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KR101570346B1 - The cosmetics and functional food composition containing N-feruloyltyramine improving anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-wrinkling containing Lycium chinense MILL STEM extracts - Google Patents

The cosmetics and functional food composition containing N-feruloyltyramine improving anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-wrinkling containing Lycium chinense MILL STEM extracts Download PDF

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KR101570346B1
KR101570346B1 KR1020130092815A KR20130092815A KR101570346B1 KR 101570346 B1 KR101570346 B1 KR 101570346B1 KR 1020130092815 A KR1020130092815 A KR 1020130092815A KR 20130092815 A KR20130092815 A KR 20130092815A KR 101570346 B1 KR101570346 B1 KR 101570346B1
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inflammatory
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cosmetics
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엄선영
문미연
임준환
김영훈
이하연
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Abstract

본 발명은 항염 또는 항주름 활성을 가지는 구기자 나무가지 추출물과 그의 분획물 및 상기 구기자 나무가지 추출물로부터 유효성분들을 분리정제동정하여 이들을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항노화, 항염 또는 항주름 활성을 갖는 화장료 또는 건강기능식품 조성물을 제공하는 뛰어난 효과가 있다.The present invention relates to a method for the isolation and purification of active ingredients from the extracts of P. japonicum tree having anti-inflammatory or anti-wrinkle activity, fractions thereof and the extracts of P. japonicus, and to provide cosmetics having antioxidant, anti- Or a health functional food composition.

Description

N-feruloyltyramine을 함유하는 항산화, 항염증 및 주름 개선용 화장료 및 건강기능식품 조성물{The cosmetics and functional food composition containing N-feruloyltyramine improving anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-wrinkling containing Lycium chinense MILL STEM extracts} FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to cosmetics and functional food compositions containing antioxidant, anti-inflammatory and anti-wrinkle containing N-feruloyltyramine,

본 발명은 N-feruloyltyramine을 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 구기자 나무가지 추출물, 이의 분획물 또는 구기자 나무가지 추출물 유래 유기화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증 및 주름 개선용 화장료 및 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition containing N-feruloyltyramine, and more particularly to a composition containing N-feruloyltyramine as an active ingredient, Antioxidant, anti-inflammatory and wrinkle-improving cosmetic compositions and health functional food compositions.

화장품산업은 지속적으로 성장하고 있는 산업으로 특히 기능성 화장품의 성장이 눈에 띄게 높아지고 있다. 상기 기능성 화장품 중에서도 피부노화 개선 및 주름개선용 기능성 화장품 시장은 성장률이 가장 높게 나타나는 분야이고 이에 따라서 피부노화, 항산화, 주름개선용 기능성 화장품의 소재 개발도 활발하게 이루어지고 있는 실정이다.The cosmetics industry has been growing steadily, especially functional cosmetics. Among the above-mentioned functional cosmetics, the functional cosmetics market for skin aging improvement and wrinkle improvement is the field with the highest growth rate. Accordingly, materials for functional cosmetics for skin aging, antioxidation and wrinkle improvement are actively being developed.

국민의 경제적 수준이 향상되고 양보다는 질을 추구하는 소비형태의 변화에 따라 안전성에 대한 소비자의 관심이 높아지면서 천연물을 원료를 사용하고, 합성 소재의 사용은 최소화한 화장품에 대한 수요가 빠른 속도로 증가하고 이로 인하여 상기 피부노화, 항산화, 주름개선용 기능성 화장품 소재의 개발은 화학성분보다 천연물 소재를 중심으로 이루어지고 있으며 이러한 천연물 소재를 유효성분으로 함유한 기능성 화장품의 이미지는 소비자에게 매우 친환경적으로 각인되고 있다.Consumers' interest in safety has increased with the improvement of the economic level of the people and the change in the consumption style that pursues quality rather than quantity. Therefore, the demand for natural cosmetics using raw materials and minimizing the use of synthetic materials is rapidly increasing The development of functional cosmetic materials for skin aging, antioxidation, and wrinkle improvement is centered on natural materials rather than chemical ingredients. The image of functional cosmetics containing such natural materials as active ingredients is very eco-friendly to consumers .

그러나, 천연물 소재는 재배, 보관에 따라 성분 및 품질의 동질성 확보가 어렵고, 그 결과 유효성분의 함량이 균일하지 않을 수 있으며, 유효성분 또는 약리작용 성분이 불분명하다는 단점이 있다.However, it is difficult to ensure homogeneity of components and quality according to the cultivation and storage of the natural material, and as a result, the content of the active ingredient may not be uniform, and the active ingredient or pharmacologically active ingredient is unclear.

따라서 기능성 화장품의 천연물소재 개발에 있어 무엇보다 중요한 것은 천연물 또는 천연추출물에 함유된 여러 성분들 중에 효과가 검정된 단일화합물을 동정하고, 그 유효성분의 효능을 검정함으로써 상기 유효성분을 함유하는 화장료 조성물의 개발이 시급한 실정이다.
Therefore, what is most important in the development of a natural material for functional cosmetics is to identify a single compound whose effect is tested among various ingredients contained in a natural or natural extract, and to test the efficacy of the effective ingredient to determine a cosmetic composition Is urgently needed.

구기자는 가지과의 구기자잎속의 목본식물로 우리나라를 비롯한 중국, 대만, 일본, 유럽 등지에 자생하거나 재배되고 있는 생약재이다. 구기자는 열매, 잎, 뿌리를 부위별로 이용하며, 상기 구기자 열매, 잎, 뿌리 등 에는 베타인(betaine), 루틴(rutin), 쿠코아민 A(kukoamine A), 베타시토스테롤(-sitosterol)과 같은 기능성 성분이 다량 함유되어 있다. 그 밖에도 비타민 A, B1, B2, C 칼슘, 인, 철, 아연, 니코티닉산(nicotinic acid) 등 영양분을 풍부하게 함유하고 있다. Gugija is a medicinal herb that is naturally grown or cultivated in Korea, China, Taiwan, Japan and Europe. Gugija uses fruits, leaves and roots in its parts. The gugija berries, leaves, roots, and the like have the same functions as betaine, rutin, kukoamine A and betasitosterol. A large amount of functional ingredient is contained. In addition, vitamin A, B1, B2, C calcium, phosphorus, iron, zinc, nicotinic acid (nicotinic acid) is rich in nutrients.

대한민국 공개특허 제10-2004-0095948호에는 구기엽 열수추출물의 체중감량효과에 대해서 개시하고 있으며, 또 대한민국 공개특허 제10-2004-0095947호에는 구기엽 분말과 인삼 분말을 혼합하여 체중감량 효과를 증대시키는 조성물에 관한 내용을 개시하고 있다. 그러나 상기 문헌들에는 구기자 나무가지 추출물 또는 이로부터 분리된 특정 단일 화합물을 포함하는 항산화, 항염증 또는 주름개선용 기능성 화장품 조성물에 대해서는 암시되거나 개시된 바 없다. Korean Patent Laid-Open No. 10-2004-0095948 discloses a weight loss effect of hot water extracts from a branch leaves, and Korean Patent Laid-Open No. 10-2004-0095947 discloses a method of reducing weight loss Discloses a composition relating to an increase in the amount of the composition. However, the above references do not suggest or disclose a functional cosmetic composition for antioxidant, anti-inflammation or wrinkle reduction containing the extract of Guanxi seed tree or a specific single compound separated therefrom.

화장품산업은 지속적으로 성장하고 있는 산업으로 특히 기능성 화장품의 성장이 눈에 띄게 높아지고 있다. 상기 기능성 화장품 중에서도 피부노화 개선 및 주름개선용 기능성 화장품 시장은 성장률이 가장 높게 나타나는 분야이고 이에 따라서 피부노화, 항산화, 주름개선용 기능성 화장품의 소재 개발도 활발하게 이루어지고 있는 실정이다.The cosmetics industry has been growing steadily, especially functional cosmetics. Among the above-mentioned functional cosmetics, the functional cosmetics market for skin aging improvement and wrinkle improvement is the field with the highest growth rate. Accordingly, materials for functional cosmetics for skin aging, antioxidation and wrinkle improvement are actively being developed.

국민의 경제적 수준이 향상되고 양보다는 질을 추구하는 소비형태의 변화에 따라 안전성에 대한 소비자의 관심이 높아지면서 천연물을 원료를 사용하고, 합성 소재의 사용은 최소화한 화장품에 대한 수요가 빠른 속도로 증가하고 이로 인하여 상기 피부노화, 항산화, 주름개선용 기능성 화장품 소재의 개발은 화학성분보다 천연물 소재를 중심으로 이루어지고 있으며 이러한 천연물 소재를 유효성분으로 함유한 기능성 화장품의 이미지는 소비자에게 매우 친환경적으로 각인되고 있다.Consumers' interest in safety has increased with the improvement of the economic level of the people and the change in the consumption style that pursues quality rather than quantity. Therefore, the demand for natural cosmetics using raw materials and minimizing the use of synthetic materials is rapidly increasing The development of functional cosmetic materials for skin aging, antioxidation, and wrinkle improvement is centered on natural materials rather than chemical ingredients. The image of functional cosmetics containing such natural materials as active ingredients is very eco-friendly to consumers .

그러나, 천연물 소재는 재배, 보관에 따라 성분 및 품질의 동질성 확보가 어렵고, 그 결과 유효성분의 함량이 균일하지 않을 수 있으며, 유효성분 또는 약리작용 성분이 불분명하다는 단점이 있다.However, it is difficult to ensure homogeneity of components and quality according to the cultivation and storage of the natural material, and as a result, the content of the active ingredient may not be uniform, and the active ingredient or pharmacologically active ingredient is unclear.

따라서 기능성 화장품의 천연물소재 개발에 있어 무엇보다 중요한 것은 천연물 또는 천연추출물에 함유된 여러 성분들 중에 효과가 검정된 단일화합물을 동정하고, 그 유효성분의 효능을 검정함으로써 상기 유효성분을 함유하는 화장료 조성물의 개발이 시급한 실정이다.
Therefore, what is most important in the development of a natural material for functional cosmetics is to identify a single compound whose effect is tested among various ingredients contained in a natural or natural extract, and to test the efficacy of the effective ingredient to determine a cosmetic composition Is urgently needed.

구기자는 가지과의 구기자잎속의 목본식물로 우리나라를 비롯한 중국, 대만, 일본, 유럽 등지에 자생하거나 재배되고 있는 생약재이다. 구기자는 열매, 잎, 뿌리를 부위별로 이용하며, 상기 구기자 열매, 잎, 뿌리 등 에는 베타인(betaine), 루틴(rutin), 쿠코아민 A(kukoamine A), 베타시토스테롤(-sitosterol)과 같은 기능성 성분이 다량 함유되어 있다. 그 밖에도 비타민 A, B1, B2, C 칼슘, 인, 철, 아연, 니코티닉산(nicotinic acid) 등 영양분을 풍부하게 함유하고 있다. Gugija is a medicinal herb that is naturally grown or cultivated in Korea, China, Taiwan, Japan and Europe. Gugija uses fruits, leaves and roots in its parts. The gugija berries, leaves, roots, and the like have the same functions as betaine, rutin, kukoamine A and betasitosterol. A large amount of functional ingredient is contained. In addition, vitamin A, B1, B2, C calcium, phosphorus, iron, zinc, nicotinic acid (nicotinic acid) is rich in nutrients.

대한민국 공개특허 제10-2004-0095948호에는 구기엽 열수추출물의 체중감량효과에 대해서 개시하고 있으며, 또 대한민국 공개특허 제10-2004-0095947호에는 구기엽 분말과 인삼 분말을 혼합하여 체중감량 효과를 증대시키는 조성물에 관한 내용을 개시하고 있다. 그러나 상기 문헌들에는 구기자 나무가지 추출물 또는 이로부터 분리된 특정 단일 화합물을 포함하는 항산화, 항염증 또는 주름개선용 기능성 화장품 조성물에 대해서는 암시되거나 개시된 바 없다.
Korean Patent Laid-Open No. 10-2004-0095948 discloses a weight loss effect of hot water extracts from a branch leaves, and Korean Patent Laid-Open No. 10-2004-0095947 discloses a method of reducing weight loss Discloses a composition relating to an increase in the amount of the composition. However, the above references do not suggest or disclose a functional cosmetic composition for antioxidant, anti-inflammation or wrinkle reduction containing the extract of Guanxi seed tree or a specific single compound separated therefrom.

본 발명의 상기 목적은, 구기자 나무가지 에탄올추출물을 수득하고 이로 부터 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 유기용매분획을 수행하는 단계와; 상기 단계에서 수득한 구기 나무가지 에탄올추출물, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올 분획물의 성분분석을 수행하고 이로부터 유효활성물질을 분리정제동정하는 단계와; 상기 각 단계들에서 수득한 구기자 나무가지 에탄올 추출물, 클로로포름 분획물 및 유효활성물질의 항산화, 항노화, 항염 및 항주름 활성을 측정하는 단계를 통하여 달성하였다.The above object of the present invention can be achieved by a method for producing a plant extract, comprising the steps of: obtaining an ethanol extract of Guanxi japonica tree and conducting hexane, chloroform, ethyl acetate, and butanol organic solvent fractions therefrom; Analyzing the components of the ethanol extract of the goat tree, hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol fractions obtained in the above step, separating and purifying the active substance from the resultant; The antioxidative, anti-aging, anti-inflammatory and anti-wrinkle activities of the extracts of ethanol extract, chloroform fractions and active substances obtained from each of the above steps were measured.

본 발명은 항염 또는 항주름 활성을 가지는 구기자 나무가지 추출물과 이의 분획물 및 이를 유효성분으로 함유하는 항산화, 항노화, 항염 또는 항주름 활성을 갖는 화장료 또는 건강기능식품 조성물을 제공하는 효과가 있다.The present invention provides an extract of Ganoderma lucidum having anti-inflammatory or anti-wrinkle activity and fractions thereof and a cosmetic or health functional food composition having antioxidant, anti-aging, anti-inflammatory or anti-wrinkle activity containing the extract as an active ingredient.

이 밖에도 구기자 나무가지 추출물로부터 항염 또는 항주름 활성을 갖는 유효성분들을 분리정제동정하여 이를 유효성분으로 함유하는 항산화, 항노화, 항염 또는 항주름 활성을 갖는 화장료 또는 건강기능식품 조성물을 제공하는 뛰어난 효과가 있다.In addition, the active ingredients having anti-inflammatory or anti-wrinkle activity are isolated and purified from the extracts of P. japonicus, Antioxidant, anti-aging, anti-inflammatory or anti-wrinkle activity.

도 1은 본 발명 구기자 나무가지 추출물과 그의 용매분획물 및 그로부터 유래된 유기화합물 1의 분리정제동정의 전체 과정을 도식화한 그림도이다.
도 2는 본 발명 구기자 나무가지 에탄올 추출물의 HPLC 분석 결과 그래프이다.
도 3은 본 발명 구기자 나무가지 클로로포름 분획물의 HPLC 분석 결과 그래프이다.
도 4는 본 발명 구기자 나무가지 에틸아세테이트 분획물의 HPLC 분석 결과 그래프이다.
도 5는 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 1의 HPLC 분석 결과 그래프이다.
도 6은 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 1의 1H- NMR 스펙트럼을 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 1의 13C- NMR 스펙트럼을 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 2의 분리정제동정의 전체 과정을 도식화한 그림도이다.
도 9는 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 2의 HPLC 분석 결과 그래프이다.
도 10은 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 2의 1H- NMR 스펙트럼을 나타낸 그래프이다.
도 11은 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 2의 13C- NMR 스펙트럼을 나타낸 그래프이다.
도 12는 본 발명 구기자 나무가지 추출물의 DCFH-DA를 측정한 결과 그래프이다.
도 13은 본 발명 구기자 나무가지 추출물의 항염 효과을 측정한 결과 그래프이다.
도 14는 본 발명 구기자 나무가지 클로로포름 분획물의 항염 효과을 측정한 결과 그래프이다.
도 15는 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 1의 항염 효과을 측정한 결과 그래프이다.
도 16은 본 발명 구기자 나무가지 추출물의 콜라겐합성 증대효과를 측정한 결과 그래프이다.
도 17은 본 발명 구기자 나무가지 클로로포름 분획물의 콜라겐합성 증대효과를 측정한 결과 그래프이다.
도 18은 본 발명 구기자 나무가지 유래의 유기화합물 1의 콜라겐합성 증대효과를 측정한 결과 그래프이다.
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a diagram illustrating the entire process of identifying and isolating and purifying an organic compound 1 derived therefrom and a solvent fraction thereof of the present invention.
FIG. 2 is a graph showing the HPLC analysis of the ethanol extract of Gujuga gigas on the present invention.
FIG. 3 is a graph of HPLC analysis of the chloroform fractions of the present invention.
FIG. 4 is a graph of HPLC analysis of ethyl acetate fractions of the present invention.
Fig. 5 is a graph showing the results of HPLC analysis of the organic compound 1 derived from the Asiatic root of the present invention. Fig.
6 is a graph showing the 1 H-NMR spectrum of the organic compound 1 derived from the Aspergillus oryzae according to the present invention.
7 is a graph showing the 13 C-NMR spectrum of the organic compound 1 derived from the Aspergillus oryzae according to the present invention.
FIG. 8 is a diagram showing the entire process of identification and identification of the organic compound 2 derived from the Aspergillus oryzae of the present invention.
9 is a graph showing the results of HPLC analysis of the organic compound 2 derived from the Aspergillus oryzae of the present invention.
10 is a graph showing the 1 H-NMR spectrum of the organic compound 2 derived from the Aspergillus oryzae of the present invention.
11 is a graph showing the 13 C-NMR spectrum of the organic compound 2 derived from the Aspergillus oryzae according to the present invention.
FIG. 12 is a graph showing the results of measurement of DCFH-DA of the extract of Aspergillus oryzae according to the present invention.
FIG. 13 is a graph showing the anti-inflammatory effect of the extract of Aspergillus oryzae in the present invention.
FIG. 14 is a graph showing the anti-inflammatory effect of the chloroform fractions of the present invention.
15 is a graph showing the anti-inflammatory effect of the organic compound 1 derived from the Aspergillus oryzae of the present invention.
FIG. 16 is a graph showing the results of measuring the effect of increasing the collagen synthesis of the extract of Aspergillus oryzae according to the present invention.
FIG. 17 is a graph showing the results of measurement of the effect of increasing the collagen synthesis of the fractions of the present invention.
Fig. 18 is a graph showing the result of measuring the effect of increasing the collagen synthesis of the organic compound 1 derived from the Asiatic root of the present invention.

본 발명에 따르면 구기자 나무가지 추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부틸렌글리콜, 프로판디올 또는 이들의 혼합 용매에 의해 추출된 것일 수 있으며, 바람직하게는 60% 에탄올로 추출한 것이다. 또, 상기 추출물은 추출에 의해 수득되는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액의 분획물, 추출액을 건조하여 수득되는 건조물 또는 추출액의 조정제물 또는 정제물일 수 있다.According to the present invention, the extract of Guanxi japonica tree can be extracted with water, ethanol, methanol, butylene glycol, propanediol or a mixed solvent thereof, preferably extracted with 60% ethanol. In addition, the above-mentioned extract may be a dried product obtained by drying an extract obtained by extraction, a diluted solution or concentrate of the extract, a fraction of the extracted solution, an extract, or a preparation or purified product of the extract.

또, 본 발명에 있어서 구기자 나무가지 추출하는 시간 및 온도는 특별하게 제한되지 않으나, 바람직하게는 실온에서 4시간씩 3회 추출한다.
In addition, in the present invention, the time and temperature for extracting the goji chestnut are not particularly limited, but are preferably extracted three times at room temperature for 4 hours each time.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포움, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention can be prepared into any of the formulations conventionally produced in the art and can be used in the form of solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, , Oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, but is not limited thereto. More specifically, it can be manufactured in the form of a flexible lotion, a convergent lotion, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오즈 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 스프레이인 경우에는 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 다이메틸 에테르와 같은 추진제를 추가로 함유할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of spraying, chlorofluorohydrocarbons, propane / Or a propellant such as dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용된다.When the formulation of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a dissolving agent or an emulsifying agent is used as a carrier component.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정질 셀룰로오즈 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester, microcrystalline cellulose or the like may be used as a carrier component.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate and the like may be used as a carrier component.

본 발명의 화장료 조성물은 1일에 1회 내지 수회에 걸쳐 얼굴 등에 도포하여 사용할 수 있다.
The cosmetic composition of the present invention can be applied to face or the like once or several times per day.

본 발명은 본 발명에 따라 제조된 구기자 나무가지 추출물, 이의 분획물 또는 구기자 나무가지 유래 유기화합물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품 조성물을 제공한다. 상기 추출물, 이의 분획물 또는 구기자 나무가지 유래 유기화합물은 바람직하게 건강기능식품 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 99 중량%를 함유하는 것으로 한다.The present invention provides a health functional food composition comprising as an active ingredient an extract of Aspergillus oryzae prepared according to the present invention, a fraction thereof or an organic compound derived from Aspergillus oryzae. The extract, the fraction thereof or the organic compound derived from Trichoderma sp. Are preferably contained in an amount of 0.1 to 99% by weight based on the total weight of the health functional food composition.

본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품으로서 사용될 수 있다. 상기 "건강기능식품"이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.The food composition of the present invention can be used as a health functional food. The term "functional food" as used herein means a food prepared and processed using a raw material or ingredient having a useful function in the human body pursuant to Law No. 6727 on Health Functional Foods, and the term "functional" And function of the nutrient for the purpose of obtaining a beneficial effect in health use such as controlling the nutrient or physiological action.

본 발명의 식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 "식품 첨가물"로 서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.The food composition of the present invention may contain conventional food additives, and the suitability of the above-mentioned "food additives" is not limited by the general rules and general test methods approved by the Food and Drug Administration It shall be determined according to standards and standards for the item.

상기 "식품 첨가물 공전"에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류들을 들 수 있다.Examples of the substances found in the above-mentioned "food additives" include natural compounds such as ketones, chemical compounds such as glycine, potassium citrate, nicotinic acid and cinnamic acid, coloring pigments, licorice extracts, crystalline cellulose, high- L-glutamic acid sodium preparations, noodle-added alkalis, preservative preparations, tar pigment preparations and the like.

캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질캅셀에 생약 추출물에 부형제 등의 첨가제와의 혼합물 또는 그의 입상물 또는 제피한 입상물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 생약 추출물에 부형제 등의 첨가제와의 혼합물을 젤라틴 등 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.The hard capsule of the capsule type health functional food can be prepared by filling a normal hard capsule with a mixture of herbal medicine extract with an additive such as an excipient or a granular product thereof or a granulated product with a hard gelatinized product. Of the present invention may be filled in a capsule base such as gelatin. The soft capsule may contain a plasticizer such as glycerin or sorbitol, a coloring agent, a preservative and the like, if necessary.

환 형태의 건강기능식품은 생약 추출물에 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 적당한 제피제로 제피를, 또는 전분, 탈크 또는 적당한 물질로 환의를 입힐 수도 있다.In case of a ring type health functional food, a mixture of excipient, binder, disintegrant, etc. may be formulated into a herbal medicine extract by an appropriate method. If necessary, the preparation may be mixed with white sugar or other suitable skin care agent or a starch, talc or a suitable substance It is possible to make a ring.

과립형태의 건강기능식품은 상기 생약 추출물에 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다. 본원 발명의 상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함한다 (대한약전 해설편, 문성사, 한국약학대학협의회, 제 5 개정판, p33-48, 1989).
In the granular health functional food, a mixture of an excipient, a binder and a disintegrant may be prepared into a granular form by an appropriate method, and if necessary, a flavoring agent, a mating agent and the like may be contained in the herbal medicine extract. The definitions of the above-mentioned excipients, binders, disintegrants, lubricants, mating agents, flavoring agents and the like of the present invention are described in documents known in the art and include the same or similar functions (see, for example, Korean Association of Pharmacy, 5th ed., Pp. 33-48, 1989).

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예를 들어 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이므로, 이에 따라 본 발명의 권리범위가 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples and experimental examples. However, the following examples and experimental examples are provided only for illustrating the present invention, and thus the scope of the present invention is not limited thereto.

< 실시예 1> 본 발명 구기자나무 추출물의 제조 및 이로부터 항염 또는 항주름 활성 물질의 분리동정 <Example 1> The present invention Preparation and Isolation and Identification of anti-inflammatory or Hangzhou name of the active material therefrom Gugija biloba

구기자나무 줄기 추출물로부터 항염 또는 항주름 효과가 있는 단일화합물을 분리동정하기 위하여 건조된 구기자 나무줄기를 청양군에서 채집하여 실험에 사용하였다.
In order to isolate and identify single compounds with anti - inflammatory or anti - wrinkle effect from the extracts of Gugija, the dried Gugai trunks were collected and used in the experiment.

제조예Manufacturing example 1: 본 발명 구기자나무 가지 추출물 제조 1: Preparation of the extract of Gujuzuga japonica tree according to the present invention

상기 건조한 구기자나무 줄기를 분쇄하여 분말화 하였고, 상기 구기자나무 줄기 분말 1kg을 10배의 60% 에탄올로 3일 동안 실온에서 추출한 다음 여과하여 얻은 여과액을 감압농축하여 본 발명 구기자나무 줄기 추출물을 제조한 다음 본 발명 구기자나무 가지추출물의 항염 및 항주름 활성검정용 및 유효성분 분리동정을 위한 공시재료로 사용하였다.
1 kg of the dried Gugija trunk was pulverized and pulverized. 1 kg of the Gugija trunk powder was extracted with 10 times of 60% ethanol at room temperature for 3 days, and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure to prepare the Gugai trunk extract of the present invention And then used as a test material for the anti-inflammatory and anti-wrinkle activity test and the identification of active ingredients in the extract of Aspergillus oryzae.

제조예Manufacturing example 2: 본 발명 구기자나무 가지 추출물  2: Invention of the present invention 분획물Fraction

상기 제조예 1에 따라 제조된 본 발명 구기자나무 가지 추출물을 도 1에 도식한 바와 같이 헥산(Haxane), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 부탄올(butanol)의 순서로 순차적으로 용매분획하여 각각의 분획물을 수득하였다. 상기 분획물 중에서 클로로포름 분획물을 본 발명 구기자나무 가지추출물의 항염 및 항주름 활성검정용 및 유효성분 분리동정을 위한 공시재료로 사용하였다.
As shown in FIG. 1, the extract of the present invention prepared according to Preparation Example 1 was subjected to sequential solvent fractionation in the order of hexane, chloroform, ethyl acetate, and butanol To obtain respective fractions. Among these fractions, chloroform fractions were used as anti-inflammatory and anti-wrinkle activity test agents of the present invention and as a disclosing material for isolating active ingredients.

실험예Experimental Example 1: 본 발명 구기자나무 가지 추출물 및 그  1: The present invention relates to the extract of Gujuzan 분획물의Fraction HPLCHPLC 분석 analysis

상기 제조예 1 내지 제조예 2에 따라 수득한 본 발명 본 발명 구기자나무 가지 에탄올추출물, 클로로포름 분획물 및 에틸아세테이트 분획물의 성분 분석은 HPLC(Waters2695)를 통하여 수행하였다. The components of the ethanol extract, chloroform fraction and ethyl acetate fraction of the present invention obtained according to Preparation Examples 1 to 2 were analyzed by HPLC (Waters 2695).

분석컬럼은 ODS 컬럼(Kromasil 4.5 X 150mm, 5um)을 이용하였고 전개용매로는 정제수와 메탄올을 50분 분석 시간동안 100:0 에서 0: 100 (v/v) 혼합비로 점진적으로 변화시켜 분석하였다. 전개용매 유속은 1 mL/min, 컬럼온도는 40, 시료주입량은 10ug/mL농도의 상기 추출물 및 분획물들을 10uL씩 각각 주입하고 검출 파장은 318nm로 하여 분석하였다. 분석 HPLC 컬럼크로마토그램은 도 2 내지 5에 나타냈다.The analytical columns were ODS columns (Kromasil 4.5 X 150 mm, 5 μm) and purified water and methanol were analyzed gradually for 50 min analysis time from 100: 0 to 0: 100 (v / v) mixing ratio. The extracts and fractions were injected at a flow rate of 1 mL / min, a column temperature of 40, and a sample injection volume of 10 ug / mL, respectively, and the detection wavelength was 318 nm. Analytical HPLC column chromatograms are shown in Figures 2 to 5.

실험결과 도 2에 나타낸 바와 같이 25분에 검출되는 본 발명 구기자나무 가지 에탄올추출물의 주요성분은 도 3에 나타낸 바와 같이 상기 제조예 2에 따라 분획된 클로로포름 분획물로 이행되었고, 그외 나머지 성분들은 에틸아세테이트 분획물로 이행되었음을 확인하였다.
Experimental Results As shown in FIG. 2, the main component of the Gugija edulis extract of the present invention, which was detected at 25 minutes, was changed to the chloroform fraction fractioned according to Preparation Example 2 as shown in FIG. 3, and the other components were dissolved in ethyl acetate It was confirmed that it was transferred into fractions.

실험예Experimental Example 2: 본 발명 유기화합물 1의 분리 동정 2: Isolation and Identification of Organic Compound 1 of the Present Invention

상기 실험예 1의 분석결과에 따라 본 발명 구기자나무 가지 에탄올 추출물의 주성분을 분리하기 위하여 상기 제조예 2에 따라 분획한 클로로포름분획물 190 mg을 도 1에 도식화한 바와 같이 고정상은 실리카겔 컬럼크로마토그래피(Silica gel, Merck, Silica gel 60, 70~230 mesh ASTM, Lot NO. 1.07734.1000)로 하고 이동상은 클로로포름:메탄올(v/v) 9:1, 7:1, 6:1 혼합비율로 각각 혼합한 용매로하여 극성별로 용출하여 분획하였다.According to the analysis result of Experimental Example 1, 190 mg of the chloroform fraction fractioned according to Preparation Example 2 was isolated from the crude extract of Gujuza japonica extract as shown in FIG. 1, and the fixed phase was purified by silica gel column chromatography (v / v) 9: 1, 7: 1, and 6: 1, respectively, and the mobile phases were mixed with each other at a mixing ratio of As a solvent, and then fractionated by elution with polarity.

상기 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 통하여 수득한 분획물 각각을 TLC 플레이트에 점적하고 전개한 다음 순도 높게 분리된 7번 분획물을 수득하였고 이를 유기화합물 1이라 하였다. 상기에서 수득한 분획물의 유기화합물 1은 HPLC, 1H-NMR 및 13C-NMR 분석을 통하여 구조동정하였다.Each of the fractions obtained through the above silica gel column chromatography was applied to a TLC plate and developed, and fraction 7 having a high purity was obtained. This fraction was called organic compound 1. The organic compound 1 of the fraction obtained above was identified by HPLC, 1 H-NMR and 13 C-NMR analysis.

HPLC분석 조건은 시료를 제외하고는 상기 실험예 1의 분석조건과 동일하였으며 1H-NMR 및 13C-NMR 분석을 위하여 상기에서 수득한 본 발명 유기화합물 1을 NMR용매 CD3OD에 용해하여 400 mHz NMR 기기를 이용하여 1H-NMR 및 13C-NMR 스펙트럼을 얻었고 그 스펙트럼을 하기 [표 1]과 같이 정리하였다.400 was dissolved in the present invention the organic compound 1 was obtained in the NMR solvent CD 3 OD for the HPLC analysis conditions were the same as in the analysis of the experimental example 1 except the sample conditions were 1 H-NMR and 13 C-NMR analysis The 1 H-NMR and 13 C-NMR spectra were obtained using a mHz NMR instrument and the spectra thereof were summarized as shown in Table 1 below.

Figure 112013070945395-pat00001

Figure 112013070945395-pat00001

실험결과 도 5에 나타낸 바와 같이 본 발명 유기화합물 1은 순도높게 분리되었고 도 6 내지 도 7의 NMR 스펙트럼 및 상기 [표 1]에 나타낸 바와 같이 1H NMR, 13C NMR의 결과로부터 유기화합물 1의 구조가 하기 화학식 1과 같이 결정되었다. 화학구조를 근거로 참고문헌 검색을 실시한 결과 유기화합물 1은 하기 화학식 1로 나타나는 페닐프로파노이드 아미드 계열의 N-feruloyltyramine임이 확인되었다.As shown in FIG. 5, the organic compound 1 of the present invention was highly purified and the NMR spectra of FIGS. 6 to 7 and the results of 1 H NMR and 13 C NMR, as shown in Table 1, The structure was determined as shown in the following formula (1). The organic compound 1 was found to be a phenylpropanoid amide N-feruloyltyramine represented by the following chemical formula 1.

<화학식 1>&Lt; Formula 1 >

Figure 112013070945395-pat00002

Figure 112013070945395-pat00002

실험예Experimental Example 3: 본 발명 유기화합물 2의 분리 동정 3: Isolation and Identification of Organic Compound 2 of the Present Invention

상기 실험예 1의 분석결과에 따라 본 발명 구기자나무 가지 에틸아세테이트 분획물로부터 주성분을 분리하기 위하여 상기 제조예 2에 따라 분획한 에틸아세테이트분획물을 고정상은 실리카겔 컬럼크로마토그래피(Silica gel, Merck, Silica gel 60, 70~230 mesh ASTM, Lot NO. 1.07734.1000)로 하고 이동상은 클로로포름:메탄올을 85:15(v/v) 혼합비율로 혼합한 용매로하여 극성별로 용출하여 분획하였고 이중 22 내지 29 분획물에서 순수한 유기화합물 2를 정제하였다.According to the results of the above Experimental Example 1, the ethyl acetate fraction obtained according to Preparation Example 2 was separated by silica gel column chromatography (Silica gel, Merck, Silica gel 60) to isolate the main component from the ethyl acetate fraction of the present invention. , 70 to 230 mesh ASTM, Lot No. 1.07734.1000), and the mobile phase was eluted with a polar solvent by using chloroform: methanol as a solvent mixed at a mixing ratio of 85:15 (v / v) The pure organic compound 2 was purified.

상기에서 수득한 본 발명 유기화합물 2는 HPLC, 1H-NMR 및13 C-NMR 분석을 통하여 구조동정하였다.The organic compound 2 of the present invention obtained above was identified by HPLC, 1 H-NMR and 13 C-NMR analysis.

HPLC분석 조건은 시료를 제외하고는 상기 실험예 1의 분석조건과 동일하였으며 1H-NMR 및 13C-NMR 분석을 위하여 상기에서 수득한 본 발명 유기화합물 2를 NMR용매 CD3OD에 용해하여 400 mHz NMR 기기를 이용하여 1H-NMR 및 13C-NMR 스펙트럼을 얻었고 그 스펙트럼을 하기 [표 2]과 같이 정리하였다.400 to dissolve the present invention the organic compound 2 obtained in the NMR solvent CD 3 OD for the HPLC analysis conditions were the same as in the analysis of the experimental example 1 except the sample conditions were 1 H-NMR and 13 C-NMR analysis The 1 H-NMR and 13 C-NMR spectra were obtained using a mHz NMR instrument and the spectra were summarized as shown in Table 2 below.

Figure 112013070945395-pat00003

Figure 112013070945395-pat00003

실험결과 도 9에 나타낸 바와 같이 본 발명 유기화합물 2는 순도높게 분리되었고 도 10 내지 도 11의 NMR 스펙트럼 및 상기 [표 2]에 나타낸 바와 같이 유기화합물 2는 상기 유기화합물 1과 유사한 스펙트럼이 관찰되는데 유기화합물 1에서의 δ 3.86인 methoxy proton이 관찰되지 않았다. As a result, as shown in FIG. 9, the organic compound 2 of the present invention was highly purified and the spectrum similar to that of the organic compound 1 was observed in the NMR spectrum of FIG. 10 to FIG. 11 and in the organic compound 2 No methoxy proton of δ 3.86 in organic compound 1 was observed.

따라서 본 발명 유기화합물 2는 상기 유기화합물 1과 같은 골격에 methoxy기가 hydroxy(-OH)로 치환된 형태인 trans-N-caffeoyltyramine으로 밝혀졌으며 화학적 구조는 하기 화학식 2와 같다.Accordingly, the organic compound 2 of the present invention was found to be trans-N-caffeoyltyramine, which is a form in which the methoxy group is substituted with a hydroxy (-OH) group in the same skeleton as the organic compound 1, and its chemical structure is shown in the following Chemical Formula 2.

<화학식 2>(2)

Figure 112013070945395-pat00004

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<< 실시예Example 2> 본 발명 유기화합물 1 및 유기화합물 2의 기능성 평가 2> Functional Evaluation of Organic Compound 1 and Organic Compound 2 of the Invention

실험예 4: 본 발명 구기자나무 가지 추출물의 DCFH -DA(2`,7`- dichloro fluorescin-diacetate)를 이용한 항산화 활성검정 EXPERIMENTAL EXAMPLE 4: Preparation of DCFH -DA (2`, 7`- dichloro Antioxidant activity assay using fluorescin-diacetate

세포에서의 에너지 생산에서는 미토콘드리아 호흡에 의한 부산물인 반응성 산소기 (ROS, reactive oxygen species)의 생성이 수반되며 이것은 단백질, 지방 및 핵산에 손상을 가져온다. Energy production in cells involves the production of reactive oxygen species (ROS), a byproduct of mitochondrial respiration, which causes damage to proteins, fats and nucleic acids.

이러한 손상으로부터 세포 자체를 보호하기 위해 세포 내의 방어체계가 작동을 하지만 유리 라디칼의 생성과 항산화 체계의 균형이 깨어지면 산화스트레스가 세포에 작용하게 되어 신체노화를 비롯한 각종 성인병과 암의 주요 원인으로 작용한다. In order to protect the cell itself from this damage, the defense system works in the cell. However, if the balance of the free radical generation and the antioxidant system is broken, oxidative stress acts on the cell, which is a major cause of various diseases and cancers of the body including aging. do.

따라서, 피부친화적이고 안정적인 식물을 원료로 항산화제 개발을 위해, 세포 내에 형성된 활성산소의 양을 측정하여 추출물에 대한 항산화능을 평가한다. DCFH-DA(2`,7`-dichlorofluorescin-diacetate)를 이용한 fluorimetric assay가 대표적인 평가법으로 DCFH-DA는 비극성분자로 용이하게 세포 내로 들어갈 수 있으며 세포 내의 esterase에 의해 비형광성 극성분자인 DCFH으로 분리된 후 세포 내의 활성산소에 의해 산화되면 형광성 DCF(2`,7`-dichlorofluorescin)로 전환되게 되고 이를 fluorometer로 측정하는 방법이다. Therefore, the antioxidant ability of the extract is evaluated by measuring the amount of active oxygen formed in the cells for developing an antioxidant using a skin-friendly and stable plant as a raw material. DCFH-DA is a nonpolar molecule that can easily enter the cell and is separated by the intracellular esterase into DCFH, which is a nonpolar polar molecule. The DCFH-DA is a typical evaluation method using a fluorimetric assay using 2 ', 7`-dichlorofluorescin-diacetate. After oxidation by reactive oxygen species in the cells, they are converted to fluorescent DCF (2`, 7`-dichlorofluorescin), which is measured by a fluorometer.

피부 섬유아세포(HDFn)를 DMEM (10 % 혈청 첨가, 1 % 항생제 포함) 배지에 현탁하여 37℃, 5 % CO2 배양기에서 배양하고 대수기에서 성장하는 세포를 주로 실험에 사용하였다. Well당 약 1 x 105세포 수가 되도록 96 well에 각각 접종한 후에 상기 제조예 1에 따라 수득한 구기자나무 가지 에탄올 추출물을 농도별로 각각 처리한 다음 37℃, 5 % CO2배양기에서 20분간 배양하였다. 그 다음, 산화스트레스 유발 물질인 H2O2 1mM을 첨가하고, DCFH-DA(stock 20 mM) 20 M를 가한 후 excitation 485 nm, emission 535 nm조건으로 spectrofluorophotometer로 측정한다음 37℃에서 90분 동안 측정하였다. 시료를 넣지 않고 활성 산소종 (Reactive oxygen species)의 형성만을 측정한 것을 대조군으로 정하고, 본 발명 구기자 나무가지 에탄올 추출물을 넣어 활성 산소종을 소거시키는 시료 처치군과 비교하여 활성 산소종 저해율을 하기 계산식 1에 따라 구하고 모든 실험은 3번 반복실험하였다.The dermal fibroblasts (HDFn) were suspended in DMEM (containing 10% serum, 1% antibiotic), cultured at 37 ° C in a 5% CO 2 incubator, and cells growing in the larval stage were mainly used for the experiment. Wells were inoculated in 96 wells at a rate of about 1 x 10 5 cells per well. Then, the ethanol extract of Gujuza japonica obtained according to Preparation Example 1 was treated for each concentration and then cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C for 20 minutes . Then, an oxidative stress-inducing substance, H 2 O 2 And 20 M of DCFH-DA (stock 20 mM) were added, and then the result was measured by spectrofluorophotometer under the conditions of excitation 485 nm and emission 535 nm, followed by measurement at 37 ° C. for 90 minutes. As a control group, only the formation of reactive oxygen species was measured without adding a sample, and compared with the group treated with the extract of the present invention for extracting active oxygen species, the inhibition rate of reactive oxygen species was calculated by the following equation 1, and all the experiments were repeated three times.

계산식 1Equation 1

Figure 112013070945395-pat00005

Figure 112013070945395-pat00005

실험결과 도 12에 나타낸 바와 같이 본 발명 구기자나무 가지 에탄올 추출물 10, 50, 100ug/mL의 농도로 각각 세포에 처리하였을 때 농도의존적인 활성이 나타났으며 특히 100ug/mL농도로 처리한 실험구에서는 활성산소의 농도를 36.23% 감소시키는 우수한 효과를 확인할 수 있었다.
As shown in FIG. 12, when the cells were treated with ethanol extracts of 10, 50 and 100 ug / mL, the concentration-dependent activity was exhibited in the cells treated with 100 ug / mL of ethanol extract And the effect of reducing the concentration of active oxygen by 36.23% was confirmed.

실험예 5: 본 발명 구기자나무 에탄올 추출물, 클로로포름 분획물 및 유기화합물 1의 항염 활성검정 Experimental Example 5: Anti- inflammatory activity test of Gugija tree ethanol extract, chloroform fraction and organic compound 1 of the present invention

염증의 발현 기전에는 다양한 매개체가 관여하고 있으며, 그 병의 원인도 다양하다. 대식세포에 endotoxin으로 알려져 있는 LPS(lipopolysachride)를 처리하면, iNOS(inducible NOS)발현에 의해 NO 생합성이 증가하며 염증반응이 유도된다. NO는 많은 세포들이 분비하는 병리적인 2차 신호전달 물질이며, COX의 활성을 조절하고 염증반응에 상승적으로 작용한다. Raw 264.7 세포에서 LPS에 의해 유도되는 NOS에 의해 생성되는 NO를 측정함으로서 추출물의 염증반응 억제 효과를 판정할 수 있다. Various inflammatory mediators are involved in the pathogenesis of inflammation, and the causes of the disease vary. Treatment of macrophages with LPS (lipopolysachride), known as endotoxin, increases NO biosynthesis by inducible NOS (iNOS) expression and induces an inflammatory response. NO is a pathological secondary signaling substance secreted by many cells, regulates the activity of COX and acts synergistically to the inflammatory response. By measuring NO produced by LPS induced by NOS in Raw 264.7 cells, the inhibitory effect of the extract on inflammation can be determined.

Mouse macrophage cell인 RAW 264.7 세포에 염증 유발 물질인 LPS를 인위적으로 처리한 후 염증 억제 효과가 있는지를 평가하였다. 96 well plate에 well 당 2 x 105cell이 되도록 분주한 다음, 24시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 Overnight 배양한 다음, 새로운 배지로 교환해주고, LPS 1ug/mL를 처리하고 동시에 상기 제조예 1 내지 2에 따라 수득한 구기자나무 가지 에탄올 추출물, 구기자 가지 클로로포름 분획물 및 본 발명 유기화합물 1을 농도별로 1ug/mL 내지 100ug/mL 범위의 농도별로 투여하여 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배지 상층액을 취해 13,000 rpm에서 3분 동안 원심 분리하여 상등액만 모은 후, Griess reagent 시약과 1:1로 반응시키고, 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
Mouse macrophage cell RAW 264.7 cells were treated with LPS, an inflammation inducing substance, to evaluate whether they inhibited inflammation. The cells were cultured in 96-well plates at a density of 2 × 10 5 cells per well, cultured for 24 hours at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator, replaced with fresh medium, treated with 1 μg LPS / The ethanol extract of Guanyi tree, the chloroform fractions obtained in accordance with Examples 1 and 2, and the organic compound 1 of the present invention were each administered at a concentration ranging from 1 ug / mL to 100 ug / mL for 24 hours. After incubation, the supernatant was taken and centrifuged at 13,000 rpm for 3 minutes to collect supernatant, reacted with Griess reagent reagent 1: 1, and absorbance was measured at 570 nm.

실험결과 도 13에 나타낸 바와 같이 본 발명 구기자나무 가지 에탄올 추출물 을 10, 50, 100 ug/mL의 농도로 각각 RAW 264.7 세포에 처리하였을 때 5, 20, 40 %의 항염활성을 각각 확인할 수 있었으며, 상기 모든 농도에서 세포독성은 나타나지 않았다.Experimental Results As shown in FIG. 13, when the RAW 264.7 cells were treated with 10, 50 and 100 μg / mL of ethanol extracts of the present invention, the anti-inflammatory activity of 5, 20 and 40% No cytotoxicity was noted at all of the concentrations.

본 발명 구기자 가지 클로로포름 분획물도 도 14에 나타낸 바와 같이 10, 50, 100 ug/mL의 농도에서 각각 20, 82.5, 98%의 우수한 항염활성을 확인할 수 있었으며, 상기 모든 농도에서 세포독성은 나타나지 않았다. 따라서 구기자 나무가지 에탄올 추출물보다 이로부터 클로로포름으로 용매분획한 분획물의 항염활성이 현저하게 증가한 것을 알 수 있었다.As shown in FIG. 14, the fractions of the present invention showed excellent anti-inflammatory activity of 20, 82.5 and 98% at 10, 50 and 100 ug / mL, respectively. Therefore, the anti - inflammatory activity of the fractions fractionated with chloroform from the ethanol extract of P. japonicus was remarkably increased.

본 발명 구기자 가지 클로로포름 분획물로부터 분리한 본 발명 유기화합물 1의 항염활성은 도 15에 나타낸 바와 같이 10, 50, 100 ug/mL의 농도에서 각각 20, 70, 85%의 항염활성을 확인할 수 있었으며, 상기 모든 농도에서 세포독성은 나타나지 않았다.
As shown in FIG. 15, the anti-inflammatory activity of the organic compound 1 of the present invention isolated from the chloroform fraction of the present invention was found to be 20, 70 and 85% at the concentrations of 10, 50 and 100 ug / mL, No cytotoxicity was noted at all of the concentrations.

실험예 6: 본 발명 구기자나무 에탄올 추출물, 클로로포름 분획물 및 유기화합물 1의 콜라겐합성 증대효과 검정 Experimental Example 6: Enhancement of Collagen Synthesis Effect of Ethanol Extract, Chloroform Fraction and Organic Compound 1 of the present invention

피부 섬유아세포(HDFn)를 48 웰 플레이트에 5×104cells/well의 농도로 배양 배지 0.3 mL로 접종하여 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. 24시간 지난 이후 추출물을 농도별로 포함한 새로운 배지로 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양 이후 배양액을 모아서 enzymes-linked immunoassay kit (Takara사)를 이용하여 콜라겐 전구체의 C-말단의 양을 측정하였다. 또한, 콜라겐 용액 640 ng/mL을 이용하여 콜라겐 농도 0 ng-640 ng 사이의 standard curve를 얻어 배지에 있는 콜라겐 양을 계산하였다.
Dermal fibroblasts (HDFn) were inoculated into 48 well plates at a concentration of 5 × 10 4 cells / well in 0.3 mL of culture medium and cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 . After 24 hours, the extracts were cultured for 24 hours in a fresh medium containing the concentrations of the extracts. After culturing for 24 hours, the culture broth was collected and the amount of C-terminus of the collagen precursor was measured using an enzymes-linked immunoassay kit (Takara). In addition, a standard curve between collagen concentration of 0 ng and 640 ng was obtained using collagen solution 640 ng / mL, and the amount of collagen in the medium was calculated.

실험결과 도 16에 나타낸 바와 같이 본 발명 구기자나무 가지 에탄올 추출물 을 10, 50, 100 ug/mL의 농도로 처리하였을 때 각각 5, 22, 40 %씩 콜라겐 생성이 우수하게 증가됨을 확인할 수 있었으며, 상기 모든 농도에서 세포독성은 나타나지 않았다.Experimental Results As shown in FIG. 16, it was confirmed that collagen production was increased by 5, 22 and 40% by 10, 50 and 100 ug / mL, respectively, No cytotoxicity was seen at all concentrations.

본 발명 구기자 가지 클로로포름 분획물도 도 17에 나타낸 바와 같이 10, 50, 100 ug/mL의 농도에서 각각 2, 15, 23%씩 콜라겐 생성이 증가됨을 확인할 수 있었으며, 상기 모든 농도에서 세포독성은 나타나지 않았다. 그러나 구기자 나무가지 에탄올 추출물보다 이로부터 클로로포름으로 용매 분획한 분획물의 콜라겐 생합성 증대 효과가 더 증가하지는 않았다.As shown in FIG. 17, it was also confirmed that collagen production was increased by 2, 15 and 23% at 10, 50 and 100 ug / mL, respectively, and no cytotoxicity was observed at all the concentrations . However, the effect of increasing the collagen biosynthesis of the fractions fractionated with chloroform from the ethanol extract of P. japonica did not increase.

본 발명 구기자 가지 클로로포름 분획물로부터 분리한 본 발명 유기화합물 1의 콜라겐 생합성 증대 효과는 도 18에 나타낸 바와 같이 10, 50, 100 ug/mL의 농도에서 각각 20, 30, 40%씩 우수한 콜라겐 생성 증대 효과를 확인할 수 있었고, 상기 모든 농도에서 세포독성은 나타나지 않았다.
As shown in FIG. 18, the collagen biosynthesis enhancing effect of the organic compound 1 of the present invention isolated from the chloroform fraction of the present invention was enhanced by 20, 30 and 40% at 10, 50 and 100 ug / mL, , And no cytotoxicity was observed at all the concentrations.

이상 설명한 바와 같이 본 발명은 항염 또는 항주름 활성을 가지는 구기자 나무가지 추출물과 이의 분획물 그리고 구기자 나무가지 추출물로부터 유효성분들을 분리정제동정하여 이들을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항노화, 항염 또는 항주름 활성을 갖는 화장료 또는 기능성건강식품 조성물을 제공하는 효과가 있으므로 화장료 또는 식의약 소재산업상 매우 유용한 발명인 것이다.
INDUSTRIAL APPLICABILITY As described above, the present invention relates to a method for the isolation and purification of active ingredients from the extracts of the Aspergillus oryzae having anti-inflammatory or anti-wrinkle activity, fractions thereof and extracts of Aspergillus oryzae, and their antioxidant, anti-aging, anti- , It is a very useful invention in the cosmetics or food materials industry.

Claims (4)

구기자나무 가지 줄기분말의 에탄올 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차적으로 용매분획하여 얻은 클로로포름 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염 및 피부 주름 개선 기능성 화장료 조성물.
A functional cosmetic composition for anti-inflammation and skin wrinkle-improving, which comprises, as an active ingredient, a chloroform fraction obtained by sequential solvent fractionation of an ethanol extract of Tricholoma japonica tree stem powder with hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol.
구기자나무 가지 줄기분말의 에탄올 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차적으로 용매분획하여 얻은 클로로포름 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염 기능성 식품 조성물.
Wherein the chloroform fraction obtained by successively solvent fractioning the ethanol extract of the tree trunks of Gujuza japonica with hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol is used as an active ingredient.
제 2항에 있어서, 상기 조성물은 캅셀제, 환제, 과립제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가지는 것을 특징으로 하는 항염 기능성 식품 조성물.
The anti-inflammatory functional food composition according to claim 2, wherein the composition has one of the formulations selected from the group consisting of capsules, pills, and granules.
제 2항에 있어서, 상기 조성물은 식품학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것이 특징인 항염 기능성 식품 조성물.
3. The anti-inflammatory functional food composition according to claim 2, wherein the composition further comprises a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent.
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