KR20100035404A

KR20100035404A - 신규 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 및 이의 항체를 이용한 치료제

Info

Publication number: KR20100035404A
Application number: KR1020080094775A
Authority: KR
Inventors: 성영철; 양세환; 최소영; 이지영; 김세원
Original assignee: 주식회사 제넥신; 포항공과대학교 산학협력단
Priority date: 2008-09-26
Filing date: 2008-09-26
Publication date: 2010-04-05

Abstract

본 발명은 두 가지 세포표면 단백질인 TM6SF1(transmembrane protein 6 superfamily 1)과 TM7SF3(transmembrane protein 7 superfamily 3)이 급성 골수성 백혈병 (Acute myeloid leukemia)의 바이오마커 (biomarker)로서 이용될 수 있음을 밝힌 것이다. 본 발명에서 이들 항원을 특이적으로 인식하는 단일클론항체를 제조하여 조사해 보았을 때, 급성 골수성 백혈구 유래의 인간 세포주, 특히 급성 단핵구성 백혈병 유래 세포인 THP-1 세포, 또는 U937 세포에서 TM6SF1과 TM7SF3가 특이적으로 높게 발현되는 것을 밝혔다. 따라서, 본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커로 이용되는 세포 표면 단백질인 TM6SF1 또는 TM7SF3은 급성 골수성 백혈병을 진단하는데 유용하다. 또한, 본 발명의 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체를 유효성분으로 포함하는 급성 골수성 백혈병 치료제는 급성 골수성 백혈병 세포에서 높게 발현되는 TM6SF1 또는 TM7SF3과 특이적으로 결합하여 이들을 중화(neutralization)시킴으로써, 급성 골수성 백혈병을 효과적으로 치료할 수 있다.

급성 골수성 백혈병, 바이오마커, TM6SF1, TM7SF3, 유전자 백신, FACS, 단일클론항체, 형광활성화 세포분류법, FACS

Description

신규 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 및 이의 항체를 이용한 치료제{Novel biomarker specific for acute myeloid leukemia and drug using the antibody}

본 발명은 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커, 급성 골수성 백혈병 진단제, 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커의 검출방법, 및 급성 골수성 백혈병 치료제에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 급성 골수성 백혈병 세포에서 높게 발현되는 세포 표면 단백질인 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1) 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)을 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커로 이용하고, TM6SF1 또는 TM7SF3에 대한 항체를 급성 골수성 백혈병 진단제 또는 급성 골수성 백혈병 치료제로 이용한다.

백혈병(leukemia)은 백혈구가 종양성으로 증식하는 질환을 총칭하는데, 백혈병 종류는 백혈병이 기원하는 백혈구에 따라 골수성 백혈병과 림프성 백혈병으로 나누고, 진행속도에 따라 급성 백혈병과 만성 백혈병으로 나뉜다. 백혈병의 임상양상은 질환의 유형과 침범된 세포의 성질에 따라 다양하다. 림프성 백혈병은 림프파계 혈액세포가, 골수성 백혈병은 골수계 혈액세포가, 그리고 만성 골수성 백혈병은 성숙기에 있는 세포가 변이해서 발생하며, 급성 골수성 백혈병은 비교적 초기단계의 조혈과정에서 분화를 시작하는 골수계 모세포의 장애로 초래된다.

이 중 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia, AML)은 정상적인 백혈구의 생산을 방해하는 비정상적인 세포가 적색골수에서 생성, 축적되는 혈액암이다. 주로 성인에게 발병하며, 나이가 많을수록 발병률이 증가한다. AML의 증상은 정상 골수가 백혈병 세포로 가득 차면서 혈구(적혈구, 혈소판, 정상 백혈구)의 수가 급감함으로서 나타난다. 주 증상은 피로감, 가쁜 호흡, 쉽게 멍이나 출혈이 일어나며 감염이 빈번하게 일어나는 것 등이다. AML의 원인으로 추정되는 여러가지 것들이 확인되었지만 확실한 AML의 원인은 밝혀지지 않았다. 급성 골수성 백혈병은 광학 현미경 상의 형태학적 소견과 세포화학적 소견에 따라 1985년 개정된 프랑스-미국-영국(French-American-British, FAB) 분류법에 의해 ① M0(최소로 분화된 급성 골수성 백혈병, minimally differentiated acute myeloblastic leukemia), ② M1(acute myeloblastic leukemia, without maturation), ③ M2(acute myeloblastic leukemia, with granulocytic maturation), ④ M3 (acute promyelocytic leukemia), ⑤ M4 (acute myelomonocytic leukemia), ⑥ M5(acute monoblastic leukemia or acute monocytic leukemia), ⑦ M6(acute erythroid leukemias), ⑧ M7 (acute megakaryoblastic leukemia)과 같이 8개의 아형으로 세분된다.

한편, 현재 성체조혈줄기세포의 바이오마커로 사용되고 있는 CD34 혹은 CD133은 줄기세포 단계뿐만 아니라 분화한 세포에서도 발현되고, 다발성 골수종(multiple myeloma), 임파선종, 백혈병 등의 세포에서도 발현하므로, 바이오마커 인 CD34와 CD133에 대한 항체를 이용하여 성체조혈모세포의 분리, 백혈병의 진단 및 치료에는 한계가 있다. 또한, CD133 양성 세포에서 발현된다고 알려진 세포 표면 단백질인 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)의 유전자 서열 및 아미노산 서열이 알려져 있으나, 아직까지 이에 대한 항체가 제조된 바가 없고, 이들 단백질의 기능에 대해 전혀 밝혀진 바가 없다.

본 발명은 급성 골수성 백혈병을 진단하기 위한 것으로서, 급성 골수성 백혈병을 진단하는 데 이용될 수 있는 신규 바이오마커를 제공하는 데 그 목적이 있다.

또한, 본 발명은 급성 골수성 백혈병의 신규 바이오마커를 측정하여 급성 골수성 백혈병 여부를 진단할 수 있는 진단제를 제공하는 데 그 목적이 있다.

또한, 본 발명은 급성 골수성 백혈병 진단제를 이용하여 급성 골수성 백혈병의 신규 바이오마커를 측정하는 방법을 제공하는 데 그 목적이 있다.

아울러, 본 발명은 급성 골수성 백혈병의 신규 바이오마커에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 이용하여 급성 골수성 백혈병을 치료할 수 있는 치료제를 제공하는 데 그 목적이 있다.

이에 본 발명의 발명자들은 TM6SF1과 TM7SF3의 세포외 도메인(extracellular domain) 유전자를 발현 벡터에 넣은 뒤에 유전자 백신 방법으로 Balb/c 마우스를 면역화시켜 하이브리도마 세포를 제조하였다. 아울러, 하이브리도마 세포로부터 생산된 항-TM6SF1 단일클론항체, 또는 항-TM7SF3 단일클론항체를 이용하여 다양한 골수성 세포, 비골수성 세포를 분석한 결과, 상기 단일클론항체가 급성 골수성 백혈병 세포를 특이적으로 인식한다는 점을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 상기 목적은 급성 골수성 백혈병 세포에서 높게 발현되는 세포 표면 단백질인 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1) 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)를 유효성분으로 포함하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커를 제공함으로써 달성될 수 있다.

본 발명의 다른 목적은 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 유효성분으로 포함하는 급성 골수성 백혈병 진단제를 제공함으로써 달성될 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 검체에 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 접촉시켜 항원-항체 결합 반응을 측정하는 단계를 포함하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법을 제공함으로써 달성될 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 유효성분으로 포함하는 급성 골수성 백혈병 치료제를 제공함으로써 달성될 수 있다.

여기서, TM6SF1의 세포 외 도메인은 바람직하게는 서열번호 5의 염기서열에 의해 암호화되고, TM7SF3의 세포 외 도메인은 바람직하게는 서열번호 6의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 한다. 또한, 항-TM6SF1 항체는 TM6SF1의 세포외 도메인과 특이적으로 결합하고, 항-TM7SF3 항체는 TM7SF3의 세포외 도메인과 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 한다. 또한, 급성 골수성 백혈병은 바람직하게는 급성 단핵구성 백혈병이고, 더 바람직하게는 THP-1 세포, 또는 U937 세포에 의해 유발되는 것을 특징으로 한다. 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법에서 항원-항체 결합 반응의 측정은 면역염색법(Immunostaining), 바람직하게는 형광활성화 세포분류법(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)에 의해 수행되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커로 이용되는 세포 표면 단백질인 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1) 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)은 급성 골수성 백혈병, 특히 급성 단핵구성 백혈병 유래 세포인 THP-1 세포, 또는 U937 세포에서 높게 발현되므로, 급성 골수성 백혈병을 진단하는데 유용하다. 또한, 본 발명의 TM6SF1과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 검체에 존재하는 TM6SF1, 또는 TM7SF3를 검출하고 정량하는 데 이용하는 경우 효과적으로 급성 골수성 백혈병을 진단할 수 있다.

또한, 본 발명의 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체는 급성 골수성 백혈병 세포에서 높게 발현되는 TM6SF1 또는 TM7SF3과 특이적으로 결합하여 이들을 중화(neutralization)시킬 수 있으므로, 급성 골수성 백혈병을 효과적으로 치료할 수 있다. 아울러, 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체는 급성 골수성 백혈병 치료 특성을 가진 독소(toxin), 방사성 동위원소(radioisotope), 그 밖의 활성물질 등과 접합되어 급성 골수성 백혈병 치료 특성을 가진 물질을 표적 항원에 전달하는 데 이용될 수 있다.

본 발명은 급성 골수성 백혈병을 진단하는 데 이용될 수 있는 신규 바이오마커에 관한 것으로서, 본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커는 급성 골수성 백혈병 세포에서 높게 발현되는 세포 표면 단백질인 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1) 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)를 유효성분으로 포함한다.

TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)은 세포 외 도메인이 세포막 표면에 존재하는 세포 표면 단백질로서, 본 발명에서는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커로 인간(Homo sapiens), 마우스(예를 들어 Mus musculus), 쥐(예를 들어 Rattus norvegicus) 등의 포유류에 존재하는 TM6SF1을 모두 포함하고, 바람직하게는 서열번호 1의 아미노산 서열(NCBI 데이터베이스상의 승인번호 NP_075379)을 가진 인간 TM6SF1을 사용한다. TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)은 세포 외 도메인이 세포막 표면에 존재하는 세포 표면 단백질로서, 본 발명에서는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커로 인간(Homo sapiens), 마우스(예를 들어 Mus musculus), 쥐(예를 들어 Rattus norvegicus) 등의 포유류에 존재하는 TM7SF3을 모두 포함하고, 바람직하게는 서열번호 2의 아미노산 서열(NCBI 데이터베이스상의 승인번호 NP_057635)을 가진 인간 TM7SF3을 사용한다.

TM6SF1 또는 TM7SF3은 급성 골수성 백혈병 세포, 특히 급성 단핵구성 백혈병 세포에서 높게 발현되고 비골수성 세포에서는 거의 발현되지 않으므로 급성 골수성 백혈병의 바이오마커로 사용될 수 있다. 즉, 검체 내의 TM6SF1 또는 TM7SF3의 발현량을 측정하고, 이를 정상인에게 존재하는 TM6SF1 또는 TM7SF3의 발현량과 비교하여 급성 골수성 백혈병 여부를 진단할 수 있다. 또한, 본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커는 TM6SF1 또는 TM7SF3 뿐만 아니라, TM6SF1의 mRNA 또는 TM7SF3의 mRNA를 유효성분으로 포함할 수 있다. 단백질의 양과 그 mRNA의 양은 비례관계에 있으므로, TM6SF1 또는 TM7SF3를 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커로 사용하는 경우, 그 mRNA도 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커로 작용할 수 있다. 본 발명에서 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오 마커로 사용되는 TM6SF1의 mRNA 또는 TM7SF3의 mRNA는 인간(Homo sapiens), 마우스(예를 들어 Mus musculus), 쥐(예를 들어 Rattus norvegicus) 등의 포유류에 존재하는 TM6SF1의 mRNA 또는 TM7SF3의 mRNA를 모두 포함하고, 바람직하게는 서열번호 3의 염기 서열(NCBI 데이터베이스상의 승인번호 NM_023003, TM6SF1 mRNA의 cDNA)을 가진 인간 TM6SF1의 mRNA 또는 서열번호 4의 염기 서열(NCBI 데이터베이스상의 승인번호 NM_016551, TM7SF3 mRNA의 cDNA)을 가진 인간 TM7SF3의 mRNA이다.

본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커로 사용되는 TM6SF1 또는 TM7SF3는 각각 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체와 특이적으로 결합하는데, TM6SF1 또는 TM7SF3는 세포 외 도메인이 세포막 표면에 존재하므로 바람직하게는 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체와 특이적으로 결합하는 부위가 TM6SF1의 세포 외 도메인 또는 TM7SF3의 세포 외 도메인다. 상기 TM6SF1의 세포 외 도메인은 특별히 제한되지 않으나 서열번호 5의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하 며, 상기 TM7SF3의 세포 외 도메인 또한 특별히 제한되지 않으나 서열번호 6의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 바이오마커인 TM6SF1 또는 TM7SF3로 진단할 수 있는 백혈병은 크게는 급성 골수성 백혈병을 포함하고, 특히 아형 M5인 급성 단핵구성 백혈병(acute monocytic leukemia)인 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바이오마커인 TM6SF1 또는 TM7SF3은 급성 단핵구성 백혈병 세포인 THP-1 세포, 또는 U937 세포에서 다른 골수성 세포보다 높게 발현되며, 특히 U937 세포에서 그 발현량이 매우 크기 때문이다.

본 발명의 다른 측면은 급성 골수성 백혈병 진단제에 관한 것으로서, 본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단제는 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 유효성분으로 포함한다.

본 발명에서 TM6SF1 또는 TM7SF3는 급성 골수성 백혈병의 바이오마커이므로, 이와 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체를 사용하여 검체 내에서의 TM6SF1 또는 TM7SF3의 발현 여부를 측정하고, 그 발현량을 정량하는 경우 급성 골수성 백혈병 여부를 쉽게 진단할 수 있다. 아울러, 본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단제로 사용되는 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체는 급성 골수성 백혈병 진단 킷트를 제조하는데 이용될 수 있다.

본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단제로 사용되는 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체는 특히 TM6SF1의 세포외 도메인 또는 TM7SF3의 세포 외 도메인과 특이 적으로 결합하는 것을 특징으로 하고, 보다 구체적으로 TM6SF1의 세포외 도메인은 서열번호 5의 염기서열에 의해 암호화되며, TM7SF3의 세포 외 도메인은 서열번호 6의 염기서열에 의해 암호화된다. 상기 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체에는 TM6SF1의 세포외 도메인 또는 TM7SF3의 세포 외 도메인과 특이적으로 결합할 수 있는 것이라면, 특별히 제한되지 않고, 다클론항체, 단일클론항체를 포함하며, 보다 바람직하게는 항원의 특정부위와의 결합 특이성이 뛰어난 단일클론항체가 있다. 또한, 본 발명의 진단제는 유효성분으로 상기 단일클론항체의 기능적인 단편을 포함할 수 있는데, 단일클론항체의 기능적인 단편은 적어도 항원 결합능을 가지는 기능적인 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')2, scFv(Single Chain Variable Fragment), Fv 또는 CDR(complementarity determining region) 단편이 있다.

본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단제로 사용되는 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체를 제조하는 방법으로는 단백질 백신, 또는 유전자 백신으로 마우스, 양, 쥐, 토끼와 같은 포유동물을 면역화하는 방법, 파아지 디스플레이(phage display) 또는 효모 디스플레이(yeast display) 등에 의해 재조합 항체를 생산하는 방법 등이 있고, 유전자 백신을 사용하는 것이 보다 바람직하다. 유전자 백신을 이용하는 경우 박테리아에서 단백질을 정제하는 데 소요되는 많은 노력과 시간을 줄일 수 있고, 단백질의 정제과정이 생략되므로 정제과정에서의 기술적인 제약도 극복할 수 있다. 또한, 유전자 백신에 의한 면역 접종의 경우 항원 단백질이 생체내에서 발현되므로 단백질의 본래의 3차원적인 구조와 동일한 구조를 가지고, 이에 의해 생성된 항체는 세포분리와 같은 목적에 더 적합하다. 특히, 단백질 분리 및 정제가 어려운 세포막 표면 단백질(transmembrane protein)인 TM6SF1 또는 TM7SF3이 항원인 경우 유전자 백신을 이용하여 항체를 생산하는 방법이 보다 유용하다.

본 발명의 진단제와 관련하여 TM6SF1 또는 TM7SF3의 특징, 급성 골수성 백혈병의 범위 및 유래 세포의 특징은 본 발명의 바이오마커에서 언급된 내용과 동일하므로 생략한다.

본 발명의 또 다른 측면은 검체에 본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커를 검출하는 방법에 관한 것으로서, 본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법은 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 접촉시켜 항원-항체 결합 반응을 측정하는 단계를 포함한다.

상기 항원-항체 결합 반응의 측정은 면역조직화학염색법(Immunohistochemistry), 유체 세포 측정법(Flow cytometry), 면역블롯팅(Immunoblotting, 또는 Western blotting), 효소면역측정법(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA) 등을 포함하는 면역염색법(Immunostaining)에 의해 수행될 수 있으며, 보다 바람직하게는 유체 세포 측정법의 특정 타입인 형광활성화 세포분류법(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)에 의해 수행되는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커인 TM6SF1 또는 TM7SF3는 세포 외 도메인이 세포막 표면에 존재하는 세포 표면 단백질이고, 특히 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체는 TM6SF1의 세포외 도메인 또는 TM7SF3의 세포 외 도메인과 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하므로, 세포표면 기반의 형광활성화 세포분류법(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)을 이용하는 경우 검체에 특별한 전처리(예를 들어 세포 용해물(cell lysates)을 얻기 위한 전처리)를 하지 않고도 하므로, 검체 내의 TM6SF1 또는 TM7SF3의 발현 여부 및 그 발현량을 간편하게 측정할 수 있다.

본 발명의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법에서 TM6SF1의 세포외 도메인 또는 TM7SF3의 세포외 도메인의 특징, 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체의 특징, 급성 골수성 백혈병의 범위 및 유래 세포의 특징은 본 발명의 바이오마커 또는 진단제에서 언급한 내용과 동일하므로 생략한다.

본 발명의 또 다른 측면은 급성 골수성 백혈병 치료제에 관한 것으로서, 본 발명의 급성 골수성 백혈병 치료제는 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 유효성분으로 포함한다.

본 발명에서 TM6SF1 또는 TM7SF3는 급성 골수성 백혈병 세포, 특히 THP-1 세포, 또는 U937 세포에 의해 유발되는 급성 단핵구성 백혈병 세포에서 높게 발현되는데, 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체를 투여하여 TM6SF1 또는 TM7SF3과 특이적으로 결합시키고, 이들을 중화(neutralization)시킴으로써, 급성 골수성 백혈병 을 효과적으로 치료할 수 있다. 상기 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체에는 TM6SF1의 세포외 도메인 또는 TM7SF3의 세포 외 도메인과 특이적으로 결합할 수 있는 것이라면, 특별히 제한되지 않고, 다클론항체, 단일클론항체를 포함하며, 보다 바람직하게는 항원의 특정부위와의 결합 특이성이 뛰어난 단일클론항체가 있다. 또한, 본 발명의 치료제는 유효성분으로 상기 단일클론항체의 기능적인 단편을 포함할 수 있는데, 단일클론항체의 기능적인 단편은 적어도 항원 결합능을 가지는 기능적인 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')2, scFv(Single Chain Variable Fragment), Fv 또는 CDR(complementarity determining region) 단편이 있다.

또한, 본 발명에 따른 급성 골수성 백혈병 치료제는 보다 바람직하게는 항-TM6SF1 단일클론항체 또는 항-TM7SF3 단일클론항체에 급성 골수성 백혈병 치료 특성을 가진 독소(toxin), 방사성 동위원소(radioisotope), 그 밖의 활성물질 등과 결합된 형태를 가질 수 있는데, 이 경우 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체는 TM6SF1 또는 TM7SF3를 중화 시킬뿐만 아니라, 급성 골수성 백혈병 치료 특성을 가진 물질을 표적 항원에 전달함으로써 급성 골수성 백혈병의 치료효과를 극대화 시킬 수 있다. 항-TM6SF1 단일클론항체 또는 항-TM7SF3 단일클론항체와 결합되는 급성 골수성 백혈병 치료 특성을 가진 물질의 구체적인 예로서, 칼리키아마이신(Calicheamicin, 세포독소), 시타라빈(cytarabine), 다우노루비신(daunorubicin) 또는 이다루비신(idarubicin)을 포함하는 안트라사이클린(anthracycline), 방사성 동위원소로서 요오드-131(Iodine-131 또는 radioiodine)이 있다.

또한, 본 발명에 따른 급성 골수성 백혈병 치료제는 다양한 제제의 형태로 제조될 수 있고, 일예로 주사제 형태로 제조되어 정맥주사에 의해 환자에게 투여될 수 있다.

본 발명의 급성 골수성 백혈병 치료제에서 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체가 특이적으로 결합하는 TM6SF1의 세포외 도메인 또는 TM7SF3의 세포외 도메인의 특징, 항-TM6SF1 항체 또는 항-TM7SF3 항체의 제조방법, 급성 골수성 백혈병의 범위 및 유래 세포의 특징은 본 발명의 바이오마커 또는 진단제에서 언급한 내용과 동일하므로 생략한다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 구체적으로 설명한다. 다만, 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일뿐, 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 항원 발현 유전자 백신의 제작

실시예 1-1. TM6SF1 항원 발현 유전자 백신의 제작

도 1은 본 발명에 사용되는 TM6SF1 항원 발현 유전자 백신의 모식도이다. 도 1에서 보이는 바와 같이 서열번호 7의 합성된 tpa-MCS-GS linker-ILZ-mCD40Lecd^co 뉴클레오티드와, pGX10 벡터(한국공개특허 제2002-58712호)를 제한효소 KpnI과 XbaI로 자른 후, 리가아제로 연결함으로써 재조합 벡터 pGX10-tpa-MCS-GS linker-ILZ-mCD40Lecd^co 를 제작하였다. tpa(tissue plasminogen activator)는 인간 조직 플리스미노겐 활성화 인자의 신호서열로서 단백질 분비를 촉진하기 위해서 사용하 였고, GS linker는 글리신(glycine), 세린(serine)으로 이루어진 링거(linker)의 염기 서열이며, ILZ(Isoleucine Zipper)는 강제적 삼량화 집행 영역(trimerizaion-enforcing domain)으로 융합 단백질을 삼량화하여 항체 반응을 증가시키고자 하였다. 또한, mCD40Lecd^co(murine CD40 Ligand extracellular domain)는 뮤린 CD40 리간드의 세포 외 도메인으로 마우스에서의 체액성 항체반응을 증가시키는 역할을 수행할 수 있으며, 발현 증진을 위해서 코돈 최적화된 유전자를 이용하고 있다. 상기 재조합 벡터의 MCS(multicloning site; 다중클로닝 부위)에 TM6SF1(서열번호 5) 유전자의 세포 외 도메인에 해당하는 뉴클레오티드[서열번호 5, GenScript사 (Piscataway, NJ, USA)에 합성을 의뢰하여 얻음]를 NotI과 AscI으로 제한한 뒤 연결함으로써 TM6SF1 항원 발현 유전자 백신을 수득하였다.

실시예 1-2. TM7SF3 항원 발현 유전자 백신의 제작

TM7SF3 항원 발현 유전자 백신도 동일한 방법으로 제작하였다.

실시예 2. 유전자 백신의 접종 및 다클론항체(polyclonal antibody)의 생산

실시예 2-1. TM6SF1 항원에 대한 다클론 항체 생산

실시예 1-1에서 제조한 TM6SF1 항원 발현 유전자 백신 100 ㎍을 액체역학 주사법 (hydrodynamic injection; Zhang et al., Hum. Gene Ther. 10: 1735-1737, 1999)에 의해 1 내지 2주 간격으로 Balb/c 마우스에게 5회 접종하였다. 마지막 접 종 전 3일 이내에 마우스의 안구혈관에서 미세모세관 튜브 (microcapillary tube)를 이용하여 혈액을 채취하고, 혈액의 응고 후 혈청만을 회수하여 TM6SF1에 특이적으로 결합하는 다클론항체를 생산하였다.

실시예 2-2. TM7SF3 항원에 대한 다클론항체 생산

TM7SF3에 특이적으로 결합하는 다클론항체도 TM7SF3 항원 발현 유전자 백신을 이용하여 동일한 방법으로 생산하였다.

실시예 3. 효소면역측정법( enzyme - linked immunosorbent assay , ELISA )에 의한 혈청 내 다클론항체의 항원 특이성 확인

실시예 3-1. TM6SF1 항원에 대한 다클론항체의 특이성

TM6SF1 항원 발현 유전자 백신 20㎍을 5×10⁶의 Cos7 세포(한국 세포주 은행)에 전기 자극의 방법으로 넣어서 융합 단백질을 36 내지 48시간 동안 발현시킨 뒤에 3번의 동결융해(freezing & thawing)를 거쳐서 세포 용해물(cell lysates)을 얻었다. 시험을 위한 혈청은 실시예 2-1에서 얻은 혈청을 사용하였고, 혈청 내 다클론항체의 항원 특이성은 샌드위치 효소면역측정법(Sandwich ELISA)을 이용하였다. 먼저 0.5㎍/ml의 항-CD40L 항체(anti-CD40L Ab, 여기서 CD40L은 CD40 ligand를 의미하는 것으로서 CD154와 동일함)를 플레이트의 웰(well)에 50㎕씩 코팅하고 여기에 세포 용해물을 50:1로 50㎕ 넣어준 후에, 시험용 항체로서 실시예 2에서 얻은 혈청을 1:100으로 희석하여 넣어주었다. 그 뒤에 호스래디쉬 퍼록시다아제(horseradish peroxidase; HRP)가 결합된 항-마우스 이뮤노글로불린 G(anti-mouse IgG Ab), 항-마우스 이뮤노글로불린 A(anti-mouse IgA Ab), 항-마우스 이뮤노글로불린 M(anti-mouse IgM Ab)을 1:3000으로 희석하여 넣어주고, 호스래디쉬 퍼록시다아제의 기질(substrate)로서 TMB(substrate, cat #:50-76-00, KPL, USA) 용액 50㎕를 넣어 준 후 10분간 빛을 차단한 조건에서 반응시킨 후 정지액 (2N H₂SO₄) 50㎕를 넣어 반응을 정지 시킨 후 흡광도(optical density, O.D)를 측정하여 정량화 하였다. 음성대조군으로 TM6SF1 항원 발현 유전자 백신을 접종하지 않은 마우스의 혈청을 사용하였다. 실험 결과, 음성대조군과 달리 TM6SF1 항원 발현 유전자 백신을 접종한 마우스의 혈청은 TM6SF1 항원을 포함하는 세포 용해물에 대해서 높은 흡광도(optical density, O.D) 값을 나타내었고, 이는 혈청 내에 TM6SF1 항원, 특히 TM6SF1의 세포 외 도메인에 특이적인 다클론항체가 있음을 의미한다.

실시예 3-2. TM7SF3 항원에 대한 다클론항체의 특이성

TM7SF3 항원 발현 유전자 백신으로부터 얻은 TM7SF3 항원을 포함하는 세포 용해물과 실시예 2-2에서 얻은 혈청을 가지고 동일한 방법으로 실험한 결과, 동일한 결과를 보였다.

실시예 4. 형광활성화 세포분류법( Fluorescence - activated cell sorting , FACS)에 의한 혈청 내 다클론항체의 항원 특이성 확인

실시예 4-1. TM6SF1 항원 세포표면 발현 벡터의 제작

서열번호 8의 tpa-Myc-MCS-CD4ΔTM-IRES-EGFP 뉴클레오티드를 합성하고, KpnI과 XbaI 제한효소를 이용하여 pGX10 벡터(한국공개특허 제2002-58712호)에 상기 뉴클레오티드를 삽입하였다. 상기의 방법으로 수득한 pGX10-tpa-Myc-MCS-CD4ΔTM-IRES-EGFP 벡터에 HindIII 제한효소를 처리하여 점착성 말단(cohesive end)을 만들고, Klenow 효소로 점착성 말단(cohesive end)을 평활성 말단(blunt end) 형태로 만들었다. 이어서, XbaI 제한효소를 처리함으로써 tpa-Myc-MCS-CD4ΔTM-IRES-EGFP를 포함하는 뉴클레오티드를 수득하였다.

또한, 네오마이신-저항성 유전자(neomycin-resistance gene; neo)을 포함하는 pCI-neo(Cat #: E1841, Promega, USA) 벡터를 제한효소 SalI과 NotI으로 처리한 뒤, Klenow 효소를 이용하여 점착성 말단을 평활성 말단 형태로 만들고, 이를 다시 리가아제(ligase)를 이용하여 연결하였다. 상기의 방법으로 처리한 pCI-neo를 제한효소 XhoI으로 절단하고 Klenow 효소를 이용하여 점착성 말단을 평활성 말단 형태로 만든 후, 다시 XbaI 제한효소를 처리하였다.

XbaI 제한효소를 처리한 pCIN 벡터에 XbaI 제한효소를 처리한 tpa-Myc-MCS-CD4ΔTM-IRES-EGFP를 포함하는 뉴클레오티드를 도입하고 리가아제를 처리하여, 항원을 세포표면에 발현하는 벡터인 pCIN-tpa-Myc-MCS-CD4ΔTM-IRES-EGFP(도 2)를 수득하였다.

TM6SF1의 세포 외 도메인을 암호화하는 유전자(서열번호 5)를 NotI과 AscI의 제한효소로 처리하고, 동일한 제한효소로 처리한 pCIN-tpa-Myc-MCS-CD4ΔTM-IRES-EGFP 벡터에 삽입한 후 리가제로 결합하여 TM6SF1 항원 세포표면 발현 벡터를 제작하였다.

TM6SF1 항원 세포표면 발현 벡터에서 내부 리보솜 부착 부위(Internal Ribosome Entry Site, IRES)는 두 개의 유전자에 대해 전사는 한번 일어나지만 단백질의 번역은 두 번 이상 일어날 수 있도록 하는 염기서열로, 두 유전자 사이에 삽입함으로써 하나의 프로모터에 의해 여러 유전자를 동시에 발현시키도록 한다. 녹색형광단백질(Enhanced green fluorescence protein, EGFP)은 리포터 단백질로 사용되었고, 네오마이신 저항성 유전자(neomycine-resistance gene, neo)는 마커 유전자로 사용되었다. 상기 neo를 포함하는 재조합 발현 벡터에 의해 형질전환된 숙주세포는 아미노글라이코사이드(aminoglycoside) 계열 항생제에 대한 저항성을 가짐으로써, 배지 내에 G418과 같은 항생제를 처리함으로써 보다 안정적으로 형질전환된 세포를 선별할 수 있다. tpa(tissue plasminogen activator)는 인간 조직 플리스미노겐 활성화 인자의 신호서열로서 항원을 암호화하는 유전자의 5' 말단 쪽에 위치하여 항원이 숙주세포의 표면에서 발현할 수 있도록 유도하는 역할을 수행한다. 상기 신호서열과 함께 CD4의 막통과영역(CD4 transmembrane domain, CD4ΔTM)을 코딩하는 뉴클레오티드를 항원 코딩 뉴클레오티드의 3' 말단 쪽에 위치시킴으로써, 항원이 숙주세포의 표면에 발현되고, 배양된 숙주세포에 대한 별도의 처리 없이, 숙주세포를 항체를 포함할 것으로 추정되는 생물학적 시료와 직접 접촉시켜 항체 검출을 수행할 수 있다.

실시예 4-2. TM7SF3 항원 세포표면 발현 벡터의 제작

TM7SF3의 세포 외 도메인을 암호화하는 유전자(서열번호 6)를 NotI과 AscI의 제한효소로 처리하고, 동일한 제한효소로 처리한 pCIN-tpa-Myc-MCS-CD4ΔTM-IRES-EGFP 벡터에 삽입한 후 리가제로 결합하여 실시예 4-1과 동일한 방법으로 TM7SF3 항원 세포표면 발현 벡터를 제작하였다.

실시예 4-3. TM6SF1 항원에 대한 다클론항체의 특이성

실시예 4-1에서 제작한 TM6SF1 항원 세포표면 발현 벡터를 Cos7 세포(한국세포주 은행)에 형질감염(transfection)함으로써 FACS용 세포를 수득하였다. 구체적으로, 5×10⁶의 Cos7 세포를 300㎕의 세포배양액(10%의 Bovine serum을 가진 DMEM)에 준비하고, 실시예 4-1에서 제작한 TM6SF1 항원 세포표면 발현 벡터 20㎍을 섞은 후, 전기천공(Electroporation)용 큐벳(Cat #: 165-2588, Bio-Rad, USA)에 옮겨서 240V에서 전기자극을 주어 Cos7 세포 내로 발현 벡터를 전달하였다. 한편, 음성대조군으로 항원 유전자가 삽입되지 않은 녹색형광단백질(Enhanced green fluorescence protein, EGFP) 발현용 벡터를 위와 동일한 방법으로 Cos7 세포 내로 전달하여 사용하였다. 전기자극을 받은 Cos7 세포는 세포 배양액을 이용하여 37℃ CO2 인큐베이터에서 36 내지 48 시간 배양하였다.

배양한 세포를 수거하여 FACS 완충액(0.5% FBS, 0.09% Sodium azide의 PBS) 로 세척한 뒤, ⅰ) 실시예 2-1에서 얻은 혈청(TM6SF1 항원 발현 유전자 백신을 접종한 마우스에서 얻은 혈청), ⅱ) 음성대조군으로 갠키린(gankyrin) 항원 단백질을 발현하는 유전자 백신을 접종한 마우스에서 얻은 혈청을 FACS 완충액에 1:100으로 희석하여 반응시켰다. 결합하지 않은 항체는 FACS 완충액으로 씻어낸 후, FACS 분석용 염료가 연결된 항-마우스(anti-mouse) Ig-APC 2차 항체와 결합시키고 마지막 세척 후, FACS 분석을 수행하였다.

실시예 4-4. TM7SF3 항원에 대한 다클론항체의 특이성

실시예 4-2에서 제작한 TM7SF3 항원 세포표면 발현 벡터 및 실시예 2-2에서 얻은 혈청(TM7SF3 항원 발현 유전자 백신을 접종한 마우스에서 얻은 혈청)을 사용한 것을 제외하고는 실시예 4-3과 동일한 방법으로 FACS 분석을 수행하였다.

도 3은 TM6SF1 또는 TM7SF3 항원 발현 유전자 백신이 투여된 마우스의 혈청에 포함된 다클론항체의 항원 반응성을 세포기반의 FACS 분석법으로 확인한 결과이다. 도 3에서 보이는 바와 같이 캔키린(gankyrin) 항원 단백질을 발현하는 유전자 백신을 접종한 마우스에서 얻은 혈청은 TM6SF1 또는 TM7SF3 항원을 발현하는 Cos7 세포에 반응을 하지 않는 반면에, TM6SF1 또는 TM7SF3 항원 발현 유전자 백신을 접종한 마우스에서 얻은 혈청은 TM6SF1 또는 TM7SF3 항원을 각각 세포 표면에 발현하는 Cos7 세포에 반응하였다. 또한, 항원을 발현하지 않고, 녹색형광단백질(Enhanced green fluorescence protein, EGFP)만 발현하는 Cos7 세포에는 모든 혈청이 반응하지 않았다. 상기 결과로부터, 실시예 2-1에서 얻은 혈청은 TM6SF1에 특이적으로 결합하는 다클론항체를, 실시예 2-2에서 얻은 혈청은 TM7SF3에 특이적으로 결합하는 다클론항체를 포함하고 있음을 알 수 있다.

실시예 5. 하이브리도마 세포 제작 및 단일클론항체( monoclonal antibody ) 생산

실시예 5-1. 항-TM6SF1 단일클론항체 생산

실시예 2-1에서 마지막 접종 후 마우스로부터 비장을 분리하고 적혈구를 용해시켜 얻은 세포를 카운트(counting) 한 후 골수종 세포(myeloma cell)인 SP2/O와 5:1로 섞어주었다. 10mM HEPES[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid] 완충액를 함유한 DMEM(Dulbecco's Modified Essential Medium)으로 3번 세척 한 후, 세포가 잘 퍼지도록 한 상태에서 미리 데운(pre-warmed) PEG(Polyethylene glycol) 1㎖을 1분 내에 떨어뜨려 세포융합을 진행하였다. 미리 데운 10mM HEPES 완충액을 함유한 DMEM 완충액 1㎖을 1분내에 떨어뜨린 후 10mM HEPES를 함유한 DMEM 10㎖를 동일한 방법으로 2번 떨어뜨렸다. 세포를 상층액과 분리한 후 HAT 배지(Hypoxanthine-Aminopterin-Thymidine media)와 조건배지(conditioned media, SP2를 16시간 정도 배양했었던 DMEM)를 1:1로 섞어서 200㎕씩 96-well 플레이트(plate)에 분주하였다.

2-3일 간격으로 HAT 배지로 교체해 준 후 융합(fusion)한 지 11일째부터 하이브리도마 클론(hybridoma clone)의 융합상태(confluence)가 50% 이상일 때 스크 리닝(screening)을 수행하였다. 스크리닝(Screening)은 실시예 3-1과 같은 방법으로 진행하였고, 양성대조군으로 실시예 2-1에서 얻은 혈청(TM6SF1 항원 발현 유전자 백신을 접종한 마우스에서 얻은 혈청)을 사용하였다. 양성대조군보다 높은 흡광도(Optical Density, O.D) 값을 보이는 것을 선택하여 24-well로 옮겨주었다. 초기 하이브리도마 클론(hybridoma clone)은 96 well 당 200개의 세포를 분주하고 10일간 배양하여 단일 콜로니(colony)가 형성된 것만 선택하여 스크리닝(screening) 하였고 양성으로 나온 것은 다시 키워서 50개의 세포를 분주하여 한 번 더 스크리닝(screening)하여 최종 하이브리도마(hybridoma) 세포를 선택하였다.

최종 하이브리도마 세포로부터 항-TM6SF1 단일클론항체를 생산하기 위하여 마우스 복강(abdominal cavity) 내에 프리스탄(pristane) 0.5㎖를 주사하였다. 프리스탄(pristane) 투여 7일 후 마우스 복강 내에 무혈청(serum-free) DMEM으로 2번 세척한 하이브리도마(hybridoma) 세포 5×10⁶ ~ 1×10⁷ 을 주사하였다. 3 내지 5일 간격으로 확인하여 복강에 복수(ascites)가 가득 찼을 때 18G 주사 바늘을 이용하여 복수를 뽑았다. 복수를 실온에서 1~2시간 방치 후 4℃에서 3,500rpm으로 30분간 원심 분리하여 노란 지방층을 포함한 덩어리 물질을 제거하고 상층액만을 분리하였다. 분리한 상층액은 분주하여 -20℃에 보관하였으며, 복수 상층액에 포함되어 있는 항-TM6SF1 단일클론항체를 GX-13 mAb로 명명하였다.

실시예 5-2. 항-TM7SF3 단일클론항체 생산

실시예 2-2에서 마지막 접종 후 마우스로부터 비장을 분리하고, 하이브리도마(hybridoma) 세포 스크리닝 과정에서 실시예 3-2와 같은 방법으로 진행하고, 양성대조군으로 실시예 2-2에서 얻은 혈청(TM7SF3 항원 발현 유전자 백신을 접종한 마우스에서 얻은 혈청)을 사용한 점을 제외하고는 실시예 5-1과 동일한 방법을 사용하였다. 분리한 상층액은 분주하여 -20℃에 보관하였으며, 복수 상층액에 포함되어 있는 항-TM7SF3 단일클론항체를 GX-28 mAb로 명명하였다.

실시예 6. 단일클론항체와 골수성(Myeloid) 세포와의 반응성 실험

실시예 5-1에서 얻은 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb를 포함하는 복수 상층액, 실시예 5-2에서 얻은 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb를 포함하는 복수 상층액과 다양한 인간 세포와의 반응성을 FACS 분석 방법을 통해 조사하였다. 구체적으로, 멜론 젤 단클론 IgG 정제 킷트(Melon^TM Gel Monoclonal IgG Purification kit, cat #:45214, Pirece, USA)를 이용하여 정제한 복수 상층액(항체)을 FACS 완충액에 3:7로 희석한 후 100㎕를 다양한 인간 세포 (1×10⁶ cell을 사용)와 반응시켰다. 결합하지 않은 항체는 FACS 완충액으로 씻어낸 후, FACS 분석용 염료가 연결된 항-마우스(anti-mouse) Ig-APC (cat #: 550826, BD pharmingen, USA) 2차 항체와 결합시키고 마지막 세척 후, FACS 분석을 수행하였다. 이때 영점(background level)은 정제된 이소타입 컨트롤(Purified isotype control Ab)을 이용하여 평가되었다.

표 1은 복수 상층액에 포함된 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb, 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb와 비골수성(non-myeloid) 세포(햄스터, 원숭이, 인간 유래)와의 반응성 결과를 나타낸 것이다. 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb 및 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb는 비골수성 세포와 거의 반응하지 않는 것을 알 수 있다.

표 2는 복수 상층액에 포함된 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb, 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb와 인간 유래 골수성 세포와의 반응성 결과를 나타낸 것이다. 또한, 도 4는 복수 상층액에 포함된 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb, 또는 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb와 U937 인간 유래 골수성 세포와의 반응성을 세포기반의 FACS 분석법으로 확인한 결과이다. 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb, 및 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb는 단핵 백혈구(monocyte)에서 유래된 급성 골수성 백혈병 세포인 THP-1 세포와 U937 세포에 특이적으로 결합하는 것을 알 수 있다 .

실시예 6의 결과로부터 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb에 특이적으로 결합하는 TM6SF1 항원과 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb에 특이적으로 결합하는 TM7SF3 항원은 급성 골수성 백혈병 세포, 특히 급성 단핵구성 백혈병 세포에서 높게 발현되므로 급성 골수성 백혈병의 바이오마커로 사용될 수 있다. 또한, 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb 또는 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb를 사용하여 TM6SF1 항원과 TM7SF3 항원를 검출하고 정량하는 경우 급성 골수성 백혈병을 진단할 수 있고, 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb 또는 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb를 급성 골수성 백혈병 환자에게 투여하여 TM6SF1 또는 TM7SF3를 중화시킴으로써 급성 골수성 백혈병을 치료할 수 있다.

도 1은 본 발명에 사용되는 TM6SF1 항원 발현 유전자 백신의 모식도이고, 도 2는 항원을 세포표면에 발현하는 벡터인 pCIN-tpa-Myc-MCS-CD4ΔTM-IRES-EGFP의 모식도이다.

도 3은 TM6SF1 또는 TM7SF3 항원 발현 유전자 백신이 투여된 마우스의 혈청에 포함된 다클론항체의 항원 반응성을 세포기반의 FACS 분석법으로 확인한 결과이고, 도 4는 복수 상층액에 포함된 항-TM6SF1 단일클론항체 GX-13 mAb, 또는 항-TM7SF3 단일클론항체 GX-28 mAb와 U937 인간 유래 골수성 세포와의 반응성을 세포기반의 FACS 분석법으로 확인한 결과이다.

<110> Genexine Co., Ltd. <120> Novel biomarker specific for acute myeloid leukemia and drug using the antibody <130> P08-06223 <160> 8 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 370 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ser Ala Ser Ala Ala Thr Gly Val Phe Val Leu Ser Leu Ser Ala 1 5 10 15 Ile Pro Val Thr Tyr Val Phe Asn His Leu Ala Ala Gln His Asp Ser 20 25 30 Trp Thr Ile Val Gly Val Ala Ala Leu Ile Leu Phe Leu Val Ala Leu 35 40 45 Leu Ala Arg Val Leu Val Lys Arg Lys Pro Pro Arg Asp Pro Leu Phe 50 55 60 Tyr Val Tyr Ala Val Phe Gly Phe Thr Ser Val Val Asn Leu Ile Ile 65 70 75 80 Gly Leu Glu Gln Asp Gly Ile Ile Asp Gly Phe Met Thr His Tyr Leu 85 90 95 Arg Glu Gly Glu Pro Tyr Leu Asn Thr Ala Tyr Gly His Met Ile Cys 100 105 110 Tyr Trp Asp Gly Ser Ala His Tyr Leu Met Tyr Leu Val Met Val Ala 115 120 125 Ala Ile Ala Trp Glu Glu Thr Tyr Arg Thr Ile Gly Leu Tyr Trp Val 130 135 140 Gly Ser Ile Ile Met Ser Val Val Val Phe Val Pro Gly Asn Ile Val 145 150 155 160 Gly Lys Tyr Gly Thr Arg Ile Cys Pro Ala Phe Phe Leu Ser Ile Pro 165 170 175 Tyr Thr Cys Leu Pro Val Trp Ala Gly Phe Arg Ile Tyr Asn Gln Pro 180 185 190 Ser Glu Asn Tyr Asn Tyr Pro Ser Lys Val Ile Gln Glu Ala Gln Ala 195 200 205 Lys Asp Leu Leu Arg Arg Pro Phe Asp Leu Met Leu Val Val Cys Leu 210 215 220 Leu Leu Ala Thr Gly Phe Cys Leu Phe Arg Gly Leu Ile Ala Leu Asp 225 230 235 240 Cys Pro Ser Glu Leu Cys Arg Leu Tyr Thr Gln Phe Gln Glu Pro Tyr 245 250 255 Leu Lys Asp Pro Ala Ala Tyr Pro Lys Ile Gln Met Leu Ala Tyr Met 260 265 270 Phe Tyr Ser Val Pro Tyr Phe Val Thr Ala Leu Tyr Gly Leu Val Val 275 280 285 Pro Gly Cys Ser Trp Met Pro Asp Ile Thr Leu Ile His Ala Gly Gly 290 295 300 Leu Ala Gln Ala Gln Phe Ser His Ile Gly Ala Ser Leu His Ala Arg 305 310 315 320 Thr Ala Tyr Val Tyr Arg Val Pro Glu Glu Ala Lys Ile Leu Phe Leu 325 330 335 Ala Leu Asn Ile Val Tyr Gly Val Leu Pro Gln Leu Leu Ala Tyr Arg 340 345 350 Cys Ile Tyr Lys Pro Glu Phe Phe Ile Lys Thr Lys Ala Glu Glu Lys 355 360 365 Val Glu 370 <210> 2 <211> 570 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Gly Phe Leu Gln Leu Leu Val Val Ala Val Leu Ala Ser Glu His 1 5 10 15 Arg Val Ala Gly Ala Ala Glu Val Phe Gly Asn Ser Ser Glu Gly Leu 20 25 30 Ile Glu Phe Ser Val Gly Lys Phe Arg Tyr Phe Glu Leu Asn Arg Pro 35 40 45 Phe Pro Glu Glu Ala Ile Leu His Asp Ile Ser Ser Asn Val Thr Phe 50 55 60 Leu Ile Phe Gln Ile His Ser Gln Tyr Gln Asn Thr Thr Val Ser Phe 65 70 75 80 Ser Pro Thr Leu Leu Ser Asn Ser Ser Glu Thr Gly Thr Ala Ser Gly 85 90 95 Leu Val Phe Ile Leu Arg Pro Glu Gln Ser Thr Cys Thr Trp Tyr Leu 100 105 110 Gly Thr Ser Gly Ile Gln Pro Val Gln Asn Met Ala Ile Leu Leu Ser 115 120 125 Tyr Ser Glu Arg Asp Pro Val Pro Gly Gly Cys Asn Leu Glu Phe Asp 130 135 140 Leu Asp Ile Asp Pro Asn Ile Tyr Leu Glu Tyr Asn Phe Phe Glu Thr 145 150 155 160 Thr Ile Lys Phe Ala Pro Ala Asn Leu Gly Tyr Ala Arg Gly Val Asp 165 170 175 Pro Pro Pro Cys Asp Ala Gly Thr Asp Gln Asp Ser Arg Trp Arg Leu 180 185 190 Gln Tyr Asp Val Tyr Gln Tyr Phe Leu Pro Glu Asn Asp Leu Thr Glu 195 200 205 Glu Met Leu Leu Lys His Leu Gln Arg Met Val Ser Val Pro Gln Val 210 215 220 Lys Ala Ser Ala Leu Lys Val Val Thr Leu Thr Ala Asn Asp Lys Thr 225 230 235 240 Ser Val Ser Phe Ser Ser Leu Pro Gly Gln Gly Val Ile Tyr Asn Val 245 250 255 Ile Val Trp Asp Pro Phe Leu Asn Thr Ser Ala Ala Tyr Ile Pro Ala 260 265 270 His Thr Tyr Ala Cys Ser Phe Glu Ala Gly Glu Gly Ser Cys Ala Ser 275 280 285 Leu Gly Arg Val Ser Ser Lys Val Phe Phe Thr Leu Phe Ala Leu Leu 290 295 300 Gly Phe Phe Ile Cys Phe Phe Gly His Arg Phe Trp Lys Thr Glu Leu 305 310 315 320 Phe Phe Ile Gly Phe Ile Ile Met Gly Phe Phe Phe Tyr Ile Leu Ile 325 330 335 Thr Arg Leu Thr Pro Ile Lys Tyr Asp Val Asn Leu Ile Leu Thr Ala 340 345 350 Val Thr Gly Ser Val Gly Gly Met Phe Leu Val Ala Val Trp Trp Arg 355 360 365 Phe Gly Ile Leu Ser Ile Cys Met Leu Cys Val Gly Leu Val Leu Gly 370 375 380 Phe Leu Ile Ser Ser Val Thr Phe Phe Thr Pro Leu Gly Asn Leu Lys 385 390 395 400 Ile Phe His Asp Asp Gly Val Phe Trp Val Thr Phe Ser Cys Ile Ala 405 410 415 Ile Leu Ile Pro Val Val Phe Met Gly Cys Leu Arg Ile Leu Asn Ile 420 425 430 Leu Thr Cys Gly Val Ile Gly Ser Tyr Ser Val Val Leu Ala Ile Asp 435 440 445 Ser Tyr Trp Ser Thr Ser Leu Ser Tyr Ile Thr Leu Asn Val Leu Lys 450 455 460 Arg Ala Leu Asn Lys Asp Phe His Arg Ala Phe Thr Asn Val Pro Phe 465 470 475 480 Gln Thr Asn Asp Phe Ile Ile Leu Ala Val Trp Gly Met Leu Ala Val 485 490 495 Ser Gly Ile Thr Leu Gln Ile Arg Arg Glu Arg Gly Arg Pro Phe Phe 500 505 510 Pro Pro His Pro Tyr Lys Leu Trp Lys Gln Glu Arg Glu Arg Arg Val 515 520 525 Thr Asn Ile Leu Asp Pro Ser Tyr His Ile Pro Pro Leu Arg Glu Arg 530 535 540 Leu Tyr Gly Arg Leu Thr Gln Ile Lys Gly Leu Phe Gln Lys Glu Gln 545 550 555 560 Pro Ala Gly Glu Arg Thr Pro Leu Leu Leu 565 570 <210> 3 <211> 1440 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 ggggcggggc gcccagcggg atgcggtgaa gggcgagcgg cgcggcggct gcgatgagtg 60 cctctgcggc caccggggtc ttcgtgctgt ccctctcggc catcccggtc acctatgtct 120 tcaaccacct ggcggcccag catgattcct ggactattgt aggggttgct gccctcatcc 180 tgttcctggt agcactgctg gctcgtgtcc tcgtcaaaag aaaaccaccc cgggacccac 240 tgttctatgt gtatgcagtt tttggattta ccagcgtggt gaacctcatc ataggactgg 300 agcaagatgg aatcattgac gggttcatga cacactactt gagagagggt gaaccgtatc 360 tgaacaccgc atatgggcac atgatctgct actgggatgg ctctgctcat tatctgatgt 420 acctggtgat ggtggcagcc atagcatggg aggaaactta tagaaccatt ggcctatatt 480 gggttggatc tattattatg agtgttgttg tttttgtgcc aggaaacatt gtagggaagt 540 atggaacacg aatttgccct gcttttttct taagcatacc atatacttgt cttcctgtct 600 gggctggttt cagaatctat aatcagccat cagaaaatta taattacccc tcaaaggtta 660 ttcaagaagc ccaagcgaaa gacctgctga gaagaccatt tgatttaatg ttggttgtgt 720 gtctcctcct ggcaactgga ttttgcctgt tcagaggttt gattgctttg gattgcccat 780 ctgagctctg ccgattatat acgcaatttc aagagcccta tctaaaggat cctgctgctt 840 atcctaaaat tcagatgctg gcatatatgt tctattctgt tccttacttt gtgactgcac 900 tgtatggctt agtggttcct ggatgttcct ggatgcctga catcacattg atacatgctg 960 gaggtctggc tcaggctcag ttttctcaca ttggtgcatc tcttcatgct agaactgctt 1020 atgtctacag agtccctgaa gaagcaaaaa tccttttttt agcattaaac atagtatatg 1080 gagttcttcc tcagctcttg gcctatcgtt gtatctacaa accagagttc ttcataaaaa 1140 caaaggcaga agaaaaagtg gaataaaaat attacttcat gttcctcctt tctaaattac 1200 taacttttgt tatactggta ctgatatttt gtcccatttc actctcttct catacgtgag 1260 tacttaagaa tatgtacatt cttgctctgc actgtatgtg tgagctatat ggtattgtgt 1320 aaattttttt tgaaggaaaa tggaaattct tgagaaacag tttgtttaaa gaaatatatt 1380 caaaatcatt tgtgaataaa cttgatcatc catctcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1440 1440 <210> 4 <211> 2527 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 ccagccctgg cgtgggccca gcccggccca ggcagcaatg gggttcctgc agctgctggt 60 cgtagcggtg ctggcatccg aacaccgggt ggctggtgca gccgaggtct tcgggaattc 120 cagcgagggt cttattgaat tttctgtggg gaaatttaga tacttcgagc tcaataggcc 180 ctttccagag gaagctattt tgcatgatat ttcaagcaat gtgacttttc ttattttcca 240 aatacactca cagtatcaga atacaactgt ttccttttct ccgactctcc tttccaattc 300 ctcggaaaca ggcactgcca gtggactggt tttcatcctt agaccagagc agagtacatg 360 cacttggtac ttggggactt caggcataca gcctgtccag aatatggcta tcctactctc 420 ctactcagaa agagatcctg tccctggagg ctgtaatttg gagttcgatt tagatattga 480 tcccaacatt tacttggagt ataatttctt tgaaacgact atcaagtttg ccccagcaaa 540 cctaggctat gcgagaggcg tagatccccc accatgtgac gctgggacag accaggactc 600 caggtggagg ttgcagtatg atgtctatca gtattttctg cctgagaatg acctcactga 660 ggagatgttg ctgaagcatc tgcagaggat ggtcagtgtg ccccaggtga aggccagtgc 720 tctcaaggtg gttaccctaa cagctaatga taagacaagt gtttccttct cctccctccc 780 gggacaaggt gtcatataca atgtcattgt ttgggacccg tttctaaata catctgctgc 840 ctacattcct gctcacacat acgcttgcag ctttgaggca ggagagggta gttgtgcttc 900 cctaggaaga gtgtcttcca aagtgttctt cactcttttt gccctgcttg gtttcttcat 960 ttgtttcttt ggacacagat tctggaaaac agaattattc ttcataggct ttatcatcat 1020 gggattcttc ttttatatac tgattacaag actgacacct atcaagtatg atgtgaatct 1080 gattctgaca gctgtcactg gaagcgtcgg tggaatgttc ttggtagctg tgtggtggcg 1140 atttggaatc ctctcgatct gcatgctctg tgttggacta gtgctggggt tcctcatctc 1200 gtcagtgact ttctttactc cactgggaaa cctaaagatt tttcatgatg atggtgtatt 1260 ctgggtcact ttctcttgca tagctatcct cattccagta gttttcatgg gctgcctaag 1320 aatactgaac atactgactt gtggagtcat tggctcctat tcggtggttt tagccattga 1380 cagttactgg tccacaagcc tttcctacat cactttgaac gtactcaaga gagcgctcaa 1440 caaggatttc cacagagctt tcacaaatgt gccttttcaa actaatgact tcattatcct 1500 ggcagtatgg ggcatgctgg ctgtaagtgg aattacgtta cagattcgaa gagagagagg 1560 acgaccgttc ttccctcccc acccatacaa gttatggaag caagagagag agcgccgagt 1620 gacaaacatt ctggacccta gctaccacat tcctccattg agagagaggc tctatggccg 1680 attaacccag attaaagggc tcttccagaa ggagcagcca gctggagaga gaacgccttt 1740 gcttctgtag atgcccaggg gcttggtcag tgtgcctcag ctttggagtt catgcctgga 1800 gtggttcaac agtctctggt gcaagtctaa taagagatca ggcatatata tctgttcttt 1860 gcataatatt atggtgccct tattgatata tggtaagggt gtactagggg attaggatga 1920 ttgtaagaga atgagaaaga tgaccaaaag gttggtggta gggaggcttt ttcttatttc 1980 caaatacttg agaaattacc ttttggttta caaatctatg atcaacttat tccattaaat 2040 agatacatta aaaaaattaa aaactgcaaa aaaaaaaaaa aaactggtgt ttctttttat 2100 aaccccttga aacaagtctc tcacctgagc ctgtctaaac tttcggaggg agtttattat 2160 tgagtcttta tctgtgacag tatttggaga tttagggatt tgatacttag gcctttgaat 2220 tttagaatac aaaaagagaa gcaagccaga catggtggct cacacctgta atcccaatac 2280 tgggaagcca aggtgggagt atcgcttgag cccaggagtt tgagaccgac atgggcaaca 2340 tgacaagacc ccatctctac aaaaaaaatt aaaaaattag ccaggcatgg tggcacatgc 2400 ctactcccag ctcccaagga gactgagatg ggaggatccc tggagccctg aagattgagg 2460 ctacagtgag ccttgattgt gtcactgcac tccagcttgg gtgacagaga ccctgtctcg 2520 agaaatt 2527 <210> 5 <211> 267 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> extracellular domain gene of transmembrane 6 superfamily member 1(TM6SF1) <400> 5 gagcaggatg gaattatcga tggttttatg actcactatc tgagggaagg cgaaccatac 60 ctgaacacag cttacgggca tggcagtggt agcgggtccg gtagcggctc tttggactgc 120 ccttcagagc tctgtcgact atacacccag ttccaggagc cttatctgaa ggatcccgca 180 gcgtacccca agggatctgg ttccggatcg gggagcggta gtaagcctga gttctttatc 240 aaaacaaagg ccgaggagaa agtggag 267 <210> 6 <211> 981 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> extracellular domain gene of transmembrane 7 superfamily member 3(TM7SF3) <400> 6 gcagaggtct ttggcaactc ttcggaggga ttaattgagt tctcagttgg gaagttccgg 60 tacttcgaac tgaaccgtcc tttcccagag gaagctatcc tgcacgatat cagctccaat 120 gtcacattcc ttatcttcca gattcactcc caataccaaa acacaactgt gtccttttca 180 cccacgctcc tttctaactc gagcgaaacg ggcacagctt caggactggt gtttatcttg 240 cgcccagagc agtctacatg cacttggtac ctgggaacaa gcggcattca gccagtgcag 300 aacatggcga tattgctgag ttattctgaa agagatcccg taccaggtgg ctgcaacttg 360 gaatttgacc tggacataga tcctaatatc tacctagagt ataacttttt tgagactacc 420 atcaaatttg ctcccgcgaa tctggggtac gcacggggag ttgatcctcc cccgtgtgac 480 gccggcacag accaagacag ccggtggcga ctgcagtatg acgtctacca gtattttctc 540 ccggaaaatg accttaccga ggaaatgtta ctcaaacatt tacagaggat ggtgagcgtg 600 ccacaggtta aagcatctgc cctgaaggtt gtgaccttga ccgctaatga caagaccagc 660 gtgtctttct ccagtctccc tggtcagggg gtgatctaca acgtcattgt atgggatccc 720 ttcctgaaca caagcgccgc ctatattcca gcacatacct atgcctgtag tttcgaggcg 780 ggcgaaggaa gttgcgcatc cctgggacgt gtgtcttcta aagggtccgg cagtgggagc 840 gggagtggga gtacccctct gggaaatcta aagatattcc atgatgacgg agtgggcagc 900 ggaagcggga gcggctcagg cagcctgaat gtcctaaaga gagcactgaa taaggacttc 960 caccgggcct tcaccaatgt c 981 <210> 7 <211> 901 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> tpa MCS GS linker ILZ mCD40Lecd nucleotide <400> 7 ggtaccgcca ccatggatgc tatgaaacgg ggcctgtgct gcgtgctgct cctgtgcggc 60 gctgtgtttg tgagccctag cgctgcggcc gcacgatcga tgatatcgct agctaggcgc 120 gccggcagcg gcagcggcag cggcagcggc agccgatcga gaatgaagca gatcgaggac 180 aaaattgagg aaatcctgtc caagatttac cacatcgaga acgagatcgc ccggattaag 240 aaactcattg gcgagaggag acgcgccaag gtggaggagg aggtgaacct gcatgaggac 300 ttcgtgttca tcaagaagct gaagaggtgc aacaagggcg agggcagcct gagcctgctg 360 aactgcgagg agatgaggag gcagttcgag gacctggtga aggacatcac cctgaacaag 420 gaggagaaga aggagaacag cttcgagatg cagaggggcg acgaggaccc ccagatcgcc 480 gcccatgtgg tgagcgaggc caacagcaac gccgccagcg tgctgcagtg ggccaagaag 540 ggctactaca ccatgaagag caacctggtg atgctggaga acggcaagca gctgaccgtg 600 aagagggagg gcctgtacta cgtgtacacc caggtgacct tctgcagcaa cagggagccc 660 agcagccaga ggcccttcat cgtgggcctg tggctgaagc ccagcagcgg cagcgagagg 720 atcctgctga aggccgccaa cacccatagc agcagccagc tgtgcgagca gcagagcgtg 780 catctgggcg gcgtgttcga gctgcaggcc ggcgccagcg tgttcgtgaa cgtgaccgag 840 gccagccagg tgatccatag ggtgggcttc agcagcttcg gcctgctgaa gctgctctag 900 a 901 <210> 8 <211> 1721 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> tpa Myc MCS CD4deltaTM IRES EGFP nucleotide <400> 8 ggtaccgcca ccatggatgc tatgaaacgg ggcctgtgct gcgtgctgct cctgtgcggc 60 gctgtgtttg tgagccctag cgctgagcag aaactcatct ctgaagagga tctggcggcc 120 gcacgatcga tgatatcgct agctaggcgc gccctgagtg aaggtgataa ggtcaagatg 180 gactccagga tccaggtttt atccagaggg gtgaaccaga cagtgttcct ggcttgcgtg 240 ctgggtggct ccttcggctt tctgggtttc cttgggctct gcatcctctg ctgtgtcagg 300 tgccggcacc aacagcgcca ggcagcacga atgtctcaga tcaagaggct cctcagtgag 360 aagaagacct gccagtgccc ccaccggatg cagaagagcc ataatctcat ctgagaattc 420 cccctctccc tccccccccc ctaacgttac tggccgaagc cgcttggaat aaggccggtg 480 tgtgtttgtc tatatgtgat tttccaccat attgccgtct tttggcaatg tgagggcccg 540 gaaacctggc cctgtcttct tgacgagcat tcctaggggt ctttcccctc tcgccaaagg 600 aatgcaaggt ctgttgaatg tcgtgaagga agcagttcct ctggaagctt cttgaagaca 660 aacaacgtct gtagcgaccc tttgcaggca gcggaacccc ccacctggcg acaggtgcct 720 ctgcggccaa aagccacgtg tataagatac acctgcaaag gcggcacaac cccagtgcca 780 cgttgtgagt tggatagttg tggaaagagt caaatggctc tcctcaagcg tagtcaacaa 840 ggggctgaag gatgcccaga aggtacccca ttgtatggga atctgatctg gggcctcggt 900 gcacatgctt tacatgtgtt tagtcgaggt taaaaaagct ctaggccccc cgaaccacgg 960 ggacgtggtt ttcctttgaa aaacacgatg ataatatggt gagcaagggc gaggagctgt 1020 tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca 1080 gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa gctgaccctg aagttcatct 1140 gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt gaccaccctg acctacggcg 1200 tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca 1260 tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga 1320 cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca 1380 tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc 1440 acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat caaggtgaac ttcaagatcc 1500 gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca 1560 tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct gagcacccag tccgccctga 1620 gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg 1680 ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agtaatctag a 1721

Claims

급성 골수성 백혈병 세포에서 높게 발현되는 세포 표면 단백질인 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1) 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)를 유효성분으로 포함하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커.
제 1항에 있어서, 상기 TM6SF1은 TM6SF1의 세포 외 도메인이 항-TM6SF1 항체와 특이적으로 결합하는 하는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커.
제 2항에 있어서, 상기 TM6SF1의 세포 외 도메인은 서열번호 5의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커.
제 1항에 있어서, 상기 TM7SF3은 TM7SF3의 세포 외 도메인이 항-TM7SF3 항체와 특이적으로 결합하는 하는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커.
제 4항에 있어서, 상기 TM7SF3의 세포 외 도메인은 서열번호 6의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 급성 골수성 백혈병은 급성 단핵구성 백혈병인 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커.
제 6항에 있어서, 상기 급성 단핵구성 백혈병은 THP-1 세포, 또는 U937 세포에 의해 유발되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커.
TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 유효성분으로 포함하는 급성 골수성 백혈병 진단제.
제 8항에 있어서, 상기 항-TM6SF1 항체는 TM6SF1의 세포외 도메인과 특이적 으로 결합하는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단제.
제 9항에 있어서, 상기 TM6SF1의 세포 외 도메인은 서열번호 5의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단제.
제 10항에 있어서, 상기 항-TM6SF1 항체는 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단제.
제 8항에 있어서, 상기 항-TM7SF3 항체는 TM7SF3의 세포외 도메인과 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단제.
제 12항에 있어서, 상기 TM7SF3의 세포 외 도메인은 서열번호 6의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단제.
제 13항에 있어서, 상기 항-TM7SF3 항체는 단일클론항체인 것을 특징으로 하 는 급성 골수성 백혈병 진단제.
제 8항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 급성 골수성 백혈병은 급성 단핵구성 백혈병인 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단제.
제 15항에 있어서, 상기 급성 단핵구성 백혈병은 THP-1 세포, 또는 U937 세포에 의해 유발되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단제.
검체에 TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 접촉시켜 항원-항체 결합 반응을 측정하는 단계를 포함하는 제 1항의 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 17항에 있어서, 상기 항-TM6SF1 항체는 TM6SF1의 세포외 도메인과 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 18항에 있어서, 상기 TM6SF1의 세포 외 도메인은 서열번호 5의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 19항에 있어서, 상기 항-TM6SF1 항체는 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 17항에 있어서, 상기 항-TM7SF3 항체는 TM7SF3의 세포외 도메인과 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 21항에 있어서, 상기 TM7SF3의 세포 외 도메인은 서열번호 6의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 22항에 있어서, 상기 항-TM7SF3 항체는 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 17항에 있어서, 상기 급성 골수성 백혈병은 급성 단핵구성 백혈병인 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 24항에 있어서, 상기 급성 단핵구성 백혈병은 THP-1 세포, 또는 U937 세포에 의해 유발되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 17항 내지 제 25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원-항체 결합 반응의 측정은 면역염색법(Immunostaining)에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
제 26항에 있어서, 상기 면역염색법은 형광활성화 세포분류법(Fluorescence- activated cell sorting, FACS)인 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 진단용 바이오마커 검출 방법.
TM6SF1(transmembrane 6 superfamily member 1)과 특이적으로 결합하는 항-TM6SF1 항체 또는 TM7SF3(transmembrane 7 superfamily member 3)과 특이적으로 결합하는 항-TM7SF3 항체를 유효성분으로 포함하는 급성 골수성 백혈병 치료제.
제 28항에 있어서, 상기 항-TM6SF1 항체는 TM6SF1의 세포외 도메인과 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 치료제.
제 29항에 있어서, 상기 TM6SF1의 세포 외 도메인은 서열번호 5의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 치료제.
제 28항에 있어서, 상기 항-TM7SF3 항체는 TM7SF3의 세포외 도메인과 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 치료제.
제 31항에 있어서, 상기 TM7SF3의 세포 외 도메인은 서열번호 6의 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 치료제.
제 28항 내지 제 32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 급성 골수성 백혈병은 급성 단핵구성 백혈병인 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 치료제.
제 33항에 있어서, 상기 급성 단핵구성 백혈병은 THP-1 세포, 또는 U937 세포에 의해 유발되는 것을 특징으로 하는 급성 골수성 백혈병 치료제.