JP5805774B2

JP5805774B2 - シクロスポリンアナログ

Info

Publication number: JP5805774B2
Application number: JP2013533942A
Authority: JP
Inventors: ウィリアム・ロバート・カーリング; カトリーヌ・シモン・ヴィクトリレ・フリードリヒ; マイケル・イー・ガースト; マイケル・イー・スターン; クリストファー・エス・ショームバーグ
Original assignee: Allergan Inc
Current assignee: Allergan Inc
Priority date: 2010-10-12
Filing date: 2011-10-11
Publication date: 2015-11-10
Anticipated expiration: 2031-10-11
Also published as: EP2627664A1; CN103328497A; JP6250608B2; US10065992B2; US20150065433A1; JP2013540776A; BR112013008864A2; AU2011316690C1; KR20140026329A; JP2016029050A; IL225617A0; US9493511B2; AU2011316690B2; EP2627664B1; WO2012051194A1; AU2011316690A1; US20170029469A1; US20120088734A1; MX2013004061A; CA2814192A1

Description

相互参照
本出願は、２０１０年１０月１２日に出願された、米国特許仮出願第６１／３９２，４４９号の利益を主張し、その開示内容全体が参照として本明細書に組み込まれる。

シクロスポリンの新規アナログ、それらを含有する医薬組成物、並びに、ドライアイ及び他の状態の治療におけるそれらの使用法が、本明細書で開示される。

シクロスポリンは、環状ポリ-N-メチル化ウンデカペプチドの１つの部類である。シクロスポリンＡなどの天然に存在するシクロスポリン及び非天然のシクロスポリン（「Ｃｓ」）誘導体がある。

シクロスポリンＡは、例えば、以下の構造を有する。

以下の構造は、シクロスポリンＡの１１個のアミノ酸残基を示す。

本発明は、以下の式（Ｉ）の新規化合物及び薬学的に許容しうるこれらの塩に関する。
（Ｉ）

請求項に記載の式（Ｉ）の新規化合物は、「Ｃｓ骨格」の３位アミノ酸（サルコシン）のα炭素への修飾の結果として生じ、「Ｃｓ骨格」は、本明細書で使用するとき、１つ以上の置換基Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤの性質が互いに異なるシクロスポリン（例えば、ＣｓＡ、ＣｓＣ、ＣｓＤ、等）を意味する。換言すると、「Ｃｓ骨格」は、３位アミノ酸のα炭素での部分を除いた、式（Ｉ）の新規化合物を意味する。

Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、以下の通り、定義される。
Ａは、―ＣＨ＝ＣＨＲ、―ＣＨ＝ＣＨ―ＣＨ＝ＣＨＲ又は―ＣＨ_２ＣＨ_２Ｒを表し、式中、Ｒは
（ａ）―ＣＨ_３、
（ｂ）―ＣＨ_２ＳＨ、
（ｃ）―ＣＨ_２Ｓ―Ｃ_ｎ、式中ｎ＝１-６、
（ｄ）―ＣＨ_２―カルボキシル、すなわち、
（ｅ）カルボキシル、すなわち、
（ｆ）アルコキシカルボニル、すなわち、
式中、Ｒ１０＝Ｃ_１―Ｃ_６アルキル、又は
（ｇ）―ＣＨ_２―アルコキシカルボニル、すなわち、
式中、Ｒ１１＝Ｃ_１―Ｃ_６アルキル、を表す。
Ｂは、−ＣＨ_２ＣＨ_３、又は、
１―ヒドロキシエチル、すなわち、
イソプロピル、すなわち、
若しくは、ｎ―プロピル、すなわち、
を表す。

Ｃは、
イソブチル、すなわち、
２―ヒドロキシイソブチル、すなわち、
又は、１―メチルプロピル、すなわち、
を表す。

Ｄは、―ＣＨ_３又は―ＣＨ_２ＯＨを表す。

本発明の一実施形態では、式（ＩＡ）で以下に示されるように、Ａは―ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３、Ｂは―ＣＨ_２ＣＨ_３、Ｃはイソブチル、及び、Ｄは―ＣＨ_３である。

（ＩＡ）

別の実施形態では、式（ＩＢ）で以下に示されるように、Ａは―ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３、Ｂは１―ヒドロキシエチル、Ｃはイソブチル、及び、Ｄは―ＣＨ_３である。

（ＩＢ）

別の実施形態では、式（ＩＣ）で以下に示されるように、Ａは―ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３、Ｂはイソプロピル、Ｃはイソブチル、及び、Ｄは―ＣＨ_３である。

（ＩＣ）

別の実施形態では、式（ＩＤ）で以下に示されるように、Ａは―ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３、Ｂはｎ―プロピル、Ｃはイソブチル、及び、Ｄは―ＣＨ_３である。

（ＩＤ）

別の実施形態では、式（ＩＥ）で以下に示されるように、Ａは―ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３、Ｂは―ＣＨ_２ＣＨ_３、Ｃは１―メチルプロピル、及び、Ｄは―ＣＨ_３である。

（ＩＥ）

一実施形態では、式（ＩＦ）で以下に示されるように、Ａは―ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３、Ｂは―ＣＨ_２ＣＨ_３、Ｃはイソブチル、及び、Ｄは―ＣＨ_２ＯＨである。

（ＩＦ）

一実施形態では、式（ＩＧ）で以下に示されるように、Ａは―ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３、Ｂは―ＣＨ_２ＣＨ_３、Ｃは２―ヒドロキシイソブチル、及び、Ｄは―ＣＨ_３である。

（ＩＧ）

別の実施形態では、可変部分が、以下にまとめたようになる。

式（Ｉ）では、さまざまなタイプのシクロスポリン骨格のアミノ酸に、１から１１までの数字で表したラベルがつけられる。一実施形態では、本発明の修飾は、Ｃｓ骨格の位置３のアミノ酸（３位のサルコシン）のα炭素で生じる。
この修飾は、式（Ｉ）の一部の、位置３のアミノ酸のα炭素での、水素原子の置換を一般に含み、
式中、Ｒ_１及びＲ_２は、同一若しくは異なる、水素若しくはＣ_１―Ｃ_４アルキルをそれぞれ表し、又は、合わせてＣ_３―Ｃ_７シクロアルキルを表す；
Ｘは、硫黄、又は、―Ｓ（Ｏ）_ｎを表し、ここでｎは１若しくは２である；
Ｒ_３は、水素、直鎖又は分枝のＣ_１―Ｃ_６アルキル、直鎖又は分枝のＣ_２―Ｃ_６アルケニル、直鎖又は分枝のＣ_２―Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３―Ｃ_７シクロアルキル、窒素、酸素及び硫黄から選択される１から３個のヘテロ原子を有するＣ_４―Ｃ_７ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、
-（ＣＨＲ’）_ｍ―ＮＨ―ＣＮＨ_２ＮＨ、
-（ＣＨＲ’）_ｍ―ＣＯＯＨ、
-（ＣＨＲ’）_ｍ―ＮＨＲ''、
-（ＣＨＲ’）_ｍ―ＮＨＣＯＲ''を表し、
式中、ｍは、１、２、３、４、５又は６であり、
それぞれのＲ’は、独立に、Ｈ、直鎖若しくは分枝のＣ_１―Ｃ_６アルキル、直鎖若しくは分枝のＣ_２―Ｃ_６アルケニル、直鎖若しくは分枝のＣ_２―Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３―Ｃ_７シクロアルキル、窒素、酸素及び硫黄から選択される１から３個のヘテロ原子を有するＣ_４―Ｃ_７ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、又は、不在（このような場合、−（ＣＨＲ’）_ｍは―ＣＨ―ＣＨなどの不飽和部分を表すことができる）であり；
Ｒ''は、ｐが０、１、２、３、４、５又は６の、−（ＣＨＲ’）_ｐＮ（ＣＨ_３）_２、−（ＣＨＲ’）_ｐＮＨＣＯＣ、−（ＣＨＲ’）_ｐＮＨＣＯＯＨであり；
Ｒ_３は、Ｃ_１―Ｃ_６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシカルボニル、カルボキシル、シクロアルキル、飽和又は部分的に不飽和の、窒素、酸素及び硫黄から選択された１から３個のヘテロ原子を有する５から６員ヘテロシクリルの、同一又は異なる１つ以上の基によって置換されていてもよく、このヘテロシクリルは、Ｃ_１―Ｃ_６アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミジノ、グアニジン又はウレアの１つ以上の基によって、置換されていてもよい。

化合物の実施例
式（Ｉ）の実施形態としては、以下の式（Ｉ）の化合物（位置３のアミノ酸のα炭素の部分のみが示される;波線は式（Ｉ）のＣｓ化合物の残りを表す）が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明は、また、式（Ｉ）の化合物調製のために有用な新規中間体に関する。新規中間体は、以下の式（ＩＩＩ）の化合物である。

（ＩＩＩ）
（式中のＡ、Ｂ、Ｃ及びＤは、上記の通り、定義される。）

以下は、式（ＩＩＩ）の非限定的な実施形態である。

式（ＩＩＩ）化合物の実施例１［メチレン―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ
ＥＳＭＳＭＨ^＋１２１４．８、ＭＮa^＋１２３６．８
すべてのＮＭＲデータは、選択された診断用のプロトンを示す。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ４．９８（ｄ、１Ｈ、オレフィンＣＨ_２）、５．２５（ｄ、１Ｈ、オレフィンＣＨ_２）、７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．５２（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．５９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．８５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。
^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ１４３．９６（オレフィンＣ）、１０８．０９（オレフィンＣＨ_２）。

本発明は、また、式（ＩＩＩ）の化合物の製造方法に関する。この方法には、
式（ＩＩ）の化合物を、
（ＩＩ）
（式中、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、上で定義した通りである）、
強塩基（例えば、リチウムジイソプロピルアミド又は他の強塩基）と、―７８℃から―７０℃の範囲の温度で反応させて、続いて―７０℃と１５℃の間で二酸化炭素ガス流下で処理し、―５０℃と室温の間で過剰クロロぎ酸クロロメチルによって処理してから、０℃から室温で酢酸によって反応混合物を急冷することにより、式（ＩＩＩ）の化合物を生成するステップが含まれる。

定義
「アルキル」とは、１から６個の炭素原子を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、メチル、エチル、プロピル（例えば、１―プロピル、イソプロピル）、ブチル（例えば、１―ブチル、イソブチル、ｓｅｃ―ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル）、ペンチル（例えば、１―ペンチル、ネオペンチル）及びヘキシル（例えば、３―ヘキシル）が挙げられるが、これらに限定されない。

「アルケニル」とは、２から６個の炭素原子及び１つ以上の二重結合を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、エテニル、プロペニル及びブテニルが挙げられるが、これらに限定されない。

「アルキニル」とは、２から６個の炭素原子及び１つ以上の三重結合を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、エチニル、プロピニル及びブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。

「シクロアルキル」とは、３から６個の炭素原子を有する一価の飽和又は部分的に不飽和な、環状の炭化水素基を意味する。例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。

「ヘテロシクリル」とは、３から６個の環原子を有する一価の飽和又は部分的に不飽和な、環状の炭化水素基を意味し、環原子の少なくとも１つが、窒素、酸素及び硫黄から選択されるヘテロ原子である。ラジカルは、炭素又はヘテロ原子にある。例としては、モルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラニル及びピラゾリニルが挙げられるが、これらに限定されない。

「アリール」とは、一価の５から７員芳香族炭化水素基を意味する。例としては、フェニルが挙げられるが、これに限定されない。

「ヘテロアリール」とは、窒素、硫黄及び酸素から選択される１つ以上のヘテロ原子を有した一価の５から７員芳香族炭化水素基を意味する。例としては、イミダゾリル、ピリジニル、フリル、ピリミジニル及びピラジニルが挙げられるが、これらに限定されない。

前記のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリール基は、本明細書で説明される１つ以上の置換基によって、独立して置換されてもよい。

「アミノ」とは、―ＮＨ_２又はアミドゲン基を意味する。

「モノアルキルアミノ」とは、―ＮＨＲ´基を意味し、式中、Ｒ´は本明細書で定義されるアルキル、アルケニル、アルキニル及びシクロアルキルを表す。

「ジアルキルアミノ」とは、―ＮＲＲ´基を意味し、式中、Ｒ及びＲ´は、独立して、本明細書で定義されるアルキル、アルケニル、アルキニル及びシクロアルキルを表す。

「ハロゲン」とは、ブロモ、クロロ、フルオロ又はヨードを意味する。

「ヒドロキシル」とは、―ＯＨ基を意味する。

「カルボキシ」とは、以下の基を意味する。

「アルコキシカルボニル」とは、以下の基を意味する。
式中、Ｒは、本明細書で定義されるアルキルを表す。

「アミジノ」とは、以下の基を意味する。

「グアニジノ」とは、以下の基を意味する。

「ウレア」とは、以下の基を意味する。

「薬学的に許容しうる塩」とは、化合物に対する生物学的効果を保持した、毒性がないか又はその反対に薬学的な使用に対して有害な、本出願で請求される化合物の任意の塩を意味し、これらの塩は、当該技術分野において公知の有機及び無機対イオンから誘導可能である。

合成実施例
本発明を以下の非限定的な合成実施例によって説明する。

特記に明記しない限り、以下の化学的な略語が、合成例で使用される。
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
Ｍｅ：メチル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ｉ―Ｐｒ：イソプロピル
ｎ―Ｂｕ：ｎ―ブチル

請求される、式（Ｉ）の化合物のための、Ｃｓ骨格を備えた出発物質は、当該技術分野において利用可能な合成スキーム及び試薬を使用して調製することができ、商業的な供給業者から獲得してもよい。本発明の新規化合物の合成のために使用する試薬も、商業的な供給業者から獲得することができる。

実施例１：［メチレン―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ジイソプロピルアミン（１１．２ｍｌ、８０ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（２４０ｍｌ）溶液に、窒素雰囲気下―７８℃で、ｎ―ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ、３２ｍｌ、８０ｍｍｏｌ）を滴加し、―７８℃で６０分間攪拌した。

乾燥シクロスポリンＡ（２×４０ｍｌのトルエンと共に共沸によって乾燥させ、続いてＰ_２Ｏ_５の存在下でデシケータに保たれた）（９．６ｇ、８．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（４０ｍｌ）溶液を加え、同じ条件で２時間攪拌した。温度を―５０℃へ増加させながら、二酸化炭素流を、３０分間、反応混合物に通気した。得られる混合物を、２時間かけて１５℃に昇温させて、その後再度―５０℃まで冷却し、その後、クロロぎ酸クロロメチル（７．１ｍｌ、８０ｍｍｏｌ）を添加した。該反応混合物を、一晩室温まで温めた後、０℃に冷却して、酢酸（５ｍｌ、８８ｍｍｏｌ）を添加した。

混合物を、室温に昇温させて、溶媒を蒸発させてから、酢酸エチルとブラインの間を分配した。有機相を、分離して、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮して、黄色油を得た。

１００％ジエチルエーテル→９６％ジエチルエーテル／４％メタノールの溶媒勾配を使用したＭＰＬＣクロマトグラフィによって、粗生成物を精製し、［メチレン―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１２１４．８、ＭＮa^＋１２３６．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ４．９８（ｄ、１Ｈ、オレフィンＣＨ_２）、５．２５（ｄ、１Ｈ、オレフィンＣＨ_２）、７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．５２（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．５９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．８５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。
^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ１４３．９６（オレフィンＣ）、１０８．０９（オレフィンＣＨ_２）。
同様の手段で、以下の化合物が調製された。

［ジヒドロ―ＭｅＢｍｔ］^１［メチレンＳａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１２１６．８、ＭＮa^＋１２３８．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．５２（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．５７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）［メチレン―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＤ。

ＥＳＭＳＭＨ^＋１２２８．８、ＭＮa^＋１２５０．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．５９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６３（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．８９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例２：［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

［メチレン―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．２３２ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１５ｍｌ）溶液に、炭酸カリウム（０．５２３ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を加え、白色懸濁液に、窒素を１時間通気した後に、ジエチルアミノエチルチオ塩酸塩（０．３２２ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を添加した。溶媒を蒸発させながら、一晩窒素を反応混合物に通気した。アセトニトリル（１５ｍｌ）を加え、白色懸濁液を硫酸ナトリウムパッドで濾過した後、濃縮して３１５ｍｇの無色油を得た。超音波条件下、ヘキサンで粉砕し、溶液のデカンテーションをして、２４０ｍｇの白色固体を得た。１００％ジエチルエーテル→９５％ジエチルエーテル／５％メタノール、それから１００％ジエチルエーテルの溶媒勾配、続いて、１００％ジエチルエーテル→９０％ジエチルエーテル／１０％の水性のアンモニア（０．８８）を含有した１０％メタノールの第２溶媒勾配を使用したＭＰＬＣクロマトグラフィによる精製により、［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを獲得した。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３４７．９
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ０．６９（３Ｈ、ｄ）（０．７７―１．０７）（４３Ｈ、ｍ）１．０９（３Ｈ、ｄ）、１．１８―１．４１（１０Ｈ、ｍ）、１．４１―１．８２（１０Ｈ、ｍ）、１．９３―２．１８（５Ｈ、ｍ）、２．３３―２．４６（２Ｈ、ｍ）、２．５３（４Ｈ、ｑ）、２．６０―２．７２（６Ｈ、ｍ）、２．９９（２Ｈ、ｂｒｄ）、３．１０（３Ｈ、ｓ）、３．１８（３Ｈ、ｓ）、３．２７（６Ｈ、ｓ）、３．５０（３Ｈ、ｓ、ＮＭｅ）、３．５８（１Ｈ、ｂｒｄ）、３．６７（１Ｈ、ｑ）、４．５２（１Ｈ、ｍ）、４．６０（１Ｈ、ｔ）、４．８２（１Ｈ、ｍ）、４．９３―５．０８（４Ｈ、ｍ）、５．１０（１Ｈ、ｄ）、５．２６―５．３９（３Ｈ、ｍ）、５．５１（１Ｈ、ｄｄ）、５．６９（１Ｈ、ｄｄ）、７．１６（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３６（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．６８（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．１３（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。
同様の手段で、以下の化合物が調製された。

［ジヒドロ―ＭｅＢｍｔ］^１［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３５０．０
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１７（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３７（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．１０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＤ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３６１．９
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１６（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．４９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７２（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．１６（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

実施例３：［（Ｓ）―２―（４―ピリジル）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３５４．０
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１４（ｄ、２Ｈ、ピリジン）、７．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３１（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．５４（ｄ、２Ｈ、ピリジン）。

実施例４：［（Ｓ）―メチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１２６２．８、ＭＮa^＋１２８４．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ２．２０（ｓ、３Ｈ、ＳＭｅ）、７．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３６（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例５：［（Ｓ）―ペンチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３１８．６、ＭＮａ^＋１３４０．６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例６：［（Ｓ）―２―アミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１２９１．７
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例７：［（Ｓ）―｛（Ｒ）―２―アミノ―２―カルボメトキシ―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３４９．６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ３．７８（ｓ、３Ｈ、ＣＯＯＭｅ）、７．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３３（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例８：［（Ｓ）―２―ジメチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］_３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３１９．５６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ２．２５（ｓ、６Ｈ、ＮＭｅ２）、７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例９：［（Ｓ）―２―（４―メチルピペリジニル）チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３４５．６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ２．２９（ｓ、３Ｈ、ＮＭｅ）、７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３３（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１０：［（Ｓ）―２―（モルホリノ）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３６１．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１１：［（Ｓ）―カルボメトキシメチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３２０．４
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ３．７８（ｓ、３Ｈ、ＣＯＯＭｅ）、７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３２（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１２：［（Ｓ）―カルボメトキシエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３３５．０５
_１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ３．７１（ｓ、３Ｈ、ＣＯＯＭｅ）、７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３４（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１３：［（Ｓ）―｛（Ｓ）―２―アミノ―２―カルボメトキシ―１，１―ジメチル―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３７７．４
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ３．７０（ｓ、３Ｈ、ＣＯＯＭｅ）、７．１５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３３（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．０８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―２―（Ｎ―イミダゾリル）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３４２．７
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ６．８９（ｓ，１Ｈ、イミダゾール）、７．００（ｓ，１Ｈ、イミダゾール）、７．１０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．２４（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．４８の（ｓ，１Ｈ、イミダゾール）、７．６０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１１（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―２―（Ｎ―ピラゾリル）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３４２．９
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ６．２６（ｄｄ、１Ｈ、ピラゾール）、７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３１（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．４６（ｄ、１Ｈ、ピラゾール）、７．５１（ｄ、１Ｈ、ピラゾール）、７．７０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１１（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―２―ジエチルアミノ―１，１―ジメチル―エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３７５．９
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１６（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．６８（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．１１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―２―モルホリノ―１，１―ジメチル―エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３８９．６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）７．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１４（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―３―ジエチルアミノプロピルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３６２．０
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３７（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．６８（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．１３（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―３―（モルホリノ）―プロピルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３７５．７
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１８（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３３（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．１６（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―メルカプトメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

［（Ｓ）―｛（Ｓ）―２―アミノ―２―カルボメトキシ―１，１―ジメチル―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．０２８ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍｌ）溶液を、１９日間、５０℃まで加熱した。ＳＣＸカラム／メタノールで精製し、［（Ｓ）―メルカプトメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１２４７．９
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ^３、ｐｐｍ）δ７．２０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．２６（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．２４（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―アリルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

［（Ｓ）―メルカプトメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．０７４ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド溶液（１．５ｍｌ）に、炭酸カリウム（０．０２１ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及び臭化アリル（０．０３６ｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を室温で一晩攪拌し、炭酸カリウム（０．０２１ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及び臭化アリル（０．０３６ｇ、０．３ｍｍｏｌ）を追加してから、２日をかけて攪拌した。濃縮し、ジクロロメタン存在下で残渣を超音波処理してから、続いて濾過した。ジクロロメタンを蒸発させ、１００％ジクロロメタン→９５％ジクロロメタン／５％メタノールの溶媒勾配を使用したＭＰＬＣクロマトグラフィによって、残渣を精製し、［（Ｓ）―アリルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１２８８．６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１３（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１４：［（Ｓ）―｛（Ｒ）―２―アミノ―２―カルボヒドロキシ―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

［（Ｓ）―｛（Ｒ）―２―アミノ―２―カルボメトキシ―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．０３３ｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２ｍｌ）に、水酸化リチウム一水和物（０．００４３ｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）水溶液（０．３ｍｌ）を加えた。溶液を、３時間室温で攪拌した。塩酸（２Ｎ、０．０５ｍｌ0）を加え、続いて、濃縮した。０．０３５Ｍアンモニアのメタノール溶液から０．１７５Ｍアンモニアのメタノール溶液の勾配を使用したＳＣＸカラムで精製し、２０ｍｇの［（Ｓ）―｛（Ｒ）―２―アミノ―２―カルボヒドロキシ―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３３５．７
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３２（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．２（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。
同様の手段で、以下の化合物が調製された。

実施例１５：［（Ｓ）―カルボヒドロキシメチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３０６．６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３５（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１６：［（Ｓ）―｛（Ｓ）―２―アミノ―２―カルボヒドロキシ―１，１―ジメチル―エチル｝チオメチル―Ｓaｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３６３．５
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１７：［（Ｓ）―カルボヒドロキシエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３２０．６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．２０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３６（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７０（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１８：［（Ｓ）―２―イソプロピルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

［（Ｓ）―２―アミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．１２９ｇ、０．１ｍｍｏｌ）のクロロホルム（２ｍｌ）アセトン（０．１ｍｌ）混合溶液に、テトラメチルアンモニウムトリアセトキシボロヒドリド（０．０６６ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加え、１７時間室温で攪拌した。反応混合物を、ジクロロメタンと水に分けた。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させてから（Ｎａ_２ＳＯ_４）、白色固体を獲得するために濃縮した。
１００％ジエチルエーテル→９５％ジエチルエーテル／５％メタノール、それから１００％ジエチルエーテルの溶媒勾配、続いて、１００％ジエチルエーテル→９６％ジエチルエーテル／１０％の水性のアンモニア（０．８８）を含有した４％メタノールの第２溶媒勾配を使用したＭＰＬＣクロマトグラフィによる精製により、［（Ｓ）―２―イソプロピルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３３３．０
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ^３、ｐｐｍ）δ１．０５（ｄ、６Ｈ、２ＸＣＨ_３）、２．８４（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）、７．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７２（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

実施例１９：［（Ｓ）―２―グアニジノエチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡヒドロクロリド

［（Ｓ）―２―アミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．０５５ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）の、ジイソプロピルエチルアミン（０．００７２ｍｌ）含有ジメチルホルムアミド（０．６ｍｌ）溶液に、１Ｈ―ピラゾール―１―カルボキサミジンヒドロクロリド（０．００５５ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を加え、２２時間室温で攪拌した。濃縮し、ジエチルエーテルで残渣を粉砕してから、上清のデカンテーションをして、白色固体を得た。ジクロロメタンと水に分け、続いて、有機相の分離及び濃縮をして、［（Ｓ）―２―グアニジノエチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡヒドロクロリドを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３３４．５
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１２（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．４３（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．６７（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．３１（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチル―１―スルフィニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．１４７ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（０．００８９ｍｌ）含有ジクロロメタン（１ｍｌ）に溶解した。５分後、溶液を濃縮してから、白色固体をアセトニトリル（６ｍｌ）に再溶解した。過ヨウ素酸ナトリウム（０．０５８ｇ）の水溶液（２ｍｌ）を加え、懸濁液を一晩室温で攪拌した。濾過して、固体をメタノールで洗浄してから、濾液を濃縮した。残渣をトリエチルアミン（０．２５５ｍｌ）含有ジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解し、続いて、１時間超音波処理した。混合物を相分離カートリッジで濾過した。有機相を濃縮し、１８８ｍｇの白色固体を獲得した。１００％ジクロロメタン→９６％ジクロロメタン／１０％の水性のアンモニア（０．８８）を含有した４％メタノールの溶媒勾配を使用したＭＰＬＣクロマトグラフィによる精製により、［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチル―１―スルフィニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３６３．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３８（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．６９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．２８（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。
同様の手段で、以下の化合物が調製された。

［ジヒドロ―ＭｅＢｍｔ］^１［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチル―１―スルフィニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３６６．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．２０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．４０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．３０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―３―ジエチルアミノプロピル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

［（Ｓ）―３―ジエチルアミノプロピルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．０３５ｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（０．００２１ｍｌ）含有ジクロロメタン（２ｍｌ）に溶解した。５分後、溶液を濃縮してから、白色固体をジクロロメタン（２ｍｌ）に再溶解した。テトラブチルアンモニウムオキソン（０．１０９ｇ）を加え、一晩室温で攪拌した。トリエチルアミン（０．０１７ｍｌ）で処理し、続いて、９０分間攪拌してから濃縮した。１００％ジクロロメタン→９５％ジクロロメタン／１０％の水性のアンモニア（０．８８）を含有した５％メタノールの溶媒勾配を使用したＭＰＬＣクロマトグラフィで残渣を精製し、［（Ｓ）―３―ジエチルアミノプロピル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３９３．９
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．２０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．６５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．２９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。
同様の手段で、以下の化合物が調製された。

［（Ｓ）―３―（モルホリノ）プロピル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１４０７．５
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．２２（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．２７（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．４１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―（４―メチルピペリジニル）―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３７７．４３
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．２２（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．２９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７４（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．４０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―（２―ジエチルアミノ―１，１―ジメチル）―エチル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１４０７．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３７（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７２（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．３０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―（２―モルホリノ―１，１―ジメチル）―エチル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１４２１．６
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．２１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．４２（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―３―（４―オキシ―モルホリン―４―イル）―プロピル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ
ＥＳＭＳＭＨ^＋１４２３．７
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．２１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．２５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７３（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．３５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―２―（３―カルボキシプロピオニルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

攪拌した［（Ｓ）―２―アミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．３０ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍｌ）溶液に、トリエチルアミン（０．０５ｍｌ、０．２３ｍｍｏｌ）、続いて、スクシニルクロリド（０．０５ｍｌ、０．２３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間室温で攪拌した。水（２０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離してから、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過そして真空下で濃縮した。得られた黄色固体を、溶離液としてメタノールを使用した５ｇのＳＣＸカートリッジを通過させることによって、続いて、１００％ジクロロメタン→９５％ジクロロメタン／１０％の水性のアンモニア（０．８８）を含有した５％メタノールの極性勾配を使用したＭＰＬＣクロマトグラフィによって、精製し、［（Ｓ）―２―（３―カルボキシプロピオニルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３９１．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．２１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。
同様の手段で、以下の化合物が調製された。

［（Ｓ）―２―（４―カルボキシブチリルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１４０５．８
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１８（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．６９（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．２１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。

［（Ｓ）―２―（アセチルアミノ―アセチルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

攪拌した［（Ｓ）―２―アミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ（０．１０ｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍｌ）溶液に、アセツル酸（０．０１ｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０１ｍｌ、０．０８４ｍｍｏｌ）、続いて、ＷＳＣ．ＨＣｌ（０．０２２ｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）を加え、１６時間室温で攪拌した。水（２０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離してから、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過そして真空下で濃縮した。得られた黄色固体を、溶離液としてメタノールを使用した２ｇのＳＣＸカートリッジを通過させることによって、続いて、１００％ジクロロメタン→９５％ジクロロメタン／１０％の水性のアンモニア（０．８８）を含有した５％メタノールの勾配を使用したＭＰＬＣクロマトグラフィによって、精製し、［（Ｓ）―２―（アセチルアミノ―アセチルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡを得た。
ＥＳＭＳＭＨ^＋１３９０．８２
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）７．２０（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．３５（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、７．７１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）、８．２１（１Ｈ、ｄ、アミドＮＨ）。
同様の手段で、以下の化合物が調製された。

［（Ｓ）―２―（ジメチルアミノ―アセチルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ

ＥＳＭＳＭＨ^＋１３７６．８９
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ｐｐｍ）δ７．１９（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．３６（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、７．７１（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）、８．１８（ｄ、１Ｈ、アミドＮＨ）。

式（Ｉ）の化合物のＣｙｐＡ阻害力及び免疫抑制可能性を示すデータ

データを得るために進められた基本手順
^* プロテアーゼ不含ＰＰｌａｓｅアッセイ
プロテアーゼ不含ＰＰＩａｓｅアッセイは、酵素シクロフィリンＡによって触媒されたペプチド基質のシスからトランスへの変換率を測定する。阻害剤の添加が触媒される速度を遅らせ、Ｋ_ｉ値が獲得される。

材料
アッセイ緩衝液：０．２μｍフィルタで濾過した、ｐＨ７．８のＨＥＰＥＳ、３５ｍＭ。５０ＭのＤＴＴを毎日使用前に加え、緩衝液を氷蔵した。
酵素：ヒト組換えＣｙｐＡ（Ｓｉｇｍａ社Ｃ３８０５）酵素を、酵素希釈緩衝液（ｐＨ７．８のＨＥＰＥＳ２０ｍＭ、４０％のグリセロール、５０ＭのＤＴＴ及び１μＭのＢＳＡ）を用いて１Ｍに希釈し、―２０℃で保存した。
基質：０．５Ｍのトリフルオロエタノール中のＬｉＣｌで調製したＳＵＣ―ＡＡＰＦ―ｐＮＡ（ＢaｃｈｅｍＡＧ社、Ｌ―１４００）２０ｍｇ／ｍｌ。

方法
攪拌されるキュベットの温度を１０．０±０．１℃に維持するために、キュベットホルダ、攪拌機及びチラーからなるＡｇｉｌｅｎｔ８４５３Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いて、すべての測定値を獲得した。温度は、温度プローブを用いてモニターされる。検査化合物のＵＶ劣化を防止するために、光路にガラススライドを使用して、２９０nm未満の光を遮断した。１．５ｍｌのアッセイ緩衝液を３ｍｌ石英キュベットに入れ、攪拌（活発だが、キャビテーションを生成するほど高速ではない）しながら１０．０の±０．１℃に冷却した。阻害剤を、１００％のＤＭＳＯで希釈して、続いて、ＤＭＳＯの最大最終濃度が分析物中０．５％となるまで、分析物に添加した。空試験のスペクトルを獲得し、その後３μＬの酵素を添加（２ｎＭの最終濃度）してから、３μＬの基質を添加（６０μＭの最終濃度）した。空試験用に、３００ｓ又は５００ｓの間、３３０nmで吸光度を測定した（注：混合誤差を最小にするため、１回の素早い注入で基質を添加し、直ちに測定が開始されなければならない）。

反応速度定数を得るために、一次反応速度式を、阻害剤のそれぞれの濃度に対する吸光度データと適合させた（混合により、曲線の最初の誤差が生じるので、最初の１０から１５秒を除外した）。触媒反応速度を、酵素反応速度定数-バックグラウンド反応速度定数で算出した。阻害剤濃度に対する触媒反応速度定数を使用して、指数曲線を作成し、阻害剤に対するＫ_ｉ値を得た。

^** カルシニューリンフォスファターゼ（ＣａＮ）アッセイ
カルシニューリンは、活性化すると活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）を脱リン酸化する、セリン―スレオニンタンパク質ホスファターゼであり、Ｔリンパ球の活性化において重要である。シクロフィリンＡ（「ＣｙｐＡ」）に結合したＣｓＡは、カルシニューリン活性を阻害し、結果として免疫抑制効果をもたらす。ＣｙｐＡに結合した場合にＣｓＡがカルシニューリンを阻害するだけでなく、いくつかのＣｓＡアナログは、ＣｙｐＡの不在下でカルシニューリンを結合する。シクロスポリンアナログである、式（Ｉ）の例示的な化合物の免疫抑制可能性を調べるために、カルシニューリンの活性を阻害する能力を、ＣｙｐＡの存在下及び不在下で測定した。

使用されるＣａＮアッセイキットは、カルシニューリンフォスファターゼの活性を測定するための比色アッセイに基づいており、市販されている（ＥｎｚｏＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ社及びＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）。カルモジュリンもまたカルシニューリンの活性のために必要とされ、ＲＩＩリンペプチドはカルシニューリンに効力のあるペプチド基質として使用される。阻害剤との１：１の複合体にＣｙｐＡを添加してＣｙｐＡ依存性及びＣｙｐＡ非依存性のカルシニューリン阻害の測定を可能にするために、我々は方法を改変した。放出された遊離リン酸塩の検出は、標準的なマラカイトグリーンアッセイに基づく。

使用した材料
ＥｎｚｏＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ社、ＣａＮアッセイキット：ＢＭＬ―ＡＫ８０４
２Ｘアッセイ緩衝液：ｐＨ７．５のトリス１００ｍＭ、２００ｍＭのＮａＣｌ、１２ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ、０．０５％のＮＰ―４０、１ｍＭのＣａＣｌ_２）
マラカイトグリーン：ＢＩＯＭＯＬＧｒｅｅｎ（商標）試薬
カルモジュリン（ヒト、組換え体）：氷上で解凍して、２Ｘアッセイ緩衝液と１：５０で希釈してから、氷蔵した。
カルシニューリン：素早く解凍し、直ちに氷蔵してから、１Ｘアッセイ緩衝液と１：１２．５で希釈し、続いて氷蔵した。
ＲＩＩ基質：９１５μＬの超純水（ＵＰＷ）を、１．５ｍｇのバイアル基質に添加して、０．７５ｍＭの最終濃度とした。
阻害剤：１００％のＤＭＳＯ中に２．５ｍＭの阻害剤。
ＣｙｐＡ：組換え体ヒトＣｙｐＡ（Ｓｉｇｍａ社Ｃ３８０５）、１ｍｇ／ｍｌ。

方法
阻害剤希釈：阻害剤化合物を、ポリプロピレン低結合性９６穴プレートにおいて、ＵＰＷによって、最終アッセイ濃度５ｘで希釈した。『ＣｙｐＡなし』試料用として、１０、１、０.１及び０．０１μＭの最終アッセイ濃度を得るために、阻害剤の４点希釈列を２連で調整した。『ＣｙｐＡあり』試料用として、ＣｙｐＡと１：１の阻害剤の複合体を得るために、７点希釈列、つまり、１０、３．３３、１．１１、０．３７、０．１２、０．０４、０．０１４μＭの阻害剤とＣｙｐＡの最終アッセイ濃度を調整した。また、ＣｓＡ阻害剤コントロールを、１０μＭのＣｙｐＡありとなしで、１０μＭのＣｓＡの最終濃度を得るために調整した。

キットに付属の９６穴プレートの半分のエリアを使用して、１０μｌのＵＰＷを２つの穴に添加して、非阻害コントロールを提供する。１０μｌの阻害剤又は阻害剤／ＣｙｐＡ複合体を、適切な試料用穴に加えた。２５μｌのＣａＭを有する２ｘアッセイ緩衝液をすべての穴に加えて、その後、５μｌの１ｘアッセイ緩衝液を加えた『カルシニューリンなしブランク』の２つの穴を除く全ての穴（穴当たり４０Ｕの最終濃度）に５μｌのＣａＮを加えた。反応温度を平衡化するために、３０℃で１５分間オーブンにアッセイプレートを置いた。１０μｌのＲＩＩ―ペプチド（０．１５ｍＭの最終濃度）を添加して、反応を開始した。反応が線形である約６０分間３０℃にて反応を進めた。続いて、１００μｌのマラカイトグリーン試薬を加えることによって、反応を終了させた。室温で１５分から３０分間で発色させた後、プレートリーダ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ―ＳｐｅｃｔｒａＭａｘＭ５）を使用して、６２０nmの吸光度を測定した。すべての吸光度の記録から『カルシニューリンなしブランク』を減算し、Ｌｏｇ_１０阻害剤濃度に対するバックグラウンド修正吸光度をプロットすることによって、データを分析した。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍＳｏｆｔｗａｒｅを使用して、データをＳ字応答曲線に当てはめた(fitted)。

^*** 混合リンパ球反応（「ＭＬＲ」）アッセイ
ＭＬＲアッセイは、検査化合物の免疫抑制可能性を推定する別の手段である。生後６週間から８週間目のＣ５７ＢＬ／６及びＢＡＬＢ／ｃ雌マウスを、国立癌研究所のＦｒｅｄｅｒｉｃｋＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（フレデリック、メリーランド州）から手に入れた。脾臓をすべてのマウスから無菌で採取して、すりガラススライドを用いて細胞を分解し、破片を沈殿させて、完全培地を用いて細胞を２回洗浄することによって、単個細胞浮遊液を調製した。完全培地は、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ；ＡｔｌａｎｔａＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ社、ローレンスヴィル、ジョージア州）、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００Ｕ／ｍＬペニシリンＧ、０．２５μｇ／ｍＬアンフォテリシンＢ（ＨｙＣｌｏｎｅ社）、２ｍＭのＬグルタミンジペプチド（ＨｙＣｌｏｎｅ社）及び２×１０^-５Ｍの２―メルカプトエタノール（シグマ社）を添加した２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ＨｙＣｌｏｎｅ社、ローガン、ユタ州）を含有しているＲＰＭＩ１６４０培地からなる。細胞を２回洗浄し、完全培地で再懸濁した。ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＺー１粒子計数器（フラートン、カリフォルニア州）を使用して、細胞数を計測した。細胞生存度は、ＡｃｃｕｒｉＣ６フローサイトメーター（アナーバー、ミシガン州）を使用したヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色によって、決定した。

Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ―２^ｂ）及びＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ―２^ｄ）の脾細胞を、キラー（Ｒ）及び刺激（Ｓ）細胞として、それぞれ使用した。それぞれの穴が２×１０^５個のＲ及び８×１０^５個のＳ細胞を含有するように、細胞を、３連で９６穴平底ミクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ社、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）にて培養した。該培養物を、さまざまな濃度の検査化合物、ＣｓＡ又は培地の存在又は不在下で、３７℃で５日間、湿気を含む５％のＣＯ_２においてインキュベートして、培養の最後の１６時間、^３Ｈ―チミジン（^３Ｈ―ＴｄＲ）でパルスラベルしてから、Ｂｒａｎｄｅｌ９６穴細胞ハーベスタ（ゲイザースバーグ、メリーランド州）を使用して収集した。増殖は、Ｗａｌｌａｃ１４５０ＭｉｃｒｏｂｅｔａＴｒｉＬｕｘシンチレーションカウンタ（トゥルク、フィンランド）のフィルターマット上の放射活性を計算することにより測定された。Ｘ線照射による効果的な失活を提示するためのコントロールは、２×１０^５細胞／穴で５μｇ／ｍＬのＰＨＡと共にＳ細胞を培養することにより実施された。これらのコントロールの培養を、ＭＬＲのために説明された条件と同じ条件で３日間行った。つまり、リンパ球増殖を、上記した方法と同様に決定した。

治療方法
本発明の組成物は、ドライアイに苦しんでいる患者を治療するため、眼瞼炎及びマイボーム腺疾患を治療するため、角膜又は眼の他の表面の手術により損なわれた角膜感度を回復するため、アレルギー結膜炎並びにアトピー性角結膜炎及び春季カタルを治療するため、翼状片、対宿主性移植片病の眼の症状、眼アレルギー、アトピー性角結膜炎、春季カタル、ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、ベーチェット病、スティーブンスジョンソン症候群、眼類天疱瘡、ウイルス感染によって引き起こされる慢性眼表面炎症、単純ヘルペス角膜炎、眼酒さ及び結膜脂肪斑を治療するため、および角膜移植拒絶反応を防止するために用いられてもよい。

国際ドライアイワークショップ（ＤＥＷＳ）は、ドライアイを「不安、視覚障害、及び、眼表面への潜在的損害を伴う涙液膜の不安定の症状を引き起こす、涙液及び眼表面の多因子病。涙液膜の増加したモル浸透圧濃度及び眼表面の炎症を伴う」と定義する。涙液の欠乏又は涙液の過度の蒸発によって引き起こされる乾性角結膜炎などの状態も含まれる。

眼瞼炎は、皮膚、それと関係した構造（毛髪及び皮脂腺）、粘膜皮膚移行部及びマイボーム腺を含んだ、上及び下まぶた辺縁の炎症を引き起こす慢性疾患である。進行期には、結膜、涙液膜及び角膜面に影響を及ぼすことも可能で、ドライアイと関連する場合がある。眼瞼の睫毛を支える領域に影響を及ぼしている上部、及び、主としてマイボーム腺開口部に影響を及ぼしている下部を有する、上部又は下部眼瞼炎に、眼瞼炎は一般に分類される。

マイボーム腺疾患は、ほとんどの場合、一次性マイボーム腺炎、二次性マイボーム腺炎及びマイボーム脂漏症の、３つの形のうちの１つとして生じる。マイボーム脂漏症は、炎症のない、過度のマイボーム分泌によって特徴づけられる（分泌過剰マイボーム腺疾患）。一次性マイボーム腺炎は、対照的に、停滞して濃化したマイボーム分泌によって特徴づけられる（閉塞性分泌過剰マイボーム腺疾患）。二次性マイボーム腺炎は、マイボーム腺が上部蓋辺縁眼瞼炎から二次的に、炎症を斑状に起こす限局性炎症反応を表す。

角膜感度障害は、多くの場合、光反応角膜整形手術、レーザーアシスト上皮下角膜曲率形成術（ＬＡＳＥＫ）、ＥＰＩ―ＬＡＳＥＫ、カスタマイズされた経上皮非接触切除又は角膜神経が切断される他の方法などの、屈折矯正手術の後に生じる。角膜感度障害は、ＨＳＶ―１、ＨＳＶ―２及びＶＺＶウイルスなどによる、ウイルス感染の後生じる場合もある。角膜感度障害を有する患者は、涙液産生及び蒸発が正常な場合であっても、眼が乾燥すると感じると多くの場合訴える。これは、角膜神経が手術によって切断されるか又はウイルス感染の後炎症を起こす場合に生じるこのような患者の「乾燥」が、実際に角膜神経障害の場合があることを示唆している。

アレルギー結膜炎は、１つ以上のアレルゲンに対する過敏症から生じる結膜の炎症である。これは、急性、間欠性又は慢性の場合がある。これは、季節的に、つまり年の一定の時にだけ生じるか、又は、絶え間なく、つまり年の全体にわたって慢性的に生じる。季節的及び永続的なアレルギー結膜炎の症状としては、結膜の炎症に加えて、催涙、流涙、結膜血管の拡張、痒み、乳頭状過形成、結膜水腫、眼瞼の浮腫及び眼からの分泌が挙げられる。分泌は、一晩の睡眠の後、眼の上に痂皮を形成する場合がある。

アトピー性角結膜炎は、アレルギー結膜炎の慢性、重度な形で、多くの場合視覚的な障害をもたらす。症状としては、痒み、灼熱感、疼痛、発赤、異物感、光感受性及び視界不良が挙げられる。特に一晩の睡眠から目ざめると、多くの場合、分泌をし、この分泌は、粘状、糸状そして粘液状となり得る。下結膜は、多くの場合、上結膜より顕著に影響を受ける。結膜は、蒼白色、浮腫状及び特徴のない状態から、乳頭増殖、上皮下の繊維増多、結膜嚢短縮、逆さ睫毛、眼瞼内反及び睫毛禿といった、進行疾患の特徴を有する場合まで変化する。患者によっては、斑点状上皮糜爛、角膜血管新生及び視野を損なう可能性のある角膜症の他の特性にまで、疾患は進行する。通常は、結膜の杯状細胞増殖、上皮偽管形成、並びに、増加した上皮の脱顆粒した好酸球及び肥満細胞が認められる。ＣＤ２５＋Ｔリンパ球、マクロファージ及び樹状細胞（ＨＬＡ―ＤＲ．ｓｕｐ．＋、ＨＬＡ―ＣＤ１＋）が、角膜固有質において著しく上昇する。

アトピー性角結膜炎のように、春季カタルは、アレルギー結膜炎の重度な形であるが、下結膜より上結膜に顕著に影響を及ぼす傾向にある。それは、２つの型で生じる。眼瞼型では、四角で、硬質な、平らに、密接して詰め込まれた乳頭突起が現れる。眼球（角膜輪部）型では、角膜周囲の結膜が、肥大し、灰色がかる。両方の型とも、多くの場合、粘液様分泌物を伴う。疼痛及び羞明、場合によっては中央の角膜プラーク及びトランタス斑点を伴って、角膜上皮の喪失が生じる場合がある。

ブドウ膜炎（ブドウ膜の炎症）は、米国の視覚障害の約１０％の原因となる。水晶体過敏性眼内炎は、ヒト自己免疫性疾患である。全ブドウ膜炎は、眼のすべてのブドウ膜（血管）層の炎症を意味する。後部ブドウ膜炎は網脈絡膜炎を一般に意味し、前部ブドウ膜炎は虹彩毛様体炎を意味する。これらの炎症の炎症産物（すなわち、細胞、フィブリン、過剰タンパク質）は、眼の場合には、流体空間内、すなわち、前房、後房及び硝子体空間内に一般に見いだされ、炎症反応に密に関係した組織を浸潤する。ブドウ膜炎は、眼に対する外科手術又は外傷による傷害後に、関節リウマチ、ベーチェット病、強直性脊椎炎、サルコイドーシスなどの、自己免疫疾患の構成要素として、既知の病因に関連していない、扁平部炎、虹彩毛様体炎などの、孤立した免疫介在性眼疾患として、そして、抗体抗原複合体をブドウ膜組織内に堆積させる以下の一定の全身性疾患後に、生じ得る。これらの疾患は、合わせて、非伝染性ブドウ膜炎を表す。

水晶体アナフィラキシーは、水晶体が原因抗原であるブドウ膜炎の重度の形である。水晶体タンパク質は、一般に、出生前から水晶体嚢によって隔離されている。これらのタンパク質が、損傷若しくは手術によって、又は、稀に白内障発症のときに眼内に放出された場合、これらのタンパク質は抗原性が激しくなり、自己免疫反応を刺激し得る。反応が中程度である場合、慢性ブドウ膜炎とみなされる。反応が非常に早く進行する場合、眼は、すべての部分において重度の炎症を起こす。この後者の反応が、水晶体アナフィラキシーと呼ばれている。

ブドウ膜炎は、ベーチェット病の顕著な特徴で、口腔及び生殖器潰瘍、皮膚、血管、関節及び神経の兆候によっても特徴づけられる多系統炎症性疾患である。

酒さは、特定の原因又は治療法のない、慢性及び一般的な外皮疾患である。
酒さの発生は、複数の要因があると考えられる。可能性のある要因としては、ニキビダニとの接触、胃腸疾患又は血管拡張疾患、及び、食餌又は日光などの他のトリガが挙げられる。患者は、炎症性丘疹、浮腫、毛細血管拡張、鼻瘤及び眼の症状といった、さまざまな症状を呈する。酒さの眼の兆候としては、前部眼瞼炎といった眼瞼炎、結膜炎、虹彩炎、虹彩毛様体炎、角膜炎、マイボーム腺機能不全、毛細血管拡張、紅斑、霰粒腫、麦粒腫、眼瞼間充血、結膜充血、毛様体充血、眼球充血、痂皮、スリーブ及び表面的で断続的な角膜症が挙げられる。眼の症状は非特異的で、灼熱感、流涙、涙液分泌の低下、発赤、及び、異物感又はざらつき感又は乾燥感、刺激、痒み、霧視、光線過敏、涙目、充血した眼、灼熱感、毛細血管拡張、眼瞼縁の不規則性並びにマイボーム腺機能不全が挙げられる。

結膜脂肪斑は、結膜に生じる、良性の、黄褐色の増殖成長である。結膜脂肪斑は、眼の刺激及び痒み、ドライアイ、結膜の炎症を引き起こし、眼の外見に影響を与える場合がある。炎症を起こした結膜脂肪斑は、眼の刺激を引き起こすか又は見苦しくなり、外科的な除去を必要とする場合もある。しかしながら、術後の瘢痕は結膜脂肪斑と同じように美容的に好ましくなく、外科的な除去後に結膜脂肪斑再生物が生じる場合がある。

同種骨髄移植（ＢＭＴ）は、悪性及び非悪性血液病のための確立した治療で、何万もの患者に毎年実施される。幹細胞移植片中の成熟したドナーＴ細胞は、有益な免疫効果の主要な媒介物であるが、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の誘発、ＢＭＴ患者の罹患率及び死亡率の大きな原因ともなる。寛容する抗原提供細胞によって発現されたタンパク質を、移植されたドナー由来Ｔ細胞が認識するときに、ＧＶＨＤは生じる。したがって、この認識は、ドナーＴ細胞の活性化、増殖及び分化を誘発し、結果として寛容する標的組織への細胞性及び炎症性の攻撃をもたらす。皮膚炎、腸炎及び肝炎をもたらす急性又は慢性ＧＶＨＤが、ＢＭＴ後１００日以内に、生じる。眼の症状としては、視覚不良、異物感、灼熱感、重度の光過敏、慢性結膜炎、ドライアイ及び眼痛が挙げられる。

医薬組成物
本発明は、また、少なくとも１つの一般式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物に関する。この化合物は、単独、又は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と混合して存在する。「薬学的に許容される賦形剤」は、組成物の有効成分と両立し、医薬組成物を投与される人に有害でないものである。このような好適な賦形剤が２つ以上の混合物が、使用されてもよい。

局所的な眼での適用のために、有効成分として、治療上有効量の本発明の化合物、又は、薬学的に許容されるこれらの塩を、従来の眼科学的に許容できる医薬品賦形剤と組み合わせて、局所的な眼での使用に適したユニット剤形での調製により、医薬組成物を調製することができる。治療上有効量は、通常、液体製剤中約０.０００１から５％（ｗ／ｖ）の間、好ましくは約０.００１から１.０％（ｗ／ｖ）である。本発明の有効な化合物の有効量は、特定の化合物、及び、治療される状態に依存する。適切な量の選択は、十分に、当業者の知識の範囲内である。

米国特許第５，４７４，９７９号は、そのすべての内容が参照により本明細書に組み込まれるが、眼科学的に許容できる医薬品賦形剤の例を提供する。この特許は、Ａｌｌｅｒｇａｎ社によって製造されたＲｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）、シクロスポリンＡ０．０５％で使用される賦形剤を開示する。

請求される医薬組成物の治療上有効量は、式（Ｉ）の化合物の不在の場合を除いて、医薬組成物と同一のプラセボ組成物と比較して治療効果を観察するために有用な濃度である。

Claims

［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（４―ピリジル）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―メチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―ペンチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―アミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―｛（Ｒ）―２―アミノ―２―カルボメトキシ―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―ジメチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―（４―メチルピペリジニル）チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（モルホリノ）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―カルボメトキシメチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―カルボメトキシエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―｛（Ｓ）―２―アミノ―２―カルボメトキシ―１，１―ジメチル―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―｛（Ｒ）―２―アミノ―２―カルボヒドロキシ―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―カルボヒドロキシメチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―｛（Ｓ）―２―アミノ―２―カルボヒドロキシ―１，１―ジメチル―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―カルボヒドロキシエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―イソプロピルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―グアニジノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［メチレン―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［ジヒドロ―ＭｅＢｍｔ］^１［メチレン―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［メチレン―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＤ、
［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［ジヒドロ―ＭｅＢｍｔ］^１［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＤ、
［（Ｓ）―２―（４―ピリジル）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―メチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―ペンチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―アミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―｛（Ｒ）―２―アミノ―２―カルボメトキシ―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―ジメチルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２−（４―メチルピペリジニル）チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（モルホリノ）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―カルボメトキシメチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―｛（Ｓ）―２―アミノ―２―カルボメトキシ―１，１―ジメチル―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（Ｎ―イミダゾリル）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（Ｎ―ピラゾリル）エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―ジエチルアミノ―１，１―ジメチル―エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―モルホリノ―１，１―ジメチル―エチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―３―ジエチルアミノプロピルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―３―（モルホリノ）―プロピルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―メルカプトメチル ―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―アリルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―｛（Ｒ）―２―アミノ―２―カルボヒドロキシ―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―カルボヒドロキシメチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―｛（Ｓ）―２―アミノ―２―カルボヒドロキシ―１，１―ジメチル―エチル｝チオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―カルボヒドロキシエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―イソプロピルアミノエチルチオメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―グアニジノエチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡヒドロクロリド、
［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチル―１―スルフィニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［ジヒドロ―ＭｅＢｍｔ］^１［（Ｓ）―２―ジエチルアミノエチル―１―スルフィニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―３―ジエチルアミノプロピル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―３―（モルホリノ）プロピル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―（４―メチルピペリジニル）―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―（２―ジエチルアミノ―１，１―ジメチル）―エチル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―（２―モルホリノ―１，１―ジメチル）―エチル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―３―（４―オキシ―モルホリン―４―イル）―プロピル―１―スルフォニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（３―カルボキシプロピオニルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（４―カルボキシブチリルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（アセチルアミノ―アセチルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
［（Ｓ）―２―（ジメチルアミノ―アセチルアミノ）エチル―１―スルファニルメチル―Ｓａｒ］^３シクロスポリンＡ、
及び、任意の前記化合物の薬学的に許容しうる塩
からなる群から選択される化合物。
化合物が、単独、又は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わされて存在する、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つを含む医薬組成物。
化合物が、単独、又は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わされて存在する、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つを含む医薬組成物であって、前記組成物中の前記化合物の濃度が、０．０１から０．０５重量％である、医薬組成物。
ドライアイ、眼瞼炎、マイボーム腺疾患、アレルギー結膜炎、アトピー性角結膜炎及び春季カタル、翼状片、対宿主性移植片病の眼の症状、眼アレルギー、アトピー性角結膜炎、春季カタル、ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、ベーチェット病、スティーブンスジョンソン症候群、眼部瘢痕性類天疱瘡、ウイルス感染によって引き起こされる慢性眼表面炎症、単純ヘルペス角膜炎、眼酒さ及び結膜脂肪斑から選択される症状を治療するため、角膜移植拒絶反応を防止するため、および角膜又は眼の他の表面の手術により損なわれた角膜感度を回復するための、請求項２又は３に記載の医薬組成物。
式（ＩＩＩ）の化合物、あるいは薬学的に許容可能なその塩：
（ＩＩＩ）
[式中、Ａは、―ＣＨ＝ＣＨＲ、又は―ＣＨ_２ＣＨ_２Ｒを表し；
ここで、Ｒは、―ＣＨ_３、―ＣＨ_２ＳＨ、―ＣＨ_２―カルボキシル、カルボキシル、アルコキシカルボニル又は―ＣＨ_２―アルコキシカルボニルを表し；
Ｂは、−ＣＨ_２ＣＨ_３、１―ヒドロキシエチル、イソプロピル又はｎ―プロピルを表し；
Ｃは、イソブチル、２―ヒドロキシイソブチル又は１―メチルプロピルを表し；
Ｄは、―ＣＨ_３又は―ＣＨ_２ＯＨを表す]。
Ａは、―ＣＨ＝ＣＨＣＨ_３であり、Ｂは―ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｃはイソブチルであり、及び、Ｄは―ＣＨ_３である、請求項５に記載の化合物。
式（ＩＩＩ）の化合物の製造方法であって、
（ＩＩＩ）
[式中、Ａは、―ＣＨ＝ＣＨＲまたは―ＣＨ_２ＣＨ_２Ｒを表し、
ここで、Ｒは、―ＣＨ_３、―ＣＨ_２ＳＨ、―ＣＨ_２―カルボキシル、カルボキシル、アルコキシカルボニル又は―ＣＨ_２―アルコキシカルボニルを表し；
Ｂは、−ＣＨ_２ＣＨ_３、１―ヒドロキシエチル、イソプロピル又はｎ―プロピルを表し；
Ｃは、イソブチル、２―ヒドロキシイソブチル又は１―メチルプロピルを表し；
Ｄは、―ＣＨ_３又は―ＣＨ_２ＯＨを表す]、
前記方法が、式ＩＩの化合物：
（ＩＩ）
（式中、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、上で定義した通りである）を、
―７８℃から―７０℃の範囲の温度で、強塩基と反応させ、続いて―７０℃から１５℃の間で二酸化炭素ガス流下で処理し、―５０℃から室温の間で過剰クロロぎ酸クロロメチルによって処理し、その後０℃から室温で該反応混合物を酢酸により反応停止させて、式（ＩＩＩ）の化合物を生成することを含む、
製造方法。
前記強塩基が、リチウムジイソプロピルアミドである、請求項７に記載の方法。