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KR20220150281A - A2a/a2b 및 pd-1/pd-l1 억제제를 포함하는 조합 요법 - Google Patents

A2a/a2b 및 pd-1/pd-l1 억제제를 포함하는 조합 요법 Download PDF

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KR20220150281A
KR20220150281A KR1020227026581A KR20227026581A KR20220150281A KR 20220150281 A KR20220150281 A KR 20220150281A KR 1020227026581 A KR1020227026581 A KR 1020227026581A KR 20227026581 A KR20227026581 A KR 20227026581A KR 20220150281 A KR20220150281 A KR 20220150281A
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Abstract

본원은 A2A 및/또는 A2B의 억제제 및 PD-1 및/또는 PD-L1의 억제제의 조합을 사용하여 암을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

A2A/A2B 및 PD-1/PD-L1 억제제를 포함하는 조합 요법
A2A/A2B의 억제제 및 PD-1/PD-L1의 억제제를 포함하는 조합 요법, 및 암과 같은 장애를 치료하기 위해 이를 사용하는 방법이 본원에 개시되어 있다.
일부 암 환자는 장기간 예후가 좋지 않거나 및/또는 당업계에서 일반적으로 사용되는 하나 이상의 유형의 치료에 내성이 있다. 따라서, 이러한 치료하기 어려운 환자 집단에서 증가된 효능 및 개선된 안전성 프로파일을 갖는 암에 대한 효과적인 치료법에 대한 필요성이 남아 있다.
요약
본원은, 특히, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다:
(i) A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) PD-1/PD-L1의 억제제.
본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점은 설명 및 청구 범위로부터 명백해질 것이다.
도 1A-1C는 1차 T 세포와 공동 배양된 CHO-PD-L1에서 (1A) 펨브롤리주맙, (1B) 항체 X 및 (1C) 화합물 Y를 사용한 화합물 9의 상승 효과를 나타낸다(실시예 1 참조).
도 2A-2D는 CD3 항체로 자극된 PBMC에서 화합물 9 또는 화합물 3A와 아테졸리주맙의 상승 효과를 나타낸다.
도 3A-3C는 전임상 CT26 및 B16-F10 종양 모델에서 화합물 9 및 항-PD1(쥐 PD-1에 대한 클론 29F.1A12)의 항종양 효과를 나타낸다. (3A) 단일 물질로서 및 항-PD1 항체와 조합된 CT26 상승 모델에서 10mg/kg BID 화합물 9의 효능 연구. (3B) CT-26 NSG 이종이식 모델에서 10mg/kg BID 화합물 9의 효능 연구. (3C) 단일 물질로서 및 항-PD-L1 항체와 조합된 B16 상승 모델에서 10mg/kg BID 화합물 9의 효능 연구.
상세한 설명
본원은 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다:
(i) A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) PD-1/PD-L1의 억제제.
A2A/A2B 억제제
아데노신은 많은 면역 세포 유형을 통해 면역 반응을 조절할 수 있는 세포외 신호 분자이다. 아데노신은 Drury와 Szent-
Figure pct00001
(Sachdeva, S. and Gupta, M. Saudi Pharmaceutical Journal, 2013, 21, 245-253)에 의해 관상동맥 긴장도의 생리학적 조절자로 처음 인식되었지만, 1970년이 되어서야 Sattin과 Rall은 아데노신이 세포 표면의 특정 수용체 점유를 통해 세포 기능을 조절한다는 것을 보여주었다(Sattin, A., and Rall, T.W., 1970. Mol. Pharmacol. 6, 13-23; Hasko', G., 등, 2007., Pharmacol.Ther.113, 264-275).
아데노신은 다양한 다른 생리적 기능에서 중요한 역할을 한다. 이는 세 개의 포스페이트 기에 연결될 때 핵산의 합성에 관여하고; 이는 세포 에너지 시스템의 필수 성분인 ATP를 형성한다. 아데노신은 세포 외 ATP의 효소적 분해에 의해 생성될 수 있거나, 손상된 원형질막을 통과하여 손상된 뉴런 및 신경아교세포로부터 방출될 수도 있다 (Tautenhahn, M. 등 Neuropharmacology, 2012, 62, 1756-1766). 아데노신은 세포막에 국한된 특정 수용체에 대한 작용을 통해 말초 및 중추 신경계 모두에서 다양한 약리학적 효과를 발생시킨다 (Matsumoto, T. 등 Pharmacol. Res., 2012, 65, 81-90). 세포 외 아데노신 생성에 대한 대안 경로가 설명되었다. 이들 경로는 CD38, CD203a 및 CD73의 공동 작용에 의한 ATP 대신 니코틴아미드 디뉴클레오타이드 (NAD)로부터의 아데노신 생성을 포함한다. 아데노신의 CD73-의존성 생성은 알칼리성 포스파테이스 또는 전립선-특이적 포스파테이스와 같은 다른 포스페이트에 의해 발생할 수도 있다.
A1, A2A (ADORA2A), A2B (ADORA2B), 및 A3 수용체를 포함하여 인간에서 아데노신 수용체의 네 가지 알려진 아형이 있다. A1 및 A2A는 고친화도 수용체인 반면, A2B 및 A3는 저친화도 수용체이다. 아데노신 및 그의 작용제는 이들 수용체 중 하나 이상을 통해 작용할 수 있으며, 사이클릭 AMP (cAMP) 증가를 담당하는 효소인 아데닐레이트 사이클라제의 활성을 조절할 수 있다. 상이한 수용체는 이 효소에 대한 차별적인 자극 및 억제 효과를 갖는다. cAMP의 증가된 세포 내 농도는 면역 및 염증 세포의 활성을 억제할 수 있다 (Livingston, M. 등, Inflamm. Res., 2004, 53, 171-178).
A2A 아데노신 수용체는 말초 및 CNS에서, 항염증제로서 탐색된 작용제 및 신경퇴행성 질환에 대해 탐색된 길항제로써 신호를 보낼 수 있다 (Carlsson, J. 등, J. Med. Chem., 2010, 53, 3748-3755). 대부분의 세포 유형에서 A2A 아형은 세포 내 칼슘 수준을 억제하는 반면 A2B는 이를 강화한다. A2A 수용체는 일반적으로 면역 세포로부터의 염증성 반응을 억제하는 것으로 보인다 (Borrmann, T. 등, J. Med. Chem., 2009, 52(13), 3994-4006).
A2B 수용체는 위장관, 방광, 폐 및 비만세포에서 고도로 발현된다 (Antonioli, L. 등, Nature Reviews Cancer, 2013, 13, 842-857). A2B 수용체는 A2A 수용체와 구조적으로 밀접하게 관련되고 아데닐레이트 사이클라제를 활성화할 수 있지만 기능적으로 상이하다. 이 아형은 아데닐레이트 사이클라제 이외의 신호전달 시스템을 이용할 수 있는 것으로 가정되었다 (Livingston, M. 등, Inflamm. Res., 2004, 53, 171-178). 모든 아데노신 수용체 중에서, A2B 아데노신 수용체는 생리학적 조건하에 침묵을 유지하고 세포 외 아데노신 수준 증가의 결과로 활성화되는 것으로 생각되는 저친화도 수용체로 고려된다 (Ryzhov, S. 등 Neoplasia, 2008, 10, 987-995). A2B 아데노신 수용체의 활성화는 각각 Gs 및 Gq 단백질의 활성화를 통해 아데닐레이트 사이클라제 및 포스포리페이스 C를 자극할 수 있다. 미토겐 활성화 단백질 키나제에 대한 커플링이 또한 설명되어 있다 (Borrmann, T. 등, J. Med. Chem., 2009, 52(13), 3994-4006).
면역 시스템에서, 아데노신 신호전달의 관여(engagement)는 과도한 면역 반응에 대해 조직을 보호하는 중요한 조절 메커니즘일 수 있다. 아데노신은 T-세포, 자연-살해 세포, 대식세포, 수지상 세포, 비만 세포 및 골수-유래 억제 세포를 포함한 여러 면역 세포 유형을 통해 면역 반응을 음성적으로 조절할 수 있다 (Allard, B. 등 Current Opinion in Pharmacology, 2016, 29, 7-16).
종양에서, 이러한 경로는 종양 미세-환경에 의해 장악되고 면역 체계의 항종양 능력을 방해하여, 암 진행을 촉진한다. 종양 미세-환경에서, 아데노신은 주로 두 엑토누클레오티다제 CD39 및 CD73에 의해 세포 외 ATP로부터 생성되었다. 여러 세포 유형이 CD39 및 CD73 발현에 의해 아데노신을 생성할 수 있다. 이는 종양 세포, T-이펙터 세포, T-조절 세포, 종양 관련 대식세포, 골수 유래 억제 세포 (MDSC), 내피 세포, 암-관련 섬유모세포 (CAF) 및 중간엽 간질/줄기 세포 (MSC)의 경우이다. 또한, 종양 미세 환경에 공통적인 조건인 저산소증 및 염증은 CD39 및 CD73의 발현을 유도하여 아데노신 생산을 증가시킨다. 결과적으로, 고형 종양의 아데노신 수준은 정상적인 생리적 조건에 비해 더 높다.
A2A는 대부분 T-이펙터 세포, T 조절 세포 및 자연 살해 세포 (NK)를 포함하는 림프구-유래 세포에서 발현된다. A2A 수용체 차단은 T 세포를 일시적으로 비활성화하는 다운스트림 면역억제 신호를 방지할 수 있다. A2B 수용체는 주로 수지상 세포, 종양-관련 대식세포, 골수 유래 억제 세포 (MDSC), 및 중간엽 간질/줄기 세포 (MSC)를 포함한 단핵구-유래 세포에서 발현된다. 전임상 모델에서 A2B 수용체 차단은 종양 성장을 억제하고, 전이를 차단하며, 종양 항원의 제시를 증가시킬 수 있다.
ADORA2A/ADORA2B (A2A/A2B) 차단의 안전성 프로파일 측면에서, A2A 및 A2B 수용체 녹아웃 (KO) 마우스가 모두 생존 가능하며, 성장 이상을 나타내지 않고 생식력이 있다 (Allard, B. 등 Current Opinion in Pharmacology, 2016, 29, 7-16). A2A KO 마우스는 지질다당류 (LPS)로 챌린지한 경우에만 증가된 수준의 전염증성 사이토카인을 나타냈으며 기준선에서는 염증의 증거가 없었다 (Antonioli, L. 등, Nature Reviews Cancer, 2013, 13, 842-857). A2B KO 마우스는 정상 혈소판, 적혈구 및 백혈구 수를 나타내었지만 기준선에서 TNF-알파 및 IL-6과 같은 염증이 증가했다(Antonioli, L. 등, Nature Reviews Cancer, 2013, 13, 842-857). LPS 처리 후 TNF-알파 및 IL-6 생산의 추가 증가가 검출되었다. A2B KO 마우스는 또한 염증뿐만 아니라 백혈구 부착/구르기를 매개하는 증가된 혈관 부착 분자; 강화된 비만-세포 활성화; IgE-매개 아나필락시스에 대한 증가된 민감도 및 저산소증하의 증가된 혈관 누출 및 호중구 유입을 나타냈다 (Antonioli, L. 등, Nature Reviews Cancer, 2013, 13, 842-857).
아데노신 경로는 과도한 면역 반응으로부터 조직을 보호하는 중요한 면역 억제 경로이다(Antonioli, L. 등 Nature Review Cancer. 2013, 13, 842-857; Inflamm. Res. 2004, 53: 171-178; Allard, 등 Current Opinion in Pharmacology 2016, 29:7). 아데노신의 면역억제 활성은 A2A 및 A2B로 알려진 2개의 G-단백질 결합 수용체(GPCR)를 통해 매개된다; 두 수용체는 모두 T-세포, 자연 살해 세포, 대식세포, 수지상 세포, 비만 세포 및 골수 유래 억제 세포를 비롯한 많은 면역 세포 유형에서 발현되는 것으로 밝혀졌다(Saudi Pharmaceutical Journal. 2013, 21:245; Frontiers in Immunology. 2019, 10:925; J Clin Invest. 2017, 127(3):929; Neoplasia. 2008, 10: 987; Neoplasia. 2013, 15:1400). 종양 미세환경에서 관찰되는 높은 수준의 아데노신 생산의 결과로, 면역계의 항종양 능력이 억제되어 암이 진행되는 것으로 보고되었다.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 표 1로부터 선택된 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
표 1.
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 식 (I)의 화합물:
Figure pct00007
(I),
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
Cy1은 할로 및 CN로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 치환체에 의해 치환된 페닐;
Cy2는 5-6 원 헤테로아릴 또는 4-7 원 헤테로사이클로알킬, 여기서 Cy2의 5-6 원 헤테로아릴 또는 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 C1-3 알킬, C1-3 알콕시, NH2, NH(C1-3 알킬) 및 N(C1-3 알킬)2로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3 기로 임의로 치환되고;
R2는 페닐-C1-3 알킬-, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬-, (5-7 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-, 및 ORa2로부터 선택되고, 여기서 R2의 페닐-C1-3 알킬-, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬-, (5-7 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 RC 치환체로 임의로 치환되고;
Ra2는 1 또는 2 독립적으로 선택되는 RC 치환체로 임의로 치환된 (5-7 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-;
각각의 RC는 할로, C1-6 알킬, C6 아릴, 5-7 원 헤테로아릴, (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-, ORa4, 및 NRc4Rd4로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
각각의 Ra4, Rc4, 및 Rd4는 H 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택된다.
식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, Cy2는 피리미디닐이다.
식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, R2는 피리딘-2-일메틸, (2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸, (5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸, (3-메틸피리딘-2-일)메톡시, 및 (5-(1H-피라졸-1-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(5-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 1, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 2, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 3A, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 3B, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(5-아미노-2-((3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 4, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(2-((5-(1H-피라졸-1-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-5-아미노-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 21A, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(2-((5-(1H-피라졸-1-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-5-아미노-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 21B, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 다음으로부터 선택된다:
3-(5-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
3-(5-아미노-2-((3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
3-(2-((5-(1H-피라졸-1-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-5-아미노-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
식 (I)의 화합물의 합성 및 특성화는 WO2019/168847 및 US 62/891,685에서 찾을 수 있으며, 이들 둘 모두는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 식 (II)의 화합물:
Figure pct00008
(II)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
R2는 H 및 CN로부터 선택되고;
Cy1은 할로 및 CN로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 치환체에 의해 치환된 페닐;
L는 C1-3 알킬렌, 여기서 상기 알킬렌은 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R8D 치환체로 임의로 치환되고;
Cy4는 페닐, 사이클로헥실, 피리딜, 피롤리디노닐, 및 이미다졸릴로부터 선택되고, 여기서 페닐, 사이클로헥실, 피리딜, 피롤리디노닐, 및 이미다졸릴은 각각 R8D 및 R8로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3 치환체로 임의로 치환되고;
각각의 R8는 할로, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C2-4 알케닐, C2-4 알키닐, 페닐, C3-7 사이클로알킬, 5-6 원 헤테로아릴, 4-7 원 헤테로사이클로알킬, 페닐-C1-3 알킬, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬, (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R8의 C1-6 알킬, C2-4 알케닐, C2-4 알키닐, 페닐, C3-7 사이클로알킬, 5-6 원 헤테로아릴, 4-7 원 헤테로사이클로알킬, 페닐-C1-3 알킬, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬, (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R8A 치환체로 임의로 치환되고;
각각의 R8A는 할로, C1-6 알킬, 5-6 원 헤테로아릴, 4-7 원 헤테로사이클로알킬, CN, ORa81, 및 NRc81Rd81로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R8A의 C1-3 알킬, 5-6 원 헤테로아릴, 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R8B 치환체로 임의로 치환되고;
각각의 Ra81, Rc81, 및 Rd81은 H, C1-6 알킬, 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 Ra81, Rc81, 및 Rd81의 C1-6 알킬 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R8B 치환체로 임의로 치환되고;
각각의 R8B는 할로 및 C1-3 알킬로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
각각의 R8D는 OH, CN, 할로, C1-6 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(5-아미노-2-(하이드록시(페닐)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 5, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 6, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 5-아미노-7-(3-시아노-2-플루오로페닐)-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-8-카보니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 7, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(5-아미노-2-((2-플루오로-6-(((1-메틸-2-옥소피롤리딘-3-일)아미노)메틸)페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 8, 표 1 참조).
식 (II)의 화합물의 합성 및 특성화는 WO2019/222677에서 찾을 수 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 식 (III)의 화합물:
Figure pct00009
(III)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
Cy1은 할로 및 CN로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 치환체에 의해 치환된 페닐;
R2는 5-6 원 헤테로아릴 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되고, 여기서 R2의 5-6 원 헤테로아릴 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R2A 치환체로 임의로 치환되고;
각각의 R2A는 D, 할로, C1-6 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R4는 페닐-C1-3 알킬-, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬-, (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬로부터 선택되고 여기서 R4의 페닐-C1-3 알킬-, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬-, (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R4A 치환체로 임의로 치환되고;
각각의 R4A는 할로, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, CN, ORa41, 및 NRc41Rd41로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
각각의 Ra41, Rc41, 및 Rd41은 H 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 식 (III)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 9, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (III)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(8-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 10, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (III)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(8-아미노-2-(아미노(2,6-디플루오로페닐)메틸)-5-(4-메틸옥사졸-5-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 11, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (III)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(8-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(2,6-디메틸피리딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 12, 표 1 참조).
식 (III)의 화합물의 합성 및 특성화는 PCT/US2019/040496에서 찾을 수 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 식 (IV)의 화합물:
Figure pct00010
(IV)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
Cy1은 할로 및 CN로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 치환체에 의해 치환된 페닐;
Cy2는 5-6 원 헤테로아릴 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되고, 여기서 Cy2의 5-6 원 헤테로아릴 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R6 치환체로 임의로 치환되고;
각각의 R6는 할로, C1-6 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R2는 페닐-C1-3 알킬- 또는 (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, 여기서 R2의 페닐-C1-3 알킬- 및 (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R2A 치환체로 임의로 치환되고; 그리고
각각의 R2A는 할로, C1-6 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 식 (IV)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(4-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-7-(피리미딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 13, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (IV)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-7-(피리미딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 14, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (IV)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-7-(피리딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 15, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (IV)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-(4-아미노-7-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)-2-플루오로벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 16, 표 1 참조).
식 (IV)의 화합물의 합성 및 특성화는 US 62/798,180에서 찾을 수 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 식 (V)의 화합물:
Figure pct00011
(V)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
R2는 H, D, 할로, C1-6 알킬 및 C1-6 할로알킬로부터 선택되고;
R3는 H 및 C1-6 알킬로부터 선택되고;
R4는 H 및 C1-6 알킬로부터 선택되고;
R5는 H, 할로, CN, C1-6 알킬로부터 선택되고;
R6는 페닐, C3-7 사이클로알킬, 5-7 원 헤테로아릴, 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되고 여기서 R6의 상기 페닐, C3-7 사이클로알킬, 5-7 원 헤테로아릴, 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 RA 치환체에 의해 임의로 치환되고;
각각의 RA는 (5-10 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬- 및 (4-10 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 RA의 (5-10 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬- 및 (4-10 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-은 각각 1 또는 2 독립적으로 선택되는 RB 치환체로 임의로 치환되고;
각각의 RB는 할로, C1-6 알킬, 및 C(O)Rb26로부터 독립적으로 선택되고;
Rb26는 H 및 C1-3 알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 Rb26의 C1-3 알킬은 1 또는 2 독립적으로 선택되는 RC 치환체로 임의로 치환되고
각각의 RC는 할로, C1-6 알킬, CN, ORa36, 및 NRc36Rd36로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
각각의 Ra36, Rc36, 및 Rd36는 H 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 식 (V)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 7-(1-((5-클로로피리딘-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 17, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (V)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-메틸-7-(1-((5-메틸피리딘-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 18, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (V)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 3-메틸-9-펜틸-7-(1-(티에노[3,2-b]피리딘-6-일메틸)-1H-피라졸-4-일)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 19, 표 1 참조).
일부 실시양태에서, 식 (V)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 7-(1-((2-(2-(디메틸아미노)아세틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다 (화합물 20, 표 1 참조).
식 (V)의 화합물의 합성 및 특성화는 US-2019-0337957에서 찾을 수 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
PD-1/PD-L1 억제제
면역 체계는 암과 같은 질병을 통제하고 근절하기 위해 중요한 역할을 한다. 그러나 암세포는 종종 성장을 촉진하기 위해 면역 체계를 회피하거나 억제하는 전략을 개발한다. 이러한 메커니즘 중 하나는 면역 세포에서 발현되는 공동 자극 및 공동 억제 분자의 발현을 변경하는 것이다(Postow 등, J. Clinical Oncology 2015, 1-9). PD-1과 같은 억제 면역 관문 신호를 차단하는 것은 유망하고 효과적인 치료 방식으로 입증되었다.
Programmed Death-1("PD-1", "CD279"로도 알려짐)은 면역 반응을 광범위하게 음성적으로 조절하는 T-세포 조절기의 확장된 CD28/CTLA-4 계열의 약 31kD 유형 I 막 단백질 구성원이다(Ishida, Y. 등(1992) EMBO J. 11:3887-3895, 미국 특허 공개 번호 2007/0202100, 2008/0311117, 2009/00110667, 미국 특허 번호 6,808,710, 7,101,550, 7,488,802, 7,635,757 및 7,722,868, PCT 공개 번호 WO 01/14557).
PD-1은 활성화된 T-세포, B-세포 및 단핵구(Agata, Y. 등 (1996) Int. Immunol. 8(5):765-772; Yamazaki, T. 등 (2002) J. Immunol. 169:5538-5545) 및 낮은 수준의 자연 살해(NK) T-세포에서 발현된다 (Nishimura, H. 등 (2000) J. Exp. Med. 191:891-898; Martin-Orozco, N. 등 (2007) Semin. Cancer Biol. 17(4):288-298).
PD-1의 세포외 영역은 CTLA-4의 동등한 도메인과 23% 동일성을 갖는 단일 면역글로불린(Ig)V 도메인으로 구성된다 (Martin-Orozco, N. 등 (2007) Semin. Cancer Biol. 17(4):288-298). 세포외 IgV 도메인은 막관통 영역과 세포내 꼬리가 뒤따른다. 세포내 꼬리는 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프와 면역수용체 티로신- 기초 스위치 모티프에 위치한 두 개의 인산화 부위를 포함하며, 이는 PD-1이 TCR 신호를 음성적으로 조절함을 시사한다(Ishida, Y. 등 (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. 등 (2006) Immunol. Immunother. 56(5):739-745).
PD-1은 B7-H1 및 B7-DC에 결합함으로써 면역계의 억제를 매개한다(Flies, D.B. 등 (2007) J. Immunother. 30(3):251-260; 미국 특허 번호 6,803, 192, 7,794,710, 미국 특허 출원 공개 번호 2005/0059051; 2009/0055944; 2009/0274666; 2009/0313687; PCT 공개 번호 WO 01/39722; WO 02/086083).
인간 PD-1 단백질(Genbank Accession No. NP_005009)의 아미노산 서열은 다음과 같다: MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL (SEQ ID NO:1).
PD-1에는 PD-L1과 PD-L2의 두 가지 리간드가 있으며(Parry 등, Mol Cell Biol 2005, 9543-9553; Latchman 등, Nat Immunol 2001, 2, 261-268), 발현 패턴이 다르다. PD-L1 단백질은 지질다당류 및 GM-CSF 처리에 대한 반응으로 대식세포 및 수지상 세포에서, 그리고 T 세포 수용체 및 B 세포 수용체 신호전달에 따라 T 세포 및 B 세포에서 상향조절된다. PD-L1은 또한 거의 모든 종양 세포에서 고도로 발현되며, IFN-γ 처리 후 발현이 더욱 증가한다(Iwai 등, PNAS2002, 99(19):12293-7; Blank 등, Cancer Res 2004, 64(3):1140-5). 실제로, 종양 PD-L1 발현 상태는 여러 종양 유형에서 예후인 것으로 나타났다 (Wang 등, Eur J Surg Oncol 2015; Huang 등, Oncol Rep 2015; Sabatier 등, Oncotarget 2015, 6(7): 5449-5464). 대조적으로 PD-L2 발현은 보다 제한적이며 주로 수지상 세포에 의해 발현된다(Nakae 등, J Immunol 2006, 177:566-73). T 세포 상에서의 PD-1과 그의 리간드 PD-L1 및 PD-L2의 결찰은 IL-2 및 IFN-γ 생성, 또한 T 세포 수용체 활성화 시 유도된 세포 증식을 억제하는 신호를 전달한다(Carter 등, Eur J Immunol 2002, 32(3):634-43; Freeman 등, J Exp Med 2000, 192(7):1027-34) 메커니즘은 Syk 및 Lck 인산화와 같은 T 세포 수용체 신호전달을 억제하기 위해 SHP-2 또는 SHP-1 포스파타제의 모집을 포함한다(Sharpe 등, Nat Immunol 2007, 8, 239-245). PD-1 신호전달 축의 활성화는 또한 NF-κB 및 AP1 경로의 활성화와 IL-2, IFN-γ 및 TNF와 같은 사이토카인 생산에 필요한, PKC-θ 활성화 루프 인산화를 약화시킨다 (Sharpe 등, Nat Immunol 2007, 8, 239-245; Carter 등, Eur J Immunol 2002, 32(3):634-43; Freeman 등, J Exp Med 2000, 192(7):1027-34).
전임상 동물 연구의 여러 증거는 PD-1과 그 리간드는 면역 반응을 음성적으로 조절한다는 것을 나타낸다. PD-1 결핍 마우스는 루푸스-유사 사구체신염 및 확장성 심근병증을 발생시키는 것으로 나타났다(Nishimura 등, Immunity 1999, 11:141-151; Nishimura 등, Science 2001, 291:319-322). 만성 감염의 LCMV 모델을 사용하여 PD-1/PD-L1 상호작용이 바이러스- 특이적 CD8 T 세포의 이펙터 기능의 활성화, 확장 및 획득을 억제하는 것으로 나타났다(Barber 등, Nature 2006, 439, 682- 7). 함께, 이들 데이터는 T 세포 반응을 증강 또는 "구원"하기 위해 PD-1 매개 억제 신호전달 캐스케이드를 차단하는 치료적 접근의 개발을 뒷받침한다. 따라서, PD-1/PD-L1 단백질/단백질 상호작용을 차단하여 대상체에서 암을 치료하는 새로운 방법이 필요하다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 니볼루맙 (OPDIVO®, BMS-936558, MDX1106, 또는 MK-34775), 펨브롤리주맙 (KEYTRUDA®, MK-3475, SCH-900475, 람브롤리주맙, CAS 등록 번호 1374853-91-4), 아테졸리주맙 (Tecentriq®, CAS 등록 번호 1380723-44-3), 더발루맙, 아벨루맙 (Bavencio®), 세미플리맙, AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, 아테졸리주맙, 아벨루맙, BGB-A317, BMS936559, 더발루맙, JTX-4014, SHR-1210, 피딜리주맙 (CT-011), REGN2810, BGB-108, BGB-A317, SHR-1210 (HR-301210, SHR1210, 또는 SHR-1210), BMS-936559, MPDL3280A, MEDI4736, MSB0010718C, MDX1105-01, 및 미국 특허 번호 7,488,802, 7,943,743, 8,008,449, 8,168,757, 8,217,149, 또는 공개 번호 WO 03042402, WO 2008/156712, WO 2010/089411, WO 2010/036959, WO 2011/066342, WO 2011/159877, WO 2011/082400, WO 2011/161699, WO 2017/070089, WO 2017/087777, WO 2017/106634, WO 2017/112730, WO 2017/192961, WO 2017/205464, WO 2017/222976, WO 2018/013789, WO 2018/04478, WO 2018/119236, WO 2018/119266, WO 2018/119221, WO 2018/119286, WO 2018/119263, WO 2018/119224, WO 2019/191707, 및 WO 2019/217821에 기재된 PD-1/PD-L1 차단제 중 하나 이상, 및 임의의 그의 조합으로부터 선택되는 화합물이다. 선행 특허, 출원 및 간행물의 각각의 개시 내용은 그 전체가 참고로 여기에 포함된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 WO 2018/119266에 개시된 화합물로부터 선택되고 가령, 예를 들어,
(S)-1-((7-클로로-2-(2'-클로로-3'-(5-(((2-하이드록시에틸)아미노)메틸)피콜린아미도)-2-메틸-[1,1'-비페닐]-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피페리딘-2-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(S)-1-((7-클로로-2-(3'-(7-클로로-5-(((S)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)벤조[d]옥사졸-2-일)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(S)-1-((2-(2'-클로로-3'-(1,5-디메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-2-메틸비페닐-3-일)-7-시아노벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(2,2'-디메틸-3'-(4,5,6,7-테트라히드로티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일)비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(5-(2-(디메틸아미노)아세틸)-5,6-디히드로-4H-피롤로[3,4-d]티아졸-2-일)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
1-((7-시아노-2-(3'-(5-(2-(디메틸아미노)아세틸)-5,6-디히드로-4H-피롤로[3,4-d]티아졸-2-일)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피페리딘-4-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 (R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 또한 여기서 화합물 Y로 지칭된다. 화합물 Y의 합성 및 특성화는 WO 2018/119266에 개시되고, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 다음으로부터 선택된다:
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산 히드로브롬산 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산 옥살산 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산 염산 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산 L-타르타르산 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산 말론산 염; 그리고
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산 인산 염.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 WO 2018/119224에 개시된 화합물로부터 선택되고 가령, 예를 들어,
(S)-1-((2-(2'-클로로-3'-(1,5-디메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-2-메틸비페닐-3-일)-7-시아노벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-1-((2-(2'-클로로-3'-(6-이소프로필-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[3,4-c]피리딘-2-일)-2-메틸비페닐-3-일)-7-시아노벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(S)-N-(2-클로로-3'-(5-(2-하이드록시프로필)-1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-2'-메틸비페닐-3-일)-5-이소프로필-1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복스아미드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
cis-4-((2-((2,2'-디클로로-3'-(1-메틸-5-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)메틸)사이클로헥산-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
trans-4-(2-(2-((2,2'-디클로로-3'-(5-(2-하이드록시에틸)-1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)사이클로헥산-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
trans-4-(2-(2-((2-클로로-2'-메틸-3'-(1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)사이클로헥산-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
cis-4-((2-(2-클로로-3'-(5-(2-(에틸(메틸)아미노)아세틸)-5,6-디히드로-4H-피롤로[3,4-d]티아졸-2-일)-2'-메틸비페닐-3-일카바모일)-1-메틸-6,7-디히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-5(4H)-일)메틸)사이클로헥산-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 WO 2019/191707에 개시된 화합물로부터 선택되고 가령, 예를 들어,
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(7-((3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-2-메틸피리도[3,2-d]피리미딘-4-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피페리딘-4-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(7-(((S)-1-하이드록시프로판-2-일아미노)메틸)-2-메틸피리도[3,2-d]피리미딘-4-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(2-(디플루오로메틸)-7-((3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)피리도[3,2-d]피리미딘-4-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피페리딘-4-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(2-(디플루오로메틸)-7-((3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)피리도[3,2-d]피리미딘-4-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)-N,N-디메틸피페리딘-4-카복스아미드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(2-사이클로프로필-7-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)피리도[3,2-d]피리미딘-4-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
(R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-6-메틸-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 WO 2019/217821에 개시된 화합물로부터 선택되고 가령, 예를 들어,
4-(2-(2-((2,2'-디클로로-3'-(1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)비사이클로[2.2.1]헵탄-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
4-(2-(2-((3'-(5-((1H-피라졸-3-일)메틸)-1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-2,2'-디클로로-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)비사이클로[2.2.1]헵탄-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
(R)-4-(2-(2-((2,2'-디클로로-3'-(5-(2-하이드록시프로필)-1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)비사이클로[2.2.1]헵탄-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
4,4'-(((((2,2'-디클로로-[1,1'-비페닐]-3,3'-디일)비스(아잔디일))비스(카보닐))비스(1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-2,5-디일))비스(에탄-2,1-디일))비스(비사이클로[2.2.1]헵탄-1-카카복실산), 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
4-(2-(2-((2-클로로-2'-메틸-3'-(1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)비사이클로[2.2.1]헵탄-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
4-(2-(2-((2,2'-디메틸-3'-(1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)비사이클로[2.2.1]헵탄-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
4-(2-(2-((3'-(5-(trans-4-카복시-4-메틸사이클로헥실)-1-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-카복사미도)-2,2'-디클로로-[1,1'-비페닐]-3-일)카바모일)-1-메틸-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)비사이클로[2.2.1]헵탄-1-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 펨브롤리주맙이다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 니볼루맙이다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 아테졸리주맙이다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 항체 X이다. 본원에 사용된, 항체 X는 인간 PD-1에 결합하는 인간화 IgG4 모노클로날 항체이다. WO2017019846 내 hPD-1 mAb 7(1.2) 참조, 이는 그 전체가 참고로 여기서 포함된다. 성숙한 항체 X 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 아래와 같다. 가변 중쇄(VH) 도메인 및 가변 경쇄(VL) 도메인의 상보성 결정 영역(CDR) 1, 2 및 3은 성숙한 VL 및 VH 서열의 N에서 C-말단까지의 순서로 표시되며 둘다 밑줄과 굵게 표시된다. 하기에 열거된 성숙 중쇄(SEQ ID NO:2) 및 성숙 경쇄(SEQ ID NO:3)로 구성된 항체는 항체 X로 명명된다.
성숙 항체 X 중쇄 (HC)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFT SYWMN WVRQAPGQGLEWIG VIHPSDSETWLDQKFKD RVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EHYGTSPFAY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO:2)
성숙 항체 X 경쇄 (LC)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDNYGMSFMNW FQQKPGQPPKLLIH AASNQGS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC QQSKEVPYT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:3)
항체 X의 가변 중쇄 (VH) 도메인은 다음 아미노산 서열을 가진다:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFT SYWMN WVRQAPGQGLEWIG VIHPSDSETWLDQKFKD RVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EHYGTSPFAY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:4)
항체 X의 가변 경쇄 (VL) 도메인은 다음 아미노산 서열을 가진다:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDNYGMSFMNW FQQKPGQPPKLLIH AASNQGS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC QQSKEVPYT FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:5)
항체 X의 VH CDRs의 아미노산 서열은 하기에 열거된다:
VH CDR1: SYWMN (SEQ ID NO:6);
VH CDR2: VIHPSDSETWLDQKFKD (SEQ ID NO:7);
VH CDR3: EHYGTSPFAY (SEQ ID NO:8)
항체 X의 VL CDRs의 아미노산 서열은 하기에 열거된다:
VL CDR1: RASESVDNYGMSFMNW (SEQ ID NO:9);
VL CDR2: AASNQGS (SEQ ID NO:10); 그리고
VL CDR3: QQSKEVPYT (SEQ ID NO:11).
본원에 사용된, "QD"는 1일1회 대상체에 투여되는 투여량을 의미한다. "QOD"는 격일로 1회 대상체에 투여되는 투여량을 의미한다. "QW"는 주당1회 대상체에 투여되는 투여량을 의미한다. "Q2W"는 격주마다 1회 대상체에 투여되는 투여량을 의미한다. "Q3W"는 3주마다 1회 대상체에 투여되는 투여량을 의미한다. "Q4W"는 4주마다 1회 대상체에 투여되는 투여량을 의미한다.
본원에 사용된, 양, 투여량, 시간적 지속시간 등과 같은 측정가능한 값을 언급할 때 "약"은 ±10%의 변동을 포함하는 것을 의미한다. 특정 실시양태에서, "약"은 명시된 값으로부터 ±5%, ±1% 또는 ±0.1%의 변동 및 이들 사이의 임의의 변동을 포함할 수 있으며, 그러한 변동은 개시된 방법을 수행하기에 적절하기 때문이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 화합물은 화합물의 (S)-거울상이성질체 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 화합물의 (R)-거울상이성질체 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
명확성을 위해, 별개의 실시양태의 맥락에서 설명된 본 발명의 특정 특성이, 또한 단일 실시양태에서 조합으로 제공될 수 있음이 또한 이해된다. 반대로, 간결성을 위해, 단일 실시양태의 맥락에서 설명된 본 발명의 다양한 특성이 또한 별개로 또는 임의의 적합한 하위조합으로 제공될 수 있다.
용어 "n-원"은, 여기서 n은 정수, 전형적으로 고리-형성 원자의 수가 n인 모이어티에서 고리-형성 원자의 수를 기재한다. 예를 들어, 피페리디닐은 6-원 헤테로사이클로알킬 고리의 예이고, 피라졸릴은 5-원 헤테로아릴 고리의 예이고, 피리딜은 6-원 헤테로아릴 고리의 예이고, 1,2,3,4-테트라하이드로-나프탈렌은 10-원 사이클로알킬 기의 예이다.
본원에 사용된 어구 "임의로 치환된"은 비치환 또는 치환된을 의미한다. 치환기는 독립적으로 선택되며, 치환은 임의의 화학적으로 접근 가능한 위치에 있을 수 있다. 본원에 사용된 용어 "치환된"은 수소 원자가 제거되고 치환기에 의해 대체됨을 의미한다. 단일 이가 치환기, 예를 들어, 옥소는 두 개의 수소 원자를 대체할 수 있다. 주어진 원자에서의 치환은 원자가에 의해 제한됨을 이해해야 한다.
본원에 사용된 어구 "각각의 '변수'는 독립적으로 선택된다"는 "각각의 출현에서 '변수'가 선택된다"와 실질적으로 동일함을 의미한다.
정의 전반에 걸쳐, 용어 "Cn-m"은 종점을 포함하는 범위를 나타내며, 여기서 n 및 m은 정수이고 탄소의 수를 나타낸다. 예는 C1-3, C1-4, C1-6, 등을 포함한다.
본원에 사용된, 단독으로 또는 다른 용어와 조합으로 사용된 용어 "Cn-m 알킬"은 직쇄 또는 분지형일 수 있고, n 내지 m 탄소를 갖는 포화 탄화수소 기를 지칭한다. 알킬 모이어티의 예는 화학기, 예컨대 메틸 (Me), 에틸 (Et), n-프로필 (n-Pr), 이소프로필 (iPr), n-부틸, tert-부틸, 이소부틸, sec-부틸; 고급 상동체, 예컨대 2- 메틸-1-부틸, n-펜틸, 3-펜틸, n-헥실, 1,2,2-트리메틸프로필, 등을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 6 개의 탄소 원자, 1 내지 4 개의 탄소 원자, 1 내지 3 개의 탄소 원자, 또는 1 내지 2 개의 탄소 원자를 포함한다.
본원에 사용된, 단독으로 또는 다른 용어와 조합으로 사용된 용어 "Cn-m 알콕시"는 식-O-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 알킬 기는 n 내지 m 탄소를 갖는다. 예시적인 알콕시 기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시 (예를 들어, n-프로폭시 및 이소프로폭시), 부톡시 (예를 들어, n-부톡시 및 tert-부톡시), 등을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에 사용된, 단독으로 또는 다른 용어와 조합으로 사용된 용어 "아릴"은 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭(예를 들어, 2, 3 또는 4개의 융합 고리를 가짐)일 수 있는 방향족 탄화수소 기를 지칭한다. 용어 "Cn-m 아릴" 은 n 내지 m 고리 탄소 원자를 갖는 아릴 기를 지칭한다. 아릴 기는 예를 들어 페닐, 나프틸, 안트라세닐, 페난트레닐, 인다닐, 인데닐 등을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아릴 기는 5 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 아릴 기는 페닐 또는 나프틸이다. 일부 실시양태에서, 아릴은 페닐 (즉, C6 아릴)이다.
본원에 사용된 "할로"는 F, Cl, Br, 또는 I를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 할로는 F, Cl, 또는 Br이다. 일부 실시양태에서, 할로는 F 또는 Cl이다. 일부 실시양태에서, 할로는 F이다. 일부 실시양태에서, 할로는 Cl이다.
본원에 사용된, 단독으로 또는 다른 용어와 조합으로 사용된 용어 "Cn-m 할로알킬"은 동일하거나 상이할 수 있는 1개의 할로겐 원자 내지 2s+1개의 할로겐 원자를 갖는 알킬 기를 지칭하며, 여기서 "s"는는 n 내지 m개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기의 탄소 원자의 수이다. 일부 실시양태에서, 할로알킬 기는 오직 플루오르화된다. 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 개의 탄소 원자를 갖는다. 실시예 할로알킬 기는 CF3, C2F5, CHF2, CH2F, CCl3, CHCl2, C2Cl5 등을 포함한다.
본원에 사용된 "사이클로알킬"은 고리화된 알킬 및 알케닐 기를 포함하는 비방향족 고리형 탄화수소를 지칭한다. 사이클로알킬 기는 모노- 또는 폴리사이클릭(예를 들어, 2개의 융합된 고리를 가짐) 기, 스피로사이클, 및 가교된 고리(예를 들어, 가교된 바이사이클로알킬 기)를 포함할 수 있다. 사이클로알킬 기의 고리-형성 탄소 원자는 옥소 또는 설피도(예를 들어, C(O) 또는 C(S))에 의해 임의로 치환될 수 있다. 또한 사이클로알킬의 정의에는 사이클로알킬 고리에 융합된(즉, 공통의 결합을 갖는) 방향족 고리가 하나 이상 있는 모이어티, 예를 들어 사이클로펜탄, 사이클로헥산 등의 벤조 또는 티에닐 유도체가 포함된다. 융합된 방향족 링을 함유하는 사이클로알킬 기는 융합된 방향족 링의 링-형성 원자를 포함하는 임의의 링-형성 원자를 통해 부착될 수 있다. 사이클로알킬 기는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 고리 형성 탄소(즉, C3-10)를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 사이클로알킬은 C3-10 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 사이클로알킬이다. 일부 실시양태에서, 사이클로알킬은 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬이다. 일부 실시양태에서, 사이클로알킬은 C4-7 모노사이클릭 사이클로알킬이다. 일부 실시양태에서, 사이클로알킬은 C4-10 스피로사이클 또는 가교된 사이클로알킬 (예를 들어, 가교된 비사이클로알킬 기)이다. 사이클로알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥세닐, 사이클로헥사디에닐, 사이클로헵타트리에닐, 노르보르닐, 노르피닐, 노르카르닐, 쿠반, 아다만탄, 비사이클로[1.1.1]펜틸, 비사이클로[2.1.1]헥실, 비사이클로[2.2.1]헵타닐, 비사이클로[3.1.1]헵타닐, 비사이클로[2.2.2]옥타닐, 스피로[3.3]헵타닐, 등을 포함한다. 일부 실시양태에서, 사이클로알킬은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실이다.
본원에 사용된 "헤테로아릴"은 N, O, S, 및 B로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 (예를 들어, 2 융합된 고리를 가지는) 방향족 헤테로사이클을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 헤테로아릴 고리는 N, O, S 및 B로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4 개의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는다. 일부 실시양태에서, 헤테로아릴 모이어티 중의 임의의 고리-형성 N은 N-옥사이드일 수 있다. 일부 실시양태에서, 헤테로아릴은 N, O, S, 및 B로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는 5-10원 모노사이클릭 또는 비사이클릭 헤테로아릴이다. 일부 실시양태에서, 헤테로아릴은 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는 5-10원 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 헤테로아릴이다. 일부 실시양태에서, 헤테로아릴은 N, O, S, 및 B로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는 5-6 모노사이클릭 헤테로아릴이다 일부 실시양태에서, 헤테로아릴은 N, O, 및 S로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는 5-6 모노사이클릭 헤테로아릴이다. 일부 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 3 내지 10, 4 내지 10, 5 내지 10, 5 내지 7, 3 내지 7, 또는 5 내지 6개의 고리 형성 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 1 내지 4 고리-형성 헤테로원자, 1 내지 3 고리- 형성 헤테로원자, 1 내지 2 고리-형성 헤테로원자 또는 1 고리-형성 헤테로원자를 갖는다. 헤테로아릴 기가 하나 초과의 헤테로원자 고리 구성원을 포함하는 경우, 헤테로원자는 동일하거나 상이할 수 있다. 헤테로아릴 기의 예는, 비제한적으로, 티에닐(또는 티오페닐), 푸릴(또는 푸라닐), 피롤릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 피라졸릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 테트라졸릴, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,3,4-트리아졸릴, 1,3,4 -티아디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴 및 1,2-디히드로-1,2-아자보린, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 아졸릴, 트리아졸릴, 티아디아졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤조티오페닐, 벤조푸라닐, 벤즈이속사졸릴 이미다조[1, 2-b]티아졸릴, 푸리닐, 트리아지닐, 티에노[3,2-b]피리디닐, 이미다조[1,2-a]피리디닐, 1,5-나프티리디닐, 1H-피라졸로[4,3-b]피리디닐, 트리아졸로[4,3-a]피리디닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 피라졸로[1,5-a]피리디닐, 인다졸릴, 등을 포함한다.
본원에 사용된 "헤테로사이클로알킬"은 하나 이상의 비방향족 고리(포화 또는 부분 불포화 고리)를 갖는 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 헤테로사이클을 지칭하며, 여기서 헤테로사이클로알킬의 고리-형성 탄소 원자 중 하나 이상이 N, O, S 및 B로부터 선택되는 헤테로원자에 의해 대체되고, 여기서 헤테로사이클로알킬 기의 고리 형성 탄소 원자 및 헤테로원자는 하나 이상의 옥소 또는 설피도(예를 들어, C(O), S(O), C(S), 또는 S(O)2 등)에 의해 임의로 치환될 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기의 고리-형성 탄소 원자 또는 헤테로원자가 하나 이상의 옥소 또는 설파이드에 의해 임의로 치환되는 경우, 상기 기의 O 또는 S는 본원에 명시된 고리 형성 원자의 수에 부가적이다(예를 들어, 1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일은 6원 헤테로사이클로알킬기이고, 여기서 고리 형성 탄소 원자는 옥소기로 치환되고, 6원 헤테로사이클로알킬기는 메틸 그룹). 헤테로사이클로알킬 기는 모노사이클릭 및 폴리사이클릭 (예를 들어, 2 융합된 고리를 가지는) 시스템을 포함한다. 헤테로사이클로알킬에는 모노사이클릭 및 폴리사이클릭 3 내지 10, 4 내지 10, 5 내지 10, 4 내지 7, 5 내지 7, 또는 5 내지 6원 헤테로사이클로알킬 기가 포함된다. 헤테로사이클로알킬 기는 또한 스피로사이클 및 가교 고리(예를 들어, 고리-형성 탄소 원자 중 하나 이상이 N, O, S 및 B로부터 독립적으로 선택된 헤테로원자로 대체된 5 내지 10원 가교 비헤테로사이클로알킬 고리)를 포함할 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 고리-형성 탄소 원자 또는 고리-형성 헤테로원자를 통해 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클로알킬 기는 0 내지 3개의 이중 결합을 함유한다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클로알킬 기는 0 내지 2개의 이중 결합을 함유한다.
또한 헤테로사이클로알킬의 정의에는 비방향족 헤테로사이클릭 고리에 융합된(즉, 공통 결합을 갖는) 하나 이상의 방향족 고리를 갖는 모이어티, 예를 들어 피페리딘, 모르폴린, 아제핀 등의 벤조 또는 티에닐 유도체가 포함된다. 융합된 방향족 고리를 함유하는 헤테로사이클로알킬기는 융합된 방향족 고리의 고리-형성 원자를 포함하는 임의의 고리-형성 원자를 통해 부착될 수 있다.
일부 실시양태에서, 헤테로사이클로알킬 기는 3 내지 10개의 고리-형성 원자, 4 내지 10개의 고리-형성 원자, 3 내지 7개의 고리-형성 원자, 또는 5 내지 6개의 고리-형성 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클로알킬 기는 1 내지 4 헤테로원자, 1 내지 3 헤테로원자, 1 내지 2 헤테로원자 또는 1 헤테로원자을 가진다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클로알킬은 N, O, S 및 B로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 갖고 하나 이상의 산화된 고리 구성원을 갖는 모노사이클릭 4-6원 헤테로사이클로알킬이다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클로알킬은 N, O, S 및 B로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개의 헤테로원자를 갖고 하나 이상의 산화된 고리 구성원을 갖는 모노사이클릭 또는 비사이클릭 5 내지 10원 헤테로사이클로알킬이다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클로알킬은 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개의 헤테로원자를 갖고 하나 이상의 산화된 고리 구성원을 갖는 모노사이클릭 또는 비사이클릭 5 내지 10원 헤테로사이클로알킬이다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클로알킬은 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개의 헤테로원자를 갖고 하나 이상의 산화된 고리 구성원을 갖는 모노사이클릭 5 내지 6원 헤테로사이클로알킬이다.
실시예 헤테로사이클로알킬 기의 예는 피롤리딘-2-온 (또는 2-옥소피롤리디닐), 1,3-이속사졸리딘-2-온, 피라닐, 테트라히드로피란, 옥세타닐, 아제티디닐, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 피페라지닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티에닐, 피페리디닐, 피롤리디닐, 이속사졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 티아졸리디닐, 이미다졸리디닐, 아제파닐, 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린, 벤즈아자펜, 아자비사이클로[3.1.0]헥사닐, 디아자비사이클로[3.1.0]헥사닐, 옥소비사이클로[2.1.1]헥사닐, 아자비사이클로[2.2.1]헵타닐, 디아자비사이클로[2.2.1]헵타닐, 아자비사이클로[3.1.1]헵타닐, 디아자비사이클로[3.1.1]헵타닐, 아자비사이클로[3.2.1]옥타닐, 디아자비사이클로[3.2.1]옥타닐, 옥소비사이클로[2.2.2]옥타닐, 아자비사이클로[2.2.2]옥타닐, 아자아다만타닐, 디아자아다만타닐, 옥소-아다만타닐, 아자스피로[3.3]헵타닐, 디아자스피로[3.3]헵타닐, 옥소-아자스피로[3.3]헵타닐, 아자스피로[3.4]옥타닐, 디아자스피로[3.4]옥타닐, 옥소-아자스피로[3.4]옥타닐, 아자스피로[2.5]옥타닐, 디아자스피로[2.5]옥타닐, 아자스피로[4.4]노나닐, 디아자스피로[4.4]노나닐, 옥소-아자스피로[4.4]노나닐, 아자스피로[4.5]데카닐, 디아자스피로[4.5]데카닐, 디아자스피로[4.4]노나닐, 옥소-디아자스피로[4.4]노나닐, 옥소-디히드로피리다지닐, 옥소-2,6-디아자스피로[3.4]옥타닐, 옥소헥사히드로피롤로[1,2-a]피라지닐, 3-옥소피페라지닐, 옥소-피롤리디닐, 옥소-피리디닐 등을 포함한다. 예를 들어, 헤테로사이클로알킬 기는 다음 기 (N-메틸 치환이 있거나 없는)을 포함한다:
Figure pct00012
.
본원에 사용된, "Co-p 사이클로알킬-Cn-m 알킬-"은 식 사이클로알킬-알킬렌-의 기를 지칭하며, 여기서 사이클로알킬은 o 내지 p개의 탄소 원자를 갖고 알킬렌 연결기는 n 내지 m개의 탄소 원자를 갖는다.
본원에 사용된 "Co-p 아릴-Cn-m 알킬-"은 식 아릴-알킬렌-의 기를 지칭하며, 여기서 아릴은 o 내지 p개의 탄소 원자를 갖고 알킬렌 연결기는 n 내지 m개의 탄소 원자를 갖는다.
본원에 사용된, "헤테로아릴-Cn-m 알킬-"은 식 헤테로아릴-알킬렌-의 기를 지칭하며, 여기서 알킬렌 연결기는 n 내지 m개의 탄소 원자를 갖는다.
본원에 사용된 "헤테로사이클로알킬-Cn-m 알킬-"은 식 헤테로사이클로알킬-알킬렌-의 기를 지칭하며, 여기서 알킬렌 연결기는 n 내지 m개의 탄소 원자를 갖는다.
특정 위치에서, 정의 또는 실시양태는 특정 고리 (예를 들어, 아제티딘 고리, 피리딘 고리, 등)를 지칭한다. 달리 지시되지 않는 한, 이들 고리는 원자의 원자가를 초과하지 않는 한 임의의 고리 구성원에 부착될 수 있다. 예를 들어, 아제티딘 고리는 고리의 임의의 위치에 부착될 수 있는 반면, 피리딘-3-일 고리는 3-위치에 부착된다.
본원에 사용된 용어 "옥소"는 이가 치환기로서, 탄소에 부착될 때 카르보닐 기 (예를 들어, C=O 또는 C(O))를 형성하거나, 질소 또는 황 헤테로원자에 부착될 때 니트로소, 설피닐 또는 설포닐 기를 형성하는 산소 원자 (즉, =O)를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "독립적으로 선택된"은 변수 또는 치환기의 각각의 출현이 적용 가능한 목록으로부터 각각의 출현에서 독립적으로 선택됨을 의미한다.
본원에 기재된 화합물은 비대칭일 수 있다 (예를 들어, 하나 이상의 입체중심을 가짐). 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체와 같은 모든 입체 이성질체는 달리 표시되지 않는 한 의도된다. 비대칭으로 치환된 탄소 원자를 포함하는 본 개시의 화합물은 광학 활성 또는 라세미 형태로 단리될 수 있다. 광학 불활성 출발 물질로부터 광학 활성 형태를 제조하는 방법은 당해 분야에 공지이며, 예컨대 라세미 혼합물의 분할 또는 입체선택적 합성에 의한 것이다. 올레핀의 많은 기하 이성질체, C=N 이중 결합 등이 본원에 기재된 화합물에 또한 존재할 수 있고, 그러한 모든 안정한 이성질체가 본 발명에서 고려된다. 본 개시의 화합물의 시스 및 트랜스 기하 이성질체가 기재되며 이성질체의 혼합물 또는 분리된 이성질체 형태로서 단리될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물은 (R)-배열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물은 (S)-배열을 갖는다. 본원에 제공된 식 (예를 들어, 식 (I), (II), 등)은 화합물의 입체이성질체를 포함한다.
화합물의 라세미 혼합물의 분할은 당해 분야에 공지인 임의의 다수의 방법에 의해 수행될 수 있다. 예시적인 방법은 광학적으로 활성인 염-형성 유기 산인 카이랄 분할 산을 사용하는 분별 재결정화를 포함한다. 분별 재결정화 방법을 위해 적합한 분할제는, 예를 들어, 광학적으로 활성인 산 예컨대 타르타르산, 디아세틸타르타르산, 디벤조일타르타르산, 만델산, 말산, 락트산의 D 및 L 형태 또는 다양한 광학적으로 활성인 캄포설폰산, 예컨대 β-캄포설폰산이다. 분별 재결정화 방법에 적합한 다른 분할제는 입체이성질적으로 순수한 형태의 α-메틸벤질 아민 (예를 들어, S 및 R 형태, 또는 부분입체이성질적으로 순수한 형태), 2-페닐글리시놀, 노르에페드린, 에페 드린, N-메틸에페드린, 사이클로헥실에틸아민, 1,2-디아미노사이클로헥산, 등을 포함한다.
라세미 혼합물의 분할은 또한 광학적으로 활성인 분할제 (예를 들어, 디니트로벤조일페닐글라이신)로 채워진 컬럼에서 용리에 의해 수행될 수 있다. 적합한 용리 용매 조성물은 당업자에 의해 결정될 수 있다.
본원에 제공된 화합물은 또한 호변이성질체 형태를 포함한다. 호변이성질체 형태는 양성자의 수반되는 이동과 함께 단일 결합과 인접한 이중 결합의 교환으로부터 기인한다. 호변이성질체 형태는 동일한 실험식 및 총 전하를 갖는 이성질성 양성자화 상태인 양성자성 호변이성질체를 포함한다. 예시적인 양성자성 호변이성질체는 케톤 - 엔올 쌍, 아미드 - 이미드산 쌍, 락탐 - 락팀 쌍, 엔아민 - 이민 쌍, 및 양성자가 헤테로사이클릭 시스템의 둘 이상의 위치를 차지할 수 있는 고리형 형태, 예를 들어, 1H- 및 3H-이미다졸, 1H-, 2H- 및 4H- 1,2,4-트리아졸, 1H- 및 2H- 이소인돌, 2-하이드록시피리딘 및 2-피리돈 및 1H- 및 2H-피라졸을 포함한다. 호변이성질체 형태는 평형에 있거나 적절한 치환에 의해 하나의 형태로 입체적으로 고정될 수 있다.
모든 화합물, 및 그의 약제학적으로 허용 가능한 염은 물 및 용매와 같은 다른 물질과 함께 발견될 수 있거나 (예를 들어, 수화물 및 용매화물) 단리될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화합물의 제조는, 예를 들어, 원하는 반응의 촉매작용 또는 산 부가염과 같은 염 형태의 형성에 영향을 미치기 위해 산 또는 염기의 첨가를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 화합물, 또는 그의 염이 실질적으로 단리된다. "실질적으로 단리된"은 화합물이 형성되거나 검출된 환경으로부터 적어도 부분적으로 또는 실질적으로 분리됨을 의미한다. 부분 분리는, 예를 들어, 본원에 제공된 화합물이 풍부한 조성물을 포함할 수 있다. 실질적인 분리는 본원에 제공된 화합물, 또는 그의 염의 중량으로 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 99%를 포함하는 조성물을 포함할 수 있다. 화합물 및 이들의 염 단리 방법은 당해 분야에서 일상적이다.
본원에 사용된 용어 "화합물"은 묘사된 구조의 모든 입체이성질체, 기하 이성질체, 호변이성질체 및 동위원소를 포함함을 의미한다. 하나의 특정한 호변이성질체로서 명칭 또는 구조에 의해 본원에서 식별되는 화합물은 달리 명시되지 않는 한 다른 호변이성질체 형태를 포함하도록 의도된다.
어구 "약학적으로 허용 가능한"은, 건전한 의학적 판단 내에서, 합리적인 이익/위험 비율에 따라, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이, 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 제제를 지칭하도록 본원에서 사용된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 본원에 사용된 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 기존의 산 또는 염기 모이어티를 그의 염 형태로 전환하여 모 화합물이 변형된 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 약제학적으로 허용 가능한 염의 예는, 아민과 같은 염기성 잔기의 무기산 또는 유기산 염; 카르복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염; 등을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다. 본 개시의 약제학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들어, 비독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비독성 염을 포함한다. 본 개시의 약제학적으로 허용 가능한 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 포함하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 그러한 염은 물 또는 유기 용매, 또는 둘의 혼합물 중에서 이들 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조될 수 있고; 일반적으로, 에테르, 에틸 아세테이트, 알코올 (예를 들어, 메탄올, 에탄올, 이소-프로판올, 또는 부탄올) 또는 아세토니트릴 (ACN)과 같은 비수성 매체가 바람직하다. 적절한 염의 목록이 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 and Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)에서 발견되고, 이들 각각은 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
염을 포함한 본원에 기재된 화합물은 공지된 유기 합성 기술을 사용하여 제조될 수 있고 임의의 수많은 가능한 합성 경로에 따라 합성될 수 있다.
본원에 기재된 화합물을 제조하기 위한 반응은 유기 합성 분야의 숙련가에 의해 용이하게 선택될 수 있는 적합한 용매에서 수행될 수 있다. 적합한 용매는 반응이 수행되는 온도, 예를 들어 용매의 동결 온도에서 용매의 비등 온도 범위일 수 있는 온도에서 출발 물질(반응물), 중간체 또는 생성물과 실질적으로 비반응성일 수 있다. 주어진 반응은 하나의 용매 또는 하나 이상의 용매의 혼합물에서 수행될 수 있다. 특정 반응 단계에 따라, 특정 반응 단계에 적합한 용매는 당업자에 의해 선택될 수 있다.
본원에 기재된 화합물의 제조는 다양한 화학 기의 보호 및 탈보호를 포함할 수 있다. 보호 및 탈보호의 필요성 및 적절한 보호기의 선택은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 보호기의 화학적 성질은 예를 들어 T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (1999)에서 찾을 수 있으며, 이는 그 전체가 참고로 여기서 포함된다.
반응은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 따라 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 생성물 형성은 핵자기 공명 분광법(예를 들어, 1H 또는 13C), 적외선 분광법, 분광광도법(예를 들어, UV-가시광선), 질량 분광법과 같은 분광학적 수단에 의해 또는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 액체 크로마토그래피-질량 분광법(LCMS) 또는 박층 크로마토그래피(TLC)와 같은 크로마토그래피 방법에 의해 모니터링될 수 있다. 화합물은 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) ("Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization" Karl F. Blom, 등 J. Combi. Chem. 2004, 6(6), 874-883, 이는 그 전체가 참고로 여기서 포함된다) 및 순상 실리카 크로마토그래피를 포함하는 다양한 방법에 의해 당업자에 의해 정제될 수 있다.
본원에 기재된 화합물은 예를 들어 A2A/A2B를 비롯한 다양한 GPCR 중 하나 이상의 활성을 조절할 수 있다. 용어 "조절하다"는 A2A/A2B 계열의 하나 이상의 구성원의 활성을 증가 또는 감소시키는 능력을 의미한다. 따라서, 본원에 기재된 화합물은 A2A/A2B를 본원에 기재된 화합물 또는 조성물 중 임의의 하나 이상과 접촉시킴으로써 A2A/A2B를 조절하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 A2A 및 A2B 중 하나 또는 둘 모두의 억제제로서 작용할 수 있다. 추가 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 조절량의 본원에 기재된 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여함으로써 수용체의 조절을 필요로 하는 개체에서 A2A/A2B의 활성을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조절은 억제이다.
암세포 성장 및 생존이 다중 신호전달 경로에 의해 영향을 받는다는 점을 감안할 때, 본 발명은 약물 내성 돌연변이를 특징으로 하는 질병 상태를 치료하기 위해 유용한다. 또한, 활성을 조절하는 GPCR에서 상이한 선호도를 나타내는 상이한 GPCR 억제제가 조합으로 사용될 수 있다. 이 접근법은 다중 신호전달 경로를 표적으로 하여 질병 상태를 치료하기 위해 매우 효율적임을 증명할 수 있고, 세포에서 발생하는 약물 내성 가능성을 줄이고, 질병 치료의 독성을 줄일 수 있다.
본 화합물이 결합 및/또는 조절(예를 들어, 억제)하는 GPCR은 A2A/A2B 패밀리의 임의의 구성원을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 하나 초과의 화합물은 하나의 GPCR(예를 들어, A2A)의 활성을 억제하기 위해 사용된다
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 1종 초과의 화합물은 2종 이상의 GPCR(예를 들어, A2A 및 A2B)과 같은 1종 초과의 GPCR을 억제하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 화합물은 하나의 GPCR(예를 들어, A2A 또는 A2B)의 활성을 억제하기 위해 또 다른 GPCR 길항제와 조합하여 사용된다.
본원에 기재된 A2A/A2B의 억제제는 선택적일 수 있다. "선택적"은 화합물이 적어도 하나의 다른 GPCR과 비교하여 각각 더 큰 친화성 또는 효능으로 GPCR에 결합하거나 이를 억제함을 의미한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 A2A 또는 A2B의 선택적 억제제이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 A2A의 선택적 억제제(예를 들어, A2B에 비해)이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 A2B의 선택적 억제제(예를 들어, A2A에 비해)이다. 일부 실시양태에서, 선택성은 적어도 약 2배, 5배, 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 50배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 약 500배 이상 또는 약 1000배 이상일 수 있다. 선택성은 당업계에서 일상적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 선택성은 각각의 GPCR에 대한 생화학적 친화성에서 시험될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물의 선택성은 특정 A2A/A2B GPCR 활성과 관련된 세포 분석에 의해 결정될 수 있다.
본원에 사용된, 용어 "접촉"은 시험관내 시스템 또는 생체내 시스템에서 표시된 모이어티를 함께 모으는 것을 지칭한다. 예를 들어, A2A/A2B를 본원에 기재된 화합물과 "접촉시키는 것"은 본 발명의 화합물을 A2A/A2B를 갖는 개인 또는 환자, 예컨대 인간에게 투여하는 것뿐만 아니라, 예를 들어 화합물을 도입하는 것을 포함한다. A2A/A2B를 함유하는 세포 또는 정제된 제제를 함유하는 샘플 내로 도입시키는 것을 포함한다.
본원에 사용된, 용어 "개체" 또는 "환자"는 상호교환적으로 사용되며 포유동물, 바람직하게는 마우스, 래트, 기타 설치류, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말 또는 영장류, 그리고 가장 바람직하게는 인간을 포함하는 임의의 동물을 지칭한다.
본원에 사용된, 어구 "치료적 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의가 추구하는, 조직, 시스템, 동물, 개체 또는 인간에서의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 활성 화합물 또는 약제학적 제제의 양을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 (1) 질병 예방; 예를 들어, 질병, 상태 또는 장애에 걸리기 쉬울 수 있지만 아직 질병의 병리 또는 증상을 경험하거나 나타내지 않는 개인의 질병, 상태 또는 장애 예방; (2) 질환 억제; 예를 들어, 질환, 병태 또는 장애의 병리 또는 증상을 경험하거나 나타내는 개체의 질환, 병태 또는 장애 억제 (즉, 병리 및/또는 증상의 추가적인 발달 저 지); 그리고 (3) 질환 개선; 예를 들어, 질환, 병태 또는 장애의 병리 또는 증상을 경험하거나 나타내는 개체의 질환, 병태 또는 장애 개선 (즉, 병리 및/또는 증상 역전), 예컨대 질환의 중증도 감소 중 하나 이상을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 질병을 억제하거나 개선하는 것을 지칭한다.
투여량 및 투여
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 1000 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 5 mg 내지 약 250 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 10 mg 내지 약 100 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 5 mg, 약 10 mg, 약 15 mg, 약 20 mg, 약 25 mg, 약 30 mg, 약 35 mg, 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg, 약 70 mg, 약 75 mg, 약 80 mg, 약 85 mg, 약 90 mg, 약 95 mg, 약 100 mg, 약 105 mg, 약 110 mg, 약 115 mg, 약 120 mg, 약 125 mg, 약 130 mg, 약 135 mg, 약 140 mg, 약 145 mg, 약 150 mg, 약 155 mg, 약 160 mg, 약 165 mg, 약 170 mg, 약 175 mg, 약 180 mg, 약 185 mg, 약 190 mg, 약 195 mg, 약 200 mg, 약 205 mg, 약 210 mg, 약 215 mg, 약 220 mg, 약 225 mg, 약 230 mg, 약 235 mg, 약 240 mg, 약 245 mg, 약 250 mg, 약 255 mg, 약 260 mg, 약 265 mg, 약 270 mg, 약 275 mg, 약 280 mg, 약 285 mg, 약 290 mg, 약 295 mg, 약 300 mg, 약 305 mg, 약 310 mg, 약 315 mg, 약 320 mg, 약 325 mg, 약 330 mg, 약 335 mg, 약 340 mg, 약 345 mg, 약 350 mg, 약 355 mg, 약 360 mg, 약 365 mg, 약 370 mg, 약 375 mg, 약 380 mg, 약 385 mg, 약 390 mg, 약 395 mg, 약 400 mg, 약 405 mg, 약 410 mg, 약 415 mg, 약 420 mg, 약 425 mg, 약 430 mg, 약 435 mg, 약 440 mg, 약 445 mg, 약 450 mg, 약 455 mg, 약 460 mg, 약 465 mg, 약 470 mg, 약 475 mg, 약 480 mg, 약 485 mg, 약 490 mg, 약 495 mg, 약 500 mg, 약 505 mg, 약 510 mg, 약 515 mg, 약 520 mg, 약 525 mg, 약 530 mg, 약 535 mg, 약 540 mg, 약 545 mg, 약 550 mg, 약 555 mg, 약 560 mg, 약 565 mg, 약 570 mg, 약 575 mg, 약 580 mg, 약 585 mg, 약 590 mg, 약 595 mg, 약 600 mg, 약 605 mg, 약 610 mg, 약 615 mg, 약 620 mg, 약 625 mg, 약 630 mg, 약 635 mg, 약 640 mg, 약 645 mg, 약 650 mg, 약 655 mg, 약 660 mg, 약 665 mg, 약 670 mg, 약 675 mg, 약 680 mg, 약 685 mg, 약 690 mg, 약 695 mg, 약 700 mg, 약 705 mg, 약 710 mg, 약 715 mg, 약 720 mg, 약 725 mg, 약 730 mg, 약 735 mg, 약 740 mg, 약 745 mg, 약 750 mg, 약 755 mg, 약 760 mg, 약 765 mg, 약 770 mg, 약 775 mg, 약 780 mg, 약 785 mg, 약 790 mg, 약 795 mg, 약 800 mg, 약 805 mg, 약 810 mg, 약 815 mg, 약 820 mg, 약 825 mg, 약 830 mg, 약 835 mg, 약 840 mg, 약 845 mg, 약 850 mg, 약 855 mg, 약 860 mg, 약 865 mg, 약 870 mg, 약 875 mg, 약 880 mg, 약 885 mg, 약 890 mg, 약 895 mg, 약 900 mg, 약 905 mg, 약 910 mg, 약 915 mg, 약 920 mg, 약 925 mg, 약 930 mg, 약 935 mg, 약 940 mg, 약 945 mg, 약 950 mg, 약 955 mg, 약 960 mg, 약 965 mg, 약 970 mg, 약 975 mg, 약 980 mg, 약 985 mg, 약 990 mg, 약 995 mg, 및 약 1000 mg 로부터 선택되는 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg 범위의 투여량, 또는 그 사이의 임의의 투여량 값으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 1 mg 내지 약 100 mg 범위의 투여량, 또는 그 사이의 임의의 투여량 값으로 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 1일1회, 격일로, 주당1회 또는 그 사이의 임의의 시간 간격으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 1일1회 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 격일로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 주당1회 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 각각의 투여량은 단일 1일 1회 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여량은 단일 1일 1회 경구 투여량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 1000 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 5 mg 내지 약 250 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 10 mg 내지 약 100 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 5 mg, 약 10 mg, 약 15 mg, 약 20 mg, 약 25 mg, 약 30 mg, 약 35 mg, 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg, 약 70 mg, 약 75 mg, 약 80 mg, 약 85 mg, 약 90 mg, 약 95 mg, 약 100 mg, 약 105 mg, 약 110 mg, 약 115 mg, 약 120 mg, 약 125 mg, 약 130 mg, 약 135 mg, 약 140 mg, 약 145 mg, 약 150 mg, 약 155 mg, 약 160 mg, 약 165 mg, 약 170 mg, 약 175 mg, 약 180 mg, 약 185 mg, 약 190 mg, 약 195 mg, 약 200 mg, 약 205 mg, 약 210 mg, 약 215 mg, 약 220 mg, 약 225 mg, 약 230 mg, 약 235 mg, 약 240 mg, 약 245 mg, 약 250 mg, 약 255 mg, 약 260 mg, 약 265 mg, 약 270 mg, 약 275 mg, 약 280 mg, 약 285 mg, 약 290 mg, 약 295 mg, 약 300 mg, 약 305 mg, 약 310 mg, 약 315 mg, 약 320 mg, 약 325 mg, 약 330 mg, 약 335 mg, 약 340 mg, 약 345 mg, 약 350 mg, 약 355 mg, 약 360 mg, 약 365 mg, 약 370 mg, 약 375 mg, 약 380 mg, 약 385 mg, 약 390 mg, 약 395 mg, 약 400 mg, 약 405 mg, 약 410 mg, 약 415 mg, 약 420 mg, 약 425 mg, 약 430 mg, 약 435 mg, 약 440 mg, 약 445 mg, 약 450 mg, 약 455 mg, 약 460 mg, 약 465 mg, 약 470 mg, 약 475 mg, 약 480 mg, 약 485 mg, 약 490 mg, 약 495 mg, 약 500 mg, 약 505 mg, 약 510 mg, 약 515 mg, 약 520 mg, 약 525 mg, 약 530 mg, 약 535 mg, 약 540 mg, 약 545 mg, 약 550 mg, 약 555 mg, 약 560 mg, 약 565 mg, 약 570 mg, 약 575 mg, 약 580 mg, 약 585 mg, 약 590 mg, 약 595 mg, 약 600 mg, 약 605 mg, 약 610 mg, 약 615 mg, 약 620 mg, 약 625 mg, 약 630 mg, 약 635 mg, 약 640 mg, 약 645 mg, 약 650 mg, 약 655 mg, 약 660 mg, 약 665 mg, 약 670 mg, 약 675 mg, 약 680 mg, 약 685 mg, 약 690 mg, 약 695 mg, 약 700 mg, 약 705 mg, 약 710 mg, 약 715 mg, 약 720 mg, 약 725 mg, 약 730 mg, 약 735 mg, 약 740 mg, 약 745 mg, 약 750 mg, 약 755 mg, 약 760 mg, 약 765 mg, 약 770 mg, 약 775 mg, 약 780 mg, 약 785 mg, 약 790 mg, 약 795 mg, 약 800 mg, 약 805 mg, 약 810 mg, 약 815 mg, 약 820 mg, 약 825 mg, 약 830 mg, 약 835 mg, 약 840 mg, 약 845 mg, 약 850 mg, 약 855 mg, 약 860 mg, 약 865 mg, 약 870 mg, 약 875 mg, 약 880 mg, 약 885 mg, 약 890 mg, 약 895 mg, 약 900 mg, 약 905 mg, 약 910 mg, 약 915 mg, 약 920 mg, 약 925 mg, 약 930 mg, 약 935 mg, 약 940 mg, 약 945 mg, 약 950 mg, 약 955 mg, 약 960 mg, 약 965 mg, 약 970 mg, 약 975 mg, 약 980 mg, 약 985 mg, 약 990 mg, 약 995 mg, 및 약 1000 mg로부터 선택되는 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg 범위의 투여량, 또는 그 사이의 임의의 투여량 값으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 유리 염기 기준으로 약 1 mg 내지 약 100 mg 범위의 투여량, 또는 그 사이의 임의의 투여량 값으로 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 약 200 mg 내지 약 1000 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 약 200 mg, 약 225 mg, 약 250 mg, 약 275 mg, 약 300 mg, 약 325 mg, 약 350 mg, 약 375 mg, 약 400 mg, 약 425 mg, 약 450 mg, 약 475 mg, 약 500 mg, 약 525 mg, 약 550 mg, 약 575 mg, 약 600 mg, 약 625 mg, 약 650 mg, 약 675 mg, 약 700 mg, 약 725 mg, 약 750 mg, 약 775 mg, 약 800 mg, 약 825 mg, 약 850 mg, 약 875 mg, 약 900 mg, 약 925 mg, 약 950 mg, 약 975 mg 또는 약 1000 mg의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 1일1회, 격일로, 주당1회 또는 그 사이의 임의의 시간 간격으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 1일1회 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 격일로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 주당1회 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 각각의 투여량은 단일 1일 1회 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여량은 단일 1일 1회 경구 투여량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 2주마다, 3주마다 또는 4주마다 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 매달 또는 분기별로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 대상체에 정맥내 투여로 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 1 mg/kg Q2W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 3 mg/kg Q2W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 3 mg/kg Q4W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 10 mg/kg Q2W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 10 mg/kg Q4W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 200 mg Q3W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 250 mg Q3W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 375 mg Q3W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 500 mg Q4W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 750 mg Q4W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, PD-1/PD-L1의 억제제는 항체 X이다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 250 mg 내지 약 내지 약 850 mg의 투여량에서 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 375 mg 내지 약 내지 약 850 mg의 투여량에서 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 450 mg 내지 약 내지 약 850 mg의 투여량에서 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 500 mg 내지 약 내지 약 750 mg의 투여량에서 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 500 mg의 투여량에서 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 750 mg의 투여량에서 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 대상체에 4주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 대상체에 정맥내 투여로 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 1 mg/kg Q2W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 3 mg/kg Q2W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 3 mg/kg Q4W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 10 mg/kg Q2W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 10 mg/kg Q4W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 200 mg Q3W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 250 mg Q3W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 375 mg Q3W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 500 mg Q4W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 750 mg Q4W의 투여량에서 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 항체 X인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여되고, 여기서 A2A/A2B의 억제제는 1일1회 또는 격일로 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 약 100 mg 내지 약 1000 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 항체 X인 PD-1/PD-L1의 억제제;
여기서 A2A/A2B의 억제제는 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여되고, 여기서 A2A/A2B의 억제제는 1일1회 또는 격일로 투여되고; 그리고
항체 X는 약 100 mg 내지 약 1000 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 약 375 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 500 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 750 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 펨브롤리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 펨브롤리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 아테졸리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 아테졸리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) (R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 (화합물 Y)인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) (R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 (화합물 Y)인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 항체 X인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 항체 X인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제는 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여되고, 여기서 A2A/A2B의 억제제는 1일1회 또는 격일로 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 약 100 mg 내지 약 1000 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 항체 X인 PD-1/PD-L1의 억제제;
여기서 A2A/A2B의 억제제는 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여되고, 여기서 A2A/A2B의 억제제는 1일1회 또는 격일로 투여되고; 그리고
항체 X는 약 100 mg 내지 약 1000 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 항체 X인 PD-1/PD-L1의 억제제;
여기서 A2A/A2B의 억제제는 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여되고, 여기서 A2A/A2B의 억제제는 1일1회 또는 격일로 투여되고; 그리고
항체 X는 약 100 mg 내지 약 1000 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 항체 X는 약 375 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 500 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 X는 약 750 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여된다.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 펨브롤리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 펨브롤리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 펨브롤리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 펨브롤리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 아테졸리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 아테졸리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 아테졸리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) 아테졸리주맙인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) (R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 (화합물 Y)인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) (R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 (화합물 Y)인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) (R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 (화합물 Y)인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, 대상체에서 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법이 여기서 제공된다:
(i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
(ii) (R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 (화합물 Y)인 PD-1/PD-L1의 억제제.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제 및 PD-1/PD-L1의 억제제는 동시에 투여된다.
일부 실시양태에서, A2A/A2B의 억제제 및 PD-1/PD-L1의 억제제는 순차적으로 투여된다.
PD-1/PD-L1의 억제제가 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 경우, 이는 대상체, 예를 들어 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 인간 대상체에게 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 본원에 논의된 방법 및 투여량은 항체 X를 포함한 모든 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 적용할 수 있다. 많은 적용에서 투여 경로는 정맥내 주사 또는 주입(IV), 피하 주사(SC), 복강내(IP), 또는 근육내 주사 중 하나이다. 관절 내 전달을 사용하는 것도 가능한다. 다른 비경구 투여 방식도 사용할 수 있다. 이러한 모드의 예는 다음을 포함한다: 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 기관내, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 경막외 및 흉골내 주사. 어떤 경우 투여가 경구일 수 있다.
항체 또는 그의 항원 결합 단편의 투여 경로 및/또는 방식은 또한 예를 들어, 단층 촬영 영상화를 사용하여 예를 들어 종양을 시각화하여 대상체를 모니터링함으로써 개별 사례에 맞춰질 수 있다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 고정 용량으로, 또는 mg/kg 용량으로 투여될 수 있다. 용량은 또한 항-PD-1 항체에 대한 항체의 생성을 감소시키거나 피하도록 선택될 수 있다. 투여 요법은 원하는 반응, 예를 들어 치료 반응 또는 조합 치료 효과를 제공하도록 조정된다. 일반적으로, 항-PD-1 항체(및 임의로 제2 작용제)의 용량은 대상체에게 생체이용 가능한 양의 작용제를 제공하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 0.1-100 mg/kg, 0.5-100 mg/kg, 1 mg/kg -100 mg/kg, 0.5-20 mg/kg, 0.1-10 mg/kg, 또는 1-10 mg/kg 범위의 용량을 투여할 수 있다. 다른 용량도 사용할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체를 사용한 치료가 필요한 대상체는 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 또는 40 mg/kg의 용량으로 항체를 투여받는다.
조성물은 약 1 mg/mL to 100 mg/ml 또는 약 10 mg/mL to 100 mg/ml 또는 약 50 내지 250 mg/mL 또는 약 100 내지 150 mg/ml 또는 약 100 내지 250 mg/ml의 항-PD-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 투여량 단위 형태 또는 "고정 투여량"은 치료될 대상체에 대한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하고; 각 단위는 필요한 약제학적 담체 및 임의로 다른 제제와 함께 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 활성 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다. 단일 또는 다중 투여가 주어질 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 항체는 연속 주입을 통해 투여될 수 있다. 예시적인 고정 용량은 375 mg, 500 mg 및 750 mg을 포함한다.
항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편 용량은 예를 들어, 적어도 2회 용량, 3회 용량, 5회 용량, 10회 이상, 예를 들어 1일 1회 또는 2회, 또는 주당 약 1 내지 4회, 또는 바람직하게는 매주, 격주로 (2주마다), 3주마다, 매월, 예를 들어 약 1 내지 12주 동안, 바람직하게는 2 내지 8주, 보다 바람직하게는 약 3 내지 7주, 훨씬 더 바람직하게는 약 4, 5, 또는 6주 동안의 용량을 포함하기에 충분한 기간(치료 과정)에 걸쳐 주기적인 간격으로 투여될 수 있다. 대상체를 효과적으로 치료하기 위해 필요한 투여량 및 시기에 영향을 미칠 수 있는 요인은 예를 들어 질병 또는 장애의 중증도, 제제, 전달 경로, 이전 치료, 피험자의 일반적인 건강 및/또는 연령 및 기타 존재하는 질병을 포함한다. 더욱이, 치료 유효량의 화합물로 대상체를 치료하는 것은 단일 치료를 포함할 수 있거나, 바람직하게는 일련의 치료를 포함할 수 있다.
약제학적 조성물은 본원에 기재된 물질의 "치료학적 유효량"을 포함할 수 있다. 그러한 효과적인 양은 투여 물질의 효과, 또는 하나 초과의 물질이 사용된다면 물질의 조합적 효과에 기초하여 결정될 수 있다. 치료적으로 효과적인 양의 물질은 또한 인자 가령 상기 질환 상태, 나이, 성별, 및 개체 중량, 및 개체내 소정의 반응, 예를 들어, 적어도 하나의 장애 파라미터 완화 또는 상기 장애의 적어도 하나의 증상 완화를 유도하는 상기 화합물의 능력에 따라서 다양할 수 있다. 치료적으로 효과적인 양은 또한 조성물의 독성 또는 치명적 효과가 치료적으로 유익한 효과를 능가하는 것이다.
약제학적 제제
약제로서 사용되는 경우, 본 개시의 화합물은 약제학적 조성물 형태로 투여될 수 있다. 이들 조성물은 제약 분야에서 공지인 방식으로 제조될 수 있고, 국소 또는 전신 치료가 바람직한지 여부 및 치료될 부위에 따라 다양한 경로에 의해 투여될 수 있다. 투여는 국소 (경피, 표피, 안구 포함 및 비강 내, 질 및 직장 전달을 포함하여 점막으로), 폐 (예를 들어, 분무기(nebulizer)에 의한 것을 포함하는, 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 취입에 의해; 기관 내 또는 비강 내), 경구 또는 비경구일 수 있다. 비경구 투여는 정맥 내, 동맥 내, 피하, 복강 내 근육 내 또는 주사 또는 주입; 또는 두개 내, 예를 들어, 경막 내 또는 뇌실 내, 투여를 포함한다. 비경구 투여는 단일 볼루스 투여의 형태일 수 있거나, 예를 들어, 연속 관류 펌프에 의한 것일 수 있다. 국소 투여를 위한 약제학적 조성물 및 제제는 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 젤, 점적제, 좌약, 스프레이, 액체 및 분말을 포함할 수 있다. 통상적인 약제학적 담체, 수성, 분말 또는 유성 기제, 증점제 등이 필요하거나 바람직할 수 있다.
본 개시는 또한 활성 성분으로서, 본 개시의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염을, 하나 이상의 약 제학적으로 허용 가능한 담체 (부형제)와 조합으로 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 국소 투여에 적합하다. 본 개시의 조성물 제조에서, 활성 성분은 전형적으로 부형제와 혼합되거나, 부형 제에 의해 희석되거나, 예를 들어, 캡슐, 사쉐(sachet), 종이, 또는 기타 용기의 형태로 그러한 담체 내에 포함된다. 부형제가 희석제 역할을 하는 경우, 이는 활성 성분의 비히클, 담체 또는 매질로 작용하는 고체, 반고체, 또는 액체 물질일 수 있다. 따라서, 조성물은 정제, 환제, 분말, 로젠지, 사쉐, 카쉐(cachet), 엘릭서, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸 (고체로서 또는 액체 매질 중에서), 예를 들어, 최대 10중량%의 활성 화합물을 포함하는 연고, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌약, 멸균 주사 용액 및 멸균 포장 분말의 형태일 수 있다.
제제 제조에서, 활성 화합물은 다른 성분과 조합하기 전에 적절한 입자 크기를 제공하도록 분쇄될 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 불용성인 경우, 이는 200 메쉬 미만의 입자 크기로 분쇄될 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 수용성인 경우, 입자 크기는 제제에서 실질적으로 균일한 분포를 제공하도록, 예를 들어, 약 40 메쉬까지의 분쇄에 의해 조정될 수 있다.
본 개시의 화합물은 정제 제제 및 다른 제제 유형에 적절한 입자 크기를 얻기 위해 습식 분쇄와 같은 공지 분쇄 절차를 사용하여 분쇄될 수 있다. 본 개시의 화합물의 미분된 (나노미립자) 제제는 당해 분야에서 공지인 공정에 의해 제조될 수 있고, 예를 들어, 국제 출원 제WO 2002/000196호 참조.
적합한 부형제의 일부 예는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 녹말, 아카시아 검, 칼슘 포스페이트, 알지네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 미세결정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽 및 메틸 셀룰로스를 포함한다. 제제는 추가로 다음을 포함할 수 있다: 윤활제, 예컨대 활석, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유; 습윤제; 유화제 및 현탁제; 보존제, 예컨대 메틸- 및 프로필하이드록시-벤조에이트; 감미제; 그리고 풍미제. 본 개시의 조성물은 당해 분야에 공지인 절차를 사용하여 환자에게 투여한 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다.
조성물은 단위 투여 형태로 제제화될 수 있다. 용어 "단위 투여 형태"는 인간 대상 및 다른 포유동물을 위한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하고, 각각의 단위는 적합한 약제학적 부형제와 함께 원하는 치료 효과가 발생하도록 계산된 소정량의 활성 물질을 포함한다.
정제와 같은 고체 조성물 제조를 위해, 주요 활성 성분은 약제학적 부형제와 혼합되어 본 개시의 화합물의 균일 혼합물을 포함하는 고체 예비제제 조성물을 형성한다. 이러한 예비제제 조성물을 균질한 것으로 언급하는 경우, 활성 성분은 전형적으로 조성물 전체에 고르게 분산되어 조성물이 정제, 환제 및 캡슐와 같이 동등하게 효과적인 단위 투여 형태로 쉽게 세분될 수 있다. 이 고체 예비제제는 이후 상기 기재된 유형의 단위 투여 형태로 다시 나뉜다.
본 개시의 정제 또는 환제는 장기간 작용의 이점을 제공하는 투여 형태를 제공하도록 코팅되거나 달리 제제화될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 환제는 내부 투여 및 외부 투여 성분을 포함할 수 있으며, 후자는 전자를 덮는 외피 형태이다. 두 성분은 위장에서 붕해에 저항하는 역할을 하고 내부 성분이 온전히 십이지장으로 전달되거나 방출이 지연되도록 하는 장용층에 의해 분리될 수 있다. 다양한 물질이 그러한 장용 층 또는 코팅에 사용될 수 있고, 그러한 물질은 다수의 고분자 산 및 고분자 산과 셸락, 세틸 알코올 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 물질의 혼합물을 포함한다.
본 개시의 화합물 및 조성물이 경구로 또는 주사에 의해 투여하기 위해 혼입될 수 있는 액체 형태는 수용액, 적 절하게 향이 첨가된 시럽, 수성 또는 유성 현탁액, 및 면실유, 참기름, 코코넛유, 또는 땅콩유와 같은 식용유를 포함하는 향이 첨가된 에멀젼, 그뿐만 아니라 엘릭서 및 유사한 약제학적 비히클을 포함한다.
흡입 또는 취입을 위한 조성물은 약제학적으로 허용 가능한, 수성 또는 유기 용매, 또는 그의 혼합물 중의 용액 및 현탁액, 및 분말을 포함한다. 액체 또는 고체 조성물은 전술한 바와 같이 적합한 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 국소 또는 전신 효과를 위해 경구 또는 비강 호흡 경로에 의해 투여된다. 조성물은 불활성 가스의 사용에 의해 분무될 수 있다. 분무된 용액은 분무 장치로부터 직접 호흡될 수 있거나 분무 장치가 페이스 마스크, 텐트, 또는 간헐적 양압 호흡 기계에 부착될 수 있다. 용액, 현탁액, 또는 분말 조성물은 적절한 방식으로 제제를 전달하는 장치로부터 경구로 또는 비강으로 투여될 수 있다.
국소 제제는 하나 이상의 통상적인 담체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 연고는 물 및 예를 들어, 액체 파라핀, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 프로필렌 글리콜, 화이트 바셀린, 등으로부터 선택된 하나 이상의 소수성 담체를 포함할 수 있다. 크림의 담체 조성물은 글리세롤 및 하나 이상의 다른 성분, 예를 들어, 글리세린모노스 테아레이트, PEG-글리세린모노스테아레이트 및 세틸스테아릴 알코올과 조합된 물을 기반으로 할 수 있다. 젤은 이소프로필 알코올 및 물을 사용하여, 적합하게는, 예를 들어, 글리세롤, 하이드록시에틸 셀룰로스, 등과 같은 다른 성분과 조합하여 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 국소 제제는 적어도 약 0.1, 적어도 약 0.25, 적어 도 약 0.5, 적어도 약 1, 적어도 약 2 또는 적어도 약 5 wt %의 본 개시의 화합물을 포함한다. 국소 제제는, 예를 들어, 100 g의 튜브에 적합하게 포장될 수 있고, 이는 선택 적응증, 예를 들어, 건선 또는 다른 피부 상태의 치료를 위한 지시와 임의로 관련된다.
환자에게 투여되는 화합물 또는 조성물의 양은 투여되는 대상, 예방 또는 치료와 같은 투여의 목적, 환자의 상태, 투여 방식 등에 따라 달라질 것이다. 치료적 적용에서, 조성물은 이미 질환을 앓고 있는 환자에게 질환 및 그의 합병증의 증상을 치유하거나 적어도 부분적으로 저지하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 유효 용량은 치료되는 질환 상태뿐만 아니라 환자의 질환의 중증도, 연령, 체중 및 일반적 상태 등과 같은 요인에 따라 담당 임상의의 판단에 의해 달라질 것이다.
환자에게 투여되는 조성물은 전술한 약제학적 조성물의 형태일 수 있다. 이들 조성물은 통상적인 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있거나, 멸균 여과될 수 있다. 수용액은 그대로 사용하기 위해 포장되거나, 동결건조될 수 있으며, 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균된 수성 담체와 조합된다. 화합물 제제의 pH는 전형적으로 3 내지 11, 더욱 바람직하게는 5 내지 9, 가장 바람직하게는 7 내지 8일 것이다. 전술한 부형제, 담체 또는 안정화제의 특정 사용은 약제학적 염의 형성을 야기할 것임이 이해될 것이다.
본 개시의 화합물의 치료적 투여량은, 예를 들어, 치료가 이루어지는 특정 용도, 화합물의 투여 방식, 환자의 건강 및 상태, 및 처방 의사의 판단에 따라 달라질 수 있다. 약제학적 조성물 중의 본 개시의 화합물의 비율 또는 농도는 투여량, 화학적 특징 (예를 들어, 소수성), 및 투여 경로를 포함하는 다수의 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 화합물은 비경구 투여를 위해 약 0.1 내지 약 10% w/v의 화합물을 포함하는 수성 생리학적 버퍼 용액으로 제공될 수 있다.
본 개시의 조성물은 화학요법제, 스테로이드, 항-염증성 화합물, 또는 면역억제제와 같은 하나 이상의 추가적인 약제학적 제제를 추가로 포함할 수 있고, 이들의 예는 본원에 나열된다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 임플란트 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제제와 같은 빠른 방출에 대해 화합물을 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체 적합성 중합체를 사용할 수 있다. 이러한 제제를 제조하는 많은 방법이 특허를 받았거나 일반적으로 알려져 있다. 예를 들어, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1978) 참조.
고체 종양 및 암
본 개시의 치료 방법 및 요법을 사용하여 치료할 수 있는 암의 예는, 비제한적으로, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 부위의 암, 위암, 고환암, 자궁암, 나팔관 암종, 자궁내막암, 자궁내막암, 자궁경부암, 질암, 외음부암, 호지킨병, 비호지킨림프종, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직육종, 암 요도, 음경암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함하는 만성 또는 급성 백혈병, 소아 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요도암, 신우암, 중추신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유도된 암을 포함하는 환경적으로 유도된 암, 및 상기 암의 조합을 포함한다. 본 개시의 방법은 또한 전이성 암, 특히 PD-L1을 발현하는 전이성 암의 치료에 유용하다.
일부 실시양태에서, 본 개시의 방법으로 치료가능한 암은 흑색종(예를 들어, 전이성 악성 흑색종), 신장암(예를 들어, 투명 세포 암종), 전립선암(예를 들어, 호르몬 불응성 전립선 선암종), 유방암, 결장암, 폐암(예를 들어, 비소세포폐암 및 소세포폐암), 편평세포 두경부암, 요로상피암(예를 들어, 방광) 및 미세부수체 불안정성이 높은 암(MSIhigh)을 포함한다. 추가로, 본 개시는 그의 성장이 개시내용의 방법을 사용하여 억제될 수 있는 난치성 또는 재발성 악성종양을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시의 방법으로 치료가능한 암은, 비제한적으로, 고형 종양 (예를 들어, 전립선암, 결장암, 식도암, 자궁내막암, 난소암, 자궁암, 신장암, 간암, 췌장암, 위암, 유방암, 폐암, 두경부암, 갑상선암, 교모세포종, 육종, 방광암 등), 혈액암(림프종, 급성림프모구성백혈병 등의 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 외투 세포 림프종, 비호지킨 림프종(재발성 또는 불응성 NHL 및 재발성 여포성 림프종 포함), 호지킨 림프종 또는 다발성 골수종) 및 상기 암의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시의 방법으로 치료가능한 암은, 비제한적으로, 담관암, 담관암, 삼중 음성 유방암, 횡문근육종, 소세포 폐암, 평활근육종, 간세포 암종, 유잉 육종, 뇌암, 뇌종양, 성상세포종, 신경모세포종, 신경섬유종, 기저세포암종, 연골육종, 상피양육종, 안구암, 나팔관암, 위장관암, 위장관 기질 종양, 털이 많은 세포 백혈병, 장암, 섬세포암, 구강암, 구강암, 인후암, 후두암, 입술암, 중피종, 목암, 비강암, 안암, 안 흑색종, 골반암, 직장암, 신세포암, 침샘암, 부비동암, 척추암, 혀암, 관암, 요도암 및 요도암을 포함한다.
일부 실시양태에서, 암은 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암), 흑색종, 췌장암, 유방암, 전립선암, 간암, 결장암, 자궁내막암, 방광암, 피부암, 자궁암, 난소암, 두경부암, 갑상선암, 신장암, 위암 및 육종으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 외투 세포 림프종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 만성 골수성 백혈병, 골수섬유증, 원발성 골수섬유증, 진성적혈소판증가증 후/본태성 혈소판증가증 골수섬유증, 본태성 혈소판증가증 후 골수섬유증 및 진성적혈구증가증 후 골수섬유증으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 자궁내막암, 폐암, 신세포암종, 요로상피암종, 방광암, 유방암, 및 췌장암으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 암은 방광암, 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암(NSCLC), 소세포 폐암 또는 폐 전이), 흑색종(예를 들어, 전이성 흑색종), 유방암, 자궁경부암, 난소암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 식도암, 전립선암, 신장암, 피부암, 갑상선암, 간암, 자궁암, 두경부암, 신세포암, 자궁내막암, 항문 암, 담관암종, 구강암, 비흑색종 피부암 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 전립선암은 전이성 거세-저항성 전립선암종 (mCRPC)이다.
일부 실시양태에서, 결장직장암은 결 장직장암종 (CRC)이다.
일부 실시양태에서, 암은 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암), 흑색종, 췌장암, 유방암, 두경부 편평 세포 암종, 전립선암, 간암, 대장암, 자궁내막암, 방광 암, 피부암, 자궁의 암, 신장암, 위암, 또는 육종이다. 일부 실시양태에서, 육종은 아스킨 종양, 포도형 육종, 연골육종, 유잉 육종, 악성 혈관내피종, 악성 신경초종, 골육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 엽상 낭성육종, 융기 피부섬유육종, 데스모이드 종양, 결합조직형성 소원형 세포 종양, 상피성 육종, 골외성 연골육종, 골외성 골육종, 섬유육종, 위장관 기질 종양 (GIST), 혈관주위세포 종, 혈관육종, 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 림프관육종, 림프육종, 악성 말초 신경초 종양 (MPNST), 신 경섬유육종, 횡문근육종, 활막 육종, 또는 미분화 다형성 육종이다.
일부 실시양태에서, 암은 중피종 또는 부신암종이다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 장애는 중피종이다. 일부 실시양태에서, 암은 부신암종이다.
MDSC (골수 유래 억제 세포)는 골수 계통 (골수 줄기 세포로부터 기원한 세포군)으로부터의 면역 세포의 이종 그룹이다. MDSC는 변경된 조혈작용의 결과로서 만성 감염 및 암과 같은 병리학적 상황에서 강하게 확장된다. MDSC는 다른 골수성 세포 유형과 구별되며 이는 면역자극 특성보다는 강한 면역억제 활성을 보유한다. 다른 골수성 세포와 유사하게, MDSC는 T 세포, 수지상 세포, 대식세포 및 자연 살해 세포를 포함하는 다른 면역 세포 유형과 상호작용하여 이들의 기능을 조절한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 등은 높은 기저 수준의 대식세포 및/또는 MDSC 침윤이 있는 고형 종양을 포함하여, 높은 침윤의 MDSC가 있는 암 조직 (예를 들어, 종양)과 관련된 방법에서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합 요법은 PD-1 또는 PD-L1을 발현하는 종양 또는 종양 침윤 림프구(TIL)를 갖는 암 조직(예를 들어, 종양)과 관련된 방법에서 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 암은 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC), 비-소세포 폐암 (NSCLC), 결장직장암 (예를 들어, 결장암), 흑색종, 난소암, 방광 암, 신세포 암, 간 암, 또는 간세포 암이다.
일부 실시양태에서, 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 암은 암은 흑색종, 자궁내막암, 폐암, 신장암, 방광암, 유방암, 췌장암, 결장암으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 암은 자궁내막암, 항문암 및 담관암종으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 암은 종양 미세환경에서 높은 아데노신 수준을 나타내는 종양이다. 이러한 종양은 유전자 발현 시그니처에 의해 강화되거나 조직 비특이적 알칼리성 포스파타제(즉, TNAP 및 PAP)를 비롯한 CD73 및/또는 기타 알칼리성 포스파타제의 높은 발현 수준에 의해 강화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 암은 결장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 자궁내막암이다. 일부 실시양태에서, 자궁내막암은 자궁내막양 선암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 폐암은 비-소세포성 폐암 및 소세포성 폐암으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 신세포 암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 요로상피암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 방광 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암이다. 일부 실시양태에서, 유방암은 삼중-음성 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌장암이다. 일부 실시양태에서, 췌장암은 췌장관 선암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 육종이다. 일부 실시양태에서, 육종은 아스킨 종양, 포도형 육종, 연골육종, 유잉 육종, 악성 혈관내피종, 악성 신경초종, 골육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 엽상 낭성육종, 융기 피부섬유육종, 데스모이드 종양, 결합조직형성 소원형 세포 종양, 상피성 육종, 골외성 연골육종, 골외성 골육종, 섬유육종, 위장관 기질 종양 (GIST), 혈관주위세포 종, 혈관육종, 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 림프관육종, 림프육종, 악성 말초 신경초 종양 (MPNST), 신 경섬유육종, 횡문근육종, 활막 육종, 및 미분화 다형성 육종으로부터 선택된다.
표지 화합물 및 분석 방법
본 개시는 본 개시의 동위원소-표지 화합물을 추가로 포함한다. "동위원소적으로" 또는 "방사성-표지" 화합물은 하나 이상의 원자가 자연에서 전형적으로 발견되는(즉, 자연적으로 발생하는) 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체되거나 치환되는 본 개시의 화합물이다. 본 개시의 화합물에 혼입될 수 있는 적합한 방사성핵종은 2H (중수소에 대해 D로도 기재됨), 3H (삼중수소에 대해 T로도 기재됨), 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 18F, 35S, 36Cl, 82Br, 75Br, 76Br, 77Br, 123I, 124I, 125I 및 131I를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 본 개시의 화합물 중의 하나 이상의 수소 원자는 중수소 원자에 의해 대체될 수 있다 (예를 들어, -CH3가 -CD3로 치환된 것과 같이, 여기서 기재된 화합물의 알킬 기의 하나 이상의 수소 원자가 중 수소 원자로 임의로 치환될 수 있다).
본원에 제시된 화합물의 하나 이상의 구성 원자는 천연 또는 비천연 풍부도의 원자의 동위원소로 대체 또는 치 환될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물은 적어도 하나의 중수소 원자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 화합물은 둘 이상의 중수소 원자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 화합물은 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 또는 1-6 개의 중수소 원자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 화합물의 모든 수소 원자는 중수소 원자에 의해 대체되거나 치환될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물의 탄소 원자에 부착된 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 수소 원자는 임의로 중수소 원자로 대체된다.
동위원소를 유기 화합물에 포함시키는 합성 방법은 당해 분야에 공지이다 (Deuterium Labeling in Organic Chemistry by Alan F. Thomas (New York, N.Y., Appleton-Century-Crofts, 1971; The Renaissance of H/D Exchange by Jens Atzrodt, Volker Derdau, Thorsten Fey and Jochen Zimmermann, Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 7744-7765; The Organic Chemistry of Isotopic Labelling by James R. Hanson, Royal Society of Chemistry, 2011). 동위원소 표지된 화합물은 NMR 분광법, 대사 실험, 및/또는 분석과 같은 다양한 연구에서 사용될 수 있다.
중수소와 같은 더 무거원 동위원소를 사용한 치환은, 더 큰 대사 안정성, 예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건으로 인한 특정한 치료적 이점을 제공할 수 있고, 따라서 일부 상황에서 바람직할 수 있다 (예를 들어, A. Kerekes et. al. J. Med. Chem. 2011, 54, 201-210; R. Xu et. al. J. Label Compd. Radiopharm. 2015, 58, 308-312 참조). 특히, 하나 이상의 대사 부위에서의 치환은 하나 이상의 치료적 이점을 제공할 수 있다.
본 방사성-표지 화합물에 혼합되는 방사성핵종은 방사성-표지 화합물의 특정 적용에 의존할 것이다. 예를 들어, 시험관 내 A2A/A2B 표지 및 경쟁 분석을 위해, 3H, 14C, 82Br, 125I, 131I 또는 35S를 포함하는 화합물이 유용할 수 있다. 방사성-영상화 적용을 위해 11C, 18F, 125I, 123I, 124I, 131I, 75Br, 76Br 또는 77Br가 유용할 수 있다.
"방사성-표지" 또는 "표지 화합물"은 적어도 하나의 방사성핵종이 혼입된 화합물인 것으로 이해된다. 일부 실시양태에서, 방사성핵종은 3H, 14C, 125I, 35S 및 82Br로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시는 방사성-동위원소를 본 개시의 화합물에 혼입시키기 위한 합성 방법을 추가로 포함할 수 있다. 방사성-동위원소를 유기 화합물에 혼입시키기 위한 합성 방법은 당해 분야에서 공지이며, 당업자는 본 개시의 화합물에 적용 가능한 방법을 쉽게 인식할 것이다.
항체 생산 방법
항체는 박테리아 또는 진핵 세포에서 생산될 수 있다. Fab와 같은 일부 항체는 대장균 (E. coli) 세포와 같은 박테리아 세포에서 생성될 수 있다. 항체는 또한 형질전환된 세포주(예를 들어, CHO, 293E, COS)와 같은 진핵 세포에서 생산될 수 있다. 또한, 항체(예를 들어, scFv's)는 피치아(Pichia)(예를 들어, Powers 등, J Immunol Methods. 251:123-35 (2001) 참조), 한세눌라(Hanseula) 또는 사카로마이세스 (Saccharomyces)와 같은 효모 세포에서 발현될 수 있다. 목적하는 항체를 생산하기 위해 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 구축하고 발현 벡터에 도입한 후 적합한 숙주 세포에서 발현시킨다. 표준 분자 생물학 기술은 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질전환체를 선택하고, 숙주 세포를 배양하고, 항체를 회수하기 위해 사용된다.
항체가 박테리아 세포(예를 들어, 대장균 (E. coli))에서 발현되는 경우 발현 벡터는 박테리아 세포에서 벡터의 증폭을 허용하는 특성을 가져야 한다. 또한, JM109, DH5α, HB101 또는 XL1-Blue와 같은 대장균 (E. coli)을 숙주로 사용하는 경우 대장균 (E. coli)에서 효율적인 발현을 허용할 수 있는 lacZ 프로모터(Ward 등, 341:544-546(1989)), araB 프로모터(Better 등, Science, 240:1041-1043 (1988)), 또는 T7 프로모터와 같은 프로모터가 있어야 한다. 이러한 벡터의 예는 예를 들어 M13-시리즈 벡터, pUC-시리즈 벡터, pBR322, pBluescript, pCR-Script, pGEX-5X-1(Pharmacia), "QIAexpress system"(QIAGEN), pEGFP 및 pET(이 발현 벡터를 사용하는 경우, 숙주는 바람직하게는 T7 RNA 중합효소를 발현하는 BL21임)를 포함한다. 발현 벡터는 항체 분비를 위한 신호 서열을 포함할 수 있다. 대장균 (E. coli)의 주변 세포질로의 생산을 위해, pelB 신호 서열(Lei 등, J. Bacteriol., 169:4379 (1987))이 항체 분비를 위한 신호 서열로서 사용될 수 있다. 박테리아 발현의 경우, 염화칼슘 방법 또는 전기천공법을 사용하여 발현 벡터를 박테리아 세포에 도입할 수 있다.
항체가 CHO, COS 및 NIH3T3 세포와 같은 동물 세포에서 발현되는 경우, 발현 벡터는 이들 세포에서의 발현에 필요한 프로모터, 예를 들어 SV40 프로모터(Mulligan 등, Nature, 277:108 (1979)), MMLV-LTR 프로모터, EF1α 프로모터(Mizushima 등, Nucleic Acids Res., 18:5322 (1990)), 또는 CMV 프로모터를 포함한다. 면역글로불린 또는 그의 도메인을 암호화하는 핵산 서열에 더하여, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포(예를 들어, 복제 기점) 및 선택 가능한 마커 유전자에서 벡터의 복제를 조절하는 서열과 같은 추가 서열을 보유할 수 있다. 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다(예를 들어, 미국 특허 번호 4,399,216, 4,634,665 및 5,179,017 참조). 예를 들어, 일반적으로 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 내성을 부여한다. 선택 가능한 마커가 있는 벡터의 예는 pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV 및 pOP13을 포함한다.
한 실시양태에서, 항체는 포유동물 세포에서 생산된다. 항체를 발현하기 위한 예시적인 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO 세포)(예를 들어 Kaufman and Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601 621에 기재된 DHFR 선택 가능한 마커와 함께 사용되는, Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220에 기재된 dhfr - CHO 세포 포함), 인간 배아 신장 293 세포(예를 들어, 293, 293E, 293T), COS 세포, NIH3T3 세포, 림프구 세포주, 예를 들어, NS0 골수종 세포 및 SP2 세포, 및 트랜스제닉 동물, 예를 들어 트랜스제닉 포유동물로부터의 세포을 포함한다. 예를 들어, 세포는 유방 상피 세포이다.
항체 발현을 위한 예시적인 시스템에서, 항-PD-1 항체(예를 들어, 항체 X)의 항체 중쇄 및 항체 경쇄 둘 다를 코딩하는 재조합 발현 벡터가 인산칼슘-매개 형질감염에 의해 dhfr - CHO 세포 내로 도입된다. 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자는 각각 인핸서/프로모터 조절 요소(예를 들어, SV40, CMV, 아데노바이러스로부터 유래된 CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소)에 작동적으로 연결되어 유전자의 높은 수준의 전사를 유도한다. 재조합 발현 벡터는 또한 메토트렉세이트 선택/증폭을 사용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포의 선택을 허용하는 DHFR 유전자를 운반한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포는 항체 중쇄 및 경쇄의 발현이 가능하도록 배양되고 항체는 배양 배지로부터 회수된다.
항체는 또한 트렌스제닉 동물에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,849,992호는 트렌스제닉 포유동물의 유선에서 항체를 발현시키는 방법을 기술하고 있다. 우유-특이적 프로모터 및 관심 항체를 코딩하는 핵산 및 분비를 위한 신호 서열을 포함하는 이식유전자가 구축된다. 그러한 트렌스제닉 포유동물의 암컷에 의해 생산된 우유는 그 안에서 분비되는 관심 항체를 포함한다. 항체는 우유에서 정제하거나 일부 응용 분야에서는 직접 사용할 수 있다. 여기서 기재된 핵산 중 하나 이상을 포함하는 동물이 또한 제공된다.
본 개시의 항체는 숙주 세포의 내부 또는 외부(예를 들어, 배지)로부터 단리되고 실질적으로 순수하고 균질한 항체로서 정제될 수 있다. 항체 정제에 일반적으로 사용되는 분리 및 정제 방법이 항체의 분리 및 정제를 위해 사용될 수 있으며, 특별한 방법에 제한되지 않는다. 항체는 예를 들어 컬럼 크로마토그래피, 여과, 한외여과, 염석, 용매 침전, 용매 추출, 증류, 면역침전, SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 등전점 집속, 투석 및 재결정화를 적절히 선택하고 조합함으로써 단리 및 정제될 수 있다. 크로마토그래피는 예를 들어 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 겔 여과, 역상 크로마토그래피 및 흡착 크로마토그래피를 포함한다(Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak 등, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996). 크로마토그래피는 HPLC 및 FPLC와 같은 액상 크로마토그래피를 사용하여 수행할 수 있다. 친화성 크로마토그래피에 사용되는 컬럼은 단백질 A 컬럼과 단백질 G 컬럼을 포함한다. 단백질 A 컬럼을 사용하는 컬럼의 예는 Hyper D, POROS 및 Sepharose FF(GE Healthcare Biosciences)을 포함한다. 본 개시은 또한 이러한 정제 방법을 사용하여 고도로 정제된 항체를 포함한다.
항체 X와 같은 항체는 예를 들어 인용된 아미노산 서열을 코딩하는 합성 유전자를 제조 및 발현하거나 인간 생식계열 유전자를 돌연변이시켜 인용된 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 제공함으로써 제조될 수 있다. 또한, 이 항체 및 다른 항-PD-1 항체는 예를 들어 다음 방법 중 하나 이상을 사용하여 얻을 수 있다.
인간화 항체는 항원 결합에 직접적으로 관여하지 않는 Fv 가변 영역의 서열을 인간 Fv 가변 영역의 동등한 서열로 대체함으로써 생성될 수 있다. 인간화 항체를 생성하는 일반적인 방법은 Morrison, S. L., Science, 229:1202-1207 (1985), Oi 등, BioTechniques,4:214 (1986), 및, 및 US 5,585,089; US 5,693,761; US 5,693,762; US 5,859,205; 그리고 US 6,407,213에 의해 제공된다. 이러한 방법은 중쇄 또는 경쇄 중 적어도 하나로부터 면역글로불린 Fv 가변 영역의 전부 또는 일부를 코딩하는 핵산 서열을 단리, 조작 및 발현하는 것을 포함한다. 이러한 핵산의 공급원은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 상기 기재된 바와 같이 미리 결정된 표적에 대한 항체를 생성하는 하이브리도마, 생식계열 면역글로불린 유전자, 또는 합성 작제물로부터 수득될 수 있다. 인간화 항체를 코딩하는 재조합 DNA는 적절한 발현 벡터로 클로닝될 수 있다.
예를 들어, 인간 생식계열 서열은 Tomlinson, I.A. 등, J. Mol. Biol., 227:776-798 (1992); Cook, G. P. 등, Immunol. Today, 16: 237-242 (1995); Chothia, D. 등, J. Mol. Bio. 227:799-817 (1992); 그리고 Tomlinson 등, EMBO J., 14:4628-4638 (1995)에 개시된다. V BASE 디렉토리는 인간 면역글로불린 가변 영역 서열의 포괄적인 디렉토리를 제공한다(Tomlinson, I.A. 등 MRC Center for Protein Engineering, Cambridge, UK에 의해 편집됨). 이들 서열은 예를 들어 프레임워크 영역 및 CDR에 대한 인간 서열의 공급원으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,300,064에 기재된 바와 같이 컨센서스 인간 프레임워크 영역이 또한 사용될 수 있다.
항체를 인간화하기 위한 다른 방법이 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 다른 방법은 항체의 3차원 구조, 결합 결정기에 3차원적으로 근접한 프레임워크 위치, 및 면역원성 펩티드 서열을 설명할 수 있다. 예를 들어, WO 90/07861; 미국 특허 번호 5,693,762; 5,693,761; 5,585,089; 5,530,101; 그리고 6,407,213; Tempest 등 (1991) Biotechnology 9:266-271 참조. 또 다른 방법은 "인간화"라고 하며, 예를 들어 U.S. 2005-008625에 설명되어 있다.
항체는 인간 Fc 영역, 예를 들어 야생형 Fc 영역 또는 하나 이상의 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 불변 영역은 항체의 특성을 변형시키기 위해 (예를 들어, 다음 중 하나 이상을 증가 또는 감소시키기 위해: Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과기 세포 기능, 또는 보체 기능) 변형, 예를 들어, 돌연변이화된다. 예를 들어, 인간 IgG1 불변 영역은 하나 이상의 잔기, 예를 들어 잔기 234 및 237(Kabat 넘버링에 기초함) 중 하나 이상에서 돌연변이화될 수 있다. 항체는 이펙터 기능, 예를 들어 Fc 수용체 결합 및 보체 활성화를 감소 또는 변경하는 중쇄의 CH2 영역에 돌연변이를 가질 수 있다. 예를 들어, 항체는 미국 특허 번호 5,624,821 및 5,648,260에 기술된 것과 같은 돌연변이를 가질 수 있다. 항체는 또한 당업계에 개시된 바와 같이 IgG4의 힌지 영역에서의 돌연변이와 같이 면역글로불린의 2개의 중쇄 사이의 이황화 결합을 안정화시키는 돌연변이를 가질 수 있다(예를 들어, Angal 등 (1993) Mol. Immunol. 30: 105-08). 또한, 예를 들어 U.S. 2005-0037000 참조.
항-PD-1 항체는 전장 항체의 형태, 또는 항-PD-1 항체의 저분자량 형태(예를 들어, 생물학적 활성 항체 단편 또는 미니바디), 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fd, dAb, scFv, 및 sc(Fv)2의 형태일 수 있다. 본 개시에 포함되는 다른 항-PD-1 항체는 VH 또는 VL과 같은 단일 가변 사슬, 또는 그의 생물학적 활성 단편을 함유하는 단일 도메인 항체 (sdAb)를 포함한다. 예를 들어, Moller 등, J. Biol. Chem., 285(49): 38348-38361 (2010); Harmsen 등, Appl. Microbiol. Biotechnol., 77(1):13-22 (2007); 미국 2005/0079574 및 Davies 등 (1996) Protein Eng., 9(6):531-7 참조. 전체 항체와 마찬가지로 sdAb는 특정 항원에 선택적으로 결합할 수 있다. 분자량이 12-15kDa에 불과한 sdAb는 일반 항체보다 훨씬 작고 Fab 단편 및 단일-사슬 가변 단편보다 훨씬 작다.
항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 그의 하나 이상의 산성 변이체의 혼합물을 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 산성 변이체(들)의 양은 약 80%, 70%, 60%, 60%, 50%, 40%, 30%, 30%, 20%, 10%, 5% 또는 1% 미만이다. 적어도 하나의 탈아미드화 부위를 포함하는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물이 또한 제공되며, 여기서 조성물의 pH는 예를 들어, 항-PD-1 항체의 적어도 약 90%가 탈아미드화되지 않도록 (즉, 항체의 약 10%미만이 탈아미드화됨) 약 5.0 내지 약 6.5이다. 특정 실시양태에서, 항체의 약 5%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 탈아미드화된다. pH는 5.0 내지 6.0, 예컨대 5.5 또는 6.0일 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물의 pH는 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4 또는 6.5이다.
"산성 변이체"는 관심 폴리펩티드보다 더 산성인 관심 폴리펩티드의 변이체(예를 들어, 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 결정됨)이다. 산성 변이체의 예는 탈아미드화된 변이체이다.
폴리펩타이드 분자의 "탈아미드화된" 변이체는 원래 폴리펩타이드의 하나 이상의 아스파라긴 잔기(들)가 아스파르테이트로 전환된, 즉 중성 아미드 측쇄가 전체적으로 산성 특성을 갖는 잔기로 전환된 폴리펩타이드이다.
항-PD-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물과 관련하여 본원에 사용된 용어 "혼합물"은 목적하는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 하나 또는 더 산성인 그의 변이체의 존재를 의미한다. 산성 변이체는 소량의 다른 산성 변이체와 함께 주로 탈아미드화된 항-PD-1 항체를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 탈아미드화를 제거하도록 돌연변이된 항체의 결합 친화도(KD), 온-레이트(KD on) 및/또는 오프-레이트(KD off)는 야생형 항체의 것과 유사하며, 예를 들어, 약 5배, 2배, 1배(100%), 50%, 30%, 20%, 10%, 5%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 차이를 가진다.
항체 단편
항체 단편(예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Facb 및 Fv)은 온전한 항체의 단백질 분해에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 전체 항체를 파파인, 펩신 또는 플라스민과 같은 효소로 처리하여 얻을 수 있다. 전체 항체의 파파인 소화는 F(ab)2 또는 Fab 단편을 생성한다; 전체 항체의 펩신 분해는 F(ab')2 또는 Fab'를 생성한다; 전체 항체의 플라스민 소화는 Facb 단편을 생성한다.
대안적으로, 항체 단편은 재조합적으로 생산될 수 있다. 예를 들어, 관심 항체 단편을 코딩하는 핵산을 구축하고, 발현 벡터에 도입하고, 적합한 숙주 세포에서 발현시킬 수 있다. 예를 들어, Co, M.S. 등, J. Immunol., 152:2968-2976 (1994); Better, M. and Horwitz, A.H., Methods in Enzymology, 178:476-496 (1989); Plueckthun, A. and Skerra, A., Methods in Enzymology, 178:476-496 (1989); Lamoyi, E., Methods in Enzymology, 121:652-663 (1989); Rousseaux, J. 등, Methods in Enzymology, (1989) 121:663-669 (1989); 그리고 Bird, R.E. 등, TIBTECH, 9:132-137 (1991)) 참조. 항체 단편은 대장균 (E. coli)에서 발현 및 분비될 수 있으므로 이러한 단편을 쉽게 대량 생산할 수 있다. 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 대장균 (E. coli)으로부터 직접 회수되고 화학적으로 결합되어 F(ab)2 단편을 형성할 수 있다(Carter 등, Bio/Technology, 10:163-167 (1992)). 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 분리될 수 있다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하는 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab') 2 단편은 미국 특허 번호 제5,869,046호에 기재되어 있다.
미니바디
항-PD-1 항체의 미니바디는 디아바디, 단일 사슬(scFv) 및 단일 사슬(Fv)2(sc(Fv)2)을 포함한다.
"디아바디"는 유전자 융합에 의해 구축된 2가 미니바디이다(예를 들어, Holliger, P. 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 90:6444-6448 (1993); EP 404,097; WO 93/ 11161).
디아바디는 두 개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 이량체이다. 디아바디의 각 폴리펩타이드 사슬의 VL 및 VH 도메인은 링커에 의해 결합된다. 링커를 구성하는 아미노산 잔기의 수는 2 내지 12개 잔기(예를 들어, 3 내지 10개 잔기 또는 5개 또는 약 5개 잔기)일 수 있다. 디아바디에서 폴리펩타이드의 링커는 일반적으로 너무 짧아서 VL과 VH가 서로 결합할 수 없다. 따라서, 동일한 폴리펩타이드 사슬에 코딩된 VL 및 VH는 단일 사슬 가변 영역 단편을 형성할 수 없고, 대신에 상이한 단일 사슬 가변 영역 단편과 이량체를 형성한다. 결과적으로 디아바디에는 두 개의 항원 결합 부위가 있다.
scFv는 VH 및 VL을 링커로 연결하여 얻은 단일 사슬 폴리펩타이드 항체이다 (예를 들어, Huston 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 85:5879-5883 (1988); and Plickthun, "The Pharmacology of Monoclonal Antibodies" Vol.113, Ed Resenburg and Moore, Springer Verlag, New York, pp.269-315, (1994) 참조).
연결되는 VH 및 VL의 순서는 특별히 제한되지 않으며 임의의 순서로 배열될 수 있다. 배열의 예는 다음을 포함한다: [VH] 링커 [VL]; 또는 [VL] 링커 [VH]. scFv의 H 쇄 V 영역 및 L 쇄 V 영역은 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편으로부터 유래될 수 있다.
sc(Fv)2는 2개의 VH와 2개의 VL이 링커에 의해 연결되어 단일 사슬을 형성하는 미니바디이다(Hudson, 등, J. Immunol. Methods, (1999) 231: 177-189 (1999)). sc(Fv)2는 예를 들어 scFv를 링커와 연결함으로써 제조할 수 있다. 본 발명의 sc(Fv)2는 단일 사슬 폴리펩티드의 N 말단에서 시작하여 바람직하게는 2개의 VH 및 2개의 VL이 VH, VL, VH 및 VL([VH] 링커[VL] 링커[VH] 링커[VL])의 순서로 배열된 항체를 포함하고; 그러나 2개의 VH 및 2개의 VL의 순서는 상기 배열에 한정되지 않고 임의의 순서로 배열될 수 있다.
이중특이성 항체
이중특이성 항체는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 예시적인 이중특이적 항체는 PD-1 단백질의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 다른 이러한 항체는 PD-1 결합 부위를 다른 단백질에 대한 결합 부위와 결합할 수 있다. 이중특이성 항체는 전장 항체 또는 그의 저분자량 형태(예를 들어, F(ab')2 이중특이성 항체, sc(Fv)2 이중특이성 항체, 디아바디 이중특이성 항체)로서 제조될 수 있다.
전장 이중특이성 항체의 전통적인 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 동시발현을 기반으로 하며, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다(Millstein 등, Nature, 305:537-539 (1983)). 다른 접근법에서, 원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 면역글로불린 중쇄 융합체 및 원하는 경우 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA를 별도의 발현 벡터에 삽입하고 적합한 숙주 세포에 공동 형질감염시킨다. 이것은 3개의 폴리펩타이드 단편의 비율을 조정할 때 더 큰 유연성을 제공한다. 그러나, 동일한 비율의 2개 이상의 폴리펩타이드 쇄의 발현이 높은 수율을 초래하는 경우, 2개 또는 3개 모두의 폴리펩타이드 쇄에 대한 코딩 서열을 단일 발현 벡터에 삽입하는 것이 가능하다.
미국 특허 번호 제5,731,168호에 기재된 다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 사이의 계면은 재조합 세포 배양에서 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 인터페이스는 CH3 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 첫 번째 항체 분자의 계면에서 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄가 더 큰 측쇄(예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 측쇄(들)와 동일하거나 유사한 크기의 보상 "공동"은 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 측쇄(예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)로 대체함으로써 두 번째 항체 분자의 계면에 생성된다. 이것은 동종이량체와 같은 다른 원치 않는 최종 생성물보다 이종이량체의 수율을 증가시키는 메커니즘을 제공한다.
이중특이성 항체는 가교 또는 "이종접합체" 항체를 포함한다. 예를 들어, 이종접합체의 항체 중 하나는 아비딘에, 다른 하나는 비오틴에 결합될 수 있다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교 방법을 사용하여 제조할 수 있다.
"디아바디" 기술은 이중특이성 항체 단편을 제조하기 위한 대체 메커니즘을 제공한다. 단편은 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 포함하는데, 링커는 너무 짧아서 동일한 사슬의 두 도메인 사이의 페어링을 허용하지 않다. 따라서, 한 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 쌍을 이루도록 강제되어 2개의 항원-결합 부위를 형성한다.
다가 항체
다가 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포에 의해 2가 항체보다 더 빠르게 내재화(및/또는 이화)될 수 있다. 본원에 기재된 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖는 다가 항체(예를 들어, 4가 항체)일 수 있으며, 이는 항체의 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 핵산의 재조합 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 예시적인 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함(또는 이로 구성)한다. 다가 항체는 3개 내지 약 8개(예를 들어, 4개)의 항원 결합 부위를 포함(또는 이들로 구성)할 수 있다. 다가 항체는 임의로 적어도 하나의 폴리펩타이드 사슬(예를 들어, 적어도 2개의 폴리펩타이드 사슬)을 포함하고, 여기서 폴리펩타이드 사슬(들)은 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩타이드 사슬(들)은 VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc를 포함할 수 있으며, 여기서 VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 폴리펩타이드 사슬이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 펩티드 스페이서를 나타내고, n은 0 또는 1이다.
접합 항체
본원에 개시된 항체는 고분자 물질(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), PEG로 변형된 폴리에틸렌이민(PEI)(PEI-PEG), 폴리글루탐산(PGA)(N- (2-히드록시프로필)메타크릴아미드(HPMA) 공중합체), 히알루론산, 방사성 물질(예를 들어, 90Y, 131I) 형광 물질, 발광 물질, 합텐, 효소, 금속 킬레이트, 약물 및 독소(예를 들어, 칼케아미신, 슈도모나스 외독소(Pseudomonas exotoxin) A, 리신 (예를 들어, 탈당화된 리신 A 사슬))과 다른 거대분자 물질을 포함하는 다양한 분자에 결합된 접합 항체일 수 있다.
한 실시양태에서, 항-PD-1 항체의 세포독성 작용 및 결과적으로 그의 치료 효과를 개선하기 위해, 항체는 방사성 동위원소 및 세포독성제를 비롯한 고독성 물질과 접합된다. 이러한 접합체는 독성 부하를 표적 부위(즉, 항체에 의해 인식되는 항원을 발현하는 세포)에 선택적으로 전달할 수 있는 반면, 항체에 의해 인식되지 않는 세포는 보존된다. 독성을 최소화하기 위해 접합체는 일반적으로 짧은 혈청 반감기를 갖는 분자를 기반으로 조작된다(따라서 쥐과 서열 및 IgG3 또는 IgG4 이소타입 사용).
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 순환, 예를 들어 혈액, 혈청 또는 기타 조직에서 그의 안정화 및/또는 보유를 예를 들어 적어도 1.5, 2, 5, 10 또는 50배만큼 개선시키는 모이어티로 변형된다. 예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중합체, 예를 들어 실질적으로 비-항원성 중합체, 예컨대 폴리알킬렌 옥사이드 또는 폴리에틸렌 옥사이드와 회합(예를 들어, 접합)될 수 있다. 적합한 중합체는 중량에 따라 실질적으로 달라질 것이다. 약 200 내지 약 35,000 달톤(또는 약 1,000 내지 약 15,000, 및 2,000 내지 약 12,500) 범위의 분자량 평균을 갖는 중합체가 사용될 수 있다. 예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 수용성 중합체, 예를 들어 친수성 폴리비닐 중합체, 예를 들어, 폴리비닐알코올 또는 폴리비닐피롤리돈에 접합될 수 있다. 이러한 중합체의 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜과 같은 폴리알킬렌 옥사이드 단독중합체, 폴리옥시에틸렌화 폴리올, 이들의 공중합체 및 이들의 블록 공중합체를 포함하고, 단, 블록 공중합체의 수용성이 유지된다. 추가적인 유용한 중합체는 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌, 및 폴리옥시에틸렌과 폴리옥시프로필렌의 블록 공중합체와 같은 폴리옥시알킬렌; 폴리메타크릴레이트; 카보머; 그리고 분지형 또는 비분지형 다당류를 포함한다.
전술한 접합 항체는 본원에 기재된 항체 또는 이의 저분자량 형태에 화학적 변형을 수행함으로써 제조될 수 있다. 항체를 변형시키는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, US 5057313 및 US 5156840).
키트
본 개시는 또한, 예를 들어, 여기서 기재된 A2A/A2B-관련 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 유용한 약제학적 키트를 포함하며, 이는 치료적 유효량의 본 개시의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 수용하는 하나 이상의 용기를 포함한다. 그러한 키트는, 바람직한 경우, 당업자에게 명백할 것과 같이 예를 들어, 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체가 있는 용기, 추가 용기 등과 같은 하나 이상의 다양한 통상적인 약제학적 키트 구성요소를 추가로 포함할 수 있다. 삽입물 또는 라벨로서, 투여될 성분의 양, 투여 지침, 및/또는 성분 혼합 지침을 나타내는 설명이 또한 키트에 포함될 수 있다.
본 발명은 특정 실시예에 의해 보다 상세히 설명될 것이다. 다음의 실시예는 예시적인 목적으로 제공되며, 임의의 방식으로 본 발명의 제한하도록 의도되지 않는다. 당업자는 본질적으로 동일한 결과를 산출하도록 변경 또는 수정될 수 있는 다양한 비필수 파라미터를 인식할 것이다. 명확성을 위해, 별개의 실시양태의 맥락에서 설명된 본 발명의 특정 특성이, 또한 단일 실시양태에서 조합으로 제공될 수 있음이 이해된다. 반대로, 간결성을 위해, 단일 실시양태의 맥락에서 설명된 본 발명의 다양한 특성이 또한 별개로 또는 임의의 적합한 하위조합으로 제공될 수 있다.
본 발명의 다양한 변형은, 본원에 설명된 것에 더하여, 전술한 설명으로부터 당업자에게 명백할 것이다. 그러한 변형은 또한 첨부된 청구범위의 범위 내에 속하도록 의도된다. 본 출원에 언급된, 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물을 포함하는 각각의 참고문헌은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
실시예
실시예 1: 시험관내 CHO-PD-L1공동배양 분석
시험관 내 CHO-PD-L1 공동 배양 분석에서 T 세포를 CHO-PD-L1 세포의 존재 하에 PD-1 항체로 처리했고, 아데노신 모방 시약인 5'-N-에틸카르복사미드 아데노신(NECA)을 사용하여 아데노신 신호를 활성화했다. 이러한 조건 하에서, 화합물 9는 항-PD1 시약으로 T 세포 기능을 회복시킬 수 있었다.
이 시스템에서 테스트된 항-PD1 시약은 다음을 포함한다: 도 1에 나타낸 바와 같이, (A) 펨브롤리주맙, (B) 항체 X 및 (C) 2 μM NECA 처리 하에 있는 화합물 Y.
프로토콜 :
0일째, 항생제 없이 플레이트 10,000 CHO PDL1+ 100ul의 CHO Media 내 Plate 96 Tissue Culture Flat Bottom 플레이트 내 세포. 1일째, T 세포를 해동하고 1x106 세포/ml로 T 세포 배지에 재현탁시켰다. CHO PDL1+ 세포 플레이트로부터 배지를 제거하고 130ul의 T 세포 배지를 첨가했다. 198 ul의 T 세포 배지를 2 ul 또는 - 1:100 희석으로 화합물 플레이트에 첨가한 다음, 재현탁시켰다. 화합물 플레이트로부터 20 ul의 화합물을 1:1000에서 화합물의 최종 희석으로 CHO 세포 플레이트에 첨가했다. 50 ul의 T 세포(50,000개 세포)를 CHO 세포가 있는 플레이트에 첨가하여 총 200 ul 부피를 만들고 37°C에서 72시간 동안 인큐베이션했다. 배양 3일 후, hIFNg 및 hIL2(제조업체 프로토콜)에 대한 ProCartaplex 2 플렉스 키트(Life Technologies Cat# PPX-02)를 사용하여 hIFNg 및 hIL2 사이토카인 분석을 실행하기 위해 상청액을 수집했다. ProCartaplex 키트를 사용한 사이토카인 분석은 Flex Map 3D Luminex 멀티플렉싱 플랫폼에서 실행된다.
실시예 2: 시험관 내 혼합 계통 반응 분석
또 다른 시험관내 분석, 혼합 계통 반응 분석(MLR)에서, 건강한 공여자로부터의 PBMC를 CD3 항체에 의해 자극하고 아데노신 모방 시약, NECA의 10μM 하에 아테졸리주맙, 화합물 9 또는 화합물 3A로 처리했다(도 2A-2D).
프로토콜 :
0일째에 건강한 기증자의 10,000개의 PBMC를 다른 건강한 기증자의 10,000개의 γ 방사선 PBMC와 공동 배양했다. 세포를 10% FBS가 보충된 200ul RPMI-1640 배지에서 96-웰 조직 배양 둥근 바닥 플레이트에 플레이팅하고, 10μM NECA, 5ng/ml CD3 항체(클론 OKT3) 및 표시된 농도의 화합물/항체로 처리하거나 처리하지 않았다. 세포를 37°C에서 4일 동안 인큐베이션했다. 각 웰의 상층액에서 IFN-γ는 HTRF 키트(Cisbio, 62HIFNGPEH)로 측정하였고 형광 신호는 Pherastar FS 플레이트 리더(BMG Labtech)에서 4일차에 검출했다.
항-PD-L1 항체(즉, 아테졸리주맙)와 조합된 경우 화합물 9는 IFNγ 생산을 유의하게 증가시킬 수 있었다(도 2A-2B). 항-PD-L1 항체(즉, 아테졸리주맙)와 조합될 때 화합물 3A는 또한 IFNγ 생산을 유의하게 증가시킬 수 있었다(도 2C-2D).
실시예 3: 마우스 상승적 모델에서의 생체내 효능 연구
화합물 9는 2개의 별개의 모델에서 종양 성장의 억제에 대해 평가되었다. CT-26 뮤린 결장암은 종양 미세환경에서 높은 수준의 아데노신을 갖고 임상 조사를 위해 선택된 높은 아데노신 종양을 반영하는 것으로 입증되었다(Mosely, 등, Cancer Immunol Res; 5(1) January 2017, pp. 29-41). 단일 물질로서, 10mg/kg BID에서, 화합물 9는 비히클 대조군에 비해 52% 종양 성장 억제(TGI)에서 종양 성장을 유의하게 둔화시켰고, 추가로 항-PD-1 항체와 조합하여 가산성(additivity)을 나타냈다 (비히클에 대해 77% TGI)(도 3A). 대조적으로, 화합물 9가 그의 치료 작용의 대부분을 발휘하는 것으로 생각되는 T 및 NK 세포가 결여된 NSG 마우스에 호스트될 때, 동일한 요법이 모델에 적용될 때 단일 물질 효능이 관찰되지 않았다(도 3B).
면역 관문 신호 내성을 파괴하는 능력에 대해 면역학적으로 저온 모델인 B16 흑색종 모델에서 화합물 9를 추가로 평가했다. 화합물 9 및 항-PD-L1는 둘 모두 온건하지만 유의성이 없는 단일 물질 활성을 가졌으나, 조합될 때 상승작용을 일으켜 54% 종양 성장 억제를 유발했다(도 3C). 이들 데이터는 화합물 9가 높은 아데노신 종양에서 미세환경을 변경하고 다른 면역-종양제와 협력하여 효과적인 항종양 반응을 유도할 수 있음을 시사한다.
실시예 A: A2A/A2B 억제제의 활성
I. A2A Tag-lite® HTRF 분석
블랙 저용량 384웰 폴리스티렌 플레이트(Greiner 784076-25)에서 최종 부피 10μL로 분석을 수행했다. 테스트 화합물을 먼저 DMSO에서 연속 희석하고 100 nL이 다른 반응 성분의 첨가 전에 플레이트 웰에 첨가했다. DMSO의 최종 농도는 1%였다. Tag-lite®아데노신 A2A 표지 세포 (CisBio C1TT1A2A)를 Tag-lite 버퍼 (CisBio LABMED)에 1:5로 희석하고 1200 g을 5 min 동안 회전시켰다. 펠렛을 Tag-lite 버퍼에 초기 세포 현탁액 부피의 10.4 X 부피로 재현탁시키고, 아데노신 A2A 수용체 레드 길항제 형광 리간드 (CisBio L0058RED)를 12.5 nM 최종 농도로 첨가했다. 10 ul의 세포 및 리간드 혼합물을 분석 웰에 첨가하고 실온에서 45 분 동안 인큐베이션한 후 HTRF 337/620/665 광학 모듈이 있는 PHERAstar FS 플레이트 리더 (BMG Labtech)에서 판독했다. 형광 리간드의 결합 퍼센트가 계산되었고; 여기서 100 nM의 A2A 길항제 대조군 ZM 241385 (Tocris 1036)는 리간드 100%를 치환하고 1% DMSO는 0% 치환을 갖는다. 결합 % 데이터 대 억제제 농도의 로그는 단일-부위 경쟁 결합 모델에 피팅되었고 (GraphPad Prism 버전 7.02) 여기서 리간드 상수 = 12.5 nM 및 리간드 Kd = 1.85 nM이다. 이러한 방법을 통해 얻은 Ki 데이터는 표 2에 나타낸다.
II. 아데노신 A2B 수용체 사이클릭 AMP GS 분석
인간 아데노신 A2B 수용체를 발현하는 안정하게 형질감염된 HEK-293 세포 (Perkin Elmer)를 10% FBS 및 100 μ g/ml 제네티신 (Life Technologies)을 포함하는 MEM 배양 배지에서 유지시켰다. 분석 18 내지 24 시간 전에, 제네티신을 배양으로부터 제거했다. FRET (형광 공명 에너지 전이) 기술을 이용하는 cisbio cAMP-GS Dynamic 키트가 세포 내 cAMP 축적을 측정하기 위해 사용되었다. 적절한 농도의 본 개시의 화합물을 백색 96 웰 절반 영역 플레이트 (Perkin Elmer)에서 30 min 동안 실온에서 부드럽게 진탕하면서 10000 세포/웰과 혼합했다. 12 nM의 작용제, NECA (R&D Technologies)를 60 min 동안 실온에서 부드럽게 진탕하면서 각각의 웰에 첨가했다. 검출 시약, d2-표지 cAMP (수용체) 및 항-cAMP 크립테이트 (공여체)를 각각의 웰에 60 min 동안 실온에서 부드럽게 진탕하면서 첨가했다. 플레이트를 Pherastar (BMG Labtech)에서 판독했고, 형광 비율 665/620을 계산하고 GraphPad Prism을 사용하는 대조군의 퍼센트 대 화합물 농도의 로그의 곡선 피팅에 의해 EC50 결정을 수행했다. 이러한 방법을 통해 얻은 EC50 데이터는 표 2에 나타낸다.
표 2. A2A_Ki 데이터 (실시예 A(I)) 및 A2B_cAMP_EC50 데이터 (실시예 A(II))가 아래에 제공된다.
Figure pct00013
†는 A2A_Ki 또는 A2B_cAMP_EC50 ≤ 10 nM를 나타내고,
††는 A2A_Ki 또는 A2B_cAMP_EC50 > 10 nM but ≤ 100 nM를 나타내고,
†††는 A2A_Ki 또는 A2B_cAMP_EC50 > 100 nM but ≤ 1 μM를 나타내고,
††††는 A2A_Ki 또는 A2B_cAMP_EC50 가 1 μM보다 큰 것을 나타낸다.
실시예 A1: 3-(5-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 1)의 합성
Figure pct00014
단계1: 3-(2-아미노-6-클로로피리미딘-4-일)벤조니트릴
Figure pct00015
1,4-디옥산 (60 mL), 및 물 (5 mL) 내 4,6-디클로로피리미딘-2-아민 (2.5 g, 15.2 mmol), (3-시아노페닐)보론산 (2.02 g, 13.7 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (1.06 g, 0.92 mmol) 및 소듐 카보네이트 (3.23 g, 30.5 mmol)의 혼합물을 질소로 탈기시키고, 이후 얻어진 혼합물을 가열시키고 60 °C에서 2 일 동안 교반했다. 실온 (r.t.)까지 냉각 후, 혼합물을 농축하고, 물로 희석하고, DCM (30 mL x 3)으로 추출했다. 조합시킨 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 얻어진 잔사를 디클로로메탄 내 8% EtOAc로 용리시키면서 실리카 겔 칼럼 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C11H8ClN4 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 231.0. 실험치: 231.0.
단계 2: 2-(피리딘-2-일)아세토하이드라지드
Figure pct00016
히드라진 (4.15 mL, 132 mmol)을 메틸 2-(피리딘-2-일)아세테이트 (10 g, 66.2 mmol)의 에탄올 (66 mL) 용액에 실온에서 부가했다. 혼합물을 가열시키고 85 oC에서 4 h 동안 교반하고, 이후 실온까지 냉각했다. 백색 고체를 방치하여 형성시키고, 이를 여과를 통해 수집하고 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. C7H10N3O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 152.1. 실험치: 152.0.
단계 3: 3-(5-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00017
2-(피리딘-2-일)아세토하이드라지드 (2.62 g, 17.34 mmol) 3-(2-아미노-6-클로로피리미딘-4-일)벤조니트릴 (4.00 g, 17.34 mmol)의 에탄올 (35 mL) 용액에 실온에서 부가했다. 가열 및 환류에서 2 h 동안 교반 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 농축했다. 얻어진 잔사를 N,O-비스(트리메틸실릴)아세트아미드 (20 mL) 내로 취하고 120 oC에서 7 h 동안 교반했다. 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, 얼음 내로 붓고, 실온에서 1 h 동안 교반하도록 방치했다. 얻어진 고체를 여과로 수집하고, 20 mL의 1 N HCl 용액 내로 취했다. 얻어진 혼합물을 실온에서 1 h 동안 교반하고, 여과하고, 수층을 포화 NaHCO3 용액의 부가로 중성화시켰다. 얻어진 침전물을 여과로 수집하고, 건조시키고 소정의 생성물을 갈색 고체로서 얻었다. C18H14N7 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 328.1; 실험치 328.1.
단계 4: 3-(5-아미노-8-브로모-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00018
DMF (12 mL) 내 3-(5-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (2 g, 6.11 mmol)의 혼합물에 -30 oC에서 NBS (1.09 g, 6.11 mmol)을 조금씩 부가했다. 반응 혼합물을 0 oC까지 천천히 데워지도록 방치하고, 균질 용액을 얻었다. 0 oC에서 1 h 동안 교반 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액으로 희석하고 얻어진 고체를 여과로 수집했다. 고체를 이후 DCM 내 0 내지 10% MeOH로 용리시키면서 실리카 겔 칼럼 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C18H13BrN7 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 406.0; 실험치 406.0.
단계 5: 3-(5-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Pd(Ph3P)4 (284 mg, 0.246 mmol)을 1,4-디옥산 (12 mL) 내 4-(트리부틸스타닐)피리미딘 (1090 mg, 2.95 mmol), 3-(5-아미노-8-브로모-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (1000 mg, 2.46 mmol), 및 구리(I) 클로라이드 (244 mg, 2.46 mmol)의 혼합물에 부가했다. 반응 혼합물을 N2로 퍼징하고 80 oC에서 7 h 동안 교반했다. 얻어진 혼합물을 실온까지 냉각하고, 농축하고, DCM (50 mL)로 희석하고 포화 NH4OH 용액으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하고, 분취용 LC-MS로 정제하고 (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물) 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C22H16N9 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 406.2; 실험치 406.2. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.95 (s, 1H), 8.83 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.96 (m, 1H), 7.88 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.60 - 7.53 (m, 2H), 7.53 - 7.48 (m, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 4.49 (s, 2H).
실시예 A2: 3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 2)의 합성
Figure pct00019
단계 1: 메틸 2-(2,6-디플루오로페닐)-2-하이드록시아세테이트
Figure pct00020
농축 황산 (1.42 mL, 27 mmol)을 2,6-디플루오로만델산 (5 g, 27 mmol)의 메탄올 (45 mL) 용액에 0 oC에서 부가했다. 혼합물을 농축 전에 실온에서 4 h 동안 교반했다. 얻어진 슬러리에 포화 NaHCO3 용액 (30 mL)을 부가했다. 얻어진 혼합물을 DCM로 추출했다 (3x20 mL). 조합시킨 유기층을 물로 세척하고, Mg2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 미정제 생성물을 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. C11H12F2NO3 (M+H+MeCN)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 244.1; 실험치 244.2.
단계 2: 3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
이 화합물을, 단계 2에서 메틸 2-(피리딘-2-일)아세테이트를 메틸 2-(2,6-디플루오로페닐)-2-하이드록시아세테이트로 대체하여 실시예 A1에 대한 기재와 유사한 절차를 사용하여 제조했다. 두 개의 거울상 이성질체를 80 mL/분의 유속으로 등용매 이동상 CO2 내 25% MeOH로 용리하면서 Phenomenex Lux Cellulose-1 칼럼 (21.2 x 250mm, 5μm 입자 크기)를 사용하여 카이랄 SFC에 의해 분리했다. 피크 1을 분리하고, prep-LCMS (pH = 2, TFA와 함께 MeCN/물)로 추가로 정제하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C23H15F2N8O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 457.1; 실험치 457.1. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.94 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.81 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 5.3, 1.4 Hz, 1H), 7.81 (dt, J = 7.4, 1.5 Hz, 1H), 7.76 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.55 (dt, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.44 (tt, J = 8.4, 6.4 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 6.27 (s, 1H).
실시예 A3: 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 3A) 및 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 3B)의 합성
Figure pct00021
및
Figure pct00022
단계 1: 3-(5-아미노-2-(하이드록시메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00023
2-하이드록시아세토하이드라지드 (2.34 g, 26.01 mmol)을 3-(2-아미노-6-클로로피리미딘-4-일)벤조니트릴 (4.00 g, 17.34 mmol) (실시예 A1, 단계 1)의 에탄올 (35 mL) 용액에 실온에서 부가했다. 가열 및 환류에서 2 h 동안 교반 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 농축했다. 얻어진 잔사를 N,O-비스(트리메틸실릴)아세트아미드 (20 mL) 내로 취하고 120 oC에서 7 h 동안 교반했다. 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, 얼음 내로 붓고, 실온에서 1 h 동안 교반하도록 방치했다. 얻어진 고체를 여과로 수집하고, 20 mL의 1 N HCl 용액 내로 취했다. 얻어진 혼합물을 실온에서 1 h 동안 교반하고, 여과하고, 수층을 포화 NaHCO3 용액의 부가로 중성화시켰다. 얻어진 침전물을 여과로 수집하고, 건조시키고 소정의 생성물을 갈색 고체로서 얻었다. C13H11N6O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 267.1; 실험치 267.1.
단계 2: 3-(5-아미노-8-브로모-2-(하이드록시메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00024
DMF (12 mL) 내 3-(5-아미노-2-(하이드록시메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (1.0 g, 3.76 mmol)의 혼합물에 -30 oC에서 NBS (0.67 g, 3.76 mmol)을 한방울씩 부가했다. 반응 혼합물을 0 oC까지 천천히 데워지도록 방치하고, 균질 용액을 얻었다. 0 oC에서 1 h 동안 교반 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액으로 희석하고 소정의 생성물을 여과로 수집하고 건조시켰다. C13H10BrN6O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 345.0; 실험치 345.0.
단계 3: 3-(5-아미노-2-(하이드록시메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00025
테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.067 g, 0.058 mmol)을 1,4-디옥산 (5.0 mL) 내 4-(트리부틸스타닐)피리미딘 (0.321 g, 0.869 mmol), 3-(5-아미노-8-브로모-2-(하이드록시메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (0.20 g, 0.579 mmol), CsF (0.176 g, 1.159 mmol), 및 구리(I)아이오다이드 (0.022 g, 0.116 mmol)의 혼합물에 부가했다. 반응 혼합물을 N2로 퍼징하고 80 oC에서 7 h 동안 교반했다. 얻어진 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 농축하고 DCM 내 0% 내지 10% 메탄올로 용리시키면서 플래시 칼럼 크로마토그래피로 정제하고 생성물을 얻었다. C17H13N8O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 345.1; 실험치 345.1.
단계 4: 3-(5-아미노-2-(클로로메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00026
아세토니트릴 (10 ml) 내 3-(5-아미노-2-(하이드록시메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (0.1 g, 0.290 mmol)의 혼합물에 티오닐 클로라이드 (0.212 ml, 2.90 mmol)을 실온에서 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 5 h 동안 교반하고, 농축하고, DCM 내 0% 내지 5% 메탄올로 용리시키면서 플래시 크로마토그래피로 정제하고 생성물을 얻었다. 계산치 C17H12ClN8 (M+H)+에 대한 LC-MS: 363.1; 실험치 363.1.
단계 5: 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 3A) 및 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 3B)의 혼합물
DMF (1 mL) 내 3-(5-아미노-2-(클로로메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (10 mg, 0.028 mmol), 2-(1H-테트라졸-5-일)피리딘 (8.1mg, 0.055 mmol) 및 Cs2CO3 (20.7 mg, 0.064 mmol)의 혼합물을 100 °C에서 10 min 동안 교반했다. 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, 메탄올 (4 mL)로 희석하고, 분취용 LC-MS (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)로 정제하고 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C23H16N13 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 474.2; 실험치 474.2.
화합물 3A: 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.99 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.85 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.80 - 8.71 (m, 1H), 8.71 - 8.39 (b, 2H), 8.18 (d, J = 7.7, 1.1 Hz, 1H), 8.04 (t, J = 7.8, 1.8 Hz, 1H), 7.85 (m, 2H), 7.80 - 7.76 (m, 1H), 7.62 - 7.55 (m, 2H), 7.53 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.39 (s, 2H).
실시예 A4: 3-(5-아미노-2-((3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 4)의 합성
Figure pct00027
단계 1: 6-클로로-N 2 ,N 2 -비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2,4-디아민
Figure pct00028
2-프로판올 (31 mL) 내 2,6-디클로로피리미딘-4-아민 (5.0 g, 31 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (6.4 ml, 37 mmol) 및 비스(4-메톡시벤질)아민 (7.9 g, 31 mmol)을 부가했다. 얻어진 용액을 100 °C에서 16 h 동안 교반하고, 실온까지 냉각시키고, 물 (100 mL)로 희석하고, EtOAc (100 mL)으로 추출했다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 농축하고 미정제 생성물을 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. C20H22ClN4O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 385.1; 실험치 385.1.
단계 2: 7-클로로-N 5 ,N 5 -비스(4-메톡시벤질)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-2,5-디아민
Figure pct00029
O-에틸 카본이소티오시아나티데이트 (3.1 mL, 26 mmol)을 6-클로로-N 2,N 2-비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2,4-디아민 (1.0 g, 2.6 mmol)의 1,4-디옥산 (5.0 mL) 용액에 실온에서 부가했다. 반응 혼합물을 이후 90 oC에서 밤새 교반하고, 실온까지 냉각시키고, 농축했다. 얻어진 물질을 메탄올 (12 mL) 및 에탄올 (12 mL) 내에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 (0.91 mL, 5.2 mmol), 이후 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (0.54 g, 7.8 mmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 45 °C에서 2 h 동안 교반하고, 실온까지 냉각시키고, 농축했다. 얻어진 물질을 EtOAc 내로 취하고, 물로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 농축했다. 미정제 물질을 이후 헥산 내 0% 내지 50% EtOAc로 용리시키면서 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하고 생성물을 얻었다. C21H22ClN6O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 425.1; 실험치 425.2.
단계 3: 3-(2-아미노-5-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00030
클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리-i-프로필-1,1'-비페닐)(2'-아미노-1,1'-비페닐-2-일) 팔라듐(II) (330 mg, 0.42 mmol)을 1,4-디옥산 (8.8 mL) 및 물 (1.8 mL) 내 (3-시아노페닐)보론산 (460 mg, 3.2 mmol), 7-클로로-N 5,N 5-비스(4-메톡시벤질)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-2,5-디아민 (890 mg, 2.1 mmol), 및 소듐 카보네이트 (890 mg, 8.4 mmol)의 혼합물에 부가했다. 혼합물을 N2로 퍼징하고 95 oC에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각시키고, 농축하고, DCM 내 0% 내지 50% EtOAc로 용리시키면서 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C28H26N7O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 492.2; 실험치 492.2.
단계 4: 3-(2-아미노-5-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-8-브로모-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00031
DMF (1.4 ml) 내 3-(2-아미노-5-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (330 mg, 0.66 mmol)의 용액에 0 °C에서 NBS (120 mg, 0.66 mmol)을 천천히 부가했다. 반응 혼합물을 이후 물 (10 mL)을 부가 전에 실온에서 30 min 동안 교반했다. 얻어진 고체를 여과로 수집하고, 건조시키고 소정의 생성물을 얻었다. C28H25BrN7O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 570.1; 실험치 570.2.
단계 5: 3-(2-아미노-5-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00032
디옥산 (4.7 ml) 내 3-(2-아미노-5-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-8-브로모-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (350 mg, 0.61 mmol), 4-(트리부틸스타닐)피리미딘 (210 μL, 0.67 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (70 mg, 0.060 mmol), 구리(I) 아이오다이드 (23 mg, 0.12 mmol) 및 세슘 플루오라이드 (180 mg, 1.2 mmol)의 혼합물을 가열시키고 140 °C에서 30 min 동안 마이크로파 반응기 내에서 교반했다. 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, (DCM로 세척시킨) Celite 플러그를 통해 여과하고, 농축했다. 얻어진 물질을 0-20% MeOH/DCM로 용리시키면서 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C32H28N9O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 570.2; 실험치 570.3.
단계 6: 3-(5-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-브로모-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
Figure pct00033
아세토니트릴 (3 ml) 내 구리(II) 브로마이드 (91 mg, 0.407 mmol) 및 tert-부틸 니트라이트 (0.054 ml, 0.407 mmol)의 혼합물에 질소 하에서 50 °C에서 한방울씩 아세토니트릴 (3 ml) 내 3-(2-아미노-5-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (100 mg, 0.203 mmol)을 부가했다. 혼합물을 50 °C에서 2 시간 동안 교반했다. 실온까지 냉각 후, 1 N 수성 NH4OH 용액 (20 ml)을 부가하고 혼합물을 3회 CH2Cl2 (20 ml)로 추출했다. 조합시킨 유기 층을 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 미정제 물질을 50-100% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리시키면서 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C32H26BrN8O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 633.1; 실험치 633.2.
단계 7: 3-(5-아미노-2-((3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
1,4-디옥산 (1 mL) 내 소듐 하이드라이드 (60% 미네랄 오일 내, 3.8 mg, 0.095 mmol), 3-(5-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-브로모-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (20 mg, 0.032 mmol) 및 (3-메틸피리딘-2-일)메탄올 (9.1 μL, 0.095 mmol)의 현탁액을 가열시키고 110 °C에서 질소 하에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, 농축하고, TFA (1.0 mL)를 부가했다. 얻어진 혼합물을 이후 110 °C에서 30 min 동안 교반하고, 실온까지 냉각하고, 아세토니트릴로 희석하고, 여과하고 분취용 LC-MS (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)에 의해 정제하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C23H18N9O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 436.2; 실험치 436.2. 1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 8.97 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.58 - 8.52 (m, 1H), 7.97 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 5.4, 1.4 Hz, 1H), 7.85 (dt, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.78 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.60 - 7.54 (m, 2H), 7.53 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 5.69 (s, 2H), 2.48 (s, 3H).
실시예 A5: 3-(5-아미노-2-(하이드록시(페닐)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 5)의 합성
Figure pct00034
단계 1: 3-(2-아미노-6-클로로피리미딘-4-일)벤조니트릴
Figure pct00035
1,4-디옥산 (60 mL), 및 물 (5 mL) 내 4,6-디클로로피리미딘-2-아민 (2.5 g, 15.24 mmol), (3-시아노페닐)보론산 (2.016 g, 13.72 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (1.057 g, 0.915 mmol) 및 소듐 카보네이트 (3.23 g, 30.5 mmol)의 혼합물을 질소로 탈기하고, 이후 얻어진 혼합물을 60°C에서 2일 동안 가열시켰다. 실온 (RT)까지 냉각 후, 혼합물을 농축하고, 이후 물로 희석하고, 디클로로메탄으로 추출했다 (DCM, 3 x 30 mL). 조합시킨 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔사를 디클로로메탄 내 8% 에틸 아세테이트 (EtOAc)을 사용하여 실리카 겔 칼럼 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. C11H8ClN4 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 231.0. 실험치: 231.0.
단계 2: 3-(5-아미노-2-(하이드록시(페닐)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴
에탄올 (2 ml) 내 3-(2-아미노-6-클로로피리미딘-4-일)벤조니트릴 (100 mg, 0.434 mmol) 및 2-하이드록시-2-페닐아세토하이드라지드 (108 mg, 0.650 mmol)의 용액을 가열시키고 95oC에서 3 h 동안 교반했다. RT까지 냉각 후, 반응 혼합물을 건조하도록 농축하고, N,O-비스(트리메틸실릴)아세트아미드 (1 mL) 내로 취하고 120 oC에서 7 h 동안 교반했다. 얻어진 혼합물을 실온까지 냉각하고, 얼음 내로 붓고, 1 h 동안 교반했다. 얻어진 현탁액을 DCM로 3회 추출했다. 조합시킨 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔사를 메탄올 (MeOH) 내에 용해시키고 분취용 LC-MS (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)에 의해 정제하고 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C19H15N6O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 343.1; 실험치 343.1.
실시예 A6: 3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5- c ]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 6)의 합성
Figure pct00036
단계 1: 3-(2-아미노-6-클로로피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴
Figure pct00037
0 oC까지 냉각시킨 THF (60 mL) 내 3-브로모-2-플루오로벤조니트릴 (18.3 g, 91 mmol)의 용액에 THF (1.3 M) 내 i-PrMgCl LiCl 복합체 (70.4 mL, 91 mmol)을 20 min에 걸쳐 부가했다. 혼합물을 0 oC에서 50 min 동안 교반하고, 이후 2-MeTHF (1.9 M) 내 아연 클로라이드 (48.1 mL, 91 mmol)을 0 oC에서 부가했다. 반응을 실온에서 25 min 동안 교반하고, 이 시점에서 4,6-디클로로피리미딘-2-아민 (10 g, 61.0 mmol)을 한번에 부가했다. 용액을 10 min 동안 교반했다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (1.41 g, 1.22 mmol)을 혼합물에 부가하고 반응을 실온에서 16 h 동안 교반했다. 완료시, 2,4,6-트리머캅토트리아진 실리카 겔 (2 g)을 반응 용액에 부가했다. 혼합물을 1 h 동안 교반하고 여과했다. 소정의 생성물이 완전히 용출될 때까지 고체를 에틸 아세테이트로 세척했다(LCMS에 의해 검출됨). 여액을 포화 암모늄 클로라이드 용액 및 물로 세척했다. 유기물을 농축하여 미정제 생성물을 얻었다. 물을 미정제 물질에 부가하고 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고 질소 기류 하에 건조시켰다. 미정제 물질을 추가 정제 없이 취했다. C11H7ClFN4 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 249.0; 실험치 249.0.
단계 2: 메틸 2-(2,6-디플루오로페닐)-2-하이드록시아세테이트
Figure pct00038
농축 황산 (1.4 mL, 27 mmol)을 2,6-디플루오로만델산 (5.0 g, 27 mmol)의 메탄올 (45 mL) 용액에 0 oC에서 부가했다. 혼합물을 농축 전에 실온에서 4 h 동안 교반했다. 얻어진 슬러리에 포화 NaHCO3 용액을 부가했다. 얻어진 혼합물을 DCM로 추출했다. 조합시킨 유기층을 물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 미정제 생성물을 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. C11H12F2NO3 (M+H+MeCN)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 244.1; 실험치 244.2.
단계 3: 2-(2,6-디플루오로페닐)-2-하이드록시아세토하이드라지드
Figure pct00039
히드라진 (3.0 mL, 96 mmol)을 메틸 2-(2,6-디플루오로페닐)-2-하이드록시아세테이트 (10.8 g, 53 mmol)의 에탄올 (90 mL) 용액에 RT에서 부가했다. 반응 혼합물을 100 oC에서 2 h 동안 교반하고, 실온까지 냉각하고, 농축하고, 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. C8H9F2N2O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 203.1; 실험치 203.2.
단계 4: 3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴
표제 화합물을, 3-(2-아미노-6-클로로피리미딘-4-일)벤조니트릴을 3-(2-아미노-6-클로로피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴로 대체하고, 2-하이드록시-2-페닐아세토하이드라지드를 2-(2,6-디플루오로페닐)-2-하이드록시아세토하이드라지드로 대체하여 실시예 A5 단계 2에 대한 기재와 유사한 절차를 사용하여 제조했다. 두 개의 거울상 이성질체를 85 mL/분의 유속으로 등용매 이동상 15% CO2 내 MeOH로 용리하면서 Phenomenex (R,R)-Whelk-O1 칼럼 (21.2 x 250mm, 5μm 입자 크기)를 사용하여 카이랄 SFC에 의해 분리했다. 피크 1과 피크 2의 체류 시간은 각각 3.8분과 5.3분이었다. 농축 후, 피크 2를 prep-LCMS (pH = 2, TFA와 함께 MeCN/물)에 의해 정제하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C19H12F3N6O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 397.1; 실험치 397.1.
실시예 A7: 5-아미노-7-(3-시아노-2-플루오로페닐)-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-8-카보니트릴 (화합물 7)의 합성
Figure pct00040
단계 1: 3-(5-아미노-8-브로모-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴
Figure pct00041
이 화합물을, 3-(5-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴을 3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴 (실시예 A6으로부터)로 대체하여 실시예 A1, 단계 4에 대한 기재와 유사한 절차를 사용하여 제조했다. C19H11BrF3N6O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 475.0; 실험치 475.0.
단계 2: 5-아미노-7-(3-시아노-2-플루오로페닐)-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-8-카보니트릴
1,4-디옥산 (0.63 mL) 및 물 (0.63 mL) 내 3-(5-아미노-8-브로모-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴 (0.12 g, 0.25 mmol), ZnCN2 (0.060 g, 0.51 mmol) 및 tBuXPhos Pd G3 (0.020 g, 0.025 mmol)의 혼합물을 N2로 퍼징하고 100 °C에서 1 h 동안 교반했다. 실온까지 냉각후, 반응을 포화 NaHCO3로 희석하고 유기물을 EtOAc로 추출했다 (3x). 조합시킨 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축했다. 두 개의 거울상 이성질체를 20 mL/분의 유속으로 등용매 이동상 60% 헥산 내 EtOH로 용리하면서 Phenomenex Lux Celluose-4 칼럼 (21.2 x 250mm, 5μm 입자 크기)를 사용하여 카이랄 HPLC에 의해 분리했다. 피크 1과 피크 2의 체류 시간은 각각 4.9분과 7.2분이었다. 농축 후, 피크 1을 분취용 LC-MS (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)에 의해 정제하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C20H11F3N7O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 422.1; 실험치 422.1.
실시예 A8: 3-(5-아미노-2-((2-플루오로-6-(((1-메틸-2-옥소피롤리딘-3-일)아미노)메틸)페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 8)의 합성
Figure pct00042
단계 1: 메틸 2-(2-플루오로-6-비닐페닐)아세테이트
Figure pct00043
메틸 2-(2-브로모-6-플루오로페닐)아세테이트 (6.0 g, 24 mmol), 포타슘 포스페이트, 3염기 (15.5 g, 73 mmol), 팔라듐(II) 아세테이트 (0.55 g, 2.4 mmol), 및 SPhos (1.0 g, 2.4 mmol)의 혼합물을 500 mL 압력 용기에 부가했다. 다음, 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (6.4 ml, 36 mmol) 내 디옥산 (150 mL) 및 물 (15 mL)을 부가하고, 반응 혼합물을 N2로 퍼징하고, 80 oC에서 16 h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, 농축하고, EtOAc로 추출했다 (x3). 조합시킨 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축하고, 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제했다 (DCM 내 0 내지 50% EtOAc). C11H12FO2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 195.1; 실험치 195.1.
단계 2: 메틸 2-(2-플루오로-6-비닐페닐)-2-하이드록시아세테이트
Figure pct00044
메틸 2-(2-플루오로-6-비닐페닐)아세테이트 (2.5 g, 12.9 mmol)을 THF (130 mL) 내에 용해시키고 -78 °C까지 냉각했다. THF (1.0 M) 내 LDA (16.7 mL, 16.7 mmol)을 한방울씩 부가하고, 얻어진 용액을 -78 °C에서 30 min 동안 교반했다. 이후, 9,9-디메틸테트라히드로-4H-4a,7-메타노벤조[c][1,2]옥사지레노[2,3-b]이소티아졸 3,3-디옥사이드 (4.7 g, 20.6 mmol)을 THF (0.5 M) 내 한방울씩 부가했다. 30 min 후 -78 °C에서, 반응 혼합물을 0 °C까지 데우고 1 h 동안 교반했다. 반응을 포화 NH4Cl로 켄칭했다. 수층을 DCM로 추출했다 (3x). 조합된 유기물을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 헥산 내 0 내지 50% 에틸 아세테이트로 용리하면서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C11H11FO3Na (M+Na)+에 대한 LCMS 계산치: 233.1; 실험치 233.1.
단계 3: 2-(2-플루오로-6-비닐페닐)-2-하이드록시아세토하이드라지드
Figure pct00045
이 화합물을, 메틸 2-(2,6-디플루오로페닐)-2-하이드록시아세테이트를 메틸 2-(2-플루오로-6-비닐페닐)-2-하이드록시아세테이트로 대체하여 실시예 A6, 단계 3에 대한 기재와 유사한 절차를 사용하여 제조했다. C10H12FN2O2 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 211.1; 실험치 211.1.
단계 4: 3-(5-아미노-2-((2-플루오로-6-비닐페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴
Figure pct00046
이 화합물을, 2-(2,6-디플루오로페닐)-2-하이드록시아세토하이드라지드를 2-(2-플루오로-6-비닐페닐)-2-하이드록시아세토하이드라지드로 대체하여 실시예 A6 단계 4에 대한 기재와 유사한 절차를 사용하여 제조했다. C21H15F2N6O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 405.1; 실험치 405.1.
단계 5: 3-(5-아미노-2-((2-플루오로-6-포밀페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴
Figure pct00047
물 내 오스뮴 테트르옥사이드 (4% w/w, 0.36 mL, 0.12 mmol)를 3-(5-아미노-2-((2-플루오로-6-비닐페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴 (930 mg, 2.30 mmol)의 THF (18 mL) 및 물 (4.6 mL) 용액에 부가했다. 반응 혼합물을 5 min 동안 RT에서 교반하고 이후 소듐 퍼아이오데이트 (2.5 g, 11.5 mmol)을 부가했다. 1 h 동안 교반 후, 혼합물을 포화 aq. NaHCO3 내 소듐 메타비설페이트(5% w/w, 20 mL)로 희석하고 EtOAc로 추출했다 (x3). 조합시킨 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 미정제 물질을 0 내지 100% 헥산 내 에틸 아세테이트로 용리하면서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C20H13F2N6O2 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 407.1; 실험치 407.1.
단계 6: 3-(5-아미노-2-((2-플루오로-6-(((1-메틸-2-옥소피롤리딘-3-일)아미노)메틸)페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴
3-아미노-1-메틸피롤리딘-2-온 (63 mg, 0.55 mmol) 및 3-(5-아미노-2-((2-플루오로-6-포밀페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴 (150 mg, 0.37 mmol)의 용액을 1,2-디클로로에탄 (1.9 mL) 내에서 40 °C에서 2 h 동안 교반했다. 이후 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (160 mg, 0.74 mmol)을 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 16 h 동안 교반했다. 반응을 포화 NaHCO3로 희석하고 유기물을 EtOAc로 추출했다 (3x). 조합시킨 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축했다. 부분입체이성질체를 20 mL/분의 유속으로 등용매 이동상 45% 헥산 내 EtOH로 용리하면서 Phenomenex Lux Celluose-4 칼럼 (21.2 x 250mm, 5μm 입자 크기)를 사용하여 카이랄 HPLC에 의해 분리했다. 피크 1과 피크 2의 체류 시간은 각각 14.9분과 17.5분이었다. 농축 후, 피크 2을 20 mL/분의 유속으로 등용매 이동상 30% 헥산 내 EtOH로 용리하면서 Phenomenex Lux Celluose-1 칼럼 (21.2 x 250mm, 5μm 입자 크기)를 사용하여 카이랄 HPLC에 의해 추가로 분리했다. 피크 1과 피크 2의 체류 시간은 각각 11.0분과 15.5분이었다. 농축 후, 피크 1을 분취용 LC-MS (pH = 2, TFA와 함께 MeCN/물)에 의해 정제하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C25H23F2N8O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: 505.2; 실험치 505.2.
실시예 A9: 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5- a ]피라진-6-일)벤조니트릴 (화합물 9)의 합성
Figure pct00048
단계 1: 메틸 3-브로모-1-(2-(3-시아노페닐)-2-옥소에틸)-1H-1,2,4-트리아졸-5-카복실레이트
Figure pct00049
DMF (100 mL) 내 메틸 3-브로모-1H-1,2,4-트리아졸-5-카복실레이트 (5.0 g, 24.3 mmol), 3-(2-브로모아세틸)벤조니트릴 (5.44 g, 24.3 mmol)의 용액에 포타슘 카보네이트 (3.35 g, 24.3 mmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 주변 온도에서 2 h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 이후 물 및 DCM로 희석했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 얻어진 잔사를 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하고 소정의 생성물을 백색 고체로서 얻었다 (5.2 g, 61%). C13H10BrN4O3 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 349.0; 실험치 349.0.
단계 2: 3-(2-브로모-8-옥소-7,8-디히드로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00050
메틸 3-브로모-1-(2-(3-시아노페닐)-2-옥소에틸)-1H-1,2,4-트리아졸-5-카복실레이트 (10.5 g, 30.1 mmol)을 아세트산 (100 mL) 내에 용해시키고, 암모늄 아세테이트 (23.18 g, 301 mmol)을 부가했다. 혼합물을 110 °C에서 12 h 동안 교반했다. 실온까지 냉각 후, 반응 혼합물을 물로 희석했다. 얻어진 침전물을 여과를 통해 수집하고, 물로 세척하고, 진공 하에서 건조시키고 생성물을 얻었다 (8.4 g, 88%). C12H7BrN5O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 316.0; 실험치 316.0.
단계 3: 3-(2-브로모-8-클로로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00051
3-(2-브로모-8-옥소-7,8-디히드로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (8.4 g, 26.6 mmol) 및 POCl3 (49.5 mL, 531 mmol)의 혼합물을 110 °C에서 밤새 교반했다. 실온까지 냉각 후, 반응 혼합물을 얼음 및 소듐 바이카보네이트를 함유하는 플라스크에 천천히 부가했다. 얻어진 침전물을 수집하고, 물로 세척하고, 건조시키고 생성물을 얻었다 (8.8 g, 99%). C12H6BrClN5 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 333.9; 실험치 334.0.
단계 4. 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-브로모-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00052
DMF (134 mL) 내 3-(2-브로모-8-클로로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (8.99 g, 26.9 mmol), 비스(4-메톡시벤질)아민 (10.37 g, 40.3 mmol), 및 DIPEA (9.4 mL, 53.7 mmol)의 혼합물을 85 °C에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고, 물로 희석했다. 얻어진 침전물을 여과를 통해 수집하고, 건조시키고 생성물을 얻었다 (14.1 g, 94%). C28H24BrN6O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 555.1; 실험치 555.1.
단계 5: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00053
THF (0.5 mL) 내 2-메틸피리딘 (0.050 g, 0.540 mmol)의 용액에 2.5 M n-부틸리튬 (0.216 mL, 0.540 mmol)을 -78° C에서 부가했다. 얻어진 용액을 동일 온도에서 1 h 동안 교반하고, 이후 2-메틸테트라히드로푸란 내 1.9 M 아연 클로라이드(0.284 mL, 0.540 mmol)을 부가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 10 min 동안 교반했다.
3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-브로모-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (0.15 g, 0.270 mmol), 팔라듐 아세테이트 (1.1 mg, 4.7 μmol), 및 2'-(디사이클로헥실포스피노)-N,N,N',N'-테트라메틸비페닐-2,6-디아민 (4.1 mg, 9.5 μmol)로 충전된 마이크로파 바이알을 고진공 하에서 탈기하고 질소로 재충전했다. THF (2.0 mL) 및 톨루엔 (0.5 mL)을 이후 반응 바이알에 부가했다. 혼합물을 0 °C까지 냉각하고 이전 단계로부터 제조된 아연 시약을 천천히 시린지를 통해 부가했다. 반응 혼합물을 이후 60 °C에서 밤새 교반하고, 실온까지 냉각하고, 에틸아세테이트 및 포화 NH4Cl 용액 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고 수층을 에틸아세테이트로 추출했다. 조합시킨 유기층을 물 및 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축했다. 얻어진 잔사를 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하고 생성물을 얻었다 (0.11 g, 71%). C34H30N7O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 568.2; 실험치 568.3.
단계 6. 3-(8-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00054
3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (110 mg, 0.194 mmol) 및 TFA (746 μL, 9.69 mmol)의 혼합물을 80 °C에서 30 분 동안 교반하고, 실온까지 냉각하고, 농축했다. 얻어진 잔사를 prep-LCMS (pH 2)를 통해 정제하고 생성물을 백색 고체로서 얻었다 (TFA 염) (57 mg, 90%). C18H14N7 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 328.1; 실험치 328.1.
단계 7. 3-(8-아미노-5-브로모-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00055
DMF (0.5 mL)/DCM (0.5 mL) 내 3-(8-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (TFA 염) (35 mg, 0.079 mmol)의 용액에 NBS (14.1 mg, 0.079 mmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 이후 실온에서 1 h 동안 교반하고, 농축하여 미정제 생성물을 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. C18H13BrN7 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 406.0; 실험치 406.0.
단계 8. 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
1,4-디옥산 (1 mL) 내 6-클로로-2-메틸피리다진-3(2H)-온 (30 mg, 0.21 mmol), 비스(피나콜라토)디보론 (53 mg, 0.21 mmol), 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2′,4′,6′-트리이소프로필-1,1′-비페닐)[2-(2′-아미노-1,1′-비페닐)]팔라듐(II) (15.7 mg, 0.02 mmol) (XPhos Pd G2) 및 포타슘 아세테이트 (61.7 mg, 0.63 mmol)의 혼합물을 100 °C에서 1 h 동안 교반했다. 3-(8-아미노-5-브로모-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (10 mg, 0.025 mmol), 세슘 카보네이트 (37.6 mg, 0.116 mmol) 및 물 (0.2 mL)를 이후 반응 혼합물에 부가했다. 얻어진 혼합물을 90 °C에서 1 h 동안 가열했다. 혼합물을 농축하고 LCMS (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)에 의해 정제하고 분취용 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C23H18N9O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 436.2; 실험치 436.2.
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.66 - 8.62 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.09 - 8.02 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.88 - 7.85 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.85 - 7.81 (m, 3H), 7.78 - 7.72 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.66 - 7.51 (m, 4H), 7.10 - 7.06 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.59 - 4.48 (s, 2H), 3.53 - 3.43 (s, 3H).
실시예 A10: 3-(8-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (화합물 10)의 합성
Figure pct00056
단계 1: 메틸 3-브로모-1-(2-(3-시아노페닐)-2-옥소에틸)-1H-1,2,4-트리아졸-5-카복실레이트
Figure pct00057
DMF (100 mL) 내 메틸 3-브로모-1H-1,2,4-트리아졸-5-카복실레이트 (5.0 g, 24.3 mmol), 3-(2-브로모아세틸)벤조니트릴 (5.44 g, 24.3 mmol)의 용액에 포타슘 카보네이트 (3.35 g, 24.3 mmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 주변 온도에서 2 h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 이후 물 및 DCM로 희석했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 얻어진 잔사를 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하고 소정의 생성물을 백색 고체로서 얻었다 (5.2 g, 61%). C13H10BrN4O3 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 349.0; 실험치 349.0.
단계 2: 3-(2-브로모-8-옥소-7,8-디히드로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00058
메틸 3-브로모-1-(2-(3-시아노페닐)-2-옥소에틸)-1H-1,2,4-트리아졸-5-카복실레이트 (10.5 g, 30.1 mmol)을 아세트산 (100 mL) 내에 용해시키고, 암모늄 아세테이트 (23.18 g, 301 mmol)을 부가했다. 혼합물을 110 °C에서 12 h 동안 교반했다. 실온까지 냉각 후, 반응 혼합물을 물로 희석했다. 얻어진 침전물을 여과를 통해 수집하고, 물로 세척하고, 진공 하에서 건조시키고 생성물을 얻었다 (8.4 g, 88%). C12H7BrN5O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 316.0; 실험치 316.0.
단계 3: 3-(2-브로모-8-클로로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00059
3-(2-브로모-8-옥소-7,8-디히드로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (8.4 g, 26.6 mmol) 및 POCl3 (49.5 mL, 531 mmol)의 혼합물을 110 °C에서 밤새 교반했다. 실온까지 냉각 후, 반응 혼합물을 얼음 및 소듐 바이카보네이트를 함유하는 플라스크에 천천히 부가했다. 얻어진 침전물을 여과를 통해 수집하고, 물로 세척하고, 건조시키고 생성물을 얻었다 (8.8 g, 99%). C12H6BrClN5 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 336.0; 실험치 336.0.
단계 4: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-브로모-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00060
DMF (134 mL) 내 3-(2-브로모-8-클로로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (8.99 g, 26.9 mmol), 비스(4-메톡시벤질)아민 (10.37 g, 40.3 mmol), 및 DIPEA (9.4 mL, 53.7 mmol)의 혼합물을 65 °C에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고, 물로 희석했다. 얻어진 침전물을 여과를 통해 수집하고, 건조시키고 생성물을 얻었다 (14.1 g, 94%). C28H24BrN6O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 555.1; 실험치 555.1.
단계 5: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00061
1,4-디옥산 (200 mL) 및 물 (50 mL) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-브로모-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (10.0 g, 18.0 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (3.88 g, 25.2 mmol), 포타슘 포스페이트 3염기 (9.55 g, 45.0 mmol) 및 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2′,4′,6′-트리이소프로필-1,1′-비페닐)[2-(2′-아미노-1,1′-비페닐)]팔라듐(II) (567 mg, 0.72 mmol)의 혼합물을 85 °C에서 2 hrs 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고, 대부분의 1, 4-디옥산을 제거했다. 얻어진 침전물을 여과를 통해 수집하고, 물로 세척하고 건조시키고 미정제 생성물을 얻었고 (9.1 g), 이를 다음 단계에서 바로 사용했다. C30H27N6O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 503.2; 실험치 503.1.
단계 6. 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00062
10 ml의 디클로로메탄 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (717 mg, 1.43 mmol)의 용액에, 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (254 mg, 1.43 mmol)을 0 oC에서 부가했다. 얻어진 혼합물을 4 hrs 동안 교반하고, 바로 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (780 mg, 94%). C30H26BrN6O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 581.1; 실험치 581.2.
단계 7: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-(피리미딘-4-일)-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00063
THF (5 mL) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (260 mg, 0.45 mmol), 4-(트리부틸스타닐)피리미딘 (215 mg, 0.58 mmol), 리튬 클로라이드 (28.4 mg, 0.67 mmol), 구리(I) 클로라이드 (67 mg, 0.67 mmol), 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (52 mg, 0.045 mmol)의 혼합물을 90 °C에서 45 mins 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 디클로로메탄으로 추출했다. 조합시킨 유기층을 농축하고, 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (176 mg, 67%). C34H29N8O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 581.2; 실험치 581.1.
단계 8: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-포밀-5-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00064
THF/물 (1:1, 6 mL) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-(피리미딘-4-일)-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (176 mg, 0.3 mmol), 오스뮴(VIII) 옥사이드 (0.3 mL 물 내 3 mg, 0.015 mmol), 및 소듐 퍼아이오데이트 (292 mg, 1.36 mmol)의 혼합물을 65 °C에서 1 h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고, 디클로로메탄으로 추출했다. 조합시킨 유기층을 농축하고, 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (130 mg, 74%). C33H27N8O3 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 583.2; 실험치 583.2.
단계 9: 3-(8-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
그리냐르 시약의 제조: 테트라히드로푸란 (1 mL) 내 1,3-디플루오로-2-아이오도벤젠 (142 mg, 0.6 mmol)의 용액에, 이소프로필마그네슘 클로라이드 용액 (296 μl, 2 M)을 -10 oC에서 부가했다. 얻어진 혼합물을 1 h 동안 교반하고, 바로 다음 단계에서 사용했다.
THF (2 mL) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-포밀-5-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.2 mmol)의 용액에, 이전 단계로부터의 새로 제조한 그리냐르 시약을 -10 oC에서 부가했다. 반응 혼합물을 30 min 동안 교반하고, 암모늄 클로라이드 용액 (4 mL)로 켄칭하고, 디클로로메탄으로 추출했다. 조합시킨 유기층을 진공 하에서 농축했다. 얻어진 물질을 TFA (5 mL) 내에 용해시키고, 80 oC에서 20 min 동안 교반했다. 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, 농축하고, 수성 NaHCO3 용액을 부가하여 염기화했다.
미정제 물질을 바로 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하고 소정의 생성물 (60 mg, 64%)을 라세미 혼합물로서 얻었다. 생성물을 이후 카이랄 칼럼 (Phenomenex Lux 5um Cellulose-4, 21.2x250mm) 및 75% 헥산 내 EtOH (20 mL/min) 용매 시스템을 사용하여 카이랄 HPLC로 분리했다.
피크 2을 분리하고, 분취용 LC/MS (pH = 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)를 통해 추가로 정제하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C23H15F2N8O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 457.1; 실험치 457.0.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6) δ 9.14 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.95 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 5.2, 1.4 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.78 (dt, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H), 7.74 (t, J = 1.4 Hz, 1H), 7.54 (dt, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 7.51 - 7.40 (m, 2H), 7.09 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.27 (s, 1H).
실시예 A11: 3-(8-아미노-2-(아미노(2,6-디플루오로페닐)메틸)-5-(4-메틸옥사졸-5-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (화합물 11)의 합성
Figure pct00065
단계 1: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00066
DCM (5 mL) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (실시예 A10, 단계 5; 241 mg, 0.48 mmol)의 용액에 NBS (84.6 mg, 0.48 mmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 이후 실온에서 1 h 동안 교반하고, 농축하여 미정제 생성물을 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. C30H26BrN6O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 581.1; 실험치 581.1.
단계 2: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-포밀-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00067
THF/물 (1:1, 6 mL) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-비닐-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (174 mg, 0.3 mmol), 오스뮴(VIII) 옥사이드 (0.3 mL 물 내 3 mg, 0.015 mmol), 및 소듐 퍼아이오데이트 (292 mg, 1.36 mmol)의 혼합물을 65 °C에서 1 h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고, 디클로로메탄으로 추출했다. 조합시킨 유기층을 농축하고, 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C29H24N6O3Br (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 583.1; 실험치 583.1.
단계 3: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00068
그리냐르 시약의 제조: 테트라히드로푸란 (1 mL) 내 1,3-디플루오로-2-아이오도벤젠 (142 mg, 0.6 mmol)의 용액에, 이소프로필마그네슘 클로라이드 용액 (296 μl, 2 M)을 -10 oC에서 부가했다. 얻어진 혼합물을 1 h 동안 교반하고, 바로 다음 단계에서 사용했다.
THF (2 mL) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-포밀-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.2 mmol)의 용액에, 이전 단계로부터의 새로 제조한 그리냐르 시약을 -10 oC에서 부가했다. 반응 혼합물을 30 min 동안 교반하고, 암모늄 클로라이드 용액 (4 mL)으로 켄칭하고, 디클로로메탄으로 추출했다. 조합시킨 유기층을 진공 하에서 농축하고 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하고 소정의 생성물을 라세미 혼합물로서 얻었다. C35H28N6O3BrF2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 697.1; 실험치 697.1.
단계 4: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(4-메틸옥사졸-5-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00069
1,4-디옥산 (2 mL) 및 물 (200 μl) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (382 mg, 0.55 mmol), 4-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)옥사졸 (137 mg, 0.65 mmol), 디사이클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필비페닐-2-일)포스핀-(2'-아미노비페닐-2-일)(클로로)팔라듐 (1:1) (17 mg, 21.6 μmol) 및 Cs2CO3 (356 mg, 1.09 mmol)의 혼합물을 N2로 퍼징하고 95 oC에서 7 h 동안 가열시켰다. 혼합물을 농축하고 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하고 소정의 생성물을 무색 오일로서 얻었다. C39H32N7O4F2 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 700.2; 실험치 700.2.
단계 5: 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-(클로로(2,6-디플루오로페닐)메틸)-5-(4-메틸옥사졸-5-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
Figure pct00070
2 ml의 디클로로메탄내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(4-메틸옥사졸-5-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (201 mg, 0.29 mmol)의 용액에, 티오닐 클로라이드 (105 μl, 1.435 mmol)을 rt에서 부가했다. 얻어진 혼합물을 4h 동안 교반하고, 농축하고 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. C39H31N7O3ClF2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 718.2; 실험치 718.2.
단계 6: 3-(8-아미노-2-(아미노(2,6-디플루오로페닐)메틸)-5-(4-메틸옥사졸-5-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴
1 ml의 DMSO 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-2-(클로로(2,6-디플루오로페닐)메틸)-5-(4-메틸옥사졸-5-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (40 mg, 0.084 mmol)의 용액에 암모니아 용액 (1 mL)을 부가했다. 혼합물을 마이크로파 조건으로 100 oC에서 10 h 동안 가열시키고 이후 물로 희석하고 EtOAc로 추출했다. 조합시킨 유기층을 물 및 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축했다. 얻어진 잔사를 TFA (1 mL) 내에 용해시키고, 80 oC에서 20 min 동안 교반했다. 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, 농축하고, 수성 NaHCO3 용액을 부가하여 염기화했다. 미정제 물질을 바로 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하고 소정의 생성물을 라세미 혼합물로서 얻었다. 생성물을 이후 카이랄 칼럼 (AM-1) 및 45% 헥산 내 EtOH (20 mL/min) 용매 시스템을 사용하여 카이랄 HPLC로 분리했다. 피크 1을 분리하고, 분취용 LC/MS (pH = 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)를 통해 추가로 정제하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C23H17F2N8O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 459.1; 실험치 459.0.
실시예 A12: 3-(8-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(2,6-디메틸피리딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (화합물 12)의 합성
Figure pct00071
디옥산 (3.0 mL) 및 물 (0.60 mL) 내 3-(8-(비스(4-메톡시벤질)아미노)-5-브로모-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴 (실시예 A11, 단계 3; 0.518 g, 0.638 mmol), 2,6-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (0.346 g, 1.48 mmol), 및 디사이클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필비페닐-2-일)포스핀-(2'-아미노비페닐-2-일)(클로로)팔라듐 (1:1) (0.058 g, 0.074 mmol)의 용액에 포타슘 포스페이트 3염기 (0.472 g, 2.23 mmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 90 °C에서 1 h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 이후 물 및 DCM로 희석했다. 층을 분리하고, 수층을 DCM로 추출하고, 조합시킨 유기 분획을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 미정제 물질을 TFA (5 mL) 내에 용해시키고 80 °C까지 20 분 동안 가열시켰다. 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각하고, 농축하고, 수성 NaHCO3 용액을 부가하여 염기화했다. 미정제 물질을 바로 실리카 겔 칼럼에 의해 정제하고 소정의 생성물을 (257 mg, 72%) 라세미 혼합물로서 얻었다.
생성물을 이후 카이랄 칼럼 (Phenomenex Lux 5um Cellulose-2, 21.1x250mm) 및 35% 헥산 내 EtOH (20 mL/min) 용매 시스템을 사용하여 카이랄 HPLC로 분리했다. 피크 2을 분리하고, 분취용 LC/MS (pH = 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)를 사용하여 추가로 정제하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C26H20F2N7O (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 484.2; 실험치 484.2. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 7.92 (s, 2H), 7.85 (s, 1H), 7.83 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.40 (m, 4H), 7.10 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.27 (s, 1H), 2.51 (s, 6H).
실시예 A13: 3-(4-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-7-(피리미딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (화합물 13)의 합성
Figure pct00072
단계 1. 4,6-디클로로-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘
Figure pct00073
물 (3mL) 내 NaNO2 (3.88 g, 56.2 mmol)의 용액을 염산, 37% (5 mL) 내 2,6-디클로로피리딘-3,4-디아민 (10 g, 56 mmol)의 용액에 0 °C에서 부가했다. 용액을 30 min 동안 교반했다. 물 (20 mL)을 부가하고 백색 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 건조시키고 소정의 생성물을 얻었다. C5H3Cl2N4에 대한 LC-MS 계산치: 189.0 (M+H)+; 실험치: 189.0 (M+H)+.
단계 2. 6-클로로-N-(2,4-디메톡시벤질)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-4-아민
Figure pct00074
1,4-디옥산 (10 mL) 내 4,6-디클로로-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘 (600 mg, 3.17 mmol), (2,4-디메톡시페닐)메탄아민 (0.53 mL, 3.49 mmol) 및 트리에틸아민 (0.53 mL, 3.81 mmol)의 혼합물을 110 °C에서 3 일 동안 교반했다. 실리카 겔 칼럼 상 직접 정제에 의해 소정의 생성물을 얻었다 (875 mg, 86%). C14H15ClN5O2에 대한 LC-MS 계산치: 320.1 (M+H)+; 실험치: 320.3 (M+H)+.
단계 3. 6-클로로-N-(2,4-디메톡시벤질)-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-4-아민
Figure pct00075
DCM (20 mL) 내 6-클로로-N-(2,4-디메톡시벤질)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-4-아민 (875 mg, 2.74 mmol), 피리딘-2-일메탄올 (0.317 mL, 3.28 mmol) 및 트리페닐포스핀 (1436 mg, 5.47 mmol)의 혼합물을 디이소프로필 아조디카복실레이트 (0.647 mL, 3.28 mmol)에 0 °C에서 부가했다. 얻어진 혼합물을 0 °C에서 1 h 동안 교반했다. 실리카 겔 칼럼 상 직접 정제에 의해 소정의 생성물을 얻었다 (375 mg, 33.4 % 수율). C20H20ClN6O2에 대한 LC-MS 계산치: 411.1 (M+H)+; 실험치: 411.2 (M+H)+.
단계 4. 3-(4-((2,4-디메톡시벤질)아미노)-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴
Figure pct00076
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (1.00 mL) 내 6-클로로-N-(2,4-디메톡시벤질)-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-4-아민 (375 mg, 0.913 mmol) 및 (3-시아노페닐)보론산 (268 mg, 1.825 mmol)의 혼합물에 세슘 카보네이트 (595 mg, 1.825 mmol)을 부가했다. 얻어진 혼합물을 N2로 퍼징하고 이후 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2′,4′,6′-트리이소프로필-1,1′-비페닐)[2-(2′-아미노-1,1′-비페닐)]팔라듐(II) (71.8 mg, 0.091 mmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 120 °C에서 마이크로파 조사 하에서 90 min 동안 교반했다. 반응을 20 ml의 에틸 아세테이트 및 20 ml의 물로 켄칭했다. 유기 상을 분리하고 수성 용액을 에틸 아세테이트로 2회 추출했다. 조합시킨 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 탈기했다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 상에서 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (300 mg, 68.9%). C27H24N7O2에 대한 LC-MS 계산치: 478.2 (M+H)+; 실험치: 478.3 (M+H)+.
단계 5. 3-(4-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴
Figure pct00077
TFA (5 mL) 내 3-(4-((2,4-디메톡시벤질)아미노)-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (300.3 mg, 0.629 mmol)의 용액을 100 oC에서 30 min 동안 교반했다. TFA을 감압 하에서 탈기하고 이후 20 ml의 포화 NaHCO3 수성 용액 및 20 ml의 에틸 아세테이트를 부가했다. 유기 상을 분리하고 수성 용액을 에틸 아세테이트로 2회 추출했다. 조합시킨 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 탈기했다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 상에서 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (175 mg, 85%). C18H14N7에 대한 LC-MS 계산치: 328.1 (M+H)+; 실험치: 328.2 (M+H)+.
단계 6. 3-(4-아미노-7-브로모-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴
Figure pct00078
THF (10 mL) 내 3-(4-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (175 mg, 0.535 mmol) 및 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (100 mg, 0.561 mmol)의 혼합물을 0 °C에서 30 min 동안 교반하고 이후 포화 NaHCO3 수성 용액으로 켄칭했다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 탈기했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 상에서 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (135 mg, 62.2%). C18H13BrN7에 대한 LC-MS 계산치: 406.0 (M+H)+ 및 408.0 (M+H)+; 실험치: 406.1 (M+H)+ 및 408.2 (M+H)+.
단계 7. 3-(4-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-7-(피리미딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴
Figure pct00079
THF (1 ml) 내 3-(4-아미노-7-브로모-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (182 mg, 0.448 mmol), 4-(트리부틸스타닐)피리미딘 (496 mg, 1.344 mmol), 및 구리(I) 클로라이드 (53.2 mg, 0.538 mmol), 리튬 클로라이드 (22.79 mg, 0.538 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (51.8 mg, 0.045 mmol)의 혼합물을 먼저 N2로 퍼징하고, 이후 가열시키고 90 °C에서 2 h 동안 교반했다. 반응을 메탄올로 희석하고 prep-LCMS (pH=2)로 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C22H16N9에 대한 LC-MS 계산치: 406.2 (M+H)+; 실험치: 406.2 (M+H)+.
실시예 A14: 3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-7-(피리미딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (화합물 14)의 합성
Figure pct00080
단계 1. 6-클로로-N-(2,4-디메톡시벤질)-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-4-아민
Figure pct00081
DCM (1.7 mL) 내 6-클로로-N-(2,4-디메톡시벤질)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-4-아민 (실시예 A13, 단계 2; 1000 mg, 3.13 mmol), (3-플루오로피리딘-2-일)메탄올 (477 mg, 3.75 mmol) 및 트리페닐포스핀 (1641 mg, 6.25 mmol)의 혼합물에 디이소프로필 아조디카복실레이트 (739 μl, 3.75 mmol)을 0 °C에서 부가했다. 반응 혼합물을 0 °C에서 1h동안 교반했다. 실리카 겔 칼럼 상 직접 정제에 의해 소정의 생성물을 얻었다 (433 mg, 32%). C20H19ClFN6O2에 대한 LC-MS 계산치: 429.1 (M+H)+; 실험치: 429.3 (M+H)+.
단계 2. 3-(4-((2,4-디메톡시벤질)아미노)-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴
Figure pct00082
세슘 카보네이트 (658 mg, 2.019 mmol)을 1,4-디옥산 (10.0 mL) 및 물 (1.0 mL) 내 6-클로로-N-(2,4-디메톡시벤질)-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-4-아민 (433 mg, 1.010 mmol) 및 (3-시아노페닐)보론산 (297 mg, 2.019 mmol)의 혼합물에 부가했다. 얻어진 혼합물을 2 min 동안 N2로 살포시키고 (SP-4-4)-[2'-아미노[1,1'-비페닐]-2-일]클로로[디사이클로헥실[2',4',6'-트리(1-메틸에틸)[1,1'-비페닐]-2-일]포스핀]팔라듐 (79 mg, 0.101 mmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 120 °C에서 1.5 h 동안 마이크로파 조사 하에서 교반했다. 반응을 20 ml의 에틸 아세테이트 및 20 ml의 물로 켄칭했다. 유기 상을 분리하고 수성 용액을 에틸 아세테이트로 2회 추출했다. 조합시킨 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 탈기했다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 상에서 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (357 mg, 71%). C27H23FN7O2에 대한 LC-MS 계산치: 496.2 (M+H)+; 실험치: 496.3 (M+H)+.
단계 3. 3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴
Figure pct00083
TFA (5 mL) 내 3-(4-((2,4-디메톡시벤질)아미노)-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (357.3 mg, 0.721 mmol)의 용액을 100 oC에서 1h동안 교반했다. TFA을 감압 하에서 탈기하고 이후 20 ml의 포화 NaHCO3 수성 용액 및 20 ml의 에틸 아세테이트를 부가했다. 유기 상을 분리하고 수성 용액을 에틸 아세테이트로 2회 추출했다. 조합시킨 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 탈기했다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 상에서 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (213 mg, 61%). C18H13FN7에 대한 LC-MS m/z 계산치: 346.1 (M+H)+; 실험치: 346.3 (M+H)+.
단계 4. 3-(4-아미노-7-브로모-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴
Figure pct00084
THF (5 mL) 내 3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (213 mg, 0.617 mmol) 및 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (220 mg, 1.234 mmol)의 혼합물을 0 °C에서 1h 동안 교반했다. 실리카 겔 상 직접 정제에 의해 소정의 생성물을 얻었다 (175 mg, 67%). C18H12BrFN7에 대한 LC-MS 계산치: 424.0 (M+H)+ 및 426.0 (M+H)+; 실험치: 424.3 (M+H)+ 및 426.3 (M+H)+.
단계 5. 3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-7-(피리미딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴
Figure pct00085
THF (1 ml) 내 3-(4-아미노-7-브로모-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (220 mg, 0.519 mmol), 4-(트리부틸스타닐)피리미딘 (383 mg, 1.037 mmol), 및 구리(I) 클로라이드 (61.6 mg, 0.622 mmol), 리튬 클로라이드 (26.4 mg, 0.622 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (59.9 mg, 0.052 mmol)의 혼합물을 먼저 N2로 퍼징하고, 이후 가열시키고 90 °C에서 2 h 동안 교반했다. 반응을 메탄올로 희석하고 prep-LCMS (pH=2)로 정제하고 소정의 생성물을 얻었다. C22H15FN9에 대한 LC-MS 계산치: 424.1 (M+H)+; 실험치: 424.3 (M+H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) ppm 8.98 (s, 1H), 8.77 (d, J = 5.02 Hz, 1H), 8.38 (dd, J 1 = 4.60 Hz, J 2 = 1.32 Hz, 1H), 7.90-8.30 (bs, 2H), 7.76-7.89 (m, 3H), 7.66 (dd, J 1 = 5.25 Hz, J 2 = 1.25 Hz, 1H), 7.45-7.58 (m, 3H), 6.25 (s, 2H).
실시예 A15: 3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-7-(피리딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (화합물 15)의 합성
Figure pct00086
세슘 카보네이트 (46.1 mg, 0.141 mmol)을 1,4-디옥산 (2 mL) 및 물 (0.2 mL) 내 3-(4-아미노-7-브로모-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴 (30 mg, 0.071 mmol) 및 피리딘-4-일보론산 (17.38 mg, 0.141 mmol)의 혼합물에 부가했다. 얻어진 혼합물을 N2로 2 min 동안 살포시키고 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2′,4′,6′-트리이소프로필-1,1′-비페닐)[2-(2′-아미노-1,1′-비페닐)]팔라듐(II) (5.56 mg, 7.07 μmol)을 부가했다. 반응 혼합물을 120 °C에서 1.5 h 동안 마이크로파 조사 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 메탄올로 희석했다. prep. HPLC 상 직접 정제에 의해 소정의 생성물을 얻었다. C23H16FN8에 대한 LC-MS 계산치: 423.1 (M+H)+; 실험치: 423.3 (M+H)+.
실시예 A16: 3-(4-아미노-7-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 16)의 합성
Figure pct00087
단계 1. 3-(4-아미노-7-브로모-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)-2-플루오로벤조니트릴
Figure pct00088
이 화합물을, 단계 4에서 (3-시아노페닐)보론산을 (3-시아노-2-플루오로페닐)보론산으로 대체하여 실시예 A13, 단계 1 내지 단계 6에서와 유사한 절차에 의해 제조했다. C18H12BrFN7에 대한 LC-MS 계산치: 424.0 (M+H)+ 및 426.0 (M+H)+; 실험치: 424.3 (M+H)+ 및 426.3 (M+H)+.
단계 2. 3-(4-아미노-7-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)-2-플루오로벤조니트릴
Figure pct00089
이 화합물을, 피리딘-4-일보론산을 (1-메틸-1H-피라졸-5-일)보론산으로 대체하고, 그리고 3-(4-아미노-7-브로모-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴을 3-(4-아미노-7-브로모-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)-2-플루오로벤조니트릴로 대체하여 실시예 A15에서와 유사한 절차에 의해 제조했다. C22H17FN9에 대한 LC-MS 계산치: 426.2 (M+H)+; 실험치: 426.3 (M+H)+.
실시예 A17: 7-(1-((5-클로로피리딘-3-일)메틸)-1 H -피라졸-4-일)-3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5 H -피롤로[3,2- d ][1,2,4]트리아졸로[4,3- a ]피리미딘-5-온 (화합물 17)의 합성
Figure pct00090
단계 1: 에틸 3-(펜틸아미노)-1H-피롤-2-카복실레이트
Figure pct00091
에틸 3-아미노-1H-피롤-2-카복실레이트 (5 g, 32.4 mmol), 펜타날 (3.79 ml, 35.7 mmol), 및 소듐 시아노보로하이드라이드 (2.038 g, 32.4 mmol)를 메탄올 (64.9 ml) 내에서 실온에서 밤새 혼합했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 미정제 잔사를 플래시 크로마토그래피 (0 내지 100% 헥산 내 EtOAc)에 의해 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (4.4 g, 61%). C12H21N2O2 (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 225.2. 실험치: 225.1
단계 2: 에틸 3-(3-(에톡시카보닐)-1-펜틸티오우레이도)-1H-피롤-2-카복실레이트
Figure pct00092
바이알을 에틸 3-(펜틸아미노)-1H-피롤-2-카복실레이트 (4.4 g, 19.62 mmol), 디클로로메탄 (39.2 ml), 및 에톡시카보닐 이소티오시아네이트 (2.78 ml, 23.54 mmol)로 충전했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 물 (40 ml)로 켄칭하고, 층을 분리했다. 수층을 디클로로메탄 (3 x 40 mL)으로 추출하고 조합시킨 유기 분획을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 미정제 물질을 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다 (7.3 g, quant.). C16H26N3O4S (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 356.2. 실험치: 356.1.
단계 3: 1-펜틸-2-티옥소-2,3-디히드로-1H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온
Figure pct00093
마이크로파 바이알을 에틸 3-(3-(에톡시카보닐)-1-펜틸티오우레이도)-1H-피롤-2-카복실레이트 (7.31 g, 20.57 mmol) 및 소듐 에톡사이드 (21% w/w, 8.45 ml, 22.62 mmol) 용액으로 충전했다. 바이알의 뚜껑을 닫고 섭씨 120도에서 10분 동안 마이크로파 반응기에서 가열했다. 1M HCl 용액을 첨가하여 반응 혼합물을 중성 pH가 되게 하고 고체 생성물을 여과하고 건조시켰다(3.1g, 64%). C11H16N3OS (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 238.1. 실험치: 238.1.
단계 4: 2-하이드라조노-1-펜틸-2,3-디히드로-1H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온
Figure pct00094
바이알을 1-펜틸-2-티옥소-2,3-디히드로-1H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 (3.13 g, 13.19 mmol) 및 히드라진 수화물 (20 mL)로 충전했다. 반응 혼합물을 섭씨 100 도에서 밤새 교반했다. 형성된 고체를 여과하고 물로 세척하고 소정의 생성물을 얻었다 (2.2 g, 70%). C11H18N5O (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 236.1. 실험치: 236.1.
단계 5: 3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온
Figure pct00095
바이알을 (E)-2-하이드라조노-1-펜틸-2,3-디히드로-1H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 (4.8 g, 20.40 mmol), 한방울의 트리플루오로아세트산, 및 트리에틸 오르토아세테이트 (20 mL)로 충전했다. 반응 혼합물을 섭씨 110 도까지 3 시간 동안 가열시켰다. 현탁액을 여과하고, 헥산으로 세척하고, 건조시켰다 (4.0 g, 76%). C13H18N5O (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 260.1. 실험치: 260.2.
단계 6: 3-메틸-9-펜틸-6-(페닐설포닐)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온
Figure pct00096
바이알을 3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (단계 1로부터) (4 g, 15.43 mmol), 디클로로메탄 (40 mL), 디메틸아미노피리딘 (0.188 g, 1.543 mmol), 트리에틸아민 (3.23 ml, 23.14 mmol), 및 벤젠설포닐 클로라이드 (2.187 ml, 16.97 mmol)로 충전했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, 층을 분리했다. 수층을 디클로로메탄 (3 x 40 mL)으로 추출하고 조합시킨 유기 분획을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 미정제 물질을 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다 (6.1 g, quant.). C19H22N5O3S (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 400.1. 실험치: 400.1.
단계 7: 7-브로모-3-메틸-9-펜틸-6-(페닐설포닐)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온
Figure pct00097
바이알을 3-메틸-9-펜틸-6-(페닐설포닐)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (1 g, 2.503 mmol), 건조 THF (30 mL)로 충전하고 혼합물을 섭씨 -78 도까지 냉각했다. 리튬 디이소프로필아미드 용액 (헥산 내 1M/THF, 3.13 ml, 3.13 mmol)을 한방울씩 부가했다. 반응 혼합물을 -78 °C에서 1.5 시간 동안 유지했다. 건조 THF (3 ml) 내 1,2-디브로모-1,1,2,2-테트라클로로에탄 (1.223 g, 3.75 mmol)의 용액을 한방울씩 반응 혼합물에 부가하고 반응 혼합물을 -78 °C에서 추가로 1.5 시간 동안 유지했다. 반응 혼합물을 sat. aq. NH4Cl 용액 (30 mL)로 켄칭하고 디클로로메탄 (30 mL)로 희석했다. 층을 분리하고 수층을 DCM로 추출했다 (3 x 30 mL). 조합시킨 유기 분획을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 미정제 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피 (0 내지 100% DCM 내 EtOAc)에 의해 정제하고 소정의 생성물을 얻었다 (0.84 g, 70%). C19H21BrN5O3S (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 478.1. 실험치: 478.1.
단계 8: 3-클로로-5-((4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)피리딘
Figure pct00098
바이알을 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.5 g, 2.58 mmol), 3-(브로모메틸)-5-클로로피리딘 히드로브로마이드 (0.741 g, 2.58 mmol), 세슘 카보네이트 (2.52 g, 7.73 mmol), 및 DMF (6.44 ml)로 충전했다. 반응 혼합물을 섭씨 60 도에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (10 ml)로 켄칭하고 디클로로메탄 (10 ml)로 희석했다. 층을 분리하고, 수층을 디클로로메탄으로 추출했다 (3 x 10 mL). 조합시킨 디클로로메탄 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 자동화 플래시 크로마토그래피 (0 내지 100% DCM 내 EtOAc)에 의한 정제로 생성물을 얻었다 (0.548 g, 67%). C15H20BClN3O2 (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 320.1, 322.1. 실험치: 320.1, 322.1
단계 9: 7-(1-((5-클로로피리딘-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온
바이알을 7-브로모-3-메틸-9-펜틸-6-(페닐설포닐)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (0.01 g, 0.021mmol), 3-클로로-5-((4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)피리딘 (0.013 g, 0.042 mmol), 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2′,4′,6′-트리이소프로필-1,1′-비페닐)[2-(2′-아미노-1,1′-비페닐)]팔라듐(II) (5.00 mg, 0.006 mmol) 및 포타슘 포스페이트 3염기 (0.016 g, 0.074 mmol)로 충전했다. 1,4-디옥산 (0.35 ml) 및 물 (0.07 ml)를 부가하고 반응 혼합물을 질소 가스로 5 분 동안 살포시키고 이후 90 °C에서 2 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고 소듐 히드록사이드 (10 mg)을 부가했다. 반응 혼합물을 섭씨 40 도에서 60 분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고 DMF (5 ml)로 희석했다. 분취용 HPLC (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)에 의한 정제로 생성물을 TFA 염으로서 얻었다 (2 mg, 21%). C22H24ClN8O (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 451.2, 453.2. 실험치: 451.2, 453.2.
실시예 A18: 3-메틸-7-(1-((5-메틸피리딘-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (화합물 18)의 합성
Figure pct00099
이 화합물을 단계 8에서 3-(브로모메틸)-5-클로로피리딘 히드로브로마이드 대신 3-(브로모메틸)-5-메틸피리딘을 사용하여 실시예 A17에 대한 기재와 유사한 절차를 사용하여 제조했다. C23H27N8O (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 431.2. 실험치: 431.3.
실시예 A19: 3-메틸-9-펜틸-7-(1-(티에노[3,2-b]피리딘-6-일메틸)-1H-피라졸-4-일)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (화합물 19)의 합성
Figure pct00100
이 화합물을 단계 8에서 3-(브로모메틸)-5-클로로피리딘 히드로브로마이드 대신 6-(브로모메틸)티에노[3,2-b]피리딘을 사용하여 실시예 A17에 대한 기재와 유사한 절차를 사용하여 제조했다. C24H25N8OS (M+H)에 대한 LCMS 계산치: 473.2. 실험치: 473.3.
실시예 A20: 7-(1-((2-(2-(디메틸아미노)아세틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (화합물 20)
Figure pct00101
단계 1: tert-부틸 6-((4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트
Figure pct00102
플라스크를 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (.5 g, 2.58 mmol), tert-부틸 6-(하이드록시메틸)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (0.339 g, 1.288 mmol), 트리페닐포스핀 (0.743 g, 2.83 mmol), 및 THF (12 ml)로 충전했다. 용액을 0 oC까지 냉각하고 DIAD (0.601 ml, 3.09 mmol)을 한방울씩 부가했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물로 세척하고, 건조시키고 농축했다. 생성물을 헥산/EtOAc (max. EtOAc 60%)로 용리하면서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하고 생성물을 얻었다. C24H35BN3O4 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: m/z = 440.3; 실험치 440.3.
단계 2: 7-브로모-3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온
Figure pct00103
TBAF (THF 내 1.0 M) (2.0 ml, 2.0 mmol)을 THF (4.0 ml) 내 7-브로모-3-메틸-9-펜틸-6-(페닐설포닐)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (0.360 g, 0.753 mmol)의 용액에 부가하고, 이후 반응을 50 °C에서 1 h 동안 교반했다. 용매를 제거하고 생성물을 CH2Cl2/MeOH (max. MeOH 10%)로 용리하면서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제했다. C13H17BrN5O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: m/z = 338.1; 실험치 338.1.
단계 3: tert-부틸 6-((4-(3-메틸-5-옥소-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-7-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트
Figure pct00104
t-BuOH (1.5 ml)/물 (0.6 ml) 내 7-브로모-3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (실시예 A20, 단계 2로부터) (0.040 g, 0.118 mmol), tert-부틸 6-((4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (0.062 g, 0.142 mmol), 디클로로[1,1'-비스(디사이클로헥실포스피노)페로센]팔라듐(II), 디클로로메탄 부가물 (Pd-127) (8.94 mg, 0.012 mmol) 및 세슘 플루오라이드 (0.090 g, 0.591 mmol)의 혼합물을 진공처리하고 N2로 3 회 대체했다. 반응을 이후 105 °C에서 2 h 동안 교반하고, 실온까지 냉각하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물로 세척하고, 건조시키고 농축했다. 생성물을 CH2Cl2/MeOH (max. MeOH 10%)로 용리하면서 칼럼에 의해 정제했다. C31H39N8O3 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: m/z = 571.3; 실험치 571.5.
단계 4: 3-메틸-9-펜틸-7-(1-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온
Figure pct00105
TFA (0.5 ml, 6.49 mmol)을 CH2Cl2 (0.5 ml) 내 tert-부틸 6-((4-(3-메틸-5-옥소-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-7-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (50.0 mg, 0.088 mmol)의 용액에 부가하고, 이후 반응을 실온에서 30 min 동안 교반했다. 용매를 이후 제거하여 미정제 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C26H31N8O (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: m/z = 471.3; 실험치 471.2.
단계 5: 7-(1-((2-(2-(디메틸아미노)아세틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-9-펜틸-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온
디메틸글리시노일 클로라이드 (3.10 mg, 0.026 mmol)을 CH2Cl2 (0.8 ml) 내 3-메틸-9-펜틸-7-(1-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)-6,9-디히드로-5H-피롤로[3,2-d][1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리미딘-5-온 (6.0 mg, 0.013 mmol) 및 트리에틸아민 (8.89 μl, 0.064 mmol)의 용액에 실온에서 부가하고 30 min 동안 교반했다. 용매를 제거하고, 혼합물을 아세토니트릴/물로 희석하고 prep HPLC (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)에 의해 정제하고 소정의 화합물을 그의 TFA 염으로서 얻었다. C30H38N9O2 (M+H)+에 대한 LC-MS 계산치: m/z = 556.3; 실험치 556.3.
실시예 A21. 3-(2-((5-(1H-피라졸-1-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-5-아미노-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 21A) 및 3-(2-((5-(1H-피라졸-1-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-5-아미노-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴 (화합물 21B)
Figure pct00106
및
Figure pct00107
표제 화합물의 혼합물을 2-(1H-테트라졸-5-일)피리딘을 5-(1H-피라졸-1-일)-1H-테트라졸로 대체하여 실시예 A3에 대한 기재와 유사한 절차를 사용하여 제조했다. 화합물 21A을 분취용 LC-MS (pH 2, TFA와 함께 아세토니트릴/물)에 의해 정제하고 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C21H15N14 (M+H)+에 대한 LCMS 계산치: 463.2; 실험치 463.2.
본 발명의 다양한 변형은, 본원에 설명된 것에 더하여, 전술한 설명으로부터 당업자에게 명백할 것이다. 그러한 변형은 또한 첨부된 청구범위의 범위 내에 속하도록 의도된다. 본 출원에 언급된, 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물을 포함하는 각각의 참고문헌은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> INCYTE CORPORATION <120> COMBINATION THERAPY COMPRISING A2A/A2B AND PD-1/PD-L1 INHIBITORS <130> 20443-0660WO1 <140> PCT/US2020/067593 <141> 2020-12-30 <150> 62/956,960 <151> 2020-01-03 <160> 11 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 288 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 20 25 30 Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 35 40 45 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 50 55 60 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 85 90 95 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 100 105 110 Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 115 120 125 Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 130 135 140 Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 145 150 155 160 Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly 165 170 175 Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys 180 185 190 Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro 195 200 205 Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly 210 215 220 Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro 225 230 235 240 Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly 245 250 255 Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg 260 265 270 Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu 275 280 285 <210> 2 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 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Claims (26)

  1. 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법:
    (i) A2A/A2B의 억제제; 그리고
    (ii) PD-1/PD-L1의 억제제.
  2. 제1항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 식 (I)의 화합물:
    Figure pct00108

    (I),
    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
    Cy1은 할로 및 CN로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 치환체에 의해 치환된 페닐;
    Cy2는 5-6 원 헤테로아릴 또는 4-7 원 헤테로사이클로알킬, 여기서 Cy2의 5-6 원 헤테로아릴 또는 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 C1-3 알킬, C1-3 알콕시, NH2, NH(C1-3 알킬) 및 N(C1-3 알킬)2로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3 기로 임의로 치환되고;
    R2는 페닐-C1-3 알킬-, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬-, (5-7 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-, 및 ORa2로부터 선택되고, 여기서 R2의 페닐-C1-3 알킬-, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬-, (5-7 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 RC 치환체로 임의로 치환되고;
    Ra2는 1 또는 2 독립적으로 선택되는 RC 치환체로 임의로 치환된 (5-7 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-;
    각각의 RC는 할로, C1-6 알킬, C6 아릴, 5-7 원 헤테로아릴, (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-, ORa4, 및 NRc4Rd4로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    각각의 Ra4, Rc4, 및 Rd4는 H 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되는 방법.
  3. 제1 또는 2항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 다음으로부터 선택되는 방법:
    3-(5-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-1H-테트라졸-1-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    3-(5-아미노-2-((3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
    3-(2-((5-(1H-피라졸-1-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-5-아미노-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 식 (II)의 화합물:
    Figure pct00109

    (II)
    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
    R2는 H 및 CN로부터 선택되고;
    Cy1은 할로 및 CN로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 치환체에 의해 치환된 페닐;
    L는 C1-3 알킬렌, 여기서 상기 알킬렌은 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R8D 치환체로 임의로 치환되고;
    Cy4는 페닐, 사이클로헥실, 피리딜, 피롤리디노닐, 및 이미다졸릴로부터 선택되고, 여기서 페닐, 사이클로헥실, 피리딜, 피롤리디노닐, 및 이미다졸릴은 각각 R8D 및 R8로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3 치환체로 임의로 치환되고;
    각각의 R8는 할로, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C2-4 알케닐, C2-4 알키닐, 페닐, C3-7 사이클로알킬, 5-6 원 헤테로아릴, 4-7 원 헤테로사이클로알킬, 페닐-C1-3 알킬, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬, (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R8의 C1-6 알킬, C2-4 알케닐, C2-4 알키닐, 페닐, C3-7 사이클로알킬, 5-6 원 헤테로아릴, 4-7 원 헤테로사이클로알킬, 페닐-C1-3 알킬, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬, (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R8A 치환체로 임의로 치환되고;
    각각의 R8A는 할로, C1-6 알킬, 5-6 원 헤테로아릴, 4-7 원 헤테로사이클로알킬, CN, ORa81, 및 NRc81Rd81로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R8A의 C1-3 알킬, 5-6 원 헤테로아릴, 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R8B 치환체로 임의로 치환되고;
    각각의 Ra81, Rc81, 및 Rd81은 H, C1-6 알킬, 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 Ra81, Rc81, 및 Rd81의 C1-6 알킬 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R8B 치환체로 임의로 치환되고;
    각각의 R8B는 할로 및 C1-3 알킬로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    각각의 R8D는 OH, CN, 할로, C1-6 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 방법.
  5. 제1 또는 4항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 다음으로부터 선택되는 방법:
    3-(5-아미노-2-(하이드록시(페닐)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    3-(5-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    5-아미노-7-(3-시아노-2-플루오로페닐)-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-8-카보니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
    3-(5-아미노-2-((2-플루오로-6-(((1-메틸-2-옥소피롤리딘-3-일)아미노)메틸)페닐)(하이드록시)메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)-2-플루오로벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  6. 제1항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 식 (III)의 화합물:
    Figure pct00110

    (III)
    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
    Cy1은 할로 및 CN로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 치환체에 의해 치환된 페닐;
    R2는 5-6 원 헤테로아릴 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되고, 여기서 R2의 5-6 원 헤테로아릴 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R2A 치환체로 임의로 치환되고;
    각각의 R2A는 D, 할로, C1-6 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R4는 페닐-C1-3 알킬-, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬-, (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬로부터 선택되고 여기서 R4의 페닐-C1-3 알킬-, C3-7 사이클로알킬-C1-3 알킬-, (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, 및 (4-7 원 헤테로사이클로알킬)-C1-3 알킬-은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R4A 치환체로 임의로 치환되고;
    각각의 R4A는 할로, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, CN, ORa41, 및 NRc41Rd41로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    각각의 Ra41, Rc41, 및 Rd41은 H 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되는 방법.
  7. 제1 또는 6항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 다음으로부터 선택되는 방법:
    3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴;
    3-(8-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    3-(8-아미노-2-(아미노(2,6-디플루오로페닐)메틸)-5-(4-메틸옥사졸-5-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
    3-(8-아미노-2-((2,6-디플루오로페닐)(하이드록시)메틸)-5-(2,6-디메틸피리딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  8. 제1항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 식 (IV)의 화합물:
    Figure pct00111

    (IV)
    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
    Cy1은 할로 및 CN로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 치환체에 의해 치환된 페닐;
    Cy2는 5-6 원 헤테로아릴 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되고, 여기서 Cy2의 5-6 원 헤테로아릴 및 4-7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R6 치환체로 임의로 치환되고;
    각각의 R6는 할로, C1-6 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R2는 페닐-C1-3 알킬- 또는 (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-, 여기서 R2의 페닐-C1-3 알킬- 및 (5-6 원 헤테로아릴)-C1-3 알킬-은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택되는 R2A 치환체로 임의로 치환되고; 그리고
    각각의 R2A는 할로, C1-6 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 방법.
    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  9. 제1 또는 8항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 다음으로부터 선택되는 방법:
    3-(4-아미노-2-(피리딘-2-일메틸)-7-(피리미딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-7-(피리미딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    3-(4-아미노-2-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)-7-(피리딘-4-일)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 그리고
    3-(4-아미노-7-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-2H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-c]피리딘-6-일)-2-플루오로벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  10. 제1항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 방법.
  11. 제1항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 방법.
  12. 제1 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1/PD-L1의 억제제는 (R)-1-((7-시아노-2-(3'-(3-(((R)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)메틸)-1,7-나프티리딘-8-일아미노)-2,2'-디메틸비페닐-3-일)벤조[d]옥사졸-5-일)메틸)피롤리딘-3-카카복실산, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 방법.
  13. 제1 내지 11 항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1/PD-L1의 억제제는 펨브롤리주맙인 방법.
  14. 제1 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1/PD-L1의 억제제는 아테졸리주맙인 방법.
  15. 제1 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1/PD-L1의 억제제는 항체 X, 여기서 항체 X 는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고 는 VH 상보성 결정 영역 (CDR)1, VH CDR2, 및 VH CDR3를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 도메인을 포함하고, 여기서:
    VH CDR1는 아미노산 서열 SYWMN (SEQ ID NO:6)을 포함하고;
    VH CDR2는 아미노산 서열 VIHPSDSETWLDQKFKD (SEQ ID NO:7)을 포함하고; 그리고
    VH CDR3는 아미노산 서열 EHYGTSPFAY (SEQ ID NO:8)을 포함하고; 그리고
    여기서 항체는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하고, 여기서:
    VL CDR1는 아미노산 서열 RASESVDNYGMSFMNW (SEQ ID NO:9)을 포함하고;
    VL CDR2는 아미노산 서열 AASNQGS (SEQ ID NO:10)을 포함하고; 그리고
    VL CDR3는 아미노산 서열 QQSKEVPYT (SEQ ID NO:11)을 포함하는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 항체 X는 인간화 항체인 방법.
  17. 제1 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, A2A/A2B의 억제제는 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 1000 mg의 투여량으로 대상체에 투여되는 방법.
  18. 제1 내지 17항 중 어느 한 항에 있어서, A2A/A2B 억제제는 1일1회, 격일로, 또는 주당1회 대상체에 투여되는 방법.
  19. 제1 내지 18 항 중 어느 한 항에 있어서, A2A/A2B의 억제제 및 PD-1/PD-L1의 억제제는 동시에 투여되는 방법.
  20. 제1 내지 18항 중 어느 한 항에 있어서, A2A/A2B의 억제제 및 PD-1/PD-L1의 억제제는 순차적으로 투여되는 방법.
  21. 제1 내지 20항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 방법.
  22. 제1 내지 20항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 흑색종, 자궁내막암, 폐암, 신장암, 방광암, 유방암, 췌장암 및 결장암으로부터 선택되는 방법.
  23. 제1 내지 20항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 흑색종인 방법.
  24. 제1 내지 20항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 결장암인 방법.
  25. 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법:
    (i) 3-(8-아미노-5-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리다진-3-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-6-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
    (ii) 항체 X인 PD-1/PD-L1의 억제제;
    여기서 A2A/A2B의 억제제는 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여되고, 여기서 A2A/A2B의 억제제는 1일1회 또는 격일로 투여되고; 그리고
    항체 X는 약 100 mg 내지 약 1000 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여되고;
    여기서 항체 X 는 VH 상보성 결정 영역 (CDR)1, VH CDR2, 및 VH CDR3를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고, 여기서:
    VH CDR1는 아미노산 서열 SYWMN (SEQ ID NO:6)을 포함하고;
    VH CDR2는 아미노산 서열 VIHPSDSETWLDQKFKD (SEQ ID NO:7)을 포함하고; 그리고
    VH CDR3는 아미노산 서열 EHYGTSPFAY (SEQ ID NO:8)을 포함하고; 그리고
    여기서 항체는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하고, 여기서:
    VL CDR1는 아미노산 서열 RASESVDNYGMSFMNW (SEQ ID NO:9)을 포함하고;
    VL CDR2는 아미노산 서열 AASNQGS (SEQ ID NO:10)을 포함하고; 그리고
    VL CDR3는 아미노산 서열 QQSKEVPYT (SEQ ID NO:11)을 포함함.
  26. 다음을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 신장암, 구강암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 비-흑색종 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 갑상선암, 및 메르켈 세포 암종으로부터 선택되는 암을 치료하는 방법:
    (i) 3-(5-아미노-2-((5-(피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)메틸)-8-(피리미딘-4-일)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-7-일)벤조니트릴, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 A2A/A2B의 억제제; 그리고
    (ii) 항체 X인 PD-1/PD-L1의 억제제;
    여기서 A2A/A2B의 억제제는 유리 염기 기준으로 약 0.1 mg 내지 약 500 mg의 투여량으로 대상체에 투여되고, 여기서 A2A/A2B의 억제제는 1일1회 또는 격일로 투여되고; 그리고
    항체 X는 약 100 mg 내지 약 1000 mg Q4W의 투여량으로 대상체에 투여되고;
    여기서 항체 X 는 VH 상보성 결정 영역 (CDR)1, VH CDR2, 및 VH CDR3를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고, 여기서:
    VH CDR1는 아미노산 서열 SYWMN (SEQ ID NO:6)을 포함하고;
    VH CDR2는 아미노산 서열 VIHPSDSETWLDQKFKD (SEQ ID NO:7)을 포함하고; 그리고
    VH CDR3는 아미노산 서열 EHYGTSPFAY (SEQ ID NO:8)을 포함하고; 그리고
    여기서 항체는 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하고, 여기서:
    VL CDR1는 아미노산 서열 RASESVDNYGMSFMNW (SEQ ID NO:9)을 포함하고;
    VL CDR2는 아미노산 서열 AASNQGS (SEQ ID NO:10)을 포함하고; 그리고
    VL CDR3는 아미노산 서열 QQSKEVPYT (SEQ ID NO:11)을 포함함.
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