JP2001354700A - モノクロ−ナル抗体及びヒトフィブリン分解産物の測定方法 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体及びヒトフィブリン分解産物の測定方法Info
- Publication number
- JP2001354700A JP2001354700A JP2000175127A JP2000175127A JP2001354700A JP 2001354700 A JP2001354700 A JP 2001354700A JP 2000175127 A JP2000175127 A JP 2000175127A JP 2000175127 A JP2000175127 A JP 2000175127A JP 2001354700 A JP2001354700 A JP 2001354700A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- degradation product
- antibody
- monoclonal antibody
- fibrin degradation
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 Ｓｏｌｂｌｅ Ｆｉｂｒｉｎ ｍｏｎｏｍｅ
ｒ Ｃｏｍｐｌｅｘ（以下SFと記載する）ヒトフィブリ
ノゲン分解産物及び測定しようとするヒトフィブリン分
解産物に対するモノクローナル抗体を製する。不溶性担
体に固定した当該抗体感作試薬と、測定しようとする抗
原（ヒトフィブリン分解産物）を反応容器の液体媒体中
で反応させる。次いで当該不溶性担体に固定した当該抗
体感作試薬と凝集反応の吸光度変化を測定する。 【効果】 不溶性担体に固定した当該抗体感作試薬は、
フィブリン分解産物に反応し、フィブリノゲン分解産物
には反応しない、二次線溶の場合に反応を示すので、特
にDIC（血管内凝固症候群）の診断に大きく効果が得ら
れる。
ｒ Ｃｏｍｐｌｅｘ（以下SFと記載する）ヒトフィブリ
ノゲン分解産物及び測定しようとするヒトフィブリン分
解産物に対するモノクローナル抗体を製する。不溶性担
体に固定した当該抗体感作試薬と、測定しようとする抗
原（ヒトフィブリン分解産物）を反応容器の液体媒体中
で反応させる。次いで当該不溶性担体に固定した当該抗
体感作試薬と凝集反応の吸光度変化を測定する。 【効果】 不溶性担体に固定した当該抗体感作試薬は、
フィブリン分解産物に反応し、フィブリノゲン分解産物
には反応しない、二次線溶の場合に反応を示すので、特
にDIC（血管内凝固症候群）の診断に大きく効果が得ら
れる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規なモノクロ−
ナル抗体、フィブリン分解産物の測定に係り、さらに詳
しくは、被測定物質を短時間且つ高精度に測定・検出で
きる凝集反応及び抗原抗体反応の測定方法に関する。
ナル抗体、フィブリン分解産物の測定に係り、さらに詳
しくは、被測定物質を短時間且つ高精度に測定・検出で
きる凝集反応及び抗原抗体反応の測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体における線溶には、一次線溶と二次
線溶があり、これらの鑑別が重要である。ＦＤＰではフ
ィブリノゲン由来かフィブリン由来かは判別できないた
め、二次線溶の判定はＦＤＰとＤ−Ｄダイマーの結果か
ら間接的に行っていた。我が国で定められているＤＩＣ
（血管内凝固症候群）の診断・経過観察においてフィブ
リン分解産物（二次線溶）の測定は必須であり、見極め
る為にはＦＤＰとＤ−Ｄダイマーを測定する必要があっ
た。そしてＦＤＰを測定する際には、他の凝固関連測定
に用いる血漿検体とは別に、ＦＤＰ専用の血清検体を患
者から採血しなければならず、測定時のコストはもちろ
ん患者負担も大きな問題であった。従来のＤ−Ｄダイマ
ーの測定試薬はＥ ｆｒａｇｍｅｎｔ、ＳＦには反応を
示さず、Ｄダイマー分画を反映している。
線溶があり、これらの鑑別が重要である。ＦＤＰではフ
ィブリノゲン由来かフィブリン由来かは判別できないた
め、二次線溶の判定はＦＤＰとＤ−Ｄダイマーの結果か
ら間接的に行っていた。我が国で定められているＤＩＣ
（血管内凝固症候群）の診断・経過観察においてフィブ
リン分解産物（二次線溶）の測定は必須であり、見極め
る為にはＦＤＰとＤ−Ｄダイマーを測定する必要があっ
た。そしてＦＤＰを測定する際には、他の凝固関連測定
に用いる血漿検体とは別に、ＦＤＰ専用の血清検体を患
者から採血しなければならず、測定時のコストはもちろ
ん患者負担も大きな問題であった。従来のＤ−Ｄダイマ
ーの測定試薬はＥ ｆｒａｇｍｅｎｔ、ＳＦには反応を
示さず、Ｄダイマー分画を反映している。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、血漿
検体などの生体試料中に含まれるフィブリノゲンやフィ
ブリノゲン分解産物の有無に影響されずに、ヒトフィブ
リン分解産物測定する方法を提供することにある。
検体などの生体試料中に含まれるフィブリノゲンやフィ
ブリノゲン分解産物の有無に影響されずに、ヒトフィブ
リン分解産物測定する方法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決する為の手段】前記目的はヒトフィブリノ
ゲン分解産物及びヒトフィブリン分解産物と反応する
が、ヒトフィブリノゲンとは反応しないことを特徴とす
るモノクロ−ナル抗体を用いる。又、不溶性担体に固定
した当該抗体感作試薬は、ヒトフィブリノゲン分解産物
には影響を受けず、ヒトフィブリン分解産物を測定され
ることにより達成される。
ゲン分解産物及びヒトフィブリン分解産物と反応する
が、ヒトフィブリノゲンとは反応しないことを特徴とす
るモノクロ−ナル抗体を用いる。又、不溶性担体に固定
した当該抗体感作試薬は、ヒトフィブリノゲン分解産物
には影響を受けず、ヒトフィブリン分解産物を測定され
ることにより達成される。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明のモノクロ−ナル抗体は細
胞融合法により作製されたハイブリド−マによるモノク
ロ−ナル抗体産生法により得られたモノクロ−ナル抗体
である。本発明の好ましいモノクロ−ナル抗体はヒトフ
ィブリノゲン分解産物及びヒトフィブリン分解産物と反
応し、ヒトフィブリノゲンとは反応しない。本発明のモ
ノクロ−ナル抗体を用いたフィブリン分解産物の測定方
法は、抗原と抗体との凝集反応、抗原抗体反応、本発明
のモノクロ−ナル抗体に不溶性担体を感作又は担持させ
て被測定物質との凝集反応、抗原抗体反応の測定を実施
するものである。そして、前記凝集反応、抗原抗体反応
の測定を、その測定が終了するまで攪拌又は揺動下のも
とで実施してもよい。本発明の凝集反応、抗原抗体反応
の測定方法によって行われる測定・検出方法としては、
特に限定されず、凝集反応及び／又は抗原抗体反応を利
用して測定する様々な方法が可能であり、免疫比濁法
（ＴＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定
法（ＲＩＡ）、ラテックス凝集反応法、蛍光免疫測定法
等が利用される。また、凝集反応、特に、ラテックス凝
集反応法が好適に用いられる。
胞融合法により作製されたハイブリド−マによるモノク
ロ−ナル抗体産生法により得られたモノクロ−ナル抗体
である。本発明の好ましいモノクロ−ナル抗体はヒトフ
ィブリノゲン分解産物及びヒトフィブリン分解産物と反
応し、ヒトフィブリノゲンとは反応しない。本発明のモ
ノクロ−ナル抗体を用いたフィブリン分解産物の測定方
法は、抗原と抗体との凝集反応、抗原抗体反応、本発明
のモノクロ−ナル抗体に不溶性担体を感作又は担持させ
て被測定物質との凝集反応、抗原抗体反応の測定を実施
するものである。そして、前記凝集反応、抗原抗体反応
の測定を、その測定が終了するまで攪拌又は揺動下のも
とで実施してもよい。本発明の凝集反応、抗原抗体反応
の測定方法によって行われる測定・検出方法としては、
特に限定されず、凝集反応及び／又は抗原抗体反応を利
用して測定する様々な方法が可能であり、免疫比濁法
（ＴＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定
法（ＲＩＡ）、ラテックス凝集反応法、蛍光免疫測定法
等が利用される。また、凝集反応、特に、ラテックス凝
集反応法が好適に用いられる。
【０００６】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細
に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるもの
ではない。
に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるもの
ではない。
【０００７】実施例１ フィブリン分解産物の調製：免疫源として用いるヒトフ
ィブリン分解産物は、次の様な方法で調製することが出
来る。即ち、ヒトフィブリノゲン（１０ｍｇ／ｍＬ）１
ｍＬにＦＸＩＩＩ（フィブロガミンＰ：ヘキスト社 用
法・用量に従い調製する）を０．３ｍＬ、１Ｍ塩化カル
シウム０．１ｍＬ、トロンビン（２００Ｕ／ｍＬ）０．
５ｍＬ、プラスミン（１Ｕ／ｍＬ）０．１ｍＬを添加
し、それぞれ３０秒、１分、３分、１０分、３０分、１
時間、３時間、１２時間後にアプロチニン２５，０００
Ｕ／ｍＬ）２ｍＬで反応を停止する。ＤＥＡＥセファロ
−ス（イオン交換クロマトグラフ）によって各分画を精
製した。Ｆｉｂｒｉｎ ｍｏｎｏｍｅｒの調製：Ｆｉｂ
ｒｉｎ ｍｏｎｏｍｅｒ（可溶性フィブリンモノマ−）
はＬａｒｇｏらの方法〔Ｂｌｏｏｄ（１９７６）４７：
９９１−１００２〕に従って調製した。即ち、ヒトフィ
ブリノゲン１ｇを１０ｍＭのＥＤＴＡを含む生理食塩液
１０００ｍＬに溶解し、１００ＮＩＨのトロンビンを添
加した後、３７℃で１２０分間保温した。生じたフィブ
リンクロットを生理食塩液２５０ｍＬで３回遠心洗浄し
た。洗浄後のフィブリンクロットを６Ｍ尿素液５０ｍＬ
に溶解し、使用した。
ィブリン分解産物は、次の様な方法で調製することが出
来る。即ち、ヒトフィブリノゲン（１０ｍｇ／ｍＬ）１
ｍＬにＦＸＩＩＩ（フィブロガミンＰ：ヘキスト社 用
法・用量に従い調製する）を０．３ｍＬ、１Ｍ塩化カル
シウム０．１ｍＬ、トロンビン（２００Ｕ／ｍＬ）０．
５ｍＬ、プラスミン（１Ｕ／ｍＬ）０．１ｍＬを添加
し、それぞれ３０秒、１分、３分、１０分、３０分、１
時間、３時間、１２時間後にアプロチニン２５，０００
Ｕ／ｍＬ）２ｍＬで反応を停止する。ＤＥＡＥセファロ
−ス（イオン交換クロマトグラフ）によって各分画を精
製した。Ｆｉｂｒｉｎ ｍｏｎｏｍｅｒの調製：Ｆｉｂ
ｒｉｎ ｍｏｎｏｍｅｒ（可溶性フィブリンモノマ−）
はＬａｒｇｏらの方法〔Ｂｌｏｏｄ（１９７６）４７：
９９１−１００２〕に従って調製した。即ち、ヒトフィ
ブリノゲン１ｇを１０ｍＭのＥＤＴＡを含む生理食塩液
１０００ｍＬに溶解し、１００ＮＩＨのトロンビンを添
加した後、３７℃で１２０分間保温した。生じたフィブ
リンクロットを生理食塩液２５０ｍＬで３回遠心洗浄し
た。洗浄後のフィブリンクロットを６Ｍ尿素液５０ｍＬ
に溶解し、使用した。
【０００８】免疫化脾細胞の調製：ヒトフィブリン分解
産物（Ｆｉｂ−Ｐ）（Ａ280nm ＝０．３）を等量のフロ
イド完全アジュバンドと乳化するまで混合し、その混合
液１００μＬをＢＡＬＡ／ｃ系マウス腹腔内に投与する
ことにより免疫を行った。約３０日経過後、Ｆｉｂ−Ｐ
（Ａ280nm ＝０．３）を等量の生理食塩液で希釈して調
製したＦｉｂ−Ｐ液１００μＬを、前記のマウスの腹腔
内に投与し、３日後、脾臓を無菌的にマウスから取り出
し、次の細胞融合工程に用いた。細胞融合：１５％ウシ
胎児血清を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ´ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅ
ｄ Ｅａｇｌｅ（ＤＭＥ）培地５ｍＬを入れたペトリ皿
に前記の脾臓を入れた。次に１５％ウシ胎児血清を含む
ＤＭＥ培地１２ｍＬで前記脾臓より還流法で脾細胞を流
出し５０ｍＬの遠心管に集める。遠心後、上清を捨て、
ペレットに溶血促進溶液（１６０ｍＭ−ＮＨ4 Ｃｌ，１
０ｍＭ−ＫＨＣＯ3 １ｍＭ−Ｎａ2 ＥＤＴＡ，ｐＨ７．
０）５ｍＬを加え、懸濁した。５分間氷冷後、遠心分離
し、脾細胞数を数えた。一方、予め培養しておいたマウ
スミエロ−マ細胞ＮＳ１の約１×１07個に前記脾細胞１
×１０8個を加え、遠心分離した。その上清を捨て、ペ
レットに４５％ポリエチレングリコ−ル１５００溶液
（３７℃に保温）１．０ｍＬを加え良く混合する。次
に、３７℃に保温しておいたＤＭＥ培地を１０ｍＬ加
え、遠心分離する。上清を除去後、ペレットを１５％ウ
シ胎児血清を含むＨＡＴ培地（ＤＭＥ培地にアミノプテ
リン４×１０-7Ｍ，チミジン１．６×１０-5Ｍ，ヒボキ
サンチン１×１０-4Ｍになるように添加したもの）で懸
濁し、次いで上記の培地で３回遠心洗浄する。ＨＡＴ培
地２０ｍＬに懸濁した細胞懸濁液を９６穴細胞培養プレ
−トの各ウェルに２００μＬずつ分注し、５％ＣＯ2Ａ
含むＣＯ2培養器で培養し、７日後に後述のＥＬＩＳＡ
法により、抗フィブリン分解産物抗体産生ハイブリド−
マをスクリ−ニングした。
産物（Ｆｉｂ−Ｐ）（Ａ280nm ＝０．３）を等量のフロ
イド完全アジュバンドと乳化するまで混合し、その混合
液１００μＬをＢＡＬＡ／ｃ系マウス腹腔内に投与する
ことにより免疫を行った。約３０日経過後、Ｆｉｂ−Ｐ
（Ａ280nm ＝０．３）を等量の生理食塩液で希釈して調
製したＦｉｂ−Ｐ液１００μＬを、前記のマウスの腹腔
内に投与し、３日後、脾臓を無菌的にマウスから取り出
し、次の細胞融合工程に用いた。細胞融合：１５％ウシ
胎児血清を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ´ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅ
ｄ Ｅａｇｌｅ（ＤＭＥ）培地５ｍＬを入れたペトリ皿
に前記の脾臓を入れた。次に１５％ウシ胎児血清を含む
ＤＭＥ培地１２ｍＬで前記脾臓より還流法で脾細胞を流
出し５０ｍＬの遠心管に集める。遠心後、上清を捨て、
ペレットに溶血促進溶液（１６０ｍＭ−ＮＨ4 Ｃｌ，１
０ｍＭ−ＫＨＣＯ3 １ｍＭ−Ｎａ2 ＥＤＴＡ，ｐＨ７．
０）５ｍＬを加え、懸濁した。５分間氷冷後、遠心分離
し、脾細胞数を数えた。一方、予め培養しておいたマウ
スミエロ−マ細胞ＮＳ１の約１×１07個に前記脾細胞１
×１０8個を加え、遠心分離した。その上清を捨て、ペ
レットに４５％ポリエチレングリコ−ル１５００溶液
（３７℃に保温）１．０ｍＬを加え良く混合する。次
に、３７℃に保温しておいたＤＭＥ培地を１０ｍＬ加
え、遠心分離する。上清を除去後、ペレットを１５％ウ
シ胎児血清を含むＨＡＴ培地（ＤＭＥ培地にアミノプテ
リン４×１０-7Ｍ，チミジン１．６×１０-5Ｍ，ヒボキ
サンチン１×１０-4Ｍになるように添加したもの）で懸
濁し、次いで上記の培地で３回遠心洗浄する。ＨＡＴ培
地２０ｍＬに懸濁した細胞懸濁液を９６穴細胞培養プレ
−トの各ウェルに２００μＬずつ分注し、５％ＣＯ2Ａ
含むＣＯ2培養器で培養し、７日後に後述のＥＬＩＳＡ
法により、抗フィブリン分解産物抗体産生ハイブリド−
マをスクリ−ニングした。
【０００９】ハイブリド−マの確立：ハイブリド−マ培
養液の上清中の抗体の有無は、ＥＬＩＳＡ法により測定
した。９６穴ＥＬＩＳＡ用プレ−ト（住友化学）の各ウ
ェルに前記のフィブリン分解産物（Ｆｉｂ＝Ｐ）溶液
（Ａ280nm＝０．３）１００μＬずつ分注し、４℃で１
６時間放置した。次に、０．０１％ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）−生理食塩液で３回洗浄した後、核ウェルに
培養上清１００μＬを加え、２５℃で１時間反応させ
た。次に、Ｔｗｅｅｎ８０−生理食塩液で１０００倍に
希釈したペルオキシダ−ゼ結合抗マウス抗体（ＤＡＫＯ
社、デンマ−ク）１００μＬを各ウェルに加えた。反応
終了後、０．０１％ＢＳＡ−生理食塩液で各ウェルを３
回洗浄し、ペルオキシダ−ゼの基質を加えた。その結
果、９６穴中、１０ウェルに抗体産生が認められた。そ
の１０ウェルのハイブリド−マを２０ウェルのブレ−ト
に移し、５日間培養後、再度ＥＬＩＳＡ法により、抗Ｆ
ｉｂ−Ｐ抗体の産生の有無を確認し、次に、フィブリノ
ゲン、フィブリノゲン分解産物、フィブリン分解産物、
Ｄ−ｄｉｍｅｒとの反応性を上記と同様のＥＬＩＳＡ法
によって検討した。その結果、フィブリノゲンには反応
しないで、フィブリノゲン分解産物及びフィブリン分解
産物に反応するクロ−ン１種（Ｆｉｂ−Ｐ−１）を確立
した。他の９種は全てフィブリノゲンとも反応したので
以下の研究から削除した。ハイブリド−マＦｉｂ−Ｐ−
１が産生するモノクロ−ナル抗体Ｆｉｂ−Ｐ−１のフィ
ブリノゲン分解産物、フィブリン分解産物の詳細な反応
も、上記と同様のＥＬＩＳＡ法によって検討した。
養液の上清中の抗体の有無は、ＥＬＩＳＡ法により測定
した。９６穴ＥＬＩＳＡ用プレ−ト（住友化学）の各ウ
ェルに前記のフィブリン分解産物（Ｆｉｂ＝Ｐ）溶液
（Ａ280nm＝０．３）１００μＬずつ分注し、４℃で１
６時間放置した。次に、０．０１％ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）−生理食塩液で３回洗浄した後、核ウェルに
培養上清１００μＬを加え、２５℃で１時間反応させ
た。次に、Ｔｗｅｅｎ８０−生理食塩液で１０００倍に
希釈したペルオキシダ−ゼ結合抗マウス抗体（ＤＡＫＯ
社、デンマ−ク）１００μＬを各ウェルに加えた。反応
終了後、０．０１％ＢＳＡ−生理食塩液で各ウェルを３
回洗浄し、ペルオキシダ−ゼの基質を加えた。その結
果、９６穴中、１０ウェルに抗体産生が認められた。そ
の１０ウェルのハイブリド−マを２０ウェルのブレ−ト
に移し、５日間培養後、再度ＥＬＩＳＡ法により、抗Ｆ
ｉｂ−Ｐ抗体の産生の有無を確認し、次に、フィブリノ
ゲン、フィブリノゲン分解産物、フィブリン分解産物、
Ｄ−ｄｉｍｅｒとの反応性を上記と同様のＥＬＩＳＡ法
によって検討した。その結果、フィブリノゲンには反応
しないで、フィブリノゲン分解産物及びフィブリン分解
産物に反応するクロ−ン１種（Ｆｉｂ−Ｐ−１）を確立
した。他の９種は全てフィブリノゲンとも反応したので
以下の研究から削除した。ハイブリド−マＦｉｂ−Ｐ−
１が産生するモノクロ−ナル抗体Ｆｉｂ−Ｐ−１のフィ
ブリノゲン分解産物、フィブリン分解産物の詳細な反応
も、上記と同様のＥＬＩＳＡ法によって検討した。
【００１０】実施例２ モノクローナル抗体の製造：ブリスタン（２，６，１
０，１４−テトラメチルペンタデカン）０．５ｍＬを１
０週令以上のＢＡＬＢ／ｃ系雄マウスの腹腔内に投与
し、それからマウスの腹腔内にハイブリド−マＦｉｂ−
Ｐ−１をマウス一匹当たり細胞数、２×１０6個になる
ように接種した。一匹のマウスから約５〜１２ｍＬの腹
水が得られた。その抗体濃度は５〜１０ｍｇ／ｍＬであ
った。腹水中モノクロ−ナル抗体の精製は、プロテイン
Ａセファロ−ス４Ｂカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，スウ
ェ−デン）により行なった。
０，１４−テトラメチルペンタデカン）０．５ｍＬを１
０週令以上のＢＡＬＢ／ｃ系雄マウスの腹腔内に投与
し、それからマウスの腹腔内にハイブリド−マＦｉｂ−
Ｐ−１をマウス一匹当たり細胞数、２×１０6個になる
ように接種した。一匹のマウスから約５〜１２ｍＬの腹
水が得られた。その抗体濃度は５〜１０ｍｇ／ｍＬであ
った。腹水中モノクロ−ナル抗体の精製は、プロテイン
Ａセファロ−ス４Ｂカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，スウ
ェ−デン）により行なった。
【００１１】実施例３ モノクローナル抗体Ｆｉｂ−Ｐ−１のイソタイプ及び特
異性：フィブリン分解産物モノクローナル抗体Ｆｉｂ−
Ｐ−１のイソタイプ及び特異性の同定は、それぞれイム
ノブロッティング法及びＥＬＩＳＡ法により行った。イ
ソタイプはＩｇＧ2a（κ）であった。また、特異性は表
１に示すとおりであった。
異性：フィブリン分解産物モノクローナル抗体Ｆｉｂ−
Ｐ−１のイソタイプ及び特異性の同定は、それぞれイム
ノブロッティング法及びＥＬＩＳＡ法により行った。イ
ソタイプはＩｇＧ2a（κ）であった。また、特異性は表
１に示すとおりであった。
【００１２】
【表１】
【００１３】実施例４ 不溶性担体に固定した当該抗体感作試薬の製造：モノク
ローナル抗体Ｆｉｂ−Ｐ−１のＦ（ａｂ’）2 分画（１
ｍｇ／ｍＬ）を含む溶液５ｍＬと、ラテックス溶液（２
％、日本合成ゴム社：２１２ｎｍ）５ｍＬとを混合し約
１時間強く攪拌した。遠心後、ペレットをＢＳＡ溶液
（２ｍｇ／ｍＬ）に懸濁して、約１時間強く攪拌した。
かくして、モノクローナル抗体Ｆｉｂ−Ｐ−１のＦ（ａ
ｂ’）2 感作ラテックス液を得た。
ローナル抗体Ｆｉｂ−Ｐ−１のＦ（ａｂ’）2 分画（１
ｍｇ／ｍＬ）を含む溶液５ｍＬと、ラテックス溶液（２
％、日本合成ゴム社：２１２ｎｍ）５ｍＬとを混合し約
１時間強く攪拌した。遠心後、ペレットをＢＳＡ溶液
（２ｍｇ／ｍＬ）に懸濁して、約１時間強く攪拌した。
かくして、モノクローナル抗体Ｆｉｂ−Ｐ−１のＦ（ａ
ｂ’）2 感作ラテックス液を得た。
【００１４】実施例５ 分光学的の方法によるＦＤＰの定量：実施例４で調製し
たＦｉｂ−Ｐ−１のＦ（ａｂ’）2 感作ラテックス液
と、調製したＦＤＰとの凝集反応の速度を分光学的方法
で測定した。その結果は図１のように、ＦＤＰ０〜１６
０μｇ／ｍＬまで測定可能であった。
たＦｉｂ−Ｐ−１のＦ（ａｂ’）2 感作ラテックス液
と、調製したＦＤＰとの凝集反応の速度を分光学的方法
で測定した。その結果は図１のように、ＦＤＰ０〜１６
０μｇ／ｍＬまで測定可能であった。
【００１５】
【発明の効果】以上詳述した如く、本発明によると次の
ような効果を奏する。本発明のモノクローナル抗体によ
り、ヒトフィブリン分解産物（二次線溶）を測定するこ
とにより、血漿検体などの生体試料中のヒトフィブリノ
ゲンやヒトフィブリノゲン分解産物の有無に影響されず
に測定する方法を提供することができる。また、ＤＩＣ
（血管内凝固症候群）の診断・経過観察において、測定
時のコストはもちろん患者負担も軽減される。
ような効果を奏する。本発明のモノクローナル抗体によ
り、ヒトフィブリン分解産物（二次線溶）を測定するこ
とにより、血漿検体などの生体試料中のヒトフィブリノ
ゲンやヒトフィブリノゲン分解産物の有無に影響されず
に測定する方法を提供することができる。また、ＤＩＣ
（血管内凝固症候群）の診断・経過観察において、測定
時のコストはもちろん患者負担も軽減される。
【図１】 本発明の実施例４で調製したＦｉｂ−Ｐ−１
のＦ（ａｂ’）2感作ラテックス液と、調製したＦＤＰ
との凝集反応の速度を分光学的方法で測定した結果を示
すグラフである。
のＦ（ａｂ’）2感作ラテックス液と、調製したＦＤＰ
との凝集反応の速度を分光学的方法で測定した結果を示
すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ Ｆターム(参考） 4B024 AA11 BA44 GA03 GA18 HA15 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 CE12 DA13 4B065 AA91X AA92X AB05 AC14 BA08 CA25 CA46 4H045 AA11 AA30 CA42 DA76 EA50 FA72 GA26
Claims (5)
- 【請求項１】 ＳＦ、ヒトフィブリノゲンのプラスミン
分解産物（Ｘ分画、Ｙ分画、Ｄ分画、Ｅ分画、ＸＤ、Ｙ
Ｄ）及びヒトフィブリンのプラスミン分解産物（Ｄ ｍ
ｏｎｏｍｅｒ、Ｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ、ＦＤＰ関連高分
子複合体、ＤＤ／Ｅ複合体、Ｄ ｄｉｍｅｒ、ｌａｔｅ
Ｄ ｄｉｍｅｒ）に反応し、ヒトフィブリノゲンには
反応しないことを特徴とするモノクロ−ナル抗体。 - 【請求項２】 不溶性担体に固定化された、請求項１記
載のモノクロ−ナル抗体を使用して、凝集反応を観察す
ることにより、被検試料中のヒトフィブリノゲン分解産
物に影響を受けずにヒトフィブリン分解産物を測定する
方法。 - 【請求項３】 免疫学的凝集反応による測定方法が、ラ
テックス凝集反応である請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 分光学的に測定する、請求項３記載の方
法。 - 【請求項５】 目視的に測定する、請求項３記載の方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000175127A JP2001354700A (ja) | 2000-06-12 | 2000-06-12 | モノクロ−ナル抗体及びヒトフィブリン分解産物の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000175127A JP2001354700A (ja) | 2000-06-12 | 2000-06-12 | モノクロ−ナル抗体及びヒトフィブリン分解産物の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001354700A true JP2001354700A (ja) | 2001-12-25 |
Family
ID=18677051
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000175127A Pending JP2001354700A (ja) | 2000-06-12 | 2000-06-12 | モノクロ−ナル抗体及びヒトフィブリン分解産物の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001354700A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008298783A (ja) * | 2007-06-04 | 2008-12-11 | Dade Behring Marburg Gmbh | 安定なｄ−ダイマー液体製剤 |
| WO2012014997A1 (ja) | 2010-07-30 | 2012-02-02 | シスメックス株式会社 | 抗ｆｄｐモノクローナル抗体、それを用いたｆｄｐ測定用試薬及び試薬キット、並びにｆｄｐ測定方法 |
| WO2012014996A1 (ja) | 2010-07-30 | 2012-02-02 | シスメックス株式会社 | Ｆｄｐ測定用試薬及び試薬キット、並びに測定方法 |
| JP2012026975A (ja) * | 2010-07-27 | 2012-02-09 | Sysmex Corp | Ｄダイマー測定用試薬 |
| WO2014133093A1 (ja) | 2013-02-28 | 2014-09-04 | 独立行政法人国立がん研究センター | 不溶性フィブリンに対する抗体 |
| JP2017044668A (ja) * | 2015-08-28 | 2017-03-02 | シスメックス株式会社 | 血液検体分析方法、血液検体分析装置、及びコンピュータプログラム |
| WO2017146119A1 (ja) * | 2016-02-22 | 2017-08-31 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | 架橋化フィブリン分解産物の測定試薬および測定方法 |
-
2000
- 2000-06-12 JP JP2000175127A patent/JP2001354700A/ja active Pending
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008298783A (ja) * | 2007-06-04 | 2008-12-11 | Dade Behring Marburg Gmbh | 安定なｄ−ダイマー液体製剤 |
| US9541564B2 (en) | 2010-07-27 | 2017-01-10 | Sysmex Corporation | Reagent for assaying D-dimer and kit of reagent for assaying D-dimer |
| US9347957B2 (en) | 2010-07-27 | 2016-05-24 | Sysmex Corporation | Reagent for assaying D-dimer and kit of reagent for assaying D-dimer |
| JP2012026975A (ja) * | 2010-07-27 | 2012-02-09 | Sysmex Corp | Ｄダイマー測定用試薬 |
| US8865424B2 (en) | 2010-07-30 | 2014-10-21 | Sysmex Corporation | Anti-FDP monoclonal antibody, FDP measurement reagent and reagent kit using same, and FDP measurement method |
| EP2599865A1 (en) * | 2010-07-30 | 2013-06-05 | Sysmex Corporation | Anti-fdp monoclonal antibody, fdp measurement reagent and reagent kit using same, and fdp measurement method |
| EP2599865A4 (en) * | 2010-07-30 | 2014-03-05 | Sysmex Corp | MONOCLONAL ANTI-FDP ANTIBODY, FDP MEASUREMENT REAGENT, REAGENT KIT CONTAINING SAID ANTIBODY, AND FDP MEASUREMENT METHOD THEREOF |
| CN103026231A (zh) * | 2010-07-30 | 2013-04-03 | 希森美康株式会社 | Fdp测定用试剂及试剂盒、以及测定方法 |
| US8865425B2 (en) | 2010-07-30 | 2014-10-21 | Sysmex Corporation | Reagent and reagent kit for measurement of FDP, and measurement method |
| WO2012014996A1 (ja) | 2010-07-30 | 2012-02-02 | シスメックス株式会社 | Ｆｄｐ測定用試薬及び試薬キット、並びに測定方法 |
| JP5984670B2 (ja) * | 2010-07-30 | 2016-09-06 | シスメックス株式会社 | Ｆｄｐ測定用試薬及び試薬キット、並びに測定方法 |
| WO2012014997A1 (ja) | 2010-07-30 | 2012-02-02 | シスメックス株式会社 | 抗ｆｄｐモノクローナル抗体、それを用いたｆｄｐ測定用試薬及び試薬キット、並びにｆｄｐ測定方法 |
| WO2014133093A1 (ja) | 2013-02-28 | 2014-09-04 | 独立行政法人国立がん研究センター | 不溶性フィブリンに対する抗体 |
| US9429584B2 (en) | 2013-02-28 | 2016-08-30 | National Cancer Center | Antibody against insoluble fibrin |
| EP3339327A2 (en) | 2013-02-28 | 2018-06-27 | National Cancer Center | Antibody against insoluble fibrin |
| JP2017044668A (ja) * | 2015-08-28 | 2017-03-02 | シスメックス株式会社 | 血液検体分析方法、血液検体分析装置、及びコンピュータプログラム |
| WO2017146119A1 (ja) * | 2016-02-22 | 2017-08-31 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | 架橋化フィブリン分解産物の測定試薬および測定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5807300B2 (ja) | 試料中のｃ反応性蛋白質の測定方法及び測定試薬 | |
| JP3517754B2 (ja) | 抗ヒト可溶性フィブリン抗体，ハイブリドーマ及び免疫学的測定法 | |
| WO2002079782A1 (fr) | Reactif et procede pour l'immunoanalyse de l'elastase 1, et procede de detection de pathologie pancreatique | |
| EP2884277B1 (en) | Method and immunoassay reagent for measuring PIVKA-II | |
| JP2001354700A (ja) | モノクロ−ナル抗体及びヒトフィブリン分解産物の測定方法 | |
| JP3681206B2 (ja) | 抗ファクターＸａ・ティシュファクターパスウェイインヒビター複合体モノクローナル抗体及びその使用 | |
| EP0842949B1 (en) | NOVEL MONOCLONAL ANTIBODY AND METHOD OF IMMUNOLOGICAL ANALYSIS OF e-D DIMER AND e-DD/E COMPLEX | |
| JP3307422B2 (ja) | ヒトｐｉｖｋａ−ｉｉの免疫学的測定方法 | |
| JPH0746104B2 (ja) | Ｆｄｐの測定法 | |
| JP3472138B2 (ja) | モノクローナル抗体及びｆｄｐの測定方法 | |
| EP1098198A1 (en) | Method for the qualitative and quantitative determination of class igG human antibodies | |
| JP3857468B2 (ja) | Ｄダイマー及びｄｄ／ｅ複合体の免疫学的分析方法及び分析用キット | |
| EP0516863B1 (en) | Antibody against human plasmin-alpha 2-plasmin inhibitor complex, hybridoma and immunoassay | |
| EP0315447A2 (en) | Method of immunological measurement of human protein S and reagent and kit therefor | |
| JP3142786B2 (ja) | 動脈硬化症の測定用キット及びこれに用いる抗体 | |
| JP4142747B2 (ja) | 抗ヒトフィブリンモノマー特異的モノクローナル抗体、該モノクローナル抗体の製造方法、ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法 | |
| JP2518602B2 (ja) | ヒトプロテインｓに対するモノクロ―ナル抗体を用いた免疫学的測定試薬及びキット | |
| JP3841364B2 (ja) | 抗ヒトビトロネクチン・トロンビン・アンチトロンビンｉｉｉ 複合体モノクローナル抗体、ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法 | |
| JPH09302000A (ja) | 抗組織因子モノクローナル抗体及び当該モノクローナル抗体を用いた組織因子凝固活性の測定法 | |
| JP2878317B2 (ja) | ラミニン測定試薬 | |
| JP2002316999A (ja) | モノクローナル抗体 | |
| JPH09104700A (ja) | 抗ヒト可溶性フィブリン抗体及びそれを用いた免疫学的測定法 | |
| JP2010271270A (ja) | ヒト心筋組織由来の脂肪酸結合蛋白の測定試薬 | |
| JPS6265693A (ja) | 活性型ヒト血液凝固第▲ｘｉ▼因子の免疫学的定量法 | |
| JP2837030B2 (ja) | 抗ヒトプラスミン−α▲下２▼−プラスミンインヒビター複合体特異抗体及び免疫学的測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060921 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20090311 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20090311 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090311 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090810 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20091207 |