RU2780603C1 - Method for diagnostics of blastocystis hominis invasion by biopsy materials - Google Patents
Method for diagnostics of blastocystis hominis invasion by biopsy materials Download PDFInfo
- Publication number
- RU2780603C1 RU2780603C1 RU2021111699A RU2021111699A RU2780603C1 RU 2780603 C1 RU2780603 C1 RU 2780603C1 RU 2021111699 A RU2021111699 A RU 2021111699A RU 2021111699 A RU2021111699 A RU 2021111699A RU 2780603 C1 RU2780603 C1 RU 2780603C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mucous membrane
- blastocystosis
- biopsy materials
- stomach
- epithelium
- Prior art date
Links
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 241000726107 Blastocystis hominis Species 0.000 title claims abstract description 18
- 229940011597 Blastocystis hominis Drugs 0.000 title claims abstract description 14
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 title abstract description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 title abstract 5
- 230000029578 entry into host Effects 0.000 title description 2
- 210000004400 Mucous Membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 210000000981 Epithelium Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 210000004347 Intestinal Mucosa Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 210000001198 Duodenum Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 210000000805 Cytoplasm Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 230000002496 gastric Effects 0.000 claims abstract description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims abstract description 3
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000002197 limbic Effects 0.000 claims description 2
- 210000000286 Epitheliocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 210000002459 Blastocyst Anatomy 0.000 abstract description 23
- 210000001072 Colon Anatomy 0.000 abstract description 10
- 210000001035 Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 abstract description 4
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000002757 inflammatory Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001575 pathological Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004040 coloring Methods 0.000 abstract description 2
- 210000002919 epithelial cells Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 244000045947 parasites Species 0.000 description 7
- 210000003608 Feces Anatomy 0.000 description 6
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 208000006551 Parasitic Disease Diseases 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 230000000968 intestinal Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 241000726108 Blastocystis Species 0.000 description 4
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 4
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 4
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 4
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 3
- 206010022678 Intestinal infection Diseases 0.000 description 3
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 3
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 3
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 3
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 3
- 206010063057 Cystitis noninfective Diseases 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 210000003097 Mucus Anatomy 0.000 description 2
- 206010037601 Pyelonephritis chronic Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 201000003139 chronic cystitis Diseases 0.000 description 2
- 201000006368 chronic pyelonephritis Diseases 0.000 description 2
- 238000002052 colonoscopy Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000008286 diarrhea Diseases 0.000 description 2
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 2
- 230000001744 histochemical Effects 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003562 morphometric Effects 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 235000007173 Abies balsamea Nutrition 0.000 description 1
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010060931 Adenovirus infection Diseases 0.000 description 1
- KDXHLJMVLXJXCW-UHFFFAOYSA-J Alcian blue stain Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cu+2].[N-]1C(N=C2C3=CC(CSC(N(C)C)=[N+](C)C)=CC=C3C(N=C3C4=CC=C(CSC(N(C)C)=[N+](C)C)C=C4C(=N4)[N-]3)=N2)=C(C=C(CSC(N(C)C)=[N+](C)C)C=C2)C2=C1N=C1C2=CC(CSC(N(C)C)=[N+](C)C)=CC=C2C4=N1 KDXHLJMVLXJXCW-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003119 Arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004857 Balsam Substances 0.000 description 1
- 241001634047 Blastocystis ratti Species 0.000 description 1
- 206010007521 Cardiac arrhythmias Diseases 0.000 description 1
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N Ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009657 Clostridium difficile colitis Diseases 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 206010011793 Cystitis haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- 208000000718 Duodenal Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 210000002472 Endoplasmic Reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 210000002288 Golgi Apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 206010018987 Haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 1
- 206010020718 Hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010021113 Hypothermia Diseases 0.000 description 1
- 244000018716 Impatiens biflora Species 0.000 description 1
- 235000015912 Impatiens biflora Nutrition 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 229940042115 Methylene blue Drugs 0.000 description 1
- 210000003470 Mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 208000003067 Myocardial Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004940 Nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 206010036784 Proctocolitis Diseases 0.000 description 1
- 206010037075 Protozoal infection Diseases 0.000 description 1
- 206010037128 Pseudomembranous colitis Diseases 0.000 description 1
- 206010057071 Rectal tenesmus Diseases 0.000 description 1
- 206010039447 Salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 206010040550 Shigella infection Diseases 0.000 description 1
- 206010052058 Sigmoiditis Diseases 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 208000001072 Type 2 Diabetes Mellitus Diseases 0.000 description 1
- YOWZJZJLXUQHGF-UHFFFAOYSA-M [7-(dimethylamino)phenothiazin-3-ylidene]-dimethylazanium;dimethyl-[7-(methylamino)phenothiazin-3-ylidene]azanium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC(=[N+](C)C)C=C2SC3=CC(NC)=CC=C3N=C21.C1=CC(=[N+](C)C)C=C2SC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 YOWZJZJLXUQHGF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000003947 acalculous cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000112 colonic Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000741 diarrhetic Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002497 edematous Effects 0.000 description 1
- 238000002181 esophagogastroduodenoscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 201000002802 hemorrhagic cystitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000544 hyperemic Effects 0.000 description 1
- 230000002631 hypothermal Effects 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000003870 intestinal permeability Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000003278 mimic Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000003108 parasitologic Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 1
- 201000000432 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent Effects 0.000 description 1
- 108091007521 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 201000005113 shigellosis Diseases 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Настоящее изобретение относится к медицинским наукам, а именно, к патологической анатомии, гастроэнтерологии, паразитологии и медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации Blastocystis hominis в слизистой оболочке разных отделов желудочно-кишечного тракта.The present invention relates to medical sciences, namely, to pathological anatomy, gastroenterology, parasitology and medical microbiology, and can be used to identify Blastocystis hominis in the mucous membrane of different parts of the gastrointestinal tract.
Бластоцистоз - это протозойная инвазия, вызываемая Blastocystis hominis. Этот паразит относится к типу Простейшие, подтипу Саркодовые [1-3] и вызывает болезнь Zierdta-Garavelli. Впервые о бластоцистозе упоминает E.Brumpt (1912). Мофологически в жизненном цикле различают шесть форм бластоцист [4-5]: вакуолярную, гранулярную, амебоидную, цистную, мультивакуолярную и клесторную. Первые три формы бластоцист хорошо морфологически идентифицируются, тогда как цистная, мультивакуолярная и клесторная - трудно различимы. Бластоцисты могут быть разделены более чем на 10 субтипов.Blastocystosis is a protozoal infection caused by Blastocystis hominis. This parasite belongs to the Protozoan phylum, Sarcodaceae subtype [1-3] and causes Zierdta-Garavelli disease. For the first time, E. Brumpt (1912) mentions blastocystosis. Morphologically, six forms of blastocysts are distinguished in the life cycle [4–5]: vacuolar, granular, amoeboid, cystic, multivacuolar, and klestor. The first three forms of blastocysts are well identified morphologically, while the cystic, multivacuolar, and klestor forms are difficult to distinguish. Blastocysts can be divided into more than 10 subtypes.
Клетки бластоцист чаще имеют круглую, овальную, редко амебоидную форму, последняя служит индикатором патогенности. По размеру паразитарной клетки вакуолярные формы различаются: чаще 5-10 мкм, реже 10-15 мкм. Цисты бластоцист бывают тонкостенные и толстостенные. По числу ядер в цитоплазме клетки бластоцист разделяют на: двухядерные (редко), четырехядерные (часто), многоядерные (редко). Светооптически в цитоплазме бластоцист выявлены митохондрии, комплекс Гольджи, эндоплазматическая сеть [4, 6, 7].Blastocyst cells often have a round, oval, rarely amoeboid shape, the latter serves as an indicator of pathogenicity. By the size of the parasitic cell, vacuolar forms differ: more often 5-10 microns, less often 10-15 microns. Blastocyst cysts are thin-walled and thick-walled. According to the number of nuclei in the cytoplasm, blastocyst cells are divided into: two-nuclear (rarely), four-nuclear (often), multinuclear (rarely). Light-optically, mitochondria, the Golgi complex, and the endoplasmic reticulum were revealed in the cytoplasm of blastocysts [4, 6, 7].
В большинстве территорий РФ лабораторная диагностика кишечной инфекции паразитарной природы проводится недостаточно.In most territories of the Russian Federation, laboratory diagnostics of intestinal infection of a parasitic nature is not carried out enough.
В настоящее время известны следующие методы для верификации бластоцист:The following methods for blastocyst verification are currently known:
1. Идентификация методом ПЦР. Известен способ идентификации бластоцист методом ПЦР [Stensvold С.R. et al. Detection of Blastocystis hominis in unpreserved stool specimens by using polymerase chain reaction // Journal of Parasitology. - 2006. - Vol.92. - №. 5. - P. 1081-108; Eroglu F., Koltas I.S. Evaluation of the transmission mode of Blastocystis hominis by using PCR method // Parasitology Research. - 2010. -Vol.107. - №4. - P. 841-845]. Данный метод является высокочувствительным и специфичным. Для его реализации необходимо специальное оборудование, квалифицированный персонал и тест-система. Этим объясняется дороговизна и большая продолжительность исследования.1. Identification by PCR. A known method for the identification of blastocysts by PCR [Stensvold C.R. et al. Detection of Blastocystis hominis in unpreserved stool specimens by using polymerase chain reaction // Journal of Parasitology. - 2006. - Vol.92. - No. 5. - P. 1081-108; Eroglu F., Koltas I.S. Evaluation of the transmission mode of Blastocystis hominis by using PCR method // Parasitology Research. - 2010. -Vol.107. - No. 4. - P. 841-845]. This method is highly sensitive and specific. Its implementation requires special equipment, qualified personnel and a test system. This explains the high cost and long duration of the study.
2. Способ определения простейших Blastocystis spp.с различной степенью вирулентности с помощью рестрикционного анализа бактериальной ДНК бластоцист с использованием комбинации эндонуклеаз рестрикции - Нае III, Pst I и Hind III [Патент РФ №2520742RU от 13.12.2012 опубл. 27.06.2014 Бюл. №18]. Анализ обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Для его реализации требуется специальное оборудование и тест система. К недостаткам анализа можно отнести его высокую стоимость и продолжительность.2. A method for determining the protozoan Blastocystis spp. with varying degrees of virulence using restriction analysis of bacterial DNA of blastocysts using a combination of restriction endonucleases - Nae III, Pst I and Hind III [RF Patent No. 2520742RU dated 13.12.2012 publ. 06/27/2014 Bull. No. 18]. The assay has high sensitivity and specificity. Its implementation requires special equipment and a test system. The disadvantages of the analysis include its high cost and duration.
3. Способ определения бластоцист в кале методом микроскопии описан в методических указаниях [МУК 4.2.735-99. Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России- 2012. - 72 с.]. Несмотря на простоту и небольшую продолжительность исследования, есть сложности с идентификацией клеток бастоцист, связанные с феноменальными возможностями вариаций морфотипов Blastocystis. Изменение формы клетки позволяет паразиту мимикрировать и быть неотличимым от других амеб. Данный метод имеет ограничения по специфичности, так как может определяться только в нативном биологическом материале, что существенно ограничивает возможности его идентификации, так как на определенных этапах его жизненного цикла паразит находится в цистной форме, неидентифицируемой микроскопически в кале.3. The method for determining blastocysts in feces by microscopy is described in the guidelines [MUK 4.2.735-99. Parasitological methods of laboratory diagnostics of helminthiases and protozooses. - M.: Federal Center of the State Sanitary and Epidemiological Surveillance of the Ministry of Health of Russia - 2012. - 72 p.]. Despite the simplicity and short duration of the study, there are difficulties with the identification of bastocystis cells associated with the phenomenal possibilities of variations in Blastocystis morphotypes. Changing the shape of the cell allows the parasite to mimic and be indistinguishable from other amoebae. This method has limitations in specificity, since it can only be determined in native biological material, which significantly limits the possibility of its identification, since at certain stages of its life cycle the parasite is in a cystic form that is not identifiable microscopically in feces.
Учитывая недостатки вышеприведенных методов диагностики, разработка наиболее достоверных методов верификации паразитарной инфекции, вызванной Blastocystis hominis, является актуальной. [8-13].Given the shortcomings of the above diagnostic methods, the development of the most reliable methods for verifying a parasitic infection caused by Blastocystis hominis is relevant. [8-13].
Технической проблемой решаемой изобретением, является экспресс-диагностика бластоцистоза (в течение 6 часов) с одновременной гистологической оценкой морфологических структур биоптата и определением разных жизненных форм паразита. Данный способ позволит в кратчайшие сроки сделать гистологическое заключение и верифицировать диагноз, что даст возможность решить поставленную в работе задачу.The technical problem solved by the invention is the rapid diagnosis of blastocystosis (within 6 hours) with simultaneous histological assessment of the morphological structures of the biopsy specimen and the determination of different life forms of the parasite. This method will allow in the shortest possible time to make a histological conclusion and verify the diagnosis, which will make it possible to solve the problem posed in the work.
Для подтверждения этиологии инвазии Blastocystis hominis выполнялись посевы испражнений на питательные среды, микроскопия нативных препаратов и биоптатов, полученных из слизистой оболочки желудка, 12-перстной и толстой кишок. Сравнительный анализ применяемых методов лабораторной диагностики бластоцист показал, что полная и достоверная верификация разных жизненных форм бластоцист, степень контаминации и выраженности воспалительных изменений в слизистой оболочке разных отделов ЖКТ, возможна только при гистологическом исследовании биоптата.To confirm the etiology of Blastocystis hominis invasion, cultures of feces on nutrient media, microscopy of native preparations and biopsies obtained from the mucous membrane of the stomach, duodenum and colon were performed. A comparative analysis of the applied methods of laboratory diagnostics of blastocysts showed that complete and reliable verification of different life forms of blastocysts, the degree of contamination and the severity of inflammatory changes in the mucous membrane of different sections of the gastrointestinal tract, is possible only with a histological examination of the biopsy.
Сущность изобретения заключается в том, что гистологическим методом в биоптатах слизистой оболочки разных отделов ЖКТ после окрашивания по методу Май-Грюнвальда идентифицируют разные жизненные формы бластоцист в короткие сроки.The essence of the invention lies in the fact that the histological method in biopsy samples of the mucous membrane of different parts of the gastrointestinal tract after staining by the May-Grunwald method identifies different life forms of blastocysts in a short time.
Заявленный способ осуществляется в несколько этапов:The claimed method is carried out in several stages:
1. Эзофагогастроскопия и фиброволоконная колоноскопия со взятием биоптата - 10 мин;1. Esophagogastroscopy and fiberoptic colonoscopy with biopsy - 10 min;
2. Фиксация биоптатов в 10% нейтральном забуференном растворе формалина в течение 3-х часов при комнатной температуре;2. Fixation of biopsy specimens in 10% neutral buffered formalin solution for 3 hours at room temperature;
3. Промывка фиксированных биоптатов в Н2O водопроводной - 1 час;3. Washing fixed biopsy specimens in H 2 O tap water - 1 hour;
4. Заливка биоптатов в парафин и приготовление серийных срезов толщиной 5 мкм - 10 минут;4. Embedding of biopsy specimens in paraffin and preparation of serial sections with a thickness of 5 microns - 10 minutes;
5. Дофиксация полученных срезов в абсолютном метаноле - 5 минут;5. Additional fixation of the obtained sections in absolute methanol - 5 minutes;
6. Высушивание срезов на воздухе - 5 минут;6. Air drying of sections - 5 minutes;
7. Окрашивание срезов по Май-Грюнвальду (сочетание метиленового синего с азуром II и эозином) - 15 минут;7. May-Grunwald staining of sections (combination of methylene blue with azure II and eosin) - 15 minutes;
8. Промывка окрашенных срезов в Н2O дистиллированной - 10 минут;8. Washing stained sections in H 2 O distilled - 10 minutes;
9. Высушивание в термостате при 56% Цельсия - 30 минут;9. Drying in a thermostat at 56% Celsius - 30 minutes;
10. Заключение готовых гистологических препаратов в канадский бальзам - 5 минут;10. Conclusion of finished histological preparations in Canadian balsam - 5 minutes;
11. Полимеризация окрашенных препаратов в термостате - 2 часа;11. Polymerization of colored preparations in a thermostat - 2 hours;
12. Просмотр готовых полимеризованных препаратов при ок7 х объект 100 в течение 6 часов;12. Review of finished polymerized preparations at approx. 7 x object 100 for 6 hours;
Технический результат заключается в том, что предлагаемый нами метод морфологической диагностики бластоцистоза по биоптатам позволит верифицировать наиболее часто встречаемые жизненные формы бластоцист и установить их роль в развитии воспалительных изменений в слизистой оболочке ЖКТ [4].The technical result is that the proposed method of morphological diagnosis of blastocystosis by biopsy specimens will allow us to verify the most common life forms of blastocysts and establish their role in the development of inflammatory changes in the gastrointestinal mucosa [4].
Гистологическим, гистохимическим и морфометрическим методами изучено 72 биоптата слизистой оболочки разных отделов ЖКТ. Биоптаты были получены при эзофагогастродуоденоскопии и фиброволоконной колоноскопии от 21 пациента обоего пола (женщин 15, а мужчин - 6). Возраст пациентов варьировал от 56 до 78 лет.Histological, histochemical and morphometric methods studied 72 biopsy samples of the mucous membrane of different parts of the gastrointestinal tract. Biopsies were obtained during esophagogastroduodenoscopy and fiberoptic colonoscopy from 21 patients of both sexes (15 women and 6 men). The age of the patients ranged from 56 to 78 years.
Гистохимическое изучение осуществляли после окраски биоптатов 0,1% раствором альцианового синего с верификацией в слизи кислых гликопротеинов. Морфометрическое исследование биоптатов включало верификацию трех жизненных форм бластоцист.Histochemical study was carried out after biopsy staining with 0.1% alcian blue solution with verification of acid glycoproteins in mucus. Morphometric study of biopsy specimens included verification of three life forms of blastocysts.
В гистологических препаратах бластоцисты были представлены клетками округлой или овальной формы с азурофильной гомогенной цитоплазмой, в поперечнике не более 50 мкм, которые располагались на поверхности покровного и ямочного эпителия желудка, в просвете желудочных ямочек, каемчатых эпителиоцитов, кишечных желез 12-перстной кишки, а также на поверхностном эпителии кишечных желез слизистой оболочки толстой кишки.In histological preparations, blastocysts were represented by cells of a round or oval shape with azurophilic homogeneous cytoplasm, no more than 50 μm in diameter, which were located on the surface of the integumentary and pit epithelium of the stomach, in the lumen of gastric pits, limbic epithelial cells, intestinal glands of the duodenum, and also on the surface epithelium of the intestinal glands of the colon mucosa.
Заявляемый метод включает использование окраски биоптата по Май-Грюнвальду, что значительно повышает частоту выявления разных форм Blastocystis hominis в короткие сроки. Так, в проведенных исследованиях в слизистой оболочке разных отделов ЖКТ Blastocystis hominis были верифицированы в 45,8%: на поверхностном и ямочном эпителии слизистой оболочки тела желудка в 12,4% случаев, в антральном отделе - в 50,0%, на слизистой оболочке 12-ти перстной кишки - в 12,5%, толстой кишки - в 25,2%). Вакуолярные формы бластоцист встречались в 65,4% случаев, гранулярные в 27,7%, а амебоидные - в 6,9%, что значительно выше, чем при других методах обследования. Одновременно с оценкой выраженности контаминации Blastocystis hominis, были установлены морфологические особенности слизистой оболочки пораженных участков: лимфофолликулярная гиперплазия разных отделов ЖКТ (5,5%>) и дисплазия ямочного эпителия тела и антрального отдела желудка и толстой кишки разной степени выраженности и частоты (2,8 до 4,2%), 2,8%) соответственно).The proposed method includes the use of May-Grunwald biopsy staining, which significantly increases the frequency of detection of various forms of Blastocystis hominis in a short time. So, in the studies conducted in the mucous membrane of different parts of the gastrointestinal tract, Blastocystis hominis was verified in 45.8%: on the surface and pit epithelium of the mucous membrane of the body of the stomach in 12.4% of cases, in the antrum - in 50.0%, on the mucous membrane 12 duodenal ulcer - in 12.5%, large intestine - in 25.2%). Vacuolar forms of blastocysts were found in 65.4% of cases, granular forms in 27.7%, and amoeboid forms in 6.9%, which is significantly higher than with other examination methods. Simultaneously with the assessment of the severity of Blastocystis hominis contamination, morphological features of the mucous membrane of the affected areas were established: lymphofollicular hyperplasia of different parts of the gastrointestinal tract (5.5%>) and dysplasia of the pit epithelium of the body and antrum of the stomach and colon of varying severity and frequency (2.8 up to 4.2%), 2.8%), respectively).
Изобретение иллюстрируют следующие примеры.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Пациент Щ-ков, 76 лет. Клинический диагноз: Бластоцистоз, кишечная форма (В. hominis), среднетяжелое течение.Example 1. Patient Shchkov, 76 years old. Clinical diagnosis: Blastocystosis, intestinal form (V. hominis), moderate course.
Сопутствующее заболевание: Язвенная болезнь 12-перстной кишки в фазе обострения. Хроническая ишемическая болезнь сердца, стабильное нарушение ритма, гипертоническая болезнь, стадия II Б, сахарный диабет 2-го типа инсулинозависимая форма.Concomitant disease: Peptic ulcer of the duodenum in the acute phase. Chronic ischemic heart disease, stable arrhythmias, hypertension, stage II B, type 2 diabetes mellitus, insulin-dependent form.
В течение 50 лет страдает язвенной болезнью 12.п.кишки с частыми обострениями. Получает много препаратов по поводу основного заболевания. В последние годы стал отмечать нарушения стула, которые чередовались запорами и поносами. Ухудшение самочувствия отмечал в течение последней недели, появились голодные и утренние боли в эпигастральной области, присоединился частый жидкий водянистый стул до 5 раз в сутки, вздутие живота, периодические рези в кишечнике. Прошел очередной курс обследования и лечения по поводу обострения язвенной болезни. Получал антибактериальные препараты. После курса лечения отмечал усиление диарейного синдрома, болей в животе, вздутия кишечника, присоединилась субфебрильная температура. С целью исключения развития псевдомембранозного колита было проведено комплексное обследование на группу возбудителей кишечных инфекций - сальмонеллез, шигеллез, рота-, норо-, аденовирусную инфекцию. При микроскопии мазка на паразитарные заболевания были обнаружены бластоцисты. При фиброволоконной микроскопии - слизистая толстой кишки была умеренно гиперемирована, отечная, с явлениями усиления сосудистого рисунка и, местами, мелкоточечных геморрагий. На стенках и в просвете отмечались густые слизистые наложения в умеренном количестве. При окраске гистологических срезов биоптата слизистой толстой кишки по Май-Грюнвальду на поверхностном эпителии и в просвете кишечных желез выявляли цисты и бластоцисты амебоидной формы (В. hominis).For 50 years, he has been suffering from peptic ulcer disease of the 12.p. of the intestine with frequent exacerbations. He receives many drugs for the underlying disease. In recent years, he began to notice stool disorders, which alternated with constipation and diarrhea. Deterioration of well-being was noted during the last week, hungry and morning pains appeared in the epigastric region, frequent liquid watery stools up to 5 times a day, bloating, periodic pains in the intestines joined. He underwent another course of examination and treatment for exacerbation of peptic ulcer. Received antibiotics. After the course of treatment, he noted an increase in diarrheal syndrome, abdominal pain, bloating, subfebrile temperature joined. In order to exclude the development of pseudomembranous colitis, a comprehensive examination was carried out for a group of pathogens of intestinal infections - salmonellosis, shigellosis, rota-, noro-, adenovirus infection. Microscopic examination of a smear for parasitic diseases revealed blastocysts. With fiberoptic microscopy, the colonic mucosa was moderately hyperemic, edematous, with signs of increased vascular pattern and, in some places, punctate hemorrhages. On the walls and in the lumen, thick mucous deposits were noted in moderate amounts. When coloring histological sections of the biopsy of the colon mucosa according to May-Grunwald, cysts and blastocysts of the amoeboid form (B. hominis) were detected on the surface epithelium and in the lumen of the intestinal glands.
Пример 2. С-ва, 70 лет. Диагноз: Бластоцистоз, кишечная форма, (В. hominis), легкое течение. Сопутствующее заболевание: обострение хронического цистита, гипертоническая болезнь 2Б стадии. Хронический цистит часто рецидивирующая форма. Настоящее заболевание началось с признаков геморрагического цистита после переохлаждения. На фоне лечения ципрофлоксацином на 2-ой день появилась диарея до 5 раз в сутки, тенезмы и вздутие живота. Для исключения кишечной инфекции и патологии толстой кишки проводилось обследование: посев фекалий на кишечную группу и инструментальное исследование кишечника. При эндоскопическом исследовании толстой кишки был диагностирован хронический катаральный сигмоидит. Гистологически в биоптате слизистой оболочки толстой кишки при окраске по Май-Грюнвальду были выявлены единичные цисты паразитов в слизистых наложениях на поверхности эпителия, а в просвете кишечных желез - вакуолярные и гранулярные формы бластоцист (В. hominis).Example 2. S-va, 70 years old. Diagnosis: Blastocystosis, intestinal form, (B. hominis), mild course. Concomitant disease: exacerbation of chronic cystitis, stage 2B hypertension. Chronic cystitis is often a recurrent form. The present illness began with signs of hemorrhagic cystitis after hypothermia. Against the background of treatment with ciprofloxacin on the 2nd day, diarrhea appeared up to 5 times a day, tenesmus and bloating. To exclude intestinal infection and pathology of the large intestine, an examination was carried out: sowing feces on the intestinal group and instrumental examination of the intestine. Endoscopic examination of the colon was diagnosed with chronic catarrhal sigmoiditis. Histologically, in the biopsy specimen of the colon mucosa, when stained according to May-Grunwald, single cysts of parasites were detected in mucous deposits on the surface of the epithelium, and in the lumen of the intestinal glands - vacuolar and granular forms of blastocysts (B. hominis).
Пример 3. Пациентка Щ-ва, 40 лет. Основной диагноз: хронический бескаменный холецистит в стадии обострения. Сопутствующее заболевание: бластоцистоз, кишечная форма, латентное течение. Хронический пиелонефрит.Example 3. Patient Sh-va, 40 years old. The main diagnosis: chronic acalculous cholecystitis in the acute stage. Concomitant disease: blastocystosis, intestinal form, latent course. Chronic pyelonephritis.
Обратилась с жалобами на боль в правом подреберье. Длительное время страдает хроническим пиелонефритом с периодическими обострениями. На фоне частого приема антибактериальных препаратов и уросептиков отмечала нарушения стула. Больная с диагностической целью была обследована. При инструментальном исследовании толстой кишки был диагностирован катаральный проктосигмоидит. Микроскопия кала на паразитарные заболевания - отрицательная. При гистологическом исследовании биоптата слизистой оболочки толстой кишки после окраски по Май-Грюнвальду в слизи на поверхностном эпителии выявляли единичные цисты и вегетативные формы бластоцист (В. hominis), представленные вакуолярными и гранулярными формами.She complained of pain in the right hypochondrium. For a long time he suffers from chronic pyelonephritis with periodic exacerbations. Against the background of frequent use of antibacterial drugs and uroseptics, stool disorders were noted. The patient was examined for diagnostic purposes. An instrumental examination of the colon was diagnosed with catarrhal proctosigmoiditis. Microscopy of feces for parasitic diseases is negative. Histological examination of the biopsy of the colon mucosa after May-Grunwald staining in mucus on the surface epithelium revealed single cysts and vegetative forms of blastocysts (B. hominis), represented by vacuolar and granular forms.
ЛитератураLiterature
1. Медицинская паразитология и паразитарные болезни: учебное пособие / под ред. А. Б. Ходжаян, С.С. Козлова, М.В. Голубевой. - М.: ГЭОТАРМедиа, 2014. - 448 с. 1. Medical parasitology and parasitic diseases: textbook / ed. A. B. Khodjayan, S.S. Kozlova, M.V. Golubev. - M.: GEOTARMedia, 2014. - 448 p.
2. Zierdt, С.Н. Blastocystis hominis an intestinal protozoa parasite of man / С.Н. Zierdt // Publ.Hith Lab. - 1973. - Vol. - P. 147-161.2. Zierdt, S.N. Blastocystis hominis an intestinal protozoa parasite of man / S.N. Zierdt // Publ. Hith Lab. - 1973. - Vol. - P. 147-161.
3. Бронштейн A.M. Паразитарные болезни человека: протозоозы и гельминтозы: учебное пособие / А.М. Бронщтейн, А.К. Токмалаев. - М.: Изд-во РУДН, 2002. - 207 с. 3. Bronstein A.M. Parasitic human diseases: protozooses and helminthiases: a textbook / A.M. Bronshtein, A.K. Tokmalaev. - M.: Publishing House of RUDN University, 2002. - 207 p.
4. Parasites - Blastocystis spp. Infection // Centers for Disease Control and Prevention. - 2020.4. Parasites - Blastocystis spp. Infection // Centers for Disease Control and Prevention. - 2020.
5. Продеус Т.В., Федянкина Л.В., Фролова А.А. Морфологическая идентификация бластоцист // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2014. - №1. - С.9-13.5. Prodeus T.V., Fedyankina L.V., Frolova A.A. Morphological identification of blastocysts // Medical parasitology and parasitic diseases. - 2014. - No. 1. - P.9-13.
6. Потатуркина-Нестерова Н.П., Чебан Н.М., Ильина Н.А., Нестеров А.С. Простейшие Blastocystis hominis в патологии человека / Практические рекомендации - Ульяновск: УлГУ. - 2000. - 38 с. 6. Potaturkina-Nesterova N.P., Cheban N.M., Ilyina N.A., Nesterov A.S. Protozoa Blastocystis hominis in human pathology / Practical recommendations - Ulyanovsk: UlGU. - 2000. - 38 p.
7. Christina М. Coyle, Julie Varughese, Louis M. Weiss, Herbert В. Tanowitz. Blastocystis: To Treat or Not to Treat... // Clinical Infectious Diseases. - 2012. - V. 54(1). - P. 105-110.7. Christina M. Coyle, Julie Varughese, Louis M. Weiss, Herbert B. Tanowitz. Blastocystis: To Treat or Not to Treat... // Clinical Infectious Diseases. - 2012. - V. 54(1). - P. 105-110.
8. Bjarnason 1., MacPherson A., Hollander D. Intestinal permeability: an overview// Gastroenterology- 1995; 108: 1566-1581.8. Bjarnason 1., MacPherson A., Hollander D. Intestinal permeability: an overview// Gastroenterology- 1995; 108: 1566-1581.
9. Tamalee Roberts, Damien Stark, John Harkness, John Ellis. Update on the pathogenic potential and treatment options for Blastocystis spp II Gut Pathog. - 2014; 6: 17.9. Tamalee Roberts, Damien Stark, John Harkness, John Ellis. Update on the pathogenic potential and treatment options for Blastocystis spp II Gut Pathog. - 2014; 6:17.
10. Manoj K. Puthia, Selena W.S. Sio, Jia Lu, Kevin S.W. Tan Blastocystis ratti Induces Contact-Independent Apoptosis, F-Actin Rearrangement, and Barrier Function Disruption in IEC-6 Cells // Infect Immun. - 2006; 74(7): 4114-4123.10. Manoj K. Puthia, Selena W.S. Sio, Jia Lu, Kevin S.W. Tan Blastocystis ratti Induces Contact-Independent Apoptosis, F-Actin Rearrangement, and Barrier Function Disruption in IEC-6 Cells // Infect Immun. - 2006; 74(7): 4114-4123.
11. Dagci H., S. Ustun M. S. Taner G. Ersoz, F. Karacasu, S. Budak. Protozoon infections and intestinal permeability // Acta Trop.- 2002; 81: 1-5.11. Dagci H., S. Ustun M. S. Taner G. Ersoz, F. Karacasu, S. Budak. Protozoon infections and intestinal permeability // Acta Trop.- 2002; 81:1-5.
12. Hala S. Elwakil, Iman H. Hewedi Pathogenic potential of Blastocystis hominis in laboratory mice // Parasitol Res. - 2010; 107(3):685-689.12. Hala S. Elwakil, Iman H. Hewedi Pathogenic potential of Blastocystis hominis in laboratory mice // Parasitol Res. - 2010; 107(3):685-689.
13. СанПиН 3.2.3215-14 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации".13. SanPiN 3.2.3215-14 "Prevention of parasitic diseases on the territory of the Russian Federation".
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2780603C1 true RU2780603C1 (en) | 2022-09-28 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2408887C1 (en) * | 2009-05-25 | 2011-01-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "КемГМа Росздрава") | Method to produce histological preparations and compositions for its realisation (versions) |
| US8778843B1 (en) * | 2011-08-03 | 2014-07-15 | Fry Laboratories, L.L.C. | Semi-pan-protozoal by quantitative PCR |
| US9786050B2 (en) * | 2013-03-15 | 2017-10-10 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Stain-free histopathology by chemical imaging |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2408887C1 (en) * | 2009-05-25 | 2011-01-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "КемГМа Росздрава") | Method to produce histological preparations and compositions for its realisation (versions) |
| US8778843B1 (en) * | 2011-08-03 | 2014-07-15 | Fry Laboratories, L.L.C. | Semi-pan-protozoal by quantitative PCR |
| US9786050B2 (en) * | 2013-03-15 | 2017-10-10 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Stain-free histopathology by chemical imaging |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Dayane Eymael et al. Standardization of Blastocystis hominis diagnosis using different staining techniques, Rev Soc Bras Med Trop. May-Jun 2010;43(3):309-12. Eymael D et al. Padronizacao do Diagnostico de Blastocystis hominis por diferentes tecnicas de coloracao. Rev.Soc.Bras.Med.Trop, 2010;43(3):309-12. * |
| Debongnie J.C. et al. Touch cytology. A quick, simple, sensitive screening test in the diagnosis of infections of the gastrointestinal mucosa, Arch Pathol Lab Med, 1994 Nov;118(11):1115-8. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Csokai et al. | Diagnostic markers for encephalitozoonosis in pet rabbits | |
| Leder et al. | Microsporidial disease in HIV-infected patients: a report of 42 patients and review of the literature | |
| Al-Jumaily et al. | Multidrug resistant Proteus mirabilis isolated from urinary tract infection from different hospitals in Baghdad City | |
| RU2780603C1 (en) | Method for diagnostics of blastocystis hominis invasion by biopsy materials | |
| Tasić et al. | Blastocystis hominis: a mysterious and commonly disregarded parasite | |
| Aykur et al. | Fecal calprotectin as a factor that supports the pathogenicity of Dientamoeba fragilis | |
| Lin et al. | Helicobacter pylori stool antigen test in patients with bleeding peptic ulcers | |
| Adao et al. | Recent advances in Blastocystis sp. research | |
| RU2425384C2 (en) | Diagnostic technique for clinical course of salmonellosis-protozoal acute enteric infections in children | |
| Hosoe et al. | In vivo visualization of trophozoites in patients with amoebic colitis by using a newly developed endocytoscope | |
| Amaeze et al. | Prevalence and antibiotic susceptibility of uropathogens among patients attending University of Abuja Teaching Hospital, Gwagwalada, Abuja | |
| Samuel et al. | ANTIBIOTIC RESISTANCE PATTERN OF BACTERIAL ISOLATES ASSOCIATED WITH ASYMPTOMATIC URINARY TRACT INFECTIONS IN WUKARI METROPOLIS, TARABA STATE, NIGERIA. | |
| RU2497122C1 (en) | Method for prediction of developing intestinal bacterial overgrowth following cholecystectomy in patients | |
| RU2736806C2 (en) | Diagnostic technique for cruciferous vascular bacteriosis by dot-immunoassay | |
| AL-Ezzy et al. | Clinical Agreements Between Ziehl Neelsen And Methylene Blue Staining Modifications For Detection Of C. parvum Infection In Claves | |
| Bartalucci et al. | Amoebic Liver Abscess: Potential Application of New Diagnostic Techniques for an Old Pathogen | |
| AL-Khikani et al. | Evaluation Sensitivity of Uropathogenic E. coli and Gram Positive Cocci to Fosfomycin and Amoxyclav | |
| AL-Khikani et al. | Fosfomycin sensitivity among E. coli and gram positive cocci uropathogens | |
| Sharma et al. | Diagnostic significance of wet mount microscopy-a retrospective observational study | |
| CN111638329B (en) | ELISPOT detection kit for detecting brucellosis and application thereof | |
| Toledo et al. | J. Guillermo Esteban, Carla Muñoz-Antoli | |
| RU2716713C1 (en) | Diagnostic technique for acute pyelonephritis stage | |
| RU2711657C1 (en) | Method for differential diagnosis of chronic prostatitis | |
| RU2639452C1 (en) | Diagnostic technique for urogenical trichomoniasis | |
| RU2342657C1 (en) | Diagnostics method for dacryostenosis stages |