JP2023526225A

JP2023526225A - 治療薬のイヌにおける半減期を増加させるための組成物及びその使用方法

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Publication number: JP2023526225A
Application number: JP2022568714A
Authority: JP
Inventors: ブロンディク、ウィリアム; シュヴァリエ、ブレット; ホーン、ユルゲン; ナタラジャン、マドゥズーダン
Original assignee: Invetx Inc
Current assignee: Invetx Inc
Priority date: 2020-05-11
Filing date: 2021-05-11
Publication date: 2023-06-21
Also published as: WO2021231464A1; AU2021270564A1; US20230127241A1; US20240327497A1; KR20230034954A; CN115867572A; CA3178123A1; US20210347854A1; BR112022022922A2; EP4149969A1; US11434276B2; MX2022014150A

Abstract

１つまたは複数のポリペプチドのイヌにおける半減期を増加させるための組成物及びその使用方法が提供される。組成物は、バリアントイヌＩｇＧＦｃ領域を含む。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年５月１１日に出願された米国特許仮出願第６３／０２３，０８３号、及び２０２０年１２月７日に出願された米国特許仮出願第６３／１２２，４１７号の優先権を主張するものであり、そのそれぞれの内容は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。

本開示は、概して、イヌにおける半減期が野生型同等物と比較して増加したポリペプチド（例えば、ポリペプチド－Ｆｃ領域融合体などの融合ポリペプチド；または抗体もしくは受容体－Ｆｃ融合体のリガンド結合部分などの結合分子）に関する。

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して提出された配列表
ＵＳＰＴＯＥＦＳ－ＷＥＢサーバーを介した以下の配列表の電子提出の全内容は、ＭＰＥＰ§１７３０ＩＩ．Ｂ．２（ａ）に認可及び規定されている通り、その全体が、全ての目的のために、参照により本明細書に援用される。配列表は、以下の通り識別される、電子的に提出されたテキストファイル内にある：

ファイル名：４７４０６－００１５ＷＯ１＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ

作成日：２０２１年５月６日

サイズ（バイト）：３４，０００バイト

抗体のＦｃ領域は、多くの機能的役割を担っており、限定するものではないが、リソソーム経路を介した分解から抗体を保護すること、抗体のエフェクター機能を媒介することなどが挙げられる。イヌ抗体の治療薬としての使用が増えるにつれ、最適なＦａｂを選択することだけでなく、望ましい半減期及びエフェクター機能を得るのに適切なＦｃと組み合わせることにも重点が置かれてきている。

当該技術分野において、イヌに使用するポリペプチド治療薬（例えば、抗体）の半減期を増加させることに関する指針はほとんどない。本開示は、イヌにおけるポリペプチド（例えば、抗体）の血清中持続性を改善するＦｃ領域バリアントを提供することによってその欠落を解消するものである。

本明細書で提供されるのは、治療用ポリペプチドに有用なイヌＦｃ（例えば、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアント）またはそのイヌＦｃＲｎ結合断片である。本開示は、対照ポリペプチド（例えば、野生型同等物であるＩｇＧのイヌＦｃ領域）よりもイヌＦｃＲｎに対する結合が増加したポリペプチドを特徴とする。いくつかの場合において、これらのポリペプチドは、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０及び／またはｐＨ６．５において、対照ポリペプチドよりもイヌＦｃＲｎに対する結合が増加する。いくつかの場合において、これらのポリペプチドは、例えば、中性ｐＨ（例えば、ｐＨ７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、または７．５）よりも酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５）で、より高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合することができる。いくつかの場合において、これらのポリペプチドは、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５及び／または６．０でより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する。本開示は、部分的には、イヌにおける半減期が野生型同等物よりも増加したポリペプチドに関する。例えば、本明細書で開示されるＦｃ領域またはそのイヌＦｃＲｎ結合領域に結合していない結合分子のバージョンと比べて半減期が増加した結合分子（例えば、抗体または受容体のリガンド結合部分）が提供される。また、酵素－Ｆｃ領域融合体、リガンド－Ｆｃ領域融合体、ナノボディ－Ｆｃ融合体、及びペプチド－Ｆｃ領域融合体も提供され、融合体は、野生型同等物と比較して半減期が増加している。Ｆｃ領域は、半減期を増加させる１つまたは複数の置換（野生型イヌＦｃ領域と比べて）を有することに加えて、例えば、エフェクター機能の増加、エフェクター機能の減少、プロテインＡに対する結合の増加及び／またはポリペプチドの不均一性の減少（例えば、Ｆｃ領域における１つ以上の翻訳後修飾を取り除くことによる）をもたらす他の置換も含み得る。イヌＦｃ領域配列は、任意のイヌ抗体に由来し得る。いくつかの場合において、イヌＦｃ領域配列は、イヌＩｇＧ（例えば、ＩｇＧＡ、ＩｇＧＢ、ＩｇＧＣ、またはＩｇＧＤ）に由来する。

本開示は、（１）リガンドまたはタンパク質のエピトープに特異的に結合する結合ドメインまたはその断片を含み、ここで、結合ドメインは、（２）本明細書で開示されるＦｃ領域（ＣＨ２＋ＣＨ３領域）またはそのイヌＦｃＲｎ結合領域を含むドメインに結合している、組み換えタンパク質を特徴とする。いくつかの場合において、結合ドメインは、（ｉ）イヌまたはヒト／ヒト化抗体の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）；（ｉｉ）ナノボディ；（ｉｉｉ）リガンドに結合する可溶性受容体結合ドメインまたはそのリガンド結合断片、及び（ｉｖ）イヌ受容体タンパク質の細胞外ドメインを含む。

本開示はまた、（１）本明細書に記載されるイヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントを含む第１のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、ＣＨ２＋ＣＨ３領域）を含む第１のポリペプチドと、（２）本明細書に記載されるイヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントを含む第２のＦｃ領域を含む第２のポリペプチドとを含む、組成物を提供する。第１及び第２のポリペプチドは、第１及び第２のＦｃ領域を介して会合することができる。いくつかの場合において、第１及び第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は、同じである。他の場合において、第１及び第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は、異なる（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸）。いくつかの場合において、Ｆｃ領域バリアントは、イヌＩｇＧＢ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、Ｆｃ領域バリアントは、イヌＩｇＧＡ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、Ｆｃ領域バリアントは、イヌＩｇＧＣ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、Ｆｃ領域バリアントは、イヌＩｇＧＤ抗体のＦｃ領域のバリアントである。

本明細書で開示されるイヌＩｇＧのＦｃ領域バリアント及びポリペプチドを含む、融合分子も開示される。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、ポリペプチドに共有結合的に結合される（例えば、ヒンジ領域またはリンカーを介して）。いくつかの場合において、ポリペプチドは、イヌ受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、イヌ受容体タンパク質の細胞外ドメイン、または抗原結合ドメインである。いくつかの場合において、ポリペプチドは、イヌＩＬ－１３Ｒα１またはＩＬ－１３Ｒα２のリガンド結合ドメインまたは細胞外ドメイン、イヌＥＰＯ、イヌＣＴＬＡ４、イヌＬＦＡ３、イヌＶＥＧＦＲ１／ＶＥＧＦＲ３、イヌＩＬ－１Ｒ、イヌＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及びイヌトロンボポエチン結合ペプチドから選択される。いくつかの場合において、ポリペプチドは、ｓｃＦｖ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体である。いくつかの場合において、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、イヌＩｇＧＢ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、イヌＩｇＧＡ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、イヌＩｇＧＣ抗体のＦｃ領域のバリアントである。いくつかの場合において、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントは、イヌＩｇＧＤ抗体のＦｃ領域のバリアントである。

いくつかの態様において、本開示は、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、以下からなる群から選択される位置：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置；及び
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
ここで、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置のアミノ酸置換は、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ及びＴｒｐからなる群から選択され、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、ポリペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸置換は、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置にアミノ酸置換を含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含む。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸置換は、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒ、ＨｉｓまたはＰｈｅを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＨｉｓを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＰｈｅを含む。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸置換は、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応するアミノ酸位置にＨｉｓを含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号９～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、以下からなる群から選択される位置に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕもしくはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置にＡｓｐもしくはＧｌｕを含み、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒもしくはＭｅｔを含み、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒもしくはＳｅｒを含み、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕもしくはＰｈｅを含み、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎもしくはＡｓｐを含み、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕもしくはＴｒｐを含み、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎもしくはＡｌａを含み、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置にＡｌａを含み、
（ｘｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含み、
（ｘｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置にＡｌａもしくはＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＰｈｅを含み、及び／または
（ｘｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸置換は、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＰｈｅを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｒｐを含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、以下からなる群から選択される位置に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕもしくはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置にＡｓｐもしくはＧｌｕを含み、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒもしくはＭｅｔを含み、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒもしくはＳｅｒを含み、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕもしくはＰｈｅを含み、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎもしくはＡｓｐを含み、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎもしくはＡｌａを含み、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置にＡｌａを含み、
（ｘｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含み、
（ｘｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置にＡｌａもしくはＬｙｓを含み、
（ｘｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＰｈｅを含み、及び／または
（ｘｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸置換は、以下からなる群から選択される位置にある：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕまたはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒまたはＭｅｔを含み、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒまたはＳｅｒを含み、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕまたはＰｈｅを含み、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎまたはＡｓｐを含み、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎまたはＡｌａを含み、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、及び
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａまたはＰｈｅを含む。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸置換は、以下からなる群から選択される位置にある：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、及び
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒもしくはＭｅｔを含み、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒもしくはＳｅｒを含み、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕもしくはＰｈｅを含み、及び／または
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＰｈｅを含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含み、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒを含み、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＧｌｕを含み、及び／または
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、ＡｒｇもしくはＨｉｓを含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、以下のうちの少なくとも１つを更に含む：
（ｉ）アミノ酸位置２５２のＴｙｒ、アミノ酸位置２５４のＴｈｒ、及びアミノ酸位置２５６のＧｌｕ；
（ｉｉ）アミノ酸位置４２８のＬｅｕ及びアミノ酸位置４３４のＳｅｒ；
（ｉｉｉ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、及びアミノ酸位置３１１のＶａｌ；
（ｉｖ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置３１５のＡｓｐ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｖ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８６のＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕもしくはＴｒｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、及びアミノ酸位置３１１のＶａｌ；
（ｖｉ）アミノ酸位置２８５のＡｓｎ、アミノ酸位置３０７のＧｌｎ、及びアミノ酸位置３１５のＡｓｐ；
（ｖｉｉ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｖｉｉｉ）アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｉｘ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｉ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、アミノ酸位置２８６のＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕもしくはＴｒｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｉｉ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８６のＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕもしくはＴｒｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及び位置３７８のＶａｌ；
（ｘｉｉｉ）アミノ酸位置３０７のＧｌｎ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｉｖ）アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＧｌｎ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｖ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｖｉ）アミノ酸位置３０７のＧｌｎ、アミノ酸位置３８０のＡｌａ、アミノ酸位置４３４のＳｅｒもしくはＡｌａ；
（ｘｖｉｉ）アミノ酸位置４２８のＬｅｕ、及びアミノ酸位置４３４のＳｅｒもしくはＡｌａ；または
（ｘｖｉｉｉ）アミノ酸位置２５０のＧｌｎ及びアミノ酸位置４２８のＬｅｕ。

いくつかの態様において、本開示は、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、以下からなる群から選択される２つ以上の位置：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置；
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応する位置；及び
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置
にアミノ酸置換を含み、
ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、ポリペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置のアミノ酸置換は、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ及び前述のいずれかの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置のアミノ酸置換がＤ３１２Ｐまたはその保存的アミノ酸置換である、請求項１に記載のポリペプチド。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置のアミノ酸置換は、Ａ４２６Ｙ、Ａ４２６Ｈ及び前述のいずれかの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応する位置のアミノ酸置換は、Ｎ４３４Ｒまたはその保存的アミノ酸置換である。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置のアミノ酸置換は、Ｙ４３６Ｈまたはその保存的アミノ酸置換である。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置にアミノ酸置換を含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、以下からなる群から選択される２つ以上の位置にアミノ酸置換を含む：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び４３４に対応する位置；
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び４３６に対応する位置；ならびに
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６、４２６及び４３６に対応する位置。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、以下からなる群から選択されるアミノ酸置換を含む：
（ｉ）Ａ４２６Ｙ及びＴ２８６Ｌ；
（ｉｉ）Ａ４２６Ｙ及びＤ３１２Ｐ；
（ｉｉｉ）Ａ４２６Ｙ及びＹ４３６Ｈ；
（ｉｖ）Ａ４２６Ｈ及びＴ２８６Ｌ；
（ｖ）Ａ４２６Ｈ及びＴ２８６Ｙ；
（ｖｉ）Ａ４２６Ｈ及びＤ３１２Ｐ；ならびに
（ｖｉｉ）Ｔ２８６Ｌ、Ａ４２６Ｙ、及びＹ４３６Ｈ。

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、以下からなる群から選択される：
（ｉ）Ａ４２６Ｙと、Ｔ２８６Ｌ、Ｄ３１２Ｐ、Ｎ４３４Ｒ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｉｉ）Ａ４２６Ｈと、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ、Ｄ３１２Ｐ、Ｎ４３４Ｒ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ；ならびに
（ｉｉｉ）Ｎ４３４Ｒと、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ、Ｄ３１２Ｐ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、配列番号９に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むイヌＩｇＧＡ、配列番号１０に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むイヌＩｇＧＢ、配列番号１１に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むイヌＩｇＧＣ、または配列番号１２に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むイヌＩｇＧＤである。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、イヌＩｇＧＡであり、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域は、配列番号９に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、イヌＩｇＧＢであり、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域は、配列番号１０に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、イヌＩｇＧＣであり、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域は、配列番号１１に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、イヌＩｇＧＤであり、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域は、配列番号１２に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、イヌＩｇＧＡであり、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域は、配列番号９に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、イヌＩｇＧＢであり、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域は、配列番号１０に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、イヌＩｇＧＣであり、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域は、配列番号１１に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧは、イヌＩｇＧＤであり、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域は、配列番号１２に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、結合ドメインを更に含む。

いくつかの実施形態において、結合ドメインは、（ｉ）免疫グロブリン分子の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）；（ｉｉ）イヌ受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、（ｉｉｉ）ナノボディ、または（ｉｖ）イヌ受容体タンパク質の細胞外ドメインを含む。

いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＮＧＦ、ＴｒＫＡ、ＡＤＡＭＴＳ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、ＩＬ－５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、ＣＤ３、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＣＤ５２、及び補体系複合体からなる群から選択される抗原に特異的に結合する。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＥＰＯ、ＣＴＬＡ４、ＬＦＡ３、ＶＥＧＦＲ１／ＶＥＧＦＲ３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及びトロンボポエチン結合ペプチドからなる群から選択されるタンパク質を更に含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、結合アッセイにおいて、中性ｐＨよりも酸性ｐＨでより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、結合アッセイにおいて、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５でより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、結合アッセイにおいて、ｐＨ７．４よりもｐＨ６．０でより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、（１）１つもしくは複数の対照ポリペプチドよりもイヌにおける半減期が増加しており、ここで、１つもしくは複数の対照ポリペプチドは、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントの代わりに、対応する野生型イヌＩｇＧのＦｃ領域を有する以外は１つもしくは複数のポリペプチドと同一であり、及び／または（２）対照ポリペプチドよりもイヌＦｃＲｎに対する結合が増加しており、ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づくものである。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号９に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１０に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１１に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１２に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの態様において、本開示は、（ｉ）本明細書に記載されるポリペプチド、及び（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。

いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載されるポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を提供する。

いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載される１つまたは複数の核酸を含む、１つまたは複数の発現ベクターを提供する。

いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載される１つもしくは複数の核酸または本明細書に記載される１つもしくは複数の発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。

いくつかの態様において、本開示は、１つまたは複数のポリペプチドを作製する方法を提供し、方法は、以下を含む：
（ａ）本明細書に記載される１つまたは複数の核酸を提供すること；
（ｂ）宿主細胞培養物中で１つまたは複数の核酸を発現させ、それにより、ポリペプチドを産生すること；
（ｃ）（ｂ）で産生されたポリペプチドを宿主細胞培養物から回収すること。

いくつかの実施形態において、方法は、ポリペプチドを医薬製剤として製剤化することを更に含む。

いくつかの態様において、本開示は、イヌの疾患または障害を治療することを、それを必要とするイヌに行う方法であって、本明細書に記載される医薬組成物を含む組成物の有効量をイヌに投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの態様において、本開示は、イヌの疾患または障害を予防することを、それを必要とするイヌに行う方法であって、本明細書に記載される医薬組成物を含む組成物の有効量をイヌに投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの態様において、本開示は、イヌの疾患または障害を治療することを、それを必要とするイヌに行う方法で使用するための、本明細書に記載される医薬組成物を提供する。

いくつかの態様において、本開示は、イヌの疾患または障害を予防することを、それを必要とするイヌに行う方法で使用するための、本明細書に記載される医薬組成物を提供する。

いくつかの態様において、本開示は、イヌの疾患または障害を治療することを、それを必要とするイヌに行うための薬剤の製造における、本明細書に記載されるポリペプチドの使用を提供する。

いくつかの態様において、本開示は、イヌの疾患または障害を予防することを、それを必要とするイヌに行うための薬剤の製造における、本明細書に記載されるポリペプチドの使用を提供する。

いくつかの実施形態において、疾患または障害は、アレルギー性疾患、慢性疼痛、急性疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、内分泌疾患、胃腸疾患、心血管疾患、腎臓疾患、生殖機能関連障害、感染症またはがんである。

いくつかの実施形態において、疾患または障害は、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、骨関節痛、関節炎、貧血、または肥満である。

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。本発明の実施または検証には、本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料を使用することができるが、例示的な方法及び材料について以下に記載する。本明細書で言及される全ての公開物、特許出願、特許及び他の参考文献は、その全体が参照により援用される。矛盾が生じる場合には、定義を含め、本出願が優先される。材料、方法及び例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。

本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び特許請求の範囲から明らかとなろう。

イヌＩｇＧ γ鎖のアミノ酸配列アライメントである。これらの鎖は、Ｖ_Ｈ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインと、ＣＨ１とＣＨ２の間のヒンジ領域とを含有する。Ｎ－グリコシル化部位を太字で示し、囲みで示した。これらの配列は、それぞれ配列番号１３、１４、１５、及び１６が割り当てられている。イヌＩｇＧ γ鎖のＣＨ２領域のアミノ酸配列アライメントである。これらの配列は、それぞれ配列番号１、２、３、及び４が割り当てられている。半減期を増加させるために置換された残基は、下線で示される。イヌＩｇＧ γ鎖のＣＨ３領域のアミノ酸配列アライメントである。これらの配列は、それぞれ配列番号５、６、７、及び８が割り当てられている。半減期を増加させるために置換された残基は、下線で示される。イヌＩｇＧ γ鎖のＦｃ領域のアミノ酸配列アライメントである。これらの配列は、それぞれ配列番号９、１０、１１、及び１２が割り当てられている。半減期を増加させるために置換された残基は、下線で示される。イヌＩｇＧのＣＨ２領域についてのＥＵナンバリングを提供する表である。イヌＩｇＧのＣＨ３領域についてのＥＵナンバリングを提供する表である。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。アラニンスキャニング変異導入実験のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置２５０のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置２５０のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置２５０のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置２５２のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置２５２のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置２５２のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ及びＢは、野生型及びバリアントＡ２５４ＴのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ及びＢは、野生型及びバリアントＧ３０９ＰのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ及びＢは、野生型及びバリアントＱ３１１ＶのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ及びＢは、野生型及びバリアントＤ３７８ＶのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ及びＢは、野生型及びバリアントＥ３８０ＡのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置４３４のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置４３４のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置４３４のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置４３４のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置４３４のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。野生型及び位置４３４のＮＮＫライブラリーの異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ～Ｅは、濃度系列における異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。使用したイヌＦｃＲｎの濃度は、１００ｎＭ（白丸）、２００ｎＭ（黒丸）、４００ｎＭ（黒三角）、及び８００ｎＭ（白三角）であった。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅＮＮＫライブラリーセンサーグラムを示す。使用したイヌＦｃＲｎの濃度は、２００ｎＭであった。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅＮＮＫライブラリーセンサーグラムを示す。使用したイヌＦｃＲｎの濃度は、２００ｎＭであった。各図において、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。濃度系列における異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。使用したイヌＦｃＲｎの濃度（下の線から上の線へ）は、それぞれ１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、及び８００ｎＭであった。各線は、１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。濃度系列における異なるバリアントのＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。使用したイヌＦｃＲｎの濃度（下の線から上の線へ）は、それぞれ１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、及び８００ｎＭであった。各線は、１：１相互作用モデルを使用した近似曲線である。Ａ～Ｃは、ｐＨ６．０におけるＩｇＧＡ野生型、ＩｇＧＡＡ４２６Ｙバリアント及びＩｇＧＡＡ４２６ＨバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。使用したイヌＦｃＲｎの濃度は、５０ｎＭ（白四角）、１００ｎＭ（黒丸）、２００ｎＭ（白丸）、４００ｎＭ（黒三角）及び８００ｎＭ（白三角）であった。各センサーグラムにおいて、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ～Ｆは、ｐＨ６．０における野生型イヌＩｇＧＢＦｃ、イヌＩｇＧＢＦｃの単一（Ａ４２６Ｙ）及び組み合わせバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。野生型ＩｇＧに使用したイヌＦｃＲｎの濃度は、２００ｎＭ（白丸）、４００ｎＭ（黒三角）、８００ｎＭ（白三角）、１６００ｎＭ（黒菱形）、及び３２００ｎＭ（白菱形）であった。残りのバリアントに対するイヌＦｃＲｎの濃度は、５０ｎＭ（白四角）、１００ｎＭ（黒丸）、２００ｎＭ（白丸）、４００ｎＭ（黒三角）及び８００ｎＭ（白三角）であった。各センサーグラムにおいて、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ～Ｆは、ｐＨ６．０におけるイヌＩｇＧＢＦｃの単一（Ａ４２６Ｈ）及び組み合わせバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。Ａ４２６Ｈ－Ｎ４３４ＲＩｇＧバリアントに使用したイヌＦｃＲｎの濃度は、２００ｎＭ（白丸）、４００ｎＭ（黒三角）、８００ｎＭ（白三角）、１６００ｎＭ（黒菱形）、及び３２００ｎＭ（白菱形）であった。残りのバリアントに対するイヌＦｃＲｎの濃度は、５０ｎＭ（白四角）、１００ｎＭ（黒丸）、２００ｎＭ（白丸）、４００ｎＭ（黒三角）及び８００ｎＭ（白三角）であった。各センサーグラムにおいて、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ～Ｅは、ｐＨ６．０におけるイヌＩｇＧＢＦｃの単一（Ｎ４３４Ｒ）及び組み合わせバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。バリアントに使用したイヌＦｃＲｎの濃度は、５０ｎＭ（白四角）、１００ｎＭ（黒丸）、２００ｎＭ（白丸）、４００ｎＭ（黒三角）及び８００ｎＭ（白三角）であった。各センサーグラムにおいて、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。ｐＨ６．０におけるイヌＩｇＧＢＦｃのＮ４３４ＹバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。バリアントに使用したイヌＦｃＲｎの濃度は、５０ｎＭ（白四角）、１００ｎＭ（黒丸）、２００ｎＭ（白丸）、４００ｎＭ（黒三角）及び８００ｎＭ（白三角）であった。各センサーグラムにおいて、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ～Ｆは、ｐＨ７．４における野生型イヌＩｇＧＢＦｃ、ＩｇＧＢＦｃの単一（Ａ４２６Ｙ）及び組み合わせバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各センサーグラムにおいて、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ～Ｆは、ｐＨ７．４におけるＩｇＧＢＦｃの単一（Ａ４２６Ｈ）及び組み合わせバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各センサーグラムにおいて、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。Ａ～Ｅは、ｐＨ７．４におけるＩｇＧＢＦｃの単一（Ｎ４３４Ｒ）及び組み合わせバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。各センサーグラムにおいて、薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。ｐＨ７．４におけるＩｇＧＢＦｃのＮ４３４ＹバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。薄い線は測定データを表し、濃い線は１：１相互作用モデルを使用した近似曲線を表す。イヌＩｇＧＢＦｃとヒトＩｇＧ１Ｆｃのアミノ酸配列アライメントである。イヌＦｃバリアントを生成するためにアミノ酸置換を行った位置（ＥＵナンバリングに従う）に下線を付した。オス（Ｍ）及びメス（Ｆ）のビーグルに静脈内投与した後の、単一アミノ酸置換またはアミノ酸置換の組み合わせを保有するイヌ抗神経成長因子（ＮＧＦ）ＩｇＧＢＦｃバリアントの終末相半減期（日数；Ｙ軸）を示す。動物を８つの群に無作為に分け、各群にオスとメスを配置した。各動物に２ｍｇ／ｋｇの抗体を単回静脈投与で投与し、およそ１．５ｍｌの全血を次の時点：０（投与前）、注射後４時間、及び１、２、４、６、１０１４１８、２２、３０、３４、３８、４２日に採取した。全血から血清を分離し、ＥＬＩＳＡによって抗ＮＧＦ抗体の存在をアッセイした。それぞれ個々の血清抗体測定値のノンコンパートメントＰＫ解析（ＮＣＡ）を、ＰＫＳｏｌｖｅｒを使用して実施した（ＹｏｎｇＺｈａｎｇｅｔａｌ．，Ｃｏｍｐｕｔ．ＭｅｔｈｏｄｓＰｒｏｇｒａｍｓＢｉｏｍｅｄ．；２０１０Ｓｅｐ；９９（３）：３０６－１４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｍｐｂ．２０１０．０１．００７）。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。ｐＨ５．９におけるＩｇＧＢの異なるバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合のＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。非線形混合効果モデルを使用した、線形クリアランスを有する２コンパートメント薬物動態（ＰＫ）モデルの模式図である。Ａ～Ｂは、ＩｇＧＢの異なるバリアントの経時的な血清中濃度を示す。野生型ＩｇＧＢＦｃまたはＩｇＧＢバリアントＡ４２６Ｙ、Ａ４２６Ｙ＋Ｙ４３６Ｈ、Ａ４２６Ｙ＋Ｙ４３６Ｈ＋Ｔ２８６Ｌ、Ｎ４３４Ｒ、Ｎ４３４Ｙ、及びＹＴＥを保有する抗体の予想血清中濃度プロファイルを示す。イヌＦｃの位置２８６、４２６及び４３６の構造モデルを示す。イヌＦｃの位置Ａ４２６Ｈの構造モデルを示す。左の構造はＦｃＲｎ大型サブユニットｐ５１であり、ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている。右の構造はＩｇＧＢＦｃであり、ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている。イヌＦｃの位置Ａ４２６Ｙの構造モデルを示す。左の構造はＦｃＲｎ大型サブユニットｐ５１であり、ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている。右の構造はＩｇＧＢＦｃであり、ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている。イヌＦｃの位置Ｙ４３６Ｈの構造モデルを示す。左の構造はＦｃＲｎ大型サブユニットｐ５１であり、ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている。右の構造はＩｇＧＢＦｃであり、ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている。イヌＦｃの位置Ｔ２８６Ｌの構造モデルを示す。左の構造（上）は、ベータ－２－ミクログロブリン（ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている）及びＦｃＲｎ大型サブユニットｐ５１（下）（ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている）である。右の構造はＩｇＧＢＦｃであり、ＷＴ構造は濃い灰色で示され、変異構造は薄い灰色で示されている。イヌＦｃの位置Ｔ２８６Ｌ、Ａ４２６Ｙ、及びＹ４３６Ｈの構造モデルを示す。左の構造は、ベータ－２－ミクログロブリン及びＦｃＲｎ大型サブユニットｐ５１である。右の構造は、ＩｇＧＢＦｃである。

多種多様なイヌ疾患の予防及び治療のための治療薬としてポリペプチド（例えば、抗体、受容体のリガンド結合ドメイン、酵素、リガンド、ペプチド）の使用が増えているが、特に、ポリペプチドを繰り返し投与しなければならない慢性疾患の予防または治療には、半減期の長いポリペプチドを開発することが重要である。

したがって、本開示は、イヌ免疫グロブリンＦｃ領域またはそのイヌＦｃＲｎ結合領域であって、これらの配列を含む１つまたは複数のポリペプチドの半減期を向上させる変異を含むものを特徴とする。また、これらのドメインを含むポリペプチド及びその使用方法も開示される。これらのペプチドは、様々な治療用途及び診断用途に使用することができる。

値が範囲で記載されている場合、その記載は、特定の数値または特定の下位範囲が明示されているかどうかにかかわらず、かかる範囲内の全ての可能な下位範囲及びかかる範囲内に入る特定の数値の開示を含むことが理解されるべきである。全ての数の表記、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、及び分子量は、範囲を含め、近似値であり、１．０または０．１の増分で適宜（＋）または（－）に変動し、あるいは＋／－１５％、あるいは１０％、あるいは５％、あるいは２％の変動がある。必ずしも常に明示されているわけではないが、全ての数の表記は、「約」という語が先行することが理解される。また、必ずしも常に明示されているわけではないが、本明細書に記載される試薬は単なる例示であり、その等価物は当該技術分野において知られていることも理解される。

「約」という用語は、量または濃度などの測定可能な値に言及する際に本明細書で使用される場合、明記される量の２０％、１０％、５％、１％、０．５％、または０．１％の変動を包含することを意味している。

イヌ抗体
イヌは、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤと呼ばれる４つのＩｇＧ重鎖を有する。これらの重鎖は、４つの異なるイヌＩｇＧのサブクラスを表し、ＩｇＧＡ、ＩｇＧＢ、ＩｇＧＣ及びＩｇＧＤと呼ばれる。これらの重鎖のアミノ酸及びＤＮＡ配列は、Ｔａｎｇｅｔａｌ．，Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，８０：２５９－２７０（２００１）及びＧＥＮＢＡＮＫデータベースから入手可能である。例えば、ＩｇＧＡ重鎖のアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＡＬ３５３０１．１であり、ＩｇＧＢは、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＡＬ３５３０２．１であり、ＩｇＧＣは、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＡＬ３５３０３．１であり、ＩｇＧＤは、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＡＬ３５３０４．１である。イヌ抗体はまた、カッパ及びラムダの２つの種類の軽鎖を含む。これらの軽鎖のＤＮＡ及びアミノ酸配列もまた、ＧＥＮＢＡＮＫデータベースから得ることができる。例えば、イヌのカッパ軽鎖のアミノ酸配列は、アクセッション番号ＡＢＹ５７２８９．１であり、イヌのラムダ軽鎖は、アクセッション番号ＡＢＹ５５５６９．１である。

イヌＦｃ領域のＣＨ２領域：
イヌ抗体のＣＨ２領域は、イヌＩｇＧ抗体のアミノ酸２３７～３４０（ＥＵナンバリングに従う）を含むか、またはそれらからなる。ＣＨ２領域は、そのＮ末端及び／またはＣ末端に、１～６個（例えば、１、２、３、４、５、６個）の追加のアミノ酸または欠失を含み得ることが理解される。

イヌＩｇＧＡのＣＨ２領域のアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＧＰＳＶＬＩＦＰＰＫＰＫＤＩＬＲＩＴＲＴＰＥＶＴＣＶＶＬＤＬＧＲＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＥＶＨＴＡＫＴＱＳＲＥＱＱＦＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＥＨＱＤＷＬＴＧＫＥＦＫＣＲＶＮＨＩＤＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲ（配列番号１）

イヌＩｇＧＢのＣＨ２ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＬＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＬＤＰＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＱＭＱＴＡＫＴＱＰＲＥＥＱＦＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＧＨＱＤＷＬＫＧＫＱＦＴＣＫＶＮＮＫＡＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲ（配列番号２）

イヌＩｇＧＣのＣＨ２ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＩＬＶＴＡＲＴＰＴＶＴＣＶＶＶＤＬＤＰＥＮＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＳＫＱＶＱＴＡＮＴＱＰＲＥＥＱＳＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＧＨＱＤＷＬＳＧＫＱＦＫＣＫＶＮＮＫＡＬＰＳＰＩＥＥＩＩＳＫＴＰ（配列番号３）

イヌＩｇＧＤのＣＨ２ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＩＬＲＩＴＲＴＰＥＩＴＣＶＶＬＤＬＧＲＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＥＶＨＴＡＫＴＱＰＲＥＱＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＥＨＱＤＷＬＴＧＫＥＦＫＣＲＶＮＨＩＧＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲ（配列番号４）

イヌＦｃ領域のＣＨ３領域：
イヌ抗体のＣＨ３領域は、イヌＩｇＧ抗体のアミノ酸３４５～４４７（ＥＵナンバリングに従う）を含むか、またはそれらからなる。ＣＨ３領域は、そのＮ末端及び／またはＣ末端に、１～６個（例えば、１、２、３、４、５、６個）の追加のアミノ酸または欠失を含み得ることが理解される。

イヌＩｇＧＡのＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＫＰＳＶＹＶＬＰＰＳＰＫＥＬＳＳＳＤＴＶＳＩＴＣＬＩＫＤＦＹＰＰＤＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＲＫＨＲＭＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＱＧＤＰＦＴＣＡＶＭＨＥＴＬＱＮＨＹＴＤＬＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号５）

イヌＩｇＧＢのＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＱＰＳＶＹＶＬＰＰＳＲＥＥＬＳＫＮＴＶＳＬＴＣＬＩＫＤＦＦＰＰＤＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＳＫＹＲＴＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＲＧＤＴＦＩＣＡＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＥＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号６）

イヌＩｇＧＣのＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＱＰＮＶＹＶＬＰＰＳＲＤＥＭＳＫＮＴＶＴＬＴＣＬＶＫＤＦＦＰＰＥＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＳＫＹＲＭＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＲＧＤＴＦＩＣＡＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＩＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号７）

イヌＩｇＧＤのＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＱＰＳＶＹＶＬＰＰＳＰＫＥＬＳＳＳＤＴＶＴＬＴＣＬＩＫＤＦＦＰＰＥＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＰＥＰＥＳＫＹＨＴＴＡＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＱＧＤＴＦＴＣＡＶＭＨＥＡＬＱＮＨＹＴＤＬＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号８）

イヌＦｃ領域のＦｃ領域：
イヌＩｇＧ抗体のＦｃ領域は、イヌＩｇＧ抗体のアミノ酸２３１～４４７（ＥＵナンバリングに従う）を含むか、またはそれらからなる。

イヌＩｇＧＡのＦｃドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＶＰＥＰＬＧＧＰＳＶＬＩＦＰＰＫＰＫＤＩＬＲＩＴＲＴＰＥＶＴＣＶＶＬＤＬＧＲＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＥＶＨＴＡＫＴＱＳＲＥＱＱＦＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＥＨＱＤＷＬＴＧＫＥＦＫＣＲＶＮＨＩＤＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲＧＲＡＨＫＰＳＶＹＶＬＰＰＳＰＫＥＬＳＳＳＤＴＶＳＩＴＣＬＩＫＤＦＹＰＰＤＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＲＫＨＲＭＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＱＧＤＰＦＴＣＡＶＭＨＥＴＬＱＮＨＹＴＤＬＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号９）

イヌＩｇＧＢのＦｃドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＡＰＥＭＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＬＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＬＤＰＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＱＭＱＴＡＫＴＱＰＲＥＥＱＦＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＧＨＱＤＷＬＫＧＫＱＦＴＣＫＶＮＮＫＡＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲＧＱＡＨＱＰＳＶＹＶＬＰＰＳＲＥＥＬＳＫＮＴＶＳＬＴＣＬＩＫＤＦＦＰＰＤＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＳＫＹＲＴＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＲＧＤＴＦＩＣＡＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＥＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号１０）

イヌＩｇＧＣのＦｃドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＧＣＧＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＩＬＶＴＡＲＴＰＴＶＴＣＶＶＶＤＬＤＰＥＮＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＳＫＱＶＱＴＡＮＴＱＰＲＥＥＱＳＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＧＨＱＤＷＬＳＧＫＱＦＫＣＫＶＮＮＫＡＬＰＳＰＩＥＥＩＩＳＫＴＰＧＱＡＨＱＰＮＶＹＶＬＰＰＳＲＤＥＭＳＫＮＴＶＴＬＴＣＬＶＫＤＦＦＰＰＥＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＳＫＹＲＭＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＲＧＤＴＦＩＣＡＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＩＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号１１）

イヌＩｇＧＤのＦｃドメインのアミノ酸配列は、以下に提供される：
ＶＰＥＳＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＩＬＲＩＴＲＴＰＥＩＴＣＶＶＬＤＬＧＲＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＥＶＨＴＡＫＴＱＰＲＥＱＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＥＨＱＤＷＬＴＧＫＥＦＫＣＲＶＮＨＩＧＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲＧＱＡＨＱＰＳＶＹＶＬＰＰＳＰＫＥＬＳＳＳＤＴＶＴＬＴＣＬＩＫＤＦＦＰＰＥＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＰＥＰＥＳＫＹＨＴＴＡＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＱＧＤＴＦＴＣＡＶＭＨＥＡＬＱＮＨＹＴＤＬＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号１２）

半減期を改善するイヌＩｇＧＦｃの置換
血清中持続性の増加は、治療用ポリペプチドにとって有益な特性である。本開示は、野生型イヌＩｇＧＡ、ＩｇＧＢ、ＩｇＧＣ、及びＩｇＧＤのＦｃ領域の置換を特徴とし、置換は、１つまたは複数の対照ポリペプチドと比べて、これらのＦｃ領域を含む１つまたは複数のポリペプチドのイヌにおける半減期を向上させるものであり、ここで、１つまたは複数の対照ポリペプチドは、ＩｇＧのＦｃ領域バリアントの代わりに、対応する野生型イヌＩｇＧのＦｃ領域を有する以外は１つまたは複数のポリペプチドと同一であるものである。半減期を増加させる置換は、イヌＣＨ２領域、イヌＣＨ３領域のうちの１つ以上において、またはイヌＦｃ（例えば、ＣＨ２＋ＣＨ３）領域との関連でなされ得る。

本開示は、イヌＩｇＧのＦｃドメインまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、以下からなる群から選択される位置：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置；及び
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置
に少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
ここで、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置のアミノ酸置換は、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ及びＴｒｐからなる群から選択され、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、ポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、結合アッセイにおいて、野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、約５．０～約６．５（例えば、約５．５または約６．０）のｐＨで、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している。いくつかの実施形態において、結合アッセイは、例えば、約５．０～約６．５のｐＨにおける本明細書に記載されるポリペプチドバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合親和性を、同じｐＨ（例えば、約５．０～約６．５のｐＨ）における野生型イヌＩｇＧのイヌＦｃＲｎに対する結合親和性と比較する、比較アッセイを指す。いくつかの実施形態において、結合アッセイは、同等の条件を使用して実施される。いくつかの実施形態において、結合アッセイは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイである。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号９～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの場合において、本開示は、配列番号１～４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、イヌＩｇＧのＣＨ２領域バリアントを提供する。また、配列番号１～４のいずれか１つとは１～１５個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個）のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含む、イヌＩｇＧのＣＨ２領域バリアントも提供される。

他の場合において、本開示は、配列番号５～８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％または少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、イヌＩｇＧのＣＨ３領域バリアントを特徴とする。また、配列番号５～８のいずれか１つとは１～１５個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個）のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含む、イヌＩｇＧのＣＨ３領域バリアントも特徴とする。

ある特定の場合において、本開示は、配列番号９～１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントを特徴とする。また、配列番号９～１２のいずれか１つとは１～２０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個）のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含む、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントが開示される。

いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域バリアント中の以下の領域のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、または３つ）は、野生型イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域中の対応する領域と同一である：
アミノ酸位置２５０～２５６；
アミノ酸位置２８５～２８８；及び
アミノ酸位置３０７～３１５
（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づく）。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域バリアント中の上記領域の全ては、野生型イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域中の対応する領域と同一である。

いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域バリアント中の以下の領域のうちの少なくとも１つ（例えば、１つまたは２つ）は、野生型イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域中の対応する領域と同一である：
アミノ酸位置３７６～３８０；及び
アミノ酸位置４２８～４３６
（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づく）。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域バリアント中の上記領域の全ては、野生型イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域中の対応する領域と同一である。

いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃバリアント中の以下の領域のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、または５つ）は、野生型イヌＩｇＧのＦｃ中の対応する領域と同一である：
アミノ酸位置２５０～２５６；
アミノ酸位置２８５～２８８；
アミノ酸位置３０７～３１５；
アミノ酸位置３７６～３８０；及び
アミノ酸位置４２８～４３６
（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づく）。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃバリアント中の以下の領域の全ては、野生型イヌＩｇＧのＦｃ中の対応する領域と同一である。

いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃバリアント中の以下の領域のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、または５つ）は、野生型イヌＩｇＧのＦｃ中の対応する領域と同一である：
アミノ酸位置２５０～２５６；
アミノ酸位置２８５、２８７及び２８８；
アミノ酸位置３０７～３１５；
アミノ酸位置３７６～３８０；ならびに
アミノ酸位置４２８～４３６
（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づく）。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃバリアント中の以下の領域の全ては、野生型イヌＩｇＧのＦｃ中の対応する領域と同一である。

いくつかの実施形態において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域バリアントを含む１つまたは複数のポリペプチドが提供され、ＣＨ２領域バリアントは、配列番号１～４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域バリアントを含む１つまたは複数のポリペプチドを特徴とし、ＣＨ３領域バリアントは、配列番号５～８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントを含む１つまたは複数のポリペプチドを特徴とし、Ｆｃ領域バリアントは、配列番号９～１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、及び／または
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒ、ＨｉｓもしくはＰｈｅを含み、及び／または
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ及びＴｒｐを含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、及び／または
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含み、及び／または
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ及びＴｒｐを含む。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、及び／または
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＨｉｓを含み、及び／または
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ及びＴｒｐを含む。

別途指摘されるように、ポリペプチドは、いくつかの実施形態において、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０～２５６、アミノ酸位置２８５～２８８；アミノ酸位置３０７～３１５；アミノ酸位置３７６～３８０；またはアミノ酸位置４２８～４３６に対応する領域中に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を更に含み、ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較して、イヌＦｃＲｎに対する結合が増加している。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０～２５６、アミノ酸位置２８５、２８７及び２８８；アミノ酸位置３０７～３１５；アミノ酸位置３７６～３８０；またはアミノ酸位置４２８～４３６に対応する領域中に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を更に含み、ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較して、イヌＦｃＲｎに対する結合が増加している。本開示によって包含される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換は、表１に開示されているアミノ酸置換のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）を含む。

いくつかの場合において、本開示によって包含される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換は、表２に開示されている置換のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、または４）を含む。

上で開示される置換の全ての可能な組み合わせ及び順列が本開示に包含される。いくつかの場合において、ポリペプチドは、以下からなる群から選択される少なくとも１つ（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上）の追加のアミノ酸置換を含む：
（ｉ）アミノ酸位置２５２のＴｙｒ、アミノ酸位置２５４のＴｈｒ、及びアミノ酸位置２５６のＧｌｕ；
（ｉｉ）アミノ酸位置４２８のＬｅｕ及びアミノ酸位置４３４のＳｅｒ；
（ｉｉｉ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、及びアミノ酸位置３１１のＶａｌ；
（ｉｖ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置３１５のＡｓｐ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｖ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８６のＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕまたはＴｒｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、及びアミノ酸位置３１１のＶａｌ；
（ｖｉ）アミノ酸位置２８５のＡｓｎ、アミノ酸位置３０７のＧｌｎ、及びアミノ酸位置３１５のＡｓｐ；
（ｖｉｉ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｖｉｉｉ）アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｉｘ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｉ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、アミノ酸位置２８６のＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕまたはＴｒｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｉｉ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８６のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及び位置３７８のＶａｌ；
（ｘｉｉｉ）アミノ酸位置３０７のＧｌｎ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｉｖ）アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＧｌｎ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｖ）アミノ酸位置２５６のＡｓｐ、アミノ酸位置２８５のＡｓｐ、アミノ酸位置３０７のＡｒｇ、アミノ酸位置３１１のＶａｌ、及びアミノ酸位置３７８のＶａｌ；
（ｘｖｉ）アミノ酸位置３０７のＧｌｎ、アミノ酸位置３８０のＡｌａ、アミノ酸位置４３４のＳｅｒまたはＡｌａ；
（ｘｖｉｉ）アミノ酸位置４２８のＬｅｕ、及びアミノ酸位置４３４のＳｅｒまたはＡｌａ；
（ｘｖｉｉｉ）アミノ酸位置２５０のＧｌｎ及びアミノ酸位置４２８のＬｅｕ；
（ｘｉｘ）アミノ酸位置２５０のＧｌｕ及びアミノ酸位置２５１のＧｌｕ；
（ｘｘ）アミノ酸位置２５６のＰｈｅ及びアミノ酸位置３０９のＰｈｅ；
（ｘｘｉ）アミノ酸位置４３０のＡｌａ及びアミノ酸位置４３３のＬｙｓ；
（ｘｘｉｉ）アミノ酸位置４３４のＰｈｅ及びアミノ酸位置４３６のＨｉｓ；ならびに
（ｘｘｉｉｉ）アミノ酸位置４３５のＴｙｒ及びアミノ酸位置４３６のＨｉｓ。

いくつかの場合において、置換は、アミノ酸位置２５２のＴｙｒ、アミノ酸位置２５４のＴｈｒ、及びアミノ酸位置２５６のＧｌｕの組み合わせを含まない。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸置換は、以下からなる群から選択される位置にある：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応するアミノ酸位置。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕもしくはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置にＡｓｐもしくはＧｌｕを含み、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒもしくはＭｅｔを含み、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒもしくはＳｅｒを含み、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕもしくはＰｈｅを含み、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎもしくはＡｓｐを含み、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕもしくはＴｒｐを含み、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎもしくはＡｌａを含み、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置にＡｌａを含み、
（ｘｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含み、
（ｘｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置にＡｌａもしくはＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＰｈｅを含み、
（ｘｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含み、及び／または
（ｘｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応するアミノ酸位置にＨｉｓを含む。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸置換は、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＰｈｅを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｒｐを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下からなる群から選択される位置に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応するアミノ酸位置。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕもしくはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置にＡｓｐもしくはＧｌｕを含み、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒもしくはＭｅｔを含み、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒもしくはＳｅｒを含み、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕもしくはＰｈｅを含み、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎもしくはＡｓｐを含み、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎもしくはＡｌａを含み、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置にＡｌａを含み、
（ｘｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含み、
（ｘｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置にＡｌａもしくはＬｙｓを含み、
（ｘｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＰｈｅを含み、
（ｘｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含み、及び／または
（ｘｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応するアミノ酸位置にＨｉｓを含む。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸置換は、以下からなる群から選択される位置にある：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応するアミノ酸位置。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕまたはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒまたはＭｅｔを含み、
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒまたはＳｅｒを含み、
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕまたはＰｈｅを含み、
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎまたはＡｓｐを含み、
（ｖｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎまたはＡｌａを含み、
（ｖｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｖｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｉｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、
（ｘｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａまたはＰｈｅを含み、及び
（ｘｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応するアミノ酸位置にＨｉｓを含む。

置換は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはＦｃドメインの片方または両方の鎖になされてもよい。いくつかの場合において、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはＦｃドメインの両方の鎖上の置換は、同一である。いくつかの場合において、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはＦｃドメインの両方の鎖上の置換は、同一ではない。いくつかの場合において、Ｆｃ領域は、エフェクター機能の増加もしくは減少及び／または産物の不均一性の改善をもたらす１つ以上の追加の置換を含む。

本開示はまた、イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、以下からなる群から選択される２つ以上（例えば、２、３、４、または５つ）の位置：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置；
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応する位置；及び
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置
にアミノ酸置換を含み、
ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、ポリペプチドを提供する。

本明細書で開示される置換の全ての可能な組み合わせ及び順列が本開示に包含される。いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、前述の２つ以上のアミノ酸置換のうちの１つのみを含むポリペプチドと比較して、ポリペプチドのイヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加する限りにおいて、相乗効果をもたらすものである。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧの位置２８６、３１２、４２６、４３４、及び４３６に対応する位置以外の位置に、少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む。例えば、本明細書に記載されるポリペプチドは、約１、２、３、４、または５～約３０以下のイヌＩｇＧの追加のアミノ酸置換を含み得る。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、約５．０～約６．５（例えば、約５．５または約６．０）のｐＨにおいて、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している。ＦｃＲｎ結合親和性を決定する方法は、当業者によく知られているが、その実例は、本明細書に別途記載されている。

ＦｃＲｎ結合活性の差は、各変数（例えば、ｐＨ値、アミノ酸置換の数、アミノ酸置換の位置、アミノ酸置換の種類など）について、同等または類似のアッセイを使用して好適に決定され得る。この文脈における同等のアッセイとは、アッセイが実施される方法及び評価される変数に依存しない結果に実質的な影響を与え得る不必要な変数を最小化するまたは回避するように、実質的に同一または類似の様式で実行されるアッセイを指す。しかしながら、例えば、ｐＨ６．０でのＦｃＲｎ結合を決定するアッセイを実施するのに必要な条件は、例えば、アッセイが実施される方法に対するｐＨの影響を考慮すると、ｐＨ７．４で類似のアッセイを実施するのに必要な条件とは異なり得ることが理解される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、同等のアッセイを使用して野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、約５．０～約６．５（例えば、約５．５または約６．０）のｐＨにおいて、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、同等のアッセイにおいて、中性ｐＨよりも酸性ｐＨでより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、同等のアッセイにおいて、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５でより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、同等のアッセイにおいて、ｐＨ７．４よりもｐＨ６．０でより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する。

本明細書で使用される「保存的アミノ酸置換」は、あるアミノ酸残基を、電荷、疎水性及び大きさなどの特性が類似している別のアミノ酸残基で置換することを指す。いくつかの実施形態において、保存的アミノ酸置換は、別のアミノ酸置換と類似の特性または機能をもたらす置換を指す。例えば、Ａ４２６Ｙの保存的アミノ酸置換は、Ａ４２６ＦまたはＡ４２６Ｔであり得る。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、以下からなる群から選択される２つ以上の位置にアミノ酸置換を含む：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び４３４に対応する位置；ならびに
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び４３６に対応する位置。

いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸置換は、以下からなる群から選択される：
（ｉ）Ａ４２６Ｙと、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ、Ｄ３１２Ｐ、Ｎ４３４Ｒ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｉｉ）Ａ４２６Ｈと、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ、Ｄ３１２Ｐ、Ｎ４３４Ｒ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ；ならびに
（ｉｉｉ）Ｎ４３４Ｒと、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ、Ｄ３１２Ｐ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、以下からなる群から選択されるアミノ酸置換を含む：
（ｉ）Ａ４２６Ｙ及びＴ２８６Ｌ；
（ｉｉ）Ａ４２６Ｙ及びＤ３１２Ｐ；
（ｉｉｉ）Ａ４２６Ｙ及びＹ４３６Ｈ；
（ｉｖ）Ａ４２６Ｈ及びＴ２８６Ｌ；
（ｖ）Ａ４２６Ｈ及びＴ２８６Ｙ；ならびに
（ｖｉ）Ａ４２６Ｈ及びＤ３１２Ｐ。

いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域バリアント中の以下の領域のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、または３つ）は、野生型イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域中の対応する領域と同一である：
アミノ酸位置２５０～２５６；及び
アミノ酸位置３０７～３１１
（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づく）。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域バリアント中の上記領域の全ては、野生型イヌＩｇＧのＦｃＣＨ２領域中の対応する領域と同一である。

いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域バリアント中の以下の領域のうちの少なくとも１つ（例えば、１つまたは２つ）は、野生型イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域中の対応する領域と同一である：
アミノ酸位置３７６～３８０；ならびに
アミノ酸位置４２８～４３３
（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づく）。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域バリアント中の上記領域の全ては、野生型イヌＩｇＧのＦｃＣＨ３領域中の対応する領域と同一である。

いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃバリアント中の以下の領域のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、または５つ）は、野生型イヌＩｇＧのＦｃ中の対応する領域と同一である：
アミノ酸位置２５０～２５６；
アミノ酸位置３０７～３１１；
アミノ酸位置３７６～３８０；及び
アミノ酸位置４２８～４３３
（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づく）。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃバリアント中の以下の領域の全ては、野生型イヌＩｇＧのＦｃ中の対応する領域と同一である。

いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃバリアント中の以下の領域のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、または５つ）は、野生型イヌＩｇＧのＦｃ中の対応する領域と同一である：
アミノ酸位置２５０～２５６；
アミノ酸位置２８５、２８７及び２８８；
アミノ酸位置３０７～３１１；
アミノ酸位置３７６～３８０；ならびに
アミノ酸位置４２８～４３３
（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づく）。いくつかの場合において、イヌＩｇＧのＦｃバリアント中の以下の領域の全ては、野生型イヌＩｇＧのＦｃ中の対応する領域と同一である。

半減期を向上させる置換と組み合わせることができる他の置換
治療用ポリペプチド／タンパク質（例えば、モノクローナル抗体）の開発は、所望のポリペプチド／タンパク質を生成するために、一連の複雑な作業の調整を必要とする複雑なプロセスである。これらには、特異性、親和性、機能活性、人工細胞株における発現レベルの最適化、長期安定性、エフェクター機能の除去または向上、ならびに商業的に利用可能な製造法及び精製法の開発が含まれる。本開示は、上記の目標のいずれか１つ以上を促進する、Ｆｃ領域バリアントの１つ以上の追加のアミノ酸位置における置換を包含する。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域バリアントは、エフェクター機能の増加もしくは減少及び／または産物の不均一性の改善をもたらす１つ以上の追加のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。

いくつかの実施形態において、置換は、イヌＦｃ領域のエフェクター機能を減少させるために導入される。そのような置換は、イヌＩｇＧの以下の位置（ＥＵナンバリングに従うナンバリング）のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、または７個）にあり得る：２３８、２６５、２９７、２９８、２９９、３２７、及び３２９。置換（複数可）は、他の１９個のアミノ酸のいずれかに対するものであってもよい。いくつかの場合において、置換は、保存的である。ある特定の非限定的な例において、位置２３８の置換アミノ酸は、Ａｌａであり、位置２６５の置換アミノ酸は、Ａｌａであり、位置２９７の置換アミノ酸は、ＡｌａまたはＧｌｎであり、位置２９８の置換アミノ酸は、Ｐｒｏであり、位置２９９の置換アミノ酸は、Ａｌａであり、位置３２７の置換アミノ酸は、Ｇｌｙであり、位置３２９の置換アミノ酸は、Ａｌａである。いくつかの場合において、バリアントＦｃ領域は、イヌＩｇＧＢ抗体またはイヌＩｇＧＣ抗体に由来する。

いくつかの実施形態において、プロテインＡクロマトグラフィーによる精製を容易にするために、置換を野生型イヌＩｇＧＦｃ領域に導入して、プロテインＡへの結合を高める。そのような置換は、イヌＩｇＧの位置（ＥＵナンバリングに従うナンバリング）のうちの１つまたは両方（例えば、１、２、３、４、５、６、または７個）にあり得る：２５２及び２５４。置換（複数可）は、他の１９個のアミノ酸のいずれかに対するものであってもよい。いくつかの場合において、置換は、保存的である。ある特定の非限定的な例において、位置２５２の置換アミノ酸は、Ｍｅｔであり、位置２５４のｔｈｅ置換アミノ酸は、Ｓｅｒである。

いくつかの実施形態において、置換は、親ポリペプチドまたは野生型ポリペプチドと比較して、ＦｃＲｎに対する結合親和性を変更するためになされる（例えば、ＦｃＲｎとの結合親和性を増加または減少させる）。いくつかのバリエーションにおいて、修飾は、３０８Ｆ、４２８Ｌ、４３４Ｍ及び４３４Ｓからなる群から選択される１、２、３、または４つの修飾であり得、ナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う。いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、２５２Ｙ／４２８Ｌ、４２８Ｌ／４３４Ｈ、４２８Ｌ／４３４Ｆ、４２８Ｌ／４３４Ｙ、４２８Ｌ／４３４Ａ、４２８Ｌ／４３４Ｍ、及び４２８Ｌ／４３４Ｓからなる群から選択される１つ以上の修飾を含み、ここで、ナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う。いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、４２８Ｌ／４３４Ｓ、３０８Ｆ／４２８Ｌ／４３４Ｓからなる群から選択される１つ以上の修飾を含み、ここで、ナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う。いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、２５９Ｉ／４３４Ｓ、３０８Ｆ／４３４Ｓ、３０８Ｆ／４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ／４３４Ｓ、３０７Ｑ／３０８Ｆ／４３４Ｓ、２５０Ｉ／３０８Ｆ／４３４Ｓ、及び３０８Ｆ／３１９Ｌ／４３４Ｓからなる群から選択される１つ以上の修飾を含み、ここで、ナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う。これらの修飾の詳しい説明は、例えば、ＵＳ８８８３９７３Ｂ２に記載されており、その全体が参照により本明細書に援用される。

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、イヌ抗体のヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態において、修飾は、半減期を増加させるために、イヌ抗体のヒンジ領域に行うことができる。いくつかの実施形態において、修飾は、ＥＵナンバリングに従う２２８Ｐである。

いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎとの結合は、ｐＨ依存性である。Ｈ３１０及びＨ４３５（ＥＵナンバリング）は、ｐＨ依存性結合に必須であり得る。したがって、いくつかの実施形態において、位置３１０（ＥＵナンバリング）のアミノ酸は、ヒスチジンである。いくつかの実施形態において、位置４３５（ＥＵナンバリング）のアミノ酸は、ヒスチジンである。いくつかの実施形態において、両方の位置のアミノ酸は、ヒスチジンである。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＬＡＬＡ変異（ＥＵナンバリングでＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの変異）、またはＬＡＬＡ－ＰＧ変異（ＥＵナンバリングでＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇの変異）を有する。いくつかの実施形態において、ＬＡＬＡの変異は、Ｐ２３４Ａ、Ｍ２３４Ａ、またはＳ２３４Ａである。いくつかの実施形態において、位置２３４（ＥＵナンバリング）のアミノ酸残基は、Ａｌａである。いくつかの実施形態において、位置２３４（ＥＵナンバリング）のアミノ酸残基は、Ａｌａである。いくつかの実施形態において、位置２３４及び２３５（ＥＵナンバリング）のアミノ酸残基は、Ａｌａである。

イヌＩｇＧＦｃバリアントを含むポリペプチド
本開示は、イヌにおける半減期を増加させることから利益を得ることができる任意のポリペプチドを包含する。半減期を増加させるために、これらのポリペプチドは、上に開示されるＦｃ領域バリアント（例えば、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、ＣＨ２＋ＣＨ３領域）を含むように設計される。

例示的なポリペプチドとしては、限定するものではないが、全抗体、ｓｃＦｖ、ナノボディ、受容体のリガンド結合部分、サイトカイン、成長因子、酵素、及びペプチドが挙げられる。例えば、上で開示されるＣＨ３ドメインバリアントは、ｓｃＦｖナノボディ、受容体のリガンド結合部分（例えば、イヌＩＬ－１３Ｒα１またはＩＬ－１３Ｒα２のリガンド結合部分）、サイトカイン、成長因子、酵素、またはペプチドに結合されてもよい。本明細書で使用される場合、「ナノボディ」、「ＶＨＨ」、「ＶＨＨ抗体断片」及び「単一ドメイン抗体」という用語は、ラクダ科動物で見られる種類の抗体の単一重鎖の可変ドメインを示すために、本明細書中で区別なく使用され、典型的に天然で軽鎖を欠いている。好適なナノボディは、当業者によく知られているが、その実例としては、ラクダ、ヒトコブラクダ、ラマ及びアルパカのナノボディが挙げられる。あるいは、上に開示されるＦｃ領域バリアントは、これらのポリペプチドに結合され得る。別の実施形態において、イヌまたはイヌ化抗体は、本明細書で開示されるＦｃ領域バリアントを含むように改変される。

いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドは、抗体ヒンジ領域を含む。ヒンジ領域は、抗原またはポリペプチドのリガンド結合ドメインとＦｃ領域バリアントとの間に配置され得る。いくつかの場合において、ヒンジ領域は、サイトカイン、成長因子、酵素、またはペプチドのＣ末端に結合され、ヒンジ領域は、Ｆｃ領域バリアントのＮ末端に結合される。例示的なヒンジ領域配列は、以下に提供される。
ＩｇＧＡ：ＦＮＥＣＲＣＴＤＴＰＰＣＰＶＰＥＰ（配列番号１７）；
ＩｇＧＢ：ＰＫＲＥＮＧＲＶＰＲＰＰＤＣＰＫＣＰＡＰＥＭ（配列番号１８）；
ＩｇＧＣ：ＡＫＥＣＥＣＫＣＮＣＮＮＣＰＣＰＧＣＧＬ（配列番号１９）；
ＩｇＧＤ：ＰＫＥＳＴＣＫＣＩＳＰＣＰＶＰＥＳ（配列番号２０）；及び
ＩｇＧＤｍｕｔ：ＰＫＥＳＴＣＫＣＩＰＰＣＰＶＰＥＳ（配列番号２１）。

本開示の組み換えタンパク質におけるヒンジ領域は、使用される場合、配列番号１７～２１のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と比べて、０～６個（すなわち、０、１、２、３、４、５、または６個）のアミノ酸置換を含み得る。いくつかの場合において、本開示の組み換えタンパク質に使用されるヒンジ領域は、配列番号１７～２１のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。

いくつかの実施形態において、リンカー配列は、ポリペプチド（例えば、抗体、受容体のリガンド結合ドメイン、酵素、リガンド、ペプチド）を、本明細書で開示されるイヌＦｃ領域バリアントに接続するために、抗体のヒンジ配列の代わりに使用されてもよい。ある特定の実施形態において、リンカーは、ペプチド結合によって連結された１～２０個のアミノ酸で構成され、ここで、アミノ酸は、天然に存在する２０個のアミノ酸から選択される。これらのアミノ酸のいくつかは、当業者にはよく理解されているように、グリコシル化され得る。他の実施形態において、１～２０個のアミノ酸は、グリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミン、及びリシンから選択される。他の実施形態において、リンカーは、グリシン及びアラニンなどの立体障害のないアミノ酸で大部分が構成される。ペプチドリンカーの例としては、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ；ＧｌｙＳｅｒ；ＧｌｙＧｌｙＳｅｒ；ＳｅｒＧｌｙＧｌｙ；ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ（配列番号２２）；ＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙ（配列番号２３）；ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ（配列番号２４）；ＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ（配列番号２５）；ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ（配列番号２６）；ＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ（配列番号２７）；ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ（配列番号２８）；ＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ（配列番号２９）；（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）_ｎ（配列番号２４）ｎ（ここで、ｎは、１以上の整数（例えば、１、２、３、４、５）である）；及び（ＳｅｒＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ）_ｎ（配列番号２５）ｎ（ここで、ｎは、１以上の整数（例えば、１、２、３、４、５）である）が挙げられる。

非ペプチドリンカーもまた、目的の１つまたは複数のポリペプチドを、本明細書で開示されるＦｃ領域バリアントに連結させるために使用され得る。例えば、－ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎＣ（Ｏ）－（式中、ｎ＝２～２０）などのアルキルリンカーを使用することができる。これらのアルキルリンカーは、低級アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_６）低級アシル、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ）、ＣＮ、ＮＨ_２、フェニルなどの任意の立体障害のない基によって更に置換されてもよい。

本開示の１つまたは複数のポリペプチドは、結合ドメインを含み得る。結合ドメインは、本明細書に記載される選択標的のタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ、及び／またはエピトープに特異的に結合することができる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）は、タンパク質を含み得、ここで、タンパク質は、本明細書に記載される治療用タンパク質である。いくつかの実施形態において、標的（例えば、結合ドメインの標的）または治療用タンパク質（例えば、融合ポリペプチド）は、以下からなる群から選択される：１７－ＩＡ、４－１ＢＢ、４Ｄｃ、６－ケト－ＰＧＦ１ａ、８－イソ－ＰＧＦ２ａ、８－オキソ－ｄＧ、Ａ１アデノシン受容体、Ａ３３、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＳ、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、アドレシン、ａＦＧＦ、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＫ、ＡＬＫ－１、ＡＬＫ－７、アルファ－１－抗トリプシン、アルファ－Ｖ／ベータ－１アンタゴニスト、ＡＮＧ、Ａｎｇ、ＡＰＡＦ－１、ＡＰＥ、ＡＰＪ、ＡＰＰ、ＡＰＲＩＬ、ＡＲ、ＩｇＥ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、ＡＲＣ、ＡＲＴ、アルテミン、抗Ｉｄ、ＡＳＰＡＲＴＩＣ、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、Ａｘｌ、ｂ２Ｍ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ、Ｂリンパ球刺激因子（ＢｌｙＳ）、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ－１、Ｂａｄ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦ－Ｒ、Ｂａｇ－１、ＢＡＫ、Ｂａｘ、ＢＣＡ－１、ＢＣＡＭ、Ｂｃｌ、ＢＣＭＡ、ＢＤＮＦ、ｂ－ＥＣＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＩＤ、Ｂｉｋ、ＢＩＭ、ＢＬＣ、ＢＬ－ＣＡＭ、ＢＬＫ、ＢＭＰ、ＢＭＰ－２ＢＭＰ－２ａ、ＢＭＰ－３オステオゲニン、ＢＭＰ－４ＢＭＰ－２ｂ、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－６Ｖｇｒ－１、ＢＭＰ－７（ＯＰ－１）、ＢＭＰ－８（ＢＭＰ－８ａ、ＯＰ－２）、ＢＭＰＲ、ＢＭＰＲ－ＩＡ（ＡＬＫ－３）、ＢＭＰＲ－ＩＢ（ＡＬＫ－６）、ＢＲＫ－２、ＲＰＫ－１、ＢＭＰＲ－ＩＩ（ＢＲＫ－３）、ＢＭＰｓ、ｂ－ＮＧＦ、ＢＯＫ、ボンベシン、骨由来神経栄養因子、ＢＰＤＥ、ＢＰＤＥ－ＤＮＡ、ＢＴＣ、補体因子３（Ｃ３）、Ｃ３ａ、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ１０、ＣＡ１２５、ＣＡＤ－８、カルシトニン、ｃＡＭＰ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、癌腫関連抗原、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ／ＤＰＰＩ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＨ、カテプシンＬ、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＶ、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、ＣＢＬ、ＣＣ１、ＣＣＫ２、ＣＣＬ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３２、ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８９、ＣＤ９５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５２、ＣＤ１６４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、ｃＧＭＰ、ＣＩＮＣ、ボツリヌス菌毒素、ウェルシュ菌毒素、ＣＫｂ８－１、ＣＬＣ、ＣＭＶ、ＣＭＶＵＬ、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＮ－１、ＣＯＸ、Ｃ－Ｒｅｔ、ＣＲＧ－２、ＣＴ－１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＧＦ、ＣＴＬＡ－４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、サイトケラチン腫瘍関連抗原、ＤＡＮ、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、崩壊促進因子、ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－１）、Ｄｈｈ、ジゴキシン、ＤＮＡＭ－１、Ｄｎａｓｅ、Ｄｐｐ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、Ｄｔｋ、ＥＣＡＤ、ＥＤＡ、ＥＤＡ－Ａ１、ＥＤＡ－Ａ２、ＥＤＡＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＭＡ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＮＡ、エンドセリン受容体、エンケファリナーゼ、ｅＮＯＳ、Ｅｏｔ、エオタキシン１、ＥｐＣＡＭ、エフリンＢ２／ＥｐｈＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＣＣ、Ｅ－セレクチン、ＥＴ－１、第ＩＩａ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩｃ因子、第ＩＸ因子、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆａｓ、ＦｃＲ１、ＦＥＮ－１、フェリチン、ＦＧＦ、ＦＧＦ－１９、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ－８、ＦＧＦＲ、ＦＧＦＲ－３、フィブリン、ＦＬ、ＦＬＩＰ、Ｆｌｔ－３、Ｆｌｔ－４、卵胞刺激ホルモン、フラクタルカイン、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、Ｇ２５０、Ｇａｓ６、ＧＣＰ－２、ＧＣＳＦ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＤＦ、ＧＤＦ－１、ＧＤＦ－３（Ｖｇｒ－２）、ＧＤＦ－５（ＢＭＰ－１４、ＣＤＭＰ－１）、ＧＤＦ－６（ＢＭＰ－１３、ＣＤＭＰ－２）、ＧＤＦ－７（ＢＭＰ－１２、ＣＤＭＰ－３）、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＤＦ－９、ＧＤＦ－１５（ＭＩＣ－１）、ＧＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＧＦＡＰ、ＧＦＲａ－１、ＧＦＲ－アルファ１、ＧＦＲ－アルファ２、ＧＦＲ－アルファ３、ＧＩＴＲ、ＧＬＰ１、ＧＬＰ２、グルカゴン、Ｇｌｕｔ４、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ（ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ｇｐ１３０、ｇｐ７２、ＧＲＯ、ＧｎＲＨ、成長ホルモン放出因子、ハプテン（ＮＰ－ｃａｐまたはＮＩＰ－ｃａｐ）、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＣＣ、ＨＣＭＶｇＢエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ）ｇＨエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶＵＬ、造血成長因子（ＨＧＦ）、ＨｅｐＢｇｐ１２０、ヘパラナーゼ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ－２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ－３）、Ｈｅｒ４（ＥｒｂＢ－４）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ｇＢ糖タンパク質、ＨＳＶｇＤ糖タンパク質、ＨＧＦＡ、高分子メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、ＨＩＶｇｐ１２０、ＨＩＶＩＩＩＢｇｐ１２０Ｖ３ループ、ＨＬＡ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＭＦＧＰＥＭ、ＨＲＧ、Ｈｒｋ、心臓ミオシン、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、成長ホルモン（ＧＨ）、ＨＶＥＭ、１－３０９、ＩＡＰ、ＩＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－３、ＩＣＥ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮｇ、Ｉｇ、ＩｇＡ受容体、ＩｇＥ、ＩＧＦ、ＩＧＦ結合タンパク質、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＧＦＢＰ、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、インターロイキン受容体（例えば、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１２Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２３Ｒ、ＩＬ－２５Ｒ、ＩＬ－３１Ｒ、ＩＬ－３３Ｒ）、インターフェロン（ＩＮＦ）－アルファ、ＩＮＦ－ベータ、ＩＮＦ－ガンマ、インヒビン、ｉＮＯＳ、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、インスリン様成長因子１、インテグリンアルファ２、インテグリンアルファ３、インテグリンアルファ４、インテグリンアルファ４／ベータ１、インテグリンアルファ４／ベータ７、インテグリンアルファ５（アルファＶ）、インテグリンアルファ５／ベータ１、インテグリンアルファ５／ベータ３、インテグリンアルファ６、インテグリンベータ１、インテグリンベータ２、インターフェロンガンマ、ＩＰ－１０、Ｉ－ＴＡＣ、ＪＥ、カリクレイン２、カリクレイン５、カリクレイン６、カリクレイン１１、カリクレイン１２、カリクレイン１４、カリクレイン１５、カリクレインＬ１、カリクレインＬ２、カリクレインＬ３、カリクレインＬ４、ＫＣ、ＫＤＲ、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、ラミニン５、ＬＡＭＰ、ＬＡＰ、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在型ＴＧＦ－１、潜在型ＴＧＦ－１ｂｐ１、ＬＢＰ、ＬＤＧＦ、ＬＥＣＴ２、Ｌｅｆｔｙ、ルイスＹ抗原、ルイスＹ関連抗原、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－３、Ｌｆｏ、ＬＩＦ、ＬＩＧＨＴ、リポタンパク質、ＬＩＸ、ＬＫＮ、Ｌｐｔｎ、Ｌ－セレクチン、ＬＴ－ａ、ＬＴ－ｂ、ＬＴＢ４、ＬＴＢＰ－１、肺サーファクタント、黄体形成ホルモン、リンホトキシンベータ受容体、Ｍａｃ－１、ＭＡｄＣＡＭ、ＭＡＧ、ＭＡＰ２、ＭＡＲＣ、ＭＣＡＭ、ＭＣＡＭ、ＭＣＫ－２、ＭＣＰ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＤＣ、Ｍｅｒ、メタロプロテアーゼ、ＭＧＤＦ受容体、ＭＧＭＴ、ＭＨＣ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＩＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ、ＭＩＰ－１－アルファ、ＭＫ、ＭＭＡＣ１、ＭＭＰ、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－９、ＭＰＩＦ、Ｍｐｏ、ＭＳＫ、ＭＳＰ、ムチン（Ｍｕｃ１）、ＭＵＣ１８、ミュラー管阻害因子、Ｍｕｇ、ＭｕＳＫ、ＮＡＩＰ、ＮＡＰ、ＮＡＶ１．７、ＮＣＡＤ、Ｎ－カドヘリン、ＮＣＡ９０、ＮＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ネプリライシン、ニューロトロフィン－３、－４、または－６、ニュールツリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ－ベータ、ｎＮＯＳ、ＮＯ、ＮＯＳ、Ｎｐｎ、ＮＲＧ－３、ＮＴ、ＮＴＮ、ＯＢ、ＯＧＧ１、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＳＭ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ｐ１５０、ｐ９５、ＰＡＤＰｒ、副甲状腺ホルモン、ＰＡＲＣ、ＰＡＲＰ、ＰＢＲ、ＰＢＳＦ、ＰＣＡＤ、Ｐ－カドヘリン、ＰＣＮＡ、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ、ＰＤＫ－１、ＰＥＣＡＭ、ＰＥＭ、ＰＦ４、ＰＧＥ、ＰＧＦ、ＰＧＩ２、ＰＧＪ２、ＰＩＮ、ＰＬＡ２、胎盤性アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、Ｐ１ＧＦ、ＰＬＰ、ＰＰ１４、プロインスリン、プロレラキシン、プロテインＣ、ＰＳ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＴＥＮ、ＰＴＨｒｐ、Ｐｔｋ、ＰＴＮ、Ｒ５１、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ、レラキシンＡ鎖、レラキシンＢ鎖、レニン、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆ、ＲＳＶＦｇｐ、Ｒｅｔ、リウマトイド因子、ＲＬＩＰ７６、ＲＰＡ２、ＲＳＫ、Ｓ１００、ＳＣＦ／ＫＬ、ＳＤＦ－１、ＳＥＲＩＮＥ、血清アルブミン、ｓＦＲＰ－３、Ｓｈｈ、ＳＩＧＩＲＲ、ＳＫ－１、ＳＬＡＭ、ＳＬＰＩ、ＳＭＡＣ、ＳＭＤＦ、ＳＭＯＨ、ＳＯＤ、ＳＰＡＲＣ、Ｓｔａｔ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ－ＩＩ、ＴＡＣＥ、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質－７２）、ＴＡＲＣ、ＴＣＡ－３、Ｔ細胞受容体（例えば、Ｔ細胞受容体アルファ／ベータ）、ＴｄＴ、ＴＥＣＫ、ＴＥＭ１、ＴＥＭ５、ＴＥＭ７、ＴＥＭ８、ＴＥＲＴ、精巣ＰＬＡＰ様アルカリホスファターゼ、ＴｆＲ、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータＰａｎ特異
的、ＴＧＦ－ベータＲ１（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲ１１、ＴＧＦ－ベータＲＩＩｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、トロンビン、胸腺Ｃｋ－１、甲状腺刺激ホルモン、Ｔｉｅ、ＴＩＭＰ、ＴＩＱ、組織因子、ＴＭＥＦＦ２、Ｔｍｐｏ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＲＡＩＬＲ１Ａｐｏ－２、ＤＲ４）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ（ＴＲＡＩＬＲ２ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ－２Ａ、ＴＲＩＣＫ－Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＲＡＩＬＲ３ＤｃＲ１、ＬＩＴ、ＴＲＩＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＲＡＩＬＲ４ＤｃＲ２、ＴＲＵＮＤＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ（ＲＡＮＫＯＤＦＲ、ＴＲＡＮＣＥＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ（ＯＰＧＯＣＩＦ、ＴＲ１）、ＴＮＦＲＳＦ１２（ＴＷＥＡＫＲＦＮ１４）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＡＣＩ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＢＡＦＦＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭＡＴＡＲ、ＨｖｅＡ、ＬＩＧＨＴＲ、ＴＲ２）、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＢＣＭＡ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲＡＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＲＯＹＴＡＪ、ＴＲＡＤＥ）、ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ（ＲＥＬＴ）、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ（ＴＮＦＲ１ＣＤ１２０ａ、ｐ５５－６０）、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ（ＴＮＦＲＩＩＣＤ１２０ｂ、ｐ７５－８０）、ＴＮＦＲＳＦ２６（ＴＮＦＲＨ３）、ＴＮＦＲＳＦ３（ＬＴｂＲＴＮＦＲＩＩＩ、ＴＮＦＣＲ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０ＡＣＴ３５、ＴＸＧＰ１Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０ｐ５０）、ＴＮＦＲＳＦ６（ＦａｓＡｐｏ－１、ＡＰＴ１、ＣＤ９５）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＤｃＲ３Ｍ６８、ＴＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＤＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ２２（ＤＣＴＲＡＩＬＲ２ＴＮＦＲＨ２）、ＴＮＦＲＳＴ２３（ＤＣＴＲＡＩＬＲ１ＴＮＦＲＨ１）、ＴＮＦＲＳＦ２５（ＤＲ３Ａｐｏ－３、ＬＡＲＤ、ＴＲ－３、ＴＲＡＭＰ、ＷＳＬ－１）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬＡｐｏ－２リガンド、ＴＬ２）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫリガンドＯＤＦ、ＯＰＧリガンド）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫＡｐｏ－３リガンド、ＤＲ３リガンド）、ＴＮＦＳＦ１３（ＡＰＲＩＬＴＡＬＬ２）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＢＡＦＦＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ２０）、ＴＮＦＳＦ１４（ＬＩＧＨＴＨＶＥＭリガンド、ＬＴｇ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８（ＧＩＴＲリガンドＡＩＴＲリガンド、ＴＬ６）、ＴＮＦＳＦ１Ａ（ＴＮＦ－ａＣｏｎｅｃｔｉｎ、ＤＩＦ、ＴＮＦＳＦ２）、ＴＮＦＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ－ｂＬＴａ、ＴＮＦＳＦ１）、ＴＮＦＳＦ３（ＬＴｂＴＮＦＣ、ｐ３３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンドｇｐ３４、ＴＸＧＰ１）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンドＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＨＩＧＭ１、ＩＭＤ３、ＴＲＡＰ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓリガンドＡｐｏ－１リガンド、ＡＰＴ１リガンド）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンドＣＤ７０）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンドＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンドＣＤ１３７リガンド）、ＴＰ－１、ｔ－ＰＡ、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬＲ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トランスフェリング受容体、ＴＲＦ、Ｔｒｋ（例えば、ＴｒｋＡ）、ＴＲＯＰ－２、ＴＳＧ、ＴＳＬＰ、腫瘍関連抗原ＣＡ１２５、ルイスＹ関連炭水化物を発現する腫瘍関連抗原、ＴＷＥＡＫ、ＴＸＢ２、Ｕｎｇ、ＵＰＡＲ、ｕＰＡＲ－１、ウロキナーゼ、ＶＣＡＭ、ＶＣＡＭ－１、ＶＥＣＡＤ、ＶＥ－カドヘリン、ＶＥ－カドヘリン－２、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｉｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）、ＶＥＧＩ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ－１、ＶＬＡ－４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ－１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、ならびにホルモン及び成長因子の受容体。

いくつかの実施形態において、結合ドメインは、イヌにおいて、１つ以上の治療標的または抗原に特異的に結合し、例えば、限定するものではないが、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＳ、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＡＮＧ、Ａｎｇ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、ｂ－ＥＣＧＦ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４７、ＣＯＸ、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＰＯ、卵胞刺激ホルモン、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＬＰ１、ＧＬＰ２、ＧｎＲＨ、成長ホルモン放出因子、ＩｇＥ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、インターロイキン受容体（例えば、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１２Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２３Ｒ、ＩＬ－２５Ｒ、ＩＬ－３１Ｒ、ＩＬ－３３Ｒ）、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在型ＴＧＦ－１、潜在型ＴＧＦ－１ｂｐ１、ＬＦＡ－１、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ－ベータ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータＰａｎ特異的、ＴＧＦ－ベータＲ１（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲ１１、ＴＧＦ－ベータＲＩＩｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｉｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、及びＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）などが挙げられる。

いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、タンパク質を含むことができ、ここで、タンパク質は、治療用タンパク質、例えば、ＥＰＯ、ＣＴＬＡ４、ＬＦＡ３、ＶＥＧＦＲ１／ＶＥＧＦＲ３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、またはトロンボポエチン結合ペプチドである。いくつかの実施形態において、治療用タンパク質は、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＩＩＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＳ、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＡＮＧ、Ａｎｇ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、ｂ－ＥＣＧＦ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４７、ＣＯＸ、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＰＯ、卵胞刺激ホルモン、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＬＰ１、ＧＬＰ２、ＧｎＲＨ、成長ホルモン放出因子、ＩｇＥ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、インターロイキン受容体（例えば、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１２Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２３Ｒ、ＩＬ－２５Ｒ、ＩＬ－３１Ｒ、ＩＬ－３３Ｒ）、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在型ＴＧＦ－１、潜在型ＴＧＦ－１ｂｐ１、ＬＦＡ－１、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ－ベータ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータＰａｎ特異的、ＴＧＦ－ベータＲ１（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲ１１、ＴＧＦ－ベータＲＩＩｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｉｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、またはＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）である。

いくつかの実施形態において、治療用タンパク質は、本明細書に記載される任意のタンパク質である。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、本明細書に記載されるイヌＩｇＧＣＨ２ドメイン、ＩｇＧＣＨ３ドメイン、またはＩｇＧＦｃ領域を更に含む。修飾されたイヌＩｇＧＣＨ２ドメイン、ＩｇＧＣＨ３ドメイン、またはＩｇＧＦｃ領域は、ｉｎｖｉｖｏで、治療用タンパク質の半減期を増大させることができる。

医薬組成物
本明細書に記載される１つまたは複数のポリペプチドの医薬組成物または無菌組成物を調製するために、１つまたは複数のポリペプチドは、薬学的に許容される担体または賦形剤とともに混合され得る。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：ＮａｔｉｏｎａｌＦｏｒｍｕｌａｒｙ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８４）参照）。

治療薬及び診断薬の製剤は、許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液または懸濁液の形態に調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔａｌ．（２００１）ＧｏｏｄｍａｎａｎｄＧｉｌｍａｎ’ｓＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓ，ｅｔａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：ＰａｒｅｎｔｅｒａｌＭｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：ＤｉｓｐｅｒｓｅＳｙｓｔｅｍｓ，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒａｎｄＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）ＥｘｃｉｐｉｅｎｔＴｏｘｉｃｉｔｙａｎｄＳａｆｅｔｙ，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．参照）。一実施形態において、本発明の１つまたは複数のポリペプチドは、ｐＨ５～６の酢酸ナトリウム溶液で適切な濃度に希釈され、張性のためにＮａＣｌまたはスクロースが添加される。安定性を高めるために、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０などの追加の剤が添加されてもよい。

単独または別の薬剤と組み合わせて投与されるポリペプチド組成物の毒性及び治療有効性は、細胞培養または実験動物における標準的な製薬手順、例えば、ＬＤ_５０（集団の５０％にとって致死的な用量）及びＥＤ_５０（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するための手順によって決定することができる。毒性と治療効果との間の用量の比が治療指数である（ＬＤ_５０／ＥＤ_５０）。特定の態様において、高い治療指数を呈する１つまたは複数のポリペプチドが望ましい。これらの細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、イヌに使用するための投与量の範囲を導き出すのに使用することができる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ_５０に入る循環濃度の範囲内である。投与量は、採用される剤形及び投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。

投与の様式は、様々であり得る。好適な投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；筋肉内、皮下、皮内、髄内、髄腔内、直接脳（心）室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮、または動脈内が含まれる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、注射などの侵襲性経路によって投与することができる。更なる実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腫瘍内、または吸入、エアロゾル送達によって投与される。

本明細書で開示される医薬組成物は、注入によって投与されてもよい。医薬組成物を投与するよく知られているインプラント及びモジュールの形態の例としては、制御された速度で薬剤を分注するための埋め込み可能な微量注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；正確な注入速度で薬物を送達するための薬剤注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のための埋め込み可能な可変流量の注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透性薬物送達系を開示する米国特許第４，４３９，１９６号が挙げられる。他の多くのそのようなインプラント、送達系、及びモジュールは、当業者によく知られている。

あるいは、１つまたは複数のポリペプチドは、全身的ではなく局所的に投与されてもよく、例えば、免疫病理学によって特徴付けられる関節炎の関節または病原体誘発病変に、多くの場合、デポーまたは持続放出性製剤で、抗体を直接注射することによりなされてもよい。更に、１つまたは複数のポリペプチドは、標的化された薬物送達系で投与されてもよく、例えば、免疫病理学によって特徴付けられる関節炎の関節または病原体誘発病変を標的とする、例えば、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームで投与されてもよい。リポソームは、患部組織に対して標的化され、患部組織によって選択的に取り込まれる。

投与レジメンは、限定するものではないが、治療されるイヌの年齢、体重、及び体調、治療用抗体の血清または組織回転率、症状のレベル、１つまたは複数の治療用ポリペプチドの免疫原性、ならびに生物学的マトリックスにおける標的細胞のアクセス容易性を含む、いくつかの因子に依存する。好ましくは、投与レジメンは、標的とする疾患状態の改善をもたらすのに十分な１つまたは複数の治療用ポリペプチドを送達し、同時に望ましくない副作用を最小化するものである。したがって、送達される生物学的製剤の量は、１つまたは複数の特定の治療用ポリペプチド及び治療される状態の重症度に部分的に依存する。治療用抗体の適切な用量を選択する際のガイダンスは、入手可能である（例えば、ＷａｗｒｚｙｎｃｚａｋＡｎｔｉｂｏｄｙＴｈｅｒａｐｙ，ＢｉｏｓＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ（１９９６）；Ｍｉｌｇｒｏｍｅｔａｌ．ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３（１９９９）；Ｓｌａｍｏｎｅｔａｌ．ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２（２００１）；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚｅｔａｌ．ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９（２０００）；Ｇｈｏｓｈｅｔａｌ．ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２（２００３）；Ｌｉｐｓｋｙｅｔａｌ．ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２（２０００）参照）。

１つまたは複数のポリペプチドの適切な用量の決定は、例えば、当該技術分野において治療に影響することが知られているまたは推定されているパラメーターまたは因子を使用して、当業者によってなされる。一般に、投与は、至適用量よりもいくらか少ない量から開始され、その後、あらゆる負の副作用に対して望ましいまたは最適な効果が達成されるまで、少量ずつ増量される。重要な診断指標には、例えば、炎症の症状または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。

核酸、ベクター、宿主細胞、及び作製方法
本開示はまた、本明細書に記載される１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸、１つまたは複数の核酸を含む１つまたは複数のベクター、及び１つもしくは複数の核酸または１つもしくは複数のベクターを含む宿主細胞を包含する。

本明細書に記載される１つまたは複数のポリペプチドは、細菌細胞または真核細胞で産生され得る。いくつかのポリペプチド、例えば、Ｆａｂ’は、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞で産生することができる。ポリペプチドはまた、形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ、２９３Ｔ、Ｈｅｌａ）などの真核細胞で産生することもできる。加えて、ポリペプチド（例えば、ｓｃＦｖ）は、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３－３５（２００１）参照）、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母菌細胞で発現させることができる。目的の抗体を産生させるために、１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを構築し、１つまたは複数の発現ベクターに導入し、次いで、好適な宿主細胞で発現させる。発現を改善するために、遺伝子のヌクレオチド配列は、アミノ酸配列を変えることなく（または最小限の変更、例えば、重鎖または軽鎖のＣ末端残基の除去）、再コード化することができる。再コード化の対象となり得る領域には、翻訳開始、コドン使用頻度、及び意図されないｍＲＮＡスプライシング候補に関連するものが含まれる。本明細書に記載されるＦｃ領域バリアントをコードするポリヌクレオチドは、当業者には容易に想定されるであろう。

標準的な分子生物学技術を使用して、組み換え発現ベクター（複数可）を調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、ポリペプチド（例えば、抗体）を回収することができる。

１つまたは複数のポリペプチドが細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現される場合、発現ベクターは、細菌細胞におけるベクターの増幅を可能にする特徴を有していなければならない。更に、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１－ＢｌｕｅなどのＥ．ｃｏｌｉが宿主として使用される場合、ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉでの十分な発現を可能にし得るプロモーター、例えば、ｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，３４１：５４４－５４６（１９８９）、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１－１０４３（１９８８））、またはＴ７プロモーターを有している必要がある。そのようなベクターの例としては、例えば、Ｍ１３ベクター、ｐＵＣシリーズベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ－５Ｘ－１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターが使用される場合は、宿主は、好ましくは、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が挙げられる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含有し得る。Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズムへの産生の場合、ｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））が抗体分泌のためのシグナル配列として使用され得る。細菌発現の場合、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法を使用して、細菌細胞に発現ベクターを導入することができる。

１つまたは複数のポリペプチドがＣＨＯ、ＣＯＳ、及びＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞で発現される場合、発現ベクターは、これらの細胞での発現に必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））（例えば、初期シミアンウイルス４０プロモーター）、ＭＭＬＶ－ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス前初期プロモーター）を含む。Ｆｃ領域バリアントをコードする核酸配列に加えて、組み換え発現ベクターは、宿主細胞でベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択マーカー遺伝子などの追加の配列を保有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号及び同第５，１７９，０１７号）。例えば、典型的に、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択マーカーを含むベクターの例としては、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。

いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、哺乳動物細胞で産生される。１つまたは複数のポリペプチドを発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（ＵｒｌａｕｂａｎｄＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６－４２２０に記載されているｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含み、例えば、ＫａｕｆｍａｎａｎｄＳｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１６２１に記載されているようにＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用される）、ヒト胎児腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、及びトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物に由来する細胞が挙げられる。例えば、細胞は、乳腺上皮細胞である。

抗体発現のための例示的な系において、抗体の抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターがリン酸カルシウムを介したトランスフェクションによってｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞に導入される。組み換え発現ベクター内において、抗体の重鎖及び軽鎖遺伝子は、高い遺伝子転写レベルを駆動するために、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来するもの、例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント）に作動可能にそれぞれ連結される。また、組み換え発現ベクターは、ＤＨＦＲ遺伝子を保有しており、これにより、ベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を、メトトレキサート選択／増幅を使用して選択することが可能となる。選択された形質転換宿主細胞は、抗体の重鎖及び軽鎖が発現するように培養され、培養培地から抗体が回収される。

治療方法
本明細書で開示される１つまたは複数のポリペプチドは、任意の疾患または障害の治療または予防を、それを必要とするイヌにおいて行うために使用することができる。本発明は、繰り返し投与が必要な慢性状態の治療に特に有用である。タンパク質治療薬の半減期が増加するため、投与頻度の減少及び／または用量レベルの減少が可能となり得る。

いくつかの実施形態において、治療または予防される疾患、障害、状態または症状は、アレルギー性疾患、慢性疼痛、急性疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、内分泌疾患、胃腸疾患、骨格／筋骨格疾患、心血管疾患、神経系疾患、腎臓疾患、代謝疾患、免疫疾患、遺伝／遺伝性疾患、生殖機能関連障害、感染症またはがんである。ある特定の実施形態において、治療または予防される疾患または障害は、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、食物アレルギー、骨関節痛、周術期の疼痛、歯痛、がん疼痛、関節炎、貧血、肥満、または糖尿病である。

抗体は、疾患の治療または予防だけでなく、正常な生物学的機能を調節するため、例えば、生殖能力または行動を管理するためにも使用され得る。

診断
本明細書で開示される１つまたは複数のポリペプチドはまた、様々な診断用途、例えば、イヌが任意の特定の疾患または障害を有するかどうかを決定するために使用することができる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、結合ドメインを含み得る。結合ドメインは、本明細書に記載されるタンパク質、サブユニット、ドメイン、モチーフ、及び／またはエピトープ（例えば、がん細胞のマーカー）に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、標識基を更に含む。一般に、標識基は、それらが検出されるアッセイに応じて、様々な種類に分けられる：ａ）放射性同位体または重元素同位体であり得る同位体標識；ｂ）磁気標識（例えば、磁気粒子）；ｃ）酸素還元活性部分；ｄ）光学色素；酵素基（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；ｅ）ビオチン化基；及びｆ）二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体用の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグなど）。いくつかの実施形態において、標識基は、潜在的な立体障害を減少させるために、様々な長さのスペーサーアームを介して抗体に結合される。タンパク質を標識するための様々な方法が当該技術分野において知られており、本発明を実施する際に使用され得る。

いくつかの実施形態において、標識基は、プローブ、色素（例えば、蛍光色素）、または放射性同位体（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^２２Ｎａ、^３６Ｃｌ、^３５Ｓ、^３３Ｐ、または^１２５Ｉ）である。

特定の標識にはまた、光学色素も含まれ、限定するものではないが、発色団、蛍光体及びフルオロフォアが含まれ、後者は、多くの場合、特異的である。フルオロフォアは、「小分子」の蛍光体、またはタンパク質性の蛍光体のいずれかであり得る。

蛍光標識は、その固有の蛍光特性を介して検出され得る任意の分子であり得る。好適な蛍光標識には、フルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリスロシン、クマリン、メチル－クマリン、ピレン、Ｍａｌａｃｉｔｅｇｒｅｅｎ、スチルベン、ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ、ＣａｓｃａｄｅＢｌｕｅＪ、ＴｅｘａｓＲｅｄ、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩＰＹＦＬ、ＬＣＲｅｄ６４０、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、ＬＣＲｅｄ７０５、Ｏｒｅｇｏｎｇｒｅｅｎ、Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ色素（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ３５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４３０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５４６、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６６０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０）、ＣａｓｃａｄｅＢｌｕｅ、ＣａｓｃａｄｅＹｅｌｌｏｗ及びＲ－フィコエリトリン（ＰＥ）（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）、ＦＩＴＣ、ローダミン、及びＴｅｘａｓＲｅｄ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７（ＡｍｅｒｓｈａｍＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐａ．）が含まれるが、これらに限定されない。好適な光学色素は、フルオロフォアを含め、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓＨａｎｄｂｏｏｋｂｙＲｉｃｈａｒｄＰ．Ｈａｕｇｌａｎｄに記載されており、その全体が参照により本明細書に援用される。

好適なタンパク質性蛍光標識にはまた、緑色蛍光タンパク質（Ｒｅｎｉｌｌａ、Ｐｔｉｌｏｓａｒｃｕｓ、またはＡｅｑｕｏｒｅａ種のＧＦＰを含む）（Ｃｈａｌｆｉｅｅｔａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６３：８０２－８０５）、ＥＧＦＰ（ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｕ５５７６２）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ、ＱｕａｎｔｕｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．１８０１ｄｅＭａｉｓｏｎｎｅｕｖｅＢｌｖｄ．Ｗｅｓｔ，８ｔｈＦｌｏｏｒ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，ＣａｎａｄａＨ３Ｈ１Ｊ９；Ｓｔａｕｂｅｒ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ２４：４６２－４７１；Ｈｅｉｍｅｔａｌ．，１９９６，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．６：１７８－１８２）、改良型黄色蛍光タンパク質（ＥＹＦＰ，ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、ルシフェラーゼ（Ｉｃｈｉｋｉｅｔａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４０８－５４１７）、βガラクトシダーゼ（Ｎｏｌａｎｅｔａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２６０３－２６０７）及びＲｅｎｉｌｌａ（ＷＯ９２／１５６７３、ＷＯ９５／０７４６３、ＷＯ９８／１４６０５、ＷＯ９８／２６２７７、ＷＯ９９／４９０１９、米国特許第５，２９２，６５８号、同第５，４１８，１５５号、同第５，６８３，８８８号、同第５，７４１，６６８号、同第５，７７７，０７９号、同第５，８０４，３８７号、同第５，８７４，３０４号、同第５，８７６，９９５号、同第５，９２５，５５８号）が含まれるが、これらに限定されない。本段落中において上で引用される参考文献は全て、その全体が参照により本明細書に明示的に援用される。

アッセイ
Ｆｃ_γＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩ結合：
ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩへの結合は、ＡＤＣＣを媒介する抗体の能力の指標である。抗体のこの特性を評価するために、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩに対する抗体の結合を測定するアッセイが当該技術分野において知られている方法を使用して実施され得る。
Ｃ１ｑ結合：

補体の第１成分であるＣ１ｑへの結合は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介する抗体の能力の指標である。抗体のこの特性を評価するために、Ｃ１ｑに対する抗体の結合を測定するアッセイが当該技術分野において知られている方法を使用して実施され得る。

半減期：
抗体の半減期を測定する方法は、当該技術分野においてよく知られている。例えば、Ｂｏｏｔｈｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ，１０（７）：１０９８－１１１０（２０１８）を参照されたい。例示的な動物モデルとしては、非ヒト霊長類モデル及びトランスジェニックマウスモデルが挙げられる。トランスジェニックマウスモデル（例えば、Ｔｇ３２またはＴｇ２７６トランスジェニックマウス）は、マウスＦｃＲｎアルファ鎖が欠損しており、ヒトＦｃＲｎアルファ導入遺伝子を発現することができる（例えば、構成性プロモーターの制御下で）。ヒトＦｃＲｎアルファ鎖は、マウスβ２－ミクログロブリンタンパク質とｉｎｖｉｖｏで対合し、機能的なキメラＦｃＲｎヘテロ二量体を形成することができる。一例として、イヌ抗体の半減期は、イヌモデルに抗体を注射し、ある一定期間にわたって血清中の抗体レベルを測定することによって測定することができる。

実施例１：イヌＩｇＧＢのＣＨ２及びＣＨ３ドメインのアラニンスキャニング変異導入
アラニンスキャニング変異導入（ＭｏｒｒｉｓｏｎａｎｄＷｅｉｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５：３０２－３０７（２００１））を、ＣＨ２ドメインの残基２５０、２５１、２５２、２５４、２５６、２８５、２８６、３０７、３０９、３１１、３１５と、ＣＨ３ドメインの残基３７８、３８０、４２８、４３０、４３３、４３４、４３５、及び４３６とに実施した。この実験のために、イヌＩｇＧＢのＣＨ２及びＣＨ３ドメインの野生型（ｗｔ）配列を合成し、変異導入の鋳型として使用した。位置２５４を除く特定の各位置を、変更をコードするプライマーを使用したＰＣＲ変異導入によって、個別にアラニンに変更した。位置２５４は、野生型配列ではアラニンであり、セリンに変更した。ＰＣＲ産物をＧｅｎＳｃｒｉｐｔＦＡＳＥＢＡプラスミドにサブクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換し、バリアントの存在について配列を確認した。ＣＨ２ドメインの上流は、アルブミンに対してｐＭの親和性を有するＳＡＳＡ（血清アルブミンに対する単一ドメイン抗体）タグである（例えば、ＵＳ２０１３／０１２９７２７Ａ１参照）。ＰｅｌＢ（ペクチン酸リアーゼＢ）シグナルペプチドは、Ｎ末端にあり、Ｆｃの培地への分泌を促進する。ＣＨ２－ＣＨ３タンパク質の発現は、Ｌａｃプロモーターによって制御した。馴化培地からの上清を、ｐＨ５．５におけるイヌＦｃＲｎ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２Ｒ０Ｌ６［ＦｃＲｎ］及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２ＲＮ１０［イヌベータ－２－ミクログロブリン］）への結合について、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して解析した。

Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋを使用したＳＰＲ解析では、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をＣＭ５センサーチップに固定した。フローセル１及び２のセンサーチップ表面を、新たに混合した５０ｍｍｏｌ／ＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド及び２００ｍｍｏｌ／Ｌの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩によって、４２０秒（１０μＬ／分）かけて活性化させた。その後、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈したＢＳＡをフローセル２に注入してコンジュゲーションを達成し、フローセル１をブランクとした。アミンカップリング反応後、チップ表面上に残存する活性カップリング部位を、１ｍＭエタノールアミン塩酸塩を４２０秒注入してブロックした。結合実験のためのランニング緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ５．５）であり、２５℃で実施した。アラニンバリアントの上清をチップ表面に注入し、固定したＢＳＡにＳＡＳＡタグを介して６０秒かけて捕捉させた。４００ｎＭのイヌＦｃＲｎを１２０秒間注入し、解離をランニング緩衝液で１２０秒間行った。ＢＳＡの固定化フェーズの流量は、１０μｌ／分であり、会合及び解離フェーズの流量は、３０μｌ／分であった。データは全て、Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋ評価ソフトウェアバージョン１．１を使用して処理した。表にしたデータを表３に示す。最後の縦列には、野生型の平均ＫＤをバリアントＫＤで割ったものが含まれる。センサーグラムを図７Ａ～７Ｕに示す。

実施例２：選択された位置でのＮＮＫ飽和変異導入ライブラリーの生成及び個々のバリアントの解析
ＮＮＫ飽和変異導入法は、所望の位置に２０個の可能な全てのアミノ酸を生成するのに効果的な戦略である（Ｈｏｇｒｅｆｅｅｔａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．３３：１１５８－１１６５（２００２））。位置２５０、２５２、２５４、３０９、３１１、３７８、３８０、及び４３４（ＥＵナンバリング）の個々のＮＮＫライブラリーを生成した。この方法のために、特定位置のＮＮＫ（Ｎ＝Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｔ、Ｋ＝Ｇ／Ｔ）プライマーをＱｕｉｋＣｈａｎｇｅＳｉｔｅ－ＤｉｒｅｃｔｅｄＭｕｔａｇｅｎｅｓｉｓＫｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ）で使用した。各ライブラリーから得た９０個の個々の形質転換体の上清を、ｐＨ５．５におけるイヌＦｃＲｎへの結合について、実施例１に記載のＢｉａｃｏｒｅ法を使用してアッセイした。唯一の違いは、アッセイで使用したイヌＦｃＲｎの濃度が４００ｎＭではなく２００ｎＭだったことである。ＮＮＫライブラリーバリアントの全てのセンサーグラムを図８～１５に示す。

位置２５０のＮＮＫライブラリーについては、いずれのバリアントもｐＨ５．５でイヌＦｃＲｎへの結合の増加を示さなかった。バリアントＴ２５０Ｅ及びＴ２５０Ｑならびに野生型Ｆｃのデータを表４に示す。競合結合アッセイでは、ヒトＩｇＧ２のバリアントＴ２５０Ｅ及びＴ２５０Ｑが、野生型ヒトＩｇＧ２Ｆｃと比較して、ｐＨ６．０でヒトＦｃＲｎに強く結合することが示されている（Ｈｉｎｔｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３－６２１６（２００４））。

位置２５２のＮＮＫライブラリーについては、Ｌ２５２Ｙ及びＬ２５２Ｍのバリアントのみが、ｐＨ５．５でイヌＦｃＲｎに対して、見かけ上高い親和性を有した（以下の表５参照）。９０個の形質転換体には、Ｌ２５２Ｆバリアントが存在しなかったため、このバリアントでの結合データは得られなかった。

位置２５４のＮＮＫライブラリーについては、試験したどのバリアントも、ｐＨ５．５でイヌＦｃＲｎに対して、見かけ上高い親和性を持たなかった。Ａ２５４Ｔバリアントのデータを表６に示す。対応するヒトＩｇＧ１のバリアントでは、ＹＴＥバリアント（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）が使用されており、ｐＨ６．０でヒトＦｃＲｎに対する親和性が増加し（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１－５１８０（２００２））、前臨床モデル及びヒトにおいてヒトＩｇＧの半減期を増加させることが示されている（Ｂｏｒｒｏｋｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９０：４２８２－４２９０（２０１５）；Ｒｏｂｂｉｅｅｔａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．ＡｇｅｎｔｓＣｈ．５７：６１４７－６１５３（２０１３））。９０個の形質転換体には、Ａ２５４Ｈバリアントが存在しなかったため、このバリアントでのデータは得られなかった。

位置３０９及び３１１のＮＮＫライブラリーについては、試験したどのバリアントも、ｐＨ５．５でイヌＦｃＲｎに対して、見かけ上高い親和性を持たなかった。バリアントＧ３０９Ｐ及びＱ３１１Ｖのデータを表７及び８に示す。対応するヒトＩｇＧ１のヒトバリアント（Ｌ３０９Ｐ及びＱ３１１Ｖ）は、他のバリアントとのいくつかの組み合わせにおいて、ｐＨ６．０でヒトＦｃＲｎに対してより高い親和性を有することが示されている（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１－５１８０（２００２）；Ｂｏｏｔｈｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ，１０（７）：１０９８－１１１０（２０１８））。バリアントＧ３０９Ｄ、Ｇ３０９Ｋ及びＱ３１１Ｄは、ＮＮＫライブラリーで同定されなかったため、ＦｃＲｎ結合について試験しなかった。

位置３７８及び３８０のＮＮＫライブラリーについては、試験したどのバリアントも、ｐＨ５．５でイヌＦｃＲｎに対して、見かけ上高い親和性を持たなかった。バリアントＤ３７８Ｖのデータを表９に示す。対応するヒトＩｇＧ１のバリアントでは、他のＩｇＧバリアントとの組み合わせが使用されており、野生型Ｆｃと比較して、ｐＨ６．０でヒトＦｃＲｎに対してより高い親和性を示し、トランスジェニックヒトＦｃＲｎマウスにおいて、ヒトＩｇＧの半減期が延長した（Ｍｏｎｎｅｔｅｔａｌ．，ＭＡＢＳ．６：４２２－４３６（２０１４）；Ｂｏｏｔｈｅｔａｌ．，２０１８）。また、バリアントＥ３８０Ａのデータを表１０に示す。対応するヒトＩｇＧのバリアントは、ｐＨ６．０でヒトＦｃＲｎに対してより高い結合親和性を有することが示されている（Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４（２００１））。バリアントＤ３７８Ｅ、Ｄ３７８Ｉ、Ｄ３７８Ｋ、及びＥ３８０Ｆは、ＮＮＫライブラリーに存在せず、イヌＦｃＲｎに対する結合についてスクリーニングしなかった。

位置４３４のＮＮＫライブラリーについては、表１１に示されるように、バリアントＮ４３４Ｙ、Ｎ４３４Ｗ、及びＮ４３４Ｒが、ｐＨ５．５でイヌＦｃＲｎに対してより高い親和性を有した。バリアントＮ４３４Ｓ及びＮ４３４Ａは、対応するヒトＩｇＧ１バリアントとは異なり、低いｐＨでイヌＦｃＲｎに対してより高い親和性を持たなかった（Ｐｅｔｋｏｖａｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：１７５９－１７６９（２００６）；Ｙｅｕｎｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２：７６６３－７６７１（２００９）；Ｚａｌｅｖｓｋｙｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：１５７－１５９（２０１０）；Ｄｅｎｇｅｔａｌ．，ＤｒｕｇＭｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．３８：６００－６０５（２０１０））。位置４３４でスクリーニングしたＮＮＫライブラリーは、Ｎ４３４Ｆバリアントを含有しなかったため、このバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合は試験しなかった。

実施例３：Ｌ２５２Ｙ、Ｎ４３４Ｙ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｒ、Ｎ４３４Ｈ及びＹＴＥ（Ｌ２５２Ｙ／Ａ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）バリアントならびに野生型Ｆｃの結合カイネティクス
ｐＨ５．５でイヌＦｃＲｎに対してより高い親和性を示したいくつかのイヌＩｇＧＢバリアントについては、イヌＦｃＲｎに対する結合カイネティクスを更に評価した。この試験では、ｐＨ５．５及びｐＨ７．４における、バリアント（Ｌ２５２Ｙ、Ｎ４３４Ｙ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｒ、Ｎ４３４Ｈ）、ＹＴＥバリアント（Ｌ２５２Ｙ／Ａ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）及び野生型イヌＦｃのイヌＦｃＲｎへの結合を評価した。ｐＨ５．５条件でのＢｉａｃｏｒｅ法は、４つの濃度のＦｃＲｎ（１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を試験したことを除き、実施例１に記載したものと同じであり、これにより、より正確な結合カイネティクスが得られる。ｐＨ７．４のＢｉａｃｏｒｅ条件では、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ７．４）のランニング緩衝液を使用し、イヌＦｃＲｎの試験濃度は２００ｎＭであった。全てのバリアント（ＹＴＥを含む）及び野生型は、ｐＨ７．４でイヌＦｃＲｎに結合しなかった。ｐＨ５．５での結合カイネティクスを表１２に示し、センサーグラムを図１６Ａ～１６Ｅに示す。試験したバリアントは、野生型Ｆｃと比較して、ｐＨ５．５でイヌＦｃＲｎに対して増加した親和性を示した。

実施例４：選択された位置でのＮＮＫ飽和変異導入ライブラリーの生成及び個々のバリアントの解析
イヌＩｇＧＢ（配列番号１０）のＣＨ２及びＣＨ３ドメインの野生型（ｗｔ）配列を合成し、ＮＮＫ変異導入の鋳型として使用した。ＮＮＫ飽和変異導入法は、所望の位置に２０個の可能な全てのアミノ酸を生成するのに効果的な戦略である（Ｈｏｇｒｅｆｅｅｔａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．３３：１１５８－１１６５（２００２））。位置２８６、３１２、４２６、及び４３６（ＥＵナンバリング）の個々のＮＮＫライブラリーを生成した。特定位置のＮＮＫ（Ｎ＝Ａ／Ｃ／Ｇ／Ｔ、Ｋ＝Ｇ／Ｔ）プライマーをＱｕｉｋＣｈａｎｇｅＳｉｔｅ－ＤｉｒｅｃｔｅｄＭｕｔａｇｅｎｅｓｉｓＫｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ）で使用した。ＰＣＲ産物をＧｅｎＳｃｒｉｐｔＦＡＳＥＢＡプラスミドにサブクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換し、バリアントの存在について配列を確認した。ＣＨ２ドメインの上流は、アルブミンに対してｐＭの親和性を有するＳＡＳＡ（血清アルブミンに対する単一ドメイン抗体）タグである（Ｚｈａｎｇ，Ｊ．；Ｗｕ，Ｓ．；Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｓｙｓｔｅｍｓｆｏｒｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ．２０１３年米国特許出願）。ＳＡＳＡ抗体は、以下に記載されるセンサーチップ表面へのＦｃの捕捉を可能にするものである。ＰｅｌＢ（ペクチン酸リアーゼＢ）シグナルペプチドは、Ｎ末端にあり、Ｆｃの培地への分泌を促進する。ＣＨ２－ＣＨ３タンパク質の発現は、Ｌａｃプロモーターによって制御した。馴化培地からの上清を、位置４２６及び３１２のバリアントについてはｐＨ５．５、位置２８６及び４３６のバリアントについてはｐＨ６．０で、イヌＦｃＲｎ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２Ｒ０Ｌ６［ＦｃＲｎ］及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２ＲＮ１０［イヌベータ－２－ミクログロブリン］）への結合について、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して解析した。

各ライブラリーから得た９０個の個々の形質転換体の上清を、以下に記載されるようにＢｉａｃｏｒｅ法を使用して、位置４２６及び３１２のバリアントについてはｐＨ５．５、位置２８６及び４３６のバリアントについてはｐＨ６．０で、イヌＦｃＲｎへの結合についてアッセイした。

Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋを使用したＳＰＲ解析では、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をＣＭ５センサーチップに固定した。フローセル１及び２のセンサーチップ表面を、新たに混合した５０ｍｍｏｌ／ＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド及び２００ｍｍｏｌ／Ｌの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩によって、４２０秒（１０μＬ／分）かけて活性化させた。その後、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈したＢＳＡをフローセル２に注入してコンジュゲーションを達成し、フローセル１をブランクとした。アミンカップリング反応後、チップ表面上に残存する活性カップリング部位を、１ｍＭエタノールアミン塩酸塩を４２０秒注入してブロックした。結合実験のためのランニング緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ５．５）であり、２５℃で実施した。バリアントの上清をチップ表面に注入し、固定したＢＳＡにＳＡＳＡタグを介して６０秒かけて捕捉させた。２００ｎＭのイヌＦｃＲｎを１２０秒間注入し、解離をランニング緩衝液で１２０秒間行った。ＢＳＡの固定化フェーズの流量は、１０μｌ／分であり、会合及び解離フェーズの流量は、３０μｌ／分であった。データは全て、Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋ評価ソフトウェアバージョン１．１を使用して処理した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサーグラムについては、図１７を参照されたい。

試験したバリアントは、野生型イヌＩｇＧＢのＦｃ（配列番号１０）と比較した場合、ｐＨ５．５（位置３１２または４２６にアミノ酸置換を含むバリアントの場合）及びｐＨ６．０（位置２８６または４３６にアミノ酸置換を含むバリアントの場合）において、イヌＦｃＲｎに対して増加した結合親和性を示した。結果を以下の表１３及び１４にまとめる。

実施例５：Ａ４２６Ｙ、Ａ４２６Ｈ、Ａ４２６Ｆ、Ｔ２８６Ｙ、Ｔ２８６Ｆ、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｗ、Ｙ４３６Ｈ及び野生型Ｆｃの結合カイネティクス
イヌＦｃＲｎに対してより高い親和性を示したいくつかのイヌＩｇＧＢバリアントについては、イヌＦｃＲｎに対する結合カイネティクスを更に評価した。この試験では、ｐＨ５．５またはｐＨ６．０のいずれか及びｐＨ７．４における、バリアント（Ａ４２６Ｙ、Ａ４２６Ｈ、Ａ４２６Ｙ、Ｔ２８６Ｙ、Ｔ２８６Ｆ、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｗ、Ｙ４３６Ｈ）、ＹＴＥバリアント（Ｌ２５２Ｙ／Ａ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）及び野生型イヌＩｇＧＢのＦｃのイヌＦｃＲｎへの結合を評価した。ｐＨ５．５及びｐＨ６．０条件でのＢｉａｃｏｒｅ法は、４つの濃度のＦｃＲｎ（１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を試験したことを除き、上の実施例４に記載したものと同じであり、これにより、より正確な結合カイネティクスが得られる。ｐＨ７．４のＢｉａｃｏｒｅ条件では、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ７．４）のランニング緩衝液を使用し、イヌＦｃＲｎの試験濃度は２００ｎＭであった。Ｂｉａｃｏｒｅセンサーグラムについては、図１８を参照されたい。野生型Ｆｃもいずれのバリアントも記載の条件を使用したｐＨ７．４において、ＦｃＲｎに結合しなかった。

結合親和性データを以下の表１５及び１６に示す。

実施例６：イヌＩｇＧＡのＦｃの位置４２６にアミノ酸置換を有するイヌＦｃバリアント
位置４２６（ＥＵナンバリングによる）にアミノ酸修飾を保有する２つのイヌＦｃバリアント及び野生型イヌＩｇＧＡのＦｃ（配列番号９）を、ＧｅａｒｉｎｇＤＰｅｔａｌ．（２０１３，ＢＭＣＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ，９：２２６）によって記載される可変ドメインを使用して合成した。イヌＩｇＧＡのＤＮＡを合成し、ｐｃＤＮＡ３．４ベクター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）にサブクローニングし、ＥｘｐｉＣＨＯトランスフェクション法（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクトした。細胞をトランスフェクトしてから１４日後に、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔプロテインＧ樹脂を使用して馴化培地を精製した。

ｐＨ６．０での結合実験のために、抗体をＣＭ５センサーチップに直接結合させ、次いで、イヌＦｃＲｎをＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ６．０）中で流した。フローセル１及び２のセンサーチップ表面を、新たに混合した５０ｍｍｏｌ／ＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及び２００ｍｍｏｌ／Ｌの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）によって、１００秒（１０μＬ／分）かけて活性化させた。抗体を１０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＡＣ（ｐＨ４．５）で希釈し、フローセル２に注入して約１００レスポンスユニットのコンジュゲーションを達成し、一方、フローセル１はブランクとした。アミンカップリング反応後、チップ表面上に残存する活性カップリング部位を、１ｍｏｌ／Ｌのエタノールアミン塩酸塩を１００秒注入してブロックした。ｐＨ６．０での結合実験のためのランニング緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ６．０）であり、２５℃で実施した。イヌＦｃＲｎ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２Ｒ０Ｌ６［ＦｃＲｎ］及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２ＲＮ１０［イヌベータ－２－ミクログロブリン］）を１２０秒間注入し、解離をランニング緩衝液で１２０秒間行った。流量は、３０μＬ／分であった。センサーチップ上に流したイヌＦｃＲｎの濃度は、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ及び８００ｎＭであった。全てのデータは、Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋ評価ソフトウェアバージョン１．１を使用して処理した。各サイクルのフローセル１及び緩衝液のみの注入を、レスポンスユニットの差し引きのリファレンスとして使用した。以下の表１７は、ｐＨ６．０での結合実験のカイネティクスデータを提供する。ＢｉａｃｏｒｅＣＭ５バイオセンサーチップへのＩｇＧのアミンカップリングは、溶液ベースの方法またはＢｉａｃｏｒｅＣ１チップへの直接カップリングによって決定される親和性と比較して、ＦｃＲｎに対する親和性が２～３倍減少することがこれまでに示されている（Ａｂｄｉｃｈｅｅｔａｌ．，２０１５．ｍＡｂｓ，７：３３１）。したがって、ｐＨ６．０におけるこれらのＩｇＧのＦｃＲｎへの真の親和性は、少なくとも２倍以上高いと思われる。しかしながら、この方法は、異なるＩｇＧのＦｃバリアントの相対的なＦｃＲｎ結合親和性を比較するのに有効である。Ｂｉａｃｏｒｅセンサーグラムを図１９に示す。

実施例７：野生型イヌＩｇＧＢのＦｃと比較して増加したＦｃＲｎ結合を有するイヌＩｇＧＢのＦｃバリアントのスクリーニング
単一のアミノ酸置換またはアミノ酸置換の組み合わせを保有するイヌＦｃバリアントを、ＧｅａｒｉｎｇＤＰｅｔａｌ．（２０１３，ＢＭＣＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ，９：２２６）によって記載される可変ドメインを使用して、イヌＩｇＧＢ（配列番号１０）フォーマットに合成した。イヌＩｇＧＢのＤＮＡを合成し、ｐｃＤＮＡ３．４ベクター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）にサブクローニングし、ＥｘｐｉＣＨＯトランスフェクション法（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクトした。細胞をトランスフェクトしてから１４日後に、ＭｏｎｏｆｉｎｉｔｙＡ樹脂（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を使用して馴化培地を精製した。抗体のイヌＦｃＲｎへの結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋを使用して、ｐＨ６．０とｐＨ７．４の両方の条件で測定した。

ｐＨ６．０での結合条件のために、フローセル１及び２のセンサーチップ表面を、新たに混合した５０ｍｍｏｌ／ＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及び２００ｍｍｏｌ／Ｌの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）によって、１００秒（１０μＬ／分）かけて活性化させた。抗体を１０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＡＣ（ｐＨ４．５）で希釈し、フローセル２に注入して約１００レスポンスユニットのコンジュゲーションを達成し、一方、フローセル１はブランクとした。アミンカップリング反応後、チップ表面上に残存する活性カップリング部位を、１ｍｏｌ／Ｌのエタノールアミン塩酸塩を１００秒注入してブロックした。ｐＨ６．０での結合実験のためのランニング緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ６．０）であり、２５℃で実施した。イヌＦｃＲｎ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２Ｒ０Ｌ６［ＦｃＲｎ］及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２ＲＮ１０［イヌベータ－２－ミクログロブリン］）を１２０秒間注入し、解離をランニング緩衝液で１２０秒間行った。流量は、３０μＬ／分であった。センサーチップ上に流したイヌＦｃＲｎの濃度は、野生型ＩｇＧ及びＡ４２６Ｈ－Ｎ４３４ＲＩｇＧバリアントについては、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ、１６００ｎＭ、及び３２００ｎＭであった。残りのバリアントについて、流したイヌＦｃＲｎの濃度は、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ及び８００ｎＭであった。全てのデータは、Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋ評価ソフトウェアバージョン１．１を使用して処理した。

各サイクルのフローセル１及び緩衝液のみの注入をレスポンスユニット減算の基準として使用した。以下の表１８は、ｐＨ６．０での結合実験のカイネティクスデータを示す。ＢｉａｃｏｒｅＣＭ５バイオセンサーチップへのＩｇＧのアミンカップリングは、溶液ベースの方法またはＢｉａｃｏｒｅＣ１チップへの直接カップリングによって決定される親和性と比較して、ＦｃＲｎに対する親和性が２～３倍減少することがこれまでに示されている（Ａｂｄｉｃｈｅｅｔａｌ．，２０１５．ｍＡｂｓ，７：３３１）。したがって、ｐＨ６．０におけるこれらのＩｇＧのＦｃＲｎへの真の親和性は、少なくとも２倍以上高いと思われる。しかしながら、この方法は、異なるＩｇＧのＦｃバリアントの相対的なＦｃＲｎ結合親和性を比較するのに有効である。Ｂｉａｃｏｒｅセンサーグラムを図２０～２３に示す。

ｐＨ７．４での結合条件のために、フローセル１及び２のセンサーチップ表面を、新たに混合した５０ｍｍｏｌ／ＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及び２００ｍｍｏｌ／Ｌの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）によって、４２０秒（１０μＬ／分）かけて活性化させた。その後、１０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＡＣ（ｐＨ４．５）で希釈したイヌＦｃＲｎをフローセル２に注入して約２０００レスポンスユニットのコンジュゲーションを達成し、一方、フローセル１はブランクとした。アミンカップリング反応後、チップ表面上に残存する活性カップリング部位を、１ｍｏｌ／Ｌのエタノールアミン塩酸塩を４２０秒注入してブロックした。ｐＨ７．４での結合実験のためのランニング緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）であり、２５℃で実施した。異なる抗体を４００ｎＭで１２０秒間注入し、解離をランニング緩衝液で１２０秒間行った。流量は、３０μＬ／分であった。以下の表１９は、ｐＨ７．４での結合実験のカイネティクスデータを示す。Ｂｉａｃｏｒｅセンサーグラムを図２４～２７に示す。

ｐＨ７．４におけるイヌＩｇＧＦｃとイヌＦｃＲｎの相互作用の親和性は、非常に弱く、多くの方法を使用するＳＰＲで測定することは困難である。イヌＦｃＲｎに対する様々なイヌＦｃバリアントのｐＨ７．４での親和性を比較するために、センサーチップに高濃度のイヌＦｃＲｎをコーティングし、バリアントＩｇＧＦｃをチップ上に流して相互作用を測定した。このフォーマットではアビディテ効果があるため、測定された結合親和性は、個々のイヌＩｇＧＦｃバリアントとイヌＦｃＲｎの相互作用の正確な測定ではないが、ｐＨ７．４におけるバリアントＩｇＧの相対的な結合を比較するために使用することができる。これらは、ｐＨ６．０における結合親和性との直接的な比較を行うために使用するべきではない。

実施例８：野生型イヌＩｇＧＢＦｃと比較して増加したＦｃＲｎ結合を有するイヌＩｇＧＢＦｃバリアントのｉｎｖｉｖｏスクリーニング。
１６匹のオス及びメスのビーグルを用いて、薬物動態（ＰＫ）試験を行った。単一のアミノ酸置換またはアミノ酸置換の組み合わせを保有するイヌＩｇＧＢＦｃバリアントを、ＧｅａｒｉｎｇＤＰｅｔａｌ．（２０１３，ＢＭＣＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ，９：２２６；その内容は全体が参照により本明細書に援用される）によって記載される抗ＮＧＦ可変ドメインを使用して、イヌＩｇＧＢ（配列番号１０）にアミノ酸置換（複数可）を組み込むことによって調製した。動物を８つの群に無作為に分け、各群にオスとメスを配置した。ビーグルの平均年齢は６ヶ月超、体重は８～１０ｋｇであった。各動物に２ｍｇ／ｋｇの抗体を単回静脈投与で投与した。およそ１．５ｍｌの全血を次の時点：０（投与前）、注射後４時間、及び１、２、４、６、１０１４１８、２２、３０、３４、３８、４２日に採取した。全血から血清を分離し、抗ＮＧＦ抗体に特異的なＥＬＩＳＡによって抗体バリアントの存在をアッセイした。

それぞれ個々の血清抗体測定値のノンコンパートメントＰＫ解析（ＮＣＡ）を、十分に立証されている薬物動態解析のためのＥｘｃｅｌプラグインソフトウェアツールを使用して実施した（“ＰＫＳｏｌｖｅｒ：Ａｎａｄｄ－ｉｎｐｒｏｇｒａｍｆｏｒｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｄａｔａａｎａｌｙｓｉｓｉｎＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ”，ＹｏｎｇＺｈａｎｇｅｔａｌ．，Ｃｏｍｐｕｔ．ＭｅｔｈｏｄｓＰｒｏｇｒａｍｓＢｉｏｍｅｄ．；２０１０Ｓｅｐ；９９（３）：３０６－１４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｍｐｂ．２０１０．０１．００７；その内容は全体が参照により本明細書に援用される）。ＰＫＳｏｌｖｅｒは、ＰＫパラメーターの決定に多くのオプションを提供する。ＮＣＡは、使い方が簡単であること、モデルに依存しないこと、及び分析者間の一貫性を高められることから、最適な方法として確認されている。特定の解析では、ＰＫＳｏｌｖｅｒのＮＣＡＩＶＢｏｌｕｓを使用して、終末相半減期（Ｔ１／２）を決定した。最初の一連の用量設定実験に続き、静脈内投与から４２日までＬＬＯＱを大きく上回る測定値を測定することができた。したがって、終末相半減期は、少なくとも最後の４週間の抗体測定値について推定することで、勾配を確実に推定することが可能であった。いずれの実験においても、データポイントの破棄または削除はなかった。図２９に示されるように、ＩｇＧＦｃ領域におけるアミノ酸置換の組み合わせは、（ｉ）野生型イヌＩｇＧＢＦｃ領域または（ｉｉ）単一のアミノ酸置換のみを含むイヌＩｇＧＢＦｃバリアントを保有する抗ＮＧＦＩｇＧＢ抗体と比較した場合、イヌの抗ＮＧＦＩｇＧＢ抗体の終末相半減期をｉｎｖｉｖｏで著しく改善した。

実施例９：Ｃ１バイオセンサーを使用したイヌＩｇＧＢバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合カイネティクス
いくつかのイヌＩｇＧＢバリアント（Ａ４２６Ｙ、Ａ４２６Ｙ＋Ｔ２８６Ｌ、Ａ４２６Ｙ＋Ｄ３１２Ｐ、Ａ４２６Ｙ＋Ｙ４３６Ｈ、Ａ４２６Ｙ＋Ｔ２８６Ｌ＋Ｙ４３６Ｈ、Ａ４２６Ｈ、Ａ４２６Ｈ＋Ｔ２８６Ｌ、Ａ４２６Ｈ＋Ｔ２８６Ｙ、Ａ４２６Ｈ＋Ｄ３１２Ｐ、Ａ４２６Ｈ＋Ｙ４３６Ｈ、及び野生型）について、ｐＨ５．９におけるイヌＦｃＲｎ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２Ｒ０Ｌ６［イヌ大型サブユニットＦｃＲｎ］及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｅ２ＲＮ１０［イヌベータ－２－ミクログロブリン］）に対する結合カイネティクスを評価した。位置の特定には、ＥＵナンバリングを使用した（図２８）。この試験において、単一のアミノ酸置換またはアミノ酸置換の組み合わせを保有するイヌＦｃバリアントを、ＧｅａｒｉｎｇＤＰｅｔａｌ．（２０１３，ＢＭＣＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ，９：２２６）によって記載される可変ドメインを使用して、イヌＩｇＧＢ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＡＬ３５３０２．１）フォーマットに合成した。合成したイヌＩｇＧＢのＤＮＡを哺乳動物発現ベクターにサブクローニングし、ＣＨＯ細胞に一過性にトランスフェクトした。プロテインＡクロマトグラフィーを使用して馴化培地を精製した。

イヌＦｃＲｎ結合実験について、全てのアッセイをＢｉａｃｏｒｅ８Ｋ＋システムで２５℃で実施した。上の実験（例えば、実施例６及び７）において、Ａｂｄｉｃｈｅｅｔａｌ．，２０１５（ｍＡｂｓ，７：３３１）によって、ＳｅｒｉｅｓＳＣ１バイオセンサーを使用した場合と比較して、ＦｃバリアントのＦｃＲｎに対する親和性が過小評価されることが示されているＢｉａｃｏｒｅＣＭ５バイオセンサーチップへのＩｇＧのアミンカップリングによって、ＩｇＧバリアントのイヌＦｃＲｎに対する親和性を測定した。この実験セットにおいて、より正確なＦｃＲｎ親和性の測定を得るために、全ての抗体を標準的なアミンカップリング試薬を使用してＳｅｒｉｅｓＳＣ１センサーチップに固定した。２００ｍｍｏｌ／Ｌの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及び５０ｍｍｏｌ／ＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合物を４２０秒間注入して表面を活性化させた。次いで、抗体を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中０．５～２μｇ／ｍｌの濃度で、１２０秒間注入した。最後に、１Ｍのエタノールアミンを４２０秒間注入した。ランニング緩衝液は、ｐＨ５．９に調節した１ＸＰＢＳ－Ｐ＋（Ｃｙｔｉｖａ、Ｃａｔ＃２８９９５０８４）であった。

ｐＨ５．９におけるイヌＩｇＧＢバリアントのイヌＦｃＲｎに対する結合親和性を評価するために、１．５６～２０００ｎＭの濃度範囲のイヌＦｃＲｎを選択し、シングルサイクルモードで注入した。各バリアントについて試験したイヌＦｃＲｎの濃度を以下の表２０に示す。

抗体につき４つの濃度を５μｌ／分で９０秒間注入し、続いて、１８０秒間解離させた。各濃度系列をこのフォーマットで３回注入し、適切なリファレンスの差し引きのために少なくとも３回の緩衝液のみのサイクルを行った。１ＸＰＢＳ－Ｐ＋（ｐＨ７．４）を３０秒間２回注入し、続いて、６０秒間の待機コマンドで、表面を再生した。解析前に表面を安定化させるため、３回のスタートアップサイクルを含めた。

ＩｎｓｉｇｈｔＥｖａｌｕａｔｉｏｎＳｏｆｔｗａｒｅを使用し、１：１カイネティクス相互作用モデルへのフィッティングまたは定常状態の親和性へのフィッティングによって、データを評価した。Ｕ値及びＴ値を含む品質指標を使用して、許容されるパラメーターを選択した。１５未満のＵ値を反応速度定数として許容できるものとみなし、１００より大きいＴ値を反応速度定数として許容できるものとみなした。これらの値がその範囲外である場合、定常状態の親和性パラメーターを許容できるものとみなした。

１０個のバリアントのカイネティクスデータを以下の表２１に示し、センサーグラムを図３０Ａ～３０Ｋに示す。

実施例１０：ＦｃＲｎ結合が増加したイヌＩｇＧＢバリアント及び野生型イヌＩｇＧＢの薬物動態試験
３つの薬物動態（ＰＫ）試験をオスとメスのビーグルで実施した。単一のアミノ酸置換またはアミノ酸置換の組み合わせを保有するイヌＦｃバリアントを、ＧｅａｒｉｎｇＤＰｅｔａｌ．（２０１３，ＢＭＣＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ，９：２２６）によって記載される抗ＮＧＦ可変ドメインを使用して、イヌＩｇＧＢ（配列番号１０）フォーマットに合成した。各試験について、各群が同数のオスとメスを含有するように動物を無作為に分けた。各試験で評価したＩｇＧＢバリアント及び各群のオス（Ｍ）とメス（Ｆ）の数を以下に示す（表２２）。

イヌの平均年齢は６ヶ月超、体重は８～１０ｋｇであった。各動物に１ｍｇ／ｋｇ（試験１）または２ｍｇ／ｋｇ（試験２及び３）の抗体を単回静脈内投与で注射した。およそ１．５ｍｌの全血を次の時点：０（投与前）、注射後４時間、及び１、２、４、６、１０１４１８、２２、３０、３４、３８、４２日に採取した。血液から血清を抽出し、ＮＧＦ抗体に特異的なＥＬＩＳＡによって抗体バリアントをアッセイした。

非線形混合効果モデルを使用して、線形クリアランスを有する２コンパートメント薬物動態（ＰＫ）モデルで血清中濃度を記述した（図３１）。母集団ＰＫパラメーターを、ＭｏｎｏｌｉｘＳｕｉｔｅ２０１９Ｒ１（Ｍｏｎｏｌｉｘｖｅｒｓｉｏｎ２０１９Ｒ１．Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ：ＬｉｘｏｆｔＳＡＳ，２０１９）に実装されている確率的期待値最大化法（ＳＡＥＭ）アルゴリズムを使用して、推定した。個々のパラメーターを対数正規分布の確率変数としてモデル化した。母集団パラメーターは、全てのバリアント及び試験を含むプールデータから推定した。試験は、クリアランスに関するカテゴリ型共変量であった。ｍＡｂバリアントは、クリアランス、中枢及び末梢の分布容積に関するカテゴリ型共変量を使用して識別した。カテゴリ型試験及びバリアントの共変量は、次のように記載された：

式中、個々の共変量がそのカテゴリに該当する場合はΩ_ｉ＝１あり、そうでない場合はΩ_ｉ＝０である。野生型ＩｇＧＢバリアントをリファレンスとして使用した。

試験２で観察された野生型、Ａ４２６Ｙ及びＡ４２６Ｙ＋Ｙ４３６Ｈバリアントの終末相半減期を図２９に示す。

３つ全ての試験データを使用して、各バリアントの推定ＰＫパラメーターを生成した（表２３）。

実験３から個々に観察された野生型、Ａ４２６Ｙ、Ａ４２６Ｙ＋Ｙ４３６Ｈ、及びＡ４２６Ｙ＋Ｙ４３６Ｈ＋Ｔ２８６Ｌの血清中濃度を図３２Ｂに示す。また、実験１から個々に観察された野生型、ＹＴＥ、Ｎ４３４Ｙ及びＮ４３４Ｒの血清中濃度を図３２Ａに示す。

野生型ＩｇＧＢＦｃまたはＩｇＧＢバリアントＡ４２６Ｙ、Ａ４２６Ｙ＋Ｙ４３６Ｈ、Ａ４２６Ｙ＋Ｙ４３６Ｈ＋Ｔ２８６Ｌ、Ｎ４３４Ｒ、Ｎ４３４Ｙ、及びＹＴＥを有する抗ＮＧＦ抗体の３ヶ月にわたる予測血清中濃度プロファイルについてシミュレーションを行った。これを図３３に示す。このシミュレーションでは、１０ｋｇのイヌを使用し、２ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与を行った。

実施例１１：イヌＦｃＲｎに結合するイヌＩｇＧＢＦｃバリアントのモデリング
イヌＦｃＲｎに結合するイヌＩｇＧＢＦｃバリアントの分子機序に関する知見を得るために、イヌＩｇＧＢＦｃとイヌＦｃＲｎの複合体の構造モデルを、ヒトＦｃＲｎとＹＴＥ－Ｆｃドメイン（ＰＤＢＩＤ：４Ｎ０Ｕ）との複合体の共結晶構造に基づいて、ＭＯＥソフトウェア（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＯｐｅｒａｔｉｎｇＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）＿，２０２０．０９；ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐｕｔｉｎｇＧｒｏｕｐＵＬＣ，１０１０ＳｈｅｒｂｒｏｏｋｅＳｔ．Ｗｅｓｔ，Ｓｕｉｔｅ＃９１０，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ，Ｈ３Ａ２Ｒ７，２０２０）を使用して生成した。ＭＯＥでモデル化した構造に変異を組み込み、エネルギーをＡｍｂｅｒ１４：ＥＨＴ力場で最小化した。Ｐｙｍｏｌソフトウェア（ＴｈｅＰｙＭＯＬＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｒａｐｈｉｃｓＳｙｓｔｅｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ１．２ｒ３ｐｒｅ，Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ）を使用して、イヌＦｃ－ＦｃＲｎ相互作用の距離を測定した。

低いｐＨでイヌＦｃＲｎへの親和性を増加させるバリアントを有するイヌＦｃ位置２８６、４２６及び４３６を図３４に示す。

イヌＩｇＧＢＡ４２６Ｈバリアントを図３５に示す。位置４２６は、ＦｃＲｎとの直接的に相互作用するには離れすぎている。このモデルは、Ａ４２６ＨがＹ４３６と立体衝突を起こし、Ｙ４３６をＦｃＲｎの結合により好ましいコンフォメーションに変えることを予測している。イヌＡ４２６Ｙを図３６に示す。Ａ４２６Ｈと同様に、ＦｃＲｎと直接的に相互作用するには離れすぎており、Ｙ４３６をＦｃＲｎへの結合により好ましいコンフォメーションへとシフトさせている。

イヌＩｇＧＢＹ４３６Ｈバリアントを図３７に示す。位置４３６の残基をＨｉｓに変更すると、隣接する残基がわずかに変化することが予測される。電荷の差がより強固な結合を促進すると思われる。Ｈ４３６は、疎水性／芳香族Ｙ４３６と同様に、中性ｐＨでは電荷を欠くため、隣接する残基を結合に好ましくない環境に留めるように駆動することが予測される。しかしながら、プロトン化されたＨｉｓ４３６は、親水性／正電荷の性質を持つため、ＦｃＲｎ大型サブユニット中のＥ１３５などの残基に対して、より魅力的な界面を提供する。

イヌＩｇＧＢＴ２８６Ｌバリアントを図３８に示す。これは、ＦｃＲｎのイヌベータ－２－ミクログロブリンと直接的に相互作用しない。しかしながら、トレオニンをロイシンに変更することで、存在する疎水性相互作用が強化され得る。この観察結果は、実施例４及び５に示されるように、低いｐＨで、Ｔ２８６Ｙ、Ｔ２８６Ｆ、及びＴ２８６ＷバリアントのイヌＦｃＲｎに対する親和性が増加したことと一致する。

イヌＩｇＧＢＦｃにおけるＡ４２６Ｙ、Ｙ４３６Ｈ及びＴ２８６Ｌバリアントの組み合わせをモデル化した（図３９）。Ａ４２６ＹとＹ４３６Ｈのバリアント間の立体衝突により、４３６が結合により好ましい位置に移動することが予測される。これは、ＨｉｓのｐＨ依存性の影響と相加的であり得る。Ｔ２８６Ｌは、４２６及び４３６の変異から直接的な影響を受けるには遠すぎるようである。実施例９の低ｐＨにおけるトリプルバリアント（Ａ４２６Ｙ、Ｙ４３６Ｈ及びＴ２８６Ｌ）のイヌＦｃＲｎに対するｉｎｖｉｔｒｏ結合データは、３つのバリアントの組み合わせがＦｃＲｎ親和性を相加的に増加させるモデルと一致する。

他の実施形態
本発明について、その詳細な説明とともに記載してきたが、前述の説明は、本発明の範囲を例示するものであり、これを限定する意図はなく、本発明は、添付する特許請求の範囲によって定義される。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。

Claims

イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、以下からなる群から選択される位置：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置；及び
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置
に少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
ここで、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する前記アミノ酸置換は、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ及びＴｒｐからなる群から選択され、前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、前記ポリペプチドは、前記野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、前記ポリペプチド。
前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置にアミノ酸置換を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含む、請求項２に記載のポリペプチド。
前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置にアミノ酸置換を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒ、ＨｉｓまたはＰｈｅを含む、請求項４に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む、請求項５に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＨｉｓを含む、請求項５に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応するアミノ酸位置にＰｈｅを含む、請求項５に記載のポリペプチド。
前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置にアミノ酸置換を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む、請求項９に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＰｈｅを含む、請求項９に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含む、請求項９に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＴｒｐを含む、請求項９に記載のポリペプチド。
前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応するアミノ酸位置にＨｉｓを含む、請求項１４に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、配列番号９～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
以下からなる群から選択される位置：
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｉｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置
に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕもしくはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置にＡｓｐもしくはＧｌｕを含み、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒもしくはＭｅｔを含み、
（ｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒもしくはＳｅｒを含み、
（ｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕもしくはＰｈｅを含み、
（ｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎもしくはＡｓｐを含み、
（ｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＬｅｕもしくはＴｒｐを含み、
（ｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎもしくはＡｌａを含み、
（ｉｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置にＡｌａを含み、
（ｘｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含み、
（ｘｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置にＡｌａもしくはＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＰｈｅを含み、及び／または
（ｘｉｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む、
請求項１７に記載のポリペプチド。
以下からなる群から選択される位置：
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、
（ｘｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置
に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、請求項９～１５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕもしくはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５１に対応するアミノ酸位置にＡｓｐもしくはＧｌｕを含み、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒもしくはＭｅｔを含み、
（ｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒもしくはＳｅｒを含み、
（ｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕもしくはＰｈｅを含み、
（ｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎもしくはＡｓｐを含み、
（ｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎもしくはＡｌａを含み、
（ｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０８に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｉｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３７８に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｘｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３８０に対応するアミノ酸位置にＡｌａを含み、
（ｘｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２８に対応するアミノ酸位置にＬｅｕを含み、
（ｘｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３０に対応するアミノ酸位置にＡｌａもしくはＬｙｓを含み、
（ｘｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、
（ｘｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＰｈｅを含み、及び／または
（ｘｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３５に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含む、
請求項１９に記載のポリペプチド。
前記少なくとも１つの追加のアミノ酸置換が、以下からなる群から選択される位置：
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、
（ｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置、
（ｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置、
（ｉｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置、
（ｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置、及び
（ｘｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置
にある、請求項１７または請求項１９に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５０に対応するアミノ酸位置にＧｌｕまたはＧｌｎを含み、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒまたはＭｅｔを含み、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒまたはＳｅｒを含み、
（ｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕまたはＰｈｅを含み、
（ｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８５に対応するアミノ酸位置にＡｓｎまたはＡｓｐを含み、
（ｖｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０７に対応するアミノ酸位置にＡｒｇ、ＧｌｎまたはＡｌａを含み、
（ｖｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３０９に対応するアミノ酸位置にＰｒｏを含み、
（ｖｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１１に対応するアミノ酸位置にＶａｌを含み、
（ｉｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１５に対応するアミノ酸位置にＡｓｐを含み、
（ｘ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３３に対応するアミノ酸位置にＬｙｓを含み、及び
（ｘｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａまたはＰｈｅを含む、
請求項２１に記載のポリペプチド。
前記少なくとも１つの追加のアミノ酸置換が、以下からなる群から選択される位置：
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置、及び
（ｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置
にある、請求項１７または請求項１９に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒもしくはＭｅｔを含み、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒもしくはＳｅｒを含み、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＡｓｐ、ＧｌｕもしくはＰｈｅを含み、及び／または
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＰｈｅを含む、
請求項２３に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、
（ｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５２に対応するアミノ酸位置にＴｙｒを含み、
（ｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５４に対応するアミノ酸位置にＴｈｒを含み、
（ｉｉｉ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２５６に対応するアミノ酸位置にＧｌｕを含み、及び／または
（ｉｖ）前記野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応するアミノ酸位置にＴｒｐ、Ｔｙｒ、ＡｒｇもしくはＨｉｓを含む、
請求項２４に記載のポリペプチド。
イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域を含むポリペプチドであって、以下からなる群から選択される２つ以上の位置：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置；
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応する位置；及び
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置
にアミノ酸置換を含み、
ここで、前記アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに基づき、前記ポリペプチドは、前記野生型イヌＩｇＧのＦｃドメインと比較した場合、イヌＦｃＲｎに対する結合親和性が増加している、前記ポリペプチド。
野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６に対応する位置の前記アミノ酸置換が、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ及び前述のいずれかの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される、請求項２６に記載のポリペプチド。
野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置３１２に対応する位置の前記アミノ酸置換が、Ｄ３１２Ｐまたはその保存的アミノ酸置換である、請求項２６に記載のポリペプチド。
野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置の前記アミノ酸置換が、Ａ４２６Ｙ、Ａ４２６Ｈ及び前述のいずれかの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される、請求項２６に記載のポリペプチド。
野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３４に対応する位置の前記アミノ酸置換が、Ｎ４３４Ｒまたはその保存的アミノ酸置換である、請求項２６に記載のポリペプチド。
野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４３６に対応する位置の前記アミノ酸置換が、Ｙ４３６Ｈまたはその保存的アミノ酸置換である、請求項２６に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６に対応する位置にアミノ酸置換を含む、請求項２６～３１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、以下からなる群から選択される２つ以上の位置：
（ｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び２８６に対応する位置；
（ｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び３１２に対応する位置；
（ｉｉｉ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び４３４に対応する位置；
（ｉｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置４２６及び４３６に対応する位置；ならびに
（ｖ）野生型イヌＩｇＧのアミノ酸位置２８６、４２６及び４３６に対応する位置
にアミノ酸置換を含む、請求項３２に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、以下からなる群から選択されるアミノ酸置換：
（ｉ）Ａ４２６Ｙ及びＴ２８６Ｌ；
（ｉｉ）Ａ４２６Ｙ及びＤ３１２Ｐ；
（ｉｉｉ）Ａ４２６Ｙ及びＹ４３６Ｈ；
（ｉｖ）Ａ４２６Ｈ及びＴ２８６Ｌ；
（ｖ）Ａ４２６Ｈ及びＴ２８６Ｙ；
（ｖｉ）Ａ４２６Ｈ及びＤ３１２Ｐ；ならびに
（ｖｉｉ）Ｔ２８６Ｌ、Ａ４２６Ｙ、及びＹ４３６Ｈ
を含む、請求項３２に記載のポリペプチド。
前記２つ以上のアミノ酸置換が、
（ｉ）Ａ４２６Ｙと、Ｔ２８６Ｌ、Ｄ３１２Ｐ、Ｎ４３４Ｒ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ；
（ｉｉ）Ａ４２６Ｈと、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ、Ｄ３１２Ｐ、Ｎ４３４Ｒ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ；ならびに
（ｉｉｉ）Ｎ４３４Ｒと、Ｔ２８６Ｌ、Ｔ２８６Ｙ、Ｄ３１２Ｐ及びＹ４３６Ｈのうちの１つ以上との組み合わせ
からなる群から選択される、請求項２６～３１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記野生型イヌＩｇＧが、配列番号９に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むイヌＩｇＧＡ、配列番号１０に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むイヌＩｇＧＢ、配列番号１１に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むイヌＩｇＧＣ、または配列番号１２に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含むイヌＩｇＧＤである、請求項１～３５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記野生型イヌＩｇＧが、イヌＩｇＧＡであり、前記イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域が、配列番号９に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記野生型イヌＩｇＧが、イヌＩｇＧＢであり、前記イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域が、配列番号１０に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記野生型イヌＩｇＧが、イヌＩｇＧＣであり、前記イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域が、配列番号１１に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記野生型イヌＩｇＧが、イヌＩｇＧＤであり、前記イヌＩｇＧのＦｃ領域バリアントまたはそのイヌＦｃＲｎ結合領域が、配列番号１２に対して、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
結合ドメインを更に含む、請求項１～４０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記結合ドメインが、（ｉ）免疫グロブリン分子の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）；（ｉｉ）イヌ受容体タンパク質のリガンド結合ドメイン、（ｉｉｉ）ナノボディ、または（ｉｖ）イヌ受容体タンパク質の細胞外ドメインを含む、請求項４１に記載のポリペプチド。
前記結合ドメインが、ＮＧＦ、ＴｒＫＡ、ＡＤＡＭＴＳ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、アンジオテンシン１型（ＡＴ１）受容体、アンジオテンシン２型（ＡＴ２）受容体、ＩＬ－５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、ＣＤ３、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＣＤ５２、及び補体系複合体からなる群から選択される抗原に特異的に結合する、請求項４１または請求項４２に記載のポリペプチド。
ＥＰＯ、ＣＴＬＡ４、ＬＦＡ３、ＶＥＧＦＲ１／ＶＥＧＦＲ３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及びトロンボポエチン結合ペプチドからなる群から選択されるタンパク質を更に含む、請求項１～４３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、結合アッセイにおいて、中性ｐＨよりも酸性ｐＨでより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する、請求項１～４４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、結合アッセイにおいて、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．５でより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する、請求項４５に記載のポリペプチド。
前記ポリペプチドが、結合アッセイにおいて、ｐＨ７．４よりもｐＨ６．０でより高いレベルでイヌＦｃＲｎに結合する、請求項４６に記載のポリペプチド。
（ｉ）請求項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドと、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
請求項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸。
請求項４９に記載の１つまたは複数の核酸を含む、１つまたは複数の発現ベクター。
請求項４９に記載の１つもしくは複数の核酸または請求項５０に記載の１つもしくは複数の発現ベクターを含む、宿主細胞。
ポリペプチドを作製する方法であって、
（ａ）請求項４９に記載の１つまたは複数の核酸を提供すること；
（ｂ）宿主細胞培養物中で前記１つまたは複数の核酸を発現させ、それにより、前記ポリペプチドを産生すること；及び
（ｃ）（ｂ）で産生された前記ポリペプチドを前記宿主細胞培養物から回収すること
を含む、前記方法。
前記ポリペプチドを医薬製剤として製剤化することを更に含む、請求項５２に記載の方法。
イヌの疾患または障害を治療することを、それを必要とするイヌに行う方法であって、請求項４８に記載の医薬組成物を含む組成物の有効量を前記イヌに投与することを含む、前記方法。
イヌの疾患または障害を予防することを、それを必要とするイヌに行う方法であって、請求項４８に記載の医薬組成物を含む組成物の有効量を前記イヌに投与することを含む、前記方法。
前記イヌの疾患または障害が、アレルギー性疾患、慢性疼痛、急性疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、内分泌疾患、胃腸疾患、心血管疾患、腎臓疾患、生殖機能関連障害、感染症またはがんである、請求項５４または請求項５５に記載の方法。
前記イヌの疾患または障害が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、骨関節痛、関節炎、貧血、または肥満である、請求項５４または請求項５５に記載の方法。
イヌの疾患または障害を治療することを、それを必要とするイヌにおいて行う方法で使用するための、請求項４８に記載の医薬組成物。
イヌの疾患または障害を予防することを、それを必要とするイヌにおいて行う方法で使用するための、請求項４８に記載の医薬組成物。
前記イヌの疾患または障害が、アレルギー性疾患、慢性疼痛、急性疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、内分泌疾患、胃腸疾患、心血管疾患、腎臓疾患、生殖機能関連障害、感染症またはがんである、請求項５８または請求項５９に記載の使用のための医薬組成物。
前記イヌの疾患または障害が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、骨関節痛、関節炎、貧血、または肥満である、請求項５８または請求項５９に記載の使用のための医薬組成物。
イヌの疾患または障害を治療することを、それを必要とするイヌに行うための薬剤の製造における、請求項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
イヌの疾患または障害を予防することを、それを必要とするイヌに行うための薬剤の製造における、請求項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
前記イヌの疾患または障害が、アレルギー性疾患、慢性疼痛、急性疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、内分泌疾患、胃腸疾患、心血管疾患、腎臓疾患、生殖機能関連障害、感染症またはがんである、請求項６２または請求項６３に記載の使用。
前記イヌの疾患または障害が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、骨関節痛、関節炎、貧血、または肥満である、請求項６２または請求項６３に記載の使用。