次且以70微升/孔再懸浮於FACS緩衝液中以使用FACS Canto (BD, Pharmingen)進行量測。證實(圖24)任何一半的SPLIT均不產生螢光信號，表明缺乏Pb-DOTA結合能力。僅當兩個一半的SPLIT組合時才能夠將Pb-DOTAM-FITC募集至標靶細胞(圖24)。
使用 ＜ huIgG ( H + L ) A488 ＞ 進行之 FACS 染色將CEA特異性SPLIT抗體(分別為P1AF0712或P1AF0713)在FACS緩衝液中調節至40 μg/mL，使得最終濃度為10 μg/mL。將兩種抗體單獨地添加至細胞中且接著添加緩衝液，或將兩種抗體以組合形式添加至細胞中，且在4℃下培育1小時。隨後在FACS緩衝液中洗滌細胞兩次。在洗滌之後，使細胞再懸浮於50 μL含有二級抗體(＜huIgG(H+L)＞-Alexa488，c=10 μg/mL)之FACS-緩衝液中，且在4℃下培育1小時。隨後將細胞在FACS緩衝液中洗滌兩次且以70微升/孔再懸浮於FACS緩衝液中以使用FACS Canto (BD, Pharmingen)進行量測。兩種SPLIT抗體之EC50類似，指示兩種SPLIT抗體之CEA特異性細胞結合。由於混合物中之抗體量更高，在此等情形下獲得較低EC50，如下表中所示。 SPLIT 抗體之 EC50 測定
   EC50，μg /ml，絕對值
＜hu＞A488 P1AF0712+ PBS 2.7
P1AF0713+ PBS 2.3
P1AF0712+ P1AF0713 0.9
hu ISO + PBS
DOTA-FITC P1AF0712+ PBS na
P1AF0713+ PBS na
P1AF0712+ P1AF0713 2.4
hu ISO + PBS
使用基於二級抗體之偵測 (＜ hu ＞ 488 ， 上部小圖 ) 或 Pb - DOTA - FITC ( DOTA - FITC 下部小圖 ) 測定 SPLIT 抗體之 EC50
實例8：Biacore結合實驗  此實例測試與參考抗體CEA-DOTAM (RO7198427、PRIT-0213)相比，單獨的TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL與DOTAM之結合。其進一步測試與參考抗體相比，DOTAM與TA-分裂-DOTAM-VH/VL對之結合。
此等實例中所使用之編碼與本申請案中其他地方所使用之蛋白編號之間的對應性展示於下文中。亦提供序列。在此實例中，參考抗體編碼為「PRIT_RS」。
標靶結合子 SPR 碼 ( 前驅藥A +B ) SPR 碼 DOTAM 蛋白質 LC (SEQ ID NO) HC (SEQ ID NO) 融合 HC (SEQ ID NO)
＜CEA＞ CH1A1A P1_AB P1_A VL P1AD8592 34 30 33
P1_B VH P1AD8749 34 28 32
＜CEA＞ CH1A1A P2_AB P2_A VL P1AD8592 34 30 33
P2_B VH P1AF0171 34 28 147
＜CEA＞ T84.66 P3_AB P3_A VL P1AF0709 89 83 84
P3_B VH P1AF0298 89 86 89
＜CEA＞ 28A9 P4_AB P4_A VL P1AF0710 96 90 91
P4_B VH P1AF0711 96 93 94
＜CEA＞ A5H1EL1(G54A) P5_AB P5_A VL P1AE4957 58 55 56
P5_B VH P1AE4956 54 51 52
＜CEA＞ CH1A1A P6_AB P6_A VL P1AF0712 103 97 98
P6_B VH P1AF0713 103 100 101
＜GPRC5D＞ P7_AB P7_A VL P1AF8284 107 104 105
P7_B VH P1AF8285 107 104 106
對於此等實驗，藉由MabSelect Sure (親和力層析法)之第一步驟及離子交換層析法(例如POROS XS)之第二步驟純化PRIT SPLIT抗體，且隨後藉由Superdex 200 (尺寸排阻層析法)進行高級純化。
在25℃之量測溫度下用Biacore T200進行實驗。全部Biacore T200實驗均在HBS-P+ (GE Healthcare，Br-1008-27) pH 7.4操作緩衝液中進行。使用不同DOTAM溶離份對各測試抗體/抗體對進行兩項實驗。
1. 在第一實驗中，相對於參考抗體而言，評估個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體與在晶片上捕獲之經生物素標記之DOTAM之結合。
在CAP晶片表面上以高密度捕獲DOTAM (含120 nM溶液之HBS-P+) (10微升/分鐘，60秒)。隨後，在DOTAM表面上注射含600 nM前驅藥_A或前驅藥_B溶液之HBS-P+ (10微升/分鐘，90秒)。在10微升/分鐘之流動速率下監測解離240秒。使用T200評估軟體評估相對最大反應測定。
結果示於圖26中。所有個別抗體均未顯示與所捕獲之DOTAM之結合。
2. 在第二實驗中，首先在晶片中使用固定抗hFab捕獲個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體，且隨後評估DOTAM-單鏈黴抗生物素蛋白複合物之結合(600 nM DOTAM+單鏈黴抗生物素蛋白偶合物，1:1 mol，在RT下1 h)。
在抗hFab (GE Healthcare，BR-1008-27) CM5晶片表面上注射含600 nM前驅藥_A或前驅藥B溶液之HBS-P+ (10微升/分鐘，120秒)。在高密度捕獲前驅藥A或B溶液之後，注射DOTAM-單鏈黴抗生物素蛋白複合物(20微升/分鐘，90秒)。在20微升/分鐘之流動速率下監測解離180秒。對於新循環，藉由使用甘胺酸2.1及75秒再生時間以10微升/分鐘再生表面。使用T200評估軟體評估相對最大反應測定。
結果顯示於圖27中。咸信低最大反應百分比(如在圖中以*標記)為與DOTAM-SA之「微量」或非特異性相互作用，且反映需要對分析法進行最佳化。
3. 在第三實驗中，與參考抗體相比，評估TA-分裂-DOTAM-VH/VL對與DOTAM之結合。首先在晶片中使用固定抗hFab捕獲抗體，且隨後評估DOTAM-單鏈黴抗生物素蛋白複合物之結合(600 nM DOTAM +單鏈黴抗生物素蛋白偶合物，1:1 mol，在RT下1 h)。
在抗hFab (GE Healthcare，BR-1008-27) CM5晶片表面上注射含300 nM前驅藥_A及前驅藥B溶液之HBS-P+ (10微升/分鐘，120秒)。在高密度捕獲前驅藥A及B溶液之後，注射DOTAM-單鏈黴抗生物素蛋白複合物(20微升/分鐘，90秒)。在20微升/分鐘之流動速率下監測解離180秒。對於新循環，藉由使用甘胺酸2.1及75秒再生時間以10微升/分鐘再生表面。使用T200評估軟體評估相對最大反應測定。
結果示於圖28中。除P6_AB (P1AF0712/P1AF0713)對(其為DOTA結合子)以外，全部TA-分裂-DOTAM-VH/VL對均顯示大量的與DOTAM之結合。
在FAP-結合子P1AF8286及P1AF8287情況下亦獲得顯示TA-分裂-DOTAM-VH/VL對(而非該對中之個別成員)的大量DOTAM結合之類似結果。P1AF8286由SEQ ID NO: 108之第一重鏈、SEQ ID NO: 109之第二重鏈及SEQ ID NO: 111之輕鏈構成，且P1AF8287由SEQ ID NO: 108之第一重鏈、SEQ ID NO: 110之第二重鏈及SEQ ID NO: 111之輕鏈構成。然而，此分析法仍需要經最佳化。
實例9  材料及方法  概要  全部實驗方案均由地方當局(Comité Régional d'Ethique de l'Expérimentation Animale du Limousin [CREEAL], Laboratoire Départemental d'Analyses et de Recherches de la Haute-Vienne)審查及批准。根據倫理準則，將雌性嚴重合併性免疫缺乏症(SCID)小鼠(Charles River)維持在具有每日光/暗(12 h/12 h)循環之不含特異性及機會性病原體(SOPF)之條件下。在到達之後的前5天期間不進行操縱以使動物習慣新環境。每日針對臨床症狀來控制動物且偵測不良事件。
藉由皮下(SC)注射表現CEA之腫瘤細胞來建立實體異種移植物，該等細胞係在與Corning® Matrigel®基底膜基質(生長因子減少；目錄號354230)以1:1混合之細胞培養基中。腫瘤體積係經由每週3次手動測徑規量測來估測，且根據下式來計算： 體積 = 0 . 5× 長度 × 寬度 2 。視腫瘤生長速率而定按需要進行額外腫瘤量測。
若小鼠由於腫瘤負荷、注射副作用或其他原因而顯示不可忍受之痛苦或疼痛徵象，則在預定的終點之前對其進行安樂死。疼痛、痛苦或不適之指示包括(但不限於)急性體重(BW)損失、毛皮不整潔、下痢、駝背姿勢及嗜睡。即刻安樂死之一般準則為BW損失超過其初始BW之20%或達到3000 mm 3之腫瘤體積。每週3次量測經處理動物之BW，其中視健康狀況而定按需要進行額外量測。出於倫理原因考慮進行安樂死之其他因素為腫瘤狀態(例如壞死區域、血液/液體滲出、自傷徵象)及動物一般外觀(例如毛皮、姿勢、動作)。
在進行安樂死時，對經麻醉之小鼠使用眼眶後採血自靜脈竇收集血液，隨後經由頸椎脫位術處死，接著進行額外組織收集以進行放射性量測及組織學分析。記載意外或異常狀況。將出於生物分佈之目的而收集之器官及組織稱重且使用2470 WIZARD2自動γ計數器(PerkinElmer)量測放射性，且隨後計算每公克組織之注射劑量百分比(% ID/g)，包括針對衰變及背景進行之校正。
使用GraphPad Prism 7 (GraphPad Software, Inc.)進行統計分析。
測試化合物  P1AF6241、P1AF6239、P1AF7887及P1AF7889為靶向CEA之CH1A1A抗原決定基的N端CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體。P1AF6241及P1AF6239對CEA為單價，而P1AF7887及P1AF7889為CEA二價。其序列如下。
標靶結合子 效應子 蛋白 LC HC 融合HC
＜CEA＞ CH1A1A Dotam VL P1AF6241 D1AD3421 (SEQ ID NO: 143) D1AC3981 (SEQ ID NO: 144) D1AF7527 (SEQ ID NO: 145)
＜CEA＞ CH1A1A Dotam VH P1AF6239 D1AD3421 (SEQ ID NO: 143) D1AC3981 (SEQ ID NO: 144) D1AF7526 (SEQ ID NO: 146)
＜CEA＞ CH1A1A Dotam VL P1AF7887 D1AD3421 (SEQ ID NO: 143) D1AC6742 (SEQ ID NO: 147) D1AF7527 (SEQ ID NO: 145)
＜CEA＞ CH1A1A Dotam VH P1AF7889 D1AD3421 (SEQ ID NO: 143) D1AC6742 (SEQ ID NO: 147) D1AF7526 (SEQ ID NO: 146)
將全部抗體構築體儲存於-80℃下直至注射之日為止，在注射之日將其解凍且在標準媒劑緩衝液(20 mM組胺酸、140 mM NaCl；pH 6.0)或0.9% NaCl中稀釋至其最終對應濃度以用於靜脈內(IV)投藥。
用於放射性標記之DOTAM螯合物係由Macrocyclics提供且在藉由Orano Med (Razès, France)進行放射性標記之前維持在-20℃下。 212Pb-DOTAM (RO7205834)係藉由用DOTAM溶離由釷生成劑生成，且隨後在標記之後用Ca淬滅。將 212Pb-DOTAM溶液用0.9% NaCl稀釋以獲得IV注射所需之 212Pb活性濃度。
腫瘤模型  BxPC3為天然表現CEA之人類原代胰臟腺癌細胞株。細胞由ECACC (歐洲認證細胞培養物保藏中心)(Salisbury, UK)供應且在用10%胎牛血清(GE Healthcare Hyclone SH30088.03)增濃之RPMI 1640培養基、GlutaMAX™補充劑、HEPES (Gibco，參考編號72400-021)中培養。在研究第0天，在各SCID小鼠中藉由將細胞皮下注射至右側腹中來建立實體異種移植物，該等細胞係在與Corning® Matrigel®基底膜基質(生長因子減少；目錄號354230)以1:1混合之RPMI培養基中。以100 μL之注射體積向每隻小鼠注射5×10 6個BxPC3細胞。
研究  方案193  方案193之目標在於提供在使用N端分裂構築體進行2步驟PRIT之後，攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之預靶向 212Pb-DOTAM之活體內分佈資料。
藉由共同注射CEA-分裂-DOTAM-VH及CEA-分裂-DOTAM-VL，隨後在7天後注射 212Pb-DOTAM來進行兩步驟PRIT。在放射性注射之後6小時處死小鼠，且收集血液及器官以進行放射性量測。
研究概述示於圖30中。
研究設計  方案193之時程及設計展示於下表中。 方案193之時程
研究日 日期 實驗程序
0 2020-10-22 製備BxPC3細胞且填充注射器
0 2020-10-22 SC注射BxPC3細胞
15 2020-11-06 IV注射SPLIT構築體
22 2020-11-13 溶離 212Pb-DOTAM且填充注射器
22 2020-11-13 IV注射 212Pb-DOTAM
22 2020-11-13 安樂死及組織收集(6 h p.i.) + γ計數
方案193中之研究組
組 P1AF6241 (VL)(µg) P1AF6239 (VH)(µg) P1AF7887 (VL)(µg) P1AF7889 (VH)(µg) 212 Pb(µCi) n(小鼠)
A 100 100 0 0 10 5
B 0 0 100 100 10 5
在研究第0天，在各SCID小鼠中藉由將含5×10 6個細胞(第28代)之RPMI/基質膠SC注射至右側腹中來建立實體異種移植物。在注射腫瘤細胞之後十五天，以272 mm 3之平均腫瘤體積將小鼠分選至實驗組中。在接種之後第22天注射 212Pb-DOTAM，此時平均腫瘤體積為400 mm 3。
在注射 212Pb-DOTAM之後6小時，將所有小鼠處死且進行屍體剖檢，且收集以下器官及組織以量測放射性含量：血液、皮膚、卵巢、胃部、小腸、結腸、脾臟、胰臟、腎臟、肝臟、肺部、心臟、股骨、肌肉、腦部、尾部及腫瘤。
結果圖31中展示在注射之後6小時所收集之全部組織中之平均 212Pb積聚及清除。用CEA單價N端SPLIT (P1AF6241 + P1AF6239)預靶向引起24.3 ± 5.4% ID/g之平均腫瘤吸收。CEA二價N端SPLIT (P1AF7887 + P1AF7889)引起7.1 ± 2.2% ID/g之平均腫瘤吸收。利用西達克氏多重比較檢定(Sidak's multiple comparisons test)之雙向變異數分析(ANOVA)顯示，各處理之腫瘤 212Pb積聚之差異為統計顯著的(p ＜ 0.0001)。使用此檢定，組織積聚中不存在其他統計顯著(p = 0.05)差異，且對於SPLIT對未發現未預期的吸收。對於兩個處理組，腎臟中之吸收為2.7-3.8% ID/g。
不良事件及毒性不存在與此研究相關之不良事件或毒性。
結論研究結果證實使用N端SPLIT構築體預靶向之非CA依賴性2步驟之概念驗證。達成 212Pb-DOTAM之高及特異性腫瘤吸收，其中在正常組織中之放射性積聚極少。
雖然出於清楚理解之目的，已藉助於說明及實例相當詳細地描述前述本發明，但描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文所引用的所有專利及科學文獻之揭示內容以全文引用的方式明確併入本文中。
圖1顯示屬於比較實例之標靶抗原(TA)-DOTAM雙特異性抗體(TA-DOTAM BsAb)及例示性TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體的示意性結構。 圖2為顯示腫瘤細胞上之分裂-VH/VL DOTAM結合子之組裝體的示意圖。除非結合於靶向細胞上之腫瘤抗原(TA)(其中組裝DOTAM結合子之兩個結構域)，否則TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體不會大量結合 212Pb-DOTAM。 圖3顯示涉及使用清除劑之三步驟TA-PRIT概念之實例的示意性概述。 圖4顯示不使用清除劑之二步驟TA-PRIT概念之實例的示意性概述。 圖5顯示分裂抗體與MKN45細胞之結合，以證實CEA結合能力。使用人類IgG特異性二級抗體進行抗體偵測。 圖6顯示分裂抗體與MKN45細胞之結合，以證實DOTAM結合能力。使用Pb-DOTAM-FITC進行抗體偵測。 圖7A顯示用CEA-分裂-DOTAM-VH/VL之二步驟PRIT之例示性方案，該方案係在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中進行(h=小時，d=天，w=週)。 圖7B顯示三步驟PRIT對照之例示性方案，該方案係在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中進行(h=小時，d=天，w=週)。 圖8顯示在注射 212Pb-DOTAM後6小時，在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之預靶向 212Pb-DOTAM之生物分佈，該等小鼠藉由單獨的CEA-分裂-DOTAM-VH、單獨的CEA-分裂-DOTAM-VL或經組合之兩種互補抗體預靶向或使用標準三步PRIT預靶向(ID/g% ± SD，n = 4)。 圖9顯示在IV注射之後，SCID小鼠中之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL藥物動力學。 圖10顯示方案158之實驗設計，其包含攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之2步驟(頂部)或3步驟(底部)CEA-PRIT。*CEA分裂DOTAM BsAb劑量經調節以補償2/4構築體中之臼/臼雜質。 圖11顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之預靶向 212Pb-DOTAM之生物分佈(6 h p.i.)。分佈係在注射 212Pb-DOTAM之後6小時，在攜有腫瘤之SCID小鼠中之 212Pb之分佈，該等小鼠經CEA-DOTAM BsAb或CEA-分裂-DOTAM抗體之雙互補位組合預靶向。器官及組織中之放射性含量表示為平均% ID/g ± SD (n = 4)。 圖12顯示方案160的實驗時程，其包含攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中的3步驟CEA-PRIT (頂部)、2步驟CEA-PRIT (中部)或1步驟CEA-RIT之一個循環。在放射性注射之後24小時，對生物分佈(BD)偵測小鼠進行安樂死，而謹慎維持且監測功效組中之小鼠直至達到終止準則為止。 圖13顯示在攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之預靶向 212Pb-DOTAM及 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM之生物分佈(24 h p.i.)。分佈係在注射CEA-DOTAM預靶向之 212Pb-DOTAM或經預培育之 212Pb-DOTAM-CEA-DOTAM之後24小時，在負載腫瘤之SCID小鼠中之 212Pb之分佈。器官及組織中之放射性含量表示為平均% ID/g ± SD (n = 3)。 圖14顯示BxPC3模型中之PRIT處理組及對照組(A-E組)之腫瘤生長平均值+標準誤差(n=10)。曲線在n＜5處截斷。豎虛線指示根據研究設計之一些組或所有組之 212Pb-DOTAM投藥(20 μCi)。 圖15顯示BxPC3模型中之PRIT處理組及對照組(A-E組)之個別腫瘤生長曲線(n=10)。豎虛線指示 212Pb標記化合物之投藥(20 μCi)。 圖16顯示BxPC3模型中之經CEA-PRIT及CEA-RIT處理之小鼠之平均體重損失(A-E組，n=10)。曲線在n＜5處截斷。豎虛線指示根據研究設計之一些組或所有組之 212Pb標記化合物之投藥。 圖17顯示方案175之實驗設計，其包含攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之二步驟CEA-PRIT，該等小鼠在注射 212Pb-DOTAM之後24小時被處死且進行屍體剖檢。CEA-分裂-DOTAM-VH-AST劑量經調節以補償臼/臼雜質。 圖18顯示在注射 212Pb-DOTAM之後24小時，在負載腫瘤之SCID小鼠中之 212Pb之分佈，該等小鼠經CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體預靶向(方案175)。器官及組織中之放射性含量表示為平均% ID/g ± SD (n = 4)。 圖19顯示方案185之實驗設計，其包含攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之二步驟CEA-PRIT，該等小鼠在注射 212Pb-DOTAM之後6小時被處死且進行屍體剖檢。CEA-分裂-DOTAM-VH-AST (CH1A1A)劑量經調節以補償臼/臼雜質。 圖20顯示在注射 212Pb-DOTAM之後6小時，在負載腫瘤之SCID小鼠中之 212Pb之分佈，該等小鼠經CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體預靶向(方案185)。器官及組織中之放射性含量表示為平均% ID/g ± SD (n = 5)。 圖21顯示在注射之後7天，CEA-分裂-DOTAM-VH/VL對(經組合之VH及VL抗體)在兩個所選SC BxPC3腫瘤中之分佈。A及B顯示來自用靶向T84.66之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL注射之小鼠A3之腫瘤切片，其中A顯示CEA表現且B顯示對應CEA-分裂-DOTAM-VH/VL分佈。C及D顯示來自用靶向CH1A1A之CEA-分裂-DOTAM-VH/VL注射之小鼠C5之腫瘤切片：C顯示CEA表現且D顯示對應CEA-分裂-DOTAM-VH/VL分佈。 圖22顯示方案189之實驗設計，其包含攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之二步驟CEA-PRIT，該等小鼠在注射 212Pb-DOTAM之後6小時被處死且進行屍體剖檢。CEA-分裂-DOTAM-VH-AST (CH1A1A)劑量經調節以補償臼/臼雜質。 圖23顯示與陽性對照(僅CH1A1A)相比，在注射 212Pb-DOTAM之後6小時在負載腫瘤之SCID小鼠中之 212Pb之分佈，該等小鼠經CEA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體(T84.66及CH1A1A)之雙互補位對預靶向。器官及組織中之放射性含量表示為平均% ID/g ± SD。 圖24顯示如藉由FACS所測定之SPLIT抗體之平均螢光強度(MFI)。僅可展示兩種SPLIT抗體與Pb-DOTA-FITC之共培育的藉由FACS測定之Pb-DOTA-FITC之結合。單一SPLIT抗體未產生有效信號。 圖25A-圖25C顯示分裂抗體之例示性型式。 圖26顯示來自實例8實驗1之結果，其評估於晶片上捕獲之個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體與經生物素標記之DOTAM的結合。 圖27顯示來自實例8實驗2之結果，其評估於晶片上捕獲之DOTAM與個別TA-分裂-DOTAM-VH及TA-分裂-DOTAM-VL抗體的結合。 圖28顯示來自實例8實驗3之結果，其評估於晶片上捕獲之DOTAM與TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體(抗體對)之結合。 圖29顯示其他例示性TA-分裂-DOTAM-VH/VL抗體之示意性結構。圖29A顯示對標靶抗原呈單價之型式。圖29B顯示對標靶抗原呈二價之型式。 圖30顯示方案193之實驗設計，其包含攜有SC BxPC3腫瘤之SCID小鼠中之2步驟SPLIT PRIT方案。 圖31顯示在注射 212Pb-DOTAM之後6小時，在負載腫瘤之SCID小鼠中之 212Pb之分佈，該等小鼠經N端SPLIT預靶向(來自實例9之結果)。 

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          Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
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                          85                  90                  95      
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          Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe Gly Val Gly Phe Leu His 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe Gly Met Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Phe Thr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  28]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
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          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
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          <![CDATA[<211>  450]]>
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          <![CDATA[<400>  29]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
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          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  591]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                      580                 585                 590     
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His 
                          485                 490                 495     
          Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly 
                  515                 520                 525             
          Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
              530                 535                 540                 
          Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr 
                          565                 570                 575     
          Lys Val Glu Ile Lys 
                      580     
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Asp Tyr Gly Val His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Thr Ala Leu Ile Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Arg Gly Ser Tyr Pro Tyr Asn Tyr Phe Asp Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr Ala Asn 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Gly His Asn Asn Arg Pro Pro 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Ala Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          His Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Thr Ala Leu Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Leu Asn Ile Tyr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Met Asn Ser Leu Gln Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Arg Gly Ser Tyr Pro Tyr Asn Tyr Phe Asp Ala Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  109]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Gln Ala Val Val Ile Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Pro Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Gly Gly His Asn Asn Arg Pro Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ala Gly Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asp 
                          85                  90                  95      
          His Trp Val Ile Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Asp Tyr Tyr Met Asn 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Lys Gly 
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ser Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  591]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                      580                 585                 590     
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro 
          <![CDATA[<210>  54]]>
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ser Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 
                      180                 185                 190         
          Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Gly Glu Cys 
              210             
          <![CDATA[<210>  55]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  581]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His 
                          485                 490                 495     
          Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly 
                  515                 520                 525             
          Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
              530                 535                 540                 
          Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr 
                          565                 570                 575     
          Lys Val Glu Ile Lys 
                      580     
          <![CDATA[<210>  57]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro 
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  213]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ser Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 
              130                 135                 140                 
          Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 
                      180                 185                 190         
          Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Gly Glu Cys 
              210             
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  59]]>
          Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr Ala Ile Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  60]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  60]]>
          Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  61]]>
          Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  62]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  62]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  63]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  63]]>
          Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  64]]>
          Gln Gln Asn Thr Gln Tyr Pro Met Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  65]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  66]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Thr Gln Tyr Pro Met 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  67]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  67]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr Ala Met Ala 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  68]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Ser Ile Ser Thr Gly Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  69]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          His Thr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  70]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  70]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ile Ser Gly Ile Asn Leu Met Asn 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  71]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  71]]>
          His Ala Ser Ile Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  72]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          Gln Gln Thr Arg Glu Ser Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  73]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  73]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr His Thr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  74]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  74]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ile Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Asn Leu Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Ile Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  75]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  75]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  76]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  76]]>
          Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  77]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  77]]>
          Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  78]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  78]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Ala 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  79]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  79]]>
          Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  80]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  80]]>
          Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  81]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  81]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  82]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  82]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  83]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  83]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  84]]>
          <![CDATA[<211>  581]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  84]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His 
                          485                 490                 495     
          Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly 
                  515                 520                 525             
          Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
              530                 535                 540                 
          Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr 
                          565                 570                 575     
          Lys Val Glu Ile Lys 
                      580     
          <![CDATA[<210>  85]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  85]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  86]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  86]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  594]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  87]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 
                      580                 585                 590         
          Ser Thr 
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  89]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  89]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  90]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
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          <![CDATA[<400>  90]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly 
          <![CDATA[<210>  91]]>
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          <![CDATA[<400>  91]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              450                 455                 460                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser 
                          485                 490                 495     
          Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val 
                  515                 520                 525             
          Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
              530                 535                 540                 
          Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys 
                          565                 570                 575     
          Val Glu Ile Lys 
                      580 
          <![CDATA[<210>  92]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  92]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly 
          <![CDATA[<210>  93]]>
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              450                 455                 460                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val 
          465                 470                 475                 480 
          Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser 
                          485                 490                 495     
          Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala 
                      500                 505                 510         
          Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala 
                  515                 520                 525             
          Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser 
              530                 535                 540                 
          Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro 
                          565                 570                 575     
          Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                      580                 585                 590         
          Thr 
          <![CDATA[<210>  95]]>
          <![CDATA[<211>  449]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  95]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Tyr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Leu Pro Ala Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Pro Pro Leu Pro Gly Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          Gly 
          <![CDATA[<210>  96]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Thr Gln Tyr Pro Met 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
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          <![CDATA[<211>  450]]>
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
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          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
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          <![CDATA[<400>  98]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
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          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
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          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Ile Gln Glu Ser Ala Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Thr Thr Pro Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr 
                          485                 490                 495     
          Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro 
                      500                 505                 510         
          Asp His Leu Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly His Asn Asn Arg Pro Pro 
                  515                 520                 525             
          Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala 
              530                 535                 540                 
          Leu Thr Ile Ala Gly Thr Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Ile Gly Gly Gly Thr Lys Leu 
                          565                 570                 575     
          Thr Val Leu 
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          <![CDATA[<400>  99]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  100]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  100]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  101]]>
          <![CDATA[<211>  592]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  101]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser His Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Val Gln Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 
                          485                 490                 495     
          Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly 
                      500                 505                 510         
          Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Ala 
                  515                 520                 525             
          Tyr Asn Thr Ala Leu Ile Ser Arg Leu Asn Ile Tyr Arg Asp Asn Ser 
              530                 535                 540                 
          Lys Asn Gln Val Phe Leu Glu Met Asn Ser Leu Gln Ala Glu Asp Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Ser Tyr Pro Tyr Asn Tyr Phe 
                          565                 570                 575     
          Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 
                      580                 585                 590         
          <![CDATA[<210>  102]]>
          <![CDATA[<211>  450]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  102]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210>  103]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  103]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  104]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  104]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr His Thr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  105]]>
          <![CDATA[<211>  359]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  105]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 
                          245                 250                 255     
          Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser 
                      260                 265                 270         
          Ser His Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 
                          325                 330                 335     
          Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly 
                      340                 345                 350         
          Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                  355                 
          <![CDATA[<210>  106]]>
          <![CDATA[<211>  369]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  106]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 
                      260                 265                 270         
          Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly 
                  275                 280                 285             
          Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr 
                          325                 330                 335     
          Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala 
                      340                 345                 350         
          Tyr Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  355                 360                 365             
          Ala 
          <![CDATA[<210>  107]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  107]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ile Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Asn Leu Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Ile Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  108]]>
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  108]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
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          <![CDATA[<211>  359]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  109]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 
                          245                 250                 255     
          Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser 
                      260                 265                 270         
          Ser His Ser Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala 
              290                 295                 300                 
          Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 
                          325                 330                 335     
          Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly 
                      340                 345                 350         
          Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                  355                 
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  110]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val 
                          245                 250                 255     
          Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 
                      260                 265                 270         
          Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly 
                  275                 280                 285             
          Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr 
                          325                 330                 335     
          Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala 
                      340                 345                 350         
          Tyr Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  355                 360                 365             
          Ala 
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          <![CDATA[<400>  111]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  112]]>
          <![CDATA[<211>  451]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  112]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Lys 
              450     
          <![CDATA[<210>  113]]>
          <![CDATA[<211>  359]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  113]]>
          Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser Val Tyr Ser Asp 
                      20                  25                  30          
          Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp 
                          85                  90                  95      
          Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
              130                 135                 140                 
          Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                          165                 170                 175     
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                      180                 185                 190         
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                  195                 200                 205             
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
              210                 215                 220                 
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
                          245                 250                 255     
          Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 
                      260                 265                 270         
          Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  275                 280                 285             
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
              290                 295                 300                 
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                          325                 330                 335     
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      340                 345                 350         
          Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  355                 
          <![CDATA[<210>  114]]>
          <![CDATA[<211>  369]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  114]]>
          Gly Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro Pro His Leu Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys 
              130                 135                 140                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          165                 170                 175     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      180                 185                 190         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  195                 200                 205             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
              210                 215                 220                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys 
                          245                 250                 255     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr 
                      260                 265                 270         
          Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 
                  275                 280                 285             
          Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              290                 295                 300                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          325                 330                 335     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      340                 345                 350         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  355                 360                 365             
          Lys 
          <![CDATA[<210>  115]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  115]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  116]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  116]]>
          Asp Ser Tyr Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  117]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  117]]>
          Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  118]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  118]]>
          Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  119]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  119]]>
          Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  120]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  120]]>
          Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  121]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  121]]>
          Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  122]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  122]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Met 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  123]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  123]]>
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  124]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  124]]>
          Tyr Thr Ser Asn Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  125]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  125]]>
          Ser Thr Ser Ser Leu Gln Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  126]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  126]]>
          Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  127]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  127]]>
          Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Thr 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  128]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  128]]>
          Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  129]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  129]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
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          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
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          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
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                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
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          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
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                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
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                      100                 105                 110         
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
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              50                  55                  60                  
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                      100                 105                 110         
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
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          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
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          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
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          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
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          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
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          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
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              50                  55                  60                  
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          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
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              50                  55                  60                  
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          65                  70                  75                  80  
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                          85                  90                  95      
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          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
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          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu 
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          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  139]]>
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          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
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          <![CDATA[<400>  140]]>
          Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
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          <![CDATA[<400>  141]]>
          Pro Lys Pro Phe Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu Asp Glu 
          1               5                   10                  15      
          Asp Ala Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Ile Gln Asn Thr Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln 
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          Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr Arg Asn 
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                          85              
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          <![CDATA[<400>  142]]>
          Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val Glu Asp Lys 
          1               5                   10                  15      
          Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Ala Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln 
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          Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn Val Thr Arg Asn 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
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                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  144]]>
          <![CDATA[<211>  227]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  144]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro Gly Lys 
          225         
          <![CDATA[<210>  145]]>
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  145]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Ser Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 
                          245                 250                 255     
          Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser His Ser 
                      260                 265                 270         
          Val Tyr Ser Asp Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 
                  275                 280                 285             
          Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val 
              290                 295                 300                 
          Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly 
                          325                 330                 335     
          Gly Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Thr Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys 
                      340                 345                 350         
          Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                  355                 360                 365             
          Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 
              370                 375                 380                 
          Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
                          405                 410                 415     
          Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 
                      420                 425                 430         
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                  435                 440                 445             
          Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
              450                 455                 460                 
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
                          485                 490                 495     
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp 
                      500                 505                 510         
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                  515                 520                 525             
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
              530                 535                 540                 
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
          545                 550                 555                 560 
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
                          565                 570                 575     
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
                      580                 585                 590         
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  595                 600             
          <![CDATA[<210>  146]]>
          <![CDATA[<211>  613]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  146]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ser Gly Gly Gly Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val 
                          245                 250                 255     
          Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser 
                      260                 265                 270         
          Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala 
                  275                 280                 285             
          Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala 
              290                 295                 300                 
          Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr 
                          325                 330                 335     
          Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 
                  355                 360                 365             
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser 
              370                 375                 380                 
          Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 
                          405                 410                 415     
          Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 
                      420                 425                 430         
          Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 
                  435                 440                 445             
          Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 
              450                 455                 460                 
          Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala 
                          485                 490                 495     
          Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 
                      500                 505                 510         
          Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 
                  515                 520                 525             
          Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 
              530                 535                 540                 
          Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 
                          565                 570                 575     
          Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 
                      580                 585                 590         
          Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 
                  595                 600                 605             
          Leu Ser Pro Gly Lys 
              610             
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          <![CDATA[<400>  147]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Lys 
              450     
          <![CDATA[<210>  148]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  148]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Gly Gly 
                      20  
          <![CDATA[<210>  149]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  149]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Gly Gly Ser 
                      20      
          <![CDATA[<210>  150]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  150]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Gly Gly Gly 
                      20      
          <![CDATA[<210>  151]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  151]]>
          Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  152]]>
          <![CDATA[<211>  591]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  152]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                      580                 585                 590     
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          <![CDATA[<223>  合成構築體]]>
          <![CDATA[<400>  153]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              450                 455                 460                 
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 
                          485                 490                 495     
          Ser Leu Ser Thr Tyr Ser Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 
                      500                 505                 510         
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Ser Arg Gly Asp Thr Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 
              530                 535                 540                 
          Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Gly Ala Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Pro His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 
                      580                 585                 590         
          Ser Thr
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
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Claims (88)

  1. 一種抗體集合，其包含： i) 第一抗體，其包含： a) 抗原結合部分，其中該抗原結合部分結合於標靶抗原； b) 多肽，其包含針對效應部分之抗原結合位點的抗體重鏈可變域(VH)或由其組成；及 c) 包含兩個子單元之Fc域， 其中(b)之多肽由其N端與(a)之抗原結合部分的C端融合，且由其C端與(c)之Fc域之一個子單元的N端融合； 且其中該第一抗體不包含針對該效應部分之抗原結合位點的VL域；及 ii) 第二抗體，其包含： d) 抗原結合部分，其中該抗原結合部分結合於標靶抗原； e) 多肽，其包含針對該效應部分之抗原結合位點的抗體輕鏈可變域(VL)或由其組成；及 f) 包含兩個子單元之Fc域， 其中(e)之多肽由其N端與(d)之抗原結合部分的C端融合，且由其C端與(f)之Fc域之一個子單元的N端融合； 且其中該第二抗體不包含針對該效應部分之抗原結合位點的VH域； 其中該第一抗體之VH域與該第二抗體之VL域一起能夠形成針對該效應部分之功能性抗原結合位點。
  2. 如請求項1之抗體集合，其中(a)中之該抗原結合部分及(d)中之該抗原結合部分為Fab。
  3. 如請求項1或請求項2之抗體集合，其中該第一抗體及第二抗體為單臂抗體。
  4. 如請求項3之抗體集合，其中該第一抗體及該第二抗體對標靶抗原為單特異性及單價的。
  5. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中： 該第一抗體包含以下多肽： i) 自N端至C端包含以下之多肽：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VH域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； ii) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)；及 iii) Fc子單元多肽(例如CH2-CH3)； 其中(i)中之該Fab重鏈及(ii)中之該Fab輕鏈形成能夠結合於標靶抗原之Fab片段；及 該第二抗體包含以下多肽： iv) 自N端至C端包含以下之多肽：Fab重鏈(例如VH-CH1)；視情況存在之連接子；針對效應部分之抗原結合位點的VL域；視情況存在之連接子；及Fc子單元(例如CH2-CH3)； v) Fab輕鏈多肽(例如VL-CL)，及 vi) Fc子單元多肽(例如CH2-CH3)； 其中(iv)之中該Fab重鏈及(v)中之該Fab輕鏈形成能夠結合於標靶抗原之Fab片段。
  6. 如請求項1或請求項2之抗體集合，其中該第一抗體包含結合於標靶抗原之另一抗原結合部分。
  7. 如請求項6之抗體集合，其中該第一抗體之另一抗體部分與(a)中之該抗原結合部分結合於相同標靶抗原。
  8. 如請求項1、2、6或7中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含結合於標靶抗原之另一抗原結合部分。
  9. 如請求項8之抗體集合，其中該第二抗體之另一抗原結合部分與(d)中之該抗原結合部分結合於相同標靶抗原。
  10. 如請求項6至9中任一項之抗體集合，其中： 該第一抗體包含： a) 第一Fab片段，其中該Fab片段與表現於標靶細胞表面上之抗原結合； b) 多肽，其包含針對效應部分之抗原結合位點的抗體重鏈可變域(VH)或由其組成；及 c) 包含第一及第二子單元之Fc域， 其中(b)之多肽由其N端與(a)之Fab片段之一條鏈的C端融合，且由其C端與(c)之Fc域之第一子單元的N端融合； 且進一步包含與表現於標靶細胞表面上之抗原結合的第二Fab片段，其中該第二Fab由其一條鏈的C端與(c)之Fc域之第二子單元的N端融合； 且該第二抗體包含： d) 第一Fab片段，其中該Fab片段與表現於標靶細胞表面上之抗原結合； e) 多肽，其包含針對該效應部分之抗原結合位點的抗體輕鏈可變域(VL)或由其組成；及 f) 包含第一及第二子單元之Fc域， 其中(e)之多肽由其N端與(d)之Fab片段之一條鏈的C端融合，且由其C端與(f)之Fc域之第一子單元的N端融合； 且進一步包含與表現於標靶細胞表面上之抗原結合的第二Fab片段，其中該第二Fab由其一條鏈的C端與(f)之Fc域之第二子單元的N端融合； 其中該第二抗體不包含針對該效應部分之抗原結合位點的VH域；且 其中該第一抗體之VH域與該第二抗體之VL域一起能夠形成針對該效應部分之功能性抗原結合位點。
  11. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中該Fc域為IgG Fc域。
  12. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中該Fc區經工程改造以減弱或消除Fc效應功能。
  13. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中： 在該第一抗體中，(b)中之該多肽由其N端經由連接子與(a)中之該Fab片段之一條鏈的C端融合，且由其C端經由連接子與(c)中之該Fc域之一個子單元的N端融合；且 在該第二抗體中，(e)中之該多肽由其N端經由連接子與(d)中之該Fab片段之一條鏈的C端融合，且由其C端經由連接子與(f)中之該Fc域之一個子單元的N端融合。
  14. 如請求項13之抗體集合，其中該連接子為具有10至70、10至60、10至50個胺基酸或15至30個胺基酸之可撓性連接子。
  15. 如請求項13之抗體集合，其中該連接子為可撓性連接子，其包含選自Gly及Ser之15至30個連續殘基，視情況包含選自Gly及Ser之15至25個連續殘基，視情況包含選自Gly及Ser之16、17、18、19、20、21、22、23或24個連續殘基。
  16. 如請求項15之抗體集合，其中該連接子為或包含GGGGSGGGGS GGGGSGGSGG (SEQ ID NO:148)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 149)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 150)，視情況為或包含GGGGSGGGGSGGGGSGGSGG (SEQ ID NO: 148)或GGGGSGGGGSGGGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 150)。
  17. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中該效應部分係選自藥物、細胞毒素、顯影劑或放射性標記化合物。
  18. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中該效應部分為放射性標記化合物。
  19. 如請求項18之抗體集合，其中該放射性標記化合物包含放射性標記DOTA或其鹽或功能變異體。
  20. 如請求項19之抗體集合，其中該放射性標記化合物為經Lu或Y放射性同位素放射性標記之DOTA或鹽或其功能變異體。
  21. 如請求項19或20之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VH域包含：(a)包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列的CDR-H3。
  22. 如請求項19至21中任一項之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VH域包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列或其變異體，該變異體包含與SEQ ID NO: 41至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  23. 如請求項19至22中任一項之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VL域包含：(d)包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的CDR-L3。
  24. 如請求項19至23中任一項之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VL域包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列或其變異體，該變異體包含與SEQ ID NO: 42至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  25. 如請求項18之抗體集合，其中該放射性標記化合物包含Pb-DOTAM。
  26. 如請求項25之抗體集合，其中針對Pb-DOTAM之功能性結合位點以100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5 pM、1 pM或更小，例如0.9 pM或更小、0.8 pM或更小、0.7 pM或更小、0.6 pM或更小或0.5 pM或更小的結合親和力之K D值結合。
  27. 如請求項25或請求項26之抗體集合，其中針對Pb-DOTAM之功能性結合位點結合於Pb-DOTAM及Bi-DOTAM。
  28. 如請求項25至27中任一項之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VH域包含： a) 重鏈CDR2，其包含胺基酸序列FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)或其在SEQ ID NO: 2中具有多至1、2或3個取代之變異體，其中此等取代不包括Phe50、Asp56及/或Tyr58，且視情況亦不包括Gly52及/或Arg54； b) 重鏈CDR3，其包含胺基酸序列ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)或其在SEQ ID NO: 3中具有多至1、2或3個取代之變異體，其中此等取代不包括Glu95、Arg96、Asp97、Pro98，且視情況亦不包括Ala100C、Tyr100D及/或Pro100E，及/或視情況亦不包括Tyr99； 以及重鏈CDR1，其視情況為： c) 重鏈CDR1，其包含胺基酸序列GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)或其在SEQ ID NO: 1中具有多至1、2或3個取代之變異體。
  29. 如請求項28之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VH域包含：(a)包含GFSLSTYSMS (SEQ ID NO:1)之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含FIGSRGDTYYASWAKG (SEQ ID NO:2)之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含ERDPYGGGAYPPHL (SEQ ID NO:3)之胺基酸序列的CDR-H3。
  30. 如請求項25至29中任一項之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VH域包含選自由SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO 9或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 9至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  31. 如請求項25至30中任一項之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VL域包含 d) 輕鏈CDR1，其包含胺基酸序列QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)或其在SEQ ID NO: 4中具有多至1、2或3個取代之變異體，其中此等取代不包括Tyr28及Asp32； e) 輕鏈CDR3，其包含胺基酸序列LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)或其在SEQ ID NO: 6中具有多至1、2或3個取代之變異體，其中此等取代不包括Gly91、Tyr92、Asp93、Thr95c及Tyr96， 以及輕鏈CDR2，其視情況為： f) 輕鏈CDR 2，其包含胺基酸序列QASKLAS (SEQ ID NO: 5)，或其在SEQ ID NO: 5中具有至少1、2或3個取代、視情況不包括Gln50之變異體。
  32. 如請求項31之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VL域包含：(d)包含QSSHSVYSDNDLA (SEQ ID NO:4)之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含QASKLAS (SEQ ID NO:5)之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含LGGYDDESDTYG (SEQ ID NO:6)之胺基酸序列的CDR-L3。
  33. 如請求項25至32中任一項之抗體集合，其中針對該放射性標記化合物之抗原結合位點的VL域包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其變異體，該變異體包含與SEQ ID NO: 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  34. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中該第一抗體及該第二抗體結合於相同標靶抗原。
  35. 如請求項34之抗體集合，其中該第一抗體及該第二抗體結合於相同標靶抗原之相同抗原決定基。
  36. 如請求項34之抗體集合，其中該第一抗體及該第二抗體結合於相同標靶抗原之不同抗原決定基。
  37. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中該標靶抗原為腫瘤相關抗原。
  38. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中該標靶抗原係選自由以下組成之群：癌胚抗原(CEA)、CD20、HER2、EGP-1 (上皮醣蛋白-1，亦稱為滋胚層-2)、結腸特異性抗原p (CSAp)、胰臟黏蛋白MUC1、GPRC5D及FAP。
  39. 如前述請求項中任一項之抗體集合，其中該標靶抗原係選自由CEA、GPRC5D及FAP組成之群。
  40. 如請求項1至39中任一項之抗體集合，其中該標靶抗原為CEA。
  41. 如請求項40之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： 重鏈可變區，其包含：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含：(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-L3。
  42. 如請求項40或請求項41之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VH序列，該VH序列包含選自由SEQ ID NO: 25或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO: 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  43. 如請求項40至42中任一項之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VL序列，該VL序列包含選自由SEQ ID NO: 26或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO: 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  44. 如請求項40之抗體集合，其中該第一抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列的CDR-H3；以及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列的CDR-L3。
  45. 如請求項40或44之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VH序列，該VH序列包含選自由SEQ ID NO: 49或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO: 49至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  46. 如請求項40、44或45中任一項之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VL序列，該VL序列包含選自由SEQ ID NO: 50或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:50至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  47. 如請求項40之抗體集合，其中該第一抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： 重鏈可變區，其包含：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含：(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-L3。
  48. 如請求項40或47之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VH序列，該VH序列包含選自由SEQ ID NO: 17或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:17至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  49. 如請求項40、47或48之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VL序列，該VL序列包含選自由SEQ ID NO: 18或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:18至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  50. 如請求項40之抗體集合，其中該第一抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： 重鏈可變區，其包含：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列的CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含：(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列的CDR-L3。
  51. 如請求項40或請求項50之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VH序列，該VH序列包含選自由SEQ ID NO: 65或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:65至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  52. 如請求項40、50或51之抗體集合，其中該第一抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VL序列，該VL序列包含選自由SEQ ID NO: 66或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:66至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  53. 如請求項40之抗體集合，其中該第一抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列的CDR-H3；以及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列的CDR-L3。
  54. 如請求項40或53之抗體集合，其中該第一抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO: 129、130、131、132、133或134之胺基酸序列，或與以上序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含選自SEQ ID NO: 135、136、137、138、139或140之胺基酸序列，或與以上序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的序列。
  55. 如請求項40、53或54之抗體集合，其中該第一抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： (a) 包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列的VL域，或 (b) 包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列的VL域，或 (c) 包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列的VL域，或 (d) 包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列的VL域，或 (e) 包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列的VL域，或 (f) 包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列的VL域，或 (g) 包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列的VL域。
  56. 如請求項40至55中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： 重鏈可變區，其包含：(a)包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含：(d)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列的CDR-L3。
  57. 如請求項40至56中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VH序列，該VH序列包含選自由SEQ ID NO: 25或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  58. 如請求項40至57中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VL序列，該VL序列包含選自由SEQ ID NO: 26或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  59. 如請求項40至55中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列的CDR-H3；以及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列的CDR-L3。
  60. 如請求項40至55或請求項59中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VH序列，該VH序列包含選自由SEQ ID NO: 49或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:49至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  61. 如請求項40至55、59或60中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VL序列，該VL序列包含選自由SEQ ID NO: 50或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:50至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  62. 如請求項40至55中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： 重鏈可變區，其包含：(a)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列的CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含：(d)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-L3。
  63. 如請求項40至55或62中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VH序列，該VH序列包含選自由SEQ ID NO: 17或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:17至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  64. 如請求項40至55、62或63中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VL序列，該VL序列包含選自由SEQ ID NO: 18或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:18至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  65. 如請求項40至55中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： 重鏈可變區，其包含：(a)包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:60之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列的CDR-H3；及 輕鏈可變區，其包含：(d)包含SEQ ID NO:62之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:63之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:64之胺基酸序列的CDR-L3。
  66. 如請求項40至55或請求項65中任一項之抗體集合，其中該第二抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VH序列，該VH序列包含選自由SEQ ID NO: 65或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:65至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  67. 如請求項40至55、65或66之抗體集合，其中該第二抗體包含針對CEA之抗原結合位點，其包含VL序列，該VL序列包含選自由SEQ ID NO: 66或其變異體組成之群的胺基酸序列，該變異體包含與SEQ ID NO:66至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
  68. 如請求項40至55之抗體集合，其中該第二抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區，其包含(a)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:117或118之胺基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列的CDR-H3；以及輕鏈可變區，其包含(d)包含SEQ ID NO:120、121或122之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:123、124或125之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列的CDR-L3。
  69. 如請求項40至55或68之抗體集合，其中該第二抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含以下：重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO: 129、130、131、132、133或134之胺基酸序列，或與以上胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含選自SEQ ID NO: 135、136、137、138、139或140之胺基酸序列，或與以上胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的序列。
  70. 如請求項40至55、68或69之抗體集合，其中該第二抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含： (a) 包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列的VL域，或 (b) 包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列的VL域，或 (c) 包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列的VL域，或 (d) 包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列的VL域，或 (e) 包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列的VL域，或 (f) 包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列的VL域，或 (g) 包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列的VH域及包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列的VL域。
  71. 如請求項40之抗體集合，其中該第一抗體為如請求項47至49中任一項之抗體且該第二抗體為如請求項56至58中任一項之抗體。
  72. 如請求項71之抗體集合，其中該第一抗體及該第二抗體包含結合於CEA之抗原結合位點，該抗原結合位點包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域，及與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的重鏈可變域。
  73. 如請求項71或72之抗體集合，其中該第一抗體及該第二抗體對該標靶抗原為單特異性及單價的。
  74. 如請求項73之抗體集合，其中該第一抗體及該第二抗體各自包含結合於CEA之兩個抗原結合位點，該等抗原結合位點包含與SEQ ID NO 26至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的輕鏈可變域，及與SEQ ID NO 25至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的重鏈可變域。
  75. 如請求項1或72之抗體集合，其中 該第一抗體包含：SEQ ID NO: 146之第一重鏈；SEQ ID NO: 144之第二重鏈；及SEQ ID NO: 143之輕鏈；及/或 該第二抗體包含：SEQ ID NO: 145之第一重鏈；SEQ ID NO: 144之第二重鏈；及SEQ ID NO: 143之輕鏈。
  76. 如請求項1或請求項74之抗體集合，其中： 該第一抗體包含：SEQ ID NO: 146之第一重鏈多肽；SEQ ID NO: 147之第二重鏈多肽；及SEQ ID NO: 143之第一及第二輕鏈多肽；及/或 該第二抗體包含：SEQ ID NO: 145之第一重鏈多肽；SEQ ID NO: 147之第二重鏈多肽；及SEQ ID NO: 143之第一及第二輕鏈多肽。
  77. 一種核酸集合，其表現如前述請求項中任一項之抗體集合。
  78. 一種表現載體或表現載體集合，其包含如請求項77之核酸集合。
  79. 一種宿主細胞或宿主細胞集合，其包含如請求項78之表現載體或表現載體集合。
  80. 一種預靶向放射免疫療法之方法，其包含 i) 向個體投與如請求項1至76中任一項之抗體集合，其中該第一抗體與該第二抗體係同時或以任何次序依序投與，其中該等抗體結合於該標靶抗原且定位至表現該標靶抗原之細胞的表面；且其中該第一抗體與該第二抗體之聯合形成針對放射性標記化合物之功能性結合位點； 及 ii) 隨後投與放射性標記化合物，其中該放射性標記化合物結合於針對該放射性標記化合物之功能性結合位點。
  81. 如請求項80之方法，其中該方法不包含投與清除劑或阻斷劑之步驟。
  82. 如請求項80或81之方法，其中該個體為人類。
  83. 如請求項80至82中任一項之方法，其中該標靶抗原為癌症或腫瘤相關抗原，且該方法為對腫瘤或癌症之放射免疫療法的方法。
  84. 如請求項1至76中任一項之抗體集合，其用於如請求項80至83中任一項之預靶向放射免疫療法之方法中。
  85. 一種使放射性同位素靶向組織或器官以放射成像之方法，其包含： i) 向個體投與如請求項1至76中任一項之抗體集合，其中該第一抗體與該第二抗體係同時或以任何次序依序投與，其中該等抗體結合於標靶抗原且定位至表現該標靶抗原之細胞的表面，其中該第一抗體及該第二抗體之聯合形成針對放射性標記化合物之功能性結合位點； 及 ii) 隨後投與放射性標記化合物，其中該放射性標記化合物結合於針對該放射性標記化合物之功能性結合位點。
  86. 如請求項85之方法，其中該方法不包含投與清除劑或阻斷劑之步驟。
  87. 如請求項85或86之方法，其中該方法進一步包含成像步驟。
  88. 如請求項87之方法，其中該標靶抗原為癌症或腫瘤相關抗原，且該方法為對腫瘤或癌症成像之方法。
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