JP2003513937A

JP2003513937A - 抗ｃｄ２０抗体および／または化学療法薬および放射線療法と併用して抗ｃｄ４０ｌ抗体を使用するｂ細胞悪性疾患の処置

Info

Publication number: JP2003513937A
Application number: JP2001536191A
Authority: JP
Inventors: ハンナ、ナビル; ハリハラン、カンダサミー
Original assignee: アイデック・ファーマシューティカルズ・コーポレイション
Priority date: 1999-11-08
Filing date: 2000-11-06
Publication date: 2003-04-15
Also published as: IL149500A0; MXPA02004599A; SG147294A1; US20010018041A1; CN1407901A; NO20022174L; AU784174B2; AU2249101A; WO2001034194A1; CA2390412A1; EP1229935A1; RU2305561C2; ZA200203631B; KR20020072277A; NO20022174D0

Abstract

(57)【要約】本発明は、Ｂ細胞リンパ種および白血病、並びに他のCD40⁺悪性疾患を治療する組成物、併用療法および方法を開示する。この組成物の主な活性剤は、CD40/CD40L相互作用を阻害する抗CD40L抗体、または他のCD40Lアンタゴニストである。組成物は、更に、前記疾患の治療のために下記の何れか一以上を含有または利用してもよい：抗CD20抗体、化学療法剤、および放射線療法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の分野】

本発明は、ＣＤ４０とそのリガンドのＣＤ４０Ｌの間の相互作用を調節するこ
とにより、またはＣＤ４０シグナル伝達を調節することにより、Ｂ細胞リンパ腫
および白血病、並びに他のＣＤ４０^＋悪性疾患を処置するための、方法および併
用療法を記載する。特に、相互作用は、抗ＣＤ４０Ｌ抗体を使用して阻害でき、
ＣＤ４０ＬがＣＤ４０に結合するのを防ぐことができる。ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ
相互作用を阻害できる、これらの抗体または他の物質はさらに、化学療法薬、放
射線および／または抗ＣＤ２０抗体および抗ＣＤ４０抗体と併用できる。

【０００２】

【発明の背景】

リンパ腫はリンパ球の腫瘍である。リンパ腫の９０％がＢ細胞起源であり、残
りの１０％はＴ細胞起源である。大半の患者はホジキン病（ＨＤ）または非ホジ
キン型リンパ腫（ＮＨＬ）と診断される。

【０００３】診断されたリンパ腫に応じて、処置選択肢は、放射線療法、化学療法、および
モノクローナル抗体の使用を含む。

【０００４】Ａ．抗ＣＤ２０抗体ＣＤ２０は、Ｂ細胞リンパ腫の９０％より多くに発現される、細胞表面抗原で
あり、新生物細胞では分断または変調されない（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら、Ｊ．
Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：２８２５〜２８３３（１９９８ｂ））。ＣＤ２０
抗原は、細胞内シグナル伝達、Ｂ細胞分化およびカルシウムチャネル動員に関与
する、グリコシル化されていない３５ｋＤａのＢ細胞膜タンパク質である（Ｃｌ
ａｒｋら、Ａｄｖ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５２：８１〜１４９（１９８９）；
Ｔｅｄｄｅｒら、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ１５：４５０〜４５４（
１９９４））。該抗原は、ヒトＢ細胞系統の初期マーカーとして出現し、正常お
よび悪性Ｂ細胞個体群の両方に種々の抗原密度で遍在的に発現している。しかし
、該抗原は、完全な成熟Ｂ細胞（例えば形質細胞）、初期Ｂ細胞個体群および幹
細胞上には存在せず、このため抗体媒介療法に適切な標的である。

【０００５】抗ＣＤ２０抗体は、研究および治療薬の両方に使用するために調製されてきた
。１つの抗ＣＤ２０抗体はモノクローナルＢ１抗体である（米国特許第５，８４
３，３９８号）。抗ＣＤ２０抗体はまた、Ｂ細胞リンパ腫の処置のために放射性
核種の形で（例えば^１３１Ｉ標識抗ＣＤ２０抗体）、並びに、前立腺癌および乳
癌転移により引き起こされる骨痛の緩和のために^８９Ｓｒ標識形で調製される。
（Ｅｎｄｏ，ＧａｎＴｏＫａｇａｋｕＲｙｏｈｏ２６：７４４〜７４８
（１９９９））ネズミモノクローナル抗体の１Ｆ５（抗ＣＤ２０抗体）は、報告によると、Ｂ
細胞リンパ腫患者に連続的静脈内点滴により投与した。しかし、極めて高いレベ
ル（＞２ｇ）の１Ｆ５が報告によると、循環中の腫瘍細胞の枯渇に必要であり、
結果は「一過性」と記載された（Ｐｒｅｓｓら、Ｂｌｏｏｄ６９：５８４〜５
９１（１９８７））。治療薬にモノクローナル抗体を使用することで生じ得る問
題は、非ヒトモノクローナル抗体（例えばネズミモノクローナル抗体）は、典型
的に、ヒト効果機能性を欠失しており、例えば、それらは、とりわけ、補体依存
的溶解を媒介できないか、または、抗体依存的細胞毒性またはＦｃ受容体媒介フ
ァゴサイトーシスによって、ヒト標的細胞を溶解できないことである。さらに、
非ヒトモノクローナル抗体は、外来タンパク質としてヒト宿主により認識され得
；それ故、かかる外来抗体の反復注射により、免疫応答が誘起され得、これによ
り有害な過敏症反応が生じる。ネズミをベースとしたモノクローナル抗体では、
これはしばしば、ヒト抗マウス抗体応答、すなわち「ＨＡＭＡ」応答と称される
。さらに、これらの「外来」抗体は、宿主の免疫系により攻撃され得、それらは
標的部位に到達する前に実質的に中和される。

【０００６】登録商標リッキサン（ＲＩＴＵＸＡＮ）。登録商標リッキサン（Ｒｉｔｕｘｉ
ｍａｂ、登録商標マブセラ（ＭａｂＴｈｅｒａ）、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８およびＣ
２Ｂ８としても知られる）は、最初にＦＤＡに認可されたモノクローナル抗体で
あり、ヒトＢ細胞リンパ腫の処置のためにＩＤＥＣ製薬（米国特許第５，８４３
，４３９号；第５，７７６，４５６号および第５，７３６，１３７号参照）で開
発された（Ｒｅｆｆら、Ｂｌｏｏｄ８３：４３５〜４４５（１９９４））。登
録商標リッキサンは、増殖阻害性であり、報告によるとインビトロで化学療法剤
によるアポトーシスのために特定のリンパ腫細胞系を感作する、キメラの抗ＣＤ
２０モノクローナル（ＭＡｂ）である（Ｄｅｍｉｄｅｍら、ＣａｎｃｅｒＢｉ
ｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ１２：１７７
〜（１９９７））。登録商標リッキサンはまた、ネズミ異種移植片動物モデルを
使用してインビボで試験した場合に、抗腫瘍活性を実証する。登録商標リッキサ
ンは効率的にヒト補体に結合し、強力なＦｃＲ結合を有し、補体依存的（ＣＤＣ
）および抗体依存的（ＡＤＣＣ）機序の両方を介して効率的にインビトロでヒト
リンパ球を殺滅できる（Ｒｅｆｆら、Ｂｌｏｏｄ８３：４３５〜４４５（１９
９４））。マカクでは、抗体は選択的に、血液およびリンパ節から正常Ｂ細胞を
枯渇させる。

【０００７】登録商標リッキサンは、低級または濾胞Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の処
置に推奨される（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈｕｎｔｉｎｇ
ｔ）１２：１７６３〜１７７７（１９９８ａ）：Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｏｎｃｏｌ
ｏｇｙ１２：６３〜７６（１９９８）；Ｌｅｇｅｔら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．
Ｏｎｃｏｌ．１０：５４８〜５５１（１９９８））。欧州では、登録商標リッキ
サンは、再発段階ＩＩＩ／ＩＶ濾胞リンパ腫の療法に認可されており（Ｗｈｉｔ
ｅら、Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ２：９５〜１０１（
１９９９））、報告によると濾胞中心細胞リンパ腫（ＦＣＣ）に対して効果的で
ある（Ｎｇｕｙｅｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ６２：７６〜８２（１
９９９））。登録商標リッキサンで処置する他の疾患は、濾胞中心細胞リンパ腫
（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、漫性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ
）、および小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病（ＳＬＬ／ＣＬＬ）（
Ｎｇｕｙｅｎら、１９９９））を含む。難治性または治癒不可能なＮＨＬの患者
は報告によると、登録商標リッキサンおよびＣＨＯＰ（例えばシクロホスファミ
ド、ビンクリスチン、プレドニンおよびドキソルビシン）療法の組合せに応答し
た（Ｏｈｎｉｓｈｉら、癌と化学療法２５：２２２３〜８（１９９８））。登録
商標リッキサンは、第ＩおよびＩＩ相臨床試験で、低級非ホジキンリンパ腫（Ｎ
ＨＬ）で最大毒性および有意な治療活性を示した（Ｂｅｒｉｎｓｔｅｉｎら、Ａ
ｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．９：９９５〜１００１（１９９８））。

【０００８】登録商標リッキサン、これを単独使用して、Ｂ細胞ＮＨＬを典型的には３７５
ｍｇ／Ｍ^２の１週間投与量で４週間、再発または難治性低級または濾胞ＮＨＬを
処置した）は、十分に耐容性であり、有意な臨床活性を示した（Ｐｉｒｏら、Ａ
ｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１０：６５５〜６１（１９９９）；Ｎｇｕｙｅｎら、（１９
９９）；およびＣｏｉｆｆｉｅｒら、Ｂｌｏｏｄ９２：１９２７〜１９３２（
１９９８））。しかし、５００ｍｇ／Ｍ^２までの４週間投与量も、抗体を使用し
た試験中に投与した（Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｂｌｏｏｄ９０：２１８８〜２１９
５（１９９７））。登録商標リッキサンはまた、ＣＨＯＰ（例えばシクロホスフ
ァミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）などの化学療法
薬と併用して、低級または濾胞Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者を処置した（Ｃ
ｚｕｃｚｍａｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２６８〜７６（１９９９
）；およびＭｃＬａｕｇｌｉｎら（１９９８ａ））。

【０００９】Ｂ．ＣＤ４０よびＣＤ４０ＬＣＤ４０は、成熟Ｂ細胞の細胞表面上、並びに、白血病およびリンパ球Ｂ細胞
上、および、ホジキン病（ＨＤ）のホジキンおよびリード・ステルンベルグ（Ｒ
Ｓ）細胞上に発現する（Ｖａｌｌｅら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：１
４６３〜１４６７（１９８９）；およびＧｒｕｓｓら、Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏ
ｍａ２４：３９３〜４２２（１９９７））。ＣＤ４０はＢ細胞受容体であり、
正常および悪性Ｂ細胞、例えば非ホジキン濾胞リンパ腫の活性化および生存をも
たらす（Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｂｌｏｏｄ８２：１８４８〜１８５７（１９９３
）；およびＭｅｔｋａｒら、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈ
ｅｒ．４７：１０４（１９９８））。ＣＤ４０受容体を通したシグナル伝達は、
未熟Ｂ細胞およびＢ細胞リンパ腫を、ＩｇＭ−またはＦａｓ誘導アポトーシスか
ら防御する（Ｗａｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１５５：３７２２〜３７
２５（１９９５））。同様に、マントル細胞リンパ腫細胞は高レベルのＣＤ４０
を有し、外来性ＣＤ４０Ｌの添加はその生存を増強し、フルダラビン誘導アポト
ーシスからそれらを救出した（Ｃｌｏｄｉら、Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ
．１０３：２１７〜２１９（１９９８））。これに対し、他者は、ＣＤ４０刺激
は、インビトロ（Ｆｕｎａｋｏｓｈｉら、Ｂｌｏｏｄ８３：２７８７〜２７９
４（１９９４））およびインビボ（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂｌｏｏｄ８６：１９４
６〜１９５３（１９９５））の両方で新生物Ｂ細胞増殖を阻害し得ると報告した
。

【００１０】マウスに投与した抗ＣＤ４０抗体（米国特許第５，８７４，０８２号および第
５，６６７，１６５号参照）は、ヒトＢ細胞リンパ腫を有するマウスの生存を延
ばした（Ｆｕｎａｋｏｓｈｉら（１９９４）；およびＴｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１６１：３１７６〜３１８５（１９９８））。ＣＤ４０Ｌの効果を模倣
した抗ＣＤ４０抗体を使用して、Ｂ細胞リンパ腫およびＥＢＶ誘導リンパ腫を含
む、新生物を処置し、それにより死シグナルを送達する方法は、米国特許第５，
６７４，４９２号（１９９７）に記載され、これは参照してその全体がここに組
み込まれる。ＣＤ４０シグナル伝達はまた、ＣＤ２０との相乗的相互作用に関連
している（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、Ｃｉｒｃ．Ｓｈｏｃｋ４４：６７〜７２（
１９９４））。抗ＣＤ４０抗体の調製および使用を記載したさらなる参考文献は
、米国特許第５，８７４，０８５号（１９９９）、第５，８７４，０８２号（１
９９９）、第５，８０１，２２７号（１９９８）、第５，６７４，４９２号（１
９９７）および第５，６６７，１６５号（１９９７）を含み、これは参照してそ
の全体がここに組み込まれる。

【００１１】ＣＤ４０リガンドのｇｐ３９（ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０ＬまたはＣＤ１５
４とも称する）は、活性化されているが、休止していないＣＤ４^＋Ｔｈ細胞上に
発現されている（Ｓｐｒｉｇｇｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１５４３〜
１５５０（１９９２）；Ｌａｎｅら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２５
７３〜２５７８（１９９２）；およびＲｏｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：
１〜１４（１９９３））。ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌの両方がクローニングおよ
び特徴づけられている（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉら、ＥＭＢＯＪ．８：１４０３
〜１４１０（１９８９）；Ａｒｍｉｔａｇｅら、Ｎａｔｕｒｅ３５７：８０〜
８２（１９９２）；Ｌｅｄｅｒｍａｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：１０９
１〜１１０１（１９９２）；およびＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈら、ＥＭＢＯＪ．
１１：４３１３〜４３２１（１９９２））。ヒトＣＤ４０Ｌも、米国特許第５，
９４５，５１３号に記載されている。ＣＤ４０Ｌ遺伝子でトランスフェクトし、
ＣＤ４０Ｌタンパク質をその表面上に発現している細胞は、Ｂ細胞増殖を引き起
こし得、他の刺激シグナルと共に、抗体産生を誘導できる（Ａｒｍｉｔａｇｅら
（１９９２）；および米国特許第５，９４５，５１３号）。ＣＤ４０Ｌは、新生
物濾胞内の腫瘍Ｂ細胞（ＣＤ４０^＋）またはホジキン疾病領域におけるリード・
ステルンベルグ細胞（ＣＤ４０^＋）の細胞接触依存的相互作用において重要な役
割を果たし得る（Ｃａｒｂｏｎｅら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７：９１２
〜９２２（１９９５））。抗ＣＤ４０Ｌモノクローナル抗体は報告によると、Ｌ
Ｐ−ＢＭ５−感染マウスにおいて、ネズミエイズ遺伝子（ＭＡＩＤＳ）の誘導の
阻害に効果的に使用されている（Ｇｒｅｅｎら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２４１：２
６０〜２６８（１９９８））。しかし、悪性Ｂ細胞の生存対細胞死応答に至るＣ
Ｄ４０Ｌ−ＣＤ４０シグナル伝達の機序は不明である。例えば、濾胞リンパ腫細
胞において、アポトーシス誘導ＴＲＡＩＬ分子（ＡＰＯ−２Ｌ）のダウンレギュ
レーション（Ｒｉｂｅｉｒｏら、ＢｒｉｔｉｓｈＪ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１０
３：６８４〜６８９（１９９８））およびＢＣＬ−２の過剰発現、およびＢ−Ｃ
ＬＬの場合には、ＣＤ９５（Ｆａｓ／ＡＰＯ−１）のダウンレギュレーション（
Ｌａｙｔｒａｇｏｏｎ−Ｌｅｗｉｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．６１：
２６６〜２７１（１９９８））は、生存の機序と提唱されている。これに対し、
濾胞リンパ腫には、ＣＤ４０活性化により、ＴＮＦ（Ｗｏｒｍら、Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌ．６：１８８３〜１８９０（１９９４））ＣＤ
９５分子（Ｐｌｕｍａｓら、Ｂｌｏｏｄ９１：２８７５〜２８８５（１９９８
））がアップレギュレートするという証拠が存在する。

【００１２】抗ＣＤ４０抗体はまた、抗体媒介疾病、例えば米国特許第５，８７４，０８２
号（１９９９）に記載のようなアレルギーおよび自己免疫疾患の予防または処置
のために調製される。抗ＣＤ４０抗体は報告によると、抗ＣＤ２０抗体と効果的
に併用され、細胞培養液中の非ホジキンＢ細胞リンパ腫の増殖の阻害において相
加作用を生じる（Ｂｅｎｏｉｔら、Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ３
５：１２９〜１３９（１９９６））。マウスにおけるインビボ試験では、抗ＣＤ
２０抗体は、個々に投与した抗ＣＤ４０抗体よりも、全てではないがいくつかの
リンパ腫系を有するマウスの生存を促進する上で、より効果的であったことが実
証されたようである（Ｆｕｎａｋｏｓｈｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｅｍ
ｐｈａｓｉｓＴｕｍｏｒＩｍｍｕｎｏｌ．１９：９３〜１０１（１９９６）
）。抗ＣＤ１９抗体は報告によると、２つの同系マウスＢ細胞リンパ腫のＢＣＬ
１およびＡ３１の処置においてインビボで効果的である（Ｔｕｔｔら（１９９８
））。Ｂ細胞活性化に関連した疾患を処置するために使用する、ＣＤ４０Ｌに対
する抗体も記載されている（欧州特許出願第５５５，８８０号（１９９３））。
抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、米国特許第５，７４７４，０３７号（１９９８）に記載の
ような、モノクローナル抗体３Ｅ４、２Ｈ５、２Ｈ８、４Ｄ９−８、４Ｄ９−９
、２４−３１、２４−４３、８９−７６および８９−７９、および、移植片対宿
主疾患の処置に使用する米国特許第５，８７６，７１８号（１９９９）に記載の
抗ＣＤ４０Ｌ抗体を含む。

【００１３】それ故、以前に文献で報告されたものとは関係なく、Ｂ細胞リンパ腫および白
血病を処置するための改良された処置法および併用療法が必要である。抗ＣＤ４
０Ｌ抗体、および、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用に拮抗する他の薬剤を含む組
成物の使用は、癌患者に別の処置手段を提供し、これは既存の療法よりも毒性が
低くあり得る。特に、ＣＤ４０刺激を阻害し癌細胞が難治性から化学療法または
他の癌療法により引き起こされるプログラム化細胞死になるのを防ぐ提唱された
方法および組成物は、以前には未知であった、癌療法を増強し、療法に耐性な細
胞が発達する可能性を減少させる方法を提供する。

【００１４】

【発明の概要】

本発明の目的は、ＣＤ４０Ｌに結合する、治療有効量の抗体または抗体断片を
投与することを含む、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞白血病、および他のＣＤ４０^＋悪
性疾患を処置する方法を提供する。Ｂ細胞リンパ腫は、ホジキンリンパ腫および
任意の等級の非ホジキンリンパ腫を含む。

【００１５】本発明の別の目的は、抗ＣＤ４０Ｌ抗体または抗体断片またはＣＤ４０Ｌアン
タゴニストおよび以下の少なくとも１つ（ａ）化学療法剤または化学療法剤の組
合せ、（ｂ）放射線療法、（ｃ）抗ＣＤ２０抗体またはその断片および（ｄ）抗
ＣＤ４０抗体またはその断片を含む、Ｂ細胞リンパ腫またはＢ細胞白血病の処置
の併用療法を提供することである。

【００１６】

【発明の詳細な記述】

本発明の別の態様は、白血病およびリンパ腫、並びに、ＣＤ４０を発現する他
の悪性疾患を処置するための組成物を提供することである。好ましい本発明の実
施形態は、該組成物およびそれを使用してＢ細胞系統のリンパ腫および白血病を
処置する方法である。該組成物は、ＣＤ４０シグナル伝達またはＣＤ４０とＣＤ
４０Ｌの間の相互作用に拮抗する物質を含み得る。前記物質は所望により、１つ
の活性物質、例えば抗ＣＤ４０Ｌ抗体またはその断片、並びにペプチド断片、ペ
プチド模倣体、または化学的化合物を含み得る。別に、該組成物は、ＣＤ４０シ
グナル伝達またはＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用以外の悪性疾患の態様を標的と
する、複数の活性物質、例えば化学療法薬、他の抗体を含み得、および／または
放射線療法と併用して投与し得る。

【００１７】Ａ．定義本明細書に使用したような「ＣＤ４０Ｌ抗体」なる語は、ＣＤ４０Ｌタンパク
質またはそのペプチドまたはＣＤ４０Ｌ融合タンパク質と特異的に反応性である
、免疫グロブリンおよびその断片を含むものとする。ＣＤ４０Ｌ抗体は、ヒト抗
体、霊長類抗体、キメラ抗体、二特異的抗体およびヒト化抗体を含み得る。

【００１８】本明細書に使用したような「ＣＤ４０抗体」により、ＣＤ４０タンパク質また
はそのペプチドまたはＣＤ４０融合タンパク質と特異的に反応性である、免疫グ
ロブリンおよびその断片を含むものとする。ＣＤ４０抗体は、ヒト抗体、霊長類
抗体、キメラ抗体、二特異的抗体およびヒト化抗体を含み得る。

【００１９】本明細書に使用したような「ＣＤ２０抗体」により、ＣＤ２０タンパク質また
はそのペプチドまたはＣＤ２０融合タンパク質と特異的に反応性である、免疫グ
ロブリンおよびその断片を含むものとする。ＣＤ２０抗体は、ヒト抗体、霊長類
抗体、キメラ抗体、二特異的抗体およびヒト化抗体を含み得る。抗ＣＤ２０抗体
は、モノクローナルＢ１抗体および登録商標リッキサンを含む。

【００２０】「ヒト化抗体」により、親抗体の抗原結合特性を保持または実質的に保持して
いるが、ヒトにおいてより免疫原性の低い、非ヒト抗体から得られた抗体、典型
的にはネズミ抗体を意味する。これは、（ａ）全非ヒト可変ドメインを、ヒト定
常領域に移植して、キメラ抗体を作成する；（ｂ）非ヒト相補性決定領域（ＣＤ
Ｒ）のみを、重要な骨格残基を保持したまたは保持していないヒト骨格および定
常領域に移植する、および（ｃ）全非ヒト可変ドメインを移植するが、それらを
表面残基の置換によりヒト様切片で「覆う」、を含む種々の方法により行ない得
る。前記方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．８１：６８５１〜５（１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．４４：６５〜９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍ
ｍｕｎ．２８：４８９〜４９８（１９９１）；およびＰａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃ
．Ｉｍｍｕｎ．３１：１６９〜２１７（１９９４）に開示され、その全てをこれ
により参照してその全体が組み込まれる。ヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、１９９５
年１１月７日に提出された米国特許出願第０８／５５４，８４０号に記載のよう
に調製でき、これも参照してその全体がここに組み込まれる。

【００２１】「ヒト抗体」により、既知の任意の標準的な方法により作成される、全ヒト軽
鎖および重鎖、並びに、定常領域を含む抗体を意味する。

【００２２】「霊長類抗体」により、サル（または他の霊長類）抗体、特にカニクイザル抗
体の可変重鎖および軽鎖ドメインを含むように工学され、ヒト定常ドメイン配列
、好ましくはヒト免疫グロブリンγ１またはγ４定常ドメイン（またはＰＥ変異
体）を含む、組換え抗体を意味する。かかる抗体の調製は、Ｎｅｗｍａｎら、Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１４５８〜１４６０（１９９２）；また共通
に譲受された一般的に第０８／３７９，０７２号、第０８／４８７，５５０号、
または第０８／７４６，３６１号に記載され、これは全部、参照してその全体を
本明細書に取込む。これらの抗体は、ヒト抗体に高度の相同性、すなわち８５〜
９８％を示し、ヒト効果機能を示し、低下した免疫原性を示し、ヒト抗原に対し
て高い親和性を示し得ると報告されている。

【００２３】「抗体断片」により、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’およびｓｃＦｖなど
の抗体断片を意味する。

【００２４】「キメラ抗体」により、典型的には異なる種である、２つの異なる抗体から得
られた配列を含む、抗体を意味する。最も典型的には、キメラ抗体は、ヒトおよ
びネズミ抗体断片、および一般的にはヒト定常およびネズミ可変領域を含む。

【００２５】「二特異的抗体」により、１つの抗原に特異的な１つの抗原結合部位、および
、別の抗原に特異的な他の抗原結合部位を有する抗体分子を意味する。

【００２６】「免疫原性」により、対象への投与時に標的化タンパク質または治療部分が免
疫応答（例えば体液性または細胞性）を誘発する能力を意味する。

【００２７】投与し易さおよび投与均一性のために、投与単位形で非経口組成物を製剤化す
ることが特に利点がある。本明細書に使用したような「単位投与形」は、処置す
る哺乳動物対象の単位投与量として適した物理的に別個の単位を意味し；予め決
定した量の活性化合物を含む各単位は、必要な医薬担体と合わせて所望の治療効
果を生じるように計算される。本発明の投与単位形の詳細は、（Ａ）活性化合物
の独特な特徴および達成したい特定の治療効果；および（Ｂ）個体の感受性の処
置のための活性化合物などの配合の分野に固有の限界により指示され直接的に依
存する。

【００２８】Ｂ．ＣＤ４０Ｌアンタゴニスト本発明の方法に従って、ＣＤ４０Ｌアンタゴニストを対象に投与し、ＣＤ４０
Ｌとその結合対のＣＤ４０の相互作用を妨害する。「ＣＤ４０Ｌアンタゴニスト
」は、この相互作用を妨害する分子と定義する。ＣＤ４０Ｌアンタゴニストは、
ＣＤ４０Ｌに対して指向される抗体（例えばＣＤ４０Ｌに対するモノクローナル
抗体）、ＣＤ４０Ｌに対する抗体の断片または誘導体（例えばＦａｂまたはＦ（
ａｂ）’_２断片）、キメラ抗体またはヒト化抗体、ＣＤ４０の可溶形、ＣＤ４０
を含む融合タンパク質の可溶形、またはＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０相互作用を破壊ま
たは妨害またはＣＤ４０シグナル伝達を妨害する医薬物質であり得る。

【００２９】抗体。抗ＣＤ４０Ｌ抗体を調製するために、哺乳動物（例えばマウス、ハムス
ター、ウサギまたは有蹄動物）に、動物において抗体応答を誘発する、ＣＤ４０
Ｌタンパク質またはタンパク質断片（例えばペプチド断片）の免疫原性形を用い
て免疫化できる。ＣＤ４０Ｌをその表面上に発現している細胞も、免疫原として
使用できる。別の免疫原は、精製ＣＤ４０Ｌタンパク質またはタンパク質断片を
含む。ＣＤ４０Ｌは、ＣＤ４０Ｌを発現している細胞から、標準的な精製技術に
より精製できる（Ａｒｍｉｔａｇｅら（１９９２）；Ｌａｄｅｒｍａｎら（１９
９２）；およびＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈら（１９９２））。別に、ＣＤ４０Ｌペ
プチドは、Ａｒｍｉｔａｇｅら（１９９２）に開示したような、ＣＤ４０Ｌのア
ミノ酸配列に基づいて調製できる。免疫原性をタンパク質に付与する技術は、担
体へのコンジュゲートまたは当分野で公知の他の技術を含む。例えば、タンパク
質は、アジュバントの存在下で投与できる。免疫化のプロセスは、血漿または血
清中の抗体力価の検出によりモニタリングできる。標準的なエライザまたは他の
イムノアッセイを、抗原と共に免疫原として使用し、抗体レベルを評価できる。
免疫化後、抗血清を得、ポリクローナル抗体を単離できる。モノクローナル抗体
を作製するために、抗体産生細胞を収集し、米国特許第５，８３３，９８７号（
１９９８）および第５，７４７，０３７号（１９９７）に記載のような標準的な
体細胞融合手順を使用して骨髄細胞と融合できる。

【００３０】抗体は、慣用的な技術を使用して断片であり得、断片を、全抗体について上記
したのと同じ様式で有用性についてスクリーニングできる。例えば、Ｆ（ａｂ’
）_２断片を、抗体をペプシンで処理することにより作成できる。得られたＦ（ａ
ｂ’）_２断片を処理して、ジスルフィド橋を還元し、Ｆａｂ’断片を生成できる
。考えられる他の抗体断片はＦａｂおよびｓｃＦｖを含む。

【００３１】一般的な免疫抑制以外に、ヒトで治療に使用する場合に非ヒト抗体の認識を最
小限にする１つの方法は、キメラ抗体誘導体、すなわち、非ヒト動物可変領域お
よびヒト定常領域を合わせた抗体分子を作製することである。ヒト化キメラ抗体
分子は、ヒト定常領域と共に、例えば、マウス、ラットまたは他の種の抗体由来
の抗原結合ドメインを含み得る。これらのヒト化キメラ抗体を作製する方法は、
米国特許第５，８３３，９８７号（１９９８）に引用した参考文献を含む。

【００３２】ヒトを治療する目的では、ＣＤ４０Ｌタンパク質またはペプチドと特異的に反
応性である抗体をさらに、ヒト可変領域キメラを作製することによりヒト化でき
、ここでの可変領域の部分、特に抗原結合ドメインの保存骨格領域はヒト起源で
あり、超可変領域のみが非ヒト起源である。かかる変化した免疫グロブリン分子
は、当分野で公知の数個のいずれかの技術により作製し得（例えば、Ｔｅｎｇら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８０：７３０８〜７３１２
（１９８３）；Ｋｏｚｂｏｒら、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ４：７２
７９（１９８３）；Ｏｌｓｓｏｎら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：３〜１
６（１９８２））、好ましくはＰＣＴ公開公報第ＷＯ９２／０６１９３号または
第ＥＰ０２３９４００号の教義に従って作製する。ヒト化抗体は、例えば、英国
ミドルセックス、トゥィックナム、２ホリーロード、スコットゲン・リミテッド
により商業的に製造できる。好ましいヒト化ｇｐ３９（ＣＤ４０Ｌ）抗体、ＩＤ
ＥＣ−１３１は、参照してその全体を本明細書に取込む、許可された米国特許出
願第０８／５５４，８４０号に開示されている。

【００３３】ＣＤ４０Ｌタンパク質またはペプチド（例えば、米国特許第５，９４５，５１
３号に記載のｇｐ３９融合タンパク質）に対して反応性である、特異的抗体また
は抗体断片を作製する別の方法は、ＣＤ４０Ｌタンパク質またはペプチドを用い
て細菌中で発現される、免疫グロブリン遺伝子またはその一部をコードする発現
ライブラリーをスクリーニングすることである。例えば、完全Ｆａｂ断片、Ｖ_Ｈ領域およびＦ_ｖ領域は、ファージ発現ライブラリーを使用して細菌中で発現でき
る。例えば、Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４〜５４６（１９８９）
；Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５〜１２８１（１９８９）；お
よびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２〜５５４（１９９
０）参照。かかるライブラリーを、例えばＣＤ４０Ｌペプチドでスクリーニング
することにより、ＣＤ４０Ｌと反応性の免疫グロブリン断片を同定できる。別に
、ＳＣＩＤ−ｈｕマウス（Ｇｅｎｐｈａｒｍから入手可能）を使用して、抗体ま
たはその断片を作製できる。

【００３４】本発明の方法に使用するための、ヒトＣＤ４０ＬおよびマウスＣＤ４０Ｌを含
む、ＣＤ４０Ｌに対して指向するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）および適切なモ
ノクローナル抗体を作製する方法は、「抗ｇｐ３９抗体およびその使用」と題し
たＰＣＴ特許出願第ＷＯ９５／０６６６６号に記載され、その教義は参照してそ
の全体がここに組み込まれる。本発明の特に好ましい抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体は、
ハイブリドーマ２４−３１および８９−７６によりそれぞれ産生される、ＭＡｂ
ｓ２４−３１および８９−７６である。それぞれ８９−７６および２４−３１抗
体を産生する、８９−７６および２４−３１ハイブリドーマは、１９９４年９月
２日、２０１１０−２２０９、バージニア州マナッサス（Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖ
Ａ）１０８０１ユニバーシティブルーバード、アメリカン・タイプ・カルチャー
・コレクション（ＡＴＣＣ）にブダペスト条約の条項下で寄託された。８９−７
６ハイブリドーマはＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ１１７１３が割当てられ、２４−３１
ハイブリドーマはＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ１１７１２が割当てられた。

【００３５】キメラおよびヒト化抗体などの組換え抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、抗ＣＤ４０Ｌ抗体
をコードする核酸（例えばＤＮＡまたはｃＤＮＡ）を標準的な組換えＤＮＡ技術
に従って操作することにより作製できる。従って、本発明の別の態様は、ＣＤ４
０Ｌ、特にヒトＣＤ４０Ｌと反応性である、免疫グロブリン重鎖または軽鎖をコ
ードする単離核酸分子またはその一部に関する。免疫グロブリンコード核酸は、
連結した重鎖または軽鎖定常領域（またはその一部）を有するまたは有さない、
免疫グロブリン軽鎖（Ｖ_Ｌ）または重鎖（Ｖ_Ｈ）可変領域をコードし得る。かか
る核酸は、標準的な技術により、抗ヒトＣＤ４０ＬＭＡｂを産生する細胞（例え
ばハイブリドーマ）から単離できる。例えば、２４−３１または８９−７６ＭＡ
ｂをコードする核酸は、ｃＤＮＡライブラリースクリーニング、ＰＣＲ増幅また
は他の標準的な技術により、それぞれ２４−３１または８９−７６ハイブリドー
マから単離できる。さらに、抗ヒトＣＤ４０ＬＭＡｂをコードする核酸を発現ベ
クターに取込み、適切な宿主細胞に導入して、抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体の組換え形
の発現および産生を容易にし得る。

【００３６】霊長類抗体。別の高度に効率的な組換え抗体の作製法は、Ｎｅｗｍａｎ、Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１４５５〜１４６０（１９９２）により開示さ
れる。より特定すると、この技術により、サル可変ドメインおよびヒト定常配列
を含む霊長類抗体が作製される。この文献は参照してその全体をここに組み込む
。さらに、この技術はまた、共通して譲受した１９９５年１月２５日提出の米国
特許出願第０８／３７９，０７２号に記載され、これは、１９９２年７月１０日
提出の米国特許出願０７／９１２，２９２号の継続出願であり、これは１９９２
年３月２３日提出の米国特許出願０７／８５６，２８１号の一部継続出願であり
、これは最後に１９９１年７月２５日提出の米国特許出願０７／７３５，０６４
号およびその親出願の一部継続出願であり、その全部を参照してその全体がここ
に組み込まれる。

【００３７】この技術は、ヒトへの投与時に抗原的に拒絶されないように抗体を修飾する。
この技術は、ヒト抗原または受容体によるカニクイザルの免疫化に依拠する。こ
の技術を展開して、ヒト細胞表面抗原に指向された高親和性モノクローナル抗体
を創造した。

【００３８】ファージディスプレイライブラリーのスクリーニングによるヒトＣＤ４０Ｌに
対するマカク抗体およびＣＤ４０Ｌ免疫化サル由来のＢリンパ球を使用して得ら
れたサルへテロハイブリドーマの同定は、１９９５年６月７日提出の共通して譲
受された米国特許出願０８／４８７，５５０号に記載の方法を使用して実施でき
、これは参照してその全体を本明細書に取込む。

【００３９】これらの出願に記載の方法を使用して作成した抗体は、以前に、ヒト効果機能
を示し、低下した免疫原性および長い血清中半減期を有することが報告された。
技術は、カニクイザルは、ヒトに系統的に類似しているという事実にも関わらず
、依然として多くのヒトタンパク質を外的として認識し、それ故、免疫応答を引
き起こすという事実に依拠する。さらに、カニクイザルは、系統的にヒトに近い
ので、これらのサルに産生された抗体は、ヒトで産生された抗体に対して高度の
アミノ酸相同性を有することが発見された。実際、マカク免疫グロブリン重鎖お
よび軽鎖可変領域遺伝子のシークエンス後、各遺伝子ファミリーの配列は、その
ヒト対応物に対して８５〜９８％相同であることが判明した（Ｎｅｗｍａｎら、
１９９２）。このように産生した第一抗体である抗ＣＤ４抗体は、ヒト免疫グロ
ブリン骨格領域の共通配列に９１〜９２％相同であった（Ｎｅｗｍａｎら、１９
９２）。

【００４０】上記したように、本発明は、一部には、ヒトＣＤ４０Ｌ抗原に特異的であり、
ＣＤ４０シグナル伝達を阻害またはＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用を阻害できる
、モノクローナル抗体またはその霊長類形の同定に関する。同定抗体（または治
療的に効果的なその断片）を用いたＣＤ４０とＣＤ４０Ｌの間の主要活性部位の
遮断は、陰性シグナル伝達に対する寛容な効果を有する陽性の共刺激時の合わせ
た拮抗作用を可能としつつ、再発形の悪性疾患、特にＢ細胞リンパ腫および白血
病に介入する有用な治療アプローチである。同定した抗体の機能的活性は、ＣＤ
４０のシグナルを遮断し、それを生存させ、ＩｇＭ−またはＦａｓ誘導アポトー
シスを回避することを可能とすることにより規定される。

【００４１】ヒトＣＤ４０ＬまたはＣＤ４０に特異的に結合する新規サルモノクローナル抗
体、並びに、それから得られた霊長類抗体の製造は、同時係属米国特許出願第０
８／４８７，５５０号に記載の方法を使用して、本明細書に示したように実施で
きる。これらの抗体は、ＣＤ４０Ｌに対して高い親和性を有し、それ故、ＣＤ４
０Ｌ／ＣＤ４０経路を阻害する免疫抑制剤として使用し得る。

【００４２】サルモノクローナル抗体の調製は、好ましくは、ファージディスプレイライブ
ラリーのスクリーニングにより、または、ＣＤ４０Ｌ（例えばヒトＣＤ４０）免
疫化サルから得られたＢリンパ球を使用したサルヘテロハイブリドーマの調製に
より行なう。ヒトＣＤ４０はまた、米国特許第５，９４５，５１３号に記載の融
合タンパク質からであり得る。

【００４３】記載したように、抗ＣＤ４０Ｌ抗体を作製する第一の方法は、組換えファージ
ディスプレイ技術を含む。この技術は一般に上記している。

【００４４】実質的に、これは、繊維状ファージの表面上に提示されるＣＤ４０Ｌ抗原に対
する組換え免疫グロブリンライブラリーの合成、および、ＣＤ４０Ｌ抗原に対し
て高い親和性を有する抗体を分泌するファージの選択を含む。上記したように、
好ましくは、ヒトＣＤ４０ＬおよびＣＤ４０の両方に結合する抗体を選択する。
かかる方法を行なうために、本発明者らは、組換えの可能性を減少させ、安定性
を向上する、サルライブラリー用の独特なライブラリーを創造した。

【００４５】実質的には、マカクライブラリーと共に使用するためのファージディスプレイ
を採用するために、このベクターは、サル免疫グロブリン遺伝子を増幅するＰＣ
Ｒ用の特異的プライマーを含む。これらのプライマーは、霊長類技術の開発中に
得られたマカク配列、および、ヒト配列を含むデータベースに基づく。

【００４６】適切なプライマーを、参照してここに組み込まれた、共通して譲受した０８／
３７９，０７２号に開示する。

【００４７】第二の方法は、ヒトＣＤ４０Ｌ抗原に対する、サル、すなわちマカクの免疫化
を含む。モノクローナル抗体の作製におけるマカクの固有の利点を上記に考察す
る。特に、かかるサル、すなわちカニクイザルは、ヒト抗原または受容体に対し
て免疫化し得る。さらに、得られた抗体を使用して、Ｎｅｗｍａｎら（１９９２
）および１９９５年１月２５日提出の共通して譲受した米国特許出願第０８／３
７９，０７２号のＮｅｗｍａｎらに従って霊長類抗体を作製し得、これを参照し
てその全体が組み込まれる。

【００４８】カニクイザルから得られた抗体の有意な利点は、これらのサルは、多くのヒト
タンパク質を外的として認識し、それにより抗体（このいくつかは、所望のヒト
抗体、例えばヒト表面タンパク質および細胞受容体に対して高い親和性を有する
）の形成を提供する。さらに、それらは系統的にヒトに近いので、得られた抗体
は、ヒトで産生された抗体に対して高度のアミノ酸相同性を示す。上記したよう
に、マカク免疫グロブリン軽鎖および重鎖可変領域遺伝子をシークエンスした後
、各遺伝子ファミリーの配列は、そのヒト対応物に対して８５〜８８％相同であ
ることが判明した（Ｎｅｗｍａｎら、１９９２）。

【００４９】実質的に、カニクイザルに、ヒトＣＤ４０Ｌ抗原を投与し、Ｂ細胞をそれから
単離し、例えばリンパ節生検を動物から採取し、その後、Ｂリンパ球をＫＨ６／
Ｂ５（マウス×ヒト）ヘテロミエローマ細胞と、ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ）を使用して融合する。ヒトＣＤ４０Ｌ抗原に結合する抗体を分泌しているヘ
テロハイブリドーマをその後同定する。

【００５０】ＣＤ４０シグナル伝達を破壊または調節する様式でＣＤ４０ＬまたはＣＤ４０
に結合する抗体が望ましい。なぜなら、かかる抗体は、ＣＤ４０Ｌと、ＣＤ４０
、その対受容体の相互作用を阻害するのに使用し得るからである。抗体が、ＣＤ
４０ＬまたはＣＤ４０上の２つ以上のエピトープに対して発達し得る場合、抗体
を共に使用し、その合わせた活性は、相乗作用を提供し得る可能性がある。

【００５１】開示した本発明は、初回抗原刺激して特定の抗体を産生する動物（例えば、霊
長類、例えばオランウータン、ヒヒ、マカク、およびカニクイザル）の使用を含
む。ヒトＣＤ４０Ｌに対する抗体を産生するのに使用し得る他の動物は、以下を
含むがこれに限定されない：マウス、ラット、モルモット、ハムスター、サル、
ブタ、ヤギおよびウサギ。

【００５２】ＳＣＩＤマウスを使用してヒト抗体を作製する好ましい手段は、共通して所有
される同時係属中の米国特許出願第０８／４８８，３７６号に開示される。

【００５３】ＣＤ４０、ＣＤ４０ＬおよびＣＤ２０抗原をコードしているヒト遺伝子がクロ
ーン化され、配列決定されており、したがって組換え体方法によって簡単に製造
できる。

【００５４】好ましくは、ヒトＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０またはＣＤ２０抗原は、たとえば、抗
原をコードしている遺伝子の発現によって、その膜貫通領域および細胞質領域が
除去され、それによって、細胞外部分、すなわち細胞外スーパーファミリーＶお
よびＣ様領域のみが残る、可溶性形態にて投与する可能性がある。

【００５５】マカクサルを、ＣＤ４０Ｌ抗原に対して特異的な抗体を産出することになる条
件下で、ＣＤ４０Ｌ抗原、好ましくはその可溶性形態で免役する。好ましくは、
可溶性ヒトＣＤ４０Ｌ抗原は、アジュバント、たとえばフロイトの完全アジュバ
ント（ＣＦＡ）、アラム、サポニン、または他のアジュバント、ならびにそれら
の組合せともに投与する可能性がある。一般的に、たとえば注射の繰り返しによ
って、数ヶ月にわたる免疫の繰り返しが必要である可能性がある。たとえば、可
溶性ヒトＣＤ４０Ｌ抗原の投与は、アジュバント中、ブースター免疫にて、３か
ら４ヶ月の間にわたり、ヒトＣＤ４０Ｌ抗原に結合した抗体を含む血清の産出と
なって実施される。

【００５６】免疫の後、Ｂ細胞を、たとえば免疫した動物からとったリンパ管生検により、
収集し、Ｂリンパ球をポリエチレングリコールを用いてＫＨ６／Ｂ５（マウス×
ヒト）異種骨髄腫細胞と融合させる。そのような異種骨髄細胞の調製の方法は公
知であり、１９９５年１月２５日にＮｅｗｍａｎらに申請された米国特許第０８
／３７９，０７２号にて見ることが可能であり、本明細書にて参考文献として組
み込まれている。

【００５７】ついで、ヒトＣＤ４０Ｌに結合する抗体を分泌する異種ハイブリドーマを同定
する。このことは、公知の技術によって実施してよい。たとえば、このことは、
酵素または放射性ヌクレオチド標識化ヒトＣＤ４０Ｌ抗原を用いたＥＬＩＳＡま
たは放射免疫アッセイによって測定してよい。

【００５８】ついで、ヒトＣＤ４０Ｌ抗原に対する望ましい特異性を持っている抗体を分泌
する細胞株を、単一クローン性になるまでサブクローン化する。

【００５９】ついでヒトＣＤ４０Ｌ抗原に特異的に結合する抗体を発現している細胞株を用
いて、その両方が参照してここに組み込まれた、Ｎｅｗｍａｎら（１９９２）お
よび１９９５年１月２５日に交付された、Ｎｅｗｍａｎら、米国特許第３７９，
０７２号にて本質的に記載されたように、霊長類化した抗体の製造のために、可
変領域配列をクローン化する。本質的に、このことは、その細胞株からのＲＮＡ
の抽出、ｃＤＮＡへの変換、およびＩｇ特異的プライマーを用いたＰＣＲによる
その増幅を必然的に伴っている。好適なプライマーは、Ｎｅｗｍａｎら、１９９
２および米国特許第３７９，０７２号にて記述されている。

【００６０】ついで、クローン化されたサル可変遺伝子をヒト重鎖および軽鎖定常領域遺伝
子を含む発現ベクター内に挿入する。好ましくは、このことは、ＮＥＯＳＰＬＡ
と呼ばれる、アイデック社（ＩＤＥＣ，Ｉｎｃ）の登録商標発現ベクターを用い
て実施され得る。このベクターには、サイトメガロウイルスプロモーター／エン
ハンサー、マウスベータグロブリン主要プロモーター、ＳＶ４０複製開始部位、
ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ
エクソン１およびエクソン２、ヒト免疫グロブリンカッパまたはラムダ定常領域
、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、ヒト免疫グロブリンガンマ１またはガンマ
４ＰＥ定常領域およびリーダー配列が含まれる。このベクターは、結果としてサ
ル可変領域遺伝子の組み込み、ＣＨＯ細胞中のトランスフェクション、続Ｇ４１
８含有培養液中での選別とメトトレキサート増幅において霊長類化抗体の非常に
高レベルの発現をおこすことがわかっている。

【００６１】たとえば、この発現系はすでに、ＣＤ４および他のヒト細胞表面レセプターに
対して高い反応性（Ｋｄ＜１０^−１０Ｍ）を持っている霊長類化抗体を作り出す
ことが開示されている。さらに、抗体は、元来のサル抗体と同様の親和性、特異
性および機能的活性を示すことがわかっている。このベクター系は、本質的には
、参照してここに組み込まれた、広く指定された米国特許第３７９，０７２号、
ならびに、これもその全体が参照してここに組み込まれている、１９９３年１１
月３日に申請された米国特許第０８／１４９，０９９号にて開示されている。こ
の系は、高い発現レベル、すなわち＞３０ｐｇ／細胞／日を提供する。

【００６２】治療的効果を産出するために有用な抗体の量は、当業者によく公知の標準の技
術にて決定できる。抗体は、一般的に、薬理学的に許容可能な緩衝液内の標準の
技術によって提供され得、望む経路にて投与してよい。現在請求された抗体の効
力およびヒトによるその耐性のために、ヒトにおける種々の疾患または疾患状態
をうち負かすために繰り返しこれらの抗体を投与することが可能である。

【００６３】当業者は、通常の実験によって、免疫抑制を誘導する目的のために、なにが効
果的で、非毒性量の抗体であるかを決定することができるであろう。しかしなが
ら、一般的に効果的用量は、１日あたり、１キログラム体重あたり約０．０５か
ら１００ミリグラムの範囲である。

【００６４】本発明の抗体（またはその断片）はまた、哺乳動物での腫瘍の処置のために有
用であるべきである。より具体的に、これらは、腫瘍の大きさを減少させ、腫瘍
増殖を阻害し、および／または腫瘍を持つ動物の生存時間を延長させるために有
用であるべきである。したがって、本発明はまた、ヒトまたは他の動物に、効果
的で、非毒性量の抗体を投与することによって、そのようなヒトまたは動物での
腫瘍を治療する方法にも関する。当業者は、通常に実験において、発癌性腫瘍を
処置する目的のために、効果的な、非毒性量の抗ＣＤ４０Ｌ抗体はどんなものか
を決定することができる。しかしながら、一般的に効果的な用量は、１日あたり
、１キログラム体重あたり、約０．０５から１００ミリグラムの範囲であること
が予想される。

【００６５】本発明の抗体は、治療的または予防的程度までその効果を産出するのに十分な
量で、上述した治療方法にしたがって、ヒトまたは他の動物に投与してよい。本
発明のそのような抗体は、公知の技術にしたがった、従来の薬理学的に許容可能
な担体または希釈液と、本発明の抗体を混合することによって調製した、従来の
投与形態にて、そのようなヒトまたは他の動物に投与することができる。薬理学
的に許容可能な担体または希釈液の形態および特徴は、混合する活性成分の量、
投与形態および他のよく公知の変数によって示唆される。ことが当業者に理解さ
れるであろう。

【００６６】本発明の抗体（またはその断片）の投与経路は、経口、非経口、吸入または局
所によってよい。本明細書で使用するところの語句、非経口には、静脈内、腹膜
内、筋肉内、皮下、腸または膣投与が含まれる。非経口投与の皮下および筋肉内
形態が一般的に好ましい。

【００６７】免疫抑制を予防的または治療的に誘導するため、または発癌性腫瘍を治療的に
処置するために本発明の化合物を使用するための、日々の非経口および経口投与
計画は、一般的に、１日あたり、１キログラム体重あたり、約０．０５から１０
０、好ましくは約０．５から１０ミリグラムの範囲である。

【００６８】本発明の抗体はまた、吸入によって投与してもよい。「吸入」は、鼻腔内およ
び経口吸入投与を意味する。エアゾル処方または計量式吸入器のような、そのよ
うな投与に対する好ましい投与形態は、従来の技術にて調製可能である。使用す
る本発明の化合物の好ましい投与量は、一般的に、約１０から１００ミリグラム
の範囲内である。

【００６９】本発明の抗体はまた、局所に投与してよい。局所投与は、非全身投与を意味し
、表面的な表皮、口腔への本発明の抗体（またはその断片）化合物の適用、およ
び耳、目および鼻、および血流に著しく侵入しない場所への、そのような抗体の
点滴注入が含まれる。全身投与は、経口、静脈内、腹膜内および筋肉内投与を意
味する。治療的または予防的効果のために必要な抗体の量は、もちろん、選択し
た抗体、処置する状態、および治療を受けている動物の性質および重傷度によっ
て変化し、最終的には、医者の裁量による。本発明の抗体の好適な局所用量は、
一般的に、１日に、１キログラム体重あたり約１から１００ミリグラムの範囲内
である。

【００７０】Ｃ．ＣＤ４０Ｌに対する可溶性リガンドＣＤ４０Ｌを認識し、結合し、ＣＤ４０とのその相互作用を阻害する抗体に加
えて、他のＣＤ４０Ｌアンタゴニストが、Ｂ細胞リンパ腫および白血病の処置で
の使用のために、単独または他の治療（たとえば放射治療または化学治療）との
組合せのいずれかで、企図される。他のＣＤ４０Ｌアンタゴニストは、ＣＤ４０
Ｌリガンドの可溶性形態である。可溶性ＣＤ４０のような、ＣＤ４０Ｌの一価可
溶性リガンドが、ＣＤ４０Ｌに結合でき、それによって、ＣＤ４０Ｌの、Ｂ細胞
発現ＣＤ４０との相互作用を阻害する。語句「可溶性は、リガンドが、永久に細
胞膜と結合しないことを示唆している。可溶性ＣＤ４０Ｌリガンドは、化学合成
によって、または好ましくは組換え体ＤＮＡ技術、たとえば、リガンドの細胞外
領域のみ（膜貫通領域および細胞質領域なし）の発現によって、調製できる。好
ましい可溶性ＣＤ４０Ｌリガンドは、可溶性ＣＤ４０である。あるいは、可溶性
ＣＤ４０Ｌリガンドは、融合タンパク質の形態でありうる。そのような融合タン
パク質は、第二分子に結合したＣＤ４０Ｌの少なくとも一部分を含む。たとえば
ＣＤ４０は、免疫グロブリンとの融合タンパク質（すなわちＣＤ４０Ｉｇ融合タ
ンパク質）として発現させることができる。１つの実施形態において、融合タン
パク質は、たとえばＣα１などの、免疫グロブリン重鎖のヒンジ、Ｃ_Ｈ２および
Ｃ_Ｈ３領域に相当する配列のアミノ酸残基と連結したＣＤ４０の細胞外領域部分
のアミノ酸を含んで産出し、ＣＤ４０Ｉｇ融合タンパク質を形成する（たとえば
、Ｌｉｎｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８３：７２１−７３０（１９９
１）、Ｃａｐｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３７：５２５−５３１（１９８９）、
および米国特許第５，１１６，９６４号（１９９２）を参照のこと）。そのよう
な融合タンパク質は、化学合成によって、または好ましくはＣＤ４０のｃＤＮＡ
に基づいた組換え体ＤＮＡ技術によって産出できる（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら
、ＥＭＢＯＪ．８：１４０３−１０（１９８９））。

【００７１】Ｄ．抗ＣＤ４０Ｌの投与ＣＤ４０Ｌアンタゴニストを、インビボでの薬理学的投与に好適な生物学的に
適合可能な形態で、対象に投与する。「インビボでの薬理学的投与に好適な生物
学的に適合可能な形態（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｆ
ｏｒｍｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎインビボ
）」は、タンパク質の治療的効果が、任意の毒性効果を上回る、投与すべきアン
タゴニストの形態を意味する。本明細書で使用するところの語句、「対象」は、
免疫応答が誘導されうる生物体、たとえば哺乳動物を含むことが意図される。好
ましい対象の例には、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、有蹄類、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒ
ツジ、マウス、ラットおよびそのトランスジェニック種が含まれる。ＣＤ４０Ｌ
アンタゴニストは、任意の薬理学的形態、任意に薬理学的に許容可能な担体中で
投与できる。治療的に効果量のアンタゴニストの投与は、望む結果（たとえば処
置したリンパ腫の進行または増殖の阻害）を達成するために必要な用量および時
間間隔で、効果的な量として定義される。たとえば、治療的に活性量のＣＤ４０
Ｌのアンタゴニストは、対象の疾患ステージ（たとえばステージＩ対ステージＩ
Ｖ）、年齢、性別、医学的合併症（たとえばＡＩＤＳまたは他の免疫抑制状態ま
たは疾患に関連したか、またはそのために発生したリンパ腫）および体重、およ
びアンタゴニストの対象での望む応答を顕在化させる能力などの因子にしたがっ
て変化してよい。投与計画は、最適な治療応答を提供するように適合してよい。
たとえば、数回の分割用量を、毎日投与してよく、または治療的状態の緊急事態
によって示唆されたように、部分的に減少させてよい。

【００７２】それ自身または他の活性剤との組合せで、抗ＣＤ４０Ｌ抗体のような活性化合
物を、注射（皮下、筋肉内、静脈内など）、経口投与、吸入、経皮適用または腸
投与によるような都合のよい様式にて投与してよい。投与経路に依存して、活性
化合物は、酵素の活性、酸および化合物を不活性化させる他の天然の状態より化
合物を保護するために、物質内でコートしてもよい。好ましい投与経路は、静脈
内（ｉ．ｖ．）注射によってである。

【００７３】非経口投与以外でＣＤ４０Ｌを投与するために、その不活性化を防ぐために、
物質でアンタゴニストをコートするか、または物質と共にアンタゴニストを共投
与することが必要である可能性がある。たとえば、アンタゴニストは、適切な担
体または希釈液中で個体に投与でき、酵素阻害剤と共に、またはリポソームのよ
うな適切な担体またはベクター内で共投与できる。薬理学的に許容可能な希釈液
には、食塩水および水性緩衝溶液が含まれる。酵素阻害剤には、膵臓トリプシン
阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＥＰ）およびトラシロールが
含まれる。リポソームには、水中油中水エマルション、ならびに従来のリポソー
ム（Ｓｔｒｅｊａｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．７：２７−４１（１９
８４））が含まれる。さらなる薬理学的に許容可能な担体および賦形剤が、本技
術分野で公知である。

【００７４】活性化合物はまた、非経口または腹膜内で投与してよい。分散液をまた、グリ
セロール、液体ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物中、および油中で
調製可能である。保存および使用の通常の状態下で、これらの調製物は、細菌の
増殖を防ぐために、保存剤を含んでよい。

【００７５】注射可能な使用に関して好適な薬理学的組成物には、無菌水性溶液（水溶液）
または分散液、および無菌注射可能溶液または分散液の即時調製のための無菌粉
末が含まれる。すべての場合において、組成物は無菌でなければならず、簡単に
シリンジに入れられる程度まで流体でなければならない。製造および保存の条件
下で安定でなければならず、細菌および真菌のような微生物の汚染活性に対して
予防されなければならない。担体は、たとえば水、エタノール、ポリオール（た
とえば、グリセロール、ポリエチレングリコールおよび液体ポリエチレングリコ
ールなど）、およびそれらの好適な混合液を含む、溶媒または分散溶液であり得
る。適切な流動性は、たとえばレシトビンのようなコーティングの使用によって
、分散液の場合は、要求される粒子の大きさを保持することによって、および界
面活性剤の使用によって保持できる。微生物の活性の防止は、種々の抗細菌剤お
よび抗真菌剤、たとえばパラベン類、クロロブタノール、フェノール、アスコル
ビン酸、チメロサルなどによって達成できる。多くの場合、組成物中に、等張剤
、たとえば糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、または塩
化ナトリウムが含まれることが好ましい。注射可能組成物の吸収を引き延ばすこ
とが、吸収を遅らせる薬剤、たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラ
チンを組成物に含ませることによって実施できる。

【００７６】無菌注射可能溶液は、必要量の活性化合物（たとえば、それ自身または他の活
性剤との組み合わせで、ＣＤ４０Ｌのアンタゴニスト）を、必要なように本明細
書で列挙した成分の１つまたは組み合わせとともに、適切な溶媒内に組み込み、
ついで濾過滅菌することで調製できる。一般的には、分散液は、活性成分を、塩
基性分散溶媒および以上で列挙した他の必要な成分を含む無菌賦形剤内に組み込
むことによって調製する。無菌注射可能溶液の調製のための無菌粉末の場合、調
製の好ましい方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これによって、活性成分
＋先に滅菌濾過したその溶液からの任意のさらなる望んだ成分が産出される。

【００７７】上述したように、活性化合物が好適に保護されている場合、タンパク質を、た
とえば不活性希釈液、または吸収可能、食用担体と共に、経口で投与してよい。
本明細書で使用するところの、「薬理学的に許容可能な担体」には、任意のおよ
びすべての溶媒、分散溶液、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張およ
び吸収遅延剤などが含まれる。そのような溶液および薬剤を、薬理学的に活性な
基質に対して使用することが本技術分野でよく公知である。任意の従来の溶液ま
たは薬剤が活性化化合物と適用可能ではない程度を除いて、治療的組成物中での
その使用が企図される。ＣＤ４０Ｌアンタゴニストと一緒の使用に関して以上で
議論したすべての組成物はまた、組成物中での補助的活性化合物（たとえば、抗
ＣＤ２０抗体中の化学治療剤）も含んでよい。

【００７８】Ｅ．他の薬剤と一緒の抗ＣＤ４０Ｌの投与ホーキンス病。毎年およそ７，５００のホーキンス病（ＨＤ）の新規症例が、
米国で診断されている。放射治療のみがステージＩ、ＩＩおよびステージＩＩＩ
ＨＤでさえも使用されてきた。放射はまた、化学治療（たとえばＡＢＶＤおよ
びＭＯＰＰ）との組合せで使用されても来た。ＨＤの治療に関する放射および化
学治療プロトコールの適用に関して、Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａら、「ホーキンス病
（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓＤｉｓｅａｓｅ）」ＣＡＮＣＥＲ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥ
Ｓ＆ＰＲＡＣＴＩＣＥＯＦＯＮＣＯＬＯＧＹＶｏｌ．２、２１４２−
２２８３（ＤｅＶｉｔａら、ｅｄｓ．，５^ｔｈｅｄ．１９９７）およびそこ
での参考文献を参照のこと。

【００７９】ＨＤを処置するために有用な化学治療薬剤には、アルキル化剤、ビンカアル
カロイド（たとえばビンクリスチンおよびビンブラスチン）、プロカルバジン、
メトトレキサートおよびプレドニゾンが含まれる。４薬剤組合せ、ＭＯＰＰ（メ
チルエタミン（窒素マスタード）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）、プロカ
ルバジンおよびプレドニゾン）が、ＨＤの処置において最も効果的である。ＭＯ
ＰＰ抵抗性患者においては、ＡＢＶＤ（たとえばアドレアマイシン、ブレオマイ
シン、ビンブラスチンおよびダカルバジン）、ＣｈｌＶＰＰ（クロラムブシル、
ビンブラスチン、プロカルバジンおよびプレドニゾン）、ＣＡＢＳ（ロムスチン
、ドキソルビシン、ブレオマイシンおよびストレプトゾトシン）、ＭＯＰＰ＋Ａ
ＢＶＤ、ＭＯＰＰ＋ＡＢＶ（ドキソルビシン、ブレオマイシンおよビンブラスチ
ン）またはＢＣＶＰＰ（カルムスチン、シクロホスファミド、ビンブラスチン、
プロカルバジンおよびプレドニゾン）組合せが使用できる。標準の投与および計
画に関しては、ＡｒｎｏｌｄＳ．ＦｒｅｅｄｍａｎａｎｄＬｅｅＭ．Ｎ
ａｄｌｅｒ，悪性リンパ腫（ＭａｌｉｇｎａｎｔＬｙｍｐｈｏｍａｓ）、ＨＡ
ＲＲＩＳＯＮ’ＳＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳＯＦＩＮＴＥＲＮＡＬＭＥＤＩ
ＣＩＮＥ１７７４−１７８８（ＫｕｒｔＪ．Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒら、ｅ
ｄｓ．，１３^ｔｈｅｄ．，１９９４）およびＶ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａら、（１９
９７）およびそこに引用された参考文献。これらの治療は、変更なく使用でき、
またはそれ自身ＣＤ４０Ｌアンタゴニストとの組合せで、またはさらに抗ＣＤ２
０抗体またはその断片との組合せで、特定の患者に関して必要なように変更して
使用できる。

【００８０】再発または抵抗性ＨＤに対して、従来の用量回収組合せ投与計画が、抗ＣＤ４
０Ｌ抗体との組合せで、単独で、または抗ＣＤ２０抗体との組合せで使用できる
。従来の用量回収組合せＨＤ投与計画の例には、Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａら（１９
９７）で記述されたような用量およびスケジュールを用いた、ＶＡＢＣＤ（ビン
ブラスチン、ドキソルビシン、デカルバジン、ロスムチンおよびブレオマイシン
）、ＡＢＤＩＣ（ドキソルビシン、ブレオマイシン、デカルバジン、ロムスチン
、プレドニゾン）、ＣＢＶＤ（ロムスチン、ブレオマイシン、ビンブラスチンお
よびデキサメタゾン）、ＰＣＶＰ（ビンブラスチン、プロカルバジン、シクロホ
スファミドおよびプレドニゾン）、ＣＥＰ（ロムスチン、エトポシドおよびプレ
ドニムスチン）、ＥＶＡ（エトポシド、ビンブラスチンおよびデキソルビシン）
、ＭＯＰＬＡＣＥ（シクロホスファミド、エトポシド、プレドニゾン、メトトレ
キサート、シタラビンおよびビンクリスチン）、ＭＩＭＥ（メチルＧＡＧ、イホ
スファミド、メトトレキサートおよびエトポシド）、ＭＩＮＥ（ミトクアゾン、
イホスファミド、ビンオレルビンおよびエトポシド）、ＭＴＸ−ＣＨＯＰ（メト
トレキサートおよびＣＨＯＰ）、ＣＥＭ（ロムスチン、エトポシドおよびメトト
レキサート）、ＣＡＶＰ（ロムスチン、メルファラン、エトポシドおよびプレド
ニソン）、ＥＶＡＰ（エトポシド、ビンブラスチン、シタラビンおよびシスプラ
チン）、ＥＰＯＣＨ（エトポシド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、シクロホ
スファミドおよびプレドニゾン）が含まれる。

【００８１】非ホーキンスリンパ腫（ＮＨＬ）。米国において毎年、約４０，０００のＮＨ
Ｌの新規症例が診断され、この数は増加しているように見える。さらに、ＮＨＬ
は毎年の死亡合計数において、癌より第四位にランクされている。ＮＨＬには、
固有の臨床的提示および天然の歴史を持つ、リンパ腫の種々の亜型が含まれる。
ＮＨＬ亜型の分類は、ＮＨＬの共通分類、ＷｏｒｋｉｎｇＦｏｒｍｕｌａｔｉ
ｏｎによって列記されている。表１は、ＷｏｒｋｉｎｇＦｏｒｍｕｌａｔｉｏ
ｎの３つの等級を列記している。

【００８２】

【表１】ＮＨＬのＢ細胞型には、小リンパ球性リンパ腫／Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病
（ＳＬＬ／Ｂ−ＣＬＬ）、リンパ性プラズマ細胞リンパ腫（ＬＰＬ）、マントル
細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾包性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（
ＤＬＣＬ）およびバーキットリンパ腫が含まれる。Ｇａｉｄａｎｏら「リンパ腫
」ＣＡＮＣＥＲ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ＆ＰＲＡＣＴＩＣＥＯＦＯＮＣ
ＯＬＯＧＹｖｏｌ．２，２１３１−２１４５（ＤｅＶｉｔａら、ｅｄｓ．，５ ^ｔｈｅｄ．１９９７）を参照のこと。２つの他の形式（たとえばＫｉｅｌ処方
およびＲｅｖｉｓｅｄＥｕｒｏｐｅａｎＡｍｅｒｉｃａｎＬｙｍｐｈｏｍ
ａＣｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、またはＲＥＡＬ）もまた腫瘍学で使用され
、ＮＨＬの名前は、２つの定義型間で変化しうる。Ｍ．Ａ．Ｓｈｉｐｐら「非ホ
ーキンスリンパ腫（Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓＬｙｍｐｈｏｍａｓ）」ＣＡ
ＮＣＥＲ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ＆ＰＲＡＣＴＩＣＥＯＦＯＮＣＯＬＧ
ＹＶｏｌ，２、２１６５−２２２０（ＤａＶｉｔａら、ｅｄｓ．，５^ｔｈｅ
ｄｓ１９９７）を参照のこと。ＮＨＬリンパ腫はさらに、診断された患者の年
齢によって分類できる。

【００８３】

【表２】放射線治療は典型的には、ステージＩまたはＩＩの低級ＮＨと診断された患者
の治療に限定され、進行的と分類された患者に対する潜在的な治療様相として限
定されている。本発明は、ＣＤ４０Ｌアンタゴニストを放射線治療と混合するこ
と、およびまたＮＨＬを処置するための他の癌処置様相を企図している。

【００８４】化学療法が、ステージＩＩのほとんどの患者およびステージＩＩＩおよびＩＶ
疾患のすべての患者のために使用される。治療計画には、シクロホスファミドま
たはクロラムブシルのようなアルキル化剤、またはＣＶＰ（シクロホスファミド
、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（ＣＶＰおよびドキソルビシ
ン）、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾンおよ
びプロカルバジン）、ＣＡＰ−ＢＯＰ（ＣＨＯＰ＋プロカルバジンおよびブレオ
マイシン）、ｍ−ＢＡＣＯＤ（ＣＨＯＰ＋メトトレキサート、ブレオマイシンお
よびロイコボリン）、ＰｒｏＭＡＣＥ−ＭＯＰＰ（プレドニゾン、メトトレキサ
ート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシドおよびロイコボリン＋
標準のＭＯＰＰ）、ＰｒｏＭＡＣＥ−ＣｙｔａＢＯＭ（プレドニゾン、ドキソル
ビシン、シクロホスファミド、エトポシド、シタラビン、ブレオマイシン、ビン
クリスチン、メトトレキサートおよびロイコボリン）およびＭＡＣＯＰ−Ｂ（メ
トトレキサート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、固定
用量プレドニゾン、ブレオマイシンおよびロイコボリン）のような組み合わせの
使用が含まれる。標準の用量およびスケジュールに関しては、Ｓｈｉｐｐら（１
９９７）を参照のこと。ＣＨＯＰはまた、ブレオマイシン、メトトレキサート、
プロカルバジン、窒素マスタード、シトシンアラビノサイトおよびエトポシドと
も組み合わされてきた。ＮＨＬの処置のための、あまり一般的ではないが使用さ
れる薬物には、２−クロロデオキシアデノシン（２−ＣＤＡ）、２’−デオキシ
コホルミシンおよびフルダラビンが含まれる。寛解の達成ができないか、再発し
た、中および高等級ＮＨＬである患者に対しては、救済治療が使用される。救済
治療は、単独または組み合わせて投与される、シトシンアラビノシド、シスプラ
チン、エトポシドおよびイホスファミドのような薬物を使用する。Ａｍｏｌｄ
Ｓ．ＦｒｅｅｄｍａｎａｎｄＬｅｅＭ．Ｎａｄｌｅｒ，悪性リンパ腫（Ｍ
ａｌｉｇｎａｎｔＬｙｍｐｈｏｍａｓ）ＨＡＲＲＩＳＯＮ’ＳＰＲＩＮＣ
ＩＰＬＥＳＯＦＩＮＴＥＲＮＡＬＭＥＤＩＣＩＮＥ１７７４−１７８８
。再発した、ＮＨＬの進行形態の事例において、以下のプロトコール、Ｓｈｉｐ
ｐら（１９９７）にて記述された投与およびスケジュールを用いた、ＩＭＶＰ−
１６（イホスファミド、メトトレキサートおよびエトポシド）、ＭＩＭＥ（メチ
ル−ｇａｇ、イホスファミド、メトトレキサートおよびエトポシド）、ＤＨＡＰ
（デキサメタゾン、高用量シタラビンおよびシスプラチン）、ＥＳＨＡＰ（エト
ポシド、メチルプレドニゾロン、ＨＤシタラビン、シスプラチン）、ＣＥＰＰ（
Ｂ）（シクロホスファミド、エトポシド、プロカルバジン、プレドニゾンおよび
ブレオマイシン）およびＣＡＭＰ（ロムスチン、ミトキサントロン、シタラビン
およびプレドニゾン）が推奨される。

【００８５】小児ＮＨＬに対する組織学およびステージによる、推奨されるプロトコールは
以下のようである。

【００８６】

【表３】ＡＰＯ＝ドキソルビシン、プレドニゾンおよびビンクリスチン、ＣＯＭＰ＝シ
クロホスファミド、オンコビン、メトトレキサートおよびプレドニゾン。すべて
が本明細書にて参考文献で組み込まれた、Ｈ．Ｊ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら「小児
期の白血病およびリンパ腫（ＬｅｕｋｅｍｉａｓａｎｄＬｙｍｐｈｏｍａｓ
ｏｆＣｈｉｌｄｈｏｏｄ）」ＣＡＮＣＥＲ：ＰＲＯＮＣＩＰＬＥＳ＆
ＰＲＡＣＴＩＣＥＯＦＯＮＣＯＬＯＧＹＶｏｌ．２，２１４５−２１６５
（ＤｅＶｉｔａら、ｅｄｓ．，５^ｔｈｅｄ．１９９７）およびそこに引用され
た参考文献を参照のこと。

【００８７】抗ＣＤ４０−Ｌ抗体およびアンタゴニストは、診断されたＨＤまたはＮＨＬ亜
種の処置のための使用で、現在、任意の化学療法および／または放射線治療と組
み合わせて使用できる。抗ＣＤ２０抗体はまた、使用する治療液に加えることが
できる。抗ＣＤ４０Ｌ抗体またはＣＤ４０Ｌアンタゴニストとの組み合わせで使
用する化学療法の量は、対象によって変化してよく、本技術分野で公知のものに
したがって投与してよい。たとえば、ＢｒｕｃｅＡＣｈａｂｎｅｒら、抗腫
瘍性剤ＧＯＯＤＭＡＮ＆ＧＩＬＭＡＮ’ＳＴＨＥＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯ
ＧＩＣＡＬＢＡＳＩＳＯＦＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ１２３３−１２８
７（（ＪｏｅｌＧ．Ｈａｒｄｍａｎら、ｅｄｓ．，９^ｔｈｅｄ．１９９６）
を参照のこと。

【００８８】白血病および他の悪性腫瘍。本発明の処置の企図される治療および方法はまた
、ＡＬＬ−Ｌ３（バーキット型白血病）および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を
含むＢ細胞白血病、ならびに単球細胞白血病および他のＣＤ４０を発現している
悪性腫瘍を治療するために使用することもできる。

【００８９】ＡＬＬに対する処置には、ビンクリスチンおよびプレドニゾンの使用が含まれ
る。アントラサイクリン、シクロホスファミド、Ｌ−アスパラギナーゼもまた、
これらの処置に加えられてきた。他の誘導治療には、４薬剤（ビンクリスチン、
プレドニゾン、アントラサイクリンおよびシクロホスファミドまたはアスパラギ
ナーゼ）または５薬剤（ビンクリスチン、プレドニゾン、アントラサイクリン、
シクロホスファミドおよびアスパラギナーゼ）組み合わせが含まれる。さらなる
治療および用量に関して、Ｄ．Ａ．Ｓｃｈｅｉｎｂｅｒｇら「急性白血病（Ａｃ
ｕｔｅＬｅｕｋｅｍｉａｓ）」ＣＡＮＣＥＲ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ＆Ｐ
ＲＡＣＴＩＣＥＯＦＯＮＣＯＬＯＧＹｖｏｌ．２，２１９３−２３２１（
ＤｅＶｉｔａら、ｅｄｓ．，５^ｔｈｅｄ．１９９７）を参照のこと。

【００９０】ＣＬＬの処置には、ＣＭＰ、ＣＶＰ、ＣＨＯＰ、ＣＯＰおよびＣＡＰ（シクロ
ホスファミド、ドキソルビシンおよびプレドニゾン）化学療法組み合わせが含ま
れる。難治ＣＬＬの患者の処置には、プリン類似体（たとえばフルダラビン一リ
ン酸、２−クロロデオキシアデノシンおよびペントスタチン）が含まれる。Ａ．
Ｂ．Ｄｅｉｓｓｅｒｏｔｈら「慢性白血病（ＣｈｒｏｎｉｃＬｅｕｋｅｍｉａ
ｓ）」ＣＡＮＣＥＲ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ＆ＰＲＡＣＴＩＣＥＯＦ
ＯＮＣＯＬＯＧＹｖｏｌ．２，２１９３−２３２１（ＤｅＶｉｔａら、ｅｄｓ
．，５^ｔｈｅｄ．１９９７）を参照のこと。

【００９１】抗ＣＤ２０および抗ＣＤ４０抗体。本発明はさらに、ＩＤＥＣ−１３１のよう
な抗ＣＤ４０Ｌ抗体と、抗ＣＤ２０抗体、または治療的に効果的なその断片およ
び／または抗ＣＤ４０抗体またはその治療的に効果的な断片との混合を企図して
いる。好ましい抗ＣＤ２０抗体は、登録商標リッキサンおよびＢｌ（米国特許第
５，８４３，３９８号を参照のこと）である。抗ＣＤ４０Ｌ（また抗ｇｐ３９と
しても知られている）の記述、治療および使用に関しては、広く指定された、１
９９５年１１月７日に申請された米国特許第０８／５５４，８４０号、１９９７
年、９月８日に申請された第０８／９２５，３３９号、１９９８年４月３０日に
申請された第０９／０６９，８７１号、１９９９年６月１４日に申請された第０
９／３３２，５９５号、および米国特許第５，７４７，０３７号を参照のこと。
好ましい抗ＣＤ４０抗体、およびその調製は、すべてその全体が参考文献として
本明細書に組み込まれている、米国特許第５，８７４，０８５号、第５，８７４
，０８２号、第５，８０１，２２７号、第５，６６７，１６５号、第５，６７４
，４９２号、および第５，６６７，１６５号に記述されている。本明細書に記述
されたような抗ＣＤ２０抗体に対するすべての議論は、抗ＣＤ４０抗体に対して
も同様に適用される。

【００９２】定義によって、末梢血Ｂ細胞疾患が、処置に関する血液に対する査定のために
必要であることを示すことが可能であるので、免疫学的に活性なキメラ抗ＣＤ２
０抗体および放射標識化抗ＣＤ２０抗体の投与系は、好ましくは非経口であり、
本明細書で使用するところの語句「非経口」には、静脈内、筋肉内、皮下、直腸
、膣または腹膜内投与が含まれる。これらのうち、静脈内投与がもっとも好まし
い。

【００９３】免疫学的に活性なキメラ抗ＣＤ２０抗体および放射標識化抗ＣＤ２０抗体は、
典型的には、薬理学的に許容可能な緩衝液、たとえば、無菌食塩水、無菌緩衝化
水、プロピレングリコール、以上の組み合わせ等内で、標準の技術を用いて提供
されうる。非経口投与可能薬剤の調製の方法は、参照してここに組み込まれてい
る、ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＣＡＲＲＩＥＲＳ＆ＦＯＲＭＵＬＡＴ
ＩＯＮＳ，Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，１５^ｔｈＥｄ．（ＭａｃｋＰｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａ
ｓｔｏｎ，Ｐａ．１９７５）に記述されており、または上述のようである。

【００９４】任意の投与患者における固有の治療効果を産出するのに有用である、免疫学的
活性キメラ抗ＣＤ２０抗体の特異的な、治療的に効果量は、当業者によく公知の
標準の技術によって決定できる。免疫学的に活性なキメラ抗ＣＤ２０抗体の効果
的量（すなわち治療的に効果的な量）は、約０．００１から約３０ｍｇ／ｋｇ体
重、より好ましくは約０．０１から約２５ｍｇ／ｋｇ体重、もっとも好ましくは
約０．４から約２０．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。他の用量も実現可能であ
る。用量に影響を与える因子には、疾患の重症度、先行治療アプローチ、患者の
全体の健康、患者の年齢、他の疾患の存在などが、限定はしないが、含まれる。
当業者は、特定の患者を査定し、必要な範囲内であるか、または必要ならば必要
な範囲外である好適な用量を決定することで、簡単に評価する。これらの用量範
囲での免疫学的に活性なキメラ抗ＣＤ２０抗体または他のＣＤ２０抗体（たとえ
ば登録商標リッキサンまたはＢｌ）は、単一処置として、または連続処置にて実
施可能である。キメラ抗体に関して、そのような投与は、連続治療にて実施する
ことが好ましい。この好ましいアプローチは、本疾患に関連した治療方法に基づ
く。事実上、単一投与は利益をもたらし、疾患処置／取り扱いに関して効果的に
利用可能である一方で、好ましい処置過程がいくつかのステージわたり起こりえ
、もっとも好ましくは、約０．４から約２０ｍｇ／ｋｇの間体重の免疫学的に活
性なキメラ抗ＣＤ２０抗体または他の抗ＣＤ２０抗体が、約２から約１０週間、
もっとも好ましくは約４週間に１回、患者に導入される。

【００９５】放射標識抗ＣＤ２０抗体および／または抗ＣＤ４０抗体の使用に関して、選択
は、抗体が、（１）キメラでない、または（２）領域削除、キメラヒト化抗体、
または（３）ヒト抗体であることである。この選択は、全キメラまたはヒト化抗
体（すなわちより長い循環半減期を持ち、放射性核種が、より長い時間患者内に
存在する）と比較して、領域削除または齧歯類抗体が有意に循環半減期が短いこ
とに基づく。しかしながら、放射標識キメラ抗体は、この抗体に相当する非標識
抗体とともに使用される、より低キューリー（「ｍＣｉ」）用量にて有益に使用
することができる。このシナリオにより、治療的利便性を保持したまま、許容不
能レベルまで骨髄毒性を減少させることが可能である。抗ＣＤ２０の特定の放射
標識キメラ形態は、米国特許第５，７７６，４５６号および第５，８４３，４３
９号で開示したように調製できる。

【００９６】イットリウム−９０標識化抗ＣＤ２０抗体の効果的な単一治療用量（すなわち
治療的に効果的な量）は、約５から約１２０ｍＣｉの間、より好ましくは、齧歯
類抗体に関して約１０から約４０ｍＣｉの間、領域削除抗体に関して約３０から
約１００ｍＣｉの範囲である。ヨウ素−１３１標識化抗ＣＤ２０抗体の、効果的
な単一治療非骨切除用量は、約５から約７０ｍＣｉの間、より好ましくは、約５
から約４０ｍＣｉの範囲である。ヨウ素−１３１標識化抗ＣＤ２０抗体の効果的
な単一治療切除用量（すなわち自己骨髄移植を必要とする可能性がある）は、約
３０から約６００ｍＣｉの間、より好ましくは、約５０から約５００ｍＣｉ未満
の範囲である。齧歯類抗体と比較してより長い循環半減期をもっている、キメラ
抗ＣＤ２０抗体に関連して、ヨウ素−１３１標識化キメラ抗ＣＤ２０抗体の効果
的な単一治療非骨切除用量は、約５から約４０ｍＣｉの間、より好ましくは約３
０ｍＣｉより少ない範囲である。たとえばインジウム−１１１標識に対するイメ
ージング基準は、典型的には、約５ｍＣｉより少ない。放射標識化抗ＣＤ２０抗
体の作製および使用におけるさらなる議論は、両方ともその全体が参考文献とし
て、本明細書に組み込まれている米国特許第５，８４３，３９８号および第５，
８４３，４３９号で見ることができる。

【００９７】放射標識化抗体。（たとえばＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌおよび／またはＣＤ２０に
特異的な）放射標識化抗体の使用に関連して、選択は抗体がキメラではないこと
であり、この選択は、齧歯類抗体に対して、キメラ抗体の循環半減期が有意に長
い（すなわち、より長い循環半減期を持ち、放射性核種は長い間患者内に存在す
る）ことに基づく。しかしながら、放射標識化キメラ抗体は、齧歯類抗体に相当
するキメラ抗体とともに使用するより低ミリキューリー（「ｍＣｉ」）用量で有
益に使用できる。このシナリオにより、治療的利便性を保ったまま、許容可能な
レベルまで骨髄毒性の減少が可能になる。

【００９８】様々な放射性核種が、本発明に適用可能であり、当業者は、様々な環境下で、
どの放射性核種がもっとも適切であるかを簡単に決定する能力により評価する。
たとえば、ヨウ素−１３１（^１３１Ｉ）は、標的化免疫治療に対して使用される
よく公知の放射性核種である。しかしながら、^１３１Ｉの臨床使用は、８日間身
体半減期、血中および主要部位両方でのヨウ化抗体の脱ハロゲン化、および腫瘍
中の局在化した用量沈着に対して最適ではない放射特性（たとえば、多量のガン
マ含有量）を含む、様々な因子によって制限されうる。すぐれたキレート剤の登
場で、タンパク質への金属キレート基の接着に関する機会は、インジウム−１３
１（^１３１Ｉｎ）およびイットリウム−９０（^９０Ｙ）のような他の放射性核種
の使用の機会を増加させた。^９０Ｙは、放射免疫治療適用における使用に関して
いくつかの利益を提供する。^９０Ｙの６４時間の半減期は、腫瘍による抗体蓄積
を許容するのに十分長く、たとえば^１３１Ｉとは違い、^９０Ｙは、その分解にお
いて、ガンマ照射は付随せずに、高エネルギーの純粋なベータ放射物であり、１
００から１，０００細胞直径の組織の範囲内である。さらに、最小量の浸潤照射
により、^９０Ｙ標識化抗体の外来患者適用が可能になる。さらに、細胞殺傷のた
めに標識化した抗体の内面投射は必要なく、イオン化放射の局所放出が、標的抗
原を欠いている隣接腫瘍細胞に対する致死となるであろう。

【００９９】 ^９０Ｙに対する一つの非治療的制限は、有意なガンマ放射生成がなく、それか
らのイメージングが困難であることに基づく。この問題を回避するために、イン
ジウム−１１１（^１１１Ｉｎ）のような診断的「イメージング」放射性核種が、 ^９０Ｙ標識化抗ＣＤ２０の治療的用量を投与する前に、腫瘍の一および相対的な
大きさを決定するために使用することができる。インジウム−１１１は、約１か
ら約１０ｍＣｉが、検出可能な毒性なしに安全に投与可能であり、イメージング
データが一般的に続く^９０Ｙ標識化抗体分散の予想となるので、診断的放射性核
種としてとりわけ好ましい。ほとんどのイメージング研究は、安全であり、より
低い用量と比較して、イメージング効率が増加することから、５ｍＣｉ^１１１Ｉ
ｎ−標識化抗体を使用しており、最適なイメージングは、抗体投与後３から６日
の時点で起きる。たとえば、Ｍｕｒｒａｙ，Ｊ．Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．２６：３３２
８（１９８５）およびＣａｒｒａｇｕｉｌｌｏら、Ｊ．Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．２６：
６７（１９８５）を参照のこと。

【０１００】 ^９０Ｙ標識化抗体（たとえば抗ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ２０、および抗ＣＤ４０抗
体）の効果的な単一治療用量（すなわち治療的に効果的な量）は、約５から約７
５ｍＣｉの範囲であり、より好ましくは約１０から約４０ｍＣｉの範囲である。 ^１３１Ｉ標識化抗体の効果的な単一治療非骨切除用量は、約５から約７０ｍＣｉ
の間、より好ましくは約５から約４０ｍＣｉの範囲である。^１３１Ｉ標識化抗体
の効果的な単一治療切除用量（すなわち、自己骨髄移植が必要である可能性があ
る）は、約３０から約６００ｍＣｉ、より好ましくは約５０から約５００より少
ない範囲である。齧歯類抗体と比較してより長い循環半減期をもっている、キメ
ラ抗体に関連して、ヨウ素−１３１（^１３１Ｉ）標識化キメラ抗体の効果的な単
一治療非骨切除用量は、約５から約４０ｍＣｉ、より好ましくは約３０ｍＣｉよ
り少ない範囲である。たとえば^１１１Ｉｎに対するイメージング基準は、典型的
には約５ｍＣｉよりも少ない。

【０１０１】治療に対する放射標識化抗体に関して、用量はまた、単一治療処置を用いて、
または多重処置を用いても実施可能である。放射性核種含量のために、処置の前
に、末梢幹細胞（「ＰＳＣ」）または骨髄（「ＢＭ」）を、照射の結果の潜在的
な致命的骨髄毒性を経験している患者に対して「回収」することが好ましい。Ｂ
Ｍおよび／またはＰＳＣは標準の手順を用いて回収し、ついで浄化し、可能なｒ
ｅｉｎｆｕｓｉｏｎのために凍結する。さらに、処置の前に、治療的な標識化抗
体（たとえば^９０Ｙを使用）が、任意の正常器官または組織で不必要に「濃縮」
されるようにならないことを確かめる目的で、（たとえば^１１１Ｉｎを使用して
）診断的標識化抗体を用いて診断線量試験を患者において実施することがもっと
も好ましい。

【０１０２】使用してよいさらなる放射性核種には、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉｎ、^３ ^２Ｐ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^２１１Ａｔ、^１７７Ｌｕ、^９０Ｙ、^１８６Ｒｅ、^２ ^１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^４７Ｓｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｒｈ、^１５３Ｓｍ、^１８ ^８Ｒｅ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔおよび^２１３Ｂｉが含まれる。伝送される放射
量は、部分的に、半減期および型、粒子放射に依存する。

【０１０３】以下の物質および方法は、以下に記述した実験にて使用される。以下に提供さ
れた実施例は、記述した、または請求したような本発明を制限するものではなく
、単に本請求発明の実施形態を提供するのみである。

【０１０４】

【実施例】

実施例１Ｂリンパ腫細胞、ＤＨＬ−４細胞の特性抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、ＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０媒介される、化学療法誘導性の毒
性／アポトーシスにおいて生き残った悪性Ｂ細胞を阻止できるという概念を、ア
ドリアマイシン（ＡＤＭ）に曝露したＩＤＥＣ−１３１、およびＢ−リンパ腫細
胞株であるＤＨＬ−４（Roos et al., Leuk. Res 10 : 195-202 (1986)）を用い
てインビトロで調べた。ＩＤＥＣ−１３１は、マウスモノクローナル抗ヒトＣＤ
４０抗体、２４−３１をヒト化したものである。

【０１０５】まず最初に、ＤＨＬ−４細胞を種々の濃度のＡＤＭに４時間曝露することによ
り、ＤＨＬ−４細胞に対してＡＤＭ細胞傷害性を示す最小濃度を測定した。５日
間の培養後、ＤＨＬ−４細胞の細胞傷害性を、生存細胞による色素減少（ｄｙｅ
−ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）アッセイであるアラマーブルー（ＡｌａｍａｒＢｌｕ
ｅ）により測定した（Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Meth.202 : 163-1
71 (1997) 参照）。簡単に説明すると、増殖培地（ＲＭＰＩ−１６４０に１０％
ウシ胎児血清を加えたもの）中の１×１０^５のＤＨＬ−４細胞を、種々の濃度（
１×１０^−６Ｍ〜１×１０^−８Ｍ）のＡＤＭと共に、細胞培養管中で３７℃にお
いて４時間インキュベートした。インキュベート後、細胞を洗浄し、１×１０^５細胞／ｍＬの濃度となるように増殖培地中に再懸濁し、２００μＬの細胞懸濁液
を９６ウェル平底プレートの各ウェルに添加した。プレートを３７℃でインキュ
ベートし、種々の時点での細胞傷害性を検査した。インキュベーションの最後の
１８時間は、酸化還元色素であるアラマーブルー（Biosource International, C
at.♯DAL 1100）５０μＬを各ウェルに添加した。インキュベーションの後に、
プレートを振盪機上で室温で１０分間インキュベートして冷却し、色素の細胞内
減少を測定した。９６ウェル蛍光光度計を用いて、励起波長５３０ｎｍ、発光波
長５９０ｎｍにおいて蛍光を測定した。その結果を、相対蛍光単位（ｒｅｌａｔ
ｉｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｕｎｉｔｓ（ＲＦＵ））で表す。細胞障害
性の割合を、次のように算出した。

【０１０６】［１−（試験サンプルの平均ＲＦＵ／対照細胞の平均ＲＦＵ）］×１００％ＡＤＭ細胞傷害性の滴定曲線を確立し、後のアッセイのために細胞傷害性に対す
るこの薬物の最小濃度を選択した。

【０１０７】図１に示すように、この結果は、培養前にＡＤＭ（２×１０^−７Ｍおよび４×
１０^−８ＭのＡＤＭ）に曝露後、５日間培養したＤＨＬ−４細胞の細胞傷害性を
示す。細胞を曝露後に一度洗浄し、増殖培地中で５日間培養後、上述したように
アラマーブルー色素−取り込み（ｕｐｔａｋｅ）アッセイにより細胞傷害性を測
定した。さらに、フローサイトメトリーにより、選択したＣＤ分子の膜発現を調
べるためにＤＨＬ−４細胞を特徴付けた。ＤＨＬ−４細胞はＣＤ１９，ＣＤ２０
，ＣＤ４０分子を発現することが分かったが、ＣＤ４０の発現は検出されなかっ
た。

【０１０８】実施例２抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、アドリアマイシンによるＢ−リンパ腫細胞の死滅に対す
るＣＤ４０Ｌ媒介性の耐性を打消す図２は、抗ＣＤ４０抗体（ＩＤＥＣ−１３１）の、ＡＤＭにより誘発される細
胞死に対するＤＨＬ−４０細胞のＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０媒介性耐性に対する効果
を示す。ＤＨＬ−４細胞（０．５×１０^６細胞／ｍＬ）を、１０μｇ／ｍＬの可
溶性ＣＤ４０Ｌ（sCD40L, P. A. Brams, E. A. Padlan, K. Hariharan, K. Slat
er, J. Leonard, R. Noelle, および R. Newman,"A humanized anti-human CD 1
54 monoclonal antibody blocks CD 154 CD40 mediated human B cell activati
on," (manuscript submitted)）存在下で、３７℃で１時間インキュベートした
。１時間のインキュベート後、低濃度のＡＤＭ（２×１０^−７Ｍ〜４×１０^−８Ｍ）を添加し、ＣＤ４０Ｌ（１０μｇ／ｍＬ）の存在下または不在下でさらに４
時間インキュベートした。ＡＤＭへ曝露後、細胞を洗浄し、０．５×１０^６細胞
／ｍＬの濃度で増殖培地に再懸濁し、１００μＬの細胞懸濁液を、ｓＣＤ４０を
含むものと含まないものの２通りの９６ウェル平底プレートの各ウェルに添加し
た。ｓＣＤ４０Ｌ（１０μｇ／ｍＬ）を、ＡＤＭ処理の間ｓＣＤ４０Ｌに連続的
に曝露した培養液、およびＡＤＭ曝露の間ｓＣＤ４０Ｌに曝露していない培養液
に添加した。さらに、ｓＣＤ４０ＬおよびＡＤＭと共にインキュベートしたＤＨ
Ｌ−４細胞に対するその影響を測定するために、１０μｇ／ｍＬのＩＤＥＣ−１
３１を培養液に添加した。５日後、細胞傷害性を、上述したようにアラマーブル
ー色素−取り込みアッセイによって測定した。

【０１０９】データは、ｓＣＤ４０ＬはＡＤＭ処理後のＤＨＬ細胞の生存を延ばしたが、一
方、期待したように、ｓＣＤ４０Ｌの不在下でＡＤＭに曝露した細胞においては
細胞傷害性の増加が観察されたことを示す。さらに、抗ＣＤ４０Ｌ抗体（ＩＤＥ
Ｃ−１３１）を添加すると、ＣＤ４０Ｌに媒介される細胞の生存は逆転し、細胞
傷害性の増加を導く（図２Ａ）。

【０１１０】ＩＤＥＣ−１３１のみを添加してもｓＣＤ４０Ｌで処理したＤＨＬ−４細胞に
影響を及ぼさないが、これは、その抗体はそれ自身ではＤＨＬ−４細胞に対して
直接的な阻害または細胞傷害性活性を持たないことを示す（図２Ｂ）。ｓＣＤ４
０Ｌと共にまたは含まずに予めインキュベートしたＤＨＬ−４細胞を、種々の濃
度のＩＤＥＣ−１３１、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、抗−ＣＤ２０抗体ＣＥ９
．１、および抗ＣＤ４抗体（Anderson et al.,Clin. Immunol. & Immunopathol.
84 : 73-84 (1997)）の存在下で培養した。５日後、ＤＨＬ−４細胞の細胞傷害
性／増殖を、上述したようにアラマーブルーアッセイにより測定した。図２Ｂは
、ＤＨＬ−４細胞の増殖および細胞傷害性に対するＩＤＥＣ−１３１による影響
はなかったが、一方ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は期待した通り、細胞増殖を阻
害し、細胞傷害性を誘発した。抗ＣＤ４抗体と共に培養したＤＨＬ−４細胞にお
いては、何も影響は見られなかった。

【０１１１】実施例３ＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０情報伝達は、抗ＣＤ２０抗体であるＲＩＴＵＸＡＮ（登
録商標）によるＢ−リンパ腫細胞のアポトーシスを阻害する抗ＣＤ２０抗体に誘導されたＢ−リンパ腫細胞のアポトーシスに対する、ＣＤ
４０Ｌ−ＣＤ４０媒介性情報伝達の影響を、ＤＨＬ−４細胞を含むインビトロ系
およびＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）の表面架橋を用いて測定した。ＤＨＬ−４細
胞（０．５〜１×１０^６細胞／ｍＬ）をｓＣＤ４０Ｌ（１０μｇ／ｍＬ）と共に
３７℃で培養した。一夜培養後、細胞を採取し、１０μｇ／ｍＬのＲＩＴＵＸＡ
Ｎ（登録商標）または対照の抗体（抗ＣＤ４抗体であるＣＥ９．１）と共に、ｓ
ＣＤ４０Ｌ（１０μｇ／ｍＬ）と共にまたは含まずに、氷上でインキュベートし
た。１時間のインキュベート後、結合しなかった抗体を除去するために細胞を遠
心分離し、増殖培地（５％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ）中に１×１０^６細胞／ｍＬとなる
ように再懸濁し、組織培養管中で培養した。細胞表面に結合した抗体を、１５μ
ｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇ−Ｆｃγ特異的抗体のＦ（ａｂ’）_２断片を固定する
こと（ｓｐｉｋｉｎｇ）によって架橋し、アポトーシスの分析をするまで培養液
を３７℃でインキュベートした。フローサイトメトリーカスパーゼ３アッセイを
用いてアポトーシスを検出した。培養細胞を４および２４時間後に採取し、洗浄
後、サイトフィックス（Cytofix）（Cytofix/CytopermTM Kit, Pharmingen Cat.
♯2075KK）を用いて４℃で固定した。２０分の固定後、細胞を洗浄し、１５μ
Ｌのアフィニティ精製したＰＥ結合ポリクローナルウサギ抗カスパーゼ３抗体（
Pharmingen, Cat. ♯67345）および５０μＬのサイトパーム（ｃｙｔｏｐｅｒｍ
）（Pharmingen ; Cat. ♯2075KK）を添加した。細胞を暗所で氷上３０分間イン
キュベートした。インキュベート後、細胞を一度洗浄し、サイトパーム中に再懸
濁した。フローサイトメトリーのデータはＦＡＣＳｃａｎで獲得し、Ｖｅｒｉｔ
ｙＳｏｆｔｗａｒｅＨｏｕｓｅより入手したＷｉｎＬｉｓｔｓｏｆｔｗａｒ
ｅを用いて分析した。

【０１１２】表１は、ｓＣＤ４０Ｌへの曝露による、ＤＨＬ−４リンパ腫細胞におけるＲＩ
ＴＵＸＡＮ（登録商標）誘導性アポトーシスに対する耐性を示す。この実験にお
いては、発明者らの以前の研究において、カスパーゼ３とツネル（Ｔｕｎｅｌ）
アッセイの間に良好な相関作用が明らかとなったので、カスパーゼ３を代理のマ
ーカーとして用いた。ｓＣＤ４０Ｌ存在下でのＤＨＬ−４細胞表面におけるＲＩ
ＴＵＸＡＮ（登録商標）の架橋はアポトーシスのレベルを減少させたが、一方、
ｓＣＤ４０に曝さなかった細胞はアポトーシスを起こした。比較として、同じア
イソタイプの抗体、即ち対照抗体（ＣＥ９．１）の存在下でインキュベートした
培養液では、細胞のアポトーシスは起こらなかった。したがって、このデータは
、ＣＤ４０経路のｓＣＤ４０Ｌ誘導性情報伝達が、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）
に媒介されたＢリンパ腫細胞の死滅の発生を導き得ることを示唆する。

【０１１３】

【表４】実施例４慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞の生存に対するＩＤＥＣ−１３１の影響インビトロにおけるＢ−ＣＬＬ細胞の増殖および生存に対するＩＤＥＣ−１３
１の影響を測定するために、Ｂ−ＣＬＬ細胞をインビトロでＣＤ４０Ｌの存在下
で、ＩＤＥＣ−１３１と共にまたは含まずに培養した。末梢血単核細胞（ＰＢＭ
Ｃ）をＣＬＬ患者の血液から、フィコール−ハイパーク勾配遠心法を用いて単離
した。トリパンブルー色素排除により生存度を測定したところ、＞９８％であっ
た。フローサイトメトリー分析により、＞７０％のリンパ球がＣＤ１９^＋／ＣＤ
２０^＋であることが明らかとなった。ＣＬＬ細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＬＬ増殖培
地（例えば、２ｍＭのＬ−グルタミンおよび１００Ｕ／ｍＬのペニシリン−スト
レプトマイシンを追加した、５％ＦＣＳまたは２％のドナー自身の血漿を追加し
たＲＰＭＩ−１６４０培地）中で培養した。さらに、いくつかの実験のためには
、ＣＤ１９^＋Ｂ細胞を、ＣＤ１９^＋ダイナビーズ^ＴＭを説明書（Dynal, Cat.♯1
11. 03/111. 04）に従って精製し、上述したように培養した。増殖培地中で培養
したＣＬＬ細胞または精製したＢ−ＣＬＬ細胞は、大部分が自発性のアポトーシ
ス細胞死を起こした。しかしながら、これらの細胞をｓＣＤ４０Ｌの存在下で培
養すると、それらの培養液中での生存度が拡張された。表２は、ｓＣＤ４０Ｌ（
５μｇ／ｍＬ）の存在下または不在下で増殖させたＣＤ１９^＋Ｂ−ＣＬＬ細胞の
、種々の時点における細胞生存度を示し、ＣＬＬ細胞のより長い生存を示す。ｓ
ＣＤ４０Ｌと共に培養した患者♯１由来のＢ−ＣＬＬ細胞は≧６０％の生存度を
２週間以上保持したが、一方、ｓＣＤ４０Ｌの不在下で増殖させた細胞は、１０
％未満の生存度であった。

【０１１４】

【表５】図３は、７日間培養後のＢ−ＣＬＬ細胞の増殖および生存に対するＩＤＥＣ−
１３１の影響を示す。ＣＬＬ患者から精製したＢ−ＣＬＬ細胞（２×１０^６細胞
／ｍＬ）を、２つの培養管に分けた。一方の管の細胞を、等容積の増殖培地中で
ｓＣＤ４０Ｌ（５μｇ／ｍＬ）と混合する一方、他方の管は対照として、等容積
の増殖培地と共にインキュベートした。３７℃で１時間インキュベート後、細胞
を穏やかに混合し、１００μＬの細胞懸濁培養液を、種々の濃度（１０μｇ／ｍ
Ｌ〜０．３μｇ／ｍＬ）のＩＤＥＣ−１３１を含むかまたは含まないかの２通り
で、９６ウェル平底プレートの各ウェルに添加した。７日後、培養液中の細胞の
生存／死を、上述したようなアラマーブルーアッセイによって測定した。データ
は、ｓＣＤ４０Ｌを含む培養液中における細胞の生存を示した。ＩＤＥＣ−１３
１の培養液中への添加は、細胞死の増加という結果をもたらし、これは細胞生存
の逆転または細胞死に対する感作現象を示す。さらに、ＩＤＥＣ−１３１と同濃
度で投与したＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は、細胞死に対してＩＤＥＣ−１３１
よりも弱い影響を与えた（図３Ｂ）。

【０１１５】実施例５Ｂ−ＣＬＬにおけるＨＬＡ−ＤＲ分子のＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０媒介性上方制御ＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０情報伝達経路が無傷であるかどうかを測定するために、
ＣＬＬ患者由来のＣＬＬ細胞（５×１０^５細胞／ｍＬ）を、５μｇ／ｍＬのＣＤ
４０Ｌと共にまたは含まずに、３７℃で培養した。４８時間および１４４時間後
において、クラスIIの分子であるＨＬＡ−ＤＲの発現を、ＣＤ１９^＋細胞上で標
準的な手順を用いたフローサイトメトリーによって測定した。手短に説明すると
、培養したリンパ球を種々の時点で採取し、分子の表面発現を、ＦＡＣＳｃａｎ
（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）フローサイトメーターを用いて、単染色
または二重染色用にそれぞれフルオレセイン（ＦＩＴＣ）またはフィコエリトリ
ン（ＰＥ）に結合した抗体を用いて分析した。フローサイトメトリー用に染色す
るため、培養管中の１×１０^６の細胞を、次のような適切な抗体と共にインキュ
ベートした：散布図上のリンパ球集団をゲート（ｇａｔｅ）するための抗ＣＤ４
５−ＦＩＴＣ；ＣＤ１９^＋および／またはＣＤ２０^＋Ｂ細胞を測定するための抗
ＣＤ１９−ＰＥ（Pharmingen, Cat.♯30655）または抗ＣＤ２０−ＦＩＴＣ（Pha
rmingen, Cat.♯33264）抗体；Ｔ細胞をゲートオフ（ｇａｔｅ−ｏｆｆ）するた
めの抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ抗体（Pharmingen, Cat.♯30104）；ＣＤ１９^＋細胞上
のＰクラスIIの発現を測定するための抗ＣＤ１９−ＲＰＥおよび抗ＨＬＡ−ＤＲ
−ＦＩＴＣ抗体（Pharmingen, Cat.♯32384）。細胞を遠心分離法（２００×ｇ
、６分間）により２ｍＬの冷ＰＢＳで洗浄し、抗体と共に氷上で３０分間インキ
ュベート後、細胞を一度洗浄し、０．５％パラホルムアルデヒド中で固定し、分
析するまで４℃で貯蔵した。フローサイトメトリーのデータをＦＡＣＳｃａｎよ
り獲得し、ＷｉｎＬｉｓｔｓｏｆｔｗａｒｅ（ＶｅｒｉｔｙＳｏｆｔｗａｒ
ｅＨｏｕｓｅ）を用いて分析した。機械は、それぞれＲＰＥまたはＦＩＴＣで
単染色した細胞、染色していないまたは二重染色した細胞を含む四分円の試験が
できるようにオートゲート（ａｕｔｏｇａｔｉｎｇ）するように設定した。図４
は、ｓＣＤ４０Ｌと共に培養したＣＤ１９^＋ＣＬＬ細胞とｓＣＤ４０Ｌを含まず
に培養した同細胞における、ＨＬＡ−ＤＲ発現の比較を示す。ｓＣＤ４０Ｌの存
在下で培養したＢ−ＣＬＬ細胞において、より高レベルのＨＬＡ−ＤＲの発現が
検出された（表３）。

【０１１６】

【表６】実施例６ＩＤＥＣ−１３１およびＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）の調製ＣＤ４０^＋悪性疾患の治療のために、約１０〜約５０ｍｇ／ｍＬのＩＤＥＣ−
１３１を含む製剤バッファー（１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１５０ｍＭＮａ
Ｃｌ、０．０２％ポリソルベート８０（ｐＨ６．５））を被験者の静脈内に注入
する。ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）の投与前、後、またはこれと組み合わせて、
ＩＤＥＣ−１３１を投与する。注入するＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）の投与量は
、被験者の体重１ｋｇあたり約３〜約１０ｍｇの範囲である。

【０１１７】実施例７ＩＤＥＣ−１３１およびＣＨＯＰの準備ＣＨＯＰ（細胞がＣＤ４０^＋である悪性疾患のための救助療法（ｓａｌｖａｇ
ｅｔｈｅｒａｐｙ）と同様に、例えばホジキン病、非ホジキンリンパ腫および
慢性リンパ性白血病）に応答性のＣＤ４０^＋悪性疾患の治療のために、ＣＨＯＰ
サイクルの開始の直前に、ＩＤＥＣ−１３１を患者の体重１ｋｇあたり約３〜約
１０ｍｇの範囲の投与量で注入する。ＩＤＥＣ−１３１投与を、全部で４〜８サ
イクルの各ＣＨＯＰサイクルの前に繰り返す。

【０１１８】実施例８被験者におけるＢ細胞リンパ腫を治療するための、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標
）と組み合わせた抗ＣＤ４０Ｌの投与併用療法は救助療法として、即ち、再発した或いは活動的な形態のＣＤ４０^＋悪性疾患（例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫およびＣＬＬ）の治療にと
って特に有用である。ＩＤＥＣ−１３１をＣＨＯＰおよびＲＩＴＵＸＡＮ（登録
商標）と組み合わせて投与しようとする場合、ＩＤＥＣ−１３１は、実施例６で
考察したようにして投与され、続いて、実施例７でＣＨＯＰ−ＩＤＥＣ−１３１
投与のために特定されたスケジュールに従って投与される。

【０１１９】上記で議論した全ての引用文献は、その全体が参照としてここに組み込まれる
。

【図面の簡単な説明】

【図１】４時間曝露した後の、アドリアマイシンに対するＢリンパ腫細胞の感受性を示
すグラフである。

【図２ａ】抗ＣＤ４０Ｌ（ＩＤＥＣ−１３１）は、Ｂリンパ腫細胞のＡＤＭによる殺滅に
対するＣＤ４０Ｌ媒介抵抗性を打消すことを示すグラフである。

【図２ｂ】登録商標リッキサンの、正常およびｓＣＤ４０Ｌ前処理ＤＨＬ−４細胞に対す
る効果を示すグラフである。

【図３ａ】抗ＣＤ４０Ｌ抗体（ＩＤＥＣ−１３１）による、ＣＤ４０Ｌに媒介されたＢ−
ＣＬＬ細胞生存の阻止を示すグラフである。

【図３ｂ】ＩＤＥＣのＣ２Ｂ８による、ＣＤ４０Ｌに媒介されたＢ−ＣＬＬの生存の阻止
を示すグラフである。

【図４】ｓＣＬ４０Ｌと共に培養したＣＤ１９^＋ＣＬＬ細胞およびｓＣＤ４０Ｌと共に
培養していない細胞における、ＨＬＡ−ＤＲ発現を比較したＦＡＣＳ解析を示す
グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/02 35/02 Ａ６１Ｋ 43/00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ハリハラン、カンダサミーアメリカ合衆国、カリフォルニア州 92129 サン・ディエゴ、パーク・ビレッジ・ロード 7414 Ｆターム(参考） 4C084 AA11 AA12 AA16 MA02 NA14 ZB26 ZB27 4C085 AA14 AA26 AA33 CC22

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】 CD40⁺悪性疾患を治療する方法であって、CD40Lに結合する治
療的有効量抗体または抗体断片を投与することを含み、それによってCD40/CD40L
相互作用またはCD40シグナリングを阻害する方法。
【請求項２】請求項１に記載の方法であって、前記CD40⁺悪性疾患はＢ細
胞リンパ種またはＢ細胞性白血病である方法。
【請求項３】請求項２に記載の方法であって、前記Ｂ細胞リンパ種はホジ
キン氏病（HD）または非ホジキン氏リンパ種（NHL）である方法。
【請求項４】請求項３に記載の方法であって、前記NHLは軽度、中程度ま
たは重度である方法。
【請求項５】請求項３に記載の方法であって、前記NHLは、小リンパ球性
で濾胞性かつ主に小非正円形細胞、濾胞性かつ混合型の小非正円形および大細胞
タイプ、濾胞性の主に大細胞タイプ、拡散性の小非正円形細胞、拡散性かつ混合
型の小および大細胞、拡散性の大細胞、免疫芽細胞性大細胞、リンパ芽球性の小
非正円形バーキット氏および非バーキット氏タイプ、AIDS関連リンパ種、血管免
疫芽細胞性リンパ節腫脹、外套細胞リンパ種、および単球性Ｂ細胞リンパ種から
なるサブタイプ群から選択される方法。
【請求項６】請求項２に記載の方法であって、前記Ｂ細胞白血球は、慢性
Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞系統の急性リンパ芽球性白血病、またはＢ細胞系統の慢性
リンパ球性白血病である方法。
【請求項７】請求項２に記載の方法であって、前記CD40Lに結合する抗体
または抗体断片は、IDEC-131、3E4、2H5、2H8、4D9-8、4D9-9、24-31、24-43、8
9-76 または89である方法。
【請求項８】請求項７に記載の方法であって、前記抗体または抗体断片は
、キメラの二特異的なヒトまたはヒト化抗体である方法。
【請求項９】請求項２に記載の方法であって、前記抗体断片は、Fab、Fab
'、scFv またはF(ab')₂である方法。
【請求項１０】請求項２に記載の方法であって、更に、治療的有効量の第
二の項体またはその断片、化学療法剤、化学療法剤および／または放射線療法の
組合わせを投与することを含んでなる方法。
【請求項１１】請求項１０に記載の方法であって、前記放射線療法は、外
的放射線治療または放射能ラベルされた抗体である方法。
【請求項１２】請求項１１に記載の方法であって、前記放射能ラベルされ
た抗体は、放射能ラベルされたIDEC-131、RITUXAN（登録商標）もしくはB1、ま
たはそれらの断片である方法。
【請求項１３】請求項１２に記載の方法であって、前記放射能ラベルされ
た抗体は、²¹³I、¹²⁵I、¹³¹I、¹¹¹In、³²P、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、²¹¹At、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁶Re
、²¹²Pb、²¹²Bi、⁴⁷Sc、¹⁰⁵Rh、¹⁰⁹Rd、¹⁵³Sm、¹⁸⁸Re、¹⁹⁹Au、²¹¹At、および^2l ³ Biで放射能ラベルされる方法。
【請求項１４】請求項１０に記載の方法であって、HDを治療するための前
記化学療法剤は、アルキル化剤、ビンカアルカロイド、プロカルバジン、メソト
レキセートまたはプレドニゾンの何れか一以上である方法。
【請求項１５】請求項１０に記載の方法であって、NHLを治療するための
前記化学療法剤は、アルキル化剤、シクロホスファミド、クロラムブシル、2-CD
A、2'-デオキシコホルマイシン、フルダラビン、サイトシンアラビノシド、シス
プラチン、エトポシド、またはイフォスファミドの何れか一以上である方法。
【請求項１６】請求項１０に記載の方法であって、HDを治療するための前
記化学療法剤の組合わせは、MOPP、ABVD、ChlVPP、CABS、MOPP プラス ABVD、MO
PP プラス ABV、BCVPP、VABCD、ABDIC、CBVD、PCVP、CEP、EVA、MOPLACE、MIME
、MINE、CEM、MTX-CHOP、EVAP またはEPOCHである方法。
【請求項１７】請求項１０に記載の方法であって、NHLを治療するための
前記化学療法剤の組合わせは、CVP、CHOP、C-MOPP、CAP-BOP、m-BACOD、ProMACE
-MOPP、ProMACE-CytaBOM、MACOP-B、IMVP-16、MIME、DHAP、ESHAP、CEPP (B) ま
たはCAMPである方法。
【請求項１８】請求項１０に記載の方法であって、Ｂ細胞性白血病を治療
するための前記化学療法剤は、アントラサイクリン、シクロホスファミド、L-ア
スパラギナーゼおよびプリン類縁体の少なくとも一つである方法。
【請求項１９】請求項１０に記載の方法であって、Ｂ細胞白血病を治療す
るための前記化学療法剤の組合わせは、ビンクリスチン、プレドニゾン、アント
ラサイクリン、およびシクロホスファミドまたはアスパラギナーゼ；ビンクリス
チン、プレドニゾン、アントラサイクリン、シクロホスファミドおよびアスパラ
ギナーゼ；CHOP；CMP；CVP；COP またはCAPである方法。
【請求項２０】請求項１０に記載の方法であって、前記第二の項体は、抗
CD20抗体である方法。
【請求項２１】請求項２１に記載の方法であって、前記抗CD20抗体は、RI
TUXAN（登録商標）もしくはその断片、またはB1もしくはその断片である方法。.
【請求項２２】 CD40⁺悪性疾患を治療する方法において、抗CD40L抗体また
はその断片を投与する工程であって、前記抗CD40L抗体または抗体フラグメント
はCD40-CD40L相互作用をブロックし、またはCD40シグナリングを阻害する工程と
、抗体CD20抗体またはその断片を投与する工程とを含んでなる方法。
【請求項２３】請求項２２に記載の方法であって、前記CD40⁺悪性疾患は
Ｂ細胞リンパ種またはＢ細胞性白血病である方法。
【請求項２４】 CD40⁺悪性疾患を治療するための併用療法であって、CD40L アンタゴニストと、（ａ）化学療法剤または化学療法剤類の組合わせ、（ｂ）
放射線療法、（ｃ）抗CD20抗体またはその断片、および（ｄ）抗CD40抗体または
その断片のうちの少なくとも一つとを含む併用療法。
【請求項２５】請求項２４に記載の方法であって、前記放射線療法は外的
放射線治療、または放射能ラベルされた抗体である方法。
【請求項２６】請求項２５に記載の方法であって、前記放射能ラベルされ
た抗体は、²¹³I、¹²⁵I、¹³¹I、¹¹¹In、³²P、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、²¹¹At、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁶Re
、²¹²Pb、²¹²Bi、⁴⁷Sc、¹⁰⁵Rh、¹⁰⁹Rd、¹⁵³Sm、¹⁸⁸Re、¹⁹⁹Au、²¹¹At、および^2l ³ Biで放射能ラベルされる方法。
【請求項２７】請求項２４に記載の併用療法であって、前記CD40⁺悪性疾
患はＢ細胞リンパ種またはＢ細胞性白血病である併用療法。
【請求項２８】請求項２７に記載の併用療法であって、前記Ｂ細胞リンパ
種はHDまたはNHLである併用療法。
【請求項２９】請求項２８に記載の併用療法であって、前記NHLは軽度、
中程度または重度である併用療法。
【請求項３０】請求項２８に記載の併用療法であって、前記NHLは、小リ
ンパ球性で濾胞性かつ主に小非正円形細胞、濾胞性かつ混合型の小非正円形およ
び大細胞タイプ、濾胞性の主に大細胞タイプ、拡散性の小非正円形細胞、拡散性
かつ混合型の小および大細胞、拡散性の大細胞、免疫芽細胞性大細胞、リンパ芽
球性の小非正円形バーキット氏および非バーキット氏タイプ、AIDS関連リンパ種
、血管免疫芽細胞性リンパ節腫脹、外套細胞リンパ種、および単球性Ｂ細胞リン
パ種からなるサブタイプ群から選択される併用療法。
【請求項３１】請求項２８に記載の併用療法であって、前記Ｂ細胞白血球
は、慢性Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞系統の急性リンパ芽球性白血病、またはＢ細胞系
統の慢性リンパ球性白血病である併用療法。
【請求項３２】請求項２４に記載の併用療法であって、前記CD40Lアンタ
ゴニストは抗CD40L抗体またはその断片である併用療法。
【請求項３３】請求項３２に記載の併用療法であって、前記抗CD40L抗体
は、IDEC-131またはその断片である併用療法。.
【請求項３４】請求項３２に記載の併用療法であって、前記抗CD40L断片
はFab、Fab'、scFv またはF(ab')₂である併用療法。
【請求項３５】請求項２４に記載の併用療法であって、前記抗CD20抗体は
、RITUXAN（登録商標）もしくはその断片、またはB1もしくはその断片である併
用療法。
【請求項３６】請求項２８に記載の併用療法であって、HDを治療するため
の前記化学療法剤は、アルキル化剤、ビンカアルカロイド、プロカルバジン、メ
ソトレキセートまたはプレドニゾンの何れか一以上である併用療法。
【請求項３７】請求項２８に記載の併用療法であって、NHLを治療するた
めの前記化学療法剤は、アルキル化剤、シクロホスファミド、クロラムブシル、
2-CDA、2'-デオキシコホルマイシン、フルダラビン、サイトシンアラビノシド、
シスプラチン、エトポシド、またはイフォスファミドの何れか一以上である方法
。
【請求項３８】請求項２８に記載の併用療法であって、HDを治療するため
の前記化学療法剤の組合わせは、MOPP、ABVD、ChlVPP、CABS、MOPP プラス ABVD
、MOPP プラス ABV、BCVPP、VABCD、ABDIC、CBVD、PCVP、CEP、EVA、MOPLACE、M
IME、MINE、CEM、MTX-CHOP、EVAP またはEPOCHである併用療法。
【請求項３９】請求項２８に記載の併用療法であって、NHLを治療するた
めの前記化学療法剤の組合わせは、CVP、CHOP、C-MOPP、CAP-BOP、m-BACOD、Pro
MACE-MOPP、ProMACE-CytaBOM、MACOP-B、IMVP-16、MIME、DHAP、ESHAP、CEPP (B
) またはCAMPである併用療法。
【請求項４０】請求項２８に記載の併用療法であって、Ｂ細胞性白血病を
治療するための前記化学療法剤は、アントラサイクリン、シクロホスファミド、
L-アスパラギナーゼおよびプリン類縁体である併用療法。
【請求項４１】請求項２８に記載の併用療法であって、Ｂ細胞白血病を治
療するための前記化学療法剤の組合わせは、ビンクリスチン、プレドニゾン、ア
ントラサイクリン、およびシクロホスファミドまたはアスパラギナーゼ；ビンク
リスチン、プレドニゾン、アントラサイクリン、シクロホスファミドおよびアス
パラギナーゼ；CHOP；CMP；CVP；COP またはCAPである併用療法。
【請求項４２】 CD40⁺悪性疾患を治療するための組成物であって、（ｉ）
抗CD40L抗体またはその抗体断片と共に、（ii）CD40LもしくはCD20に結合する放
射能ラベルされた抗体、および（iii）抗CD20抗体もしくはその断片、または（i
v）化学療法剤もしくは化学療法剤の組合わせのうちの少なくとも一つを含有す
る組成物。
【請求項４３】請求項４２に記載のCD40⁺悪性疾患を治療するための組成
物であって、前記CD40⁺悪性疾患はＢ細胞リンパ種またはＢ細胞性白血病である
組成物。
【請求項４４】請求項４３に記載の組成物であって、前記Ｂ細胞リンパ種
はホジキン氏病またはNHLである方法。
【請求項４５】請求項４２に記載の組成物であって、前記放射能ラベルさ
れた抗体は、放射能ラベルされたIDEC-131、RITUXAN（登録商標）またはB1であ
る併用療法。
【請求項４６】請求項４２に記載の組成物であって、前記放射能ラベルさ
れた抗体は、²¹³I、¹²⁵I、¹³¹I、¹¹¹In、³²P、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、²¹¹At、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁶R
e、²¹²Pb、²¹²Bi、⁴⁷Sc、¹⁰⁵Rh、¹⁰⁹Rd、¹⁵³Sm、¹⁸⁸Re、¹⁹⁹Au、²¹¹At、および² ^l3 Biで放射能ラベルされた組成物。
【請求項４７】請求項４４に記載の組成物であって、前記NHLは軽度、中
程度または重度である組成物。
【請求項４８】請求項４４に記載の組成物であって、前記NHLは、小リン
パ球性で濾胞性かつ主に小非正円形細胞、濾胞性かつ混合型の小非正円形および
大細胞タイプ、濾胞性の主に大細胞タイプ、拡散性の小非正円形細胞、拡散性か
つ混合型の小および大細胞、拡散性の大細胞、免疫芽細胞性大細胞、リンパ芽球
性の小非正円形バーキット氏および非バーキット氏タイプ、AIDS関連リンパ種、
血管免疫芽細胞性リンパ節腫脹、外套細胞リンパ種、および単球性Ｂ細胞リンパ
種からなるNHLサブタイプ群から選択される組成物。
【請求項４９】請求項４２に記載の組成物であって、前記抗CD40抗体がID
EC131またはその断片である組成物。
【請求項５０】請求項４２に記載の組成物であって、前記抗CD20抗体がRI
TUXAN（登録商標）もしくはその断片、またはB1もしくはその断片である組成物
。
【請求項５１】請求項４３に記載の組成物であって、前記化学療法剤は、
アルキル化剤、ビンカアルカロイド、プロカルバジン、メソトレキセートまたは
プレドニゾンの何れか一以上である組成物。
【請求項５２】請求項４４に記載の組成物であって、NHLを治療するため
の前記化学療法剤は、アルキル化剤、シクロホスファミド、クロラムブシル、2-
CDA、2'-デオキシコホルマイシン、フルダラビン、サイトシンアラビノシド、シ
スプラチン、エトポシド、またはイフォスファミドの何れか一以上である組成物
。
【請求項５３】請求項４４に記載の組成物であって、HDを治療するための
前記化学療法剤の組合わせは、MOPP、ABVD、ChlVPP、CABS、MOPP プラス ABVD、
MOPP プラス ABV、BCVPP、VABCD、ABDIC、CBVD、PCVP、CEP、EVA、MOPLACE、MIM
E、MINE、CEM、MTX-CHOP、EVAP またはEPOCHである組成物。
【請求項５４】請求項４４に記載の組成物であって、NHLを治療するため
の前記化学療法剤の組合わせは、CVP、CHOP、C-MOPP、CAP-BOP、m-BACOD、ProMA
CE-MOPP、ProMACE-CytaBOM、MACOP-B、IMVP-16、MIME、DHAP、ESHAP、CEPP (B)
またはCAMPである組成物。
【請求項５５】請求項４３に記載の組成物であって、Ｂ細胞性白血病を治
療するための前記化学療法剤は、アントラサイクリン、シクロホスファミド、L-
アスパラギナーゼおよびプリン類縁体である組成物。
【請求項５６】請求項４３に記載の組成物であって、Ｂ細胞白血病を治療
するための前記化学療法剤の組合わせは、ビンクリスチン、プレドニゾン、アン
トラサイクリン、およびシクロホスファミドまたはアスパラギナーゼ；ビンクリ
スチン、プレドニゾン、アントラサイクリン、シクロホスファミドおよびアスパ
ラギナーゼ；CHOP；CMP；CVP；COP またはCAPである組成物。