Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

RU2451082C2 - Production of polypeptides - Google Patents

Production of polypeptides Download PDF

Info

Publication number
RU2451082C2
RU2451082C2 RU2007108719/10A RU2007108719A RU2451082C2 RU 2451082 C2 RU2451082 C2 RU 2451082C2 RU 2007108719/10 A RU2007108719/10 A RU 2007108719/10A RU 2007108719 A RU2007108719 A RU 2007108719A RU 2451082 C2 RU2451082 C2 RU 2451082C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
total
culture
conditions
per unit
unit volume
Prior art date
Application number
RU2007108719/10A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2007108719A (en
Inventor
Дэнис ДРЭПЕ (US)
Дэнис ДРЭПЕ
Йен-Тунг ЛУАН (US)
Йен-Тунг Луан
Джэймс Р. МЕРСЕР (US)
Джэймс Р. МЕРСЕР
Венг ВАНГ (US)
Венг ВАНГ
Дэниэл Р. ЛАСКО (US)
Дэниэл Р. ЛАСКО
Original Assignee
Вайет Рисёрч Айрлэнд Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Вайет Рисёрч Айрлэнд Лимитед filed Critical Вайет Рисёрч Айрлэнд Лимитед
Publication of RU2007108719A publication Critical patent/RU2007108719A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2451082C2 publication Critical patent/RU2451082C2/en

Links

Images

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: chemistry.
SUBSTANCE: method involves preparing a cell culture containing mammal cells which contain a gene which encodes a polypeptide whose expression takes place in cell culture conditions. A medium containing glutamine and having the required properties is used. Said culture is kept at the initial growth phase under a first set of culturing conditions for a first period of time. At least one of the culturing conditions is changed to obtain a second set of culturing conditions, wherein said culturing condition at said step for changing at least one culturing condition is selected from a group consisting of: (i) temperature; (ii) pH; (iii) osmolality; (iv) level of chemical activator and combinations thereof. Said culture is kept at said second set of conditions for a second period of time so that polypeptide accumulates in said culture.
EFFECT: invention enables large-scale production of polypeptides in a cell culture.
46 cl, 76 dwg, 27 tbl, 17 ex

Description

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003
Figure 00000004
Figure 00000005
Figure 00000006
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
Figure 00000043
Figure 00000044
Figure 00000045
Figure 00000046
Figure 00000047
Figure 00000048
Figure 00000049
Figure 00000050
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
Figure 00000063
Figure 00000064
Figure 00000065
Figure 00000066
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
Figure 00000070
Figure 00000071
Figure 00000072
Figure 00000073
Figure 00000074
Figure 00000075
Figure 00000076
Figure 00000077
Figure 00000078
Figure 00000079
Figure 00000080
Figure 00000081
Figure 00000082
Figure 00000083
Figure 00000084
Figure 00000085
Figure 00000086
Figure 00000087
Figure 00000088
Figure 00000089
Figure 00000090
Figure 00000091
Figure 00000092
Figure 00000093
Figure 00000094
Figure 00000095
Figure 00000096
Figure 00000097
Figure 00000098
Figure 00000099
Figure 00000100
Figure 00000101
Figure 00000102
Figure 00000103
The text of the description is given in facsimile form.
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003
Figure 00000004
Figure 00000005
Figure 00000006
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
Figure 00000043
Figure 00000044
Figure 00000045
Figure 00000046
Figure 00000047
Figure 00000048
Figure 00000049
Figure 00000050
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
Figure 00000063
Figure 00000064
Figure 00000065
Figure 00000066
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
Figure 00000070
Figure 00000071
Figure 00000072
Figure 00000073
Figure 00000074
Figure 00000075
Figure 00000076
Figure 00000077
Figure 00000078
Figure 00000079
Figure 00000080
Figure 00000081
Figure 00000082
Figure 00000083
Figure 00000084
Figure 00000085
Figure 00000086
Figure 00000087
Figure 00000088
Figure 00000089
Figure 00000090
Figure 00000091
Figure 00000092
Figure 00000093
Figure 00000094
Figure 00000095
Figure 00000096
Figure 00000097
Figure 00000098
Figure 00000099
Figure 00000100
Figure 00000101
Figure 00000102
Figure 00000103

Claims (46)

1. Способ крупномасштабного получения полипептида в культуре клеток, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий представляющий интерес полипептид, экспрессия которого происходит в условиях культивирования клеток; и
среду, содержащую глютамин, характеризующуюся тем, что суммарное общее количество гистидина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, тирозина и пролина на единицу объема в указанной культуре больше, чем приблизительно 25 мМ, суммарное количество аминокислот на единицу объема больше 70 мМ, и отношение суммарного молярного количества глютамина к суммарному количеству аспарагина составляет от 0 до 2, причем указанное отношение больше 0, и обладающую свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующего: (i) отношение суммарного молярного количества глютамина к суммарному общему количеству всех аминокислот составляет от 0 до 0,2, причем указанное отношение больше 0; (ii) отношение суммарного молярного количества неорганических ионов к суммарному количеству всех аминокислот составляет от 0,4 до 1; (iii) совокупное суммарное количество глютамина и аспарагина на единицу объема больше чем 16 мМ; и комбинаций указанных свойств;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток, лежащей в диапазоне приблизительно 20%-80% от максимальной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при выращивании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) pH; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в культуре клеток произошло накопление указанного полипептида.1. A method for large-scale production of a polypeptide in a cell culture, comprising the following steps:
providing a cell culture containing:
mammalian cells that contain a gene encoding a polypeptide of interest, the expression of which occurs under cell culture conditions; and
a medium containing glutamine, characterized in that the total total amount of histidine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, tyrosine and proline per unit volume in the specified culture is greater than approximately 25 mm, the total number of amino acids per unit volume is more than 70 mm, and the ratio of the total molar amount of glutamine to the total amount of asparagine is from 0 to 2, said ratio being greater than 0 and having properties selected from the group consisting of: (i) total molar amount of glutamine to the total total amount of all amino acids is from 0 to 0.2, moreover, said ratio is greater than 0; (ii) the ratio of the total molar amount of inorganic ions to the total amount of all amino acids is from 0.4 to 1; (iii) the combined total amount of glutamine and asparagine per unit volume is greater than 16 mM; and combinations of these properties;
maintaining the specified culture in the initial growth phase during the first set of cultivation conditions for the first period of time, sufficient for the cells to multiply to obtain a density of viable cells lying in the range of approximately 20% -80% of the maximum density of viable cells that could be get when growing the specified culture with the specified first set of cultivation conditions;
changing at least one of the cultivation conditions to obtain a second set of culturing conditions, wherein said culturing condition at said step of changing at least one of the cultivation conditions is selected from the group consisting of: (i) temperature; (ii) pH; (iii) osmolality; (iv) the level of chemical activator and their combinations;
maintaining said culture under said second set of conditions for a second period of time so that the accumulation of said polypeptide occurs in the cell culture. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что исходная концентрация глютамина в указанной среде меньше или равна 10 мМ.2. The method according to claim 1, characterized in that the initial concentration of glutamine in the specified environment is less than or equal to 10 mm. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что исходная концентрация глютамина в указанной среде меньше или равна 4 мМ.3. The method according to claim 1, characterized in that the initial concentration of glutamine in the specified environment is less than or equal to 4 mm. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество глютамина на единицу объема в указанной среде меньше или равно 10 мМ.4. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of glutamine per unit volume in the specified environment is less than or equal to 10 mm. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество глютамина на единицу объема в указанной среде меньше или равно 4 мМ.5. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of glutamine per unit volume in the specified environment is less than or equal to 4 mm. 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что глютамин обеспечивают только в исходной среде в начале культивирования клеток.6. The method according to claim 1, characterized in that glutamine is provided only in the initial medium at the beginning of cell culture. 7. Способ по п.1, отличающийся тем, что исходная плотность указанных клеток млекопитающего составляет по меньшей мере 2·105 клеток/мл.7. The method according to claim 1, characterized in that the initial density of these mammalian cells is at least 2 · 10 5 cells / ml 8. Способ, по п.1, отличающийся тем, что исходная плотность указанных клеток млекопитающего составляет по меньшей мере 2·106 клеток/мл.8. The method according to claim 1, characterized in that the initial density of these mammalian cells is at least 2 · 10 6 cells / ml 9. Способ по п.1, отличающийся тем, что этап обеспечения включает обеспечение по меньшей мере 1000 л культуры.9. The method according to claim 1, characterized in that the step of providing includes providing at least 1000 l of culture. 10. Способ по п.1, отличающийся тем, что этап обеспечения включает обеспечение по меньшей мере 10000 л культуры.10. The method according to claim 1, characterized in that the step of providing includes providing at least 10,000 liters of culture. 11. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый набор условий включает первый диапазон температур, который составляет приблизительно от 30 до 42°С.11. The method according to claim 1, characterized in that said first set of conditions includes a first temperature range that is from about 30 to 42 ° C. 12. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый набор условий включает первую температуру, которая составляет приблизительно 37°С.12. The method according to claim 1, characterized in that said first set of conditions includes a first temperature, which is approximately 37 ° C. 13. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный второй набор условий включает второй диапазон температур, который составляет приблизительно от 25 до 41°С.13. The method according to claim 1, characterized in that said second set of conditions includes a second temperature range that is from about 25 to 41 ° C. 14. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный второй набор условий включает второй диапазон температур, который составляет приблизительно от 29 до 35°С.14. The method according to claim 1, characterized in that the second set of conditions includes a second temperature range, which is from about 29 to 35 ° C. 15. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный второй набор условий включает вторую температуру, которая составляет приблизительно 31°С.15. The method according to claim 1, characterized in that said second set of conditions includes a second temperature, which is approximately 31 ° C. 16. Способ по п.1, который дополнительно включает следующий за первым указанным этапом изменения по меньшей мере одного из условий культивирования второй этап изменения условий, включающий изменение по меньшей мере одного из условий культивирования, в результате которого получают третий набор условий культивирования, при этом второй этап изменения условий культивирования включает изменение по меньшей мере одного условия культивирования, выбранного из группы, состоящей из (i) температура, (ii) рН, (iii) осмоляльность, (iv) уровень химического активатора и их комбинации.16. The method according to claim 1, which further includes following the first indicated step of changing at least one of the cultivation conditions, a second stage of changing conditions, comprising changing at least one of the cultivation conditions, as a result of which a third set of cultivation conditions is obtained, wherein the second stage of changing the cultivation conditions includes changing at least one cultivation condition selected from the group consisting of (i) temperature, (ii) pH, (iii) osmolality, (iv) level of chemical ac tivator and their combinations. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанный третий набор условий включает третий диапазон температур, который составляет приблизительно от 27 до 37°С.17. The method according to clause 16, wherein said third set of conditions includes a third temperature range, which is from about 27 to 37 ° C. 18. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый период времени составляет 1-7 дней.18. The method according to claim 1, characterized in that said first period of time is 1-7 days. 19. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый период времени составляет примерно 4 дня.19. The method according to claim 1, characterized in that said first period of time is approximately 4 days. 20. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый период времени и указанный второй период времени вместе составляют по меньшей мере 5 дней.20. The method according to claim 1, characterized in that said first period of time and said second period of time together are at least 5 days. 21. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанную культуру поддерживают в течение второго периода времени, достаточного для того, чтобы наблюдать снижение уровня лактата после того, как уровень лактата в культуре достиг максимального уровня.21. The method according to claim 1, characterized in that the culture is maintained for a second period of time sufficient to observe a decrease in the level of lactate after the level of lactate in the culture has reached a maximum level. 22. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанную культуру поддерживают в течение второго периода времени, достаточного для того, чтобы наблюдать снижение уровня аммония после того, как уровень аммония в культуре достиг максимального уровня.22. The method according to claim 1, characterized in that the culture is maintained for a second period of time sufficient to observe a decrease in the level of ammonia after the level of ammonia in the culture has reached a maximum level. 23. Способ по п.1, отличающийся тем, что в указанную культуру клеток добавляют дополнительные компоненты, выбранные из группы, состоящей из: гормонов и/или других факторов роста, некоторых ионов (таких как натрий, хлор, кальций, магний и фосфат-ион), буферных соединений, витаминов, нуклеозидов или нуклеотидов, микроэлементов (неорганических соединений, обычно присутствующих в очень низких конечных концентрациях), аминокислот, липидов, глюкозы или других источников энергии.23. The method according to claim 1, characterized in that in the specified cell culture add additional components selected from the group consisting of: hormones and / or other growth factors, certain ions (such as sodium, chlorine, calcium, magnesium and phosphate- ion), buffer compounds, vitamins, nucleosides or nucleotides, trace elements (inorganic compounds usually present in very low final concentrations), amino acids, lipids, glucose or other energy sources. 24. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанные дополнительные компоненты добавляют в множественные моменты времени.24. The method according to item 23, wherein the specified additional components are added at multiple points in time. 25. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная среда включает среду, содержащую глютамин, которая обладает свойством, выбранным из группы, состоящей из следующего:
i) начальная концентрация аминокислот больше чем 70 мМ; ii) начальное отношение молярного количества глютамина к молярному количеству аспарагина меньше чем 2; iii) начальное отношение молярного количества глютамина к количеству всех аминокислот меньше чем 0,2; iv) начальное отношение молярного количества неорганических ионов к количеству всех аминокислот составляет от 0,4 до 1; и v) совокупная концентрация глютамина и аспарагина больше чем 16 мМ; и комбинаций указанных свойств.25. The method according to claim 1, characterized in that the medium includes a medium containing glutamine, which has a property selected from the group consisting of the following:
i) an initial concentration of amino acids greater than 70 mm; ii) the initial ratio of the molar amount of glutamine to the molar amount of asparagine is less than 2; iii) the initial ratio of the molar amount of glutamine to the amount of all amino acids is less than 0.2; iv) the initial ratio of the molar amount of inorganic ions to the number of all amino acids is from 0.4 to 1; and v) the cumulative concentration of glutamine and asparagine is greater than 16 mM; and combinations of these properties. 26. Способ по п.1, отличающийся тем, что в указанную культуру в ходе получения указанного полипептида не добавляют дополнительных компонентов.26. The method according to claim 1, characterized in that in the specified culture during the preparation of the specified polypeptide do not add additional components. 27. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество гистидина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, тирозина и пролина на единицу объема в указанной культуре больше чем приблизительно 35 мМ.27. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of histidine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, tyrosine and proline per unit volume in the specified culture is more than approximately 35 mm. 28. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная среда обладает свойством, выбранным из группы, состоящей из следующего:
(i) суммарное общее количество гистидина на единицу объема больше чем приблизительно 1,7 мМ;
(ii) суммарное общее количество изолейцина на единицу объема больше чем приблизительно 3,5 мМ;
(iii) суммарное общее количество лейцина на единицу объема больше чем приблизительно 5,5 мМ;
(iv) суммарное общее количество метионина на единицу объема больше чем приблизительно 2,0 мМ;
(v) суммарное общее количество фенилаланина на единицу объема больше чем приблизительно 2,5 мМ;
(vi) суммарное общее количество пролина на единицу объема больше чем приблизительно 2,5 мМ;
(vii) суммарное общее количество триптофана на единицу объема больше чем приблизительно 1,0 мМ;
(viii) суммарное общее количество тирозина на единицу объема больше чем приблизительно 2,0 мМ;28. The method according to claim 1, characterized in that the medium has a property selected from the group consisting of the following:
(i) the total total amount of histidine per unit volume is greater than about 1.7 mM;
(ii) the total total amount of isoleucine per unit volume is greater than approximately 3.5 mm;
(iii) the total total amount of leucine per unit volume is greater than about 5.5 mM;
(iv) the total total amount of methionine per unit volume is greater than about 2.0 mM;
(v) the total total amount of phenylalanine per unit volume is greater than about 2.5 mM;
(vi) the total total amount of proline per unit volume is greater than about 2.5 mM;
(vii) the total total amount of tryptophan per unit volume is greater than about 1.0 mM;
(viii) the total total amount of tyrosine per unit volume is greater than about 2.0 mM; 29. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество серина на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 10 мМ.29. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of serine per unit volume in said medium is more than about 10 mM. 30. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество аспарагина на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 8 мМ.30. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of asparagine per unit volume in the specified medium is more than approximately 8 mm. 31. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество аспарагина на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 12 мМ.31. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of asparagine per unit volume in the specified medium is more than approximately 12 mm. 32. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество фосфора на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 5 мМ.32. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of phosphorus per unit volume in said medium is more than about 5 mM. 33. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество глютамата на единицу объема в указанной среде меньше чем приблизительно 1 мМ.33. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of glutamate per unit volume in the specified medium is less than approximately 1 mm. 34. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество пантотената кальция на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 20 мг/л.34. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of calcium pantothenate per unit volume in the specified medium is more than approximately 20 mg / L. 35. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество никотинамида на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 25 мг/л.35. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of nicotinamide per unit volume in the specified medium is more than approximately 25 mg / L. 36. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество пиридоксина и пиридоксала на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 35 мг/л.36. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of pyridoxine and pyridoxal per unit volume in the specified medium is more than approximately 35 mg / L. 37. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество рибофлавина на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 2,0 мг/л.37. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of riboflavin per unit volume in said medium is greater than about 2.0 mg / L. 38. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество тиамина гидрохлорида на единицу объема в указанной среде больше чем приблизительно 35 мг/л.38. The method according to claim 1, characterized in that the total total amount of thiamine hydrochloride per unit volume in the specified medium is more than approximately 35 mg / L. 39. Способ крупномасштабного получения полипептида в культуре клеток, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий представляющий интерес полипептид, экспрессия которого происходит в условиях культивирования клеток; и
среду, содержащую глутамин, характеризующуюся тем, что суммарное общее количество гистидина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, тирозина и пролина на единицу объема в указанной культуре больше чем приблизительно 25 мМ, суммарное количество аминокислот на единицу объема больше 70 мМ и отношение суммарного молярного количества глютамина к суммарному количеству аспарагина составляет от 0 до 2, причем указанное отношение больше 0; и при этом
указанная среда обладает двумя свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующего: (i) отношение суммарного молярного количества глютамина к суммарному количеству всех аминокислот составляет от 0 до 0,2, причем указанное отношение больше 0; (ii) отношение суммарного молярного количества неорганических ионов к суммарному количеству всех аминокислот составляет приблизительно от 0,4 до 1; (iii) совокупное суммарное количество глютамина и аспарагина на единицу объема больше чем 16 мМ; и комбинаций указанных свойств;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток, лежащей в диапазоне приблизительно 20%-80% от максимальной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при выращивании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) pH; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в культуре произошло накопление указанного полипептида.39. A method for large-scale production of a polypeptide in a cell culture, comprising the following steps:
providing a cell culture containing:
mammalian cells that contain a gene encoding a polypeptide of interest, the expression of which occurs under cell culture conditions; and
medium containing glutamine, characterized in that the total total amount of histidine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, tyrosine and proline per unit volume in the specified culture is more than approximately 25 mm, the total number of amino acids per unit volume is more than 70 mm and the ratio the total molar amount of glutamine to the total amount of asparagine is from 0 to 2, and the ratio is greater than 0; and wherein
said medium has two properties selected from the group consisting of the following: (i) the ratio of the total molar amount of glutamine to the total amount of all amino acids is from 0 to 0.2, and the specified ratio is greater than 0; (ii) the ratio of the total molar amount of inorganic ions to the total amount of all amino acids is from about 0.4 to 1; (iii) the combined total amount of glutamine and asparagine per unit volume is greater than 16 mM; and combinations of these properties;
maintaining the specified culture in the initial growth phase during the first set of cultivation conditions for the first period of time, sufficient for the cells to multiply to obtain a density of viable cells lying in the range of approximately 20% -80% of the maximum density of viable cells that could be get when growing the specified culture with the specified first set of cultivation conditions;
changing at least one of the cultivation conditions to obtain a second set of culturing conditions, wherein said culturing condition at said step of changing at least one of the cultivation conditions is selected from the group consisting of: (i) temperature; (ii) pH; (iii) osmolality; (iv) the level of chemical activator and their combinations;
maintaining said culture under said second set of conditions for a second period of time so that said polypeptide accumulates in the culture. 40. Способ крупномасштабного получения полипептида в культуре клеток, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий представляющий интерес полипептид, экспрессия которого происходит в условиях культивирования клеток; и
среду заданного состава, содержащую глютамин, характеризующуюся тем, что суммарное общее количество гистидина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, тирозина и пролина на единицу объема в указанной культуре больше чем приблизительно 25 мМ, начальная концентрация аминокислот больше 70 мМ и отношение молярного количества глютамина к молярному количеству аспарагина составляет от 0 до 2, причем указанное отношение больше 0, и обладающую по меньшей мере двумя свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующего: i) отношение молярного количества глютамина к количеству всех аминокислот составляет от 0 до 0,2, причем указанное отношение больше 0; ii) отношение молярного количества неорганических ионов к количеству всех аминокислот составляет от 0,4 до 1; и iii) совокупная концентрация глютамина и аспарагина больше чем 16 мМ;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток в диапазоне приблизительно 20%-80% от максимальной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при выращивании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) рН; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в культуре произошло накопление указанного полипептида.40. A method for large-scale production of a polypeptide in cell culture, comprising the following steps:
providing a cell culture containing:
mammalian cells that contain a gene encoding a polypeptide of interest, the expression of which occurs under cell culture conditions; and
a medium of a given composition containing glutamine, characterized in that the total total amount of histidine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, tyrosine and proline per unit volume in this culture is more than about 25 mM, the initial concentration of amino acids is more than 70 mM and the molar ratio the amount of glutamine to the molar amount of asparagine is from 0 to 2, wherein said ratio is greater than 0 and having at least two properties selected from the group consisting of the following: i) ratio the ratio of the molar amount of glutamine to the amount of all amino acids is from 0 to 0.2, wherein said ratio is greater than 0; ii) the ratio of the molar amount of inorganic ions to the number of all amino acids is from 0.4 to 1; and iii) the cumulative concentration of glutamine and asparagine is greater than 16 mM;
maintaining the specified culture in the initial growth phase during the first set of cultivation conditions for the first period of time sufficient for the cells to multiply to obtain a density of viable cells in the range of about 20% -80% of the maximum density of viable cells that could be obtained with growing said culture under said first set of culture conditions;
changing at least one of the cultivation conditions to obtain a second set of culturing conditions, wherein said culturing condition at said step of changing at least one of the cultivation conditions is selected from the group consisting of: (i) temperature; (ii) pH; (iii) osmolality; (iv) the level of chemical activator and their combinations;
maintaining said culture under said second set of conditions for a second period of time so that said polypeptide accumulates in the culture. 41. Способ крупномасштабного получения полипептида в культуре клеток, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий представляющий интерес полипептид, экспрессия которого происходит в условиях культивирования клеток; и
среду заданного состава, содержащую глютамин и характеризующуюся тем, что: i) начальная концентрация аминокислот больше чем 70 мМ; ii) отношение молярного количества глютамина к молярному количеству аспарагина составляет от 0 до 2, причем указанное отношение больше 0; iii) отношение молярного количества глютамина к количеству всех аминокислот составляет от 0 до 0,2, причем указанное отношение больше 0,
iv) отношение молярного количества неорганических ионов к количеству всех аминокислот составляет от 0,4 до 1; и v) совокупная концентрация глютамина и аспарагина больше чем 16 мМ;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до достижения плотности жизнеспособных клеток в диапазоне приблизительно 20%-80% от максимальной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при выращивании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) рН; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в культуре произошло накопление указанного полипептида.41. A method for large-scale production of a polypeptide in a cell culture, comprising the following steps:
providing a cell culture containing:
mammalian cells that contain a gene encoding a polypeptide of interest, the expression of which occurs under cell culture conditions; and
a medium of a given composition containing glutamine and characterized in that: i) the initial concentration of amino acids is more than 70 mm; ii) the ratio of the molar amount of glutamine to the molar amount of asparagine is from 0 to 2, said ratio being greater than 0; iii) the ratio of the molar amount of glutamine to the amount of all amino acids is from 0 to 0.2, wherein said ratio is greater than 0,
iv) the ratio of the molar amount of inorganic ions to the number of all amino acids is from 0.4 to 1; and v) the cumulative concentration of glutamine and asparagine is greater than 16 mM;
maintaining the specified culture in the initial growth phase during the first set of cultivation conditions for the first period of time sufficient for the cells to multiply until reaching a density of viable cells in the range of approximately 20% -80% of the maximum density of viable cells that could be obtained by growing said culture under said first set of culture conditions;
changing at least one of the cultivation conditions to obtain a second set of culturing conditions, wherein said culturing condition at said step of changing at least one of the cultivation conditions is selected from the group consisting of: (i) temperature; (ii) pH; (iii) osmolality; (iv) the level of chemical activator and their combinations;
maintaining said culture under said second set of conditions for a second period of time so that said polypeptide accumulates in the culture. 42. Способ по любому из пп.1-41, отличающийся тем, что полипептид представляет собой антитело против GDF-8.42. The method according to any one of claims 1 to 41, characterized in that the polypeptide is an anti-GDF-8 antibody. 43. Способ по любому из пп.1-41, отличающийся тем, что полипептид представляет собой антитело против антигена Lewis Y.43. The method according to any one of claims 1 to 41, characterized in that the polypeptide is an antibody against Lewis Y antigen. 44. Способ по пп.1, 39, 40 или 41, отличающийся тем, что полипептид представляет собой антитело против антигена GDF-8.44. The method according to claims 1, 39, 40 or 41, characterized in that the polypeptide is an antibody against the GDF-8 antigen. 45. Способ по пп.1, 39, 40 или 41, отличающийся тем, что полипептид представляет собой антитело против антигена Lewis Y.45. The method according to claims 1, 39, 40 or 41, characterized in that the polypeptide is an antibody against Lewis Y antigen. 46. Способ крупномасштабного получения полипептида в культуре клеток, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий представляющий интерес полипептид, экспрессия которого происходит в условиях культивирования клеток; и
среду, содержащую глицилглютамин, характеризующуюся тем, что суммарное общее количество гистидина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, тирозина и пролина на единицу объема в указанной культуре больше чем приблизительно 25 мМ, суммарное количество аминокислот на единицу объема больше 70 мМ и отношение суммарного молярного количества глицилглютамина к суммарному количеству аспарагина составляет от 0 до 2, причем указанное отношение больше 0, и обладающую свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующего: (i) отношение суммарного молярного количества глицилглютамина к суммарному количеству всех аминокислот составляет от 0 до 0,2, причем указанное отношение больше 0; (ii) отношение суммарного молярного количества неорганических ионов к суммарному количеству всех аминокислот составляет от 0,4 до 1; (iii) совокупное суммарное количество глицилглютамина и аспарагина на единицу объема больше чем 16 мМ; и комбинаций указанных свойств;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток, лежащей в диапазоне приблизительно 20%-80% от максимальной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при выращивании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) рН; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в культуре произошло накопление указанного полипептида. 46. A method for large-scale production of a polypeptide in a cell culture, comprising the following steps:
providing a cell culture containing:
mammalian cells that contain a gene encoding a polypeptide of interest, the expression of which occurs under cell culture conditions; and
medium containing glycylglutamine, characterized in that the total total amount of histidine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, tyrosine and proline per unit volume in the specified culture is more than approximately 25 mm, the total number of amino acids per unit volume is more than 70 mm and the ratio the total molar amount of glycylglutamine to the total amount of asparagine is from 0 to 2, and this ratio is greater than 0, and having properties selected from the group consisting of the following: (i) ix glitsilglyutamina total molar amount to the total amount of amino acids is 0 to 0.2, wherein said ratio is greater than 0; (ii) the ratio of the total molar amount of inorganic ions to the total amount of all amino acids is from 0.4 to 1; (iii) the combined total amount of glycylglutamine and asparagine per unit volume is greater than 16 mM; and combinations of these properties;
maintaining the specified culture in the initial growth phase during the first set of cultivation conditions for the first period of time, sufficient for the cells to multiply to obtain a density of viable cells lying in the range of approximately 20% -80% of the maximum density of viable cells that could be get when growing the specified culture with the specified first set of cultivation conditions;
changing at least one of the cultivation conditions to obtain a second set of culturing conditions, wherein said culturing condition at said step of changing at least one of the cultivation conditions is selected from the group consisting of: (i) temperature; (ii) pH; (iii) osmolality; (iv) the level of chemical activator and their combinations;
maintaining said culture under said second set of conditions for a second period of time so that said polypeptide accumulates in the culture.
RU2007108719/10A 2004-08-27 2005-08-26 Production of polypeptides RU2451082C2 (en)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US60509704P 2004-08-27 2004-08-27
US60494104P 2004-08-27 2004-08-27
US60/604,941 2004-08-27
US60/605,097 2004-08-27
US60/605,074 2004-08-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2007108719A RU2007108719A (en) 2008-10-10
RU2451082C2 true RU2451082C2 (en) 2012-05-20

Family

ID=39926993

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007108719/10A RU2451082C2 (en) 2004-08-27 2005-08-26 Production of polypeptides

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2451082C2 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995024484A1 (en) * 1994-03-08 1995-09-14 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Recombinant humanized anti-lewis y antibodies
WO2002101019A2 (en) * 2001-06-13 2002-12-19 Genentech, Inc. Methods of culturing animal cells and polypeptide production in animal cells
WO2003027248A2 (en) * 2001-09-26 2003-04-03 Wyeth Antibody inhibitors of gdf-8 and uses thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995024484A1 (en) * 1994-03-08 1995-09-14 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Recombinant humanized anti-lewis y antibodies
WO2002101019A2 (en) * 2001-06-13 2002-12-19 Genentech, Inc. Methods of culturing animal cells and polypeptide production in animal cells
WO2003027248A2 (en) * 2001-09-26 2003-04-03 Wyeth Antibody inhibitors of gdf-8 and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
RU2007108719A (en) 2008-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2418858C2 (en) Obtaining antibodies against amiloid beta
RU2458988C2 (en) PRODUCING RECOMBINANT PROTEIN rTNF-lg
JP2008511330A5 (en)
JP6347949B2 (en) Improved cell culture media
JP2008511328A5 (en)
RU2009138226A (en) METHODS FOR PRODUCING PROTEIN USING ANTI-AGING COMPOUNDS
RU2008113220A (en) METHOD FOR PRODUCING PROTEINS USING COMPOUNDS PREVENTING AGING
JP2008511329A5 (en)
CN109337861B (en) CHO cell serum-free medium supporting high expression of product
KR101362805B1 (en) Improved cell culture medium
US20100196995A1 (en) Systems and methods for maintaining the dominance and increasing the biomass production of nannochloropsis in an algae cultivation system
JP5979684B2 (en) Bacterial culture method for improving the yield of capsular polysaccharide
CN1187441C (en) Media for culturing animal cells and process for producing protein by using same
JP2004532642A5 (en)
RU2008152449A (en) Glycoprotein Production
CA2878053C (en) Method for producing haemophilus influenzae type b antigens
CA2561624A1 (en) Fed-batch fermentation process and culture medium for the production of plasmid dna in e. coli on a manufacturing scale
CN105543163A (en) Serum-free culture medium used for full-suspension culture of MDCK (Madin Darby Canine Kidney) cells
RU2015144020A (en) ENVIRONMENTS FOR CULTIVATION OF CELLS AND METHODS FOR PRODUCING ANTIBODIES
US20060084146A1 (en) Method for cell-free protein synthesis using extract solution derived from insect cell
RU2451082C2 (en) Production of polypeptides
Sigrell et al. Purification, characterization, and crystallization of Escherichia coli ribokinase
Zawada et al. Effects of growth rate on cell extract performance in cell‐free protein synthesis
Wall et al. A pleiotropic mutant of Rhodopseudomonas capsulata defective in nitrogen metabolism
JPH08511952A (en) Medium for recombinant yeast growth

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20121101