KR20240085798A

KR20240085798A - 항체 분자-약물 접합체 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20240085798A
Application number: KR1020227037975A
Authority: KR
Inventors: 오바디아 죠셉 플랜트; 티리 제이 코치; 카르틱 비스와나탄; 케네스 더글라스 존슨; 제임스 씨 델라니; 하미드 티시르; 앤드류 엠 올라콧; 부파티 라마크리쉬난
Original assignee: 비스테라, 인크.
Priority date: 2020-04-03
Filing date: 2021-04-02
Publication date: 2024-06-17
Also published as: US20240342300A1; CN116710146A; AU2021248643A1; US11969476B2; EP4126064A1; CA3178465A1; JP2023521319A; US20210316004A1; WO2021203024A1

Abstract

지질다당류(LPS)에 특이적으로 결합하는 항체 분자-약물 접합체(ADC)를 개시한다. 이 항체 분자-약물 접합체는 세균 감염 및 관련 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 사용될 수 있다.

Description

항체 분자-약물 접합체 및 이의 용도

관련 출원의 교차참조

본원은 2020년 4월 3일자로 출원된 미국 가출원 제63/004,946호의 이익을 주장한다. 앞서 언급된 출원의 내용은 그의 전체가 본원에 참고로 포함된다.

서열목록

본원은 ASCII 형식으로 전자 제출되었고 그의 전체가 본원에 참고로 포함되는 서열목록을 함유한다. 2021년 4월 2일에 생성된 상기 ASCII 사본은 명칭이 P2029-7036WO_SL.txt이고 크기가 123,053 바이트이다.

배경

광범위한 세균은 경증 내지 중증 질병까지 이어지는 감염을 야기할 수 있다. 세균 감염은 종종 항생제에 의해 치료된다. 그러나, 항생제 내성 세균 균주의 출현은 감염의 치료를 복잡하게 만들었다. 항생제 내성 감염은 항생제에 의해 쉽게 치료될 수 있는 감염에 비해 종종 더 큰 장애와 사망을 초래한다. 질병 통제 및 예방 센터(CDC)에 따르면, 미국에서 매년 적어도 200만 명의 사람들이 감염을 치료하도록 설계된 하나 이상의 항생제에 대한 내성을 가진 세균에 의한 심각한 감염을 획득한다. 이 항생제 내성 감염의 직접적인 결과로서 매년 적어도 23,000명의 사람들이 사망한다. 이 추정치는 보수적인 가정에 기반한 것이고 최소 추정치일 가능성이 높다. 더 많은 환자들이 세균 감염의 합병증인 다른 병태로 인해 사망할 수 있다. 1차 항생제 치료 선택에 이은 2차 항생제 치료 선택이 내성에 의해 제한되거나 이용될 수 없는 경우, 의료 제공자는 환자에게 더 강한 독성을 나타낼 수 있고 종종 더 비싸고 덜 효과적인 항생제를 어쩔 수 없이 사용한다. 많은 사례에서, 항생제 내성 감염은 연장된 치료 또는 비용이 더 많이 드는 치료를 요구하고, 입원 기간을 연장하고, 추가 의사 방문 및 의료 이용을 필요로 한다.

항생제의 사용은 전 세계적으로 항생제 내성을 유발하는 가장 중요한 요인들 중 하나이다. 항생제는 인간 의학에서 사용되는 가장 흔히 처방되는 약물에 속한다. 그러나, CDC에 따르면, 사람들에게 처방된 모든 항생제의 최대 50%는 필요하지 않거나 처방된 바와 같이 최적으로 효과적이지는 않다. 항생제는 질환의 예방, 통제 및 치료, 및 식품 생산 동물의 성장 촉진을 위해 식용 동물에서도 일반적으로 사용된다. 내성 세균 균주는 사람에서 사람으로 전파될 수 있거나, 음식을 포함하는, 환경의 비인간 공급원으로부터 전파될 수 있다.

세균 감염을 치료하고 예방하고 진단하는 새로운 접근법을 개발할 필요가 있다.

본 개시내용은 적어도 부분적으로 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균의 외막 상의 지질다당류(LPS)에 결합하고 본원에 개시된 기능적 및 구조적 특성을 포함하는 항체 분자 또는 항체 분자-약물 접합체(ADC)를 제공한다. 한 실시양태에서, ADC는 항-LPS 항체 분자에 부위 특이적으로 커플링된(예를 들어, 접합된) 항미생물 펩타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 항-LPS 항체 분자에 각각 부위 특이적으로 커플링된(예를 들어, 접합된) 복수의 항미생물 펩타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 LPS의 코어 영역에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) LPS의 단당류 성분(예를 들어, 헵토스)에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 (예를 들어, 슈도모나스 애루기노사에서) 코어 LPS의 인산화된(예를 들어, 과인산화된 또는 이인산화된) HepI 잔기에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 헵토스에 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 일인산화된 헵토스 유사체(예를 들어, 2-P-Hep 및/또는 4-P-Hep)에 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 2-P 포스페이트 기보다 4-P 포스페이트 기에 더 강하게 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 슈도모나스 애루기노사 LPS의 단당류 성분(예를 들어, 헵토스)과 접촉하는 아미노산 잔기에서 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VH 잔기 A33 또는 E99에서 하나 이상(예를 들어, 1개 또는 2개)의 보존적 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VL 잔기 H32에서 보존적 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VH 잔기 D54 및/또는 D56의 돌연변이를 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상의 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균에 결합하고/하거나, 이러한 세균을 억제하고/하거나 이러한 세균의 생존력을 감소시킨다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 표 1 또는 3에 기재된 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및/또는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 표 1 또는 3에 기재된 하나 이상의 중쇄 CDR 및/또는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 항미생물 펩타이드, 예를 들어, 본원, 예를 들어, 표 4에 기재된 항미생물 펩타이드를 포함한다. 이론에 의해 구속받고자 하는 것은 아니지만, 한 실시양태에서, 항체 분자와 항미생물 펩타이드의 접합은 항체 분자 및/또는 항미생물 펩타이드의 하나 이상의 특성을 개선할 수 있고, 예를 들어, 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상의 세균, 예를 들어, 하나 이상의 그람 음성 세균을 억제하거나 이 세균의 생존력을 감소시키는 항미생물 펩타이드의 능력을 개선할 수 있다. 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포, 조성물(예를 들어, 약학 조성물), 키트, 및 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 제조 방법도 제공한다. 본원에 개시된 항체 분자, ADC 및 항미생물 펩타이드는 그람 음성 세균(예를 들어, 슈도모나스, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사)에 의해 야기되거나 이 세균과 관련된 세균 감염 또는 관련 장애를 치료하고/하거나, 예방하고/하거나 진단하는 데 (단독으로 또는 다른 작용제 또는 치료 요법과 함께) 사용될 수 있다.

따라서, 한 측면에서, 본 개시내용은 항체 분자 및 공유커플링된 펩타이드(예를 들어, 항미생물 펩타이드)를 포함하는 항체 분자-약물 접합체(ADC)를 제공하는 것으로, 이때 상기 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 VH는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 이 VH는 (a) 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 또는 (b) 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고;

상기 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 VL은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이 VL은 (a) 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3, 또는 (b) 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 서열번호 257의 아미노산 서열, 또는 서열번호 257의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 약 2의 펩타이드-대-항체 비를 가진다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 서열번호 156의 아미노산 서열, 또는 서열번호 156의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 약 4의 펩타이드-대-항체 비를 가진다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 D-아미노산을 포함하거나 이로 구성된다.

한 실시양태에서, VH는 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL은 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 한 실시양태에서, VH는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL은 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 서열번호 257의 아미노산 서열, 또는 서열번호 257의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 약 2의 펩타이드-대-항체 비를 가진다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 서열번호 156의 아미노산 서열, 또는 서열번호 156의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 약 4의 펩타이드-대-항체 비를 가진다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 D-아미노산을 포함하거나 이로 구성된다.

일부 실시양태에서, VH는 서열번호 117의 아미노산 서열, 또는 서열번호 117의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, VH는 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, VL은 서열번호 135의 아미노산 서열, 또는 서열번호 135의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, VL은 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 펩타이드는 서열번호 257의 아미노산 서열, 또는 서열번호 257의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 약 2의 펩타이드-대-항체 비를 가진다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 서열번호 156의 아미노산 서열, 또는 서열번호 156의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 약 4의 펩타이드-대-항체 비를 가진다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 D-아미노산을 포함하거나 이로 구성된다.

한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 HCDR2 서열 Xaa-Xaa-Gly-Gly-(Ser/Thr/Gly)를 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 슈도모나스에 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 슈도모나스 애루기노사에 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 슈도모나스의 지질다당류(LPS)에 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 슈도모나스의 LPS의 내부 코어(예를 들어, 내부 코어 글리칸 모이어티)에 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 웨스턴 블롯에 의해 확인될 때, 이. 콜라이(E. coli) LPS에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 헵토스 또는 일인산화된 헵토스 유사체(예를 들어, 2-P-Hep 또는 4-P-Hep)에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 예를 들어, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 비해 감소된 결합으로 이인산화된 만노스(2,4-P-Man)에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, ¹H-포화 전달 차이(STD) NMR 스펙트럼에 의해 확인될 때, 이인산화된 헵토스, 예를 들어, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, ¹H-포화 전달 차이(STD) NMR 스펙트럼에 의해 확인될 때, 이인산화된 헵토스, 예를 들어, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에만 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 예를 들어, 약 20 내지 약 150 pM(예를 들어, 약 50 내지 약 120 pM)의 겉보기 결합력으로 본원에 기재된 하나 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주, 예를 들어, 카르바페넴, 항-슈도모나스 3세대 세팔로스포린 또는 플루오로퀴놀론에 대한 내성을 가진 하나 이상의 균주에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 본원에 기재된 하나 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주, 예를 들어, 카르바페넴에 대한 내성을 가진 하나 이상의 균주를 사멸시킨다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 1 내지 10 ㎍/㎖(예를 들어, 1 내지 2 ㎍/㎖, 2 내지 5 ㎍/㎖ 또는 5 내지 10 ㎍/㎖) 또는 5 내지 50 nM(예를 들어, 5 내지 10 nM, 10 내지 20 nM, 20 내지 30 nM, 30 내지 40 nM, 40 내지 45 nM, 또는 45 내지 50 nM)의 농도에서 세팔로스포린 및/또는 플루오로퀴놀론에 대한 내성을 가진 슈도모나스 애루기노사 균주를 사멸시킨다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 그람 음성 세균(예를 들어, 병원성 그람 음성 세균)에 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 전체 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 그람 양성 세균 또는 포유동물 세포 중 하나 이상에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 100개 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA, 유세포분석 및/또는 전자 현미경관찰에 의해 확인될 때, 슈도모나스 애루기노사 이외의 슈도모나스 종, 예를 들어, 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) 또는 슈도모나스 스투트제리(Pseudomonas stutzeri) 중 하나 이상에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 단일클론 항체 분자, 인간화된 항체 분자, 단리된 항체 분자, 또는 합성 항체 분자이다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 2개의 VH 및 2개의 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역을 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 카파 또는 람다 쇄의 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, ADC(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음) 또는 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음)는 Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단일 쇄 Fv 단편(scFv)을 포함한다.

한 실시양태에서, 펩타이드는 서열번호 257의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개 또는 33개의 D-아미노산을 포함하거나, 펩타이드 내의 아미노산 잔기의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100%는 D-아미노산이다. 한 실시양태에서, 펩타이드 내의 모든 아미노산 잔기는 D-아미노산이다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 예를 들어, 간접적으로(예를 들어, 불변 영역, 링커, 또는 이들 둘 다를 통해) VH, 예를 들어, VH의 C-말단에 커플링된다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 예를 들어, 소르타제(sortase) 인식 서열(예를 들어, LPETGGG(서열번호 244))을 통해, 예를 들어, 소르타제 A(SrtA)를 사용하는 효소 라이게이션에 의해 항체 분자에 커플링된다.

한 실시양태에서, 펩타이드는 소르타제 공여체 서열, 예를 들어, N-말단 GGG를 포함한다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 항체 분자의 경쇄의 C-말단, N-말단, 또는 C-말단 및 N-말단 둘 다에 부착된다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 항체 분자의 중쇄의 C-말단, N-말단, 또는 C-말단 및 N-말단 둘 다에 부착된다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 항체 분자의 경쇄 및 중쇄 둘 다의 C-말단, N-말단, 또는 C-말단 및 N-말단 둘 다에 부착된다. 한 실시양태에서, ADC는 항체 분자와 펩타이드 사이에 링커, 예를 들어, n이 2 내지 20인 (Gly-Ser)n 링커 서열(서열번호 262)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 약 2 내지 약 8, 예를 들어, 약 2 내지 약 4의 펩타이드-대-항체 분자 비를 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 약 2의 펩타이드-대-항체 분자 비를 가진다.

한 실시양태에서, ADC는 약 2 ㎍/㎖ 내지 약 50 ㎍/㎖, 예를 들어, 약 3.1 ㎍/㎖ 내지 약 25 ㎍/㎖의 농도에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 2 ㎍/㎖(예를 들어, 약 0.1 ㎍/㎖ 내지 약 2 ㎍/㎖, 약 0.1 ㎍/㎖ 내지 약 1.5 ㎍/㎖, 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 1.5 ㎍/㎖, 약 0.5 ㎍/㎖ 내지 약 1.5 ㎍/㎖)의 농도에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 약 1 ㎍/㎖(예를 들어, 약 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4 또는 1.5 ㎍/㎖)의 농도에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 슈도모나스 애루기노사 세포의 약 5% 내지 50%(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사 세포의 약 5% 내지 40%, 5% 내지 30%, 5% 내지 20%, 10% 내지 40%, 15% 내지 40%, 10% 내지 30%, 15% 내지 25%)의 사멸을 유도한다. 한 실시양태에서, ADC는 슈도모나스 애루기노사 세포의 약 20%(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사 세포의 약 10%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25% 또는 30%)의 사멸을 유도한다. 한 실시양태에서, ADC는 약 1 ㎍/㎖에서 약 20%의 사멸을 유도한다. 한 실시양태에서, ADC는 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 50% 이하, 예를 들어, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 이하만큼 상이한 농도에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 슈도모나스 애루기노사에 대해 약 500 ㎍/㎖ 이상, 예를 들어, 800 ㎍/㎖ 이상의 평균 용해 농도(MLC)를 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 슈도모나스 애루기노사에 대해 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 50% 이하, 예를 들어, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 이하만큼 상이한 MLC를 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 슈도모나스 애루기노사에 대해 약 500 ㎍/㎖ 이상, 예를 들어, 800 ㎍/㎖ 이상의 CC50(포유동물 세포의 50% 세포독성이 관찰되는 농도)을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 슈도모나스 애루기노사에 대해 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1보다 더 높은, 예를 들어, 적어도 0.5배, 1배, 2배, 3배, 4배 또는 5배 더 높은 CC50을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 실시예 4에 기재된 바와 같은 HEK-블루 리포터 어세이에 따라 LPS 매개 톨(Toll) 유사 수용체 4(TLR4) 활성화를 억제한다. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 혈액 샘플의 약물동력학 측정, 전신 영상화, 생체내 영상화, 장기 분포의 평가(예를 들어, ADC는 간에 실질적으로 또는 주로 분포하지 않음), ELISA 및/또는 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 개선된 생체분포를 가진다.

한 측면에서, 본 개시내용은 2개의 VH 및 2개의 VL을 포함하는 항체 분자를 포함하는 ADC를 제공하는 것으로, 이때 VH는 서열번호 257의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 공유커플링되고; VH는 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL은 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 2개의 VH 및 2개의 VL을 포함하는 항체 분자를 포함하는 ADC를 제공하는 것으로, 이때 VH는 서열번호 257의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 공유커플링되고; VH는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL은 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 한 실시양태에서, VH는 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 펩타이드는 (Gly-Ser)n 링커를 통해 VH의 C-말단에 커플링된다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 대상체에서 세균 감염, 예를 들어, 슈도모나스와 관련된 세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한, 본원에 기재된 ADC 또는 약학 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 세균 감염은 슈도모나스 애루기노사와 관련된다. 한 실시양태에서, 세균 감염은 대상체의 폐에 있다. 한 실시양태에서, ADC 또는 약학 조성물은 폐에서 세균 부하(load)를 감소시킨다. 한 실시양태에서, ADC는 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 한 실시양태에서, ADC 또는 조성물은 정맥내로, 피하로 또는 비강내로 또는 흡입에 의해 투여된다. 한 실시양태에서, ADC 또는 조성물은 세균 감염과 관련된 증상의 발병 전 또는 후에 투여된다. 한 실시양태에서, 대상체는 폐렴, 요로 감염(UTI), 패혈증, 수막염, 설사, 연조직 감염, 피부 감염, 균혈증, 호흡기 감염, 심내막염, 복강내 감염, 패혈성 관절염, 골수염, CNS 감염, 안과 감염, 담낭염, 담관염, 수막염, 장티푸스, 식중독, 위장염, 장열, 세균성이질, 혈류 감염, 복강내 패혈증, 뇌농양, 수막염, 패혈증, 관절 감염, 뼈 감염, 위장 감염 또는 상처 감염 중 하나 이상을 가진다. 한 실시양태에서, 세균 감염은 병원내 감염 또는 병원 획득 감염이다. 한 실시양태에서, 대상체는 인간 또는 동물이다. 한 실시양태에서, 대상체는 면역손상된 환자 또는 건강 전문가이다. 한 실시양태에서, 대상체는 HIV 감염 또는 AIDS, 암, 고형 장기 이식, 줄기 세포 이식, 겸상 세포 질환 또는 무비증, 선천성 면역 결핍, 만성 염증성 병태, 인공 와우, 영양실조 또는 뇌척수액 누출을 갖거나 가질 위험이 있다. 한 실시양태에서, 대상체는 18세 이하, 15세 이하, 12세 이하, 9세 이하, 또는 6세 이하이거나, 적어도 60세, 적어도 65세, 적어도 70세, 적어도 75세 또는 적어도 80세이다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 제2 항미생물 작용제 또는 요법을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 제2 항미생물 작용제 또는 요법은 항생제 또는 파지 요법을 포함한다. 한 실시양태에서, 항생제는 폴리믹신(polymyxin)(예를 들어, 콜리스틴(colistin)) 또는 β-락탐(예를 들어, 카르바페넴(carbapenem), 예를 들어, 메로페넴(meropenem))이다. 한 실시양태에서, 항생제는 아미노글리코사이드, 안사마이신(ansamycin), 카르바세펨(carbacephem), 카르바페넴, 세팔로스포린(cephalosporin), 글리코펩타이드, 린코사마이드(lincosamide), 리포펩타이드, 마크롤라이드(macrolide), 모노박탐(monobactam), 니트로푸란(nitrofuran), 옥사졸리디논(oxazolidinone), 페니실린(penicillin), 페니실린 조합, 폴리펩타이드, 퀴놀론 또는 플루오로퀴놀론, 설폰아미드, 테트라사이클린(tetracycline), 또는 마이코박테리아에 대한 약물로부터 선택된다.

한 실시양태에서, 항생제는 아미카신(amikacin), 젠타마이신(gentamicin), 카나마이신(kanamycin), 네오마이신(neomycin), 네틸마이신(netilmicin), 토브라마이신(tobramycin), 파로모마이신(paromomycin), 스트렙토마이신(streptomycin), 스펙티노마이신(spectinomycin), 겔다나마이신(geldanamycin), 허비마이신(herbimycin), 또는 리팍시민(rifaximin), 로라카르베프(loracarbef), 에르타페넴(ertapenem), 도리페넴(doripenem), 이미페넴(imipenem)/실라스타틴(cilastatin), 메로페넴, 세파드록실(cefadroxil), 세파졸린(cefazolin), 세팔로틴(cefalotin), 세팔로씬(cefalothin), 세팔렉신(cephalexin), 세파클로르(cefaclor), 세파만돌(cefamandole), 세폭시틴(cefoxitin), 세프프로질(cefprozil), 세푸록심(cefuroxime), 세픽심(cefixime), 세프디니르(cefdinir), 세프디토렌(cefditoren), 세포페라존(cefoperazone), 세포탁심(cefotaxime), 세프포독심(cefpodoxime), 세프타지딤(ceftazidime), 세프티부텐(ceftibuten), 세프티족심(ceftizoxime), 세프트리악손(ceftriaxone), 세페핌(cefepime), 세프타롤린 포사밀(ceftaroline fosamil), 세프토비프롤(ceftobiprole), 테이코플라닌(teicoplanin), 반코마이신(vancomycin), 텔라반신(telavancin), 달바반신(dalbavancin), 오리타반신(oritavancin), 클린다마이신(clindamycin), 린코마이신(lincomycin), 댑토마이신(daptomycin), 아지쓰로마이신(azithromycin), 클라리쓰로마이신(clarithromycin), 디리쓰로마이신(dirithromycin), 에리쓰로마이신(erythromycin), 록시쓰로마이신(roxithromycin), 트롤레안도마이신(troleandomycin), 텔리쓰로마이신(telithromycin), 스피라마이신(spiramycin), 아즈트레오남(aztreonam), 푸라졸리돈(furazolidone), 니트로푸란토인(nitrofurantoin), 리네졸리드(linezolid), 포시졸리드(posizolid), 라데졸리드(radezolid), 토레졸리드(torezolid), 아목시실린(amoxicillin), 암피실린(ampicillin), 아즐로실린(azlocillin), 카르베니실린(carbenicillin), 클록사실린(cloxacillin), 디클록사실린(dicloxacillin), 플루클록사실린(flucloxacillin), 메즐로실린(mezlocillin), 메티실린(methicillin), 나프실린(nafcillin), 옥사실린(oxacillin), 페니실린(penicillin) g, 페니실린 v, 피페라실린(piperacillin), 페니실린 g, 테모실린(temocillin), 티카르실린(ticarcillin), 아목시실린/클라불라네이트(clavulanate), 암피실린/설박탐(sulbactam), 피페라실린/타조박탐(tazobactam), 티카르실린/클라불라네이트, 바시트라신(bacitracin), 콜리스틴, 폴리믹신 b, 시프로플록사신(ciprofloxacin), 에녹사신(enoxacin), 가티플록사신(gatifloxacin), 제미플록사신(gemifloxacin), 레보플록사신(levofloxacin), 로메플록사신(lomefloxacin), 목시플록사신(moxifloxacin), 날리딕스산(nalidixic acid), 노르플록사신(norfloxacin), 오플록사신(ofloxacin), 트로바플록사신(trovafloxacin), 그레파플록사신(grepafloxacin), 스파르플록사신(sparfloxacin), 테마플록사신(temafloxacin), 마페나이드(mafenide), 설파세타마이드(sulfacetamide), 설파디아진(sulfadiazine), 은 설파디아진, 설파디메톡신(sulfadimethoxine), 설파메티졸(sulfamethizole), 설파메톡사졸(sulfamethoxazole), 설파닐이미드(sulfanilimide), 설파살라진(sulfasalazine), 설피속사졸(sulfisoxazole), 트리메토프림(trimethoprim)-설파메톡사졸(코-트리목사졸(co-trimoxazole)), 설폰아미도크리소이딘(sulfonamidochrysoidine), 데메클로사이클린(demeclocycline), 독시사이클린(doxycycline), 미노사이클린(minocycline), 옥시테트라사이클린(oxytetracycline), 테트라사이클린(tetracycline), 클로파지민(clofazimine), 댑손(dapsone), 카프레오마이신(capreomycin), 사이클로세린(cycloserine), 에탐부톨(ethambutol), 에티온아미드(ethionamide), 이소니아지드(isoniazid), 피라진아미드(pyrazinamide), 리팜핀(rifampin), 리파부틴(rifabutin), 리파펜틴(rifapentine), 스트렙토마이신, 아르스페나민(arsphenamine), 클로람페니콜(chloramphenicol), 포스포마이신(fosfomycin), 푸시딘산(fusidic acid), 메트로니다졸(metronidazole), 무피로신(mupirocin), 플라텐시마이신(platensimycin), 퀴누프리스틴(quinupristin)/달포프리스틴(dalfopristin), 티암페니콜(thiamphenicol), 티게사이클린(tigecycline), 티니다졸(tinidazole) 또는 트리메토프림으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 항생제는 레보플록사신, 시프로플록사신, 젠타마이신, 세프트리악손, 오플록사신, 아미카신, 토브라마이신, 아즈트레오남, 또는 이미페넴/실라스타틴으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 제2 항미생물 작용제 또는 요법은 ADC가 투여되기 전에, ADC의 투여와 동시에, 또는 ADC가 투여된 후에 투여된다.

한 측면에서, 본 개시내용은 세균 감염을 억제하거나 감소시키는 방법으로서, 세균 감염을 억제하거나 감소시키기에 효과적인 양으로 본원에 기재된 ADC 또는 본원에 기재된 약학 조성물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, ADC 또는 약학 조성물은 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 세포와 접촉된다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC 또는 본원에 기재된 약학 조성물; 및 ADC 또는 약학 조성물의 사용을 위한 지침서를 포함하는 키트를 제공한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC 또는 본원에 기재된 약학 조성물을 포함하는 용기를 제공한다.

한 측면에서, 본 개시내용은

(a) 본원에 기재된 ADC의 항체 분자의 VH, VL 또는 이들 둘 다;

(b) 본원에 기재된 ADC의 항미생물 펩타이드;

(c) (a) 및 (b) 둘 다; 또는

(d) 본원에 기재된 ADC

를 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 핵산 분자 또는 벡터를 포함하는 세포를 제공한다. 한 실시양태에서, ADC의 생성을 허용하는 조건 하에서 본원에 기재된 세포를 배양하여 ADC를 생성하는 단계를 포함하는 ADC의 제조 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, LPS에 결합하는 항체 분자를, 소르타제 매개 반응이 일어나게 하는 조건 하에서 소르타제의 존재 하에 항미생물 펩타이드 및 임의적으로 소르타제 공여체 서열을 포함하는 펩타이드와 접촉시킴으로써, ADC를 생성하는 단계를 포함하는 ADC의 제조 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 소르타제 인식 서열, 링커 서열, 또는 이들 둘 다를 포함하는 소르타제 수용체 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 세균 감염을 치료하거나 예방하기에 효과적인 양으로 본원에 기재된 ADC 또는 본원에 기재된 약학 조성물을, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 세균 감염을 치료하거나 예방하기 위한 의약의 제조에 있어서 본원에 기재된 ADC의 용도를 제공한다.

따라서, 한 측면에서, 본 개시내용은 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 공유커플링된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 항체 분자-약물 접합체(ADC)를 제공하는 것으로, 이때 이 항체 분자는 변형된 설파타제(sulfatase) 모티프를 포함한다.

한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 하기 식을 가진다:

X₁(FGly')X₂Z₂X₃Z₃

상기 식에서,

FGly'는 하기 화학식을 가진다:

상기 화학식에서,

J₁은 공유커플링된 항미생물 펩타이드이고;

L₁은 각각 알킬렌, 치환된 알킬렌, 알케닐렌, 치환된 알케닐렌, 알키닐렌, 알키닐렌, 아릴렌, 치환된 아릴렌, 사이클로알킬렌, 치환된 사이클로알킬렌, 헤테로아릴렌, 치환된 헤테로아릴렌, 헤테로사이클렌, 치환된 헤테로사이클렌, 아실, 아미도, 아실옥시, 우레타닐렌, 티오에스테르, 설포닐, 설폰아미드, 설포닐 에스테르, -O-, -S-, -NH- 및 치환된 아민으로부터 독립적으로 선택된 2가 모이어티이고;

n은 0 내지 40으로부터 선택된 수이고;

Z₂는 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;

X₁은 존재하거나 부재하고, 존재할 때, 임의의 아미노산이고, 단 설파타제 모티프가 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 때, X₁은 존재하고;

X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;

Z₃은 염기성 아미노산이다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 폴딩된 상태일 때 공유커플링된 항미생물 펩타이드를 용매 접근 가능한 표면 상에 제시한다.

한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 이종 변형된 설파타제 모티프이다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 12개 이하(예를 들어, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하 또는 6개 이하)의 아미노산 잔기를 포함하거나 이들로 구성된다.

한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 ADC에서 항체 분자 쇄의 N-말단, 항체 분자 쇄의 C-말단, 또는 항체 분자의 용매 접근 가능한 루프에 위치한다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 항체 분자의 중쇄(또는 이의 단편)에 위치한다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 중쇄의 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3)에 위치한다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 중쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단)에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 중쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단) 이외의 중쇄 불변 영역 내의 영역에 위치한다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 항체 분자의 경쇄(또는 이의 단편)에 위치한다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 경쇄의 불변 영역에 위치한다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 경쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단)에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 경쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단) 이외의 경쇄 불변 영역 내의 영역에 위치한다.

한 실시양태에서, ADC는 복수의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 3개 이상(예를 들어, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 4개 이상(예를 들어, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 4개의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다.

한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 ADC에서 항체 분자 쇄의 N-말단, 항체 분자 쇄의 C-말단, 또는 항체 분자의 용매 접근 가능한 루프에 위치한다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 항체 분자의 중쇄(또는 이의 단편), 경쇄(또는 이의 단편), 또는 이들 둘 다에 위치한다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 중쇄의 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3 중 하나 이상), 경쇄의 불변 영역, 또는 이들 둘 다에 위치한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 변형된 설파타제 모티프를 각각 포함하는 2개 이상의 중쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 변형된 설파타제 모티프를 각각 포함하는 2개 이상의 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하고, 각각의 중쇄는 2개의 변형된 설파타제 모티프(예를 들어, CH1에서 하나 및 CH3에서 하나, CH1에서 하나 및 CH2에서 하나, 또는 CH2에서 하나 및 CH3에서 하나)를 포함한다.

한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 유연성 링커에 의해 분리된 변형된 설파타제 모티프를 포함하는 콘카타머(concatamer)로서 제공된다.

한 실시양태에서, Z₃은 아르기닌(R)이다. 한 실시양태에서, X₁(존재하는 경우), X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성 비하전 아미노산이다. 한 실시양태에서, X₁은 존재하는 경우 L, M, V, S 또는 T이다. 한 실시양태에서, X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 또는 C이다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 식 L(FGly')TPSR(서열번호 168)을 가진다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 하기 식의 아미노산 서열을 가진 설파타제 모티프를 포함하는 알데하이드 태그부착된 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자)를 특징으로 한다:

X₁Z₁X₂Z₂X₃Z₃

상기 식에서,

Z₁은 시스테인, 세린 또는 2-포르밀글리신 잔기이고;

Z₂는 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;

X₁은 존재하거나 부재하고, 존재할 때 임의의 아미노산이고, 단 이종 설파타제 모티프가 알데하이드 태그부착된 폴리펩타이드의 N-말단에 있을 때, X₁은 존재하고;

X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;

Z₃은 염기성 아미노산이다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 폴딩된 상태일 때 공유커플링된 항미생물 펩타이드를 용매 접근 가능한 표면 상에 제시할 수 있다.

한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 이종 설파타제 모티프이다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 비변형 설파타제 모티프이다. 또 다른 실시양태에서, 설파타제 모티프는 변형된 설파타제 모티프이다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 12개 이하(예를 들어, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 또는 6개 이하)의 아미노산 잔기를 포함하거나 이들로 구성된다.

한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 항체 분자 쇄의 N-말단, 항체 분자 쇄의 C-말단, 또는 항체 분자의 용매 접근 가능한 루프에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 항체 분자의 중쇄(또는 이의 단편)에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 중쇄의 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3)에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 중쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단)에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 중쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단) 이외의 중쇄 불변 영역 내의 영역에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 항체 분자의 경쇄(또는 이의 단편)에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 경쇄의 불변 영역에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 경쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단)에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 경쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단) 이외의 경쇄 불변 영역 내의 영역에 위치한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 복수의 설파타제 모티프를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 설파타제 모티프를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 3개 이상(예를 들어, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 4개 이상(예를 들어, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 4개의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다.

한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 항체 분자 쇄의 N-말단, 항체 분자 쇄의 C-말단, 또는 항체 분자의 용매 접근 가능한 루프에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 항체 분자의 중쇄(또는 이의 단편), 경쇄(또는 이의 단편), 또는 이들 둘 다에 위치한다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 중쇄의 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3 중 하나 이상), 경쇄의 불변 영역, 또는 이들 둘 다에 위치한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 설파타제 모티프를 각각 포함하는 2개 이상의 중쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 변형된 설파타제 모티프를 각각 포함하는 2개 이상의 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하고, 각각의 중쇄는 2개의 변형된 설파타제 모티프(예를 들어, CH1에서 하나 및 CH3에서 하나, CH1에서 하나 및 CH2에서 하나, 또는 CH2에서 하나 및 CH3에서 하나)를 포함한다.

한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 유연성 링커에 의해 분리된 변형된 설파타제 모티프를 포함하는 콘카타머로서 제공된다.

한 실시양태에서, Z₃은 아르기닌(R)이다. 한 실시양태에서, X₁(존재하는 경우), X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성 비하전 아미노산이다. 한 실시양태에서, X₁은 존재할 때 L, M, V, S 또는 T이다. 한 실시양태에서, X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 또는 C이다. 한 실시양태에서, 변형된 설파타제 모티프는 식 LCTPSR(서열번호 169)을 가진다.

한 측면에서, 본 개시내용은 항체 분자의 알데하이드와 항미생물 펩타이드의 반응성 기 사이의 반응이 일어나게 하는 조건 하에서 알데하이드 태그부착된 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 알데하이드 태그부착된 항-LPS 항체 분자)와 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 접촉시킴으로써, ADC를 생성하는 단계를 포함하는 ADC의 제조 방법을 제공한다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 2-포르밀-글리신 잔기 (예를 들어, Z₁에서 FGly')를 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 아미노옥시 또는 하이드라지드 반응성 기를 포함한다.

한 실시양태에서, 상기 방법은 반응 혼합물에서 알데하이드 태그부착된 항체 분자와 항미생물 펩타이드를 조합하는 단계를 포함한다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 항미생물 펩타이드 대 항체 분자의 원하는 비를 제공하기에 충분한 양으로 항체 분자와 접촉되거나 반응 혼합물에 제공된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드 대 항체 분자의 비는 약 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1 이상이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드 대 항체 분자의 비는 약 4:1이다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자 및 항미생물 펩타이드는 하이드라지노-이소-픽테트-스펜글러(Hydrazino-iso-Pictet-Spengler)(HIPS) 라이게이션에 의해 커플링된다. 또 다른 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자 및 항미생물 펩타이드는 옥심 및 하이드라지드와의 접합에 이은 환원에 의해 커플링된다.

한 실시양태에서, 상기 방법은 예를 들어, 반응 혼합물로부터 ADC를 단리하는(예를 들어, 정제하는) 단계를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 알데하이드 태그부착된 항체 분자가 항미생물 펩타이드와 접촉되기 전에(예를 들어, 알데하이드 태그부착된 항체 분자가 반응 혼합물에서 항미생물 펩타이드와 조합되기 전에) 폴딩된다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 방법에 의해 생성된 ADC를 제공한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 공유커플링된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 ADC, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물(예를 들어, 약학 조성물)을 제공하는 것으로, 이때 상기 항체 분자는 본원에 기재된 변형된 설파타제 모티프를 포함한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 ADC를 포함하는 반응 혼합물을 제공하는 것으로, 이때 상기 항체 분자는 본원에 기재된 설파타제 모티프(예를 들어, 변형된 설파타제 모티프)를 포함한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 세균 감염 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하기에 효과적인 양으로 ADC, 또는 ADC를 포함하는 약학 조성물을, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 세균 감염 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하는 방법을 특징으로 하고, 이때 ADC는 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 공유커플링된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하고, 상기 항체 분자는 본원에 기재된 변형된 설파타제 모티프를 포함한다.

한 실시양태에서, 세균 감염은 그람 음성 세균과 관련된다. 한 실시양태에서, 세균 감염은 슈도모나스 감염이다. 한 실시양태에서, 세균 감염은 슈도모나스 애루기노사와 관련된다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 알데하이드 태그부착된 항-LPS 항체 분자를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 에피토프에 결합하는 항체 분자 또는 ADC를 제공한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 변형된 설파타제 모티프(예를 들어, 본원에 기재된 변형된 설파타제 모티프)를 포함한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 공유커플링된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 ADC를 제공하는 것으로, 이때 항미생물 펩타이드는 (a) 라이신 접합(예를 들어, 표면에 노출된 라이신을 항체 반응성 기로서 사용함); (b) 쇄간 디설파이드(예를 들어, HC-HC 또는 HC-LC를 연결하는 디설파이드의 사용); (c) 비천연 아미노산(예를 들어, 알데하이드, 아지드 또는 알킨으로 치환된 아미노산); 또는 (d) 생분해성 중합체(예를 들어, 라이신 또는 티올)를 통해 항체 분자에 커플링된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 (a)를 통해 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 항미생물 펩타이드의 활성화된 아미노산에 직접 접합된다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 라이신은 티올 반응성 기로 전환되고, 티올 반응성 기를 가진 항체 분자는 티올을 가진 항미생물 펩타이드에 라이게이션된다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 라이신은 유리 티올로 전환되고 유리 티올을 가진 항체 분자는 티올 반응성 항미생물 펩타이드에 라이게이션된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 (b)를 통해 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 쇄간 디설파이드는 환원되고, 환원된 쇄간 디설파이드를 가진 항체 분자는 티올 반응성 항미생물 펩타이드에 라이게이션된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 (c)를 통해 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 클릭 화학반응의 이용을 통해 항미생물 펩타이드에 라이게이션된다(Kolb et al. Angew Chem Int Ed Engl. 2001; 40(11):2004-2021; Evans Australian Journal of Chemistry. 2007; 60 (6): 384-395).

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 (d)를 통해 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 생분해성 중합체에 라이게이션되고 이 중합체는 항체 분자에 라이게이션된다.

한 실시양태에서, ADC는 조성물(예를 들어, 약학 조성물)로 제공된다.

한 실시양태에서, ADC 또는 약학 조성물은 대상체에서 세균 감염(예를 들어, 감염은 그람 음성 세균, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사와 관련됨) 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하는 데 사용된다.

따라서, 특정 측면에서, 본 개시내용은 하기 특성들 중 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개 또는 모두)을 가진 항체 분자-약물 접합체(ADC), 예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자 및 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 ADC를 제공한다:

a) 고친화성으로, 예를 들어, 약 100 nM 미만, 전형적으로 약 10 nM, 보다 전형적으로 약 10 내지 0.01 nM, 약 5 내지 0.01 nM, 약 3 내지 0.05 nM, 약 1 내지 0.1 nM 또는 더 강한, 예를 들어, 약 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05 또는 0.01 nM 미만의 해리 상수(K_D)로 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 그람 음성 세균(예를 들어, 장내세균과의 하나 이상의 세균(예를 들어, 클렙시엘라(Klebsiella), 엔테로박터(Enterobacter), 시겔라(Shigella), 에스케리키아(Escherichia), 살모넬라(Salmonella) 또는 시트로박터(Citrobacter), 예를 들어, 범-내성 장내세균과), 슈도모나스의 하나 이상의 세균, 악시네토박터(Acinetobacter)의 하나 이상의 세균, 또는 이들의 임의의 조합)에 결합함;

b) 고친화성으로, 예를 들어, 약 100 nM 미만, 전형적으로 약 10 nM, 보다 전형적으로 약 10 내지 0.01 nM, 약 5 내지 0.01 nM, 약 3 내지 0.05 nM, 약 1 내지 0.1 nM 또는 더 강한, 예를 들어, 약 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05 또는 0.01 nM 미만의 해리 상수(K_D)로 지질다당류(LPS)에 결합함,

c) 예를 들어, 본원에 기재된 방법으로, 예를 들어, ADC의 최소 억제 농도(MIC)를 측정함으로써 확인될 때, 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 하나 이상의 그람 음성 세균)을 억제함,

d) 예를 들어, 본원에 기재된 방법에 의해 측정될 때, 예를 들어, 몰 기준으로 항미생물 펩타이드 단독에 비해 더 낮은 MIC, 예를 들어, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배, 200배, 500배 또는 1,000배 더 낮은 MIC로 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 하나 이상의 그람 음성 세균)을 억제함,

e) 예를 들어, 본원에 기재된 방법으로, 예를 들어, 최소 살균 농도(MBC)를 측정함으로써 확인될 때, 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 하나 이상의 그람 음성 세균)의 생존력을 감소시킴,

f) 예를 들어, 본원에 기재된 방법에 의해 측정될 때, 예를 들어, 몰 기준으로 항미생물 펩타이드 단독에 비해 더 낮은 MBC, 예를 들어, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배, 200배, 500배 또는 1,000배 더 낮은 MBC로 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 하나 이상의 그람 음성 세균)의 생존력을 감소시킴,

g) 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, OPA 어세이에 의해 확인될 때, 옵소닌식작용 활성(OPA)을 표시함,

h) LPS의 에피토프, 예를 들어, 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6에 의해 인식되는 에피토프와 동일하거나 유사한 에피토프에 특이적으로 결합함,

i) 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6과 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

j) 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6을 포함하는 ADC와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

k) 표 1 또는 3에 기재된 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 분자와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

l) 표 1 또는 3에 기재된 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 ADC와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

m) 표 1 또는 3에 기재된 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 중쇄 CDR 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 경쇄 CDR, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 중쇄 CDR 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 경쇄 CDR을 포함하는 항체 분자와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

n) 표 1 또는 3에 기재된 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 중쇄 CDR 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 경쇄 CDR, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 중쇄 CDR 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 경쇄 CDR을 포함하는 ADC와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

o) 표 1 또는 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

p) 표 1 또는 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 ADC와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

q) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6인 제2 항체 분자와 그람 음성 세균, LPS 또는 이들 둘 다의 결합을 억제, 예를 들어, 경쟁적으로 억제함,

r) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6인 제2 항체 분자를 포함하는 제2 ADC와 그람 음성 세균, LPS 또는 이들 둘 다의 결합을 억제, 예를 들어, 경쟁적으로 억제함,

s) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6인 제2 항체 분자와 동일하거나 중첩되는 에피토프에 결합함,

t) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6인 제2 항체 분자를 포함하는 제2 ADC와 동일하거나 중첩되는 에피토프에 결합함,

u) 그람 음성 세균, LPS 또는 이들 둘 다와의 결합에 대해 제2 항체 분자와 경쟁하고, 이때 제2 항체 분자가 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6임,

v) 그람 음성 세균, LPS 또는 이들 둘 다와의 결합에 대해 제2 ADC를 포함하는 제2 ADC와 경쟁하고, 이때 제2 항체 분자가 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6임,

w) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 하나 이상의 생물학적 특성을 가짐,

x) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6을 포함하는 ADC의 하나 이상의 생물학적 특성을 가짐,

y) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6을 포함하는 ADC의 하나 이상의 약물동력학적 특성을 가짐,

z) 예를 들어, 본원에 기재된 혼합 미생물 사멸 어세이에 의해 확인될 때, 제2 속, 종 또는 아종의 그람 음성 세균(예를 들어, 이. 콜라이, 클렙시엘라 종 또는 이들 둘 다)의 생존력의 감소에 비해 높은 선택성, 예를 들어, 적어도 2배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배, 200배, 500배 또는 1000배 더 높은 % 사멸로 제1 속, 종 또는 아종의 그람 음성 세균(예를 들어, 슈도모나스)의 생존력을 감소시킴,

aa) 고친화성, 예를 들어, 약 200 pM 이하, 예를 들어, 약 150 pM 이하, 약 120 pM 이하, 약 100 pM 이하, 약 80 pM 이하, 약 60 pM 이하, 또는 약 40 pM 이하, 예를 들어, 약 40 pM 내지 약 120 pM, 약 50 pM 내지 110 pM, 약 60 pM 내지 100 pM, 약 40 pM 내지 80 pM, 또는 80 pM 내지 120 pM의 결합력 EC₅₀으로 하나 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합함, 또는

bb) 예를 들어, 동물 모델, 예를 들어, 본원에 기재된 뮤린 급성 폐렴 모델을 사용함으로써 확인될 때, 예를 들어, 적어도 2배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배, 200배, 500배, 1000배 이상의 세균 부하 감소로 생체내에서 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 하나 이상의 그람 음성 세균, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사)을 억제함.

따라서, 특정 측면에서, 본 개시내용은 하기 특성들 중 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개 또는 모두)을 가진 항체 분자, 예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자를 제공한다:

a) 고친화성으로, 예를 들어, 약 100 nM 미만, 전형적으로 약 10 nM, 보다 전형적으로 약 10 내지 0.01 nM, 약 5 내지 0.01 nM, 약 3 내지 0.05 nM, 약 1 내지 0.1 nM 또는 더 강한, 예를 들어, 약 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05 또는 0.01 nM 미만의 해리 상수(K_D)로 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 그람 음성 세균(예를 들어, 장내세균과의 하나 이상의 세균(예를 들어, 클렙시엘라, 엔테로박터, 시겔라, 에스케리키아, 살모넬라 또는 시트로박터, 예를 들어, 범-내성 장내세균과), 슈도모나스의 하나 이상의 세균, 악시네토박터의 하나 이상의 세균, 또는 이들의 임의의 조합)에 결합함;

c) 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, OPA 어세이에 의해 확인될 때, 옵소닌식작용 활성(OPA)을 표시함,

d) LPS의 에피토프, 예를 들어, 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6에 의해 인식되는 에피토프와 동일하거나 유사한 에피토프에 특이적으로 결합함,

e) 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6과 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

f) 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6을 포함하는 ADC와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

g) 표 1 또는 3에 기재된 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 분자와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

h) 표 1 또는 3에 기재된 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 중쇄 CDR 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 경쇄 CDR, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 중쇄 CDR 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 경쇄 CDR을 포함하는 항체 분자와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

i) 표 1 또는 3에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자와 동일하거나 유사한 결합 친화성 또는 특이성, 또는 이들 둘 다를 보임,

j) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6인 제2 항체 분자와 그람 음성 세균, LPS 또는 이들 둘 다의 결합을 억제, 예를 들어, 경쟁적으로 억제함,

k) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6인 제2 항체 분자와 동일하거나 중첩되는 에피토프에 결합함,

l) 그람 음성 세균, LPS 또는 이들 둘 다와의 결합에 대해 제2 항체 분자와 경쟁하고, 이때 제2 항체 분자가 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6임,

m) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 하나 이상의 생물학적 특성을 가짐,

n) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 하나 이상의 생물학적 특성을 가짐,

o) 표 1 또는 3으로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, mAb001(예를 들어, 인간화된 mAb001), A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6의 하나 이상의 약물동력학적 특성을 가짐,

p) 고친화성으로, 예를 들어, 약 200 pM 이하, 예를 들어, 약 150 pM 이하, 약 120 pM 이하, 약 100 pM 이하, 약 80 pM 이하, 약 60 pM 이하, 또는 약 40 pM 이하, 예를 들어, 약 40 pM 내지 약 120 pM, 약 50 pM 내지 110 pM, 약 60 pM 내지 100 pM, 약 40 pM 내지 80 pM, 또는 80 pM 내지 120 pM의 결합력 EC₅₀으로 하나 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합함.

한 측면에서, 본 개시내용은 a) 지질다당류(LPS)에 결합하는 항체 분자 및 b) 항미생물 펩타이드를 포함하는 항체 분자-약물 접합체(ADC)를 특징으로 한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 LPS의 코어 오당류 영역에 결합한다. 한 실시양태에서, 코어 오당류 영역은 하나 이상(예를 들어, 2개)의 Kdo 잔기 및 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 Hep 잔기를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 하나 이상(예를 들어, 2개)의 Kdo 잔기, 또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 Hep 잔기, 또는 이들의 임의의 조합에 결합한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109, 145 또는 146)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109, 145 또는 146)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109, 145 또는 146)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109, 145 또는 146)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109, 145 또는 146)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109, 145 또는 146)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110, 138, 140 또는 144)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 하나 이상의 인간 또는 인간 유래 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 프레임워크를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 103 또는 115 내지 118 중 임의의 서열)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 103 또는 115 내지 118 중 임의의 서열)을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 104 또는 119 내지 137 중 임의의 서열)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 104 또는 119 내지 137 중 임의의 서열)을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 103 또는 115 내지 118 중 임의의 서열)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 104 또는 119 내지 137 중 임의의 서열)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 103 또는 115 내지 118 중 임의의 서열)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001 또는 인간화된 mAb001의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 104 또는 119 내지 137 중 임의의 서열)을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 2개의 중쇄 가변 영역 및 2개의 경쇄 가변 영역을 포함하거나 이들로 구성된다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단일 쇄 Fv 단편(scFv)을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 또는 이들 둘 다를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 IgG 항체 분자, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체 분자이다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 IgM 항체 분자가 아니다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 카파 또는 람다 경쇄로부터의 경쇄 불변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 단일클론 항체 분자이다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 인간화된 항체 분자이다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 단리된 항체 분자이다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 합성 항체 분자이다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 예를 들어, 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 예를 들어, 하나 이상의 그람 음성 세균에 결합한다.

한 실시양태에서, 하나 이상의 그람 음성 세균은 장내세균과의 종(예를 들어, 클렙시엘라, 엔테로박터, 시겔라, 에스케리키아, 살모넬라, 예르시니아 또는 시트로박터, 예를 들어, 범-내성 장내세균과의 종), 슈도모나스의 종, 악시네토박터의 종, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumonia)(예를 들어, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 오자나(ozaenae), 클렙시엘라 뉴모니아 아종 뉴모니아(pneumoniae) 또는 클렙시엘라 뉴모니아 아종 리노스클레로마티스(rhinoscleromatis)), 엔테로박터 칸세로게노우스(Enterobacter cancerogenous), 엔테로박터 클로아카(Enterobacter cloacae), 엔테로박터 호르마케이(Enterobacter hormaechei), 엔테로박터 아스부리아(Enterobacter asburiae), 시겔라 보이디이(Shigella boydii), 시겔라 디센테리아(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri), 시겔라 손네이(Shigella sonnei), 에스케리키아 콜라이(예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 11775, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 에스케리키아 콜라이 ATCC 35401, 또는 에스케리키아 콜라이 ATCC 43895), 에스케리키아 페르구소니이(Escherichia fergusonii), 살모넬라 콜레라수이스(Salmonella choleraesuis), 살모넬라 콜레라수이스 아종 인디카(indica), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 살모넬라 비르초우(Salmonella virchow), 살모넬라 파라티피(Salmonella paratyphi) B, 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 살모넬라 파라티피(Salmonella paratyphi) A, 살모넬라 티피(Salmonella typhi), 살모넬라 콜레라수이스 아종 아리조나(arizonae), 살모넬라 콜레라수이스 아종 디아리조나(diarizonae), 살모넬라 콜레라수이스 아종 아우테나(houtenae), 살모넬라 본고리(Salmonella bongori), 시트로박터 세들라키이(Citrobacter sedlakii), 시트로박터 브라아키이(Citrobacter braakii), 시트로박터 웨르크만니이(Citrobacter werkmanii), 시트로박터 프레운디이(Citrobacter freundii), 시트로박터 영가(Citrobacter youngae), 시트로박터 아말로나티쿠스(Citrobacter amalonaticus), 예르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica), 예르시니아 프레데리크세니이(Yersinia frederiksenii), 예르시니아 페스티스(Yersinia pestis), 예르시니아 슈도튜버큘로시스(Yersinia pseudotuberculosis), 슈도모나스 애루기노사, 악시네토박터 바우만니이(Acinetobacter baumannii) 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상에 결합한다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 슈도모나스 애루기노사에 결합한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 내성 슈도모나스 애루기노사 균주(예를 들어, 본원에 기재된 하나 이상의 항생제에 대한 내성을 가짐)에 결합한다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 돌연변이체 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합한다. 한 실시양태에서, 슈도모나스 애루기노사 균주는 wapQ 유전자 내에 돌연변이를 가진다. 한 실시양태에서, 슈도모나스 애루기노사 균주는 galU 유전자 내에 돌연변이를 가진다.

한 실시양태에서, 하나 이상의 세균은 하나 이상의 항생제 내성 세균, 예를 들어, 하나 이상의 다중약물 내성 그람 음성 세균이다.

한 실시양태에서, 하나 이상의 항생제 내성 세균은 슈도모나스(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사), 장내세균과(예를 들어, 클렙시엘라 뉴모니아 또는 이. 콜라이), 또는 악시네토박터(예를 들어, 악시네토박터 바우만니이)로부터 선택된다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 엔테로코커스 파시움(Enterococcus faecium)(예를 들어, 반코마이신 내성(VRE) 엔테로코커스 파시움), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)(예를 들어, 메티실린 내성(MRSA) 스타필로코커스 아우레우스), 클로스트리듐 디피실(Clostridium difficile), 악시네토박터 바우만니이(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 악시네토박터), 슈도모나스 애루기노사(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 슈도모나스 애루기노사, 예를 들어, 카르바페넴 내성 슈도모나스 애루기노사), 장내세균과(예를 들어, 이. 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아 또는 엔테로박터 종, 예를 들어, 카르바페넴 내성 장내세균과(CRE)), 네이세리아 고노로에아(N. gonorrhoaeae)(예를 들어, 약물 내성 네이세리아 고노로에아), 살모넬라(예를 들어, 약물 내성 살모넬라), 시겔라(예를 들어, 약물 내성 시겔라), 확장된 스펙트럼 β-락타마제를 생성하는 세균(ESBL), 또는 마이코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis)(예를 들어, 약물 내성 마이코박테리움 튜버큘로시스) 중 하나 이상에 결합한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합한다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 적어도 23개의 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상)의 다중약물 내성 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 예를 들어, ELISA 방법에 의해 측정될 때, 고친화성으로, 예를 들어, 약 10 nM 미만의 K_D로 LPS에 결합한다.

한 실시양태에서 ADC 또는 항체 분자는 1X10^-4, 5X10^-5 또는 1X10^-5 s^-1보다 더 느린 K_off로 LPS에 결합한다. 한 실시양태에서 ADC 또는 항체 분자는 1X10⁴, 5X10⁴, 1X10⁵ 또는 5X10⁵ M^-1s^-1보다 더 빠른 K_on으로 LPS에 결합한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, OPA 어세이에 의해 확인될 때, 옵소닌식작용 활성을 가진다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자(예를 들어, VSX-1)는 예를 들어, 약 10 ㎍/㎖(예를 들어, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5 또는 15 ㎍/㎖)의 열 불활성화된 보체의 존재 하에 세균을 사멸시켜, 약 1 로그 감소(예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4 또는 1.5 로그 감소)를 야기한다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 다형핵 호중구의 존재 하에 열 불활성화되지 않은 보체와 함께 세균을 사멸시켜, 약 3 로그(예를 들어, 2, 2.5, 3, 3.5, 4 로그) 초과의 사멸 활성을 야기한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 검출 가능한 용혈 활성을 갖지 않는다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 최소 용혈 활성을 가진다. 한 실시양태에서, 항체 분자(예를 들어, VSX-1)는 포유동물 세포(예를 들어, 293T 세포)에 대해 검출 가능한 세포독성 활성을 갖지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자(예를 들어, VSX-1)는 포유동물 세포(예를 들어, 293T 세포)에 대해 무시할만한 세포독성 활성을 가진다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자(예를 들어, VSX-1)는 항생제, 예를 들어, 항-슈도모나스 항생제와 상승작용적 활성을 나타낸다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자와 항생제의 조합의 활성은 ADC 또는 항체 분자, 또는 항생제 단독의 활성보다 더 크다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 LPS에서 하나 이상(예를 들어, 2개)의 Kdo 잔기 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 Hep 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다.

한 실시양태에서, a) 지질다당류(LPS)에 결합하는 항체 분자는 b) 항미생물 펩타이드에 커플링(예를 들어, 융합)된다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드의 N-말단 쪽에 있다. 또 다른 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드의 C-말단 쪽에 있다. 한 실시양태에서, VH는 항미생물 펩타이드에 융합되어, 예를 들어, 오픈 리딩 프레임(open reading frame)에 의해 코딩된 융합 폴리펩타이드를 형성한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드에 간접적으로 커플링(예를 들어, 융합)되고, 예를 들어, 이때 중쇄 가변 영역의 C-말단은 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해 항미생물 펩타이드의 N-말단에 커플링(예를 들어, 융합)된다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드의 N-말단 쪽에 있다. 또 다른 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드의 C-말단 쪽에 있다. 한 실시양태에서, VL은 항미생물 펩타이드에 융합되어, 예를 들어, 오픈 리딩 프레임에 의해 코딩된 융합 폴리펩타이드를 형성한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드에 간접적으로 커플링(예를 들어, 융합)되고, 예를 들어, 이때 경쇄 가변 영역의 C-말단은 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해 항미생물 펩타이드의 N-말단에 커플링(예를 들어, 융합)된다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 소르타제 인식 서열을 포함하는 소르타제 수용체 서열을 포함한다. 예를 들어, 소르타제 인식 서열은 아미노산 서열 LPXTG(예를 들어, 스타필로코커스 아우레우스 소르타제 A의 경우)(서열번호 160) 또는 LPXTA(예를 들어, 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes) 소르타제 A의 경우)(서열번호 161)를 가질 수 있고, 이때 X는 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 한 실시양태에서, 소르타제 인식 서열은 LPETG(서열번호 162)이다. 소르타제 수용체 서열은 소르타제 인식 서열 이외의 추가 서열(들)을 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 소르타제 수용체 서열은 링커 서열, 예를 들어, 글리신-세린 펩타이드 링커 서열의 직렬 반복부(예를 들어, (GS)₁₅(서열번호 157))를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 중쇄는 예를 들어, C-말단에서 소르타제 수용체 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 경쇄는 예를 들어, C-말단에서 소르타제 수용체 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자의 중쇄는 제1 소르타제 수용체 서열을 포함하고 항체 분자의 경쇄는 제2 소르타제 수용체 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 소르타제 수용체 서열, 예를 들어, 제1 소르타제 인식 서열은 아미노산 서열 (GS)₆LPETGGG(서열번호 24)를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 소르타제 수용체 서열, 예를 들어, 제2 소르타제 수용체 서열은 아미노산 서열 P(G₄S)₂LPETGGSG(서열 번호 26)를 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 도 37에 기재된 바와 같이 링커 서열, 소르타제 인식 서열, 또는 이들 둘 다를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC의 각각의 중쇄는 도 37에 기재된 바와 같이 링커 서열, 소르타제 인식 서열, 또는 이들 둘 다를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC의 각각의 경쇄는 도 37에 기재된 바와 같이 링커 서열, 소르타제 인식 서열, 또는 이들 둘 다를 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 항미생물 펩타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 4개의 항미생물 펩타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드 중 적어도 2개는 동일하거나 실질적으로 동일하다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드 중 적어도 2개는 상이하다. 예를 들어, 복수의 항미생물 펩타이드는 항체 분자(예를 들어, 중쇄(또는 이의 일부), 경쇄(또는 이의 일부), 또는 이들 둘 다)에 커플링(예를 들어, 융합)될 수 있다.

한 실시양태에서, ADC는 2개 이상(예를 들어, 3개 또는 4개)의 동일하거나 실질적으로 동일한 항미생물 펩타이드를 포함하고, 이들 각각은 예를 들어, 간접적으로, 예를 들어, 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해 중쇄 가변 영역에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, ADC는 2개 이상(예를 들어, 3개 또는 4개)의 동일하거나 실질적으로 동일한 항미생물 펩타이드를 포함하고, 이들 각각은 예를 들어, 간접적으로, 예를 들어, 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해 경쇄 가변 영역에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, ADC는 2개의 동일하거나 실질적으로 동일한 항미생물 펩타이드를 포함하고, 이들 각각은 예를 들어, 간접적으로, 예를 들어, 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해 중쇄 가변 영역에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, ADC는 2개의 동일하거나 실질적으로 동일한 항미생물 펩타이드를 포함하고, 이들 각각은 예를 들어, 간접적으로, 예를 들어, 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해 경쇄 가변 영역에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, ADC는 적어도 4개의 동일하거나 실질적으로 동일한 항미생물 펩타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 2개의 중쇄 가변 영역 및 2개의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 각각의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 예를 들어, 간접적으로, 예를 들어, 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해 적어도 하나의 항미생물 펩타이드에 커플링(예를 들어, 융합)된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 효소 접합(예를 들어, 소르타제 반응)에 의해 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 화학 접합에 의해 항체 분자에 커플링된다.

한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 항미생물 펩타이드 단독의 최소 억제 농도(MIC)보다 더 낮은, 예를 들어, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 더 낮은 MIC를 가짐으로써, 항미생물 펩타이드 또는 항체 분자 단독보다 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)을 억제하는, 예를 들어, 이러한 세균의 생장, 병독성 또는 감염성을 억제하는 데 더 효과적이다.

한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 항미생물 펩타이드 단독의 MIC보다 더 낮은 예를 들어, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 더 낮은 최소 살균 농도(MBC)를 가짐으로써, 항미생물 펩타이드 또는 항체 분자 단독보다 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)의 생존력을 감소시키는, 예를 들어, 이러한 세균을 사멸시키는 데 더 효과적이다.

한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, OPA 어세이에 의해 확인될 때, 옵소닌식작용 활성을 가진다(예를 들어, 호중구의 Fc 수용체(FcR)에 결합될 때 식세포화 된다).

한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 그람 양성 세균(예를 들어, 그람 양성 세균)에 대한 최소 억제 농도(MIC)보다 더 낮은, 예를 들어, 적어도 2배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배, 200배, 500배 또는 1000배 더 낮은, 그람 음성 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)에 대한 MIC를 가짐으로써, 그람 양성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 양성 세균)을 억제하지 않는다, 예를 들어, 이러한 세균의 생장, 병독성 또는 감염성을 억제하지 않는다.

한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 그람 양성 세균(예를 들어, 그람 양성 세균)에 대한 최소 살균 농도(MBC)보다 더 낮은, 예를 들어, 적어도 2배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배, 200배, 500배 또는 1000배 더 낮은, 그람 음성 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)에 대한 MBC를 가짐으로써, 그람 양성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 양성 세균)의 생존력을 감소시키지 않는다, 예를 들어, 이러한 세균을 사멸시키지 않는다. 한 실시양태에서, 그람 양성 세균은 스타필로코커스 아우레우스이다.

한 실시양태에서, ADC는 마이크로바이옴을 변경시키지 않거나 유의미하게 변경시키지 않는다(예를 들어, 마이크로바이옴이 보존됨).

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 알파-나선형 항미생물 펩타이드, 예를 들어, 잔기 i 및 i+4가 동일한 면에 있는 회전(turn)을 포함하는 펩타이드를 포함하거나 이로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 아미노산 서열, 예를 들어, 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 아미노산 서열, 예를 들어, 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 카르복스아미드 기(예를 들어, C-말단 카르복스아미드 작용기)를 포함한다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상의 D-아미노산을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항미생물 펩타이드의 아미노산 잔기의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%는 D-아미노산이다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 제1 시스테인 잔기 및 제2 시스테인 잔기를 포함하고, 이때 제1 시스테인 잔기는 제2 시스테인 잔기에 가교결합된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 장내세균과의 적어도 한 종(예를 들어, 클렙시엘라, 엔테로박터, 시겔라, 에스케리키아, 살모넬라, 예르시니아 또는 시트로박터, 예를 들어, 범-내성 장내세균과의 하나 이상의 종), 슈도모나스의 적어도 한 종 또는 악시네토박터의 적어도 한 종 중 2개, 3개 또는 모두에 대한 항미생물 활성을 가진 광범위 스펙트럼 항미생물 펩타이드이다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 클렙시엘라의 적어도 한 종, 엔테로박터의 적어도 한 종, 시겔라의 적어도 한 종, 에스케리키아의 적어도 한 종, 살모넬라의 적어도 한 종, 예르시니아의 적어도 한 종, 또는 시트로박터의 적어도 한 종 중 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 모두에 대한 항미생물 활성을 가진 광범위 스펙트럼 항미생물 펩타이드이다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 세균 균주, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이(예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922), 슈도모나스 애루기노사(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사 ATCC 27853), 또는 이들 둘 다에 대한 100 ㎍/㎖ 미만, 예를 들어, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 또는 5 ㎍/㎖ 미만의 최소 억제 농도(MIC)를 가진다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 세균 균주, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이(예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922), 슈도모나스 애루기노사(슈도모나스 애루기노사 ATCC 27853), 또는 이들 둘 다에 대한 100 ㎍/㎖ 미만, 예를 들어, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 또는 5 ㎍/㎖ 미만의 최소 살균 농도(MBC)를 가진다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 각각 적혈구 용혈 어세이 및 MIC 어세이에 의해 측정될 때, 낮은 용혈 활성을 가진다, 예를 들어, 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)에 대해 4:1보다 더 큰(예를 들어, 8:1, 16:1, 24:1 또는 32:1보다 더 큰) 부분적 용해 농도(PLC) 대 MIC 비를 가진다. 한 실시양태에서, PLC는 적혈구의 50%의 용해를 야기하는 농도(예를 들어, 최소 농도)이다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 각각 적혈구 용혈 어세이 및 MIC 어세이에 의해 측정될 때, 낮은 용혈 활성을 가진다, 예를 들어, 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)에 대해 4:1보다 더 큰(예를 들어, 8:1, 16:1, 24:1 또는 32:1보다 더 큰) 부분적 용해 농도(PLC) 대 MIC 비를 가진다. 한 실시양태에서, MLC는 적혈구의 100%의 용해를 야기하는 농도(예를 들어, 최소 농도)이다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물, 예를 들어, 약학 조성물을 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 세균 감염 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 세균 감염 또는 관련 장애의 치료 또는 예방에 효과적인 양으로 본원에 기재된 ADC 또는 본원에 기재된 약학 조성물을, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 특징으로 한다.

한 실시양태에서, 세균 감염은 그람 음성 세균 감염이다. 한 실시양태에서, 장애는 그람 음성 세균 감염에 의해 야기되거나 그람 음성 세균 감염과 관련되어 있다.

한 실시양태에서, ADC는 0.1 내지 100 mg/kg, 예를 들어, 0.1 내지 50 mg/kg 또는 1 내지 10 mg/kg, 예를 들어, 1 내지 5 mg/kg, 또는 5 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 한 실시양태에서, ADC는 정맥내로, 피하로 또는 비강내로 또는 흡입에 의해 투여된다.

한 실시양태에서, ADC는 세균 감염 또는 관련 장애와 관련된 증상의 발병 전에 투여된다. 한 실시양태에서, ADC는 세균 감염 또는 관련 장애와 관련된 증상의 발병 시 또는 후에 투여된다.

한 실시양태에서, 대상체는 폐렴(예를 들어, 지역사회 획득 폐렴, 환기구 관련 세균성 폐렴(VABP) 및 병원 획득 세균성 폐렴(HABP)), 요로 감염(UTI), 패혈증, 수막염, 설사(예를 들어, 여행자의 설사), 연조직 감염, 피부 감염, 균혈증, 호흡기 감염(예를 들어, 하부 호흡관 감염), 심내막염, 복강내 감염, 패혈성 관절염, 골수염, CNS 감염, 안과 감염, 담낭염, 담관염, 수막염(예를 들어, 신생아 수막염), 장티푸스, 식중독, 위장염, 장열, 세균성이질, 혈류 감염, 복강내 패혈증, 뇌농양, 수막염, 패혈증(예를 들어, 신생아 패혈증), 관절 감염, 뼈 감염, 위장 감염 또는 상처 감염 중 하나 이상을 가진다. 한 실시양태에서, 대상체는 약화된 면역 시스템을 가진다. 한 실시양태에서, 대상체는 낭성 섬유증을 가진다. 한 실시양태에서, 대상체는 화상을 앓는다.

한 실시양태에서, 세균 감염은 병원내 감염 또는 병원 획득 감염이다. 한 실시양태에서, 세균 감염과 관련된 장애는 병원내 감염 또는 병원 획득 감염과 관련되어 있다.

한 실시양태에서, 대상체는 인간 또는 동물이다. 한 실시양태에서, 대상체는 면역손상된 환자, 예를 들어, HIV 감염 또는 AIDS, 암, 고형 장기 이식, 줄기 세포 이식, 겸상 세포 질환 또는 무비증, 또는 선천성 면역 결핍, 만성 염증성 병태, 인공 와우, 영양실조 또는 뇌척수액 누출을 가진 대상체이다. 한 실시양태에서, 대상체는 건강 전문가이다.

한 실시양태에서, 대상체는 18세 이하, 예를 들어, 15세 이하, 12세 이하, 9세 이하, 6세 이하 또는 3세 이하의 대상체이다. 한 실시양태에서, 대상체는 적어도 60세, 예를 들어, 적어도 65세, 적어도 70세, 적어도 75세 또는 적어도 80세의 대상체이다.

한 실시양태에서, 방법은 제2 항미생물 작용제 또는 요법, 예를 들어, 항생제 또는 파지 요법을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 항생제는 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신, 젠타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 토브라마이신, 파로모마이신, 스트렙토마이신, 또는 스펙티노마이신), 안사마이신(예를 들어, 겔다나마이신, 허비마이신, 또는 리팍시민), 카르바세펨(예를 들어, 로라카르베프), 카르바페넴(예를 들어, 에르타페넴, 도리페넴, 이미페넴/실라스타틴, 또는 메로페넴), 세팔로스포린(세파드록실, 세파졸린, 세팔로틴, 세팔로씬, 세팔렉신, 세파클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존(예를 들어, 설박탐과 병용), 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, 세페핌, 세프타롤린 포사밀, 또는 세프토비프롤), 글리코펩타이드(예를 들어, 테이코플라닌, 반코마이신, 텔라반신, 달바반신, 또는 오리타반신), 린코사마이드(예를 들어, 클린다마이신 또는 린코마이신), 리포펩타이드(예를 들어, 댑토마이신), 마크롤라이드(예를 들어, 아지쓰로마이신, 클라리쓰로마이신, 디리쓰로마이신, 에리쓰로마이신, 록시쓰로마이신, 트롤레안도마이신, 텔리쓰로마이신, 또는 스피라마이신), 모노박탐(예를 들어, 아즈트레오남), 니트로푸란(예를 들어, 푸라졸리돈 또는 니트로푸란토인), 옥사졸리디논(예를 들어, 리네졸리드, 포시졸리드, 라데졸리드, 토레졸리드), 페니실린(예를 들어, 아목시실린, 암피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린 g, 페니실린 v, 피페라실린, 페니실린 g, 테모실린, 또는 티카르실린), 페니실린 조합(예를 들어, 아목시실린/클라불라네이트, 암피실린/설박탐, 피페라실린/타조박탐, 또는 티카르실린/클라불라네이트), 폴리펩타이드(예를 들어, 바시트라신, 콜리스틴, 또는 폴리믹신 b), 퀴놀론/플루오로퀴놀론(예를 들어, 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 목시플록사신, 날리딕스산, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 스파르플록사신, 또는 테마플록사신), 설폰아미드(예를 들어, 마페나이드, 설파세타마이드, 설파디아진, 은 설파디아진, 설파디메톡신, 설파메티졸, 설파메톡사졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸), 또는 설폰아미도크리소이딘), 테트라사이클린(예를 들어, 데메클로사이클린, 독시사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 또는 테트라사이클린), 마이코박테리아에 대한 약물(예를 들어, 클로파지민, 댑손, 카프레오마이신, 사이클로세린, 에탐부톨, 에티온아미드, 이소니아지드, 피라진아미드, 리팜핀, 리파부틴, 리파펜틴, 또는 스트렙토마이신), 또는 기타(예를 들어, 아르스페나민, 클로람페니콜, 포스포마이신, 푸시딘산, 메트로니다졸, 무피로신, 플라텐시마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 티암페니콜, 티게사이클린, 티니다졸, 또는 트리메토프림)으로 구성된 군으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, 항생제는 레보플록사신, 시프로플록사신, 젠타마이신, 세프트리악손, 오플록사신, 아미카신, 토브라마이신, 아즈트레오남, 또는 이미페넴/실라스타틴으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 항생제는 콜리스틴 또는 메로페넴이다.

한 실시양태에서, 제2 항미생물 작용제 또는 요법은 ADC가 투여되기 전에, ADC의 투여와 동시에, 또는 ADC가 투여된 후에 투여된다.

조합 투여될 때, ADC, 추가 작용제(예를 들어, 제2 또는 제3 작용제), 또는 이들 둘 다는 예를 들어, 단일요법으로서 개별적으로 사용된 각각의 작용제의 양 또는 용량보다 더 높거나 더 낮거나, 이 양 또는 용량과 동일한 양 또는 용량으로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, ADC, 추가 작용제(예를 들어, 제2 또는 제3 작용제), 또는 이들 둘 다의 투여되는 양 또는 용량은 예를 들어, 단일요법으로서 개별적으로 사용된 각각의 작용제의 양 또는 용량보다 더 낮다(예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 더 낮다). 또 다른 실시양태에서, 원하는 효과(예를 들어, 세균 생장의 억제 또는 세균 감염의 치료)를 야기하는 ADC, 추가 작용제(예를 들어, 제2 또는 제3 작용제), 또는 이들 둘 다의 양 또는 용량은 더 낮다(예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 더 낮다).

한 실시양태에서, ADC 및 제2 항미생물 작용제 또는 요법의 투여는 본원에 기재된 세균, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사를 억제하는(예를 들어, 사멸시키는) 데 있어서 상승작용적 효과를 야기한다. 예를 들어, ADC가 그의 최소 억제 농도(MIC)의 약 50%로 사용될 때, 제2 항미생물 작용제의 MIC는 적어도 2배, 4배, 8배, 12배, 16배, 20배, 24배, 28배, 32배, 36배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 감소된다.

한 측면에서, 본 개시내용은 세균 감염(예를 들어, 그람 음성 세균 감염)을 억제하거나 감소시키는 방법으로서, 이러한 억제 또는 감소를 필요로 하는 (예를 들어, 샘플 중의) 세포 또는 대상체를, 세균 감염의 억제 또는 감소에 효과적인 양의 본원에 기재된 ADC 또는 본원에 기재된 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법을 특징으로 한다.

한 실시양태에서, ADC는 시험관내에서, 생체외에서 또는 생체내에서 세포 또는 대상체와 접촉된다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 세균 감염(예를 들어, 그람 음성 세균 감염) 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하는 데 사용될, 본원에 기재된 ADC를 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 세균 감염(예를 들어, 그람 음성 세균 감염) 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서 본원에 기재된 ADC의 용도를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC 또는 본원에 기재된 약학 조성물을 포함하는 키트를 특징으로 한다.

한 실시양태에서, 키트는 ADC 또는 약학 조성물의 사용을 위한 지침서도 포함한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC 또는 본원에 기재된 약학 조성물을 포함하는 용기를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC, 예를 들어, VH, VL 또는 이들 둘 다; 또는 본원에 기재된 바와 같이 항미생물 펩타이드에 커플링(예를 들어, 융합)된, 본원에 기재된 항체 분자의 중쇄, 경쇄 또는 이들 둘 다를 코딩하는 핵산 분자(예를 들어, 단리된 핵산 분자)를 특징으로 한다.

한 실시양태에서, 핵산 분자는 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어, 서열번호 81 내지 93, 113 또는 114 중 임의의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 핵산 분자를 포함하는 벡터를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 핵산 분자 또는 본원에 기재된 벡터를 포함하는 세포(예를 들어, 단리된 세포)를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC를 제조하는 방법으로서, ADC의 생성을 허용하는 조건 하에서 본원에 기재된 세포를 배양함으로써, 본원에 기재된 ADC를 제조하는 단계를 포함하는 방법을 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 ADC를 제조하는 방법으로서, 소르타제 매개 반응이 일어나게 하는 조건 하에서 소르타제의 존재 하에 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자)를 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드 및 임의적으로 소르타제 공여체 서열을 포함하는 펩타이드)와 접촉시킴으로써, ADC를 제조하는 단계를 포함하는 방법을 특징으로 한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 소르타제 수용체 서열, 예를 들어, 본원에 기재된 소르타제 수용체 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 중쇄는 예를 들어, C-말단에서 소르타제 수용체 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 경쇄는 예를 들어, C-말단에서 소르타제 수용체 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 소르타제 수용체 서열은 링커 서열, 예를 들어, 글리신-세린 펩타이드 링커 서열의 탠덤 반복부를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자의 중쇄는 제1 소르타제 수용체 서열을 포함하고, 항체 분자의 경쇄는 제2 소르타제 수용체 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 소르타제 수용체 서열, 예를 들어, 제1 소르타제 인식 서열은 아미노산 서열 (GS)₆LPETGGG(서열번호 24)를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 소르타제 수용체 서열, 예를 들어, 제2 소르타제 수용체 서열은 아미노산 서열 P(G₄S)₂LPETGGSG(서열번호 26)를 포함한다.

한 실시양태에서, 펩타이드는 본원에 기재된 아미노산 서열, 예를 들어, 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 아미노산 서열, 예를 들어, 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 카르복스아미드 기(예를 들어, C-말단 카르복스아미드 작용기)를 포함한다.

한 실시양태에서, 1.5 mg/㎖ 항체 분자를 소르타제 수용체 서열당 20 몰 당량의 소르타제 공여체 펩타이드 및 75 몰 당량의 소르타제 수용체 서열당 1 몰 당량의 소르타제와 접촉시킨다. 한 실시양태에서, 접촉을 150 mM NaCl, 50 mM Tris(pH 7.5) 및 10 mM CaCl₂의 존재 하에 수행한다. 한 실시양태에서, 접촉을 예를 들어, 2시간 내지 48시간, 예를 들어, 18시간 내지 24시간, 예를 들어, 20시간 동안 18℃ 내지 37℃, 예를 들어, 25℃에서 수행한다. 한 실시양태에서, 소르타제는 소르타제 A 펜타돌연변이체이다.

한 실시양태에서, 예를 들어, Q-TOF 질량 분광분석으로 소르타제 매개 반응을 검출하는 단계를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 예를 들어, 겔 전기영동으로 ADC를 정제하는 단계를 추가로 포함한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 (i) 소르타제, 예를 들어, 본원에 기재된 소르타제, 및 (ii) 본원에 기재된 항체 분자, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드 또는 이들 둘 다를 포함하는 반응 혼합물을 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자, 예를 들어, VH, VL 또는 이들 둘 다; 또는 본원에 기재된 항체 분자의 중쇄, 경쇄 또는 이들 둘 다를 코딩하는 핵산 분자(예를 들어, 단리된 핵산 분자)를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자를 코딩하는 핵산 분자 또는 본원에 기재된 벡터를 포함하는 세포(예를 들어, 단리된 세포)를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자를 제조하는 방법으로서, 항체 분자의 생성을 허용하는 조건 하에서 본원에 기재된 세포를 배양함으로써, 본원에 기재된 항체 분자를 제조하는 단계를 포함하는 방법을 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 단리된 또는 합성 항미생물 펩타이드)를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항미생물 펩타이드를 코딩하는 핵산 분자(예를 들어, 단리된 핵산 분자)를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항미생물 펩타이드를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항미생물 펩타이드를 코딩하는 핵산 분자 또는 본원에 기재된 벡터를 포함하는 세포(예를 들어, 단리된 세포)를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항미생물 펩타이드를 제조하는 방법으로서, 항미생물 펩타이드의 생성을 허용하는 조건 하에서 본원에 기재된 세포를 배양함으로써, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드를 제조하는 단계를 포함하는 방법을 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자와 동일한 에피토프 또는 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 항체 분자를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 a) 본원에 기재된 항체 분자와 동일한 에피토프 또는 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 항체 분자; 및 b) 항미생물 펩타이드, 예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드를 포함하는 ADC를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자와 결합에 대해 경쟁하는 항체 분자를 특징으로 한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 a) 본원에 기재된 항체 분자와 결합에 대해 경쟁하는 항체 분자; 및 b) 항미생물 펩타이드, 예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드를 포함하는 ADC를 특징으로 한다.

나열된 실시양태

1. 항체 분자 및 공유커플링된 펩타이드를 포함하는 항체 분자-약물 접합체(ADC)로서,

상기 항체 분자가 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 VH가 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, VH가

(a) 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 또는

(b) 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3

을 포함하고;

상기 항체 분자가 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 VL이 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, VL이

(a) 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3; 또는

(b) 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3

을 포함하고;

상기 펩타이드가 서열번호 257의 아미노산 서열, 또는 서열번호 257의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

2. 실시양태 1에 있어서, VH가 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 ADC.

3. 실시양태 1에 있어서, VH가 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 ADC.

4. 실시양태 1 내지 3 중 임의의 실시양태에 있어서, VH가 서열번호 117의 아미노산 서열, 또는 서열번호 117의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

5. 실시양태 1 내지 4 중 임의의 실시양태에 있어서, VH가 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

6. 실시양태 1 내지 5 중 임의의 실시양태에 있어서, VL이 서열번호 135의 아미노산 서열, 또는 서열번호 135의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

7. 실시양태 1 내지 6 중 임의의 실시양태에 있어서, VL이 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

8. 실시양태 1 내지 7 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스에 결합할 수 있는 것인 ADC.

9. 실시양태 1 내지 8 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스 애루기노사에 결합할 수 있는 것인 ADC.

10. 실시양태 1 내지 9 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스의 지질다당류(LPS)에 결합할 수 있는 것인 ADC.

11. 실시양태 1 내지 10 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스의 LPS의 내부 코어 글리칸 모이어티에 결합할 수 있는 것인 ADC.

12. 실시양태 1 내지 11 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 웨스턴 블롯에 의해 확인될 때, 이. 콜라이 LPS에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는 것인 ADC.

13. 실시양태 1 내지 12 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 헵토스 또는 일산화된 헵토스 유사체(예를 들어, 2-P-Hep 또는 4-P-Hep)에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는 것인 ADC.

14. 실시양태 1 내지 13 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 결합하는 것인 ADC.

15. 실시양태 1 내지 14 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 예를 들어, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 비해 감소된 결합으로 이인산화된 만노스(2,4-P-Man)에 결합하는 것인 ADC.

16. 실시양태 1 내지 15 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 예를 들어, 약 20 내지 약 150 pM(예를 들어, 약 50 내지 약 120 pM)의 겉보기 결합력으로 본원에 기재된 하나 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주, 예를 들어, 카르바페넴, 항-슈도모나스 3세대 세팔로스포린 또는 플루오로퀴놀론에 대한 내성을 가진 하나 이상의 균주에 결합하는 것인 ADC.

17. 실시양태 1 내지 16 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 에스케리키아 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아, 살모넬라 티피뮤리움, 그람 양성 유기체 또는 포유동물 세포 중 하나 이상에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는 것인 ADC.

18. 실시양태 1 내지 17 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 슈도모나스 애루기노사 이외의 슈도모나스 종, 예를 들어, 슈도모나스 플루오레센스, 슈도모나스 푸티다 또는 슈도모나스 스투트제리 중 하나 이상에 결합하는 것인 ADC.

19. 실시양태 1 내지 18 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 단일클론 항체 분자, 인간화된 항체 분자, 단리된 항체 분자 또는 합성 항체 분자인 ADC.

20. 실시양태 1 내지 19 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 2개의 VH 및 2개의 VL을 포함하는 것인 ADC.

21. 실시양태 1 내지 20 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 ADC.

22. 실시양태 1 내지 21 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 카파 또는 람다 쇄의 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 ADC.

23. 실시양태 1 내지 22 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자가 Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일 쇄 Fv 단편(scFv)을 포함하는 것인 ADC.

24. 실시양태 1 내지 23 중 임의의 실시양태에 있어서, 펩타이드가 서열번호 257의 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

25. 실시양태 1 내지 24 중 임의의 실시양태에 있어서, 펩타이드가 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개 또는 33개의 D-아미노산을 포함하거나, 펩타이드의 아미노산 잔기의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100%가 D-아미노산인 ADC.

26. 실시양태 1 내지 25 중 임의의 실시양태에 있어서, 펩타이드의 모든 아미노산 잔기가 D-아미노산인 ADC.

27. 실시양태 1 내지 26 중 임의의 실시양태에 있어서, 펩타이드가 예를 들어, 간접적으로(예를 들어, 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해) VH, 예를 들어, VH의 C-말단에 커플링된 것인 ADC.

28. 실시양태 1 내지 27 중 임의의 실시양태에 있어서, 펩타이드가 예를 들어, 소르타제 인식 서열(예를 들어, LPETGGG)을 통해, 예를 들어, 소르타제 A(SrtA)를 사용하는 효소 라이게이션에 의해 항체 분자에 커플링된 것인 ADC.

29. 실시양태 1 내지 28 중 임의의 실시양태에 있어서, 펩타이드가 소르타제 공여체 서열, 예를 들어, N-말단 GGG를 포함하는 것인 ADC.

30. 실시양태 1 내지 29 중 임의의 실시양태에 있어서, 항체 분자와 펩타이드 사이에 링커, 예를 들어, n이 2 내지 20인 (Gly-Ser)n 링커 서열을 포함하는 ADC.

31. 실시양태 1 내지 30 중 임의의 실시양태에 있어서, 예를 들어, 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 약 2 내지 약 8, 예를 들어, 약 2 내지 약 4의 펩타이드-대-항체 분자 비를 가진 ADC.

32. 실시양태 1 내지 31 중 임의의 실시양태에 있어서, 예를 들어, 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 약 2의 펩타이드-대-항체 분자 비를 가진 ADC.

33. 실시양태 1 내지 32 중 임의의 실시양태에 있어서, 약 2 ㎍/㎖ 내지 약 50 ㎍/㎖, 예를 들어, 약 3.1 ㎍/㎖ 내지 약 25 ㎍/㎖의 농도에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진 ADC.

34. 실시양태 1 내지 33 중 임의의 실시양태에 있어서, 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 50% 이하, 예를 들어, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 이하만큼 상이한 농도에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진 ADC.

35. 실시양태 1 내지 34 중 임의의 실시양태에 있어서, 슈도모나스 애루기노사에 대해 약 500 ㎍/㎖ 이상, 예를 들어, 800 ㎍/㎖ 이상의 평균 용해 농도(MLC)를 가진 ADC.

36. 실시양태 1 내지 35 중 임의의 실시양태에 있어서, 슈도모나스 애루기노사에 대해 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 50% 이하, 예를 들어, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 이하만큼 상이한 MLC를 가진 ADC.

37. 실시양태 1 내지 36 중 임의의 실시양태에 있어서, 슈도모나스 애루기노사에 대해 약 500 ㎍/㎖ 이상, 예를 들어, 800 ㎍/㎖ 이상의 CC50(포유동물 세포의 50% 세포독성이 관찰되는 농도)을 가진 ADC.

38. 실시양태 1 내지 37 중 임의의 실시양태에 있어서, 슈도모나스 애루기노사에 대해 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1보다 더 높은, 예를 들어, 적어도 0.5배, 1배, 2배, 3배, 4배 또는 5배 더 높은 CC50을 가진 ADC.

39. 실시양태 1 내지 38 중 임의의 실시양태에 있어서, 예를 들어, 혈액 샘플의 약물동력학 측정, 전신 영상화, 생체내 영상화, 장기 분포의 평가(예를 들어, ADC는 간에 실질적으로 또는 주로 분포하지 않음), ELISA 및/또는 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 개선된 생체분포를 가진 ADC.

40. 2개의 VH 및 2개의 VL을 포함하는 항체 분자를 포함하는 ADC로서, VH가 서열번호 257의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 공유커플링되고; VH가 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 ADC.

41. 2개의 VH 및 2개의 VL을 포함하는 항체 분자를 포함하는 ADC로서, VH가 서열번호 257의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 공유커플링되고; VH가 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 ADC.

42. 실시양태 40 또는 41에 있어서, VH가 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

43. 실시양태 40 내지 42 중 임의의 실시양태에 있어서, 펩타이드가 (Gly-Ser)n 링커를 통해 VH의 C-말단에 커플링된 것인 ADC.

44. 실시양태 1 내지 40 중 임의의 실시양태의 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.

45. 실시양태 1 내지 44 중 임의의 실시양태에 있어서, 대상체에서 슈도모나스와 관련된 세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한 ADC 또는 약학 조성물.

46. 실시양태 45에 있어서, 세균 감염이 슈도모나스 애루기노사와 관련된 것인 ADC 또는 약학 조성물.

47. 실시양태 45 또는 46에 있어서, ADC가 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

48. 실시양태 45 내지 47 중 임의의 실시양태에 있어서, ADC가 정맥내로, 피하로 또는 비강내로 또는 흡입에 의해 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

49. 실시양태 45 내지 48 중 임의의 실시양태에 있어서, ADC가 세균 감염과 관련된 증상의 발병 전 또는 후에 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

50. 실시양태 45 내지 49 중 임의의 실시양태에 있어서, 대상체가 폐렴, 요로 감염(UTI), 패혈증, 수막염, 설사, 연조직 감염, 피부 감염, 균혈증, 호흡기 감염, 심내막염, 복강내 감염, 패혈성 관절염, 골수염, CNS 감염, 안과 감염, 담낭염, 담관염, 수막염, 장티푸스, 식중독, 위장염, 장열, 세균성이질, 혈류 감염, 복강내 패혈증, 뇌농양, 수막염, 패혈증, 관절 감염, 뼈 감염, 위장 감염 또는 상처 감염 중 하나 이상을 가진 것인 ADC 또는 약학 조성물.

51. 실시양태 45 내지 50 중 임의의 실시양태에 있어서, 세균 감염이 병원내 감염 또는 병원 획득 감염인 ADC 또는 약학 조성물.

52. 실시양태 45 내지 51 중 임의의 실시양태에 있어서, 대상체가 인간 또는 동물인 ADC 또는 약학 조성물.

53. 실시양태 45 내지 52 중 임의의 실시양태에 있어서, 대상체가 면역손상된 환자 또는 건강 전문가인 ADC 또는 약학 조성물.

54. 실시양태 45 내지 53 중 임의의 실시양태에 있어서, 대상체가 HIV 감염 또는 AIDS, 암, 고형 장기 이식, 줄기 세포 이식, 겸상 세포 질환 또는 무비증, 선천성 면역 결핍, 만성 염증성 병태, 인공 와우, 영양실조 또는 뇌척수액 누출을 갖거나 가질 위험이 있는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

55. 실시양태 45 내지 54 중 임의의 실시양태에 있어서, 대상체가 18세 이하, 15세 이하, 12세 이하, 9세 이하 또는 6세 이하이거나, 적어도 60세, 적어도 65세, 적어도 70세, 적어도 75세 또는 적어도 80세인 ADC 또는 약학 조성물.

56. 실시양태 45 내지 55 중 임의의 실시양태에 있어서, 방법이 제2 항미생물 작용제 또는 요법을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

57. 실시양태 56에 있어서, 제2 항미생물 작용제 또는 요법이 항생제 또는 파지 요법을 포함하는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

58. 실시양태 57에 있어서, 항생제가 폴리믹신(예를 들어, 콜리스틴) 또는 β-락탐(예를 들어, 카르바페넴, 예를 들어, 메로페넴)인 ADC 또는 약학 조성물.

59. 실시양태 57에 있어서, 항생제가 아미노글리코사이드, 안사마이신, 카르바세펨, 카르바페넴, 세팔로스포린, 글리코펩타이드, 린코사마이드, 리포펩타이드, 마크롤라이드, 모노박탐, 니트로푸란, 옥사졸리디논, 페니실린, 페니실린 조합, 폴리펩타이드, 퀴놀론 또는 플루오로퀴놀론, 설폰아미드, 테트라사이클린, 또는 마이코박테리아에 대한 약물로부터 선택된 것인 ADC 또는 약학 조성물.

60. 실시양태 58 또는 59에 있어서, 항생제가 아미카신, 젠타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 토브라마이신, 파로모마이신, 스트렙토마이신, 스펙티노마이신, 겔다나마이신, 허비마이신, 또는 리팍시민, 로라카르베프, 에르타페넴, 도리페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, 세파드록실, 세파졸린, 세팔로틴, 세팔로씬, 세팔렉신, 세파클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, 세페핌, 세프타롤린 포사밀, 세프토비프롤, 테이코플라닌, 반코마이신, 텔라반신, 달바반신, 오리타반신, 클린다마이신, 린코마이신, 댑토마이신, 아지쓰로마이신, 클라리쓰로마이신, 디리쓰로마이신, 에리쓰로마이신, 록시쓰로마이신, 트롤레안도마이신, 텔리쓰로마이신, 스피라마이신, 아즈트레오남, 푸라졸리돈, 니트로푸란토인, 리네졸리드, 포시졸리드, 라데졸리드, 토레졸리드, 아목시실린, 암피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린 g, 페니실린 v, 피페라실린, 페니실린 g, 테모실린, 티카르실린, 아목시실린/클라불라네이트, 암피실린/설박탐, 피페라실린/타조박탐, 티카르실린/클라불라네이트, 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 b, 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 목시플록사신, 날리딕스산, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 스파르플록사신, 테마플록사신, 마페나이드, 설파세타마이드, 설파디아진, 은 설파디아진, 설파디메톡신, 설파메티졸, 설파메톡사졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸), 설폰아미도크리소이딘, 데메클로사이클린, 독시사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 테트라사이클린, 클로파지민, 댑손, 카프레오마이신, 사이클로세린, 에탐부톨, 에티온아미드, 이소니아지드, 피라진아미드, 리팜핀, 리파부틴, 리파펜틴, 스트렙토마이신, 아르스페나민, 클로람페니콜, 포스포마이신, 푸시딘산, 메트로니다졸, 무피로신, 플라텐시마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 티암페니콜, 티게사이클린, 티니다졸 또는 트리메토프림으로부터 선택된 것인 ADC 또는 약학 조성물.

61. 실시양태 58 내지 60 중 임의의 실시양태에 있어서, 항생제가 레보플록사신, 시프로플록사신, 젠타마이신, 세프트리악손, 오플록사신, 아미카신, 토브라마이신, 아즈트레오남, 또는 이미페넴/실라스타틴으로부터 선택된 것인 ADC 또는 약학 조성물.

62. 실시양태 56 내지 61 중 임의의 실시양태에 있어서, 제2 항미생물 작용제 또는 요법이 ADC의 투여 전에, ADC의 투여와 동시에, 또는 ADC의 투여 후에 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

63. 세균 감염을 억제하거나 감소시키는 방법으로서, 세균 감염을 억제하거나 감소시키기에 효과적인 양으로 실시양태 1 내지 43 중 임의의 실시양태의 ADC 또는 실시양태 44의 약학 조성물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.

64. 실시양태 62에 있어서, ADC 또는 약학 조성물을 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 세포와 접촉시키는 것인 방법.

65. 실시양태 1 내지 43 중 임의의 실시양태의 ADC 또는 실시양태 44의 약학 조성물; 및 이 ADC 또는 약학 조성물의 사용을 위한 지침서를 포함하는 키트.

66. 실시양태 1 내지 43 중 임의의 실시양태의 ADC 또는 실시양태 44의 약학 조성물을 포함하는 용기.

67. (a) 실시양태 1 내지 43 중 임의의 실시양태의 ADC의 항체 분자의 VH, VL 또는 이들 둘 다;

(b) 실시양태 1 내지 43 중 임의의 실시양태의 ADC의 항미생물 펩타이드;

(c) (a) 및 (b) 둘 다; 또는

(d) 실시양태 1 내지 43 중 임의의 실시양태의 ADC

를 코딩하는 핵산 분자.

68. 실시양태 67의 핵산 분자를 포함하는 벡터.

69. 실시양태 67의 핵산 분자 또는 실시양태 68의 벡터를 포함하는 세포.

70. ADC를 제조하는 방법으로서, ADC의 생성을 허용하는 조건 하에서 실시양태 69의 세포를 배양함으로써 ADC를 생성하는 단계를 포함하는 방법.

71. ADC를 제조하는 방법으로서, LPS에 결합하는 항체 분자를, 소르타제 매개 반응이 일어나게 하는 조건 하에서 소르타제의 존재 하에 항미생물 펩타이드 및 임의적으로 소르타제 공여체 서열을 포함하는 펩타이드와 접촉시킴으로써 ADC를 생성하는 단계를 포함하는 방법.

72. 실시양태 71에 있어서, 항체 분자가 소르타제 인식 서열, 링커 서열 또는 이들 둘 다를 포함하는 소르타제 수용체 서열을 포함하는 것인 방법.

73. 세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 세균 감염을 치료하거나 예방하기에 효과적인 양으로 실시양태 1 내지 43 중 임의의 실시양태의 ADC 또는 실시양태 44의 약학 조성물을, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.

74. 세균 감염을 치료하거나 예방하기 위한 의약의 제조에 있어서 실시양태 1 내지 43 중 임의의 실시양태의 ADC의 용도.

본 개시내용은 상기 측면 및/또는 실시양태 중 어느 하나 이상의 측면 및/또는 실시양태의 모든 조합들뿐만 아니라, 상세한 설명 및 실시예에 기재된 실시양태 중 어느 하나 이상의 실시양태와의 조합도 고려한다.

본원의 조성물 및 방법의 다른 특징, 목적 및 장점은 설명과 도면 및 청구범위로부터 자명해질 것이다.

도면 및 표가 여기에 함께 제공된다.

본 특허 또는 출원 파일은 컬러로 작성된 적어도 하나의 도면을 함유한다. 컬러 도면(들)을 가진 이 특허 또는 특허 출원 공보의 사본은 요청 및 필요한 수수료 지불 시 특허청에 의해 제공될 것이다.
도 1a는 예시적인 VSX 항체에 대한 VH, VL, 프레임워크, 상보성 결정 영역(CDR) 아미노산 서열을 도시한다(예를 들어, 표 3에 나타낸 바와 같음). 도 1a는 등장 순서대로 각각 서열번호 264, 265, 266 및 266을 개시한다.
도 1b는 VSX 항체와 단리된 LPS의 결합을 웨스턴 블롯으로 도시한다. A, 상단: 이. 콜라이(레인 1) 및 Pae(레인 2 내지 4)의 단리된 LPS, 레인 5 - 청색 참조; 및 시그마(Sigma)의 Pae LPS(레인 6)의 은 염색 SDS-Page 분석. 하단: VSX와 LPS의 결합의 웨스턴 블롯 분석은 이. 콜라이와의 결합을 검출하지 않았으나, Pae LPS와의 결합을 검출하였다(레인 2 내지 4, 6); 레인 5 - 매직 마크.
도 2는 VSX와 합성 단당류의 결합의 생물층 간섭계 분석을 도시한다.
도 3a는 VSX 항체와 복수의 슈도모나스 애루기노사 균주의 전체 세포 ELISA 결합을 도시한다(표시된 바와 같음). VSX 항체는 다수의 슈도모나스 애루기노사 균주와의 강한 결합 및 소 혈청 알부민인 BSA와의 최소 결합을 보여준다.
도 3b는 VSX 항체가 슈도모나스 애루기노사 균주 ATCC 27853과 강하게 결합하고, 이. 콜라이(짙은 청색), 클렙시엘라 뉴모니아(녹색), 살모넬라 티피뮤리움(밝은 청색), 포유동물 세포 또는 BSA(적색)와 약하게 결합함을 도시한다.
도 3c는 전체 세포 ELISA를 이용하여 다양한 감염 부위의 임상 단리주로부터의 100개 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주에서 VSX 결합을 반정량적으로 분석한 것을 도시한다. 결합은 Pae ATCC 27853을 기준으로 한 것이다.
도 4a는 100:1 몰 비, 0.15 M NaCl에서 2,4-P-Hep 및 VSX Fab의 STD NMR 스펙트럼(A, 상단)을 도시한다. VSX 결합은 이인산화된 헵토스(2,4-P-Hep)에만 결합하는 것으로 확인되었다.
도 4b는 VSX Fab의 존재 하에 2,4-P-Hep 적정의 ¹H NMR 스펙트럼(A, 하단), (B) 2,4-P-Hep 적정의 ³¹P NMR을 도시한다.
도 5a는 2,4-Hep-VSX 복합체의 두 도킹 자세의 6 및 34 ns에서 분자 역학(MD) 시뮬레이션 스냅샷을 도시한다. 왼쪽 및 오른쪽 자세는 각각 C6 위치에서 메틸-하이드록실 기를 갖고 그의 4-포스페이트 기를 가진 단당류를 VSX 수용체 결합 부위 쪽으로 배향한다.
도 5b는 2개의 상이한 자세에서 VSX와 결합된 상태의 Hep 잔기의 제곱 평균 제곱근 변동(RMSF)을 도시한다.
도 6a는 단당류 VSX-접촉 및 비-접촉 잔기의 돌연변이, 및 VSX와 2,4-P-Hep의 결합에 대한 이들의 효과를 도시한다.
도 6b는 VSX(어두운 색) 또는 대조군 항체(밝은 색)와 LPS의 결합을 도시한다.
도 6c는 VSX 결합이 LPS 매개(톨 유사 수용체 4) TLR4 활성화를 억제한다는 것을 보여준다. 다이아몬드 = VSX; 정사각형 = 음성 대조군 항체.
도 6d는 TLR4 수용체-MD-2-LPS 복합체의 구조적 모델을 도시한다.
도 7a는 항미생물 펩타이드(AMP)의 확인을 위한 작업흐름도를 도시한다.
도 7b는 슈도모나스 애루기노사 ATCC 27853을 사용한 시간 사멸 어세이에서 신속한 P297 살균 활성을 도시한다.
도 7c는 모델 세균 막을 대표하는 DOPE/DOPG 리포좀을 사용한 칼세인 누출 측정을 도시한다. P297의 작용 기작은 막 파괴를 수반할 가능성이 있다.
도 7d는 소수성 함량이 증가하는 완충제에서 P297의 원편광 이색성 스펙트럼을 도시한다. 결과는 소수성과 함께 증가하는 알파-나선형 특성을 보여준다.
도 8은 (D)-P297이 인간 혈청의 존재 하에 (L)-P297보다 더 안정함을 보여준다. 왼쪽 패널: t=0(상단) 및 10% 인간 혈청(NHS)에서 60분 후 P297의 대표적인 총 이온 크로마토그램. (L)-P297 또는 (D)-P297에 대한 추출된 이온 전류의 적분으로 남아 있는 온전한 펩타이드를 정량하였다. 오른쪽 패널: 10% 인간 혈청(NHS)의 존재 하에 P297 변이체의 분해의 60분 시간 과정. 값은 혈청에서 인큐베이션된 시작 시간 = 0분 샘플로 정규화되었다. Y 축은 t₀에서의 온전한 펩타이드에 대한 t₁에서의 온전한 펩타이드의 측정된 양의 비이다.
도 9a는 소르타제 라이게이션을 이용한 항체-AMP 접합체의 합성을 도시한다. 도 9a는 "_(GS)15_LPETGGSG"를 서열번호 267로서 개시하고 "_(GS)15_LPETGGG-AMP"를 서열번호 268로서 개시한다.
도 9b는 DAR2 및 DAR4로의 VSX의 전환의 분석을 도시한다. 중쇄 및 경쇄 둘 다의 소르타제 수용체(상단 2개의 패널)및 중쇄만의 소르타제 수용체(하단 2개의 패널)에 대한 출발 물질 및 소르타제-라이게이션된 D-P297 생성물의 중쇄의 Q-tof 분석. 출발 물질 및 생성물의 편견 없는 검출을 가정하면, "DAR4" 물질의 경우 중쇄의 88.7%가 D-P297에 라이게이션되었다.
도 9c는 원하는 D-P297 ADC 생성물로의 출발 물질의 강력한 전환을 보여주는 쿠마시 겔 분석을 도시한다. 레인 1 및 2는 각각 D-P297과 중쇄 및 경쇄 둘 다의 라이게이션에 대한 출발 물질 및 생성물이다. 레인 3 및 4는 각각 D-P297과 중쇄만의 라이게이션에 대한 출발 물질 및 생성물이다(항체 출발 물질의 경쇄는 소르타제 수용체 인식 서열을 결여하는 야생형이었다). 이 분석을 기반으로, 중쇄 및 경쇄 둘 다에서 소르타제 수용체를 가진 물질에 대한 약물-항체 비(DAR)는 3.6이고, 중쇄에만 수용체를 가진 물질에 대한 약물-항체 비(DAR)는 1.8인 것으로 추정된다.
도 9d는 VSX(적색 선) 및 VSX 접합체(청색 선)의 크기 배제 크로마토그래피를 도시한다.
도 10은 2종의 슈도모나스 애루기노사 균주(Pae 27853 및 Pae 39324) 각각에 대한 VSX 접합체의 시험관내 사멸 활성을 도시한다.
도 11은 P297 단독(왼쪽 패널), VSX 단독(중앙 패널) 및 VSX-1(오른쪽 패널)에 의한 슈도모나스 애루기노사, 클렙시엘라 뉴모니아 및 이. 콜라이의 혼합 미생물 사멸을 도시한다.
도 12는 VSX-1의 시험관내 살균 활성, 용혈성, 세포독성 및 옵소닌 활성을 도시한다.
도 13a 내지 13c는 슈도모나스 애루기노사 폐 감염의 생체내 모델에서 접합체의 평가를 도시한다. (도 13a) VSX-1 및 세균(ATCC 27853)을 호중구감소증 동물에게 공-투여하였다. 8시간에서 CFU 부하를 폐에서 측정하였다. (도 13b) 감염(ATCC 27853) 1시간 후 호중구감소증 동물을 VSX-1로 치료하였다. 8시간에서 CFU 부하를 폐에서 측정하였다. (도 13c) 슈도모나스 애루기노사 PA14(2x10⁶/동물)를 사용한 급성 폐 감염 모델, C57/Bl6, 10마리 동물/gp, 비강내 접종, 감염 4시간 후 복강내 투여.
도 14a는 VSX-297 생체분포의 생체내 영상화를 도시한다.
도 14b는 주사 후 1시간, 24시간 및 72시간에서 VSX-297(실선 회색 막대), 및 297을 가진 DAR2 구축물(각각 HC 및 LC 쇄 구축물, 음영 막대 및 점선 막대)의 혈청 수준 분석을 도시한다.
도 15는 VSX-2 또는 VSX-1이 투여된 마우스의 혈액 수준을 도시한다. 이 실험을 위해, VSX-1 또는 VSX-2를 마우스에게 주사하고 주사 후 1시간, 24시간 또는 72시간에서 혈액 샘플을 채취하였다. 접합체의 수준을 질량 분광분석 또는 ELISA로 평가하였다.
도 16은 슈도모나스 애루기노사 PA14(2x10⁶/동물)를 사용한 VSX-2 급성 폐 감염 모델, C57/Bl6, 25마리 동물/gp, 비강내 접종, 감염 4시간 후 복강내 투여를 도시한다.
도 17a 내지 17c는 VSX(도 17a), 항-알긴산염 항체(도 17b), 및 이소타입 대조군 항체(도 17c)에 대한 슈도모나스 애루기노사 세포의 전자 현미경관찰을 도시한다.
도 18a 내지 18c는 헵토스 유도체의 양성자 및 HSQC 스펙트럼을 도시한다. 신호가 배정된 (도 18a) 헵토스 유도체, (도 18b) 4-P-헵토스 유도체 및 (도 18c) 2,4-P-헵토스 유도체의 양성자(주황색) 및 HSQC 스펙트럼(청색).
도 19는 합성 헵토스 유도체 및 VSX Fab의 ¹H STD NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 20은 2,4-P-헵토스 유도체의 ¹H-³¹P HMBC NMR 스펙트럼을 도시한다. 양성자와 인 신호 사이의 장거리 상관관계가 표시된다.

본원은 슈도모나스, 예를 들어, 슈도모나스의 지질다당류(LPS)를 표적화하는 항체 분자-약물 접합체(ADC), 예컨대, 항체 분자-펩타이드 접합체를 개시한다.

본원의 개시내용은 적어도 부분적으로, 단일클론 항체(이하 VSX로서 지칭됨)의 독특한 특이성을 항미생물 펩타이드(AMP)의 직접 작용 항균 활성과 병용하여, 세균 감염, 심지어 MDR 또는 범-내성 균주에 의해 야기된 세균 감염을 치료하는 신규 전략의 개발 및 특징규명을 포함한다. 이 접근법은 강한 항미생물 활성과 항체의 표적화 능력을 병용한다. 이 접근법을 예시하기 위해, 본 발명자들은 슈도모나스 애루기노사에 초점을 맞추었다.

이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 본원에 기재된 VSX 구축물은 항체의 Fc 도메인을 통한 직접적인 살균 활성 및 이펙터 기능 둘 다를 이용하여 작용하는 것으로 여겨진다. 이러한 구축물은 시험관내 및 생체내에서 강력한 선택적 활성을 보여줌으로써, 포유동물 세포에 대한 비특이적 세포독성을 거의 또는 전혀 갖지 않으면서 특이적 사멸 활성을 나타내었다. 또한, VSX 구축물은 외막 표면에서 직접 작용 효과를 사용하여, ADC의 내재화를 필요로 하지 않으므로, 그람 음성 병원체의 이중 막을 통과해야 하는 작용제에 대한 필요성을 없앤다. 본원의 개시내용은 VSX 구축물이 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사 감염의 관리, 항생제 사용관리의 촉진 및 미생물균총(microbiota)의 보존을 위한 치료적 임의성을 제공한다는 것을 입증한다.

본원의 개시내용은 적어도 부분적으로, 슈도모나스 애루기노사의 표면 상의 보존된 글리칸 구조물을 표적화하는 항체의 특징규명을 기반으로 한 것이다. 항체는 직접적인 살균 활성을 갖도록 ADC 포맷으로 조작되었다. 특히, 활성을 위해 페이로드의 내재화 및 방출이 요구되는 종양학 적응증 또는 심지어 그람 양성 유기체를 위해 구축된 ADC와 달리, 오로지 외막 표면에서 작용하는 ADC의 구축이 개시되어 있다.

이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 세균 외막의 표면에서 LPS 코어 글리칸의 카피 수와 위치로 인해 이 글리칸은 막 파괴 ADC 접근법에서 사용되기에 이상적이라고 여겨진다. 외막 표면에서 LPS의 고밀도가 확립되는 동안, 모든 슈도모나스 애루기노사 균주에서 공통 코어 에피토프의 보존은 덜 잘 받아들여진다. 본원에 기재된 연구는 VSX 항체의 조작, 및 VSX와 LPS 내부 코어의 합성 헵토스 모방체 사이의 추가 결합 연구를 통해, 슈도모나스 애루기노사의 코어 글리칸이 접근될 수 있고 단일 이인산화된 헵토스 단량체가 항체에 의해 결합될 수 있음을 입증하였다.

이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 코어 LPS 글리칸과 관련된 기능적 활성은 슈도모나스 애루기노사 균주에 걸쳐 그의 높은 보존도 이외에, 코어 LPS 글리칸을 항체 표적으로서 매력적인 특징으로 만드는 것으로 생각된다. 슈도모나스 애루기노사 LPS의 외부 코어 영역은 유기체가 숙주 세포, 예컨대, 각막염의 감염 단계 동안 각막 세포와 회합하고 이 세포 내로 진입하기 위한 세균 리간드로서 작용할 수 있다. 외부 코어의 말단 D-Glc 모이어티는 LPS와 마우스 각막 상피 세포의 결합에 중요할 수 있다. 더욱이, 낭포성 섬유증의 경우, 슈도모나스 애루기노사와 숙주 상피 표면의 결합을 위한 수용체로서의 낭포성 섬유증 막횡단 전도도 조절제 단백질(CFTR)의 역할은 코어 글리칸-CFTR 상호작용에 의해 매개된다. 따라서, LPS는 숙주 상피 세포에 의한 슈도모나스 애루기노사의 흡수를 매개하여, 발병기전에서 중요한 역할을 하고 중요한 병독성 요인이다.

준최적 포맷, 예를 들어, IgM을 이용하고, 낮은 친화성을 갖고, 온전한 세균에 대한 유의미한 비특이적 교차반응성 및 접근성 문제를 야기하는 소수성 지질 A 도메인을 표적화하는 LPS 유도 항체는 임상적 이점을 나타내지 않을 수 있다. VSX는 친수성 내부 코어 글리칸을 표적화하고 검출 가능한 비특이적 결합을 나타내지 않는다. 또한, VSX 구축물은 직접적인 살균 활성을 갖고 내독소 중화 특성을 나타낸다.

이론에 의해 구속받고자 하는 것은 아니지만, 한 실시양태에서, 본원에 개시된 생성된 ADC는 2개의 최적화된 성분인 광범위 스펙트럼 항체와 최적화된 항미생물 펩타이드를 함께 가짐으로써, 모 성분보다 더 우수한 치료적 특성을 갖는 것으로 생각된다. 본원의 개시내용은 조작된 VSX 항체가 슈도모나스 애루기노사의 표면 상의 보존된 글리칸 에피토프를 표적화하고 항미생물 펩타이드(예를 들어, D369)가 항체에 라이게이션될 때 기능적이고 안전하다는 것을 입증한다. 생성된 ADC는 다양한 슈도모나스 애루기노사 균주들에 대한 유의미한 시험관내 활성을 보였고 공격적인 폐 감염 모델에서 생체내 효능을 나타내었다. 본원에서 제시된 데이터 및 접근법은 예를 들어, 소분자 및 생물제제에서 기존 노력과 진행 중인 노력을 개선하기 위해 그람 음성 세균을 퇴치하는 항미생물 작용제의 개발을 위한 원하는 ADC 전략을 제공한다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 ADC는 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균(예를 들어, 슈도모나스, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사)의 외막 상의 지질다당류에 높은 친화성 및 특이성으로 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 ADC는 그람 음성 세균(예를 들어, 슈도모나스, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사)의 외막에 결합할 수 있다. 본원에 개시된 ADC는 항체 분자 및 항미생물 펩타이드(AMP)를 포함할 수 있다. 유리하게는, 본원에 기재된 ADC 중 몇몇은 항미생물 펩타이드 단독에 비해 상이한 속, 종 및/또는 아종의 하나 이상의 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)의 생존력을 억제하거나 감소시키는 개선된 능력을 가진다. 항체 분자, ADC 및 항미생물 펩타이드를 코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포, 조성물(예를 들어, 약학 조성물), 키트, 및 항체 분자, ADC 및 항미생물 펩타이드의 제조 방법도 제공된다. 본원에 개시된 항체 분자, ADC, 항미생물 펩타이드 및 약학 조성물은 (단독으로 또는 다른 작용제 또는 치료 요법과 함께) 예를 들어, 그람 음성 세균에 의해 야기된 세균 감염 또는 관련 장애와 병태의 치료, 예방 및/또는 진단에 사용될 수 있다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 ADC는 하기 특성들 중 하나 이상의 특성을 가질 수 있다: (i) 충족되지 않은 의학적 필요성을 가진 환자에서 세균 질환을 치료할 수 있거나 예방할 수 있거나; (ii) 세균 질환을 야기하는 세균의 속 및 종을 치료할 수 있거나; 신규 작용 기작을 통해 작용하거나; (iii) 내성 기작을 감소시키거나 중화시키는 첨가된 억제제를 갖거나; (iv) 내성 기작을 감소시키거나 중화시키는 분자 구조의 변경을 가진다.

한 실시양태에서, ADC는 (예를 들어, 항체 분자를 통해) 옵소닌식작용 활성, (예를 들어, 페이로드, 예를 들어, 항미생물 펩타이드를 통해) 살균 활성, 또는 이들 둘 다를 가진다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, ADC에서의 항미생물 펩타이드의 사용은 하기 목적들 중 하나 이상의 목적을 달성할 수 있다: 낮은 내성을 가진 신규 표적, 보다 낮은 자연발생적 내성 확률을 가진 상승작용적 효능, 개선된 유도 치료, 또는 신속한 살균 활성. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 잠재적인 표적 부위 변경에 의해 야기된 내성의 확률을 감소시키기 위해 코어 LPS 영역을 표적화한다. 또 다른 실시양태에서, 펩타이드 스테이플링은 활성 및/또는 안정성을 증가시키는 데, 예를 들어, 잠재적인 항생제 불활성화를 감소시키거나 예방하는 데 사용된다.

정의

본원에서 사용된 바와 같이, 단수형 관사는 이 관사의 하나 또는 하나 초과(예를 들어, 적어도 하나)의 문법적 객체를 지칭한다.

문맥이 달리 명시하지 않은 한, 용어 "또는"은 용어 "및/또는"을 의미하기 위해 본원에서 사용되고 용어 "및/또는"과 교환 가능하게 사용된다.

"약" 및 "대략"은 일반적으로 측정의 성질 및 정확도를 고려할 때 측정된 양에 대한 허용되는 오차 정도를 의미할 것이다. 예시적인 오차 정도는 소정의 값 또는 값의 범위의 20퍼센트(%) 이내, 전형적으로 10% 이내, 보다 전형적으로 5% 이내에 있다.

본원에 개시된 조성물 및 방법은 특정된 서열, 또는 이와 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어, 특정된 서열과 적어도 85%, 90% 또는 95% 이상 동일한 서열을 가진 폴리펩타이드 및 핵산을 포함한다.

아미노산 서열과 관련하여, 용어 "실질적으로 동일한"은 제1 아미노산 서열과 제2 아미노산 서열이 공통의 구조적 도메인 및/또는 공통의 기능적 활성을 가질 수 있도록 제2 아미노산 서열에서 i) 정렬된 아미노산 잔기와 동일하거나, ii) 정렬된 아미노산 잔기의 보존적 치환인 충분한 또는 최소 수의 아미노산 잔기를 함유하는 제1 아미노산을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, 기준 서열, 예를 들어, 본원에서 제공된 서열과 적어도 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가진 공통의 구조적 도메인을 함유하는 아미노산 서열.

뉴클레오타이드 서열과 관련하여, 용어 "실질적으로 동일한"은 제1 뉴클레오타이드 서열과 제2 뉴클레오타이드 서열이 공통의 기능적 활성을 가진 폴리펩타이드를 코딩하거나, 공통의 구조적 폴리펩타이드 도메인 또는 공통의 기능적 폴리펩타이드 활성을 코딩하도록 제2 핵산 서열에서 정렬된 뉴클레오타이드와 동일한 충분한 또는 최소 수의 뉴클레오타이드를 함유하는 제1 핵산 서열을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, 기준 서열, 예를 들어, 본원에서 제공된 서열과 적어도 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가진 뉴클레오타이드 서열.

용어 "기능성 변이체"는 천연 생성 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖거나 실질적으로 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩되고 천연 생성 서열의 하나 이상의 활성을 가질 수 있는 폴리펩타이드를 지칭한다.

한 실시양태에서, "상동성"은 "동일성"과 교환 가능하게 사용된다.

서열들 사이의 상동성 또는 서열 동일성(이 용어들은 본원에서 교환 가능하게 사용됨)의 계산은 다음과 같이 수행된다.

2개의 아미노산 서열들 또는 2개의 핵산 서열들의 퍼센트 동일성을 측정하기 위해, 최적 비교 목적으로 서열들을 정렬한다(예를 들어, 최적 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산 서열 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열 중 하나 또는 이들 둘 다에 갭을 도입할 수 있고, 비교 목적을 위해 비-상동 서열을 무시할 수 있다). 전형적인 실시양태에서, 비교 목적으로 정렬된 기준 서열의 길이는 기준 서열의 길이의 적어도 30%, 예를 들어, 적어도 40%, 50%, 60%, 예를 들어, 적어도 70%, 80%, 90% 또는 100%이다. 그 다음, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오타이드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 비교한다. 제1 서열의 한 위치가 제2 서열의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드에 의해 점유될 때, 분자들은 그 위치에서 동일하다.

2개의 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 2개의 서열들의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각각의 갭의 길이를 고려할 때 상기 서열들에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다.

서열들의 비교 및 2개의 서열들 사이의 퍼센트 동일성의 측정은 수학 알고리즘을 사용함으로써 달성될 수 있다. 한 실시양태에서, 2개의 아미노산 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 중량을 사용하는, GCG 소프트웨어 팩키지의 GAP 프로그램 내로 혼입된, 문헌(Needleman and Wunsch, (1970) J. Mol. Biol. 48:444-453)의 알고리즘을 사용함으로써 측정된다. 한 실시양태에서, 2개의 뉴클레오타이드 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 NWSgapdna.CMP 매트릭스, 및 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 중량을 사용하는, GCG 소프트웨어 팩키지의 GAP 프로그램을 사용함으로써 측정된다. 적합한 한 세트의 파라미터들(및 달리 특정되어 있지 않은 한, 사용되어야 하는 파라미터)는 12의 갭 벌점, 4의 갭 연장 벌점 및 5의 프레임시프트 갭 벌점을 이용하는 Blossum 62 점수화 매트릭스이다.

2개의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 PAM120 중량 잔기 표, 12의 갭 길이 벌점 및 4의 갭 벌점을 사용하는, ALIGN 프로그램(버전 2.0) 내로 혼입된, 문헌(E. Meyers and W. Miller, (1989) CABIOS, 4:11-17)의 알고리즘을 사용함으로써 측정될 수 있다.

본원에 기재된 핵산 및 단백질 서열은 공용 데이터베이스에 대한 검색을 수행하여, 예를 들어, 다른 패밀리 구성원 또는 관련 서열을 찾기 위한 "질의(query) 서열"로서 사용될 수 있다. 이러한 검색은 문헌(Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-1)의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 사용함으로써 수행될 수 있다. NBLAST 프로그램, 점수 = 100, 단어길이 = 12를 사용하여 BLAST 뉴클레오타이드 검색을 수행함으로써, 본원에 기재된 핵산과 상동한 뉴클레오타이드 서열을 수득할 수 있다. XBLAST 프로그램, 점수 = 50, 단어길이 = 3을 사용하여 BLAST 단백질 검색을 수행함으로써, 본원에 기재된 단백질 분자와 상동한 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적으로 갭을 가진 정렬을 수득하기 위해, 갭핑된(Gapped) BLAST를 문헌(Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)에 기재된 바와 같이 사용할 수 있다. BLAST 및 갭핑된 BLAST 프로그램을 사용할 때, 각각의 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터를 사용할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "낮은 엄격도, 중간 엄격도, 높은 엄격도 또는 매우 높은 엄격도 조건 하에서 하이브리드화한다"는 하이브리드화 및 세척을 위한 조건을 기술한다. 하이브리드화 반응을 수행하기 위한 지침은 참고로 포함되는 문헌(Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6)에서 발견될 수 있다. 수성 방법 및 비수성 방법은 이 참고문헌에 기재되어 있고 이들 중 어느 하나가 이용될 수 있다. 본원에서 언급된 특이적 하이브리드화 조건은 다음과 같다: 1) 약 45℃의 6X 염화나트륨/구연산나트륨(SSC)에서 낮은 엄격도 하이브리드화 조건에 이은, 적어도 50℃의 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 2회 세척(세척의 온도는 낮은 엄격도 조건을 위해 55℃까지 증가될 수 있음); 2) 약 45℃의 6X SSC에서 중간 엄격도 하이브리드화 조건에 이은, 60℃의 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상의 세척; 3) 약 45℃의 6X SSC에서 높은 엄격도 하이브리드화 조건에 이은, 65℃의 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상의 세척; 및 바람직하게는 4) 매우 높은 엄격도 하이브리드화 조건은 65℃의 0.5 M 인산나트륨, 7% SDS이고, 그 후 65℃의 0.2X SSC, 1% SDS에서 1회 이상의 세척이 수행된다. 매우 높은 엄격도 조건 4)는 적합한 조건이고, 달리 특정되어 있지 않은 한, 사용되어야 하는 조건이다.

본원에 기재된 분자는 그의 기능에 실질적으로 영향을 미치지 않는 추가 보존적 또는 비필수 아미노산 치환을 가질 수 있다는 것이 이해된다.

용어 "아미노산"은 아미노 작용기 및 산 작용기 둘 다를 포함하고 천연 생성 아미노산의 중합체에 포함될 수 있는 모든 천연 또는 합성 분자들을 포괄하기 위한 것이다. 예시적인 아미노산은 천연 생성 아미노산; 이의 유사체, 유도체 및 동족체; 변이체 측쇄를 가진 아미노산 유사체; 및 이들 중 임의의 물질의 모든 입체이성질체들을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "아미노산"은 D 또는 L 광학 이성질체 및 펩타이드 모방체 둘 다를 포함한다.

"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기로 대체되는 치환이다. 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기의 패밀리들은 당분야에서 정의되어 있다. 이 패밀리들은 염기성 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 쓰레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타 분지된 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어, 쓰레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다.

용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"(단일 쇄인 경우)은 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭하기 위해 본원에서 교환 가능하게 사용된다. 상기 중합체는 선형 또는 분지된 중합체일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 비-아미노산에 의해 불연속될 수 있다. 상기 용어들은 예를 들어, 디설파이드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화 또는 임의의 다른 조작, 예컨대, 표지부착 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 중합체도 포함한다. 폴리펩타이드는 천연 공급원으로부터 단리될 수 있거나, 재조합 기법에 의해 진핵 또는 원핵 숙주로부터 생성될 수 있거나, 합성 절차의 생성물일 수 있다.

용어 "핵산", "핵산 서열", "뉴클레오타이드 서열" 또는 "폴리뉴클레오타이드 서열" 및 "폴리뉴클레오타이드"는 교환 가능하게 사용된다. 이들은 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드인 뉴클레오타이드, 또는 이의 유사체의 임의의 길이의 중합체 형태를 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, 단일 가닥인 경우 코딩 가닥 또는 비-코딩(안티센스) 가닥일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예컨대, 메틸화된 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체를 포함할 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열은 비-뉴클레오타이드 성분에 의해 불연속될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 중합 후, 예컨대, 표지부착 성분과의 접합에 의해 더 변형될 수 있다. 핵산은 재조합 폴리뉴클레오타이드일 수 있거나, 자연에서 존재하지 않거나 비천연 정렬로 또 다른 폴리뉴클레오타이드에 연결되어 있는, 게놈, cDNA, 반합성 또는 합성 유래의 폴리뉴클레오타이드일 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단리된"은 그의 원래의 또는 천연 환경(예를 들어, 천연 생성 물질인 경우 천연 환경)으로부터 제거되어 있는 물질을 지칭한다. 예를 들어, 살아있는 동물에 존재하는 천연 생성 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 단리되어 있지 않으나, 인간 개입에 의해 천연 시스템에 공존하는 물질들 중 일부 또는 전부로부터 분리되어 있는 동일한 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 단리되어 있다. 이러한 폴리뉴클레오타이드는 벡터의 일부일 수 있고/있거나, 이러한 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 조성물의 일부일 수 있고, 이러한 벡터 또는 조성물이 자연에서 발견되는 환경의 일부가 아니라는 점에서 여전히 단리되어 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 예를 들어, 세균 감염 또는 관련 장애를 "치료한다"라는 용어는, 한 실시양태에서, 세균 감염 또는 관련 장애를 갖고/갖거나, 세균 감염 또는 관련 장애의 증상을 경험하는 대상체(예를 들어, 인간)가 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 투여받은 경험이 없는 경우보다 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 투여받은 때 덜 심각한 증상을 앓고/앓거나 더 빨리 회복할 것임을 의미한다. 한 실시양태에서, 감염 또는 관련 장애가 치료될 때, 대상체에서 세균을 검출하는 어세이는 상기 감염 또는 장애에 대한 효과적인 치료 후 더 적은 세균을 검출할 것이다. 예를 들어, 항체 분자 또는 ADC, 예컨대, 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC를 사용한 진단 어세이는 상기 감염 또는 장애의 효과적인 치료를 위해 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 투여한 후 대상체의 생물학적 샘플에서 세균을 더 적게 검출하거나 전혀 검출하지 않을 것이다. 다른 어세이, 예컨대, PCR(예를 들어, qPCR)도 대상체에서의 세균 감염 또는 장애의 치료 후 존재, 예를 들어, 감소된 존재(또는 부재)를 검출하기 위해 환자에서 치료를 모니터링하는 데 이용될 수 있다. 치료는 예를 들어, 특정 감염, 질환, 장애 및/또는 병태(예를 들어, 세균 감염)의 영향 또는 증상, 특징 및/또는 원인의 하나 이상의 징후의 중증도를 부분적으로 또는 완전히 완화할 수 있거나, 호전시킬 수 있거나, 경감할 수 있거나, 억제할 수 있거나 감소시킬 수 있고/있거나, 상기 하나 이상의 징후의 발생률을 감소시킬 수 있고 임의적으로 이러한 징후의 발생을 지연시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 치료는 관련 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 특정 징후를 나타내지 않는 대상체, 및/또는 상기 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 초기 징후만을 나타내는 대상체의 치료이다. 한 실시양태에서, 치료는 관련 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 확립된 징후를 나타내는 대상체의 치료이다. 한 실시양태에서, 치료는 세균 감염 또는 관련 장애를 앓고 있는 것으로서 진단된 대상체의 치료이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 예를 들어, 세균 감염을 "예방한다"라는 용어는 대상체(예를 들어, 인간)가 감염을 야기하는 세균에 노출되기 전(예를 들어, 1일, 2일, 1주, 2주, 3주 또는 1개월 이상 전)에 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 제공받은 경우 세균 감염을 가질 가능성이 더 적다는 것을 의미한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "최소 억제 농도" 또는 "MIC"는 예를 들어, 인큐베이션(예를 들어, 밤샘 인큐베이션) 후 세균의 생장(예를 들어, 가시적 생장)을 억제할 항미생물 작용제, 예를 들어, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 가장 낮은 농도를 지칭한다. 최소 억제 농도 또는 MIC를 측정하는 방법은 예를 들어, 문헌(Andrews, J. Antimicrob. Chemother. 2001; 48 Suppl 1:5-16 (Erratum in J. Antimicrob. Chemother. 2002; 49(6):1049))에 기재되어 있다. 예를 들어, MIC는 하기 절차를 이용함으로써 측정될 수 있다: 항생제 스톡 용액의 준비, 항생제 희석 범위의 준비, 한천 희석 플레이트의 준비, 접종물의 준비, 접종, 인큐베이션, 및 결과 판독 및 해석. MIC는 통상적으로 참고 기관, 예컨대, 임상 & 실험실 표준 위원회(CLSI), 영국 항미생물 화학요법 협회(BSAC), 또는 유럽 항미생물 민감성 시험 위원회(EUCAST)의 지침에 따라 한천 희석 및 브로쓰 미세희석에 의해 측정될 수도 있다. 한 실시양태에서, MIC는 세균의 생장을 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%까지 억제하는 항미생물 작용제, 예를 들어, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 가장 낮은 농도이다. 한 실시양태에서, MIC는 세균의 생장을 적어도 80%까지 억제하는 항미생물 작용제, 예를 들어, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 가장 낮은 농도이다. MIC를 측정하는 예시적인 방법은 실시예 5에도 기재되어 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "최소 살균 농도" 또는 "MBC"는 특정 세균을 사멸시키는 데 요구된, 항미생물 작용제, 예를 들어, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 가장 낮은 농도를 지칭한다. 한 실시양태에서, 최소 살균 농도 또는 MBC는 시험 작용제를 함유하지 않는 한천 플레이트에 하위배양함으로써 브로쓰 희석 최소 억제 농도(MIC) 시험으로부터 측정될 수 있다. 한 실시양태에서, MBC는 초기 세균 접종물의 생존력을 99.9% 이상 감소시키는 항미생물 작용제의 가장 낮은 농도를 측정함으로써 확인된다. 한 실시양태에서, 항미생물 작용제는 통상적으로 MBC가 MIC의 4배 이하인 경우 살균제로서 간주된다(French, J Antimicrob Chemother. 2006; 58(6):1107-1117).

본원의 조성물 및 방법의 다양한 측면들이 이하에 더 상세히 기재되어 있다. 추가 정의는 본 명세서 전체에 걸쳐 기재되어 있다.

지질다당류

본원은 예를 들어, 그람 음성 세균의 외막 상의 지질다당류(LPS)에 결합할 수 있는 항체 분자 및 항체 분자-약물 접합체(ADC)를 개시한다. 한 실시양태에서, 이 항체 분자 또는 ADC는 LPS의 코어 오당류 영역에 결합한다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 적어도 부분적으로 코어 LPS 영역은 하기 특성들 중 하나 이상의 특성을 갖기 때문에 표적화된다고 믿어진다: 고밀도, 종 내에서의 보존, 접근 가능성, 또는 부착을 위해 필수적임(Raetz and Whitfield Annu. Rev. Biochem. 2002; 71: 635-700; de Kievit and Lam J Bacteriol. 1994; 176(23):7129-39; Schmengler et al. Eur J Cell Biol. 2010; 89(1):25-33; Pier et al. Am J Respir Crit Care Med. 1996; 154(4 Pt 2):S175-82).

리포글리칸 또는 내독소로서도 공지되어 있는 LPS는 공유결합에 의해 연결된 O-항원, 외부 코어 및 내부 코어로 구성된, 지질 및 다당류를 포함하는 큰 분자이다. LPS는 예를 들어, 동물에서 강한 면역 반응을 이끌어낼 수 있는, 그람 음성 세균의 외막에서 발견된다. LPS는 세균의 구조적 온전성에 기여하고 특정 종류의 화학적 공격으로부터 막을 보호한다. 이것은 세포막의 음전하도 증가시키고 전체 막 구조를 안정화시키는 데 도움을 준다. LPS는 동물에서 강한 면역 반응을 유도할 수 있다. 이것은 표면 부착, 박테리오파지 민감성, 및 포식자, 예컨대, 아메바와의 상호작용을 비롯한, 세균 생태계의 비-병원성 측면에도 연루되어 있다. LPS는 옵틴(omptin) 활성의 적절한 입체구조를 위해 요구되나; 활면(smooth) LPS는 옵틴을 입체적으로 방해할 것이다. LPS가 그람 음성 세균의 외막의 주요 성분이기 때문에, LPS의 돌연변이 또는 제거는 그람 음성 세균의 사멸을 야기할 수 있다.

LPS는 3개의 부분을 포함한다: O 항원(또는 O 다당류), 코어 올리고당, 및 지질 A.

O 다당류 또는 O 측쇄로서도 공지되어 있는 O 항원은 세균의 LPS 내에 함유된 반복적 글리칸 중합체이다. O 항원은 코어 올리고당에 부착되고, LPS 분자의 최외각 도메인을 포함한다. O 쇄의 조성은 균주마다 다르다. 예를 들어, 상이한 이. 콜라이 균주들에 의해 생성된 160종 이상의 상이한 O 항원 구조물들이 있다(Raetz and Whitfield Annu. Rev. Biochem. 2002; 71: 635-700). O 쇄의 존재 또는 부재는 LPS가 조면 LPS로서 간주되는지 아니면 활면 LPS로서 간주되는지를 결정한다. 전체 길이 O 쇄는 LPS를 조면 LPS로 만들 것인 반면, O 쇄의 부재 또는 감소는 LPS를 활면 LPS로 만들 것이다(Rittig et al. J. Leukoc. Biol. 2003; 74 (6): 1045-55). 조면 LPS가 더 높은 소수성을 갖기 때문에(Tsujimoto et al. J. Infect. Chemother. 1999, 5 (4): 196-200), 조면 LPS를 가진 세균은 통상적으로 소수성 항생제에 대한 더 침투 가능한 세포 막을 가진다. O 항원은 세균 세포의 최외각 표면에 노출되고, 숙주 항체에 의한 인식을 위해 표적화될 수 있다.

코어 올리고당 또는 코어 도메인은 지질 A에 직접 부착되고 통상적으로 당, 예컨대, 헵토스(Hep) 및 3-데옥시-D-만노옥툴로손산(Kdo 또는 케토-데옥시옥툴로소네이트로서도 공지되어 있음)을 함유하는 올리고당 성분을 함유한다(Hershberger and Binkley, J. Biol. Chem. 1968; 243 (7): 1578-1584). 전형적인 코어 오당류 또는 코어 오당류 영역은 예를 들어, 2개의 Kdo 잔기 및 1개, 2개 또는 3개의 Hep 잔기를 포함한다. 예시적인 세균으로부터의 코어 오당류의 조성과 구조는 PCT 공개 제WO 2018/136626호(이의 전체가 본원에 참고로 포함됨)의 도 1에 표시되어 있다. 많은 세균들의 LPS 코어는 비-탄수화물 성분, 예컨대, 포스페이트, 아미노산 및 에탄올아민 치환기도 함유한다.

LPS 코어는 내부 코어 및 외부 코어를 포함할 수 있다.

내부 코어의 "염기"는 1개 내지 3개의 Kdo 잔기이다. 마지막 Kdo는 포스페이트 또는 에탄올아민 기에 의해 종종 변형된다. Kdo 잔기로부터, 통상적으로 인산화되는 부착된 2개 또는 3개의 헵토스 잔기(예를 들어, L-글리세로-D-만노헵툴로스)가 있다. 이 Kdo 및 헵토스 잔기들은 "내부 코어"를 형성한다. Kdo와 지질 A 사이의 케토시드 결합(α2→6)은 산 절단에 특히 민감하다. LPS의 지질 부분과 다당류 부분은 약산 처리에 의해 분리될 수 있다. 지질 A 및 내부 코어(또는 더 적은 부분)만을 포함하는 LPS 분자는 "깊은 조면 LPS"로서 지칭된다.

외부 코어는 내부 코어 내의 마지막 헵토스 잔기에 부착된 헥소스 잔기로 만들어진다. 외부 코어에서 종종 발견되는 헥소스는 예를 들어, D-글루코스, D-만노스 또는 D-갈락토스를 포함한다. 통상적으로 β1→3으로 결합된 적어도 3개의 헥소스가 존재하고, 이때 O 항원은 세 번째 헥소스에 라이게이션된다. 주요 올리고머로부터 분지되는 다른 헥소스는 종종 외부 코어에 부착된 상태로 발견된다. 지질 A 및 완전한 코어 올리고당(내부 및 외부)를 포함하는 LPS는 "조면 LPS"로서 지칭된다.

일부 환경에서, 지질 A는 다수의 지방산들로 장식된, 인산화된 글루코사민 이당류이다. 이 소수성 지방산 쇄는 LPS를 세균 막에 고착시키고, LPS의 나머지 부분은 세포 표면으로부터 돌출된다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 세포 표면 근처에 결합한다. 지질 A 도메인은 그람 음성 세균의 독성의 대부분의 원인이다. 세균 세포가 면역 시스템에 의해 용해될 때, 지질 A를 함유하는 막의 단편은 순환계 내로 방출되어, 열, 설사 및 가능한 치명적 내독성 쇼크(패혈증성 쇼크로서도 지칭됨)를 야기한다.

한 실시양태에서, 슈도모나스 애루기노사의 코어 글리칸이 표적화된다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 슈도모나스 애루기노사의 내부 코어 글리칸에 결합한다. 예를 들어, 에피토프는 HepI, 및 더 적은 정도로 주변 접촉부를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 활면 LPS, 조면 LPS, 또는 이들 둘 다에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 활면 LPS에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 슈도모나스 애루기노사의 활면 LPS에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 (예를 들어, 슈도모나스 애루기노사의) 활면 LPS에 결합하지만, 이. 콜라이 LPS에는 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 O-다당류에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 과인산화된 헵토스에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 슈도모나스 애루기노사 이외의 그람 음성 세균에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 합성 인산화된 헵토스 유닛에 결합한다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC(예를 들어, mAb001)는 PCT 공개 제WO 2018/136626호(이의 전체가 본원에 참고로 포함됨)의 도 29에 표시된 에피토프에 결합할 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 슈도모나스 애루기노사의 코어 글리칸은 균주들 사이에 보존되어 있고/있거나, 생체내에서 접근 가능하고/하거나 제한된 상 변이/내성 요소를 가진다고 생각된다.

한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 인산화된 LPS, 예를 들어, LPS의 인산화된 코어 오당류 영역에 결합한다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC는 슈도모나스 애루기노사의 코어 LPS 영역 내의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 포스페이트 기에 결합한다. 한 실시양태에서, 포스페이트 기는 항체 분자 또는 ADC 내의 아르기닌 잔기에 의해 결합된다. 한 실시양태에서, 포스페이트 기는 항체 분자 또는 ADC 내의 아르기닌 잔기에 의해 억제되거나 중화된다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 슈도모나스 애루기노사의 코어 LPS 영역 내의 적어도 3개의 포스페이트 기(예를 들어, Hep2,4,6-PO₄)에 결합하고, 이 기는 각각 항체 분자 또는 ADC 내의 아르기닌 잔기(예를 들어, VL 잔기 R100, 또는 VH 잔기 R101 또는 R103)에 의해 결합되거나, 억제되거나 중화된다. 예를 들어, 항체 분자의 H3 및 L3 캐비티(cavity)는 단당류를 수용할 수 있다. 예시적인 항체 분자인 mAb001에서 인산화된 글리칸(Hep2,4,6-PO₄)과 3개의 아르기닌 잔기(VL 잔기 R100, 또는 VH 잔기 R101 및 R103) 사이의 상호작용은 PCT 공개 제WO 2018/136626호(이의 전체가 본원에 참고로 포함됨)의 도 30에 예시되어 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC는 VL 잔기 R100 및/또는 VH 잔기 R101 및/또는 R103의 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개 또는 3개)의 보존적 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 보존적 치환 중 하나 이상은 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산(예를 들어, 라이신 또는 히스티딘)으로의 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VL 잔기 R100의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VH 잔기 R101의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VH 잔기 R103의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다.

이론에 의해 구속받고자 하는 것은 아니지만, 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC에 의해 표적화된 포스페이트는 세균(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사) 생존에 필수적이라고 생각된다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 슈도모나스 애루기노사 LPS의 내부 코어(예를 들어, HepI)의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 포스페이트에 결합한다. HepI의 적절한 인산화는 전형적으로 일부 그람 음성 세균들, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사에서의 외막 생합성을 위해 필요하다. HepI의 적절한 인산화의 결여로 인해 손상된 외막은 비-바이러스성 세균으로 이어질 수 있다.

이론에 의해 구속받고자 하지 않지만, 한 실시양태에서, 슈도모나스 애루기노사의 다수의 시퀀싱된 균주들에 존재하는 3개의 키나제를 포함하는 오페론이 HepI 인산화에 관여하는 것으로 생각된다. 슈도모나스에만 존재하는 이 오페론에서, waaP 및 wapP 키나제 유전자는 슈도모나스 애루기노사 균주를 위한 필수 유전자이고 전형적으로 생존을 위해 요구된다(Delucia et al. MBio. 2011; 2(4). pii: e00142-11). 상기 오페론은 슈도모나스 애루기노사의 종에 특이적이고 비-필수 키나제를 코딩하는, 추가 키나제(예를 들어, wapQ 및 적어도 하나의 추가 잠정적 키나제)를 코딩하는 유전자도 함유한다. 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC와 슈도모나스 애루기노사 사이의 결합은 전형적으로 상기 오페론의 이 비-필수 키나제 유전자의 결실에 의해 영향을 받지 않는다. 따라서, 본원에 기재된 항체 분자 및 ADC는 슈도모나스 애루기노사 균주들의 넓은 적용범위를 갖고, 슈도모나스에 감염된 환자에 대한 높은 특이성을 갖고, 내성 또는 돌연변이체 슈도모나스 애루기노사 균주와 관련된 감염을 치료하거나 예방하는 데 효과적이다.

항체 분자

본원은 세균(예를 들어, 그람 음성 세균) 및/또는 지질다당류(LPS)에 결합하는 항체 분자를 개시한다. 본원에 개시된 항체 분자-약물 접합체(ADC)는 본원에 개시된 항체 분자를 포함할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체 분자"는 적어도 하나의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질, 예를 들어, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편을 지칭한다. 용어 "항체 분자"는 예를 들어, 전체 길이 성숙 항체, 및 항체의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 항체 분자는 중쇄(H) 가변 도메인 서열(본원에서 VH로서 약칭됨) 및 경쇄(L) 가변 도메인 서열(본원에서 VL로서 약칭됨)을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 항체 분자는 2개의 중쇄(H) 가변 도메인 서열들 및 2개의 경쇄(L) 가변 도메인 서열들을 포함함으로써, 전체 항체의 변형에 의해 생성될 수 있거나 재조합 DNA 기술의 이용을 통해 새로 합성될 수 있는 2개의 항원 결합 부위, 예컨대, Fab, Fab', F(ab')2, Fc, Fd, Fd', Fv, 단일 쇄 항체(예를 들어, scFv), 단일 가변 도메인 항체, 디아바디(Dab)(2가 및 이중특이적) 및 키메라(예를 들어, 인간화된) 항체를 형성한다. 이 기능성 항체 단편들은 그들 각각의 항원 또는 수용체에 선택적으로 결합하는 능력을 보유한다. 항체 및 항체 단편은 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE를 포함하나, 이들로 제한되지 않는 항체의 임의의 클래스, 및 항체의 임의의 서브클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)로부터 유래할 수 있다. 항체 분자는 단일클론 또는 다중클론 항체 분자일 수 있다. 항체 분자는 인간, 인간화된, CDR-이식된 또는 시험관내에서 생성된 항체일 수도 있다. 항체 분자는 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 가질 수 있다. 항체 분자는 예를 들어, 카파 또는 람다로부터 선택된 경쇄도 가질 수 있다. 용어 "면역글로불린"(Ig)은 본원에서 용어 "항체"와 교환 가능하게 사용된다.

항원 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인들로 구성된 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디설파이드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편들을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인들로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인들로 구성된 Fv 단편; (v) VH 도메인으로 구성된 디아바디(dAb) 단편; (vi) 낙타과 또는 낙타과화된 가변 도메인; (vii) 단일 쇄 Fv(scFv)(예를 들어, 문헌(Bird et al. (1988) Science 242:423-426) 및 문헌(Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883) 참조); (viii) 단일 도메인 항체를 포함한다. 당분야에서 숙련된 자에게 공지되어 있는 여러 통상적인 기법들을 포함하는 임의의 적합한 방법을 이용하여 이 항체 단편들을 수득할 수 있고, 온전한 항체와 동일한 방식으로 상기 단편들을 유용성에 대해 스크리닝할 수 있다.

용어 "항체"는 온전한 분자뿐만 아니라 이의 기능성 단편도 포함한다. 항체의 특성을 변형시키기 위해(예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 이펙터 세포 기능 또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시키기 위해) 항체의 불변 영역을 변경, 예를 들어, 돌연변이시킬 수 있다.

항체 분자는 단일 쇄 항체일 수 있다. 단일 쇄 항체(scFv)는 조작될 수 있다(예를 들어, 문헌(Colcher, D. et al. (1999) Ann N Y Acad Sci 880:263-80) 및 문헌(Reiter, Y. (1996) Clin Cancer Res 2:245-52) 참조). 단일 쇄 항체를 이량체화하거나 다량체화하여, 동일한 표적 단백질의 상이한 에피토프들에 대한 특이성을 가진 다가 항체를 생성할 수 있다.

본원에 개시된 항체 분자는 단일 도메인 항체일 수도 있다. 단일 도메인 항체는 상보성 결정 영역이 단일 도메인 폴리펩타이드의 일부인 항체를 포함할 수 있다. 예는 중쇄 항체, 경쇄를 천연적으로 결여하는 항체, 통상적인 4-쇄 항체로부터 유래한 단일 도메인 항체, 조작된 항체, 및 항체로부터 유래한 단일 도메인 스캐폴드 이외의 단일 도메인 스캐폴드를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 단일 도메인 항체는 당분야의 임의의 단일 도메인 항체, 또는 임의의 장래 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 마우스, 인간, 낙타, 라마, 어류, 상어, 염소, 토끼 및 소를 포함하나, 이들로 제한되지 않는 임의의 종으로부터 유래할 수 있다. 일부 측면에 따르면, 단일 도메인 항체는 경쇄를 결여하는 중쇄 항체로서 공지되어 있는 천연 생성 단일 도메인 항체이다. 이러한 단일 도메인 항체는 예를 들어, 국제 특허출원 공개 제WO 94/04678호에 개시되어 있다. 명료성 이유로, 경쇄를 천연적으로 결여하는 중쇄 항체로부터 유래한 이 가변 도메인은 본원에서 이것을 4-쇄 면역글로불린의 통상적인 VH와 구별하기 위해 VHH 또는 나노바디로서 공지되어 있다. 이러한 VHH 분자는 낙타과 종, 예를 들어, 낙타, 라마, 단봉낙타, 알파카 및 과나코에서 생성된 항체로부터 유래할 수 있다. 낙타과 이외의 다른 종도 경쇄를 천연적으로 결여하는 중쇄 항체를 생성할 수 있고; 이러한 VHH도 고려된다.

VH 및 VL 영역은 "프레임워크 영역"(FR 또는 FW)으로서 명명된, 보다 더 잘 보존된 영역에 의해 산재된, "상보성 결정 영역"(CDR)으로서 명명된 초가변 영역으로 세분될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "상보성 결정 영역" 및 "CDR"은 항원 특이성 및 결합 친화성을 부여하는, 항체 가변 영역 내의 아미노산 서열을 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "프레임워크", "FW" 및 "FR"은 교환 가능하게 사용된다.

프레임워크 영역 및 CDR의 정도는 다수의 방법들에 의해 정확히 정의되었다(문헌(Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242); 문헌(Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917); 및 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된 AbM 정의 참조). 일반적으로, 예를 들어, 문헌(Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg))을 참조한다. 한 실시양태에서, 하기 정의가 사용된다: 중쇄 가변 도메인의 CDR1의 AbM 정의 및 다른 CDR에 대한 카바트 정의. 한 실시양태에서, 카바트 정의는 모든 CDR들에 대해 사용된다. 추가로, 카바트 또는 AbM CDR에 대해 기재된 실시양태는 초티아 초가변 루프를 사용함으로써 실시될 수도 있다. 각각의 VH 및 VL은 전형적으로 아미노-말단부터 카르복시-말단까지 하기 순서로 정렬된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4.

본원에서 사용된 바와 같이, "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 지칭한다. 예를 들어, 상기 서열은 천연 생성 가변 도메인의 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 서열은 1개 또는 2개 이상의 N-말단 또는 C-말단 아미노산을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있거나, 단백질 구조의 형성과 양립 가능한 다른 변경을 포함할 수 있다.

용어 "항원 결합 영역"은 항원, 예를 들어, 지질다당류(LPS), 또는 이의 에피토프에 결합하는 계면을 형성하는 결정인자를 포함하는 항체 분자의 일부를 지칭한다. 단백질(또는 단백질 모방체)에 대하여, 항원 결합 영역은 전형적으로 항원, 예를 들어, LPS에 결합하는 계면을 형성하는 하나 이상의 루프(예를 들어, 적어도 4개의 아미노산 또는 아미노산 모방체)를 포함한다. 전형적으로, 항체 분자의 항원 결합 영역은 적어도 1개 또는 2개의 CDR 및/또는 초가변 루프, 또는 보다 전형적으로 적어도 3개, 4개, 5개 또는 6개의 CDR 및/또는 초가변 루프를 포함한다.

용어 "경쟁한다" 또는 "교차경쟁한다"는 항-LPS 항체 분자, 예를 들어, 본원에서 제공된 항-LPS 항체 분자와 표적, 예를 들어, 그람 음성 세균의 LPS의 결합을 방해하는 항체 분자의 능력을 지칭하기 위해 본원에서 교환 가능하게 사용된다. 결합의 방해는 직접적일 수 있거나 간접적일 수 있다(예를 들어, 항체 분자 또는 표적의 알로스테릭 조절을 통한 방해). 항체 분자가 또 다른 항체 분자와 표적의 결합을 방해할 수 있는 정도와, 이로써 항체 분자가 경쟁한다고 말할 수 있는지 여부는 경쟁 결합 어세이, 예를 들어, FACS 어세이, ELISA, SPR 어세이 또는 OCTET^® 어세이(ForteBio)를 이용함으로써 확인될 수 있다. 한 실시양태에서, 경쟁 결합 어세이는 정량적 경쟁 어세이이다. 한 실시양태에서, 경쟁 결합 어세이(예를 들어, 본원에 기재된 경쟁 어세이)에서 제1 항체 분자와 표적의 결합이 10% 이상, 예를 들어, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상 감소될 때, 제1 항-LPS 항체 분자가 표적과의 결합에 대해 제2 항-LPS 항체 분자와 경쟁한다고 말한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단일클론 항체" 또는 "단일클론 항체 조성물"은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 단일클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다. 단일클론 항체는 하이브리도마 기술, 또는 하이브리도마 기술을 이용하지 않는 방법(예를 들어, 재조합 방법)에 의해 제조될 수 있다.

"효과적인 인간" 단백질은 중화 항체 반응, 예를 들어, 인간 항-뮤린 항체(HAMA) 반응을 일으키지 않는 단백질이다. HAMA는 다수의 환경들, 예를 들어, 항체 분자가 반복적으로 투여되는 경우, 예를 들어, 만성 또는 재발성 질환 상태의 치료에 있어서 문제점이 될 수 있다. HAMA 반응은 혈청으로부터의 증가된 항체 제거(예를 들어, 문헌(Saleh et al., Cancer Immunol. Immunother. 32:180-190 (1990)) 참조) 및 잠재적인 알레르기 반응(예를 들어, 문헌(LoBuglio et al., Hybridoma, 5:5117-5123 (1986)) 참조) 때문에 반복된 항체 투여를 잠재적으로 비효과적으로 만들 수 있다.

항체 분자는 다중클론 또는 단일클론 항체일 수 있다. 한 실시양태에서, 항체는 재조합적으로 생성될 수 있고, 예를 들어, 임의의 적합한 파지 디스플레이 또는 조합적 방법에 의해 생성될 수 있다.

항체를 생성하는 다양한 파지 디스플레이 및 조합적 방법들이 당분야에서 공지되어 있다(예를 들어, 내용이 본원에 참고로 포함되는 문헌(Ladner et al. 미국 특허 제5,223,409호; Kang et al. 국제 특허출원 공개 제WO 92/18619호; Dower et al. 국제 특허출원 공개 제WO 91/17271호; Winter et al. 국제 특허출원 공개 제WO 92/20791호; Markland et al. 국제 특허출원 공개 제WO 92/15679호; Breitling et al. 국제 특허출원 공개 제WO 93/01288호; McCafferty et al. 국제 특허출원 공개 제WO 92/01047호; Garrard et al. 국제 특허출원 공개 제WO 92/09690호; Ladner et al. 국제 특허출원 공개 제WO 90/02809호; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; Griffths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al. (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; and Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982)에 기재되어 있음).

한 실시양태에서, 항체 분자는 전체 인간 항체(예를 들어, 인간 면역글로불린 서열로부터 항체를 생성하도록 유전적으로 조작된 마우스에서 제조된 항체) 또는 비인간 항체, 예를 들어, 설치류(마우스 또는 래트), 염소, 영장류(예를 들어, 원숭이), 낙타 항체이다. 한 실시양태에서, 비인간 항체는 설치류(마우스 또는 래트) 항체이다. 설치류 항체를 제조하는 방법은 당분야에서 공지되어 있다.

인간 단일클론 항체는 마우스 시스템보다 오히려 인간 면역글로불린 유전자를 보유하는 형질전환 마우스를 사용함으로써 생성될 수 있다. 관심 있는 항원으로 면역화된 이 형질전환 마우스의 비장세포를 사용하여, 인간 단백질의 에피토프에 대한 특이적 친화성을 가진 인간 mAb를 분비하는 하이브리도마를 생성한다(예를 들어, 문헌(Wood et al. 국제 특허출원 공개 제WO 91/00906호, Kucherlapati et al. PCT 공개 제WO 91/10741호; Lonberg et al. 국제 특허출원 공개 제WO 92/03918호; Kay et al. 국제 특허출원 공개 제WO 92/03917호; Lonberg, N. et al. 1994 Nature 368:856-859; Green, L.L. et al. 1994 Nature Genet. 7:13-21; Morrison, S.L. et al. 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855; Bruggeman et al. 1993 Year Immunol 7:33-40; Tuaillon et al. 1993 PNAS 90:3720-3724; Bruggeman et al. 1991 Eur J Immunol 21:1323-1326) 참조).

항체는 가변 영역 또는 이의 일부, 예를 들어, CDR이 비인간 유기체, 예를 들어, 래트 또는 마우스에서 생성된 항체일 수 있다. 키메라 항체, CDR-이식된 항체 및 인간화된 항체는 본 발명 내에 있다. 비인간 유기체, 예를 들어, 래트 또는 마우스에서 생성된 후, 인간에서의 항원성을 감소시키도록, 예를 들어, 가변 프레임워크 또는 불변 영역에서 변형된 항체는 본 발명 내에 있다.

키메라 항체는 임의의 적합한 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 수 있다. 여러 기법들이 당분야에서 공지되어 있다(문헌(Robinson et al., 국제 특허출원 제PCT/US86/02269호; Akira, et al., 유럽 특허출원 제184,187호; Taniguchi, M., 유럽 특허출원 제171,496호; Morrison et al., 유럽 특허출원 제173,494호; Neuberger et al., 국제 특허출원 공개 제WO 86/01533호; Cabilly et al. 미국 특허 제4,816,567호; Cabilly et al., 유럽 특허출원 제125,023호; Better et al. (1988 Science 240:1041-1043); Liu et al. (1987) PNAS 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al. (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Canc. Res. 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-449; and Shaw et al., 1988, J. Natl Cancer Inst. 80:1553-1559) 참조).

인간화된 또는 CDR-이식된 항체는 공여체 CDR로 대체된 (면역글로불린 중쇄 및/또는 경쇄의) 적어도 1개 또는 2개, 그러나 일반적으로 모든 3개의 수용체 CDR을 가질 것이다. 상기 항체가 비인간 CDR의 적어도 일부로 대체될 수 있거나, CDR들 중 일부만이 비인간 CDR로 대체될 수 있다. 인간화된 항체와 지질다당류의 결합을 위해 요구된 수의 CDR만을 대체할 필요가 있다. 한 실시양태에서, 공여체는 설치류 항체, 예를 들어, 래트 또는 마우스 항체일 것이고, 수용체는 인간 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크일 것이다. 전형적으로, CDR을 제공하는 면역글로불린은 "공여체"로서 지칭되고, 프레임워크를 제공하는 면역글로불린은 "수용체"로서 지칭된다. 한 실시양태에서, 공여체 면역글로불린은 비인간(예를 들어, 설치류) 면역글로불린이다. 수용체 프레임워크는 전형적으로 천연 생성(예를 들어, 인간) 프레임워크 또는 컨센서스 프레임워크, 또는 이와 약 85% 이상, 예를 들어, 90%, 95% 또는 99% 이상 동일한 서열이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "컨센서스 서열"은 관련된 서열들의 패밀리에서 가장 빈번히 발견되는 아미노산(또는 뉴클레오타이드)로부터 형성된 서열을 지칭한다(예를 들어, 문헌(Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987)) 참조). 단백질들의 패밀리에서, 컨센서스 서열 내의 각각의 위치는 상기 패밀리에서 그 위치에서 가장 빈번히 발견되는 아미노산에 의해 점유된다. 2개의 아미노산들이 동등하게 빈번히 발견되는 경우, 이들 중 어느 하나가 컨센서스 서열에 포함될 수 있다. "컨센서스 프레임워크"는 컨센서스 면역글로불린 서열 내의 프레임워크 영역을 지칭한다.

항체는 임의의 적합한 방법에 의해 인간화될 수 있고, 여러 이러한 방법들이 당분야에서 공지되어 있다(예를 들어, 내용이 본원에 참고로 포함되는 문헌(Morrison, S. L., 1985, Science 229:1202-1207), 문헌(Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214), 및 미국 특허 제5,585,089호, 제5,693,761호 및 제5,693,762호(Queen et al.) 참조).

인간화된 또는 CDR-이식된 항체는 CDR 이식 또는 CDR 치환에 의해 생성될 수 있고, 이때 면역글로불린 쇄의 1개, 2개 또는 모든 CDR이 대체될 수 있다. 예를 들어, 내용이 본원에 명확히 참고로 포함되는 미국 특허 제5,225,539호; 문헌(Jones et al. 1986 Nature 321:552-525); 문헌(Verhoeyan et al. 1988 Science 239:1534); 문헌(Beidler et al. 1988 J. Immunol. 141:4053-4060); 및 원터(Winter)의 미국 특허 제5,225,539호를 참조한다. 윈터는 인간화된 항체를 제조하는 이용될 수 있는 CDR 이식 방법을 기술한다(내용이 명확히 참고로 포함되는, 1987년 3월 26일에 출원된 영국 특허출원 제2188638A호; 및 원터의 미국 특허 제5,225,539호).

특정 아미노산이 치환되어 있거나, 결실되어 있거나 추가되어 있는 인간화된 항체도 제공된다. 공여체로부터의 아미노산을 선택하기 위한 기준은 예를 들어, 내용이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제5,585,089호, 예를 들어, 미국 특허 제5,585,089호의 컬럼 12 내지 16에 기재되어 있다. 항체를 인간화하는 다른 기법은 1992년 12월 23일에 공개된 유럽 특허출원 제519596A1호(Padlan et al.)호에 기재되어 있다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된, 특히 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 중쇄 불변 영역(예를 들어, 인간 중쇄 불변 영역)으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 카파 또는 람다의 경쇄 불변 영역(예를 들어, 인간 경쇄 불변 영역)으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 가진다. 불변 영역은 항체 분자의 특성을 변형시키도록(예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 이펙터 세포 기능, 및/또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시키도록) 변경될, 예를 들어, 돌연변이될 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 이펙터 기능을 갖고 보체를 고정시킬 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자는 이펙터 세포를 동원하지 않거나 보체를 고정시키지 않는다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 Fc 수용체에 결합하는 능력이 감소되어 있거나 이 능력을 갖지 않는다. 예를 들어, 항체 분자는 Fc 수용체와의 결합을 뒷받침하지 않는 이소타입 또는 서브타입, 단편 또는 다른 돌연변이체일 수 있고, 예를 들어, 항체 분자는 돌연변이된 또는 결실된 Fc 수용체 결합 영역을 가진다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 ADCC 활성을 증가시키도록 변경된 Fc 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADCC 활성은 10배 이상, 예를 들어, 25배 이상, 50배 이상, 100배 이상, 200배 이상, 400배 이상, 600배 이상, 800배 이상 또는 1000배 이상, 예를 들어, 100배 내지 1000배, 또는 250배 내지 750배까지 증가된다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 Fcγ 수용체와의 맞물림 또는 옵소닌식작용 활성을 조절하도록 변경된 Fc 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 FcRn 수용체와의 맞물림을 조절하도록 변경된 Fc 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자의 불변 영역은 변경된다. 항체 불변 영역을 변경시키는 방법은 당분야에서 공지되어 있다. 변경된 기능, 예를 들어, 이펙터 리간드, 예컨대, 세포의 FcR, 또는 보체의 C1 성분에 대한 변경된 친화성을 가진 항체 분자는 항체의 불변 부분 내의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 잔기로 대체함으로써 생성될 수 있다(예를 들어, 내용이 본원에 참고로 포함되는 유럽 특허출원 제388,151A1호, 미국 특허 제5,624,821호 및 미국 특허 제5,648,260호 참조). 항체 구조를 안정화시키는 아미노산 돌연변이, 예컨대, 인간 IgG4 내의 S228P(EU 명명법, 카바트 명명법의 경우 S241P)도 고려된다. 뮤린 또는 다른 종 면역글로불린에 적용되는 경우 이 기능들을 감소시키거나 제거할 유사한 유형의 변경이 기재될 수 있다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 향상된 옵소닌식작용 활성(OPA), 보체 의존적 세포독성(CDC) 또는 이들 둘 다를 위해 Fc 수용체, 예를 들어, FcγRIIa, FcγRII, C1q 또는 이들의 조합과 최적으로 맞물리도록 조작된다. 이론에 의해 구속받고자 하는 것은 아니지만, 한 실시양태에서, OPA는 항체의 Fc 영역과 활성화 수용체 FcγRIIa 및 억제 수용체 FcγRIIb의 맞물림에 의해 매개될 수 있다고 생각된다. 한 실시양태에서, FcγRIIb에 비해 FcγRIIa와의 맞물림을 선택적으로 향상시키는 Fc의 돌연변이는 예를 들어, FcγRIIa 및 FcγRIIb를 가진 Fc의 해상된 결정 구조를 사용함으로써 확인될 수 있다. 하나 이상의 Fc 맞물림 향상 돌연변이를 보유하는 항체 분자 또는 ADC를 OPA 어세이에서 평가할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 예를 들어, 세균에의 보체 침착 및 세균의 CDC 매개 사멸을 촉진하기 위해, C1q 복합체와의 결합을 증가시키는 Fc 돌연변이를 확인할 수 있다. 하나 이상의 C1q 친화성 향상 돌연변이를 보유하는 항체 분자 또는 ADC를 CDC 어세이에서 평가할 수 있다.

한 실시양태에서, 항체 분자의 아미노산은 오로지 정규 아미노산이다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 천연 생성 아미노산; 이의 유사체, 유도체 및 동족체; 변이체 측쇄를 가진 아미노산 유사체; 및/또는 이들 중 임의의 물질의 모든 입체이성질체들을 포함한다. 항체 분자는 아미노산의 D 또는 L 광학 이성질체, 및 펩타이드 모방체를 포함할 수 있다.

본원에 기재된 항체 분자의 폴리펩타이드는 선형 또는 분지된 폴리펩타이드일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 비-아미노산에 의해 불연속될 수 있다. 항체 분자는 예를 들어, 디설파이드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작, 예컨대, 표지부착 성분과의 접합에 의해 변형될 수도 있다. 폴리펩타이드는 천연 공급원으로부터 단리될 수 있거나, 진핵 또는 원핵 숙주로부터 재조합 기법에 의해 생성될 수 있거나, 합성 절차의 생성물일 수 있다.

본원에 기재된 항체 분자는 비접합된 형태로 단독으로 사용될 수 있거나, 물질, 예를 들어, 독소 또는 모이어티(예를 들어, 치료 약물(예를 들어, 항생제); 방사선을 방사하는 화합물; 식물, 진균 또는 세균 유래의 분자; 또는 생물학적 단백질(예를 들어, 단백질 독소) 또는 입자(예를 들어, 바이러스 코트 단백질을 통해, 예를 들어, 재조합 바이러스 입자)에 결합될 수 있다. 예를 들어, 항-LPS 항체는 방사성 동위원소, 예컨대, α, β 또는 γ 방사체, 또는 β 및 γ 방사체에 커플링될 수 있다.

항체 분자는 유도체화될 수 있거나 또 다른 기능성 분자(예를 들어, 또 다른 펩타이드 또는 단백질)에 연결될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "유도체화된" 항체 분자는 변형된 항체 분자이다. 유도체화 방법은 형광 모이어티, 방사뉴클레오타이드, 독소, 효소 또는 친화성 리간드, 예컨대, 바이오틴의 추가를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 따라서, 항체 분자는 면역부착 분자를 포함하는, 본원에 기재된 항체의 유도체화된 형태 및 다른 방식으로 변형된 형태를 포함하기 위한 것이다. 예를 들어, 항체 분자는 (화학적 커플링, 유전적 융합, 비-공유결합 또는 다른 방식에 의해) 하나 이상의 다른 분자 독립체, 예컨대, 또 다른 항체(예를 들어, 이중특이적 항체 또는 디아바디), 검출 가능한 작용제, 독소, 약제, 및/또는 항체 또는 항체 일부와 또 다른 분자(예컨대, 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그)의 결합을 매개할 수 있는 단백질 또는 펩타이드에 기능적으로 연결될 수 있다.

일부 유형의 유도체화된 항체 분자들은 (예를 들어, 이중특이적 항체를 생성하기 위해 동일한 유형 또는 상이한 유형의) 2개 이상의 항체들을 가교결합시킴으로써 생성된다. 적합한 가교링커는 적절한 스페이서에 의해 분리된 2개의 상이한 반응성 기들을 가진 이종이작용성 가교링커(예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르), 또는 동종이작용성 가교링커(예를 들어, 디석신이미딜 수버레이트)를 포함한다. 이러한 링커는 피어스 케미칼 컴퍼니(Pierce Chemical Company, 일리노이주 록포드 소재)로부터 입수될 수 있다.

항-LPS 항체 분자의 유도체화(또는 표지부착)에 사용될 수 있는 유용한 검출 가능한 작용제는 형광 화합물, 다양한 효소들, 보결분자단, 발광 물질, 생체발광 물질, 형광 방사 금속 원자, 예를 들어, 유로퓸(Eu) 및 다른 안타나이드(anthanide), 및 방사성 물질(이하에 기재됨)을 포함한다. 예시적인 형광 검출 가능한 작용제는 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 5-디메틸아민-1-나프탈렌설포닐 클로라이드, 파이코에리쓰린 등을 포함한다. 항체는 검출 가능한 효소, 예컨대, 알칼리성 포스파타제, 호스라디쉬 퍼록시다제, β-갈락토시다제, 아세틸콜린에스터라제, 글루코스 옥시다제 등에 의해 유도체화될 수도 있다. 항체가 검출 가능한 효소에 의해 유도체화될 때, 이 항체는 효소가 사용하는 추가 시약을 첨가하여 검출 가능한 반응 생성물을 생성함으로써 검출된다. 예를 들어, 검출 가능한 작용제 호스라디쉬 퍼록시다제가 존재할 때, 과산화수소 및 디아미노벤지딘의 첨가는 검출 가능한 착색된 반응 생성물을 이끌어낸다. 항체 분자는 보결분자단(예를 들어, 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴)에 의해 유도체화될 수도 있다. 예를 들어, 항체는 바이오틴에 의해 유도체화될 수 있고, 아비딘 또는 스트렙타비딘 결합의 간접적인 측정을 통해 검출될 수 있다. 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 댄실 클로라이드 또는 파이코에리쓰린을 포함하고; 발광 물질의 예는 루미놀을 포함하고; 생체발광 물질의 예는 루시퍼라제, 루시페린 및 에쿠오린을 포함한다.

표지부착된 항체 분자는 예를 들어, (i) 표준 기법, 예컨대, 친화성 크로마토그래피 또는 면역침전으로 소정의 항원을 단리하는 것; (ii) 단백질 발현의 존재도 및 패턴을 평가하기 위해 (예를 들어, 세포 용해물 또는 세포 상청액에서) 소정의 항원을 검출하는 것; 및 (iii) 예를 들어, 주어진 치료법의 효능을 확인하기 위해 임상 시험 절차의 일부로서 조직에서 단백질 수준을 모니터링하는 것을 포함하는 다수의 환경들에서 진단적 및/또는 실험적으로 사용될 수 있다.

항체 분자는 또 다른 분자 독립체, 전형적으로 표지, 또는 치료(예를 들어, 항미생물(예를 들어, 항균 또는 살균), 면역조절, 면역자극, 세포독성 또는 세포증식억제) 작용제 또는 모이어티에 접합될 수 있다. 방사성 동위원소는 진단 또는 치료 적용에 사용될 수 있다. 항체 분자에 커플링될 수 있는 방사성 동위원소는 α, β 또는 γ 방사체, 또는 β 및 γ 방사체를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 방사성 동위원소는 요오드(¹³¹I 또는 ¹²⁵I), 이트륨(⁹⁰Y), 루테튬(¹⁷⁷Lu), 악티늄(²²⁵Ac), 프라세오디뮴, 아스타틴(²¹¹At), 레늄(¹⁸⁶Re), 비스무쓰(²¹²Bi 또는 ²¹³Bi), 인듐(¹¹¹In), 테크네튬(⁹⁹mTc), 인(³²P), 로듐(¹⁸⁸Rh), 황(³⁵S), 탄소(¹⁴C), 삼중수소(³H), 크로뮴(⁵¹Cr), 염소(³⁶Cl), 코발트(⁵⁷Co 또는 ⁵⁸Co), 철(⁵⁹Fe), 셀레늄(⁷⁵Se) 또는 갈륨(⁶⁷Ga)을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 치료제로서 유용한 방사성 동위원소는 이트륨(⁹⁰Y), 루테튬(¹⁷⁷Lu), 악티늄(²²⁵Ac), 프라세오디뮴, 아스타틴(²¹¹At), 레늄(¹⁸⁶Re), 비스무쓰(²¹²Bi 또는 ²¹³Bi) 및 로듐(¹⁸⁸Rh)을 포함한다. 예를 들어, 진단제에 사용될 표지로서 유용한 방사성 동위원소는 요오드(¹³¹I 또는 ¹²⁵I), 인듐(¹¹¹In), 테크네튬(⁹⁹mTc), 인(³²P), 탄소(¹⁴C) 및 삼중수소(³H), 또는 상기 나열된 치료 동위원소들 중 하나 이상을 포함한다.

본 개시내용은 방사성 표지부착된 항체 분자 및 이를 표지부착하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 항체 분자를 표지부착하는 방법이 개시되어 있다. 이 방법은 항체 분자를 킬레이팅제와 접촉시킴으로써, 접합된 항체를 생성하는 단계를 포함한다. 접합된 항체를 방사성 동위원소, 예를 들어, ¹¹¹인듐, ⁹⁰이트륨 및 ¹⁷⁷루테튬으로 방사성 표지부착함으로써, 표지부착된 항체 분자를 생성한다.

상기 논의된 바와 같이, 항체 분자는 치료제에 접합될 수 있다. 치료 활성 방사성 동위원소는 이미 언급되어 있다. 다른 치료제의 예는 항미생물(예를 들어, 항균) 작용제, 예를 들어, 항미생물 펩타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 항체 분자, 예를 들어, 항체 분자의 중쇄 또는 경쇄에 커플링(예를 들어, 융합)될 수 있다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 기능성 단편의 N-말단에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 기능성 단편의 C-말단에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 불변 영역 또는 이의 일부에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 일부와 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 오픈 리딩 프레임(ORF)에 의해 코딩된 융합 폴리펩타이드를 형성한다. 하나 이상의 항미생물 펩타이드는 항체 분자에 커플링(예를 들어, 융합)될 수 있다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드들 중 적어도 2개의 항미생물 펩타이드들은 동일하거나 실질적으로 동일하다. 또 다른 실시양태에서, 항미생물 펩타이드들 중 적어도 2개의 항미생물 펩타이드들은 상이하다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드들 전부가 동일하거나 실질적으로 동일하다.

일부 측면에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체 분자를 제조하는 방법을 제공한다. 이 방법은 항원, 예를 들어, 세균(예를 들어, 그람 음성 세균) 또는 LPS를 제공하는 단계; 항원에 특이적으로 결합하는 항체 분자를 수득하는 단계; 항원 및/또는 항원을 발현하는 유기체, 예를 들어, 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)의 활성을 조절하는 데 있어서 항체 분자의 효능을 평가하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 항체 분자의 유도체(예를 들어, 인간화된 항체 분자)를 비롯한 항체 분자를 대상체, 예를 들어, 인간에게 투여하는 단계도 포함할 수 있다.

본 개시내용은 상기 항체 분자를 코딩하는 단리된 핵산 분자, 이의 벡터 및 숙주 세포를 제공한다. 상기 핵산 분자는 RNA, 게놈 DNA 및 cDNA를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

항체 분자의 예시적인 서열은 하기 표 1 내지 3에 기재되어 있다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 CDR의 카바트 또는 초티아 정의를 사용하는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VH 영역의 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 CDR의 카바트 또는 초티아 정의를 사용하는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VL 영역의 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 CDR의 카바트 또는 초티아 정의를 사용하는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VH 영역의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 CDR 및/또는 VL 영역의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 CDR을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 1개, 2개 또는 3개의 HCDR을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 1개, 2개 또는 3개의 LCDR을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 HCDR 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 LCDR을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VH 영역의 1개, 2개, 3개 또는 4개의 프레임워크를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VL 영역의 1개, 2개, 3개 또는 4개의 프레임워크를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VH 영역의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개 또는 4개)의 프레임워크 및 VL 영역의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개 또는 4개)의 프레임워크를 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 아미노산 서열을 가진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 아미노산 서열을 가진 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 아미노산 서열을 가진 중쇄 가변 영역 및 표 1 또는 3에 기재된 아미노산 서열을 가진 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC는 VL 잔기 R100 및/또는 VH 잔기 R101 및/또는 R103의 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개 또는 3개)의 보존적 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 보존적 치환 중 하나 이상은 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산(예를 들어, 라이신 또는 히스티딘)으로의 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VL 잔기 R100의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VH 잔기 R101의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VH 잔기 R103의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 중쇄 가변 영역 및 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 경쇄 가변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자의 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자의 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 LPS의 코어 오당류 영역에 결합한다. 한 실시양태에서, 코어 오당류 영역은 하나 이상(예를 들어, 2개)의 Kdo 잔기 및 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 Hep 잔기를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 하나 이상(예를 들어, 2개)의 Kdo 잔기 또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 Hep 잔기, 또는 이들의 임의의 조합에 결합한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 108)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 109)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 105)을 포함하는 HCDR1; 항체 mAb001의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 106)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 mAb001의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 107)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 110)을 포함하는 LCDR1; 항체 mAb001의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 111)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 mAb001의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 112)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 하나 이상의 인간 또는 인간 유래의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 프레임워크를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 103)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 103)을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 104)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 104)을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 103)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 104)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 103)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 mAb001의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 104)을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 113)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 114)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 17)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 18)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 17)을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 18)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 17)을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 18)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 17)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 18)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 17)을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 18)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 17)을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 18)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 14)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 14)을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 14)을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 14)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 14)을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 14)을 포함하는 HCDR1; 항체 A001-25의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 A001-25의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 16)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 49)을 포함하는 LCDR1; 항체 A001-25의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 50)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 A001-25의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 51)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 하나 이상의 인간 또는 인간 유래의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 프레임워크를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 8)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 8)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 8)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 A001-25의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 8)을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 81)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 88)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 22)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 23)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 22)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 23)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 22)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 23)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 hWN01의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWN01의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWN01의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWN01의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWN01의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 hWN01의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 22)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 23)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 hWN01의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWN01의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 22)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 23)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWN01의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWN01의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 22)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 23)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWN01의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 hWN01의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 20)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 20)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 20)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 20)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 hWN01의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWN01의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 20)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWN01의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWN01의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWN01의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 2)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 2)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 2)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 2)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWN01의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 82)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 89)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 27)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 28)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 27)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 28)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 27)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 28)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 27)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 28)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 27)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 28)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 27)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 28)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 25)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 25)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 25)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWN01의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 25)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 25)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 19)을 포함하는 HCDR1; 항체 hWNv1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 25)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 hWNv1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 21)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 hWNv1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 52)을 포함하는 LCDR1; 항체 hWNv1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 53)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 hWNv1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 54)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 hWNv1의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 hWNv1의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 hWNv1의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 hWNv1의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 hWNv1의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 hWNv1의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 hWNv1의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 hWNv1의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 83)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 89)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 32)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 33)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 32)을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 33)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 32)을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 33)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 32)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 33)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 32)을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 33)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 32)을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 33)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 29)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 30)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 29)을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 30)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 29)을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 30)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 29)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 30)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 29)을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 30)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3E7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 29)을 포함하는 HCDR1; 항체 3E7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 30)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3E7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 31)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3E7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 55)을 포함하는 LCDR1; 항체 3E7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 56)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3E7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 57)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3E7의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 4)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 3E7의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 4)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3E7의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 10)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 3E7의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 10)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3E7의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 4)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3E7의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 10)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 3E7의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 4)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3E7의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 10)을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 84)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 90)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 37)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 38)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 37)을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 38)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 37)을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 38)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 37)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 38)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 37)을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 38)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 37)을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 38)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 34)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 35)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 34)을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 35)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 34)을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 35)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 34)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 35)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 34)을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 35)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3G1의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 34)을 포함하는 HCDR1; 항체 3G1의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 35)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3G1의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 36)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3G1의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 58)을 포함하는 LCDR1; 항체 3G1의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 59)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3G1의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 60)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3G1의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 3G1의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3G1의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 3G1의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3G1의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3G1의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 3G1의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3G1의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11)을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 85)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 91)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 42)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 43)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 42)을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 43)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 42)을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 43)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 42)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 43)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 42)을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 43)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 42)을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 43)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 39)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 40)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 39)을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 40)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 39)을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 40)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 39)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 40)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 39)을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 40)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 2C7의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 39)을 포함하는 HCDR1; 항체 2C7의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 40)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 2C7의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 41)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 2C7의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 61)을 포함하는 LCDR1; 항체 2C7의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 62)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 2C7의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 63)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 2C7의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 6)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 2C7의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 6)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 2C7의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 12)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 2C7의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 12)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 2C7의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 6)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 2C7의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 12)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 2C7의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 6)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 2C7의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 12)을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 86)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 92)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 47)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 48)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 47)을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 48)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 47)을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 48)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 47)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 48)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 47)을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 48)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 47)을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 48)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 44)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 45)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 44)을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 45)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 44)을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 45)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 44)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 45)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 44)을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 45)을 포함하는 HCDR2; 또는 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)을 포함하는 LCDR2; 또는 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항체 3D6의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 44)을 포함하는 HCDR1; 항체 3D6의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 45)을 포함하는 HCDR2; 및 항체 3D6의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 46)을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 항체 3D6의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 64)을 포함하는 LCDR1; 항체 3D6의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 65)을 포함하는 LCDR2; 및 항체 3D6의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 66)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3D6의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 3D6의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3D6의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 3D6의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3D6의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3D6의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 3D6의 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3D6의 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13)을 포함한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 87)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 2로부터의 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열번호 93)에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 VH는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, VH는 표 3에 기재된 VH의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 표 3에 기재된 VH의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 표 3에 기재된 VH의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, VH는 표 3에 기재된 VH의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR1; 표 3에 기재된 VH의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR2; 또는 표 3에 기재된 VH의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, VH는 표 3에 기재된 VH의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR1; 표 3에 기재된 VH의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR2; 및 표 3에 기재된 VH의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 VL은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, VL은 표 3에 기재된 VL의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 표 3에 기재된 VL의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 표 3에 기재된 VL의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, VL은 표 3에 기재된 VL의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR1; 표 3에 기재된 VL의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR2; 또는 표 3에 기재된 VL의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, VL은 표 3에 기재된 VL의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR1; 표 3에 기재된 VL의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR2; 및 표 3에 기재된 VL의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, VL은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 VH는 표 3에 기재된 VH의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 표 3에 기재된 VH의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 또는 표 3에 기재된 VH의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고; VL은 표 3에 기재된 VL의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 표 3에 기재된 VL의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 또는 표 3에 기재된 VL의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, VH는 표 3에 기재된 VH의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR1; 표 3에 기재된 VH의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR2; 또는 표 3에 기재된 VH의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고; VL은 표 3에 기재된 VL의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR1; 표 3에 기재된 VL의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR2; 또는 표 3에 기재된 VL의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, VH는 표 3에 기재된 VH의 HCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR1; 표 3에 기재된 VH의 HCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR2; 및 표 3에 기재된 VH의 HCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL은 표 3에 기재된 VL의 LCDR1의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR1; 표 3에 기재된 VL의 LCDR2의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR2; 및 표 3에 기재된 VL의 LCDR3의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 VH는 표 3에 기재된 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VH는 표 3에 기재된 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 VL은 표 3에 기재된 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VL은 표 3에 기재된 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 VH는 표 3에 기재된 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고, VL은 표 3에 기재된 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VH는 표 3에 기재된 VH의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 115 내지 118 중 임의의 아미노산 서열)을 포함하고, VL은 표 3에 기재된 VL의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 119 내지 137 중 임의의 아미노산 서열)을 포함한다.

한 실시양태에서, HCCDR1, HCCDR2 및 HCCDR3은 표 3에 기재된 동일한 VH로부터 유래한다. 한 실시양태에서, LCCDR1, LCCDR2 및 LCCDR3은 표 3에 기재된 동일한 VL로부터 유래한다.

표 3에 개시된 VH 아미노산 서열들(또는 이들의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열들) 중 임의의 아미노산 서열(또는 이 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나, 이 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 서열)은 표 3에 개시된 VL 아미노산 서열들(또는 이들의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열들) 중 임의의 아미노산 서열(또는 이 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나, 이 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 서열)과 조합되어, 예를 들어, 인간화된 항체 분자를 형성할 수 있다. 예시적인 조합은 하기 조합들을 포함한다: 서열번호 103 및 104; 서열번호 103 및 119; 서열번호 103 및 120; 서열번호 103 및 121; 서열번호 103 및 122; 서열번호 103 및 123; 서열번호 103 및 124; 서열번호 103 및 125; 서열번호 103 및 126; 서열번호 103 및 127; 서열번호 103 및 128; 서열번호 103 및 129; 서열번호 103 및 130; 서열번호 103 및 131; 서열번호 103 및 132; 서열번호 103 및 133; 서열번호 103 및 134; 서열번호 103 및 135; 서열번호 103 및 136; 서열번호 103 및 137; 서열번호 115 및 104; 서열번호 115 및 119; 서열번호 115 및 120; 서열번호 115 및 121; 서열번호 115 및 122; 서열번호 115 및 123; 서열번호 115 및 124; 서열번호 115 및 125; 서열번호 115 및 126; 서열번호 115 및 127; 서열번호 115 및 128; 서열번호 115 및 129; 서열번호 115 및 130; 서열번호 115 및 131; 서열번호 115 및 132; 서열번호 115 및 133; 서열번호 115 및 134; 서열번호 115 및 135; 서열번호 115 및 136; 서열번호 115 및 137; 서열번호 116 및 104; 서열번호 116 및 119; 서열번호 116 및 120; 서열번호 116 및 121; 서열번호 116 및 122; 서열번호 116 및 123; 서열번호 116 및 124; 서열번호 116 및 125; 서열번호 116 및 126; 서열번호 116 및 127; 서열번호 116 및 128; 서열번호 116 및 129; 서열번호 116 및 130; 서열번호 116 및 131; 서열번호 116 및 132; 서열번호 116 및 133; 서열번호 116 및 134; 서열번호 116 및 135; 서열번호 116 및 136; 서열번호 116 및 137; 서열번호 117 및 104; 서열번호 117 및 119; 서열번호 117 및 120; 서열번호 117 및 121; 서열번호 117 및 122; 서열번호 117 및 123; 서열번호 117 및 124; 서열번호 117 및 125; 서열번호 117 및 126; 서열번호 117 및 127; 서열번호 117 및 128; 서열번호 117 및 129; 서열번호 117 및 130; 서열번호 117 및 131; 서열번호 117 및 132; 서열번호 117 및 133; 서열번호 117 및 134; 서열번호 117 및 135; 서열번호 117 및 136; 서열번호 117 및 137; 서열번호 118 및 104; 서열번호 118 및 119; 서열번호 118 및 120; 서열번호 118 및 121; 서열번호 118 및 122; 서열번호 118 및 123; 서열번호 118 및 124; 서열번호 118 및 125; 서열번호 118 및 126; 서열번호 118 및 127; 서열번호 118 및 128; 서열번호 118 및 129; 서열번호 118 및 130; 서열번호 118 및 131; 서열번호 118 및 132; 서열번호 118 및 133; 서열번호 118 및 134; 서열번호 118 및 135; 서열번호 118 및 136; 또는 서열번호 118 및 137. 한 실시양태에서, ADC 항체 분자는 서열번호 117의 아미노산 서열, 또는 이에 대한 적어도 80%(예를 들어, 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 동일성을 가진 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 135의 아미노산 서열, 또는 이에 대한 적어도 80%(예를 들어, 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 동일성을 가진 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; X₁이 I 또는 T이고, X₂가 N 또는 S이고, X₃이 I 또는 V인 아미노산 서열 YISSDGDSX₁YYPDX₂X₃KG(서열번호 165)를 포함하는 HCDR2; 또는 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 X₁이 V 또는 I이고, X₂가 M 또는 L인 아미노산 서열 RASESX₁FGHGISPX₂H(서열번호 166)를 포함하는 LCDR1; X₁이 N 또는 S이고, X₂가 L 또는 R이고, X₃이 F, T 또는 S인 아미노산 서열 RASX₁X₂KX₃(서열번호 167)를 포함하는 LCDR2; 또는 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 VH 및 VL을 포함하고,이때 VH는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, VL은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 VH는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; X₁이 I 또는 T이고, X₂가 N 또는 S이고, X₃이 I 또는 V인 아미노산 서열 YISSDGDSX₁YYPDX₂X₃KG(서열번호 165)를 포함하는 HCDR2; 또는 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함하고; VL은 X₁이 V 또는 I이고, X₂가 M 또는 L인 아미노산 서열 RASESX₁FGHGISPX₂H(서열번호 166)를 포함하는 LCDR1; X₁이 N 또는 S이고, X₂가 L 또는 R이고, X₃이 F, T 또는 S인 아미노산 서열 RASX₁X₂KX₃(서열번호 167)를 포함하는 LCDR2; 또는 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 중 하나, 둘 또는 전부를 포함한다.

한 실시양태에서, ADC 또는 항체 분자는 VH 및 VL을 포함하고, 이때 VH는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, VL은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 이때 VH는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; X₁이 I 또는 T이고, X₂가 N 또는 S이고, X₃이 I 또는 V인 아미노산 서열 YISSDGDSX₁YYPDX₂X₃KG(서열번호 165)를 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL은 X₁이 V 또는 I이고, X₂가 M 또는 L인 아미노산 서열 RASESX₁FGHGISPX₂H(서열번호 166)를 포함하는 LCDR1; X₁이 N 또는 S이고, X₂가 L 또는 R이고, X₃이 F, T 또는 S인 아미노산 서열 RASX₁X₂KX₃(서열번호 167)를 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 2개의 중쇄 가변 영역 및 2개의 경쇄 가변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 또는 이들 둘 다를 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 IgG 항체 분자, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체 분자이다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 IgM 항체 분자가 아니다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 카파 또는 람다 경쇄로부터의 경쇄 불변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 2개 이상의 그람 음성 균주들에 결합할 수 있다. 2개 이상의 그람 음성 세균 균주들에 결합할 수 있는 항체 분자는 여러 유리한 특성을 가진다. 예를 들어, 한 요법은 다수의 세균 감염을 치료하거나, 예방하거나 진단하는 데 사용될 수 있다. 추가로, 의사는 적절한 요법을 결정하기 위해 어느 세균 균주가 환자를 감염시켰는지를 확인할 필요가 없다.

따라서, 한 실시양태에서, 항체 분자는 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 예를 들어, 하나 이상의 그람 음성 세균에 결합한다.

한 실시양태에서, 하나 이상의 그람 음성 세균은 장내세균과의 종(예를 들어, 클렙시엘라, 엔테로박터, 시겔라, 에스케리키아, 살모넬라, 예르시니아 또는 시트로박터, 예를 들어, 범-내성 장내세균과의 종), 슈도모나스의 종, 악시네토박터의 종 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 클렙시엘라 뉴모니아(예를 들어, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 오자나, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 뉴모니아 또는 클렙시엘라 뉴모니아 아종 리노스클레로마티스), 엔테로박터 칸세로게노우스, 엔테로박터 클로아카, 엔테로박터 호르마케이, 엔테로박터 아스부리아, 시겔라 보이디이, 시겔라 디센테리아, 시겔라 플렉스네리, 시겔라 소네이, 에스케리키아 콜라이(예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 11775, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 에스케리키아 콜라이 ATCC 35401, 또는 에스케리키아 콜라이 ATCC 43895), 에스케리키아 페르구소니이, 살모넬라 콜레라수이스, 살모넬라 콜레라수이스 아종 인디카, 살모넬라 엔테리티디스, 살모넬라 비르초우, 살모넬라 파라티피 B, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 파라티피 A, 살모넬라 티피, 살모넬라 콜레라수이스 아종 아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 디아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 하우테나, 살모넬라 본고리, 시트로박터 세들라키이, 시트로박터 브라아키이, 시트로박터 웨르크마니이, 시트로박터 프레운디이, 시트로박터 영가, 시트로박터 아말로나티쿠스, 예르시니아 엔테로콜리티카, 예르시니아 프레데릭세니이, 예르시니아 페스티스, 예르시니아 슈도튜버큘로시스, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상의 세균에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 슈도모나스, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 엔테로코커스 파시움(예를 들어, 반코마이신 내성(VRE) 엔테로코커스 파시움), 스타필로코커스 아우레우스(예를 들어, 메티실린 내성(MRSA) 스타필로코커스 아우레우스), 클로스트리듐 디피실, 악시네토박터 바우만니이(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 악시네토박터), 슈도모나스 애루기노사(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 슈도모나스 애루기노사, 예를 들어, 카르바페넴 내성 슈도모나스 애루기노사), 장내세균과(예를 들어, 이. 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아, 또는 엔테로박터 종, 예를 들어, 카르바페넴 내성 장내세균과(CRE)), 네이세리아 고노로애아(예를 들어, 약물 내성 네이세리아 고노로애아), 살모넬라(예를 들어, 약물 내성 살모넬라), 시겔라(예를 들어, 약물 내성 시겔라), 확장된 스펙트럼 β-락타마제(ESBL)를 생성하는 세균 또는 마이코박테리움 튜버큘로시스(예를 들어, 약물 내성 마이코박테리움 튜버큘로시스) 중 하나 이상의 세균에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상)의 다중약물 내성 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, ELISA 방법에 의해 측정될 때 높은 친화성, 예를 들어, 약 10 nM 미만의 K_D로 LPS에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 1X10^-4, 5X10^-5 또는 1X10^-5 s^-1보다 더 느린 K_off로 LPS에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 1X10⁴, 5X10⁴, 1X10⁵ 또는 5X10⁵ M^-1s^-1보다 더 빠른 K_on로 LPS에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, OPA 어세이에 의해 확인될 때, 옵소닌식작용 활성을 가진다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 LPS에서 하나 이상(예를 들어, 2개)의 Kdo 잔기 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 Hep 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다.

한 실시양태에서, a) 지질다당류(LPS)에 결합하는 항체 분자는 b) 항미생물 펩타이드, 예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드에 커플링(예를 들어, 융합)되어, 예를 들어, 항체 분자-약물 접합체(ADC)를 형성한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 중쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드에 커플링(예를 들어, 융합)되고, 예를 들어, 중쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드의 N-말단 쪽에 존재한다.

한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드에 간접적으로 커플링(예를 들어, 융합)되고, 예를 들어, 중쇄 가변 영역의 C-말단은 불변 영역을 통해 항미생물 펩타이드의 N-말단에 커플링(예를 들어, 융합)된다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 경쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드에 커플링(예를 들어, 융합)되고, 예를 들어, 경쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드의 N-말단 쪽에 존재한다.

한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 항미생물 펩타이드에 간접적으로 커플링(예를 들어, 융합)되고, 예를 들어, 경쇄 가변 영역의 C-말단은 불변 영역을 통해 항미생물 펩타이드의 N-말단에 커플링(예를 들어, 융합)된다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 효소 접합 또는 화학 접합에 의해 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개 이상, 예를 들어, 4개)의 항미생물 펩타이드들에 커플링(예를 들어, 융합)된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드들 중 적어도 2개의 항미생물 펩타이드들은 동일하다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드들 중 적어도 2개의 항미생물 펩타이드들은 상이하다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 간접적으로, 예를 들어, 불변 영역을 통해 중쇄 가변 영역에 각각 커플링(예를 들어, 융합)되는, 2개의 동일한 항미생물 펩타이드들에 커플링(예를 들어, 융합)된다.

한 실시양태에서, 항체 분자에 커플링(예를 들어, 융합)된 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 항미생물 펩타이드 단독의 최소 억제 농도(MIC)보다 더 낮은, 예를 들어, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 더 낮은 MIC를 가짐으로써, 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)을 억제하는 데 있어서, 예를 들어, 이 그람 음성 세균의 생장, 병독성 또는 감염성을 억제하는 데 있어서 항미생물 펩타이드 또는 항체 분자 단독보다 더 효과적이다.

한 실시양태에서, 항체 분자에 커플링(예를 들어, 융합)된 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 항미생물 펩타이드 단독의 최소 살균 농도(MBC)보다 더 낮은, 예를 들어, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 더 낮은 MBC를 가짐으로써, 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)의 생존력을 감소시키는 데 있어서, 예를 들어, 이 그람 음성 세균을 사멸시키는 데 있어서 항미생물 펩타이드 또는 항체 분자 단독보다 더 효과적이다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, OPA 어세이에 의해 확인될 때, 옵소닌식작용 활성을 가진다(예를 들어, 호중구의 Fc 수용체(FcR)에 결합될 때 식세포화 된다).

한 실시양태에서, 항체 분자에 커플링(예를 들어, 융합)된 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 그람 양성 세균(예를 들어, 그람 양성 세균)에 대한 최소 억제 농도(MIC)보다 더 낮은, 예를 들어, 적어도 2배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배, 200배, 500배 또는 1000배 더 낮은, 그람 음성 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)에 대한 MIC를 가짐으로써, 그람 양성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 양성 세균)을 억제하지 않는다, 예를 들어, 이 그람 양성 세균의 생장, 병독성 또는 감염성을 억제하지 않는다.

한 실시양태에서, 항체 분자에 커플링(예를 들어, 융합)된 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 그람 양성 세균(예를 들어, 그람 양성 세균)에 대한 최소 살균 농도(MBC)보다 더 낮은, 예를 들어, 적어도 2배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배, 200배, 500배 또는 1000배 더 낮은, 그람 음성 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)에 대한 MBC를 가짐으로써, 그람 양성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 양성 세균)의 생존력을 감소시키지 않는다, 예를 들어, 이 그람 양성 세균을 사멸시키지 않는다.

한 실시양태에서, 그람 양성 세균은 스타필로코커스 아우레우스이다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 그람 음성 세균의 선형 또는 입체구조형 에피토프, 또는 LPS에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 웨스턴 분석에 의해 확인될 때, 저분자량 LPS 및 고분자량 LPS에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 슈도모나스 애루기노사 코어 LPS의 고도로 인산화된 헵토스 영역에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 코어 LPS의 인산화된(예를 들어, 과인산화된, 예를 들어, 이인산화된) Hep I 잔기에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 (예를 들어, 내용이 본원에 참고로 포함되는 문헌(DeLucia et al. MBio. 2011; 2(4). pii: e00142-11)에 기재된 바와 같이) (예를 들어, 슈도모나스 애루기노사에서) 외막 형성에 필수적인 코어 LPS 내의 영역에 결합한다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어, 본원에 기재된 방법에 의해 측정될 때, 높은 친화성, 예를 들어, 약 20 nM 이하의 겉보기 K_D로 이인산화된 헵토스에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 인산화되지 않은 헵토스에 비해 인산화된(예를 들어, 과인산화된) 헵토스에 우선적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 단일 인산화를 가진 헵토스에 비해 과인산화된(예를 들어, 이인산화된) 헵토스에 우선적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 이인산화된 만노스, 단일 인산화를 가진 만노스 또는 인산화되지 않은 만노스에 비해 과인산화된(예를 들어, 이인산화된) 헵토스에 우선적으로 결합한다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 결합 특성을 가진 항체 분자는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이 설파타제 모티프(예를 들어, 변형된 설파타제 모티프)를 포함한다.

항미생물 펩타이드

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항미생물 펩타이드"는 항미생물 활성, 예를 들어, 항균 활성을 가진 펩타이드를 지칭한다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 다수의 미생물들, 예를 들어, 세균에 대한 광범위한 스펙트럼 활성 및 임의적으로 낮은 수준의 유도된 내성과 함께 가변 길이, 서열 및 구조를 가질 수 있다고 생각된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 항균 펩타이드이다.

항미생물 펩타이드들은 그들의 아미노산 조성 및 구조를 기준으로 하위군으로 나누어진 다양한 분자들의 군이다. 전형적으로, 이 펩타이드들은 아르기닌, 라이신, 또는 산성 환경에서 히스티딘에 의해 제공된 2개 이상의 양으로 하전된 잔기, 및 큰 비율(예를 들어, 50% 초과)의 소수성 잔기를 포함한다. 이 분자들의 2차 구조는 예를 들어, i) α-나선, ii) 2개 이상의 디설파이드 결합의 존재로 인한 β-가닥, iii) 단일 디설파이드 결합의 존재 및/또는 펩타이드 쇄의 고리화로 인한 β-헤어핀 또는 루프, 및 iv) 확장된 구조를 포함한다. 이 펩타이드들 중 일부는 유리 용액에서 구조화되지 않을 수 있고, 생물학적 막 내로 삽입될 때 그들의 최종 입체구조로 폴딩된다. 항미생물 펩타이드는 나선형 분자의 한 쪽을 따라 정렬된 친수성 아미노산 잔기 및 나선형 분자의 반대 쪽을 따라 정렬된 소수성 아미노산 잔기를 함유할 수 있다. 항미생물 펩타이드의 이 양친매성은 이 항미생물 펩타이드가 막 지질 이중층 내로 삽입될 수 있게 한다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 막 투과성이 요구되지 않을 수 있지만, 막과 회합하는 능력은 항미생물 펩타이드의 전형적인 특징인 것으로 생각된다.

항미생물 펩타이드의 종류는 예를 들어, 음이온성 펩타이드(예를 들어, 글루탐산 및 아스파르트산이 풍부함), 선형 양이온성 α-나선형 펩타이드(예를 들어, 시스테인을 결여함), 양이온성 펩타이드(예를 들어, 프롤린, 아르기닌, 페닐알라닌, 글리신 또는 트립토판이 풍부함), 및 시스테인을 함유하고 디설파이드 결합(예를 들어, 1개 내지 3개의 디설파이드 결합을 함유함)을 형성하는 음이온성 펩타이드와 양이온성 펩타이드를 포함한다.

항미생물 펩타이드가 미생물을 사멸시키는 작용 방식은 다양하고 상이한 세균 종들마다 상이할 수 있다. 세포질 막은 빈번한 표적이나, 상기 펩타이드는 DNA 및 단백질 합성, 단백질 폴딩 및 세포벽 합성도 방해할 수 있다. 대다수의 세균 표면이 음이온성 또는 소수성을 갖기 때문에, 상기 펩타이드와 표적 유기체 사이의 초기 접촉은 정전기적 접촉일 수 있다. 상기 펩타이드의 아미노산 조성, 양친매성, 양이온성 전하 및 크기는 이 펩타이드가 막 이중층에 부착하고 막 이중층 내로 삽입되어, "배럴-스테이브(barrel-stave)", "카펫(carpet)" 또는 "도넛형(toroidal)-공극" 기작으로 공극을 형성할 수 있게 한다. 대안적으로, 상기 펩타이드는 세포 내로 침투하여, 세포 생존에 중요한 세포내 분자에 결합할 수 있다. 세포내 결합 모델은 세포벽 합성의 억제, 세포질 막의 변경, 오토라이신의 활성화, DNA, RNA 및 단백질 합성의 억제, 및 일부 효소들의 억제를 포함한다. 이 펩타이드는 살균성 및/또는 정균성을 가질 수 있다. 전형적으로, 이 펩타이드의 항미생물(예를 들어, 항균) 활성은 최소 억제 농도(MIC)를 측정함으로써 확인된다.

항미생물 펩타이드는 그람 음성 세균, 그람 양성 세균, 바이러스, 진균, 및 형질전환된 또는 암성 세포를 사멸시키는 것으로 입증되었다(Reddy et al. (2004) International Journal of Antimicrobial Agents 24 (6): 536-547). 항미생물 펩타이드는 면역조절 활성도 가질 수 있다. 예를 들어, 면역조절 활성, 예를 들어, 숙주 유전자 발현을 변경시키고/시키거나, 케모카인으로서 작용하고/하거나 케모카인 생성을 유도하는 능력, 지질다당류에 의해 유도된 전구염증성 사이토카인 생성의 억제, 상처 치유의 촉진, 또는 수지상 세포 및 후천성 면역 반응 세포의 반응의 조절이 감염의 제거에 관여할 수 있다.

여러 방법들이 항미생물 펩타이드 활성의 기작을 확인하는 데 이용될 수 있다. 이 방법들은 예를 들어, 고체상 NMR 분광법, 현미경관찰, 원자 방사 분광법, 형광 염료, 이온 채널 형성, 원편광 이색성 및 배향된 원편광 이색성, 이중 분극화 간섭측정, 또는 중성자 및 X-선 회절을 포함한다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 10 kDa 미만, 예를 들어, 8 kDa, 6 kDa, 4 kDa, 2 kDa 또는 1 kDa 미만이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 약 6개 내지 100개의 아미노산들, 예를 들어, 약 6개 내지 약 75개의 아미노산들, 약 6개 내지 약 50개 아미노산들, 약 6개 내지 약 25개의 아미노산들, 약 25개 내지 약 100개의 아미노산들, 약 50개 내지 약 100개의 아미노산들, 또는 약 75개 내지 약 100개의 아미노산들을 포함하거나 이들로 구성된다. 한 실시양태에서, 항균 펩타이드는 약 12개 내지 약 50개의 아미노산들을 포함하거나 이들로 구성된다. 한 실시양태에서, 항균 펩타이드는 약 15개 내지 약 45개의 아미노산들을 포함하거나 이들로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 실질적으로 양이온성을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 실질적으로 양친매성을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 실질적으로 양이온성 및 양친매성을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 그람 음성 세균에 대한 세포증식억제성을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 그람 음성 세균에 대한 세포독성을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 그람 양성 세균에 대한 세포증식억제성 및 세포독성을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 광범위 스펙트럼 항미생물 펩타이드이다, 예를 들어, 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 2개 이상의 세균들에 대한 세포증식억제성 및/또는 세포독성을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 분비된 폴리펩타이드이다.

항미생물 펩타이드는 광범위한 동물들, 즉 미생물, 무척추동물, 식물, 양서류, 조류, 어류 및 포유동물로부터 단리되었고 기재되었다(Wang et al., Nucleic Acids Res. 2009; 37 (Database issue):D933-7). 예를 들어, 항미생물 폴리펩타이드는 내용이 참고로 포함되는 항미생물 펩타이드 데이터베이스(Wang et al., Nucleic Acids Res. 2009; 37 (Database issue):D933-7), CAMP: 항미생물 펩타이드의 수집(Collection of Anti-Microbial Peptides)(Thomas et al., Nucleic Acids Res. 2010; 38 (Database issue):D774-80), 미국 특허 제5221732호, 미국 특허 제5447914호, 미국 특허 제5519115호, 미국 특허 제5607914호, 미국 특허 제5714577호, 미국 특허 제5734015호, 미국 특허 제5798336호, 미국 특허 제5821224호, 미국 특허 제5849490호, 미국 특허 제5856127호, 미국 특허 제5905187호, 미국 특허 제5994308호, 미국 특허 제5998374호, 미국 특허 제6107460호, 미국 특허 제6191254호, 미국 특허 제6211148호, 미국 특허 제6300489호, 미국 특허 제6329504호, 미국 특허 제6399370호, 미국 특허 제6476189호, 미국 특허 제6478825호, 미국 특허 제6492328호, 미국 특허 제6514701호, 미국 특허 제6573361호, 미국 특허 제6573361호, 미국 특허 제6576755호, 미국 특허 제6605698호, 미국 특허 제6624140호, 미국 특허 제6638531호, 미국 특허 제6642203호, 미국 특허 제6653280호, 미국 특허 제6696238호, 미국 특허 제6727066호, 미국 특허 제6730659호, 미국 특허 제6743598호, 미국 특허 제6743769호, 미국 특허 제6747007호, 미국 특허 제6790833호, 미국 특허 제6794490호, 미국 특허 제6818407호, 미국 특허 제6835536호, 미국 특허 제6835713호, 미국 특허 제6838435호, 미국 특허 제6872705호, 미국 특허 제6875907호, 미국 특허 제6884776호, 미국 특허 제6887847호, 미국 특허 제6906035호, 미국 특허 제6911524호, 미국 특허 제6936432호, 미국 특허 제7001924호, 미국 특허 제7071293호, 미국 특허 제7078380호, 미국 특허 제7091185호, 미국 특허 제7094759호, 미국 특허 제7166769호, 미국 특허 제7244710호, 미국 특허 제7314858호 및 미국 특허 제7582301호에 기재되어 있다.

본원에 기재된 항미생물 펩타이드는 하나 이상의 세균 종, 예를 들어, 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)의 생존력을 억제할 수 있거나 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상의 그람 음성 세균의 생존력을 억제할 수 있고/있거나 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 항체 분자는 장내세균과(예를 들어, 클렙시엘라, 엔테로박터, 시겔라, 에스케리키아, 살모넬라, 예르시니아 또는 시트로박터, 예를 들어, 범-내성 장내세균과)로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 슈도모나스로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 악시네토박터로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 또는 이들의 임의의 조합의 생존력을 억제할 수 있고/있거나 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 클렙시엘라 뉴모니아(예를 들어, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 오자나, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 뉴모니아 또는 클렙시엘라 뉴모니아 아종 리노스클레로마티스), 엔테로박터 칸세로게노우스, 엔테로박터 클로아카, 엔테로박터 호르마케이, 엔테로박터 아스부리아, 시겔라 보이디이, 시겔라 디센테리아, 시겔라 플렉스네리, 시겔라 소네이, 에스케리키아 콜라이(예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 11775, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 에스케리키아 콜라이 ATCC 35401, 또는 에스케리키아 콜라이 ATCC 43895), 에스케리키아 페르구소니이, 살모넬라 콜레라수이스, 살모넬라 콜레라수이스 아종 인디카, 살모넬라 엔테리티디스, 살모넬라 비르초우, 살모넬라 파라티피 B, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 파라티피 A, 살모넬라 티피, 살모넬라 콜레라수이스 아종 아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 디아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 하우테나, 살모넬라 본고리, 시트로박터 세들라키이, 시트로박터 브라아키이, 시트로박터 웨르크마니이, 시트로박터 프레운디이, 시트로박터 영가, 시트로박터 아말로나티쿠스, 예르시니아 엔테로콜리티카, 예르시니아 프레데릭세니이, 예르시니아 페스티스, 예르시니아 슈도튜버큘로시스, 또는 이들의 임의의 조합의 생존력을 억제할 수 있거나 감소시킬 수 있다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 엔테로코커스 파시움(예를 들어, 반코마이신 내성(VRE) 엔테로코커스 파시움), 스타필로코커스 아우레우스(예를 들어, 메티실린 내성(MRSA) 스타필로코커스 아우레우스), 클로스트리듐 디피실, 악시네토박터 바우만니이(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 악시네토박터), 슈도모나스 애루기노사(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 슈도모나스 애루기노사, 예를 들어, 카르바페넴 내성 슈도모나스 애루기노사), 장내세균과(예를 들어, 이. 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아, 또는 엔테로박터 종, 예를 들어, 카르바페넴 내성 장내세균과(CRE)), 네이세리아 고노로애아(예를 들어, 약물 내성 고노로애아 고노로에아), 살모넬라(예를 들어, 약물 내성 살모넬라), 시겔라(예를 들어, 약물 내성 시겔라), 확장된 스펙트럼 β-락타마제(ESBL)를 생성하는 세균, 또는 마이코박테리움 튜버큘로시스(예를 들어, 약물 내성 마이코박테리움 튜버큘로시스) 중 하나 이상의 세균의 생존력을 억제할 수 있고/있거나 감소시킬 수 있다. 본원에 기재된 항미생물 펩타이드는 하기 특성들 중 하나 이상의 특성(예를 들어, 2개 또는 3개의 특성, 또는 모든 특성)을 가질 수 있다: 강한 세균 억제 활성, 강한 살균 활성, 낮은 적혈구(RBC) 용혈 활성, 또는 낮은 세포독성(예를 들어, 오프-표적 독성). 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 세균 균주, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 슈도모나스 애루기노사 ATCC 27853, 또는 이들 둘 다에 대한 100 ㎍/㎖ 미만, 예를 들어, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 또는 5 ㎍/㎖ 미만의 최소 억제 농도(MIC)를 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 세균 균주, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 슈도모나스 애루기노사 ATCC 27853, 또는 이들 둘 다에 대한 100 ㎍/㎖ 미만, 예를 들어, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 또는 5 ㎍/㎖ 미만의 최소 살균 농도(MBC)를 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 낮은 용혈 활성을 가진다, 예를 들어, 각각 적혈구 용혈 어세이 및 MIC 어세이에 의해 측정될 때, 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)에 대한 1 이상(예를 들어, 4:1, 8:1, 16:1, 24:1 또는 32:1 이상)의 PLC 대 MIC 비를 가진다. 한 실시양태에서, PLC는 적혈구의 50%를 용해시키는 데 요구되거나 필요한 농도(예를 들어, 최소 농도)이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 낮은 용혈 활성을 가진다, 예를 들어, 각각 적혈구 용혈 어세이 및 MIC 어세이에 의해 측정될 때, 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)에 대한 4:1 초과(예를 들어, 8:1, 16:1, 24:1 또는 32:1 초과)의 MLC 대 MIC 비를 가진다. 한 실시양태에서, MLC는 적혈구의 100%를 용해시키는 데 요구되거나 필요한 농도(예를 들어, 최소 농도)이다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 α-나선형 펩타이드이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 가진다. 예를 들어, 항미생물 펩타이드에서 2개의 시스테인 잔기들은 가교결합될, 예를 들어, 화학적으로 가교결합될 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 2개 이상의 아미노산 잔기들의 가교결합은 α-나선형 입체구조를 향상시킬 수 있고/있거나, 혈청 안정성을 향상시킬 수 있고/있거나, 항미생물 효능을 증가시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 가진 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 혈청에서 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 갖지 않은 동일한 항미생물 펩타이드보다 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 더 안정하다. 한 실시양태에서, 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 가진 항미생물 펩타이드는 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 갖지 않은 동일한 항미생물 펩타이드보다 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 더 낮은 MIC를 가진다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 항체 분자, 예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자에 커플링(예를 들어, 융합)되어, 예를 들어, 항체 분자-약물 접합체(ADC)를 형성한다.

하기 기준은 후보 항미생물 펩타이드를 선택하는 데 이용될 수 있다: 넓은 스펙트럼(예를 들어, 다수의 세균 병원체들에 대한 활성), 알파-나선형 2차 구조(예를 들어, 기능성 형태로 용이하게 발현됨), 막 파괴에 의한 작용 기작(예를 들어, 살균 및/또는 소분자와의 상승작용), 생체내 안정성(예를 들어, 인간 혈청에서의 안정성), 및 (예를 들어, C-말단 항체 접합체로서 작용하기 위한) N-말단 변형에의 적응 가능성.

본원에 기재된 항미생물 펩타이드는 그 자체만으로 항미생물 활성을 갖지 않은 서열을 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 링커 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 소르타제 공여체 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드 단독은 LPS, 예를 들어, LPS의 코어 영역에 결합하지 않는다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 아미노산 서열, 예를 들어, 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 아미노산 서열, 예를 들어, 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열 또는 이의 일부, 예를 들어, 이의 기능성 단편(예를 들어, N-말단 G 잔기들 중 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개 또는 4개 이상)의 G 잔기가 누락되어 있음)을 포함하거나 이러한 아미노산 서열 또는 이의 일부로 구성된다. 예를 들어, 서열번호 101, 147, 152 내지 154, 156, 163 또는 164 중 임의의 아미노산 서열에서 처음 3개의 N-말단 G 잔기는 누락될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개 이상)의 N-말단 G 잔기의 존재는 항미생물 펩타이드의 활성을 감소시키지 않거나 유의미하게 감소시키지 않는다.

한 실시양태에서, 상기 펩타이드는 하기 아미노산 서열을 포함한다: RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(서열번호 68), GGGRGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(서열번호 80), GGGGRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(서열번호 101), 또는 GRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(서열번호 102).

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 스테이플링된(stapled) 항미생물 펩타이드이다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 스테이플링은 예를 들어, 혈청에서 안정성을 증가시킬 수 있거나, 비특이적 결합을 감소시킬 수 있거나, 이들 둘 다를 달성할 수 있다. 예시적인 스테이플링 방법은 예를 들어, 문헌(Alexander et al. J. Am. Chem. Soc., 2013, 135 (16), 5946-5949) 및 실시예 7에 기재되어 있다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 표 4에 기재된 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 또 다른 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 표 4에 기재된 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열 또는 이의 일부, 예를 들어, 이의 기능성 단편을 포함하거나 이러한 아미노산 서열 또는 이의 일부로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 카르복스아미드 기(예를 들어, C-말단 카르복스아미드 작용기)를 포함한다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 257의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 258의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 101의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 147의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 152의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 153의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 154의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 156의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드를 포함하는 ADC는 예를 들어, MIC의 약 4배(예를 들어, 약 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배) 이상의 펩타이드 수준에서 슈도모나스 애루기노사 역가를 적어도 약 3 로그(예를 들어, 약 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5 또는 4 로그)까지 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드를 포함하는 ADC는 세균, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사의 막을 파괴한다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 163의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 164의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 156 및 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 246의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 247의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 248의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 249의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 250의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 251의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 252의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 253의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 254의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 255의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 256의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개, 35개, 36개, 37개, 38개, 39개, 40개 이상)의 D-아미노산을 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 아미노산 잔기의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%는 D-아미노산이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 모든 아미노산 잔기는 D-아미노산이다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 하나 이상(예를 들어, 모든)의 D-아미노산의 존재는 예를 들어, 하나 이상(예를 들어, 모든)의 L-아미노산을 함유하는 동일한 항미생물 펩타이드에 비해, 예를 들어, 혈청(예를 들어, 인간 혈청)에서 항미생물 펩타이드 또는 ADC의 안정성을 증가시킬 수 있다고 생각된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개, 35개, 36개, 37개, 38개, 39개, 40개 이상)의 L-아미노산을 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 아미노산 잔기의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%는 L-아미노산이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 모든 아미노산 잔기는 L-아미노산이다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 하나 이상의 D-아미노산 및 하나 이상의 L-아미노산을 포함한다. 예를 들어, 표 4에 기재된 항미생물 펩타이드들에서 임의의 아미노산 잔기는 D-아미노산 또는 L-아미노산일 수 있다.

한 실시양태에서, ADC는 아미노산 서열 RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(서열번호 68), GGGRGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(서열번호 80), GGGGRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(서열번호 101) 또는 GRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(서열번호 102)를 포함하는 펩타이드를 포함한다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(서열번호 68), GIGKFLKKAKKFGKAFVKILKK(서열번호 69), KKLLKWLKKLL(서열번호 72), RLGNFFRKAKKKIGRGLKKIGQKIKDFLGNLVPRTES(서열번호 74), GIGKHVGKALKGLKGLLKGLGES(서열번호 94), GRRKRKWLRRIGKGVKIIGGAALDHL(서열번호 95), GGLRSLGRKILRAWKKYGPQATPATRQ(서열번호 96), IKWKKLLRAAKRIL(서열번호 97), IGKKWKRIVKRIKKFLRKL(서열번호 98), ILGKIWKIKKLF(서열번호 99), 또는 RLGDILQKAREKIEGGLKKLVQKIKDFFGKFAPRTES(서열번호 100)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원(예를 들어, 표 4)에 기재된 펩타이드 서열들로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 항미생물 펩타이드의 하나 이상의 생물물리학적 특성을 향상시키기 위해 본원에 기재된 항미생물 펩타이드의 유사체이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 펩타이드 297(P297)의 유사체, 예를 들어, (D)-P297이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P297 유사체)는 비하전 잔기(예를 들어, 알라닌 또는 쓰레오닌)로의 하전된 잔기(예를 들어, 아르기닌 또는 라이신)의 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P297 유사체)는 A로의 R의 돌연변이, T로의 R의 돌연변이, S로의 R의 돌연변이, 또는 이들의 조합을 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P297 유사체)는 A로의 K의 돌연변이, T로의 K의 돌연변이, S로의 K의 돌연변이, 또는 이들의 조합을 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 C-말단, N-말단, 또는 C-말단 또는 N-말단에 가까운 위치(예를 들어, C-말단 또는 N-말단으로부터의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이하의 아미노산)에서 음이온성 펩타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 음이온성 펩타이드의 길이는 약 2개 내지 15개, 3개 내지 14개, 4개 내지 13개, 5개 내지 12개, 6개 내지 11개, 7개 내지 10개, 8개 또는 9개, 2개 내지 13개, 2개 내지 11개, 2개 내지 9개, 2개 내지 7개, 2개 내지 5개, 12개 내지 15개, 9개 내지 15개, 6개 내지 15개, 3개 내지 15개, 4개 내지 9개, 5개 내지 8개, 6개 또는 7개 아미노산 잔기이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 음이온성 펩타이드 서열의 N-말단 및 인접 위치에서 서열 AAA를 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드, 예를 들어, (D)P-297은 P297과 거의 동일한 활성(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사 사멸)을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드, 예를 들어, (D)P-297은 혈청에서 P297보다 더 안정하다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P297 유사체)는 예를 들어, MIC의 4배 이상의 펩타이드 수준에서 슈도모나스 애루기노사 역가를 약 3 로그(예를 들어, 2, 2.5, 3, 3.5 또는 4 로그) 이상 감소시킨다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P297 유사체)는 MIC보다 10배 이상 더 큰 용해 수준을 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P297 유사체)는 시험관내 어세이에서 높은 치료 지수를 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P297 유사체)는 MIC보다 약 200배 더 큰 포유동물 세포(예를 들어, 293T)의 세포독성을 보인다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P297 유사체)는 L-아미노산이 D-아미노산으로 치환되어 있다(예를 들어, (D)-P297). 한 실시양태에서, L-아미노산이 D-아미노산으로 치환되어 있는 항미생물 펩타이드, 예를 들어, (D)-P297은 (L)-P297에 비해 감소된 프로테아제 민감성 및/또는 증가된 혈청 안정성을 가진다. 한 실시양태에서, L-아미노산이 D-아미노산으로 치환되어 있는 항미생물 펩타이드, 예를 들어, (D)-P297은 P297과 거의 동일하거나 본질적으로 동일한 활성(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사 사멸)을 가진다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 표 4에 기재된 펩타이드 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 펩타이드 297(P297) 또는 펩타이드 369(P369)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 156의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 257의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이 D-아미노산을 포함하거나 이로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드(예를 들어, P369 또는 P297)는 항체 분자(예를 들어, VSX)에 접합된다. 한 실시양태에서, ADC(예를 들어, VSX-1 또는 VSX-2)는 살균 활성을 가진다. 한 실시양태에서, ADC(예를 들어, VSX-1 또는 VSX-2)는 기준 ADC에 비해 감소된 세포독성을 보인다. 한 실시양태에서, ADC(예를 들어, VSX-1 또는 VSX-2)는 기준 ADC에 비해 개선된 생체분포를 가진다. 한 실시양태에서, ADC(예를 들어, VSX-1 또는 VSX-2)는 예를 들어, 실시예 11에 기재된 바와 같이 기준 항체에 비해 뮤린 슈도모나스 애루기노사 폐 감염 모델에서 생존을 증가시킨다.

항체 분자-약물 접합체

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체 분자-약물 접합체" 또는 ADC는 비-항체 모이어티, 예를 들어, 치료제 또는 표지, 예를 들어, 항미생물 펩타이드에 커플링된 항체 분자를 지칭한다. 항체 분자는 직접적으로 또는 간접적으로, 예를 들어, 링커를 통해 비-항체 모이어티에 커플링될 수 있다.

한 실시양태에서, 항체 분자는 공유결합에 의해 비-항체 모이어티에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 펩타이드 결합에 의해 비-항체 모이어티에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자와 비-항체 모이어티의 커플링은 소르타제에 의해 매개된다. 한 실시양태에서, 항체 분자와 비-항체 모이어티의 커플링은 융합 단백질을 형성한다. 한 실시양태에서, 항체 분자와 비-항체 모이어티는 융합 단백질을 형성한다. 한 실시양태에서, 융합 단백질은 항체 분자(예를 들어, 중쇄, 경쇄 또는 이들 둘 다)와 비-항체 모이어티 사이에 링커를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 비-펩타이드 결합에 의해 비-항체 모이어티에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 비-펩타이드 결합에 의해 비-항체 모이어티에 커플링되지 않는다. 한 실시양태에서, 비-항체 모이어티는 "페이로드"로서도 지칭된다.

한 실시양태에서, 비-항체 모이어티는 항체 분자의 골격에 커플링된다. 또 다른 실시양태에서, 비-항체 모이어티는 항체 분자의 측쇄에 커플링된다. 한 실시양태에서, 비-항체 모이어티는 펩타이드(예를 들어, 항미생물 펩타이드)이고, 항체 분자는 펩타이드(예를 들어, 항미생물 펩타이드)의 골격에 커플링된다. 한 실시양태에서, 비-항체 모이어티는 펩타이드(예를 들어, 항미생물 펩타이드)이고, 항체 분자는 펩타이드(예를 들어, 항미생물 펩타이드)의 측쇄에 커플링된다.

한 실시양태에서, 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 비-항체 모이어티(예를 들어, 항미생물 펩타이드)가 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 4개의 비-항체 모이어티(예를 들어, 항미생물 펩타이드)가 항체 분자에 커플링된다. 예를 들어, 비-항체 모이어티는 동일할 수 있거나, 비-항체 모이어티 중 적어도 일부는 서로 상이하다. 한 실시양태에서, 비-항체 모이어티(예를 들어, 항미생물 펩타이드)는 2가 방식으로 항체 분자에 커플링된다. 또 다른 실시양태에서, 비-항체 모이어티(예를 들어, 항미생물 펩타이드)는 4가 방식으로 항체 분자에 커플링된다.

한 실시양태에서, ADC는 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)에 결합하는 항체 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 그람 음성 세균의 외막 상의 LPS에 결합하는 항체 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 본원에 기재된 항체 분자를 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 CDR의 카바트 또는 초티아 정의를 이용할 때 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VH 영역의 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 CDR의 카바트 또는 초티아 정의를 이용할 때 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VL 영역의 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 CDR의 카바트 또는 초티아 정의를 이용할 때 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VH 영역의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 CDR 및/또는 VL 영역의 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 CDR을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 1개, 2개 또는 3개의 VH CDR을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 1개, 2개 또는 3개의 VL CDR을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 VH CDR 및/또는 하나 이상(예를 들어, 2개 또는 3개)의 VL CDR을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VH 영역의 1개, 2개, 3개 또는 4개의 프레임워크를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VL 영역의 1개, 2개, 3개 또는 4개의 프레임워크를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 VH 영역의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개 또는 4개)의 프레임워크 및/또는 VL 영역의 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개 또는 4개)의 프레임워크를 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자(예를 들어, mAb001, A001-25, hWN01, hWNv1, 3E7, 3G1, 2C7 또는 3D6, 또는 임의의 인간화된 mAb001)의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 아미노산 서열을 가진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 표 1 또는 3에 기재된 아미노산 서열을 가진 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 표 2에 기재된 아미노산 서열을 가진 중쇄 가변 영역 및 표 1 또는 3에 기재된 아미노산 서열을 가진 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC는 VL 잔기 R100 및/또는 VH 잔기 R101 및/또는 R103의 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개 또는 3개)의 보존적 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 보존적 치환 중 하나 이상은 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산(예를 들어, 라이신 또는 히스티딘)으로의 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VL 잔기 R100의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VH 잔기 R101의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자 또는 ADC는 VH 잔기 R103의 보존적 치환(예를 들어, 아르기닌 이외의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어, 라이신 또는 히스티딘으로의 돌연변이)을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 표 1 또는 3에 기재된 항체 분자의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 2개 이상의 그람 음성 세균에 결합할 수 있다. 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 2개 이상의 그람 음성 세균에 결합할 수 있는 항체 분자 또는 ADC는 여러 유리한 특성을 가진다. 예를 들어, 한 요법은 다수의 세균 감염을 치료하거나, 예방하거나 진단하는 데 사용될 수 있다. 추가로, 의사는 적절한 요법을 결정하기 위해 어느 세균 속, 종, 아종 및/또는 균주가 환자를 감염시켰는지를 확인할 필요가 없다. 따라서, 한 실시양태에서, ADC는 높은 친화성으로 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상의 그람 음성 세균에 독립적으로 결합할 수 있다. 예를 들어, 항체 분자는 장내세균과(예를 들어, 클렙시엘라, 엔테로박터, 시겔라, 에스케리키아, 살모넬라, 예르시니아 또는 시트로박터, 예를 들어, 범-내성 장내세균과)로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 슈도모나스로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 악시네토박터로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 또는 이들의 임의의 조합에 높은 친화성으로 독립적으로 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, ADC는 클렙시엘라 뉴모니아(예를 들어, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 오자나, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 뉴모니아 또는 클렙시엘라 뉴모니아 아종 리노스클레로마티스), 엔테로박터 칸세로게노우스, 엔테로박터 클로아카, 엔테로박터 호르마케이, 엔테로박터 아스부리아, 시겔라 보이디이, 시겔라 디센테리아, 시겔라 플렉스네리, 시겔라 소네이, 에스케리키아 콜라이(예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 11775, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 에스케리키아 콜라이 ATCC 35401, 또는 에스케리키아 콜라이 ATCC 43895), 에스케리키아 페르구소니이, 살모넬라 콜레라수이스, 살모넬라 콜레라수이스 아종 인디카, 살모넬라 엔테리티디스, 살모넬라 비르초우, 살모넬라 파라티피 B, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 파라티피 A, 살모넬라 티피, 살모넬라 콜레라수이스 아종 아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 디아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 하우테나, 살모넬라 본고리, 시트로박터 세들라키이, 시트로박터 브라아키이, 시트로박터 웨르크마니이, 시트로박터 프레운디이, 시트로박터 영가, 시트로박터 아말로나티쿠스, 예르시니아 엔테로콜리티카, 예르시니아 프레데릭세니이, 예르시니아 페스티스, 예르시니아 슈도튜버큘로시스, 또는 이들의 임의의 조합에 결합할 수 있다.

한 실시양태에서, ADC는 엔테로코커스 파시움(예를 들어, 반코마이신 내성(VRE) 엔테로코커스 파시움), 스타필로코커스 아우레우스(예를 들어, 메티실린 내성(MRSA) 스타필로코커스 아우레우스), 클로스트리듐 디피실, 악시네토박터 바우만니이(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 악시네토박터), 슈도모나스 애루기노사(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 슈도모나스 애루기노사, 예를 들어, 카르바페넴 내성 슈도모나스 애루기노사), 장내세균과(예를 들어, 이. 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아 또는 엔테로박터 종, 예를 들어, 카르바페넴 내성 장내세균과(CRE)), 네이세리아 고노로애아(예를 들어, 약물 내성 네이세리아 고노로애아), 살모넬라(예를 들어, 약물 내성 살모넬라), 시겔라(예를 들어, 약물 내성 시겔라), 확장된 스펙트럼 β-락타마제(ESBL)를 생성하는 세균, 또는 마이코박테리움 튜버큘로시스(예를 들어, 약물 내성 마이코박테리움 튜버큘로시스) 중 하나 이상의 세균에 결합할 수 있다.

한 실시양태에서, ADC는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상)의 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, ADC는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상)의 다중약물 내성 슈도모나스 애루기노사 균주에 결합할 수 있다.

한 실시양태에서, ADC는 LPS의 선형 또는 입체구조형 에피토프에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, ADC는 LPS의 코어 오당류에 결합한다. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 본원에 기재된 옵소닌식작용 어세이에 의해 확인될 때, 옵소닌식작용 활성을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 식세포의 존재 하에 약 20 ㎍/㎖의 ADC에서 옵소닌식작용 사멸 활성을 가진다.

한 실시양태에서, ADC는 항미생물 펩타이드, 예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드, 예를 들어, 표 4에 개시된 아미노산 서열을 가진 항미생물 펩타이드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 표 4에 기재된 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열 또는 이의 일부, 예를 들어, 이의 기능성 단편(예를 들어, N-말단 G 잔기들 중 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개 이상)의 G 잔기가 누락되어 있음)을 포함하거나 이러한 아미노산 서열 또는 이의 일부로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시양태에서, ADC는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 항미생물 펩타이드를 포함하고, 각각의 항미생물 펩타이드는 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 4개 이상의 항미생물 펩타이드를 포함하고, 각각의 항미생물 펩타이드는 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 4개 이상의 항미생물 펩타이드를 포함하고, 각각의 항미생물 펩타이드는 서열번호 67 내지 80, 94 내지 102, 147 내지 156, 158, 159, 163, 164, 또는 246 내지 258 중 임의의 아미노산 서열을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 카르복스아미드 기(예를 들어, C-말단 카르복스아미드 작용기)를 포함한다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개, 35개, 36개, 37개, 38개, 39개, 40개 이상)의 D-아미노산을 포함한다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 아미노산 잔기의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%는 D-아미노산이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 모든 아미노산 잔기는 D-아미노산이다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 하나 이상의 D-아미노산 및 하나 이상의 L-아미노산을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상의 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)의 생존력을 억제할 수 있고/있거나 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 항체 분자는 장내세균과(예를 들어, 클렙시엘라, 엔테로박터, 시겔라, 에스케리키아, 살모넬라, 예르시니아 또는 시트로박터, 예를 들어, 범-내성 장내세균과)로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 슈도모나스로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 악시네토박터로부터의 상이한 종, 아종 및/또는 균주의 하나 이상의 세균, 또는 이들의 임의의 조합의 생존력을 억제할 수 있고/있거나 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, ADC는 클렙시엘라 뉴모니아(예를 들어, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 오자나, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 뉴모니아 또는 클렙시엘라 뉴모니아 아종 리노스클레로마티스), 엔테로박터 칸세로게노우스, 엔테로박터 클로아카, 엔테로박터 호르마케이, 엔테로박터 아스부리아, 시겔라 보이디이, 시겔라 디센테리아, 시겔라 플렉스네리, 시겔라 소네이, 에스케리키아 콜라이(예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 11775, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 에스케리키아 콜라이 ATCC 35401, 또는 에스케리키아 콜라이 ATCC 43895), 에스케리키아 페르구소니이, 살모넬라 콜레라수이스, 살모넬라 콜레라수이스 아종 인디카, 살모넬라 엔테리티디스, 살모넬라 비르초우, 살모넬라 파라티피 B, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 파라티피 A, 살모넬라 티피, 살모넬라 콜레라수이스 아종 아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 디아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 하우테나, 살모넬라 본고리, 시트로박터 세들라키이, 시트로박터 브라아키이, 시트로박터 웨르크마니이, 시트로박터 프레운디이, 시트로박터 영가, 시트로박터 아말로나티쿠스, 예르시니아 엔테로콜리티카, 예르시니아 프레데릭세니이, 예르시니아 페스티스, 예르시니아 슈도튜버큘로시스, 또는 이들의 임의의 조합의 생존력을 억제할 수 있거나 감소시킬 수 있다.

한 실시양태에서, ADC는 엔테로코커스 파시움(예를 들어, 반코마이신 내성(VRE) 엔테로코커스 파시움), 스타필로코커스 아우레우스(예를 들어, 메티실린 내성(MRSA) 스타필로코커스 아우레우스), 클로스트리듐 디피실, 악시네토박터 바우만니이(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 악시네토박터), 슈도모나스 애루기노사(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 슈도모나스 애루기노사, 예를 들어, 카르바페넴 내성 슈도모나스 애루기노사), 장내세균과(예를 들어, 이. 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아 또는 엔테로박터 종, 예를 들어, 카르바페넴 내성 장내세균과(CRE)), 네이세리아 고노로애아(예를 들어, 약물 내성 네이세리아 고노로애아), 살모넬라(예를 들어, 약물 내성 살모넬라), 시겔라(예를 들어, 약물 내성 시겔라), 확장된 스펙트럼 β-락타마제(ESBL)를 생성하는 세균, 또는 마이코박테리움 튜버큘로시스(예를 들어, 약물 내성 마이코박테리움 튜버큘로시스) 중 하나 이상의 세균의 생존력을 억제할 수 있거나 감소시킬 수 있다.

이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 본원에 기재된 ADC에 적합한 항미생물 펩타이드는 적어도 부분적으로 하기 특성들 중 하나 이상의 특성(예를 들어, 2개 또는 3개의 특성, 또는 모든 특성)을 기준으로 선택될 수 있다: 강한 세균 억제 활성, 강한 살균 활성, 낮은 적혈구(RBC) 용혈 활성, 또는 낮은 세포독성(예를 들어, 오프-표적 독성). 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 세균 균주, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 슈도모나스 애루기노사 ATCC 27853, 또는 이들 둘 다에 대한 100 ㎍/㎖ 미만, 예를 들어, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 또는 5 ㎍/㎖ 미만의 최소 억제 농도(MIC)를 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 본원에 기재된 세균 균주, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 슈도모나스 애루기노사 ATCC 27853, 또는 이들 둘 다에 대한 100 ㎍/㎖ 미만, 예를 들어, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 또는 5 ㎍/㎖ 미만의 최소 살균 농도(MBC)를 가진다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 낮은 용혈 활성을 가진다, 예를 들어, 각각 적혈구 용혈 어세이 및 MIC 어세이에 의해 측정될 때, 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)에 대한 1 이상(예를 들어, 4:1, 8:1, 16:1, 24:1 또는 32:1 이상)의 PLC 대 MIC 비를 가진다. 한 실시양태에서, PLC는 적혈구의 50%를 용해시키는 데 요구되거나 필요한 농도(예를 들어, 최소 농도)이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 낮은 용혈 활성을 가진다, 예를 들어, 각각 적혈구 용혈 어세이 및 MIC 어세이에 의해 측정될 때, 그람 음성 세균(예를 들어, 본원에 기재된 그람 음성 세균)에 대한 4:1 초과(예를 들어, 8:1, 16:1, 24:1 또는 32:1 초과)의 MLC 대 MIC 비를 가진다. 한 실시양태에서, MLC는 적혈구의 100%를 용해시키는 데 요구되거나 필요한 농도(예를 들어, 최소 농도)이다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 α-나선형 펩타이드이다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 가진다. 예를 들어, 항미생물 펩타이드에서 2개의 시스테인 잔기는 가교결합될, 예를 들어, 화학적으로 가교결합될 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드에서 2개 이상의 아미노산 잔기의 가교결합은 α-나선형 입체구조를 향상시킬 수 있고/있거나, 혈청 안정성을 향상시킬 수 있고/있거나, 항미생물 효능을 증가시킬 수 있다고 생각된다. 한 실시양태에서, 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 가진 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 혈청에서 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 갖지 않은 동일한 항미생물 펩타이드보다 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 더 안정하다. 한 실시양태에서, 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 가진 항미생물 펩타이드는 가교결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 갖지 않은 동일한 항미생물 펩타이드보다 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 더 낮은 MIC를 가진다.

한 실시양태에서, ADC는 효소 합성에 의해 생성된다. 예를 들어, ADC는 항체 분자(예를 들어, 태그부착된 항체 분자)의 발현, 펩타이드(예를 들어, 항미생물 펩타이드)의 화학 합성, 및 펩타이드와 항체 분자의 효소 라이게이션에 의해 생성될 수 있다. 한 실시양태에서, 90% 이상, 예를 들어, 92% 이상, 95% 이상, 97% 이상 또는 99% 이상의 반응 효율이 달성된다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 ADC를 정제하는 단계를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 수율은 정제 후 60% 이상(예를 들어, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상)이다.

한 실시양태에서, ADC는 세균 표면에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, ADC는 분비된 소포체에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, ADC는 세균 표면 및 분비된 소포체 둘 다에 결합한다. 한 실시양태에서, 결합은 전자 현미경관찰에 의해 검출된다. 한 실시양태에서, ADC는 제2 속, 종 또는 아종으로부터의 세균과의 결합에 비해 제1 속, 종 또는 아종으로부터의 세균과의 향상된 결합을 가진다. 한 실시양태에서, ADC는 슈도모나스 애루기노사 이외의 세균(예를 들어, 이. 콜라이 또는 클렙시엘라 종)과의 결합에 비해 슈도모나스 애루기노사와의 향상된 결합을 가진다.

한 실시양태에서, ADC는 a) 지질다당류(LPS)에 결합하는 항체 분자; 및 b) 항미생물 펩타이드를 포함하고, 이때 상기 항체 분자는 VH 및 VL을 포함하고, 이때 VH는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, VL은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, ADC 또는 항체 분자는

(a) 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 109, 145 또는 146 중 임의의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 110, 138, 140 또는 144 중 임의의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143 중 임의의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3, 또는

(b) 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 110, 138, 140 또는 144 중 임의의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 111, 139, 141, 142 또는 143 중 임의의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3

을 포함하고; 항미생물 펩타이드는

(i) 서열번호 101의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(ii) 서열번호 147의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(iii) 서열번호 152의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(iv) 서열번호 153의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(v) 서열번호 154의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(vi) 서열번호 156의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(vii) 서열번호 163의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(viii) 서열번호 164의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(ix) 서열번호 246의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(x) 서열번호 247의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xi) 서열번호 248의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xii) 서열번호 249의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xiii) 서열번호 250의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xiv) 서열번호 251의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xv) 서열번호 252의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xvi) 서열번호 253의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xvii) 서열번호 254의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xviii) 서열번호 255의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xix) 서열번호 256의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열;

(xx) 서열번호 257의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열; 또는

(xxi) 서열번호 258의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열

을 포함하거나 이러한 아미노산 서열로 구성된다.

한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (i)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (ii)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (iii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (iv)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (v)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (vi)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (vii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (viii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (ix)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (x)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xi)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xii)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xiii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xiv)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xv)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xvi)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xvii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xviii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xix)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xviii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xx)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xviii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xxi)을 포함한다.

한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (i)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (ii)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (iii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (iv)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (v)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (vi)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (vii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (viii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (ix)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (x)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xi)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xii)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xiii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xiv)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xv)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xvi)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xvii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xviii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xix)를 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xviii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xx)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (a) 및 (xviii)을 포함한다. 한 실시양태에서, ADC는 (b) 및 (xxi)을 포함한다.

부위 특이적 접합

본원에 기재된 ADC는 부위 특이적 접합 방법에 의해 제조될 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 부위 특이적 접합은 ADC를 제조하는 데 이용된 통상적인 접합 화학반응에 비해 일부 장점들을 제공할 수 있다고 생각된다. 예를 들어, 부위 특이적 페이로드 배치를 비롯한 부위 특이적 접합은 약물-대-항체 비 및 접합 부위에 대한 제어를 가능하게 하고, 이것은 ADC의 특성, 예를 들어, ADC의 약물동력학(PK), 배치 또는 효능에 영향을 미칠 수 있다. 추가로, 부위 특이적 접합에서 사용된 링커 조성도 ADC의 특성에 영향을 미칠 수 있다.

ADC를 제조하는 부위 특이적 접합 방법들은 예를 들어, 제어된 약물 적재, 단순화된 분석정보 및 개선된 치료 치수를 가진 균질한 생성물을 생성할 수 있다. 전형적으로, 이 방법들은 항체 골격의 정해진 위치에서 반응성 아미노산을 도입하고 이 아미노산의 독특한 화학적 또는 효소적 반응성을 이용하여 페이로드를 접합시킨다(예를 들어, 문헌(Junutula et al. Nat Biotechnol. 2008; 26(8):925-32); 문헌(Strop et al. Chem Biol. 2013; 20(2):161-7); 문헌(Axup et al. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 2012; 109(40):16101-6); 문헌(Kung Sutherland et al. Blood. 2013; 122(8):1455-63)에 기재됨).

예시적인 부위 특이적 접합 방법은 예를 들어, 내용이 본원에 참고로 포함되는 문헌(Drake et al. Bioconjug Chem. 2014; 25(7):1331-41), 미국 특허 제9,238,878호 및 국제 특허출원 공개 제WO 2010/096394호에도 기재되어 있다. 예를 들어, 단백질을 부위 선택적으로 변형시키는 화학효소 방법은 천연 생성 포르밀글리신 생성 효소(FGE)를 사용하여 포르밀글리신(fGly) 잔기를 단백질 골격 내로 도입할 수 있다. fGly의 알데하이드 측쇄와 선택적으로 반응하여 단백질과 안정한 C-C 결합을 형성하도록 링커를 설계할 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 예를 들어, 제어된 화학양론 및 깨끗한 분석정보를 이용하여 부위 특이적으로 접합된 ADC를 생성할 수 있고, 이것은 원하는 효능 및 감소된 독성을 가진 ADC를 설계할 수 있게 한다고 생각된다.

본원에 기재된 바와 같이, 한 실시양태에서, 부위 특이적 ADC 생성은 비천연 아미노산인 포르밀글리신(fGly)을 항체 서열 내로 혼입하는 것을 기반으로 한다. 예를 들어, fGly을 혼입하기 위해, 표준 분자생물학 클로닝 기법(Rabuka et al. Nat Protoc. 2012; 7(6):1052-67)을 이용하여 짧은 컨센서스 서열(예를 들어, CXPXR, 이때 X는 전형적으로 세린, 쓰레오닌, 알라닌 또는 글리신임)을 항체 중쇄 또는 경쇄의 원하는 위치, 예를 들어, 보존된 영역에서 삽입할 수 있다. 컨센서스 서열은 항체 분자의 다양한 위치들, 예를 들어, 중쇄(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3, 또는 C-말단), 경쇄(예를 들어, 불변 영역 또는 C-말단), 또는 이들 둘 다에서 삽입될 수 있다. 복수의 컨센서스 서열들(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상의 동일한, 유사한 또는 상이한 컨센서스 서열들)이 항체 분자 내로 삽입될 수 있다.

태그부착된 항체 분자는 포르밀글리신 생성 효소(FGE)를 공-발현하는 세포에서 재조합적으로 생성될 수 있다. FGE는 태그 내의 시스테인을 fGly 잔기로 공-번역적으로 전환시켜, 알데하이드 태그를 가진 항체 분자가 발현될 수 있게 한다(Carison et al. J Biol Chem. 2008; 283(29):20117-25). 상기 태그의 알데하이드 작용기는 바이오오르토고날(bioorthogonal) 접합을 위한 화학적 핸들 역할을 할 수 있다(Sletten et al. Angew Chem Int Ed Engl. 2009; 48(38):6974-98). 한 실시양태에서, 하이드라지노-이소-픽테트-스펜글러(HIPS) 라이게이션을 이용하여 페이로드를 fGly에 연결하여, 약물 페이로드(예를 들어, 항미생물 펩타이드)와 항체 분자 사이의 안정한 공유 C-C 결합을 형성한다(Agarwal et al. Bioconjug Chem. 2013; 24(6):846-51). 이 C-C 결합은 전형적으로, 예를 들어, 순환 및 FcRn 재활용 동안 ADC가 우연히 만나는 생리학적으로 관련된 공격(예를 들어, 프로테아제, 낮은 pH 또는 환원 시약)에 대한 안정성을 가진다. 예시적인 접합 방법 및 관련 화학반응은 PCT 공개 제WO 2018/136626호(이의 전체가 본원에 참고로 포함됨)의 도 26에 기재되어 있다.

본원의 개시내용은 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자) 및 공유커플링된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 ADC를 제공하는 것으로, 이때 상기 항체 분자는 변형된 설파타제 모티프를 포함한다. 본 개시내용은 항미생물 펩타이드에 공유적으로 및 부위 특이적으로 커플링되어 약물 함유 스캐폴드를 제공할 수 있는 알데하이드 태그부착된 항체 분자도 제공한다. 본원에 기재된 ADC는 본원에 기재된 방법에 따라 세균 감염(예를 들어, 그람 음성 세균, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사와 관련된 감염) 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 ADC 또는 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 생성하는 방법도 본원에 기재되어 있다.

알데하이드 태그

전형적으로, 알데하이드 태그는 포르밀글리신(FGly)을 함유하도록 포르밀글리신 생성 효소(FGE)에 의해 전환될 수 있는, 설파타제 모티프로부터 유래한 임의의 아미노산 서열에 기반을 둘 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, FGE의 작용은 서열 특이적 방식으로 유도된다, 예를 들어, FGE는 설파타제 모티프에서 작용하고 이 설파타제 모티프는 항체 분자의 임의의 영역 내에 위치할 수 있다고 생각된다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프의 FGE 매개 전환은 부위 특이적이다, 예를 들어, FGE는 설파타제 모티프의 아미노산 서열에서 작용한다. 또 다른 실시양태에서, 설파타제 모티프에 작용하는 FGE의 능력은 서열 환경 독립적이다, 예를 들어, 설파타제 모티프의 시스테인/세린을 전환시키는 FGE의 능력은 설파타제 모티프가 항체 분자에서 제시되는 서열 환경과 무관하다.

알데하이드 태그의 최소 설파타제 모티프는 길이가 전형적으로 6개 이하의 아미노산 잔기, 전형적으로 길이가 약 5개 또는 6개 아미노산 잔기이다. 알데하이드 태그는 5개 또는 6개 잔기의 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있거나, 더 길 수 있고 하나 이상의 추가 아미노산 잔기에 의해 상기 모티프의 N-말단 및/또는 C-말단 측면에서 플랭킹될 수 있는 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있다. 예를 들어, 5개 또는 6개 아미노산 잔기의 알데하이드 태그뿐만 아니라, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 이상의 아미노산 잔기의 보다 더 긴 아미노산 서열도 사용될 수 있다.

이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, (예를 들어, N-말단 또는 C-말단에) 삽입되거나, 결실되거나, 치환되거나(대체되거나) 추가되는 아미노산 잔기의 수를 최소화함으로써 항체 분자의 천연 아미노산 서열의 변형 정도를 최소화하는 것이 바람직하다고 생각된다. 한 실시양태에서, 알데하이드 태그는 항체 분자의 아미노산 서열의 16개, 15개, 14개, 13개, 12개, 11개, 10개, 9개, 8개 또는 7개 미만의 아미노산 잔기의 변형(삽입, 추가, 결실, 치환/대체)을 요구한다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 알데하이드 태그에 유용한 설파타제 모티프는 하기 식을 가진다:

X₁Z₁X₂Z₂X₃Z₃ (I)

상기 식에서,

Z₁은 ((C/S)로도 표시될 수 있는) 시스테인 또는 세린이고;

Z₂는 ((P/A)로도 표시될 수 있는) 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;

Z₃은 염기성 아미노산이고, 아르기닌(R), 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 통상적으로 라이신, 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I) 또는 프롤린(P)), 통상적으로 A, G, L, V 또는 I일 수 있고;

X₁은 존재하거나 부재하고, 존재할 때, 통상적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성 비하전 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 통상적으로 L, M, V, S 또는 T, 보다 통상적으로 L, M, S 또는 V일 수 있지만, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 설파타제 모티프가 항체 쇄의 N-말단에 존재할 때, X₁은 존재하고;

X₂ 및 X₃은 통상적으로 지방족 아미노산, 극성 비하전 아미노산 또는 황 함유 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 통상적으로 S, T, A, V, G 또는 C, 보다 통상적으로 S, T, A, V 또는 G일 수 있지만, 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있다.

한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 하기 식을 가진다:

X₁Z₁X₂Z₂X₃R (Ia)

전형적으로, 설파타제 모티프에 대한 FGE의 작용 후, Z₁은 산화되어 2-포르밀글리신(FGly) 잔기를 생성한다. FGE 매개 전환 및 항미생물 펩타이드의 반응성 파트너와의 반응 후, 상기 식에서 Z₁에 위치하는 FGly은 항미생물 펩타이드에 공유결합된다. 한 실시양태에서, 상기 반응성 파트너는 α-친핵체, 예를 들어, 아미노옥시 또는 하이드라자이드 기이고, 예를 들어, 옥심 또는 하이드라존 결합을 통해 항체 분자와 항미생물 펩타이드의 결합을 제공한다. 한 실시양태에서, 항체 분자와 항미생물 펩타이드는 재조합 융합 단백질 기술에 기반을 둔 다른 약물 접합체에서 발견될 수 있는 바와 같이 아미드 결합을 통해 연결되지 않는다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그는 항체 쇄의 N-말단 이외의 위치에 존재하고, 상기 식의 X₁은 항체 분자의 천연 아미노산 서열의 아미노산 잔기에 의해 제공된다. 한 실시양태에서, 항체 분자 쇄의 N-말단 이외의 위치에 존재할 때, 설파타제 모티프는 하기 식을 가진다:

(C/S)X₁(P/A)X₂Z₃ (II)

상기 식에서, X₁ 및 X₂는 전형적으로 지방족 아미노산, 극성 비하전 아미노산 또는 황 함유 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 전형적으로 S, T, A, V 또는 C, 보다 전형적으로 S, T, A 또는 V이지만, 독립적으로 임의의 아미노산이다. 식 II에서 Z₃은 상기 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 하기 식을 가진다:

(C/S)X₁(P/A)X₂R (IIa)

설파타제 모티프는 예를 들어, 알데하이드 태그가 설파타제 모티프 및 "보조 모티프" 둘 다를 포함하도록 서열의 N-말단 및 C-말단 중 하나 또는 이들 둘 다에서 추가 잔기를 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 (예를 들어, 상기 식에서 아르기닌 잔기 다음에) C-말단에서 하기 아미노산 서열의 인접 잔기들 중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 모든 7개의 잔기들을 임의적 보조 모티프로서 포함한다: AALLTGR(서열번호 170), SQLLTGR(서열번호 171), AAFMTGR(서열번호 172), AAFLTGR(서열번호 173), SAFLTGR(서열번호 174), ASILTGK(서열번호 175), VSFLTGR(서열번호 176), ASLLTGL(서열번호 177), ASILITG(서열번호 178), VSFLTGR(서열번호 176), SAIMTGR(서열번호 179), SAIVTGR(서열번호 180), TNLWRG(서열번호 181), TNLWRGQ(서열번호 182), TNLCAAS(서열번호 183), VSLWTGK(서열번호 184), SMLLTG(서열번호 185), SMLLTGN(서열번호 186), SMLLTGT(서열번호 187), ASFMAGQ(서열번호 188), ASLLTGL(서열번호 177)(예를 들어, 문헌(Dierks et al. (1999) EMBO J 18(8): 2084-2091) 참조) 또는 GSLFTGR(서열번호 189). 한 실시양태에서, 알데하이드 태그는 포스포네이트 모노에스테르 하이드롤라제에서 천연 아미노산 서열로서 존재할 수 있는 아미노산 서열 CGPSR(M/A)S(서열번호 190) 또는 CGPSR(M/A)(서열번호 191)을 함유하지 않는다.

알데하이드 태그의 설파타제 모티프는 전형적으로 선택된 FGE에 의해 전환될 수 있도록 선택된다. 한 실시양태에서, FGE는 알데하이드 태그부착된 항체 분자가 발현되는 숙주 세포에 존재한다. 또 다른 실시양태에서, FGE는 세포 부재 방법에서 알데하이드 태그부착된 항체 분자와 접촉된다.

전형적으로, 진핵 FGE에 의한 전환에 민감한 설파타제 모티프는 시스테인 및 프롤린을 함유하고(예를 들어, 상기 식 I에서 Z₁ 및 Z₂에서 각각 시스테인 및 프롤린(예를 들어, X₁CX₂PX₃R); 상기 식 II에서 CX₁PX₂R), "SUMF1형" FGE에 의해 변형된다(예를 들어, 문헌(Cosma et al. Cell 2003, 113, (4), 445-56); 및 문헌(Dierks et al. Cell 2003, 113, (4), 435-44)에 기재됨). 원핵 FGE에 의한 전환에 민감한 설파타제 모티프는 설파타제 모티프에서 시스테인 또는 세린, 및 프롤린을 함유하고(예를 들어, 상기 식 I에서 각각 Z₁에서 시스테인 또는 세린 및 Z₂에서 프롤린(예를 들어, X₁(C/S)X₂PX₃R); 상기 식 II에서 (C/S)X₁PX₂R), 각각 "SUMF1형" FGE 또는 "AtsB형" FGE에 의해 변형된다(예를 들어, 문헌(Szameit et al. J Biol Chem 1999, 274, (22), 15375-81)에 기재됨). 원핵 FGE에 의한 전환에 민감한 다른 설파타제 모티프는 설파타제 모티프에서 시스테인 또는 세린, 및 프롤린 또는 알라닌을 함유하고(예를 들어, 각각 Z₁에서 시스테인 또는 세린, 및 Z₂에서 프롤린 또는 알라닌, 예를 들어, SX₁AX₂R; X₁CX₂PX₃Z₃; X₁SX₂PX₂Z₃; X₁CX₂AX₃Z₃; X₁SX₂AX₃Z₃; CX₁PX₂Z₃; SX₁PX₂Z₃; CX₁AX₂Z₃; SX₁AX₂Z₃(상기 식 I에서); CX₁PX₂Z₃(상기 식 II에서); X₁CX₂PX₃R; X₁SX₂PX₂R; X₁CX₂AX₃R; X₁SX₂AX₃R(상기 식 Ia에서); CX₁PX₂R; SX₁PX₂R; CX₁AX₂R; SX₁AX₂R(상기 식 IIa에서)), 예를 들어, 문헌(Berteau et al. J. Biol. Chem. 2006; 281:22464-22470)에 기재된 바와 같이, 예를 들어, 퍼미큐테스(Firmicutes)(예를 들어, 클로스트리듐 퍼프링겐스(Clostridium perfringens))의 FGE에 의한 변형에 민감하고, 이러한 FGE에 의해 변형될 수 있다.

한 실시양태에서, FGE는 진핵 FGE(예를 들어, 포유동물 FGE, 예를 들어, 인간 FGE)이고, 설파타제 모티프는 하기 식을 가진다:

X₁CX₂PX₃Z₃ (III)

상기 식에서,

X₁은 존재하거나 부재하고, 존재할 때, 전형적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성 비하전 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 전형적으로 L, M, S 또는 V이지만, 임의의 아미노산이고, 단 설파타제 모티프가 항체 분자 쇄의 N-말단에 존재할 때, X₁은 존재하고;

X₂ 및 X₃은 전형적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성 비하전 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 전형적으로 S, T, A, V, G 또는 C, 보다 통상적으로 S, T, A, V 또는 G이지만, 독립적으로 임의의 아미노산이고;

Z₃은 염기성 아미노산(아르기닌(R) 이외의 아미노산일 수 있고, 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 통상적으로 라이신일 수 있음), 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I) 또는 프롤린(P), 통상적으로 A, G, L, V 또는 I)이고, 이때 Z₃은 식 IIIa에서 아르기닌(R)이다.

한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 하기 식을 가진다:

X₁CX₂PX₃R (IIIa)

예를 들어, 예시적인 설파타제 모티프는 LCTPSR(서열번호 169), MCTPSR(서열번호 192), VCTPSR(서열번호 193), LCSPSR(서열번호 194), LCAPSR(서열번호 195), LCVPSR(서열번호 196), LCGPSR(서열번호 197), ICTPAR(서열번호 198), LCTPSK(서열번호 199), MCTPSK(서열번호 200), VCTPSK(서열번호 201), LCSPSK(서열번호 202), LCAPSK(서열번호 203), LCVPSK(서열번호 204), LCGPSK(서열번호 205), LCTPSA(서열번호 206), ICTPAA(서열번호 207), MCTPSA(서열번호 208), VCTPSA(서열번호 209), LCSPSA(서열번호 210), LCAPSA(서열번호 211), LCVPSA(서열번호 212) 및 LCGPSA(서열번호 213)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

하기 보다 더 상세히 기재된 바와 같이, 전환된 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 관심 있는 모이어티의 반응성 파트너와 반응하여, 관심 있는 모이어티와 전환된 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 FGly 잔기 사이의 접합, 및 변형된 폴리펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 ADC)의 생성을 제공한다. 변형된 알데하이드 태그를 가진 변형된 항체 분자는 전형적으로 하기 식을 가진 변형된 설파타제를 포함하는 것으로써 기재된다:

X₁(FGly')X₂Z₂X₃Z₃ (I')

상기 식에서,

FGly'은 공유부착된 모이어티(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 가진 포르밀글리신 잔기이고;

Z₂는 ((P/A)로 표시될 수도 있는) 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;

식 I'에서 Z₃은 염기성 아미노산이고, (식 Ia'에서와 같이) 아르기닌(R), 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 통상적으로 라이신, 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I) 또는 프롤린(P), 통상적으로 A, G, L, V 또는 I)일 수 있고;

X₁은 존재하거나 부재하고, 존재할 때, 전형적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성 비하전 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 전형적으로 L, M, V, S 또는 T, 보다 전형적으로 L, M 또는 V이지만, 임의의 아미노산이고, 단 설파타제 모티프가 항체 쇄의 N-말단에 존재할 때, X₁은 존재하고;

X₂ 및 X₃은 전형적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성 비하전 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 전형적으로 S, T, A, V, G 또는 C, 보다 전형적으로 S, T, A, V 또는 G이지만, 독립적으로 임의의 아미노산이다.

X₁(FGly')X₂Z₂X₃R (Ia')

예시적인 전환된 설파타제 모티프는 L(FGly)TPSR(서열번호 214), M(FGly)TPSR(서열번호 215), V(FGly)TPSR(서열번호 216), L(FGly)SPSR(서열번호 217), L(FGly)APSR(서열번호 218), L(FGly)VPSR(서열번호 219), L(FGly)GPSR(서열번호 220), I(FGly)TPAR(서열번호 221), L(FGly)TPSK(서열번호 222), M(FGly)TPSK(서열번호 223), V(FGly)TPSK(서열번호 224), L(FGly)SPSK(서열번호 225), L(FGly)APSK(서열번호 226), L(FGly)VPSK(서열번호 227), L(FGly)GPSK(서열번호 228), L(FGly)TPSA(서열번호 229), M(FGly)TPSA(서열번호 230), V(FGly)TPSA(서열번호 231), L(FGly)SPSA(서열번호 232), L(FGly)APSA(서열번호 233), L(FGly)VPSA(서열번호 234) 및 L(FGly)GPSA(서열번호 235)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

FGly 잔기의 알데하이드와의 반응을 통해 항미생물 펩타이드에 공유커플링되는 예시적인 항체 분자는 앞서 기재된 아미노산 서열을 갖되, 변형되지 않은 FGly 대신에 변형된 FGly(상기 식에서 FGly'로 표시됨)을 가진 항체 분자를 포함할 수 있다.

알데하이드 태그를 함유하기 위한 항체 분자의 변형

알데하이드 태그는 (예를 들어, 천연 아미노산 서열 내에서 5개 또는 6개의 아미노산 잔기 삽입을 제공하기 위한) 삽입 및/또는 (예를 들어, 항체 쇄의 N-말단 또는 C-말단에서의) 추가에 의해 항체 분자(예를 들어, 항체 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 단편)에 제공될 수 있다. 알데하이드 태그는 알데하이드 태그의 인접 아미노산 서열에 의한 항체 분자의 천연 아미노산 잔기의 완전한 또는 부분적 치환에 의해 제공될 수도 있다. 예를 들어, 5개 또는 6개 아미노산 잔기의 이종 알데하이드 태그는 천연 아미노산 서열의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 아미노산 잔기를 알데하이드 태그의 상응하는 아미노산 잔기로 대체함으로써 항체 분자에 제공될 수 있다.

하나 이상의 알데하이드 태그를 포함하기 위한 항체 분자의 변형은 재조합 분자 유전학 기법을 이용하여, 예를 들어, 원하는 알데하이드 태그부착된 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산을 생성함으로써 달성될 수 있다. 대안적으로, 알데하이드 태그는 비-재조합 기법, 예를 들어, 천연 화학적 라이게이션 또는 슈도-천연 화학적 라이게이션을 이용하여, 예를 들어, 알데하이드 태그를 폴리펩타이드의 C-말단에 추가함으로써 추가될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제6,184,344호, 제6,307,018호, 제6,451,543호 및 제6,570,040호; 및 문헌(Rush et al. (Jan. 5, 2006) Org Lett. 8(1):131-4)에 기재됨).

알데하이드 태그는 항체 분자 내의 임의의 적합한 위치에 위치할 수 있다. 한 실시양태에서, 알데하이드 태그의 부위는 FGE에 의한 전환 및 FGly에서의 후속 변형을 위해 접근될 수 있거나, (예를 들어, 폴리펩타이드를 변성시킴으로써) 접근 가능해질 수 있다. 항체 분자는 복수의 알데하이드 태그들, 예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상의 알데하이드 태그들을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 복수의 알데하이드 태그들 중 적어도 2개의(예를 들어, 모든) 알데하이드 태그들이 동일하다. 또 다른 실시양태에서, 복수의 알데하이드 태그들 중 적어도 하나의 알데하이드 태그는 복수의 알데하이드 태그들 중 또 다른 알데하이드 태그와 상이하다.

다수의 알데하이드 태그들을 함유하는 항체 분자

복수의 알데하이드 태그들은 예를 들어, 태그를 항체 분자의 표면 위에 분포시키기 위해 알데하이드 태그부착된 항체 분자에 위치할 수 있다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그들은 항체 분자에 천연적으로 존재하는 아미노산 잔기에 의해 항체 분자에서 떨어져 있다. 또 다른 실시양태에서, 알데하이드 태그들은 항체 분자에 대한 이종성 아미노산 서열을 가진 링커에 의해 떨어져 있다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그는 2개, 3개, 4개 이상의 알데하이드 태그들의 콘카타머성 구축물로서 알데하이드 태그부착된 항체 분자에 제공되고, 이로써 발현 구축물은 변형된 항체 분자의 인접 서열에서 2개, 3개, 4개 이상의 설파타제 모티프들을 코딩하고, 이때 설파타제 모티프들은 링커에 의해 분리된다. 예를 들어, 링커는 알데하이드 태그들 사이에 유연성을 제공함으로써, 공유결합된 항미생물 펩타이드의 회전을 가능하게 하여, 예를 들어, ADC 표면에서의 생물학적 활성 항미생물 펩타이드의 제시를 향상시키도록 선택될 수 있다. 이러한 링커는 알데하이드 태그가 콘카타머로서 제공되지 않는 경우, 예를 들어, 알데하이드 태그가 항체 쇄의 C-말단 또는 N-말단에 위치하는 경우에도 사용될 수 있다. 콘카타머로서 제공된 알데하이드 태그를 포함하는 알데하이드 태그는 항체 쇄의 C-말단 또는 이 말단의 근처, 항체 쇄의 N-말단 또는 이 말단의 근처, 및/또는 항체 분자의 하나 이상의 용매 접근 가능한 루프에 위치할 수 있다.

링커는 예를 들어, 사용된 알데하이드 태그, 콘카타머에서의 알데하이드 태그의 수, 원하는 유연성 정도 또는 이들의 조합에 따라 선택될 수 있다. 링커의 길이는 상이할 수 있고, 예를 들어, 약 2개 내지 50개, 3개 내지 25개, 4개 내지 23개, 5개 내지 20개, 6개 내지 18개, 7개 내지 16개, 8개 내지 14개, 또는 9개 내지 12개 아미노산일 수 있다. 예시적인 유연성 링커는 글리신 중합체 (G)_n, 글리신-세린 중합체(예를 들어, (GS)_n, (GSGGS)_n(서열번호 236) 및 (GGGS)_n(서열번호 237)을 포함하고, 이때 n은 적어도 1의 정수임), 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체 및 다른 유연성 링커, 예컨대, 쉐이커(shaker) 칼륨 채널을 위한 테더(tether)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 글리신 및 글리신-세린 중합체는 이 아미노산들 둘 다가 상대적으로 비구조화되어 있으므로 성분들 사이의 중성 테더로서 작용할 수 있기 때문에 관심을 끈다. 글리신 중합체는 글리신이 심지어 알라닌보다 상당히 더 phi-psi 공간에 접근하고 보다 더 긴 측쇄를 가진 잔기보다 훨씬 덜 제한되기 때문에 특히 관심을 끈다(문헌(Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)) 참조). 예시적인 유연성 링커는 GGSGG(서열번호 238), GSGSG(서열번호 239), GSGGG(서열번호 240), GGGSG(서열번호 241) 또는 GSSSG(서열번호 242)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 다른 링커는 비-아미노산 결합으로 구성될 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 반복부(예를 들어, EG₂, EG₃, EG₄ 또는 EG₆)는 PEG 반복부가 생체분자에의 비특이적 결합을 거의 갖지 않기 때문에 특히 관심을 끈다.

링커를 함유하는 콘카타머성 알데하이드 태그 구축물은 일반식 T₁-L_n-T₂로 기재될 수 있고, 이때 T₁ 및 T₂는 본원에 기재된 바와 같이 동일하거나 상이한 알데하이드 태그이고(예를 들어, 식 I, Ia, I', Ia', II, IIa, III 및 IIIa), L은 링커 펩타이드이고, n은 1 이상, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 이상의 정수이다. 링커를 함유하는 콘카타머성 알데하이드 태그의 예시적인 아미노산 서열은 LCTPSRGGGGLCTPSR(서열번호 243)이고, 이때 시스테인(C)은 FGE의 작용에 의해 FGly으로 변형되고, 반응성 파트너 함유 항미생물 펩타이드와 반응하여, 본원에 기재된 바와 같이 공유결합된 항미생물 펩타이드를 제공할 수 있다.

알데하이드 태그(들)는 (예를 들어, 세포 부재 환경, 통상적으로 세포 부재 생리학적 환경에서) 폴딩될 때 그의 구조를 고려하여, 예를 들어, 폴딩된 항체 분자의 용매 접근 가능한 부위에서 알데하이드 태그를 제공하도록 항체 분자에 위치할 수 있다. 따라서, 용매 접근 가능한 알데하이드 태그는 FGly으로의 세린 또는 시스테인의 전환을 위해 FGE에 접근될 수 있고/있거나 항미생물 펩타이드와의 접합을 위해 반응성 파트너 시약에 접근될 수 있도록 폴딩된 비전환된 알데하이드 태그부착된 항체 분자에서 접근될 수 있다. 알데하이드 태그가 용매 접근 가능한 부위에 위치하는 경우, 단백질을 변성시킬 필요 없이 세포 부재 FGE 매개 전환 및 반응성 파트너와의 반응에 의한 모이어티를 사용한 변형을 수행할 수 있다. 용매 접근 가능한 부위는 숙주 세포에서 발현될 때 세포외 또는 세포내 세포 표면에서 노출된 폴리펩타이드 영역도 포함할 수 있다.

따라서, 하나 이상의 알데하이드 태그는 예를 들어, 용매 접근 가능한 N-말단, 용매 접근 가능한 N-말단 영역, 용매 접근 가능한 C-말단, 용매 접근 가능한 C-말단 영역 및/또는 루프 구조로부터 독립적으로 선택된 부위에서 제공될 수 있다. 한 실시양태에서, 알데하이드 태그는 항체 쇄의 C-말단 이외의 부위에 위치한다. 한 실시양태에서, 2개 이상의 알데하이드 태그들은 중쇄, 예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3 중 하나, 둘 또는 전부에 위치한다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 경쇄는 알데하이드 태그를 함유하지 않는다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그 부위는 모 항체 분자에서 번역 후 변형되는 부위(예를 들어, 천연 생성 부위)에 위치한다. 예를 들어, 알데하이드 태그는 천연 항체 분자에서 글리코실화(예를 들어, N-글리코실화, O-글리코실화), 인산화, 황산화, 유비퀴틴화, 아실화, 메틸화, 프레닐화, 하이드록실화 또는 카르복실화의 부위에서 도입될 수 있다. 한 실시양태에서, 번역 후 변형 부위는 (예를 들어, 재조합 기법에 의해) 조작되고 항체 분자에 천연적으로 존재하지 않는다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 알데하이드 태그부착된 Fc 단편을 포함한다. 링커에 의해 분리된 2개의 알데하이드 태그들을 가진 알데하이드 태그 콘카타머를 함유하는 예시적인 알데하이드 태그부착된 Fc 단편을 비롯한, 단일 알데하이드 태그를 가진 예시적인 알데하이드 태그부착된 마우스 IgG1 Fc 단편 및 다수의 알데하이드 태그들을 가진 예시적인 알데하이드 태그부착된 마우스 IgG1 Fc 단편은 미국 특허 제9,238,878호에 기재되어 있다.

포르밀글리신 생성 효소(FGE)

포르밀글리신 생성 효소(FGE)는 설파타제 모티프에서 시스테인 또는 세린을 FGly으로 산화시키는 효소이다. 본원에서 사용된 바와 같이, FGE는 설파타제 모티프에서 시스테인(C)을 FGly으로 전환시키는 효소, 및 설파타제 모티프에서 세린(S)을 FGly으로 전환시키는 효소(AtsB형으로서도 공지되어 있음)를 포함한다.

폴리펩타이드의 알데하이드 태그의 설파타제 모티프에서 시스테인 또는 세린을 FGly으로 전환시키는 것을 용이하게 하는 데 사용된 FGE는 알데하이드 태그에 존재하는 설파타제 모티프에 따라 선택될 수 있다. FGE는 알데하이드 태그부착된 폴리펩타이드가 발현되는 숙주 세포에 천연적으로 존재할 수 있거나, 숙주 세포를 유전적으로 변형시켜 적절한 FGE를 발현시킬 수 있다. 진핵 설파타제는 일반적으로 그의 설파타제 모티프에서 시스테인을 함유하고 "SUMF1형" FGE에 의해 변형된다(Cosma et al. Cell 2003, 113, (4), 445-56; Dierks et al. Cell 2003, 113, (4), 435-44). 원핵 설파타제는 일반적으로 그의 설파타제 모티프에서 시스테인 또는 세린을 함유하고 각각 "SUMF1형" FGE 또는 "AtsB형" FGE에 의해 변형된다(Szameit et al. J Biol Chem 1999, 274, (22), 15375-81). FGE는 마이코박테리움 튜버큘로시스(예를 들어, 진뱅크 수탁번호 NP-215226(gi:15607852) 및 국제 특허출원 공개 제WO 2008/036350호), 및 척추동물과 극피동물을 포함하는 후구동물에서 기재되어 있다(예를 들어, 문헌(Pepe et al. Cell 2003; 113, 445-456); 문헌(Dierks et al. (2003) Cell 113, 435-444); 및 문헌(Cosma et al. Hum. Mutat. 2004; 23, 576-581)). 다수의 FGE들을 코딩하는 핵산들은 당분야에서 공지되어 있고 용이하게 입수될 수 있다(예를 들어, 문헌(Preusser et al. J. Biol. Chem. 2005; 280(15):14900-10); 문헌(Fang et al. J Biol. Chem. 2004; 79(15):14570-8); 문헌(Landgrebe et al. Gene. 2003; 316:47-56); 문헌(Dierks et al. FEBS Lett. 1998; 423(1):61-5); 문헌(Dierks et al. Cell. 2003; 113(4):435-44); 문헌(Cosma et al. Cell 2003; 113(4):445-56); 문헌(Baenziger Cell 2003; 113(4):421-2 (review)); 문헌(Dierks et al. Cell. 2005; 121(4):541-52); 문헌(Roeser et al. Proc Natl Acad Sci USA 2006; 103(1):81-6); 문헌(Sardiello et al. Hum Mol. Genet. 2005; 14(21):3203-17); 진뱅크 수탁번호 NM182760; 국제 특허출원 공개 제WO 2004/072275호 및 제WO 2008/036350호). 한 실시양태에서, 설파타제 모티프는 인간 FGE와 병용될 수 있다(예를 들어, 문헌(Cosma et al. Cell 2003; 113, 445-56); 및 문헌(Dierks et al. Cell 2003; 113, 435-44)에 기재된, 예를 들어, SUMF1형 FGE). 한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 FGE를 발현하는 인간 세포, 또는 인간 FGE를 발현하도록 유전적으로 변형된 숙주 세포, 전형적으로 포유동물 세포에서 발현된다. 세포 부재 방법을 이용하여 설파타제 모티프 함유 항체 분자를 전환시킬 때, 단리된 FGE를 사용할 수 있다.

알데하이드 태그의 전환 및 변형 방법

알데하이드 태그부착된 항체 분자에 존재하는 알데하이드 태그의 전환은 세포 기반 또는 세포 부재 방법에 의해 달성될 수 있다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 알데하이드 태그의 전환은 적합한 FGE를 함유하는 세포에서 알데하이드 태그부착된 단백질의 발현에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 알데하이드 태그의 시스테인 또는 세린의 전환은 숙주 세포에서 번역 동안 또는 후에 일어날 수 있다. 숙주 세포의 FGE는 숙주 세포에 내재할 수 있거나, 숙주 세포는 숙주 세포에 대한 이종성을 가진 적합한 FGE를 위한 재조합 숙주 세포일 수 있다. FGE 발현은 FGE 유전자에 내재하는 발현 시스템에 의해 제공될 수 있거나(예를 들어, 발현은 숙주 세포의 천연 FGE 유전자에 존재하는 프로모터 및 다른 제어 요소에 의해 제공되거나), FGE 코딩 서열이 이종 프로모터에 작동 가능하게 연결되어 항시성 또는 유도성 발현을 제공하는 재조합 발현 시스템에 의해 제공될 수 있다. 반응성 파트너 모이어티와 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 접합을 달성하는 데 사용하기에 적합한 조건은 문헌(Mahal et al. Science 1997; 276(5315):1125-8)에 기재된 조건과 유사하다.

또 다른 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 알데하이드 태그의 세포 부재 전환은 알데하이드 태그의 설파타제 모티프의 시스테인 또는 세린을 FGly으로 전환시키기에 적합한 조건 하에서 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 FGE와 접촉시킴으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 알데하이드 태그부착된 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산을 적합한 FGE의 존재 하에 시험관내 전사/번역 시스템에서 발현시켜, 전환된 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 생성을 제공할 수 있다.

대안적으로, 단리된 전환되지 않은 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 적합한 FGE를 결여하는 숙주 세포에서의 재조합 생성 후에 또는 합성 생성에 의해 단리될 수 있다. 그 다음, 알데하이드 태그 전환을 제공하기 위한 조건 하에서 상기 단리된 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 적합한 FGE와 접촉시킨다. 당분야에서 공지되어 있는 방법(예를 들어, 열의 이용, pH의 조절, 무질서화제(chaotropic agent)(예를 들어, 우레아), 유기 용매(예를 들어, 탄화수소: 옥탄, 벤젠 또는 클로로포름)으로 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 언폴딩시킬 수 있고 변성된 단백질을 적합한 FGE와 접촉시킬 수 있다. 그 다음, 적합한 조건 하에서 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 리폴딩시킬 수 있다.

유사하게, 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 전환된 알데하이드 태그의 변형은 세포 기반 또는 세포 부재 방법에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 전환된 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 생성 공급원(예를 들어, 재조합 숙주 세포 생성, 합성 생성)으로부터 단리될 수 있고, 반응성 파트너의 모이어티와 알데하이드 태그의 FGly의 접합을 제공하기에 적합한 조건 하에서 반응성 파트너 함유 항미생물 펩타이드와 접촉할 수 있다.

2-포르밀글리신과의 반응을 위해 반응성 파트너를 함유하도록 펩타이드를 변형시키는 방법

알데하이드 태그부착된 항체 분자에 접합될 항미생물 펩타이드는 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 FGly 잔기의 알데하이드와의 반응을 위해 반응성 파트너를 포함하도록 변형될 수 있다.

알데하이드 태그부착된 항체 변형 방법이 통상적인 화학적 공정과 병용될 수 있기 때문에, 다양한 상업적으로 입수 가능한 시약들 중 임의의 시약을 사용하여 접합을 달성할 수 있다. 예를 들어, 관심 있는 다수의 모이어티들의 아미노옥시, 하이드라자이드, 하이드라진 또는 티오세미카르바자이드 유도체는 적합한 반응성 파트너이고, 용이하게 입수될 수 있거나 표준 화학적 방법을 이용함으로써 생성될 수 있다.

한 실시양태에서, 반응성 모이어티(예를 들어, 아미노옥시 또는 하이드라자이드)는 펩타이드의 N-말단 영역, N-말단, C-말단 영역, C-말단 또는 내부 위치에 위치할 수 있다. 예를 들어, 펩타이드는 Boc-보호된 전구체로부터 합성될 수 있다. 펩타이드의 아미노 기는 카르복실산 기 및 옥시-N-Boc 기를 포함하는 화합물(예를 들어, 3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일옥시)프로판산)과 반응할 수 있다. 카르복실산 기 및 옥시-N-보호기를 포함하는 화합물에 대한 다른 변경은 알킬렌 링커에서의 상이한 수의 탄소 및 알킬렌 링커의 치환기를 포함할 수 있다. 펩타이드의 아미노 기와, 카르복실산 기 및 옥시-N-보호기를 포함하는 화합물 사이의 반응은 표준 펩타이드 커플링 화학반응을 통해 일어난다. 사용될 수 있는 펩타이드 커플링 시약의 예는 DCC(디사이클로헥실카르보디이미드), DIC(디이소프로필카르보디이미드), 디-p-톨루오일카르보디이미드, BDP(1-벤조트리아졸 디에틸포스페이트-1-사이클로헥실-3-(2-모르폴리닐에틸)카르보디이미드), EDC(1-(3-디메틸아미노프로필-3-에틸-카르보디이미드 하이드로클로라이드), 시아누릭 플루오라이드, 시아누릭 클로라이드, TFFH(테트라메틸 플루오로포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트), DPPA(디페닐포스포라지데이트), BOP(벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), HBTU(O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트), TBTU(O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트), TSTU(O-(N-석신이미딜)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트), HATU(N-[(디메틸아미노)-1-H-1,2,3-트리아졸로[4,5,6]-피리딘-1-일메틸렌]-N-메틸메탄아미늄 헥사플루오로포스페이트 N-옥사이드), BOP-Cl(비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스피닉 클로라이드), PyBOP((1-H-1,2,3-벤조트리아졸-1-일옥시)-트리스(피롤리디노)포스포늄 테트라플루오로포스페이트), BrOP(브로모트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), DEPBT(3-(디에톡시포스포릴옥시)-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온) 및 PyBrOP(브로모트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

아미노-옥시 작용기를 노출시키기 위한 탈보호를, N-보호기를 포함하는 펩타이드에 대해 수행할 수 있다. 예를 들어, N-옥시석신이미드 기의 탈보호는 고리형 아미드 기에 대한 표준 탈보호 조건에 따라 일어난다. 탈보호 조건은 문헌(Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3rd Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY and Harrison et al.)에서 발견될 수 있다. 일부 탈보호 조건들은 하이드라진 시약, 아미노 시약 또는 수소화붕소나트륨을 포함한다. 예를 들어, Boc 보호기의 탈보호는 TFA에 의해 일어날 수 있다. 탈보호를 위한 다른 시약은 하이드라진, 메틸하이드라진, 페닐하이드라진, 수소화붕소나트륨 및 메틸아민을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 생성물 및 중간체는 통상적인 수단, 예컨대, HPLC 정제에 의해 정제될 수 있다.

한 실시양태에서, 7 미만의 pH, 약 5.5, 약 6 또는 약 6.5의 pH에서 접합 반응을 수행한다. 살아있는 세포에 존재하는 알데하이드 태그부착된 항체 분자로 접합을 수행하는 경우, 조건은 생리학적으로 적합하도록 선택된다. 예를 들어, pH는 반응이 일어나게 하기에 충분한 시간 동안, 그러나 알데하이드 태그를 가진 세포에 의해 용인되는 시간(예를 들어, 약 30분 내지 1시간) 이내에 일시적으로 떨어질 수 있다. 세포 표면의 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 변형을 수행하기 위한 생리학적 조건은 세포 표면 아자이드를 가진 세포의 변형을 위한 케톤-아자이드 반응에서 사용된 조건과 유사할 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제6,570,040호).

예시적인 부위 특이적 ADC

한 실시양태에서, 하나 이상의 공유커플링된 항미생물 펩타이드로 ADC를 부위 특이적으로 장식한다. 반응성 파트너 함유 항미생물 펩타이드와 단백질의 알데하이드 태그의 반응의 부위 특이성은 다수의 화학 접합 부위들을 가진 단백질이 생성되게 함으로써, 단백질당 원하는 펩타이드 페이로드 비를 가진 ADC의 생성을 위한 스캐폴드를 제공한다. 한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 단백질에서 알데하이드 태그의 상대적인 위치는 최종 ADC의 표면에서의 공유결합된 항미생물 펩타이드의 원하는 제시를 제공함으로써, 표시된 펩타이드 페이로드의 공간적 배향을 제어할 수 있도록 설계될 수 있다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드를 항체 분자에 부착시키기 위한 알데하이드 태그의 화학적 변형의 부위 특이적 특성을 이용하여, 실질적으로 균질한 집단 ADC를 포함하는 조성물을 제공할 수 있다. 이러한 ADC는 약물 전달의 화학양론의 제어를 제공할 수 있다. 이러한 균질한 집단은 집단의 ADC의 60% 이상, 예를 들어, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상이 동일한 항미생물 펩타이드 페이로드 대 항체 분자 비를 가진 집단을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC는 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 하나 이상의 공유결합된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하고, 이때 상기 항체 분자는 하기 식의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다:

X₁(FGly')X₂Z₂X₃Z₃

상기 식에서, FGly'는 하기 화학식을 가진다:

상기 화학식에서,

J₁은 공유결합된 항미생물 펩타이드이고;

L₁은 각각 알킬렌, 치환된 알킬렌, 알케닐렌, 치환된 알케닐렌, 알키닐렌, 알키닐렌, 아릴렌, 치환된 아릴렌, 사이클로알킬렌, 치환된 사이클로알킬렌, 헤테로아릴렌, 치환된 헤테로아릴렌, 헤테로사이클렌, 치환된 헤테로사이클렌, 아실, 아미도, 아실옥시, 우레타닐렌, 티오에스테르, 설포닐, 설폰아미드, 설포닐 에스테르, -O-, -S-, -NH-, 및 치환된 아민으로부터 독립적으로 선택된 2가 모이어티이고;

n은 0 내지 40으로부터 선택된 수이고;

Z₂는 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;

X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;

Z₃은 염기성 아미노산이고,

항체 분자가 폴딩된 상태로 존재할 때 용매 접근 가능한 표면에서 공유결합된 약물을 제시한다. X₁, X₂, Z₂, X₃ 및 Z₃은 상기 논의된 바와 같이 더 정의될 수 있다.

한 실시양태에서, ADC는 (예를 들어, 그의 전체가 본원에 참고로 포함되는 PCT 공개 제WO 2018/136626호에 기재된 바와 같이) HIPS 화학반응 라이게이션에 의해 형성된다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 단백질은 예를 들어, 단백질당 원하는 약물 페이로드 비를 가진 ADC의 생성을 위한 스캐폴드를 제공하기 위해 다수의 화학 접합 부위들을 제공하도록 설계될 수 있다. 본 개시내용의 ADC는 전형적으로 공유결합된 항미생물 펩타이드를 가진 적어도 2개(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 변형된 설파타제 모티프를 포함한다. 본 개시내용의 ADC는 ADC에서 4개 이상, 5개 이상 또는 6개 이상의 공유결합된 항미생물 펩타이드를 제공할 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 ADC는 적어도 2:1, 적어도 3:1, 적어도 4:1, 적어도 5:1, 적어도 6:1, 적어도 7:1 또는 적어도 8:1의 펩타이드 페이로드 대 항체 분자 비를 가진 ADC를 포함한다.

알데하이드 태그부착된 항체 분자에서 알데하이드 태그의 상대적인 위치는 최종 ADC의 표면에서의 공유커플링된 항미생물 펩타이드의 원하는 제시를 제공하도록 설계될 수 있다. 이 특징은 최종 ADC의 표면에서 표시된 약물 페이로드의 공간적 배향을 제어할 수 있게 한다. 본원에 기재된 바와 같이 유연성 링커에 의해 분리된 콘카타머성 알데하이드 태그들을 포함할 수 있는, 다수의 알데하이드 태그들을 함유하는 ADC는 예를 들어, 더 큰 약물 페이로드:항체 분자 비, 및 ADC가 존재하는 생리학적 환경에의 약물의 향상된 제시를 제공할 수 있다. 한 실시양태에서, ADC는 예를 들어, 항체 분자의 골격에의 옥심 또는 하이드라존 결합을 통해 항체 분자에 공유커플링된 항미생물 펩타이드로 "장식된" 변형된 항체 분자로서 기재될 수 있다.

예를 들어, 알데하이드 태그는 항체 쇄의 N-말단, 항체 쇄의 C-말단 및 항체 분자의 용매 접근 가능한 루프에서 ADC에 위치할 수 있다. 전술된 바와 같이, 알데하이드 태그는 임의적으로 링커, 예를 들어, 유연성 링커와 함께 제공될 수 있다. 다수의 알데하이드 태그들은 항체 분자 또는 항체 쇄의 특정 영역(들)에 위치할 수 있거나(예를 들어, 용매 접근 가능한 루프, N-말단 영역(N-말단을 포함함) 및 C-말단 영역(C-말단을 포함함) 중 하나 이상에서 제공될 수 있거나), 폴딩된 변형된 항체 분자의 용매 접근 가능한 표면적에 걸쳐 분포될 수 있다. 한 실시양태에서, 적어도 하나의 알데하이드 태그는 중쇄 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3 중 하나, 둘 또는 전부), 경쇄 불변 영역, 또는 이들 둘 다에 위치한다.

한 실시양태에서, 알데하이드 태그들은 최종 ADC가 공유커플링된 항미생물 펩타이드들 사이의 상호작용을 피하기에 충분한 거리를 두고 떨어져 있는 공유커플링된 항미생물 펩타이드들을 갖도록, 예를 들어, 상기 펩타이드들이 서로 접촉하지 않거나 그들 각각의 생물학적 활성을 다른 방식으로 방해하지 않도록 떨어져 있다.

ADC의 제조 방법

원하는 펩타이드 페이로드 대 항체 분자 비를 가진 ADC를 제공하기 위해 FGly 함유 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 반응성 파트너 함유 항미생물 펩타이드와 접합시키는 방법은 본 개시내용에 의해 제공된다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 알데하이드 태그부착된 항체 분자의 FGly(들)에 대한 알데하이드(들)와 펩타이드(들)의 반응성 파트너 사이의 반응을 촉진하기에 적합한 조건 하에서 반응 혼합물에서 FGly 함유 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 반응성 파트너 함유 항미생물 펩타이드(예를 들어, 아미노옥시 또는 하이드라자이드 함유 펩타이드)와 조합함으로써, 예를 들어, 옥심 결합, 하이드라자이드 결합, 또는 다른 알데하이드 특이적 화학반응, 예컨대, 환원성 아민화 또는 위티그(Wittig) 반응을 통해 항체 분자의 골격에 공유커플링된 펩타이드를 가진 반응 생성물인 ADC를 생성하는 단계를 포함한다.

알데하이드 태그부착된 항체 분자의 생성 후, 당분야에서 이용될 수 있는 다양한 기법들 중 임의의 기법(예를 들어, 크로마토그래피, 예를 들어, HPLC, FPLC, 또는 면역친화성 정제)을 이용하여 상기 항체 분자를 단리한다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 약물과 접합시키기 전에 단리 및 정제를 용이하게 하기 위해 전형적으로 N-말단 또는 C-말단에 위치한 면역태그(예를 들어, His 태그, FLAG 태그)를 함유한다. 항미생물 펩타이드와 접합시키는 반응에서 사용하기 위한 FGly 함유 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 변성된 형태로 제공될 수 있거나, 반응 혼합물에서 조합 전에 폴딩될 수 있다. 전형적으로, FGly 함유 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 접합 반응 혼합물에서 폴딩된 형태로 제공된다. 알데하이드 태그부착된 항체 분자 및 병용 가능한 FGE를 발현하는 세포로부터 수득되는 경우, FGly 함유 알데하이드 태그부착된 항체 분자는 세포로부터 또는, 분비되는 경우, 배양 상청액으로부터 폴딩된 형태로 단리될 수 있다. 필요한 경우, 단백질을 폴딩시키는 방법이 당분야에서 이용될 수 있고 본원에 기재된 방법에 용이하게 적용될 수 있다.

한 실시양태에서, FGly 잔기를 가진 알데하이드 태그부착된 단백질을 단리한다. 한 실시양태에서, FGly 잔기를 가진 알데하이드 태그부착된 단백질을 정제한다. 한 실시양태에서, 알데하이드 태그부착된 단백질을 반응 혼합물(예를 들어, 완충된 용액)에서 반응성 파트너 함유 항미생물 펩타이드와 조합한다. 완충된 용액은 생리학적 또는 거의 생리학적 pH, 예를 들어, 약 5 내지 7의 pH, 전형적으로 약 6.5의 pH를 가질 수 있다. 한 실시양태에서, 반응성 파트너 함유 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 반응의 완료를 유도하기 위해 FGly 함유 알데하이드 태그부착된 단백질의 알데하이드 모이어티보다 과량으로, 전형적으로 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배 이상의 과량으로 반응 혼합물에 제공된다. 반응성 파트너 함유 항미생물 펩타이드를 반응 혼합물에 첨가한 후, 혼합물을 적합한 시간 및 온도 조건 하에서(예를 들어, 약 2시간 동안 실온에서) 교반한다. 생성된 ADC를 반응 혼합물로부터 단리하고 표준 기법(예를 들어, 크로마토그래피, 예를 들어, HPLC 또는 FPLC)을 이용하여 더 정제할 수 있다.

대안적 ADC 라이게이션 방법

본원에 기재된 ADC는 다수의 상이한 방법들에 의해 생성될 수 있다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 (예를 들어, 표면 노출된 라이신을 항체 반응성 기로서 사용하는) 라이신 접합에 의해 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 항미생물 펩타이드의 활성화된 아미노산에 직접적으로 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자의 라이신은 티올 반응성 기로 전환되고, 티올 반응성 기를 가진 항체 분자는 티올을 가진 항미생물 펩타이드에 라이게이션된다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자의 라이신은 유리 티올로 전환되고, 유리 티올을 가진 항체 분자는 티올 반응성 항미생물 펩타이드에 라이게이션된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 (예를 들어, HC-HC 또는 HC-LC을 연결하는 디설파이드를 사용함으로써) 쇄간 디설파이드에 의해 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자의 쇄간 디설파이드는 환원되고, 환원된 쇄간 디설파이드를 가진 항체 분자는 티올 반응성 항미생물 펩타이드에 라이게이션된다.

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 비천연 아미노산(예를 들어, 알데하이드, 아자이드 또는 알킨으로 치환된 아미노산)을 사용함으로써 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항체 분자는 클릭 화학반응을 이용함으로써 항미생물 펩타이드에 라이게이션된다(Kolb et al. Angew Chem Int Ed Engl. 2001; 40(11):2004-2021; Evans Australian Journal of Chemistry. 2007; 60(6): 384-395).

한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 생분해성 중합체(예를 들어, 라이신 또는 티올)을 사용함으로써 항체 분자에 커플링된다. 한 실시양태에서, 항미생물 펩타이드는 생분해성 중합체에 라이게이션되고, 상기 중합체는 항체 분자에 라이게이션된다.

본원은 본원에 기재된 방법에 의해 제조된 ADC도 제공한다.

후보의 평가

본원에 기재된 ADC는 예를 들어, 1) 살균 활성, 2) 옵소닌식작용 활성 및 3) 막 파괴를 포함하는 다수의 시험관내 어세이들을 이용함으로써 평가될 수 있다.

이론에 의해 구속받고자 하는 것은 아니지만, 한 실시양태에서, 이중 작용 기작인 직접적인 사멸 및 옵소닌식작용 활성(OPA)은 본원에 기재된 ADC가 정상 또는 호중구감소증 환자에서 작용할 수 있게 한다고 생각된다. 옵소닌성 항체는 전형적으로 세균 표면에 결합하여, 보체 및 식세포(예를 들어, 호중구)를 동원함으로써 작용하고, 그 후 상기 식세포는 세균을 삼킨다. 면역손상된 환자는 가장 높은 감염 위험에 있고, 종종 매우 낮은 수준의 식세포를 가진다. 직접적인 살균 작용 기작을 제공하는 항균 접근법은 작용 기작으로서 옵소닌식작용 또는 보체 매개 사멸에 초점을 맞추는 항체 기반 요법의 한계점들 중 일부를 극복할 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 ADC는 직접적인 신속 작용 살균 기능을 포함함으로써 여러 내성 기작들을 극복할 수 있다고도 생각된다.

살균 어세이: 2개의 잘 기재된 슈도모나스 애루기노사 실험실 균주(PA14 및 PA01), 및 MDR 및 범-내성 균주를 포함하는 3개 이상의 슈도모나스 애루기노사 임상 균주에 대한 ADC의 직접적인 사멸 활성을 측정할 수 있다. 이 어세이는 보체 또는 이펙터 세포의 부재 하에 수행된다. 이 어세이에서의 활성은 ADC의 고유 사멸 활성에 대한 통찰을 제공할 수 있다.

옵소닌식작용 어세이: 살균 활성에 대해 사용된 균주와 동일한 슈도모나스 애루기노사 균주에 대한 ADC의 사멸 활성을 측정할 수 있되, 이번에는 보체 및 새로 정제된 다형핵 백혈구의 존재 하에 측정할 수 있다. 이 어세이에서의 활성은 호중구를 동원하고 옵소닌식작용을 통한 세균 사멸을 유도하는 ADC의 능력에 대한 정보를 제공할 수 있다.

막 파괴: 살균 및 옵소닌식작용 어세이에서 사용된 슈도모나스 애루기노사 균주와 동일한 균주에 대해 염료 방출/흡수 어세이를 수행할 수 있다. 세균 외막을 파괴하는 ADC의 능력을 측정한다. 이 어세이에서의 활성은 ADC의 분자 작용 기작에 대한 통찰을 제공할 수 있다.

후보의 평가: 옵소닌식작용 어세이(OPA)

본원에 기재된 항체 분자 및 항체 분자-약물 접합체(ADC)의 후보의 옵소닌식작용 활성을 옵소닌식작용 어세이로, 예를 들어, 시험관내에서 평가할 수 있다.

항체 매개 보체 의존적 옵소닌화에 대한 어세이는 예를 들어, 문헌(Hemachandra et al. Infect Immun. 2001; 69(4):2223-2229)에 기재되어 있다. 요약하건대, 인간 다형핵 백혈구(PMN)에 의한 흡수를 위해 세균을 옵소닌화하는 항체 분자 또는 ADC 후보의 능력을 유세포분석으로 측정할 수 있다. 세균을 생장시키고, 가열 사멸시키고, FITC 표지를 부착시킨다. 옵소닌화는 무감마글로불린혈증 환자로부터의 1% 인간 혈청을 보체 공급원으로서 사용하거나 사용하지 않으면서 표지부착된 세균을 항체 분자 또는 항체 분자-약물 접합체와 함께 인큐베이션함으로써 수행될 수 있다. 6% 덱스트란 및 0.2% 글루코스를 함유하는 PBS로 세균을 세척한 후, 0.1% 젤라틴을 가진 행크스 발란스드(Hanks balanced) 염 용액에 재현탁한다. 건강한 성인 지원자의 정맥천자를 통해 말초 인간 혈액으로부터 PMN을 단리할 수 있다. PMN을 재현탁하여 10⁷개 세포/㎖의 농도를 달성하고 세포 ㎖당 10 ㎕의 N-포르밀-Met-Leu-Phe(FMLP; Peninsula Laboratories, 캘리포니아주 산 칼로스 소재)의 10^-6 희석물로 30분 동안 활성화시킨다. PMN을 각각의 옵소닌화된 세균 옵소닌화된 세균 샘플에 첨가하고 37℃에서 인큐베이션하고 차등 원심분리로 유리 세균으로부터 분리하고 PBS에 재현탁한다. FACScan 및 CellQuest 소프트웨어(Becton Dickinson, 캘리포니아주 마운틴 뷰 소재)를 이용하여 PMN의 단색 유세포분석을 수행할 수 있고, 식작용을 각각의 샘플에 대해 10,000 PMN의 평균 형광의 상대적인 유닛으로 표현한다. 관찰된 옵소닌식작용이 세균 사멸과 관련되어 있음을 입증하기 위해, RPMI 배지(400 ㎖ 최종 부피)에서 25,000 CFU의 살아있는 세균을 무감마글로불린혈증 인간 혈청, 다양한 농도의 항체 분자 또는 항체 분자-약물 접합체 및 전술된 바와 같이 수득된 10⁶개의 새로운 인간 PMN과 혼합하는 대안적 어세이를 이용할 수 있다. 90분 37℃ 인큐베이션의 시작 및 종료 시 샘플을 수득한 후, 세균을 희석한 다음, 세균 수를 세기 위해 플레이팅한다.

한 실시양태에서, 살균 활성에 대해 사용된 균주와 동일한 슈도모나스 애루기노사 균주에 대한 ADC의 사멸 활성을 측정할 수 있되, 이번에는 보체 및 새로 정제된 다형핵 백혈구의 존재 하에 측정할 수 있다. 이 어세이에서의 활성은 호중구를 동원하고 옵소닌식작용을 통해 세균 사멸을 유도하는 ADC의 능력에 대한 정보를 제공할 수 있다.

예시적인 옵소닌식작용 어세이는 실시예 1에도 기재되어 있다.

후보의 평가: 최소 억제 농도 측정

최소 억제 농도(MIC)를 측정함으로써 본원에 기재된 항미생물 펩타이드 및 항체 분자-약물 접합체(ADC)의 후보의 미생물 억제 활성을 예를 들어, 시험관내에서 평가할 수 있다.

한 실시양태에서, MIC는 인간 혈청(예를 들어, 50% 인간 혈청)의 존재 하에 측정되고, 종종 본원에서 hsMIC로서 지칭된다. 한 실시양태에서, MIC는 포스페이트 완충 식염수(PBS)의 존재 하에 측정된다. 한 실시양태에서, MIC 또는 hsMIC는 ADC당 기준으로 측정된다. 한 실시양태에서, MIC 또는 hsMIC는 페이로드 또는 항미생물 펩타이드당 기준으로 측정된다. 한 실시양태에서, MIC에 대한 hsMIC의 비는 2 이하, 예를 들어, 1.5 또는 1 이하이다.

MIC를 측정하는 방법은 예를 들어, 문헌(Clinical and Laboratory Standards Institute. 2012. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard, 9th ed. M07-A8, vol 29, no. 2 Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, PA)에도 기재되어 있다. 예를 들어, 96웰 마이크로타이터 플레이트에서 2배 연속 화합물 희석물들을 사용하여 CLSI 지침에 따라 MIC를 측정할 수 있다. 요약하건대, 모 플레이트 전체에 걸쳐 화합물을 물로 희석한 후, 2 ㎕를 어세이 플레이트에 스탬핑하는데, 이때 시험될 각각의 균주에 대해 1개의 플레이트가 사용된다. 37℃의 한천 플레이트에서 세균 균주를 밤새 하위배양한다. 밤샘 플레이트를 사용하여 0.85% 식염수 중의 0.5 McFarland 배양물을 제조한다. 이 농축된 배양물을 생장 배지로 대략 5 x 10⁵개 세포/㎖까지 1:200 희석한다. 모든 어세이 플레이트들은 웰당 100 ㎕ 희석된 배양물을 제공받는다. 모든 플레이트들을 37℃에서 밤새 놓아둔다. 18시간 후, 유리 플레이트 판독기 및 반사된 백열 광을 이용하여 플레이트를 판독한다. 한 실시양태에서, MIC는 생장을 적어도 80%까지 억제하는 화합물의 최저 농도로서 정의될 수 있다. MIC 이상의 억제 농도를 가진 웰은 육안으로 판독할 때 생장이 없는 것처럼 보일 것이다.

예시적인 MIC 측정 방법은 실시예 2에도 기재되어 있다.

후보의 평가: 시험관내 사이토카인 방출 및 Fc 기능 연구

사이토카인 방출을 자극하는 ADC의 능력을 시험관내 가용성 사이토카인 방출 어세이에서 평가할 수 있다. 예를 들어, 건강한 지원자로부터의 인간 전혈을 3개 농도의 항체 분자 및 적절한 대조군과 함께 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션할 수 있다. 인큐베이션의 완료 시, 사이토카인 패널에 대해 샘플을 분석할 수 있다. 다른 시판되는 항체들에 비해 사이토카인 방출 프로파일에 영향을 미치지 않는다는 것이 이 연구를 위한 통과 기준으로서 이용될 수 있다.

결합하고 이펙터 기능, 예컨대, 항체 의존적 세포 세포독성 및 보체 의존적 세포독성을 매개하는 항체 분자의 특성을 특징규명하여, 후보 ADC가 Fcγ 수용체 및 C1q에 대한 그의 정규 이소타입 결합 특성을 근거로 예측된 Fc 이펙터 기능을 가진다는 것을 확인할 수 있다.

동물 모델

예를 들어, 다양한 동물 모델들을 사용하여 본원에 기재된 항체 분자, 항체 분자-약물 접합체(ADC) 및 항미생물 펩타이드를 생체내에서 평가할 수 있다. 예를 들어, 동물 모델을 사용하여, 세균 감염을 감소시키거나 억제하는 데 있어서 본원에 기재된 항체 분자, 항균 펩타이드 또는 항체 분자-약물 접합체의 효능을 시험할 수 있다. 또한, 동물 모델을 사용하여, 예를 들어, 부작용에 대해 조사할 수 있고, 제자리에서 항체 분자, 항균 펩타이드 또는 항체 분자-약물 접합체의 농도를 측정할 수 있고, 제어된 조건 하에서 세균 감염과 세균 사이의 상관관계를 입증할 수 있다.

본원에 기재된 항체 분자, 항균 펩타이드 또는 항체 분자-약물 접합체를 평가하는 데 사용될 수 있는 예시적인 동물 모델은 기본 항미생물 스크리닝 모델(예를 들어, 문헌(Zak and O'Reilly, Antimicrob. Agents Chemother. 1991; 35(8): 1527-1531)에 기재됨); 1차 설치류 감염 모델(예를 들어, 문헌(Marra and Girard Curr. Protoc. Pharmacol. 2006; Chapter 13: Unit13A.4)에 기재됨); 생체외 모델(예를 들어, 문헌(Zak and O'Reilly, Antimicrob. Agents Chemother. 1991; 35(8): 1527-1531)에 기재됨); 모노파라미터 또는 식별 모델(예를 들어, 문헌(Zak and O'Reilly, Antimicrob. Agents Chemother. 1991; 35(8): 1527-1531)에 기재됨); 상처 치유에 대한 마우스 모델(예를 들어, 문헌(Samy et al. Methods Mol. Biol. 2011; 716: 245-265)에 기재됨); 세균 이동 및 콜로니화의 평가를 위한 토끼 모델(예를 들어, 문헌(Allan et al. J. Biomed. Biotechnol. 2012; 2012: 921617)에 기재됨)을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 항미생물 약물의 약물동력학-약물역학 모델링은 예를 들어, 문헌(Nielsen and Friberg Pharmacol. Rev. 2013; 65(3):1053-1090)에 기재되어 있다.

본원에 기재된 항체 분자, 항균 펩타이드 또는 항체 분자-약물 접합체를 평가하는 데 사용될 수 있는 예시적인 유형의 동물은 마우스, 래트, 토끼, 기니 피그 및 원숭이를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 다양한 면역억제 방법들이 접종을 위한 세균의 병독성 향상을 위해 이용될 수 있다. 예를 들어, 이 방법들은 (예를 들어, 방사선조사에 의한) 골수의 표적화, (예를 들어, 세포증식억제제를 사용한) 호중구의 표적화, (예를 들어, 뮤신 또는 빵 효모를 사용한) 대식세포의 표적화, (예를 들어, 코브라 뱀독 인자를 사용한) 보체의 표적화, (예를 들어, 비장절제에 의한) 투프트신(tuftsin)의 표적화, (예를 들어, 항-Ig를 사용한) 면역글로불린의 표적화, (예를 들어, 흉선절제에 의한) T 림프구의 표적화, 또는 (예를 들어, 항체 또는 화학적 화합물을 사용한) 인터류킨의 표적화를 포함한다. 생체내 시험에서 항균 활성에 영향을 미칠 수 있는 다른 고려사항은 예를 들어, 접종물 크기, 병독성, 생체내에서의 생장 또는 생성 시간, 치료 시기, 투여 방법, 약물동력학/약물역학, 및 생체내에서의 내성의 발생을 포함한다.

약학 조성물 및 키트

일부 측면에서, 본 개시내용은 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화된, 본원에 기재된 항체 분자, 항체 분자-약물 접합체(ADC) 또는 항미생물 펩타이드를 포함하는 조성물, 예를 들어, 약학적으로 허용되는 조성물을 제공한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용되는 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 상기 담체는 (예를 들어, 주사 또는 주입에 의한) 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 직장, 척추, 경피 또는 표피 투여에 적합할 수 있다. 한 실시양태에서, 약학 조성물에서 약 5% 미만, 예를 들어, 약 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 응집체로서 존재한다. 다른 실시양태에서, 약학 조성물에서 적어도 약 95%, 예를 들어, 적어도 약 96%, 97%, 98%, 98.5%, 99%, 99.5%, 99.8% 이상의 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 단량체로서 존재한다. 한 실시양태에서, 응집체 또는 단량체의 수준은 크로마토그래피, 예를 들어, 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HP-SEC)에 의해 측정된다.

본원에 기재된 조성물은 다양한 형태들로 존재할 수 있다. 이들은 예를 들어, 액체 제형, 반고체 제형 및 고체 제형, 예컨대, 액체 용액(예를 들어, 주사 가능한 용액 및 주입 가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 리포좀 및 좌약을 포함한다. 적합한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 적용에 의존한다. 전형적인 적합한 조성물은 주사 가능하거나 주입 가능한 용액의 형태로 존재한다. 한 적합한 투여 방식은 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내)이다. 한 실시양태에서, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 한 실시양태에서, 항체, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다.

본원에서 사용된 어구 "비경구 투여" 및 "비경구적으로 투여된"은 통상적으로 주사에 의한, 장 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하고, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

치료 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건 하에서 멸균 상태이어야 하고 안정해야 한다. 상기 조성물은 용액, 마이크로에멀전, 분산액, 리포좀, 또는 높은 항체 농도에 적합한 다른 정돈된 구조물로서 제제화될 수 있다. 멸균 주사 가능한 용액은 요구된 양의 활성 화합물(즉, 항체 또는 항체 일부)을 상기 나열된 성분들 중 하나 또는 이들의 조합과 함께 적절한 용매 내에 혼입한 후, 요구될 때 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을, 기본 분산 매질 및 상기 나열된 성분들 중 요구된 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내에 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사 가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 활성 성분과 임의의 추가 요구된 성분을 가진 분말을 이의 미리 멸균 여과된 용액으로부터 생성하는 진공 건조 및 동결 건조이다. 용액의 적절한 유동성은 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅제의 사용, 분산액의 경우 요구된 입자 크기의 유지, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 물질, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 달성될 수 있다.

항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 다양한 방법들에 의해 투여될 수 있다. 여러 방법들이 당분야에서 공지되어 있고, 많은 치료, 예방 또는 진단 적용에 적절한 투여 경로/방식은 정맥내 주사 또는 주입이다. 예를 들어, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 약 1 내지 100 mg/m², 바람직하게는 약 5 내지 50 mg/m², 약 7 내지 25 mg/m², 보다 바람직하게는 약 10 mg/m²의 용량에 도달하기 위해 10 mg/분 미만, 바람직하게는 5 mg/분 이하의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 숙련된 당업자가 인식할 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 달라질 것이다. 한 실시양태에서, 활성 화합물은 신속한 방출로부터 상기 화합물을 보호할 담체를 사용함으로써, 예컨대, 임플란트, 경피 패치 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 비롯한 제어 방출 제제로 제조될 수 있다. 생분해성 및 생체적합성 중합체, 예컨대, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리젖산을 사용할 수 있다. 이러한 제제를 제조하는 많은 방법들은 특허를 받았거나 당분야에서 숙련된 자에게 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌(Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978)을 참조한다.

한 실시양태에서, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 예를 들어, 불활성 희석제 또는 동화 가능한 식용 담체와 함께 경구 투여될 수 있다. 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드(및 원하는 경우 다른 성분)는 경질 또는 연질 외피 젤라틴 캡슐 내에 봉입될 수도 있거나, 정제로 압축될 수도 있거나, 대상체의 음식물 내로 직접 혼입될 수도 있다. 경구 치료적 투여를 위해, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 부형제와 함께 혼입될 수 있고 삼킬 수 있는 정제, 협측 정제, 트로치, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 비경구 투여 이외의 투여로 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 투여하기 위해, 화합물의 불활성화를 방지하는 물질로 화합물을 코팅하거나 화합물을 이러한 물질과 함께 공-투여할 필요가 있을 수 있다. 치료, 예방 또는 진단 조성물은 의료 장치에 의해 투여될 수도 있고, 여러 장치들이 당분야에서 공지되어 있다.

용법은 원하는 반응(예를 들어, 치료, 예방 또는 진단 반응)을 제공하도록 조절된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 여러 나누어진 용량이 시간의 경과에 따라 투여될 수 있거나, 용량이 치료 상황의 긴급성에 의해 표시될 때 비례적으로 감소될 수 있거나 증가될 수 있다. 투여의 용이함 및 용량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 용량 유닛 형태로 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용된 용량 유닛 형태는 치료될 대상체를 위한 단위 용량으로서 맞추어진 물리적으로 분리된 유닛을 지칭하고; 각각의 유닛은 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정 양의 활성 화합물을 요구된 약학 담체와 함께 함유한다. 용량 유닛 형태에 대한 세부요건은 (a) 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 독특한 특성 및 달성될 특정 치료, 예방 또는 진단 효과, 및 (b) 개체에서 민감성의 치료를 위해 이러한 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 배합하는 분야에 내재하는 한계점에 의해 좌우되고 이들에 직접적으로 의존한다.

한 실시양태에서, ADC는 단일 용량으로서 대상체에게 투여된다. 본원에 기재된 예시적인 ADC의 시험관내 연구는 심지어 혈청 또는 이펙터 세포의 부재 하에 MDR 균주를 비롯한 슈도모나스 애루기노사에 대한 약 10 마이크로그램/㎖ 이하의 신속 살균 활성을 입증한다. 또한, 예시적인 ADC를 사용한 생체내 연구는 호중구감소증 슈도모나스 애루기노사 폐 감염 모델에서 세균 카운트의 상당한 감소를 입증한다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 본원에 기재된 ADC의 특이성 및 반감기(예를 들어, 대략 일수)는 항미생물 관리를 촉진하고 위 마이크로바이옴을 보존하고 내성 발생을 제한하면서, MDR/XDR 균주를 비롯한 슈도모나스 애루기노사에 대한, 예를 들어, 병원체 특이적 항균 작용제로서 ADC의 단일 용량 투여를 가능하게 할 수 있다고 생각된다.

항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 치료, 예방 또는 진단 유효량에 대한 예시적인 비제한적 범위는 0.1 내지 100 mg/kg, 예를 들어, 0.1 내지 50 mg/kg 또는 0.1 내지 20 mg/kg, 예를 들어, 약 1 내지 10 mg/kg, 1 내지 5 mg/kg, 5 내지 10 mg/kg, 또는 1 내지 3 mg/kg, 예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg/kg이다. 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 약 1 내지 100 mg/m², 예를 들어, 약 5 내지 50 mg/m², 약 7 내지 25 mg/m², 예를 들어, 약 10 mg/m²의 용량에 도달하기 위해 10 mg/분 미만, 예를 들어, 5 mg/분 이하의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 용량 값은 완화될 병태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있음을 인식해야 한다. 임의의 특정 대상체를 위한 구체적인 용법은 개체의 필요성 및 조성물을 투여하거나 조성물의 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간의 경과에 따라 조절되어야 하고, 본원에 기재된 용량 범위는 예시적인 것일 뿐이고 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하기 위한 것이 아니라는 것도 이해해야 한다.

본원의 약학 조성물은 "치료 유효량", "예방 유효량" 또는 "진단 유효량"의 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 포함할 수 있다.

"치료 유효량"은 필요한 시간 동안 필요한 용량에서 원하는 치료 결과를 달성하기에 효과적인 양을 지칭한다. 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 치료 유효량은 질환 상태, 개체의 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 항체 또는 항체 일부의 능력과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 치료 유효량은 치료적으로 유리한 효과가 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 임의의 독성 또는 유해한 효과를 능가하는 양이기도 하다. "치료 유효 용량"은 전형적으로 측정 가능한 파라미터를 치료받지 않은 대상체에 비해 적어도 약 20%, 예를 들어, 적어도 약 40%, 적어도 약 60% 또는 적어도 약 80%까지 억제한다. 측정 가능한 파라미터는 예를 들어, 세균 부하, 열, 두통, 근육 또는 관절 통증, 피부 발진, 출혈, 감소된 혈소판 수준 및 감소된 혈압일 수 있다. 세균 감염을 감소시키거나, 억제하거나 예방하는 데 있어서 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서 측정 가능한 파라미터를 억제하는 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 능력을 평가할 수 있다. 대안적으로, 예를 들어, 본원에 기재된 시험관내 어세이로 세균의 생존력을 억제하거나 감소시키는 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 능력을 조사함으로써 조성물의 이 특성을 평가할 수 있다.

"예방 유효량"은 필요한 시간 동안 필요한 용량에서 원하는 예방 결과를 달성하기에 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방 용량은 질환 전에 또는 질환의 초기 단계에서 대상체에 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 더 적을 것이다.

"진단 유효량"은 필요한 시간 동안 필요한 용량에서 원하는 진단 결과를 달성하기에 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로, 진단 유효량은 세균 감염 또는 관련 장애가 시험관내에서, 생체외에서 또는 생체내에서 진단될 수 있는 양이다.

본원에 기재된 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 포함하는 키트도 본 개시내용 내에 있다. 이 키트는 사용을 위한 지침서; 다른 시약, 예를 들어, 표지, 치료제, 또는 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 표지 또는 치료제에 킬레이팅하거나 다른 방식으로 커플링시키는 데 유용한 작용제, 또는 방사성보호 조성물; 투여를 위해 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 준비하기 위한 장치 또는 다른 물질; 약학적으로 허용되는 담체; 및 대상체에게 투여하기 위한 장치 또는 다른 물질을 포함하는 하나 이상의 다른 요소를 포함할 수 있다.

핵산

본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자(예를 들어, 항체 분자의 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 CDR), 항체 분자-약물 접합체(예를 들어, 항체 분자-약물 접합체의 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 CDR) 또는 항미생물 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산도 특징으로 한다.

예를 들어, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체 분자들 중 하나 이상의 항체 분자로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, 표 1 또는 3의 항체 분자, 또는 항체 분자의 일부의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역, 예를 들어, 표 1 또는 3의 가변 영역을 코딩하는 각각 제1 핵산 및 제2 핵산을 특징으로 한다. 상기 핵산은 본원의 표의 아미노산 서열들 중 어느 한 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일한 서열, 또는 본원의 표에 표시된 서열과 3개, 6개, 15개, 30개 또는 45개 이하의 뉴클레오타이드에 의해 상이한 서열)을 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 핵산은 본원의 표에 기재된 아미노산 서열을 가진 중쇄 가변 영역으로부터의 적어도 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 하나 이상의 치환, 예를 들어, 보존된 치환을 가진 서열)을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 핵산은 본원의 표에 기재된 아미노산 서열을 가진 경쇄 가변 영역으로부터의 적어도 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 하나 이상의 치환, 예를 들어, 보존된 치환을 가진 서열)을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 핵산은 본원의 표에 기재된 아미노산 서열을 가진 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역으로부터의 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 하나 이상의 치환, 예를 들어, 보존된 치환을 가진 서열)을 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 핵산은 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열을 가진 중쇄 가변 영역으로부터의 적어도 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 본원에 기재된 엄격도 조건 하에서 하이브리드화할 수 있는 서열)을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 핵산은 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열을 가진 경쇄 가변 영역으로부터의 적어도 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 본원에 기재된 엄격도 조건 하에서 하이브리드화할 수 있는 서열)을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 핵산은 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열을 가진 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역으로부터의 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 본원에 기재된 엄격도 조건 하에서 하이브리드화할 수 있는 서열)을 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 핵산은 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 본원에 기재된 엄격도 조건 하에서 하이브리드화할 수 있는 서열)을 포함한다. 한 실시양태에서, 핵산은 표 2에 기재된 뉴클레오타이드 서열의 일부 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 본원에 기재된 엄격도 조건 하에서 하이브리드화할 수 있는 서열)을 포함한다. 상기 일부는 예를 들어, 가변 영역(예를 들어, VH 또는 VL); 1개, 2개 또는 3개 이상의 CDR; 또는 1개, 2개, 3개 또는 4개 이상의 프레임워크 영역을 코딩할 수 있다.

한 실시양태에서, 핵산은 표 4에 기재된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95% 이상 동일하고/하거나, 본원에 기재된 엄격도 조건 하에서 하이브리드화할 수 있는 서열)을 포함한다. 한 실시양태에서, 핵산은 표 4에 기재된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열의 일부 또는 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95% 이상 동일하고/하거나, 본원에 기재된 엄격도 조건 하에서 하이브리드화할 수 있는 서열)을 포함한다.

본원에 개시된 핵산은 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드, 또는 이들의 유사체를 포함한다. 폴리뉴클레오타이드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, 단일 가닥인 경우 코딩 가닥 또는 비-코딩(안티센스) 가닥일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예컨대, 메틸화된 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체를 포함할 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열은 비-뉴클레오타이드 성분에 의해 불연속될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 중합 후, 예컨대, 표지부착 성분과의 접합에 의해 더 변형될 수 있다. 핵산은 재조합 폴리뉴클레오타이드일 수 있거나, 자연에서 발견되지 않거나 비천연 정렬로 또 다른 폴리뉴클레오타이드에 연결되어 있는, 게놈, cDNA, 반합성 또는 합성 유래의 폴리뉴클레오타이드일 수 있다.

일부 측면에서, 본원은 본원에 기재된 핵산을 함유하는 숙주 세포 및 벡터를 특징으로 한다. 상기 핵산은 이하에 더 상세히 기재된 바와 같이 동일한 숙주 세포 또는 별개의 숙주 세포에 존재하는 단일 벡터 또는 별개의 벡터에 존재할 수 있다.

벡터

본원은 본원에 기재된 항체 분자, 항체 분자-약물 접합체(ADC) 또는 항미생물 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터도 제공한다. 한 실시양태에서, 벡터는 본원에 기재된 항체 분자를 코딩하는 뉴클레오타이드를 포함한다. 한 실시양태에서, 벡터는 본원에 기재된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 벡터는 바이러스, 플라스미드, 코스미드, 람다 파지 또는 효모 인공 염색체(YAC)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

다수의 벡터 시스템들이 사용될 수 있다. 예를 들어, 한 클래스의 벡터들은 동물 바이러스, 예를 들어, 소 파필로마 바이러스, 폴리오마 바이러스, 아데노바이러스, 백시니아 바이러스, 바큘로바이러스, 레트로바이러스(라우스 육종 바이러스, MMTV 또는 MOMLV) 또는 SV40 바이러스로부터 유래한 DNA 요소를 사용한다. 또 다른 클래스의 벡터들은 RNA 바이러스, 예컨대, 셈리키 포레스트 바이러스, 이스턴 말 뇌염 바이러스 및 플라비바이러스로부터 유래한 RNA 요소를 사용한다.

추가로, 그 자신의 염색체 내에 안정하게 삽입된 DNA를 가진 세포는 형질감염된 숙주 세포의 선택을 가능하게 하는 하나 이상의 마커를 도입함으로써 선택될 수 있다. 상기 마커는 예를 들어, 영양요구성 숙주에 대한 프로토트로피(prototropy), 살생물제 내성(예를 들어, 항생제), 또는 중금속, 예컨대, 구리에 대한 내성 등을 제공할 수 있다. 선택 마커 유전자는 발현될 DNA 서열에 직접적으로 연결될 수 있거나, 공형질전환에 의해 동일한 세포 내로 도입될 수 있다. 추가 요소도 mRNA의 최적 합성을 위해 요구될 수 있다. 이 요소는 스플라이스 신호뿐만 아니라, 전사 프로모터, 인핸서 및 종결 신호도 포함할 수 있다.

일단 구축물을 함유하는 발현 벡터 또는 DNA 서열이 발현을 위해 준비되면, 발현 벡터를 적절한 숙주 세포 내로 형질감염시킬 수 있거나 도입할 수 있다. 다양한 기법들, 예를 들어, 원형질체 융합, 인산칼슘 침전, 전기천공, 레트로바이러스 형질도입, 바이러스 형질감염, 유전자 총, 지질 기반 형질감염 또는 다른 통상적인 기법을 이용하여 이를 달성할 수 있다. 원형질체 융합의 경우, 세포를 배지에서 생장시키고 적절한 활성에 대해 스크리닝한다.

수득된 형질감염된 세포를 배양하고 생성된 항체 분자, 항균 펩타이드 또는 항체 분자-약물 접합체를 회수하는 방법 및 조건은 당분야에서 숙련된 자에게 공지되어 있고, 본 설명을 기반으로 사용된 구체적인 발현 벡터 및 포유동물 숙주 세포에 따라 변경될 수 있거나 최적화될 수 있다.

세포

본 개시내용은 본원에 기재된 항체 분자, 항균 펩타이드 또는 항체 분자-약물 접합체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포도 제공한다. 예를 들어, 숙주 세포는 표 2의 핵산, 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/하거나, 본원에 기재된 엄격도 조건 하에서 하이브리드화할 수 있는 서열), 또는 상기 핵산들 중 한 핵산의 일부를 포함할 수 있다. 추가로, 숙주 세포는 표 1, 3 또는 8에 기재된 아미노산 서열, 이와 실질적으로 상동한 서열(예를 들어, 이와 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일한 서열), 또는 상기 서열들 중 한 서열의 일부를 코딩하는 핵산을 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 숙주 세포는 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 코딩하는 핵산을 포함하도록 유전적으로 조작된다.

한 실시양태에서, 숙주 세포는 발현 카세트를 사용함으로써 유전적으로 조작된다. 어구 "발현 카세트"는 이러한 서열과 병용될 수 있는 숙주에서 유전자의 발현에 영향을 미칠 수 있는 뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 이러한 카세트는 프로모터, 인트론을 갖거나 갖지 않은 오픈 리딩 프레임, 및 종결 신호를 포함할 수 있다. 발현에 영향을 미치는 데 필요하거나 도움을 주는 추가 인자, 예를 들어, 유도성 프로모터도 사용될 수 있다.

본 개시내용은 본원에 기재된 벡터를 포함하는 숙주 세포도 제공한다.

상기 세포는 진핵 세포, 세균 세포, 곤충 세포 또는 인간 세포일 수 있으나 이들로 제한되지 않는다. 적합한 진핵 세포는 Vero 세포, HeLa 세포, COS 세포, CHO 세포, HEK293 세포, BHK 세포 및 MDCKII 세포를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 적합한 곤충 세포는 Sf9 세포를 포함하나, 이것으로 제한되지 않는다.

항체 분자, 항체 분자-약물 접합체 및 항미생물 펩타이드의 용도

본원에 개시된 항체 분자, 항체 분자-약물 접합체(ADC) 또는 항미생물 펩타이드뿐만 아니라 본원에 개시된 약학 조성물도 시험관내, 생체외 및 생체내 치료, 예방 및/또는 진단 유용성을 가진다.

한 실시양태에서, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균의 생존력을 억제하거나 감소시킨다. 예를 들어, 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균의 생존력을 억제하거나 감소시키기 위해 이 분자를 배양물, 시험관내 또는 생체외의 세포에 투여할 수 있거나 대상체, 예를 들어, 인간 대상체, 예를 들어, 생체내에 투여할 수 있다. 따라서, 한 측면에서, 본 개시내용은 대상체에서 세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 세균 감염이 치료되거나 예방되도록 본원에 기재된 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 세균 감염을 치료하고/하거나, 예방하고/하거나 진단하거나, 세균 감염을 억제하거나 감소시키기 위해 이 항체 분자를 배양물, 예를 들어, 시험관내 또는 생체외의 세포에 투여할 수 있거나 대상체, 예를 들어, 생체내에 투여할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 인간 및 비인간 동물을 포함하기 위한 것이다. 한 실시양태에서, 대상체는 인간 대상체, 예를 들어, 세균, 예를 들어, 질환 야기 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균에 감염되었거나 세균, 예를 들어, 질환 야기 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균에 감염될 위험을 가진 인간 환자이다. 용어 "비인간 동물"은 포유동물 및 비포유동물, 예컨대, 비인간 영장류를 포함한다. 한 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 본원에 기재된 방법 및 조성물은 세균, 예를 들어, 질환 야기 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균에 감염된 인간 환자를 치료하기에 적합하다. 세균, 예를 들어, 질환 야기 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균에 감염된 환자는 세균에 노출되었으나 (적어도 일시적으로) 증상을 보이지 않는 환자, 세균 감염을 가진 환자, 또는 세균 감염과 관련된 장애를 가진 환자를 포함한다.

세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법

그람 음성 세균은 세균의 외막에서 지질다당류(LPS)를 표시한다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자, 항체 분자-약물 접합체(ADC) 또는 항미생물 펩타이드는 LPS에 결합함으로써 적어도 부분적으로 그람 음성 세균의 생존력을 억제할 수 있거나 감소시킬 수 있다.

본원에 기재된 항체 분자, ADC 및 항미생물 펩타이드는 세균 감염뿐만 아니라, 세균 감염과 관련된 장애, 병태 또는 증상도 치료하거나 예방하는 데 사용될 수 있다.

한 실시양태에서, 세균 감염은 하기 세균들 중 하나 이상의 세균에 의해 야기된다: 클렙시엘라 뉴모니아(예를 들어, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 오자나, 클렙시엘라 뉴모니아 아종 뉴모니아 또는 클렙시엘라 뉴모니아 아종 리노스클레로마티스), 엔테로박터 칸세로게노우스, 엔테로박터 클로아카, 엔테로박터 호르마케이, 엔테로박터 아스부리아, 시겔라 보이디이, 시겔라 디센테리아, 시겔라 플렉스네리, 시겔라 소네이, 에스케리키아 콜라이(예를 들어, 에스케리키아 콜라이 ATCC 11775, 에스케리키아 콜라이 ATCC 25922, 에스케리키아 콜라이 ATCC 35401, 또는 에스케리키아 콜라이 ATCC 43895), 에스케리키아 페르구소니이, 살모넬라 콜레라수이스, 살모넬라 콜레라수이스 아종 인디카, 살모넬라 엔테리티디스, 살모넬라 비르초우, 살모넬라 파라티피 B, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 파라티피 A, 살모넬라 티피, 살모넬라 콜레라수이스 아종 아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 디아리조나, 살모넬라 콜레라수이스 아종 하우테나, 살모넬라 본고리, 시트로박터 세들라키이, 시트로박터 브라아키이, 시트로박터 웨르크마니이, 시트로박터 프레운디이, 시트로박터 영가, 시트로박터 아말로나티쿠스, 예르시니아 엔테로콜리티카, 예르시니아 프레데릭세니이, 예르시니아 페스티스, 예르시니아 슈도튜버큘로시스, 또는 이들의 임의의 조합.

한 실시양태에서, 세균 감염은 하기 세균들 중 하나 이상의 세균에 의해 야기된다: 엔테로코커스 파시움(예를 들어, 반코마이신 내성(VRE) 엔테로코커스 파시움), 스타필로코커스 아우레우스(예를 들어, 메티실린 내성(MRSA) 스타필로코커스 아우레우스), 클로스트리듐 디피실, 악시네토박터 바우만니이(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 악시네토박터), 슈도모나스 애루기노사(예를 들어, 다중약물 내성(MDR) 슈도모나스 애루기노사, 예를 들어, 카르바페넴 내성 슈도모나스 애루기노사), 장내세균과(예를 들어, 이. 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아 또는 엔테로박터 종, 예를 들어, 카르바페넴 내성 장내세균과(CRE)), 네이세리아 고노로애아(예를 들어, 약물 내성 네이세리아 고노로애아), 살모넬라(예를 들어, 약물 내성 살모넬라), 시겔라(예를 들어, 약물 내성 시겔라), 확장된 스펙트럼 β-락타마제(ESBL)를 생성하는 세균, 또는 마이코박테리움 튜버큘로시스(예를 들어, 약물 내성 마이코박테리움 튜버큘로시스).

세균 감염과 관련될 수 있는 예시적인 장애 또는 병태는 폐렴(예를 들어, 지역사회 획득 폐렴 및 병원 획득 폐렴), 요로 감염(UTI), 패혈증, 수막염, 설사(예를 들어, 여행자의 설사), 연조직 감염, 피부 감염, 균혈증, 호흡기 감염(예를 들어, 하부 호흡관 감염), 심내막염, 복강내 감염, 패혈성 관절염, 골수염, CNS 감염, 안과 감염, 담낭염, 담관염, 수막염(예를 들어, 신생아 수막염), 장티푸스, 식중독, 위장염, 장열, 세균성이질, 혈류 감염, 복강내 패혈증, 뇌농양, 수막염, 패혈증(예를 들어, 신생아 패혈증), 관절 감염, 뼈 감염, 위장 감염 또는 상처 감염을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

본원에 기재된 일부 항체 분자, ADC 및 항미생물 펩타이드는 상이한 속, 종, 아종 및/또는 균주의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 50개, 100개, 200개 이상의 세균(예를 들어, 그람 음성 세균)을 치료할 수 있다. 따라서, 한 실시양태에서, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 세균의 속, 종, 아종 및/또는 균주를 확인하기 위한 시험이 수행되지 않았을 때, 예를 들어, 감염된 세균 또는 질환 야기 세균의 유형이 알려져 있지 않을 수 있을 때, 세균 감염에 의해 감염된 환자 또는 세균 감염에 의해 감염될 위험을 가진 환자에게 투여된다.

항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 전형적으로 환자가 회복될 때까지 환자의 시스템에서 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 치료 유효 수준을 유지하는 빈도로 투여된다. 예를 들어, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 적어도 약 1개, 2개, 5개, 10개, 20개, 30개 또는 40개의 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드가 각각의 세균에 결합하기에 충분한 혈청 농도를 달성하는 빈도로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일마다 투여된다.

다양한 항체 분자들, ADC들 또는 항미생물 펩타이드들을 투여하는 방법은 당분야에서 공지되어 있고 이하에 기재되어 있다. 사용된 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드의 적합한 용량은 대상체의 연령과 체중, 및 사용된 구체적인 약물에 의해 좌우될 것이다.

항체 분자 또는 항미생물 펩타이드는 그 자체로 사용될 수 있거나, 제2 작용제, 예를 들어, 항균 작용제, 독소 또는 단백질, 예를 들어, 제2 항균(예를 들어, 항-LPS) 항체 분자 또는 항미생물 펩타이드에 접합된 상태로 사용될 수 있다. 이 방법은 단독으로 또는 제2 작용제에 접합된 상태로 상기 항체 분자 또는 항미생물 펩타이드를, 이러한 치료를 요구하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 항체 분자는 다양한 치료제들, 예를 들어, 독소 또는 항바이러스 작용제, 또는 이들의 혼합물을 전달하는 데 사용될 수 있다.

조합 요법

항체 분자, 항체 분자-약물 접합체(ADC) 및 항미생물 펩타이드는 다른 요법과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 조합 요법은 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어, 항균 작용제(항생제 또는 다른 항균 항체를 포함함), 백신, 또는 면역 반응을 향상시키는 작용제와 함께 공-제제화되고/되거나 공-투여되는 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체 분자, 항균 펩타이드 또는 항체 분자-약물 접합체는 다른 치료적 치료법, 예컨대, 정맥내 수화, 해열제(예컨대, 아세트아미노펜) 또는 수혈과 함께 투여된다. 이러한 조합 요법은 유리하게는 보다 낮은 용량의 투여되는 치료제를 사용함으로써, 다양한 단일요법들과 관련된 가능한 독성 또는 합병증을 피할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "함께" 투여된다는 것은 대상체가 세균 감염 또는 질환을 앓기 전에 또는 앓는 과정 동안 2종(또는 더 많은 종류)의 상이한 치료를 대상체에게 전달한다는 것을 의미한다. 한 실시양태에서, 2종 이상의 치료는 예방을 위해, 예를 들어, 대상체가 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균에 감염되거나 이러한 세균을 갖는 것으로 진단받기 전에 전달된다. 또 다른 실시양태에서, 2종 이상의 치료는 대상체가 세균, 예를 들어, 그람 음성 세균에 감염되었거나 이러한 세균을 갖는 것으로 진단받은 후에 전달된다. 한 실시양태에서, 한 치료의 전달은 제2 치료의 전달이 시작될 때 여전히 일어나므로, 중첩이 있다. 이것은 종종 본원에서 "동시적인" 또는 "동시 전달"로서 지칭된다. 다른 실시양태에서, 한 치료의 전달은 다른 치료의 전달이 시작되기 전에 종료된다. 이들 중 어느 한 경우의 한 실시양태에서, 치료는 조합된 투여로 인해 더 효과적이다. 예를 들어, 제2 치료가 더 효과적이거나, 예를 들어, 더 적은 제2 치료의 사용 시 동등한 효과가 확인되거나, 제2 치료가 제1 치료의 부재 하에 제2 치료를 투여하였을 경우 확인된 정도보다 더 큰 정도로 증상을 감소시키거나, 제1 치료의 사용 시 유사한 상황이 확인된다. 한 실시양태에서, 전달은 증상, 또는 세균 감염 또는 장애와 관련된 다른 파라미터의 감소가 다른 치료의 부재 하에 전달된 한 치료의 사용 시 관찰된 감소보다 더 크게 하는 전달이다. 2종의 치료의 효과는 부분적으로 상가적일 수 있거나, 전체적으로 상가적일 수 있거나, 상가적 효과보다 더 클 수 있다. 전달은 전달된 제1 치료의 효과가 제2 치료를 전달할 때 여전히 검출될 수 있게 하는 전달일 수 있다.

일부 실시양태에서, 추가 항미생물 작용제는 항생제이다. 예를 들어, 항생제는 베타-락탐 항생제(예를 들어, 페니실린, 세팔로스포린, 모노박탐 또는 카르바페넴), 모노박탐, 카르바페넴, 마크롤라이드, 린코사마이드, 스트렙토그라민, 아미노글리코사이드, 퀴놀론, 설폰아미드, 테트라사이클린, 글리코펩타이드, 리포글리코펩타이드, 옥사졸리디논, 리파마이신, 폴리펩타이드 또는 투버악티노마이신일 수 있다. 예시적인 항생제는 아미카신, 아목시실린, 암피실린, 아지쓰로마이신, 아즈트레오남, 바캄피실린, 바시트라신, 발로플록사신, 베시플록사신, 카프레오마이신, 카르베니실린, 세파세트릴(세프아세트릴), 세파클로메진, 세파클로르, 세파드록스일(세파드록실), 세팔렉신(세프알렉신), 세팔로글리신(세프알로글리신), 세팔로늄(세프알로늄), 세팔로람, 세팔로리딘(세프알로라딘), 세팔로틴(세프알로틴), 세파만돌, 세파파롤, 세파피린(세프아피린), 세파트리진, 세파자플루르, 세파제돈, 세파졸린(세프아졸린), 세프카넬, 세프카펜, 세프클리딘, 세프달록심, 세프디니르, 세프디토렌, 세페드롤르, 세펨피돈, 세페핌, 세페타메트, 세페트리졸, 세피비트릴, 세픽심, 세플루프레남, 세프마틸렌, 세프메녹심, 세프메피듐, 세프메타졸, 세포디짐, 세포니시드, 세포페라존, 세포셀리스, 세포탁심, 세포테탄, 세포벡신, 세폭사졸, 세폭시틴, 세포조프란, 세프피미졸, 세프피롬, 세프포독심, 세프프로질(세프프록실), 세프퀴놈, 세프라딘(세프라딘), 세프로틸, 세프록사딘, 세프수마이드, 세프타롤린, 세프타롤린(테플라로), 세프타지딤, 세프테람, 세프테졸, 세프티부텐, 세프티오푸르, 세프티올렌, 세프티옥사이드, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸라세팀, 세푸록심, 세푸조남, 클로람페니콜, 시프로플록사신, 클라리쓰로마이신, 클리나플록사신, 클린다마이신, 클록사실린, 사이클로세린, 댑토마이신(쿠비신), 데메클로사이클린, 디클록사실린, 디리쓰로마이신, 도리페넴, 독시사이클린, 에녹사신, 에르타페넴, 에리쓰로마이신, 플루클록사실린, 플루메퀸, 가티플록사신, 제미플록사신, 제미플록사신(팍티브), 젠타마이신, 그레파플록사신, 이미페넴, 이미페넴/실라스타틴, 카나마이신, 레보플록사신, 린코마이신, 리네졸리드, 로메플록사신, 마크로사이클릭스, 메로페넴, 메트로니다졸, 메즐로실린, 미노사이클린, 목시플록사신, 나디플록사신, 나프실린, 날리딕스산, 네오마이신, 네틸마이신, 니트로푸란토인, 노르플록사신, 오플록사신, 옥사실린, 옥솔린산, 옥시테트라사이클린, 파로모마이신, 파주플록사신, 페플록사신, 페니실린 g, 페니실린 v, 피페미드산, 피페라실린, 피로미드산, 피밤피실린, 피브메실리남, 폴리믹신 b, 프리스티나마이신, 프룰리플록사신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리파부틴, 리팜핀, 리파펜틴, 로속사신, 록시쓰로마이신, 루플록사신, 시타플록사신, 스파르플록사신, 스트렙토마이신, 설파메티졸, 설파메톡사졸, 설피속사졸, 테이코플라닌, 텔라반신, 텔라반신(비바티브), 텔리쓰로마이신, 테마플록사신, 테트라사이클린, 티카르실린, 티게사이클린, 티니다졸, 토브라마이신, 토수플록사신, 트리메토프림-설파메톡사졸, 트로바플록사신, 반코마이신, 비오마이신 또는 제오신을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

한 실시양태에서, 추가 항균 작용제는 백신이다. 백신은 예를 들어, 살아있는 세균, 약독화된 세균 또는 불활성화된 세균, 예를 들어, 탄저병 백신(예를 들어, BIOTHRAX^®), DTaP 백신(예를 들어, DAPTACEL^® 또는 INFANRIX^®), DT 백신, 해모필루스 인플루엔자 b형(Hib) 백신(예를 들어, ACTHIB^®, HIBERIX^® 또는 PEDVAXHIB^®), 수막구균 백신(예를 들어, MENOMUNE^®, MENACTRA^®, MENVEO^®, TRUMENBA^® 또는 BEXSERO^®), 폐렴구균 백신(예를 들어, PNEUMOVAX^® 23 또는 PREVNAR^® 13), 파상풍/디프테리아 백신(예를 들어, DECAVAC^® 또는 TENIVAC^®), 파상풍/디프테리아/백일해 백신(예를 들어, BOOSTRIX^® 또는 ADACEL^®), 장티푸스 백신(예를 들어, TYPHIM VI^® 또는 VIVOTIF^®), DTaP/소아마비 백신(예를 들어, KINRIX^®), DTaP/B형 간염/소아마비 백신(예를 들어, PEDIARIX^®), DTaP/소아마비/해모필루스 인플루엔자 b형 백신(예를 들어, PENTACEL^®), 해모필루스 인플루엔자 b형/B형 간염 백신(예를 들어, COMVAX^®), 및 해모필루스 인플루엔자 b형/수막구균 백신(예를 들어, MENHIBRIX^®)일 수 있다.

한 실시양태에서, 추가 항바이러스 작용제는 제2 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드, 예를 들어, 제1 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드와 상이한 항체 분자, ADC 또는 항미생물 펩타이드이다. 함께 사용될 수 있는 예시적인 항체 분자는 표 1 또는 3에 나열된 항체 분자들의 임의의 조합을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

한 실시양태에서, 추가 항균 작용제는 항미생물(예를 들어, 항균) 펩타이드이다. 예시적인 항미생물 펩타이드는 펙시가난(pexiganan) 아세테이트(MSI 78), 오미가난(omiganan)(MX-226/MBI-226 또는 CLS001), 이세가난(iseganan)(IB-367), hLF1-11, XOMA 629, PAC-113, CZEN-002, IMX942, OP-145, 그렐린(Ghrelin), PMX-30063, 델미타이드(delmitide)(RDP58), 플렉타신(plectasin) 및 HB1345를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

한 실시양태에서, 추가 항균 작용제는 내성 변형제이다. 예시적인 내성 변형제는 유출 억제제(예를 들어, Phe-Arg-β-나프틸아미드) 및 베타-락타마제 억제제(예를 들어, 클라불란산 또는 설박탐)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

진단 방법

일부 측면에서, 본 개시내용은 시험관내(예를 들어, 생물학적 샘플, 예컨대, 혈액 샘플) 또는 생체내(예를 들어, 대상체에서의 생체내 영상화)에서 세균의 존재를 검출하는 진단 방법을 제공한다. 상기 방법은 (i) 샘플을 본원에 기재된 항체 분자 또는 항체 분자-약물 접합체(ADC)와 접촉시키거나, 상기 항체 분자 또는 ADC를 대상체에게 투여하는 단계; (임의적으로) (ii) 기준 샘플, 예를 들어, 대조군 샘플(예를 들어, 대조군 생물학적 샘플, 예컨대, 혈장 또는 혈액) 또는 대조군 대상체를 본원에 기재된 항체 분자 또는 ADC와 접촉시키는 단계; 및 (iii) 상기 항체 분자 또는 ADC와 상기 샘플 또는 대상체, 또는 상기 대조군 샘플 또는 대상체 사이의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하고, 이때 상기 대조군 샘플 또는 대상체에 비해 상기 샘플 또는 대상체에서의 상기 복합체 형성의 변화, 예를 들어, 통계학적으로 유의미한 변화는 세균이 상기 샘플에 존재함을 표시한다. 결합된 항체 또는 결합되지 않은 항체의 검출을 용이하게 하기 위해 상기 항체 분자 또는 ADC를 검출 가능한 물질로 직접적으로 또는 간접적으로 표지부착할 수 있다. 적합한 검출 가능한 물질은 앞서 기재되어 있고 아래에 더 상세히 기재되어 있는 바와 같이 다양한 효소들, 보결분자단들, 형광 물질들, 발광 물질들 및 방사성 물질들을 포함한다.

세균을 검출하는 데 사용된 샘플을 지칭할 때, 용어 "샘플"은 세포, 세포 용해물, 세포의 단백질 또는 막 추출물, 체액, 예컨대, 혈액 또는 조직 샘플을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

항체 분자 또는 ADC와 세균 또는 지질다당류 사이의 복합체 형성은 세균 또는 지질다당류에 결합된 항체 분자 또는 항체 분자-약물 접합체, 또는 결합되지 않은 항체 분자 또는 ADC를 측정하거나 시각화함으로써 검출될 수 있다. 임의의 적합한 검출 어세이가 이용될 수 있고, 통상적인 검출 어세이는 효소-연결된 면역흡착 어세이(ELISA), 형광-활성화된 세포 분류(FACS) 어세이, 방사면역어세이(RIA) 또는 조직 면역조직화학을 포함한다. 항체 분자 또는 ADC의 표지부착에 대한 대안으로서, 검출 가능한 물질로 표지부착된 표준물 및 표지부착되지 않은 항체 분자 또는 ADC를 사용하는 경쟁 면역어세이로 샘플에서 세균 또는 지질다당류의 존재를 어세이할 수 있다. 이 어세이에서, 생물학적 샘플, 표지부착된 표준물 및 항체 분자 또는 ADC를 조합하고 표지부착되지 않은 결합 분자에 결합된 표지부착된 표준물의 양을 측정한다. 샘플 중의 세균 또는 지질다당류의 양은 항체 분자 또는 ADC에 결합된 표지부착된 표준물의 양에 반비례한다.

추가 측면 및 실시양태는 하기 넘버링된 단락들에서 제공된다.

1. 항체 분자 및 공유커플링된 펩타이드를 포함하는 항체 분자-약물 접합체(ADC)로서, 상기 항체 분자가 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 VH가 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, VH가

(a) 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 또는

을 포함하고;

(a) 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3, 또는

을 포함하고;

2. 단락 1에 있어서, VH가 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 ADC.

3. 단락 1에 있어서, VH가 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 ADC.

4. 단락 1 내지 3 중 임의의 단락에 있어서, VH가 서열번호 117의 아미노산 서열, 또는 서열번호 117의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

5. 단락 1 내지 4 중 임의의 단락에 있어서, VH가 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

6. 단락 1 내지 5 중 임의의 단락에 있어서, VL이 서열번호 135의 아미노산 서열, 또는 서열번호 135의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

7. 단락 1 내지 6 중 임의의 단락에 있어서, VL이 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

8. 단락 1 내지 7 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스에 결합할 수 있는 것인 ADC.

9. 단락 1 내지 8 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스 애루기노사에 결합할 수 있는 것인 ADC.

10. 단락 1 내지 9 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스의 지질다당류(LPS)에 결합할 수 있는 것인 ADC.

11. 단락 1 내지 10 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스의 LPS의 내부 코어 글리칸 모이어티에 결합할 수 있는 것인 ADC.

12. 단락 1 내지 11 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 웨스턴 블롯에 의해 확인될 때, 이. 콜라이 LPS에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는 것인 ADC.

13. 단락 1 내지 12 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 헵토스 또는 일인산화된 헵토스 유사체(예를 들어, 2-P-Hep 또는 4-P-Hep)에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는 것인 ADC.

14. 단락 1 내지 13 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 결합하는 것인 ADC.

15. 단락 1 내지 14 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 예를 들어, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 비해 감소된 결합으로 이인산화된 만노스(2,4-P-Man)에 결합하는 것인 ADC.

16. 단락 1 내지 15 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 예를 들어, 약 20 내지 약 150 pM(예를 들어, 약 50 내지 약 120 pM)의 겉보기 결합력으로 본원에 기재된 하나 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주, 예를 들어, 카르바페넴, 항-슈도모나스 3세대 세팔로스포린 또는 플루오로퀴놀론에 대한 내성을 가진 하나 이상의 균주에 결합하는 것인 ADC.

17. 단락 1 내지 16 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 전체 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 에스케리키아 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아, 살모넬라 티피뮤리움, 그람 양성 유기체 또는 포유동물 세포 중 하나 이상에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는 것인 ADC.

18. 단락 1 내지 17 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 슈도모나스 애루기노사 이외의 슈도모나스 종, 예를 들어, 슈도모나스 플루오레센스, 슈도모나스 푸티다 또는 슈도모나스 스투트제리 중 하나 이상에 결합하는 것인 ADC.

19. 단락 1 내지 18 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 단일클론 항체 분자, 인간화된 항체 분자, 단리된 항체 분자 또는 합성 항체 분자인 ADC.

20. 단락 1 내지 19 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 2개의 VH 및 2개의 VL을 포함하는 것인 ADC.

21. 단락 1 내지 20 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 ADC.

22. 단락 1 내지 21 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 카파 또는 람다 쇄의 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 ADC.

23. 단락 1 내지 22 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단일 쇄 Fv 단편(scFv)을 포함하는 것인 ADC.

24. 단락 1 내지 23 중 임의의 단락에 있어서, 펩타이드가 서열번호 257의 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

25. 단락 1 내지 24 중 임의의 단락에 있어서, 펩타이드가 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개 또는 33개의 D-아미노산을 포함하거나, 펩타이드 내의 아미노산 잔기의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100%가 D-아미노산인 ADC.

26. 단락 1 내지 25 중 임의의 단락에 있어서, 펩타이드 내의 모든 아미노산 잔기가 D-아미노산인 ADC.

27. 단락 1 내지 26 중 임의의 단락에 있어서, 펩타이드가 예를 들어, 간접적으로(예를 들어, 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해) VH, 예를 들어, VH의 C-말단에 커플링된 것인 ADC.

28. 단락 1 내지 27 중 임의의 단락에 있어서, 펩타이드가 예를 들어, 소르타제 인식 서열(예를 들어, LPETGGG(서열번호 244))을 통해, 예를 들어, 소르타제 A(SrtA)를 사용하는 효소 라이게이션에 의해 항체 분자에 커플링된 것인 ADC.

29. 단락 1 내지 28 중 임의의 단락에 있어서, 펩타이드가 소르타제 공여체 서열, 예컨대, N-말단 GGG를 포함하는 것인 ADC.

30. 단락 1 내지 29 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자와 펩타이드 사이에 링커, 예를 들어, n이 2 내지 20인 (Gly-Ser)n 링커 서열(서열번호 262)을 포함하는 ADC.

31. 단락 1 내지 30 중 임의의 단락에 있어서, 예를 들어, 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 약 2 내지 약 8, 예를 들어, 약 2 내지 약 4의 펩타이드-대-항체 분자 비를 가진 ADC.

32. 단락 1 내지 31 중 임의의 단락에 있어서, 예를 들어, 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 약 2의 펩타이드-대-항체 분자 비를 가진 ADC.

33. 단락 1 내지 32 중 임의의 단락에 있어서, 약 2 ㎍/㎖ 내지 약 50 ㎍/㎖, 예를 들어, 약 3.1 ㎍/㎖ 내지 약 25 ㎍/㎖의 농도에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진 ADC.

34. 단락 1 내지 33 중 임의의 단락에 있어서, 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 50% 이하, 예를 들어, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 이하만큼 상이한 농도에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진 ADC.

35. 단락 1 내지 34 중 임의의 단락에 있어서, 슈도모나스 애루기노사에 대해 약 500 ㎍/㎖ 이상, 예를 들어, 800 ㎍/㎖ 이상의 평균 용해 농도(MLC)를 가진 ADC.

36. 단락 1 내지 35 중 임의의 단락에 있어서, 슈도모나스 애루기노사에 대해 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 50% 이하, 예를 들어, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 이하만큼 상이한 MLC를 가진 ADC.

37. 단락 1 내지 36 중 임의의 단락에 있어서, 슈도모나스 애루기노사에 대해 약 500 ㎍/㎖ 이상, 예를 들어, 800 ㎍/㎖ 이상의 CC50(포유동물 세포의 50% 세포독성이 관찰되는 농도)을 가진 ADC.

38. 단락 1 내지 37 중 임의의 단락에 있어서, 슈도모나스 애루기노사에 대해 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1보다 더 높은, 예를 들어, 적어도 0.5배, 1배, 2배, 3배, 4배 또는 5배 더 높은 CC50을 가진 ADC.

39. 단락 1 내지 38 중 임의의 단락에 있어서, 예를 들어, 혈액 샘플의 약물동력학 측정, 전신 영상화, 생체내 영상화, ELISA 및/또는 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 개선된 생체분포를 가진 ADC.

42. 단락 40 또는 41에 있어서, VH가 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.

43. 단락 40 내지 42 중 임의의 단락에 있어서, 펩타이드가 (Gly-Ser)n 링커를 통해 VH의 C-말단에 커플링된 것인 ADC.

44. 단락 1 내지 43 중 임의의 단락에 있어서, 항체 분자가 변형된 설파타제 모티프를 포함하는 것인 ADC.

45. 단락 44에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 하기 식을 가진 것인 ADC:

X₁(FGly')X₂Z₂X₃Z₃

상기 식에서, FGly'는 하기 화학식을 갖고:

상기 화학식에서, J₁은 공유커플링된 항미생물 펩타이드이고;

n은 0 내지 40으로부터 선택된 수이고;

Z₂는 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;

X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;

Z₃은 염기성 아미노산이다.

46. 단락 44 또는 45에 있어서, 항체 분자가 폴딩된 상태로 존재할 때 공유커플링된 항미생물 펩타이드를 용매 접근 가능한 표면 위에 제시하는 것인 ADC.

47. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 이종 변형된 설파타제 모티프인 ADC.

48. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 12개 이하(예를 들어, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하 또는 6개 이하)의 아미노산 잔기를 포함하거나 이러한 아미노산 잔기로 구성된 것인 ADC.

49. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 항체 분자 쇄의 N-말단, 항체 분자 쇄의 C-말단, 또는 항체 분자의 용매 접근 가능한 루프에서 ADC에 위치하는 것인 ADC.

50. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 항체 분자의 중쇄(또는 이의 단편)에 위치하는 것인 ADC.

51. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 중쇄의 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3), 예를 들어, 중쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단)에 위치하는 것인 ADC.

52. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 항체 분자의 경쇄(또는 이의 단편)에 위치하는 것인 ADC.

53. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 경쇄의 불변 영역, 예를 들어, 경쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단)에 위치하는 것인 ADC.

54. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 복수의 변형된 설파타제 모티프, 예를 들어, 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 변형된 설파타제 모티프를 포함하는 ADC.

55. 단락 54에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 항체 분자의 중쇄(또는 이의 단편), 경쇄(또는 이의 단편), 또는 이들 둘 다에 위치하는 것인 ADC.

56. 단락 54 또는 55에 있어서, 변형된 설파타제 모티프가 중쇄의 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3 중 하나 이상), 경쇄의 불변 영역, 또는 이들 둘 다에 위치하는 것인 ADC.

57. 단락 54 내지 56 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프를 각각 포함하는 2개 이상의 중쇄를 포함하는 ADC.

58. 단락 54 내지 57 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프를 각각 포함하는 2개 이상의 경쇄를 포함하는 ADC.

59. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, Z₃이 아르기닌(R)인 ADC.

60. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 존재할 때 X₁, X₂ 및 X₃이 각각 독립적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성 비하전 아미노산인 ADC.

61. 상기 단락들 중 임의의 단락에 있어서, 존재할 때 X₁이 L, M, V, S 또는 T인 ADC. 한 실시양태에서, X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 또는 C이다.

62. 단락 1 내지 58 중 임의의 단락의 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.

63. 단락 1 내지 62 중 임의의 단락에 있어서, 대상체에서 슈도모나스와 관련된 세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한 ADC 또는 약학 조성물.

64. 단락 63에 있어서, 세균 감염이 슈도모나스 애루기노사와 관련된 것인 ADC 또는 약학 조성물.

65. 단락 63 또는 64에 있어서, ADC가 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

66. 단락 63 내지 65 중 임의의 단락에 있어서, ADC가 정맥내로, 피하로 또는 비강내로 또는 흡입에 의해 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

67. 단락 63 내지 66 중 임의의 단락에 있어서, ADC가 세균 감염과 관련된 증상의 발병 전 또는 후에 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

68. 단락 63 내지 67 중 임의의 단락에 있어서, 대상체가 폐렴, 요로 감염(UTI), 패혈증, 수막염, 설사, 연조직 감염, 피부 감염, 균혈증, 호흡기 감염, 심내막염, 복강내 감염, 패혈성 관절염, 골수염, CNS 감염, 안과 감염, 담낭염, 담관염, 수막염, 장티푸스, 식중독, 위장염, 장열, 세균성이질, 혈류 감염, 복강내 패혈증, 뇌농양, 수막염, 패혈증, 관절 감염, 뼈 감염, 위장 감염 또는 상처 감염 중 하나 이상을 가진 것인 ADC 또는 약학 조성물.

69. 단락 63 내지 68 중 임의의 단락에 있어서, 세균 감염이 병원내 감염 또는 병원 획득 감염인 ADC 또는 약학 조성물.

70. 단락 63 내지 69 중 임의의 단락에 있어서, 대상체가 인간 또는 동물인 ADC 또는 약학 조성물.

71. 단락 63 내지 70 중 임의의 단락에 있어서, 대상체가 면역손상된 환자 또는 건강 전문가인 ADC 또는 약학 조성물.

72. 단락 63 내지 71 중 임의의 단락에 있어서, 대상체가 HIV 감염 또는 AIDS, 암, 고형 장기 이식, 줄기 세포 이식, 겸상 세포 질환 또는 무비증, 선천성 면역 결핍, 만성 염증성 병태, 인공 와우, 영양실조 또는 뇌척수액 누출을 갖거나 가질 위험이 있는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

73. 단락 63 내지 72 중 임의의 단락에 있어서, 대상체가 18세 이하, 15세 이하, 12세 이하, 9세 이하 또는 6세 이하이거나, 적어도 60세, 적어도 65세, 적어도 70세, 적어도 75세 또는 적어도 80세인 ADC 또는 약학 조성물.

74. 단락 63 내지 73 중 임의의 단락에 있어서, 방법이 제2 항미생물 작용제 또는 요법을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

75. 단락 74에 있어서, 제2 항미생물 작용제 또는 요법이 항생제 또는 파지 요법을 포함하는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

76. 단락 75에 있어서, 항생제가 폴리믹신(예를 들어, 콜리스틴) 또는 β-락탐(예를 들어, 카르바페넴, 예를 들어, 메로페넴)인 ADC 또는 약학 조성물.

77. 단락 76에 있어서, 항생제가 아미노글리코사이드, 안사마이신, 카르바세펨, 카르바페넴, 세팔로스포린, 글리코펩타이드, 린코사마이드, 리포펩타이드, 마크롤라이드, 모노박탐, 니트로푸란, 옥사졸리디논, 페니실린, 페니실린 조합, 폴리펩타이드, 퀴놀론 또는 플루오로퀴놀론, 설폰아미드, 테트라사이클린, 또는 약물로부터 선택된 것인 ADC 또는 약학 조성물.

78. 단락 76 또는 77에 있어서, 항생제가 아미카신, 젠타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 토브라마이신, 파로모마이신, 스트렙토마이신, 스펙티노마이신, 겔다나마이신, 허비마이신, 또는 리팍시민, 로라카르베프, 에르타페넴, 도리페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, 세파드록실, 세파졸린, 세팔로틴, 세팔로씬, 세팔렉신, 세파클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, 세페핌, 세프타롤린 포사밀, 세프토비프롤, 테이코플라닌, 반코마이신, 텔라반신, 달바반신, 오리타반신, 클린다마이신, 린코마이신, 댑토마이신, 아지쓰로마이신, 클라리쓰로마이신, 디리쓰로마이신, 에리쓰로마이신, 록시쓰로마이신, 트롤레안도마이신, 텔리쓰로마이신, 스피라마이신, 아즈트레오남, 푸라졸리돈, 니트로푸란토인, 리네졸리드, 포시졸리드, 라데졸리드, 토레졸리드, 아목시실린, 암피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린 g, 페니실린 v, 피페라실린, 페니실린 g, 테모실린, 티카르실린, 아목시실린/클라불라네이트, 암피실린/설박탐, 피페라실린/타조박탐, 티카르실린/클라불라네이트, 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 b, 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 목시플록사신, 날리딕스산, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 스파르플록사신, 테마플록사신, 마페나이드, 설파세타마이드, 설파디아진, 은 설파디아진, 설파디메톡신, 설파메티졸, 설파메톡사졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸), 설폰아미도크리소이딘, 데메클로사이클린, 독시사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 테트라사이클린, 클로파지민, 댑손, 카프레오마이신, 사이클로세린, 에탐부톨, 에티온아미드, 이소니아지드, 피라진아미드, 리팜핀, 리파부틴, 리파펜틴, 스트렙토마이신, 아르스페나민, 클로람페니콜, 포스포마이신, 푸시딘산, 메트로니다졸, 무피로신, 플라텐시마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 티암페니콜, 티게사이클린, 티니다졸 또는 트리메토프림으로부터 선택된 것인 ADC 또는 약학 조성물.

79. 단락 76 내지 78 중 임의의 단락에 있어서, 항생제가 레보플록사신, 시프로플록사신, 젠타마이신, 세프트리악손, 오플록사신, 아미카신, 토브라마이신, 아즈트레오남, 또는 이미페넴/실라스타틴으로부터 선택된 것인 ADC 또는 약학 조성물.

80. 단락 74 내지 79 중 임의의 단락에 있어서, 제2 항미생물 작용제 또는 요법이 ADC의 투여 전에, ADC의 투여와 동시에, 또는 ADC의 투여 후에 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.

81. 세균 감염을 억제하거나 감소시키는 방법으로서, 세균 감염을 억제하거나 감소시키기에 효과적인 양으로 단락 1 내지 61 중 임의의 단락의 ADC 또는 단락 62의 약학 조성물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.

82. 단락 81에 있어서, ADC 또는 약학 조성물을 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 세포와 접촉시키는 것인 방법.

83. 단락 1 내지 61 중 임의의 단락의 ADC 또는 단락 62의 약학 조성물; 및 이 ADC 또는 약학 조성물의 사용을 위한 지침서를 포함하는 키트.

84. 단락 1 내지 61 중 임의의 단락의 ADC 또는 단락 62의 약학 조성물을 포함하는 용기.

85. (a) 단락 1 내지 61 중 임의의 단락의 ADC의 항체 분자의 VH, VL 또는 이들 둘 다;

(b) 단락 1 내지 61 중 임의의 단락의 ADC의 항미생물 펩타이드;

(c) (a) 및 (b) 둘 다; 또는

(d) 단락 1 내지 61 중 임의의 단락의 ADC

를 코딩하는 핵산 분자.

86. 단락 85의 핵산 분자를 포함하는 벡터.

87. 단락 64의 핵산 분자 또는 단락 86의 벡터를 포함하는 세포.

88. ADC를 제조하는 방법으로서, ADC의 생성을 허용하는 조건 하에서 단락 66의 세포를 배양함으로써 ADC를 생성하는 단계를 포함하는 방법.

89. ADC를 제조하는 방법으로서, LPS에 결합하는 항체 분자를, 소르타제 매개 반응이 일어나게 하는 조건 하에서 소르타제의 존재 하에 항미생물 펩타이드 및 임의적으로 소르타제 공여체 서열을 포함하는 펩타이드와 접촉시킴으로써 ADC를 생성하는 단계를 포함하는 방법.

90. 단락 89에 있어서, 항체 분자가 소르타제 인식 서열, 링커 서열 또는 이들 둘 다를 포함하는 소르타제 수용체 서열을 포함하는 것인 방법.

91. 세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 세균 감염을 치료하거나 예방하기에 효과적인 양으로 단락 1 내지 61 중 임의의 단락의 ADC 또는 단락 62의 약학 조성물을, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.

92. 세균 감염을 치료하거나 예방하기 위한 의약의 제조에 있어서 단락 1 내지 61 중 임의의 단락의 ADC의 용도.

93. 하기 식의 아미노산 서열을 가진 설파타제 모티프를 포함하는 알데하이드 태그부착된 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자):

X₁Z₁X₂Z₂X₃Z₃

상기 식에서,

Z₁은 시스테인, 세린 또는 2-포르밀글리신 잔기이고;

Z₂는 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;

X₁은 존재하거나 부재하고, 존재할 때, 임의의 아미노산이고, 단 이종 설파타제 모티프가 알데하이드 태그부착된 폴리펩타이드의 N-말단에 있을 때, X₁은 존재하고;

X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;

Z₃은 염기성 아미노산이다.

94. 단락 93에 있어서, 폴딩된 상태로 존재할 때 공유커플링된 항미생물 펩타이드를 용매 접근 가능한 표면 위에 제시할 수 있는 항체 분자.

95. 단락 93 또는 94에 있어서, 설파타제 모티프가 이종 설파타제 모티프, 및/또는 비변형된 설파타제 모티프 또는 변형된 설파타제 모티프인 항체 분자.

96. 단락 93 내지 95 중 임의의 단락에 있어서, 설파타제 모티프가 12개 이하(예를 들어, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하 또는 6개 이하)의 아미노산 잔기를 포함하거나 이러한 아미노산 잔기로 구성된 것인 항체 분자.

97. 단락 93 내지 96 중 임의의 단락에 있어서, 설파타제 모티프가 항체 분자 쇄의 N-말단, 항체 분자 쇄의 C-말단, 또는 항체 분자의 용매 접근 가능한 루프에서 ADC에 위치하는 것인 항체 분자.

98. 단락 93 내지 97 중 임의의 단락에 있어서, 설파타제 모티프가 항체 분자의 중쇄(또는 이의 단편)에 위치하는 것인 항체 분자.

99. 단락 93 내지 98 중 임의의 단락에 있어서, 설파타제 모티프가 중쇄의 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3), 예를 들어, 중쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단)에 위치하는 것인 항체 분자.

100. 단락 93 내지 99 중 임의의 단락에 있어서, 설파타제 모티프가 항체 분자의 경쇄(또는 이의 단편)에 위치하는 것인 항체 분자.

101. 단락 93 내지 100 중 임의의 단락에 있어서, 설파타제 모티프가 경쇄의 불변 영역, 예를 들어, 경쇄 불변 영역의 말단(예를 들어, C-말단)에 위치하는 것인 항체 분자.

102. 단락 93 내지 101 중 임의의 단락에 있어서, ADC가 복수의 설파타제 모티프, 예를 들어, 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상)의 변형된 설파타제 모티프를 포함하는 것인 항체 분자.

103. 단락 102에 있어서, 설파타제 모티프가 항체 분자의 중쇄(또는 이의 단편), 경쇄(또는 이의 단편), 또는 이들 둘 다에 위치하는 것인 항체 분자.

104. 단락 102 또는 103에 있어서, 설파타제 모티프가 중쇄의 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 또는 CH3 중 하나 이상), 경쇄의 불변 영역, 또는 이들 둘 다에 위치하는 것인 항체 분자.

105. 단락 102 내지 104 중 임의의 단락에 있어서, 설파타제 모티프를 각각 포함하는 2개 이상의 중쇄를 포함하는 항체 분자.

106. 단락 102 내지 105 중 임의의 단락에 있어서, 변형된 설파타제 모티프를 각각 포함하는 2개 이상의 경쇄를 포함하는 항체 분자.

107. 단락 93 내지 106 중 임의의 단락에 있어서, Z₃이 아르기닌(R)인 항체 분자.

108. 단락 93 내지 106 중 임의의 단락에 있어서, 존재할 때 X₁, X₂ 및 X₃이 각각 독립적으로 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성 비하전 아미노산인 항체 분자.

109. 단락 93 내지 108 중 임의의 단락에 있어서, 존재할 때 X₁이 L, M, V, S 또는 T인 항체 분자. 한 실시양태에서, X₂ 및 X₃은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 또는 C이다.

110. 항체 분자의 알데하이드와 항미생물 펩타이드의 반응성 기 사이의 반응이 일어나게 하는 조건 하에서 알데하이드 태그부착된 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 알데하이드 태그부착된 항-LPS 항체 분자)를 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)와 접촉시킴으로써, ADC를 생성하는 단계를 포함하는 ADC의 제조 방법.

111. 단락 110에 있어서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자가 2-포르밀-글리신 잔기(예를 들어, Z₁에서 FGly')를 포함하는 것인 방법.

112. 단락 110 또는 111에 있어서, 항미생물 펩타이드가 아미노옥시 또는 하이드라자이드 반응성 기를 포함하는 것인 방법.

113. 단락 110 내지 112 중 임의의 단락에 있어서, 반응 혼합물에서 알데하이드 태그부착된 항체 분자와 항미생물 펩타이드를 조합하는 단계를 포함하는 방법.

114. 단락 110 내지 113 중 임의의 단락에 있어서, 항미생물 펩타이드 대 항체 분자의 원하는 비, 예를 들어, 약 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1 이상의 비를 제공하기에 충분한 양으로 항미생물 펩타이드를 항체 분자와 접촉시키거나 반응 혼합물에 제공하는 것인 방법.

115. 단락 110 내지 114 중 임의의 단락에 있어서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자와 항미생물 펩타이드를 하이드라지노-이소-픽테트-스펜글러(HIPS) 라이게이션으로 커플링시키는 것인 방법.

116. 단락 110 내지 114 중 임의의 단락에 있어서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자와 항미생물 펩타이드를, 환원 후 옥심 및 하이드라자이드를 사용한 접합으로 커플링시키는 것인 방법.

117. 단락 110 내지 116 중 임의의 단락에 있어서, 예를 들어, 반응 혼합물로부터 ADC를 단리(예를 들어, 정제)하는 단계를 추가로 포함하는 방법.

118. 단락 110 내지 117 중 임의의 단락에 있어서, 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 항미생물 펩타이드와 접촉시키기 전에(예를 들어, 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 반응 혼합물에서 항미생물 펩타이드와 조합하기 전에) 알데하이드 태그부착된 항체 분자를 폴딩시키는 것인 방법.

119. 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 공유커플링된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물(예를 들어, 약학 조성물)로서, 상기 항체 분자가 본원에 기재된 변형된 설파타제 모티프를 포함하는 것인 조성물.

120. 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 반응 혼합물로서, 상기 항체 분자가 본원에 기재된 설파타제 모티프(예를 들어, 변형된 설파타제 모티프)를 포함하는 것인 반응 혼합물.

121. ADC, 또는 ADC를 포함하는 약학 조성물을, 세균 감염 또는 관련 장애의 치료 또는 예방에 효과적인 양으로 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 세균 감염 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 ADC가 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 공유커플링된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하고 상기 항체 분자가 본원에 기재된 변형된 설파타제 모티프를 포함하는 것인 방법.

122. 단락 121에 있어서, 세균 감염이 그람 음성 세균과 관련된 것인 방법.

123. 단락 121 또는 122에 있어서, 세균 감염이 슈도모나스 감염인 방법.

124. 단락 121 내지 123 중 임의의 단락에 있어서, 세균 감염이 슈도모나스 애루기노사와 관련된 것인 방법.

125. 본원에 기재된 알데하이드 태그부착된 항-LPS 항체 분자를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산.

126. 본원에 기재된 에피토프에 결합하는 항-LPS 항체 분자 또는 ADC로서, 변형된 설파타제 모티프(예를 들어, 본원에 기재된 변형된 설파타제 모티프)를 포함하는 항-LPS 항체 분자 또는 ADC.

127. 단락 126에 있어서, 슈도모나스 애루기노사의 코어 LPS 내의 과인산화된 HepI 잔기에 결합하는 항체 분자 또는 ADC.

128. 항-LPS 항체 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-LPS 항체 분자) 및 공유커플링된 항미생물 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 항미생물 펩타이드)를 포함하는 ADC로서, 상기 항미생물 펩타이드가

(a) 라이신 접합(예를 들어, 표면 노출된 라이신을 항체 반응성 기로서 사용함);

(b) 쇄간 디설파이드(예를 들어, HC-HC 또는 HC-LC를 연결하는 디설파이드를 사용함);

(c) 비천연 아미노산(예를 들어, 알데하이드, 아자이드 또는 알킨으로 치환된 아미노산); 또는

(d) 생분해성 중합체(예를 들어, 라이신 또는 티올)

를 통해 항체 분자에 커플링된 것인 ADC.

129. 단락 128에 있어서, 항미생물 펩타이드가 (a)를 통해 항체 분자에 커플링되고, 항체 분자가 항미생물 펩타이드의 활성화된 아미노산에 직접 접합된 것인 ADC.

130. 단락 128에 있어서, 항미생물 펩타이드가 (a)를 통해 항체 분자에 커플링되고, 항체 분자의 라이신이 티올 반응성 기로 전환되고, 티올 반응성 기를 가진 항체 분자가 티올을 가진 항미생물 펩타이드에 라이게이션된 것인 ADC.

131. 단락 128에 있어서, 항미생물 펩타이드가 (a)를 통해 항체 분자에 커플링되고, 항체 분자의 라이신이 유리 티올로 전환되고, 유리 티올을 가진 항체 분자가 티올 반응성 항미생물 펩타이드에 라이게이션된 것인 ADC.

132. 단락 128에 있어서, 항미생물 펩타이드가 (b)를 통해 항체 분자에 커플링되고, 항체 분자의 쇄간 디설파이드가 환원되고, 환원된 쇄간 디설파이드를 가진 항체 분자가 티올 반응성 항미생물 펩타이드에 라이게이션된 것인 ADC.

133. 단락 128에 있어서, 항미생물 펩타이드가 (c)를 통해 항체 분자에 커플링되고, 항체 분자가 클릭 화학반응을 이용함으로써 항미생물 펩타이드에 라이게이션된 것인 ADC.

134. 단락 128에 있어서, 항미생물 펩타이드가 (d)를 통해 항체 분자에 커플링되고, 항미생물 펩타이드가 생분해성 중합체에 라이게이션되고, 상기 중합체가 항체 분자에 라이게이션된 것인 ADC.

135. 단락 128 내지 134 중 임의의 단락의 ADC를 포함하는 조성물(예를 들어, 약학 조성물).

136. 세균 감염 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 세균 감염 또는 관련 장애를 치료하거나 예방하기에 효과적인 양으로 단락 128 내지 134 중 임의의 단락의 ADC 또는 단락 135의 약학 조성물을, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.

실시예

본원에 기재된 연구는 효과적인 항미생물 작용제를 생성할 수 있는 중요한 치료 전략으로서 항체-약물 접합체(ADC)를 확인한다. 이를 위해, 본 실시예는 병원성 그람 음성 세균 슈도모나스 애루기노사에 초점을 맞추었다. 슈도모나스 애루기노사 생존에 필수적인 지질다당류(LPS)의 내부 코어 글리칸 모이어티에 결합하는 예시적인 단일클론 항체인 VSX를 조작하였다. 내부 코어 LPS에서 발견된 2,4-포스포-헵토스 당은 그의 특이적 결합 프로파일, 상동성 모델링 및 NMR 분석을 기반으로 그의 코어 에피토프로서 확인되었다. VSX의 V_H 및/또는 V_L 쇄의 C-말단에서 항미생물 펩타이드를 융합함으로써 ADC를 설계하였다. 이 ADC는 슈도모나스 애루기노사 균주를 빠르게 사멸시키고, 포유동물 세포에 대한 낮은 수준의 독성을 나타내고, 치료적으로 투여될 때 슈도모나스 애루기노사 폐 감염으로부터 마우스를 보호한다. 나아가, ADC는 항-슈도모나스 클래스의 항생제와 상승작용을 하는 것으로 밝혀졌다. 이 접근법은 특정 병원성 미생물을 표적화함으로써 미생물균총을 보존하는 데 널리 유용한 전략일 수 있다.

실시예 1: VSX의 조작

LPS는 항-약물 접합체(ADC)의 구축을 위한 이상적인 표적을 대표한다. 첫째, 이 항원은 종양 지향 ADC에 의해 표적화되는 전형적인 항원보다 10배 내지 100배 더 높은 카피 수(세포당 >10⁷ 카피)(9)로 존재한다. 둘째, 이용 가능한 유전 정보의 분석은 LPS의 여러 부분이 슈도모나스 애루기노사 균주 전체에 걸쳐, 특히 내부 코어 내에서 고도로 보존될 가능성이 높음을 시사한다. WaaP(4-O 인산화) 및 WapP(2-O 인산화) 유전자 생성물 둘 다가 시험관내 및 생체내에서 슈도모나스 애루기노사 생장에 필수적인 유전자이고(Skurnik D, et al. 2013. PLoS Pathog 9:e1003582) 모든 시퀀싱된 균주들에 존재한다(Winsor GL, et al. 2016. Nucleic Acids Res 44:D646-53). 따라서, 이 단백질들의 유전자 생성물을 표적화하는 항체에 의해 가해진 선택적 압력은 회피 돌연변이체가 생존할 수 없는 것으로 보고된 현재까지 이 돌연변이체가 나타날 확률을 감소시킬 것이다(Delucia AM, et al. 2011. MBio 2). 추가로, 이 유전자들은 슈도모나스 종에 고유한 오페론의 일부이고: glnE-ilvE-waaF-waaC-waaG-waaP-PA5008-PA5007-PA5006(Winsor GL, et al. 2016. Nucleic Acids Res 44:D646-53), 이는 특정 항체가 다른 그람 음성 세균보다 슈도모나스 종만을 표적화할 것임을 암시한다.

이 근거를 실험적으로 시험하기 위해, 슈도모나스 애루기노사로부터 단리된 LPS에 강하게 결합하는 마우스 항체를 단리하였다. 이 항체의 체계적인 조작(인간화, 약물 유사 특성의 개선, 친화성의 증가)은 단일클론 항체 VSX의 식별로 이어졌다. 이 항체는 인간 생식세포계열과 >85% 동일하고, 글리코실화 부위(불변 영역 제외) 또는 페어링되지 않은 시스테인을 함유하지 않고, CHO 세포에서 잘 발현된다. 웨스턴 블롯에 의해 평가된 항체 결합은 VSX가 단리된 슈도모나스 애루기노사 LPS에 결합한다는 것을 확인시켜준다. 구체적으로, 슈도모나스 애루기노사로부터 추출된 활면 LPS와의 결합은 검출된 반면, 이. 콜라이 LPS와의 결합은 검출되지 않았다(도 1b). 항체의 에피토프를 더 특징규명하기 위해, 내부 코어 결합 에피토프(하기 참조)의 핵심 Hep I 및 Hep II 잔기를 모방하는 일인산화된 헵토스 단당류 및 이인산화된 헵토스 단당류를 합성하여(실시예 10의 합성식 및 특징규명) 결합 연구에서 사용하였고, 생물층 간섭계 및 미세열량계로 평가하였다(도 2). VSX는 헵토스 또는 일인산화된 헵토스 유사체(2-P-Hep 및 4-P-Hep)에 결합하지 않고; 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에만 결합한다. 흥미롭게도, 이 결합은 Fab 도메인도 유사한 친화성으로 결합하기 때문에 전적으로 결합력에 의해 유발되지 않았다. 2,4-P-Hep와의 결합은 C6 위치에서 메틸-하이드록실 기를 결여하는 이인산화된 만노스(2,4-P-Man)와의 유사하지만 감소된 결합이 관찰되었기 때문에 주로 비특이적 상호작용에 기인하지 않았다.

실시예 2: VSX는 슈도모나스 애루기노사 표면 항원 LPS에 결합한다.

내부 코어 LPS 영역이 온전한 유기체의 세포 표면에서 접근될 수 있는지와 이 접근성이 혈청형 특이적일 것인지에 대한 질문이 해결된다. 전체 세균 세포 ELISA에서, 본 발명자들은 이 에피토프가 접근될 수 있고 VSX가 카르바페넴, 항-슈도모나스 3세대 세팔로스포린 또는 플루오로퀴놀에 대한 내성을 가진 균주를 비롯한 23개의 다양한 슈도모나스 애루기노사 균주들에 결합한다는 것을 발견하였고(도 3a), 이는 혈청형 독립적 결합을 암시한다. ELISA에 의해 측정되었을 때 50 내지 120 pM의 겉보기 결합력이 균주들 전체에 걸쳐 관찰되었다. 항체는 에스케리키아 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니아 및 살모넬라 티피뮤리움의 많은 균주들을 비롯한 다른 일반적인 인간 병원성 그람 음성 세균(도 3b), 또는 그람 양성 유기체 또는 포유동물 세포에 결합하지 않는다. 이 분석을 반정량적 방식으로 확장하였을 때, 다양한 감염 부위들의 임상 단리주로부터 100개 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주들에서 항체 결합이 검출될 수 있음이 확인되었다. 나아가, 슈도모나스 플루오레센스, 슈도모나스 푸티다 및 슈도모나스 스투트제리를 비롯한 다른 슈도모나스 종의 결합 분석도 결합을 입증하였다(도 3c). 이 발견을 더 확인하기 위해, 전자 현미경관찰 영상은 VSX가 알기네이트를 표적화하는 항체와 대조적으로 세포 표면 근처에서 결합함을 보여준다(도 17a 내지 17c). 종합하건대, 이 결과는 VSX가 슈도모나스 애루기노사의 외막에 존재하는 LPS의 내부 코어에 결합함을 시사한다. 이 발견을 확신하고 VSX와 LPS의 내부 코어의 상호작용을 더 조사하기 위해, VSX가 LPS의 친수성 내부 코어 부분을 인식하는 방식을 설명하기 위한 추가 구조적 조사를 완료하였다.

실시예 3: 글리칸-Fab 상호작용의 구조적 분석

합성 단당류의 양성자 및 탄소 신호를 동종핵(COSY 및 TOCSY, 표시되지 않음) 및 이종핵 NMR 분광법으로 배정하였다(도 18a 내지 18c). VSX Fab와 합성 단당류의 상호작용에 대한 구조적 통찰은 ¹H-STD, ³¹P-NMR 분광법, 분자 모델링 및 MD 시뮬레이션에 의해 연구되었다. ¹H-STD NMR 스펙트럼은 이전 연구와 일관되게 이인산화된 헵토스(2,4-P-Hep)만이 VSX Fab 도메인에 결합함을 보여주었다(도 4a, 도 19). 측정 조건 하에서, Fab 도메인으로부터 2,4-P-Hep의 H1, H4 및 H7a 원자로의 에너지 전달이 관찰되었는데, 이는 도 5a의 왼쪽 및 오른쪽에 보고된 2개의 선택된 도킹 자세와 정성적으로 일치하는, 이 원자들과 Fab 분자의 가능한 공간적 인접성을 암시한다. ¹H-NMR은 포스페이트 기의 역할을 알려주지 않기 때문에, ³¹P-NMR을 이용하여 단당류 적정 실험을 수행하였다(도 4b). 적정 실험 전에, 2,4-P-Hep 스펙트럼에서 2개의 ³¹P 신호의 배정을 도 20에 도시된 바와 같이 ¹H-³¹P HMBC NMR로 수행하였다. 추가 적정 연구에서, 4-P 포스페이트 공명은 2-P 포스페이트 공명에 비해 더 넓은 선폭 및 화학적 이동의 더 유의미한 변화를 보여줌으로써, 2-P 포스페이트 기에 비해 4-P 포스페이트와 Fab 도메인의 더 강한 결합을 암시한다.

슈도모나스 애루기노사 코어 올리고당은 10개의 당 잔기를 갖고, 이들 중 2개는 음이온성 Kdo 당(Kdo I 및 Kdo II)이고 2개는 인산화된 헵토스(Hep I 및 Hep II) 당이다. 이들은 함께 지질-A와 외부 코어-올리고당 모이어티를 가교연결하는 내부 코어 올리고당을 형성한다. 2개의 Kdo 당이 대다수의 그람 음성 LPS 분자 내에 존재한다는 점 및 VSX의 표시된 특이성으로 인해, 이 이당류는 VSX의 코어 에피토프가 아닐 가능성이 높다. 대다수의 슈도모나스 애루기노사 LPS 분자에서, Hep II 당은 두 번째 위치에서 일인산화되고 균주 특이적 변형을 나타내는 반면, Hep I 당은 더 낮은 수준의 변형을 가지면서 두 번째 및 네 번째 위치에서 이인산화된다. 이전 연구는 Hep I 당의 네 번째 위치 인산화가 LPS의 완전한 합성뿐만 아니라 세균 생존에도 필수적임을 입증하였다(Delucia AM, et al. 2011. MBio 2). 이러한 제약을 고려할 때, 고도로 보존된 Hep I 당 모이어티는 VSX에 대한 코어 에피토프 내에 있을 가능성이 높다. Hep I 당 모이어티가 이. 콜라이 LPS에도 존재하지만, 두 번째 위치에서만 일인산화되어 인식되지 않는데, 이는 VSX 결합을 가능하게 하는 데 있어서 네 번째 위치의 포스페이트 기가 중요함을 추가로 암시한다. 특히, 모델링 및 STD 연구는 결합이 2개의 포스페이트 기의 동시 작용에 의해 유도되므로, 2-O 포스페이트 기의 상대적 기여가 상당할 가능성이 높음을 시사한다.

Hep I의 단당류 모방체인 2,4-P-헵토스 단당류와 Fv 도메인의 분자 도킹은 2개의 밀접하게 관련된 결합 자세를 확인하였고, 이때 상기 단당류는 포켓의 바닥에서 R100 잔기와 상호작용하는 C6 위치(도 5a)에서 그의 4-포스페이트 기 또는 그의 메틸-하이드록실 기와 결합하였다. 이 2개의 자세는 당의 60^o 회전에 의해 상이하고, 이들 둘 다가 결합된 2,4-P-Hep 단당류의 환원 및 비환원 말단에서 확장된 당 모이어티의 존재를 허용한다. 오토독(Autodock) 4.2 점수화 함수는 상기 2개의 자세에 대한 결합 에너지 추정값으로서 각각 -3.8 및 -6.0 Kcal mol^-1을 제공한다. 추가로 조사하기 위해, MD 시뮬레이션을 적용하여 두 도킹 자세의 기하구조를 개량함으로써, 초기 단계 및 후기 단계 둘 다에서(즉, 6 및 34 ns에서, 도 5a) 완성된 스냅샷과 함께 2,4-Hep-VSX 분자 인식 이벤트의 역학적 설명을 얻었다. VSX와 결합된 상태의 Hep 잔기의 제곱 평균 제곱근 변동(RMSF)(도 5b) 및 오토독 점수화 함수는 R103 및 R101에 의한 2-P 및 4-P의 인식 이외에 당 C6-C7의 지방족 꼬리가 Trp47, Tyr50 및 Tyr59에 의해 형성된, VSX 결합 포켓의 헤지(hedge) 중 하나에 의해 인식될 때 결합 에너지가 약간 더 크다는 것을 시사한다. 이 결과는 분산력도 2,4-P-Hep-VSX 분자 인식 이벤트에 기여할 가능성이 높음을 암시함으로써, MD 시뮬레이션의 후기 단계에서 리간드와 수용체 접촉 부위 사이의 더 짧은 거리에 의해서도 뒷받침되는 바와 같이, 이 결합 자세가 더 강한 결합 상호작용에 상응함을 암시한다.

상기 분석을 확인하기 위해, 본 발명자들은 항원 결합 포켓의 3개의 CDR Arg 잔기(VH: R101, R103 및 VL: R100)를 조사하여, 이들이 결합의 중심임을 확인하였다. 이 Arg 잔기들 중 임의의 Arg 잔기를 Gln으로 돌연변이시켰을 때 측쇄 양전하가 제거되고 항원 계면 영역의 상당한 부분이 제거될 것으로 예상된다. 이 모델과 일치하게, Arg이 Gln으로 바뀐 돌연변이체 중 어느 돌연변이체도 일인산화된 헵토스 당(2P-Hep 또는 4P-Hep)과의 임의의 측정 가능한 결합을 보여주지 않았는데, 이는 결합에 있어서 이 Arg 잔기들의 중요성을 암시한다(도 6a). 또한, 단당류 접촉 잔기(VH: A33, E99, VL: H32)의 돌연변이는 결합을 제거한 반면, HCDR2 내의 비접촉 잔기(VH: D54 및 D56)의 돌연변이는 결합의 유의미한 손실을 나타내지 않았다. 이 CDR Arg 잔기들 중 임의의 CDR Arg 잔기를 Gln으로 돌연변이시켰을 때 항원 결합이 제거되었는데, 이는 정전기적 상호작용의 중요성을 암시한다. 일반적으로 관찰되는 HCDR2 서열 Xaa-Xaa-Gly-Gly-(Ser/Thr/Gly)는 탄수화물, DNA 및 단백질의 음으로 하전된 기와의 결합에 관여한다(13). VSX에서, 이 서열은 산성 아미노산 서열 Ser-Ser-Asp-Gly-Asp(서열번호 263)과 함께 존재하고; 이 Asp 잔기를 Gln으로 돌연변이시킨 것은 2,4-Hep 결합에 영향을 미치지 않는다.

실시예 4: VSX의 활성

보체만 존재할 때, VSX는 시험관내에서 어느 정도의 직접적인 살균 활성을 나타내었다(1 ㎍/㎖에서 약 20% 사멸). 식세포가 시스템에 첨가되었을 때, 옵소닌식작용 사멸 활성이 검출되었지만 20 ㎍/㎖에서는 완전하지 않았다. 따라서, VSX에 의해 매개될 수 있는 다른 추가 보호 기작을 더 조사하였다. 특히, LPS의 탈락(shedding)은 패혈증성 쇼크를 유발할 수 있는 톨 유사 수용체(TLR)의 활성화에 의해 시작된, 숙주 면역 시스템의 과다자극 시 병태생리학적 징후를 야기할 수 있다고 보고되었다(Singer M, et al. 2016. JAMA 315:801-10). 이 병태생리학을 고려할 때, 항-LPS mAb는 LPS 탈락을 제한하고 이의 혈청 제거를 촉진하고 LPS에 의해 매개된 TLR과의 결합 및 면역 시스템의 수반되는 활성화를 억제함으로써 LPS를 중화시키는 데 있어서 중추적인 역할을 할 수 있다. 이 경로 및 VSX의 결합 부위와 일치하게, VSX는 대조군 항체에 비해 LPS와의 강한 결합을 보였다(도 6b). 또한, 유리 LPS에 의한 TLR4 수용체의 활성화를 측정하는 HEK-블루 리포터 어세이는 VSX가 LPS 매개 TLR4 활성화를 억제함을 입증하였다(도 6c).

실시예 5: AMP의 선택

보체 또는 식세포를 필요로 하지 않으면서 직접적인 사멸 활성으로 무장한 VSX는 임의의 항균 항체에 의해 달성될 수 있는 총 세균 사멸 수준도 유의미하게 증가시킬 수 있는 살균 페이로드의 추가를 통해 추구되었다. 이를 위해, 본 발명자들의 현재 항생제인 폴리믹신의 마지막 방어선에 매우 가까운 항미생물 펩타이드(AMP)를 그의 빠른 사멸 활성 및 그의 작용 기작의 입증된 효능으로 인해 선택하였다(Velkov T, et al. 2016 Future Med Chem 8:1017-25). 2차 구조를 기준으로 항미생물 펩타이드의 적어도 4개의 상이한 클래스가 있다: β-시트, α-나선, 확장 및 루프(Bahar AA, Ren D. 2013. Pharmaceuticals(Basel) 6:1543-75). 항체에 공유부착되어 있는 상황에서 AMP 활성에 초점을 맞추었기 때문에, 2차 구조를 안정화하기 위한 디설파이드의 요구로 인해 루프 클래스를 제거하였을 뿐만 아니라, 세포 사멸 활성을 이끌어내기 위해 올리고머화를 요구하는 펩타이드도 제거하였다. 이러한 제한을 염두에 두었을 때, 세포 표면에서 작용하는 양친매성 α-나선형 펩타이드의 클래스는 ADC의 형성을 위한 바람직한 펩타이드 클래스를 분명히 대표한다. 더욱이, 보고서는 약 10⁶개 AMP/세포의 결합이 세포 사멸을 유도할 것이고; 약물-항체 비(DAR)가 1:1인 경우에도 LPS의 10%와의 결합이 사멸을 유도하기에 충분할 것이며, DAR이 높을수록 요구되는 양이 적어짐을 시사한다.

ADC에 대한 최적 AMP 페이로드를 확인하기 위해, 강력한 구조-활성 캠페인을 완료하여, (1) 세포 표면에서 활성을 나타냄으로써 내재화를 요구하지 않고; (2) 슈도모나스 애루기노사에 대한 살균 활성을 나타내고; (3) 낮은 용혈 및 세포독성 활성을 가진 α-나선형 AMP를 확인하였다. 먼저, 생물정보학 기반 작업흐름(AMP의 공개 데이터베이스(YADAMP) 검색 → 특성별로 AMP를 클러스터링 → 활성 및 독성 평가)을 이용하여, 높은 치료 지수를 가진 강력한 페이로드를 확인하기 위한 실험적 특징규명을 위한 AMP를 선택하였다(도 7a). 이들 중 가장 강력한 것을 선택하는 것은 데이터베이스에서 각각의 AMP가 특징규명되는 일관성의 결여로 인해 복잡한 과정일 수 있다. ADC에 사용하기 위한 AMP의 확인을 용이하게 하기 위해, 그의 기본 물리화학적 특성을 기반으로 펩타이드를 클러스터링하는 스크리닝 전략을 실시한 후, 각각의 클러스터를 대표하는 구성원을 특징규명하였다. 여기서, 항균 활성이 보고된 2,500개 이상의 펩타이드 서열을 함유하는 AMP 데이터베이스인 YADAMP를 이용하였다. 항미생물 활성과 관련이 있는 것으로 보고된 계산된 특성(펩타이드 길이, 예측된 나선도, 예측된 수병증, 선택 아미노산[Lys, Arg, Trp, Cys, His]의 백분율, 및 pH7, pH5 및 pH9에서의 전하)을 이용하는 K-평균 알고리즘을 이용함으로써 클러스터링을 수행하였다. 다수의 세균 균주들에 대한 MIC 시험, 용혈성 평가 및 세포독성을 포함하는 시험관내 어세이의 패널을 통한 실험적 특징규명을 위해 100개 펩타이드의 초기 세트를 선택하였다. 유리한 특성을 가진 강력한 펩타이드가 일단 확인되면, 실험적 특징규명을 위해 상응하는 클러스터의 나머지 구성원들을 선택하였다. 이 접근법을 이용하여, 스크리닝이 필요한 펩타이드의 수를 대략 10배까지 유의미하게 감소시켰다. 상기 캠페인의 과정에 걸쳐 약 400개의 펩타이드가 실험적으로 스크리닝되었다.

초기 스크린은 슈도모나스 애루기노사에 대한 1 내지 8 ㎍/㎖의 최소 억제 농도(MIC)를 가진 여러 α-나선형 AMP를 확인하였고, 이들 중 일부는 다른 그람 음성 세균에 대해서도 광범위한 활성을 가진다. 그러나, 이 초기 AMP들 중 일부는 인간 적혈구에 대한 용해 활성도 나타내었다. 이 경향에 대한 한 가지 주목할 만한 예외는 AMP의 카텔리시딘 패밀리의 α-나선형 서브클래스이었다. 카텔리시딘은 강력한 항균 활성을 발휘하고 선천성 면역의 다기능성 이펙터 분자로서 작용하는 구조적으로 다양한 AMP의 패밀리이다. 특히, 이 클래스의 한 구성원인 카텔리시딘-BF는 다수의 슈도모나스 애루기노사 균주들에 대한 강력한 MIC 값 및 낮은 용혈 활성을 나타내었고 포유동물 세포를 사멸시키는 능력을 갖지 않았다(도 6a). 이 클래스의 한 구성원인 P297을 사용한 시간 경과 실험은 MIC의 4배 이상의 펩타이드 수준에서 상기 펩타이드가 슈도모나스 애루기노사 역가를 >3 로그만큼 빠르게 감소시킬 수 있음을 시사함으로써, 상기 펩타이드가 살균성을 갖고 정균성만을 갖는 것은 아님을 확인시켜준다(도 7b). 기작 연구는 이 펩타이드 패밀리가 막 파괴를 통해 작용할 가능성이 높음을 확인시켜주었다(도 7c). 또한, 두 가지 상이한 방법에 의한 내성 평가, 및 이의 빈도와 폴리믹신 B(콜리스틴)의 빈도의 비교는 P297에 대해 대략 10^-8 내지 10^-10의 유사하거나 더 낮은 돌연변이 빈도를 표시하였다. 원편광 이색성 분석은 수용액에서 P297이 주목할 만한 2차 구조를 채택하지 않음을 시사하였다; 랜덤 코일의 π-π* 전이에 상응하는 대략 198 nm에서의 최소값. 대조적으로, 본질적인 α-나선 형성 특성을 가진 펩타이드에서 천연 유사 α-나선형 구조를 촉진하는 데 사용된 비극성 용매인 40% 2,2,2-트리플루오로에탄올의 존재 하에, α-나선 형성을 표시하는 강한 신호가 196 nm에서 있다(도 7d). 종합하건대, 이 결과는 P297이 슈도모나스 애루기노사를 신속하게 사멸시킬 수 있고 내성 발생에 대한 비교적 높은 장벽을 가진 α-나선형 살균 펩타이드임을 확인시켜준다.

추가로, P297은 본 발명자들의 시험관내 어세이에서 비교적 높은 치료 지수를 나타내었다. 본 발명자들이 사용하였고 잠재적인 독성의 민감한 어세이인 것으로 이전에 밝혀진 한 핵심 메트릭(metric)은 적혈구 용혈이다(Oddo A, Hansen PR. 2017. Methods Mol Biol 1548:427-435). 이 평가를 위해, 평균 용해 농도(MLC), 즉 100% 용혈을 유도한 펩타이드의 농도뿐만 아니라, 적혈구 용혈이 처음 관찰되는 최소 농도(부분적 용해 농도(PLC)로서 정의됨)도 사용하였다.

상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 두 측정 모두에서 P297의 용해 수준은 MIC보다 >10배 더 컸다. 나아가, 대표적인 포유동물 세포인 293T에 대한 P297의 세포독성은 MIC보다 약 200배 더 컸다. 따라서, 세균에 대한 이의 효능 및 상대적 선택성을 고려하여 추가 펩타이드 설계를 위해 P297을 선택하였다.

P297의 추가 분석은 P297이 시험관내에서 높은 활성을 나타내고 특이적이지만, 인간 또는 마우스 혈청의 존재 하에 P297의 활성이 시간의 경과에 따라 실질적으로 감소하였음을 시사하였다. 혈청의 존재 하에 P297의 LC-MS 분석은 이 펩타이드가 혈청 성분, 아마도 단백질에 흡착될 가능성이 높고 또한 혈청 프로테아제에 의해 절단됨을 입증하였다 - 그의 반감기는 대략 20분이었다(도 8). 따라서, 특히 항체 수준이 며칠 동안 지속될 수 있다는 점을 고려하여, 생체내에서 긴 노출 시간에 더 잘 적응하도록 P297의 특성을 변형시켰다. 첫 번째 변형으로서, P297의 L-아미노산을 D-아미노산으로 치환시켰는데(D297), 이 치환은 프로테아제 민감성을 감소시킬 수 있고 혈청 안정성을 증가시킬 수 있는 치환이다. D297의 원편광 이색성 분석은 D297이 2,2,2-트리플루오로에탄올의 존재 하에 왼손 나선을 채택하였음을 확인시켜주었다. D297의 시험관내 분석은 D-버전이 혈청에서 안정하다는 추가된 이점과 함께, P297과 비교될 때 슈도모나스 애루기노사에 대한 동등한 효능을 가짐을 시사하였다(도 18b). P297과 마찬가지로, D297은 낮은 용혈 및 세포독성 활성을 가졌다. 따라서, 본 발명자들은 D-펩타이드 서열로 전환함으로써 살균 활성을 유지할 수 있었고 혈청 안정성을 향상시킬 수 있었고 AMP의 용혈성 및 세포독성의 결여를 보존할 수 있었다.

실시예 6: VSX 접합체의 구축

VSX 및 D297로 이루어진 다수의 항체-약물 접합체(ADC) 구축물을 생성하고 시험하기 위해, 본 발명자들은 소르타제 A(SrtA)를 사용하는 효소 라이게이션 전략에 의존하였다(도 9a). SrtA 방법은 SrtA에 의해 라이게이션될 수 있는 태그를 가진 항체를 발현시킨 후, 이를 화학적으로 합성된 AMP와 효소로 커플링시키는 단계를 포함한다(Mao H, et al. 2004. J Am Chem Soc 126:2670-1). 구축물을 중쇄(HC), 경쇄(LC) 또는 이들 쇄 둘 다(이중)의 C-말단 변이체로서 생성하였다. ADC를 질량 분광분석, SDS-PAGE 겔 및 SEC-HPLC로 분석하였다. 커플링은 LC-MS에 의해 측정되었을 때 통상적으로 부위당 >90%로 전환될 정도로 효율적이었다. 예를 들어, HC 또는 LC가 부착된 접합체는 약 2(질량 분광분석에 의해 평가될 때 ≥1.8) 또는 이중 접합체의 경우 약 4(질량 분광분석에 의해 평가될 때 ≥3.6)의 약물-대-항체 비(DAR)를 가졌다(도 9b 및 9c). 모든 경우에서 30개 아미노산 -GS₁₅- 링커(서열번호 157)를 D297에 부착하여, 말단 HC/LC 잔기와 소르타제 신호 서열 사이에 유연성을 유지하였다. 중요하게는, SEC 분석은 ADC 분야에서 공통적인 관심사인 응집의 징후가 없는 균질한 생성물을 보여주었다(도 9d).

실시예 7: VSX-297의 시험관내 활성

VSX 항체를 사용하여, 일련의 ADC 구축물들을 시험관내에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 직접적인 살균 활성에 대해 평가하였다(도 10). 이 초기 구축물들로부터, 활성의 상대적 순서가 이중>HC>LC라는 결론을 내렸다. 가장 강력한 ADC인 VSX-1은 HC 및 LC 각각의 C-말단에 라이게이션된 페이로드 D-297과 함께 4의 DAR을 함유한다. VSX-1은 실험실 균주, 및 카르바페넴 및 항-슈도모나스 3세대 세팔로스포린 또는 플루오로퀴놀(1 내지 10 ㎍/㎖ 또는 5 내지 50 nM)에 대한 내성을 가진 균주를 비롯한 슈도모나스 애루기노사에 대한 사멸 어세이에서 강력한 살균 활성을 나타내었다. 또한, 상기 구축물은 슈도모나스 애루기노사, 클렙시엘라 뉴모니아 및 이. 콜라이를 함유하는 혼합 미생물 어세이에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 선택성을 나타내었다(도 11). D297의 결과와 일치하게, 상기 구축물은 293T 세포에 대한 최소 용혈 활성 및 무시할만한 세포독성 활성을 가졌다. 항체의 온전함을 확인하기 위해 옵소닌식작용 어세이에서 ADC의 사멸 특성도 평가하였다. ADC는 다형핵 호중구의 존재 하에, 열 불활성화된 보체의 존재 하에 1 로그 세균 감소 및 열 불활성화되지 않은 보체의 존재 하에 >3 로그 사멸 활성을 야기할 정도로 10 ㎍/㎖에서 높은 활성을 나타내었다(도 12). VSX-1이 VSX 모 항체보다 더 높은 활성을 가진다는 것은 AMP가 막 내로 삽입될 때 항체와 보체 및/또는 식세포성 면역 세포 사이의 긴밀한 접촉을 촉진할 가능성이 높다는 점을 고려할 때 놀라운 결과가 아니다. 대체로, 모 펩타이드와 항체의 특성들 중 대부분은 ADC의 특성으로도 해석되었다. 마지막으로, VSX-1이 슈도모나스 애루기노사의 외막에서 작용한다는 점을 고려할 때, VSX-1이 세포내 표적을 표적화하기 위해 이중막을 통과해야 하는 기존 항생제와의 상승작용을 나타낼 수 있다고 추론하였다. 실제로, VSX-1 또는 펩타이드 구축물은 아마도 외막 투과성을 증가시킴으로써, 고전적인 항-슈도모나스 항생제(예를 들어, 카르바페넴 또는 폴리믹신)의 효능을 증가시키는 것으로 밝혀졌다.

실시예 8: VSX-1의 생체내 활성

VSX-1의 생체내 활성을 조사하기 위해, 몇 가지 이유로 폐 감염 모델에 초점을 맞추었다. 첫째, 폐는 일부 연구에서 문제가 있는 결과, 즉 최대 30% 내지 60%의 높은 사망률과 관련되어 있는 지역사회/병원 획득 폐렴으로 이어지는 슈도모나스 애루기노사 감염의 흔한 부위이다(Zavascki AP, et al. 2006. Crit Care 10:R114). 따라서, 폐는 병원체 특이적 ADC를 임상적으로 사용할 가능성이 있는 한 영역을 제시한다. 둘째, 혈류로부터의 폐의 구획화를 고려할 때, 폐는 전신 투여된 항미생물 작용제에 대한 효능을 입증하기 위한 높은 장애물을 대표한다. 마지막으로, 이 연구에서 AMP 등가물의 준최적 투약(즉, 질량을 기준으로 유효 용량의 <20%) 및 국소화된 콜로니화를 고려할 때, 효능은 VSX 항체에 의해 매개된, ADC의 수송을 요구할 가능성이 높을 것이다.

시험관내 데이터와 일치하게, VSX-1은 슈도모나스 애루기노사 감염의 여러 동물 모델에서 생체내 효능을 나타내었다. 슈도모나스 애루기노사(ATCC 27853)를 사용한 뮤린 호중구감소증 폐 감염 모델을 먼저 사용하였다. 감염된 동물을 VSX-297 구축물로 비강내로 치료함으로써, 공-투여되었거나(도 13a) 치료적으로 투약되었을 때(도 13b) 폐에서 세균 부하의 통계적으로 유의미한 감소를 야기하였다. 특히, 항체 단독 군은 세균 감소를 보이지 않음으로써, 특히 면역손상된 환경에서 바람직한 기작으로서 직접적인 살균 활성을 가진 ADC의 선택을 뒷받침한다. 이 초기 데이터를 기반으로, 슈도모나스 애루기노사의 잘 설명된 PA14 균주를 사용하여 뮤린 면역적격 폐 감염 모델에서 VSX-1을 평가하였다. 감염 3시간 후에 15 mg/kg의 단일 복강내 용량의 VSX-297을 사용한 감염된 동물의 치료는 100시간에서 통계적으로 유의미한 생존을 야기하였다(도 13c). 이 실험에 사용된 면역적격 모델은 활동적이고, 이때 대조군 동물의 50% 내지 100%는 감염 24시간 이내에 감염에 굴복한다. mAb 성분의 기여를 확인하기 위해, 비-슈도모나스 애루기노사 표적화 항체(악토수맙(actoxumab))를 사용하여 샴(sham) 접합체를 제조하였다. 악토수맙-D297 접합체는 면역적격 폐 감염 모델에서 생존 이점을 보여주지 않았는데, 이는 슈도모나스 애루기노사 표면 표적화 항체의 선택이 옳았음을 입증하였다. 전체적으로, VSX-1 접합체의 사용 시 관찰된 보호는 매우 고무적이었고 슈도모나스 애루기노사 폐 감염에 대한 잠재적인 치료제로서 이 ADC의 추가 조사를 보증하였다.

실시예 9: VSX 접합체의 최적화

1세대 VSX-1 구축물을 생체내에서 추가로 평가하였다. 슈도모나스 애루기노사 감염 모델에서의 완전한 보호에도 불구하고, 모 항체에 비해 생체분포를 개선하기 위해 VSX-1 구축물을 더 조작하였다(도 14a). 잠재적인 치료제로서 VSX 접합체의 생체분포 특성을 최적화하기 위해, 페이로드 전하, 페이로드 소수성 및 DAR에 초점을 맞춘 한 세트의 연구를 수행하였다. P297 서열부터 시작하여, 한 세트의 전하 변이체 및 전체적으로 감소된 소수성을 가진 변이체를 스크리닝하였다. 예상외로, 5개의 페닐알라닌이 류신으로 치환되어 있는 P369(GGGKLLRKLKKSVKKRAKELLKKPRVIGVSIPL(서열번호 257))는 보다 더 강력한 펩타이드로서 등장하였고, VSX 항체에 접합될 때, 살균 활성을 유지하였고 세포 독성을 거의 나타내지 않았다(도 14b). 동시에, 일련의 DAR2 구축물들은 모 항체에 비해 생체분포에 대해 생체내에서 평가되었고 개선된 생체분포를 나타내었다(도 15). 실제로, 각각의 HC의 C-말단에 라이게이션된 페이로드 D369와 함께 2의 DAR을 함유하는 VSX-2는 대조군 항체에 비해 슈도모나스 애루기노사 폐 감염 모델에서 보호를 나타내었다(도 16).

실시예 10: 재료 및 방법

재료. 먼저 VSX 항체를 마우스 하이브리도마로부터 단리하고 인간화하고 안정성 및 높은 발현을 위해 조작하였다. 항체의 서열 및 속성은 도 1a에 나열되어 있다. 고체상 합성을 통해 L-297 펩타이드 및 D-297 펩타이드를 합성하였고; 순도 및 동일성을 HPLC 및 고해상 질량 분광분석으로 검증하였다(Calc. Mass 3807.29, Obs. Mass 3807.37-3807.38). 세균 균주는 ATCC로부터 입수되었고 에보텍(Evotec)에 의해 특징규명되었다. 간단히 말해서, 인간 객담으로부터 단리된 이 균주는 페니실린, 세팔로스포린, 카르바페넴, 퀴놀론 및 아미노글리코사이드를 비롯한 다양한 약물 클래스에 대해 시험되었다. 각각의 균주에 대한 특정 항생제 내성 표현형의 설명은 하기 표 6에 기재되어 있다.

에피토프 분석에 사용된 글리칸의 합성은 일반 합성 방법의 단락에 설명되어 있다.

일반 합성 방법. 모든 시약과 용매(ACS 등급 또는 무수)는 추가 정제 또는 건조 없이 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 알파-애세르(Alfa-Aeser) 및 코덴 파마 컴퍼니(Corden Pharma Company)로부터 구입된 상태로 사용되었다. TLC 플레이트는 머크 밀리포어(Merck Millipore)로부터 구입되었다. 세파덱스(Sephadex) G-10은 지이 헬스케어 라이프 사이언시스(GE Healthcare Life Sciences)로부터 구입되었다. 설포-NHS-LC-LC-바이오틴(카탈로그 #: 21338)은 써모 피셔 사이언티픽 컴퍼니(Thermo Fisher Scientific Company)로부터 구입되었다. 추출 및 플래쉬 크로마토그래피에 사용된 용매는 ACS 등급이었다. 공기 부재 반응은 단순화된 슐렌크(Schlenk) 작업: 진공-N2 가스 풍선 기법에 의해 수행되었다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피는 레디셉 골드(Redisep Gold) 또는 일반 실리카 겔 컬럼을 갖춘 텔레다인 이스코 콤비플래쉬(Teledyne ISCO CombiFlash) 시스템에서 수행되었다. 1H-NMR 및 13C-NMR 스펙트럼은 매사추세츠 기술 연구소(MIT)에서 화학 계측 시설(DCIF) 부서의 300, 400 또는 500 MHz Varian^® FT-NMR 분광계에서 수득되었는데, 이들의 관대한 재정 지원에 대해 국립 과학 재단에 특별히 감사를 표하며; 이들의 지속적인 지원이 없었다면, DCIF는 이 최첨단 시설을 유지하는 데 필요한 수준의 지원을 MIT 및 주변 과학계에 제공할 수 없었을 것이다. 질량 스펙트럼은 아질런트(Agilent) 1100 단일 사중극자 LC-MS 기계를 이용한 전자분무 이온화를 이용함으로써 수득되었다.

VSX의 발현. 8% CO₂를 가진 가습 인큐베이터에서 37℃로 유지된 Expi293 발현 배지(Invitrogen, 캘리포니아주 칼스바드 소재)에서 배양된 Expi293F™ 세포(Invitrogen, 캘리포니아주 칼스바드 소재)에서 항체의 재조합 발현을 수행하였다. 동등한 양의 HC 및 LC 함유 플라스미드와 함께 ExpiFectamine™ 293을 사용하여 Expi293F™ 세포(>95% 생존율을 가짐)를 형질감염시켰다. 24시간 후, 형질감염된 세포를 ExpiFectamine™ 293 형질감염 향상제 1 및 ExpiFectamine™ 293 형질감염 향상제 2로 보충하였다. 감염 7일 후, 세포를 4℃에서 15분 동안 4000 rpm으로 회전시켜 세포를 수거하고 0.45 ㎛ 필터 시스템(Nalgene, 뉴욕주 로체스터 소재)을 통해 여과하였다. AKTA 정제기 FPLC 시스템(GE Healthcare Life Sciences, 매사추세츠주 말보로 소재)에서 맙셀렉트 슈어(MabSelect SuRe) 수지(GE Healthcare Life Sciences, 매사추세츠주 말보로 소재)를 사용하여 상청액으로부터 항체를 정제하였다. 항체를 100 mM 글리신-HCl 완충제(pH 2.5)로 용출하고 1 M NaCl(pH 8.5)과 함께 10% 1 M 트리스-염기를 첨가하여 pH를 중화시켰다. 이어서, 정제된 샘플을 1x PBS(pH 7.4)로 완충제 교환하고 30 KDa MWCO 스핀 필터(EMD Millipore, 매사추세츠주 빌러리카 소재)를 사용하여 한외여과/정용여과(UF/DF)로 농축한다. 나노드롭(NanoDrop) 분광광도계를 이용하여 정제된 항체를 정량한다.

1차원 및 2차원 NMR. 4개의 합성 글리칸(Man-2P,4P, Hep-2P,4P, Hep-4P, Hep)의 1H 1차원 및 2차원 NMR 스펙트럼을, 298K에서 5 mm TCI 크리오프로브를 갖춘 브루커 아반스(Bruker Avance) 500/600 분광계에서 500 및/또는 600 MHz에서 측정하였다. 0.25 mg의 각각의 글리칸을 동결건조하여 D₂O(99.9%)로 교환함으로써 잔류 물을 제거한 다음, D₂O 중의 0.15 M NaCl 및 0.3 mM EDTA-d16을 함유하는 0.5 ㎖의 10 mM 포스페이트 완충제(pH 7.2)에 용해시켰다. 1H NMR 스펙트럼은 잔류 물 신호의 억제, 12초의 재순환 지연, 32K fid 크기 및 16회 스캔으로 기록되었다. 256개의 자유 유도 붕괴(fid) 각각에 대한 32회의 스캔으로 2D 동종핵 상관관계 스펙트럼을 획득하였다. TPPI를 사용하여 상 민감성 모드로 2D TOCSY를 측정하였고, 상 이동(π/3) 정사각형 사인-벨 함수를 사용하여 2Kx1K의 데이터 매트릭스로 푸리에 변환시켰다. 상 민감성 향상된 순수 흡수 모드에서 획득 기간 동안 탄소 탈커플링과 함께 간섭 선택을 위한 z-구배를 이용하여 민감성 향상 1H/13C 화학적 이동 상관관계(HSQC) 스펙트럼을 획득하였다. 2초의 재순한 지연, F2의 1K 데이터 점, F1의 256개 증분, 증분당 24회 스캔으로 스펙트럼을 획득하였다. 최종 매트릭스 크기를 2Kx1K까지 제로-충전하였고 이동된(π/3) 사인-벨-제곱 이전 푸리에 변환과 곱하였다. 31P 1차원 NMR, 31P 탈커플링을 가진 1H NMR 및 1H-31P HMBC 스펙트럼을 500 MHz 브루커 아반스 분광계에서 획득하였다. 두 1차원 스펙트럼은 5초의 재순환 지연, 20K fid 크기 및 128회 스캔을 이용함으로써 획득된 반면, 2D HMBC 스펙트럼은 F2의 2K 데이터 점 및 F1의 48개 증분에서 시리즈당 1.5초의 재순환 지연 및 16회 스캔을 이용함으로써 획득되었다. 스펙트럼을 8 Hz의 nJCH 장거리로 최적화하였다.

정량적 1H NMR 분석. 브루커 Topspin3.5pl6 버전에 존재하는 정량적 분석 모듈을 이용하여 각각의 글리칸의 정량적 1H NMR 분석을 수행하였다. 간단히 말해서, 시험 샘플의 스펙트럼 및 알려진 농도를 가진 기준 용액의 스펙트럼을 동일한 실험 조건 하에서 획득하였다. D₂O에서 2.38 mg/㎖(1.57 mM) 농도의 합성 오당류(GlcN_NS6S-G-GlcN_NS3S6S-I_2SGlcN_NS6S ^OMe(34))를 기준물로서 선택하였다. 5 mm NMR 튜브를 각각의 샘플에 사용하였다. 탄수화물의 완전한 1H 핵 이완을 허용하는 12초의 재순환 지연으로 스펙트럼을 획득하였다(Guerrini, M. et al., 2001. Semin Thromb Hemost, 27:473-82). 이 최적 조건 하에서, 기준 분자의 선택된 H1과 글리칸의 H1 사이의 적분 비는 이들의 몰 비를 나타내고 글리칸 정량에 사용될 수 있다. Hep-2P,4P의 순도는 92%인 것으로 확인되었고, 이 값은 1H STD 및 31P NMR 적정 실험을 위한 리간드 농도를 추가로 계산하는 데 사용되었다.

1H STD NMR. 298K에서 5 mm TCI 크리오프로브를 갖춘 브루커 아반스 600 분광계에서 600 MHz에서 1H STD NMR 스펙트럼을 획득하였다. 8℃에서 컷오프 10 kDa을 가진 비바스핀(Vivaspin) 원심분리 필터를 사용하여 VSX Fab를 D₂O(0.15 M NaCl 및 0.3 mM EDTA-d16 함유) 중의 10 mM 포스페이트 완충제(pH 7.2)로 교환하였다. 각각의 리간드 5.5·10^-4 mmol(정량적 1H NMR에 의해 확인된 농도를 고려함)을 5.5·10^-6 mmol Fab와 함께, 0.15 M NaCl 및 0.3 mM EDTA를 함유하는 0.5 ㎖의 포스페이트 완충제(pH 7.2)에 용해시켜, 100:1 리간드-단백질 몰 비에 도달하였다. 1H STD NMR 스펙트럼 동안 1% 절단 및 각각 50 ms의 지속을 이용한 일련의 가우시안(Gaussian) 모양 펄스로 단백질의 선택적 방사선조사를 달성하였다. 단백질을 0.75 ppm(온(on)-공명) 및 40 ppm(오프(off)-공명)에서 방사선조사하였다. 원치 않는 자화를 파괴하기 위한 스포일(Spoil) 서열 및 단백질 신호를 억제하기 위한 스핀록(spinlock)을 사용하였다.

31P NMR 적정 실험. 3초의 재순환 지연 및 512회 스캔을 이용하여 298K의 브루커 아반스 500에서 500 MHz에서 31P NMR 스펙트럼을 획득하였다. 최종 47:1, 42:1, 30:1, 19:1, 10:1 리간드-Fab 몰 비에 도달하기 위해, 0.26·10^-4 mmol Fab를 함유하는 용액을 20 mg/㎖ 리간드 용액으로 적정하였고, 31P NMR 스펙트럼을 각각의 농도 점에서 획득하였다.

글리칸 및 VSX 복합체의 분자 모델링. 스위스독(SwissDock) 웹 서버를 사용하여 VSX 항체에 대한 리간드 2,4-P-Hep의 분자 도킹을 수행하였다. 5개의 CDR 루프에 결합된 리간드를 보여주는 고유 용액은 상위 20개의 용액들 중 6위를 차지하였다. 이 용액의 검사를 가능한 결합 모드로서 확인하고 추가 분석에 이용하였다. 그 다음, AMBER 역장(Force Field)(파라미터의 parm14.dat 세트) 및 소프트웨어 NAMD 2.12 분자 역학 엔진을 이용하여 명시적 물 용매(TIP3P 모델)에서 MD 시뮬레이션(20 ns)으로 분자 도킹으로부터의 VSX:글리칸의 입체구조를 개량하였다(Case, D.A. et al., AMBER 11, University of San Francisco, California; Jorgensen, W.l. et al., 1983. J. Chem. Phys., 79:926-935; Phillips, J.C. et al., 2005. J. Compt. Chem., 26:1781-802). 2,4-P-Hep-VSX 리간드-수용체 복합체 기하구조는 100회 실행 후 오토독 4.2(Morris, G.M. et al., 2009. J. Compt. Chem., 30:2785-91)를 이용한 자동 도킹에 의해 수득된 반면, 파라미터화는 1000명의 집단 크기를 포함하였고, 이때 최대 세대 수는 270,000이고 최대 에너지 평가 수는 2.5·10⁷이다. 리간드/수용체 입체구조 검색은 VSX가 고정된 상태로 남아 있는 동안 라마키안(Lamarckian) 유전 알고리즘 4.2를 적용하였고 2,4-P-Hep의 모든 16개의 2면각을 이용하였다. 리간드/수용체 상대적 초기 위치 및 방향을 모든 100회의 도킹 실행에서 무작위로 선택한 후, 2.0 Å의 허용오차 RMSD를 사용하여 수득된 자세를 클러스터링하였다. 가장 낮은 결합 에너지를 가진 클러스터 및 가장 높은 집단(-6.0 Kcal mol^-1 오토독 점수화 함수)은 도 5a 왼쪽에 보고된 구조에 따라 VSX 결합 포켓과 일치하는 2,4-P-Hep의 C6-C7 지방족 꼬리를 보여준다. 이전에 수득된 바와 같이, VSX 결합 포켓과 일치하는 Hep의 4-P 포스페이트 기를 특징으로 하는 복합체인 2,4-P-Hep-VSX의 선택된 기하구조로부터 시작하여 도킹의 추가 개량을 수행하였다. 이 추가 100회 실행에서, 오토독은 도 5a 우측에 따라, 이전 용액에 비해 약간 더 큰(-3.8 Kcal mol^-1) 추정된 결합 에너지를 가진 VSX 결합 포켓에 피팅되는 Hep의 4-P 포스페이트 기를 특징으로 하는 추가 글리칸-VSX 클러스터를 예측한다. 도킹 절차의 종료 시, C6-C7 지방족 꼬리 또는 4-P 포스페이트 기가 VSX 결합 포켓에 피팅되는 복합체 2,4-P-Hep-VSX의 두 도킹 자세를, 명시적 물 용매(TIP3P)에서 MD 시뮬레이션(약 40 ns)으로 더 개량하였다. GLYCAM06 역장을 이용하여 2,4-P-Hep 글리칸을 모델링하였다(Kirschner, K.N. et al., 2008. J. COmpt. Chem., 29:622-55; Holmberg, N. et al., 1999. Protein Eng., 12:851-6). MD 시뮬레이션 궤적의 시각화를 위해, 조작 및 역학적 분석 VMD 1.9.3 및 워돔(wordom) 0.22 소프트웨어를 사용하였다(Humphrey, W. et al., 1996. J. Mol. Graph, 14:33-8, 27-8; Seeber, M. et al., 2007. Bioinformatics, 23:2625-7). 이 MD 시뮬레이션에서, 상대적 리간드/수용체 거리 및 방향을 평가하고 분석하였고, 특히 2개의 가정된 결합 상태에서 Hep 역학을 제곱 평균 제곱근 변동(RMSF) 함수를 통해 비교하였다.

ADC의 구축. N-말단 GGG 소르타제 공여체 서열을 함유하는 펩타이드를, 소르타제 A 인식 서열 LPETGGG(서열번호 244)를 함유하는 mAb 중쇄의 C-말단에 라이게이션시켰다. mAb를 라이게이션 전에 150 mM NaCl/50 mM Tris(pH 7.5)로 완충제 교환하였다. 1.5 mg/㎖ mAb(150 kDa), 10 mM CaCl₂, 5.8 ㎍/㎖ 소르타제 A(BPS Bioscience, (21.7 kDa))에서 20 당량의 펩타이드를 사용하여 150 mM NaCl/50 mM Tris(pH 7.5)에서 최적화된 소르타제 라이게이션 조건을 수행하였다. 암실에서 18시간 동안 주위 온도에서 인큐베이션한 후, 샘플을 PBS로 10 ㎖ 총 부피까지 희석하고 FPLC로 정제하였다. 10 mM DTT에서 5 ㎍의 샘플을 65℃에서 15분 동안 가열함으로써 제조된 환원 항체를 사용하여 Q-TOF 질량 분광분석으로 접합 효율을 측정하였다.

혈청 안정성의 평가. 정상 인간 혈청(NHS)(Sigma S-7023)을 해동하고, 물로 희석하고, 13000 rpm에서 10분 동안 원심분리하였고, 상청액을 수조에서 37℃까지 가온하였다. 20 ㎕의 각각의 시험 제품을 2.0 ㎖ 환저 마이크로원심분리 튜브에 넣었다. 2 ㎖의 희석된 NHS를 각각의 튜브에 첨가하고 즉시 튜브를 볼텍싱하고 200 ㎕를, 40 ㎕의 15% 트리클로로아세트산(TCA)을 가진 새로운 마이크로원심분리 튜브로 옮겼다. 어세이 튜브를 시점 사이에 37℃의 회전 랙에 넣었다. TCA 튜브를 15분 동안 얼음 위에 놓은 후 13000 rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 각각의 튜브로부터 상청액을 모으고 분석을 위해 -20℃에서 동결하였다. 샘플을 최대 6시간 동안 다양한 시점에서 채취하고 처리하였다.

항미생물 활성의 평가. 96웰 마이크로타이터 플레이트에서 2배 연속 화합물 희석을 이용하여 CLSI 지침에 따라 MIC를 측정하였다. 요약하건대, 화합물을 모 플레이트 전체에 걸쳐 물로 희석한 다음, 2 ㎕를 어세이 플레이트에 스탬프로 찍어, 각각의 균주에 대해 하나의 플레이트를 시험하였다. 세균 균주를 37℃에서 한천 플레이트 상에서 밤새 하위배양하였다. 밤샘 플레이트를 사용하여 0.85% 식염수 중의 0.5 McFarland 배양물을 제조하였다. 이 농축된 배양물을 생장 배지로 약 5 x 10⁵개 세포/㎖까지 1:200 희석하였다. 모든 어세이 플레이트는 웰당 100 ㎕ 희석된 배양물을 제공받았다. 모든 플레이트를 37℃에서 밤새 두었다. 18시간 후, 거울 플레이트 판독기 및 반사된 백열 광을 사용하여 플레이트를 판독하였다. MIC는 생장을 적어도 80% 억제하는 화합물의 가장 낮은 농도로서 정의된다. MIC 이상의 농도를 가진 웰은 육안으로 판독할 때 생장이 없는 것으로 보일 것이다.

미생물 사멸을 평가하기 위해, 세균 세포를 37℃의 한천 플레이트 상에서 밤새 호기적으로 생장시켰다. 밤샘 플레이트를 사용하여 250 ㎖ 통기 플라스크에서 생장 배지의 30 ㎖ 배양물을 시딩하였다. 배양물을 150 rpm에서 진탕하면서 37℃에서 호기적으로 생장시켰다. A₆₀₀에서 생장을 모니터링하였고 중간 로그 생장에서 세균 세포를 수거하였다. 10 ㎖의 배양물을 4000xg에서 10분 동안 펠렛화하고 PBS + 1% BSA로 1회 세척한 후 2 ㎖ PBS + BSA에 재현탁하였다. 농축된 배양물을 사용하여, 1 x 10⁸개 세포/㎖의 농도를 제공하는 OD까지 PBS + BSA의 6 ㎖ 튜브를 시딩하였다. 배양물을 PBS + BSA로 1 x 10⁴개 세포/㎖까지 희석하였다. 시험 제품을 PBS + 1% BSA로 희석하고 시험된 농도당 50 ㎕를 96웰 폴리프로필렌 마이크로타이터 플레이트에 로딩하였다. 희석된 배양물 50 ㎕를 모든 시험 웰뿐만 아니라 화합물이 없는 대조군 웰에도 첨가하였다. 플레이트를 진탕하고 37℃에서 90분 동안 정적으로 인큐베이션하였다. 각각의 어세이 웰로부터 10 ㎕를 한천 플레이트 상에 플레이팅하고 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 화합물이 없는 대조군 웰에 대한 CFU에 비해 시험 웰에 대한 CFU로 퍼센트 사멸을 측정하였다.

혼합 미생물 어세이. 세균 균주를 37℃에서 한천 플레이트 상에서 밤새 호기적으로 생장시켰다. 밤샘 플레이트를 사용하여, 6 ㎖ PBS 중의 0.5 McFarland 배양물(대략 1 x 10⁸개 세포/㎖)을 확립하였다. 농축된 배양물을 PBS로 1 x 10⁴개 세포/㎖까지 희석하였다. 각각의 희석된 배양물 10 ㎕를 혈액 한천 플레이트(BAP) 상에 플레이팅하여 초기 농도를 측정하고, 순도를 확인하고, 균주 형태를 확립하였다. 각각의 희석된 배양물 1 ㎖를 합하고(총 3개) PBS를 사용하여 부피를 10 ㎖로 만들었다(1 x 10³개 세포/㎖의 각각의 균주). 25 ㎕의 혼합 배양물을 BAP 상에 평판도말하여, t=0에서 각각의 균주에 대한 CFU/㎖를 확립하였다. 시험 제품을 2.0 ㎖ 환저 에펜도르프(Eppendorf) 튜브에서 200 ㎕의 최종 부피로 PBS에 4배 연속 희석하였다. 화합물이 없는 대조군이 포함되었다. 200 ㎕의 혼합 세균 배양물을 모든 어세이 튜브에 첨가하였다. 튜브를 볼텍싱하고 즉시 각각의 튜브로부터 50 ㎕를 별도의 BAP 상에 평판도말하였다. 어세이 튜브를 시점 사이에 회전시키면서 37℃에서 인큐베이션하였다. 플레이팅 절차를 2시간 동안 1시간 간격으로 반복하였고 모든 플레이트를 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날, 상이한 형태에 의해 구별되는 각각의 균주에 대한 CFU를 기록하면서 모든 플레이트를 계수하고, 결과를 화합물이 없는 대조군과 비교하여 퍼센트 사멸로서 작도하였다.

호중구감소증 마우스 모델. CD1 마우스는 찰스 리버(Charles River)(영국 마게이트 소재)에 의해 공급되었고 특정 병원체를 갖지 않았다. 수컷 마우스는 수령 시 11 내지 15 g이었고 적어도 7일 동안 순응되었다. 마우스를 HEPA 여과된 멸균 공기에 항상 노출시키는 멸균된 개별 환기 케이지에 마우스를 수용하였다. 복강내 주사로 감염 4일 전에 200 mg/kg의 사이클로포스프아미드를 사용하고 감염 1일 전에 150 mg/kg의 사이클로포스프아미드를 사용하여 면역억제함으로써, 마우스를 호중구감소증 마우스로 만들었다. 면역억제 요법은 첫 번째 주사의 투여 후 24시간에서 시작되는 호중구감소증을 유발하고, 이 호중구감소증은 연구 전반에 걸쳐 계속된다. 슈도모나스 애루기노사 균주 ATCC 27853을 사용하여 생체내 보호를 평가하였다. 감염을 위해, 먼저 약 15 ㎖/kg으로 전달된 IP 주사를 통해 케타민/자일라진 마취 칵테일(90 mg/kg 케타민/9 mg/kg 자일라진)로 동물을 마취시켰다. 마우스 콧구멍 내로 비강내 점적함으로써(콧구멍당 20 ㎕, 콧구멍 사이에 5분), 0.04 ㎖ 접종물을 사용하여 마취된 마우스를 감염시키고 감염 후 약 10분 동안 스트링 랙 위에 똑바로 세운 자세로 유지하였다. 접종물 농도는 2.83 x 10⁵ CFU/㎖(약 1.14 x 10⁴ CFU/폐)이었다. 작용제를 실시예에 특정된 바와 같이 IN 또는 IP로 투여하였다. 동물의 임상 상태를 모니터링하였고 질환에 굴복한 동물을 인도적으로 안락사시켰다. 대다수의 비히클 마우스가 유의미한 임상 증상을 표시하는 때인 감염 후 약 24.5시간에서 연구를 종결하였다. 감염 후 24.5시간에서, 모든 남은 동물들의 임상 상태를 평가하였고, 이 동물들을 펜토바르비톤 과다용량으로 인도적으로 안락사시켰다. 동물 체중을 측정한 후 폐를 회수하고 칭량하였다. 프리셀리스 비드 비터(Precellys bead beater)를 이용하여 폐 샘플을 빙냉 멸균 포스페이트 완충 식염수에 균질화하였고; 균질화물을 슈도모나스 선택적 한천 상에서 정량적으로 배양하고 37℃에서 16시간 내지 24시간 동안 인큐베이션한 후, 콜로니를 계수하였다. 스테이츠디렉트(StatsDirect) 소프트웨어(버전 2.7.8)를 이용하여 데이터를 분석하였다. 비모수 크루스칼-왈리스(Kruskal-Wallis) 검정을 이용하여 조직 부하 데이터에 대한 모든 쌍별 비교(Conover-Inman)를 검정하였다.

급성 폐 감염 모델. 일부 약간 변형된 급성 폐 감염 모델을 이전에 기재된 바와 같이(3) 수행하였다. 요약하건대, C3H/H3N 암컷 6주령 내지 8주령 마우스의 전신 마취(케타민 및 자일라진을 사용한 복강내 주사) 후, 10 ㎕(1x10⁶ CFU)의 기준 균주 슈도모나스 애루기노사 PA14를 각각의 콧구멍에 접종하여 급성 폐 감염을 유도하였다. LB에서 생장된 PA14의 밤샘 배양물의 희석물로부터 접종물을 준비하였다. 마우스를 4일 동안 모니터링하였고 헝클어진 털, 혼수, 떨림, 높은 호흡수, 만졌을 때 움직일 수 없음 또는 옆으로 누운 후 스스로를 일어날 수 없음을 비롯한 사망의 임박한 징후를 보일 때 마우스를 인도적으로 안락사시켰다. 보호 어세이를 위해, 세균 챌린지 3시간 후에 15 mg/kg의 ADC 또는 대조군 화합물을 IP로 주사하였다.

참고에 의한 도입

본원에서 언급된 모든 간행물, 특허 및 수탁번호는 각각의 개별 간행물 또는 특허가 구체적 및 개별적으로 참고로 포함되는 것으로 표시된 것처럼 그의 전체가 본원에 참고로 포함된다.

균등물

본원의 조성물 및 방법의 특정 실시양태들이 논의되어 있지만, 상기 명세서는 예시하기 위한 것이고 제한하기 위한 것이 아니다. 본 발명의 많은 변경은 본 명세서 및 하기 청구범위의 검토 시 당분야에서 숙련된 자에게 자명해질 것이다. 본 발명의 전체 범위는 본 청구범위를 그의 전체 균등물 범위와 함께 참조하고 본 명세서를 이러한 변경과 함께 참조함으로써 결정되어야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> VISTERRA, INC. <120> ANTIBODY MOLECULE-DRUG CONJUGATES AND USES THEREOF <130> P2029-7036WO <140> <141> <150> 63/004,946 <151> 2020-04-03 <160> 270 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Tyr Pro Tyr His Gly Ile Thr Lys Tyr Asn Arg Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Leu Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Gly Ser Arg Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of 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<221> SITE <222> (1)..(40) <223> /note="This sequence may encompass 2-20 'Gly Ser' repeating units" <400> 262 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser 1 5 10 15 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser 20 25 30 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser 35 40 <210> 263 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 263 Ser Ser Asp Gly Asp 1 5 <210> 264 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 264 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu 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Claims

항체 분자 및 공유커플링된 펩타이드를 포함하는 항체 분자-약물 접합체(ADC)로서, 상기 항체 분자가 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고, 이때 VH가 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하고, VH가
(a) 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 또는
(b) 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3
을 포함하고;
상기 항체 분자가 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 이때 VL이 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하고;
상기 펩타이드가 서열번호 257의 아미노산 서열, 또는 서열번호 257의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.
제1항에 있어서, VH가 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나;
VH가 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 ADC.
제1항 또는 제2항에 있어서, VH가 서열번호 117의 아미노산 서열, 또는 서열번호 117의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
VL이 서열번호 135의 아미노산 서열, 또는 서열번호 135의 아미노산 서열과 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개 이하의 아미노산 잔기에 의해 상이하거나 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상동성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 것인 ADC.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 분자가 슈도모나스(Pseudomonas)(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa))에 결합할 수 있는 것인, 예를 들어, 항체 분자가 슈도모나스의 지질다당류(LPS), 예를 들어, 슈도모나스의 LPS의 내부 글리칸 모이어티에 결합할 수 있는 것인 ADC.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 분자가
(i) 예를 들어, 웨스턴 블롯에 의해 확인될 때, 이. 콜라이(E. coli) LPS;
(ii) 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 헵토스 또는 일인산화된 헵토스 유사체(예를 들어, 2-P-Hep 또는 4-P-Hep); 및/또는
(iii) 예를 들어, 전체 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 그람 양성 유기체 또는 포유동물 세포 중 하나 이상
에 결합하지 않거나 실질적으로 결합하지 않는 것인 ADC.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 분자가
(i) 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류;
(ii) 예를 들어, 생물층 간섭계 분석에 의해 확인될 때, 예를 들어, 이인산화된 2,4-P-Hep 단당류에 비해 감소된 결합으로, 이인산화된 만노스(2,4-P-Man);
(iii) 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 예를 들어, 약 20 내지 약 150 pM(예를 들어, 약 50 내지 약 120 pM)의 겉보기 결합력으로, 본원에 기재된 하나 이상의 슈도모나스 애루기노사 균주, 예를 들어, 카르바페넴(carbapenem), 항-슈도모나스 3세대 세팔로스포린(cephalosporin) 또는 플루오로퀴놀론(fluoroquinolone)에 대한 내성을 가진 하나 이상의 균주; 및/또는
(iv) 예를 들어, 전체 세균 세포 ELISA에 의해 확인될 때, 슈도모나스 애루기노사 이외의 슈도모나스 종, 예를 들어, 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) 또는 슈도모나스 스투트제리(Pseudomonas stutzeri) 중 하나 이상
에 결합하는 것인 ADC.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 분자가 단일클론 항체 분자, 인간화된 항체 분자, 단리된 항체 분자 또는 합성 항체 분자인 ADC.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 분자가 2개의 VH 및 2개의 VL을 포함하고;
임의적으로,
(i) 항체 분자가 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하고,
(ii) 항체 분자가 카파 또는 람다 쇄의 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하고,
(iii) 항체 분자가 Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일 쇄 Fv 단편(scFv)을 포함하는 것인 ADC.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드가
(i) 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개 또는 33개의 D-아미노산을 포함하거나, 펩타이드 내의 아미노산 잔기의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100%가 D-아미노산이고/이거나;
(ii) 예를 들어, 간접적으로(예를 들어, 불변 영역, 링커 또는 이들 둘 다를 통해) VH, 예를 들어, VH의 C-말단에 커플링되고/되거나;
(iii) 예를 들어, 소르타제 인식 서열(예를 들어, LPETGGG(서열번호 244))을 통해, 예를 들어, 소르타제 A(SrtA)를 사용하는, 효소 라이게이션에 의해 항체 분자에 커플링되고/되거나;
(iv) 소르타제 공여체 서열, 예를 들어, N-말단 GGG를 포함하는 것인 ADC.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 항체 분자와 펩타이드 사이에 링커, 예를 들어, n이 2 내지 20인 (Gly-Ser)n 링커 서열(서열번호 262)을 포함하고/하거나;
(ii) 예를 들어, 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 약 2 내지 약 8, 예를 들어, 약 2 내지 약 4의 펩타이드-대-항체 분자 비를 갖고/갖거나;
(iii) 예를 들어, 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 약 2의 펩타이드-대-항체 분자 비를 가진 ADC.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 약 2 ㎍/㎖ 내지 약 50 ㎍/㎖, 예를 들어, 약 3.1 ㎍/㎖ 내지 약 25 ㎍/㎖의 농도, 및/또는
(ii) 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 50% 이하, 예를 들어, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 이하만큼 상이한 농도
에서 슈도모나스 애루기노사에 대한 시험관내 살균 활성을 가진 ADC.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 슈도모나스 애루기노사에 대해 약 500 ㎍/㎖ 이상, 예를 들어, 800 ㎍/㎖ 이상의 평균 용해 농도(MLC);
(ii) 슈도모나스 애루기노사에 대해 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 50% 이하, 예를 들어, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 이하만큼 상이한 MLC;
(iii) 슈도모나스 애루기노사에 대해 약 500 ㎍/㎖ 이상, 예를 들어, 800 ㎍/㎖ 이상의 CC50(포유동물 세포의 50% 세포독성이 관찰되는 농도);
(iv) 슈도모나스 애루기노사에 대해 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1보다 더 높은, 예를 들어, 적어도 0.5배, 1배, 2배, 3배, 4배 또는 5배 더 높은 CC50; 및/또는
(v) 예를 들어, 혈액 샘플의 약물동력학 측정, 전신 영상화, 생체내 영상화, 장기 분포의 평가(예를 들어, ADC는 간에 실질적으로 또는 주로 분포하지 않음), ELISA 및/또는 질량 분광분석에 의해 확인될 때, 기준 ADC, 예를 들어, VSX-1에 비해 개선된 생체분포
를 가진 ADC.
2개의 VH 및 2개의 VL을 포함하는 항체 분자를 포함하는 ADC로서, VH가 서열번호 257의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 공유커플링되고;
(i) VH가 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나;
(ii) VH가 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고; VL이 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하고;
임의적으로, VH가 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하고;
임의적으로, 상기 펩타이드가 (Gly-Ser)n 링커를 통해 VH의 C-말단에 커플링된 것인 ADC.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 슈도모나스(예를 들어, 슈도모나스 애루기노사)와 관련된 세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한 ADC 또는 약학 조성물로서,
임의적으로,
(i) ADC가 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여되고;
(ii) ADC가 정맥내로, 피하로 또는 비강내로 또는 흡입에 의해 투여되고;
(iii) ADC가 세균 감염과 관련된 증상의 발병 전 또는 후에 투여되고;
(iv) 대상체가 폐렴, 요로 감염(UTI), 패혈증, 수막염, 설사, 연조직 감염, 피부 감염, 균혈증, 호흡기 감염, 심내막염, 복강내 감염, 패혈성 관절염, 골수염, CNS 감염, 안과 감염, 담낭염, 담관염, 수막염, 장티푸스, 식중독, 위장염, 장열, 세균성이질, 혈류 감염, 복강내 패혈증, 뇌농양, 수막염, 패혈증, 관절 감염, 뼈 감염, 위장 감염 또는 상처 감염 중 하나 이상을 갖고;
(v) 세균 감염이 병원내 감염 또는 병원 획득 감염이고;
(vi) 대상체가 인간 또는 동물이고;
(vii) 대상체가 면역손상된 환자 또는 건강 전문가이고;
(viii) 대상체가 HIV 감염 또는 AIDS, 암, 고형 장기 이식, 줄기 세포 이식, 겸상 세포 질환 또는 무비증, 선천성 면역 결핍, 만성 염증성 병태, 인공 와우, 영양실조 또는 뇌척수액 누출을 갖거나 가질 위험이 있고;
(ix) 대상체가 18세 이하, 15세 이하, 12세 이하, 9세 이하 또는 6세 이하이거나, 적어도 60세, 적어도 65세, 적어도 70세, 적어도 75세 또는 적어도 80세인 ADC 또는 약학 조성물.
제15항에 있어서, 방법이 제2 항미생물 작용제 또는 요법을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하고;
임의적으로, 제2 항미생물 작용제 또는 요법이 항생제 또는 파지 요법, 예를 들어, 폴리믹신(polymyxin)(예를 들어, 콜리스틴(colistin)), β-락탐(예를 들어, 카르바페넴, 예를 들어, 메로페넴(meropenem)), 아미노글리코사이드, 안사마이신(ansamycin), 카르바세펨(carbacephem), 카르바페넴, 세팔로스포린, 글리코펩타이드, 린코사마이드(lincosamide), 리포펩타이드, 마크롤라이드(macrolide), 모노박탐(monobactam), 니트로푸란(nitrofuran), 옥사졸리디논(oxazolidinone), 페니실린(penicillin), 페니실린 조합, 폴리펩타이드, 퀴놀론 또는 플루오로퀴놀론, 설폰아미드, 테트라사이클린(tetracycline), 마이코박테리아에 대한 약물, 아미카신(amikacin), 젠타마이신(gentamicin), 카나마이신(kanamycin), 네오마이신(neomycin), 네틸마이신(netilmicin), 토브라마이신(tobramycin), 파로모마이신(paromomycin), 스트렙토마이신(streptomycin), 스펙티노마이신(spectinomycin), 겔다나마이신(geldanamycin), 허비마이신(herbimycin), 또는 리팍시민(rifaximin), 로라카르베프(loracarbef), 에르타페넴(ertapenem), 도리페넴(doripenem), 이미페넴(imipenem)/실라스타틴(cilastatin), 메로페넴, 세파드록실(cefadroxil), 세파졸린(cefazolin), 세팔로틴(cefalotin), 세팔로씬(cefalothin), 세팔렉신(cephalexin), 세파클로르(cefaclor), 세파만돌(cefamandole), 세폭시틴(cefoxitin), 세프프로질(cefprozil), 세푸록심(cefuroxime), 세픽심(cefixime), 세프디니르(cefdinir), 세프디토렌(cefditoren), 세포페라존(cefoperazone), 세포탁심(cefotaxime), 세프포독심(cefpodoxime), 세프타지딤(ceftazidime), 세프티부텐(ceftibuten), 세프티족심(ceftizoxime), 세프트리악손(ceftriaxone), 세페핌(cefepime), 세프타롤린 포사밀(ceftaroline fosamil), 세프토비프롤(ceftobiprole), 테이코플라닌(teicoplanin), 반코마이신(vancomycin), 텔라반신(telavancin), 달바반신(dalbavancin), 오리타반신(oritavancin), 클린다마이신(clindamycin), 린코마이신(lincomycin), 댑토마이신(daptomycin), 아지쓰로마이신(azithromycin), 클라리쓰로마이신(clarithromycin), 디리쓰로마이신(dirithromycin), 에리쓰로마이신(erythromycin), 록시쓰로마이신(roxithromycin), 트롤레안도마이신(troleandomycin), 텔리쓰로마이신(telithromycin), 스피라마이신(spiramycin), 아즈트레오남(aztreonam), 푸라졸리돈(furazolidone), 니트로푸란토인(nitrofurantoin), 리네졸리드(linezolid), 포시졸리드(posizolid), 라데졸리드(radezolid), 토레졸리드(torezolid), 아목시실린(amoxicillin), 암피실린(ampicillin), 아즐로실린(azlocillin), 카르베니실린(carbenicillin), 클록사실린(cloxacillin), 디클록사실린(dicloxacillin), 플루클록사실린(flucloxacillin), 메즐로실린(mezlocillin), 메티실린(methicillin), 나프실린(nafcillin), 옥사실린(oxacillin), 페니실린(penicillin) g, 페니실린 v, 피페라실린(piperacillin), 페니실린 g, 테모실린(temocillin), 티카르실린(ticarcillin), 아목시실린/클라불라네이트(clavulanate), 암피실린/설박탐(sulbactam), 피페라실린/타조박탐(tazobactam), 티카르실린/클라불라네이트, 바시트라신(bacitracin), 콜리스틴, 폴리믹신 b, 시프로플록사신(ciprofloxacin), 에녹사신(enoxacin), 가티플록사신(gatifloxacin), 제미플록사신(gemifloxacin), 레보플록사신(levofloxacin), 로메플록사신(lomefloxacin), 목시플록사신(moxifloxacin), 날리딕스산(nalidixic acid), 노르플록사신(norfloxacin), 오플록사신(ofloxacin), 트로바플록사신(trovafloxacin), 그레파플록사신(grepafloxacin), 스파르플록사신(sparfloxacin), 테마플록사신(temafloxacin), 마페나이드(mafenide), 설파세타마이드(sulfacetamide), 설파디아진(sulfadiazine), 은 설파디아진, 설파디메톡신(sulfadimethoxine), 설파메티졸(sulfamethizole), 설파메톡사졸(sulfamethoxazole), 설파닐이미드(sulfanilimide), 설파살라진(sulfasalazine), 설피속사졸(sulfisoxazole), 트리메토프림(trimethoprim)-설파메톡사졸(코-트리목사졸(co-trimoxazole)), 설폰아미도크리소이딘(sulfonamidochrysoidine), 데메클로사이클린(demeclocycline), 독시사이클린(doxycycline), 미노사이클린(minocycline), 옥시테트라사이클린(oxytetracycline), 테트라사이클린, 클로파지민(clofazimine), 댑손(dapsone), 카프레오마이신(capreomycin), 사이클로세린(cycloserine), 에탐부톨(ethambutol), 에티온아미드(ethionamide), 이소니아지드(isoniazid), 피라진아미드(pyrazinamide), 리팜핀(rifampin), 리파부틴(rifabutin), 리파펜틴(rifapentine), 스트렙토마이신, 아르스페나민(arsphenamine), 클로람페니콜(chloramphenicol), 포스포마이신(fosfomycin), 푸시딘산(fusidic acid), 메트로니다졸(metronidazole), 무피로신(mupirocin), 플라텐시마이신(platensimycin), 퀴누프리스틴(quinupristin)/달포프리스틴(dalfopristin), 티암페니콜(thiamphenicol), 티게사이클린(tigecycline), 티니다졸(tinidazole), 트리메토프림, 레보플록사신, 시프로플록사신, 젠타마이신, 세프트리악손, 오플록사신, 아미카신, 토브라마이신, 아즈트레오남 또는 이미페넴/실라스타틴으로부터 선택된 항생제를 포함하고;
임의적으로, 제2 항미생물 작용제 또는 요법이 ADC의 투여 전에, ADC의 투여와 동시에, 또는 ADC의 투여 후에 투여되는 것인 ADC 또는 약학 조성물.
세균 감염을 억제하거나 감소시키기에 효과적인 양으로 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC 또는 제14항의 약학 조성물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 세균 감염을 억제하거나 감소시키는 방법으로서, 임의적으로 상기 ADC 또는 약학 조성물을 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 세포와 접촉시키는 것인 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC 또는 제14항의 약학 조성물; 및 이 ADC 또는 약학 조성물의 사용을 위한 지침서를 포함하는 키트.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC 또는 제14항의 약학 조성물을 포함하는 용기.
(a) 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC의 항체 분자의 VH, VL 또는 이들 둘 다;
(b) 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC의 항미생물 펩타이드;
(c) (a) 및 (b) 둘 다; 또는
(d) 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC
를 코딩하는 핵산 분자.
제20항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제20항의 핵산 분자 또는 제21항의 벡터를 포함하는 세포.
ADC의 생성을 허용하는 조건 하에서 제22항의 세포를 배양함으로써 ADC를 생성하는 단계를 포함하는, ADC의 제조 방법.
LPS에 결합하는 항체 분자를, 소르타제 매개 반응이 일어나게 하는 조건 하에서 소르타제의 존재 하에 항미생물 펩타이드 및 임의적으로 소르타제 공여체 서열을 포함하는 펩타이드와 접촉시킴으로써, ADC를 생성하는 단계를 포함하는, ADC의 제조 방법으로서, 임의적으로 상기 항체 분자가 소르타제 인식 서열, 링커 서열 또는 이들 둘 다를 포함하는 소르타제 수용체 서열을 포함하는 것인 방법.
세균 감염을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 세균 감염을 치료하거나 예방하기에 효과적인 양으로 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC 또는 제14항의 약학 조성물을, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
세균 감염을 치료하거나 예방하기 위한 의약의 제조에 있어서 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 ADC의 용도.