Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

RU2526814C1 - Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions) - Google Patents

Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions) Download PDF

Info

Publication number
RU2526814C1
RU2526814C1 RU2013127322/15A RU2013127322A RU2526814C1 RU 2526814 C1 RU2526814 C1 RU 2526814C1 RU 2013127322/15 A RU2013127322/15 A RU 2013127322/15A RU 2013127322 A RU2013127322 A RU 2013127322A RU 2526814 C1 RU2526814 C1 RU 2526814C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
wound
skin
mmsc
perforated
cells
Prior art date
Application number
RU2013127322/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Могели Шалвович Хубутия
Наталья Валерьевна Боровкова
Валерий Борисович Хватов
Олег Петрович Филиппов
Иван Юрьевич Клюквин
Дмитрий Юрьевич Похитонов
Иван Николаевич Пономарев
Юлий Вадимович Андреев
Александр Сергеевич Миронов
Ольга Ивановна Конюшко
Original Assignee
Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы filed Critical Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы
Priority to RU2013127322/15A priority Critical patent/RU2526814C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2526814C1 publication Critical patent/RU2526814C1/en

Links

Landscapes

  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: waste skin is incised on the periphery of the wound. The incised skin is prepared from the residual subcutaneous fat and milled to fragments having an area of 1-2 mm2. A dermal matrix made of dead donor's tissue is simulated after the wound shape. The dermal matrix (DM) is perforated to create traumatic discharge outflow tracts and laid on a wound bed so that to form a diastasis between perforation edges. Patient's waste skin fragments are introduced into the perforations in a staggered order. The wound is closed with a sterile gauze dressing. The other invention is allogenic mesenchymal multipotent stromal cell (MMSC) transplantation onto the wound bed in the form of the suspension by means of injections at a depth of 0.1-0.3 mm at a rate of 10 injections per 1 cm2. A volume of each injection makes 0.05-0.1 ml. The dermal matrix made of dead donor's tissue is simulated after the wound shape. That is perforated to form the traumatic discharge outflow tracts and laid on the wound bed. The wound is closed with the sterile gauze dressing. The effect is ensured by using the DM as an optimum biocompatible cell carrier and creating a required micromedium in the wound, stimulating the regeneration processes ensured by a combination with the homogenised autologous skin or allogenic MMSC injections into the wound.
EFFECT: inventions provide optimising skin and soft tissue wound healing ensured by stimulating the regeneration processes by means of stromal cells, including allo- and auto-MMSC and resident stem cells.
5 cl, 2 ex

Description

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и может быть применено для лечения обширных травматических дефектов в хирургии, травматологии и комбустиологии.The invention relates to medicine and biotechnology and can be used to treat extensive traumatic defects in surgery, traumatology, and combustiology.

Основным методом лечения обширных травматических дефектов является первичная хирургическая обработка (ПХО) раны с последующей отсроченной кожно-пластической операцией для закрытия дефекта кожи [Алексеев А.А., Светухин A.M., Кузнецов В.А. Современная стратегия и тактика лечения ожогов, ожоговой болезни и обширных гнойных ран. Последипломное образование на современном этапе. - М. - 2000. -с.277-284].The main method for treating extensive traumatic defects is primary surgical treatment (PCP) of the wound, followed by a delayed skin-plastic surgery to close the skin defect [Alekseev A.A., Svetukhin A.M., Kuznetsov V.A. The modern strategy and tactics for the treatment of burns, burn disease and extensive purulent wounds. Postgraduate education at the present stage. - M. - 2000.-p. 277-284].

Для закрытия раны применяют аутодермопластику (АДП) расщепленным лоскутом. Однако результаты АДП в гнойной хирургии остаются не удовлетворительные, что связано с неполной регенерацией кожи и формированием рубца [Губин М.А., Эктов В.Н., Лакатош К.О. Ранние реконструктивно-пластические операции в лечении больных, перенесших термическую травму головы и шеи: Человек и его здоровье. - Курск. - 2000.- Вып. 3. - с.83-84]. Подчеркнем, что при АДП требуется получить кожный лоскут с интактной поверхности тела пациента, что создает дополнительные трудности.Autodermoplasty (ADP) with a split flap is used to close the wound. However, the results of ADP in purulent surgery remain unsatisfactory, which is associated with incomplete skin regeneration and scar formation [Gubin MA, Ektov VN, Lakatosh K.O. Early reconstructive plastic surgery in the treatment of patients who suffered a thermal injury to the head and neck: Man and his health. - Kursk. - 2000.- Iss. 3. - p. 83-84]. We emphasize that with ADP it is required to obtain a skin flap from the intact surface of the patient’s body, which creates additional difficulties.

Развитие клеточных технологий открывает новые возможности лечения ран с использованием различных клеток, в том числе мезенхимальных мультипотентных стромальных клеток (ММСК). В клинической практике используют аллогенные или аутологичные клетки. Тип используемых клеток определяется предполагаемой тактикой лечения, обусловленной характером патологического процесса. Для стимулирования регенерации за счет резидентных прогенеторных клеток применяют биологически активные факторы, выделяемые из аутологичных или аллогенных клеток при их разрушении in situ или in vitro. В частности, эффективность методики показана в лечении пограничных ожогов, когда сохранен источник регенерации кожи, для стимуляции которого используют аллофибробласты.The development of cellular technologies opens up new possibilities for treating wounds using various cells, including mesenchymal multipotent stromal cells (MMSCs). In clinical practice, allogeneic or autologous cells are used. The type of cells used is determined by the proposed treatment tactics, due to the nature of the pathological process. To stimulate regeneration due to resident progenitor cells, biologically active factors isolated from autologous or allogeneic cells when they are destroyed in situ or in vitro are used. In particular, the effectiveness of the technique is shown in the treatment of borderline burns, when the source of skin regeneration is saved, allofibroblasts are used to stimulate it.

При дефиците резидентных прогенеторных клеток выполняют их аутотрансплантацию из интактных областей.With a deficit of resident progenitor cells, their autotransplantation from intact regions is performed.

Аллогенные и аутологичные ММСК стимулируют процессы регенерации раны. Существует способ лечения ожоговых ран IIIа степени разработанный в НИИ СП им. Н.В. Склифосовского, заключающийся в наложении на ожоговую рану повязки, содержащей аллофибробласты [Патент №2320349 «Способ лечения ожоговых ран». 27.03.08; №2373944 «Способ лечения ожоговой раны». 27.11.09]. Однако способ эффективен для стимулирования заживления только поверхностного термического дефекта кожи (например, ожог IIIа степени), при котором сохраняются прогениторные клетка в дериватах кожи (волосяные фолликулы). При более глубоких дефектах кожи и, следовательно, отсутствии резидентных прогениторных клеток метод неэффективен. Трансплантация в рану аутологичных ММСК из других источников позволяет стимулировать регенерацию покровных тканей [Клинико-экспериментальное обоснование применения аллогенных фибробластов для лечения ожоговых ран III А степени. / Жиркова Е.Ю. Дисс.канд наук 2011. С.57]Allogeneic and autologous MMSCs stimulate wound regeneration processes. There is a method for the treatment of burn wounds IIIa degree developed at the Research Institute of Sp. N.V. Sklifosovsky, which consists in applying to the burn wound dressings containing allofibroblasts [Patent No. 2320349 "Method for the treatment of burn wounds." 03/27/08; No. 2373944 "Method for the treatment of burn wounds." 11/27/09]. However, the method is effective for stimulating the healing of only a superficial thermal skin defect (for example, a grade IIIa burn), in which the progenitor cells are preserved in the skin derivatives (hair follicles). With deeper skin defects and, consequently, the absence of resident progenitor cells, the method is ineffective. Autologous MMSC transplantation from other sources into the wound can stimulate the regeneration of integumentary tissues [Clinical and experimental study of the use of allogeneic fibroblasts for the treatment of burn wounds of III degree. / Zhirkova E.Yu. Diss. Candidate of Sciences 2011. P.57]

Наиболее близким техническим решением, принятым за прототип, является методика получения и использования дермального матрикса (ДМ), комбинированного с аутологичным лоскутом [WANG Jing,SUN Shu-guang, WANG Liang-xi, WU Jing, MAO Xue-fei «Repair of scar deformities by composite grafting of acellular dermal matrix with razor thin autoskin» Journal of Southeast China National Defence Medical Science 2006-04]. Способ используют для устранения послеожоговой рубцовой деформации. Производят иссечение рубца до подкожно-жировой клетчатки. На донорском участке заготавливают аутологичный расщепленный кожный лоскут соразмерно дефекту. На рану последовательно укладывают ДМ с аутологичным кожным лоскутом пациента. Основным недостатком метода является увеличение раневой поверхности в два раза при заготовке лоскута аутологичной кожи соразмерно иссеченному рубцу. При этом метод применяется только при лечении операционной раны, формируемой при устранении послеожоговой рубцовой деформации. Кроме того, для устранения рубца требуется дополнительная операция с адекватным анестезиологическим пособием.The closest technical solution adopted for the prototype is the method of obtaining and using a dermal matrix (DM) combined with an autologous flap [WANG Jing, SUN Shu-guang, WANG Liang-xi, WU Jing, MAO Xue-fei “Repair of scar deformities by composite grafting of acellular dermal matrix with razor thin autoskin »Journal of Southeast China National Defense Medical Science 2006-04]. The method is used to eliminate post-burn cicatricial deformity. The scar is excised to subcutaneous fat. An autologous split skin flap is harvested at the donor site in proportion to the defect. DM is sequentially placed on the wound with an autologous skin flap of the patient. The main disadvantage of the method is a double increase in the wound surface when preparing a flap of autologous skin in proportion to the excised scar. In this case, the method is used only in the treatment of an surgical wound, formed during the elimination of post-burn scar deformity. In addition, an additional operation with an adequate anesthetic allowance is required to remove the scar.

Таким образом, для лечения пациентов с обширными травматическими дефектами мягких тканей требуется разработка нового способа, применимого при ранах разной этиологии, на разных этапах лечения, позволяющего комбинировать ДМ со стволовыми клетками, в том числе с алло- и ауто-ММСК и резидентными столовыми клетками.Thus, the treatment of patients with extensive traumatic soft tissue defects requires the development of a new method that is applicable for wounds of various etiologies at different stages of treatment, which allows combining DM with stem cells, including allo and auto-MMSCs and resident table cells.

Достигаемым техническим результатом предлагаемого способа является оптимизация заживления раны кожи и мягких тканей за счет стимуляции процессов регенерации стволовыми клетками, в том числе с алло- и ауто-ММСК и резидентными столовыми клетками. Результат достигается за счет использования ДМ как оптимального биосовместимого носителя для клеток и для создания необходимой микросреды в ране, стимулирования процессов регенерации за счет комбинации с гомогенизированной аутологичной кожей или инъекциями аллогенных ММСК в область раны. Предложенный метод можно применять на разных этапах лечения: как во время ПХО раны, так и отсрочено после подготовки дна раны.Achievable technical result of the proposed method is to optimize the healing of skin and soft tissue wounds by stimulating stem cell regeneration processes, including with allo-and auto-MMSCs and resident table cells. The result is achieved through the use of DM as the optimal biocompatible carrier for cells and to create the necessary microenvironment in the wound, to stimulate regeneration processes by combining with homogenized autologous skin or injecting allogeneic MMSCs into the wound area. The proposed method can be used at different stages of treatment: both during the PHC of the wound and delayed after preparation of the bottom of the wound.

Трансплантированные аллогенные клетки в области раны сохраняют свою жизнеспособность в течение 2-3 суток. При их разрушении выделяются биологически активные вещества, способствующие ускорению ангиогенеза и миграции клеток в область поражения, что позволяет сократить фазы раневого процесса и тем самым ускорить процессы регенерации.The transplanted allogeneic cells in the wound area retain their viability for 2-3 days. When they are destroyed, biologically active substances are released that contribute to the acceleration of angiogenesis and cell migration to the affected area, which allows to reduce the phases of the wound process and thereby accelerate the regeneration processes.

Аутологичная измельченная кожа, вносимая в перфорацию дермального матрикса, является источником собственных резидентных столовых клеток. При этом аутологичные фрагменты кожи могут приживаться на дне раны, формируя островки эпителизации и являясь источником факторов роста, что особенно важно при обширных дефектах кожи, когда заживление вторичным натяжением может занимать длительное время.Autologous shredded skin introduced into the perforation of the dermal matrix is the source of its own resident table cells. Moreover, autologous skin fragments can take root at the bottom of the wound, forming islands of epithelization and being a source of growth factors, which is especially important for extensive skin defects, when healing by secondary intention may take a long time.

Экспериментальное обоснование применения утильных тканей в качестве источника аутологичных клетокExperimental justification for the use of scrap tissues as a source of autologous cells

С целью оценки возможности использования утильных тканей в качестве источника аутологичных клеток проведено выделение и культивирование клеток из лоскута кожи, удаленного во время первичной хирургической обработки рвано-ушибленной раны плеча. После иссечения поврежденные ткани помещали в среду для культивирования клеток ДМЕМ с добавлением гентамицина (10:1) и сохраняли до трипсинизации 11,5 часов при температуре +4°С.In order to assess the possibility of using scrap tissues as a source of autologous cells, cells were isolated and cultured from a skin flap removed during the initial surgical treatment of a torn-bruised shoulder wound. After excision, the damaged tissues were placed in a DMEM cell culture medium supplemented with gentamicin (10: 1) and stored until trypsinization for 11.5 hours at a temperature of + 4 ° C.

В стерильном боксе фрагмент лоскута извлекали из транспортной среды, помещали в чашку Петри диаметром 90 мм и фрагментировали ножницами на кусочки 1-3 мм3. Измельченный материал трижды промывали физиологическим раствором, затем сливали промывную жидкость и добавляли 10 мл 0,25% раствора трипсина, подогретого до 37°С. Чашку Петри с кусочками ткани и трипсином помещали в термостат с температурой 37°С на 30 минут.In a sterile box, a fragment of the flap was removed from the transport medium, placed in a Petri dish with a diameter of 90 mm and fragmented with scissors into pieces of 1-3 mm 3 . The crushed material was washed three times with physiological saline, then the washing liquid was drained and 10 ml of a 0.25% trypsin solution heated to 37 ° C was added. A Petri dish with pieces of tissue and trypsin was placed in a thermostat with a temperature of 37 ° C for 30 minutes.

После инкубации смесь пипетировали для выделения из кусочков ткани отдельных клеток и небольших конгломератов, действие трипсина ингибировали добавлением эмбриональной сыворотки фирмы «Gibco».After incubation, the mixture was pipetted to separate individual cells and small conglomerates from tissue pieces, and trypsin was inhibited by the addition of Gibco fetal serum.

Полученную смесь переносили в центрифужные пробирки и центрифугировали 10 минут при скорости 1000 об/мин.The resulting mixture was transferred to centrifuge tubes and centrifuged for 10 minutes at a speed of 1000 rpm.

Супернатант удаляли, а осадок ресуспендировали в питательной среде для культур клеток ДМЕМ с глютамином с добавлением 10% эмбриональной сыворотки, гентамицина (40 мкг/мл) и инсулина (5 мкг/мл). В течение 1 минуты дали осесть крупным кусочкам ткани и после этого надосадочную жидкость распределили на 2 чашки Петри диаметром 40 мм, в одной из которых находилась повязка на основе коллагена I типа человека.The supernatant was removed and the pellet was resuspended in glutamine-containing DMEM cell culture media supplemented with 10% fetal serum, gentamicin (40 μg / ml) and insulin (5 μg / ml). Large pieces of tissue were allowed to settle for 1 minute, and then the supernatant was distributed into 2 Petri dishes with a diameter of 40 mm, in one of which was a bandage based on human type I collagen.

При просмотре капли клеточной суспензии, полученной в результате трипсинизации и окрашенной витальным красителем, обнаруживали скопления различных по морфологии живых клеток.When viewing a droplet of a cell suspension obtained by trypsinization and stained with vital dye, clusters of living cells of various morphology were found.

Спустя 8 суток после посадки первичной клеточной взвеси много округлых клеток разного размера прикрепились ко дну чашки Петри, а часть из них - к находящимся во взвеси коллагеновым волокнам. Отмечали клетки, находящиеся в метаболически активном состоянии. Из мелких округлых клеток начали образовываться единичные фибробласты - вытянутые клетки веретеновидной формы. Наблюдали митотически делящиеся клетки. Через 9 суток после посадки первичной клеточной взвеси сформировался неплотный монослой клеток. Фибробласты образовывали «ячейки» сети, в которой располагались группы кератиноцитов. Через 11 суток после посадки первичной клеточной взвеси из крупных конгломератов клеток, прикрепившихся ко дну чашки Петри, образовалась монослойная смешанная по составу культура, состоящая из фибробластов и кератиноцитов. Клетки продуцировали коллаген.Eight days after planting the primary cell suspension, many rounded cells of different sizes attached to the bottom of the Petri dish, and some of them to the collagen fibers in suspension. Cells in a metabolically active state were noted. From small rounded cells, single fibroblasts began to form - elongated spindle-shaped cells. Mitotically dividing cells were observed. 9 days after planting the primary cell suspension, a loose cell monolayer was formed. Fibroblasts formed the “cells” of the network in which the keratinocyte groups were located. 11 days after planting the primary cell suspension from large conglomerates of cells attached to the bottom of the Petri dish, a monolayer mixed culture consisting of fibroblasts and keratinocytes was formed. The cells produced collagen.

Таким образом, из утильных тканей, иссеченных при первичной хирургической обработке раны, можно получить жизнеспособные клетки, образующие при культивировании органоспецифические колонии. Это подтверждает возможность использования утильных тканей в качестве источника аутологичных прогениторных клеток кожи.Thus, from scrap tissues excised during the initial surgical treatment of the wound, viable cells can be obtained that form organ-specific colonies during cultivation. This confirms the possibility of using recycled tissues as a source of autologous progenitor skin cells.

Способ комбинации аутологичной кожи с ДМ в ране пациента.A method for combining autologous skin with DM in a patient’s wound.

Показанием к применению данного способа являются обширные травматические раны с дефектом мягких тканей. При этом обязательным условием для осуществления данного способа является наличие достаточного количества утильных лоскутов кожи.Indications for the use of this method are extensive traumatic wounds with a soft tissue defect. In this case, a prerequisite for the implementation of this method is the presence of a sufficient number of scrap skin flaps.

Абсолютным противопоказанием являются укушенные раны в остром периоде (первые трое суток с момента травмы согласно Приложению №2 к приказу МЗ РФ №297 от 07.10.1997).An absolute contraindication is bitten wounds in the acute period (the first three days from the moment of injury according to Appendix No. 2 to the order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 297 of 10/07/1997).

Относительным противопоказанием является наличие на дне раны крупных сосудисто-нервных пучков, костей или внутренних органов, когда требуется предварительная пластика мягкими тканями.A relative contraindication is the presence of large neurovascular bundles, bones or internal organs at the bottom of the wound, when preliminary plastic surgery of soft tissues is required.

Первым этапом производят ПХО в операционной с соблюдением правил асептики и антисептики по стандартной методике с иссечением краев.The first step is the production of PHO in the operating room in compliance with the rules of asepsis and antiseptics according to the standard technique with excision of the edges.

Сразу после иссечения кожу тщательно обрабатывают растворами антисептиков, препарируют от остатков подкожно-жировой клетчатки. С сохранением стерильности, измельчают в лотке скальпелем или ножницами до размеров фрагментов 1-2 мм.Immediately after excision, the skin is thoroughly treated with antiseptic solutions, prepared from the remains of subcutaneous fat. While maintaining sterility, they grind in a tray with a scalpel or scissors to fragment sizes of 1-2 mm.

Стерильный ДМ, изготовленный из кожи донора-трупа, с соблюдением правил асептики и антисептики перфорируют скальпелем в лотке для обеспечения оттока раневого отделяемого, например, с частотой 1 перфорация длиной 5 мм на 1 см2.A sterile DM made of the skin of a donor corpse is perforated with a scalpel in a tray in accordance with aseptic and antiseptic rules to ensure the outflow of wound discharge, for example, with a frequency of 1 perforation 5 mm long per 1 cm 2 .

Перфорированный ДМ укладывают на дно раны таким образом, чтобы между краями перфораций был диастаз, в перфорации вносят все приготовленные фрагменты утильной кожи пациента, равномерно распределяют, затем рану укрывают стерильной марлевой повязкой. Первую перевязку производят через 48 часов, оценивают наличие признаков воспаления, характер и количество раневого отделяемого, степень фиксации ДМ и фрагментов кожи. В дальнейшем перевязки производят каждые 48 часов.Perforated DM is placed on the bottom of the wound so that there is diastasis between the edges of the perforations, all prepared fragments of the patient’s scrap skin are introduced into the perforation, evenly distributed, then the wound is covered with a sterile gauze dressing. The first dressing is performed after 48 hours, the presence of signs of inflammation, the nature and amount of wound discharge, the degree of fixation of DM and skin fragments are assessed. In the future, dressings are made every 48 hours.

Способ комбинации ДМ и аллогенных ММСК.A method of combining DM and allogeneic MMSCs.

Для стимуляции процессов регенерации в укушенных ранах и при необходимости стимуляции процессов регенерации в отсроченном периоде был разработан способ комбинации ДМ и аллогенных ММСК. Также этот способ может быть применен и при поступлении пациента в стационар. Показанием к применению данного способа являются обширные травматические раны с дефектом мягких тканей различного генеза.To stimulate the regeneration processes in bitten wounds and, if necessary, stimulate the regeneration processes in the delayed period, a method was developed for combining DM and allogeneic MMSCs. Also, this method can be applied upon admission to the hospital. Indications for the use of this method are extensive traumatic wounds with a soft tissue defect of various origins.

Относительным противопоказанием является наличие на дне раны крупных сосудисто-нервных пучков, костей или внутренних органов, когда требуется предварительная пластика мягкими тканями. Наличие острого гнойно-воспалительного процесса в области раны.A relative contraindication is the presence of large neurovascular bundles, bones or internal organs at the bottom of the wound, when preliminary plastic surgery of soft tissues is required. The presence of acute purulent-inflammatory process in the wound area.

Суспензию аллогенных клеток готовят в культуральном блоке с соблюдением правил асептики и антисептики. Используют ММСК третьего-четвертого пассажа, полученные из костного мозга доноров. Раствором трипсина-версена клетки отделяют от культурального пластика и готовят суспензию клеток в 0,9% растворе NaCl. Для оценки качества ММСК проводится цитометрическое исследование. Клеточный материал пригоден для трансплантации в случае, если подтверждена его биологическая и инфекционная безопасность, в нем содержится 80-95% неповрежденных клеток и более 80% клеток с фенотипом CD105+CD90+CD45-CD34-. В случае признания культуры ММСК пригодной для трансплантации готовят инъекционную форму препарата в 0,9% растворе NaCl с концентрацией клеток в суспензии 0,5-2 млн/мл, предпочтительно 1 млн/мл. Препарат ММСК пригоден для применения в течение 6 часов.A suspension of allogeneic cells is prepared in a culture block in compliance with aseptic and antiseptic rules. MMSCs of the third or fourth passage are used, obtained from bone marrow of donors. With a trypsin-versene solution, the cells are separated from the culture plastic and a cell suspension is prepared in a 0.9% NaCl solution. To assess the quality of MMSC, a cytometric study is performed. Cellular material is suitable for transplantation if its biological and infectious safety is confirmed, it contains 80-95% of intact cells and more than 80% of cells with the phenotype CD105 + CD90 + CD45 - CD34 - . If the MMSC culture is recognized as suitable for transplantation, an injection form of the preparation is prepared in a 0.9% NaCl solution with a cell concentration in suspension of 0.5-2 mln / ml, preferably 1 mln / ml. MMSC is suitable for use within 6 hours.

В случае укушенной раны проводят ПХО в условиях операционной с соблюдением правил асептики и антисептики согласно Приложению №2 к приказу МЗ РФ №297 от 07.10.1997, которая заключается в обильном промывании раны струей воды с мылом (или любым моющим средством), обработке краев раны 70° спиртом. Затем производится трансплантация аллогенных ММСК в виде суспензии, содержащей 0,5-2 млн ММСК в 1 мл, предпочтительно 1 млн/мл, в дно раны и окружающие мягкие ткани при помощи инъекций на глубину 0,1-0,3 см с частотой 10 инъекций на 1 см2, объем каждой инъекции 0,05-0,1 мл. Дно раны укрывают стерильным ДМ, моделированным по форме раны, с перфорациями для создания оттока раневого отделяемого, предпочтительно с частотой 1 перфорация длиной 5 мм на 1 см2, затем рану укрывают стерильной марлевой повязкой.In the case of a bite wound, PECs are performed in the operating room in compliance with aseptic and antiseptic rules in accordance with Appendix No. 2 to the order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 297 of 10/07/1997, which consists in abundant washing of the wound with a jet of water and soap (or any detergent), and treating the edges of the wound 70 ° alcohol. Then, allogeneic MMSCs are transplanted in the form of a suspension containing 0.5-2 million MMSCs in 1 ml, preferably 1 million / ml, into the bottom of the wound and surrounding soft tissues by injection to a depth of 0.1-0.3 cm with a frequency of 10 injections per 1 cm 2 , the volume of each injection is 0.05-0.1 ml. The wound bottom is covered with sterile DM, modeled on the shape of the wound, with perforations to create an outflow of wound discharge, preferably with a frequency of 1 perforation, 5 mm long per 1 cm 2 , then the wound is covered with a sterile gauze dressing.

При применении способа в отсроченном периоде манипуляцию осуществляют в перевязочной с соблюдением правил асептики и антисептики. У пациента снимают повязку с раны. Рану трехкратно обрабатывают стерильными марлевыми тампонами, смоченными 5% водным раствором хлоргексидина, промокают стерильным сухим марлевым тампоном. С целью предотвращения контаминации раны кожу вокруг раны трехкратно обрабатывают 0,5%спиртовым раствором хлоргексидина, избегая его попадания в рану. Затем с соблюдением правил асептики и антисептики производится трансплантация аллогенных ММСК в дно раны и окружающие мягкие ткани при помощи инъекций суспензии, содержащей 0,5-2 млн ММСК, предпочтительно 1 млн/мл в 1 мл раствора на глубину 0,1-0,3 мм с частотой 10 инъекций на 1 см2, объем каждой инъекции 0,05-0,1 мл. Затем дно раны укрывают стерильным ДМ, моделированным по форме раны, с перфорациями для создания оттока раневого отделяемого, предпочтительно с частотой 1 перфорация длиной 5 мм на 1 см2, затем рану укрывают стерильной марлевой повязкой. Первую перевязку производят через 48 часов, оценивают наличие признаков воспаления, характер и количество раневого отделяемого, степень фиксации дермального матрикса. В дальнейшем перевязки производят каждые 48 часов.When applying the method in a delayed period, the manipulation is carried out in a dressing room in compliance with the rules of asepsis and antiseptics. The patient removes the bandage from the wound. The wound is treated three times with sterile gauze swabs moistened with a 5% aqueous solution of chlorhexidine, soaked with a sterile dry gauze swab. In order to prevent wound contamination, the skin around the wound is treated three times with a 0.5% alcohol solution of chlorhexidine, avoiding its entry into the wound. Then, following aseptic and antiseptic rules, allogeneic MMSCs are transplanted into the bottom of the wound and surrounding soft tissues by injection of a suspension containing 0.5-2 million MMSCs, preferably 1 million / ml in 1 ml of solution to a depth of 0.1-0.3 mm with a frequency of 10 injections per 1 cm 2 , the volume of each injection is 0.05-0.1 ml. Then, the wound bottom is covered with sterile DM, modeled on the shape of the wound, with perforations to create an outflow of wound discharge, preferably with a frequency of 1 perforation, 5 mm long per 1 cm 2 , then the wound is covered with a sterile gauze dressing. The first ligation is performed after 48 hours, the presence of signs of inflammation, the nature and amount of wound discharge, the degree of fixation of the dermal matrix are assessed. In the future, dressings are made every 48 hours.

Клинические примеры применения предлагаемого способаClinical examples of the application of the proposed method

Клинический пример 1Clinical example 1

Больной К. 43 лет поступил в НИИ СП с диагнозом: обширная рвано-укушенная лоскутная рана средней трети правой голени.A 43-year-old patient K. was admitted to the SRI with a diagnosis of an extensive ragged-bitten patchwork wound in the middle third of the right lower leg.

Дном раны являлась подкожно-жировая клетчатка (ПЖК). Основание лоскута направлено дистально. Лоскут представлял собой слой кожи и ПЖК площадью 20 см2.The bottom of the wound was subcutaneous fat (TFA). The base of the flap is directed distally. The flap was a layer of skin and PUFA with an area of 20 cm 2 .

При поступлении согласно приложению №2 к приказу МЗ РФ №297 от 07.10.1997 был произведен туалет раны мыльным раствором и растворами антисептиков, рана укрыта стерильными салфетками, смоченными 5% водным раствором хлоргексидина.Upon admission according to Appendix No. 2 to the order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 297 of 10/07/1997, the wound toilet was made with soap and antiseptic solutions, the wound was covered with sterile wipes moistened with a 5% aqueous solution of chlorhexidine.

На первые сутки с момента травмы с целью стимуляции регенерации, профилактики ишемических осложнений в лоскуте с соблюдением правил асептики и антисептики была произведена трансплантация аллогенных ММСК в виде суспензии, содержащей 1 млн ММСК в 1 мл в дно раны и окружающие мягкие ткани при помощи инъекций на глубину 0,1-0,3 мм с частотой 10 инъекций на 1 см и создания оптимальной микросреды в ране на дно раны уложен стерильный перфорированный ДМ. Больной получал комплексную терапию, в ходе которой ему проводилась антибактериальная терапия, ГБО, ФЗТ.On the first day after the injury, in order to stimulate the regeneration, prevention of ischemic complications in the flap in compliance with the rules of asepsis and antiseptics, allogeneic MMSCs were transplanted in the form of a suspension containing 1 million MMSCs in 1 ml into the wound bottom and surrounding soft tissues by injection to a depth 0.1-0.3 mm with a frequency of 10 injections per 1 cm and the creation of an optimal microenvironment in the wound, sterile perforated DM was placed on the bottom of the wound. The patient received complex therapy, during which he was given antibacterial therapy, HBO, FZT.

После удаления ДМ на 5-е сутки с момента трансплантации дно раны покрыто яркими грануляциями, лоскут телесного цвета плотно спаян с подлежащими тканями.After DM removal on the 5th day after the transplantation, the bottom of the wound is covered with bright granulations, the flesh-colored flap is tightly soldered to the underlying tissues.

На 6-е сутки с момента травмы с целью раннего закрытия раневого дефекта в перевязочной с соблюдением правил асептики и антисептики была произведена комбинированная пластика раны: стерильный ДМ, изготовленный из кожи донора-трупа, перфорировали с частотой 1 перфорация длиной 5 мм на 1 см2 для создания путей оттока раневого отделяемого и уложили на дно раны таким образом, чтобы между краями перфораций был диастаз, в перфорации, в шахматном порядке, внесли аутологичную кожу пациента, затем рану укрыли стерильной марлевой повязкой.On the 6th day after the injury, in order to early close the wound defect in the dressing room, observing the rules of asepsis and antiseptics, a combined wound repair was performed: sterile DM made from the skin of a donor corpse was perforated with a frequency of 1 perforation 5 mm long per 1 cm 2 to create ways for the outflow of the wound discharge and laid on the bottom of the wound so that between the edges of the perforations there was diastasis, in the perforations, in a checkerboard pattern, autologous skin of the patient was introduced, then the wound was covered with a sterile gauze dressing.

На 3 сутки с момента пластики отмечалось приживление кожных фрагментов в перфорациях ДМ, отмечена выраженная краевая эпителизация под ДМ.On the 3rd day from the moment of grafting, engraftment of skin fragments in perforations of the DM was noted, marked marginal epithelization under the DM was noted.

На всех этапах лечения производили взятие посевов из раны. По результатам посевов роста патологической микрофлоры не выявлено.At all stages of treatment, crops were taken from the wound. According to the results of crops, the growth of pathological microflora was not detected.

Клинический пример 2Clinical example 2

Пациентка П. 70 лет поступила в НИИ СП с диагнозом: множественные укушенные раны конечностей, в том числе обширная лоскутная рана с дефектом кожи по тыльной поверхности правого предплечья с дистальным основанием лоскута. Дном этой раны являлись неповрежденные сухожилия разгибателей пальцев кисти, мышцы предплечья и размозженная подкожно-жировая клетчатка.A 70-year-old patient P. was admitted to the SRI with a diagnosis of multiple bite wounds of the limbs, including an extensive patch wound with a skin defect on the dorsum of the right forearm with the distal base of the flap. The bottom of this wound was the intact tendons of the extensors of the fingers of the hand, the muscles of the forearm, and the crushed subcutaneous fat.

В отделении больная получала комплексное лечение: антибактериальную терапию, ГБО, ФЗТ, проводились ежедневные перевязки ран. На 7-е сутки нахождения в стационаре, несмотря на проводимое лечение, отмечено нарастание ишемии кожного лоскута в нижней трети предплечья.In the department, the patient received complex treatment: antibiotic therapy, HBO, FZT, daily wound dressings were performed. On the 7th day of being in the hospital, despite the treatment, an increase in ischemia of the skin flap in the lower third of the forearm was noted.

С целью стимуляции регенерации и профилактики ишемических осложнений в лоскуте с соблюдением правил асептики и антисептики была произведена трансплантация аллогенных ММСК в виде суспензии, содержащей 1 млн ММСК в 1 мл в дно раны и окружающие мягкие ткани при помощи инъекций на глубину 0,1-0,3 мм с частотой 10 инъекций на 1 см2. Затем дно раны укрыли стерильным ДМ, моделированным по форме раны, с перфорациями для создания оттока раневого отделяемого, частотой 1 перфорация длиной 5 мм на 1 см2, затем рану укрыли стерильной марлевой повязкой.In order to stimulate the regeneration and prevention of ischemic complications in the flap in compliance with the rules of asepsis and antiseptics, allogeneic MMSCs were transplanted in the form of a suspension containing 1 million MMSCs in 1 ml into the wound bottom and surrounding soft tissues by injection to a depth of 0.1-0, 3 mm with a frequency of 10 injections per 1 cm 2 . Then, the wound bottom was covered with sterile DM, modeled on the shape of the wound, with perforations to create an outflow of wound discharge, with a frequency of 1 perforation 5 mm long per 1 cm 2 , then the wound was covered with a sterile gauze dressing.

На пятые сутки после трансплантации клеток отмечена положительная динамика: область ишемии уменьшилась, дно раны на 80% покрыто грануляционной тканью, выражена краевая эпителизация. После заполнения раны предплечья яркой мелкозернистой сочной грануляционной тканью при выраженной краевой эпителизации с целью закрытия дефекта произведена аутодермопластика свободным кожным лоскутом. На момент пластики площадь раны составляла 48 кв.см. Первая перевязка произведена на 6-е сутки после аутодермопластики. Результат аутодермопластики расценен как хороший - пересаженный кожный лоскут прижился на 90%. На 7-е сутки после операции пациентка выписана на амбулаторное долечивание.On the fifth day after cell transplantation, positive dynamics were noted: the ischemia area decreased, the bottom of the wound was covered with granulation tissue by 80%, and edge epithelization was expressed. After filling the wound of the forearm with bright fine-grained juicy granulation tissue with pronounced marginal epithelization in order to close the defect, autodermoplasty was performed with a free skin flap. At the time of plastic surgery, the wound area was 48 sq.cm. The first dressing was performed on the 6th day after autodermoplasty. The result of autodermoplasty is regarded as good - a transplanted skin flap has taken root by 90%. On the 7th day after the operation, the patient was discharged for outpatient aftercare.

Отдаленный результат лечения оценивался через 8 месяцев с момента травмы. Кожа области бывшей раны подвижна без трофических нарушений и деформирующих рубцов. Функция руки восстановлена полностью.The long-term outcome of the treatment was evaluated after 8 months from the moment of injury. The skin of the area of the former wound is mobile without trophic disorders and deforming scars. Hand function restored fully.

Таким образом, предложенный способ позволяет сократить сроки регенерации раны за счет стимулирования процессов эпителизации (более ранняя активация пролиферации и миграции кератиноцитов), сокращения воспалительной фазы, а также ускорения формирования и созревания грануляционной ткани.Thus, the proposed method allows to reduce the time of regeneration of the wound by stimulating the processes of epithelization (earlier activation of the proliferation and migration of keratinocytes), reducing the inflammatory phase, as well as accelerating the formation and maturation of granulation tissue.

Claims (5)

1. Способ восстановления кожного покрова у пациентов с обширными травматическими ранами с дефектом мягких тканей, включающий иссечение утильной кожи по краям раны, иссеченную кожу препарируют от остатков подкожной жировой клетчатки и измельчают до фрагментов площадью 1-2 мм2, моделируют дермальный матрикс, изготовленный из кожи донора-трупа, по форме раны, перфорируют для создания путей оттока раневого отделяемого и укладывают на дно раны таким образом, чтобы между краями перфораций был диастаз, в перфорации в шахматном порядке вносят фрагменты утильной кожи пациента, затем рану укрывают стерильной марлевой повязкой.1. A method of restoring the skin in patients with extensive traumatic wounds with a soft tissue defect, including excision of scrap skin along the edges of the wound, excised skin is prepared from the remnants of subcutaneous adipose tissue and crushed to fragments with an area of 1-2 mm 2 , a dermal matrix made of the skin of the donor corpse, in the shape of a wound, is perforated to create pathways for the outflow of the wound discharge and laid on the bottom of the wound so that there is diastasis between the edges of the perforations, fr Agents of the patient’s scrap skin, then the wound is covered with a sterile gauze dressing. 2. Способ по п.1, в котором трансплантат перфорируют по всей поверхности с частотой одна перфорация 5 мм на 1 см2.2. The method according to claim 1, in which the graft is perforated over the entire surface with a frequency of one perforation of 5 mm per 1 cm 2 . 3. Способ восстановления кожного покрова у пациентов с обширными травматическими ранами с дефектом мягких тканей, включающий трансплантацию в дно раны аллогенных мезенхимальных мультипотентных стромальных клеток (ММСК) в виде суспензии при помощи инъекций на глубину 0,1-0,3 мм с частотой 10 инъекций на 1 см, объемом каждой инъекции 0,05-0,1 мл, моделируют дермальный матрикс, изготовленный из кожи донора-трупа, по форме раны и перфорируют для создания путей раневого отделяемого, укладывают на дно раны, затем рану укрывают стерильной марлевой повязкой.3. A method of restoring the skin in patients with extensive traumatic wounds with a soft tissue defect, including transplantation into the bottom of the wound of allogeneic mesenchymal multipotent stromal cells (MMSC) in the form of a suspension by injection to a depth of 0.1-0.3 mm with a frequency of 10 injections 1 cm, the volume of each injection is 0.05-0.1 ml, the dermal matrix made of the skin of a donor-corpse is modeled in the shape of a wound and perforated to create paths of the wound, laid on the bottom of the wound, then the wound is covered with a sterile gauze bandage Coy. 4. Способ по п.3, в котором трансплантат перфорируют по всей поверхности с частотой одна перфорация 5 мм на 1 см2.4. The method according to claim 3, in which the graft is perforated over the entire surface with a frequency of one perforation of 5 mm per 1 cm 2 . 5. Способ по п.3, в котором суспензия ММСК содержит 1 млн ММСК в 1 мл. 5. The method according to claim 3, in which the MMSC suspension contains 1 million MMSCs in 1 ml.
RU2013127322/15A 2013-06-17 2013-06-17 Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions) RU2526814C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013127322/15A RU2526814C1 (en) 2013-06-17 2013-06-17 Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013127322/15A RU2526814C1 (en) 2013-06-17 2013-06-17 Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2526814C1 true RU2526814C1 (en) 2014-08-27

Family

ID=51456264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013127322/15A RU2526814C1 (en) 2013-06-17 2013-06-17 Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions)

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2526814C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2627817C1 (en) * 2016-04-25 2017-08-11 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России) Method for hyaline cartilage production
RU2825747C1 (en) * 2024-02-27 2024-08-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр хирургии имени А.В. Вишневского" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ хирургии им. А.В. Вишневского" Минздрава России) Method for skin integrity restoration in case of extensive deep burns

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2280459C2 (en) * 1999-05-14 2006-07-27 Скинмедика, Инк. Agent for growth rate or cells reproduction alteration, method for its preparing, method for stimulation of wound healing or burn treatment, method for correction of cosmetic defect, method for inhibition of skin aging and method for stimulation of hair growth
RU2335538C2 (en) * 2004-03-31 2008-10-10 Релайанс Лайф Сайенсиз Пвт Лтд Organization of cells similar to tissue and macroscopical designs similar to tissue obtained by means of culture of macromass of cells and method of macromass culture
RU2372922C1 (en) * 2008-06-18 2009-11-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярская государственная медицинская академия имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Therapy of deep burn of skin

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2280459C2 (en) * 1999-05-14 2006-07-27 Скинмедика, Инк. Agent for growth rate or cells reproduction alteration, method for its preparing, method for stimulation of wound healing or burn treatment, method for correction of cosmetic defect, method for inhibition of skin aging and method for stimulation of hair growth
RU2335538C2 (en) * 2004-03-31 2008-10-10 Релайанс Лайф Сайенсиз Пвт Лтд Organization of cells similar to tissue and macroscopical designs similar to tissue obtained by means of culture of macromass of cells and method of macromass culture
RU2372922C1 (en) * 2008-06-18 2009-11-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярская государственная медицинская академия имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Therapy of deep burn of skin

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANG J., SUN S. et al. Repair of scar deformities by composite grafting of acellular dermal matrix with razor thin autoskin. Journal of Southeast China National Defence Medical Science 2006 -04 Найдено [24.04.2014] Найдено из Интернет:. http://en.cnki.com.cn/Article_en/CJFDTOTALDNGY200604007.htm. *
РАСУЛОВ М. Ф. Трансплантация мезенхимальных стромальных клеток костного мозга для лечения термических ожогов кожи. (экспериментально-клиническое исследование), автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 2007 стр. 10-38 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2627817C1 (en) * 2016-04-25 2017-08-11 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России) Method for hyaline cartilage production
RU2825747C1 (en) * 2024-02-27 2024-08-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр хирургии имени А.В. Вишневского" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ хирургии им. А.В. Вишневского" Минздрава России) Method for skin integrity restoration in case of extensive deep burns

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018201536B2 (en) Skin Substitutes And Methods For Hair Follicle Neogenesis
Rasulov et al. First experience in the use of bone marrow mesenchymal stem cells for the treatment of a patient with deep skin burns
US7419661B2 (en) Dermal sheath tissue in wound healing
Oshima et al. Permanent restoration of human skin treated with cultured epithelium grafting-wound healing by stem cell based tissue engineering
Abdel-Sayed et al. Cell therapies for skin regeneration: An overview of 40 years of experience in burn units
Lorenti Wound healing: from epidermis culture to tissue engineering
US20030202965A1 (en) Methods and compositions for the preparation of cell transplants
EP0980270B1 (en) Dermal sheath tissue in wound healing
RU2014148251A (en) STEM CELL MATERIAL AND METHOD FOR PRODUCING IT
RU2526814C1 (en) Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions)
CN111097041A (en) Preparation method of mixed solution for repairing striae gravidarum by using mesenchymal stem cell culture medium in combination with fibronectin
Pokhitonov et al. Experimental substantiation and clinical use of a combination of dermal matrix with allogenic or autologous cells for the treatment of extensive traumatic wounds
RU2657202C1 (en) Method of cutaneous autoplasty
Rasheda et al. Role of stem cells in healing of tympanic membrane perforations
Sterodimas Tissue engineering with adipose derived stem cells (ADSCs) in plastic & reconstructive surgery: current and future applications
Olegovich New Methods of Treatment of the Burned (Literature Review)
RU2526813C1 (en) Combined graft of dermal matrix with mesenchymal multipotent stromal cells, method for preparing it and method for wound healing using it
US20210220518A1 (en) Producing method of the collagen-laminin matrix for healing ulcers, burns and wounds of a human skin
RU2731313C1 (en) Skin repair method
RU2720470C1 (en) Method of producing transplant for treating limbal insufficiency
RU2671642C1 (en) Method of recovery of the skin with extensive deep burns
Yamin et al. Human amniotic membrane: A biological cost effective dressing in chronic wounds.
Hitzig Use of urinary bladder matrix, a bioactive, acellular scaffold, in transplant donor scars and androgenetic alopecia: initial clinical experience
Goh Surgical Therapies
Horch et al. Burn Reconstruction: Skin Substitutes and Tissue Engineering