JP2015051934A - 皮膚の酸化的ストレス抑制剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実のエタノールまたはブタンジオールを含む抽出溶媒による抽出物を含有させ、皮膚の酸化的ストレス抑制剤とする。
【選択図】図2
Description
しかしながら、皮膚の酸化的ストレスに対し十分な抑制効果を有し、安全性、使用性等の点でも問題のない皮膚の酸化的ストレス抑制剤が得られているとは言い難い。
[1]オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実より、エタノールまたはブタンジオールを含む抽出溶媒により抽出して得られる抽出物を含有する、皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
[2]抽出溶媒中のエタノールの濃度が、50(v/v)%〜100(v/v)%である、上記[1]に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
[3]ブタンジオールが1,3−ブタンジオールである、上記[1]に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
[4]抽出溶媒中のブタンジオールの濃度が50(v/v)%である、上記[1]または[3]に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
[5]皮膚の酸化的ストレスによる炎症の改善または防止用である、上記[1]〜[4]のいずれかに記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
[6]皮膚の酸化的ストレスによる老化の改善または防止用である、上記[1]〜[4]のいずれかに記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
[7]皮膚外用医薬品である、上記[1]〜[6]のいずれかに記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
[8]皮膚外用医薬部外品である、上記[1]〜[6]のいずれかに記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
[9]皮膚用化粧品である、上記[1]〜[6]のいずれかに記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
また、本発明に係る皮膚の酸化的ストレス抑制剤において、有効成分として含有されるオオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実の抽出物は、植物由来であり、高い活性酸素種消去活性を有し、低濃度で十分な皮膚の酸化的ストレス抑制効果を奏するため、皮膚に対する刺激性等、安全性および使用性の点でも有利である。
オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実は水洗し、そのまま、または細切、乾燥、粉砕等を行うことにより、スラリー状、細粒状、顆粒状または粉末状として抽出に供する。抽出溶媒としては、エタノールまたはブタンジオールを含む抽出溶媒を用いるが、50(v/v)%〜100(v/v)%エタノール、50(v/v)%〜100(v/v)%ブタンジオールが好ましく用いられる。ブタンジオールとしては、1,3−ブタンジオールが好ましく用いられる。また、エタノールを含む抽出溶媒としては、50(v/v)%エタノールが特に好ましく、ブタンジオールを含む溶媒としては、50(v/v)%ブタンジオールが特に好ましい。
抽出は、エタノールを含む抽出溶媒の場合、通常20℃〜30℃で2日間〜60日間行い、25℃〜30℃で2日間〜7日間行うことが好ましい。また、ブタンジオールを含む抽出溶媒の場合は、通常20℃〜30℃で2日間〜60日間行い、25℃〜30℃で7日間〜60日間行うことが好ましい。
抽出後、定法に従い、たとえばろ過、遠心分離等により、抽出液を回収する。
オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実100gを水洗し、蒸留水、50(v/v)%エタノール、100(v/v)%エタノール、50(v/v)%1,3−ブタンジオール各300mLに浸漬し、ときどき撹拌しながら、25℃にて静置して抽出した。蒸留水、50(v/v)%エタノール、100(v/v)%エタノールのそれぞれにより抽出する場合は7日間、50(v/v)%1,3−ブタンジオールにより抽出する場合は、2か月間静置した後、ろ過してろ液を回収した。
上記の各抽出物の抗酸化活性を、抗酸化能測定キット「ラジカルキャッチ」(日立アロカメディカル株式会社製)を用いて測定した。その際、陽性対照として、ブチルヒドロキシアニソール(BHA)およびTroloxを用いた。フェントン反応により生じる活性酸素に対する50%阻害濃度(IC50)を求めて、表1に示した。なお、オオヤマザクラ果実の抽出物のIC50値については、ポリフェノール(没食子酸)量に換算した値により示した。
オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実の50(v/v)%エタノール抽出物を試料として、ヒト表皮角化細胞(HaCaT Keratinocyte)を用い、過酸化水素による細胞傷害に対する緩和作用を評価した。評価方法を以下に示した。
(1)細胞密度3×106cells/wellのHaCaT細胞分散液を調製し、十分に分散しながら100μLを96wellマイクロプレートの各wellに添加し、細胞播種した(すなわち3×105cells/well播種したこととなる)。
なお、培地は、5%牛胎児血清(FBS)含有ダルベッコ変法イーグル培地(Dulbecco’s modified Eagle’s Medium)(DMEM)(ニッスイ)〈1〉(日水製薬株式会社製、code:5915)と、CERTIFIED FOETAL BOVINE SERUM(BIOLOGICAL INDUSTRIES社製、cat.04-001-1E)を用いて調製した。
(2)CO2インキュベーター(5%CO2濃度)にて、37℃で24時間培養後、各濃度の試料を含有する培地100μLに交換した。なお、試料(オオヤマザクラ果実の50(v/v)%エタノール抽出物)の添加濃度は、抽出物の乾燥重量により示した。
(3)さらに24時間培養後、各wellの細胞を100μLのHanks緩衝液(HBSS+)で2回洗浄した。
(4)150μM過酸化水素溶液100μLを各wellの細胞に添加し、2時間培養した。
なお、対照として、過酸化水素溶液を含有しないHBSS+処理細胞群を同培養条件にて調製した(過酸化水素処理群および対照(過酸化水素未処理群)ともにn=5で実施)。
(5)各wellの細胞をHBSS+で2回洗浄した後、試料を含まない培地で24時間培養した。
(6)各wellの細胞をHBSS+で2回洗浄した後、33mg/Lのニュートラルレッド(3−アミノ−7−ジメチルアミノ−2−メチルフェノジンハイドロクロライド;シグマ−アルドリッチ社製)溶液(NR液)100μLを添加し、2時間培養した。
(7)各wellの細胞をHBSS+で2回洗浄した後、30(v/v)%メタノール含有1M塩酸溶液100μLを添加して細胞を溶解し、細胞内に取り込まれたニュートラルレッドを抽出した。
(8)マイクロプレートリーダーで細胞溶解液の吸光度を550nmおよび650nmにて測定し、その差(Abs550nm−Abs650nm)をニュートラルレッド取込みの吸光度として求めた。
(9)対照(過酸化水素未処理群)の吸光度を100とした場合の百分率により、過酸化水素処理群の細胞生存率を算出した。
上記結果より、オオヤマザクラエキス果実の50(v/v)%エタノール抽出物によって、過酸化水素曝露による細胞傷害が緩和されたと考えられ、培養細胞においても過酸化水素消去作用が働いていることが認められた。
オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実の50(v/v)%エタノール抽出物を試料として、ヒト表皮角化細胞(HaCaT Keratinocyte)を用い、紫外線(UVB)による細胞傷害に対する緩和作用を評価した。評価方法を以下に示した。
(1)細胞密度3×106cells/wellのHaCaT細胞分散液を調製し、十分に分散しながら100μLを96wellマイクロプレートの各wellに添加し、細胞播種した(すなわち3×105cells/well播種したこととなる)。
なお、培地は、上記試験例2で用いた培地と同じものを用いた。
(2)CO2インキュベーター(5%CO2濃度)にて、37℃で24時間培養後、試料無添加培地100μLに交換した。
(3)さらに24時間培養後、各wellの細胞を100μLのHBSS+で2回洗浄した。
(4)HBSS+ 100μLを各wellの細胞に添加し、UVBランプ(PHILIPS BROADBAND TL20W12 RS ULTRAVIORET−B)でUVB照射(800mJ/cm2(照射強度=0.85mW/cm2)で16分)した。その際、対照として、UVB未照射細胞群を同培養条件にて調製した(UVB照射群および対照(UVB未照射群)ともにn=6で実施)。
(5)各wellの細胞をHBSS+で2回洗浄した後、試料無添加培地または各濃度の試料を添加した培地で24時間培養した。なお、試料(オオヤマザクラ果実の50(v/v)%エタノール抽出物)の添加濃度は、抽出物の乾燥重量により示した。
(6)各wellの細胞をHBSS+で2回洗浄した後、NR液100μLを添加し、2時間培養した。
(7)各wellの細胞をHBSS+で2回洗浄した後、30(v/v)%メタノール含有1M塩酸溶液100μLを添加して細胞を溶解し、細胞内に取り込まれたニュートラルレッドを抽出した。
(8)マイクロプレートリーダーで細胞溶解液の吸光度を550nmおよび650nmにて測定し、その差(Abs550nm−Abs650nm)をニュートラルレッド取込みの吸光度として求めた。
(9)対照(UVB未照射群)の吸光度を100とした場合の百分率により、UVB照射群の細胞生存率を算出した。
上記結果より、オオヤマザクラ果実の50(v/v)%エタノール抽出物は、UVBにより生じた細胞傷害を緩和する作用を有することが示唆された。
(1)オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実の50(v/v)%1,3−ブタンジオール抽出物 0.05(重量%)
(2)グリセリン 5
(3)ポリエチレングリコール1500 2
(4)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(15E.O.) 2
(5)エタノール 15
(6)水酸化カリウム 0.03
(7)パラオキシ安息香酸メチル 0.1
(8)精製水 75.82
製法:(1)〜(3)および(6)を(8)に添加して溶解する。(5)に(4)および(7)を溶解して、前記溶液に加えて均一とし、ろ過する。
(1)白色ワセリン 25.0(重量%)
(2)ステアリルアルコール 25.0
(3)グリセリン 12.0
(4)ラウリル硫酸ナトリウム 1.0
(5)パラオキシ安息香酸メチル 0.1
(6)精製水 36.8
(7)オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実の50(v/v)%エタノール抽出物 0.1
製法:(1)〜(4)の油相成分を混合、溶解して均一とし、75℃に加熱する。一方、(5)を(6)に溶解して75℃に加熱し、これに前記油相成分を添加して乳化し、冷却後40℃にて(7)を添加、混合する。
(1)精製水 全量を100重量%とする量
(2)1,3−ブタンジオール 5(重量%)
(3)グリセリン 10
(4)キサンタンガム 0.15
(5)クエン酸ナトリウム 0.1
(6)エデト酸二ナトリウム 0.01
(7)パラオキシ安息香酸メチル 0.12
(8)精製水 5
(9)オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実の50(v/v)%1,3−ブタンジオール抽出物 0.05
(10)炭酸ジオクチル 3
(11)バチルアルコール 1.8
(12)ベヘニルアルコール 1.2
(13)マイクロクリスタリンワックス 1
(14)ミツロウ 2.5
(15)キャンデリラロウ 0.8
(16)水素添加パーム油 2.5
(17)ヘキサメチルシクロトリシロキサン 25
(18)スクワラン 3
(19)精製ホホバ油 2
(20)マカデミアナッツ油 1
(21)ポリヒドロキシステアリン酸 0.2
(22)トリポリヒドロキシステアリン酸ジペンタエリスリチル 0.3
(23)香料 0.02
製法:(1)に(2)〜(7)を添加、溶解して70℃〜75℃に加熱する(水相成分)。(10)〜(22)を混合し、70℃〜75℃に加熱して均一とする(油相成分)。前記水相成分を撹拌しながら、前記油相成分を徐々に添加して乳化する。40℃まで冷却した後、(8)に溶解した(9)、および(23)を順次添加して混合し、均一とする。
Claims (9)
- オオヤマザクラ(Cerasus sargentii (Rehder) H.Ohba)の果実より、エタノールまたはブタンジオールを含む抽出溶媒により抽出して得られる抽出物を含有する、皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
- 抽出溶媒中のエタノールの濃度が、50(v/v)%または100(v/v)%である、請求項1に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
- ブタンジオールが1,3−ブタンジオールである、請求項1に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
- 抽出溶媒中のブタンジオールの濃度が50(v/v)%である、請求項1または3に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
- 皮膚の酸化的ストレスによる炎症の改善または防止用である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
- 皮膚の酸化的ストレスによる老化の改善または防止用である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
- 皮膚外用医薬品である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
- 皮膚外用医薬部外品である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
- 皮膚用化粧品である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の皮膚の酸化的ストレス抑制剤。
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