PL202698B1 - Kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie ludzkiego lub humanizowanego przeciwciała - Google Patents
Kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie ludzkiego lub humanizowanego przeciwciałaInfo
- Publication number
- PL202698B1 PL202698B1 PL384503A PL38450398A PL202698B1 PL 202698 B1 PL202698 B1 PL 202698B1 PL 384503 A PL384503 A PL 384503A PL 38450398 A PL38450398 A PL 38450398A PL 202698 B1 PL202698 B1 PL 202698B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- pbs
- peptide
- mice
- antibody
- patient
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 105
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 37
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title abstract description 36
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 title abstract description 12
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 title abstract description 12
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 title abstract description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 183
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims abstract description 69
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 69
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 55
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 claims abstract description 43
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 30
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 43
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 9
- 208000000340 Alzheimer disease type 1 Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 18
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 151
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 128
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 107
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 78
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 77
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 76
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 67
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 64
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 64
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 64
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 59
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 58
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 57
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 55
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 44
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 42
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 34
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 34
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 34
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 34
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 34
- 230000004044 response Effects 0.000 description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 30
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 30
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N (2s,3s,4s,5r,6r)-6-[[(3s,4s,4ar,6ar,6bs,8r,8ar,12as,14ar,14br)-8a-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3-[(2s,3r,4s,5r,6s)-5-[(2s,3r,4s,5r)-4-[(2s,3r,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-5-[(3s,5s, Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@H]5CC(C)(C)CC[C@@]5([C@@H](C[C@@]4(C)[C@]3(C)CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)O)C(=O)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H]([C@@H]([C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@](O)(CO)CO3)O)[C@H](O)CO2)O)[C@H](C)O1)O)O)OC(=O)C[C@@H](O)C[C@H](OC(=O)C[C@@H](O)C[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](CO)O1)O)[C@@H](C)CC)C(O)=O)[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N 0.000 description 28
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 28
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 21
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 20
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 20
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 19
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 18
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 18
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 17
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 16
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 15
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 15
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 14
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 14
- 239000000306 component Substances 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 13
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 12
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 12
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 11
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 10
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 10
- 206010018341 Gliosis Diseases 0.000 description 10
- 101000962498 Macropis fulvipes Macropin Proteins 0.000 description 10
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 10
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 10
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 10
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 10
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 10
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 9
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 9
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 9
- -1 his Chemical compound 0.000 description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 8
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 208000037875 astrocytosis Diseases 0.000 description 7
- 230000007341 astrogliosis Effects 0.000 description 7
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 7
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 7
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010045517 Serum Amyloid P-Component Proteins 0.000 description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 6
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 6
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 6
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 6
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 6
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 5
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 5
- 101000823051 Homo sapiens Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 5
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 5
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 5
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 4
- 102000046783 human APP Human genes 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 3
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 3
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 3
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 206010044688 Trisomy 21 Diseases 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 3
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 3
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 210000001947 dentate gyrus Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000007387 gliosis Effects 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 3
- 230000007171 neuropathology Effects 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- QMXCRMQIVATQMR-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-pyridin-2-ylsulfanylpropanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSC1=CC=CC=N1 QMXCRMQIVATQMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034112 Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal Human genes 0.000 description 2
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 2
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 2
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 2
- 241000272478 Aquila Species 0.000 description 2
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 2
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 2
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 2
- 108010078015 Complement C3b Proteins 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 101100347633 Drosophila melanogaster Mhc gene Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Polymers OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000799143 Homo sapiens Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal Proteins 0.000 description 2
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102100039564 Leukosialin Human genes 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 108010050254 Presenilins Proteins 0.000 description 2
- 208000024777 Prion disease Diseases 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 2
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 2
- 238000000848 angular dependent Auger electron spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000005786 degenerative changes Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 210000005110 dorsal hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 208000025688 early-onset autosomal dominant Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 2
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 230000007388 microgliosis Effects 0.000 description 2
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 2
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N mifamurtide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 2
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 210000004179 neuropil Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002475 olfactory pathway Anatomy 0.000 description 2
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 2
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGEZPLCPKXKLQQ-VOTSOKGWSA-N (e)-4-(3-methoxyphenyl)but-3-en-2-one Chemical compound COC1=CC=CC(\C=C\C(C)=O)=C1 NGEZPLCPKXKLQQ-VOTSOKGWSA-N 0.000 description 1
- HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 3,3'-diaminobenzidine Chemical compound C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- LQILVUYCDHSGEU-UHFFFAOYSA-N 4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound C1CC(C(=O)O)CCC1CN1C(=O)C=CC1=O LQILVUYCDHSGEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- WOJKKJKETHYEAC-UHFFFAOYSA-N 6-Maleimidocaproic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O WOJKKJKETHYEAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- ZSOICJZJSRWNHX-ACZMJKKPSA-N Ala-Ile Chemical group CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](C)[NH3+] ZSOICJZJSRWNHX-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- LNNSWWRRYJLGNI-NAKRPEOUSA-N Ala-Ile-Val Chemical group C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O LNNSWWRRYJLGNI-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 208000022099 Alzheimer disease 2 Diseases 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010060159 Apolipoprotein E4 Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 description 1
- 101100289995 Caenorhabditis elegans mac-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000001327 Chemokine CCL5 Human genes 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 208000031124 Dementia Alzheimer type Diseases 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000709744 Enterobacterio phage MS2 Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000000666 Fowlpox Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101100268553 Homo sapiens APP gene Proteins 0.000 description 1
- 101000930801 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000608935 Homo sapiens Leukosialin Proteins 0.000 description 1
- 101000617536 Homo sapiens Presenilin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000617546 Homo sapiens Presenilin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000031942 Late Onset disease Diseases 0.000 description 1
- 108010005832 Leukosialin Proteins 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 108010048188 MS2 polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010030317 Macrophage-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 101100500493 Mus musculus Eapp gene Proteins 0.000 description 1
- DTERQYGMUDWYAZ-ZETCQYMHSA-N N(6)-acetyl-L-lysine Chemical compound CC(=O)NCCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O DTERQYGMUDWYAZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- NTNWOCRCBQPEKQ-YFKPBYRVSA-N N(omega)-methyl-L-arginine Chemical compound CN=C(N)NCCC[C@H](N)C(O)=O NTNWOCRCBQPEKQ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- JJIHLJJYMXLCOY-BYPYZUCNSA-N N-acetyl-L-serine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JJIHLJJYMXLCOY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PYUSHNKNPOHWEZ-YFKPBYRVSA-N N-formyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC=O PYUSHNKNPOHWEZ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108010049175 N-substituted Glycines Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 description 1
- 229910021586 Nickel(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N Nitroglycerin Chemical compound [O-][N+](=O)OCC(O[N+]([O-])=O)CO[N+]([O-])=O SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 101000612288 Pinus strobus Putative oxygen-evolving enhancer protein 1 Proteins 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- WINXNKPZLFISPD-UHFFFAOYSA-M Saccharin sodium Chemical compound [Na+].C1=CC=C2C(=O)[N-]S(=O)(=O)C2=C1 WINXNKPZLFISPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 1
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 1
- 101150084279 TM gene Proteins 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 235000012545 Vaccinium macrocarpon Nutrition 0.000 description 1
- 244000291414 Vaccinium oxycoccus Species 0.000 description 1
- 235000002118 Vaccinium oxycoccus Nutrition 0.000 description 1
- 208000000260 Warts Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000001642 activated microglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 230000007792 alzheimer disease pathology Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 108010064397 amyloid beta-protein (1-40) Proteins 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002528 anti-freeze Effects 0.000 description 1
- 230000008350 antigen-specific antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 101150031224 app gene Proteins 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108010030694 avidin-horseradish peroxidase complex Proteins 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 description 1
- 150000001557 benzodiazepines Chemical class 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- KDPAWGWELVVRCH-UHFFFAOYSA-N bromoacetic acid Chemical compound OC(=O)CBr KDPAWGWELVVRCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHBXORBAOCQNMC-UHFFFAOYSA-N butan-2-yl-[2-hydroxy-2-(5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)ethyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1CCCC2=CC(C(O)C[NH2+]C(C)CC)=CC=C21 KHBXORBAOCQNMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N carboxyglutamic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000009850 completed effect Effects 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 235000004634 cranberry Nutrition 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007933 dermal patch Substances 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- AFZSMODLJJCVPP-UHFFFAOYSA-N dibenzothiazol-2-yl disulfide Chemical compound C1=CC=C2SC(SSC=3SC4=CC=CC=C4N=3)=NC2=C1 AFZSMODLJJCVPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 102000038383 gamma-secretases Human genes 0.000 description 1
- 108091007739 gamma-secretases Proteins 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004326 gyrus cinguli Anatomy 0.000 description 1
- 238000011597 hartley guinea pig Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001632 homeopathic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000001872 metatarsal bone Anatomy 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 description 1
- 230000008906 neuronal response Effects 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007121 neuropathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L nickel dichloride Chemical compound Cl[Ni]Cl QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940067631 phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000007342 reactive astrogliosis Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- MIDXXTLMKGZDPV-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O MIDXXTLMKGZDPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 238000011820 transgenic animal model Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/739—Lipopolysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0007—Nervous system antigens; Prions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
- A61K9/2031—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyethylene oxide, poloxamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
- A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
- A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
- A61K9/4866—Organic macromolecular compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/605—MHC molecules or ligands thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2009—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
- A61K9/7023—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Virology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy kompozycji farmaceutycznej zawierającej ludzkie lub humanizowane przeciwciało oraz ich zastosowania do wytwarzania leku do leczenia lub profilaktyki choroby Alzheimera.
Choroba Alzheimera (AD) jest postępującą chorobą wywołującą otępienie starcze. Patrz ogólnie Selkoe, TINS 16, 403-409 (1993); Hardy i inni, WO 92/13069; Selkoe, J. Neuropathol. Exp. Neurol. 53, 438-447 (1994); Duff i inni, Nature 373, 476-477 (1995); Games i inni, Nature 373, 523 (1995). Ogólnie chorobę można podzielić na dwie kategorie: o późnym początku, która pojawia się w podeszłym wieku (od 65 roku życia) oraz o wczesnym początku, która rozwija się przed okresem starości, to jest pomiędzy 35 a 60 rokiem życia. W obu typach choroby patologia jest taka sama, ale nieprawidłowości wydają się być znacznie poważniejsze i bardziej rozległe w przypadkach gdy choroba rozpoczyna się w młodszym wieku. Chorobę charakteryzują dwa typy uszkodzeń w mózgu, płytki starcze oraz kłębki neurofibrylarne. Płytki starcze stanowią obszary zdezorganizowanego neuropilu o szerokości do 150 μm z zewnątrzkomórkowymi złogami amyloidowymi występującymi w centrum widocznym przy analizie mikroskopowej przekrojów tkanki mózgowej. Kłębki neurofibrylarne stanowią wewnątrzkomórkowe złogi białka tau składające się z dwóch filamentów owiniętych parami wokół siebie.
Głównym składnikiem płytek jest peptyd nazywany Ae lub peptydem β-amyloidowym. Peptyd Ae jest wewnętrznym fragmentem 39-43 aminokwasów białka prekursorowego nazywanego białkiem prekursorowym amyloidu (APP). Kilka mutacji białka APP powiązano z występowaniem choroby Alzheimera. Patrz np. Goate i inni, Nature 349, 704 (1991) (walina717 do izoleucyny); Chartier Harlan inni, Nature 353, 844 (1991) (walina717 do glicyny); Murrell i inni, Science 254, 97 (1991) (walina717 do
595 fenyloalaniny); Mullan i inni, Nature Genet. 1, 345 (1992) (podwójna mutacja zmieniająca lizynę595metioninę596 w asparaginę595-leucynę596). Uważa się, że mutacje te wywołują chorobę Alzheimera w wyniku zwiększonego lub zmienionego przetwarzania APP w Ae, w szczególności przetwarzania APP w zwiększone ilości długich form Ae (czyli Ae1-42 i Ae-1-43). Uważa się, że mutacje w innych genach, takich jak geny preseniliny, PS1 i PS2, pośrednio wpływają na przetwarzanie APP powodując powstanie zwiększonych ilości długich form Ae (patrz Hardy, TINS 20, 154 (1997)). Obserwacje te wskazują, że Ae, a zwłaszcza jego długa forma, jest elementem przyczynowym w chorobie Alzheimera.
McMichael, EP 526511, zaproponował podawanie homeopatycznych dawek (mniejszych niż lub równych 10-2 mg/dzień) Ae pacjentom z wcześniej rozwiniętą AD. Oczekuje się, że u typowego człowieka z około 5 litrami osocza nawet wyższa granica tej dawki wytworzy stężenie nie większe niż pg/ml. Normalne stężenie Ae w osoczu człowieka wynosi 50 - 200 pg/ml (Seubert i inni, Nature 359, 325-327 (1992). Ze względu na to, że dawka proponowana w EP 526511 w niewielkim stopniu zmienia poziom endogennego Ae w krążeniu oraz że EP 526511 nie zaleca stosowania adiuwanta, wydaje się niemożliwym, że wystąpi jakikolwiek skutek leczniczy.
W przeciwieństwie do powyższego wynalazek dotyczy ludzkiego lub humanizowanego przeciwciała do leczenia lub profilaktyki choroby Alzheimera. Zatem wynalazek dostarcza od dawna potrzebnego sposobu leczniczej do zapobiegania lub poprawy neuropatologii choroby Alzheimera.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna charakteryzująca się tym, że zawiera ludzkie lub humanizowane przeciwciało, które specyficznie wiąże się z Ae i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, przy czym izotyp tego przeciwciała stanowi ludzkie IgG1.
Korzystnie przeciwciało stanowi monoklonalne przeciwciało.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie ludzkiego lub humanizowanego przeciwciała, które specyficznie wiąże się z Ae, gdzie izotyp przeciwciała stanowi ludzkie IgG1, do wytwarzania leku do leczenia lub profilaktyki choroby Alzheimera u pacjenta, przy czym złogi amyloidowe zawierają zagregowany peptyd Ae.
W korzystnym zastosowaniu przeciwciało stanowi monoklonalne przeciwciało.
Korzystne jest zastosowanie, w którym pacjentem jest człowiek.
Korzystne jest zastosowanie do wytwarzania leku do profilaktyki choroby Alzheimera u pacjenta, w którym u pacjenta nie występują objawy.
Korzystne jest zastosowanie, w którym pacjent ma mniej niż 50 lat.
Korzystne jest zastosowanie, w którym pacjent ma odziedziczone czynniki ryzyka wskazujące podatność na chorobę Alzheimera.
Korzystne jest także zastosowanie, w którym pacjent nie ma znanych czynników ryzyka choroby Alzheimera.
PL 202 698 B1
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek podaje się doustnie, podskórnie, domięśniowo, miejscowo lub dożylnie. Korzystniej lek podaje się domięśniowo lub podskórnie.
Korzystne jest zastosowanie, w którym pacjent jest monitorowany pod względem odpowiedzi immunologicznej.
Sposoby profilaktyki lub leczenia chorób charakteryzujących się odkładaniem amyloidu u pacjenta powodują wywołanie odpowiedzi immunologicznej przeciw peptydowemu składnikowi złogów amyloidowych u pacjenta. Takie wywołanie odpowiedzi może zajść czynnie przez podanie immunogenu, albo biernie przez podanie przeciwciała lub aktywnego fragmentu lub pochodnej przeciwciała.
U niektórych pacjentów złogiem amyloidowym jest skupisko peptydu Αβ i choroba jest chorobą Alzheimera. W niektórych sposobach u pacjenta brak objawów. W niektórych sposobach pacjent ma ponad 50 lat. W niektórych sposobach pacjent odziedziczył czynniki ryzyka wskazujące na podatność na chorobę Alzheimera. Te czynniki ryzyka obejmują zmienne allele genów preseniliny PS1 i PS2 oraz zmienne formy APP. W innych sposobach nie ma znanych czynników ryzyka wystąpienia choroby Alzheimera.
W leczeniu pacjentów cierpiących na chorobę Alzheimera jeden ze sposobów leczenia obejmuje podawanie pacjentowi dawki peptydu Ap, aby wywołać odpowiedź immunologiczną. Niekiedy peptyd Ae podaje się z adiuwantem wzmacniającym odpowiedź immunologiczną na peptyd Ap. Może nim być ałun lub MPL. Dawka peptydu Ap podawanego pacjentowi zazwyczaj wynosi co najmniej 1 lub 10 μg przy podawaniu z adjuwantem, a co najmniej 50 μg przy podawaniu bez adiuwanta. Może również wynosić co najmniej 100 μg.
Peptydem Ap może też być Ap1-42. Niekiedy peptyd Ap jest podawany w postaci zagregowanej lub w postaci zdysocjowanej. Środkiem leczniczym może też być skuteczna dawka kwasu nukleinowego kodującego Ap lub jego aktywny fragment lub jego pochodną. Kwas nukleinowy kodujący Ap lub jego fragment jest eksprymowany u pacjenta z wytworzeniem Ap lub jego aktywnego fragmentu wywołującego odpowiedź immunologiczną. Niekiedy kwas nukleinowy podaje się przez skórę, ewentualnie w postaci plastra. Środek leczniczy można znajdować przeszukując bibliotekę związków w celu zidentyfikowania związku oddziaływującego z przeciwciałami względem Ap oraz podawać związek pacjentowi w celu wywołania odpowiedzi immunologicznej.
Odpowiedź immunologiczna może być skierowana przeciw peptydowi Ap w postaci zagregowanej, a nie przeciw peptydowi Ap w postaci zdysocjowanej. Przykładowo na odpowiedź immunologiczną mogą składać się przeciwciała wiążące zagregowaną postać peptydu Ap, nie wiążące zdysocjowanego peptydu Ap. Odpowiedź immunologiczna może obejmować komórki T wiążące Ap skompleksowany z MCHI lub MCHII na komórkach CD8 lub CD4, lub jest indukowana przez podanie pacjentowi przeciwciała przeciw Ap. Odpowiedź immunologiczna może też być indukowana przez pobranie komórek T od pacjenta, poddanie komórek T działaniu peptydu Ap w warunkach, w których komórki T są aktywowane, a następnie ponowne umieszczenie komórek T w organizmie pacjenta.
Środek leczniczy zazwyczaj podaje się doustnie, donosowo, śródskórnie, podskórnie, domięśniowo, miejscowo lub dożylnie. Pacjenta po podaniu leku można monitorować w celu określenia odpowiedzi immunologicznej. Jeżeli podczas monitorowania wystąpi obniżenie odpowiedzi immunologicznej w czasie, pacjentowi można podać jedną lub większą liczbę kolejnych dawek leku.
Środki farmaceutyczne mogą zawierać Ap oraz zaróbkę odpowiednią do podawania doustnego i innymi drogami, lub też środek skuteczny w wywoływaniu u pacjenta odpowiedzi immunologicznej przeciw Ap oraz dopuszczalny farmaceutycznie adiuwant. Środkiem może być niekiedy Ap lub jego aktywny fragment. Adiuwant może stanowić ałun, a niekiedy jest to emulsja typu olej w wodzie. Ap lub jego aktywny fragment może także być składnikiem kopolimeru polilaktyd-poliglikolid (PLPG) lub innej cząstki. Możliwe jest łączenie Ap lub jego aktywnego fragmentu z cząsteczką koniugatową sprzyjającą dostarczaniu Ap do krwioobiegu pacjenta i/lub sprzyjającą odpowiedzi immunologicznej przeciw Ap. Koniugat może na przykład sprzyjać wywołaniu odpowiedzi immunologicznej przeciw Ap i może nim być toksyna cholery, immunoglobulina, atenuowana toksyna błonicy CRM 197 (Gupta, Vaccine 15, 1341-3 (1997)).
Środek farmaceutyczny może zawierać środek skutecznie wywołujący u pacjenta odpowiedź immunologiczną przeciw Ap, z tym, że środek nie powinien zawierać kompletnego adiuwantu Freunda. Środek może także zawierać wektor wirusowy kodujący Ap lub jego aktywny fragment skutecznie wywołujący odpowiedź immunologiczną przeciw Ap. Odpowiednimi wektorami wirusowymi mogą być: wirus opryszczki, adenowirus, wirus adenosatelitarny, retrowirus, wirus Sindibs, wirus gorączki Semliki Forest, wirus ospy krowiej lub ospy ptasiej.
PL 202 698 B1
W sposobach zapobiegania chorobie Alzheimera oraz jej leczenia pacjentowi podaje się skuteczną dawkę peptydu Αβ. Można stosować Αβ lub przeciwciała skierowane przeciw niemu do wytwarzania leku przeciwdziałającego chorobie Alzheimera lub leczącego ją.
Można również oceniać skuteczność sposobu leczenia choroby Alzheimera u pacjenta. Oznacza się w próbkach tkanek pacjenta podstawową ilość przeciwciał specyficznych przeciw Αβ przed podaniem środka. Ilość przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Αβ w próbkach tkanek pacjenta po leczeniu środkiem można porównać z podstawową ilością przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Αβ. Ilość przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Αβ zmierzona po leczeniu, znacząco większa od ilości podstawowej przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Αβ, wskazuje na pozytywny wynik leczenia.
W ocenie skuteczności sposobów leczenia choroby Alzheimera u pacjenta można oznaczać w próbkach tkanek pacjenta podstawową ilość przeciwciał specyficznych przeciw Αβ przed podaniem środka. Ilość przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae w próbkach tkanek pacjenta po leczeniu środkiem można porównać z podstawową ilością przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae. Obniżenie ilości lub brak znaczącej różnicy pomiędzy ilością przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae zmierzoną po leczeniu a ilością podstawową przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae wskazuje na negatywny wynik leczenia.
W ocenie innym sposobem skuteczności leczenia choroby Alzheimera u pacjenta można oznaczać w próbkach tkanek kontrolnej populacji kontrolną ilość przeciwciał specyficznych przeciw Ae. Ilość przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae w próbkach tkanek pacjenta po leczeniu środkiem można porównać z kontrolną ilością przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae. Ilość przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae zmierzona po leczeniu, znacząco większa od ilości kontrolnej przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae, wskazuje na pozytywny wynik leczenia.
W ocenie innym sposobem skuteczności leczenia choroby Alzheimera u pacjenta można oznaczać w próbkach tkanek kontrolnej populacji kontrolną ilość przeciwciał specyficznych przeciw Ae. Ilość przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae w próbkach tkanek pacjenta po podaniu środka można porównać z kontrolną ilością przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae. Brak znaczącej różnicy pomiędzy ilością przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae zmierzoną po rozpoczęciu leczenia a ilością kontrolną przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae wskazuje na negatywny wynik leczenia.
Inne sposoby monitorowania u pacjenta choroby Alzheimera lub podatności na tę chorobę mogą obejmować wykrywanie odpowiedzi immunologicznej przeciw peptydowi Ae w próbce pobranej od pacjenta. Niekiedy pacjentowi podaje się środek skuteczny w leczeniu choroby Alzheimera lub jej zapobieganiu, a poziom odpowiedzi określa przyszły tryb leczenia pacjenta.
W ocenie innym sposobem skuteczności leczenia choroby Alzheimera u pacjenta można oznaczać ilość przeciwciał specyficznych przeciw peptydowi Ae w próbce tkanki pacjenta leczonego środkiem. Ilość tę można porównać z kontrolną ilością oznaczoną w populacji pacjentów u których występuje poprawa lub zanik objawów choroby Alzheimera pod wpływem leczenia środkiem. Wartość u pacjenta równa co najmniej wartości kontrolnej wskazuje na pozytywną odpowiedź na leczenie.
Zestawy do takich ocen zazwyczaj mogą zawierać odczynnik specyficznie wiążący się z przeciwciałami przeciw Ae lub stymulujący proliferację komórek T reaktywnych wobec Ae.
Wynalazek stanie się bardziej zrozumiały dzięki załączonym rysunkom, przy czym
Fig. 1: Miano przeciwciał po iniekcji transgenicznym myszom Ae1-42.
Fig. 2: Obciążenie hipokampu amyloidem. Na podstawie wspomaganej komputerowo ilościowej analizy obrazu immunoreaktywnych obszarów mózgu oznaczono procent powierzchni regionu hipokampu zajmowanego przez płytki amyloidowe, określony na podstawie reaktywności z mAe 3D6 specyficznymi dla Ae. Wartości dla poszczególnych myszy podano dzieląc je na grupy badawcze. Linia pozioma dla każdej z grup wskazuje wartość mediany rozkładu.
Fig. 3: Dystrofia neurytowa w hipokampie. Na podstawie wspomaganej komputerowo ilościowej analizy obrazu immunoreaktywnych obszarów mózgu oznaczono procent powierzchni regionu hipokampu zajmowany przez zwyrodniałe neuryty, określony przez ich oddziaływanie z ludzkimi mAe 8E5 specyficznymi dla APP. Wartości dla poszczególnych myszy podano dla grupy traktowanej AN1792 oraz grupy kontrolnej traktowanej PBS. Linia pozioma dla każdej z grup wskazuje wartość mediany rozkładu.
Fig. 4: Astrocytoza w korze pozamodzelowatej. Na podstawie wspomaganej komputerowo ilościowej analizy obrazu immunoreaktywnych obszarów mózgu oznaczono procent powierzchni regionu korowego zajmowany przez astrocyty pozytywne pod względem kwaśnego włóknistego białka glejoPL 202 698 B1 wego (GFAP). Wartości dla poszczególnych myszy podano dzieląc je na grupy badawcze, a wartości mediany dla grup wskazano poziomymi liniami.
Fig. 5: Średnie geometryczne mian przeciwciał przeciw Αβ1-42 po immunizacji w zakresie ośmiu dawek AN1792 zawierających 0,14, 0,4, 1,2, 3,7, 11,33, 100 lub 300 μg.
Fig. 6: Kinetyka odpowiedzi na przeciwciała po immunizacji AN1792. Miana wyrażono w postaci średnich geometrycznych wartości dla 6 zwierząt w każdej z grup.
Fig. 7: Ilościowa analiza obrazu obciążenia kory amyloidem u myszy poddanych działaniu PBS i AN1792.
Fig. 8: Ilościowa analiza obrazu obciążenia płytkami neurytycznymi u myszy poddanych działaniu PBS i AN1792.
Fig. 9: Ilościowa analiza obrazu procentu kory pozamodzelowatej objętej astrocytozą u myszy poddanych działaniu PBS i AN1792.
Fig. 10: Test proliferacji limfocytów na komórkach śledziony u myszy poddanych działaniu AN1792 (górny wykres) i PBS (dolny wykres).
Fig. 11: Całkowity poziom Ae w korze. Wykres rozrzutu poszczególnych profili Ae u myszy immunizowanych Ae lub pochodnymi APP w połączeniu z adiuwantem Freunda.
Fig. 12: Obciążenie kory amyloidem określono na podstawie sterowanej komputerowo ilościowej analizy obrazu immunoreaktywnych obszarów mózgu myszy immunizowanych koniugatami peptydu Ae - Λβ1-5, Ae1-12, Ae13-28, agregatami AN1792 o pełnej długości Ae (Ae1-42) i AN1528 (Άβ1-40) oraz poddanej działaniu PBS grupy kontrolnej.
Fig. 13: Średnie geometryczne mian przeciwciał specyficznych dla Ae dla grup myszy immunizowanych Ae lub pochodnymi APP, w połączeniu z adiuwantem Freunda.
Fig. 14: Średnie geometryczne mian przeciwciał specyficznych dla Ae dla grup świnek morskich immunizowanych AN1792 lub jego palmitoliowaną pochodną, w połączeniu z różnymi adiuwantami.
Fig. 15: Poziomy Ae w korze 12-miesięcznych myszy PDAPP poddanych działaniu AN1792 lub AN1528, z różnymi adiuwantami.
Określenie „zasadniczo identyczne oznacza, że dwie sekwencje białkowe, najlepiej przyrównywane z zastosowaniem takich programów jak GAP lub BESTFIT, z użyciem domyślnych ważności luk (gap weights), wykazują co najmniej 65 procent identyczności sekwencji, korzystnie co najmniej 80 lub 90 procent identyczności sekwencji, korzystniej co najmniej 95 procent identyczności sekwencji lub więcej (np. 99 procent identyczności sekwencji lub więcej). Korzystnie pozycje reszt, które nie są takie same, różnią się podstawieniem konserwatywnymi aminokwasami.
Przy przyrównywaniu sekwencji zazwyczaj jedną z sekwencji stosuje się jako sekwencję odniesienia, z którą porównuje się badane sekwencje. Z zastosowaniem algorytmu porównującego sekwencje, sekwencję badaną i odniesienia wprowadza się do komputera, jeżeli jest to konieczne określa się współrzędne podsekwencji, a następnie ustala się parametry algorytmu programowego. Następnie algorytm porównujący sekwencje oblicza procent identyczności sekwencji badanej(ych) do sekwencji odniesienia na podstawie ustalonych parametrów programu.
Optymalne przyrównanie porównywanych sekwencji można przeprowadzić, np. z zastosowaniem algorytmu homologii lokalnej Smitha i Watermana, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), algorytmu przyrównującego homologie Needelemana i Wunscha, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), szukając podobieństw metodą Pearsona i Lipmana, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444 (1988), za pomocą skomputeryzowanych wersji tych algorytmów (GAP, BESTFIT, FASTA oraz TFASTA w Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) albo na podstawie oceny wzrokowej (patrz głównie Ausubel i inni, supra). Jednym z przykładów algorytmu odpowiedniego do określania procentu podobieństwa i identyczności sekwencji jest algorytm BLAST opisany przez Altschul i inni, J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990). Oprogramowanie do przeprowadzania algorytmu BLAST jest publicznie dostępne przez National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Zazwyczaj domyślne parametry programu można stosować do wykonywania porównania sekwencji, ale można także użyć dostosowanych parametrów. Dla sekwencji aminokwasowych program BLAST używa jako domyślnych długości słowa (wordlength) (W) równej 3, oczekiwania (expectation) (E) równego 10 oraz macierzy punktującej (scoring matrix) BLOSUM62 (patrz Henikoff i Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 10915 (1989)).
Celem klasyfikacji podstawień aminokwasowych konserwatywnych i niekonserwatywnych aminokwasy grupuje się w następujący sposób: Grupa I (hydrofobowe, łańcuchy boczne): norleucyna, met, ala, val, leu, ile; Grupa II (obojętne, hydrofilowe łańcuchy boczne): cys, ser, thr; Grupa III (kwa6
PL 202 698 B1 sowe, łańcuchy boczne): asp, glu; Grupa IV (zasadowe, łańcuchy boczne): asn, gln, his, lys, arg; Grupa V (aminokwasy wpływające na orientację łańcucha): gly, pro oraz Grupa VI (aromatyczne łańcuchy boczne): trp, tyr, phe. Konserwatywne podstawienia obejmują podstawienia pomiędzy aminokwasami tej samej klasy. Niekonserwatywne podstawienia obejmują zmiany aminokwasu jednej klasy na aminokwas drugiej klasy.
Środki lecznicze zawarte w kompozycjach według wynalazku zazwyczaj są zasadniczo czyste. Oznacza to, że środek jest zazwyczaj co najmniej w 50% (wagowo) czyste, a ponadto są zasadniczo wolne od przeszkadzających białek lub zanieczyszczeń. Czasem środki są co najmniej w 80% (wagowo), korzystniej w co najmniej 80 lub około 95% (wagowo) czyste. Jednakże za pomocą standardowych technik oczyszczania białek można uzyskać preparaty białek homogenne co najmniej w 99%.
Specyficzne wiązanie dwóch jednostek oznacza powinowactwo co najmniej 106, 107, 108, 109 -1 10 -1 8 -1
M-1 lub 1010 M-1. Korzystne są wartości powinowactwa większe niż 108 M-1.
Określenie „przeciwciało stosowano tutaj w odniesieniu do nienaruszonych przeciwciał jak i ich fragmentów wiążących. Zazwyczaj fragmenty współzawodniczą w wiązaniu antygenu z nienaruszonymi przeciwciałami od których pochodzą. Ponadto przeciwciała lub ich fragmenty wiążące mogą być chemicznie połączone lub wyeksprymowane jako białka fuzyjne z innymi białkami.
APP695, APP751 i APP770 dotyczą odpowiednio polipeptydów o długości 695, 751 i 770 aminokwasów kodowanych przez ludzki gen APP. Patrz Kang i inni, Nature 325, 773 (1987); Ponte i inni, Nature 331, 525 (1988), oraz Kitaguchi i inni, Nature 331, 530 (1988). Aminokwasy w obrębie ludzkiego białka prekursorowego amyloidu (APP) mają przypisane numery zgodnie z sekwencją izoformy APP770. Określenia takie jak Αβ39, Αβ40, Αβ41, Αβ42 i Αβ43 oznaczają peptydy Αβ zawierające aminokwasy 1-39, 1-40, 1-41, 1-42 i 1-43.
Określenie „epitop lub „determinanta antygenowa oznacza miejsce na antygenie, na które odpowiadają komórki B i/lub T. Epitopy komórek B mogą być utworzone z dwóch przylegających lub nieprzylegających aminokwasów zestawionych obok siebie przez trzeciorzędowe złożenie białka. Epitopy utworzone z przylegających aminokwasów są zazwyczaj zachowane przy działaniu rozpuszczalników denaturujących, podczas gdy epitopy utworzone w wyniku trzeciorzędowego składania znikają po działaniu rozpuszczalnikami denaturującymi. Epitop zazwyczaj obejmuje co najmniej 3, a częściej co najmniej 5 lub 8-10 aminokwasów w unikatowej konformacji przestrzennej. Sposoby określania przestrzennej konformacji epitopów obejmują np. krystalografię rentgenowską i dwuwymiarowy jądrowy rezonans magnetyczny. Patrz np. Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, tom 66, red. Glenn E. Morris (1996) . Przeciwciała rozpoznające ten sam epitop można zidentyfikować w prostym teście immunologicznym pokazującym zdolność jednego przeciwciała do blokowania wiązania innego przeciwciała z docelowym antygenem. Komórki T rozpoznają ciągłe epitopy o długości około 9 aminokwasów dla komórek CD8 lub około 13-15 aminokwasów dla komórek CD4. Komórki T rozpoznające epitop można zidentyfikować w testach in vitro mierzących zależną od antygenu proliferację, oznaczaną przez inkorporację 3H-tymidyny w uczulonych komórkach T, w odpowiedzi na epitop (Burke i inni, J. Inf. Dis. 170, 1110-19 (1994)), zależne od antygenu uśmiercanie (test limfocytów T cytotoksycznych, Tigges i inni, J. Immunol. 156, 3901-3910) lub wydzielanie cytokin.
Określenie „immunologiczny lub odpowiedź „immunologiczna oznacza rozwój korzystnej odpowiedzi humoralnej (pośredniczonej przez przeciwciała) i/lub komórkowej (pośredniczonej przez specyficzne dla antygenu komórki T lub ich produkty wydzielnicze) skierowanej przeciw peptydowi amyloidowemu u pacjenta biorcy. Taka odpowiedź może być czynną odpowiedzią wywołana przez podanie immunogenu, albo bierną odpowiedzią wywołaną przez podanie przeciwciał lub uczulonych komórek T. Komórkowa odpowiedź immunologiczna jest wywoływana przez prezentację epitopów polipeptydowych w połączeniu z cząsteczkami MHC Klasy I lub Klasy II w celu aktywowania specyficznych dla antygenu pomocniczych komórek T CD4+ i/lub cytotoksycznych komórek T CD8+. Odpowiedź może także obejmować aktywacje monocytów, makrofagów, komórek NK, bazofili, komórek dendrytycznych, astrocytów, komórek mikrogleju, eozynofili lub innych składników odporności wrodzonej. Wystąpienie pośredniczonej przez komórki odpowiedzi immunologicznej można okeślić w testach proliferacji (komórek T CD4+) lub testach CTL (limfocytów T cytotoksycznych) (patrz Burke, supra; Tiggers, supra). Względne udziały odpowiedzi humoralnej i komórkowej w ochronnym lub leczniczym działaniu immunogenu można rozróżnić oddzielnie izolując IgG i komórki T z immunizowanego syngeneicznego zwierzęcia i mierząc ochronne lub lecznicze działanie u drugiego zwierzęcia.
„Środek immunogenny lub „immunogen jest zdolny po podaniu pacjentowi wywołać odpowiedź immunologiczną przeciw sobie samemu, ewentualnie w połączeniu z adiuwantem.
PL 202 698 B1
Określenie „nagi polinukleotyd oznacza polinukleotyd nie skompleksowany z materiałem koloidalnym. Nagie polinukleotydy czasem klonuje się w wektory plazmidowe.
Określenie „adiuwant oznacza związek, który podany razem z antygenem wzmaga odpowiedź immunologiczną na antygen, ale podany oddzielnie nie wywołuje odpowiedzi immunologicznej na antygen. Adiuwanty mogą wzmagać odpowiedź immunologiczną na drodze kilku różnych mechanizmów, włącznie z rekrutacją limfocytów, stymulacją komórek B i/lub T oraz stymulacją makrofagów.
Określenie „pacjent oznacza człowieka lub innego ssaka poddawanego profilaktyce lub leczeniu.
Zdezintegrowany lub monomeryczny Αβ oznacza rozpuszczalne, monomeryczne jednostki peptydowe Ap. Jednym ze sposobów preparowania monomerycznych Ae jest rozpuszczenie liofilizowanego peptydu w czystym DMSO z rozbijaniem ultradźwiękami. Powstały roztwór odwirowuje się w celu usunięcia cząstek nierozpuszczalnych. Zagregowany Ap jest mieszaniną oligomerów, w której monomeryczne jednostki są utrzymywane razem wiązaniami niekowalencyjnymi.
Środki lub sposoby „obejmujące jeden lub większą liczbę wymienionych elementów mogą zawierać inne elementy nie wymienione specyficznie. Przykładowo środek zawierający peptyd Ap obejmuje zarówno wyizolowany peptyd Ap, jak i peptyd Ap jako składnik dłuższej sekwencji polipeptydowej.
Wynalazek dotyczy środków leczniczych oraz sposobów profilaktyki i leczenia chorób charakteryzujących się nagromadzeniem złogów amyloidowych. Złogi amyloidowe zawierają peptydy zagregowane w nierozpuszczalną masę. Natura peptydów różni się w różnych chorobach, ale w większości przypadków agregat ma strukturę p-pofałdowanej kartki i wybarwia się barwnikiem Congo Red. Choroby charakteryzujące się złogami amyloidowymi obejmują chorobę Alzheimera (AD), zarówno o wczesnym jak i późnym początku. W obu chorobach złogi amyloidowe zawierają peptyd nazywany Ap, który gromadzi się w mózgu osób chorych. Przykładami innych chorób charakteryzujących się złogami amyloidu są amyloidoza SAA, dziedziczny zespół islandzki, szpiczak mnogi oraz encefalopatię gąbczaste, włącznie z chorobą szalonych krów, chorobą Creutzfeldta Jakoba, encefalopatia owiec oraz encefalopatią gąbczastą norek (patrz Weissmenn i inni, Curr. Opin. Neurobiol. 7, 695-700 (1997); Smits i inni, Veterinary Quarterly 19, 101-105 (1997)), Nathanson i inni, Am. J. Epidemiol. 145, 959969 (1997)). Peptydy tworzące agregaty w tych chorobach, to odpowiednio dla pierwszych trzech surowiczy amyloid A, cystantyna C, lekki łańcuch IgG κ oraz białka prionowe dla pozostałych.
Środki lecznicze zawarte w kompozycjach farmaceutycznych według wynalazku wywołują odpowiedź immunologiczną przeciw peptydowi Ap. Środki te obejmują sam peptyd Ap oraz jego odmiany, analogi i mimetyki peptydu Ap indukujące przeciwciała skierowanymi przeciw peptydowi Ap i/lub reagujące z nimi krzyżowo oraz przeciwciała lub komórki T reagujące z peptydem Ap. Wywołanie odpowiedzi immunologicznej może być czynne, np. w przypadku podania pacjentowi immunogenu w celu zaindukowania przeciwciał lub komórek T reagujących z Ap, albo bierne, np. w przypadku podania pacjentowi przeciwciał, które same wiążą Ap.
Ap znany także jako peptyd p-amyloidowy lub peptyd A4 (patrz US 4666829; Glenner i Wong, Biochem. Biophys. Res. Commun. 120, 1131 (1984), jest peptydem o długości 39-43 aminokwasów, który jest główną składową charakterystycznych płytek w chorobie Alzheimera. Ap powstaje w wyniku przetwarzania większego białka APP przez dwa enzymy, nazywane sekretazami p i γ (patrz. Hardy, TINS 20, 154 (1997)). Znane mutacje w APP związane z chorobą Alzheimera występują proksymalnie do miejsc p lub γ sekretaz lub w obrębie Ap. Przykładowo pozycja 717 leży proksymalnie do miejsca cięcia APP przez sekretazę γ podczas obróbki do Ap, a pozycje 670/671 leżą proksymalnie do miejsca cięcia przez sekretazę p. Uważa się, że mutacje powodują chorobę AD przez wpływanie na reakcje cięcia, w wyniku których powstaje Ap, tak że zwiększają ilość wytwarzanej 42/43 aminokwasowej formy Ap.
Ap ma tę niezwykłą zdolność, że może utrwalać i aktywować zarówno klasyczną, jak i alternatywną kaskadę dopełniacza. W szczególności wiąże się on z Clq i ostatecznie z C3bi. To połączenie ułatwia wiązanie do makrofagów, prowadzące do aktywacji komórek B. Ponadto C3bi dalej rozpada się i wiąże z CR2 na komórkach B w sposób zależny od komórek T, co prowadzi do 10000 krotnego wzrostu aktywacji tych komórek. Mechanizm ten powoduje, że Ap wytwarza większą niż inne antygeny odpowiedź immunologiczną.
Środek leczniczy zawarty w kompozycji farmaceutycznej może być dowolną naturalnie występującą postacią peptydu Ap, a zwłaszcza ludzką postacią (to jest Ap39, Ap40, Ap41, Ap42 lub Ap43). Sekwencje tych peptydów i ich pokrewieństwo z prekursorowym APP przedstawiono na fig. 1 w Hardy i inni, TINS 20, 155-158 (1997). Przykładowo Ap42 ma sekwencję:
PL 202 698 B1
H2N-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-AlaGlu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-OH
Ae41, Ae40 i Ae39 różnią się od Ae42 pominięciem odpowiednio Ala, Ala-Ile i Ala-Ile-Val na C-końcu. Ae43 różni się od Ae42 obecnością reszty treoniny na C-końcu. Środkiem leczniczym może także być aktywny fragment lub analog naturalnego peptydu Ae, zawierający epitop indukujący podobną ochronną lub leczniczą odpowiedź immunologiczną po podaniu człowiekowi. Immunogenne fragmenty zazwyczaj mają ciągłą sekwencję co najmniej z 3, 5, 6, 10 lub 20 sąsiednich aminokwasów naturalnego peptydu. Immunogenne fragmenty obejmują Ae1-5, 1-6, 1-12, 13-28, 17-28, 25-25, 35-40 i 35-42. Fragmenty z N-końcowej połowy Ae są korzystniejsze w niektórych sposobach. Analogi obejmują odmiany alleliczne, gatunkowe i indukowane. Analogi zazwyczaj różnią się od naturalnie występujących peptydów w jednym lub kilku miejscach, często przez konserwatywne podstawienia. Analogi zazwyczaj wykazują co najmniej 80 lub 90% identyczności sekwencji z naturalnymi peptydami. Niektóre analogi zawierają także nienaturalne aminokwasy lub modyfikacje N- lub C-końcowych aminokwasów. Przykładami nienaturalnych aminokwasów są α,α-dwupodstawione aminokwasy, N-alkiloaminokwasy, kwas mlekowy, 4-hydroksyprolina, γ-karboksyglutaminian, ε-N,N,N-trimetylolizyna, ε-N-acetylolizyna, O-fosfoseryna, N-acetyloseryna, N-formylometionina, 3-metylohistydyna, 5-hydroksylizyna, ω-N-metyloarginina. Profilaktyczne lub lecznicze działanie fragmentów i analogów można selekcjonować z użyciem zwierzęcych modeli transgenicznych, co opisano poniżej.
Ae, jego fragmenty, analogi i inne peptydy amyloidogenne można zsyntetyzować drogą syntezy peptydów w fazie stałej lub przez ekspresję rekombinacyjną, albo można je otrzymać z naturalnych źródeł. Automatyczne syntetyzatory białek są dostępne w handlu od wielu dostawców, takich jak Applied Biosystems, Foster City, California. Ekspresję rekombinacyjną można przeprowadzić w bakteriach, takich jak E. coli, w drożdżach, komórkach owadzich lub komórkach ssaczych. Procedury ekspresji rekombinacyjnej opisali Sambrook i inni, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (C.S.H.P. Press, NY 2 wyd., 1989). Niektóre postacie peptydu Ae są także dostępne w handlu (np. American Peptides Company, Inc., Sunnyvale, CA i California Peptide Research, Inc. Napa, CA).
Środki lecznicze obejmują także dłuższe polipeptydy obejmujące np. peptyd Ae, aktywny fragment lub analog razem z innymi aminokwasami. Przykładowo peptyd Ae może być obecny w nieaktywnym białku APP lub jego segmencie, takim jak fragment C-100 zaczynający się na N-końcu Ae i biegnący do końca APP. Takie polipeptydy można przebadać pod względem ich działania profilaktycznego lub leczniczego na modelach zwierzęcych w sposób opisany poniżej. Peptyd Ae, analog, aktywny fragment lub inny polipeptyd można podać w zasocjowanej postaci (to jest jako peptyd amyloidowy) lub w postaci zdysocjowanej. Środki lecznicze obejmują także multimery monomerycznych środków immunogennych.
W kolejnej odmianie peptyd immunogenny, taki jak Ae, może być stosowany jako szczepionka wirusowa lub bakteryjna. Kwas nukleinowy kodujący peptyd immunogenny wprowadza się do genomu lub episomu wirusa lub bakterii. Ewentualnie kwas nukleinowy wprowadza się w taki sposób, że peptyd immunogenny jest eksprymowany jako białko wydzielnicze lub białko fuzyjne z białkiem zewnętrznej powierzchni wirusa lub transbłonowym białkiem bakterii, tak że peptyd jest eksponowany. Wirusy lub bakterie użyte w takich metodach powinny być niepatogenne lub atenuowane. Odpowiednie wirusy obejmują adenowirusy, HSV, ospę krowią i ospę drobiu. Fuzja peptydu immunogennego z HBsAg z HBV jest szczególnie odpowiednia. Środki lecznicze obejmują także peptydy i inne związki, które nie koniecznie wykazują znaczące podobieństwo sekwencji z Ae, ale tym niemniej działają jako mimetyki Ae i wywołują podobną odpowiedź immunologiczną. Można np. przebadać pod względem przydatności dowolne peptydy lub białka tworzące e-pofałdowane kartki. Można także stosować przeciwciała przeciwidiotypowe przeciw przeciwciałom monoklonalnym przeciw Ae lub innym peptydom amyloidogennym. Takie przeciwciała przeciw-Id naśladują antygen i wytwarzają odpowiedź immunologiczną na niego (patrz Essential Immunology (red. Roit, Blackwell Scientific Publications, Palo Alto, wyd. 6) str. 181).
Można także zbadać pod względem przydatności losowe biblioteki peptydów lub innych związków. Biblioteki kombinatoryjne można wytworzyć dla wielu typów związków, które mogą być syntetyzowane krok-po-kroku. Związki takie obejmują polipeptydy, mimetyki e-skrętu, polisacharydy, fosfolipidy, hormony, prostaglandyny, steroidy, związki aromatyczne, związki heterocykliczne, benzodiazepiny, oligomeryczne N-podstawione glicyny i oligokarbaminiany. Duże biblioteki kombinatoryjne związków można skonstruować metodą kodowanych syntetycznych bibliotek opisaną w Affymax, WO 95/12608, Affymax, WO 93/06121, Columbia University, WO 94/0851, Pharmacopeia, WO 95/35503 i Scripps, WO 95/30642 (z których każdy cytuje się tutaj jako pozycję literaturową do wszystkich zastosowań).
PL 202 698 B1
Biblioteki peptydowe można także skonstruować metodami ekspozycji fagowej. Patrz np. Devlin, WO 91/18980.
Początkowo biblioteki kombinatoryjne i inne związki bada się pod względem przydatności określając ich zdolność do wiązania się do przeciwciał lub limfocytów (B lub T) znanych jako specyficzne dla Ap lub innych peptydów amyloidogennych. Na przykład początkowe przeszukiwania można przeprowadzić stosując jakiekolwiek surowice poliklonalne lub przeciwciała monoklonalne przeciw Ap lub innym peptydom amyloidogennym. Następnie związki zidentyfikowane w tych badaniach dalej analizuje się pod względem ich zdolności do indukowania przeciwciał lub reaktywnych limfocytów przeciw Ap lub innym peptydom amyloidogennym. Na przykład można przebadać wielokrotne rozcieńczenia surowicy na płytkach do mikromianowania wcześniej powleczonych peptydem Ap i przeprowadzić standardowy test ELISA w celu wykrycia reaktywnych przeciwciał na Ap. Następnie związki można zbadać pod względem ich profilaktycznej lub leczniczej skuteczności na zwierzętach transgenicznych predysponowanych do choroby amyloidogennej, co opisano w przykładach. Zwierzęta takie obejmują, np. myszy niosące mutację 717 APP opisane przez Games i innych, supra, oraz myszy niosące mutację Swedish APP, takie jak opisane przez McConlogue i innych, US 5612486 i Hsiao i innych, Science 274, 99 (1996); Staufenbiela i innych, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 13287-13292 (1997); SturchleraPierrata i innych, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 13287-13292 (1997); Brochleta i innych, Neuron 19, 939-945 (1997). To samo podejście badawcze można zastosować w przypadku innych potencjalnych środków, takich jak opisane powyżej fragmenty Ap, analogi Ap i dłuższe peptydy zawierające Ap.
Środki lecznicze zawarte w kompozycjach farmaceutycznych według wynalazku zawierają także przeciwciała specyficznie wiążące Ap. Takie przeciwciała mogą być przeciwciałami monoklonalnymi lub poliklonalnymi. Niektóre z takich przeciwciał specyficznie wiążą się z zagregowaną formą Ap, nie wiążąc się z formą zdysocjowaną. Niektóre wiążą się z formą zdysocjowaną, nie wiążąc się z formą zagregowaną. Niektóre wiążą się zarówno z formą zagregowaną, jak i zdysocjowaną. Wytwarzanie przeciwciał monoklonalnych nieczłowieczych, np. mysich lub szczurzych, można osiągnąć np. przez immunizację zwierzęcia z użyciem Ap. Patrz Harlow i Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (CSHP NY, 1988) (przytoczony tutaj jako pozycja literaturowa do wszystkich zastosowań). Taki immunogen można otrzymać ze źródła naturalnego przez syntezę peptydów lub ekspresję rekombinacyjną.
Humanizowane postacie mysich przeciwciał można tworzyć z zastosowaniem technik rekombinacji DNA łącząc regiony CDR nieczłowieczych przeciwciał z ze stałymi regionami ludzkimi. Patrz Queen i inni, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 10029-10033 (1989) i WO 90/07861 (przytoczone tutaj jako pozycje literaturowe do wszystkich zastosowań).
Ludzkie przeciwciała można uzyskać metodami ekspozycji fagowej. Patrz np. Dower i inni, WO 91/17271; McCafferty i inni, WO 92/01047. W tych metodach wytwarza się biblioteki fagowe, których członkowie eksponują różne przeciwciała na swoich powierzchniach zewnętrznych. Przeciwciała zazwyczaj są eksponowane jako fragmenty Fv lub Fab. Fagi eksponujące przeciwciała o wymaganej specyficzności wybiera się przez wzbogacenie powinowactwa do Ap lub jego fragmentów. Można także wytworzyć ludzkie przeciwciała przeciw Ap z niebędących ludźmi ssaków transgenicznych niosących transgeny kodujące co najmniej segment ludzkiego locus immunoglobulinowego oraz inaktywowane endogenne locus immunoglobulinowe. Patrz Lonberg i inni, WO93/12227 (1993); Kucherlapati, WO 91/10741 (1991) (z których każde jest przytoczone tutaj jako pozycja literaturowa do wszystkich zastosowań). Ludzkie przeciwciała można wybrać w doświadczeniach wiązania kompetycyjnego lub inaczej, jako mające tę samą specyficzność epitopową jak konkretne przeciwciało mysie. Takie przeciwciała szczególnie prawdopodobnie wykazują korzystne funkcjonalne właściwości przeciwciał mysich. Ludzkie przeciwciała poliklonalne także można otrzymać w postaci surowicy od pacjentów immunizowanych środkiem immunogennym. Ponadto takie przeciwciała poliklonalne można zagęścić drogą oczyszczania na zasadzie powinowactwa stosując Ap lub inny peptyd amyloidowy jako odczynnik z powinowactwem.
Ludzkie lub humanizowane przeciwciała można tak zaprojektować, żeby miały region stały IgG, IgD, IgA lub IgE oraz jakikolwiek izotyp, włącznie z IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4. Przeciwciała można eksprymować jako tetramery zawierające dwa łańcuchy lekkie i dwa ciężkie, jako oddzielne łańcuchy ciężkie, łańcuchy lekkie, jako Fab, Fab', F(ab')2 i Fv lub jako pojedyncze łańcuchy przeciwciał, w których domeny zmienne łańcuchów lekkich i ciężkich są połączone razem przez odstępnik.
Środki lecznicze zawarte w kompozycjach farmaceutycznych według wynalazku obejmują także komórki T wiążące peptyd Ap. Przykładowo komórki T mogą być aktywowane przeciw peptydowi Ap przez wyeksprymowanie ludzkiego genu MHC klasy I i ludzkiego genu p-2-mikroglobuliny z owadziej
PL 202 698 B1 linii komórkowej, gdzie pusty kompleks jest tworzony na powierzchni komórek i może związać peptyd Ae. Komórki T, które wystawiono na działanie linii komórkowej, stają się specyficznie zaktywowane przeciw peptydowi. Patrz Peterson i inni, US 5314813. Linie komórek owadzich eksprymujące antygen MHC klasy II można w podobny sposób stosować do aktywacji komórek T CD4.
Wytwarzanie leczniczych środków do leczenia innych chorób amyloidogennych określają te same lub analogiczne zasady. Ogólnie środki wymienione powyżej do zastosowań w leczeniu choroby Alzheimera można także stosować do leczenia choroby Alzheimera o wczesnym początku, związanej z zespołem Downa. W chorobie szalonych krów stosuje się peptyd prionowy, jego aktywne fragmenty lub analogi oraz przeciwciała przeciw peptydowi prionowemu zamiast peptydu Ae, jego aktywnych fragmentów lub analogów oraz przeciwciał przeciw peptydowi Ae stosowanych w leczeniu choroby Alzheimera. W leczeniu szpiczaka mnogiego stosuje się lekkie łańcuchy IgG oraz ich analogi i przeciwciała przeciw nim, itd. w przypadku innych chorób.
Niektóre środki wywołujące odpowiedź immunologiczną zawierają odpowiedni epitop do indukowania odpowiedzi immunologicznej przeciw złogom amyloidu, ale są zbyt małe, żeby mogły być immunogenne. W tej sytuacji immunogenny peptyd można połączyć z odpowiednim nośnikiem, aby ułatwić wywołanie odpowiedzi immunologicznej. Odpowiednie nośniki obejmują albuminy surowicze, hemocjaninę z mięczaka z rodzaju Fisurella (ang. keyhole limpet), cząsteczki immunoglobulin, tyroglobulinę, albuminę jaja kurzego, toksynę tężca lub toksynę z innych bakterii patogennych, takich jak błonica, E. coli, cholera lub H. pylori lub atenuowne pochodne toksyn. Inne nośniki do stymulacji lub wzmacniania odpowiedzi immunologicznej obejmują cytokiny, takie jak IL-1, peptydy IL-1 α i e, IL-2, YlNF, IL-10, GM-CSF oraz chemokiny, takie jak M1P1a i β oraz RANTES. Środki immunogenne można także połączyć z peptydami polepszającymi transport przez tkanki, co opisano w O'Mahony, WO 97/17613 i WO 97/17614.
Środki immunogenne można połączyć z nośnikami przez sieciowanie chemiczne. Techniki łączenia immunogenu z nośnikiem obejmują tworzenie disulfidowych mostków z użyciem N-sukcynymidylo-3-(2-pirydylotio)propionianu (SPDP) i 4-(N-maleimidometylo)cykloheksano-1-karboksylanu sukcymidylu (SMCC) (jeżeli w peptydzie nie ma grupy tiolowej, można ją wprowadzić przez dodanie cysteiny). Te reagenty tworzą wiązania disulfidowe między sobą i resztami cysteiny peptydu na jednym białku i wiązanie amidowe przez grupę ε-amidową lizyny lub inną wolną grupą aminową w innych aminokwasach. Wiele z takich środków tworzących mostki disulfidowe/amidowe opisano w Immun. Rev. 62, 185 (1982). Inne dwufunkcyjne środki sprzęgające tworzą raczej tioetery niż mostki disulfidowe. Wiele z tych środków tworzących tioetery jest dostępnych w handlu i obejmują one reaktywne estry kwasu 6-maleimidokapronowego, kwasu 2-bromooctowego, kwasu 2-jodooctowego i kwasu 4-(maleimidometylo)cykloheksano-1-karboksylowego. Grupy karboksylowe można zaktywować łącząc je z imidem kwasu bursztynowego lub solą sodową kwasu 1-hydroksylo-2-nitro-4-sulfonowego.
Peptydy immunogenne można także wyeksprymować jako białka fuzyjne z nośnikami. Peptyd immunogenny można połączyć z nośnikiem na N-końcu, C-końcu lub w środku. Ponadto w białku fuzyjnym mogą być obecne wielokrotne powtórzenia peptydu immunogennego.
Odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciw złogom amyloidowym można także wywołać podając kwasy nukleinowe kodujące peptyd Ae lub inne immunogeny peptydowe. Takim kwasem nukleinowym może być DNA lub RNA. Segment kwasu nukleinowego kodujący immunogen jest zazwyczaj połączony z elementami regulatorowymi, takimi jak promotor i wzmacniacz, które umożliwiają ekspresję segmentu DNA w przewidywanych komórkach docelowych pacjenta. Do ekspresji w komórkach krwi, co jest wymagane do wywołania odpowiedzi immunologicznej, do bezpośredniej ekspresji odpowiednie są elementy promotora i wzmacniacza z genów lekkich i ciężkich łańcuchów immunoglobulin lub promotor i wzmacniacz głównego produktu pośredniego CMV. Połączone elementy regulacyjne i sekwencje kodujące często wklonowuje się do wektora.
Dostępnych jest wiele wirusowych układów wektorowych obejmujących układy retrowirusowe (patrz np. Lawrie i Tumin, Cur. Opin. Genet. Develop. 3, 102-109 (1993)), wektory adenowirusowe (patrz np. Bett i inni, J. Virol. 67, 5911 (1993)), wektory wirusów adenosatelitarnych (patrz np. Zhou i inni, J. Exp. Med. 179, 1867 (1994)), wektory wirusowe z rodziny ospy obejmujące wirus krowianki, wirus ospy ptasiej, wirusowe wektory z rodzaju alfawirus, takie jak wyprowadzone z wirusów Sindibs i gorączki Semliki Forest (patrz np. Dubensky i inni, J. Virol. 70, 508-519 (1996)) oraz wirusy brodawek (Ohe i inni, Human Gene Therapy 6, 325-333 (1995); Woo i inni, WO 94/12692 i Xiao i Brandsma, Nucleic Acids. Res. 24, 2630-2622 1996)).
PL 202 698 B1
DNA kodujący immunogen lub zawierający go wektor można umieścić w liposomach. Odpowiednie lipidy i pokrewne analogi opisano w US 5208036, 5264618, 5279833 i 5283185. Wektory i DNA kodujący immunogen mogą być także zaadsorbowane lub związane z odpowiednimi nośnikami w postaci cząstek, takimi jak np. polimetakrylan metylu, polimleczany i poli(mleczano-koglikolidy), patrz np. McGee i inni, J. Micro Encap. (1996).
Wektory do terapii genowej lub nagi DNA można dostarczyć in vivo podając konkretnemu pacjentowi, zazwyczaj ogólnoustrojowo (np. dożylnie, śródotrzewnowo, donosowo, dożołądkowo, śródskórnie, domięśniowo, podskórnie lub przez wlew wewnątrzczaszkowy) albo miejscowo (patrz np. US 5399346). DNA można także podawać za pomocą działa genowego. Patrz Xiao i Brandsma, supra. DNA kodujący immunogen osadza się na powierzchni mikroskopijnych metalowych kulek. Mikropociski są przyspieszane przez falę szokową lub rozprężany hel i przenikają do tkanek na głębokość kilku warstw komórek. Odpowiednie jest np. urządzenie The Accel™ Gene Delivery Device wytwarzane przez Agacetus, Inc. Middleton WI. Ponadto nagi DNA może przejść przez skórę do krwi, po prostu w wyniku naniesienia DNA na skórę podrażnioną chemicznie lub mechanicznie (patrz, WO 95/05853).
W innej odmianie wektory kodujące immunogeny można dostarczyć do komórek ex vivo, takich jak komórki eksplantowane od pojedynczego pacjenta (np. limfocyty, aspirat szpiku kostnego, biopsja tkankowa) albo uniwersalne donorowe hematopoetyczne komórki macierzyste, a następnie reimplantować te komórki pacjentowi, zazwyczaj po selekcji pod względem komórek, które mają włączony wektor.
Pacjenci, których można leczyć, stanowią osoby z ryzykiem choroby, ale u których nie wystąpiły objawy, a także pacjenci, u których wystąpiły objawy. Jeśli chodzi o chorobę Alzheimera, praktycznie u każdego występuje ryzyko choroby Alzheimera jeżeli on lub ona żyją dostatecznie długo. Zatem niniejsze sposoby można stosować profilaktycznie do ogólnej populacji, bez określania ryzyka u danego pacjenta. Niniejsze sposoby są szczególnie użyteczne w przypadku pacjentów ze znanym genetycznym ryzykiem choroby Alzheimera. Pacjenci tacy obejmują osoby mające krewnych, u których wystąpiła ta choroba, a także osoby u których ryzyko określa się analizując znaczniki genetyczne i biochemiczne. Znaczniki genetyczne ryzyka choroby Alzheimera obejmują mutacje genu APP, w szczególności mutacje w pozycji 717 oraz pozycjach 670 i 671 nazywane odpowiednio mutacjami Hardy'ego i Swedish (patrz Hardy, TINS, supra). Innymi znacznikami ryzyka są mutacje genów preseniliny, PS1 i PS2 oraz ApoE4, rodzinna historia AD, hipercholesterolemia lub miażdżyca tętnic. Osoby obecnie cierpiące na chorobę Alzheimera można rozpoznać po charakterystycznym otępieniu, a także po obecności opisanych wyżej czynników ryzyka. Ponadto dostępnych jest wiele testów diagnostycznych do identyfikacji osób z AD. Obejmują one pomiary poziomów CSF τ i Ae42. Podniesione poziomy τ i obniżone poziomy Ae42 wskazują na obecność AD. Pacjentów z chorobą Alzheimera można także zdiagnozować pod względem kryteriów MMSE i ADRDA, co opisano niżej w części z przykładami.
U pacjentów, u których nie występują objawy, leczenie można rozpocząć w dowolnym wieku (np. 10, 20, 30). Jednakże zazwyczaj nie jest konieczne rozpoczynanie leczenia zanim pacjent osiągnie 40, 50, 60 lub 70 rok życia. Leczenie zazwyczaj obejmuje podawanie wielu dawek w pewnym okresie czasu. Leczenie można monitorować określając odpowiedzi przeciwciał lub aktywowanych komórek T lub B na środek leczniczy (np. peptyd Ae) w czasie. Jeżeli odpowiedź słabnie, wskazana jest wzmocniona dawka. W przypadku pacjentów z potencjalnym zespołem Downa leczenie można rozpocząć przed urodzeniem podając środek leczniczy matce, lub wkrótce po urodzeniu.
W zastosowaniach profilaktycznych środki farmaceutyczne lub leki podaje się pacjentowi, podatnemu na konkretną chorobę lub z ryzykiem konkretnej choroby, w ilości wystarczającej do wyeliminowania lub zmniejszenia ryzyka lub opóźnienia pojawienia się choroby. W zastosowaniach leczniczych środki farmaceutyczne lub leki podaje się pacjentowi, u którego podejrzewa się taką chorobę lub u którego już wystąpiła taka choroba, w ilości wystarczającej do wyleczenia lub co najmniej częściowego zahamowania objawów choroby i jej powikłań. Ilość odpowiednią do osiągnięcia tego definiuje się jako leczniczo lub profilaktycznie skuteczną dawkę. Zarówno w trybie leczenia, jak i profilaktyki środki zazwyczaj podaje się w kilku dawkach do uzyskania wystarczającej odpowiedzi immunologicznej. Zazwyczaj odpowiedź immunologiczną monitoruje się i kolejne dawki podaje się gdy odpowiedź immunologiczna zaczyna zanikać.
Skuteczne dawki środków według wynalazku do leczenia opisanych powyżej stanów różnią się zależnie od wielu różnych czynników, włącznie z sposobem podawania, docelowym miejscem, stanem fizjologicznym pacjenta, czy pacjent jest człowiekiem czy zwierzęciem, innymi przyjmowanymi lekami, oraz od tego czy leczenie jest profilaktyczne czy terapeutyczne. Zazwyczaj pacjent jest człowiekiem, ale w niektórych chorobach, takich jak choroba szalonych krów, pacjent może być ssakiem nie będą12
PL 202 698 B1 cym człowiekiem, takim jak bydło. Dawki lecznicze powinno się mianować w celu zoptymalizowania bezpieczeństwa i skuteczności. Ilość immunogenu zależy od tego, czy również podaje się adiuwant, przy czym przy braku adiuwanta wymagane są wyższe dawki. Ilość immunogenu do podawania czasami wynosi od 1 do 500 μg na pacjenta, a częściej 5 - 500 μg na zastrzyk przy podawaniu ludziom. Czasami stosuje się wyższą dawkę 1 - 2 mg na zastrzyk. Zazwyczaj przy podawaniu ludziom stosuje się 10, 20, 50 lub 100 μg na zastrzyk. Okresy wstrzykiwania mogą się znacząco różnić od jednego raza dziennie do jednego raza na rok, oraz do jednego raza na dekadę. W dowolnym danym dniu, w którym podaje się dawkę immunogenu, dawka jest większa niż 1 μg/pacjenta, a zazwyczaj większa niż 10 μg/ml gdy także podaje się adiuwant oraz większa niż 10 μg/pacjenta, a zazwyczaj 100 μg/pacjenta w przypadku braku adiuwanta. Typowy tryb leczenia obejmuje immunizację, a po niej zastrzyki dawek przypominających z przerwami 6-tygodniowymi. Inny tryb leczenia obejmuje immunizację, a następnie zastrzyki dawek przypominających po 1, 2 i 12 miesiącach. Inny tryb leczenia obejmuje zastrzyki co 2 miesiące przez całe życie. Ponadto zastrzyki przypominające mogą być nieregularne, wykonywane w oparciu o monitorowanie odpowiedzi immunologicznej. Dla biernej immunizacji przeciwciałami dawki wynoszą od 0,0001 do 100 mg/kg, a częściej 0,01 do 5 mg/kg wagi ciała biorcy. Dawki kwasów nukleinowych kodujących immunogeny wynoszą od 10 ng do 1 g, 100 ng do 100 mg, 1 μg do 10 mg lub 30300 μg DNA na pacjenta. Dawki dla infekcyjnych wektorów wirusowych wynoszą od 10 - 109 lub więcej wirionów na dawkę.
Środki do wywoływania odpowiedzi immunologicznej można podawać pozajelitowo, miejscowo, dożylnie, doustnie, podskórnie, dootrzewnowo, donosowo lub domięśniowo przy leczeniu profilaktycznym i/lub terapeutycznym. Najczęstszą drogą podawania jest droga podskórna, ale inne mogą być równie skuteczne. Kolejną najczęstszą drogą są zastrzyki domięśniowe. Ten typ zastrzyków najczęściej wykonuje się w mięśnie ręki lub nogi. Także skuteczne w wytwarzaniu odpowiedzi immunologicznej są zastrzyki dożylne, a także zastrzyki śródotrzewnowe, dotętnicze, wewnątrzczaszkowe lub śródskórne. W niektórych sposobach środki wstrzykuje się bezpośrednio do konkretnej tkanki gdzie nagromadziły się złogi.
Ponadto środki według wynalazku można podawać w połączeniu z innymi środkami, które są co najmniej częściowo skuteczne w leczeniu choroby amyloidogennej. W przypadku choroby Alzheimera i zespołu Downa, gdzie złogi amyloidowe występują w mózgu, środki według wynalazku można podawać w połączeniu z innymi środkami polepszającymi przenikanie środków według wynalazku przez barierę krew-mózg.
Środki immunogenne według wynalazku, takie jak peptydy, czasami podaje się w połączeniu z adiuwantem. Można stosować wiele różnych adiuwantów w połączeniu z peptydem, takim jak Ap, aby wywołać odpowiedź immunologiczną. Korzystne adiuwanty wzmacniają wewnętrzną odpowiedź na immunogen nie powodując konformacyjnych zmian immunogenu, które wpływałyby na jakościową postać odpowiedzi. Korzystne adiuwanty obejmują ałun, de-O-acylowany monfosforylowany lipid A (MPL) (patrz GB 2220211). QS21 jest glikozydem triterpenu lub saponiną wyizolowaną z kory drzew Quillaja Saponaria Molina rosnącego w Południowej Ameryce (patrz Kensil i inni, w Vaccine Design: The Subunit and Adjuwant Approach (red. Powell i Newman, Plenum Press, NY, 1995); opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5057540) . Inne adiuwanty to emulsje olej w wodzie (np. skwalenu lub oleju arachidowego), ewentualnie w połączeniu z immunostymulantami, takimi jak monofosforylowany lipid A (patrz Stoute i inni, N. Engl. Med. 336, 86-91 (1997)). Innym adiuwantem jest CpG (Bioworld Today, 15 listopada 1998 r.). Ponadto Ap może być sprzężony z adiuwantem. Przykładowo lipopeptydową wersję Ap można otrzymać przez sprzęganie kwasu palmitynowego lub innych lipidów bezpośrednio z N-końcem Ap, jak opisano dla szczepionek antygenem zapalenia wątroby typu B (Livingston, J. Immunol. 159, 1383-1392 (1997)). Jednakże takie sprzęganie nie powinno zasadniczo zmienić konformacji Ap tak, że wpłynęłoby to także na Nature odpowiedzi na niego. Adiuwanty można podawać jako składnik środka leczniczego razem ze środkiem czynnym lub osobno, przed podaniem, równocześnie lub po podaniu środka leczniczego.
Korzystną klasą adiuwantów są sole glinu (ałun), takie jak wodorotlenek glinu, fosforan glinu, siarczan glinu. Takie adiuwanty można stosować z innymi konkretnymi środkami immunostymulującymi albo bez innych konkretnych środków immunostymulujących, takich jak MPL lub 3-DMP, QS21, polimeryczne lub monomeryczne aminokwasy, takie jak polikwas glutaminowy lub polilizyna. Inną klasą adiuwantów są preparaty typu emulsji olej w wodzie. Takie adiuwanty można stosować z innymi konkretnymi środkami immunostymulującymi albo bez innych konkretnych środków immunostymulujących, takich jak peptydy muramylowe (np. N-acetylomuramylo-L-treonylo-D-izogluPL 202 698 B1 tamina (thr-MDP), N-acetylonormuramylo-L-alanylo-D-izoglutamina (nor-MDP), N-acetylomuramylo-L-alanylo-D-izoglutaminylo-L-alanino-2-(1'-2'dipalmitoilo-sn-glicero-3-hydroksyfosforyloksy)etyloamina (MTP-PE), N-acetyloglukozaminylo-N-acetylomuramylo-L-Al-D-izoglu-L-Ala-dipalmitoksypropyloamid (DTP-DPP) teramid™) lub inne składniki ścian komórek bakteryjnych. Emulsje olej w wodzie obejmują (a) MF59 (WO 90/14837), zawierający 5% skwalenu, 0,5% Tween 80 i 0,5% Span 85 (ewentualnie zawierające różne ilości MTP-PE) w postaci submikronowych cząstek utworzonych z użyciem mikrofluidyzatora, takiego jak mikrofluidyzator Model 110Y (Microfluidics, Newton MA), (b) SAF, zawierający 10% skwalenu, 0,4% Tween 80, 5% polimeru blokowego Pluronic L121 i thr-MDP, wytworzony w postaci submikronowej emulsji drogą mikrofluidyzacji lub zworteksowane w celu wytworzenia emulsji cząstek o większym rozmiarze oraz (c) układ adiuwantowy Ribi™ (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT) zawierający 2% skwalenu, 0,2% Tween 80 i jeden lub większą liczbę składników ścian komórek bakteryjnych z grupy obejmującej monofosforylolipid A (MPL), dimikolinian trehalozy (TDM) i szkielet ściany komórkowej (CWS), korzystnie MPL+CWS (Detox™). Inną klasę korzystnych adiuwantów stanowią adiuwanty saponinowe, takie jak Stimulon™ (qs21, Aquila, Worcester, MA) lub wytworzone z niego cząstki, takie jak ISCOM (kompleksy immunostymulujące) i ISCOMATRIX. Inne adiuwanty obejmują kompletny adiuwant Freunda (CFA) i niekompletny adiuwant Freunda (IFA). Inne adiuwanty obejmują cytokiny, takie jak interleukiny (IL-1, IL-2 i IL-12), czynnik pobudzający tworzenie kolonii makrofagów (M-CSF), czynnik martwicy nowotworu (TNF).
Adiuwant można podawać z immunogenem w jednym preparacie przed podaniem, równocześnie z podaniem albo po podaniu immunogenu. Immunogen i adiuwant mogą być zapakowane i dostarczane w tej samej fiolce albo mogą być umieszczone w oddzielnych fiolkach i mieszane przed użyciem. Immunogen i adiuwant zazwyczaj pakuje się z etykietką wskazującą zamierzone zastosowanie lecznicze. Jeżeli immunogen i adiuwant są zapakowane osobno, zazwyczaj opakowanie zawiera instrukcje odnośnie mieszania przed użyciem. Wybór adiuwanta i/lub nośnika zależy od trwałości szczepionki zawierającej adiuwant, drogi podawania, harmonogramu dawkowania, skuteczności adiuwanta u szczepionych gatunków oraz u ludzi. Farmaceutycznie dopuszczalnym adiuwantem jest taki, który został dopuszczony lub jest dopuszczalny do podawania ludziom przez stosowne organy ustawodawcze. Na przykład kompletny adiuwant Freunda nie jest odpowiedni do podawania ludziom. Ałun, MPL i QS21 są korzystne. Ewentualnie można równocześnie stosować jeden lub większą liczbę adiuwantów. Korzystne połączenia obejmują ałun z MPL, ałun z QS21, MPL z QS21 oraz ałun, QS21 i MPL razem. Ponadto można stosować niekompletny adiuwant Freunda (Chung i inni, Advanced Drug Delivery Reviews 32, 173-186 (1998)), ewentualnie w połączeniu z jakimkolwiek składnikiem wybranym spośród ałunu, QS21 i MPL i wszystkich ich kombinacji.
Środki według wynalazku często podaje się jako środki farmaceutyczne zawierające środek leczniczo czynny i różne farmaceutycznie dopuszczalne składniki. Patrz Remington's Pharmaceutical Science (wyd. 15, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1980). Korzystna postać zależy od zamierzonej drogi podawania oraz zastosowania leczniczego. Środki mogą także zawierać, zależnie od wymaganego preparatu, farmaceutycznie dopuszczalne, nietoksyczne nośniki lub rozcieńczalniki, które określa się jako nośniki powszechnie stosowane do formułowania środków farmaceutycznych do podawania ludziom i zwierzętom. Rozcieńczalnik wybiera się tak, żeby nie wpływał na aktywność biologiczną danego środka. Przykładami takich rozcieńczalników są woda destylowana, fizjologiczna sól buforowana fosforanem, płyny Ringera, roztwór dekstrozy oraz płyn Hanka. Ponadto środek farmaceutyczny lub preparat może także zawierać inne nośniki, adiuwanty lub nietoksyczne, nielecznicze, nieimmunogenne stabilizatory itp. Jednakże niektóre odczynniki odpowiednie do podawania zwierzętom, takie jak kompletny adiuwant Freunda, zazwyczaj nie wchodzą w skład środków dla ludzi.
Środki farmaceutyczne mogą także zawierać duże, wolno metabolizowane makrocząsteczki, takie jak białka, polisacharydy, polikwasy mlekowe, polikwasy glikolowe i kopolimery (takie jak funkcjonalizowana lateksem sefaroza, agaroza, celuloza itp.), polimeryczne aminokwasy, kopolimery aminokwasów i agregaty lipidów (takie jak kropelki oleju lub liposomy). Nośniki te mogą ponadto działać jako środki immunostymulujące (to jest adiuwanty).
Do podawania pozajelitowego środki według wynalazku można podawać jako wstrzykiwane dawki roztworów lub zawiesin substancji w fizjologicznie dopuszczalnym rozcieńczalniku z farmaceutycznym nośnikiem, którym może być jałowa ciecz, taka jak woda, oleje, roztwór soli, gliceryna lub etanol. Ponadto w preparatach mogą być obecne substancje pomocnicze, takie jak środki zwilżające lub emulgujące, powierzchniowo czynne, substancje buforujące pH itp. Innymi składnikami środków farmaceutycznych są środki pochodzące z ropy naftowej, zwierzęce, roślinne lub syntetyczne, np. olej
PL 202 698 B1 arachidowy, olej sojowy i olej mineralny. Ogólnie glikole, takie jak glikol propylenowy lub glikol polietylenowy, są korzystnymi ciekłymi nośnikami, szczególnie do roztworów do wstrzykiwania.
Zazwyczaj środki wytwarza się jako preparaty do wstrzykiwania, jako płynne roztwory lub zawiesiny; można także wytwarzać stałe postacie odpowiednie do rozpuszczania lub dyspergowania w ciekłych nośnikach przed iniekcją. Preparat może także być zemulgowany lub kapsułkowany w liposomach lub mikrocząstkach, takich jak polilaktyd, poliglikolid lub kopolimer, w celu wzmocnienia działania adiuwanta, co opisano powyżej (patrz Langer, Science 249, 1527 (1990) i Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28, 97-119 (1997). Środki według wynalazku można także podawać jako zastrzyki typu depot lub preparaty w postaci wszczepów, które można wytwarzać w taki sposób, aby umożliwić przedłużone lub pulsacyjne uwalnianie składnika czynnego.
Dodatkowe preparaty odpowiednie do innych sposobów podawania obejmują preparaty doustne, donosowe i dopłucne, czopki i preparaty przezskórne.
W przypadku czopków, substancje wiążące i nośniki obejmują np. glikole polialkilenowe lub triglicerydy; takie czopki można wytwarzać z mieszanin zawierających składnik czynny w ilości od 0,5% do 10%, korzystnie 1%-2%. Doustne preparaty zawierają zaróbki, takie jak mannitol, laktozę, skrobię, stearynian magnezu, sacharynian sodu, celulozę i węglan magnezu jakości farmaceutycznej. Środki te mają postać roztworów, zawiesin, tabletek, pigułek, kapsułek, preparatów o przedłużonym uwalnianiu lub proszków i zawierają 10%-95% składnika czynnego, korzystnie 25%-70%.
Podawanie miejscowe można osiągnąć drogą przezskórną lub śródskórną. Podawaniu miejscowemu może sprzyjać równoczesne podawanie środka z toksyną cholery lub jej detoksykowanymi pochodnymi lub podjednostkami, albo z podobnymi toksynami bakteryjnymi (patrz Glenn i inni, Nature 391, 851 (1998)). Równoczesne podawanie można osiągnąć stosując składniki w postaci mieszaniny lub połączone cząsteczki uzyskane przez chemiczne sieciowanie lub ekspresję białka fuzyjnego.
Alternatywnie dostarczanie przezskórne można osiągnąć stosując plastry na skórę lub transferosomy (Paul i inni, Eur. J. Immunol. 25, 3521-24 (1995); Cevc i inni, Biochem. Biophys. Acta 1368, 201-15 (1998)).
Możliwe jest wykrywanie odpowiedzi immunologicznej przeciw peptydowi Ae u pacjenta cierpiącego na lub podatnego na chorobę Alzheimera. Sposoby takie są szczególnie przydatne do monitorowania przebiegu leczenia stosowanego u pacjenta. Sposoby można stosować do monitorowania zarówno leczenia terapeutycznego u pacjentów, u których wystąpiły objawy, jak i leczenia profilaktycznego u pacjentów, u których nie wystąpiły objawy.
Możliwe jest ustalanie wartości podstawowej odpowiedzi immunologicznej u pacjenta przed podaniem dawki środka i porównanie jej z wartością odpowiedzi immunologicznej po leczeniu. Znaczący wzrost (to jest większy niż typowy margines błędu doświadczalnego w powtarzanych pomiarach tej samej próbki, wyrażony jako jedno odchylenie standardowe od średniej z tych pomiarów) wartości odpowiedzi immunologicznej sygnalizuje pozytywny wynik leczenia (to jest, że podanie środka wywołało lub wzmocniło odpowiedź immunologiczną). Jeżeli wartość odpowiedzi immunologicznej nie zmienia się znacząco lub obniża się, wskazuje to na negatywny wynik leczenia. Ogólnie u pacjentów w początkowym okresie leczenia środkiem oczekuje się wzrostu odpowiedzi immunologicznej po kolejno następujących dawkach, która ewentualnie może osiągnąć plateau. Ogólnie podawanie środka kontynuuje się gdy odpowiedź immunologiczna wzrasta. Osiągnięcie plateau wskazuje, że leczenia można dalej nie kontynuować lub zmniejszyć dawkę albo częstość jej podawania.
Możliwe jest też ustalenie kontrolnej wartości (to jest średniej z odchyleniem standardowym) odpowiedzi immunologicznej dla populacji kontrolnej. Zazwyczaj osoby w populacji kontrolnej nie były wcześniej poddawane leczeniu. Wartości odpowiedzi immunologicznej zmierzone u pacjenta po podaniu środka leczniczego porównuje się z wartością kontrolną. Znaczący wzrost w porównaniu z wartością kontrolną (to jest większy niż jedno odchylenie standardowe od średniej z tych pomiarów) sygnalizuje pozytywny wynik leczenia. Brak znaczącego wzrostu lub obniżenie sygnalizuje negatywny wynik leczenia. Ogólnie podawanie środka kontynuuje się do czasu gdy odpowiedź immunologiczna zacznie wzrastać w odniesieniu do wartości kontrolnej. Tak jak poprzednio, osiągnięcie plateau w odniesieniu do wartości kontrolnych wskazuje, że leczenia można dalej nie kontynuować lub zmniejszyć dawkę albo częstość jej podawania.
Wartość kontrolną odpowiedzi immunologicznej (np. średnią i odchylenie standardowe) można też ustalać z kontrolnej populacji osobników, którzy przeszli leczenie środkiem leczniczym i których odpowiedzi immunologiczne osiągnęły plateau w odpowiedzi na leczenie. Wartości odpowiedzi immunologicznej zmierzone u pacjenta porównuje się z wartością kontrolną. Jeżeli zmierzony u pacjenta
PL 202 698 B1 poziom nie różni się znacząco (np. więcej niż jedno odchylenie standardowe) od wartości kontrolnej leczenia można dalej nie kontynuować. Jeżeli poziom u pacjenta jest znacząco niższy od wartości kontrolnej, wskazane jest dalsze podawanie środka. Jeżeli poziom u pacjenta utrzymuje się poniżej wartości kontrolnej wskazana może być zmiana trybu leczenia, np. zastosowanie innego adiuwanta.
Pacjenta, który obecnie nie jest leczony, ale który przeszedł okres leczenia, można też monitorować pod względem odpowiedzi immunologicznej w celu określenia, czy wymagane jest wznowienie leczenia. Wartość odpowiedzi immunologicznej zmierzoną u pacjenta można porównać z wartością odpowiedzi immunologicznej wcześniej osiągniętej u pacjenta podczas okresu leczenia. Znaczące obniżenie w porównaniu z poprzednimi pomiarami (to jest większe niż typowy margines błędu w powtórzonych pomiarach tej samej próbki) wskazuje, że leczenie należy wznowić. Ponadto wartość zmierzoną u pacjenta można porównać z wartością kontrolną (średnia plus odchylenie standardowe) oznaczoną dla populacji pacjentów po przejściu okresu leczenia. Ponadto wartości zmierzone u pacjenta można porównać z wartością kontrolną populacji pacjentów leczonych profilaktycznie, u których nie wystąpiły objawy choroby lub leczonych terapeutycznie, u których wystąpiła poprawa cech charakterystycznych choroby. We wszystkich tych przypadkach znaczące obniżenie w odniesieniu do poziomów kontrolnych (to jest większe niż odchylenie standardowe) wskazuje, że leczenie pacjenta powinno być wznowione.
Tkanką pobieraną od pacjenta do analizy jest zazwyczaj krew, osocze, surowica, śluz lub płyn mózgowo-rdzeniowy. Próbkę analizuje się pod względem wskaźników odpowiedzi immunologicznej na jakąkolwiek postać peptydu Ap, zazwyczaj Ap42. Odpowiedź immunologiczną można określić na podstawie obecności, np. przeciwciał lub komórek T, które specyficznie wiążą peptyd Ap. Metody ELISA stosowane do wykrywania przeciwciał specyficznie wiążących peptyd Ap opisano w części z przykładami. Sposoby wykrywania reaktywnych komórek T opisano powyżej (patrz Definicje).
Można sporządzać zestawy diagnostyczne do realizacji metod diagnostycznych opisanych powyżej. Zazwyczaj takie zestawy zawierają środek specyficznie wiążący przeciwciała przeciw Ap lub reagujący z komórkami T specyficznymi dla Ap. Zestaw może także zawierać znacznik. Do wykrywania przeciwciał przeciw Ap znacznik jest zazwyczaj w postaci znakowanych przeciwciał przeciwidiotypowych. Do wykrywania przeciwciał można dostarczyć środek wcześniej związany z fazą stałą, taką jak studzienki na płytce do mikromianowania. Do wykrywania reaktywnych komórek T znacznik można dostarczyć jako 3H-tymidynę w celu zmierzenia odpowiedzi proliferacyjnej. Zestawy także zazwyczaj zawierają etykiety z wskazówkami jak zastosować zestaw. Etykieta może także zawierać wykres lub inną formę korelującą poziomy zmierzonego znacznika z przeciwciałami przeciw Ap lub komórek T reaktywnych z Ap. Określenie etykieta odnosi się do jakiegokolwiek pisanego lub nagranego materiału dołączonego do zestawu lub w inny sposób towarzyszącego zestawowi, w dowolnym momencie podczas jego wytwarzania, transportu, sprzedaży i stosowania. Na przykład określenie etykieta obejmuje ulotki reklamujące oraz broszury, materiały opakowaniowe, instrukcje, kasety audio i wideo, dyskietki komputerowe, a także napisy wydrukowane bezpośrednio na zestawach, towarzyszącego zestawowi, w dowolnym momencie podczas jego wytwarzania, transportu, sprzedaży i stosowania. Na przykład określenie etykieta obejmuje ulotki reklamujące oraz broszury, materiały opakowaniowe, instrukcje, kasety audio i wideo, dyskietki komputerowe, a także napisy wydrukowane bezpośrednio na zestawach.
P r z y k ł a d y
I. Skuteczność profilaktyczna Ap przeciw AD
W przykładach tych opisano podawanie peptydu Ap42 myszom transgenicznym nadeksprymujacym APP z mutacją w pozycji 717 (APP717V^F) predysponującą je do rozwoju neuropatologii typu Alzheimera. Wytwarzanie i charakterystykę tych myszy (myszy PDAPP) opisano w Games i inni, Nature, supra. U zwierząt tych, w postaci heterozygot, zaczyna odkładać się Ap poczynając od wieku 6 miesięcy. W wieku 15 miesięcy wykazują one poziomy złogów Ap porównywalne z obserwowanymi w chorobie Alzheimera. Myszom PDAPP wstrzyknięto zagregowany Ap42 (zagregowany Ap42) lub sól buforowaną fosforanem. Zagregowany Ap42 wybrano ze względu na jego zdolność indukowania przeciwciał na wielokrotne epitopy Ap.
A. Metody
1. Źródło myszy
Trzydzieści heterogenicznych samic myszy PDAPP losowo podzielono na następujące grupy: 10 myszy, którym wstrzykiwano zagregowany Ap42 (jedna zdechła w transporcie), 5 myszy, którym
PL 202 698 B1 wstrzykiwano PBS/adiuwant lub PBS oraz 10 myszy kontrolnych, którym nie podawano zastrzyków. Pięciu myszom wstrzyknięto osoczowe białko amyloidu (SAP).
2. Przygotowanie immunogenów
Przygotowanie zagregowanego Ae42: 2 mg Ae42 (US Peptides Inc, partia K-42-12) rozpuszczono w 0,9 ml wody i doprowadzono do 1 ml przez dodanie 0,1 ml 10xPBS. Następnie mieszaninę zworteksowano i inkubowano przez noc w 37°C w warunkach, w których peptyd ulega agregacji. Jakikolwiek nie używany Ae przechowywano w postaci suchego liofilizowanego proszku w -20°C do czasu następnego zastrzyku.
3. Przygotowanie zastrzyków
100 μg zagregowanego Ae42 w PBS na mysz zemulgowano w stosunku 1:1 z kompletnym adiuwantem Freunda (CFA) w końcowej objętości 400 μl emulsji do pierwszej immunizacji, a następnie podano przypominającą dawkę tej samej ilości immunogenu w niekompletnym adiuwancie Freunda (IFA) po 2 tygodniach. Dwie dodatkowe dawki w IFA podano z przerwami miesięcznymi. Kolejne immunizację wykonywano z miesięcznymi przerwami w 500 μl PBS. Zastrzyki wykonywano śródotrzewnowo (i.p.).
Zastrzyki PBS podawano w takim samym porządku i myszom wstrzyknięto mieszaninę 1:1 PBS/adiuwant w objętości 400 μl na mysz lub 500 μl PBS na mysz. Zastrzyki z SAP podobnie podawano w tym samym porządku stosując dawki 100 μq na zastrzyk.
4. Mianowanie krwi mysiej, preparowanie tkanek i immunohistochemia
Powyższe metody opisano poniżej w Ogólnych Materiałach i Metodach.
B. Wyniki
Myszom PDAPP podano zagregowany Ae42 (zagregowany Ae42), peptydy SAP lub sól buforowaną fosforanem. Jedną grupę myszy traktowano jako kontrolę pozytywną i nie podawano im zastrzyków. Miana z myszy z grupy zagregowanego Ae42 monitorowano każdego miesiąca od czwartej dawki przypominającej aż myszy osiągnęły rok. Myszy uśmiercono w wieku 13 miesięcy. We wszystkich badanych punktach czasowych 8 z 9 myszy z grupy zagregowanego Ae42 rozwinęło wysokie miano przeciwciał, które pozostało wysokie przez serię zastrzyków (miana wyższe niż 1/10000). Dziewiąta mysz miała niskie, ale mierzalne miano około 1/1000 (fig. 1, tabela 1). Myszy, którym wstrzyknięto SAPP miały miana 1:1000 do 1:30000 wobec tego immunogenu, przy czym tylko u jednej myszy miano przekraczało 1:100000.
U myszy, którym podawano PBS zmierzono miana przeciw zagregowanemu Ae42 w wieku 6, 10 i 12 miesięcy. Miana przeciw zagregowanemu Ae42 myszy PBS w rozcieńczeniach 1/100 przekroczyły tylko 4-krotnie wartość podstawową w jednym punkcie danych, a w pozostałych punktach danych wynosiły mniej niż 4-krotna wartość podstawowa (tabela 1). Odpowiedź specyficzna dla SAP była nieistotna dla tych punktów czasowych i wszystkie miana były mniejsze niż 300.
Siedem z dziewięciu myszy z grupy zagregowanego Ae1-42 nie miało wykrywalnego amyloidu w mózgach. Natomiast tkanka mózgowa z myszy w grupach SAP i PBS zawierała wiele 3D6dodatnich złogów amyloidowych w hipokampie, a także korach czołowej i obręczowej. Wzór utworzonych złogów był podobny jak u nieleczonych myszy kontrolnych, z charakterystycznym występowaniem wrażliwych na uszkodzenie podregionów, takich jak zewnętrzna cząsteczkowa warstwa hipokampowego zakrętu zębatego. Jedna z myszy z grupy, której podawano Ae1-42 miała znacznie zmniejszone obciążenie amyloidem, graniczącym z hipokampem. Zidentyfikowano odizolowaną płytkę u innej myszy leczonej Ae1-42.
Ilościowa analiza obrazu dla obciążenia amyloidem hipokampu wykazała znaczne zmniejszenie osiągnięte u zwierząt leczonych AN1792 (fig. 2). Wartości mediany obciążenia amyloidem dla grupy PBS (2,22%) i dla nieleczonej grupy kontrolnej (2,65%) były znacznie większe niż dla myszy immunizowanych AN1792 (0,00%, p=0,0005). Natomiast wartość mediany dla grupy immunizowanej peptydami SAP (SAPP) wynosiła 5,74%. Tkanka mózgowa nie leczonych myszy kontrolnych zawierała liczne złogi Ae, ujawnione za pomocą specyficznych dla Ae przeciwciał monoklonalnych (mAb) 3D6, w hipokampie, a także w korze poza-modzelowatej. Podobny wzór złogów amyloidowych obserwowano także u myszy immunizowanych SAPP lub PBS (fig. 2). Ponadto we wszystkich trzech ostatnich grupach obserwowano znaczący udział wrażliwych na uszkodzenie podregionów mózgu klasycznie obserwowanych w AD, takich jak zewnętrzna cząsteczkowa warstwa hipokampowego zakrętu zębatego.
Mózgi, które nie zawierały złogów Ae, były także pozbawione płytek neurytycznych zazwyczaj widocznych u myszy PDAPP z ludzkim przeciwciałem przeciw APP 8E5. Wszystkie mózgi z pozostałych grup (którym wstrzykiwano SAP, PBS lub którym nie podawano zastrzyków) zawierały wiele płyPL 202 698 B1 tek neurytycznych typowych dla nieleczonych myszy PDAPP. Niewielka liczba płytek neurytycznych była obecna u jednej z myszy leczonych AN1792 oraz pojedyncze skupisko dystroficznych neurytów znaleziono u drugiej myszy leczonej AN1792. Analiza obrazu dla hipokampu, przedstawiona na fig. 3, wykazała faktyczną eliminację dystroficznych neurytów u myszy leczonych AN1792 (mediana 0,00%) w porównaniu z biorcami PBS (mediana 0,28%, p=0,0005).
Astrocytoza charakterystyczna dla towarzyszącego płytkom zapalenia także nie występowała w mózgach grupy, której podawano Ae1-42. Mózgi myszy z innych grup zawierały znaczną ilość zgrupowanych GFAP-dodatnich astrocytów typowych dla związanej z płytkami Ae glejozy. Część z reagujących z GFAP preparatów histologicznych wybarwiono przeciwnie Tioflawiną S w celu zlokalizowania złogów Ae. GFAP-dodatnie astrocyty były związane z płytkami Ae u myszy SAP, PBS oraz nieleczonych kontrolnych. Nie stwierdzono takiego związku u płytko-ujemnych myszy leczonych Ae1-42, podczas gdy minimalną glejozę związaną z płytkami obserwowano u jednej z myszy leczonych AN1792.
Analiza obrazu, przedstawiona na fig. 4 dla kory poza-modzelowatej, potwierdziła, że zmniejszenie astrocytozy było znaczące, z wartością mediany 1,56% dla myszy leczonych AN1792 wobec wartości mediany większych niż 6% dla grup immunizowanych peptydami SAP, PBS lub nieleczonymi (p=0,0017).
Dane z podzestawu myszy Ae1-42 i PBS wykazały brak związanej z płytkami MHC II immunoreaktywności u myszy Ae1-42, co zgadzało się z brakiem związanej z Ae odpowiedzi zapalnej.
Fragmenty mózgów myszy także poddano działaniu mAe specyficznych dla MAC-1, komórkowego białka powierzchniowego. MAC-1 (CD11b) jest członkiem rodziny integryn i występuje w postaci heterodimeru z CD18. Kompleks CD11b/CD18 występuje na monocytach, makrofagach, neutrofilach i komórkach NK (Mak i Simard). Komórka typu MAC-1-reaktywnego występująca w mózgu jest najprawdopodobniej mikroglejem, w oparciu o podobną morfologię fenotypową w MAC-1 immunoreaktywnych fragmentach. Związane z płytkami znakowanie MAC-1 było niższe w mózgach myszy leczonych AN1792 w porównaniu z kontrolną grupą PBS, przy czym obserwacja ta zgadzała się z brakiem związanej z Ae odpowiedzi zapalnej.
C. Wnioski
Brak płytek Ae i reaktywnych neuronalnych i glejowych zmian w mózgach myszy, którym podano Ae1-42 wskazują, że w ich mózgach amyloid nie odkładał się lub odkładała się jego minimalna ilość oraz, że nie wystąpiły konsekwencje patologiczne, takie jak glejoza i patologia neurytów. Myszy PDAPP leczone Ae1-42 wykazały zasadniczo taki sam brak patologii, co kontrolne myszy nietransgeniczne. Tak więc zastrzyki z Ae1-42 są bardzo skuteczne w zapobieganiu złogom lub w oczyszczeniu tkanki mózgowej z ludzkiej formy Ae oraz w eliminacji następujących później neuronalnych lub zapalnych zmian degeneracyjnych. Zatem podawanie peptydu Ae przynosi lecznicze korzyści w zapobieganiu AD.
II. Badania odpowiedzi na dawkę
Grupy 5-tygodniowych samic myszy Swiss Webster (N=6 na grupę) immunizowano dootrzewnowo 300, 100, 33, 3,7, 1,2, 0,4 lub 0,13 μg Ae przygotowanymi w CFA/IFA. Podano 3 dawki z dwutygodniowymi przerwami, a następnie czwartą dawkę miesiąc później. Pierwszą dawkę zemulgowano z CFA, a pozostałe dawki zemulgowano z IFA. Od zwierząt pobierano krew do pomiaru miana w 4-7 dni po każdej z immunizacji zaczynając po drugiej dawce. Od zwierząt z zestawu trzech grup, immunizowanych 11, 33 lub 300 μg antygenu, dodatkowo pobierano krew z około miesięcznymi przerwami przez 4 miesiące po czwartej immunizacji w celu monitorowania zaniku odpowiedzi przeciwciał w różnym zakresie dawek szczepionki. Zwierzętom tym wykonano piątą dodatkową immunizację w 7 miesięcy po rozpoczęciu badania. Zwierzęta uśmiercono tydzień później celem zmierzenia odpowiedzi przeciwciał na AN1792 i przeprowadzenia analizy toksykologicznej .
Przy dawkach od 300 do 3,7 μg obserwowano obniżającą się odpowiedź na dawkę, a przy dwóch niższych dawkach nie obserwowano odpowiedzi. Średnie wartości miana przeciwciał wynosiły około 1:1000 po trzech dawkach i około 1:10000 po czterech dawkach 11-300 μg antygenu (patrz fig. 5).
Miana przeciwciał znacznie wzrastały po trzeciej immunizacji dla wszystkich grup, z wyjątkiem grupy najniższej dawki, ze wzrostem GMT w zakresie od 5 do 25 razy. Niskie odpowiedzi przeciwciał wykryto wtedy nawet u biorców dawek 0,4 5 μg. Grupy 1,2 i 3,7 μg miały porównywalne miana z GMT około 1000, a cztery najwyższe dawki zgrupowały się razem z GMT około 25000, z wyjątkiem grupy dawki 33 μg z niższą GMT wynoszącą 3000. Po czwartej immunizacji wzrost miana był bardziej umiarkowany dla wszystkich grup. Zaobserwowano wyraźną odpowiedź na dawkę w grupach niższych dawek antygenu od 0,14 μg do 11 μg, wynoszącą od nie wykrywalnych przeciwciał dla biorców 0,14 μg
PL 202 698 B1 do GMT 36000 dla biorców 11 μg. Ponownie miana czterech najwyższych grup od 11 do 300 μg zgrupowały się razem. Zatem przez dwie kolejne immunizacje miano przeciwciał zależało od dawki antygenu w szerokim zakresie od 0,4 do 300 μg. Po trzeciej immunizacji miana z grup najwyższych czterech dawek były porównywalne i pozostały jako plateau po dodatkowej immunizacji.
Miesiąc po czwartej immunizacji miana były 2- do 3- krotnie wyższe w grupie 300 μg niż miana zmierzone w krwi pobranej 5 dni po immunizacji (fig. 6). Obserwacja ta sugeruje, że szczytowa anamnestyczna odpowiedź przeciwciał wystąpiła później niż 5 dni po immunizacji. Mniejszy (50%) wzrost obserwowano w tym czasie dla grupy 33 μg. W grupie dawki 300 μg po dwóch miesiącach od ostatniej dawki GMT obniżyła się stopniowo o około 70%. Po kolejnym miesiącu miano przeciwciał spadało mniej gwałtowne, o 45% (100 μg) i około 14% dla 33 i 11 μg dawek. Zatem szybkość obniżania miana przeciwciał w krążeniu po zaprzestaniu immunizacji jest dwufazowy z gwałtownym spadkiem w pierwszym miesiącu po szczytowej odpowiedzi, po którym następuje łagodniejszy spadek.
Miana przeciwciał i kinetyka odpowiedzi tych myszy Swiss Webster była podobna jak u młodych, heterozygotycznych, transgenicznych myszy PDAPP, immunizowanych w podobny sposób. Dawki skuteczne w wywoływaniu odpowiedzi immunologicznej u ludzi są zazwyczaj podobne do dawek skutecznych u myszy.
III. Poszukiwanie środków skutecznych leczniczo przeciw występującej AD
Test ten zaprojektowano w celu przebadania środków immunogennych pod względem aktywności w zatrzymywaniu lub odwracaniu charakterystyki neuropatologicznej AD u starych myszy. Immunizacje Ae o długości 42 aminokwasów (AN1792) zaczęto w punkcie czasowym w którym płytki amyloidowe były już obecne w mózgach myszy PDAPP.
Z upływem czasu w badaniu u nie leczonych myszy PDAPP rozwinęło się wiele zmian neurodegeneracyjnych przypominających występujące w AD (Games i inni, supra, oraz Johnson-Wood i inni, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 1550-1555 (1997)). Odkładanie Ae w płytkach amyloidowych jest związane z degeneracyjną odpowiedzią neuronalną, obejmującą niewłaściwe elementy aksonalne i dendrytyczne, nazywane dystroficznymi neurytami. Złogi amyloidowe otoczone przez i zawierające dystroficzne neuryty nazywane są płytkami neurytycznymi. Zarówno u myszy AD, jak i u myszy PDAPP, neuryty dystroficzne mają wyróżniające się struktury globularne, są immunoreaktywne z zespołem przeciwciał rozpoznających APP i składniki cytoszkieletu i wykazują złożone, wewnątrzkomórkowe zmiany degeneracyjne na poziomie ultrastrukturalnym. Charakterystyki te pozwalają na istotne dla choroby, wybiórcze i powtarzalne pomiary tworzenia płytek neurytycznych w mózgach PDAPP. Dystroficzny składnik neuronalny płytek neurytycznych PDAPP łatwo jest uwidocznić przy pomocy przeciwciał specyficznych dla ludzkiego APP (mAe 8E5) i łatwo jest go zmierzyć przy pomocy komputerowo wspomaganej analizy obrazu. Zatem dodatkowo poza pomiarem działania AN1792 na tworzenie płytek amyloidowych monitorowano wpływ tego leczenia na rozwój dystrofii neurytycznej.
Astrocyty i mikroglej stanowią nieneuronalne komórki odpowiadające na i odzwierciedlające stopień uszkodzenia neuronalnego. W AD często obserwuje się astrocyty GFAP-dodatnie i MHC II-dodatni mikroglej, a ich aktywacja zwiększa się z ostrością choroby. Zatem monitorowano także rozwój reaktywnych astrocytów i mikroglejozy u myszy leczonych AN1792.
A. Materiały i metody
Czterdzieści osiem heterozygotycznych samic myszy PDAPP w wieku 11 do 11,5 miesięcy, otrzymanych z Charles River, losowo podzielono na dwie grupy: 24 myszy immunizowano 100 μq AN1792, a 24 immunizowano PBS, w każdym przypadku w połączeniu z adiuwantem Freunda. Grupy AN1792 i PBS powtórnie podzielono w wieku około 15 miesięcy. W wieku 15 miesięcy zwierzęta z około połowy z każdej z grup AN1792 i PBS uśmiercono (odpowiednio n=10 i 9), a pozostałe nadal otrzymywały immunizację aż do końca w wieku około 18 miesięcy (odpowiednio n=9 i 12). W czasie badań zdechło 8 zwierząt (5 AN1792, 3 PBS). Ponadto, poza immunizowanymi zwierzętami, do doświadczenia włączono nieleczone myszy PDAPP jednoroczne (n=10), 15-miesięczne (n=10) i 18miesięczne (n=10) dla porównania w testach ELISA pomiarów poziomu ae i APP w mózgach; dodatkowo zwierzęta jednoroczne włączono do analizy immunohistochemicznej.
Metodologia była taka jak w przykładzie 1, z wyjątkiem przypadków, gdy wskazano inaczej. Do przygotowania antygenu do 6 immunizacji, podawanych przed 15 miesiącem, zastosowano AN1792 z US Peptides seria 12 i California Peptides seria ME0339. Do 3 dodatkowych immunizacji podawanych pomiędzy 15 a 18 miesiącem zastosowano California Peptides serie ME0339 i ME0439.
Do immunizacji zemulgowano 100 μg AN1792 w 200 μl PBS, lub samej PBS, w stosunku 1:1 z kompletnym adiuwantem Freunda (CFA) lub niekompletnym adiuwantem Freunda (IFA) lub PBS
PL 202 698 B1 w końcowej objętości 400 gl. Pierwszą immunizację wykonano z CFA jako adiuwantem, następne 4 dawki podano z IFA, a końcowe 4 dawki z samą PBS bez dodatku adiuwanta. Łącznie wykonano 9 immunizacji w okresie 7 miesięcy z dwutygodniowymi przerwami dla pierwszych 3 dawek, a następnie z czterotygodniowymi przerwami dla pozostałych dawek. Grupie leczonej przez 4 miesiące, uśmierconej w wieku 15 miesięcy, wykonano tylko pierwszych 6 immunizacji.
B. Wyniki
Wpływ leczenia AN1792 na obciążenie amyloidem
Wyniki leczenia AN1792 na obciążenie kory amyloidem oznaczone metodą ilościowej analizy obrazu, przedstawiono na fig. 7. Wartość mediany dla obciążenia amyloidem kory wynosiła 0,28% w grupie nieleczonych 12-miesięcznych myszy PDAPP, która to wartość odpowiadała obciążeniu płytkami u myszy na początku badania. W wieku 18 miesięcy obciążenie amyloidem wzrosło ponad 17-krotnie do 4,87% w myszach leczonych PBS, podczas gdy myszy leczone AN1792 miały znacznie obniżone obciążenie amyloidem wynoszące 0,01%, znacząco mniej niż 12-miesięczne nieleczone myszy i grupy 15- i 18-miesięczne leczone PBS. Obciążenie amyloidem było znacznie obniżone u biorców AN1792 zarówno w 15 (96% zmniejszenia, p=0,003) i 18 (>99% zmniejszenia, p=0,0002) miesiącu.
Zazwyczaj złogi amyloidowe w korze myszy PDAPP zaczynały się w korze czołowej i pozamodzelowatej (RSC), postępowały w kierunku brzuszno-bocznym i obejmowały korę skroniową i węchową (EC). Znaleziono niewiele lub wcale nie znaleziono amyloidu znaleziono w EC myszy 12-miesięcznych, tj. w wieku około którego podano pierwszą dawkę AN1792. Po 4 miesiącach leczenia AN1792 złogi amyloidowe znacznie zmalały w RSC, a postępujący udział EC został całkowicie wyeliminowany przez leczenie AN1792. Ostatnia obserwacja pokazała, że AN1792 całkowicie zatrzymał postępowanie amyloidu, który normalnie zaatakowałby korę skroniową i węchową, a także zatrzymał i ewentualnie cofnoł odkłanianie w RSC.
Znaczące działanie leczenia AN1792 na rozwój obciążenia kory amyloidem u myszy PDAPP pokazano dla grupy 18-miesięcznej, którą leczono przez 7 miesięcy. Stwierdzono prawie całkowity brak amyloidu w korze u myszy leczonych AN1792, z całkowitym brakiem rozproszonych płytek, a także zmniejszeniem litych złogów.
2. Zmiany komórkowe i morfologiczne towarzyszące leczeniu AN1792.
Populację komórek Ap-dodatnich znaleziono w regionach mózgu zazwyczaj zawierających złogi amyloidowe. Znaczące było to, że w kilku mózgach biorców AN1792 znaleziono bardzo niewiele korowych płytek amyloidowych lub nie znaleziono ich wcale. Większość immunoreaktywności Ap okazała się być związana z komórkami o dużym, płatkowym lub pozlepianym ciele. Fenotypowo komórki te przypominały aktywowany mikroglej lub monocyty. Były one immunoreaktywne z przeciwciałami rozpoznającymi ligandy eksprymowane przez aktywowane monocyty i mikroglej (MHC II i CD11b), a czasami były związane ze ścianą lub światłem naczyń krwionośnych. Porównanie blisko sąsiadujących fragmentów znakowanych przeciwciałami specyficznymi dla Ap i MHC II ujawniło, że podobne wzory tych komórek były rozpoznawane przez obydwie klasy przeciwciał. Szczegółowe badanie mózgów myszy leczonych AN1792 ujawniło, że MHC II-dodatnie komórki były ograniczone do sąsiedztwa ograniczonego amyloidu pozostającego u tych zwierząt. W zastosowanych warunkach utrwalania komórki nie były immunoreaktywne z przeciwciałami rozpoznającymi ligandy komórek T (CD3, CD3e) lub B (CD45RA, CD45RB) lub zwykły antygen leukocytowy (CD45), ale były reaktywne z przeciwciałami rozpoznającymi leukosialinę (CD43), która reaguje krzyżowo z monocytami. Nie znaleziono takich komórek u żadnej z myszy leczonych PBS.
U myszy PDAPP niezmiennie rozwijały się ciężkie złogi amyloidowe w zewnętrznej warstwie cząsteczkowej hipokampowego zakrętu zębatego. Złogi tworzyły wyraźną smugę w obrębie ścieżki perforacji, regionu zazwyczaj zawierającego płytki amyloidowe w AD. Charakterystyczne występowanie tych złogów u myszy leczonych PBS przypominało wcześniej scharakteryzowane u nieleczonych myszy PDAPP. Złogi amyloidowe składały się z zarówno rozproszonych, jak i z litych płytek w ciągłym paśmie. Natomiast w wielu mózgach myszy leczonych AN1792 wzór ten był znacznie zmieniony. Złogi amyloidowe w hipokampie nie zawierały rozproszonego amyloidu i wzór pasmowy był częściowo zniszczony. Zamiast tego występowało wiele niezwykłych struktur nakrapianych, reagujących z przeciwciałami przeciw-Ap, z których kilka okazało się komórkami zawierającymi amyloid.
Komórki MHC II-dodatnie często obserwowano w sąsiedztwie amyloidu zewnątrzkomórkowego u zwierząt leczonych AN1792. Wzór związania komórek Ap-dodatnich z amyloidem był bardzo podobny w kilku mózgach myszy leczonych AN1792. Rozmieszczenie tych komórek monocytów było ogra20
PL 202 698 B1 niczone do sąsiedztwa złogów amyloidowych i było całkowicie nieobecne w innych regionach mózgu pozbawionych płytek Ap.
Ilościowa analiza obrazu fragmentów znakowanych MHC II i MAC I wykazała tendencję w kierunku zwiększonej reaktywności w RSC i hipokampie u myszy leczonych AN1792, w porównaniu z grupą PBS, która osiągnęła wartość znaczącą dla pomiarów reaktywności MAC 1 w hipokampie.
Wyniki te wskazują na aktywne, kierowane przez komórki, usuwanie amyloidu w regionach mózgu w których występują płytki.
3. Działanie AN1792 na poziomy Ap: oznaczenia ELISA.
(a) Poziomy korowe
U nieleczonych myszy PDAPP poziom mediany całkowitego Ap w korze w wieku 12 miesięcy wynosiła 1600 ng/g, w wieku 15 miesięcy wzrosła do 8700 ng/g (tabela 2). W wieku 18 miesięcy wartość wynosiła 22000 ng/g, co oznacza, że wzrosła ponad 10-krotnie podczas doświadczenia. Zwierzęta leczonych PBS miały 8600 ng/g całkowitego Ap w wieku 15 miesięcy, która to wartość wzrosła do 19000 ng/g w 18 miesiącu. W porównaniu z tym, zwierzęta leczone AN1792 miały 81% mniej całkowitego Ap w wieku 15 miesięcy (1600 ng/g) niż grupa immunizowana PBS. Znacząco mniej (0=0,0001) całkowitego Ap (5200 ng/g) znaleziono w 18 miesiącu porównując grupy AN1792 i PBS (tabela 2), co odpowiadało 72% zmniejszeniu ilości Ap, który by normalnie występował. Podobne wyniki uzyskano porównując korowe poziomy Ap42, gdyż stwierdzono, że grupa leczona AN1792 zawierała znacznie mniej Ap42, ale w tym wypadku różnice pomiędzy grupami AN1792 i PBS były znaczące zarówno w 15 (p=0,04), jak i 18 miesiącu (p=0,0001, tabela 2).
T a b e l a 2: Poziomy mediany Ap (ng/g) w korze
Nieleczone | PBS | AN1792 | |||||||
Wiek | Całkowity Ap | AP42 | (n) | Całkowity Ap | Ap42 | (n) | Całkowity Ap | Ap42 | (n) |
12 | 1600 | 1300 | (10) | ||||||
15 | 8700 | 8300 | (10) | 8600 | 7200 | (9) | 1600 | 1300* | (10) |
18 | 22200 | 18500 | (10) | 19000 | 15900 | (12) | 5200** | 4000** | (9) |
*p=0,0412 **p=0,0001 (b) Poziomy w hipokampie
U nieleczonych myszy PDAPP poziomy mediany w hipokampie całkowitego Ap w wieku 12 miesięcy wynosiły 15000 ng/g, która to wartość wzrosła do 51000 ng/g w wieku 15 miesięcy i dalej wzrastała osiągając 81000 ng/g w wieku 18 miesięcy (tabela 3). Podobnie myszy immunizowane PBS miały 40000 ng/g i 65000 ng/g odpowiednio w wieku 15 i 18 miesięcy. U zwierząt leczonych AN1792 stwierdzono mniejszą całkowitą ilość Ap, to znaczy 25000 ng/g i 51000 ng/g odpowiednio w wieku 15 i 18 miesięcy. Wartość dla grupy leczonej AN1792 w wieku 18 miesięcy była znacząco niższa niż dla grupy leczonej PBS (p=0,0105; tabela 3). Pomiary Ap42 dały ten sam układ wyników, to znaczy poziomy u grupy leczonej AN1792 były znacząco niższe niż u grupy leczonej PBS (odpowiednio 39000 ng/g wobec 57000 ng/g; p=0,0022) w wieku 18 miesięcy (tabela 3).
T a b e l a 3: Poziomy mediany Ap (ng/g) w hipokampie
Nieleczone | PBS | AN1792 | |||||||
Wiek | Całkowity Ap | Ap42 | (n) | Całkowity Ap | Ap42 | (n) | Całkowity Ap | Ap42 | (n) |
12 | 15500 | 11100 | (10) | ||||||
15 | 51500 | 44400 | (10) | 40100 | 35700 | (9) | 24500 | 22100 | (10) |
18 | 80800 | 64200 | (10) | 65400 | 57100 | (12) | 50900* | 38900** | (9) |
*p=0,0105 **p=0, 0022 (c) Poziomy w móżdżku
U 12 miesięcznych nieleczonych myszy PDAPP mediana poziomu całkowitego Ap wynosiła 15 ng/g (tabela 4). W wieku 15 miesięcy mediana ta wzrosła do 28 ng/g, a w wieku 18 miesięcy do 35 ng/g. U zwierząt leczonych PBS wartość mediany całkowitego Ap wynosiły 21 ng/g w wieku 15 miesięcy i 43 ng/g w wieku 18 miesięcy. U zwierząt leczonych AN1792 znaleziono 22 ng/g całkowiPL 202 698 B1 tego Ae w wieku 15 miesięcy i znacząco mniej (p=0,002) całkowitego Ae w wieku 18 miesięcy (25 ng/g), niż w odpowiadającej im grupie PBS (tabela 4).
T a b e l a 4: Średnie poziomy Ae (ng/g) w móżdżku
Nieleczone | PBS | AN1792 | ||||
Wiek (miesiące) | Całkowity Λβ | (n) | Całkowity Ae | (n) | Całkowity Ae | (n) |
12 | 15,6 | (10) | ||||
15 | 27,7 | (10) | 20,8 | (9) | 21,7 | (10) |
18 | 35,0 | (10) | 43,1 | (12) | 24,8* | (9) |
*p=0,0018
4. Wpływ leczenia AN1792 na poziomy APP
APP-α oraz pełnej długości cząsteczka APP zawierają całość lub część sekwencji Ae, a zatem może na nie potencjalnie wpływać wytworzenie odpowiedzi immunologicznej kierowanej przez AN1792. W dotychczasowych badaniach stwierdzono niewielki wzrost poziomów APP wraz ze wzrostem neuropatologii u myszy PDAPP. W korze podczas leczenia poziomy zarówno APP-a/FL (pełnej długości), jak i APP-α pozostały zasadniczo bez zmian, z wyjątkiem tego, że poziom APP-α był zmniejszony o 19% u myszy w wieku 18 miesięcy w grupie leczonej AN1792 wobec grupy leczonej PBS. Wartości APP u 18 miesięcznych zwierząt z grupy AN1792 nie różniły się znacząco od tych wartości dla zwierząt 12- i 15-miesięcznych nieleczonych oraz 15-miesięcznych leczonych PBS. We wszystkich przypadkach wartości APP utrzymywały się w zakresie normalnie występującym u myszy PDAPP.
5. Działanie leczenia AN1792 na patologię neurodegeneracyjną i glejową.
Obciążenie płytkami neurytycznymi było znacząco zmniejszone w korze czołowej u myszy leczonych AN1792 w porównaniu z grupą leczoną PBS zarówno w wieku 15 (84%; p=0,03) jak i 18 miesięcy (55%; p=0,01) (fig. 8). Wartości mediany obciążenia płytkami neurytycznymi wzrosły od 0,32% do 0,49% w grupie PBS pomiędzy 15, a 18 miesiącem życia. W odróżnieniu od tego, rozwój płytek neurytycznych w grupie leczonej AN1792 był znacznie zmniejszony, z wartościami mediany obciążenia płytkami neurytycznymi wynoszącymi 0,05% i 0,22% odpowiednio dla wieku 15 i 18 miesięcy.
Immunizacje AN1792 wydawały się być dobrze tolerowane, reaktywna astrocytoza także zmalała znacząco w RSC u myszy leczonych AN1792 w porównaniu z grupą leczoną PBS zarówno w wieku 15 (56%; p=0,011), jak i 18 miesięcy (39%; p=0,028) (fig. 9). Wartości mediany procentu astrocytozy w grupie PBS wzrosły pomiędzy 15 a 18 miesiącem od 4,26% do 5,21%. Leczenie AN1792 przytłumiło rozwój astrocytozy w obu punktach czasowych odpowiednio do 1,89% i 3,2%. Sugeruje to, że neuropil nie był niszczony przez proces klirensu.
6. Odpowiedzi przeciwciał
Jak opisano powyżej, 11-miesięczne, heterozygotyczne myszy PDAPP (n=24) otrzymały serię 5 immunizacji, 100 μg AN1792 zemulgowanymi z adiuwantem Freunda, podawanych dootrzewnowo w tygodniach 0, 2, 4, 8 i 12, a szóstą immunizację wykonano samą PBS (bez adiuwanta Freunda) w 16 tygodniu. Jako kontrole negatywne przygotowano zestaw dobranych wiekowo 24 myszy, które immunizowano PBS zemulgowaną z tymi samymi adiuwantami i podawano w takim samym harmonogramie. Od zwierząt pobierano krew 3-7 dni po każdej immunizacji zaczynając od drugiej dawki. Odpowiedzi przeciwciał na AN1792 zmierzono metodą ELISA. Średnie geometryczne mian (GMT) dla zwierząt immunizowanych AN1792 wynosiły około 1900, 7600 i 45000 odpowiednio po drugiej, trzeciej i ostatniej (szóstej) dawce. Po szóstej immunizacji nie stwierdzono specyficznych dla Ae przeciwciał u zwierząt kontrolnych.
Około połowę zwierząt leczono przez kolejne 3 miesiące, immunizując je około 20, 24 i 27 tygodnia. Każdą z dawek podawano w podłożu samą PBS, bez adiuwanta Freunda. Średnie miana przeciwciał nie zmieniły się przez ten czas. W rzeczywistości miana przeciwciał pozostały stabilne w okresie od czwartego do ósmego pobrania krwi odpowiadającym okresowi od piątej do dziewiątej iniekcji.
Aby stwierdzić, czy przeciwciała specyficzne dla Ae, wytworzone przez immunizację, które wykryto w surowicy u myszy leczonych AN1792, także były związane z amyloidem odłożonym w mózgu, zestaw preparatów histologicznych z myszy leczonych AN1792 i PBS poddano działaniu przeciwciał specyficznych dla mysich IgG. W odróżnieniu od grupy PBS, płytki Ae w mózgach myszy leczonych AN1792 były pokryte endogennymi IgG. Tę różnicę pomiędzy oboma grupami zaobserwowano zarówno dla myszy w wieku 15, jak i 18 miesięcy. Szczególnie rażący był brak znakowania w grupie
PL 202 698 B1
PBS, pomimo obecności dużego obciążenia amyloidem u tych myszy. Wyniki te pokazują, że immunizacja syntetycznym białkiem Αβ wytwarza przeciwciała rozpoznające i wiążące się in vivo z Αβ w płytkach amyloidowych.
7. Komórkowe odpowiedzi immunologiczne
Z dziewięciu myszy immunizowanych AN1792 i 12 immunizowanych PBS myszy PDAPP w wieku 18 miesięcy pobrano śledziony w 7 dni po dziewiątej immunizacji. Wyizolowano limfocyty śledziony i hodowano je przez 72 godziny w obecności Αβ40, Αβ42 lub Αβ40-1 (białko o odwrotnej sekwencji). Mitogen Con Α posłużył jako kontrola pozytywna. Optymalne odpowiedzi uzyskano stosując >1,7 μΜ białko. Komórki ze wszystkich dziewięciu myszy leczonych AN1792 proliferowały w odpowiedzi na białka Αβ1-40 lub Αβ1-42, z równym poziomem inkorporacji obu białek (fig. 10, górny wykres). Nie stwierdzono odpowiedzi na białko o odwrotnej sekwencji Αβ40-1. Komórki ze zwierząt kontrolnych nie odpowiadały na którekolwiek z białek Αβ (fig. 10, dolny wykres).
C. Wnioski
Wyniki tego badania wykazały, że immunizacja AN1792 myszy PDAPP mających złogi amyloidowe spowalnia postępujące odkładanie amyloidu i zapobiega mu, oraz hamuje występujące w konsekwencji zmiany neuropatologiczne w mózgach starych myszy PDAPP. Immunizację AN1792 znacząco hamują rozwój amyloidu w strukturach, które normalnie ulegają amyloidozie. Zatem podawanie peptydu Ae ma pozytywne działanie w leczeniu AD.
VI. Poszukiwanie fragmentów Αβ
100 myszy PDAPP w wieku 9-11 miesięcy immunizowano dziewięcioma różnymi regionami APP i Ae w celu oznaczenia, które epitopy uczestniczą w odpowiedzi. Dziewięć różnych immunogenów oraz jeden kontrolny podano i.p., jak opisano powyżej. Immunogeny zawierały 4 koniugaty ludzkich peptydów Ae 1-12, 13-28, 32-42, 1-5, wszystkie połączone przez łącznik cysteinowy z owczymi przeciwciałami przeciwmysiej IgG, polipeptyd APP aminokwasy 592-695, zagregowany ludzki Ae1-40, zagregowany ludzki Ae25-35 oraz zagregowany Ae42 z gryzoni. Zagregowany Ae42 i PBS zastosowano jako kontrole. Na każdą z grup leczniczych przypadało 10 myszy. Miana monitorowano jak wyżej, a myszy uśmiercano na koniec 4-miesięcznych immunizacji. Po śmierci oznaczono histochemię, poziomy Ae oraz toksykologię.
A. Materiały i metody
1. Przygotowanie immunogenów
Przygotowanie sprzężonych peptydów Ae: 4 koniugaty ludzkich peptydów Ae (aminokwasy 1-5, 1-12, 13-28 i 33-42, każdy połączony z owczymi przeciwciałami przeciwmysiej IgG) przygotowano sprzęgając przez cysteinę sztucznie dodaną do peptydu Ae przy pomocy środka sieciującego sulfoEMCS. Pochodne peptydu Ae zsyntetyzowano z następującymi końcowymi sekwencjami aminokwasowymi. W każdym przypadku umiejscowienie wstawionej cysteiny wskazano przez podkreślenie. Pochodna peptydu Ae13-28 miała również, jak wskazano, dodane dwie glicyny przed C-końcową cysteiną.
peptyd Ap1-12 NH2-DAEFRHDSGYEVC COOH peptyd Ap1-5 NH2-DAEFRC COOH peptyd Ae33-42 NH2-C-kwas aminoheptanowy-GLMVGGVVIA COOH peptyd Ae13-28 Ac-NH-HHQKLVFFAEDVGSNKGGC-COOH
W celu przygotowania do reakcji sprzęgania 10 mg owczych przeciwciał przeciwmysiej IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories) dializowano przez noc wobec 10 mM buforu boranu sodu, pH 8,5. Następnie oddializowane przeciwciała zagęszczono do objętości 2 ml z użyciem rurki Amicon Centriprep. Dziesięć mg sulfo-EMCS [Nfe-maleimidokuproiloksy)sukcynimidu] (Molecular Sciences Co.) rozpuszczono w 1 ml dejonizowanej wody. Czterdziestokrotny cząsteczkowy nadmiar sulfoEMCS wkroplono w trakcie mieszania do owczego przeciwciała przeciwmysiej IgG, a następnie roztwór mieszano nadal przez kolejnych 10 minut. Aktywowane owcze przeciwciała przeciwmysiej IgG oczyszczono i wymieniono bufor przez przepuszczanie przez 10 ml kolumnę do filtracji żelowej (Pierce Presto Column, uzyskana z Pierce Chemicals) równoważoną 0,1 M NaPO4, 5 mM EDTA, pH 6,5. Frakcje zawierające przeciwciała, zidentyfikowane przez pomiar absorbancji przy 280 nm, połączono i rozcieńczono do stężenia około 1 mg/ml, z użyciem 1,4 mg na OD jako współczynnik ekstynkcji. Czterdziestokrotny nadmiar cząsteczkowy peptydu Ae rozpuszczono w 20 ml 10 mM NaPO4, pH 8,0, z wyjątkiem peptydu Ae33-42, którego 10 mg najpierw rozpuszczono w 0,5 ml DMSO, a następnie rozcieńczono do 20 ml 10 mM buforem NaPO4. Każdy z roztworów peptydów dodano do 10 ml aktywowanych owczych przeciwciał przeciwmysiej IgG i kołysano w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Powstałe koniugaty zagęszczono do końcowej objętości poniżej 10 ml z użyciem rurki Amicon
PL 202 698 B1
Centriprep, a następnie dializowano wobec buforu PBS, aby wymienić bufor i usunąć wolne peptydy. Koniugaty przepuszczono przez filtry o średnicy porów 0,22 μ w celu wyjałowienia, a następnie podzielono na równe frakcje po 1 mg i przechowywano zamrożone w -20°C. Stężenia koniugatów oznaczono z użyciem białkowego testu BSA (Pierce Chemicals) z końską IgG jako krzywą standardową. Sprzężenie zostało potwierdzone przez wzrost masy cząsteczkowej sprzężonych peptydów w porównaniu z aktywowanymi przeciwciałami przeciwmysiej IgG. Preparat koniugatu Ae1-5 z owczym przeciwciałem przeciwmysiej IgG zawierał połączone koniugaty z dwóch reakcji sprzęgania, reszta stanowiła pojedynczy preparat.
2. Przygotowanie zagregowanych peptydów Ae
Peptydy ludzki 1-40 (AN1528; California Peptides Inc., seria ME0541), ludzki 1-42 (AN1792; California Peptides Inc., serie ME0339 i ME0439), ludzki 25-35 i z gryzoni 1-42 (California Peptides Inc., seria ME0218) świeżo solubilizowano do przygotowania każdego z zestawu zastrzyków z liofilizowanych proszków, które przechowywano wysuszone w -20°C. W tym celu 2 mg peptydu dodano do 0,9 ml dejonizowanej wody i mieszaninę zworteksowano aby wytworzyć względnie jednorodny roztwór lub zawiesinę. Z czterech peptydów jedynym rozpuszczalnym na tym etapie był AN1528. Następnie dodano równe objętości po 100 μl 10x PBS (1x PBS: 0,15 NaCl, 0,01 M fosforan sodu, pH 7,5) i wtedy AN1528 zaczął się wytrącać. Zawiesinę ponownie zworteksowano i inkubowano przez noc w 37°C do zastosowania następnego dnia.
Przygotowanie białka pBx6: Plazmid ekspresyjny kodujący pBx6, białko fuzyjne składające się z 100 aminokwasowej N-końcowej sekwencji liderowej z polimerazy bakteriofaga MS-2 oraz aminokwasów 592-695 z APP (eAPP) skonstruowano w sposób opisany w Oltersdorf i inni, J. Biol. Chem. 265, 4492-4497 (1990). Plazmid transfekowano do E. coli i białko wyeksprymowano po indukcji promotora. Bakterie zlizowano w 8M moczniku i pBx6 częściowo oczyszczono metodą preperatywnej SDS PAGE. Frakcje zawierające pBx6 zidentyfikowano metodą Western blot używając króliczych przeciwciał poliklonalnych przeciw pBx6, zebrano, zagęszczono za pomocą rurki Amicon Centriprep i dializowano wobec PBS. Czystość preparatu, oznaczona przez wybarwienie Coomassie Blue SDS PAGE, wynosiła około 5 do 10%.
B. Wyniki i ich omówienie
1. Projekt badań
Sto samic i samców, w wieku od 9 do 11 miesięcy heterozygotycznych transgenicznych myszy PDAPP uzyskano z Charles River Laboratory i Taconic Laboratory. Myszy podzielono na 10 grup do immunizacji różnymi regionami Ae lub APP razem z adiuwantem Freunda. Zwierzęta podzielono tak by dobrać płeć, wiek, rodziców oraz źródło w obrębie grupy tak blisko jak to było możliwe. Immunogeny obejmowały 4 peptydy Ae wyprowadzone z ludzkiej sekwencji, 1-5, 1-12, 13-28 i 33-42, każdy sprzężony z owczym przeciwciałem przeciw mysiej IgG; 4 zagregowane peptydy Ae, ludzki 1-40 (AN1528), ludzki 1-42 (AN1792), ludzki 25-35 i z gryzoni 1-42; oraz fuzyjny polipeptyd nazwany pBx6, zawierający aminokwasy APP 592-695. Dziesiątą grupę immunizowano PBS w połączeniu z adiuwantem jako kontrolą.
Do każdej immunizacji zemulgowano 100 μg każdego z peptydów Ae w 200 μl PBS lub 200 μg pBx6 pochodnej APP w tej samej objętości PBS, lub samą PBS w stosunku 1:1 (obj.) z kompletnym adiuwantem Freunda (CFA) w końcowej objętości 400 μl do pierwszej immunizacji, po czym stosowano dawki przypominające z tą samą ilością immunogenu w niekompletnym adiuwancie Freunda (IFA) w kolejnych czterech dawkach i PBS do końcowej dawki. Immunizację stosowano śródotrzewnowo w trybie dwutygodniowym przez 3 pierwsze dawki, a następnie w trybie miesięcznym. Od zwierząt pobierano krew w 4-7 dni po każdej immunizacji, zaczynając od drugiej dawki, do pomiarów miana przeciwciał. Zwierzęta uśmiercono około tydzień po końcowej dawce.
2. Poziomy Ae i APP w mózgu
Po 4 miesiącach immunizacji różnymi peptydami Ae lub pochodną APP ze zwierząt perfundowanych solą usunięto mózgi. Jedną półkulę wypreparowano do analizy immunohistochemicznej, a drugą użyto do oznaczenia poziomów Ae i APP. Aby zmierzyć stężenie różnych postaci peptydu e-amyloidowego i białka prekursorowego amyloidu, półkulę pocięto na części i przygotowano homogenaty regionów hipokampu, kory i móżdżka w 5 M guanidynie. Rozcieńczono je i oznaczono poziom amyloidu lub APP, porównując do serii rozcieńczeń wzorców peptydu Ae lub APP o znanych stężeniach, w formacie ELISA.
Średnie stężenie całkowitego Ae dla grup kontrolnych immunizowanych PBS była 5,8-raza większa w hipokampie niż w korze (mediana 24318 ng/g tkanki hipokampa w porównaniu do 4221 ng/g
PL 202 698 B1 kory). Poziom mediany w móżdżku grupy kontrolnej (23,4 ng/g tkanki) był około 1000-razy niższy niż w hipokampie. Poziomy te były podobne do wcześniej opisanych dla heterozygotycznych transgenicznych myszy PDAPP w tym wieku (Johnson-Woods i inni, 1997, supra).
Dla kory, zestaw grup leczniczych miały średnie całkowite poziomy Ap i Ap1-42 znacznie różniące się od grupy kontrolnej (p<0,05), zwierzęta otrzymujące peptydy AN1792, gryzoni Ap1-42 lub koniugat Ap1-5 przedstawiono na fig. 11. Poziomy mediany całkowitego Ap zmniejszyły się odpowiednio o 75%, 79% i 61% w porównaniu z kontrolą dla tych grup leczniczych. Nie stwierdzono dostrzegalnych współzależności pomiędzy mianami przeciwciał specyficznych dla Ap i poziomami Ap w regionie korowym mózgu dla jakiejkolwiek z tych grup.
W hipokampie średnie zmniejszenie całkowitej ilości Ap towarzysząca leczeniu AN1792 (46%, p=0,0543) nie była tak duża jak obserwowana w korze (75%, p=0,0021). Jednakże stopień zmniejszenia był znacznie wyższy w hipokampie niż w korze, zmniejszenie netto wynosiło 11186 ng/g tkanki w hipokampie wobec 3171 ng/g tkanki w korze. Dla grup zwierząt otrzymujących Ap1-42 z gryzoni lub Ap1-5 średnie całkowitych poziomów Ap zmniejszyły się odpowiednio o 36% i 26%. Jednakże, biorąc pod uwagę fakt, że grupy były małe oraz ze względu na zmienność poziomów peptydu amyloidowego u poszczególnych zwierząt w grupie, zmiany te nie były znaczące. Przy pomiarach Ap1-42 w hipokampie żadna ze zmian wywołanych leczeniem nie była znacząca. Zatem, ze względu na niższe obciążenie Ap kory, zmiany w tym regionie są znacznie czulszym wskaźnikiem skutków leczenia. Zmiany poziomów Ap zmierzone metodą ELISA w korze były podobne, ale nie takie same, jak wyniki analizy immunohistochemicznej (patrz poniżej).
Całkowity Ap zmierzono także w móżdżku, regionie zazwyczaj nie dotkniętym w patologii AD. Żadne ze średnich stężeń Ap jakiejkolwiek z grup immunizowanych różnymi peptydami Ap lub pochodną APP nie różniło się od wartości dla grupy kontrolnej w tym regionie mózgu. Wynik ten sugeruje, że leczenie nie wpływa na niepatologiczne poziomy Ap.
Stężenie APP oznaczono także metodą ELISA w korze i móżdżku z leczonych i kontrolnych zwierząt. Zastosowano dwa różne testy APP. Pierwszy, nazwany APP-a/FL, rozpoznaje zarówno APP-α (α, wydzielaną postać APP, która została wzięta w obrębie sekwencji Ap), jak i postaci APP pełnej długości (FL), podczas gdy drugi rozpoznaje tylko APP-α. W odróżnieniu od towarzyszącego leczeniu zmniejszenia AP w zestawie grup leczniczych, poziomy APP pozostały bez zmian u wszystkich zwierząt leczonych w porównaniu z kontrolnymi. Wyniki te wskazują, że immunizację peptydami Ap nie usuwają APP, a skutek leczniczy jest raczej specyficzny dla Ap.
W podsumowaniu, całkowite poziomy Ap i Ap1-42 były znacząco zmniejszone w korze przez leczenie AN1792, gryzoni Ap1-42 lub koniugatem Ap1-5. W hipokampie całkowity Ap był znacznie zmniejszony tylko przez leczenie AN1792. Żadne inne związane z leczeniem zmiany poziomów Ap lub APP w regionach hipokampu, kory lub móżdżku nie były znaczące.
2. Analiza histochemiczna
Mózgi z podzestawu sześciu grup przygotowano do analizy immunohistochemicznej, 3 grupy immunizowane koniugatami peptydu Ap - Ap1-5, Ap1-12 i Ap13-28; 3 grupy immunizowane agregatami Ap pełnej długości - AN1792 i AN1528 oraz grupę kontrolną leczoną PBS. Wyniki analizy obrazu dla obciążenia amyloidem skrawków histologicznych mózgu z tych grup przedstawiono na fig. 12. Stwierdzono znaczące obniżenie obciążenia amyloidem regionów korowych w 3 grupach leczniczych w stosunku do zwierząt kontrolnych. Największe obniżenie obciążenia amyloidem obserwowano w grupach otrzymujących AN1792, gdzie średnia wartość była zmniejszona o 97% (p=0,001). Znaczące obniżenie obserwowano także dla zwierząt leczonych AN1528 (95%, p=0,005) i koniugatem peptydu Ap1-5 (67%, p=0,02).
Wyniki uzyskane przez pomiar całkowitego Ap lub Ap1-42 metodą ELISA oraz obciążenia amyloidem metodą analizy obrazu w pewnym stopniu różnią się. Leczenie AN1528 miało znaczący wpływ na poziom obciążenia amyloidem kory w pomiarach metodą ilościowej analizy obrazu, ale nie miało wpływu na stężenie całkowitego Ap zmierzone metodą ELISA w tym samym regionie. Różnica pomiędzy tymi dwoma wynikami prawdopodobnie związana jest ze specyfiką testów. Analiza obrazu mierzy tylko nierozpuszczalne Ap zagregowane w płytkach. W odróżnieniu od tego ELISA mierzy wszystkie postaci Ap, zarówno rozpuszczalne, jak i nierozpuszczalne, monomeryczne i zagregowane. Ponieważ przypuszcza się, że patologia choroby jest związana z nierozpuszczalną formą Ap związaną z płytkami, technika analizy obrazu może mieć większą czułość w ocenie skutków leczenia. Jednakże z uwagi na to, że test ELISA jest szybszym i łatwiejszym testem, jest on bardzo użyteczny do celów poszukiwania nowych leków. Ponadto może to oznaczać, że związane z leczeniem zmniejszenie Ap jest większe dla związanego z płytkami niż całkowitego Ap.
PL 202 698 B1
Aby stwierdzić, czy specyficzne dla Ae przeciwciała wytworzone przez immunizację u leczonych zwierząt reagowały z odłożonym w mózgu amyloidem, podzestaw skrawków histologicznych ze zwierząt leczonych i kontrolnych poddano działaniu przeciwciał specyficznych dla mysich IgG. W odróżnieniu od grupy PBS, płytki zawierające Ae były pokryte endogenną IgG u zwierząt immunizowanych koniugatami peptydów Ae- Ae1-5, Ae1-12 i Ae13-28; oraz agregatami pełnej długości Ae - AN1792 i AN1528. Mózgów zwierząt immunizowanych innymi peptydami Ae lub peptydem APP pBx6 nie analizowano w tym teście.
3. Pomiar mian przeciwciał
Od myszy pobrano krew w 4-7 dni po każdej immunizacji, poczynając od drugiej immunizacji, łącznie 5 razy. Zmierzono miana przeciwciał jako przeciwciała wiążące Ae1-42 metodą kanapkowego ELISA na wielostudzienkowych płytkami z tworzywa sztucznego, powleczonych Ae1-42. Jak pokazano na fig. 13, szczytowe miana przeciwciał były wytworzone po czwartej dawce dla tych 4 szczepionek, które wywoływały najwyższe miana przeciwciał specyficznych dla AN1792: AN1792 (szczytowa GMT: 94647), AN1528 (szczytowe GMT: 88231), koniugat Ae1-12 (szczytowe GMT 47216) i gryzonia Ae1-42 (szczytowa GMT: 10766). Miana dla tych grup obniżyły się w pewnym stopniu po piątej i szóstej dawce. Dla pozostałych pięciu immunogenów szczytowe miana osiągnięto po piątej i szóstej dawce i były one znacznie mniejsze niż uzyskane dla czterech grup najwyższych mian: koniugat Ae1-5 (szczytowa GMT: 2356), pBx6 (szczytowa GMT: 1986), koniugat Ae13-28 (szczytowa GMT: 1183), koniugat Ae33-42 (szczytowa GMT: 658), Ae25-35 (szczytowa GMT: 125). Miana przeciwciał zmierzono także wobec homologicznych peptydów stosując ten sam format kanapkowego ELISA dla podzestawu immunogenów, grup immunizowanych Ae1-5, Ae13-28, Ae25-35, Ae33-42 i gryzoni Ae1-42. Miana te były w przybliżeniu takie same, jak zmierzone względem Ae1-42, z wyjątkiem immunogenu gryzoniego Ae1-42, dla którego miana przeciwciał względem homologicznego immunogenu były około 2-krotnie wyższe. Wielkość miana przeciwciał specyficznych względem AN1792 u poszczególnych zwierząt lub średnia wartość dla grup leczniczych nie miała związku ze skutecznością zmierzoną jako zmniejszenie Ae w korze.
4. Odpowiedzi limfoproliferacyjne
Zależną od Ae limfoproliferację zmierzono stosując komórki śledziony zebrane około tydzień po końcowej, szóstej, immunizacji. Świeżo zebrane komórki, 105 na studzienkę, hodowano przez 5 dni w obecności Ae1-40 w stężeniu 5 μM w celu stymulacji. Komórki z podzestawu siedmiu spośród dziesięciu grup także hodowano w obecności peptydu o odwrotnej sekwencji Ae40-1. Jako pozytywną kontrolę hodowano dodatkowe komórki z mitogenem komórek T, PHA, a jako negatywną kontrolę komórki hodowano bez dodanego peptydu.
Limfocyty z większości zwierząt proliferowały w odpowiedzi na PHA. Nie stwierdzono znaczących odpowiedzi na peptyd o odwrotnej sekwencji Ae40-1. Komórki ze zwierząt immunizowanych większymi zagregowanymi peptydami Ae, AN1792, gryzonim Ae1-42 i AN1528 silnie proliferowały po stymulacji Ae1-40 z najwyższymi cmp u biorców AN1792. U jednego ze zwierząt w każdej z grup immunizowanych koniugatami Ae1-12, Ae13-28 i Ae25-35 komórki proliferowały w odpowiedzi na Ae140. W pozostałych grupach otrzymujących koniugaty Ae1-5, Ae33-42 oraz pBx6 lub PBS nie było zwierząt z odpowiedzią stymulowaną Ae. Wyniki te zestawiono w tabeli 5 poniżej.
T a b e l a 5
Immunogen | Koniugat | Aminokwasy Ae | Zwierzęta odpowiadające |
Ae1-5 | tak | 5-mer | 0/7 |
Ae1-12 | tak | 12-mer | 1/8 |
Ae13-28 | tak | 16-mer | 1/9 |
Ae25-35 | 11-mer | 1/9 | |
Ae33-42 | tak | 10-mer | 0/10 |
Ae1-40 | 40-mer | 5/8 | |
Ae1-42 | 42-mer | 9/9 | |
gryzoni Ae1-42 | 42-mer | 8/8 | |
pBx6 | 0/9 | ||
PBS | 0-mer | 0/8 |
PL 202 698 B1
Wyniki te wskazują, że AN1792 i AN1528 najsilniej stymulują odpowiedzi komórek T, najprawdopodobniej o fenotypie CD4+. Brak specyficznej względem Ae odpowiedzi komórek T u zwierząt immunizowanych Ae1-5 nie jest zaskakująca, gdyż epitopy peptydowe rozpoznawane przez komórki T CD4+ mają zazwyczaj długość 15 aminokwasów, jakkolwiek krótsze peptydy mogą czasem działać z mniejszą skutecznością. Zatem większość epitopów komórek T pomocniczych dla czterech koniugatów peptydów znajduje się w części IgG koniugatu, a nie w regionie Ae. Hipotezę tę potwierdza bardzo niska częstość odpowiedzi proliferacyjnych dla zwierząt z każdej z tych grup leczniczych. Z uwagi na to, że koniugat Ae1-5 był skuteczny w znaczącym obniżaniu poziomu Ae w mózgu, przy widocznym braku komórek T specyficznych dla Ae, kluczową efektorową odpowiedzią immunologiczną wywołaną przez immunizację tym peptydem okazuje się być przeciwciało.
Brak komórek T oraz niska odpowiedź przeciwciał dla białka fuzyjnego pBx6, zawierającego aminokwasy APP 592-695 włącznie ze wszystkimi aminokwasami Ae, może być spowodowana słabą immunogennością konkretnego preparatu. Słaba immunogenność agregatu Ae25-35 jest prawdopodobnie spowodowana tym, że peptyd jest za mały, aby było prawdopodobne, że zawiera dobry epitop dla komórki T, aby wspomóc indukcję odpowiedzi przeciwciał. Jeżeli peptyd ten byłby sprzężony z białkiem nośnikowym prawdopodobnie byłby bardziej immunogenny.
V. Przygotowanie przeciwciał poliklonalnych do biernej ochrony nietransgenicznych myszy immunizowanych Ae lub innym immunogenem, dodatkowo z adiuwantem, uśmiercono w wieku 4-5 miesięcy. Zebrano krew immunizowanych myszy. Ewentualnie IgG wydzielono z innych składników krwi. Przeciwciała specyficzne dla immunogenu częściowo oczyszczono metodą chromatografii powinowactwa. Otrzymano średnio 0,5-1 mg przeciwciał specyficznych dla immunogenu na mysz, co dało łącznie 5-10 mg.
VI. Bierna immunizacja przeciwciałami na Ae
Grupom 7-9 -miesięcznych myszy PDAPP podano 0,5 mg w PBS przeciwciał poliklonalnych przeciw-Ae lub specyficznych monoklonalnych przeciw-Ae, co pokazano poniżej. Przeciwciała monoklonalne można przygotować przeciw fragmentowi przez wstrzyknięcie myszy fragmentu lub dłuższej formy Ae, przygotowanie hybrydom i przeszukiwanie hybrydom pod względem przeciwciała specyficznie wiążącego wymagany fragment Ae nie wiążąc przy tym innych niezachodzących fragmentów Ae.
T a b e l a 6
Przeciwciało | Epitop |
2H3 | Ae1-12 |
10D5 | Ae1-12 |
266 | Ae 13-28 |
21F12 | Ae33-42 |
Mysie poliklonalne przeciwludzkie Ae42 | przeciw zagregowanemu Ae42 |
Zwierzętom podawano przez 4 miesiące śródotrzewnowo preparaty, gdy było to potrzebne, aby utrzymać przeciwciała w krążeniu w stężeniach, mierzonych jako miana ELISA, większych niż 1/1000, oznaczanych w ELISA wobec Ae42 lub innego immunogenu. Miana monitorowano jak wyżej i myszy uśmiercono na koniec 4-miesięcznych wstrzykiwań. Po śmierci wykonano histochemię, oznaczanie poziomów Ae i toksykologię. W każdej z grup użyto po 10 myszy.
VII. Porównanie różnych adiuwantów
Przykłady te porównują CFA, ałun, emulsję olej w wodzie i MPL pod względem ich zdolności stymulowania odpowiedzi immunologicznej.
A. Materiały i metody
1. Projekt badań
Sto samic sześciotygodniowych świnek morskich rasy Hartley, otrzymanych z Elm Hill, podzielono na 10 grup do immunizacji AN1792 lub jego palmitoilowaną pochodną, połączonymi z różnymi adiuwantami. Siedem grup immunizowano przez iniekcję AN1792 (33 μg, z wyjątkiem gdy zaznaczono inaczej) połączonym z a) PBS, b) adiuwantem Freunda, c) MPL, d) skwalenem, e) MPL/skwalenem, f) niską dawką z ałunem lub g) wysoką dawką z ałunem (300 μg AN1792). Dwie grupy immunizowano przez iniekcję palmitoliowaną pochodną AN1792 (33 μg) połączoną z a) PBS lub b) skwalenem. Na koniec, dziesiąta grupa otrzymywała samą PBS, bez antygenu i dodatkowego adiuwanta. Dla grupy otrzymującej adiuwant Freunda pierwszą dawkę zemulgowano z CFA, a pozoPL 202 698 B1 stałe 4 dawki z IFA. Antygen podawano w dawce 33 μg dla wszystkich 11 grup, z wyjątkiem grupy wysokiej dawki z ałunem, która otrzymywała 300 μg AN1792. Immunizację wykonywano śródotrzewnowo dla CFA/IFA i domięśniowo do mięśnia czterogłowego tylnej łapy, na zmianę po prawej i lewej stronie dla wszystkich innych grup. Pierwsze trzy dawki podawano w trybie dwutygodniowym, a następnie podano dwie dawki z miesięczną przerwą. Krew pobierano 6-7 dni po każdej immunizacji, zaczynając od drugiej dawki, w celu pomiaru miana przeciwciał.
2. Przygotowanie immunogenów
Dwa mg Ae42 (California Peptide, seria ME0339) dodano do 0,9 ml dejonizowanej wody i mieszaninę zworteksowano, aby utworzyć względnie jednorodną zawiesinę. Dodano 100 μl 10x PBS (1X PBS, 0,15 M NaCl, 0,01 M fosforan sodu, pH 7,5). Zawiesinę ponownie zworteksowano i inkubowano przez noc w 37°C do zastosowania następnego dnia. Nie zużyte Ae1-42 przechowywano z osuszaczem jako liofilizowany proszek w -20°C.
Palmitoilowaną pochodną AN1792 otrzymano przez sprzęganie bezwodnika palmitynowego, zawieszonego w dimetyloformamidzie, z N-końcowym aminokwasem AN1792, przed usunięciem powstającego peptydu z żywicy przez podziałanie kwasem fluorowodorowym.
Aby przygotować dawki szczepionek z kompletnym adiuwantem Freunda (CFA) (grupa 2) zemulgowano 33 μg AN1792 w 200 μl PBS w stosunku 1:1 (obj.) z CFA w końcowej objętości 400 μl do pierwszej immunizacji. Do kolejnych immunizacji antygen podobnie emulgowano z niekompletnym adiuwantem Freunda (IFA).
Aby przygotować dawki szczepionek z MPL dla grup 5 i 8 liofilizowany proszek (Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, MT) dodano do 0,2% wodnego roztworu trietyloaminy, do końcowego stężenia 1 mg/ml i całość zworteksowano. Mieszaninę podgrzano do 65 do 70°C przez 30 sekund aby wytworzyć lekko nieprzezroczystą jednorodną zawiesinę miceli. Roztwór świeżo przygotowywano do każdego zestawu zastrzyków. Do każdego zastrzyku w grupie 5, zmieszano 33 μg AN1792 w 16,5 μl PBS, 50 gg MPL (50 μΓ) i 162 μl PBS w probówce borokrzemianowej bezpośrednio przed użyciem.
Aby przygotować dawki szczepionek z małą ilością emulsji olej w wodzie, AN1792 w PBS dodano do 5% skwalenu, 0,5% Tween 80, 0,5% Span 85 w PBS, do końcowego stężenia w pojedynczej dawce 33 μg AN1792 w 250 μl (grupa 6). Mieszaninę zemulgowano przepuszczając przez dwukomorowe ręczne urządzenie 15 do 20 razy do momentu otrzymania kropelek emulsji o średnicy zbliżonej do standardowej perełki lateksowej o średnicy 1 μm, przy analizie mikroskopowej. Otrzymana zawiesina była opalizująca, mlecznobiała. Emulsje świeżo przygotowywano dla każdej z serii iniekcji. Dla grupy 8 dodano MPL w 0,2% trietyloaminie w stężeniu 50 μg na dawkę do mieszaniny skwalenu w detergencie w celu zemulgowania jak opisano powyżej. Dla pochodnej palmitoilowych (grupa 7), 33 gg na dawkę palmitoilo-NH-Ae1-42 dodano do skwalenu i zworteksowano. Następnie dodano Tween 80 i Span 85 i zworteksowano. Mieszaninę tę dodano do PBS, aby osiągnąć końcowe stężenia 5% skwalenu, 0,5% Tween 80, 0,5% Span 85 i mieszaninę zemulgowano jak powyżej.
Aby przygotować dawki szczepionek z ałunem (grupy 9 i 10), AN1792 w PBS dodano do Alhydrogel (żel wodorotlenku glinu, Accurate, Wetsbury, NY) do osiągnięcia stężenie 33 μg (niska dawka, grupa 9) lub 300 μg (wysoka dawka, grupa 10) AN1792 na 5 mg ałunu, w końcowej objętości dawki 250 gl. Zawiesinę delikatnie mieszano przez 4 godziny w temperaturze pokojowej.
3. Pomiary mian przeciwciał
Od świnek morskich pobierano krew 6-7 dni po immunizacji, zaczynając po drugiej immunizacji, wykonując to 4 razy. Mian przeciwciał przeciw Ae42 zmierzono metodą ELISA, jak opisano w ogólnych materiałach i metodach.
4. Preparaty tkanek
Po około 14 tygodniach wszystkim świnkom morskim podano CO2. Zebrano płyn mózgowordzeniowy i usunięto mózgi, po czym wypreparowano 3 regiony mózgowe (hipokamp, korę i móżdżek), które użyto do pomiarów stężenia całkowitego Ae metodą ELISA.
B. Wyniki
1. Odpowiedzi przeciwciał
Zaobserwowano szeroki zakres skuteczności różnych adiuwantów mierzonej w testach odpowiedzi przeciwciał na AN1792 po immunizacji. Jak pokazano na fig. 14, gdy AN1792 podawano w PBS, nie wykryto przeciwciał po dwóch lub trzech immunizacjach, a niewielkie odpowiedzi wykryto po czwartej i piątej dawce ze średnią geometryczną mian (GMT) zaledwie około 45. Emulsja olej w wodzie wytworzyła umiarkowane miana po trzeciej dawce (GMT 255), które utrzymywały się po czwartej dawce (GMT 301) i spadły po końcowej dawce (GMT 54). Wystąpiła wyraźna odpowiedź
PL 202 698 B1 antygenowa na dawkę dla AN1792 związanego z ałunem, przy czym 300 μg było bardziej immunogenne we wszystkich punktach czasowych niż 33 μg. W szczytowej odpowiedzi przeciwciał, po czwartej immunizacji, różnica pomiędzy dwoma dawkami wynosiła 43% z GMT około 1940 (33 μg) i 3400 (300 pg). Odpowiedź przeciwciał na 33 μg AN1792 plus MPL była bardzo podobna do wytworzonej przez prawie 10-krotnie większą dawkę antygenu (300 μg) związanego z ałunem. Dodatek MPL do emulsji olej w wodzie zmniejszył siłę szczepionki w stosunku do szczepionki z MPL, jako jedynym adiuwantem, aż o 75%. Palmitoilowana pochodna AN1792 była całkowicie nieimmunogenna przy podawaniu w PBS i dała średnie miana przy podawaniu w emulsji olej w wodzie z GMT, 340 i 105 dla trzeciego i czwartego pobrania krwi. Najwyższe miana przeciwciał wytworzył adiuwant Freunda z szczytem GMT około 87000, która to wartość była prawie 30-krotnie wyższa niż GMT kolejnych najsilniejszych szczepionek, MPL i wysokiej dawki AN1792/ałun.
Najbardziej obiecującymi adiuwantami zidentyfikowanymi w tym badaniu są MPL i ałun. Z tych dwóch MPL wydaje się być korzystny, gdyż 10-krotnie niższa dawka antygenu była niezbędna do wytworzenia tej samej odpowiedzi przeciwciał, co uzyskana dla ałunu. Odpowiedź można wzmocnić przez zwiększenie dawki antygenu i/lub adiuwanta, oraz optymalizację trybu immunizacji. Emulsja olej w wodzie była bardzo słabym adiuwantem dla AN1792, tak że dodanie emulsji olej w wodzie do adiuwanta MPL zmniejszyło wewnętrzną aktywność samego adiuwanta MPL.
2. Poziomy Ap w mózgu
W wieku około 14 tygodni świnki morskie głęboko uśpiono, pobrano płyn mózgowo-rdzeniowy (CSF) i usunięto zwierzętom mózgi w podzestawie grup immunizowanych adiuwantem Freunda (grupa 2), MPL (grupa 5), ałunem z wysoką dawką, 300 μg AN1792 (grupa 10) i z immunizowanej PBS grupy kontrolnej (grupa 3). Aby zmierzyć poziom peptydu Ap, jedną półkulę wypreparowano i przygotowano homogenaty regionów hipokampa, kory i móżdżku w 5 M guanidynie. Następnie rozcieńczono je i oznaczono przez porównanie z serią rozcieńczeń standardowego białka Ap o znanych stężeniach, w formacie ELISA. Poziomy Ap w hipokampie, korze i móżdżku były bardzo podobne dla wszystkich grup, pomimo szerokiego zakresu odpowiedzi przeciwciał na Ap wywołanej przez te szczepionki. Zmierzono średnie poziomy Ap w tkance, wynoszące około 25 ng/g w hipokampie, 21 ng/g w korze i 12 ng/g w móżdżku. Zatem obecność w krążeniu wysokiego miana przeciwciał przeciw Ap przez prawie 3 miesiące u niektórych z tych zwierząt nie zmieniła całkowitych poziomów Ap w ich mózgach. Poziomy Ap w CFS także były podobne pomiędzy grupami. Brak wyraźnych skutków immunizacji AN1792 na endogenny Ap wskazuje, że odpowiedź immunologiczna jest skupiona na patologicznych formach Ap.
VIII. Odpowiedź immunologiczna na różne adiuwanty u myszy
Sześciotygodniowe samice myszy Swiss Webster zastosowano do tych badań z 10-13 zwierzętami na grupę. Immunizację wykonywano śródotrzewnowo w dniach 0, 14, 28, 60, 90 i 20, w dawkach o objętości 200 pl. Do wszystkich stymulacji jako bufor zastosowano PBS. Od zwierząt pobrano krew w 7 dni po każdej immunizacji, zaczynając po drugiej dawce, do analizy mian przeciwciał w teście ELISA. Tryb leczenia każdej z grup podano w tabeli 7.
T a b e l a 7. Projekt doświadczenia badania Betabloc 010
Grupa | Na | Adiuwantb | Dawka | Antygen | Dawka (pg) |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
1 | 10 | MPL | 12,5 pg | AN1792 | 33 |
2 | 10 | MPL | 25 pg | AN1792 | 33 |
3 | 10 | MPL | 50 pg | AN1792 | 33 |
4 | 13 | MPL | 125 pg | AN1792 | 33 |
5 | 13 | MPL | 50 pg | AN1792 | 150 |
6 | 13 | MPL | 50 pg | AN1528 | 33 |
7 | 10 | PBS | AN1792 | 33 | |
8 | 10 | PBS | - | ||
9 | 10 | zemulgowany skwalen | 5% | AN1792 | 33 |
10 | 10 | domieszany skwalen | 5% | AN1792 | 33 |
PL 202 698 B1 cd. tabeli 7
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
11 | 10 | ałun | 2 mg | AN1792 | 33 |
12 | 13 | MPL+ałun | 50 pg/2 mg | AN1792 | 33 |
13 | 10 | QS21 | 5 pg | AN1792 | 33 |
14 | 10 | QS21 | 10 pg | AN1792 | 33 |
15 | 10 | QS21 | 25 pg | AN1792 | 33 |
16 | 13 | QS21 | 25 pg | AN1792 | 150 |
17 | 13 | QS21 | 25 pg | AN1528 | 33 |
18 | 13 | QS21+MPL | 25 pg/50 pg | AN1792 | 33 |
19 | 13 | QS21+ałun | 25 pg/2 mg | AN1792 | 33 |
Odnośniki:
a Liczba myszy w każdej grupie na początku doś wiadczenia b Wskazano adiuwanty. Jako bufor do wszystkich preparatów zastosowano PBS. Grupie 8 nie podano antygenu ani adiuwanta.
Miana ELISA przeciwciał przeciw Ae42 dla każdej grupy przedstawiono w tabeli 8 poniżej. T a b e l a 8. Geometryczne średnie mian przeciwciał
Tydzień pobierania krwi | |||||
Grupa lecznicza | 2,9 | 5,0 | 8,7 | 12,9 | 16,7 |
1 | 248 | 1797 | 2577 | 6180 | 4177 |
2 | 598 | 3114 | 3984 | 5287 | 6878 |
3 | 1372 | 5000 | 7159 | 12333 | 12781 |
4 | 1278 | 20791 | 14368 | 20097 | 25631 |
5 | 3288 | 26242 | 13229 | 9315 | 23742 |
6 | 61 | 2536 | 2301 | 1442 | 4504 |
7 | 37 | 395 | 484 | 972 | 2149 |
8 | 25 | 25 | 25 | 25 | 25 |
9 | 25 | 183 | 744 | 952 | 1823 |
10 | 25 | 89 | 311 | 513 | 817 |
11 | 29 | 708 | 2618 | 2165 | 3666 |
12 | 198 | 1458 | 1079 | 612 | 797 |
13 | 38 | 433 | 566 | 1080 | 626 |
14 | 104 | 541 | 3247 | 1609 | 838 |
15 | 212 | 2630 | 2472 | 1224 | 1496 |
16 | 183 | 2616 | 6680 | 2085 | 1631 |
17 | 28 | 201 | 375 | 222 | 1540 |
18 | 31699 | 15544 | 23095 | 6412 | 9059 |
19 | 63 | 243 | 554 | 299 | 441 |
Tabela wykazuje, że najwyższe miana uzyskano dla grup 4, 5 i 18, w których adiuwantami było 125 pg MPL, 50 pg MPL oraz QS21 plus MPL.
IX. Lecznicza skuteczność różnych adiuwantów.
Badania nad skutecznością leczniczą prowadzono na transgenicznych myszach PDAPP, z zestawem adiuwantów odpowiednich do stosowania u ludzi, aby oznaczyć ich zdolność do wzmocnienia
PL 202 698 B1 odpowiedzi immunologicznej przeciw Ae i wywołać kierowane immunologicznie oczyszczanie złogów amyloidowych z mózgu.
Sto osiemdziesiąt samców i samic, w wieku 7,5 do 8,5 miesięcy, heterozygotycznych transgenicznych myszy PDAPP otrzymano z Charles River Laboratories. Myszy podzielono na 9 grup zawierających po 15 do 23 zwierzęta w grupie, do immunizacji AN1792 i AN1528 w połączeniu z różnymi adiuwantami. Zwierzęta podzielono tak, by dobrać płeć, wiek oraz rodziców zwierząt w obrębie grupy tak blisko jak to tylko było możliwe. Jako adiuwanty zastosowano ałun, MPL i QS21, każdy w połączeniu z dwoma antygenami, oraz adiuwant Freunda (FA) połączony tylko z AN1792. Dodatkową grupę immunizowano AN1792 w buforze PBS ze środkiem konserwującym tymerozalem bez adiuwanta. Dziewiątą grupę, jako negatywną kontrolę, immunizowano samą PBS.
Przygotowanie zagregowanych peptydów: peptydy ludzki Ae1-40 (AN1528; California Peptides Inc., Napa, CA; seria ME0541), ludzki Ae1-42 (AN1792; California Peptides Inc., seria ME0439), świeżo solubilizowano do przygotowania każdego z zestawu zastrzyków z liofilizowanych proszków, które przechowywano wysuszone w -20°C. W tym celu 2 mg peptydu dodano do 0,9 ml dejonizowanej wody i mieszaninę zworteksowano, aby wytworzyć względnie jednorodny roztwór lub zawiesinę. AN1528 był rozpuszczalny na tym etapie, w odróżnieniu od AN1792. Następnie dodano równe objętości po 100 μl 10x PBS (1x PBS: 0,15 NaCl, 0,01 M fosforan sodu, pH 7,5) i wtedy AN1528 zaczął się wytrącać. Zawiesinę ponownie zworteksowano i inkubowano przez noc w 37°C do zastosowania następnego dnia.
Aby przygotować dawki szczepionek z ałunem (grupy 1 i 5), peptyd Ae w PBS dodano do Alhydrogelu (2% wodny żel wodorotlenku glinu, Sargeant, Inc., Clifton, NJ), do osiągnięcia stężenia 100 μg peptydu Ae na 1 mg ałunu. Dodano 10x PBS do końcowej objętości dawki wynoszącej 200 μl w 1x PBS. Zawiesinę delikatnie mieszano przez około 4 godziny w temperaturze pokojowej przed wstrzykiwaniem.
Aby przygotować dawki szczepionek z MPL (grupy 2 i 6) liofilizowany proszek (Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, MT; seria 67039-E0896B) dodano do 0,2% wodnego roztworu trietyloaminy, do końcowego stężenia 1 mg/ml i zworteksowano. Mieszaninę podgrzano do 65 do 70°C przez 30 s, aby otrzymać lekko nieprzezroczystą jednorodną zawiesinę miceli. Roztwór przechowywano w 4°C. Do każdego zestawu iniekcji zmieszano 100 μg peptydu na dawkę w 50 μl PBS, 50 μg MPL na dawkę (50 μΓ) i 100 μl PBS na dawkę, w probówce borokrzemianowej, bezpośrednio przed użyciem.
Aby przygotować dawki szczepionek z QS21 (grupy 3 i 7) liofilizowany proszek (Aquila, Framingham, MA; seria A7018R) dodano do PBS, pH 6,6-6,7 do końcowego stężenia 1 mg/ml i zworteksowano. Roztwór przechowywano w -20°C. Do każdego zestawu zastrzyków zmieszano 100 μg peptydu na dawkę w 50 μl PBS, 25 μg QS21 na dawkę w 25 μl PBS i 125 μl PBS na dawkę w probówce borokrzemianowej bezpośrednio przed użyciem.
Aby przygotować dawki szczepionek z adiuwantem Freunda (grupa 4) zemulgowano 100 μg AN1792 w 200 μl PBS w stosunku 1:1 (obj.) z kompletnym adiuwantem Freunda (CFA) w końcowej objętości 400 μl do pierwszej immunizacji. Do kolejnych immunizacji antygen podobnie zemulgowano z niekompletnym adiuwantem Freunda (IFA). Do szczepionek zawierających adiuwanty ałun, MPL lub QS21, połączono 100 μg na dawkę AN1792 lub AN1528 z ałunem (1 mg na dawkę) lub MPL (50 μg na dawkę) lub QS21 (25 μg na dawkę), w końcowej objętości 200 μl PBS i podawano szczepiąc podskórnie na boku pomiędzy łopatkami. Dla grupy otrzymującej FA 100 μg AN1792 zemulgowano w stosunku 1:1 (obj.) z kompletnym adiuwantem Freunda (CFA) w końcowej objętości 400 μl i podawano śródotrzewnowo przy pierwszej immunizacji, a następnie podawano dawki przypominające tej samej ilości immunogenu w niekompletnym adiuwancie Freunda (IFA) przez kolejnych pięć dawek. Dla grupy otrzymującej AN1792 bez adiuwanta 10 μg AN1792 połączono z 5 μg tymerozalu w końcowej objętości 50 μl PBS i podawano podskórnie. Dziewiąta grupa kontrolna otrzymywała tylko 200 μl PBS w zastrzykach podskórnych. Immunizację wykonywano w trybie dwutygodniowym przez 3 pierwsze dawki, a następnie w trybie miesięcznym, a zatem w dniach 0, 16, 28, 56, 85 i 112. Od zwierząt pobierano krew w 6-7 dni po każdej immunizacji, zaczynając od drugiej dawki, do pomiarów miana przeciwciał. Zwierzęta uśmiercono około tygodnia po końcowej dawce. Wyniki oznaczono w teście ELISA mierząc poziomy Ae i APP w mózgu i na podstawie immunohistochemicznej oceny obecności płytek amyloidowych w skrawkach histologicznych mózgu. Ponadto oznaczono miana specyficznych przeciwciał przeciw Ae oraz zależne od Ae odpowiedzi, proliferacyjną i cytokin.
Z tabeli 9 wynika, że najwyższe miana przeciwciał przeciw Ae1-42 wytworzył FA z AN1792, miana, które osiągnęły szczyt po czwartej immunizacji (szczytowa GMT: 75386), a następnie spaPL 202 698 B1 dły o 59% po końcowej, szóstej immunizacji. Szczytowe miano przeciwciał wytworzone przez MPL z AN1792 było o 62% niższe niż wytworzone przez FA (szczytowa GMT: 28867) i także zostało osiągnięte wcześnie podczas immunizacji, po trzech dawkach, a następnie spadło do 28% szczytowej wartości po szóstej immunizacji. Szczytowe miano przeciwciał wytworzone przez QS21 połączony z AN1792 (GMT: 1511) było około 5-krotnie niższe niż uzyskane dla MPL. Ponadto kinetyka odpowiedzi była wolniejsza, gdyż dodatkowa immunizacja była konieczna do uzyskania szczytowej odpowiedzi. Miana wytworzone przez ałun związany z AN1792 były niewiele wyższe niż uzyskane dla QS21, a kinetyka odpowiedzi była szybsza. Dla AN1792 podawanego w PBS z tymerozalem częstość i wielkość mian była niewiele wyższa niż uzyskana dla samej PBS. Szczytowe miana wytworzone przez MPL i AN1528 (szczytowa GMT 3099) były około 9-krotnie niższe niż dla AN1792. AN1528 związany z ałunem był w niewielkim stopniu immunogenny, z niskimi mianami wytworzonymi tylko u paru zwierząt. Nie obserwowano odpowiedzi przeciwciał u zwierząt kontrolnych immunizowanych samą PBS.
T a b e l a 9. Średnie geometryczne mian przeciwciała
Tydzień pobierania krwi | |||||
Leczenie | 3,3 | 5,0 | 9,0 | 13,0 | 17,0 |
Ałun/AN1792 | 102 (12/21 )b | 1081 (17/20) | 2366 (21/21) | 1083 (19/21) | 572 (18/21) |
MPL/AN1792 | 6241 (21/21) | 28867 (21/21) | 11242 (21/21) | 5665 (20/20) | 8204 (20/20) |
QS21/AN1792 | 30 (1/20) | 227 (10/19) | 327 (10/19) | 1511 (17/18) | 1188 (14/18) |
CFA/AN1792 | 10076 (15/15) | 61279 (15/15) | 75386 (15/15) | 41628 (15/15) | 30574 (15/15) |
Ałun/AN1528 | 25 (0/21) | 33 (1/21) | 39 (3/20) | 37 (1/20) | 31 (2/20) |
MPL/AN1528 | 184 (15/21) | 2591 (20/21) | 1653 (21/21) | 1156 (20/20) | 3099 (20/20) |
QS21/AN1528 | 29 (1/22) | 221 (13/22) | 51 (4/22) | 820 (20/22) | 2994 (21/22) |
PBS+tymerozal | 25 (0/16) | 33 (2/16) | 39 (4/16) | 37 (3/16) | 47 (4/16) |
PBS | 25 (0/16) | 25 (0/16) | 25 (0/15) | 25 (0/12) | 25 (0/16) |
Odnośniki:
a Średnie geometryczne mian przeciwciał zmierzonych względem Ae1-42. b Liczba odpowiadających na grupę.
Wyniki leczenia AN1792 lub AN1592 z różnymi adiuwantami lub tymerozalem na obciążenie kory amyloidem u 12-miesięcznych myszy oznaczone metodą ELISA przedstawiono na fig. 15. U PBS kontrolnych myszy PDAPP średni poziom całkowitego Ae w korze w wieku 12 miesięcy wynosił 1817 ng/g. Znacznie obniżone poziomy Ae obserwowano u myszy leczonych AN1792 plus CFA/IFA, AN1792 plus ałun, AN1792 plus MPL oraz QS21 plus AN1792. Obniżenie osiągnęło znaczącą statystycznie wartość (p<0,05) tylko dla AN1792 plus CFA/IFA. Jednakże, jak pokazano w przykładach I i III, działanie immunizacji na obniżenie poziomów Ae było znacząco większe u 15 i 18-miesięcznych myszy. Zatem oczekuje się, że przynajmniej leczenie preparatami AN1792 plus ałun, AN1792 plus MPL i AN1792 plus QS21 osiągnie znaczenie statystyczne u starszych myszy. W porównaniu z tym, AN1792 plus środek konserwujący tymerozal wytwarzał średni poziom Ae prawie taką samą jak u myszy leczonych PBS. Podobne wyniki uzyskano porównując korowe poziomy Ae42. Średni poziom Ae42 w kontrolach PBS wynosił 1624 ng/g. Wyraźnie obniżone średnich poziomów o wartościach 403, 1149, 620 i 714 obserwowano u myszy leczonych odpowiednio preparatami AN1792 plus CFA/IFA, AN1792 plus ałun, AN1792 plus MPL i AN1792 plus QS21, ze zmniejszeniem osiągającym znaczenie statystyczne (p=0,05) dla grupy leczonej AN1792 plus CFA/IFA. Wartość średnia w grupie leczonej AN1792 z tymerozalem wynosiła 1619 ng/g Ae42.
X. Analiza toksyczności
Po zakończeniu badań opisanych w przykładach 2, 3 i 7 zebrano tkanki do oceny histopatologicznej. Ponadto w końcowych próbkach krwi z przykładów 3 i 7 wykonano analizy hematologiczne i chemiczne. Oceniono większość głównych organów, włącznie z mózgiem, płucami, tkanką limfatyczną, przewodem żołądkowo-jelitowym, wątrobą, nerkami, nadnerczami i gruczołami płciowymi. Pomimo, że zaobserwowano sporadyczne uszkodzenia u badanych zwierząt, nie stwierdzono żadnych
PL 202 698 B1 oczywistych różnic, ani w zaatakowanych tkankach, ani w ostrości uszkodzeń pomiędzy zwierzętami leczonymi AN1792 a nieleczonymi. Nie stwierdzono unikatowych uszkodzeń histopatologicznych u myszy immunizowanych AN1782 w porównaniu z myszami leczonymi PBS lub nieleczonymi. Nie stwierdzono także różnic w profilu analiz chemicznych pomiędzy grupami leczonymi adiuwantem a zwierzętami leczonymi PBS w przykładzie 7. Jakkolwiek zaobserwowano znaczne wzrosty kilku parametrów hematologicznych pomiędzy zwierzętami leczonymi AN1792 z adiuwantem Freunda w przykładzie 7 w porównaniu do zwierząt leczonych PBS, ale ten typ działania był oczekiwany z leczenia adiuwantem Freunda i towarzyszącego mu zapalenia otrzewnej i nie wskazuje na jakiekolwiek niekorzystne działanie leczenia AN1792. Szczegółowe badania patologii mózgów myszy PDAPP wykonano nie jako część oceny toksykologicznej, ale jako część punktów końcowych badania skuteczności. W żadnym z tych badań nie stwierdzono jakichkolwiek oznak niekorzystnego działania na morfologię mózgu. Wyniki te wskazują, że leczenie AN1792 jest dobrze tolerowane i przynajmniej w znacznym stopniu pozbawione skutków ubocznych.
XI. Profilaktyka i leczenie pacjentów
Przeprowadzono I fazę prób z pojedynczą dawką, aby oznaczyć bezpieczeństwo. Środek leczniczy podawano w wzrastających dawkach różnym pacjentom zaczynając od dawki około 0,01, poziomu o przypuszczalnej skuteczności, i zwiększano ją 3-krotnie do czasu gdy poziom osiągnął 10-krotność skutecznej mysiej dawki.
Badania fazy II prób przeprowadzono, by oznaczyć skuteczność leczniczą. Wybrano pacjentów we wczesnej do średniej fazie choroby Alzheimera, z użyciem kryterium Alzheimer's disease and Related Disorders Association (ADRDA) na prawdopodobieństwo AD. Odpowiedni pacjenci lokowali się w zakresie 12-26 w badaniach Mini-Mental State Exam (MMSE). Innymi kryteriami wyboru było to, że pacjenci są w stanie przeżyć czas trwania testu oraz brak komplikujących danych, takich jak równoczesne stosowanie leków, które mogą wpływać na leczenie. Podstawową ocenę funkcjonowania pacjentów wykonano z użyciem klasycznych pomiarów psychometrycznych, takich jak MMSE i ADAS, które stanowią ogólną skalę oceny stanu i działania pacjentów z chorobą Alzheimera. Te skale psychometryczne dostarczają miary postępu stanu choroby Alzheimera. Do monitorowania leczenia można także zastosować odpowiednie skale jakości życia. Postęp choroby można także monitorować metodą MRI. Można także monitorować profile krwi pacjentów, włącznie z testami dla specyficznych dla antygenu odpowiedzi przeciwciał i komórek T.
Po podstawowych pomiarach pacjentów zaczęto poddawać leczenie. Losowo podzielono ich i leczono środkiem leczniczym lub placebo. Pacjentów monitorowano co najmniej 6 miesięcy. Skuteczność oznaczono jako znaczne zmniejszenie postępu w grupie leczonej względem grupy placebo.
Drugą fazę II próby przeprowadzono w celu oceny przejścia pacjentów z nie-Alzheimerowskiej wczesnej utraty pamięci, czasami nazywanej upośledzeniem pamięci związanym z wiekiem (AAMI), do prawdopodobnej choroby Alzheimera, określanej na podstawie kryterium ADRDA. Wybrano pacjentów z wysokim ryzykiem przejścia do choroby Alzheimera z nieklinicznej populacji, przeszukując populacje odniesienia pod względem wczesnych oznak utraty pamięci lub innych trudności związanych z przed-Alzheimerowskimi objawami, historii rodzinnej choroby Alzheimera, genetycznych czynników ryzyka, wieku, płci oraz innych cech, które wskazują wysokie ryzyko choroby Alzheimera. Zebrano punkty podstawowe odpowiednich miar włącznie z MMSE i ADAS, razem z innymi miernikami zaprojektowanymi do oceny bardziej normalnej populacji. Populacje tych pacjentów podzielono na dwie odpowiednie grupy z porównaniem placebo wobec wariantów dawek środka. Losy pacjentów z tych populacji śledzono z przerwami około sześciomiesięcznymi, a końcowym punktem dla każdego pacjenta było, czy na koniec obserwacji osoba ta przejdzie do fazy prawdopodobnej choroby Alzheimera oznaczonej na podstawie kryterium ADRDA.
XII. Ogólne materiały i metody
1. Pomiary miana przeciwciał
Od myszy pobrano krew robiąc niewielkie nakłucie w żyle ogonowej i zebrano około 200 gl krwi do probówki mikrowirówkowej. Od świnek morskich pobrano krew przez wygolenie najpierw okolicy tylnego golenia, a następnie nakłucie za pomocą igły nr 18 żyły śródstopowej i zebranie krwi do probówek mikrowirówkowych. Krew zostawiono do skrzepnięcia przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej (RT), zworteksowano, a następnie odwirowano przy 14000 x g przez 10 minut, aby oddzielić skrzep od surowicy. Surowicę przeniesiono do czystych probówek mikrowirówkowych i przechowywano w 4°C do czasu oznaczania miana.
PL 202 698 B1
Miana przeciwciał zmierzono metodą ELISA. 96-studzienkowe płytki do mikromianowania (płytki Costar EIA) powleczono 100 gl roztworu zawierającego 10 gg/ml Ae42 lub SAPP albo innych antygenów, jak wskazano w każdym z poszczególnych przypadków, w buforze Well Coating Buffer (0,1 M fosforan sodu, pH 8,5, 0,1% azydek sodu) i trzymano przez noc w RT. Z płytek odessano płyn i dodano surowicę do studzienek, zaczynając od rozcieńczenia 1/100 w Specimen Diluent (0,014 M fosforan sodu, pH 7,4, 0,15 M NaCl, 0,6% surowiczej albuminy bydlęcej, 0,05% tymerozalu). Bezpośrednio na płytkach wykonano 7 kolejnych 3-krotnych rozcieńczeń próbek, tak by osiągnąć końcowe rozcieńczenie 1/218700. Rozcieńczone preparaty inkubowano w powleczonych studzienkach na płytce przez 1 godzinę w RT. Następnie płytki przemyto 4-krotnie za pomocą PBS zawierającej 0,05% Tween 20. Następnie dodano do studzienek drugie przeciwciało, kozie przeciwmysiej Ig, sprzężone z peroksydazą chrzanową (otrzymane z Boehringer Mannheim), w ilości 100 gl rozcieńczenia 1/3000 w Specimen Diluent i inkubowano przez 1 godzinę w RT. Płytki ponownie przemyto 4-krotnie za pomocą PBS, Tween 20. Aby wywołać chromogen do każdej studzienki dodano 100 gl Slow TMB (3,3',5,5'-tetrametylobenzydyna otrzymana z Pierce Chemicals) i inkubowano przez 15 minut w RT. Reakcję zatrzymano przez dodanie 25 gl 2M H2SO4. Następnie odczytano intensywność barwy w Molecular Devices Vmax przy 450 nm-650 nm.
Miana zdefiniowano jako odwrotność rozcieńczenia surowicy wywołującego połowę maksymalnego OD. Zazwyczaj maksymalne OD odczytywano z początkowego rozcieńczenia 1/100, z wyjątkiem przypadków bardzo wysokich mian, przy których niezbędne było większe początkowe rozcieńczenie do ustalenia maksymalnej OD. Jeżeli punkt 50% znajdował się pomiędzy dwoma rozcieńczeniami, wykonywano liniową ekstrapolację aby wyznaczyć końcowe miano. Aby policzyć średnią geometryczną mian przeciwciał, miana niższe niż 100 były umownie oznaczane jako wartość miana 25.
2. Test proliferacji limfocytów
Myszy uśpiono izofluranem. Śledziony usunięto i przepłukano dwukrotnie w 5 ml PBS zawierającej 10% inaktywowanej termicznie płodowej surowicy bydlęcej (PBS-FBS), zhomogenizowano w 50 g Centricon Unit (Dako A/S, Denmark) w 1,5 ml PBS-FBS przez 10 sekund przy 10 rpm w Medimachine (Dako), a następnie przefiltrowano przez nylonowe sito o średnicy porów 100 g. Limfocyty śledzionowe przemyto jeden raz 15 ml PBS-FBS, następnie osadzono przez wirowanie przy 200 x g przez 5 minut. Czerwone krwinki zlizowano zawieszając osad w 5 ml buforu zawierającego 0,15 M NH4CI, 1M KHCO3, 0,1 M NaEDTA, pH 7.4 przez 5 minut w RT. Następnie leukocyty przemyto w sposób opisany powyżej. Świeżo wyizolowane komórki śledzionowe (105 na studzienkę) hodowano w 3 powtórzeniach zestawów w 96-studzienkowych płytkach do mikromianowania, do hodowli tkankowych, o dnie w kształcie litery U (Corning, Cambridge, MA) w pożywce RPMI 1640 (JRH Biosciences, Lenexa, KS) wzbogaconej 2.05 ml L-glutaminy, 1% penicyliną/streptomycyną oraz 10% inaktywowaną termicznie FBS, przez 96 godzin w 37°C. Dodawano także różne peptydy Ae, Ae1-16, Ae1-40, Ae1-42 lub o odwrotnej sekwencji aminokwasowej Ae40-1, w dawkach wynoszących od 5 gM do 0,18 gM w czterech etapach. Komórki w studzienkach kontrolnych hodowano z konkanawaliną A (Con A) (Sigma, nr katalogowy C-5275, w stężeniu 1 gg/ml) bez dodawania białka. Do komórek na ostatnie 24 godziny dodano 3H-tymidynę (1 gCi/studzienkę uzyskanej z Amersham Corp., Arlington Heights IL). Następnie komórki zebrano na płytki UniFilter i zmierzono radioaktywność licznikiem Top Count Microplate Scintillation Counter (Packard Instruments, Downers Grove, IL). Wyniki wyrażono jako impulsy na minutę (cpm) radioaktywności włączonej do nierozpuszczalnych makrocząsteczek.
4. Preparowanie tkanek mózgowych
Po uśmierceniu zwierząt mózgi usunięto i jedną półkulę przygotowano do analizy immunohistochemicznej, a z drugiej półkuli wypreparowano 3 regiony mózgu (hipokamp, korę i móżdżek) i zastosowano do zmierzenia stężeń różnych białek Ae i form APP metodą specyficznych testów ELISA (Johnson-Wood i inni, supra).
Tkanki przeznaczone do testów ELISA zhomogenizowano w 10 objętościach lodowatego buforu guanidynowego (5,0 M guanidyna-HCl, 50 mM Tris-HCl, pH 8,0). Homogentay zmieszano przez delikatne wstrząsanie w aparacie Adams Nutator (Fisher) przez 3-4 godziny w RT i przechowywano w -20°C przed oznaczeniem Ae i APP. Wcześniejsze doświadczenia wykazały, że preparaty analityczne były stabilne w tych warunkach przechowywania, oraz że syntetyczne białko Ae (Bachem) można ilościowo odzyskać po wkłuciu homogenatów kontrolnej tkanki mózgowej z miotów mysich (Johnson-Wood i inni, supra).
PL 202 698 B1
5. Pomiar poziomów Ae
Homogenaty mózgu rozcieńczono w stosunku 1:10 lodowatym Casein Diluent (0,25% kazeina, PBS, 0,05% azydek sodu, 20 μg/ml aprotyniny, 5 mM EDTA pH 8,0, 10 μg/ml leupeptyny), a następnie odwirowano przy 16000 x g przez 20 minut w 4°C. Wzorce syntetycznego peptydu Ae (aminokwasy 1-42) i wzorce APP przygotowano tak, by zawierały 0,5 M guanidynę i 0,1% surowiczą albuminę bydlęcą (BSA) i ostatecznym preparacie. W teście kanapkowym ELISA „całkowitego Ae stosowano monoklonalne przeciwciała (mAe) 266, specyficzne dla aminokwasów 13-28 Ae (Seubert i inni) jako przeciwciało wychwytujące oraz biotynylowane mAe 3D6, specyficzne dla aminokwasów 1-5 Ae (Johnson-Wood i inni) jako przeciwciało reporterowe. 3D6 mAe nie rozpoznaje wydzielanej APP ani pełnej długości APP, ale wykrywa tylko Ae z N-końcowym kwasem asparaginowym. Test ten ma niższą granicę czułości ~50 pg/ml (11 pM) i nie wykazuje reaktywności krzyżowej z endogennym mysim białkiem Ae w stężeniach do 1 ng/ml (Johnson-Wood i inni, supra).
W specyficznym dla Ae1-42 kanapkowym teście ELISA stosuje się mAe 21F12, specyficzne dla aminokwasów 33-42 Ae (Johnson-Wood i inni) jako przeciwciało wychwytujące. Biotynylowane mAe 3D6 jest także przeciwciałem reporterowym w tym teście, który ma niższą granicę czułości, wynoszącą około 125 pg/ml (28 pM, Johnson-Wood i inni). Do testów Ae ELISA studzienki 96-studzienkowych płytek do immunotestów (Costar) powlekano 100 μl mAe 266 (w stężeniu 10 μg/ml) lub mAe 21F12 (w stężeniu 5 μg/ml) z inkubowaniem przez noc w RT. Roztwór usunięto przez odessanie i studzienki zablokowano przez dodanie 200 μl 0,25% surowiczej albuminy ludzkiej w buforze PBS na co najmniej 1 godzinę w RT. Roztwór blokujący usunięto i płytki przechowywano wysuszone w 4°C do czasu zastosowania. Płytki przed użyciem nawodniono buforem Wash Buffer [sól buforowana Tris (0,15 M NaCl, 0,01 M Tris-HCl, pH 7,5), plus 0,05% Tweed 20]. Próbki i wzorce dodano w trzech powtórzeniach równych części po 100 μl na studzienkę, a następnie inkubowano przez noc w 4°C. Płytki przemywano co najmniej 3-krotnie buforem Wash Buffer pomiędzy każdym z etapów testu. Dodano biotynylowane mAe 3D6, rozcieńczone do 0,5 nl/ml w buforze Casein Assay Buffer (0,25% kazeina, PBS, 0,05% Tween 20, pH 7,4) i inkubowano w studzienkach przez 1 godzinę w RT. Koniugat awidynaperoksydaza chrzanowa (Avidin-HRP uzyskana z Vector, Burlingame, CA) rozcieńczony 1:4000 w Casein Assay Buffer dodano na 1 godzinę w TP. Dodano kolorymetryczny substrat, Slow TMBELISA (Pierce) i pozostawiono do reakcji przez 15 minut w RT, po czym reakcję enzymatyczną zatrzymano przez dodanie 25 μl 2N H2SO4. Produkt reakcji oznaczono stosując Molecular Devices Vmax mierzący różnicę absorpcji przy 450 nm i 650 nm.
6. Pomiar poziomów APP
Zastosowano dwa różne testy APP. Pierwszy, nazwany APP-a/FL, rozpoznaje zarówno APPalfa (a), jak i formy APP pełnej długości (FL). Drugi test rozpoznaje tylko APP-α. Test APP-a/FL rozpoznaje wydzielaną postać APP włącznie z pierwszymi 12 aminokwasami Ae. Ponieważ przeciwciało reporterowe (2H3) nie jest specyficzne dla miejsca α-klamerki, występującego pomiędzy 612-613 aminokwasem APP695 (Esch i inni, Science 248, 1122-1124 (1990)), test ten rozpoznaje również pełne długości APP (APP-FL). Wstępne doświadczenia z immobilizowanymi przeciwciałami APP przeciw cytoplastycznemu ogonowi APP-FL, w celu usunięcia APP-FL z homogenatów mózgowych zasugerowały, że około 30-40% APP-a/FL APP jest FL (dane nie prezentowane). Przeciwciałem wychwytującym w obu testach APP-a/FL i APP-a jest mAP 8E5 wytworzone przeciw aminokwasom 444 do 592 formy APP695 (Games i inni, supra). Reporterowym mAe dla testu APP-a/FL jest mAe 2H3, specyficzne dla aminokwasów 597-608 formy APP695 (Johnson-Wood i inni, supra), a przeciwciałem reporterowym dla testu APP-a jest biotynylowana pochodna mAe 16H9, wytworzona przeciw aminokwasom 605 do 611 APP. Niższa granica czułości testu APP-a/FL wynosi 11 ng/ml (150 pM) (Johnson-Wood i inni), a testu specyficznego dla APP-a wynosi 22 ng/ml (0,3 nM). Dla obydwu testów APP studzienki 96-studzienkowych płytek EIA powlekano mAP 8E5, jak opisano powyżej dla mAe 266. Oczyszczone, zrekombinowane wydzielane APP-a zastosowano jako wzorzec do testu APP-a i testu APP-a/FL (Esch i inni, supra). Próbki homogenatu mózgu w 5 M guanidynie rozcieńczono 1:10 w ELISA Specimen Diluent (0,014 M bufor fosforanowy, pH 7,4, 0,6% surowicza albumina bydlęca, 0,05% tymerozal, 0,5 M NaCl, 0,1% NP40). Następnie rozcieńczono je 1:4 w Specimen Diluent zawierającym 0,5 M guanidynę. Rozcieńczone homogenaty odwirowano przy 16000 x g przez 15 sekund w RT. Wzorce APP i próbki dodano do płytek w dwóch powtórzeniach tych samych ilości i inkubowano przez 1,5 godziny w RT. Biotynylowane przeciwciała reporterowe 2H3 i 16H9 inkubowano z próbkami przez 1 godzinę w RT. Streptawidynę-alkaliczną fosfatazę (Boehringer Mannheim) rozcieńczoną 1:1000 w Specimen Diluent inkubowano w studzienkach przez 1 godzinę w RT. Dodano fluorescencyjnego
PL 202 698 B1 substratu, fosforanu 4-metylo-umbeliferylu i inkubowano 30 minut w RT, a następnie płytki odczytano w fluorymetrze Cytofluor tm 2350 (Millipore) przy 365 nm pobudzenia i 450 nm emisji.
7. Immunohistochemia
Mózgi utrwalano przez 3 dni w 4°C w 4% paraformaldehydzie w PBS, a następnie przechowywano 1-7 dni w 4°C w 1% paraformaldehydzie, PBS przed pocięciem na skrawki. Wieńcowe skrawki histologiczne o grubości 40 mikronów cięto na wibratomie w RT i przechowywano w buforze chroniącym przed zamarznięciem (30% gliceryna, 30% glikol etylenowy w buforze fosforanowym) w -20°C przed obróbką immunohistochemiczną. Dla każdego mózgu 6 fragmentów na poziomie hipokampu grzbietowego, każdy oddzielony kolejnymi 240 μm przerwami, inkubowano przez noc z jednym z następujących przeciwciał: (1) biotynylowanym przeciw-Ae (mAe, 3D6, specyficznym dla ludzkiego Ae) rozcieńczonym do stężenia 2 μg/ml w PBS i 1% surowicy końskiej; lub (2) biotynylowanym mAe, specyficznym dla ludzkiego APP, 8E5, rozcieńczonym do stężenia 3 μg/ml w PBS i 1,0% surowicy końskiej; lub (3) mAe specyficznym dla glejowego włókienkowego białka kwasowego (GFAP; Sigma Chemical Co.) rozcieńczonym 1:500 w 0,25% Triton X-100 i 1% surowicy końskiej w soli buforowanej Trisem, pH 7,4 (TBS); lub (4) mAe specyficznym dla CD11b, antygenu MAC-1, (Chemicon International) rozcieńczonym w stosunku 1:100 w 0,25% Triton X-100 i 1% króliczej surowicy w TBS; lub (5) mAe specyficznym dla antygenu MHC II, (Pharmingen) rozcieńczonym w stosunku 1:100 w 0,25% Triton X-100 i 1% króliczej surowicy w TBS; lub (6) szczurzym mAe specyficznym dla CD 43, (Pharmingen) rozcieńczonym w stosunku 1:100 z 1% króliczej surowicy w PBS; lub (7) szczurzym mAe specyficznym dla CD 45RA, (Pharmingen) rozcieńczonym w stosunku 1:100 z 1% króliczej surowicy w PBS; lub (8) szczurzym monoklonalnym Ae specyficznym dla CD 45RB, (Pharmingen) rozcieńczonym w stosunku 1:100 z 1% króliczej surowicy w PBS; lub (9) szczurzym monoklonalnym Ae specyficznym dla CD 45, (Pharmingen) rozcieńczonym w stosunku 1:100 z 1% króliczej surowicy w PBS; lub (10) biotynylowanym chomiczym poliklonalnym Ae specyficznym dla CD3e, (Pharmingen) rozcieńczonym w stosunku 1:100 z 1% króliczej surowicy w PBS; lub (11) szczurzym mAe specyficznym dla CD3, (Serotec) rozcieńczonym w stosunku 1:200 z 1% króliczej surowicy w PBS; lub z (12) roztworem PBS nie zawierającym pierwotnych przeciwciał, zawierającym 1% normalną surowicę końską.
Skrawki histologiczne poddane działaniu roztworów przeciwciał wymienionych w 1, 2 i 6-12 powyżej wcześniej traktowano roztworem 1,0% Triton X-100, 0,4% nadtlenku wodoru w PBS przez 20 minut w RT aby zablokować endogenne peroksydazy. Następnie inkubowano je przez noc w 4°C z pierwotnymi przeciwciałami. Skrawki poddane działaniu 3D6 lub 8E5 lub CD3e mAe następnie poddano przez 1 godzinę w RT reakcji z kompleksem peroksydaza chrzanowa-awidyna-biotyna ze składnikami zestawu „A i „B rozcieńczonymi 1:75 w PBS (Vector Elite Standard Kit, Vector Labs, Burlingame, CA.). Skrawki poddane działaniu przeciwciał specyficznych dla CD 45RA, CD 45RB, CD 45, CD3 i roztworem PBS pozbawionym pierwotnych przeciwciał inkubowano przez 1 godzinę w RT odpowiednio z biotynylowanymi przeciwciałami przeciw-szczurzym IgG (Vector) rozcieńczonymi 1:75 w PBS lub biotynylowanymi przeciwciałami przeciw-mysim IgG (Vector) rozcieńczonymi 1:75 w PBS. Następnie skrawki przez 1 godzinę w RT reakcji z kompleksem peroksydaza chrzanowa-awidynabiotyna ze składnikami zestawu „A i „B rozcieńczonymi 1:75 w PBS (Vector Elite Standard Kit, Vector Labs, Burlingame, CA.).
Skrawki wywołano w 0,01% nadtlenku wodoru, 0,05% 3,3'-diaminobenzydynie (DAB) w RT. Skrawki przeznaczone do inkubacji z przeciwciałami specyficznymi dla GFAP, MAC-1 i MHC II wcześniej traktowano 0,6% nadtlenkiem wodoru w RT aby zablokować endogenne peroksydazy, a następnie inkubowano przez noc w 4°C z pierwotnymi przeciwciałami. Skrawki poddane działaniu przeciwciała GFAP inkubowano 1 godzinę w RT z biotynylowanymi przeciwciałami przeciwmysiej IgG, wytworzonymi u koni (Vector Laboratories; zestaw Vectastain Elite ABC Kit) rozcieńczonymi 1:200 w TBS. Następnie skrawki inkubowano przez 1 godzinę z kompleksem peroksydaza-awidyna-biotyna (Vector Laboratories; \/ectastain Elite ABC Kit) rozcieńczonym 1:1000 w TBS. Skrawki inkubowane z przeciwciałami mAe specyficznymi dla MAC-1 i MHC Il jako pierwotnymi przeciwciałami kolejno poddano reakcji przez 1 godzinę w RT z biotynylowanymi przeciwciałami przeciw-szczurzym IgG wytworzonymi w królikach, rozcieńczonymi 1:200 w TBS, następnie inkubowane przez 1 godzinę z kompleksem peroksydaza chrzanowa-awidyna-biotyna rozcieńczonym 1:1000 w TBS. Skrawki inkubowane z przeciwciałami specyficznymi dla GFAP, MAC-1 i MHC II wywołano inkubując je w RT z 0,05% DAB, 0,01% nadtlenkiem wodoru, 0,04% chlorkiem niklu, TBS odpowiednio przez 4 i 11 minut.
PL 202 698 B1
Wyznakowane immunologicznie skrawki umieszczono na szklanych szkiełkach przedmiotowych (VWR, Superfrost slides), wysuszono na powietrzu przez noc, zanurzono w Propar (Anatech) i nałożono na nie szkiełka nakrywkowe stosując Permount (Fisher) jako środek osadzający.
Aby przeciwnie wybarwić płytki Ap podzestaw GFAP-dodatnich skrawków umieszczono na szkiełkach przedmiotowych Superfrost i inkubowano w wodnej 1% Thioflavin S (Sigma) przez 7 minut po obróbce immunohistochemicznej. Następnie skrawki odwodniono i oczyszczono w Propar, po czym nałożono na nie szkiełka nakrywkowe osadzając je z użyciem Permount.
8. Analiza obrazu
Do oceny ilościowej immunoreaktywnych skrawków zastosowano Videometric 150 Image Analysis System (Oncor, Inc. Gaithersburg, MD) sprzężony z mikroskopem Nikon Microphot-FX przez kamerę wideo CCD i monitor Sony Trinitron. Obraz skrawków był przechowywany w buforze wideo i oznaczono próg koloru i nasycenia aby wybrać i policzyć całkowity obszar pikseli zajmowany przez wyznakowane immunologicznie struktury. Dla każdego skrawka hipokamp obrysowano ręcznie i obliczono całkowity obszar pikseli zajmowany przez hipokamp. Procent obciążenia amyloidem zmierzono jako: (frakcja obszaru hipokampu zawierająca złogi Ap immunoreaktywne z mAp 3D6) x 100. Podobnie procent obciążenia neurytycznego zmierzono jako: (frakcja obszaru hipokampu zawierająca dystroficzne neuryty reagujące z mAp 8E5) x100. C-Imaging System (Comprix, Inc., Cranberry Township, PA) wykorzystujący program Simple 32 Software Application połączono z mikroskopem Nikon Microphot-FX przez kamerę Optronics i zastosowano do ilościowej oceny procentu kory pozamodzelowatej zajętej przez GFAP-dodatnie astrocyty i MAC-1- i MHC II-dodatni mikroglej. Obraz immunoreaktywnych skrawków przechowywano w buforze wideo i wyznaczono próg monochromatyczny, aby wybrać i policzyć całkowity obszar pikseli zajmowany przez wyznakowane immunologicznie komórki. Dla każdego skrawka korę pozamodzelowatą (RSC) ręcznie obrysowano i obliczono całkowity obszar pikseli zajmowany przez RSC. Procent astrocytozy zdefiniowano jako: (frakcja obszaru RSC zajmowana przez GFAP-reaktywne astrocyty) x 100. Podobnie procent mikroglejozy zdefiniowano jako: (frakcja obszaru RSc zajmowana przez mikroglej reaktywny z MAC-1 i MHC II) x 100. Do wszystkich analiz obrazu 6 skrawków na poziomie hipokampu grzbietowego, każdy oddzielony kolejnymi 240 pm przerwami, oznaczono ilościowo dla każdego zwierzęcia. We wszystkich przypadkach status leczniczy zwierząt nie był znany obserwatorowi.
Jakkolwiek powyższy wynalazek opisano szczegółowo w celu jego wyjaśnienia i zrozumienia, oczywiste jest, że dokonać można pewnych modyfikacji w ramach zakresu załączonych zastrzeżeń. Wszystkie cytowane publikacje i dokumenty patentowe wprowadza się niniejszym w całości jako odnośniki we wszystkich celach w stopniu, w jakim zostały one wymienione.
T a b e l a 1. Miana przy 50% O.D.
Myszy, którym wstrzykiwano zagregowany Ap | |||||||||
Wiek PDAPP | mysz 100 | mysz 101 | mysz 102 | mysz 103 | mysz 104 | mysz 105 | mysz 106 | mysz 107 | mysz 108 |
4 | 70000 | 150000 | 15000 | 120000 | 1000 | 15000 | 50000 | 80000 | 100000 |
6 | 15000 | 65000 | 30000 | 55000 | 300 | 15000 | 15000 | 50000 | 60000 |
8 | 20000 | 55000 | 50000 | 50000 | 400 | 15000 | 18000 | 50000 | 60000 |
10 | 40000 | 20000 | 60000 | 50000 | 900 | 15000 | 50000 | 20000 | 40000 |
12 | 25000 | 30000 | 60000 | 40000 | 2700 | 20000 | 70000 | 25000 | 20000 |
Myszy, którym wstrzykiwano PBS z dwoma immunogenami w 1/100 | |||||||||
Wiek PDAPP | mysz 113 | mysz 114 | mysz 115 | mysz 116 | mysz 117 | ||||
6 | <4x bkg | <4x bkg | <4x bkg | <4x bkg | <4x bkg | ||||
10 | 5x bkg | <4x bkg | <4x bkg | <4x bkg | <4x bkg | ||||
12 | <4x bkg | <4x bkg | <4x bkg | <4x bkg | <4x bkg |
PL 202 698 B1
Claims (12)
- Zastrzeżenia patentowe1. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera ludzkie lub humanizowane przeciwciało, które specyficznie wiąże się z Ae i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, przy czym izotyp tego przeciwciała stanowi ludzkie IgG1.
- 2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że przeciwciało stanowi monoklonalne przeciwciało.
- 3. Zastosowanie ludzkiego lub humanizowanego przeciwciała, które specyficznie wiąże się z Ae, gdzie izotyp przeciwciała stanowi ludzkie IgG1, do wytwarzania leku do leczenia lub profilaktyki choroby Alzheimera u pacjenta, przy czym złogi amyloidowe zawierają zagregowany peptyd Ae.
- 4. Zastosowanie według zastrz. 3, w którym przeciwciało stanowi monoklonalne przeciwciało.
- 5. Zastosowanie według zastrz. 3 albo 4, w którym pacjentem jest człowiek.
- 6. Zastosowanie według zastrz. 3 albo 4 do wytwarzania leku do profilaktyki choroby Alzheimera u pacjenta, w którym u pacjenta nie występują objawy.
- 7. Zastosowanie według zastrz. 3 albo 4, w którym pacjent ma mniej niż 50 lat.
- 8. Zastosowanie według zastrz. 3 albo 4, w którym pacjent ma odziedziczone czynniki ryzyka wskazujące podatność na chorobę Alzheimera.
- 9. Zastosowanie według zastrz. 3 albo 4, w którym pacjent nie ma znanych czynników ryzyka choroby Alzheimera.
- 10. Zastosowanie według zastrz. 3 albo 4, w którym lek podaje się doustnie, podskórnie, domięśniowo, miejscowo lub dożylnie.
- 11. Zastosowanie według zastrz. 3 albo 4, w którym lek podaje się domięśniowo lub podskórnie.
- 12. Zastosowanie według zastrz. 3 albo 4, w którym pacjent jest monitorowany pod względem odpowiedzi immunologicznej.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US6774097P | 1997-12-02 | 1997-12-02 | |
US8097098P | 1998-04-07 | 1998-04-07 | |
PCT/US1998/025386 WO1999027944A1 (en) | 1997-12-02 | 1998-11-30 | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL202698B1 true PL202698B1 (pl) | 2009-07-31 |
Family
ID=26748211
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL384504A PL202706B1 (pl) | 1997-12-02 | 1998-11-30 | Kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie immunogennego środka połączonego z cząsteczką nośnika |
PL384503A PL202698B1 (pl) | 1997-12-02 | 1998-11-30 | Kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie ludzkiego lub humanizowanego przeciwciała |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL384504A PL202706B1 (pl) | 1997-12-02 | 1998-11-30 | Kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie immunogennego środka połączonego z cząsteczką nośnika |
Country Status (38)
Country | Link |
---|---|
US (26) | US20040171816A1 (pl) |
EP (5) | EP1033996B1 (pl) |
JP (4) | JP4677094B2 (pl) |
KR (3) | KR20120135915A (pl) |
CN (1) | CN100374151C (pl) |
AR (1) | AR020050A1 (pl) |
AT (4) | ATE493149T1 (pl) |
AU (1) | AU1706199A (pl) |
BG (1) | BG104562A (pl) |
BR (1) | BR9815357A (pl) |
CA (1) | CA2312920C (pl) |
CO (1) | CO4980846A1 (pl) |
CY (3) | CY1108331T1 (pl) |
CZ (1) | CZ303137B6 (pl) |
DE (7) | DE69840969D1 (pl) |
DK (4) | DK1033996T3 (pl) |
EA (3) | EA200000608A1 (pl) |
EE (1) | EE05377B1 (pl) |
ES (4) | ES2263408T3 (pl) |
GE (2) | GEP20053715B (pl) |
HK (2) | HK1095265A1 (pl) |
HR (2) | HRP20000443B1 (pl) |
HU (2) | HU228493B1 (pl) |
ID (1) | ID25504A (pl) |
IL (5) | IL136252A0 (pl) |
IS (1) | IS5500A (pl) |
MY (1) | MY134906A (pl) |
NO (3) | NO328865B1 (pl) |
NZ (1) | NZ504569A (pl) |
PE (1) | PE20001383A1 (pl) |
PL (2) | PL202706B1 (pl) |
PT (4) | PT1994937E (pl) |
SA (1) | SA99191269B1 (pl) |
SG (1) | SG111083A1 (pl) |
SI (4) | SI1033996T1 (pl) |
TR (1) | TR200001608T2 (pl) |
TW (1) | TWI239847B (pl) |
WO (1) | WO1999027944A1 (pl) |
Families Citing this family (295)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0866805A1 (en) | 1995-12-12 | 1998-09-30 | Karolinska Innovations AB | PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b) |
US8173127B2 (en) * | 1997-04-09 | 2012-05-08 | Intellect Neurosciences, Inc. | Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof |
US6703015B1 (en) | 1999-09-03 | 2004-03-09 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Filamentous bacteriophage displaying an β-amyloid epitope |
US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US7588766B1 (en) * | 2000-05-26 | 2009-09-15 | Elan Pharma International Limited | Treatment of amyloidogenic disease |
US6761888B1 (en) * | 2000-05-26 | 2004-07-13 | Neuralab Limited | Passive immunization treatment of Alzheimer's disease |
US6750324B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-06-15 | Neuralab Limited | Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies |
US7964192B1 (en) * | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
US7790856B2 (en) | 1998-04-07 | 2010-09-07 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US6905686B1 (en) | 1997-12-02 | 2005-06-14 | Neuralab Limited | Active immunization for treatment of alzheimer's disease |
US7179892B2 (en) * | 2000-12-06 | 2007-02-20 | Neuralab Limited | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
TWI239847B (en) * | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
US6787523B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
US20050059802A1 (en) * | 1998-04-07 | 2005-03-17 | Neuralab Ltd | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
WO1999060024A1 (en) * | 1998-05-21 | 1999-11-25 | The University Of Tennessee Research Corporation | Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies |
US20030147882A1 (en) | 1998-05-21 | 2003-08-07 | Alan Solomon | Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies |
US7060670B1 (en) | 1999-05-05 | 2006-06-13 | Neurochem (International) Limited | Stereoselective antifibrillogenic peptides and peptidomimetics thereof |
KR100863367B1 (ko) | 1999-05-13 | 2008-10-13 | 와이어쓰 홀딩스 코포레이션 | 보조제 배합 제형물 |
AU2008203784B2 (en) * | 1999-05-28 | 2012-01-19 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
US6787637B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | N-Terminal amyloid-β antibodies |
AU2005202644B2 (en) * | 1999-06-01 | 2009-03-05 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
UA81216C2 (en) | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
PE20010212A1 (es) * | 1999-06-01 | 2001-02-22 | Neuralab Ltd | Composiciones del peptido a-beta y procesos para producir las mismas |
AU780474B2 (en) | 1999-06-16 | 2005-03-24 | Boston Biomedical Research Institute Incorporated | Immunological control of beta-amyloid levels in vivo |
US6919075B1 (en) * | 1999-09-03 | 2005-07-19 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Bacteriophage displaying aβ epitopes and method of use |
US7384640B1 (en) | 1999-09-30 | 2008-06-10 | Wyeth Holdings Corporation | Mutant cholera holotoxin as an adjuvant |
US20070135337A2 (en) * | 1999-11-29 | 2007-06-14 | Neurochem (International) Limited | Vaccine for the Prevention and Treatment of Alzheimer's and Amyloid Related Diseases |
US20020094335A1 (en) * | 1999-11-29 | 2002-07-18 | Robert Chalifour | Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases |
EP1752472A3 (en) * | 1999-12-08 | 2007-04-25 | Intellect Neurosciences, Inc. | Chimeric amyloid beta peptides |
WO2001042306A2 (en) | 1999-12-08 | 2001-06-14 | Mindset Biopharmaceuticals (Usa), Inc. | Chimeric peptides (short b-cell epitope joined to a t-cell epitope) and their use for immunization |
MXPA02007796A (es) | 2000-02-21 | 2003-12-08 | Pharmexa As | Metodo novedoso para la disminucion de cuerpos amiloides. |
ATE306933T1 (de) * | 2000-02-21 | 2005-11-15 | Pharmexa As | Verfahren zur herabregulierung von amyloid |
MXPA02008145A (es) * | 2000-02-24 | 2004-04-05 | Univ Washington | Anticuerpos humanizados que secuestran al peptido beta amiloide. |
CA2404237C (en) | 2000-04-05 | 2010-01-26 | University Of Tennessee Research Corporation | Methods of investigating, diagnosing, and treating amyloidosis |
DE60108111T2 (de) | 2000-05-22 | 2005-12-08 | New York University | Synthetische immunogene jedoch nicht amyloidogene peptide, die homolog zu amyloid beta sind und deren verwendung zur induktion einer immunantwort gegen amyloid beta und amyloidaggregate |
JP2003516929A (ja) * | 2000-06-01 | 2003-05-20 | ニユーララブ・リミテツド | アミロイド形成性疾患の予防および治療 |
US7371920B2 (en) | 2000-06-20 | 2008-05-13 | The Governing Council Of The University Of Toronto | Transgenic mouse model of neurodegenerative disorders |
DK1292187T3 (da) | 2000-06-20 | 2006-08-21 | Univ Toronto | Transgen dyremodel for neurodegenerative lidelser |
DK1294892T3 (da) | 2000-06-23 | 2008-01-28 | Wyeth Corp | Aggregering af vildtype- og kimære influenzaviruslignende partikler (VLP'er) |
AU2001268828C1 (en) | 2000-06-28 | 2006-12-14 | Prana Biotechnology Limited | Neurotoxic oligomers |
EP1309341A2 (en) * | 2000-07-07 | 2003-05-14 | Lars Lannfelt | Prevention and treatment of alzheimer's disease |
AU2007200047B2 (en) * | 2000-07-07 | 2009-11-26 | Bioarctic Neuroscience Ab | Prevention and treatment of Alzheimer's disease |
DE60139788D1 (de) * | 2000-09-06 | 2009-10-15 | Aventis Pharma Sa | Verfahren und zusammensetzungen für amyloidosis-verbundene krankheiten |
AU1225702A (en) * | 2000-09-19 | 2002-04-02 | Evotec Neurosciences Gmbh | Methods and compounds for treating brain amyloidosis |
IL139308A0 (en) * | 2000-10-26 | 2001-11-25 | Marikovsky Moshe | Peptides from amyloid precursor protein which inhibit tumor growth and metastasis |
CN1533285A (zh) | 2000-11-10 | 2004-09-29 | ���Ͽع�����˾ | 佐剂组合制剂 |
EP1346036B1 (en) | 2000-11-29 | 2010-04-28 | University of Rochester | Helper virus-free herpes virus amplicon particles and uses thereof |
US7700751B2 (en) | 2000-12-06 | 2010-04-20 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide |
PE20020574A1 (es) * | 2000-12-06 | 2002-07-02 | Wyeth Corp | Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta |
ATE501161T1 (de) | 2000-12-28 | 2011-03-15 | Wyeth Llc | Rekombinantes schutzprotein aus streptococcus pneumoniae |
US7320793B2 (en) | 2001-01-19 | 2008-01-22 | Cytos Biotechnology Ag | Molecular antigen array |
US6815175B2 (en) | 2001-03-16 | 2004-11-09 | Cornell Research Foundation, Inc. | Anti-amyloid peptide antibody based diagnosis and treatment of a neurological disease or disorder |
GB0109297D0 (en) | 2001-04-12 | 2001-05-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
EP1385545B1 (en) | 2001-04-30 | 2009-01-07 | Eli Lilly And Company | Humanized antibodies recognizing the beta-amyloid peptide |
WO2002088307A2 (en) | 2001-04-30 | 2002-11-07 | Eli Lilly And Company | Humanized antibodies |
US8092791B2 (en) | 2001-05-23 | 2012-01-10 | University Of Rochester | Method of producing herpes simplex virus amplicons, resulting amplicons, and their use |
US6906169B2 (en) | 2001-05-25 | 2005-06-14 | United Biomedical, Inc. | Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide |
KR100898648B1 (ko) | 2001-06-07 | 2009-05-22 | 와이어쓰 홀딩스 코포레이션 | 보조제로서 콜레라 홀로톡신의 돌연변이체 형태 |
CN1541111A (zh) | 2001-06-07 | 2004-10-27 | ���Ͽع�����˾ | 作为佐剂的霍乱全毒素的突变形式 |
US7829087B2 (en) | 2001-07-09 | 2010-11-09 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating cognitive impairment |
AU2002312566A1 (en) | 2001-07-09 | 2003-01-29 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods of inhibiting amyloid toxicity |
WO2003016467A2 (en) * | 2001-08-17 | 2003-02-27 | Eli Lilly And Company | Use of antibodies having high affinity for soluble ass to treat conditions and diseases related to ass |
ES2391905T3 (es) | 2001-08-17 | 2012-11-30 | Washington University | Método de ensayo para la enfermedad de alzheimer |
US20040192898A1 (en) * | 2001-08-17 | 2004-09-30 | Jia Audrey Yunhua | Anti-abeta antibodies |
EP1416965B8 (en) * | 2001-08-17 | 2008-02-13 | Washington University | Assay method for alzheimer's disease |
WO2003015691A2 (en) * | 2001-08-17 | 2003-02-27 | Eli Lilly And Company | RAPID IMPROVEMENT OF COGNITION IN CONDITIONS RELATED TO A$g(b) |
MY144532A (en) * | 2001-08-20 | 2011-09-30 | Lundbeck & Co As H | Novel method for down-regulation of amyloid |
US20030082191A1 (en) * | 2001-08-29 | 2003-05-01 | Poduslo Joseph F. | Treatment for central nervous system disorders |
MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
AU2002357007A1 (en) * | 2001-11-21 | 2003-06-10 | New York University | SYNTHETIC IMMUNOGENIC BUT NON-DEPOSIT-FORMING POLYPEPTIDES AND PEPTIDES HOMOLOGOUS TO AMYLOID Beta, PRION PROTEIN, AMYLIN, Alpha-SYNUCLEIN, OR POLYGLUTAMINE REPEATS FOR INDUCTION OF AN IMMUNE RESPONSE THERETO |
US20040052928A1 (en) | 2002-09-06 | 2004-03-18 | Ehud Gazit | Peptides and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases |
WO2005000193A2 (en) * | 2003-06-30 | 2005-01-06 | Tel Aviv University Future Technology Development L.P. | Peptides antibodies directed thereagainst and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases |
AR038568A1 (es) | 2002-02-20 | 2005-01-19 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-a beta y su uso |
US20040001848A1 (en) * | 2002-03-01 | 2004-01-01 | Szu-Yi Chou | Method of producing disease-specific antigens |
CA2477675C (en) * | 2002-03-05 | 2013-05-21 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Immunizing composition and method for inducing an immune response against the .beta.-secretase cleavage site of amyloid precursor protein |
MY139983A (en) * | 2002-03-12 | 2009-11-30 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US20040091945A1 (en) * | 2002-07-17 | 2004-05-13 | Cheryl Fitzer-Attas | Peptides and methods of screening immunogenic peptide vaccines against Alzheimer's Disease |
WO2004016282A1 (en) | 2002-07-19 | 2004-02-26 | Cytos Biotechnology Ag | Vaccine compositions containing amyloid beta1-6 antigen arrays |
US7252953B2 (en) | 2002-08-13 | 2007-08-07 | United States Of America Department Of Veterans Affairs | Method of detecting and preventing Alzheimer's disease, particularly at prodromal and early stages |
US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
US9535076B2 (en) | 2002-09-12 | 2017-01-03 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for eliciting an amyloid-selective immune response |
DE60336848D1 (de) | 2002-09-12 | 2011-06-01 | Univ California | Immunogene und entsprechende antikörper, die spezifisch sind für häufige hochmolekulare aggregations-zwischenprodukte von amyloiden aus proteinen unterschiedlicher sequenz |
MXPA05003621A (es) * | 2002-10-09 | 2005-10-19 | Rinat Neuroscience Corp | Metodos de tratamiento de la enfermedad de alzheimer usando anticuerpos dirigidos contra el peptido beta amiloide y composiciones de los mismos. |
US20080014194A1 (en) | 2003-10-31 | 2008-01-17 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Prevention and Treatment of Synucleinopathic and Amyloidogenic Disease |
US8697082B2 (en) | 2002-11-01 | 2014-04-15 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
TW200509968A (en) | 2002-11-01 | 2005-03-16 | Elan Pharm Inc | Prevention and treatment of synucleinopathic disease |
US9034337B2 (en) | 2003-10-31 | 2015-05-19 | Prothena Biosciences Limited | Treatment and delay of outset of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
US8506959B2 (en) | 2002-11-01 | 2013-08-13 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
CN100450551C (zh) * | 2002-11-29 | 2009-01-14 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 用于治疗和预防阿尔茨海默病的重组腺相关病毒基因疫苗及其用途 |
WO2004056318A2 (en) | 2002-12-19 | 2004-07-08 | New York University | Method for treating amyloid disease |
DE10303974A1 (de) * | 2003-01-31 | 2004-08-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
CA2513722A1 (en) | 2003-02-01 | 2004-08-19 | Neuralab Limited | Active immunization to generate antibodies to soluble a-beta |
EP1592709A2 (en) * | 2003-02-10 | 2005-11-09 | TO-BBB Holding B.V. | Differentially expressed nucleic acids in the blood-brain barrier under inflammatory conditions |
US7575747B2 (en) | 2003-02-10 | 2009-08-18 | Applied Molecular Evolution | Aβ binding molecules |
US8663650B2 (en) | 2003-02-21 | 2014-03-04 | Ac Immune Sa | Methods and compositions comprising supramolecular constructs |
CA2519511A1 (en) * | 2003-03-17 | 2004-09-30 | Wyeth Holdings Corporation | Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein |
KR100546066B1 (ko) * | 2003-03-21 | 2006-01-26 | 한국생명공학연구원 | 베타아밀로이드 유전자의 다중 연결체를 발현하는 형질전환 식물 세포 및 이로부터 배양된 식물 |
US7632816B2 (en) * | 2003-03-28 | 2009-12-15 | New York University | Treatment of Alzheimer amyloid deposition |
US7732162B2 (en) | 2003-05-05 | 2010-06-08 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase for treating neurodegenerative diseases |
ES2246178B1 (es) * | 2003-05-08 | 2007-03-01 | Universidad De Zaragoza. | Uso de anticuerpos para el tratamiento de enfermedades amiloideas. |
US7358331B2 (en) * | 2003-05-19 | 2008-04-15 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease |
TWI306458B (en) | 2003-05-30 | 2009-02-21 | Elan Pharma Int Ltd | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
JP4888876B2 (ja) * | 2003-06-13 | 2012-02-29 | 田平 武 | アルツハイマー病の治療のための組換えアデノ随伴ウィルスベクター |
WO2005014041A2 (en) * | 2003-07-24 | 2005-02-17 | Novartis Ag | Use of an amyloid beta dna vaccine for the treatment and/or prevention of amyloid diseases |
US7807171B2 (en) | 2003-07-25 | 2010-10-05 | Ac Immune Sa | Therapeutic vaccine targeted against P-glycoprotein 170 for inhibiting multidrug resistance in the treatment of cancers |
GB0321615D0 (en) | 2003-09-15 | 2003-10-15 | Glaxo Group Ltd | Improvements in vaccination |
WO2005046605A2 (en) * | 2003-11-07 | 2005-05-26 | University Of Rochester | Compositions and methods of treating neurological diseases |
WO2005047860A2 (en) | 2003-11-08 | 2005-05-26 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies to alpha-synuclein |
SG149039A1 (en) * | 2003-12-17 | 2009-01-29 | Elan Pharm Inc | Ass IMMUNOGENIC PEPTIDE CARRIER CONJUGATES AND METHODS OF PRODUCING SAME |
US20050225165A1 (en) * | 2004-04-13 | 2005-10-13 | Naik Sanjeev M | Brake by-wire control system |
AU2005235271A1 (en) | 2004-04-26 | 2005-11-03 | Innate Pharma | Adjuvant composition and methods for its use |
GB0410220D0 (en) | 2004-05-07 | 2004-06-09 | Kirkham Lea Ann | Mutant pneumolysin proteins |
SE0401601D0 (sv) | 2004-06-21 | 2004-06-21 | Bioarctic Neuroscience Ab | Protofibril specific antibodies and uses thereof |
AU2005259991B2 (en) * | 2004-06-25 | 2011-05-26 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Compositions and methods for treating neurological disorders |
US7955812B2 (en) | 2004-07-19 | 2011-06-07 | The General Hospital Corporation | Methods of diagnosing alzheimer's disease by detecting antibodies to cross-linked β-amyloid oligomers |
WO2006036291A2 (en) * | 2004-07-30 | 2006-04-06 | Rinat Neuroscience Corp. | Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same |
CA2576405A1 (en) | 2004-08-11 | 2006-02-16 | Mitsubishi Chemical Corporation | Antibody and utilization of the same |
CA2582157A1 (en) * | 2004-10-05 | 2006-04-20 | Wyeth | Methods and compositions for improving recombinant protein production |
WO2006044666A2 (en) * | 2004-10-15 | 2006-04-27 | Northeastern University | Detection of disease associated proteolysis by direct mass spectrometry analysis of low molecular weight peptides |
GB0424563D0 (en) | 2004-11-05 | 2004-12-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
US20060257396A1 (en) * | 2004-12-15 | 2006-11-16 | Jacobsen Jack S | Abeta antibodies for use in improving cognition |
EP1838348B1 (en) | 2004-12-15 | 2013-06-26 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition |
AU2006211625A1 (en) * | 2005-01-14 | 2006-08-10 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for inhibiting drusen formation and for diagnosing or treating drusen-related disorders |
CA2589860A1 (en) | 2005-01-24 | 2006-08-03 | Amgen Inc. | Humanized anti-amyloid antibody |
GT200600031A (es) | 2005-01-28 | 2006-08-29 | Formulacion anticuerpo anti a beta | |
EP1841456A2 (en) * | 2005-01-28 | 2007-10-10 | Wyeth | Stabilized liquid polypeptide formulations |
WO2006112553A2 (en) * | 2005-04-20 | 2006-10-26 | Dnavec Corporation | Highly safe intranasally administrable gene vaccines for treating alzheimer's disease |
CN101228272A (zh) * | 2005-04-20 | 2008-07-23 | 生物载体株式会社 | 用于治疗阿尔茨海默病的具有较高安全性的经鼻腔内给药基因疫苗 |
PE20061323A1 (es) * | 2005-04-29 | 2007-02-09 | Rinat Neuroscience Corp | Anticuerpos dirigidos contra el peptido amiloide beta y metodos que utilizan los mismos |
WO2006119352A2 (en) * | 2005-05-03 | 2006-11-09 | University Of South Florida | Method of treating cognitive decline and synaptic loss related to alzheimer's disease |
ATE535252T1 (de) | 2005-05-05 | 2011-12-15 | Merck Sharp & Dohme | Peptid-konjugat-zusammensetzungen und -verfahren zur prävention und behandlung von alzheimer- krankheit |
WO2006126682A1 (ja) * | 2005-05-27 | 2006-11-30 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | アルツハイマー病の予防・治療用ワクチン |
CA2611816C (en) | 2005-06-17 | 2014-05-27 | Wyeth | Methods of purifying fc region containing proteins |
US7830955B2 (en) | 2005-07-10 | 2010-11-09 | Adaptive Spectrum & Signal Alignment, Inc. | Adaptive margin and band control |
WO2007056401A1 (en) * | 2005-11-09 | 2007-05-18 | Merck & Co., Inc. | Method for identifying modulators of osbp useful for treating alzheimer's disease |
JP2009517406A (ja) * | 2005-11-28 | 2009-04-30 | ザイモジェネティクス, インコーポレイテッド | Il−21受容体アンタゴニスト |
EP1963369B1 (en) * | 2005-11-28 | 2013-05-15 | Zymogenetics, Inc. | Il-21 antagonists |
PL1976877T5 (pl) | 2005-11-30 | 2017-09-29 | Abbvie Inc | Przeciwciała monoklonalne przeciwko białku amyloidu beta oraz ich zastosowania |
CN117903302A (zh) | 2005-11-30 | 2024-04-19 | Abbvie 公司 | 抗-Aβ球聚体抗体,其相关产品,生产所述抗体的方法,所述抗体的应用以及使用方法 |
WO2007067512A2 (en) * | 2005-12-08 | 2007-06-14 | Merck & Co., Inc. | Method for identifying modulators of adprh useful for treating alzheimer's disease |
NO345996B1 (no) * | 2005-12-12 | 2021-12-13 | Ac Immune Sa | A beta 1-42-spesifikke monoklonale antistoffer med terapeutiske egenskaper. |
PE20100684A1 (es) | 2005-12-12 | 2010-10-04 | Hoffmann La Roche | Anticuerpo anti b-4-amiloide que contiene asparagina glicosilada en la region variable de vh |
CN101421299A (zh) * | 2006-02-22 | 2009-04-29 | 株式会社林原生物化学研究所 | 用于诱导产生抗淀粉样β肽抗体的肽疫苗 |
CA2630344C (en) | 2006-03-23 | 2015-04-28 | Bioarctic Neuroscience Ab | Improved protofibril selective antibodies and the use thereof |
US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
US7479550B2 (en) | 2006-06-02 | 2009-01-20 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Amyloid β gene vaccines |
AU2007275467B2 (en) * | 2006-07-14 | 2013-12-05 | Ac Immune S.A. | Humanized antibody against amyloid beta |
WO2008021296A2 (en) * | 2006-08-14 | 2008-02-21 | Thymon, L.L.C. | Compositions and methods for the treatment and prophylaxis of alzheimer's disease |
EP2076287A2 (en) * | 2006-10-12 | 2009-07-08 | Wyeth | Methods and compositions with reduced opalescence |
US8188046B2 (en) * | 2006-10-16 | 2012-05-29 | University Of South Florida | Amyloid beta peptides and methods of use |
US8455626B2 (en) | 2006-11-30 | 2013-06-04 | Abbott Laboratories | Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies |
AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
US20080214987A1 (en) | 2006-12-22 | 2008-09-04 | Nanomed Devices, Inc. | Microdevice And Method For Transdermal Delivery And Sampling Of Active Substances |
IL199534A (en) | 2007-01-05 | 2013-01-31 | Univ Zuerich | An isolated human antibody capable of detecting a neoepitope in a disease-related protein, a polynucleotide encoding an antibody, a vector containing the polynucleotide, a host cell containing the polynucleotide or vector, a preparation containing the antibody and related methods and uses. |
PT2436696T (pt) | 2007-01-05 | 2017-08-21 | Univ Zuerich | Anticorpo anti-beta-amiloide e usos do mesmo |
EP2104682B1 (en) | 2007-01-11 | 2016-09-21 | Michael Bacher | Diagnosis and treatment of alzheimer's and other neurodementing diseases |
RS53948B1 (en) | 2007-01-18 | 2015-08-31 | Eli Lilly And Company | PEGILATED AMYLOID BETA FAB |
US8147833B2 (en) | 2007-02-23 | 2012-04-03 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
DK3067066T3 (da) | 2007-02-23 | 2019-05-20 | Prothena Biosciences Ltd | Forebyggelse og behandling af synukleinopatisk og amyloidogenisk sygdom |
EP2124952A2 (en) | 2007-02-27 | 2009-12-02 | Abbott GmbH & Co. KG | Method for the treatment of amyloidoses |
US7618944B2 (en) * | 2007-03-01 | 2009-11-17 | Intezyne Technologies, Inc. | Encapsulated amyloid-beta peptides |
ZA200905537B (en) | 2007-03-01 | 2010-10-27 | Probiodrug Ag | New use of glutaminyl cyclase inhibitors |
US20080292625A1 (en) * | 2007-04-18 | 2008-11-27 | Sally Schroeter | Prevention and treatment of cerebral amyloid angiopathy |
US8003097B2 (en) | 2007-04-18 | 2011-08-23 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of cerebral amyloid angiopathy |
US9656991B2 (en) | 2007-04-18 | 2017-05-23 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
EP2012122A1 (en) * | 2007-07-06 | 2009-01-07 | Medigene AG | Mutated parvovirus structural proteins as vaccines |
JP2010528583A (ja) * | 2007-06-11 | 2010-08-26 | エーシー イミューン ソシエテ アノニム | アミロイドβに対するヒト化抗体 |
NZ599497A (en) * | 2007-06-12 | 2013-11-29 | Ac Immune Sa | Humanized antibodies to amyloid beta |
US8048420B2 (en) * | 2007-06-12 | 2011-11-01 | Ac Immune S.A. | Monoclonal antibody |
US8613923B2 (en) * | 2007-06-12 | 2013-12-24 | Ac Immune S.A. | Monoclonal antibody |
DK2173378T3 (da) | 2007-06-27 | 2014-05-12 | Admune Therapeutics Llc | Komplekser af il-15 og il-15ralfa og anvendelser deraf |
US8613920B2 (en) | 2007-07-27 | 2013-12-24 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
ES2588705T3 (es) | 2007-09-27 | 2016-11-04 | Immunovaccine Technologies Inc. | Uso de liposomas en un vehículo que comprende una fase hidrófoba continua para la entrega de polinucleótidos in vivo |
EP2650308A3 (en) * | 2007-10-05 | 2014-11-12 | Genentech, Inc. | Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases |
BRPI0818621A8 (pt) * | 2007-10-05 | 2018-01-30 | Ac Immune Sa | composição farmacêutica, e, métodos para reduzir a carga da placa e a quantidade de placas na camada de célula de gânglio retinal de um indivíduo, para prevenir, tratar e/ou aliviar os efeitos de uma doença ocular, para diagnosticar uma doença ocular e uma predisposição a uma doença ocular, para monitorar doença ocular, para predizer responsividade de um paciente, e para reter ou diminuir pressão ocular nos olhos de um indivíduo |
CN101883790B (zh) | 2007-10-05 | 2015-09-09 | 基因技术公司 | 抗淀粉样蛋白β抗体在眼病中的用途 |
JO3076B1 (ar) * | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe |
CN104098695B (zh) * | 2007-10-29 | 2018-09-07 | 道健康生活医药株式会社 | 抗体及其应用 |
EP2217268B1 (en) | 2007-12-07 | 2016-05-04 | ZymoGenetics, Inc. | Anti-human il-21 monoclonal antibodies |
EP2261254A3 (en) | 2007-12-21 | 2011-04-13 | Amgen, Inc | Anti-amyloid antibodies and uses thereof |
WO2009090650A2 (en) * | 2008-01-16 | 2009-07-23 | Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Vaccine for alzheimer's disease |
ES2524699T3 (es) * | 2008-06-05 | 2014-12-11 | Immunovaccine Technologies Inc. | Composiciones que comprenden liposomas, un antígeno, un polinucleótido y un vehículo que comprende una fase continua de una sustancia hidrófoba |
CA2736187A1 (en) * | 2008-09-05 | 2010-03-11 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Novel compositions and adjuvants |
AU2009295357A1 (en) * | 2008-09-26 | 2010-04-01 | The University Of Melbourne | Alzheimer's disease biomarkers |
US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
JPWO2010050585A1 (ja) * | 2008-10-31 | 2012-03-29 | ディナベック株式会社 | アルツハイマー病治療用ベクター |
ES2648231T3 (es) | 2008-11-05 | 2017-12-29 | Wyeth Llc | Composición inmunogénica de múltiples componentes para la prevención de la enfermedad por estreptococos beta hemolíticos (EBH) |
PL2370466T3 (pl) | 2008-12-19 | 2015-12-31 | Biogen Int Neuroscience Gmbh | Ludzkie autoprzeciwciała anty-alfa-synukleina |
US8614297B2 (en) * | 2008-12-22 | 2013-12-24 | Hoffmann-La Roche Inc. | Anti-idiotype antibody against an antibody against the amyloid β peptide |
US9925282B2 (en) | 2009-01-29 | 2018-03-27 | The General Hospital Corporation | Cromolyn derivatives and related methods of imaging and treatment |
JP2012519300A (ja) | 2009-03-02 | 2012-08-23 | ディグニティー ヘルス | 治療デバイスおよび使用方法 |
FR2945538B1 (fr) | 2009-05-12 | 2014-12-26 | Sanofi Aventis | Anticorps humanises specifiques de la forme protofibrillaire du peptide beta-amyloide. |
AU2010282340B2 (en) | 2009-08-13 | 2016-12-22 | The Johns Hopkins University | Methods of modulating immune function |
JP5934645B2 (ja) | 2009-09-11 | 2016-06-15 | プロビオドルグ エージー | グルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのヘテロ環式誘導体 |
WO2011102901A1 (en) * | 2010-02-20 | 2011-08-25 | Ebiotec (Euroespes Biotechnology) | Prevention and treatment of alzheimer's disease by amyloid beta peptide and sphingosine-1-phosphate |
PE20130527A1 (es) | 2010-03-03 | 2013-05-09 | Boehringer Ingelheim Int | Polipeptidos de union a a-beta biparatopicos |
AU2011223456A1 (en) * | 2010-03-03 | 2012-10-18 | The University Of British Columbia | Oligomer-specific amyloid beta epitope and antibodies |
WO2011107530A2 (en) | 2010-03-03 | 2011-09-09 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors |
MX2012010470A (es) | 2010-03-10 | 2012-10-09 | Probiodrug Ag | Inhibidores heterociclicos d ciclasa de glutaminilo (qc, ec .3 2. 5). |
MX336196B (es) | 2010-04-15 | 2016-01-11 | Abbvie Inc | Proteinas de union a amiloide beta. |
WO2011131748A2 (en) | 2010-04-21 | 2011-10-27 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors |
EP2576617B1 (en) | 2010-06-04 | 2016-04-27 | Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Universitätsmedizin | MONOCLONAL ANTIBODIES TARGETING Aß OLIGOMERS |
SG187173A1 (en) | 2010-07-30 | 2013-02-28 | Ac Immune Sa | Safe and functional humanized anti beta-amyloid antibody |
EP3527220A1 (en) | 2010-08-12 | 2019-08-21 | AC Immune S.A. | Vaccine engineering |
CN103298833B (zh) | 2010-08-14 | 2015-12-16 | Abbvie公司 | β淀粉样蛋白结合蛋白 |
ES2639035T3 (es) | 2010-08-23 | 2017-10-25 | Wyeth Llc | Formulaciones estables de antígenos rLP2086 de Neisseria meningitidis |
ES2585328T5 (es) | 2010-09-10 | 2022-12-14 | Wyeth Llc | Variantes no lipidadas de antígenos ORF2086 de Neisseria meningitidis |
CA2817973C (en) | 2010-10-15 | 2019-06-25 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Antibodies that bind amyloid oligomers |
EP2632434A1 (en) | 2010-10-26 | 2013-09-04 | AC Immune S.A. | Liposome-based construct comprising a peptide modified through hydrophobic moieties |
AR083885A1 (es) | 2010-11-15 | 2013-03-27 | Univ Ramot | Analogos de dipeptidos para el tratamiento de afecciones asociadas con la formacion de fibrillas amiloides |
WO2012123563A1 (en) | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Probiodrug Ag | Benz imidazole derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
RU2473133C2 (ru) * | 2011-03-30 | 2013-01-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития РФ | Способ профилактики системного амилоидоза и его нефропатической формы у экспериментальных животных |
CA2830027C (en) | 2011-03-31 | 2016-04-26 | Pfizer Inc. | Novel bicyclic pyridinones |
BR112013030963B1 (pt) | 2011-06-01 | 2020-12-01 | Xiamen University | proteína de fusão, polinucleotídio, constructo, vetor, célula hospedeira, composição farmacêutica ou vacina, uso da proteína de fusão, método para modificar uma proteína alvo para melhorar sua imunogenicidade e uso do fragmento de crm197 ou um fragmento do mesmo |
WO2012172449A1 (en) | 2011-06-13 | 2012-12-20 | Pfizer Inc. | Lactams as beta secretase inhibitors |
EP2723379B1 (en) | 2011-06-23 | 2018-09-12 | Biogen International Neuroscience GmbH | Anti-alpha synuclein binding molecules |
WO2013013056A1 (en) | 2011-07-19 | 2013-01-24 | New York University | Method for treating amyloid disease |
US9926353B2 (en) | 2011-07-19 | 2018-03-27 | New York University | Immunotherapeutic modulation of amyloidogenic disease using non-fibrillogenic, non-amyloidogenic polymerized proteins and peptides |
CN102895659B (zh) * | 2011-07-29 | 2014-10-29 | 复旦大学 | 一种防治老年痴呆症复合疫苗及其制备方法 |
US20150065449A1 (en) | 2011-08-12 | 2015-03-05 | Florida State University Research Foundation, Inc. | Treating Amyloidoses With A Vitamin B12 Composition Including Melatonin, Resveratrol, and EGCG |
WO2013025607A1 (en) * | 2011-08-12 | 2013-02-21 | The Florida State University Research Foundation Inc. | Methods of treating amyloidoses with vitamin b12 and test for detecting amyloid-beta peptides |
WO2013030713A1 (en) | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Pfizer Inc. | Hexahydropyrano [3,4-d][1,3] thiazin-2-amine compounds |
PT2579042E (pt) | 2011-10-04 | 2014-09-09 | Affiris Ag | Método para detecção de anticorpos específicos para a numa amostra biológica. |
US20140294724A1 (en) * | 2011-10-24 | 2014-10-02 | Intellect Neurosciences, Inc. | Compositions and methods for treatment of proteinopathies |
JP2012102131A (ja) * | 2012-01-05 | 2012-05-31 | Elan Pharma Internatl Ltd | アミロイド形成性疾患の予防および治療 |
SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
CN105693830B (zh) | 2012-03-09 | 2021-07-06 | 辉瑞公司 | 脑膜炎双球菌组合物及其方法 |
JP6110937B2 (ja) | 2012-05-04 | 2017-04-05 | ファイザー・インク | APP、BACE1、およびBACE2の阻害剤としての複素環式置換ヘキサヒドロピラノ[3,4−d][1,3]チアジン−2−アミン化合物 |
CN105732639A (zh) | 2012-06-29 | 2016-07-06 | 辉瑞大药厂 | 作为LRRK2抑制剂的4-(取代的氨基)-7H-吡咯并〔2,3-d〕嘧啶类 |
WO2014045162A1 (en) | 2012-09-20 | 2014-03-27 | Pfizer Inc. | ALKYL-SUBSTITUTED HEXAHYDROPYRANO[3,4-d] [1,3]THIAZIN-2-ANIME COMPOUNDS |
UA110688C2 (uk) | 2012-09-21 | 2016-01-25 | Пфайзер Інк. | Біциклічні піридинони |
CA2889446C (en) | 2012-10-25 | 2021-05-11 | The General Hospital Corporation | Combination therapies for the treatment of alzheimer's disease and related disorders |
US10058530B2 (en) | 2012-10-25 | 2018-08-28 | The General Hospital Corporation | Combination therapies for the treatment of Alzheimer's disease and related disorders |
US9295393B2 (en) | 2012-11-09 | 2016-03-29 | Elwha Llc | Embolism deflector |
JP2016502978A (ja) | 2012-12-11 | 2016-02-01 | ファイザー・インク | BACE1の阻害剤としてのヘキサヒドロピラノ[3,4−d][1,3]チアジン−2−アミン化合物 |
US9403846B2 (en) | 2012-12-19 | 2016-08-02 | Pfizer Inc. | Carbocyclic- and heterocyclic-substituted hexahydropyrano[3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds |
JP6469585B2 (ja) | 2013-01-07 | 2019-02-13 | バイオメディカル リサーチ モデルズ, インコーポレイテッド | 単純ヘルペスウイルス2型感染を処置するための治療用ワクチン |
JP2016507551A (ja) | 2013-02-13 | 2016-03-10 | ファイザー・インク | ヘテロアリール置換ヘキサヒドロピラノ[3,4−d][1,3]チアジン−2−アミン化合物 |
US9233981B1 (en) | 2013-02-15 | 2016-01-12 | Pfizer Inc. | Substituted phenyl hexahydropyrano[3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds |
PE20151332A1 (es) | 2013-02-19 | 2015-09-20 | Pfizer | Compuestos de azabencimidazol |
EP2964665B1 (en) | 2013-03-08 | 2018-08-01 | Pfizer Inc | Immunogenic fusion polypeptides |
WO2014159614A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Flow Pharma, Inc. | Adjuvant and antigen particle formulation |
US9102752B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-08-11 | United Biomedical, Inc. | Peptide vaccine for prevention and immunotherapy of dementia of the Alzheimer's type |
EP2787347A1 (en) | 2013-04-03 | 2014-10-08 | Affiris AG | Method for detecting Aß-specific antibodies in a biological sample |
US10525005B2 (en) | 2013-05-23 | 2020-01-07 | The General Hospital Corporation | Cromolyn compositions and methods thereof |
EP3027205A4 (en) | 2013-07-28 | 2017-07-19 | Qantu Therapeutics, Inc. | Vaccine formulations that induce a th2 immune response |
WO2015033251A2 (en) | 2013-09-08 | 2015-03-12 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
WO2015049616A1 (en) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | Pfizer Inc. | Novel bicyclic pyridinones as gamma-secretase modulators |
US10188757B2 (en) | 2013-10-22 | 2019-01-29 | The General Hospital Corporation | Cromolyn derivatives and related methods of imaging and treatment |
ES2663622T3 (es) | 2013-12-17 | 2018-04-16 | Pfizer Inc. | Novedosas 1H-pirrolo[2,3-b]piridinas 3,4-disustituidas y 7H-pirrolo[2,3-c]piridacinas 4,5-disustituidas como inhibidores de LRRK2 |
WO2015150957A1 (en) | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Pfizer Inc. | Chromene and 1,1 a,2,7b-tetrahydrocyclopropa[c]chromene pyridopyrazinediones as gamma-secretase modulators |
CR20160455A (es) | 2014-04-10 | 2016-12-16 | Pfizer | 2-AMINO-6-METIL-4,4a,5,6-TETRAHIDROPIRANO[3,4-d][1,3]TIAZIN-8a(8H)-IL-1,3-TIAZOL-4-ILA |
KR102460465B1 (ko) | 2014-04-29 | 2022-10-27 | 어드밴티지 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 알츠하이머병(ad)의 치료 및 예방 |
FI3137094T3 (fi) * | 2014-04-29 | 2023-03-20 | Advantage Therapeutics Inc | Alzheimerin taudin (ad) hoitaminen ja ehkäiseminen |
WO2015165961A1 (en) | 2014-04-29 | 2015-11-05 | Affiris Ag | Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad) |
WO2015165971A1 (en) * | 2014-04-29 | 2015-11-05 | Affiris Ag | Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad) |
EP3269376B1 (en) * | 2014-04-29 | 2020-07-15 | Affiris AG | Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad) |
ES2811303T3 (es) * | 2014-06-17 | 2021-03-11 | Academia Sinica | Anticuerpos anti-IGE humanizados que entrecruzan CD23 en linfocitos B pero no sensibilizan los mastocitos |
MA40224B1 (fr) | 2014-07-10 | 2021-05-31 | Eisai R&D Man Co Ltd | Anticorps se liant aux protofibrilles ass améliorés |
WO2016012896A1 (en) | 2014-07-24 | 2016-01-28 | Pfizer Inc. | Pyrazolopyrimidine compounds |
WO2016020786A1 (en) | 2014-08-06 | 2016-02-11 | Pfizer Inc. | Imidazopyridazine compounds |
MA41115A (fr) | 2014-12-02 | 2017-10-10 | Biogen Int Neuroscience Gmbh | Procédé de traitement de la maladie d'alzheimer |
KR102000382B1 (ko) | 2015-02-03 | 2019-07-15 | 화이자 인코포레이티드 | 신규 시클로프로파벤조푸라닐 피리도피라진디온 |
BR112017017460A2 (pt) | 2015-02-19 | 2018-04-10 | Pfizer Inc. | composições de neisseria meningitidis e métodos das mesmas |
PL3766885T3 (pl) | 2015-06-17 | 2022-09-19 | Pfizer Inc. | Związki tricykliczne i ich zastosowanie jako inhibitory fosfodiesterazy |
HUE057952T2 (hu) | 2015-06-24 | 2022-06-28 | Hoffmann La Roche | Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással |
RU2722149C1 (ru) | 2015-09-14 | 2020-05-27 | Пфайзер Инк. | Новые производные имидазо[4,5-c] хинолинов и имидазо[4,5-c][1,5] нафтиридинов в качестве ингибиторов LRRK2 |
EP3353183A1 (en) | 2015-09-24 | 2018-08-01 | Pfizer Inc | N-[2-(2-amino-6,6-disubstituted-4, 4a, 5, 6-tetrahydropyrano [3,4-d][1,3]thiazin-8a (8h)-yl) -1, 3-thiazol-4-yl]amides |
EP3353174A1 (en) | 2015-09-24 | 2018-08-01 | Pfizer Inc | N-[2-(3-amino-2,5-dimethyl-1,1-dioxido-5,6-dihydro-2h-1,2,4-thiadiazin-5-yl)-1,3-thiazol-4-yl]amides useful as bace inhibitors |
WO2017051303A1 (en) | 2015-09-24 | 2017-03-30 | Pfizer Inc. | Tetrahydropyrano[3,4-d][1,3]oxazin derivatives and their use as bace inhibitors |
AR106189A1 (es) | 2015-10-02 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO |
RU2753390C1 (ru) | 2015-10-02 | 2021-08-13 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Биспецифические антитела к человеческому cd20/человеческому рецептору трансферрина и способы их применения |
WO2017079833A1 (en) | 2015-11-09 | 2017-05-18 | The University Of British Columbia | Epitopes in amyloid beta mid-region and conformationally-selective antibodies thereto |
US10772969B2 (en) | 2015-11-09 | 2020-09-15 | The University Of British Columbia | N-terminal epitopes in amyloid beta and conformationally-selective antibodies thereto |
WO2017079835A1 (en) | 2015-11-09 | 2017-05-18 | The University Of British Columbia | Amyloid beta epitopes and antibodies thereto |
CN113332292A (zh) | 2016-02-23 | 2021-09-03 | 辉瑞公司 | 6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪-2-甲酰胺化合物 |
BR112018077257A2 (pt) | 2016-07-01 | 2019-04-02 | Pfizer Inc. | derivados de 5,7-di-hidro-pirrolo-piridina para o tratamento de doenças neurológicas e neurodegenerativas |
EP3484919A4 (en) | 2016-07-18 | 2020-03-04 | The University of British Columbia | ANTIBODIES AGAINST AMYLOID BETA |
AU2017321782B2 (en) | 2016-08-31 | 2022-03-10 | The General Hospital Corporation | Macrophages/microglia in neuro-inflammation associated with neurodegenerative diseases |
US20180125920A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-10 | The University Of British Columbia | Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions |
US10183070B2 (en) | 2017-01-31 | 2019-01-22 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
CN111201226B (zh) | 2017-03-10 | 2022-07-22 | 辉瑞大药厂 | 环状被取代的咪唑并[4,5-c]喹啉衍生物 |
SG11201908322WA (en) | 2017-03-10 | 2019-10-30 | Pfizer | Novel imidazo[4,5-c]quinoline derivatives as lrrk2 inhibitors |
RU2678987C2 (ru) | 2017-04-28 | 2019-02-05 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ВЕРТА" | Пептид для лечения болезни альцгеймера |
EP3634978A1 (en) | 2017-06-07 | 2020-04-15 | Adrx, Inc. | Tau aggregation inhibitors |
KR20200013783A (ko) | 2017-06-22 | 2020-02-07 | 화이자 인코포레이티드 | 디히드로-피롤로-피리딘 유도체 |
US11209638B2 (en) * | 2017-07-05 | 2021-12-28 | West Virginia University | Systems and methods for supporting and positioning body tissue samples in a microscope |
WO2019017995A1 (en) | 2017-07-20 | 2019-01-24 | Aztherapies, Inc. | FORMULATIONS OF CROMOLYNE SODIUM POWDER AND IBUPROFEN |
US11453701B2 (en) | 2017-08-18 | 2022-09-27 | Adrx, Inc. | Tau aggregation peptide inhibitors |
RS64289B1 (sr) | 2017-08-22 | 2023-07-31 | Biogen Ma Inc | Farmaceutske kompozicije koje sadrže anti-amiloid beta antitela |
ES2812698T3 (es) | 2017-09-29 | 2021-03-18 | Probiodrug Ag | Inhibidores de glutaminil ciclasa |
US11524954B2 (en) | 2018-03-23 | 2022-12-13 | Pfizer Inc. | Piperazine azaspiro derivatives |
US12018069B2 (en) | 2018-06-28 | 2024-06-25 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods and compositions for imaging amyloid deposits |
EP3817739A4 (en) | 2018-07-02 | 2022-04-13 | The General Hospital Corporation | SODIUM CROMOGLYCATE AND ?-LACTOSE POWDER FORMULATIONS |
US20230183304A1 (en) | 2020-05-19 | 2023-06-15 | Robinoo BARBOUR | Multi-Epitope Vaccine for the Treatment of Alzheimer's Disease |
Family Cites Families (433)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US589566A (en) * | 1897-09-07 | meevten | ||
US6096318A (en) | 1973-05-07 | 2000-08-01 | The Ohio State University | Antigenically modified HCG polypeptides |
JPS57212347A (en) * | 1981-06-25 | 1982-12-27 | Nissan Motor Co Ltd | Air-fuel ratio control system |
US4902506A (en) * | 1983-07-05 | 1990-02-20 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates |
GB8308235D0 (en) * | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4816567A (en) * | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5158769A (en) | 1984-03-07 | 1992-10-27 | New York Blood Center, Inc. | Pre-S gene coded peptide hepatitis B immunogens, vaccines, diagnostics, and synthetic lipid vesicle carriers |
US5417986A (en) | 1984-03-16 | 1995-05-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Vaccines against diseases caused by enteropathogenic organisms using antigens encapsulated within biodegradable-biocompatible microspheres |
US5208036A (en) | 1985-01-07 | 1993-05-04 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N-(ω, (ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω, (ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4666829A (en) | 1985-05-15 | 1987-05-19 | University Of California | Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis |
IT1190383B (it) * | 1985-08-01 | 1988-02-16 | Eniricerche Spa | Sostanze peptidominetiche ad azione ipotensiva |
US5618920A (en) * | 1985-11-01 | 1997-04-08 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
EP0247091B1 (en) | 1985-11-01 | 1993-09-29 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
US4713366A (en) * | 1985-12-04 | 1987-12-15 | The Ohio State University Research Foundation | Antigenic modification of polypeptides |
US5096706A (en) * | 1986-03-25 | 1992-03-17 | National Research Development Corporation | Antigen-based treatment for adiposity |
US6548640B1 (en) * | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
US5225539A (en) * | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5278049A (en) * | 1986-06-03 | 1994-01-11 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Recombinant molecule encoding human protease nexin |
US5231170A (en) * | 1986-08-27 | 1993-07-27 | Paul Averback | Antibodies to dense microspheres |
US5187153A (en) | 1986-11-17 | 1993-02-16 | Scios Nova Inc. | Methods of treatment using Alzheimer's amyloid polypeptide derivatives |
US5223482A (en) | 1986-11-17 | 1993-06-29 | Scios Nova Inc. | Recombinant Alzheimer's protease inhibitory amyloid protein and method of use |
US5220013A (en) * | 1986-11-17 | 1993-06-15 | Scios Nova Inc. | DNA sequence useful for the detection of Alzheimer's disease |
US4879213A (en) | 1986-12-05 | 1989-11-07 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic polypeptides and antibodies related to Epstein-Barr virus early antigen-diffuse |
US4818397A (en) * | 1986-12-22 | 1989-04-04 | Sundstrand Corporation | Shut-off valve seal |
DE3702789A1 (de) | 1987-01-30 | 1988-08-18 | Bayer Ag | Vorlaeuferprotein des apc-polypeptids, dafuer codierende dna und diagnostische verwendung der dna und des proteins |
US4912206A (en) * | 1987-02-26 | 1990-03-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | CDNA clone encoding brain amyloid of alzheimer's disease |
JP3101690B2 (ja) * | 1987-03-18 | 2000-10-23 | エス・ビィ・2・インコーポレイテッド | 変性抗体の、または変性抗体に関する改良 |
US4883666A (en) | 1987-04-29 | 1989-11-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Controlled drug delivery system for treatment of neural disorders |
US5258498A (en) | 1987-05-21 | 1993-11-02 | Creative Biomolecules, Inc. | Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins |
US5583112A (en) * | 1987-05-29 | 1996-12-10 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin-antigen conjugates and the use thereof |
US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
US5245015A (en) | 1991-04-26 | 1993-09-14 | Tanox Biosystems, Inc. | Monoclonal antibodies which neutralize HIV-1 through reaction with a conformational epitope in vitro |
US5641474A (en) * | 1987-06-24 | 1997-06-24 | Autoimmune, Inc. | Prevention of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens |
US5869054A (en) * | 1987-06-24 | 1999-02-09 | Autoimmune Inc. | Treatment of multiple sclerosis by oral administration of autoantigens |
US5849298A (en) * | 1987-06-24 | 1998-12-15 | Autoimmune Inc. | Treatment of multiple sclerosis by oral administration of bovine myelin |
US5571500A (en) * | 1987-06-24 | 1996-11-05 | Autoimmune, Inc. | Treatment of autoimmune diseases through administration by inhalation of autoantigens |
US5645820A (en) * | 1987-06-24 | 1997-07-08 | Autoimmune, Inc. | Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens |
DE3854741T3 (de) | 1987-06-24 | 2002-08-14 | Autoimmune, Inc. | Behandlung von autoimmun-erkrankungen durch orale verabreichung von autoantigenen. |
US5571499A (en) * | 1987-06-24 | 1996-11-05 | Autoimmune, Inc. | Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens |
US4912208A (en) * | 1987-06-29 | 1990-03-27 | Abbott Laboratories | Fluorophores for encapsulation into liposomes |
US5004697A (en) * | 1987-08-17 | 1991-04-02 | Univ. Of Ca | Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier |
US4966753A (en) | 1987-08-18 | 1990-10-30 | Molecular Rx, Inc. | Immunotherapeutic methods and compositions employing antigens characteristic of malignant neoplasms |
US5677425A (en) | 1987-09-04 | 1997-10-14 | Celltech Therapeutics Limited | Recombinant antibody |
CA1339014C (en) | 1987-10-08 | 1997-03-25 | Ronald E. Majocha | Antibodies to a4 amyloid peptide |
US5231000A (en) * | 1987-10-08 | 1993-07-27 | The Mclean Hospital | Antibodies to A4 amyloid peptide |
JP2518911B2 (ja) | 1987-10-23 | 1996-07-31 | 森永乳業株式会社 | c―fms癌原遺伝子の過剰発現によって特徴づけられた癌の処置用組成物および方法 |
US5089603A (en) * | 1989-06-21 | 1992-02-18 | Tanox Biosystems, Inc. | Antigenic epitopes present on membrane-bound but not secreted iga |
WO1989006689A1 (en) | 1988-01-13 | 1989-07-27 | The Mclean Hospital Corporation | Genetic constructs containing the alzheimer brain amyloid gene |
WO1994029459A1 (en) | 1993-06-04 | 1994-12-22 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Stress proteins and uses therefor |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
US5576184A (en) * | 1988-09-06 | 1996-11-19 | Xoma Corporation | Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens |
US5098706A (en) * | 1988-11-01 | 1992-03-24 | The Regents Of The University Of California | Juvenile hormone esterase for insect control |
WO1990005142A1 (en) | 1988-11-10 | 1990-05-17 | Imperial Cancer Research Technology Ltd. | Polypeptides |
IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5227159A (en) | 1989-01-31 | 1993-07-13 | Miller Richard A | Anti-idiotype antibodies reactive with shared idiotopes expressed by B cell lymphomas and autoantibodies |
US5262332A (en) | 1989-04-05 | 1993-11-16 | Brigham And Women's Hospital | Diagnostic method for Alzheimer's disease: examination of non-neural tissue |
WO1990012871A1 (en) | 1989-04-14 | 1990-11-01 | Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. | Cerebrovascular amyloid protein-specific monoclonal antibody sv17-6e10 |
WO1990012870A1 (en) | 1989-04-14 | 1990-11-01 | Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. | Monoclonal antibody to amyloid peptide |
HU212924B (en) | 1989-05-25 | 1996-12-30 | Chiron Corp | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
US5399346A (en) | 1989-06-14 | 1995-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Gene therapy |
CA2070281C (en) | 1989-12-20 | 2005-08-23 | David Allen Hafler | Improved treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of auto antigens |
GB8928874D0 (en) * | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
US5859205A (en) * | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
ATE139258T1 (de) | 1990-01-12 | 1996-06-15 | Cell Genesys Inc | Erzeugung xenogener antikörper |
EP0594607B1 (en) | 1990-03-02 | 1997-08-27 | Autoimmune, Inc. | Enhancement of the down-regulation of autoimmune diseases by oral or enteral administration of autoantigens |
GB9005705D0 (en) | 1990-03-14 | 1990-05-09 | Health Lab Service Board | Particle manipulation |
US5279833A (en) | 1990-04-04 | 1994-01-18 | Yale University | Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells |
EP0451700A1 (en) | 1990-04-10 | 1991-10-16 | Miles Inc. | Recombinant APP minigenes for expression in transgenic mice as models for Alzheimers's disease |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
JPH05506990A (ja) * | 1990-04-24 | 1993-10-14 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | プロテアーゼ ネキシン―2の精製、検出、及び使用方法 |
GB9009548D0 (en) | 1990-04-27 | 1990-06-20 | Celltech Ltd | Chimeric antibody and method |
US5753624A (en) | 1990-04-27 | 1998-05-19 | Milkhaus Laboratory, Inc. | Materials and methods for treatment of plaquing disease |
CA2081482C (en) * | 1990-04-27 | 2000-11-21 | Ellis L. Kline | Method and composition for treatment of central nervous system disease states associated with abnormal amyloid beta protein molecular organization |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
DK0600866T3 (da) | 1990-06-01 | 1998-03-09 | Chiron Corp | Præparater og fremgangsmåder til identifikation af biologisk aktive molekyler |
ATE260974T1 (de) | 1990-06-15 | 2004-03-15 | Scios Inc | Transgenes, nicht-menschliches säugetier das die amyloidbildende pathologie der alzheimerschen krankheit zeigt |
US5914109A (en) * | 1990-06-15 | 1999-06-22 | New York University | Heterohybridomas producing human monoclonal antibodies to HIV-1 |
CA2085897A1 (en) | 1990-06-19 | 1991-12-20 | George Pieczenik | Nonpathogenic variant virus |
GB9014932D0 (en) | 1990-07-05 | 1990-08-22 | Celltech Ltd | Recombinant dna product and method |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
KR970005049B1 (ko) * | 1990-07-16 | 1997-04-11 | 더 리젠츠 오브 더 유니벌시티 오브 캘리포니아 | 바쿨로비루스 발현 시스템, 이 벡터 시스템을 포함하는 이종성 무척추동물 숙주세포, 상기 시스템에 의해 생산되는 가용성의 정제된 야생형 망막아세포종 폴리펩티드 및 이 폴리펩티드의 생산 방법 |
US5780587A (en) * | 1990-08-24 | 1998-07-14 | President And Fellows Of Harvard College | Compounds and methods for inhibiting β-protein filament formation and neurotoxicity |
NZ239643A (en) | 1990-09-17 | 1996-05-28 | North American Vaccine Inc | Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group. |
US5702906A (en) | 1990-09-25 | 1997-12-30 | Genentech, Inc. | Antibodies to neurotrophic factor-4 (NT-4) |
WO1992006187A1 (en) | 1990-09-28 | 1992-04-16 | The Upjohn Company | Transgenic animals with alzheimer's amyloid precursor gene |
ATE175118T1 (de) * | 1990-10-05 | 1999-01-15 | Medarex Inc | Gezielte immunostimulierung mit bispezifischen stoffen |
JP2635444B2 (ja) | 1990-10-15 | 1997-07-30 | オートイミューン インク | 自己抗体の経口投与による自己免疫性疾患の治療 |
GB9023352D0 (en) * | 1990-10-26 | 1990-12-05 | Lynxvale Ltd | Vaccinia vectors,vaccinia genes and expression products thereof |
ES2236682T5 (es) | 1991-01-21 | 2011-03-31 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Ensayo y modelo para la enfermedad de alzheimer. |
KR100257214B1 (ko) | 1991-03-01 | 2000-05-15 | 데스꼴롱그 티에리 | 거세되지 않은 수컷가축의 고기의 관능적 품질을 개선하기 위한 방법 |
DE4107857A1 (de) * | 1991-03-12 | 1992-09-17 | Thomae Gmbh Dr K | Cyclische harnstoffderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung |
US5192753A (en) * | 1991-04-23 | 1993-03-09 | Mcgeer Patrick L | Anti-rheumatoid arthritic drugs in the treatment of dementia |
DE69229703T2 (de) | 1991-05-08 | 2000-04-27 | Schweiz Serum & Impfinst | Wiederhergestellte Influenza-Virosomen mit immunostimulierenden und immunoverstärkenden Eigenschaften und diese enthaltende Impfstoffe |
EP0940468A1 (en) * | 1991-06-14 | 1999-09-08 | Genentech, Inc. | Humanized antibody variable domain |
WO1994004679A1 (en) * | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
US5672805A (en) | 1991-07-18 | 1997-09-30 | The Regents Of The University Of California | Transgenic mice expressing the neurotoxic C-terminus of β-amyloid precursor protein |
US5434050A (en) | 1991-08-13 | 1995-07-18 | Regents Of The University Of Minnesota | Labelled β-amyloid peptide and methods of screening for Alzheimer's disease |
US5283185A (en) | 1991-08-28 | 1994-02-01 | University Of Tennessee Research Corporation | Method for delivering nucleic acids into cells |
EP0773227A1 (en) | 1991-09-18 | 1997-05-14 | Affymax Technologies N.V. | Diverse collections of oligomers in use to prepare drugs, diagnostic reagents, pesticides or herbicides |
US5837268A (en) | 1991-10-16 | 1998-11-17 | University Of Saskatchewan | GnRH-leukotoxin chimeras |
EP0746609A4 (en) | 1991-12-17 | 1997-12-17 | Genpharm Int | NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES |
DE69233109T2 (de) | 1992-01-07 | 2004-05-19 | Elan Pharmaceuticals, Inc., San Francisco | Transgene tiermodelle fur alzheimer-krankheit |
US5679348A (en) * | 1992-02-03 | 1997-10-21 | Cedars-Sinai Medical Center | Immunotherapy for recurrent HSV infections |
ATE245446T1 (de) | 1992-02-11 | 2003-08-15 | Jackson H M Found Military Med | Dualer träger für immunogene konstrukte |
US5314813A (en) | 1992-02-19 | 1994-05-24 | Scripps Research Institute | Drosophila cell lines expressing genes encoding MHC class I antigens and B2-microglobulin and capable of assembling empty complexes and methods of making said cell lines |
HU220357B (hu) | 1992-02-28 | 2001-12-28 | Autoimmune Inc. | Eljárás és készítmények autoimmun betegségek kezelésére bystander antigén alkalmazásával |
US5714350A (en) * | 1992-03-09 | 1998-02-03 | Protein Design Labs, Inc. | Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region |
EP0561087B1 (en) | 1992-03-20 | 1999-08-04 | N.V. Innogenetics S.A. | Mutated form of the beta-amyloid precursor protein gene |
US5441870A (en) * | 1992-04-15 | 1995-08-15 | Athena Neurosciences, Inc. | Methods for monitoring cellular processing of β-amyloid precursor protein |
US5604102A (en) | 1992-04-15 | 1997-02-18 | Athena Neurosciences, Inc. | Methods of screening for β-amyloid peptide production inhibitors |
US5851787A (en) * | 1992-04-20 | 1998-12-22 | The General Hospital Corporation | Nucleic acid encoding amyloid precursor-like protein and uses thereof |
EP0640094A1 (en) | 1992-04-24 | 1995-03-01 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells |
GB9209118D0 (en) | 1992-04-28 | 1992-06-10 | Sb 120 Amsterdam Bv | Vaccine compositions |
CA2138137C (en) | 1992-06-18 | 2004-11-09 | R. John Collier | Diphtheria toxin vaccines |
PT761231E (pt) * | 1992-06-25 | 2000-06-30 | Smithkline Beecham Biolog | Composicao de vacina contendo adjuvantes |
US6610493B1 (en) | 1993-06-17 | 2003-08-26 | Brigham And Women's Hospital | Screening compounds for the ability to alter the production of amyloid-β peptide |
US5766846A (en) * | 1992-07-10 | 1998-06-16 | Athena Neurosciences | Methods of screening for compounds which inhibit soluble β-amyloid peptide production |
US5837672A (en) * | 1992-07-10 | 1998-11-17 | Athena Neurosciences, Inc. | Methods and compositions for the detection of soluble β-amyloid peptide |
WO1994001772A1 (en) | 1992-07-13 | 1994-01-20 | The Children's Medical Center Corporation | SCREEN FOR ALZHEIMER'S DISEASE THERAPEUTICS BASED ON β-AMYLOID PRODUCTION |
IL102687A (en) | 1992-07-30 | 1997-06-10 | Yeda Res & Dev | Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them |
CA2141427C (en) | 1992-07-31 | 2008-07-22 | Mohammed Anjam Khan | Expression of recombinant fusion proteins in attenuated bacteria |
NZ255256A (en) * | 1992-08-27 | 1997-02-24 | Deakin Res Ltd | Synthetic peptide antigen analogues with retro, inverso or retro-inverso modification, their use and antibodies against them |
FI96267C (sv) | 1992-09-16 | 1996-06-10 | Formit Foodprocessing Ab Oy | Vals och maskin för skalning eller formning av potatis och liknande produkter |
US5958883A (en) * | 1992-09-23 | 1999-09-28 | Board Of Regents Of The University Of Washington Office Of Technology | Animal models of human amyloidoses |
CA2107181C (en) * | 1992-09-29 | 1998-12-29 | Yoshiaki Tachikawa | Arrayed-wave guide grating multi/demultiplexer with loop-back optical paths |
EP0665897B1 (en) | 1992-10-01 | 2003-07-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags |
AU5358494A (en) | 1992-10-13 | 1994-05-09 | Duke University | Method of inhibiting binding of amyloid precursor protein to beta-amyloid protein |
US5605811A (en) * | 1992-10-26 | 1997-02-25 | Athena Neurosciences, Inc. | Methods and compositions for monitoring cellular processing of beta-amyloid precursor protein |
EP0667959B1 (en) | 1992-10-26 | 2003-08-13 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods for identifying inhibitors of the production of beta-amyloid peptide |
US5972336A (en) | 1992-11-03 | 1999-10-26 | Oravax Merieux Co. | Urease-based vaccine against helicobacter infection |
US5733647A (en) * | 1992-11-05 | 1998-03-31 | Polymer Innovations, Inc. | Insole |
US6210671B1 (en) | 1992-12-01 | 2001-04-03 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized antibodies reactive with L-selectin |
AU6014094A (en) | 1992-12-02 | 1994-06-22 | Baylor College Of Medicine | Episomal vectors for gene therapy |
US7014856B1 (en) * | 1993-01-22 | 2006-03-21 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Ganglioside-KLH conjugate vaccines plus OS-21 |
EP0683234B2 (en) * | 1993-01-25 | 2007-06-06 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Antibody against beta-amyloid or their derivative and use thereof |
US5955317A (en) * | 1993-01-25 | 1999-09-21 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof |
US5750106A (en) * | 1993-01-28 | 1998-05-12 | Novartis Ag | Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus |
US5358708A (en) | 1993-01-29 | 1994-10-25 | Schering Corporation | Stabilization of protein formulations |
US5989565A (en) * | 1993-01-29 | 1999-11-23 | University Of Pittsburgh | Elution and identification of T cell epitopes from viable cells |
US5472693A (en) * | 1993-02-16 | 1995-12-05 | The Dow Chemical Company | Family of anti-carcinoembryonic antigen chimeric antibodies |
CA2115811A1 (en) * | 1993-02-17 | 1994-08-18 | Claus Krebber | A method for in vivo selection of ligand-binding proteins |
CA2115900A1 (en) | 1993-02-22 | 1994-08-23 | Gerald W. Becker | Pharmaceutical screens and antibodies |
CA2158455C (en) | 1993-03-17 | 2003-05-27 | Nicholas P. Restifo | Immunogenic chimeras comprising nucleic acid sequences encoding endoplasmic reticulum signal sequence peptides and at least one other peptide and their uses in vaccines and disease treatments |
EP0690722B1 (en) * | 1993-03-18 | 2004-06-30 | Cytimmune Sciences, Inc. | Composition and method for reducing toxicity of biologically-active factors |
SG48309A1 (en) * | 1993-03-23 | 1998-04-17 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a |
CA2119090A1 (en) * | 1993-03-26 | 1994-09-27 | Wayne R. Gombotz | Compositions for controlled release of biologically active tgf-.beta. |
IT1270939B (it) | 1993-05-11 | 1997-05-26 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Procedimento per la preparazione di immunogeni e reagenti diagnostici,e immunogeni e reagenti diagnostici cosi' ottenibili. |
JP3734263B2 (ja) | 1993-05-25 | 2006-01-11 | ワイス・ホールディングズ・コーポレイション | 呼吸器シンシチウムウイルスに対するワクチンのためのアジュバント |
AU7043894A (en) | 1993-05-28 | 1994-12-20 | Miriam Hospital, The | Composition and method for (in vivo) imaging of amyloid deposits |
US5464823A (en) * | 1993-07-20 | 1995-11-07 | The Regents Of The University Of California | Mammalian antibiotic peptides |
JPH09500540A (ja) | 1993-07-30 | 1997-01-21 | メデヴァ ホールディングス ビー.ヴイ. | ワクチン組成物 |
WO1995005393A2 (en) | 1993-08-18 | 1995-02-23 | Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh | Lipopolysaccharide-binding and neutralizing peptides |
EP0714308A4 (en) | 1993-08-26 | 1998-07-29 | Univ California | METHOD, COMPOSITIONS AND DEVICES FOR THE DELIVERY OF NAKED POLYNUCLEOTIDES THAT ENCODE BIOLOGICALLY ACTIVE PEPTIDES |
AU707083B2 (en) | 1993-08-26 | 1999-07-01 | Bavarian Nordic Inc. | Inducing antibody response against self-proteins with the aid of foreign T-cell epitopes |
DK96493D0 (da) | 1993-08-26 | 1993-08-26 | Mouritsen Og Elsner Aps | Fremgangsmaade til at inducere antistofresponser mod selvproteiner og autovaccine fremstillet ved fremgangsmaaden |
FR2709247B1 (fr) * | 1993-08-27 | 1995-09-29 | Martin Jean Raymond | Dispositif d'ancrage d'une instrumentation rachidienne sur une vertèbre. |
WO1995006407A1 (en) | 1993-08-30 | 1995-03-09 | The Regents Of The University Of California | Novel component of amyloid in alzheimer's disease and methods for use of same |
KR100362340B1 (ko) | 1993-09-07 | 2003-02-26 | 스미스클라인비이참피이엘시이 | 인터로이킨-4(il4)매개된질환의치료에유용한재조합il4항체 |
US5652334A (en) * | 1993-09-08 | 1997-07-29 | City Of Hope | Method for design of substances that enhance memory and improve the quality of life |
US5385887A (en) * | 1993-09-10 | 1995-01-31 | Genetics Institute, Inc. | Formulations for delivery of osteogenic proteins |
AU698962B2 (en) | 1993-09-14 | 1998-11-12 | Epimmune, Inc. | Alteration of immune response using pan DR-binding peptides |
US5415584A (en) | 1993-09-21 | 1995-05-16 | Tomco2 Equipment Company | Particle blast cleaning apparatus |
US5470951A (en) | 1993-09-29 | 1995-11-28 | City Of Hope | Peptides for antagonizing the effects of amyloid βprotein |
US5858981A (en) * | 1993-09-30 | 1999-01-12 | University Of Pennsylvania | Method of inhibiting phagocytosis |
ES2173130T3 (es) | 1993-10-20 | 2002-10-16 | Univ Duke | Metodo de fijacion de material al peptido beta-amiloide. |
CA2172507C (en) | 1993-10-22 | 2008-12-02 | Jeffrey L. Cleland | Methods and compositions for microencapsulation of antigens for use as vaccines |
JPH09508353A (ja) | 1993-11-02 | 1997-08-26 | アフィマックス テクノロジーズ ナムローゼ フェンノートシャップ | 分子多様性の合成及びスクリーニング |
US5744368A (en) * | 1993-11-04 | 1998-04-28 | Research Foundation Of State University Of New York | Methods for the detection of soluble amyloid β-protein (βAP) or soluble transthyretin (TTR) |
US5827690A (en) | 1993-12-20 | 1998-10-27 | Genzyme Transgenics Corporatiion | Transgenic production of antibodies in milk |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
US5434170A (en) * | 1993-12-23 | 1995-07-18 | Andrulis Pharmaceuticals Corp. | Method for treating neurocognitive disorders |
US5877399A (en) * | 1994-01-27 | 1999-03-02 | Johns Hopkins University | Transgenic mice expressing APP-Swedish mutation develop progressive neurologic disease |
ATE278023T1 (de) * | 1994-01-27 | 2004-10-15 | Univ Minnesota | Nicht humane, transgenische säugetiere mit sich entwickelnder neurologischer krankheit |
EP0802797A1 (en) * | 1994-02-03 | 1997-10-29 | The Picower Institute For Medical Research | Compositions and methods for advanced glycosylation endproduct-mediated modulation of amyloidosis |
AUPM411994A0 (en) | 1994-02-25 | 1994-03-24 | Deakin Research Limited | Epitopes |
EP0705880B1 (en) | 1994-02-28 | 1999-01-27 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Polyolefin resin composition and resin film |
US5795954A (en) | 1994-03-04 | 1998-08-18 | Genentech, Inc. | Factor VIIa inhibitors from Kunitz domain proteins |
US6270757B1 (en) | 1994-04-21 | 2001-08-07 | Genetics Institute, Inc. | Formulations for IL-11 |
US6372716B1 (en) * | 1994-04-26 | 2002-04-16 | Genetics Institute, Inc. | Formulations for factor IX |
JPH10500112A (ja) | 1994-05-06 | 1998-01-06 | ファーマコピーア,インコーポレイテッド | 組合せ ジヒドロベンゾピラン ライブラリー |
ATE202940T1 (de) * | 1994-05-25 | 2001-07-15 | John Mcmichael | Mittel und methoden zur behandlung von plaque- krankheiten |
US5622701A (en) * | 1994-06-14 | 1997-04-22 | Protein Design Labs, Inc. | Cross-reacting monoclonal antibodies specific for E- and P-selectin |
US5663046A (en) | 1994-06-22 | 1997-09-02 | Pharmacopeia, Inc. | Synthesis of combinatorial libraries |
US5798100A (en) * | 1994-07-06 | 1998-08-25 | Immunomedics, Inc. | Multi-stage cascade boosting vaccine |
US6417178B1 (en) * | 1994-07-19 | 2002-07-09 | University Of Pittsburgh | Amyloid binding nitrogen-linked compounds for the antemortem diagnosis of alzheimer's disease, in vivo imaging and prevention of amyloid deposits |
WO1996003144A1 (en) | 1994-07-27 | 1996-02-08 | The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research | Polyepitope vaccines |
WO1996008565A2 (en) | 1994-09-16 | 1996-03-21 | Cancer Research Fund Of Contra Costa | RECOMBINANT PEPTIDES DERIVED FROM THE Mc3 ANTI-BA46 ANTIBODY, METHODS OF USE THEREOF, AND METHODS OF HUMANIZING ANTIBODY PEPTIDES |
DE69508521T2 (de) * | 1994-10-14 | 1999-10-07 | Able Corp., Tokio/Tokyo | Elektrolytische Vorrichtung zur Herstellung von Kohlenstoff-Dioxyd |
NL9401735A (nl) * | 1994-10-19 | 1996-06-03 | Crown Gear Bv | Tandwieloverbrenging van een cilindrisch rondsel met een kroonwiel, het kroonwiel dat toegepast wordt in deze tandwieloverbrenging, een werkwijze volgens welke het kroonwiel gemaakt kan worden alsmede een gereedschap waarmee het kroonwiel gemaakt kan worden. |
US5872005A (en) * | 1994-11-03 | 1999-02-16 | Cell Genesys Inc. | Packaging cell lines for adeno-associated viral vectors |
JPH08137927A (ja) * | 1994-11-07 | 1996-05-31 | Hitachi Ltd | 部品配置配線表示方法 |
US6114133A (en) * | 1994-11-14 | 2000-09-05 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods for aiding in the diagnosis of Alzheimer's disease by measuring amyloid-β peptide (x-≧41) |
US5589154A (en) | 1994-11-22 | 1996-12-31 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Methods for the prevention or treatment of vascular hemorrhaging and Alzheimer's disease |
US5688651A (en) * | 1994-12-16 | 1997-11-18 | Ramot University Authority For Applied Research And Development Ltd. | Prevention of protein aggregation |
EP0820299B1 (en) * | 1995-02-06 | 2002-04-24 | Genetics Institute, Inc. | Formulations for il-12 |
US5786180A (en) | 1995-02-14 | 1998-07-28 | Bayer Corporation | Monoclonal antibody 369.2B specific for β A4 peptide |
US5624937A (en) | 1995-03-02 | 1997-04-29 | Eli Lilly And Company | Chemical compounds as inhibitors of amyloid beta protein production |
US5817626A (en) * | 1995-03-14 | 1998-10-06 | Praecis Pharmaceuticals Incorporated | Modulators of beta-amyloid peptide aggregation |
WO1996028471A1 (en) | 1995-03-14 | 1996-09-19 | Praecis Pharmaceuticals Incorporated | Modulators of amyloid aggregation |
US6303567B1 (en) * | 1995-03-14 | 2001-10-16 | Praecis Pharmaceuticals, Inc . | Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids |
US5854215A (en) | 1995-03-14 | 1998-12-29 | Praecis Pharmaceuticals Incorporated | Modulators of β-amyloid peptide aggregation |
AU711702B2 (en) * | 1995-03-23 | 1999-10-21 | Cambridge University Technical Services Limited | Vectors for gene delivery |
US5869046A (en) * | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US6121022A (en) | 1995-04-14 | 2000-09-19 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
ATE274064T1 (de) | 1995-05-23 | 2004-09-15 | Morphosys Ag | Multimere proteine |
AU6113896A (en) | 1995-06-05 | 1996-12-24 | Brigham And Women's Hospital | Use of oral tolerance to suppress both th1 and th2 immune re sponses and to suppress antibody production |
US5948763A (en) | 1995-06-07 | 1999-09-07 | New York University | Peptides and pharmaceutical compositions thereof for treatment of disorders or diseases associated with abnormal protein folding into amyloid or amyloid-like deposits |
AU6264996A (en) | 1995-06-07 | 1996-12-30 | Athena Neurosciences, Inc. | Method for identifying alzheimer's disease therapeutics usin g transgenic animal models |
IT1276680B1 (it) * | 1995-06-08 | 1997-11-03 | Oris Spa | Processo di sintesi dell'1-piridiniopropan-3-solfonato |
US5910427A (en) | 1995-06-22 | 1999-06-08 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Antigen non-specific glycosylation inhibiting factor derivatives |
US5780361A (en) * | 1995-06-23 | 1998-07-14 | Nec Corporation | Salicide process for selectively forming a monocobalt disilicide film on a silicon region |
ATE214603T1 (de) * | 1995-06-30 | 2002-04-15 | American Cyanamid Co | Stabile makrolide und makrolide imptstoff- zusammensetzungen |
WO1997003192A2 (en) * | 1995-07-07 | 1997-01-30 | Darwin Molecular Corporation | Chromosome 1 gene and gene products related to alzheimer's disease |
US6685940B2 (en) | 1995-07-27 | 2004-02-03 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
US6267958B1 (en) * | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
AUPN443995A0 (en) | 1995-07-27 | 1995-08-17 | Csl Limited | Papillomavirus polyprotein |
EP0859841B1 (en) | 1995-08-18 | 2002-06-19 | MorphoSys AG | Protein/(poly)peptide libraries |
AU6898996A (en) * | 1995-08-21 | 1997-03-12 | Cytrx Corporation | Compositions and methods for growth promotion |
EP1416280A3 (en) * | 1995-09-14 | 2005-08-10 | The Regents of the University of California | Antibodies specific for native PrPsc |
US5664823A (en) * | 1995-09-18 | 1997-09-09 | Ford Global Technologies, Inc. | Instrument panel brace |
US5731284A (en) | 1995-09-28 | 1998-03-24 | Amgen Inc. | Method for treating Alzheimer's disease using glial line-derived neurotrophic factor (GDNF) protein product |
WO1997013855A1 (en) | 1995-10-10 | 1997-04-17 | Novartis Ag | Melanoma-associated protein |
US5985242A (en) * | 1995-10-27 | 1999-11-16 | Praecis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids |
US5750361A (en) * | 1995-11-02 | 1998-05-12 | The Regents Of The University Of California | Formation and use of prion protein (PRP) complexes |
EP0876615A1 (en) | 1995-11-10 | 1998-11-11 | Elan Corporation Plc | Peptides which enhance transport across tissues and methods of identifying and using the same |
WO1997018855A1 (en) | 1995-11-21 | 1997-05-29 | Eduard Naumovich Lerner | Device for enhanced delivery of biologically active substances and compounds in an organism |
EP0866805A1 (en) | 1995-12-12 | 1998-09-30 | Karolinska Innovations AB | PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b) |
JPH09178743A (ja) | 1995-12-27 | 1997-07-11 | Oriental Yeast Co Ltd | 可溶性appの定量法 |
US6015662A (en) | 1996-01-23 | 2000-01-18 | Abbott Laboratories | Reagents for use as calibrators and controls |
US5770700A (en) * | 1996-01-25 | 1998-06-23 | Genetics Institute, Inc. | Liquid factor IX formulations |
ZA97452B (en) | 1996-01-25 | 1997-08-15 | Trinity College Dublin | Streptococcus equi vaccine. |
WO1997026913A1 (en) | 1996-01-26 | 1997-07-31 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | A POLYPEPTIDE FROM LUNG EXTRACT WHICH BINDS AMYLOID-β PEPTIDE |
GB9602294D0 (en) * | 1996-02-05 | 1996-04-03 | Zeneca Ltd | Heterocyclic compounds |
US6096313A (en) | 1996-02-09 | 2000-08-01 | Ludwig Institute For Cancer Research | Compositions containing immunogenic molecules and granulocyte-macrophage colony stimulating factor, as an adjuvant |
EP0883686A1 (en) | 1996-02-26 | 1998-12-16 | Morphosys Gesellschaft für Proteinoptimierung mbH | Novel method for the identification of nucleic acid sequences encoding two or more interacting (poly)peptides |
US6150091A (en) * | 1996-03-06 | 2000-11-21 | Baylor College Of Medicine | Direct molecular diagnosis of Friedreich ataxia |
US5870587A (en) * | 1996-03-20 | 1999-02-09 | International Business Machines Corporation | Information-handling system, method, and article of manufacture including a mechanism for providing an improved application binary interface |
JP4229341B2 (ja) | 1996-03-23 | 2009-02-25 | 財団法人阪大微生物病研究会 | 破傷風毒素の機能的フラグメント抗原及び破傷風ワクチン |
CA2250041A1 (en) * | 1996-03-29 | 1997-10-09 | University Of Otago | Parapoxvirus vectors |
EP0954324A4 (en) * | 1996-04-03 | 2000-11-02 | Anergen Inc | CYCLIC PEPTID VACCINES FOR DIABETES TREATMENT AND PREVENTION |
EP0904365A1 (en) * | 1996-04-19 | 1999-03-31 | The Government of the United States Of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Antigenically reactive regions of the hepatitis-a virus polyprotein |
US6284533B1 (en) * | 1996-05-01 | 2001-09-04 | Avant Immunotherapeutics, Inc. | Plasmid-based vaccine for treating atherosclerosis |
EP0938506B1 (en) | 1996-07-16 | 2003-11-05 | Plückthun, Andreas, Prof. Dr. | Immunoglobulin superfamily domains and fragments with increased solubility |
WO1998004720A1 (en) | 1996-07-26 | 1998-02-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method and reagents for genetic immunization |
US7147851B1 (en) | 1996-08-15 | 2006-12-12 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin |
GB9617616D0 (en) | 1996-08-22 | 1996-10-02 | Osteometer Biotech As | Assaying protein fragments in body fluids |
CA2183901A1 (en) | 1996-08-22 | 1998-02-23 | Johanna E. Bergmann | Targets for therapy and diagnosis of alzheimer's disease and down syndrome in humans |
DE69733655T2 (de) | 1996-08-27 | 2006-04-27 | Praecis Pharmaceuticals, Inc., Cambridge | beta-AMYLOID PEPTIDAGGREGATION REGULIERENDE PEPTIDE MIT D-AMINOSÄUREN |
US6057367A (en) * | 1996-08-30 | 2000-05-02 | Duke University | Manipulating nitrosative stress to kill pathologic microbes, pathologic helminths and pathologically proliferating cells or to upregulate nitrosative stress defenses |
US6797495B2 (en) * | 1996-11-05 | 2004-09-28 | The Regents Of The University Of California | Somatic cells with ablated PrP gene and methods of use |
US6022859A (en) * | 1996-11-15 | 2000-02-08 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Inhibitors of β-amyloid toxicity |
WO1998022120A1 (en) | 1996-11-19 | 1998-05-28 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Diagnostic and therapeutic reagents for alzheimer's disease |
US6962984B2 (en) | 1996-12-05 | 2005-11-08 | Nihon University | IgA nephropathy-related DNA |
US6218506B1 (en) * | 1997-02-05 | 2001-04-17 | Northwestern University | Amyloid β protein (globular assembly and uses thereof) |
US20030068316A1 (en) | 1997-02-05 | 2003-04-10 | Klein William L. | Anti-ADDL antibodies and uses thereof |
US6277375B1 (en) * | 1997-03-03 | 2001-08-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
EP0966447B1 (en) | 1997-03-03 | 2003-03-05 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. | Small molecules useful in the treatment of inflammatory disease |
US5798102A (en) | 1997-03-04 | 1998-08-25 | Milkhaus Laboratory, Inc. | Treatment of cardiomyopathy |
US6611610B1 (en) * | 1997-04-02 | 2003-08-26 | Gentex Corporation | Vehicle lamp control |
US6057098A (en) | 1997-04-04 | 2000-05-02 | Biosite Diagnostics, Inc. | Polyvalent display libraries |
US20020086847A1 (en) * | 1997-04-09 | 2002-07-04 | Mindset Biopharmaceuticals (Usa) | Recombinant antibodies specific for beta-amyloid ends, DNA encoding and methods of use thereof |
EP2305709A1 (en) | 1997-04-09 | 2011-04-06 | Intellect Neurosciences, Inc. | Recombinant antibodies specific for beta-amyloid ends, DNA encoding and methods for use thereof |
US8173127B2 (en) * | 1997-04-09 | 2012-05-08 | Intellect Neurosciences, Inc. | Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof |
ATE326481T1 (de) | 1997-04-15 | 2006-06-15 | Pharmexa As | Veränderte tnfalpha-moleküle, dns, welche für derartige veränderte tnfalpha-moleküle kodiert und impfstoffe, die derartige veränderte tnfalpha-moleküle und dns enthalten |
US6787319B2 (en) * | 1997-04-16 | 2004-09-07 | American Home Products Corp. | β-amyloid peptide-binding proteins and polynucleotides encoding the same |
US5858205A (en) * | 1997-05-13 | 1999-01-12 | Uop Llc | Multizone catalytic reforming process |
DE69838294T2 (de) | 1997-05-20 | 2009-08-13 | Ottawa Health Research Institute, Ottawa | Verfahren zur Herstellung von Nukleinsäurekonstrukten |
ES2190087T3 (es) | 1997-06-13 | 2003-07-16 | Genentech Inc | Formulacion estabilizada de un anticuerpo. |
AU8269898A (en) | 1997-06-27 | 1999-01-19 | Regents Of The University Of California, The | Drug targeting of a peptide radiopharmaceutical through the primate blood-brain barrier in vivo with a monoclonal antibody to the human insulin receptor |
IT1293511B1 (it) | 1997-07-30 | 1999-03-01 | Gentili Ist Spa | Anticorpi monoclonali catalitici ad attivita' proteasica per la lisi selettiva della componente proteica di placche e aggregati correlati |
WO1999006587A2 (en) | 1997-08-01 | 1999-02-11 | Morphosys Ag | Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex |
US7078191B1 (en) | 1997-08-01 | 2006-07-18 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Composition and method for the detection of diseases associated with amyloid-like fibril or protein aggregate formation |
ES2327693T3 (es) | 1997-08-29 | 2009-11-02 | Antigenics Inc. | Composiciones que comprenden el adyvante qs-21 y polisorbato o ciclodextrina excipiente. |
US6175057B1 (en) * | 1997-10-08 | 2001-01-16 | The Regents Of The University Of California | Transgenic mouse model of alzheimer's disease and cerebral amyloid angiopathy |
US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
TWI239847B (en) | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
US7790856B2 (en) | 1998-04-07 | 2010-09-07 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US6923964B1 (en) | 1997-12-02 | 2005-08-02 | Neuralab Limited | Active immunization of AScr for prion disorders |
US6761888B1 (en) * | 2000-05-26 | 2004-07-13 | Neuralab Limited | Passive immunization treatment of Alzheimer's disease |
US6905686B1 (en) * | 1997-12-02 | 2005-06-14 | Neuralab Limited | Active immunization for treatment of alzheimer's disease |
US7179892B2 (en) | 2000-12-06 | 2007-02-20 | Neuralab Limited | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US6750324B1 (en) * | 1997-12-02 | 2004-06-15 | Neuralab Limited | Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies |
US6913745B1 (en) * | 1997-12-02 | 2005-07-05 | Neuralab Limited | Passive immunization of Alzheimer's disease |
US6787523B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
US7964192B1 (en) | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
US7588766B1 (en) * | 2000-05-26 | 2009-09-15 | Elan Pharma International Limited | Treatment of amyloidogenic disease |
US6710226B1 (en) * | 1997-12-02 | 2004-03-23 | Neuralab Limited | Transgenic mouse assay to determine the effect of Aβ antibodies and Aβ Fragments on alzheimer's disease characteristics |
JP2002511385A (ja) | 1997-12-03 | 2002-04-16 | ニューララブ リミテッド | アルツハイマー病におけるβ−アミロイド関連変化を抑制する方法 |
KR20010032303A (ko) | 1997-12-03 | 2001-04-16 | 후지야마 아키라 | 연질 펠렛상 약제 및 그 제조방법 |
FR2777015B3 (fr) | 1998-02-23 | 2000-09-15 | Financ De Biotechnologie | Procede et moyens pour l'obtention de modeles cellulaires et animaux de maladies neurodegeneratives |
US6528624B1 (en) * | 1998-04-02 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
US6194551B1 (en) * | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
US20050059591A1 (en) * | 1998-04-07 | 2005-03-17 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
US20050059802A1 (en) * | 1998-04-07 | 2005-03-17 | Neuralab Ltd | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
WO1999055369A1 (en) * | 1998-04-28 | 1999-11-04 | Smithkline Beecham Corporation | Monoclonal antibodies with reduced immunogenicity |
NO314086B1 (no) | 1998-05-08 | 2003-01-27 | Gemvax As | Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til |
EP1080110A2 (en) | 1998-05-19 | 2001-03-07 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Use of activated t cells, nervous system-specific antigens for treating disorders of the nevrous system |
US20030147882A1 (en) * | 1998-05-21 | 2003-08-07 | Alan Solomon | Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies |
WO1999060024A1 (en) | 1998-05-21 | 1999-11-25 | The University Of Tennessee Research Corporation | Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies |
US6432710B1 (en) | 1998-05-22 | 2002-08-13 | Isolagen Technologies, Inc. | Compositions for regenerating tissue that has deteriorated, and methods for using such compositions |
US6710228B1 (en) * | 1998-05-29 | 2004-03-23 | Mycogen Corporation | Cotton cells, plants, and seeds genetically engineered to express insecticidal and fungicidal chitin binding proteins (lectins) |
US6727349B1 (en) | 1998-07-23 | 2004-04-27 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Recombinant anti-CCR2 antibodies and methods of use therefor |
PT1117421E (pt) | 1998-10-05 | 2004-11-30 | Pharmexa A S | Novos metodos para vacinacao terapeutica |
WO2000023082A1 (en) * | 1998-10-19 | 2000-04-27 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Treatment of systemic lupus erythematosus by down-regulating the autoimmune response to autoantigens |
US7112661B1 (en) | 1998-10-30 | 2006-09-26 | The Research Foundation Of State University Of New York | Variable heavy chain and variable light chain regions of antibodies to human platelet glycoprotein Ib alpha |
GB2348203B (en) | 1998-11-04 | 2002-06-19 | Imp College Innovations Ltd | Solube beta-forms of prion proteins, methods of preparation and use |
SI1148891T1 (en) | 1999-01-19 | 2004-08-31 | Pharmacia & Upjohn Company | Method of packaging an oxidation sensitive medicinal substance |
AU775525B2 (en) | 1999-01-22 | 2004-08-05 | Auckland Technology Enabling Corporation Limited | Vaccine-mediated treatment of neurological disorders |
US7629311B2 (en) | 1999-02-24 | 2009-12-08 | Edward Lewis Tobinick | Methods to facilitate transmission of large molecules across the blood-brain, blood-eye, and blood-nerve barriers |
US7282570B2 (en) | 1999-04-20 | 2007-10-16 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
JP2003503312A (ja) | 1999-05-05 | 2003-01-28 | ニューロシェム インコーポレイテッド | 立体選択的抗原線維形成ペプチドおよびそのペプチド模倣体 |
US6787637B1 (en) * | 1999-05-28 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | N-Terminal amyloid-β antibodies |
PE20010212A1 (es) | 1999-06-01 | 2001-02-22 | Neuralab Ltd | Composiciones del peptido a-beta y procesos para producir las mismas |
UA81216C2 (en) | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
AU780474B2 (en) * | 1999-06-16 | 2005-03-24 | Boston Biomedical Research Institute Incorporated | Immunological control of beta-amyloid levels in vivo |
CA2377382A1 (en) | 1999-07-01 | 2001-01-11 | Scios, Inc. | Prevention and treatment of amyloid-associated disorders |
NZ516664A (en) | 1999-07-15 | 2003-06-30 | Inst Genetics Llc | Formulations and compositions for interleukin-11 |
DE60016227T2 (de) | 1999-08-04 | 2005-12-15 | Northwestern University, Evanston | Globularer aufbau vom amyloid-beta- protein und deren verwendungen |
US6919075B1 (en) | 1999-09-03 | 2005-07-19 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Bacteriophage displaying aβ epitopes and method of use |
US6294171B2 (en) | 1999-09-14 | 2001-09-25 | Milkhaus Laboratory, Inc. | Methods for treating disease states comprising administration of low levels of antibodies |
US6824780B1 (en) | 1999-10-29 | 2004-11-30 | Genentech, Inc. | Anti-tumor antibody compositions and methods of use |
US20020094335A1 (en) | 1999-11-29 | 2002-07-18 | Robert Chalifour | Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases |
CN1433321A (zh) | 1999-11-29 | 2003-07-30 | 尼奥切姆公司 | 预防和治疗Alzheimer症和其他与淀粉样蛋白有关的疾病的疫苗 |
WO2001042306A2 (en) | 1999-12-08 | 2001-06-14 | Mindset Biopharmaceuticals (Usa), Inc. | Chimeric peptides (short b-cell epitope joined to a t-cell epitope) and their use for immunization |
US6399314B1 (en) * | 1999-12-29 | 2002-06-04 | American Cyanamid Company | Methods of detection of amyloidogenic proteins |
MXPA02007796A (es) * | 2000-02-21 | 2003-12-08 | Pharmexa As | Metodo novedoso para la disminucion de cuerpos amiloides. |
ATE306933T1 (de) | 2000-02-21 | 2005-11-15 | Pharmexa As | Verfahren zur herabregulierung von amyloid |
MXPA02008145A (es) | 2000-02-24 | 2004-04-05 | Univ Washington | Anticuerpos humanizados que secuestran al peptido beta amiloide. |
US6294221B1 (en) * | 2000-03-08 | 2001-09-25 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for spray-coating with frequent changes between aqueous and non-aqueous coating agents inside a spray-coating chamber |
US6548840B1 (en) * | 2000-04-03 | 2003-04-15 | Hrl Laboratories, Llc | Monolithic temperature compensation scheme for field effect transistor integrated circuits |
CA2404237C (en) | 2000-04-05 | 2010-01-26 | University Of Tennessee Research Corporation | Methods of investigating, diagnosing, and treating amyloidosis |
AU5162201A (en) | 2000-04-13 | 2001-10-30 | Corixa Corporation | Immunostimulant compositions comprising an aminoalkyl glucosaminide phosphate and qs-21 |
DE60108111T2 (de) * | 2000-05-22 | 2005-12-08 | New York University | Synthetische immunogene jedoch nicht amyloidogene peptide, die homolog zu amyloid beta sind und deren verwendung zur induktion einer immunantwort gegen amyloid beta und amyloidaggregate |
EP1309341A2 (en) * | 2000-07-07 | 2003-05-14 | Lars Lannfelt | Prevention and treatment of alzheimer's disease |
EP1172378A1 (en) | 2000-07-12 | 2002-01-16 | Richard Dr. Dodel | Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease |
US20020009445A1 (en) * | 2000-07-12 | 2002-01-24 | Yansheng Du | Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease |
US20030092145A1 (en) * | 2000-08-24 | 2003-05-15 | Vic Jira | Viral vaccine composition, process, and methods of use |
US7199102B2 (en) * | 2000-08-24 | 2007-04-03 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides synergize statin activity |
DE60139788D1 (de) | 2000-09-06 | 2009-10-15 | Aventis Pharma Sa | Verfahren und zusammensetzungen für amyloidosis-verbundene krankheiten |
IT1319277B1 (it) | 2000-10-24 | 2003-09-26 | Chiesi Farma Spa | Proteine di fusione utili per il trattamento di immunizzazione dellamalattia di alzheimer. |
IL139308A0 (en) | 2000-10-26 | 2001-11-25 | Marikovsky Moshe | Peptides from amyloid precursor protein which inhibit tumor growth and metastasis |
CA2427014A1 (en) | 2000-11-02 | 2002-08-22 | Cornell Research Foundation, Inc. | In vivo multiphoton diagnostic detection and imaging of a neurodegenerative disease |
JP2004534511A (ja) * | 2000-11-27 | 2004-11-18 | プラエシス ファーマシューティカルズ インク. | アミロイド形成性疾患を治療するための治療薬及びその使用法 |
US7700751B2 (en) | 2000-12-06 | 2010-04-20 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide |
PE20020574A1 (es) * | 2000-12-06 | 2002-07-02 | Wyeth Corp | Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta |
US6900036B2 (en) * | 2000-12-27 | 2005-05-31 | University Of Texas Health Science Center Houston | Prion isomers, methods of making, methods of using, and compositions and products comprising prion isomers |
US20020160394A1 (en) * | 2001-01-24 | 2002-10-31 | Bayer Corporation | Regulation of transthyretin to treat obesity |
EP1251138B1 (en) * | 2001-04-19 | 2006-07-26 | Hermann Dr. Schätzl | Prion protein dimers useful for vaccination |
WO2002088307A2 (en) | 2001-04-30 | 2002-11-07 | Eli Lilly And Company | Humanized antibodies |
EP1385545B1 (en) | 2001-04-30 | 2009-01-07 | Eli Lilly And Company | Humanized antibodies recognizing the beta-amyloid peptide |
US6524624B1 (en) * | 2001-05-16 | 2003-02-25 | Alcide Corporation | Two-part disinfecting systems and compositions and methods related thereto |
US6906169B2 (en) | 2001-05-25 | 2005-06-14 | United Biomedical, Inc. | Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide |
GB0113179D0 (en) | 2001-05-31 | 2001-07-25 | Novartis Ag | Organic compounds |
US6888849B2 (en) * | 2001-06-15 | 2005-05-03 | Lucent Technologies Inc. | Method for evaluating capacity utilization of a terminus in a communication system |
AU2002345843A1 (en) * | 2001-06-22 | 2003-01-08 | Panacea Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for preventing protein aggregation in neurodegenerative diseases |
EP1409018B1 (en) | 2001-07-25 | 2010-01-06 | Facet Biotech Corporation | Stable lyophilized pharmaceutical formulation the igg antibody daclizumab |
US20030135035A1 (en) | 2001-08-09 | 2003-07-17 | Mark Shannon | Human ZZAP1 protein |
WO2003016467A2 (en) | 2001-08-17 | 2003-02-27 | Eli Lilly And Company | Use of antibodies having high affinity for soluble ass to treat conditions and diseases related to ass |
WO2003015691A2 (en) | 2001-08-17 | 2003-02-27 | Eli Lilly And Company | RAPID IMPROVEMENT OF COGNITION IN CONDITIONS RELATED TO A$g(b) |
US20040192898A1 (en) | 2001-08-17 | 2004-09-30 | Jia Audrey Yunhua | Anti-abeta antibodies |
US20030082191A1 (en) | 2001-08-29 | 2003-05-01 | Poduslo Joseph F. | Treatment for central nervous system disorders |
US7625550B2 (en) * | 2001-09-10 | 2009-12-01 | Anticancer, Inc. | Enhanced resolution of tumor metastasis using a skin flap model |
US6736142B2 (en) * | 2001-09-13 | 2004-05-18 | Gines Sanchez Gomez | Protective tube and harness |
US6907297B2 (en) | 2001-09-28 | 2005-06-14 | Ethicon, Inc. | Expandable intracardiac return electrode and method of use |
US6597198B2 (en) * | 2001-10-05 | 2003-07-22 | Intel Corporation | Current mode bidirectional port with data channel used for synchronization |
GB0124446D0 (en) * | 2001-10-11 | 2001-12-05 | Short Brothers Ltd | Aircraft propulsive power unit |
US7781413B2 (en) | 2001-10-31 | 2010-08-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | SEMA3B inhibits tumor growth and induces apoptosis in cancer cells |
DK1441589T3 (da) | 2001-11-08 | 2012-08-06 | Abbott Biotherapeutics Corp | Stabil, flydende, farmaceutisk sammensætning af IgG-antistoffer |
AU2002357007A1 (en) * | 2001-11-21 | 2003-06-10 | New York University | SYNTHETIC IMMUNOGENIC BUT NON-DEPOSIT-FORMING POLYPEPTIDES AND PEPTIDES HOMOLOGOUS TO AMYLOID Beta, PRION PROTEIN, AMYLIN, Alpha-SYNUCLEIN, OR POLYGLUTAMINE REPEATS FOR INDUCTION OF AN IMMUNE RESPONSE THERETO |
WO2003051374A2 (en) | 2001-12-17 | 2003-06-26 | New York State Office Of Mental Health | SEQUESTRATION OF Aβ IN THE PERIPHERY IN THE ABSENCE OF IMMUNOMODULATING AGENT AS A THERAPEUTIC APPROACH FOR THE TREATMENT OR PREVENTION OF BETA-AMYLOID RELATED DISEASES |
AR038568A1 (es) | 2002-02-20 | 2005-01-19 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-a beta y su uso |
JP2005526501A (ja) | 2002-02-21 | 2005-09-08 | デューク・ユニヴァーシティ | 自己免疫疾患用の試薬および治療方法 |
US6688651B2 (en) * | 2002-02-21 | 2004-02-10 | Dmt Co., Ltd. | Device for locking cap nut for coupling |
MY139983A (en) * | 2002-03-12 | 2009-11-30 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
CA2390700C (en) * | 2002-06-11 | 2004-09-07 | Henry Tsang | Illuminated soap bar with sound |
GB0213437D0 (en) | 2002-06-12 | 2002-07-24 | Univ Cranfield | Temporary tattoos: A novel vehicle for skin testing |
US7132100B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-07 | Medimmune, Inc. | Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations |
US6892535B2 (en) * | 2002-06-14 | 2005-05-17 | Volvo Construction Equipment Holding Sweden Ab | Hydraulic circuit for boom cylinder combination having float function |
WO2004016282A1 (en) | 2002-07-19 | 2004-02-26 | Cytos Biotechnology Ag | Vaccine compositions containing amyloid beta1-6 antigen arrays |
AU2003250102B2 (en) | 2002-07-24 | 2009-09-17 | Innogenetics N.V. | Fragments of beta-amyloid as targets for vaccination against alzheimer disease |
AU2003279728B2 (en) | 2002-10-01 | 2007-09-27 | Northwestern University | Amyloid beta-derived diffusible ligands (addls), addl-surrogates, addl-binding molecules, and uses thereof |
US20040080762A1 (en) * | 2002-10-25 | 2004-04-29 | Xerox Corporation | Half-tone based enhancement of black |
US20060019850A1 (en) * | 2002-10-31 | 2006-01-26 | Korzenski Michael B | Removal of particle contamination on a patterned silicon/silicon dioxide using dense fluid/chemical formulations |
FR2846667B1 (fr) | 2002-11-06 | 2004-12-31 | Pasteur Institut | Fragments variables d'anticorps de camelides a chaine unique diriges contre le peptide beta-amyloide 1-42 et leurs applications pour le diagnostic et le traitement des maladies neuroagregatives |
US20040191243A1 (en) | 2002-12-13 | 2004-09-30 | Bei Chen | System and method for stabilizing antibodies with histidine |
US6787129B1 (en) | 2003-01-13 | 2004-09-07 | Zenitech Llc | Castor polyester as gloss agents in anionic systems |
CA2513722A1 (en) | 2003-02-01 | 2004-08-19 | Neuralab Limited | Active immunization to generate antibodies to soluble a-beta |
US7575747B2 (en) | 2003-02-10 | 2009-08-18 | Applied Molecular Evolution | Aβ binding molecules |
DK2335725T3 (en) | 2003-04-04 | 2017-01-23 | Genentech Inc | Highly concentrated antibody and protein formulations |
EP1480041A1 (en) | 2003-05-22 | 2004-11-24 | Innogenetics N.V. | Method for the prediction, diagnosis and differential diagnosis of Alzheimer's disease |
TWI306458B (en) | 2003-05-30 | 2009-02-21 | Elan Pharma Int Ltd | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US20060182321A1 (en) | 2003-07-07 | 2006-08-17 | Agency For Science, Technology And Research | Method and apparatus for extracting third ventricle information |
WO2005014041A2 (en) | 2003-07-24 | 2005-02-17 | Novartis Ag | Use of an amyloid beta dna vaccine for the treatment and/or prevention of amyloid diseases |
US20060233788A1 (en) | 2003-09-05 | 2006-10-19 | Heiman Mark L | Anti-ghrelin antibodies |
CA2445743A1 (en) | 2003-10-08 | 2005-04-08 | The University Of British Columbia | Methods for modulating neuronal responses |
WO2005035753A1 (ja) | 2003-10-10 | 2005-04-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 機能蛋白質を代替する二重特異性抗体 |
SG149039A1 (en) * | 2003-12-17 | 2009-01-29 | Elan Pharm Inc | Ass IMMUNOGENIC PEPTIDE CARRIER CONJUGATES AND METHODS OF PRODUCING SAME |
MY146566A (en) | 2003-12-17 | 2012-08-30 | Wyeth Llc | Immunogenic peptide carrier conjugates and methods of producing same |
US20050214222A1 (en) | 2004-02-13 | 2005-09-29 | Mckinnon Stuart J | In vivo imaging of amyloid plaques in glaucoma using intravenous injectable dyes |
KR101166342B1 (ko) | 2004-03-15 | 2012-07-18 | 얀센 파마슈티카 엔.브이. | 아편계 약물 수용체 조절자로서의 신규의 화합물 |
CN101137397A (zh) | 2004-07-02 | 2008-03-05 | 匹兹堡大学高等教育联邦体系 | 淀粉样蛋白成像作为抗淀粉样蛋白疗法的功效的替代标记物 |
WO2006036291A2 (en) | 2004-07-30 | 2006-04-06 | Rinat Neuroscience Corp. | Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same |
US7328838B2 (en) * | 2004-09-09 | 2008-02-12 | Igt | Counterfeit cashless instrument detection methods and systems |
TW200616662A (en) | 2004-09-10 | 2006-06-01 | Wyeth Corp | Humanized anti-5t4 antibodies and anti-5t4 antibody/calicheamicin conjugates |
CA2582157A1 (en) | 2004-10-05 | 2006-04-20 | Wyeth | Methods and compositions for improving recombinant protein production |
US20060160161A1 (en) | 2004-10-26 | 2006-07-20 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods for assessing antibodies to neurodegenerative disease-associated antigens |
US20060026911A1 (en) * | 2004-11-18 | 2006-02-09 | Sutton Adam F | Footer track with moisture vent |
EP1838348B1 (en) | 2004-12-15 | 2013-06-26 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition |
TW200636066A (en) | 2004-12-15 | 2006-10-16 | Elan Pharm Inc | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US20060257396A1 (en) | 2004-12-15 | 2006-11-16 | Jacobsen Jack S | Abeta antibodies for use in improving cognition |
WO2006066233A1 (en) | 2004-12-15 | 2006-06-22 | Neuralab Limited | An immunoprecipitation-based assay for predicting in vivo efficacy of beta-amyloid antibodies |
WO2006066118A2 (en) | 2004-12-15 | 2006-06-22 | Neuralab Limited | Contextual fear test for predicting efficacy of alzheimer immunotherapeutic treatment |
GT200600031A (es) | 2005-01-28 | 2006-08-29 | Formulacion anticuerpo anti a beta | |
EP1841456A2 (en) | 2005-01-28 | 2007-10-10 | Wyeth | Stabilized liquid polypeptide formulations |
ATE535252T1 (de) | 2005-05-05 | 2011-12-15 | Merck Sharp & Dohme | Peptid-konjugat-zusammensetzungen und -verfahren zur prävention und behandlung von alzheimer- krankheit |
CA2611816C (en) | 2005-06-17 | 2014-05-27 | Wyeth | Methods of purifying fc region containing proteins |
ATE550338T1 (de) | 2005-07-18 | 2012-04-15 | Merck Sharp & Dohme | Spiropiperidininhibitoren von beta-secretase zur behandlung von alzheimer-krankheit |
CN101558080A (zh) | 2005-11-10 | 2009-10-14 | 罗斯坎普研究有限责任公司 | Aβ肽片段对血管生成的调节 |
SI1996621T1 (sl) | 2006-03-30 | 2010-04-30 | Glaxo Group Ltd | Protitelesa proti amiloidnemu peptidu beta |
US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
WO2010044803A1 (en) | 2008-10-17 | 2010-04-22 | Elan Pharma International Limited | Treatment of amyloidogenic diseases |
AU2007275467B2 (en) | 2006-07-14 | 2013-12-05 | Ac Immune S.A. | Humanized antibody against amyloid beta |
EP2120717A1 (en) | 2007-03-12 | 2009-11-25 | National Institute of Radiological Sciences | Pet visualization of amyloid-associated neuroinflammation in the brain |
US20080292625A1 (en) | 2007-04-18 | 2008-11-27 | Sally Schroeter | Prevention and treatment of cerebral amyloid angiopathy |
US8003097B2 (en) | 2007-04-18 | 2011-08-23 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of cerebral amyloid angiopathy |
US8613920B2 (en) | 2007-07-27 | 2013-12-24 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
WO2011133919A1 (en) | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Use of tau to monitor immunotherapy |
JO3076B1 (ar) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe |
JP5730020B2 (ja) | 2007-12-28 | 2015-06-03 | ネオトープ バイオサイエンシーズ リミテッド | アミロイドーシスの処置および予防 |
WO2010033861A1 (en) | 2008-09-18 | 2010-03-25 | Cedars-Sinai Medical Center | Optical method for the detection of alzheimer's disease |
JP2013521233A (ja) | 2010-02-25 | 2013-06-10 | ヤンセン アルツハイマー イミュノセラピー | Aβを標的とする免疫療法のPETモニタリング |
-
1998
- 1998-11-26 TW TW087119660A patent/TWI239847B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-11-30 DE DE69840969T patent/DE69840969D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 BR BR9815357-9A patent/BR9815357A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-11-30 DK DK98961833T patent/DK1033996T3/da active
- 1998-11-30 KR KR1020127028217A patent/KR20120135915A/ko not_active Application Discontinuation
- 1998-11-30 SI SI9830911T patent/SI1033996T1/sl unknown
- 1998-11-30 TR TR2000/01608T patent/TR200001608T2/xx unknown
- 1998-11-30 CZ CZ20001706A patent/CZ303137B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-11-30 AR ARP980106063A patent/AR020050A1/es not_active Application Discontinuation
- 1998-11-30 CA CA2312920A patent/CA2312920C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 JP JP2000522929A patent/JP4677094B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 PE PE1998001161A patent/PE20001383A1/es not_active IP Right Cessation
- 1998-11-30 EP EP98961833A patent/EP1033996B1/en not_active Revoked
- 1998-11-30 EP EP06075479A patent/EP1679080B1/en not_active Revoked
- 1998-11-30 EE EEP200000379A patent/EE05377B1/xx unknown
- 1998-11-30 DE DE06075479T patent/DE06075479T1/de active Pending
- 1998-11-30 PT PT08011409T patent/PT1994937E/pt unknown
- 1998-11-30 ES ES06075479T patent/ES2263408T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 KR KR1020097011537A patent/KR101248711B1/ko active IP Right Grant
- 1998-11-30 DK DK08011409.3T patent/DK1994937T3/da active
- 1998-11-30 HU HU1200431A patent/HU228493B1/hu unknown
- 1998-11-30 EP EP08011409A patent/EP1994937B1/en not_active Revoked
- 1998-11-30 SI SI9830942T patent/SI2305282T1/sl unknown
- 1998-11-30 SI SI9830928T patent/SI1994937T1/sl unknown
- 1998-11-30 EP EP06075704A patent/EP1690547B1/en not_active Revoked
- 1998-11-30 PL PL384504A patent/PL202706B1/pl unknown
- 1998-11-30 GE GE5511A patent/GEP20053715B/en unknown
- 1998-11-30 GE GE3977A patent/GEP20043319B/en unknown
- 1998-11-30 DE DE69839647T patent/DE69839647D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 CN CNB988117312A patent/CN100374151C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 AU AU17061/99A patent/AU1706199A/en not_active Abandoned
- 1998-11-30 DE DE1033996T patent/DE1033996T1/de active Pending
- 1998-11-30 AT AT08011409T patent/ATE493149T1/de active
- 1998-11-30 SG SG200205898A patent/SG111083A1/en unknown
- 1998-11-30 IL IL13625298A patent/IL136252A0/xx unknown
- 1998-11-30 AT AT06075704T patent/ATE435659T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-11-30 DE DE69840922T patent/DE69840922D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 ES ES98961833T patent/ES2310017T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 DK DK10182575.0T patent/DK2305282T3/da active
- 1998-11-30 DE DE69842082T patent/DE69842082D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 EA EA200000608A patent/EA200000608A1/ru unknown
- 1998-11-30 EP EP10182575.0A patent/EP2305282B1/en not_active Revoked
- 1998-11-30 WO PCT/US1998/025386 patent/WO1999027944A1/en active Application Filing
- 1998-11-30 SI SI9830921T patent/SI1679080T1/sl unknown
- 1998-11-30 PT PT101825750T patent/PT2305282E/pt unknown
- 1998-11-30 HU HU0100627A patent/HU228061B1/hu unknown
- 1998-11-30 ES ES06075704T patent/ES2262460T1/es active Pending
- 1998-11-30 NZ NZ504569A patent/NZ504569A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-11-30 PL PL384503A patent/PL202698B1/pl unknown
- 1998-11-30 PT PT98961833T patent/PT1033996E/pt unknown
- 1998-11-30 ES ES10182575T patent/ES2428740T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-30 EA EA200601132A patent/EA009283B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-11-30 DE DE06075704T patent/DE06075704T1/de active Pending
- 1998-11-30 PT PT06075479T patent/PT1679080E/pt unknown
- 1998-11-30 AT AT06075479T patent/ATE433760T1/de active
- 1998-11-30 AT AT98961833T patent/ATE399016T1/de active
- 1998-11-30 DK DK06075479T patent/DK1679080T3/da active
- 1998-11-30 ID IDW20001293A patent/ID25504A/id unknown
- 1998-11-30 KR KR1020007005913A patent/KR100936419B1/ko active IP Right Grant
- 1998-11-30 EA EA200401473A patent/EA007218B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-12-01 CO CO98071271A patent/CO4980846A1/es unknown
- 1998-12-01 MY MYPI98005427A patent/MY134906A/en unknown
-
1999
- 1999-04-06 SA SA99191269A patent/SA99191269B1/ar unknown
-
2000
- 2000-05-17 IS IS5500A patent/IS5500A/is unknown
- 2000-05-21 IL IL136252A patent/IL136252A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-05-31 NO NO20002784A patent/NO328865B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-06-27 BG BG104562A patent/BG104562A/xx unknown
- 2000-06-30 HR HR20000443A patent/HRP20000443B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-11-07 US US10/704,070 patent/US20040171816A1/en not_active Abandoned
- 2003-11-07 US US10/703,713 patent/US20040171815A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-02-27 US US10/789,273 patent/US20050249725A1/en not_active Abandoned
- 2004-03-31 US US10/815,353 patent/US6808712B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-31 US US10/816,380 patent/US7014855B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-31 US US10/815,404 patent/US6982084B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-08-20 US US10/923,474 patent/US20050048049A1/en not_active Abandoned
- 2004-08-20 US US10/923,605 patent/US20050249727A1/en not_active Abandoned
- 2004-08-20 US US10/923,469 patent/US8034339B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-08-20 US US10/923,267 patent/US20050191292A1/en not_active Abandoned
- 2004-08-20 US US10/923,471 patent/US8535673B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-08-27 US US10/928,926 patent/US20050196399A1/en not_active Abandoned
- 2004-09-02 US US10/933,559 patent/US6972127B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-09-02 US US10/934,819 patent/US20050163788A1/en not_active Abandoned
- 2004-09-02 US US10/934,609 patent/US6946135B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-02-14 US US11/058,757 patent/US20050142132A1/en not_active Abandoned
- 2005-04-15 US US11/108,102 patent/US20050191314A1/en not_active Abandoned
- 2005-10-07 US US11/245,916 patent/US20060029611A1/en not_active Abandoned
- 2005-10-07 US US11/245,524 patent/US20060034858A1/en not_active Abandoned
- 2005-11-30 JP JP2005346511A patent/JP4677334B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2005-11-30 JP JP2005346462A patent/JP4677333B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-01-12 HK HK07100441.8A patent/HK1095265A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2007-02-13 HK HK07101687.9A patent/HK1094535A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2007-08-20 US US11/842,120 patent/US20080227719A1/en not_active Abandoned
- 2007-08-20 US US11/842,085 patent/US20080096818A1/en not_active Abandoned
- 2007-08-20 US US11/842,113 patent/US8034348B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-08-20 US US11/842,116 patent/US8642044B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-06-03 IL IL191904A patent/IL191904A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-08-05 IL IL193245A patent/IL193245A0/en unknown
- 2008-09-10 CY CY20081100977T patent/CY1108331T1/el unknown
-
2009
- 2009-08-21 NO NO20092874A patent/NO331425B1/no not_active IP Right Cessation
- 2009-09-16 CY CY20091100951T patent/CY1109368T1/el unknown
- 2009-10-26 HR HR20090568A patent/HRP20090568A2/hr not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-01-15 NO NO20100061A patent/NO332813B1/no not_active IP Right Cessation
- 2010-04-22 IL IL205298A patent/IL205298A0/en unknown
- 2010-06-01 JP JP2010126015A patent/JP2010215651A/ja active Pending
-
2011
- 2011-03-28 CY CY20111100331T patent/CY1111370T1/el unknown
- 2011-10-10 US US13/270,015 patent/US20130058869A1/en not_active Abandoned
- 2011-10-11 US US13/271,081 patent/US20120276116A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-09-03 US US14/017,177 patent/US20140227274A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6787523B1 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
CA2312920C (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
AU2006202899B2 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
AU2016256668A1 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
PL203431B1 (pl) | Kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie srodka immunogennego | |
AU2013206069A1 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RECP | Rectifications of patent specification |