KR100796851B1

KR100796851B1 - 사이클록시게나아제-2의 억제제로서 1-(4-설파밀아릴)-3-치환형-5-아릴-2-피라졸린

Info

Publication number: KR100796851B1
Application number: KR1020017016170A
Authority: KR
Inventors: 이. 프렘쿠마르 레디; 엠. 브이. 라마나 레디
Original assignee: 템플 유니버시티-오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션
Priority date: 1999-06-16
Filing date: 2000-06-16
Publication date: 2008-01-22
Also published as: EP1191931B1; USRE39681E1; AU771668C; EP1191931A4; AU5495100A; NZ516553A; IL146851A; AU771668B2; JP2003501464A; DE60034785D1; US6376519B1; EP1191931A1; IL146851A0; CA2377153A1; ATE361748T1; KR20020015350A; WO2000076503A1

Abstract

본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물로, 여기서, X는 트리할로메틸, C₁-C₆ 알킬 및 하기 화학식 2의 군으로 이루어진 군으로부터 선택되고:

화학식 2에서, R₃ 및 R₄는 수소; 할로겐; 히드록실; 니트로; C₁-C₆ 알킬; C₁-C₆ 알콕시; 카복시; C₁-C₆ 트리할로알킬; 및 시아노로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;

Z는 치환형 및 비치환형 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 상기 화합물은 사이클록시게나아제-2 활성의 억제제이다. 이들은 예컨대, 염증, 종양성 질환 및 혈관생성-매개 질환을 포함하는 사이클록시게나아제-매개 질환을 치료하는데 유용하다.

1-(4-설파밀아릴)-3-치환형-5-아릴-2-피라졸린, 사이클록시게나아제(COX)-2, 프로스타글란딘, COX-2 활성 억제, 사이클록시게나아제-매개 질환

Description

사이클록시게나아제-2의 억제제로서 1-(4-설파밀아릴)-3-치환형-5-아릴-2-피라졸린{1-(4-sulfamylaryl)-3-substituted-5-aryl-2-pyrazolines as inhibitors of cyclooxygenase-2}

본 발명은 1999년 6월 16일자로 출원된 미국 가특허 출원 제60/139,416호를 우선권으로 한다. 상기 가출원의 전체가 참고문헌으로 포함된다.

본 발명은 일반적으로 항-염증제, 좀 더 상세하게는 사이클록시게나아제-2의 활성을 억제하는 신규한 화합물에 관한 것이다.

프로스타글란딘(prostaglandin), 리폭시게나아제(lipoxygenase), 및 트롬복세인(thromboxane) 산물 같은 아라키돈산 대사물질은 다양한 조직에서 생성되고, 여러가지 생물학적 반응에서 중요한 역할을 한다. 프로스타글란딘은 유익한, 그리고 바람직하지 않은 생물학적 반응을 모두 중재한다. 프로스타글란딘의 생성은 염증의 특징인 동통, 종창, 열 및 발적(redness)을 유도한다. 프로스타글란딘 생성과 관련된 만성 염증은 손상된 조직 및 혈관생성(angiogenesis)의 파괴를 유도한다. 병리학적 만성 염증에서, 정상 조직이 파괴될 수 있고, 새로운 혈관 형성이 비정상 조직의 증식을 유도할 수 있다. 프로스타글란딘은 또한, 다른 기관에서 통상의 생리적 과정에 중요하다. 위(stomach)에서, 프로스타글란딘은 산으로부터 점막을 보 호한다. 그들은 또한, 신장에서 혈류와 염-물 균형을 조정한다. 프로스타글란딘은 또한, 혈소판 응집(platelet aggregation) 및 기억과 다른 인지 작용(cognitive function)에 참여한다.

프로스타글란딘은 효소의 캐스캐이드(cascade)에 의해 세포막 인지질로부터 생성된다. 상기 효소적 활성은 포스포리파제 A₂에 의해 세포막으로부터 아라키돈산의 방출, 아라키돈산의 사이클록시게나아제(또한, 프로스타글란딘 H 합성효소라고 함)에 의한 통상의 프로스타글란딘 전구체, PGH₂로의 전환을 포함한다.

아스피린 및 다른 비스테로이드계 항-염증제(NSAIDs)는 사이클록시게나아제 활성을 억제하여 프로스타글란딘의 형성을 방해한다. 그들은 진통성(analgesic), 해열성(antipyretic) 및 항염증성 활성을 갖는다. 그러나, 이용가능한 NSAIDs로의 만성 치료는 종종 유익한 프로스타글란딘-매개 과정의 손상을 유도한다. NSAIDs의 일정한 사용과 관련된 부작용은 위장(gastrointestinal; GI) 장애 및 생명을 위협하는 GI 궤양을 포함한다.

염증 조사 분야에서 놀라운 진보는 프로스타글란딘 합성효소 캐스캐이드의 각 단계에 대한 다양한 효소의 발견이 가져왔다. 상기 조사는 염증과 같은 일부 상황에서, 사이클록시게나아제가 유도성이라는 것을 제안한다. 사이클록시게나아제-1(COX-1)로 공지된 사이클록시게나아제는 완전히 비-유도성이거나, 또는 글루코코르티코이드에 의해 조정된다. 두번째로, 사이클록시게나아제-2(COX-2)로 공지된 사이클록시게나아제의 유도형(inducible form)이 계속해서 수 개의 연구 군에 의해 동정되고, 클론되었다. COX-1은 본질적으로 사이클록시게나아제 동형(isoform)이고, 주로 GI 관(tract)에서 세포방어 프로스타글란딘과 혈소판에서 혈소판 응집을 유도하는 트로복세인을 합성한다. COX-2는 유도성이고, 본질적으로 활성화되어 있는 일부 종양의 경우를 제외하고는 단생(short-lived)한다. COX-2 발현은 내독소(endotoxin), 사이토카인, 호르몬, 성장 인자 및 미토겐에 반응하여 자극된다. 이들 관찰은 COX-1 및 COX-2가 다른 생리학적 및 병리생리학적 기능을 제공한다는 것을 제안한다. 실제로, COX-1은 프로스타글란딘의 내인성 기저 방출의 역할을 하고, 따라서, GI 통합 및 신혈류량(renal blood flow) 같은 프로스타글란딘의 생리학적 기능에 중요하다. 반면, COX-2는 주로 염증약, 호르몬, 성장 인자 및 사이토카인에 반응하여 상기 효소의 유도가 일어나는 위치에서 프로스타글란딘의 병리적 효과의 역할을 한다고 개시되었다. 선택적 COX-2 억제의 이점에 대한 참고문헌으로 포함된 미국 특허 제5,604,253호 참조. 주로, 선택적 COX-2 억제제는 위장 독성 및 신장 부작용에 대해 감소된 포텐셜을 갖는 것 외에, 종래 NSAID와 유사한 항염증, 해열 및 진통 특성을 가질 것으로 기대된다.

COX-1 및 COX-2의 차별적 조직 분포는 COX-1에 대한 감소된 효과를 갖고 있어 위 부작용을 막는 COX-2에 대한 선택적 억제제를 발달시키려는 접근을 제공한다.

다양한 선택적 COX-2 억제제가 보고되었다. 이들은 디아릴 헤테로사이클릭(Penning et al., J. Med. Chem. 40, 1347-1365(1997)); 아세톡시페닐 알킬 설파이드(Kalgutkar et al., J. Med. Chem. 41, 4800-4818(1998)); 메탄 설폰아닐리드(Li et al., J. Med. Chem., 38, 4897-4905(1995)); 및 트리사이클릭 억제제 클라스(Wilkerson et al., J. Med. Chem., 38, 3895-3901(1995)) 등이다. 미국 특허 제5,604,253호는 사이클록시게나아제 억제제로서 N-벤질인돌-3-일 프로파노익 산 유도체를 개시한다.

추가 COX-2 억제제로서 요구된 것은 특히 COX-1 상에서 COX-2의 상기 사이클록시게나아제 활성을 선택적으로 억제하는 화합물이다.

본 발명의 요약

본 발명의 목적은 COX-2의 생물학적 활성, 특히, COX-2의 사이클록시게나아제 활성을 억제하는 화합물 및 이것의 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 목적은 바람직하지 않은 프로스타글란딘 생산 및/또는 분비와 관련된 병 상태를 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 목적은 사이클록시게나아제-매개 질환의 치료를 제공한다.

본 발명의 목적은 COX-1 상에서 COX-2를 선택적으로 억제하는 화합물을 제공한다.

본 발명의 목적은 본 발명의 화합물 및 이것의 중간체를 합성하는 방법을 제공한다.

본 발명의 상기 및 다른 목적들이 하기 설명으로부터 명확해질 것이다.

하기 화학식 1(Ⅰ)로 표시되는 화합물 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염으로,

여기서, X는 C₁-C₆ 트리할로메틸, 바람직하게는 트리플루오로메틸; C₁-C ₆ 알킬; 및 하기 화학식 2(Ⅱ)로 나타내는 선택적 치환형 또는 디-치환형 페닐기로 이루어진 군으로부터 선택되고:

여기서, R₃ 및 R₄는 수소, 할로겐, 바람직하게는 염소, 불소 및 브롬; 히드록실; 니트로; C₁-C₆ 알킬, 바람직하게는 C₁-C₃ 알킬; C₁-C₆ 알콕시, 바람직하게는 C₁-C₃ 알콕시; 카복시; C₁-C₆ 트리할로알킬, 바람직하게는 트리할로메틸, 가장 바람직하게는 트리플루오로메틸; 및 시아노로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;

Z는 치환형 및 비치환형 아릴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것으로 제공된다.

본 발명의 화합물에서 발생할 수 있는 알킬 및 알콕시기 중의 탄소 체인은 직쇄 또는 측쇄일 수 있다. 따라서, 상기 표현 "C₁-C₆ 알킬"은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소들을 포함하는 알킬기로 연장된다. 따라서, 상기 표현 "C₁-C₆ 알콕시"는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소들을 포함하는 알콕시키로 연장된다.

상기 단독 또는 혼합의 "아릴"은 1, 2 또는 3개 고리를 포함하는 방향족 시스템을 의미하는 것으로, 상기 고리는 매달린 형태로 함께 부착될 수 있거나 융합될 수 있다. 상기 "아릴"은 단지 탄소 고리 원자를 포함하는 방향족 시스템뿐만 아니라 고리 원자 같은 하나 이상의 비탄소 원자를 포함하는 시스템을 포함하는 것이다. 상기 시스템은 "헤테로아릴" 시스템으로 알려질 수 있다. 상기 "아릴"은 따라서, "헤테로아릴"을 포함하는 것이다.

바람직한 아릴기 Z는 페닐 및 헤테로아릴을 포함하고, 이는 치환 또는 비치환될 수 있다. "치환형"은 치환의 정도를 의미하는 것으로, 모노-, 디- 및 트리-치환이 바람직하다. 상기 치환기는 독립적으로 선택된다. 상기 치환기는 바람직하게는, 할로겐, 특히 염소, 불소 및 브롬; 히드록실; 니트로; C₁-C₆ 알킬, 바람직하게는 C₁-C₃ 알킬, 가장 바람직하게는 메틸; C₁-C₆ 알콕시, 바람직하게는 C₁-C₃ 알콕시, 가장 바람직하게는 메톡시; 카복시; C₁-C₆ 트리할로알킬, 바람직하게는 트리할로메틸, 가장 바람직하게는 트리플루오로메틸; 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택된다. 모노-, 디- 및 트리-치환이 바람직할지라도, 특히 아릴기가 페닐인 경우, 완전한 치환(full substitution)이 가능하다. 하나의 바람직한 실시형태에 따라, Z는 페닐기, 및 할로겐으로 모노-, 디-, 트리-, 테트라- 또는 펜타-치환된 것이다. 상기 할로겐 원자는 같거나 다를 수 있다.

또 다른 실시형태에 따라, Z는 페닐 또는 치환형 페닐기 외의 아릴기이고, 특히 치환형 또는 비치환형 헤테로아릴기이다. 상기 헤테로아릴기는 예컨대, 피리딜, 특히 2-, 3- 및 4-피리딜; 티에닐, 특히 2- 및 3-티에닐; 퓨릴, 특히 2- 및 3-퓨릴; 인돌일, 특히, 3-, 4-, 5-, 6- 및 7- 인돌일; 벤조티에닐, 특히, 3-, 4-, 5-, 6- 및 7- 벤조티에닐; 벤조퓨릴, 특히 3-, 4-, 5-, 6- 및 7-벤조퓨릴; 이미다졸일, 특히 2- 및 5-이미다졸일; 피라졸일, 특히 3- 및 5-피라졸일; 2-티아졸일; 2-벤조티아졸일; 퀴놀리닐, 특히, 2-, 3- 및 4-퀴놀리닐; 및 4-(2-벤질록사졸일)을 포함한다. 대표적인 바람직한 치환형 헤테로아릴기는 6-메틸-2-피리딜, 5-할로-2-티에닐, 5-메틸-2-티에닐, 5-할로-2-퓨릴, 5-할로-3-퓨릴, 2,5-디메틸-3-티에닐, 및 2,5-디메틸-3-퓨릴이다.

본 발명의 하나의 바람직한 실시형태에 따라, Z는 선택적으로 하기 화학식 3(Ⅲ)으로 나타내는 2- 또는 4-치환형(또는 2-, 4-디-치환형)페닐기이다:

여기서, R₁ 및 R₂는 수소; 할로겐, 특히, 불소, 브롬 및 염소; 히드록실; 니트로; C₁-C₆ 알킬; C₁-C₆ 알콕시; 및 카복시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.

다른 바람직한 실시형태에 따라, X는 선택적으로, 화학식 2에 따른 모노- 또는 디-치환형 페닐이고, R₃ 및 R₄는 수소, 할로겐, 히드록실; 니트로; C₁-C ₆ 알킬, C₁-C₆ 알콕시 및 카복시, 가장 바람직하게는 수소, 불소, 브롬, 염소, C₁-C ₃ 알킬, C₁-C₃ 알콕시, 히드록시 및 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. R₃가 수소이고, R₄가 수소가 아닐 때, R₄의 바람직한 고리 부착 위치는 2- 또는 4- 위치, 가장 바람직하게는 4-위치이다. R₃ 및 R₄는 모두 수소가 아닌 경우, 치환의 바람직한 위치는 2- 및 4-위치 또는 3- 및 4-위치이다.

본 발명은 또한, 화학식 1또는 5에 따른 화합물의 분리된 광학 이성체에 관한 것이다. "분리된"은 실질적으로 상기 같은 화학식의 상응하는 광학 이성체로부터 정제된 것이다. 바람직하게는, 상기 분리된 이성체는 적어도 약 80중량%, 더욱 바람직하게는 적어도 90중량% 순수, 좀 더 바람직하게는 적어도 98중량% 순수, 가장 바람직하게는 적어도 약 99중량% 순수이다.

본 발명은 또한, 상기 하기 화학식 4(Ⅳ)로 표시되는 신규한 중간체에 관한 것으로,

여기서, X 및 Z는 전술한 바와 같다.

본 발명은 또한, 전술한 신규한 중간체를 제조하는 방법에 관한 것이다. 화학식 4의 화합물을 제조하는 방법은,

(a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 케톤 화합물,

(ⅰ) 1,1,1-트리할로아세톤, 바람직하게는 1,1,1-트리플루오로아세톤; 및

(ⅱ) 하기 화학식의 화합물,

여기서, X는 C₁-C₆ 알킬 또는 하기 화학식 2의 라디칼;

화학식 2

여기서, R₃ 및 R₄는 전술된 바와 같고;

하기 화학식의 화합물과 반응시키는 단계: 및

여기서, Z는 치환형 및 비치환형 아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고;

(b) 상기 반응 산물로부터 화학식 4에 따른 화합물을 분리하는 단계:를 포함한다. 바람직한 실시형태에 따라, 상기 반응 온도는 약 15 내지 약 30℃의 범위에서 유지되나, 상기 반응 물질(reactant)의 끓는점에 따라 더욱 높은 온도가 가능하다.

다른 방법이 화학식 4의 전술된 중간체를 제조하기 위해 제공되고, 여기서, X는 트리할로메틸, 바람직하게는 트리플루오로-, 트리브로모- 또는 트리클로로메틸이다. 상기 방법은:

(a) 디에틸 메틸포스포네이트를 N-페닐트리할로아세트이미도일 클로라이드 및 하기 화학식의 화합물과 반응시키는 단계로: 및

여기서, Z는 치환형 및 비치환형 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;

(b) 화학식 4(여기서, X는 상기 반응 산물로부터 트리할로메틸이다.)에 따른 화합물을 분리하는 단계:를 포함한다.

본 발명의 다른 실시형태에 따라, 하기 화학식 5(Ⅴ)로 표시되는 화합물 또 는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공된다:

여기서, X는 트리할로메틸, C₁-C₆ 알킬 및 하기 화학식 2의 군으로 이루어진 군으로부터 선택되고:

화학식 2

여기서, R₃ 및 R₄는 수소; 할로겐; 히드록실; 니트로; C₁-C₆ 알킬; C₁-C₆ 알콕시; 카복시; C₁-C₆ 트리할로알킬; 및 시아노로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;

Z는 치환형 또는 비치환형 아릴, 바람직하게는 치환형 또는 비치환형 헤테로아릴이고; 그리고

R₅는 하기 화학식으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

여기서, R₆은 C₁-C₆ 알킬 및 M은 Na, K 또는 Li이다.

상기 화학식 4 중간체(여기서, X 및 Z는 전술된 바와 같다.)를 4-설파밀 페닐 히드라진 또는 이의 염과 반응시키고; 상기 반응 산물로부터 화학식 1에 따른 화합물을 분리하는 것으로, 화학식 1에 따른 화합물을 제조하는 방법이 또한 제공된다.

본 발명은 또한, 화학식 1의 하나 이상의 화합물을 약제학적으로 유효한 담체와 결합한 약제학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 다른 실시형태에 따라, 사이클록시게나아제-매개병을 치료하는 방법이 화학식 1에 따른 화합물의 유효량을 그러한 치료의 요구상태에 있는 동물에 투여하는 것을 포함하여 제공된다. 상기 "동물"이라는 표현은 사람을 포함하는 것이다.

상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 COX-2의 유효한 억제제이다. COX-2 활성이 사람 재조합 COX-2를 시험 화합물 및 [¹⁴C]-아라키돈산과 인큐베이션하는 세포-프리 분석으로 확인되었다. 상기 생성되는 방사선 표지된 프로스타노이드 화합물, 즉, 아라키돈산과 COX-2 반응 산물을 정량했다.

본 발명의 화합물은 하기 화학식 4의 중간체를 통하여 제조될 수 있다:

화학식 4

여기서, X 및 Z는 전술된 바와 같다.

화학식 1로 표시되는 화합물은 화학식 4의 중간체를 설파밀 페닐 히드라진 하이드로클로라이드와 반응시켜서 제조된다.

본 발명의 다른 실시형태에 따라, 화학식 1에 따른 화합물을 또한, 하기 화학식의 무수물,

또는 하기 화학식의 아실레이팅 화합물,

(여기서, R₆는 C₁-C₆ 알킬이다.)과 반응시켜서 상응하는 설폰아미드 즉, 하기 화학식 5에 따른 화합물을 형성할 수 있다:

화학식 5

여기서, R₅는 하기 화학식,

및 R₆은 전술된 바와 같다. 상기 상응하는 알칼리 금속염 즉, R₅가 하기 화학식,

(여기서, M은 Na, K 또는 Li이다.)으로 나타내는 화합물을, 상기 설폰아미드와 NaOH, KOH 또는 LiOH로 이루어진 군으로부터 선택된 알칼리 하이드록사이드를 반응시켜서 형성할 수 있다.

하기는 상기 화학식 1 화합물 또는 그것의 중간체를 제조하는 통상의 과정이다:

과정 1: 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-아릴-3-부텐-2-온 중간체의 합성

에탄올(25 ml) 중 10% 소듐 하이드록사이드 용액에, 1,1,1-트리플루오로아세톤(10 mmol)을 첨가하고, 15 내지 20℃에서 교반한다. 여기에 적당한 하기 화학식의 아르알데하이드(araldehyde)(10 mmol) 용액,

(여기서, Z는 전술된 바와 같다.)을 첨가하고, 4시간 동안 강하게 교반시킨다. 전체 반응을 통하여 반응 온도는 15 내지 20℃로 유지시킨다. 상기 용액을 얼음 물에 부어 넣고, 농축 염산으로 산성화시킨다. 생성되는 분리된 화학식 4(X=CF₃)의 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-아릴-3-부텐-2-온을 에테르로 추출하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨다. 건조된 에테르층의 증발로 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-아릴-3-부텐-2-온을 생성하고, 재결정으로 정제한다.

과정 1A: 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-아릴-3-부텐-2-온 중간체의 다른 합성

리튬 디이소프로필아미드(10 mmol)의 냉각된 용액(-70℃)에, 디에틸 메틸포스포네이트(5 mmol)을 첨가한다. 상기 혼합물을 -70℃에서 30분 동안 교반한 후, N-페닐트리플루오로아세트이미도일 클로라이드(5 mmol)을 점진적으로 첨가하고, -70℃에서 1시간 동안 교반을 계속한다. 하기 적당한 아르알데하이드(5 mmol),

(여기서, Z는 전술한 바와 같다.)를 10분 동안 한 방울식 첨가한다. 생성되는 혼합물을 2시간에 걸쳐서 실온으로 가열하고, 밤새 교반한다. 그리고, 희석 염산 20 ml을 첨가하고, 실온에서 4시간 동안 교반시킨다. 상기 용액을 디에틸 에테르(각 20 ml)로 3회 추출하고, 이어서 5% 소듐 비카보네이트와 소금물로 상기 용액의 pH가 6이 될 때까지 세척한다. 상기 에테르 층을 분리하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하여 조 트랜스-1,1,1-트리플루오로메틸-4-아릴-3-부텐-2-온을 생성한다. 상기 생성물을 컬럼 크로마토그라피 또는 재결정으로 정제한다.

적당한 1,1,1-트리할로아세톤이 과정 1의 1,1,1-트리플루오로아세톤에 대해 치환되어 다른 트랜스-1,1,1-트리할로-4-아릴-3-부텐-2-온 중간체를 제공할 수 있다. 유사하게, 다른 N-페닐트리할로아세트이미도일 클로라이드가 과정 1A의 N-페닐트리플루오로아세트이미도일 클로라이드에 대해 치환되어 다른 트랜스-1,1,1-트리할로-4-아릴-3-부텐-2-온 중간체를 제조할 수 있다.

과정 2: 트랜스-1-(알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴)-3-아릴-2-프로펜-1-온 중간체의 합성

에탄올(25 ml) 중 10% 소듐 하이드록사이드 용액에, 하기 화학식의 케톤(20 mmol),

(여기서, X는 C₁-C₆ 알킬이다.), 또는 하기 화학식 2의 라디칼(10 mmol),

화학식 2

(여기서, R₃ 및 R₄는 전술된 바와 같다.)을 첨가하고, 15 내지 20℃에서 교반시킨다. 여기에, 적당한 아르알데하이드(10 mmol),

(여기서, Z는 전술한 바와 같다.) 용액을 첨가하고, 4시간 동안 강하게 교반한다. 상기 반응 온도는 반응 전체를 통하여 15 내지 20℃로 유지한다. 상기 용액을 얼음 물에 부어 넣고, 농축 염산으로 산성화한다. 생성되는 분리된 하기 화학식 4(X=C₁-C₆ 알킬 또는 상기 화학식 2의 라디칼)의 트랜스-1-(알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴)-3-아릴-2-프로펜-1-온을 에테르로 추출하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨다. 상기 건조된 에테르 층의 증발로 트랜스-1-(알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴)-3-아릴-2-프로펜-1-온을 생성하고, 이를 증류 또는 재결정으로 정제한다.

과정 3: 1-(4-설파밀아릴)-3-트리플루오로메틸-5-아릴-2-피라졸린의 합성

무수 메탄올 중 상기 화학식 4(X=CF₃)의 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-아릴-3-부텐-2-온(5 mmol)의 용액에, 4-설파밀페닐 히드라진 하이드로클로라이드(6 mmol)을 첨가한다. 상기 혼합물을 교반기를 갖는 핫 플레이트(hot plate) 위에서 밤새 동안 교반으로 환류시킨다. 상기 용액을 냉각하고, 분쇄된 얼음에 부어 넣고, 고체 물질을 여과에 의해 분리한다. 상기 고체 물질의 적당한 용매로의 재결정으로 하기 화학식 1a의 순수한 1-(4-설파밀아릴)-3-트리플루오로메틸-5-아릴-2-피라졸린을 생성한다.

과정 4: 1-(4-설파밀아릴)-3-(알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴)-5-아릴-2-피라졸린의 합성

무수 메탄올 중 상기 화학식 4의 트랜스-1-(알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴)-3-아릴-2-프로펜-1-온(5 mmol)의 용액에, 4-설파밀 페닐 히드라진 하이드로클로라이드(6 mmol)를 첨가한다. 상기 혼합물을 교반기를 갖는 핫 플레이트 위에서 밤새동안 교반하여 환류시킨다. 상기 용액을 냉각시키고, 분쇄된 얼음에 부어 넣고, 고체 물질을 여과로 분리한다. 상기 고체 물질의 적당한 용매로의 재결정으로 상기 화학식 1(여기서, X 는 과정 2에서 전술된 바와 같다.)의 순수한 1-(4-설파밀아릴)-3-(알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴)-5-아릴-2-피라졸린을 생성한다.

과정 5: N-[4-(5-아릴-3-트리플루오로메틸피라졸린-1-일)페닐설포닐]아세트아미드의 합성

테트라히드로퓨란(40 ml) 중 1-(4-설파밀페닐)-3-트리플루오로메틸-5-아릴-2-피라졸린(10 mmol)의 용액에, 무수 아세트산(20 mmol), 4-디메틸아미노피리딘(10 mmol) 및 트리에틸아민(11 mmol)을 첨가하고, 실온에서 16시간 동안 교반한다. 상기 반응 혼합물을 물(100 ml)에 부어 넣고, 에틸아세테이트로 추출한다. 상기 에틸아세테이트 층을 분리, 연속해서 물, 소금물로 세척하고, 무수 황산설페이트 상에서 건조한다. 상기 건조된 유기층을 여과하고, 감압하에서 증발시켜 조 N-[4-(5-아릴-3-트리플루오로메틸피라졸린-1-일)페닐설포닐]아세트아미드를 생성한다. 혼합된 용매로부터의 재결정으로 순수한 화합물을 생성한다.

다른 설폰아미드를 과정 5에서 무수 아세트산에 대해 하기 화학식의 무수물,

(여기서, R₆은 C₁-C₆ 알킬이다.)로 치환하여 제조하는 것으로 하기 화학식 6(Ⅵ)(여기서, X는 트리플루오로메틸이다.)의 화합물을 생성할 수 있다:

과정 6: N-[4-(5-아릴-3-트리플루오로메틸피라졸린-1-일)페닐설포닐]아세트아미드 소듐염의 합성

에탄올(100 ml) 중 N-[4-(5-아릴-3-트리플루오로메틸피라졸린-1-일)페닐설포닐]아세트아미드(5 mmol) 용액에, 소듐 하이드록사이드(물 20 ml 중 5 mmol)을 첨가하고, 5시간 동안 교반한다. 상기 용액을 진공에서 농축하여 1-(4-설파밀페닐)-3-트리플루오로메틸-5-아릴-2-피라졸린의 고체 수화 소듐염을 생성한다.

다른 설폰아미드의 염을 출발 화합물로서 상기 화학식 5에 따른 적당한 아미드로 치환하여 같은 방식으로 제조할 수 있다.

과정 7: N-[4-(5-아릴-3-[알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴]피라졸린-1-일)페닐설포닐]아세트아미드의 합성

화학식 5(X=C₁-C₆ 알킬 또는 선택적으로 치환된 또는 디-치환된 페닐)에 따른 N-[4-(5-아릴-3-[알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴]피라졸린-1-일)페닐설포닐]아세트아미드를 출발 물질로서 1-(4-설파밀페닐)-3-트리플루오로메틸-5-아릴-2-피라 졸린에 대해 적당한 1-(4-설파밀페닐)-3-(알킬 또는 선택적으로 치환된 페닐)-5-아릴-2-피라졸린으로 치환하여 과정 5에 따라 제조한다.

유사한 방식으로, 아세트아미드 외의 화학식 5(X=C₁-C₆ 알킬 또는 선택적으로 치환된 또는 디-치환되 페닐)에 따른 설폰아미드를 과정 5에서 무수 아세트산에 대해 적당한 무수물로 치환하여 제조할 수 있다. 이들 화합물은 과정 6에 따라 염으로 전환될 수 있다.

본 발명의 화합물은 바람직하게는 적어도 약 50, 더욱 바람직하게는 적어도 약 100의 COX-1 억제 상에서 COX-2 억제의 선택성 비율(selectivity ratio)로 특징지어진다. COX 억제는 본 명세서의 후반에 기술된 효소 분석 방법과 같은 종래 공지된 시험관내 효소 분석으로 측정될 수 있다.

본 발명의 화합물은 제형 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로 제조될 수 있다. 상기 "약제학적으로 허용가능한 염"은 알칼리 금속염을 형성하고, 유리(free) 산 또는 유리 염의 부가염(addition salt)을 형성하는데 통상 사용되는 염을 포함한다. "화학식 1(또는 화학식 5)" 또는 "본 발명의 화합물"이라는 표현은 약제학적으로 허용가능한 염이 또한 포함되는 것을 의미하는 것으로 이해된다. 상기 염의 본질은 중요하지 않고, 약제학적으로 허용가능하게 제공된다. 적당한 약제학적으로 허용가능한 산 부가염은 무기산 또는 유기산으로부터 제조될 수 있다. 그러한 무기산의 예는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 질산, 탄산, 황산 및 인산이다. 적당한 유기산은 지방족, 사이클로지방족, 방향족, 아르알리패틱(araliphatic), 헤테로사이클릭, 카복실 및 설포닉 유기산류로부터 선택될 수 있고, 그 예는 포름산, 아세트산, 프로피온산, 석신산, 글리콜산, 글루콘산, 젖산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 글루쿠론산, 말레인산, 푸마르산, 피루브산, 아스파르트산, 글루탐산, 벤조산, 안트라닐린산, 메실릭(mesylic)산, 4-히드록시벤조산, 페닐아세트산, 만데릭(manderic)산, 엠보닉(embonic)(파모익)산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, 판토테닉(pantothenic)산, 2-히드록시에탄설폰산, 톨루엔설폰산, 설파닐릭산, 사이클로헥실아미노설폰산, 스테아르산, 알게닉산, 베타-히드록시부틸산, 살리사이클릭산, 갈락타릭(galactaric)산 및 갈락투로닉산이다. 화학식 1 화합물의 적당한 약제학적으로 허용가능한 염기 부가염은 칼슘, 리튬, 마그네슘, 포타슘, 소듐 및 아연으로 제조된 금속염, 또는 N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 클로린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민(meglumine)(N-메틸글루카민) 및 프로카인으로 제조된 유기염을 포함한다. 이들 염 모두는 예컨대, 화학식 1 또는 화학식 5의 상기 화합물과 예컨대, 적당한 산 또는 염기를 반응시켜서 화학식 1 또는 화학식 5의 상응하는 화합물로부터 종래 수단에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용가능한 담체와 결합시킨 약제학적 조성물의 제형으로 투여될 수 있다. 그러한 제형의 유효 성분은 0.1 내지 99.99 중량%로 구성될 수 있다. "약제학적으로 허용가능한 담체"는 상기 제형의 다른 성분들과 상용가능하고, 수용자에게 해가 없는 희석제 또는 부형제인 담체를 의미한다.

본 발명의 화합물은 사이클록시게나아제 활성, 특히 COX-2 활성("사이클록시게나아제-매개 질환")으로 발생하는 바람직하지 않은 프로스타글란딘 생산으로 특징지어지는 질환으로 고생하는 개체(동물, 가장 바람직하게는 사람을 포함하는 포유류)에 투여될 수 있다. 특히, 본 발명의 화합물은 염증 및 염증-관련 질환을 치료하는데 유용한 것으로 믿어지는데, 그러한 염증 또는 염증-관련 질환을 갖거나 의심되는 검체에 화학식 1 화합물의 유효량을 투여하여 이루어진다. 염증은 다양한 질환 상태와 관련된다. 사이클록시게나아제 억제제 및 특히, COX-2 억제제에 의해 치료가능한 그러한 질환 상태의 리스트는 여기서 전체적으로 참고문헌으로 포함된 미국 특허 제5,604,253호 및 제5,908,852호를 참고. 그러한 상태는 예컨대, 류마티스 관절염에 제한되지 않는 관절염으로, 척추관절증(spondyloarthropathies), 통풍성 관절염(gouty arthritis), 골관점염(osteoarthritis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus) 및 연소성 관절염(juvenile arthritis)을 포함한다. 그러한 상태는 또한, 류마티스성 열, 인플루엔자 또는 다른 바이러스성 감염, 일반적인 감기, 요통(low back) 및 경부통, 월경불순(dysmenorrhea), 두통, 치통, 염좌(sprain) 및 스트레인(strain), 근염(myositis), 신경통(neuralgia), 활막염(synovitis), 통풍(gout) 및 강직성 척추염(ankylosing spondylitis), 점액낭염(bursitis), 및 외과적, 치과적 치료에 따르는 징후를 포함한다. 본 발명의 화합물은 고통의 다양한 형태를 치료하고, 경감하는데 유용한 진통제로서 유용한 것으로 여겨진다. 상기 화합물은 천식(asthma), 기관지염(bronchitis), 건염(tendinitis), 점액낭염(bursitis); 건선(psoriasis), 습진(eczema), 화상(burns) 및 피부염(dermatitis)과 같은 피부 관련 상태; 염증성 장질환(inflammatory bowel disease), 크론병(Crohn's disease), 위염(gastritis), 과민성 대장증후군(irritable bowel syndrome) 및 궤양성 대장염(ulcerative colitis)과 같은 위장 상태를 포함하는 다른 질환 및 대장암 예방을 위한 치료; 혈관 질환, 편두통(migraine headaches), 결절성동맥주위염(periarteritis nodosa), 갑상선염(thyroiditis), 재생불량성 빈혈(aplastic anemia), 호즈킨병(Hodgkin's disease), 경종(sclerodoma), 타입 Ⅰ 당뇨병(type Ⅰ diabetes), 중증 근무력증(myasthenia gravis), 사르코이도증(sarcoidosis), 신 증후군(nephrotic syndrome), 베제트 증후군(Behcet's syndrome), 다발성 근염(polymyositis), 치은염(gingivitis), 과민성(hypersensitivity), 결막염(conjunctivitis), 손상 후 종창, 심근허혈(myocardial ischemia) 등의 치료에 유용한 것으로 여겨진다. 본 발명의 화합물은 열 치료를 위한 해열제로 유용한 것으로 여겨진다.

또한, 본 발명의 화합물은 세포 종양성 형질전환(neoplastic transformation) 및 전이성 종양 성장을 억제할 수 있어서 암치료에 사용될 수 있다. 특히, 본 발명은 그러한 치료 또는 예방의 필요가 있는 검체에 프로스타글란딘을 생성하는 종양(neoplasia)을 치료 또는 억제하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 화학식 1 또는 화학식 5 화합물의 치료학적 유효량으로 검체를 치료하는 것을 포함한다. 상기 "종양"은 프로스타글란딘을 생성하거나 사이클록시게나아제를 발현시키는 종양으로, 양성과 암성 종양, 그로스(growths) 및 폴립을 포함한다. 사이클록시게나아제 억제제로 치료가능한 것으로 여겨지는 종양이 미국 특허 제5,972,986호 에 개시되어 있고, 그 전체가 참고문헌으로 포함된다. 상기 화합물은 증식 또는 생성된 종양을 억제, 즉, 퇴보를 유도하거나 상기 종양의 발병을 예방하거나 지연시킨다.

미국 특허 제5,972,986호에 따르면, 프로스타글란딘을 생성하고, 따라서 본 발명의 화합물로 치료가능한 것으로 여겨지는 종양은 뇌암, 골암, 기저 세포 암종 같은 상피세포-기원 종양(상피성 암종), 선암종, 입술 암, 입 암, 식도암, 소장암 및 위암 같은 위장암, 대장암, 간암, 담낭암, 이자암, 난소암, 자궁암, 폐암, 유방암 및 편평 세포 및 기저 세포 암 같은 피부암, 전립선암, 신세포암종 및 몸 전체를 통하여 상피세포에 영향을 미치는 다른 공지된 암을 포함한다.

본 발명의 화합물은 또한, 혈관생성-매개 질환의 치료에 유용할 수 있다. 따라서, 검체에서 혈관생성-매개 질환의 발병을 치료, 억제 또는 지연하는 방법은 본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량을 그러한 치료의 요구 상태에 있는 검체에 투여하는 것을 포함한다. 사이클록시게나아제 억제제로 치료될 수 있는 혈관생성-매개 질환은 전체적으로 여기서 참고문헌으로 포함된 미국 특허 제6,025,353호에 개시되어 있다. 미국 특허 제6,025,353호에 따르면, 그러한 질환은 예컨대, 전이(metastasis), 각막이식 거부(corneal graft rejection), 눈 혈관신생(ocular neovascularization), 망막 혈관신생(retinal neovascularization), 당뇨병성 망막벽증(diabetic retinopathy), 수정체후부섬유증식증(retrolental fibroplasia), 신생혈관 녹내장(neovascular glaucoma), 위궤양(gastric ulcer), 유아 혈관종(infantile hemaginomas), 비인두 혈관섬유종(angiofibroma of the nasophrynx), 뼈의 허혈괴사(avascular necrosis of bone) 및 자궁내막증(endometriosis)을 포함한다.

상기 화합물은 경구 및 비경구 투여의 어떤 루트로도 투여될 수 있다. 비경구 투여는 예컨대, 정맥내, 근육내, 동맥내, 복강내, 비강내, 직장내 또는 피하 투여를 포함한다. 상기 작용약(active agent)은 바람직하게는 선택된 투여 루트 및 표준 약제학 기준을 근거로 하여 선택된 약제학적으로 허용가능한 담체로 투여된다.

상기 작용약는 약제학 조제 분야에서 표준 기준에 따라 투여제형으로 제형화될 수 있다. 알퐁소 게나로(Alphonso Gennaro)의 Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed.(1990, Mack Publishing Co., Easton, PA.)을 참고. 적당한 투여 제형은 예컨대, 정제, 캅셀, 용액, 비경구 용액, 트로키(troches), 좌약 또는 현탁액을 포함할 수 있다.

비경구 투여에 대해, 상기 작용약는 물, 오일, 살린 용액, 수용성 덱스트로스(글루코오스) 및 동류의 설탕 용액 또는 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜의 글리콜 같은 적절한 담체 또는 희석제와 혼합될 수 있다. 비경구 투여를 위한 용액은 바람직하게는 상기 작용약의 물 용해성 염을 포함한다. 안정화제, 항산화제 및 방부제가 또한 첨가될 수 있다. 적당한 항산화제는 설파이트, 아스코르브산, 시트르산과 그것의 염 및 소듐 EDTA를 포함한다. 적당한 방부제는 벤즈알코니움 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로르부탄올을 포함한다.

경구 투여에 대해, 상기 작용약은 정제, 캅셀 또는 다른 적당한 경구 투여 제형의 제조를 위한 하나 이상의 고체 불활성 성분과 혼합될 수 있다. 예컨대, 상기 작용약은 카복시메틸셀룰로오스 칼슘, 마그네슘 스테아레이트, 만니톨 및 전분과 혼합될 수 있고, 종래 정제 제조방법으로 정제로 제형될 수 있다.

치료적 이점을 얻기 위한 본 발명에 따른 화합물의 특정 투여량은 물론 환자의 사이즈, 무게, 나이 및 성, 병의 본질 및 단계, 병의 공격성 및 투여 루트를 포함하는 각 환자의 특이적 환경에 따라 결정될 것이다. 예컨대, 약 0.01 내지 약 150 mg/kg/일의 일일 투여량이 사용될 수 있다. 더욱 높거나 또는 더욱 낮은 투여량이 또한 고려될 수 있다.

본 발명의 화합물은 피라졸린 중심의 위치 5에서 키랄 탄소 원자의 존재 때문에 선택적으로 활성이다:

화학식 1

다른 키랄 탄소 원자가 또한 존재할 수 있다. 본 발명은 부분입체이성질체들(diastereomers)과 그들의 라세미형 및 변형된 거울상이성질체로 순수한 폼 및 이의 약제학적으로 허용가능함 염을 포함하는 것을 의미한다. 분리된 광학 이성체는 종래 공지된 키랄 분리 기술에 의해 라세미 혼합물로부터 정제 될 수 있다. 그러한 하나의 방법에 따라, 화학식 1 또는 화학식 5 또는 이것의 키랄 중간체 구조를 갖는 화합물의 라세미 혼합물이 DAICEL CHIRALPAK AD(Daicel Chemical Industries, Ltd., Tokyo, Japan) 같은 적당한 키랄 컬럼을 사용하는 HPLC에 의해 99 중량%의 순수한 광학 이성체로 분리된다. 이 컬럼은 10 ㎛ 실리카-겔 기질에 코팅된 아밀로스 트리스(3,5-디메틸페닐)카바메이트의 충전을 포함한다. 상기 컬럼은 250 ×4.6 mm(L ×I.D.)의 크기를 갖는다. 상기 컬럼은 상기 제조자의 지시에 따라 작동된다. 유속은 430 psi(30 kg/㎤) 미만의 컬럼 압력을 생성하도록 유지되어야 한다. 통상 유속은 1.0 ml/분이다. 상기 작동 온도 범위는 0 내지 40℃이다. 상기 최대 작동 압력은 1200 psi이다. 하나의 적당한 이동상 시스템은 헥산/2-프로판올(100/0 내지 0/100 v/v)이다. 통상의 헥산/2-프로판올 이동상은 헥산/2-프로판올(90/10 v/v)이다. 다른 적당한 이동상 시스템은 헥산/에탄올(100/0 내지 85/15 v/v), (40/60 내지 0/100 v/v)이다. 적당한 이동상 변형제(modifier)는 염기성 샘플에 대해 N,N-디에틸아민 및 산성 샘플에 대해 트리플루오로아세트산을 포함한다.

도 1은 셀레콕시브(celecoxib)와 비교하여 본 발명의 화합물의 존재에서 결장암 세포 콜로니 증식의 억제를 도시하는 그래프이다.

본 발명의 실행이 하기 비제한 실시예를 통하여 기술된다.

실시예 1

1-(4-설파밀페닐)-3-트리플루오로메틸-5-페닐-2-피라졸린

A. 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-페닐-3-부텐-2-온을 1,1,1-트리플루오로아세톤 및 벤질알데하이드로부터 과정 1에 따라 제조한다.

B. 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-페닐-3-부텐-2-온(5 mmol)과 4-설파밀페닐 히드라진 하이드로클로라이드(6 mmol)의 용액으로 과정 3을 수행하였다. 상기 제목의 1-(4-설파밀페닐)-3-트리플루오로메틸-5-페닐-2-피라졸린 화합물을 73% 수율로 생성한다(m.p. 132-135℃; C, H 분석(C₁₈H₁₅SO₂N₄F₃H₂O)):

	%C	%H	%N
계산	50.70	4.01	13.13
확인	49.90	3.95	13.13

하기 표 1은 과정 3에 따라 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-(치환형)페닐-3-부텐-2-온(5 mmol)과 4-설파밀페닐 히드라진 하이드로클로라이드를 반응시켜서 제조된 실시예 2-23의 추가 화합물을 열거한다.

실시예	Y
2	2-Cl
3	3-Cl
4	4-Cl
5	2-F
6	3-F
7	4-F
8	4-Br
9	2-Cl, 4-F
10	2,4-Cl₂
11	3,4-Cl₂
12	3-Cl, 4-F
13	3,4-F₂
14	2,3-Cl₂
15	2-CH₃
16	4-CH₃
17	2-OCH₃
18	4-OCH₃
19	4-C₂H₅
20	4-CF₃
21	4-OH
22	4-NO₂
23	4-COOH

실시예 24

1-(4-설파밀페닐)-3-트리플루오로메틸-5-(3-인돌일)-2-피라졸린

A. 1,1,1-트리플루오로아세톤과 3-인돌일 카복스알데하이드로부터 과정 1에 따라 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-(3-인돌일)-3-부텐-2온을 제조하였다.

B. 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-(3-인돌일)-3-부텐-2-온(5 mmol)과 4-설파 밀페닐 히드라진 하이드로클로라이드(6 mmol)의 용액으로 과정 3을 수행한다. 상기 제목의 1-(4-설파밀페닐)-3-트리플루오로메틸-5-(3-인돌일)-2-피라졸린 혼합물을 82% 수율로 얻는다(m.p. 178-180℃; C, H 분석(C₁₆H₁₄SO₂N₄F ₃)):

	%C	%H	%N
계산	52.03	3.82	11.37
확인	51.91	3.84	11.15

하기 표 2는 과정 3에 따라 트랜스-1,1,1-트리플루오로-4-아릴-3-부텐-2-온과 4-설파밀페닐 히드라진 하이드로클로라이드를 반응시켜서 제조된 실시예 25-30의 추가 화합물을 열거한다.

실시예	Z
25	2-퓨릴
26	2-티에닐
27	2-피리딜
28	3-피리딜
29	4-피리딜
30	2-벤조퓨릴

하기 표 3은 과정 2 및 4에 따라 제조된 실시예 31-40의 추가 화합물을 열거한다.

실시예	Y₁	Y₂	M.P.(℃)
31	H	4-CH₃O	220-221
32	H	4-Cl	208-210
33	H	4-Br	206-207
34	4-F	4-F	188-190
35	4-Cl	4-F	212-213
36	4-CH₃	4-F	226-227
37	4-Cl	4-Cl	217-219
38	4-CH₃O	H	193-194
39	4-CH₂S	4-CH₃	204-206
40	4-CH₃SO₂	4-CH₃	250-252

사이클록시게나아제 효소 분석

화합물을 COX-1 및 COX-2에 대한 억제 활성에 관해 시험하였다. 실시예 1 및 24의 화합물들은 COX-2를 억제하는데 높은 선택성을 갖고 있다.

양(ovine) COX-1(Oxford Biomedical Research Inc.)과 사람 재조합 COX-2(Oxford Biomedical Research Inc.)의 사이클록시게나아제 활성을 하기와 같은 얇은 막 크로마토그라피(TLC) 방법으로 분석하였다. 모든 억제제는 디메틸 설폭사이드 중에 용해시켜 5 mM의 스톡 용액으로 하였다. 사람 재조합 COX-2(3 유닛) 또는 양 COX-1(15 유닛)을 100 mM Tris-HCl, pH 7.8, 500 μM 페놀 및 헤마틴(hematin)을 함유하는 용액 중에 다양한 농도의 억제제로 실온(24℃)에서 90 내지 120분 동안 인큐베이션하였다. 대조군으로 약물 없이 동일한 부피의 DMSO가 인큐베이션 혼 합물에 첨가되었다. 90-120분 동안 인큐베이션 후, [1-¹⁴C]아라키돈산(50 μM, 51 mCi/mmol)(DuPontNEN)을 첨가하고, 37℃에서 2분 동안 인큐베이션하였다. 상기 반응을 1 ml 에틸아세테이트의 추출로 종결하였다. 상기 에틸아세테이트 층을 새로운 관에 옮기고, 스피드백(Speedvac) 진공 드라이어에서 증발건조시켰다. 상기 관의 함량을 20 ml의 에틸아세테이트로 복원하고, TCL 플레이트(J.T. Baker, Philipsburg, NJ)에 반점을 찍고, 4℃, 클로로포름/메탄올(95:5)을 함유하는 이동상에서 현상하였다. 방사선 표지된 프로스타노이드 화합물(방사선 표지된 아라키돈산 기질을 갖는 COX 효소적 반응의 생성물)을 방사능 스캐너(Fuji, Phosphorimager)로 정량하였다. 다양한 억제제 농도에서 관찰된 총 생성물의 퍼센트는 DMSO로 동일한 시간 동안 프리 인큐베이션(pre incubationed)된 단백질 샘플에 대해 관찰된 생성물의 퍼센트로 나눠진다. 상기 결과를 하기 표 4에 나타낸다. 상기 실시예 1 및 2의 화합물은 COX-1과 비교하여 COX-2를 억제하는 것에 있어서, 1000배 이상의 활성을 나타낸다.

사이클록시게나아제 활성의 억제

		IC₅₀(μM)
실시예	Z	COX-2	COX-1
1	C₆H₅	0.10	>100
24	3-인돌일	0.078	>100

소프트 아가 분석

상기 실시예 1 및 24 화합물들을 소프트 아가에서 DLD-1 세포의 증식을 억제하는데 있어서, COX-2 억제제 셀레콕시브(celecoxib)와 비교하였다. DLD-1 세포는 COX-2를 과발현하는 사람 대장성 암종 세포이다. DLD-1 세포는 소프트 아가에서 증식하고, 누드 마우스에서 종양을 형성한다. 상기 소프트 아가 분석은 하기와 같이 수행된다. 바닥층 아가(8% 노블 아가)를 60 ㎣ 조직 배양 디쉬에 놓는다. 상기 종양 세포를 지수 증식(exponential growth)에 있는 동안 정상 성장 플라스크로부터 트립신화한다. 상기 세포를 혈구계수기(hemecytometer)를 사용하여 카운트하고, 1.0 ×10⁵ 세포를 증식 배지, 4% 노블 아가 및 다양한 농도의 약물을 함유하는 탑 아가(top agar) 혼합물로 넣는다. 상기 농도 범위는 통상 10 μM 내지 75 μM 사이이다. 상기 세포는 분석 시스템 동안 재주입되지 않는다; 따라서, 상기 세포를 상기 작용약의 1회 투여 처리하였다. 상기 플레이트를 0.05%(w/v) 니트로블루 테트라졸리움 용액(단지 생육할 수 있는 세포만을 염색하는)으로 20일 후에 48시간 동안 염색한다. 상기 결과를 도 1에 도시하고, 도 1에서, y-축은 비처리 대조군 세포에 비교하여 남아있는 세포 콜로니의 퍼센트이다. 시험된 가장 높은 농도에서도 셀레콕시브는 본 발명의 화합물에 대한 100%와 비교하여 단지 일부의 억제만을 얻었다.

여기서 인용된 문헌이 참고문헌으로 포함된다.

본 발명은 그것의 관점 또는 필수적 특징으로부터 벗어남 없이 다른 특정 형태로 구체화될 수 있고, 따라서, 참고는 본 발명의 범위를 지시하는 것으로서 상기 명세서 보다는 첨부된 청구항으로 이루어질 수 있다.

Claims

삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
하기 화학식으로 표시되는 것을 특징으로 하는 화합물;

여기서:

X는 트리할로메틸, C₁-C₆알킬 및 하기 화학식 2로 표시되는 그룹으로 이루어진 군으로 부터 선택되며:

화학식 2

여기서:

R₃ 및 R₄는 수소; 할로겐; 하이드록실; 니트로; C₁-C₆알킬, C₁-C₆알콕시, 카복시; C₁-C₆트리할로알킬; 및 시아노로 이루어진 군으로 부터 독립적으로 선택되며;

Z는 아릴이며;

그리고

R은 NH₂,
, 및
으로 이루어진 군으로 부터 선택되며,

여기서 R₆는 C₁-C₆알킬이고 M은 Na, K 또는 Li이고;

여기서 상기 아릴은 하나 이상의 비-탄소 원자를 고리 원자로 함유하는 탄소환 시스템, 및 또한 방향족 시스템을 포함하고, 상기 시스템은 메달린 형태로 함께 부착되거나, 또는 융합된 1, 2, 또는 3 고리를 함유하며, 각 고리는 5개 또는 6개의 원자를 포함하고;

(i) X가 트리할로메틸이면,

Z는 페닐이외의 아릴이며;

(ii) R이 NH₂이고 X가 하기 화학식 2로 표시되는 그룹이면:

화학식 2

여기서:

R₃ 및 R₄는 수소; 할로겐; 하이드록실; 니트로; 카복시; C₁-C₆알킬; C₁-C₆알콕시; C₁-C₆트리할로알킬; 및 시아노로 이루어진 군으로 부터 독립적으로 선택되고;

Z는 헤티로아릴; 하이드록실, 니트로, 카복시, C₁-C₆알킬 또는 시아노로 치환된 모노-치환형 페닐; 디-치환형 페닐; 및 트리-치환형 페닐로 이루어진 군으로 부터 선택되고;

Z가 헤테로아릴일때, 피리딜, 퓨릴, 인돌릴, 벤조티에닐, 벤조퓨릴, 이미다졸일, 피라졸일, 2-티아졸일, 퀴놀리닐 및 4-(2-벤질록사졸일)로 이루어진 군으로 부터 선택되며; 그리고

(iii) X가 C₁-C₆알킬이면,

Z는 헤티로아릴; 하이드록실, 니트로, 및 카복시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 치환체를 갖는 모노-치환형 또는 디-치환형 페놀; 및 트리-치환형 페닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Z가 헤테로아릴일때, 피리딜, 인돌릴, 벤조티에닐, 벤조퓨릴, 이미다졸일, 피라졸일, 2-티아졸일, 퀴놀리닐 및 4-(2-벤질록사졸일); 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염으로로 이루어진 군으로 부터 선택된다.
제39항에 있어서, 상기 화합물은 1-(4-설파밀페닐)-3-트리플루오로메틸-5-(3-인돌일)-2-피라졸린; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인 것을 특징으로 하는 화합물.
제39항 또는 제40항에 따른 것을 특징으로 하는 분리된(isolated) 광학 이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
의약품으로 사용하는 것을 특징으로 하는 제39항 또는 제40항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염
삭제
삭제
삭제
종양(neoplasia) 치료용 약제를 제조하기 위한 것을 특징으로 하는 제40항 에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 사용방법.
삭제
(a) 하기 화학식 4로 표시되는 화합물을 4-설파밀페닐 하이드라진 또는 이의 염과 반응시키는 단계:

화학식 4

여기서, X 및 Z는 제 39항에서 정의한 바와 같으며;

(b) 상기 반응산물로부터 R이 -NH₂인 경우의 제 39항에 따른 화합물을 분리하는 단계를 포함하며, R이 -NH₂인 것을 특징으로 하는 제39항에 따른 화합물의 제조방법.
(a) 제39항에 따른 화합물:

여기서, X 및 Z는 제39항의 정의와 같고;

R은 -NH₂임;

하기 화학식으로 표시되는 화합물의 무수물:

또는

하기 화학식으로 표시되는 화합물의 아실화 화합물:

여기서, R₆는 C₁-C₆ 알킬;

을 반응시키는 단계; 및

(b) 상기 반응 산물로 부터 제39항에 따른 화합물을 분리하는 단계를 포함하며: 여기서 R 및 R₆는 상기에서 정의한 바와 같음;

R이
이고, 여기서 R₆는 C₁-C₆ 알킬인 것을 특징으로 하는 제39항에 따른 화합물; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 제조방법
(a) 제39항에 따른 화합물:

여기서, X 및 Z는 제39항의 정의와 같고;

R이
이며, 여기서, R₆는 상기 정의한 바와 같음: 및

NaOH, KOH 및 LiOH로 이루어진 군으로 부터 선택된 알칼리 하이드록사이드와 반응시키는 단계; 및

(b) 상기 반응 산물로 부터 제39항에 따른 화합물을 분리하는 단계를 포함하며; 여기서 R 및 R₆는 상기 정의한 바와 같음;

R이
, 여기서 R₆는 C₁-C₆ 알킬 및 M은 Na, K, 또는 Li인 것을 특징으로 하는 제39항에 따른 화합물; 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 제조방법.
의약품으로 사용하는 것을 특징으로 하는 제41항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.