FR2578054A1

FR2578054A1 - Methods and devices for preparing, packaging and using reactant holders

Info

Publication number: FR2578054A1
Application number: FR8502894A
Authority: FR
Inventors: Bruno Cornut; Mireille Guimpier
Original assignee: Inovelf
Current assignee: Inovelf
Priority date: 1985-02-28
Filing date: 1985-02-28
Publication date: 1986-08-29
Also published as: FR2578054B1

Abstract

Method for preparing reactant holders 1, 2 comprising at least one receptacle per sample in the liquid state or dissolved in a solvent, communicating with one or more cells 4 each containing one or more solid reactants. This method is characterised in that the said cells 4 of the said holders 1, 2 are provided with their reactants, in that the holders 1, 2 are partially closed, flushed of their air by an inert gas and then closed, the reactants undergoing freeze-drying before closure of the holder. Application to medical analysis systems.

Description

La présente invention a pour objet des procédés et dispositifs pour la préparation, le conditionnement et l'utilisation de supports de réactifs destinés à l'analyse automatique d'échantillons par mesure de la transmission lumineuse. The present invention relates to methods and devices for the preparation, packaging and use of reagent carriers intended for the automatic analysis of samples by measuring the light transmission.

Elle trouve une application toute particulière dans les systèmes d'analyse faisant appel à des réactions enzymatiques. It finds a very particular application in analysis systems using enzymatic reactions.

Dans l'art antérieur existe une quantité de procédés permettant à l'aide de réactifs de définir la teneur en un ou plusieurs composants par mesure colorimétrique, par mesure de la transmission (ou de l'absorption lumineuse) ou autres mesures optiques ou optoélectroniques. In the prior art, there are a number of methods which make it possible, using reagents, to define the content of one or more components by colorimetric measurement, by measurement of light transmission (or absorption) or other optical or optoelectronic measurements.

On répartit généralement un échantillon liquide entre un certain nombre d'éprouvettes contenant un réactif et on observe l'évolution du contenu en prenant des mesures optiques en début, et/ou pendant et/ou en fin de réaction. A liquid sample is generally distributed between a certain number of test tubes containing a reagent and the evolution of the content is observed by taking optical measurements at the start, and / or during and / or at the end of the reaction.

La précision de la mesure est liée à celle des dosages absolus et/ou relatifs des composants et aux conditions physico-chimiques d'exécution des réactions, ce qui sous-entend non seulement un bon dosage des échantillons et des réactifs mais également une excellente homogénéité des réactifs lorsque ceux-ci sont à plusieurs composants ce qui est très souvent le cas. The precision of the measurement is linked to that of the absolute and / or relative dosages of the components and to the physico-chemical conditions of execution of the reactions, which implies not only a good dosage of the samples and of the reagents but also excellent homogeneity. reagents when these are multi-component which is very often the case.

Or la tendance actuelle vers l'automatisation des analyses et vers des préldvements d'échantillons de plus en plus restreints impose une méticuleuse précision. However, the current trend towards the automation of analyzes and towards increasingly restricted sampling requires meticulous precision.

Si un réactif composite est sous forme de solution, il ne pose que rarement des problèmes d'hétérogénéité, par contre dans les analyses en petites quantités, on utilise de plus en plus des réactifs à l'état solide ce qui complique les problèmes d'homogénéisation poussée des composants puis de dissolution dans l'échantillon tel quel ou avec un solvant. If a composite reagent is in the form of a solution, it rarely poses problems of heterogeneity, on the other hand in analyzes in small quantities, reagents are used more and more in the solid state which complicates the problems of advanced homogenization of the components then dissolution in the sample as is or with a solvent.

Il est certain qu' l'heure actuelle, le besoin est de plus en plus impérieux de disposer d'analyseurs automatiques performants, fiables, précis, simples à mettre en oeuvre et portant sur des quantités de plus en plus faibles. It is certain that at present, the need is more and more imperative to have automatic analyzers performing, reliable, precise, simple to implement and relating to increasingly smaller quantities.

La présente invention s'applique à tous les procédés et dispositifs d'analyse par mesures optiques ou optoélectroniques -des caractéristiques d'échantillons en début, et/ou pendant et/ou en fin de réaction. The present invention applies to all methods and devices for analysis by optical or optoelectronic measurements of the characteristics of samples at the start, and / or during and / or at the end of the reaction.

C'est le cas en particulier des appareils de mesure de transmission ou d'absorption lumineuse. This is particularly the case for light transmission or absorption measurement devices.

L'usage de tels appareils est de plus en plus répandu dans tous les domaines de la chimie, de la biologie, de la biochimie, et donc de la médecine, de la pharmacie, de la bio-industrie, de l'agro-alimentaire, etc... The use of such devices is increasingly widespread in all fields of chemistry, biology, biochemistry, and therefore of medicine, pharmacy, bio-industry, agro-food , etc ...

Mais si l'industrie peut disposer d'équipements relativement importants, il est évident que dans des domaines comme celui de l'analyse médicale, on recherche des équipements légers et néanmoins performants. C'est le cas par exemple de l'analyse hématologique qui s'oriente vers le dosage d'un nombre croissant de composants du sang et qui requiert de plus en plus de rapidité et la précision tout en limitant à un minimum la quantité d'échantillon prélevée. But if the industry can have relatively large equipment, it is obvious that in fields like that of medical analysis, we are looking for light and nevertheless efficient equipment. This is the case, for example, of hematological analysis which is oriented towards the determination of an increasing number of components of the blood and which requires more and more speed and precision while limiting to a minimum the amount of sample taken.

Dans ce qui suit et à titre illustratif, on se reportera à cette analyse sanguine étant bien entendu que l'invention s'applique à d'innombrables autres types d'analyse. In what follows and by way of illustration, reference will be made to this blood analysis, it being understood that the invention applies to innumerable other types of analysis.

L'analyse sanguine accumule un nombre assez élevé d'exigences ce qui constitue un terrain d'application de choix pour la présente invention. The blood analysis accumulates a fairly high number of requirements which constitutes a field of application of choice for the present invention.

On abandonne actuellement les prélèvements importants que nécessitait un nombre souvent non négligeable de tubes à essais eux-mêmes de capacité non négligeable mais qui présentaient l'avantage de demander moins de précautions que les analyses en petites quantités. L'usage de réactifs liquides assurait l'homogénéité, la facilité de mélanger avec l'échantillon de sang, mais cela nécessitait une bonne rapidité d'exécution pour éviter des coagulations et autres décantations et dégradations des échantillons en attente d'analyse, inconvénients réduits dans les analyses de sérum. We are currently abandoning the large samples required by an often non-negligible number of test tubes themselves, of non-negligible capacity but which had the advantage of requiring fewer precautions than analyzes in small quantities. The use of liquid reagents ensured homogeneity, the ease of mixing with the blood sample, but this required a good speed of execution to avoid coagulations and other decantations and degradations of the samples awaiting analysis, reduced disadvantages in serum analyzes.

On a donc proposé des supports à plusieurs cellules contenant des réactifs, un échantillon liquide étant amené aux diverses cellules simultanément ou successivement, les cellules transparentes étant soumises simultanément ou successivement aux mesures optiques ou optoélectroniques, généralement à une longueur d'onde ou à plusieurs simultanément ou successivement grâce, en général, à des jeux de filtres monochromatiques. La mesure est faite à l'aide de sources lumineuses et de capteurs ou détecteurs le plus souvent optoélectroniques, entre lesquels on vient intercaler les cellules contenant les mélanges réactionnels d'échantillons et de réactifs et, le cas échéant, des filtres. Dans le cas de certaines mesures différentielles, on prévoit des cellules de référence vides ou contenant notamment le produit à analyser seul ou un réactif seul. Support has therefore been proposed for several cells containing reagents, a liquid sample being brought to the various cells simultaneously or successively, the transparent cells being subjected simultaneously or successively to optical or optoelectronic measurements, generally at one wavelength or several simultaneously or successively thanks, in general, to sets of monochromatic filters. The measurement is made using light sources and most often optoelectronic sensors or detectors, between which the cells containing the reaction mixtures of samples and reagents are inserted, and, where appropriate, filters. In the case of certain differential measurements, empty reference cells or cells containing in particular the product to be analyzed alone or a reagent alone are provided.

On citera par exemple les dispositifs des brevets français suivants : 2 400 700, 2 424 531 et 2 468 909. Examples include the following French patent devices: 2,400,700, 2,424,531 and 2,468,909.

Dans ces documents sont décrits des supports de réactifs en forme générale de disques présentant un récipient ou cuvette centrale destinés à recevoir l'échantillon liquide qui communique avec une série de cellules périphériques contenant les divers réactifs. In these documents are described reagent carriers in the general form of discs having a central container or cuvette intended to receive the liquid sample which communicates with a series of peripheral cells containing the various reagents.

Ces supports rotatifs ou rotors présentent l'avantage d'une facilité de répartition de l'échantillon liquide entre cuvette centrale et cellules équidistantes de la cuvette -et équidistantes entre elles grâce à la force centrifuge, ce qui assure la meilleure division statistique. These rotary supports or rotors have the advantage of an easy distribution of the liquid sample between the central cuvette and equidistant cells from the cuvette - and equidistant from each other thanks to the centrifugal force, which ensures the best statistical division.

Par ailleurs ils peuvent être de dimensions réduites (quelques centimetres de diamètre, cuvette centrale de l'ordre du centimètre cube, vingt à trente cellules de quelques millimètres cubes), ce qui, en matière plastique transparente, peut être réalisé aisément, tout le problème étant d'assurer la mise en place des compositions réactives, le conditionnement, la conservation, puis l'utilisation de ces supports de réactifs. Comme échantillon on utilise généralement du plasma sanguin dilué de l'ordre de 10 à 100 fois dans l'eau distillée. Or il est évident que l'on doit recourir à des réactifs solides pour éviter des migrations d'une cellule vers la cuvette centrale d'une cellule à l'autre. Furthermore, they can be of reduced dimensions (a few centimeters in diameter, central bowl of the order of a cubic centimeter, twenty to thirty cells of a few cubic millimeters), which, in transparent plastic, can be produced easily, the whole problem being to ensure the establishment of the reactive compositions, the conditioning, the conservation, then the use of these reagent supports. As a sample, blood plasma is generally used diluted on the order of 10 to 100 times in distilled water. However, it is obvious that solid reagents must be used to avoid migrations from one cell to the central bowl from one cell to another.

Mais comme on l'a souligné, un réactif solide composite de petit volume doit être minutieusement dosé c' est-à-dire qu'aussi bien la quantité totale de réactifs que la teneur en ses divers composants doivent être précisément définies dans chaque cellule. Quant à la répartition et au dosage de l'échantillon, la disposition symétrique centrale de ces supports peut l'assurer aisément grâce par exemple à une rotation axiale entraînant par force centrifuge le remplissage de chaque cellule. Dès lors que les volumes de celles-ci sont bien calibrés ce qui peut s'obtenir aisément par moulage de la matière plastique, ce dosage est bien assuré. I1 faut ensuite une bonne solubilité des réactifs dans l'échantillon ou le solvant . L'essentiel repose donc sur la préparation et la mise en place des réactifs, le conditionnement, puis la conservation et l'utilisation des supports équipés de leurs réactifs. Or, les réactifs sont de plus en plus complexes pour nombre de raisons. Pour illustrer cette tendance, on se référera à l'analyse par voie enzymatique qui se répand aujourd'hui dans de très nombreux domaines et en particulier en biochimie.However, as has been pointed out, a small solid composite reagent must be meticulously dosed, that is to say that both the total quantity of reagents and the content of its various components must be precisely defined in each cell. As for the distribution and the dosage of the sample, the central symmetrical arrangement of these supports can easily ensure it thanks for example to an axial rotation causing by centrifugal force the filling of each cell. As soon as the volumes of these are well calibrated, which can be easily obtained by molding the plastic, this dosage is well ensured. It is then necessary good solubility of the reagents in the sample or the solvent. The main thing is therefore based on the preparation and installation of reagents, packaging, then the conservation and use of supports equipped with their reagents. However, reagents are becoming more and more complex for a number of reasons. To illustrate this trend, we will refer to the analysis by enzymatic way which is spreading today in very many fields and in particular in biochemistry.

Dans le cas de l'analyse sanguine, elle convient à la mesure de la teneur du nombre de métabolites (urée, glucose ou cholestérol par exemple) et d'enzymes (créatinine-phosphokinase, glutamyltransférase ou amylase, par exemple). Toujours pour illustrer les problèmes posés par les réactifs complexes, on peut, au suet des enzymes utilisés, donner les indications suivantes expliquant la nécessité de ces compositions faisant appel à nombre de composants. In the case of blood analysis, it is suitable for measuring the content of the number of metabolites (urea, glucose or cholesterol for example) and enzymes (creatinine phosphokinase, glutamyltransferase or amylase, for example). Still to illustrate the problems posed by complex reagents, one can, on the basis of the enzymes used, give the following indications explaining the need for these compositions using a number of components.

Tout d'abord, ces réactifs recourent parfois à l'association de deux enzymes ou plus. First of all, these reagents sometimes use the combination of two or more enzymes.

Il faut en général prévoir un substrat qui participe à la réaction et souvent un activateur d'enzyme. In general, it is necessary to provide a substrate which takes part in the reaction and often an enzyme activator.

Par ailleurs il faut, dans de nombreux cas, éviter des réactions secondaires par exemple grâce à un agent complexant les ions gênants ou dégradant une substance pouvant interférer.Furthermore, in many cases it is necessary to avoid side reactions, for example by means of an agent complexing the annoying ions or degrading a substance which may interfere.

On doit aussi prévoir des stabilisants et/ou charges et/ou tampons. Stabilizers and / or fillers and / or buffers must also be provided.

Il faut également souvent des chromogènes (pour les mesures optiques) et des émulsifiants qui pourront intervenir comme on le verra ci-après aux stades de la lyophilisation et/ou de la remise en solution réactionnelle. Chromogens (for optical measurements) and emulsifiers are also often required, which can be used, as will be seen below, at the stages of lyophilization and / or of reactivation.

Il est donc évident que l'on peut arriver ainsi à des compositions réactives pouvant comprendre jusqu'à une quinzaine de constituants. On comprend aisément les problèmes que pose l'obtention de doses de quelques milligrammes ou centigrammes elles mêmes solides et à compositions précises et stables dans le temps. It is therefore obvious that it is thus possible to arrive at reactive compositions which can comprise up to fifteen constituents. It is easy to understand the problems posed by obtaining doses of a few milligrams or centigrams which are themselves solid and with precise and stable compositions over time.

Pour parvenir à cette stabilité, à cette homogénéité et à cette solubilité dans l'échantillon ou le solvant et ceci pour un corps solide et en quantités minimes, la présente invention utilise des caractéristiques particulières et nouvelles des supports de réactifs permettant le remplissage correctement dosé, l'emprisonnement des réactifs dans les cellules, et la conservation, ce qui est assuré sur le plan des réactifs eux-mêmes par le travail sous atmosphère d'azote ou autre gaz inerte et le passage par une phase de lyophilisation. To achieve this stability, this homogeneity and this solubility in the sample or the solvent and this for a solid body and in minimal quantities, the present invention uses particular and new characteristics of the reagent supports allowing the filling correctly dosed, the imprisonment of the reagents in the cells, and the preservation, which is ensured in terms of the reagents themselves by working under an atmosphere of nitrogen or other inert gas and passing through a lyophilization phase.

Ce procédé consiste essentiellement en la préparation de la composition de chaque mélange réactionnel, suivi de la mise en place dans les cellules du support ouvert, de la fermeture partielle de celui-ci, de la mise du support sous azote ou autre gaz inerte, de sa fermeture et de sa mise sous conditionnement, les compositions étant soumises à lyophilisation soit avant la mise en place des produits solides lyophilisés dans les cellules, soit après la mise en -place des produits à l'état liquide dans les cellules, la lyophilisation étant alors conduite sur les supports partiellement clos. This process essentially consists in the preparation of the composition of each reaction mixture, followed by the placing in the cells of the open support, the partial closure of the latter, the placing of the support under nitrogen or other inert gas, its closure and its packaging, the compositions being subjected to lyophilization either before the placement of the lyophilized solid products in the cells, or after the placement of the products in the liquid state in the cells, the lyophilization being then conducted on partially closed supports.

Les supports doivent dans tous les cas permettre, lors du remplissage, l'accès aux cellules pour mise en place de solides ou de liquides, la fermeture partielle par fixation du couvercle, purgeant ainsi l'air qui est inclus dans le support, -et la fermeture du joint entre couvercle et base présentant cellules et cuvette centrale, et de l'ouverture de cette cuvette permettant l'introduction postérieure des échantillons. The supports must in all cases allow, during filling, access to the cells for placing solids or liquids, partial closing by fixing the cover, thus purging the air which is included in the support, -and the closing of the joint between cover and base presenting cells and central bowl, and the opening of this bowl allowing the later introduction of the samples.

Par ailleurs on peut prévoir une segmentation du support permettant d'éviter certaines interférences entre les divers mélanges réactionnels surtout si l'on travaille avec des solvants différents et/ou à concentrations différentes, ce qui nécessite autant d'ouvertures d'accès aux divers segments. En ce qui concerne le remplissage, doit être résolu le problème de placer le mélange réactionnel adéquat dans une cellule bien repérée. d'un support bien défini. Pour ce faire, ces supports sont munis de dispositifs permettant le repérage d'une cellule dite NO 0 et de dispositifs de signalisation du type de support, c'est à dire de la ou des recherches analytiques correspondant au support.Ce problème de repérage de la cellule NO 0 et du type de support se retrouvera dans les mêmes conditions lors de l'utilisation. Furthermore, it is possible to provide for a segmentation of the support making it possible to avoid certain interference between the various reaction mixtures, especially if one works with different solvents and / or at different concentrations, which requires as many access openings to the various segments. . As regards filling, the problem of placing the appropriate reaction mixture in a well identified cell must be resolved. well-defined support. To do this, these supports are provided with devices allowing the location of a cell called NO 0 and with devices for signaling the type of support, that is to say analytical research or research corresponding to the support. the NO 0 cell and the type of support will be found under the same conditions during use.

Pour mieux faire comprendre les caractéristiques techniques et les avantages de la présente invention, on va en décrire des exemples de réalisation étant bien entendu que ceux-ci ne sont pas limitatifs quant à leur mode de mise en oeuvre et aux applications qu'on peut en faire. To better understand the technical characteristics and advantages of the present invention, we will describe embodiments thereof, it being understood that these are not limiting as to their mode of implementation and to the applications that can be made of them. to do.

On se référera à la figure unique qui représente en perspective cavalière partiellement arrachée un support de réactifs permettant la mise en oeuvre du procédé conforme à la présente invention. Reference will be made to the single figure which represents a partially broken away perspective view of a reagent support allowing the implementation of the process according to the present invention.

Le support présente la forme générale d'un disque pouvant pivoter autour de son axe, ensemble que l'on appellera ci-après le rotor. The support has the general shape of a disc that can pivot around its axis, an assembly that will be called the rotor below.

Il comprend une base 1 et un couvercle 2 pouvant être constitués en matière plastique transparente moulée. It comprises a base 1 and a cover 2 which may be made of transparent molded plastic.

La base 1 présente une cuvette centrale 3 et une série de cellules périphériques 4 reliées à la cuvette 3 par des canaux 5 sensiblement radiaux. Chaque ensemble constitué par un canal 5 ou équivalent et la cellule qui lui est associée peut être isolée de ses voisins par des nervures 6 sensiblement radiales et de l'extérieur parue nervure circulaire 7. Ces nervures 6 et 7 peuvent servir au soudage ou au collage du couvercle 2 sur la base 1, fixation pouvant être ponctuelle ou linéaire (le long- de ces nervures). Ces nervures peuvent lors du soudage ou du collage être en tout ou partie écrasées. Il est évident d'ailleurs comme l'expérience l'a montré que les canaux 5 peuvent être inutiles si le jeu laissé entre soudures ou collages permet la communication entre cuvette 3 et cellules 4 et le passage de l'azote puis des échantillons à analyser. The base 1 has a central bowl 3 and a series of peripheral cells 4 connected to the bowl 3 by substantially radial channels 5. Each assembly consisting of a channel 5 or equivalent and the cell associated therewith can be isolated from its neighbors by ribs 6 substantially radial and from the outside appearing circular rib 7. These ribs 6 and 7 can be used for welding or bonding of the cover 2 on the base 1, fixing may be punctual or linear (along these ribs). These ribs can be completely or partially crushed during welding or gluing. It is moreover evident, as experience has shown, that the channels 5 can be useless if the clearance left between welds or bondings allows communication between cuvette 3 and cells 4 and the passage of nitrogen and then of the samples to be analyzed. .

On peut également isoler totalement une cellule 4 et la rendre inaccessible à l'échantillon, par exemple en la privant de son canal 5, ce qui permet d'en faire la cellule NO 0 qui restera vide ou -contiendra au départ solvant ou autre substance, en vue de mesures différentielles par exemple. Dans ce cas les dispositifs optiques peuvent d'eux-mêmes repérer cette cellule NO 0. We can also completely isolate a cell 4 and make it inaccessible to the sample, for example by depriving it of its channel 5, which makes it possible to make the NO 0 cell which will remain empty or - will initially contain solvent or other substance , for example for differential measurements. In this case, the optical devices can themselves locate this NO 0 cell.

Le couvercle 2 présente une cheminée centrale 8 au centre d'une surface généralement plate. Au-dessus des cellules 4, le couvercle 2 ainsi que le fond des cellules 4 doivent être des lames transparentes à faces de préférence parallèles pour faciliter les mesures optiques. The cover 2 has a central chimney 8 at the center of a generally flat surface. Above the cells 4, the cover 2 as well as the bottom of the cells 4 must be transparent slides with preferably parallel faces to facilitate optical measurements.

Le couvercle 2 et la base 1 présentent respectivement des rebords 9 et 10 entre lesquels on pourra placer un joint par exemple posé par voie thermique. The cover 2 and the base 1 respectively have flanges 9 and 10 between which it is possible to place a seal, for example laid thermally.

Ce joint 11 repose entre les rebords 9 et 10 sur la périphérie 12 du couvercle 2. Deux nervures 13 de la base 1 et 14 du couvercle 2 peuvent créer une chicane améliorant la fixation du couvercle 2 sur la base 1 et formant chicane d'étanchéité. This seal 11 rests between the flanges 9 and 10 on the periphery 12 of the cover 2. Two ribs 13 of the base 1 and 14 of the cover 2 can create a baffle improving the fixing of the cover 2 on the base 1 and forming a sealing baffle. .

Sous la cuvette 3 une douille cylindrique 15 qui présente par exemple un crantage 16 permettant le reprage de la cellule N 0 et l'entraînement en rotation de l'ensemble, et/ou des saillies ou mesures de guidage dû rotor sur l'arbre d'entraînement en rotation de la machine de remplissage puis de la machine de mesure optique. Le couvercle 2 peut également présenter des signaux d'identification optique par exemple un anneau 18 à signalisation digitale telle que des zones claires et des zones sombres qui peuvent être lues et identifient le type de rotor. Under the bowl 3 a cylindrical sleeve 15 which has for example a notch 16 allowing the darning of the cell N 0 and the drive in rotation of the assembly, and / or the projections or guiding measures due to the rotor on the shaft d drive in rotation of the filling machine then of the optical measuring machine. The cover 2 can also have optical identification signals, for example a ring 18 with digital signaling such as light areas and dark areas which can be read and identify the type of rotor.

On peut d'ailleurs concevoir que si la base I et le couvercle 2 présentent par exemple une reprise de positionnement relatif angulaire (encoche et saillie par exemple), les signaux 18 peuvent servir également à identifier la cellule N 0. It is also conceivable that if the base I and the cover 2 have for example a resumption of angular relative positioning (notch and projection for example), the signals 18 can also serve to identify the cell N 0.

La cheminée 8 peut être fermée par un bouchon 19 de forme générale cylindrique à tête élargie pour empêcher son enfoncement trop profond dans la cheminée 8. Ce bouchon 19 présente des concavités 20 ouvertes vers la cuvette et closes vers le haut de façon à permettre, lorsque le bouchon n'est pas totalement enfoncé comme sur la figure, la communication entre cuvette 3 et l'extérieur. The chimney 8 can be closed by a plug 19 of generally cylindrical shape with an enlarged head to prevent it from being pushed too deep into the chimney 8. This plug 19 has concavities 20 open towards the bowl and closed upwards so as to allow, when the plug is not fully inserted as in the figure, the communication between bowl 3 and the outside.

Le type de rotor ci-dessus décrit est particulièrement adapté à la mise en oeuvre du procédé conforme à la présente invention dont on donnera. The type of rotor described above is particularly suitable for implementing the method according to the present invention which will be given.

Exemple 1 : Lyophilisation in situ
On prépare les compositions réactives destinées à chacune des cellules (y compris la substance ou composition réactive ou non destinée éventuellement à la cellule NO 0. Ces compositions sont bien homogénéisées puis dosées dans chaque cellule 4. Le couvercle 2 est placé sur la base 1 et fixé par tout moyen adéquat (collage, soudage etc...) en prenant soin de ne pas détériorer thermiquement les réactifs. On peut également mettre en place le joint 11. Le bouchon 19 est placé dans la cheminée 8 à mi-hauteur pour assurer la communication avec l'extérieur. On peut placer un certain nombre de rotors sur un ou plusieurs plateaux et l'on entre en lyophilisation.Example 1: Lyophilization in situ
The reactive compositions intended for each of the cells are prepared (including the reactive substance or composition, whether or not optionally intended for the NO 0 cell. These compositions are well homogenized and then dosed in each cell 4. The cover 2 is placed on the base 1 and fixed by any suitable means (bonding, welding, etc.), taking care not to thermally deteriorate the reagents, the seal 11 can also be put in place. The plug 19 is placed in the chimney 8 halfway up to ensure communication with the outside. A number of rotors can be placed on one or more trays and freeze-drying begins.

Le cycle de lyophilisation sera de tout type classique convenant aux diverses compositions réactives. The lyophilization cycle will be of any conventional type suitable for the various reactive compositions.

On notera en passant que des réactifs différents devront être lyophilisés dans les mêmes conditions, il faudra jouer sur les divers additifs et composants pour assurer cette lyophilisation commune. It will be noted in passing that different reagents will have to be lyophilized under the same conditions, it will be necessary to play on the various additives and components to ensure this common lyophilization.

On va purger les rotors en éliminant l'air. par exemple par un courant d'azote ou autre gaz inerte qui pénètre dans les rotors par les concavités 20 du bouchon 19. Une fois terminé le cycle de lyophilisation, on enfonce l'ensemble des bouchons 19 pour maintenir l'azote ou gaz inerte dans les rotors et on les extrait du lyophilisateur. On les conditionne alors sous emballage plastique ou équivalent de préférence scellé et éventuellement rempli d'azote ou de gaz-inerte. We are going to purge the rotors by eliminating the air. for example by a stream of nitrogen or other inert gas which enters the rotors through the concavities 20 of the plug 19. Once the freeze-drying cycle is complete, all the plugs 19 are pressed in to keep the nitrogen or inert gas in the rotors and they are extracted from the lyophilizer. They are then packaged in plastic or equivalent packaging, preferably sealed and possibly filled with nitrogen or inert gas.

Il est évident que comme pour toute opération de lyophilisation, on travaille sous atmosphère contrôlée. It is obvious that, as with any lyophilization operation, we work in a controlled atmosphere.

En ce qui concerne le remplissage, la machine doit comprendre un support repérant la cellule NO 0 grâce à l'un des systèmes prévus plus haut et dans les autres cellules qui sont remplies par autant de doseuses, simultanément ou successivement, rotor fixe ou tournant pas à pas. With regard to filling, the machine must include a support identifying the NO 0 cell thanks to one of the systems provided above and in the other cells which are filled by as many dosers, simultaneously or successively, rotor fixed or not turning step by step.

Exemple 2 : Lyophilisation préalable
On prépare les diverses compositions réactives et on les lyophilise ce qui permet de travailler dans des conditions adaptées à chaque composition.Example 2: Prior Lyophilization
The various reactive compositions are prepared and lyophilized, which makes it possible to work under conditions suitable for each composition.

On dose les quantités adéquates que l'on place dans chaque cellule. Cette opération peut être simplifiée par la préparation de comprimés correspondant à chaque dose, que l'on place dans les diverses cellules. On effectue le remplissage par des moyens mécaniques correspondant à ceux de remplissage liquide quant au repérage des différentes cellules. On place le couvercle 2 sur la base 1, on la fixe, on place le joint 11. On met le bouchon 19 à mi-hauteur, on purge à l'azote ou à un gaz inerte on bouche puis on conditionne en emballage de préférence étanche et éventuellement rempli d'azote ou de gaz inerte. Toutes ces opérations doivent être effectuées sous atmosphère à humidité contrôlée. We dose the adequate quantities which we place in each cell. This can be simplified by the preparation of tablets corresponding to each dose, which are placed in the various cells. The filling is carried out by mechanical means corresponding to those of liquid filling as regards the location of the different cells. The cover 2 is placed on the base 1, it is fixed, the gasket is placed 11. The plug 19 is placed at mid-height, it is purged with nitrogen or an inert gas, it is closed then it is preferably packaged waterproof and possibly filled with nitrogen or inert gas. All these operations must be carried out in a humidity-controlled atmosphere.

Ce procédé présente l'avantage d'adopter les conditions de lyophilisation à chaque composition et non chaque composition à des conditions communes comme c'était le cas à l'exemple 1. This process has the advantage of adopting the lyophilization conditions for each composition and not each composition under common conditions as was the case in Example 1.

I1 faut par contre prévoir des liants pour constituer les comprimés ou équivalents, mais cela constitue une bonne garantie contre les transits de réactifs entre cellules ou entre cellules et cuvette centrale. On the other hand, binders must be provided to form the tablets or the like, but this constitutes a good guarantee against the transits of reagents between cells or between cells and central cuvette.

Qui plus est, cela évite les précautions à prendre lors des manutentions de rotors contenant les réactifs liquides non encore lyophilisés. What is more, this avoids the precautions to be taken when handling rotors containing liquid reagents which have not yet been lyophilized.

Lors de l'utilisation, quel que soit le procédé utilisé pour la fabrication, on sort le rotor de son emballage, on débouche et on place l'échantillon par la cheminée dans la cuvette centrale. De préférence on rebouche par exemple à mi-hauteur et on place sur l'appareil analyseur ; la cellule NO 0 est repérée soit par les dispositifs mécaniques de la douille soit optiquement sur l'anneau 18 ou directement sur la cellule si celle-ci est vide ou contient une substance ou composition d'étalonnage. During use, whatever the process used for manufacturing, the rotor is removed from its packaging, it opens and the sample is placed through the chimney in the central cuvette. Preferably, it is recapped, for example at mid-height, and placed on the analyzer apparatus; the NO 0 cell is identified either by the mechanical devices of the sleeve or optically on the ring 18 or directly on the cell if the latter is empty or contains a calibration substance or composition.

La machine peut -être du type faisant l'objet de la demande de brevet français NO déposée ce jour. The machine may be of the type which is the subject of the French patent application NO filed today.

En ce qui concerne l'échantillon lorsqu'on veut analyser du sérum sanguin, on le-prépare généralement par centrifugation, puis on peut le diluer dans 10 à 100 fois son volume de solvant et en particulier dans 15 à 60 fois son volume d'eau distillée. As regards the sample when it is desired to analyze blood serum, it is generally prepared by centrifugation, then it can be diluted in 10 to 100 times its volume of solvent and in particular in 15 to 60 times its volume. distilled water.

On a décrit ici des dispositifs et des procédés en se référant à l'analyse par voie enzymatique et à l'analyse sanguine. Il est évident que l'on peut les appliquer à d'autres types d'analyses et à tout type de support de réactifs solides dans lesquels on introduit un échantillon liquide ou dissous dans un solvant que l'on amène simultanément ou successivement aux diverses cellules contenant les réactifs. Ces supports doivent être transparents au moins dans la zone permettant des mesures optiques sur les cellules et leur contenu. Devices and methods have been described here with reference to enzyme analysis and blood analysis. It is obvious that they can be applied to other types of analysis and to any type of solid reagent support in which a liquid or dissolved sample is introduced in a solvent which is brought simultaneously or successively to the various cells. containing the reagents. These supports must be transparent at least in the area allowing optical measurements on the cells and their contents.

Comme on l'a noté, il est possible de sectoriser des supports pour permettre de disposer de plusieurs cuvettes connectées chacune à une ou plusieurs cellules. As noted, it is possible to sectorize supports to allow having several cuvettes each connected to one or more cells.

Ceci permet d'éliminer les risques de transit entre cellules et/ou cuvettes mais surtout de travailler avec des solvants différents et/ou à des concentrations différentes. Sur des rotors tels ceux de la figure, cette sectorisation peut être réalisée par des séparations radiales, en prévoyant de préférence plusieurs accès aux cheminées bien repérés pour y déposer les divers échantillons.This makes it possible to eliminate the risks of transit between cells and / or cuvettes but above all to work with different solvents and / or at different concentrations. On rotors such as those in the figure, this sectoring can be carried out by radial separations, preferably providing several accesses to the well marked chimneys to deposit the various samples there.

On notera que si l'on a parlé d'analyse du sérum, on peut analyser le sang et toutes autres substances biologiques (urine, lait, extraits végétaux) ou non (compositions chimiques). Il faut bien entendu choisir alors le matériau de réalisation du support inerte aux échantillons, aux solvants et aux réactifs. Note that if we talked about serum analysis, we can analyze blood and all other biological substances (urine, milk, plant extracts) or not (chemical compositions). It is of course then necessary to choose the material for producing the inert support for the samples, the solvents and the reagents.

Claims

1 - Process for the preparation of reagent supports

comprising at least one container 3 for sample

liquid or dissolved in a solvent communicating with

one or more cells 4 each containing one or

several solid reagents, characterized by the fact

that said cells of said supports are lined

of their reagents, that the supports are

partially closed, purged of air by a gas

inert then closed, the reactants undergoing before

end of support freeze-drying.

2 - Method according to claim 1 characterized by the

freeze-drying takes place on the reagents

before placement in cells 4.

3 - Method according to claim 2 characterized by the

fact that the lyophilized reagents are put in the form

tablets before placing in cells 4.

4 - Method according to claim 1 characterized by the

the reagents are freeze-dried in

supports loaded with liquid reagents.

5 - Method according to one of claims 1 to 4

characterized by the fact that the supports ~ are placed

in sealed packaging.

6 - Process according to claim 5 characterized by the

causes the package to contain an inert gas.

7 - Method according to one of claims 1 to 6

characterized by the fact that the inert gas is

nitrogen.

8 - Method according to one of claims 1 to 7

characterized by the fact that the reagents are

enzymatic.

9 - Device for implementing the method according to

one of claims 1 to 8 characterized by

each support is made up of at least one

container or bowl 3 intended to receive at least

a liquid or dissolved sample, communicating

each with at least one cell 4 intended for

receive at least one reagent, - all

containers / cuvettes and cells being arranged

in a base 1 which is closed with a cover

2 fixed on the base while sparing communications 5

between containers / cuvettes and cells and in

trapping the reagents, the assembly being closed to

trap an inert gas.

10 - Device according to claim 9 characterized by

the fact that the supports are circular and rota

tifs, cells 4 being arranged peripherally

to ensure the circulation of samples by channel

centrifugal.

11 - Device according to one of claims 9 or 10

characterized by the fact that the supports have

detection means 16, 17, 18 of a detection cell

reference.

12 - Device according to one of claims 9 to 11

characterized by the fact that the supports are dry

torized.