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JP7284256B2 - Ｉｌｔ２に対する抗体およびその使用 - Google Patents

Ｉｌｔ２に対する抗体およびその使用 Download PDF

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Description

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０２０年６月４日に出願された米国仮特許出願第６３／０３４，５６９号、および２０１９年８月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／８８５，３７４号の優先権の利益を主張し、これらの内容は、それらの全体が参照によってすべて本明細書に組み入れられる。
本発明は、モノクローナル抗体、およびがんに対する免疫応答をモジュレートする分野にある。
ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＲ１およびＣＤ８５ｊとしても公知のＩＬＴ２は、免疫応答の阻害において公知の機能を有する免疫細胞上で発現する細胞表面タンパク質である。このタンパク質は、細胞外領域に４つのＩｇＣドメイン、および４つの細胞内のＩＴＩＭドメインを含有する。これは、ＩＬＴ１、ＩＬＴ２、ＩＬＴ３およびＩＬＴ４で構成されるＩＬＴファミリーのメンバーである。ＩＬＴ２は、ＩＬＴ４に最も類似し、約８０％の相同性を有する。ＩＬＴ２の公知のリガンドとしては、ＭＨＣ－１、ならびにＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＬＡ－Ｂ２７およびＵＬ１８（ヒトＣＭＶ）などの非古典的ＭＨＣ分子が挙げられる。ヒトゲノムにおけるＩＬＴ２の最も強い公知の相互作用物質はＨＬＡ－Ｇ１である。
ＨＬＡ－Ｇ１は、乳房、子宮頸部、ＣＲＣ、肺、胃、膵臓、甲状腺および卵巣のがん細胞、ならびに多形神経膠芽腫、メラノーマの細胞を含むさまざまな悪性腫瘍の表面上で広く発現する。その発現は、臨床転帰不良に関連する。さらに、腫瘍微小環境におけるＩＬＴ２発現は、ＨＬＡ－Ｇ１が存在しない場合でさえ、腫瘍溶解性免疫療法に対する臨床応答不良に関連している。がんに対する武器として、およびがんサーベイランスのための免疫応答の利用は、がんの予防および処置のための有望な手段である。しかしながら、ＩＬＴ２は、効果的な免疫療法に対する障害を提示する。ＩＬＴ２－ＨＬＡ－Ｇ１軸を回避することができる処置様式、およびＩＬＴ２のＨＬＡ－Ｇ１非依存性機能が大いに必要とされている。
本発明は、ＩＬＴ２に結合し、ＩＬＴ２媒介免疫細胞抑制を阻害するモノクローナル抗体；およびそれを含む医薬組成物を提供する。がんを処置する方法であって、本発明の組成物を投与することを含む方法、本発明の抗体、結合性断片および組成物を生成する方法、ならびにＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法の効能を増加させる方法も提供される。
第１の態様によれば、３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）および３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含むモノクローナル抗体または抗原結合性断片であって、
ａ．ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１３（ＳＧＹＹＷＮ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１４（ＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１５（ＧＹＳＹＹＹＡＭＤＸ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１６（ＲＴＳＱＤＩＳＮＹＬＮ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１７（ＹＴＳＲＬＨＳ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１８（ＱＱＧＮＴＬＰＴ）に示すアミノ酸配列を含み、Ｘは、Ａ、ＣおよびＳから選択され；
ｂ．ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１（ＤＨＴＩＨ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２（ＹＩＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＧ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３（ＴＷＤＹＦＤＹ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４（ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５（ＲＡＳＮＬＥＳ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６（ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ）に示すアミノ酸配列を含み；または
ｃ．ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号７（ＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８（ＥＩＹＰＧＳＧＮＳＹＹＮＥＫＦＫＧ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号９（ＳＮＤＧＹＰＤＹ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１０（ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１１（ＧＡＴＳＬＥＴ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１２（ＱＱＹＷＳＴＰＷＴ）に示すアミノ酸配列を含む、
モノクローナル抗体または抗原結合性断片が提供される。
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合性断片は、配列番号１９（ＱＶＱＬＱＱＳＤＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨＷＭＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＴＷＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ）、配列番号２１（ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＫＱＲＴＧＱＧＬＥＷＶＧＥＩＹＰＧＳＧＮＳＹＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＮＤＧＹＰＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ）および配列番号２３（ＤＶＱＬＱＧＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＧＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＴＩＳＲＤＴＤＫＮＱＦＳＬＫＬＮＳＶＴＡＡＤＴＡＴＹＹＣＡＨＧＹＳＹＹＹＡＭＤＸＷＧＱＧＴＳＳＶＴＶＳＳ）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含み、Ｘは、Ａ、ＣおよびＳから選択される。
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合性断片は、配列番号２０（ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＮＰＶＥＡＤＤＶＡＴＹＹＣＱＱＳＮＥＤＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ）、配列番号２２（ＤＩＱＭＴＱＳＳＳＹＬＳＶＳＬＧＧＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＳＩＴＳＬＱＴＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ）、配列番号２４（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＴＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＳＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ）および配列番号４５（ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＴＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＳＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗原結合性断片はヒト化されており、Ｘは、ＡおよびＳから選択される。
いくつかの実施形態によれば、ＸはＡであり、配列番号１５はＧＹＳＹＹＹＡＭＤＡ（配列番号２５）であり、配列番号２３はＤＶＱＬＱＧＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＧＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＴＩＳＲＤＴＤＫＮＱＦＳＬＫＬＮＳＶＴＡＡＤＴＡＴＹＹＣＡＨＧＹＳＹＹＹＡＭＤＡＷＧＱＧＴＳＳＶＴＶＳＳ（配列番号２８）である。
別の態様によれば、ＶＫＫＧＱＦＰＩＰＳＩＴＷＥＨ（配列番号４１）、ＬＥＬＶＶＴＧＡＹＩＫＰＴＬＳ（配列番号４２）、ＶＩＬＱＣＤＳＱＶＡＦＤＧＦＳ（配列番号４３）およびＷＹＲＣＹＡＹＤＳＮＳＰＹＥＷ（配列番号４４）から選択されるヒト白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＩＬＴ２）の配列内のヒトＩＬＴ２エピトープに結合する、モノクローナル抗体または抗原結合性断片が提供される。
いくつかの実施形態によれば、エピトープは、配列番号４１、４２、４３および４４を含む３次元エピトープである。
別の態様によれば、ＩＬＴ２に結合し、ＩＬＴ２とベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の間の直接相互作用を阻害する、モノクローナル抗体または抗原結合性断片が提供される。
いくつかの実施形態によれば、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２とＢ２Ｍの直接相互作用の阻害を介して、ＩＬＴ２とＨＬＡタンパク質またはＭＨＣ－Ｉタンパク質の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態によれば、ＨＬＡはＨＬＡ－Ｇである。
別の態様によれば、ＩＬＴ２に結合し、がんを患う対象において、
ａ．ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性の増加；
ｂ．Ｔ細胞の細胞傷害性、増殖またはその両方の増加；
ｃ．マクロファージの食作用の増加、Ｍ１炎症性マクロファージの発生の増加、Ｍ２サプレッサーマクロファージの発生の減少、またはそれらの組合せ；および
ｄ．がんの腫瘍への樹状細胞のホーミングの増加、樹状細胞の活性化の増加、またはそれらの組合せ
のうちの少なくとも３つを誘導する、モノクローナル抗体または抗原結合性断片が提供される。
いくつかの実施形態によれば、がんは、ＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんである。
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２への結合、抗腫瘍Ｔ細胞応答の誘導／増強、Ｔ細胞の増殖の増加、がん誘導サプレッサー骨髄活性の低減、ナチュラルキラー細胞の細胞傷害性の増加、マクロファージの食作用の増加、Ｍ１炎症性マクロファージの発生の増加、Ｍ２サプレッサーマクロファージの発生の減少、腫瘍微小環境における樹状細胞の数の増加、樹状細胞の活性化の増加、ＨＬＡ－Ｇを発現するがんの処置、およびＭＨＣ－Ｉを発現するがんの処置のうちの少なくとも１つにおける使用のためのものである。
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんを処置するための、オプソニン化剤と組み合わせた使用のためのものである。
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんを処置するための、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法と組み合わせた使用のためのものである。
別の態様によれば、それを必要とする対象におけるＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんを処置する方法であって、対象に本発明の抗体または抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与することを含む、方法が提供される。
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、対象にオプソニン化剤を投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態によれば、オプソニン化剤はＥＧＦＲ阻害剤であり、場合によりＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブである。
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、対象に抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく免疫療法を投与することをさらに含む。
別の態様によれば、それを必要とする対象におけるＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんを処置する方法であって、
ａ．対象におけるＩＬＴ２または可溶性ＨＬＡ－Ｇの発現が所定の閾値を上回ることを確認すること；および
ｂ．対象にＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤を投与すること
を含み、それにより対象におけるがんを処置する、方法が提供される。
いくつかの実施形態によれば、確認することには、投与前の対象におけるＩＬＴ２または可溶性ＨＬＡ－Ｇの発現を測定することを含む。
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、ＩＬＴ２の発現を確認することを含み、ＩＬＴ２の発現は対象の免疫細胞における発現である。
いくつかの実施形態によれば、免疫細胞は、末梢血免疫細胞および腫瘍内免疫細胞から選択される。
いくつかの実施形態によれば、免疫細胞は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞から選択される。
いくつかの実施形態によれば、免疫細胞は末梢血ＣＤ８陽性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、可溶性ＨＬＡ－Ｇの発現を確認することを含む。
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、対象に抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法を投与することをさらに含む。
別の態様によれば、それを必要とする対象におけるＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんを処置する方法であって、
ａ．対象にＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤を投与すること；および
ｂ．対象に抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法を投与すること
を含み、それにより対象におけるがんを処置する、方法が提供される。
別の態様によれば、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＨＣ－Ｉまたはその両方を発現するがん細胞に対する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる方法であって、がん細胞をＩＬＴ２アンタゴニストと接触させることを含む、方法が提供される。
いくつかの実施形態によれば、ＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤は、ＩＬＴ２アンタゴニストである。
いくつかの実施形態によれば、ＩＬＴ２アンタゴニストは、ＩＬＴ２に特異的に結合し、ＩＬＴ２媒介免疫細胞抑制を阻害する、抗体または抗原結合性断片である。
いくつかの実施形態によれば、本方法の抗体または抗原結合性断片は、本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片である。
いくつかの実施形態によれば、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく免疫療法は、抗ＰＤ－１遮断抗体である。
いくつかの実施形態によれば、がんは、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法に対して不応性である。
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、対象にオプソニン化剤を投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態によれば、オプソニン化剤はＥＧＦＲ阻害剤であり、場合によりＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブである。
別の態様によれば、がんを患う対象を処置する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法と組み合わせた使用のための、ＩＬＴ２に結合し、ＩＬＴ２媒介免疫細胞抑制を阻害する薬剤を含む医薬組成物が提供される。
別の態様によれば、本発明の抗体または抗原結合性断片を含む医薬組成物が提供される。
別の態様によれば、薬剤を生成するための方法であって、
ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること、マクロファージによるがん細胞の食作用の増加、がん細胞に対するＴ細胞の活性の増加、Ｍ１マクロファージの発生の増加、Ｍ２マクロファージの発生の低減、樹状細胞の腫瘍微小環境への動員の増加、樹状細胞の活性化の増加、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性の増加のうちの少なくとも２つを誘導する薬剤の能力を試験すること、ならびに前記食作用の増加、前記活性の増加、前記発生の増加、前記発生の低減、前記動員、前記活性化の増加、前記活性の減少、および前記細胞傷害性の増加のうちの少なくとも２つを誘導する少なくとも１つの薬剤を選択すること；または薬剤をコードする核酸配列を含む１つもしくはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、
ｉ．ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること；
ｉｉ．マクロファージによるがん細胞の食作用の増加、がん細胞に対するＴ細胞の活性の増加、Ｍ１マクロファージの発生の増加、Ｍ２マクロファージの発生の低減、樹状細胞の腫瘍微小環境への動員の増加、樹状細胞の活性化の増加、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性の増加のうちの少なくとも２つを誘導する薬剤の能力を試験すること；ならびに
ｉｉｉ．前記食作用の増加、前記活性の増加、前記発生の増加、前記発生の低減、前記動員、前記活性化の増加、前記活性の減少、および前記細胞傷害性の増加のうちの少なくとも２つを増加させる少なくとも１つの薬剤を選択すること
によって選択された薬剤の核酸配列であること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、マクロファージによるがん細胞の食作用の増加、がん細胞に対するＴ細胞の活性の増加、Ｍ１マクロファージの発生の増加、Ｍ２マクロファージの発生の低減、樹状細胞の腫瘍微小環境への動員の増加、樹状細胞の活性化の増加、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性の増加のうちの少なくとも３つを誘導する薬剤の能力を試験すること、ならびに少なくとも３つを誘導する少なくとも１つの薬剤を選択することを含む。
別の態様によれば、薬剤を生成するための方法であって、
ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること、がん細胞に対する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる薬剤の能力を試験すること、ならびに抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる少なくとも１つの薬剤を選択すること；または薬剤をコードする核酸配列を含む１つもしくはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、
ｉ．ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること；
ｉｉ．がん細胞に対する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる薬剤の能力を試験すること；ならびに
ｉｉｉ．がん細胞に対する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる少なくとも１つの薬剤を選択すること
によって選択された薬剤の核酸配列であること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
いくつかの実施形態によれば、効能を増加させることには、炎症誘発性サイトカインの分泌における相乗的な増加を含むか、または細胞傷害性の増加は、炎症誘発性サイトカインの分泌における増加を含む。
いくつかの実施形態によれば、炎症誘発性サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦαおよびＩＦＮγから選択される。
いくつかの実施形態によれば、効能を増加させることには、Ｔ細胞の活性化、細胞傷害性またはその両方における相乗的な増加を含む。
いくつかの実施形態によれば、Ｔ細胞の活性化、細胞傷害性またはその両方における増加は、膜のＣＤ１０７ａ発現の増加を含む。
いくつかの実施形態によれば、効能を増加させることには、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法に対して不応性のがんを抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法に対して応答するがんに転換することを含む。
いくつかの実施形態によれば、がん細胞は、ＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんである。
別の態様によれば、薬剤を生成するための方法であって、
ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること、ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する薬剤の能力を試験すること、ならびにＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する少なくとも１つの薬剤を選択すること；または薬剤をコードする核酸配列を含む１つもしくはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、
ｉ．ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること；
ｉｉ．ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する薬剤の能力を試験すること；ならびに
ｉｉｉ．ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する少なくとも１つの薬剤を選択すること
によって選択された薬剤の核酸配列であること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によれば、薬剤を生成するための方法であって、
配列番号４１、４２、４３および４４から選択されるヒトＩＬＴ２の配列内のＩＬＴ２エピトープに結合する薬剤を得ること、または薬剤をコードする核酸配列を含む１つもしくはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、
配列番号４１、４２、４３および４４から選択されるヒトＩＬＴ２の配列内のＩＬＴ２エピトープに結合する薬剤を得ることによって選択された薬剤の核酸配列であること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によれば、本発明の抗体または抗原結合性断片をコードする核酸分子が提供される。
いくつかの実施形態によれば、核酸分子は発現ベクターである。
本発明のさらなる実施形態および適用性の全範囲は、本明細書に以下に与えられる詳細な説明から明らかになるだろう。しかしながら、本発明の精神および範囲内のさまざまな変更および改変がこの詳細な説明から当業者に明らかになるので、詳細な説明および特定の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しながら、例示としてのみ与えられることが理解されるべきである。
リンパ球上でのＩＬＴ２の発現を描くヒストグラムである。５μｇ／ｍＬの最終濃度での市販の抗体＃１を使用した。結合は黒色ヒストグラムとして描かれ、アイソタイプ対照染色は薄い灰色ヒストグラムで示されている。 種々の免疫細胞上のＩＬＴ２の発現を描くヒストグラムである。５μｇ／ｍＬの最終濃度での市販の抗体＃１を使用した。結合は黒色ヒストグラムとして描かれ、アイソタイプ対照染色は薄い灰色ヒストグラムで示されている。 ＩＬＴ２ ＲＮＡが過剰発現されているＴＣＧＡデータベースからのがん徴候の表である。 腫瘍中のＭＤＳＣ濃縮とＩＬＴ２発現の間の相関のドットプロットである。Ｍ２濃縮とＩＬＴ２発現の間の相関を描く棒グラフも提示されている。 異なる腫瘍においてＩＬＴ２を発現する種々の免疫細胞のパーセントの散布図である。 免疫組織化学（ＩＨＣ）により決定した場合のＨＬＡ－Ｇ陽性である種々のがんについての症例のパーセントの棒グラフである。 種々のがんについてのＨＬＡ－Ｇ ＩＨＣスコアーの散布図である。 種々のがんにおける可溶性ＨＬＡ－Ｇレベルの散布図である。 ３つの抗ＩＬＴ２抗体の重鎖および軽鎖の配列である。ＫＡＢＡＴ方式で決定した場合の３つの抗ＩＬＴ－２抗体ＣＤＲの重鎖および軽鎖の配列は下線が施されているまたは赤色で示されている。 図６－１の続き。 図６－２の続き。 図６－３の続き。 ＩＬＴ２およびＩＬＴ２ファミリーメンバーへの抗体結合値の表である。 ヒトＩＬＴ２をトランスフェクトしたＢＷ細胞の細胞表面上のＩＬＴ２への抗体結合のヒストグラムである。 図７Ｂの続き。 ヒトＩＬＴ２をトランスフェクトしたＢＷ細胞の細胞表面で発現されるＩＬＴ２へのキメラおよびヒト化１９Ｅ３（左パネル）のならびにキメラおよびヒト化１５Ｇ８（右パネル）の結合の線グラフである。 １９Ｅ３抗体を用いた胃がん試料への免疫染色の画像である。 １５Ｇ８ヒト化抗体を使用しての、健康な対照およびがん患者由来のＰＢＭＣ試料でＩＬＴ２を発現する種々の免疫細胞のパーセントの散布図である。 図８Ａは、それぞれのＩＬＴ２抗体および正の対照（ＰＣ、ＧＨＩ／７５抗体）についてのパーセント遮断の棒グラフである。図８Ｂは、ＩＬＴ２遮断抗体の存在下でＨＬＡ－Ｇを発現する細胞へのＩＬＴ２－ビオチン結合のヒストグラムである。細胞へのＩＬＴ２－ビオチンの結合は、フローサイトメトリー分析によりストレプトアビジン－ＰＥを使用して決定された。抗体なし（灰色線）、１５Ｇ８（薄い灰色線）、アイソタイプ対照（黒色線）。図８Ｃは、ＨＬＡ－Ｇを発現する細胞へのＩＬＴ２－ビオチン結合により決定された場合の１５Ｇ８ヒト化抗体の遮断活性の線グラフである。図８Ｄは、抗体の存在下でＨＬＡ－Ｇを発現する細胞へのＩＬＴ２－ビオチンの結合により決定された場合のキメラおよびヒト化１９Ｅ３（左パネル）のならびにキメラおよびヒト化１５Ｇ８（右パネル）の遮断活性の線グラフである。図８Ｅは、ＨＬＡ－Ｇ発現細胞の存在下およびＩＬＴ２遮断抗体の存在または非存在下でのＩＬＴ２シグナル伝達レポーター構築物を発現する細胞からのマウスＩＬ－２分泌の棒グラフである。ＰＣ＝正の対照（ＧＨＩ／７５抗体）。図８Ｆは、レポーターアッセイにより決定した場合の１５Ｇ８ヒト化抗体の遮断活性の線グラフである。図８Ｇは、ＩＬＴ２遮断抗体および正の対照抗体の存在または非存在下でのＩＬＴ２シグナル伝達レポーター構築物を発現する細胞からのマウスＩＬ－２分泌の棒グラフである。図８Ｈ～図８Ｋは、ＩＬＴ２遮断抗体および正の対照（図８Ｉ～図８Ｊ）汎ＨＬＡ抗体もしくは（図８Ｋ）ＨＬＡ－Ｇ特異的抗体の存在または非存在下で、（図８Ｈ）ＩＬＴ２を欠くジャーカット細胞、または（図８Ｉ～図８Ｋ）Ａ３７５がん細胞と共培養されＩＬＴ２を発現し（図８Ｉ）ＭＨＣ－Ｉ発現のみであるジャーカット細胞もしくは（図８Ｊ～図８Ｋ）ＭＨＣ－Ｉと外来性ＨＬＡ－Ｇの両方を発現するジャーカット細胞からのヒトＩＬ－２分泌の棒グラフである。図８Ｌ～図８Ｎは、（図８Ｌ）１５Ｇ８抗体、（図８Ｍ）ＧＨＩ／７５抗体および（図８Ｎ）ＨＰ－Ｆ１抗体の存在または非存在下、ＨＬＡ－Ｇを発現するＡ３７５がん細胞と一緒に培養されてＩＬＴ２を発現するジャーカット細胞からのヒトＩＬ－２分泌の棒グラフである。図８Ｏ～図８Ｐは、１５Ｇ８抗体の存在と一緒におよびこの存在なしでＨＬＡ－Ｇ陽性がん細胞と一緒にインキュベートされた、ＴＩＬ細胞およびＮＫ細胞におけるそれぞれ活性化マーカー（図８Ｏ）リン酸化ＺＡＰ７０および（図８Ｐ）リン酸化Ｓｙｋの発現のドットプロットである。 図８－１の続き。 図８－２の続き。 図８－３の続き。 図８－４の続き。 図８－５の続き。 図８－６の続き。 図８－７の続き。 ＦＡＣＳベースの方法により決定される場合の、ＩＬＴ２抗体の存在下でマクロファージと共培養されたＨＬＡ－Ｇ発現がん細胞の対照からのパーセントとして食作用を測定した棒グラフである。 Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）システムにより決定した場合の、ＩＬＴ２抗体の存在下でマクロファージによるがん細胞のリアルタイム食作用の線グラフである。 ＩＬＴ２抗体１５Ｇ８の存在下で、マクロファージと共培養された種々のＨＬＡ－ＧおよびＭＨＣ－Ｉ発現がん細胞の対照からのパーセントとして食作用を測定した棒グラフである。 ＩＬＴ２抗体、アービタックス、ｈＩｇＧ対照またはそれらの組合せの存在下で、Ａ２５３－ＨＬＡ－Ｇ細胞と共培養されたマクロファージによる食作用の棒グラフである。 ＩＬＴ２抗体の存在下で、野生型７２１．２２１細胞またはＨＬＡ－Ｇ発現７２１．２２１細胞と共培養された活性化されたＣＤ８ Ｔ細胞からのＩＦＮγ分泌およびグランザイムＢ分泌の棒グラフである。 ＩＬＴ２抗体の存在下で、ＨＬＡ－Ｇ発現Ａ３７５細胞と共培養された活性化されたＣＤ８ Ｔ細胞からのＩＦＮγ分泌およびグランザイムＢ分泌の棒グラフである。 図１１Ａ～図１１Ｂは、ＩＬＴ２抗体の存在下で、（図１１Ａ）ＨＬＡ－Ｇおよび（図１１Ｂ）ＭＨＣ－Ｉを発現する種々のがん細胞系統と共培養されたＮＫ細胞系統細胞からのパーセント細胞傷害性の棒グラフである。図１１Ｃ～図１１Ｄは、１５Ｇ８ ＩＬＴ２抗体の存在下で、Ｈ＆Ｎがんおよびメラノーマ細胞と共培養したＮＫ細胞系統細胞からのそれぞれ（図１１Ｃ）グランザイムＢおよび（図１１Ｄ）ＩＦＮγ分泌の棒グラフである。図１１Ｅ～図１１Ｆは、ＩＬＴ２抗体の存在下で、標的がん細胞と一緒にインキュベートされたＩＬＴ２陽性原発ＮＫ細胞における（図１１Ｅ）ＩＦＮγ発現および（図１１Ｆ）ＣＤ１０７Ａ発現の棒グラフである。図１１Ｇ～図１１Ｈは、ＩＬＴ２陽性細胞とＩＬＴ２抗体への応答における（図１１Ｇ）ＩＦＮγ発現および（図１１Ｈ）ＣＤ１０７Ａ発現の相関を示す個々の発現の散布図である。 図１１－１の続き。 図１１－２の続き。 図１１－３の続き。 ＩｇＧまたは抗ＩＬＴ２抗体の存在下で、健康なドナーから単離された単球からＭ０、Ｍ１またはＭ２マクロファージへ分化されたマクロファージにおいてフローサイトメトリーにより決定された場合のＨＬＡ－ＤＲおよびＣＤ８０発現（ＭＦＩ）の線グラフである。対照ＩｇＧと比べて特定のマーカーの発現の増加を示す患者の数は試験した条件ごとに示されている。 図１３Ａは、種々の原発腫瘍細胞と共培養されたマクロファージによる食作用の棒グラフである。図１３Ｂ～図１３Ｃは、本発明のヒト化抗体の存在下での自己マクロファージによる（図１３Ｂ）ＲＣＣ患者および（図１３Ｃ）Ｈ＆Ｎ患者から単離された原発腫瘍細胞の用量依存性食作用の棒グラフである。 図１３－１の続き。 図１４Ａは、ＲＣＣおよび食道がん患者由来の腫瘍細胞（左パネル）およびＰＢＭＣ（右パネル）におけるＩＬＴ２およびＰＤ－１発現のドットプロットである。図１４Ｂ～図１４Ｃは、ＣＲＣ患者のＴＭＥ中のＣＤ８ Ｔ細胞集団での（図１４Ｂ）ＰＤ－１および（図１４Ｃ）ＩＬＴ２ ＲＮＡ発現の箱ひげ図である。図１４Ｄ～図１４Ｅは、（図１４Ｄ）健康なドナーの末梢血由来のＣＤ８ Ｔ細胞でのＩＬＴ２発現のならびに（図１４Ｅ）食道がん由来のＴＩＬでのＩＬＴ２およびＰＤ－１発現のドットプロットである。図１４Ｆは、１５Ｇ８、抗ＰＤ－１抗体またはこの２つの組合せの存在下で、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）で活性化された１０人の健康なドナー由来のＰＢＭＣ上での膜ＣＤ１０７ａの増加の散布図である。図１４Ｇは、３人のドナー由来の代表的なＰＢＭＣでの発現のＣＤ１０７ａ増加の棒グラフである。図１４Ｈ～図１４Ｊは、抗ＰＤ－１抗体、ヒト化抗ＩＬＴ２抗体または両方の存在下で、種々の原発がん細胞と共培養された活性化されたＰＢＭＣからの炎症性サイトカイン（図１４Ｈ）ＩＦＮγ、（図１４Ｉ）ＴＮＦα、（図１４Ｊ）ＧＭ－ＣＳＦ分泌のレベルの棒グラフである。図１４Ｋ～図１４Ｌは、混合リンパ球反応における（図１４Ｋ）樹状細胞または（図１４Ｌ）マクロファージと共培養されたＴ細胞からのＩＦＮγ分泌のレベルの棒グラフである。 図１４－１の続き。 図１４－２の続き。 図１４－３の続き。 図１４－４の続き。 図１４－５の続き。 図１５Ａは、ヒトマクロファージおよび抗ＩＬＴ－２抗体を補充した免疫無防備状態マウスにおいて成長したＨＬＡ－ＧおよびＭＨＣ－１発現腫瘍の腫瘍量の線グラフである。図１５Ｂは、肺腫瘍を予防するためのマウス処置スケジュールの図示である。図１５Ｃは、ヒトＰＢＭＣおよびＩＬＴ２抗体ありでまたはなしでＨＬＡ－Ｇ陽性がん細胞を接種した免疫無防備状態マウスの肺の写真である。図１５Ｄは、図１５Ｃからのデータを要約した散布図である。図１５Ｅは、すでに確立している肺腫瘍を処置するためのマウス処置スケジュールの図示である。図１５Ｆは、腫瘍重量の箱ひげ図である。 図１５－１の続き。 図１５－２の続き。 図１６Ａ～図１６Ｆは、そのＴＥＭＲＡ細胞またはＮＫ細胞においてそれぞれ低または高レベルのＩＬＴ２を有するドナーからＰＢＭＣを受けたマウスにおける、（図１６Ａ）全ＣＤ８ Ｔ細胞でのＣＤ１０７Ａ発現、（図１６Ｂ）ＴＥＭＲＡ細胞でのＣＤ１０７Ａ発現、（図１６Ｃ）ＮＫ細胞でのＣＤ６９発現、（図１６Ｄ）全ＣＤ８ Ｔ細胞でのＣＤ６９発現、（図１６Ｅ）ＴＥＭＲＡ細胞でのＣＤ１０７発現および（図１６Ｆ）組合せ処置を受けたＮＫ細胞でのＣＤ６９発現の箱ひげ図である。＊はＰ＜０．００５である。＊＊はＰ＜０．０００５である。＊＊＊はＰ＜０．０００１である。 図１６－１の続き。 図１６－２の続き。 図１７Ａは、Ｈ＆Ｎがんを接種され抗ＩＬＴ２または対照抗体で処置されたヒト化ＮＳＧマウスのマウス処置スケジュールの図示である。図１７Ｂは、ＩｇＧおよび抗ＩＬＴ２処置マウスの腫瘍重量の線グラフである。図１７Ｃ～図１７Ｆは、ＢＮＤ－２２処置に応答した（Ｒ）または応答しなかった（ＮＲ）マウスにおける末梢ＣＤ８ Ｔ細胞での（図１７Ｃ）ベースラインＩＬＴ２レベルの棒グラフである。抗ＩＬＴ２抗体で処置した４頭のマウスでの腫瘍内処置後（図１７Ｄ）ＣＤ１０７Ａ発現、（図１７Ｅ）Ｍ１／Ｍ２比および（図１７Ｆ）全ＣＤ８０陽性樹状細胞数。 図１７－１の続き。 図１７－２の続き。 図１８Ａは、重要な予測された結合をした残基を示すＩＬＴ２の部分的配列である。これらの残基は、最も高い可能性を表す青紫色から最も低い可能性を表す淡いシアン（それでも重要である）まで、エピトープに属するその生の可能性の関数としての４つの範疇に分割される。星印は、選択された突然変異の位置を示す。図１８Ｂ～図１８Ｃは、（図１８Ｂ）図１８Ａからの残基の位置および（図１８Ｃ）ＩＬＴ２上の４つの主な相互作用領域を示すＩＬＴ２表面構造の３Ｄレンダリングである。図１８Ｄ～図１８Ｆは、（図１８Ｄ）１５Ｇ８抗体のエピトープ（黄色／ピンク色）および国際公開第２０２０／１３６１４５号からの３Ｈ５、１２Ｄ１２および２７Ｈ５抗体のエピトープ（赤色）、ならびに３Ｈ５抗体の第２のエピトープ（濃青色）および（図１８Ｅ～図１８Ｆ）ＩＬＴ２上の１５Ｇ８エピトープ（ピンク色）と（図１８Ｅ）ＨＬＡ－Ａ（青色）または（図１８Ｆ）ＨＬＡ－Ｇ（青色）と複合したＢ２Ｍ（薄紫色）との相互作用を示すＩＬＴ２の３Ｄリボンまたは表面図である。 図１８－１の続き。 図１８－２の続き。 図１８－３の続き。 図１８－４の続き。 図１８－５の続き。 図１９Ａ～図１９Ｂは、種々のＩＬＴ２抗体の存在下で、マクロファージと共培養された（図１９Ａ）Ａ３７５－ＨＬＡ－Ｇおよび（図１９Ｂ）ＳＫＭＥＬ２８－ＨＬＡ－Ｇがん細胞のＩｇＧ対照と比べた％増加食作用の棒グラフである。図１９Ｃは、競合する非ビオチン化ＧＨＩ／７５、ＨＰ－Ｆ１および１５Ｇ８抗体の存在下で、ビオチン化１５Ｇ８抗体を使用する競合ＩＬＴ２結合ＥＬＩＳＡの線グラフである。 図１９－１の続き。
本発明は、ＩＬＴ２に結合し、ＩＬＴ２媒介免疫抑制を阻害する、モノクローナル抗体または抗原結合性断片、および医薬組成物を対象とする。がんを処置する方法、およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫療法を増強する方法も提供される。
本発明は少なくとも部分的には、ＩＬＴ２拮抗作用ががん細胞と戦うための、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１に基づく免疫療法と相乗的に作用するという驚くべき発見に基づいている。具体的には、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせたＩＬＴ２遮断抗体が免疫細胞による炎症誘発性サイトカインの分泌を増加させたことが見出された。この増加は、単に相加的であったのではなく、むしろそれぞれの薬剤個々の効果の総和よりも大きかった。実際、少なくとも１種のサイトカインに関して、いずれの薬剤も単独では一切の効果を有しなかった場合に、新たな増加が観察された。この組み合わされた処置は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１不応性がんの、応答性にする転換を可能にする。
さらに驚くべきことに、患者の免疫細胞におけるＩＬＴ２発現のレベルがＩＬＴ２遮断療法の効力に相関したことが見出された。療法に対する応答者は高いＩＬＴ２レベルを有し、非応答者は低いＩＬＴ２レベルを有した。特に、循環ＣＤ８陽性Ｔ細胞は処置転帰を予測した。
最後に、本発明の抗体は、Ｄ１ドメインおよびＤ２ドメインの間のＩＬＴ２インタードメイン（ｉｎｔｅｒｄｏｍａｉｎ）内の特有のエピトープに結合することが見出された。この領域は、ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用ドメインであることが公知であり、本発明の抗体はこの相互作用を直接遮断することが公知となった最初の抗体である。さらに、本発明の抗体は、他の抗ＩＬＴ２抗体に関して報告されていない免疫賦活効果を有することが見出された。本抗体は、ＨＬＡ－ＧおよびＭＨＣ－Ｉを発現するがん細胞に対する、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞およびマクロファージの免疫のサーベイランスをモジュレートすることができた。特に、単剤療法として初めて使用された抗ＩＬＴ２抗体は、がん細胞の食作用を増強することができた。
抗体
第１の態様において、３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）および３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含む抗体または抗原結合性断片であって、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１（ＤＨＴＩＨ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２（ＹＩＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＧ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３（ＴＷＤＹＦＤＹ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４（ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５（ＲＡＳＮＬＥＳ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６（ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ）に示すアミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合性断片が提供される。
別の態様において、３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）および３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含む抗体または抗原結合性断片であって、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号７（ＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号８（ＥＩＹＰＧＳＧＮＳＹＹＮＥＫＦＫＧ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号９（ＳＮＤＧＹＰＤＹ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１０（ＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１１（ＧＡＴＳＬＥＴ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１２（ＱＱＹＷＳＴＰＷＴ）に示すアミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合性断片が提供される。
別の態様において、３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）および３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含む抗体または抗原結合性断片であって、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１３（ＳＧＹＹＷＮ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１４（ＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１５（ＧＹＳＹＹＹＡＭＤＸ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１６（ＲＴＳＱＤＩＳＮＹＬＮ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１７（ＹＴＳＲＬＨＳ）に示すアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１８（ＱＱＧＮＴＬＰＴ）に示すアミノ酸配列を含み、Ｘは、Ａ、ＣおよびＳから選択される、抗体または抗原結合性断片が提供される。
いくつかの実施形態において、配列番号１６はＧＹＳＹＹＹＡＭＤＡ（配列番号２５）である。いくつかの実施形態において、配列番号１６は配列番号２５であり、抗体または抗原結合性断片はヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、配列番号１６はＧＹＳＹＹＹＡＭＤＳ（配列番号２６）である。いくつかの実施形態において、配列番号１６は配列番号２６であり、抗体または抗原結合性断片はヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、配列番号１６はＧＹＳＹＹＹＡＭＤＣ（配列番号２７）である。いくつかの実施形態において、配列番号１６は配列番号２７であり、抗体または抗原結合性断片はマウス抗体である。
別の態様において、ドメインＤ１およびＤ２の間のヒト白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＩＬＴ２）インタードメインに結合する、抗体または抗原結合性断片が提供される。
別の態様において、ＶＫＫＧＱＦＰＩＰＳＩＴＷＥＨ（配列番号４１）、ＬＥＬＶＶＴＧＡＹＩＫＰＴＬＳ（配列番号４２）、ＶＩＬＱＣＤＳＱＶＡＦＤＧＦＳ（配列番号４３）およびＷＹＲＣＹＡＹＤＳＮＳＰＹＥＷ（配列番号４４）から選択されるＩＬＴ２の配列内のＩＬＴ２エピトープに結合する、抗体または抗原結合性断片が提供される。
別の態様において、ＩＬＴ２に結合し、ＩＬＴ２およびベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の間の相互作用を阻害する、抗体または抗原結合性断片が提供される。
別の態様において、ＩＬＴ２に結合し、がんを患う対象において、
ａ．ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性の増加；
ｂ．Ｔ細胞の細胞傷害性、増殖またはその両方の増加；
ｃ．マクロファージの食作用の増加、Ｍ１炎症性マクロファージの発生の増加、Ｍ２サプレッサーマクロファージの発生の減少、またはそれらの組合せ；および
ｄ．前記がんの腫瘍への樹状細胞のホーミングの増加、樹状細胞の活性化の増加、またはそれらの組合せ
のうちの少なくとも１つを誘導する、抗体または抗原結合性断片が提供される。
いくつかの実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗体はポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗体はマウス抗体である。いくつかの実施形態において、抗体はヒト化抗体である。本明細書で使用される場合、「ヒト化」抗体とは、ヒト骨格を有するが、非ヒト抗体に由来するかまたは非ヒト抗体から取得されるＣＤＲを有する抗体を指す。いくつかの実施形態において、ヒト化の間、ＣＤＲは変更されるが、全体的に依然として非ヒト抗体のＣＤＲに由来する。いくつかの実施形態において、抗原結合性断片は一本鎖抗体である。いくつかの実施形態において、抗原結合性断片は単一ドメイン抗体である。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＩＬＴ２）に結合する。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２はヒトＩＬＴ２である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２は哺乳動物ＩＬＴ２である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２は霊長類ＩＬＴ２である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２はマウスＩＬＴ２である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片はＩＬＴ２の細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片はＩＬＴ２のリガンドポケットに結合する。いくつかの実施形態において、リガンドはＢ２Ｍである。いくつかの実施形態において、リガンドはＨＬＡではない。いくつかの実施形態において、リガンドはＨＬＡである。いくつかの実施形態において、ＨＬＡはＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態において、リガンドはＭＨＣではない。いくつかの実施形態において、リガンドはＭＨＣである。いくつかの実施形態において、ＭＨＣはＭＨＣクラスＩ（ＭＨＣ－Ｉ）である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片はＩＬＴ２インタードメインに結合する。いくつかの実施形態において、インタードメインはＤ１ドメインおよびＤ２ドメインの間の境界である。いくつかの実施形態において、インタードメインはＤ１ドメインおよびＤ２ドメインの間のヒンジドメインである。いくつかの実施形態において、インタードメインはＤ１のＮ末端ドメインを含まない。いくつかの実施形態において、インタードメインは配列番号３１のアミノ酸５４～１８４由来である。いくつかの実施形態において、配列番号３１のアミノ酸５４～１８４はインタードメインを含む。いくつかの実施形態において、インタードメインは配列番号３１のアミノ酸９０～１８４由来である。いくつかの実施形態において、アミノ酸９０～１８４はインタードメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片はインタードメイン内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、エピトープは、少なくとも２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９７、９９または１００％のインタードメインを含む。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、エピトープはＤ２内に存在する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合ドメインはＤ２におけるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、エピトープは少なくとも部分的にＤ２に存在する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合ドメインは少なくとも部分的にＤ２に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、エピトープはＤ１およびＤ２にまたがる。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＨＬＡ－Ｇのα３ドメインと相互作用するＩＬＴ２ドメインに結合しない。
いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２は哺乳動物ＩＬＴ２である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２はヒトＩＬＴ２である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２はＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６６６０．４において提供されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２は以下のアミノ酸配列：ＭＴＰＩＬＴＶＬＩＣＬＧＬＳＬＧＰＲＴＨＶＱＡＧＨＬＰＫＰＴＬＷＡＥＰＧＳＶＩＴＱＧＳＰＶＴＬＲＣＱＧＧＱＥＴＱＥＹＲＬＹＲＥＫＫＴＡＬＷＩＴＲＩＰＱＥＬＶＫＫＧＱＦＰＩＰＳＩＴＷＥＨＡＧＲＹＲＣＹＹＧＳＤＴＡＧＲＳＥＳＳＤＰＬＥＬＶＶＴＧＡＹＩＫＰＴＬＳＡＱＰＳＰＶＶＮＳＧＧＮＶＩＬＱＣＤＳＱＶＡＦＤＧＦＳＬＣＫＥＧＥＤＥＨＰＱＣＬＮＳＱＰＨＡＲＧＳＳＲＡＩＦＳＶＧＰＶＳＰＳＲＲＷＷＹＲＣＹＡＹＤＳＮＳＰＹＥＷＳＬＰＳＤＬＬＥＬＬＶＬＧＶＳＫＫＰＳＬＳＶＱＰＧＰＩＶＡＰＥＥＴＬＴＬＱＣＧＳＤＡＧＹＮＲＦＶＬＹＫＤＧＥＲＤＦＬＱＬＡＧＡＱＰＱＡＧＬＳＱＡＮＦＴＬＧＰＶＳＲＳＹＧＧＱＹＲＣＹＧＡＨＮＬＳＳＥＷＳＡＰＳＤＰＬＤＩＬＩＡＧＱＦＹＤＲＶＳＬＳＶＱＰＧＰＴＶＡＳＧＥＮＶＴＬＬＣＱＳＱＧＷＭＱＴＦＬＬＴＫＥＧＡＡＤＤＰＷＲＬＲＳＴＹＱＳＱＫＹＱＡＥＦＰＭＧＰＶＴＳＡＨＡＧＴＹＲＣＹＧＳＱＳＳＫＰＹＬＬＴＨＰＳＤＰＬＥＬＶＶＳＧＰＳＧＧＰＳＳＰＴＴＧＰＴＳＴＳＧＰＥＤＱＰＬＴＰＴＧＳＤＰＱＳＧＬＧＲＨＬＧＶＶＩＧＩＬＶＡＶＩＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩＬＲＨＲＲＱＧＫＨＷＴＳＴＱＲＫＡＤＦＱＨＰＡＧＡＶＧＰＥＰＴＤＲＧＬＱＷＲＳＳＰＡＡＤＡＱＥＥＮＬＹＡＡＶＫＨＴＱＰＥＤＧＶＥＭＤＴＲＳＰＨＤＥＤＰＱＡＶＴＹＡＥＶＫＨＳＲＰＲＲＥＭＡＳＰＰＳＰＬＳＧＥＦＬＤＴＫＤＲＱＡＥＥＤＲＱＭＤＴＥＡＡＡＳＥＡＰＱＤＶＴＹＡＱＬＨＳＬＴＬＲＲＥＡＴＥＰＰＰＳＱＥＧＰＳＰＡＶＰＳＩＹＡＴＬＡＩＨ（配列番号３１）を有する。
いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２はＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１０７５１０６．２において提供されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２はＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１０７５１０７．２において提供されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２はＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１０７５１０８．２において提供されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２はＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１２６５３２８．２において提供されるアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２のＤ１ドメインは、アミノ酸配列ＧＨＬＰＫＰＴＬＷＡＥＰＧＳＶＩＴＱＧＳＰＶＴＬＲＣＱＧＧＱＥＴＱＥＹＲＬＹＲＥＫＫＴＡＬＷＩＴＲＩＰＱＥＬＶＫＫＧＱＦＰＩＰＳＩＴＷＥＨＡＧＲＹＲＣＹＹＧＳＤＴＡＧＲＳＥＳＳＤＰＬＥＬＶＶＴＧＡ（配列番号４６）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２のＤ１ドメインは、配列番号３１のアミノ酸２４～１２１を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２のＤ２ドメインは、アミノ酸配列ＹＩＫＰＴＬＳＡＱＰＳＰＶＶＮＳＧＧＮＶＩＬＱＣＤＳＱＶＡＦＤＧＦＳＬＣＫＥＧＥＤＥＨＰＱＣＬＮＳＱＰＨＡＲＧＳＳＲＡＩＦＳＶＧＰＶＳＰＳＲＲＷＷＹＲＣＹＡＹＤＳＮＳＰＹＥＷＳＬＰＳＤＬＬＥＬＬＶＬＧＶ（配列番号４７）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２のＤ２ドメインは、配列番号３１のアミノ酸１２２～２２２を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２のインタードメインは、配列番号３１のアミノ酸Ｇｌｎ４１、Ｌｙｓ６５、Ｔｒｐ９０、Ｇｌｙ１２０、Ａｌａ１２１、Ｖａｌ１２２、Ｉｌｅ１２３、Ｇｌｎ１４８、Ｖａｌ１４９、Ａｌａ１５０、Ｐｈｅ１５１、Ａｓｐ２０１、Ａｓｎ２０３およびＧｌｕ２０７を含む。いくつかの実施形態において、エピトープは、配列番号３１のアミノ酸Ｇｌｎ４１、Ｌｙｓ６５、Ｔｒｐ９０、Ｇｌｙ１２０、Ａｌａ１２１、Ｖａｌ１２２、Ｉｌｅ１２３、Ｇｌｎ１４８、Ｖａｌ１４９、Ａｌａ１５０、Ｐｈｅ１５１、Ａｓｐ２０１、Ａｓｎ２０３およびＧｌｕ２０７を含む。いくつかの実施形態において、エピトープは、配列番号３１のアミノ酸Ｇｌｎ４１、Ｌｙｓ６５、Ｔｒｐ９０、Ｇｌｙ１２０、Ａｌａ１２１、Ｖａｌ１２２、Ｉｌｅ１２３、Ｇｌｎ１４８、Ｖａｌ１４９、Ａｌａ１５０、Ｐｈｅ１５１、Ａｓｐ２０１、Ａｓｎ２０３およびＧｌｕ２０７から選択される少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、エピトープは、配列番号３１のアミノ酸Ｇｌｎ４１、Ｌｙｓ６５、Ｔｒｐ９０、Ｇｌｙ１２０、Ａｌａ１２１、Ｖａｌ１２２、Ｉｌｅ１２３、Ｇｌｎ１４８、Ｖａｌ１４９、Ａｌａ１５０、Ｐｈｅ１５１、Ａｓｐ２０１、Ａｓｎ２０３およびＧｌｕ２０７から選択される少なくとも１０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号４１において提供されるＩＬＴ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号４２において提供されるＩＬＴ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号４３において提供されるＩＬＴ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号４４において提供されるＩＬＴ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号４１、４２、４３および４４のうちの少なくとも２つを含む３次元エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、３次元エピトープは、配列番号４１、４２、４３および４４のうちの少なくとも３つを含む。いくつかの実施形態において、３次元エピトープは、配列番号４１、４２、４３および４４を含む。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、Ｑ１８、Ｇ１９、Ｋ４２、Ｌ４５、Ｓ６４、Ｉ６５、Ｔ６６、Ｗ６７、Ｅ６８、Ｇ９７、Ａ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｑ１２５、Ｖ１２６、Ａ１２７、Ｆ１２８、Ｄ１７８、Ｎ１８０、Ｓ１８１、およびＥ１８４から選択されるＩＬＴ２の残基を含むＩＬＴ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、Ｇ９７、Ａ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｑ１２５およびＶ１２６から選択されるＩＬＴ２の残基を含むＩＬＴ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、Ｑ１８、Ｇ１９、Ｋ４２、Ｌ４５、Ｓ６４、Ｉ６５、Ｔ６６、Ｗ６７、Ｅ６８、Ｇ９７、Ａ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｑ１２５、Ｖ１２６、Ａ１２７、Ｆ１２８、Ｄ１７８、Ｎ１８０、Ｓ１８１、およびＥ１８４から選択されるＩＬＴ２の複数の残基を含むＩＬＴ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、Ｇ９７、Ａ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｑ１２５およびＶ１２６から選択されるＩＬＴ２の複数の残基を含むＩＬＴ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、Ｑ１８、Ｇ１９、Ｋ４２、Ｌ４５、Ｓ６４、Ｉ６５、Ｔ６６、Ｗ６７、Ｅ６８、Ｇ９７、Ａ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｑ１２５、Ｖ１２６、Ａ１２７、Ｆ１２８、Ｄ１７８、Ｎ１８０、Ｓ１８１、およびＥ１８４から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１個の残基に結合する。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、Ｇ９７、Ａ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｑ１２５およびＶ１２６から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個の残基に結合する。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、Ｇ９７、Ａ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｑ１２５およびＶ１２６に結合する。本明細書で使用される番号が配列番号３１に関するものであることは理解されるだろう。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２アゴニストではない。いくつかの実施形態において、拮抗作用は、ＩＬＴ２媒介免疫抑制の拮抗作用である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２媒介免疫抑制を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２シグナル伝達を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、相互作用は直接相互作用である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２とＢ２Ｍとの接触を阻害する。いくつかの実施形態において、接触は直接接触である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２およびＨＬＡ、ＭＨＣまたはその両方の間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２およびＨＬＡ、ＭＨＣまたはその両方の間の相互作用を、Ｂ２ＭとのＩＬＴ２相互作用の阻害を介して阻害する。ある実施形態において、相互作用はＢ２Ｍによって媒介される。いくつかの実施形態において、抗体は、ＨＬＡ、ＭＨＣまたはその両方との相互作用を、Ｂ２Ｍとの相互作用の阻害を介して間接的に阻害する。いくつかの実施形態において、相互作用はＢ２Ｍ媒介相互作用である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２およびＢ２Ｍ／ＨＬＡ複合体の間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２およびＢ２Ｍ／ＭＨＣ複合体の間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、複合体はＢ２Ｍ単量体を含む。いくつかの実施形態において、複合体はＨＬＡまたはＭＨＣ単量体を含む。いくつかの実施形態において、複合体はＢ２Ｍ二量体を含む。いくつかの実施形態において、複合体はＨＬＡまたはＭＨＣ二量体を含む。
いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２媒介免疫抑制は、免疫細胞の抑制である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、マクロファージ、樹状細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２媒介免疫抑制は、Ｔ細胞、マクロファージ、樹状細胞およびＮＫ細胞の抑制である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２媒介免疫抑制は、Ｔ細胞、マクロファージおよびＮＫ細胞の抑制である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はＣＤ８陽性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はＴＥＭＲＡ細胞（ＣＤ４５ＲＡを再発現する最終分化エフェクターメモリー細胞）である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＴＥＭＲＡ細胞、樹状細胞、マクロファージおよびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はマクロファージである。いくつかの実施形態において、マクロファージは腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は樹状細胞である。いくつかの実施形態において、樹状細胞は免疫寛容誘発性樹状細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は末梢血免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は腫瘍内免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における免疫細胞である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２媒介免疫抑制は、マクロファージの食作用の抑制である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２媒介免疫抑制は、ＮＫ細胞の細胞傷害性の抑制である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２媒介免疫抑制は、Ｔ細胞の細胞傷害性の抑制である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２媒介免疫抑制は、Ｔ細胞の増殖の抑制である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２媒介免疫抑制は、免疫細胞の増殖の抑制である。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２以外の白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢのメンバーに結合しない。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２に特異的である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２に優先的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＩＬＴ２以外の白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢのメンバーを阻害しない。
本明細書で使用される場合、「増加した結合効能」とは、アイソタイプ対照の結合よりも大きい、標的または抗原との特異的結合を指す。いくつかの実施形態において、増加した結合は、結合効能の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００％の増加である。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、増加した結合は、結合を有しないアイソタイプ対照と比較した結合の存在である。抗体と特異的ドメインとの結合は当業者に周知であるだろう。抗体結合は：Ｘ線結晶構造解析、免疫沈降、イムノブロッティング、競合アッセイ、および結合平衡除外法を含むがこれらに限定されない、当業者に公知の任意の手段においてアッセイすることができる。いくつかの実施形態において、増加した結合効能は特異的結合である。
本明細書に開示される抗体もしくは抗原結合性断片、バリアント、または誘導体は、１０３Ｍ”１秒”１、５×１０３Ｍ”１秒”１、１０４Ｍ”１秒”１または５×１０４Ｍ”１秒”１よりも大きいかまたはこれらと等しい会合速度（ｋ（ｏｎ））で標的抗原、例えばＩＬＴ２に結合すると言うことができる。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。大半の抗体は１０－９Ｍの典型的な親和性を有するが、本明細書に開示される抗体もしくは抗原結合性断片、バリアント、または誘導体は、１０－６Ｍ以上の親和性で標的抗原に結合すると言うことができる。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号１９（ＱＶＱＬＱＱＳＤＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨＷＭＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＴＷＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ）のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２１（ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＫＱＲＴＧＱＧＬＥＷＶＧＥＩＹＰＧＳＧＮＳＹＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＮＤＧＹＰＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ）のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２３（ＤＶＱＬＱＧＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＧＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＴＩＳＲＤＴＤＫＮＱＦＳＬＫＬＮＳＶＴＡＡＤＴＡＴＹＹＣＡＨＧＹＳＹＹＹＡＭＤＸＷＧＱＧＴＳＳＶＴＶＳＳ）のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、Ｘは、Ａ、ＣおよびＳから選択される。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２０（ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＮＰＶＥＡＤＤＶＡＴＹＹＣＱＱＳＮＥＤＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２２（ＤＩＱＭＴＱＳＳＳＹＬＳＶＳＬＧＧＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＳＩＴＳＬＱＴＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２４（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＴＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＳＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号４５（ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＴＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＳＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、配列番号２３はＤＶＱＬＱＧＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＧＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＴＩＳＲＤＴＤＫＮＱＦＳＬＫＬＮＳＶＴＡＡＤＴＡＴＹＹＣＡＨＧＹＳＹＹＹＡＭＤＡＷＧＱＧＴＳＳＶＴＶ（配列番号２８）である。いくつかの実施形態において、配列番号２３は配列番号２８であり、抗体または抗原結合性断片はヒト化されている。いくつかの実施形態において、配列番号２３はＤＶＱＬＱＧＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＧＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＴＩＳＲＤＴＤＫＮＱＦＳＬＫＬＮＳＶＴＡＡＤＴＡＴＹＹＣＡＨＧＹＳＹＹＹＡＭＤＳＷＧＱＧＴＳＳＶＴＶ（配列番号２９）である。いくつかの実施形態において、配列番号２３は配列番号２９であり、抗体または抗原結合性断片はヒト化されている。いくつかの実施形態において、配列番号２３はＤＶＱＬＱＧＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＧＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＳＥＤＴＡＴＹＹＣＡＨＧＹＳＹＹＹＡＭＤＣＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号３０）である。いくつかの実施形態において、配列番号２３は配列番号３０であり、抗体または抗原結合性断片はマウス由来である。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、それを必要とする対象におけるがんを処置または改善することにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、がんは、ＨＬＡ－Ｇ陽性がんである。いくつかの実施形態において、がんは、ＭＨＣ－Ｉ陽性がんである。いくつかの実施形態において、がんは、ＨＬＡ－Ｇを発現するがんである。いくつかの実施形態において、がんは、ＭＨＣ－Ｉを発現するがんである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、免疫抑制性から免疫賦活性へ腫瘍微小環境を変化させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、前記腫瘍微小環境を変化させることは：抗腫瘍Ｔ細胞応答を誘導する／増強する、Ｔ細胞の増殖を増加させる、がん誘導サプレッサー骨髄活性を低減する、樹状細胞（ＤＣ）の活性化を増加させる、腫瘍への樹状細胞のホーミングを増加させる、マクロファージの食作用を増加させる、Ｍ１マクロファージの発生を増加させる、Ｍ２マクロファージの発生を減少させる、およびＮＫ細胞の活性を増加させるのうちの１つまたはそれ以上を含む。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、がん細胞に対するＴ細胞応答を増加させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞応答は、炎症誘発性サイトカインの分泌の増加を含む。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞応答は、細胞傷害性の増加を含む。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞応答は、Ｔ細胞の増殖の増加を含む。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、がん細胞に対するマクロファージの食作用を増加させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、腫瘍またはがんへの樹状細胞のホーミングを増加させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、マクロファージの食作用を増加させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、がんに対するマクロファージの食作用を増加させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、Ｍ１マクロファージの発生を増加させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、Ｍ２マクロファージの発生を減少させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＮＫ細胞のがん細胞に対する細胞傷害性を増加させることにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、がん誘導サプレッサー骨髄活性を低減することにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、免疫寛容誘発性樹状細胞（ＤＣ）の活性を低減することにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、Ｍ１単球の活性または数を増加させるためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、Ｍ２単球の活性または数を減少させるためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、Ｍ１マクロファージの発生を増加させるためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、Ｍ２マクロファージの発生を減少させるためのものである。いくつかの実施形態において、Ｍ１単球／マクロファージは炎症性マクロファージ／単球である。いくつかの実施形態において、Ｍ２単球／マクロファージはサプレッサーマクロファージ／単球である。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、腫瘍におけるＤＣ数を増加させるためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＤＣの腫瘍への動員を増加させるためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、腫瘍へのＤＣ動員を増加させるためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＤＣの活性化を増加させるためのものである。いくつかの実施形態において、ＤＣの活性化を増加させることは、免疫寛容誘発性樹状細胞の活性を減少させることを含む。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、抗原提示を増加させるためのものである。いくつかの実施形態において、腫瘍に対するとは、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）に対することである。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、対象において、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の抗がん効果を誘導する。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、対象において、少なくとも２つの効果を誘導する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、対象において、少なくとも３つの効果を誘導する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、対象において、少なくとも４つの効果を誘導する。いくつかの実施形態において、効果は、ＮＫ細胞の細胞傷害性の増加、Ｔ細胞の細胞傷害性の増加、Ｔ細胞の増殖の増加、マクロファージの食作用の増加、Ｍ１マクロファージの発生の増加、Ｍ２マクロファージの発生の減少、がんの腫瘍への樹状細胞のホーミングの増加、および樹状細胞の活性化の増加から選択される。いくつかの実施形態において、効果は、ａ）ＮＫ細胞の細胞傷害性の増加；ｂ）Ｔ細胞の細胞傷害性、増殖またはその両方の増加；ｃ）マクロファージの食作用の増加、Ｍ１マクロファージの発生の増加、Ｍ２マクロファージの発生の減少、またはそれらの組合せ；ならびにｄ）がんの腫瘍への樹状細胞のホーミングの増加、樹状細胞の活性化の増加、およびそれらの組合せから選択される。いくつかの実施形態において、細胞傷害性は、がんに対する細胞傷害性である。いくつかの実施形態において、食作用は、がんまたはがん細胞の食作用である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、対象において、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞およびマクロファージに対する抗がん効果を誘導する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、対象において、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞およびマクロファージのうちの少なくとも３つに対する抗がん効果を誘導する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、単剤療法として効果を誘導する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、組み合わせずに効果を誘導する。
いくつかの実施形態において、細胞傷害性の増加は、炎症誘発性サイトカインの分泌の増加を含む。炎症誘発性サイトカインは、当技術分野において周知であり、これらに限定されないが：ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＭＣＰ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、炎症誘発性サイトカインは、ＩＬ－６、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）およびＧＭ－ＣＳＦから選択される。いくつかの実施形態において、炎症誘発性サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦである。
「抗ＩＬＴ２抗体」、「ＩＬＴ２を認識する抗体」、または「ＩＬＴ２に対する抗体」とは、十分な親和性および特異性によりＩＬＴ２に結合する抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＩＬＴ２抗体は、結合する抗原としてＩＬＴ２を有する。
「抗原」とは、抗体形成を誘発することができ、抗体によって結合することができる分子または分子の一部である。抗原は、１つまたは２つ以上のエピトープを有し得る。上で言及した特異的反応とは、抗原が高度に選択的に、対応する抗体とは反応することができ、他の抗原によって惹起される数多くの他の抗体とは反応し得ないことを示すことが意図される。
「抗原決定基」または「エピトープ」という用語は、本発明によれば、特定の抗体と特異的に反応する抗原分子の領域を指す。エピトープに由来するペプチド配列は、当技術分野において公知の方法を適用して、動物を免疫化し、追加のポリクローナルまたはモノクローナル抗体を産生させるために、単独でまたは担体部分と組み合わせて使用することができる。免疫グロブリン可変ドメインもまた、ＣＤＲを含む可変領域セグメントを同定するために、ＩＭＧＴ情報システム（ｗｗｗ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／）（ＩＭＧＴ（登録商標）／Ｖ－Ｑｕｅｓｔ）を使用して分析することができる。例えば、Ｂｒｏｃｈｅｔ、Ｘ．ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｊ６：Ｗ５０３～５０８頁（２００８年）を参照されたい。
Ｋａｂａｔらもまた、あらゆる抗体に適用可能な可変ドメイン配列のための番号付けシステムを定義した。当業者は、配列それ自体以外のいかなる実験データにも頼らずに、この「Ｋａｂａｔ番号付け」のシステムをあらゆる可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔ番号付け」とは、Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３年）によって記載されている番号付けシステムを指す。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、別の薬剤と組み合わせた使用のためのものである。いくつかの実施形態において、別の薬剤と組み合わせた使用は、ＨＬＡ－Ｇおよび／またはＭＨＣ－Ｉを発現するがんを処置するためのものである。いくつかの実施形態において、薬剤はオプソニン化剤である。いくつかの実施形態において、薬剤は抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１剤である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法と組み合わせた使用のためのものである。
本明細書で使用される場合、「オプソニン化剤」とは、標的細胞（例えば、がん細胞、細胞内病原体を保有する細胞等）に結合し、標的細胞をオプソニン化することができる任意の薬剤である。例えば、標的細胞に結合することができる任意の抗体は、抗体がＦｃ領域を有する場合、標的細胞をオプソニン化する薬剤であると考えられる。いくつかの実施形態において、オプソニン化剤は、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導する抗体である。オプソニン化剤の例としては、これらに限定されないが、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ５２抗体および抗ＣＤ３０抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、オプソニン化剤は、リツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ハーセプチン、セツキシマブ、パニツムマブ、およびアービタックスから選択される。いくつかの実施形態において、オプソニン化剤は抗ＥＧＦＲ抗体である。いくつかの実施形態において、オプソニン化剤はアービタックスである。
本明細書で使用される場合、「抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法」および「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法」は同義であり、交換可能に使用され、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の遮断を含む治療計画を指す。いくつかの実施形態において、がんは、ＰＤ－Ｌ１陽性がんである。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫療法である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、ＰＤ－１に基づく免疫阻害を遮断する薬剤である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、抗ＰＤ－１遮断抗体を含む。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、抗ＰＤ－Ｌ１遮断抗体を含む。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、免疫サーベイランスを増加させる。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、抗がん療法である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、腫瘍免疫サーベイランスを増加させる。「抗体」（「免疫グロブリン」とも称される）という用語は、広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体および、所望の生物活性を呈する限りにおいて、抗体断片を包含する。ある特定の実施形態において、キメラ抗体またはヒト化抗体の使用も本発明によって包含される。
天然に存在する抗体構造の基本単位は、非共有結合による会合およびジスルフィド結合の両方によって一緒に連結した、２つの同一な軽（Ｌ）鎖および２つの同一な重（Ｈ）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質複合体である。それぞれの重および軽鎖は、一定間隔の鎖間ジスルフィド架橋も有する。５つのヒト抗体クラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥ）が存在し、これらのクラスにおいて、さまざまなサブクラスが構造の相違、例えば単一の抗体分子における免疫グロブリン単位の数、個々の単位のジスルフィド架橋構造、ならびに鎖の長さおよび配列における相違に基づいて認識される。抗体のクラスおよびサブクラスは抗体のアイソタイプである。
重および軽鎖のアミノ末端領域は、カルボキシ末端領域よりも配列が多様であり、そのため可変ドメインと称される。抗体構造のこの部分は、抗体の抗原結合特異性を付与する。重可変（ＶＨ）ドメインおよび軽可変（ＶＬ）ドメインは一緒に単一の抗原結合部位を形成し、したがって、基本的な免疫グロブリン単位は２つの抗原結合部位を有する。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの間の境界を形成すると考えられている（Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６、６５１～６３頁（１９８５年）；Ｎｏｖｏｔｎｙ ａｎｄ Ｈａｂｅｒ、（１９８５年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２ ４５９２～４５９６頁）。
重および軽鎖のカルボキシ末端部は、定常ドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＬを形成する。これらのドメインの方が多様性ははるかに低いが、動物種ごとに相違が存在し、さらに、同じ個体内において、抗体のいくつかの異なるアイソタイプが存在し、それぞれは異なる機能を有する。
「フレームワーク領域」または「ＦＲ」という用語は、本明細書で定義される超可変領域アミノ酸残基以外の、抗体の可変ドメインにおけるアミノ酸残基を指す。「超可変領域」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原結合を担う、抗体の可変ドメインにおけるアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原のエピトープとの結合を主に担う。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は厳密に定義されている（Ｋａｂａｔらを参照されたい）。いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、ＫＡＢＡＴシステムを使用して決定される。いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｌｏｔｈｉａシステムを使用して決定される。いくつかの実施形態において、Ｃｌｏｔｈｉａシステムは、増強Ｃｌｏｔｈｉａシステム（Ｍａｒｔｉｎシステム）である。
本明細書におけるモノクローナル抗体としては、具体的には、重および／または軽鎖の一部は、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同であるが、鎖の残りの部分は、別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体、ならびに、所望の生物活性を呈する限りにおいて、そのような抗体の断片が挙げられる（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ５７：６８５１～６８５５頁（１９８４年））。加えて、相補性決定領域（ＣＤＲ）移植は、親和性または特異性を含む抗体分子のある特定の特性を変更するために実施してもよい。ＣＤＲ移植の非限定的な例は、米国特許第５，２２５，５３９号に開示されている。
キメラ抗体とは、異なる部分が異なる動物種に由来する分子、例えばマウスｍＡｂに由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する分子である。実質的にヒト抗体（アクセプター抗体と称される）からの可変領域フレームワーク残基と、実質的にマウス抗体（ドナー抗体と称される）からの相補性決定領域とを有する抗体は、ヒト化抗体とも称される。キメラ抗体は、例えば、マウスｍＡｂがハイブリドーマからのより高い収率を有するがヒトにおいてより高い免疫原性を有する場合にヒト／マウスキメラｍＡｂが使用されるように、適用時の免疫原性を低減させ、産生時の収率を増加させるために主に使用される。キメラ抗体およびその生成のための方法は、当技術分野において公知である（例えばＰＣＴ特許出願第ＷＯ８６／０１５３３号、同第ＷＯ９７／０２６７１号、同第ＷＯ９０／０７８６１号、同第ＷＯ９２／２２６５３号ならびに米国特許第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，５３０，１０１号および同第５，２２５，５３９号）。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒト抗体からのフレームワーク領域と、非ヒト（通例マウスまたはラット）免疫グロブリンからの１つまたはそれ以上のＣＤＲとを含む抗体を指す。ヒト化免疫グロブリンの部分は、場合によってはＣＤＲを除いて、天然ヒト免疫グロブリン配列の対応する部分に対して実質的に同一である。しかしながら、いくつかの場合において、例えばフレームワーク領域における特異的アミノ酸残基は、ヒト化抗体の性能を最適化するように改変してもよい。重要なことに、ヒト化抗体は、ＣＤＲを提供するドナー抗体と同じ抗原に結合すると予期される。さらなる詳細に関しては、例えばＭｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ、ＵＫに譲渡された米国特許第５，２２５，５３９号を参照されたい。「アクセプターヒト免疫グロブリンからのフレームワーク領域」および「アクセプターヒト免疫グロブリンに由来するフレームワーク領域」という用語、ならびに文法上の類似表現は、本明細書で交換可能に使用され、アクセプターヒト免疫グロブリンの同じアミノ酸配列を有するフレームワーク領域またはその一部を指す。
「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、モノクローナル抗体の生成中に生じる場合がある存在し得るバリアントであって、一般に少量存在する、バリアントを除いて、同一である、および／または同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に向けられる異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、抗原の単一の決定基に向けられる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていないという点で好都合である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体の特徴を示し、本明細書において提供される方法に従って使用される予定の抗体が、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５頁（１９７５年）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作ることができると解釈されるべきでも、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）によって作ることができると解釈されるべきでもない。「モノクローナル抗体」はまた、例えばＣｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４～６２８頁（１９９１年）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１～５９７頁（１９９１年）に記載されている技法を使用してファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。
本発明のｍＡｂは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＡを含むいずれの免疫グロブリンクラスのｍＡｂであってもよい。ｍＡｂを産生するハイブリドーマは、インビトロで培養してもインビボで培養してもよい。高力価のｍＡｂは、個々のハイブリドーマからの細胞がプリスチン予備刺激Ｂａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射されて高濃度の所望のｍＡｂを含有する腹水を産生するインビボ産生において得ることができる。ＩｇＭまたはＩｇＧアイソタイプのｍＡｂは、当業者に周知のカラムクロマトグラフィー法を使用して、そのような腹水または培養上清から精製することができる。
「抗体断片」または「抗原結合性断片」とは、同義に使用され、完全抗体の一部、好ましくは完全抗体の抗原結合領域を含む一部を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；タンデムダイアボディ（ｔａＤｂ）、直鎖状抗体（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７～１０６２頁（１９９５年））；一アーム抗体、単一可変ドメイン抗体、ミニボディ、一本鎖抗体分子；抗体断片から形成される多重特異性抗体（例えば、これらに限定されないが、Ｄｂ－Ｆｃ、ｔａＤｂ－Ｆｃ、ｔａＤｂ－ＣＨ３、（ｓｃＦＶ）４－Ｆｃ、二価ｓｃＦｖ、二重ｓｃＦｖ、またはタンデム（二価、三価）ｓｃＦｖが挙げられる）；ならびに二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ）が挙げられる。
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、それぞれが単一の抗原結合部位を有する２つの同一な抗原結合性断片と、名称が容易に結晶化する能力を表す残りの「Ｆｃ」断片とを生成する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原と架橋することができるＦ（ａｂ’）２断片を生じる。
「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識および抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、非共有結合による緊密な会合状態の１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとの二量体からなる。ＶＨ－ＶＬ二量体の３つの面がこの配置において存在する。全体として、６つの超可変領域は抗原結合特異性を抗体に付与する。しかしながら、単一可変ドメイン（または抗原に関して特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも低い親和性でではあるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１個またはそれ以上のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における数個の残基の付加によってＦａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１個の遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は本来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明確に別個の種類のうちの１つに割り当てることができる。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は異なるクラスに割り当てることができる。完全抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２にさらに分割することができる。抗体の種々のクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、デルタ、ε、ガンマ、およびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの種々のクラスのサブユニット構造および３次元配置は周知である。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖に存在する。いくつかの実施形態において、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインの間に、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの概説に関しては、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９～３１５頁（１９９４年）におけるＰｌｕｃｋｔｈｕｎを参照されたい。
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する低分子抗体断片であって、同じポリペプチド鎖における軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ－ＶＬ）を含む、断片を指す。同じ鎖の２つのドメインを対にすることができないほど短いリンカーを使用することによって、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対になり２つの抗原結合部位を作出することを強いられる。ダイアボディは、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４～６４４８頁（１９９３年）である。
「多重特異性抗体」という用語は、広い意味で使用され、具体的には、ポリエピトープ特異性を有する抗体を網羅する。そのような多重特異性抗体としては、これらに限定されないが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、ＶＨＶＬ単位がポリエピトープ特異性を有する抗体、２つ以上のＶＬおよびＶＨドメインを有し、それぞれのＶＨＶＬ単位が異なるエピトープに結合する抗体、２つ以上の単一可変ドメインを有し、それぞれの単一可変ドメインが異なるエピトープに結合する抗体、全長抗体、抗体断片、例えばＦａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ、トリアボディ、三機能性抗体、共有結合または非共有結合的に連結した抗体断片が挙げられる。「ポリエピトープ特異性」とは、同じまたは異なる標的の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。
本発明のモノクローナル抗体は、当技術分野において周知の方法を使用して調製することができる。例としては、Ｋｏｈｌｅｒ、Ｇ． ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、Ｃ、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５～４９７頁（１９７５年）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２頁（１９８３年）；ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５年）におけるＣｏｌｅら、７７～９６頁における技法等のさまざまな技法が挙げられる。
抗体をインビボにおいて産生させる従来の方法に加えて、抗体は、ファージディスプレイ技術を使用してインビトロにおいて作製することができる。組換え抗体のそのような生成は、従来の抗体生成と比較してはるかに速く、組換え抗体は、非常に多くの数の抗原に対して作製することができる。さらに、従来の方法を使用する場合、多くの抗原は、非免疫原性であるかまたは極めて毒性であることが判明しており、したがって動物において抗体を作製するために使用することができない。さらに、組換え抗体の親和性成熟（すなわち、親和性および特異性を増加させること）は非常に単純であり、比較的速い。最後に、特異的抗原に対する多数の異なる抗体は、１回の選択手順において作製することができる。組換えモノクローナル抗体を作製するために、異なる抗原認識部位を有する抗体の大きなプールを作製するディスプレイライブラリーに基づくさまざまな方法をすべて使用することができる。そのようなライブラリーは、いくつかの手段において作ることができ：重鎖生殖細胞系列遺伝子のプールにおいて合成ＣＤＲ３領域をクローニングし、したがって大きな抗体レパートリーを作製することによって合成レパートリーを作製することができ、そこからさまざまな特異性を有する組換え抗体断片が選択される。ヒトのリンパ球プールを抗体ライブラリーの構築のための出発物質として使用することができる。ヒトＩｇＭ抗体のナイーブレパートリーを構築し、したがって大きな多様性を有するヒトライブラリーを作出することが可能である。この方法は、異なる抗原に対する多数の抗体を成功裏に選択するために広く使用されている。組換え抗体のバクテリオファージライブラリー構築および選択のためのプロトコルは、周知の参照テキストであるＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｃｏｌｌｉｇａｎら（編）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９２～２０００年）、第１７章、第１７．１節において提供されている。
非ヒト抗体は、当技術分野において公知の任意の方法によってヒト化することができる。ある方法では、非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ヒト抗体またはコンセンサス抗体フレームワーク配列に挿入される。次いで、さらなる変化が抗体フレームワークに導入されて、親和性または免疫原性をモジュレートすることができる。
いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗体は中和抗体である。「中和」とは、本明細書で議論される場合、本発明の抗体によるタンパク質機能の低下として定義される。一実施形態において、「中和」とは、本明細書で議論される場合、抗体と、免疫細胞の表面、好ましくは未熟および成熟骨髄系由来細胞、すなわちＴ細胞およびＮＫ細胞との結合であり、それによりこれらの細胞の内部の阻害シグナルの伝播を遮断し、より抑制性の小さい表現型および機能を付与する。
いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の抗体をコードする核酸配列を提供する。一実施形態において、本明細書において記載される抗体は、本明細書において記載されるＤＮＡ配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコードされる。一実施形態において、本明細書において記載される抗体は、本明細書において記載されるＤＮＡ配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコードされる。一実施形態において、本明細書において記載される抗体は、本明細書において記載されるＤＮＡ配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコードされる。一実施形態において、本明細書において記載される抗体は、本明細書において記載されるＤＮＡ配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコードされる。一実施形態において、本明細書において記載される抗体は、本明細書において記載されるＤＮＡ配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコードされる。
別の態様によって、本発明の抗体または抗原結合性断片をコードする核酸配列が提供される。
別の態様によって、本発明の抗体または抗原結合性断片をコードする核酸分子が提供される。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片の重鎖をコードする核酸配列は、ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＴＡＴＧＧＴＡＴＡＡＧＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＡＡＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＡＡＴＴＣＴＴＡＣＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＧＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＣＧＡＡＴＧＡＴＧＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号３２）、ＧＡＴＧＴＡＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧＧＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＴＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＴＧＧＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＴＴＴＣＣＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＡＡＧＣＴＡＣＧＡＴＧＧＴＡＧＣＡＡＴＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＡＡＡＡＡＴＣＧＡＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＣＧＴＧＡＣＡＣＡＴＣＴＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＴＴＴＣＣＴＧＡＡＧＴＴＧＡＡＴＴＣＴＧＴＧＡＣＴＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＣＣＡＴＧＧＴＴＡＣＴＣＡＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号３３）、ＧＡＴＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＴＡＡＧＣＣＴＴＣＣＧＡＧＡＣＡＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＣＴＡＴＣＡＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＡＧＡＣＡＧＴＴＣＣＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＣＧＧＡＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＧＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＡＣＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＣＴＧＣＣＧＡＴＡＣＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＡＣＧＧＣＴＡＣＴＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＧＡＴＧＣＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＴＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＴ（配列番号３４）およびＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＣＡＧＴＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＴＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＴＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＣＡＴＡＣＴＡＴＴＣＡＣＴＧＧＡＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＡＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＡＧＡＧＡＴＧＧＴＡＧＴＡＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＣＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号３５）から選択される。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片の軽鎖をコードする核酸配列は、ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＡＡＧＴＧＴＴＧＡＴＡＧＴＴＡＴＧＧＣＡＡＴＡＧＴＴＴＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＡＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＡＴＣＣＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＡＧＴＡＡＴＧＡＧＧＡＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ（配列番号３６）、ＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＣＴＧＴＴＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＣＣＴＡＣＡＣＡＴＣＡＡＧＡＴＴＧＣＡＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＡＴＴＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＡＡＴＡＣＧＣＴＴＣＣＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ（配列番号３７）、ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＧＡＣＣＴＣＴＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＣＣＴＡＣＡＣＣＴＣＣＡＧＡＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＴＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ（配列番号３８）およびＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＴＣＡＴＣＣＴＡＣＴＴＧＴＣＴＧＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＣＴＴＧＣＡＡＧＧＣＡＡＧＴＧＡＣＣＡＣＡＴＴＡＡＴＡＡＴＴＧＧＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＴＧＣＴＣＣＴＡＧＧＣＴＣＴＴＡＡＴＡＴＣＴＧＧＴＧＣＡＡＣＣＡＧＴＴＴＧＧＡＡＡＣＴＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＣＡＡＧＡＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＡＧＧＡＴＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＴＣＡＧＡＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＴＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＴＧＧＡＧＴＡＣＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号３９）から選択される。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片はマウス由来であり、重鎖をコードする配列は配列番号３２、３３、および３５から選択される。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片はマウス由来であり、軽鎖をコードする配列は配列番号３６、３７、および３９から選択される。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片はヒト化されており、重鎖をコードする配列は配列番号３４である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片はヒト化されており、軽鎖をコードする配列は配列番号３８である。
「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、本明細書で交換可能に使用される場合、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、これに限定されないが、ポリペプチドｍＲＮＡを有し、それを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織から調製されるｃＤＮＡライブラリーを含むいかなる供給源から得てもよい。したがって、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ヒト組織から調製されるｃＤＮＡライブラリーから簡便に得ることができる。ポリペプチドをコードする遺伝子はまた、ゲノムライブラリーから得ても、公知の合成手順（例えば、自動核酸合成）によって得てもよい。
例えば、ポリヌクレオチドは、軽鎖または重鎖等の免疫グロブリン分子鎖全体をコードしてもよい。完全な重鎖には、重鎖可変領域（ＶＨ）だけでなく、典型的には３つの定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む重鎖定常領域（ＣＨ）；ならびに「ヒンジ」領域も含まれる。いくつかの状況では、定常領域の存在は望ましい。
ポリヌクレオチドによってコードされる他のポリペプチドとしては、単一ドメイン抗体（「ｄＡｂ」）、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’等の抗原結合抗体断片が挙げられ、ＣＨ１およびＣＫまたはＣＬドメインは切除されている。ミニボディは、従来の抗体よりも小さいため、臨床／診断的使用においてより良好な組織浸透を達成するはずであるが、二価の場合は、ｄＡｂ等の一価抗体断片よりも高い結合親和性を保持するはずである。したがって、文脈上別段の指示がない限り、「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、全抗体分子だけでなく、上で議論された種類の抗原結合抗体断片も包含する。コードされたポリペプチドに存在するそれぞれのフレームワーク領域は、対応するヒトアクセプターフレームワークと比べて少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでもよい。したがって、例えば、フレームワーク領域は、アクセプターフレームワーク領域と比べて、合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５のアミノ酸置換を含んでもよい。開示されるタンパク質産物を構成する個々のアミノ酸の特性を考慮すると、いくつかの合理的な置換が当業者によって認識されるだろう。アミノ酸置換、すなわち「保存的置換」は、例えば、関与する残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒性性質における類似性に基づいて行うことができる。
好適には、本明細書において記載されるポリヌクレオチドは単離および／または精製してもよい。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは単離ポリヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、「天然に存在しない」物質、組成物、実体、および／もしくは物質、組成物、もしくは実体の任意の組合せという用語、またはそれらの任意の文法上の変化形は、当業者によって「天然に存在する」と良好に理解されているか、または裁判官もしくは行政もしくは司法機関によって「天然に存在する」といかなる時でも判定もしくは解釈されるかもしくはされ得る、物質、組成物、実体、および／または物質、組成物、もしくは実体の任意の組合せの形態を明示的に除外するが、単に除外するに過ぎない、条件付き用語である。
処置および診断のための方法
別の態様によって、それを必要とする対象におけるＨＬＡ、ＭＨＣ－Ｉまたはその両方を発現するがんを処置する方法であって、対象に本発明の抗体または抗原結合性断片を投与することを含む、方法が提供される。
別の態様によって、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、対象におけるＩＬＴ２の発現が所定の閾値を上回ることを確認すること、および対象にＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤を投与することを含み、それにより対象におけるがんを処置する、方法が提供される。
別の態様によって、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、対象にＩＬＴ２媒介免疫抑制を阻害する薬剤を投与すること；および対象にＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法を投与することを含み、それにより対象におけるがんを処置する、方法が提供される。
別の態様によって、がん細胞に対するＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法の効能を増加させる方法であって、がん細胞をＩＬＴ２媒介免疫抑制を阻害する薬剤と接触させることを含む、方法が提供される。
別の態様によって、がんを患う対象を処置する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法と組み合わせた使用のための、結合し、ＩＬＴ２媒介免疫細胞抑制を阻害する薬剤が提供される。
本明細書で使用される場合、疾患、障害もしくは状態の「処置」または「処置すること」という用語は、その少なくとも１つの症状の軽減、その重症度の低減、またはその進行の阻害を包含する。処置は、疾患、障害または状態が、完全に治癒することを意味する必要はない。効果的な処置であるために、本明細書における有用な組成物は、疾患、障害または状態の重症度を軽減すること、それらに関連する症状の重症度を低減すること、または患者もしくは対象のクオリティオブライフの改善を提供することのみを必要とする。
本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、処置される個体における疾患の過程を変更しようとする試みにおける臨床的介入を指し、予防のため、または臨床病理の過程の間のいずれかで行うことができる。処置の望ましい効果としては、疾患の出現もしくは再発を予防すること、症状の緩和、疾患の病理学的帰結を低減すること、疾患の進行の速度を低減すること、疾患状態の改善、寛解、または予後の改善が挙げられる。「処置」という用語は、培養中の細胞または組織に影響を与えるエクスビボ手順も含む。
いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、単剤療法として投与される。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法とともに投与される。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、オプソニン化剤とともに投与される。いくつかの実施形態において、オプソニン化剤は、抗ＣＤ４７剤ではない。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７剤は、抗ＣＤ４７抗体である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、抗ＣＤ４７剤または療法とともに投与されない。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、抗ＣＤ４７剤または療法と組み合わされない。
いくつかの実施形態において、処置することには、免疫サーベイランスを増加させることを含む。いくつかの実施形態において、処置することには、免疫応答を増加させることを含む。いくつかの実施形態において、処置することには、腫瘍量を減少させることを含む。いくつかの実施形態において、処置することには、がん転移を低減することを含む。いくつかの実施形態において、処置することには、がんに対する細胞傷害性を増加させることを含む。いくつかの実施形態において、処置することには、がんに対する炎症反応を増加させることを含む。いくつかの実施形態において、処置することには、がんの食作用の増加を含む。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、脊椎動物、例えば、哺乳動物、特にヒトを含む、個体または患者を指す。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態において、対象はがんを患っている。
いくつかの実施形態において、がんは、ＨＬＡを発現するがんである。いくつかの実施形態において、ＨＬＡはＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態において、がんは、ＭＨＣ－Ｉを発現するがんである。いくつかの実施形態において、がんは、ＰＤ－１を発現するがんである。いくつかの実施形態において、がんは固形がんである。いくつかの実施形態において、がんは血液がんである。いくつかの実施形態において、がんは、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１に基づく療法に対して不応性である。いくつかの実施形態において、がんは、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１に基づく療法に以前に応答しなかった。いくつかの実施形態において、がんは、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１に基づく療法に対して応答性であったが、不応性になった。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、不応性がんを応答性がんに転換する。
いくつかの実施形態において、本方法は、ＨＬＡ、ＭＨＣ－Ｉまたはその両方を発現するがんを確認することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、ＨＬＡを発現するがんを確認することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、ＭＨＣ－Ｉを発現するがんを確認することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、ＨＬＡおよびＭＨＣ－Ｉを発現するがんを確認することを含む。いくつかの実施形態において、確認することには、がんにおける発現を測定することを含む。いくつかの実施形態において、確認することには、がんの表面における発現を測定することを含む。いくつかの実施形態において、がんの中および／または上は、がん細胞の中および／または上である。いくつかの実施形態において、確認することには、がんによって分泌されるＨＬＡ－Ｇを測定することを含む。いくつかの実施形態において、確認することには、可溶性ＨＬＡ－Ｇを測定することを含む。いくつかの実施形態において、可溶性ＨＬＡ－Ｇは、体液中にある。いくつかの実施形態において、体液は血液である。
いくつかの実施形態において、本方法は、対象におけるＩＬＴ２の発現を確認することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、対象におけるＩＬＴ２の発現が所定の閾値を上回ることを確認することを含む。いくつかの実施形態において、確認することには、対象におけるＩＬＴ２の発現を測定することを含む。いくつかの実施形態において、確認することは、投与する前である。いくつかの実施形態において、測定することは、投与する前である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２の発現は、免疫細胞における発現である。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２の発現は、対象の免疫細胞における発現である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は末梢血免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は腫瘍内免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞から選択される。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＣＤ８陽性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は末梢血ＣＤ８陽性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片を投与することには、本発明の抗体または抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、治療有効量の抗体または抗原結合性断片が投与される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、担体、賦形剤またはアジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態において、担体は薬学的に許容される担体である。
本明細書で使用される場合、「担体」、「賦形剤」または「アジュバント」という用語は、活性薬剤ではない医薬組成物の任意の構成成分を指す。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、非毒性の、不活性な固体、半固体、液体の増量剤、希釈剤、カプセル化材料、任意の種類の製剤補助剤、または生理食塩水等の単なる無菌水性媒体を指す。薬学的に許容される担体としての機能を果たすことができる材料のいくつかの例は、ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；トラガント粉末；麦芽、ゼラチン、タルク；カカオバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル、寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリーの水；等張生理食塩水、リンゲル液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝液、ならびに医薬製剤において使用される他の非毒性の適合物質である。本明細書において担体としての機能を果たすことができる物質のいくつかの非限定的な例としては、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、トラガント粉末、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、植物油、ポリオール、アルギン酸、パイロジェンフリーの水、等張生理食塩水、リン酸緩衝液、カカオバター（坐剤基剤）、乳化剤、ならびに他の医薬製剤において使用される他の非毒性の薬学的な適合物質が挙げられる。湿潤剤、およびラウリル硫酸ナトリウムなどの滑沢剤、ならびに着色剤、香味剤、賦形剤、安定剤、抗酸化剤および保存剤が存在していてもよい。任意の非毒性の不活性で有効な担体は、本明細書において企図される組成物を製剤化するために使用される。これに関する適切な薬学的に許容される担体、賦形剤および希釈剤は、当業者に周知であり、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ、第１３版、Ｂｕｄａｖａｒｉら編、Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．、Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．（２００１年）；ｔｈｅ ＣＴＦＡ（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，ａｎｄ Ｆｒａｇｒａｎｃｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ） Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第１０版（２００４年）；および「Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ」、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ） Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ） Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔに記載されるものなどであり、これらのすべての内容は、それらの全体が参照によって本明細書に組み入れられる。本組成物において有用な薬学的に許容される賦形剤、担体および希釈剤の例としては、蒸留水、生理的食塩水、リンゲル液、デキストロース液、ハンクス液およびＤＭＳＯが挙げられる。これらの追加の不活性構成成分、ならびに効果的な製剤および投与手順は、当技術分野において周知であり、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｇｉｌｍａｎら編、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ（１９９０年）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．（１９９０年）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．（２００５年）などの標準的なテキストに記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。現在記載の組成物はまた、リポソーム、ＩＳＣＯＭＳ、徐放性粒子、および血清中のペプチドまたはポリペプチドの半減期を増加させる他のビヒクルなどの人工的に作出された構造に含有される。リポソームは、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単分子層、液晶、リン脂質分散系、ラメラ層などを含む。現在記載のペプチドとの使用のためのリポソームは、中性および負に荷電したリン脂質、ならびにコレステロールなどのステロールを一般に含む、標準的なビヒクル形成脂質から形成される。脂質の選択は、一般に、リポソームのサイズおよび血中の安定性などの特徴によって決定される。さまざまな方法が、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ、Ｊ． Ｅ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９年、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、によって概説されるように、リポソームを調製するために利用可能であり、米国特許第４，２３５，８７１号、米国特許第４，５０１，７２８号、米国特許第４，８３７，０２８号および米国特許第５，０１９，３６９号も参照されたい。
担体は、合計で、本明細書に提示される医薬組成物の約０．１重量％～約９９．９９９９９重量％を構成する。
「治療有効量」という用語は、哺乳動物における疾患または障害を処置するために有効な薬物の量を指す。「治療有効量」という用語は、所望の治療的または予防的結果を達成するために、必要な投薬量および期間で有効な量を指す。正確な剤形およびレジメンは、患者の状態に従って、医師によって決定されるだろう。
いくつかの実施形態において、本方法は、対象にオプソニン化剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、本方法は、細胞をオプソニン化剤と接触させることをさらに含む。いくつかの実施形態において、オプソニン化剤は上皮性増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブである。いくつかの実施形態において、オプソニン化剤は、抗ＣＤ４７剤ではない。いくつかの実施形態において、本方法は、対象にＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、本方法は、細胞をＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法と接触させることをさらに含む。いくつかの実施形態において、本方法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法の存在下で細胞を成長させることをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の遮断抗体である。いくつかの実施形態において、本方法は、抗ＣＤ４７剤または療法を投与することを含まない。いくつかの実施形態において、本方法は、抗ＣＤ４７剤または療法の投与を欠く。いくつかの実施形態において、本方法は、抗ＣＤ４７剤または療法を投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤は、ＩＬＴ２に結合する。いくつかの実施形態において、薬剤は、ＩＬＴ２細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、薬剤はＩＬＴ２アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、薬剤はＩＬＴ２遮断抗体である。いくつかの実施形態において、薬剤は、Ｂ２ＭとのＩＬＴ２相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、薬剤は本発明の抗体である。
いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤は、オプソニン化剤の前、その後またはそれと同時に投与される。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤およびオプソニン化剤は、単一の組成物で投与される。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤およびオプソニン化剤は、別々の組成物で投与される。
いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法の前、その後またはそれと同時に投与される。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、単一の組成物で投与される。いくつかの実施形態において、ＩＬＴ２に基づく免疫抑制を阻害する薬剤およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法は、別々の組成物で投与される。いくつかの実施形態において、薬剤または療法の少なくとも１つは、共投与に適合する。
本明細書で使用される場合、「共投与に適合する」という用語は、それらを対象に安全かつ容易に投与することができるような形態で存在する抗体を指す。共投与は、いくつかの非限定的な実施形態において、経口で、注射によって、または吸入によって行うことができる。いくつかの実施形態において、抗体は、対象に安全かつ容易に投与することができるように、医薬組成物内に含まれる。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、抗体、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。
いくつかの実施形態において、ＨＬＡはＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態において、ＨＬＡは、非標準的なＨＬＡである。いくつかの実施形態において、ＨＬＡは、標準的なＨＬＡである。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡ発現が確認される。いくつかの実施形態において、タンパク質発現が確認される。いくつかの実施形態において、タンパク質の表面発現が確認される。発現を測定する方法は、当技術分野において周知であり、ＰＣＲ、Ｑ－ＰＣＲ、ノーザンブロット、イムノブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、免疫染色およびＦＡＣＳを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、表面発現を確認するためのがんのＦＡＣＳ分析を含む。
製剤
本発明は、ヒトの医学的使用のための医薬組成物も企図し、これは、本明細書においてさまざまに記載される状態の処置、診断または予防のための治療用組成物の製造のための、ＩＬＴ２を認識する少なくとも１つの抗体を活性薬剤として含む。
このような医薬製剤および医学製剤において、活性薬剤は、好ましくは、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される担体、および場合により任意の他の治療用成分と一緒に利用される。担体は、製剤の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに過度に有害ではないという意味で、薬学的に許容可能でなければならない。活性薬剤は、上記に記載の所望の薬理学的効果を達成する有効量で、所望の一日用量を達成するのに適切な量で提供される。
典型的には、抗体の抗原結合性部分を含む本発明の分子は、治療的使用のために、無菌生理食塩水に懸濁される。あるいは、医薬組成物は、有効成分（抗体の抗原結合性部分を含む分子）の放出を制御するため、または患者の系におけるその存在を延長するために、製剤化される。多数の適切な薬物送達システムが公知であり、例えば、埋め込み可能な薬物放出システム、ヒドロゲル、ヒドロキシメチルセルロース、マイクロカプセル、リポソーム、マイクロエマルジョン、ミクロスフェアなどが挙げられる。放出制御調製物は、本発明による分子を複合化または吸着するポリマーの使用により調製することができる。例えば、生体適合性ポリマーとしては、ポリ（エチレン－コ－酢酸ビニル）のマトリックス、ならびにステアリン酸二量体およびセバシン酸のポリ酸無水物コポリマーのマトリックスが挙げられる。そのようなマトリックスからの本発明による分子、すなわち抗体または抗体断片の放出の速度は、分子の分子量、マトリックス内の分子の量、および分散された粒子のサイズに依存する。
本発明の医薬組成物は、経口、局所、鼻腔内、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、関節内、病巣内または非経口などの任意の適切な手段によって投与される。通常、静脈内（ｉ．ｖ．）、関節内、局所または非経口投与が好ましい。
当業者には、本発明による分子の治療有効量が、とりわけ、投与スケジュール、投与される分子の単位用量、分子が他の治療薬剤と組み合わせて投与されるか否か、患者の免疫状態および健康、投与される分子の治療活性、ならびに処置する医師の判断に依存することが明らかであろう。
本発明の分子（抗体またはその断片）の適切な投薬量は、投与経路、分子の種類（ポリペプチド、ポリヌクレオチド、有機分子など）、患者の年齢、体重、性別または状態に応じて変わり、最終的には医師が決定されなければならないが、経口投与の場合において、一日投薬量は、一般に、体重１ｋｇあたり、約０．０１ｍｇ～約５００ｍｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ～約５０ｍｇ、より好ましくは約０．１ｍｇ～約１０ｍｇの間である。非経口投与の場合において、一日投薬量は、一般に、体重１ｋｇあたり、約０．００１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは約０．００１ｍｇ～約１０ｍｇ、より好ましくは約０．０１ｍｇ～約１ｍｇの間である。一日投薬量は、例えば、毎日１～４回の個々の投与の典型的なレジメンで投与することができる。投与の他の好ましい方法は、体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇの関節内投与を含む。有効量に達するさまざまな考慮事項は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、１９９０年；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９９０年に記載されている。
組合せ化学療法の適切な投薬レジメンは、当技術分野において公知であり、例えば、Ｓａｌｔｚら、Ｐｒｏｃ ＡＳＣＯ １９９９年、１８巻、２３３ａ頁およびＤｏｕｉｌｌａｒｄら、Ｌａｎｃｅｔ ２０００年、３５５巻、１０４１～７頁に記載されている。
活性成分としての本発明の分子は、周知であるように薬学的に許容され、活性成分と適合性である賦形剤に、溶解され、分散され、または混合される。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、デキストロース、グリセリン、エタノールなど、およびそれらの組合せである。他の適切な担体は、当業者に周知である。加えて、所望により、組成物は、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの少量の補助物質を含有することができる。
生成の方法
別の態様によって、薬剤を生成する方法であって、ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること、マクロファージの炎症活性、がん細胞に対するＴ細胞の活性、樹状細胞の活性、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性のうちの少なくとも１つを増加させる薬剤の能力を試験すること、ならびにマクロファージの活性、Ｔ細胞の活性、樹状細胞の活性および細胞傷害性のうちの少なくとも１つを増加させる少なくとも１つの薬剤を選択することを含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成する方法であって、薬剤をコードする核酸配列を含む１つまたはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、
ｉ．ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること；
ｉｉ．マクロファージの炎症活性、がん細胞に対するＴ細胞の活性、樹状細胞の活性、およびＮＫ細胞のがん細胞に対する細胞傷害性のうちの少なくとも１つを増加させる前記薬剤の能力を試験すること；ならびに
ｉｉｉ．食作用、活性および細胞傷害性のうちの少なくとも１つを増加させる少なくとも１つの薬剤を選択すること
によって選択された薬剤の核酸配列であること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成する方法であって、ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること、がん細胞に対する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる薬剤の能力を試験すること、および抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる少なくとも１つの薬剤を選択することを含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成する方法であって、薬剤をコードする核酸配列を含む１つまたはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、
ｉ．ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること；
ｉｉ．がん細胞に対する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる薬剤の能力を試験すること；ならびに
ｉｉｉ．がん細胞に対する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効能を増加させる少なくとも１つの薬剤を選択すること
によって選択された薬剤の核酸配列であること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成するための方法であって、
ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること、マクロファージによるがん細胞の食作用の増加、がん細胞に対するＴ細胞の活性の増加、Ｍ１マクロファージの発生の増加、Ｍ２マクロファージの発生の低減、樹状細胞の腫瘍微小環境への動員の増加、樹状細胞の活性化の増加、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性の増加のうちの少なくとも２つを誘導する前記薬剤の能力を試験すること、ならびに前記食作用の増加、前記活性の増加、前記発生の増加、前記発生の低減、前記動員、前記活性化の増加、前記活性の減少、および前記細胞傷害性の増加のうちの少なくとも２つを誘導する少なくとも１つの薬剤を選択すること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成するための方法であって、
薬剤をコードする核酸配列を含む１つまたはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、
ｉ．ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること；
ｉｉ．マクロファージによるがん細胞の食作用の増加、がん細胞に対するＴ細胞の活性の増加、Ｍ１マクロファージの発生の増加、Ｍ２マクロファージの発生の低減、樹状細胞の腫瘍微小環境への動員の増加、樹状細胞の活性化の増加、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性の増加のうちの少なくとも２つを誘導する前記薬剤の能力を試験すること；ならびに
ｉｉｉ．前記食作用の増加、前記活性の増加、前記発生の増加、前記発生の低減、前記動員、前記活性化の増加、前記活性の減少、および前記細胞傷害性の増加のうちの少なくとも２つを増加させる少なくとも１つの薬剤を選択すること
によって選択された薬剤の核酸配列であること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成するための方法であって、
ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること、ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する前記薬剤の能力を試験すること、ならびにＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する少なくとも１つの薬剤を選択することを含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成するための方法であって、薬剤をコードする核酸配列を含む１つまたはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、
ｉ．ＩＬＴ２細胞外ドメインまたはその断片に結合する薬剤を得ること；
ｉｉ．ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する前記薬剤の能力を試験すること；ならびに
ｉｉｉ．ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの間の相互作用を阻害する少なくとも１つの薬剤を選択すること
によって選択された薬剤の核酸配列であること
を含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成するための方法であって、配列番号４１、４２、４３および４４から選択されるヒトＩＬＴ２の配列内のＩＬＴ２エピトープに結合する薬剤を得ることを含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
別の態様によって、薬剤を生成するための方法であって、薬剤をコードする核酸配列を含む１つまたはそれ以上のベクターを含む宿主細胞を培養することであって、核酸配列が、配列番号４１、４２、４３および４４から選択されるヒトＩＬＴ２の配列内のＩＬＴ２エピトープに結合する薬剤を得ることによって選択された薬剤の核酸配列であることを含み、それにより薬剤を生成する、方法が提供される。
いくつかの実施形態において、本方法は、ＩＬＴ２媒介免疫抑制を阻害する薬剤の能力を試験すること、およびＩＬＴ２媒介免疫抑制を阻害する少なくとも１つの薬剤を選択することをさらに含む。いくつかの実施形態において、核酸配列は、ＩＬＴ２媒介免疫抑制を阻害する薬剤の能力を試験すること、およびＩＬＴ２媒介免疫抑制を阻害する薬剤を選択することによって選択される薬剤の核酸配列である。いくつかの実施形態において、本方法は、マクロファージによるがん細胞の食作用の増加、がん細胞に対するＴ細胞の活性の増加、Ｍ１マクロファージの発生の増加、Ｍ２マクロファージの発生の低減、樹状細胞の腫瘍微小環境への動員の増加、樹状細胞の活性化の増加、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性の増加のうちの少なくとも３つを誘導する前記薬剤の能力を試験すること、ならびに少なくとも３つを誘導する少なくとも１つの薬剤を選択することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞およびマクロファージのうちの少なくとも３つにおける効果を誘導する薬剤の能力を試験することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞およびマクロファージにおける効果を誘導する薬剤の能力を試験することを含む。
いくつかの実施形態において、効能を増加させることには、抗がん効果における相乗的な増加を含む。いくつかの実施形態において、抗がん効果は、炎症誘発性サイトカイン分泌である。いくつかの実施形態において、炎症誘発性サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－６およびＩＦＮγから選択される。いくつかの実施形態において、炎症誘発性サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－６またはＩＦＮγである。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、炎症誘発性サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦである。いくつかの実施形態において、増加した効能は、Ｔ細胞の活性化における相乗的な増加を含む。いくつかの実施形態において、増加した効能は、Ｔ細胞の細胞傷害性における相乗的な増加を含む。いくつかの実施形態において、増加した効能は、Ｔ細胞の活性化および細胞傷害性の両方の相乗的な増加を含む。いくつかの実施形態において、増加は、膜のＣＤ１０７ａ発現の増加を含む。いくつかの実施形態において、増加は、膜のＣＤ１０７ａ発現の増加によって特徴付けられる。いくつかの実施形態において、増加は、薬剤が投与または接触されない場合の効能と比較される。いくつかの実施形態において、効能を増加させることは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく療法に対して不応性のがんを療法に対して応答するがんに転換することを含む。いくつかの実施形態において、がんは、ＨＬＡを発現する。いくつかの実施形態において、がんは、ＭＨＣ－Ｉを発現する。
いくつかの実施形態においてマクロファージの炎症活性の増加は、マクロファージによるがん細胞の食作用の増加を含む。いくつかの実施形態において、マクロファージの炎症活性の増加は、Ｍ１マクロファージの発生を増加させることを含む。いくつかの実施形態において、マクロファージの炎症活性の増加は、Ｍ２マクロファージの発生を減少させること含む。いくつかの実施形態において、マクロファージの炎症活性の増加は、マクロファージにおけるＭ１表現型を増加させることを含む。いくつかの実施形態において、マクロファージの炎症活性の増加は、マクロファージにおけるＭ２表現型を減少させることを含む。
いくつかの実施形態において、樹状細胞の活性は、樹状細胞の活性化を含む。いくつかの実施形態において、樹状細胞の活性は、樹状細胞の腫瘍への動員を含む。いくつかの実施形態において、樹状細胞の活性は、がん細胞に対する活性である。いくつかの実施形態において、がん細胞に対する活性は、ＴＭＥにおける活性である。いくつかの実施形態において、腫瘍はＴＭＥである。いくつかの実施形態において、樹状細胞の活性は、抗原提示を含む。
いくつかの実施形態において、薬剤の能力を試験することには、がん細胞に対するＴ細胞の活性、マクロファージの炎症活性、樹状細胞の活性、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性のうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはすべてを増加させる薬剤の能力を含む。それぞれの可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの薬剤を選択することには、がん細胞に対するＴ細胞の活性、マクロファージの炎症活性、樹状細胞の活性、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のがん細胞に対する細胞傷害性のうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはすべてを増加させる薬剤を選択することを含む。いくつかの実施形態において、マクロファージの炎症活性を増加させることは、Ｍ１マクロファージの発生を増加させること、および／またはマクロファージによるがん細胞の食作用を増加させることである。いくつかの実施形態において、マクロファージの炎症活性を増加させることは、Ｍ２マクロファージの発生を減少させることである。いくつかの実施形態において、薬剤の能力を試験することには、マクロファージの炎症活性を増加させる薬剤の能力を含む。いくつかの実施形態において、薬剤の能力を試験することには、樹状細胞の活性を増加させる薬剤の能力を含む。いくつかの実施形態において、腫瘍に対するとは、ＴＭＥに対することである。いくつかの実施形態において、薬剤の能力を試験することには、ＮＫ細胞のがん細胞に対する細胞傷害性を増加させる薬剤の能力を含む。
いくつかの実施形態において、本方法は、ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの相互作用を阻害する薬剤の能力を試験することをさらに含む。いくつかの実施形態において、相互作用は直接相互作用である。いくつかの実施形態において、本方法は、ＩＬＴ２およびＢ２Ｍの接触を阻害する薬剤の能力を試験することをさらに含む。いくつかの実施形態において、相互作用は結合である。いくつかの実施形態において、接触は結合である。いくつかの実施形態において、本方法は、エピトープに結合する薬剤の能力を試験することをさらに含む。
以下の実施例は、本発明の化合物および方法を作成および使用する方法を説明することを意図し、決して限定として解釈されるべきではない。本発明は、ここにその特定の実施形態と併せて記載するが、多くの改変および変形が当業者に明らかであることは明白である。したがって、添付の特許請求の範囲の精神および広い範囲内のそのような改変および変形のすべてを包含することを意図する。
一般に、本明細書で使用される命名法および本発明で利用される検査手順は、分子、生化学、細菌学および組換えＤＮＡ技法を含む。そのような技法は文献で徹底的に説明されている。例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」 第Ｉ～ＩＩＩ巻 Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｒ．Ｍ．，ら（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ、「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎら、（編）「Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ」、１～４巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号；米国特許第４，６８３，２０２号；米国特許第４，８０１，５３１号；米国特許第５，１９２，６５９号および米国特許第５，２７２，０５７号に記載の技法；「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、Ｉ～ＩＩＩ巻 Ｃｅｌｌｉｓ、Ｊ．Ｅ．編（１９９４）；「Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ－Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」ｂｙ Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９９４）、第３版；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｉ～ＩＩＩ巻 Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ．Ｅ．、編（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓら、（編）、「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｉｇｉ（編）、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ － Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」．Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｏｓｓｉｐｏｗ、Ｎｉｃｏｌａｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ．Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（２０１４）；「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」．Ｍａｈｅｒ Ａｌｂｉｔａｒ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｍｅｄｉａ（２００７）を参照されたい。前記文献はすべて参照によって組み入れる。他の一般的な参考文献は本文書全体で提供される。
材料および方法
抗体－市販の抗ＩＬＴ２ｍＡｂは、クローン＃１－ＧＨＩ／７５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３３３７０４）、クローン＃２－ＨＰ－Ｆ１（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、カタログ番号１６－５１２９）である。追加のｍＡｂは、ＨＬＡ－Ｇ（ＭＥＭ－Ｇ／９；Ａｂｃａｍ社、カタログ番号ａｂ７７５８；Ｇ－００３１）、ＩＬＴ４（４２Ｄ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３３８７０４）、ＩＬＴ６（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社、カタログ番号１３５４９－ＭＭ０６）、ＬＩＬＲＡ１（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＭＡＢ３０８５１）、汎ＨＬＡ（Ｗ６／２２；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、カタログ番号１６－９９８３－８５）およびＨｉｓ（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ社、カタログ番号１０００１－０－ＡＰ）を使用した。
フローサイトメトリー－一般には、細胞はすべての工程の間氷上または４℃に保った。染色に先立って、５×１０５細胞は、ＦＡＣＳバッファー（０．１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ）中５０μｇ／ｍＬヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｉ４５０６）で１５分間遮断した。抗体は製造業者が推奨する濃度で使用し、３０分間、暗所でインキュベートした。インキュベーションは９６ウェルＵ字ボトムプレートにおいて１００μＬで行い、細胞は２００μＬのＦＡＣＳバッファーで２度洗浄し、分析のためにＦＡＣＳチューブの１５０μＬのＦＡＣＳバッファーに移した。細胞は、Ｇａｌｌｉｏｓフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒ社）上で、Ｇａｌｌｉｏｓフローサイトメトリー取得ソフトウェア用のＫａｌｕｚａを使用して分析した。
骨髄細胞分化－単球は、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒト単球濃縮キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ社、カタログ番号１９０５９）を使用してネガティブ選択法により健康なドナー由来の新鮮な血液試料から単離した。異なる細胞集団を、関連するマーカーのＦＡＣＳ分析によりおよび特徴的なサイトカインの分泌の分析により指示された表現型について試験した。成熟化のため、単球は、ＲＰＭＩ培地において０．８×１０６／ｍＬの密度で成長因子を用いて培養し、培地は３日目および６日目に補充した。炎症性Ｍ１マクロファージは、５０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ１表現型）の存在下で６日間、次に２０ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－ガンマおよび５０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳの存在下で４８時間成熟させた。抑制性Ｍ２マクロファージは５０ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦを使用して６日間、次に１０ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦならびに２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４およびＩＬ－１０を使用して４８時間分化させた。樹状細胞は、５０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦおよび２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４により６日間誘導し、成熟（１００ ｎｇ／ｍＬ ＬＰＳ）または免疫寛容原性（ＩＬ－１０ １００Ｕ／ｍＬおよびＩＦＮ－ａ２ｂ（１０００ Ｕ／ｍＬ）樹状細胞にさらに分化させた。
トランスフェクション－ＨＬＡ－Ｇ１（完全長ＨＬＡ－Ｇ転写物をコードする）プラスミドを、ＨＬＡ－Ｇ１ ｃＤＮＡをＰＣＤＮＡ３．１ベクター中にクローニングすることにより作成した。トランスフェクションは、ｊｅｔＰＥＩ（登録商標）トランスフェクション試薬（ＰｏｌｙＰｌｕｓ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｓ社）を使用して行った。ＩＬＴ２／ＣＤ３ｚプラスミドは、ヒトＩＬＴ２タンパク質の細胞外部分とマウスＣＤ３遺伝子の膜貫通および細胞質残基をインフレームに組み合わせることにより作成した。プラスミドは、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ ＩＩ（Ｌｏｎｚａ社）を製造業者により記載されている通りに使用してマウスＢＷ５４１７．３ Ｔ細胞系統にヌクレオフェクトした（ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔ）。安定なトランスフェクタントをＧ４１８含有培地中で選択した。
ＮＫおよびがん細胞系統共培養アッセイ－ＮＫ細胞を、抗ＩＬＴ２抗体およびマッチング（ｍａｔｃｈｉｎｇ）アイソタイプ対照の存在下で、指示された細胞系統と一緒に３７℃で５時間インキュベートした。細胞傷害性レベルは、蛍光定量的ＬＤＨ検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を使用して測定した。
フローサイトメトリー遮断アッセイ－Ｎ末端でヒトＩｇＧ１のＦｃ部分と融合した組換えヒトＩＬＴ２タンパク質にビオチン（Ｉｎｎｏｖａ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）をコンジュゲートした。全部で５×１０５のＡ３７５／ＨＬＡ－Ｇ１細胞を、抗ＩＬＴ２クローン＃１またはアイソタイプ適合（ｍａｔｃｈｅｄ）対照ｍＡｂおよびビオチンをコンジュゲートしたＩＬＴ２－Ｆｃの存在下（１０μｇ／ｍＬ）室温で３０分間、容積１００μＬでインキュベートした。数回の洗浄工程後、ストレプトアビジン－ＰＥを最終濃度０．２μｇ／ｍＬで添加して氷上で３０分間インキュベートし、続いてＦＡＣＳ分析にかけた。
ＢＷ ＩＬＴ２／ＣＤ３ｚ鎖キメラアッセイ－３×１０４のＢＷ／ＩＬＴ２ｚを当量数のＡ３７５／ＷＴまたはＡ３７５／ＨＬＡ－Ｇ１細胞と２４時間混ぜ合わせた。機能的ｍＡｂは指示された濃度およびマッチングアイソタイプ対照で使用した。分泌したマウスＩＬ２の量は市販のＥＬＩＳＡキット（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）により評価された。
ＩＬＴ２およびＨＬＡ－Ｇはがん細胞およびがん関連免疫細胞上に見出される
ＩＬＴ２は、健康な免疫細胞ならびに多くの腫瘍細胞の表面で見出される既知の免疫抑制分子である。ＩＬＴ２は、ＭＨＣ－１ならびにＨＬＡクラス分子（ＨＬＡ－Ｇ、ならびにＨＬＡ－ＦおよびＨＬＡ－Ｂ２７）に結合することが明らかにされており、ＣＤ８と競合しそれによってＴ細胞活性化を阻害する。ＩＬＴ２を発現する細胞の広がりをさらに理解するために、種々の免疫細胞上で市販の抗体（抗体＃１）を使用してフローサイトメトリー解析を実施した。文献に報告されているように、メラノーマ患者由来の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）、ならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、ＩＬＴ２の表面発現に陽性であった（図１）。健康なドナーの血液由来の単球も試験し、ＩＬＴ２を高度に発現することが分かった（図２、一番左のパネル）。単球が異なる骨髄細胞集団（樹状細胞およびマクロファージ）に分化すると、未成熟であれ、炎症性であれ、免疫寛容原性であれ、ＩＬＴ２発現は保持された（図２、右パネル）。
異なるがん徴候におけるＩＬＴ２発現を、ＴＣＧＡデータベースのバイオインフォマティック解析により調べた（図３Ａ）。興味深いことに、ＴＣＧＡに表される試料の腫瘍におけるＩＬＴ２ ＲＮＡ発現レベルと骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）および抑制性Ｍ２腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の存在の間の相関性が観察された（図３Ｂ）。フローサイトメトリーによる異なる固形腫瘍由来の新鮮な腫瘍試料の分析により、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における先天的および適応免疫細胞によるＩＬＴ２の発現が実証された。非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、腎臓がん（ＲＣＣ）、頭頚部がん、食道がんおよび結腸がん患者由来の腫瘍試料を収集し、酵素的消化により単細胞浮遊液を作成した。全免疫細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、ＣＤ８陽性Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ）についてのＩＬＴ２陽性細胞のパーセントは図３Ｃに提示されている。したがって、抗がん活性を有する細胞（炎症細胞）上ならびにがん促進および免疫抑制活性を有する細胞（免疫寛容原性およびＭＤＳＣ）上の両方でＩＬＴ２が発現されていることは明らかである。
ＨＬＡ－Ｇ発現も種々のがんにおいて調べた。異なる徴候由来のがん試料の組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）を免疫組織化学により市販のポリクローナルＨＬＡ－Ｇ抗体を用いて染色した。がんタイプごとの陽性症例のパーセントが示されている（図４Ａ）。さらに、いくつかの徴候では、拡張したＴＭＡを調べた。ＨＬＡ－Ｇ染色のスコアーは、染色強度と陽性細胞のパーセントの掛け算により計算した。１００を超える高スコアーのＨＬＡ－Ｇ染色は、食道、胃、頭頚部および腎臓がんの高い割合で検出された（図４Ｂ）。それぞれの徴候における陽性症例のパーセントは表１に示されている。
Figure 0007284256000001
ＨＬＡ－Ｇは、可溶性分泌型ならびにもっと一般的な膜型を有する。がん患者での可溶性ＨＬＡ－Ｇの発現レベルを調べるため、市販のＥＬＩＳＡを使用してＨＬＡ－Ｇの存在について血漿試料を調べた。ＨＬＡ－Ｇは、正常な（健康な）対照と比べていくつかのがん徴候において過剰発現されていることが分かった（図５）。さらに、ある特定のがんタイプでは、有意に高いレベルを有する患者の集団を検出することができた。
ＩＬＴ２遮断抗体の作成
ハイブリドーマ技術を用いて、モノクローナルＩＬＴ２アンタゴニスト抗体を作成した。６９のＩＬＴ２特異的ハイブリドーマを最初に作成した。３つのリード抗体を、試験した種々のアッセイにおけるその好ましい結合、交差反応性プロファイルおよび機能的活性に従って選択した。選択された抗体は１９Ｅ３、１５Ｇ８および１７Ｆ２であった。これらの抗体は一般的な方法を使用して配列決定した。選択された抗体の配列は図６に示されている。ＣＤＲは、ＫＡＢＡＴ方式により決定した。１５Ｇ８および１９Ｅ３は、一般的なＣＤＲ移植（ｇｒａｆｔｍｅｎｔ）アプローチを使用してヒト化した。手短に言えば、最初のハイブリドーマ由来抗体由来の必須のＣＤＲおよびフレームワーク残基を同定して、生殖系列ヒト抗体の可変および定常領域に移植した。最終ヒト化抗体はＩｇＧ４抗体である。最終ヒト化１５Ｇ８は、ＣＤＲ－Ｈ３のシステインを取り除いてそれをアラニンまたはセリンで置き換えて、単一アミノ酸変化も含んでいた。この変化は開発可能性を改善するために加えられた。両方の得られた抗体の結合が確かめられ、アラニンを有する１５Ｇ８抗体がさらなる試験のために選択された。ヒト化１５Ｇ８への今後の言及はすべてアラニン変異体のことである。
ＩＬＴ２に結合する抗ＩＬＴ２抗体の能力は、３つの異なるシステムを使用して試験した。組換えＩＬＴ２への結合はＥＬＩＳＡを使用して（図７Ａ）、およびＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して（表２）試験し、膜ＩＬＴ２への結合はＩＬＴ２をトランスフェクトしたＢＷ細胞を使用して試験した（図７Ｂ～図７Ｃ）。キメラマウスおよびヒト化抗体は、類似する結合を示した（図７Ｄ）。市販のマウス抗ヒトＩＬＴ２抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社；クローンＧＨＩ／７５）は正の対照として使用した。３つの試験した抗体は、溶液中であれ細胞の表面であれ、ＩＬＴ２に首尾よく結合した。いくつかの類似するＩＬＴファミリーメンバー－ＰＩＲＢ、ＩＬＴ６およびＬＩＬＲＡ１への交差反応性は、同様にＥＬＩＳＡへの結合を使用して調べた。これらのタンパク質に対する抗体は正の対照として使用した。ＰＩＲＢ、ＩＬＴ６およびＬＩＬＲＡ１と交差反応した抗体はなかった。抗体は免疫染色にも効果的であった（図７Ｅ）。興味深いことに、ＰＢＭＣががん患者の血液から単離された場合、健康な対照よりもがん患者のほうがより多くのＴ細胞およびＮＫ細胞でＩＬＴ２が発現されることが分かった（図７Ｆ）。
Figure 0007284256000002
ＩＬＴ２抗体はＩＬＴ２－ＨＬＡ－Ｇ相互作用を遮断する
ＨＬＡ－ＧとＩＬＴ２の間の相互作用を遮断する作成された抗ＩＬＴ２抗体の能力は、４つの異なるアッセイを使用して試験した。第１に、遮断フローサイトメトリーアッセイを実施した。ＨＬＡ－ＧトランスフェクトＡ３７５細胞を、本発明の抗体および正の対照抗体の存在下でビオチン化ＩＬＴ２と一緒にインキュベートした。市販の抗ＩＬＴ２抗体ＧＨＩ／７５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３３３７０４）を正の対照として使用した。細胞へのＩＬＴ２－ビオチンの結合は、フローサイトメトリー解析によりストレプトアビジン－ＰＥを使用して決定した（図８Ａ）。遮断のパーセントは、負の対照（対照ＩｇＧの存在下でのＩＬＴ２結合）に正規化することにより決定した。１５Ｇ８（薄灰色線）およびアイソタイプ対照（黒色線）の存在下で、抗体なし（灰色線）でのＩＬＴ２結合を示す代表的なＦＡＣＳ分析は図８Ｂに提示されている。遮断の割合は種々の濃度の抗体で計算した（図８Ｃ）。キメラマウスおよびヒト化抗体は類似する遮断能力を示した（図８Ｄ）。
ＨＬＡ－ＧとＩＬＴ２の間の相互作用を機能的に遮断するＩＬＴ２抗体の能力も、ＢＷ ＩＬＴ２／マウスＺ鎖キメラレポーターアッセイにおいて調べた。ＢＷ細胞に、マウスＴ細胞ゼータ鎖に融合されたヒトＩＬＴ２をトランスフェクトした（ＢＷ－ＩＬＴ２）。次に、細胞を、選択されたＩＬＴ２抗体の存在下でＡ３７５－ＨＬＡ－Ｇ細胞と一緒にインキュベートした。機能的ＩＬＴ２－ＨＬＡ－Ｇ相互作用により、ＢＷ細胞はレポーターサイトカイン、マウスＩＬ－２を分泌した。相互作用を遮断すれば、レポーターサイトカインの分泌が低減されると考えられる。マウスＩＬ－２の分泌はインキュベーションの２４時間後ＥＬＩＳＡにより決定した。結果は、処置あたり３通りのウェルからのｍＩＬ－２レベル±ＳＥの平均を表している（図８Ｅ）。市販のマウス抗ヒトＩＬＴ２抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社；クローンＧＨＩ／７５）を両方のアッセイについての正の対照（ＰＣ）として使用した。遮断の割合は、種々の濃度の抗体で計算した（図８Ｆ）。この同じＢＷ ＩＬＴ２／マウスＺ鎖キメラレポーターアッセイを使用して、新しい抗体が単独でＩＬＴ２活性化効果を有し得るという可能性を排除した。細胞はがん細胞なしでＩＬＴ２抗体と一緒にインキュベートし、マウスＩＬ－２分泌を再び測定した（図８Ｇ）。新しいＩＬＴ２抗体はアゴニスト効果がないことが分かったが、同じハイブリドーマ方法により作成された他の抗体（１Ｇ７）はＩＬＴ２に結合しその活性を誘導することができる。
機能的遮断もヒトジャーカット細胞（Ｔ細胞）で調べた。ジャーカット細胞は、ＨＬＡ－Ｇおよび一本鎖抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）を外因的に発現するＡ３７５がん細胞と一緒にまたはこれなしでインキュベートした。炎症促進性ヒトＩＬ－２の分泌を測定した。非変性ジャーカット細胞（ＩＬＴ２陰性である細胞）を使用した場合、ジャーカット細胞をがん細胞と共培養すると高レベルのＩＬ－２が分泌された（図８Ｈ）。驚くべきことではないが、遮断するＩＬＴ２がなかったので、１５Ｇ８抗体を添加してもＩＬ－２分泌には何の効果もなかった。したがって、ジャーカット細胞をヒトＩＬＴ２を発現するようにトランスフェクトした。まず第１に、ＩＬＴ２陽性ジャーカット細胞を、ＯＫＴ３を外因的に発現するＡ３７５がん細胞と一緒にまたはこれなしで培養した。これらのがん細胞は天然にはＭＨＣ－Ｉ陽性である。がん細胞由来のＭＨＣ－ＩはＩＬ－２分泌を強く阻害した（図８Ｉ）。この場合、１５Ｇ８抗体を添加するとＩＬＴ２／ＭＨＣ－Ｉ相互作用を遮断し、ＩＬ－２分泌を用量依存的に増やした。汎ＨＬＡ抗体は正の対照として使用し、等濃度では１５Ｇ８抗体は汎ＨＬＡ抗体に匹敵していた（図８Ｉ）。阻害効果を増強するため、Ａ３７５細胞もＨＬＡ－Ｇをトランスフェクトし、この細胞をＭＨＣ－ＩおよびＨＬＡ－Ｇ陽性にした。これらの細胞はＩＬＴ２陽性細胞に対してはるかに強力な阻害効果を生じ、ＩＬ－２分泌を単独で培養されたジャーカット細胞のＩＬ－２分泌まで低減した（図８Ｊ）。１５Ｇ８抗体を投与すると用量依存効果が再び観察され、再び等しい投与量では１５Ｇ８抗体と汎ＨＬＡ抗体は同じ程度に効果的であった（図８Ｊ）。注目すべきは、汎ＨＬＡの代わりにＨＬＡ－Ｇ特異的抗体のみを使用した場合、効果は大きく低減され、１００分の１の濃度で使用した１５Ｇ８抗体に匹敵した（図８Ｋ）。
このジャーカット系を使用して、１５Ｇ８抗体を２つの市販の抗体：ＧＨＩ／７５およびＨＰ－Ｆ１とも比較した。ヒトＩＬＴ２を発現するジャーカット細胞は、種々の濃度の１５Ｇ８、ＧＨＩ／７５およびＨＰ－Ｆ１の存在および非存在下で、ＨＬＡ－Ｇ／ＯＫＴ３を発現するＡ３７５細胞と一緒に培養した。すでに観察されたように、１５Ｇ８は、ＩＬ－２分泌の統計的に有意な用量依存的増加を引き起こした（図８Ｌ）。ＧＨＩ／７５は、培地単独と比べてＩＬ２分泌に何の効果もなかったが、ＩｇＧ対照と比べるとわずかな増加を生じた（図８Ｍ）。ＨＰ－Ｆ１は、わずかであるが有意な増加を生じて定常に達したが、投与の増加に比例して増えることはなかった（図８Ｎ）。２０μｇ／ｍｌのＨＰ－Ｆ１でさえ、たった４μｇ／ｍｌの１５Ｇ８と比べても劣っていた。
最後に、活性化はＴＩＬ、およびＮＫ細胞において直接測定した。ＴＩＬはＡ３７５－ＨＬＡ－Ｇ－ＯＫＴ３細胞と５分間一緒にインキュベートし、続いてＴ細胞活性化マーカー、リン酸化ＺＡＰ７０を検出した。ＮＫ細胞はＡ２５３－ＨＬＡ－Ｇ細胞と２分間一緒にインキュベートし、続いてＮＫ細胞活性化マーカー、リン酸化Ｓｙｋを検出した。がん細胞と共培養した場合両方の細胞型において活性化が観察されたが、この活性化はＩＬＴ２抗体の存在下で増強された（図８Ｏ～図８Ｐ）。これらの結果は、ＩＬＴ２抗体がＩＬＴ２－ＨＬＡ－Ｇ相互作用を効率的に遮断することができ、これによりＴ細胞およびＮＫ細胞活性化が増強されることを実証している。
ＩＬＴ２抗体はＨＬＡ－ＧおよびＭＨＣ－Ｉ陽性腫瘍細胞の食作用を増強する
腫瘍細胞の食作用を増強する作成された抗ＩＬＴ２抗体の能力は、２つの異なるシステムを使用して試験した。単球は健康なドナーの血液から単離し、Ｍ－ＣＳＦの存在下で６～７日間インキュベートして、マクロファージを作成した。まず第１に、フローサイトメトリーベースのアッセイを用いた。ＰＫＨ６７－ＦＩＴＣで染色した異なるがん細胞系統を、指示された抗体の存在下、ｅＦｌｕｏｒ ６７０－ＡＰＣで染色したマクロファージと一緒にインキュベートした。食作用レベルは、二重染色され標的細胞の貪食を示すマクロファージのパーセントにより決定した。食作用レベルは対照（培地のみ）からのパーセントとして提示される。図９Ａに示されるように、異なるＩＬＴ２遮断抗体は、マクロファージによるＨＬＡ－Ｇ陽性Ａ３７５細胞の食作用を増強することができた。さらに、腫瘍細胞の食作用を増強するマクロファージの能力は、リアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）分析システムを使用して調べた。標的細胞系統は、ｐＨｒｏｄｏ（商標）赤血球標識色素で標識し、洗浄して、種々の処理と一緒に反復してマクロファージに添加した。ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）ｐＨｒｏｄｏ（商標）赤血球標識色素の蛍光は、ファゴソームに固有である環境などの酸性環境で増やされ、したがって、蛍光の測定により食作用イベントの定量化を可能にする。ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）装置は、蛍光赤色シグナル強度および位相画像のために３０分ごとにアッセイプレートから試料採取した。食作用イベントは赤色蛍光シグナルの蓄積として反映され、食作用速度は赤色蛍光シグナル蓄積の速度論から反映された。このリアルタイムシステムを使用して、ＨＬＡ－Ｇ陽性Ａ３７５細胞の食作用を増強するヒト化抗ＩＬＴ２抗体の能力を確かめた（図９Ｂ）。さらに、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）システムを使用して、作成された遮断ＩＬＴ２抗体が、ＨＬＡ－Ｇ陽性ならびに種々のＭＨＣ－Ｉ陽性（ＷＴ）がん細胞系統の両方の食作用を増強できることが実証された（図９Ｃ）。
がん細胞の食作用に対する作成されたＩＬＴ２抗体と抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）誘導抗体であるアービタックスを組み合わせる効果を、上記のＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）リアルタイムシステムを使用して調べた。ＩＬＴ２遮断抗体とアービタックスの組合せは、それぞれの抗体単独の活性と比べてＨＬＡ－Ｇを過剰発現するがん細胞系統の食作用を有意に増加させた（図９Ｄ）。実際、アービタックスと１５Ｇ８ヒト化抗体の組合せは相乗効果があり、組合せ処理の食作用の増加は相加効果だけよりも大きかった。
選択されたＩＬＴ２抗体はＨＬＡ－Ｇにより阻害されるＴ細胞活性を回復させることができる
ＨＬＡ－Ｇにより阻害されたＴ細胞活性を回復させる作成された抗ＩＬＴ２抗体の能力を調べるため、ヒトＣＤ８ Ｔ細胞を野生型７２１．２２１細胞（２２１ＷＴ）または可溶性ＨＬＡ－Ｇ５を過剰発現する７２１．２２１細胞（２２１－ＨＬＡ－Ｇ）と一緒に共インキュベートした。Ｔ細胞からのＩＦＮγ分泌レベルは、標準ＥＬＩＳＡを使用して５日後に測定した。結果は、２２１－ＨＬＡ－Ｇのみの効果の倍のパーセントとして示されており、４つの独立した実験の平均を表す。図１０Ａに示される結果は、いくつかのＩＬＴ抗体がＨＬＡ－Ｇ阻害Ｔ細胞活性を回復できることを実証している。これはＡ３７５－ＨＬＡ－Ｇ－ＯＫＴ３細胞とのインキュベーションでも試験した。７２時間後、ヒトグランザイムＢも測定し、１５Ｇ８抗体の存在下で用量依存的に増加することが分かった（図１０Ｂ）。
選択されたＩＬＴ２抗体はＨＬＡ－ＧおよびＭＨＣ－Ｉ陽性腫瘍細胞に対するＮＫ細胞傷害性を増強することができる
ＮＫ細胞エフェクター活性を増強する作成された抗ＩＬＴ２抗体の能力を、ＮＫ細胞を種々の標的がん細胞系統と一緒にインキュベートする系において試験した。細胞は、エフェクター対標的比７．５対１で５時間共インキュベートし、続いて蛍光定量的ＬＤＨ検出キットを使用して細胞傷害性レベルを検出した。特異的細胞傷害性のパーセントは以下の通り計算した。
Figure 0007284256000003
図１１Ａに示されるように、本発明のＩＬＴ２抗体は、ＨＬＡ－Ｇ陽性細胞と種々のＭＨＣ－Ｉ陽性がん細胞系統の両方に対するＮＫ細胞の細胞傷害性（図１１Ｂ）を用量依存的に有意に増強することができた。グランザイムＢ（図１１Ｃ）およびインターフェロンガンマ（図１１Ｄ）分泌も測定し、用量依存的様式で増加することが分かった。原発ＮＫ細胞を標的ＨＬＡ－Ｇ＋メラノーマ細胞と一緒に共培養し、続いてＩＦＮγ、ＩＬＴ２、ＣＤ５６、およびＣＤ１０７Ａの発現についてＦＡＣＳにより分析した。ＩＬＴ２陽性、ＣＤ５６陽性、ＮＫ細胞集団は特に分析し、ＩＦＮγ発現および膜ＣＤ１０７Ａ発現の用量依存的増加が観察された（図１１Ｅ～図１１Ｆ）。それぞれの実験を別々にプロットする場合、％ＩＬＴ２陽性細胞とＩＦＮγおよびＣＤ１０７Ａの発現の増加の間の相関性がはっきり見えていた（図１１Ｇ～図１１Ｈ）。
ＩＬＴ２抗体は炎症性マクロファージの生成を増加させる
マクロファージの成熟に対する遮断ＩＬＴ２の効果をインビトロで調べた。健康なドナーから単離した単球をＭ－ＣＳＦ（５０ｍｇ／ｍＬ）の存在下で５日間分化させて、ヒト化遮断ＩＬＴ２抗体または対照ＩｇＧの存在下で成熟マクロファージ（Ｍ０）を作成した。マクロファージはＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍＬ）の存在下でさらに分化させてＭ１マクロファージを作成し、またはＩＬ－４（２５ｎｇ／ｍＬ）を用いてＭ２マクロファージを作成した。図１２に示されるように、マクロファージの成熟過程中のＩＬＴ２遮断抗体の存在により、Ｍ０マクロファージに分化したものであれ、Ｍ１マクロファージに分化したものであれまたはＭ２マクロファージに分化したものであれ、試験したドナーの大半のマクロファージ上ではＨＬＡ－ＤＲ（Ｍ１炎症性マクロファージのマーカー）の発現が増加した。さらに、Ｍ１マクロファージに分化したマクロファージは、試験したドナーの大半においてＣＤ８０レベルも増加していた。まとめると、これらの結果は、選択されたＩＬＴ２アンタゴニスト抗体が、より炎症性が高いＭ１表現型を持つマクロファージとなるより高いレベルのＨＬＡ－ＤＲおよびＣＤ８０を示すマクロファージを誘導することができることを実証している。
ＩＬＴ２遮断抗体は患者由来の腫瘍細胞に対して免疫細胞の活性を増強する
作成された抗ＩＬＴ２抗体の活性を、がん患者由来の腫瘍試料（ＲＣＣおよびＨ＆Ｎ）を用いてエクスビボ系において調べた。患者由来の腫瘍細胞の食作用を増やす抗体の能力を試験するため、単球から作成されたマクロファージを腫瘍試料から単離した腫瘍細胞と一緒にインキュベートした。食作用レベルは上で詳述したＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）リアルタイム分析システムを使用して調べた。図１３Ａに示されるように、ＩＬＴ２抗体は異なるがん徴候の患者由来の腫瘍細胞の食作用を増強することができた。さらに、効果は用量依存性であり、自己マクロファージの場合でさえ存在しており、ＲＣＣについて（図１３Ｂ）とＨ＆Ｎ由来の扁平上皮癌（図１３Ｃ）の両方で見られた。さらに、ＰＢＭＣの活性を増強するＩＬＴ２抗体の効果を調べた。患者由来の腫瘍試料の単細胞浮遊液をＩＬ－２の存在下で同じ患者から単離したＰＢＭＣ（活性化されたＰＢＭＣ）と一緒にインキュベートした。図１４Ｇに示されるように、腫瘍細胞の存在下での炎症促進性ＴＮＦαサイトカインのＰＢＭＣ分泌を、ＩＬＴ２抗体の存在下で評価した。まとめると、これらの結果は、種々のがん徴候由来の腫瘍細胞に対して免疫細胞の活性を増やす遮断ＩＬＴ２抗体の能力を実証していた。
ＩＬＴ２遮断抗体はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法と併用することができる
ＩＬＴ２とＰＤ－１はほとんどが、末梢血細胞と腫瘍微小環境常在免疫細胞の両方を含む異なる免疫細胞上で発現される（図１４Ａ）。ＣＲＣ患者由来の腫瘍内ＣＤ８陽性Ｔ細胞でのＩＬＴ２およびＰＤ－１発現の分析により、Ｔセントラルメモリー細胞（Ｔｃｍ）および疲弊Ｔ細胞（Ｔｅｘ）の両方が高レベルのＰＤ－１（図１４Ｂ）を発現したが、ＩＬＴ２のレベルは低い（図１４Ｃ）ことが分かった。ＣＤ４５ＲＡ再発現Ｔ細胞（ＴＥＭＲＡ）は正反対のパターンを示し、高レベルのＩＬＴ２および低レベルのＰＤ－１を発現した。この二分法はがん特有の現象ではなく、健康なドナーの血液由来のＴＥＭＲＡ細胞の大きな割合（８３％）がＩＬＴ２陽性であり、陽性である全ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合はごくわずかである（１７％）ことが分かった（図１４Ｄ）。にもかかわらず、ＩＬＴ２発現はＴＭＥのＴ細胞では増強されていた。単細胞浮遊液は、食道がん患者から単離された腫瘍の酵素的消化により作成した。ＦＡＣＳ分析によれば、ＣＤ８陽性腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の大きな割合がＴＥＭＲＡ細胞であり（５０％）、これらのＴＥＭＲＡ細胞は１００％ＩＬＴ２陽性であるが、ほぼ完全にＰＤ－１陰性（９５％）であることが明らかにされた（図１４Ｅ）。
本発明の抗ＩＬＴ２抗体と抗ＰＤ－１の組合せの効果を、１０人の健康なドナー由来のＳＥＢ活性化（１０ｎｇ／ｍｌ）ＰＢＭＣで試験した。膜ＣＤ１０７ａの発現は細胞傷害性の増加についてのマーカーとして使用した。全体として、１５Ｇ８抗体は表面ＣＤ１０７ａにおいて平均でわずかな増加を生じ、抗ＰＤ－１はドナー依存性であるいくぶん大きな応答を生じた（図１４Ｆ）。２つの抗体の組合せは平均でＣＤ１０７ａレベルの増加を生じたが、これらの変化は特定のドナー試料に基づいて変わりやすかった。図１４Ｇは、３つの例示的な試料を提示している。最初のドナーは、抗ＰＤ－１を１５Ｇ８と組み合わせた場合、相加効果が見られ、全ＣＤ１０７ａレベルはそれぞれの抗体単独の効果の合計におおよそ等しかった。第２のドナーは抗ＩＬＴ２よりも抗ＰＤ－１に対して強い応答があったが、意外なことに、２つの抗体の組合せのほうが相加以上の効果があった。抗ＰＤ－１は発現の１９％増加を生じ、抗ＩＬＴ２は３．７％増加を生じたが、併用処理では３３．２％増加となった。この相乗効果はドナー＃３の細胞のほうがはるかにはっきりしていた。ドナー＃３では、１５Ｇ８のほうが抗ＰＤ－１よりも効果的であり（１３．１％増加対９．３％増加）、併用療法でははるかに効果的であり（４１％）、相加的組合せだけから予測される効果のほぼ２倍の効果を生じた。
ＰＤ－１遮断抗体と作成されたＩＬＴ２抗体を用いた患者腫瘍細胞の併用処置は次のように評価した。種々の患者がん細胞を、抗ＰＤ－１抗体、本発明の抗体およびその組合せの存在下で、自己ＰＢＭＣと一緒にインキュベートした。ＩｇＧは対照として使用し、炎症促進性分子の分泌は読み出し情報として測定した。炎症促進性サイトカインの増強された分泌は併用処置において観察された（図１４Ｈ～図１４Ｊ）。第１の患者由来の結腸腺癌細胞のヒト化抗体１５Ｇ８による処置ではＩｇＧ対照と比べてＩＦＮγ分泌を全く増強せず、抗ＰＤ－１はサイトカイン分泌の頑強な増加を生じた（図１４Ｈ）。しかし、意外なことに、抗ＰＤ－１とＩＬＴ２抗体の組合せは分泌を５０％以上増やした。第２の患者は類似する傾向を示し、ＩＬＴ２抗体または抗ＰＤ－１によりわずかな増加が誘導され、２つの抗体を併用して使用すると存在する相乗的増加は増強された（図１４Ｉ）。ＧＭ－ＣＳＦ発現は、対照と比べるとどちらの抗体単独によっても変更されなかったが、驚くべきことに、２つの抗体を併用すると対照ＧＭ－ＣＳＦレベルのほぼ１００％の頑強な増加を生じた（図１４Ｊ）。
次に、混合リンパ球反応を使用して、併用療法を評価した。樹状細胞およびＣＤ８陽性Ｔ細胞は異なる健康なドナーから単離し、マクロファージはＨ＆Ｎがん患者から単離した単球から作成した。細胞はエフェクター細胞対標的比５対１で組合せ、指示された処理をした（それぞれ２０μｇ／ｍｇ）。Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌は、抗ＩＬＴ２抗体または抗ＰＤ－１抗体が存在する場合は増強され、この効果は両方の抗体を併用して使用すると増加した（図１４Ｋ～図１４Ｌ）。マクロファージ培養物では、樹状細胞培養物（図１４Ｋ）と比べてより大きな累積効果が観察された（図１４Ｌ）。これらの結果は、抗ＩＬＴ２と抗ＰＤ－１療法が、免疫細胞炎症応答を増強するのに相乗的で新規の効果があることを明白に示している。
ＩＬＴ２遮断抗体は腫瘍負荷をインビボで低減する
抗ＩＬＴ２抗体の効力を異種移植片インビボモデルにおいて調べた。免疫無防備状態ＳＣＩＤ－ＮＯＤまたはＮＳＧマウスにがん細胞系統（Ａ３７５－ＨＬＡ－Ｇ、Ａ３７５－ＷＴ、ＣＯＬＯ－３２０－ＨＬＡ－Ｇ）を接種し、健康なドナーの血液から作成したヒトマクロファージをＩＬＴ２抗体の存在下でマウスに注射した。図１５Ａに示されるように、作成されたＩＬＴ２抗体の投与により、この系では九分どおりヒトマクロファージの活性により媒介されたこのモデルでの有意な腫瘍阻害が生じた。さらに、抗腫瘍効力がＨＬＡ－Ｇ陽性ならびにＭＨＣ－Ｉ陽性腫瘍細胞において観察された。
抗ＩＬＴ２抗体の効力も、肺病変メラノーマ異種移植片インビボモデルで調べた。免疫無防備状態ＳＣＩＤ－ＮＯＤマウスにメラノーマ細胞（ＭＥＬ５２６－ＨＬＡ－Ｇ）を接種した。ヒトＰＢＭＣは健康なドナーの血液から単離されたが、接種の１日後に開始して選抜ＩＬＴ２抗体の存在下でマウスに注射され、２、１０、１８日目に繰り返した（図１５Ｂ）。ＩＬＴ２抗体は１、４、８、１１、１５、１８、２２および２５日目に投与した。図１５Ｃに示されるように、作成されたＩＬＴ２抗体の投与により、腫瘍細胞の転移が有意に低減したが、この転移はマウスの肺での黒色病変の形成により表される。ＩＬＴ２抗体で処置されたマウスの肺は、対照ＩｇＧで処置されたマウスと比べてそのような病変が非常に少ない。この効果は、これらのマウスでの肺の重量の低減によっても示され（図１５Ｄ）、九分どおり投与された抗体によるＩＬＴ２の阻害と組み合わせてマウスに投与されたヒトリンパ球により媒介された。このように、抗ＩＬＴ２抗体は転移および腫瘍形成を予防するのに効果的であった。
次に、すでに形成されている腫瘍を処置する際の新しい抗体の有効性を、同じインビボマウスモデルで試験した。ＳＣＩＤ－ＮＯＤマウスには、以前と同じく、ＭＥＬ５２６－ＨＬＡ－Ｇ細胞を静脈内投与により移植した。１５日後、健康なドナーから単離されたヒトＰＢＭＣをマウスの関連のある群に投与し、この投与は２５、３５および５１日目に繰り返した（図１５Ｅ参照）。抗体（ＩＬＴ２抗体、抗ＰＤ－１抗体またはこの２つの組合せ）を、１４、１７、２０、２４、２７、３０、３４、３７および５０日目に投与した（図１５Ｅ参照）。５３日目、マウスは屠殺し、肺を秤量した。腫瘍重量は、試験マウスの肺重量から無処置マウス肺重量を引き算することにより計算した。抗ＰＤ－１抗体は腫瘍重量を減らしたが、有意ではなく、ＩＬＴ２抗体および併用処置は有意な効果があった（図１５Ｆ）。
腫瘍由来ＣＤ８ Ｔ細胞、ＴＥＭＲＡ細胞およびＮＫ細胞を、ＣＤ１０７ＡおよびＣＤ６９発現について試験した。全ＣＤ８ Ｔ細胞では、抗ＰＤ－１抗体はＣＤ１０７Ａ発現の有意でない増加を誘導し、ＩＬＴ２抗体は有意な変化を誘導したが、併用療法は誘導しなかった（図１６Ａ）。ＴＥＭＲＡ細胞では、ＩＬＴ２抗体と併用療法の両方が有意な増加を誘導した（図１６Ｂ）。ＮＫ細胞では、抗ＰＤ－１と抗ＩＬＴ２抗体の両方がＣＤ６９陽性細胞の割合を有意に増やしたが、驚くべきことに、併用療法は大幅に増強された効果があり、ＣＤ６９陽性細胞の全割合はどちらかの療法単独の組合せ以上であった（図１６Ｃ）。驚いたことに、ＣＤ６９発現をＣＤ８ Ｔ細胞で調べると、抗ＰＤ１も抗ＩＬＴ２も発現を増やさなかったが、併用処置はＣＤ６９発現の高度に有意な増加を誘導した（図１６Ｄ）。さらに、ＩＬＴ２抗体の効果がＩＬＴ２発現と相関していることが確定された。実験が低いまたは高いＩＬＴ２発現を有するＰＢＭＣを受けたマウス中に分類された場合、活性化マーカーの有意な差が観察された。ＴＥＭＲＡ細胞では、高ＩＬＴ２発現ＰＢＭＣは、低ＩＬＴ２発現ＰＢＭＣと比べると倍加を超えるＣＤ１０７Ａ発現を含んでいた（図１６Ｅ）。同様に、ＮＫ細胞を調べると、高ＩＬＴ２発現ＰＢＭＣは、併用処置を施した場合、細胞のほぼ９０％がＣＤ６９を発現するように誘導したが、低ＩＬＴ２発現ＰＢＭＣがＣＤ６９を発現するように誘導したＮＫ細胞は４０％未満であった（図１６Ｆ）。このように、ＰＢＭＣにおけるＩＬＴ２の発現レベルは抗体の最も強力な効果には不可欠である。
インビボヒト化Ｈ＆Ｎモデル
第２のインビボモデルでは、ヒト化マウス（ヒトＣＤ３４＋移植マウス）にＡ２５３－ＨＬＡ－Ｇ細胞を接種した。腫瘍が８０立方ミリメートルの大きさに到達すると、マウスは対照ＩｇＧまたはＩＬＴ２抗体（１５Ｇ８、両方とも１０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。処置は４３日まで週２回繰り返し（図１７Ａ）、腫瘍は種々の時点でキャリパーにより測定して腫瘍サイズを決定した。ＩＬＴ２抗体は、４頭のマウスのうちの２頭（マウス番号２３および２８）で腫瘍成長を完全に遅延させ、腫瘍は４３日までに根絶された（図１７Ｂ）。処置に対する異なる応答が、マウスの免疫細胞でのＩＬＴ２の発現のレベルが異なるせいだったのかどうかを判定するため、末梢血由来のＣＤ８ Ｔ細胞をベースラインでのＩＬＴ２発現についてアッセイした。実際、完全奏功をした両方のマウスはＩＬＴ２が高発現したＴ細胞を有し、その他の２頭のマウスは発現レベルが有意に低かった（図１７Ｃ）。さらに、ＴＭＥ後処置を調べることにより、レスポンダーを非レスポンダーと区別する３つの他の薬力学的応答マーカー、Ｔ細胞でのＣＤ１０７Ａ発現（図１７Ｄ）、Ｍ１／Ｍ２マクロファージ比（図１７Ｅ）、および全ＣＤ８０陽性樹状細胞（図１７Ｆ）を実証した。これらの結果は、抗ＩＬＴ２が腫瘍微小環境の骨髄系リンパ系区画の移動を生じ、抗原を提示する樹状細胞の能力を高めてもっと多くのＴ細胞を腫瘍まで動員することもできるという事実を指し示している。
１５Ｇ８ヒト化抗体のエピトープマッピング
１５Ｇ８抗体をエピトープマッピングのために送って、ＩＬＴ２上の１５Ｇ８が結合する位置を決定した。マッピングはＭＡｂＳｉｌｉｃｏ社により実施された。使用したＩＬＴ２の構造は、構造体；６ＡＥＥ（４つのＩｇ様ドメイン、いくつかのループは欠損）、１ＶＤＧ（未公表、ドメイン１および２）、１Ｇ０Ｘ（ドメイン１および２）および４ＬＬ９（ドメイン３および４）を使用してモデル化した。６ＡＥＥおよび１Ｇ０Ｘ構造体は、Ｗａｎｇ、Ｑ．ら、（２０１９）．「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｕｒ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ ＬＩＬＲＢ２ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｏｕｒ－ｄｏｍａｉｎ ＬＩＬＲＢ１ ａｎｄ ＨＬＡ－Ｇ１ ｃｏｍｐｌｅｘ」．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．から採用し、４ＬＬ９構造体はＣｈａｐｍａｎ、Ｔ．Ｌ．ら、（２０００）．「Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｄ１Ｄ２ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＬＩＲ－１（ＩＬＴ２）」．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１３（５）、７２７～７３６頁から採用した。領域Ｄ１はＩＬＴ２の残基２４～１２１と定義した。領域Ｄ２はＩＬＴ２の残基１２２～２２２と定義した。領域Ｄ３はＩＬＴ２の残基２２３～３２１と定義した。領域Ｄ４はＩＬＴ２の残基３２２～４０９と定義した。抗体の３Ｄモデルは、Ｍｏｄｅｌｌｅｒを使用して構築した。
上位３０を占めるドッキングポーズに基づいて、標的の残基をエピトープに属するその確率についてスコアー化した。おそらくエピトープに属する残基は、図１８Ａの配列上および図１８Ｂの標的の構造体上に示されている。これらの残基から、標的上で４つの主な相互作用領域が定義される（図１８Ｃ）。これらの相互作用領域の４つすべてがＩＬＴ２のドメイン間部分、すなわち、Ｄ１とＤ２の間のヒンジ部分に見出される。確認突然変異はこれらの領域内で選択され、表３に要約されている。これらの突然変異は完全長ＩＬＴ２または切断型Ｄ１＋Ｄ２タンパク質内に作成され、１５Ｇ８抗体の結合を試験する。突然変異体への結合が消失したことまたは減少したことは、その領域が１５Ｇ８抗体の確実なエピトープであることを示している。
Figure 0007284256000004
大半のＩＬＴ２抗体の結合エピトープは知られていないが、国際公開第２０２０／１３６１４５は種々の抗体についてのエピトープ情報を本当に開示している。２つの一般的結合領域、１つはＤ１領域内に、１つはＤ４領域内に見つかった。特に、３Ｈ５、１２Ｄ１２および２７Ｈ５と命名された３つの抗体は、Ｄ１中のＥ３４、Ｒ３６、Ｙ７６、Ａ８２およびＲ８４に置換のある突然変異体への結合が消失していることを特徴とした。これらの抗体のうちの１つ、３Ｈ５は、Ｄ１のＧ２９、Ｑ３０、Ｔ３２、Ｑ３３およびＤ８０に置換のある突然変異体への結合の減少を示した。これらの残基はもっぱらＤ１領域にあり、すべて１５Ｇ８抗体の結合エピトープとして定義された４つの領域の外側（すべてドメイン間内）にある（図１８Ａにおいて、例えば、国際公開第２０２０／１３６１４５号のＥ３４が図１８ＡではＥ３３になるように、配列が１アミノ酸遅れて開始していることに注目されたい）。したがって、抗体１５Ｇ８は、国際公開第２０２０／１３６１４５号の抗体のエピトープとは異なる３次元エピトープに結合する（図１８Ｄ）。
興味深いことに、１５Ｇ８エピトープと定義された領域、すなわち、Ｄ１とＤ２の間のドメイン間は、ＨＬＡと複合している場合にベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）と結合するＩＬＴ２の主要相互作用領域として同定されてきた（Ｋｕｒｏｋｉら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ＬＩＬＲＢ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ＨＬＡ－Ｇ ｉｓｏｆｏｒｍｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．、２０１９年１２月１５日；２０３（１２）：３３８６～３３９４頁参照）（図１８Ｅ～図１８Ｆ）。実際、残基Ｇ９７、Ａ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｑ１２５およびＶ１２６は、Ｋｕｒｏｋｉら、によりＢ２Ｍと相互作用すると明確に同定された（Ｋｕｒｏｋｉの補足図Ｓ２）。これらの残基は１５Ｇ８では相互作用領域３および４内に収まり、すべてがエピトープの極めて高い確実性のまたは可能性が極めて高い残基と考えられる。これは、１５Ｇ８がＨＬＡへのＩＬＴ２の結合をＢ２Ｍ依存的様式で阻害し、実際に、Ｂ２ＭへのＩＬＴ２の直接結合を遮断することを強く示唆している。これとは対照的に、３Ｈ５、１２Ｄ１２および２７Ｈ５抗体は、ＨＬＡ－Ｇのα３ドメインと相互作用するＩＬＴ２のＮ末端Ｄ１領域に結合する（Ｋｕｒｏｋｉの補足図Ｓ２参照）。Ｋｕｒｏｋｉらが、ＩＬＴ２に対する主要相互作用部位がＢ２Ｍであり、α３ドメインへの結合が追加で可動性であることを見つけていたので、これは極めて意義深い。これが、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびマクロファージ／樹状細胞機能を果たす１５Ｇ８の独特の能力を説明する可能性があり：１５Ｇ８がＩＬＴ２の主要相互作用部位を遮断しており、二次部位を遮断しない。
食作用に対して何らかの効果があることが特定された唯一のＩＬＴ２抗体はＧＨＩ／７５であり、これは抗ＣＤ４７遮断媒介がん細胞食作用を増強することが明らかにされているが、単独で効果があることは示されなかった（Ｂａｒｋａｌら、「Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＬＩＬＲＢ１ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｊａｎ；１９（１）：７６～８４頁参照）。組合せＧＨＩ／７５と抗ＣＤ４７効果は、Ｂ２Ｍを欠失させても食作用の増加には何の効果もなかったので、Ｂ２Ｍ依存性ではないことが分かった。したがって、食作用に対する１５Ｇ８単独の効果（図１３Ａ～図１３Ｃ）はＢ２Ｍ依存性である可能性があり、そうであればこの抗体の独特の能力が説明されると考えられる。この点に関する本発明の抗体の優位性を直接試験した。外因性ＨＬＡ－Ｇを発現するＡ３７５またはＳＫＭＥＬ２８がん細胞をＩｇＧ対照、本発明の抗体、またはＧＨＩ／７５の存在下でマクロファージと一緒に共培養した。ＨＰ－Ｆ１抗体もＡ３７５細胞で試験した。ＰＫＨ６７－ＦＩＴＣで染色したがん細胞系統を、指示された抗体の存在下、ｅＦｌｕｏｒ ６７０－ＡＰＣで染色したマクロファージと一緒にインキュベートした。食作用レベルは二重染色されたマクロファージのパーセントにより決定し、これは標的細胞の貪食を示していた。ＩｇＧ対照と比べた食作用の％増加を計算した。本発明の３つの抗体すべてが、両方の細胞型の対照と比べて食作用を増加させ（図１９Ａ～図１９Ｂ）、抗体間でおよび細胞型間である程度の可変性があった。予想通りに、ＧＨＩ／７５もＨＰ－Ｆ１も食作用には何の効果もなかった。これにより、本発明の抗体が、単独療法として食作用を増強することができる最初の抗ＩＬＴ２抗体であることが確かめられる。
これにより、ＧＨＩ／７５および他の市販の抗体のエピトープの問題が生じる。これらの抗体のエピトープは公表されてはいないが、競合ＥＬＩＳＡアッセイを実施して１５Ｇ８ならびにＧＨＩ／７５およびＨＰ－Ｆ１が同時にＩＬＴ２に結合できるかどうかを調べた。ビオチン化１５Ｇ８抗体を、ＩＬＴ２結合ＥＬＩＳＡにおいて一定濃度（１μｇ／ｍｌ）で使用した。ＧＨＩ／７５およびＨＰ－Ｆ１は漸増濃度で添加し、競合を評価した。添加したこれらの２つの抗体の量とは無関係に、ＩＬＴ２への結合を巡ってどちらの抗体も１５Ｇ８と競合しなかった（図１９）。これとは対照的に、裸の（非ビオチン化）１５Ｇ８を添加した場合、予想通り結合は用量依存的様式で減少した。これは、ＧＨＩ／７５およびＨＰ－Ｆ１が１５Ｇ８とは異なるエピトープに結合することを示している。これにより、１５Ｇ８は、このエピトープに結合する、Ｂ２Ｍとの相互作用を特異的に遮断する、ならびにがんに対してＴ細胞、ＮＫ細胞およびマクロファージ／樹状細胞を同時に活性化する／動員することができることがこれまで確認された最初の抗ＩＬＴ２抗体となる。
特定の実施形態の前述の記載は、本発明の一般的性質を十分に明らかにしているので、他者は、現在の知識を適用することにより、不要な実験なしで、上位概念から逸脱することなくそのような特定の実施形態を種々の応用のために容易に修正するおよび／または改作することができ、したがって、そのような改作および修正は、開示された実施形態の意味および等価物の範囲内で理解されるべきであり理解されるよう意図されている。本明細書で用いられる言葉遣いまたは専門語は、説明を目的とし限定を目的としていないことは理解されるべきである。種々の開示された機能を実行するための手段、材料および工程は、本発明から逸脱することなく種々の代替形を取ってもよい。

Claims (26)

  1. ３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）および３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含む抗ＩＬＴ２モノクローナル抗体または抗原結合性断片であって、
    ａ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３は、それぞれ、配列番号１３、１４および１５に示されるアミノ酸配列を含み、ここで前記配列番号１５のＸは、Ａ、ＣおよびＳから選択され、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３は、それぞれ、配列番号１６、１７および１８に示されるアミノ酸配列を含む；
    ｂ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３は、それぞれ、配列番号１、２および３に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３は、それぞれ、配列番号４、５および６に示されるアミノ酸配列を含む；または
    ｃ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３は、それぞれ、配列番号７、８および９に示されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３は、それぞれ、配列番号１０、１１および１２に示されるアミノ酸配列を含む、
    前記抗体または抗原結合性断片。
  2. ａ）配列番号１９、２１もしくは２３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖であって、ここで前記配列番号２３のＸは、Ａ、ＣおよびＳから選択される、前記重鎖；
    ｂ）配列番号２０、２２、２４もしくは４５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    ｃ）ａ）とｂ）との両方、
    を含む、請求項１に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片。
  3. 前記抗体または抗原結合性断片がヒト化され、前記ＸはＡまたはＳである、請求項１または２に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片。
  4. 前記ＸがＡであり、配列番号１５に示されるアミノ酸配列が配列番号２５に示されるアミノ酸配列と同一であるか、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列が配列番号２８に示されるアミノ酸配列と同一である、請求項３に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片。
  5. 配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、抗ＩＬＴ２モノクローナル抗体または抗原結合性断片。
  6. 配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含み、抗体がヒトＩｇＧ４アイソタイプの抗体である、抗ＩＬＴ２モノクローナル抗体。
  7. がんを患う対象において：
    ａ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性の増加；
    ｂ）Ｔ細胞の細胞傷害性、増殖またはその両方の増加；
    ｃ）マクロファージの食作用の増加、Ｍ１炎症性マクロファージの発生の増加、Ｍ２サプレッサーマクロファージの発生の減少、またはそれらの組合せ；および
    ｄ）前記がんの腫瘍への樹状細胞のホーミングの増加、樹状細胞の活性化の増加、またはそれらの組合せ；
    のうちの少なくとも３つを誘導する、
    請求項１～６のいずれか１項に記載の抗ＩＬＴ２モノクローナル抗体または抗原結合性断片。
  8. 前記がんは、ＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんである、請求項７に記載の抗ＩＬＴ２モノクローナル抗体または抗原結合性断片。
  9. 請求項１～８のいずれか１項に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片を含む、医薬組成物。
  10. それを必要としている対象における、
    抗腫瘍Ｔ細胞応答の誘導／増強、
    Ｔ細胞の増殖の増加、
    がん誘導サプレッサー骨髄活性の低減、
    ナチュラルキラー細胞の細胞傷害性の増加、
    マクロファージの食作用の増加、
    Ｍ１炎症性マクロファージの発生の増加、
    Ｍ２サプレッサーマクロファージの発生の減少、
    腫瘍微小環境における樹状細胞の数の増加、
    樹状細胞の活性化の増加、
    ＨＬＡ－Ｇを発現するがんの処置、または
    ＭＨＣ－Ｉを発現するがんの処置、
    のための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片を含む、前記医薬組成物。
  11. それを必要とする対象におけるＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんの処置のための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片を含む、前記医薬組成物。
  12. それを必要とする対象におけるＨＬＡ－ＧまたはＭＨＣ－Ｉを発現するがんの処置のための医薬組成物であって、前記処置は：
    ａ）前記対象におけるＩＬＴ２または可溶性ＨＬＡ－Ｇの発現が所定の閾値を上回ることを確認すること；および
    ｂ）前記対象に、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片を投与すること、
    を含み、それにより、対象のがんを処置する、
    前記医薬組成物。
  13. 前記確認することは、前記投与前の前記対象における前記ＩＬＴ２または可溶性ＨＬＡ－Ｇの発現を測定することを含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
  14. 前記処置は、前記対象の免疫細胞におけるＩＬＴ２の発現を確認することを含む、請求項１２または１３に記載の医薬組成物。
  15. 前記免疫細胞は、末梢血免疫細胞、腫瘍内免疫細胞、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
  16. 前記免疫細胞が末梢血ＣＤ８陽性Ｔ細胞である、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. 前記処置は、可溶性ＨＬＡ－Ｇの発現を確認することを含む、請求項１２～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  18. ＨＬＡ－Ｇ、ＭＨＣ－Ｉまたはその両方を発現するがん細胞に対する抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法の効果を増強するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片を含む、前記医薬組成物。
  19. 前記抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく免疫療法は、抗ＰＤ－１遮断抗体である、請求項１８に記載の医薬組成物。
  20. 前記がんは、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく療法に対して不応性である、請求項１０～１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  21. 前記処置は、オプソニン化剤をさらに含む、請求項１１～２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  22. 前記オプソニン化剤がＥＧＦＲ阻害剤である、請求項２１に記載の医薬組成物。
  23. 前記ＥＧＦＲ阻害剤がセツキシマブである、請求項２２に記載の医薬組成物。
  24. 前記処置は、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１に基づく免疫療法をさらに含む、請求項１１～２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  25. 請求項１～８のいずれか１項に記載の抗ＩＬＴ２抗体または抗原結合性断片をコードする核酸分子。
  26. 前記核酸分子が発現ベクターである、請求項２５に記載の核酸分子。
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