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KR20240035633A - Lair 신호 변환을 조정하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

Lair 신호 변환을 조정하기 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20240035633A
KR20240035633A KR1020247006978A KR20247006978A KR20240035633A KR 20240035633 A KR20240035633 A KR 20240035633A KR 1020247006978 A KR1020247006978 A KR 1020247006978A KR 20247006978 A KR20247006978 A KR 20247006978A KR 20240035633 A KR20240035633 A KR 20240035633A
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seq
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amino acid
antigen
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KR1020247006978A
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댈러스 벤자민 플라이스
린다 리우
솔로몬 랭거만
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넥스트큐어 인코포레이티드
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Publication date
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Abstract

LAIR-1을 조정하기 위한 조성물 및 이의 사용 방법이 제공된다. 예를 들어, LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 감소시키는 면역조정제가 제공된다. 이러한 작용제는 면역 반응의 증가를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증가시키기 위해서 사용될 수 있다. 예시적인 작용제는 (i)가용성 LAIR-2 폴리펩타이드 또는 융합 단백질, (ii) 가용성 LAIR 1 폴리펩타이드 또는 융합 단백질, (iii) 기능 차단 항-LAIR-1 항체, (iv) LAIR-1 양성 세포를 고갈시키는 항체 및 (v) 이들의 조합물을 포함한다. LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 증가시키는 면역조정제가 또한 제공된다. 이러한 작용제는 면역 반응의 감소를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 감소시키기 위해서 사용될 수 있다. 예시적인 작용제는 (i) 기능 활성화 항-LAIR-1 항체, (ii) 기능 차단 항-LAIR-2 항체 및 (iii) 이들의 조합물을 포함한다.

Description

LAIR 신호 변환을 조정하기 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING LAIR SIGNAL TRANSDUCTION}
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2016년 8월 3일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/370,334호 및 2017년 1월 25일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/450,300호에 대한 이익 및 우선권을 주장하며, 이들 둘 모두는 이들의 전문이 참고로 포함된다.
서열 목록에 대한 언급
2017년 8월 3일자로 생성되고, 136킬로바이트의 크기를 갖는 파일명 "LAIR1ST25.txt"로서 제출된 텍스트로서, 2017년 8월 3일자로 제출된 서열 목록은 37 C.F.R. § 1.52(e)(5)에 따라서 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은 일반적으로 면역조정, 보다 특별하게는 LAIR-1 신호전달을 조정하여 면역 반응을 증가 또는 감소시키는 조성물 및 방법 및 백혈병 세포 생존 및 자기 재생(self-renewal)의 직접적인 조절에 의해서 백혈병을 치료하는 조성물 및 방법에 관한 것이다.
백혈구-연관 면역글로불린-유사 수용체-1(Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1: LAIR-1)은 다수의 면역 세포 상에서 발현되고, 2개의 세포질 면역수용체 타이로신-기반 저해성 모티프(ITIM) 도메인을 통해서 저해성 신호전달을 발휘하는 저해성 세포 표면 수용체이다(Verbrugge et al., 2006, J. Leukoc. Biol. 79:828-836). LAIR-1은 다수의 콜라겐, 보체 성분 C1q, 및 계면활성제 단백질 D(SP-D)에 의해서 가교결합되어 면역 세포 성숙, 증식 및 탈과립화를 저해하는 음성 신호전달을 유도한다(Lebbink et al., 2009, Matrix Biol. 28:202-210; Meyaard., 2008, J. Leukoc. Biol. 83:799-803). 마우스가 아닌, 인간 게놈은 가용성 LAIR-2 단백질을 암호화한다(Sun et al., 2014, Gene 552:140-145). LAIR-2 단백질은 LAIR-1과 동일한 리간드에 결합하고, 따라서 LAIR-1을 통한 저해성 신호를 감소시키기 위한 디코이(decoy)로서 기능할 수 있다.
LAIR-1 저해성 신호전달은 자가면역 질환, 예컨대, 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 자가면역 갑상선 질환 및 죽상동맥경화증뿐만 아니라 접촉 과민증을 예방할 수 있다(Sun et al., 2014, Gene 552:140-145). 만성 림프구성 백혈병 세포 상에서의 LAIR-1의 감소된 발현은 증가된 질환과 연관된다(Poggi et al., 2008, Leukemia 22:980-988; Perbellini et al., 2014, Haematolagica 99:881-887). LAIR-1은 또한 상피 난소암 세포 및 다른 인간 종양 상에서 발현되는 것으로 밝혀져 있지만, 고형 종양 상에서 발현되는 LAIR-1의 기능은 불명확하다(Meyaard et al., 1997, Immunity 7:283-290; Cao et al., 2015, Biochem. Biophys. Res. Commun. 458:399-404).
급성 골수성 백혈병(AML) 세포 및 가능하게는 급성 림프모구성 백혈병(ALL) 세포 상에서의 LAIR-1 발현은 이들 세포의 자기 재생 능력 또는 '줄기능(stemness)'을 유지하기 위해서 백혈병 줄기세포의 아포토시스 및 분화를 저해하는 포스파타제 독립적인 LAIR-1-SHP-1-CAMK1-CREB 신호전달 경로를 통한 이의 성장에 본질적인 것으로 밝혀져 있다(Kang et al., 2015, Nat. Cell Biol. 17:665-677).
함께, LAIR-1에 대한 축적된 데이터는, 면역 항상성에서의 중요한 역할을 나타내지만, 질환 및 장애의 치료를 위해서 LAIR-1을 조절하기 위한 조성물 및 방법에 대한 필요성이 존재한다.
따라서, 본 발명의 목적은 LAIR-1 음성 신호전달을 증가시키는 조성물 및 염증성 질환 및 장애 및 자가면역 질환의 치료를 위한 이의 사용 방법을 제공한다.
본 발명의 목적은 LAIR-1 음성 신호전달을 감소시키는 조성물 및 암 및 감염성 질환의 치료를 위한 이의 사용 방법을 제공하는 것이다.
LAIR-1을 조정하기 위한 조성물 및 이의 사용 방법이 제공된다. 예를 들어, LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 신호 변환 또는 이들의 조합을 감소시키는 면역조정제가 제공된다. LAIR-1은 예를 들어, 골수 세포, T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 이들의 조합물에 의해서 발현될 수 있다. 골수 세포는 항원-제시 세포, 예를 들어, 단핵구, 대식세포, 또는 수지상 세포일 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 상기 세포 유형 중 하나 이상을 특이적으로 표적으로 한다.
개시된 작용제는 면역 반응의 증가를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증가시키기 위해서 사용될 수 있다. 면역 반응은 예를 들어, 항원에 대한 1차 면역 반응이거나 또는 효과기 세포 기능의 증가, 예컨대, T 세포의 항원-특이적 증식의 증가, T 세포에 의한 사이토카인 생산의 향상, 분화의 자극 또는 이들의 조합일 수 있다. 예시적인 작용제는 (i) 가용성 LAIR-2 폴리펩타이드 또는 융합 단백질, (ii) 가용성 LAIR-1 폴리펩타이드 또는 융합 단백질, (iii) 기능 차단 항-LAIR-1 항체, (iv) LAIR-1 양성 세포를 고갈시키는 데 사용될 수 있는 항체 및 (v) 이들의 조합물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역조정제는 LAIR-1의 길항제이다.
특정 실시형태에서 작용제는 LAIR-2 융합 단백질, 예를 들어, LAIR-2의 세포외 도메인 또는 면역글로불린 도메인에 연결된 이의 기능성 변이체를 포함하는 융합 단백질이다. 예시적인 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 실시형태에서 작용제는 LAIR-2 단백질 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체이다. LAIR-2 단백질 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체는 서열번호 6에 대해서 적어도 80%, 90%, 95% 또는 100% 서열 동일성을 가질 수 있다.
작용제는 LAIR-1 융합 단백질, 예를 들어, LAIR-1의 세포외 도메인 또는 면역글로불린 도메인에 연결된 이의 기능성 변이체를 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예시적인 LAIR-1 융합 단백질은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 실시형태에서, 작용제는 가용성 LAIR-1 단백질 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체이다. 예를 들어, 가용성 LAIR-1 단백질은 LAIR-1의 세포외 도메인 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체로 이루어질 수 있다. 예시적인 가용성 단백질은 서열번호 2와 적어도 80%, 90%, 95% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다.
대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법은 전형적으로 이를 필요로 하는 대상체에게 LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 신호 변환 또는 이들의 조합을 감소시키는 유효량의 면역조정제를 투여하는 단계를 포함한다. 대상체는 예를 들어, 암 또는 감염성 질환을 가질 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상체, 암 또는 질환은 LAIR-1의 증가된 발현, LAIR-1 리간드의 증가된 발현, LAIR-2의 감소된 발현 또는 이들의 조합을 특징으로 한다. 특정 실시형태에서, 암은 난소암, 폐암, 위장암, 급성 골수성 백혈병(AML) 또는 급성 림프성 백혈병(ALL)이다. 작용제는 백신 또는 이의 성분을 갖는 단일 조성물로서 동시에 또는 조합하여 투여될 수 있다.
LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 증가시키는 면역조정제가 또한 제공된다. 이러한 작용제는 면역 반응의 감소를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 감소시키기 위해서 사용될 수 있다. 예시적인 작용제는 (i) 기능 활성화 항-LAIR-1 항체, (ii) 기능 차단 항-LAIR-2 항체 및 (iii) 이들의 조합물을 포함한다.
일 실시형태는 1E11, 1G7, 4B3, 5A6, 5E1, 6B2, 6F4, 6G6, 7G3, 9H6, 11B3, 12E10a 및 12E10b로 이루어진 군으로부터 선택된 하이브리도마에 의해서 생산된 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 1E11, 1G7, 4B3, 5A6, 5E1, 6B2, 6F4, 6G6, 7G3, 9H6, 11B3, 12E10a 및 12E10b로 이루어진 군으로부터 선택된 하이브리도마 중 하나 이상에 의해서 생산된 항체의 적어도 하나의 경쇄 또는 적어도 하나의 중쇄를 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107 또는 115에 따른 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄와 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄를 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103 또는 111에 따른 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄와 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄를 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107 또는 115에 따른 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄와 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄, 및 서열번호 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103 또는 111에 따른 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄를 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 20 내지 22, 24 내지 26, 28 내지 30, 32 내지 34, 36 내지 38, 40 내지 42, 44 내지 46, 48 내지 50, 52 내지 54, 56 내지 58, 60 내지 62, 64 내지 66, 68 내지 70, 72 내지 74, 76 내지 78, 80 내지 82, 84 내지 86, 88 내지 90, 92 내지 94, 96 내지 98, 100 내지 102, 104 내지 106, 108 내지 110, 112 내지 114 및 116 내지 118로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역(CDR)의 군으로부터 선택된 CDR을 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 20 내지 22, 24 내지 26, 28 내지 30, 32 내지 34, 36 내지 38, 40 내지 42, 44 내지 46, 48 내지 50, 52 내지 54, 56 내지 58, 60 내지 62, 64 내지 66, 68 내지 70, 72 내지 74, 76 내지 78, 80 내지 82, 84 내지 86, 88 내지 90, 92 내지 94, 96 내지 98, 100 내지 102, 104 내지 106, 108 내지 110, 112 내지 114 및 116 내지 117로 이루어진 군으로부터 선택된 복수의 CDR을 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다. 복수의 CDR은 2 내지 12개일 수 있다.
또 다른 실시형태는 서열번호 120 또는 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 갖는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 126 또는 서열번호 128에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 갖는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 132 또는 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 갖는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 138 또는 서열번호 140에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 142에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 갖는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 124, 130, 136 또는 142에 따른 경쇄 아미노산 서열 및/또는 서열번호 120, 122, 126, 128, 132, 134, 138 또는 140에 따른 중쇄 아미노산을 갖는 항체를 암호화하는 핵산 서열을 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107 또는 115가변 경쇄 및/또는 서열번호 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103 또는 111에 따른 가변 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 제공한다. 경쇄 및/또는 중쇄를 암호화하는 핵산은 발현 벡터의 부분일 수 있다. 핵산은 세포에 의해서 발현될 수 있다. 발현은 유도적 또는 구성적일 수 있다.
또 다른 실시형태는 LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 구성적으로- 또는 유도적으로-발현하는 세포를 제공하며, 여기서 세포는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 또는 이들의 조합에 따른 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 갖는다.
또 다른 실시형태는 LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 구성적으로 또는 유도적으로 발현하는 세포를 제공하며, 여기서 세포는 서열번호 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142 또는 이들의 조합에 따른 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 갖는다.
대상체에서 면역 반응을 감소시키는 방법은 전형적으로 이를 필요로 하는 대상체에게 LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 증가시키는 유효량의 면역조정제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 염증, 자가면역 장애를 갖는다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 류마티스 관절염을 갖는다.
일부 실시형태에서, 대상체 또는 질환 또는 병태는 LAIR-1의 감소된 발현, LAIR-1 리간드의 감소된 발현, LAIR-2의 증가된 발현 또는 이들의 조합을 특징으로 한다.
개시된 방법 중 임의의 것은 면역조정제 단독으로 또는 1종 이상의 추가적인 치료제와 조합하여 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
일 실시형태는 대상체에게 LAIR-1 단클론성 항체, 가용성 LAIR-1 폴리펩타이드, 가용성 LAIR-2 폴리펩타이드, LAIR-1 융합 단백질, LAIR-2 융합 단백질 또는 이들의 조합물을 포함하는 유효량의 약제학적 조성물을 투여하여 백혈병 세포에서 LAIR-1 신호 변환을 저해 또는 감소시키고, 이에 의해서 백혈병 세포 생존을 저해하거나 백혈병 세포에 대한 항-종양 면역 반응을 촉진시킴으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 백혈병을 치료하는 방법을 제공한다. 백혈병은 급성 골수성 백혈병일 수 있다.
일 실시형태는 치료를 필요로 하는 대상체의 세포를 검정하여 그 세포가 LAIR, LAIR의 결합 파트너 또는 이들 모두를 발현하는지의 여부를 결정함으로써 항-LAIR 결합 모이어티를 사용하여 치료의 효능을 평가 또는 예측하는 방법을 제공한다. 검정될 예시적인 세포는 대상체로부터 수득된 암 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 예시적인 암 세포는 급성 골수성 백혈병(AML) 세포를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 다수의 상호작용 저해성 수용체를 발현하는 암 세포는 항-LAIR 결합 모이어티를 사용하는 치료에 대해서 더 양호하게 반응하는 것으로 여겨진다. 예시적인 LAIR 결합 파트너는 막관통 콜라겐(XIII, XVII 및 XXIII) 및 LILRB4를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 도 3은 암 세포 상의 LAIR-1 또는 LAIR-1의 결합 파트너의 존재를 기초로 한 예측된 치료 결과를 나타낸다.
일 실시형태는 서열번호 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18에 따른 융합 단백질을 제공한다.
도 1A는 클론 1E11, 1G7, 4B3, 5A6, 5E1, 6B2, 6F4, 6G6, 7G3, 9H6, 11B3, 12E10a 및 12E10b로부터의 항-LAIR-1 항체 내의 가변 경쇄의 아미노산 서열을 나타낸 표. 도 1B는 클론 1E11, 1G7, 4B3, 5A6, 5E1, 6B2, 6F4, 6G6, 7G3, 9H6, 11B3 및 12E10(a 및 b)로부터의 항-LAIR-1 항체 내의 가변 중쇄의 아미노산 서열을 나타낸 표.
도 2A는 제시된 하이브리도마로부터의 가변 경쇄의 다중 방식 정렬 그래프. 도 2B는 제시된 하이브리도마로부터의 가변 중쇄의 다중 방식 정렬 그래프.
도 3은 LAIR-1, LAIR-1 결합 파트너 또는 이들의 조합의 발현을 기초로 한 예상된 치료 결과를 나타낸 표.
도 4는 면역 기능 및 항상성의 LAIR 조절을 도시한 개략적인 다이어그램.
도 5는 치료제로서의 LAIR-2 Fc 및 LAIR-1 단클론성 항체(mAb)의 개략적인 다이어그램.
도 6A는 LAIR-2 Fc의 SDS PAGE 젤을 나타낸 도면. 도 6B는LAIR-2 Fc의 크기 배제 크로마토그램을 나타낸 도면.
도 7A는 LAIR-2 Fc로 염색되고, 그 후에 항-hIg-PE로 염색된 K562-Col17 세포의 형광-활성화 세포 분류(FACS) 히스토그램. 도 7B는 LAIR-2 Fc로 염색되고, 그 후에 항-hIg-PE로 염색된 대조군 세포의 FACS 히스토그램. 도 7C는 LAIR-1 Fc로 염색되고, 그 후에 항-hIg-PE로 염색된 대조군 세포의 FACS 히스토그램. 도 7D는 LAIR-1 Fc로 염색되고, 그 후에 항-hIg-PE로 염색된 대조군 세포의 FACS 히스토그램. 도 7E는 LAIR-1 Fc 및 LAIR-2 Fc의 비-환원 SDS-PAGE 젤. 도 7F는 LAIR-1 Fc 및 LAIR-2 Fc의 환원 SDS-PAGE 젤.
도 8A는 α-LAIR-1로 염색된 주카트(Jurkat) T 세포의 FACS 히스토그램. 도 8B는 LAIR-1 Fc로 염색된 주카트 T 세포의 FACS 히스토그램. 도 8C는 LAIR-2 Fc로 염색된 주카트 T 세포의 FACS 히스토그램. 도 8D는 α-LAIR-1로 염색된 K562 Col 17 세포의 FACS 히스토그램. 도 8E는 LAIR-1 Fc로 염색된 K562 Col 17 세포의 FACS 히스토그램. 도 8F는 LAIR-2 Fc로 염색된 K562 Col 17 세포의 FACS 히스토그램. 도 8G는 α-LAIR-1로 염색된 THP-1 AML 세포의 FACS 히스토그램. 도 8H는 LAIR-1 Fc로 염색된 K562 Col 17 세포의 FACS 히스토그램. 도 8I는 LAIR-2Fc로 염색된 K562 Col 17 세포의 FACS 히스토그램.
도 9A는 % NF-kB-GFP+ 대 항-CD3(㎍/㎖)의 선 그래프. LAIR-2 Fc(●), 대조군 Fc(■), 및 배지(▲). 도 9B는 NFAT-Lucia(RLU) 대 단백질(㎍/㎖)의 선 그래프. LAIR-2 Fc(●), 및 대조군 Fc(■). 도 9C는 IL-2(pg/㎖) 대 10㎍/㎖의 단백질의 막대 그래프; LAIR-2 Fc의 경우 좌측 및 대조군 Fc의 경우 우측. 도 9D는 TNF-α(pg/㎖) 대 10㎍/㎖의 단백질의 막대 그래프; LAIR-2 Fc의 경우 좌측 및 대조군 Fc의 경우 우측.
도 10A는 LAIR-2 Fc(●)가 대조군 Fc(■)에 비해서 용량 의존적인 방식으로 THP-1 세포에 결합한다는 것을 나타내는 MFI 대 단백질(㎍/㎖)의 선 그래프. 도 10B는 막대 그래프이다. 도 10B는 1㎍/㎖ LPS 및 LAIR-2 Fc(각각의 쌍의 우측 칼럼) 또는 대조군 Fc(각각의 쌍의 좌측 칼럼)로 처리된 THP-1 세포에 대한 IRF(인터페론 조절 인자) 유도 - RLU의 막대 그래프. 도 10C는 RPMI 배지 및 LAIR-2 Fc(각각의 쌍의 우측 칼럼) 또는 대조군 Fc(각각의 쌍의 좌측 칼럼)로 처리된 THP-1 세포에 대한 IRF 유도 - RLU의 막대 그래프.
도 11A는 LAIR-2 Fc(●) 또는 대조군 Fc(▼)로 처리된 CD4+ T 세포에 대한 CFSE 희석된 세포 집단 대 OKT3(㎍/㎖)에 의해서 측정된 % T 세포 증식의 선 그래프. 도 11B는 LAIR-Fc(●) 또는 대조군 Fc(▼)로 처리된 CD8+ 세포에 대한 % T 세포 증식 CFSE 증식 대 OKT3(㎍/㎖)의 선 그래프.
도 12A는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1710 CD3+CD4+ T 세포의 히스토그램. 도 12B는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1710 CD3+CD8+ T 세포의 히스토그램. 도 12C는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1710 CD3-CD16+CD56+ NKC 세포의 히스토그램. 도 12D는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1710 CD14+ 단핵구의 히스토그램. 도 12E는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1711 CD3+CD4+ T 세포의 히스토그램. 도 12F는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1711 CD3+CD8+ T 세포의 히스토그램. 도 12G는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1711 CD3-CD16+CD56+ NKC 세포의 히스토그램. 도 12H는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1711 CD14+ 단핵구의 히스토그램. 도 12I는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1712 CD3+CD4+ T 세포의 히스토그램. 도 12J는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1712 CD3+CD8+ T 세포의 히스토그램. 도 12CK는 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1712 CD3-CD16+CD56+ NKC 세포의 히스토그램. 도 12L은 LAIR-2 Fc로 처리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 공여자 1712 CD14+ 단핵구의 히스토그램.
도 13은 생체내에서 OT-1 T 세포 확장에 대한 처리의 다이어그램. 도 13B는 LAIR-2 Fc(□) 또는 대조군 Fc(○)로 처리된 세포에 대한 총 CD8+ T 세포의 % OT-1(공여자) 대 OT-1 이식일의 선 그래프.
도 14A는 오브알부민(OVA) 펩타이드 없이 CD45.1 비장세포로 시험감염된 마우스에서 CFSE 수준 및 비의 주사전 평가를 나타낸 유세포 분석 히스토그램. 도 14B는 OVA 펩타이드가 적재된 CD45.1 비장세포(CFSE 고)로 시험감염된 마우스에서 CFSE 수준 및 비의 주사전 평가를 나타낸 유세포 분석 히스토그램. 도 14C는 OVA 펩타이드가 없이 적재된(CFSE 저) 및 OVA 펩타이드가 적재된 CD45.1 비장세포(CFSE hi)로 시험감염된 마우스에서 CFSE 수준 및 비의 주사전 평가를 나타낸 세포 분석 히스토그램. 도 14D는 비장세포 전달 48시간 후 세포 분석 히스토그램: 미경험 대조군(OT-1 없음)을 사용한 비장 내의 표지된 세포(CD45.1+ 세포 상에서 게이팅형)(숙주 세포는 CD45.2임)의 평가. 도 14E는 비장세포 전달 48시간 후 세포 분석 히스토그램: OT-1 대조군 Fc로 처리된 비장 내의 표지된 세포(CD45.1+ 세포 상에서 게이팅형)(숙주 세포는 CD45.2임)의 평가. 도 14F는 비장세포 전달 48시간 후 세포 분석 히스토그램: OT-1 LAIR-2 Fc로 처리된 비장 내의 표지된 세포(CD45.1+ 세포 상에서 게이팅형)(숙주 세포는 CD45.2임)의 평가. 도 14G는 Fc로 처리된 마우스(좌측 칼럼) 및 LAIR-2 Fc로 처리된 마우스(우측 칼럼)에 대한 특이적 용해 % = [1-(OT-I이 없는 대조군 비율)/실험 비율)] x 100으로서 계산된 특이적 용해 %의 막대 그래프.
도 15A는 0일에 주사된 5e6개 ID8-OVA 종양 세포 복강내 주사(ip)를 사용한 치료 모델의 다이어그램. OT-I T 세포를 종양 3주 후에 ip로 주사하였다. 200ug의 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc로의 처리를 T 세포 전달 후 1일에 시작하여 총 5회 용량 동안 4일마다 수행하였다. 도 15B는 체중 증가 백분율(종양 부담) 대 ID8.OVA 접종 후 일의 선 그래프. 대조군(○); LAIR-2 Fc(●). 도 15C는 생존 백분율 대 ID8.OVA 접종 후 일의 선 그래프. 대조군(파선), LAIR-2 Fc(실선).
도 16은 생존 대 ID8-OVA 종양 세포가 주사되고, T 세포 전달 후 1일에 시작하여 총 5회 용량 동안 4일마다 수행된 200ug의 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc 또는 제시된 치료제로 처리된 마우스에서의 ID8.OVA 접종 후 일 수. 데이터는, LAIR-2 Fc와 항-PD-1이 난소암에서 효과적인 병용 면역요법임을 나타낸다. (□) 시스플라틴, (△) 시스플라틴 + LAIR-2 Fc, (○) 항-PD-1 + LAIR-2 Fc, (▽) 항-PD-1, (◇) LAIR-2 Fc, (육각형) 대조군 IgG.
도 17A는 LAIR-2 Fc를 사용한 예시적인 림프종 치료 요법의 다이어그램. 도 17B는 대조군 Fc(○) 또는 LAIR-2 Fc(□)로 처리된 마우스에서 종양 체적 대 종양 접종 후 일 수의 선 그래프. 도 17C는 대조군 Fc(파선) 또는 LAIR-2 Fc(실선)로 처리된 마우스에서 생존 백분율 대 종양 접종 후 일 수의 선 그래프의 선 그래프.
도 18은 좌측에서 우측으로, 하기 세포주 각각의 군에 대한 제시된 (단클론성 항체) mAb의 결합에 대해서 양성인 백분율의 막대 그래프: HL-60(LAIR-1 +), MV-4-11(LAIR-1 +) K562-LAIR-1(형질주입됨), 및 U266B1(음성 대조군).
도 19는 콜라겐 I 및 III에 대한 LAIR-1 Fc 결합의 차단 및 향상을 나타내는 제시된 mAb에 대한 흡광도(450㎚)의 막대 그래프. 콜라겐 I은 좌측 칼럼이고, 콜라겐 III은 각각의 mAb에 대해서 우측 칼럼이다.
도 20은 C1q 및 SP-D에 대한 결합에 대한 제시된 mAb의 흡광도(450㎚)의 막대 그래프. 각각의 세트에 대해서 좌측 칼럼은 C1q이고, 우측 칼럼은 SP-D이다.
도 21은 LAIR-1 키메라 mAb 에피토프 비닝 검정(binning assay)의 결과를 나타낸 표. 단일 밑줄 항체는 차단되지 않음을 나타낸다. 이중 밑줄 항체는 차단을 나타낸다. 동일한 mAb가 제1 및 제2 mAb(밑줄 없는 점이 있는 배경)로서 사용되는 경우 관찰될 수 있는 바와 같이, 동일한 에피토프에 결합하는 mAb는 결합 포화로 인해서 LAIR-1 Fc에 대한 결합으로부터 차단될 것이다.
도 22은 LAIR-1 키메라 mAb 비닝 맵의 다이어그램. 이러한 맵은 mAb의 상당한 중첩이 존재하는 반면, 다수가 LAIR-1 분자 상의 별개의 부위를 차지한다는 것을 입증한다.
도 23은 옥텟(Octet) RED96 장비(포르테바이오(ForteBio))를 사용하여 수행된 제시된 LAIR-1 mAb에 대한 최적화된 친화도 측정을 나타내는 표.
도 24A는 mAb가 플레이트에 코팅된 경우 THP-1 세포에서 인터페론 리포터 활성도의 차등적 유도를 나타내는 제시된 LAIR-1 mAb에 대한 IRF 유도 - RLU의 막대 그래프. 도 24B는 mAb가 가용성 단백질로서 첨가된 경우 THP-1 세포에서 인터페론 리포터 활성도의 차등적 유도를 나타내는 제시된 LAIR-1 mAb에 대한 IRF 유도 - RLU의 막대 그래프.
도 25A는 플레이트가 0.5㎍/㎖에서 항-CD3(OKT3)으로 코팅된 경우 주카트 T 세포 리포터 활성도의 유도를 나타내는 제시된 mAb에 대한 NFAT 유도 - RLU의 막대 그래프. OKT3의 흡인 이후에, LAIR-1 mAb 또는 LAIR-2 Fc 및 대조군 Fc를 10ug/㎖로 24시간 동안 코팅하였다. 주카트 T 세포 NFAT-Lucia 경로 리포터 세포(인비보젠(Invivogen))를 첨가하기 전에, 비결합된 단백질을 흡인시켰다. 주카트 T 세포를 200ul 총 체적으로 50,000세포/웰로 플레이팅하였다. 48시간에서, 10ul의 상청액을 제거하고, 개별 플레이트로 전달하였다. Quanti-Luc(인비보젠)를 프로토콜에 따라서 첨가하였다. 발광을 퍼킨 엘머 엔비젼 플레이트 판독기(Perkin Elmer Envision plate reader)를 사용하여 평가하였다. 도 25B는 LAIR-1 mAb, LAIR-2 Fc 및 대조군 Fc가 가용성 형태로 첨가되는 경우 도 25a에서와 같이 주카트 T 세포 리포터 활성도의 유도를 나타내는 제시된 mAb에 대한 NFAT 유도 - RLU의 막대 그래프.
I. 정의
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 분자는 결합이 이의 동족 항원에 대해서 항체의 특이성 및 친화도를 나타내는 경우 제2 분자에 "면역특이적으로 결합"할 수 있다고 지칭된다. 항체는 결합이 면역글로불린 분자의 항원 인식 부위에 관련되는 경우 항원의 표적 영역 또는 입체배좌("에피토프")에 면역특이적으로 결합할 수 있다고 지칭된다. 특정 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체는 예를 들어, 면역검정, BIACORE(등록상표) 검정 또는 관련 기술 분야에 공지된 다른 검정에 의해서 결정되는 바와 같이, 다른 항원이 항원 인식 부위에 의해서 인식되는 약간의 서열 또는 입체배좌 유사성을 갖는 경우 더 낮은 친화도로 다른 항원에 결합할 수 있지만, 완전히 비관련된 항원에 결합하지 않을 것이다. 그러나, 일부 실시형태에서, 항체(및 이의 항원 결합 단편)는 다른 항원과 교차 반응하지 않을 것이다. 항체는 또한 항원 인식 부위, 예컨대, Fc 영역에 관여되지 않은 분자의 다른 영역/도메인 내의 결합 도메인으로 인해서, 예컨대, FcR 수용체에 대해서 면역특이적이지 않은 방식으로 다른 분자에 결합할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 분자는 결합이 이의 동족 결합 리간드에 대해서 수용체의 특이성 및 친화도를 나타내는 경우 제2 분자에 "생리특이적으로(physiospecifically) 결합한다"고 지칭된다. 분자는 하나를 초과하는 다른 분자에 생리특이적으로 결합할 수 있을 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 "가변 영역" 항원 인식 부위를 보유하는 면역글로불린 분자를 나타내도록 의도된다. 용어 "가변 영역"은 면역글로불린의 이러한 도메인을 항체에 의해서 넓게 공유된 도메인(예컨대, 항체 Fc 도메인)과 구별하도록 의도된다. 가변 영역은 잔기가 항원 결합에 책임이 있는 "초가변 영역"을 포함한다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기(즉, 전형적으로 경쇄 가변 도메인 내의 대략적으로 잔기 24 내지 34(L1), 50 내지 56(L2) 및 89 내지 97(L3)에서 그리고 중쇄 가변 도메인 내의 대략적으로 잔기 27 내지 35(H1), 50 내지 65(H2) 및 95 내지 102(H3); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) 및/또는 "초가변 루프로부터의 잔기"(즉, 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 26 내지 32(L1), 50 내지 52(L2) 및 91 내지 96(L3) 및 중쇄 가변 도메인 내의 26 내지 32(H1), 53 내지 55(H2) 및 96 내지 101(H3); Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917)를 포함한다. "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본 명세서에 정의된 바와 같이 초가변 영역 잔기가 아닌 가변 도메인 잔기이다. 용어 항체는 단클론성 항체, 다중특이적 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 합성 항체, 키메라 항체, 낙타화 항체(예를 들어, 문헌[Muyldermans et al., 2001, Trends Biochem. Sci. 26:230; Nuttall et al., 2000, Cur. Pharm. Biotech. 1:253; Reichmann and Muyldermans, 1999, J. Immunol. Meth. 231:25]; 국제 공개 제WO 94/04678호 및 제WO 94/25591; 미국 특허 제6,005,079호), 단일 쇄 Fv(scFv)(예를 들어, 문헌[Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)] 참고), 단일 쇄 항체, 다이설파이드-연결된 Fv(sdFv), 인트라바디, 및 항-유전자형(항-Id) 항체(예를 들어, 항체에 대한 항-Id 및 항-항-Id 항체 포함)를 포함한다. 특히, 이러한 항체는 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류의 면역글로불린 분자를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 항체의 "항원 결합 단편"은 항체의 상보성 결정 영역("CDR") 및 임의로 항체의 "가변 영역" 항원 인식 부위를 포함하고, 항원에 면역특이적으로 결합하는 능력을 나타내는 프레임워크 잔기를 함유하는 항체의 하나 이상의 부분을 지칭한다. 이러한 단편은 Fab', F(ab')2, Fv, 단일 쇄(ScFv), 및 이의 돌연변이체, 자연 발생 변이체, 및 항체의 "가변 영역" 항원 인식 부위를 비롯한 융합 단백질 및 이종 단백질(예를 들어, 독소, 상이한 항원에 대한 항원 인식 부위, 효소, 수용체 또는 수용체 리간드 등)을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단편"은 적어도 5개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 10개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 15개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 20개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 25개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 40개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 50개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 60개의 인접한 아미노 잔기, 적어도 70개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 80개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 90개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 100개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 125개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 150개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 175개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 200개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 250개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "조정하다"는 효과, 결과 또는 활성도(예를 들어, 신호 변환)를 변경하는 능력을 지칭한다. 이러한 조정은 효능적 또는 길항적일 수 있다. 길항적 조정은 부분적(즉, 제거는 아니지만 약화시킴)일 수 있거나, 또는 그것은 이러한 활성도를 완전히 폐지(예를 들어, 중화)시킬 수 있다. 조정은 항체의 결합 이후 수용체의 내재화 또는 표적 세포 상의 수용체의 발현의 감소를 포함할 수 있다. 효능적 조정은 활성도(예를 들어, 신호 변환)를 향상시키거나 또는 달리 증가 또는 향상시킬 수 있다. 더 추가의 실시형태에서, 이러한 조정은 도출된 신호 변환의 본성을 변경하도록 리간드와 이의 동족 수용체 간의 상호작용의 본성을 변경할 수 있다. 예를 들어, 분자는 리간드 또는 수용체에 대한 결합에 의해서, 이러한 분자가 다른 리간드 또는 수용체에 결합하는 능력을 변경시킴으로써 이의 전체 활성도를 변경할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 조정은 측정 가능한 면역계 활성도의 적어도 10% 변화, 이러한 활성도의 적어도 50% 변화, 또는 이러한 활성도의 적어도 2배, 5배, 10배 또는 적어도 100배 변화를 제공할 것이다.
용어 "실질적으로"는 결합 또는 나타낸 효과와 관련하여 사용되는 바와 같이 관찰된 효과가 생리학적으로 또는 치료적으로 관련이 있음을 나타내도록 의도된다. 따라서, 예를 들어, 분자는 차단 정도가 생리학적으로 또는 치료적으로 관련되는 경우(예를 들어, 이러한 정도가 완전한 것의 60% 초과, 완전한 것의 70% 초과, 완전한 것의 75% 초과, 완전한 것의 80% 초과, 완전한 것의 85% 초과, 완전한 것의 90% 초과, 완전한 것의 95% 초과, 또는 완전한 것의 97% 초과인 경우) 리간드 또는 수용체의 활성도를 실질적으로 차단할 수 있다. 유사하게, 분자는, 이러한 면역특이성 및 특징이 60%를 초과하게 동일하거나, 70%를 초과하게 동일하거나, 75%를 초과하게 동일하거나, 80%를 초과하게 동일하거나, 85%를 초과하게 동일하거나, 90%를 초과하게 동일하거나, 95%를 초과하게 동일하거나, 또는 97%를 초과하게 동일한 경우, 또 다른 분자와 실질적으로 동일한 면역특이성 및/또는 특징을 갖는다고 지칭된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "공자극성" 신호는 양성 공자극성 신호(예를 들어, 활성도를 향상시키는 신호) 및 음성 공자극성 신호(예를 들어, 활성도를 저해하는 신호)를 포함한다.
용어 "유도체"는 모체 또는 참조 항체의 동일한 표적에 면역특이적으로 결합하지만 모체 또는 참조 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 비해서 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 그 초과의 아미노산 치환, 첨가, 결실 또는 변형을 포함함으로써 모체 또는 참조 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 아미노산 서열이 상이한 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다. 일부 실시형태에서 이러한 유도체는 모체 또는 참조 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 실질적으로 동일한 면역특이성 및/또는 특징, 또는 동일한 면역특이성 및 특징을 가질 것이다. 이러한 유도체의 아미노산 치환 또는 첨가는 자연 발생(즉, DNA-암호화된) 또는 비자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 용어 "유도체"는 예를 들어, 향상된 또는 손상된 효과기 또는 결합 특징을 나타내는 변이체 Fc 영역을 갖는, 예를 들어, 항체 등을 형성하도록, 키메라 또는 인간화된 변이체, 뿐만 아니라 변경된 CH1, 힌지, CH2, CH3 또는 CH4 영역을 갖는 변이체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "키메라 항체"는 항체의 상이한 부분이 상이한 면역글로불린 분자, 예컨대, 비인간 항체로부터 유래된 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 항체로부터 유래된 분자이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "인간화된 항체"는 인간 프레임워크 영역 및 비인간(통상적으로 마우스 또는 래트) 면역글로불린으로부터의 하나 이상의 CDR을 포함하는 면역글로불린을 지칭한다. CDR을 제공하는 비인간 면역글로불린은 "공여자"라 지칭되며, 프레임워크를 제공하는 인간 면역글로불린은 "수용자"라 지칭된다. 불변 영역이 존재할 필요는 없지만, 그것이 존재하면, 그것은 인간 면역글로불린 불변 영역과 실질적으로 동일, 즉, 적어도 약 85 내지 99% 또는 약 95% 이상 동일해야 한다. 따라서, 가능하게는 CDR을 제외한, 인간화된 면역글로불린의 모든 부분은 자연 인간 면역글로불린 서열의 상응하는 부분과 실질적으로 동일하다. 인간화된 항체는 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄 면역글로불린을 포함하는 항체이다. 예를 들어, 인간화된 항체는 전형적인 키메라 항체를 포함하지 않을 것인데, 그 이유는 예를 들어, 키메라 항체의 전체 가변 영역이 비인간이기 때문이다.
용어 "내생 농도"는 분자가 세포(세포는 정상 세포, 암 세포 또는 감염된 세포일 수 있음)에 의해서 자연적으로(즉, 발현 벡터 또는 재조합 프로모터의 부재 하에서) 발현되는 수준을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", "치료" 및 "치료적 용도"는 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 제거, 감소 또는 개선을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료적 유효량"은 이러한 증상의 임상적으로 관련된 제거, 감소 또는 개선을 매개하기에 충분한 치료제의 양을 지칭한다. 효과는 이의 크기가 수령인 대상체의 건강 또는 예후에 영향을 주기에 충분하다면 임상적으로 관련된다. 치료적 유효량은 질환의 발병을 지연 또는 최소화시키기에, 예를 들어, 암의 확산을 지연 또는 최소화시키기에 충분한 치료제의 양을 지칭할 수 있다. 치료적 유효량은 또한 질환의 치료 또는 관리에 치료적 이익을 제공하는 치료제의 양을 지칭할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "예방제"는 장애 또는 질환의 임의의 증상을 검출하기 전에 장애 또는 질환의 예방에 사용될 수 있는 작용제를 지칭한다. "예방적 유효"량은 이러한 보호를 매개하기에 충분한 예방제의 양이다. 예방적 유효량은 또한 질환의 예방에 예방적 이익을 제공하는 예방제의 양을 지칭할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "암"은 세포의 비제어된 성장으로부터 초래되는 신생물 또는 종양을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 암은 백혈병 및 림프종을 명백히 포함한다. 용어 "암"은 원위 부위로 전이될 가능성을 갖고 비-암세포의 것과 상이한 표현형 특질, 예를 들어, 3차원 기질, 예컨대, 연한천(soft agar)에서의 집락의 형성 또는 3차원 기저부 막 또는 세포외 기질 제제에서의 관형 네트워크 또는 웹-유사 기질의 형성을 나타내는 질환 관련 세포를 지칭한다. 비-암 세포는 연한천에서 집락을 형성하지 않고, 3차원 기저부 막 또는 세포외 기질 제제에서 뚜렷한 구체-유사 구조를 형성한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "면역 세포"는 T 세포, B 세포, 단핵구, 수지상 세포, 및 대식세포를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 조혈 기원으로부터의 임의의 세포를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "염증성 분자"는 예컨대, IL-1β, TNF-α, TGF-베타, IFN-γ, IL-18, IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21 및 MMP를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 사이토카인 및 메탈로프로테아제를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 염증성 반응을 초래하는 분자를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "원자가"는 분자당 사용 가능한 결합 부위의 수를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "면역학", "면역학적" 또는 "면역" 반응은 수령인 환자에서 펩타이드에 대해서 지향된 이로운 체액(항체 매개된) 및/또는 세포(항원-특이적 T 세포 또는 이의 분비 산물에 의해서 매개된) 반응의 발달이다. 이러한 반응은 면역원의 투여에 의해서 유도된 능동 반응 또는 항체 또는 프라이밍된 T-세포의 투여에 의해서 유도된 수동 반응일 수 있다. 세포 면역 반응은 클래스 I 또는 클래스 II MHC 분자와 연관된 폴리펩타이드 에피토프의 제시에 의해서 도출되어 항원-특이적 CD4+ T 헬퍼 세포 및/또는 CD8+ 세포독성 T 세포를 활성화시킨다. 반응은 또한 단핵구, 대식세포, NK 세포, 호염구, 수지상 세포, 성상세포, 미세아교세포 세포, 호산구의 활성화, 호중구 또는 선천성 면역의 다른 성분의 활성화 또는 모집에 관여할 수 있다. 세포-매개된 면역학적 반응의 존재는 증식 검정(CD4+ T 세포) 또는 CTL(세포독성 T 림프구) 검정에 의해서 결정될 수 있다. 면역원의 보호 또는 치료 효과에 대한 체액 및 세포 반응의 상대적인 기여는 면역화된 동계 동물로부터 항체 및 T-세포를 별개로 단리하고, 제2 대상체에서 보호 또는 치료적 효과를 측정함으로써 구별될 수 있다.
"면역제" 또는 "면역원"은 임의로 아주반트와 함께, 포유동물에게 투여 시에 그 자체에 대해서 면역학적 반응을 유도할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "개체", "숙주", "대상체", 및 "환자"는 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용되고, 인간, 설치류, 예컨대, 마우스 및 래트, 및 다른 실험실 동물을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 포유동물을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리펩타이드"는 변형(예를 들어, 포스포릴화 또는 글리코실화)에 상관없이, 임의의 길이의 아미노산 쇄를 지칭한다. 용어 폴리펩타이드는 단백질 및 이의 단편을 포함한다. 폴리펩타이드는 "외인성"(그것이 "이종"임을 의미하고, 즉, 숙주 세포에 대한 외부 물질이 사용됨), 예컨대, 박테리아 세포에 의해서 생산된 인간 폴리펩타이드일 수 있다. 폴리펩타이드는 본 명세서에서 아미노산 잔기 서열로서 개시되어 있다. 이러한 서열은 아미노에서부터 카복시 말단으로 좌측에서 우측으로 쓰여져 있다. 표준 명명법에 따라서, 아미노산 잔기 서열은 하기에 제시된 바와 같이 3문자 또는 단일 문자 암호에 의해서 명명된다: 알라닌(Ala, A), 아르기닌(Arg, R), 아스파라긴(Asn, N), 아스파트산(Asp, D), 시스테인(Cys, C), 글루타민(Gln, Q), 글루탐산(Glu, E), 글리신(Gly, G), 히스티딘(His, H), 아이소류신(Ile, I), 류신(Leu, L), 라이신(Lys, K), 메티오닌(Met, M), 페닐알라닌(Phe, F), 프롤린(Pro, P), 세린(Ser, S), 트레오닌(Thr, T), 트립토판(Trp, W), 타이로신(Tyr, Y) 및 발린(Val, V).
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "변이체"는 참조 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드와 상이하지만, 본질적인 특성을 보유하는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 폴리펩타이드의 전형적인 변이체는 또 다른 참조 폴리펩타이드와 아미노산 서열이 상이하다. 일반적으로, 차이가 제한되어 참조 폴리펩타이드 및 변이체의 서열은 전체적으로 상당히 유사하고, 다수의 영역에서 동일하다. 변이체 및 참조 폴리펩타이드는 하나 이상의 변형(예를 들어, 치환, 첨가 및/또는 결실)에 의해서 아미노산 서열이 상이할 수 있다. 치환된 또는 삽입된 아미노산 잔기는 유전자 암호에 의해서 암호화된 것일 수 있거나 암호화된 것이 아닐 수 있다. 폴리펩타이드의 변이체는 자연 발생, 예컨대, 대립유전자 변이체일 수 있거나, 또는 그것은 자연 발생인 것으로 공지되지 않은 변이체일 수 있다.
변형 및 변화는 본 개시내용의 폴리펩타이드의 구조에서 일어날 수 있고, 폴리펩타이드와 유사한 특징을 갖는 분자를 여전히 수득할 수 있다(예를 들어, 보존적 아미노산 치환). 예를 들어, 특정 아미노산은 활성도의 인지 가능한 손실 없이 서열 내의 다른 아미노산에 대해서 치환될 수 있다. 그것은 폴리펩타이드의 생물학적 기능 활성도를 정의하는 폴리펩타이드의 상호작용 능력 및 본성이기 때문에, 특정 아미노산 서열 치환이 폴리펩타이드 서열 내에서 일어날 수 있고, 그럼에도 불구하고 유사한 특성을 갖는 폴리펩타이드를 수득할 수 있다.
이러한 변화의 생성 시에, 아미노산의 수치 지수(hydropathic index)가 고려될 수 있다. 폴리펩타이드에 상호작용 생물학적 기능을 부여하는 데 있어서의 수치 아미노산 지수의 중요성은 일반적으로 관련 기술 분야에서 이해된다. 특정 아미노산이 유사한 수치 지수 또는 점수를 갖는 다른 아미노산을 대체할 수 있고, 유사한 생물학적 활성도를 갖는 폴리펩타이드가 여전히 생성될수 있음이 공지되어 있다. 각각의 아미노산은 이의 소수성 및 전하 특징을 기준으로 수치 지수가 할당되어 있다. 이러한 지수는 다음과 같다: 아이소류신(+4.5); 발린(+4.2); 류신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스테인(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글리신(-0.4); 트레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 타이로신(-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5).
아미노산의 상대적인 수치 특징은 생성된 폴리펩타이드의 2차 구조를 결정하고, 이것은 결국 폴리펩타이드와 다른 분자, 예컨대, 효소, 물질, 수용체, 항체, 항원 및 공동인자의 상호작용을 정의하는 것으로 여겨진다. 아미노산은 유사한 수치 지수를 갖는 또 다른 아미노산에 의해서 치환될 수 있고, 기능적으로 동등한 폴리펩타이드를 여전히 수득하는 것으로 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 이러한 변화 시에, 수치 지수가 ± 2 이내인 아미노산의 치환이 바람직하고, 이의 ± 1 이내인 것이 특히 바람직하고, ± 0.5 이내인 것이 보다 더 특별하게 바람직하다.
유사한 아미노산의 치환은 또한 친수성을 기준으로 행해질 수 있고, 특히, 이에 의해서 생성된 생물학적 기능이 동등한 폴리펩타이드 또는 펩타이드가 면역학적 실시형태에서의 사용을 위해서 의도된다. 하기 친수성 값이 아미노산 잔기에 대해서 할당되어 있다: 아르기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스파테이트(+3.0 ± 1); 글루타메이트(+3.0 ± 1); 세린(+0.3); 아스파라긴(+0.2); 글루타민(+0.2); 글리신 (0); 프롤린(-0.5 ± 1); 트레오닌(-0.4); 알라닌(-0.5); 히스티딘(-0.5); 시스테인(-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린(-1.5); 류신(-1.8); 아이소류신(-1.8); 타이로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5); 트립토판(-3.4). 아미노산은 유사한 친수성 값을 갖는 또 다른 것으로 치환될 수 있고, 생물학적으로 동등한, 특히 면역학적으로 동등한 폴리펩타이드를 여전히 수득할 수 있다고 이해된다. 이러한 변화 시에, 친수성 값이 ± 2 이내인 아미노산의 치환이 바람직하고, 이의 ± 1 이내인 것이 특히 바람직하고, ± 0.5 이내인 것이 보다 더 특별하게 바람직하다.
상기에 요약된 바와 같이, 아미노산 치환은 일반적으로 아미노산 측쇄 치환기의 상대적인 유사성, 예를 들어, 이의 소수성, 친수성, 전하, 크기 등을 기준으로 한다. 다양한 상기 특징을 고려한 예시적인 치환은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 하기를 포함한다(본래 잔기: 예시적인 치환): (Ala: Gly, Ser), (Arg: Lys), (Asn: Gln, His), (Asp: Glu, Cys, Ser), (Gln: Asn), (Glu: Asp), (Gly: Ala), (His: Asn, Gln), (Ile: Leu, Val), (Leu: Ile, Val), (Lys: Arg), (Met: Leu, Tyr), (Ser: Thr),(Thr: Ser), (Tip: Tyr), (Tyr: Trp, Phe) 및 (Val: Ile, Leu). 따라서 본 개시내용의 실시형태는 상기에 제시된 바와 같은 폴리펩타이드의 기능적 또는 생물학적 등가물을 고려한다. 특히, 폴리펩타이드의 실시형태는 관심대상 폴리펩타이드와 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.
용어 "백분율(%) 서열 동일성"은 최대 백분율 서열 동일성을 달성하기 위해서, 필요한 경우, 서열을 정렬하고 갭을 도입한 후, 참조 핵산 서열 내의 뉴클레오타이드 또는 아미노산과 동일한 후보 서열 내의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 백분율로서 정의된다. 백분율 서열 동일성을 결정하기 위한 목적을 위한 정렬은 예를 들어, 공개적으로 입수 가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대, BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 관련 기술 분야 내의 기술에 포함되는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 비교될 서열의 전장에 걸친 최대 정렬을 달성하기 위해서 필요한 임의의 알고리즘을 비롯한, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터는 공지된 방법에 의해서 결정될 수 있다.
본 명세서에의 목적을 위해서, 주어진 핵산 서열 D에 대한, 이것과의 또는 이것과 비교하여 주어진 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 C의 % 서열 동일성(이것은 대안적으로 주어진 서열 D에 대한, 이것과의 또는 이것과 비교하여 특정 % 서열 동일성을 갖거나 또는 포함하는 주어진 서열 C로서 표현될 수 있음)은 하기와 같이 계산된다:
분율 W/Z의 100배,
여기서, W는 C 및 D의 프로그램의 정렬 시에 서열 정렬 프로그램에 의해서 동일한 매치로서 점수매겨진 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 수이고, Z는 D 내의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 총수이다. 서열 C의 길이가 서열 D의 길이와 동일하지 않은 경우, D에 대한 C의 % 서열 동일성은 C에 대한 D의 % 서열 동일성과 동일하지 않음이 인식될 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 표준 약제학적 담체, 예컨대, 인산염 완충 염수 용액, 물 및 에멀션, 예컨대, 유/수 또는 수/유 에멀션, 및 다양한 유형의 습윤제 중 임의의 것을 포함한다.
II. 조성물
LAIR 단백질을 통해서 신호 변환을 조정하는 데 유용한 LAIR 결합 모이어티가 제공된다. 도 4는 면역 기능 및 항상성의 LAIR 조절을 나타낸다. 도 5는 LAIR-1 mAb 및 LAIR-2 Fc가 치료제로서 사용될 수 있는 방법을 나타낸다.
A. LAIR 폴리펩타이드
LAIR-1 및 LAIR-2 폴리펩타이드가 개시된다. 폴리펩타이드는 전장 LAIR-1 또는 LAIR-2 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체 또는 이의 융합 단백질의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
LAIR-1은 다수의 면역 세포 상에서 발현되고, 2개의 세포질 면역수용체 타이로신-기반 저해성 모티프(ITIM) 도메인을 통해서 저해성 신호전달을 발휘하는 저해성 세포 표면 수용체이다(Verbrugge et al., 2006)(도 4). 마우스가 아닌 인간 및 비인간 영장류 게놈은 LAIR-1의 가용성 동족체인 LAIR-2 유전자를 암호화한다(Sun et al., 2014). LAIR-2는 막관통 도메인 및 세포질 도메인이 결여되어 있지만, LAIR-1과 동일한 리간드에 결합하고, 따라서 LAIR-1을 통해서 저해성 신호를 감소시키기 위한 디코이로서 기능할 수 있다(Meyaard, 2008). LAIR-1 및 LAIR-2는 원섬유 콜라겐 I 및 III, 및 막관통 콜라겐 13, 17 및 23을 비롯한 다수의 콜라겐과 상호작용하지만, 정규 Gly-Pro-Hyp 하이드록시프롤린 반복부의 인식으로 인해서 다양한 정도로 다른 콜라겐에 또한 결합할 수 있다(Meyaard, 2008). LAIR-1 및 LAIR-2는 또한 보체 성분 C1q, 계면활성제 단백질 D(SP-D) 및 만노스 결합 렉틴(MBL)에 결합한다. 이러한 분자와 백혈구 원형질막 상의 LAIR-1의 가교결합은 면역 세포 성숙, 증식 및 탈과립화를 저해하는 음성 신호전달을 유도한다(Lebbink et al., 2009), Meyaard., (2008)).
LAIR-1 저해성 신호전달은 자가면역 질환, 에컨대, 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 자가면역 갑상선 질환 및 죽상동맥경화증뿐만 아니라 접촉 과민증을 예방할 수 있다(Sun et al., 2014). 한편, LAIR-2의 과발현은 LAIR-1 리간드의 디코이 결합을 통해서 자가면역을 촉진시킬 수 있다. LAIR-1 리간드의 LAIR-2 결합은 LAIR-1의 세포 표면 가교결합을 본질적으로 감소시켜, 과반응성 면역 기능으로 이어지는 저해성 신호전달 경로을 한정할 수 있다. 이에 반해서, LAIR-2의 증가된 수준은 동일한 기전을 통해서 항-종양 면역을 촉진시킬 수 있다고 가정했다.
만성 림프구성 백혈병 세포(CLL) 상에서의 LAIR-1의 감소된 발현은 증가된 질환과 연관된다(Poggi et al., 2008; Perbellini et al., 2014). 이에 반해서, 연구는, 급성 골수성 백혈병(AML)에 대한 LAIR-1의 증가된 발현은 줄기-유사 상태를 유지시키고, 분화 및 아포토시스를 예방함으로써 AML 생존을 촉진시킨다는 것을 시사한다(Kang et al., 2015). 이러한 개념의 지지로, 다른 연구는 또한 LAIR-1이 AML 및 급성 림프모구성 백혈병(ALL) 암에 대해서 증가된다는 것을 나타내었다(Mirkowska et al, Blood, 2013; Chen et al, Nature, 2015; Zhang et al., review in life.sciechina.com, 2015). LAIR-1은 또한 상피 난소암 세포 및 다른 인간 종양 상에서 발현되는 것으로 밝혀져 있지만, 고형 종양 상에서 발현되는 LAIR-1의 기능은 불명확하다(Meyaard et al., 1997; Cao et al., 2015).
종양 미세환경은 종종 콜라겐을 비롯한 세포외 기질 단백질(ECM)이 풍부하다(Rygiel et al., 2011). 따라서, 종양 미세환경에 국지화된 LAIR-1 발현 세포는 Lair-1의 콜라겐 가교결합 및 후속 저해성 신호전달을 통해서 특히 억제될 수 있다. 흥미롭게도, 콜라겐 및 C1q 둘 모두는 LAIR-1을 통해서 항원-제시 세포(단핵구/대식세포/DC) 분화 및 활성화를 제한 또는 변경하는 것으로 밝혀져 있다. 연구는, NK 세포 및 T 세포 상에서 Lair-1을 가교결합시키는 것이 증식 및 기능을 저해할 수 있음을 나타내었다. 그러나, 조절 항-종양 면역에서의 LAIR-1의 역할은 추가 연구가 필요하다.
함께, LAIR-1 상에서의 축적된 데이터는, 면역 항상성에서의 중요한 역할을 나타낸다. 그러나, 뮤린 및 인간 세포 상에서의 LAIR-1의 차별적 발현, 뿐만 아니라 마우스가 아닌 인간에서의 LAIR-2의 존재는, 마우스 연구가 인간에서 LAIR-1/LAIR-2의 기능을 나타낼 수 없다는 것을 시사한다. 반면에, 인간계는 LAIR-2의 존재로 인해서 치료적으로 보다 용이하게 활용될 수 있다. 즉, LAIR-2는 인간에서 LAIR-1 기능을 조정하기 위해서 치료적으로 사용될 수 있는데, 이것은 뮤린계에서는 가능하지 않다. 따라서, LAIR-2 Fc 디코이 단백질 또는 차단(길항제) LAIR-1 mAb는 세포 표면 LAIR-1을 통한 신호전달을 예방함으로써 면역 기능을 향상시키기 위한 암 면역요법에 효과적일 수 있다(도 5). 이에 반해서, 효능제 LAIR-1 mAb, 또는 mAb에 의한 LAIR-2의 차단은 자가면역 질환의 치료를 위해서 사용될 수 있는데, 그 이유는 그것이 LAIR-1을 통해서 신호전달을 본질적으로 증가시켜서 면역 반응을 하향조절할 것이기 때문이다.
1. LAIR-1
LAIR-1에 대한 서열이 제공된다. 일부 실시형태에서, 선두(leading) 메티오닌 아미노산은 단백질의 번역후 형태에서 절단된다.
a. 인간 LAIR-1
인간 LAIR-1에 대한 서열은 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, LAIR-1a(아이소폼 1)에 대한 컨센서스 서열은 다음과 같다:
MSPHPTALLGLVLCLAQTIHTQEEDLPRPSISAEPGTVIPLGSHVTFVCRGPVGVQTFRL
ERESRSTYNDTEDVSQASPSESEARFRIDSVSEGNAGPYRCIYYKPPKWSEQSDYLELLV
KETSGGPDSPDTEPGSSAGPTQRPSDNSHNEHAPASQGLKAEHLYILIGVSVVFLFCLLL
LVLFCLHRQNQIKQGPPRSKDEEQKPQQRPDLAVDVLERTADKATVNGLPEKDRETDTSA
LAAGSSQEVTYAQLDHWALTQRTARAVSPQSTKPMAESITYAAVARH
(서열번호 1, UniProtKB - Q6GTX8(LAIR1_인간)), 여기서 아미노산 1 내지 21은 신호 서열이고, 아미노산 22 내지 165(밑줄)는 세포외 도메인이고, 아미노산 166 내지 186은 막관통 도메인이고, 아미노산 187 내지 287은 세포질 도메인이다. 아미노산 29 내지 117은 Ig-유사 C2-도메인을 형성한다. 아미노산 249 내지 254 및 279 내지 284는 각각 ITIM 모티프 1 및 2를 형성한다. LAIR-1b(아이소폼 2라고도 공지됨)는 서열번호 1에 비해서 아미노산 122 내지 138이 누락되어 있다. LAIR-1c(아이소폼 3이라고도 공지됨)는 서열번호 1에 비해서 아미노산 23 내지 23 및 122 내지 138이 누락되어 있다. LAIR-1d(아이소폼 4라고도 공지됨)는 서열번호 1에 비해서 아미노산 210 내지 287이 누락되어 있다.
상기에 도입된 바와 같이, 인간 LAIR-1에 대한 세포외 도메인은 다음과 같을 수 있다:
QEEDLPRPSISAEPGTVIPLGSHVTFV CRGPVGVQTFRLERESRSTYNDTEDVSQASPSESEARFRIDSVSEGNAGPYRC IYYKPPKWSEQSDYLELLVKETSGGPDSPDTEPGSSAGPTQRPSDNSHNEHAPASQGLKAEHLY
(서열번호 2) 또는 이의 단편, 예를 들어, Ig-유사 C2-도메인(서열번호 2의 밑줄 아미노산 8 내지 96), 또는 서열번호 1의 아미노산 49 내지 101(이탤릭체로 기술된, 서열번호 2의 아미노산 28 내지 80) 사이에 다이설파이드 결합을 형성하는 시스테인에 의해서 획정된 영역.
LAIR-1의 공지된 변이체 및 돌연변이체는 서열번호 1에 비해서 E63D, Y251F, 및 Y251F를 포함한다. 증거는, F-281과 연관되는 경우 Y215F가 타이로신 포스포릴화 및 PTPN6 및 CSK에 대한 결합의 손실뿐만 아니라 저해성 활성도의 완전한 손실, 뿐만 아니라 포스포릴화의 손실 및 칼슘 동원의 저해를 감소시켰다는 것을 나타낸다(Xu, et al., J. Biol. Chem. 275:17440-17446 (2000), Verbrugge, et al., Int. Immunol., 15:1349-1358 (2003), Verbrugge, et al., Eur. J. Immunol., 36:190-198 (2006)). Y281F는 감소된 타이로신 포스포릴화 및 PTPN6에 대한 결합의 손실, 및 세포독성 활성도의 부분적 저해를 나타낸다.
문헌[Meyaard, 2008, J. Leukoc. Biol. 83:799-803]은 LAIR-1이 인간 면역 세포 상에서 광범위하게 발현된다는 것을 나타낸다. 학술 논문에서 실제 유세포 분석 발현 데이터의 조사는 LAIR-1이 T 세포 및 NK 세포보다 골수 계통 세포, 예컨대, 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포 상에서 훨씬 더 높게 발현된다는 것을 나타낸다(Meyaard et al., 1997, Immunity 7:283-290). 그러나, B 세포는 분화 동안 높은 수준의 LAIR-1을 달리 발현한다(van der Vuurst de Vries et al., 1999, Eur. J. Immunol. 29:3160-3167). LAIR-1은 또한 급성 골수성 백혈병 세포, 급성 림프모구성 백혈병 세포 및 만성 림프구성 백혈병 세포 상에서 발현되는 것이 발견되었다(van der Vuurst de Vries et al., 1999, Eur. J. Immunol. 29:3160-3167; Poggi et al., 2000, Eur. J. Immunol. 30:2751-2758; Zocchi et al., 2001, Eur. J. Immunol. 31:3667-3675; Perbellini et al., 2014, Haematologica, 99:881-887; (Kang et al., 2015, Nat. Cell Biol. 17:665-677). 마지막으로, LAIR-1은 몇몇 인간 종양 세포주 상에서 발현되는 것으로 나타났다(Meyaard et al., 1997, Immunity 7:283-290; Cao et al., 2015, Biochem. Biophys, Res. Commun. 458:399-404; (Kang et al., 2015, Nat. Cell Biol. 17:665-677).
인간 및 마우스에서, LAIR-1은 높은 친화도로 몇몇 유형의 콜라겐에 결합한다(Meyaard, 2008, J. Leukoc. Biol. 83:799-803 및 Meyaard, 2010, Immunol. Lett. 128:26-28). 인간에서, LAIR-1은 또한 보체 성분 C1q(Son et al., 2012, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109:E3160-3167) 및 콜라겐성 C-형 렉틴, 계면활성제 단백질-D(SP-D), 콜라겐성 탄수화물 결합 당단백질(콜렉틴)(미생물 및 항원 시험감염에 대한 폐의 선천적인 면역반응에서 중요한 역할을 함)에 결합하는 것으로 밝혀져 있다(Olde Nordkamp et al., 2014, J. Leukoc. Biol. 96:105-111). C1q 및 SP-D에 결합하는 뮤린 LAIR-1의 능력은 조사되지 않았다.
전신 홍반 루푸스(SLE)는 면역 관용의 손실을 특징으로 하는 원형(prototypic) 자가면역 질환이다. C1q에 대한 면역억제성 역할은 SLE가 발생한 C1q-결핍 개체의 높은 백분율에 의해서 뒷받침된다. 손(Son) 박사 및 그녀의 파인슈타인 연구소(Feinstein Institute)의 동료인 베티 다이아몬드(Betty Diamond) 박사, 프랜시스 산티아고-슈바르츠(Frances Santiago-Schwarz ) 박사 및 유세프 알-아베드(Yousef Al-Abed) 박사는 C1q이 보편적 콜라겐 수용체로서 공지된 LAIR-1에 대한 기능적 리간드라는 것을 밝혀냈다. 이들은 LAIR-1의 관계를 통한 DC 분화 및 pDC 활성화에 대한 단핵구의 저해에 의해서 C1q이 관용을 촉진시킨다는 것을 추가로 밝혀냈다(Son and Diamond, Mol. Med., 2015, 20:559-568; Son et al., PNAS, 109(46):E3160-3167). 이러한 발견은 루푸스 분야에 상당한 영향을 갖는데, 그 이유는 이러한 발견이 보체계가 관용을 조절하고 자가면역 질환, 예컨대, 루푸스를 예방하는 기전을 설명하기 때문이다.
모든 콜라겐은 반복 Gly-X-X' 서열을 특징으로 하는 3개의 폴리펩타이드로 구성되며, 여기서 X는 종종 프롤린이고, X'는 빈번하게는 4-R-하이드록시프롤린(Hyp, O)이다(Brondijk, Blood, 115(7):1364-1373 (2010). GPO 삼중항은 콜라겐의 거의 독점적인 특징부이며, 특징적인 삼중나선형(triplehelical) 콜라겐 구조의 형성을 가능하게 한다.
공지된 면역글로불린 슈퍼패밀리 콜라겐 수용체, LAIR-1, GPVI, 및 OSCAR의 엑토도메인은 1 또는 2개의 면역글로불린-유사 도메인으로 이루어진다. GPVI 및 LAIR-1은 기능적으로 상이하지만, 그들은 콜라겐-결합 특성이 유사하다. 그러나, 문헌[Zhou, et al., Blood, 127(5):529-537 (2016)]에 논의된 바와 같이, 구조적 동질성으로 인해서, 3종의 단백질은 매우 상이한 콜라겐 인식 부위를 갖는다. GPVI는 콜라겐 III(GPO)10의 서열 글리신-프롤린-하이드록시프롤린(GPO)-풍부 트랙(tract)을 갖는 모델 콜라겐-관련 펩타이드 및 몇몇 툴키트(Toolkit) 펩타이드(III-1, III-30, 및 III-40)(1개 또는 2개의 GPO 삼중항을 함유함)에 대해서 가장 강하게 결합한다(Jarvis, et al., Blood, 111(10):4986-4996 (2008)). LAIR-1은 또한 III-30 및 아미노산-풍부 펩타이드의 하위세트에 대해서 높은 친화도를 나타내지만, III-1 및 콜라겐 관련된 펩타이드에 덜 단단하게 결합한다(Lebbink , et al., Matrix Biol., 28(4):202-210 (2009)).
돌연변이생성 및 핵 자기 공명 적정은 가닥 C, C9, F, 및 FG 루프로 구성된 그루브(groove)에 존재하는, 모델 삼중 나선형 펩타이드(THP)와 접촉하는 LAIR-1의 돌연변이생성 영역 상의 잔기의 패치(patch)을 나타내었다(Brondijk, Blood, 115(7):1364-1373 (2010), 전문이 참고로 구체적으로 포함됨). 예를 들어, 고정된 콜라겐 I, III, 및 IV에 대한 접착은 R59A, E61A, R65A, 및 E111A 돌연변이체에서 상당히 감소되었지만, 효과의 크기는 시험된 콜라겐의 유형에 좌우된다. 또한, 유세포 측정 검정에서 거의 야생형 콜라겐 결합을 나타내는 돌연변이체 R62A 및 N69A에 대한 접착은 다소 감소되었다. 브론디크(Brondijk) 등은, LAIR-1 잔기 E61, S66, Y68, I102, W109, 및 Y115가 반데르발스 상호작용을 제공하는 반면, 리간드에 대한 수소 결합은 LAIR-1 잔기 R59, E63, R100, E111, 및 Q112에 빈번하게 관여된다고 보고하고, R59, E61, 및 또한 W109가 콜라겐-결합 부위의 코어를 구성하는 반면, 더 많은 주변 잔기, 예컨대, E111이 결합에 덜 기여한다고 결론낸다(예를 들어, 서열번호 1을 참고로 하는 잔기).
b. 마우스 LAIR-1
마우스 LAIR-1(mLAIR-1)에 대한 서열은 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, mLAIR-1a(아이소폼 1)에 대한 컨센서스 서열은 다음과 같다:
MSLHPVILLVLVLCLGWKINTQEGSLPDITIFPNSSLMISQGTFVTVVCSYSDKHDLYNM
VRLEKDGSTFMEKSTEPYKTEDEFEIGPVNETITGHYSCIYSKGITWSERSKTLELKVIK
ENVIQTPAPGPTSDTSWLKTYSIYIFTVVSVIFLLCLSALLFCFLRHRQKKQGLPNNKRQ
QQRPEERLNLATNGLEMTPDIVADDRLPEDRWTETWTPVAGDLQEVTYIQLDHHSLTQRA
VGAVTSQSTDMAESSTYAAIIRH
(서열번호 3, UniProtKB - Q8BG84(LAIR1_마우스)), 여기서 아미노산 1 내지 21은 신호 서열이고, 아미노산 22 내지 144(밑줄)는 세포외 도메인이고, 아미노산 145 내지 165는 막관통 도메인이고, 아미노산 166 내지 263은 세포질 도메인이다. 아미노산 27 내지 115은 Ig-유사 C2-도메인을 형성한다. 아미노산 226 내지 231 및 255 내지 260은 각각 ITIM 모티프 1 및 2를 형성한다. mLAIR-1b(아이소폼 2라고도 공지됨)는 서열번호 3에 비해서 아미노산 124 내지 133이 누락되어 있다. 아이소폼 3은 ELCLWFLLYPWATLELIMCTWDAWKETLEYFL(서열번호 8)로 대체된 아미노산 25 내지 56[서열번호 3의 SLPDITIFPNSSLMISQGTFVTVVCSYSDKHD(서열번호 7)]을 갖고, 서열번호 3에 비해서 아미노산 57 내지 263이 누락되어 있다. mLAIR-1d(아이소폼 5라고도 공지됨)는 서열번호 3에 비해서 아미노산 24 내지 172가 누락되어 있다. mLAIR-1e(아이소폼 6이라고도 공지됨)는 아미노산 134 내지 172가 누락되어 있다.
상기에 도입된 바와 같이, 뮤린 LAIR-1에 대한 세포외 도메인은 다음과 같을 수 있다:
QEGSLPDITIFPNSSLMISQGTFVTVV CSYSDKHDLYNMVRLEKDGSTFMEKSTEPYKTEDEFEIGPVNETITGHYSC IYSKGITWSERSKTLELKVIKENVIQTPAPGPTSDTSWLKTYSIY
(서열번호 4) 또는 이의 단편, 예를 들어, Ig-유사 C2-도메인(서열번호 4의 밑줄 아미노산 6 내지 94), 또는 서열번호 3의 아미노산 49 내지 99(이탤릭체로 기술된, 서열번호 4의 아미노산 28 내지 78) 사이에 다이설파이드 결합을 형성하는 시스테인에 의해서 획정된 영역. 인간 및 마우스 세포외 도메인의 예시적인 정렬을 하기에 나타낸다:
Query 1은 서열번호 2이고, Sbjct는 서열번호 4이다.
LAIR-1의 공지된 변이체 및 돌연변이체는 서열번호 3에 비해서 아미노산 위치 143 내지 145, V149G, L154P 및 H263R에서 IYI → MYM을 포함한다.
메이아드(Meyaard)(2008, J. Leukoc. Biol. 83:799-803)는 마우스 면역 세포 상에서의 LAIR-1의 광범위한 발현을 나타내고, 인간 B 세포의 하위세트 상에서 높게 발현되는 것과 상반되는 바와 같이, 하나의 주요 차이는 LAIR-1이 B 세포에 대해서 음성을 나타낸다는 것이다. 인간 발현 패턴에서와 같이, LAIR-1 발현의 실제 유세포 분석 데이터를 조사하는 경우, 다시 한번, LAIR-1이 단핵구, 대식세포 및 DC 상에서 높게 발현되는 반면, T 세포, NK 세포 및 Gr-1+ 세포는 비교적 더 낮은 수준으로 LAIR-1을 발현한다는 것이 발견된다(Lebbink et al., 2007 Int. Immunol. 19:1011-1019; Tang et al., 2012, J. Immunol. 188:548-558).
탕(Tang) 등(2012, J. Immunol. 188:548-558)은 LAIR-1 결핍 마우스의 표현형을 조사하였다. KO 마우스는 건강하고, 임신 가능하며, 변경된 면역 기능의 표시를 나타내지만, CTLA-4 KO 마우스에서 관찰되는 중대한 자가면역 또는 염증이 존재하지 않는다. LAIR-1 KO 마우스는 증가된 수의 수지상 세포, 비장 B 세포 및 조절 T 세포, 뿐만 아니라 더 높은 빈도의 활성화 및 기억 T 세포를 갖는데, 이는 향상된 T 세포 재활성도를 시사한다. 그러나, LAIR-1 wt 및 KO 마우스에서 EAE 및 대장염 질환 모델에서 차이가 존재하지 않았다. 이러한 질환 모델은 LAIR-1 KO 표현형을 조사하기 위해서는 최적이 아닐 수 있고, LAIR-1 결핍 면역 세포 하위세트의 시험관내 기능 연구는 수행되지 않았다. 또한 LAIR-1 KO 마우스는 인간에서의 가용성 LAIR-2의 차등적 발현 및 존재로 인해서 인간에서 LAIR-1의 역할을 나타내지 않을 수 있다고 추측된다. 뮤린 및 인간 내부 기관에서의 LAIR-1 유전 경로 간의 차이가 문헌[internal organs are discussed in Sun, et al., Gene, 552:14-145 (2014)]에 논의되어 있고, 마우스 모델을 사용한 실험을 설계 및 평가하는 경우에 설명될 수 있다.
2. LAIR-2
LAIR-2 및 이의 융합 단백질에 대한 서열이 제공된다. 일부 실시형태에서, 선두 메티오닌 아미노산은 단백질의 번역후 형태에서 절단된다.
인간 LAIR-2에 대한 서열은 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, LAIR-2a(아이소폼 1)에 대한 컨센서스 서열은 다음과 같다:
MSPHLTALLGLVLCLAQTIHTQEGALPRPSISAEPGTVISPGSHVTFMCRGPVGVQTFRL
EREDRAKYKDSYNVFRLGPSESEARFHIDSVSEGNAGLYRCLYYKPPGWSEHSDFLELLV
KESSGGPDSPDTEPGSSAGTVPGTEASGFDAP
(서열번호 5, UniProtKB - Q6ISS4(LAIR2_인간)), 여기서 아미노산 1 내지 21은 신호 서열이고, 아미노산 22 내지 152(밑줄)는 백혈구-연관 면역글로불린-유사 수용체 2 도메인이다. 아미노산 29 내지 117은 Ig-유사 C2-도메인을 형성한다. LAIR-2b(아이소폼 2라고도 공지됨)는 서열번호 5에 비해서 아미노산 122 내지 138이 누락되어 있다.
상기에 도입된 바와 같이, 인간 LAIR-2에 대한 백혈구-연관 면역글로불린-유사 수용체 2 도메인은 다음과 같을 수 있다:
QEGALPRPSISAEPGTVISPGSHVTFM CRGPVGVQTFRLEREDRAKYKDSYNVFRLGPSE
SEARFHIDSVSEGNAGLYRC LYYKPPGWSEHSDFLELLVKESSGGPDSPDTEPGSSAGTV
PGTEASGFDAP
(서열번호 6) 또는 이의 단편, 예를 들어, Ig-유사 C2-도메인(서열번호 6의 밑줄 아미노산 8 내지 96), 또는 서열번호 1의 아미노산 49 내지 101(이탤릭체로 기술된, 서열번호 6의 아미노산 28 내지 80) 사이에 다이설파이드 결합을 형성하는 시스테인에 의해서 획정된 영역.
LAIR-2의 공지된 변이체 및 돌연변이체는 서열번호 5에 비해서 G78S, H87R, 및 F115Y를 포함한다.
인간에서의 LAIR-2는 LAIR-1보다 더 높은 친화도로 콜라겐 및 SP-D에 결합하는 것으로 밝혀져 있다(Meyaard, 2008, J. Leukoc. Biol. 83:799-803). 린데 메이아드(Linde Meyaard) 박사는 LAIR-2가 또한 C1q 및 만노스-결합 렉틴(MBL)(이들 둘 모두는 콜라겐-유사 도메인을 함유함)에 결합하는 것을 입증하였다(Olde Nordkamp et al., J. Innate Immun., 2014, 6(3):284-92). 이러한 발견은, LAIR-2가 C1q에 결합한다는 손(Son) 등에 의한 증거를 확인해준다(Son et al., 2012, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109:E3160-3167). 콜라겐 및 C1q는 어디에서나 발현되지만, SP-D는 점막 표면(폐 폐포 표면 및 GI관)에 주로 제한되는데, 여기서 그것은 병원균에 대한 1차적인 선천적 방어로서 기능한다(Herias et al., 2007, Mol. Immunol. 44:3324-3332).
인간 LAIR-1 및 인간 LAIR-2 세포외 도메인의 예시적인 정렬을 하기에 나타낸다:
Query는 서열번호 2이고, Sbjct는 서열번호 6이다.
B. 면역조정제
LAIR-1의 효능제 및 길항제 및 LAIR-2의 길항제를 비롯한 면역조정제가 제공되어 있다. LAIR-1의 효능제는 LAIR-1 음성 신호전달을 전형적으로 유도하거나, 증강시키거나 또는 활성화시킨다. LAIR-1의 길항제는 LAIR-1 음성 신호전달을 전형적으로 예방하거나, 감소시키거나 또는 차단한다. LAIR-2의 길항제는 LAIR-1 및 LAIR-2에 의해서 공유되는 리간드를 비롯한, 이의 리간드에 결합하는 LAIR-2의 능력을 전형적으로 감소시키거나 예방한다. 조성물 및 방법은 예를 들어, 항원-제시 세포(예를 들어, 단핵구, 대식세포, 또는 수지상 세포), T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 이들의 조합물을 비롯한 골수 세포에 대한 LAIR-1 음성 신호전달을 조절하기 위해서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 하나 이상의 세포 유형을 특이적으로 표적으로 한다. LAIR-1의 효능제 또는 길항제 및 LAIR-2의 길항제일 수 있는 예시적인 분자를 하기에 보다 상세하게 논의한다.
일부 실시형태에서, 항-LAIR-1 기능 차단 항체를 비롯한 LAIR-1 길항제는 콜라겐 결합 도메인, C1q 결합 도메인, SP-D 결합 도메인 또는 이들과 LAIR-1의 조합물에 결합하거나 또는 이것을 달리 방해한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, LAIR-1 길항제는 LAIR-1 잔기 R59, E61, R62, E63, R65, S66, Y68, N69, I102, R100, W109, E111, Q112, 및 Y115 또는 상기 중 임의의 것의 임의의 조합물에 결합하거나, 이를 차단하거나, 입체배좌 변화를 생성하거나, 이를 달리 방해한다. 일부 실시형태에서, LAIR-1 기능 차단 항체 또는 이의 기능적 단편은 (예를 들어, 서열번호 1에 비해서) R59, E61, R62, E63, R65, S66, Y68, N69, I102, R100, W109, E111, Q112, 및 Y115 중 하나 이상을 비롯한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 면역조정제는 OSCAR 결합 또는 활성도, GPVI 결합 또는 활성도 또는 이들의 조합을 방해하지 않는다.
1. 항체
면역조정제는 항체일 수 있다. 적합한 항체는 관련 기술 분야에 공지되어 있거나 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 제조될 수 있다. LAIR-1 및 LAIR-2에 대한 핵산 및 폴리펩타이드 서열은 관련 기술 분야에 공지되어 있고, 예시적인 단백질 서열은 상기에 제공되어 있다. 이러한 서열은 하기에 보다 상세하게 논의된 바와 같이 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 사용되어 LAIR-1 또는 LAIR-2에 대해서 특이적인 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조할 수 있다. 따라서, 항체, 또는 항원 결합 단편은 LAIR-1의 효능제 또는 길항제 또는 LAIR-2의 길항제일 수 있다.
LAIR-1 또는 LAIR-2에 대해서 특이적인 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 활성도(즉, 효능제 또는 길항제)는 관련 기술 분야에 공지되고, 하기에 논의된 검정을 포함하는 기능성 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 전형적으로 검정은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 LAIR-1을 통한 신호전달을 증가시키는지(즉, 효능제) 또는 감소시키는지(즉, 길항제)를 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서 검정은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 LAIR-1에 의해서 음성적으로 조절된 면역 반응을 감소시키는지(즉, 효능제) 또는 증가시키는지(즉, 길항제)를 결정하는 것을 포함한다.
일부 실시형태에서, 개시된 항체 및 이의 항원 결합 단편은 LAIR-1 또는 LAIR-2(예를 들어, 서열번호 1 내지 6 중 어느 하나)에 면역특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 LAIR-1 또는 LAIR-2의 세포외 도메인에 결합한다.
예를 들어,
(I) 세포(특히 살아있는 세포)의 표면 상에 배열된;
(II) 내생 농도로 세포(특히 살아있는 세포)의 표면 상에 배열된;
(III) 살아있는 세포의 표면 상에 배열된(그리고 LAIR-1과 이의 리간드 간의 결합을 조정함);
(IV) 살아있는 세포의 표면 상에 배열된(그리고 LAIR-1에 의한 면역 억제를 감소 또는 저해함);
(V) 살아있는 세포의 표면 상에 배열된(그리고 LAIR-1에 의한 면역 억제를 유도 또는 향상시킴);
(VI) 살아있는 세포의 표면 상에 배열된(여기서 세포는 항원-제시 세포(예를 들어, 단핵구, 대식세포, 또는 수지상 세포), T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 이들의 조합물을 비롯한 골수 세포임);
(VII) I 내지 IV 및 VI의 조합;
(VIII) I 내지 III 및 V 내지 IV의 조합; 및
(IX) 살아있는 골수 또는 림프구 유래 암 세포(AML 또는 ALL)의 표면 상에 배열된(그리고 암 줄기세포의 자기 재생을 감소시키는 아포토시스 및 분화를 향상시킴) LAIR-1에 면역특이적으로 결합할 수 있는 분자가 제공된다.
가용성 내생 LAIR-2에 면역특이적으로 결합할 수 있는 분자가 또한 제공된다. 일부 실시형태에서 분자는 LAIR-2가 이의 리간드와 결합하거나 달리 상호작용하는 것을 감소시키거나 예방한다.
일부 실시형태에서, 분자는 LAIR-1 발현 세포의 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC), 보체 의존적 세포독성(CDC) 또는 다른 기전을 통한 세포 아포토시스를 유도할 수 있다.
LAIR-1 또는 LAIR-2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하기 위해서, LAIR-1 또는 LAIR-2에 대한 정제된 단백질, 폴리펩타이드, 단편, 융합체, 또는 에피토프, 또는 이의 핵산 서열로부터 발현된 폴리펩타이드가 사용될 수 있다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 관련 기술 분야에 공지된 임의의 적합한 방법, 예컨대, 하기에 보다 상세하게 기술된 것을 사용하여 제조될 수 있다.
a. 인간 및 인간화된 항체
다수의 비인간 항체(예를 들어, 마우스, 래트 또는 토끼로부터 유래된 것)는 인간에서 본래 항원성이기 때문에, 인간에게 투여될 때 바람직하지 않은 면역 반응을 생성시킬 수 있다. 따라서, 방법에서 인간 또는 인간화된 항체의 사용은 인간에게 투여된 항체가 바람직하지 않은 면역 반응을 일으킬 기회를 줄이기 위해서 제공된다.
면역화 시, 내생 글로불린 생산의 부재 하에서 인간 항체의 완전 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물(예를 들어, 마우스)이 사용될 수 있다. 예를 들어, 키메라 및 생식계열 돌연변이체 마우스에서의 항체 중쇄 결합 영역(J(H)) 유전자의 동형 결실은 내생 항체 생산의 완전한 저해를 초래한다고 설명되어 있다. 이러한 생식계열 돌연변이체 마우스에서의 인간 생식계열 면역글로불린 유전자 배열의 전달은 항원 시험감염 시 인간 항체의 생산을 초래할 것이다.
임의로, 항체는 다른 종에서 생성되고, 및 인간에서의 투여를 위해서 "인간화된다". 비인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 인간화된 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)이다. 인간화된 항체는 수령인 항체의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비인간 종(공여자 항체), 예컨대, 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기에 의해서 대체된 인간 면역글로불린(수령인 항체)이다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 상응하는 비인간 잔기에 의해서 대체된다. 인간화된 항체는 또한 수령인 항체에서도 내수송된 CDR 또는 프레임워크에서도 발견되지 않는 잔기를 또한 함유할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인 중 실질적으로 전부를 함유할 것인데, 여기서 CDR 영역 중 전부 또는 실질적으로 전부는 비인간 면역글로불린의 것에 상응하고, FR 영역 중 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 것이다. 인간화된 항체는 또한 적어도 일부의 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 최적으로 함유할 것이다.
비인간 항체의 인간화 방법은 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Jones, P.T., et al. (1986). Replacing the complementarity-determining regions in a human antibody with those from a mouse. Nature 321, 522-525] 참고). 일반적으로, 인간화된 항체는 비인간인 기원으로부터의 그것 내에 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이러한 비인간 아미노산 잔기는 종종 "내수송" 잔기로서 지칭되는데, 이것은 전형적으로 "내수송" 가변 도메인으로부터 취해진다. 항체 인간화 기술은 일반적으로 항체 분자의 하나 이상의 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 DNA 서열을 조정하기 위해서 재조합 DNA 기술을 사용하는 것을 포함한다. 인간화는 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 인간 항체의 상응하는 서열로 대체함으로써 본질적으로 수행될 수 있다. 따라서, 비인간 항체(또는 이의 단편)의 인간화된 형태는 키메라 항체 또는 단편이며, 여기서 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 짧은 부분이 비인간 종으로부터의 상응하는 서열로 치환되어 있다. 실제로, 인간화된 항체는 전형적으로 일부의 CDR 잔기 및 가능하게는 일부의 FR 잔기가 설치류 항체 내의 유사한 부위로부터의 잔기에 의해서 치환된 인간 항체이다.
인간화된 항체를 제조하는 데 사용될 인간 가변 도메인, 경쇄 및 중쇄 둘 모두의 선택은 항원성을 감소시키기 위해서 매우 중요하다. "최상 정합" 방법에 따라서, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열은 공지된 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해서 스크리닝된다. 이어서 설치류의 것에 가장 유사한 인간 서열이 인간화된 항체에 대해서 인간 프레임워크(FR)로서 허용된다. 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위군의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 특정 프레임워크를 사용한다. 동일한 프레임워크가 몇몇 상이한 인간화된 항체에 대해서 사용될 수 있다.
항체는 항원에 대한 높은 친화도 및 다른 바람직한 생물학적 특성을 보유하면서 인간화되는 것이 추가로 중요하다. 이러한 목적을 달성하기 위해서, 인간화된 항체는 모체 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 사용하여 모체 서열 및 상이한 개념의 인간화된 생성물의 분석 방법에 의해서 제조될 수 있다. 3차원 면역글로불린 모델은 일반적으로 입수 가능하고, 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 친숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 입체배좌 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 입수 가능하다. 이러한 디스플레이의 조사는 후보 면역글로불린 서열의 기능에서 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉, 항원에 결합하는 후보 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이러한 방식에서, FR 잔기는 컨센서스 및 내수송 서열로부터 선택 및 조합될 수 있어서 목적하는 항체 특징, 예컨대, 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화도가 달성된다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는 데 직접적으로 그리고 가장 실질적으로 관여된다.
항체는 물질에 결합되거나 또는 검출 가능한 모이어티로 표지될 수 있거나 또는 결합되고 표지될 수 있다. 본 발명의 조성물에서 고려되는 검출 가능한 모이어티는 형광, 효소 및 방사성 마커를 포함한다.
b. 단일 쇄 항체
단일 쇄 항체의 생산 방법은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 단일 쇄 항체는 짧은 펩타이드 링커를 사용하여 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 함께 융합하여, 단일 분자 상에서 항원 결합 부위를 재구성함으로써 생성된다. 하나의 가변 도메인의 C-말단이 15 내지 25개의 아미노산 펩타이드 또는 링커를 통해서 다른 가변 도메인의 N-말단에 테더링된 단일 쇄 항체 가변 단편(scFv)이 개발되었는데, 이것은 항원 결합 및 결합의 특이성을 상당히 방해하지 않는다. 링커는 중쇄 및 경쇄가 이의 적절한 입체배좌 배향으로 함께 결합하는 것을 허용하도록 선택된다. 이들 Fv는 네이티브 항체의 중쇄 및 경쇄에 존재하는 불변 영역(Fc)이 존재하지 않다.
c. 1가 항체
시험관내 방법이 또한 1가 항체를 제조하기에 적합하다. 단편, 특히, Fab 단편을 생산하기 위한 항체의 소화는 관련 기술 분야에 공지된 일상적인 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 소화는 파파인을 사용하여 수행될 수 있다. 항체의 파파인 소화는 전형적으로 각각 단일 항원 결합 부위, 및 잔류하는 Fc 단편을 갖는, Fab 단편이라고 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편을 생성한다. 펩신 처리는, 2개의 항원 조합 부위를 갖고, 항원을 여전히 가교결합할 수 있는, F(ab')2 단편이라 지칭되는 단편을 산출한다.
항체 소화에서 생산되는 Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 도메인의 카복시 말단에서의 몇몇 잔기의 첨가에 의해서 Fab 단편과 상이하다. F(ab')2 단편은 힌지 영역에서 다이설파이드 브리지에 의해서 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 2가 단편이다. Fab'-SH는 본 명세서에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올기를 보유하는 Fab'에 대한 명칭이다. 항체 단편은 본래 그 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산된다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
d. 혼성 항체
항체는 혼성 항체일 수 있다. 혼성 항체에서, 하나의 중쇄 및 경쇄 쌍은 하나의 에피토프에 대해서 발생된 항체에서 발견되는 것과 상동성인 반면, 다른 중쇄 및 경쇄 쌍은 또 다른 에피토프에 대해서 발생된 항체에서 발견되는 쌍에 대해서 상동성이다. 이러한 결과는 다작용성 원자가의 특성, 즉, 적어도 2종의 상이한 에피토프에 동시에 결합하는 능력을 초래한다. 이러한 혼성체는 각각의 성분 항체를 생산하는 하이브리도마의 융합에 의해서 또는 재조합 기술에 의해서 형성될 수 있다. 이러한 혼성체는 물론 또한 키메라 쇄를 사용하여 형성될 수 있다.
e. 항체 단편의 접합체 또는 융합체
항체의 표적화 기능은 항체 또는 이의 단편을 치료제와 커플링시킴으로써 치료적으로 사용될 수 있다. 항체 또는 항체 단편 및 치료제를 포함하는, 항체 또는 단편(예를 들어, 적어도 일부의 면역글로불린 불변 영역(Fc))과 치료제의 이러한 커플링은 면역접합체를 제조함으로써 또는 융합 단백질을 제조함으로써 달성될 수 있다.
항체 또는 항체 단편 및 치료제를 포함하는, 항체 또는 단편과 치료제의 이러한 커플링은 면역접합체를 제조함으로써 또는 융합 단백질을 제조함으로써 또는 항체 또는 단편을 핵산, 예컨대, siRNA에 연결함으로써 달성될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항체는 이의 반감기를 변경시키도록 변형된다. 일부 실시형태에서, 항체의 반감기를 증가시켜 항체가 더 긴 시간 기간 동안 순환계 또는 치료 부위에 존재하도록 하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 순환계 또는 치료될 부위에서 연장된 시간 기간 동안 항체의 역가를 유지시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체는 예를 들어, Xtend(상표명) 항체 반감기 연장 기술(젠코어(Xencor), 미국 캘리포니아주 몬로비아 소재)을 사용하여 반감기를 연장시킨 Fc 변이체로 조작될 수 있다. 다른 실시형태에서, 항-DNA 항체의 반감기는 가능한 부작용을 감소시키기 위해서 감쇠된다. 개시된 접합체는 주어진 생물학적 반응을 변형시키기 위해서 사용될 수 있다. 약물 모이어티는 전통적인 화학 치료제에 제한되는 것으로서 이해되어서는 안 된다. 예를 들어, 약물 모이어티는 목적하는 생물학적 활성도를 보유하는 단백질 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 이러한 단백질은 예를 들어, 독소, 예컨대, 아브린(abrin), 리신(ricin) A, 슈도모나스 외독소, 또는 디프테리아 독소를 포함할 수 있다.
f. 예시적인 항체
일 실시형태는 1E11, 1G7, 4B3, 5A6, 5E1, 6B2, 6F4, 6G6, 7G3, 9H6, 11B3, 12E10a 및 12E10b로 이루어진 군으로부터 선택된 하이브리도마에 의해서 생산된 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 1E11, 1G7, 4B3, 5A6, 5E1, 6B2, 6F4, 6G6, 7G3, 9H6, 11B3, 12E10a 및 12E10b로 이루어진 군으로부터 선택된 하이브리도마 중 하나 이상에 의해서 생산된 항체의 적어도 하나의 경쇄 또는 적어도 하나의 중쇄를 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107 또는 115에 따른 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄와 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄를 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103 또는 111에 따른 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄와 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄를 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107 또는 115에 따른 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄와 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄, 및 서열번호 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103 또는 111에 따른 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄를 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 20 내지 22, 24 내지 26, 28 내지 30, 32 내지 34, 36 내지 38, 40 내지 42, 44 내지 46, 48 내지 50, 52 내지 54, 56 내지 58, 60 내지 62, 64 내지 66, 68 내지 70, 72 내지 74, 76 내지 78, 80 내지 82, 84 내지 86, 88 내지 90, 92 내지 94, 96 내지 98, 100 내지 102, 104 내지 106, 108 내지 110, 112 내지 114 및 116 내지 118로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역(CDR)의 군으로부터 선택된 CDR을 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 20 내지 22, 24 내지 26, 28 내지 30, 32 내지 34, 36 내지 38, 40 내지 42, 44 내지 46, 48 내지 50, 52 내지 54, 56 내지 58, 60 내지 62, 64 내지 66, 68 내지 70, 72 내지 74, 76 내지 78, 80 내지 82, 84 내지 86, 88 내지 90, 92 내지 94, 96 내지 98, 100 내지 102, 104 내지 106, 108 내지 110, 112 내지 114 및 116 내지 117로 이루어진 군으로부터 선택된 복수의 CDR을 갖는 항-LAIR 항체를 제공한다. 복수의 CDR은 2 내지 12개일 수 있다.
또 다른 실시형태는 서열번호 120 또는 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 갖는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 126 또는 서열번호 128에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 갖는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 132 또는 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 갖는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 138 또는 서열번호 140에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 142에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 갖는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 124, 130, 136 또는 142에 따른 경쇄 아미노산 서열 및/또는 서열번호 120, 122, 126, 128, 132, 134, 138 또는 140에 따른 중쇄 아미노산을 갖는 항체를 암호화하는 핵산 서열을 제공한다.
또 다른 실시형태는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107 또는 115가변 경쇄 및/또는 서열번호 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103 또는 111에 따른 가변 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 제공한다. 경쇄 및/또는 중쇄를 암호화하는 핵산은 발현 벡터의 부분일 수 있다. 핵산은 세포에 의해서 발현될 수 있다. 발현은 유도적 또는 구성적일 수 있다.
2. 단백질 및 폴리펩타이드
a. 단백질 및 폴리펩타이드 조성물
면역조정제는 단백질, 폴리펩타이드, 또는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들어, 면역조정제는 LAIR-1 또는 LAIR-2의 단리된 또는 재조합 단백질 또는 폴리펩타이드, 또는 이의 기능성 단편, 변이체, 또는 융합 단백질일 수 있다.
단백질 또는 폴리펩타이드, 또는 이의 기능성 단편, 변이체, 또는 융합 단백질은 효능제 또는 길항제일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서 LAIR-1의 길항제는 LAIR-1의 리간드에 결합하는 LAIR-1 또는 LAIR-2 폴리펩타이드 또는 이의 단편 또는 융합 단백질이다. 폴리펩타이드는 LAIR-1 또는 LAIR-2의 가용성 단편, 예를 들어 세포외 도메인 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 융합 단백질일 수 있다. 일부 실시형태에서, LAIR-1의 가용성 리간드는 LAIR-1을 통해서 신호 변환을 증가시키는, 효능제로서 제공될 수 있다.
LAIR-1 또는 LAIR-2의 단백질 또는 폴리펩타이드 또는 이의 임의의 단편, 변이체 또는 융합 단백질의 활성도(즉, 효능제 또는 길항제)는 관련 기술 분야에 공지되고, 하기에 논의된 검정을 포함하는 기능성 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 전형적으로 검정은 단백질, 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체 또는 융합 단백질이 LAIR-1 수용체를 통한 신호전달을 증가시키는지(즉, 효능제) 또는 감소시키는지(즉, 길항제)를 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서 검정은 단백질, 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 융합 단백질이 LAIR-1과 연관된 면역 반응(즉, 공자극성 또는 공저해성)을 증가시키는지(즉, 효능제) 또는 감소시키는지(즉, 길항제)를 결정하는 것을 포함한다. 전형적으로 검정은 단백질, 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체 또는 융합 단백질이 LAIR-1을 통한 신호전달을 증가시키는지(즉, 효능제) 또는 감소시키는지(즉, 길항제)를 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서 검정은 단백질, 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 융합 단백질이 LAIR-1에 의해서 부정적으로 조절되는 면역 반응을 감소시키는지(즉, 효능제) 또는 증가시키는지(즉, 길항제)를 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서 검정은 단백질, 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 융합 단백질이 AML 및 ALL 줄기세포의 감소된 자기 재생 능력을 초래하는 급성 골수성 백혈병 세포 및 급성 림프모구성 백혈병 세포의 아포토시스 및 분화를 증가시키는지(즉, 길항제)를 결정하는 것을 포함한다.
LAIR-1 및 LAIR-2에 대한 핵산 및 폴리펩타이드 서열은 관련 기술 분야에 공지되어 있고, 예시적인 단백질 및 펩타이드 서열은 상기에 제공되어 있다. 이러한 서열은 하기에 보다 상세하게 논의된 바와 같이 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 사용되어 LAIR-1 또는 LAIR-2의 임의의 단백질 또는 폴리펩타이드, 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 또는 융합 단백질을 제조할 수 있다. 일반적으로, LAIR-1 및 LAIR-2의 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체, 및 융합체는 신호 서열을 암호화하는 서열을 포함하는 핵산으로부터 발현된다. 신호 서열은 일반적으로 미성숙 폴리펩타이드로부터 절단되어 신호 서열이 존재하지 않는 성숙 폴리펩타이드를 생성시킨다. 신호 서열은 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 또 다른 폴리펩타이드에 의해서 대체되어 폴리펩타이드의 발현 수준, 분비, 용해도 또는 다른 특성에 영향을 줄 수 있다. 신호 서열을 갖는 LAIR-1 및 LAIR-2와 갖지 않는 것 둘 모두가 개시된다. 일부 경우에, 관련 기술 분야에 공지되어 있거나 기술된 바와 같은 성숙 단백질, 즉, 신호 서열이 없는 단백질 서열은 추정 성숙 단백질이다. 정상 세포 발현 동안, 신호 서열은 세포 펩티다제에 의해서 제거되어 성숙 단백질을 산출할 수 있다. 성숙 단백질의 서열은 관련 기술 분야에 공지된 방법을 사용하여 결정 또는 확인될 수 있다.
i. 단편
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, LAIR-1 또는 LAIR-2의 단편은 전장 단백질보다 더 짧은 적어도 하나의 아미노산인 폴리펩타이드의 임의의 하위세트를 지칭한다. 유용한 단편은 이의 자연 리간드 또는 리간드들에 결합하는 능력을 보유하는 것을 포함한다. 임의의 전장 LAIR-1 또는 LAIR-2의 단편인 폴리펩타이드는 전장 단백질과 비교할 때 각각 전형적으로 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 100%, 또는 심지어는 100% 초과의, 그의 자연 리간드에 결합하는 능력을 갖는다.
LAIR-1 및 LAIR-2의 단편은 무세포 단편을 포함한다. 무세포 폴리펩타이드는 생산 세포로부터 제거, 분비 또는 달리 추출될 수 있는 전장, 막관통, 폴리펩타이드의 단편일 수 있다. 폴리펩타이드의 무세포 단편은 폴리펩타이드의 세포외 도메인 중 일부 또는 전부를 포함할 수 있고, 전장 단백질의 세포내 도메인 및/또는 막관통 도메인의 일부 또는 전부가 존재하지 않는다. 일 실시형태에서, 폴리펩타이드 단편은 전장 단백질의 전체 세포외 도메인을 포함한다. 다른 실시형태에서, 폴리펩타이드의 무세포 단편은 전장 단백질의 생물학적 활성도를 보유하는 세포외 도메인의 단편을 포함한다. 세포외 도메인은 막관통 도메인으로부터의 1, 2, 3, 4 또는 5개의 인접한 아미노산, 및/또는 신호 서열로부터의 1, 2, 3, 4 또는 5개의 인접한 아미노산을 포함할 수 있다. 대안적으로, 세포외 도메인은 C-말단, N-말단 또는 둘 모두로부터 제거된 1, 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 아미노산을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서 세포외 도메인은 단편의 유일한 기능성 도메인(예를 들어, 리간드 결합 도메인)이다.
ii. 변이체
LAIR-1 및 LAIR-2의 변이체 및 이의 단편이 또한 제공된다. 일부 실시형태에서, 변이체는 서열번호 1 내지 6 중 임의의 하나와 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일하다. 유용한 변이체는 본 명세서에 기술된 검정 중 임의의 것에 의해서 제시된 바와 같이, 생물학적 활성도를 증가시키는 것, 또는 단백질의 반감기 또는 안정성을 증가시키는 것을 포함한다. LAIR-1 또는 LAIR-2의 단백질 및 폴리펩타이드, 및 이의 단편, 변이체, 및 융합 단백질은 생물학적 활성도를 증가시키도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, LAIR-2 폴리펩타이드, 단백질, 또는 이의 단편, 변이체 또는 융합체는 이의 기능을 증가시키는 적어도 하나의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되었다.
다른 변이체는 다른 LAIR-1및/또는 LAIR-2 리간드에 비해서 하나 이상의 유형의 LAIR-1 및/또는 LAIR-2 리간드에 선택적으로 결합하도록 조작된 것이다. 예를 들어, 변이체는 1종 이상의 콜라겐, SP-D, C1q 또는 MBL 또는 이들의 특이적 조합물에 우세하게 결합하도록 조작될 수 있다. 우세한 결합은 또 다른 유형의 리간드보다 하나의 유형의 리간드에 대해서 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 그 초과인 결합을 지칭한다.
또 다른 변이체는 또 다른 것과 비교할 때 하나의 리간드에 대해서 감소된 결합을 갖도록 조작될 수 있다. 이러한 변이체는 적당한 영향을 갖는 면역 반응을 조정하기 위해서 더 강한 결합 특성을 갖는 변이체와 조합하여 사용될 수 있다.
추가의 다른 실시형태에서, 변이체는 다른 것에 비해서 하나 이상의 콜라겐 결합 부위에 대해서 감소된 결합을 갖도록 조작될 수 있다. 문헌[Brondijk, et al., Blood, 18(115):1364-73 (2010)]에 논의된 바와 같이, LAIR-1을 갖는 잔기의 돌연변이는 상이한 콜라겐 리간드에 대한 결합에 차별적인 효과를 가질 수 있다. 예를 들어, 고정된 콜라겐 I, III, 및 IV에 대한 접착은 R59A, E61A, R65A, 및 E111A 돌연변이체에서 상당히 감소되었지만, 효과의 크기는 시험된 콜라겐의 유형에 좌우된다. 또한, 접착은 돌연변이체 R62A 및 N69A의 경우 다소 감소되었다. 일부 실시형태에서, 변이체는 서열번호 1에 비해서 R59, E61, R62, E63, R65, S66, Y68, N69, I102, R100, W109, E111, Q112, 및 Y115 중 하나 이상에서 돌연변이된다. 일부 실시형태에서, 변이체는 R59, E61, R65, E111, R62A, 및 N69A 중 하나 이상에서 돌연변이된다. 특정 실시형태에서, 돌연변이(들)는 알라닌으로의 치환이다.
마지막으로, 변이체 폴리펩타이드는 야생형에 비해서 증가된 반감기를 갖도록 조작될 수 있다. 이러한 변이체는 전형적으로 효소 분해에 저항하도록 변형된다. 예시적인 변형은 효소 분해에 저항하는 변형된 아미노산 잔기 및 변형된 펩타이드 결합을 포함한다. 이를 달성하기 위한 다양한 변형이 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 변이체는 혈청 및 엔도솜 pH에서 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 또는 융합체의 반감기에 대한, 수용체에 대한 친화도의 효과를 조정하도록 변형될 수 있다.
iii. 융합 단백질
융합 폴리펩타이드는 직접 또는 제2 폴리펩타이드에 융합된 링커 펩타이드 서열을 통해서 제2 폴리펩타이드에 융합된 폴리펩타이드 LAIR-1 또는 Liar-2의 전부 또는 일부를 포함하는 제1 융합 파트너를 갖는다. 융합 단백질은 2개 이상의 융합 단백질을 이량체화 또는 다량체화하는 기능을 하는 도메인을 임의로 함유한다. 펩타이드/폴리펩타이드 링커 도메인은 별개의 도메인일 수 있거나, 또는 대안적으로는 융합 단백질의 다른 도메인(제1 폴리펩타이드 또는 제2 폴리펩타이드) 중 하나 내에 함유될 수 있다. 유사하게, 융합 단백질을 이량체화 또는 다량체화하는 기능을 하는 도메인은 별개의 도메인일 수 있거나, 또는 대안적으로는 융합 단백질의 다른 도메인(제1 폴리펩타이드 또는 제2 폴리펩타이드 또는 펩타이드/폴리펩타이드 링커 도메인) 중 하나 내에 함유될 수 있다. 일 실시형태에서, 이량체화/다량체화 도메인 및 펩타이드/폴리펩타이드 링커 도메인은 동일하다.
본 명세서에 개시된 융합 단백질은 화학식 I을 갖는다:
N-R1-R2-R3-C
식 중, "N"은 융합 단백질의 N-말단을 나타내고, "C"는 융합 단백질의 C-말단을 나타낸다. 일부 실시형태에서, "R1"은 LAIR-1 또는 Liar-2의 폴리펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체이고, "R2"는 임의적인 펩타이드/폴리펩타이드 링커 도메인이고, "R3"은 제2 폴리펩타이드이다. 대안적으로, R3은 LAIR-1 또는 Liar-2의 폴리펩타이드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체일 수 있고, R1은 제2 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 실시형태에서, LAIR-1 또는 Liar-2 폴리펩타이드는 세포외 도메인 또는 이의 단편, 예컨대, Ig-유사 C2-도메인, 또는 상기에 논의된 바와 같이 다이설파이드 결합을 형성하는 시스테인에 의해서 획정된 영역이다.
이량체화 또는 다량체화는 이량체화 또는 다량체화 도메인을 통해서 2개 이상의 융합 단백질 간에 또는 그 중에서 일어날 수 있다. 대안적으로, 융합 단백질의 이량체화 또는 다량체화는 화학적 가교결합에 의해서 일어날 수 있다. 형성되는 이량체 또는 다량체는 동종이량체/동종다량체 또는 이종이량체/이종다량체일 수 있다.
일부 실시형태에서, 융합 단백질은 Ig Fc 영역에 융합된, LAIR-1 또는 LAIR-2 또는 이의 단편 또는 변이체의 세포외 도메인을 포함한다. 재조합 Ig 융합 단백질은 상기에 기술된 바와 같이, 세포외 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체의 세포외 도메인의 암호 영역을 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 또는 마우스 IgG2a, 또는 다른 적합한 Ig 도메인의 Fc 영역에 융합시킴으로써 제조될 수 있다(Chapoval, et al., Methods Mol. Med., 45:247-255 (2000)).
iv. 예시적인 융합 단백질
예시적인 융합 단백질이 하기에 제공된다. 신호 서열은 이중 밑줄로 표현되고, LAIR-1 또는 LAIR-2 세포외 도메인은 단일 밑줄로 표현되고, Ig 도메인은 이탤릭체로 표현된다. 신호 서열은 전형적으로 성숙 단백질에서 제거된다. 추가적으로, 다른 폴리펩타이드 또는 유기체로부터의 신호 펩타이드가 사용되어(예를 들어, 치환되어) 제조 동안 숙주로부터의 융합 단백질의 분비를 향상시킬 수 있다.
hLAIR1.hG1
일부 실시형태에서, 인간 LAIR1-hIg 융합 단백질(hIgG1)(hLAIR1.hG1)은 하기 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다:
신호 서열이 존재하지 않는 서열번호 9는 다음과 같다:
인간 LAIR1-hIg(hIgG1)(hLAIR1.hG1)는 LAIR-1 리간드에 대한 디코이로서 작용함으로써 LAIR-1 신호전달을 위한 길항제일 수 있고, 암 또는 감염성 질환의 치료를 위해서 사용될 수 있다. hLAIR1.hG1은 또한 hLAIR2.hG1의 활성도를 시험하기 위한 대조군일 수 있다.
hLAIR1.mG2a
일부 실시형태에서, 인간 LAIR1-mIg 융합 단백질(mIgG2a)(hLAIR1.mG2a)은 하기 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다:
신호 서열이 존재하지 않는 서열번호 11은 다음과 같다:
일부 실시형태에서, 인간 LAIR1-mIg 융합 단백질(mIgG2a)(hLAIR1.mG2a)을 사용하여 항-hLAIR1 항체를 생성한다. 항체는 예를 들어, 암의 치료를 위해서 사용될 수 있는 LAIR-1 길항제 항체(예를 들어, mAb, 또는 이의 단편), 또는 자가면역 질환의 치료를 위해서 사용될 수 있는 LAIR-1 효능제 항체(예를 들어, mAb, 또는 이의 단편)일 수 있다.
mLAIR1.mG2a
일부 실시형태에서, 마우스 LAIR1-mIg 융합 단백질(mLAIR1.mG2a)은 하기 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다:
신호 서열이 존재하지 않는 서열번호 13은 다음과 같다:
일부 실시형태에서, 마우스 LAIR1-mIg 융합 단백질은 마우스 모델에서 생체내 연구를 위해서 사용되는 마우스 유사체이다.
hLAIR2.hG1
일부 실시형태에서, 인간 LAIR2-hIg 융합 단백질(hIgG1)(hLAIR2.hG1)은 하기 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다:
신호 서열이 존재하지 않는 서열번호 15는 다음과 같다:
인간 LAIR2-hIg 융합 단백질(hIgG1)(hLAIR2.hG1)은 LAIR-1 리간드에 대한 디코이로서 작용함으로써 Liar-1 신호전달을 위한 길항제일 수 있고, 암 또는 감염성 질환의 치료를 위해서 사용될 수 있다.
LAIR2.mIg
일부 실시형태에서, 인간 LAIR2.mIg 융합 단백질(mIgG2a)은 하기 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다:
신호 서열이 존재하지 않는 서열번호 17은 다음과 같다:
인간 LAIR2.mIg 융합 단백질(mIgG2a)을 사용하여 길항성 항-LAIR2(예를 들어, mAb, 또는 이의 단편)를 생성할 수 있는데, 이것은 자가면역 질환의 치료를 위해서 사용될 수 있다.
v. 폴리펩타이드 변형
폴리펩타이드 및 융합 단백질은 정상 세포 환경에서 폴리펩타이드에 존재할 수 있는 화학 모이어티에 의해서 변형, 예를 들어, 포스포릴화, 메틸화, 아마이드화, 설페이트화, 아실화, 글리코실화, 스모화(sumoylation) 및 우비퀴틸화(ubiquitylation)될 수 있다. 융합 단백질은 또한 방사성 동위원소 및 형광 화합물을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 검출 가능한 신호를 직접적으로 또는 간접적으로 제공할 수 있는 표지로 변형될 수 있다.
폴리펩타이드 및 융합 단백질은 또한 세포 환경에서 폴리펩타이드에 일반적으로 첨가되지 않는 화학 모이어티에 의해서 변형될 수 있다. 예를 들어, 개시된 융합 단백질은 또한 폴리에틸렌 글리콜 중합체(PEG) 쇄를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 중합체 쇄의 공유 부착에 의해서 변형(즉, 페길화)될 수 있다. PEG에 대한 거대분자의 접합은 다양한 약물의 약동력학(PK) 프로파일을 변경시켜 이의 치료 가능성을 개선시키는 효과적인 전략으로서 최근에 출현하였다. PEG 접합은 효소 분해에 대해서 보호하고, 신장에 의한 여과를 둔화시키고, 중화 항체의 생성을 감소시킴으로써 순환계에서 약물의 보유를 증가시킨다. 또한, PEG 접합체는 융합 단백질의 다량체화를 허용하기 위해서 사용될 수 있다.
변형은 폴리펩타이드의 표적화된 아미노산 잔기를, 선택된 측쇄 또는 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화 작용제와 반응시킴으로써 분자에 도입될 수 있다. 또 다른 변형은 단백질의 사이클화이다.
폴리펩타이드의 화학적 유도체의 예는 석신산 무수물 또는 다른 카복실산 무수물로 유도체화된 라이신일 및 아미노 말단 잔기를 포함한다. 사이클릭 카복실산 무수물로의 유도체화는 라이신일 잔기의 전하를 반전시키는 효과를 갖는다. 아미노-함유 잔기를 유도체화시키기에 적합한 다른 시약은 이미도에스터, 예컨대, 메틸 피콜린이미데이트; 피리독살 포스페이트; 피리독살; 클로로보로하이드라이드; 트라이나이트로벤젠설폰산; O-메틸아이소우레아; 2,4 펜탄다이온; 및 글리옥실레이트와의 트랜스아미나제-촉매화 반응을 포함한다. 카복실 측기, 아스파틸 또는 글루탐일은 카보다이이미드(R―N=C=N--R'), 예컨대, 1-사이클로헥실-3-(2-모폴린일-(4-에틸)카보다이이미드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-다이메틸펜틸) 카보다이이미드와의 반응에 의해서 선택적으로 변형될 수 있다. 추가로, 아스파틸 및 글루탐일 잔기는 암모니아와의 반응에 의해서 아스파라긴일 및 글루타민일 잔기로 전환될 수 있다. 융합 단백질은 또한 하나 이상의 L-아미노산에 대해서 치환된 하나 이상의 D-아미노산을 포함할 수 있다.
vi. 변형된 결합 특성
단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체는 투여될 용량 및 용량 요법에 관련된다. 일 실시형태에서 개시된 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체는 이에 결합하는 다른 수용체 분자에 비해서, 더 높은 (예를 들어, 리간드 상의) 결합 부위의 점유 기간 또는 더 높은 점유 백분율을 나타내는 LAIR-1 리간드에 대한 결합 특성을 갖는다. 다른 실시형태에서, 개시된 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체는 야생형 단백질에 비해서 LAIR-1 리간드에 대한 감소된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시형태에서 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체는 LAIR-1 리간드에 대해서 비교적 높은 친화도를 갖고, 따라서 비교적 느린 오프 레이트(off rate)를 가질 수 있다. 다른 실시형태에서, 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체는 일정 일, 주 또는 개월의 기간 동안 간헐적으로 투여되어 면역 반응(이는 다음 투여 이전에 회복될 수 있음)을 약화시키는데, 이것은 면역 반응을 완전히 켜거나 끄지 않으면서 면역 반응을 변경시키기 위해서 제공될 수 있고, 장기간 부작용을 회피할 수 있다.
3. 단리된 핵산 분자
단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체를 암호화하는 단리된 핵산 서열이 본 명세서에 개시된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "단리된 핵산"은 포유동물 게놈 내의 핵산의 하나의 측 또는 양측을 일반적으로 플랭킹하는 핵산을 비롯한, 포유동물 게놈 내에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 핵을 지칭한다. 용어 "단리된"은 핵산과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 또한 임의의 비자연 발생 핵산 서열과의 조합물을 포함하는데, 이는 이러한 비자연 발생 서열이 자연에서 발견되지 않고, 자연 발생 게놈 내의 바로 인접한 서열을 갖지 않기 때문이다.
단리된 핵산은 예를 들어, 자연 발생 게놈 내의 DNA 분자가 제거되거나 존재하지 않는 바로 플랭킹된 일반적으로 발견되는 핵산 서열 중 하나가 제공된 DNA 분자일 수 있다. 따라서, 단리된 핵산은 다른 서열과 독립적인 별개의 분자로서 존재하는 DNA 분자(예를 들어, 화학적으로 합성된 핵산 또는 cDNA 또는 PCR 또는 제한 엔도뉴클레아제 처리에 의해서 생산된 게놈 DNA 단편), 뿐만 아니라 벡터, 자체적으로 복제하는 플라스미드, 바이러스(예를 들어, 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스 또는 허피스 바이러스), 또는 원핵생물 또는 진핵생물의 게놈 DNA 내에 혼입된 재조합 DNA를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 또한, 단리된 핵산은 혼성 또는 융합 핵산의 부분인 조작된 핵산, 예컨대, 재조합 DNA 분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, cDNA 라이브러리 또는 게놈 라이브러리 내의 수백 내지 수백만의 다른 핵산 중에 존재하는 핵산, 또는 게놈 DNA 제한 다이제스트를 함유하는 겔 슬라이스는 단리된 핵산으로 간주되어서는 안 된다.
단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체를 암호화하는 핵산은 선택된 발현 숙주에서의 발현을 위해서 최적화될 수 있다. 코돈은 핵산 서열이 유래된 포유동물과 발현 숙주 간의 코돈 사용의 차이를 설명하기 위해서 동일한 아미노산을 암호화하는 대안적인 코돈으로 치환될 수 있다. 이러한 방식에서, 핵산은 발현 숙주-바람직한 코돈을 사용하여 합성될 수 있다.
핵산은 센스 또는 안티센스 배향으로 존재할 수 있거나, LAIR-1 또는 LAIR-2의 폴리펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 참조 서열에 상보적일 수 있다. 핵산은 DNA, RNA 또는 핵산 유사체일 수 있다. 핵산 유사체는 염기 모이어티, 당 모이어티 또는 포스페이트 골격에서 변형될 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어, 핵산의 안정성, 혼성화 또는 용해도를 개선시킬 수 있다. 염기 모이어티에서의 변형은 데옥시티미딘의 경우 데옥시우리딘, 및 데옥시사이티딘의 경우 5-메틸-2'-데옥시사이티딘 또는 5-브로모-2'-데옥시사이티딘을 포함할 수 있다. 당 모이어티의 변형은 리보스 당의 2' 하이드록실의 변형을 포함하여 2'-O-메틸 또는 2'-O-알릴 당을 형성할 수 있다. 데옥시리보스 포스페이트 골격은 변형되어 각각의 염기 모이어티가 6원의 모폴리노 고리에 연결된 모폴리노 핵산, 또는 데옥시포스페이트 골격이 슈도펩타이드 골격에 의해서 대체되고 4개의 염기가 보유된 펩타이드 핵산을 생산할 수 있다(예를 들어, 문헌[Summerton and Weller (1997) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:187-195; 및 Hyrup et al. (1996) Bioorgan. Med. Chem. 4:5-23] 참고). 또한, 데옥시포스페이트 골격은 예를 들어, 포스포로티오에이트 또는 포스포로다이티오에이트 골격, 포스포로아미다이트 또는 알킬 포스포트라이에스터 골격으로 대체될 수 있다.
폴리펩타이드를 암호화하는 핵산은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다. 핵 전달은 "외부" 핵산을 세포 및 궁극적으로는 살아있는 동물 내로 도입하는 것을 포함한다. 핵산을 대상체에게 전달하기 위한 조성물 및 방법은 관련 기술 분야에 공지되어 있다([Understanding Gene Therapy, Lemoine, N.R., ed., BIOS Scientific Publishers, Oxford, 2008] 참고).
4. 벡터 및 숙주 세포
단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체를 암호화하는 벡터가 또한 제공된다. 핵산, 예컨대, 상기에 기술된 것은 세포에서의 발현을 위해서 벡터 내에 삽입될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "벡터"는 삽입된 분절의 복제를 유발하도록 또 다른 DNA 분절이 삽입될 수 있는 리플리콘, 예컨대, 플라스미드, 파지, 바이러스 또는 코스미드이다. 벡터는 발현 벡터일 수 있다. "발현 벡터"는 하나 이상의 발현 제어 서열을 포함하는 벡터이고, "발현 제어 서열"은 또 다른 DNA 서열의 전사 및/또는 번역을 제어 및 조절하는 DNA 서열이다.
벡터 내의 핵산은 하나 이상의 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "작동 가능하게 연결된"은 유전 작제물 내에 도입되어 발현 제어 서열이 관심대상 암호 서열의 발현을 효과적으로 제어하는 것을 의미한다. 발현 제어 서열의 예는 프로모터, 인핸서 및 전사 종결 영역을 포함한다. 프로모터는 전사가 시작되는 지점의 상류(일반적으로 RNA 폴리머라제 II에 대한 개시 부위 근처)의 전형적으로 100개 이내의 뉴클레오타이드의 DNA 분자의 영역으로 구성된 발현 제어 서열이다. 암호 서열을 프로모터의 제어 하에 존재하도록 하기 위해서, 프로모터의 하류에 1개 내지 약 50개의 뉴클레오타이드의 폴리펩타이드의 번역 리딩 프레임의 번역 개시 부위를 위치시킬 필요가 있다. 인핸서는 시간, 위치 및 수준의 면에서 발현 특이성을 제공한다. 프로모터와 달리, 인핸서는 전사 부위로부터 다양한 거리에 위치되는 경우 기능할 수 있다. 인핸서는 또한 전사 개시 부위로부터 하류에 위치될 수 있다. 암호 서열은, RNA 폴리머라제가 암호 서열을 mRNA로 전사할 수 있고, 이어서 그것이 암호 서열에 의해서 암호화된 단백질로 전사될 수 있을 때 "작동 가능하게 연결"되어 있고 세포 내에서 발현 제어 서열의 "제어 하에"있다.
적합한 발현 벡터는 예를 들어, 박테리오파지, 바쿨로바이러스, 담배 모자이크 바이러스, 허피스 바이러스, 사이토메갈로 바이러스, 레트로바이러스, 백시나 바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관 바이러스로부터 유래된 플라스미드 및 바이러스 벡터를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 다수의 벡터 및 발현계가 회사, 예컨대, 노바젠(Novagen)(미국 위스콘신주 매디슨 소재), 클론테크(미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재), 스트라타젠(Stratagene)(미국 캘리포니아주 라올라 소재), 및 인비트로젠 라이프 테크놀로지스(미국 캘리포니아주 칼스배드 소재)로부터 상업적으로 입수 가능하다.
발현 벡터는 태그 서열을 포함할 수 있다. 태그 서열은 전형적으로 암호화된 폴리펩타이드와의 융합체로서 발현된다. 이러한 태그는 카복실 또는 아미노 말단 중 어느 하나를 비롯한 폴리펩타이드 내에 어느 곳에서도 삽입될 수 있다. 유용한 태그의 예는 녹색 형광 단백질(GFP), 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST), 폴리히스티딘, c-myc, 헤마글루티닌, Flag(상표명) 태그(코닥(Kodak), 미국 코네티컷주 뉴헤븐 소재), 말토스 E 결합 단백질 및 단백질 A를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 일 실시형태에서, 개시된 폴리펩타이드 중 하나를 암호화하는 핵산 분자는 예를 들어, 인간 면역글로불린 Cγ1 쇄의 힌지, CH2 및 CH3 영역에 상응하는 아미노산 서열을 갖는, Ig 중쇄 불변 영역의 하나 이상의 도메인을 암호화하는 핵산을 함유하는 벡터 내에 존재한다.
발현될 핵산을 함유하는 벡터는 숙주 세포로 전달될 수 있다. 용어 "숙주 세포"는 재조합 발현 벡터가 도입될 수 있는 원핵 세포 및 진핵 세포를 포함하도록 의도된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "형질전환된" 및 "형질주입된"은 다수의 기술 중 하나에 의한 세포 내로의 핵산 분자(예를 들어, 벡터)의 도입을 포함한다. 특정 기술에 제한되지 않지만, 다수의 이러한 기술은 관련 기술 분야에서 널리 확립된다. 원핵 세포는 예를 들어, 전기천공법 또는 염화칼슘 매개된 형질전환에 의해서 핵산으로 형질전환될 수 있다. 핵산은 예를 들어, 인산칼슘, 공침전, DEAE-덱스트란-매개된 형질주입, 리포펙션, 전기천공법, 또는 미세주사를 비롯한, 기술에 의해서 포유동물 세포 내로 형질주입될 수 있다. 숙주 세포(예를 들어, 원핵 세포 또는 진핵 세포 예컨대, CHO 세포)를 사용하여 예를 들어, 본 명세서에 기술된 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체를 생산할 수 있다.
기술된 벡터를 사용하여 세포에서 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체를 발현할 수 있다. 예시적인 벡터는 아데노바이러스 벡터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 하나의 접근법은 배양물에서 1차 세포 내로의 핵산 전달, 그 다음 전신으로 또는 특정 기관 또는 조직 내로, 숙주 내에서의 생체외 형질전환된 세포의 자가유래 이식을 포함한다. 생체외 방법은 예를 들어, 대상체로부터 세포를 수거하는 단계, 세포를 배양하는 단계, 이를 발현 벡터로 형질도입시키는 단계, 및 세포를 암호화된 폴리펩타이드의 발현에 적합한 조건 하에서 유지시키는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 방법은 분자 생물학 기술 분야에 공지되어 있다. 형질도입 단계는 예를 들어, 인산칼슘, 리포펙션, 전기천공법, 바이러스 감염, 및 바이오리스틱 유전자(biolistic gene) 전달을 비롯한, 생체외 유전자 요법에 대해서 사용되는 임의의 표준 수단에 의해서 달성될 수 있다. 대안적으로, 리포솜 또는 중합체 마이크로입자가 사용될 수 있다. 이어서 성공적으로 형질도입된 세포를 예를 들어, 암호 서열 또는 내약성 유전자의 발현을 위해서 선택할 수 있다. 이어서 세포를 (바람직한 경우) 치사량으로 조사하고, 대상체에게 주입 또는 이식할 수 있다. 일 실시형태에서, 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 함유하는 발현 벡터는 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 세포 내에 형질주입된다.
생체내 핵산 요법은 생체내에서 기능적 활성 DNA의 포유동물 체조직 또는 체기관 내로의 직접 전달에 의해서 달성될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산은 림프구 조직에 직접 투여될 수 있다. 대안적으로, 림프구 조직 특이적 표적화는 림프구 조직-특이적 전사 조절 요소(TRE), 예컨대, B 림프구-, T 림프구- 또는 수지상 세포-특이적 TRE를 사용하여 달성될 수 있다. 림프구 조직 특이적 TRE는 관련 기술 분야에 공지되어 있다.
핵산은 또한 바이러스 수단에 의해서 생체내로 투여될 수 있다. 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자는 관련 기술 분야에 널리 공지된 바와 같이, 복제 결함 레트로바이러스를 생산하는 패키징 세포주를 사용하여 레트로바이러스 벡터 내에 패키징될 수 있다. 복제되지 않을 수 있는, 재조합 아데노바이러스 및 백시나 바이러스 다른 바이러스 벡터가 또한 사용될 수 있다. 네이키드 DNA 또는 RNA, 또는 바이러스 벡터에 더하여, 조작된 박테리아가 벡터로서 사용될 수 있다.
핵산은 또한 리포솜, 중합체 마이크로입자 및 나노입자 및 다양이온, 예컨대, 아시알로당단백질/폴리라이신을 비롯한, 다른 담체에 의해서 전달될 수 있다.
생체내에서 바이러스- 및 담체-매개된 유전자 전달에 더하여, 플라스미드 DNA의 투여 및 입자 폭발 매개된 유전자 전달을 비롯한, 관련 기술 분야에 널리 공지된 물리적 수단이 DNA의 직접 전달을 위해서 사용될 수 있다.
일 실시형태는 LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 구성적으로 또는 유도적으로 발현하는 세포를 제공하며, 여기서 세포는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 또는 이들의 조합에 따른 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 갖는다.
5. 소분자
면역조정제는 소분자일 수 있다. 소분자 효능제 및 길항제 LAIR-1 및 LAIR-2의 길항제는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있거나 또는 일상적인 스크리닝 방법을 사용하여 식별될 수 있다.
일부 실시형태에서, 스크리닝 검정은 시험 화합물의 거대 라이브러리의 무작위 스크리닝을 포함할 수 있다. 대안적으로, 검정은 LAIR-1 또는 LAIR-2의 수준을 조정하는 것으로 의심되는 화합물의 특정 부류에 초점을 맞추기 위해서 사용될 수 있다. 검정은 LAIR-1 신호전달 활성도, 또는 저해성 반응 매개된 LAIR-1의 결정을 포함할 수 있다. 다른 검정은 핵산 전사 또는 번역, mRNA 수준, mRNA 안정성, mRNA 분해, 전사 비율, 및 번역 비율의 결정을 포함할 수 있다.
C. 약제학적 조성물
개시된 면역조정제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 면역조정제를 함유하는 약제학적 조성물은 비경구(근육내, 복강내, 정맥내(IV) 또는 피하 주사), 경피(수동족으로 또는 이온도입법 또는 전기천공법), 또는 점막경유(코, 질, 직장 또는 설하) 투여 경로에 의한 투여 또는 생체침식성(bioerodible) 삽입물을 사용한 투여를 위한 것일 수 있고, 각각의 투여 경로에 적절한 투여형으로 제형화될 수 있다.
일부 생체내 접근법에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 치료적 유효량으로 대상체에게 투여된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 치료하고자 하는 장애의 하나 이상의 증상을 치료, 저해 또는 개선시키거나 또는 목적하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 달리 제공하기에 충분한 투여량을 의미한다. 정확한 투여량은 다양한 인자, 예컨대, 대상체-의존적 변수(예를 들어, 연령, 면역계 건강 등), 질환 및 달성될 치료에 따라서 달라질 것이다.
개시된 면역조정제의 경우, 추가 연구가 수행되기 때문에, 다양한 환자에서 다양한 병태의 치료를 위한 적절한 투여량 수준에 관련된 정보가 제시될 것이며, 통상의 연구자들은 수령인의 치료 내용, 연령 및 일반적인 건강을 고려하여 적절한 투여를 찾아낼 수 있을 것이다. 선택된 투여량은 목적하는 치료 효과, 투여 경로 및 목적하는 치료 기간에 좌우된다. 개시된 면역조정제의 경우, 일반적으로 1일에 0.001 내지 20㎎/신체 ㎏의 투여량 수준이 포유동물에게 투여된다. 일반적으로, 정맥내 주사 또는 주입의 경우, 투여량은 더 낮을 수 있다.
특정 실시형태에서, 면역조정제는 국지적으로, 예를 들어 주사에 의해서 치료하고자 하는 부위에 직접 투여된다. 전형적으로, 주사는 전신 투여에 의해서 달성될 수 있는 것보다 더 큰 면역조정제 조성물의 증가된 농도를 유발한다. 면역조정제 조성물은 치료하고자 하는 부위로부터의 폴리펩타이드의 수동적 확산을 감소시킴으로써 폴리펩타이드 조성물의 증가된 국지화된 농도를 발생시키는 것을 돕기 위해서 상기에 기술된 바와 같이 매트릭스와 조합될 수 있다.
1. 비경구 투여를 위한 제형
일부 실시형태에서, 펩타이드 및 폴리펩타이드를 함유하는 것을 포함하는 본 명세서에 개시된 조성물은 비경구 주사에 의해서 수성 용액으로 투여된다. 이러한 제형은 또한 현탁액 또는 에멀션의 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 유효량의 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물이 제공되며, 이것은 임의로 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 보존제, 가용화제, 유화제, 아주반트 및/또는 담체를 포함한다. 이러한 조성물은 하기 중 하나 이상을 임의로 포함한다: 희석제, 멸균수, 다양한 완충제 내용물(예를 들어, Tris-HCl, 아세테이트, 포스페이트), pH 및 이온 강도의 완충 염수 및 첨가제, 예컨대, 세정제 및 가용화제(예를 들어, TWEEN 20(폴리솔베이트-20), TWEEN 80(폴리솔베이트-80)), 항산화제(예를 들어, 아스코르브산, 소듐 메타바이설파이트), 및 보존제(예를 들어, 티머솔(Thimersol), 벤질 알코올) 및 벌킹 물질(예를 들어, 락토스, 만니톨). 비수성 용매 또는 비히클의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물유, 예컨대, 올리브유 및 옥수수유, 젤라틴 및 주사 가능한 유기 에스터, 예컨대, 에틸 올레에이트이다. 제형은 동결건조되고, 사용 직전에 재용해/재현탁될 수 있다. 제형은 예를 들어, 박테리아 보유 필터를 통한 여과에 의해서, 멸균제를 조성물에 혼입함으로써, 조성물을 조사함으로써 또는 조성물을 가열함으로써 멸균될 수 있다.
2. 경구 투여를 위한 제형
실시형태에서 조성물은 경구 전달을 위해서 제형화된다. 경구 고형 투여형은 일반적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. 1990 (Mack Publishing Co. Easton Pa. 18042) at Chapter 89]에 기술되어 있다. 고형 투여형은 정제, 캡슐, 환제, 트로치제 또는 로젠지, 샤셋(cachet), 펠렛, 분말 또는 과립, 또는 중합체 화합물, 예컨대, 폴리락트산, 폴리글리콜산 등의 미립자 제제 내의 또는 리포솜 내의 재료의 혼입물을 포함한다. 이러한 조성물은 개시된 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출률, 및 생체내 클리어런스율에 영향을 줄 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042) pages 1435-1712] 참고). 조성물은 액체 형태로 제조될 수 있거나, 또는 건조 분말(예를 들어, 동결건조) 형태로 존재할 수 있다. 리포솜 또는 프로테노이드 캡슐화를 사용하여 조성물을 제형화할 수 있다. 리포솜 캡슐화가 사용될 수 있고, 리포솜은 다양한 중합체로 유도체화될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,013,556호)(또한 문헌[Marshall, K. In: Modern Pharmaceutics Edited by G. S. Banker and C. T. Rhodes Chapter 10, 1979] 참고). 일반적으로, 제형은 펩타이드(또는 이의 화학적으로 변형된 형태) 및 위 환경에서 펩타이드를 보호하고 장에서 생물 활성 물질을 방출하는 불활성 성분을 포함할 것이다.
작용제는 유도체의 경구 전달이 효능적이도록 화학적으로 변형될 수 있다. 일반적으로, 고려되는 화학적 변형은 그 자체의 성분 분자에 대한 적어도 하나의 모이어티의 부착이며, 여기서 모이어티는 위 또는 장으로부터의 혈류 내로 흡수되거나 장 점막 내로의 직접적으로 흡수되는 것을 허용한다. 또한 성분 또는 성분들의 전체 안정성의 증가 및 신체에서의 순환 시간의 증가가 바람직하다. 페길화는 약제학적 사용을 위한 예시적인 화학적 변형이다. 사용될 수 있는 다른 모이어티는 다음을 포함한다: 프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 카복시메틸 셀룰로스, 덱스트란, 폴리바이닐 알코올, 폴리바이닐 피롤리돈, 폴리프롤린, 폴리-1,3-다이옥솔란 및 폴리-1,3,6-티오옥소칸(예를 들어, 문헌[Abuchowski and Davis (1981) "Soluble Polymer-Enzyme Adducts," in Enzymes as Drugs. Hocenberg and Roberts, eds. (Wiley-Interscience: New York, N.Y.) pp. 367-383; 및 Newmark, et al. (1982) J. Appl. Biochem. 4:185-189] 참고).
또 다른 실시형태는 불활성 희석제를 비롯한 다른 성분; 아주반트, 예컨대, 습윤제, 유화제 및 현탁화제; 및 감미료, 조미제 및 향제를 함유할 수 있는, 약제학적으로 허용 가능한 에멀션, 용액, 현탁액 및 시럽을 비롯한, 경구 투여를 위한 액체 투여형을 제공한다.
제어 방출형 경구 제형이 바람직할 수 있다. 작용제는 확산 또는 침출 기전에 의한 방출을 허용하는 불활성 매트릭스, 예를 들어, 검 내에 혼입될 수 있다. 서서히 약해지는 매트릭스가 또한 제형 내에 혼입될 수 있다. 또 다른 형태의 제어 방출형은 오로스 쎄라퓨틱 시스템(Oros therapeutic system)(알자 코프(Alza Corp.))을 기반으로 하며, 즉, 그 약물은 물이 삼투 효과로 인한 단일의 작은 개구부를 통해서 약물이 들어가거나 나가게 할 수 있는 반투과성 막에 둘러싸여 있다.
경구 제형의 경우, 방출 위치는 위, 소장(십이지장, 공장 또는 회장), 또는 대장일 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 방출은 작용제(또는 유도체)의 보호에 의해서 또는 작용제(또는 유도체)를 위 환경을 지나서, 예컨대, 장에서 방출시킴으로써, 위 환경의 유해한 효과를 회피할 것이다. 완전한 위 내성을 보장하기 위해서 적어도 pH 5.0에 불투과성인 코팅이 필수적이다. 장용 코팅으로서 사용되는 보다 일반적인 불활성 성분의 예는 셀룰로스 아세테이트 트라이멜리테이트(CAT), 하이드록시프로필메틸셀룰로스 프탈레이트(HPMCP), HPMCP 50, HPMCP 55, 폴리바이닐 아세테이트 프탈레이트(PVAP), 유드라짓 L30D(상표명), 아쿠터릭(Aquateric)(상표명), 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트(CAP), 유드라짓 L(상표명), 유드라짓 S(상표명), 및 셸락(Shellac)(상표명)이다. 이러한 코팅은 혼합 필름으로서 사용될 수 있다.
3. 국소 투여를 위한 제형
개시된 면역조정제는 국소적으로 적용될 수 있다. 국소 투여는 대부분의 펩타이드 제형의 경우 양호하게 기능하지 않지만, 특히 폐, 코, 경구(설하, 협측), 질 또는 직장 점막에 적용되는 경우 효과적일 수 있다.
조성물은 약 5마이크론 미만의 공기역학 직경을 갖는 분무 건조된 입자 또는 에어로졸로서 전달되는 경우 흡입 동안 폐로 전달되고, 혈류에 라이닝된 폐 상피를 통해서 횡단한다.
모두 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 친숙한 네불라이저, 계량 투여 흡입기 및 분말 흡입기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 치료 생성물의 폐 전달을 위해서 설계된 광범위한 기계적 장치가 사용될 수 있다. 상업적으로 입수 가능한 장치의 일부 구체적인 예는 울트라벤트 네블라이저(Ultravent nebulizer)(말린크로트 인크.(Mallinckrodt Inc.), 미국 미주리주 세인트 루이스 소재); 아콘(Acorn) II 네블라이저(마퀘스터 메디컬 프로덕츠(Marquest Medical Products), 미국 콜로라도주 잉글우드 소재); 벤톨린(Ventolin) 계량 투여 흡입기(글락소 인크.(Glaxo Inc.), 미국 노쓰캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크 소재); 및 스핀할러 분말 흡입기(Spinhaler powder inhaler)(피손즈 코프(Fisons Corp.), 미국 매사추세츠주 벨포드 소재)이다. 넥타(Nektar), 알커메스(Alkermes) 및 만카인드(Mannkind) 모두는 승인되거나 또는 임상 시험 중인 흡입 가능한 인슐린 분말 제제를 가지며, 여기서 이 기술은 본 명세서에 기술된 제형에 적용될 수 있다.
점막에 대한 투여를 위한 제형은 전형적으로 분무 건조된 약물 입자일 것이고, 이것은 정제, 젤, 캡슐, 현탁액 또는 에멀션 내에 혼입될 수 있다. 표준 약제학적 부형제는 임의의 제조사로부터 입수 가능하다.
경피 제형이 또한 제조될 수 있다. 이것은 전형적으로 연고, 로션, 스프레이, 또는 패치일 것이고, 이들 모두는 표준 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 경피 제형은 관통 인핸서의 포함을 요구할 수 있다.
4. 제어 전달형 중합체 매트릭스
본 명세서에 개시된 면역조정제는 또한 제어 방출형 제형으로 투여될 수 있다. 제어 방출형 중합체 장치는 중합체 장치(막대, 실린더, 필름, 디스크)의 이식 또는 주사(마이크로입자) 이후에 전신으로의 장기간 방출을 위해서 제조될 수 있다. 매트릭스는 마이크로입자, 예컨대, 작용제가 고형 중합체 매트릭스 내에 분산된 마이크로구체 또는 코어가 중합체 쉘과 상이한 재료이고, 펩타이드가 본래 액체 또는 고체일 수 있는 코어 중에 분산 또는 현탁된 마이크로캡슐의 형태일 수 있다. 본 명세서에 구체적으로 정의되지 않는 한, 마이크로입자, 마이크로구체 및 마이크로캡슐은 상호 교환 가능하게 사용된다. 대안적으로, 중합체는 나노미터 내지 4센티미터 범위의 얇은 슬랩(slab) 또는 필름, 그라인딩 또는 다른 표준 기술에 의해서 제조된 분말, 또는 심지어는 젤, 예컨대, 하이드로젤로서 주조될 수 있다.
비-생분해성 또는 생분해성 매트릭스가 융합 폴리펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 전달을 위해서 사용될 수 있지만, 일부 실시형태에서 생분해성 매트릭스가 바람직하다. 이것은 자연 또는 합성 중합체일 수 있지만, 일부 실시형태에서 분해 및 방출 프로파일의 보다 양호한 특징으로 인해서 합성 중합체가 바람직하다. 중합체는 방출이 바람직한 기간을 기준으로 선택된다. 일부 경우에 선형 방출이 가장 유용할 수 있지만, 나머지 것 중에서 펄스형 방출 또는 "벌크 방출"이 보다 유효한 결과를 제공할 수 있다. 중합체는 하이드로젤(전형적으로 최대 약 90중량%의 물을 흡수함)의 형태일 수 있고, 임의로 다가 이온 또는 중합체와 가교결합될 수 있다.
매트릭스는 용매 증발, 분무 건조, 용매 추출 및 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 방법에 의해서 형성될 수 있다. 생체침식성 마이크로구체는 예를 들어, 문헌[Mathiowitz and Langer, J. Controlled Release, 5:13-22 (1987); Mathiowitz, et al., Reactive Polymers, 6:275-283 (1987); 및 Mathiowitz, et al., J. Appl. Polymer Sci., 35:755-774 (1988)]에 기술된 바와 같이, 약물 전달을 위한 마이크로구체를 제조하기 위해서 개발된 방법 중 임의의 것을 사용하여 제조될 수 있다.
장치는 이식 또는 주사 면적을 치료하기 위한 국지 방출 - 전신의 치료를 위한 투여량보다 훨씬 더 적은 투여량을 전형적으로 전달할 것임 - 또는 전신 전달을 위해서 제형화될 수 있다. 이것은 피하에, 근육, 지방 내에 이식 또는 주사되거나 삼켜질 수 있다.
III. 제조 방법
A. 항체의 제조 방법
항체는 세포 배양물에서, 파지에서 또는 소, 토끼, 염소, 마우스, 래트, 햄스터, 기니피그, 양, 개, 고양이, 원숭이, 침팬지, 유인원을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 다양한 동물에서 생성될 수 있다. 따라서, 일 실시형태에서, 항체는 포유동물 항체이다. 파지 기술을 사용하여 개시 항체를 단리하거나 또는 변경된 특이성 또는 결합활성(avidity) 특징을 갖는 변이체를 생성할 수 있다. 이러한 기술은 일상적이며, 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있다. 일 실시형태에서, 항체는 관련 기술 분야에 공지된 재조합 수단에 의해서 생산된다. 예를 들어, 재조합 항체는 숙주 세포를 항체를 암호화하는 DNA 서열을 포함하는 벡터로 형질주입함으로써 생산될 수 있다. 하나 이상의 벡터를 사용하여 숙주 세포에서 적어도 하나의 VL 및 하나의 VH 영역에서 DNA 서열을 형질주입할 수 있다. 항체 생성 및 생산의 재조합 수단의 예시적인 설명은 문헌[Delves, Antibody Production: Essential Techniques (Wiley, 1997); Shephard, et al., Monoclonal Antibodies (Oxford University Press, 2000); Goding, Monoclonal Antibodies: Principles And Practice (Academic Press, 1993); Current Protocols In Immunology (John Wiley & Sons, most recent edition)]을 포함한다.
개시된 항체는 목적하는 기능을 매개하는 데 있어서 항체의 더 높은 효능을 증가시키기 위해서 재조합 수단에 의해서 변형될 수 있다. 따라서, 항체가 재조합 수단을 사용한 치환에 의해서 변형될 수 있다는 것은 본 발명의 범주 내이다. 전형적으로, 치환은 보존적 치환일 것이다. 예를 들어, 항체의 불변 영역 내의 적어도 하나의 아미노산은 상이한 잔기로 대체될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,624,821호, 미국 특허 제6,194,551호, 출원 제WO 9958572호; 및 문헌[Angal, et al., Mol. Immunol. 30:105-08 (1993)] 참고). 아미노산의 변형은 아미노산의 결실, 첨가 및 치환을 포함한다. 일부 경우에, 이러한 변화는 목적하는 활성도, 예를 들어, 보체-의존적 세포독성을 감소시키기 위해서 수행된다. 빈번하게는, 항체는 검출 가능한 신호를 제공하는 물질에 공유적으로 또는 비공유적으로 결합됨으로써 표지된다. 광범위한 표지 및 접합 기술이 공지되어 있고, 과학 및 특허 문헌 둘 모두에 널리 보고되어 있다. 이러한 항체를 LAIR-1 또는 LAIR-2의 단백질, 폴리펩타이드, 또는 융합 단백질에 대한 결합에 대해서 스크리닝할 수 있다(예를 들어, 문헌[Antibody Engineering: A Practical Approach (Oxford University Press, 1996] 참고).
예를 들어, 목적하는 생물학적 활성도를 갖는 적합한 항체는 증식, 이동, 접착, 연한천 성장, 혈관신생, 세포-세포 소통, 아포토시스, 이송, 신호 변환을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 시험관내 검정, 및 생체내 검정, 예컨대, 종양 성장의 저해를 사용하여 식별될 수 있다. 본 명세서에 제공된 항체는 또한 진단 응용에 유용할 수 있다. 포획 또는 비-중화 항체로서, 이것은 항원의 수용체-결합 또는 생물학적 활성도를 저해하지 않으면서 특이적 항원에 결합하는 능력에 대해서 스크리닝될 수 있다. 중화 항체로서, 항체는 경쟁 결합 검정에 유용할 수 있다.
개시된 조성물 및 방법에서 사용될 수 있는 항체는 임의의 부류의 전체 면역글로불린(즉, 무손상 항체), 이의 단편, 및 항체의 적어도 항원 결합 가변 도메인을 함유하는 합성 단백질을 포함한다. 가변 도메인은 항체 중에서 서열이 상이하고, 이의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다. 그러나, 가변성은 통상적으로 항체의 가변 도메인을 통해서 균일하게 분포되지 않는다. 그것은 전형적으로 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 모두 내의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역이라 지칭되는 3개의 분절에 집중된다. 가변 도메인의 보다 상당히 보존되는 부분을 프레임워크(FR)라 부른다. 네이티브 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 루프 연결을 형성하고, 일부 경우에 베타-시트 구조를 부분적으로 형성하는 3개의 CDR에 의해서 연결된 주로 베타-시트 구성을 채택하는 4개의 FR 영역을 포함한다. 각각의 쇄 내의 CDR은 FR 영역과 인접하게 보유되고, 다른 쇄로부터의 CDR은 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다.
또한 생물활성도를 갖는 항체의 단편이 개시된다. 다른 서열에 부착되든 부착되지 않든 간에 이러한 단편은 특정 영역 또는 특이적 아미노산 잔기의 삽입, 결실, 치환 또는 다른 선택된 변형을 포함하되, 단편의 활성도는 비변형된 항체 또는 항체 단편과 비교할 때 상당히 변경되거나 손상되지 않는다.
기술은 또한 항원 펩타이드에 특이적인 단일 쇄 항체의 생산을 위해서 개작될 수 있다. 단일 쇄 항체의 생산 방법은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 단일 쇄 항체는 짧은 펩타이드 링커를 사용하여 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 함께 융합하여, 단일 분자 상에서 항원 결합 부위를 재구성함으로써 생성될 수 있다. 하나의 가변 도메인의 C-말단이 15 내지 25개의 아미노산 펩타이드 또는 링커를 통해서 다른 가변 도메인의 N-말단에 테더링된 단일 쇄 항체 가변 단편(scFv)은 개발되었는데, 이것은 항원 결합 및 결합의 특이성을 상당히 방해하지 않는다. 링커는 중쇄 및 경쇄가 이의 적절한 입체배좌 배향으로 함께 결합하는 것을 허용하도록 선택된다.
2가 단일 쇄 가변 단편(다이-scFv)은 2개의 scFv를 연결함으로써 조작될 수 있다. 이것은 2개의 VH 및 2개의 VL 영역을 갖는 단일 펩타이드를 생산하여, 탠덤 scFv를 산출함으로써 수행될 수 있다. ScFv는 또한 2개의 가변 영역이 함께 접히기에는 너무 짧아서, scFv를 이량체화시키는 링커 펩타이드(약 5개의 아미노산)를 사용하여 설계될 수 있다. 이러한 유형은 다이아바디로서 공지되어 있다. 다이아바디는 상응하는 scFv보다 최대 40배 더 낮은 해리 상수를 갖는 것으로 밝혀졌는데, 이는 다이아바디가 이의 표적에 대해서 훨씬 더 높은 친화도를 갖는 것을 의미한다. 훨씬 더 짧은 링커(하나 이상의 아미노산)는 삼량체(트라이아바디 또는 트라이바디)의 형성으로 이어진다. 테트라바디가 또한 생산되었다. 이것은 다이아바디보다 이의 표적에 대해서 훨씬 더 높은 친화도를 나타낸다.
단클론성 항체는 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 수득되며, 즉, 집단 내의 개별 항체가 항체 분자의 작은 하위세트에 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단클론성 항체는, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속한 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 이에 상동성이지만, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속한 항체 내의 상응하는 서열, 뿐만 아니라 목적하는 길항성 활성도를 나타내는 한 이러한 항체의 단편과 동일하거나 이와 상동성인 "키메라" 항체를 포함한다.
단클론성 항체는 단클론성 항체를 생산하는 임의의 절차를 사용하여 제조될 수 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물은 전형적으로 면역화제로 면역화되어 면역화제에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도한다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다.
항체는 또한 재조합 DNA 방법에 의해서 제조될 수 있다. 개시된 항체를 암호화하는 DNA는 종래의 절차(예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용함으로써)를 사용하여 쉽게 단리되고 서열결정될 수 있다. 항체 또는 활성 항체 단편의 라이브러리는 또한 파지 디스플레이 기술을 사용하여 생성되고 스크리닝될 수 있다.
단백질 화학을 사용한 제조 방법이 또한 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 항체를 포함하는 단백질의 하나의 생산 방법은 단백질 화학 기술에 의해서 2개 이상의 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 함께 연결하는 것이다. 예를 들어, 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 Fmoc(9-플루오렌일메틸옥시카보닐) 또는 Boc(tert -부틸옥시카보노일) 화학 중 어느 하나를 사용하여 현재 사용 가능한 실험실 장비를 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다(어플라이드 바이오시스템즈, 인크.(Applied Biosystems, Inc.), 미국 캘리포니아주 포스터 시티 소재). 관련 기술 분야의 통상의 기술자는 항체에 상응하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드가 표준 화학 반응에 의해서 합성될 수 있다는 것을 쉽게 인지할 수 있다. 예를 들어, 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 합성될 수 있고, 이의 합성 수지로부터 절단되지 않을 수 있는 반면, 항체의 다른 단편은 합성되고, 그 다음 수지로부터 절단되어, 다른 단편 상에 기능적으로 차단된 말단기를 노출시킬 수 있다. 펩타이드 축합 반응에 의해서, 이러한 2개의 단편은 각각 이의 카복실 및 아미노 말단에서 펩타이드 결합을 통해서 공유 결합되어, 항체, 또는 이의 단편을 형성할 수 있다. 대안적으로, 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 상기에 기술된 바와 같이 생체내에서 독립적으로 합성된다. 단리된 후, 이러한 독립적인 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 연결되어 유사한 펩타이드 축합 반응을 통해서 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 형성할 수 있다.
예를 들어, 클로닝되거나 합성된 펩타이드 분절의 효소적 결찰은 비교적 짧은 펩타이드 단편이 결합되어 더 큰 펩타이드 단편, 폴리펩타이드 또는 전체 단백질 도메인을 생성하게 할 수 있다. 대안적으로, 합성 펩타이드의 네이티브 화학적 결찰을 사용하여 더 짧은 펩타이드 단편으로부터 큰 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 화학적으로 작제할 수 있다. 이러한 방법은 2단계 화학 반응으로 이루어진다. 제1 단계는 비보호된 합성 펩타이드-알파-티오에스터와 아미노-말단 Cys 잔기를 함유하는 또 다른 비보호된 펩타이드 분절을 화학선택적으로 반응시켜 초기 공유 생성물로서 티오에스터-연결된 중간체를 제공한다. 반응 조건에서의 변화 없이, 이러한 중간체는 자발적인 신속한 분자내 반응을 겪어서 결찰 부위에서 네이티브 펩타이드 결합을 형성한다.
B. 단백질의 생산 방법
개시된 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 및 융합체는 관련 기술 분야에 공지된 종래의 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 단리된 융합 단백질은 예를 들어, 화학적 합성 또는 숙주 세포에서의 재조합 생산에 의해서 수득될 수 있다. 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체를 재조합 방식으로 생산하기 위해서, 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 핵산을 사용하여 박테리아 또는 진핵 숙주 세포(예를 들어, 곤충, 효모 또는 포유동물 세포)를 형질전환시키거나, 이것에 형질도입 또는 형질주입할 수 있다. 일반적으로, 핵산 작제물은 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된 조절 서열을 포함한다. 조절 서열(또한 본 명세서에서 발현 제어 서열이라고도 지칭됨)은 전형적으로 유전자 산물을 암호화하지 않지만, 대신에 이것이 작동 가능하게 연결된 핵산 서열의 발현에 영향을 준다.
폴리펩타이드를 발현 및 생산하기에 유용한 원핵계 및 진핵계는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 이것은 예를 들어, 에쉐리키아 콜라이 균주, 예컨대, BL-21, 및 배양된 포유동물 세포, 예컨대, CHO 세포를 포함한다.
진핵 숙주 세포에서, 다수의 바이러스계 발현계를 사용하여 융합 단백질을 발현할 수 있다. 바이러스계 발현계는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 바쿨로바이러스, SV40, 레트로바이러스 또는 백시나계 바이러스 벡터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체를 안정적으로 발현하는 포유동물 세포주는 적절한 대조군 요소 및 선택 가능한 마커를 갖는 발현 벡터를 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 진핵 발현 벡터 pCR3.1(인비트로젠 라이프 테크놀로지스) 및 p91023(B)(문헌[Wong et al. (1985) Science 228:810-815] 참고)는 예를 들어, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, COS-1 세포, 인간 배아 신장 293 세포, NIH3T3 세포, BHK21 세포, MDCK 세포, 및 인간 혈관 내피 세포(HUVEC)에서 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체의 발현에 적합하다. 추가적인 적합한 발현계는 론자 그룹 엘티디(Lonza Group Ltd)를 통해서 입수 가능한 GS 젠 익스프레션 시스템(GS Gene Expression System)(상표명)을 포함한다.
전기천공법, 리포펙션, 인산칼슘, 또는 염화칼슘 공침전, DEAE 덱스트란 또는 다른 적합한 형질주입 방법에 의한 발현 벡터의 도입 이후에, 안정적인 세포주가 선택될 수 있다(예를 들어, 대사 선택, 또는 G418, 카나마이신, 또는 하이그로마이신에 대한 항생제 내성). 형질주입된 세포를 관심대상 폴리펩타이드가 발현되도록 배양할 수 있고, 폴리펩타이드를 예를 들어, 세포 배양 상청액으로부터 또는 용해된 세포로부터 회수할 수 있다. 대안적으로, 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체는 (a) 증폭된 서열을 포유동물 발현 벡터, 예컨대, pcDNA3(인비트로젠 라이프 테크놀로지스) 내에 결찰시키고, (b) 맥아 추출물 또는 토끼 망상적혈구 용해물을 사용하여 시험관내에서 전사 및 번역함으로써 생산될 수 있다.
단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체는 예를 들어, 크로마토그래피 방법, 예컨대, 친화도 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, DEAE 이온 교환, 젤 여과, 및 수산화인회석 크로마토그래피에 의해서 단리될 수 있다. 일부 실시형태에서, 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체는 폴리펩타이드가 친화도 매트릭스 상에 포획되도록 할 수 있는 아미노산 서열을 함유하는 추가적인 도메인을 함유하도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 세포 배양 상청액 또는 세포질 추출물 중의 Fc-융합 폴리펩타이드는 단백질 A 칼럼을 사용하여 단리될 수 있다. 또한, 태그, 예컨대, c-myc, 헤마글루티닌, 폴리히스티딘, 또는 Flag(상표명)(코닥)를 사용하여 폴리펩타이드 정제를 도울 수 있다. 이러한 태그는 카복실 또는 아미노 말단 중 어느 하나를 비롯한 폴리펩타이드 내에 어느 곳에서도 삽입될 수 있다. 유용할 수 있는 다른 융합체는 폴리펩타이드, 예컨대, 알칼리성 포스파타제의 검출을 돕는 효소를 포함한다. 면역친화도 크로마토그래피를 또한 사용하여 폴리펩타이드를 정제할 수 있다. 융합 단백질은 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체가 그것이 생산되는 세포에 의해서 분비되도록 하는 분비 신호(분비 신호가 이미 존재하지 않는 경우)를 함유하도록 추가로 조작될 수 있다. 이어서, 분비된 단백질, 폴리펩타이드, 이의 단편, 변이체 또는 융합체는 세포 배지로부터 편리하게 단리될 수 있다.
C. 단리된 핵산 분자의 생산 방법
단리된 핵산 분자는 일반적인 분자 클로닝 및 화학적 핵산 합성 기술을 포함하지만 이에 제한되지 않는 표준 기술에 의해서 생산될 수 있다. 예를 들어, 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 기술을 사용하여 변이체 폴리펩타이드를 암호화하는 단리된 핵산을 수득할 수 있다. PCR은 표적 핵산이 효소적으로 증폭되는 기술이다. 전형적으로, 관심대상 영역의 단부 또는 그 이상으로부터의 서열 정보를 사용하여 증폭될 템플레이트의 반대 가닥과 서열이 동일한 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 설계할 수 있다. PCR은 전체 게놈 DNA 또는 전체 세포 RNA로부터의 서열을 비롯한, DNA뿐만 아니라 RNA로부터의 특이적 서열을 증폭시키는 데 사용될 수 있다. 프라이머는 전형적으로 14 내지 40개의 뉴클레오타이드 길이이지만, 10개의 뉴클레오타이드 내지 수백개의 뉴클레오타이드 길이의 범위일 수 있다. 일반적인 PCR 기술은 예를 들어, 문헌[PCR Primer: A Laboratory Manual, ed. by Dieffenbach and Dveksler, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995]에 기술되어 있다. 템플레이트 기원으로서 RNA를 사용하는 경우, 역전사효소를 사용하여 상보성 DNA(cDNA) 가닥을 합성할 수 있다. 리가제 연쇄 반응, 가닥 치환 증폭, 자가-지속 서열 복제 또는 핵산 서열-기반 증폭을 또한 사용하여 단리된 핵산을 수득할 수 있다(예를 들어, 문헌[Lewis (1992) Genetic Engineering News 12:1; Guatelli et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874-1878; 및 Weiss (1991) Science 254:1292-1293] 참고).
단리된 핵산은 단일 핵산 분자로서 또는 일련의 올리고뉴클레오타이드로서 화학적으로 합성될 수 있다(예를 들어, 3'에서 5' 방향의 자동화 DNA 합성을 위한 포스포아미다이트 기술을 사용함). 예를 들어, 목적하는 서열을 함유하는 긴 올리고뉴클레오타이드(예를 들어, 100개 초과의 뉴클레오타이드)의 하나 이상의 쌍을 합성할 수 있고, 각각의 쌍은 올리고뉴클레오타이드 쌍이 어닐링될 때 듀플렉스가 형성되도록 상보성의 짧은 분절(예를 들어, 약 15개의 뉴클레오타이드)을 함유한다. DNA 폴리머라제를 사용하여 올리고뉴클레오타이드를 연장시켜, 올리고뉴클레오타이드 쌍당 단일의 이중-가닥 핵산 분자를 생성시키고, 이어서 이것을 벡터 내에 결찰시킬 수 있다. 단리된 핵산은 또한 돌연변이생성에 의해서 수득될 수 있다. 단백질-암호화 핵산은 올리고뉴클레오타이드-지향된 돌연변이생성 및/또는 PCR을 통한 부위-지향된 돌연변이생성을 비롯한, 표준 기술을 사용하여 돌연변이될 수 있다(문헌[Short Protocols in Molecular Biology. Chapter 8, Green Publishing Associates and John Wiley & Sons, edited by Ausubel et al, 1992] 참고).
IV. 검정 및 항체 스크리닝
암 요법을 위한 LAIR-2 Fc 융합 단백질("LAIR-2-Fc")의 생산은 LAIR-1 mAb의 개발 및 스크리닝에 대한 필요성을 회피한다. LAIR-2는 LAIR-1보다 더 큰 친화도를 갖기 때문에, 일부 실시형태에서, LAIR-2-Fc는 LAIR-1 Fc 융합 단백질("LAIR-1-Fc")에 비해서 치료적 치료제로서 선택된다. 일부 실시형태에서, LAIR-1-Fc는 마우스 전임상 모델에서 사용될 수 있는데, 이는 LAIR-2가 마우스에서 존재하기 않기 때문이다.
A. LAIR-2-Fc에 대한 검정
1. ELISA에 의한 콜라겐, SP-D, C1q 및 MBL의 다수의 형태에 결합하는 능력의 확인.
2. LAIR-1에 대한 다수의 콜라겐, SP-D 및 C1q의 결합을 저해하는 LAIR-2-Fc의 능력의 확인. 이것은 하기에 의해서 시험될 수 있다: 1) ELISA 경쟁 검정, 및 2) 역가량의 LAIR-2-Fc 및 형광 표지된 LAIR 리간드의 존재 하에서 인큐베이션된 LAIR-1 형질주입된 세포를 사용한 유세포 분석.
3. LAIR-1과 비교된 리간드에 대한 LAIR-2-Fc의 결합 친화도의 분석.
4. LAIR-2-Fc가 LAIR-1 발현 세포에 의한 신호전달을 예방하는지를 확인하기 위한 기능성 검정. 리포터 세포를 이러한 검정을 위해서 사용할 수 있거나, 1차 LAIR-1+ 세포가 또 다른 선택이다.
B. LAIR-2 차단 mAb에 대한 검정 및 항체 스크리닝
LAIR-2는 마우스에 존재하지 않기 때문에, 야생형 마우스를 LAIR-2에 대한 높은 친화도 mAb의 생성을 위해서 사용할 수 있다. LAIR-2는 가용성이고, 가용성 리간드에 결합하기 때문에, 형질주입된 세포의 스크리닝은 이러한 분자에 대한 선택이 아니다.
1. 단계 I 스크리닝: ELISA에 의한, LAIR-1가 아닌 LAIR-2에 결합하는 mAb. 이러한 mAb는 LAIR-2에 대해서 고도로 특이적이어야 한다.
2. 단계 II 스크리닝: LAIR-2 특이적 mAb는 다수의 콜라겐, SP-D, C1q 및 MBL에 대한 LAIR-2의 결합을 차단해야 한다. 어떠한 단일 mAb도 3종 모두의 리간드의 결합을 차단하지 않을 것이고, 따라서, 다수의 LAIR-2 mAb는 최대 치료 효과를 위해서 모든 상호작용을 차단하기 위한 제형으로서 동시에 사용될 수 있어야 한다.
3. 단계 III 스크리닝: LAIR-2 mAb 또는 mAb의 조합물이 역가량의 다수의 콜라겐, SP-D, C1q 및 MBL의 존재 하에서 역가량의 가용성 LAIR-2의 존재 하에서 LAIR-1 신호전달을 증가시킨다는 것을 확인하기 위한 기능성 검정. (즉, LAIR-2 mAb는 가용성 LAIR-2에 대한 리간드 접근을 차단할 것이고, 따라서 세포 표면 상의 LAIR-1에 대한 리간드의 결합을 초래하고, 음성 신호전달 경로를 유도함).
단계 II 및 III 검정을 사용하여 생체내에서 리간드의 생리학적 수준을 차단하는 데 필요한 LAIR-2 mAb(들)의 농도를 예측할 수 있다.
C. LAIR-1 차단 mAb 또는 LAIR-1 고갈 mAb에 대한 검정 및 항체 스크리닝
LAIR-1 결핍("넉아웃) 마우스 또는 야생형 마우스를 소유권이 있는 면역화 기술을 사용한 LAIR-1에 대한 높은 친화도 mAb의 생성을 위해서 사용하였다.
1. 단계 I 스크리닝: ELISA에 의한, LAIR-2가 아닌 LAIR-1에 결합하는 mAb. 세포 표면 LAIR-1을 발현하도록 형질주입된 세포주에 결합하는 mAb. 추가로, mAb는 1차 인간 세포 하위세트의 표면 상에서 내생적으로 발현된 LAIR-1에 결합하는 능력을 가져야 한다. 이러한 mAb는 LAIR-1에 대해서 고도로 특이적이어야 한다.
2. 단계 II 스크리닝: LAIR-1 특이적 mAb는 다수의 콜라겐, SP-D 및 C1q 중 하나 이상에 대한 LAIR-1의 결합을 차단해야 한다. 어떠한 단일 mAb도 3종 모두의 리간드의 결합을 차단하지 않을 것이고, 따라서, 다수의 LAIR-1 mAb는 최대 치료 효과를 위해서 모든 상호작용을 차단하기 위한 제형으로서 동시에 사용될 수 있어야 한다.
3. 단계 III 스크리닝: LAIR-1 mAb 또는 mAb의 조합물이 역가량의 다수의 콜라겐, SP-D 및 C1q의 존재 하에서 LAIR-1 신호전달을 감소시킨다는 것을 확인하기 위한 기능성 검정(길항제 또는 차단 mAb). 이러한 검정은 내생 LAIR-1, 예컨대, THP-1 세포, 또는 1차 세포, 예컨대, 인간 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포 하위세트를 발현하는 세포주를 사용하여 LAIR-1 mAb의 존재 하에서의 기능을 평가할 것이다. 추가로, 리포터 세포주를 사용하여 신호전달 경로, 예컨대, NFkB(NFkB 리포터) 또는 NFAT(NFAT 리포터)가 LAIR-1 mAb와의 배양 이후에 변경되는지를 결정할 수 있다.
4. 단계 IV 스크리닝: LAIR-1 mAb가 LAIR-1 발현 세포주의 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC), 보체 의존적 세포독성(CDC) 또는 다른 기전을 통한 세포 아포토시스를 유도할 수 있는지를 결정하기 위한 기능성 검정. 특히, LAIR-1 mAb는 이러한 방법 중 하나를 통해서 세포 표면 상에서 LAIR-1을 발현시킨다고 공지된, 백혈병 세포주, 예컨대, THP-1을 고갈시키는 능력에 대해서 시험될 것이다. LAIR-1 mAb는 또한 LAIR-1 발현 세포를 고갈시키도록 조작될 수 있고, 공지된 방법을 통해서 본 문헌에 추후에 기술된 바와 같이 시험될 수 있다.
5. 단계 V 스크리닝: LAIR-1 mAb가 LAIR-1을 통해서 LAIR-1 발현 세포 내에서 음성 신호(효능제)를 전달 또는 유도하여 세포 기능을 저해할 수 있는지를 결정하기 위한 기능성 검정. LAIR-1을 내생적으로 발현하는 세포주, 예컨대, THP-1 또는 U937, 또는 세포주, 예컨대, K562의 형질주입체를 LAIR-1 mAb와의 배양 이후에 저해에 대해서 평가할 것이다. 다른 검정에서, 리포터 세포주를 사용하여 LAIR-1 mAb가 양성 신호전달 경로, 예컨대, NF-kB(NF-kB 리포터) 또는 다른 공지된 세포 신호전달 리포터를 약화시키는지를 결정할 것이다. 세포주, 예컨대, THP-1 및 U937에서의 아포토시스의 유도를 또한 평가할 것이다.
단계 II 및 III 검정을 사용하여 생체내에서 리간드의 생리학적 수준을 차단하는 데 필요한 LAIR-1 mAb(들)의 농도를 예측할 수 있다.
V. 사용 방법
지금까지의 증거는 LAIR-1 세포 표면 수용체에 대한 저해성 역할을 예시하고, LAIR-2가 LAIR-1과 동일한 리간드에 결합함으로써 간접적으로 LAIR-1의 기능을 길항작용하여, 디코이 수용체로서 본질적으로 기능한다는 것을 예시한다. 종양 미세환경은 종종 LAIR-1 리간드 콜라겐을 비롯한 세포외 기질 단백질(ECM)이 풍부하다(Rygiel et al., 2011, Mol. Immunol. 49:402-406). 따라서, 종양 미세환경에 국지화된 LAIR-1 발현 세포는 LAIR-1의 콜라겐 가교결합 및 후속 저해성 신호전달을 통해서 특히 억제될 수 있다. 증가된 LAIR-1 발현 및 신호전달은 몇몇 면역 하위세트의 증식, 분화 및 기능을 저해하는 것으로 밝혀져 있으며, 따라서 특히, 높은 수준의 LAIR-1 리간드 콜라겐, C1q 및 SP-D를 갖는 종양 미세환경에서, 항-종양 면역을 억제하는 것으로 여겨진다.
콜라겐 및 C1q 둘 모두는 LAIR-1을 통해서 항원-제시 세포(단핵구/대식세포/수지상 세포(DC)) 분화 및 활성화를 제한 또는 변경하는 것으로 밝혀져 있다. LAIR-1은 또한 APC보다 훨씬 더 낮은 수준으로, NK 및 T 세포 상에서 발견되는 것으로 밝혀져 있다. 그럼에도 불구하고, 연구는, NK 세포 및 T 세포 상에서 LAIR-1을 가교결합시키는 것이 증식 및 기능을 저해할 수 있음을 나타내었다. 따라서, LAIR-1 가교결합의 감소가 암 및 감염성 질환에 대한 면역 반응을 증가시킬 수 있다고 여겨진다. LAIR-2의 증가된 수준은 동일한 기전을 통해서 항-종양 면역을 촉진시킬 수 있다고 여겨진다. 따라서, LAIR-1 및 LAIR-2 폴리펩타이드 및 LAIR-1 및 LAIR-2 융합 단백질을 비롯한, 가용성 LAIR-1 및 가용성 LAIR-2을 인간 질환의 요법을 위해서 사용할 수 있다. 예를 들어, LAIR-2Fc 단백질을 암 면역요법을 위해서 사용하여 LAIR-1에 대한 리간드 결합을 예방함으로써 면역 기능을 향상시킬 수 있다. 이러한 전략은 특히 유망한데, 그 이유는 LAIR-2가 LAIR-1보다 더 높은 친화도로 리간드에 결합하기 때문이다.
대안적으로, 높은 수준의 LAIR-1을 발현하는 AML 암 세포 상의 LAIR-1을 통한 신호전달은, 고유의 LAIR-1-SHP-1-CAMK1-CREB 경로를 통한 아포토시스 및 분화를 저해함으로써 AML 세포의 자기 재생 능력, 또는 '줄기능'을 지속시킨다(Kang et al., 2015, Nat. Cell Biol. 17:665-677). 이러한 암에서, 감소된 LAIR-1 신호전달은 AML 세포사로 이어진다. 따라서, 백혈병에 대한 LAIR-1 신호전달의 차단(즉, 길항작용)은 백혈병의 근절을 위한 치료제인 것으로 생각된다. 따라서, LAIR-1 단클론성 항체, 또는 LAIR-1 및 LAIR-2 폴리펩타이드 및 LAIR-1 및 LAIR-2 융합 단백질을 비롯한 가용성 LAIR-1 및 가용성 LAIR-2를 사용한 LAIR-1 신호전달의 차단은 암 세포 생존의 직접적인 저해에 의해서, 뿐만 아니라 항-종양 면역 반응을 촉진시킴으로써 백혈병의 치료를 위해서 사용될 수 있다.
이에 반해서, 감소된 LAIR-1 발현 또는 기능은 몇몇 자가면역 증상발현과 연관되고, 동시에, LAIR-2의 과발현은 LAIR-1 리간드의 디코이 결합을 통해서 자가면역을 촉진시킬 수 있다. LAIR-1 리간드의 LAIR-2 결합은 LAIR-1의 세포 표면 가교결합을 본질적으로 감소시켜, 과반응성 면역 기능으로 이어지는 저해성 신호전달 경로를 한정할 수 있다. 따라서, LAIR-1 가교결합의 증가는 예를 들어, 자가면역 질환 또는 염증의 경우에, 과활성 또는 부적절한 면역 반응을 감소시킬 수 있다고 여겨진다. 예를 들어, mAb에 의한 LAIR-2의 차단은 자가면역 질환의 치료를 위해서 사용될 수 있는데, 그 이유는 그것이 LAIR-1에 대한 리간드 결합을 증가시켜서 면역 반응을 하향조절할 것이기 때문이다. 표적화 LAIR-2는 류마티스 관절염에 대해서 밝혀진 바와 같이, 세포 표면 LAIR-1의 발현과 가용성 LAIR-2의 발현 간에 불균형이 존재하는 질환에서 특히 효과적일 것이다(Lebbink et al., 2008, J. Immunol 180:1662-1669).
예시적인 방법은 하기에 보다 상세하게 논의되어 있다.
A. 면역 반응 자극
1. 치료 전략
대상체에서 면역 반응을 유도 또는 향상시키는 방법이 제공된다. 전형적으로, 방법은 대상체에게 유효량의 면역조정제, 또는 면역조정제로 생체외에서 프라이밍된 세포를 투여하는 단계를 포함한다. 면역 반응은 예를 들어, 항원에 대한 1차 면역 반응이거나 또는 효과기 세포 기능의 증가, 예컨대, T 세포의 항원-특이적 증식의 증가, T 세포에 의한 사이토카인 생산의 향상, 분화의 자극 또는 이들의 조합일 수 있다. 일부 실시형태에서, 작용제는 미경험 T 세포가 Th1, Th17, Th22, 또는 IL-1β, TNF-α, TGF-베타, IFN-γ, IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21, 및 MMP를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 염증성 분자를 분비하는 다른 세포 또는 다른 세포가 염증성 세포를 분비하도록 유도하는 다른 세포로 발달하는 것을 증가시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 작용제는 Treg의 활성도를 감소시키거나 저해할 수 있거나, Treg로부터의 사이토카인, 예컨대, IL-10의 생산을 감소시킬 수 있거나, Treg의 분화를 감소시킬 수 있거나, Treg의 수를 감소시킬 수 있거나, 면역 세포 집단 내의 Treg의 비율을 감소시킬 수 있거나, 또는 Treg의 생존을 감소시킬 수 있다. 면역조정제는 T 세포 고갈 및/또는 T 세포 무력증(anergy)을 극복하기 위해서 유효량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다. T 세포 고갈 또는 T 세포 무력증의 극복은 공지된 기술을 사용하여 T 세포 기능을 측정함으로써 결정될 수 있다.
방법은 생체내에서 또는 생체외에서 면역 반응-자극 치료 응용으로서 사용될 수 있다. 따라서 일부 실시형태에서, 작용제, 또는 작용제를 암호화하는 핵산이 대상체에게 직접 투여된다. 일부 실시형태에서, 작용제 또는 작용제를 암호화하는 핵산을 세포(예를 들어, 면역 세포)와 생체외에서 접촉시키고, 처리된 세포를 대상체에게 투여한다(예를 들어, 입양 전달). 일반적으로, 개시된 면역조정제는 대상체의 면역계가 면역 반응을 시작하는 임의의 질환 또는 장애를 갖거나 이것에 취약한 대상체를 치료하기 위해서 사용될 수 있다. 작용제는 보다 강한 면역 반응을 가능하게 할 수 있도록 할 수 있다. 개시된 조성물은 T 세포에 관여된 면역 반응을 자극 또는 향상시키는 데 유용하다.
면역 반응을 증가시키기 위해서 사용되는 면역조정제는 전형적으로 LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 작용제는 LAIR-1의 길항제, 예컨대, 길항제(차단) 항-LAIR-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 일부 실시형태에서, 길항제는 LAIR-1 콜라겐 결합 도메인에 결합한다(예를 들어, 전문이 참고로 구체적으로 포함된 문헌[Brondijk, et al., Blood, 18(115):1364-73 (2010), 및 Zhou, et al., Blood, 127(5):529-537 (2016)] 및 이의 보충 정보 참고). 일부 실시형태에서, LAIR-1 길항제, 예컨대, 기능 차단 항체 또는 이의 기능적 단편은 (예를 들어, 서열번호 1에 비해서) LAIR-1의 R59, E61, R62, E63, R65, S66, Y68, N69, I102, R100, W109, E111, Q112, 및 Y115 중 하나 이상을 비롯한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 작용제는 또한 LAIR-1 폴리펩타이드, 예를 들어, 하나 이상의 LAIR-1 리간드에 대한 디코이 수용체로서 기능할 수 있는 가용성 폴리펩타이드, 또는 이의 융합 단백질일 수 있다. 작용제는 또한 LAIR-2 또는 하나 이상의 LAIR-1 리간드에 대한 디코이 수용체로서 기능할 수 있는 이의 기능성 단편 또는 융합 단백질일 수 있다.
예를 들어, 일부 실시형태에서 유효량의 LAIR-2 융합 단백질, 예를 들어 LAIR-2-Fc을 암 또는 감염을 갖는 대상체에게 투여한다. 환자를 LAIR-2-Fc로 치료하는 것은 LAIR-1 수용체의 가교결합을 감소시킬 것이고, 및 그 다음 LAIR-1+ 세포의 저해성 신호전달을 감소시키고, 면역 기능을 개선시킬 것이다. 특히, LAIR-1/2 리간드의 발현이 고도로 발현되는 종양 환경에서, 세포 표면 LAIR-1과 비교하여 가용성 LAIR-2의 증가된 수준으로 비율을 조정하는 것이 향샹된 항-종양 면역을 선호할 것이다.
두 콜라겐, SP-D 및/또는 C1q 모두의 높은 수준 및 높은 수준의 LAIR-1을 발현하는 면역 침윤물을 갖는 종양 미세환경이 개시된 면역요법(예를 들어, LAIR-2-Fc 면역요법)에 이상적일 것이다. 난소암은 높은 수준의 콜라겐을 갖지만, SP-D 및 C1q 수준이 높은지는 불명확하다. 반면에, 폐 및 GI 암은 높은 수준의 두 콜라겐 및 SP-D를 가질 수 있고, 따라서 LAIR-2-Fc로의 표적화를 위한 암일 수 있다. 다른 실시형태에서, 가용성 LAIR-2, 가용성 LAIR-1 또는 LAIR-1 융합 단백질(예를 들어, LAIR-1-Fc)이 사용된다. 일부 실시형태에서, LAIR-2-기반 분자가 선택될 수 있는데, 그 이유는 LAIR-2가 LAIR-1보다 더 높은 친화도로 리간드에 결합하기 때문이다.
예를 들어 기능 차단 항-LAIR-1 항체를 사용한, LAIR-1 차단은 가용성 LAIR-1 및 LAIR-2 폴리펩타이드 및 융합 단백질에 대한 대안적인 작용제 또는 상보성 작용제일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, LAIR-1 차단제는 디코이 수용체, 예컨대, 가용성 LAIR-1 또는 LAIR-2 또는 이의 융합 단백질과 조합된다. 조합된 치료제(예를 들어, LAIR-2-Fc 및 LAIR-1 차단)는 상보성일 수 있다.
일부 실시형태에서, (예를 들어, 암 또는 감염의 치료에서) 면역 반응 자극 요법은 LAIR-1+ 세포의 고갈을 포함한다. LAIR-1은 마우스 및 인간 난소암 복수(ascite)에서 높게 발현된다. LAIR-1의 상향조절은 면역조절 대식세포 및 F4/80+ DC에 제한되는데, 이들 모두는 높은 수준의 PD-L1을 공동발현한다. 따라서, LAIR-1 발현 세포의 고갈을 표적화하는 것이 면역조절 집단의 제거에 의한 종양 미세환경의 전체 조건을 개선시킬 것이다. 난소암에서 다른 세포 하위세트 상에서 LAIR-1의 발현이 관찰되지 않았지만, LAIR-1은 보편적으로 저해성이기 때문에, 다른 LAIR-1+ 세포의 고갈은 또한 면역 저해를 감소시키고, 항-종양 면역을 개선시키는 효과를 가질 것이다. LAIR-1은 급성 골수성 백혈병 암의 표면 상에서 발현되는 것으로 밝혀져 있고, 이의 발달에 중요하다(Kang et al, Nature Cell Biology, Vol17, No 5, 2015; pp 665-679). 따라서, LAIR-1 고갈 mAb로의 조혈('혈액')암의 고갈은 LAIR-1 양성 암을 감소 또는 근절시키는 직접적인 효과를 가질 것이다.
LAIR-1 고갈 mAb의 개발 및 식별은 본 명세서에 논의된 것을 비롯한 공지된 작제 및 스크리닝 방법에 따라서 수행될 수 있다(예를 들어, 인간 Clq에 결합하고, 인간 보체의 존재 하에서 보체-의존적 세포 용해(CDCC)를 매개하고, 인간 효과기 세포를 사용한 항-신체-의존적 세포 세포독성(ADCC)을 매개하는 항-CD20 키메라 항체의 제조를 기술하는 문헌[Reff, et al, Blood. Vol83, No 2, 1994: pp 435-445] 참고). 리툭시맙(rituximab)은 B 세포를 파괴하고, 따라서 B 세포의 과활성, 기능이상 또는 과도한 수를 특징으로 하는 질환을 치료하는 데 사용된다. 다른 B 세포-고갈 항체는 오크렐리주맙(ocrelizumab) 및 오파투무맙(ofatumumab)을 포함한다. 또 다른 예에서, CD3 Ab는 CD4+Foxp3+ Treg를 보존하면서 활성화된 효과기 T 세포를 우선적으로 표적화 및 고갈시킨다. 이러한 항체는 일시적으로 T 세포를 고갈시키지만, 이것은 보체-의존적 및 항체-의존적 세포 세포독성을 전혀 또는 거의 나타내지 않는다. 2종의 상이한 세포(한 쪽의 세포독성 CD8+ T 세포 및 다른 쪽의 다른 표적 T 세포)에 의해서 발현된 CD3 분자를 가교결합시키는 능력으로 인한 재지향된 세포 용해는 밝혀져 있지만, T 세포 고갈은 대부분 AICD로부터 초래된다(문헌[You, Front Immunol. 2015; 6: 242]에서 검토됨).
일부 실시형태에서, 세포-고갈 항체는 LAIR-1 양성 대식세포, F4/80+ DC, 암 세포 또는 이들의 조합물의 수를 감소시킨다.
2. 치료하고자 하는 대상체
a. 암의 치료
개시된 조성물 및 방법은 암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 작용제는 대상체에게 LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 감소시키는 면역조정제의 양을 투여함으로써 대상체에서 암에 대한 면역 반응을 자극 또는 향상시키기 위해서 사용된다. 방법은 암의 하나 이상의 증상을 감소시킬 수 있다.
면역계는 암 개시 및 성장에 대한 증명된 방어이다. 면역 반응의 조절은 암 세포에 대한 활성화 또는 저해를 비롯한, 특이적 경로를 따라서 면역 세포 기능을 안내하는 세포 표면 상호작용에 의해서 조정된다. LAIR-1은 최적의 면역 반응을 예방하는 몇몇 면역 세포(백혈구) 하위 세트의 표면 상의 저해성 수용체이다. 반면에, LAIR-2은 디코이로서 기능하여 LAIR-1 매개된 저해를 차단하는 가용성 동족체이다.
일 실시형태에서, LAIR-2 Fc 융합 단백질은 시험관내에서 그리고 생체내에서 면역 반응을 촉진시킨다. 또 다른 실시형태에서, LAIR-2 Fc는 종양 성장을 저해하고, 생존을 촉진시킨다. 추가의 또 다른 실시형태에서, LAIR-2 Fc는 항-PD-1 면역요법을 촉진시킨다. 본 명세서에 제공된 시기는 LAIR-1 mAb가 인간 T 세포 및 골수 세포주에서 시험관내 활성도를 갖는다는 것을 입증하는데, 이는 특이적 mAb 클론에 대한 특이적 효능제 및 길항제 활성도를 나타낸다. 이러한 발견은 암 및 다른 질환에서 면역요법 개입에 대한 LAIR-2 Fc 또는 LAIR-1 mAb에 의한 잠재적인 LAIR-1 경로 조정을 입증한다.
또 다른 실시형태에서, LAIR-Fc는 TCR 자극에 대한 1차 인간 T 세포 반응성을 증가시킨다. 또 다른 실시형태에서, LAIR-2 Fc는 생체내에서 항원 특이적 T 세포 반응을 증가시킨다.
암 세포는 비록 다양한 기전을 통할지라도, 이의 발달 동안 특징적인 기능성 능력 세트를 획득한다. 이러한 능력은 회피 아포토시스(evading apoptosis), 성장 신호에서의 자족, 항-성장 신호에 대한 무감각, 조직 침투/전이, 무한한 잠재력 및 지속된 혈관신생을 포함한다. 용어 "암 세포"는 전암성 암 세포 및 악성 암 세포 둘 모두를 포함하는 의미이다. 일부 실시형태에서, 암은 국지화되어 유지된 양성 종양을 지칭한다. 다른 실시형태에서, 암은 이웃하는 신체 구조에 침윤하고, 이를 파괴하고, 윈위 부위로 확산된 악성 종양을 지칭한다. 또 다른 실시형태에서, 암은 특이적 암 항원(예를 들어, 범(pan)-암종 항원(KS 1/4), 난소 암종 항원(CA125), 전립선 특이적 항원(PSA), 암배아 항원(CEA), CD19, CD20, HER2/neu 등)과 연관된다.
본 명세서에 개시된 방법 및 조성물은 하기를 비롯한(이에 제한되지 않음) 암 또는 다른 비정상적 증식성 질환의 치료 또는 예방에 유용하다: 암종, 예컨대, 방광, 유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 췌장, 위, 자궁경부, 갑상선 및 피부의 암종; 예컨대, 편평 세포암종; 림프구 계통의 조혈 종양, 예컨대, 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 버킷 림프종(Berketts lymphoma); 골수 계통의 조혈 종양, 예컨대, 급성 및 만성 골수성 백혈병 및 전골수구 백혈병; 간엽성 기원의 종양, 예컨대, 섬유육종 및 횡문근종육종(rhabdomyoscarcoma); 다른 종양, 예컨대, 흑색종, 정상피종, 기형암종(tetratocarcinoma), 신경모세포종 및 신경교종; 중추 신경계 및 말초 신경계의 종양, 예컨대, 별아교세포종, 신경모세포종, 신경교종, 및 신경초종; 간엽성 기원의 종양, 예컨대, 섬유육종, 횡문근육종, 및 골육종; 및 다른 종양, 예컨대, 흑색종, 색소성 건피증(xenoderma pegmentosum), 각화 상피 종양(keratoactanthoma), 정상피종, 갑상선 여포암 및 기형암종.
아포토시스에서의 일탈에 의해서 유발된 암이 또한 개시된 방법 및 조성물에 의해서 치료될 수 있다. 이러한 암은 소포 림프종, p53 돌연변이를 갖는 암종, 유방, 전립선 및 난소의 호르몬 의존형 종양, 및 전암성 병변, 예컨대, 가족성 선종성 용종증, 및 골수이형성 증후군을 포함할 수 있지만 이들로 제한되지 않는다. 구체적인 실시형태에서, 악성종양 또는 이상증식성(dysproliferative) 변화(예컨대, 화생(metaplasia) 및 이형성증(dysplasia)), 또는 과증식성 장애가 난소, 방광, 유방, 결장, 폐, 피부, 췌장, 또는 자궁에서 이러한 방법 및 조성물에 의해서 치료 또는 예방된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 육종, 흑색종 또는 백혈병이 이러한 방법 및 조성물에 의해서 치료 또는 예방된다.
개시된 조성물 및 방법은 비정상적으로 높은 수준의 LAIR-1, 높은 수준의 LAIR-1 리간드, 낮은 수준의 LAIR-2 또는 이들의 조합을 발현하는 세포와 연관된 암의 치료에 특히 유용하다.
본 명세서에 개시된 방법 및 조성물에 의해서 치료 또는 예방될 수 있는 구체적인 암 및 관련된 장애는, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 예컨대, 골수아구성, 전골수구, 골수단핵구성, 단핵구성, 적백혈병 백혈병 및 골수이형성 증후군을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 백혈병, 만성 백혈병, 예컨대, 비제한적으로 만성 골수구성(과립구성) 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 모발 세포 백혈병; 진성 다혈구증; 림프종, 예컨대, 비제한적으로 호지킨병 또는 비호지킨병 림프종(예를 들어, 미만성 역형성 림프종 카이나제(ALK) 음성, 거대 B-세포 림프종(DLBCL); 미만성 역형성 림프종 카이나제(ALK) 양성, 거대 B-세포 림프종(DLBCL); 역형성 림프종 카이나제(ALK) 양성, ALK+ 역형성 거대-세포 림프종(ALCL), 급성 골수 림프종(AML)); 다발성 골수종, 예컨대, 비제한적으로 스몰더링(smoldering) 다발성 골수종, 비분비성 골수종, 골경화 골수종, 형질구성 백혈병, 고립성 형질세포종 및 골수외 형질세포종; 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia); 의미 불명 단클론성 감마글로불린증; 양성 단클론성 감마글로불린증; 중쇄병; 골 및 결합 조직 육종, 예컨대, 비제한적으로, 뼈육종, 골육종, 연골육종, 유잉 육종, 악성 거대 세포 종양, 골의 섬유육종, 척색종, 골막 육종, 연조직 육종, 맥관육종(혈관육종), 섬유육종, 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 림프관육종, 신경초종, 횡문근육종, 활막 육종; 신경교종, 별아교세포종, 뇌줄기 신경교종, 상의세포종, 핍지교정, 비신경교(nonglial) 종양, 청신경총종, 두개인두종, 수모세포종, 수막종, 솔방울세포종, 솔방울샘모세포종, 1차 뇌 림프종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 뇌종양; 선암, 소엽(소세포) 암종, 관내 암종, 수질 유방암, 점액성 유방암, 관상형 유방암, 유두상 유방암, 파제트병, 및 염증성 유방암을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 유방암; 갈색세포종(pheochromocytom) 및 부산피질 암종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 부신암; 갑상선암, 예컨대, 비제한적으로, 유두상 또는 소포 갑상선암, 수질 갑상선암 및 역형성 갑상선암; 인슐린종, 가스트린종, 글루카곤종, 비포마, 소마토스타틴-분비 종양, 및 카시노이드 또는 도세포 종양; 쿠싱병, 프로락틴-분비 종양, 말단비대증, 및 요붕증(diabetes insipius)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 뇌하수체암; 안 흑색종, 예컨대, 홍채 흑색종, 맥락막 흑색종, 및 모양체 흑색종, 및 망막모세포종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 안암; 편평 세포암종, 선암, 및 흑색종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 질암; 편평 세포암종, 흑색종, 선암, 기저 세포암종, 육종, 및 파제트병을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 외음부암; 편평 세포암종, 및 선암을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 자궁경부암; 자궁내막 암종 및 자궁 육종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 자궁암; 난소 상피 암종, 경계형 종양, 생식 세포 종양, 및 기질 종양을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 난소암; 편평암, 선암, 선낭 암종, 점막표피모양 암종, 선편평세포암종, 육종, 흑색종, 형질세포종, 우상 암종, 및 연맥 세포(소세포) 암종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 식도암; 선암, 균상형(폴립형), 궤양성, 표재 확장성, 산만 확장성(diffusely spreading), 악성 림프종, 지방육종, 섬유육종, 및 암육종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 위암; 결장암; 직장암; 간세포암종 및 간모세포종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 간암, 선암을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 담낭암; 유두상, 결절성, 및 미만성을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 담도암종; 비소세포 폐암, 편평 세포암종(표피형 암종), 선암, 거대-세포암종 및 소세포 폐암을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 폐암; 아세포성(germinal) 종양, 정상피종, 역형성, 일반적(전형적), 정모세포성, 비정상피종, 배아 암종, 기형종 암종, 융모막암종(난황낭 종양)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 고환암,선암, 평활근육종, 및 횡문근육종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 전립선암; 음경암(penal cancer); 편평 세포암종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 경구암; 기저암; 선암, 점막표피모양 암종, 및 선양낭성 암종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 침샘암; 편평 세포암, 및 우상을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 인두암; 기저 세포암종, 편평 세포암종 및 흑색종, 표재 확장성 흑색종, 결절성 흑색종, 흑자 악성 흑색종, 말단 흑색점 흑색종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 피부암; 신장 세포암, 선암, 부신종, 섬유육종, 이행성 세포암(신우 및/또는 요관(uterer))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 신장 암; 윌름스 종양; 이행성 세포암종, 편평 세포암, 선암, 암육종을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 방광암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 또한, 암은 점액육종, 골원성 육종, 내피육종, 림프관내피육종, 중피종, 활막종, 혈관모세포종, 상피 암종, 낭샘암종, 기관지 암종, 땀샘 암종, 피지선 암종, 유두상 암종 및 유두상 선암(이러한 장애의 검토에 대해서는 문헌[Fishman et al., 1985, Medicine, 2d Ed., J.B. Lippincott Co., Philadelphia and Murphy et al., 1997, Informed Decisions: The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment, and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books U.S.A., Inc., United States of America] 참고).
b. 감염의 치료
개시된 조성물 및 방법은 감염 및 감염성 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 작용제는 대상체에게 LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 감소시키는 면역조정제의 양을 투여함으로써 대상체에서 감염 유발제에 대한 면역 반응을 자극 또는 향상시키기 위해서 사용된다. 방법은 감염의 하나 이상의 증상을 감소킬 수 있다. 또한, 가용성 LAIR-1 및/또는 LAIR-2는 보체 인자 C1q에 결합할 수 있기 때문에, 높은 수준의 가용성 LAIR-1 또는 LAIR-2를 비정상적으로 발현하는 대상체는 일부 경우에 감염의 감소된 보체-매개된 면역 클리어런스를 가질 수 있다 따라서, 비정상적으로 높은 수준의 LAIR-1 또는 LAIR-2를 갖고, 감소된 보체 기능을 나타내는 것으로 발견된 대상체는 보체 캐스케이드를 개선시켜 감염에 대한 선천적인 면역 반응을 개선시키기 위해서 작용제, 예컨대, 각각 보체 인자 C1q에 대한 LAIR-1 및 LAIR-2 결합을 차단하는 LAIR-1 및 LAIR-2 mAb가 투여될 수 있다.
감염 또는 질환은 세포내로 도입되어, 즉, 세포독성 T 림프구에 의해서 공격되는 박테리아, 바이러스, 원생동물, 유충, 또는 다른 미생물 병원균에 의해서 유발될 수 있다.
감염 또는 질환은 급성 또는 만성일 수 있다. 급성 감염은 전형적으로 단기간의 감염이다. 급성 미생물 감염 동안, 면역 세포는 면역조절 수용체를 발현하기 시작한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 방법은 급성 감염에 대한 면역 자극 반응을 증가시키는 것을 포함한다.
감염은 예를 들어, 비제한적으로 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes), 스트렙토코쿠스 파이오게네스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae), 네이세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 에쉐리키아 콜라이, 아시네토박터 바우만니이(Acinetobacter baumannii), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa) 또는 마이코박테리움(Mycobacterium)에 의해서 유발될 수 있다.
일부 실시형태에서, 개시된 조성물은 만성 감염, 예를 들어, T 세포 고갈 또는 T 세포 무력증이 발생하여 감염이 연장된 시간 기간에 걸쳐서 숙주와 함께 남아있게 하는 감염을 치료하는 데 사용된다.
치료하고자 하는 예시적인 감염은 간염 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 인간 T-림프영양성 바이러스(HTLV), 허피스 바이러스, 엡스타인-바 바이러스 또는 인간 유두종 바이러스에 의해서 유발되는 만성 감염이다.
바이러스 감염은 T 세포에 의해서 주로 제거되기 때문에, T-세포 활성도의 증가는 감염성 바이러스제의 보다 신속하거나 철저한 클리어런스가 동물 또는 인간 대상체에게 이로울 상황에서 치료적으로 유용할 것이다. 따라서, 개시된 조성물은 면역결핍(예를 들어, HIV), 유두종(예를 들어, HPV), 허피스(예를 들어, HSV), 뇌염, 인플루엔자(예를 들어, 인간 인플루엔자 바이러스 A), 및 감기(예를 들어, 인간 리노바이러스) 및 예를 들어, HTLV, 간염 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 백시나 바이러스, 및 광견병 바이러스에 의해서 유발되는 다른 바이러스 감염을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 국지 또는 전신 바이러스 감염의 치료를 위해서 투여될 수 있다. 이러한 분자는 바이러스 피부 질환, 예컨대, 허피스 병변 또는 슁글(shingle), 또는 생식기 사마귀를 치료하기 위해서 국소적으로 투여될 수 있다. 이러한 분자는 또한 AIDS, 인플루엔자, 감기, 또는 뇌염을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 전신 바이러스 질환을 치료하기 위해서 전신에 투여될 수 있다.
치료될 수 있는 대표적인 감염은 악티노마이세스(Actinomyces), 아나바에나(Anabaena), 바실루스, 박테로이데스, 브델로비브리오(Bdellovibrio), 보데텔라(Bordetella), 보렐리아(Borrelia), 캠필로박터(Campylobacter), 카울로박터(Caulobacter), 클라미디아(Chlamydia), 클로로비움(Chlorobium), 크로마티움(Chromatium), 클로스트리디움(Clostridium), 코리네박테리움(Corynebacterium), 사이토파가(Cytophaga), 데이노코쿠스(Deinococcus), 에쉐리키아(Escherichia), 프란시셀라(Francisella), 할로박테리움(Halobacterium), 헬리오박터(Heliobacter), 해모필루스(Haemophilus), B형 헤모필루스 인플루엔자(Hemophilus influenza type B: HIB), 하이포마이크로비움(Hyphomicrobium), 레지오넬라(Legionella), 렙트스피로시스(Leptspirosis), 리스테리아, 메닌고코쿠스(Meningococcus) A, B 및 C, 메타노박테리움(Methanobacterium), 마이크로코쿠스(Micrococcus), 마이오박테리움(Myobacterium), 마이코플라즈마(Mycoplasma), 믹소코쿠스(Myxococcus), 네이세리아(Neisseria), 나이트로박터(Nitrobacter), 오실라토리아(Oscillatoria), 프로클로론(Prochloron), 프로테우스(Proteus), 슈도모나스(Pseudomonas), 포도스피릴룸(Phodospirillum), 리켓시아(Rickettsia), 살모넬라(Salmonella), 시겔라(Shigella), 스피릴룸(Spirillum), 스피로카에타(Spirochaeta), 스타필로코쿠스(Staphylococcus), 스트렙토코쿠스, 스트렙토마이세스(Streptomyces), 설폴로버스(Sulfolobus), 써모플라즈마(Thermoplasma), 티오바실루스(Thiobacillus), 및 트레포네마(Treponema), 비브리오(Vibrio), 에르시니아(Yersinia), 크립토코쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 히스토플라즈마 캅술라텀(Histoplasma capsulatum), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 칸디다 트로피칼리스(Candida tropicalis), 노카르디아 아스테로이데스(Nocardia asteroides), 리켓시아 리켓시(Rickettsia ricketsii), 리켓시아 타이피(Rickettsia typhi), 마이코플라즈마 뉴모니아에, 클라마이디알 스시타시(Chlamydial psittaci), 클라마이디알 트라코마티스(Chlamydial trachomatis), 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 트라이파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), 엔타모에바 히스톨리티카(Entamoeba histolytica), 톡소플라즈마 곤디이(Toxoplasma gondii), 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis) 및 쉬스토소마 만소니(Schistosoma mansoni)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 미생물에 의해서 유발되는 감염을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
개시된 조성물 및 방법을 사용하여 치료될 수 있는 다른 미생물은 박테리아, 예컨대, 클레브시엘라(Klebsiella), 세라티아(Serratia), 파스테우렐라(Pasteurella); 콜레라, 파상풍, 보툴리즘, 탄저병, 페스트(plague), 및 라임병(Lyme disease)과 연관된 병원균; 또는 진균 또는 기생충 병원균, 예컨대, 칸디다(Candida)(알라비칸스(albicans), 크루세이(krusei), 글라브라타(glabrata), 트로피칼리스(tropicalis) 등), 크립토코쿠스(Cryptococcus), 아스퍼길루스(Aspergillus)(푸미가투스(fumigatus), 니거(niger) 등), 털곰팡이속(Genus Mucorales)(무코르(mucor), 압시디아(absidia), 리조푸스(rhizophus)), 스포로트릭스(Sporothrix)(쉔키이(schenkii)), 블라스토마이세스(Blastomyces)(데르마티티디스(dermatitidis)), 파라콕시디오이데스(Paracoccidioides)(브라실리엔시스(brasiliensis)), 콕시디오이데스(Coccidioides)(이미티스(immitis)) 및 히스토플라즈마(Histoplasma)(캅술라투마(capsulatuma)), 엔타모에바(Entamoeba), 히스톨리티아(histolytica), 발란티디움 콜라이(Balantidium coli), 나에글레리아 포울레리(Naegleria fowleri), 아칸타모에바종(Acanthamoeba sp.), 기아디아 람비아(Giardia lambia), 크립토스포리디움종(Cryptosporidium sp.), 뉴모사이스티스 카리니이(Pneumocystis carinii), 플라스모디움 비박스(Plasmodium vivax), 바베시아 미크로티(Babesia microti), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 톡소플라스마 군디(Toxoplasma gondi) 등), 스포로트릭스(Sporothrix), 블라스토마이세스(Blastomyces), 파라콕시디오이데스(Paracoccidioides), 콕시디오이데스(Coccidioides), 히스토플라즈마(Histoplasma), 엔타모에바(Entamoeba), 히스톨리티카(Histolytica), 발란티디움(Balantidium), 나에글레리아(Naegleria), 아칸타모에바(Acanthamoeba), 기아디아(Giardia), 크립토스포리둠(Cryptosporidium), 뉴모사이스티스(Pneumocystis), 플라스모디움(Plasmodium), 바베시아(Babesia), 또는 트리파노소마(Trypanosoma) 등의 것을 포함한다.
B. 면역 반응 저해
1. 치료 전략
대상체에서 면역 반응을 감소 또는 저해시키는 방법이 제공된다. 전형적으로, 방법은 대상체에게 유효량의 면역조정제, 또는 면역조정제로 생체외에서 프라이밍된 세포를 투여하는 단계를 포함한다. 면역 반응은 예를 들어, 항원에 대한 1차 면역 반응이거나 또는 효과기 세포 기능의 증가, 예컨대, T 세포의 항원-특이적 증식의 증가, T 세포에 의한 사이토카인 생산의 향상, 분화의 자극 또는 이들의 조합일 수 있다. 따라서 일부 실시형태에서, 작용제는 T 세포 증식, T 세포 사이토카인 생산, T 세포 분화 또는 이들의 조합을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 작용제는 미경험 T 세포가 Th1, Th17, Th22, 또는 IL-1β, TNF-α, TGF-베타, IFN-γ, IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21, 및 MMP를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 염증성 분자를 분비하는 다른 세포 또는 다른 세포가 염증성 세포를 분비하도록 유도하는 다른 세포로 발달하는 것을 감소시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 작용제는 Treg의 활성도를 증가시키거나 촉진시킬 수 있거나, Treg로부터의 사이토카인, 예컨대, IL-10의 생산을 증가시킬 수 있거나, Treg의 분화를 증가시킬 수 있거나, Treg의 수를 증가시킬 수 있거나, 면역 세포 집단 내의 Treg의 비율을 증가시킬 수 있거나, 또는 Treg의 생존을 증가시킬 수 있다.
방법은 생체내에서 또는 생체외에서 면역 반응-저해 치료 응용으로서 사용될 수 있다. 따라서 일부 실시형태에서, 작용제, 또는 작용제를 암호화하는 핵산이 대상체에게 직접 투여된다. 일부 실시형태에서, 작용제 또는 작용제를 암호화하는 핵산을 세포(예를 들어, 면역 세포)와 생체외에서 접촉시키고, 처리된 세포를 대상체에게 투여한다(예를 들어, 입양 전달). 일반적으로, 개시된 면역조정제는 대상체의 면역계가 과활성 또는 부적절한 면역 반응을 시작하는 임의의 질환 또는 장애를 갖거나 이것에 취약한 대상체를 치료하기 위해서 사용될 수 있다. 작용제는 보다 덜 강한 면역 반응을 가능하게 할 수 있도록 할 수 있다. 개시된 조성물은 T 세포에 관여된 면역 반응을 감소 또는 저해시키는 데 유용하다.
면역 반응을 감소시키기 위해서 사용되는 면역조정제는 전형적으로 LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 증가시키는 것이다. 예를 들어, 작용제는 LAIR-1의 효능제, 예컨대, 효능제(자극) 항-LAIR-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 작용제는 또한 1종 이상의 LAIR-1 리간드를 위한 디코이 수용체로서 기능하는 LAIR-2의 능력을 감소시키는, LAIR-2의 길항제, 예컨대, 길항성(차단) 항-LAIR-2 항체일 수 있다.
예를 들어, 일부 실시형태에서, 유효량의, LAIR-2 차단을 유도하는 작용제가 자가면역 질환 또는 염증성 질환 또는 장애를 갖는 대상체에게 투여된다. LAIR-1 신호전달은 자가면역 및 면역 자가반응성 증상발현을 예방하는 데 특히 중요한 면역 반응을 구분하는 기능을 한다. 따라서, 감소된 LAIR-1 발현은 증가된 자가면역을 초래할 수 있다. 대안적으로, LAIR-2의 증가된 수준은 LAIR-1에 의한 리간드 가교결합 및 저해성 신호전달을 예방함으로써 자가면역을 촉진시킬 수 있다. 실제로, LAIR-2의 증가된 수준은 류마티스 관절염을 갖는 환자에서 보고되어 있다(Olde Nordkamp et al. 2011, Arthritis Rheum. 63:3749-3757). 이와 같이, RA 환자에서의 LAIR-1의 증가된 수준에도 불구하고, LAIR-2가 더 높은 리간드 친화도를 갖기 때문에, LAIR-1 발현의 증가는 거의 효과가 없을 것이다. 따라서, 콜라겐, SP-D 및 C1q에 대한 LAIR-2 결합의 차단은 LAIR-1의 증가된 가교결합을 초래할 것이고, 그 다음 면역 염증성 경로를 감소시킬 것이다. LAIR-2를 고갈시키거나 LAIR-2 리간드 결합을 차단하는 mAb는 LAIR-2의 전신 또는 국지적 수준이 증가된 자가면역 질환의 치료에 특히 효과적일 수 있다. 실제로, LAIR-2 및 LAIR-1 둘 모두의 증가된 발현을 갖는 자가면역 질환은 LAIR-2 mAb 면역요법을 사용하여 최대 성공 기회를 가질 것인데, 그 이유는 LAIR-2가 일단 중화되면, 높은 수준의 LAIR-1가 낮은 수준의 LAIR-1 발현을 갖는 질환에서보다 더 높은 저해성 효과를 가질 것이기 때문이다. 따라서 일부 실시형태에서, LAIR-2 mAb 면역요법은 류마티스 관절염을 갖는 대상체를 치료하는 데 사용된다.
a. 염증성 반응
개시된 조성물 및 방법은 염증을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 작용제는 대상체에게 LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 증가시키는 면역조정제의 양을 투여함으로써 대상체에서 면역 반응을 감소 또는 저해시키기 위해서 사용된다. 방법은 염증의 하나 이상의 증상을 감소킬 수 있다. 염증은 급성, 만성, 또는 지속적인 염증일 수 있다.
일부 실시형태에서, 면역조정제는 면역계를 둔화시킨다. 예를 들어, 작용제는 건강한 조직의 손상을 초래하는 고-염증성 반응을 제어하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 작용제는 고-염증성 반응을 겪는 대상체에게 투여된다. 이러한 경우에, 과도한 면역 반응을 제어하는 것은 대상체에게 이로울 수 있다.
b. 염증성 및 자가면역 질환/장애
LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 증가시키는 작용제는 또한 염증성 또는 자가면역 질환 및 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다. 대표적인 염증성 또는 자가면역 질환/장애는 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 원형 탈모증, 강직성 척추염, 항인지질항체증후군, 자가면역 애디슨병, 자가면역 용혈성빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환, 자가면역 림프세포증식 증후군(alps), 자가면역 혈소판감소성자반병(ATP), 베체트병, 물집유사천포창, 셀리악-스프루 피부염(celiac sprue-dermatitis), 만성 피로 증후군 면역 결핍 증후군(CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성신경병증, 흉터유사천포창, 한랭응집소증, 크레스트 증후군(Crest syndrome), 크론병, 데고병(Dego's disease), 피부근염, 피부근염 - 청소년, 원판성 루푸스, 필수 혼합 한냉글로불린혈증, 섬유근육통 - 섬유근염, 그레이브병, 길랑-바레(guillain-barre), 하시모토 갑상선염, 특발성 폐섬유증, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), Iga 신장병, 인슐린 의존형 당뇨병(I형), 아동 관절염, 메니에르병(Meniere's disease), 혼합 결합 조직병, 다발성 경화증, 중증근무력증, 심상성천포창, 악성빈혈, 결절성동맥주위염, 다발연골염, 다선성 증후군(polyglancular syndrome), 류마티스성 다발근통, 다발근염 및 피부근염, 원발성 무감마글로불린혈증, 원발성 담즙성 간경변증, 건선, 레이노 증후군(Raynaud's phenomenon), 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 류마티스열, 사르코이드증, 피부경화증, 쇼그렌 증후군, 강직-인간 증후군, 타카야수동맥염, 측두 동맥염/거대 세포 동맥염, 궤양성 대장염, 포도막염, 혈관염, 백반증, 및 베게너 육아종증을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서 염증 또는 자가면역 질환은 병원균에 의해서 유발되거나, 또는 감염의 결과이다.
V. 병용 요법
개시된 면역조정제는 이를 필요로 하는 대상체에게 단독으로 또는 1종 이상의 추가적인 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역조정제 및 추가적인 치료제는 별개로, 그러나 동시에 투여된다. 면역조정제 및 추가적인 치료제는 또한 동일한 조성물의 부분으로서 투여될 수 있다. 다른 실시형태에서, 면역조정제 및 제2 치료제는 상이한 시간에 별개로, 그러나 동일한 치료 요법의 부분으로서 투여된다.
대상체는 제2 치료제의 투여 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 초과의 시간 이전에 또는, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 그 초과의 일 이전에 제1 치료제가 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상체는 제2 작용제의 제1 투여 1, 2, 3, 4, 5, 6 7, 14, 21, 28, 35 또는 48일 이전 마다 제1 작용제의 하나 이상의 용량이 투여될 수 있다. 면역조정제는 제1 또는 제2 치료제일 수 있다.
면역조정제 및 추가적인 치료제는 치료 요법의 부분으로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 제1 치료제가 대상체에게 4일째마다 투여될 수 있는 경우, 제2 치료제는 제1일, 제2일, 제3일 또는 제4일 또는 이들의 조합일에 투여될 수 있다. 제1 치료제 또는 제2 치료제는 전체 치료 요법 전체에서 반복적으로 투여될 수 있다.
예시적인 분자는 사이토카인, 화학치료제, 방사성핵종, 다른 면역치료제, 효소, 항생제, 항바이러스제(특히 단독, 또는 HIV 또는 B형 또는 C형 간염의 치료를 위한 뉴클레오사이드와 조합된 프로테아제 저해제), 항-기생충제(유충, 원생동물), 성장 인자, 성장 저해제, 호르몬, 호르몬 길항제, 항체 및 이의 생물활성 단편(인간화된, 단일 쇄, 및 키메라 항체 포함), 항원 및 백신 제형(아주반트 포함), 펩타이드 약물, 항-염증제, Toll-유사 수용체에 결합하여 선천적인 면역계를 활성화시키는 리간드(CpG 올리고뉴클레오타이드를 포함하지만 이들로 제한되지 않음), 적응성 면역계를 동원 및 최적화하는 분자, 세포독성 T 림프구, 자연 살해 세포 및 헬퍼 T-세포의 작용을 활성화시키거나 상향조절하는 다른 분자, 및 억제인자 또는 조절 T-세포를 불활성화시키거나 하향조절하는 다른 분자를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
추가적인 치료제는 치료하고자 하는 병태, 장애 또는 질환을 기준으로 선택된다. 예를 들어, 면역조정제는 면역 반응을 향상시키거나 촉진시키거나, 또는 면역 반응을 저해하거나 억제하는 기능을 하는 1종 이상의 추가적인 작용제와 함께 공동투여될 수 있다.
A. 면역 반응의 증가
1. 항미생물제
예를 들어, LAIR-1 또는 LAIR-2 면역조정제는 상기에 논의된 바와 같은 질환의 치료 및 예방에서, 그리고 또한 중증 외상 상해, 예컨대, 주요 화상, 개방 골절, 우발 유산 또는 다른 상처와 관련하여 예방 또는 예방적 역할에서 사용될 수 있다. 따라서, LAIR-1 또는 LAIR-2 면역조정제는 항미생물제, 예컨대, 항생제, 항진균제, 항바이러스제, 항기생쳉제, 또는 에션셜 오일과 조합하여 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상체는 추가의 박테리아, 진균 또는 바이러스 합병증을 예방하기 위해서 병원에 입원할 때 LAIR-1 또는 LAIR-2 면역조정제 및/또는 항미생물제가 투여된다. 항생제는 병원균을 표적으로 할 수 있고, LAIR-1 또는 LAIR-2 면역조정제는 추가 감염 또는 질환을 치료 또는 예방하기 위해서 향상된 반응을 제공하도록 면역계를 자극할 수 있다.
2. 화학치료제
LAIR-1 또는 LAIR-2 면역조정제는 1종 이상의 화학치료제 및 프로-아폽토틱제(pro-apoptotic agent)와 조합될 수 있다. 대표적인 화학치료제는 암사크린, 블레오마이신, 부설판, 카페시타빈, 카보플라틴, 카부스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로파라빈, 크리산타스파제(crisantaspase), 사이클로포스파미드, 시타라빈, 다카바진, 닥티노마이신, 다우노루비신, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 하이드록시카바마이드, 이다루비신, 이소파마이드, 이리노테칸, 류코보린, 리포솜 독소루비신, 리포솜 다우노루비신, 로무스틴, 멜팔란, 머캅토퓨린, 멘스나, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 페메트렉세드, 펜토스타틴, 프로카바진, 랄티트렉세드, 사트라플라틴, 스트렙토조신, 테가퍼-우라실, 테모졸로마이드, 테니포사이드, 티오테파, 티오구아닌, 토포테칸, 트레오설판, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈 또는 이들의 조합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 대표적인 프로-아폽토틱제는 플루다라빈타우로스포린, 사이클로헥스이미드, 악티노마이신 D, 락토실세라마이드, 15d-PGJ(2) 및 이들의 조합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
3. 다른 면역조정제
a. PD-1 길항제
일부 실시형태에서, LAIR-1 또는 LAIR-2 면역조정제는 PD-1 길항제와 공동투여된다. 예정된 사멸-1(PD-1)은 T 세포 상에서 유도될 때 음성 면역 반응을 전달하는 수용체의 CD28 패밀리의 구성원이다. PD-1과 이의 리간드(B7-H1 또는 B7-DC) 중 하나 간의 접촉은 T 세포 증식 및/또는 T 세포 반응의 강도 및/또는 기간을 감소시키는 저해성 반응을 유도한다. 적합한 PD-1 길항제는 전문이 본 명세서에 참고로 구체적으로 포함된 미국 특허 제8,114,845호, 제8,609,089호 및 제8,709,416호에 기술되어 있고, PD-1의 리간드에 결합하여 이를 차단하여 PD-1 수용체에 대한 리간드의 결합을 방해하거나 저해하거나, 또는 PD-1 수용체를 통한 저해성 신호 변환을 유도하지 않으면서 PD-1 수용체에 적접 결합하여 이를 차단하는 화합물 또는 작용제를 포함한다.
일부 실시형태에서, PD-1 수용체 길항제는 저해성 신호 변환을 촉발하지 않으면서 PD-1 수용체에 직접 결합하고, 또한 PD-1 수용체의 리간드에 결합하여 리간드가 PD-1 수용체를 통해서 신호 변환을 촉발하는 것을 감소시키거나 저해한다. PD-1 수용체에 결합하고, 저해성 신호의 형질도입을 촉발하는 리간드의 수 및/또는 양을 감소시킴으로써, 더 적은 세포가 PD-1 신호 변환에 의해서 전달된 음성 신호 전달에 의해서 약화되고, 더 강한 면역 반응이 달성될 수 있다.
PD-1 신호전달은 주조직 적합 유전자 복합체(MHC)에 의해서 제시된 펩타이드 항원에 인접하여 PD-1 리간드(예컨대, B7-H1 또는 B7-DC)에 대한 결합에 의해서 유도된다고 여겨진다(예를 들어, 문헌[Freeman, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 105:10275-10276 (2008)] 참고). 따라서, T 세포막 상의 PD-1 및 TCR의 공동결찰을 예방하는 단백질, 항체 또는 소분자가 또한 유용한 PD-1 길항제이다.
일부 실시형태에서, PD-1 수용체 길항제는 PD-1의 리간드 또는 PD-1 자체(특히 TCR로의 PD-1의 공동결찰이 이러한 결합 다음에 이어지지 않는 경우)에 대한 결합에 의해서 PD-1 수용체 신호 변환을 감소시키거나 방해하고, 이에 의해서 PD-1 수용체를 통해서 저해성 신호 변환을 촉발시키지 않는 소분자 길항제 또는 항체이다.
본 발명의 방법에 의해서 고려되는 다른 PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-1의 리간드에 결합하는 항체, 및 다른 항체를 포함한다.
적합한 항-PD-1 항체는 하기 공보에 기술된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다:
PCT/IL03/00425(Hardy et al., WO/2003/099196)
PCT/JP2006/309606(Korman et al., WO/2006/121168)
PCT/US2008/008925(Li et al., WO/2009/014708)
PCT/JP03/08420(Honjo et al., WO/2004/004771)
PCT/JP04/00549(Honjo et al., WO/2004/072286)
PCT/IB2003/006304(Collins et al., WO/2004/056875)
PCT/US2007/088851(Ahmed et al., WO/2008/083174)
PCT/US2006/026046(Korman et al., WO/2007/005874)
PCT/US2008/084923(Terrett et al., WO/2009/073533)
Berger et al., Clin. Cancer Res., 14:30443051 (2008).
항-PD-1 항체의 구체적인 예는 특허 제US 20070166281호(공개일 2007년 7월 19일) at par. 42)(Kosak)에 기술된 항체, 인간 항-PD-1 항체(일부 실시형태에서 3㎎/㎏의 용량으로 투여됨)이다.
예시적인 항-B7-H1 항체는 하기 공보에 기술된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다:
PCT/US06/022423(WO/2006/133396, 공개일 2006년 12월 14일)
PCT/US07/088851(WO/2008/083174, 공개일 2008년 7월 10일)
US 2006/0110383(공개일 2006년 5월 25일).
항-B7-H1 항체의 구체적인 예는 (WO/2007/005874, 공개일 2007년 1월 11일))에 기술된 항체, 인간 항-B7-H1 항체이다.
추가적인 항-PD-1 및 항-B7-H1 항체는 전문이 본 명세서에 참고로 구체적으로 포함된 특허 제2014/0044738호에 개시되어 있다.
항-B7-DC 항체에 대해서는 특허 제7,411,051호, 제7,052,694호, 제7,390,888호 및 미국 공개 출원 제2006/0099203호를 참고하기 바란다.
다른 예시적인 PD-1 수용체 길항제는 B7-DC 폴리펩타이드, 예컨대, 이의 동족체 및 변이체, 뿐만 아니라 상기 중 임의의 것의 활성 단편, 및 이들 중 임의의 것을 혼입한 융합 단백질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 융합 단백질은 항체, 예컨대, 인간 IgG의 Fc 부분에 커플링된 B7-DC의 가용성 부분을 포함하고, 인간 B7-DC의 막관통 부분의 전부 또는 일부를 혼입하지 않는다.
PD-1 길항제는 또한 예를 들어 마우스 또는 영장류, 예컨대, 인간으로부터의 포유동물 B7-H1의 단편일 수 있고, 여기서 단편은 PD-1에 결합하여 이를 차단하지만, PD-1을 통해서 저해성 신호 변환을 초래하지 않는다. 단편은 또한 융합 단백질, 예를 들어, Ig 융합 단백질의 부분일 수 있다.
다른 유용한 폴리펩타이드 PD-1 길항제는 PD-1 수용체의 리간드에 결합하는 것을 포함한다. 이것은 PD-1 리간드, 예컨대, B7-H1 또는 B7-DC에 결합하고, 내생 PD-1 수용체에 대한 결합을 예방함으로써, 저해성 신호 변환을 예방할 수 있는 PD-1 수용체 단백질, 또는 이의 가용성 단편을 포함한다. B7-H1은 단백질 B7.1에 결합하는 것으로 밝혀져 있다(Butte et al., Immunity, Vol. 27, pp. 111-122, (2007)). 이러한 단편은 또한 자연 리간드에 대한 결합을 증가시키는, 돌연변이, 예컨대, A99L 돌연변이를 포함하는 PD-1 단백질의 가용성 ECD 부분을 포함한다(Molnar et al., PNAS, 105:10483-10488 (2008)). B7-H1 리간드에 결합하고, 내생 PD-1 수용체에 대한 결합을 예방함으로써, 저해생 신호 변환을 예방할 수 있는 B7-1 또는 이의 가용성 단편이 또한 유용하다.
PD-1 및 B7-H1 안티-센스 핵산, DNA 및 RNA 둘 모두, 뿐만 아니라 siRNA 분자는 또한 PD-1 길항제일 수 있다. 이러한 안티-센스 분자는 T 세포 상에서의 PD-1의 발현뿐만 아니라 T 세포 리간드, 예컨대, B7-H1, PD-L1 및/또는 PD-L2의 생산을 예방한다. 예를 들어, 담체, 예컨대, 폴리에틸렌이민과 복합체화된 siRNA(예를 들어, 약 21개 뉴클레오타이드 길이, PD-1을 암호화하는 유전자 또는 PD-1 리간드를 암호화하는 유전자에 대해서 특이적임, 올리고뉴클레오타이드는 상업적으로 쉽게 구매될 수 있음)(문헌[Cubillos-Ruiz et al., J. Clin. Invest. 119(8): 2231-2244 (2009)] 참고)는 PD-1뿐만 아니라 PD-1의 리간드를 발현하고, 이러한 수용체 및 리간드의 발현을 감소시켜 T 세포에서 저해성 신호 변환의 감소를 달성하는 세포에 의해서 쉽게 포획됨으로써, T 세포를 활성화시킨다.
b. CTLA4 길항제
면역 반응에서 T 세포의 효과를 매개하는 데 유용한 다른 분자가 또한 추가적인 치료제로서 고려된다. 일부 실시형태에서, 분자는 CTLA4의 길항제, 예를 들어 길항성 항-CTLA4 항체이다. 본 발명의 방법에서의 사용에 고려되는 항-CTLA4 항체의 예는 특허 제PCT/US2006/043690호(Fischkoff et al., WO/2007/056539)에 기술된 항체를 포함한다.
항-PD-1, 항-B7-H1, 및 항-CTLA4 항체에 대한 투여량은 관련 기술 분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 0.1 내지 100㎎/㎏의 범위, 또는 1 내지 50㎎/㎏, 또는 10 내지 20㎎/㎏의 더 좁은 범위일 수 있다. 인간 대상체에 대한 적절한 용량은 5 및 15㎎/㎏일 수 있고, 10㎎/㎏의 항체(예를 들어, 인간 항-PD-1 항체)가 구체적인 실시형태이다.
본 발명의 방법에 유용한 항-CTLA4 항체의 구체적인 예는 예를 들어, 약 10㎎/㎏의 용량으로 투여되는 인간 항-CTLA4 항체인 이필리무맙, 및 예를 들어, 약 15㎎/㎏의 용량으로 투여되는 인간 항-CTLA4 항체인 트레멜리무맙이다(또한 문헌[Sammartino, et al., Clinical Kidney Journal, 3(2):135-137 (2010), published online December 2009] 참고).
다른 실시형태에서, 길항제는 소분자이다. 일련의 작은 유기 화합물이 B7-1 리간드에 결합하여 CTLA4에 대한 결합을 예방하는 것으로 밝혀져 있다(문헌[Erbe et al., J. Biol. Chem., 277:7363-7368 (2002)] 참고). 이러한 작은 유기물은 단독으로 항-CTLA4 항체와 함께 투여되어 T 세포의 저해성 신호 변환을 감소시킬 수 있다.
4. 증강제(potentiating agent)
일부 실시형태에서, 추가적인 치료제는 증강제를 포함한다. 증강제는 가능하게는 하나 초과의 기전에 의해서, 면역 반응 상향조절제의 효능을 증가시키는 작용을 하지만, 정확한 작용 기전은 본 발명의 광범위한 실시에 본질적인 것이 아니다.
일부 실시형태에서, 증강제는 사이클로포스파마이드이다. 사이클로포스파마이드(CTX, Cytoxan(등록상표), 또는 Neosar(등록상표))는 옥사자포스포린(oxazahosphorine) 약물이고, 유사체는 이포스파마이드(IFO, 이펙스(Ifex)), 퍼포스파마이드, 트로포스파마이드(트로포스파마이드; 익소텐(Ixoten)), 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 전구약물 및 대사산물(전문이 포함된 미국 특허 출원 제20070202077호)을 포함한다. 이포스파마이드(MITOXANA(등록상표))는 사이클로포스파마이드의 구조 유사체이고, 이의 작용 기전은 사이클로포스파마이드의 작용 기전과 동일하거나 실질적으로 유사하다고 간주된다. 퍼포스파마이드(4-하이드로퍼옥시사이클로포스파마이드) 및 트로포스파마이드는 또한 사이클로포스파마이드와 구조적으로 관련된 알킬화제이다. 예를 들어, 퍼포스파마이드는 DNA를 알킬화시킴으로써, DNA 복제 및 RNA 및 단백질 합성을 저해한다. 신규 옥사자포스포린 유도체는 감소된 숙주 독성과 함께 선택성 및 반응을 개선시키려는 시도로 설계 및 평가되었다(Liang J, Huang M, Duan W, Yu XQ, Zhou S. Design of new oxazaphosphorine anticancer drugs. Curr Pharm Des. 2007;13(9):963-78. Review). 이것은 마포스파마이드(NSC 345842), 글루포스파마이드(D19575, 베타-D-글루코실아이소포스포르아마이드 머스타드), S-(-)-브로모포스파마이드(CBM-11), NSC 612567(알도포스파마이드 퍼하이드로티아진) 및 NSC 613060(알도포스파마이드 티아졸리딘)를 포함한다. 마포스파마이드는 4-하이드록시-CPA의 화학적으로 안정한 4-티오에탄 설폰산염인 옥사자포스포린 유사체이다. 글루포스파마이드는 IFO의 알킬화 대사산물인 아이소포스포르아마이드 머스타드가 베타-D-글루코스 분자에 글리코시드에 의해서 연결된 IFO 유도체이다. 추가적인 사이클로포스파마이드 유사체는 전문이 본 명세서에 참고로 포함되고 발명의 명칭이 "Cyclophosphamide analogs useful as anti-tumor agents"인 미국 특허 제5,190,929호에 기술되어 있다.
CTX 자체는 비독성이지만, 이의 대사산물 중 일부는 DNA 가교결합을 유도하고, 더 높은 용량에서 가닥 절단을 유도하는 세포독성 알킬화제이다. 다수의 세포는 CTX에 내성인데, 그 이유는 그것이 높은 수준의 해독 효소 알데하이드 데하이드로게나제(ALDH)를 발현하기 때문이다. CTX는 림프구를 증식시키는 것을 표적으로 하는데, 그 이유는 림프구(그러나 조혈 줄기세포 아님)가 단지 낮은 수준의 ALDH를 발현하고, 순환 세포가 DNA 알킬화제에 대부분 민감하기 때문이다.
저용량의 CTX(200㎎/㎏ 미만)는 암의 인간 및 마우스 모델에서 항-종양 면역 반응의 자극을 비롯한, 면역 자극 효과를 가질 수 있다(Brode & Cooke Crit Rev. Immunol. 28:109-126 (2008)). 이러한 낮은 용량은 치료효과가 없고, 직접적 항-종양 활성도를 갖지 않는다. 이에 반해서, 고용량의 CTX는 항-종양 반응을 저해한다. 몇몇 기전이 항-종양 면역 반응의 강화에서 CTX의 역할을 설명할 수 있다: (a) CD4+CD25+FoxP3+ Treg(및 특히 억제성일 수 있는 특이적으로 증식하는 Treg)의 고갈, (b) B 림프구의 고갈; (c) 종양 세포 성장의 억제를 초래하는 산화질소(NO)의 유도; (d) CD11b+Gr-1+ MDSC의 동원 및 확장. 이러한 1차 효과는 다수의 2차 효과를 갖고; 예를 들어 Treg 고갈 후에 대식세포는 더 많은 IFN-γ 및 더 적은 IL-10을 생산한다. CTX는 또한 타입 I IFN 발현을 유도하고, 림프구의 항상성 증식을 촉진시키는 것으로 밝혀져 있다.
Treg 고갈은 CTX가 항-종양 면역 반응을 증강시키는 기전으로서 가장 자주 언급되어 있다. 이러한 결론은 입양 전달 실험의 결과를 부분적으로 기반으로 한다. AB1-HA 종양 모델에서, 9일에 CTX 처리는 75% 치료율을 제공한다. 12일에 정제된 Treg의 전달은 CTX 반응을 거의 완전히 저해하였다(van der Most et al. Cancer Immunol. Immunother. 58:1219-1228 (2009). HHD2 종양 모델에서 유사한 결과가 관찰되었는데: CTX 전처리 후 CD4+CD25+ Treg의 입양 전달은 백신에 대한 치료 반응을 제거하였다(Taieb, J. J. Immunol. 176:2722-2729 (2006)).
다수의 인간 임상 시도는, 저용량 CTX가 안전하고, 널리 용인되고, 항-종양 면역 반응을 위한 효과적인 작용제인 것을 입증하였다(Bas, & Mastrangelo Cancer Immunol. Immunother. 47:1-12 (1998)).
항-종양 면역 반응을 증강시키기 위한 CTX에 대한 최적의 용량은, Treg 수준을 정상 수준 미만으로 낮춤으로써 전체 T 세포 수치를 낮추지만, 치료 수준 미만인 것이다(문헌[Machiels et al. Cancer Res. 61:3689-3697 (2001)] 참고).
CTX가 면역증강제로서 사용된 인간 임상 시험에서, 300㎎/㎡의 용량이 통상적으로 사용되었다. 평균 남성(6ft, 1.98㎡의 신체 표면적을 갖는 170파운드(78㎏)의 경우, 300㎎/㎡가 8㎎/㎏, 또는 624㎎의 총 단백질이다. 암의 마우스에서, 효능은 15 내지 150㎎/㎏ 범위의 용량에서 인지되었고, 이는 30g 마우스에서 0.45 내지 4.5㎎의 총 단백질에 관련된다(Machiels et al. Cancer Res. 61:3689-3697 (2001), Hengst et al Cancer Res. 41:2163-2167 (1981), Hengst Cancer Res. 40:2135-2141 (1980)).
더 큰 포유동물, 예컨대, 영장류, 예컨대, 인간, 환자에서, 이러한 ㎎/㎡ 용량이 사용될 수 있지만, 한정된 시간 간격에 걸쳐서 투여되는 단위 용량이 또한 사용될 수 있다. 이러한 단위 용량은 한정된 시간 기간 동안 1일 기준으로 투여될 수 있고, 예컨대, 최대 3일, 또는 최대 5일, 또는 최대 7일, 또는 최대 10일, 또는 최대 15일 또는 최대 20일 또는 최대 25일이 본 발명에 의해서 모두 구체적으로 고려된다. 동일한 요법이 본 명세서에 언급된 다른 증강제에 대해서 적용될 수 있다.
다른 실시형태에서, 증강제는 활성도 및/또는 조절 T 림프구(T-reg)의 수를 감소시키는 작용제, 예컨대, 수니티닙(SUTENT(등록상표)), 항-TGFβ 또는 이마티닙(GLEEVAC(등록상표))이다. 언급된 치료 요법은 또한 아주반트를 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
유용한 증강제는 또한 유사분열 저해제, 예컨대, 파클리탁솔, 아로마타제 저해제(예를 들어, 레트로졸) 및 혈관신생 저해제(VEGF 저해제, 예를 들어, 아바스틴, VEGF-Trap)(예를 들어, 문헌[Li et al., Vascular endothelial growth factor blockade reduces intratumoral regulatory T cells and enhances the efficacy of a GM-CSF-secreting cancer immunotherapy. Clin Cancer Res. 2006 Nov 15; 12(22):6808-16] 참고), 안트라사이클린, 옥살리플라틴, 독소루비신, TLR4 길항제, 및 IL-18 길항제를 포함한다.
B. 면역 반응의 감소
1. 면역억제제
일부 실시형태에서, 면역 반응, 또는 염증성/자가면역 질환/장애는 대상체에게 LAIR-1 또는 LAIR-2 면역조정제 및 면역 억제성인 제2 작용제를 투여함으로써 치료된다. 면역억제제는 다른 림프구 표면 마커(예를 들어, CD40, 알파-4 인테그린) 또는 사이토카인)에 대한 항체, 융합 단백질(예를 들어, CTLA-4-Ig(Orencia(등록상표)), TNFR-Ig(Enbrel(등록상표))), TNF-α 차단제, 예컨대, 엔브렐(Enbrel), 레마케이드(Remicade), 심지아(Cimzia) 및 휴미라(Humira), 사이클로포스파마이드(CTX)(즉, Endoxan(등록상표), Cytoxan(등록상표), Neosar(등록상표), Procytox(등록상표), Revimmune(상표명)), 메토트렉세이트(MTX)(즉, Rheumatrex(등록상표), Trexall(등록상표)), 벨리무맙(즉, Benlysta(등록상표)), 따른 면역억제 약물(예를 들어, 사이클로스포린 A, FK506-유사 화합물, 라파마이신 화합물, 또는 스테로이드), 항-증식제, 세포독성제, 또는 면역억제를 도울 수 있는 다른 화합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
치료제는 CTLA-4 융합 단백질, 예컨대, CTLA-4-Ig(아바타셉트)일 수 있다. CTLA-4-Ig 융합 단백질은 T 세포 상의 공자극성 수용체, CD28과 항원 제시 세포 상의 CD80/CD86 (B7-1/B7-2)에 대한 결합에 대해서 경쟁함으로써, T 세포 활성화를 저해하는 기능을 한다. 또 다른 실시형태에서, 치료제는 벨라타셉트라고 공지된 CTLA-4-Ig 융합 단백질이다. 벨라타셉트는 생체내에서 CD86에 대한 이의 결합활성을 상당히 증가시키는 2개의 아미노산 치환기를 함유한다(L104E 및 A29Y). 또 다른 실시형태에서, 치료제는 Maxy-4이다.
또 다른 실시형태에서, 치료제는 사이클로포스파마이드(CTX)이다. 사이토포스판이라고도 공지된 사이클로포스파마이드(Endoxan(등록상표), Cytoxan(등록상표), Neosar(등록상표), Procytox(등록상표), Revimmune(상표명)에 대한 일반명)는 옥사조포린 군으로부터의 질소 머스타드 알킬화제이다. 그것은 다양한 유형의 암 및 일부 자가면역 장애를 치료하는 데 사용된다. 사이클로포스파마이드(CTX)는 신장 루푸스를 갖는 환자에서 미만성 증식성 사구체신염을 위해서 사용되는 1차 약물이다.
이러한 치료제는 항-이중 가닥 DNA(항-ds DNA) 자가 항체의 혈액 또는 혈청 수준을 감소시키기 위해서 그리고/또는 이를 필요로 하는 환자에서 단백뇨를 감소시키기 위해서 유효량으로 투여될 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 치료제는 혈청에서 아데노신의 양을 증가시킨다(예를 들어, 국제 특허 제WO 08/147482호 참고). 예를 들어, 제2 치료제는 CD73-Ig, 재조합 CD73, 또는 CD73의 발현을 증가시키는 또 다른 작용제(예를 들어, 사이토카인 또는 단클론성 항체 또는 소분자)일 수 있다(예를 들어, 국제 특허 제WO 04/084933호 참고). 또 다른 실시형태에서 치료제는 인터페론-베타이다.
치료제는 Th1, Th17, Th22, 및/또는 IL-1β, TNF-α, TGF-베타, IFN-γ, IL-18 IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21, 및 MMP를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 염증성 분자를 분비하거나 또는 다른 분자가 이들을 분비하도록 하는 다른 세포에 의한 분화, 증식, 활성도, 및/또는 사이토카인 생산 및/또는 분비를 저해하거나 감소시키는 소분자일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 치료제는 Treg와 상호작용하거나, Treg 활성도를 향상시키거나, Treg에 의한 IL-10 분비를 촉진시키거나 향상시키거나, Treg의 수를 증가시키거나, Treg의 억제 능력을 증가시키거나 또는 이들의 조합인 소분자이다.
일부 실시형태에서, 조성물은 Treg 활성도 또는 생산을 증가시킨다. 예시적인 Treg 향상제는 IL-12, IFN-γ, 및 IL-4에 대한 항체인 글루코코티코이드 플루티카손, 살메테로알; 비타민 D3, 및 덱사메타손 및 이들의 조합물을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 치료제는 항체, 예를 들어, 전염증성 분자, 예컨대, IL-6, IL-23, IL-22 또는 IL-21에 대한 기능 차단 항체인, 항체이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "라파마이신 화합물"은 중성 트라이사이클릭 화합물 라파마이신, 라파마이신 유도체, 라파마이신 유사체, 및 라파마이신과 동일한 작용 기전(예를 들어, 사이토카인 기능의 저해)을 갖는 것으로 생각되는 다른 마크롤라이드 화합물을 포함한다. 표현 "라파마이신 화합물"은 라파마이신, 예를 들어, 이의 치료적 효과를 향상시키기 위해서 변형된 유사한 마크로사이클릭 구조를 갖는 화합물과 구조적 유사성을 갖는 화합물을 포함한다. 예시적인 라파마이신 화합물은 관련 기술 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 국제 특허 제WO95122972호, 제WO 95116691호, 제WO 95104738호, 미국 특허 제6,015,809호; 제5,989,591호; 미국 특허 제5,567,709호; 제5,559,112호; 제5,530,006호; 제5,484,790호; 제5,385,908호; 제5,202,332호; 제5,162,333호; 제5,780,462호; 제5,120,727호 참고).
표현 "FK506-유사 화합물"은 FK506, 및 FK506 유도체 및 유사체, 예를 들어, FK506, 예를 들어, 이의 치료적 효과를 향상시키기 위해서 변형된 유사한 마크로사이클릭 구조를 갖는 화합물과 구조적 유사성을 갖는 화합물을 포함한다. FK506-유사 화합물의 예는 예를 들어, 국제 특허 제WO 00101385호에 기술된 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 표현 "라파마이신 화합물"은 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 FK506-유사 화합물을 포함하지 않는다.
2. 항염증제
다른 적합한 치료제는 항염증제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 항염증제는 비스테로이드, 스테로이드 또는 이들의 조합물일 수 있다. 한 실시형태는 약 1%(w/w) 내지 약 5%(w/w), 전형적으로 약 2.5%(w/w) 또는 항염증제를 함유하는 경구 조성물을 제공한다. 비스테로이드 항염증제의 대표적인 예는 옥시캄, 예컨대, 피록시캄, 아이속시캄, 테녹시캄, 수독시캄; 살리실레이트, 예컨대, 아스피린, 다이살시드, 베노릴레이트, 트라일리세이트, 사파프린, 솔프린, 다이플루니살, 및 펜도살; 아세트산 유도체, 예컨대, 다이클로페낙, 펜클로페낙, 인도메타신, 설린닥, 톨메틴, 아이속세팍, 퍼로페낙, 티오피낙, 지도메타신, 아세마타신, 펜티아작, 조메피락, 클린다낙, 옥세피낙, 펠비낙, 및 케토롤락; 페나메이트, 예컨대, 메페나믹, 메클로페나믹, 플루페나믹, 니플루믹, 및 톨페남산; 프로피온산 유도체, 예컨대, 이부프로펜, 나프록센, 베녹사프로펜, 플루르비프로펜, 케토프로펜, 페노프로펜, 펜부펜, 인도프로펜, 피르프로펜, 카르프로펜, 옥사프로진, 프라노프로펜, 미로프로펜, 티옥사프로펜, 수프로펜, 알미노프로펜, 및 티아프로페닉; 피라졸, 예컨대, 페닐부타존, 옥시펜부타존, 페프라존, 아자프로파존, 및 트라이메타존을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 이들 비스테로이드 항염증제의 혼합물이 또한 사용될 수 있다.
스테로이드 항염증 약물의 대표적인 예는 코티코스테로이드, 예컨대, 하이드로코티손, 하이드록실-트라이암시놀론, 알파-메틸 덱사메타손, 덱사메타손-포스페이트, 베클로메타손 다이프로피오네이트, 클로베타솔 발러레이트, 데소나이드, 데스옥시메타손, 데스옥시코티코스테론 아세테이트, 덱사메타손, 다이클로리손, 다이플로라손 다이아세테이트, 다이플루코톨론 발러레이트, 플루아드레놀론, 플루클로롤론 아세토나이드, 플루드로코티손, 플루메타손 피발레이트, 플루오시놀론 아세토나이드, 플루오시노나이드, 플루코틴 부틸에스터, 플루오코톨론, 플루프레드니덴(플루프레드닐리덴) 아세테이트, 플루란드레놀론, 할시노나이드, 하이드로코티손 아세테이트, 하이드로코티손 부티레이트, 메틸프레드니솔론, 트라이암시놀론 아세토나이드, 코티손, 코토독손, 플루세토나이드, 플루드로코티손, 다이플루오로손 다이아세테이트, 플루라드레놀론, 플루드로코티손, 다이플루로손 다이아세테이트, 플루라드레놀론 아세토나이드, 메드리손, 암시나펠, 암시나파이드, 베타메타손 및 이의 에스터의 나머지, 클로로프레드니손, 클로르프레드니손 아세테이트, 클로코텔론, 클레스시놀론, 다이클로리손, 다이플루르프레드네이트, 플루클로로나이드, 플루니솔리데, 플루오로메탈론, 플루페롤론, 플루프레드니솔론, 하이드로코티손 발러레이트, 하이드로코티손 사이클로펜틸프로피오네이트, 하이드로코타메이트, 메프레드니손, 파라메타손, 프레드니솔론, 프레드니손, 베클로메타손 다이프로피오네이트, 트라임시놀론 및 이들의 혼합물을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
VI. AML 생물마커
일 실시형태는 치료를 필요로 하는 대상체의 세포를 검정하여 그 세포가 LAIR, LAIR의 결합 파트너 또는 이들 모두를 발현하는지의 여부를 결정함으로써 항-LAIR 결합 모이어티를 사용하여 치료의 효능을 평가 또는 예측하는 방법을 제공한다. 검정될 예시적인 세포는 대상체로부터 수득된 암 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 예시적인 암 세포는 급성 골수성 백혈병(AML) 세포를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 다수의 상호작용 저해성 수용체를 발현하는 암 세포는 항-LAIR 결합 모이어티를 사용하는 치료에 대해서 더 양호하게 반응하는 것으로 여겨진다. 예시적인 LAIR 결합 파트너는 막관통 콜라겐(XIII, XVII 및 XXIII) 및 LILRB4를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 도 3은 암 세포 상의 LAIR-1 또는 LAIR-1의 결합 파트너의 존재를 기초로 한 예측된 치료 결과를 나타낸다.
VII. 키트　
개시된 LAIR-1 및 LAIR-2 면역조정제는 양을 표시하는 밀폐식 밀봉 용기, 예컨대, 앰플 및 사™ˆ(sachette)에 포장될 수 있다. 작용제는 밀폐식 밀봉 용기 내의 건조 멸균 동결건조 분말 또는 무수 농축물로서 제공될 수 있고, 예를 들어, 대상체에 대한 투여를 위해서 적절한 농도로 물 또는 염수를 사용하여 재구성될 수 있다. 예를 들어, 작용제는 적어도 5㎎, 또는 적어도 10㎎, 적어도 15㎎, 적어도 25㎎, 적어도 35㎎, 적어도 45㎎, 적어도 50㎎, 또는 적어도 75㎎의 단위 투여량으로 밀폐식 밀봉 용기 내에 건조 멸균 동결건조 분말로서 제공될 수 있다. 동결건조된 작용제는 본래 용기 내에 2 내지 8℃에서 저장될 수 있고, 전형적으로 재구성 후에 12시간 이내, 또는 6시간 이내, 또는 5시간 이내, 또는 3시간 이내, 또는 1시간 이내에 투여된다.
대안적인 실시형태에서, 작용제는 양 및 농도를 나타내는 밀폐식 밀봉 용기에 액체 형태로 제공된다. 일부 실시형태에서, 밀폐식 밀봉 용기에 제공된 작용제의 액체 형태는 적어도 1㎎/㎖, 또는 적어도 2.5㎎/㎖, 적어도 5㎎/㎖, 적어도 8㎎/㎖, 적어도 10㎎/㎖, 적어도 15㎎/㎖, 적어도 25㎎/㎖, 적어도 50㎎/㎖, 적어도 100㎎/㎖, 적어도 150㎎/㎖, 적어도 200㎎/㎖의 작용제를 포함한다.
작용제가 충전된 하나 이상의 용기를 포함하는 약제학적 팩 및 키트가 또한 제공된다. 추가로, 질환의 치료에 유용한 1종 이상의 다른 예방제 또는 치료제가 또한 약제학적 팩 또는 키트에 포함될 수 있다. 약제학적 팩 또는 키트는 또한 개시된 약제학적 조성물의 성분 중 1종 이상으로 충전된 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다. 임의로 연관된 이러한 용기(들)는 약제학적 또는 생물학적 생성물의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해서 규정된 형태의 설명서를 가질 수 있고, 설명서는 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매 기관에 의한 승인을 반영한다.
상기에 기술된 방법을 위해서 설계된 키트가 또한 제공된다. 실시형태는 전형적으로 1종 이상의 LAIR-1 및/또는 LAIR-2 면역조정제를 포함한다. 특정 실시형태에서, 키트는 또한 하나 이상의 용기 내에, 암의 치료에 유용한 1종 이상의 다른 예방제 또는 치료제를 포함한다. 다른 실시형태에서, 키트는 또한 하나 이상의 용기 내에, 염증성 및 자가면역 질환의 치료에 유용한 1종 이상의 항염증제를 포함한다.
실시예
실시예 1: LAIR 항체 및 이의 중쇄 및 경쇄 서열
물질 및 방법
마우스 항-인간 LAIR-1 단클론성 항체
마우스를 뮤린 G2a Fc에 융합된 가용성 인간 LAIR-1(가용성 LAIR-1은 LAIR-1의 세포외 도메인을 지칭함)(서열번호 10)로 면역화시켰다. 마우스를 2주 후에 동일한 면역원으로 시험감염시켰다. 마우스에게 2주 후에 제3 용량의 항원을 제공하였다. 최종 부스트 3일 후에, 마우스 비장세포를 수거하고, 10% FBS 및 글루타민이 보충된 RPMI 중에 재현탁시키고, 이후에 융합시켜 하이브리도마를 형성하였다.
RACE
중쇄 및 경쇄의 RACE(cDNA 단부의 신속 증폭) 식별을 하기 프로토콜에 따라서 수행하였다: (1) mRNA 변성, (2) cDNA 합성, (3) 5'RACE 반응, (4) PCR 결과(아가로스 젤 상에서)를 분석하여 증폭된 DNA 단편을 가시화함 - 올바른 항체 가변 영역 DNA 단편은 500 내지 700개 염기쌍 크기를 가짐, (5) PCR 양성 밴드를 TOPO 클로닝시킴; (6) TOPO 클론을 PCR-증폭시키고, 그 다음 젤 전기영동 및 아가로스 젤로부터 회수함, (7) 총 218개의 클론의 서열결정, (8) 서열결정 데이터를 사용하여 CDR 분석을 수행함(CDR 영역을 vbase2.org를 통해서 입수 가능한 VBASE2를 사용하여 정의함).
결과
항체를 RACE 방법을 사용하여 클로닝시켰다. 항체 서열 분석은 본 명세서에서 1E11, 1G7, 4B3, 5A6, 5E1, 6B2, 6F4, 6G6, 7G3, 9H6, 11B3, 12E10a, 및 12E10b라고 지칭된 13종의 항체 하이브리도마에 대해서 하나의 가변 중쇄 및 하나의 가변 경쇄를 식별하였다. 서열을 하기 및 상기에 제공한다. 중쇄 및 경쇄 서열 및 CDR을 상기 및 하기에 제공하고, 도 1A 및 1B에 도시한다.
1E11 서열
1E11 VL 아미노산 서열
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQVLIYQMSSLASGVPDRFSSSGSGTEFTLRISRVEAEDVGVYYCAQNLELPLTFGAGTKLELK(서열번호 19)
1E11 VL의 CDR1
1E11 VL의 CDR1의 아미노산은 하기를 포함한다:
RSSKSLLHSNGITYLY(서열번호 20).
1E11 VL의 CDR2
1E11 VL의 CDR2의 아미노산은 하기를 포함한다:
QMSSLAS(서열번호 21).
1E11 VL의 CDR3
1E11 VL의 CDR3의 아미노산은 하기를 포함한다:
AQNLELPLT(서열번호 22).
1E11 VH 아미노산 서열
QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYDINWVKQRPGQGLEWIGWIYPRDGSTKYNEKLKGKATLTVDTSSRTAYMELHSLTSEDSAVYFCARGGYYDYDGYWGQGTLVTVSA(서열번호 23)
1E11 VH의 CDR1
1E11VH의 CDR1의 아미노산은 하기를 포함한다:
SYDIN(서열번호 24).
1E11 VH의 CDR2
1E11VH의 CDR2의 아미노산은 하기를 포함한다:
WIYPRDGSTKYNEKLKG(서열번호 25).
1E11 VH의 CDR3
1E11VH의 CDR3의 아미노산은 하기를 포함한다:
GGYYDYDGY(서열번호 26).
1G7 서열
1G7 VL 아미노산 서열
DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAATSLADGVPSRFSGSGSGTKFSFKISSLQAEDFVSYYCQQLYSTPLTFGAGTKLELK(서열번호 27).
IG7 VL의 CDR1
1G7 VL의 CDR1의 아미노산은 하기를 포함한다:
LASQTIGTWLA(서열번호 28).
IG7 VL의 CDR2
1G7 VL의 CDR2의 아미노산은 하기를 포함한다:
AATSLAD(서열번호 29).
IG7 VL의 CDR3
1G7 VL의 CDR3의 아미노산은 하기를 포함한다:
QQLYSTPLT(서열번호 30).
1G7 VH 아미노산 서열
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTNAMYWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTARYYCVRGGSGFFAYWGQGTLVTVSA(서열번호 31).
1G7 VH의 CDR1
1G7 VH의 CDR1의 아미노산을 하기를 포함한다:
TNAMY(서열번호 32).
1G7 VH의 CDR2
1G7 VH의 CDR2의 아미노산을 하기를 포함한다:
RIRSKSSNYATYYADSVKD(서열번호 33).
1G7 VH의 CDR3
1G7 VH의 CDR3의 아미노산을 하기를 포함한다:
GGSGFFAY(서열번호 34).
4B3 서열
4B3 VL 아미노산 서열
DIVMKQSPSSLRVSAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFTGSGSGTDFALTISSVQAEDLAVYYCQNDHSYPFTFGSGTKLEIK(서열번호 35)
4B3 VL의 CDR1
4B3 VL의 CDR1의 아미노산은 하기를 포함한다:
KSSQSLLNSGNQKNYLA(서열번호 36).
4B3 VL의 CDR2
4B3 VL의 CDR2의 아미노산은 하기를 포함한다:
GASTRES(서열번호 37).
4B3 VL의 CDR3
4B3 VL의 CDR3의 아미노산은 하기를 포함한다:
QNDHSYPFT(서열번호 38).
4B3 VH 아미노산 서열
QIQLQQSGAELARPGASVKLPCKASDYIFISYGLNWVRQTTGQGLEWIGEIYPRSGHTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCARRSVFYDYDKNGFDYWGQGTTLTVSS(서열번호 39).
4B3 VH의 CDR1
4B3 VH의 CDR1의 아미노산은 하기를 포함한다:
SYGLN(서열번호 40).
4B3 VH의 CDR2
4B3 VH의 CDR2의 아미노산은 하기를 포함한다:
EIYPRSGHTYYNEKFKG(서열번호 41).
4B3 VH의 CDR3
4B3 VH의 CDR3의 아미노산은 하기를 포함한다:
RSVFYDYDKNGFDY(서열번호 42).
5A6 서열
5A6 VL 아미노산 서열
DIQMTQSPSSLSASLGERVSFSCRASQDIGSSLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVEYYCLQYDSFPYTFGGGTKLEIK(서열번호 43).
5A6 VL의 CDR1
5A6 VL의 CDR1의 아미노산은 하기를 포함한다:
RASQDIGSSLN(서열번호 44).
5A6 VL의 CDR2
5A6 VL의 CDR2의 아미노산은 하기를 포함한다:
ATSSLDS(서열번호 45).
5A6 VL의 CDR3
5A6 VL의 CDR3의 아미노산은 하기를 포함한다:
LQYDSFPYT(서열번호 46).
5A6 VH 아미노산 서열
QVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRTGQGLEWIGEIYPRRGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCARQLFAYWGQGTLVTVSA(서열번호 47).
5A6 VH의 CDR1
5A6 VH의 CDR1의 아미노산은 하기를 포함한다:
SYGIS(서열번호 48).
5A6 VH의 CDR2
5A6 VH의 CDR2의 아미노산은 하기를 포함한다:
EIYPRRGNTYYNEKFKG(서열번호 49).
5A6 VH의 CDR3
5A6 VH의 CDR3의 아미노산은 하기를 포함한다:
QLFAY(서열번호 50).
5E1 서열
5E1 VL 아미노산 서열
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPRTFGGGTKLEIK(서열번호 51).
5E1 VL의 CDR1
5E1 VL의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
RASQDISNYLN(서열번호 52).
5E1 VL의 CDR2
5E1 VL의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
YTSRLHS(서열번호 53).
5E1 VL의 CDR3
5E1 VL의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
QQGNTLPRT(서열번호 54).
5E1 VH 아미노산 서열
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTGYFMNWVKQSPEKSLEWIGEIHPSTGSIIYNQKFKAKATLTIDKSSSTAYMQLKSLTSEDSAVYYCARFDYSNSFAYWGQGTLVTVSA(서열번호 55).
5E1 VH에 대한 CDR1
5E1 VH의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
GYFMN(서열번호 56).
5E1 VH에 대한 CDR2
5E1 VH의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
EIHPSTGSIIYNQKFKA(서열번호 57).
5E1 VH에 대한 CDR3
5E1 VH의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
FDYSNSFAY(서열번호 58).
6B2 서열
6B2 VL 아미노산 서열
DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAATSLADGVPSRFSGSGSGTKFSFKISSLQAEDFVSYYCQQLYSTPLTFGAGTKLELK(서열번호 59).
6B2 VL의 CDR1
6B2 VL에 대한 CDR1의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
LASQTIGTWLA(서열번호 60).
6B2 VL의 CDR2
6B2 VL에 대한 CDR2의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
AATSLAD(서열번호 61).
6B2 VL의 CDR3
6B2 VL에 대한 CDR3의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
QQLYSTPLT(서열번호 62).
6B2 VH 아미노산 서열
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFSFNINAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKSNNYETYYADSVKDRFTISRDDSESMVYLQMNNLKTEDTAMYYCVRSLWFVYWGQGTLVTVSA(서열번호 63).
6B2 VH에 대한 CDR1
6B2 VH의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
INAMN(서열번호 64).
6B2 VH에 대한 CDR2
6B2 VH의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
RIRSKSNNYETYYADSVKD(서열번호 65).
6B2 VH에 대한 CDR3
6B2 VH의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
SLWFVY(서열번호 66).
6F4 서열
6F4 VL 아미노산 서열
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINSYLSWVQQKPGKSPKTLIDRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPPYTFGGGTKLEIK(서열번호 67).
6F4 VL의 CDR1
6F4에 대한 CDR1의 아미노산 서열은 다음과 같다:
KASQDINSYLS(서열번호 68).
6F4 VL의 CDR2
6F4에 대한 CDR2의 아미노산 서열은 다음과 같다:
RANRLVD(서열번호 69).
6F4 VL의 CDR3
6F4에 대한 CDR3의 아미노산 서열은 다음과 같다:
LQYDEFPPYT(서열번호 70).
6F4 VH 아미노산 서열
QVQLQQSGAELAKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGYINPFSGHTKYNQKFKDKATLTADKSSSTAYMQLSSLTYEDSAVYYCARNFDQWGQGTTLTVSS(서열번호 71).
6F4 VH에 대한 CDR1
6F4 VH의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
SYWMH(서열번호 72).
6F4 VH에 대한 CDR2
6F4 VH의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
YINPFSGHTKYNQKFKD(서열번호 73).
6F4 VH에 대한 CDR3
6F4 VH의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
NFDQ(서열번호 74).
6G6 서열
6G6 VL 아미노산 서열
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQNVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASIRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSHPYTFGGGTKLEIK(서열번호 75).
6G6 VL에 대한 CDR1
6G6 VL의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
KASQNVGTAVA(서열번호 76).
6G6 VL에 대한 CDR2
6G6 VL의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
WASIRHT(서열번호 77).
6G6 VL에 대한 CDR3
6G6 VL의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
QQYSSHPYT(서열번호 78).
G6G VH 아미노산 서열
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTTYYMNWVKQSHGKSLEWIGNINPDNGITSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARGKSLAYWGQGTLVTVSA(서열번호 79).
6G6 VH에 대한 CDR1
6G6 VH의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
TYYMN(서열번호 80).
6G6 VH에 대한 CDR2
6G6 VH의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
NINPDNGITSYNQKFKG(서열번호 81).
6G6 VH에 대한 CDR3
6G6 VH의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
GKSLAY(서열번호 82).
7G3 서열
7G3 VL 아미노산 서열
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQVLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTEFTLRISRVEAEDVGVYYCAQNLEFPLTFGAGTKLELK(서열번호 83).
7G3 VL에 대한 CDR1
7G3 VL의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
RSSKSLLHSNGITYLY(서열번호 84).
7G3 VL에 대한 CDR2
7G3 VL의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
QMSNLAS(서열번호 85).
7G3 VL에 대한 CDR3
7G3 VL의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
AQNLEFPLT(서열번호 86).
7G3 VH 아미노산 서열
QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGYTFTTYDINWVKQRPGQGLEWIGWIYPRDGTTKYNEKFKGKATLTVDTSSTTAYMELHSLTSEDSAVYFCARGGYYDYDGYWGQGTLVTVSA(서열번호 87).
7G3 VH에 대한 CDR1
7G3 VH의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
TYDIN(서열번호 88).
7G3 VH에 대한 CDR2
7G3 VH의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
WIYPRDGTTKYNEKFKG(서열번호 89).
7G3 VH에 대한 CDR3
7G3 VH의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
GGYYDYDGY(서열번호 90).
9H6 서열
9H6 VL 아미노산 서열
DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGRSPQLLIYAATSLADGVPSRFSGSGSGTKFSFKINSLQAEDFVSYYCQQLYSTPFTFGSGTKLEIK(서열번호 91).
9H6 VL에 대한 CDR1
9H6 VL의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
LASQTIGTWLA(서열번호 92).
9H6 VL에 대한 CDR2
9H6 VL의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
AATSLAD(서열번호 93).
9H6 VL에 대한 CDR3
9H6 VL의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
QQLYSTPFT(서열번호 94).
9H6 VH 아미노산 서열
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFSFNTHAMNWVRQAPGKGLEWVARIRTKSNNYATYYADSVKDRFIISRDDSENMVYLQMNNLKTEDTAIYYCVRLRGGFLDYWGQGTTLTVSS(서열번호 95).
9H6 VH의 CDR1
9H6 VH의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
THAMN(서열번호 96).
9H6 VH의 CDR2
9H6 VH의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
RIRTKSNNYATYYADSVKD(서열번호 97).
9H6 VH의 CDR3
9H6 VH의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
LRGGFLDY(서열번호 98).
11B3 서열
11B3 VL 아미노산 서열
DIQMAQSSSSFSVSLGDRVTITCKASEDIYIRLAWYQQKPGNAPRLLISTATSLETGVPSRFSGSGSGKDYTLSITSLQTEDVATYYCQQYWSTPYTFGGGTRLEIK(서열번호 99).
11B3 VL의 CDR1
11B3 VL의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
KASEDIYIRLA(서열번호 100).
11B3 VL의 CDR2
11B3 VL의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
TATSLET(서열번호 101).
11B3 VL의 CDR3
11B3 VL의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
QQYWSTPYT(서열번호 102).
11B3 VH 아미노산 서열
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASDFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRTKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLTTEDTAMYYCVRDRYGGAMDYWGQGTSVTVSS(서열번호 103)
11B3 VH에 대한 CDR1
11B3 VH의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
TYAMH(서열번호 104).
11B3 VH에 대한 CDR2
11B3 VH의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
RIRTKSNNYATYYADSVKD(서열번호 105).
11B3 VH에 대한 CDR3
11B3 VH의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
DRYGGAMDY(서열번호 106).
12E10a 서열
클론 12E10은 2개의 경쇄(12E10a 및 12E10b). mb를 갖는 것을 확인하였다.
12E10a VL 아미노산 서열
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSITCKASQNVRSAVAWYQQKPGQSPKTLIYLASNRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCLQHWNYPLTFGAGTKLELK(서열번호 107).
12E10a VL의 CDR1
12E10a VL의 CDR1의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
KASQNVRSAVA(서열번호 108).
12E10a VL의 CDR2
12E10a VL의 CDR2의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
LASNRHT(서열번호 109).
12E10a VL의 CDR3
12E10a VL의 CDR3의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
LQHWNYPLT(서열번호 110).
12E10(a 및 b) VH 아미노산 서열
QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTSCGLSWVKQRTGQGLEWIGEIYPSNGNSYYSDKVKDKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCARAYYTNGYYAMDYWGQGTSVTVSS(서열번호 111).
12E10 VH의 CDR1
12E10 VH에 대한 CDR1의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
SCGLS(서열번호 112).
12E10 VH의 CDR2
12E10 VH에 대한 CDR2의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
EIYPSNGNSYYSDKVKD(서열번호 113).
12E10 VH의 CDR3
12E10 VH에 대한 CDR3의 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
AYYTNGYYAMDY(서열번호 114).
12E10b VL 아미노산 서열
DIVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQSNSWPLTFGAGTKLELK(서열번호 115).
12E10b VL에 대한 CDR1
12E10b VL의 CDR1에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
RASQSISNNLH(서열번호 116).
12E10b VL에 대한 CDR2
12E10b VL의 CDR2에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
YASQSIS(서열번호 117).
12E10b VL에 대한 CDR3
12E10b VL의 CDR3에 대한 아미노산 서열은 하기를 포함한다:
QQSNSWPLT(서열번호 118).
실시예 2: LAIR-2 Fc의 정제
방법 및 물질
LAIR-2 hIgG1(이하 LAIR-2 Fc라 칭함)을 론자(Lonza) GS 벡터로 형질주입된 CHOK1SV KO 모체주를 사용함으로써 생성하였다. 이러한 세포주를 사용하여 리드 후보, LAIR-2 hIgG1(네이티브 IgG1), 및 돌연변이된 Fc 버전 LAIR2-hIgG1 Fc(L145A/L146A) 둘 모두를 발현하였다. LAIR-2 Fc를 단백질 A 크로마토그래피에 의해서 정제하고, SDS-PAGE(도 6A) 및 정제용 크기 배제 크로마토그램(도 6B)에 의해서 평가하였다. LAIR-1 Fc를 대조군과 유사하게 제조하고, LAIR-2 Fc를 크기 배제 크로마토그래피에 의해서 정제하고, SDS PAGE를 사용하여 가시화하였다.
결과
도 6A는 환원 조건 및 비환원 조건 하에서 LAIR-2 Fc를 나타내는 SDS-PAGE 젤이다. 도 6B는 38.550분에 단일, 주피크를 나타내는 크로마토그램이다. 이 데이터는, LAIR-2 Fc의 예상된 크기, 및 본 명세서에 기술된 연구에서 사용된 LAIR-2 Fc 단백질의 높은 수준 및 높은 순도를 입증한다.
실시예 3: LAIR-2Fc는 콜라겐에 결합한다
물질 및 방법
콜라겐 17의 안정적인 발현을 갖는 K562 AML 세포주 또는 콜라겐 17이 없는 대조군을 1ug의 LAIR-2 Fc 및 LAIR-1 Fc로 염색하고, 30분 동안 얼음 상에서 인큐베이션시키고, 그 다음 FACS 완충액(PBS + 1% FBS) 중에서 세포를 세척하고, 이어서 0.05ug의 항-hIgG-PE로 30분 동안 얼음 상에서 염색하였다. 세포를 세척하고, FACS 고정 완충액(PBS 중의 3% 파라폼알데하이드) 중에 재현탁시키고, 유세포 분석에 의해서 평가하였다.
결과
LAIR-2 Fc(도 7A 및 7B) 및 LAIR-1 Fc(도 7C 및 7D)를 K562 세포의 표면 상에서 발현되는 내생 막관통 리간드 콜라겐 17에 결합하는 능력에 의해서 기능적으로 평가하였다. LAIR-2 Fc 및 LAIR-1 Fc의 SDS-PAGE 분석을 사용하여 본 연구 및 하기 연구에서 사용된 단백질의 순도를 평가하였다(도 7E 및 7F). LAIR-2 Fc 및 LAIR-1 Fc의 95% 초과의 순도가 본 실시예에서 나타낸 모든 데이터에 대한 표준이었다.
실시예 4: AML 세포주 상에서의 LAIR-1 발현 및 LAIR-1 Fc 및 LAIR-2 Fc 결합
방법 및 물질
주카트 T 세포, K562 Col 17 세포, 및 THP-1 세포를 10㎎/㎖ 항-LAIR-1-PE(이바이오사이언스(eBioscience), NKTA255) 또는 10㎎/㎖의 바이오틴일화된 LAIR-1 Fc 또는 LAIR-2 Fc로 염색하고, 그 다음 Fc 수용체를 TruStain FcX(바이오레전드(Biolegend)) 및 hIgG(이노베이티브 리서치(Innovative Research))로 차단하였다. 30분 인큐베이션 후, 세포를 FACS 완충액으로 세척하고, 0.4ug/㎖ 스트렙타비딘-PE로 염색하였다. 발현을 유세포 분석에 의해서 평가하였다.
결과
LAIR-1은 특이적 AML 세포주 상에서 높게 발현되는 것으로 확인된다. LAIR-2 Fc는 특이적 AML 세포주의 표면 상의 미지의 분자에 결합하지만, LAIR-1 Fc 결합은 관찰되지 않았다.
시험관내 검정에 유용한 세포주를 평가하기 위해서, 조혈-유래된 AML 세포주를 LAIR-1 발현, 뿐만 아니라 LAIR-2 Fc 및 LAIR-1 Fc 결합에 의한 잠재적인 결합에 대해서 평가하였다(도 8A 내지 8I).
도 8A 내지 8I는 항-LAIR-1, LAIR-1 Fc, 또는 LAIR-2 Fc로 처리된 제시된 세포주의 유세포 분석의 히스토그램이다. 도 8A 내지 8C는 각각 항-LAIR-1, LAIR-1 Fc, 및 LAIR-2 Fc로 처리된 주카트 세포를 나타낸다.
도 8D 내지 8F는 각각 항-LAIR-1, LAIR-1 Fc, 및 LAIR-2 Fc로 처리된 K562 Col 17 세포를 나타낸다.
도 8G 내지 8I는 각각 항-LAIR-1, LAIR-1 Fc, 및 LAIR-2 Fc로 처리된 THP-1 세포를 나타낸다.
나타난 바와 같이, 주카트 T 세포, T 세포 백혈병, 및 THP-1 세포, 단구성 백혈병 모두는 높은 수준의 LAIR-1을 발현하였지만, K562 세포는 그렇지 않다. 추가로, LAIR-2 Fc는 THP-1 세포, 뿐만 아니라 양성 대조군 K562-콜라겐 17 발현 세포에 결합하였지만, 주카트 T 세포에는 결합하지 않았다. 이러한 결과로부터 신호전달 경로 리포터가 형질도입된 주카트 T 세포 및 THP-1 세포를 시험관내 연구를 위해서 선택하였다.
실시예 5: LAIR-2 Fc는 주카트 T 세포에서 NF-kB 및 NFAT 신호전달을 유도한다.
물질 및 방법
96-웰의 편평 바닥 플레이트를 역가량의 항-CD3(OKT3)으로 밤새 코팅한 후, 흡인시키고, 세포룰 첨가하였다. NF-kB-GFP 경로 리포터를 갖는 주카트 T 세포를 50,000개 세포/웰/200ul RPMI-C로 10ug/㎖의 LAIR-2 Fc, 대조군 Fc의 존재 하에서 또는 단백질 없이 플레이팅하였다. 세포를 1일 동안 배양하였다. 세포를 플레이트로부터 수거하고, 유세포 분석에 의해서 GFP 발현에 대해서 평가하였다.
NFAT 경로 리포터를 갖는 주카트 T 세포를 0.5ug/㎖의 코팅된 항-CD3 및 역가량의 가용성 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc의 존재 하에서 배양하였다. 대략 24시간에, 상청액을 프로토콜(인비보젠)에 따라서 분비된 Lucia 수준에 대해서 평가하였다. 판독치를 퍼킨-엘머 엔비젼 플레이트 판독기로 기록하였다.
10ug/㎖의 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc로 처리된 주카트-NFAT-Lucia T 세포로부터의 상청액을 MSD 사이토카인 분석에 의해서 IL-2 및 TNF 수준에 대해서 평가하였다.
결과
시험관내 검정은 LAIR-2 Fc가 저혈 유래된 백혈병 세포주에서 활성을 유도할 수 있음을 나타낸다. NF-kB-GFP 경로 리포터를 갖는 주카트 T 세포를 10ug/㎖의 LAIR-2 Fc, 대조군 Fc, 또는 배지 대조군의 존재 하에서 역가 농도의 코팅된 항-CD3과 함께 배양하고, 유세포 분석법에 의해서 GFP+ 세포 백분율의 분석에 의해서 NF-kB 유도에 대해서 평가하였다(도 9A). 이러한 검정은, LAIR-2 Fc가 주카트 T 세포에서 NF-kB 신호전달의 유도를 촉진시킨다는 것을 나타낸다. 이러한 효과는 주카트 T 세포에 대한 LAIR-2 Fc의 인지 가능한 결합 없이 일어나는 것이며, 따라서, 이는 LAIR-2 Fc가 주카트 T 세포의 원형질막 상에서 발현되는 LAIR-1에 대한 리간드 결합에 대한 디코이로서 작용한다는 것을 나타낸다.
NFAT-Lucia 경로 리포터를 갖는 제2 주카트 T 세포주를 사용하여, NFAT는 설정된 농도의 항-CD3의 존재 하에서 LAIR-2 Fc 용량 의존적인 방식으로 유도되었다는 것을 입증하였다(도 9B).
10ug/㎖의 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc의 존재 하에서 NFAT 리포터 검정에서 주카트 T 세포로부터의 상청액을 IL-2 및 TNF 사이토카인 수준에 대해서 시험하였다(도 9C 및 9D). LAIR-2 Fc 배양된 주카트 T 세포는 경로 리포터 유도와 일관되게, 두 사이토카인 모두의 더 높은 수준을 나타내었다. LAIR-2 Fc는 주카트 T 세포에 직접 결합하는 것으로 나타나지 않았기 때문에, LAIR-2 Fc는 주카트 리포터 활성도를 향상시키기 위해서 가용성 인자와 LAIR-1 상호작용을 파괴하거나, 다른 기전을 통해서 LAIR-1 저해성 신호전달을 파괴하는 것으로 받아들여진다.
실시예 6: LAIR-2 Fc는 THP-1 세포에 결합하고, 리포터 활성도를 유도한다.
물질 및 방법
0.1ug/㎖의 바이오틴일화된 LAIR-2 Fc를 얼음 상에서 THP-1 세포에 첨가한 후, Fc 수용체를 Trustain FcX(바이오레전드) 및 hIgG(이노베이티브 리서치(Innovative Research))로 차단하였다. 그 후 세포를 FACS 완충액으로 세척하고, 0.4ug/㎖의 스트렙타비딘-PE 2차(바이오레전드)로 얼음 상에서 30분 동안 염색하였다. 세포를 세척하고, 고정시키고, 유세포 분석에 의해서 분석하였다.
THP-1 세포를 96-웰의 편평 바닥 플레이트에 50,000개 세포/웰로 첨가하였다. 1ug/㎖의 최종 농도의 LPS, 또는 RPMI-완전 배지를 첨가한 후 10ug/㎖의 최종 농도의 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc를 첨가하였다. 모든 웰은 200ul의 최종 체적을 함유하였다. 세포를 제시된 일 동안 인큐베이션시키고, 프로토콜(인비보젠)에 따라서 분비된 Lucia에 대해서 상청액을 분석하였다. 판독을 퍼킨-엘머 엔비젼 플레이트 판독기로 수행하였다.
결과
THP-1 경로 리포터 세포를 또한 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc의 존재 하에서 반응에 대해서 평가하였다. 흥미롭게도, LAIR-1 발현에 더하여, LAIR-2 Fc는 용량 의존적인 방식으로 THP-1 세포에 결합한다는 것을 발견하였다(도 10A). 이것은 THP-1 세포가 공지된 LAIR-2 리간드인 막관통 콜라겐을 발현하기 때문인 것 같다(데이터 나타내지 않음). THP-1 세포를 THP-1 세포에서 인터페론 경로를 유도한다고 공지된 Toll-유사 수용체 리간드인 LPS와 함께 또는 그것 없이 배양하였다. LPS 및 LAIR-2 Fc의 존재 하에서, 인터페론 조절 인자(IRF) 유도는 LPS와 대조군 Fc의 비교 시에 상당히 증가되었다(도 10B). 더욱이, LAIR-2 Fc는 LPS의 부재 하에서도 인터페론 신호전달을 유도할 수 있었는데, 이는 공동신호전달에 대한 필요성 없이 THP-1 세포에 대한 직접적인 효과를 나타낸다(도 10C). 작용 기전은 아마도 막관통 콜라겐에 대한 LAIR-1 결합의 차단인데, 그 이유는 LAIR-2 Fc가 막관통 콜라겐을 통한 신호전달을 유도할 수 없을 것이기 때문이다.
실시예 7: LAIR-2 Fc는 1차 T 세포 증식을 향상시킨다.
물질 및 방법
CD4+ 및 CD8+ T 세포를 비롯한 Pan T 세포를 건강한 공여자 PBMC로부터 단리하였다. CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 1uM의 CFSE(라이프테크놀로지스(LifeTechnologies))로 표지된 MACS 자성 비드 인리치먼트(밀테니이(Miltenyi))에 의해서 전체 PBMC로부터 단리하고, 역가량의 항-CD3(OKT3)으로 밤새 4℃에서 미리 코팅된 96-웰 플레이트에 첨가하였다. LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc를 10ug/㎖로 첨가하고, 세포를 72시간 동안 배양하고, 그 다음 유세포 분석에 의해서 분석하였다. 특이적 T 세포 하위세트의 유세포 분석을 위해서, 세포를 항-CD4 및 항-CD8 mAb로 염색하였다. 따라서, CD4 및 CD8 T 세포 하위세트는 게이팅형이었고, 증식의 척도로서 CFSE 희석에 대해서 평가되었다.
결과
LAIR-2 Fc를 다음으로 1차 인간 T 세포에 대한 효과에 대해서 평가하였다. 결과는 LAIR-2 Fc의 존재 하에서 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 둘 모두에 의한 증가된 증식을 나타낸다(도 11A 및 11B).
실시예 8: LAIR-2 Fc는 인간 PBMC 세포 하위세트에 직접 결합하지 않는다.
물질 및 방법
3명의 정상의 건강한 공여자로부터의 새로운 인간 PBMC를 CD3+CD4+ T 세포, CD3+CD8+ T 세포, CD3-CD16+CD56+ NK 세포, 및 CD14+ 단핵구로 염색하고, 유세포 분석으로 분석하였다.
결과
이러한 효과가 T 세포에 대한 LAIR-2 Fc의 직접적인 결합으로 인한 것이었는지를 결정하기 위해서, 건강한 공여자 PBMC를 LAIR-2 Fc로 염색하였다. 도 12A 내지 12D는 각각 LAIR-2 Fc로 치료된 공여자 1710으로부터의 CD4, CD8, NK 세포, 및 단핵구를 나타낸다. 도 12E 내지 12H는 각각 LAIR-2 Fc로 치료된 공여자 1711로부터의 CD4, CD8, NK 세포, 및 단핵구를 나타낸다. 도 12I 내지 12L은 각각 LAIR-2 Fc로 치료된 공여자 1712로부터의 CD4, CD8, NK 세포, 및 단핵구를 나타낸다.
이러한 데이터는 LAIR-2 Fc가 인간 T 세포에 직접 결합하지 않았다는 것을 나타낸다. 더욱이, LAIR-2 Fc는 상당한 수준에서 어떠한 PBMC 세포 하위세트에도 결합하는 것으로 나타나지 않는다. 이와 같이, LAIR-2 Fc는 이러한 배양계에 존재하거나 또는 발현된 LAIR 리간드와 LAIR-1 상호작용을 방해하는 것 같다. 이러한 발견은 또한 LAIR-2 Fc가 생체내에서 조혈 세포 고갈에 대해 어떠한 효과도 갖지 않아야 하는 반면, 세포 발현 막관통 LAIR 리간드는 아직 조사되지 않은 다른 방식으로 잠재적으로 고갈되거나 또는 직접 영향을 받을 수 있다는 것을 시사한다.
실시예 9: LAIR-2 Fc는 생체내에서 항원-특이적 CD8+ T 세포 확장을 촉진시킨다.
물질 및 방법
뮤린 C57BL/6 MHC 클래스 I(H-2Kb)과 관련하여, 모델 항원인 계란 오브알부민(OVA)에 대해서 특이적인 CD8+ T 세포를 사용하였다. CD8+ OT-I T 세포는 H-2Kb에 결합할 때 OVA 펩타이드 SIINFEKL(서열번호 119)을 인식한다. 아주반트의 존재 하에서, OT-I T 세포는 확장기를 겪고, 그 다음 수축기를 겪는다. OVA 및 폴리I:C 아주반트를 사용하여 OT-I 확장이 증가되었는지의 여부 및/또는 수축이 지연되었는지의 여부를 결정하였다.
실험 설계를 도 13A에 도시한다. 10마리의 마우스/군을 -2일 및 5일에 500ug의 대조군 Fc 또는 LAIR-2 Fc로 처리하였다. 0일에, CD8+ T 세포를 MACS 분리(밀테니이)에 의해서 OT-I x Ly5.1 F1 마우스로부터 단리하고, 2e5 세포를 ip로 주사하였다. 1일에, 100ug의 SIINFEKL(서열번호 119) 펩타이드(펩타이드 인터내셔널(Peptides International)) 및 150ug의 폴리I:C 아주반트(인비보젠)를 300ul/마우스의 총 체적으로 ip로 주사하였다. 마우스를 면역화 전 0일, 및 1, 3, 5, 7, 10 및 14일에 채혈하고, TCR Vbeta2+CD8+ T 세포 및 Ly5.1(CD45.1) 상에 게이팅함으로써 유세포 분석법에 의해서 혈액 중의 OT-I T 세포를 분석하였다.
결과
LAIR-2 Fc를 다음으로 생체내에서 시험하여 LAIR-2 Fc가 항원-특이적 T 세포 반응을 향상시킬 것인지의 여부를 결정하였다. 도 13B은 총 CD8+ T 세포의 OT-I의 백분율이 대조군 Fc에 비해서 5일까지 유의하게 증가함을 나타낸다. 결과는, OT-I T 세포가 대조군 Fc로 처리된 마우스와 비교할 때 LAIR-2 Fc의 존재 하에서 유의하게 향상된 확장을 겪는다는 것을 나타낸다(도 13B). 이러한 결과는 종양 항원 특이적 T 세포 반응을 평가하기 위한 OVA 발현 종양 모델과 직접 관련된다.
실시예 10: LAIR-2 Fc 처리된 마우스는 상당히 개선된 항원-특이적 리콜 반응을 갖는다.
물질 및 방법
초기 확장 약 10주 후, 마우스를 OVA 펩타이드(CFSE 고)가 적재되거나 또는 펩타이드가 적재되지 않은(CFSE저) 동일한 수(각각 1e6)의 CD45.1 비장세포로 시험감염시켰다. 48시간 후, 마우스를 안락사시키고, 비장세포를 OT-I 매개된 항원-특이적 기억 CTL 사멸 활성도의 척도로서 적재되지 않은 것 대 OVA 적재된 비장세포의 비에 대해서 유세포 분석에 의해서 평가하였다.
결과
OT-I 확장 실험(실시예 9)으로부터의 마우스를 약 10주 동안 휴식시키고, 이어서 항원-특이적 기억 CTL 리콜 반응에 대해서 평가하여 LAIR-2 Fc가 항원 적재된 비장세포의 CTL 사멸에 의해서 설명된 향상된 기능성 리콜 반응으로 번역되는 확장을 향상시켰는지를 결정하였다.
비주입 대조군을 CFSE 피크 게이팅 및 시작 비율에 대해서 평가하였다(도 14A 내지 14C). 각각의 군에서 CFSE 고 대 저 비율의 대표적인 예를 도 14D 내지 14F에 도시한다. 결과는 OT-I T 세포의 초기 확장 동안 LAIR-2 Fc로 처리된 마우스(리콜 반응 동안 어떠한 치료제도 투여되지 않았음을 주목해야 함)는 OVA 적재된 비장세포의 특이적 용해로서 계산된 상당히 더 양호한 리콜 반응을 갖는다는 것을 나타낸다(도 14C).
실시예 11: LAIR-2 Fc는 1D8-OVA 난소암 성장을 제어하고, 생존을 연장시킨다.
물질 및 방법
C57BL/6 마우스에게 5e6개의 ID8-OVA 세포를 ip 주사하고, 그 다음 3주 후에 1e6개의 CD8+ OT-I T 세포를 ip 주사하였다. 이어서, 마우스를 OT-I 전달 1일 후에서 시작하여 총 5회 처리 동안 4일마다 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc로 처리하였다. 체중 증가를 2 내지 3일마다 모니터링하였다. 생존율을 평가하기 위해서, 복수 생산이 관찰되고, 마우스가 출발 체중으로부터 50% 증가된 경우 마우스를 안락사시켰다. 도 15A는 5e6개의 ID8-OVA 종양 세포를 0일에 ip 주사한 예시적인 치료 요법의 다이어그램이다.
결과
LAIR-2 Fc 처리에 의해서 매개된 개선된 항원-특이적 T 세포 반응이 OVA-발현 종양 모델 및 OT-I T 세포를 사용한 개선된 항종양 면역으로 해석되었는지의 여부를 조사하였다. 종양 접종 3주 후에 전달된 OT-I T 세포는 보호성이 아니고, OT-I T 세포는 기능장애, 또는 고갈된 표현형을 발달시킨다고 이전에 결정되었다. 따라서, 이것은 면역치료제가 항원-특이적 T 세포 반응을 촉진시키고/거나 고갈이 발생하는 것을 역전/예방할 수 있다는 것을 결정하는 유용한 모델이다.
결과는 상당히 지연된 체중 증가 및 장기간 생존의 상당한 증가를 나타내었다(도 15B 및 15C). 대조군 중 20%와 비교할 때 마우스 중 60%가 장기간 생존하였는데, 이는 LAIR-2 Fc를 사용한 상당한 전체 치유를 시사한다(도 15C).
실시예 12: LAIR-2 Fc와 항-PD-1은 난소암에서 효과적인 병용 면역요법이다.
물질 및 방법
더 많은(6e6) ID8-OVA 종양 세포를 0일에 ip로 주사하고, 더 적은 OT-I T 세포(5e5)를 3주에 입양 전달한 것을 제외하고는, 마우스를 도 15A에서와 같이 처리하였다. 200ug의 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc의 처리를 T 세포 전달 후 1일에 시작하여 총 5회 용량 동안 4일마다 수행하였다. 마우스 체중을 2 내지 3일마다 모니터링하였고, 복수 생산이 관찰되고, 마우스가 출발 체중으로부터 50% 증가된 경우 마우스를 안락사시켰다.
결과
항-PD-1 면역요법 및 시스플라틴 화학요법과 비교하여, 그리고 PD-1 및 시스플라틴과 조합하여 LAIR-2 Fc 단독을 상승작용 효과를 조사하기 위해서 검사하였다(도 16). 결과는 이 모델에서 LAIR-2 Fc 단독이 보통의 효과를 나타낸다. 그러나, LAIR-2 Fc와 항-PD-1의 조합물에서 최상의 반응이 관찰되었고, 마우스 중 50%가 13주 후에 생존하였다. 다른 단일 또는 병용 요법에서 어떠한 마우스도 13주까지 생존하지 못했다.
실시예 13: LAIR-2 Fc는 피하 림프종 모델에서 종양 성장을 지연시키고, 생존을 증가시킨다.
물질 및 방법
4e5개의 A20 종양 세포를 0일에 피하(sc) 이식하였다. 200ug의 LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc를 4일에서 시작하여 5회의 처리 동안 4일마다 ip로 투여하였다. 종양 성장을 모니터링하고, 2 내지 3회/주로 측정하고, 평균 종양 직경이 15㎜ 또는 2000㎣ 에 도달했을 때 마우스를 희생시켰다. 도 17A는 A20 종양 모델을 사용한 예시적인 치료 요법이다.
결과
결과는 종양 성장이 상당히 지연되었음을 나타낸다(도 17B). 추가로, 상당한 생존 연장이 존재하였고, 1마리의 동물은 장기간 무 종양으로 유지되었다(도 17C).
실시예 14. LAIR-1 mAb의 생성, 선택 및 특징규명.
물질 및 방법
항-인간 LAIR-1 mAb의 면역화, 융합 및 클로닝을 프리시젼 안티바디(Precision Antibody) CRO로부터의 서비스로 수행하였다. 넥스트큐어(NextCure)는 프리시젼 안티바디에서 5마리의 SJL 균주 마우스의 면역화 및 부스팅을 위한 인간 LAIR-1 mG2a Fc 융합 단백질을 생산하였다. 더 높은 역가를 갖는 2마리의 마우스로부터의 비장세포 및 림프절을 사용하여 전기융합을 수행하였다. 대략 1200개의 하이브리도마 클론을 인간 LAIR-1 hG1 Fc 융합 단백질에 대한 결합에 대해서 ELISA에 의해서, 그리고 내생 LAIR-1(주카트, HL-60)을 발현하는 AML 종양 세포주에 대한 결합에 대해서 유세포 분석에 의해서 스크리닝하였다.
항-인간 LAIR-1 하이브리도마 클론 상청액을 LAIR-1을 발현하는 것으로 공지된 세포주(HL-60, MV-4-11), 특이성을 시험하기 위해서 LAIR-1을 위해서 형질주입된 LAIR-1에 대해서 음성인 세포주(K562-LAIR-1), 및 LAIR-1 발현에 대해서 음성인 것으로 공지된 세포주(U266B1)와 함께 인큐베이션시켰다. 간략하면, 50ul의 상청액을 30분 동안 96-웰의 둥근 바닥 플레이트 내에서 1e5개의 세포와 함께 인큐베이션시켰다. 세포를 FACS 완충액(PBS+1% FBS)으로 세척하고, 0.05ug의 항-마우스 IgG-PE 2차 항체(Ab)로 30분 동안 염색하였다. 유세포 분석을 위해서 세포를 세척하고, PBS 중의 3% 파라폼알데하이드 100ul 중에서 고정시켰다. 나타낸 데이터는 배경 배지 + 2차 염색 대조군(마지막 칼럼)을 초과하게 염색된 세포의 백분율이다.
결과
결과는 최종 15종의 선택된 클론을 나타낸다(도 18). 하이브리도마로부터의 상청액은 특이적 세포 유형에 대한 차등적 결합 수준을 갖는다. 이는 세포 상청액 중의 mAb의 다양한 수준, 또는 원형질막 상의 LAIR-1에 대한 결합의 다양한 강도(결합활성)로 인한 것일 수 있다. 그러나, 일부 상청액은 특정 세포 유형에 대해서 LAIR-1에 더 높은 수준으로 결합하였기 때문에, LAIR-1 mAb 클론은 종양 세포주 상의 LAIR-1의 특이적 글리코폼 또는 달리 변형된 형태에 결합하는 것이 가능하다.
하기 서열에서, 볼드체 및 밑줄친 텍스트는 리더 서열을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 리더 서열이 제거된다.
키메라 1E11에 대한 서열:
hG1 HC
hG1 중쇄에 대한 아미노산 서열은 하기와 같다:
hG1 중쇄에 대한 핵산 서열은 하기와 같다:
hG4P HC
hG4P 중쇄에 대한 아미노산 서열은 하기와 같다:
hG4P에 대한 핵산 서열은 하기와 같다:
경쇄
키메라 1E11에 대한 경쇄에 대한 아미노산 서열은 다음과 같다:
키메라 1E11에 대한 경쇄에 대한 핵산 서열은 다음과 같다:
키메라 5E1 에 대한 서열
hG1 HC
hG1 중쇄에 대한 아미노산 서열은 하기와 같다:
hG1 중쇄에 대한 핵산 서열은 하기와 같다:
hG4P HC
hG4P 중쇄에 대한 아미노산 서열은 하기와 같다:
hG4P 중쇄에 대한 핵산 서열은 하기와 같다:
경쇄
키메라 5E1에 대한 경쇄에 대한 아미노산 서열은 다음과 같다:
키메라 1E5에 대한 경쇄에 대한 핵산 서열은 다음과 같다:
키메라 6G6 에 대한 서열
hG1 중쇄
hG1 중쇄에 대한 아미노산 서열은 하기와 같다:
hG1 중쇄에 대한 핵산 서열은 하기와 같다:
hG4P 중쇄에 대한 아미노산 서열은 하기와 같다:
hG4P 중쇄에 대한 핵산 서열은 하기와 같다:
경쇄에 대한 아미노산은 다음과 같다:
경쇄에 대한 핵산 서열은 다음과 같다:
키메라 11B3 에 대한 서열
hG1 HC
hG1 중쇄에 대한 아미노산 서열은 하기와 같다:
hG1 중쇄에 대한 핵산 서열은 하기와 같다:
hG4P HC
hG4P 중쇄에 대한 아미노산 서열은 하기와 같다:
hG4P 중쇄에 대한 핵산 서열은 하기와 같다:
경쇄
경쇄에 대한 아미노산 서열은 다음과 같다:
경쇄에 대한 핵산 서열은 다음과 같다:
키메라 항체는 경쇄를 개시된 중쇄 중 하나와 조합함으로써 생산된다.
실시예 15: 콜라겐 I 및 III에 대한 LAIR-1 Fc 결합의 차단 또는 향상에 대한 LAIR-1 하이브리도마 상청액의 스크리닝.
물질 및 방법
1ug/㎖의 콜라겐 I 또는 콜라겐 III(밀리포어(Millipore))을 (개별 스크린을 위해서 개별 플레이트에서) PBS 중에서 밤새 코팅하였다. 플레이트를 세척하고, ELISA 차단 완충액(PBS 중의 5% BSA)으로 차단하였다. 세척 후, 50ul의 LAIR-1 하이브리도마 상청액을 플레이트에 첨가하고, 50ul의 2ug/㎖ 인간 LAIR-1Fc-바이오틴을 첨가하였다. 플레이트를 세척하고, SA-HRP를 1:10000 희석으로 첨가하였다(이바이오(eBio)). 30분 인큐베이션 후, TMB를 첨가한 후, 정지 용액을 첨가하였다. 흡광도를 퍼킨엘머 엔비젼 분석기를 사용하여 결정하였다.
결과
도 19는 LAIR-1 하이브리도마 스크리닝의 결과를 나타낸다. 클론 P1-A4, P1-D6, 및 P6-F4는 콜라겐 I 및 III에 대한 LAIR-1 Fc 결합의 결합의 인핸서로서 식별되었다. 클론 P1-E11, P2-A10, P4-B3, P5-A6, P5-E1, P6-B2, P6-G6, P7-G3, P9-H6, P10-G7, P11-B3 및 P12-E10은 콜라겐 I 및 III에 대한 LAIR-1 Fc 결합의 차단제인 것을 발견하였다.
실시예 16: C1q 및 SP-D에 대한 LAIR-1 Fc 결합의 차단 또는 향상에 대한 LAIR-1 하이브리도마 상청액의 스크리닝.
물질 및 방법
1ug/㎖의 C1q(시그마(Sigma)) 또는 SP-D(알앤디 시스템스(R&D Systems))를 (개별 스크린을 위해서 개별 플레이트에서) PBS 중에서 밤새 코팅하였다. 플레이트를 세척하고, ELISA 차단 완충액(PBS 중의 5% BSA)으로 차단하였다. 세척 후, 50ul의 LAIR-1 하이브리도마 상청액을 플레이트에 첨가하고, 50ul의 2ug/㎖ 인간 LAIR-1Fc-바이오틴을 첨가하였다. 플레이트를 세척하고, SA-HRP를 1:10000 희석으로 첨가하였다(이바이오). 30분 인큐베이션 후, TMB를 첨가한 후, 정지 용액을 첨가하였다. 흡광도를 퍼킨엘머 엔비젼 분석기를 사용하여 결정하였다.
결과
도 20은 스크리닝 검정의 결과를 나타낸다. 클론 P1-A4, P1-D6, 및 P6-F4는 C1q 및 SP-D에 대한 LAIR-1 Fc 결합을 향상시키는 것을 발견하였다. 클론 P1-E11, P2-A10, P4-B3, P5-A6, P5-E1, P6-B2, P6-G6, P7-G3, P9-H6, P10-G7, P11-B3 및 P12-E10은 C1q 및 SP-D에 대한 LAIR-1 Fc 결합의 차단제인 것을 발견하였다.
실시예 17: LAIR-1 키메라 mAb 비닝.
방법 및 물질
옥텟 RED96 장비(포르테바이오)를 비닝 검정을 위해서 사용하였다. LAIR-1 Fc(hIgG1)는 항-인간 IgG 센서에 결합하였다. 센서에 대한 LAIR-1 Fc의 안정성을 확인한 후, 센서를 좌측 칼럼 상에 열겨된 제1 mAb와 함께 웰에 담갔다. 과량의 mAb를 LAIR-1 Fc에 결합시킴으로써 제1 mAb의 결합을 포화시켰다. 다음으로, 센서를 상단 행을 가로질러 나타낸 바와 같은, 제2 mAb를 함유하는 웰에 넣었다. 동일한 mAb가 제1 및 제2 mAb로서 사용되는 경우 관찰될 수 있는 바와 같이, 동일한 에피토프에 결합하는 mAb는 결합 포화로 인해서 LAIR-1 Fc에 대한 결합으로부터 차단될 것이다(도 21, 밑줄이 없고 점이 있는 셀). 차단 없음은 먼 에피토프, 뿐만 아니라 입체 장애의 결핍을 나타내었다. 부분적인 차단은 약간 중첩된 에피토프 또는 mAb 결합 부위의 근접성으로 인한 결합의 입체 장애로 인한 것일 것이다. 매우 약한 결합(낮은 결합활성)을 기준으로, 클론 중 3종을 추가 연구로부터 제거하고, 12종의 클론을 남겼다. 2종의 상업적인 항-인간 LAIR-1 클론인 DX26 및 NKTA를 비교 목적을 위해서 포함시켰다.
결과
도 21은 LAIR-1 키메라 Ab 비닝의 결과를 나타낸다. 차단 없음을 단일 밑줄로 나타낸다. 차단을 이중 밑줄로 나타낸다. 데이터는 LAIR-1의 세포외 도메인(ECD) 상의 유사한 부위, 중첩된 부위 또는 먼 부위(에피토프)에 결합하는 mAb의 식별을 가능하게 하였고, LAIR-1 mAb 결합의 에피토프 맵의 작제를 가능하게 하였다.
비닝 결과로부터, mAb의 4개의 1차 빈이 이러한 12개의 클론의 세트에 존재하였다(도 22). 이것은 빈 1: 11B3, 6B2, 6F4; 빈 2: 5E1 및 4B3; 빈 3: 5A6 및 6G6; 빈 4: 1E11, 7G3, 1A4, 및 10G7이다.
실시예 18: LAIR-1 키메라 mAb 비닝 맵.
물질 및 방법
도 21에 생성된 비닝 데이터를 사용하여, 결합 부위의 맵을 상대적인 결합 부위의 가시화를 위해서 2D 포맷으로 작제하였다.
결과
실시예 17에 생성된 비닝 데이터를 사용하여, 결합 부위의 맵을 상대적인 결합 부위의 가시화를 위해서 2D 포맷으로 작제하였다(도 22). 이러한 맵은 mAb의 상당한 중첩이 존재함을 입증한다. 유사하게, 다수의 mAb가 LAIR-1 분자 상의 별개의 부위를 차지한다. LAIR-1에 대한 결합의 최대 중첩 및 차단을 갖는 mAb를 빈이라 간주한다. 함께, 이러한 데이터는 mAb 패널이 LAIR-1 단백질의 대부분을 피복한다는 것을 시사한다.
실시예 19: 최적화된 친화도 평가를 옥텟 RED96 장비(포르테바이오)를 사용하여 수행하였다.
물질 및 방법
항-인간 IgG 캡쳐 센서를 사용하여 다양한 농도에서의 용액 중에서 단량체 LAIR-1-His(알앤디 시스템스)에 대한 1:1 결합을 보장하는 밀도에서 키메라 LAIR-1 mAb에 결합시켰다. 검정 완충액은 0.05% Tween-20을 갖는 PBS였고, 재생 완충액은 10mM 글리신 pH 1.5였다. 먼저, 키메라 LAIR-1 mAb를 센서에 적재하였다. 이것 다음에 LAIR-1-His로의 회합 단계, 및 개별 LAIR-1-His 무함유 웰 내에서의 해리 단계가 이어졌다. 포르테바이오 데이터 분석 소프트웨어 9.0을 사용하여 데이터를 처리하였다. 참조 웰을 뺀 후 글로벌 핏(global fit)을 사용하였다. 보고된 평균 KD 값은 X2 및 R2 값을 기준으로 정확도의 높은 신뢰를 갖는 적어도 3개의 독립적인 옥텟 실시로부터 기원한다. 12E10의 2종의 키메라 버전을 시험하였음을 주목하기 바란다. 둘 모두는 비교적 낮은 친화도를 가진 반면, 12E10V2 mAb는 매우 낮은 친화도로 인해서 사용으로부터 제거되었다.
결과
도 23은 친화도 평가의 결과를 나타낸다. 해리 상수(Kd)를 해리(Kdis)율 및 회합(Kon)율을 기준으로 제3 칼럼에 nM 값으로 나타낸다. 대부분의 mAb는 매우 강한 회합 비율을 가졌지만, 또한 비교적 신속한 해리 비율을 가졌다. 1E11, 7G3 및 11B3, 5E1 및 6G6 모두는 5nM 미만의 Kd 값을 가졌는데, 이는 LAIR-1에 대한 매우 강한 친화도를 나타낸다.
실시예 20: LAIR-1 mAb는 THP-1 세포에서 인터페론 리포터 활성도의 차등적 유도를 나타낸다.
물질 및 방법
인터페론 조절 인자(IRF) 리포터를 갖는 THP-1-듀얼(Dual) 세포(인비보젠)를 LAIR-1 mAb(10ug/㎖)(도 24A)로 미리 코팅되거나 또는 코팅되지 않은(도 24B) 플레이트에 25,000개 세포/96-웰 플레이트의 웰로 플레이팅하였다. 도 24B의 경우 LAIR-1 mAb를 가용성 단백질로서 10ug/㎖로 첨가하였다. LAIR-2 Fc 또는 대조군 Fc를 또한 코팅하거나(도 24A) 또는 가용성 단백질(도 24B)로서 양성 및 음성 대조군으로서 첨가하였다.
LAIR-1 mAb가 IRF 경로 유도를 향상시키는지 또는 저해하는지의 여부를 시험하기 위해서 낮은 수준 IRF 유도를 위해서 LPS를 1ug/㎖로서 첨가하였다. 72시간에서, 10ul의 상청액을 검정 플레이트로부터 제거하고, 분석을 위해서 개별 플레이트로 전달하였다. Quanti-luc(인비보젠)를 프로토콜에 따라서 첨가하고, 발광을 퍼킨엘머 엔비젼으로 측정하였다.
결과
플레이트 결합된 LAIR-1 mAb는, 3종의 mAb, 11B3, 6G6 및 5E1가 IRF 신호전달을 향상시킬 수 있는 반면, 2종의 mAb, 1E11 및 7G3은 거의 효과가 없거나 IRF 유도를 실제로 저해할 수 있음을 나타내었다(도 24A). mAb는 가용성 형태에서 유사한 효과를 가졌다(도 24B). 흥미롭게도, 동일한 빈에 속한 1E11 및 7G3은 유사한 기능을 갖는 것으로 보인다. 이에 반해서, 11B3, 6G6 및 5E1은 별개의 빈에 속하지만, 유사한 기능을 갖는 것으로 보이는데, 이는 클론 1E11 및 7G3과 대조적이다.
실시예 21: 주카트 T 세포 리포터 활성도의 유도를 위한 LAIR-1 mAb 스크리닝.
물질 및 방법
96-웰 플레이트를 밤새 4℃에서 0.5ug/㎖의 항-CD3(OKT3)으로 코팅하였다. 비결합된 CD3을 흡입에 의해서 제거하였다. OKT3의 흡입 후, LAIR-1 mAb 또는 LAIR-2 Fc 및 대조군 Fc를 24시간 동안 10ug/㎖로 코팅하였다(도 25A). 주카트 T 세포 NFAT-Lucia 경로 리포터 세포(인비보젠)를 첨가하기 전에, 비결합된 단백질을 흡인시켰다. 주카트 T 세포를 200ul 총 체적으로 50,000세포/웰로 플레이팅하였다. 48시간에서, 10ul의 상청액을 제거하고, 개별 플레이트로 전달하였다. Quanti-Luc(인비보젠)를 프로토콜에 따라서 첨가하였다. 발광을 퍼킨 엘머 엔비젼 플레이트 판독기를 사용하여 평가하였다. 도 25B의 경우 도 25A와 동일하게 수행하였지만, 단백질을 플레이트 상에 코팅하지 않고 가용성 형태로 첨가하였다.
결과
결과는, 1E11이 NFAT 리포터 유도에 거의 효과를 갖지 않거나 전혀 효과를 갖지 않지만, 11B3, 6G6 및 5E1은 NFAT 유도를 유도하였음을 나타내었다(도 25A). 유사한 검정에서, LAIR-1 mAb 또는 LAIR-2 Fc 및 대조군 Fc를 가용성 단백질로서 첨가하였다(도 25B). 이러한 검정에서 처리 중 임의의 것에서 거의 효과가 관찰되지 않았다. 7G3을 THP-1 검정에서만 시험하였고, 주카트 검정에서 시험하지 않았음을 주목해야 한다.
종합하면, 본 실시예에서의 데이터는 세포주 경로 리포터-기반 검정에서 LAIR-1 mAb의 특이적 기능을 나타낸다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 개시된 발명이 속한 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 인용된 간행물 및 그것이 인용하는 문헌은 참고로 구체적으로 포함된다.
관련 기술 분야의 통상의 기술자는 단지 일상적인 실험을 사용하여 본 명세서에 기술된 본 발명의 구체적인 실시형태에 대한 다수의 등가물을 인식할 것이거나 또는 알아낼 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 청구범위에 포함되도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> NextCure, Inc FLIES, DALLAS LIU, LINDA LANGERMANN, SOLOMON <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING LAIR SIGNAL TRANSDUCTION <130> 064467.002PCT <140> 3,062,826 <141> 2017-08-03 <150> PCT/US2017/045310 <151> 2017-08-03 <150> 62/370,334 <151> 2016-08-03 <150> 62/450,300 <151> 2017-01-25 <160> 143 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 287 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 1 Met Ser Pro His Pro Thr Ala Leu Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Ala 1 5 10 15 Gln Thr Ile His Thr Gln Glu Glu Asp Leu Pro Arg Pro Ser Ile Ser 20 25 30 Ala Glu Pro Gly Thr Val Ile Pro Leu Gly Ser His Val Thr Phe Val 35 40 45 Cys Arg Gly Pro Val Gly Val Gln Thr Phe Arg Leu Glu Arg Glu Ser 50 55 60 Arg Ser Thr Tyr Asn Asp Thr Glu Asp Val Ser Gln Ala Ser Pro Ser 65 70 75 80 Glu Ser Glu Ala Arg Phe Arg Ile Asp Ser Val Ser Glu Gly Asn Ala 85 90 95 Gly Pro Tyr Arg Cys Ile Tyr Tyr Lys Pro Pro Lys Trp Ser Glu Gln 100 105 110 Ser Asp Tyr Leu Glu Leu Leu Val Lys Glu Thr Ser Gly Gly Pro Asp 115 120 125 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cccacgagga ccctgaagtg aagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 900 gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag gaacagtaca actccaccta ccgggtggtg 960 tccgtgctga ccgtgctgca ccaggattgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1020 tccaacaagg ccctgcctgc ccccatcgaa aagaccatct ccaaggccaa gggccagccc 1080 cgggaacccc aggtgtacac actgccccct agcagggacg agctgaccaa gaaccaggtg 1140 tccctgacct gtctcgtgaa aggcttctac ccctccgata tcgccgtgga atgggagtcc 1200 aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc accccccctg tgctggactc cgacggctca 1260 ttcttcctgt acagcaagct gacagtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320 tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380 agccccggct ga 1392 <210> 134 <211> 460 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 134 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Thr Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asn Pro Asp Asn Gly Ile Thr Ser Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Lys Ser Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 115 120 125 Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 180 185 190 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205 Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 210 215 220 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 225 230 235 240 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln 275 280 285 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300 Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335 Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 340 345 350 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365 Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 385 390 395 400 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 420 425 430 Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 450 455 460 <210> 135 <211> 1383 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 135 atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60 gttcagttgc agcagtctgg ccccgagctt gtgaaacctg gcgcctctgt gaagatctcc 120 tgcaaggcct ctggctacac cttcaccacc tactacatga actgggtcaa gcagtcccac 180 ggcaagtccc tggaatggat cggcaacatc aaccccgaca acggcatcac ctcctacaac 240 cagaagttca agggcaaagc taccctgacc gtggacaagt cctcctccac cgcctacatg 300 gaactgagat ccctgacctc tgaggactcc gccgtgtact actgtgccag aggcaagtct 360 ctggcttatt ggggccaggg cacactggtc acagtgtctg ctgcttccac caaggggccc 420 tccgtgttcc ctctggcccc ttgctccaga tccacctccg agtctaccgc cgctctgggc 480 tgcctcgtga aggactactt ccccgagcct gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg 540 acctctggcg tgcacacctt ccctgctgtg ctgcagtcct ccggcctgta ctccctgtcc 600 tccgtcgtga ccgtgccttc cagctctctg ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac 660 cacaagccct ccaacaccaa ggtggacaag cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc 720 cctccttgcc cagcccctga atttctgggc ggacccagcg tgttcctgtt ccccccaaag 780 cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg 840 tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac 900 gccaagacca agcctagaga ggaacagttc aactccacct accgggtggt gtccgtgctg 960 accgtgctgc accaggattg gctgaacggc aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag 1020 ggcctgccca gctccatcga aaagaccatc tccaaggcca agggccagcc ccgggaaccc 1080 caggtgtaca cactgcctcc aagccaggaa gagatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1140 tgtctcgtga aaggcttcta cccctccgat atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag 1200 cctgagaaca actacaagac caccccccct gtgctggact ccgacggctc cttcttcctg 1260 tactctcgcc tgaccgtgga caagtcccgg tggcaggaag gcaacgtgtt ctcctgctcc 1320 gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaagt ccctgtccct gtctctggga 1380 tga 1383 <210> 136 <211> 234 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 136 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser 20 25 30 Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn 35 40 45 Val Gly Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg His Thr Gly Val Pro Asp 65 70 75 80 Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser 100 105 110 Ser His Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 130 135 140 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 165 170 175 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 137 <211> 705 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 137 atgtccgtgc ctacacaggt tctgggactg ctgctgctgt ggctgaccga cgctagatgc 60 gacatcgtga tgacccagag ccacaagttc atgtccacct ccgtgggcga cagagtgtcc 120 atcacatgca aggcctctca gaatgtgggc accgccgttg cctggtatca gcagaaacct 180 ggccagtctc ctaagctgct gatctactgg gcctccatca gacacaccgg cgtgccagat 240 agattcaccg gctctggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatctctaa cgtgcagtct 300 gaggacctgg ccgactactt ctgccagcag tacagctctc acccctacac ctttggcgga 360 ggcaccaagc tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccct ccgtgttcat cttcccacct 420 tccgacgagc agctgaagtc cggcaccgct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 480 ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caactcccag 540 gaatccgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc caccctgacc 600 ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 660 ctgtctagcc ccgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gctga 705 <210> 138 <211> 468 <212> PRT <213> artificial swquence <220> <223> synthetic construct <400> 138 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Lys Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asp Phe Thr Phe 35 40 45 Asn Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Thr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr 65 70 75 80 Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 85 90 95 Gln Ser Met Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Thr Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Arg Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly 465 <210> 139 <211> 1407 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 139 atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60 gtgcagttgg ttgaatctgg cggcggactg gtgcagccta agggatctct gaagctgtct 120 tgcgccgcct ccgacttcac cttcaatacc tacgccatgc actgggtccg acaggcccct 180 ggaaaaggac tggaatgggt cgccagaatc cggaccaagt ccaacaacta cgccacctac 240 tacgccgact ccgtgaagga cagattcacc atctctcggg acgactccca gtccatgctg 300 tacctgcaga tgaacaacct gaccaccgag gacaccgcca tgtactactg cgtgcgggat 360 agatatggcg gcgctatgga ttattggggc cagggcacat ctgtgaccgt gtcctctgct 420 tccaccaagg ggccctccgt gttccctctg gccccttcca gcaagtctac ctctggcggc 480 acagccgctc tgggctgcct cgtgaaggac tacttccccg agcctgtgac cgtgtcctgg 540 aactctggcg ctctgacatc cggcgtgcac accttccctg ctgtgctgca gtcctccggc 600 ctgtactccc tgtcctccgt cgtgaccgtg ccttccagct ctctgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 720 tcctgcgaca agacccacac ctgtccccct tgtcctgccc ctgaactgct gggcggaccc 780 agcgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 840 gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac gaggaccctg aagtgaagtt caattggtac 900 gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gtacaactcc 960 acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 1020 tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg cctgccccca tcgaaaagac catctccaag 1080 gccaagggcc agccccggga accccaggtg tacacactgc cccctagcag ggacgagctg 1140 accaagaacc aggtgtccct gacctgtctc gtgaaaggct tctacccctc cgatatcgcc 1200 gtggaatggg agtccaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1260 gactccgacg gctcattctt cctgtacagc aagctgacag tggacaagtc ccggtggcag 1320 cagggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1380 aagtccctgt ccctgagccc cggctga 1407 <210> 140 <211> 465 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 140 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Lys Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asp Phe Thr Phe 35 40 45 Asn Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Thr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr 65 70 75 80 Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 85 90 95 Gln Ser Met Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Thr Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Arg Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val 210 215 220 Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys 225 230 235 240 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly 245 250 255 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 260 265 270 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 275 280 285 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 290 295 300 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 305 310 315 320 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 340 345 350 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 355 360 365 Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 370 375 380 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 385 390 395 400 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 405 410 415 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp 420 425 430 Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 435 440 445 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Gly 465 <210> 141 <211> 1398 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 141 atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtctgtga ccaccggcgt gcactctgaa 60 gtgcagttgg ttgaatctgg cggcggactg gtgcagccta agggatctct gaagctgtct 120 tgcgccgcct ccgacttcac cttcaatacc tacgccatgc actgggtccg acaggcccct 180 ggaaaaggac tggaatgggt cgccagaatc cggaccaagt ccaacaacta cgccacctac 240 tacgccgact ccgtgaagga cagattcacc atctctcggg acgactccca gtccatgctg 300 tacctgcaga tgaacaacct gaccaccgag gacaccgcca tgtactactg cgtgcgggat 360 agatatggcg gcgctatgga ttattggggc cagggcacat ctgtgaccgt gtcctctgct 420 tccaccaagg ggccctccgt gttccctctg gccccttgct ccagatccac ctccgagtct 480 accgccgctc tgggctgcct cgtgaaggac tacttccccg agcctgtgac cgtgtcctgg 540 aactctggcg ctctgacctc tggcgtgcac accttccctg ctgtgctgca gtcctccggc 600 ctgtactccc tgtcctccgt cgtgaccgtg ccttccagct ctctgggcac caagacctac 660 acctgtaacg tggaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagcgggt ggaatctaag 720 tacggccctc cctgccctcc ttgcccagcc cctgaatttc tgggcggacc cagcgtgttc 780 ctgttccccc caaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga agtgacctgc 840 gtggtggtgg atgtgtccca ggaagatccc gaggtgcagt tcaattggta cgtggacggc 900 gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agttcaactc cacctaccgg 960 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 1020 aaggtgtcca acaagggcct gcccagctcc atcgaaaaga ccatctccaa ggccaagggc 1080 cagccccggg aaccccaggt gtacacactg cctccaagcc aggaagagat gaccaagaac 1140 caggtgtccc tgacctgtct cgtgaaaggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1200 gagtccaacg gccagcctga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggactccgac 1260 ggctccttct tcctgtactc tcgcctgacc gtggacaagt cccggtggca ggaaggcaac 1320 gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1380 tccctgtctc tgggatga 1398 <210> 142 <211> 234 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 142 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Ala Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser 20 25 30 Val Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp 35 40 45 Ile Tyr Ile Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile Ser Thr Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr 85 90 95 Ser Leu Gln Thr Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp 100 105 110 Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 130 135 140 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 165 170 175 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 143 <211> 705 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 143 atgtccgtgc ctacacaggt tctgggactg ctgctgctgt ggctgaccga cgctagatgt 60 gatatccaga tggcccagtc ctcctccagc ttctctgtgt ctctgggcga cagagtgacc 120 atcacatgca aggcctccga ggacatctac atccggctgg cctggtatca gcagaagcct 180 ggaaacgccc ctcggctgct gatctctacc gctacatctc tggaaaccgg cgtgccctct 240 agattctctg gctctggatc tggcaaggac tacaccctgt ctatcaccag cctgcagacc 300 gaggatgtgg ccacctacta ctgccagcag tactggtcta ccccttacac ctttggcggc 360 ggaacccggc tggaaatcaa acgtacggtg gccgctccct ccgtgttcat cttcccacct 420 tccgacgagc agctgaagtc cggcaccgct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 480 ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caactcccag 540 gaatccgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc caccctgacc 600 ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 660 ctgtctagcc ccgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gctga 705

Claims (68)

  1. 면역 반응 증가를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증가시키기 위한 약제학적 조성물로서, LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 감소시키는 유효량의 면역조정제를 포함하되, 상기 면역조정제는,
    (i) 가용성 LAIR-2 폴리펩타이드 또는 융합 단백질,
    (ii) 가용성 LAIR-1 폴리펩타이드 또는 융합 단백질,
    (iii) 면역 반응을 증가시키는 LAIR-1 mAb,
    (iv) LAIR-1 양성 세포를 고갈시키는 항체, 및
    (iv) 이들의 조합물
    로 이루어진 군으로부터 선택된, 약제학적 조성물:.
  2. 제1항에 있어서, 상기 면역조정제는 LAIR-2 융합 단백질인, 약제학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 LAIR-2 융합 단백질은 LAIR-2의 세포외 도메인 또는 면역글로불린 도메인에 연결된 이의 기능성 변이체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 LAIR-2 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 면역조정제는 LAIR-1 융합 단백질인, 약제학적 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 LAIR-1 융합 단백질은 LAIR-1의 세포외 도메인 또는 면역글로불린 도메인에 연결된 이의 기능성 변이체를 포함하는, 면역글로불린 도메인, 약제학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 LAIR-1 융합 단백질은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 면역조정제는 LAIR-2 단백질 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체인, 약제학적 조성물.
  9. 제2항에 있어서, 상기 LAIR-2 단백질 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체는 서열번호 6에 대해서 적어도 80%, 90%, 95% 또는 100% 서열 동일성을 포함하는, 약제학적 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 면역조정제는 가용성 LAIR-1 단백질 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체인, 약제학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 LAIR-1 단백질은 LAIR-1의 세포외 도메인 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체로 이루어진, 약제학적 조성물.
  12. 제10항에 있어서, 상기 LAIR-1 단백질 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체는 서열번호 2에 대해서 적어도 80%, 90%, 95% 또는 100% 서열 동일성을 포함하는, 약제학적 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 반응은 항원에 대한 1차 면역 반응 또는 효과기 세포 기능의 증가, 예컨대, T 세포의 항원-특이적 증식의 증가, T 세포에 의한 사이토카인 생산의 향상, 분화의 자극 또는 이들의 조합인, 약제학적 조성물.
  14. 면역 반응의 증가를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 면역 반응을 증가시키는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는, 면역 반응을 증가시키는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 암은 LAIR-1의 증가된 발현, LAIR-1 리간드의 증가된 발현, LAIR-2의 감소된 발현 또는 이들의 조합을 특징으로 하는, 면역 반응을 증가시키는 방법.
  17. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 암은 난소암, 폐암 또는 위장암인, 면역 반응을 증가시키는 방법.
  18. 제14항에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는, 면역 반응을 증가시키는 방법.
  19. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 백신 또는 이의 성분과 동시에 상기 약제학적 조성물이 투여되는, 면역 반응을 증가시키는 방법.
  20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 제2 치료제를 투여하는 단계를 더 포함하는, 면역 반응을 증가시키는 방법.
  21. 면역 반응의 감소를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 감소시키기 위한 약제학적 조성물로서, LAIR-1 발현, 리간드 결합, 가교결합, 음성 신호전달 또는 이들의 조합을 증가시키는 유효량의 면역조정제를 포함하되, 상기 면역조정제는,
    (i) 기능 활성화 항-LAIR-1 항체,
    (ii) 기능 차단 항-LAIR-2 항체, 및
    (iii) 이들의 조합물
    로 이루어진 군으로부터 선택된, 약제학적 조성물
  22. 제21항에 있어서, 상기 면역 반응은 항원에 대한 1차 면역 반응이거나 또는 효과기 세포 기능의 증가, 예컨대, T 세포의 항원-특이적 증식의 증가, T 세포에 의한 사이토카인 생산의 향상, 분화의 자극 또는 이들의 조합인, 약제학적 조성물.
  23. 면역 반응의 감소를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 감소시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 제21항 또는 제22항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 면역 반응을 감소시키는 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 대상체는 염증을 갖는, 면역 반응을 감소시키는 방법.
  25. 제23항에 있어서, 상기 대상체는 자가면역 장애를 갖는, 면역 반응을 감소시키는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 자가면역 장애는 류마티스 관절염인, 면역 반응을 감소시키는 방법.
  27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 LAIR-1의 감소된 발현, LAIR-1 리간드의 감소된 발현, LAIR-2의 증가된 발현 또는 이들의 조합을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 갖는, 면역 반응을 감소시키는 방법.
  28. 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 제2 치료제를 투여하는 단계를 더 포함하는, 면역 반응을 증가시키는 방법.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LAIR-1은 골수 세포, T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 이들의 조합물 상에서 발현되는, 조성물 및 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 골수 세포는 항원-제시 세포인, 조성물 및 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 항원 제시 세포는 단핵구, 대식세포 또는 수지상 세포인, 조성물 및 방법.
  32. 백혈병의 치료를 필요로 하는 대상체에서 백혈병을 치료하는 방법으로서,
    상기 대상체에게 LAIR-1 단클론성 항체, 가용성 LAIR-1 폴리펩타이드, 가용성 LAIR-2 폴리펩타이드, LAIR-1 융합 단백질, LAIR-2 융합 단백질 또는 이들의 조합물을 포함하는 유효량의 약제학적 조성물을 투여하여 백혈병 세포에서 LAIR-1 신호 변환을 저해 또는 감소시킴으로써 백혈병 세포 생존을 저해하거나 백혈병 세포에 대한 항-종양 면역 반응을 촉진시키는 단계를 포함하는, 백혈병을 치료하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 백혈병은 급성 골수성 백혈병인, 백혈병을 치료하는 방법.
  34. 1E11, 1G7, 4B3, 5A6, 5E1, 6B2, 6F4, 6G6, 7G3, 9H6, 11B3, 12E10a 및 12E10b로 이루어진 군으로부터 선택된 하이브리도마에 의해서 생산된, 항-LAIR 항체.
  35. 제34항의 항체의 적어도 하나의 경쇄 또는 적어도 하나의 중쇄를 포함하는, 항-LAIR 항체.
  36. 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107 및 115로 이루어진 가변 경쇄의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄를 포함하는, 항-LAIR 항체.
  37. 서열번호 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103 및 111로 이루어진 가변 중쇄의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄를 포함하는, 항-LAIR 항체.
  38. 서열번호 20 내지 22, 24 내지 26, 28 내지 30, 32 내지 34, 36 내지 38, 40 내지 42, 44 내지 46, 48 내지 50, 52 내지 54, 56 내지 58, 60 내지 62, 64 내지 66, 68 내지 70, 72 내지 74, 76 내지 78, 80 내지 82, 84 내지 86, 88 내지 90, 92 내지 94, 96 내지 98, 100 내지 102, 104 내지 106, 108 내지 110, 112 내지 114 및 116 내지 118로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역(CDR)의 군으로부터 선택된 CDR을 포함하는, 항-LAIR 항체.
  39. 서열번호 20 내지 22, 24 내지 26, 28 내지 30, 32 내지 34, 36 내지 38, 40 내지 42, 44 내지 46, 48 내지 50, 52 내지 54, 56 내지 58, 60 내지 62, 64 내지 66, 68 내지 70, 72 내지 74, 76 내지 78, 80 내지 82, 84 내지 86, 88 내지 90, 92 내지 94, 96 내지 98, 100 내지 102, 104 내지 106, 108 내지 110, 112 내지 114 및 116 내지 118로 이루어진 군으로부터 선택된 복수의 CDR을 갖는, 항-LAIR 항체.
  40. 제39항에 있어서, 상기 복수의 CDR은 2 내지 12개의 CDR로부터 유래된, 항-LAIR 항체.
  41. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 LAIR-2 Fc를 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 조합하여 또는 이것과 교대로 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  42. 제40항에 있어서, 상기 암은 난소암인, 암을 치료하는 방법.
  43. 종양 부담의 감소를 필요로 하는 대상체에서 종양 부담을 감소시키는 방법으로서, 종양 부담의 감소를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 LAIR-2 Fc를 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 조합하여 또는 이것과 교대로 투여하는 단계를 포함하는, 종양 부담을 감소시키는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 종양은 난소 종양인, 종양 부담을 감소시키는 방법.
  45. 제41항 또는 제43항에 있어서, 상기 암 또는 종양은 림프종인, 방법.
  46. 숙주에게 치료적 유효량의 LAIR-2 Fc를 투여하는 단계를 포함하는, 1차 T-세포 확장을 필요로 하는 대상체에서 1차 T-세포 확장을 촉진시키는 방법.
  47. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 20, 서열번호 21 및 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  48. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  49. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 36, 서열번호 37 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  50. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 44, 서열번호 45 및 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 48, 서열번호 49 및 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  51. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 52, 서열번호 53 및 서열번호 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 56, 서열번호 57 및 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  52. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 60, 서열번호 61 및 서열번호 62에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 64, 서열번호 65 및 서열번호 66에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  53. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 68, 서열번호 69 및 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 72, 서열번호 73 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  54. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 76, 서열번호 77 및 서열번호 78에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 80, 서열번호 81 및 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  55. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 84, 서열번호 85 및 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 88, 서열번호 89 및 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  56. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 92, 서열번호 93 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 96, 서열번호 97 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  57. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 100, 서열번호 101 및 서열번호 102에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  58. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 108, 서열번호 109 및 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 112, 서열번호 113 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  59. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 116, 서열번호 117 및 서열번호 118에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 및 서열번호 112, 서열번호 113 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  60. 제47항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 Fc 도메인을 포함하는, 항체.
  61. 서열번호 120 또는 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 항체.
  62. 서열번호 126 또는 서열번호 128에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 항체.
  63. 서열번호 132 또는 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 항체.
  64. 서열번호 138 또는 서열번호 140에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및/또는 서열번호 142에 제시된 아미노산 서열과 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 항체.
  65. 서열번호 124, 130, 136 또는 142에 따른 경쇄 아미노산 서열 및/또는 서열번호 120, 122, 126, 128, 132, 134, 138 또는 140에 따른 중쇄 아미노산을 포함하는 항체를 암호화하는 핵산 서열.
  66. 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107 또는 115에 따른 가변 경쇄 및/또는 서열번호 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103 또는 111에 따른 가변 중쇄를 암호화하는 핵산 서열.
  67. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 구성적으로 또는 유도적으로 발현하는 세포로서, 상기 세포는 서열번호 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 또는 이들의 조합에 따른 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 포함하는, 세포.
  68. LAIR-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 구성적으로 또는 유도적으로 발현하는 세포로서, 상기 세포는 서열번호 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142 또는 이들의 조합에 따른 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 포함하는, 세포.
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019528311A (ja) 2016-08-03 2019-10-10 ネクストキュア インコーポレイテッド Ｌａｉｒシグナル伝達を調節するための組成物及び方法
EP3877399A4 (en) * 2018-11-06 2022-10-19 Alsatech, Inc. CELL-BASED GENE THERAPY FOR NEURODEGENERATIVE DISEASES
WO2021002735A1 (ko) * 2019-07-04 2021-01-07 주식회사 굳티셀 T 세포의 세포 표면 항원 및 이의 다양한 용도
EP4000633A4 (en) * 2019-07-12 2024-02-21 Kyoto University NEUTRALIZING ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF DENTAL REGENERATION TARGETING THE USAG-1 MOLECULE
MX2022013176A (es) * 2020-04-24 2022-11-30 Millennium Pharm Inc Anticuerpos anti cumulo de diferenciacion 19 (cd19) y sus usos.
AU2021400761A1 (en) * 2020-12-18 2023-07-06 Cullinan Amber Corp. Bi-functional linear fusion collagen-localized immunomodulatory molecules and methods thereof
WO2023122618A1 (en) * 2021-12-21 2023-06-29 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Combinational use of an anti-ilt3 antibody and an anti-lair-1 antibody
WO2023173091A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Osteoclast-associated ig-like receptor (oscar) and methods of use thereof
WO2024022495A1 (en) * 2022-07-28 2024-02-01 Concept To Medicine Biotech Co., Ltd. Anti-MerTK ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2024067864A1 (en) * 2022-09-30 2024-04-04 Shanghai Junshi Biosciences Co., Ltd. Anti-lair1 antibodies and their uses
WO2024086684A2 (en) * 2022-10-19 2024-04-25 Ibio, Inc. Chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
WO2024102807A2 (en) * 2022-11-08 2024-05-16 Nextcure, Inc. Immune checkpoint inhibitor and extracellular matrix component binder combination therapy and methods of use thereof

Family Cites Families (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5190929A (en) 1988-05-25 1993-03-02 Research Corporation Technologies, Inc. Cyclophosphamide analogs useful as anti-tumor agents
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5120727A (en) 1991-05-29 1992-06-09 American Home Products Corporation Rapamycin dimers
US5202332A (en) 1991-08-07 1993-04-13 American Home Products Corporation Rapamycin analog as immunosuppressant
US5162333A (en) 1991-09-11 1992-11-10 American Home Products Corporation Aminodiesters of rapamycin
JPH07505628A (ja) 1992-03-30 1995-06-22 アメリカン・ホーム・プロダクツ・コーポレイション 静脈注射用のラパマイシン製剤
DE69334258D1 (de) 1992-08-21 2009-02-26 Univ Bruxelles Immunoglobuline ohne Leichtkette
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
US5489680A (en) 1992-10-13 1996-02-06 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5434260A (en) 1992-10-13 1995-07-18 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US6838254B1 (en) 1993-04-29 2005-01-04 Conopco, Inc. Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae
US5385908A (en) 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Hindered esters of rapamycin
US5780462A (en) 1995-12-27 1998-07-14 American Home Products Corporation Water soluble rapamycin esters
US20030105303A1 (en) 1996-12-06 2003-06-05 Schering Corporation, A New Jersey Corporation Isolated mammalian monocyte cell genes; related reagents
US6140076A (en) 1996-12-06 2000-10-31 Schering Corporation Ig superfamily `dlair` receptors expressed in monocytes
WO1998024906A2 (en) 1996-12-06 1998-06-11 Schering Corporation Isolated mammalian monocyte cell genes; related reagents
US7411051B2 (en) 1997-03-07 2008-08-12 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to HDPPA04 polypeptide
US5989591A (en) 1997-03-14 1999-11-23 American Home Products Corporation Rapamycin formulations for oral administration
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6015809A (en) 1998-08-17 2000-01-18 American Home Products Corporation Photocyclized rapamycin
SE521446C2 (sv) 2001-07-09 2003-11-04 Volvo Wheel Loaders Ab Anordning för upphängning av en hytt vid en fordonsram
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
DK1537878T3 (da) 2002-07-03 2011-01-24 Ono Pharmaceutical Co Immunpotenserende sammensætninger
US7052694B2 (en) 2002-07-16 2006-05-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Dendritic cell potentiation
BR0316880A (pt) 2002-12-23 2005-10-25 Wyeth Corp Anticorpos contra pd-1 e usos dos mesmos
ES2729974T3 (es) 2003-01-23 2019-11-07 Ono Pharmaceutical Co Anticuerpo específico de PD-1 y CD3 humanas
US7534423B2 (en) 2003-03-28 2009-05-19 Faron Pharmaceuticals Oy Method for inducing an elevated level of adenosine in an individual
US7465318B2 (en) 2004-04-15 2008-12-16 Soteira, Inc. Cement-directing orthopedic implants
US20060099203A1 (en) 2004-11-05 2006-05-11 Pease Larry R B7-DC binding antibody
US20070166281A1 (en) 2004-08-21 2007-07-19 Kosak Kenneth M Chloroquine coupled antibodies and other proteins with methods for their synthesis
EP2439272A3 (en) 2005-05-09 2013-07-31 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
SI1907000T2 (sl) 2005-06-08 2020-07-31 Dana-Farber Cancer Institute Postopki in sestavki za zdravljenje persistentne HIV infekcije z inhibicijo programiranih celični smrtnih 1 (PD-1) poti
AU2006265108C1 (en) 2005-07-01 2013-01-17 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (PD-L1)
WO2007056539A2 (en) 2005-11-08 2007-05-18 Medarex, Inc. Prophylaxis and treatment of enterocolitis associated with anti-ctla-4 antibody therapy
CA2631760A1 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Robert A. Brodsky Use of high-dose oxazaphosphorine drugs for treating immune disorders
WO2007102736A2 (en) * 2006-03-08 2007-09-13 Universitair Medisch Centrum Utrecht Interfering in activation of an immune cell by influencing interaction of lair and collagen.
FR2909092B1 (fr) 2006-11-24 2012-10-19 Pf Medicament Nouveaux anticorps anti-proliferation
NZ720288A (en) 2006-12-27 2020-02-28 Harvard College Compositions and methods for the treatment of infections and tumors
US20100178299A1 (en) 2007-02-13 2010-07-15 Northeastern University Methods and compositions for improving immune responses
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
EP2036570A1 (en) * 2007-09-13 2009-03-18 UMC Utrecht Holding B.V. Means and methods for influencing platelet-collagen interaction
CN101951959A (zh) 2007-11-30 2011-01-19 百时美施贵宝公司 抗b7h4单克隆抗体-药物缀合物和使用方法
EP2328919A2 (en) * 2008-08-25 2011-06-08 Amplimmune, Inc. Pd-i antagonists and methods for treating infectious disease
EP2350129B1 (en) 2008-08-25 2015-06-10 Amplimmune, Inc. Compositions of pd-1 antagonists and methods of use
US20110268741A1 (en) 2009-01-05 2011-11-03 The Johns Hopkins University Immunotherapy for Contact Dermatitis Using Co-Signal Regulation
US8399624B1 (en) 2009-06-25 2013-03-19 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Acceptor framework for CDR grafting
EP4397675A3 (en) * 2012-09-13 2024-10-16 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domain proteins that bind to myostatin
US20180179274A1 (en) * 2015-06-26 2018-06-28 Institute For Research In Biomedicine Proteins comprising a mutated lair-1 fragment and uses thereof
JP2019528311A (ja) 2016-08-03 2019-10-10 ネクストキュア インコーポレイテッド Ｌａｉｒシグナル伝達を調節するための組成物及び方法

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