TW202134221A - 苯并噻二氮呯化合物及其作為膽酸調節劑之用途 - Google Patents

Abstract

本發明係關於式(I)之1,2,5-苯并噻二氮呯衍生物。此等化合物為具有小腸頂區鈉依賴性膽酸轉運蛋白(ASBT)及/或肝臟膽酸轉運(LBAT)抑制活性之膽酸調節劑。本發明亦關於包含此等化合物之醫藥組合物，以及此等化合物在治療心血管疾病、脂肪酸代謝及葡萄糖利用病症、胃腸道疾病及肝病中之用途。

Description

苯并噻二氮呯化合物及其作為膽酸調節劑之用途

本發明係關於式(I)之1,2,5-苯并噻二氮呯衍生物。此等化合物為具有小腸頂區鈉依賴性膽酸轉運蛋白(ASBT)及/或肝臟膽酸轉運(LBAT)抑制活性之膽酸調節劑。本發明亦關於包含此等化合物之醫藥組合物，以及此等化合物在治療心血管疾病、脂肪酸代謝及葡萄糖利用病症、胃腸道疾病及肝病中之用途。

膽酸為生理清潔劑，其在腸道吸收及脂質、營養物及維生素之運輸中起重要作用。其亦為信號傳導分子，活化核受體及調節脂質、葡萄糖及能量代謝之細胞信號傳導路徑。膽酸為類固醇酸，其由肝臟中之膽固醇合成且以混合微胞形式儲存於膽囊中。在消化期間，十二指腸觸發引起膽囊收縮之激素的釋放，從而在小腸中釋放膽酸，其使得能夠在小腸中吸收脂溶性維生素及膽固醇。當其到達迴腸時，膽酸自腸道再吸收且分泌至門靜脈血液中，經由門靜脈循環返回肝臟。因此，超過90%之膽酸再循環且返回肝臟。此等膽酸隨後轉運穿過肝細胞之竇狀隙膜且穿過小管膜再分泌至膽汁中。在此第一遍中，75-90%之膽酸由肝細胞吸收，完成一輪腸肝循環。逃脫肝臟清除之膽酸部分進入全身循環，其中游離膽酸由腎小球過濾，在近端小管中有效回收且輸出回全身循環。有趣的是，大多數穿過小管膜分泌至膽汁中之膽酸來源於再循環池，而少於10%來自新的重新肝臟合成。在迴腸中未被再吸收之小部分膽酸到達結腸。在腸腔內，初級膽酸在腸道細菌之作用下轉化成次級膽酸，主要藉由類固醇核之單或雙脫羥基反應。逃脫腸道吸收之膽酸此後排泄至糞便中。

總體而言，有效的轉運系統有助於維持恆定的膽酸池，確保腸道中足夠高水準之結合膽酸，以促進脂質吸收以及減少小腸細菌負荷。該系統亦藉由消除潛在的細胞毒性清潔劑而使糞便及尿膽酸損失降至最低且保護腸道及肝膽區室(如由Kosters及Karpen (Xenobiotica 2008, 第38卷, 第1043-1071頁)；Chiang (J. Lipid Res. 2009, 第50卷, 第1955-1966頁)；及Dawson (Handb. Exp. Pharmacol. 2011, 第201卷, 第169-203頁)所綜述)。

已發現膽酸池大小之調節藉由肝臟將膽固醇轉化為膽酸而在膽固醇恆定中起關鍵作用，其代表自身體消除膽固醇之主要途徑。肝臟在自身體移除內源性及外來生物化合物中起至關重要的作用。正常的肝膽分泌及腸肝循環為自身體消除內源性化合物諸如膽固醇及膽紅素及其代謝物所必需的，從而維持脂質及膽酸恆定。(Kosters及Karpen, Xenobiotica 2008, 第38卷, 第1043-1071頁)。

迴腸中膽酸之再吸收可藉由小腸頂區鈉依賴性膽酸轉運蛋白(ASBT)抑制劑化合物來抑制。已報導抑制膽酸再吸收適用於治療數種疾病，包括血脂異常、糖尿病、肥胖症、便秘、膽汁鬱積性肝病、非酒精性脂肪變性肝炎及其他肝病。在過去數十年中已揭示多種ASBT抑制劑化合物，參見例如WO 93/16055、WO 94/18183、WO 94/18184、WO 96/05188、WO 96/08484、WO 96/16051、WO 97/33882、WO 98/03818、WO 98/07449、WO 98/40375、WO 99/35135、WO 99/64409、WO 99/64410、WO 00/47568、WO 00/61568、WO 00/38725、WO 00/38726、WO 00/38727、WO 00/38728、WO 00/38729、WO 01/66533、WO 01/68096、WO 02/32428、WO 02/50051、WO 03/020710、WO 03/022286、WO 03/022825、WO 03/022830、WO 03/061663、WO 03/091232、WO 03/106482、WO 2004/006899、WO 2004/076430、WO 2007/009655、WO 2007/009656、WO 2011/137135、WO 2019/234077、WO 2020/161216、WO 2020/161217、DE 19825804、EP 864582、EP 489423、EP 549967、EP 573848、EP 624593、EP 624594、EP 624595、EP 624596、EP 0864582、EP 1173205、EP 1535913及EP 3210977。

儘管先前已報導許多ASBT抑制劑化合物，但仍需要額外的膽酸調節化合物，其在效力、選擇性及生物可用性方面具有最佳化特徵。

相關申請案之交叉引用 本申請案主張2019年12月4日申請之印度申請案第201911049980號之優先權，其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。

已發現某些1,2,5-苯并噻二氮呯衍生物為小腸頂區鈉依賴性膽酸轉運蛋白(ASBT)及/或肝臟膽酸轉運蛋白(LBAT)之有效抑制劑，且可適用於治療需要抑制膽酸循環之疾病。

在第一態樣中，本發明係關於一種式(I)化合物

其中 R¹ 及R² 各自獨立地為C_1-4 烷基； R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、C_{1 - 4} 烷基、C_{1 - 4} 鹵烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{1 - 4} 鹵烷氧基、氰基、硝基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基、N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N -(芳基-C_{1 - 4} 烷基)胺基； n為整數1、2或3；及 R⁴ 係選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 烷基、C_{3 - 6} 環烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{3 - 6} 環烷氧基、C_{1 - 4} 烷硫基、C_{3 - 6} 環烷硫基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基； 或其醫藥學上可接受之鹽， 其限制條件為該化合物並非來自由以下組成之群的化合物： 2-((3,3-二丁基-7-甲基-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸； 2-((3,3-二丁基-7-(甲硫基)-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸；及 2-((7-溴-3,3-二丁基-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸。

在一些實施例中，R¹ 為正丁基。

在一些實施例中，R² 為C_{2 - 4} 烷基。在一較佳實施例中，R² 為乙基。在另一較佳實施例中，R² 為正丙基。在另一較佳實施例中，R² 為正丁基。

在一些實施例中，R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 鹵烷基、C_{1 - 4} 烷氧基及C_{1 - 4} 鹵烷氧基。在一較佳實施例中，R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、氟、氯、溴、羥基、氰基、三氟甲基、甲氧基及三氟甲氧基。

在一較佳實施例中，n為1，亦即苯基環僅經一個取代基R³ 取代。在另一較佳實施例中，R³ 在對位。

在一些實施例中，R⁴ 係選自由以下組成之群：鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{1 - 4} 烷硫基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基。在一較佳實施例中，R⁴ 係選自由以下組成之群：氟、氯、溴、羥基、氰基、甲基、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基、胺基、甲胺基及二甲胺基。在另一較佳實施例中，R⁴ 係選自由以下組成之群：氟、氯、溴、羥基、氰基、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基及二甲胺基。

在一較佳實施例中，式(I)化合物為式(I-a)化合物

其中 R² 為C_{2 - 4} 烷基； R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 鹵烷基、C_{1 - 4} 烷氧基及C_{1 - 4} 鹵烷氧基； n為整數1或2； R⁴ 係選自由以下組成之群：鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{1 - 4} 烷硫基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基； 或其醫藥學上可接受之鹽， 其限制條件為該化合物並非來自由以下組成之群的化合物： 2-((3,3-二丁基-7-(甲硫基)-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸；及 2-((7-溴-3,3-二丁基-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸。

在另一較佳實施例中，式(I)化合物為式(I-b)化合物

其中 R² 為乙基、正丙基或正丁基； R³ 係選自由以下組成之群：氫、氟、氯、溴、羥基、氰基、三氟甲基、甲氧基及三氟甲氧基； R⁴ 係選自由以下組成之群：氟、氯、溴、羥基、氰基、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基及二甲胺基； 或其醫藥學上可接受之鹽， 其限制條件為該化合物並非來自由以下組成之群的化合物： 2-((3,3-二丁基-7-(甲硫基)-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸；及 2-((7-溴-3,3-二丁基-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸。

本發明之較佳化合物為如上文所定義之式(I-b)化合物，其中M及R¹ 至R⁴ 係如下表1中所指示，或其醫藥學上可接受之鹽：表 1

R1	R2	R3
CH2 CH3	H	SCH3
CH2 CH3	F	SCH3
CH2 CH3	OCH3	SCH3
CH2 CH3	OH	SCH3
CH2 CH3	Cl	SCH3
CH2 CH3	CN	SCH3
CH2 CH3	CF3	SCH3
CH2 CH3	H	N(CH3 )2
CH2 CH3	F	N(CH3 )2
CH2 CH3	OCH3	N(CH3 )2
CH2 CH3	OH	N(CH3 )2
CH2 CH3	Cl	N(CH3 )2
CH2 CH3	CN	N(CH3 )2
CH2 CH3	CF3	N(CH3 )2
CH2 CH3	H	SCH2 CH3
CH2 CH3	F	SCH2 CH3
CH2 CH3	OCH3	SCH2 CH3
CH2 CH3	OH	SCH2 CH3
CH2 CH3	Cl	SCH2 CH3
CH2 CH3	CN	SCH2 CH3
CH2 CH3	CF3	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH3	H	SCH3
CH2 CH2 CH3	F	SCH3
CH2 CH2 CH3	OCH3	SCH3
CH2 CH2 CH3	OH	SCH3
CH2 CH2 CH3	Cl	SCH3
CH2 CH2 CH3	CN	SCH3
CH2 CH2 CH3	CF3	SCH3
CH2 CH2 CH3	H	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH3	F	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH3	OCH3	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH3	OH	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH3	Cl	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH3	CN	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH3	CF3	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH3	H	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH3	F	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH3	OCH3	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH3	OH	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH3	Cl	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH3	CN	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH3	CF3	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH2 CH3	F	SCH3
CH2 CH2 CH2 CH3	OCH3	SCH3
CH2 CH2 CH2 CH3	OH	SCH3
CH2 CH2 CH2 CH3	Cl	SCH3
CH2 CH2 CH2 CH3	CN	SCH3
CH2 CH2 CH2 CH3	CF3	SCH3
CH2 CH2 CH2 CH3	H	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH2 CH3	F	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH2 CH3	OCH3	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH2 CH3	OH	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH2 CH3	Cl	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH2 CH3	CN	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH2 CH3	CF3	N(CH3 )2
CH2 CH2 CH2 CH3	H	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH2 CH3	F	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH2 CH3	OCH3	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH2 CH3	OH	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH2 CH3	Cl	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH2 CH3	CN	SCH2 CH3
CH2 CH2 CH2 CH3	CF3	SCH2 CH3

在一具體實施例中，式(I)化合物係選自由以下組成之群： 2-((3-丁基-3-乙基-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫苯并-1,2,5-噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸； (S)-2-((3-丁基-3-乙基-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸；及 (R)-2-((3-丁基-3-乙基-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸； 或其醫藥學上可接受之鹽。

如本文所用，術語「鹵基」係指氟基、氯基、溴基及碘基。

如本文所用，術語「C_{1 - 6} 烷基」係指具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基，且術語「C_{1 - 4} 烷基」係指具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基。C_{1 - 4} 烷基之實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基。

如本文所用，術語「C_{1 - 4} 鹵烷基」係指如本文所定義之直鏈或分支鏈C_{1 - 4} 烷基，其中一或多個氫原子已經鹵素置換。C_{1 - 4} 鹵烷基之實例包括氯甲基、氟乙基及三氟甲基。

如本文所用，術語「C_{1 - 4} 烷氧基」及「C_{1 - 4} 烷硫基」係指分別經由氧或硫原子與分子之其餘部分連接的直鏈或分支鏈C_{1 - 4} 烷基。

如本文所用，術語「C_{3 - 6} 環烷基」係指具有3至6個碳原子之單環飽和烴環。C_{3 - 6} 環烷基之實例包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。

術語「芳基」表示由6個碳原子構成之芳族單環或由10個碳原子構成之芳族雙環系統。芳基之實例包括苯基、萘基及薁基。

術語「胺基」係指-NH₂ 基團。如本文所用，術語「N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基」及「N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基」係指一個或兩個氫原子分別經直鏈或分支鏈C_{1 - 4} 烷基置換之胺基。N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基之實例包括甲胺基、乙胺基及第三丁胺基，且N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基之實例包括二甲胺基及二乙胺基。

如本文所用，術語「N-(芳基-C_1-4 烷基)胺基」係指氫原子經芳基-C_1-4 烷基置換之胺基。N-(芳基-C_1-4 烷基)胺基之實例包括苯甲基胺基及苯乙基胺基。

如本文所用，術語「醫藥學上可接受」係指適用於人類醫藥用途且一般為安全、無毒、既非生物學上亦非其他方面不合需要的彼等化合物、物質、組合物及/或劑型。

如本文所用，術語「約」係指本文中之值或參數，包括(及描述)針對該值或參數本身之實施例。舉例而言，提及「約20」之描述包括「20」之描述。數值範圍包括界定該範圍之數值。一般而言，術語「約」係指變數之指定值及變數在指定值之實驗誤差內(例如，在平均值之95%信賴區間內)或在指定值之10%內的所有值，以較大者為凖。

式(I)之1,2,5-苯并噻二氮呯化合物或其醫藥學上可接受之鹽為小腸頂區鈉依賴性膽酸轉運蛋白之抑制劑(ASBT抑制劑)、肝臟膽酸轉運蛋白之抑制劑(LBAT抑制劑)或小腸頂區鈉依賴性膽酸及肝臟膽酸轉運體兩者之抑制劑(雙重ASBT/LBAT抑制劑)。因此，其適用於治療或預防需要抑制膽酸循環之病況、病症及疾病，諸如心血管疾病、脂肪酸代謝及葡萄糖利用病症、胃腸道疾病及肝病。

心血管疾病以及脂肪酸代謝及葡萄糖利用病症包括但不限於高膽固醇血症；脂肪酸代謝病症；1型及2型糖尿病；糖尿病之併發症，包括白內障、微血管疾病及大血管疾病、視網膜病變、神經病變、腎病變及傷口癒合延遲、組織缺血、糖尿病足、動脈硬化、心肌梗塞、急性冠狀動脈症候群、不穩定型心絞痛、穩定型心絞痛、中風、周邊動脈阻塞疾病、心肌病、心臟衰竭、心律不整及血管再狹窄；糖尿病相關疾病，諸如胰島素抗性(葡萄糖恆定受損)、高血糖症、高胰島素血症、脂肪酸或甘油之血液含量升高、肥胖症、血脂異常、包括高三酸甘油酯血症之高脂質血症、代謝症候群(症候群X)、動脈粥樣硬化及高血壓；及用於增加高密度脂蛋白含量。

胃腸道疾病及病症包括便秘(包括慢性便秘、功能性便秘、慢性特發性便秘(CIC)、間歇性/偶發性便秘、因糖尿病繼發之便秘、因中風繼發之便秘、因慢性腎病繼發之便秘、因多發性硬化症繼發之便秘、因帕金森氏病(Parkinson's disease)繼發之便秘、因全身性硬化症繼發之便秘、藥物誘發之便秘、伴有便秘之大腸急躁症(IBS-C)、混合型大腸急躁症(IBS-M)、小兒功能性便秘及類鴉片誘發之便秘)；克羅恩氏病(Crohn's disease)；原發性膽酸吸收障礙；大腸急躁症(IBS)；發炎性腸病(IBD)；迴腸發炎；及逆流性疾病及其併發症，諸如巴雷特氏食道(Barrett's esophagus)、膽汁逆流性食道炎及膽汁逆流性胃炎。

如本文所定義之肝病為肝臟及與其連接之器官(諸如胰臟、門靜脈、肝實質、肝內膽道、肝外膽道及膽囊)中之任何疾病。在一些情況下，肝病為膽酸依賴性肝病。肝臟疾病及病症包括但不限於遺傳性肝臟代謝病症；膽酸合成之先天性錯誤；先天性膽管異常；膽道閉鎖；葛西術後膽道閉鎖(post-Kasai biliary atresia)；肝移植術後膽道閉鎖；新生兒肝炎；新生兒膽汁鬱積；遺傳性膽汁鬱積；腦腱性黃瘤病；次級BA合成缺陷；齊薇格氏症候群(Zellweger´s syndrome)；囊腫性纖維化相關肝病；α1-抗胰蛋白酶缺乏症；阿拉傑里症候群(Alagilles syndrome，ALGS)；拜勒症候群(Byler syndrome)；初級膽酸(BA)合成缺陷；進行性家族性肝內膽汁鬱積(PFIC)，包括PFIC-1、PFIC-2、PFIC-3及非特異性PFIC、膽汁分流術後PFIC及肝移植術後PFIC；良性復發性肝內膽汁鬱積(BRIC)，包括BRIC1、BRIC2及非特異性BRIC、膽汁分流術後BRIC及肝移植術後BRIC；自體免疫肝炎；原發性膽汁性肝硬化(PBC)；肝纖維化；非酒精性脂肪肝病(NAFLD)；非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)；門靜脈高血壓；膽汁鬱積；唐氏症候群膽汁鬱積(Down syndrome cholestasis)；藥物誘發性膽汁鬱積；妊娠肝內膽汁鬱積(妊娠期黃疸)；肝內膽汁鬱積；肝外膽汁鬱積；非經腸式營養相關膽汁鬱積(PNAC)；低磷脂相關膽汁鬱積；淋巴水腫膽汁鬱積症候群1 (LSC1)；原發性硬化性膽管炎(PSC)；免疫球蛋白G4相關膽管炎；原發性膽汁性膽管炎；膽石症(膽結石)；膽道結石；輸膽管結石；膽石性胰臟炎；卡羅利病(Caroli disease)；膽管惡性腫瘤；惡性腫瘤導致膽道梗阻；膽道狹窄；AIDS膽管病；缺血性膽管病；膽汁鬱積或黃疸引起之搔癢病；胰臟炎；慢性自體免疫肝病導致進行性膽汁鬱積；肝臟脂肪變性；酒精性肝炎；急性脂肪肝；妊娠脂肪肝；藥物誘發性肝炎；鐵過載症；先天性膽酸合成缺陷1型(BAS 1型)；藥物誘發性肝損傷(DILI)；肝纖維化；先天性肝纖維化；肝硬化；蘭格漢氏細胞組織細胞增生症(Langerhans cell histiocytosis，LCH)；新生兒魚鱗癬硬化性膽管炎(NISCH)；紅血球生成性原卟啉症(EPP)；特發性成人期膽管缺失症(IAD)；特發性新生兒肝炎(INH)；非症候型小葉間膽管缺乏(NS PILBD)；北美印第安兒童期肝硬化(NAIC)；肝結節病；澱粉樣變性；壞死性小腸結腸炎；血清膽酸引起之毒性，包括血清膽酸分佈型態異常之心律不整(例如心房微顫)、與肝硬化相關之心肌病(「膽心病」)及與膽汁鬱積性肝病相關之骨骼肌萎縮；多囊性肝病；病毒性肝炎(包括A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎及E型肝炎)；肝細胞癌(肝癌)；膽管癌；膽酸相關之胃腸道癌症；及由肝臟、膽道及胰臟腫瘤及贅瘤引起之膽汁鬱積。式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽亦適用於增強肝臟疾病之皮質類固醇療法。

可藉由式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽治療或預防之其他疾病包括超吸收症候群(包括無β脂蛋白血症、家族性低β脂蛋白血症(FHBL)、乳糜微粒滯留病(CRD)及植固醇血症)；維生素過多症及骨質石化病；高血壓；腎小球高濾過；多囊性腎病(PKD) (包括體染色體顯性多囊性腎病(ADPKD)及體染色體隱性多囊性腎病(ARPKD))；及腎衰竭之搔癢病。化合物亦適用於對肝臟疾病或代謝疾病相關腎損傷的保護措施中。

人體內膽酸之轉運受SLC10溶質載體蛋白家族成員之作用控制，尤其Na⁺ -牛膽酸鹽協同轉運多肽(NTCP，亦稱為肝臟膽酸轉運蛋白(LBAT)；基因符號SLC10A1 )，其在肝細胞之竇狀隙膜中表現；及小腸頂區鈉依賴性膽酸轉運蛋白(ASBT，亦稱為迴腸膽酸轉運蛋白(IBAT)、ISBT、ABAT或NTCP2；基因符號SLC10A2 )，其在迴腸上皮細胞、近端腎小管細胞、膽道上皮細胞、大膽管細胞及膽囊上皮細胞之小腸頂區膜中表現。在肝臟中，膽酸藉由肝臟膽酸轉運蛋白(LBAT)自門靜脈血中有效提取，且藉由膽鹽輸出泵(BSEP；基因符號ABCB11 )再分泌穿過小管膜。迴腸中膽酸之再吸收係由小腸頂區鈉依賴性膽酸轉運蛋白(ASBT)處理，其通常稱為迴腸膽酸轉運蛋白(IBAT)。LBAT及ASBT均充當起電鈉-溶質協同轉運蛋白，每分子溶質移動兩個或更多個Na⁺ 離子。

外生物及內生物，包括膽酸，係由肝臟自門靜脈血吸收且藉由具有個別化受質特異性之不同轉運蛋白分泌於膽汁中。甘胺酸結合之膽酸及牛磺酸結合之膽酸以陰離子形式存在且不能藉由擴散穿過膜，因此完全依賴於膜轉運蛋白進入或離開肝細胞(Kosters及Karpen, Xenobiotica 2008, 第38卷, 第1043-1071頁)。ASBT及LBAT偏好甘胺酸結合之膽鹽及牛磺酸結合之膽鹽超過其未結合之對應物，且表現出對二羥基膽鹽之親和力高於對三羥基膽鹽之親和力。尚未鑑別出ASBT之非膽酸受質，然而，亦發現LBAT轉運多種類固醇硫酸鹽、激素及外生物。

就藥物抑制要求而言，LBAT未如ASBT一般徹底表徵。Dong等人已鑑別出FDA核准之抑制人類LBAT之藥物，且比較LBAT及ASBT抑制要求。使用FDA核准之藥物，配合迭代計算模型開發進行一系列LBAT抑制研究。篩選研究鑑別出27種藥物作為新穎的LBAT抑制劑，包括依貝沙坦(irbesartan，Ki =11.9 μM)及依澤替米貝(ezetimibe，Ki = 25.0 μM)。共同特徵藥效團表明兩個疏水物及一個氫鍵受體對於抑制LBAT為重要的。自活體外篩選之72種藥物中，共有31種藥物抑制LBAT，而51種藥物(亦即超過一半)抑制ASBT。因此，雖然存在抑制劑重疊，但ASBT出乎意料地比LBAT更容許藥物抑制，且此可能與LBAT具有較少的藥效團特徵相關(Dong等人, Mol. Pharm. 2013, 第10卷, 第1008-1019頁)。

Vaz等人將LBAT缺乏症之鑑別描述為具有相對輕微臨床表型之新的先天性代謝錯誤。LBAT缺乏症之鑑別證實，此轉運蛋白為結合膽鹽進入肝臟之主要輸入系統，且亦表明輔助轉運蛋白能夠在其不存在時維持腸肝循環(Vaz等人, Hepatology 2015, 第61卷, 第260-267頁)。此等發現支持LBAT抑制為安全作用機制的假設，因為肝細胞仍有可能吸收必需量之膽酸。

Liu等人描述與SLC10A1 (LBAT)中p.Ser267Phe突變之純合性相關之新型高膽烷血症的鑑別。基因SLC10A1 中此突變之對偶基因頻率在不同群體中有所不同，其中最高的發病率出現在中國南方(中國漢族及傣族分別為8%及12%)及越南(11%)。咸信此「隱藏的」高膽烷血症影響南方漢族之0.64%、中國傣族人口之1.44%及越南人口之1.21%。亦觀測到純合個體中結合及未結合之血清BA含量的增加。Liu等人提出，此發現最可能歸因於自門靜脈循環至肝細胞中之BA轉運減少。此支持以下假設：腸肝循環之生理功能不僅使膽酸再循環，且亦自循環清除膽酸以達成恆定(Karpen及Dawson, Hepatology 2015, 第61卷, 第24-27頁)。或者，肝臟可合成增加含量之膽酸以補償純合載體中減少的腸肝再循環。由於LBAT亦轉運未結合之膽酸，故在此研究中未結合之膽酸增加並不出人意料(Liu等人, Scientific Reports 2017, 7: 9214, 第1-7頁)。

已發現LBAT在數種形式之膽汁鬱積性肝損傷及膽汁鬱積中被下調，而發現ASBT在多種胃腸道病症中被下調，諸如克羅恩氏病、原發性膽酸吸收障礙、發炎性腸病及迴腸發炎，但在膽汁鬱積中被上調。LBAT亦充當B型肝炎病毒(HBV)及D型肝炎病毒(HDV)之病毒進入的細胞受體，B型肝炎病毒及D型肝炎病毒又為肝病及肝細胞癌之主要原因。

已研究ASBT抑制用於降低血漿膽固醇含量及改良胰島素抗性，以及減輕膽汁鬱積性肝病中之肝膽酸負荷。另外，已發現ASBT抑制恢復胰島素含量及血糖濃度正常，從而確立ASBT抑制為2型糖尿病之有前景的治療。ASBT抑制劑亦用於治療功能性便秘。

由於ASBT主要在迴腸中表現(在此其通常稱為IBAT)，因此ASBT抑制劑不必全身可用。另一方面，ASBT亦在腎臟之近端小管細胞中表現。因此，全身可用之ASBT抑制劑亦可抑制腎臟中膽酸之再吸收。咸信，此將導致尿液中膽酸含量增加，及經由尿液增加自身體移除膽酸。因此，預期不僅在迴腸中且亦在腎臟中發揮作用之全身可用的ASBT抑制劑比僅在迴腸中發揮作用之非全身可用的ASBT抑制劑導致膽酸含量之更大降低。

具有高ASBT抑制效力之化合物特別適用於治療引起膽汁鬱積之肝病，諸如進行性家族性肝內膽汁鬱積(PFIC)、阿拉傑里症候群、膽道閉鎖及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。

膽道閉鎖為一種罕見的小兒肝病，其涉及大膽管之部分或完全阻塞(或甚至缺失)。此阻塞或缺失造成膽汁鬱積，導致膽酸積聚，從而損害肝臟。在一些實施例中，膽酸之積聚發生在肝外膽道中。在一些實施例中，膽酸之積聚發生在肝內膽道中。目前的護理標準為葛西手術，其為移除阻塞的膽管且將一部分小腸直接連接至肝臟的手術。目前沒有針對此病症之核准藥物療法。

本文提供用於治療有需要之個體之膽道閉鎖的方法，該等方法包含投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，個體在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前已進行葛西手術。在一些實施例中，在進行葛西手術之前，向個體投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，膽道閉鎖之治療降低個體之血清膽酸含量。在一些實施例中，血清膽酸含量係藉由例如ELISA酶分析或量測總膽酸之分析來測定，如Danese等人, PLoS One. 2017, 第12(6)卷: e0179200中所述，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，血清膽酸含量可降低例如在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前的血清膽酸含量的10%至40%、20%至50%、30%至60%、40%至70%、50%至80%或大於90%。在一些實施例中，膽道閉鎖之治療包括搔癢病之治療。

PFIC為一種罕見的遺傳病症，據估計影響全球出生的每50,000至100,000名兒童中之一名且造成進行性、危及生命的肝病。

PFIC之一種表現形式為搔癢病，其通常導致生活品質嚴重下降。在一些情況下，PFIC導致肝硬化及肝衰竭。目前的療法包括部分膽汁外分流術(PEBD)及肝移植，然而，此等選項可能帶來相當大的手術後併發症風險，以及心理及社會問題。

已鑑別三種可選基因缺陷，其與稱為1型、2型及3型之三種單獨的PFIC亞型相關： ● PFIC 1型，其有時稱為「拜勒病」，係由因ATP8B1基因突變所致的膽汁分泌受損引起，該基因編碼之蛋白質有助於維持稱為磷脂之脂肪在膽管細胞膜中之適當平衡。此等磷脂之不平衡與膽汁鬱積及肝臟中之膽酸升高相關聯。受PFIC 1型影響之個體通常在出生後的前幾個月發生膽汁鬱積，且在沒有手術治療之情況下，在生命的第一個十年結束之前進展為肝硬化及末期肝病。 ● PFIC 2型，其有時稱為「拜勒症候群」，係由因ABCB11基因突變所致的膽鹽分泌受損引起，該基因編碼一種稱為膽鹽輸出泵之蛋白質，其將膽酸自肝臟移出。患有PFIC 2型之個體通常在出生後的前幾年內罹患肝衰竭，且罹患一類稱為肝細胞癌之肝癌的風險增加。 ● PFIC 3型，其通常在兒童期之最初幾年伴隨進行性膽汁鬱積出現，係由ABCB4基因突變引起，該基因編碼將磷脂移動穿過細胞膜之轉運蛋白。

另外，已提出TJP2基因、NR1H4基因或Myo5b基因突變為PFIC之原因。另外，一些患有PFIC之個體在ATP8B1、ABCB11、ABCB4、TJP2、NR1H4或Myo5b基因中之任一者中均沒有突變。在此等情況下，病況之原因為未知的。

ATP8B1基因或所得蛋白質的例示性突變列於表2及表3中，其中編號基於人類野生型ATP8B1蛋白(例如SEQ ID NO: 1)或基因(例如SEQ ID NO: 2)。ABCB11基因或所得蛋白質的例示性突變列於表4及表5中，其中編號基於人類野生型ABCB11蛋白(例如SEQ ID NO: 3)或基因(例如SEQ ID NO: 4)。

如熟習此項技術者可瞭解，參考蛋白質序列中對應於SEQ ID NO: 1或3之特定胺基酸位置的胺基酸位置可藉由將參考蛋白質序列與SEQ ID NO: 1或3比對來確定(例如，使用軟體程式，諸如ClustalW2)。此等殘基之變化(在本文中稱為「突變」)可包括單個或多個胺基酸取代、序列內或側翼之插入以及序列內或側翼之缺失。如熟習此項技術者可瞭解，參考基因序列中對應於SEQ ID NO: 2或4之特定核苷酸位置的核苷酸位置可藉由將參考基因序列與SEQ ID NO: 2或4比對來確定(例如，使用軟體程式，諸如ClustalW2)。此等殘基之變化(在本文中稱為「突變」)可包括單個或多個核苷酸取代、序列內或側翼之插入以及序列內或側翼之缺失。亦參見Kooistra等人, 「KLIFS: A structural kinase-ligand interaction database」, Nucleic Acids Res. 2016, 第44卷, 第D1期, 第D365-D371頁，其以全文引用的方式併入本文中。 ATP8B1之典型蛋白質序列(SEQ ID NO: 1) - Uniprot ID O43520

ATP8B1之典型DNA序列(SEQ ID NO: 2)

表 2. 例示性 ATP8B1 突變

胺基酸位置3 (例如T3K)27

胺基酸位置23 (例如P23L)5

胺基酸位置45 (例如N45T)5,8,9

胺基酸位置46 (例如R46X)A,25

胺基酸位置62 (例如C62R)28

胺基酸位置63 (例如T63T)41

胺基酸位置70 (例如D70N)1,6

胺基酸位置71 (例如R71H)43

胺基酸位置78 (例如H78Q)19

胺基酸位置82 (例如T82T)41

胺基酸位置92 (例如Y92Y)41

胺基酸位置93 (例如A93A)6

胺基酸位置96 (例如A96G)27

胺基酸位置114 (例如E114Q)8

胺基酸位置127 (例如L127P6 、L127V36 )

胺基酸位置177 (例如T177T)6

胺基酸位置179 (例如E179X)29

Δ胺基酸位置185-28244

胺基酸位置197 (例如G197Lfs*10)22

胺基酸位置201 (例如R201S27 、R201H35 )

胺基酸位置203 (例如K203E5,8 、K203R9 、K203fs25 )

胺基酸位置205 (例如N205fs6 、N205Kfs*235 )

胺基酸位置209 (例如P209T)4

胺基酸位置217 (例如S217N)43

胺基酸位置232 (例如D232D)30

胺基酸位置233 (例如G233R)38

胺基酸位置243 (例如L243fs*28)33

胺基酸位置265 (例如C265R)25

胺基酸位置271 (例如R271X13 、R271R30 )

胺基酸位置288 (例如L288S)6

胺基酸位置294 (例如L294S)43

胺基酸位置296 (例如R296C)11

胺基酸位置305 (例如F305I)28

胺基酸位置306 (例如C306R)23

胺基酸位置307 (例如H307L)35

胺基酸位置308 (例如G308V1 、G308D6 、G308S35 )

胺基酸位置314 (例如G314S)13

胺基酸位置320 (例如M320Vfs*13)11

胺基酸位置337 (例如M337R)18

胺基酸位置338 (例如N338K)18

胺基酸位置340 (例如M340V)18

胺基酸位置344 (例如I344F)6,20

胺基酸位置349 (例如I349T)41

胺基酸位置358 (例如G358R)28

胺基酸位置367 (例如G367G)41

胺基酸位置368 (例如N368D)41

胺基酸位置393 (例如I393V)27

胺基酸位置403 (例如S403Y)6

胺基酸位置407 (例如S407N)40

胺基酸位置412 (例如R412P)6

胺基酸位置415 (例如Q415R)27

胺基酸位置422 (例如D422H)35

胺基酸位置429 (例如E429A)6

胺基酸位置446 (例如G446R)4,11

胺基酸位置453 (例如S453Y)6

胺基酸位置454 (例如D454G)6

胺基酸位置455 (例如K455N)43

胺基酸位置456 (例如T456M3,6 、T456K35 )

胺基酸位置457 (例如G457G6 、G457fs*633 )

胺基酸位置469 (例如C469G)41

胺基酸位置478 (例如H478H)41

胺基酸位置500 (例如Y500H)6

胺基酸位置525 (例如R525X)4

Δ胺基酸位置5296

胺基酸位置535 (例如H535L6 、H535N41 )

胺基酸位置553 (例如P553P)43

胺基酸位置554 (例如D554N1,6 、D554A35 )

Δ胺基酸位置556-62844

Δ胺基酸位置559-56335

胺基酸位置570 (例如L570L)41

胺基酸位置577 (例如I577V)19

胺基酸位置581 (例如E581K)35

胺基酸位置554及581 (例如D554A+E581K)35

胺基酸位置585 (例如E585X)21

胺基酸位置600 (例如R600W2,4 、R600Q6 )

胺基酸位置602 (例如R602X)3,6

胺基酸位置628 (例如R628W)6

胺基酸位置631 (例如R631Q)28

Δ胺基酸位置645-6994

胺基酸位置661 (例如I661T)1,4,6

胺基酸位置665 (例如E665X)4,6

胺基酸位置672 (例如K672fs6 、K672Vfs*135 )

胺基酸位置674 (例如M674T)19

胺基酸位置78及674 (例如H78Q/M674T)19

胺基酸位置684 (例如D684D)41

胺基酸位置688 (例如D688G)6

胺基酸位置694 (例如I694T6 、I694N17 )

胺基酸位置695 (例如E695K)27

胺基酸位置709 (例如K709fs6 、K709Qfs*4113 )

胺基酸位置717 (例如T717N)4

胺基酸位置733 (例如G733R)6

胺基酸位置757 (例如Y757X)4

胺基酸位置749 (例如L749P)21

胺基酸位置792 (例如P792fs)6

Δ胺基酸位置795-7976

胺基酸位置809 (例如I809L)27

胺基酸位置814 (例如K814N)28

胺基酸位置833 (例如R833Q27 、R833W41 )

胺基酸位置835 (例如K835Rfs*36)35

胺基酸位置845 (例如K845fs)25

胺基酸位置849 (例如R849Q)24

胺基酸位置853 (例如F853S、F853fs)6

胺基酸位置867 (例如R867C1 、R867fs6 、R867H23 )

胺基酸位置885 (例如K885T)41

胺基酸位置888 (例如T888T)41

胺基酸位置892 (例如G892R)6

胺基酸位置912 (例如G912R)35

胺基酸位置921 (例如S921S)41

胺基酸位置924 (例如Y924C)28

胺基酸位置930 (例如R930X6 、R930Q28 )

胺基酸位置941 (例如R941X)35

胺基酸位置946 (例如R946T)41

胺基酸位置952 (例如R952Q5,9,15 、R952X6 )

胺基酸位置958 (例如N958fs)6

胺基酸位置960 (例如A960A)41

Δ胺基酸位置97143

胺基酸位置976 (例如A976E41 、A976A43 )

胺基酸位置981 (例如E981K)20

胺基酸位置994 (例如S994R)4

胺基酸位置1011 (例如L1011fs*18)33

胺基酸位置1012 (例如S1012I)10

胺基酸位置1014 (例如R1014X)6,11

胺基酸位置1015 (例如F1015L)27

胺基酸位置1023 (例如Q1023fs)6

胺基酸位置1040 (例如G1040R)1,6

胺基酸位置1044 (例如S0144L)34

胺基酸位置1047 (例如L1047fs)6

胺基酸位置1050 (例如I1050K)31

胺基酸位置1052 (例如L1052R)28

胺基酸位置1095 (例如W1095X)11

胺基酸位置1098 (例如V1098X)35

胺基酸位置1131 (例如Q1131X)44

胺基酸位置1142 (例如A1142Tfs*35)43

胺基酸位置1144 (例如Y1144Y)43

胺基酸位置1150 (例如I1150T)41

胺基酸位置1152 (例如A1152T)30

胺基酸位置1159 (例如P1159P)25,43

胺基酸位置1164 (例如R1164X)6

胺基酸位置1193 (例如R1193fs*39)33

胺基酸位置1197 (例如V1197L)41

胺基酸位置1208 (例如A1208fs)6

胺基酸位置1209 (例如Y1209Lfs*28)4

胺基酸位置1211 (例如F1211L)27

胺基酸位置1219 (例如D1219H5 、D1219G27 )

胺基酸位置1223 (例如S1223S)41

胺基酸位置1233 (例如P1233P)41

胺基酸位置1241 (例如G1241fs)6

胺基酸位置1248 (例如T1248T)43

剪接位點突變IVS3+1_+3delGTG6

剪接位點突變IVS3-2A＞G6

IVS6+5T＞G17,25

剪接位點突變IVS8+1G＞T6

IVS9-G＞A26

IVS12+1G＞A25

剪接位點突變IVS17-1G＞A6

剪接位點突變IVS18+2T＞C6

剪接位點突變IVS20-4CT＞AA

剪接位點突變IVS21+5G＞A6

剪接位點突變IVS23-3C＞A6

剪接位點突變IVS26+2T＞A6

g.24774-42062del4

c.-4C＞G41

c.145C＞T12

c.181-72G＞A9

c.182-5T＞A41

c.182-72G＞A41

c.246A＞G9

c.239G＞A39

c.279+1_279+3delGTG46

c.280-2A＞G46

c.625_62715delinsACAGTAAT46

c.554+122C＞T9

c.555-3T＞C27

c.625+5 G＞T4

胺基酸位置209 (例如P209T)及c.625+5 G＞T4

c.628-30G＞A41

c.628-31C＞T41

c.698+1G＞T46

c.698+20C＞T41

c.782-1G＞A46

c.782-34G＞A41

Δ795-79714

c.782 -1G＞A4

c.852A＞C27

c.941-1G＞A46

c.1014C＞T9

c.1029+35G＞A9

c.1221-8C.G41

1226delA16

c.1429+1G＞A46

c.1429+2T＞G13

c.1429+49G＞A41

c.1430-42A＞G41

c.1493T＞C12

c.1587_1589delCTT46

c.1630+2T＞G27

c.1631-10T＞A41

c.1637-37T＞C41

1660 G＞A14

1798 C＞T14

1799 G＞A14

c.1819-39_41delAA9

c.1819+1G＞A31

c.1820-27G＞A41

c.1918+8C＞T27

c.1933-1G＞AK46

c.2097+2T＞C32

c.2097+60T＞G41

c.2097+89T＞C41

c.2097+97T＞G41

c.2210-114T＞C9

2210delA16

c.2210-45_50dupATAAAA9

c.2285+29C.T41

c.2285+32A＞G41

c.2286-4_2286-3delinsAA46

c.2418+5G＞A46

c.2707+3G＞C27

c.2707+9T＞G41

c.2707+43A＞G41

c.2709-59T＞C41

c.2931+9A＞G41

c.2931+59T＞A41

c.2932-3C＞A46

c.2932+59T＞A9

c.2937A＞C27

c.3016-9C＞A31

c.3033-3034del19

3122delTCCTA/ insACATCGATGTTGATGTTAGG45

3318 G＞A14

c.3400+2T＞A46

c.3401-175C＞T9

c.3401-167C＞T9

c.3401-108C＞T9

c.3531+8G＞T9,15

c.3532-15C＞T9

Δ Phe ex 154

Ex1_Ex13del6

Ex2_Ex6del33

Ex12_Ex14del27

跳過外顯子2445

del5'UTR-ex1811

c.*11C＞T41

c.*1101 + 366G ＞ A7

g.92918del56531

GC在外顯子16之前(例如導致4 bp缺失)42

自外顯子16之5'端讀框轉移42

5' 1.4 kb缺失46

表 3 . 與 PFIC - 1 相關之所選 ATP8B1 突變

胺基酸位置23 (例如P23L)5

胺基酸位置78 (例如H78Q)19

胺基酸位置93 (例如A93A)6

胺基酸位置96 (例如A96G)27

胺基酸位置127 (例如L127P)6

胺基酸位置197 (例如G197Lfs*10)22

胺基酸位置205 (例如N205fs)6

胺基酸位置209 (例如P209T)4

胺基酸位置233 (例如G233R)38

胺基酸位置243 (例如L243fs*28)33

胺基酸位置288 (例如L288S)6

胺基酸位置296 (例如R296C)11

胺基酸位置308 (例如G308V1,6 )

胺基酸位置320 (例如M320Vfs*13)11

胺基酸位置403 (例如S403Y)6

胺基酸位置407 (例如S407N)40

胺基酸位置412 (例如R412P)6

胺基酸位置415 (例如Q415R)27

胺基酸位置429 (例如E429A)6

胺基酸位置446 (例如G446R)4

胺基酸位置456 (例如T456M)3,6

胺基酸位置457 (例如G457G6 、G457fs*633 )

胺基酸位置500 (例如Y500H)6

胺基酸位置525 (例如R525X)4

Δ胺基酸位置5296

胺基酸位置535 (例如H535L)6

胺基酸位置554 (例如D554N)1,6

胺基酸位置577 (例如I577V)19

胺基酸位置585 (例如E585X)21

胺基酸位置600 (例如R600W)4

胺基酸位置602 (例如R602X)3,6

胺基酸位置661 (例如I661T)4,6

胺基酸位置665 (例如E665X)4,6

Δ胺基酸位置645-6994

胺基酸位置672 (例如K672fs)6

胺基酸位置674 (例如M674T)19

胺基酸位置78及674 (例如H78Q/M674T)19

胺基酸位置688 (例如D688G)6

胺基酸位置694 (例如I694N)17

胺基酸位置695 (例如E695K)27

胺基酸位置709 (例如K709fs)6

胺基酸位置717 (例如T717N)4

胺基酸位置733 (例如G733R)6

胺基酸位置749 (例如L749P)21

胺基酸位置757 (例如Y757X)4

胺基酸位置792 (例如P792fs)6

胺基酸位置809 (例如I809L)27

胺基酸位置853 (例如F853S、F853fs)6

胺基酸位置867 (例如R867fs)6

胺基酸位置892 (例如G892R)6

胺基酸位置930 (例如R930X6 、R952Q15 )

胺基酸位置952 (例如R952X)6

胺基酸位置958 (例如N958fs)6

胺基酸位置981 (例如E981K)20

胺基酸位置994 (例如S994R)4

胺基酸位置1014 (例如R1014X)6,11

胺基酸位置1015 (例如F1015L)27

胺基酸位置1023 (例如Q1023fs)6

胺基酸位置1040 (例如G1040R)1,6

胺基酸位置1047 (例如L1047fs)6

胺基酸位置1095 (例如W1095X)11

胺基酸位置1208 (例如A1208fs)6

胺基酸位置1209 (例如Y1209Lfs*28)4

胺基酸位置1211 (例如F1211L)27

胺基酸位置1219 (例如D1219H5 、D1219G27 )

剪接位點突變IVS3+1_+3delGTG6

剪接位點突變IVS3-2A＞G6

IVS6+5T＞G17

剪接位點突變IVS8+1G＞T6

IVS9-G＞A26

剪接位點突變IVS17-1G＞A6

剪接位點突變IVS18+2T＞C6

剪接位點突變IVS21+5G＞A6

g.24774-42062del4

c.145C＞T12

c.239G＞A39

c.625+5 G＞T4

胺基酸位置209 (例如P209T)及c.625+5 G＞T4

c.782 -1G＞A4

c.1493T＞C12

c.1630+2T＞G27

1660 G＞A14

c.2707+3G＞C27

c.2097+2T＞C32

c.3033-3034del19

3318 G＞A14

c.3158+8G＞T15

Δ Phe ex 154

Ex1_Ex13del6

Ex2_Ex6del33

Ex12_Ex14del27

del5'UTR-ex1811

c.*1101 + 366G ＞ A7

GC在外顯子16之前(例如導致4 bp缺失)42

自外顯子16之5'端讀框轉移42

^A 突變為「X」表示早期終止密碼子表 2 及表 3 之參考文獻 ¹ Folmer et al., Hepatology. 2009, vol. 50(5), p. 1597-1605.² Hsu et al., Hepatol Res. 2009, vol. 39(6), p. 625-631.³ Alvarez et al., Hum Mol Genet. 2004, vol. 13(20), p. 2451-2460.⁴ Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.⁵ Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958.⁶ Klomp et al., Hepatology 2004, vol. 40(1), p. 27-38.⁷ Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.⁸ Dixon et al., Scientific Reports 2017, vol. 7, 11823.⁹ Painter et al., Eur J Hum Genet. 2005, vol. 13(4), p. 435-439.¹⁰ Deng et al., World J Gastroenterol. 2012, vol. 18(44), p. 6504-6509.¹¹ Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.¹² Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S180. Abstract Number: OP284.¹³ Togawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 67, Supp. Supplement 1, pp. S363. Abstract Number: 615.¹⁴ Miloh et al., Gastroenterology 2006, vol. 130, No. 4, Suppl. 2, pp. A759-A760. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/107th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Los Angeles, CA, USA. May 19.¹⁵ Dröge et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2015, vol. 53, No. 12. Abstract Number: A3-27. Meeting Info: 32. Jahrestagung der Deutschen Arbeitsgemeinschaft zum Studium der Leber. Dusseldorf, Germany. 22 Jan 2016-23 Jan 2016¹⁶ Mizuochi et al., Clin Chim Acta. 2012, vol. 413(15-16), p. 1301-1304.¹⁷ Liu et al., Hepatology International 2009, vol. 3, No. 1, p. 184-185. Abstract Number: PE405. Meeting Info: 19th Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver. Hong Kong, China. 13 Feb 2009-16 Feb 2009¹⁸ McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32.v2¹⁹ Hasegawa et al., Orphanet J Rare Dis. 2014, vol. 9:89.²⁰ Stone et al., J Biol Chem. 2012, vol. 287(49), p. 41139-51.²¹ Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]²² Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107.²³ Uegaki et al., Intern Med. 2008, vol. 47(7), p. 599-602.²⁴ Goldschmidt et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(4), p. 306-311.²⁵ Liu et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 50(2), p. 179-183.²⁶ Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458.²⁷ Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol. 75, No. 1C. Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.²⁸ Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p. 1195-1204.²⁹ Ivashkin et al., Hepatology International 2016, vol. 10, No. 1, Supp. SUPPL. 1, pp. S461. Abstract Number: LBO-38. Meeting Info: 25th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2016. Tokyo, Japan. 20 Feb 2016-24 Feb 2016³⁰ Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p. 159-161.³¹ Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 488-493.³² Squires et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2017, vol. 64(3), p. 425-430.³³ Hayshi et al., EBioMedicine. 2018, vol. 27, p. 187-199.³⁴ Nagasaka et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 45(1), p. 96-105.³⁵ Wang et al., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.³⁶ Narchi et al., Saudi J Gastroenterol. 2017, vol. 23(5), p. 303-305.³⁷ Alashkar et al., Blood 2015, vol. 126, No. 23. Meeting Info.: 57th Annual Meeting of the American-Society-of-Hematology. Orlando, FL, USA. December 05 -08, 2015. Amer Soc Hematol.³⁸ Ferreira et al., Pediatric Transplantation 2013, vol. 17, Supp. SUPPL. 1, pp. 99. Abstract Number: 239. Meeting Info: IPTA 7th Congress on Pediatric Transplantation. Warsaw, Poland. 13 Jul 2013-16 Jul 2013.³⁹ Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357.⁴⁰ Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2015, vol. 60(3), p. 368-374.⁴¹ van der Woerd et al., PLoS One. 2013, vol. 8(11): e80553.⁴² Copeland et al., J Gastroenterol Hepatol. 2013, vol. 28(3), p. 560-564.⁴³ Dröge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264.⁴⁴ Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124.⁴⁵ Jirsa et al., Hepatol Res. 2004, vol. 30(1), p. 1-3.⁴⁶ van der Woerd et al., Hepatology 2015, vol. 61(4), p. 1382-1391.

在一些實施例中，ATP8B1中之突變係選自L127P、G308V、T456M、D554N、F529del、I661T、E665X、R930X、R952X、R1014X及G1040R。 ABCB11之典型蛋白質序列(SEQ ID NO: 3) - Uniprot ID O95342

ABCB11之典型DNA序列(SEQ ID NO: 4)

表 4. 例示性 ABCB11 突變

胺基酸位置1 (例如M1V)9

胺基酸位置4 (例如S4X)A,64

胺基酸位置8 (例如R8X)88

胺基酸位置19 (例如G19R)56

胺基酸位置24 (例如K24X)35

胺基酸位置25 (例如S25X)5,14

胺基酸位置26 (例如Y26Ifs*7)38

胺基酸位置36 (例如D36D)27

胺基酸位置38 (例如K38Rfs*24)73

胺基酸位置43 (例如V43I)57

胺基酸位置49 (例如Q49X)73

胺基酸位置50 (例如L50S、L50W)57

胺基酸位置52 (例如R52W26 、R52R28 )

胺基酸位置56 (例如S56L)58

胺基酸位置58 (例如D58N)62

胺基酸位置62 (例如M62K)9

胺基酸位置66 (例如S66N)17

胺基酸位置68 (例如C68Y)41

胺基酸位置50 (例如L50S)5,7

胺基酸位置71 (例如L71H)73

胺基酸位置74 (例如I74R)71

胺基酸位置77 (例如P77A)73

胺基酸位置87 (例如T87R)67

胺基酸位置90 (例如F90F)7,27

胺基酸位置93 (例如Y93S13 、Y93X88 )

胺基酸位置96 (例如E96X)88

胺基酸位置97 (例如L97X)39

胺基酸位置101 (例如Q101Dfs*8)9

胺基酸位置107 (例如C107R)36

胺基酸位置112 (例如I112T)9

胺基酸位置114 (例如W114R)2,9

胺基酸位置123 (例如M123T)67

胺基酸位置127 (例如T127Hfs*6)5

胺基酸位置129 (例如C129Y)25

胺基酸位置130 (例如G130G)77

胺基酸位置134 (例如I134I)28

胺基酸位置135 (例如E135K7,13 、E135L17 )

胺基酸位置137 (例如E137K)7

胺基酸位置157 (例如Y157C)5

胺基酸位置161 (例如C161X)39

胺基酸位置164 (例如V164Gfs*730 、V164I85 )

胺基酸位置167 (例如A167S4 、A167V7 、A167T9,17 )

胺基酸位置181 (例如R181I)35

胺基酸位置182 (例如I182K)9

胺基酸位置183 (例如M183V8 、M183T9 )

胺基酸位置185 (例如M185I)73

胺基酸位置186 (例如E186G)2,7,22

胺基酸位置188 (例如G188W)73

胺基酸位置194 (例如S194P)7

胺基酸位置198 (例如L198P)7

胺基酸位置199 (例如N199Ifs*15X)88

胺基酸位置206 (例如I206V)28

胺基酸位置212 (例如A212T)73

胺基酸位置217 (例如M217R)88

胺基酸位置225 (例如T225P)57

胺基酸位置226 (例如S226L)9

胺基酸位置232 (例如L232Cfs*9)9

胺基酸位置233 (例如L233S)86

胺基酸位置238 (例如G238V)2,7

胺基酸位置242 (例如T242I)5,7

胺基酸位置245 (例如I245Tfs*26)57

胺基酸位置256 (例如A256G)9

胺基酸位置260 (例如G260D)7

胺基酸位置269 (例如Y269Y)27

胺基酸位置277 (例如A277E)77

胺基酸位置283 (例如E283D)73

胺基酸位置212及283 (例如A212T+E283D)73

胺基酸位置284 (例如V284L7,39 、V284A7 、V284D23 )

胺基酸位置297 (例如E297G1,2,5,7 、E297K7 )

胺基酸位置299 (例如R299K)28

胺基酸位置303 (例如R303K8 、R303M63 R303fsX32183 )

胺基酸位置304 (例如Y304X)26

胺基酸位置312 (例如Q312H)7

胺基酸位置313 (例如R313S)5,7

胺基酸位置314 (例如W314X)57

胺基酸位置318 (例如K318Rfs*26)29

胺基酸位置319 (例如G319G)7

胺基酸位置327 (例如G327E)5,7

胺基酸位置330 (例如W330X)24

胺基酸位置336 (例如C336S)2,7

胺基酸位置337 (例如Y337H)21,27

胺基酸位置342 (例如W342G)50

胺基酸位置354 (例如R354X)9

胺基酸位置361 (例如Q361X57 、Q361R74 )

胺基酸位置366 (例如V366V28 、V366D57 )

胺基酸位置368 (例如V368Rfs*27)5

胺基酸位置374 (例如G374S)3

胺基酸位置380 (例如L380Wfs*18)5

胺基酸位置382 (例如A382G)88

Δ胺基酸位置382-3885

Δ胺基酸位置383-38957

胺基酸位置387 (例如R387H)9

胺基酸位置390 (例如A390P)5,7

胺基酸位置395 (例如E395E)28

胺基酸位置404 (例如D404G)9

胺基酸位置410 (例如G410D)5,7

胺基酸位置413 (例如L413W)5,7

胺基酸位置415 (例如R415X)42

胺基酸位置416 (例如I416I)27

胺基酸位置420 (例如I420T)9

胺基酸位置423 (例如H423R)13

胺基酸位置432 (例如R432T)1,2,7

胺基酸位置436 (例如K436N)40

胺基酸位置440 (例如D440E)88

胺基酸位置444 (例如V444A)2

胺基酸位置454 (例如V454X)49

胺基酸位置455 (例如G455E)9

胺基酸位置457 (例如S457Vfs*23)88

胺基酸位置461 (例如K461E)2,7

胺基酸位置462 (例如S462R)88

胺基酸位置463 (例如T463I)5,7

胺基酸位置466 (例如Q466K)5,7

胺基酸位置470 (例如R470Q5,7 、R470X9 )

胺基酸位置471 (例如Y472X)5

胺基酸位置472 (例如Y472C5,27 、Y472X14 )

胺基酸位置473 (例如D473Q35 、D473V88 )

胺基酸位置475 (例如C475X)29

胺基酸位置481 (例如V481E)5,7

胺基酸位置482 (例如D482G)2,5,7

胺基酸位置484 (例如H484Rfs*5)9

胺基酸位置487 (例如R487H2 、R487P5 )

胺基酸位置490 (例如N490D)5,7

胺基酸位置493 (例如W493X)8

胺基酸位置496 (例如D496V)88

胺基酸位置498 (例如I498T)2,7

胺基酸位置499 (例如G499E)73

胺基酸位置501 (例如V501G)68

胺基酸位置504 (例如E504K)79

胺基酸位置510 (例如T510T)7

胺基酸位置512 (例如I512T)5,7

胺基酸位置515 (例如N515T5,7 、N515D64 )

胺基酸位置516 (例如I516M)17

胺基酸位置517 (例如R517H)5,7

胺基酸位置520 (例如R520X)5

胺基酸位置523 (例如A523G)13

胺基酸位置528 (例如I528Sfs*215 、I528X9 、I528T73 )

胺基酸位置535 (例如A535A7 、A535X89 )

胺基酸位置540 (例如F540L)46

胺基酸位置541 (例如I541L5,7 、I541T5,17 )

胺基酸位置546 (例如Q546K39 、Q546H73 )

胺基酸位置548 (例如F548Y)5,7

胺基酸位置549 (例如D549V)9

胺基酸位置554 (例如E554K)21

胺基酸位置556 (例如G556R)67

胺基酸位置558 (例如Q558H)23

胺基酸位置559 (例如M559T)57

胺基酸位置562 (例如G562D5,7 、G562S73 )

胺基酸位置570 (例如A570T2,5,7 、A570V26 )

胺基酸位置575 (例如R575X2,5 、R575Q21 )

胺基酸位置580 (例如L580P)57

胺基酸位置586 (例如T586I)7

胺基酸位置587 (例如S587X)73

胺基酸位置588 (例如A588V5,7 、A588P73 )

胺基酸位置591 (例如N591S)2,7

胺基酸位置593 (例如S593R)2,7

胺基酸位置597 (例如V597V9 、V597L13 )

胺基酸位置603 (例如K603K)55

胺基酸位置609 (例如H609Hfs*46)26

胺基酸位置610 (例如I610Gfs*459 、I610T57 )9

胺基酸位置615 (例如H615R)26

胺基酸位置616 (例如R616G28 、R616H73 )

胺基酸位置619 (例如T619A)28

胺基酸位置623 (例如A623A)28

胺基酸位置625 (例如T625Nfs*5)26

胺基酸位置627 (例如I627T)7

胺基酸位置628 (例如G628Wfs*3)70

胺基酸位置636 (例如E636G)2

胺基酸位置648 (例如G648Vfs*65 、G648V50 )

胺基酸位置655 (例如T655I)7

胺基酸位置669 (例如I669V)26

胺基酸位置676 (例如D676Y)11

胺基酸位置677 (例如M677V)7,13

胺基酸位置679 (例如A679V)58

胺基酸位置685 (例如G685W)60

胺基酸位置696 (例如R696W27 、R696Q58 )

胺基酸位置698 (例如R698H7,9 、R698K61 、R698C88 )

胺基酸位置699 (例如S699P)9

胺基酸位置701 (例如S701P)58

胺基酸位置702 (例如Q702X)89

胺基酸位置709 (例如E709K)7

胺基酸位置710 (例如P710P)7

胺基酸位置712 (例如L712L)28

胺基酸位置721 (例如Y721C)88

胺基酸位置729 (例如D724N)39

胺基酸位置731 (例如P731S)23

胺基酸位置740 (例如P740Qfs*6)73

胺基酸位置758 (例如G758R)5

胺基酸位置766 (例如G766R)5,24

胺基酸位置772 (例如Y772X)5

胺基酸位置804 (例如A804A)7

胺基酸位置806 (例如G806D44 、G806G55 )

胺基酸位置809 (例如S809F)81

胺基酸位置817 (例如G817G)88

胺基酸位置818 (例如Y818F)7

胺基酸位置824 (例如G824E)42

胺基酸位置825 (例如G825G)73

胺基酸位置830 (例如R830Gfs*28)73

胺基酸位置832 (例如R832C7,26 、R832H41 )

胺基酸位置842 (例如D842G)2

胺基酸位置848 (例如D848N)73

胺基酸位置855 (例如G855R)11

胺基酸位置859 (例如T859R)5,7

胺基酸位置865 (例如A865V)27

胺基酸位置866 (例如S866A)57

胺基酸位置868 (例如V868D)73

胺基酸位置869 (例如Q869P)73

胺基酸位置875 (例如Q875X)73

胺基酸位置877 (例如G877R)56

胺基酸位置879 (例如I879R)88

胺基酸位置893 (例如A893V)57

胺基酸位置901 (例如S901R17 、S901I73 )

胺基酸位置903 (例如V903G)57

Δ胺基酸位置91912

胺基酸位置923 (例如T923P)2,7

胺基酸位置926 (例如A926P)2,7

胺基酸位置928 (例如R928X15 、R928Q40 )

胺基酸位置930 (例如K930X5 、K930Efs*795,10 、K930Efs*4926 )

胺基酸位置931 (例如Q931P)27

胺基酸位置945 (例如S945N)57

胺基酸位置948 (例如R948C)5,7,26

胺基酸位置958 (例如R958Q)28

胺基酸位置969 (例如K969K)88

Δ胺基酸位置969-9725

胺基酸位置973 (例如T973I)57

胺基酸位置976 (例如Q976R58 、Q976X88 )

胺基酸位置979 (例如N979D)5,7

胺基酸位置981 (例如Y981Y)28

胺基酸位置982 (例如G982R)2,5,7

胺基酸位置444及982 (例如V444A+G982R)38

胺基酸位置995 (例如A995A)28

胺基酸位置1001 (例如R1001R)9

胺基酸位置1003 (例如G1003R)24

胺基酸位置1004 (例如G1004D)2,7

胺基酸位置1027 (例如S1027R)26

胺基酸位置1028 (例如A1028A7,10,88 、A1028E88 )

胺基酸位置1029 (例如T1029K)5

胺基酸位置1032 (例如G1032R)12

胺基酸位置1041 (例如Y1041X)9

胺基酸位置1044 (例如A1044P)88

胺基酸位置1050 (例如R1050C)2,7,57

胺基酸位置1053 (例如Q1053X)57

胺基酸位置1055 (例如L1055P)36

胺基酸位置1057 (例如R1057X2 、R1057Q58 )

胺基酸位置1058 (例如Q1058Hfs*389 、Q1058fs*3817 、Q1058X73 )

胺基酸位置1061 (例如I1061Vfs*34)9

胺基酸位置1083 (例如C1083Y)47

胺基酸位置1086 (例如T1086T)28

胺基酸位置1090 (例如R1090X)2,5

胺基酸位置1099 (例如L1099Lfs*38)26

胺基酸位置1100 (例如S1100Qfs*38)13

胺基酸位置1110 (例如A1110E)5,7

胺基酸位置1112 (例如V1112F)70

胺基酸位置1116 (例如G1116R7 、G1116F9,17 、G1116E36 )

胺基酸位置1120 (例如S1120N)88

胺基酸位置1128 (例如R1128H2,7 、R1128C5,7,13 )

胺基酸位置1131 (例如D1131V)27

胺基酸位置1144 (例如S1144R)7

胺基酸位置1147 (例如V1147X)5

胺基酸位置1153 (例如R1153C2,5,7 、R1153H5 )

胺基酸位置1154 (例如S1154P)5,7

胺基酸位置1162 (例如E1162X)39

Δ胺基酸位置116588

胺基酸位置1164 (例如V1164Gfs*7)

胺基酸位置1173 (例如N1173D)57

胺基酸位置1175 (例如K1175T)58

胺基酸位置1186 (例如E1186K)7

胺基酸位置1192 (例如A1192Efs*50)9

胺基酸位置1196 (例如Q1196X)88

胺基酸位置1197 (例如L1197G)7

胺基酸位置1198 (例如H1198R)27

胺基酸位置1204 (例如L1204P)88

胺基酸位置1208 (例如Y1208C)73

胺基酸位置1210 (例如T1210P5,7 、T1210F57 )

胺基酸位置1211 (例如N1211D)7

胺基酸位置1212 (例如V1212F)36

胺基酸位置1215 (例如Q1215X)5

胺基酸位置1221 (例如R1221K)53

胺基酸位置1223 (例如E1223D)7

胺基酸位置1226 (例如R1226P)73

胺基酸位置1228 (例如A1228V)7

胺基酸位置1231 (例如R1231W5,7 、R1231Q5,7 )

胺基酸位置1232 (例如A1232D)17

胺基酸位置1235 (例如R1235X)5,12

胺基酸位置1242 (例如L1242I)5,7

胺基酸位置1243 (例如D1243G)67

胺基酸位置1249 (例如L1249X)73

胺基酸位置1256 (例如T1256fs*1296)83

胺基酸位置1268 (例如R1268Q)2,7

胺基酸位置1276 (例如R1276H)30

胺基酸位置1283 (例如A1283A28 、A1283V88 )

胺基酸位置1292 (例如G1292V)73

胺基酸位置1298 (例如G1298R)5

胺基酸位置1302 (例如E1302X)5

胺基酸位置1311 (例如Y1311X)57

胺基酸位置1316 (例如T1316Lfs*64)15

胺基酸位置1321 (例如S1321N)57

內含子4 ((+3)A＞C)1

IVS4-74A＞T89

剪接位點突變3'內含子5 c.3901G＞A5

剪接位點突變5;內含子7 c.6111G＞A5

剪接位點突變IVS7+1G＞A14

IVS7+5G＞A40

IVS8+1G＞C76

剪接位點突變5'內含子9 c.9081delG5

剪接位點突變5'內含子9 c.9081G＞T5

剪接位點突變5'內含子9 c.9081G＞A5

剪接位點突變IVS9+1G＞T14

剪接位點突變3'內含子13 c.143513_1435-8del5

剪接位點突變IVS13del-13^-814

剪接位點突變3'內含子16 c.20128T＞G5

剪接位點突變IVS16-8T＞G14

剪接位點突變5'內含子18 c.21781G＞T5

剪接位點突變5'內含子18 c.21781G＞A5

剪接位點突變5'內含子18 c.21781G＞C5

剪接位點突變3'內含子18 c.21792A＞G5

剪接位點突變IVS18+1G＞A14

剪接位點突變5'內含子19 c.2343+1G＞T5

剪接位點突變5'內含子19 c.2343+2T＞C5

剪接位點突變IVS19+2T＞C14

剪接位點突變IVS19+1G＞A22

剪接位點突變3'內含子21 c.26112A＞T5

IVS22+3A＞G89

IVS 23-8 G-A36

IVS24+5G＞A51

剪接位點突變5'內含子24 c.32131delG5

IVS35-6C＞G89

推定的剪接突變1198-1G＞C17

推定的剪接突變1810-3C＞G17

推定的剪接突變2178+1G＞A17

推定的剪接突變2344-1G＞T17

推定的剪接突變c.2611-2A＞T39

推定的剪接突變3213+1_3213+2delinsA17

c.-24C＞A44,78

c.76 13 G＞T9

c.77-19T＞A52

c.90_93delGAAA18

c.124G＞A69

c.150 +3 A＞C10

174C＞T54

c.245T＞C87

c.249_250insT18

270T＞C54

402C＞T54

585G＞C54

c.611+1G＞A70

c.611+4A＞G36

c.612-15_-6del10bp55

c.625A＞C31

c.627+5G＞T31

c.625A＞C/ c.627+5G＞T31

696G＞T54

c. 784+1G＞C49

807T＞C54

c.886C＞T31

c.890A＞G59

c.908+1G＞A57

c.908+5G＞A55

c.908delG59

c.909-15A＞G66

957A＞G54

c.1084-2A＞G57

1145 1bp缺失90

1281C＞T54,57

c.1309-165C ＞ T19

c.1434 + 174G ＞ A19

c.1434 + 70C ＞ T19

c.1530C＞A57

c.1587-1589delCTT31

c.1621A＞C33,59

c.1638+32T＞C66

c.1638+80C＞T66

1671C＞T54

1791G＞T54

1939delA14

c.2075+3A＞G53

c.2081T＞A31

c.2093G＞A65

2098delA16

c.2138-8T＞G67

2142A＞G54

c.2178+1G＞T36,39

c.2179-17C＞A66

c.2344-157T＞G66

c.2344-17T＞C66

c.2417G＞A78

c.2541delG87

c.2620C＞T32,33

c.2815-8A＞G55

c.3003A＞G37

c.3084A＞G48,54

c.3213 +4 A＞G9,37

c.3213 +5 G＞A9

c.3268C＞T75

3285A＞G54

c.3382C＞T75

3435A＞G54

c.3491delT72

c.3589C＞T57

c.3765(+1 +5)del542

c.3766-34A＞G66

c.3767-3768insC6

c.3770delA67

c.3826C＞T72

c.3846C＞T57

c.3929delG67

c.*236A＞G66

1145delC8

Ex13_Ex17del82

表 5 . 與 PFIC - 2 相關之所選 ABCB11 突變

胺基酸位置1 (例如M1V)9

胺基酸位置4 (例如S4X)64

胺基酸位置19 (例如G19R)56

胺基酸位置25 (例如S25X)14

胺基酸位置26 (例如Y26Ifs*7)38

胺基酸位置50 (例如L50S)7,57

胺基酸位置52 (例如R52W)26

胺基酸位置58 (例如D58N)62

胺基酸位置62 (例如M62K)9

胺基酸位置66 (例如S66N)17

胺基酸位置68 (例如C68Y)41

胺基酸位置93 (例如Y93S)13

胺基酸位置101 (例如Q101Dfs*8)9

胺基酸位置107 (例如C107R)36

胺基酸位置112 (例如I112T)9

胺基酸位置114 (例如W114R)2,9

胺基酸位置129 (例如C129Y)25

胺基酸位置135 (例如E135K13 、E135L17 )

胺基酸位置167 (例如A167V7 、A167T9,17 )

胺基酸位置182 (例如I182K)9

胺基酸位置183 (例如M183V8 、M183T9 )

胺基酸位置225 (例如T225P)57

胺基酸位置226 (例如S226L)9

胺基酸位置232 (例如L232Cfs*9)9

胺基酸位置233 (例如L233S)86

胺基酸位置238 (例如G238V)2,7

胺基酸位置242 (例如T242I)7

胺基酸位置245 (例如I245Tfs*26)57

胺基酸位置256 (例如A256G)9

胺基酸位置260 (例如G260D)57

胺基酸位置284 (例如V284L)7

胺基酸位置297 (例如E297G)2,7

胺基酸位置303 (例如R303K8 、R303M63 、R303fsX32183 )

胺基酸位置304 (例如Y304X)26

胺基酸位置312 (例如Q312H)7

胺基酸位置313 (例如R313S)7

胺基酸位置314 (例如W314X)57

胺基酸位置318 (例如K318Rfs*26)29

胺基酸位置327 (例如G327E)7

胺基酸位置330 (例如V330X)24

胺基酸位置336 (例如C336S)2,7

胺基酸位置337 (例如Y337H)21

胺基酸位置342 (例如W342G)50

胺基酸位置354 (例如R354X)9

胺基酸位置361 (例如Q361X)57

胺基酸位置366 (例如V366D)57

胺基酸位置386 (例如G386X)34

Δ胺基酸位置383-38957

胺基酸位置387 (例如R387H)9

胺基酸位置390 (例如A390P)7

胺基酸位置410 (例如G410D)7

胺基酸位置413 (例如L413W)7

胺基酸位置415 (例如R415X)42

胺基酸位置420 (例如I420T)9

胺基酸位置454 (例如V454X)49

胺基酸位置455 (例如G455E)9

胺基酸位置461 (例如K461E)2,7

胺基酸位置463 (例如T463I)7

胺基酸位置466 (例如Q466K)7

胺基酸位置470 (例如R470Q7 、R470X9 )

胺基酸位置472 (例如Y472X14 、Y472C27 )

胺基酸位置475 (例如C475X)29

胺基酸位置481 (例如V481E)7

胺基酸位置482 (例如D482G)2,7

胺基酸位置484 (例如H484Rfs*5)9

胺基酸位置487 (例如R487H2 、R487P84 )

胺基酸位置490 (例如N490D)7

胺基酸位置493 (例如W493X)8

胺基酸位置498 (例如I498T)7

胺基酸位置501 (例如V501G)68

胺基酸位置512 (例如I512T)7

胺基酸位置515 (例如N515T7 、N515D64 )

胺基酸位置516 (例如I516M)17

胺基酸位置517 (例如R517H)7

胺基酸位置520 (例如R520X)57

胺基酸位置523 (例如A523G)13

胺基酸位置528 (例如I528X)9

胺基酸位置540 (例如F540L)46

胺基酸位置541 (例如I541L7 、I541T17 )

胺基酸位置548 (例如F548Y)7

胺基酸位置549 (例如D549V)9

胺基酸位置554 (例如E554K)21

胺基酸位置559 (例如M559T)57

胺基酸位置562 (例如G562D)7

胺基酸位置570 (例如A570T7 、A570V26 )

胺基酸位置575 (例如R575X2 、R575Q21 )

胺基酸位置588 (例如A588V)7

胺基酸位置591 (例如N591S)9,17

胺基酸位置593 (例如S593R)2,7

胺基酸位置597 (例如V597V9 、V597L13 )

胺基酸位置591及597 (例如N591S+V597V)9

胺基酸位置603 (例如K603K)55

胺基酸位置609 (例如H609Hfs*46)26

胺基酸位置610 (例如I610Gfs*45)9

胺基酸位置615 (例如H615R)26

胺基酸位置625 (例如T625Nfs*5)26

胺基酸位置627 (例如I627T)7

胺基酸位置636 (例如E636G)2

胺基酸位置669 (例如I669V)26

胺基酸位置698 (例如R609H)9

胺基酸位置112及698 (例如I112T+R698H)9

胺基酸位置699 (例如S699P)9

胺基酸位置766 (例如G766R)24

胺基酸位置806 (例如G806G)55

胺基酸位置824 (例如G824E)42

胺基酸位置832 (例如R832C7,26 、R832H41 )

胺基酸位置842 (例如D842G)2

胺基酸位置859 (例如T859R)7

胺基酸位置865 (例如A865V)45

胺基酸位置877 (例如G877R)56

胺基酸位置893 (例如A893V)57

胺基酸位置901 (例如S901R)17

胺基酸位置903 (例如V903G)57

Δ胺基酸位置91912

胺基酸位置928 (例如R928X)15,21

胺基酸位置930 (例如K930Efs*7910 、K930Efs*4926 )

胺基酸位置948 (例如R948C)7,26

胺基酸位置979 (例如N979D)7

胺基酸位置982 (例如G982R)2,7

胺基酸位置444及982 (例如V444A+G982R)38

胺基酸位置1001 (例如R1001R)9

胺基酸位置1003 (例如G1003R)24

胺基酸位置1004 (例如G1004D)2,7

胺基酸位置1027 (例如S1027R)26

胺基酸位置1028 (例如A1028A)10

胺基酸位置1032 (例如G1032R)12

胺基酸位置1041 (例如Y1041X)9

胺基酸位置1050 (例如R1050C)57

胺基酸位置1053 (例如Q1053X)57

胺基酸位置1055 (例如L1055P)36

胺基酸位置1057 (例如R1057X)2

胺基酸位置1058 (例如Q1058Hfs*389 、Q1058fs*3817 )

胺基酸位置1061 (例如I1061Vfs*34)9

胺基酸位置1083 (例如C1083Y)47

胺基酸位置1090 (例如R1090X)2

胺基酸位置1099 (例如L1099Lfs*38)26

胺基酸位置1100 (例如S1100Qfs*38)13

胺基酸位置1110 (例如A1110E)7

胺基酸位置1116 (例如G1116R7 、G1116F9,17 、G1116E36 )

胺基酸位置1128 (例如R1128C)7,13

胺基酸位置1131 (例如D1131V)27

胺基酸位置1144 (例如S1144R)7

胺基酸位置1153 (例如R1153C2,7 、R1153H7,26 )

胺基酸位置1154 (例如S1154P)7

胺基酸位置1173 (例如N1173D)57

胺基酸位置1192 (例如A1192Efs*50)9

胺基酸位置1198 (例如H1198R)27

胺基酸位置1210 (例如T1210P7 、T1210F57 )

胺基酸位置1211 (例如N1211D)7

胺基酸位置1212 (例如V1212F)36

胺基酸位置1231 (例如R1231W7 、R1223Q7 )

胺基酸位置1232 (例如A1232D)17

胺基酸位置1235 (例如R1235X)12

胺基酸位置1242 (例如L1242I)7

胺基酸位置1256 (例如T1256fs*1296)83

胺基酸位置1268 (例如R1268Q)2,7

胺基酸位置1302 (例如E1302X)57

胺基酸位置1311 (例如Y1311X)57

胺基酸位置1316 (例如T1316Lfs*64)15

內含子4 ((+3)A＞C)1

剪接位點突變IVS7+1G＞A14

IVS8+1G＞C76

剪接位點突變IVS9+1G＞T14

剪接位點突變IVS13del-13^-814

剪接位點突變IVS16-8T＞G14

剪接位點突變IVS18+1G＞A14

剪接位點突變IVS19+2T＞C14

IVS 23-8 G-A36

IVS24+5G＞A51

推定的剪接突變1198-1G＞C17

推定的剪接突變1810-3C＞G17

推定的剪接突變2178+1G＞A17

推定的剪接突變2344-1G＞T17

推定的剪接突變3213+1_3213+2delinsA17

c.-24C＞A78

c.76 13 G＞T9

c.77-19T＞A52

c.90_93delGAAA18

c.124G＞A69

c.150 +3 A＞C10

c.249_250insT18

c.611+1G＞A84

c.611+4A＞G36

c.612-15_-6del10bp55

c.625A＞C31

c.627+5G＞T31

c.625A＞C/ c.627+5G＞T31

c.886C＞T31

c.890A＞G59

c.908+1G＞A57

c.908+5G＞A55

c.908delG59

1273 1bp缺失91

c.1084-2A＞G57

c.1445A＞G59

c.1587-1589delCTT31

c.1621A＞C59

1939delA14

c.2081T＞A31

2098delA16

c.2343+1 G＞T80

c.2178+1G＞T36

c.2417G＞A78

c.2620C＞T32

c.2815-8A＞G55

c.3003A＞G37

c.3213 +4 A＞G9,37

c.3213 +5 G＞A9

c.3268C＞T75

c.3382C＞T75

c.3765(+1 +5)del542

c.3767-3768insC6

1145delC8

Ex13_Ex17del82

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在一些實施例中，ABCB11中之突變係選自A167T、G238V、V284L、E297G、R470Q、R470X、D482G、R487H、A570T、N591S、A865V、G982R、R1153C及R1268Q。

提供治療個體之PFIC(例如PFIC-1及PFIC-2)的方法，其包括對自個體獲得之樣品進行分析以確定個體是否具有與PFIC相關之突變(例如ATP8B1、ABCB11、ABCB4、TJP2、NR1H4或Myo5b突變)，及向確定具有與PFIC相關之突變的個體投與(例如特異性或選擇性投與)治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，突變為ATP8B1或ABCB11突變。舉例而言，如表2至表5中之任一者所提供之突變。在一些實施例中，ATP8B1中之突變係選自L127P、G308V、T456M、D554N、F529del、I661T、E665X、R930X、R952X、R1014X及G1040R。在一些實施例中，ABCB11中之突變係選自A167T、G238V、V284L、E297G、R470Q、R470X、D482G、R487H、A570T、N591S、A865V、G982R、R1153C及R1268Q。

亦提供治療有需要之個體之PFIC(例如PFIC-1及PFIC-2)的方法，該方法包含：(a)偵測個體之與PFIC相關之突變(例如ATP8B1、ABCB11、ABCB4、TJP2、NR1H4或Myo5b突變)；及(b)向個體投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，用於治療PFIC之方法可包括向具有與PFIC相關之突變(例如ATP8B1、ABCB11、ABCB4、TJP2、NR1H4或Myo5b突變)的個體投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，突變為ATP8B1或ABCB11突變。舉例而言，如表2至表5中之任一者所提供之突變。在一些實施例中，ATP8B1中之突變係選自L127P、G308V、T456M、D554N、F529del、I661T、E665X、R930X、R952X、R1014X及G1040R。在一些實施例中，ABCB11中之突變係選自A167T、G238V、V284L、E297G、R470Q、R470X、D482G、R487H、A570T、N591S、A865V、G982R、R1153C及R1268Q。

在一些實施例中，經由使用任何技術公認之測試，包括下一代定序(NGS)，在個體體內或來自個體之活組織檢查樣品中確定個體具有與PFIC相關之突變。在一些實施例中，使用管理機構核准(例如FDA核准)之用於鑑別個體或來自個體之活組織檢查樣品中與PFIC相關之突變的測試或分析，或藉由進行本文所述分析之非限制性實例中之任一者來確定個體具有與PFIC相關之突變。診斷PFIC之額外方法描述於Gunaydin, M.等人, Hepat Med. 2018, 第10卷, 第95-104頁中，其以全文引用的方式併入本文中。

在一些實施例中，PFIC (例如PFIC-1或PFIC-2)之治療降低個體之血清膽酸含量。在一些實施例中，血清膽酸含量係藉由例如ELISA酶分析或量測總膽酸之分析來測定，如Danese等人, PLoS One. 2017, 第12(6)卷: e0179200中所述，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，血清膽酸含量可降低例如在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前的血清膽酸含量的10%至40%、20%至50%、30%至60%、40%至70%、50%至80%或大於90%。在一些實施例中，PFIC之治療包括搔癢病之治療。

由於LBAT在肝細胞上表現，故LBAT及雙重ASBT/LBAT抑制劑物質需要在血液中具有至少一定生物可用性及游離分率。因為LBAT抑制劑化合物僅需要自腸道存活至肝臟，所以預期此類化合物之相對低的全身暴露將為足夠的，從而使身體其餘部分中任何副作用之潛在風險降至最低。預期LBAT及ASBT之抑制將至少在降低肝內膽酸濃度方面具有累加效應。亦預期雙重ASBT/LBAT抑制劑可能夠降低膽酸含量而不誘發腹瀉，有時亦在ASBT抑制劑下觀測到。

預期具有高LBAT抑制效力及足夠生物可用性之化合物特別適用於治療肝炎。預期具有雙重ASBT/LBAT抑制效力及足夠生物可用性之化合物特別適用於治療非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。

NASH為一種常見且嚴重的慢性肝病，類似於酒精性肝病，但發生在少喝酒或不喝酒的人中。在NASH患者中，肝臟中之脂肪堆積，稱為非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或脂肪變性，及諸如高LDL膽固醇及胰島素抗性之其他因素誘發肝臟中之慢性發炎，且可能導致組織進行性瘢痕形成，稱為纖維化及肝硬化，最終導致肝衰竭及死亡。已發現NASH患者在空腹條件(NASH增加2.2至2.4倍)及所有餐後時間點(NASH增加1.7至2.2倍)下的總血清膽酸濃度顯著高於健康個體。此等為牛磺酸結合及甘胺酸結合之初級及次級膽酸增加所驅動的。NASH患者在其空腹及餐後膽酸概況中表現出較大的可變性。此等結果表明，NASH患者在空腹及餐後更高地暴露於膽酸，包括更多疏水性及細胞毒性次級物種。增加的膽酸暴露可能涉及肝損傷以及NAFLD及NASH之發病機制(Ferslew等人, Dig Dis Sci. 2015, 第60卷, 第3318-3328頁)。因此，ASBT及/或LBAT抑制可能有益於NASH之治療。

NAFLD之特徵在於肝臟脂肪變性而沒有肝臟脂肪變性之繼發性原因，包括過量飲酒、其他已知肝病或長期使用致脂藥物(Chalasani等人, Hepatology 2018, 第67(1)卷, 第328-357頁)。NAFLD可分類為非酒精性脂肪肝(NAFL)及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。根據Chalasani等人，NAFL定義為存在≥5%肝臟脂肪變性而沒有呈肝細胞膨脹形式之肝細胞損傷的證據。NASH定義為存在≥5%肝臟脂肪變性及肝細胞損傷(例如膨脹)之發炎，伴有或不伴有任何肝纖維化。NASH亦通常與肝臟發炎及肝纖維化相關，其可進展為肝硬化、末期肝病及肝細胞癌。雖然肝纖維化並非總是存在於NASH中，但纖維化(當存在時)之嚴重程度可能與長期結果有關。

存在許多方法用於評定及評估個體是否患有NAFLD，若如此，則評定及評估疾病之嚴重程度，包括區分NAFLD為NAFL或NASH。在一些實施例中，可使用NAS評定NAFLD之嚴重程度。在一些實施例中，可使用NAS評定NAFLD之治療。在一些實施例中，可如Kleiner等人,Hepatology . 2005, 41(6):1313-1321中所述確定NAS，其以全文引用之方式併入本文中。關於改編自Kleiner之簡化NAS方案，參見例如表6。表 6 . 具有纖維化 分期之 NAFLD 活動評分 ( NAS ) 的實例

特徵	程度	評分
脂肪變性	＜5%	0
5-33%	1
＞33-66%	2
＞66%	3
小葉發炎	無病灶	0
＜2個病灶/200x	1
2-4個病灶/200x	2
＞4個病灶/200x	3
膨脹變性	無	0
很少	1
許多細胞/顯著膨脹	2
纖維化	無	0
竇周或門靜脈周	1
竇周及門靜脈/門靜脈周	2
橋接纖維化	3
肝硬化	4

在一些實施例中，NAS係非侵入性地確定的，例如，如美國申請案公開號2018/0140219中所述，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前，確定來自個體之樣品的NAS。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之時間段期間或之後確定NAS。在一些實施例中，與投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前相比，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之時間段期間或之後的NAS評分較低指示NAFLD (例如NASH)之治療。舉例而言，NAS降低1、2、3、4、5、6或7指示NAFLD (例如NASH)之治療。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽後，NAS為7或更小。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間，NAS為5或更小、4或更小、3或更小或2或更小。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間，NAS為7或更小。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間，NAS為5或更小、4或更小、3或更小或2或更小。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段之後，NAS為7或更小。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段之後，NAS為5或更小、4或更小、3或更小或2或更小。

評定及評估個體之NASH的其他方法包括確定肝臟脂肪變性(例如肝臟中之脂肪堆積)；肝臟發炎；指示肝損傷、肝臟發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的生物標誌物(例如血清標誌物及組)中之一或多者。NASH之生理指標的其他實例可包括肝臟形態、肝臟硬度及個體肝臟之大小或重量。

在一些實施例中，個體之NASH係藉由肝臟脂肪之堆積及指示肝損傷之生物標誌物的偵測來證明。舉例而言，升高之血清鐵蛋白及低效價之血清自體抗體可為NASH之常見特性。

在一些實施例中，評定NASH之方法包括磁共振成像、藉由光譜分析或藉由質子密度脂肪分率(MRI-PDFF)來量化脂肪變性、瞬時彈性成像(FIBROSCAN®)、肝靜脈壓力梯度(HPVG)、使用MRE之肝臟硬度量測診斷顯著肝纖維化及/或肝硬化，以及評定肝臟活組織檢查之組織學特徵。在一些實施例中，磁共振成像用於偵測脂肪變性肝炎(NASH-MRI)、肝纖維化(Fibro-MRI)及脂肪變性中之一或多者。參見例如美國申請案公開號2016/146715及2005/0215882，其各自以全文引用的方式併入本文中。

在一些實施例中，NASH之治療可包括在投與一或多次劑量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽後，個體之與NASH相關之一或多個症狀減少；肝臟脂肪變性之量減少；NAS降低；肝臟發炎減少；指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的生物標誌物含量降低；及纖維化及/或肝硬化減少、纖維化及/或肝硬化沒有進一步進展或纖維化及/或肝硬化進展減緩。

在一些實施例中，NASH之治療包含個體之與NASH相關之一或多個症狀減少。例示性症狀可包括肝臟擴大、疲勞、右上腹疼痛、腹部腫脹、皮膚表面正下方血管擴大、男性乳房增大、脾臟腫大、紅掌、黃疸及搔癢病中之一或多者。在一些實施例中，個體無症狀。在一些實施例中，個體之總體重不增加。在一些實施例中，個體之總體重降低。在一些實施例中，個體之身體質量指數(BMI)不增加。在一些實施例中，個體之身體質量指數(BMI)降低。在一些實施例中，個體之腰臀(WTH)比不增加。在一些實施例中，個體之腰臀(WTH)比降低。

在一些實施例中，NASH之治療可藉由量測肝臟脂肪變性來評定。在一些實施例中，NASH之治療包含在投與如本文所述之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽後肝臟脂肪變性減少。在一些實施例中，肝臟脂肪變性係藉由選自由以下組成之群的一或多種方法來確定：超音波檢查術、電腦斷層掃描(CT)、磁共振成像、磁共振光譜分析(MRS)、磁共振彈性成像(MRE)、瞬時彈性成像(TE) (例如FIBROSCAN®)、量測肝臟大小或重量或藉由肝臟活組織檢查(參見例如Di Lascio等人, Ultrasound Med Biol. 2018, 第44(8)卷, 第1585-1596頁；Lv等人, J Clin Transl Hepatol. 2018, 第6(2)卷, 第217-221頁；Reeder等人, J Magn Reson Imaging. 2011, 第34(4)卷, spcone；及de Lédinghen V等人, J Gastroenterol Hepatol. 2016, 第31(4)卷, 第848-855頁，其各自以全文引用的方式併入本文中)。經診斷患有NASH之個體可具有大於約5%肝臟脂肪變性，例如大於約5%至約25%、約25%至約45%、約45%至約65%或大於約65%肝臟脂肪變性。在一些實施例中，具有大於約5%至約33%肝臟脂肪變性之個體具有1期肝臟脂肪變性，具有約33%至約66%肝臟脂肪變性之個體具有2期肝臟脂肪變性，且具有大於約66%肝臟脂肪變性之個體具有3期肝臟脂肪變性。

在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前測定肝臟脂肪變性之量。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間或之後測定肝臟脂肪變性之量。在一些實施例中，與在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前相比，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間或之後，肝臟脂肪變性之量減少指示NASH之治療。舉例而言，肝臟脂肪變性之量減少約1%至約50%、約25%至約75%或約50%至約100%指示NASH之治療。在一些實施例中，肝臟脂肪變性之量減少約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%或約95%指示NASH之治療。

在一些實施例中，肝臟發炎之存在係藉由選自由以下組成之群的一或多種方法來確定：指示肝臟發炎之生物標誌物及來自個體之肝臟活組織檢查樣品。在一些實施例中，肝臟發炎之嚴重程度係由來自個體之肝臟活組織檢查樣品來確定。舉例而言，肝臟活組織檢查樣品中之肝臟發炎可如Kleiner等人, Hepatology 2005, 第41(6)卷, 第1313-1321頁及Brunt等人, Am J Gastroenterol 1999, 第94卷, 第2467-2474頁中所述來評定，其各自特此以全文引用之方式併入。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前確定肝臟發炎之嚴重程度。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間或之後確定肝臟發炎之嚴重程度。在一些實施例中，與在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前相比，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間或之後，肝臟發炎之嚴重程度降低指示NASH之治療。舉例而言，肝臟發炎之嚴重程度降低約1%至約50%、約25%至約75%或約50%至約100%指示NASH之治療。在一些實施例中，肝臟發炎之嚴重程度降低約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%或約95%指示NASH之治療。

在一些實施例中，NASH之治療包含纖維化及/或肝硬化之治療，例如纖維化之嚴重程度降低、纖維化及/或肝硬化沒有進一步進展或纖維化及/或肝硬化之進展減緩。在一些實施例中，纖維化及/或肝硬化之存在係藉由選自由以下組成之群的一或多種方法來確定：瞬時彈性成像(例如FIBROSCAN®)、肝臟纖維化之非侵入性標誌物及肝臟活組織檢查之組織學特徵。在一些實施例中，纖維化之嚴重程度(例如分期)係藉由選自由以下組成之群的一或多種方法來確定：瞬時彈性成像(例如FIBROSCAN®)、纖維化評分系統、肝臟纖維化之生物標誌物(例如非侵入性生物標誌物)及肝靜脈壓力梯度(HVPG)。纖維化評分系統之非限制性實例包括NAFLD纖維化評分系統(參見例如Angulo等人, Hepatology 2007, 第45(4)卷, 第846-54頁)、Brunt等人, Am. J. Gastroenterol. 1999, 第94卷, 第2467-2474頁中之纖維化評分系統、Kleiner等人, Hepatology 2005, 第41(6)卷, 第1313-1321頁中之纖維化評分系統及ISHAK纖維化評分系統(參見Ishak等人, J. Hepatol. 1995, 第22卷, 第696-699頁)，其各自之內容以全文引用之方式併入本文中。

在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前確定纖維化之嚴重程度。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間或之後確定纖維化之嚴重程度。在一些實施例中，與在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前相比，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間或之後，纖維化之嚴重程度降低指示NASH之治療。在一些實施例中，纖維化之嚴重程度降低、纖維化及/或肝硬化沒有進一步進展或纖維化及/或肝硬化之進展減緩指示NASH之治療。在一些實施例中，使用評分系統，諸如本文所述之纖維化評分系統中之任一者來確定纖維化之嚴重程度，例如，評分可指示纖維化之分期，例如0期(無纖維化)、1期、2期、3期及4期(肝硬化) (參見例如Kleiner等人)。在一些實施例中，纖維化分期之降低為纖維化嚴重程度之降低。舉例而言，1、2、3或4期之降低為纖維化嚴重程度之降低。在一些實施例中，分期之降低，例如自4期至3期、自4期至2期、自4期至1期、自4期至0期、自3期至2期、自3期至1期、自3期至0期、自2期至1期、自2期至0期或自1期至0期指示NASH之治療。在一些實施例中，與在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前相比，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽後，纖維化之分期自4期至3期、自4期至2期、自4期至1期、自4期至0期、自3期至2期、自3期至1期、自3期至0期、自2期至1期、自2期至0期或自1期至0期降低。在一些實施例中，與在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前相比，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間，纖維化之分期自4期至3期、自4期至2期、自4期至1期、自4期至0期、自3期至2期、自3期至1期、自3期至0期、自2期至1期、自2期至0期或自1期至0期降低。在一些實施例中，與在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前相比，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段之後，纖維化之分期自4期至3期、自4期至2期、自4期至1期、自4期至0期、自3期至2期、自3期至1期、自3期至0期、自2期至1期、自2期至0期或自1期至0期降低。

在一些實施例中，NASH之存在係藉由指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物或其評分系統來確定。在一些實施例中，NASH之嚴重程度係藉由指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物或其評分系統來確定。生物標誌物之含量可藉由例如量測、定量及監測編碼生物標誌物之基因或mRNA的表現量及/或生物標誌物之肽或蛋白質來測定。指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的生物標誌物及/或其評分系統的非限制性實例包括天冬胺酸轉胺酶(AST)與血小板比率指數(APRI)；天冬胺酸轉胺酶(AST)與丙胺酸轉胺酶(ALT)比率(AAR)；FIB-4評分，其係基於APRI、丙胺酸轉胺酶(ALT)含量及個體年齡(參見例如McPherson等人, Gut 2010, 第59(9)卷, 第1265-9頁，其以全文引用之方式併入本文中)；玻尿酸；促炎性細胞介素；與個體之年齡及性別相結合的一組由α2-巨球蛋白、結合球蛋白、脂蛋白元A1、膽紅素、γ麩胺醯基轉肽酶(GGT)組成的生物標誌物，以產生肝臟中纖維化及壞死性發炎活動的量度(例如FIBROTEST®、FIBROSURE®)，與個體之年齡及性別相結合的一組由膽紅素、γ-麩胺醯基轉移酶、玻尿酸、α2-巨球蛋白組成之生物標誌物(例如HEPASCORE®；參見例如Adams等人, Clin. Chem. 2005, 第51(10)卷, 第1867-1873頁)，及一組由金屬蛋白酶-1之組織抑制劑、玻尿酸及α2-巨球蛋白組成的生物標誌物(例如FIBROSPECT®)；一組由金屬蛋白酶1之組織抑制劑(TIMP-1)、III型原膠原之胺基端前肽(PIIINP)及玻尿酸(HA)組成的生物標誌物(例如增強型肝纖維化(ELF)評分，參見例如Lichtinghagen R等人, J Hepatol. 2013年8月;59(2):236-42，其以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，纖維化之存在係藉由FIB-4評分，與個體之年齡及性別相結合的一組由α2-巨球蛋白、結合球蛋白、脂蛋白元A1、膽紅素、γ麩胺醯基轉肽酶(GGT)組成的生物標誌物，以產生肝臟中纖維化及壞死性發炎活動的量度(例如FIBROTEST®、FIBROSURE®)，與個體之年齡及性別相結合的一組由膽紅素、γ-麩胺醯基轉移酶、玻尿酸、α2-巨球蛋白組成之生物標誌物(例如HEPASCORE®；參見例如Adams等人, Clin. Chem. 2005, 第51(10)卷, 第1867-1873頁)，及一組由金屬蛋白酶-1之組織抑制劑、玻尿酸及α2-巨球蛋白組成的生物標誌物(例如FIBROSPECT®)；及一組由金屬蛋白酶1之組織抑制劑(TIMP-1)、III型原膠原之胺基端前肽(PIIINP)及玻尿酸(HA)組成的生物標誌物(例如增強型肝纖維化(ELF)評分)中之一或多者來確定。

在一些實施例中，天冬胺酸轉胺酶(AST)之含量不升高。在一些實施例中，天冬胺酸轉胺酶(AST)之含量降低。在一些實施例中，丙胺酸轉胺酶(ALT)之含量不升高。在一些實施例中，丙胺酸轉胺酶(ALT)之含量降低。在一些實施例中，酶之「含量」係指酶之濃度，例如在血液中。舉例而言，AST或ALT之含量可表示為U/L。

在一些實施例中，纖維化之嚴重程度係藉由FIB-4評分，與個體之年齡及性別相結合的一組由α2-巨球蛋白、結合球蛋白、脂蛋白元A1、膽紅素、γ麩胺醯基轉肽酶(GGT)組成的生物標誌物，以產生肝臟中纖維化及壞死性發炎活動的量度(例如FIBROTEST®、FIBROSURE®)，與個體之年齡及性別相結合的一組由膽紅素、γ-麩胺醯基轉移酶、玻尿酸、α2-巨球蛋白組成之生物標誌物(例如HEPASCORE®；參見例如Adams等人, Clin. Chem. 2005, 第51(10)卷, 第1867-1873頁，其以全文引用之方式併入本文中)，及一組由金屬蛋白酶-1之組織抑制劑、玻尿酸及α2-巨球蛋白組成的生物標誌物(例如FIBROSPECT®)；及一組由金屬蛋白酶1之組織抑制劑(TIMP-1)、III型原膠原之胺基端前肽(PIIINP)及玻尿酸(HA)組成的生物標誌物(例如增強型肝纖維化(ELF)評分)中之一或多者來確定。

在一些實施例中，肝臟發炎係藉由肝臟發炎生物標誌物(例如促炎性細胞介素)之含量來確定。指示肝臟發炎之生物標誌物的非限制性實例包括介白素-(IL) 6、介白素-(IL) 1β、腫瘤壞死因子(TNF)-α、轉化生長因子(TGF)-β、單核球趨化蛋白(MCP)-1、C反應蛋白(CRP)、PAI-1及膠原蛋白同功異型物諸如Col1a1、Col1a2及Col4a1 (參見例如Neuman等人, Can. J. Gastroenterol. Hepatol. 2014, 第28(11)卷, 第607-618頁及美國專利第9,872,844號，其各自以全文引用之方式併入本文中)。肝臟發炎亦可藉由巨噬細胞浸潤之變化，例如量測CD68表現量之變化來評定。在一些實施例中，肝臟發炎可藉由量測或監測介白素-(IL) 6、介白素-(IL) 1β、腫瘤壞死因子(TNF)-α、轉化生長因子(TGF)-β、單核球趨化蛋白(MCP)-1及C反應蛋白(CRP)中之一或多者的血清含量或循環含量來確定。

在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前，測定來自個體之樣品的指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物的含量。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間或之後，測定指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物的含量。在一些實施例中，與在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前相比，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間或之後，指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物的含量降低指示NASH之治療。舉例而言，指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物的含量降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%指示NASH之治療。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽後，指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物的含量降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段期間，指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物的含量降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。在一些實施例中，在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的時間段之後，指示肝損傷、發炎、肝纖維化及/或肝硬化中之一或多者的一或多種生物標誌物的含量降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。

在一些實施例中，NASH之治療降低個體之血清膽酸含量。在一些實施例中，血清膽酸含量係藉由例如ELISA酶分析或量測總膽酸之分析來測定，如Danese等人, PLoS One. 2017, 第12(6)卷: e0179200中所述，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，血清膽酸含量可降低例如在投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前的血清膽酸含量的10%至40%、20%至50%、30%至60%、40%至70%、50%至80%或大於90%。在一些實施例中，NASH為伴隨膽汁鬱積之NASH。在膽汁鬱積中，膽汁(包括膽酸)自肝臟之釋放被阻塞。膽酸會導致肝細胞損傷(參見例如Perez MJ, Briz O. World J. Gastroenterol. 2009, 第15(14)卷, 第1677-1689頁)，從而可能導致或增加纖維化(例如肝硬化)之進展及增加肝細胞癌之風險(參見例如Sorrentino P等人,Dig . Dis . Sci . 2005, 第50(6)卷, 第1130-1135頁及Satapathy SK及Sanyal AJ.Semin . Liver Dis . 2015, 第35(3)卷, 第221-235頁，其各自以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，NASH之治療包括搔癢病之治療。在一些實施例中，伴隨膽汁鬱積之NASH之治療包括搔癢病之治療。在一些實施例中，患有伴隨膽汁鬱積之NASH的個體患有搔癢病。

NASH之例示性生物標誌物提供於表7中。表 7. 例示性 NASH 生物標誌物

肝纖維化生物標誌物

天冬胺酸轉胺酶(AST)與血小板比率指數(APRI)

天冬胺酸轉胺酶(AST)與丙胺酸轉胺酶(ALT)比率(AAR)

FIB-4評分1

玻尿酸

促炎性細胞介素

與個體之年齡及性別相結合的一組包括α2-巨球蛋白、結合球蛋白、脂蛋白元A1、膽紅素、γ麩胺醯基轉肽酶(GGT)，以產生肝臟中纖維化及壞死性發炎活動的量度(例如FIBROTEST®、FIBROSURE®)

與個體之年齡及性別相結合的一組包括膽紅素、γ-麩胺醯基轉移酶、玻尿酸、α2-巨球蛋白(例如HEPASCORE®2 )

一組包括金屬蛋白酶-1之組織抑制劑、玻尿酸及α2-巨球蛋白(例如FIBROSPECT®)

一組包括金屬蛋白酶1之組織抑制劑(TIMP-1)、III型原膠原之胺基端前肽(PIIINP)及玻尿酸(HA) (例如增強型肝纖維化(ELF)評分3 )

肝臟發炎生物標誌物 4,5

介白素-(IL) 6

介白素-(IL) 1β

腫瘤壞死因子(TNF)-α

轉化生長因子(TGF)-β

單核球趨化蛋白(MCP)-1

C反應蛋白(CRP)

PAI-1

膠原蛋白同功異型物(例如Col1a1、Col1a2及Col4a1)

巨噬細胞浸潤之變化(例如CD68表現量之變化)

表 7 之參考文獻 ¹ McPherson et al., Gut. 2010, vol. 59(9), p. 1265-1269.² Adams, et al. Clin Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873.³ Lichtinghagen, et al. J Hepatol. 2013, vol. 59(2), p. 236-242.⁴ Neuman, et al. Can J Gastroenterol Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618.⁵ U.S. Patent No. 9,872,844

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可在血漿中顯示出較高游離分率。在一些實施例中，游離分率大於約0.2%，諸如大於約0.4%，諸如大於約0.6%，諸如大於約0.8%，諸如大於約1.0%，諸如大於約1.25%，諸如大於約1.5%，諸如大於約1.75%，諸如大於約2.0%，諸如大於約2.5%，諸如大於約3%，諸如大於約4%，諸如大於約5%，諸如大於約7.5%，諸如大於約10%或諸如大於約20%。

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可在尿液中被排出。在一些實施例中，尿液中排出的化合物之分率大於約0.2%，諸如大於約0.4%，諸如大於約0.6%，諸如大於約0.8%，諸如大於約1.0%，諸如大於約2%，諸如大於約3%，諸如大於約5%，諸如大於約7.5%，諸如大於約10%，諸如大於約15%，諸如大於約20%，諸如大於約30%或諸如大於約50%。

由腸道吸收之後，一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可經由腸肝循環進行循環。在一些實施例中，經由腸肝循環進行循環的化合物之分率大於約0.1%，諸如大於約0.2%，諸如大於約0.3%，諸如大於約0.5%，諸如大於約1.0%，諸如大於約1.5%，諸如大於約2%，諸如大於約3%，諸如大於約5%，諸如大於約7%，諸如大於約10%，諸如大於約15%，諸如大於約20%，諸如大於約30%或諸如大於約50%。

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可引起腎臟分泌膽鹽。在一些實施例中，腎臟途徑所分泌的循環膽酸之分率大於約1%，諸如大於約2%，諸如大於約5%，諸如大於約7%，諸如大於約10%，諸如大於約15%，諸如大於約20%或諸如大於約25%。

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可顯示出經改良或最佳滲透率。滲透率可在Caco2細胞中量測，且值係以表觀滲透率(Papp)值給出，單位為cm/秒。在一些實施例中，滲透率大於至少約0.1×10^-6 cm/秒，諸如大於約0.2×10^-6 cm/秒，諸如大於約0.4×10^-6 cm/秒，諸如大於約0.7×10^-6 cm/秒，諸如大於約1.0×10^-6 cm/秒，諸如大於約2×10^-6 cm/秒，諸如大於約3×10^-6 cm/秒，諸如大於約5×10^-6 cm/秒，諸如大於約7×10^-6 cm/秒，諸如大於約10×10^-6 cm/秒，諸如大於約15×10^-6 cm/秒。

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可顯示出經改良或最佳生物可用性。在一些實施例中，口服生物可用性大於約5%，諸如大於約7%，諸如大於約10%，諸如大於約15%，諸如大於約20%，諸如大於約30%，諸如大於約40%，諸如大於約50%，諸如大於約60%，諸如大於約70%或諸如大於約80%。在其他實施例中，口服生物可用性在約10%與約90%之間，諸如在約20%與約80%之間，諸如在約30%與約70%之間或諸如在約40%與約60%之間。

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可為腎臟中相關轉運蛋白之受質。

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可在腸道、肝臟及血清中產生不會引起不利胃腸道作用之膽酸濃度。

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可降低肝臟中之膽酸濃度而不會引起諸如腹瀉之胃腸道疾病。

如本文所用，術語「治療(treatment/treat/treating)」係指逆轉、緩解如本文所述之疾病或病症或其一或多種症狀，延遲其發作或抑制其進展。在一些實施例中，可在已出現一或多種症狀之後投與治療。在其他實施例中，可在不存在症狀之情況下投與治療。舉例而言，可在症狀發作之前向易感個體投與治療(例如，根據症狀病史及/或根據遺傳性或其他易感性因素)。亦可在症狀已消退之後繼續治療，例如以預防或延遲其復發。

本發明化合物之適合之醫藥學上可接受之鹽為例如本發明化合物之鹼加成鹽，其具有足夠的酸性，諸如鹼金屬鹽(例如鈉或鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如鈣或鎂鹽)、銨鹽或與提供生理學上可接受之陽離子的有機鹼之鹽，例如與甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、嗎啉或參-(2-羥乙基)胺之鹽。

一些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可具有對掌性中心及/或幾何異構中心(E-及Z-異構體)。應理解，本發明涵蓋具有ASBT及/或LBAT抑制活性之所有此類光學異構體、非對映異構體及幾何異構體。本發明亦涵蓋具有ASBT及/或LBAT抑制活性之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的任何及所有互變異構形式。某些式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以非溶劑化以及溶劑化形式存在，諸如水合形式。應理解，本發明涵蓋具有ASBT及/或LBAT抑制活性之所有此類溶劑化形式。

在另一態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。賦形劑可例如包括填充劑、黏合劑、崩解劑、滑動劑及潤滑劑。一般而言，醫藥組合物可使用習知賦形劑以習知方式製備。

適合之填充劑的實例包括但不限於二水合磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖(諸如單水合乳糖)、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素、微晶纖維素、乾澱粉、水解澱粉及預膠凝化澱粉。在某些實施例中，填充劑為甘露糖醇及/或微晶纖維素。

適合之黏合劑的實例包括但不限於澱粉、預膠凝化澱粉、明膠、糖(諸如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖及山梨糖醇)、聚乙二醇、蠟、天然及合成膠(諸如阿拉伯膠及黃蓍膠)、海藻酸鈉、纖維素衍生物(諸如羥丙基甲基纖維素(或羥丙甲纖維素)、羥丙基纖維素及乙基纖維素)及合成聚合物(諸如丙烯酸及甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸胺基烷基酯共聚物、聚丙烯酸/聚甲基丙烯酸共聚物及聚乙烯吡咯啶酮(聚維酮))。在某些實施例中，黏合劑為羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素)。

適合之崩解劑的實例包括但不限於乾澱粉、改質澱粉(諸如(部分)預膠凝化澱粉、羥基乙酸澱粉鈉及羧甲基澱粉鈉)、褐藻酸、纖維素衍生物(諸如羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素及低取代之羥丙基纖維素(L-HPC))及交聯聚合物(諸如羧甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣及交聯PVP (交聯聚維酮))。在某些實施例中，崩解劑為交聯羧甲基纖維素鈉。

適合之滑動劑及潤滑劑的實例包括但不限於滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、山崳酸甘油酯、膠態二氧化矽、水性二氧化矽、合成矽酸鎂、細粒氧化矽、澱粉、月桂基硫酸鈉、硼酸、氧化鎂、蠟(諸如巴西棕櫚蠟)、氫化油、聚乙二醇、苯甲酸鈉、聚乙二醇及礦物油。在某些實施例中，滑動劑或潤滑劑為硬脂酸鎂或膠態二氧化矽。

醫藥組合物可習知地包覆有一或多個包衣層。亦涵蓋用於延遲或靶向釋放式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的腸溶包衣層或包衣層。包衣層可包含一或多種包衣劑，且可視情況包含塑化劑及/或顏料(或著色劑)。

適合之包衣劑的實例包括但不限於基於纖維素之聚合物(諸如乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素(或羥丙甲纖維素)、羥丙基纖維素、鄰苯二甲酸乙酸纖維素、丁二酸乙酸纖維素、丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素及鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素)、基於乙烯基之聚合物(諸如聚乙烯醇)及基於丙烯酸及其衍生物之聚合物(諸如丙烯酸及甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸胺基烷基酯共聚物、聚丙烯酸/聚甲基丙烯酸共聚物)。在某些實施例中，包衣劑為羥丙基甲基纖維素。在其他實施例中，包衣劑為聚乙烯醇。

適合之塑化劑的實例包括但不限於檸檬酸三乙酯、三乙酸甘油酯、檸檬酸三丁酯、鄰苯二甲酸二乙酯、檸檬酸乙醯基三丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯及聚乙二醇。在某些實施例中，塑化劑為聚乙二醇。

適合之顏料的實例包括但不限於二氧化鈦、氧化鐵(諸如黃色、棕色、紅色或黑色氧化鐵)及硫酸鋇。

醫藥組合物可呈適用於經口投與、非經腸注射(包括靜脈內、皮下、肌肉內及血管內注射)、局部投與或直腸投與之形式。在一較佳實施例中，醫藥組合物呈適用於經口投與之形式，諸如錠劑或膠囊。

治療性或預防性治療所需之劑量將取決於投與途徑、疾病之嚴重程度、患者之年齡及體重以及當確定適於特定患者之方案及劑量水準時主治醫師通常考慮的其他因素。

待投與之化合物之量對於所治療之患者為不同的，且可在每天每公斤體重約1 µg至約50 mg之間變化。諸如錠劑或膠囊之單位劑型將通常含有約1至約250 mg活性成分，諸如約1至約100 mg，或諸如約1至約50 mg，或諸如約1至約20 mg，例如約2.5 mg，或約5 mg，或約10 mg，或約15 mg。日劑量可以單次劑量形式投與或分成一個、兩個、三個或更多個單位劑量。經口投與之膽酸調節劑的日劑量較佳在約0.1至約250 mg內，更佳在約1至約100 mg內，諸如在約1至約5 mg內，諸如在約1至約10 mg內，諸如在約1至約15 mg內，或諸如在約1至約20 mg內。

在另一態樣中，本發明係關於一種式(I)化合物

其中 R¹ 及R² 各自獨立地為C_1-4 烷基； R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、C_{1 - 4} 烷基、C_{1 - 4} 鹵烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{1 - 4} 鹵烷氧基、氰基、硝基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基、N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N -(芳基-C_{1 - 4} 烷基)胺基； n為整數1、2或3； R⁴ 係選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 烷基、C_{3 - 6} 環烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{3 - 6} 環烷氧基、C_{1 - 4} 烷硫基、C_{3 - 6} 環烷硫基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基； 或其醫藥學上可接受之鹽， 其供用作藥劑。

在另一態樣中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防本文中所列舉之任何疾病。本發明亦關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽在製造用於治療或預防本文中所列舉之任何疾病之藥劑中的用途。本發明亦關於治療或預防個體(諸如人類)之本文中所列舉之任何疾病的方法，其包含向需要此類治療或預防之個體投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

組合療法 在本發明之一個態樣中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與至少一種其他治療活性劑，諸如與一種、兩種、三種或更多種其他治療活性劑組合投與。式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種其他治療活性劑可同時、依次或分開投與。適合與式(I)化合物組合之治療活性劑包括但不限於適用於治療任何前述病況、病症及疾病的已知活性劑。

在一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與另一種ASBT抑制劑組合投與。適合ASBT抑制劑揭示於WO 93/16055、WO 94/18183、WO 94/18184、WO 96/05188、WO 96/08484、WO 96/16051、WO 97/33882、WO 98/03818、WO 98/07449、WO 98/40375、WO 99/35135、WO 99/64409、WO 99/64410、WO 00/47568、WO 00/61568、WO 00/38725、WO 00/38726、WO 00/38727、WO 00/38728、WO 00/38729、WO 01/66533、WO 01/68096、WO 02/32428、WO 02/50051、WO 03/020710、WO 03/022286、WO 03/022825、WO 03/022830、WO 03/061663、WO 03/091232、WO 03/106482、WO 2004/006899、WO 2004/076430、WO 2007/009655、WO 2007/009656、WO 2011/137135、WO 2019/234077、WO 2020/161216、WO 2020/161217、DE 19825804、EP 864582、EP 489423、EP 549967、EP 573848、EP 624593、EP 624594、EP 624595、EP 624596、EP 0864582、EP 1173205、EP 1535913及EP 3210977中，其皆以全文引用之方式併入本文中。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與膽酸結合劑(亦稱為膽酸螯合劑或樹脂)，諸如考來維侖(colesevelam)、消膽胺(cholestyramine)或降膽寧(cholestipol)組合投與。在此類組合之一較佳實施例中，膽酸結合劑經調配用於結腸釋放。此類調配物之實例揭示於例如WO 2017/138877、WO 2017/138878、WO 2019/032026及WO 2019/032027中，其均以全文引用的方式併入本文中。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與DPP-IV抑制劑，包括列汀類(gliptins)，諸如西他列汀(sitagliptin)、維格列汀(vildagliptin)、沙格列汀(saxagliptin)、利格列汀(linagliptin)、吉格列汀(gemigliptin)、阿拉格列汀(anagliptin)、替格列汀(teneligliptin)、阿格列汀(alogliptin)、曲格列汀(trelagliptin)、奧格列汀(omarigliptin)、依格列汀(evogliptin)、戈塞列汀(gosogliptin)及多格列汀(dutogliptin)或其醫藥學上可接受之鹽組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與HMG CoA還原酶抑制劑，諸如氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、美伐他汀(mevastatin)、羅素他汀(rosuvastatin)、貝伐他汀(bervastatin)或達伐他汀(dalvastatin)或其醫藥學上可接受之鹽組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與膽固醇吸收抑制劑，諸如依澤替米貝(ezetimibe)或其醫藥學上可接受之鹽組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與PPARα促效劑，包括貝特類(fibrates)，諸如氯貝特(clofibrate)、苯紮貝特(bezafibrate)、環丙貝特(ciprofibrate)、可琳貝特(clinofribrate)、氯貝胺(clofibride)、非諾貝特(fenofibrate)、吉非羅齊(gemfibrozil)、氯菸貝特(ronifibrate)及雙貝特(simfribrate)或其醫藥學上可接受之鹽組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與PPARγ促效劑，包括噻唑啶二酮類(thiazolidinediones)，諸如吡格列酮(pioglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)及洛貝格列酮(lobeglitazone)或其醫藥學上可接受之鹽組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與雙重PPARα/γ促效劑，包括格列紮類(glitazars)，諸如沙格列紮(saroglitazar)、阿格列紮(aleglitazar)、莫格列紮(muraglitazar)或替格列紮(tesaglitazar)或其醫藥學上可接受之鹽組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與雙重PPARα/δ促效劑諸如艾拉貝諾(elafibranor)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與泛PPAR促效劑(亦即對以下所有亞型具有活性之PPAR促效劑：α、γ及δ)，諸如IVA337組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與法尼醇X受體(FXR)調節劑，包括FXR促效劑，諸如咖啡醇(cafestol)、鵝去氧膽酸、6α-乙基-鵝去氧膽酸(奧貝膽酸(obeticholic acid；INT-747)、非沙拉明(fexaramine)、曲匹氟索(tropifexor)、希羅氟索(cilofexor)及MET409組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與TGR5受體調節劑，包括TGR5促效劑，諸如6α-乙基-23(S)-甲基膽酸(INT-777)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與雙重FXR/TGR5促效劑諸如INT-767組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與熊去氧膽酸(UDCA)組合投與。在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與去甲熊去氧膽酸(nor-UDCA)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與FGF19調節劑，諸如NGM282組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與FGF21促效劑，諸如BMS-986036組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與整合素抑制劑，諸如PLN-74809及PLN-1474組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與CCR2/CCR5抑制劑，諸如森尼韋若(cenicriviroc)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與凋亡蛋白酶抑制劑，諸如恩利卡生(emricasan)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與半乳糖凝集素-3抑制劑，諸如GR-MD-02組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與硬脂醯基-CoA去飽和酶(SCD)抑制劑，諸如阿雷美羅(aramchol) (二十烷基醯胺基膽酸)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與細胞凋亡信號調節激酶1 (ASK1)抑制劑，諸如司隆色替(selonsertib)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與LOXL2抑制劑，諸如辛圖珠單抗(simtuzumab)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與ACC抑制劑，諸如GS-0976組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與甲狀腺激素受體-β促效劑，諸如MGL3196組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與GLP-1促效劑諸如利拉魯肽(liraglutide)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與雙重類升糖素肽及升糖素受體促效劑，諸如SAR425899組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與粒線體丙酮酸載體抑制劑，諸如MSDC-0602K組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與抗氧化劑，諸如維生素E組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與SGLT1抑制劑、SGLT2抑制劑或雙重SGLT1及SGLT2抑制劑組合投與。此類化合物之實例為達格列淨(dapagliflozin)、索格列淨(sotagliflozin)、卡格列淨(canagliflozin)、依帕列淨(empagliflozin)、LIK066及SGL5213。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與二醯基甘油O-醯基轉移酶2 (DGAT2)抑制劑，諸如DGAT2RX及PF-06865571組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與脂肪酸合成酶(FASN)抑制劑，諸如TVB-2640組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與AMP活化蛋白激酶(AMPK)活化劑，諸如PXL-770組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與糖皮質激素受體拮抗劑(GR)、鹽皮質激素受體拮抗劑(MR)或雙重GR/MR拮抗劑組合投與。此類化合物之實例為MT-3995及CORT-118335。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與大麻素受體1 (CB1)拮抗劑，諸如IM102組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與Klothoβ (KLB)及纖維母細胞生長因子受體(FGFR)活化劑，諸如MK-3655 (先前稱為NGM-313)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與趨化因子(c-c模體)配體24 (CCL24)抑制劑，諸如CM101組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與A3拮抗劑，諸如PBF-1650組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與P2x7受體拮抗劑，諸如SGM 1019組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與P2Y13受體促效劑，諸如CER-209組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與硫酸化氧固醇，諸如Dur-928組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與白三烯D4 (LTD4)受體拮抗劑，諸如MN-001組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與1型自然殺手T細胞(NKT1)抑制劑，諸如GRI-0621組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與抗脂多醣(LPS)化合物，諸如IMM-124E組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與VAP1抑制劑，諸如BI1467335組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與A3腺苷受體促效劑，諸如CF-102組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與SIRT-1活化劑，諸如NS-20組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與菸鹼酸受體1促效劑，諸如ARI-3037MO組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與TLR4拮抗劑，諸如JKB-121組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與己酮糖激酶抑制劑，諸如PF-06835919組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與脂聯素受體促效劑，諸如ADP-335組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與自分泌運動因子抑制劑，諸如PAT-505及PF8380組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與趨化因子(c-c模體)受體3 (CCR3)拮抗劑，諸如柏替木單抗(bertilimumab)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與氯通道刺激劑，諸如科普斯酮(cobiprostone)及魯比前列酮(lubiprostone)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與熱休克蛋白47 (HSP47)抑制劑，諸如ND-L02-s0201組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與固醇調節元件結合蛋白(SREBP)轉錄因子抑制劑，諸如CAT-2003及MDV-4463組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與雙胍，諸如二甲雙胍(metformin)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與胰島素組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與糖原磷酸化酶抑制劑及/或葡萄糖-6-磷酸酶抑制劑組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與磺醯脲，諸如格列吡嗪(glipizid)、格列本脲(glibenklamid)及格列美脲(glimepirid)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與美格替耐(meglitinide)，諸如瑞格列奈(repaglinide)、那格列奈(nateglinide)及奧格替耐(ormiglitinide)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與葡糖苷酶抑制劑，諸如阿卡波糖(acarbose)或米格列醇(miglitol)組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與角鯊烯合成酶抑制劑，諸如TAK-475組合投與。

在另一個實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與PTPB1抑制劑，諸如特羅杜明(trodusquemine)、埃替他非(ertiprotafib)、JTT-551及克拉若明(claramine)組合投與。

化合物之製備 本發明之化合物可藉由下文所述之方法製備為游離酸或其醫藥學上可接受之鹽。在整個以下對此類方法之描述中，應理解，在適當的情況下，將以熟習有機合成技術者容易理解的方式將適合之保護基添加至各種反應物及中間物中，且隨後自各種反應物及中間物移除。使用此類保護基之習知程序以及適合之保護基的實例例如描述於P.G.M Wutz及T.W. Greene之Greene ' s Protective Groups in Organic Synthesis , 第4版, John Wiley & Sons, Hoboken, 2006中。

通用方法 所用的所有溶劑均為分析級。常規使用市售無水溶劑進行反應。起始物質可購自商業來源或根據文獻程序製備。室溫係指20-25℃。溶劑混合物組成係以體積百分比或體積比給出。

LCMS ： 儀器名稱： Agilent 1290 infinity II。

方法A ： 移動相：A：0.1% HCOOH/H₂ O:ACN (95:5)，B：ACN；流動速率：1.5 mL/分鐘；管柱：ZORBAX XDB C-18 (50×4.6 mm) 3.5 μM。

方法 B ： 移動相：A：10 mM NH₄ HCO₃ 水溶液，B：ACN；流動速率：1.2 mL/分鐘；管柱：XBridge C8 (50×4.6 mm)，3.5 μM。

方法 C ： 移動相：A：0.1% HCOOH水溶液:ACN (95:5)，B：ACN；流動速率：1.5 mL/分鐘；管柱：ATLANTIS dC18 (50×4.6 mm)，5 μM。

方法 D ： 移動相：A：10 mM NH₄ OAc水溶液，B：ACN；流動速率：1.2 mL/分鐘；管柱：Zorbax Extend C18 (50×4.6mm) 5 μM。

方法 E ： 移動相：A：0.1% TFA水溶液:ACN (95:5)，B：0.1% TFA之ACN溶液；流動速率：1.5 mL/分鐘；管柱：XBridge C8 (50×4.6 mm)，3.5 μM。

UPLC ： 儀器名稱： waters Acquity I Class

方法 A ： 移動相：A：0.1% HCOOH水溶液，B：0.1% HCOOH之ACN溶液；流動速率：0.8 mL/分鐘；管柱：Acquity UPLC HSS T3 (2.1×50) mm；1.8 μm。

HPLC ： 儀器名稱： Agilent 1260 Infinity II系列儀器，如下使用%與UV偵測(maxplot)。

方法 A ： 移動相：A：10 mM NH₄ HCO₃ 水溶液，B：ACN；流動速率：1.0 mL/分鐘；管柱：XBridge C8 (50×4.6 mm，3.5 µm)。

方法 B ： 移動相：A：0.1% TFA水溶液，B：0.1% TFA之ACN溶液；流動速率：2.0 mL/分鐘；管柱：XBridge C8 (50×4.6 mm，3.5 µm)。

方法 C ： 移動相：A：10 mM NH₄ OAc之milli-q水溶液，B：ACN；流動速率：1.0 ml/分鐘；管柱：Phenomenex Gemini C18 (150×4.6 mm，3.0 μm)。

對掌性 SFC ： 儀器名稱： PIC SFC 10 (分析型)

CO₂ 與共溶劑之間的比率介於60:40與80:20之間

方法 A ： 移動相：0.5%異丙胺/IPA；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：YMC Amylose-SA (250×4.6 mm，5 μm)。

方法 B ： 移動相：0.5%異丙胺/IPA；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：Chiralpak AD-H (250×4.6 mm，5 μm)。

方法 C ： 移動相：20 mM氨/甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：YMC Cellulose-SC (250×4.6 mm，5 μm)。

方法 D ： 移動相：甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：Lux A1 (250×4.6 mm，5 μm)。

方法 E ： 移動相：0.5%異丙胺/甲醇；流動速率：5 mL/分鐘；管柱：Lux C4。

方法 F ： 移動相：0.5%異丙胺/甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：YMC Cellulose-SC。

方法 G ： 移動相：0.5%異丙胺/甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：Lux A1。

方法 H ： 移動相：0.5%異丙胺/IPA；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：Lux A1 (250×4.6 mm，5 μm)。

方法 I ： 移動相：0.5%異丙胺/甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：對掌性CCS (250×4.6 mm，5 μm)。

方法 J ： 移動相：0.5%異丙胺/IPA；流動速率：5 mL/分鐘；管柱：YMC Cellulose-SC AD-H (250×4.6 mm，5 μm)。

製備型 HPLC ： 儀器名稱： Agilent 1290 Infinity II

方法 A ： 移動相：A：0.1% TFA水溶液；移動相；B：0.1% TFA之ACN溶液；流動速率：2.0 mL/分鐘；管柱：X-Bridge C8 (50×4.6 mm，3.5 μM)。

方法 B ： 移動相：A：10 mM NH₄ OAc水溶液；B：ACN；流動速率：35 mL/分鐘；管柱：X select C18 (30×150 mm，5 µm)。

方法 C ： 移動相：A：10 mM NH₄ HCO₃ 水溶液；B：ACN；流動速率：1.0 mL/分鐘；管柱：XBridge C8 (50×4.6 mm，3.5 µm)。

方法 D ： 移動相：A：0.1% HCOOH水溶液；B：ACN；流動速率：1.0 mL/分鐘；管柱：X-select C18 (30×150 mm，5 µm)。

對掌性製備型 SFC ： 儀器名稱： PIC SFC 100及PSC SFC 400

CO₂ 與共溶劑之間的比率介於60:40與80:20之間

方法 A ： 移動相：0.5%異丙胺/IPA；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：YMC Amylose-SA (250×30 mm，5 μm)。

方法 B ： 移動相：0.5%異丙胺/IPA；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：Chiralpak AD-H (250×30 mm，5 μm)。

方法 C ： 移動相：20 mM氨/甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：YMC Cellulose-SC (250×30 mm，5 μm)。

方法 D ： 移動相：甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：對掌性CCS (250×30 mm，5 µm)。

方法 E ： 移動相：甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：Lux A1 (250×30 mm，5 μm)。

方法 F ： 移動相：0.5%異丙胺/IPA；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：Lux A1 (250×30 mm，5 μm)。

方法 G ： 移動相：0.5%異丙胺/甲醇；流動速率：3 mL/分鐘；管柱：對掌性CCS (250×30 mm，5 μm)。

縮寫 ACN       乙腈 DCM       二氯甲烷 DMF       二甲基甲醯胺 IPA         異丙醇 LCMS     液相層析-質譜分析 HPLC      高效液相層析 PE           石油醚 SFC        超臨界流體層析 TFA        三氟乙酸 THF        四氫呋喃 TLC        薄層層析 UPLC      超效能液相層析

現將藉由以下實例描述本發明，該等實例不在任何方面限制本發明。全部列舉文獻及參考文獻均以引用之方式併入。

實例中間物 1 2 - 胺基丁酸乙酯鹽酸鹽

在0℃下，向2-胺基丁酸(100 g，0.97 mol)於乙醇(750 mL)中之攪拌溶液中添加亞硫醯氯(78 mL，1.07 mol)隨後將反應混合物在80℃下加熱16小時反應完成後，真空濃縮反應混合物，得到粗標題化合物，其原樣用於下一步驟而不經任何進一步純化產率 ： 93% (152 g，白色固體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 8.66 (bs, 3H), 4.25-4.16 (m, 2H), 3.98-3.85 (m, 1H), 1.84 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.23 (t,J = 6.8 Hz, 3H), 0.92 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。

中間物 2 ( E ) - 2 -( 苯亞甲基胺基 ) 丁酸乙酯

在0℃下，經30分鐘之時段向2-胺基丁酸乙酯鹽酸鹽(中間物1；152 g，0.91 mol)於DCM (900 mL)中之攪拌溶液中添加三乙胺(152 mL，1.09 mol)在0℃下，將硫酸鎂(98 g，0.82 mol)分批添加至反應混合物隨後在0℃下，將苯甲醛(84 mL，0.82 mol)經20分鐘之時段添加至反應混合物中，且將反應混合物在室溫下攪拌16小時反應完成(藉由TLC監測)後，經由矽藻土過濾反應混合物且真空濃縮濾液將所得粗物質溶解於石油醚(1000 mL)中且再次經由矽藻土過濾隨後真空濃縮濾液，得到標題化合物將此粗物質原樣轉移至下一步驟而不經任何進一步純化產率： 90% (180 g，淡棕色液體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 8.40 (s, 1H), 7.79-7.76 (m, 2H), 7.49-7.47 (m, 3H), 4.16-4.10 (m, 2H), 3.98-3.95 (m, 1H), 1.92-1.89 (m, 1H), 1.79-1.74 (m, 1H), 1.19 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 0.85 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。

中間物 3 ( E ) - 2 -( 苯亞甲基胺基 )- 2 - 乙基己酸乙酯

在0℃下，經30分鐘之時段向NaH (60%；32.8 g，0.82 mol)於DMF (100 mL)中之攪拌溶液中緩慢添加含( E ) -2-(苯亞甲基胺基)丁酸乙酯(中間物2；180 g，0.82 mol)之DMF (800 mL)隨後將反應混合物在室溫下攪拌1.5小時在0℃下，將正丁基碘化物(93 mL，0.82 mol)添加至反應混合物，且將混合物在室溫下攪拌1小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物在0℃下用2-丙醇(100 mL)淬滅且隨後用水(1000 mL)稀釋用石油醚(1000 mL)萃取水層將有機層用鹽水(200 mL)洗滌且經無水Na₂ SO₄ 乾燥真空濃縮有機部分，且將所得粗物質原樣轉移至下一步驟而不經任何進一步純化產率： 88% (200 g，黃色液體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 8.34 (s, 1H), 7.80 - 7.77 (m, 2H), 7.47-7.44 (m, 3H), 4.16 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 2.51-1.79 (m, 4H), 1.31-1.18 (m, 7H), 0.88 - 0.84 (m, 6H)。

中間物 4 2 - 胺基 - 2 - 乙基己酸乙酯

在0℃下，向( E ) -2-(苯亞甲基胺基)-2-乙基己酸乙酯(中間物3；200 g，0.73 mol)於石油醚(500 mL)中之攪拌溶液中添加稀HCl (1000 mL，1.5 N)，且將反應混合物在室溫下劇烈攪拌16小時反應完成(藉由TLC監測)後，分離有機層且用EtOAc (2×100 mL)洗滌水層隨後藉由使用固體碳酸氫鈉(200 g)將水層鹼化(pH~8.5)且用EtOAc (2×200 mL)萃取用水(2×15 mL)洗滌有機層將合併之有機部分經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，得到標題化合物將粗物質原樣轉移至下一步驟而不經任何進一步純化產率： 80% (110 g，淡黃色液體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 4.08 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 1.68 - 1.00 (m, 13H), 0.85 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 0.77 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。

中間物 5 2 - 胺基 - 2 - 乙基 - N - 苯基己醯胺

在-78℃下，經30分鐘之時段向苯胺(48.3 mL，534 mmol)於THF (250 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加n -BuLi (2.6M於己烷中；205 mL，534 mmol)，且將反應混合物在-25℃至-30℃下攪拌45分鐘隨後在-78℃下，將含2-胺基-2-乙基己酸乙酯(中間物4；50 g，267 mmol)之THF (250 mL)添加至反應混合物，且將反應混合物在-78℃下攪拌2小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物在-78℃下用水(500 mL)淬滅用EtOAc (2×250 mL)萃取反應混合物且用水(2×15 mL)洗滌有機層將有機部分經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，得到呈粗物質之標題化合物將粗產物溶解於石油醚(1000 mL)中將有機部分用30%甲醇水溶液(2×250 mL)洗滌且經無水Na₂ SO₄ 乾燥真空濃縮有機部分，且將所得粗物質原樣轉移至下一步驟而不經任何進一步純化產率： 66 g (粗物質，棕色液體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 7.64 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.30 (t,J = 7.4 Hz, 2H), 7.05 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 6.55 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 1.76-1.07 (m, 10H), 0.86-0.77 (m, 6H)。

中間物 6 2 - 乙基 - N1 - 苯基己烷 - 1 , 2 - 二胺

在0℃下，向2-胺基-2-乙基-N -苯基己醯胺(中間物5；66 g，0.28 mol)於THF (600 mL)中之攪拌溶液中添加甲硼烷二甲基硫醚(2M於THF中，253 mL，0.51 mol)，且將反應混合物在70℃下加熱16小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物在0℃下用甲醇(300 mL)淬滅隨後將反應混合物在70℃下加熱2小時真空濃縮反應混合物且將所獲得之殘餘物溶解於EtOAc (1000 mL)中將有機層用水(2×150 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮藉由Isolera管柱層析(溶離劑：40% EtOAc/己烷；矽膠：230-400目)純化所得粗物質，得到標題化合物產率： 82% (50 g，棕色液體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 7.04 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 6.61 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 6.49 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 5.15 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 2.79 (d,J = 5.6 Hz, 2H), 1.39 - 1.17 (m, 10H), 0.88-0.79 (m, 6H)。

中間物 7 1 , 2 - 雙 ( 2 , 4 - 二溴 - 5 - 甲氧苯基 ) 二硫烷

在0℃下，向3-甲氧基苯硫酚(100 g，0.7 mol)於甲醇(1000 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加溴(73 mL，1.4 mol)，且將反應混合物在室溫下攪拌24小時真空蒸發反應混合物，將所獲得之粗物質用EtOAc (2000 mL)稀釋且用水(2×500 mL)洗滌有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮將所得粗物質溶解於冰乙酸(600 mL)中，在室溫下逐滴添加溴(20 mL)且將反應混合物在室溫下攪拌2小時將所得固體濾出，用DCM濕磨且真空乾燥，得到純標題化合物產率： 37% (78 g，白色固體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 7.69 (s, 2H), 7.17 (s, 2H), 3.84 (s, 6H)。

中間物 8 2 , 4 - 二溴 - 5 - 甲氧基苯磺醯氯

在0℃下，向1,2-雙(2,4-二溴-5-甲氧苯基)二硫烷(中間物7；20.0 g，33.67 mmol)及硝酸鉀(17.02 g，168.35 mmol)於乙腈(200 mL)中之攪拌懸浮液逐滴添加硫醯氯(13.6 mL，168.35 mmol)將反應混合物在室溫下攪拌24小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物倒入碎冰中且濾出所獲得之固體用水洗滌固體且真空乾燥，得到純標題化合物產率： 91% (22.5 g，白色固體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 8.05 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 4.01 (s, 3H)。

中間物 9 2 , 4 - 二溴 - 5 - 甲氧基 - N -( 3 -(( 苯胺基 ) 甲基 ) 庚 - 3 - 基 ) 苯磺醯胺

在0℃下，向2-乙基-N1-苯基己烷-1,2-二胺(中間物6；4.9 g，22.34 mmol)於THF (10 mL)中之攪拌溶液中添加2,4-二溴-5-甲氧基苯磺醯氯(中間物8；10.5 g，28.91 mmol)及三乙胺(9.3 mL，67.02 mmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌16小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物用EtOAc (50 mL)稀釋將有機層用水(2×15 mL)洗滌且經無水Na₂ SO₄ 乾燥真空濃縮有機部分且藉由Isolera管柱層析(溶離劑：10% EtOAc/PE；矽膠：230-400目)純化所得粗物質，得到標題化合物產率： 59% (7.2 g，白色固體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 8.01 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.03 (t,J = 8.1 Hz, 2H), 6.54 - 6.46 (m, 3H), 4.80 (t,J = 5.1 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.07-2.96 (m, 2H), 1.66-1.41 (m, 4H), 1.15-0.95 (m, 4H), 0.78-0.69 (m, 6H)。

中間物 10 7 - 溴 - 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 8 - 甲氧基 - 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫 - 1 , 2 , 5 - 苯并噻二氮呯 1 , 1 - 二氧化物

向2,4-二溴-5-甲氧基-N -(3-((苯胺基)甲基)庚-3-基)苯磺醯胺(中間物9；7.2 g，13.1 mmol)於DMF (50 mL)中之攪拌溶液中添加碳酸鉀(3.62 g，26.2 mmol)及銅粉(834 mg，13.1 mmol)，且將反應混合物在150℃下加熱24小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物經由矽藻土過濾且用EtOAc (25 mL)洗滌真空濃縮濾液部分且藉由Isolera管柱層析(溶離劑：20% EtOAc/PE；矽膠：230-400目)純化所得粗物質，得到標題化合物產率 ： 83% (5.1 g，白色固體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 7.43-7.30 (m, 4H), 7.15-7.13 (m, 2H), 7.03-7.01 (m, 2H), 4.00-3.60 (m, 5H), 1.62-1.34 (m, 4H), 1.08-0.95 (m, 4H), 0.74-0.71 (m, 6H)。LCMS: (方法A) 467.0 (M⁺ ), Rt. 3.06 min, 95.31% (max)。

中間物 11 7 - 溴 - 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 8 - 甲氧基 - 2 -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫 - 1 , 2 , 5 - 苯并噻二氮呯 1 , 1 - 二氧化物

在0℃下，向7-溴-3-丁基-3-乙基-8-甲氧基-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯1,1-二氧化物(中間物10；20.0 g，42.7 mmol)於N -甲基-2-吡咯啶酮(100 mL)中之攪拌溶液中添加Cs₂ CO₃ (27.8 g，85.5 mmol)及對甲氧基苯甲基溴(7.98 mL，39.5 mmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌1小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物用EtOAc (200 mL)稀釋且將有機層用水(2×50 mL)洗滌有機部分經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮藉由Isolera管柱層析(溶離劑：10% EtOAc/PE；矽膠：230-400目)純化所得粗物質，得到標題化合物產率： 64% (16 g，白色固體)。LCMS : (方法A) 587.2 (M⁺ ), Rt. 3.51 min, 92.94% (max)。

中間物 12 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 8 - 羥基 - 2 -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 7 -( 甲硫基 )- 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫 - 1 , 2 , 5 - 苯并噻二氮呯 1 , 1 - 二氧化物

向7-溴-3-丁基-3-乙基-8-甲氧基-2-(4-甲氧基苯甲基)-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯1,1-二氧化物(中間物11；16.0 g，27.2 mmol)於DMF (120 mL)中之攪拌溶液中添加硫代甲醇鈉(9.5 g，136.1 mmol)，且將反應混合物在60℃下加熱16小時反應完成(藉由LCMS監測)後，將反應混合物用EtOAc (200 mL)稀釋且將有機層用水(2×50 mL)洗滌將有機部分經無水Na₂ SO₄ 乾燥，隨後真空濃縮且藉由Isolera管柱層析(溶離劑：10% EtOAc/PE；矽膠：230-400目)純化所得粗物質，得到標題化合物產率： 65% (9.2 g，白色固體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 10.37 (bs, 1H), 7.31-7.22 (m, 5H), 7.01-6.65 (m, 6H), 4.32-4.13 (m, 2H), 4.10-3.90 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.62-1.34 (m, 4H), 1.08-0.98 (m, 4H), 0.74-0.65 (m, 6H)。LCMS : (方法E) 541.2 (M⁺ +H), Rt. 2.86 min, 93.67% (max)。

中間物 13 2 -(( 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 2 -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 7 -( 甲硫基 )- 1 , 1 - 二氧離子基 - 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫 - 1 , 2 , 5 - 苯并噻二氮呯 - 8 - 基 ) 氧基 ) 乙酸第三丁酯

向3-丁基-3-乙基-8-羥基-2-(4-甲氧基苯甲基)-7-(甲硫基)-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯1,1-二氧化物(中間物12；1 g，1.85 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加無水K₂ CO₃ (0.51 g，3.70 mmol)及溴乙酸第三丁酯(0.25 mL，2.77 mmol)，且將反應混合物在100℃下加熱16小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物用EtOAc (20 mL)稀釋將有機層用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮藉由Isolera管柱層析(溶離劑：15% EtOAc/PE；矽膠：230-400目)純化所得粗物質，得到標題化合物產率： 66% (0.8 g，白色固體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ 7.29-7.27 (m, 4H), 7.11-6.96 (m, 4H), 6.88 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 6.81 (s, 1H), 3.31 (s, 2H), 4.81 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.40 (s, 13H), 1.11-0.81 (m, 4H), 0.78-0.55 (m, 6H)。LCMS : (方法A) 655.3 (M⁺ +H), Rt. 3.51 min, 90.95% (max)。

中間物 14 ( S )- 2 -(( 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 2 -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 7 -( 甲硫基 )- 1 , 1 - 二氧離子基 - 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫 - 1 , 2 , 5 - 苯并噻二氮呯 - 8 - 基 ) 氧基 ) 乙酸第三丁酯及 ( R )- 2 -(( 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 2 -( 4 - 甲氧基苯甲基 )- 7 -( 甲硫基 )- 1 , 1 - 二氧離子基 - 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫 - 1 , 2 , 5 - 苯并噻二氮呯 - 8 - 基 ) 氧基 ) 乙酸第三丁酯

藉由對掌性SFC (方法H)分離外消旋2-((3-丁基-3-乙基-2-(4-甲氧基苯甲基)-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸第三丁酯(0.52 g，0.79 mmol)之兩種對映異構體在50℃下真空濃縮物質第一溶離份對應於對映異構體1且第二溶離份對應於對映異構體2兩種對映異構體之絕對組態為未知的 對映異構體1：產率： 38% (200 mg，白色固體)對掌性 SFC: (方法J) Rt. 3.13 min, 99.90% (Max)。 對映異構體2：產率： 42% (220 mg，白色固體)。LCMS: (方法E) 654.8 (M⁺ +H), Rt. 3.55 min, 99.21% (Max)HPLC : (方法B) Rt. 7.12 min, 99.02% (Max)對掌性 SFC: (方法J) Rt. 3.84 min, 98.09% (Max)。

實例 1 2 -(( 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 7 -( 甲硫基 )- 1 , 1 - 二氧離子基 - 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫苯并 - 1 , 2 , 5 - 噻二氮呯 - 8 - 基 ) 氧基 ) 乙酸

在0℃下，向2-((3-丁基-3-乙基-2-(4-甲氧基苯甲基)-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸第三丁酯(中間物13；0.8 g，1.22 mmol)於DCM (10 mL)中之攪拌溶液中添加TFA (4 mL)及三乙基矽烷(4 mL)，且將反應混合物在室溫下攪拌4小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物倒入冰冷的水中且用DCM (2×10 mL)萃取水層將合併之有機層用冰冷的水(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮藉由製備型HPLC (方法D)純化所得粗物質，得到標題化合物產率： 20% (0.12 g，灰白色固體)。 ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ): δ13.18 (s, 1H), 7.27 (t,J = 8.0 Hz, 3H), 7.18-7.04 (m, 3H), 6.95-6.93 (m, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 3.82 (s, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.62-1.52 (m, 2H), 1.49-1.43 (m, 2H), 1.40-1.35 (m, 1H), 1.24-0.97 (m, 3H), 0.76-0.72 (m, 6H)。LCMS: (方法A) 479.1 (M⁺ +H), Rt. 2.65 min, 99.44% (max)HPLC : (方法B) Rt. 5.58 min, 97.46% (Max)。

實例 2 及 3 ( S )- 2 -(( 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 7 -( 甲硫基 )- 1 , 1 - 二氧離子基 - 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫 - 1 , 2 , 5 - 苯并噻二氮呯 - 8 - 基 ) 氧基 ) 乙酸及 ( R )- 2 -(( 3 - 丁基 - 3 - 乙基 - 7 -( 甲硫基 )- 1 , 1 - 二氧離子基 - 5 - 苯基 - 2 , 3 , 4 , 5 - 四氫 - 1 , 2 , 5 - 苯并噻二氮呯 - 8 - 基 ) 氧基 ) 乙酸

向2-((3-丁基-3-乙基-2-(4-甲氧基苯甲基)-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫苯并-1,2,5-噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸第三丁酯之對映異構體1(中間物14；0.20 g，0.33 mmol)於甲苯(6 mL)中之溶液中添加三苯胺(0.16 g，0.67 mmol)，且將反應混合物冷卻至0℃隨後添加TFA (0.77 g，6.72 mmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌16小時反應完成(藉由TLC監測)後，將反應混合物用EtOAc (15 mL)稀釋，且將有機層用水(2×10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌有機部分經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮藉由Isolera管柱層析(溶離劑：30% EtOAc/PE；矽膠：230-400目)純化所得粗物質，得到標題化合物之對映異構體1

遵循相同程序，以0.22 g之中間物14之對映異構體2為起始物質獲得標題化合物之對映異構體2兩種對映異構體之絕對組態為未知的 對映異構體1：產率 ： 43% (70 mg，白色固體) ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 13.14 (bs, 1H), 7.29-7.25 (m, 3H), 7.11-7.06 (m, 3H), 6.94 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 3.85 (bs, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.72-1.58 (m, 1H), 1.57-1.45 (m, 1H), 1.43-1.35 (m, 2H), 1.29-1.14 (m, 1H), 1.13-0.88 (m, 3H), 0.74 (t,J = 7.2 Hz, 6H)。LCMS: (方法E) 478.8 (M⁺ +H), Rt. 2.92 min, 98.18% (max)HPLC : (方法B) Rt. 5.54 min, 97.87% (Max)對掌性 SFC: (方法G) Rt. 2.0 min, 99.30% (Max)。 對映異構體2：產率： 37% (60 mg，白色固體) ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 13.10 (bs, 1H), 7.29-7.25 (m, 3H), 7.11-7.06 (m, 3H), 6.96-6.94 (m, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 3.80 (bs, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.72-1.58 (m, 1H), 1.57-1.45 (m, 1H), 1.43-1.35 (m, 2H), 1.29-1.13 (m, 1H), 1.13-0.88 (m, 3H), 0.74 (t,J = 7.2 Hz, 6H)。LCMS: (方法E) 478.9 (M⁺ +H), Rt. 2.92 min, 98.99% (max),HPLC : (方法B) Rt. 5.53 min, 97.81% (Max)對掌性 SFC: (方法G) Rt. 1.89 min, 100% (Max)。

生物分析IBAT (h/m) 分析方案 將10,000個細胞(人類或小鼠IBAT過度表現細胞)接種於96孔盤(Corning CLS3809)中之200 µL MEM-α培養基(Gibco 12571-063)中，該培養基補充有10% FBS (Gibco 10438026)且含有嘌呤黴素(Gibco A1113803) (10 µg/mL)，且將該等細胞在37℃下5% CO₂ 中培育48小時。培育後，自孔中傾析出培養基且用300 µL基礎MEM-α培養基(不含FBS)洗滌細胞兩次。每次傾析基礎MEM-α培養基後，將盤對著紙巾輕拍以確保最大程度地移除殘餘培養基。

將在DMSO (Sigma D2650)中製備之測試抑制劑稀釋液(最高測試濃度為10 µM，3倍連續稀釋，10個點)添加於含有0.25 µM 3H-牛膽酸(ARC ART-1368)及5 µM冷牛膽酸(Sigma T4009)之培育混合物(維持0.2%最終DMSO濃度)中。隨後將50 µL含有測試抑制劑之培育混合物添加至孔中(一式兩份)，且將盤在CO₂ 培育箱中在37℃下培育20分鐘。培育後，藉由將盤保持在冰水混合物上2-3分鐘來停止反應，且隨後自孔中完全吸出培育混合物。用溶解於HEPES (Gibco 15630080)緩衝之(10 mM) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7.4)中的250 µL冷卻的未經標記之1 mM牛膽酸洗滌孔兩次。每次洗滌後，將盤對著紙巾輕拍以確保最大程度地移除阻斷緩衝液。

將100 µL MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621)添加至孔中且在室溫下保持隔夜，隨後在來自PerkinElmer之TopCount NXT™微量盤閃爍及發光計數器中根據3H測試方案(設定為每孔120秒讀取時間)讀取盤。

LBAT (h/m) 分析方案 將20,000個細胞(人類或小鼠LBAT過度表現細胞)接種於96孔盤(Corning CLS3809)中之100 µL MEM-α培養基(Gibco 12571-063)中，該培養基補充有10% FBS (Gibco 10438026)且含有遺傳黴素(Gibco 10131-027) (1 mg/mL)，且將該等細胞在37℃下5% CO₂ 中培育24小時。培育後，自孔中傾析出培養基且用300 µL基礎MEM-α培養基(不含FBS)洗滌細胞兩次。每次傾析基礎MEM-α培養基後，將盤對著紙巾輕拍以確保最大程度地移除殘餘培養基。

對於人類LBAT，藉由將測試抑制劑稀釋液(在DMSO (Sigma D2650)中之3倍連續稀釋液，10個點)添加於含有0.3 µM 3H-牛膽酸(ARC ART-1368)及7.5 µM冷牛膽酸(Sigma T4009)之MEM-α (無FBS) (維持0.2%最終DMSO濃度)中來製備培育混合物。對於小鼠LBAT，藉由將測試抑制劑稀釋液(在DMSO中之3倍連續稀釋液，10個點)添加於含有0.3 µM 3H-牛膽酸及25 µM冷牛膽酸之MEM-α (無FBS)(維持0.2%最終DMSO濃度)中來製備培育混合物。

隨後將50 µL含有測試抑制劑之培育混合物添加至孔中(一式兩份)，且將盤在CO₂ 培育箱中在37℃下培育20分鐘。培育後，藉由將盤保持在冰水混合物上2-3分鐘來停止反應，且隨後自孔中完全吸出培育混合物。用溶解於HEPES (Gibco 15630080)緩衝之(10 mM) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7.4)中的250 µL冷卻的未經標記之1 mM牛膽酸洗滌孔兩次。每次洗滌後，將盤對著紙巾輕拍以確保最大程度地移除阻斷緩衝液。

將100 µL MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621)添加至孔中且在室溫下保持隔夜，隨後在來自PerkinElmer之TopCount NXT™微量盤閃爍及發光計數器中根據3H測試方案(設定為每孔120秒讀取時間，正常盤方向)讀取盤。

雙向滲透率分析 ( Caco - 2 細胞 ) 將Caco-2細胞(Evotec)以70,000個細胞/孔之密度接種於Millicell® 24孔插入式細胞培養盤中，且維持於培育箱(37℃，5% CO₂ ，95% RH)中持續21天，伴隨隔天更換一次培養基。

在二甲亞碸(DMSO)中製備測試化合物阿替洛爾(atenolol) (低滲透率標誌物)、普萘洛爾(propranolol) (高滲透率標誌物)及地高辛(digoxin) (P-gp轉運路徑之受質)之儲備溶液(10 mM)。藉由用90 µL純DMSO稀釋10 µL之10 mM母儲備溶液來製備中間儲備溶液(1 mM)。藉由用4950 µL之FaSSIF緩衝液稀釋50 µL之1 mM中間儲備溶液來製備工作儲備溶液(10 µM)。向FaSSIF後添加化合物，對樣品進行音波處理持續2小時，且在37℃下以4000 RPM離心30分鐘。將4 mL上清液直接用於分析中。轉運實驗中之最終DMSO濃度為1%。

分析當天，用轉運緩衝液(HBSS，pH 7.4)洗滌Caco-2單細胞層兩次，且在培育箱中預培育30分鐘(37℃，5% CO₂ ，95% RH)。用Millicell®-ERS系統單細胞層之電阻。將跨上皮電阻(TEER)值超過350 ohm.cm² 之單細胞層選用於分析。

沿吸收方向(A2B)及分泌方向(B2A)進行分析。藉由在孔(一式兩份(n=2))中向供體室(頂部室A-B；基側室B-A)添加由化合物組成之轉運分析緩衝液(在HBSS中製備之FaSSIF緩衝液)來啟動轉運實驗。將含有1%牛血清白蛋白(BSA)的不含藥物之HBSS緩衝液(pH 7.4)引入至接受者室(A-B-基側室；B-A-頂部室)。頂部室與基側室之體積分別為0.4 mL與0.8 mL。添加投配溶液之後，將培養板在培育箱中在37℃下培育120分鐘。120分鐘之後，收集供體與接受者樣品，用相反的緩衝液進行基質匹配(1:1，30 µL研究樣品+30 µL空白緩衝液)。投配樣品基質與相反的緩衝液匹配(1:1，30 µL研究樣品+30 µL空白緩衝液)。藉由添加含有內標物之乙腈來處理樣品(60 µL研究樣品+ 200 µL含有內標物甲苯磺丁脲之乙腈，500 ng/mL)。對樣品進行渦旋且以4000 rpm離心10分鐘。用100 µL水稀釋所獲得之上清液(100 µL)且轉移至新製96孔盤。若適用，使用發現級生物分析方法藉由液相層析聯合質譜分析(LC-MS/MS)法來分析化合物在樣品中之濃度。

測試化合物阿替洛爾、普萘洛爾及地高辛之平均表觀滲透率(P_app ，×10^{- 6} cm/秒)係計算如下：

其中dq/dt =轉運速率(接受者室中化合物之轉運速率)，C₀ =供體室中之初始濃度，A =有效濾膜之表面積。

基於 HepaRG 之分析方案 按照Biopredic International提供之方案，在補充有200 mM Glutamax (Gibco 35050061)之HepaRG解凍/接種/通用培養基(Biopredic International ADD670C)解凍冷凍保存之小瓶分化HepaRG細胞(Biopredic International HPR116080)。將每孔70,000個細胞接種於96孔盤(Corning CLS3809)中之100 µL補充有200 mM Glutamax之HepaRG解凍/接種/通用培養基中，且在37℃下5% CO₂ 中培育24小時。培育後，將接種培養基替換為HepaRG維持/代謝培養基(Biopredic International ADD620C)且培育6天，每48小時補充新鮮的HepaRG維持/代謝培養基。接種後培育7天後，自孔中傾析出培育培養基，且用250 µL威廉姆斯氏E基礎培養基(William's E Basal Media) (Gibco 12551032)洗滌細胞兩次。每次傾析威廉姆斯氏E基礎培養基後，將盤對著紙巾輕拍以確保最大程度地移除殘餘培養基。

培育混合物係藉由將測試抑制劑稀釋液(在DMSO (Sigma D2650)中之3倍連續稀釋液)添加於含有0.3 µM 3H-牛膽酸(ARC ART-1368)及7.5 µM冷牛膽酸(Sigma T4009)之威廉姆斯氏E培養基(基礎) (維持0.2%最終DMSO濃度)中來製備。隨後將50 µL含有測試抑制劑之培育混合物添加至孔中(一式兩份)，且將盤在5% CO₂ 培育箱中在37℃下培育30分鐘。培育後，藉由將盤保持在冰水混合物上2-3分鐘來停止反應，且隨後自孔中完全吸出培育混合物。用溶解於HEPES (Gibco 15630080)緩衝之(10 mM) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7.4)中的250 µL冷卻的未經標記之1 mM牛膽酸洗滌孔兩次。每次洗滌後，將盤對著紙巾輕拍以確保最大程度地移除阻斷緩衝液。

將100 µL MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621)添加至孔中且在室溫下保持隔夜，隨後在來自PerkinElmer之TopCount NXT™微量盤閃爍及發光計數器中根據3H測試方案(設定為每孔120秒讀取時間，正常盤方向)讀取盤。

測試化合物稀釋液之製備 所有測試化合物在室溫下以粉末形式提供。製備測試化合物之10 mM DMSO儲備液，等分且儲存於-20℃下。由化合物之10 mM DMSO儲備液製備在DMSO中之3倍連續稀釋液，得到總共10個測試化合物稀釋液。將0.5 µL此DMSO中之稀釋液添加至含有3H-牛膽酸及冷牛膽酸之250 µL不含FBS的基礎培養基中以製備培育混合物。

生物可用性研究 使用8至9週齡之雄性小鼠(C57BL/6或CD1)或威斯塔大鼠(Wistar rat)。對於每種測試化合物，使用兩組，每組3隻動物。一組經由尾部靜脈投與1 mg/kg (媒劑100% DMSO)之單次靜脈內劑量，另一組經由管飼針投與10 mg/kg之單次經口劑量。投與經口劑量之組禁食隔夜。靜脈內投與後0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8及24小時後以及經口投與後0.25、0.5、1、2、4、6、8及24小時後收集血液樣品。血液樣品取自於隱靜脈。使用0.2% EDTA作為抗凝血劑。藉由開發用於估計血漿中之測試化合物的發現級生物分析方法，使用LC-MS/MS系統分析樣品。

結果 實例化合物之生物學資料顯示於下表8中。表 8

實例	hLBAT IC50 (nM)	hIBAT IC50 (nM)	滲透率 (Caco-2)
Papp A2B (×10-6 cm/ 秒 )	Papp B2A (×10-6 cm/ 秒 )
1		8.8	1.1	2.9
2	3979	5.7	2.52	4.0
3	4998	182

PD 模型 ： 測試化合物對雄性 C57BL6 小鼠之總膽酸含量的評估。 使用8至9週齡之C57BL/6N Tac小鼠來研究膽酸調節劑對膽酸含量的影響。在檢疫及適應期結束後，將動物基於體重隨機分成x個實驗組：(i)媒劑對照，及(ii)每日經口投與y mg/kg測試化合物一次。用測試化合物處理動物7天。在研究之第5天，將動物單獨圈養於新籠中。在第7天，自各籠收集糞便，隨後經由眼眶後途徑自各動物抽取血液。對動物實施安樂死以自各動物收集肝臟及末端迴腸用於進一步分析。每週兩次量測體重及食物消耗。在第7天之血清樣品中分析血清脂質概況。在第7天之血清樣品中量測血清中之總膽酸。在第7天之糞便樣品中量測糞便膽汁排泄。在第7天之肝臟樣品中量化CYP7A1及SHP之肝臟表現。在第7天之肝臟樣品中分析肝臟甘油三酯及總膽固醇。

尿膽酸模型 ： 測試化合物對雄性 C57BL / 6N 小鼠之尿膽酸含量的評估。 使用8至9週齡之C57BL/6N Tac小鼠來研究膽酸調節劑對膽酸含量的影響。在檢疫及適應期結束後，將動物基於體重隨機分成x個實驗組：(i)媒劑對照，及(ii)每日經口投與y mg/kg測試化合物一次。用測試化合物處理動物7天。在研究之第6天，將動物轉移至代謝籠中。在第7天，自各代謝籠收集糞便及尿液，隨後經由眼眶後途徑自各動物抽取血液。對動物實施安樂死以自各動物收集腎臟用於進一步分析。每週量測體重兩次。在第7天之血清樣品中量測血清中之總膽酸。在第7天之糞便樣品中量測糞便膽酸排泄。在第7天之樣品中量測膽酸之尿排泄。在第7天之樣品中量化ASBT、OSTa、OSTAb及MRP2之腎臟表現。

Claims (15)

1. 一種式(I)化合物

   

   其中 R¹ 及R² 各自獨立地為C_{1 - 4} 烷基； R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、C_{1 - 4} 烷基、C_{1 - 4} 鹵烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{1 - 4} 鹵烷氧基、氰基、硝基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基、N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N -(芳基-C_{1 - 4} 烷基)胺基； n為整數1、2或3；及 R⁴ 係選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 烷基、C_{3 - 6} 環烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{3 - 6} 環烷氧基、C_{1 - 4} 烷硫基、C_{3 - 6} 環烷硫基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基； 或其醫藥學上可接受之鹽， 其限制條件為該化合物並非來自由以下組成之群的化合物： 2-((3,3-二丁基-7-甲基-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸； 2-((3,3-二丁基-7-(甲硫基)-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸；及 2-((7-溴-3,3-二丁基-5-苯基-1,1-二氧離子基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸。
2. 如請求項1之化合物，其中R¹ 為正丁基。
3. 如請求項1或2之化合物，其中R² 為正丁基。
4. 如請求項1或2之化合物，其中R² 為乙基。
5. 如請求項1至4中任一項之化合物，其中R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 鹵烷基、C_{1 - 4} 烷氧基及C_{1 - 4} 鹵烷氧基。
6. 如請求項1至5中任一項之化合物，其中R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、氟、氯、溴、羥基、氰基、三氟甲基、甲氧基及三氟甲氧基。
7. 如請求項1至6中任一項之化合物，其中R⁴ 係選自由以下組成之群：鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{1 - 4} 烷硫基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基。
8. 如請求項1至7中任一項之化合物，其中R⁴ 係選自由以下組成之群：氟、氯、溴、羥基、氰基、甲基、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基、胺基、甲胺基及二甲胺基。
9. 如請求項1之化合物，其選自由以下組成之群： 2-((3-丁基-3-乙基-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫苯并-1,2,5-噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸； (S)-2-((3-丁基-3-乙基-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸；及 (R)-2-((3-丁基-3-乙基-7-(甲硫基)-1,1-二氧離子基-5-苯基-2,3,4,5-四氫-1,2,5-苯并噻二氮呯-8-基)氧基)乙酸； 或其醫藥學上可接受之鹽。
10. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如請求項1至9中任一項之化合物及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
11. 一種式(I)化合物

    

    其中 R¹ 及R² 各自獨立地為C_{1 - 4} 烷基； R³ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、C_{1 - 4} 烷基、C_{1 - 4} 鹵烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{1 - 4} 鹵烷氧基、氰基、硝基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基、N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N -(芳基-C_{1 - 4} 烷基)胺基； n為整數1、2或3；及 R⁴ 係選自由以下組成之群：氫、鹵素、羥基、氰基、C_{1 - 4} 烷基、C_{3 - 6} 環烷基、C_{1 - 4} 烷氧基、C_{3 - 6} 環烷氧基、C_{1 - 4} 烷硫基、C_{3 - 6} 環烷硫基、胺基、N -(C_{1 - 4} 烷基)胺基及N , N -二(C_{1 - 4} 烷基)胺基； 或其醫藥學上可接受之鹽，其供用作藥劑。
12. 如請求項11之所使用之化合物，其係用於治療或預防心血管疾病或脂肪酸代謝病症或葡萄糖利用病症，諸如高膽固醇血症；脂肪酸代謝病症；1型及2型糖尿病；糖尿病之併發症，包括白內障、微血管疾病及大血管疾病、視網膜病變、神經病變、腎病變及傷口癒合延遲、組織缺血、糖尿病足、動脈硬化、心肌梗塞、急性冠狀動脈症候群、不穩定型心絞痛、穩定型心絞痛、中風、周邊動脈阻塞疾病、心肌病、心臟衰竭、心律不整及血管再狹窄；糖尿病相關疾病，諸如胰島素抗性(葡萄糖恆定受損)、高血糖症、高胰島素血症、脂肪酸或甘油之血液含量升高、肥胖症、血脂異常、包括高三酸甘油酯血症之高脂質血症、代謝症候群(症候群X)、動脈粥樣硬化及高血壓；及用於增加高密度脂蛋白含量。
13. 如請求項11之所使用之化合物，其係用於治療或預防胃腸道疾病或病症，諸如便秘(包括慢性便秘、功能性便秘、慢性特發性便秘(CIC)、間歇性/偶發性便秘、因糖尿病繼發之便秘、因中風繼發之便秘、因慢性腎病繼發之便秘、因多發性硬化症繼發之便秘、因帕金森氏病(Parkinson's disease)繼發之便秘、因全身性硬化症繼發之便秘、藥物誘發之便秘、伴有便秘之大腸急躁症(IBS-C)、混合型大腸急躁症(IBS-M)、小兒功能性便秘及類鴉片誘發之便秘)；克羅恩氏病(Crohn's disease)；原發性膽酸吸收障礙；大腸急躁症(IBS)；發炎性腸病(IBD)；迴腸發炎；及逆流性疾病及其併發症，諸如巴雷特氏食道(Barrett's esophagus)、膽汁逆流性食道炎及膽汁逆流性胃炎。
14. 如請求項11之所使用之化合物，其係用於治療或預防肝臟疾病或病症，諸如遺傳性肝臟代謝病症；膽酸合成之先天性錯誤；先天性膽管異常；膽道閉鎖；葛西術後膽道閉鎖(post-Kasai biliary atresia)；肝移植術後膽道閉鎖；新生兒肝炎；新生兒膽汁鬱積；遺傳性膽汁鬱積；腦腱性黃瘤病；次級BA合成缺陷；齊薇格氏症候群(Zellweger's syndrome)；囊腫性纖維化相關肝病；α1-抗胰蛋白酶缺乏症；阿拉傑里症候群(Alagilles syndrome，ALGS)；拜勒症候群(Byler syndrome)；初級膽酸(BA)合成缺陷；進行性家族性肝內膽汁鬱積(PFIC)，包括PFIC-1、PFIC-2、PFIC-3及非特異性PFIC、膽汁分流術後PFIC及肝移植術後PFIC；良性復發性肝內膽汁鬱積(BRIC)，包括BRIC1、BRIC2及非特異性BRIC、膽汁分流術後BRIC及肝移植術後BRIC；自體免疫肝炎；原發性膽汁性肝硬化(PBC)；肝纖維化；非酒精性脂肪肝病(NAFLD)；非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)；門靜脈高血壓；膽汁鬱積；唐氏症候群膽汁鬱積(Down syndrome cholestasis)；藥物誘發性膽汁鬱積；妊娠肝內膽汁鬱積(妊娠期黃疸)；肝內膽汁鬱積；肝外膽汁鬱積；非經腸式營養相關膽汁鬱積(PNAC)；低磷脂相關膽汁鬱積；淋巴水腫膽汁鬱積症候群1 (LSC1)；原發性硬化性膽管炎(PSC)；免疫球蛋白G4相關膽管炎；原發性膽汁性膽管炎；膽石症(膽結石)；膽道結石；輸膽管結石；膽石性胰臟炎；卡羅利病(Caroli disease)；膽管惡性腫瘤；惡性腫瘤導致膽道梗阻；膽道狹窄；AIDS膽管病；缺血性膽管病；膽汁鬱積或黃疸引起之搔癢病；胰臟炎；慢性自體免疫肝病導致進行性膽汁鬱積；肝臟脂肪變性；酒精性肝炎；急性脂肪肝；妊娠脂肪肝；藥物誘發性肝炎；鐵過載症；先天性膽酸合成缺陷1型(BAS 1型)；藥物誘發性肝損傷(DILI)；肝纖維化；先天性肝纖維化；肝硬化；蘭格漢氏細胞組織細胞增生症(Langerhans cell histiocytosis，LCH)；新生兒魚鱗癬硬化性膽管炎(NISCH)；紅血球生成性原卟啉症(EPP)；特發性成人期膽管缺失症(IAD)；特發性新生兒肝炎(INH)；非症候型小葉間膽管缺乏(NS PILBD)；北美印第安兒童期肝硬化(NAIC)；肝結節病；澱粉樣變性；壞死性小腸結腸炎；血清膽酸引起之毒性，包括血清膽酸分佈型態異常之心律不整(例如心房微顫)、與肝硬化相關之心肌病(「膽心病」)及與膽汁鬱積性肝病相關之骨骼肌萎縮；多囊性肝病；病毒性肝炎(包括A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎及E型肝炎)；肝細胞癌(肝癌)；膽管癌；膽酸相關之胃腸道癌症；及由肝臟、膽道及胰臟腫瘤及贅瘤引起之膽汁鬱積；或用於增強肝臟疾病之皮質類固醇療法。
15. 如請求項11之所使用之化合物，其係用於治療或預防超吸收症候群(包括無β脂蛋白血症、家族性低β脂蛋白血症(FHBL)、乳糜微粒滯留病(CRD)及植固醇血症)；維生素過多症及骨質石化病；高血壓；腎小球高濾過；多囊性腎病(PKD) (包括體染色體顯性多囊性腎病(ADPKD)及體染色體隱性多囊性腎病(ARPKD))；及腎衰竭之搔癢病；或用於對肝臟疾病或代謝疾病相關腎損傷的保護措施中。