Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

PL199652B1 - Sposób wytwarzania stałych kompozycji farmaceutycznych - Google Patents

Sposób wytwarzania stałych kompozycji farmaceutycznych

Info

Publication number
PL199652B1
PL199652B1 PL340505A PL34050598A PL199652B1 PL 199652 B1 PL199652 B1 PL 199652B1 PL 340505 A PL340505 A PL 340505A PL 34050598 A PL34050598 A PL 34050598A PL 199652 B1 PL199652 B1 PL 199652B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
cyclodextrin
taxoid
paclitaxel
hydroxypropyl
docetaxel
Prior art date
Application number
PL340505A
Other languages
English (en)
Other versions
PL340505A1 (en
Inventor
Joseph M. Géczy
Original Assignee
Hexal Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hexal Ag filed Critical Hexal Ag
Publication of PL340505A1 publication Critical patent/PL340505A1/xx
Publication of PL199652B1 publication Critical patent/PL199652B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
    • A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania sta lych kompozycji farmaceutycznych, natychmiast rozpuszczalnych, do zastosowania farmaceutycznego, oraz ich roztworów w wodnych rozpuszczalni- kach, polegaj acego na tym, ze a) rozpuszcza si e w etanolu taksoid, korzystnie paklitaksel lub doce- taksel, albo jego sól, hydrat lub solwat, a nastepnie prowadzi si e dalsze etapy: i) dodaje si e silnie roz- proszonej pochodnej cyklodekstryny o du zej powierzchni w la sciwej, w postaci acetylo- ?-cyklodek- stryny lub hydroksypropylo- ß-cyklodekstryny, rozpuszcza si e mieszanin e w wodnym rozpuszczalniku i prowadzi si e liofilizacj e, z wytworzeniem substancji sta lej, albo ii) dodaje si e silnie rozproszonej po- chodnej cyklodekstryny o du zej powierzchni w la sciwej, w postaci acetylo- ?-cyklodekstryny lub hydro- ksypropylo- ß-cyklodekstryny, odparowuje si e rozpuszczalnik i prowadzi si e suszenie, z wytworzeniem substancji sta lej, zawieraj acej A. taksoid jako substancj e czynn a i B. pochodn a cyklodekstryny przy czym stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:400; z tym ze gdy stosuje si e hydroksypropylo- ß-cyklodekstryn e, to wówczas taksoid mo ze stanowi c tylko docetaksel, a stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:100; oraz ewentualnie b) rozpuszcza si e substancj e sta la w wodnym rozpuszczalniku, z wytworzeniem roztworu do bezpo sredniego zastoso- wania w leczeniu. PL PL PL PL PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania stałych kompozycji farmaceutycznych, natychmiast rozpuszczalnych, do zastosowania farmaceutycznego oraz ich roztworów w wodnych rozpuszczalnikach, zawierających taksoidy i pewne cyklodekstryny.
Taksoid to nazwa wspólna dla paklitakselu i strukturalnie pokrewnych substancji. Paklitaksel jest związkiem znanym z silnego działania przeciwnowotworowego, działającym jako trucizna mitotyczna i silny inhibitor replikacji komórek. Wiadomo również, że paklitaksel wykazuje słabą rozpuszczalność w wodzie, wynoszącą około 0,0005 mg/ml w temperaturze otoczenia oraz że jest nietrwały w roztworach przy przechowywaniu, a także na skutek solwolizy wiązania estrowego traci aktywność cytotoksyczną. Paklitaksel jest dostępny w handlu w postaci roztworu w mieszaninie 1:1 etanolu i Cremophoru EL (polihydroksylowanego oleju rycynowego).
Sugerowano, że Cremophor EL bierze udział w wywoływaniu niektórych działań ubocznych (nadwrażliwość, uwalnianie histaminy) podczas leczenia przy podawaniu dożylnym, co skłoniło badaczy do podjęcia w ostatnim dziesięcioleciu wysiłków zmierzających do opracowania nowych układów podawania leków.
Gdy paklitaksel formułuje się w postać roztworu w rozpuszczalnikach organicznych, etanolu i polietoksylowanym oleju rycynowym, jest on podawany jako przesycona emulsja typu olej w wodzie i rozpuszcza się szybko we krwi, w środowisku wodnym bogatym w hydrofobowe domeny tworzone przez lipidy i białka. Paklitaksel przenika przez środowisko hydrofobowe błony komórkowej podczas wnikania do komórek i opuszczania ich na drodze dyfuzji.
Skłonność paklitakselu do samoagregacji zależnej od rozpuszczalnika i stężenia skłoniły badaczy do sformułowania tego słabo rozpuszczalnego leku wraz z farmaceutycznie dopuszczalnymi zarobkami w postać preparatu przeznaczonego do stosowania klinicznego.
Wiadomo również, że docetaksel, półsyntetyczny taksoid, jest wysoce lipofilowy i lepiej rozpuszczalny w wodzie niż paklitaksel (US 4 814 470). Dostępny w handlu koncentrat docetakselu przeznaczony do iniekcji stanowi sterylny roztwór leku w polisorbacie 80, wraz z dodatkiem towarzyszącego rozcieńczalnika, który stanowi 13% (wag.) roztwór etanolu w wodzie do iniekcji. Maksymalne stężenie leku, jakie można stosować, wynosiło 0,3-0,9 mg/ml. Należy unikać stężeń wyższych niż 0,9 mg/ml ze względu na problemy związane z wytrącaniem się. Związane ze stosowaniem polisorbatu 80 reakcje nadwrażliwości mogą stwarzać problemy podczas stosowania preparatów dostępnych w handlu.
W celu odpowiedniego sformułowania stosowano szereg podejść, między innymi użyto nośników o właściwościach hydrofobowych. W większości nośników taksoid jest zawarty w stężeniach milimolowych, porównywalnych ze stężeniami, przy których obserwuje się samoistną agregację taksoidu, co powoduje jego wytrącanie się.
W oparciu o wzajemne oddział ywania pomię dzy taksoidem a cyklodekstrynami wysunię to dalsze sugestie. Podczas badania ruchliwości taksoidu w chromatografii cienkowarstwowej w obecności cyklodekstryn (Int. J. Pharm. 1994, 108, 64-75) stwierdzono najpierw, że oddziaływanie pomiędzy taksoidem a cyklodekstryną było bardzo słabe. Później (AU 645927) zaobserwowano umiarkowany wzrost rozpuszczalności taksoidu przy użyciu nie podstawionych cyklodekstryn oraz zmodyfikowanych enzymatycznie rozgałęzionych β-cyklodekstryn.
Sugerowano, że wodne roztwory leków trudno rozpuszczalnych w wodzie, przeznaczone do stosowania pozajelitowego, w połączeniu z cyklodekstrynami ograniczają wytrącanie się leków w miejscu iniekcji lub w narządach po podaniu pozajelitowym (US 5 024 998). Obserwowano wzrost rozpuszczalności po zastosowaniu wysokiego (około 50%, wag./obj.) stężenia CD, a w przypadku pewnych substancji w tych stężeniach otrzymano stałe kompleksy, co wskazuje, że w stężeniach CD poniżej 20% (wag./obj.) może nastąpić wytrącanie. Wśród wielu leków wymienionych w tym opisie nie ma ani słowa dotyczącego taksoidów lub acetylo-yCD.
Dalszy postęp stanowiło zastosowanie wodnego roztworu metylowanych β-cyklodekstryn jako skutecznych substancji zwiększających rozpuszczalność paklitakselu (PCT WO 94/26728) oraz łączenie metylowanych β-cyklodekstryn z etanolem przy wytwarzaniu roztworów zawierających 1-4 mg/ml paklitakselu (EP 788 373). Te koncentraty taksoidów nie ulegały wytrącaniu podczas rozcieńczania aż do pewnych granic, co pozwalało na uniknięcie stosowania toksycznych detergentów. Sugerowano również, że 2,6-di-O-metylo-e-cyklodekstryna jest skuteczniejszym solubilizatorem paklitakselu (EP 0 639 380), a szczegółowe wyniki jego zdolności solubilizującej zostały opublikowane w J. Pharm. Sci., 84, 10: 1223-1230, 1995. Wyrażano jednakże pewne zastrzeżenia dotyczące stosowania metyPL 199 652 B1 lowanych β-cyklodekstryn w preparatach do iniekcji ze względu na ich właściwości zmniejszające napięcie powierzchniowe, ich powinowactwo do cholesterolu i innych lipidowych składników błon komórkowych, występujące już w niskich stężeniach i dawkach.
Opublikowano prace, w których badano stosowanie cyklodekstryn wraz z rozpuszczalnymi w wodzie lekami, powodujące mniejsze owrzodzenia w porównaniu z takimi samymi preparatami związków cytotoksycznych po wyjściu poza naczynie (WO 95/06485). Chociaż paklitaksel nie rozpuszcza się w wodzie, w tej publikacji patentowej podano również przykład dotyczący „Taksolu” w 50% roztworze etanolu, dla zilustrowania tego działania z dodatkiem „HPCD”. Otrzymane wyniki wskazują, że HPCD wywierała ochronne działanie na skórę wówczas, gdy Taksol został umieszczony śródskórnie, co powodowało zmniejszenie rozmiarów zmiany.
Rozgałęzione cyklodekstryny zawierające grupy tiolowe zostały ujawnione jako związki rozpuszczające taksoidy o działaniu przeciwnowotworowym (np. docetaksel i paklitaksel, patrz PCT WO 95/19994), bez podania szczegółów dotyczących poprawy rozpuszczalności, trwałości lub toksyczności. Takie środki zapewniały znaczący wzrost rozpuszczalności paklitakselu w wodzie. Jednakże w rozcieńczeniach stosowanych podczas iniekcji pozajelitowych (0,3 do 1,2 mg/ml) następowało wytrącanie się leku. W WO 96/14872 ujawniono kompleksy inkluzyjne paklitakselu lub docetakselu lub ekstraktu z Taxus brevifolia z pochodną cyklodekstryny i współrozpuszczalnikiem, sposób ich wytwarzania oraz środki farmaceutyczne zawierające takie kompleksy jako substancję czynną, o zwiększonej rozpuszczalności i trwałości.
Celem niniejszego wynalazku było osiągnięcie dalszej poprawy zarówno rozpuszczalności taksoidów w preparatach do iniekcji, jak i trwałości układów leków taksoidowych, do stosowania pozajelitowego, a także w miarę możliwości zmniejszenie toksyczności substancji pomocniczych, stosowanych przy wytwarzaniu tych preparatów.
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania stałych kompozycji farmaceutycznych, natychmiast rozpuszczalnych, do zastosowania farmaceutycznego oraz ich roztworów w wodnych rozpuszczalnikach, który to sposób charakteryzuje się tym, że
a) rozpuszcza się w etanolu taksoid, korzystnie paklitaksel lub docetaksel albo jego sól, hydrat lub solwat, a następnie prowadzi się dalsze etapy:
i) dodaje się silnie rozproszonej pochodnej cyklodekstryny o dużej powierzchni właściwej, w postaci acetylo-Y-cyklodekstryny lub hydroksypropylo-e-cyklodekstryny, rozpuszcza się mieszaninę w wodnym rozpuszczalniku i prowadzi się liofilizację, z wytworzeniem substancji stałej, albo ii) dodaje się silnie rozproszonej pochodnej cyklodekstryny o dużej powierzchni właściwej, w postaci acetylo-Y-cyklodekstryny lub hydroksypropylo-e-cyklodekstryny, odparowuje się rozpuszczalnik i prowadzi się suszenie, z wytworzeniem substancji stałej, zawierającej
A. taksoid jako substancję czynną i
B. pochodną cyklodekstryny przy czym stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:400; z tym, że gdy stosuje się hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę, to wówczas taksoid może stanowić tylko docetaksel, a stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:100; oraz ewentualnie
b) rozpuszcza się substancję stałą w wodnym rozpuszczalniku, z wytworzeniem roztworu do bezpośredniego zastosowania w leczeniu.
Korzystnie w etapie i) albo ii) dodaje się innych rozpuszczalnych substancji pomocniczych, zwykle stosowanych do wytwarzania środków farmaceutycznych do podawania pozajelitowego.
Korzystnie jako wodny rozpuszczalnik lub rozcieńczalnik stosuje się wodę do iniekcji lub wodny roztwór środka zapewniającego izotoniczność, takiego jak chlorek sodu, glukoza lub dekstroza, zawierający te składniki w ilości odpowiedniej do zapewnienia izotoniczności roztworu wodnego.
Korzystnie jako składnik cyklodekstrynowy stosuje się acetylo-Y-cyklodekstrynę o stopniu acetylowania około 2-12 grup acetylowych na pierścień cyklodekstryny lub acetylo-Y-cyklodekstrynę o stopniu acetylowania około 8 grup acetylowych na pierścień cyklodekstryny.
Korzystnie stosuje się paklitaksel w uwodnionej postaci polimorficznej lub w postaci solwatowanej, takiej jak solwat etanolowy.
Korzystnie jako składnik cyklodekstrynowy stosuje się hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę, korzystnie hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę o stopniu podstawienia około 2-10 grup hydroksypropylowych na pierścień cyklodekstryny lub hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę o stopniu podstawienia około 4-6 grup hydroksypropylowych na pierścień cyklodekstryny.
PL 199 652 B1
Korzystnie po etapie ii) dodatkowo prowadzi się etapy, w których
a) rozpuszcza się substancję stałą w wodnym rozpuszczalniku, z wytworzeniem wodnego roztworu oraz
b) zamraża się ten wodny roztwór i prowadzi się liofilizację, z wytworzeniem natychmiast rozpuszczalnego liofilizatu, zawierającego
A. taksoid jako substancję czynną i
B. pochodną cyklodekstryny przy czym stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:400; z tym, że gdy stosuje się hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę, to wówczas taksoid może stanowić tylko docetaksel, a stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:100.
Korzystnie po etapie b) dodatkowo prowadzi się etap ponownego rozpuszczania liofilizatu w wodnym rozpuszczalniku, z wytworzeniem wodnego roztworu zawierającego
A. taksoid jako substancję czynną i
B. pochodną cyklodekstryny przy czym stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:400; z tym, że gdy stosuje się hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę, to wówczas taksoid może stanowić tylko docetaksel, a stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:100.
W szczególności jako substancję czynną stosuje się paklitaksel wraz z acetylo-Y-cyklodekstryną w stosunku wagowym od 1:100 do 1:250.
Podstawą niniejszego wynalazku było ustalenie, że zarówno acetylowana γ-cyklodekstryna, jak i hydroksypropylo-e-cyklodekstryna, wywierają korzystne działanie na przedłużanie stanu przesycenia rozpuszczonego paklitakselu i docetakselu, co zapobiega przedwczesnemu wytrącaniu się tych związków, bez konieczności stosowania etanolu jako współrozpuszczalnika. Stwierdzenie tego faktu było nieoczekiwane, gdyż wiadomo, że γ-cyklodekstryna i jej hydroksypropylowane pochodne, które, jak wiadomo, mają największe wnęki wśród CD, zostały uprzednio ujawnione jako mniej odpowiednie do rozpuszczania i tworzenia kompleksów z paklitakselem (Int. J. Pharm. 133, 191-201, 1996). Zostało to potwierdzone w naszych badaniach, w których rejestrowano stan równowagi rozpuszczalności paklitakselu w zależności od stężenia wodnych roztworów zmodyfikowanych chemicznie γ-cyklodekstryn i nie stwierdzono użytecznego z praktycznego punktu widzenia działania rozpuszczającego, mimo stosowania cyklodekstryn w wysokim stężeniu (patrz tabela 1).
T a b e l a 1
Rozpuszczalność paklitakselu w zależności od stężenia acetylo-y-cyklodekstryny
Acetylo y-cyklodekstryna (% wag./obj.) Rozpuszczony paklitaksel ^g/ml)
2 4,0
5 8,8
10 25,0
20 48,0
40 170,0
Rozpuszczalność paklitakselu w wodzie w temperaturze pokojowej wynosi około 0,5 μg/ml, a zatem wartość 170 μg/ml rozpuszczonego paklitakselu uzyskana w roztworze 40% acetylo-y-cyklodekstryny oznacza już około 340-krotny wzrost rozpuszczalności. Powyższe dane wskazują jednakże na stosunkowo słaby wynik, w porównaniu z wynikami rozpuszczalności paklitakselu w 40% (wag./obj.) wodnym roztworze DIMEe, w którym rozpuszczono około 800-1000 μg/ml paklitakselu. Podobnie słabe wyniki otrzymano przy użyciu HPeCD jako solubilizatora. Osiągnięta wartość odbiega znacznie od wartości pożądanej, odpowiadającej terapeutycznej dawce paklitakselu, a zastosowanie takiej postaci dawkowanej wymagało by podania pacjentowi ponad 70 gramów cyklodekstryny, przy dawce paklitakselu wynoszącej 30 mg.
W sposobie według wynalazku jako wodny rozpuszczalnik lub rozcieńczalnik można stosować wodę do iniekcji lub wodne roztwory substancji zapewniającej izotoniczność, np. chlorku sodu, glukozy, mannitolu, dekstrozy. Te ostatnie roztwory muszą zawierać te składniki w ilości odpowiedniej do zapewnienia izotoniczności roztworu wodnego w opisanych poniżej warunkach. W związku z tym moPL 199 652 B1 gą wymagać pewnych zmian stężenia, o których wiadomo, że są odpowiednie do zapewnienia izotoniczności roztworów farmaceutycznych, ze względu na obecność zastosowanej cyklodekstryny i taksoidu. Należy zatem zoptymalizować stężenia chlorku sodu do wartości około 0,9% (wag./obj.) lub około 5% (wag./obj.) w przypadku glukozy dla konkretnego środka, w zależności od zastosowanego taksoidu oraz ilości i jakości CD. Roztwory te wytwarza się bez dodatku szkodliwych rozpuszczalników i/lub detergentów.
Dzięki sposobowi według wynalazku możliwe jest zapobieganie samoagregacji oraz przedwczesnemu wytrącaniu się taksoidu, np. paklitakselu lub docetakselu i ich soli, solwatów lub hydratów, z roztworów wodnych oraz przedłużanie stanu przesyconego roztworu leków.
Kompozycje farmaceutyczne wytwarzane sposobem według wynalazku można stosować w leczeniu niepożądanej proliferacji komórek przez ich podawanie tych kompozycji w skutecznej ilości. Gotowe do użycia roztwory paklitakselu zachowują trwałość fizyczną przez odpowiedni okres czasu. Podawanie drogą dożylną wymaga zazwyczaj, aby stosowane były roztwory, które zachowują trwałość fizyczną przez co najmniej 6 godzin. W przypadku rozpuszczania stałej kompozycji w roztworach wodnych, tak otrzymane roztwory zachowują trwałość przez co najmniej 6 do 8 godzin. W przypadku roztworów zawierających połączenia paklitaksel/AcY CD, jak również docetaksel/AcY CD lub HPeCD, osiągnięto trwałość fizyczną ponad 24 godziny.
W trakcie leczenia pacjentowi podaje się pozajelitową postać dawkowaną zawierającą kompozycję farmaceutyczną. Jednostki dawkowane 100 mg taksoidu można wytworzyć w postaci liofilizowanej. Rozcieńcza się je tak, aby otrzymać gotowe do stosowania roztwory dawkowane, np. do podawania drogą dożylną. W zależności od wymaganego sposobu leczenia, mającego zastosowanie zgodnie z konkretnymi potrzebami danego pacjenta, można podawać kilka jednostek po 100 mg, aby osiągnąć skuteczną dawkę odpowiadającą pożądanej ilości leku, wyrażanej zazwyczaj w mg/m2 powierzchni ciała. Można w ten sposób osiągnąć np. zalecaną dawkę paklitakselu 135-250 mg/m2 powierzchni ciała. Lek można stosować skutecznie np. drogą dożylną, dootrzewnową, domięśniową, w zależności od rodzaju leczonego nowotworu oraz wybranego taksoidu i cyklodekstryny. W ten sposób można osiągnąć lepsze wyniki niż po zastosowaniu znanych form terapii, ze względu na znacznie zmniejszoną toksyczność postaci dawkowanej w porównaniu z toksycznością nośników zawartych w znanych, stosowanych do tej pory środkach. Wyeliminowana zostaje również konieczność poddania pacjenta premedykacji, mającej na celu zapobieżenie reakcjom nadwrażliwości lub wystąpieniu innych niepożądanych działań ubocznych, w której stosuje się steroidy, leki przeciwhistaminowe oraz antagonistów receptorów H2 przed podaniem pacjentowi paklitakselu lub docetakselu, zapobiegając wystąpieniu poważnych reakcji nadwrażliwości.
W niniejszym opisie stosowane są następujące określenia: paklitaksel = taksol A;
docetaksel = (N-debenzoilo-N-tert-butoksykarbonylo)-10-deacetylopaklitaksel;
„wodne rozpuszczalniki” = woda o jakości odpowiedniej do iniekcji lub roztwór wodny zawierający rozpuszczoną substancję zapewniającą izotoniczność roztworu, w ilości i stężeniu odpowiednich do nadania izotoniczności temu roztworowi wodnemu; np. chlorek sodu, glukozę;
„amorficzny” = wykazujący w badaniu rentgenowskim strukturę amorficzną;
CD = cyklodekstryna
Y-cyklodekstryna = cyklomaltooktaoza β-cyklodekstryna = cyklomaltoheptaoza AcYCD = acetylo-Y-cyklodekstryna
HPeCD = hydroksypropylo-e-cyklodekstryna (około 2-8 grup hydroksypropylowych na jednostkę CD)
DIMEe = heptakis-2,6-di-O-metylo-e-cyklodekstryna
Wynalazek ilustrują poniższe przykłady.
I. Wytwarzanie preparatów
P r z y k ł a d I.1. Wytwarzanie roztwarzalnych, stałych kompozycji paklitaksel/acetylo-Y-cyklodekstryna przez suszenie
Do 500 mg acetylo-Y-cyklodekstryny w postaci proszku (otrzymanego przez liofilizację roztworu wodnego) dodano 3 mg paklitakselu (rozpuszczonego w 0,3 ml etanolu). Otrzymaną mieszaninę utrzymywano pod próżnią przez 18 godzin nad penta-tlenkiem fosforu w celu usunięcia etanolu. Porcje tak otrzymanego proszku wolnego od etanolu rozpuszczono odpowiednio w 5, 4, 3 i 2 ml 5% wodnego roztworu glukozy. Trwałość fizyczną tych odtworzonych roztworów przedstawiono w tabeli 2.
PL 199 652 B1
T a b e l a 2
Dodany roztwór 5% glukozy (ml)
5 ml 4 ml 3 ml 2 ml
Końcowe stężenie paklitakselu (mg/ml) 0,6 0,75 1,0 1,5
Końcowe stężenie Ac yCD (mg/ml) 100 125 167 250
Trwałość oceniana wizualnie (godziny) > 120 > 48 > 48 > 48
po 72 godzinach nastąpiło wytrącanie
Rozpuszczony paklitaksel, mg/ml (HPLC) 0,576
Eksperyment ten powtórzono z użyciem mniejszych ilości acetylo-Y-cyklodekstryny. Do 450, 400 lub 350 mg próbek liofilizowanej acetylo-Y-cyklodekstryny dodano 3 mg paklitakselu (rozpuszczonego w 0,3 ml etanolu), po czym utrzymywano pod próżnią przez 18 godzin nad pentatlenkiem fosforu w celu usunięcia etanolu.
Kompozycje te rozpuszczono w 5, 4, 3 i 2 ml 5% roztworu glukozy. W tabelach 3, 4, 5 podano skład, a także trwałość fizyczną tych odtworzonych roztworów paklitakselu, wytworzonych według przykładu I.1, z użyciem różnych ilości acetylo-Y-cyklodekstryny.
T a b e l a 3
Dodany roztwór 5% glukozy (ml)
5 ml 4 ml 3 ml 2 ml
Końcowe stężenie paklitakselu (mg/ml) 0,6 0,75 1,0 1,5
Końcowe stężenie acetylo-Y-cyklodekstryny 90 112,5 150 225
Trwałość oceniana wizualnie (godziny) Roztwór opalizujący > 48 > 48 > 48
T a b e l a 4
Dodany roztwór 5% glukozy (ml)
5 ml 4 ml 3 ml 2 ml
Końcowe stężenie paklitakselu (mg/ml) 0,6 0,75 1,0 1,5
Końcowe stężenie Ac γ-CD (mg/ml) 80 100 133 200
Trwałość oceniana wizualnie (godziny) < 4 roztwór lekko opalizujący > 24 roztwór klarowny
Rozpuszczony paklitaksel (mg/ml) Po wytworzeniu Po 22 godzinach 0,41 0,42 1,26 1,25
T a b e l a 5
Dodany roztwór 5% glukozy (ml)
5 ml 4 ml 3 ml 2 ml
Końcowe stężenie paklitakselu (mg/ml) 0,6 0,75 1,0 1,5
Końcowe stężenie Ac γ-CD 70 86 117 175
Trwałość oceniana wizualnie, w godzinach wzrastająca opalescencja wzrastająca opalescencja > 24 roztwór prawie klarowny
Rozpuszczony paklitaksel, mg/ml (HPLC) Po wytworzeniu Po 22 godzinach 1,16 1,17
PL 199 652 B1
Zależność stężenia paklitakselu od stężenia acetylo-Y-cyklodekstryny (Ac Y-CD) przedstawia wykres na fig. 7.
P r z y k ł a d I.2. Wytwarzanie preparatu zawierającego paklitaksel w nominalnym stężeniu 0,6 mg/ml
6,5 g amorficznej acetylo-Y-cyklodekstryny zwilżono 3 ml roztworu paklitakselu, o stężeniu paklitakselu wynoszącym 10 mg/ml (co odpowiada 30 mg paklitakselu). Do zwilżonej mieszaniny dodano natychmiast 50 ml 5% roztworu dekstrozy, a otrzymaną kompozycję wstrząsano aż do otrzymania klarownego roztworu. Stężenie rozpuszczonego paklitakselu w otrzymanym roztworze wynosiło 0,55 ± 0,05 mg/ml, co oznaczono metodą HPLC po przesączeniu roztworu przez filtr membranowy o średnicy porów 0,2 μm. Roztwór można przechowywać w temperaturze pokojowej przy normalnym oświetleniu w pojemnikach szklanych przez co najmniej 6 godzin bez zauważalnej opalescencji i/lub tworzenia się cząstek. Ponowna analiza rozpuszczonego paklitakselu wykonana metodą HPLC po 6 godzinach przechowywania wykazała, że nie wystąpił spadek stężenia rozpuszczonego paklitakselu.
P r z y k ł a d I.3. Wytwarzanie preparatu zawierającego paklitaksel w nominalnym stężeniu około 0,3 mg/ml
6,5 g amorficznej acetylo-Y-cyklodekstryny zwilżono 3 ml roztworu paklitakselu, o stężeniu paklitakselu wynoszącym 10 mg/ml (co odpowiada 30 mg paklitakselu). Do zwilżonej mieszaniny dodano natychmiast 100 ml 5% roztworu dekstrozy i mieszaninę wstrząsano aż do otrzymania klarownego roztworu. Stężenie rozpuszczonego paklitakselu w otrzymanym roztworze wynosiło 0,27 ± 0,03 mg/ml, co oznaczono metodą HPLC po przesączeniu roztworu przez filtr membranowy o średnicy porów 0,2 μm. Roztwór można przechowywać w temperaturze pokojowej przy normalnym oświetleniu w pojemnikach szklanych przez co najmniej 12 godzin bez zauważalnej opalescencji i/lub tworzenia się cząstek. Ponowna analiza rozpuszczonego paklitakselu wykonana metodą HPLC po 12 godzinach przechowywania wykazała, że w tym czasie nie wystąpił spadek stężenia rozpuszczonego paklitakselu.
P r z y k ł a d I.4. Wytwarzanie preparatu zawierającego docetaksel w nominalnym stężeniu 0,5 i 1 mg/ml
100 mg amorficznej acetylo-Y-cyklodekstryny zwilżono 0,1 ml roztworu docetakselu o stężeniu docetakselu wynoszącym 20 mg/ml (co odpowiada 2 mg docetakselu). Do próbek zwilżonej mieszaniny dodano natychmiast 1 lub 2 ml 5% (wag./obj.) wodnego roztworu dekstrozy i mieszaninę wstrząsano aż do otrzymania klarownego roztworu. Stężenie rozpuszczonego docetakselu w roztworze według przykładu 1.4. wynosiło odpowiednio 1 i 0,5 mg/ml. Roztwory można przechowywać w temperaturze pokojowej przy normalnym oświetleniu w pojemnikach szklanych przez co najmniej 24 godziny bez zauważalnej opalescencji i/lub tworzenia się cząstek. Skład obu roztworów, odpowiadający 20 mg docetakselu w jednostkowej postaci dawkowanej, jest następujący:
- 1000 mg AcY CD
- 20 mg docetakselu
- 1 ml etanolu
- 20 lub 40 ml 5% dekstrozy
P r z y k ł a d I.5. Wytwarzanie preparatu zawierającego docetaksel w nominalnym stężeniu 0,75 mg/ml, z użyciem hydroksypropylo-e-cyklodekstryny (HPeCD)
200 mg HPeCD zwilżono 0,15 ml roztworu docetakselu o stężeniu docetakselu wynoszącym 10 mg/ml (co odpowiada 1,5 mg docetakselu). Do tej zwilżonej mieszaniny dodano natychmiast 2 ml 5% wodnego roztworu dekstrozy i mieszaninę wstrząsano aż do otrzymania klarownego roztworu. Stężenie rozpuszczonego docetakselu w roztworze według przykładu I.5. wynosiło 0,75 mg/ml. Roztwory można przechowywać w temperaturze pokojowej przy normalnym oświetleniu w pojemnikach szklanych przez co najmniej 24 godziny bez zauważalnej opalescencji i/lub tworzenia się cząstek. Skład roztworów, odpowiadający 20 mg docetakselu w jednostkowej postaci dawkowanej jest następujący:
- 2670 mg HPeCD
- 20 mg docetakselu
- 2 ml etanolu
- 27 ml 5% dekstrozy
P r z y k ł a d I.6. Wytwarzanie dwuskładnikowego liofilizatu paklitaksel/acetylo-Y-cyklodekstryna
Do 5,0 g amorficznej acetylo-Y-cyklodekstryny dodano 30 mg paklitakselu rozpuszczonego w 3 ml etanolu. Do wilgotnego proszku dodano 2 ml etanolu i proszek rozpuszczono w 50 ml wody destylowanej, co doprowadziło do otrzymania klarownego roztworu o nominalnym stężeniu paklitakselu
PL 199 652 B1
0,6 mg/ml. Otrzymany roztwór szybko zamrożono w suchym lodzie i zliofilizowano z wytworzeniem białego liofilizatu o zawartości paklitakselu 0,6 ± 0,05% wagowych. Otrzymany w ten sposób liofilizat można łatwo przywrócić do postaci roztworu o wyjściowej objętości przez dodanie 50 ml 5% wodnego roztworu glukozy. Otrzymuje się w ten sposób klarowny roztwór o stężeniu paklitakselu 0,6 mg/ml.
Odtworzony roztwór przechowywano w temperaturze pokojowej w zwykłych warunkach w szklanych pojemnikach. Stężenie paklitakselu oceniono metodą HPLC po uprzednim przesączeniu badanych roztworów przez filtr membranowy o średnicy porów 0,2 μm. Zawartość paklitakselu wynosiła:
- po wytworzeniu: 0,513 ± 0,07 mg/ml*
- po 25 godzinach przechowywania: 0,556 ± 0,01 mg/ml (* Różnica pomiędzy nominalnym a zmierzonym stężeniem paklitakselu wynika z rozszerzalności objętościowej liofilizatu)
P r z y k ł a d I.7. Wytwarzanie dwuskładnikowego liofilizatu docetaksel/acetylo-Y-cyklodekstryna
Do 400 mg amorficznej acetylo-Y-cyklodekstryny dodano 10 mg docetakselu rozpuszczonego w 0,5 ml etanolu. Zwilżony proszek rozpuszczono w 8 ml wody destylowanej i otrzymano klarowny roztwór o nominalnym stężeniu docetakselu 1,25 mg/ml. Roztwór ten szybko zamrożono w suchym lodzie i zliofilizowano z wytworzeniem białego liofilizatu o zawartości docetakselu 2,25 ± 0,1%. 50 mg tego stałego liofilizatu można łatwo rozpuścić w 1 ml 5% wodnego roztworu glukozy i otrzymać klarowny roztwór zawierający 1,13 mg/ml docetakselu (zawartość ustalona metodą HPLC). Odtworzony roztwór można przechowywać w temperaturze pokojowej w zwykłych warunkach w szklanym pojemniku. Po 21 godzinach przechowywania stwierdzono metodą HPLC, że stężenie docetakselu wynosiło 1,15 ± 0,02 mg/ml. Nawet po 72 godzinach przechowywania nie obserwowano widocznej opalescencji lub obecności stałych cząstek w roztworze.
P r z y k ł a d I.8. Wytwarzanie liofilizatu paklitaksel/acetylo-Y-cyklodekstryna/glukoza
Do 5,0 g amorficznej acetylo-Y-cyklodekstryny dodano 30 mg paklitakselu rozpuszczonego w 3 ml etanolu. Do wilgotnego proszku dodano 2 ml etanolu i proszek rozpuszczono w 50 ml wodnego roztworu 5% glukozy. Otrzymany roztwór zamrożono w suchym lodzie i zliofilizowano z wytworzeniem białego liofilizatu o zawartości paklitakselu 0,42 ± 0,01%. Otrzymany w ten sposób liofilizat można łatwo przywrócić do postaci roztworu o wyjściowej objętości przez dodanie 50 ml wody destylowanej. Otrzymuje się w ten sposób klarowny roztwór o nominalnym stężeniu paklitakselu 0,6 mg/ml.
Odtworzone roztwory przechowywano w temperaturze pokojowej w zwykłych warunkach w zamkniętych szklanych pojemnikach. Stężenie paklitakselu podczas przechowywania oceniono metodą HPLC po przesączeniu badanych roztworów. Zawartość paklitakselu wynosiła:
- bezpośrednio po wytworzeniu: 0,530 ± 0,08 mg/ml*
- po 25 godzinach przechowywania: 0,541 ± 0,05 mg/ml (* Różnica pomiędzy nominalnym a zmierzonym stężeniem paklitakselu wynika z rozszerzalności objętościowej liofilizatu)
P r z y k ł a d I.9. Wytwarzanie liofilizatu docetaksel/acetylo-Y-cyklodekstryna/glukoza
Do 400 mg amorficznej acetylo-Y-cyklodekstryny dodano 8 mg docetakselu rozpuszczonego w 0,4 ml etanolu. Wilgotny proszek rozpuszczono następnie w 8 ml 5% (wag./obj.) roztworu glukozy. Otrzymano w ten sposób klarowny roztwór o nominalnym stężeniu docetakselu wynoszącym 1 mg/ml, który zamrożono w suchym lodzie i zliofilizowano z wytworzeniem białego liofilizatu o zawartości docetakselu wynoszącej 1%.
100 mg stałego, wolnego od etanolu liofilizatu można w łatwy sposób przywrócić do postaci roztworu przez dodanie 1, 2 lub 4 ml wody destylowanej i otrzymać klarowne roztwory o nominalnym stężeniu docetakselu wynoszącym odpowiednio 1, 0,5 lub 0,25 mg/ml. W tabeli 6 podano trwałość fizyczną roztworów docetakselu w okresie 21 godzin przechowywania w temperaturze pokojowej w zamkniętych szklanych pojemnikach; stężenie rozpuszczonego docetakselu w różnych nominalnych stężeniach oznaczono metodą HPLC.
T a b e l a 6
Stężenie rozpuszczonego docetakselu, HPLC, (mg/ml) Nominalne stężenie rozpuszczonego docetakselu
1 mg/ml 0,5 mg/ml 0,25 mg/ml
Po wytworzeniu 0,93 0,49 0,24
Po 21 godzinach 0,89 0,48 0,24
PL 199 652 B1
P r z y k ł a d I.10. Wytwarzanie dwuskładnikowego liofilizatu docetaksel/hydroksypropylo-β-cyklodekstryna (HPeCD)
Do 300 mg HPeCD dodano 6 mg docetakselu rozpuszczonego w 0,3 ml etanolu. Zwilżony proszek rozpuszczono w 6 ml wody destylowanej i otrzymano klarowny roztwór o nominalnym stężeniu docetakselu wynoszącym 1 mg/ml.
Roztwór ten szybko zamrożono w suchym lodzie i zliofilizowano z wytworzeniem białego liofilizatu o zawartości docetakselu 2% (wag./wag.). 50 mg tego stałego liofilizatu można łatwo rozpuścić w 1 lub 2 ml 5% (wag./obj.) wodnego roztworu glukozy i otrzymać klarowny roztwór zawierający odpowiednio 0,97 i 0,59 mg/ml docetakselu (zawartość oznaczona metodą HPLC).
Odtworzone roztwory przechowywano w temperaturze pokojowej w zwykłych warunkach w szklanych pojemnikach.
Po 21 godzinach przechowywania stwierdzono metodą HPLC, że stężenie docetakselu wynosiło 0,95 ± 0,05 i 0,49 ± 0,005 mg/ml.
P r z y k ł a d I.11. Przedłużanie stanu przesyconego roztworu paklitakselu przez odparowywanie
W 6 ml etanolu rozpuszczono 30 mg paklitakselu i roztwór dokładnie zmieszano z 5 g acetylo-γ-cyklodekstryny.
Dodano jeszcze 3 ml etanolu i mieszaninę mieszano przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
Następnie usunięto etanol z mieszaniny w strumieniu azotu z użyciem próżniowej wyparki obrotowej. Otrzymaną białą substancję stałą rozpuszczono następnie w 5 ml dejonizowanej wody, a otrzymany lekko opalizujący roztwór natychmiast zamrożono w suchym lodzie i zliofilizowano.
Otrzymano liofilizat, który jest łatwo rozpuszczalnym amorficznym proszkiem. Proszek ten został dogodnie przywrócony do postaci klarownego roztworu przez dodanie wody do iniekcji lub 5% wodnego roztworu glukozy.
Odtworzony roztwór o stężeniu paklitakselu 0,3-0,6 mg/ml pozostawał trwały przez co najmniej 24 godziny w temperaturze pokojowej.
P r z y k ł a d I.12. Preparat do podawania dożylnego
W 10 ml etanolu rozpuszczono 100 mg paklitakselu i roztwór dodano do 15,0 g amorficznej acetylo-Y-cyklodekstryny o dużej powierzchni właściwej.
Do wilgotnego proszku dodano następnie 10 ml etanolu, proszek rozpuszczono w 80 ml wody destylowanej i otrzymano klarowny roztwór o nominalnym stężeniu paklitakselu wynoszącym 1,25 mg/ml.
Roztwór ten szybko zamrożono w suchym lodzie i zliofilizowano z wytworzeniem białego liofilizatu o zawartości paklitakselu 0,7 ± 0,05% wagowych.
Liofilizat ten można łatwo przywrócić do postaci roztworu o objętości 100 ml z użyciem 5% (wag./obj.) wodnego roztworu dekstrozy.
Otrzymuje się w ten sposób gotowy do stosowania dożylnego klarowny roztwór o stężeniu paklitakselu 1,0 mg/ml.
II. Badania biologiczne
Celem tych badań była ocena określonych działań ubocznych, związanych z dożylnym stosowaniem paklitakselu.
Badano wpływ stosowanego dożylnie paklitakselu na układ krążenia i układ oddechowy łącznie 7 psów gończych, znieczulonych za pomocą α-chloralozy/pentobarbitalu sodowego.
11.1. Badane substancje
A. Paklitaksel w postaci ciekłej, 1 ml (30 mg/ml, w etanolu), dostarczany w fiolkach.
Rozpuszczony w nośniku Cremophor ELP:etanol 1:1 podczas przeprowadzania badania.
B. Paklitaksel/AcYCD w postaci białego, krystalicznego proszku; otrzymany według powyższego przykładu I.I.6.
Rozpuszczony w nośniku - 2,5% (wag./obj.) dekstrozie podczas przeprowadzania badania.
11.2. Metody
Dla oceny stanu funkcjonalnego poszczególnych elementów układu krążenia i układu oddechowego rejestrowano lub obliczano podane poniżej parametry.
Jednostki tych parametrów podano w nawiasach.
PL 199 652 B1
Ciśnienie krwi - skurczowe, rozkurczowe, średnie (mm Hg) Częstość akcji serca (uderzenia/min) Ogólny stan hemodynamiczny
Ciśnienie skurczowe lewej komory (mm Hg) dp/dt max. lewej komory (mm Hg.sec'1) Kurczliwość mięśnia serca
Elektrokardiogram (odprowadzenie H) Elektryczny stan mięśnia sercowego
Przepływ przez tętnicę udową (ml/min) Opór w tętnicy udowej (mm Hg/ml/min) Stan i oporność naczyń obwodowych
Częstość oddechów (oddechy/min) Pojemność minutowa (ml) Objętość oddechowa (ml) Ogólny stan układu oddechowego
Znieczulenie wywołano dożylnym podaniem tiopentalu sodowego i utrzymywano przez dożylny wlew mieszaniny α-chloralozy/pentobarbitalu sodowego, dawkowany zależnie od potrzeb. Utrzymywano stałą temperaturę ciała zwierząt.
Do tchawicy zwierząt wprowadzono kaniulę, podłączoną do aparatu umożliwiającego pomiar objętości oddechowej (ml) oraz parametrów pochodnych, jak częstość oddechów (odd/min) oraz objętości minutowej (ml).
Do prawej tętnicy udowej i żyły odpromieniowej wprowadzono cewniki, służące odpowiednio do pomiaru ciśnienia krwi oraz podawania nośnika, badanej substancji i środka znieczulającego.
Cewnik w tętnicy udowej był podłączony z wypełnionym heparyną/roztworem soli przetwornikiem ciśnienia sprzężonym z poligrafem Grass 7E.
Częstość akcji serca obliczano elektronicznie z wykorzystaniem sygnału ciśnienia krwi.
Wokół lewej tętnicy udowej umieszczono ultradźwiękowy miernik przepływu i połączono go z przepływomierzem krwi, sprzężonym z poligrafem Grass do rejestracji przepływu krwi przez tętnicę udową (ml/ml).
Do lewej tętnicy szyjnej wprowadzono cewnik, który następnie doprowadzono do lewej komory serca. Umożliwiało to pomiar ciśnienia skurczowego lewej komory (LVSP).
Cewnik był połączony z wypełnionym heparyną/roztworem soli przetwornikiem ciśnienia, a sygnał LVSP wyświetlano na poligrafie Grass.
Na odpowiednich kończynach umieszczano podskórne igły w celu monitorowania zapisu elektrokardiograficznego, wyświetlanego na poligrafie Grass.
Rozmaite sygnały przenoszono z poligrafu Grass na komputer, a zebrane w ten sposób dane poddawano analizie i wyświetlano.
Po 30 minutowym okresie stabilizacji podano dożylnie nośnik w dawce 7,0 ml/kg przez okres 15 minut. W 45 minut później, w odstępach co najmniej 45 minut, podawano dożylnie leki w dawce 7,0 ml/kg przez 15 minut każdy.
Omawiane wyżej parametry monitorowano co najmniej przez 45 minut od rozpoczęcia infuzji. Wszystkie dawki podawano za pomocą pompy infuzyjnej model KdS 200.
Badano następujące próbki:
Nr Zwierzę Nośnik, i.v. Lek Dawka leku
7 ml/kg, 1 5 min mg/m2
1. Cremophor ELP: etanol Paklitaksel 6; 60
2. Cremophor ELP: etanol Paklitaksel 6; 60
3. 2901AK Cremophor ELP:etanol Bez leku -
4. 2841AK Cremophor ELP:etanol Bez leku -
5. D2515 2,5% dekstroza w wodzie Paklitaksel/AcYCD* 10; 20; 40; 60
6. D2937 2,5% dekstroza w wodzie Paklitaksel/AcYCD* 40; 10; 60; 90
7. D5 2,5% dekstroza w wodzie Paklitaksel/AcYCD* 90; 120; 240
* = otrzymany według przykładu I.6
PL 199 652 B1
Wszystkie parametry, w tym zapis elektrokardiograficzny o dużej rozdzielczości (50 mm/s), mierzono w odstępach pięciominutowych w okresie stabilizacji oraz w odstępach co 0,5, 1, 2 i 5 minut po podaniu dawki nośnika i leku. Pod koniec okresu obserwacji zwierzęta uśmiercono przez przedawkowanie pentobarbitalu sodowego, stosowanego dożylnie.
II. 3. Wyniki
Zwierzęta 1 i 2. Wyniki
Podawanie paklitakselu w dawce 6 i 60 mg/m2 w nośniku Cremophor ELP:etanol 1:1 zostało przerwane z powodu śmierci zwierząt.
Zwierzęta 3 i 4. Wyniki
Podawanie dożylne mieszaniny Cremophor ELP:etanol w obu poziomach dawek (odpowiadających dawkom stosowanym odpowiednio przy podawaniu paklitakselu w dawkach 6 i 60 mg/m2) wywołało reakcję typu anafilaktycznego: natychmiastowy spadek ciśnienia tętniczego krwi, częstości akcji serca, ciśnienia skurczowego lewej komory i maksimum dp/dt lewej komory o podobnym nasileniu u obu zwierząt. Po zakończeniu podawania dawki obserwowano jedynie niewielki powrót parametrów układu krążenia lub całkowity brak powrotu. Oba poziomy dawki indukowały występowanie ektopowych skurczów komorowych, zmniejszały całkowitą amplitudę załamków EKG, powodowały zazębienia załamków T oraz zmniejszenie amplitudy załamka T. U zwierzęcia 2841AK nośnik wywołał również uniesienie odcinka ST. W oparciu o otrzymane wyniki można wnioskować, że mieszanina rozpuszczająca jest toksyczna per se oraz że należy jej unikać podczas infuzji dożylnych.
Zwierzęta 5, 6 i 7. Wyniki
Podawanie 2,5% (wag./obj.) dekstrozy w dawce 7 ml/kg pozostało bez widocznego wpływu na którykolwiek z mierzonych parametrów układu krążenia i układu oddechowego u trzech badanych zwierząt. Dodanie paklitakselu/AcYCD w dawkach do 240 mg/m2 ogólnie spowodowało jedynie niewielkie zmiany w mierzonych parametrach układu krążenia i układu oddechowego. Do tych nieznacznych działań należały niewielki wzrost ciśnienia tętniczego krwi oraz ciśnienia skurczowego lewej komory, którym towarzyszyło zmniejszenie częstości akcji serca oraz maksimum dp/dt lewej komory. Do innych, nie występujących stale zmian należały wzrost przepływu w tętnicy udowej, objętości oddechowej i częstości oddechów. Zmiany te były odwracalne.
II.4. Figury
Dla zilustrowania ważnego parametru, jakim jest zachowanie się ciśnienia tętniczego krwi po dożylnym podaniu omawianych substancji znieczulonym psom gończym, na figurach 1-6 przedstawiono następujące dane:
Ciśnienie tętnicze krwi (mm Hg) w czasie (minuty):
•-•-•- skurczowe ▲-▲-▲- rozkurczowe
Wykres Zwierzę Nośnik Lek (mg/m2)
Fig. 1 2901 AK Cremophor:etanol Bez leku
Fig. 2 2841 AK Cremophor:etanol Bez leku
Fig. 3 D2515 2,5% dekstroza w wodzie Paklitaksel/AcYCD, Przykł. 1.6. 10, 20, 40, 60
Fig. 4 D5 2,5% dekstroza w wodzie Paklitaksel/AcYCD, Przykł. 1.6. 120, 90, 240
Fig. 5 D2937 2,5% dekstroza w wodzie Paklitaksel/AcYCD, Przykł. 1.6. 10, 90, 40, 60
Fig. 6; śr. ciśnienie D5 2,5% dekstroza w wodzie Paklitaksel/AcYCD, Przykł. 1.6. 120, 90, 240
II. 5. Wnioski
Dożylne podawanie nośnika Cremophor ELP:etanol 1:1, jak również paklitakselu wraz z tym nośnikiem wywoływało wystąpienie reakcji typu anafilaktycznego, a więc te związki nie nadają się do stosowania terapeutycznego. Podawanie paklitakselu/acetylo-Y-CD (od 20 aż do 240 mg/m2) w wodnym roztworze dekstrozy jako nośniku nie wywołało istotnego i trwałego widocznego wpływu na układ krążenia, jak wywnioskowano na podstawie braku wpływu na którykolwiek z mierzonych parametrów u każdego z badanych zwierząt.

Claims (8)

1. Sposób wytwarzania stałych kompozycji farmaceutycznych, natychmiast rozpuszczalnych, do zastosowania farmaceutycznego oraz ich roztworów w wodnych rozpuszczalnikach, znamienny tym, że
a) rozpuszcza się w etanolu taksoid, korzystnie paklitaksel lub docetaksel albo jego sól, hydrat lub solwat, a następnie prowadzi się dalsze etapy:
i) dodaje się silnie rozproszonej pochodnej cyklodekstryny o dużej powierzchni właściwej, w postaci acetylo-y-cyklodekstryny lub hydroksypropylo-e-cyklodekstryny, rozpuszcza się mieszaninę w wodnym rozpuszczalniku i prowadzi się liofilizację, z wytworzeniem substancji stałej albo ii) dodaje się silnie rozproszonej pochodnej cyklodekstryny o dużej powierzchni właściwej, w postaci acetylo-y-cyklodekstryny lub hydroksypropylo-e-cyklodekstryny, odparowuje się rozpuszczalnik i prowadzi się suszenie, z wytworzeniem substancji stałej, zawierającej
A. taksoid jako substancję czynną i
B. pochodną cyklodekstryny przy czym stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:400; z tym, że gdy stosuje się hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę, to wówczas taksoid może stanowić tylko docetaksel, a stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:100; oraz ewentualnie
b) rozpuszcza się substancję stałą w wodnym rozpuszczalniku, z wytworzeniem roztworu do bezpośredniego zastosowania w leczeniu.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w etapie i) albo ii) dodaje się innych rozpuszczalnych substancji pomocniczych, zwykle stosowanych do wytwarzania środków farmaceutycznych do podawania pozajelitowego.
3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że jako wodny rozpuszczalnik lub rozcieńczalnik stosuje się wodę do iniekcji lub wodny roztwór środka zapewniającego izotoniczność, takiego jak chlorek sodu, glukoza lub dekstroza, zawierający te składniki w ilości odpowiedniej do zapewnienia izotoniczności roztworu wodnego.
4. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienny tym, że jako składnik cyklodekstrynowy stosuje się acetylo-y-cyklodekstrynę o stopniu acetylowania około 2-12 grup acetylowych na pierścień cyklodekstryny lub acetylo-y-cyklodekstrynę o stopniu acetylowania około 8 grup acetylowych na pierścień cyklodekstryny.
5. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, znamienny tym, że stosuje się paklitaksel w uwodnionej postaci polimorficznej lub w postaci solwatowanej, takiej jak solwat etanolowy.
6. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 5, znamienny tym, że jako składnik cyklodekstrynowy stosuje się hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę, korzystnie hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę o stopniu podstawienia około 2-10 grup hydroksypropylowych na pierścień cyklodekstryny lub hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę o stopniu podstawienia około 4-6 grup hydroksypropylowych na pierścień cyklodekstryny.
7. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, albo 5, albo 6, znamienny tym, że po etapie ii) dodatkowo prowadzi się etapy, w których
a) rozpuszcza się substancję stałą w wodnym rozpuszczalniku, z wytworzeniem wodnego roztworu oraz
b) zamraża się ten wodny roztwór i prowadzi się liofilizację, z wytworzeniem natychmiast rozpuszczalnego liofilizatu, zawierającego
A. taksoid jako substancję czynną i
B. pochodną cyklodekstryny przy czym stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:400; z tym, że gdy stosuje się hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę, to wówczas taksoid może stanowić tylko docetaksel, a stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:100.
8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że po etapie b) dodatkowo prowadzi się etap ponownego rozpuszczania liofilizatu w wodnym rozpuszczalniku, z wytworzeniem wodnego roztworu zawierającego
A. taksoid jako substancję czynną i
B. pochodną cyklodekstryny przy czym stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:400; z tym, że gdy stosuje się hydroksypropylo-e-cyklodekstrynę, to wówczas taksoid może stanowić tylko docetaksel, a stosunek wagowy taksoidu do cyklodekstryny wynosi od 1:25 do 1:100.
PL340505A 1997-11-10 1998-11-09 Sposób wytwarzania stałych kompozycji farmaceutycznych PL199652B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU9701945A HUP9701945A3 (en) 1997-11-10 1997-11-10 Pharmaceutical composition for injection containing cyclodextrin and taxoids

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL340505A1 PL340505A1 (en) 2001-02-12
PL199652B1 true PL199652B1 (pl) 2008-10-31

Family

ID=89995733

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL340505A PL199652B1 (pl) 1997-11-10 1998-11-09 Sposób wytwarzania stałych kompozycji farmaceutycznych

Country Status (19)

Country Link
US (1) US7671042B2 (pl)
EP (1) EP1059942B1 (pl)
JP (1) JP3656550B2 (pl)
KR (1) KR100607391B1 (pl)
CN (1) CN1222321C (pl)
AR (1) AR015482A1 (pl)
AT (1) ATE387916T1 (pl)
AU (1) AU742036B2 (pl)
BR (1) BR9814015A (pl)
CA (1) CA2309326C (pl)
DE (1) DE69839224T2 (pl)
EA (1) EA002776B1 (pl)
HU (1) HUP9701945A3 (pl)
IL (1) IL135990A0 (pl)
NO (1) NO329382B1 (pl)
NZ (1) NZ504098A (pl)
PL (1) PL199652B1 (pl)
WO (1) WO1999024073A1 (pl)
ZA (1) ZA989779B (pl)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE20020300A1 (es) 2000-08-22 2002-05-10 Pharmacia Corp Composicion de solucion de un farmaco antibiotico a base de oxazolidinona con mejoramiento de la carga de farmaco
WO2003015828A1 (en) * 2001-08-20 2003-02-27 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Parenteral formulations of 1-(5-tert-butyl-2-p-tolyl-2h-pryrazol-3-yl)-3-[4-(2-morpholin-4-yl-ethoxy)-naphthalen-1-yl]-urea and a cyclodextrin
CN100384865C (zh) * 2001-11-02 2008-04-30 嵌入治疗公司 用于rna干扰的治疗用途的方法及组合物
WO2004022100A1 (fr) * 2002-08-15 2004-03-18 Yunqing Liu Formulation nanopharmaceutique et son procede de preparation
AR054215A1 (es) 2006-01-20 2007-06-13 Eriochem Sa Una formulacion farmaceutica de un taxano, una composicion solida de un taxano liofilizado a partir de una solucion de acido acetico, un procedimiento para la preparacion de dicha composicion solida de un taxano, una composicion solubilizante de un taxano liofilizado, y un conjunto de elementos (kit
CN101020059B (zh) * 2006-02-15 2011-01-05 中国科学院上海药物研究所 一种含多烯紫杉醇类物质的药物组合物及其制备方法
KR100917809B1 (ko) * 2006-05-22 2009-09-18 에스케이케미칼주식회사 우수한 저장안정성을 갖는 도세탁셀 함유 주사제 조성물
KR100917810B1 (ko) * 2006-06-02 2009-09-18 에스케이케미칼주식회사 저장안정성이 우수한 파클리탁셀 함유 주사제 조성물
WO2007142440A1 (en) * 2006-06-02 2007-12-13 Sk Chemicals Co., Ltd. Stable pharmaceutical composition containing paclitaxel and a method of manufacturing the same
CN100411688C (zh) * 2006-09-12 2008-08-20 南京师范大学 含有环糊精/多烯紫杉醇包合物的药物组合物及其制备方法
CN100486645C (zh) 2006-09-12 2009-05-13 南京师范大学 含有环糊精紫杉醇包合物的药物组合物及其制备方法
US20090022727A1 (en) 2007-01-26 2009-01-22 Alza Corp. Injectable, nonaqueous suspension with high concentration of therapeutic agent
US20080262078A1 (en) * 2007-04-20 2008-10-23 Namdeo Alok B Pharmaceutical Compositions
EP2170319A4 (en) * 2007-06-22 2011-10-12 Scidose Llc SOLVENT FORMULATION FROM DOCETAXEL WITHOUT TWEEN 80
US20090087460A1 (en) * 2007-10-02 2009-04-02 Hamamatsu Photonics K.K. Solid composition, microparticles, microparticle dispersion liquid, and manufacturing methods for these
AR063111A1 (es) 2007-10-03 2008-12-30 Eriochem Sa Una formulacion farmaceutica de taxano
KR101478779B1 (ko) * 2007-11-22 2015-01-05 에스케이케미칼주식회사 재수화시간이 향상된 택산 유도체 함유 동결건조 조성물 및이의 제조방법
KR101502533B1 (ko) * 2007-11-22 2015-03-13 에스케이케미칼주식회사 우수한 안정성을 갖는 택산 유도체 함유 주사제용동결건조 조성물 및 이의 제조방법
EP2106786A1 (de) * 2008-04-04 2009-10-07 Roewer, Norbert, Univ.-Prof. Dr. med. Pharmazeutische Zubereitung mit permethyliertem Cyclodextrin
US8912228B2 (en) 2009-10-19 2014-12-16 Scidose Llc Docetaxel formulations with lipoic acid
KR20120130740A (ko) * 2011-05-23 2012-12-03 에스케이케미칼주식회사 도세탁셀을 함유하는 액상 주사용 조성물
US11406595B2 (en) * 2012-05-21 2022-08-09 University Of Maryland, College Park Highly stable colloid from aqueous solutions of small organic molecules
US9925274B2 (en) 2012-11-15 2018-03-27 Sapiotec Gmbh Delphinidin complex as an antiphlogistic or immunosuppressive active ingredient
CA2893883A1 (en) 2012-12-11 2014-06-19 Sapiotec Gmbh Delphinidin for combating melanoma cells
CN105823810A (zh) * 2016-01-04 2016-08-03 杭州电子科技大学 紫杉醇化疗效果检测装置及检测方法
KR101829705B1 (ko) * 2016-09-21 2018-02-19 씨제이헬스케어 주식회사 안정성이 향상된 주사용 조성물
KR102262743B1 (ko) 2017-07-07 2021-06-09 에이치케이이노엔 주식회사 주사용 조성물
EP3827822B1 (en) 2018-07-25 2024-11-06 Bika Biotechnology (Guangzhou) Co., Ltd. Docetaxel composition for injection and preparation method therefor
WO2022250469A1 (ko) * 2021-05-26 2022-12-01 주식회사 대웅제약 1-(5-(2,4-다이플루오로페닐)-1-((3-플루오로페닐)술포닐)-4-메톡시-1h-피롤-3-일)-n-메틸메탄아민을 포함하는 신규한 주사용 제제
CN115960834B (zh) * 2023-03-07 2023-06-09 浙江省肿瘤医院 一种pd-1/ptx联合pd-1耐药模型建立的方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5602112A (en) * 1992-06-19 1997-02-11 Supergen, Inc. Pharmaceutical formulation
JPH0753396A (ja) * 1993-08-19 1995-02-28 Ensuiko Sugar Refining Co Ltd タキソールのサイクロデキストリン包接物，その製造法および用途
JPH06157330A (ja) * 1992-11-27 1994-06-03 Ensuiko Sugar Refining Co Ltd タキソールのサイクロデキストリン包接物，その製造法と用途
HU213200B (en) * 1993-05-12 1997-03-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet The cyclodextrin or cyclodextrin derivative cluster complexes of taxol, taxotere, or taxus, pharmaceutical preparations containing them and process for their production
DE4414138A1 (de) * 1994-04-22 1995-10-26 Consortium Elektrochem Ind Acylierte gamma-Cyclodextrine
HUT73844A (en) * 1994-11-11 1996-09-30 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet New taxol complexes and pharmaceutical compositions containing them
CA2163837C (en) * 1994-12-13 1999-07-20 Robert K. Perrone Crystalline paclitaxel hydrates
CN1596250A (zh) * 2001-11-30 2005-03-16 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 紫杉醇溶剂化物

Also Published As

Publication number Publication date
CN1281373A (zh) 2001-01-24
NO329382B1 (no) 2010-10-04
EA002776B1 (ru) 2002-08-29
HUP9701945A3 (en) 2000-04-28
JP3656550B2 (ja) 2005-06-08
CA2309326A1 (en) 1999-05-20
AR015482A1 (es) 2001-05-02
CA2309326C (en) 2010-12-21
US20070087999A1 (en) 2007-04-19
US7671042B2 (en) 2010-03-02
KR100607391B1 (ko) 2006-08-02
WO1999024073B1 (en) 1999-07-08
IL135990A0 (en) 2001-05-20
EP1059942B1 (en) 2008-03-05
EP1059942A2 (en) 2000-12-20
HU9701945D0 (en) 1998-01-28
PL340505A1 (en) 2001-02-12
NZ504098A (en) 2003-06-30
ZA989779B (en) 1999-04-28
AU742036B2 (en) 2001-12-13
AU1253899A (en) 1999-05-31
ATE387916T1 (de) 2008-03-15
DE69839224D1 (de) 2008-04-17
EA200000494A1 (ru) 2000-10-30
NO20002165L (no) 2000-07-07
WO1999024073A1 (en) 1999-05-20
DE69839224T2 (de) 2009-04-16
BR9814015A (pt) 2000-09-26
HUP9701945A1 (hu) 1999-09-28
CN1222321C (zh) 2005-10-12
NO20002165D0 (no) 2000-04-27
JP2001522816A (ja) 2001-11-20
KR20010031967A (ko) 2001-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL199652B1 (pl) Sposób wytwarzania stałych kompozycji farmaceutycznych
FI92556C (fi) Menetelmä intravenoosisen farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi
US5407683A (en) Pharmaceutical solutions and emulsions containing taxol
US8697678B2 (en) Anaesthetic formulation
JP3558344B2 (ja) 非経口的に用いる薬物製剤
JP2005504008A (ja) 過形成を治療するための組成物及び方法
KR20090052920A (ko) 우수한 안정성을 갖는 택산 유도체 함유 주사제용동결건조 조성물 및 이의 제조방법
WO1996040052A1 (en) Fluorochemical solutions for the delivery of lipophilic pharmaceutical agents
KR100720886B1 (ko) 주사용 실로스타졸 수성 제제
US5990153A (en) Ultrasonicated α-lipoic acid solutions for attenuating microvascular injury
EP1707195A1 (en) Retinoic acid-containing remedy for diabetes
JPH0193587A (ja) ジピリダモルとシクロデキストリンとの包接複合体及びその製造方法並びに該複合体を有効成分とする医薬組成物
EP2204167A1 (en) Pharmaceutical microemulsion for preventing supramolecular aggregation of amphiphilic molecules
AU2008318536B2 (en) Injectable meclizine formulations and methods
CZ20001636A3 (cs) Farmaceutické přípravky obsahující cyklodextriny a taxoidy
CN114732789A (zh) 一种用于治疗肺动脉高压的复方长效递药系统及其制备
JPH09301861A (ja) ラジカル疾患用注射・点滴薬剤
CN115350288A (zh) 聚合物囊泡稳定的药物-碘油乳液及其制备方法与应用
JP2008509141A (ja) 非経口製剤の組織刺激を軽減させる方法及び組成物
JPS6133127A (ja) 医薬活性化合物の包接化方法
MXPA00004456A (en) Pharmaceutical compositions containing cyclodextrins and taxoids
AU2014200491A1 (en) Anaesthetic formulation

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20131109