Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

KR20160117608A - 뎅기열 바이러스에 대한 항체 분자 및 그의 용도 - Google Patents

뎅기열 바이러스에 대한 항체 분자 및 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20160117608A
KR20160117608A KR1020167024916A KR20167024916A KR20160117608A KR 20160117608 A KR20160117608 A KR 20160117608A KR 1020167024916 A KR1020167024916 A KR 1020167024916A KR 20167024916 A KR20167024916 A KR 20167024916A KR 20160117608 A KR20160117608 A KR 20160117608A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody molecule
seq
sequence
antibody
gly
Prior art date
Application number
KR1020167024916A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102356951B1 (ko
Inventor
루케 로빈슨
재커리 슈라이버
제임스 미예트
그레고리 밥콕
카르딕 비스와나탄
Original Assignee
비스테라, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 비스테라, 인크. filed Critical 비스테라, 인크.
Publication of KR20160117608A publication Critical patent/KR20160117608A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102356951B1 publication Critical patent/KR102356951B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1081—Togaviridae, e.g. flavivirus, rubella virus, hog cholera virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
    • G01N2333/185—Flaviviruses or Group B arboviruses, e.g. yellow fever virus, japanese encephalitis, tick-borne encephalitis, dengue
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

뎅기열 바이러스에 특이적으로 결합하는 항체 분자를 개시한다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4에 결합한다. 항체 분자는 뎅기열 바이러스를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 사용될 수 있다.

Description

뎅기열 바이러스에 대한 항체 분자 및 그의 용도{ANTIBODY MOLECULES TO DENGUE VIRUS AND USES THEREOF}
본 발명은 뎅기열 바이러스에 대한 항체 분자 및 그의 용도에 관한 것이다.
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2014년 2월 11일에 출원된 미국 가출원 제61/938,646호, 2014년 6월 27일에 출원된 미국 가출원 제62/017,970호, 및 2014년 9월 5일에 출원된 미국 가출원 제62/046,379호에 대한 우선권을 주장한다. 선행 출원의 개시 내용은 본 출원의 (개시 내용에 있어 그 전문으로 참고에 포함되며) 개시 내용의 일부로 간주한다.
목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자 제출된 서열 목록을 포함하며, 이로써 그 전문으로 참고에 포함된다. 2015년 1월 7일에 생성된 상기 ASCII 복사본은 P2029-7002WO_SL.txt로 명명하였으며 그 크기는 75,052바이트이다.
뎅기열 바이러스는 플라비비리데(Flaviviridae)과, 플라비바이러스(Flavivirus) 속에 속하는 양성 센스 RNA 바이러스이다. 뎅기열 바이러스는 세계 열대 및 아열대 지역에 걸쳐 널리 분포하며 모기 매개체에 의해 인간에게 전파된다. 뎅기열 바이러스는 8개국 이상의 열대 아시아 국가에서 어린이 입원 및 사망의 주된 원인이 된다(WHO, 1997. Dengue haemorrhagic fever: diagnosis, treatment prevention and control--2nd ed. Geneva: WHO). 뎅기열 바이러스에는 4가지 혈청형(DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4)이 존재하며, 이들은 매년 대략 5천만-1억 건의 뎅기열 및 500,000건의 뎅기열 바이러스 감염의 더 심각한 형태인 뎅기 출혈열/뎅기 쇼크 증후군(DHF(dengue hemorrhagic fever)/DSS(dengue shock syndrome))을 일으킨다(Gubler, D. J. & Meltzer, M. 1999 Adv Virus Res 53:35-70). DHF/DSS는 1차 뎅기열 바이러스 감염과 상이한 혈청형을 가진 2차 뎅기열 바이러스 감염을 경험한 어린이 및 성인, 그리고 순환하는 뎅기 특이적 모계 항체를 계속해서 갖는 영아의 1차 감염에서 주로 관찰된다(Burke, D. S. et al. 1988 Am J Trop Med Hyg 38:172-80; Halstead, S. B. et al. 1969 Am J Trop Med Hyg 18:997-1021; Thein, S. et al. 1997 Am J Trop Med Hyg 56:566-72).
뎅기열 바이러스의 상이한 혈청형은 아미노산 수준에서 약 25-40% 상이하고 항원성에 차이를 가지며, 이러한 변이는 모든 혈청형에 대해 효과적인 요법을 만들려는 노력에 방해가 되어 왔다.
뎅기열 바이러스의 4가지 모든 혈청형은 바이러스 표면에 E(외피) 단백질을 나타낸다. E 단백질은 바이러스가 숙주 세포에 부착하는 데에 기여한다. E 단백질은 DI 도메인(9가닥 베타 배럴(barrel)), DⅡ 도메인(숙주 세포와의 융합에 관련된 도메인), 및 DⅢ 도메인(면역글로불린 유사 도메인)을 포함한다. 인간에서 E 단백질에 대한 체액성 반응은 일반적으로 교차 혈청형 반응성은 높지만 중화 활성이 낮은 많은 항체로 DI 및 DⅡ 영역을 표적화한다.
뎅기열 바이러스에 대한 새로운 예방요법 및 치료요법, 특히 바이러스의 4가지 혈청형 모두에 대해 효과적인 요법이 당 업계에 요구된다.
요약
본 개시는, 적어도 일부분, 뎅기열 바이러스, 예를 들어, 뎅기열 바이러스 E 단백질에 결합하고, 본원에 개시된 기능적 구조적 특성을 포함하는 항체 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 EDⅢ(E 단백질 DIII 도메인)의 "A" 베타 가닥에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 적어도 1, 2, 3, 또는 4가지 뎅기열 바이러스 혈청형, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4에 결합하고/거나 이들을 중화시킨다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 표 1로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 항체 A11과 비교하여 VH S26의 결실 및/또는 VH T33V 치환을 포함한다. 상기 돌연변이는, 일부 실시양태에서, 하나 이상의 특성, 예를 들어, 하나 이상의 뎅기열 바이러스 혈청형, 예를 들어, 혈청형 DV-4에 대한 항체 친화도를 향상시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 4가지 뎅기 혈청형 모두에 보존되는 EDⅢ 상의 부위를 표적화한다. 또한, 항체 분자를 코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포, 약학 조성물, 및 항체 분자의 제조 방법을 제공한다. 본원에 개시된 항-뎅기열 항체 분자는 (단독으로 또는 기타 제제 또는 치료 방식과 병용하여) 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 또는 DV-4를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 이용될 수 있다.
따라서, 특정 측면에서, 본 개시는 하기 목록 1의 특성 중 하나 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 모든) 특성을 갖는 항체 분자(예를 들어, 단리된, 재조합, 또는 인간화 항체 분자)를 제공한다.
a) EDⅢ(예를 들어, 임의의 뎅기열 바이러스 혈청형, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 또는 DV-4 중 하나 이상의 EDⅢ, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 또는 DV-4 중 4가지 EDⅢ 모두)에 높은 친화도로, 예를 들어, 약 100 nM 미만, 전형적으로 약 10 nM, 보다 전형적으로, 약 10-0.01 nM, 약 5-0.01 nM, 약 3-0.05 nM, 약 1-0.1 nM 또는 더 강한, 예를 들어, 약 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05, 또는 0.01 nM 미만의 해리 상수(KD)로 결합하거나,
b) DV-4 EDⅢ에 높은 친화도로, 예를 들어, 약 100 nM 미만, 예를 들어, 약 10 nM, 예를 들어, 약 10-1 nM 또는 더 강한, 예를 들어, 약 10, 8, 6, 5, 4, 또는 3 nM 미만의 해리 상수(KD)로 결합하거나,
c) DV-4 및/또는 DV-3 EDⅢ 도메인에 항체 A11(본원에서 4E5A로도 언급됨) 및/또는 항체 4E11보다 더 큰 친화도로, 예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 15, 100, 1,000, 5,000, 또는 10,000배 더 큰 친화도로 결합하거나,
d) 예를 들어, 포커스 감소 중화(focus reduction neutralization) 시험 또는 바이러스 활성의 중화를 평가하기 위한 관련된 시험에서, 뎅기열 바이러스(예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4 중 하나 이상, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4 모두)를 중화시키거나,
e) 예를 들어, 포커스 감소 중화 시험 또는 바이러스 활성의 중화를 평가하기 위한 관련된 시험에서, 항체 A11 및/또는 항체 4E11과 비교하여 향상된 IC50, 예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 25, 50, 75, 100, 또는 1,000배 향상된 IC50으로 DV-4를 중화시키거나,
f) A11에 비해, 예를 들어 VH 및/또는 VL 내, 예를 들어 하나 이상의 CDR 또는 골격 영역 내, 하나 이상의 위치에서 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환)를 가지거나,
g) A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 치환, 예를 들어, T33V 치환을 가지거나,
h) A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 결실을 가지거나,
i) A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 치환, 예를 들어, T33V 돌연변이 및 A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 결실 둘다를 가지거나,
j) A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 치환, 예를 들어, T33V 돌연변이를 가지고, 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4 중 하나 이상(예를 들어, 모두)에의 결합 및/또는 그의 중화가 (예를 들어, A11에 비해) 향상되거나,
k) A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 결실을 가지며, 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4 중 하나 이상(예를 들어, 모두), 예를 들어, DV-4에의 결합 및/또는 그의 중화가 (예를 들어, A11에 비해) 향상되거나,
l) A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 치환, 예를 들어, T33V 돌연변이 및 A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 결실 둘다를 가지며, 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4 중 하나 이상(예를 들어, 모두), 예를 들어, DV-4에의 결합 및/또는 그의 중화가 (예를 들어, A11에 비해) 향상되거나,
m) [도 10a-10b], [도 11] 및 [도 19- 21]에 열거된 하나 이상의 (예를 들어, 모든) 뎅기열 바이러스 균주, 예를 들어, 하나 이상의 DV-2 균주, 하나 이상의 DV-3 균주, 하나 이상의 DV-4 균주, 예를 들어, DENV-4 BC2, DENV-4-Sing10, DENV-4 NewCal09, DENV-4 Phil56, DENV-3 Sing09, DENV-3 Nic10, DENV-3 H87, DENV-2 페루95, DENV-2 Sing08, DENV-2 NGC, DENV-1 하와이/1944, DENV-2 뉴기니/1944 (NGC), DENV-3 필리핀/1956 (H87), DENV-4 멕시코/1997 (BC287/97), 및 DENV-4 H241 중 하나 이상의 EDⅢ에 대해, 예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 25, 50, 75, 100, 또는 1,000배 더 큰 친화도로 향상된 결합을 나타내거나,
n) 비리온 표면 상의 E 단백질의 고유한 구조를 파괴하여, 예를 들어, 바이러스를 불활성화시킬 수 있거나,
o) EDⅢ 상의 에피토프, 예를 들어, A11 또는 B11 단클론 항체에 의해 인식되는 에피토프와 동일하거나 유사한 에피토프에 특이적으로 결합하거나,
p) 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88과 동일하거나 유사한 결합 친화도 또는 특이성, 또는 둘다를 나타내거나,
q) 표 1에 기재된 항체 분자, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88(예를 들어, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역)와 동일하거나 유사한 결합 친화도 또는 특이성, 또는 둘다를 나타내거나,
r) 표 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자(예를 들어, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역)와 동일하거나 유사한 결합 친화도 또는 특이성, 또는 둘다를 나타내거나,
s) 본원에 기재된 항체 분자, 예를 들어, 표 1로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88인 제2 항체 분자의 EDⅢ에 대한 결합을 억제하거나, 예를 들어, 경쟁적으로 억제하거나,
t) 본원에 기재된 항체 분자, 예를 들어, 표 1로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88인 제2 항체 분자와 EDⅢ에 대해 동일하거나 겹치는 에피토프에 결합하거나,
u) 본원에 기재된 항체 분자, 예를 들어, 표 1로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88인 제2 항체 분자와 EDⅢ에 대한 결합에 대해 경쟁하거나 동일한 에피토프에 결합하거나,
v) 본원에 기재된 항체 분자, 예를 들어, 표 1로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 하나 이상의 생물학적 특성을 가지거나,
w) 본원에 기재된 항체 분자, 예를 들어, 표 1로부터 선택된 항체 분자, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 하나 이상의 약동학적 특성을 가지거나,
x) 뎅기열 바이러스의 하나 이상의 활성을 억제하며, 예를 들어, 바이러스를 중화한다(예를 들어, 포커스 감소 중화 시험 또는 바이러스 활성의 중화를 평가하기 위한 관련된 시험에서 측정됨).
일부 실시양태에서, 항체 분자는 상기 목록 1의 하나 이상의 기능적 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)과 함께, A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, T33V 돌연변이를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 상기 목록 1의 하나 이상의 기능적 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)과 함께, A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 결실을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 상기 목록 1의 하나 이상의 기능적 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)과 함께, A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, T33V 돌연변이 및 A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 돌연변이(예를 들어, 하나 이상의 결실, 삽입, 치환, 예를 들어, 보존적 치환), 예를 들어, 결실 둘다를 갖는다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 상기 목록 1의 하나 이상의 기능적 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)과 함께, A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 T33V 돌연변이를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 상기 목록 1의 하나 이상의 기능적 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)과 함께, A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 결실을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 상기 목록 1의 하나 이상의 기능적 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)과 함께, A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 T33V 돌연변이 및 A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 결실 둘다를 갖는다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 상기 목록 1의 하나 이상의 기능적 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)과 함께, A11에 비해 중쇄 CDR1 영역에 T33V 돌연변이 및 A11에 비해 중쇄 FW1 내 위치 26에서 결실 둘다를 갖는다. 예를 들어, 항체 분자는 (예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 또는 DV-4의) EDⅢ에 높은 친화도로, 예를 들어, 약 100 nM 미만, 전형적으로 약 10 nM, 보다 전형적으로, 약 10-0.01 nM, 약 5-0.01 nM, 약 3-0.05 nM, 또는 약 1-0.1 nM 또는 더 강한, 예를 들어, 약 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05, 또는 0.01 nM 미만의 해리 상수(KD)로 결합할 수 있다. 또 다른 예로서, 항체 분자는 DV-4 EDⅢ에 높은 친화도로, 예를 들어, 약 100 nM 미만, 예를 들어, 약 10 nM, 예를 들어, 약 10-1 nM 또는 더 강한, 예를 들어, 약 10, 8, 6, 5, 4, 또는 3 nM 미만의 해리 상수(KD)로 결합할 수 있다. 게다가, 항체 분자는, 예를 들어, 포커스 감소 중화 시험 또는 바이러스 활성의 중화를 평가하기 위한 관련된 시험에서, 항체 A11 및/또는 항체 4E11에 비해 향상된 IC50, 예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 100, 1,000배 향상된 IC50으로 DV-4를 중화시킬 수 있다.
특정 실시양태에서, 친화도는 경쟁 ELISA 또는 SPR에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, 친화도는 BIA코어(BIAcore), ELISA, 또는 유세포 분석법 중 하나 이상에 의해 측정된다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 인간화 항체이며, 상기 목록 1의 하나 이상의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 EDⅢ에 높은 친화도로, 예를 들어, 뮤린 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, 4E11, A11 또는 B11의 KD보다 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 더 낮은 KD로 결합한다.
일부 실시양태에서, 항체 분자의 발현 수준은 뮤린 항체 분자, 예를 들어, 본원에 기재된 뮤린 항-뎅기열 항체 분자의 발현 수준보다 더 높은, 예를 들어, 적어도 약 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10배 더 높다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 포유동물 세포, 예를 들어, 인간 또는 설치류 세포에서 발현된다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 뮤린 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, 본원에 기재된 뮤린 항-뎅기열 항체 분자의 IC50보다 더 낮은, 예를 들어, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 더 낮은 IC50(50% 억제 시 농도)로 하나 이상의 뎅기열 바이러스 활성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 뎅기열 바이러스 활성은, 예를 들어, 모든 보충 자료를 포함한 문헌(Tharakaramana et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Apr 23; 110(17):E1555-64. doi: 10.1073/pnas.1303645110. Epub 2013 Apr 8)(그 전문이 본원에서 명시적으로 참고적으로 포함됨)에 기재되는 포커스 감소 중화 시험에서 중화된다. 바이러스 활성의 중화를 평가하는데 이용될 수 있는 기타 관련 시험은, 예를 들어, 효소 면역 측정법(ELISA) 기반 마이크로중화(MN: microneutralization) 분석법(예를 들어, 문헌(Vorndam et al., Am J Trop Med Hyg 2002; 66: 208-212)에 기재됨) 및 형광 항체 세포 분류기 기반 DC-SIGN 발현 수지상 세포(DC: dendritic cell) 분석법(예를 들어, 문헌(Martin et al., J Virol Methods 2006; 134: 74-85)에 기재됨)을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 뎅기열 바이러스의 전파(예를 들어, 피험체(예를 들어, 인간)와 모기 사이의 전파)를, 예를 들어, 본원에 기재된 모기 모델에 의해 측정되는 바와 같이, 예를 들어, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 감소시킨다.
다른 실시양태에서, 항체 분자는 뎅기열 바이러스 전파를 감소시키는 능력(예를 들어, 피험체(예를 들어, 인간)와 모기 사이의 뎅기열 바이러스 전파를 감소시키는 능력)이, 예를 들어, 본원에 기재된 모기 모델에 의해 측정되는 바와 같이, 뮤린 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, 본원에 기재된 뮤린 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, 4E11, A11 또는 B11보다, 예를 들어, 적어도 약 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10배 더 향상된다.
다른 실시양태에서, 항체 분자는 모기 바이러스 부하(예를 들어, 모기에 의해 전달되는 바이러스 양, 및/또는 감염도)를, 예를 들어, 본원에 기재된 모기 모델에 의해 측정되는 바와 같이, 예를 들어, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 개선된 안정성을 가지는데, 예를 들어 뮤린 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, 본원에 기재된 뮤린 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, 4E11, A11 또는 B11보다, 생체 내 또는 시험관 내에서, 적어도 약 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10배 더 안정하다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1로부터 선택된 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88, 또는 상기에 언급된 임의의 서열과 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열) 중 적어도 하나의 항원 결합 영역, 예를 들어, 가변 영역 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88, 또는 상기에 언급된 임의의 서열과 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열) 중 적어도 1, 2, 3, 또는 4개의 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1로부터 선택된 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88, 또는 상기에 언급된 임의의 서열과 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열) 중 적어도 하나 또는 2개의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88, 또는 상기에 언급된 임의의 서열과 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열) 중 적어도 하나 또는 2개의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는, 예를 들어, 4E5A 및/또는 4E11 또는 표 1의 항체에 비해 VH 영역 내 위치 33에 발린(예를 들어, T33V 돌연변이)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체는, 예를 들어, 4E5A 또는 표 1의 항체에 비해 VH 영역 내 del26(예를 들어, 위치 26의 결실)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체는, 예를 들어, 4E5A 또는 표 1의 항체에 비해 VH 영역 내 위치 33에 발린(예를 들어, T33V 돌연변이) 및 del26 돌연변이 둘다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88, 또는 상기에 언급된 임의의 서열과 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)의 중쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 또는 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 3에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 CDR(또는 전체 모든 CDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 CDR(또는 전체 모든 CDR)은 표 3에 나타낸 CDR에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상의 변화, 예를 들어, 아미노산 치환, 삽입, 또는 결실을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 3에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 CDR(또는 전체 모든 CDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 CDR(또는 전체 모든 CDR)은 표 3에 나타낸 CDR에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상의 변화, 예를 들어, 아미노산 치환, 삽입, 또는 결실을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 3에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR(또는 전체 모든 CDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 CDR(또는 전체 모든 CDR)은 표 3에 나타낸 CDR에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상의 변화, 예를 들어, 아미노산 치환, 삽입, 또는 결실을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 6개의 모든 CDR, 또는 밀접하게 연관된 CDR, 예를 들어, 동일하거나, 적어도 하나의 아미노산 변경을 가지나 2, 3, 또는 4개 이하의 변경(예를 들어, 치환 예를 들어, 보존적 치환, 결실 또는 삽입)을 갖는 CDR을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 임의의 CDR을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 중쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 코티아(Cothia) 초가변 루프, 또는 적어도, EDⅢ과 접촉하는 상기 초가변 루프의 아미노산을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 분자는 서열 번호 9의 VHCDR1, 서열 번호 10의 VHCDR2, 및 서열 번호 5의 VHCDR3을 갖는다. 또한, 본원에 제공된 항체 분자는 서열 번호 15의 VHCDR1, 서열 번호 10의 VHCDR2, 및 서열 번호 5의 VHCDR3을 가질 수 있다. 또한, 본원에 제공된 항체 분자는 서열 번호 22, 24, 26, 28, 또는 30의 VHCDR1; 서열 번호 10의 VHCDR2; 및 서열 번호 5의 VHCDR3을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 선택적으로 본원에 기재된 중쇄 CDR과 함께, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 경쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 코티아 초가변 루프, 또는 적어도, EDⅢ과 접촉하는 상기 초가변 루프의 아미노산을 포함한다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 분자는 서열 번호 6의 VHCDR1, 서열 번호 7의 VHCDR2, 및 서열 번호 8의 VHCDR3을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 중쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 카밧(Kabat) 초가변 루프, 또는 적어도, EDⅢ과 접촉하는 상기 초가변 루프의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 경쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 카밧 초가변 루프, 또는 적어도, EDⅢ과 접촉하는 상기 초가변 루프의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 초가변 루프, 또는 적어도, EDⅢ과 접촉하는 상기 초가변 루프의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 6개의 모든 초가변 루프, 또는 적어도, EDⅢ과 접촉하는 상기 초가변 루프 또는 밀접하게 연관된 초가변 루프, 예를 들어, 동일하거나 적어도 하나의 아미노산 변경을 가지나 2, 3, 또는 4개 이하의 변경(예를 들어, 치환 예를 들면, 보존적 치환, 결실 또는 삽입)을 갖는 초가변 루프의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 해당 초가변 루프와 동일한 기본 구조, 예를 들어, 본원에 기재된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인의 적어도 루프 1 및/또는 루프 2와 동일한 기본 구조를 갖는 적어도 1, 2, 또는 3개의 초가변 루프를 포함한다. 예를 들어, 초가변 루프 기본 구조에 대한 설명은 문헌(Chothia et al., (1992) J. Mol . Biol . 227:799-817; Tomlinson et al., (1992) J. Mol . Biol . 227:776-798)을 참조한다. 이들 구조는 상기 간행물에 기재된 표를 검토하여 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 3에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 중쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 (예를 들어, 모든) CDR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 3에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 경쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 (예를 들어, 모든) CDR을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 3에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 (예를 들어, 모든) CDR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 중쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 (예를 들어, 모든) CDR을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 경쇄 가변 영역의 적어도 1, 2, 또는 3개의 (예를 들어, 모든) CDR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는, 예를 들어, 표 2의 VL 및 VH 서열에서, 본원에 기재된 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
실시양태 측면에서, 항체 분자는 표 3으로부터 선택된 VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3을 갖는다. 6개의 CDR은 모두 카밧 정의되거나, 모두 코티아 정의되거나, 일부는 카밧 정의되고 일부는 코티아 정의될 수 있다. 예를 들어, VHCDR1은 서열 번호 3, 9, 14, 15, 22, 24, 26, 28, 또는 30으로부터 선택될 수 있으며, VHCDR2는 서열 번호 4, 10, 또는 35로부터 선택될 수 있으며, VHCDR3은 서열 번호 5일 수 있고, VLCDR1은 서열 번호 6일 수 있고, VLCDR2는 서열 번호 7일 수 있고, VLCDR3은 서열 번호 8일 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체의 경쇄 또는 중쇄 가변 골격은 (a) 인간 경쇄 또는 중쇄 가변 골격의 아미노산 잔기, 예를 들어, 인간 성숙 항체, 인간 생식세포(계열)(germline) 서열, 또는 인간 공통(consensus) 서열의 경쇄 또는 중쇄 가변 골격 잔기의 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100%를 포함하는 경쇄 또는 중쇄 가변 골격; (b) 인간 경쇄 또는 중쇄 가변 골격의 아미노산 잔기, 예를 들어, 인간 성숙 항체, 인간 생식세포계열 서열, 또는 인간 공통 서열의 경쇄 또는 중쇄 가변 골격 잔기의 20% 내지 80%, 40% 내지 60%, 60% 내지 90%, 또는 70% 내지 95%를 포함하는 경쇄 또는 중쇄 가변 골격; (c) 비인간 골격(예를 들어, 설치류 골격); 또는 (d), 예를 들어, 항원 또는 세포독성 결정인자를 제거하도록, 변형된, 예를 들어, 탈면역화 또는 부분적으로 인간화된 비인간 골격으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 경쇄 또는 중쇄 가변 골격 영역은 인간 생식세포계열 유전자의 VH 또는 VL 분절의 골격과 동일하거나 적어도 70, 75, 80, 85, 87, 88, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 동일한 경쇄 또는 중쇄 가변 골격 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체의 VH 영역(예를 들어, 그 안의 골격 영역)은 인간 VH 영역, 예를 들어, 인간 중쇄 생식세포계열 코딩된 아미노산 서열의 하나 이상의 위치, 예를 들어, FW1, FW2, FW3, 및 FW4 중 하나 이상(예를 들어, 모두)에서 발견되는 위치를 포함한다. 특정 실시양태에서, 선택적으로 이전 문장에서 논의된 VH 잔기와 함께, 항-뎅기열 항체의 VL 영역(예를 들어, 그 안의 골격 영역)은 인간 VL 영역, 예를 들어, 인간 중쇄 생식세포계열 코딩된 아미노산 서열의 하나 이상의 위치, 예를 들어, FW1, FW2, FW3, 및 FW4 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 또는 모두)에서 발견되는 위치를 포함한다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체 분자는 표 5의 인간 생식세포계열 서열의 중쇄 또는 경쇄 FW1, FW2, FW3, 또는 FW4 영역에 따른 하나 이상의 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 또는 모든) 잔기를 포함한다. 보다 구체적으로, 일부 실시양태에서 항체 분자는 표 6의 VH 생식세포계열 서열의 하나 이상의 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15, 또는 모든) VH FW1 잔기를 갖는다. 일부 실시양태에서 항체 분자는 표 6의 VH 생식세포계열 서열의 하나 이상의 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15, 또는 모든) VH FW2 잔기를 갖는다. 일부 실시양태에서 항체 분자는 표 6의 VH 생식세포계열 서열의 하나 이상의 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15, 또는 모든) VH FW3 잔기를 가지며, 일부 실시양태에서 항체 분자는 표 6의 VH 생식세포계열 서열의 하나 이상의 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15, 또는 모든) VH FW4 잔기를 갖는다. 게다가, 선택적으로 이전 문장에 논의된 중쇄 잔기와 함께, 일부 실시양태에서 항체 분자는 표 6의 VL 생식세포계열 서열의 하나 이상의 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15, 또는 모든) VL FW1 잔기를 갖는다. 일부 실시양태에서 항체 분자는 표 6의 VL 생식세포계열 서열의 하나 이상의 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15, 또는 모든) VL FW2 잔기를 갖는다. 일부 실시양태에서 항체 분자는 표 6의 VL 생식세포계열 서열의 하나 이상의 (예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15, 또는 모든) VL FW3 잔기를 가지며, 일부 실시양태에서 항체 분자는 표 6의 VL 생식세포계열 서열의 하나 이상(예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15, 또는 모두) VL FW4 잔기를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 중쇄 골격 VH1-18*01, JH4*01 및/또는 경쇄 골격 Vk4-1*01, Jk2*02을 갖는다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 1의 아미노산 서열, 예를 들어, B11, D88, A48, F38, F108, 또는 C88, 예를 들어, 전체 가변 영역의 FR 영역의 아미노산 서열로부터 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 20개 이상의 변화, 예를 들어, 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 가진 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 1의 항체, 예를 들어, A11의 아미노산 서열의 위치 3에 Q, 위치 5에 V, 위치 6에 E 결실, 위치 12에 V, 위치 13에 K, 위치 20에 K, 위치 21에 V, 위치 24에 K, 위치 26에 S 결실, 위치 33에 V, 위치 39에 R, 위치 41에 A, 위치 43에 G, 위치 49에 M, 위치 65에 L, 위치 68에 R, 위치 69에 V, 위치 71에 M, 위치 77에 T, 위치 82에 M, 위치 83에 E, 위치 85에 R, 위치 88에 R, 위치 90에 D, 위치 98에 A 또는 V 또는 S, 및 위치 117에 S 중 하나 이상(예를 들어, 적어도 5, 10, 15, 또는 20, 또는 모두)을 가진 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 상기 돌연변이 중 하나 이상(예를 들어, 모두)을 가진 항체의 예는 A48, B48, C88, F38, F108, 및 D48을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 중쇄는 표 1의 항체, 예를 들어, A11의 아미노산 서열의 위치 3에 Q, 위치 5에 V, 위치 6에 E 결실, 위치 12에 V, 위치 13에 K, 위치 20에 K, 위치 21에 V, 위치 24에 K, 위치 39에 R, 위치 41에 A, 위치 43에 G, 위치 49에 M, 위치 65에 L, 위치 68에 R, 위치 69에 V, 위치 71에 M, 위치 77에 T, 위치 82에 M, 위치 83에 E, 위치 85에 R, 위치 88에 R, 위치 90에 D, 위치 98에 V 또는 A 또는 S, 및 위치 117에 S 중 하나 이상을 포함한다. 상기 돌연변이 중 하나 이상(예를 들어, 모두)을 가진 항체의 예는 A68이다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서 (선택적으로 본원에서, 예를 들어, 이전 단락에서 기재된 중쇄 치환과 함께), 항-뎅기열 항체 분자는 표 1, 예를 들어, B11, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 아미노산 서열, 예를 들어, 전체 가변 영역의 FR 영역의 아미노산 서열로부터 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 20개 이상의 아미노산 변화, 예를 들어, 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 가진 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체는 표 1의 항체, 예를 들어, B11, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 아미노산 서열의 위치 1에 D, 위치 2에 I, 위치 7에 S, 위치 17에 E, 위치 44에 P, 위치 62에 V, 위치 64에 D, 위치 72에 G, 위치 80에 S, 위치 81에 S, 위치 82에 L, 위치 83에 Q, 위치 85에 E, 위치 89에 V, 위치 91에 Y, 및 위치 104에 Q 중 하나 이상(예를 들어, 적어도 5, 10, 15, 또는 모두)을 가진 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인, 또는 둘다는 본원에 개시된 아미노산과 실질적으로 동일한, 예를 들면 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88의 가변 영역과 적어도 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일하거나, 본원에 기재된 항체의 가변 영역과 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 잔기가 상이하지만, 40, 30, 20, 또는 10개 미만의 잔기가 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 또는 둘다는 본원에 기재된 핵산 서열, 또는, 예를 들어, 낮은 엄격도, 중간 엄격도, 또는 높은 엄격도, 또는 본원에 기재된 기타 혼성화 조건하에서 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88을 코딩하는 핵산 서열 또는 그의 상보체에 혼성화하는 핵산에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 포함한다. 또한, 본 출원은 항-뎅기열 항체 분자의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 또는 둘다, 예를 들어, 낮은 엄격도, 중간 엄격도, 또는 높은 엄격도, 또는 본원에 기재된 기타 혼성화 조건하에서 표 4의 핵산 서열, 또는 그의 상보체에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 포함한다는 것을 개시한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 표 4의 서열 또는 그의 일부분과 적어도 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일하다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 2에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하거나, 표 2에 나타낸 서열과 1, 2, 5, 10, 또는 15개 이하의 아미노산 잔기가 상이한 서열)을 가진 적어도 1, 2, 3, 또는 4개의 항원 결합 영역, 예를 들어, 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 상기 임의의 뉴클레오티드 서열과 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하거나, 상기 임의의 뉴클레오티드 서열과 3, 6, 15, 30, 또는 45개 이하의 뉴클레오티드가 상이한 서열)을 가진 핵산에 의해 코딩되는 VH 및/또는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 본 단락에서 논의된 구조적 특징, 및 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 갖는다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 측면에서, 본 개시는, 선택적으로 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서, 하기를 포함하는 항체 분자를 제공한다:
(a) 서열 D V YMS (서열 번호 3) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, V 는 변하지 않음)를 포함하는 CDR1,
서열 RIDPENGDTKYDPK L QG (서열 번호 4) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, L 은 변하지 않음)를 포함하는 CDR2, 및
서열 GWEGFAY (서열 번호 5) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역 분절(segment) 및
(b) 서열 RASENVDKYGNSFMH (서열 번호 6) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR1,
서열 RASELQW (서열 번호 7) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR2, 및
서열 QRSNEVPWT (서열 번호 8) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 분절.
일부 실시양태에서, HCDR1의 V 는 변하지 않는다. 일부 실시양태에서, HCDR2의 L 은 변화되지 않고, 일부 실시양태에서, HCDR1의 V 및 HCDR2의 L 둘다 변화되지 않는다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAGFNIK (서열 번호 11)을 가진 VH FW1, 또는 서열 번호 11에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84)를 가진 VH FW2, 또는 서열 번호 84에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85)를 가진 VH FW2, 또는 서열 번호 85에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 포함한다.
특정 측면에서, 본 개시는 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서 하기를 포함하는 항체 분자를 제공한다:
(a) 서열 번호 33에 비해 위치 26의 결실을 포함하는 FW1,
서열 D T YMS (서열 번호 14) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, T 는 변하지 않음)을 포함하는 CDR1, 또는 서열 D V YMS (서열 번호 3) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, V 는 변하지 않음)을 포함하는 CDR1,
서열 RIDPENGDTKYDPK L QG (서열 번호 4) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, L 은 변하지 않음)을 포함하는 CDR2, 및
서열 GWEGFAY (서열 번호 5) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역 분절; 및
(b) 서열 RASENVDKYGNSFMH (서열 번호 6) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열)을 포함하는 CDR1,
서열 RASELQW (서열 번호 7) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)을 포함하는 CDR2, 및
서열 QRSNEVPWT (서열 번호 8) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 분절.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84)를 가진 VH FW2, 또는 서열 번호 84에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85)를 가진 VH FW2, 또는 서열 번호 85에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 포함한다.
특정 측면에서, 본 개시는, 선택적으로 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서, 하기를 포함하는 항체 분자를 제공한다:
(a) 서열 D V YMS (서열 번호 3) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, V 는 변하지 않음)를 포함하는 CDR1,
서열 RIDPENGDTKYDPK L QG (서열 번호 4) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, L 은 변하지 않음)를 포함하는 CDR2, 및
서열 GWEGFAY (서열 번호 5) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, A 가 I, K, D 또는 E로 치환됨)를 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역 분절 및
(b) 서열 RASENVDK Y GNSFMH (서열 번호 6) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로, 단, Y 가 F로 치환됨)를 포함하는 CDR1,
서열 RASELQW (서열 번호 7) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR2, 및
서열 QRSNEVPWT (서열 번호 8) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 분절.
따라서, 일부 실시양태에서, 중쇄 CDR3은 GWEGF I Y (서열 번호 90), GWEGF K Y (서열 번호 91), GWEGF D Y (서열 번호 92), 또는 GWEGF E Y (서열 번호 93)이다. 일부 실시양태에서, 경쇄 CDR1은 RASENVDK F GNSFMH (서열 번호 94)이다. 바꾸어 말하면, 일부 실시양태에서, 항체 A11에서 알라닌인 중쇄 위치 105는 또 다른 잔기, 예를 들어, I, K, D 또는 E로 변화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 A11에서 티로신인 경쇄 위치 32는 또 다른 잔기, 예를 들어, F로 변화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 단락에 기재된 돌연변이는 EDⅢ에 대한 항체 분자의 친화도 및/또는 뎅기열 바이러스의 하나 이상의 (또는 모든) 규주 또는 혈청형에 대한 그의 중화 활성을 향상시킨다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAGFNIK (서열 번호 11), 또는 서열 번호 11에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 갖는 VH FW1을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84), 또는 서열 번호 84에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 갖는 VH FW2를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85), 또는 서열 번호 85에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 갖는 VH FW2를 포함한다.
본원의 측면의 일부 실시양태에서, 항체 분자는 뎅기열 바이러스 EDⅢ(E 단백질 도메인 III)에 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 서열 번호 3-8, 14, 및 35(또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열) 중 임의의 서열을 가진 하나 이상의 CDR을 포함한다. 예를 들어, 항체 분자는 서열 번호 3-8, 14, 및 35중 임의의 서열을 가진 적어도 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 서열 번호 3 또는 14의 VH CDR1, 서열 번호 4 또는 35의 VH CDR2, 서열 번호 5의 VH CDR3, 서열 번호 6의 VL CDR1, 서열 번호 7의 VL CDR2, 및 서열 번호 8의 VL CDR3을 포함한다. 예를 들어, 항체 분자는 서열 번호 3의 VH CDR1, 서열 번호 4의 VH CDR2, 서열 번호 5의 VH CDR3, 서열 번호 6의 VL CDR1, 서열 번호 7의 VL CDR2, 및 서열 번호 8의 VL CDR3을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 서열 번호 1과 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 100% 동일한 VH 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 서열 번호 80과 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 100% 동일한 VH 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 서열 번호 16-21, 24, 25, 27, 29, 31, 32, 33, 36, 80, 또는 81중 임의의 서열과 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 100% 동일한 VH 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 서열 번호 2 또는 34와 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 100% 동일한 VL 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv 단편(scFv)이다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 카파 또는 람다의 경쇄 불변 영역으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 포함한다.
항체 분자는 단리된 항체 분자 및/또는 인간화 항체 분자일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 인간 골격 생식세포계열 서열로부터 유래한 하나 이상의 골격 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 약 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.2, 또는 0.1 nM 미만의 해리 상수(KD)로 뎅기열 바이러스 EDⅢ에 결합할 수 있다. 항체 분자는 약 10, 8, 6, 5, 4, 또는 3 nM 미만의 해리 상수(KD)로 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-4 EDⅢ에 결합할 수 있다. 항체 분자는 항체 A11 또는 항체 4E11보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 100, 1,000배 더 큰 친화도로 DV-3 또는 DV-4 EDⅢ 도메인에 결합할 수 있다. 항체 분자는 하나 이상의 DENV-4 BC2, DENV-4-Sing10, DENV-4 NewCal09, DENV-4 Phil56, DENV-3 Sing09, DENV-3 Nic10, DENV-3 H87, DENV-2 페루95, DENV-2 Sing08, DENV-2 NGC, DENV-1 하와이/1944, DENV-2 뉴기니/1944 (NGC), DENV-3 필리핀/1956 (H87), DENV-4 멕시코/1997 (BC287/97), 및 DENV-4 H241로부터 선택된 뎅기열 바이러스 균주에 항체 A11 또는 항체 4E11보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 25, 50, 75, 100, 또는 1,000배 더 큰 친화도로 결합할 수 있다. 항체 분자는 포커스 감소 중화 시험 또는 바이러스 활성의 중화를 평가하기 위한 관련된 시험에서, 뎅기열 바이러스를 중화시킬 수 있다. 항체 분자는 포커스 감소 중화 시험 또는 바이러스 활성의 중화를 평가하기 위한 관련된 시험에서, 항체 A11 또는 항체 4E11보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 50, 75, 또는 100배 더 낮은 IC50으로 뎅기열 바이러스를 중화시킬 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시는 상기 청구하는 임의의 항체 분자 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 안정제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 개시는, 예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자의 항체 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 제공한다. 또한, 본 개시는, 예를 들어, 상기 핵산을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 또한, 본 개시는, 예를 들어, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 본 개시는, 추가적으로, 예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자 또는 그의 단편의 제조 방법으로서, 유전자 발현에 적합한 조건하에서 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시는 본원에 기재된 항체 분자를 포함하는 키트를 제공한다. 키트는 용기를 포함할 수 있으며, 용기는 그 안에 배치된 항체 분자를 가질 수 있다. 또한, 키트는 선택적으로 항체 분자와 혼합된 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 안정제를 포함할 수 있다. 또한, 키트는 전달 디바이스, 예를 들어, 주사기 또는 바늘을 포함하는 전달 디바이스를 포함할 수 있다. 또한, 키트는 사용 설명서도 포함할 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시는 뎅기열 바이러스의 중화 방법으로서, 뎅기열 바이러스를 본원에 기재된 항체 분자와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 뎅기열 바이러스는 혈청형 DV-1, DV-2, DV-3, 또는 DV-4이다.
일부 측면에서, 본 개시는 뎅기열 바이러스 감염의 치료 방법으로서, 이를 필요로 하는 피험체에 본원에서 기재된 단리된 항체 분자를 바이러스의 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 방법은 피험체에게 항바이러스제, 예를 들어, 하나 이상의 발라피라비르(balapiravir), 클로로퀸(chloroquine), 셀고시비르(celgosivir), 이베르멕틴(ivermectin), 또는 카리카 폴리아(Carica folia)로부터 선택된 항바이러스제를 투여하는 단계를 더 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항바이러스제는 제2의 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, 제1 항-뎅기열 항체 분자와 상이한 본원에 기재된 항-뎅기열 항체 분자이다. 다른 실시양태에서, 항바이러스제는 알파-글루코시다제 I 억제제(예를 들어, 셀고시비르), 아데노신 뉴클레오시드 억제제(예를 들어, NITD008); RNA 의존성 RNA 폴리머라제 (RdRp) 억제제(예를 들어, NITD107), 숙주 피리미딘 생합성의 억제제, 예를 들어, 숙주 디히드로오로테이트 데히드로게나제(DHODH)(예를 들어, NITD-982 및 브레퀴나르(brequinar)), 바이러스 NS4B 단백질의 억제제(예를 들어, NITD-618), 및 이미노당(예를 들어, UV-4)으로부터 선택된다. 방법은 백신, 예를 들어, 뎅기열 바이러스 백신을 피험체에 투여하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 비경구 또는 정맥 내 투여된다.
또한, 본 개시는 예방 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 분자를 당시에 뎅기열 바이러스에 감염되지 않은 피험체에 투여함으로써 뎅기열 바이러스 감염을 예방하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 특정 측면에서, 본 개시는 환자가 뎅기열 바이러스에 접촉할 위험을 감소시키는 방법으로서, 이를 필요로 하는 피험체에 본원에 기재된 항체 분자를 바이러스 접촉 위험을 감소시키기 위한 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 뎅기열 바이러스에 접촉할 위험은, 예를 들어, 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 감소될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 뎅기열 바이러스에 감염되지 않은 환자에 제공되어 결과적으로 감염이 발생하는 경우, 질환 과정이 항체 분자를 제공받지 않은 유사한 환자의 질환 과정보다 가벼워질 가능성이 있다. 예를 들어, 항체 분자는 뎅기열이 발생할 위험을 감소시킬 수 있다(예를 들어, 환자는 무증상 감염을 경험할 가능성이 크다). 뎅기열 발생 위험은 항체 분자를 제공받지 않은 환자에 비해, 예를 들어, 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 감소될 수 있다. 일부 실시양태에서, 뎅기열이 뎅기 출혈열로 진행할 위험도 항체 분자를 제공받지 않은 환자에 비해, 예를 들어, 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 감소될 수 있다.
또한, 본 개시는 뎅기열 바이러스의 전파를 감소시키는 방법 또는 예방하는 법(피험체(예를 들어, 인간)과 모기 사이의 전파를 감소시키는 방법 또는 예방하는 법)을 제공한다. 특정 실시양태에서, 피험체는 뎅기열 바이러스에 감염된다. 다른 실시양태에서, 피험체는 당시에 뎅기열 바이러스에 감염되지 않았지만, 뎅기열 바이러스에 감염될 위험에 있다. 예를 들어, 특정 측면에서, 본 개시는 뎅기열 바이러스의 전파를 감소시키는 방법 또는 예방 방법(피험체(예를 들어, 인간)과 모기 사이의 전파를 감소시키는 방법 또는 예방 방법)으로서 본원에 기재된 단리된 항체 분자를 뎅기열 바이러스의 전파를 감소시키기 위한 유효량으로 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 피험체에서 모기로 뎅기열 바이러스의 전파는, 예를 들어, 본원에 기재된 모기 모델에 의해 측정되는 바와 같이, 항체 분자를 제공받지 않은 피험체로부터 전파에 비해, 예를 들어, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 감소될 수 있다. 결과적으로, 일부 실시양태에서, 감염된 모기로부터 감염되지 않은 피험체(예를 들어, 인간)로 뎅기열 바이러스의 전파는 또한, 예를 들어, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또 90% 감소될 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시는 생물학적 시료에서 뎅기열 바이러스의 검출 방법으로서, (i) 항체 분자와 폴리펩티드 사이의 상호 작용이 일어나도록 하는 조건하에서 시료 또는 피험체(및 선택적으로, 기준 시료 또는 피험체)를 본원에 기재된 항체 분자와 접촉시키는 단계, 및 (ii) 항체 분자와 시료 또는 피험체(및 선택적으로 기준 시료 또는 피험체) 사이의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시는 항체 A11의 VH에 비해 위치 26이 결실된 VH 영역을 포함하는 항-뎅기열 항체 분자를 제공한다. 예를 들어, 청구하는 항-뎅기열 항체 분자는 항체 A11의 VH에 비해 약 1-30, 5-30, 10-30, 15-30, 또는 20-25개의 돌연변이를 가진 VH 영역을 가질 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시는 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서, 서열 번호 3의 서열, 또는 서열 번호 3에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 가진 VH CDR1을 포함하는 항체 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 치환, 예를 들어, 보존적 치환이다.
특정 측면에서, 본 개시는 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서, 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAGFNIK (서열 번호 11), 또는 서열 번호 11에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 가진 VH FW1을 포함하는 항체 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 결실 및 치환, 예를 들어, 보존적 치환으로부터 독립적으로 선택된다. 또한, 본 단락의 항체 분자는 본 출원, 예를 들어, 이전 단락에 기재된 특징을 가질 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시는 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서, 서열 번호 4의 서열, 또는 서열 번호 4에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 10, 또는 15개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 가진 VH CDR2를 포함하는 항체 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 치환, 예를 들어, 보존적 치환이다. 또한, 본 단락의 항체 분자는 본 출원, 예를 들어, 이전 두 단락에 기재된 특징을 가질 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시는 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서, 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84) 또는 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85), 또는 서열 번호 84 또는 서열 번호 85에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 또는 10개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 가진 VH FW2를 포함하는 항체 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 결실 및 치환, 예를 들어, 보존적 치환으로부터 독립적으로 선택된다. 또한, 본 단락의 항체 분자는 본 출원, 예를 들어, 이전 단락에 기재된 특징을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4로부터 선택된 두 가지 이상, 예를 들어, 3 또는 4가지 뎅기열 바이러스 혈청형의 EDⅢ에 상기 두 가지 이상의 혈청형 각각에 대해 약 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05, 또는 0.01 nM 미만의 해리상수(KD)로 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 본원에 기재된 가변 영역(예를 들어, 본원에 개시된 FR 영역)과 서열이 동일하거나 그와 1, 2, 3, 또는 4개의 아미노산이 상이한 가변 영역을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 그의 전항체 또는 그의 단편(예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv 단편(scFv)이다. 특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 단클론 항체 또는 단일 특이성을 가진 항체이다. 또한, 항-뎅기열 항체 분자는 인간화, 키메라, 카멜리드, 상어, 또는 시험관 내에서 생성된 항체 분자일 수 있다. 일부 실시양태에서, 그의 항-뎅기열 항체 분자는 인간화 항체 분자이다. 항-뎅기열 항체 분자의 중쇄 및 경쇄는 전장일 수 있거나(예를 들어, 항체는 적어도 하나 또는 적어도 2개의 완전한 중쇄, 및 적어도 하나 또는 적어도 2개의 완전한 경쇄를 포함할 수 있다) 항원 결합 단편(예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv, 단쇄 Fv단편, 단일 도메인 항체, 디아바디(dAb), 이가 또는 이중 특이적 항체 또는 그의 단편, 그의 단일 도메인 변이체, 또는 카멜리드 항체)을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역, 구체적으로, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 중쇄 불변 영역, 보다 구체적으로, IgG1 또는 IgG2(예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG2)의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된 중쇄 불변 영역(Fc)을 갖는다. 일부 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1이다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는, 예를 들어, 카파 또는 람다, 일부 실시양태에서 카파(예를 들어, 인간 카파)의 경쇄 불변 영역으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다. 일부 실시양태에서, 불변 영역은 항-뎅기열 항체 분자의 특성을 변형시키기 위해(예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기 개수, 이펙터 세포 기능, 또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시키기 위해) 변경, 예를 들어, 돌연변이된다. 예를 들어, 불변 영역은 Fc 수용체 결합을 변경시키기 위해 위치 234(예를 들어, L에서 A로), 235(예를 들어, L에서 A로), 296(예를 들어, M에서 Y로), 297(예를 들어, N에서 A 또는 G 또는 Q로), 298(예를 들어, S에서 T), 300(예를 들어, T에서 E로), 477(예를 들어, H에서 K로) 및 478(예를 들어, N에서 F로)에서 돌연변이될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 인간화 항체 분자이다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 단리 또는 재조합 분자이다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 인간 또는 인간화 골격 영역과 CDR(상보성 결정 영역)의 조합을 포함한다.
또한, 본 개시는 본원에 기재된 항-뎅기열 항체 분자의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 예를 들어, 본 개시는 표 1에 따른 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88, 또는 그와 실질적으로 동일한 서열의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 각각을 코딩하는 제1 및 제2 핵산을 제공한다. 예를 들어, 핵산은 표 1에 따른 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 상기 뉴클레오티드 서열과 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하거나 상기 언급된 뉴클레오티드 서열과 3, 6, 15, 30, 또는 45개 미만의 뉴클레오티드가 상이한 서열)을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 핵산은 표 2에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 중쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 핵산은 표 2에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 경쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산은 표 2에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 1, 2, 3개 이상의 돌연변이(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환)를 가진 서열)을 가진 중쇄 및 경쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 단락에서 논의된 구조적 특징을 가진 핵산은 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 가진 항체 분자 또는 그의 일부분을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
또한, 본 개시는 핵산 서열, 예를 들어, 표 1의 항체, 예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88을 코딩하는 핵산에, 예를 들어, 낮은 엄격도, 중간 엄격도, 또는 높은 엄격도, 또는 본원에 기재된 기타 혼성화 조건하에서 혼성화하는 핵산, 및 그의 상보체를 제공한다. 또한, 본 출원은, 예를 들어, 낮은 엄격도, 중간 엄격도, 또는 높은 엄격도, 또는 본원에 기재된 기타 혼성화 조건하에서 표 4의 핵산 서열, 및 그의 상보체를 개시한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 표 4의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 서열, 그의 상보체, 또는 상기 언급된 서열의 일부분이다. 일부 실시양태에서, 본 단락에서 논의된 구조적 특징을 가진 핵산은 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-4에 대해 (예를 들어, A11에 비해) 향상된 친화도 또는 중화 활성과 같은 하나 이상의 장점을 가진 항체 분자 또는 그의 일부분을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 장점은 목록 1의 특성, 예를 들어, 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t), (u), (v), (w), 또는 (x) 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 모두)이다.
특정 측면에서, 본 개시는 본원에 기재된 핵산을 포함하는 숙주 세포 및 벡터를 특징으로 한다. 핵산은 단일 벡터 또는 동일한 숙주 세포 또는 분리된 숙주 세포에 존재하는 분리된 벡터로 존재할 수 있다. 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들들어 포유동물 세포, 곤충 세포, 효모 세포, 원핵 세포, 예를 들어, 이. 콜라이(E. coli)일 수 있다. 예를 들어, 포유동물 세포는 배양된 세포 또는 세포주일 수 있다. 대표적인 포유동물 세포는 인간 세포, 예를 들어, HEK293 세포, 림프구 세포주(예를 들어, NS0), 중국 햄스터 난소 세포(CHO: Chinese hamster ovary cell), COS 세포, 난모 세포, 및 트랜스제닉 동물 세포를 포함한다.
일부 측면에서, 본 개시는 본원에 기재된 항체 분자의 제공 방법을 제공한다. 방법은 EDⅢ 항원에 특이적으로 결합하는 항체 분자를 제공하는 단계, 항체(예를 들어, 불변 영역, 골격, 및/또는 CDR)에 하나 이상의 돌연변이를 생성하는 단계, 및 항체 분자가 EDⅢ 항원에 특이적으로 결합하는 지를 평가하거나 뎅기열 바이러스 기능을 억제하는 항체 분자의 효능을 평가하는 단계를 포함할 수 있다. 방법은 항체 분자를 정제하는 단계를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 분자는, 예를 들어, 친화도 크로마토그래피, 예를 들어, 단백질 A 크로마토그래피를 포함하는, 하나 이상의 크로마토그래피 단계에 의해 정제될 수 있다. 방법은 항체 분자를 피험체, 예를 들어, 인간 또는 비인간 동물에 투여하는 단계를 더 포함할 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시는 조성물, 예를 들어, 약학 조성물로서, 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정제, 및 본원에 기재된 적어도 한 가지의 항-뎅기열 항체 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 표지 또는 치료제에 접합된다. 일부 실시양태에서, 조성물, 예를 들어, 약학 조성물은 항체 분자 및 제2 제제, 예를 들어, 치료제의 조합, 또는 본원에서 더 기재되는 상기에 언급된 두 가지 이상의 항체 분자를 포함한다.
본원에서 개시된 항체 분자는 뎅기열 바이러스의 하나 이상의 활성을 억제할 수 있다. 예를 들어, 항체 분자는 비리온 표면상 E 단백질의 고유한 구조를 파괴시켜, 예를 들어, 바이러스를 불활성화시킬 수 있다. 결과로서, 항체 분자는 바이러스를 중화시키고, 숙주 세포에 진입하는 바이러스의 능력을 억제하거나, 바이러스 안정성을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 (예를 들어, 포커스 감소 중화 시험 또는 바이러스 활성의 중화를 평가하기 위한 관련된 시험에서) 1400, 1000, 800, 600, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 350, 200, 150, 100, 50, 또는 25 ng/ml 이하의 EC50 또는 FRNT50으로 뎅기열 바이러스를 중화시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 (예를 들어, 포커스 감소 중화 시험 또는 바이러스 활성의 중화를 평가하기 위한 관련된 시험에서) 20, 17.6, 15, 10, 5, 4, 2, 1.4, 1, 또는 0.50 μg/mL 이하의 IC50으로 뎅기열 바이러스를 중화시킨다. 일부 실시양태에서, DV-4의 중화를 시험하며, 일부 실시양태에서, DV-1, DV-2, 또는 DV-3의 중화를 시험한다.
피험체는 포유동물, 예를 들어, 원숭이, 영장류, 바람직하게는 고등 영장류, 예를 들어, 인간(예를 들어, 뎅기열 바이러스에 걸린 환자, 또는 뎅기열 바이러스에 걸릴 위험에 있는 환자)일 수 있다.
또한, 본 개시는 피험체에서 뎅기열 바이러스의 치료 방법으로서, 피험체에 본원에 기재된 항-뎅기열 항체 분자를, 예를 들어, 항-뎅기열 항체 분자, 또는 그의 항원 결합 부분의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 뎅기열 바이러스에 걸린 환자에 투여되어, 결과적으로 바이러스 부하를 감소시키고/거나 적어도 하나 이상의 증상, 예를 들어, 갑작스런 발열, 두통, 근육 및 관절 통증, 체중 감소, 중추 신경계 관통, 및/또는 발진으로부터 선택된 증상을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 뎅기열 바이러스에 감염될 위험에 있는 환자에 투여되어, 결과적으로 감염될 위험을 감소시키거나 감염이 발생하더라도 감염의 중증도를 감소시킨다.
항-뎅기열 항체 분자는 피험체에 전신(예를 들어, 경구, 비경구, 피하, 정맥 내, 직장, 근육 내, 복강 내, 비 내, 경피로, 또는 흡입, 또는 강 내 설치), 국소적으로, 또는 점막, 예를 들어, 코, 목 및 기관지에 적용되어 투여될 수 있다.
본원에 기재된 방법 및 조성물은 기타 치료 방식과 병용하여 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 본원에 기재된 항-뎅기 분자를 뎅기열 바이러스의 제2 치료제 또는 예방제와 병용하여 상기 질병을 치료 또는 예방하기 위한 유효량으로 피험체에 투여하는 단계를 포함한다. 항체 분자 및 제2 제제는 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
항-뎅기열 항체 분자와 기타 치료 방식의 임의의 조합 및 순서가 이용될 수 있다. 항-뎅기열 항체 분자 및/또는 기타 치료 방법은 활성 감염 기간에, 완화(remission) 기간 또는 더 낮은 활성의 질환 기간에 투여될 수 있다. 항-뎅기열 항체 분자 및 기타 치료 방식은 치료 전, 치료와 동시에, 치료 후에, 또는 감염의 완화 과정에서 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시는 시료, 예를 들어, 시험관 내 또는 생체 내(예를 들어, 생물학적 시료, 예를 들어, 혈액 또는 혈청) 시료에서 뎅기열 바이러스의 존재의 검출 방법을 제공한다. 본원에서 방법은 평가하는데(예를 들어, 피험체에서 본원에 기재된 질병, 예를 들어, 뎅기열 바이러스의 치료 또는 진행을 모니터하고, 상기 질병을 진단하고/거나 단계를 결정하는데) 이용될 수 있다. 방법은 (i) 상호 작용이 일어나도록 하는 조건하에서 본원에 기재된 항-뎅기열 항체 분자와 시료(및 선택적으로, 기준, 예를 들어, 대조 시료)를 접촉하거나 상기 분자를 피험체에 투여하는 단계, 및 (ii) 항체 분자와 시료(및 선택적으로 기준, 예를 들어, 대조 시료) 사이의 복합체 형성 여부를 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 복합체 형성은 뎅기열 바이러스의 존재를 나타내며, 본원에 기재된 치료의 적합성 또는 필요성을 나타낼 수 있다. 본 방법은, 예를 들어, 면역조직화학, 면역세포화학, FACS, 항체 분자와 복합체를 형성하는 자성 비드, ELISA 분석 또는 PCR 기술(예를 들어, RT-PCR)을 수반할 수 있다.
전형적으로, 생체 내 및 시험관 내의 진단 방법에 사용되는 항-뎅기열 항체 분자는 결합 되거나 결합 되지 않은 결합제의 검출을 용이하게 하는 검출 가능한 물질로 직접 또는 간접적으로 표지된다. 적합한 검출 가능 물질은 다양한 생물학적 활성 효소, 보결 분자단, 형광 물질, 발광 물질, 상자성(예를 들어, 핵자기 공명 활성) 물질, 및 방사성 물질을 포함한다.
일부 측면에서, 본 개시는 본원에 기재된 항-뎅기열 항체 분자 및 사용 설명서를 포함하는 진단 또는 치료 키트를 제공한다.
본 개시는 상기 임의의 하나 이상의 측면 및/또는 실시양태의 모든 조합뿐만 아니라 상세한 설명 및 실시예에 개시된 임의의 하나 이상의 모든 실시양태의 조합도 고려한다.
본원에서 조성물 및 방법의 기타 특징, 목적 및 장점은 설명 및 도면, 및 청구항으로부터 명백할 것이다.
도면 및 표는 본원에 함께 제공된다.
각 도면은 본원에 보다 상세하게 기재된다.
[도 1a- 1i]는 여러 항-뎅기 EDⅢ 항체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 밑줄은 카밧 CDR이고, 상자(우선권 문서에 회색 배경으로 나타냄)는 관심 잔기이다.
[도 2]는 항체 B11이 DV4의 mAb A11 중화를 능가한다는 것을 나타내는 생 바이러스를 이용한 포커스 감소 중화 시험의 결과를 나타낸다.
[도 3]은 DV4를 중화시키는 항체 A11 및 B11의 반복된 분석을 나타낸다.
[도 4]는 여러 인간화 EDⅢ 항체의 골격에 대한 기능의 평가이다.
[도 5]는 항-뎅기열 항체의 N-말단의 복귀 돌연변이에 대한 항체 친화도를 나타낸다. 중쇄 FW "04"는, 예를 들어, mAb B48과 동일한 중쇄 골격 아미노산 서열을 가진 골격의 한 유형을 나타낸다. 경쇄 FW "08"은, 예를 들어, mAb B48과 동일한 경쇄 골격 아미노산 서열을 가진 골격의 한 유형을 나타낸다. mAb B48의 중쇄 및 경쇄 골격 서열은 표 1 및 2에 나타낸다.
[도 6]은 특정 점 돌연변이들의 조합으로 EDⅢ에 대한 친화도를 향상시킨다는 것을 보여준다. 경쇄 FW "08"은, 예를 들어, mAb B88과 동일한 경쇄 골격 아미노산 서열을 가진 골격의 한 유형을 나타낸다. mAb B88의 경쇄 골격 서열은 표 1 및 2에 나타낸다.
[도 7]은 다른 돌연변이와 함께 위치 98을 A, V, 또는 S로 설정한 결과를 나타낸다.
[도 8]은 선택된 항체의 EDⅢ 결합 친화도를 결정하기 위한 경쟁 ELISA의 결과를 나타낸다.
[도 9]는 4가지 뎅기열 바이러스 혈청형의 EDⅢ에 대한 선택된 항-뎅기열 항체의 결합을 나타낸다.
[도 10a]는 선택된 뎅기열 바이러스 단리체의 EDⅢ 아미노산 서열의 계통 관계를 요약한다. "DENV"는 뎅기열 바이러스의 약어이고, DENV-2는 혈청형 DV-2를 나타내고, DENV-3은 혈청형 DV-3을 나타내고, DENV-4는 혈청형 DV-4를 나타낸다.
[도 10b]는 다양한 뎅기열 바이러스 단리체의 패널에 항체 D88의 결합을 나타낸다. *는 시험관 내 중화시험에 사용되는 균주를 나타낸다.
[도 11]은 다양한 뎅기열 바이러스 균주에 대해 선택된 항-뎅기열 항체의 친화도를 나타낸다.
[도 12]는 포커스 감소 중화 시험에서 여러 항-뎅기열 항체의 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-4를 중화시키는 능력을 나타낸다.
[도 13]은 포커스 감소 중화 시험에서 여러 항-뎅기열 항체의 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-3을 중화시키는 능력을 나타낸다. DV-3 H87을 본 시험에 사용하였다.
[도 14]는 포커스 감소 중화 시험에서 여러 항-뎅기열 항체의 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-4를 중화시키는 능력을 나타낸다.
[도 15a- 15c]는 열 이동 분석법(사이프로 오렌지(Sypro Orange))을 기초로 선택된 항-뎅기열 항체의 열 안정성을 나타낸다.
[도 16]은 AG129 마우스 모델에서 뎅기열 바이러스로 감염된 마우스의 생존에 대한 항체 D88의 효과를 나타낸다.
[도 17]은 AG129 마우스 모델에서 뎅기열 바이러스로 감염된 마우스의 체중 변화에 대한 항체 D88의 효과를 나타낸다.
[도 18]은 AG129 마우스 모델에서 뎅기열 바이러스 혈청형 2(NGC 균주)로 감염된 마우스에서 바이러스 혈증에 대한 항체 D88의 효과를 나타낸다.
[도 19]는 포커스 감소 중화 시험(FRNT)에서 항체 D88의 C6/36 곤충 세포에서 증식된 뎅기열 바이러스 혈청형 DENV-1, DENV-2, DENV-3, 및 DENV-4를 중화시키는 능력을 나타낸다.
[도 20]은 포커스 감소 중화 시험(FRNT)에서 항체 D88의 베로(Vero)(원숭이) 세포에서 증식된 뎅기열 바이러스 혈청형 DENV-1, DENV-2, DENV-3, 및 DENV-4를 중화시키는 능력을 나타낸다.
[도 21]은 포커스 감소 중화 시험(FRNT)에서 항체 D88 및 A11의 베로(원숭이) 세포에서 증식된 뎅기열 바이러스 DENV-4 균주 H241을 중화시키는 능력을 나타낸다.
[도 22]는 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HP-SEC)에 의해 평가된 항체 A48, C88 및 D88의 응집 성향을 나타낸다.
[도 23]은 항체 D88이 항체 4E11과 비교하여 DENV-1, DENV-2 및 DENV-3에 대해 동시에 향상된 친화도를 가지면서 DENV-4에 대한 친화도 이득(affinity gain)을 나타낸다.
표의 간략한 설명
각 표는 본원에 보다 상세하게 기재된다.
표 1은 대표적인 항-뎅기열 항체의 서열을 요약한다.
표 2는 표 1의 중쇄 가변 도메인과 경쇄 가변 도메인 서열의 아미노산 서열을 도식한다. 밑줄은 카밧 CDR이고, 이탤릭체는 코티아 CDR이고, 관심 잔기는 회색 배경으로 나타낸다.
표 3은 표 1의 CDR의 아미노산 서열을 도식한다.
표 4는 표 1의 항체를 코딩하는 핵산 서열을 요약한다.
표 5는 표 4에 요약된 핵산 서열을 도식한다.
표 6은 본 출원에 기재된 추가의 아미노산 서열을 도식한다.
뎅기열 바이러스 에피토프, 예를 들어, EDⅢ에 높은 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체 분자를 본원에서 개시한다. 유리하게는, 본원에서 여러 항체 분자는 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4의 EDⅢ에 높은 친화도로 결합한다. 또한, 항체 분자를 코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 항체 분자의 제조 방법을 제공한다. 본원에 개시된 항-뎅기열 항체 분자는 뎅기열 바이러스, 예를 들어, DV-1, DV-2, DV-3, 또는 DV-4의 치료, 예방 및/또는 진단에 (단독으로 또는 기타 제제 또는 치료 방식과 병용하여) 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4는 때로는 DENV-1, DENV-2, DENV-3, 및 DENV-4를 각각 나타낸다.
정의
본원에서 사용되는 관사 "하나"("a" 및 "an")은 관사의 문법적인 대상의 하나 또는 하나 초과(예를 들어, 적어도 하나)를 나타낸다.
용어 "또는"은, 본문에 달리 명시되지 않는다면, 용어 "및/또는"을 의미하는데 사용되고, 그와 호환적으로 사용된다.
"약" 및 "대략"은 측정값의 특성 또는 정확도가 주어지는 경우 측정된 양에 대해 허용 가능한 정도의 오차를 의미할 것이다. 대표적인 오차 정도는 주어진 값 또는 값의 범위의 20 퍼센트(%), 통상적으로, 10%, 보다 통상적으로, 5% 이내에 있다.
본원에서 개시된 조성물 및 방법은 명시된 서열을 가진 폴리펩티드 및 핵산, 또는 그와 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어, 명시된 서열과 적어도 85%, 90%, 95% 이상 동일한 서열을 포함한다. 아미노산 서열의 문맥에서, 용어 "실질적으로 동일한"은 본원에서, 제1과 제2 아미노산 서열이 공통의 구조적 도메인 및/또는 공통의 기능적 활성을 가질 수 있도록 제2 아미노산 서열 내 정렬된 아미노산 잔기와 i) 동일하거나, ii) 보존적으로 치환된 아미노산 잔기를 충분하거나 최소한의 개수로 포함하는 제1 아미노산을 나타내는데 사용된다. 예를 들어, 기준 서열, 예를 들어, 본원에 제공된 서열과 적어도 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가진 공통의 구조적 도메인을 포함하는 아미노산 서열이다.
뉴클레오티드 서열의 문맥에서, 용어 "실질적으로 동일한"은 본원에서, 제1과 제2 뉴클레오티드 서열이 공통의 기능적 활성을 가진 폴리펩티드를 코딩하거나 공통의 구조적 도메인 및/또는 공통의 기능적 활성을 가진 폴리펩티드를 코딩하도록 제2 핵산 서열 내 정렬된 뉴클레오티드와 동일한 뉴클레오티드를 충분하거나 최소한의 개수로 포함하는 제1 뉴클레오티드를 나타내는데 사용된다. 기준 서열, 예를 들어, 본원에 제공된 서열과 적어도 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가진 뉴클레오티드 서열이다.
용어 "기능적 변이체"는 자연 발생 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 가지거나, 실질적으로 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되고, 자연 발생 서열의 하나 이상의 활성을 가질 수 있는 폴리펩티드를 나타낸다.
2개의 아미노산 서열, 또는 2개의 핵산 서열의 퍼센트 동일성을 결정하기 위해서, 서열은 최적의 비교 목적에 대해 정렬된다(예를 들어, 최적 정력을 위해 제1 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열 중 하나 또는 둘다에 갭이 도입될 수 있으며 비교 목적을 위해 비-상동 서열은 무시될 수 있다). 바람직한 실시양태에서, 비교 목적에 대해 정렬된 기준 서열의 길이는 기준 서열 길이의 적어도 30%, 예를 들어, 적어도 40%, 50%, 60%, 예를 들어, 적어도 70%, 80%, 90%, 100%이다. 그리고 나서, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열의 위치에서 제2 서열의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드가 존재하면, 분자는 그 위치에서 동일하다.
두 서열 사이의 퍼센트 동일성은 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입되어야 하는 갭의 개수, 각 갭의 길이를 고려하여 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 개수에 대한 함수이다.
두 서열 사이의 서열 비교 및 퍼센트 동일성의 결정은 수학적 알고리즘을 이용하여 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 두 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 블로썸(Blossum) 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 갭 길이(gap length)를 이용하는, GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 이용 가능)의 GAP 프로그램에 통합된 문헌(Needleman and Wunsch (1970) J. Mol . Biol . 48:444-453)의 알고리즘을 이용하여 결정된다. 특정 실시양태에서, 두 뉴클레오티드 서열 사이의 퍼센트 동일성은 이 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70, 또는 80의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 갭 길이를 이용하는 GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 이용 가능)의 GAP 프로그램을 이용하여 결정된다. 적합한 한 세트의 매개변수(및 달리 명시되지 않는다면 사용되어야 하는 매개변수 세트)는 갭 페널티(gap penalty) 12, 갭 익스텐드 페널티(gap extend penalty) 4, 및 프레임시프트(frameshift) 갭 페널티 5를 이용한 블로썸 62 스코어링 매트릭스이다.
두 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 퍼센트 동일성은 PAM120 중량 잔기 테이블, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 이용하는 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 문헌(E. Meyers and W. Miller (1989) CABIOS, 4:11-17)의 알고리즘을 이용하여 결정될 수 있다.
본원에 기재된 핵산 및 단백질 서열은 "조회(query) 서열"로서 사용되어 공개 데이터베이스를 검색할 수 있으며, 예를 들어, 다른 패밀리 일원 또는 관련 서열을 확인하는데 사용될 수 있다. 이러한 검색은 문헌(Altschul, et al. (1990) J. Mol . Biol. 215:403-10)의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 이용하여 수행될 수 있다. BLAST 뉴클레오티드 검색은 NBLAST 프로그램, 스코어(score) = 100, 워드길이(wordlength) = 12로 수행되어 본원에 기재된 핵산과 상동인 뉴클레오티드 서열을 얻을 수 있다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 워드길이 = 3으로 수행되어 본원에 기재된 단백질 분자와 상동인 아미노산 서열을 얻을 수 있다. 비교 목적을 위해 갭트(gapped) 정렬을 얻기 위해, 갭트 BLAST를 문헌(Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)에 기재된 바와 같이 이용할 수 있다. BLAST 및 갭트 BLAST 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 매개변수를 사용할 수 있다. 'www.ncbi.nlm.nih.gov'를 참조한다.
본원에서 사용되는 용어 "낮은 엄격도, 중간 엄격도, 높은 엄격도, 또는 매우 높은 엄격도 조건하에서 혼성화한다"는 혼성화 및 세척 조건을 기재한다. 혼성화 반응을 수행하기 위한 지침은 참고에 포함된 문헌(Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6)에서 찾아볼 수 있다. 수성 및 비수성 방법이 상기 참고에 기재되어 있으며 어떤 방법이든 이용될 수 있다. 본원에서 언급된 구체적인 혼성화 조건은 다음과 같다. 1) 낮은 엄격도 혼성화 조건: 6X 염화나트륨/시트르산 나트륨(SSC) 중에서 약 45℃, 이어서 0.2X SSC, 0.1% SDS 중 50℃ 이상에서 2회 세척(세척 온도는 낮은 엄격도 조건을 위해 55℃로 상승될 수 있다); 2) 중간 엄격도 혼성화 조건: 6X SSC 중에서 약 45℃, 이어서 0.2X SSC, 0.1% SDS 중 60℃에서 1회 이상 세척; 3) 높은 엄격도 혼성화 조건: 6X SSC 중에서 약 45℃, 이어서 0.2X SSC, 0.1% SDS 중 65℃에서 1회 이상 세척; 바람직하게는 4) 매우 높은 엄격도 혼성화 조건: 0.5M 인산나트륨, 7% SDS, 65℃, 이어서 0.2X SSC, 1% SDS 중 65℃에서 1회 이상 세척. 매우 높은 엄격도 조건 (4)가 적합한 조건이며 달리 명시되지 않는다면 사용되어야 하는 조건이다.
본원에 기재된 분자는 그 기능에 실질적으로 영향을 주지 않는 추가의 보존적 또는 비필수적인 아미노산 치환을 가질 수 있다는 것을 이해해야 한다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기로 치환되는 것이다. 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기의 부류는 당 업계에 정의되어 있다. 이들 부류는 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 무전하 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다.
용어 "폴리펩티드," "펩티드" 및 "단백질"(단쇄인 경우)는 본원에서 호환적으로 사용된다.
용어 "핵산," "핵산 서열," "뉴클레오티드 서열," 또는 "폴리뉴클레오티드 서열," 및 "폴리뉴클레오티드"는 호환적으로 사용된다.
본원에서 사용된 용어 "단리된"은 그의 본래의 또는 타고난 환경(예를 들어, 자연 발생적일 경우 자연환경)으로부터 제거된 물질을 나타낸다. 예를 들어, 살아있는 동물에 존재하는 자연 발생의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 단리된 것이 아니지만, 자연계에 공존하는 물질의 일부 또는 전체로부터 인간의 개입에 의해 분리된 동일한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 단리된 것이다. 이러한 폴리뉴클레오티드는 벡터의 일부분일 수 있고/거나 이러한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 조성물의 일부분일 수 있으며, 상기 벡터 또는 조성물은 자연에서 발견되는 환경의 일부분이 아니라는 점에서 역시 단리된 것일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어, 예를 들어, 뎅기열 바이러스 감염을 "치료하다"는 바이러스에 감염되고, 바이러스 증상을 경험한 피험체(예를 들어, 인간)가, 실시양태에서, 항체가 전혀 투여되지 않았을 때보다 항체 분자가 투여될 때 더 낮은 중증도의 증상을 겪고/거나 더 빠르게 회복될 것이라는 것을 의미한다. 실시양태에서, 감염이 치료될 때, 피험체에서 바이러스를 검출하기 위한 분석은 감염에 대한 효과적인 치료 후에 더 적은 바이러스를 검출할 것이다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체 분자와 같은 항체 분자를 이용하는 진단 분석은 감염을 효과적으로 치료하기 위한 항체 분자의 투여 후 환자의 생물학적 시료에서 더 적은 바이러스를 검출하거나 바이러스를 검출하지 못할 것이다. 또한, 다른 분석법, 예를 들어, PCR (예를 들어, qPCR)이 환자에서 바이러스 감염 치료 후 존재, 예를 들어, 존재의 감소(또는 부재)를 검출하여 환자에서 치료를 모니터하는데 사용될 수 있다. 치료는, 예를 들어, 특정 질환, 질병, 및/또는 병태(예를 들어, 뎅기열 바이러스)의 효과 또는 증상, 특징, 및/또는 원인의 하나 이상의 징후의 중증도를 부분적으로 또는 완전하게 경감, 개선, 완화, 억제, 감소시키고/거나 감소시키고, 상기 징후의 발생률을 감소시키고, 선택적으로 상기 징후의 개시를 지연시킬 수 있다. 실시양태에서, 치료는 해당 질환, 질병 및/또는 병태의 특정 징후를 나타내지 않는 피험체, 및/또는 질환, 질병, 및/또는 병태의 조기 징후만을 나타내는 피험체의 치료이다. 실시양태에서, 치료는 해당 질환, 질병 및/또는 병태의 하나 이상의 만성의 징후를 나타내는 피험체의 치료이다. 실시양태에서, 치료는 뎅기열 바이러스에 걸린 것으로 진단받은 피험체의 치료이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어, 예를 들어, 뎅기열 바이러스를, "예방하다"는 피험체가 바이러스에 노출되기 전(예를 들어, 1일, 2일, 1주, 2주, 3주, 또는 1개월 이상 전) 항체를 받을 경우 피험체(예를 들어, 인간)가 바이러스(예를 들어, 뎅기열 바이러스)에 감염될 가능성이 더 낮아진다는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "골격", "FW" 및 "FR"은 호환적으로 사용되며 본 문서 및 그의 우선권 문서에서 동일한 의미를 갖는다.
본원에서 조성물 및 방법의 다양한 측면은 하기에 더 상세히 기재된다. 추가적인 정의는 명세서에서 개시된다.
항-뎅기열 항체 분자
항-뎅기열 항체의 대표적인 서열은 하기 표 1-4에 기재되어 있다.
<표 1>
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
A11 및 B11은 마우스 항체이고, 표 1의 나머지 항체는 인간화 항체이다.
<표 2>
표 1의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 서열의 아미노산 서열의 도식. 밑줄 친 굵은 글씨는 카밧 시스템에 따라 정의된 CDR이고, 이탤릭체는 코티아 시스템에 따라 정의된 CDR이다. 관심 잔기는 회색 배경으로 나타낸다. 결실은 탈자 기호(^)로 나타낸다.
Figure pct00007
Figure pct00008
본 출원서에서, 마우스 항체 A11의 가변 영역에 기초한 아미노산 위치를 기준으로 삼았다. 마우스 항체 B11의 가변 영역은 A11에 비해 위치 26에서 결실된다. 표 1에서 인간 가변 영역 서열은 A11의 위치 6에서 글루탐산 서열이 결실된다. 결과적으로, A11에 비해 결실을 포함하는 서열은 상쇄되는 넘버링 시스템을 이용한다. 예를 들어, A48 중쇄는 A11에 비해 위치 6에서 글루탐산 서열이 결실된다. 결과적으로, A48 VH의 위치 26(세린)은 실제로 A48 VH 서열(서열 번호 16)의 25번째 아미노산이다. 또 다른 예로서, D88 중쇄는 A11의 위치 6에서 글루탐산 서열이 결실되고 A11에 비해 위치 26에서 세린이 결실된다. 결과적으로, D88 VH의 위치 33(발린)은 실제로 D88 VH 서열(서열 번호 1)의 31번째 아미노산이다.
항체의 일부 구조적인 특징은 표 2의 VH 및 VL 서열을 기초로 언급될 수 있다. B11은 A11 VH 영역에 비해 위치 26이 결실된다. D88은 A48 VH 영역(A11 넘버링과 일치하도록 유지)에 비해 위치 26이 결실되고 T33V 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. F38은 A48 VH 영역에 비해 위치 26이 결실되고 T33V 및 E43G 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. A48은 A11과 동일한 CDR을 가진 인간화 항체이다. C88은 A48 VH 영역에 비해 T33V 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. F108은 A48 VH 영역에 비해 T33V 및 E43G 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. B48은 A48 VH 영역에 비해 위치 26이 결실된 인간화 항체이다. A68은 A48 VH 영역에 비해 A98V 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. A100은 A48 VH 영역에 비해 A98S 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. C58은 A48 VH 영역에 비해 G27Y 및 F28W 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. C78은 A48 VH 영역에 비해 K31Q 및 T33V 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. C68은 A48 VH 영역에 비해 K31S 및 T33V 돌연변이를 가진 인간화 항체이다. D98은 A48 VH 영역에 비해 G27A 돌연변이를 가진 인간화 항체이다.
표 1 및 2의 항체의 기타 변이가 고려된다. 예를 들어, 본 출원은 항체 B48에 비해 A98V 돌연변이를 가진 항체 B48 + A98V; A48에 비해 V2L 돌연변이를 가진 A48 + V2L; A48에 비해 InsE6 돌연변이를 가진 A48+ InsE6; B48에 비해 V2L 돌연변이를 가진 B48+V2L; B48에 비해 InsE6 돌연변이를 가진 B48 + InsE6; A48에 비해 F28W 및 T33V 돌연변이를 가진 D118; A48에 비해 G27A, F28W, 및 T33V 돌연변이를 가진 D128; A48에 비해 G27Y, F28A, 및 T33V 돌연변이를 가진 D138; A48에 비해 G27Y 및 T33V 돌연변이를 가진 D148; A48에 비해 G27Y, F28G, 및 T33V 돌연변이를 가진 D158; A48에 비해 F28Y 및 T33V 돌연변이를 가진 D168; A48에 비해 T33V 및 A98V 돌연변이를 가진 C98; A48에 비해 T33V 및 A98S 돌연변이를 가진 C128; A48에 비해 Del26, T33V, 및 A98V 돌연변이를 가진 D178; 및 A48에 비해 Del26, T33V, 및 A98S 돌연변이를 가진 D188을 제공한다.
<표 3>
Figure pct00009
<표 4>
Figure pct00010
Figure pct00011
<표 5>
Figure pct00013
Figure pct00014
<표 6>
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
일부 실시양태에서, 항체 분자는 A11에 비해 VH T33V 돌연변이를 포함한다. 보다 구체적으로, 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 카밧 또는 코티아의 CDR 정의를 이용하는, 표 1의 항체(예를 들어, D88, F38, F108, 또는 C88)의 VH 영역의 CDR1을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 카밧 또는 코티아의 CDR 정의를 이용하는, 표 1의 항체(예를 들어, D88, F38, F108, 또는 C88)의 VH 영역의 CDR1, 및 CDR2과 CDR3 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 카밧 또는 코티아의 CDR 정의를 이용하는, 표 1의 항체(예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88)의 VH 영역의 CDR1을 표 2의 VH 및/또는 VL 영역에서 발견되는 또 다른 1, 2, 3, 4, 또는 5(예를 들어, 전부 6)개의 CDR과 함께 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 서열 번호 3의 VH CDR1을 포함한다. 예를 들어, 항-뎅기열 항체 분자는 서열 번호 3의 VH CDR1을 표 3의 VH CDR2 및/또는 VHCDR3, 예를 들어, 서열 번호 4의 VH CDR2 및 서열 번호 5의 VH CDR3과 함께 포함할 수 있다. 추가의 예로서, 항-뎅기열 항체 분자는 서열 번호 3의 VH CDR1을 표 2의 VH 및/또는 VL 영역에서 발견되는 또 다른 1, 2, 3, 4, 또는 5(예를 들어, 전부 6)개의 CDR과 함께 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 A11에 비해 VH F65L 돌연변이를 포함한다. 카밧 정의된 A11의 CDR에서, 위치 65는 CDR 잔기이지만, 코티아 정의된 A11의 CDR에서 위치 65는 골격 잔기이다. 일부 실시양태에서, 항체 분자의 뎅기열 바이러스에 대한 친화도는 F65L 돌연변이에 의해 영향을 받지 않는다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 CDR의 카밧 또는 코티아 정의를 이용하는, 표 1의 항체(예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88)의 VH 영역의 CDR2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 CDR의 카밧 또는 코티아 정의를 이용하는, 표 1의 항체 (예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88)의 VH 영역의 CDR2, 및 CDR1과 CDR3 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 카밧 또는 코티아 정의를 이용하는, 표 1의 항체 (예를 들어, D88, A48, F38, F108, 또는 C88)의 VH 영역의 CDR2를 표 2의 VH 및/또는 VL 영역에서 발견되는 또 다른 1, 2, 3, 4, 또는 5(예를 들어, 전부 6)개의 CDR과 함께 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 서열 번호 4의 VH CDR2를 포함한다. 예를 들어, 항-뎅기열 항체 분자는 표 3의 VH CDR1 및/또는 VH CDR3, 예를 들어, 서열 번호 3의 VH CDR1 및 서열 번호 5의 VH CDR3과 함께 서열 번호 4의 VH CDR2를 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, 항-뎅기열 항체 분자는 서열 번호 4의 VH CDR2를 표 2의 VH 및/또는 VL 영역에서 발견되는 또 다른 1, 2, 3, 4, 또는 5(예를 들어, 전부 6)개의 CDR과 함께 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 A11에 비해 VH F65L 돌연변이 및 VH T33V 돌연변이를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 A11에 비해 VH 내 위치 26에 S의 결실(del26)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 VH T33V 돌연변이 및/또는 VH F65L 돌연변이와 함께 del26 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 del26 돌연변이 및 표 3의 하나 이상의 CDR을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 CDR의 카밧 또는 코티아 정의를 이용하는, 표 2의 VH 및/또는 VL 영역 내 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR과 함께 del26 돌연변이를 포함한다.
하기 실시예 4에 나타낸 바와 같이, 중쇄 N-말단은 돌연변이에 내성을 갖는다. 따라서, 일부 실시양태에서, 중쇄 서열의 위치 1-6은 표 1의 항체에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 돌연변이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 표 2의 중쇄 서열의 잔기 2, 3, 5, 또는 6 중 하나 이상(예를 들어, 전부)에서 치환, 삽입, 또는 결실을 갖는다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 표 2의 중쇄 서열의 일부분, 예를 들어, 아미노산 위치 2-117, 3-117, 4-117, 5-117, 6-117, 8-117, 또는 10-117을 포함한다.
하기 실시예 5에 나타낸 바와 같이, VH 내 위치 27 및 28은 돌연변이에 내성을 가지며, 일부 실시양태에서, 위치 27 및/또는 28에서 돌연변이는 결합을 상승시킨다. 따라서, 일부 실시양태에서, 위치 27 및 28중 하나 또는 둘 다는 표 1의 항체 대해 돌연변이를 갖는다.
또한, 실시예 5는 VH 내 위치 98이 돌연변이에 내성을 갖는다는 것을 보여주며, 일부 실시양태에서, 위치 98에서 돌연변이는 결합을 상승시킨다. 따라서, 일부 실시양태에서, 위치 98은 표 1의 항체에 비해 돌연변이를 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 표 2의 중쇄 및 경쇄 가변영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 표 3의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함하는 및 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 VH 내 잔기 98이 어떤 아미노산이든 될 수 있는 표 1의 중쇄 가변 영역이다. 특정 실시양태에서, 잔기 98은 어떤 무전하 아미노산이든 될 수 있다. 일부 실시양태에서, 위치 98은 A, V, 또는 S일 수 있다. 하기 실시예 5는 위치 98에서 잔기 A, V, 또는 S를 가진 항체가 EDⅢ에 대해 우수한 결합을 갖는다는 것을 보여준다.
인간화 과정에서, 다양한 골격 영역(예를 들어, VH FW1)은 마우스 항체 A11 또는 B11의 잔기를 포함하도록 복귀 돌연변이될 수 있다. 보다 광범위하게는, 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 1의 VH 영역의 전부 또는 일부분의 서열을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 1의 VH 영역의 아미노산 5-117, 10-117, 15-117, 20-117, 25-117, 30-117, 또는 32-117을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 마우스 VH FW1 영역(예를 들어, A11 또는 B11에서 발견되는 것) 또는 인간 VH FW1 영역(예를 들어, 표 1의 항체에서 발견되는 것 또는 인간 생식세포계열 VH FW1 서열)으로부터 선택된 인간 VH FW1 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH FW1 영역은 표 1의 VH 서열의 아미노산 1-31에 비해 1, 2, 3, 또는 4개 이하의 위치에서 비동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 표 1의 항체의 VH FW2 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH FW2 영역은 표 1의 VH 서열의 아미노산 37-50에 비해 1, 2, 3, 또는 4개 이하의 위치에서 비동일성을 갖는다. 뎅기열 바이러스의 여러 혈청형의 EDⅢ과 교차 반응할 수 있는 항체 분자는 여러 가지 장점을 갖는다. 예를 들어, 한 가지 요법이 여러 혈청형을 치료 또는 진단하는데 이용될 수 있다. 게다가, 의사는 적합한 요법을 결정하기 위하여 환자가 감염된 혈청형을 결정할 필요가 없다. 따라서, 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 2, 3, 4가지 이상의 뎅기열 바이러스 혈청형에 높은 친화도로 독립적으로 결합할 수 있다. 예를 들어, 항체 분자는 DV-1 및 DV-2의 EDⅢ, DV-1 및 DV-3의 EDⅢ, DV-1 및 DV-4의 EDⅢ, DV-2 및 DV-3의 EDⅢ, DV-2 및 DV-4의 EDⅢ, DV-3 및 DV-4의 EDⅢ, 또는 DV-1 및 DV-2 및 DV-3의 EDⅢ, DV-1 및 DV-2 및 DV-4의 EDⅢ, DV-1 및 DV-3 및 DV-4의 EDⅢ, DV-2 및 DV-3 및 DV-4의 EDⅢ, 또는 DV-1 및 DV-2 및 DV-3 및 DV-4의 EDⅢ에 높은 친화도로 독립적으로 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 분자는 DV-4의 EDⅢ, 및 하나 이상의 기타 DV 혈청형의 EDⅢ에 독립적으로 결합할 수 있다.
상기에 언급된 뎅기열 바이러스의 각 혈청형은 여러 균주를 포함하는 한 부류이다. 상기에 기재된 뎅기열 바이러스는 다양한 혈청형 내에서 여러 균주에 결합하는 광범위한 반응성을 보인다([도 11] 참조). 따라서, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자는 하나 이상(예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 15, 또는 20, 25, 또는 30가지 이상)의 뎅기열 바이러스 균주, 예를 들어, DENV-4 BC2, DENV-4-Sing10, DENV-4 NewCal09, DENV-4 Phil56, DENV-3 Sing09, DENV-3 Nic10, DENV-3 H87, DENV-2 페루95, DENV-2 Sing08, DENV-2 NGC, DENV-1 하와이/1944, DENV-2 뉴기니/1944 (NGC), DENV-3 필리핀/1956 (H87), DENV-4 멕시코/1997 (BC287/97), 및 DENV-4 H241로부터 선택된 균주, [도 10a]의 계통 나무에 열거된 균주, [도 10b 및 19- 21]에 나타낸 균주, 본원에서 표 6에 열거된 균주(예를 들어, EDⅢ 서열이 표 6에 제공된 균주), ATCC에 기탁된 균주, 신생 바이러스와 아르보바이러스 세계 종합자료관(World Reference Center for Emerging Viruses and Arboviruses(WRCEVA))에 열거된 균주(www.niaid.nih.gov/labsandresources/resources/dmid/wrceva/Pages/default.aspx에서 이용 가능), 및 CDC'의 매개 인자성 감염질환 부서(CDC's Division of Vector Borne Infectious Diseases)에 열거된 균주(www2a.cdc.gov/nczved/dvbid/misc/reg.asp에서 이용 가능)에 결합하고/거나 이들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4 중 하나 이상에 높은 친화도로 결합한다. 상기 혈청형 각각의 E 단백질의 EDⅢ 아미노산 서열은, 일부 실시양태에서, 표 6에 제공된 E 단백질 서열이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 분자는 항체 의존 증강(ADE: antibody-dependent enhancement)을 활성화시키지 않는다. ADE는 문헌(Balsitis et al., Lethal Antibody Enhancement of Dengue Disease in Mice Is Prevented by Fc Modification, PLoS Pathog 6(2): e1000790. doi:10.1371/journal.ppat.1000790)에 더 상세히 기재되어 있다. 간략하게, ADE는 개인이 상이한 혈청형의 뎅기열 바이러스에 두번 연속적으로 뎅기 감염을 경험하고, 1차 감염의 발생이 2차 감염을 더 심하게 만든다는 것을 나타낸다(예를 들어, 뎅기 출혈열로 진행할 가능성이 더 큼). ADE 기전은 항-뎅기열 항체가 바이러스와 숙주 세포의 항체 Fc 수용체에 동시에 결합하여, 감염성을 증가시키는 것일 수 있다. 본원에 개시된 FRNT 실험에서 명백하듯이, 본 출원은 감염성을 증가시키기보다는 감소시키는 다수의 항체 분자를 제공한다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자는 환자에서 ADE를 활성화시키지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 기타 항체(예를 들어, 환자의 내인성 항체)에 의해 유도되는 ADE를 억제한다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 EDⅢ 상의 선형 또는 입체구조적 에피토프에 결합한다.
본원에 기재된 용어 "항체 분자"는 적어도 하나의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질을 나타낸다. 용어 항체 분자는, 예를 들어, 전장의, 성숙 항체 및 항체의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 항체 분자는 중쇄(H) 가변 도메인 서열(본원에서 VH로 축약), 및 경쇄(L) 가변 도메인 서열(본원에서 VL로 축약)을 포함할 수 있다. 또 다른 실시예에서, 항체 분자는 2개의 중쇄(H) 가변 도메인 서열 및 2개의 경쇄(L) 가변 도메인 서열을 포함함으로써 2개의 항원 결합 부위, 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fc, Fd, Fd', Fv, 단쇄 항체(예를 들어, scFv), 단일 가변 도메인 항체, 디아바디(Dab)(이가 및 이중 특이적), 및 키메라(예를 들어, 인간화) 항체를 형성하며, 이들은 전항체의 변형 또는 재조합 DNA 기술을 이용하여 드 노보(de novo) 합성에 의해 생성될 수 있다. 상기 기능적 항체 단편은 그들의 각각의 항원 또는 수용체에 선택적인 결합능을 보유한다. 항체 및 항체 단편은 IgG, IgA, IgM, IgD, 및 IgE를 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는, 임의의 항체 부류, 및 항체의 임의의 하위 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4)로부터 유래할 수 있다. 항체는 단클론 또는 다클론일 수 있다. 또는, 항체는 인간, 인간화, CDR-이식된, 또는 시험관 내 생성된 항체일 수 있다. 항체는, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 가질 수 있다. 또한, 항체는, 예를 들어, 카파 또는 람다로부터 선택된 경쇄를 가질 수 있다.
항원 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편, (ii) 힌지 영역에서 이황화 결합에 의해 결합된 2개의 Fab 단편을 포함하는 이가 단편인 F(ab')2 단편, (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편, (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 디아바디(dAb) 단편, (vi) 카멜리드 또는 카멜라이즈드(camelized) 가변 도메인, (vii) 단쇄 Fv(scFv), 예를 들어, 문헌(Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 85:5879-5883))을 참조; (viii) 단일 도메인 항체를 포함한다. 이들 항체 단편은 당 업자에게 공지된 통상의 여러 기술을 포함한 임의의 적합한 방법에 의해 얻을 수 있으며, 단편은 완전한 항체와 동일한 방법으로 용도에 따라 스크리닝될 수 있다.
용어 "항체"는 완전한 분자뿐 아니라 그의 기능적 단편을 포함한다. 항체의 불변 영역은 항체의 특성을 변형시키기 위해서(예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기 개수, 이펙터 세포 기능, 또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시키기 위해서) 변경, 예를 들어, 돌연변이될 수 있다.
또한, 본원에 개시된 항체는 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 상보성 결정 영역이 단일 도메인 폴리펩티드의 일부분인 항체를 포함할 수 있다. 예로는 중쇄 항체, 본래 경쇄가 없는 항체, 통상의 4쇄 항체로부터 유래된 단일 도메인 항체, 조작된 항체 및 항체로부터 유래한 것 이외에 단일 도메인 스캐폴드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 단일 도메인 항체는 어떤 기술의, 또는 어떤 미래의 단일 도메인 항체든 될 수 있다. 단일 도메인 항체는 마우스, 인간, 낙타, 라마, 어류, 상어, 염소, 토끼 및 소를 포함하나 이에 제한되지 않은 어떤 종으로부터든 유래할 수 있다. 일부 측면에 따르면, 단일 도메인 항체는 경쇄가 없는 중쇄 항체로 공지된 자연 발생의 단일 도메인 항체이다. 이 같은 단일 도메인 항체는, 예를 들어, WO 9404678호에 개시되어 있다. 명백히 하기 위해, 본래 경쇄가 없는 중쇄 항체로부터 유래한 상기 가변 도메인은 4쇄 면역글로불린의 통상의 VH와 구분하기 위해 VHH 또는 나노바디로 본원에서 공지된다. 이 같은 VHH 분자는 낙타과(camelidae) 종, 예를 들어, 낙타, 라마, 단봉 낙타, 알파카 및 과나코에서 상승된 항체로부터 유래할 수 있다. 낙타과 이외의 종은 본래 경쇄가 없는 중쇄 항체를 생산할 수 있다. 또한, 이 같은 VHH도 고려된다.
VH 및 VL 영역은 "골격 영역"(FR)이라고 불리는 보존성이 높은 영역이 사이에 배치된, "상보성 결정 영역"(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 세분될 수 있다. 골격 영역 및 CDR의 크기는 많은 방법에 의해 정확하게 정의되었다(문헌(Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Humna Services, NIH Publication No. 91-3242; Chothia, C. et al. (1987) J. Mol . Biol . 196:901-917); 및 옥스포드 분자 AbM 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular's AbM antibody modeling software)에서 사용되는 AbM 정의) 참조. 전반적으로, 예를 들어, 문헌(Protein and Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual(Ed.: Duebel, S and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg) 참조). 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인의 CDR1의 AbM 정의 및 기타 CDR에 카밧 정의가 사용된다. 특정 실시양태에서, 카밧 정의가 모든 CDR에 사용된다. 또한, 카밧 또는 AbM CDR과 관련하여 기재된 실시양태는 코티아 과가면 루프를 이용하여 실시될 수 있다. 각 VH 및 VL는 전형적으로 아미노 말단에서 카복시 말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR을 포함한다.
본원에서 사용되는 "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 나타낸다. 예를 들어, 서열은 자연 발생의 가변 도메인의 아미노산 서열의 전체 또는 일부분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열은 1, 2개 이상의 N-말단 또는 C-말단 아미노산을 포함할 수도 포함하지 않을 수도 있거나, 단백질 구조의 형성과 적합한 기타 변경을 포함할 수 있다.
용어 "항원 결합 영역"은 E 단백질, 또는 그의 에피토프에 결합하는 계면을 형성하는 결정인자를 포함하는 항체 부분을 나타낸다. 단백질(또는 단백질 모방체)와 관련하여, 항원 결합 영역은 전형적으로 E 단백질에 결합하는 계면을 형성하는(적어도, 예를 들어, 4개의 아미노산 또는 아미노산 모방체의) 하나 이상의 루프를 포함한다. 전형적으로, 항체 분자의 항원 결합 영역은 적어도 하나 또는 2개의 CDR, 또는 보다 전형적으로 적어도 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "단클론 항체" 또는 "단클론 항체 조성물"은 단일 분자 조성물의 항체 분자 제제를 나타낸다. 단클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타낸다. 단클론 항체는 하이브리도마 기술에 의해 또는 하이브리도마 기술을 이용하지 않는 방법(예를 들어, 재조합 방법)에 의해 제조될 수 있다.
"효과적인 인간" 단백질은 항체 반응, 예를 들어, 인간 항-마우스 항체(HAMA) 반응의 중화를 유발하지 않는 단백질이다. HAMA는 여러 가지 환경에서, 예를 들어, 항체 분자가, 예를 들어, 만성 또는 재발성 질환 상태의 치료에, 반복적으로 투여되는 경우에 문제가 있을 수 있다. HAMA 반응은 혈청으로부터 항체 청소의 증가로 인해(예를 들어, 문헌(Saleh et al., Cancer Immunol . Immunother ., 32:180-190 (1990) 참조) 및 잠재적인 알레르기 반응으로 인해(예를 들어, 문헌(LoBuglio et al., Hybridoma, 5:5117-5123 (1986)) 참조) 반복된 항체 투여가 잠재적으로 효과가 없게 만들 수 있다.
항체 분자는 다클론 또는 단클론 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 재조합에 의해, 예를 들어, 적합한 임의의 파아지 디스플레이 또는 조합법에 의해 생산될 수 있다.
항체를 생산하기 위한 다양한 파아지 디스플레이 및 조합법은 당 업계에 공지에 있다(예를 들어, 그 내용이 본원에서 참고에 포함되어 있는 문헌(Ladner et al. 미국 특허 제5,223,409호; Kang et al. 국제 공개 WO 92/18619호; Dower et al. 국제 공개 WO 91/17271호; Winter et al. 국제 공개 WO 92/20791호; Markland et al. 국제 공개 WO 92/15679호; Breitling et al. 국제 공개 WO 93/01288호; McCafferty et al. 국제 공개 WO 92/01047호; Garrard et al. 국제 공개 WO 92/09690호; Ladner et al. 국제 공개 WO 90/02809호; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; Griffths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al. (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; 및 Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982)에 기재됨).
일부 실시양태에서, 항체는 완전 인간 항체(예를 들어, 인간의 면역글로불린 서열로부터 항체를 생산하도록 유전적으로 조작된 마우스에서 제조된 항체), 또는 비-인간 항체, 예를 들어, 설치류(마우스 또는 랫트), 염소, 영장류(예를 들어, 원숭이), 낙타 항체이다. 특정 실시양태에서, 비-인간 항체는 설치류(마우스 또는 랫트 항체)이다. 설치류 항체의 제조 방법은 당 업계에 공지되어 있다.
인간 단클론 항체는 마우스 시스템보다는 인간 면역글로불린 유전자를 포함하는 트랜스제닉 마우스를 이용하여 생산될 수 있다. 관심 항원으로 면역화된 이들 트랜스제닉 마우스의 비장 세포를 이용하여 인간 단백질의 에피토프에 대해 특이적인 친화도를 가진 인간 mAb를 분비하는 하이브리도마를 생산한다(예를 들어, 문헌(Wood et al. 국제 출원 WO 91/00906호, Kucherlapati et al. PCT 공개 WO 91/10741호; Lonberg et al. 국제 출원 WO 92/03918호; Kay et al. 국제 출원 92/03917호; Lonberg, N. et al. 1994 Nature 368:856-859; Green, L.L. et al. 1994 Nature Genet. 7:13-21; Morrison, S.L. et al. 1994 Proc . Natl . Acad . Sci . USA 81:6851-6855; Bruggeman et al. 1993 Year Immunol 7:33-40; Tuaillon et al. 1993 PNAS 90:3720-3724; Bruggeman et al. 1991 Eur J Immunol 21:1323-1326) 참조).
항체는 가변 영역, 또는 그의 일부분, 예를 들어, CDR이 비-인간 생물체, 랫트 또는 마우스에서 생산되는 것일 수 있다. 또한, 키메라, CDR-이식된 인간화 항체도 고려된다. 또한, 비인간 생물체, 예를 들어, 랫트 또는 마우스에서 생산된 후 인간에서 항원성을 감소시키기 위해, 예를 들어, 가변 골격 또는 불변 영역에서 변형된 항체가 고려된다.
키메라 항체는 임의의 적합한 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 여러 가지 기술이 당 업계에 공지되어 있다(문헌(Robinson et al., 국제 특허 공개 PCT/US86/02269호; Akira, et al., 유럽 특허 출원 제184,187호; Taniguchi, M., 유럽 특허 출원 171,496호; Morrison et al., 유럽 특허 출원 제173,494호; Neuberger et al., 국제 출원 WO 86/01533호; Cabilly et al. 미국 특허 제4,816,567호; Cabilly et al., 유럽 특허 출원 제125,023호; Better et al. (1988 Science 240:1041-1043); Liu et al. (1987) PNAS 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol . 139:3521-3526; Sun et al. (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Canc . Res. 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-449; 및 Shaw et al., 1988, J. Natl Cancer Inst. 80:1553-1559) 참조).
인간화 또는 CDR-이식된 항체는 공여체 CDR로 치환된 적어도 하나 또는 2개 그러나 일반적으로 3개 모두 수용체 CDR(면역글로불린 중쇄 및/또는 경쇄)을 가질 것이다. 항체는 비인간 CDR의 적어도 일부분으로 치환될 수 있거나 CDR의 일부분만이 비인간 CDR로 치환될 수 있다. EDⅢ에 대한 인간화 항체의 결합에 필요한 CDR의 개수를 치환하는 것만이 필요하다. 일부 실시양태에서, 공여체는 설치류, 예를 들어, 랫트 또는 마우스 항체이고, 수용체는 인간 골격 또는 인간 공통 골격이 될 것이다. 전형적으로, CDR을 제공하는 면역글로불린은 "공여체"로 불리고, 골격을 제공하는 면역글로불린은 "수용체"로 불린다. 일부 실시양태에서, 공여체 면역글로불린은 비인간(예를 들어, 설치류)이다. 수용체 골격은 전형적으로 자연 발생(예를 들어, 인간) 골격 또는 공통 골격, 또는 그에 약 85% 이상, 예를 들어, 90%, 95%, 99% 이상 동일한 서열이다.
본원에서 사용되는 용어 "공통 서열"은 관련된 서열 부류에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산(또는 뉴클레오티드)로부터 형성된 서열을 언급한다(예를 들어, 문헌(Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987) 참조). 한 부류의 단백질에서, 공통 서열 내 각 위치는 부류 내 그 위치에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산이 차지한다. 2개의 아미노산이 동일한 빈도로 발생하는 경우, 어느 것이든 공통 서열에 포함될 수 있다. "공통 골격"은 공통 면역글로불린 서열 내 골격 영역을 언급한다.
항체는 임의의 적합한 방법 및 당 업계에 공지된 여러 가지 이 같은 방법에 의해 인간화될 수 있다(예를 들어, 그 내용이 이로써 참고에 포함된 문헌(Morrison, S. L., 1985, Science 229:1202-1207, Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214, 및 Queen et al. 미국 특허 제5,585,089호, 미국 특허 제5,693,761호 및 미국 특허 제5,693,762호 참조).
인간화 또는 CDR-이식된 항체는 CDR-이식 또는 CDR 치환에 의해 생성될 수 있으며, 여기서 면역글로불린 사슬의 하나, 2개, 또는 전체 CDR이 치환될 수 있다(예를 들어, 그 내용이 이로써 참고에 명백히 포함되는 문헌(미국 특허 제5,225,539호; Jones et al. 1986 Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. 1988 Science 239:1534; Beidler et al. 1988 J. Immunol . 141:4053-4060; Winter 미국 특허 제5,225,539호) 참조), 윈터(Winter)는 인간화 항체 제조에 이용될 수 있는 CDR-이식 방법을 기재하고 있다(1987년 3월 26일 출원된 영국 특허 출원 GB 2188638A호; 윈터 미국 특허 제5,225,539호).
또한, 특정 아미노산이 치환, 결실 및 첨가된 인간화 항체를 제공한다. 공여체로부터 아미노산을 선택하기 위한 기준은, 예를 들어, 그 내용이 이로써 참고에 포함된 미국 특허 제5,585,089호, 예를 들어, 미국 특허 제5,585,089호 12-16열에 기재되어 있다. 인간화 항체를 위한 다른 기술은 1992년 12월 23일에 공개된 EP 519596 A1호(Padlan et al.)에 기재되어 있다.
항체 분자는 단쇄 항체일 수 있다. 단쇄 항체(scFV)는 조작될 수 있다(예를 들어, 문헌(Colcher, D. et al. (1999) Ann N Y Acad Sci 880:263-80; 및 Reiter, Y. (1996) Clin Cancer Res 2:245-52 참조). 단쇄 항체는 이량체화 또는 다량체화되어 동일한 표적 단백질의 상이한 에피토프에 특이성을 갖는 다가 항체를 생성할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역, 특히 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 (예를 들어, 인간) 중쇄 불변 영역으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자는, 예를 들어, 카파 또는 람다의 (예를 들어, 인간) 경쇄 불변 영역으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다. 불변 영역은 항체의 특성을 변형시키기 위해(예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기 개수, 이펙터 세포 기능, 및/또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시키기 위해) 변경, 예를 들어, 돌연변이될 수 있다. 일부 실시양태에서 항체는 이펙터 기능을 가지며 보체를 고정시킬 수 있다. 다른 실시양태에서 항체는 이펙터 세포를 동원하거나 보체를 고정하지 않는다. 특정 실시양태에서, 항체는 Fc 수용체에 결합을 감소시키거나 Fc 수용체에 결합할 수 없다. 예를 들어, 항체는 Fc 수용체에 결합을 지원하지 않는 이소형 또는 아형, 단편 또는 기타 변이체일 수 있으며, 예를 들어, 항체는 Fc 수용체 결합 영역이 돌연변이되거나 결실된다.
항체 불변 영역은 일부 실시양태에서 변경된다. 항체 불변 영역의 변경 방법은 당 업계에 공지되어 있다. 변경된 기능, 예를 들어, 세포 상의 FcR 또는 보체의 C1 구성성분과 같은 이펙터 리간드에 대한 변경된 친화도를 갖는 항체는 항체의 불변 영역 내 적어도 하나의 아미노산 잔기를 다른 잔기로 치환함으로써 생성될 수 있다(예를 들어, 그 내용이 이로써 참고에 포함된 EP 388,151 A1호, 미국 특허 제5,624,821호 및 미국 특허 제5,648,260호 참조). 또한, 인간 IgG4에서 S228P(EU 명명법, 카밧 명명법에서는 S241P)와 같이 항체 구조를 안정시키는 아미노산 돌연변이가 고려된다. 마우스 또는 기타 종에 적용되는 경우 면역글로불린이 상기 이러한 기능을 감소시키거나 제거할 수 있는 유사한 유형의 변경이 기재될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자 내 아미노산은 오직 표준 아미노산이다. 일부 실시양태에서, 항-뎅기열 항체 분자는 자연 발생 아미노산, 유사체, 그의 유도체 및 동질체; 변이 측쇄를 가진 아미노산 유사체; 및/또는 상기 임의의 모든 입체 이성질체를 포함한다. 항-뎅기열 항체 분자는 아미노산의 D- 또는 L-광학 이성질체 및 펩티드 모방체를 포함할 수 있다.
항-뎅기열 항체 분자의 폴리펩티드는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 변형된 아미노산을 포함할 수 있으며, 비아미노산이 삽입될 수 있다. 또한, 항체 분자는, 예를 들어, 이황화 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 표지 성분으로 접합과 같은 임의의 기타 조작에 의해 변형될 수 있다. 폴리펩티드는 천연 공급원으로부터 단리될 수 있거나, 진핵 또는 원핵 숙주로부터 재조합 기술에 의해 생산될 수 있거나, 합성 절차의 산물일 수 있다.
항-뎅기열 항체 분자는 비접합 형태로 단독으로 사용될 수 있거나, 물질, 예를 들어, 독소 또는 잔기(예를 들어, 치료제; 방사선 방출 화합물; 식물, 진균, 또는 세균 기원의 분자; 또는 생물학적 단백질(예를 들어, 단백질 독소) 또는 입자(예를 들어, 재조합 바이러스 입자, 예를 들어, 바이러스 코트 단백질)에 결합될 수 있다. 예를 들어, 항-뎅기열 항체는, α-, β-, 또는 γ-이미터, 또는 β- 및 γ-이미터와 같은 방사성 동위원소에 결합될 수 있다.
항체 분자는 또 다른 작용 분자(예를 들어, 또 다른 펩티드 또는 단백질)에 유도체화되거나 결합될 수 있다. 본원에서 사용되는 "유도체화" 항체 분자는 변형된 것이다. 유도체화 방법은 형광 잔기, 방사성 뉴클레오티드, 독소, 효소 또는 비오틴과 같은 친화성 리간드의 첨가를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 따라서, 항체 분자는, 면역 부착 분자를 포함한, 본원에 기재된 항체의 유도체화된, 아니면 변형된 형태를 포함하고자 한다. 예를 들어, 항체 분자는 항체 또는 항체 일부분과 또 다른 분자(예를 들어, 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히드티딘 태그)의 결합을 매개 할 수 있는 하나 이상의 다른 분자체, 예를 들어, 또 다른 항체(예를 들어, 이중 특이적 항체 또는 디아바디), 검출 가능 제제, 독소, 약학 제제 및/또는 단백질 또는 펩티드에 기능적으로 결합될 수 있다(화학적 결합, 유전적 융합, 비공유 결합 또는 그 외에 의해).
일부 유형의 유도체화된 항체 분자는 2개 이상의 항체(동일한 유형, 또는, 예를 들어, 이중 특이적 항체를 생성하기 위해 상이한 유형)을 가교시켜 생성된다. 적합한 가교제는 적합한 스페이서(예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르)에 의해 분리되는 2개의 구별되는 반응기를 가진 헤테로 이작용성, 또는 호모이작용성(예를 들어, 디숙신이미딜 수베레이트)인 것이다. 상기 가교제는 피어스 케미컬 컴퍼니(Pierce Chemical Company, Rockford, Ill)로부터 구입 가능하다.
항-뎅기열 항체 분자가 유도체화(표지)될 수 있는 유용한 검출 가능 제제는 형광 화합물, 여러 효소, 보결 분자단, 발광 물질, 생물발광 물질, 형광 방출 금속 원자, 예를 들어, 유로피윰(Eu), 및 기타 안타니드, 및 방사성 물질(하기에 기재됨)을 포함한다. 대표적인 형광 검출 가능한 제제는 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 5-디메틸아민-1-나프탈렌설포닐 클로라이드, 피코에리트린 등을 포함한다. 또한, 항체는 검출 가능한 효소, 예를 들어, 알칼리 포스파타제, 겨자무 과산화 효소, β-갈락토시다제, 아세틸콜린에스테라제, 글루코스 옥시다아제 등으로 유도체화될 수 있다. 항체가 검출 가능한 효소로 유도체화될 때, 효소가 검출 가능한 반응 산물을 생산하는데 사용하는 추가의 시약을 첨가하여 검출된다. 예를 들어, 검출 가능한 제제로 겨자무 과산화 효소가 존재하는 경우, 과산화수소 및 디아미노벤지딘을 첨가하여 검출 가능한 발색된 반응 산물을 생성한다. 또한, 항체 분자는 보결 분자단(예를 들어, 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴)으로 유도체화될 수 있다. 예를 들어, 항체는 비오틴으로 유도체화되어 아비딘 또는 스트렙타비딘 결합을 간접적으로 측정함으로써 검출될 수 있다. 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하고, 발광 물질의 예는 루미놀을 포함하고, 생물발광 물질의 예는 루시퍼라제, 루시페린, 및 에쿠오린을 포함한다.
표지된 항체 분자는, 예를 들어, (i) 친화성 크로마토그래피 또는 면역 침전과 같은 표준 기술에 의한 예정된 항원의 단리; (ii) 단백질 발현의 빈도 및 양상을 평가하기 위한 (예를 들어, 세포 용해액 또는 세포 상등액에서) 예정된 항원의 검출; (iii) 임상 시험 절차의 일부로서 조직 내 단백질 수준의 모니터, 예를 들어, 주어진 치료 요법의 효능의 결정을 포함한 수많은 상황에서 진단 및/또는 실험적으로 사용될 수 있다.
항체 분자는 또 다른 분자체, 전형적으로 표지 또는 치료(예를 들어, 면역조절, 면역자극, 세포독성, 또는 세포정지) 제제 또는 잔기에 접합될 수 있다. 방사성 동위원소는 진단 또는 치료 용도에 사용될 수 있다. 항-뎅기열 항체에 결합될 수 있는 방사성 동위원소는 α-, β-, 또는 γ-이미터, 또는 β- 및 γ-이미터를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이 같은 방사성 동위원소에는 요오드(31I 또는 125I), 이트륨(90Y), 루테튬(177Lu), 악티늄(225Ac), 프라세오디뮴, 아스타틴(211At), 레늄(186Re), 비스무트(212Bi 또는 213Bi), 인듐(111In), 테크네튬(99 mTc), 인(32P), 로듐 (188Rh), 황(35S), 탄소(14C), 트리튬(3H), 크롬(51Cr), 염소(36Cl), 코발트(57Co 또는 58Co), 철(59Fe), 셀레늄(75Se), 또는 갈륨(67Ga)이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 치료제로서 유용한 방사성 동위원소는 이트륨(90Y), 루테튬(177Lu), 악티늄(225Ac), 프라세디뮴, 아스타틴(211At), 레늄(186Re), 비스무트(212Bi 또는 213Bi), 및 로듐(188Rh)을 포함한다. 예를 들어, 진단에 사용하기 위한, 표지로서 유용한 방사성 동위원소는 요오드(131I 또는 125I), 인듐(111In), 테크네튬(99mTc), 인(32P), 탄소(14C), 및 트리튬(3 H), 또는 상기에 열거된 하나 이상의 치료 동위원소를 포함한다.
본 개시는 방사성 표지된 항체 분자 및 그의 표지 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자의 표지 방법을 개시한다. 방법은 항체 분자를 킬레이팅제와 접촉시킴으로써 접합된 항체를 생성하는 단계를 포함한다. 접합된 항체는 방사성 동위원소, 예를 들어, 111인듐, 90이트륨 및 177루테륨으로 방사성 표지함으로써 표지된 항체 분자를 생성한다.
상기에서 논의된 바와 같이, 항체 분자는 치료제에 접합될 수 있다. 치료 활성의 방사성 동위원소는 이미 언급되었다. 기타 치료제의 예에는 항바이러스제가 포함된다.
일부 측면에서, 본 개시는 본원에서 개시된 항체 분자의 제공 방법을 제공한다. 방법은 항원, 예를 들어, 뎅기열 바이러스 E 단백질 또는 그의 일부분을 제공하는 단계; 항원에 특이적으로 결합하는 항체 분자를 획득하는 단계; 항원의 활성을 조절하는데 있어 항체 분자의 효능 및/또는 항원, 예를 들어, 뎅기열 바이러스 항원을 발현하는 생물체를 평가하는 단계를 포함한다. 방법은 항체 분자 유도체(예를 들어, 인간화 항체 분자)를 포함한 항체 분자를 피험체, 예를 들어, 인간에 투여하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 개시는 상기 항체 분자를 코딩하는 단리된 핵산 분자, 그의 벡터 및 숙주 세포를 제공한다. 핵산 분자는 RNA, 게놈 DNA 및 cDNA를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
동물 모델
본원에 기재된 항체 분자는 동물 모델에서 평가될 수 있다. 예를 들어, 동물 모델은 뎅기열 바이러스 감염, 복제 및/또는 전파를 감소시키는데 있어 본원에 기재된 항체 분자의 효능을 시험하는데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항체 분자를 평가하는데 사용될 수 있는 대표적인 동물 모델은 AG129 마우스 모델(예를 들어, 문헌(Tharakaraman et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(17):E1555-64; Johnson et al. J Virol . 1999; 73(1):783-6)에 기재된 바와 같음): 비-마우스 적응된 마우스 모델(예를 들어, 문헌(Tan et al. PLoS Negl Trop Dis . 2010; 4(4):e672)에 기재된 바와 같은 비-마우스 적응된 DENV-2 D2Y98P 마우스 모델); 인간화 마우스 모델(예를 들어, 문헌(Sridharan et al. J Virol . 2013; 87(21):11648-58)에 기재된 바와 같음); 비인간 영장류 모델(예를 들어, 문헌(Goncalvez et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007; 104(22):9422-7)에 기재된 바와 같음); 및 모기 모델(예를 들어, 문헌(Vu et al. PLoS Negl Trop Dis . 2010; 4(7):e757)에 기재된 바와 같음)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
I형 및 II 형 인터페론 수용체가 둘다 결여된 AG129 마우스 균주는 바이러스 혈증 및 질환의 기타 징후를 포함한 뎅기의 임상 사례에서 발견되는 특정 질환 징후를 복제하는 동물 모델이다(Tharakaraman et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(17):E1555-64; Johnson et al. J Virol . 1999; 73(1):783-6). 이 모델은 항바이러스 치료를 평가하는데 유용하며, 원리 연구를 입증하는데에도 사용될 수 있다. 간략하게, AG129(IFN-α/β 및 IFN-γ 수용체 결여) 마우스를 뎅기열 바이러스로 공격하고, 후보 치료 항체 분자를 투여한다. 전형적으로, 바이러스 혈증(혈액 시료 내 바이러스 역가)이 실험의 종말점이다. 바이러스 혈증은, 예를 들어, 정량 RT-PCR로 측정될 수 있다. 대표적인 AG129 마우스 모델은 실시예 10에 기재된다.
비-마우스 적응된 마우스 모델은, 예를 들어, 복강 내 투여시 AG129 마우스에서 높은 감염성을 갖는 비-마우스 적응된 DEN2 바이러스 균주(D2Y98P)를 이용하여 생성될 수 있다(Tan et al. PLoS Negl Trop Dis . 2010; 4(4):e672). 고용량의 D2Y98P로 감염은 사이토카인 폭풍, 거대한 조직 손상, 및 중증 혈관 누수를 유도하여 출혈 및 바이러스 혈증의 전성기에 동물의 신속한 사망을 일으킬 수 있다. 낮은 용량의 D2Y98P로 감염은 해당 기관 내 무증상 바이러스 전파 및 복제, 이어서 인간에서 질환 동력학과 유사하게 바이러스 제거 며칠 후 동물의 비마비성 사망을 일으킬 수 있다. 빈사동물에서 비장 손상, 간기능 장애, 및 혈관 투과성 증가가 관찰될 수 있으나 출혈은 관찰될 수 없으며, 이는 뎅기 쇼크 증후군에서 기본 특징인 무손상 혈관 상태를 암시한다..
인간화 마우스 모델은 상당한 수준의 인간 혈소판, 단핵구/대식구, 및 간세포를 발생시키는 NOD-scid Il2rg -/-(NSG) 마우스에 인간 CD34+ 태아 간세포를 양자 이전시켜 생성될 수 있다(Sridharan et al. J Virol . 2013; 87(21):11648-58). DENV 혈청형 2(DENV-2)와 같은 뎅기열 바이러스로 상기 마우스의 감염은 인간에서 뎅기열 바이러스 감염의 어떤 특징적인 성질, 예를 들어, 일시적인 백혈구 감소증 및 혈소판 감소증을 재현할 수 있다.
비인간 영장류 모델은, 예를 들어, 문헌(Goncalvez et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007; 104(22):9422-7)에 기재된 바와 같이 DENV 공격 후 어린 붉은털 원숭이에서 생성될 수 있다. 감염된 원숭이의 바이러스 혈증 역가는, 예를 들어, 정량 PCR 또는 포커스 형성 단위(FFU: Focus Forming Units(FFU) 분석에 의해 결정될 수 있다.
또한, 모기 모델은 뎅기열 바이러스에 대한 항체의 억제 활성, 예를 들어, 바이러스 감염의 중화 또는 감염된 피험체와 모기 사이의 전파의 감소를 평가하는데 이용될 수 있다. 뎅기열 바이러스는 모기에 의해 전파되는 RNA 바이러스이다. 어떤 뎅기열 바이러스는 생체 내 적합도의 이점을 발달시킬 수 있으며, 이는 결과적으로 인간에서 모기로의 전파 가능성을 높일 수 있다(Vu et al., PLoS Negl Trop Dis . 2010; 4(7):e757). 모기 모델을 확립하기 위하여, 바이러스와 항체를 함유하는 혈액을 모기에게 급식할 수 있다. 모기 복부 내 바이러스 부하를 qRT-PCR로 측정할 수 있다. 대표적인 모기 모델은 실시예 13에 기재된다.
약학 조성물 및 키트
일부 측면에서, 본 개시는 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 제제화된 본원에 기재된 항-뎅기열 항체 분자를 포함하는 조성물, 예를 들어, 약학적으로 허용 가능한 조성물을 제공한다. 본원에서 사용되는 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 생리적으로 적합한 모든 용매, 분산 매질, 등장성 제제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 담체는 정맥 내, 근육 내, 피하, 비경구, 직장, 척추 또는 표피 투여(예를 들어, 주사 또는 주입에 의해)에 적합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 약학 조성물 내 약 5% 미만, 예를 들어, 약 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 항체 분자가 응집체로서 존재한다. 다른 실시양태에서, 약학 조성물 내에 적어도 약 95%, 예를 들어, 적어도 약 96%, 97%, 98%, 98.5%, 99%, 99.5%, 99.8% 이상의 항체 분자가 단량체로서 존재한다. 일부 실시양태에서, 항체 응집체 또는 단량체의 수준은 크로마토그래피, 예를 들어, 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HP-SEC)에 의해 결정된다.
본원에 개시된 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어, 액상, 반고상 및 고상 제형, 예를 들어, 용액(예를 들어, 주사액 및 주입액), 분산액 또는 현탁액, 리포솜, 및 좌약을 포함한다. 적합한 형태는 의도하는 투여 형태 및 치료 용도에 따라 결정된다. 전형적으로 적합한 조성물은 주사액 또는 주입액의 형태이다. 적합한 한 가지 투여 형태는 비경구(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내, 근육 내)이다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 정맥 내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 특정 실시양태에서, 항체는 근육 내 또는 피하 주사에 의해 투여된다.
본원에서 사용되는 용어 "비경구 투여" 및 "비경구 투여되는"은 장관 투여 및 국소 투여 이외에 대개 주사에 의한 투여를 의미하며, 제한 없이, 정맥 내, 근육 내, 동맥 내, 경막 내, 관절낭 내, 안와 내, 심장 내, 피부 내, 복강 내, 경기관 내, 피하, 표피 하, 관절 내, 피막 하, 지주막 하, 척추 내, 경막 외 및 흉골 내 주사 및 주입을 포함한다.
치료 조성물은 통상적으로 제조 및 저장 시 멸균되고 안정되어야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포솜 또는 고농도 항체에 적합한 기타 규칙적인 구조로서 제제화될 수 있다. 멸균 주사액은 적합한 용매 내 필요량의 활성 화합물(즉, 항체 또는 항체 일부분)을 상기에 열거된 성분 중 한 가지 또는 조합과 혼합하고, 필요한 경우, 이어서 여과 멸균시켜 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 기본 분산 매질 및 상기에 열거된 필요한 기타 성분을 포함하는 멸균 비히클에 혼합하여 제조된다. 멸균 주사액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 사전에 멸균 여과된 용액으로부터 활성 성분 및 임의의 추가의 바람직한 성분의 분말을 생산하는 진공 건조 및 동결 건조이다. 용액의 적합한 유동성은, 예를 들어, 레시틴관 같은 코팅제의 사용, 분산액일 경우 필요한 입자 크기의 유지, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사 가능한 조성물은 조성물 내에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함시킴으로써 지연 흡수될 수 있다.
항체 분자는 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 여러 방법이 당 업계에 공지되어 있으며, 치료 용도의 경우, 적합한 투여 경로/방식은 정맥 내 주사 또는 주입이다. 예를 들어, 항체 분자는 약 1 내지 100 mg/m 2, 바람직하게는 약 5 내지 50 mg/m2, 약 7 내지 25 mg/m2, 보다 바람직하게는, 약 10 mg/m2의 용량에 도달하도록 10mg/min 미만, 바람직하게는 5 mg/min 이하의 속도로 정맥 내 주입에 의해 투여될 수 있다. 당 업자에게 인식되는 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 바라는 결과에 따라 달라질 것이다. 특정 실시양태에서, 활성 화합물은 이식편, 경피 패치, 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제제와 같은 신속한 방출로부터 화합물을 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리산 무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생물적합성 중합체가 사용될 수 있다. 이 같은 제제의 많은 제조 방법은 특허받았거나 일반적으로 당 업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌(Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978)을 참조한다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는, 예를 들어, 불활성 희석제 또는 동화 가능한 식용 담체와 함께 경구 투여될 수 있다. 또한, 항체 분자(바람직한 경우, 및 기타 성분)은 경질 또는 연질 외층 젤라틴 캡슐에 포장되거나, 정제로 압축되거나 피험체의 식사에 직접 혼합될 수 있다. 경구 치료 투여의 경우, 항체 분자는 부형제와 혼합되어 소화 가능한 정제, 버컬정, 트로키제, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 경구 이외의 투여에 의해 항체 분자를 투여하기 위해서, 화합물을 그의 불활성화 방지 물질과 함께 코팅하거나 동시 투여하는 것이 필요할 수 있다. 또한, 치료 조성물은 의료기구를 이용하여 투여될 수 있으며 여러 가지가 당 업계에 공지되어 있다.
투여 계획은 바라는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼러스가 투여될 수 있으며, 분리된 여러 용량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나 용량은 치료 상황의 긴급 정도에 따라 명시되는 바와 같이 비례적으로 감소 또는 증가 될 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위형태로 비경구 조성물을 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 투여 단위 형태는 치료받는 피험체에 단위 투여량으로 적합한 물리적 개별 단위를 나타낸다. 각 단위는 필요한 약학 담체와 함께 바라는 치료 효과를 가져올 수 있도록 계산된 예정된 양의 활성 화합물을 포함한다. 투여 단위 형태에 대한 상세한 내용은 (a) 항체 분자의 고유한 특성 및 달성될 구체적인 치료 효과, 및 (b) 개인에 있어 민감도를 다루기 위해 상기 항체 분자를 혼합하는 기술에 내재하는 제한에 의해 그리고 그에 따라 직접적으로 기술된다.
항체 분자의 치료 또는 예방 유효량의 대표적이고 비제한적인 범위는 0.1-20 mg/kg, 보다 바람직하게는 1-10 mg/kg이다. 항체 분자는 약 1 내지 100 mg/m2, 바람직하게는 약 5 내지 50 mg/m2, 약 7 내지 25 mg/m2, 보다 바람직하게는, 약 10 mg/m2의 용량에 도달하도록 10 mg/m2 미만, 바람직하게는 5 mg/m2 이하의 속도로 정맥 내 주입에 의해 투여될 수 있다. 투여량 값은 경감되어야 하는 병태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있다는 것에 주의해야 한다. 또한, 어떤 특정 피험체의 경우, 구체적인 투여 계획은 개인의 요구 및 조성물을 투여하거나 투여를 관리하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간에 걸쳐 조정되어야 한다는 것과, 본원에 개시된 투여량 범위가 단지 예시적이며, 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하고자 하는 것이 아님을 알아야 한다.
본원에서 약학 조성물은 항체 분자의 "치료 유효량" 또는 "예방 유효량"을 포함할 수 있다. "치료 유효량"은 바라는 치료 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 기간에 효과적인 양을 나타낸다. 변형된 항체 또는 항체 단편의 치료 유효량은 개인의 질환 상태, 나이, 성별, 및 체중, 및 항체 또는 항체 일부분이 개인에 따라 바라는 반응을 유발하는 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 또한, 치료 유효량은 항체 분자의 어떤 독성 또는 해로운 영향이 치료의 유익한 효과를 능가하는 양이다. "치료 유효량"은 치료받지 않은 피험체에 비해 측정 가능한 매개변수를 바람직하게는 적어도 약 20%, 보다 바람직하게는 적어도 약 40%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 80% 억제한다. 측정 가능한 매개변수는, 예를 들어, 바이러스 부하, 열, 두통, 근육 또는 관절 통증, 피부 발진, 출혈, 혈소판 수준 감소, 및 혈압 감소일 수 있다. 항체 분자가 측정 가능한 매개변수를 억제하는 능력은 뎅기열의 효능을 예상하는 동물 모델에서 평가될 수 있다. 별법으로, 조성물의 상기 특성은 항체 분자가 뎅기열 바이러스를 중화시키는 능력을 조사함으로써, 예를 들어, 시험관 내 포커스 형성을 분석함으로써 평가될 수 있다.
"예방 유효량"은 바라는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 기간에 효과적인 양을 나타낸다. 전형적으로, 예방 용량은 질환에 앞서, 또는 조기 단계에 피험체에 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 적을 것이다.
또한, 본원에 기재된 항체 분자를 포함하는 키트도 본 개시 내에 있다. 키트는 사용 설명서; 기타 시약, 예를 들어, 표지, 치료제, 또는 항체를 표지 또는 치료제, 또는 방사선보호 조성물에 킬레이트 하거나 그 외 결합시키는데 유용한 제제; 투여용 항체 분자를 제조하기 위한 디바이스 또는 기타 재료; 약학적으로 허용 가능한 담체; 및 피험체에 투여하기 위한 디바이스 또는 기타 재료를 포함한 하나 이상의 기타 요소를 포함할 수 있다.
핵산
또한, 본 개시는 본원에 기재된 항-뎅기열 항체 분자의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 특징으로 한다. 예를 들어, 본 개시는 본원에 개시된 하나 이상의 항체 분자, 예를 들어, 표 1의 항체, 또는 항체의 일부분, 예를 들어, 표 2의 가변 영역으로부터 선택된 항-뎅기열 항체 분자의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 각각 코딩하는 제1 및 제2 핵산을 특징으로 한다. 핵산은 본원에서 표의 아미노산 서열 중 임의의 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 그와 실질적으로 동일한 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하거나 본원에서 표에 나타낸 서열과 3, 6, 15, 30, 또는 45개 미만의 뉴클레오티드가 상이한 서열)을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 핵산은 본원에서 표에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나 하나 이상의 치환, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 중쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산은 본원에서 표에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 하나 이상의 치환, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 경쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산은 본원에서 표에 개시된 아미노산 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 하나 이상의 치환, 예를 들어, 보존적 치환을 가진 서열)을 가진 중쇄 및 경쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 핵산은 본원에서 표 5에 개시된 뉴클레오티드 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 본원에 기재된 엄격 조건하에서 혼성화할 수 있는 서열)을 가진 중쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산은 본원에서 표 5에 개시된 뉴클레오티드 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 본원에 기재된 엄격 조건하에서 혼성화할 수 있는 서열)을 가진 경쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 또는 3개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 핵산은 본원에서 표 5에 개시된 뉴클레오티드 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 본원에 기재된 엄격 조건하에서 혼성화할 수 있는 서열)을 가진 중쇄 및 경쇄 가변 영역 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 핵산은 본원에서 표 5에 개시된 뉴클레오티드 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 본원에 기재된 엄격 조건하에서 혼성화할 수 있는 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 본원에서 표 5에 개시된 뉴클레오티드 서열, 또는 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 본원에 기재된 엄격 조건하에서 혼성화할 수 있는 서열)의 일부분을 포함한다. 일부분은, 예를 들어, 가변 영역(예를 들어, VH 또는 VL); 1, 2, 또는 3개 이상의 CDR; 또는 1, 2, 3, 또는 4개 이상의 골격 영역을 코딩할 수 있다.
본원에 개시된 핵산은 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드, 또는 그들의 유사체를 포함한다. 폴리뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있으며, 단일 가닥일 경우 코딩 가닥 또는 비코딩(안티센스) 가닥일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예를 들어, 메틸화 뉴클레오티드 및 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드의 서열은 비-뉴클레오티드 성분이 삽입될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 중합 후, 예를 들어, 표지 성분과의 접합에 의해, 더 변형될 수 있다. 핵산은 재조합 폴리뉴클레오티드, 또는 게놈, cDNA, 자연에 존재하지 않거나 비천연 배열로 또 다른 폴리뉴클레오티드에 결합되는 반합성 또는 합성 기원의 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
일부 측면에서, 본 출원은 본원에 기재된 핵산을 포함하는 숙주 세포 및 벡터를 특징으로 한다. 핵산은 본원의 하기에 더 상세히 기재되는 바와 같이 단일 벡터에 또는 동일한 숙주 세포 또는 분리된 숙주 세포에 존재하는 분리된 벡터에 존재할 수 있다.
벡터
또한, 본원에 기재된 항체 분자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터를 본원에서 제공한다. 일부 실시양태에서, 벡터는 본원에 기재된 항체 분자를 코딩하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 벡터는 본원에 기재된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 벡터는 바이러스, 플라스미드, 코스미드, 람다 파아지 또는 효모 인공 염색체(YAC: yeast artificial chromosome)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
많은 벡터 시스템이 이용될 수 있다. 예를 들어, 한 부류의 벡터는, 예를 들어, 소 유두종 바이러스, 폴리오마 바이러스, 아데노바이러스, 백시니아 바이러스, 배큘로바이러스, 레트로바이러스(라우스(Rous) 육종 바이러스, MMTV 또는 MOMLV) 또는 SV40 바이러스와 같은 동물 바이러스로부터 유래한 DNA 인자를 이용한다. 또 다른 부류의 벡터는 셈리키 삼림열 바이러스(Semliki Forest virus), 동부형 말 뇌염 바이러스(Estern Equine Encephalitis virus) 및 플라비바이러스와 같은 RNA 바이러스로부터 유래한 RNA 인자를 이용한다.
추가적으로, DNA가 자신의 염색체에 안정적으로 통합된 세포는 형질감염된 숙주 세포의 선별을 가능하게 하는 하나 이상의 지표를 도입시킴으로써 선별될 수 있다. 지표는, 예를 들어, 영양요구 숙주에 대한 프로토트로피, 살생제 내성(예를 들어, 항생제), 또는 구리와 같은 중금속에 대한 내성 등을 제공할 수 있다. 선별 가능한 지표 유전자는 발현되는 DNA 서열에 직접 결합되거나 동시 형질전환에 의한 동일한 세포에 도입될 수 있다. 또한, mRNA를 최적으로 합성하기 위해 추가의 인자가 요구될 수 있다. 이들 인자는 스플라이스 신호뿐 아니라 전사 프로모터, 인핸서, 및 종결 신호를 포함할 수 있다.
구조물을 포함하는 발현 벡터 또는 DNA 서열이 발현을 위해 제조되면, 발현 벡터는 적합한 숙주 세포로 형질감염 또는 도입될 수 있다. 이를 달성하기 위하여, 예를 들어, 원형질체 융합, 인산칼슘 침전, 전기 천공, 레트로바이러스 형질도입, 바이러스 형질감염, 유전자 총, 지질 기반 형질감염 또는 기타 통상적인 기술과 같은 여러 기술이 이용될 수 있다. 원형질체 융합의 경우, 세포는 배지에서 배양된 후 적합한 활성에 대해 스크리닝된다.
생성된 형질감염된 세포를 배양하고 생산된 항체 분자를 회수하기 위한 방법 및 조건은 당 업자에게 공지되어 있으며, 본 기재 내용을 기초로 하여 구체적인 발현 벡터 및 이용되는 포유동물 숙주 세포에 따라 달라지거나 최적화될 수 있다.
세포
또한, 본 개시는 본원에 기재된 항체 분자를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 예를 들어, 숙주 세포는 표 5의 핵산, 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일하고/거나, 본원에 기재된 엄격 조건하에서 혼성화할 수 있는 서열), 또는 상기 한 핵산의 일부분을 포함할 수 있다. 추가적으로, 숙주 세포는 표 2 또는 표 3의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산, 그와 실질적으로 상동인 서열(예를 들어, 그와 적어도 약 85%, 90%, 95%, 99% 이상 동일한 서열), 또는 상기 한 핵산의 일부분을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 숙주 세포는 항체 분자를 코딩하는 핵산을 포함하도록 유전적으로 조작된다.
특정 실시양태에서, 숙주 세포는 발현 카세트를 이용하여 유전적으로 조작된다. 용어 "발현 카세트"는 유전자 서열과 적합한 숙주 세포에서 상기 유전자의 발현에 영향을 줄 수 있는 뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 이 같은 카세트는 프로모터, 인트론을 포함하거나 포함하지 않는 오픈 리딩 프레임, 및 종결 신호를 포함할 수 있다. 발현하는데 필수적이거나 도움이 되는 추가의 인자, 예를 들어, 유도성 프로모터가 사용될 수 있다.
또한, 본 개시는 본원에 기재된 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
세포는 진핵 세포, 세균 세포, 곤충 세포, 또는 인간 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 적합한 진핵 세포는 베로 세포, 헬라(HeLa) 세포, COS 세포, CHO 세포, HEK293 세포, BHK 세포 및 MDCKII 세포일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 적합한 곤충 세포는 Sf9 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항-뎅기열 항체 분자의 용도
본원에 개시된 항체 분자는 시험관 내 및 생체 내 진단 용도, 및 치료 및 예방 용도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 뎅기열 바이러스를 중화시킨다. 예를 들어, 이들 분자는 뎅기열 바이러스를 중화시키기 위해서, 시험관 내 또는 생체 외에서 배양물 내 세포에, 또는, 예를 들어, 생체 내에서, 피험체, 예를 들어, 인간 피험체에 투여될 수 있다. 따라서, 일부 측면에서, 본 개시는 피험체에서 뎅기열 바이러스 감염의 치료 방법으로서, 뎅기열 바이러스 감염이 치료되도록 본원에 기재된 항체 분자를 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 이들 항체 분자는 뎅기열 바이러스 감염을 치료, 예방 및/또는 진단하기 위해서, 예를 들어, 시험관 내 또는 생체 외에서 배양물 내 세포에, 예를 들어, 생체 내에서, 피험체 내 세포에 투여될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "피험체"는 인간 및 비인간 동물을 포함하고자 한다. 일부 실시양태에서, 피험체는 인간 피험체, 예를 들어, 뎅기열 바이러스에 감염되거나 뎅기열 바이러스에 감염될 위험에 있는 인간 환자이다. 용어 "비인간 동물"은 포유동물 및 비-포유동물, 예를 들어, 비인간 영장류를 포함한다. 일부 실시양태에서, 피험체는 인간이다. 본원에 기재된 방법 및 조성물은 뎅기열 바이러스에 감염된 인간 환자를 치료하는데 적합하다. 뎅기열 바이러스에 감염된 환자는 바이러스에 노출되었으나 (적어도 일시적으로) 무증상 환자, 뎅기열 환자, 뎅기 출혈열 환자, 및 뎅기 쇼크 증후군 환자를 포함한다.
뎅기열 바이러스의 치료 방법
뎅기열 바이러스는 바이러스 표면에 E(외피) 단백질을 나타낸다. E 단백질은 바이러스가 숙주에 부착하는데에 기여한다. E 단백질은 DI 도메인(9 가닥의 베타 배럴) DII 도메인(숙주 세포와 융합에 관련된 소수성 도메인), 및 DIII 도메인(세포 외 도메인)을 포함한다. 이론에 구속되도록 하는 것은 아니지만, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 분자는 E 단백질 DIII(EDⅢ) 도메인에 결합함으로써, 예를 들어, 바이러스의 숙주 세포와 융합을 방지하거나, 바이러스의 숙주 세포에 결합을 방지하거나, E 단백질 구조를 파괴하거나, 바이러스를 불안정화시킴으로써 뎅기열 바이러스를 중화시킬 수 있다.
뎅기열은 뎅기열 바이러스에 의해 발생되는, 대개 모기에 의해 매개되는 감염성 질환이다. 초기 감염은 대개는 통상 4-7일의 짧은 무증상 기간이 따른다. 때때로, 감염된 환자는 뎅기열의 증상으로 전혀 발달하지 않는다. 그러나 뎅기열을 나타내는 환자에서, 특징적인 증상은 갑작스런 발열(때로는 40℃ 초과), 두통, 근육 및 관절 통증, 및/또는 발진이다. 감염의 발열기에서, 열, 통증, 및 두통이 나타난다. 일부 환자에서는, 발열기 후에 위험기(뎅기 쇼크 증후군 및 뎅기 출혈열 관련)가 뒤 따르는데, 위험기에 환자는 흉부 및 복강에 체액 축적, 순환되는 체액의 고갈, 생체 기관에 혈액의 부적절한 공급 및 출혈을 겪을 수 있다. 이어서 회복기가 뒤따른다. 일부 실시양태에서, 본원에서 항체 분자는 무증상 기간, 발열기, 위험기 및/또는 회복기에 있는 환자에 투여된다.
뎅기열 바이러스는 전형적으로 신체 검사 및 환자에 의해 보고된 증상을 기초로 진단된다. 환자가 메스꺼움/구토, 발진, 전신 통증, 백혈구 수준의 감소, 또는 양성 압박띠(tourniquet) 검사로부터 선택된 적어도 두 가지 증상 및 열을 나타낼 때 가능한 진단이 내려질 수 있다. 뎅기열을 나타내는 추가의 검사는 백혈구 수 감소, 낮은 혈소판 수준, 대사성 산성 혈액증, 간으로부터 아미노트랜스퍼라제의 수준 상승, 혈액 농축, 저알부민혈증, 초음파에 의한 체액 검출(뎅기 쇼크 증후군을 나타냄), 20 mm Hg 미만의 맥박압(뎅기 쇼크 증후군을 나타냄), 모세혈관 재충전 지연(말초 혈관 붕괴를 나타냄)에 대한 검사를 포함한다. 따라서, 일부 실시양태에서 항체 분자는 상기에 언급된 기준을 만족시키는 환자에 투여된다.
본원에 기재된 어떤 항체 분자는 적어도 2, 3, 또는 4가지 혈청형의 뎅기열 바이러스를 치료할 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, 항체 분자는 뎅기열 바이러스 혈청형을 결정하기 위한 검사가 수행되지 않은 때, 예를 들어, 뎅기열 바이러스 혈청형을 알지 못할 때에 뎅기열 바이러스에 감염되거나 감염될 위험이 있는 환자에 투여된다. 일부 실시양태에서, 뎅기열 바이러스는 혈청형 DV-1, DV-2, DV-3, 또는 DV-4이다.
항체 분자는 전형적으로 환자가 회복될 때까지 환자의 전신에 치료 유효량 수준을 유지하는 빈도로 투여된다. 예를 들어, 항체 분자는 적어도 약 1, 2, 5, 10, 20, 30, 또는 40개의 항체가 각 비리온에 결합하기에 충분한 혈청 농도를 달성하는 빈도로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 마다 투여된다.
여러 항체 분자를 투여하는 방법은 당 업계에 공지되어 있으며 하기에 기재된다. 사용되는 항체 분자의 적합한 투여량은 피험체의 나이 및 체중 및 사용되는 구체적인 약물에 따라 결정될 것이다.
항체 분자는 단독으로 또는 제2 제제, 예를 들어, 항바이러스제, 독소 또는 단백질, 예를 들어, 제2 항-뎅기열 항체에 접합되어 이용될 수 있다. 본 방법은 항체 분자 단독 또는 제2 제제에 접합된 항체 분자를 상기 치료를 필요로 하는 피험체에 투여하는 단계를 포함한다. 항체 분자는 다양한 치료제, 예를 들어, 독소 또는 항바이러스제, 또는 그들의 혼합물을 전달하는데 이용될 수 있다.
병용 요법
항-뎅기열 항체 분자는 다른 요법과 병용하여 이용될 수 있다. 예를 들어, 병용 요법은 하나 이상의 추가의 치료제, 예를 들어, 항 바이스제(기타 항-뎅기열 항체 포함), 백신(뎅기열 바이러스 백신 포함), 또는 면역 반응을 상승시키는 제제와 함께 제제화되고/거나 동시 투여되는 항-뎅기열 바이러스 분자를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체 분자는 기타 치료 요법 방식, 예를 들어, 정맥 내 수화, 해열제(예를 들어, 아세트아미노펜), 또는 혈액 수혈과 병용하여 투여된다. 이 같은 병용 요법은 유리하게는 투여되는 치료제를 더 낮은 투여량을 이용함으로써 여러 단일 요법과 연관된 독성 또는 합병증의 가능성을 피할 수 있다.
본원에 사용되는 "병용하여" 투여된다는 것은 두 가지(이상)의 상이한 치료를 피험체가 질환을 겪는 과정 전, 또는 중에 피험체에 전달하는 것을 의미한다. 한 실시양태에서, 두 가지 이상의 치료는, 예를 들어, 피험체가 뎅기열 바이러스에 감여되거나 진단받기 전에 예방적으로 전달된다. 또 다른 실시양태에서, 두 가지 이상의 치료는 피험체가 뎅기열 바이러스로 진단받은 후에 전달된다. 일부 실시양태에서, 한 가지 치료의 전달은 2차 치료 전달이 시작될 때 여전히 일어나고 있어 겹치게 된다. 이는 때로는 "동시" 또는 "동시 전달"로도 언급된다. 다른 실시양태에서, 한 가지 치료의 전달은 다른 치료의 전달이 시작하기 전에 종료된다. 두 경우의 일부 실시양태에서, 치료는 병용된 투여로 인해 효과가 커진다. 예를 들어, 2차 치료는 더 효과적이거나, 예를 들어, 더 적은 2차 치료로 동등한 효과가 관찰되거나, 2차 치료는 증상을 1차 치료 없이 2차 치료가 투여되는 경우에 관찰되는 것보다 더 큰 정도로 감소시키거나, 1차 치료로 유사한 상황이 관찰된다. 일부 실시양태에서, 전달은 질병과 관련된 증상 또는 기타 매개변수의 감소가 다른 치료 없이 전달되는 한가지 치료로 관찰되는 것보다 큰 경우이다. 두 가지 치료 효과는 부분적으로 상가적, 완전 상가적, 또는 상가적 효과보다 클 수 있다. 전달은 2차가 전달될 때에 전달된 1차 치료 효과가 여전히 검출 가능한 경우이다.
항바이러스제는, 예를 들어, 발라피라비르, 클로로퀸, 셀고시비르, 이베르멕틴, 또는 카리카 폴리아일 수 있다.
백신은, 예를 들어, 생, 약독화, 재조합 뎅기 혈청형 1, 2, 3, 및 4 바이러스(예를 들어, 임상 시험 NCT01488890(사노피 파스퇴르(Sanofi Pasteur)); CYD 4가 뎅기 백신(예를 들어, 임상 시험 NCT01943825(사노피 파스퇴르)), 키메라 뎅기 혈청형(1, 2, 3, 4)(예를 들어, 임상 시험 NCT00730288(사노피), CYD 뎅기 백신(예를 들어, 임상 시험 NCT00993447(사노피)), 4가의 생 약독화 뎅기 백신(예를 들어, 임상 시험 NCT00322049(글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)), 4가 뎅기 백신(TVDV)(예를 들어, 임상 시험 NCT01502358(미군 의학 연구 및 물자 사령부(U.S. Army Medical Research and Materiel Command)), 키메라 4가 뎅기(혈청형 1, 2, 3, 4)(예를 들어, 임상 시험 NCT00842530(사노피 파스퇴르)), 뎅기 동결건조 백신(예를 들어, 임상 시험 NCT01696422(부탄탄 연구소(Butantan Institute)), 키메리백스(ChimeriVax)™ 4가 뎅기 백신(예를 들어, 임상 시험 NCT00617344(Sanofi)), 2가 CYD-1,3 뎅기(베로)(예를 들어, 임상 시험 NCT00740155(사노피 파스퇴르)), 2가 CYD-2,4 뎅기(베로)(예를 들어, 임상 시험 NCT00740155(사노피 파스퇴르)), 4가 혼합 VDV-2/CYD-1,3,4 뎅기(베로)(예를 들어, 임상 시험 NCT00740155(사노피 파스퇴르)), 4가 CYD-1,2,3,4 뎅기(베로)(예를 들어, 임상 시험 NCT00740155(사노피 파스퇴르)), rDEN1delta30 또는 rDEN2/4delta30(ME)(예를 들어, 임상 시험 NCT00458120(국립 알레르기 및 전염병 연구원(National Institute of Allergy and Infectious Diseases)), 변형된 생 4가 키메라 뎅기 백신(SC 또는 ID)(예를 들어, 임상 시험 NCT01110551(국립 알레르기 및 전염병 연구원), 뎅기 백신(예를 들어, 임상 시험 NCT00384670(미군 의무 물자 개발 활동(United States Army Medical Materiel Development Activity)), 뎅기열 바이러스 아형 2에 대한 시험용 백신(예를 들어, NCT01073306(국립 알레르기 및 전염병 연구원), F 17(예를 들어, NCT01843621(미군 의학 연구 및 물자 사령부), 형질감염 후 F17 또는 형질감염 후 F19 (예를 들어, 임상 시험 NCT00468858(미군 의학 연구 및 물자 사령부)), DENVax(예를 들어, 임상 시험 NCT01511250(인비라젠 인코포레이티드(Inviragen Inc.)), D1ME(뎅기-1 프리멤브레인/외피 DNA 백신)(예를 들어, 임상 시험 NCT00290147(미군 의무감실(U.S. Army Office of the Surgeon General)), DEN 1을 위한 시험용 백신(예를 들어, 임상 시험 NCT01084291(국립 알레르기 및 전염병 연구원), 생 약독화 4가 뎅기 백신(예를 들어, 임상 시험 NCT00350337(월터리드 미육군 연구소(Walter Reed Army Institute of Research), rDEN4delta30-200,201(예를 들어, 임상 시험 NCT00270699(국립 알레르기 및 전염병 연구원), 테트라백스(TetraVax)-DV-TV003 또는 rDEN2△30-7169(예를 들어, 임상 시험 NCT02021968(국립 알레르기 및 전염병 연구원), 선택적으로 혼합된 테트라백스-DV(예를 들어, 임상 시험 NCT01436422(국립 알레르기 및 전염병 연구원), DEN4 백신 후보(예를 들어, 임상 시험 NCT00919178(국립 알레르기 및 전염병 연구원), rDEN4delta30-4995(예를 들어, 임상 시험 NCT00322946(국립 알레르기 및 전염병 연구원), rDEN3delta30/31-7164(예를 들어, 임상 시험 NCT00831012(국립 알레르기 및 전염병 연구원), TDENV-PIV(예를 들어, 임상 시험 NCT01702857(미군 의학 연구 및 물자 사령부), DENV-1 PIV(예를 들어, 임상 시험 NCT01502735(미군 의학 연구 및 물자 사령부), rDEN3-3'D4delta30(예를 들어, 임상 시험 NCT00712803(국립 알레르기 및 전염병 연구원), V180(예를 들어, 임상 시험 NCT01477580(머크 샤프 & 돔 코포레이션(Merck Sharp & Dohme Corp.)), 또는 DEN1-80E(예를 들어, 임상 시험 NCT00936429(하와이 바이오테크 인코포레이티드(Hawaii Biotech, Inc.)일 수 있다.
기타 요법은, 예를 들어, 고장성의 락트산나트륨, 활성화된 재조합 인간 인자 VII, 또는 항-d(예를 들어, 임상 시험 NCT01443247(대학원 의학 교육 연구소(Postgraduate Institute of Medical Education and Research))일 수 있다.
특정 실시양태에서, 추가의 항바이러스제는 제2 항-뎅기열 항체 분자, 예를 들어, 제1 항-뎅기열 항체 분자와 상이한 항-뎅기열 항체 분자이다. 병용하여 사용될 수 있는 대표적인 항-뎅기열 항체 분자는 표 1에 열거된 항체의 임의의 조합(예를 들어, D88, F38, A48, C88, F108, B48, A68, A100, C58, C78, C68, D98, A11(단클론 항체 4E5A로도 공지됨(Tharakaraman et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(17):E1555-64) 또는 B11 중 두 가지 이상의 임의의 조합); 단클론 항체 4E11(Thullier et al., J Biotechnol . 1999; 69(2-3):183-90); 인간 항체 14c10 (HM14c10)(Teoh et al. Sci Transl Med . 2012 Jun 20;4(139):139ra83); 인간 단클론 항체 1F4, 2D22, 및 5J7(de Alwis et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2012; 109(19):7439-44); 인간 단클론 항체 DV1.1, DV1.6, DV3.7, DV4.4, DV5.1, DV6.1, DV7.5, DV8.1, DV10.16, DV13.4, DV13.8, DV14.5, DV14.5, DV15.7, DV16.5, DV16.8, DV17.6, DV18.21, DV18.4, DV19.3, DV20.1, DV21.1, DV21.5, DV22.3, DV22.3 LALA, DV23.13, DV25.5, DV27.2, DV28.1, DV28.8, DV34.4, DV35.3, DV38.1, DV51.6, DV52.1, DV53.4, DV54.7, DV55.1, DV56.12, DV54.7, DV57.4, DV59.3, DV60.3, DV61.2, DV62.5, DV63.1, DV64.3, DV65.5, DV66.1, DV67.9, DV68.2, DV69.6, DV70.1, DV71.1, DV74.4, DV75.9, DV76.5, DV77.5, DV78.6, DV79.3, DV82.11, DV82.11 LALA, DV86.2, DV87.1, DV87.1 LALA, DV90.3, DV257.13, DV291.7, DV415.8, 및 DV470.12(Beltramello et al., Cell Host Microbe. 2010; 8(3):271-83); 인간 단클론 항체 3-147, 58/5, 2F5, 2G4, 5F9, 및 135.3(Dejnirattisai et al., Science. 2010; 328(5979):745-8); mAb 2H12(Midgley et al. J Immunol . 2012; 188(10):4971-9); 인간화 단클론 항체 1A5(Goncalvez et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2007; 104(22):9422-7); 및 인간 단클론 항체 1C19(Smith et al., MBio . 2013; 4(6):e00873-13); 또는 WO 05/056600호(Lai, C. and Purcell, R.)(예를 들어, 항체 1A5 및 5H2), WO2010/043977호(Lanzavecchia, A. et al.), WO2013/173348호(Dimitrov et al.), US2013/0259871호(Macary et al. WO 2013/089647호(Fink et al.), WO 2013/035345호(Setthapramote et al.), 미국 특허 제8,637,035호(Han-Chung Wu et al.); 또는 WO 2014/025546호(Sasisekharan, R. et al.)에 개시된 임의의 항체; 또는 상기 언급된 임의의 항체의 유도체(예를 들어, 인간 또는 그의 인간화 형태)를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
또한, 본원에 기재된 항-뎅기열 항체와 병용하여 사용될 수 있는 기타 치료제는, 예를 들어, 알파-글루코시다제 I 억제제(예를 들어, 문헌(Rathore et al., Antiviral Res. 2011; 92(3):453-60)에 기재된 셀고시비르); 아데노신 뉴클레오시드 억제제(예를 들어, 문헌(Yin et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2009; 106(48):20435-9)에 기재된 NITD008); NS3 및/또는 그의 보조인자 NS2B의 억제제 (예를 들어, NS3 내에 NS2B 결합 포켓을 차단하는 화합물, 예를 들어, 문헌(Lescar et al., Antiviral Res. 2008; 80(2):94-101)에 기재된 [5-아미노-1-(페닐)설포닐-피라졸-3-일] 화합물); RNA 의존성 RNA 폴리머라제(RdRp) 억제제(예를 들어, 문헌(Noble et al., J Virol . 2013; 87(9):5291-56)에 기재된 NITD107); 숙주 피리미딘 생합성의 억제제, 예를 들어, 숙주 디히드로오로테이트 데히드로게나제(DHODH)(예를 들어, 문헌(Wang et al., J Virol . 2011; 85(13):6548-56)에 기재된 NITD-982 및 브레퀴나르); 바이러스 NS4B 단백질의 억제제(예를 들어, 문헌(Xie et al., J Virol . 2011; 85(21):11183-95)에 기재된 NITD-618); 및 이미노당(예를 들어, 문헌(Perry et al., Antiviral Res. 2013; 98(1):35-43)에 기재된 UV-4)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
진단 방법
일부 측면에서, 본 개시는 시험관 내(예를 들어, 혈액 시료와 같은 생물학적 시료 내)에서 또는 생체 내(예를 들어, 피험체에서 생체 내 이미징)에서 뎅기열 바이러스 E 단백질의 존재를 검출하기 위한 진단 방법을 제공한다. 방법은 (i) 시료를 본원에 기재된 항체 분자와 접촉시키는 단계, 또는 피험체에 항체 분자를 투여하는 단계; (선택적으로) (ii) 기준 시료, 예를 들어, 대조 시료(예를 들어, 대조 생물학적 시료, 예를 들어, 혈장 또는 혈액) 또는 대조 피험체를 본원에 기재된 항체 분자와 접촉시키는 단계; 및 (iii) 항체 분자와 시료 또는 피험체, 또는 대조 시료 또는 피험체 사이의 복합체 형성을 검출하는 단계로서, 대조 시료 또는 피험체에 비해 시료 또는 피험체 내 복합체 형성에 있어 변화, 예를 들어, 통계적으로 유의한 변화가 시료 내 뎅기열 바이러스 존재를 나타내는 것인 단계를 포함한다. 항체 분자는 결합 되거나 결합 되지 않은 항체의 검출을 가능하게 하기 위한 검출 가능한 물질로 직접적으로 또는 간접적으로 표지될 수 있다. 적합한 검출 가능한 물질은 상기에 기재된 바와 하기에 더 자세히 기재되는 바와 같이 다양한 효소, 보결 분자단, 형광 물질, 발광 물질 및 방사성 물질을 포함한다.
폴리펩티드를 검출하기 위해 사용되는 시료를 언급할 때 용어 "시료"는 세포, 세포 용해액, 세포의 단백질 또는 막 추출물, 체액, 예를 들어, 혈액, 또는 조직 시료를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항체 분자와 뎅기열 바이러스 단백질 사이의 복합체 형성은 뎅기열 바이러스 단백질에 결합된 항체 분자 또는 결합 되지 않은 항체 분자를 측정하거나 가시화함으로써 검출될 수 있다. 적합한 어떤 검출 분석법이든 이용될 수 있으며, 통상의 검출 분석법은 효소 면역 측정법(ELISA), 방사 면역 측정법(RIA), 또는 조직 면역 화학법을 포함한다. 항체 분자를 표지하는 대안으로, 뎅기열 바이러스 단백질의 존재는 검출 가능한 물질로 표지된 기준 및 비표지된 항체 분자를 이용하는 경쟁 면역 분석에 의해 시료 내에서 분석될 수 있다. 본 분석법에서, 생물학적 시료, 표지된 기준 및 항체 분자를 합하여 비표지된 결합 분자에 결합된 표지된 기준의 양을 결정한다. 시료 내 뎅기열 바이러스 단백질의 양은 항체 분자에 결합된 표지된 기준의 양에 반비례한다.
실시예
실시예 1: 항-뎅기열 항체의 구조에 따른 설계
에피토프 및 주형 확인
여러 가지 중화 에피토프가 뎅기열 바이러스 E 단백질 이량체에 존재한다. 이들 에피토프는, 예를 들어, EDI, EDⅡ, EDⅢ, 융합 루프, EDI/Ⅱ 힌지, 및 EDⅢ "A" β-가닥 내에 있는 영역을 포함한다. EDI 및 EDⅡ는 인간에서 면역 우성이며 중화 활성은 약하지만 교차 반응성이 높은 항체를 유도할 수 있다. EDⅢ은 중화 활성이 강력한 항체를 유도할 수 있다. EDⅡ에 위치한 융합 루프에 대한 항체는 대개 교차 혈청형 반응성을 나타내지만 중화 활성이 약하다. EDI/Ⅱ 힌지 영역에 대한 항체는 중화 활성은 강력하지만 에피토프 영역에서 보존성이 낮아서 전형적으로 혈청형 특이적이다. EDⅢ A-가닥에 대한 항체는 부분적으로 항체에 이 영역의 접근성이 더 크기 때문에 대개는 높은 효능을 나타내지만, 대개는 교차 혈청형 반응성이 제한된다.
뎅기열 바이러스에 대해 광범위한 반응성과 높은 효능을 갖는 중화 항체를 조작하기 위해서, 마우스 mAb 4E11을 주형 항체로 확인하였는데, 그 이유는 상기 항체가 EDⅢ A-가닥 에피토프 영역에 결합하고 DENV-4를 제외한 DENV-1, DENV-2, 및 DENV-3에 강한 중화 활성을 나타내기 때문이다. 4E11은 DENV-4에 매우 약하게(μM) 결합한다. DENV-4에 대한 친화도를 증가시킴으로써 중화 효능을 증가시키기 위해, DENV-4와 4E11의 분자적 접촉을 증가시키는 접근법을 이용하였다. 이를 위하여, EDⅢ를 가진 4E11의 구조적 모델을 만든 후 분석하여 4E11의 혈청형 특이적 결합 결정인자를 확인하였다.
기술 및 도구 개발
단백질 공학에 대해 통상적인 컴퓨터 접근법은 전형적으로 에너지론에 기반한 방법에 의존한다. 본 방법의 결과는 일반적으로 구조 또는 모델에서 정확한 원자 위치에 매우 민감하기 때문에, 본 방법은 정확한 모델링과 유익한 돌연변이 예상을 위해 전형적으로 고해상도 및 양질의 단백질-단백질 복합체의 결정 구조 또는 유사한 데이터를 요구한다. 추가적으로, 단백질 공학에 대해 에너지론에 기반한 통상적인 접근법은 항체 특이적 특성과 정보를 반영하지 않는다.
다른 접근법은 실험적인 정보과학 및 특히 잔기의 쌍 형성 성향을 이용한 방법을 이용하는 것이다(Tharakaraman K. et al. (2013) Proc Natl Acad Sci U S A. 23;110(17):E1555-64). 에피토프 환경에 주어진 파라토프 잔기에 대한 쌍 형성 성향("적합도")을 측정함으로써, 넓은 스펙트럼의 활성을 가지면서 생체 내 효능이 증가된, 뎅기열 바이러스에 광범위한 교차 반응성을 가진 항체를 조작하였다. 이 적합도 측정법은 항체-항원 구조에 관한 실험 데이터에 기초하며 다른 접근법에 비해 정확한 원자 위치에 민감하지 않다. 따라서, 본 접근법은 컴퓨터를 사용하여 항체-항원의 분자 도킹의 정확도를 상승시키고 친화도 상승 돌연변이의 예측과 친화력 증가를 위한 위치 확인을 증대시키는데 효과적으로 이용될 수 있다.
적용: 4가지 모든 DENV 혈청형에 대한 pM-nM 결합을 위해 주형 mAb를 조작한다
4E11-EDⅢ 구조 모델을 만들어 친화도 상승 돌연변이/위치를 예측하였다. 예를 들어, 각각의 돌연변이를 특정 위치에서 예측하고 합리적이고 집중된 조합 라이브러리를 생성하기 위한 위치를 선택하였다. [도 23]에 나타낸 바와 같이, 생성된 인간화 항체 D88은 항체 4E11에 비해, DENV1-3에 대한 친화도가 향상됨과 동시에 DENV-4에 대해 10,000배의 친화도 이득을 증명한다.
mAb 4E11과 mAb A11의 비교
항-뎅기열 항체 4E11(항체는 문헌(Thullier et al., J Biotechnol . 1999 Apr 15; 69(2-3):183-90)에 기재됨)과 A11(4E5A) 사이의 비교는 문헌(Tharakaraman et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(17):E1555-64)에 제공되어 있다. 4E5A는 4E11에 비해 A55E(VH), R31K(VL), N57E(VL), E59Q(VL), 및 S60W(VL)에 5개의 점 돌연변이를 갖는다(Tharakaraman et al., 2013, Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(17):E1555-64).
실시예 2. Del26은 DV -4 중화 활성을 향상시킨다
B11은 A11(4E5A)에 비해 골격 1(FR1)에 S26이 결실된 중쇄를 가진 항-뎅기열 항체이다. 4G2는 대조 항-뎅기열 항체이다. 4가지 뎅기열 바이러스 혈청형의 EDⅢ에 대한 각 항체의 중화 활성을 포커스 감소 중화 시험(FRNT)으로 시험하였다.
포커스 감소 중화 시험은 뎅기열 바이러스가 숙주 베로 세포를 감염시킬 때 형성된 포커스를 검출한다. 간략하게, 항체 희석액을 희석된 바이러스와 동일한 부피로 혼합하고, 혼합물을 베로 세포 단층에 옮기고 포커스를 검출한다. 데이터는 상대 감염도로 나타낸다. FRNT50은 50% 바이러스 중화를 달성하는데 필요한 항체의 농도를 나타낸다. 포커스 감소 중화 시험에 대해 더 상세한 프로토콜은 문헌(Tharakaraman et al., 2013, Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(17):E1555-64)에서 찾아볼 수 있다.
[도 2]의 4개의 그래프 패널은 뎅기열 바이러스 혈청형의 대표적인 균주에 대한 각 항체의 중화 활성을 나타낸다. [도 3]은 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-4에 대한 각 항체의 분석을 반복한 것이다. 결과는 [도 2]의 하단의 표에 요약되며, 바이러스에 대한 각 항체의 IC50을 (μg/ml로) 보여준다.
예상외로, 골격 1 영역 내 하나의 아미노산의 결실은 B11에 대한 DV-4 중화 활성을 향상시킨다. 보다 구체적으로, IC50이 4.0-17.6 μg/mL인 A11과 비교하여, 항체 B11은 0.50-1.4 μg/mL의 IC50을 달성하면서 DV-4의 중화를 향상시킨다. 이러한 결과는 B11이 A11보다 약 8 내지 약 12배 더 낮은 IC50을 달성한다는 것을 나타낸다. B11의 뛰어난 중화 활성을 기초로 하여, B11의 인간화 변이체를 만들었다.
실시예 3. 인간화 항-뎅기열 항체.
[도 4]는 A11 및 B11과 관련된 일부 인간화 항체를 기재한다. 여러 인간화 골격을 시험하였다. 최우측 4개의 컬럼은 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4의 EDⅢ에 대한 각 항체의 친화도를 나타낸다. 중쇄 FW3 내 A98V 돌연변이(항체 B48와 항체 B48 + A98V를 비교)는 다른 혈청형에 대해 결합을 유지하거나 향상시키면서 DV-4에 대한 결합을 약 5배 향상시켰다.
실시예 4. 인간화 항-뎅기열 항체의 복귀 돌연변이
특히 DV-4에서, EDⅢ에 대한 항체 친화도를 향상시키기 위해, 선택된 인간화 항체의 중쇄 N-말단에 여러 가지 복귀 돌연변이를 만들었다. [도 5]는 N-말단이 완전히 마우스로 복귀된 D48에서 완전히 인간화된 N-말단을 가진 항체에 비해 친화도가 약 2배 향상된다는 것을 보여준다. 다른 경우에, 복귀 돌연변이는 결과적으로 EDⅢ-DV-4에 대한 친화도가 유사하거나, 약간 낮거나, 또는 약간 높았다.
[도 5]의 상단과 하단의 표에서 최우측 컬럼은 DV-4에 대한 인간화 항체의 친화도가 7.494와 26.89 nM 사이임을 보여준다. 결합 활성이 이렇게 유지된다는 것은 N-말단 영역, 예를 들어, 중쇄의 위치 1-6에서 돌연변이에 대해 상당량의 내성이 존재한다는 것을 나타낸다.
실시예 5. 친화도 상승 돌연변이의 조합을 통한 항체 친화도의 향상
DV-4에 대한 인간화 항체의 친화도를 더 향상시키기 위해서, 다양한 친화도상승 돌연변이를 단독으로 또는 조합하여 시험하였다. [도 6]에서, 다음 돌연변이 VH 내 T33V, del26, G27A, G27Y, F28W, F28G, F28A, 및 F28Y, 모두를 시험하였다. Del26과 T33V는 함께(항체 D88에서) T33V 돌연변이 단독(항체 C88에서)에 비해 EDⅢ-DV-4에 대한 친화도를 약 4배 향상시킨다는 것이 확인되었다. 또한, 항체 D88에서 확인된 del26과 T33V의 이중 돌연변이는 del26 돌연변이를 단독으로 가진 항체에 비해 친화도를 향상시킨다. 결합에 있어 이러한 상가적 또는 상승적 향상은 예상하지 못했다.
또한, [도 6]에서, 친화도를 감소시키지 않으면서, 또는 친화도를 단지 적당하게 감소시키면서 여러 돌연변이가 조합될 수 있다는 것을 나타낸다(예를 들어, 항체 D118에서 F28W 및 T33V, 항체 D98에서 G27A 및 T33V, 항체 D148에서 G27Y 및 T33V, 항체 D108에서 G27Y 및 F28W 및 T33V, 항체 D128에서 G27A 및 F28W 및 T33V). 본 실험은 항체가 위치 27 및 28에서 치환에 대해 약간의 내성을 갖는다는 것을 나타낸다.
다음, VH에서 위치 98의 돌연변이를 다른 돌연변이와 조합하여 시험하였다. 본래 인간화 서열은 위치 98에 A를 갖는다. [도 7]은 98V가 T33V 돌연변이 상황에서 98S 또는 98A에 비해 DV-4에 대한 결합을 약 2배 향상시킨다는 것을 나타낸다(표의 위에서 세 번째 행을 참조). 표의 아래 3개의 열은 위치 98에서 돌연변이가 이중 돌연변이 del26+T33V 상황에서 강한 효과를 보이지 않는다는 것을 보여준다. 따라서, 항체 분자는 잔기 98의 돌연변이에 약간의 내성을 갖는다.
실시예 6. 인간화 항-뎅기열 항체에 대한 추가적인 결합 연구
여러 인간화 항-뎅기열 항체를 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-1, DV-2, DV-3, 및 DV-4의 EDⅢ에 대한 결합능에 대해 시험하였다. [도 8]은 경쟁 ELISA 분석에 의해 결정된 항체 친화도를 나타내고, [도 9]는 SPR에 의해 결정된 항체 친화도를 나타낸다. 모든 인간화 항체가 강한 친화도를 가지지만(예를 들어, 모두 24.35 nM 이하이고 많은 것은 나노몰 이하 범위), 일부 항체는 특히 강한 결합을 나타낸다. 예를 들어, C88 및 D88은 C98 용량보다 약 20배 더 큰 친화도로 DV-1에 결합한다. [도 9]의 세 가지 항체 모두는 DV-2 및 DV-3에 대해 대략 동일한 친화도를 나타낸다. [도 9]의 항체 중 D88이 DV-4에 대해 가장 강한 친화도를 나타낸다.
뎅기열 바이러스의 유전적 및 항원 다양성은 혈청형 사이뿐만 아니라 혈청형 내에서도 존재한다. 항-뎅기열 바이러스 항체에 의한 결합의 범위를 더 완전하게 조사하기 위해서, 일련의 분석을 실시하여, 뎅기열 바이러스 서열의 다양성, 특히 EDⅢ에서의 다양성을 추가로 포착하는 일단의 종의 서열을 확인하였다. 우선, NCBI 진뱅크(GenBank)로부터 >3,500 E 단백질 서열의 뎅기열 바이러스 단리체를 EDⅢ 내 아미노산 다양성에 대해 분석하였다. 본 분석으로부터, 일련의 21가지 균주의 EDⅢ 서열을 확인하고 선별하여 뎅기열 바이러스의 다양성을 보다 완전하게 나타냈다. 보다 구체적으로, 이들 서열은 최근 유행한다고 입증된 모든 유전자형 및 주요 풍토성 지역에서의 최근 단리체(임상적으로 해당하는 균주)를 대표한다. 공격성 단리체, 예를 들어, 에피토프 영역 내 또는 그에 가까이에 다양성의 위치를 갖는 것들을 가능할 때마다 선별하였다. 추가적으로, 원형 균주를 포함시켰다. 선택된 21가지 뎅기열 바이러스 단리체의 EDⅢ 아미노산 서열의 계통적 관계는 [도 10a]에 요약된다. 21가지 다양한 뎅기열 균주의 EDⅢ 단백질의 패널에 대한 항체 D88 결합의 결과는 [도 10b]에 나타낸다. [도 10b]에 나타낸 바와 같이, 항체 D88은 뎅기열 바이러스에 대해 완전한 스펙트럼의 결합을 나타낸다.
실시예 7. 인간화 항-뎅기열 항체는 혈청형 DV -2, DV -3, 및 DV -4의 다수 균주의 EDⅢ에 결합한다.
D88([도 11], 최우측 컬럼) 및 C88(우측에서 두 번째 컬럼)을 다양한 뎅기열 바이러스 균주로부터 단리된 EDⅢ에 대한 결합능에 대해 시험하였다. 균주의 혈청형 및 지리학적 위치는 최좌측 두 컬럼에 나타낸다. 일반적으로 항체는 우수한 결합 범위를 보였으며, 이는 항체가 광범위한 뎅기열 바이러스 균주에 대해 효과적이라는 것은 나타낸다.
실시예 8. 인간화 항-뎅기열 항체는 포커스 감소 중화 시험에서 뎅기열 바이러스를 중화시킨다
인간화 항체는 포커스 감소 중화 시험에서 DV-1, DV-2, DV-3 및 DV-4를 중화시키는 능력을 보인다. 분석법은 상기 실시예 2에 기재되어 있다. [도 12, 13, 및 14]는 대표적인 DV-3 및 DV-4 균주를 이용한 이들 실험 결과를 나타낸다. 인간화 항체는 본 분석에서 뎅기열 바이러스를 중화시키는데 효과적이다. 예를 들어, A48, C98, 및 D88은 마우스 항-뎅기열 항체 A11보다 DV-4에 대한 더 낮은 EC50을 달성한다(도 12). [도 13]은 항체 D88, D188, 및 D128이 상기 DV-3 균주에 대해서 426-506 ng/ml의 범위의 EC50을 갖는다는 것을 보여준다. 게다가, D88, D188, 및 D128은 마우스 항-뎅기열 항체 A11보다 DV-4에 대해 더 낮은 EC50을 보였다(도 14). 또한, 인간화 항체도 DV-1 및 DV-2를 중화시키는 능력을 보인다(데이터 미제시). 인간화 항체가 마우스 항-뎅기열 항체보다 더 높은 활성을 달성할 것으로 예상하지 못했다. 적어도 부분적으로 본원에 나타낸 결합 데이터 및 공지된 뎅기열 단리체의 서열 분석을 기초로 하여, 본원에 기재된 인간화 항-뎅기열 항체 분자는 다양한 뎅기열 바이러스를 대표하는 본원에 열거된 균주에서 모든 혈청형 및 유전자형에 걸쳐 광범위한 중성화능을 가질 것으로 보인다.
실시예 9. 인간화 항체의 열 안정성은 열 이동 분석에 의해 시험되었다 .
선택된 인간화 항체를 시약 시프로 오렌지를 이용하는 열 이동 분석에 의해 분석하였다. 실험 결과는 [도 15a, 15b, 및 15c]에 나타낸다. 일반적으로, 인간화 항체는 대개 약 64와 68 사이의 Tm을 가지는 우수한 안정성을 나타내었다.
실시예 10. 뎅기열 바이러스를 위한 마우스 모델.
본원에 기재된 항체 분자를 동물 모델에서의 효능에 대해 시험하였다. 이러한 한 가지 모델인 AG129 마우스 모델은 문헌(Tharakaraman et al., 2013, Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(17): E1555-64)에 기재되어 있다. I형 및 Ⅱ 형 인터페론 수용체가 둘다 결여된 AG129 마우스 균주는 흔히 사용되는 동물 모델로서, 바이러스 혈증 및 질환의 기타 징후를 포함한 뎅기의 임상 사례에서 발견되는 일부 질환 징후를 복제한다. 감염된 AG129 마우스는 뇌에서 DENV 복제와 관련된 신경 손상을 경험할 수 있으며, 이것은 바이러스에 감염된 인간 환자에서 단지 매우 드물게 발견된다. 이는 대개 바이러스 공격 후 18일가량에 감염된 AG129 마우스를 사망에 이르게 한다(Stein, D.A., et al., J Antimicrob Chemother, 2008. 62(3): p. 555-65.; Johnson AJ, Roehrig JT. J Virol. 1999 Jan; 73(1):783-6). 인간 감염과 유사성이 결여되지만, 본 모델은 항바이러스 치료를 평가하는데 유용하며 원리 연구를 입증하는데 사용될 수 있다. 간략하게, AG129(IFN-α/β 및 IFN-γ 수용체 결여) 마우스를 뎅기열 바이러스로 공격하고, 후보 치료 항체 분자를 투여한다. 전형적으로, 바이러스 혈증(혈액 시료 내 바이러스 역가)이 실험의 종말점이다. 바이러스 혈증은, 예를 들어, 정량 RT-PCR로 측정될 수 있다. 본 연구에서, 바이러스 혈증, 체중 변화, 및 생존율을 DENV-2의 뉴기니 C (NGC) 균주에 감염 후 질환의 징후로서 사용하였다. 본 실시예에서 나타난 결과는 DENV-2 마우스 모델에서 항체 D88의 강한 생체 내 억제 활성을 증명해준다.
동물은 각각 10마리가 포함된 케이지에 따라 군으로 구획을 무작위 배정하였다. 동물을 항체 D88, 무관한 이소형 일치 대조군 mAb(CmAb), 또는 플라시보로 바이러스 공격 1일 전에 처리하였다. 바이러스에 공격받지 않은 한 마우스 군을 D88로 처리하고 독성 대조군으로 사용하였다. 또한, 한 마우스 군은 정상 대조군으로 포함시키고, 면역약화되는 AG129 마우스에 대한 효과에 대해 처리 및 케이징(caging) 기술을 모니터하기 위해 바이러스로 처리하거나 공격하지 않았다. 바이러스의 10-1 희석액(106.8 CCID50 (세포 배양 감염 용량 50%)/ml)을 최소 필수 배지 중에 제조하였다. 마우스를 0.4 ml의 희석된 바이러스(106.4 CCID50/동물)로 복강 내(i.p.) 주사하였다. 사망률을 31일 동안 매일 관찰하였다. 마우스는 0일에 체중을 재고 1 dpi(day post infection: 감염 후 1일)에 시작하여 격일로 체중을 쟀다. qRT-PCR에 의해 바이러스 혈증을 정량하기 위해 3 dpi에 모든 동물로부터 혈청을 수집하였다.
[도 16]은 뎅기열 바이러스로 감염 후 D88(25 mg/kg), D88(5 mg/kg), CmAb, 또는 PBS를 투여받은 마우스의 생존율을 나타낸다. [도 16]에 나타난 바와 같이, 25 mg/kg의 D88로 치료받은 마우스의 약 90%와 5 mg/kg의 D88로 치료받은 마우스의 약 60%는 31일까지 생존하였지만, CmAb 또는 PBS로 치료받은 대조군 마우스는 모두 17일 또는 그 전에 사망하였다.
[도 17]은 뎅기열 바이러스로 감염 후 D88(25 mg/kg), D88(5 mg/kg), CmAb, 또는 PBS를 투여받은 마우스의 평균 체중 변화율을 나타낸다. D88(25 mg/kg)로 또는 PBS로 치료받았으나 뎅기열 바이러스에 감염되지 않은 마우스(sham)도 시험하였다. [도 17]에 나타낸 바와 같이, 항체 D88을 투여받은 마우스는 감염 후 31일에도 유의한 체중 감소를 보이지 않았지만, CmAb 또는 PBS를 투여받은 마우스는 15일에 유의한 체중 감소를 보였다. 대조군으로서, D88 또는 PBS로 치료받았지만 뎅기열 바이러스에 감염되지 않은 마우스는 뚜렷한 체중 변화를 나타내지 않았다.
[도 18]은 뎅기열 바이러스로 감염 후 D88(25 mg/kg), D88(5 mg/kg), CmAb, 또는 PBS를 투여받은 마우스의 바이러스 혈증 역가를 나타낸다. 결과는 ml 당 추정 PFU와 게놈 복제수 당량(GCE)/mL으로 나타낸다. p값 <0.001에서 유의성은 기호 ***로 나타낸다. [도 18]에 나타낸 바와 같이, CmAb(이소형 대조군) 또는 PBS를 투여받은 마우스는 25 mg/kg의 D88 또는 5 mg/kg의 D88로 치료받은 마우스에 비해 더 높은 바이러스 혈증 역가를 보였다.
본 결과는 항체 D88의 단일 전신 투여가 순환하는 바이러스 역가를 신속하게 감소시켰다는 것을 증명해준다. 항체 D88은 25 및 5 mg/kg에서 각각 9/10 및 6/10마리의 동물로 강력한 보호를 제공하여 DENV-2 치사 공격에 생존하였다. 항체 D88은 최대 바이러스 혈증을 보인 감염 후 3일에 바이러스 역가에 있어 유의적이고 용량 의존적인 감소를 증명하였다.
실시예 11. 생체 내에서 ADE에 대한 보호
본원에 기재된 항체 분자를 동물 모델에서 효능에 대해 시험할 수 있다. 이러한 한 가지 모델인, AG129 마우스에서 항체 증강된 중증 뎅기열 바이러스 감염은 문헌(Balsitis et al., 2010 (Lethal andtibody enhancement of dengue disease in mice is prevented by Fc modification, PLoS Pathogens, 2010 Feb 12;6(2):e1000790)에 기재되어 있다. 간략하게, AG129 마우스는 뎅기열 바이러스(예를 들어, D2S10) 투여 1일 전에 뎅기열 바이러스 증강 항체(예를 들어, DV1 항혈청 또는 4G2 단클론 항체)를 투여받는다. 후보 항체 분자는 공격 1일 전(예방) 또는 공격 1 또는 2일 후(치료)에 투여된다. 전형적으로, 사망이 실험의 종말점이다. 또한, 바이러스 혈증 및 혈청 내 염증성 사이토카인(예를 들어, TNF-α) 수준도 종말점으로 역할을 할 수 있다.
실시예 12. 곤충 및 포유동물 세포에서 증식된 뎅기열 바이러스 혈청형의 중화
4가지 뎅기열 바이러스 혈청형에 대한 인간화 항체의 중화 활성을 상기 실시예 2에서 기재된 포커스 감소 중화 시험(FRNT)에 의해 조사하였다. 4가지 뎅기열 바이러스 혈청형(DENV-1, DENV-2, DENV-3 및 DENV-4)을 곤충 세포 또는 포유동물 세포에서 증식하고 숙주 베로(원숭이) 세포를 감염시키는데 사용하였다. [도 16-18]은 대표적인 DENV-1-4 균주를 이용한 상기 실험 결과를 나타낸다. 데이터는 상대 감염도로서 나타낸다. 예를 들어, EC50 또는 FRNT50 값은 50% 바이러스 중화를 달성하는데 필요한 항체 농도를 나타낸다. [도 16- 18]에 나타낸 바와 같이, 시험된 항체는 곤충 및 포유동물 세포에서 증폭된 DENV-1, DENV-2, DENV-3 및 DENV-4 균주를 중화시키는데 효과적이다.
[도 19]는 항체 D88이 C6/36 곤충 세포에서 증폭된 DENV-1, DENV-2, DENV-3 및 DENV-4 균주를 중화시켰다는 것을 보여준다. 결과는 [도 19]의 하단의 표에 요약되어 있으며, 이는 대표적인 DENV-1, DENV-2, DENV-3 및 DENV-4 균주에 대한 EC50 값을 (ng/ml로) 나타낸다. DENV-1 균주 하와이/1944, DENV-2 균주 뉴기니/1944 (NGC), DENV-3 균주 필리핀/1956 (H87), 및 DENV-4 균주 멕시코/1997 (BC287/97)을 시험하였다.
[도 20]은 항체 D88이 베로 세포에서 증식된 DENV-1, DENV-2, DENV-3 및 DENV-4 균주를 중화시켰다는 것을 보여준다. 결과는 대표적인 DENV-1, DENV-2, DENV-3 및 DENV-4 균주에 대한 FRNT50 값(ng/ml)으로 나타낸다. DENV-1 균주 하와이/1944, DENV-2 균주 뉴기니/1944 (NGC), DENV-3 균주 필리핀/1956 (H87), 및 DENV-4 균주 멕시코/1997 (BC287/97)을 시험하였다.
[도 21]은 항체 D88 및 A11이 베로 세포에서 증식된 DENV-4 균주 H241을 중화시켰다는 것을 보여준다. 결과는 [도 21]의 하단의 표에 요약되어 있으며, 이는 DENV-4 균주 H241에 대한 항체의 EC50 값을 (ng/ml로) 나타낸다.
상기 결과는 항체 D88이 4가지 모든 DENV 혈청형을 < 1μg/ml의 EC50 값으로 강하게 중화시켰다는 것을 증명한다. 항체 D88은 100 nM 친화도로 결합한 공격성 DENV-4 균주 H241을 효율적으로 중화시켰다.
실시예 13. 항체의 억제 활성을 평가하기 위한 뎅기열 바이러스의 모기 모델
본원에 기재된 항체 분자를 모기 모델에서의 효능에 대해 시험할 수 있다. 뎅기열 바이러스는 모기에 의해 전파되는 RNA 바이러스이다. 어떤 뎅기열 바이러스는 생체 내 적응 이점을 발달시킬 수 있으며, 이는 결과적으로 인간에서 모기로의 전파 가능성을 높일 수 있다(Vu et al., PLoS Negl Trop Dis . 2010; 4(7):e757). 뎅기열 바이러스에 대한 항체의 억제 활성을 평가하기 위한 모기 모델을 확립하기 위하여, 바이러스 함유 혈액을 다양한 희석률로 항체와 혼합하고 37℃에서 30분간 인큐베이션한다. 항체 포함 혈액을 모기 급식기에 넣고 약 1시간 동안 급식한다. 모기를 한냉 마취하고 충혈된 것을 선별한다. 모기 복부를 혈액 공급 후 7일에 수집한다. 바이러스 부하를 qRT-PCR로 측정할 수 있다. 복부 감염된 모기 비율을 감염된 복부 수를 PCR로 시험한 복부의 전체 수로 나누어 계산할 수 있다.
실시예 14. 항-뎅기열 항체의 HP-SEC 평가
고성능 크기 배제 크로마토그래피(HP-SEC)를 수행하여 자연의 스트레스 없는 조건하에서 항-뎅기열 항체의 응집 성향을 평가하였다. 본 방법은 단량체와 항체 이량체 및 응집체를 구분하도록 해준다. 이량체 및 응집체는 면역원성 위험을 증가시킬 수 있다.
본 연구에서, 항체는 1 mg/ml로 정제하였으며, 크기 배제 컬럼, 예를 들어, 페노메넥스 바이오셉(Phenomenex BioSep) s3000에 의해 이동상으로 PBS를 이용하여 1 ml/min의 유속으로 평가하였다.
[도 22]는 항체 D88의 대표적인 크로마토그램을 나타내며, 이는 98% 넘게 단량체로 존재하는 항체(단백질 A 크로마토그래피에 의해서만 정제됨)를 나타낸다. [도 22]의 하단의 표에 요약된 바와 같이, 항체 A48의 99.15%, 항체 C88의 98.37%, 및 항체 D88의 99.59%가 시료 내에서 단량체로 존재하였다.
참고에 의한 포함
본원에 언급된 모든 출판물, 특허, 및 승인 번호는 각 출판물 또는 특허가 구체적으로 개별적으로 참고에 포함되는 것으로 나타낸 것과 마찬가지로 이로써 그 전문으로 참고에 포함된다.
등가물
본원에서 조성물 및 방법의 구체적인 실시양태가 논의되었지만, 상기 명세서는 예시적이며 한정적인 것은 아니다. 본 발명의 많은 변형은 본 명세서 및 하기 청구항을 검토할 때 당 업자에게는 자명할 것이다. 본 발명의 전체 범위는 등가물의 전체 범위와 함께 청구항, 및 상기 변형과 함께 명세서를 참고로 하여 결정되어야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> VISTERRA, INC. <120> ANTIBODY MOLECULES TO DENGUE VIRUS AND USES THEREOF <130> P2029-7002WO <140> <141> <150> 62/046,379 <151> 2014-09-05 <150> 62/017,970 <151> 2014-06-27 <150> 61/938,646 <151> 2014-02-11 <160> 98 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Gly Phe Asn Ile Lys Asp Val Tyr 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 40 45 Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu Gln 50 55 60 Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 2 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Val Asp Lys Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Glu Leu Gln Trp Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Arg Ser Asn 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Asp Val Tyr Met Ser 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 5 Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 6 Arg Ala Ser Glu Asn Val Asp Lys Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 7 Arg Ala Ser Glu Leu Gln Trp 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 8 Gln Arg Ser Asn Glu Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 9 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Val 1 5 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 10 Asp Pro Glu Asn Gly Asp 1 5 <210> 11 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Gly Phe Asn Ile Lys 20 25 <210> 12 <400> 12 000 <210> 13 <400> 13 000 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 14 Asp Thr Tyr Met Ser 1 5 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 15 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 1 5 <210> 16 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 16 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 17 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Val 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 18 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 40 45 Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu Gln 50 55 60 Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 19 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 20 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 20 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 21 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Tyr Trp Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 22 Tyr Trp Asn Ile Lys Asp Thr 1 5 <210> 23 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 23 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Gln Asp Val 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 24 Gly Phe Asn Ile Gln Asp Val 1 5 <210> 25 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 25 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Ser Asp Val 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 26 Gly Phe Asn Ile Ser Asp Val 1 5 <210> 27 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Ala Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 28 Ala Phe Asn Ile Lys Asp Thr 1 5 <210> 29 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 29 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Ala Phe Asn Ile Lys Asp Val 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 30 Ala Phe Asn Ile Lys Asp Val 1 5 <210> 31 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 31 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Val 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 32 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 32 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Val 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 33 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 33 Gln Val Lys Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Val Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp 20 25 30 Thr Tyr Met Ser Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys 50 55 60 Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Leu His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ser Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 34 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 34 Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Val Asp Lys Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Glu Leu Gln Trp Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Arg Ser Asn 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 35 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 35 Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 36 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 36 Gln Val Lys Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Val Arg Leu Ser Cys Thr Ala Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala 115 <210> 37 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 37 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg ccggcttcaa tatcaaggac gtctacatgt cctgggtgcg gcaggctcca 120 gagcaaggac tggaatggat ggggcgcatt gacccggaga acggtgatac gaagtacgac 180 ccgaaactgc agggccgcgt gaccatgacc gcagatacta gcaccaacac cgcgtacatg 240 gagctgcggt ccttgaggtc ggatgacact gctgtgtatt actgtgccag aggctgggaa 300 gggttcgcgt actggggaca gggaactctc gtgactgtgt cgtct 345 <210> 38 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 38 gatattgtca tgacccaaag cccagcctcc ctcgccgtgt ctctcggaga aagagcaact 60 atctcgtgcc gggcttcgga gaatgtggac aagtacggca actccttcat gcactggtac 120 cagcagaaac cgggacagcc gcctaaactg ttgatctacc gggcgtcaga actgcaatgg 180 ggagtgcctg acaggttttc gggttcggga tccggcacgg atttcaccct cactatctcc 240 agcctgcaag cagaggacgt tgcggtgtac tactgtcagc gctcaaacga ggtcccatgg 300 acttttggac aagggaccaa gctggaaatc aag 333 <210> 39 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 39 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatcaag gacacctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 40 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 40 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatcaag gacgtctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 41 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 41 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg ccggcttcaa tatcaaggac acctacatgt cctgggtgcg gcaggctcca 120 gagcaaggac tggaatggat ggggcgcatt gacccggaga acggtgatac gaagtacgac 180 ccgaaactgc agggccgcgt gaccatgacc gcagatacta gcaccaacac cgcgtacatg 240 gagctgcggt ccttgaggtc ggatgacact gctgtgtatt actgtgccag aggctgggaa 300 gggttcgcgt actggggaca gggaactctc gtgactgtgt cgtct 345 <210> 42 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 42 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatcaag gacacctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgt cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 43 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 43 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgtactg gaatatcaag gacacctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 44 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 44 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatccag gacgtctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 45 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 45 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatctcg gacgtctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 46 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 46 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcggcctt caatatcaag gacacctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 47 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 47 caagtcaaac tgctggaaca gtccggagca gagctggtga agcctggagc gtcggtgcgg 60 ctttcgtgta ccgcctccgg ctttaacatc aaggacacct acatgtcgtg ggtgaagcag 120 aggcccgagc aggggctcga atggattggc cgcatcgacc cggaaaatgg tgataccaaa 180 tacgacccaa agttccaggg aaaggccact atcactgcag atacttcaag caacaccgcc 240 tacctccacc tgtcctcgct cacttccgga gataccgcgg tctactattg ctcaagagga 300 tgggaaggct tcgcgtactg gggtcaagga acgttggtga ccgtcagcgc c 351 <210> 48 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 48 gaattggtca tgactcagac gccagcttcg ctggccgtgt cactgggaca gagggccact 60 atcagctgca gagcatcgga gaatgtggat aagtacggga acagcttcat gcactggtat 120 caacagaaag ctggtcaacc tccgaagctg cttatctacc gggcgtcgga actccaatgg 180 ggcattccag cacggttcag cgggtcgggc tccagaactg acttcaccct caccatcaat 240 cccgtggagg ccgatgacgt ggcgacctac ttttgtcagc gctccaacga ggtcccgtgg 300 actttcggag gaggaaccaa gctggaaatc aag 333 <210> 49 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 49 caagtcaaac tgctggaaca gtccggagca gagctggtga agcctggagc gtcggtgcgg 60 ctttcgtgta ccgccggctt taacatcaag gacacctaca tgtcgtgggt gaagcagagg 120 cccgagcagg ggctcgaatg gattggccgc atcgacccgg aaaatggtga taccaaatac 180 gacccaaagt tccagggaaa ggccactatc actgcagata cttcaagcaa caccgcctac 240 ctccacctgt cctcgctcac ttccggagat accgcggtct actattgctc aagaggatgg 300 gaaggcttcg cgtactgggg tcaaggaacg ttggtgaccg tcagcgcc 348 <210> 50 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 50 Met Thr Leu Lys Gly Met Ser Tyr Val Met Cys Thr Gly Ser Phe Lys 1 5 10 15 Leu Glu Lys Glu Val Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Val Leu Val Gln 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Thr Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr 35 40 45 Gln Asp Glu Lys Gly Ala Thr Gln Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Ile Val Thr Asp Lys Glu Lys Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Tyr Ile Val Val Gly Ala Gly Glu Lys Ala Leu 85 90 95 Lys Leu Ser Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 51 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 51 Met Gln Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ser Met Cys Thr Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Val Val Lys Glu Ile Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Val Ile Arg 20 25 30 Val Gln Tyr Glu Gly Asp Gly Ser Pro Cys Lys Ile Pro Phe Glu Ile 35 40 45 Met Asp Leu Glu Lys Arg His Val Leu Gly Arg Leu Ile Thr Val Asn 50 55 60 Pro Ile Val Thr Glu Lys Asp Ser Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Ile Ile Gly Val Glu Pro Gly Gln Leu 85 90 95 Lys Leu Asn Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Leu Glu 100 105 <210> 52 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 52 Met Lys Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ala Met Cys Leu Asn Thr Phe Val 1 5 10 15 Leu Lys Lys Glu Val Ser Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Leu Ile Lys 20 25 30 Val Glu Tyr Lys Gly Glu Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr 35 40 45 Glu Asp Gly Gln Gly Lys Ala His Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Val Val Thr Lys Lys Glu Glu Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Asn Ile Val Ile Gly Ile Gly Asp Lys Ala Leu 85 90 95 Lys Ile Asn Trp Tyr Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 53 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 53 Met Arg Ile Lys Gly Met Ser Tyr Thr Met Cys Ser Gly Lys Phe Ser 1 5 10 15 Ile Asp Lys Glu Met Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Thr Val Val Lys 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Ala Gly Ala Pro Cys Lys Val Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Arg Asp Val Asn Lys Glu Lys Val Val Gly Arg Ile Ile Ser Ser Thr 50 55 60 Pro Leu Ala Glu Asn Thr Asn Ser Val Thr Asn Ile Glu Leu Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asn Ser Ala Leu 85 90 95 Thr Leu His Trp Phe Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 54 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 54 Met Thr Leu Lys Gly Met Ser Tyr Val Met Cys Thr Gly Ser Phe Lys 1 5 10 15 Leu Glu Lys Glu Leu Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Val Leu Val Gln 20 25 30 Ile Lys Tyr Glu Gly Thr Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr 35 40 45 Gln Asp Glu Lys Gly Val Thr Gln Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Ile Val Thr Asp Lys Glu Lys Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Tyr Ile Val Ile Gly Ala Gly Glu Lys Ala Leu 85 90 95 Lys Leu Ser Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 55 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 55 Met Thr Leu Lys Gly Ile Ser Tyr Val Met Cys Thr Gly Pro Phe Lys 1 5 10 15 Leu Glu Lys Glu Val Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Val Leu Val Gln 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Thr Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Ser 35 40 45 Gln Asp Glu Lys Gly Val Thr Gln Asn Gly Arg Leu Val Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Ile Val Thr Asp Lys Glu Lys Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Tyr Ile Val Val Gly Ala Gly Glu Lys Ala Leu 85 90 95 Lys Leu Ser Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 56 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 56 Met Thr Leu Lys Gly Thr Ser Tyr Val Met Cys Thr Gly Ser Phe Lys 1 5 10 15 Leu Glu Lys Glu Val Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Val Leu Val Gln 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Thr Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr 35 40 45 Gln Asp Glu Lys Gly Val Thr Gln Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Ile Val Thr Asp Lys Glu Lys Pro Val Asn Ile Glu Thr Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Tyr Ile Val Val Gly Ala Gly Glu Lys Ala Leu 85 90 95 Lys Leu Ser Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 57 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 57 Met Gln Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ser Met Cys Thr Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Val Val Lys Glu Ile Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Val Ile Arg 20 25 30 Val Gln Tyr Glu Gly Asp Gly Ser Pro Cys Lys Ile Pro Phe Glu Ile 35 40 45 Met Asp Leu Glu Lys Arg His Val Leu Gly Arg Leu Ile Thr Val Asn 50 55 60 Pro Ile Val Thr Glu Lys Asp Ser Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Ile Ile Gly Val Glu Pro Gly Gln Leu 85 90 95 Lys Leu Ser Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Gln 100 105 <210> 58 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 58 Met Gln Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ser Met Cys Thr Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ile Val Lys Glu Ile Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Val Ile Arg 20 25 30 Ile Gln Tyr Glu Gly Asp Gly Ser Pro Cys Lys Ile Pro Phe Glu Ile 35 40 45 Thr Asp Leu Glu Lys Arg His Val Leu Gly Arg Leu Ile Thr Val Asn 50 55 60 Pro Ile Val Ile Glu Lys Asp Ser Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Ile Ile Gly Val Glu Pro Gly Gln Leu 85 90 95 Lys Leu Asn Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Gln 100 105 <210> 59 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 59 Met Gln Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ser Met Cys Thr Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ile Val Lys Glu Ile Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Val Ile Arg 20 25 30 Val Gln Tyr Glu Gly Asp Gly Ser Pro Cys Lys Ile Pro Phe Glu Ile 35 40 45 Met Asp Leu Glu Lys Arg His Val Leu Gly Arg Leu Ile Thr Val Asn 50 55 60 Pro Ile Val Thr Glu Lys Asp Ser Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Ile Ile Gly Val Glu Pro Gly Gln Leu 85 90 95 Lys Leu Asp Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Gln 100 105 <210> 60 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 60 Met Gln Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ser Met Cys Thr Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Val Val Lys Glu Ile Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Val Ile Arg 20 25 30 Val Gln Tyr Glu Gly Asp Gly Ser Pro Cys Lys Ile Pro Phe Glu Ile 35 40 45 Met Asp Leu Glu Lys Arg Tyr Val Leu Gly Arg Leu Ile Thr Val Asn 50 55 60 Pro Ile Val Thr Glu Lys Asp Ser Pro Ile Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Ile Ile Gly Val Glu Pro Gly Gln Leu 85 90 95 Lys Leu Asn Trp Phe Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Gln 100 105 <210> 61 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 61 Met Glu Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ala Met Cys Leu Asn Thr Phe Val 1 5 10 15 Leu Lys Lys Glu Val Ser Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Leu Ile Lys 20 25 30 Val Glu Tyr Lys Gly Glu Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr 35 40 45 Glu Asp Gly Gln Gly Lys Ala His Ser Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Val Val Thr Lys Lys Glu Glu Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Asn Ile Val Ile Gly Ile Gly Asp Lys Ala Leu 85 90 95 Lys Ile Asn Trp Tyr Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 62 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 62 Met Glu Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ala Met Cys Gln Asn Ala Phe Val 1 5 10 15 Leu Lys Lys Glu Val Ser Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Leu Ile Lys 20 25 30 Val Glu Tyr Lys Gly Glu Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr 35 40 45 Glu Asp Gly Gln Gly Lys Ala His Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Val Val Thr Lys Lys Glu Glu Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Asn Ile Val Ile Gly Ile Gly Asp Lys Ala Leu 85 90 95 Lys Ile Asn Trp Tyr Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 63 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 63 Met Glu Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ala Met Cys Thr Asn Thr Phe Val 1 5 10 15 Leu Lys Lys Glu Val Ser Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Leu Ile Lys 20 25 30 Val Glu Tyr Lys Gly Glu Asp Val Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr 35 40 45 Glu Asp Gly Gln Gly Lys Ala His Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Val Val Thr Lys Lys Glu Glu Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Asn Ile Val Ile Gly Ile Gly Asp Asn Ala Leu 85 90 95 Lys Ile Asn Trp Tyr Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 64 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 64 Met Glu Leu Lys Gly Met Ser Tyr Ala Met Cys Ser Gly Thr Phe Val 1 5 10 15 Leu Lys Lys Glu Val Ser Glu Thr Gln His Gly Thr Ile Leu Ile Lys 20 25 30 Ile Glu Tyr Lys Gly Glu Asp Ala Pro Cys Lys Ile Pro Phe Ser Thr 35 40 45 Glu Asp Ala Gln Gly Lys Ala His Asn Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn 50 55 60 Pro Val Val Thr Lys Lys Glu Glu Pro Val Asn Ile Glu Ala Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Glu Ser Asn Ile Val Ile Gly Thr Gly Asp Lys Ala Leu 85 90 95 Arg Ile Asn Trp Tyr Lys Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 65 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 65 Met Arg Ile Lys Gly Met Ser Tyr Thr Met Cys Ser Gly Lys Phe Ser 1 5 10 15 Ile Asp Lys Glu Met Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Thr Val Val Lys 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Ala Gly Ala Pro Cys Lys Val Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Arg Asp Val Asn Lys Glu Lys Val Val Gly Arg Val Ile Ser Ala Thr 50 55 60 Pro Leu Ala Glu Asn Thr Asn Ser Val Thr Asn Ile Glu Leu Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asn Ser Ala Leu 85 90 95 Thr Leu His Trp Phe Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 66 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 66 Met Arg Ile Lys Gly Met Ser Tyr Thr Met Cys Ser Gly Lys Phe Ser 1 5 10 15 Ile Asp Lys Glu Met Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Thr Val Val Lys 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Ala Gly Ala Pro Cys Lys Val Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Arg Asp Val Asn Lys Glu Lys Val Val Gly Arg Ile Ile Ser Ser Thr 50 55 60 Pro Phe Ala Glu Asn Thr Asn Ser Val Thr Asn Ile Glu Leu Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asp Ser Ala Leu 85 90 95 Thr Leu His Trp Phe Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 67 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 67 Met Arg Ile Lys Gly Met Ser Tyr Thr Met Cys Ser Gly Lys Phe Ser 1 5 10 15 Ile Asp Lys Glu Met Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Thr Val Val Lys 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Ala Gly Ala Pro Cys Lys Ile Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Arg Asp Val Asn Lys Glu Lys Val Val Gly Arg Ile Ile Ser Ser Thr 50 55 60 Pro Phe Ala Glu Asn Thr Asn Ser Val Ile Asn Ile Glu Leu Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asp Ser Ala Leu 85 90 95 Thr Leu His Trp Phe Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 68 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 68 Met Arg Ile Lys Gly Met Ser Tyr Thr Met Cys Ser Gly Lys Phe Ser 1 5 10 15 Ile Asp Lys Glu Met Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Thr Val Val Lys 20 25 30 Ile Lys Tyr Glu Gly Thr Gly Ala Pro Cys Lys Val Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Arg Asp Val Asn Lys Glu Lys Val Val Gly Arg Ile Ile Ser Ser Thr 50 55 60 Pro Phe Ala Glu Asn Thr Asn Ser Val Thr Asn Ile Glu Leu Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asp Ser Ala Leu 85 90 95 Thr Leu His Trp Phe Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 69 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 69 Met Arg Ile Lys Gly Met Ser Tyr Thr Met Cys Ser Gly Lys Phe Ser 1 5 10 15 Ile Asp Arg Glu Met Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Thr Val Val Lys 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Thr Gly Ala Pro Cys Lys Val Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Arg Asp Val Asn Lys Glu Lys Val Val Gly Arg Ile Ile Ser Ser Thr 50 55 60 Pro Phe Ala Glu Ser Thr Asn Ser Val Thr Asn Ile Glu Leu Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asp Ser Ala Leu 85 90 95 Thr Leu His Trp Phe Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 70 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 70 Met Arg Ile Lys Gly Met Ser Tyr Thr Met Cys Ser Gly Lys Phe Ser 1 5 10 15 Ile Asp Lys Glu Met Ala Glu Thr Gln His Gly Thr Thr Val Val Lys 20 25 30 Val Lys Tyr Glu Gly Ala Gly Ala Pro Cys Lys Val Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Arg Asp Val Asn Lys Glu Lys Val Val Gly Arg Ile Ile Ser Ser Thr 50 55 60 Pro Phe Ala Glu Tyr Thr Asn Ser Val Thr Asn Ile Glu Leu Glu Pro 65 70 75 80 Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asp Ser Ala Leu 85 90 95 Thr Leu His Trp Phe Arg Lys Gly Ser Ser Ile Gly Lys 100 105 <210> 71 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 71 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 72 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 72 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 73 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 73 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 74 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 74 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 75 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 75 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 76 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 76 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Cys 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 77 <211> 103 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 77 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Gly Gly 85 90 95 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 <210> 78 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 78 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 79 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 79 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Phe Leu 20 25 30 Gly Ile Asn Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Lys Asp Thr Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Lys 85 90 95 Asn Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 80 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 80 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Gly Phe Asn Ile Lys Asp Val Tyr 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 40 45 Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu Gln 50 55 60 Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 81 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 81 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Val 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 82 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 82 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg ccggcttcaa tatcaaggac gtctacatgt cctgggtgcg gcaggctcca 120 gggcaaggac tggaatggat ggggcgcatt gacccggaga acggtgatac gaagtacgac 180 ccgaaactgc agggccgcgt gaccatgacc gcagatacta gcaccaacac cgcgtacatg 240 gagctgcggt ccttgaggtc ggatgacact gctgtgtatt actgtgccag aggctgggaa 300 gggttcgcgt actggggaca gggaactctc gtgactgtgt cgtct 345 <210> 83 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 83 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatcaag gacgtctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagggcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 84 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 84 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 85 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 85 Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 86 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 86 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatcaag gacacctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgttc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 87 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 87 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcggcctt caatatcaag gacgtctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 88 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 88 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatcaag gacgtctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtag cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 89 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 89 caagtgcaac tcgttcagtc cggagcagaa gtcaagaaac ctggagcttc agtcaaagtc 60 agctgcaagg cctcgggctt caatatcaag gacgtctaca tgtcctgggt gcggcaggct 120 ccagagcaag gactggaatg gatggggcgc attgacccgg agaacggtga tacgaagtac 180 gacccgaaac tgcagggccg cgtgaccatg accgcagata ctagcaccaa caccgcgtac 240 atggagctgc ggtccttgag gtcggatgac actgctgtgt attactgtgc cagaggctgg 300 gaagggttcg cgtactgggg acagggaact ctcgtgactg tgtcgtct 348 <210> 90 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 90 Gly Trp Glu Gly Phe Ile Tyr 1 5 <210> 91 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 91 Gly Trp Glu Gly Phe Lys Tyr 1 5 <210> 92 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 92 Gly Trp Glu Gly Phe Asp Tyr 1 5 <210> 93 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 93 Gly Trp Glu Gly Phe Glu Tyr 1 5 <210> 94 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 94 Arg Ala Ser Glu Asn Val Asp Lys Phe Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 95 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 95 Gln Leu Gln Leu Val Gln Ser Gly 1 5 <210> 96 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 96 Gln Val Gln Leu Val Glu Gln Ser Gly 1 5 <210> 97 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 97 Gln Val Lys Leu Val Glu Gln Ser Gly 1 5 <210> 98 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 98 Gln Val Lys Leu Leu Glu Gln Ser Gly 1 5

Claims (62)

  1. 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서,
    (a) 서열 D V YMS (서열 번호 3) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 단, V 는 변하지 않음)를 포함하는 CDR1,
    서열 RIDPENGDTKYDPK L QG (서열 번호 4) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로 단, L 은 변하지 않음)를 포함하는 CDR2, 및
    서열 GWEGFAY (서열 번호 5) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역 분절; 및
    (b) 서열 RASENVDKYGNSFMH (서열 번호 6) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR1,
    서열 RASELQW (서열 번호 7) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR2, 및
    서열 QRSNEVPWT (서열 번호 8) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 분절
    을 포함하는 항체 분자.
  2. 제1항에 있어서, 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAGFNIK (서열 번호 11), 또는 서열 번호 11에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 갖는 VH FW1을 포함하는 항체 분자.
  3. 제1항에 있어서, 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAGFNIK (서열 번호 11)을 갖는 VH FW1을 포함하는 항체 분자.
  4. 제1항에 있어서, 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84) 또는 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85), 또는 서열 번호 84 또는 85에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 갖는 VH FW2를 포함하는 항체 분자.
  5. 제1항에 있어서, 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84) 또는 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85)를 갖는 VH FW2를 포함하는 항체 분자.
  6. 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서,
    (a) 서열 D V YMS (서열 번호 3) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로 단, V 는 변하지 않음)를 포함하는 CDR1,
    서열 RIDPENGDTKYDPK L QG (서열 번호 4) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 단, L 은 변하지 않음)를 포함하는 CDR2, 및
    서열 GWEGFAY (서열 번호 5) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역 분절; 및
    (b) 서열 RASENVDKYGNSFMH (서열 번호 6) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR1,
    서열 RASELQW (서열 번호 7) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR2, 및
    서열 QRSNEVPWT (서열 번호 8) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 분절
    을 포함하는 항체 분자.
  7. 제6항에 있어서, 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAGFNIK (서열 번호 11), 또는 서열 번호 11에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 갖는 VH FW1을 포함하는 항체 분자.
  8. 제6항에 있어서, 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAGFNIK (서열 번호 11)을 갖는 VH FW1을 포함하는 항체 분자.
  9. 제6항에 있어서, 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84) 또는 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85), 또는 서열 번호 84 또는 85에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 갖는 VH FW2를 포함하는 항체 분자.
  10. 제6항에 있어서, 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84) 또는 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85)를 갖는 VH FW2를 포함하는 항체 분자.
  11. 뎅기열 바이러스에 결합할 수 있는 항체 분자로서,
    (a) 서열 번호 33에 비해 위치 26의 결실을 포함하는 FW1,
    서열 D V YMS (서열 번호 3) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로 단, V 는 변하지 않음)를 포함하는 CDR1,
    서열 RIDPENGDTKYDPK L QG (서열 번호 4) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열, 선택적으로 단, L 은 변하지 않음)를 포함하는 CDR2, 및
    서열 GWEGFAY (서열 번호 5) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역 분절; 및
    (b) 서열 RASENVDKYGNSFMH (서열 번호 6) (또는 그와 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 상이한 서열)를 포함하는 CDR1,
    서열 RASELQW (서열 번호 7) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)을 포함하는 CDR2, 및
    서열 QRSNEVPWT (서열 번호 8) (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열)을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 분절
    을 포함하는 항체 분자.
  12. 제11항에 있어서, 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84) 또는 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85), 또는 서열 번호 84 또는 85에 비해 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 돌연변이를 가진 아미노산 서열을 갖는 VH FW2를 포함하는 항체 분자.
  13. 제11항에 있어서, 서열 WVRQAPGQGLEWMG (서열 번호 84) 또는 WVRQAPEQGLEWMG (서열 번호 85)를 갖는 VH FW2를 포함하는 항체 분자.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 뎅기열 바이러스 EDⅢ(E 단백질 도메인 Ⅲ)에 결합할 수 있는 항체 분자.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 3-8, 14, 및 35 (또는 그와 1, 2, 또는 3개 이하의 아미노산이 상이한 서열) 중 임의의 것의 서열을 가진 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체 분자.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 3-8, 14, 및 35 중 임의의 것의 서열을 가진 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체 분자.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 3-8, 14, 및 35 중 임의의 것의 서열을 가진 적어도 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체 분자.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 3의 VH CDR1, 서열 번호 4의 VH CDR2, 서열 번호 5의 VH CDR3, 서열 번호 6의 VL CDR1, 서열 번호 7의 VL CDR2, 및 서열 번호 8의 VL CDR3을 포함하는 항체 분자.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 3 또는 14의 VH CDR1, 서열 번호 4 또는 35의 VH CDR2, 서열 번호 5의 VH CDR3, 서열 번호 6의 VL CDR1, 서열 번호 7의 VL CDR2, 및 서열 번호 8의 VL CDR3을 포함하는 항체 분자.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 1과 적어도 70% 동일한 VH 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 1의 VH 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 16-21, 24, 25, 27, 29, 31, 32, 33, 36, 80, 또는 81 중 임의의 서열과 적어도 70% 동일한 VH 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 16-21, 24, 25, 27, 29, 31, 32, 33, 36, 80, 또는 81의 VH 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 2와 적어도 70% 동일한 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 2의 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 34와 적어도 70% 동일한 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 34의 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv 단편(scFv)인 항체 분자.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택되는 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체 분자.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 카파 또는 람다의 경쇄 불변 영역으로부터 선택되는 경쇄 불변 영역을 포함하는 항체 분자.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 항체 분자인 항체 분자.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화 항체 분자인 항체 분자.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 골격 생식세포계열 서열로부터 유래한 하나 이상의 골격 영역을 함유하는 항체 분자.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 뎅기열 바이러스 EDⅢ에 약 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05, 또는 0.01 nM 미만의 해리 상수(KD)로 결합할 수 있는 항체 분자.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 뎅기열 바이러스 혈청형 DV-4 EDⅢ에 약 10, 8, 6, 5, 4, 또는 3 nM 미만의 해리 상수(KD)로 결합할 수 있는 항체 분자.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, DV-3 또는 DV-4 EDⅢ 도메인에 항체 A11 또는 항체 4E11보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 15, 25, 50, 75, 100, 1,000, 5,000, 또는 10,000배 더 큰 친화도로 결합할 수 있는 항체 분자.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, DENV-4 BC2, DENV-4-Sing, DENV-4 NC, DENV-4 Phil, DENV-3 Sing, DENV-3 Nic, DENV-3 H87, DENV-2 페루, DENV-2 Sing, DENV-2 NGC, DENV-1 하와이/1944, DENV-2 뉴기니/1944 (NGC), DENV-3 필리핀/1956 (H87), DENV-4 멕시코/1997 (BC287/97), 및 DENV-4 H241로부터 선택되는 뎅기열 바이러스 균주에 항체 A11 또는 항체 4E11보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 25, 50, 75, 100, 또는 1,000배 더 큰 친화도로 결합할 수 있는 항체 분자.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 포커스 감소 중화 시험에서 뎅기열 바이러스를 중화시킬 수 있는 항체 분자.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 포커스 감소 중화 시험에서 항체 A11 또는 항체 4E11보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 25, 50, 75, 또는 100배 더 낮은 IC50으로 뎅기열 바이러스를 중화시킬 수 있는 항체 분자.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 항체 분자, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 안정제를 포함하는 약학 조성물.
  41. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 항체 분자의 항체 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산.
  42. 제41항의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  43. 제41항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  44. 항체 분자 또는 그의 단편의 제조 방법으로서, 유전자 발현에 적합한 조건하에서 제43항의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 제조 방법.
  45. 내부에 배치되는 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 항체 분자, 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 안정제를 갖는 용기; 및 선택적으로, 전달 디바이스를 포함하는 키트.
  46. 제45항에 있어서, 전달 디바이스가 주사기 또는 바늘을 포함하는 것인 키트.
  47. 제45항에 있어서, 사용 설명서를 더 포함하는 키트.
  48. 뎅기열 바이러스의 중화 방법으로서, 뎅기열 바이러스를 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 항체 분자와 접촉시키는 단계를 포함하는 중화 방법.
  49. 제48항에 있어서, 뎅기열 바이러스가 혈청형 DV-1, DV-2, DV-3, 또는 DV-4인 중화 방법.
  50. 뎅기열 바이러스의 치료 방법으로서, 이를 필요로 하는 피험체에 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 단리된 항체 분자를 상기 바이러스의 치료에 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
  51. 제50항에 있어서, 항바이러스제를 피험체에 투여하는 단계를 더 포함하는 치료 방법.
  52. 제50항에 있어서, 항바이러스제가 발라피라비르, 클로로퀸, 셀고시비르, 이베르멕틴, 또는 카리카 폴리아(Carica folia) 중 하나 이상으로부터 선택되는 것인 치료 방법.
  53. 제50항에 있어서, 항바이러스제가 표 1에 열거된 항체들 중 임의의 항체, 4E11, 14c10 (HM14c10), 1F4, 2D22, 5J7, DV1.1, DV1.6, DV3.7, DV4.4, DV5.1, DV6.1, DV7.5, DV8.1, DV10.16, DV13.4, DV13.8, DV14.5, DV14.5, DV15.7, DV16.5, DV16.8, DV17.6, DV18.21, DV18.4, DV19.3, DV20.1, DV21.1, DV21.5, DV22.3, DV22.3 LALA, DV23.13, DV25.5, DV27.2, DV28.1, DV28.8, DV34.4, DV35.3, DV38.1, DV51.6, DV52.1, DV53.4, DV54.7, DV55.1, DV56.12, DV54.7, DV57.4, DV59.3, DV60.3, DV61.2, DV62.5, DV63.1, DV64.3, DV65.5, DV66.1, DV67.9, DV68.2, DV69.6, DV70.1, DV71.1, DV74.4, DV75.9, DV76.5, DV77.5, DV78.6, DV79.3, DV82.11, DV82.11 LALA, DV86.2, DV87.1, DV87.1 LALA, DV90.3, DV257.13, DV291.7, DV415.8, DV470.12, 3-147, 58/5, 2F5, 2G4, 5F9, 135.3, 2H12, 1A5, 또는 1C19 중 하나 이상으로부터 선택되는 항-뎅기열 항체인 치료 방법.
  54. 제50항에 있어서, 항바이러스제가 알파-글루코시다제 I 억제제, 아데노신 뉴클레오시드 억제제, NS3 및/또는 그의 보조인자 NS2B의 억제제, RNA 의존성 RNA 폴리머라제(RdRp) 억제제, 숙주 피리미딘 생합성의 억제제, 바이러스 NS4B 단백질의 억제제, 또는 이미노당 중 하나 이상으로부터 선택되는 것인 치료 방법.
  55. 제54항에 있어서, 알파-글루코시다제 I 억제제가 셀고시비르이고, 아데노신 뉴클레오시드 억제제가 NITD008이고, NS3 및/또는 그의 보조인자 NS2B의 억제제가 [5-아미노-1-(페닐)설포닐-피라졸-3-일] 화합물이고, RNA 의존성 RNA 폴리머라제(RdRp) 억제제가 NITD107이고, 숙주 피리미딘 생합성의 억제제가 NITD-982 또는 브레퀴나르로부터 선택되는 숙주 디히드로오로테이트 데히드로게나제(DHODH)의 억제제이고, 바이러스 NS4B 단백질의 억제제가 NITD-618이거나, 또는 이미노당이 UV-4인 치료 방법.
  56. 제50항에 있어서, 피험체에 백신을 투여하는 단계를 더 포함하는 치료 방법.
  57. 제50항에 있어서, 투여가 비경구인 치료 방법.
  58. 제50항에 있어서, 투여가 정맥 내인 치료 방법.
  59. 뎅기열 바이러스 감염의 예방 방법으로서, 이를 필요로 하는 피험체에 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 단리된 항체 분자를 감염의 예방에 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 예방 방법.
  60. 환자가 뎅기열 바이러스와 접촉할 위험을 감소시키는 방법으로서, 이를 필요로 하는 피험체에 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 단리된 항체 분자를 상기 바이러스와 접촉할 위험을 감소시키기에 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 감소 방법.
  61. 피험체와 모기 사이에 뎅기열 바이러스의 전파를 감소시키는 방법으로서, 뎅기열 바이러스에 감염되기 전 또는 후에 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 단리된 항체 분자를 뎅기열 바이러스의 전파를 감소시키기에 효과적인 양으로 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 감소 방법.
  62. 생물학적 시료에서 뎅기열 바이러스를 검출하는 방법으로서, (i) 항체 분자와 폴리펩티드의 상호작용이 일어나도록 하는 조건하에서 시료 또는 피험체(및 선택적으로, 기준 시료 또는 피험체)를 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 항체 분자와 접촉시키는 단계, 및 (ii) 항체 분자와 시료 또는 피험체(및 선택적으로, 기준 시료 또는 피험체) 사이의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는 검출 방법.
KR1020167024916A 2014-02-11 2015-01-20 뎅기열 바이러스에 대한 항체 분자 및 그의 용도 KR102356951B1 (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461938646P 2014-02-11 2014-02-11
US61/938,646 2014-02-11
US201462017970P 2014-06-27 2014-06-27
US62/017,970 2014-06-27
US201462046379P 2014-09-05 2014-09-05
US62/046,379 2014-09-05
PCT/US2015/011965 WO2015122995A1 (en) 2014-02-11 2015-01-20 Antibody moleules to dengue virus and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160117608A true KR20160117608A (ko) 2016-10-10
KR102356951B1 KR102356951B1 (ko) 2022-01-27

Family

ID=52478058

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167024916A KR102356951B1 (ko) 2014-02-11 2015-01-20 뎅기열 바이러스에 대한 항체 분자 및 그의 용도

Country Status (12)

Country Link
US (5) US9212217B2 (ko)
EP (2) EP4047015A1 (ko)
JP (1) JP6764348B2 (ko)
KR (1) KR102356951B1 (ko)
CN (2) CN106211773B (ko)
AU (1) AU2015217572B2 (ko)
CA (2) CA3212977A1 (ko)
ES (1) ES2900749T3 (ko)
IL (1) IL247221B (ko)
MX (1) MX2016010360A (ko)
SG (1) SG11201606624WA (ko)
WO (1) WO2015122995A1 (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190086833A (ko) * 2018-01-15 2019-07-24 주식회사 티앤디바이오 지카 바이러스의 외막 단백질에 특이적으로 결합하는 펩티드 및 이의 용도
KR102008608B1 (ko) 2018-01-29 2019-08-07 충북대학교 산학협력단 뎅기 바이러스의 비구조단백질 1에 대한 특이 항체를 생산하는 하이브리도마 및 이로부터 생성된 항체, 이의 용도
KR20190091823A (ko) 2018-01-29 2019-08-07 충북대학교 산학협력단 뎅기 바이러스 및 지카 바이러스의 비구조단백질 1에 동시에 결합 가능한 항체를 생산하는 하이브리도마 및 이로부터 생성된 항체, 이의 용도

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2978687C (en) 2007-09-26 2020-02-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
BR112015002605B1 (pt) 2012-08-07 2023-03-07 Massachusetts Institute Of Technology Agente de anticorpo específico para o vírus da dengue, seu uso, kit, composição farmacêutica e método para sua produção
MX2016009991A (es) 2014-02-11 2016-10-07 Massachusetts Inst Technology Nuevo anticuerpo anti-dengue de espectro completo.
EP4047015A1 (en) 2014-02-11 2022-08-24 Visterra, Inc. Antibody molecules to dengue virus and uses thereof
CN114773469A (zh) 2015-02-05 2022-07-22 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il-8-结合抗体及其应用
CN107531779B (zh) * 2015-03-17 2021-04-13 新加坡科技研究局 血清型交叉反应性登革热中和抗体和其用途
US11007260B2 (en) 2015-07-21 2021-05-18 Modernatx, Inc. Infectious disease vaccines
EP3433274A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 Visterra, Inc. Formulation of antibody molecules to dengue virus
WO2017181098A2 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Visterra, Inc. Antibody molecules to zika virus and uses thereof
KR20230079499A (ko) 2016-08-05 2023-06-07 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-8 관련 질환의 치료용 또는 예방용 조성물
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
TWI769185B (zh) * 2016-10-27 2022-07-01 海樂源有限公司 登革熱類病毒顆粒、抗登革熱病毒抗體、及含其之組合物
KR102595080B1 (ko) * 2016-12-23 2023-10-30 세럼 인스티튜트 오브 인디아 프라이비트 리미티드 포유류 세포 배양에서 항체 생산성을 증강시키고 하류 제제화 프로세스 동안 응집을 최소화하기 위한 개선된 방법, 및 그로부터 수득된 안정한 항체 제제
EP3606552A4 (en) 2017-04-07 2020-08-05 The Rockefeller University COMPOSITIONS AND PROCEDURES RELATED TO HUMAN NEUTRALIZING ANTIBODIES AGAINST ZIKA AND DENGUE-1 VIRUS
EP3621645A4 (en) 2017-05-10 2021-01-27 University of Massachusetts BIVALENT DENGUE / HEPATITIS B VACCINES
US11576962B2 (en) 2017-12-21 2023-02-14 Green Biomed, Inc. Cross-immunizing antigen vaccine and method for preparation thereof
EP3765494A4 (en) 2018-03-15 2022-03-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-DENGUE VIRUS ANTIBODIES WITH CROSS-REACTIVITY AGAINST ZIKA VIRUS AND METHODS OF USE
US10889548B2 (en) 2018-03-26 2021-01-12 Clear Creek Bio, Inc. Compositions and methods for inhibiting dihydroorotate dehydrogenase
CN109320607B (zh) * 2018-09-06 2021-10-08 中国人民解放军第二军医大学 抗登革病毒de3的纳米抗体、制备方法及用途
CN111320688B (zh) * 2018-12-17 2021-08-24 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种黄病毒中和抗体、其制备方法及应用
CN109929033B (zh) * 2019-03-15 2020-06-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种特异性结合四种血清型登革病毒的人源抗体
US20200323813A1 (en) * 2019-04-09 2020-10-15 Tremeau Pharmaceuticals, Inc. Treatment of viral hemorrhagic fevers with cox-2 selective non-steroidal anti-inflammatory drugs
US20220372079A1 (en) * 2019-06-24 2022-11-24 Jonathan R. Lai Resurfaced dengue virus and ziki virus glycoprotein e diii variants and uses thereof
US20210290651A1 (en) 2020-03-20 2021-09-23 Clear Creek Bio, Inc. Methods of treating viral infections using inhibitors of nucleotide synthesis pathways

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013035345A2 (en) * 2011-09-09 2013-03-14 Osaka University Dengue-virus serotype neutralizing antibodies
WO2013173348A1 (en) * 2012-05-14 2013-11-21 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health & Human Services Cross-reactive antibodies against dengue virus and uses thereof

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
EP0768377A1 (en) 1988-09-02 1997-04-16 Protein Engineering Corporation Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8905669D0 (en) 1989-03-13 1989-04-26 Celltech Ltd Modified antibodies
WO1991000906A1 (en) 1989-07-12 1991-01-24 Genetics Institute, Inc. Chimeric and transgenic animals capable of producing human antibodies
ATE139258T1 (de) 1990-01-12 1996-06-15 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
DK0585287T3 (da) 1990-07-10 2000-04-17 Cambridge Antibody Tech Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
AU664976B2 (en) 1990-08-29 1995-12-14 Gene Pharming Europe Bv Homologous recombination in mammalian cells
DE69127627T2 (de) 1990-08-29 1998-02-19 Genpharm Int Produktion und Nützung nicht-menschliche transgentiere zur Produktion heterologe Antikörper
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
EP1279731B1 (en) 1991-03-01 2007-05-30 Dyax Corporation Process for the development of binding mini-proteins
ATE269401T1 (de) 1991-04-10 2004-07-15 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer rezeptoren mittels phagemiden
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
DE69334258D1 (de) 1992-08-21 2009-02-26 Univ Bruxelles Immunoglobuline ohne Leichtkette
ES2533085T3 (es) 2001-05-22 2015-04-07 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Desarrollo de mutaciones útiles para atenuar virus del dengue y virus del dengue quiméricos
US7232888B2 (en) 2002-07-01 2007-06-19 Massachusetts Institute Of Technology Antibodies against tumor surface antigens
US7473424B2 (en) 2003-01-31 2009-01-06 The Scripps Research Institute Anti-dengue virus antibodies and compositions
WO2005056600A2 (en) 2003-12-08 2005-06-23 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind or neutralize dengue virus
AU2006245734C1 (en) 2005-05-12 2012-05-24 Crucell Holland B.V. Host cell specific binding molecules capable of neutralizing viruses and uses thereof
US7943134B2 (en) 2005-08-31 2011-05-17 Academia Sinica Compositions and methods for identifying response targets and treating flavivirus infection responses
CU23586A1 (es) 2005-11-22 2010-10-30 Ct Ingenieria Genetica Biotech Métodos y proteínas para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de los cuatro serotipos del virus de dengue y otros flavivirus
CU23632A1 (es) 2006-04-28 2011-02-24 Ct Ingenieria Genetica Biotech Métodos para la identificación de candidatos terapéuticos contra enfermedades causadas por flavivirus y moléculas antivirales.
WO2009011941A2 (en) 2007-04-04 2009-01-22 The Government Of U.S.A., As Represented By The Secretary, Departmetnt Of Health & Human Services Monoclonal antibodies against dengue and other viruses with deletion in fc region
US20100150912A1 (en) 2007-04-11 2010-06-17 Novartis Ag Blocking interaction between pathogen factors and factor h to inhibit hemorrhagic syndromes
MX2011003588A (es) * 2008-10-13 2011-10-14 Inst Research In Biomedicine Anticuerpos neutralizadores del virus del dengue y uso de los mismos.
WO2010093335A1 (en) 2009-02-10 2010-08-19 Nanyang Technological University Antibodies for diagnosis and treatment of flaviviral infections
JP2012519706A (ja) 2009-03-06 2012-08-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体製剤
EP2473191B1 (en) 2009-09-04 2017-08-23 XOMA Technology Ltd. Antibody coformulations
IT1395574B1 (it) 2009-09-14 2012-10-16 Guala Dispensing Spa Dispositivo di erogazione
SG182304A1 (en) 2009-12-29 2012-08-30 Hoffmann La Roche Antibody formulation
US8637035B2 (en) 2010-07-16 2014-01-28 Academia Sinica Anti-dengue virus antibodies
DK2651975T3 (en) 2010-12-14 2017-10-30 Nat Univ Singapore HUMAN MONOCLONAL ANTIBODY WITH SPECIFICITY OF DENGUE VIRUS SEROTYPE-1E PROTEIN AND APPLICATIONS THEREOF
TWI448552B (zh) * 2011-07-15 2014-08-11 Academia Sinica 抗登革病毒抗體
WO2013089647A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Agency For Science, Technology And Research Binding molecules against dengue virus and uses thereof
US8920804B2 (en) 2011-12-22 2014-12-30 Inbios International, Inc. Methods and materials for the detection of dengue virus infection
CN104428312A (zh) 2012-04-02 2015-03-18 北卡罗来纳-查佩尔山大学 用于登革病毒表位的方法和组合物
BR112015002605B1 (pt) * 2012-08-07 2023-03-07 Massachusetts Institute Of Technology Agente de anticorpo específico para o vírus da dengue, seu uso, kit, composição farmacêutica e método para sua produção
US10335484B2 (en) 2013-01-08 2019-07-02 Humabs Biomed Sa Methods of generating robust passive and active immune responses
CA2898262A1 (en) 2013-01-24 2014-07-31 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Tnf-alpha antigen-binding proteins
EP4047015A1 (en) 2014-02-11 2022-08-24 Visterra, Inc. Antibody molecules to dengue virus and uses thereof
MX2016009991A (es) * 2014-02-11 2016-10-07 Massachusetts Inst Technology Nuevo anticuerpo anti-dengue de espectro completo.
EP3433274A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 Visterra, Inc. Formulation of antibody molecules to dengue virus

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013035345A2 (en) * 2011-09-09 2013-03-14 Osaka University Dengue-virus serotype neutralizing antibodies
WO2013173348A1 (en) * 2012-05-14 2013-11-21 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health & Human Services Cross-reactive antibodies against dengue virus and uses thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Proc Natl Acad Sci U S A, Vol. 110, No. 17, pp. E1555-1564 (2013.04.23.)* *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190086833A (ko) * 2018-01-15 2019-07-24 주식회사 티앤디바이오 지카 바이러스의 외막 단백질에 특이적으로 결합하는 펩티드 및 이의 용도
KR102008608B1 (ko) 2018-01-29 2019-08-07 충북대학교 산학협력단 뎅기 바이러스의 비구조단백질 1에 대한 특이 항체를 생산하는 하이브리도마 및 이로부터 생성된 항체, 이의 용도
KR20190091823A (ko) 2018-01-29 2019-08-07 충북대학교 산학협력단 뎅기 바이러스 및 지카 바이러스의 비구조단백질 1에 동시에 결합 가능한 항체를 생산하는 하이브리도마 및 이로부터 생성된 항체, 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
US20220177553A1 (en) 2022-06-09
US20190153074A1 (en) 2019-05-23
US20160251413A1 (en) 2016-09-01
US20160046697A1 (en) 2016-02-18
EP3105249A1 (en) 2016-12-21
EP4047015A1 (en) 2022-08-24
KR102356951B1 (ko) 2022-01-27
US11059883B2 (en) 2021-07-13
ES2900749T3 (es) 2022-03-18
AU2015217572B2 (en) 2020-10-15
US10155806B2 (en) 2018-12-18
SG11201606624WA (en) 2016-09-29
JP6764348B2 (ja) 2020-09-30
JP2017512209A (ja) 2017-05-18
US12054539B2 (en) 2024-08-06
IL247221A0 (en) 2016-09-29
WO2015122995A1 (en) 2015-08-20
CN106211773B (zh) 2021-09-03
US9212217B2 (en) 2015-12-15
US20150225474A1 (en) 2015-08-13
CA2938590C (en) 2023-10-17
US9365639B2 (en) 2016-06-14
MX2016010360A (es) 2016-11-30
EP3105249B1 (en) 2021-09-15
CA2938590A1 (en) 2015-08-20
CN113817053A (zh) 2021-12-21
IL247221B (en) 2022-01-01
CN106211773A (zh) 2016-12-07
CA3212977A1 (en) 2015-08-20
AU2015217572A1 (en) 2016-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12054539B2 (en) Antibody molecules to dengue virus and uses thereof
US20170298119A1 (en) Antibody molecules to zika virus and uses thereof
US11918651B2 (en) Formulations of antibody molecules to dengue virus
US20220289828A1 (en) Human monoclonal antibodies to enterovirus d68
CN110088131A (zh) 抗chikv抗体及其用途
US20230065377A1 (en) Human antibodies to alphaviruses
WO2022226060A1 (en) Antibody cocktail for treatment of ebolavirus infections
CA3158401A1 (en) Human antibodies that neutralize zika virus and methods of use therefor
AU2020273365A1 (en) Human antibodies to Ross River virus and methods of use therefor
BR122024007318A2 (pt) Moléculas de anticorpo para vírus da dengue e suas utilizações

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant