RU2807524C2

RU2807524C2 - Составы антител к rsv и способы их применения

Info

Publication number: RU2807524C2
Application number: RU2021112761A
Authority: RU
Inventors: Венус ХАШЕМИ; Арнаб Де; Чакравартхи Начу НАРАСИМХАН
Original assignee: МЕРК ШАРП И ДОУМ ЭлЭлСи
Priority date: 2018-10-18
Filing date: 2019-10-14
Publication date: 2023-11-15

Abstract

Настоящее изобретение относится к стабильным составам, содержащим антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с респираторно-синцитиальным вирусом (RSV). Также предусмотрены способы профилактики и/или лечения связанных с RSV заболеваний с помощью составов по настоящему изобретению. Изобретение обеспечивает составы, которые содержат высокую концентрацию антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и уровень вязкости, приемлемый для подкожной доставки, а также не приводят к высоким уровням агрегации. 3 н. и 17 з.п. ф-лы, 15 ил., 10 табл., 8 пр.

Description

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

Настоящее изобретение относится к стабильным составам, содержащим антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с респираторно-синцитиальным вирусом (RSV). Также предусмотрены способы профилактики и/или лечения связанных с RSV заболеваний с помощью составов по настоящему изобретению.

Ссылка на родственные заявки

Не применима.

Ссылка на перечень последовательностей, представленный электронным образом

Перечень последовательностей настоящей заявки представлен в электронном виде через EFS-Web в виде перечня последовательностей в формате ASCII с именем файла «24641WOPCT-SEQLIST.TXT», датой создания 9 октября 2019 г. и размером 9,19 кБ. Этот перечень последовательностей, представленный через EFS-Web, представляет собой часть описания и полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

Парамиксовирусы представляют собой оболочечные РНК-вирусы с отрицательной цепью, которые являются важными патогенами человека и животных. Респираторно-синцитиальный вирус человека (hRSV, RSV) принадлежит к семейству Paramyxoviridae, подсемейству Pneumovirinae. Были идентифицированы два подтипа, тип А и тип В, которые представляют собой основную причину тяжелых, а иногда даже смертельных респираторных инфекций у детей в возрасте до 6 месяцев. Взрослые с основными заболеваниями, такими как COPD, бронхиальная астма и рак, и взрослые с ослабленным иммунитетом, включая в себя HIV или посттрансплантационный период, также подвержены риску развития тяжелой инфекции RSV. Пятнадцать процентов ежегодных госпитализаций взрослых старше 50 лет из-за острой респираторной инфекции вызваны RSV. В Соединенных Штатах RSV вызывает более 100000 госпитализаций и, по оценкам, ежегодно вызывает около 160000 смертей во всем мире. В настоящее время вакцины против RSV не существует, а испытание с инактивированным формалином вирусом было связано с увеличением тяжести заболевания у младенцев после инфицирования RSV. Другие представители семейства, включая в себя метапневмовирус человека (hMPV) и вирус парагриппа человека (hPIV), также несут ответственность за острое респираторное заболевание, подобное hRSV.

Геном hRSV представляет собой одноцепочечную отрицательно-полярную молекулу РНК размером около 15 т.п.н., которая кодирует 11 белков. Два из этих белков представляют собой основные поверхностные гликопротеины вириона. Это (i) белок прикрепления (G), который опосредует связывание вируса с клетками, и (ii) белок слияния (F), который способствует как слиянию вирусной и клеточной мембран на начальных этапах инфекционного цикла, так и слиянию мембраны инфицированных клеток с мембранами соседних клеток с образованием характерных синцитий. Белок прикрепления G связывается с рецепторами клеточной поверхности и взаимодействует с белком F. Это взаимодействие запускает конформационное изменение белка F, чтобы вызвать слияние мембран, высвобождая, таким образом, вирусный рибонуклеопротеиновый комплекс в цитоплазму клетки-хозяина.

Было показано, что моноклональные антитела к белку F или G обладают нейтрализующим действием in vitro и профилактическим действием in vivo. Смотрите, например, Beeler and Coelingh 1989, J. Virol. 63:2941-50; Garcia-Barreno et al, 1989, J. Virol. 63:925-32; Taylor et al, 1984, Immunology 52:137-142; Walsh et al, 1984, Infection and Immunity 43:756-758 и патенты США №5842307 и 6818216. Другие антитела к hRSV описаны в международных заявках на патент WO 94/06448 и WO 92/04381, а также в патентах США №8221759 и 9963500.

Антитела для применения у субъектов-людей должны храниться до применения и транспортироваться к месту введения. Воспроизводимое достижение желаемого уровня лекарственного средства антитела у субъекта требует, чтобы лекарственное средство хранилось в составе, который поддерживает биоактивность лекарственного средства. Существует потребность в стабильных составах антител к RSV для фармацевтического применения, например, для профилактики и/или лечения связанных с RSV заболеваний. Предпочтительно, такие составы будут характеризоваться длительным сроком хранения, будут стабильными при хранении и транспортировке и их можно будет вводить в высоких концентрациях, например, для применения при подкожном введении, а также в низких концентрациях, например, для внутривенного введения.

Составы по настоящему изобретению применимы для подкожной доставки нуждающемуся в этом пациенту. Для обеспечения максимальной терапевтической пользы пациентам желательно, чтобы составы для подкожной (SC) доставки содержали высокую концентрацию антител (75-200 мг/мл). Для подкожных инъекций часто требуется высокая концентрация API из-за исторической биодоступности 50-60% для подкожных инъекций и ожидаемого диапазона доз продукта антитела. Однако высокая концентрация антитела или его антигенсвязывающего фрагмента может вносить вклад в другие свойства продукта, что было бы нежелательно, например, низкая инъекционная способность из-за повышенной вязкости и выше физиологической осмоляльности и повышенной агрегации. Следовательно, предпочтительно, чтобы продукт антител, предназначенный для подкожного введения, уравновешивал эффекты концентрации при поддержании уровня лекарственного средства, обеспечивающего наивысший терапевтический эффект. Идеальный продукт содержит высокую концентрацию белка, низкую вязкость, осмоляльность, аналогичную физиологическим условиям, и низкий уровень агрегации при типичных условиях хранения. Повышенная вязкость при высокой концентрации белка может не только затруднить извлечение продукта из контейнера с помощью шприца, но и введение пациенту необходимой дозы из шприца (проходимость через иглу). Преимущественно варианты осуществления настоящего изобретения обеспечивают составы, которые содержат высокую концентрацию антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и уровень вязкости, приемлемый для подкожной доставки. Кроме того, составы по настоящему изобретению не приводят к высоким уровням агрегации, как более подробно показано в примерах.

Сущность настоящего изобретения

В настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента; b) от около 5 мМ до около 20 мМ буфера; с) стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из: (i) от около 6% до около 8% в массово-объемном отношении (масса/объем) невосстанавливающего сахара; (ii) от около 25 мМ до около 75 мМ L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина, L-пролина или фармацевтически приемлемой соли L-пролина; L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина; L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата или смеси аминокислот, описанных в настоящем документе, и (iii) около от 25 мкМ до 75 мкМ хелатора; d) от около 0,01% до около 0,10% неионного поверхностно-активного вещества и е) от около 1 мМ до около 20 мМ антиоксиданта.

Согласно другому варианту осуществления в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 150 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 6% до около 8% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) вспомогательное вещество, выбранное из следующих: L-аргинин или фармацевтически приемлемая соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, L-лизин или фармацевтически приемлемая соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, смесь L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и смесь L-аргинина (HCl) в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-лизина (HCl) в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ; е) DTPA в концентрации около от 25 мкМ до 75 мкМ; f) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% и необязательно g) L-метионин в концентрации от около 1 мМ до около 20 мМ.

Согласно другому варианту осуществления в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидин в концентрации около 10 мМ; с) сахарозу в концентрации около 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) вспомогательное вещество, выбранное из L-аргинина (HCl) в концентрации около 50 мМ, L-лизина (HCl) в концентрации около 50 мМ, смеси L-аргинина в концентрации около 25 мМ и L-глутамата в концентрации около 25 мМ и смеси L-аргинина (HCl) в концентрации около 25 мМ и L-лизина (HCl) в концентрации около 25 мМ; е) DTPA в концентрации около 50 мкМ; f) полисорбат 80 в концентрации около 0,02% и необязательно g) L-метионин в концентрации около от 1 мМ до 20 мМ.

Согласно другому варианту осуществления в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидин в концентрации около 10 мМ; с) сахарозу в концентрации около 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) вспомогательное вещество, выбранное из L-аргинина (HCl) в концентрации 50 мМ, L-лизина (HCl) в концентрации 50 мМ, смеси L-аргинина в концентрации 25 мМ и L-глутамата в концентрации 25 мМ и смеси L-аргинина в концентрации 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации 25 мМ; е) DTPA в концентрации 50 мкМ; f) полисорбат 80 в концентрации 0,02% и необязательно g) L-метионин в концентрации от 1 мМ до 20 мМ.

Согласно другому варианту осуществления в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидин в концентрации около 10 мМ; с) сахарозу в концентрации около 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) смесь L-аргинина в концентрации 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации 25 мМ; е) DTPA в концентрации 50 мкМ и f) полисорбат 80 в концентрации 0,02%.

Согласно другому варианту осуществления в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, состоящий из: а) антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидина в концентрации около 10 мМ; с) сахарозы в концентрации около 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) смеси L-аргинина в концентрации 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации 25 мМ; е) DTPA в концентрации 50 мкМ и f) полисорбата 80 в концентрации 0,02%.

Согласно одному аспекту в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) вспомогательное вещество, выбранное из группы, состоящей из следующего: L-аргинин или фармацевтически приемлемая соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, L-лизин или фармацевтически приемлемая соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации около от 25 мМ до 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем.

Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) L-аргинин или фармацевтически приемлемую соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) L-аргинин или фармацевтически приемлемую соль L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) L-лизин или фармацевтически приемлемую соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) L-лизин или фармацевтически приемлемую соль L-лизина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до около 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно некоторым вариантам осуществления композиция характеризуется значением рН от 5,5 до 6,5.

Согласно некоторым вариантам осуществления композиция характеризуется значением рН 6,0.

В настоящем документе также представлены способы профилактики и/или лечения связанных с RSV заболеваний у нуждающегося в этом пациента-человека, предусматривающие: введение пациенту эффективного количества составов антител kRSV по настоящему изобретению.

В настоящем документе также представлены способы лечения или профилактики инфекции RSV у нуждающегося в этом пациента-человека, предусматривающие: введение пациенту эффективного количества составов антител к RSV по настоящему изобретению.

В настоящем документе также представлены способы лечения или профилактики инфекции RSV у нуждающегося в этом пациента-человека, предусматривающие: введение пациенту эффективного количества составов антител к RSV по настоящему изобретению, причем эффективное количество включает в себя фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, причем фиксированная доза находится в диапазоне от около 10 до около 100 мг.

В настоящем документе также представлены способы лечения или профилактики инфекции RSV у нуждающегося в этом пациента-человека, предусматривающие: введение пациенту эффективного количества составов антител к RSV по настоящему изобретению, причем составы антител к RSV вводят подкожно или причем составы антител к RSV вводят внутривенно; или причем составы антител к RSV вводят внутримышечно.

В настоящем документе также представлено применение составов антител к RSV по настоящему изобретению для лечения или профилактики инфекции RSV у пациента-человека.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1А-1С показаны результаты UPSEC: % HMW, % mAb (мономер) и % LMW в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения 5°С.

На фиг. 2А-2С показаны результаты UPSEC: % HMW, % mAb (мономер) и % LMW в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения 25°С.

На фиг. 3А-3С показаны результаты UPSEC: % HMW, % mAb (мономер) и % LMW в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения при 40°С.

На фиг. 4А-4В показаны результаты HP-IEX: % всех пиков кислых форм и % пика определяемого компонента в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения 5°С.

На фиг. 5А-5В показаны результаты HP-IEX: % всех пиков кислых форм и % пика определяемого компонента в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения 25°С.

На фиг. 6А-6В показаны результаты HP-IEX: % всех пиков кислых форм и % пика определяемого компонента в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения при 40°С.

На фиг. 7 показаны результаты снижения вязкости вспомогательного вещества антитела к RSV в концентрации 100 мг/мл (все эксперименты повторяли n=5, чтобы получить стандартное отклонение).

На фиг. 8А-8С показаны результаты UPSEC: % HMW, % mAb (мономер) и % LMW в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения 5°С.

На фиг. 9А-9С показаны результаты UPSEC: % HMW, % mAb (мономер) и % LMW в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения 25°С.

На фиг. 10А-10С показаны результаты UPSEC: % HMW, % mAb (мономер) и % LMW в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения при 40°С.

На фиг. 11А-11В показаны результаты HP-IEX: % всех пиков кислых форм и % пика определяемого компонента в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения 5°С.

На фиг. 12А-12В показаны результаты HP-IEX: % всех пиков кислых форм и % пика определяемого компонента в зависимости от времени для составов антител к RSV в условиях хранения 25°С.

На фиг. 13А-13В показаны результаты HP-IEX: % всех пиков кислых форм и % пика определяемого компонента в зависимости от времени для составов антител к RSV а условиях хранения при 40°С.

На фиг. 14 показаны результаты процентной деградации PS80 при 40°С.

На фиг. 15 показана гистограмма, сравнивающая вязкость составов с вспомогательными веществами из гистидина в концентрации 80 мМ, лизина в концентрации 70 мМ или аргинина в концентрации 70 мМ.

Подробное описание настоящего изобретения

В настоящем изобретении предусмотрены стабильные составы, содержащие антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывается с RSV. В настоящем изобретении предусмотрены стабильные составы, содержащие антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывается с F-белком RSV человека, которые применимы для способов лечения или профилактики инфекции RSV человека.

Антитела, используемые в составах, раскрытых в настоящем документе, описаны в патентах США №9963500. Иллюстративное антитело, используемое в составах, раскрытых в настоящем документе, описано в патентах США №9963500. Это иллюстративное антитело содержит определяющие комплементарность области (CDR), имеющие аминокислотные последовательности: SEQ ID NO: 1 (CDR 1 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 2 (CDR 2 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 3 (CDR 3 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 4 (CDR 1 легкой цепи), SEQ ID NO: 5 (CDR 2 легкой цепи) и SEQ ID NO: 6 (CDR 3 легкой цепи). Кроме того, это иллюстративное антитело содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8. Кроме того, это иллюстративное антитело включает в себя тяжелую и легкую цепи иммуноглобулина, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10.

I. Определения и сокращения

Определения используются по всему описанию. Сокращения определены по всему описанию и формуле изобретения.

Для более легкого понимания настоящего изобретения некоторые технические и научные термины конкретно определены ниже. Если специально не определено где-либо в этом документе, все другие технические и научные термины, используемые в настоящем документе, характеризуются значением, обычно понимаемым специалистом в настоящей области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение.

Используемые во всем описании и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают в себя множественное число, если контекст явно не диктует иное.

Ссылка на «или» указывает на одну или обе возможности, если контекст явно не диктует одну из указанных возможностей. В некоторых случаях «и/или» использовалось, чтобы выделить одну или обе возможности.

Когда приводится диапазон значений, такой как «количество от 50 мг до 100 мг», предполагается, что диапазон включает в себя указанные значения.

«Введение» и «воздействие» применительно к животному, человеку, экспериментальному субъекту, клетке, ткани, органу или биологической жидкости относятся к контакту экзогенного фармацевтического, терапевтического, диагностического средства или композиции с животным, человеком, субъектом, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью. Воздействие на клетки предусматривает контакт реагента с клеткой, а также контакт реагента с жидкостью, причем жидкость контактирует с клеткой. «Введение» и «воздействие» также означают воздействие in vitro и ex vivo, например, на клетки, реагентом, диагностическим, связывающим соединением или другой клеткой.

«Связанное с RSV заболевание» означает любое заболевание, вызванное, прямо или косвенно, инфекцией респираторно-синцитиальным вирусом (RSV), а также заболевания или состояния, которые предрасполагают пациента к инфицированию RSV. Примеры заболеваний, попадающих в первую категорию, включают в себя пневмонию и бронхиолит. Заболевания и состояния, относящиеся к последней категории (т.е. те, которые подвергают пациента риску тяжелой инфекции RSV), включают в себя муковисцидоз, врожденный порок сердца, рак, возрастную иммуносупрессию, реципиентов трансплантата и, как правило, любые состояния, вызывающие состояние иммуносупрессии. или снижение функции иммунной системы, например, режимы послеоперационной трансплантации органов или преждевременные роды.

«Лечить» или «лечение» означает введение терапевтического средства, такого как состав, содержащий любое из антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, внутрь или снаружи субъекту или пациенту, имеющему один или более симптомов заболевания, или с подозрением наличия заболевания, при котором средство обладает терапевтической активностью. Как правило, средство вводят в количестве, эффективном для облегчения одного или более симптомов заболевания у подвергающегося лечению субъекта или популяции, либо путем индукции регресса, либо ингибирования прогрессирования такого симптома(ов) в любой клинически измеряемой степени. Количество терапевтического средства, которое эффективно для облегчения какого-либо конкретного симптома заболевания, может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраста и массы пациента, а также способности лекарственного средства вызывать желаемый ответ у субъекта. Облегчился ли симптом заболевания, можно оценить с помощью любого клинического измерения, как правило, используемого врачами или другими квалифицированными поставщиками медицинских услуг для оценки степени тяжести или статуса прогрессирования этого симптома. Лечение антителами к RSV также можно сочетать с другими вмешательствами (антителами, нуклеиновыми кислотами, вакцинами и низкомолекулярными соединениями) для лечения других респираторных патогенов.

«Предотвращать» или «профилактика» означает вводить профилактическое средство, такое как состав, содержащий любое из антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, внутрь или снаружи субъекту или пациенту с риском заражения RSV, для которого средство обладает профилактической активностью. Профилактика включает в себя снижение вероятности или тяжести последующей инфекции RSV, облегчение симптомов, связанных с инфекцией нижних дыхательных путей (LRI) после инфицирования RSV, и индукцию иммунитета для защиты от инфекции RSV. Как правило, средство вводят в количестве, эффективном для нейтрализации RSV в легких и/или носу с целью блокирования инфекции. Количество профилактического средства, которое эффективно для облегчения симптомов любого конкретного заболевания, может варьироваться в зависимости от таких факторов, как возраст и масса пациента, а также способность средства вызывать желаемый ответ у субъекта. Облегчился ли симптом заболевания, можно оценить с помощью любого клинического измерения, как правило, используемого врачами или другими квалифицированными поставщиками медицинских услуг для оценки степени тяжести или статуса прогрессирования этого симптома или, в некоторых случаях, уменьшения потребности в госпитализации.

Термин «пациент» (альтернативно именуемый в настоящем документе «субъект» или «индивидуум») относится к млекопитающему (например, крысе, мыши, собаке, кошке, кролику), способному лечиться составами по настоящему изобретению, наиболее предпочтительно человеку. Согласно некоторым вариантам осуществления пациент является взрослым пациентом. Согласно другим вариантам осуществления пациент является пациентом-ребенком. Те, кто «нуждается в лечении», включают в себя тех пациентов, которым может помочь лечение составами по настоящему изобретению.

Термин «фармацевтически эффективное количество» или «эффективное количество» означает количество, при котором терапевтический состав вводится пациенту для лечения заболевания или состояния. Специалист в настоящей области техники признает, что этот уровень может варьироваться в зависимости от характеристик пациента, таких как возраст, масса и т.д.

Используемая в настоящем документе фраза «фиксированная доза» относится к количеству (например, в миллиграммах) активного ингредиента, которое вводится пациенту.

Термин «приблизительно» при изменении количества (например, мМ или М) вещества или состава, процентного содержания (в объемном отношении или в массово-объемном отношении) компонента состава, рН раствора/состава или значения параметра, характеризующего этап способа или т.п., относится к изменению числовой величины на плюс или минус 5%. Такое изменение числового количества может происходить, например, посредством типичных процедур измерения, обращения и отбора проб, связанных с приготовлением, характеристикой и/или использованием вещества или композиции; из-за непреднамеренной ошибки в этих процедурах; из-за различий в производстве, источнике или чистоте ингредиентов, используемых для изготовления или использования композиций или выполнения процедур; и тому подобное.

Фраза «состоит по существу из» или варианты, такие как «состоять по существу из» или «состоящий по существу из», используемые в описании и формуле изобретения, указывают на включение любых перечисленных элементов или группы элементов и необязательное включение других элементов, сходных или отличающихся по природе от перечисленных элементов, которые существенно не изменяют основные или новые свойства указанной схемы введения, способа или состава. В качестве неограничивающего примера связывающее соединение, которое состоит по существу из указанной аминокислотной последовательности, может также включать в себя одну или более аминокислот, включая в себя замены одного или более аминокислотных остатков, которые существенно не влияют на свойства связывающего соединения.

«Содержащий» или варианты, такие как «содержать», «содержит» или «состоит из», используются во всем описании и формуле изобретения во включительном смысле, то есть для указания наличия заявленных признаков, но не для исключения присутствия или добавления дополнительных функций, которые могут существенно улучшить работу или полезность любого из вариантов осуществления настоящего изобретения, если контекст не требует иного из-за выражения языком или необходимого значения.

Фраза «фармацевтический состав» относится к препаратам, которые находятся в такой форме, чтобы позволить активным ингредиентам быть эффективными, и которые не содержат дополнительных компонентов, являющихся токсичными для субъектов, которым может быть введен состав. Термины «состав» и «фармацевтический состав» повсюду используются взаимозаменяемо.

Фраза «фармацевтически приемлемый» относится к вспомогательным веществам (носителям, добавкам) и композициям, которые можно разумно вводить субъекту для обеспечения эффективной дозы применяемого активного ингредиента и которые «как правило, считаются безопасными», например, которые являются физиологически переносимыми и, как правило, не вызывают аллергической или подобной нежелательной реакции, такой как расстройство желудка и т.п., при введении человеку. Согласно другому варианту осуществления этот термин относится к молекулярным объектам и композициям, одобренным регулирующим органом федерального правительства или правительства штата или перечисленным в Фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для применения у животных и, в частности, у людей.

Используемый в настоящем документе термин «эффективное количество» означает такое количество активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или лечебный ответ в ткани, системе, животном или человеке, который требуется исследователю, ветеринару, врачу или другому клиницисту. Согласно одному варианту осуществления эффективное количество представляет собой «терапевтически эффективное количество» для облегчения симптомов заболевания или состояния, которое подвергают лечению. Согласно другому варианту осуществления эффективное количество представляет собой «профилактически эффективное количество» для профилактики симптомов предотвращаемого заболевания или состояния.

«Стабильный» состав представляет собой состав, в котором белок в нем по существу сохраняет свою физическую стабильность и/или химическую стабильность, и/или биологическую активность при хранении. В настоящей области техники доступны различные аналитические способы измерения стабильности белка, которые рассматриваются в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) и Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90 (1993). Стабильность можно измерить при выбранной температуре в течение выбранного периода времени. Например, согласно одному варианту осуществления стабильный состав представляет собой состав, в котором не наблюдается значительных изменений при температуре охлаждения (2-8°С) в течение по меньшей мере 12 месяцев. Согласно другому варианту осуществления стабильный состав представляет собой состав, в котором не наблюдается значительных изменений при температуре охлаждения (2-8°С) в течение по меньшей мере 18 месяцев. Согласно другому варианту осуществления стабильный состав представляет собой состав, в котором не наблюдается значительных изменений при комнатной температуре (23-27°С) в течение по меньшей мере 3 месяцев. Согласно другому варианту осуществления стабильный состав представляет собой состав, в котором не наблюдается значительных изменений при комнатной температуре (23-27°С) в течение по меньшей мере 6 месяцев. Согласно другому варианту осуществления стабильный состав представляет собой состав, в котором не наблюдается значительных изменений при комнатной температуре (23-27°С) в течение по меньшей мере 12 месяцев. Согласно другому варианту осуществления стабильный состав представляет собой состав, в котором не наблюдается значительных изменений при комнатной температуре (23-27°С) в течение по меньшей мере 18 месяцев. Критерии стабильности состава антител следующие. Как правило, не более чем 10%, предпочтительно 5% мономера антитела разлагается, как измерено с помощью SEC-HPLC. Как правило, композиция бесцветная или прозрачная или слегка опалесцирующая при визуальном анализе. Как правило, концентрация, рН и осмоляльность состава изменяются не более чем на +/- 10%. Эффективность, как правило, находится в пределах 60-140%, предпочтительно 80-120%, от контроля или сравнения. Как правило, наблюдается не более чем 10%, предпочтительно 5% отсечения антитела, т.е. % частиц с низкой молекулярной массой, как определено, например, с помощью HP-SEC. Как правило, наблюдается не более чем 10%, предпочтительно не более чем 5% агрегации антитела, т.е. % частиц с высокой молекулярной массой, как определено, например, с помощью HP-SEC.

Фраза «антитело к RSV» относится к моноклональному антителу, направленному против белка F или белка G RSV. Антитела к RSV раскрыты и описаны в патенте США №9963500. Конкретное антитело к RSV раскрыто и описано в патенте США №9963500 и содержит определяющие комплементарность области (CDR), имеющие аминокислотные последовательности: SEQ ID NO: 1 (CDR 1 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 2 (CDR 2 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 3 (CDR 3 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 4 (CDR 1 легкой цепи), SEQ ID NO: 5 (CDR 2 легкой цепи) и SEQ ID NO: 6 (CDR 3 легкой цепи). Кроме того, антитело к RSV раскрыто и описано в патенте США №9963500 и содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, соответственно. Кроме того, конкретное антитело к RSV раскрыто и описано в патенте США №9963500 и включает в себя тяжелую и легкую цепи иммуноглобулина, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно.

Антитело «сохраняет свою физическую стабильность» в фармацевтическом составе, если оно не показывает значительного увеличения агрегации, преципитации и/или денатурации при визуальном исследовании цвета и/или прозрачности или при измерении с помощью рассеяния УФ-света, эксклюзионной хроматографии (SEC) и динамического рассеяния света. Изменения конформации белка можно оценить с помощью флуоресцентной спектроскопии, которая определяет третичную структуру белка, и с помощью FTIR-спектроскопии, которая определяет вторичную структуру белка.

Антитело «сохраняет свою химическую стабильность» в фармацевтическом составе, если не обнаруживает значительных химических изменений. Химическая стабильность может быть оценена путем обнаружения и количественного определения химически измененных форм белка. Процессы деградации, которые часто изменяют химическую структуру белка, включают в себя гидролиз или усечение (оценивается такими способами, как эксклюзионная хроматография и ДСН-ПААГ), окисление (оценивается такими способами, как картирование пептидов в сочетании с масс-спектроскопией или MALDI/TOF/MS), дезамидирование (оценивается такими способами, как ионообменная хроматография, капиллярное изоэлектрическое фокусирование, картирование пептидов, измерение изоаспарагиновой кислоты) и изомеризация (оценивается путем измерения содержания изоаспарагиновой кислоты, картирования пептидов и т.д.).

Антитело «сохраняет свою биологическую активность» в фармацевтическом составе, если биологическая активность антитела в данный момент времени находится в пределах заранее определенного диапазона биологической активности, проявленной во время приготовления фармацевтического состава. Биологическая активность антитела может быть определена, например, с помощью анализа связывания антигена. Композиции по настоящему изобретению включают в себя антитела и их фрагменты, которые являются биологически активными при восстановлении или в жидкой форме.

II. Составы по настоящему изобретению

Составы по настоящему изобретению минимизируют образование агрегатов антител, повышают стабильность и снижают вязкость.

Настоящее изобретение включает в себя различные составы антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, как более подробно описано ниже. Например, настоящее изобретение включает в себя составы, содержащие (i) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент, (ii) буфер (например, гистидин), (iii) стабилизатор (например, невосстанавливающий сахар, такой как сахароза); (iv) неионогенное поверхностно-активное вещество (например, полисорбат 80) и (v) антиоксидант (например, метионин). Согласно дополнительным вариантам осуществления составы по настоящему изобретению содержат понижающее вязкость вещество (например, аргинин или его фармацевтически приемлемую соль; лизин или его фармацевтически приемлемую соль; смесь аргинина и лизина или их фармацевтически приемлемых солей, смесь аргинина и глутамата или их фармацевтически приемлемых солей, и/или гистидин или его фармацевтически приемлемые соли) и/или хелатор металлов (например, DTPA).

III. Антитела к RSV и их антигенсвязывающие фрагменты

В настоящем изобретении предусмотрены стабильные биологические составы, содержащие антитело к RSV, которое содержит определяющие комплементарность области (CDR), имеющие аминокислотные последовательности: SEQ ID NO: 1 (CDR 1 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 2 (CDR 2 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 3 (CDR 3 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 4 (CDR 1 легкой цепи), SEQ ID NO: 5 (CDR 2 легкой цепи) и SEQ ID NO: 6 (CDR 3 легкой цепи). В настоящем изобретении также предусмотрены стабильные биологические составы, содержащие антитело к RSV, которое содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, соответственно, и/или содержащие тяжелую и легкую цепи иммуноглобулина, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно. Способы получения антитела к RSV раскрыты и описаны в патентах США №9963500 и полностью включены в настоящий документ посредством ссылки. SEQ ID NO: 1-10 представлены в таблице А ниже:

Согласно некоторым вариантам осуществления составов, описанных в настоящем документе, API («активный фармацевтический ингредиент», т.е. антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент) присутствует в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления составов API (т.е. антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент) присутствует в концентрации от около 75 мг/мл до около 200 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 90 мг/мл до около 110 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации около 100 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации от 90 мг/мл до 110 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации 100 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации 75 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации 50 мг/мл.

Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 125 мг/мл до около 175 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 140 мг/мл до около 160 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации около 150 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от 125 мг/мл до 175 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от 140 мг/мл до 160 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации 150 мг/мл.

Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 150 мг/мл до около 200 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 165 мг/мл до около 185 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации около 175 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от 150 мг/мл до 200 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от 165 мг/мл до 185 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации 175 мг/мл.

Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 175 мг/мл до около 225 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 190 мг/мл до около 210 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации около 200 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от 175 мг/мл до 225 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от 190 мг/мл до 210 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации 200 мг/мл.

Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 200 мг/мл до около 250 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от около 215 мг/мл до около 235 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации около 225 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от 200 мг/мл до 250 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в концентрации от 215 мг/мл до 235 мг/мл. Согласно другому варианту осуществления API присутствует в концентрации 225 мг/мл.

Согласно некоторым вариантам осуществления составов, раскрытых в настоящем документе, API (т.е. антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент) присутствует в фиксированной дозе (например, количество в миллиграммах). Согласно некоторым вариантам осуществления составов, раскрытых в настоящем документе, API присутствует в фиксированной дозе от около 10 мг до около 150 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в фиксированной дозе от 10 мг до 150 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в фиксированной дозе от около 25 мг до около 125 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в фиксированной дозе от 25 мг до 125 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в фиксированной дозе от около 50 мг до около 100 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления API присутствует в фиксированной дозе от 50 мг до 100 мг.

IV. Вспомогательные вещества состава

Составы по настоящему изобретению содержат по меньшей мере одно вспомогательное вещество, которое стабилизирует состав.

Согласно некоторым вариантам осуществления составов по настоящему изобретению стабилизатор представляет собой невосстанавливающий сахар. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения невосстанавливающий сахар представляет собой сахарозу. Согласно дополнительным вариантам осуществления невосстанавливающий сахар представляет собой глюкозу. Согласно дополнительным вариантам осуществления невосстанавливающий сахар представляет собой трегалозу. Согласно другим вариантам осуществления невосстанавливающий сахар представляет собой лактозу. Согласно другим вариантам осуществления невосстанавливающий сахар представляет собой рафинозу.

Согласно некоторым вариантам осуществления составы антител к RSV по настоящему изобретению содержат стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из: сахарозы, глюкозы, трегалозы, лактозы или рафинозы в концентрации от около 4% до около 8% в массово-объемном отношении (масса/объем).

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% в массово-объемном отношении. Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от 4% до 8% в массово-объемном отношении.

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от около 6% до около 8% в массово-объемном отношении.

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от 4% до 8% в массово-объемном отношении.

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой трегалозу в концентрации от около 4% до около 8% в массово-объемном отношении. Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой трегалозу в концентрации от 4% до 8% в массово-объемном отношении.

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой трегалозу в концентрации от около 6% до около 8% в массово-объемном отношении. Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой трегалозу в концентрации от 6% до 8% в массово-объемном отношении.

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от около 6,5% до около 7,5% в массово-объемном отношении. Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от 6,5% до 7,5% в массово-объемном отношении.

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от 6% до 8%.

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от 6,5% до 7,5% в массово-объемном отношении.

Согласно некоторым вариантам осуществления стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации 7%.

Составы по настоящему изобретению содержат аргинин, например L-аргинин, или его фармацевтически приемлемую соль, например, HCl; лизин, например L-лизин, или его фармацевтически приемлемую соль, например, HCl; или комбинацию аргинина (L-аргинина) или его фармацевтически приемлемой соли (HCl) и лизина (L-лизина) или его фармацевтически приемлемой соли (HCl); или комбинацию аргинина (L-аргинина) или его фармацевтически приемлемой соли (HCl) и глутамата (L-глутамата) или его фармацевтически приемлемой соли; все это может обеспечить дополнительную стабильность композиции, а также регулировать вязкость, что позволяет создавать композиции с высокой концентрацией API.

В дополнение к антителу к RSV или его антигенсвязывающему фрагменту и стабилизатору в количествах/концентрациях, указанных выше, составы по настоящему изобретению также содержат буфер. Согласно некоторым вариантам осуществления буфер присутствует в количестве от около 5 мМ до около 20 мМ, что обеспечивает значение рН в диапазоне от около 5 до около 7. Согласно некоторым вариантам осуществления буфер присутствует в количестве от 5 мМ до 20 мМ, что обеспечивает значение рН в диапазоне от 5 до 7.

Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения буфер обеспечивает значение рН состава в диапазоне от около 5,5 до около 6,5. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения буфер обеспечивает значение рН состава в диапазоне от 5,5 до 6,5. Согласно некоторым вариантам осуществления буфер характеризуется значением рН в диапазоне около 6,0. Согласно другим вариантам осуществления значение рН составляет 6,0.

Согласно конкретным вариантам осуществления буфер характеризуется значением рН около 5,7, около 5,8, около 5,9, около 6,0, около 6,1, около 6,2 или около 6,3. Согласно конкретным вариантам осуществления буфер характеризуется значением рН 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2 или 6,3. Примеры буферов, которые будут контролировать значение рН в этом диапазоне, включают в себя сукцинат (натрий или калий), гистидин, ацетат натрия, фосфат (натрий или калий), трис (трис(гидроксиметил)аминометан), диэтаноламин, цитрат (натрий) и другие органические кислотные буферы.

Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения буфер представляет собой гистидин или ацетат со значением рН от около 5,5 до около 6,5. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения буфер представляет собой гистидин или ацетат со значением рН от 5,5 до 6,5. Согласно некоторым вариантам осуществления буфер представляет собой L-гистидиновый буфер. Согласно вариантам осуществления, где состав является лиофилизированным, предпочтительно, чтобы буфер не был ацетатным, поскольку ацетатные буферные системы несовместимы с процессом лиофилизации.

Когда указывается диапазон значений рН, такой как «рН от 5,5 до 6,5», предполагается, что этот диапазон включает в себя указанные значения. Если не указано иное, для лиофилизированной формулы рН относится к рН после восстановления лиофилизированных составов по настоящему изобретению. рН, как правило, измеряется при температуре 25°С с помощью стандартного рН-метра со стеклянной колбой. В данном контексте раствор, содержащий «гистидиновый буфер при рН X», относится к раствору при рН X и содержащему гистидиновый буфер, т.е. рН предназначен для обозначения рН раствора.

Помимо антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, стабилизатора и буфера в количествах/концентрациях, указанных выше, составы по настоящему изобретению также содержат антиоксидант. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения антиоксидант представляет собой метионин. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения антиоксидант представляет собой L-метионин или его фармацевтически приемлемую соль. Согласно дополнительным вариантам осуществления метионин представляет собой L-метионин. Согласно другим вариантам осуществления антиоксидант представляет собой L-метионин HCl. Согласно другим вариантам осуществления антиоксидант представляет собой гистидин.

Согласно некоторым вариантам осуществления антиоксидант (например, L-метионин) присутствует в составах по настоящему изобретению в количестве от около 1 мМ до около 20 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления антиоксидант присутствует в количестве от около 5 мМ до около 20 мМ, от около 5 мМ до около 15 мМ, от около 5 мМ до около 10 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления антиоксидант присутствует в количестве около 1 мМ, около 2 мМ, около 3 мМ, около 4 мМ, около 5 мМ, около 6 мМ, около 7 мМ, около 8 мМ, около 9 мМ, около 10 мМ, около 11 мМ, около 12 мМ, около 13 мМ, около 14 мМ, около 15 мМ, около 16 мМ, около 17 мМ, около 18 мМ, около 19 мМ или около 20 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления антиоксидант присутствует в количестве от 5 до 20 мМ, от 5 до 15 мМ, от 5 до 10 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления антиоксидант присутствует в количестве 1 мМ, 2 мМ, 3 мМ, 4 мМ, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мМ или 20 мМ.

Согласно вариантам осуществления, в которых антиоксидант представляет собой гистидин, гистидин может присутствовать в количествах до 100 мМ. Согласно таким вариантам осуществления гистидин может служить буфером, антиоксидантом и/или снижать вязкость описанных в настоящем документе составов. Согласно некоторым вариантам осуществления гистидин может присутствовать в концентрации около 10-20 мМ, около 20-30 мМ, около 30-40 мМ, около 40-50 мМ, около 50-60 мМ, около 60-70 мМ, около 70 мМ-80 мМ, около 80-90 мМ или около 90-100 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления гистидин может присутствовать в концентрациях 10-20 мМ, 20-30 мМ, 30-40 мМ, 40-50 мМ, 50-60 мМ, 60-70 мМ, 70-80 мМ, 80-90 мМ или 90-100 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления гистидин может присутствовать в концентрации около 10 мМ, около 20 мМ, около 30 мМ, около 40 мМ, около 50 мМ, около 60 мМ, около 70 мМ, около 80 мМ, около 90 мМ или около 100 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления гистидин может присутствовать в концентрации 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 55 мМ, 60 мМ, 65 мМ, 70 мМ, 75 мМ, 80 мМ, 85 мМ, 90 мМ, 95 мМ или 100 мМ.

Помимо антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, стабилизатора, буфера и антиоксиданта в количествах/концентрациях, указанных выше, составы по настоящему изобретению также содержат поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активные вещества, как правило, добавляют в составы для обеспечения стабильности, уменьшения и/или предотвращения агрегации или для предотвращения и/или ингибирования повреждения белка в условиях обработки, таких как очистка, фильтрация, сублимационная сушка, транспортировка, хранение и доставка. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения поверхностно-активное вещество применимо для обеспечения дополнительной стабильности активного ингредиента(ов), т.е. антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента.

Поверхностно-активные вещества, которые могут быть использованы в составах по настоящему изобретению, включают в себя, без ограничения: неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот (полисорбаты, продаваемые под торговым названием TWEEN (Uniquema Americas LLC, Уилмингтон, Делавэр)), включая в себя полисорбат-20 (монолаурат полиоксиэтиленсорбитана), полисорбат-40 (монопальмитат полиоксиэтиленсорбитана), полисорбат-60 (моностеарат полиоксиэтиленсорбитана) и полисорбат-80 (моноолеат полиоксиэтиленсорбитана); простые алкиловые эфиры полиоксиэтилена, такие как BRIJ 58 (Uniquema Americas LLC, Wilmington, DE) и BRIJ 35; полоксамеры (например, полоксамер 188); TRITON Х-100 (Union Carbide Corp., Хьюстон, Техас) и TRITON Х-114; NP40; Span 20, Span 40, Span 60, Span 65, Span 80 и Span 85; сополимеры этилена и пропиленгликоля (например, серия неионных поверхностно-активных веществ PLURONIC, таких как PLURONIC F68, PLURONIC 10R5, PLURONIC F108, PLURONIC F127, PLURONIC F38, PLURONIC L44, PLURONIC L62 (BASF Corp., Людвигсхафен, Германия) и додецилсульфат натрия (ДСН).

Количество поверхностно-активного вещества, которое должно быть включено в составы по настоящему изобретению, представляет собой количество, достаточное для выполнения желаемой функции, т.е. минимальное количество, необходимое для стабилизации активного фармацевтического ингредиента (т.е. антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента) в составе. Как правило, поверхностно-активное вещество присутствует в концентрации от около 0,008% до около 0,1% в массово-объемном отношении Согласно некоторым вариантам осуществления этого аспекта настоящего изобретения поверхностно-активное вещество присутствует в составе в количестве от около 0,01% до около 0,04% в массово-объемном отношении; от около 0,01% до около 0,03% в массово-объемном отношении, от около 0,01% до около 0,02% в массово-объемном отношении, от около 0,015% до около 0,04% в массово-объемном отношении; от около 0,015% до около 0,03% в массово-объемном отношении, от около 0,015% до около 0,02% в массово-объемном отношении, от около 0,02% до около 0,04% в массово-объемном отношении, от около 0,02% до около 0,035% в массово-объемном отношении или от около 0,02% до около 0,03% в массово-объемном отношении Согласно конкретным вариантам осуществления поверхностно-активное вещество присутствует в количестве около 0,02% в массово-объемном отношении. Согласно альтернативным вариантам осуществления поверхностно-активное вещество присутствует в количестве около 0,01%, около 0,015%, около 0,025%, около 0,03%, около 0,035% или около 0,04% в массово-объемном отношении

Согласно иллюстративным вариантам осуществления настоящего изобретения поверхностно-активное вещество представляет собой неионогенное поверхностно-активное вещество, выбранное из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80 и F127. Согласно предпочтительным вариантам осуществления поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80.

Согласно конкретным вариантам осуществления составы антител к RSV содержат PS80 в количестве от около 0,01% до около 0,04% в массово-объемном отношении. Согласно дополнительным вариантам осуществления составы антител к RSV содержат PS80 в количестве около 0,008%, около 0,01%, около 0,015%, около 0,02%, около 0,025%, около 0,03%, около 0,035%, около 0,04% или около 0,045% в массово-объемном отношении. Согласно конкретным вариантам осуществления составы антител к RSV содержат PS80 в количестве около 0,02% в массово-объемном отношении. Согласно некоторым вариантам осуществления составы антител к RSV содержат PS80 в количестве от 0,01% до 0,04% в массово-объемном отношении. Согласно некоторым вариантам осуществления составы антител к RSV содержат PS80 в количестве 0,008%, 0,01%, 0,015%, 0,02%, 0,025%, 0,03%, 0,035%, 0,04% или 0,045% в массово-объемном отношении Согласно конкретным вариантам осуществления составы антител к RSV содержат PS80 в количестве 0,02% в массово-объемном отношении.

Согласно конкретным вариантам осуществления составы антител к RSV по настоящему изобретению содержат хелатор, выбранный из DTPA и EDTA. Согласно некоторым вариантам осуществления хелатор представляет собой DTPA. Согласно дополнительным вариантам осуществления количество DTPA составляет от около 10 мкМ до около 90 мкМ, от около 25 мкМ до около 75 мкМ или около 50 мкМ. Согласно некоторым вариантам осуществления хелатор представляет собой DTPA. Согласно некоторым вариантам осуществления количество DTPA составляет от 10 мкМ до 90 мкМ, от 25 мкМ до 75 мкМ или 50 мкМ.

В дополнение к антителу к RSV или его антигенсвязывающему фрагменту варианты осуществления состава могут содержать стабилизатор, буфер, антиоксидант, поверхностно-активное вещество и хелатор в количествах/концентрациях, указанных выше.

В настоящем раскрытии также предусмотрен описанный в настоящем документе состав антитела к RSV, причем состав содержится в стеклянном флаконе или инъекционном устройстве (например, шприце).

Согласно дополнительным вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрены описанные в настоящем документе составы антител к RSV, причем после хранения состава при температуре 2-8°С в течение 12 месяцев процент тяжелой цепи и легкой цепи, измеренный посредством CE-SDS в восстанавливающих условиях, составляет >96%.

Согласно дополнительным вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрены описанные в настоящем документе составы антител к RSV, причем после хранения состава при температуре 2-8°С в течение 12 месяцев процент интактного IgG в составе, измеренный посредством CE-SDS в невосстанавливающих условиях, составляет >97%.

Согласно дополнительным вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрены описанные в настоящем документе составы антител к RSV, причем после хранения состава при температуре 2-8°С в течение 12 месяцев процент мономера, измеренный посредством HP-SEC, составляет >98,5%.

Согласно дополнительным вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрены описанные в настоящем документе составы антител к RSV, причем после хранения состава при температуре 2-8°С в течение 12 месяцев процент высокомолекулярных частиц, измеренный посредством HP-SEC, составляет <1,5%.

Согласно дополнительным вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрены описанные в настоящем документе составы антител к RSV, причем после хранения состава при температуре 25°С в течение 12 месяцев процент мономера, измеренный посредством HP-SEC, составляет >98,0%.

Согласно дополнительным вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрены описанные в настоящем документе составы антител к RSV, причем после хранения состава при температуре 25°С в течение 6 месяцев процент высокомолекулярных частиц, измеренный посредством HP-SEC, составляет <2%.

Согласно дополнительным вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрены описанные в настоящем документе составы антител к RSV, причем после хранения состава при температуре 40°С в течение 3 месяцев процент мономера, измеренный посредством HP-SEC, составляет >94,0%, >94,5% или >95,0%.

Согласно дополнительным вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрены описанные в настоящем документе составы антител к RSV, причем после хранения состава при температуре 40°С в течение 3 месяцев процент высокомолекулярных частиц, измеренный посредством HP-SEC, составляет <5,5%, <5,0% или <4,4%.

V. Конкретные аспекты и варианты осуществления настоящего изобретения Согласно одному аспекту в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) буфер в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из: (i) невосстанавливающего сахара в концентрации от около 6% до около 8% в массово-объемном отношении (масса/объем); (ii) L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ; L-пролина или фармацевтически приемлемой соли L-пролина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ; L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ; L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ или смеси таких аминокислот, и (iii) хелатора в концентрации от около 25 мкМ до 75 мкМ; d) неионного поверхностно-активного вещества в концентрации от около 0,01% до около 0,10% и необязательно е) антиоксиданта в концентрации от около 1 мМ до около 20 мМ.

Согласно другому аспекту в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 150 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 6% до около 8% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) вспомогательное вещество, выбранное из следующих: L-аргинин или фармацевтически приемлемая соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, L-лизин или фармацевтически приемлемая соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, смесь L-аргинина (HCl) и L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и смесь L-аргинина (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ; е) DTPA в концентрации около от 25 до 75 мкМ; f) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% и необязательно g) L-метионин в концентрации от около 1 мМ до около 20 мМ.

Согласно другому аспекту в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидин в концентрации около 10 мМ; с) сахарозу в концентрации 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) вспомогательное вещество, выбранное из L-аргинина (HCl) в концентрации 50 мМ, L-лизина (HCl) в концентрации 50 мМ, смеси L-аргинина в концентрации 25 мМ и L-глутамата в концентрации 25 мМ и смеси L-аргинина в концентрации 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации 25 мМ; е) DTPA в концентрации 50 мкМ; f) полисорбат 80 в концентрации 0,02% и необязательно g) L-метионин в концентрации от 1 мМ до 20 мМ.

Согласно другому аспекту в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидин в концентрации около 10 мМ; с) сахарозу в концентрации 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) смесь L-аргинина в концентрации 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации 25 мМ; е) DTPA в концентрации 50 мкМ и f) полисорбат 80 в концентрации 0,02%.

Согласно другому аспекту концентрация антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента составляет от около 50 мг/мл до около 150 мг/мл. Согласно другому аспекту концентрация антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента составляет от около 75 мг/мл до около 125 мг/мл. Согласно другому аспекту концентрация антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента составляет от 50 мг/мл до 150 мг/мл. Согласно другому аспекту концентрация антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента составляет от 75 мг/мл до 125 мг/мл. Согласно другому аспекту концентрация антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента составляет 100 мг/мл. Согласно другому аспекту концентрация антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента составляет 75 мг/мл. Согласно другому аспекту концентрация антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента составляет 50 мг/мл.

Согласно другому аспекту композиция характеризуется значением рН от около 5,5 до около 6,5. Согласно другому аспекту композиция характеризуется значением рН от 5,5 до 6,5. Согласно другому аспекту композиция характеризуется значением рН 6,0.

Согласно другому аспекту буфер представляет собой гистидин. Согласно другому аспекту концентрация гистидина составляет от около 1 мМ до около 20 мМ. Согласно другому аспекту концентрация гистидина составляет от около 5 мМ до около 15 мМ. Согласно другому аспекту концентрация гистидина составляет от 1 мМ до 20 мМ. Согласно другому аспекту концентрация гистидина составляет от 5 мМ до 15 мМ. Согласно другому аспекту концентрация гистидина составляет 10 мМ.

Согласно другому аспекту данный состав содержит стабилизатор, выбранный из невосстанавливающего сахара; L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина; L-пролина или фармацевтически приемлемой соли L-пролина; L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата; L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина или смеси таких аминокислот.Согласно другому аспекту данный состав содержит вспомогательное вещество, выбранное из L-аргинина (HCl) в концентрации около 50 мМ, L-лизина (HCl) в концентрации около 50 мМ, смеси L-аргинина в концентрации около 25 мМ и L-глутамата в концентрации около 25 мМ и смеси L-аргинина в концентрации около 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации около 25 мМ.

Согласно другому аспекту данный состав содержит хелатор, который представляет собой DTPA в концентрации от около 25 мкМ до около 75 мкМ. Согласно другому аспекту данный состав содержит хелатор, который представляет собой DTPA в концентрации около 50 мкМ. Согласно другому аспекту данный состав содержит хелатор, который представляет собой DTPA в концентрации 50 мкМ.

Согласно другому аспекту состав содержит неионное поверхностно-активное вещество, которое представляет собой PS80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% в массово-объемном отношении Согласно другому аспекту состав содержит неионогенное поверхностно-активное вещество, которое представляет собой PS80 в концентрации около 0,02% в массово-объемном отношении Согласно другому аспекту состав содержит неионное поверхностно-активное вещество, которое представляет собой PS80 в концентрации 0,02% в массово-объемном отношении

Согласно другому аспекту состав содержит антиоксидант, который представляет собой L-метионин в концентрации от около 1 мМ до около 20 мМ. Согласно другому аспекту состав содержит антиоксидант, который представляет собой L-метионин в концентрации около 10 мМ. Согласно другому аспекту состав содержит антиоксидант, который представляет собой L-метионин в концентрации 10 мМ.

Согласно еще одному аспекту в настоящем раскрытии представлен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) вспомогательное вещество, выбранное из группы, состоящей из следующего: L-аргинин или фармацевтически приемлемая соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, L-лизин или фармацевтически приемлемая соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации около от 25 до 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем.

Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) L-аргинин или фармацевтически приемлемую соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) L-аргинин или фармацевтически приемлемую соль L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) L-лизин или фармацевтически приемлемую соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) L-лизин или фармацевтически приемлемую соль L-лизина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно еще одному аспекту в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем и d) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV, содержащий: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем и d) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному аспекту состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) L-аргинин или фармацевтически приемлемую соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) L-аргинин или фармацевтически приемлемую соль L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному аспекту композиция антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) L-лизин или фармацевтически приемлемую соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) L-лизин или фармацевтически приемлемую соль L-лизина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному аспекту состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до около 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно одному аспекту состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около от 50 мг/мл до 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от 5 мМ до 100 мМ; с) сахарозу в концентрации от 4% до 8% масса/объем; d) смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от 25 мМ до 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от 0,01% до 0,10% масса/объем.

Согласно некоторым вариантам осуществления любого из вышеуказанных аспектов и вариантов осуществления концентрация гистидина составляет от около 70 мМ до около 90 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления концентрация гистидина составляет от 70 мМ до 90 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления концентрация гистидина составляет около 80 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления концентрация гистидина составляет 80 мМ.

Согласно некоторым вариантам осуществления вышеуказанных аспектов и вариантов осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 125 мг/мл до около 175 мг/мл. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 125 мг/мл до 175 мг/мл. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 150 мг/мл. Согласно одному варианту осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации 150 мг/мл.

Согласно некоторым вариантам осуществления вышеуказанных аспектов и вариантов осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 150 мг/мл до около 200 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 150 мг/мл до 200 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 175 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации 175 мг/мл.

Согласно некоторым вариантам осуществления вышеуказанных аспектов и вариантов осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 175 мг/мл до около 225 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от 175 мг/мл до 225 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 200 мг/мл. Согласно некоторым вариантам осуществления состав антитела к RSV содержит антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации 200 мг/мл.

Согласно некоторым вариантам осуществления вышеуказанных аспектов и вариантов осуществления состав антитела к RSV дополнительно содержит диэтилентриамин-пентаацетата (DTPA) в концентрации от около 25 до около 75 мкМ. Согласно некоторым вариантам осуществления состав антитела к RSV дополнительно содержит диэтилентриамин-пентаацетата (DTPA) в концентрации от 25 до 75 мкМ.

Согласно некоторым вариантам осуществления вышеуказанных аспектов и вариантов осуществления состав антитела к RSV дополнительно содержит L-метионин в концентрации от около 1 мМ до около 20 мМ. Согласно некоторым вариантам осуществления состав антитела к RSV дополнительно содержит L-метионин в концентрации от 1 мМ до 20 мМ.

Согласно некоторым вариантам осуществления рН состава антитела к RSV составляет от 5,5 до 6,5. Согласно некоторым вариантам осуществления рН состава антитела к RSV составляет около 6,0. Согласно некоторым вариантам осуществления рН состава антитела к RSV составляет 6,0.

Согласно некоторым вариантам осуществления антитело к RSV содержит CDR, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1-6. Согласно некоторым вариантам осуществления антитело к RSV содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. Согласно некоторым вариантам осуществления антитело к RSV включает в себя тяжелую цепь иммуноглобулина, состоящую из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 9, и легкую цепь иммуноглобулина, состоящую из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 10.

Согласно одному аспекту в настоящем раскрытии представлен способ лечения или профилактики инфекции RSV у нуждающегося в этом пациента-человека, предусматривающий: введение пациенту эффективного количества композиции антитела к RSV любого из вышеуказанных аспектов и вариантов осуществления.

Согласно некоторым вариантам осуществления вышеизложенного способа эффективное количество состава антитела к RSV предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, составляющую от около 10 мг до около 150 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления эффективное количество состава антитела к RSV предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, составляющую от 10 мг до 150 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления эффективное количество состава антитела к RSV предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, составляющую от около 25 мг до около 125 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления эффективное количество состава антитела к RSV предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, составляющую от 25 мг до 125 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления эффективное количество состава антитела к RSV предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, составляющую от около 50 мг до около 100 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления эффективное количество состава антитела к RSV предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, составляющую от 50 мг до 100 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления эффективное количество состава антитела к RSV предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, составляющую около 100 мг. Согласно некоторым вариантам осуществления эффективное количество состава антитела к RSV предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, составляющую около 100 мг.

Согласно некоторым вариантам осуществления вышеизложенного способа состав антитела к RSV вводят внутримышечно.

Согласно некоторым вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрен состав антитела к RSV в соответствии с любым из вышеуказанных аспектов или вариантов осуществления для применения в способе лечения или профилактики инфекции RSV у пациента-человека.

Согласно некоторым вариантам осуществления в настоящем раскрытии предусмотрено применение состава антитела к RSV в соответствии с любым из вышеуказанных аспектов или вариантов осуществления при изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики инфекции RSV у пациента-человека.

Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения любой из описанных в настоящем документе составов находится в водном растворе. Согласно альтернативным вариантам осуществления в настоящем изобретении предусмотрены лиофилизированные составы, полученные лиофилизацией водного состава для получения восстановленного состава по настоящему изобретению, как более подробно обсуждается ниже.

VI. Лиофилизированные фармацевтические композиции

Лиофилизированные составы терапевтических белков (например, антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента) обеспечивают несколько преимуществ. Лиофилизированные составы в целом обладают лучшей химической стабильностью, чем составы в виде растворов, и, таким образом, увеличивают период полураспада. Лиофилизированный состав также может быть восстановлен в различных концентрациях в зависимости от клинических факторов, таких как путь введения или дозировка. Например, лиофилизированный состав может быть восстановлен в высокой концентрации (т.е. в небольшом объеме), если это необходимо для подкожного введения, или в более низкой концентрации, если вводится внутривенно. Высокие концентрации также могут быть необходимы, если для конкретного субъекта требуется высокая дозировка, особенно при подкожном введении, когда объем инъекции должен быть минимизирован. Один такой состав лиофилизированного антитела раскрыт в патенте США №6267958, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. Лиофилизированные составы другого терапевтического белка раскрыты в патенте США №7247707, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Как правило, лиофилизированный состав готовят в ожидании восстановления при высокой концентрации лекарственного продукта (DP, согласно иллюстративному варианту осуществления антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент), то есть в ожидании восстановления в небольшом объеме воды. Последующее разбавление водой или изотоническим буфером можно легко использовать для разбавления DP до более низкой концентрации. Как правило, вспомогательные вещества включают в лиофилизированный состав по настоящему изобретению в количествах, которые будут приводить к около изотоническому составу при восстановлении при высокой концентрации DP, например, для подкожного введения. Восстановление в большем объеме воды для получения более низкой концентрации DP обязательно снизит тоничность восстановленного раствора, но такое снижение может иметь небольшое значение при неподкожном введении, например, внутривенном введение. Если изотоничность желательна при более низкой концентрации DP, лиофилизированный порошок может быть восстановлен в стандартном небольшом объеме воды, а затем разбавлен изотоническим разбавителем, таким как 0,9% хлорид натрия.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения антитело к RSV (или его антигенсвязывающий фрагмент) готовят в виде лиофилизированного порошка для восстановления и применения для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения. Согласно некоторым вариантам осуществления антитело (или его антигенсвязывающий фрагмент) предоставляется в количестве около 50 мг/флакон и перед применением восстанавливается стерильной водой для инъекций. При желании восстановленное антитело можно асептически разбавить 0,9% раствором хлорида натрия для инъекций USP в стерильном контейнере для внутривенного введения. Согласно некоторым вариантам осуществления целевое значение рН восстановленного состава составляет 5,5±0,5. Согласно различным вариантам осуществления лиофилизированный состав по настоящему изобретению позволяет восстанавливать антитело к RSV до высоких концентраций, таких как около 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 100, 125, 150, 175 или более мг/мл.

Лиофилизированные составы по определению являются по существу сухими, и поэтому понятие концентрации бесполезно для их описания. Описание лиофилизированного состава с точки зрения массы компонентов во флаконе с единичной дозой более применимо, но проблематично, поскольку оно варьируется для разных доз или размеров флаконов. При описании лиофилизированных составов по настоящему изобретению полезно выражать количество компонента как отношение массы компонента к массе лекарственного вещества (DS) в том же образце (например, флаконе). Это соотношение может быть выражено в процентах. Такие соотношения отражают внутреннее свойство лиофилизированных составов по настоящему изобретению, независимо от размера флакона, дозировки и протокола восстановления.

Согласно другим вариантам осуществления лиофилизированный состав антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента определяется в терминах раствора для предварительной лиофилизации, используемого для приготовления лиофилизированного состава, такого как раствор для предварительной лиофилизации. Согласно одному варианту осуществления раствор для лиофилизации содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 10 мг/мл, около 25 мг/мл или около 50 мг/мл. Такие растворы для предварительной лиофилизации могут характеризоваться значением рН 4,4-5,2 (включая в себя около 4,4, 4,5, 4,6,4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1 и 5,2), например, предпочтительно около рН 4,8 или около 5,5.

Согласно другим вариантам осуществления лиофилизированный состав антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента определяется как восстановленный раствор, полученный из лиофилизированного состава.

Восстановленные растворы могут содержать антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрациях около 50, 60, 75, 80, 90 или 100 мг/мл или более высоких концентрациях, таких как 150 мг/мл, 167 мг/мл, 200 мг/мл или около до 250 мг/мл. Такие восстановленные растворы могут характеризоваться значением рН около 5,5 или диапазоном от около 5,0 до около 6,0.

Лиофилизированные составы по настоящему изобретению получают лиофилизацией (сублимационной сушкой) раствора для предварительной лиофилизации. Сублимационная сушка осуществляется путем замораживания состава и последующей сублимацией воды при температуре, подходящей для первичной сушки. В этих условиях температура продукта ниже точки эвтектики или температуры разрушения состава. Как правило, температура полки для первичной сушки будет находиться в диапазоне от около -30 до 25°С (при условии, что продукт остается замороженным во время первичной сушки) при подходящем давлении, как правило, в диапазоне около от 50 до 250 мТорр. Состав, размер и тип контейнера, содержащего образец (например, стеклянный флакон), а также объем жидкости будут определять время, необходимое для сушки, которое может варьироваться от нескольких часов до нескольких дней (например, 40-60 часов). Стадия вторичной сушки может проводиться при температуре около 0-40°С, в зависимости, прежде всего, от типа и размера контейнера и типа используемого белка. Время вторичной сушки определяется желаемым уровнем остаточной влажности продукта и, как правило, занимает по меньшей мере около 5 часов. Как правило, содержание влаги в лиофилизированной композиции составляет менее чем около 5% и предпочтительно менее чем около 3%. Давление может быть таким же, как на этапе первичной сушки. Условия сублимационной сушки можно варьировать в зависимости от состава и размера флакона.

В некоторых случаях может быть желательно лиофилизировать белковый состав в контейнере, в котором должно проводиться восстановление белка, чтобы избежать стадии переноса. Контейнер в этом случае может представлять собой, например, флакон объемом 3, 5, 10, 20, 50 или 100 мл.

Лиофилизированные составы по настоящему изобретению восстанавливают перед введением. Белок может быть восстановлен в концентрации около 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 80, 90 или 100 мг/мл или более высоких концентрациях, таких как 150 мг/мл, 200 мг/мл, 250 мг/мл или 300 мг/мл около до 500 мг/мл. Высокие концентрации белка особенно применимы, когда предполагается подкожная доставка восстановленного состава. Однако для других способов введения, таких как внутривенное введение, могут быть желательны более низкие концентрации белка (например, около от 5 до 50 мг/мл).

Восстановление, как правило, происходит при температуре около 25°С для обеспечения полной гидратации, хотя при желании можно использовать другие температуры. Время, необходимое для восстановления, будет зависеть, например, от типа разбавителя, количества вспомогательного вещества (веществ) и белка. Иллюстративные разбавители включают в себя стерильную воду, бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор (например, забуференный фосфатом физиологический раствор), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.

В настоящем раскрытии предусмотрен жидкий состав антитела к RSV, восстановленный из лиофилизированного состава, причем восстановленный раствор содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 150 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 6% до около 8% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) вспомогательное вещество, выбранное из следующего: L-аргинин или фармацевтически приемлемая соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, L-пролин или фармацевтически приемлемая соль L-пролина от около 25 мМ до около 75 мМ, L-глутамат или фармацевтически приемлемая соль L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, L-лизин или фармацевтически приемлемая соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, смесь L-аргинина и L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и смесь L-аргинина (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ; е) DTPA в концентрации около от 25 мкМ до 75 мкМ; f) полисорбат 80 в концентрации отоколо 0,01% до около 0,10% и необязательно g) L-метионин в концентрации от около 1 мМ до около 20 мМ.

В настоящем раскрытии предусмотрен жидкий состав антитела к RSV, восстановленный из лиофилизированного состава, причем восстановленный раствор содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидин в концентрации около 10 мМ; с) сахарозу в концентрации 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) вспомогательное вещество, выбранное из L-аргинина (HCl) в концентрации 50 мМ, L-лизина (HCl) в концентрации 50 мМ, смеси L-аргинина в концентрации 25 мМ и L-глутамата в концентрации 25 мМ и смеси L-аргинина в концентрации 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации 25 мМ; е) DTPA в концентрации 50 мкМ; f) полисорбат 80 в концентрации 0,02% и необязательно g) L-метионин в концентрации от 1 мМ до 20 мМ.

В настоящем раскрытии предусмотрен жидкий состав антитела к RSV, восстановленный из лиофилизированного состава, причем восстановленный раствор содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидин в концентрации около 10 мМ; с) сахарозу в концентрации 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) смесь L-аргинина в концентрации 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации 25 мМ; е) DTPA в концентрации 50 мкМ и f) полисорбат 80 в концентрации 0,02%.

В настоящем раскрытии также предусмотрен жидкий состав антитела к RSV, восстановленный из лиофилизированного состава, причем восстановленный раствор содержит: а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл; b) гистидин в концентрации от около 5 мМ до около 20 мМ; с) сахарозу в концентрации от около 4% до около 8% масса/объем; d) вспомогательное вещество, выбранное из группы, состоящей из следующего: L-аргинин или фармацевтически приемлемая соль L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, L-лизин или фармацевтически приемлемая соль L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ, смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации около от 25 до 75 мМ и L-глутамата или фармацевтически приемлемой соли L-глутамата в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и смесь L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и L-лизина или фармацевтически приемлемой соли L-лизина в концентрации от около 25 мМ до около 75 мМ и е) полисорбат 80 в концентрации от около 0,01% до около 0,10% масса/объем.

VII. Жидкие фармацевтические композиции

Жидкий состав антител может быть получен путем замены буфера лекарственного вещества (например, антитела к RSV), которое находится в жидкой форме, на желаемый буфер на последнем этапе процесса очистки. Согласно этому варианту осуществления нет стадии лиофилизации. Лекарственное вещество в конечном буфере концентрируют до желаемой концентрации. К лекарственному веществу добавляют вспомогательные вещества, такие как сахароза, метионин и полисорбат 80, и его разбавляют с помощью соответствующего буфера до конечной концентрации белка. Конечный состав лекарственного вещества фильтруют, например, с использованием фильтров 0,22 мкм, и разливают в конечный контейнер (например, стеклянные флаконы или шприцы). Примером такого жидкого состава является конечный жидкий состав, содержащий а) антитело к RSV или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации около 100 мг/мл; b) гистидин в концентрации около 10 мМ; с) сахарозу в концентрации 7% в массово-объемном отношении (масса/объем); d) смесь L-аргинина в концентрации 25 мМ (HCl) и L-лизина (HCl) в концентрации 25 мМ; е) DTPA в концентрации 50 мкМ и f) полисорбат 80 в концентрации 0,02%.

VIII. Способы применения

Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или лечения инфекции RSV у субъекта, причем способ предусматривает введение эффективного количества любого из составов по настоящему изобретению; т.е. любого состава, описанного в настоящем документе, субъекту. Согласно некоторым вариантам осуществления этого способа состав вводят субъекту внутривенно. Согласно другим вариантам осуществления состав вводят субъекту подкожно. Согласно другим вариантам осуществления состав вводят внутримышечно.

Согласно конкретному варианту осуществления млекопитающему, предпочтительно человеку, вводят профилактический, терапевтический или фармацевтический состав по настоящему изобретению для лечения, профилактики или облегчения одного или более симптомов, связанных с инфекцией RSV, в количестве, эффективном для снижения титров RSV. В соответствии с этим вариантом осуществления эффективное количество антитела или фрагмента антитела к RSV снижает титры RSV в легких, измеренные, например, по концентрации RSV в образцах мокроты или в лаваже из легких млекопитающего. Согласно другому варианту осуществления млекопитающему, предпочтительно человеку, вводят профилактический, терапевтический или фармацевтический состав, содержащий антитело к RSV по настоящему изобретению или его фрагменты, для лечения, профилактики или облегчения симптомов, связанных с инфекцией RSV, в количестве, эффективном для нейтрализации RSV и/или блокирования RSV-инфекции у млекопитающих.

Составы по настоящему изобретению также можно применять иммунотерапевтически при заболевании RSV как у людей, так и у других животных. Термин «иммунотерапевтически» или «иммунотерапия», используемый в настоящем документе в сочетании с антителом к RSV или его антигенсвязывающими фрагментами по настоящему изобретению, обозначает как профилактическое, так и терапевтическое введение, а также пассивную иммунизацию существенно очищенными полипептидными продуктами, а также в качестве генной терапии путем переноса полинуклеотидных последовательностей, кодирующих продукт или его часть. Пассивная иммунизация предусматривает передачу активного гуморального иммунитета или предоставление антител нуждающемуся в этом субъекту. Соответственно, согласно определенным вариантах осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении представлены способы передачи активного гуморального иммунитета и способы предоставления антител к RSV или их антигенсвязывающих фрагментов, таких как антитела IgG, пациенту с риском инфицирования RSV. Таким образом, моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты можно вводить субъектам высокого риска, чтобы уменьшить вероятность и/или тяжесть заболевания RSV, или вводить субъектам, уже демонстрирующим активную инфекцию RSV.

В настоящем изобретении также представлен способ модуляции или лечения по меньшей мере одного заболевания, связанного с RSV у взрослых или детей, в клетке, ткани, органе, животном или пациенте, включая в себя, без ограничения, инфекции нижних дыхательных путей, пневмонию, трахеобронхит, бронхиолит, бронхит и любые связанные инфекции или воспалительные нарушения, такие как, без ограничения, по меньшей мере одно или по меньшей мере одно из следующего: воспаление, связанное с синдромом системной воспалительной реакции, синдром сепсиса, грамположительный сепсис, грамотрицательный сепсис, культурально-отрицательный сепсис, грибковый сепсис, нейтропеническая лихорадка, уросепсис, менингококкемия, респираторный дистресс-синдром у взрослых, аллергический ринит, многолетний ринит, бронхиальная астма, системная анафилаксия, реакция гиперчувствительности рецепторов, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), гиперчувствительный пневмонит, гранулемы, вызванные внутриклеточными организмами, лекарственная чувствительность, кахексия, муковисцидоз, хронические заболевания легких новорожденных; по меньшей мере одно инфекционное заболевание в клетке, ткани, органе, у животного или пациента, включая в себя, без ограничения, по меньшей мере одно из следующих: острая или хроническая бактериальная инфекция, острые и хронические паразитарные или инфекционные процессы, включая в себя бактериальные, вирусные и грибковые инфекции, ВИЧ-инфекцию, ВИЧ-нейропатию, менингит, гепатит (А, В или С и т.п.), септический артрит, перитонит, пневмония, эпиглоттит, Е. coli 0157:h7, гемолитико-уремический синдром, тромболитическую тромбоцитопеническую пурпуру, малярию, геморрагическую лихорадку денге, лейшманиоз, проказу, синдром токсического шока, стрептококковый миозит, газовую гангрену, микобактерии туберкулеза, микобактерии avium intracellulare, пневмоцистную пневмонию, воспалительные заболевания органов малого таза, орхит, эпидидимит, легионеллу, болезнь Лайма, грипп А, вирус Эпштейна-Барра ассоциированный гемофагоцитарный синдром, витальный энцефалит, асептический менингит и т.п. Такой способ может необязательно предусматривать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело к RSV или его антигенный фрагмент, в клетку, ткань, орган, животному или пациенту, нуждающимся в таком модулировании, лечении или терапии.

Согласно одному варианту осуществления профилактический, терапевтический или фармацевтический состав, содержащий антитело к RSV по настоящему изобретению или его фрагменты, вводят млекопитающему, предпочтительно человеку, для лечения, профилактики или облегчения одного или более симптомов, связанных с инфекцией RSV. Согласно другому варианту осуществления профилактические, терапевтические или фармацевтические составы, содержащие антитело к RSV по настоящему изобретению или его фрагменты, вводят человеку с муковисцидозом, бронхолегочной дисплазией, врожденным пороком сердца, врожденным иммунодефицитом или приобретенным иммунодефицитом, или человеку, который перенес трансплантацию (например, трансплантацию костного мозга, легких или гемопоэтических стволовых клеток (HSCT)) для лечения, профилактики или облегчения одного или более симптомов, связанных с инфекцией RSV.

Согласно другому варианту осуществления профилактические, терапевтические или фармацевтические составы, содержащие антитело к RSV по настоящему изобретению или его фрагменты, вводят младенцу-человеку, предпочтительно недоношенному младенцу-человеку или младенцу-человеку с риском госпитализации из-за инфекции RSV для лечения, профилактики или облегчения одного или более симптомов, связанных с инфекцией RSV. Согласно еще одному варианту осуществления профилактические, терапевтические или фармацевтические составы по настоящему изобретению вводят пожилым людям или людям в групповых домах (например, домах престарелых или реабилитационных центрах) или лицам с ослабленным иммунитетом.

Согласно другому варианту осуществления в настоящем изобретении представлен способ профилактики респираторной инфекции, вызванной RSV. Согласно другому варианту осуществления в настоящем изобретении представлен способ профилактики инфекции нижних дыхательных путей, вызванной RSV. Согласно другому варианту осуществления в настоящем изобретении представлен способ профилактики инфекции нижних дыхательных путей, вызванной штаммами RSV А и В. Согласно другому варианту осуществления в настоящем изобретении представлен способ профилактики инфекции нижних дыхательных путей, сопровождаемой медицинским наблюдением, вызванной штаммами RSV А и В, у младенцев, рожденных на сроке беременности >29 недель и в возрасте <8 месяцев на момент введения дозы. Согласно другому варианту осуществления в настоящем изобретении представлен способ профилактики инфекции нижних дыхательных путей, вызванной RSV, у всех младенцев, вступающих в свой первый сезон RSV, и у детей с хроническим заболеванием легких или врожденным пороком сердца, начинающих свой первый и второй сезон RSV.

IX. Общие способы

Стандартные способы в молекулярной биологии описаны в Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2^nd Edition, 2001 3^rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3^rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Стандартные способы также представлены в публикации Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, в которой описано клонирование в бактериальных клетках и мутагенез ДНК (том 1), клонирование в клетках млекопитающих и дрожжах (том 2), гликоконъюгаты и экспрессия белков (том 3) и биоинформатика (том 4).

Описаны способы очистки белка, включая в себя иммунопреципитацию, хроматографию, электрофорез, центрифугирование и кристаллизацию (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Описаны химический анализ, химическая модификация, посттрансляционная модификация, производство гибридных белков, гликозилирование белков (смотрите, например, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391). Описаны производство, очистка и фрагментация поликлональных и моноклональных антител (Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, выше). Доступны стандартные способы для характеристики взаимодействий лиганд/рецептор (смотрите, например, Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York).

Могут быть получены моноклональные, поликлональные и гуманизированные антитела (смотрите, например, Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; патент США №6329511).

Альтернативой гуманизации является использование библиотек человеческих антител, отображаемых на фаговых библиотеках или библиотеках человеческих антител у трансгенных мышей (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21:371-377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:397-399).

Для образования антител очистка антигена не требуется. Животных можно иммунизировать клетками, несущими представляющий интерес антиген. Затем спленоциты могут быть выделены из иммунизированных животных, и спленоциты могут быть слиты с линией миеломных клеток для получения гибридомы (смотрите, например, Meyaard et al. (1997) Immunity 7:283-290; Wright et al. (2000) Immunity 13:233-242; Preston et al, выше; Kaithamana et al. (1999) J. Immunol. 163:5157-5164).

Антитела могут быть конъюгированы, например, с небольшими молекулами лекарственного средства, ферментами, липосомами, полиэтиленгликолем (PEG). Антитела применимы для терапевтических, диагностических наборов или других целей и включают в себя антитела, связанные, например, с красителями, радиоизотопами, ферментами или металлами, например, с коллоидным золотом (смотрите, например, Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146:169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804-2811; Everts et al. (2002) J. Immunol. 168:883-889).

Доступны способы проточной цитометрии, включая в себя сортировку активированных флуоресценцией клеток (FACS) (смотрите, например, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2^nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Доступны флуоресцентные реагенты, подходящие для модификации нуклеиновых кислот, включая в себя праймеры и зонды нуклеиновых кислот, полипептиды и антитела, для применения, например, в качестве диагностических реагентов (Molecular Probes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).

Описаны стандартные способы гистологии иммунной системы (смотрите, например, Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY).

Доступны пакеты программного обеспечения и базы данных для определения, например, антигенных фрагментов, лидерных последовательностей, фолдинга белков, функциональных доменов, сайтов гликозилирования и выравнивания последовательностей (смотрите, например, GenBank, Vector NTI Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DECYPHER (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16:741-742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690).

X. Аналитические способы.

Аналитические способы, подходящие для оценки стабильности продукта, включают в себя эксклюзионную хроматографию (SEC), тест динамического светорассеяния (DLS), дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC), количественное определение изо-аспартата, активность, УФ при 340 нм, УФ-спектроскопию и FTIR. SEC (J. Pharm. Scien., 83:1645-1650, (1994); Pharm. Res., 11:485 (1994); J. Pharm. Bio. Anal., 15:1928 (1997); J. Pharm. Bio. Anal., 14:1133-1140 (1986)) измеряет процентное содержание мономера в продукте и дает информацию о количестве растворимых агрегатов. DSC (Pharm. Res., 15:200 (1998); Pharm. Res., 9:109 (1982)) дает информацию о температуре денатурации белка и температуре стеклования. DLS (American Lab., November (1991)) измеряет средний коэффициент диффузии и дает информацию о количестве растворимых и нерастворимых агрегатов. УФ при 340 нм измеряет интенсивность рассеянного света при 340 нм и дает информацию о количестве растворимых и нерастворимых агрегатов. УФ-спектроскопия измеряет оптическую плотность при 278 нм и дает информацию о концентрации белка. FTIR (Eur. J. Pharm. Biopharm., 45:231 (1998); Pharm. Res., 12:1250 (1995); J. Pharm. Scien., 85:1290 (1996); J. Pharm. Scien., 87:1069 (1998)) измеряет ИК-спектр в одной амидной области и дает информацию о вторичной структуре белка.

Содержание изо-аспартата в образцах измеряется с помощью системы определения изокванта изоаспартата (Promega). В наборе используется фермент изоаспартилметилтрансфераза (PIMT) для специфического обнаружения присутствия остатков изоаспарагиновой кислоты в целевом белке. PIMT катализирует перенос метальной группы от S-аденозил-L-метионина к изоаспарагиновой кислоте в а-карбоксильном положении, образуя при этом S-аденозил-L-гомоцистеин (SAH). Это относительно небольшая молекула, и ее, как правило, можно выделить и количественно оценить с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием стандартов SAH ВЭЖХ, поставляемых в наборе.

Эффективность или биоидентичность антитела можно измерить по его способности связываться со своим антигеном. Специфическое связывание антитела с его антигеном может быть определено количественно любым способом, известным специалистам в настоящей области техники, например, иммуноанализом, таким как ELISA (иммуноферментный анализ).

Все публикации, указанные в настоящем документе, включены посредством ссылки с целью описания и раскрытия методологий и материалов, которые могут быть использованы в связи с настоящим изобретением.

Описав в настоящем документе различные варианты осуществления настоящего изобретения со ссылкой на прилагаемые графические материалы, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается этими точными вариантами осуществления, и что различные изменения и модификации могут быть выполнены специалистом в настоящей области техники без отклонения от объема или сущности настоящего изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения.

ПРИМЕР 1

Стабильность состава антитела к RSV при различных значениях рН Настоящее исследование выполняли с концентрацией антител к RSV 100 мг/мл в гистидиновом буфере с концентрацией 10 мМ. В состав добавляли сахарозу в концентрации семь % масса/объем для повышения объемной стабильности (в качестве стабилизатора и неионного модификатора тоничности) молекулы. Вкратце, лекарственное вещество (DS) готовили в концентрации 100 мг/мл в гистидине с концентрацией 10 мМ, сахарозе с концентрацией 7% при рН 5,5, рН 6,0 и рН 6,5. Составленное DS разливали во флаконы и проверяли стабильность при температуре 5°С (влажность окружающей среды), 25°С (относительная влажность 60%) и 40°С (относительная влажность 75%) в течение трех месяцев в защищенном от света месте.

Образцы оценивали с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) на предмет чистоты, в которой определяли процентное содержание мономера, а также процентное содержание высокомолекулярных частиц (HMW) и пиков позднего элюирования (LMW-частицы). Сверхвысокоэффективную эксклюзионную хроматографию (UP-SEC) выполняли путем разбавления образцов (антитела к RSV) до 1,0 мг/мл в подвижной фазе (фосфат натрия в концентрации 100 мМ и хлорид натрия в концентрации 100 мМ, рН 7,0); скорость потока 0,5 мл/мин. Разбавленные образцы вводили (5 мкл) в UPLC, оборудованную колонкой Waters ВЕН200 и УФ-детектором. Белки в образце разделяли по размеру и обнаруживали по УФ-поглощению при 214 нм.

Это исследование проводили для изучения влияния рН на стабильность состава антител к RSV. Основываясь на результатах исследования термостабильности на срок до 3 месяцев, не было заметной разницы между стабильностью составов с концентрацией 100 мг/мл при рН 5,5, 6,0 и 6,5 для любого из условий. Никаких изменений не было замечено в уровнях % мономера по UP-SEC при температуре 5°С; однако небольшое снижение (~2%) было отмечено при температуре 25°С и более значительное (~20%) при температуре 40°С. На основании результатов для дальнейшей разработки было выбрано значение рН 6,0 (смотрите таблицу 1).

ПРИМЕР 2

Скрининг (для уменьшения агрегации) вспомогательных веществ (аминокислот и их смесей) состава антител к RSV

В этом исследовании сравнивали стабильность антитела к RSV в гистидине с концентрацией 10 мМ (рН=6), 0,02% PS80, 7% сахарозе в присутствии (i) L-Arg.HCl в концентрации 50 мМ или (ii) L-Lys.HCl в концентрации 50 мМ или (iii) смеси L-Arg в концентрации 25 мМ и L-Glu в концентрации 25 мМ или (iv) смеси L-Arg. HCl в концентрации 25 мМ и L-Lys.HCl в концентрации 25 мМ.

Эти четыре вспомогательных вещества исследовали на уменьшение агрегации, улучшение химической стабильности (смотрите пример 3) и снижение вязкости (смотрите пример 4). Четыре исследованных вспомогательных вещества представляли собой:

(i) L-Arg.HCl в концентрации 50 мМ;

(ii) L-Lys.HCl в концентрации 50 мМ;

(iii) смесь L-Arg в концентрации 25 мМ и L-Glu в концентрации 25 мМ; а также

(iv) смесь L-Arg.HCl в концентрации 25 мМ и L-Lys.HCl в концентрации 25 мМ.

Первые два вспомогательных вещества исследовали, чтобы понять эффекты положительно заряженного лизина и аргинина в присутствии противоаниона хлорида. Третье вспомогательное вещество исследовали, чтобы понять эффект аргинина в присутствии другого противоаниона (глутамата). Четвертое вспомогательное вещество представляло собой смесь первых двух вспомогательных веществ, чтобы определить, могут ли два вспомогательных вещества играть дополнительную роль. Была выдвинута гипотеза, что эта смесь может играть лучшую роль, чем отдельные вспомогательные вещества, поскольку смесь вспомогательных веществ характеризуется различными pKa и по-разному защищает распределение поверхностных изменений моноклонального антитела, тем самым увеличивая отталкивающие взаимодействия, что, в свою очередь, снижает агрегацию и вязкость.

Для оценки стабильности составов пять составов разливали во флаконы и устанавливали стабильность при температуре 5°С (влажность окружающей среды), 25°С (относительная влажность 60%) и 40°С (относительная влажность 75%) в течение восьми недель в защищенном от света месте. Пять составов перечислены в таблице 2 ниже.

Образцы оценивали с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) на предмет чистоты, при этом определяли процентное содержание мономера, а также процентное содержание высокомолекулярных частиц (HMW) и пиков позднего элюирования (LMW-частицы). Сверхвысокоэффективную эксклюзионную хроматографию (UP-SEC) выполняли путем разбавления образцов до 1,0 мг/мл (антитело к RSV) в подвижной фазе (100 мМ фосфат натрия и 100 мМ хлорид натрия, рН 7,0); скорость потока 0,5 мл/мин. Разбавленные образцы вводили (5 мкл) в UPLC, оборудованную колонкой Waters ВЕН200 и УФ-детектором. Белки в образце разделяли по размеру и обнаруживали по УФ-поглощению при 214 нм.

Данные UPSEC для оценки уровней высокомолекулярных частиц (HMW или агрегатов), % мономеров и низкомолекулярных (LMW) частиц показаны в таблице 3. [Т0=время 0; 4W=4 недели и 8W=8 недель]

Как показано на фиг. 1, фиг. 2 и фиг. 3, анализ UP-SEC образцов для определения процентного содержания HMW и процентного содержания мономера показал, что при температуре 5°С, 25°С и 40°С все составы показали тенденцию к увеличению пика % HMW и пика % LMW (и последующее уменьшение пика % мономера) до временной точки 8 недель. При температуре 25°С все составы показали аналогичные тенденции, но меньшие изменения по сравнению с температурой 40°С. При температуре 5°С существенных изменений не наблюдалось.

Как показано на фиг. 2 и 3, состав 1 показывает большее увеличение % HMW и % LMW по сравнению с другими составами. Кроме того, состав 1 показал большее уменьшение % мономера. Таким образом, все четыре набора вспомогательных веществ снижают % HMW и % LMW и, таким образом, улучшают стабильность DP антитела к RSV.

ПРИМЕР 3

Скрининг вспомогательных веществ состава антитела к RSV (аминокислоты и их смеси) для улучшения химической стабильности антитела к RSV

В этом исследовании сравнивали стабильность антитела к RSV в гистидине с концентрацией 10 мМ (рН=6), 0,02% PS80, сахарозе с концентрацией 7% в присутствии (i) L-Arg.HCl в концентрации 50 мМ или (ii) L-Lys.HCl в концентрации 50 мМ или (iii) смеси L-Arg в концентрации 25 мМ и L-Glu в концентрации 25 мМ или (iv) смеси L-Arg.HCl в концентрации 25 мМ и Lys.HCl в концентрации 25 мМ.

Эти четыре вспомогательных вещества исследовали на улучшение химической стабильности. Четыре исследованных вспомогательных вещества представляли собой:

(i) L-Arg.HCl в концентрации 50 мМ;

(ii) L-Lys.HCl в концентрации 50 мМ;

(iv) смесь L-Arg.HCl в концентрации 25 мМ и Lys.HCl в концентрации 25 мМ.

Первые два вспомогательных вещества исследовали, чтобы понять эффекты положительно заряженного лизина и аргинина в присутствии противоаниона хлорида. Третье вспомогательное вещество исследовали, чтобы понять эффект аргинина в присутствии другого противоаниона (глутамата). Четвертое вспомогательное вещество представляло собой смесь первых двух вспомогательных веществ, чтобы определить, могут ли эти два вспомогательных вещества играть дополнительную роль. Было высказано предположение, что эта смесь может играть лучшую роль, чем отдельные вспомогательные вещества, поскольку смесь вспомогательных веществ характеризуется различными pKa и по-разному защищает распределение поверхностных изменений моноклонального антитела, и это может повлиять на химическую деградацию моноклонального антитела.

Для оценки стабильности составов пять составов разливали во флаконы и устанавливали стабильность при температуре 5°С (влажность окружающей среды), 25°С (относительная влажность 60%) и 40°С (относительная влажность 75%) в течение восьми недель в защищенном от света месте. Эти пять составов показаны в примере 2.

Ионообменную хроматографию выполняли для оценки химической стабильности и отслеживания изменения профиля варианта заряда с течением времени. Способ ионообменной ВЭЖХ проводили с использованием колонки Dionex ProPac WCX-10 и УФ-детектора при 280 нм. Образцы разбавляли очищенной водой и вводили 80 мкг для анализа. Подвижная фаза, используемая для IEX-анализа образцов термостабильности, представляла собой градиент следующих подвижных фаз (подвижная фаза А: 20 мМ MOPS, рН 7,2; подвижная фаза В: 50 мМ фосфат натрия, 60 мМ хлорид натрия, рН 8,0). Анализ проводят с использованием градиента подвижной фазы от 20 мМ MOPS, рН 7,2 до 50 мМ фосфата натрия, 60 мМ NaCl, рН 8,0. УФ обнаружение проводили при 280 нм.

Данные HP-IEX для оценки уровней кислых вариантов, % пика определяемого компонента и % щелочных вариантов показаны в таблице 4. [Т0=время 0; 4W=4 недели и 8W=8 недель]

Как показано на фиг. 4, фиг. 5 и фиг. 6, анализ HP-IEX образцов для определения химической стабильности показал, что при температуре 5°С, 25°С и 40°С все составы показали тенденцию к увеличению % пика кислых форм и последующее уменьшение % пика мономера до временной точки 8 недель. При температуре 25°С все составы показали аналогичные тенденции, но меньшие изменения по сравнению с температурой 40°С. При температуре 5°С существенных изменений не наблюдалось.

Как видно на фиг. 5 и 6, состав 1 показывает большее увеличение % кислотного пика по сравнению с другими составами. Кроме того, состав 1 показал большее уменьшение % пика определяемого компонента по сравнению с другими составами. Таким образом, все четыре набора вспомогательных веществ уменьшают % пика кислых форм и, таким образом, улучшают химическую стабильность DP антитела к RSV.

ПРИМЕР 4

Скрининг вспомогательных веществ состава антитела к RSV (для уменьшения вязкости антитела к RSV)

В этом исследовании сравнивали стабильность антитела к RSV в гистидине с концентрацией 10 мМ (рН=6), PS80 с концентрацией 0,02%, сахарозе с концентрацией 7% в присутствии (i) L-Arg.HCl в концентрации 50 мМ или (ii) L-Lys.HCl в концентрации 50 мМ или (iii) смеси L-Arg в концентрации 25 мМ и L-Glu в концентрации 25 мМ или (iv) смеси L-Arg.HCl в концентрации 25 мМ и L-Lys.HCl в концентрации 25 мМ.

Эти четыре вспомогательных вещества исследовали на их способность снижать вязкость антитела к RSV. Четыре исследованных вспомогательных вещества представляли собой:

(i) L-Arg.HCl в концентрации 50 мМ;

(ii) L-Lys.HCl в концентрации 50 мМ;

Первые два вспомогательных вещества исследовали, чтобы понять эффекты положительно заряженного лизина и аргинина в присутствии противоаниона хлорида. Третье вспомогательное вещество исследовали, чтобы понять эффект аргинина в присутствии другого противоаниона (глутамата). Четвертое вспомогательное вещество представляло собой смесь первых двух вспомогательных веществ, чтобы посмотреть, могут ли эти два вспомогательных вещества играть дополнительную роль. Была выдвинута гипотеза, что эта смесь может играть лучшую роль, чем отдельные вспомогательные вещества, поскольку смесь вспомогательных веществ характеризуется различными pKa и по-разному экранирует распределение поверхностных изменений моноклонального антитела, тем самым увеличивая отталкивающее межбелковое взаимодействие и уменьшая вязкость моноклонального антитела.

Для измерения вязкости образцы загружали в шприц на 500 мкл и измеряли вязкость (пять раз для каждого образца) при температуре 20°С с помощью вискозиметра MVROC. Датчики VROC определяют вязкость путем измерения падения давления при прохождении пробы через проточный канал датчика в определенных местах от входа. Вязкость измеряли как функцию скорости сдвига, причем скорости сдвига образцов определяли по вязкости образца.

Как показано в таблице 5 и на фиг. 7, все четыре набора вспомогательных веществ снижают вязкость DP антитела к RSV.

ПРИМЕР 5

Добавление хелатора к составу антител к RSV для уменьшения агрегации В этом исследовании сравнивали стабильность антитела к RSV в гистидине с концентрацией 10 мМ (рН=6), PS80 с концентрацией 0,02%, сахарозе с концентрацией 7% в присутствии или в отсутствие DTPA в концентрации 50 мкМ (диэтилентриамин-пентаацетата).

Чтобы оценить стабильность составов, два состава разливали во флаконы и устанавливали стабильность при температуре 5°С (окружающая влажность), 25°С (60% относительной влажности) и 40°С (75% относительной влажности) в течение восьми недель в защищенном от света месте. Эти два состава показаны в таблице 6.

Образцы оценивали с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) на предмет чистоты, при этом определяли процентное содержание мономера, а также процентное содержание высокомолекулярных частиц (HMW) и пиков позднего элюирования (LMW-частицы). Сверхвысокоэффективную эксклюзионную хроматографию (UP-SEC) выполняли путем разбавления образцов до 1,0 мг/мл в подвижной фазе (100 мМ фосфата натрия и 100 мМ хлорида натрия, рН 7,0); скорость потока 0,5 мл/мин. Разбавленные образцы вводили (5 мкл) в UPLC, оборудованную колонкой Waters ВЕН200 и УФ-детектором. Белки в образце разделяли по размеру и обнаруживали по УФ-поглощению при 214 нм.

Данные UPSEC для оценки уровней высокомолекулярных частиц (HMW или агрегаты), % мономера и LMW (низкомолекулярных частиц) показаны в таблице 7. [Т0=время 0; 4W=4 недели и 8W=8 недель]

Как показано на фиг. 8, фиг. 9 и фиг. 10, анализ UP-SEC образцов для определения процентного содержания HMW и процентного содержания мономера показал, что при температуре 5°С, 25°С и 40°С оба состава показали тенденцию к увеличение % пика HMW и % пика LMW (и последующее уменьшение % пика мономера) до временной точки 8 недель. При температуре 25°С оба состава показали аналогичные тенденции, но меньшие изменения по сравнению с температурой 40°С. При температуре 5°С существенных изменений не наблюдалось.

Как видно на фиг. 9 и 10, состав 1 показал большее увеличение % HMW и % LMW по сравнению с составом 2. Кроме того, состав 1 показал большее снижение % мономера по сравнению с составом 2. Таким образом, DTPA (состав 2) снижает % HMW и % LMW и, таким образом, улучшает агрегацию DP антитела к RSV.

ПРИМЕР 6

Добавление хелатора к составу антитела к RSV для улучшения химической стабильности антитела к RSV

В этом исследовании сравнивают химическую стабильность антитела к RSV в гистидине с концентрацией 10 мМ (рН=6), PS80 с концентрацией 0,02%, сахарозе с концентрацией 7% в присутствии или в отсутствие DTPA в концентрации 50 мкМ.

Чтобы оценить химическую стабильность составов, два состава разливали во флаконы и оценивали стабильность при температуре 5°С (влажность окружающей среды), 25°С (относительная влажность 60%) и 40°С (относительная влажность 75%) в течение восьми недель в защищенном от света месте. Эти два состава представлены в примере 5.

Ионообменную хроматографию выполняли для оценки химической стабильности и отслеживания изменения профиля варианта заряда с течением времени. Способ ионообменной ВЭЖХ проводили с использованием колонки Dionex ProPac WCX-10 и УФ-детектора при 280 нм. Образцы разбавляли очищенной водой и вводили 80 мкг для анализа. Подвижная фаза, используемая для IEX-анализа образцов термостабильности, представляла собой градиент следующих подвижных фаз (подвижная фаза А: 20 мМ MOPS, рН 7,2; подвижная фаза В: 50 мМ фосфат натрия, 60 мМ хлорид натрия, рН 8,0). Анализ выполняли с использованием градиента подвижной фазы от 20 мМ MOPS, рН 7,2 до 50 мМ фосфата натрия, 60 мМ NaCl, рН 8,0. УФ обнаружение проводили при 280 нм.

Данные HP-IEX для оценки уровней кислых вариантов, % пика определяемого компонента и % щелочных вариантов показаны в таблице 8. [Т0=время 0; 4W=4 недели и 8W=8 недель]

Как показано на фиг. 11, фиг. 12 и фиг. 13, анализ HP-IEX образцов для определения химической стабильности показал, что при температуре 5°С, 25°С и 40°С оба состава показали тенденцию к увеличению % пика кислых форм и последующее уменьшение % пика мономера) до временной точки 8 недель. При температуре 25°С оба состава показали аналогичные тенденции, но меньшие изменения по сравнению с температурой 40°С. При температуре 5°С существенных изменений не наблюдалось.

Как видно на фиг. 12 и 13, состав 1 показал большее увеличение % пика кислых форм по сравнению с составом 2. Кроме того, состав 1 показал большее уменьшение % пика определяемого компонента по сравнению с составом 2. Таким образом, DTPA (состав 2) снижал % пика кислых форм и, таким образом, улучшает химическую стабильность DP антитела к RSV.

ПРИМЕР 7

Добавление хелатора к составу антител к RSV для уменьшения деградации PS80

В этом исследовании сравнивали химическую стабильность PS80 в антителе к RSV в гистидине с концентрацией 10 мМ (рН=6), PS80 с концентрацией 0,02%, сахарозе с концентрацией 7% в присутствии или в отсутствие DTPA в концентрации 50 мкМ. Деградация PS80, как правило, наблюдается при длительном хранении моноклонального антитела, и эксперимент проводили для определения совместимости DTPA с PS80.

Чтобы оценить химическую стабильность PS80 в двух составах, эти два состава разливали во флаконы и устанавливали стабильность при температуре 5°С (влажность окружающей среды), 25°С (относительная влажность 60%) и 40°С (относительная влажность 75%) в течение восьми недель в защищенном от света месте. Эти два состава представлены в примере 5.

Результаты в таблице 9 показывают аналогичные профили деградации PS80 для обоих составов. На фиг. 14 показан % деградации PS80 при температуре 40°С. Процент деградации был немного меньше для состава 2 (в присутствии DTPA). Таким образом, DTPA может защищать от деградации PS80, и эти два вспомогательных вещества (DTPA и PS80) взаимно совместимы. [Т0=время 0; 4W=4 недели и 8W=8 недель]

ПРИМЕР 8

Повышение концентрации вспомогательных вещества для снижения вязкости и поддержания стабильности

Чтобы оценить влияние повышенных концентраций вспомогательных веществ на снижение вязкости, антитела к RSV готовили в двух различных концентрациях (около 200 мг/мл и 154 мг/мл) в четырех различных составах: первый состав, содержащий гистидин в концентрации около 10 мМ, сахарозу в концентрации 7% и PS80 в концентрации 0,02%, рН 6, и три состава с добавлением дополнительной высокой концентрации вспомогательных вещества: 70 мМ гистидина (для общей концентрации 80 мМ гистидина), 70 мМ лизина или 70 мМ Arg.

Для измерения вязкости четырех составов образцы загружали в шприц на 500 мкл и измеряли вязкость (четыре раза для каждого образца) при комнатной температуре с помощью вискозиметра MVROC. Датчики VROC определяют вязкость путем измерения падения давления при прохождении пробы через проточный канал датчика в определенных местах от входа. Вязкость измеряли как функцию скорости сдвига (измеряли в обратных секундах [с^-1]). Используемая скорость сдвига составляла 997 с^-1. На фиг. 15 показана гистограмма, сравнивающая четыре различных состава антитела к RSV в их соответствующих концентрациях (около 200 мг/мл и 154 мг/мл).

По сравнению с составом, содержащим гистидин в концентрации около 10 мМ, сахарозу в концентрации 7% и PS80 в концентрации 0,02%, рН 6, добавление более высоких концентраций гистидина, лизина и аргинина показало существенное снижение вязкости. Как показано на фиг. 15, четыре состава не показали существенно различающейся вязкости при концентрации антитела к RSV 154 мг/мл. Однако при более высоких концентрациях антител к RSV, составляющих около 200 мг/мл, составы, в которых использовались дополнительные 70 мМ гистидина, 70 мМ лизина или 70 мМ аргинина, показали значительное снижение средней вязкости по сравнению с первым составом. Антитело к RSV в концентрации 213 мг/мл в составе гистидин в концентрации около 10 мМ, сахарозу в концентрации 7% и PS80 в концентрации 0,02%, рН 6, характеризуется средней вязкостью 64,97 сантипуаз (сП). Использование дополнительного вспомогательных вещества из гистидина в концентрации 70 мМ (общая концентрация гистидина 80 мМ) снизило среднюю вязкость композиции антител к RSV с концентрацией 204 мг/мл до 30,85 сП. Использование лизина в концентрации 70 мМ в качестве вспомогательных вещества снизило среднюю вязкость состава 192 мг/мл антитела к RSV до 19,81 сП. Использование аргинина в концентрации 70 мМ в качестве вспомогательных вещества снизило среднюю вязкость состава 217 мг/мл антитела к RSV до 29,27 сП.

Стабильность каждого из составов отслеживали в течение 3 месяцев при температуре 5°С, 25°С и 40°С. Образцы оценивали с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) на предмет чистоты, в которой определяли процентное содержание мономера, а также процентное содержание высокомолекулярных частиц (HMW) и пиков позднего элюирования (частицы LMW). Ионообменную хроматографию выполняли, как описано в примере 6, для оценки химической стабильности и отслеживания изменения профиля варианта заряда с течением времени. Значения перечислены в таблице 10 ниже.

По сравнению с составом, содержащим гистидин в концентрации около 10 мМ, сахарозу в концентрации 7% и PS80 в концентрации 0,02%, рН 6, добавление более высоких концентраций гистидина, лизина и аргинина не приводило к значительному увеличению количества высокомолекулярных или низкомолекулярных частиц и не приводило к значительному снижению процентного содержания мономера.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> МЕРК ШАРП ЭНД ДОУМ КОРП.

Hashemi, Venus

De, Arnab

Narasimhan, Chakravarthy Nachu

<120> СОСТАВЫ АНТИТЕЛ К RSV И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

<130> 24641-WO-PCT

<150> US 62/747,418

<151> 2018-10-18

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 1

Asp Ser Ala Met Ser

1 5

<210> 2

<211> 19

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 2

Phe Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Lys Glu Tyr Ala Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 3

<211> 16

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 3

Gly Ala Pro Tyr Gly Gly Asn Ser Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val

1 5 10 15

<210> 4

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 4

Arg Thr Ser Gln Asp Val Arg Gly Ala Leu Ala

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 5

Asp Ala Ser Ser Leu Glu Thr

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 6

Gln Gln Phe Leu Asp Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 7

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь RB-1 с аминокислотной заменой

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Phe Asp Asp Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ser Phe Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Lys Glu Tyr Ala Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Gly Ala Pro Tyr Gly Gly Asn Ser Asp Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

115 120

<210> 8

<211> 106

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 8

Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val

1 5 10 15

Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Val Arg Gly Ala Leu Ala Trp

20 25 30

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Phe Asp Ala

35 40 45

Ser Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe

65 70 75 80

Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Leu Asp Phe Pro Phe Thr Phe Gly

85 90 95

Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr

100 105

<210> 9

<211> 457

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь RB1+YTE

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Phe Asp Asp Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ser Phe Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Lys Glu Tyr Ala Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Gly Ala Pro Tyr Gly Gly Asn Ser Asp Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120 125

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser

130 135 140

Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe

145 150 155 160

Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly

165 170 175

Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu

180 185 190

Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr

195 200 205

Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys

210 215 220

Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

225 230 235 240

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

245 250 255

Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val

260 265 270

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

275 280 285

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

290 295 300

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

305 310 315 320

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

325 330 335

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

340 345 350

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

355 360 365

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

370 375 380

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

385 390 395 400

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

405 410 415

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

420 425 430

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

435 440 445

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 10

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь RB1+YTE

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Val Arg Gly Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Asp Ala Ser Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Leu Asp Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<---

Claims

1. Состав антитела к RSV для лечения или профилактики инфекции RSV у пациента-человека, содержащий:

а) от около 50 мг/мл до около 250 мг/мл антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего определяющие комплементарность области (CDR), имеющие аминокислотные последовательности: SEQ ID NO: 1 (CDR 1 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 2 (CDR 2 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 3 (CDR 3 тяжелой цепи), SEQ ID NO: 4 (CDR 1 легкой цепи), SEQ ID NO: 5 (CDR 2 легкой цепи) и SEQ ID NO: 6 (CDR 3 легкой цепи);

b) от около 5 мМ до около 20 мМ гистидина;

c) от около 4% до около 8% масса/объем сахарозы;

d) около 70 мМ L-аргинина или фармацевтически приемлемой соли L-аргинина; и

e) от около 0,01% до около 0,10% масса/объем полисорбата 80.

2. Состав антитела к RSV по п. 1, содержащий от около 125 мг/мл до около 175 мг/мл антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента.

3. Состав антитела к RSV по п. 1, содержащий около 150 мг/мл антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента.

4. Состав антитела к RSV по п. 1, содержащий от около 150 мг/мл до около 200 мг/мл антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента.

5. Состав антитела к RSV по п. 1, содержащий около 175 мг/мл антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента.

6. Состав антитела к RSV по п. 1, содержащий от около 175 мг/мл до около 225 мг/мл антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента.

7. Состав антитела к RSV по п. 1, содержащий около 200 мг/мл антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента.

8. Состав антитела к RSV по любому из пп. 1-7, дополнительно содержащий от около 25 до около 75 мкМ диэтилентриамин-пентаацетата (DTPA).

9. Состав антитела к RSV по любому из пп. 1-8, дополнительно содержащий от около 1 мМ до около 20 мМ L-метионина.

10. Состав антитела к RSV по любому из пп. 1-9, в котором значение pH составляет от 5,5 до 6,5.

11. Состав антитела к RSV по любому из пп. 1-10, в котором значение pH составляет 6,0.

12. Состав антитела к RSV по любому из пп. 1-11, в котором антитело к RSV содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность. SEQ ID NO: 8.

13. Состав антитела к RSV по любому из пп. 1-11, в котором антитело к RSV включает в себя тяжелую цепь иммуноглобулина, состоящую из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 9, и легкую цепь иммуноглобулина, состоящую из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 10.

14. Применение состава антитела к RSV по любому из пп. 1-13 для лечения или профилактики инфекции RSV у нуждающегося в этом пациента-человека.

15. Применение состава антитела к RSV по п. 14, при котором состав антитела к RSV применяется в эффективном количестве, которое предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента от около 10 мг до около 150 мг.

16. Применение состава антитела к RSV по п. 14, при котором состав антитела к RSV применяется в эффективном количестве, которое предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента от около 25 мг до около 125 мг.

17. Применение состава антитела к RSV по п. 14, при котором состав антитела к RSV применяется в эффективном количестве, которое предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента от около 50 мг до около 100 мг.

18. Применение состава антитела к RSV по п. 14, при котором состав антитела к RSV применяется в эффективном количестве, которое предусматривает фиксированную дозу антитела к RSV или его антигенсвязывающего фрагмента около 100 мг.

19. Применение состава антитела к RSV по любому из пп. 14-18, при котором состав антитела к RSV применяют внутримышечно.

20. Применение состава антитела к RSV по любому из пп. 1-13 для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики инфекции RSV у пациента-человека.