ES2716138T3 - Inhibidores de virus de hepatitis C - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula (IV):**Fórmula** o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde: J es alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6, en donde el alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6 está opcionalmente sustituido con 1-4 halógeno, -25 OH, arilo o ciano; es carbociclileno C3-C5 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbociclileno C3-C5 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4, haloalquilo C1- C3, halógeno, -OH o ciano, o es carbociclileno bicíclico C5-C8 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, o carbociclileno C3-C6 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbocloro C3-C6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4 o haloalquilo C1-C3; L es alquileno C3-C6, alquenileno C3-C6 o -(CH2)3-ciclopropileno, opcionalmente sustituido con 1-4 halógeno, -OH o ciano; Q es alquilo C2-C4 o carbociclilo C3-C6 opcionalmente sustituido con alquilo C1-C3, halógeno, -OH o ciano; E es alquilo C1-C3 o alquenilo C2-C3, opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos; W es H, -OH, -O(C1C3) alquilo, -O(C1-C3) haloalquilo, halógeno o ciano; y Z2a es H o alquilo C1-C3.
Description
DESCRIPCIÓN
Inhibidores de virus de hepatitis C
CAMPO
[0001] Se describen nuevos inhibidores de moléculas pequeñas de la replicación viral, también se describen las composiciones que contienen dichos compuestos y los métodos terapéuticos que comprenden la administración de dichos compuestos.
ANTECEDENTES
[0002] El virus de la hepatitis C (VHC), un miembro de los géneros de hepacivirus dentro de la familia Flaviviridae, es la principal causa de enfermedad hepática crónica en todo el mundo (Boyer, N. y otros J Hepatol. 2000, 32, 98 112). En consecuencia, un foco importante de la investigación antiviral actual se dirige hacia el desarrollo de métodos mejorados para el tratamiento de infecciones crónicas por VHC en humanos (Ciesek, S., von Hahn T., y Manns, MP., Clin. Liver Dis., 2011)., 15, 597-609; Soriano, V. y otros, J. Antimicrob. Chemother., 2011, 66, 1573 1686; Brody, H., Nature Outlook, 2011, 474, S1-S7; Gordon, CP, et al. al., J. Med. Chem. 2005, 48, 1-20; Maradpour, D., et al., Nat. Rev. Micro. 2007, 5, 453-463).
[0003] Las curaciones virológicas de pacientes con infección crónica por VHC son difíciles de lograr debido a la prodigiosa producción diaria de virus en pacientes con infección crónica y la alta mutabilidad espontánea del VHC (Neumann, et al., Science 1998, 282, 103-7). Fukimoto, et al., Hepatology, 1996, 24, 1351-4; Domingo, et al., Gene 1985, 40, 1-8; Martell, et al., J. Virol. 1992, 66, 3225-9). El tratamiento del VHC se complica aún más por el hecho de que el VHC es genéticamente diverso y se expresa como varios genotipos diferentes y numerosos subtipos. Por ejemplo, el VHC se clasifica actualmente en seis genotipos principales (designados 1-6), muchos subtipos (denominados a, b, c, etc.) y aproximadamente 100 cepas diferentes (numeradas 1, 2, 3, etc.).
[0004] El VHC se distribuye en todo el mundo con los genotipos 1, 2 y 3 que predominan en los Estados Unidos, Europa, Australia y Asia Oriental (Japón, Taiwán, Tailandia y China). El genotipo 4 se encuentra principalmente en Medio Oriente, Egipto y África central, mientras que los genotipos 5 y 6 se encuentran principalmente en Sudáfrica y el sudeste asiático respectivamente (Simmonds, P. et al. J Virol. 84: 4597-4610, 2010).
[0005] La combinación de ribavirina, un análogo de nucleósido e interferón alfa (a) (IFN), se utiliza para el tratamiento de múltiples genotipos de infecciones crónicas por VHC en humanos. Sin embargo, la variable respuesta clínica observada en los pacientes y la toxicidad de este régimen han limitado su utilidad. La adición de un inhibidor de la proteasa del VHC (telaprevir o boceprevir) al régimen de ribavirina y IFN mejora las tasas de respuesta virológica post-tratamiento de 12 semanas (RVS12) de manera sustancial. Sin embargo, actualmente el régimen solo está aprobado para pacientes con genotipo 1 y la toxicidad y otros efectos secundarios permanecen.
[0006] El uso de antivirales de acción dirigida para tratar múltiples genotipos de infección por VHC ha resultado ser un reto debido a la actividad variable de los antivirales contra los diferentes genotipos. Los inhibidores de la proteasa del VHC con frecuencia tienen una actividad in vitro comprometida contra los genotipos 2 y 3 del VHC en comparación con el genotipo 1 (Ver, por ejemplo, la Tabla 1 de Summa, V. et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2012, 56, 4161-4167; Gottwein, J. et al, Gastroenterology, 2011, 141, 1067-1079). En consecuencia, la eficacia clínica también ha demostrado ser muy variable en los genotipos del VHC. Por ejemplo, las terapias que son altamente efectivas contra los genotipos 1 y 2 del VHC pueden tener una eficacia clínica limitada o nula contra el genotipo 3. (Moreno, C. et al., Poster 895, 61a reunión de AASLD, Boston, MA, EE.UU., 29 de octubre)- 2 de noviembre de 2010; Graham, F., et al, Gastroenterology, 2011, 141, 881-889; Foster, GR et al., EASL 45a Reunión Anual, 14 a 18 abril de 2010, Viena, Austria.) En En algunos casos, los agentes antivirales tienen una buena eficacia clínica contra el genotipo 1, pero son más bajos y más variables contra los genotipos 2 y 3. (Reiser, M. et al., Hepatology, 2005, 41,832-835). Para superar la eficacia reducida en el genotipo 3. pacientes, se pueden requerir dosis sustancialmente más altas de agentes antivirales para lograr reducciones sustanciales de la carga viral (Fraser, IP et al., Abstract n° 48, HEP DART 2011, Koloa, HI, diciembre de 2011).
[0007] Los agentes antivirales que son menos susceptibles a la resistencia viral también son necesarios. Por ejemplo, las mutaciones de resistencia en las posiciones 155 y 168 en la proteasa del VHC frecuentemente causan una disminución sustancial en la eficacia antiviral de los inhibidores de la proteasa del VHC (Mani, N. Ann Forum Collab HIV Res., 2012, 14, 1-8; Romano, KP et al. al, PNAS, 2010, 107, 20986-20991; Lenz O, Antimicrobial agents and chemotherapy, 2010, 54,1878-1887.)
[0008] También se llama la atención sobre el documento WO2007/016441A1; Srikanth Venkatraman et al., Expert Opinion on Therapeutic Patents, 2009, vol.19, n° 9, p1277-1303; Chen Shu-Hui y otros, Current Medicinal Chemistry, 2005, vol.12, no.20, p2317-2342; y US2010/029666A1.
[0009] En vista de las limitaciones de la terapia actual contra el VHC, existe la necesidad de desarrollar terapias más eficaces contra el VHC. También sería útil proporcionar terapias que sean eficaces contra múltiples genotipos y subtipos de VHC.
RESUMEN
[0010] Se describen nuevos compuestos que inhiben la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C (VHC). En ciertas realizaciones, los compuestos descritos inhiben múltiples genotipos del virus de la hepatitis C. Estos compuestos son útiles para el tratamiento de la infección por VHC y los síntomas relacionados.
[0011] En una realización (1), un compuesto de Fórmula (IV):
o se proporciona un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
J es alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6, en donde el alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6 está opcionalmente sustituido con 1-4 halógeno, -OH, arilo o ciano;
© es carbociclileno C3-C5 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbociclileno C3-C5 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4, haloalquilo C1-C3, halógeno, -OH o ciano, o © es carbociclileno bicíclico C5-C8 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, o carbociclileno C3-C6 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbocicleno C3-C6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4 o haloalquilo C1-C3;
L es alquileno C3-C6, alquenileno C3-C6 o -(CH2)3-ciclopropileno, opcionalmente sustituido con 1-4 halógeno, -OH o ciano;
Q es alquilo C2-C4 o carbociclilo C3-C6 opcionalmente sustituido con alquilo C1-C3, halógeno, -OH o ciano;
E es alquilo C1-C3 o alquenilo C2-C3, opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos;
W es H, -OH, -O-alquilo (C1-C3), -O(C1-C3) haloalquilo, halógeno o ciano; y
Z2a es H o alquilo C1-C3.
(2) En una realización de (1), J es alquilo C1-C3.
(3) En una realización de (1), J es metilo o etilo.
(4) En una realización de (1) a (3), © _ y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbocicleno C3-C6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4 o haloalquilo C1-C3.
(5) En una realización de (1) a (3), © _ y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde el carbocicleno C3-C6 está opcionalmente sustituido con metilo, etilo o trifluorometilo.
(6) En una realización de (1) a (3), © es ciclopropileno.
(7) En una realización de (1) a (3), © es carbociclileno bicíclico con puente C6-Cs o carbociclileno bicíclico fusionado C6-C8 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes.
(8) En una realización de (1) a (7), L es alquileno C3-C6, sustituido con 1-4 halógenos.
(9) En una realización de (1) a (7), L es alquileno C5, sustituido con dos halógenos.
4
(10) En una realización de (1) a (7), L es alquileno C3-C6.
(11) En una realización de (1) a (7), L es alquileno C5.
(12) En una realización de (8) o (9), los halógenos son cada uno flúor.
(13) En una realización de (1) a (12), Q es f-butilo o carbociclilo C5-C6.
(14) En una realización de (1) a (12), Q es f-butilo.
(15) En una realización de (1) a (14), E es alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con 1-3 átomos de halógeno. (16) En una realización de (1) a (14), E es difluorometilo.
(17) En una realización de (1) a (16), W es hidrógeno, -O(C1-C3) alquilo, halógeno o ciano.
(18) En una realización de (1) a (16), W es metoxi.
(19) En una realización de (1) a (18), Z2a es hidrógeno o metilo.
(20) En una realización de (1) a (18), Z2a es metilo.
(21) En una realización adicional, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las realizaciones (1)-(20), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. (22) En una realización de (21), la composición farmacéutica comprende además al menos un agente terapéutico adicional.
(23) En una realización de (22), dicho agente terapéutico adicional es un interferón, un análogo de ribavirina, un inhibidor de NS5a, un inhibidor de NS4b, un inhibidor de la proteasa NS3, un inhibidor de NS5b, un inhibidor de la alfa-glucosidasa 1, un hepatoprotector, un inhibidor no nucleósido del VHC u otro medicamento para tratar la infección por el virus de la hepatitis C.
(24) En una realización adicional, se proporciona un compuesto de una cualquiera de las realizaciones (1) a (20) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia médica.
(25) En una realización de (24), se proporciona un compuesto de una cualquiera de las realizaciones (1) a (20) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de una infección por el virus de la hepatitis C.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
[0012] Si bien la presente invención puede realizarse de varias formas, la siguiente descripción de varias realizaciones se realiza con el entendimiento de que la presente divulgación debe considerarse como un ejemplo de la materia reivindicada, y no pretende limitarla. Las reivindicaciones a las realizaciones específicas ilustradas. Los encabezados utilizados a lo largo de esta divulgación se proporcionan solo por conveniencia y no deben interpretarse como limitantes de las reclamaciones de ninguna manera. Las realizaciones ilustradas en cualquier partida pueden combinarse con las realizaciones ilustradas en cualquier otra partida.
Abreviaturas
[0013] Las siguientes abreviaturas se usan a lo largo de la especificación, y tienen los siguientes significados:
°C = grados Celsius
A = Angstrom
Ac = acetilo
AcOH = ácido acético
aq = acuoso
Ar = argón
atm = atmosfera
BEP = tetrafluoroborato de 2-bromo-1-etilo piridinio
Dicloruro de bis(difenilfosfino)ferroceno)paladio (II)
Bn = bencilo
Boc = ferc-butoxi carbonilo
Boc2O = dicarbonato de di-ferc-butilo
pb = punto de ebullición
Bs = 4-bromofenilsulfonilo
Bu = butilo
calcd = calculado
CBS = Corey-Bakshi-Shibata
CBZ = Cbz = carboxibencilo
CDI = 1,1'-carbonildiimidazol
cm = centímetro
COMU = (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbeno hexafluorofosfato DABCO = 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano
DBU = 1,8-diazabicicloundec-7-eno
DCE = 1,2-dicloroetano
DCM = diclorometano
DDQ = 2,3-dicloro-5,6-dicianobenzoquinona
DIAD = azodicarboxilato de diisopropilo
dioxano = 1,4-dioxano
DIPEA = N,N-diisopropil-N-etilamina
DMF = N,N-dimetilformamida
DMAP = 4-dimetilaminopiridina
DMPU = 1,3-dimetilo-3,4,5,6-tetrahidro-2 (1H)-pirimidinona
DMSO = dimetisulfóxido
dppf = 1,1'-bis (difenilfosfino)ferroceno
DSC=Carbonato de N,N'-disuccinimidilo
EA = EtOAc = acetato de etilo
CE50 = concentración efectiva máxima media
EDC = 1-etilo-3-(3-dimetilaminopropilo)carbodiimida
Et = etilo
Et2O = dietilo éter
EtOAc = acetato de etilo
EtOH = etanol
equiv = equivalente
F-RMN = espectroscopia de resonancia magnética nuclear de flúor
g = gramo
h = hr = hora
HATU = O-(7-azabenzotriazol-1-ilo)-W,W,W',W-tetrametiluronio Hexafluorofosfato
VHC = virus de la hepatitis C
HEPES = ácido hidroxietil piperazineetanosulfónico
Hexadecimal = hex = hexanos
HMDS = hexametildisilazano (azida)
HMPA = hexametilfosforamida
1H-RMN = espectroscopia de resonancia magnética nuclear de protones
HOAc = ácido acético
HOBT = hidroxibenzotriazol
HPLC = Cromatografía líquida de alta presión
Hz = Hertz
IPA = alcohol isopropílico
i = iso
J = constante de acoplamiento
KHMDS = bis(trimetilsililo)amida de potasio
L = litro
LCMS-ESI+ = cromatografía líquida espectrómetro de masas (ionización por electrospray) LiHMDS = bis(trimetilsililo)amida de litio
M = concentración molar (mol/L)
mCPBA = ácido meta-cloroperoxibenzoico
Me = metilo
MeCN = ACN = acetonitrilo
MeOH = metanol
MetF = 2-metiltetrahidrofurano
mg = miligramo
MHz = mega Hertz
mL = mililitro
mmol = milimol
min = minuto
MTBE = metilo ferc-butiléter
MS = metanosulfonilo
MsCI = cloruro de metanosulfonilo
MS = tamices moleculares
MSA = ácido metilsulfónico
n = normal
N = concentración normal
NCS = N-Clorosuccinimida
NMM = N-metilmorfolina
NMO = W-metilmorfolina-N-óxido
NMP = W-metilpirrolidinona
o/n = durante la noche
PCR = reacción en cadena de la polimerasa
Pf = 9-fenilo-9H-fluoreno-9-ilo
PG = grupo protector
PE = éter de petróleo
Ph = fenilo
PhMe = tolueno
pM = picomolar
PMB = 4-metoxibencilo
Pr = propilo
Pd(dppf)Cl2 = PdCl2(dppf)=PdCl2dppf = (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)dicloropalladio (II)
PPh3 = trifenilfosfina
RetTime = tiempo de retención
ta = temperatura ambiente
sat = sat = saturado
sec = secundario
Sn1 = sustitución nucleófila unimolecular
Sn2 = sustitución nucleofílica bimolecular
SNAr = sustitución nucleófila aromática
t = terc = terciario
TBAF = fluoruro de tetra-n-butilamonio
TBS = TBDMS = terc-butildimetilsililo
TBTU = tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-ilo)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
TEA = trietilamina
temp = temperatura
Te MpO = (2,2,6,6-T etrametilpiperidin-1-ilo)oxilo
Tf = trifluorometanosulfonilo
TFA = ácido trifluoroacético
THF = tetrahidrofurano
TIPS = triisoproilsililo
TLC = Cromatografía en capa fina
TMS = trimetilsililo
TMSOTf = trifluorometanosulfonato de trimetilsililo
TPAP = perrutenato de tetrapropilamonio
Tr = trifenilmetilo
Ts = para-toluensulfonilo
wt = peso
p/p = relación peso/peso
Definiciones
[0014] A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos y frases, tal como se utilizan en el presente documento, tienen los siguientes significados:
Cuando un grupo cíclico (por ejemplo, cicloalquilo, carbociclilo, carbociclilo bicíclico, heteroarilo, heterociclilo) está limitado por un número o rango de números, el número o los números se refieren al número de átomos que forman el grupo cíclico, incluidos los heteroátomos. Por lo tanto, por ejemplo, un grupo heterociclilo de 4-8 miembros tiene 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de anillo.
[0015] "Alquenilo" se refiere a un hidrocarbilo de cadena lineal o ramificada con al menos un sitio de insaturación, por ejemplo, un doble enlace de carbono (sp2)carbonato-(sp2). Por ejemplo, un grupo alquenilo puede tener de 2 a 8 átomos de carbono (es decir, alquenilo C2-C8), o de 2 a 6 átomos de carbono (es decir, alquenilo C2-C6). Los ejemplos de grupos alquenilo adecuados incluyen, pero no se limitan a, etileno o vinilo (-CH = CH2) y alilo (-CH2CH = CH2).
[0016] "Alquenileno" se refiere a un alqueno que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno del mismo o dos átomos de carbono diferentes de un alqueno parental. Los ejemplos de radicales alquenileno incluyen, pero no se limitan a, 1,2-etenileno (-CH = CH-) o prop-1-enileno (-CH2CH = CH-).
[0017] "Alcoxi" es RO- donde R es alquilo, como se define en el presente documento. Los ejemplos no limitantes de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi y propoxi.
[0018] "Alquilo" se refiere a un radical hidrocarbilo de cadena lineal o ramificada saturada. Por ejemplo, un grupo alquilo puede tener de 1 a 8 átomos de carbono (es decir, alquilo (C1-C8)) o de 1 a 6 átomos de carbono (es decir,
(alquilo C1-C6) o de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, í-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo y decilo.
[0019] "Alquileno" se refiere a un alquilo que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno del mismo o dos átomos de carbono diferentes de un alcano parental. Los ejemplos de radicales alquileno incluyen, pero no se limitan a, metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-), propileno (-CH2CH2CH2-) y butileno (-CH2CH2CH2CH2-).
[0020] "Alquinilo" se refiere a un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada con al menos un sitio de insaturación, por ejemplo, un triple enlace carbono (sp)carbono (sp). Por ejemplo, un grupo alquinilo puede tener de 2 a 8 átomos de carbono (alquino C2-C8) o de 2 a 6 átomos de carbono (alquinilo C2-C6). Los ejemplos de grupos alquinilo incluyen, pero no se limitan a, grupos acetilenilo (-C=CH) y propargilo (-CH2C=CH).
[0021] "Alquinileno" se refiere a un alquinilo que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno de la misma o dos átomos de carbono diferentes de un alquino parental. Los radicales alquinileno típicos incluyen, pero no se limitan a, acetileno (-C=C-), propargileno (-CH2C=C-), y 1-pentinileno (-CH2CH2CH2CEC-).
[0022] "Arilo" se refiere a un solo anillo aromático de todo carbono o un sistema de anillo de carbono condensado múltiple (por ejemplo, un sistema de anillo multicíclico fusionado) en el que al menos uno de los anillos es aromático. Por ejemplo, un grupo arilo puede tener de 6 a 20 átomos de carbono, de 6 a 14 átomos de carbono, o de 6 a 12 átomos de carbono. Debe entenderse que el punto de unión de un sistema de anillo condensado múltiple, como se definió anteriormente, puede estar en cualquier posición del sistema de anillo que incluye una parte aromática o carbociclilo del anillo. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, pero no se limitan a, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo e indanilo.
[0023] "Arileno" se refiere a un arilo como se define en el presente documento que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno de dos átomos de carbono diferentes de un arilo original. Los radicales arileno típicos incluyen, pero no se limitan a, fenileno, por ejemplo,
y naftileno, por ejemplo,
[0024] "Carbociclilo bicíclico" se refiere a un hidrocarburo de anillo espiro, bicíclico, saturado o parcialmente insaturado, de 5 a 14 miembros, unido a través de un anillo de carbono. En un carbociclilo bicíclico espiro, los dos anillos comparten un único átomo de carbono común. En un carbociclilo bicíclico fusionado, los dos anillos comparten dos átomos de carbono comunes y adyacentes. En un carbociclilo bicíclico con puente, los dos anillos comparten tres o más átomos de carbono no adyacentes comunes. Los ejemplos de grupos carbociclilo bicíclicos incluyen, pero no están limitados a grupos carbociclilo bicíclicos espiro, en los que dos anillos de carbociclilo comparten un átomo común (por ejemplo,
), grupos carbociclilo bicíclicos fusionados en los que dos anillos de carbociclilo comparten dos átomos comunes (por ejemplo,
), y grupos carbociclilo bicíclicos puenteados en los que dos anillos de carbociclilo comparten tres o más átomos (como 3, 4, 5 o 6) átomos comunes (por ejemplo,
).
[0025] "Carbociclileno bicíclico" se refiere a un carbociclilo bicíclico, como se definió anteriormente, que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno del mismo o dos átomos de carbono diferentes de un carbociclilo bicíclico parental. Los ejemplos de grupos carbociclileno bicíclicos incluyen, pero no se limitan a, grupos de carbociclileno espiro bicíclicos en los que dos anillos de carbociclilo comparten un átomo común (por ejemplo,
), grupos carbociclileno bicíclicos fusionados en los que dos anillos de carbociclilo comparten dos átomos comunes (por ejemplo,
), y grupos de carbociclileno bicíclicos con puentes en los que dos anillos de carbociclilo comparten tres o más átomos (como 3, 4, 5 o 6) átomos comunes (por ejemplo,
)
[0026] "Carbocicliloxi" es RO- donde R es carbociclilo, como se define en el presente documento.
[0027] "Carbocicliloxi bicíclico" es RO- donde R es carbociclilo bicíclico, como se define en el presente documento.
[0028] "Carbociclilo", y "carbociclo" se refiere a un grupo hidrocarbilo que contiene una estructura anular saturada o parcialmente insaturada, unida a través de un anillo de carbono. En diversas realizaciones, carbociclilo se refiere a un resto cíclico C3-C12 saturado o parcialmente no saturado, cuyos ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo y ciclooctilo.
[0029] "Carbociclileno" (así como "carbocicleno") se refiere a un carbociclilo, como se define aquí, que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno de la misma o dos átomos de carbono diferentes de un carbociclilo original. Los ejemplos de carbocicleno incluyen, pero no se limitan a, ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno y ciclohexileno.
[0030] "Carbociclilalquilo" se refiere a un grupo hidrocarbilo que contiene una estructura de anillo saturada o parcialmente insaturada unida a un grupo alquilo, unida a través de un anillo de carbono o un alquilo de carbono. En diversas realizaciones, carbociclilalquilo se refiere a un resto carbociclilalquilo Cr-C12 saturado o parcialmente insaturado, cuyos ejemplos incluyen ciclopropilalquilo, ciclobutilalquilo, ciclopropiletilo y ciclopropilpropilo.
[0031] "Carbociclilalquileno" se refiere a un carbociclilalquilo, como se define en el presente documento, que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno de la misma o dos átomos de carbono diferentes de un cicloalquilalquilo original. Los ejemplos de cicloalquileno incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilmetileno y ciclopropilmetileno.
[0032] "Cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarbilo que contiene una estructura de anillo saturada, unida a través de un anillo de carbono. En diversas realizaciones, cicloalquilo se refiere a un resto cíclico C3-C12 saturado, cuyos ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.
[0033] "Cicloalcoxi" es RO- donde R es cicloalquilo, como se define en el presente documento.
[0034] "Enlace directo" se refiere a un enlace covalente entre dos átomos.
[0035] "Halo" o "halógeno" se refiere a cloro (-CI), bromo (-Br), flúor (-F) o yodo (-I).
[0036] "Haloalquenilo" se refiere a un grupo alquenilo, como se define en el presente documento, sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0037] "Haloalcoxi" se refiere a alcoxi, como se define en el presente documento, sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0038] "Haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo, en el que uno o más átomos de hidrógeno del grupo alquilo se reemplazan con un átomo de halógeno. Los ejemplos de grupos haloalquilo incluyen, pero no se limitan a, -CF3, -CHF2, -CFH2 y -CH2CF3.
[0039] "Haloalquileno" se refiere a un grupo alquileno, como se define en el presente documento, sustituido con uno o más átomos de halógeno.
[0040] "Heteroalquilo" se refiere a un grupo alquilo, como se define en el presente documento, en el que uno o más átomos de carbono se reemplazan con un átomo de oxígeno, azufre o nitrógeno.
[0041] "Heteroalquileno" se refiere a un grupo alquileno, como se define en el presente documento, en el que uno o más átomos de carbono se reemplazan con un átomo de oxígeno, azufre o nitrógeno.
[0042] "Heteroalquenilo" se refiere a un grupo alquenilo, como se define en el presente documento, en el que uno o más átomos de carbono se reemplazan con un átomo de oxígeno, azufre o nitrógeno.
[0043] "Heteroalquenileno" se refiere al grupo heteroalquenilo, como se definió anteriormente, que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno del mismo o dos átomos diferentes de un grupo heteroalquenilo original.
[0044] "Heteroarilo" se refiere a un solo anillo aromático que tiene al menos un átomo diferente al carbono en el anillo, en donde el átomo se selecciona del grupo que consiste en oxígeno, nitrógeno y azufre; el término también incluye múltiples sistemas de anillos condensados que tienen al menos uno de estos anillos aromáticos. Por ejemplo, heteroarilo incluye un anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico que tiene hasta 6 átomos en cada anillo, en donde al menos un anillo es aromático y contiene de 1 a 4 heteroátomos en el anillo seleccionado del grupo que consiste en oxígeno, nitrógeno y azufre. Los anillos del sistema de anillo condensado múltiple se pueden conectar entre sí mediante enlaces fusionados, espirales y puenteados cuando los requisitos de valencia lo permitan. Entre los ejemplos no limitativos de heteroarilo incluyen piridilo, tienilo, furanilo, pirimidilo, imidazolilo, piranilo, pirazolilo, tiaziazilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirrolilo, piridazinilo, pirazinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinoxalinilo, benzofuranilo, dibenzofuranilo, dibenzotiofenilo, benzotienilo, indolilo, benzotiazolilo, benzooxazolilo, bencimidazolilo, isoindolilo, benzazriazolilo, purinilo, tianaftenilo y pirazinilo. La unión de heteroarilo puede ocurrir a través de un anillo aromático o, si el heteroarilo es bicíclico o tricíclico y uno de los anillos no es aromático o no contiene heteroátomos, a través de un anillo no aromático o un anillo que no contenga heteroátomos. También se entiende que "heteroarilo" incluye el derivado de N-óxido de cualquier heteroarilo que contiene nitrógeno.
[0045] "Heteroarileno" se refiere a un heteroarilo, como se definió anteriormente, que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno de los mismos o dos átomos de carbono diferentes o la eliminación de un hidrógeno de un átomo de carbono y la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de nitrógeno de un grupo heteroarilo padre. Ejemplos no limitantes de grupos heteroarileno son:
[0046] "Heterociclilo" se refiere a un grupo monocíclico, bicíclico o tricíclico saturado o parcialmente insaturado de 2 a 14 átomos de carbono en el anillo y, además de los átomos de carbono en el anillo, 1 a 4 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los grupos heterociclilo bicíclicos o tricíclicos pueden tener conectividad de anillo fusionado, puenteado o espiro. En diversas realizaciones, el grupo heterocíclico está unido a otro resto a través del carbono o a través de un heteroátomo. Los ejemplos de heterociclilo incluyen, sin limitación azetidinilo, oxazolinilo, isoxazolinilo, oxetanilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, tetrahidroisoquinolinilo, 1,4-dioxanilo, pirrolidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, dihidrobenzoimidazolilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzotiofenilo, dihidrobenzoxazolilo, dihidrofuranilo, dihidroimidazolilo, dihidroindolilo, dihidroisooxazolilo, dihidroisotiazolilo, dihidrooxadiazolilo, dihidrooxazolilo, dihidropirazinilo, dihidropirazolilo, dihidropiridinilo, dihidropirimidinilo, dihidropirrolilo, dihidroquinolinilo, dihidrotetrazolilo, dihidrotiadiazolilo, dihidrotiazolilo, dihidrotienilo, dihidrotriazolilo, dihidroazetidinilo, metilendioxibenzoílo, cromanilo, dihidropiranoquinoxalinilo, tetrahidroquinoxalinilo, tetrahidroquinolinilo, dihidropiranoquinolinilo y tetrahidrotienilo y N-óxidos de los mismos. Un grupo heterociclilo bicíclico espiro se refiere a un grupo heterociclilo bicíclico en el que los dos anillos del grupo heterociclilo bicíclico comparten un átomo común. Un grupo heterociclilo bicíclico bicíclico fusionado se refiere a un grupo heterociclilo bicíclico en el que los dos anillos del grupo heterociclilo bicíclico comparten dos átomos comunes. Un grupo heterociclilo bicíclico con puente se refiere a un grupo heterociclilo bicíclico en el que los dos anillos del grupo heterociclilo bicíclico comparten tres o más átomos (tales como 3, 4, 5 o 6) átomos comunes.
[0047] "Heterociclilo" se refiere a un heterociclilo, como se define en el presente documento, que tiene dos centros radicales monovalentes derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno o dos átomos de carbono diferentes, a través de un carbono y un heteroátomo, o a través de dos heteroátomos de un heterociclo parental.
[0048] "Profármaco" se refiere a cualquier compuesto que cuando se administra a un sistema biológico genera la sustancia farmacológica o el ingrediente activo, como resultado de una reacción o reacciones químicas espontáneas, reacciones químicas catalizadas por enzimas, fotólisis y/o reacción/reacciones químicas metabólicas. Un profármaco es, por lo tanto, una forma análoga o latente modificada covalentemente de un compuesto terapéuticamente activo. Los ejemplos no limitantes de profármacos incluyen restos éster, restos de amonio cuaternario, restos de glicol y similares.
[0049] El término "opcionalmente sustituido" se refiere a un resto en el que todos los sustituyentes son hidrógeno o en el que uno o más de los hidrógenos del resto están reemplazados por sustituyentes que no son hidrógeno; es decir, el resto que está opcionalmente sustituido está sustituido o no sustituido.
[0050] "Grupo saliente" (LG) se refiere a un resto de un compuesto que es activo hacia el desplazamiento o la sustitución en una reacción química. Los ejemplos en los que se produce el desplazamiento o la sustitución incluyen, entre otros, la sustitución nucleófila bimolecular (Sn2 ), la sustitución nucleófila unimolecular (Sn1), la sustitución aromática nucleófila (SNAr) y los acoplamientos cruzados catalizados por metales de transición. Los ejemplos de grupos salientes incluyen, pero no se limitan a, un átomo de halógeno (por ejemplo, -CI, -Br, -I) y sulfonatos (por ejemplo, mesilato (-OMs), tosilato (-OTs) o triflato (-OTf)). El experto en la materia conocerá los diversos grupos salientes químicos y las estrategias para la activación y apreciará el resto apropiado que actuará como grupos salientes, en función de la reacción química particular, la funcionalidad a la que está unido el grupo y los reactivos químicos utilizados para realizar la reacción de desplazamiento o sustitución. Como ejemplo no limitativo, en algunas situaciones, un átomo de halógeno (por ejemplo, -Cl, -Br o -I) sirve como grupo saliente en una reacción catalizada por un metal de transición (por ejemplo, el acoplamiento Suzuki catalizado por Pd entre un haluro de arilo y ácido aril borónico) y otros reactivos como una base.
Estereoisómeros
[0051] Las definiciones y convenciones estereoquímicas usadas en el presente documento generalmente siguen a SP Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984), McGraw-Hill Book Company, Nueva York; y Eliel, E. y Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., Nueva York.
[0052] El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no superponibilidad de la pareja de la imagen de espejo, mientras que el término "aquiral" se refiere a las moléculas que son superponibles en su pareja de la imagen de espejo.
[0053] Los "isómeros" son compuestos diferentes que tienen la misma fórmula molecular. Los isómeros incluyen estereoisómeros, enantiómeros y diastereómeros.
[0054] Los "diastereoisómeros" son estereoisómeros que tienen al menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes especulares entre sí.
[0055] Los "enantiómeros" son un par de estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla "racémica". El término "(6)" se utiliza para designar una mezcla racémica cuando sea apropiado.
[0056] El término "estereoisómeros" se refiere a compuestos que tienen una constitución química idéntica, pero difieren con respecto a la disposición de los átomos o grupos en el espacio.
[0057] Los compuestos descritos en el presente documento pueden tener centros quirales, por ejemplo, átomos de carbono quirales. Tales compuestos incluyen, por lo tanto, mezclas racémicas de todos los estereoisómeros, incluidos enantiómeros, diastereómeros y atropisómeros. Además, los compuestos descritos en el presente documento incluyen isómeros ópticos enriquecidos o resueltos en cualquiera o todos los átomos quirales asimétricos. En otras palabras, los centros quirales evidentes a partir de las representaciones se proporcionan como los isómeros quirales o mezclas racémicas. Las mezclas racémicas y diastereoméricas, así como los isómeros ópticos individuales aislados o sintetizados, sustancialmente libres de sus socios enantioméricos o diastereoméricos, están todos dentro del alcance de la invención. Las mezclas racémicas se pueden separar en sus isómeros individuales, sustancialmente ópticamente puros a través de técnicas bien conocidas como, por ejemplo, la separación de sales diastereoméricas formadas con adyuvantes ópticamente activos, por ejemplo, ácidos o bases seguidos por la conversión de nuevo a las sustancias ópticamente activas.. El isómero óptico deseado también se puede sintetizar por medio de reacciones estereoespecíficas, comenzando con el estereoisómero apropiado del material de partida deseado.
[0058] Se debe entender que para los compuestos descritos en el presente documento cuando un enlace se dibuja de una manera no estereoquímica (por ejemplo, plana), el átomo al que está unido el enlace incluye todas las posibilidades estereoquímicas. También debe entenderse que cuando un enlace se dibuja de una manera estereoquímica (por ejemplo, negrita, cuña en negrita, guión discontinua o discontinua) el átomo al que está unido el enlace estereoquímico tiene la estereoquímica como se muestra a menos que se indique lo contrario. Por consiguiente, en una realización, un compuesto descrito aquí es mayor que 50% de un solo enantiómero. En otra realización, un compuesto descrito en este documento es al menos el 80% de un solo enantiómero. En otra realización, un compuesto descrito en el presente documento es al menos el 90% de un solo enantiómero. En otra realización, un compuesto descrito en el presente documento es al menos el 98% de un solo enantiómero. En otra realización, un compuesto descrito en este documento es al menos el 99% de un solo enantiómero. En otra realización, un compuesto descrito aquí es mayor que 50% de un diastereómero único. En otra realización, un compuesto descrito en este documento es al menos el 80% de un solo diastereómero. En otra realización, un compuesto descrito en la presente memoria es al menos el 90% de un solo diastereómero. En otra realización, un compuesto descrito en el presente documento es al menos el 98% de un solo diastereómero. En otra realización, un compuesto descrito en el presente documento es al menos el 99% de un solo diastereómero.
Tautómeros
[0059] Los compuestos descritos en el presente documento también pueden existir como isómeros tautoméricos en ciertos casos. Aunque solo se puede representar una estructura de resonancia deslocalizada, todas estas formas se contemplan dentro del alcance de la invención. Por ejemplo, los tautómeros de enoamina pueden existir para los sistemas de purina, pirimidina, imidazol, guanidina, amidina y tetrazol y todas sus formas tautoméricas posibles están dentro del alcance de la invención.
Isótopos
[0060] Un experto en la técnica entenderá que esta invención también incluye cualquier compuesto reivindicado que pueda enriquecerse en cualquiera o en todos los átomos por encima de las relaciones isotópicas naturales con uno
o más isótopos, tales como, pero sin limitarse a, deuterio (2H o D). Como ejemplo no limitativo, un grupo -CH3 puede ser reemplazado por -CD3.
[0061] Los valores específicos que se enumeran a continuación para los radicales, sustituyentes e intervalos son solo para ilustración; no excluyen otros valores definidos u otros valores dentro de intervalos definidos para los radicales y sustituyentes.
Grupos protectores
[0062] En ciertas realizaciones, los grupos protectores incluyen restos profármacos y grupos protectores químicos. Los grupos de protección pueden estar representados por la abreviatura "PG".
[0063] "Grupo protector" ("PG") se refiere a un resto de un compuesto que enmascara o altera las propiedades de un grupo funcional o las propiedades del compuesto en su totalidad. Los grupos de protección química y las estrategias para la protección/desprotección son bien conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Peter GM Wuts y Theodora W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 4a edición; John Wiley & Sons, Inc.: Nueva Jersey, 2007. Ver también Kocienski, PJ Protecting Groups, 3a edición; Georg Thieme Verlag Stuttgart: Nueva York, 2005, en particular el Capítulo 1, Protecting Groups: An Overview, páginas 1-48, Capítulo 2, Carbonyl Protecting Groups, páginas 49-118, Capítulo 3, Diol Protecting Groups, páginas 119-186, Capítulo 4, Hydroxyl Protecting Groups, páginas 187-364, Capítulo 5, Thiol Protecting Groups, páginas 365-392. Los grupos protectores a menudo se utilizan para enmascarar la reactividad de ciertos grupos funcionales, para ayudar en la eficiencia de las reacciones químicas deseadas, por ejemplo, creando y rompiendo enlaces químicos de forma ordenada y planificada.
[0064] La protección de los grupos funcionales de un compuesto altera otras propiedades físicas además de la reactividad del grupo funcional protegido, como la polaridad, la lipofilia (hidrofobicidad) y otras propiedades que pueden medirse con herramientas analíticas comunes. Los intermedios protegidos químicamente pueden ser biológicamente activos o inactivos.
[0065] En ciertas realizaciones, los grupos protectores se emplean opcionalmente para evitar reacciones secundarias con el grupo protegido durante los procedimientos sintéticos. Selección de los grupos apropiados para proteger, cuándo hacerlo, y la naturaleza del grupo protector químico "PG" depende de la química de la reacción que se va a proteger (por ejemplo, condiciones ácidas, básicas, oxidativas, reductoras u otras) y la dirección prevista de la síntesis. Los PG no necesitan ser, y generalmente no lo son, lo mismo si el compuesto está sustituido con múltiples PG. En general, el PG se utilizará para proteger grupos funcionales tales como grupos carboxilo, hidroxilo, tio o amino y, por lo tanto, para prevenir reacciones secundarias o para facilitar la eficacia sintética. El orden de desprotección para producir grupos desprotegidos libres depende de la dirección prevista de la síntesis y de las condiciones de reacción que se van a encontrar, y puede ocurrir en cualquier orden según lo determinado por el experto.
Sales e Hidratos
[0066] Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en el presente documento incluyen sales derivadas de una base apropiada, tal como un metal alcalino (por ejemplo, sodio), un metal alcalinotérreo (por ejemplo, magnesio), amonio y NX4 (en donde X es alquilo C1-C4). Las sales farmacéuticamente aceptables de un átomo de nitrógeno o un grupo amino incluyen, por ejemplo, sales de ácidos carboxílicos orgánicos tales como ácidos acético, benzoico, láctico, fumárico, tartárico, maleico, malónico, málico, isetiónico, lactobiónico y succínico; ácidos sulfónicos orgánicos, tales como ácidos metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico y ptoluenosulfónico; y ácidos inorgánicos, tales como ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico y sulfámico. Las sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto de un grupo hidroxi incluyen el anión de dicho compuesto en combinación con un catión adecuado tal como Na+ y NX4 (en donde cada X se selecciona independientemente de H o un grupo alquilo C1-C4).
[0067] Para uso terapéutico, las sales de los ingredientes activos de los compuestos descritos en el presente documento típicamente serán farmacéuticamente aceptables, es decir, serán sales derivadas de un ácido o base fisiológicamente aceptable. Sin embargo, las sales de ácidos o bases que no son farmacéuticamente aceptables también pueden ser útiles, por ejemplo, en la preparación o purificación de un compuesto de Fórmula I, II, III o IV, (como uno cualquiera de IVa-IVh) o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, u otro compuesto descrito en el presente documento. Todas las sales, derivadas o no de un ácido o base fisiológicamente aceptable, están dentro del alcance de la presente invención.
[0068] Las sales metálicas se preparan típicamente haciendo reaccionar el hidróxido metálico con un compuesto descrito en el presente documento. Ejemplos de sales metálicas que se preparan de esta manera son sales que contienen Li+, Na+ y K+. Una sal metálica menos soluble puede precipitarse a partir de la solución de una sal más soluble mediante la adición del compuesto metálico adecuado.
[0069] Además, las sales pueden formarse a partir de la adición de ácidos de ciertos ácidos orgánicos e inorgánicos, por ejemplo, HCI, HBr, H2SO4, H3PO4 o ácidos orgánicos sulfónicos, a centros básicos, como las aminas. Finalmente, debe entenderse que las composiciones en este documento comprenden compuestos descritos en este documento en su forma no ionizada, así como bipolar, y combinaciones con cantidades estequiométricas de agua como en hidratos.
Realizaciones
[0070] En una realización, un compuesto de fórmula (IV):
o se proporciona un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:
J es alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6, en donde alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6 está opcionalmente sustituido con 1-4 halógeno, -OH, arilo o ciano;
© es carbociclileno C3-C5 que está unido a L y al resto del compuesto a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbociclileno C3-C5 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4, haloalquilo C1-C3, halógeno, OH o ciano o © es carbociclileno bicíclico Cs-Cs que está unido a L y al resto del compuesto a través de dos carbonos adyacentes, o © es carbociclileno C3-C6 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a dos carbonos adyacentes, en los que dicho carbocicleno C3-C6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4 o haloalquilo C1-C3;
L es alquileno C3-C6, alquenileno C3-C6 o -(CH2)3-ciclopropileno, opcionalmente sustituido con 1-4 halógeno, -OH o ciano;
Q es alquilo C2-C4 o carbociclilo C3-C6 opcionalmente sustituido con alquilo C1-C3, halógeno, -OH o ciano;
E es alquilo C1-C3 o alquenilo C2-C3, opcionalmente sustituido con alquilo C1-C3, halógeno, -OH o ciano;
W es H, -OH, -O-alquilo (C1-C3), -O(C1-C3) haloalquilo, halógeno o ciano; y
Z2a es H o alquilo C1-C3.
[0071] En una realización adicional de la Fórmula (IV), J es alquilo C1-C3.
[0072] En una realización adicional de la Fórmula (IV), J es metilo o etilo.
[0073] En una realización adicional de Fórmula (IV), s es carbociclileno C3-C6 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbocicleno C3-C6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4 o haloalquilo C1-C3.
[0074] En una realización adicional de Fórmula (IV), © es carbociclileno C3-C6 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde el carbocicleno C3-C6 está opcionalmente sustituido con metilo, etilo o trifluorometilo.
[0075] En una realización adicional de Fórmula (IV), © es ciclopropileno.
[0076] En una realización adicional de Fórmula (IV), s es carbociclileno bicíclico con puente C6-C8 o carbociclileno bicíclico fusionado C6-C8 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes.
[0077] En una realización adicional de Fórmula (IV), L es alquileno C3-C6, sustituido con 1-4 halógenos. En otra realización de Fórmula (IV), L es alquileno C5, sustituido con dos halógenos. En algunas realizaciones, los halógenos son cada uno flúor.
[0078] En una realización adicional de Fórmula (IV), L es alquileno C3-C6.
[0079] En una realización adicional de Fórmula (IV), L es alquileno C5.
[0080] En una realización adicional de Fórmula (IV), Q es í-butilo o carbociclilo C5-C6.
[0081] En una realización adicional de Fórmula (IV), Q es í-butilo.
[0082] En una realización adicional de Fórmula (IV), E es alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con 1-3 átomos de halógeno.
[0083] En una realización adicional de Fórmula (IV), E es difluorometilo.
[0084] En una realización adicional de Fórmula (IV), W es hidrógeno, -O-alquilo (C1-C3), halógeno o ciano.
[0085] En una realización adicional de Fórmula (IV), W es metoxi.
[0086] En una realización adicional de Fórmula (IV), Z2a es hidrógeno o metilo.
[0087] En una realización adicional de Fórmula (IV), Z2a es metilo.
[0088] Se proporciona además un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
[0089] Se excluye un compuesto de uno cualquiera de Fórmula IVa, IVb, IVc, IVd, IVe, IVf, IVg o IVh, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Métodos de tratamiento
[0090] Una realización proporciona un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en terapia médica (por ejemplo, para uso en el tratamiento de una infección viral por Flaviviridae (por ejemplo, una infección viral por VHC) o la proliferación del virus del VHC o retrasar la aparición de los síntomas del VHC en un paciente (por ejemplo, un mamífero como un ser humano).
[0091] Una realización proporciona un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh) o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para uso en la fabricación de un medicamento para tratar una infección viral por Flaviviridae (por ejemplo, una infección viral del VHC) o la proliferación del virus del VHC o retrasar la aparición de los síntomas del VHC en un paciente que lo necesite (por ejemplo, un mamífero como un ser humano).
[0092] Una realización proporciona un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de la proliferación de un virus Flaviviridae, un virus del VHC o para su uso en el tratamiento terapéutico para retrasar la aparición de los síntomas del VHC.
[0093] Una realización proporciona un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh) o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de una infección por virus de Flaviviridae. (por ejemplo, una infección por el virus del VHC).
[0094] Una realización proporciona el uso de un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para una infección por virus Flaviviridae (por ejemplo, una infección por el virus del VHC) en un mamífero (por ejemplo, un ser humano).
[0095] En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto para uso en un método para tratar la infección crónica por hepatitis C. El método incluye administrar a un paciente que lo necesite, un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el paciente.
[0096] En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto para uso en un método para tratar la infección por hepatitis C en pacientes sin tratamiento previo. El método incluye administrar a un paciente sin tratamiento previo, un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0097] En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto para uso en un método para tratar la infección por hepatitis C en pacientes con experiencia en el tratamiento. El método incluye administrar a un paciente con experiencia en el tratamiento, un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0098] En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto para uso en un método para tratar la infección por hepatitis C en un paciente no elegible por interferón o intolerante a interferón. El método incluye administrar, un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente.
[0099] En ciertas realizaciones, los métodos de tratamiento descritos en este documento incluyen la administración del compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al paciente. Por un período fijo de duración. En algunas realizaciones, el período fijo de duración es de 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 10 semanas o 12 semanas.
[0100] En otras realizaciones, el período fijo de duración no es más de 12 semanas. En algunas realizaciones, el compuesto se administra durante aproximadamente 12 semanas. En realizaciones adicionales, el compuesto se administra durante aproximadamente 12 semanas o menos, durante aproximadamente 10 semanas o menos, durante aproximadamente 8 semanas o menos, durante aproximadamente 6 semanas o menos, o durante aproximadamente 4 semanas o menos.
[0101] El compuesto se puede administrar una vez al día, dos veces al día, una vez cada dos días, dos veces a la semana, tres veces a la semana, cuatro veces a la semana o cinco veces a la semana.
[0102] En ciertas realizaciones, los métodos de tratamiento descritos en este documento incluyen administrar un
compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para infectarse con el genotipo VHC (GT) 1, 2, 3, 4, 5 o 6 (es decir, un método para tratar una infección por VHC GT 1, 2, 3, 4, 5, o 6).
[0103] Una realización proporciona un compuesto para uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente que lo necesite (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 1 del VHC. El método incluye la administración de un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el paciente.
[0104] Una realización proporciona un compuesto para uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente que lo necesite (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 2 del VHC. El método incluye administrar un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el paciente.
[0105] Una realización proporciona un compuesto para uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente que lo necesite (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 3 del VHC. El método incluye administrar un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el paciente.
[0106] Una realización proporciona un compuesto para uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente que lo necesite (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 4 del VHC. El método incluye administrar un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el paciente.
[0107] Una realización proporciona un compuesto para uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente que lo necesite (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 5 del VHC. El método incluye administrar un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el paciente.
[0108] Una realización proporciona un compuesto para uso en un método para tratar una infección por VHC en un paciente que lo necesite (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano), en el que el paciente está infectado con el genotipo 6 del VHC. El método incluye administrar un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el paciente.
[0109] En los métodos de tratamiento descritos en el presente documento, la etapa de administración incluye administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o Sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el paciente que necesita tratamiento.
[0110] En ciertas realizaciones, se proporcionan métodos para inhibir la actividad del VHC. Dichos métodos incluyen la etapa de tratar una muestra sospechosa de contener VHC con un compuesto o composición descrito aquí.
[0111] En una realización, los compuestos descritos en el presente documento actúan como inhibidores del VHC, como intermedios para dichos inhibidores o tienen otras utilidades como se describen a continuación.
[0112] En ciertas realizaciones, los compuestos que se unen en el hígado pueden unirse con diversos grados de reversibilidad.
[0113] En una realización, un método para tratar el VHC incluye añadir un compuesto descrito aquí a la muestra. La etapa de adición comprende cualquier método de administración como se describe anteriormente.
[0114] Si se desea, la actividad del VHC después de la aplicación del compuesto puede observarse mediante cualquier método, incluidos los métodos directos e indirectos para detectar la actividad del VHC. Se contemplan todos los métodos cuantitativos, cualitativos y semicuantitativos para determinar la actividad del VHC. Típicamente, uno de los métodos de detección descritos anteriormente se aplica, sin embargo, cualquier otro método, como la observación de las propiedades fisiológicas de un organismo vivo, también es aplicable.
[0115] Muchos organismos contienen VHC. Los compuestos de esta invención son útiles en el tratamiento o profilaxis de afecciones asociadas con la activación del VHC en animales o en seres humanos.
Formulaciones farmacéuticas
[0116] "Farmacéuticamente aceptable" significa adecuado para su uso en preparaciones farmacéuticas, generalmente consideradas como seguras para tal uso, oficialmente aprobadas por una agencia reguladora de un gobierno nacional o estatal para tal uso, o incluido en la Farmacopea de los EE.UU. u otra Farmacopea reconocida para su uso en animales, y más particularmente en humanos.
[0117] "Portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o portador, u otro ingrediente que sea farmacéuticamente aceptable y con el cual se administra un compuesto de la invención.
[0118] Los compuestos de esta invención se formulan con vehículos convencionales (por ejemplo, ingrediente inactivo o material excipiente), que se seleccionarán de acuerdo con la práctica habitual. Las tabletas contendrán excipientes que incluyen deslizantes, rellenos, aglutinantes y similares. Las formulaciones acuosas se preparan en forma estéril y, cuando están destinadas a ser administradas por una administración diferente a la oral, generalmente serán isotónicas. Todas las formulaciones contendrán opcionalmente excipientes como los que se exponen en el Handbook of Pharmaceutical Excipients (1986). Los excipientes incluyen ácido ascórbico y otros antioxidantes, agentes quelantes tales como EDTA, carbohidratos tales como dextrina, hidroxialquilcelulosa, hidroxialquilmetilcelulosa, ácido esteárico y similares. Una realización proporciona la formulación como una forma de dosificación sólida que incluye una forma de dosificación oral sólida. El pH de las formulaciones varía de aproximadamente 3 a aproximadamente 11, pero generalmente es de aproximadamente 7 a 10.
[0119] Si bien es posible que los ingredientes activos se administren solos, puede ser preferible presentarlos como formulaciones farmacéuticas (composiciones). Las formulaciones, tanto para uso veterinario como para uso humano, de la invención comprenden al menos un ingrediente activo, como se define anteriormente, junto con uno o más vehículos aceptables para el mismo y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. El (los) portador(es) debe(n) ser "aceptable(s)" en el sentido de ser compatible(s) con los otros ingredientes de la formulación y fisiológicamente inocuos para el receptor de la misma.
[0120] Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas para las rutas de administración anteriores. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia. Las técnicas y formulaciones generalmente se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Tales métodos incluyen la etapa de asociar el ingrediente activo con ingredientes inactivos (por ejemplo, un vehículo, excipiente farmacéutico, etc.) que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan asociando de manera uniforme e íntima el ingrediente activo con portadores líquidos o portadores sólidos finamente divididos o ambos, y luego, si es necesario, dando forma al producto.
[0121] En ciertas realizaciones, las formulaciones adecuadas para administración oral se presentan como unidades discretas, tales como cápsulas, sellos o tabletas, cada una de las cuales contiene una cantidad predeterminada del ingrediente activo.
[0122] En ciertas realizaciones, las formulaciones farmacéuticas incluyen uno o más compuestos de la invención junto con uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables y opcionalmente otros agentes terapéuticos. Las formulaciones farmacéuticas que contienen el ingrediente activo pueden estar en cualquier forma adecuada para el método de administración deseado. Cuando se usan para uso oral, por ejemplo, pueden prepararse tabletas, trociscos, pastillas, suspensiones acuosas o de aceite, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, jarabes o elixires. Las composiciones destinadas a uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener uno o más agentes que incluyen agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, con el fin de proporcionar una preparación de sabor agradable. Las tabletas que contienen el ingrediente activo en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable no tóxico que son adecuados para la fabricación de tabletas son aceptables. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como calcio o carbonato de sodio, lactosa, lactosa monohidrato, croscarmelosa de sodio, povidona, calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y desintegración, tales como almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, tales como celulosa, celulosa microcristalina, almidón, gelatina o goma arábiga; y agentes lubricantes, como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden no estar recubiertos o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas, incluida la microencapsulación para retrasar la desintegración y la adsorción en el tracto gastrointestinal y, por lo tanto, proporcionar una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de retardo temporal tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera.
[0123] La cantidad de ingrediente activo que se combina con los ingredientes inactivos para producir una forma de dosificación variará dependiendo del huésped tratado y el modo particular de administración. Por ejemplo, en algunas realizaciones, una forma de dosificación para administración oral a seres humanos contiene
aproximadamente 1 a 1000 mg de material activo formulado con una cantidad apropiada y conveniente de material portador (por ejemplo, ingrediente inactivo o material excipiente). En ciertas realizaciones, el material portador varía de aproximadamente 5 a aproximadamente 95% del total de composiciones (peso: peso). En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en este documento contienen aproximadamente 1 a 800 mg, 1 a 600 mg, 1 a 400 mg, 1 a 200 mg, 1 a 100 mg o 1 a 50 mg del compuesto de Fórmula IV (excepto cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en este documento contienen no más de aproximadamente 400 mg del compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en este documento contienen aproximadamente 100 mg del compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0124] Debe entenderse que además de los ingredientes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones descritas en el presente documento pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica teniendo en cuenta el tipo de formulación en cuestión, por ejemplo, las adecuadas para la administración oral pueden incluir agentes aromatizantes.
[0125] Se proporcionan además composiciones veterinarias que comprenden al menos un ingrediente activo como se define anteriormente junto con un vehículo veterinario.
[0126] Los portadores veterinarios son materiales útiles para el fin de administrar la composición y pueden ser materiales sólidos, líquidos o gaseosos que, por lo demás, son inertes o aceptables en la técnica veterinaria y son compatibles con el ingrediente activo. Estas composiciones veterinarias se pueden administrar por vía oral, parenteral o por cualquier otra vía deseada.
[0127] La dosis efectiva de ingrediente activo depende al menos de la naturaleza de la condición tratada, la toxicidad, si el compuesto se usa profilácticamente (dosis más bajas), el método de administración y la formulación farmacéutica, y se determinará por la clínico utilizando estudios de dosis convencionales.
Vías de administración
[0128] Uno o más compuestos de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh) (aquí referidos como los ingredientes activos), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, se administran por cualquier vía apropiada para la condición a tratar. Las vías adecuadas incluyen la administración oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal y epidural), y similares. Se apreciará que la vía preferida puede variar, por ejemplo, con la condición del destinatario. Una ventaja de los compuestos de esta invención es que son biodisponibles por vía oral y pueden dosificarse por vía oral. Por consiguiente, en una realización, las composiciones farmacéuticas descritas en este documento son formas de dosificación oral. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en este documento son formas de dosificación sólidas orales.
[0129] Un experto en la técnica reconocerá que los sustituyentes y otros restos de los compuestos de la fórmula genérica de este documento deben seleccionarse con el fin de proporcionar un compuesto que sea suficientemente estable para proporcionar un compuesto farmacéuticamente útil que pueda formularse en un compuesto aceptable. composición farmacéutica. Se contempla que los compuestos que tienen tal estabilidad están dentro del alcance de la presente invención. Un experto en la técnica debe entender que cualquier combinación de las definiciones y los sustituyentes descritos anteriormente no debe dar como resultado una especie o compuesto inoperable.
Terapia de combinación
[0130] En otra realización más, la presente solicitud describe composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con al menos un agente terapéutico adicional (es decir,, ingrediente activo), y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, los agentes terapéuticos adicionales incluyen agentes antivirales adicionales.
[0131] El agente terapéutico adicional usado en combinación con los compuestos descritos en el presente documento incluye, sin limitación, cualquier agente que tenga un efecto terapéutico cuando se usa en combinación con el compuesto de la presente invención. Dichas combinaciones se seleccionan en función de la condición a tratar, las reactividades cruzadas de los ingredientes y las propiedades farmacológicas de la combinación. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, el agente terapéutico usado en combinación con los compuestos de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh) incluye, sin limitación, uno o más de los siguientes: interferones, análogos de ribavirina, inhibidores de la proteasa NS3, NS5a inhibidores, inhibidores de NS5b, inhibidores de la alfa-glucosidasa 1, hepatoprotectores, inhibidores no nucleósidos del VHC, análogos de los nucleósidos y otros fármacos para tratar
la infección por el VHC. En algunas realizaciones, los agentes terapéuticos adicionales incluyen, sin limitación, inhibidores de proteasa NS3, inhibidores de NS5a y/o inhibidores de NS5b. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y uno o más de un inhibidor de la proteasa NS3, un inhibidor de NS5a y/o un inhibidor de NS5b es previsto. En algunas realizaciones, se proporciona una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y uno o más de un inhibidor de NS5a y/o un inhibidor de NS5b. En ciertas realizaciones, se proporcionan composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh) y uno o más agentes antivíricos adicionales, en donde el agente antiviral adicional no es un interferón, ribavirina o un análogo de ribavirina. En realizaciones adicionales, se proporcionan composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh), o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, y uno o más agentes antivíricos adicionales, en donde el agente antiviral adicional no es ribavirina o un análogo de la ribavirina.
[0132] En ciertas realizaciones, los compuestos descritos en el presente documento se combinan con uno o más ingredientes activos (por ejemplo, uno o más agentes antivirales adicionales) en una forma de dosificación unitaria para administración simultánea o secuencial a un paciente. La terapia de combinación puede administrarse como un régimen simultáneo o secuencial. Cuando se administra de forma secuencial, la combinación se administra en dos o más administraciones. En ciertas realizaciones, los ingredientes activos son: (1) formulados conjuntamente y administrados o administrados simultáneamente en una composición farmacéutica combinada; (2) entregados por alternancia o en paralelo como composición farmacéutica separada; o (3) por algún otro régimen. Cuando se administran en terapia de alternancia, los ingredientes activos se administran o se administran de forma secuencial, por ejemplo, en tabletas, píldoras o cápsulas separadas, o mediante diferentes inyecciones en jeringas separadas. En general, durante la terapia de alternancia, una dosis efectiva de cada ingrediente activo se administra secuencialmente, es decir, en serie, mientras que en la terapia de combinación, las dosis efectivas de dos o más ingredientes activos se administran juntas.
[0133] Los interferones ejemplares incluyen, sin limitación, rIFN-alfa 2b pegilado (PEG-Intron), rIFN-alfa 2a pegilado (Pegasys), rIFN-alfa 2b (Intron A), rIFN-alfa 2a (Roferon-A), interferón alfa (MOR-22, OPC-18, Alfaferona, Alfanativa, Multiferon, subalina), interferón alfacon-1 (Infergen), interferón alfa-n1 (Wellferon), interferón alfa-n3 (Al-feron), interferón-beta (Avonex, DL-8234), interferón-omega (omega DUROS, Biomed 510), albinterferón alfa-2b (Albuferón), IFN alfa XL, BLX-883 (Locteron), DA-3021, interferón glicosilado alfa-2b (AVI- 005), PEG-Infergen, interferón lambda PEGilado (IL-29 PEGilado), o belerofon, IFN alfa-2b XL, RIFN-alfa 2a, iFn alfa consenso, infergen, rebif, IFN-beta pegilado, interferón oral, alfa, feron, reaferon, intermax alfa, r-IFN-beta e infergen actinmune.
[0134] Los ejemplos de análogos de ribavarina incluyen, sin limitación, ribavirina (Rebetol, Copegus), levovirina VX-497 y taribavirina (Viramidina).
[0135] Los inhibidores de NS5A ejemplares incluyen, sin limitación, ledipasvir (GS-5885), GS-5816, JNJ-47910382, da-clatasvir (BMS-790052), ABT-267, MK-8742, EDP-239, IDX-719, PPI-668, GSK-2336805, ACH-3102, A-831, A-689, AZD-2836 (A-831), AZD-7295 (A-689) y BMS-790052.
[0136] Los inhibidores de NS5B ejemplares incluyen, sin limitación, el inhibidor de polimerasa es sofosbuvir (GS-7977), tegobuvir (GS-9190), GS-9669, TMC647055, ABT-333, ABT-072, setrobuvir (ANA-598), filibuvir (PF-868554), VX-222, IDX-375, IDX-184, IDX-102, BI-207127, valopicitabina (NM-283), R1626, PSI-6130 (R1656), PSI-7851, BCX-4678, Nesbuvir (VHC-796), BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, GSK625433, XTL-2125, VCH-916, JTK-652, MK-3281, VBY-708, A848837, GL59728, A-63890, A-48773, A-48547, BC-2329, BMS-791325, y BILB-1941.
[0137] Los inhibidores de proteasa NS3 ejemplares incluyen, sin limitación, GS-9451, GS-9256, simeprevir (TMC-435), ABT-450, boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (s Ch-900518), vaniprevir (MK-7009)), MK-5172, danoprevir (ITMN-191), sovaprevir (ACH-1625), neceprevir (ACH-2684), Telaprevir (VX-950), VX-813, VX-500, faldaprevir (BI-201335), asunaprevir (BMS-650032), BMS-605339, VBY-376, PHX-1766, YH5531, BILN-2065, y BILN-2061.
[0138] Los inhibidores de la alfa-glucosidasa 1 ejemplares incluyen, sin limitación, celgosivir (MX-3253), Miglitol y UT-231B.
[0139] Los hepatoprotectores ejemplares incluyen, sin limitación, IDN-6556, ME 3738, MitoQ y LB-84451.
[0140] Los inhibidores no nucleósidos ejemplares del VHC incluyen, sin limitación, derivados de bencimidazol, derivados de benzo-1,2,4-tiadiazina, y derivados de fenilalanina.
[0141] Los ejemplos de análogos de nucleósidos incluyen, sin limitación, ribavirina, viramidina, levovirina, un L-nucleósido o isatoribina y dicho interferón es interferón a o interferón pegilado.
[0142] Otros fármacos ejemplares para el tratamiento de la infección por VHC incluyen, sin limitación, imiquimod, 852A, GS-9524, ANA-773, ANA-975, AZD-8848 (DSP-3025), PF-04878691 y SM-360320, ciclofilina. inhibidores (por ejemplo, DEBIO-025, SCY-635 o NIM811) o inhibidores de IRES del VHC (por ejemplo, MCI-067); emericasan (IDN-6556), ME-3738, GS-9450 (LB-84451), silibilina o MitoQ. BAS-100, SPI-452, PF-4194477, TMC-41629, GS-9350, GS-9585 y roxitromicina.
[0143] Otros fármacos ejemplares adicionales para tratar la infección por VHC incluyen, sin limitación, zadaxina, nitazoxanida (alinea), BiVn-401 (virostat), DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, bavituximab, oglufanida, PYN-17, KPE02003002, actilon (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975 (isatoribina), XTL-6865, ANA 971, NOV-205, tarvacina, EHC-18 y NIM811.
[0144] Otros ejemplos de otros fármacos para tratar la infección por VHC incluyen, sin limitación, timosina alfa 1 (Zadaxin), nitazoxanida (Alinea, NTZ), BIVN-401 (virostat), PYN-17 (altirex), KPE02003002, actilon (CPG-10101), GS-9525, KRN-7000, civacir, GI-5005, XTL-6865, BIT225, PTX-111, ITX2865, TT-033i, ANA 971, NOV-205, tarvacina, EHC-18, VGX -410C, EMZ-702, AVI 4065, BMS-650032, Bavituximab, MDX-1106 (ONO-4538), Oglufanida, FK-788, VX-497 (merimepodib), DEBIO-025, ANA-975 (isatoribine), XTL -6865, o NIM811.
Procedimientos Sintéticos Generales
[0145] Los esquemas, procedimientos y ejemplos proporcionados en el presente documento describen la síntesis de los compuestos descritos en el presente documento, así como los intermedios utilizados para preparar los compuestos. Debe entenderse que los pasos individuales descritos en este documento pueden combinarse. También debe entenderse que los lotes separados de un compuesto pueden combinarse y luego llevarse a cabo en la siguiente etapa sintética.
[0146] Los siguientes esquemas describen métodos que son útiles para preparar compuestos descritos en el presente documento.
[0147] Lf es un "fragmento enlazador" (es decir, un precursor de L) en donde un enlace carbono-carbono insaturado unido (por ejemplo, alqueno o alquino) en la porción de Lf distal a © facilita, como ejemplo no limitativo, una reacción catalizada por metal que da como resultado la conexión de Lf a U para formar un grupo L. Los ejemplos no limitantes de reacciones catalizadas por metales que resultan en tal conexión incluyen la metátesis de cierre de anillo catalizada por Ru o una reacción de acoplamiento cruzado catalizada por Pd (por ejemplo, acoplamientos de Negishi, Heck o Sonagashira).
[0148] Los espectros de resonancia magnética nuclear 1H (RMN) fueron en todos los casos consistentes con las estructuras propuestas. Los desplazamientos químicos característicos (ó) se dan en partes por millón campo abajo del tetrametilsilano utilizando abreviaturas convencionales para la designación de picos principales: por ejemplo, s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete; br, amplio Las siguientes abreviaturas se han utilizado para solventes comunes utilizados en experimentos de resonancia magnética nuclear: CDCb, deuterochloroform; CD3OD, perdeuterometanol; CD3CN, perdeuteroacetonitrilo; d6-DMSO, perdeuterodimetilsulfóxido. Los espectros de masas se obtuvieron utilizando espectrómetros de masas Thermo Scientific o Agilent Technologies equipados con ionización por electrospray (ESI). Las masas se informan como relaciones de masa a cargar (m/z) de, por ejemplo, un ion del compuesto (representado por [M]+), un ion formado a partir del compuesto con otro ion, como un ion hidrógeno (representado por [M+H]+), un ion sodio (representado por [M+Na]+), un ion formado a partir del compuesto al perder un ion, como el compuesto desprotonado (representado por [M-H]-), etc. Las mediciones de HPLC analíticas se realizaron en HPLC Agilent Technologies serie 1100 utilizando Phenomenex Kinetex C18, 2,6 um 100 A, columna de 4,6 x 100 mm con un programa de elución de Solvente B al 2% durante 0,55 min, gradiente a 98% de solvente B durante 8 min que se mantiene al 98% del disolvente B durante 0,40 minutos antes de volver al 2% del disolvente B durante 0,02 minutos y al 2% del disolvente B durante 2,03 minutos a una velocidad de flujo de 1,5 ml/min (disolvente A = MiliQ filtrado H2O 0,1% TFA, disolvente B = MeCN 0,1% de TFA). El término "cromatografía en capa fina (TLC)" se refiere a cromatografía en gel de sílice utilizando placas de gel de sílice 60 F254. El factor de retención ("Rf") de un compuesto es la distancia recorrida por un compuesto dividida por la distancia recorrida por el frente del solvente en una placa de TLC. Términos tales como "elución temprana" y "elución tardía" se refieren al orden en que un compuesto se eluye o se recupera de un método de cromatografía en fase móvil de fase estacionaria/disolvente líquido sólido (por ejemplo, cromatografía en gel de sílice en fase normal o alta fase inversa cromatografía líquida a presión (HPLC)).
Esquema 1
[0149] El Esquema 1 demuestra una ruta general a S1-3, donde J, R1, R, M, L, T, U, W y Q son como se definen aquí, Z2a es como se define en la Fórmula IV o III, o es H o Z2a como se define en la Fórmula I o II. En el esquema 1, el intermedio de éster S1-1 se hidroliza con una base tal como hidróxido de litio cuando R es alquilo C1-C3 (por ejemplo, metilo), o con ácido tal como ácido trifluoroacético cuando R es tere-butilo. El producto de la hidrólisis del éster se acopla luego a un intermedio S1-2 a través de una reacción de acoplamiento (por ejemplo, utilizando un agente de acoplamiento peptídico como HATU y una base como DIPEA) para generar compuestos de la estructura general S1-3,
Esquema 2
[0150] El esquema 2 muestra una síntesis general de un intermedio S2-6 en el que U, W, R1, J y Q son como se definen en este documento. En el esquema 2, una especie de prolina S2-2 adecuadamente sustituida y protegida sufre una reacción de eterificación como SNAr (p. ej., tratamiento con Cs2CO3 y S2-1 donde R2 es H y LG2 es halógeno), Sn2 (p. ej., Preconversión de S2-2 a brosilato (R2 es Bs) seguido por tratamiento con S2-1 donde LG2 es -OH y una base como DABCO), reacción de Mitsunobu (por ejemplo, tratamiento de S2-2 con DIAD y trifenilfosfina seguido de S2-1 donde LG2 es -OH) o Reacción de acoplamiento cruzado catalizada por metal (LG2 es halógeno, R2 es H) para generar el intermedio S2-3, El intermedio S2-3 se desprotege (p. ej. 4 N HCl en dioxano cuando PG es Boc) para producir el intermedio S2-4, La formación de enlaces amida a través de la activación del ácido carboxílico de s 2-5 utilizando agentes de acoplamiento peptídicos u otros métodos de activación de ácido carboxílico antes del tratamiento de S2-4 proporciona el intermedio S2-6.
Esquema 3
[0151] El esquema 3 muestra una síntesis general del intermedio S3-6 en donde LF-CH2-CH2 es L, y U, W, R1, J, Q, M, T y L son como se definen en este documento. En el esquema 3, un intermedio S3-1 se acopla a través de una reacción de formación de enlace amida a un intermedio S3-2 para proporcionar el intermedio S3-3, Acoplamiento cruzado catalizado por metal (p. ej., Reacción de Suzuki con vinilfluoroboroborato de potasio, Et3N, Pd(dppf)Cb) para obtener S3-4, seguido de metátesis de cierre del anillo (p. ej. Zhan 1B) para obtener S3-5, seguido de reducción del doble enlace (por ejemplo, H2 , 10% Pd/C) proporciona el intermedio s 3-6.
[0152] El esquema 4 muestra una síntesis general de un intermedio S4-5 donde LF-CH2-CH2 es L, y U, W, R1, J, Q, Q y L son como se definen en este documento. En el esquema 4, el intermedio S4-1 está protegido con un grupo protector tal como Boc. S4-1 experimenta un acoplamiento cruzado catalizado por metal de transición (por ejemplo, acoplamiento de Sonogashira) a un intermedio S4-2 para proporcionar el intermedio S4-3, El triple enlace del intermedio S4-3 se reduce a un enlace simple por hidrogenación (por ejemplo, H2 , Pd/C catalítico al 10%) para dar el intermedio S4-4, La desprotección de la Boc-amina seguida de un acoplamiento en condiciones básicas (por ejemplo, trietilamina) proporciona el intermedio S4-5,
Esquema 4
[0153] El esquema 5 muestra una síntesis general de un intermedio S5-9 donde LF-CH2-CH2 es L, y U, W, R1, J, Q, T y L son como se definen en este documento. En el esquema 5, el intermedio S5-1 experimenta un acoplamiento cruzado catalizado por metal (como la reacción de Sonogashira) con un intermedio S5-2 para proporcionar el intermedio S5-3, El triple enlace del intermedio S5-3 se reduce a un enlace sencillo bajo las conducciones apropiadas, como por ejemplo mediante hidrogenación (por ejemplo, usando H2 sobre catalizador de Pd/C al 10%) para obtener el intermedio S5-4, La desprotección del alcohol para proporcionar S5-5, seguida de la activación (por ejemplo, DSC en condiciones básicas, por ejemplo, trietilamina) proporciona el intermedio S5-6. El acoplamiento de S5-6 y S5-7 en condiciones básicas proporciona S5-8, La desprotección del nitrógeno de la prolina (por ejemplo, HCl en dioxano cuando PG = Boc) seguido de una macrolactamización (por ejemplo, un agente de acoplamiento como HATU en condiciones básicas) proporciona el intermedio S5-9.
[0154] El esquema 6 muestra una síntesis general de los compuestos intermedios S6-6 y S6-7 donde U, R1, J, Q, M, T y L son como se definen en el presente documento. En el esquema 6 intermedio S6-1, W es OPG, donde PG es un grupo protector. S6-1 se desprotege primero para dar el intermedio S6-2, La alquilación del intermedio S6-2 con un electrófilo apropiado, como el S6-4, proporciona un S6-6 intermedio. La reacción de S6-2 con anhídrido tríflico proporciona s 6-3, que luego sufre un acoplamiento cruzado catalizado por metal con un par de acoplamiento nucleófilo apropiado tal como S6-5 (por ejemplo, la reacción de Sonagashira o Suzuki) para proporcionar el intermedio S6-7.
Esquema 7
[0155] El esquema 7 muestra una síntesis general del intermedio S7-13 donde LF-CH2-CH2-CF2 es L, y W, R1, J, Q, M y T son como se definen en este documento. En S7-13, L es alquilo C1-C3. En el Esquema 7, el intermedio S7-1 primero sufre un intercambio de halógeno de litio y luego se trata con el intermedio S7-2 para generar el intermedio S7-3, que luego se condensa con el intermedio S7-4 para proporcionar el intermedio de quinoxalina S7-5, La halogenación de S7-5 (por ejemplo, POCE) proporciona el intermedio S7-6. El intermedio S7-6 se une a través de una formación de éter al intermedio S7-7 a través de una reacción SNAr (por ejemplo, Cs2CO3) para generar el intermedio S7-8, La desprotección de la n-PG del intermedio S7-8 proporciona S7-10. Una reacción de acoplamiento de enlace amida del intermedio S7-9 y el intermedio S7-10 (por ejemplo, EDC y HOBT, o HATU, NMM, DIPEA) proporciona el intermedio S7-11. La metátesis de cierre del anillo de S7-11 genera el intermedio S7-12. La reducción del doble enlace (por ejemplo, la hidrogenación sobre paladio sobre carbono) proporciona el intermedio S7-13.
Esquema 8
[0156] El esquema 8 muestra una síntesis general del intermedio S8-5 en el que una 4-oxo prolina S8-1 adecuadamente protegida reacciona con el reactivo de Bredereck para generar la enaminona S8-2, La adición de una especie organometálica proporciona enone S8-3, que sufre una reducción al intermedio de hidroxilo S8-4 de manera estereoselectiva (por ejemplo, reducción de Luche o reducción de CBS). La reducción subsiguiente de olefinas da un compuesto intermedio de hidroxi prolina 3-sustituido S8-5,
Esquema 9
[0157] El Esquema 9 muestra una síntesis general del intermedio S9-3 en donde un triflato de vinilo S9-1 (preparado por ejemplo, mediante métodos en Kamenecka, TM, y otros, Tetrahedron Letters, 2001, 8571) experimenta un acoplamiento cruzado catalizado por metal (por ejemplo, Acoplamiento Negishi) para generar intermedio S9-2, La hidroboración y posterior oxidación del intermedio S9-2 proporciona el intermedio S9-3,
Esquema 10
[0158] El esquema 10 muestra una síntesis general del compuesto intermedio de sulfonamida sustituido S10-3, El ciclopropilo-sulfonilcarbamato de tere-butilo S10-1 se desprotona (p. ej., n-BuLi) y se hace reaccionar con un electrófilo (p. ej., haluro de alquilo) para dar el intermedio de sulfonamida sustituido protegido S10-2, que luego se desprotege (p. ej. 4 N HCl en dioxano) para proporcionar intermedio S10-3.
Esquema 11
[0159] El esquema 11 muestra una síntesis general de un intermedio S11-3 en el que E es como se define en el presente documento. En el Esquema 11, una sulfonamida S11-1 se acopla a un aminoácido protegido S11-2 utilizando un agente de acoplamiento tal como CDI y una base tal como DBU.
Esquema 12
[0160] El esquema 12 muestra una síntesis general de los compuestos intermedios S12-10 y S12-17, donde Lf es alquileno C1-C3. En el Esquema 12, ambas síntesis comienzan con la monoprotección del intermedio S12-1 para producir S12-2, seguido de oxidación (por ejemplo, oxidación de Swern) para proporcionar el intermedio S12-3, La cloración alfa enantioselectiva (por ejemplo, organocatalizador S12-4 y NCS) proporciona cloroaldehído S12-5, La reacción de S12-5 con un derivado de bis-cinciometano (por ejemplo, el reactivo de Nysted) proporciona el intermedio de ciclopropano S12-6. El intermedio S12-6 está protegido ortogonalmente para proporcionar el intermedio S12-7, La desprotección de -OPG de S12-7 proporciona el intermedio S12-8, que posteriormente se deshidrata (por ejemplo, el reactivo de Grieco) al intermedio S12-9 y finalmente se elimina O-PG2 para proporcionar el intermedio S12-10. El intermedio S12-6 se activa alternativamente (por ejemplo, DSC y una base como la piridina) para proporcionar el intermedio S12-11 que está acoplado al intermedio S12-12 para proporcionar el intermedio de carbamato S12-13. El intermedio S12-13 se desprotege para dar el intermedio S12-14, que luego se oxida (por ejemplo, la oxidación de Swern) para proporcionar el intermedio de aldehído S12-15. La olefinación (por ejemplo, la reacción de Wittig) del intermedio S12-15 proporciona el intermedio S12-16. La hidrólisis del éster (por ejemplo, LiOH cuando R es metilo, TFA cuando R = tere-butilo) produce el intermedio S12-17.
Esquema 13
[0161] El Esquema 13 muestra una síntesis general del intermedio S13-5 donde Q y T son como se definen aquí y Lf es alquileno C1-C3. La activación del intermedio S13-1 (por ejemplo, DSC) seguido de la formación de carbamato entre el intermedio S13-2 y el intermedio de éster de aminoácido S13-3 en condiciones básicas da el intermedio de éster S13-4, La hidrólisis del éster (por ejemplo, LiOH cuando R = metilo o TFA cuando R = tere-butilo) proporciona el intermedio S13-5,
Esquema 14
[0162] El esquema 14 muestra una síntesis general del intermedio S14-7 en donde Q es como se define aquí y Lf es alquileno C1-C3. La oxidación del intermedio S14-1 (por ejemplo, periodinano Dess-Martin) produce la cetona S14-2, El tratamiento de S14-2 con S14-3 (por ejemplo, R2 es -CF3) en presencia de reactivo adecuado (como CsF) proporciona el intermedio S14-4, La desprotección de S14-4 (por ejemplo, TBAF) proporciona S14-5, que luego se agrega a un isocianato S14-6 para dar el intermedio S14-7.
Esquema 15
[0163] El esquema 15 muestra una síntesis general de un intermedio (+)-S15-3, generado por la reacción de Kulinkovich de un reactivo de Grignard S15-1 y un éster S15-2, de acuerdo con los procedimientos estándar descritos en Kulinkovich, OG y Kananovich, DG, Eur. J. Org. Chem. 2007, 2007, 2121.
Esquema 16
[0164] El esquema 16 muestra una síntesis general de un intermedio S16-4 en el que Q, M y T son como se definen en el presente documento y Lf es alquileno C1-C3. En el Esquema 16, la olefina S16-1 experimenta escisión oxidativa (p. ej., OsO4, NaIO4) al aldehído S16-2, que luego se reduce a alcohol S16-3 (p. ej. NaBH4) y finalmente se deshidrata (p. ej., eliminación de Greico) para proporcionar S16-4.
Esquema 17
[0165] El esquema 17 muestra dos estrategias sintéticas generales para producir el intermedio S17-3 donde J es como se define aquí. En el Esquema 17, una 4-oxo prolina S17-1 adecuadamente protegida se desprotona y se alquila (por ejemplo, LiHMDS seguido de J-LG). Una segunda desprotonación con una base seguida de una protonación a baja temperatura genera el intermedio S17-2 estereo enriquecido, basado en un protocolo descrito (Blanco, MJ. Y col. J. Org. Chem. 1999, 64, 8786). La reducción de la cetona de manera estereoselectiva (por ejemplo, reducción de CBS) proporciona el alcohol S17-3, Donde J es metilo, el Esquema 17 muestra una síntesis general alternativa en donde el intermedio S17-4 se hidrogena para generar una mezcla de S17-5 y S17-6. La reducción de la cetona de S17-5 de manera estereoselectiva (por ejemplo, la reducción de CBS) proporciona el intermedio S17-3, donde J es metilo.
Esquema 18
[0166] El Esquema 18 muestra una síntesis general de los intermedios S18-4 y S18-5, en donde una 4-oxo prolina S18-1 apropiadamente protegida se hidroxila de manera estereoselectiva (por ejemplo, MoOPh) para proporcionar el intermedio S18-2, que es subsiguientemente reaccionó con un agente alquilante (por ejemplo, tetrafluoroborato de trimetiloxonio) para proporcionar el intermedio S18-3, La reducción de la cetona (por ejemplo, complejo BH3^SMe2) proporciona los compuestos intermedios S18-4 y S18-5.
Esquema 19
[0167] El esquema 19 muestra una síntesis general de un intermedio S19-7 en el que Q es como se define aquí y Lf es alquileno C1-C3. En el Esquema 19, un compuesto intermedio epóxido S19-1 se convierte en el (+)-transmisor intermedio S19-3, La activación del intermedio de alcohol (+)-S19-3 (por ejemplo, DSC) produce carbonato (+)-S19-4, que se trata con el intermedio S19-5 para producir el intermedio de carbamato S19-6. El intermedio S19-6 luego sufre hidrólisis del éster (por ejemplo, LiOH cuando R = metilo o TFA cuando R = tere-butilo) para proporcionar el intermedio S19-7.
[0168] El esquema 20 muestra una síntesis general de un intermedio S20-3 en el que Lf-O es F, y U, W, R1, J, Q, M, T y L son como se definen en este documento. En el esquema 20, el intermedio S20-1 primero sufre una escisión oxidativa de una olefina (por ejemplo, OsO4, NaI04) y la subsiguiente reducción del aldehído resultante (por ejemplo, NaBH4) para proporcionar el intermedio S20-2, El acoplamiento cruzado catalizado por metal de transición proporciona el intermedio S20-3.
Esquema 21
[0169] El esquema 21 muestra una síntesis general de un intermedio S21-7 en el que Q y T son como se definen en el presente documento. En el Esquema 21, la activación del diol S21-1 mono-protegido (p. ej., DSC) seguido de un acoplamiento con el aminoéster intermedio S21-3 proporciona el intermedio de carbamato S21-4, El Intermedio S21-4 se desprotege luego para desenmascarar la funcionalidad del alcohol (intermedio S21-5) que luego se divide para proporcionar el intermedio S21-6. El intermedio S21-6 luego se somete a hidrólisis del éster (p. ej., LiOH cuando R = metilo o TFA cuando R = tere-butilo) para proporcionar el intermedio S21-7.
Esquema 22
[0170] El esquema 22 muestra una síntesis general de un intermedio S22-3 en el que U, W, R1, J y Q son como se definen en el presente documento. En el esquema 22, el intermedio S22-1 está desprotegido globalmente para proporcionar el intermedio de aminoácido S22-2, La funcionalidad ácida del intermedio S22-2 se convierte luego en un éster de ácido carboxílico lábil en bases (por ejemplo, éster metílico), intermedio S22-3.
Preparación de intermedios seleccionados
Preparación de intermedio A1.
[0171]
[0172] Pasos 1-3, Preparación del Intermedio A1: El Intermedio A1 se preparó usando el procedimiento detallado en el Ejemplo 2,12 de la Publicación de Patente Internacional N° WO 2008/064066 (en adelante "WO '066") (pág. 75 76) sustituyendo (1R, 2S)-metilo 1-(terc-butoxicarbonilamino)-2-vinilciclopropano-carboxilato (preparado de acuerdo con Beaulieu, PL, y otros, J. Org. Chem. 2005, 70, 5869) para (1R, 2S)-etilo 1-(terc-butoxicarbonilamino))-2-vinilciclopropano-carboxilato.
Preparación del Intermedio A2.
[0173]
[0174] El Intermedio A2 se preparó de manera similar al Intermedio A1, sustituyendo 1-metilciclopropano-1-sulfonamida (preparado de acuerdo con el Ejemplo 1.2 de WO '066, pág. 47) por ciclopropanosulfonamida.
Preparación del Intermedio A3.
[0175]
[0176] Paso 1. Preparación de A3-1: se preparó ciclopropano éster A3-1 a partir de (1R, 2S)-metilo 1-(tercbutoxicarb-onilamino)-2-vinilciclopropanocarboxilato (preparado de acuerdo con Beaulieu, PL, et al.., J. Org. Chem.
2005, 70, 5869) utilizando el procedimiento detallado en el Ejemplo 26 de la Publicación de Patente Internacional No. WO 2009/005677 (en adelante "WO '677") (p. 176).
[0177] Pasos 2-4, Preparación del Intermedio A3: El Intermedio A3 se preparó de manera similar al clorhidrato de (1R, 2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonilo)-2-vinilciclopropancarbox-amida del Ejemplo 2,12 de WO '066 (pág. 75-76) sustituyendo A3-1 para (1R, 2S)-etilo-1-(terc-butoxicarbonilamino)-2-vinilciclopropano-carboxilato.
Preparación del Intermedio A4.
[0178]
[0179] El Intermedio A4 se preparó de manera similar al Intermedio A3, sustituyendo 1-metilciclopropano-1-sulfonamida (preparado de acuerdo con el Ejemplo 1.2 de WO '066, pág. 47) por ciclopropanosulfonamida.
Preparación del intermedio A5.
[0180]
[0181] Pasos 1-3, Preparación del Intermedio A5: El Intermedio A5 se preparó de manera similar al clorhidrato de (1R, 2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonilo)-2-vinilciclopropano-carboxamida del Ejemplo 2,12 de WO '066 (pág. 75-76) sustituyendo A5-1 (preparado de acuerdo con el Ejemplo 104 del documento WO '677, pág. 265) para (1R, 2S)-1-(terc-butoxicarbonilamino)-2-vinilo-ciclopropanocarboxilato de etilo.
Preparación del Intermedio A6.
[0182]
[0183] El Intermedio A6 se preparó de manera similar al Intermedio A5, sustituyendo 1-metilciclopropano-1-sulfonamida (preparado de acuerdo con el Ejemplo 1.2 de WO '066, pág. 47) por ciclopropanosulfonamida.
Preparación del Intermedio A7.
[0184]
[0185] El compuesto intermedio A7 se preparó de acuerdo con el Ejemplo 97.1,6 de la Publicación de Patente de los Estados Unidos No. 2009/274652 (en adelante, "US 652"), pág. 72-73.
Preparación del intermedio A8.
[0186]
[0187] Pasos 1-2, Preparación del Intermedio A8: El Intermedio A8 se preparó de manera similar al clorhidrato de (1R, 2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonilo)-2-vinilciclopropano-carboxamida del Ejemplo 2.12 de WO '066 (pág. 75-76) sustituyendo A8-1 (preparado de acuerdo con el procedimiento detallado en el Ejemplo 97.1.4 del documento US '652, pág. 72-3) para el ácido (1R, 2S)-1-(terc-butoxi-carbonilamino)-2-vinilciclo-propanocarboxílico y sustituyendo 1-metilciclopropano-1-sulfonamida (preparada de acuerdo con el Ejemplo 1.2 del documento WO '066, pág. 47) por ciclopropanosulfonamida. A8-1 1H RMN (400 MHz, CDCh) 59,22 (br s, 1H), 6,05 - 5.75 (m, 1H), 5,38 (br s, 1H), 2,04 (m, 2H), 1,68 (m, 2H), 1,61 (m, 3H), 1,52 (m, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,28 (m, 1H), 0,85 (m, 2H).
Preparación del intermedio A9.
[0188]
[0189] Paso 1-2, Preparación del Intermedio A9: El Intermedio A9 se preparó de manera similar al clorhidrato de (1R, 2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonilo)-2-vinilciclopropano-carboxamida del Ejemplo 2,12 de WO '066 (pág. 75-76) sustituyendo A9-1 (preparado de acuerdo con el Ejemplo 1, Pasos 1L-1O de la Publicación de Patente Internacional No. WO 2009/134987, p. 75-77) para ácido (1R, 2S)-1-(terc-butoxicarbonilamino)-2-vinilciclopropancarboxílico.
Preparación del Intermedio A10.
[0190]
[0191] El Intermedio A10 se preparó de manera similar al Intermedio A9, sustituyendo 1-metilciclopropano-1
sulfonamida (preparado de acuerdo con el Ejemplo 1.2 de WO '066, pág. 47) por ciclopropanosulfonamida.
Preparación del Intermedio A11.
[0192]
[0193] Paso 1. Preparación de A11-1: A una solución de NaOH (46,2 g, 50% p/p en agua) a temperatura ambiente se agregó BnEt3NCl (10,5 g, 46 mmol), malonato de di-ferc-butilo (10 g, 46 mmol) y 1,2-dibromopropano (14 g, 69,3 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se extrajo con DCM (3X100 ml). Las capas orgánicas se lavaron con agua (80 ml) y salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración al vacío produjo A11-1 que se usó posteriormente sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 1,83-1,62 (m, 1H); 1,42 (s, 9H); 1,40 (s, 9H); 1,24-1,05 (m, 2H); 1,03-1,02 (d, 3H).
[0194] Paso 2, Preparación de A11-2: A una mezcla de t-BuOK (175 g, 1,56 mol) en éter (1,2 L) a 0°C se le añadió agua (3,4 mL) seguido de la adición del diéster A11-1 (91 g, 0,35 mol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante tres días, luego se detuvo con agua helada. La capa acuosa se extrajo con éter (2X400 ml), se acidificó con ácido crítico y luego se extrajo con EA (3X400 ml). Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con agua (2X100 ml), salmuera (200 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron al vacío para producir A11-2 que se usó posteriormente sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 512,60 (s, 1H); 1,70-1,64 (s, 1H); 1,37 (s, 9H); 1,19-1,13 (m, 1H); 1,03-1,00 (m, 4H). Paso 3. Preparación de A11-3: A una mezcla A11-2 (33,5 g, 0,17 mol) y trietilamina (70 ml) en THF (200 ml) a 0°C se le añadió cloroformiato de etilo (22 ml). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h. A la mezcla a 0°C se le añadió azida sódica (54 g, 0,83 mol, 4,9 eq) en agua (100 ml), la mezcla se agitó durante 40 minutos. La mezcla se extrajo con EA (2X400 ml), se lavó con agua (100 ml), salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío para producir un residuo que se recogió en tolueno (100 ml) y tratado con alcohol bencílico (50 ml). La mezcla se calentó luego a 70°C durante 2 h, se enfrió a temperatura ambiente, se ajustó a pH 8 con bicarbonato de sodio y luego se extrajo con éter (3X200 ml). La capa acuosa se ajustó luego a pH 5 con 1 N HCl y se extrajo con EA (2X300 ml). Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con agua (100 ml), salmuera (80 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron al vacío para dar la amina A11-3 protegida por CBZ (16 g) que se usó posteriormente sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 57,85 (s, 1H); 7,28-7,15 (m, 5H); 4,97-5,03 (m, 2H); 1,33 (s, 9H); 1,33-1,17 (m, 2H); 1,10 (d, J = 6,8 Hz, 3H); 0.90-1,00 (m, 1H).
[0195] Pasos 4 y 5. Preparación de A11-4: A una solución de Cbz amina A11-3 protegida (16 g, 52 mmol) en DCM (250 ml) se añadió gota a gota TFA (250 ml, 3,24 mol) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró al vacío, se ajustó a pH 8-9 usando carbonato de sodio acuoso y se lavó con éter (3X80 ml). La fase acuosa se ajustó luego a pH 5-6 usando 1 N HCl y se extrajo con EA (2X300 ml). Las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con agua (80 ml), salmuera (80 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para dar 13 g como un aceite ligeramente amarillo que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Este material (8,0 g, 32 mmol) se recogió en metanol (200 ml), se trató con cloruro de tionilo (15 ml) a 0°C y luego se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla resultante se concentró al vacío y se purificó por cromatografía flash sobre sílice (eluyente PE/EA 10: 1-5: 1) para dar el éster metílico A11-4 (6 g). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 57,97 (s, 1H); 7.37-7,26 (m, 5H); 4,99 (s, 2H); 3,61 (s, 3H); 1,48-1,45 (m, 1H);
1,17-1,08 (m, 2H); 1,06-1,04 (d, 3H).
[0196] Paso 6. Preparación de A11-5: Cbz carboxamida A11-4 (36 g, 0,15 mol), B0 C2O (40 g, 0,18 mol) y Pd/C (3,6 g, 10% p/p) se combinaron en metanol bajo H2 y se agitó a 32°C durante la noche. La mezcla de reacción se filtró para eliminar el catalizador, se agregaron Boc2O adicionales (40 g, 0,18 mol) y Pd/C (3,6 g, 10% p/p) y la reacción se colocó en una atmósfera de H2 con agitación a temperatura ambiente durante un fin de semana. La mezcla de reacción se filtró para eliminar el catalizador, se concentró al vacío y se purificó por cromatografía flash sobre sílice (eluyente PE/EA 20:1-10: 1) para producir la amina A11-5 protegida con Boc. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfó) 5 7,48 (s, 1H), 3,59 (s, 3H), 1,43-1,41 (m, 1H), 1,34 (s, 9H), 1,21-1,18 (m, 1H), 1,07-1,01 (m, 4H).
[0197] Paso 7. Preparación de A11-6: A una solución de NaH2PO4 (1,9 g) en agua (160 mL) a 40°C se le añadió Alcalasa (2,4 U/g, 16 mL). La mezcla se ajustó con hidróxido de sodio acuoso al 50% a pH 8, A11-5 (2,80 g) en DMSO (32 ml) se añadió al tampón gota a gota durante 30 min. La mezcla se agitó a 40°C y se mantuvo a pH 8 con la adición de NaOH al 50% durante 19 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, con éter (3 x 100 ml) y la fase orgánica se lavó con una solución sat. NaHCO3 (2 x 40 ml), agua (2 x 40 ml), salmuera (40 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para producir A11-6. 1H RMN (300 MHz, DMSO-cfó) 5 5,18 (br s, 1H); 3,71 (s, 3H); 1,43-1,18 (m, 2H); 1,34 (s, 9H); 1,07-1,01 (m, 4H). El análisis del producto utilizando una columna CC3 cromegaChiral (0,46 cm ID X 25 cm L, inyección de 3 ml, hexano/IPA 80/20, 1 ml/min, 34°C, detección de UV 220 nM) determinó que el exceso enantiomérico era del 99,4% (TA deseada = 5,238 min, TA no deseada = 6,745 min).
[0198] Pasos 8 y 9, Preparación de A11-7: LiOH sólido • H2O (19,1 g, 455 mmol) se recoge en 50 ml de MeOH/50 ml de agua a temperatura ambiente. Una vez que todo el LiOH se ha disuelto, el éster metílico A11-6 (10.4 g, 45,5 mmol) se recoge en 100 mL de THF agregado a la mezcla de reacción y se agita vigorosamente durante la noche. La solución resultante se diluye con agua (150 ml), se ajusta a pH ~ 3 con 12 M HCl y se extrae con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavan con salmuera, se secan sobre MgSO4 anhidro y se concentran al vacío para producir un polvo blanco fino (9,2 g). Este material (1,5 g, 7 mmol) se recoge en THF (30 ml) y se trata con CDI (1,47 g, 9,1 mmol). La solución resultante se calentó a 65°C durante 2 h, se enfrió a temperatura ambiente y se trató con DBU (2,1 ml, 13,9 mmol) y 1-metilciclopropano-1-sulfonamida (1,4 g, 10,5 mmol). La solución resultante se agita a temperatura ambiente durante la noche. La adición de 1 M HCl se utiliza para ajustar el pH ~ 1 antes de eliminar la mayoría de THF al vacío. La suspensión resultante se extrae con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan sobre MgSO4 anhidro y se concentran al vacío para producir 2,29 g de acilo sulfonamida A11-7, Lc MS-ESI (m/z): [M+Na]+ calculado para C14H24N2NaOsS: 355,41; encontrado: 355,84.
[0199] Paso 10. Preparación del producto intermedio A11. La sulfonamida de acilo A11-7 (0,25 g, 0,75 mmol) en dioxano (1 ml) se trata con HCl (4 M en dioxano, 2,8 ml, 11,2 mmol) a temperatura ambiente. Después de 4 h, la reacción se concentra al vacío para producir 0,20 g de Intermedio A-11 que se usa posteriormente sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 81,87-1,84 (m, 0,5 H); 1,77-1,65 (m, 1,5H); 1,58-1,46 (m, 2H); 1,54 (d, J = 8 Hz, 3H); 1,34-1,26 (m, 3 1H); 1,02-0,92 (m, 1H); 0,83-0,77 (m, 1H).
Preparación del Intermedio A12.
[0200]
[0201] Paso 1, Preparación de A12-1: un recipiente que contiene una solución de ácido carboxílico A9-1 (1 g, 4 mmol) en THF (15 ml) se trató con CDI (0,84 g, 5,2 mmol), se selló y Se calienta a 75°C durante 2 h. La solución de color marrón claro se divide por la mitad y se usa posteriormente sin purificación adicional durante el resto del Paso 1 en la preparación del Intermedio A12, así como la preparación del Intermedio A13 como se detalla a continuación. Esta solución se trata con 1-fluorociclopropano-1-sulfonamida (0,42 g, 3 mmol; preparada de acuerdo con los Pasos 1, 4 y 9 del Ejemplo 7 de la Publicación de Patente Internacional No. WO 2009/14730, pág. 107-110) y DBU (0,6 ml, 4 mmol) y se dejó agitar durante la noche a temperatura ambiente. La solución se acidificó a pH ~ 1 con 1 M HCl y se concentró a vacío para eliminar la mayor parte de THF. La capa acuosa se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro y se concentraron a vacío hasta sequedad para proporcionar 0,73 g de A12-1 que se usó sin más purificación.
[0202] Paso 2, Preparación del Intermedio A12: se recogió acilo sulfonamida A12-1 (0,25 g, 0,67 mmol) en 1 ml de dioxano y se trató con HCl (4 M en dioxano, 2,5 ml, 11 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se concentró a vacío hasta sequedad para proporcionar un rendimiento cuantitativo de Intermedio A12. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 56,04 (td, JH-F = 55,6 Hz, J = 5,2 Hz, 1H); 2,25-2,14 (m, 1H); 1,78-1,62 (m, 2H); 1,52-1,38 (m, 4H).
Preparación del Intermedio A13.
[0203]
[0204] El Intermedio A13 se preparó de manera similar al Intermedio A12, sustituyendo 1-clorociclopropano-1-sulfonamida (preparado de acuerdo con Li, J, et al. Synlett, 2006, 5, pp. 725-728) por 1-clorociclopropano-1-sulfonamida en el Paso 1, 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 56,03 (td, JH-F = 54,8 Hz, J = 6 Hz, 1H); 2,32-2,18 (m, 1H); 2,06-1,92 (m, 2H); 1,80-1,68 (m, 2 1H); 1,56-1,44 (m, 1H); 1,44-1,37 (m, 1H).
Preparación del Intermedio B1.
[0205]
[0206] Pasos 1 y 2, Preparación del Intermedio B1: Enaminona B1-1 (4,0 g, 11,8 mmol, preparada de acuerdo con Camplo, M., y otros, Tetrahedron 2005, 61, 3725) se disolvió en acetona (120 ml) y el recipiente de reacción se purgó con Ar. Se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 820 mg) en una sola porción y el recipiente de reacción se purgó dos veces con H2. La reacción se agitó a 1 atm de H2 a temperatura ambiente durante 15 hy luego se filtró a través de una capa de Celite con acetona. El filtrado se concentró y se filtró a través de un tapón de gel de sílice con 30% de EtOAc en hexanos para proporcionar un ~ 2:1 mezcla de cetonas B1-2 y B1-3 (3,48 g) como un sólido blanco. Esta mezcla (3,37 g, 11,3 mmol) se disolvió en THF (100 ml) bajo Ar. Se añadió una solución 1 M de (R)-(+)-2-metilo-CBS-oxazaborolidina en tolueno (11,3 ml, 11,3 mmol) en una sola porción y la solución resultante se enfrió a -78°C. A continuación, se añadió gota a gota una solución 1 M de BH3^SMe2 en CH2G 2 (11,3 ml) durante 5 min. La solución resultante se agitó durante 20 minutos y se retiró del baño frío. Después de 15 minutos adicionales, la reacción se colocó en un baño de agua a temperatura ambiente. Después de 7 minutos adicionales, la reacción se detuvo mediante la adición gota a gota de MeOH (20 ml). Después de agitarse durante 2,5 h adicionales, la mezcla de reacción se concentró, se disolvió en EtOAc (300 ml) y se lavó con 0,2 M HCl (200 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (100 ml). La fase orgánica combinada se filtró para eliminar los sólidos, se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró. El residuo crudo se disolvió en CH2G 2 y se concentró en 20 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (25 al 40% de EtOAc en hexanos) proporcionó una separación parcial del Intermedio B1 de otros productos diastereoisómeros. Las fracciones mezcladas se agruparon y se concentraron en 9 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice proporcionó el Intermedio B1 contaminado con componentes diastereoméricos menores como un sólido blanco (1,96 g). 1H RMN (400 MHz, CDCl3 , se observaron rotámeros) 54,25 - 4,15 (m, 1H), 4,13 - 4,04 (m, 1H), 3,91 -3,79 (m, 1H), 3,28 - 3,09 (m, 1H), 2,41 - 2,23 (m, 1H), 2,04 (bs, 1H), 1,51 - 1,39 (m, 18H), 1,09 - 1,01 (m, 3H).
Preparación de Intermedio B2.
[0207]
[0208] Pasos 1 y 2, Preparación de B2-1: trans-3-Hidroxi-L-prolina (571 mg, 4,35 mmol, Chem-Impex International, Inc.) se suspendió en MeOH y se enfrió a 0°C. Se añadió cloruro de tionilo (1,6 ml, 22 mmol) durante 5 minutos y la solución se calentó a temperatura ambiente. Después de agitarse durante 24 h, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar el éster metílico, que se llevó a cabo sin purificación adicional. El éster bruto se suspendió en DCM (22 ml) y se trató con TEA (1,3 ml, 9,57 mmol). La mezcla agitada se enfrió a 0°C y se añadió cloruro de tritilo (1,21 g, 4,35 mmol). Se dejó que la mezcla de reacción llegara gradualmente a temperatura ambiente y luego se vertió en NaHCO3 acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo tres veces con dCm . Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (25% a 50% de EtOAc/Hex para proporcionar el alcohol B2-1 (1,27 g).
[0209] Paso 3. Preparación de B2-2: Se suspendieron el alcohol B2-1 (1,23 g, 3,18 mmol) y 2 g de 4A MS en DCM (16 ml) y se trataron con NMO (560 mg, 4,78 mmol) y TPAP (76 mg, 0,218 mmol). Después de agitarse durante 30 minutos, la mezcla se filtró sobre una almohadilla corta de sílice y se eluyó con EtOAc al 50%/Hex. El filtrado se concentró y el residuo crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (10% a 30% de EtOAc/Hex para proporcionar la cetona B2-2 (0,99 g).
[0210] Paso 4, Preparación de B2-3: Se añadió LiHMDS (1,0 M en THF, 5,8 ml, 5,8 mmol) a THF (22 ml) y la solución agitada se enfrió a -78°C. Se añadió gota a gota una solución ta de cetona B2-2 (2,14 g, 5,55 mmol) en THF (6 ml) mediante cánula durante 5 minutos. El matraz que contenía B2-2 se enjuagó luego con THF (4 ml) y el enjuague se añadió gota a gota con una cánula a la mezcla de reacción. Después de 35 minutos, se añadió gota a gota n-(5-cloro-2-piridilo) bis(trifluorometanosulfonimida) (2,40 g, 6,11 mmol) en THF (6 ml) a la mezcla de reacción con una jeringa durante 5 minutos. Después de otras 1 h, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente. Después de 30 minutos adicionales, la reacción se detuvo mediante la adición de 20 ml de H2O y se diluyó con Et2O. La solución orgánica se lavó con NaOH al 10% y se secó sobre K2CO3, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se cargó en una columna de sílice que había sido pre-equilibrada con 1% de TEA/Hex. El material se purificó por cromatografía en gel de sílice (0% a 15% de EtOAc/Hex dopado con TEA al 1%) para proporcionar triflato de enol B2-3 (1,89 g).
[0211] Paso 5. Preparación de B2-4: se disolvió trifolilato de enol B2-3 (957 mg, 1,85 mmol) en THF (9 ml) y se trató con Pd(PPh3) 4 (107 mg, 0,0925 mmol) y dimetilcinc. (2,0 M en PhMe, 1,9 ml, 3,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h, luego se añadió más dimetilo cinc (2,0 M en PhMe, 1,9 ml, 3,7 mmol) y la reacción se calentó a 50°C durante 15 min. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con Et2O. La solución orgánica se lavó con NaOH al 10% dos veces, luego se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo B2-4 crudo se continuó sin purificación adicional. Pasos 6 y 7. Preparación de B2-5: el Compuesto B2-4 (1,85 mmol teórico) se disolvió en MeoH/DCM 1:1 (20 ml) y se trató con HCl (4,0 M en dioxano, 2 ml, 8,0 mmol). Después de agitarse durante 2 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró y el material bruto se continuó sin purificación adicional. El producto crudo clorhidrato de amina se trató con Boc2O (2,02 g, 9,25 mmol), DCM (18 ml), MeOH (1,8 ml) y TEA (0,52 ml, 3,7 mmol). Después de agitarse durante 2 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl al 10%, NaHCO3 acuoso saturado y salmuera. La solución orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (15% a 40% de EtOAc/Hex) para proporcionar carbamato B2-5 (331 mg). LCMS-ESI (m/z): [M+H]+ calcd para C12H20NO4 : 242,14; encontrado: 243,26.
[0212] Paso 8. Preparación del producto intermedio B2: se disolvió carbamato B2-5 (345 mg, 1,43 mmol) en THF (7 ml) y se enfrió a 0°C. Se añadió gota a gota complejo BH3^SMe2 (2,0 M en THF, 0,79 ml, 1,58 mmol) y se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente gradualmente. Después de 15 h, la reacción se detuvo mediante la adición gota a gota de H2O (añadido hasta que cesó el burbujeo), luego se enfrió a 0°C. Se añadieron en sucesión rápida peróxido de hidrógeno (30% p/p en H2O, 0,73 ml, 7,2 mmol) y NaOH (2,0 M en H2O, 0,86 ml,
1,72 mmol) y la mezcla agitada se calentó a 50°C durante 35 min. La mezcla se diluyó luego con Et2Ü y se lavó sucesivamente con H2O, NaHCÜ3 acuoso saturado y salmuera, luego se secó sobre MgSÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El intermedio B2 se utilizó en reacciones posteriores sin purificación adicional. LCMS-ESI (m/z): [M+H]+ calculado para C12H22NO5 : 260,15; encontrado: 259,99.
Preparación del Intermedio B3.
[0213]
[0214] Paso 1. Preparación de B3-1: se disolvió trifolilato de B2-3-3 (91 mg, 0,176 mmol) en THF (1,7 mL) y se trató con bromuro de ciclopropilcinc (0,5 M en THF, 1,7 mL, 0,85 mmol) y Pd(PPh3)4 (20 mg, 0,018 mmol). La mezcla de reacción agitada se calentó a 50°C durante 2 h, luego se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, luego se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0% a 20% de EtOAc/Hex) para proporcionar ciclopropano B3-1 (43 mg). LCMS-ESI (m/z): [M-Tr+H]+ calc. para C9H14NO2 : 168,10; encontrado: 168,04.
[0215] Pasos 2 y 3. Preparación de B3-2: Se disolvió vinil ciclopropano B3-1 (43 mg, 0,11 mmol) en Me-OH/DCM 1:1 (10 ml) y se trató con HCl (4,0 M en dioxano, 1 ml, 4,0 mmol). Después de agitarse durante 1,5 h a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró y el material bruto se continuó sin purificación adicional. El producto bruto del paso 2 se trató con Boc2O (229 mg, 1,05 mmol), DMAP (13 mg, 0,105 mmol), DCM (5 ml) y TEA (0,293 ml, 2,10 mmol). Después de agitarse durante 5 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl al 10%, NaHCO3 acuoso saturado dos veces y salmuera. La solución orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (10% a 30% de EtOAc/Hex) para proporcionar carbamato B3-2 (20 mg). LCMS-ESI (m/z): [M-(t-Bu)+H]+ calculado para C10H14NO4: 212,09; encontrado: 211,91.
[0216] Paso 4. Preparación del producto intermedio B3: se disolvió carbamato B3-2 (152 mg, 0,569 mmol) en THF (5,7 ml) y se enfrió a 0°C. Se añadió gota a gota complejo BH3^SMe2 (2,0 M en THF, 0,31 ml, 0,63 mmol) y se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente gradualmente. Después de 20 h, la reacción se detuvo mediante la adición gota a gota de H2O (añadido hasta que cesó el burbujeo), luego se enfrió a 0°C. Se añadieron en sucesión rápida peróxido de hidrógeno (30% p/p en H2O, 0,29 ml, 2,85 mmol) y NaOH (2,0 M en H2O, 0,43 ml, 0,86 mmol) y la mezcla agitada se calentó a 50°C durante 30 min. La mezcla se diluyó luego con Et2O y se lavó sucesivamente con H2O, NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, luego se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El intermedio B3 se continuó sin purificación adicional. LCMS-ESI (m/z): [M-(t-Bu)+H]+ calculado para C10H16NO5: 230,10; encontrado: 230,03.
Preparación del intermedio B4.
[0217]
[0218] El compuesto intermedio B4 ((2S, 3S, 4R)-di-terc-butilo-3-etilo-4-hidroxipirrolidina-1,2-dicarboxilato) se preparó de acuerdo con Camplo, M., et al. Tetrahedron 2005, 61, 3725.
Preparación del intermedio B5.
[0219]
[0220] Paso 1. Preparación de la enona B5-2: a una solución de B1-1 en tetrahidrofurano (7,35 ml) se le añadió bromuro de magnesio etilo (3 M en éter dietílico, 1,47 ml 4,41 mmol) mediante una jeringa a -78°C bajo una atmósfera de argón. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 30 minutos, momento en el que la mezcla de reacción se diluyó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (20 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (20 ml dos veces) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el intermedio B5-1 (308,8 mg) como un aceite incoloro. LCMS-ESI (m/z): [M+H]+ calculado para C17H28NO5: 326,2; encontrado: 326,2.
[0221] Paso 2. Preparación de B5-2: A una solución de enona B5-1 (308 mg, 0,95 mmol) en metanol (4,7 mL) se le añadió cloruro de cerio (III) heptahidrato (566 mg, 1,52 mmol) a temperatura ambiente. bajo una atmósfera de argón. La mezcla resultante se enfrió a -78°C y se añadió borohidruro de sodio (57,7 mg, 1,52 mmol) como un sólido. Después de 1 h, la mezcla de reacción se calentó a 0°C y se añadió cloruro de amonio acuoso saturado (20 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (20 ml dos veces) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar alcohol alílico B5-2 (319,3 mg) como un aceite incoloro, que se usó directamente En el siguiente paso sin purificación. LCMS-ESI (m/z): [M+H]+ calculado para C17H29NO5 : 328,2; encontrado: 328,2.
[0222] Paso 3. Preparación del Intermedio B5: A una solución de alcohol B5-2 (319 mg, 0,98 mmol) en etanol (4,9 mL) se añadió Pd/C (10%, 103,9 mg, 0,097 mmol) a temperatura ambiente. Una atmósfera de argón. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente. Después de 16 h, la mezcla de reacción se diluyó con etilo acetato (25 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (10 ml tres veces). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el Intermedio B5 (188 mg), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación. LCMS-ESi (m/z): [M+H]+ calculado para C17H32NO5 : 330,2; encontrado: 330,3.
Preparación del Intermedio B6.
[0223]
[0224] Paso 1, Preparación de B6-1: se añadió gota a gota una solución de bromuro de isopropilmagnesio (2,9 M en MetF, 3,2 ml, 9,3 mmol) a una solución enfriada de B1-1 (1,02 g, 3,00 mmol) en 60 ml de éter a -78°C bajo argón. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas. La mezcla de reacción se inactivó con una solución sat. NH4Cl acuoso y se extrae tres veces con éter. Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con una solución sat. NaHCO3 acuoso y salmuera, se secó (MgSO4), se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos)
para producir B6-1 (743 mg) en form a de un aceite am arillo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCI3 ): 6 6,60 (dd, J = 10,8, 2,4 Hz, 1H), 5,14 y 5.06 (rotám eros, d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,96 (m, 2H), 2,91 (m, 1H), 1,46 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,04 (d, J = 8,8 Hz, 6H). Paso 2. Preparación de B6-2 y B6-3: Se añadió C eCb • 7 H2O (1,32 g, 3,50 m m ol) a una solución de B6-1 (740 mg, 2,18 m m ol) en 47 mL de metanol a tem peratura am biente bajo argón. Después de enfriarse a -78°C, se añadió lentam ente en porciones borohidruro de sodio (127 mg, 3,34 mmol). Después de dos horas, la mezcla de reacción se calentó a 0°C. Después de quince m inutos, la mezcla de reacción se inactivó con una solución sat. NH4Cl acuoso y se extrae tres veces con acetato de etilo. O rgánicos com binados se lavaron con salm uera, se secaron (M gSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir una mezcla ~3:1 (400 MHz, CDCb): 6 5,68-5,48 (m, 1H), 4,90-4,31 (m, 2H), 4 ,05-3,15 (m, 2H), 2,90-2,61 (m, 1H), 1,50-1,39 (br s, 18H), 1,02 (d, J = 9,2 Hz, 6H).
[0225] Paso 3. Preparación del com puesto interm edio B6: la mezcla ~ 3:1 de B6-2 y B6-3 (341 mg, 1,00 mmol) se d isolvió en 28 ml de acetato de etilo. Luego se añadió paladio sobre carbono (10% en peso, 109 mg, 0,11 m m ol) y la mezcla se hidrogenó bajo una atm ósfera de hidrógeno durante d iecinueve horas. La mezcla se filtró luego sobre Celite, se lavó con acetato de etilo y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó m ediante crom atografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) para producir el Intermedio B6 (141 mg) en form a de un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCb): 6 4 ,31-4,17 (m, 2H), 3,97-3,85 (m, 1H), 3,21-3,07 (m, 1H), 2 ,35-2,18 (m, 1H), 1,92-1,78 (m, 1H), 1,47-1,37 (m, 18H), 1,35-1,19 (m, 2H), 0,94 (d, J = 8,8 Hz, 6H).
Preparación del Interm edio B7.
[0226]
[0227] Paso 1, Preparación de B7-2: A una solución de alcohol B7-1 (500 mg, 1,33 mmol; preparada de acuerdo con Barreling, P., et al. Tetrahedron 1995, 51, 4195) en DCM (6,65 ml) se añadió periodinano de Dess-M artin (564 mg, 1,33 m m ol) a tem peratura am biente bajo una atm ósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se purificó d irectam ente m ediante crom atografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100% /hexanos) para proporcionar la cetona B7-2 (431 mg) en form a de un aceite incoloro. LCMS-ESI (m/z): [M H]+ calculado para C21H30NO5 : 376,2; encontrado: 376,2.
[0228] Paso 2, Preparación del producto interm edio B7: a una solución del producto interm edio B7-2 (410 mg, 1,09 m m ol) y (R )-(+)-2-m etilo-C BS-oxazaboro lid ina (Aldrich, 1 M en tolueno, Se añadieron 1,09 ml, 1,09 m m ol) en THF (5,45 ml) BHa^ THF (1 M en tolueno, 2,18 ml, 2,18 m m ol) a -78°C bajo una atm ósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de cloruro de am onio (15 ml) y la mezcla resultante se dejó calentar a tem peratura am biente. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo dos veces (20 ml) con DCM. Las capas orgánicas com binadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío. El residuo crudo se purificó por crom atografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo /hexanos) para proporcionar el Interm edio B7 (390,9 mg, mezcla d iastereom érica 4: 1) com o un aceite incoloro. LCMS-ESI (m/z):
[m H]+ calculado para C21H32NO5 : 378,2; encontrado: 378,5.
Preparación del interm edio B8.
[0229]
[0230] Paso 1. Preparación de B8-1, Se añadió n-BuLi (0,44 ml, 1,1 mmol, 2,5 M en hexano) a una solución fría (-78°C) de (S)-metilo 4-oxo-1-(9-fenilo-9H-fluoreno-9- yl) pirrolidina-2-carboxilato (383 mg, 1 mmol, preparado como se describe en Sardina, FJ, Blanco, M.-J. J. Org. Chem. 1996, 61, 4748) en THF/HMPA (3,8 ml/0,4 ml). La solución resultante se agitó a una temperatura de -78°C a -50°C durante 1,5 h, y luego se añadió bromoacetonitrilo (0,2 ml, 3 mmol). La mezcla de reacción se agitó mientras se dejaba que la temperatura alcanzara los -10°C (4 h). La mezcla de reacción se cargó con NH4Cl acuoso saturado (1 ml) y EtOAc (15 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml). Ambas capas orgánicas se combinaron, se lavaron con H2O y salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La capa orgánica se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar la mezcla diastereomérica B8-1 (170 mg) en forma de un aceite incoloro. Paso 2. Preparación de B8-2, se añadió KHMDS (0,4 ml, 0,4 mmol, 1 M en THF) a una solución fría (-78°C) de B8-1 (140 mg, 0,33 mmol) en THF/DMPU (1,5 ml/0,75 ml). La solución resultante se agitó a -78°C durante 1,5 h. Luego se añadió HOAc (0,1 ml). La mezcla de reacción se cargó con NH4Cl acuoso saturado (1 ml) y EtOAc (15 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml). Ambas capas orgánicas se combinaron, se lavaron con H2O y salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La capa orgánica se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar la cetona B8-2 (120 mg) en forma de un aceite incoloro.
[0231] Paso 3. Preparación del producto intermedio B8. A un matraz lavado con nitrógeno y secado al horno, se agregó BH3^THF (0,28 mL, 0,28 mmol) seguido de (R)-(+)-2-metilo-CBS-oxazaborolidina (0,012 mL, 0,03 mmol, 1,0 M en tolueno). Se añadió gota a gota una solución de B8-2 (120 mg, 0,28 mmol) en THF (0,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 60 min, y luego se detuvo mediante la adición de HCl acuoso 1,0 M (0,2 ml). Se añadió EtOAc (20 ml) y la fase orgánica se lavó con una solución sat. NaHCO3 acuoso y salmuera, y se secó sobre Na2SO4. La capa orgánica se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar el Intermedio b8 (100 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M]+ calculado para C27H24N2O3 : 424,49; encontrado: 424,77.
Preparación del Intermedio C1.
[0232]
[0233] El metilo 3-metilo-N-(oxometileno)-L-valinato (Intermedio C1) se preparó de acuerdo con el Paso 3 del Intermedio B1 de la Publicación de Patente Internacional N° WO 2010/11566 (en adelante "WO'566"), p. 14.
Preparación del intermedio C2.
[0234]
[0235] El compuesto intermedio C2 (3-metilo-N-(oxometileno)-L-valinato de ferc-butilo se preparó de manera similar al Intermedio C1, sustituyendo el 3-metilo-L-valinato de ferc-butilo (Bachem AG). para el 3-metilo-L-valinato de metilo en el Paso 3 del intermedio B1 del documento WO'566, pág. 14.
Preparación del intermedio D1.
[0236]
[0237] Pasos 1 y 2. Preparación de la mezcla de trans-ciclopropanol D1-2 y D1-3: THF (1000 ml) se introdujo en un matraz de fondo redondo de tres cuellos que contiene Mg (32,2 g, 1,34 mol). Se introdujo una solución de 7-bromohept-1-eno (216 g, 1,22 mol) en THF (600 ml) en un embudo de adición. Se añadieron a la reacción un cristal de yodo y 20 ml de solución de 7-bromohept-1-eno. La solución se calentó a reflujo y se añadió gota a gota el resto de la solución de 7-bromohept-1-eno. Una vez que se completó la adición, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h más y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente para producir una solución de reactivo de Grignard D1-1, que luego se añadió gota a gota a una solución de formato de etilo (30 g, 0,41 mol) y Ti(O/'-Pr)4 (115,2 g, 0,41 mol) en THF (1200 ml) a temperatura ambiente. Después de agitarse durante la noche, la mezcla se vertió en 1600 ml de H2SO4 acuoso al 10% y se extrajo con MTBE (1500 ml tres veces). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar 31,0 g de una mezcla de alcoholes trans-ciclopropílicos D1-2 y D1-3 en forma de un aceite amarillo. 1H RMN: (400 MHz, CDCla): ó 5,77-5,70 (m, 1H), 4,96-4,86 (m, 2H), 3,15-3,12 (m, 1H), 2,03-1,98 (m, 2H), 1,75 (br s, 1H), 1,45-1,37 (m, 2H), 1,20-1,15 (m, 1H), 1,06-1,01 (m, 1H), 0,89-0,82 (m, 1H), 0,63-0,59 (m, 1H), 0,24 (q, J = 6,0 Hz, 1H). Paso 3. Preparación de la mezcla de acetato de ciclopropilo D1-4 y D1-5: A un matraz de fondo redondo de 1000 ml se agregó la mezcla de alcohol trans-ciclopropílico D1-2 y D1-3 (60,3 g, 0,48 mol), 700 ml de DCM y TEA (62,9 g, 0,62 mol) antes de enfriar la solución en un baño de acetona/hielo a una temperatura interna de <5°C. Se añadió gota a gota cloruro de acetilo (41,3 g, 0,53 mol) a la solución durante un período de 30 minutos mientras se mantenía una temperatura interna <10°C. La suspensión resultante se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con 350 ml de agua. La mezcla bifásica se transfirió a un embudo de decantación y la capa acuosa se eliminó. La capa orgánica se lavó con 480 ml de HCl acuoso 2 N y luego con 500 ml de una solución sat. NaHCO3 acuoso antes de secar sobre MgSO4. El disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar una mezcla D1-4 y D1-5 (56,3 g) en forma de un aceite amarillo. Información de TLC (PE/EtOAc = 5/1) Rf (material de partida) =0,4; Rf (producto) =0,8.
[0238] Paso 4. Preparación de D1-3: a un matraz de fondo redondo de 1000 ml, se agregó una solución de la mezcla D1-4 y D1-5 (39 g, 0,23 mol) en 680 ml de MTBE saturado con una solución acuosa 0,1 M pH 7 tampón fosfato. El matraz se colocó en un baño de hielo para mantener una temperatura interna de aproximadamente 10°C durante toda la reacción de hidrólisis que se inició mediante la adición de 3,0 g de Novozyme 435, La reacción se envejeció a 10°C durante aproximadamente 6 h hasta que la conversión alcanzó alrededor del 40%. La mezcla de reacción se filtró y la enzima inmovilizada sólida se lavó tres veces con 200 ml de MTBE. La solución de MTBE resultante se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar D1-3 (11,3 g) como un aceite amarillo. 1H RMN: (400 MHz, CDCla) ó 5,80-5,75 (m, 1H), 5,02-4,91 (m, 2H), 3,20-3,17 (m,
1H), 2,09-2,03 (m, 3H), 1,50-1,43 (m, 2H), 1,26-1,22 (m, 1H), 1,17-1,08 (m, 1H), 1,07-0,89 (m, 1H), 0,70-0,65 (m, 1H), 0,32-0,27 (m, 1H).
[0239] Paso 5. Preparación de D1-6: Se disolvió ciclopropanol D1-3 (17,7 g, 0,140 mol) en 300 ml de MeCN a 0°C. A la solución se le añadió DSC (72,0 g, 0,280 mol) y TEA (42,42 g, 0,420 mol). La mezcla de reacción se calentó a 40°C y se agitó durante la noche y luego se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar D1-6 (25,8 g) como un sólido amarillo. 1H RMN: (400 MHz, CDCb) ó 5,84-5,77 (m, 1H), 5,05 4,96 (m, 2H), 4,09-4,03 (d, J = 24 Hz, 1H), 2,86 (s, 4H), 2,12 -2,06 (m, 2H), 1,58-1,51 (m, 2H), 1,33-1,27 (m, 3H), 1,09 (m, 1H), 0,68-0,62 (m, 1H).
[0240] Paso 6. Preparación de D1-7: A una solución de D1-6 (10 g, 0,0374 mol) en THF (374 mL) se le añadió clorhidrato de éster metílico de L-ferc-leucina (10,2 g, 0,056 mol) y TEA (11,3 g, 0,112 mol). La solución se agitó durante la noche a 40°C. La mezcla se concentró al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc y se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar D1-7 (10,2 g) como un aceite amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C16H28NO4: 298,2; encontrado: 298,0.
[0241] Paso 7. Preparación del producto intermedio D1: una solución de D1-7 (20 g, 0,067 mol) en una mezcla 2:1 de MeOH/H2O (447 ml/223 ml) se trató con LiOH • H2O (11,3 g, 0,269 mol) y luego se calienta a 60°C durante 4 h. La mezcla de reacción se enfrió, se concentró a la mitad del volumen y se extrajo con MTBE. Luego la solución acuosa se acidificó con 1 N HCl acuoso (400 ml) y se extrajo con EtOAc (400 ml X 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar el Intermedio D1 (18 g). 1H RMN: (400 MHz, CDCb) ó 10,5-9,4 (br, 1H), 5,82-5,71 (m, 1H), 5,20-5,17 (m, 1H), 4,99-4,91 (m, 2H), 4,19-4,16 (m, 1H), 3,86-3,68 (m, 1H), 2,09-2,03 (m, 2H), 1,53-1,32 (m, 2H), 1,30-1,20 (m, 2H), 1,18-1,13 (m, 1H), 1,11-0,99 (s, 9H), 0,80-0,75 (m, 1H), 0,49-0,47 (m, 1H).
Preparación del intermedio D2.
[0242]
[0243] Paso 1, Preparación del Intermedio D2: A una suspensión de D1-6 (600 mg, 2,25 mmol) y sal de clorhidrato de ácido (S)-2-amino-2- ciclopentilacético (386 mg, 2,7 mmol, Betapharma Inc.) en THF (20 ml) se agregaron agua destilada (6 ml) y trietilamina (0,94 ml, 6,74 mmol). La solución homogénea se dejó agitar durante aproximadamente 18 h. El THF se evaporó y el residuo acuoso se diluyó con agua (20 ml). La mezcla se basificó con 1 N NaOH (pH> 10) y luego se lavó dos veces (20 ml) con acetato de etilo. La fase acuosa se acidificó luego con 1 N HCl (pH <2) y la solución resultante se extrajo dos veces (20 ml) con acetato de etilo. La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró para proporcionar el Intermedio D2 (500 mg) en forma de un aceite marrón. Esto se usó sin purificación en un paso posterior. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C16H26NO4 : 296,2; encontrado: 296,3.
Preparación del intermedio D3.
[0244]
[0245] Paso 1, Preparación del producto intermedio D3: a una suspensión de D1-6 (800 mg, 3 mmol) y ácido (S)-2-amino-2-ciclohexilacético (519 mg, 3,3 mmol; Alfa Aesar) en agua (15 ml) se añadió K3PO4 (1,27 g, 6 mmol). La solución homogénea se dejó agitar a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción se cargó con agua (15 ml) y EtOAc (15 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con 1 N HCl, H2O y salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La concentración de la solución orgánica produjo el Intermedio D3 (850 mg) como un aceite que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C17H28NO4 : 310,4; encontrado: 310,3.
Preparación del intermedio D4.
[0246]
Paso 1. Preparación de D4-2: Alcohol bicíclico D4-1(2,9 g, 29,5 mmol, preparado de acuerdo con la Sección A, el Intermedio 1 de la Patente de EE.UU. N° 8.178.491 B2 (en adelante "US 491"), p. 192.) Se disolvió en DCM (60 ml) y se añadió TEA (8,2 ml, 59 mmol). La solución agitada se enfrió a 0°C y se añadió MsCl (3,4 ml, 44 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente gradualmente. Después de 18 h, la mezcla de reacción se vertió en H2O. La capa acuosa se extrajo 2 x con DCM, luego los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (20% a 50% de EtOAc/Hex) para proporcionar D4-2 (3,73 g).
[0247] Paso 2. Preparación de D4-3: Se suspendió NaH (1,69 g, 42,3 mmol) en 100 ml de THF y la mezcla se enfrió a 0°C. Se añadió malonato de dietilo (6,4 ml, 47 mmol) gota a gota durante 4 minutos y la mezcla agitada se calentó a temperatura ambiente. Después de otra hora, se añadió mesilato D4-2 (3,73 g, 21,2 mmol) en 20 ml de THF y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 15 h. Después de este período, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en NaHCO3 acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo 2 x con EtOAc. Luego, los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (0% a 15% de EtOAc/Hex) para proporcionar D4-3 (4,64 g).
[0248] Paso 3. Preparación de D4-4: se disolvió malonato D4-3 (4,64 g, 19,3 mmol) en 20 ml de DMSO, luego se añadieron NaCl (1,24 g, 21,2 mmol) y agua (0,694 ml, 38,6 mmol). La mezcla agitada se calentó a 170°C durante 48 h, luego se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con Et2O. La solución orgánica se lavó con H2O dos veces, luego salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El material bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (5% a 15% de EtOAc/Hex) para proporcionar D4-4 (2,83 g).
[0249] Pasos 4 y 5, Preparación de D4-5: Una solución de éster etílico D4-4 (2,83 g, 16,8 mmol) y LiOH (1 M en H2O, 34 ml, 34 mmol) en EtOH (68 ml) se agitó a temperatura ambiente y luego se concentró a presión reducida para eliminar el EtOH. El material restante se diluyó con H2O y se lavó dos veces con DCM. La fase acuosa se acidificó a pH 1-2 con HCl al 10% y luego se extrajo tres veces con DCM. Esta solución de DCM se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El ácido carboxílico bruto resultante se disolvió en DCM (100 ml) y se trató con d Mf (5 gotas). Se añadió cuidadosamente cloruro de oxalilo (2,2 ml, 25 mmol). Después de agitarse, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar D4-5, que se llevó a cabo sin purificación adicional.
[0250] Paso 6. Preparación de D4-6: (S)-4-Bencilo-2-oxazolidinona (3,57 g, 20,2 mmol) se disolvió en THF (80 ml) y se enfrió a -78°C. Se añadió n-BuLi (1,6 M en hexano, 12,6 ml, 20,2 mmol) gota a gota durante 7 minutos y la mezcla de reacción se dejó agitar a -78°C durante 30 minutos. Esta solución, que contiene la oxazolidinona litiada, se añadió luego con una cánula a una solución a -78°C de cloruro de ácido D4-5 (16,8 mmol) en THF (80 ml) durante 6 min. Después de agitarse a -78°C durante 30 minutos adicionales, la mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de NaHSO4 acuoso 1 M. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y la capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El material bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (10% a 40% de EtOAc/Hex) para proporcionar D4-6 (4,32 g). LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calculado para C18H22NO3 : 300,16; encontrado: 300,14.
[0251] Paso 7. Preparación de D4-7: una solución de KHMDS (0,5 M en PhMe, 3,4 ml, 1,7 mmol) en THF (5 ml) se enfrió a -78°C y una solución separada de -78°C de Se añadió gota a gota oxazolidinona D4-6 (465 mg, 1,55 mmol) en THF (5 ml) mediante una cánula. Después de 30 minutos, se añadió con una cánula una solución a -78°C de trisil azida (576 mg, 1,86 mmol) en THF (5 ml). Tres minutos más tarde, la reacción se detuvo mediante la adición de AcOH (0,41 ml, 7,13 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 30°C durante 2 h. Después de enfriar, la mezcla se vertió en salmuera. La capa acuosa se extrajo tres veces con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (4% a 25% de EtOAc/Hex) para proporcionar azida D4-7 (367 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C18H21N4O3 : 341,16; encontrado: 341,10.
[0252] Paso 8. Preparación de D4-8: Se disolvieron en EtOAc (20 ml) dicarbonato de azida D4-7 (367 mg, 1,08 mmol) y di-ferc-butilo (471 mg, 2,16 mmol). Se añadió 10% de Pd/C (197 mg) y la atmósfera se reemplazó con H2. La suspensión se agitó a 1 atm de H2 durante 20 h, luego se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (15% a 30% de AcOEt/Hex) para proporcionar D4-8 (376 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M-(f-Bu)+H]+ calculado para C19H23N2O5: 359,16; encontrado: 359,43.
[0253] Pasos 9 y 10. Preparación de D4-9: Se disolvió carbamato D4-8 (376 mg, 0,907 mmol) en THF (9 ml) y se enfrió a 0°C. Se añadieron H2O2 (30% en H2O, 0,463 ml, 4,54 mmol) y LiOH (1 M en H2O, 2,7 ml, 2,7 mmol). La reacción se dejó agitar a 0°C durante otras 2 horas y luego se concentró a presión reducida. El concentrado resultante se vertió en H2O y la solución acuosa se lavó dos veces con Et2O, luego se acidificó a pH 1-2 y se extrajo tres veces con DCM. Los extractos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo crudo resultante se disolvió en DCM (8 ml) y MeOH (1 ml) y se trató con trimetilsilildiazometano (2 M en hexano, 0,9 ml, 1,8 mmol). Después de agitarse durante 40 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de AcOH al 10%/MeOH y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por
crom atografía en gel de sílice (4% a 25% de EtOAc/Hex) para proporcionar D4-9 (167 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 4,98 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,22 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 1,89 (m, 1H), 1,77-1,46 (m, 4H), 1,42 (s, 9H), 1,22 (m, 2H), 0,28 (dd, J = 7,2 Hz, 13,3 Hz, 1H), 0,13 (d, J = 3,7 Hz, 1H).
[0254] Paso 11. Preparación de D4-10: Se disolvió carbam ato D4-9 (223 mg, 0,828 mmol) en DCM (4 ml) y se trató con HCl (4,0 M en dioxano, 1 ml, 4,0 mmol). Después de agitarse a tem peratura am biente durante 17 h, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar la sal clorh idrato de am ina D4-10, que se llevó a cabo sin purificación. LC M S-ESI+ (m/z): [M H]+ calculado para C9H 16NO2 : 170.12; encontrado: 170,04.
[0255] Pasos 12 y 13. Preparación del producto interm edio D4: la sal de clorhidrato de am ina D4-10 (0,828 mmol, teórica) en H2O (1,4 ml) se trató con una solución recién preparada de D1-6 (1,35 mmol) en DMF (1,4 mL). Se añadió K3PO4 (703 mg, 3,31 mmol) y la m ezcla de reacción se agitó durante 2 horas a tem peratura ambiente. Después de la dilución con EtOAc, la capa orgánica se lavó con HCl acuoso al 10% y salm uera, luego se secó sobre M gSO 4 , se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó m ediante crom atografía en gel de sílice (0% a 25% de EtOAc/Hex) para proporcionar el carbam ato esperado (239 mg). LCM S-ESI+ (m/z): [M H]+ calculado para C 18H28NO4 : 322,20; encontrado: 323,00. Este material (239 mg, 0,744 mmol) se disolvió en MeOH y se trató con LiOH (1,0 M en H2O, 5,0 ml, 5,0 mmol). Después de agitarse a tem peratura am biente durante 1 h, el MeOH se elim inó a presión reducida. La solución acuosa se acidificó a pH 1-2 con HCl acuoso al 10% y se extrajo tres veces con DCM. Los extractos orgánicos com binados se secaron sobre M gSO 4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar el Interm edio D4 (229 mg). LC M S-ESI+ (m/z): [m +H]+ calculado para C 17H26NO4 : 308,2; encontrado: 307,9.
Preparación del interm edio D5.
[0256]
[0257] El com puesto interm edio D5 se preparó de acuerdo con el procedim iento detallado en Li, H., y col. Synlett 2011, 10, 1454.
Preparación de la m ezcla interm edia D6.
[0258]
[0259] Paso 1. Preparación de la mezcla de carbamato diastereomérico D6-1: Intermedio C2 (1,34 g, 6,31 mmol), (+)-trans-1-metilo-2-(pent-4-enilo)ciclopropanol (590 mg, 4,208 mmol; preparado de acuerdo con el procedimiento para el Intermedio C3 , WO2011014487, página 36), DMAP (514 mg, 4,21 mmol) y DIPEA (2,93 mL, 16,83 mmol) se combinaron en tolueno (14 mL). La reacción se calentó a 90°C durante 18 h. La reacción se diluyó con Et2O (25 ml) y HCl acuoso 1 N (75 ml), se agitó bien y se eliminaron los compuestos orgánicos. La capa acuosa se extrajo tres veces con éter (50 ml), los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron para dar un aceite bruto, que se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para dar 1:1 diastereoisómero. Mezcla d6-1 como un aceite claro (820 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+ calculado para C20H35NNaO4: 376,3; encontrado: 376,2.
[0260] Paso 2: Preparación de la mezcla intermedia diastereomérica D6. Se tomó la mezcla diastereomérica D6-1 en DCM (2 ml) y se trató con TFA (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 1,5 h, la reacción se concentró al vacío y se evaporó conjuntamente con cloroformo para eliminar el TFA residual y se purificó por cromatografía en gel de sílice para dar una mezcla diastereomérica 1:1 de Intermedio D6 en forma de un aceite marrón (536 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+ calculado para C16H27NNaO4: 320,2; encontrado: 320,1.
Preparación del Intermedio D7.
[0261]
[0262] Paso 1. Preparación de D7-1: (1R, 2R)-1-metilo-2-(pent-4-enilo)ciclopentanol (220,9 mg, 1,313 mmol; preparado de acuerdo con el procedimiento para el Intermedio B26, publicación de patente internacional N° WO 2008/057209 (en adelante "WO '209"), p. 45) y el Intermedio C1 (337,1 mg, 1,969 mmol) fueron tratados con DIPEA (0,91 mL, 5,252 mmol) y DMAP (160,4 mg, 1,313 mmol) en tolueno (4,4 ml). La mezcla se calentó a 85°C durante 21 h. La solución se diluyó con éter (80 ml). La solución se lavó con HCl acuoso 1 N (30 ml) y salmuera (30 ml) sucesivamente. La capa orgánica obtenida se secó sobre Na2SO4. Después de eliminar el agente de secado por filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 13% en hexanos) para dar D7-1 (249,5 mg, 0,735 mmol) como un aceite incoloro. 1H RMN (300 MHz, CDCíb, rotámeros expresados como el valor total de H x fracción presente) ó 5,76-5,92 (m, 1H), 5,12 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,81 (s, 3 x 4/10H), 3,73 (s, 3 x 6/10H), 1,80-2,15 (m, 7H), 1,04-1,74 (m, 6H), 1,36 (s, 3H), 1,04 (s, 9 x 4/10H), 0,97 (s, 9 x 6/10H). Paso 2. Preparación del producto intermedio D7: el éster D7-1 (249,5 mg, 0,735 mmol) se trató con una solución acuosa de LiOH acuosa 2 M (2 ml, 4,0 mmol) en MeOH/THF (4 ml/4 ml) a temperatura ambiente durante 25 h. La mezcla de reacción se trató luego con HCl acuoso 1 N (5 ml) y salmuera acuosa (25 ml) para acidificar ligeramente. La mezcla se extrajo tres veces con CH2Cl2 (30 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera acuosa (30 ml). La capa orgánica obtenida se secó sobre Na2SO4. Después de eliminar el agente de secado por filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar el Intermedio D7 (191,2 mg, 0,587 mmol) en forma de un aceite incoloro que se usó posteriormente sin purificación adicional. 1H RMN (300 MHz, CDCb) ó 9,00 (br s, 1H), 5,72-5,90 (m, 1H), 5,12 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 1,80-2,16 (m, 7H), 1,04-1,74 (m, 6H), 1,35 (s, 3H), 1,02 (s, 9H).
Preparación de la mezcla intermedia D8.
[0263]
[0264] Paso 1. Preparación de D8-2: A una solución de intermedio D8-1 (500 mg, 3,24 mmol, preparada de acuerdo con WO '209, p. 36) en DCM (6.65 mL) se añadió periodinano de Dess-Martin. (1,37 g, 3,24 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 6 h, la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se purificó directamente mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%) dando la cetona D8-2 (252 mg) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 5,81 (ddt, J = 16,9, 10,2, 6,6 Hz, 1H), 5,05 - 4,92 (m, 2H), 2,38 - 1,93 (m, 7H), 1,87 - 1,68 (m, 2H), 1,60 - 1,37 (m, 3H), 1,35 - 1,20 (m, 1H).
[0265] Paso 2. Preparación de la mezcla diastereomérica D8-3: A una solución de cetona D8-2 (385 mg, 2,53 mmol) y TMSCF3 (749 mL, 5,07 mmol) en THF (2,3 mL) se añadió CsF (7.0 mg)., 46 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y la mezcla resultante se extrajo dos veces con DCM (10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar silil éter D8-3 (714 mg, mezcla diastereomérica 1:1) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 5,67 (ddt, J = 13,3, 10.1, 6,7 Hz, 1H), 4,91 - 4,76 (m, 2H), 2,02 - 1,00 (m, 13H), 0,00 (s, 9H).
[0266] Paso 3. Preparación de la mezcla diastereomérica D8-4: A una solución de D8-3 (700 mg, 2,38 mmol) en THF (11,9 ml) se añadió TBAF (1M en THF, 2,38 ml, 2,38 mmol) a temperatura ambiente. bajo una atmósfera de argón. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (100 ml). La mezcla resultante se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (75 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el alcohol D8-4 (418 mg, mezcla diastereomérica 1:1) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 5,81 (dt, J = 16,8, 6,6 Hz, 1H), 5,09 - 4,88 (m, 2H), 2,20 - 1,91 (m, 4H), 1,86 - 1,08 (m, 10H).
[0267] Paso 4. Preparación de la mezcla diastereomérica D8-5: Una solución de D8-4 (380 mg, 1,72 mmol), Intermedio C1 (295,7 mg, 1,72 mmol), DIPEA (1,20 mL, 6,88 mmol) y DMAP (Se calentaron 210 mg, 1,72 mmol) en tolueno (8,6 ml) a 85°C bajo una atmósfera de argón. Después de 20 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con acetato de etilo (100 ml). La mezcla resultante se lavó con solución de 1 N HCl (50 ml), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (50 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar carbamato D8-5 (550 mg, mezcla diastereomérica 1:1) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 5,81 (ddt, J = 16,7, 9,8, 6,6 Hz, 1H), 5,37 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 5,06 - 4,89 (m, 2H), 4,16 - 4,07 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,84 - 2,29 (m, 2H), 2,27 - 1,89 (m, 3H), 1,85 - 1,12 (m, 8H), 0,98 (s, 9H).
[0268] Paso 5. Preparación de la mezcla intermedia diastereomérica D8: A una solución de carbamato D8-5 (500 mg, 1,27 mmol) en DCE (6,4 mL) se le añadió hidróxido de trimetilestaño (2,30 g, 12,7 mmol) a temperatura ambiente bajo un argón. Atmósfera, y la mezcla resultante se calentó a 65°C. Después de 21 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con una solución de 1 N HCl (50 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 X 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a vacío para proporcionar el Intermedio D8 (575 mg, mezcla diastereomérica
1:1) como un aceite incoloro, que se usó posteriormente sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ó 5,90 - 5,71 (m, 1H), 5,32 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 5,07 - 4,89 (m, 2H), 4,16 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 2,83 - 2,30 (m, 2H), 2,27 - 1,87 (m, 3H), 1,83 - 1,12 (m, 8H), 1,04 (s, 9H).
Preparación de la mezcla intermedia D9 y D10.
[0269]
[0270] Pasos 1 y 2: Preparación de racemato D9-1: Se añadió metal de magnesio (1,32 g, 54,3 mmol) a un matraz de 2 bocas equipado con un condensador de reflujo y el recipiente se lavó con Ar. Se añadió THF (42 ml) seguido de yodo (aprox. 5 mg). La suspensión agitada se calentó a 45°C y se añadió 5-bromopent-1-eno (1,2 g, 8,1 mmol) en una porción. Después de agitarse durante varios minutos, se añadió 5-bromopent-1-eno adicional (5,5 g, 37 mmol) a una velocidad suficiente para mantener un reflujo suave. La mezcla resultante se agitó a 50°C durante 15 min y luego se enfrió a temperatura ambiente y se usó inmediatamente en la siguiente etapa. Una suspensión de CuI (630 mg, 3,3 mmol) en t Hf (24 ml) bajo argón se enfrió a -5°C. Se añadió una parte alícuota de bromuro de pent-4-enilmagnesio (aprox. 0,95 M, 20 ml, 19 mmol) preparada en el paso 1 durante 5 minutos, y la mezcla resultante se agitó durante 15 minutos adicionales. La mezcla de reacción se enfrió luego a -20°C y se añadió (+)-exo-2,3-epoxinorbornano (1,5 g, 14 mmol) como una solución en THF (5 ml) durante 1 minuto. Se utilizaron dos porciones adicionales de THF (2,5 ml cada una) para asegurar la transferencia completa, y la mezcla resultante se agitó durante 20 min. La reacción se retiró del baño frío y se calentó a temperatura ambiente. Después de agitarse durante 1,75 h adicionales, la reacción se detuvo con NH4Cl acuoso saturado (5 ml) y se filtró con EtOAc (100 ml) y H2O (100 ml) a través de Celite. Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar (+)-D9-1 en forma de un residuo incoloro (813 mg). 1H RMN (300 MHz, CDCb) ó 5,90 -5,67 (m, 1H), 5,04 - 4,86 (m, 2H), 3,12 (s, 1H), 2,20 - 1,92 (m, 5H), 1,69 - 1,57 (m, 1H), 1,55 - 1,12 (m, 9H), 1,03 -0,84 (m, 1H). Paso 3. Preparación de la mezcla intermedia diastereomérica D9 y D10: Se disolvió la mezcla de alcohol (+)-D9-1 (813 mg, 4,51 mmol) en DMF (4,5 ml). Se añadió piridina (370 ml, 4,5 mmol) seguido de DSC (1,5 g, 5,8 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 45°C y se agitó durante 4 h. La mezcla de reacción se enfrió luego a 0°C y se añadió agua (4,5 ml) gota a gota durante 2 min. La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos y se retiró del baño frío. Después de 5 minutos adicionales, la mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se agregaron L-tercleucina (835 mg, 6,37 mmol) y K3PO4 (2,70 g, 12,7 mmol). La mezcla se agitó durante 10 minutos y se retiró del baño frío. Después de agitarse durante 24 h adicionales, la mezcla se diluyó con EtOAc (30 ml), se acidificó con HCl acuoso 1 M (15 ml) y se diluyó con HCl acuoso 0,2 M (15 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con HCl acuoso 0,2 M (2 x 20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar la mezcla de intermedios diastereoméricos D9 y D10 (1,64 g). LCMS-ESI-(m/z): [M-H]- calculado para C19H30NO4: 336,2; encontrado: 336,0.
Preparación del intermedio D11.
[0271]
[0272] Paso 1. Preparación de D11-1: A una mezcla de D1 (1,0 g, 3,53 mmol), se añadió peryodato sódico (2,26 g, 10,59 mmol) en 24 mL de THF y 12 mL de agua Os EnCatTM 40 (0,25 mmol)/g de carga, 282 mg, 0,071 mmol, Sigma-Aldrich). La mezcla se agitó durante 3 días. Se añadió agua (50 ml) y la mezcla se filtró. La torta del filtro se lavó con agua (volumen total 400 ml) y acetato de etilo (volumen total 600 ml). Las capas de filtrado se separaron. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró para dar D11-1 (1,56 g) que se usó sin más purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C14H24NO5 : 286,2 encontrado: 286,1.
[0273] Paso 2. Preparación de D11-2: A una solución de D11-1 (3,05 g, 10,7 mmol) en MeOH (50 ml) a 0°C se le añadió borohidruro de sodio en porciones (809 mg, 21,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. La mezcla se diluyó con 50 ml de acetato de etilo y 50 ml de salmuera y las capas se separaron. La fase orgánica se extrajo con dos porciones de acetato de etilo de 25 ml. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. La mezcla de producto en bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc en hexanos: 10% a 100%) para dar D11-2 (380 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C14H26NO5: 288,2; encontrado: 288,1.
[0274] Paso 3. Preparación del producto intermedio D11: A una solución de D11-2 (283 mg, 0,98 mmol) en THF (2,8 ml) a 0°C se añadió 1-nitro-2-selenocianatobenceno (336 mg, 1,47 mmol) y tributilfosfina (363 mL, 1,47 mmol). Se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla se agitó durante 25 minutos a temperatura ambiente. La reacción se enfrió de nuevo a 0°C y se trató con una solución de peróxido de hidrógeno al 30% (0,665 ml, 5,85 mmol) y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y luego se calentó a 60°C durante 1 hora. La reacción se diluyó con EtOAc y el producto deseado se extrajo en bicarbonato de sodio acuoso. El extracto de bicarbonato se acidificó con 2 N HCl y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró para dar el Intermedio D11 (136 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C14H24NO4 : 270,2; encontrado: 270,1.
Preparación de la mezcla intermedia D12 y D13.
[0275]
[0276] Paso 1: Preparación de D12-1: A una solución de K2Cr2O7 (121 g, 0,41 mol) en H2O (1,5 L) se añadió gota a gota H2SO4 (143 g, 1,46 mol) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se enfrió luego a 0°C y se añadió gota a gota D4-1 (80 g, 0,814 moles; preparado de acuerdo con la Sección A, Intermedio 1 de US '491, p 192.) en MTBE (1,5 l). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La fase acuosa se extrajo con MTBE (3 x 500 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El producto crudo se purificó por destilación (20 mmHg, pe: 60 - 62°C) para proporcionar D12-1 como un líquido amarillo pálido (60 g). 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 2,57 - 2,63 (m, 2H), 2,14 - 2,19 (d, J = 20 Hz, 2H), 1,52 - 1,57 (m, 2H), 0,89 - 0,94 (m, 1H), -0,05 - -0,02 (m, 1H).
[0277] Paso 2: Preparación de (+)-D12-2: Bajo Ar, se enfrió una mezcla de THF (4,4 ml) y HMPA (1,8 ml) a -78°C. Se añadió una solución 1 M de LiHMDS en Th F (2,2 ml, 2,2 mmol). Se añadió cetona D12-1(202 mg, 2,10 mmol) como una solución en THF (2 ml) durante 1 minuto, lavando con THF adicional (2 x 1 ml) para asegurar la transferencia completa. Después de 25 min, se añadió 5-yodopent-1-eno (preparado de acuerdo con Jin, J. y otros, J. Org. Chem. 2007, 72, 5098-5103) (880 mg, 4,5 mmol) durante 30 s mediante jeringuilla. Después de 10 min, la reacción se colocó en un baño frío a -45°C y se calentó a -30°C durante 1,5 h. La reacción se detuvo con NH4Cl acuoso saturado (15 ml) y se diluyó con EtOAc (30 ml) y H2O (15 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar un residuo bruto que se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0% a 15%
de EtOAc en hexanos) para proporcionar (+/-)-D12-2 un aceite incoloro (162). mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5,82 -5,67 (m, 1H), 5,03 - 4,87 (m, 2H), 2,61 - 2,51 (m, 1H), 2,11 (d, J = 19,1 Hz, 1H), 2,08 - 1,99 (m, 3H), 1,61 - 1,40 (m, 5H), 1,36 - 1,28 (m, 1H), 0,92 - 0,81 (m, 1H), -0,03 - -0,11 (m, 1H).
[0278] Paso 3: Preparación de (+)-D12-3 y (+)-D12-4: Una solución de (+)-D12-2 (142 mg, 0,865 mmol) en THF (4 ml) se enfrió a -78°C. Se añadió gota a gota una solución 1 M de THF de LiBHEt3 (1,3 ml, 1,3 mmol) durante 30 s. La reacción se agitó durante 15 minutos y se retiró del baño frío. Después de calentar a temperatura ambiente (15 min), la reacción se detuvo con NH4Cl acuoso saturado (1 ml). La mezcla resultante se diluyó con Et2O (20 ml) y H2O (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con Et2O (20 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta un residuo crudo. La purificación por cromatografía en gel de sílice (0% a 10% de EtOAc en hexanos) proporcionó 133 mg de una mezcla de diastereómeros (+)-D12-3 y (+)-D12-4, El material combinado de dos experimentos (253 mg) se purificó adicionalmente mediante cromatografía en gel de sílice (0% a 15% de EtOAc en hexanos) para proporcionar (+)-D12-3 (150 mg) y (+)-D12-4 (58 mg) como aceites incoloros. 1H RMN para (+)-D12-3 (300 MHz, CDCla) 65,91 - 5,69 (m, 1H), 5,07 - 4,88 (m, 2H), 3,97 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,19 - 1,99 (m, 3H), 1,84 - 1,73 (m, 1H), 1,62 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 1,54 - 1,40 (m, 2H), 1,32 - 1,17 (m, 3H), 1,16 - 1,06 (m, 1H), 0,60 - 0,43 (m, 2H). 1H RMN para (+)-D12-4 (300 MHz, CDCla) 65,95 - 5,73 (m, 1H), 5,09 -4,88 (m, 2H), 4,05 -3,86 (m, 1H), 2,17 - 1,84 (m, 4H), 1,72 - 1,34 (m, 5H), 1,28 - 1,08 (m, 3H), 0,49 - 0,36 (m, 1H), 0,21 - 0,11 (m, 1H).
[0279] Paso 4: Preparación de la mezcla intermedia diastereomérica D12 y D13: se disolvió una mezcla de (+)-D12-3 (150 mg, 0,90 mmol) en DMF (1,0 ml). Se añadieron piridina (75 ml, 0,92 mmol) y DSC (302 mg, 1,18 mmol) y la reacción se agitó a 45°C durante 21,5 h. A continuación, la reacción se colocó en un baño de agua con hielo y se añadió H2O gota a gota a través de una jeringa durante 1 minuto. La mezcla se retiró del baño frío y se dejó agitar durante 5 min. La mezcla se volvió a enfriar en un baño de agua con hielo y se añadió L-ferc-leucina (154 mg, 1,17 mmol) seguido de K3PO4 (502 mg, 2,36 mmol). La mezcla de reacción se retiró del baño frío y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla se diluyó luego con EtOAc (40 ml) y HCl acuoso 1 M (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se lavó con HCl acuoso 0,2 M (2 x 20 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar la mezcla intermedia diastereomérica D12 y D13 (300 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI-(m/z): [M-H]- calculado para C18H28NO4: 322,2; encontrado: 322,0).
Preparación del Intermedio D12.
[0280]
[0281] Paso 1: Preparación de D12-5: A una solución de (1S, 4R)-cis-4-acetoxi-2-ciclopent-1-ol (Aldrich, 10 g, 70,4 mmol), trietilamina (48,8 mL, 350 mmol) y se añadió DMAP (4,29 g, 35,2 mmol) en diclorometano (352 ml) cloruro de pivaloilo (10,8 ml, 87,75 mmol) gota a gota a través de una jeringa a 0°C bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (500 ml) y se extrajo con diclorometano (2 X 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a vacío para proporcionar D12-5 (15,0 g) en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (300 MHz, CDC¡3) 6 6,08 (br s, 2H), 5,54 (td, J = 8,0, 4,1 Hz, 2H), 2,88 (dt, J = 14.9, 7,5 Hz, 1H), 2,07 (s, 3H), 1,69 (dt, J = 14,7, 4,1 Hz, 1H), 1,20 (s, 9H).
[0282] Paso 2: Preparación de D12-6: A una solución de D12-5 (15,0 g, 70,4 mmol) en metanol (352 ml) se le añadió carbonato de potasio (9,73 g, 70,4 mmol) a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. Después de 5 h, la mezcla de reacción se filtró y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (500 ml) y la mezcla
resultante se lavó con agua (500 ml) y salmuera (500 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar D12-6 (12,0 g) en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (300 Mhz, CDCb) 56,11 (br d, J = 5,5 Hz, 1H), 5,97 (br d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,48 (br s, 1H), 4,73 (br s, 1H), 2,82 (dt, J = 14,6, 7,3 Hz, 1H), 1,67 (s, 1H), 1,61 (dt, J = 14,5, 4,0 Hz, 1H), 1,20 (s, J = 3,8 Hz, 9H).
[0283] Paso 3: Preparación de D12-7: A una solución de cobre (I) cianuro (5,10 g, 57,0 mmol) en dietilo éter (95 ml) se le añadió bromuro de pent-4-enilmagnesio (Novel Chemical Solutions, 0,5 M en THF, 114 ml, 57,0 mmol) gota a gota a través de una cánula durante un período de 30 minutos a 0°C bajo una atmósfera de argón. Después de 10 minutos, se añadió lentamente una solución de D12-6 (3,50 g, 19,0 mmol) en éter dietílico (10 ml) a través de una cánula. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente. Después de 16 h, la mezcla resultante se inactivó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (400 ml) y la mezcla resultante se extrajo en acetato de etilo (2 X 400 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (400 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar D12-7 (2,4 g) en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCb) 55,80 (ddt, J = 16,9, 10,2, 6,7 Hz, 1H), 5,69 (dd, J = 5,8, 1,7 Hz, 1H), 5,65 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,00 (dd, J = 17,1, 1,3 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,12 - 4,05 (m, 1H), 2,69 (ddd, J = 17,2, 6,4, 1,5 Hz, 1H), 2,54 - 2,45 (m, 1H), 2,24 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 1,69 (br s, 1H), 1,52 - 1,19 (m, 6H).
[0284] Paso 4: Preparación de (1S, 2R, 3R, 5S)-D12-3: A una solución de D12-7 (20 mg, 0,13 mmol) y dietilcinc (1 M en hexanos, 132 ml, 0,132 mmol) en éter dietílico (0,66 ml) se añadió diiodometano (21 ml, 0,26 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa de 1 N HCl (0,66 ml). Después de 5 minutos, la mezcla amarilla resultante se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (5 ml) y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 X 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre una solución anhidra de sulfato de sodio y se concentraron al vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% acetato de etilo/hexanos) para proporcionar (1S, 2R, 3R, 5S)-D12-3 (10 mg) en forma de un aceite incoloro.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 55,83 (ddt, J = 16,9, 10,2, 6,7 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,00 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,19 - 2,02 (m, 3H), 1,82 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 1,64 (d, J = 14,2 Hz, 1H), 1,55 - 1,42 (m, 2H), 1,38 - 1,20 (m, 4H), 1,19 - 1,08 (m, 1H), 0,62 - 0,47 (m, 2H).
[0286] Paso 5: Preparación del producto intermedio D12: el alcohol (1S, 2R, 3R, 5S)-D12-3 (0,450 g, 2,7 mmol) se recogió en DMF (2,7 ml) y se trató posteriormente con DSC (0,92 g, 3,52 mmol) y piridina (0,22 ml, 2,8 mmol). La reacción se calentó luego a 50°C. La reacción se enfrió luego a 0°C y se añadió agua (5,5 ml) gota a gota durante 1 minuto. La suspensión opaca resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 min antes de volver a enfriarse a 0°C. La reacción se trató posteriormente con L-ferc-leucina (0,462 g, 3,5 mmol) y K3PO4 (1,5 g, 7,0 mmol) y se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche con agitación vigorosa. La suspensión opaca resultante se diluyó con EtOAc y HCl acuoso 1M. Se añadió gota a gota HCl adicional (12 M) para ajustar el pH ~ 3. La capa acuosa se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgSO4 anhidro. Tras la concentración al vacío, se obtuvo el Intermedio D12 (1,72 g) como un aceite viscoso e incoloro que está contaminado con pequeñas cantidades de DMF y EtOAc. El material se usó en reacciones posteriores sin purificación adicional. lCm S-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C18H30NO4: 324,2; encontrado 324,7.
Preparación del producto intermedio D14.
[0286]
[0287] Paso 1. Preparación del producto intermedio D14. El carbonato D1-6 (862 mg, 3,23 mmol) se trató con hidrocloruro de ácido (S)-2-amino-2-(1-metilciclopentilo)acético (750 mg, 3,87 mmol; preparado de acuerdo con Robl, JA, y otros. J Med. Chem., 2004, 47, 2587), THF (28 ml), H2O (8,4 ml) y TEA (1,4 ml, 9,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 16 h y el THF se eliminó a vacío. El material restante se diluyó con H2O y el pH se ajustó a ~ 10-12 mediante la adición de NaOH acuoso al 10%. La fase acuosa se lavó dos veces con EtOAc y luego se
acidificó a pH ~ 1-2 con HCl acuoso al 10%. La solución ácida se extrajo 3x con EtOAc. Las extracciones combinadas se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los lavados iniciales de EtOAc (de la solución acuosa básica) se lavaron con HCl acuoso al 10%, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron al vacío. Los concentrados combinados se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (50% a 100% de EtOAc/Hex) para proporcionar el Intermedio D14 (980 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C17H28NO4 : 310,2; encontrado 310,0.
Preparación de la mezcla intermedia D15.
[0288]
[0289] Paso 1. Preparación de (+)-D15-1: A una solución de titanio (IV) isopropóxido (11,3 g, 40,0 mmol) en THF (160 mL) se agregó bromuro de metilo magnesio (3 M en Et2O, 20 mL, 60,0 mmol) gota a gota a través de una jeringa a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 10 minutos, la mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se añadió lentamente una solución de propionato de metilo (3,80 ml, 40,0 mmol) en THF (10 ml) con una jeringa. Después de 5 min, se añadió gota a gota bromuro de hept-6-enilmagnesio (Novel Chemical Solutions, 0,5 M en THF, 160 ml, 80 mmol) a través de un embudo de adición durante 1 h. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se inactivó con ácido sulfúrico acuoso al 10% (100 ml) y la mezcla resultante se extrajo con éter dietílico (2 X 200 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% acetato de etilo/hexanos) para proporcionar (+)-D15-1 (3,03 g, 50%) como un aceite incoloro. 1H RMN (300 MHz, CDCL) 55,77 (ddt, J = 16,9, 10,2, 6,7 Hz, 1H), 5,03 - 4,86 (m, 2H), 2,04 (q, J = 6,1Hz, 2H), 1,75-1,14 (m, 6H), 1,04 (t, J = 7,4Hz, 3H), 1,01-0,91 (m, 1H), 0,89-0,71 (m, 2H), 0,02 (t, J = 5,5Hz, 1H).
[0290] Paso 2. Preparación de la mezcla intermedia diastereomérica D15: Se disolvió la mezcla de alcohol racémica (+)-D15-1(2,00 g, 13,0 mmol) en DMF (13,0 ml). Se añadió piridina (1,05 ml, 13,0 mmol) seguido de DSC (4,00 g, 15,6 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50°C y se agitó durante 20 h. La mezcla de reacción se enfrió luego a temperatura ambiente y se añadió agua (13 ml) gota a gota durante 2 min. Luego se agregaron L -te rc -le u c in a (2,17 g, 13,0 mmol) y K3PO4 (8,28 g, 39,0 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 50°C. Después de 5 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con agua (500 ml). La mezcla resultante se lavó con diclorometano (100 ml). La fase acuosa se acidificó a pH 2 con una solución acuosa de 2 N HCl y se extrajo con DCM (2 X 400 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar la mezcla intermedia diastereomérica D15 (4,5 g) en forma de un aceite de color naranja pálido, que se usó posteriormente sin purificación adicional.
Preparación del producto intermedio D16:
[0291]
[0292] El Intermedio D16 se preparó de manera similar a la preparación del Intermedio D12, sustituyendo bromuro de but-3-enilmagnesio por bromuro de pent-4-enilmagnesio en el Paso 3. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para
C17H28NO4: 310,2; encontrado 310,8.
Preparación del producto intermedio D17:
[0293]
[0294] Paso 1. Preparación de la mezcla intermedia D17. (+)-trans-1-metilo-2-(but-3-enilo)ciclopropanol (900 mg,.13 mmol), preparado según el procedimiento para el Intermedio B2, Publicación de Patente Internacional N° WO 2012/40040 (en adelante "w O" '040 "), pág. 38, se disolvió en DMF (6 ml). Se añadió piridina (577 ml, 7,13 mmol) seguido de DSC (2,37 g, 9,27 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 40°C y se agitó durante 18 h. La mezcla de reacción se enfrió luego a 0°C y se añadió agua (6 ml) gota a gota durante 5 min. La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos y se retiró del baño frío. Después de 5 minutos adicionales, la mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se agregaron L-terc-leucina (1,21 g, 9,27 mmol) y K3PO4 (4,69 g, 22,1 mmol). La mezcla se agitó durante 10 minutos y se retiró del baño frío. Después de agitarse durante 6 h adicionales, la mezcla se diluyó con EtOAc (30 ml), se acidificó con HCl acuoso 1 M (25 ml) y se diluyó con HCl acuoso 0,2 M (25 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con HCl acuoso 0,2 M (2 x 20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar una mezcla de carbamato diastereoisómero D17 (2,10 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+ calculado para C15H25NNaO4: 306,2; encontrado: 306,1.
Preparación del intermedio D18:
[0295]
[0296] Paso 1. Preparación de D18-1: (Preparado de acuerdo con el documento WO2011013141) En una solución de ácido (S)-4-amino-2-hidroxibutanoico (15 g, 126 mmol) en metanol (95 ml) Se añadió ácido sulfúrico concentrado (8 ml) y la reacción se calentó a reflujo. Después de 18 h, la mezcla resultante se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se suspendió con acetato de etilo (95 ml) y D18-1 se recogió por filtración al vacío. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 5,69 (br s, 1H), 4,31 (ddd, J = 9,2, 8,1, 2,2 Hz, 1H), 3,49 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,41 (tt, J = 9,2, 1,7 Hz, 1H), 3,33 (td, J = 9,4, 6,5 Hz, 1H), 2,81 (br s, 1H), 2,59 - 2,48 (m, 1H), 2,09 (dq, J = 12,9, 9,1 Hz, 1H).
[0297] Paso 2. Preparación de D18-2: A una solución de D18-1 (4,5 g, 44 mmol), ácido 4-nitrobenzoico (8,19 g, 49 mmol) y trifenilfosfina (22,4 g, 132 mmol) en tetrahidrofurano. (220 ml) se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (12,1 ml, 61,6 mmol) gota a gota a través de una jeringa a 23°C bajo una atmósfera de argón. Después de 20 h, la mezcla de reacción naranja turbia resultante se concentró al vacío y se añadieron metanol (200 ml) seguido de
carbonato de potasio (15 g, 109 mmol) y la reacción se agitó a 23°C. Después de 5 h adicionales, la mezcla resultante se diluyó con cloroformo (200 ml) y se filtró. El filtrado se concentró al vacío y el residuo bruto se recogió en agua (150 ml) y una solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico (50 ml). La capa acuosa se lavó con acetato de etilo (3 X 200 ml) para eliminar los subproductos orgánicos y se concentró al vacío para obtener D18-2 en bruto que se usó directamente en la siguiente etapa. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) ó 4,28 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 3,43 -3,20 (m, 1H), 2,56 - 2,39 (m, 1H), 1,96 (dq, J = 12,7, 8,7 Hz, 1H).
[0298] Paso 3. Preparación de D18-3: A una solución de D18-2 bruto (5 g, 49,5 mmol) e imidazol (3,4 g, 49,5 mmol) en DMF (247 mL) se agregó TBSCI (7,5 g, 49,5 mmol) a 0°C bajo una atmósfera de argón. La mezcla resultante se dejó calentar a 23°C. Después de 7 h, se añadieron secuencialmente imidazol adicional (7 g, 102 mmol) y TBSCI (16 g, 106 mmol). Después de 16 h adicionales, la mezcla resultante se diluyó con una solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico (1 l) y se extrajo con acetato de etilo (1 l). La capa orgánica se dividió y se lavó con salmuera (1 l), se secó con sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar D18-3, 1H r Mn (300 MHz, CDCb) ó 5,99 (s, 1H), 4,26 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 3,44 -3,33 (m, 1H), 3,30 -3,19 (m, 1H), 2,45 - 2,29 (m, 1H), 2,11 - 1,95 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,02 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
[0299] Paso 4. Preparación de D18-4: A una solución de D18-3 (1,00 g, 4,65 mmol), DMAP (57,8 mg, 0,465 mmol) y trietilamina (1,29 mL, 9,3 mmol) en diclorometano (23,3 mL).) se añadió dicarbonato de di-ferc-butilo (1,5 g, 6,97 mmol) a 23°C bajo atmósfera de argón. Después de 20 h, la mezcla de reacción se purificó directamente mediante cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D18-4, 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 4,31 (dd, J = 9,4, 7,9 Hz, 1H), 3,79 (ddd, J = 11,0, 8,9, 2,2 Hz, 1H), 3,53 -3,41 (m, 1H), 2,34 - 2,21 (m, 1H), 1,92 (dq, J = 12,2, 9,2 Hz, 1H), 1,53 (s, 9H), 0,91 (s, 9H), 0,17 (s, 3H), 0,13 (s, 3H).
[0300] Paso 5. Preparación de D18-5: A una solución de D18-4 (700 mg, 2,22 mmol) en tetrahidrofurano (11,1 mL) se le añadió bromuro de pent-4-enilmagnesio (Novel Chemical Solutions, 0,5 M en 2). MetF, 4,89 ml, 2,44 mmol) a -78°C gota a gota a través de una jeringa bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (50 ml) y se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar D18-5, 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 5,77 - 5,62 (m, 1H), 4,95 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 4,92 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,26 (app t, J = 8,4) Hz, 1H), 3,77 - 3,69 (m, 1H), 3,41 (td, J = 10,4, 6,7 Hz, 1H), 2,48 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,28 - 2,17 (m, 1H), 1,91 - 1,78 (m, 2H), 1,77 - 1,65 (m, 1H), 1,60 (quin, J = 7,3 Hz, 2H), 1,47 (s, 9H), 0,85 (s, 9H), 0,11 (s, 3H), 0,07 (s, 3H).
[0301] Paso 6. Preparación de D18-6: A una solución de D18-5 (740 mg, 1,92 mmol) y trietilsilano (6,10 mL, 38,4 mmol) en diclorometano (9,6 mL) se añadió dietileterato de trifluoruro de boro (308 pL, 2,50 mmol) a -78°C gota a gota a través de una jeringa bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 4 h adicionales, la reacción se detuvo con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (10 ml) y se diluyó con una solución saturada de bicarbonato de sodio (50 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (50 ml) y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a vacío para proporcionar una amina libre bruta que se usó directamente en la siguiente etapa. A una solución de la amina libre bruta y trietilamina (535 ml, 3,84 mmol) en tetrahidrofurano (9,6 ml) se añadió anhídrido acético (146,5 ml, 1,55 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla resultante se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar D18-6 (mezcla diastereomérica 2:1 que favorece 1-((2S, 3R)-3-(fercbutildimetilsililoxi)-2-(pent-4-enilo)pirrolidina-1-ilo) etanona diastereómero). 1H RMN (400 MHz, CDCl3, diastereómero menor indicado por *) ó 5,80 - 5,64 (m, 1H, 1H *), 5,01 - 4,82 (m, 2H, 2H *), 4,10 (d, J = 4,2 Hz, 1H *), 4,04 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 3,82 (dd, J = 10,3, 4,0 Hz, 1H), 3,66 -3,56 (m, 1H *), 3,55-3,29 (m, 2H, 1H *), 3,24 -3,16 (m, 1H *), 2,37 -2,25 (m, 1H *), 2,08 - 1,88 (m, 2H, 1H *), 2,03 (s, 3H *), 2,00 (s, 3H), 1,81 - 1,61 (m, 2H, 2H *), 1,50 - 1,01 (m, 4H, 4H *), 0,85 (s, 9H *), 0,80 (s, 9H), 0,10 (s, 3H *), 0,09 (s, 3H *), 0,00 (br s, 6H).
[0302] Paso 7. Preparación de D18-7: A una solución de D18-6 (338 mg, 1,08 mmol) en tetrahidrofurano (21 ml) se le añadió TBAF (1M en tetrahidrofurano, 21 ml, 21 mmol) a 0°C bajo una atmósfera de argón. Después de 17 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó directamente mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar D18-7 (102 mg, mezcla diastereomérica 2:1 que favorece el diastereómero de 11-(2S, 3R)-3-hidroxi-2-(pent-4-enilo)pirrolidina-1-ilo)etanona). 1H RMN (400 MHz, CDCb diastereómero menor indicado por *) ó 5,84 - 5,70 (m, 1H, 1H *), 5,06 - 4,91 (m, 2H, 2H *), 4,25 (d, J = 3,7 Hz, 1H *), 4,20 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 3,98 (dd, J = 9,2, 4,2 Hz, 1H), 3,76 -3,68 (m, 1H *), 3,67 -3,59 (m, 1H, 1H *), 3,55 -3,46 (m, 1H, 2H *), 3,02 - 2,94 (m, 1H), 2,22 - 1,85 (m, 2H, 2H *), 2,10 (s, 3H *), 2,07 (s, 3H), 1,82 - 1,59 (m, 2H, 2H *), 1,55 - 1,13 (m, 4H, 4H *).
[0303] Paso 8. Preparación de D18-8: A una solución de D18-7 (102 mg, 0,518 mmol) y piridina (8 ml, 0,104 mmol) se agregó DSC (159,2 mg, 0,621 mmol) a temperatura ambiente, y la mezcla resultante se calentó a 45°C. Después de 16 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se añadieron secuencialmente L-tercleucina (86,5 mg, 0,518 mmol) y K3PO4 (330 mg, 1,55 mmol), y la mezcla se calentó a 50°C. Después de 6 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con una solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico (10 ml). La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar D18-8 (mezcla diastereomérica 2:1 que favorece el ácido (S)-2-(((2S, 3R)-1-acetilo-2-(pent-4-enilo)pirrolidina-3-iloxi)carbonilamino)-3,3-dimetilbutanoico). 1H RMN (400 MHz, CdCI3, diastereómero menor indicado por *) ó 5,85 - 5,65 (m, 1H, 1H *), 5,39 (d, J = 9,3 Hz, 1H *), 5,34 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,07 - 4,87 (m, 3H, 3H *), 4,16 - 4,03 (m, 1H, 1H *), 3,83 - 3,45 (m, 3H, 3H *), 2,30 - 1,95 (m, 8H), 2,30 - 1,95 (m, 2H, 3H *), 1,82 - 1,65 (m, 2H, 1H *), 2,11 (s, 3H), 2,09 (s, 3H *), 1,58 -1,13 (m, 4H, 4H *), 1,01 (br s, 9H, 9H *).
Preparación de la mezcla intermedia D19.
[0304]
[0305] Pasos 1 y 2: Preparación de D19-1: se diluyó una solución de THH 1,0 M de KHMDS (10 ml, 10 mmol) con THF (10 ml) bajo Ar y la solución resultante se enfrió a -78°C en un CO2: baño de acetona. Se añadió biciclo [3.1.1] heptan-2-ona (1,0 g, 9,1 mmol, ver: Yin, y otros, J. Org. Chem. 1985, 50, 531) como una solución en THF (5 ml) sobre 2 min, lavado con THF adicional (2 x 2,5 ml) para asegurar la transferencia completa. La mezcla resultante se agitó durante 30 minutos, y se añadió W-(5-cloro-2-piridilo) bis(trifluorometanosulfonimida) (3,8 g, 9,7 mmol) como una solución en THF (10 ml) durante 2 minutos, lavando con THF (2 x 2,5 ml). La mezcla resultante se agitó durante 5 min y se retiró del baño frío. Después de agitarse 30 min adicionales, la reacción se diluyó con Et2O (70 ml) y HCl acuoso 1 M (50 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con NaOH acuoso 1 M (2 x 30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. Esto se filtró a través de un tapón de sílice con 30% de EtOAc en hexanos para proporcionar un residuo crudo de (1,24 g) que se usó directamente en el siguiente paso. Paso 2: A una solución de dietilacetal 3-butenal (1,4 ml, 8,3 mmol) enfriada con Ar en un baño de agua con hielo, se agregó una solución 0,5 M de THF de 9-borabiciclo [3.3.1] nonano (15,9 ml, 7,95 mmol) durante 3 min. La reacción se agitó durante 20 h, dejando que el baño frío expirara durante la noche. Luego se añadió una solución acuosa 3 M de NaOH (2,9 ml, 8,7 mmol) y, Después de agitarse 20 minutos, la solución resultante se transfirió en su totalidad a un matraz que contenía el producto de el paso 1 (aprox. 5,16 mmol) y PdCl2.(dppf)CH2Cl2 (420 mg, 0,51 mmol). La mezcla resultante se calentó a 60°C. Después de agitarse durante 14 h, la mezcla de reacción se diluyó con Et2O (50 ml) y H2O (50 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. La purificación por cromatografía en gel de sílice (EtOAc del 0% al 10% en hexanos después del pre-equilibrio con Et3N al 1% en EtOAc) proporcionó el intermedio D19-1, 1H RMN (300 MHz, CDCI3) 5,36 - 5,28 (m, 1H), 4,59 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,73 - 3,58 (m, 2H), 3,54 - 3,39 (m, 2H), 2,72 - 2,60 (m, 1H), 2,45 - 2,34 (m, 3H), 2,23 - 2,08 (m, 4H), 1,89 - 1,76 (m, 2H), 1,67 (dt, J = 16,1, 6,9 Hz, 2H), 1,58 - 1,47 (m, 2H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 6H).
[0306] Paso 3: Preparación de D19-2: Una solución de olefina D19-1 (660 mg, 2,77 mmol) en THF (25 ml) se enfrió en un baño de agua con hielo. Luego se añadió BH3Me2S como una solución 1 M en CH2CI2 (2,9 ml, 2,9 mmol) durante 1 minuto. La solución resultante se agitó durante 2 h en el baño de agua con hielo y luego se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de agitarse durante 3 h adicionales, la mezcla de reacción se volvió a enfriar en un baño de agua con hielo y se diluyó con NaOH acuoso 2 M (7°C). mL) seguido de H2O2 acuoso al 30% (7 mL). La mezcla resultante se agitó durante 16 h adicionales a medida que se dejaba que el baño frío expirara gradualmente. La mezcla se repartió entre EfeO (100 ml) y H2O (50 ml), las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con NaOH acuoso 0,5 M (50 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto que se purificó por cromatografía en gel de sílice (15% a 40% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 570 mg de Intermedio D19-2, 1H RMN (300 MHz, CDCI3) ó 4,60 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,76-3,60 (m, 3H), 3,58-3,42 (m, 2H),
2,39 - 2,05 (m, 4H), 1,91 - 1,48 (m, 9H), 1,43 - 1,35 (m, 1H), 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 6H), 1,06 - 0,98 (m, 1H).
[0307] Pasos 4 y 5: Preparación de D19-3: Se disolvió el acetal D19-2 (360 mg, 1,4 mmol) en THF (8 ml) y H2O (2 ml). Se añadió monohidrato de ácido para-toluensulfónico (40 mg, 0,2 mmol) y la solución resultante se agitó 16 h a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con Et2O (50 ml) y H2O (30 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con Et2O (30 ml) y la fase orgánica combinada se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (15 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto que se usó inmediatamente en el siguiente paso. Paso 5: Se suspendió bromuro de metilo trifenilfosfonio (1,66 g, 4,6 mmol) en THF (40 ml) bajo Ar y se enfrió a través de un baño de CO2/acetona a -78°C. Se añadió gota a gota una solución 1 M de NaHMDS en t Hf (4,2 ml, 4,2 mmol) y la suspensión amarilla resultante se agitó durante 5 min. La mezcla se retiró del baño frío y la agitación continuó durante 30 min adicionales. Luego, la mezcla se volvió a enfriar a -78°C y el residuo bruto de la etapa anterior (aproximadamente 1,4 mmol) se añadió como una solución en THF (5 ml) durante 5 minutos, lavando con THF adicional (2 x 2,5 ml) para garantizar la transferencia completa. La mezcla resultante se agitó durante 5 min y luego se colocó en un baño de agua con hielo y se agitó durante 1 h adicional. La reacción se detuvo con NH4Cl acuoso saturado (20 ml) y se diluyó con Et2O (30 ml) y H2O (20 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró en 5 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 30% de EtOAc en hexanos) proporcionó D19-3, 1H RMN (300 MHz, CDCb) ó 6,01 - 5,81 (m, 1H), 5,22 - 5,05 (m, 2H), 3,79 -3,66 (m, 1H), 2,43 - 2,25 (m, 2H), 2,24 - 2,04 (m, 4H), 1,83 - 1,16 (m, 10H).
[0308] Paso 6: Intermedio D19-3 (270 mg, 1,5 mmol) se disolvió en DMF (2,0 ml). Se añadieron piridina (125 ml, 1,5 mmol) y DSC (500 mg, 1,9 mmol) y la reacción se agitó a 45°C durante 15 h. A continuación, la reacción se colocó en un baño de agua con hielo y se añadió H2O gota a gota durante 30 s. La mezcla se retiró del baño frío y se dejó agitar 10 min. La mezcla se volvió a enfriar en un baño de agua con hielo y se añadió L-ferc-leucina (259 mg, 1,97 mmol) seguido de K3PO4 (835 mg, 3,93 mmol). La mezcla de reacción se retiró del baño frío y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 5,25 h. La mezcla se diluyó luego con EtOAc (40 ml), HCl acuoso 1 M (20 ml) y H2O (15 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se lavó con HCl acuoso 0,2 M (2 x 25 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar una mezcla de diastereómeros D19 (505 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C19H32NO4 : 338,2; encontrado: 337,8.
Preparación del Intermedio E1.
[0309]
[0310] El compuesto intermedio E1 (2-cloro-6-metoxi-3-(metilsulfonilo)quinoxalina) se preparó de acuerdo con Mahata, PK, et al. Org. Letón. 2005, 7, 2169.
Preparación del Intermedio E2.
[0311]
[0312] Paso 1. Preparación de E2-1: en un matraz de fondo redondo, 3-(benciloxi)anilina (4,025 g, 20,20 mmol) y 1,1-bis(metiltio)-2-nitroetileno (3,338 g, 20,20 mmol) en etanol (40 ml) se sometió a reflujo durante 24 h con agitación constante. La mezcla de reacción se enfrió luego en un baño de hielo y se diluyó con éter (150 ml). La mezcla se filtró y se lavó con éter para proporcionar E2-1 (3,32 g) como un sólido amarillo que se usó directamente en la siguiente etapa. LCMS-eSi+ (m/z): [M+H]+ calc. para C16H17N2O3S: 317,1; encontrado: 317,1.
[0313] Paso 2. Preparación de E2-2: A una suspensión de E2-1 (3,32 g, 10,49 mmol) en 25 ml de MeCN, se añadió gota a gota POCI3 (2,93 ml, 31,5 mmol) durante 15 minutos con agitación constante. La mezcla de reacción se calentó a 80°C y se agitó durante 5 h. La reacción se enfrió luego a temperatura ambiente y se neutralizó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 enfriada con hielo, se extrajo tres veces con CH2Cl2 (100 ml), se lavó con agua, salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro. El disolvente se eliminó a presión reducida. El material bruto se eluyó a través de un tapón de sílice con CH2Cl2. El disolvente se eliminó a presión reducida y el sólido se lavó con MeCN para proporcionar E2-2 (1,56 g) como un sólido blanquecino. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C16H14CIN2o S: 317,1; encontrado: 317,3.
[0314] Paso 3. Preparación del Intermedio E2. Se añadió gota a gota una solución de mCPBA (1,87 g, 10,83 mmol) en CH2CI2 (40 ml) a una solución agitada de E2-2 (1,56 g, 4,92 mmol) en CH2CI2 (40 ml) a 0°C durante un período de 30 min. La mezcla de reacción se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 5 h. Luego se vertió en hielo, se pudo saturar con NaHCO3 acuoso y se repartió con CH2CI2. La capa orgánica se lavó posteriormente con agua, salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro. El disolvente se eliminó a presión reducida y el material bruto se purificó por cromatografía de fase normal con CH2CI2 para proporcionar el compuesto del título Intermedio E2 en forma de un sólido amarillo pálido. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C16H14CIN2O3S: 349,0; encontrado: 349,0.
Preparación del intermedio E3.
[0315]
[0316] Paso 1. Preparación de E3-1: En una solución de 3-bromo-3,3-difluoroprop-1-eno (25,0 g, 159 mmol) y oxalato de dietilo (21,6 mL, 159 mmol) en THF (380 mL), se añadió éter dietílico (90 mL) y n-pentano (90 mL) a -100°C gota a gota n-butillitio (2,5 M en hexano, 67 mL, 167,6 mmol) durante 30 min. La mezcla de reacción se agitó a -95°C durante 1 h y -78°C durante 2 h, y se inactivó con ac. NH4Cl (11 g en 150 ml de agua). La mezcla se extrajo con éter (tres veces). Las capas orgánicas se lavaron con HCl acuoso 1 N, salmuera y se secaron sobre Na2SÜ4 , y se concentraron para dar el residuo bruto, que se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc en hexanos: 0% a 40%) para dar E3-1 (7,0 g). 1H RMN (300 MHz, CDCh) 55,98-6,18 (m, 1H), 5,78 (dd, J = 0,9 Hz, 13 Hz, 1H), 5,60 (dd, J = 0,9 Hz, 11 Hz, 1H), 4,38 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
[0317] Paso 2. Preparación de E3-2 y E3-3: a una solución de E3-1 (14,0 g, 78,6 mmol) y dihidrocloruro de 4-metoxibenceno-1,2-diamina (15,08 g, 71,4 mmol) en EtÜH (360 ml) a ta se añadió trietilamina (19,9 ml, 142,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró. La suspensión en diclorometano (30 ml) y el filtrado dieron una cierta separación de los regioisómeros con E3-2 como la especie precipitante. (16,5 g de rendimiento total de filtración y cromatografía posterior). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 511,940 (br s, 1H), 7,850 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,985 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1H), 6,754 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,625-6,498 (m, 1H), 5,907 (dt, J = 17, 2 Hz, 1H), 5,601 (d, J = 11 Hz, 1H), 3,938 (s, 3H). La mezcla se suspendió, se filtró y se concentró una vez más, luego se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc en hexanos: 5% a 34%) para dar E3-3 (2,07 g) como el primer componente eluyente. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 512,05 (br s, 1H), 7,850 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,986 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1H), 6,761 (d, J = 3 Hz, 1H), 6,597-6,526 (m, 1H), 5,91 (dt, J = 17, 2 Hz, 1H), 5,601 (d, J = 11 Hz, 1H), 3,939 (s, 3H).
[0318] Paso 3. Preparación del Intermedio E3: Una solución de E3-3 (2,07 g, 8,2 mmol en 1 mL de DMF se trató con POCl3 (0,8 mL) y se calentó a 65°C durante 2,5 h. La reacción se diluyó con EtOAc y se detuvo vertiendo en agua con hielo. La fase orgánica se lavó posteriormente con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró para dar 2,1 g de Intermedio E3. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 58,028 J = 10 Hz, 1H), 7,46 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 3 Hz, 1H), 6,549-6.478 (m, 1H), 5,86 (dt, J = 17, 2 Hz, 1H), 5,67 (d, J = 11 Hz, 1H), 3,981 (s, 3H).
Preparación del Intermedio E4.
[0319]
[0320] El compuesto intermedio E4 (2-cloro-3-(1,1-difluoroalilo)quinoxalina) se preparó de manera similar al intermedio E3, sustituyendo el 1,2-diaminobenceno por dihidrocloruro de 4-metoxibenceno-1,2-diamina en el Paso 2,
Preparación de Intermedio E5.
[0321]
[0322] El compuesto intermedio E5 (2,6-dicloro-3-(metilsulfonilo)quinoxalina) se preparó de acuerdo con Mahata, PK, y col. Org. Letón. 2005, 7, 2169.
Preparación del Intermedio E6.
[0323]
[0324] Paso 1. Preparación de E6-1: se cargó un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1 l con una solución de 3-bromo-3,3-difluoroprop-1-eno (25 g, 159,3 mmol) en DMF (360 ml) y agua (90 ml). La solución resultante se trató con 2-oxoacetato de etilo (33 ml, 1 M en tolueno) e In (25 g). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente y luego se extrajo con 3x300 ml de éter. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con 1 x 100 ml de NH4Cl acuoso saturado y 1 x 100 ml de salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron al vacío para proporcionar E6-1 que se usó posteriormente sin purificación adicional.
[0325] Paso 2. Preparación de E6-2. Al hidroxiéster E6-1 (58,1 g, 323 mmol) se le añadió DCM (700 ml) en un matraz de 3 litros de 3 bocas equipado con agitación superior y una sonda de temperatura interna. Luego se secuenciaron TEMPO (5,4 g, 35 mmol), solución tampón (preparada mediante la disolución de 4,2 g de NaHCO3 y 0,53 g de Na2CO3 por 100 ml de agua, 700 ml, 7v) y NaOCl (Clorox 6,15% en peso, 422 ml, 395 mmol) se añadieron al matraz a 20°C. Después de 2 h, la capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 X 300 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío para proporcionar E6-2, 1H-RMN (300 MHz, CDCla) ó 5,98-6,18 (m, 1H), 5,78 (dd, J = 0,9 Hz, 13 Hz, 1H), 5,60 (dd, J = 0,9 Hz, 11 Hz, 1H), 4,38 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
[0326] Paso 3. Preparación de E6-3. A una solución de etilo 3,3-difluoro-2,2-dihidroxipent-4-enoato E6-2 (57,4 g, 292 mmol) en THF (725 ml) y agua (131 ml) se añadió L iO H ^O (22 g, 529 mmol) a 20°C. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo sólido se suspendió en agua (300 ml) y la mezcla resultante se acidificó a pH = 1 con una solución acuosa concentrada de ácido clorhídrico. La mezcla resultante se agitó hasta que todos los sólidos se disolvieron (~ 1,5 h) y luego se añadió cloruro de sodio hasta que la solución se saturó. La solución resultante se extrajo con MTBE (2 X 500 ml) y acetato de etilo (2 X 500 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron al vacío. El residuo sólido anaranjado en bruto se suspendió en DCM (100 ml) y se agitó hasta que los sólidos se distribuyeron finamente antes de que los hexanos (75 ml) se agregaran lentamente a través de un embudo de adición. Los sólidos resultantes se recogieron por filtración al vacío a través de un embudo fritado medio y se lavaron con 1:1 de diclorometano/hexanos (2 X 10 ml) para proporcionar el producto deseado. 1H-RMN (400 m Hz, DMSO-cfó) ó 13,17 (bs, 1H), 6,18-6,01 (m, 1h ), 5,64-5,52 (m, 2H).
[0327] Paso 4. Preparación de E6-4 y E6-5: se trató una solución de E6-3 (0,5 g, 3,3 mmol) en EtOH (12 ml) con 3,4-diaminobenzonitrilo (0,47 g, 3,5 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 1 h, luego se concentró al vacío. El residuo resultante se absorbió en gel de sílice, luego se purificó por cromatografía en columna para dar E6-4 (0,5 g) como el primer componente eluyente. 1H-RMN (400 MHz, CD3OD) ó 8,01 (d, 1H), 7,65 (dd, 2H), 6,49 (m, 1 H), 5,80 (dt, 1H), 5,60 (d, 1 H). Se recuperó E6-5 (0,2 g) como el segundo componente eluyente. 1H-Rm N (400 MHz, CD3OD) ó 8,25 (d, 1H), 7,87 (dd, 1H), 7,41 (d, 1H), 6,49 (m, 1H), 5,80 (dt, 1H), 5,59 (d, 1H).
[0328] Paso 5. Preparación del producto intermedio E6 : una solución de E6-4 (0,5 g, 2 mmol en 4,5 ml de DMF se trató con POCl3 (3 ml) y se calentó a 65°C durante 3 h. La reacción se diluyó con EtOAc y se apagó vertiendo en agua con hielo. La fase orgánica se lavó posteriormente con NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío para dar 0,48 g de Intermedio E6 (3-cloro-2-(1,1-difluoroal)quinoxalina-6-carbonitrilo). 1H-RMN (400 MHz, CD3OD) ó 8,52 (s, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,13 (dd, 1H), 6,55 (m, 1H), 5,84 (dt, 1H), 5,72 (d, 1 H).
Preparación del Intermedio E7
[0329]
[0330] Paso 1. Preparación de E7-1: A una solución de E3-1 (1,84 g, 10,93 mmol) y 4-(difluorometoxi)benceno-1,2-diamina (1,90 g, 10,93 mmol, preparada de acuerdo con el ejemplo de referencia 30 y del documento WO2003035065, pág. 511.) en DMF (40 ml) a ta. Se añadió DIPEA (9,5 ml, 54,65 mmol) y HATU (6,23 g, 16,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 h, se diluyó con acetato de etilo (100 ml), se lavó con agua (100 ml) y salmuera (50 ml). La mezcla se concentró al vacío. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc en hexanos: 20% a 60%) proporcionó E7-1 (800 mg) como la fracción de elución posterior de dos con espectros de masas similares. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C12H9F4N2O: 289,2; encontrado: 289,0.
[0331] Paso 2: Preparación del Intermedio E7: Se combinan hidroxi-quinoxalina E7-1 (800 mg, 2,8 mmol), POCl3 (1,65 mL, 3,0 mmol) y DMF (10 mL) a temperatura ambiente y luego se calientan a 65°C a 2,5°C, momento en el que se agregó POCl3 adicional (0,2 mL, 0,36 mmol). La reacción se calentó durante 3 h más a 65°C, luego se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se detuvo mediante la adición de agua fría (30 ml) y se recogió en acetato de etilo (50 ml), se lavó con Na2CO3 acuoso saturado (100 ml) seguido de salmuera (50 ml) y se secó sobre MgSO4 anhidro. La solución resultante se concentró al vacío para dar el Intermedio E7 (859 mg) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C12H8CF4N2O: 307,0; encontrado: 307,0.
Preparación del Intermedio E8.
[0332]
[0333] El compuesto intermedio E8 (2-cloro-6-fluoro-3-(metilsulfonilo)quinoxalina) se preparó de acuerdo con Mahata, PK, et al. Org. Letón. 2005, 7, 2169.
Preparación del intermedio E9.
[0334]
[0335] Se preparó 2,7-dicloro-3-(prop-2-en-1-ilo)quinazolina-4(3H)-ona (Intermedio E9) de acuerdo con el Paso 3 del Intermedio D5 de WO '040 p 53-4.
Preparación de ejemplos
[0336] Los compuestos de Fórmula IV, excepto los compuestos IVa-IVh, son de acuerdo con la invención. Todos los demás compuestos son ejemplos de referencia.
[0337] Ejemplo 1 Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-ferc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetra-decahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0338] Paso 1. Preparación de 1-1: Una mezcla que contiene el Intermedio B4 (2,03 g, 6,44 mmol), el Intermedio E1 (1,6 g, 5,85 mmol) y el carbonato de cesio (3,15 g, 9,66 mmol) en MeCN (40 ml) se agitó vigorosamente a temperatura ambiente bajo una atmósfera de Ar durante 16 h. La reacción se filtró luego a través de una capa de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar 1-1 como un sólido blanco (2,5 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M-Boc+2H]+ calculado para C20H27ClN3O4: 408,9; encontrado: 408,6.
[0339] Paso 2. Preparación de 1-2: A una solución 1-1 (2,5 g, 4,92 mmol) en dioxano (10 ml) se le añadió ácido clorhídrico en dioxano (4 M, 25 ml, 98,4 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. La reacción bruta se concentró al vacío para dar 1-2 como un sólido blanco (2,49 g) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M]+ calc. para C20H26ClN3O4: 407,9; encontrado: 407,9.
[0340] Paso 3. Preparación de 1-3: A una solución de DMF (35 ml) de 1-2 (2,49 g, 5,61 mmol), Intermedio D1 (1,75 mg, 6,17 mmol) y DIPEA (3,9 ml, 22.44 mmol) se añadió COMU (3,12 g, 7,29 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se detuvo con una solución acuosa al 5% de ácido cítrico y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró para producir 1-3 como una espuma naranja (2,31 g) que se usó sin más purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M]+ calculado para C35H49ClN4O7: 673,3; encontrado: 673,7.
[0341] Paso 4. Preparación de 1-4: A una solución de 1-3 (2,31 g, 3,43 mmol), TEA (0,72 ml, 5,15 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (0,69 mg, 5,15 mmol) en EtOH (35 ml). Se añadió PdCb(dppf) (0,25 g, 0,34 mmol, Frontier Scientific). La reacción se roció con argón durante 15 min y se calentó a 80°C durante 2 h. La reacción se adsorbió directamente sobre gel de sílice y se purificó usando cromatografía en gel de sílice para dar 1-4 en forma de un aceite amarillo (1,95 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H53N4O7: 665,4; encontrado: 665,3.
[0342] Paso 5. Preparación de 1-5: A una solución de 1-4 (1,95 g, 2,93 mmol) en DCE (585 mL) se añadió catalizador Zhan 1B (0,215 g, 0,29 mmol, Strem) y la reacción fue rociada con Ar durante 15 min. La reacción se calentó a 80°C durante 1,5 h, se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para producir 1-5 en forma de un aceite amarillo (1,47 g; LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C35H49N4O7 : 637,4; encontrado: 637,3).
[0343] Paso 6. Preparación de 1-6: se trató una solución de 1-5 (0,97 g, 1,52 mmol) en EtOH (15 ml) con Pd/C (10% en peso de Pd, 0,162 g). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se filtró a través de Celite, la almohadilla se lavó con EtOAc y se concentró para dar 1-6 en forma de un sólido espumoso marrón (0,803 g) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H51N4O7 : 639,4; encontrado: 639,3.
[0344] Paso 7. Preparación de 1-7: A una solución de 1-6 (0,803 g, 1,26 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió TFA (5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se añadieron 2 ml adicionales de TFA y la reacción se agitó durante otras 1,5 h. La reacción se concentró hasta un aceite marrón que se recogió en EtOAc (35 ml). La solución orgánica se lavó con agua. Después de la separación de las capas, se sentó. Se añadió NaHCO3 acuoso con agitación hasta que la capa acuosa alcanzó un pH ~ 7-8, Las capas se separaron de nuevo y la fase acuosa se extrajo con EtOAc dos veces. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con ácido cítrico acuoso 1 M, salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para producir 1-6 en forma de un sólido espumoso marrón (0,719 g) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C31H43N4O7: 583,3; encontrado: 583,4.
[0345] Paso 8, Preparación del Ejemplo 1: A una solución de 1-7 (0,200 g, 0,343 mmol), Intermedio A10 (0,157 g, 0,515 mmol), DMAP (0,063 g, 0,51 mmol) y DIPEA (0,3 mL, 1,72 mmol) en DMF (3 ml) se añadió HATU (0,235 g, 0,617 mmol) y la reacción se agitó a ta durante 2 h. La reacción se diluyó con MeCN y se purificó directamente por HPLC de fase inversa (Gemini, 30-100% MeCN/H2O TFA al 0,1%) y se liofilizó para dar el Ejemplo 1 (118,6 mg) como una sal de TFA sólida. Tiempo de HPLC analítico: 8,63 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55F2N6O9S: 833,4; encontrado: 833,5, 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,19 (s, 1H); 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,23 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H); 7,15 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 5,89 (d, J = 3,6Hz, 1H); 5,83 (td, JH-F = 55,6Hz, J = 6,4Hz, 1H); 4,56 (d, J = 7,2Hz, 1H); 4,40 (s, 1H) 4,38 (apd, J = 7,2 Hz, 1H); 4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H); 3,93 (s, 3H); 3,75 (dt, J = 7,2, 4 Hz, 1H); 3,00-2,91 (m, 1H); 2,81 (td, J = 12, 4,4 Hz, 1H); 2,63-2,54 (m, 1H); 2,01 (br s, 2H); 1,88-1,64 (m, 3H); 1,66-1,33 (m, 11H) 1,52 (s, 3H); 1,24 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,96 (m, 2H); 0,96-0,88 (m, 2H); 0,78-0,68 (m, 1H); 0,55-0,46 (m, 1H).
[0346] Ejemplo 2. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0347] El Ejemplo 2 se preparó de manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio A9 por el Intermedio A10 en el Paso 8, El Ejemplo 2 se aisló (37,9 mg) con una pureza de aproximadamente el 85% como una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,54 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H53F2N6O9S: 819,35; encontrado: 819,51. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 510,26 (s, 1H); 7,90 (d, J = 9,2Hz, 1H); 7,26 (dd, J = 9,2, 2,4Hz, 1H); 7,10 (d, J = 2,4Hz, 1H); 6,68 (brs, 1H) ; 6,01 (td, JH-F = 55,6 Hz, J = 6,8 Hz, 1H); 5,87 (d, J = 3,6 Hz, 1H); 5,38, (d, J = 10 Hz, 1H); 4,50 - 4,40 (m, 3H); 4,10 (dd, J = 12, 3,6 Hz, 1H); 3,95 (s, 3H); 3,79-3,72 (m, 1H); 2,96-2,82 (m, 3H); 2,63-2,56 (m, 1H); 2,14 (t, J = 6,8 Hz, 1H); 1,98-1,86 (m, 1H); 1,84-1,28 (m, 13H); 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,16-0,92 (m, 3H); 1,09 (s, 9H); 0,74-0,64 (m, 1H); 0,48 (q, J = 6,4 Hz, 1H).
[0348] Ejemplo 3. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-{(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-etilciclopropilo}-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a, 3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0349] El Ejemplo 3 se preparó de manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio A3 por el Intermedio A10 en el Paso 8, El Ejemplo 3 se aisló (0,035 g) con una pureza de aproximadamente el 88% como una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,63 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H57N6O9S: 797,4; encontrado: 797,5, 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 58,98 (s, 1H); 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,23 (d, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H); 7,15 (d, J = 2,8 Hz, 1H); 5,89 (d, J = 3,6 Hz, 1H); 4,58 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 4,41-4,32 (m, 2H); 4,16 (dd, J = 12,4 Hz, 3,6 Hz, 1H); 3,93 (s, 3H); 3,74 (dt, J = 6,8, 2,8 Hz, 1H); 3,20-2,91 (m, 2H); 2,86-2,76 (m, 1H); 2,61-2,53 (m, 1H); 1,88-1,68 (m, 4H); 1,66 1,34 (m, 9H); 1,34-1,20 (m, 5H); 1,18-1,04 (m, 3H); 1,10 (s, 9H); 1,00-0,92 (m, 7H); 0,79-0,69 (m, 1H); 0,50 (br d, J = 7,2 Hz, 1H).
[0350] Ejemplo 4 Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-9-etilo-N-[(1R, 2R)-2-etilo-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a -tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0351] El Ejemplo 4 se preparó de manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio A4 por el Intermedio A10 en el Paso 8, El Ejemplo 4 se aisló (0,018 g) con una pureza de aproximadamente el 88% como una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,75, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H59N6O9S: 811,4; encontrado: 811,6. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 58,91 (s, 1H); 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,23 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H); 7,16 (d, J = 2,8 Hz, 1H); 5,90 (d, J = 3,6 Hz, 1H); 4,59 (d, J = 6,8 Hz, 1H); 4,38 (s, 1H); 4,37 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,16 (dd, J = 11,6, 6,8 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H); 3,74 (dt, J = 6,8, 3,6 Hz, 1H); 3,10-2,91 (m, 1H); 2,90-2,7 (m, 1H); 2,63-2,55 (m, 1H); 1,86-1,69 (m, 3H); 1,65-1,36 (m, 13H), 1,52 (s, 3H); 1,24 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,16-1,06 (m, 2H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,85 (m, 7H); 0,79-0,68 (m, 1H); 0,50 (br d, J = 6,8 Hz, 1H).
[0352] Ejemplo 5 Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-11-etilo-16-metoxi-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0353] Paso 1. Preparación de 5-1: HATU (555 mg, 1,46 mmol, Oakwood) y DIPEA (1,10 ml, 6,35 mmol) se agregaron a una mezcla de 1-2 (533 mg, 1,20 mmol) y el producto intermedio d5, (414 mg, 1,33 mmol) en 12 ml de DMF bajo argón. Después de agitarse durante la noche, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-35% en hexanos) para dar 5-1 (713 mg) como un sólido blanco. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C37H54ClN4O7: 701,36; encontrado: 701,58.
[0354] Paso 2. Preparación de 5-2: Pd(dppf)Cl2^CH2Ch (94 mg, 0,115 mmol, Strem) se agregó a una mezcla desoxigenada de 5-1 (710 mg, 1,01 mmol), vinilflorifluoroborato (213 mg, 1,59 mmol) y trietilamina (0,210 ml, 1,52 mmol) en 11 ml de EtOH a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 78°C bajo argón durante una hora. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 5-2 (699 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H57N4O7 : 693,41; encontrado: 693,47.
[0355] Paso 3. Preparación de 5-3: Una mezcla de 5-2 (699 mg, 1,01 mmol) y catalizador Zhan 1B (81 mg, 0,111 mmol, Strem) en 200 ml de DCE se desoxigenó bajo argón durante 25 minutos. La mezcla se calentó luego a 95°C durante 45 minutos. La mezcla de reacción se calentó a 95°C durante 10 minutos adicionales, se enfrió a temperatura ambiente y luego se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos) para dar 5-3 (336 mg) en forma de un sólido marrón claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H53N4O7 : 665,38; encontrado: 665,53.
[0356] Paso 4. Preparación de 5-4: Se añadió paladio sobre carbono (10% en peso de Pd, 102 mg, 0,096 mmol) a una solución de 5-3 (330 mg, 0,497 mmol) en 8 ml de etanol y 3,5 ml de acetato de etilo. La mezcla se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 100 minutos y luego se filtró sobre Celite, lavando con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 5-4 (64 mg) como una película sólida de color amarillo-marrón claro, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H55N4O7 : 667,40; encontrado: 667,52.
[0357] Paso 5 Preparación de 5-5: Se añadió gota a gota TMSOTf (0,53 ml, 2,91 mmol) a una solución de 5-4 (329 mg, 0,494 mmol) en 10 ml de diclorometano bajo argón a temperatura ambiente. Después de una hora, se agregaron 0,3 ml adicionales de TMSOTf. Después de una hora adicional, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. La película resultante se recogió en 12 ml de tolueno y se concentró a presión reducida. Este proceso se repitió una segunda vez para producir 5-5 (301 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C33H47N4O7 : 611,34; encontrado: 611,46.
[0358] Paso 6. Preparación del Ejemplo 5: HATU (129 mg, 0,339 mmol) y DIPEA (0,22 mL, 1,27 mmol) se agregaron a una mezcla de 5-5 (134 mg, 0,22 mmol) e Intermedio A9 (95 mg), 0,328 mmol) en 6,6 mL de MeCN bajo argón. Después de agitarse durante 5 h, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (acetonitrilo al 15-100% en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1%) para producir el Ejemplo 5 (43 mg) como un sólido amarillo claro, sal de ácido trifluoroacético, después de la liofilización. Tiempo de HPLC analítico: 9,11 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C41H57F2N6O9S: 847,38; encontrado: 847,62. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 5 9,31 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 15,4, 2,8 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,87 (td, Jh-f = 56 Hz, J = 6 Hz, 1H), 5,87-5,83 (m, 1H), 4,59 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,23-4,14 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,06-2,94 (m, 2H), 2,77-2,67 (m, 1H), 2,65-2,58 (m, 1H), 2,07-2,01 (m, 2H), 1,98-1,74 (m, 4H), 1,72-1,52 (m, 4H), 1,50-1,20 (m, 12H), 1,18-1,02 (m, 8H), 1,06 (s, 9H).
[0359] Ejemplo 6 Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-11 -etilo-16-metoxi-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0360] El Ejemplo 6 se preparó de manera similar al Ejemplo 5, sustituyendo al Intermedio A10 por el Intermedio A9 en el Paso 6, El Ejemplo 6 se aisló (29 mg) como un sólido blanco. Tiempo de HPLC analítico: 9,26 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 861,40; encontrado: 861,20. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 59,91 (s, 1H), 7,82 (d, J = 12Hz, 1H), 7,18 (d, J = 12 Hz 1H), 7,13-7,06 (m, 1H), 6,48 (s, 1H), 5,95 (td, Jh-f = 56 Hz, J = 6 Hz, 1H), 5,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,95-4,91 (m, 1H), 4,38-4,31 (m, 2H), 4,10-3,88 (m, 2H), 3,98 (s, 3H),
2,98-2,89 (m, 1H), 2,67-2,59 (m, 1H), 2,05 -1,65 (m, 4H), 1,64-1,21 (m, 12H), 1,40 (s, 3H), 1,17-0,80 (m, 12H), 1,09 (s, 9H).
[0361] Ejemplo 7: Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-1a-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0362] Paso 1. Preparación de 1-2 (base libre): se añadió carbamato 1-1 (350 mg, 0,689 mmol) a un matraz que contenía una mezcla 4: 1 de acetato de í-butilo: DCM (3,5 ml). A esta solución se le añadió luego ácido metanosulfónico (447 ml, 6,89 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 20 min a temperatura ambiente, luego se diluyó con cloruro de metileno (20 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml). La solución se dejó agitar hasta que cesó el desprendimiento de gas, luego se eliminaron los compuestos orgánicos y la capa acuosa se extrajo dos veces con cloruro de metileno (20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El sólido blanco resultante 1-2 (base libre, 280 mg) se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C20H27ClN3O4: 408,2; encontrado: 408,1
[0363] Paso 2. Preparación de la mezcla 7-1: se combinó la amina 1-2 (281 mg, 0,689 mmol) con la mezcla intermedia diastereomérica D6 (266 mg, 0,895 mmol), DIPEA (600 ml, 3,45 mmol) y DMF (2 ml). Luego se añadió HATU (340 mg, 0,895 mmol) a la mezcla de reacción, que se agitó a 40°C durante 5 h. La mezcla de reacción se
diluyó luego con agua (10 ml) y se recogió en cloruro de metileno (10 ml). Los compuestos orgánicos se separaron y la capa acuosa se extrajo una vez con cloruro de metileno (10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo bruto se purificó luego por cromatografía en gel de sílice para dar 7-1 como una mezcla diastereomérica 1:1 (280 mg). LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C36H52ClN4O7: 687,4; encontrado: 687,3.
[0364] Paso 3. Preparación de 7-2: Se añadió Pd(dppf)Cb (29 mg, 0,0407 mmol) a una mezcla desgasificada de 7-1 (280 mg, 0,407 mmol), viniltrifluoroborato de potasio (55 mg, 0,733 mmol).), y trietilamina (91 ml, 0,651 mmol) en 2 ml de etanol a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 80°C bajo N2 durante una hora. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con tolueno (10 ml), se concentró al vacío hasta un pequeño volumen de disolvente y se volvió a diluir en tolueno (1 ml). A continuación, la mezcla se cargó directamente en una columna de sílice y se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar 7-2 como una mezcla diastereomérica 1:1 que se llevó a la siguiente etapa sin concentrarse completamente hasta sequedad. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H55N4O7: 679,4; encontrado: 679,4.
[0365] Paso 4. Preparación de 7-3 y 7-4: mezcla diastereomérica 7-2 (276 mg, 0,407 mmol) y catalizador Zhan 1B (32 mg, 0,0407 mmol, Strem) se disolvieron en 80 ml de DCE y se desgasificaron bajo N2 durante 25 minutos. La mezcla se calentó luego a 100°C durante 1 h. La reacción se enfrió luego a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0% a 30% de acetato de etilo en hexanos) para producir diastereoisómeros únicos 7-3 (20 mg, fracción de elución temprana) y 7-4 (25 mg, fracción de elución tardía) como marrón claro. residuos Fracción de elución temprana: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7 : 651,4; encontrado: 651,3. Fracción de elución tardía: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7 : 651,4; encontrado: 651,3.
[0366] Paso 5. Preparación de 7-5: Se añadió paladio sobre carbono (10% p/p, 25 mg) a una solución de 7-3 (20 mg, 0,0307 mmol) en una mezcla 1:1 de acetato de etilo. y dioxano (2 ml). La mezcla se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 30 minutos y luego se filtró a través de un tapón de Celite y se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 7-5 (16 mg) como una película marrón clara, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H53N4O7: 653,4; encontrado: 653,4.
[0367] Paso 6. Preparación de 7-6: Se disolvió el intermedio 7-5 (16 mg, 0,023 mmol) en 2 M HCl en dioxano (2 ml) y se calentó a 80°C durante 1,5 h mediante un reactor de microondas. La mezcla de reacción se concentró luego al vacío para dar 7-6 (15 mg) como un residuo marrón, que se usó en la etapa posterior sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C32H44N4O7: 597,3; encontrado: 597,3.
[0368] Paso 7. Preparación del Ejemplo 7: HATU (11,9 mg, 0,031 mmol) y DIPEA (22 mL, 0,126 mmol) se agregaron a una mezcla de 7-6 (15 mg, 0,025 mmol) y A10 (11,5 mg, 0,0377 mmol) en 1 ml de DMF. Después de agitarse durante la noche a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua, se acidificó a pH 1 con HCl acuoso 1 N y se extrajo tres veces con cloruro de metileno (15 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (acetonitrilo al 5 - 100% en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1%) seguido de cromatografía en gel de sílice para proporcionar el Ejemplo 7 (4,3 mg) como una película sólida blanca. Tiempo de HPLC analítico: 9,07 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,4. 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 9,88 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 9,1Hz, 2,8 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,98 (td, Jh-f = 55,7, J = 6,7 Hz, 1H), 5,95 (d, J = 9,6, 1H), 5,32 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,45 (dd, J = 13,0 Hz, 9,6 Hz, 2H), 4,32 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 15,5 Hz, 8,8 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 2,99-2,84 (m, 1H), 2,82 - 2,68 (m, 1H), 2,62 - 2,47 (m 1H), 2,16 - 2,02 (m, 1H) 2,00-1,85 (m, 1H) 1,84-1,69 (m, 1H), 1,70 - 1,15 (m, 11H), 1,52 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,20 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,14 - 0,77 (m, 5H) 1,09 (s, 9H), 0,11 (m, 1H).
[0369] Ejemplo 8 Preparación de (1aS, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aS)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-1a-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0370] El Ejemplo 8 se preparó de manera similar al Ejemplo 7, sustituyendo la elución tardía 7-4 por elución temprana 7-3 en el Paso 5, El Ejemplo 7 se aisló (2,9 mg) como un sólido blanco. Tiempo de HPLC analítico: 9,09 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,4.
[0371] Ejemplos 9 y 10, Preparación de (7S, 10S, 11S, 12R)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-11-etilo-16-metoxi-5,8-dioxo-3aR-(trifluorometilo)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida y (7S, 10S, 11S, 12R)-7-terc-butilo-N-[(1 R, 2R)-2-(difluorometilo)-1 -{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-11 -etilo-16-metoxi-5,8-dioxo-3aS-(trifluorometilo)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiaza-ciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0372] Paso 1. Preparación de 9-1: A una solución de Intermedio D8 (322 mg, 0,85 mmol) y 1-2 (316 mg, 0,78 mmol) en MeCN (3,9 mL) se agregó HATU (323 mg, 0,85 mmol) seguido de DIPEA (678 mL, 3,90 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar la amida 9-1 (476 mg, mezcla diastereomérica 1:1) como un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H63CF3N4O7 : 769,4; encontrado: 769,5,
[0373] Paso 2. Preparación de 9-2: A una solución de 9-1 (470 mg, 612 mmol), TEA (128 ml, 918 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (123 mg, 918 mmol) en EtOH (3,06) se añadió PdCh(dppf)(50 mg, 61 mmol). La mezcla de reacción se desoxigenó con argón durante 10 minutos y se calentó a 78°C. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar vinil quinoxalina 9-2 (329 mg, mezcla diastereomérica 1:1) como un aceite amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H56F3N4O7 : 761,4; encontrado: 761,6.
[0374] Paso 3. Preparación de 9-3: A una solución de 9-2 (329 mg, 485 mmol) en DCE (97 ml) se agregó catalizador
Zhan 1B (35 mg, 49 mmol, Strem) y la mezcla de reacción. Se desoxigenó durante 10 minutos con argón. La mezcla de reacción se calentó luego a 100°C. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el macro-ciclo 9-3 (301 mg, 7:4 mezclas diastereoméricas) como un aceite amarillo claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H52F3N4O7 : 733,4; encontrado: 733,5,
[0375] Paso 4. Preparación de 9-4: A una solución de 9-3 (300 mg, 410 mmol) en etanol (2,00 mL) se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 43 mg, 41 mmol) a bajo una atmósfera de argón. La atmósfera de la reacción se reemplazó con hidrógeno gas y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 X 5 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el macrociclo 9-4 (295 mg, mezcla diastereomérica 7:4), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C38H54F3N4O7: 735,4; encontrado: 735,5,
[0376] Paso 5. Preparación de 9-5: A una solución de 9-4 (295 mg, 401 mmol) en DCM (2 ml) se añadió TMSOTf (72,6 |jl, 401 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 1,5 h, se añadió TMSOTf adicional (362,9 ml, 2,00 mmol). Después de 1 h, se añadió TMSOTf adicional (362,9 ml, 2,00 mmol). Después de 2 h, la mezcla de reacción se añadió lentamente a una solución acuosa de NaOH 0,25 N (preenfriada a 0°C, 3 ml). La mezcla resultante se diluyó con una solución acuosa de 1 N HCl (5 ml) y se extrajo con DCM (3 X 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron para proporcionar ácido carboxílico 9-5 (353 mg, 7:4 de mezcla diastereomérica) como un sólido de color canela, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H45F3N4O7 : 679,3; encontrado: 679,5,
[0377] Paso 6. Preparación del Ejemplo 9 y del Ejemplo 10: A una solución de ácido 9-5 (150 mg, 220 mmol) e Intermedio A10 (101 mg, 330 mmol) en MeCN (1,1 mL) se agregó HATU (127 mg, 330 mmol) seguido de DIPEA (191 mL, 1,10 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró a vacío, y el residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se repurificaron mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetona/hexanos al 0-50%) para proporcionar la primera elución.
[0378] El Ejemplo 9 (40 mg) como un polvo blanco y el segundo Ejemplo de elución 10 (70 mg) como un polvo blanco. Primer ejemplo de elución 9: Tiempo de HPLC analítico: 9,42 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H58F5N6O9S: 929,4; encontrado: 929,5, 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 9,83 (s, 1H), 7,92 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,99 (br s, 1H), 5,96 (td, Jh-f 55,5, J = 6,6 Hz, 1H), 5,70 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,63 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,22 - 4,04 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,12 - 2,89 (m, 1H), 2,71 - 2,51 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,15 - 1,82 (m, 4H), 1,83 - 1,34 (m, 8H), 1,36 - 0,98 (m, 12H), 1,26 (s, 9H), 0,92 - 0,79 (m, 4H). Segundo ejemplo de elución 10: Tiempo de HPLC analítico: 9,55 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H58F5N6O9S: 929,4; encontrado: 929,5, 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 9,61 (s, 1H), 7,91 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 9,0, 3,0 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 5,98 - 5,91 (m, 1H), 5,83 (td, Jh-f 55,5, J = 6,6 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,72 - 4,63 (m, 1H), 4,46 - 4,38 (m, 1H), 4,32 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,25 - 4,14 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,73 (br d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,23 - 3,07 (m, 1H), 2,86 - 2,37 (m, 2H), 2,14 - 1,79 (m, 2H), 1,78 - 1,38 (m, 8H), 1,51 (s, 3H), 1,35 - 1,08 (m, 8H), 1,25 (s, 9H), 1,05 (br s, 3H), 0,93 - 0,68 (m, 6H).
[0379] Ejemplos 11 y 12, Preparación de (7S, 10S, 11S, 12R)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoílo]-2-(difluorometilo).)ciclopropilo]-11-etilo-16-metoxi-5,8-dioxo-3aR-(trifluorometilo)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22, 23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida y (7S, 10S, 11S, 12R)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilosulfonilo)carbamoílo]-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-11-etilo-16-metoxi-5,8-dioxo-3aS-(trifluorometilo)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0380] Preparación del Ejemplo 11 y del Ejemplo 12: A una solución de ácido 9-5 (150 mg, 220 mmol) e Intermedio A9 (96 mg, 330 mmol) en MeCN (1,1 mL) se añadió HATU (127 mg, 330). mmol) seguido de DIPEA (191 ml, 1,10 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetona/hexanos al 0-50%). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se repurificaron mediante cromatografía en gel de sílice (0-50% de gradiente de acetona/hexanos) para proporcionar el primer Ejemplo de elución 11 (29 mg) como un polvo blanco y el segundo Ejemplo de elución 12 (60,2 mg) como un polvo blanco. Primer eluyente Ejemplo 11:
Tiempo de HPLC analítico: 9,44 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. C42H56F5N6O9S: 915,4; encontrado: 915,6. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 10,17 (br s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,21 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,17 - 7,07 (m, 1H), 5,99 (br s, 1H), 5,97 (td, Jh-f 55,5, J = 6 , 6 Hz, 1H), 5,82 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,20 - 4,03 (m, 2H), 3,95 (s, J = 5,9 Hz, 3H), 2,97 - 2,82 (m, 2H), 2,79 - 2,49 (m, 3H)), 2,24 - 1,81 (m, 8 H), 1,80 - 1,11 (m, 12H), 1,10-0,98 (m, 4H), 1,07 (s, 9H), 0,95-0,81 (m, 3H). Segundo ejemplo de elución 12:
Tiempo de HPLC analítico: 9,48 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. C42H56F5N6O9S: 915,4; encontrado: 915,6. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 510,07 (s, 1H), 7,93 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,28-7,20 (m, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,17 - 5,68 (m, 3H), 4,67 - 4,55 (m, 1H), 4,37 - 4,23 (m, 2H), 4,17 - 4,05 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,75 -3,66 (m, 1H), 3,22 - 3,04 (m, 1H), 3,02 - 2,31 (m, 6H), 2,30 - 1,83 (m, 10H), 1,85 - 1,13 (m, 13H), 1,06 (s, 9H), 0,95 - 0,79 (m, 1H).
[0381] Ejemplo 13, Preparación de (1R, 4S, 4aR, 8S, 11S, 12S, 13R, 25aR)-8-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-12-etilo-17-metoxi-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-1,4:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecina-11-carboxamida.
[0382] Paso 1. Preparación de la mezcla de diastereómeros 13-1 y 13-2: A una solución de 1-2 (354 mg, 0,87 mmol), mezcla intermedia D9 y D10 (323 mg, 0,96 mmol) y BEP (263 mg, 0,96 mmol; TCI America) se añadió DIPEA (0,45 ml, 2,61 mmol) y la reacción se agitó a 50°C durante 2 h. La reacción se detuvo con una solución sat. de NaHCÜ3 acuoso y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 0-30%/hexanos) para producir una mezcla inseparable de diastereómeros 13-1 y 13-2 (338 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C39H56ClN4O7: 727,38; encontrado: 727,46.
[0383] Paso 2. Preparación de la mezcla de diastereómeros 13-3 y 13-4: A una solución de la mezcla de 13-1 y 13-2 (338 mg, 0,46 mmol), TEA (0,10 mL, 0,69 mmol) y trifluoroborato de vinilo potásico (93 mg, 0,69 mmol) en EtOH (30 ml) se añadió PdCh(dppf)(38 mg, 0,046 mmol, Strem Chemicals). La reacción se desoxigenó con N2 durante 10 min y se calentó a 80°C durante 1 h. La reacción se detuvo con una solución sat. acuosa de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía en gel de sílice para dar una mezcla inseparable de diastereómeros 13-3 y 13-4 (285 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H59N4O7 : 719,44; encontrado: 719,70.
[0384] Pasos 3 y 4, Preparación de 13-5: A una solución de la mezcla diastereomérica 13-3 y 13-4 (285 mg, 0,40 mmol) en DCE (100 ml) se agregó catalizador Zhan 1B (30 mg, 0,04 mmol, Strem) y la reacción se desoxigenó durante 30 minutos con N2. La reacción se calentó a 100°C durante 45 min, se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró. El producto crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice para producir un producto de olefina macrocíclica (125 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H55N4O7 : 691,41; encontrado: 691,58) que se recogió en EtOH (6 ml) y se trató con Pd/C (10%, 120 mg). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOAc y se concentró para dar 13-5 en forma de un aceite (125 mg) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+
calculado para C39H57N4O7 : 693,42; encontrado: 693,46.
[0385] Paso 5. Preparación de 13-6: A una solución de 13-5 (50 mg, 0,072 mmol) en DCM (4 ml) se le añadió TFA (1 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. La reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con H2O, un tampón acuoso de pH 7, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró para dar 13-6 como un residuo que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H49N4O7: 637,36; encontrado: 637,40.
[0386] Paso 6. Preparación del Ejemplo 13: A una solución de 13-6 (46 mg, 0,072 mmol), Intermedio A9 (28 mg, 0,11 mmol), TBTU (34 mg, 0,10 mmol) y DMAP (13 mg, Se añadieron 0,11 mmol) en DCM (5 ml) DIPEA (0,038 ml, 0,22 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se inactivó con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con una solución sat. NaHCO3 acuosa, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El material bruto se purificó por HPLC de fase inversa (Gemini, 30-85% MeCN4-hO 0,1% TFA) y se liofilizó para dar el Ejemplo 13 (14,5 mg) como una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 9,39 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C43H59F2N6O9S: 873,40; encontrado: 873,42. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 6 9,28 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,26 (dd, J = 6,4, 2,8 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,04 - 5,74 (m, 2H), 5,50 (s, 1H), 4,55 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,47 (s, 1H), 4,26 - 4,16 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,03 - 2,95 (m, 2H), 2,78 - 2,66 (m, 2H), 2,17 (br, 2H), 2,05 (s, 3H), 1,90 - 1,85 (m, 1H), 1,76 - 1,74 (m, 2H), 1,61 - 1,21 (m, 20H), 1,15 - 1,11 (m, 2H), 1,08 (s, 9H), 0,93 - 0,90 (m, 1H).
[0387] Ejemplo 14. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-ciclopentilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0388] Paso 1. Preparación de 14-1: A una solución de 1-2 (223 mg, 0,50 mmol) e Intermedio D2 (221 mg, 0,75 mmol) en acetonitrilo (5 ml) se agregó HATU (306 mg, 0,80 mmol) seguido de DIPEA (0,43 ml, 2,5 mmol) a temperatura ambiente. Después de 19 h, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo resultante se diluyó con acetato de etilo (15 ml). La solución resultante se lavó con HCl acuoso 1 M (10 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml) y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (15 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. El residuo bruto resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/gradiente de hexanos) para proporcionar 14-1 (173 mg) como un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H50ClN4O7: 685,33; encontrado: 685,49.
[0389] Paso 2. Preparación de 14-2: A una solución de 14-1 (173 mg, 0,25 mmol) en EtOH (3 ml) se añadió viniltrifluoroborato de potasio (51 mg, 0,38 mmol), PdCh(dppf)(21 mg, 0,025 mmol) y TEA (0,053 ml, 0,38 mmol) secuencialmente y la mezcla resultante se calentó a 80°C. Después de 1 h, se añadió viniltrifluoroborato de potasio adicional (17 mg, 0,12 mmol) y se continuó agitando a 80°C. Después de 2,5 h, se añadió viniltrifluoroborato de potasio adicional (8 mg, 0,06 mmol) y la reacción se agitó durante 10 minutos adicionales a 80°C. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y se lavó con salmuera (20 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (10 ml) y la capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para proporcionar 14-2 como un residuo que se usó sin purificación en la siguiente etapa. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H53N4O7 : 677,38; encontrado: 677,50.
[0390] Paso 3. Preparación de 14-3: a una solución de 14-2 en DCE desoxigenado (0,006 M) se añadió catalizador Zhan 1B (18 mg, 0,025 mmol, Strem) y la reacción se desoxigenó durante otros 10 minutos con Arkansas. La reacción se calentó a 100°C. Después de 1,5 h, se añadió catalizador Zhan 1B (9 mg, 0,012 mmol) y la reacción se agitó durante otros 30 min. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró hasta 4-5 ml de volumen. Esto se purificó directamente mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar 14-3 en forma de un aceite marrón (70 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H49N4O7 : 649,35; encontrado: 649,50.
[0391] Paso 4. Preparación de 14-4: A una solución de 14-3 (70 mg, 0,11 mmol) en EtOH (5 ml) se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 12 mg) bajo argón. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOH y se concentró para dar 14-4 en forma de un aceite marrón que se usó posteriormente sin más purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H51N4O7: 651,37; encontrado: 651,60.
[0392] Paso 5. Preparación de 14-5: A una solución de 14-4 (70 mg, 0,11 mmol) en DCM (3 ml) se añadió TMSOTf (0,103 ml, 0,53 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La reacción se concentró para proporcionar 14-5, que se usó para la siguiente etapa sin purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H43N4O7 : 595,31; encontrado: 595,43.
[0393] Paso 6. Preparación del Ejemplo 14: A una solución de 14-5 (36,8 mg, 0,06 mmol) e Intermedio A10 (28 mg, 0,09 mmol) en acetonitrilo (1,5 mL) se agregó HATU (38 mg, 0,1 mmol).) seguido de DIPEA (0,065 ml, 0,37 mmol) a temperatura ambiente. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción se purificó directamente mediante HPLC de fase inversa (columna Gemini 5u C18 110A, MeCN al 15-100%/H2O TFA al 0,1%) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 14 como un sólido amarillo (24 mg) como un TFA sal. Tiempo de HPLC analítico: 9,03 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F2N6O9S: 845,4; encontrado: 845,6. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,31 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,03 - 5,66 (m, 2H), 4,53 (dd, J = 13,2, 9,6 Hz, 2H), 4,18 (dd, J = 17,2, 7,1 Hz, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,68 (dt, J = 6,8, 2,8 Hz, 1H), 3,13 (quin, J = 1,7 Hz, 1H), 3,02 -2,92 (m, 1H), 2,85 - 2,78 (m, 1H), 2,62 - 2,55 (m, 1H), 2,30 - 2,17 (m, 1H), 2,02 (s, 2H), 1,97 - 1,86 (m, 3H), 1,86 -1,79 (m, 1H), 1,80 - 1,41 (m, 17H), 1,40 - 1,28 (m, 3H), 1,22 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 1,03-0,87 (m, 4H), 0,76-0,68 (m, 1H), 0,51-0,44 (m, 1H).
[0394] Ejemplo 15, Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-ciclopentilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(difluorometilo))ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0395] Paso 1. Preparación del Ejemplo 15, A una solución de 14-5 (27 mg, 0,045 mmol) e Intermedio A9 (20 mg, 0,067 mmol) en acetonitrilo (1,3 mL) se agregó HATU (27 mg, 0,072 mmol).) seguido de DIPEA (0,047 ml, 0,27 mmol) a temperatura ambiente. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción se purificó directamente mediante HPLC de fase inversa (columna Gemini 5u C18 110A, MeCN al 15-100%/H2O TFA al 0,1%) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 15 en forma de un sólido amarillo (18,6 mg) como un TFA. sal. Tiempo de HPLC analítico: 8,89 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F2N6O9S: 831,4; encontrado: 831,6. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,32 (s, 1H), 7,79 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,03 - 5,66 (m, 2H), 4,53 (t, J = 10,0 Hz, 2H), 4,22 - 4,14 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,67 (dt, J = 6,5, 2,9 Hz, 1H), 3,13 (quin, 1,6 Hz, 1H), 3,04 - 2,92 (m, 3H), 2,85 - 2,77 (m, 1H), 2,63 - 2,55 (m, 1H), 2,26 - 2,19 (m, 1H), 2,05 - 2,02 (m, 2H), 1,99 - 1,86 (m, 3H), 1,84 - 1,42 (m, 12H), 1,41 - 1,25 (m, 4H), 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,15 - 1,03 (m, 3H), 1,01 - 0,90 (m, 2H), 0,76 - 0,68 (m, 1H), 0,49 - 0,45 (m, 1H).
[0396] Ejemplo 16, Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-ciclohexilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0397] Paso 1. Preparación de 16-1: A una solución de Intermedio D3 (190 mg, 0,60 mmol) y 1-2 (264 mg, 0,60 mmol) en DMF (5 ml) se añadió DIPEA (0,31 ml, 1,8 mmol) seguido de Co MU (257 mg, 0,60 mmol) a temperatura ambiente. Después de 2 h, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo resultante se diluyó con acetato de etilo (15 ml). La solución resultante se lavó con una solución acuosa al 10% de ácido cítrico. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml) y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (15 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. El residuo bruto resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar 16-1 (260 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H51ClN4Oy: 700,28; encontrado: 700,03.
[0398] Paso 2. Preparación de 16-2: A una solución de 16-1(260 mg, 0,37 mmol) en EtOH (5 ml) se agregó vinilfluoroborato de potasio (75 mg, 0,56 mmol), PdCb(dppf) (30 mg, 0,037 mmol) y TEA (0,079 ml, 0,56 mmol) secuencialmente. La reacción se desoxigenó con Ar durante 12 min y se calentó a 78°C durante 2 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y se lavó con salmuera (20 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (10 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio
anhidro y se concentraron para proporcionar un residuo bruto. El residuo bruto resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar 16-2 en forma de un aceite amarillo (250 mg). LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C39H54N4O7 : 691,87; encontrado: 691,54.
[0399] Paso 3. Preparación de 16-3: A una solución de 16-2 (250 mg, 0,36 mmol) en DCE desoxigenado (0,005 M) se agregó catalizador Zhan 1B (26 mg, 0,036 mmol, Strem) y la reacción se desoxigenó durante otros 10 minutos con Ar. La reacción se calentó a 70°C durante 2 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró. El residuo resultante se purificó directamente mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar 16-3 en forma de un aceite amarillo (250 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H50N4O7 : 663,82; encontrado: 663,42.
[0400] Paso 4. Preparación de 16-4: A una solución de 16-3 (200 mg, 0,3 mmol) en EtOAc (10 ml) se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 100 mg) bajo argón. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOH y se concentró para dar 16 4 en forma de un aceite (180 mg) que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H52N4O7 : 665,83; encontrado: 665,36.
[0401] Paso 5. Preparación de 16-5: A una solución de 16-4 (165 mg, 0,25 mmol) en DCM (5 ml) se añadió TFA (2 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El disolvente se eliminó a presión reducida, la reacción se diluyó con acetato de etilo (15 ml). La solución resultante se lavó con una solución sat. NaHCO3 acuoso y se concentró para proporcionar 16-5 que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C33H44N4O7 : 609,73; encontrado: 609,47
[0402] Paso 6. Preparación del Ejemplo 16: A una solución de 16-5 (70 mg, 0,12 mmol) e Intermedio A10 (65 mg, 0,21 mmol) en DCM (1 ml) se agregó DIPEA (0,08 mL, 0,46 mmol)) seguido de HATU (88 mg, 0,23 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con NH4Cl acuoso y salmuera. El material bruto se purificó por HPLC de fase inversa (columna Gemini, 58-98% MeCN/H2O 0,1% TFA) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 16 (40 mg) en forma de una sal TFA. Tiempo de HPLC analítico: 9,21 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H56F2N6O9S: 859,99; encontrado: 859,60. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,28 (s, 1H), 7,76 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,10 (s, 1H), 5,97 - 5,82 (m, 2H), 4,88 (m, 2H), 4,51 4,46 (m, 3H), 4,19-4,11 (m, 3H), 3,90 (s, 3H), 3,70-3,29 (m, 6H), 2,97-2,52 (m, 3H), 2,06 - 1,41 (m, 20H), 1,39 - 1,17 (m, 4H), 1,09 - 0,89 (m, 4H), 0,65 (m, 1H), 0,46 - 0,44 (m, 1H).
[0403] Ejemplo 17, Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19, 20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0404] Pasos 1 y 2, Preparación de 17-2: una mezcla de Intermedio B4 (273 mg, 0,865 mmol), Intermedio E3 (234 mg, 0,865 mmol) y carbonato de cesio (310 mg, 0,952 mmol) en MeCN (2,5 ml) se calentaron a 85°C durante 36 horas. En un proceso alternativo, se utilizó DMF como disolvente. Se añadió agua (10 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró para proporcionar 17-1, que se usó posteriormente sin purificación adicional o después de la purificación por cromatografía. El residuo se trató con 35 equivalentes de 4 N HCl en dioxano a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Tras la adición de éter dietílico, se precipitó la sal de hidrocloruro de 17-2, La sal se recogió por filtración al vacío y se secó a presión
reducida (375 mg). En un proceso alternativo, la desprotección se realizó en presencia de MSA en tBuOAc y DCM. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C23H30F2N3O4 : 450,2; encontrado: 450,1.
[0405] Paso 3. Preparación de 17-3: Una mezcla de 17-2 (370 mg, 0,761 mmol), Intermedio D11 (205 mg, 0,761 mmol), HATU (347 mg, 0,914 mmol) y DIPEA (0,795 mL, 4,57 mmol) en DMF (3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyó con 100 ml de agua y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. La mezcla de producto en bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc en hexanos: 30%) para dar 17-3 (236 mg). En un proceso alternativo, 17-2 e Intermedio D11 se mezclaron con EDC y HOBT en presencia de NMM en DMF para dar 17-3, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H51F2N4O7 : 701,4; encontrado: 701,3.
[0406] Paso 4. Preparación de 17-4: Se desoxigenó una solución de 17-3 (236 mg, 0,34 mmol) en DCE (67 ml) con argón durante 40 minutos. Se añadió catalizador Zhan 1B (25 mg, 0,034 mmol, Strem) y la reacción se calentó en un baño de aceite a 100°C durante 40 minutos. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc en hexanos: 5% a 65%) para dar el 17-4 (229 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [MF]+ calculado para C35H46FN4O7 : 653,3; encontrado: 653,2.
[0407] Paso 5. Preparación de 17-5: se hidrogenó una solución de 17-4 (229 mg, 0,34 mmol) en 50 ml de etanol a 1 atm de gas de hidrógeno sobre 220 mg de 10% en peso de Pd/C (húmedo) para 2,5 horas. La filtración a través de Celite y la concentración a presión reducida dieron un residuo bruto de 17-5 (184 mg). En un proceso alternativo, 17 4 se hidrogenó en hidrógeno gas en presencia de Rh. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H49F2N4O7 : 675,4; encontrado: 675,3.
[0408] Paso 6. Preparación de 17-6: el éster 17-5 (184 mg, 0,27 mmol) en 2 ml de DCM se trató con 1 ml de TFA y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró y luego se repartió entre agua y acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para dar 17-6 (153 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H41F2N4O7: 619,3; encontrado: 619,2.
[0409] Paso 7. Preparación del Ejemplo 17: Una mezcla de ácido carboxílico 17-6 (153 mg, 0,247 mmol), Intermedio A10 (90 mg, 0,297 mmol), HATU (113 mg, 0,297 mmol), DMAP (45 mg, 0,37 mmol) y DIPEA (0,215 ml, 1,24 mmol) en DMF (1,5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. La mezcla se diluyó con HCl acuoso 2 N (2 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. La mezcla de producto en bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc en hexanos: 30% - 95%) para dar el Ejemplo 17 (95 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,79 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F4N6O9S: 869,3; encontrado: 869,2. 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 9,948 (br s, 1H), 7,99 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,57 (br s, 1H), 5,97 (td, Jh-f = 52Hz, J = 6,8Hz, 1H), 5,92 (d, J = 3,6Hz, 1H), 5,322 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,42 (apd, J = 7,2Hz, 1H), 4,40 (ap s, 1H), 4,34 (ap d, J = 10 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 12,0, 3,6 Hz, 1H), 3,99 -3,94 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 2,52 (m, 2H), 2,06 (m, 1H), 1,93 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 1,63 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,56 - 1,42 (m, 4H), 1,25 (m, 1H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H)), 1,10-0,93 (m, 2H), 0,85 (m, 2H), 0,69 (m, 1H), 0,49 (m, 1H).
[0410] Ejemplo 18. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1, 1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopopa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0411] Paso 1. Preparación de 18-1: el compuesto intermedio B1 (1,94 g, 6,44 mmol) se disolvió en MeCN (30 ml) bajo Ar. Se añadieron el intermedio E1 (2,02 g, 7,4 mmol) y Cs2CO3 (7,5 mmol), y la mezcla resultante se agitó durante 8 horas a temperatura ambiente. Se añadieron el Intermedio adicional E1 (200 mg, 0,73 mmol) y Cs2CO3 (245 mg, 0,75 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 15 h adicionales. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite con EtOAc y se concentró. El residuo crudo resultante se disolvió en CH2Cl2 , se concentró en 12 g de gel de sílice y se purificó por cromatografía en gel de sílice (5% a 20% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 18-1 en forma de una espuma blanca (2,63 g). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C24^3ClN3O6: 494,2; encontrado: 494,1.
[0412] Paso 2. Preparación de 18-2: Se disolvió quinoxalina sustituida 18-1 (905 mg, 1,84 mmol) en acetato de terebutilo (7 ml) y CH2Cl2 (1,75 ml). Se añadió gota a gota MeSO3H (600 ml, 9,2 mmol) durante 45 s, y la solución amarilla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 50 min. Se añadió MeSO3H adicional (100 ml, 1,5 mmol) gota a gota y la reacción se agitó durante 10 minutos adicionales. La mezcla de reacción se transfirió a una mezcla agitada de EtOAc (20 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró para proporcionar la amina 18-2 en forma de un residuo incoloro (680 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C19H25ClN3O4: 394,2; encontrado: 394,2.
[0413] Paso 3. Preparación de 18-3: se disolvieron en DMF (10 ml) la amina 18-2 (680 mg, 1,73 mmol) y el compuesto intermedio D1 (600 mg, 2,1 mmol). Se añadió DIPEA (925 ml, 5,30 mmol) seguido de HATU (880 mg, 2,3 mmol). La reacción se agitó 110 min a temperatura ambiente y se diluyó con NaHCO3 acuoso saturado (30 ml) y EtOAc (30 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con salmuera medio saturada (2 x 40 ml), se secó
sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró hasta un residuo crudo. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 20% de EtOAc en hexanos) proporcionó 18-3 como un residuo incoloro (703 mg). LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C34H4sClN4O7: 659,3; encontrado: 659,4.
[0414] Paso 4. Preparación de 18-4: una mezcla heterogénea agitada de 18-3 (703 mg, 1,07 mmol), PdCh(dppfy CH2Cl2 (48 mg, 0,059 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (290 mg, 2,16 mmol) en EtOH (11 ml) se roció con argón durante 15 min. Se añadió trietilamina (320 ml, 2,3 mmol) y la mezcla se calentó a 75°C durante 70 min. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (40 ml) y salmuera medio saturada (30 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 20% a 30% de EtOAc en hexanos) proporcionó 18-4 como un residuo amarillo (490 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H51N4O7 : 651,4; encontrado: 651,3.
[0415] Paso 5. Preparación de 18-5: 18-4 (490 mg, 0,179 mmol) se disolvió en DCE (250 ml) y la solución se roció con Ar durante 15 min. Se añadió catalizador de Zhan 1B (66 mg, 0,090 mmol, Strem) como una solución en DCE (5 ml) y la solución resultante se agitó a 85°C bajo Ar durante 105 min. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se adsorbió en gel de sílice (7,5 g). La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 30% de EtOAc en hexanos) proporcionó 18-5 como un residuo amorfo (290 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H47N4O7 : 623,3; encontrado: 623,3.
[0416] Paso 6: Preparación de 18-6: se disolvió olefina 18-5 (290 mg, 0,072 mmol) en EtOAc (5,5 ml) y EtOH (5,5 ml) y el recipiente de reacción se purgó con Ar. Se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 92 mg) en una sola porción y el recipiente de reacción se purgó dos veces con H2. La reacción se agitó a temperatura ambiente bajo 1 atm H 2 durante 1,5 hy se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para proporcionar un residuo bruto de 18-6 que se usó sin purificación adicional (LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H49N4O7 : 625,4; encontrado: 625,0.
[0417] Paso 7. Preparación de 18-7: Se disolvió 18-6 (0,466 mmol) en CH2Cl2 (4,3 ml) bajo Ar. Se añadió gota a gota TMSOTf (210 ml, 1,16 mmol) durante 30 s. La reacción se agitó durante 65 minutos y se añadió una porción adicional de TMSOTf (50 ml, 0,28 mmol). La reacción se agitó durante 100 minutos adicionales y se añadió una porción adicional de TMSOTf (100 ml, 0,55 mmol). La reacción se agitó durante 105 min adicionales y se concentró al vacío. El residuo bruto resultante se disolvió en CH2Cl2 (20 ml) y se añadió NaOH acuoso 0,2 M (10 ml). La mezcla se agitó durante 5 min y se acidificó con HCl acuoso 1 M (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar 18-7 en forma de un sólido marrón (273 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C30H41N4O7 : 569,3; encontrado: 568,9.
[0418] Paso 8. Preparación del Ejemplo 18: A una suspensión de ácido 18-7 (28 mg, 0,049 mmol) e Intermedio A10 (26,5 mg, 0,087 mmol) en MecN (1,3 mL) se añadió DIPEA (55 mL, 0,31). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (30,5 mg, 0,080 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se agregó una porción adicional del Intermedio A10 (3 mg, 0,01 mmol). Después de 15 minutos adicionales, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml) y HCl acuoso 1 M (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 40% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 18 en forma de un sólido amorfo blanco (26,4 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,42 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H53F2N6O9S: 819,4; encontrado: 819,1.
1H RMN (300 MHz, CDCb) ó 9,68 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,14 - 5,70 (m, 1H), 5,65 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,56 - 5,50 (m, 1H), 4,53 - 4,40 (m, 3H), 4,12 (dd, J = 11,9, 4,3 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,81 -3,74 (m, 1H), 3,06 - 2,64 (m, 4H), 2,10 - 1,35 (m, 13H), 1,13 (d, J = 7,5 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,04 - 0,65 (m, 6H), 0,52 - 0,41 (m, 1H).
[0419] Ejemplo 19. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0420] Paso 1. Preparación del Ejemplo 19: a una suspensión de ácido 18-7 (8 , 8 mg, 0,015 mmol) e Intermedio A9 (7,4 mg, 0,025 mmol) en MeCN (0,5 mL) se añadió DIPEA (14 mL, 0,08). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (9,1 mg, 0,024 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se agregó una porción adicional del Intermedio A9 (5 mg, 0,02 mmol) y HATU (5 mg, 0,01 mmol). Después de 1,5 h adicionales, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (10 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 40% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 19 como un sólido amorfo blanco (8,5 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,69 min. LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calc. para C38H51F2N6O9S: 805,3; encontrado: 805,2. 1H RMN (300 MHz, CDCla) ó 10,12 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,25 - 5,76 (m, 1H), 5,57 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,51 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,49 - 4,37 (m, 3H), 4,13 (dd, J = 12,2, 4,3 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,79 -3,72 (m, 1H), 3,01 - 2,69 (m, 4H), 2,13 - 2,06 (m, 1H), 2,01 - 1,22 (m, 9H), 1,14 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,06 - 0,82 (m, 6 H), 0,76 - 0,62 (m, 1H), 0,54 -0,41 (m, 1H).
[0421] Ejemplo 20. Preparación de (1aR, 5S, 8 S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-{(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-etilciclopropilo}-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0422] Paso 1. Preparación del Ejemplo 20: A una suspensión de ácido 18-7 (10 mg, 0,018 mmol) e Intermedio A3 (6,3 mg, 0,023 mmol) en MeCN (0,5 mL) se añadió DIPEA (15 mL, 0,086). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (9,0 mg, 0,024 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 h y se añadió una porción adicional de Intermedio A3 (6,5 mg, 0,024 mmol). Después de 45 minutos adicionales, la reacción se diluyó con EtOAc (2 ml) y HCl acuoso 1 M (1,5 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (4 x 1,5 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. La purificación por cromatografía en gel de sílice (20% a 25% a 30% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 20 en forma de un sólido amorfo blanco (8,0 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,40 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H55N6O9S: 783,4; encontrado: 783,2.
1H RMN (300 MHz, CDCls) ó 9,98 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,42 (s, 1H), 5,57 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,48 - 4,34 (m, 3H), 4,11 (dd, J = 11,8, 4,1 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,79 -3,72 (m, 1H), 2,98 - 2,68 (m, 4H), 1,95 - 0,80 (m, 33H), 0,76 - 0,61 (m, 1H), 0,53 - 0,41 (m, 1H).
[0423] Ejemplo 21. Preparación de (1aR, 5S, 8 S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-etilo-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1, 1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a -tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0424] Paso 1. Preparación del Ejemplo 21: A una suspensión de ácido 18-7 (94,9 mg, 0,167 mmol) e Intermedio A4 (74,5 mg, 0,263 mmol) en MeCN (2,5 mL) se añadió DIPEA (180 mL, 1,0). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (9,0 mg, 0,024 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 110 minutos y se agregaron porciones adicionales de Intermedio A4 (31 mg, 0,11 mmol) y DIPEA (50 ml, 0,29 mmol). Después de 40 min adicionales, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 40% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 21 en forma de un sólido blanco amorfo (102,1 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,83 min. lCm S-ESI+ (m /z): [M+H]+ calc. para C40H57N6O9S: 797,4; encontrado: 797,5, 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 9,76 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,17 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,58 - 5,42 (m, 2H), 4,48 - 4,36 (m, 3H), 4,09 (dd, J = 11,8, 4,2 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,79 -3,74 (m, 1H), 2,97 - 2,66 (m, 4H), 1,80 - 0,88 (m, 33H), 0,84 - 0,77 (m, 1H), 0,77 - 0,61 (m, 2H), 0,52 - 0,40 (m, 1H).
[0425] Ejemplo 22. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(2-fluoroetilo)ciclopropilo]-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0426] Paso 1. Preparación del Ejemplo 22: A una suspensión de ácido 18-7 (30,1 mg, 0,0529 mmol) e Intermedio A5 (35 mg, 0,12 mmol) en MeCN (0,5 mL) se añadió DIPEA (85 mL, 0,49). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (34,5 mg, 0,0907 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 90 min y se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió en 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (15% a 55% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 22 como un sólido amorfo blanco (35,5 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,54 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H54FN6O9S: 801,4; encontrado: 801,3. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 9,95 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,68 (s, 1H), 5,56 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,43 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,57 - 4,29 (m, 5H), 4,12 (dd, J = 11,8, 4,1 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,78 -3,71 (m, 1H), 2,97 -2,67 (m, 4H), 2,12 - 1,25 (m, 14H), 1,15 (d, J = 7,4 Hz), 3H), 1,10 (s, 9H), 1,06-0,89 (m, 4H), 0,76-0,62 (m, 1H), 0,53 0,42 (m, 1H).
[0427] Ejemplo 23. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-2-(2-fluoroetilo)-1-{[(1-metilo-ciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21, 22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxiamida.
[0428] Paso 1. Preparación del Ejemplo 23: a una suspensión de ácido 18-7 (30,5 mg, 0,0536 mmol) e Intermedio A6 (24,8 mg, 0,0824 mmol) en MeCN (0,5 mL) se añadió DIPEA (60 mL, 0,34). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (32,3 mg, 0,0850 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 75 min y se añadió una porción adicional de Intermedio A6 (9 mg, 0,03 mmol). Después de 75 minutos adicionales, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió en 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (15% a 55% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 23 como un sólido amorfo blanco (37,1 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,64 min. LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calc. para C40H56FN6O9S: 815,4; encontrado: 815,6. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 9,63 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,56 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,56 - 4,34 (m, 5H), 4,13 (dd, J = 11,8, 4,2 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,82 -3,75 (m, 1H), 2,98 -2,70 (m, 4H), 2,07 - 2,00 (m, 1H), 2,00 - 1,93 (m, 1H), 1,88 - 1,44 (m, 12H), 1,32-1,26 (m, 1H), 1,17 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,12 (d, J = 10,6 Hz, 9H), 1,07 - 0,83 (m, 4H)), 0,81 - 0,65 (m, 2H), 0,52 - 0,44 (m, 1H).
[0429] Ejemplo 24. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(2,2-difluoroetilo)ciclopropilo]-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetra-decahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0430] Paso 1. Preparación del Ejemplo 24: A una suspensión de ácido 18-7 (30,2 mg, 0,0531 mmol) e Intermedio A7 (25,9 mg, 0,0850 mmol) en MeCN (0,5 mL) se añadió DIPEA (60 mL, 0,34). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (32 mg, 0,084 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 75 min y se añadió una porción adicional de Intermedio A7 (3,0 mg, 0,0098 mmol). Después de 30 minutos adicionales, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió en 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (15% a 55% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 24 en forma de un sólido amorfo blanco (35,5 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,62 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H53F2N6O9S: 819,4; encontrado: 819,2. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 9,99 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,69 (s, 1H), 5,99 - 5,64 (m, 1H), 5,56 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,47 - 4,39 (m, 3H), 4,14 - 4,08 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,78 -3,72 (m, 1H), 2,96 - 2,67 (m, 4H), 2,29-2,16 (m, 2H), 1,83-1,24 (m, 12H), 1,15 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,05 - 0,82 (m, 4H), 0,74 - 0,63 (m, 1H), 0,53 - 0,42 (m, 1H).
[0431] Ejemplo 25, Preparación de (1aR, 5S, 8 S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-2-(2,2-difluoroetilo)-1- { [(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21, 22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0432] Paso 1. Preparación del Ejemplo 25: A una suspensión de ácido 18-7 (30,3 mg, 0,0532 mmol) e Intermedio A8 (28,3 mg, 0,0887 mmol) en MeCN (0,5 mL) se añadió DIPEA (60 mL, 0,34). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (32,4 mg, 0,0852 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 h y se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió en 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (15% a 55% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 25 en forma de un sólido blanco amorfo (33,9 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,66 min. LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calc. para C46H55F2N6O9S: 833,4; encontrado: 833,4. 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 9,62 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,18 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,04 - 5,66 (m, 1H), 5,54 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,47 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,50 - 4,38 (m, 3H), 4,11 (dd, J = 11,8, 4,2 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,82 -3,71 (m, 1H), 2,98 - 2,68 (m, 4H), 2,27 - 2,11 (m, 2H), 1,96 - 1,41 (m, 12H), 1,32 (dd, J = 9,6, 5,4 Hz, 1H), 1,15 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,10 (s, 9H), 1,05 - 0,64 (m, 6H)), 0,51-0,42 (m, 1H).
[0433] Ejemplo 26. Preparación de (1R, 4S, 4aR, 8S, 11S, 12S, 13R, 25aR)-8-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-17-metoxi-12-metilo-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-1,4: 10,13-dimetanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecina-11-carboxamida.
[0434] Paso 1. Preparación de 26-2: A una solución de 26-1 (311 mg, 0,710 mmol; preparada de manera similar a 18-1 del Ejemplo 18, sustituyendo al Intermedio B2 por el Intermedio B1 en la etapa 1) en dioxano (1,8 ml) se añadió HCl 4 M en dioxano (1,8 ml, 7,2 mmol). La reacción se agitó durante 15,5 horas a temperatura ambiente y luego se concentró a presión reducida para dar 26-2 como un sólido amorfo blanco que se usó sin más purificación en la siguiente etapa. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C16H19ClN3O4: 352,1; encontrado: 352,2.
[0435] Pasos 2 y 3. Preparación de la mezcla diastereomérica 26-3 y 26-4: Se disolvió clorhidrato de amina 26-2 (0,710 mmol) junto con una mezcla 1:1 de la mezcla intermedia D9 y D10 (266 mg, 0,788 mmol) y DIPEA (600 ml, 3,4 mmol) en DMF (4,5 ml). Se añadió HATU (360 mg, 0,95 mmol) en una porción. La reacción se agitó durante 1, 75 h a temperatura ambiente y se diluyó con NaHCO3 acuoso saturado (20 ml), agua (10 ml) y EtOAc (30 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó dos veces con una mezcla de agua (30 ml) y salmuera (5 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró hasta obtener un residuo bruto que se purificó por cromatografía en gel de sílice (10% a 30% de EtOAc en hexanos) para proporcionar un residuo incoloro (380 mg; LCMS-ESI+ (m/z) : [M+H]+ calculado para C35H4sClN4O7: 671,3; encontrado: 671,6). Una mezcla heterogénea agitada de este residuo, PdCte(dppfy CH2Cl2 (35 mg, 0,043 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (156 mg, 1,16 mmol) en EtOH (7 ml) se roció con argón durante varios minutos. Se añadió trietilamina (170 ml, 1,2 mmol) y la mezcla se calentó a 70°C durante 55 min. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (40 ml) y se lavó con agua (30 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar un residuo que se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (15% a 30% de EtOAc en hexanos) para proporcionar la mezcla diastereomérica 26-3 y 26-4 como un residuo amarillo (277 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H51N4O7: 663,4; encontrado: 663,3.
[0436] Paso 4. Preparación de 26-5: Se disolvieron la mezcla diastereomérica 26-3 y 26-4 (277 mg, 0,419 mmol) en DCE (140 ml) y la solución se roció con Ar durante 15 min. Se añadió catalizador Zhan 1B (37 mg, 0,050 mmol, Strem) y la solución resultante se agitó a 85°C bajo Ar durante 1,5 h. La mezcla de reacción se concentró y se purificó luego por cromatografía en gel de sílice (20% a 50% de EtOAc en hexanos) para proporcionar 26-5 como un residuo amorfo (105 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H47N4O7: 635,3; encontrado: 635,3.
[0437] Pasos 5 y 6, Preparación de 26-6: A una solución de 26-5 (105 mg, 0,165 mmol) en 1:1 EtOAc: EtOH (4 ml) se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 43 mg). El recipiente de reacción se purgó dos veces con H2 y se agitó a temperatura ambiente bajo 1 atm de H2 durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para proporcionar un residuo bruto (106 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. Para C35H49N4O7 : 637,4; encontrado: 637,3). Este residuo se disolvió luego en THF (0,8 ml). Se añadieron MeOH (0,4 ml), agua (0,4 ml) y L iO H ^O (67 mg, 1,6 mmol) y la mezcla se agitó a 45°C durante 14,5 h. La reacción se detuvo gota a gota con HCl acuoso 1 N (1,3 ml) y se diluyó con CH2Cl2 (30 ml) y HCl acuoso 1 N (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar 26-6 como un residuo (93,8 mg) que se usó directamente en el Paso 7. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. Para C34H47N4O7 : 623,3; encontrado: 623,3.
[0438] Paso 7. Preparación del Ejemplo 26: A una suspensión de ácido 26-6 (93,8 mg, 0,151 mmol) e Intermedio A9 (58 mg, 0,20 mmol) en MeCN se añadió DIPEA (120 ml, 0,69 mmol). A la solución resultante se le agregó HATU (73,5 mg, 0,193 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 100 minutos y se añadió una porción adicional de Intermedio A9 (6 mg, 0,02 mmol). Después de 30 minutos adicionales, se agregaron el Intermedio A9 adicional (9 mg, 0,03 mmol), HATU (9 mg, 0,02 mmol) y DIPEA (10 ml, 0,06 mmol). La reacción se agitó durante 50 minutos adicionales y se diluyó con EtOAc (25 ml), HCl acuoso 0,2 M (20 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (25 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. La purificación por cromatografía en gel de sílice (25% a 40% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 26 en forma de un sólido blanco amorfo (113 mg). Tiempo de HPLC analítico: 9,19 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,2. 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 10,02 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,21 - 7,15 (m, 2H), 7,07 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,13 - 5,79 (m, 1H), 5,63 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,50 - 5,45 (m, 1H), 4,51 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,18-4,12 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,02 - 2,77 (m, 3H), 2,66 - 2,57 (m, 1H), 2,18 - 0,90 (m, 36H).
[0439] Ejemplo 27. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-16-metoxi-11-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0440] Paso 1. Preparación de 27-1: clorhidrato de amina 26-2 (217 mg, 0,504 mmol), se trató con BEP (207 mg, 0,756 mmol), producto intermedio D5 (283 mg, 0,909 mmol), EtOAc (9 mL), NMP (1 mL) y DIPEA (0,44 mL, 2,5 mmol), luego se calienta a 50°C. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, luego se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (9% a 40% de EtOAc/Hex) para proporcionar la amida 27-1(235 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52ClN4O7: 687,35; encontrado: 688,13.
[0441] Paso 2. Preparación de 27-2: la amida 27-1(235 mg, 0,342 mmol) se trató con viniltrifluoroborato de potasio (69 mg, 0,513 mmol), Pd(dppf)Cb^DCM (28 mg, 0,0342 mmol), EtOH (3,4 ml) y TEA (0,072 ml, 0,513 mmol), luego se calienta a reflujo. Después de 50 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con H2O y salmuera. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (9% a 40% de EtOAc/Hex) para proporcionar vinil quinoxalina 27-2 (219 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H55N4O7: 679,41; encontrado: 679,49.
[0442] Pasos 3 y 4, Preparación de 27-3: vinil quinoxalina 27-2 (219 mg, 0,323 mmol) se suspendió en DCE (65 ml) y se trató con catalizador Zhan 1B (41 mg, 0,065 mmol, Strem). La suspensión se desoxigenó con N2 burbujeante durante 17 minutos, luego se calentó a reflujo durante 90 minutos. La mezcla de reacción se filtró luego sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (15% a 50% de AcOEt/Hex) para proporcionar el macrociclo deseado (165 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H51N4O7: 651,38; : 651,40). El producto macrocíclico de la etapa 3 se disolvió en EtOH (10 ml) y EtOAc (2 ml) y se trató con 10% en peso de Pd/C (95 mg). Se burbujeó hidrógeno de un globo a través de la suspensión durante 1 min y la mezcla se agitó en H2 (1 atm) durante 1,5 h adicionales. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida para proporcionar el macrociclo deseado 27-3 que se llevó a cabo sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H53N4O7 : 653,39; encontrado: 653,32.
[0443] Paso 5. Preparación de 27-4: el producto bruto de la etapa 4 se disolvió en DCM y se trató con TMSOTf (0,23 ml, 1,3 mmol). Después de agitarse a temperatura ambiente durante 1 h 15 min, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se volvió a disolver en DCM y se añadió con una pipeta a un embudo de separación que contenía NaOH acuoso 1M. La mezcla se agitó durante 1 min, luego se acidificó a pH 1 ~ 2 con HCl acuoso al 10%. La capa acuosa se extrajo tres veces con DCM y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar ácido carboxílico 27-4 (119 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H45N4O7: 597,33; encontrado: 597,40.
[0444] Paso 6. Preparación del Ejemplo 27: Ácido carboxílico 27-4 (105 mg, 0,177 mmol) e Intermedio A10 (65 mg, 0,212 mmol) se trataron con TBTU (68 mg, 0,212 mmol), DMAP (26 mg, 0,212 mmol), DCM (1,8 ml) y DIPEA (0,31
ml, 1,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se añadió más amina A10 (40 mg, 0,131 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo. Después de 1,25 h adicionales, la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó por HPLC para proporcionar el Ejemplo 27 (80 mg) con una pureza de aproximadamente el 90% en forma de una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 9,06 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,39; encontrado: 847,69. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,23 (s, 1H), 7,87 - 7,72 (m, 1H), 7,31 - 7,14 (m, 2H), 5,84 (td, J = 55,6, 6,5 Hz, 1H), 5,58 (d, J = 22,6 Hz, 1H), 4,94 - 4,81 (m, 1H), 4,37 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 4,29 - 4,10 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,01 (ddd), J = 15,1, 9,9, 5,3 Hz, 1H), 2,84 (p, J = 7,4 Hz, 1H), 2,75 (ddd, J = 13,3, 10,2, 6,0 Hz, 1H), 2,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 1,97 - 1,74 (m, 4H), 1,73 - 1,55 (m, 6H), 1,53 (s, 3H), 1,48 - 1,21 (m, 8H), 1,19 - 1,02 (m, 14H), 0,99 - 0,80 (m, 2H).
[0445] Ejemplo 28. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-16-metoxi-11-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0446] Paso 1, El ácido carboxílico 27-4 (20 mg, 0,034 mmol) y el Intermedio A9 (35 mg, 0,12 mmol) se trataron con TBTU (22 mg, 0,067 mmol), DMAP (8 mg, 0,07 mmol), DCM. (1 mL) y DIPEA (0,117 mL, 0,674 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 h, luego se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó por HPLC para proporcionar el Ejemplo 28 (22 mg) con una pureza de aproximadamente el 90% en forma de una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,90 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55F2N6O9S: 833,37; encontrado: 833,61. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,23 (s, 1H), 7,79 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,34 - 7,10 (m, 2H), 5,86 (td, J = 55,8, 6,5 Hz, 1H), 5,61 (s, 1H), 4,54 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,28 - 4,07 (m, 2H), 3,95 (d, J = 17,8 Hz, 3H), 3,08 - 2,91 (m, 2H), 2,90 - 2,79 (m, 1H), 2,73 (ddd, J = 13,3, 10,3, 6,0 Hz, 1H), 2,04 (s, 2H), 1,97 -1,74 (m, 4H), 1,64 (ddd, J = 18,7, 11,6, 4,0 Hz, 4H), 1,49 - 1,19 (m, 11H), 1,18 - 0,94 (m, 14H), 0,94 - 0,80 (m, 1H).
[0447] Ejemplo 29. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-3,6-dioxo-9-propilo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0448] Paso 1. Preparación de 29-1: A una solución de Intermedio B5 (188 mg, 0,57 mmol) e Intermedio E1 (233 mg, 0,86 mmol) en MeCN (2,85 mL) se añadió carbonato de cesio (280 mg, 9,18). mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 19 h, la mezcla de reacción se filtró luego a través de una capa de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar quinoxalina 29-1 sustituida (240 mg) como un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calculado para C26^7ClN3O6: 522,2; encontrado: 522,3.
[0449] Paso 2. Preparación de 29-2: A una solución 29-1(240 mg, 0,46 mmol) en dioxano (1 ml) se le añadió ácido clorhídrico 4 M en dioxano (4 ml, 1 mmol) y la reacción se agitó a ta. Después de 15 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío para proporcionar clorhidrato de amina 29-2 (200 mg) en forma de un sólido blanquecino, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C21H29ClN3O4: 422,2; encontrado: 422,2.
[0450] Paso 3. Preparación de 29-3: a una solución de 29-2 (200 mg, 0,46 mmol) e Intermedio D1 (170 mg, 0,51 mmol) en MeCN (2,3 mL) se agregó HATU (192 mg, 0,51). mmol) seguido de DIPEA (400 ml, 2,30 mmol) a temperatura ambiente y atmósfera de argón. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar la amida 29-3 (67 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52ClN4O7: 687,3; encontrado: 687,5,
[0451] Paso 4. Preparación de 29-4: a una solución de 29-3 (67 mg, 98 mmol), TEA (20 ml, 150 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (19,7 mg, 150 mmol) en EtOH (500 ml). Se añadió PdCb(dppf)(8 mg, 9,8 mmol). La mezcla de reacción se desoxigenó con argón durante 10 minutos y se calentó a 78°C. Después de 40 minutos, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar vinil quinoxalina 29-4 (40,2 mg) como un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H55N4O7: 679,4; encontrado: 679,6.
[0452] Paso 5. Preparación de 29-5: A una solución de 29-4 (40 mg, 59 mmol) en DCE (11,8 mL) se agregó catalizador Zhan 1B (4 mg, 6 mmol, Strem) y la mezcla de reacción. Se desgasificó durante 10 minutos con argón. La mezcla de reacción se calentó luego a 100°C. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el macrociclo 29-5 (31 mg) en forma de un aceite amarillo
claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H51N4O7: 651,4; encontrado: 651,5,
[0453] Paso 6. Preparación de 29-6: A una solución de macrociclo 29-5 (31 mg, 47 pmol) en etanol (500 pl) se añadió Pd/C (10% en peso, 5 mg, 5 pmol) a bajo una atmósfera de argón. El recipiente de reacción se evacuó y se volvió a llenar con 1 atm de gas de hidrógeno (3 X) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente. Después de 1 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 X 5 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el macrociclo 29-6 (31 mg), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C36H53N4O7 : 653,4; encontrado: 653,5,
[0454] Paso 7. Preparación de 29-7: A una solución de 29-6 (31 mg, 47 pmol) en DCM (0,5 ml) se le añadió TMSOTf (44 pl, 0,25 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 25 minutos, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se secó azeotrópicamente en tolueno (2 X 2 ml) para producir ácido carboxílico 29 7 (35 mg) como un aceite amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESl+ (m/z): [M+H]+ calculado para C32H45N4O7 : 597,3; encontrado: 597,4.
[0455] Paso 8. Preparación del Ejemplo 29: a una solución de 29-7 (35 mg, 49 pmol) e Intermedio A10 (22 mg, 74 pmol) en MeCN (245 pL) se añadió HATU (28 mg, 74 pmol) seguido de DIPEA (43 pl, 250 pmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 3 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se purificó por HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110A, 5 - 100% MeCN/H2O, 0,1% de modificador de ácido trifluoroacético) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 29 (22,3 mg) como una sal blanca en polvo TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H56F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,5, 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 69,83 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,97 (td, Jh-f = 55 Hz, J = 7,2 Hz, 1H), 5,84 (br s, 1H), 5,41 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,66 - 4,34 (m, 3H), 4,13 (app d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,08 (s, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,78 -3,71 (m, 1H), 3,09 - 2,65 (m, 5H), 2,14 - 2,04 (m, 1H), 1,87 - 1,34 (m, 8H), 1,52 (s, 3H), 1,12 (s, 9H), 1,08 - 0,84 (m, 10H), 0,76 - 0,62 (m, 1H), 0,50 (dd, J = 12,6, 6,6 Hz, 1H).
[0456] Ejemplo 30 Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-9-(2-metilpropilo)-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0457] Paso 1. Preparación de 30-1: una mezcla de Intermedio B6 (139 mg, 0,405 mmol), Intermedio E1 (170 mg, 0,625 mmol) y carbonato de cesio (203 mg, 0,623 mmol) en 3,3 mL de acetonitrilo. Se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante la noche. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite, se lavó con acetato de etilo y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos) para dar 30-1 (170 mg) como una película transparente. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C27H39ClN3O6: 536,24; encontrado: 536,31.
[0458] Paso 2. Preparación de 30-2: se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano (4,0 M, 0,16 ml, 0,64 mmol) a una solución de 30-1 (168 mg, 0,314 mmol) en 3,3 ml de dioxano a temperatura ambiente. Después de treinta minutos, se agregaron 4 equivalentes adicionales de HCl y la mezcla se agitó durante la noche. Luego se agregaron 25 equivalentes adicionales de HCl. Después de treinta minutos, se agregaron 19 equivalentes adicionales de HCl. Después de una hora, se agregaron 29 equivalentes adicionales de HCl. Después de treinta minutos, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para producir 30-2 (148 mg, 85% de pureza), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C22H31ClN3O4: 436,19; encontrado: 436,25,
[0459] Paso 3. Preparación de 30-3: HATU (144 mg, 0,379 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,28 ml, 1,58 mmol) se agregaron a una mezcla de 30-2 (148 mg, 0,315 mmol) y el producto intermedio D1. (99 mg, 0,348 mmol) en 3,5 mL de DMF bajo argón. Después de agitarse durante la noche, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) para producir 30-3 (136 mg) como un sólido blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H54ClN4O7: 701,36; encontrado: 701,47.
[0460] Paso 4. Preparación de 30-4: Pd (dppf)2Cl2^CH2Cl2 (35 mg, 0,043 mmol) se añadió a una mezcla
desgasificada de 30-3 (135 mg, 0,193 mmol), viniltrifluoroborato de potasio (41 mg, 0,306 mmol) y trietilamina (0,040 mL, 0,289 mmol) en 2,1 mL de etanol a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 78°C bajo argón durante 45 minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (tres veces). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 30-4 (133 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H57N4O7 : 693,41; encontrado: 693,48.
[0461] Paso 5: Preparación de 30-5: se desoxigenó una mezcla de 30-4 (133 mg, 0,192 mmol) y catalizador Zhan 1B (16 mg, 0,022 mmol, Strem) en 38 ml de DCE bajo argón durante 25 minutos. La mezcla se calentó luego a 95°C durante 50 minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) para dar 30-5 (70 mg) como una película amarilla clara. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H53N4O7 : 665,38; encontrado: 665,50.
[0462] Paso 6. Preparación de 30-6: se añadió paladio sobre carbono (10% en peso de Pd, 22 mg, 0,0208 mmol) a una solución de 30-5 (69 mg, 0,104 mmol) en 3 ml de etanol. La mezcla se agitó luego bajo una atmósfera de hidrógeno durante 1 hora y luego se filtró sobre Celite, lavando con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida para producir 30-6 (64 mg) como una película sólida de color amarillo-marrón claro, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H55N4O7 : 667,40; encontrado: 667,43.
[0463] Paso 7. Preparación de 30-7: se añadió gota a gota TMSOTf (0,050 ml, 0,274 mmol) a una solución de 30-6 (30 mg, 0,045 mmol) en 1,2 ml de diclorometano bajo argón a temperatura ambiente. Después de 45 minutos, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. La película resultante se recogió en 5 ml de tolueno y se concentró a presión reducida. Este proceso se repitió una segunda vez para producir 30-7 (27 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C33H47N4O7 : 611,34; encontrado: 611,41.
[0464] Paso 8, Preparación del Ejemplo 30: HATU (28 mg, 0,074 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,050 mL, 0,281 mmol) se agregaron a una mezcla de 30-7 (27 mg, 0,045 mmol) e Intermedio A10 (22 mg, 0,072 mmol) en 2,2 mL de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante la noche, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) y HPLC prep de fase inversa (15-100% de acetonitrilo en agua, con un 0,1% de tampón de ácido trifluoroacético) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo 30 (18 mg) como un sólido amarillo claro, después de la liofilización. Tiempo de HPLC analítico: 8,96 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 861,40; encontrado: 861,30. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 69,17 (s, 1H), 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 8,8,2,8Hz, 1H), 7,14 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,81 (td, Jh-f = 56Hz, J = 7,6Hz, 1H); 5,77 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,39 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 4,16 (dd, J = 11,8, 4 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,79-3,71 (m, 1H), 2,98-2,90 (m, 1H), 2,84 (dd, J = 12,6, 4,8 Hz, 1H), 2,79-2,72 (m, 1H), 2,06-1,91 (m, 3H), 1,77 (m, 3H), 1,64 1,44 (m, 6H), 1,51 (s, 3H), 1,44-1,32 (m, 3H), 1,15-1,07 (m, 1H), 1,10 (s, 9H), 1,06-0,96 (m, 3H), 1,04-1,01 (m, 6H), 0,93-0,89 (m, 2H), 0,79-0,68 (m, 1H), 0,52-0,47 (m, 1H).
[0465] Ejemplo 31. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-9-ciclopropilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0466] Paso 1. Preparación de 31-1: se trató una muestra no purificada del Intermedio B3 con el Intermedio E1 (217 mg, 0,797 mmol), MeCN (5,7 ml) y Cs2CO3 (371 mg, 1,14 mmol). Después de agitarse a temperatura ambiente durante 17 h, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (20% a 40% de EtOAc/Hex) para proporcionar quinoxalina 31-1 (143 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M-Boc+2H]+ calculado para C18H21ClN3O4: 378,12; encontrado: 378,59.
[0467] Paso 2. Preparación de 31-2: se disolvió quinoxalina 31-1 (143 mg, 0,299 mmol) en DCM (10 ml) y se trató con HCl (4,0 M en dioxano, 5 ml, 20,0 mmol). Después de agitarse durante 2 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró y el crudo 31-2 se continuó sin purificación adicional.
[0468] Paso 3. Preparación de 31-3: el clorhidrato de amina bruto 31-2 se trató con BEP (115 mg, 0,419 mmol), Intermedio D1 (120 mg, 0,423 mmol), EtOAc (9 ml), NMP (1 mL) y DIPEA (0,37 mL, 2,1 mmol), luego se calienta a 50°C. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con Et2O. La solución orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, luego se secó sobre MgSO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (15% a 30% de EtOAc/Hex) para proporcionar la amida 31-3 (166 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H44ClN4Oy: 643,29; encontrado: 643,48.
[0469] Paso 4. Preparación de 31-4: la amida 31-3 (166 mg, 0,258 mmol) se trató con viniltrifluoroborato de potasio (52 mg, 0,387 mmol), Pd(dppf)Cb^DCM (21 mg, 0,0258 mmol), EtOH (2,6 ml) y TEA (0,054 ml), luego se calienta a reflujo. Después de 50 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con H2O y salmuera. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó
mediante cromatografía en gel de sílice (15% a 40% de EtOAc/Hex) para proporcionar vinil quinoxalina 31-4 (145 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H47N4O7 : 635,34; encontrado: 635,58.
[0470] Pasos 5 y 6, Preparación de 31-5: quinoxalina de vinilo31-4 (145 mg, 0,228 mmol) se suspendió en DCE (46 ml) y se trató con catalizador Zhan 1B (33 mg, 0,0456 mmol, Strem). La suspensión se desoxigenó con N2 burbujeante durante 22 minutos, luego se calentó a reflujo durante 50 minutos. La mezcla de reacción se filtró luego sobre Celite y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (25% a 35% de AcOEt/Hex) para proporcionar el macrociclo deseado (54 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. Para C33H43N4O7 : 607,31; encontrado : 607,67). El producto macrocíclico de la etapa 5 se disolvió en EtOH (10 ml) y se trató con Pd/C al 10% (45 mg). Se burbujeó hidrógeno de un globo a través de la suspensión durante 1 min y se continuó la hidrogenación (1 atm) durante 1,5 h adicionales. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a presión reducida para proporcionar el macrociclo 31-5 deseado que se llevó a cabo sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C33H45N4O7 : 609,33; encontrado: 609,95.
[0471] Paso 7. Preparación de 31-6: el producto bruto 31-5 se disolvió en THF y se trató con LiOH (1,0 M en H2O, 5 ml, 5 mmol). Después de agitarse a temperatura ambiente durante 3 d, la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 20 h. La mezcla se vertió luego en H2O y se acidificó a pH ~ 1-2 con HCl al 10%. La capa acuosa se extrajo tres veces con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (80% a 100% de EtOAc/Hex) para proporcionar ácido carboxílico 31-6 (24 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H43N4O7 : 595,31; encontrado: 595,12.
[0472] Paso 8. Preparación del Ejemplo 31: el ácido carboxílico 31-6 (24 mg, 0,040 mmol) y el Intermedio A10 (25 mg, 0,081 mmol) se trataron con TBTU (23 mg, 0,081 mmol), DMAP (10 mg, 0,081 mmol), DCM (2 ml) y DIPEA (0,070 ml, 0,40 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 h, luego se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó por HPLC para proporcionar el Ejemplo 31 (13 mg, 34%) con una pureza de aproximadamente el 90% en forma de una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,92 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F2N6O9S: 845,37; encontrado: 845,67. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 69,13 (s, 1H), 7,79 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,05 - 5,65 (m, 2H), 4,55 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 4,27 (dd, J = 12,0, 3,7 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,78 (dd, J = 6,8, 2,8 Hz, 1H), 2,99 -2,86 (m, 1H), 2,80 (td, J = 13,2, 4,1 Hz, 1H), 1,98 (d, J = 28,8 Hz, 2H), 1,92 - 1,67 (m, 4H), 1,65 - 1,41 (m, 10H), 1,33 (d, J = 27,7 Hz, 3H), 1,20 - 1,06 (m, 9H), 1,04 - 0,84 (m, 6H), 0,82 - 0,62 (m, 3H), 0,61 - 0,41 (m, 2H), 0,06 (dd, J = 9,2, 4,9 Hz, 1H).
[0473] Ejemplo 32, Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-9-Bencilo-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0474] Paso 1. Preparación de 32-1: A una solución de Intermedio B7 (390 mg, 1,00 mmol) e Intermedio E1 (272 mg, 1,00 mmol) en MeCN (5 mL) se le añadió carbonato de cesio (390 mg, 1,00 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 24 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml). La mezcla resultante se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (50 ml) y salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar quinoxalina 32-1 (550 mg) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C3üH37CIN3O6: 570,2; encontrado: 570,2.
[0475] Paso 2. Preparación de 32-2: A una solución de 32-1 (549 mg, 0,96 mmol) en dioxano (2 mL) se le añadió ácido clorhídrico 4 M en dioxano (2 mL, 1 mmol) y la reacción Se agitó a temperatura ambiente. Después de 24 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío para proporcionar clorhidrato de amina 32-2 (461 mg) en forma de un sólido blanquecino, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C25H29CIN3O4: 470,2; encontrado: 470,2.
[0476] Paso 3. Preparación de 32-3: a una solución de 32-2 (461 mg, 0,96 mmol) e Intermedio D1 (369 mg, 1,10 mmol) en MeCN (5 mL) se añadió HATU (418 mg, 1,10 mmol) seguido de DIPEA (869 mL, 5,00 mmol) a temperatura ambiente y atmósfera de argón. Después de 24 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar 32-3 (202,6 mg) como un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H52CIN4O7 : 735,3; encontrado: 735,4.
[0477] Paso 4. Preparación de 32-4: A una solución de 32-3 (202 mg, 276 mmol), TEA (56 ml, 414 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (56 mg, 414 mmol) en EtOH (2,76 ml). Se añadió PdCh(dppf)(22,5 mg, 27,6 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó con argón durante 10 minutos y se calentó a 78°C. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo bruto se purificó mediante
cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 32-4 (163 mg) en forma de un aceite amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C42H55N4O7 : 727,4; encontrado: 727,5,
[0478] Paso 5. Preparación de 32-5: a una solución de 32-4 (163 mg, 220 mmol) en DCE (44 ml) se agregó el catalizador Zhan 1B (16 mg, 22 mmol, Strem) y la mezcla de reacción Se desgasificó durante 10 minutos con argón. La mezcla de reacción se calentó luego a 100°C. Después de 45 minutos, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 32-5 (125 mg) en forma de un aceite amarillo claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C40H51N4O7 : 699,4; encontrado: 699,4.
[0479] Paso 6. Preparación de 32-6: A una solución de macrociclo 32-5 (124 mg, 178 mmol) en etanol (890 ml) se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 19 mg, 18 mmol) en ta bajo una atmósfera de argón. El recipiente de reacción se evacuó y se volvió a llenar con hidrógeno gas (3 X) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente bajo 1 atm H2. Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (5 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 X 5 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar 32-6 (139 mg), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C40H53N4O7 : 701,4; encontrado: 701,5,
[0480] Pasos 7 y 8. Preparación del Ejemplo 32: A una solución de 32-6 (124 mg, 178 mmol) en DCM (3 ml) se añadió TFA (2 ml) a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. Después de 3 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se secó azeotrópicamente en tolueno (2 X 2 ml) para proporcionar el ácido carboxílico deseado en forma de un aceite amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. (126 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H45N4O7 : 645,3; encontrado: 645,4). A una solución de este ácido carboxílico (120 mg, 178 mmol) e Intermedio A10 (119 mg, 392 mmol) en MeCN (1 ml) se añadió HATU (151 mg, 392 mmol) seguido de DIPEA (155 ml, 890 mmol) en ta bajo una atmósfera de argón. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se repurificaron mediante HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110Á, 5-100% MeCN4-hO, 0,1% de modificador de ácido trifluoroacético) y se liofilizaron para proporcionar la sal de TFA del Ejemplo 32 (23 mg). como un polvo blanco. Tiempo de HPLC analítico: 8,81 min. Lc Ms -ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C45H57F2N6O9S: 895,4; encontrado: 895,6. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 69,24 (s, 1H), 7,73 (d, J = 9,1Hz, 1H), 7,47-7,27 (m, 4H), 7,21-7,12 (m, 1H), 6,65 (d, J = 2,9Hz, 1H), 5,83 (td, J h-f = 55Hz, J = 7,2Hz, 1H), 5,77 (br s, 1H), 4,63 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 4,50 - 4,28 (m, 3H), 3,93 (s, 2H), 3,79 -3,71 (m, 1H), 3,11 - 2,99 (m, 1H), 2,97 - 2,85 (m, 1H), 2,82 - 2,61 (m, 3H), 1,92 (br s, 2H), 1,82 - 1,70 (m, 2H), 1,63 - 1,44 (m, 4H), 1,52 (s, 3H), 1,15 (s, 9H), 1,04 (br s, 2H), 1,02 - 0,96 (m, 2H), 0,95 - 0,88 (m, 4H), 0,78 - 0,66 (m, 1H), 0,56 - 0,46 (m, 1H).
[0481] Ejemplo 33. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1S, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-15-metoxi-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopopa[4',5']ciclopenta[1',2':18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0482] Pasos 1 y 2, Preparación de la mezcla diastereomérica 33-1 y 33-2: Se disolvió quinoxalina 18-2 (220 mg, 0,56 mmol) junto con diastereómero 1:1 Mezcla intermedia D12 y D13 (208 mg, 0,643 mmol)) en MeCN (5 ml). Se añadieron DIPEA (280 ml, 1,6 mmol) y HATU (360 mg, 0,95 mmol) y la reacción se agitó durante 1,25 h a temperatura ambiente. La reacción se diluyó luego con EtOAc (30 ml), NaHCO3 acuoso saturado (15 ml), H2O (10 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró hasta un residuo bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió en gel de sílice (5 g). La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 30% de EtOAc en hexanos) proporcionó una espuma blanca (352 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H52ClN4O7: 699,4; encontrado: 699,1). Una mezcla heterogénea agitada de este residuo, PdCh(dppf)^CH2Ch (30,7 mg, 0,0376 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (135 mg, 1,01 mmol) en EtOH (5 ml) se roció con argón durante varios minutos. Se añadió trietilamina (160 ml, 1,1 mmol) y la mezcla se calentó a 75°C durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (30 ml), H2O (15 ml) y salmuera (15 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar un residuo bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió en gel de sílice (3 g). La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 40% de EtOAc en hexanos) produjo una mezcla inseparable de 33-1 y 33-2 como un residuo amarillo (258 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C39H55N4O7 : 691,4; encontrado: 691,7.
[0483] Paso 3: Preparación de 33-3: se disolvió la mezcla diastereomérica 33-1 y 33-2 (258 mg, 0,373 mmol) en DCE (125 ml) y la solución se roció con Ar durante 10 min. Se añadió catalizador de Zhan 1B (41 mg, 0,056 mmol, Strem) como una solución en DCE (3,3 ml) y la solución resultante se agitó a 85°C bajo Ar durante 105 min. La mezcla de reacción se concentró luego en 5 g de gel de sílice y se purificó por cromatografía en gel de sílice (0% a 25% de EtOAc en hexanos) para proporcionar el macrociclo 33-3 como un residuo amorfo (81,9 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H51N4O7 : 663,4; encontrado: 663,3.
[0484] Pasos 4 y 5: Preparación de 33-4: A una solución de 33-3 (81,9 mg, 0,124 mmol) en 1:1 EtOAc: EtOH (4 ml) se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 19 mg). El recipiente de reacción se purgó dos veces con H2 y se agitó a temperatura ambiente bajo 1 atm de H2 durante 2,5 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para proporcionar un residuo crudo. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 (1,2 ml) y se añadió TMSOTf
(90 ml, 0,50 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4,5 h. La reacción se concentró luego a vacío y se disolvió en CH2G 2 (5 ml). Se añadió NaOH acuoso 0,2 M (5 ml) y la mezcla bifásica se agitó a temperatura ambiente durante 5 min. La mezcla se acidificó luego con HCl acuoso 1 M (20 ml) y se diluyó con CH2G 2 (20 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con CH2G 2 (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4 , se filtró y se concentró para proporcionar 33-4 en forma de un residuo bruto (76,1 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C33H45N4O7 : 609,3; encontrado: 608,9.
[0485] Paso 6: Preparación del Ejemplo 33: A una suspensión de ácido 33-4 (43 mg, 0,072 mmol) e Intermedio A9
(40,9 mg, 0,14 mmol) en MeCN (800 pl) se añadió DIPEA (100 pl, 0,57 mmol). Se añadió HATU (37 mg, 0,097 mmol) a la solución resultante y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. La reacción se diluyó luego con EtOAc (20 ml), HCl acuoso 0,2 M (10 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se disolvió en CH2G 2 y se concentró en 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (15% a 55% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 33 en forma de un sólido blanco amorfo (29,6 mg).
Tiempo de HPLC analítico: 9,07 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F2N6O9S: 845,4; encontrado: 845,2.
1H RMN (400 MHz, CDCb) 510,21 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,7
Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,21 - 5,76 (m, 1H), 5,65 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 7,5 Hz, 1H),
4,47 - 4,29 (m, 4H), 4,16 - 4,09 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 2,99 - 2,85 (m, 2H), 2,80 - 2,64 (m, 2H), 2,24 - 2,16 (m, 1H),
2,13 - 2,05 (m, 1H), 2,01 - 0,95 (m, 29H), 0,56 - 0,45 (m, 1H), 0,45 - 0,35 (m, 1H).
[0486] Ejemplo 34. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-{(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-etilciclopropilo}-9-etilo-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0487] El Ejemplo 34 se preparó de manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo al Intermedio A3 por el Intermedio
A10 en el Paso 7. El Ejemplo 34 se aisló (5,7 mg) con una pureza de aproximadamente el 95%. Tiempo de HPLC analítico: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H55F2N6O9S: 833,4; encontrado: 833,25, 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 10,027 (br s, 1H), 7,98 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 6,32 (br s, 1H), 5,92 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,42 - 4,33 (m, 3H), 4,08 (dd, J = 11,6, 4,0 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,65 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 2,51 (m, 2H), 2,02 (m, 1H), 1,86 - 1,40 (m, 11H) 1,34 - 1,14 (m, 7H),
1,09 (s, 9H), 1,10 - 0,82 (m, 6H), 0,72 (m, 1H), 0,48 (m, 1H).
[0488] Ejemplo 35, Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-2-(2,2-difluoroetilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1, 1 a,3,4,5,6,9,10,18, 19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0489] El Ejemplo 35 se preparó de manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo al Intermedio A8 por el Intermedio A10 en el Paso 7. El Ejemplo 35 se aisló (12,8 mg) con una pureza de aproximadamente el 90%. Tiempo de HPLC analítico: 8,78 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F4N6O9S: 883,4; encontrado: 883,2. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 59,69 (br s, 1H), 7,98 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,53 (br s, 1H), 5,91 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,84 (tt, Jh-f = 56 Hz, J = 3,6 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,43 (m, 2H), 4,34 (ap d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 11,6, 4,0 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,99 - 3,94 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 2,58 - 2,52 (m, 3H), 2,20 (m, 2H), 1,82 - 1,58 (m, 7H) 1,54 - 1,40 (m, 5H), 1,36 - 1,18 (m, 6H), 1,09 (s, 9H), 1,10 - 1,00 (m, 1H), 0,85 (m, 2H), 0,69 (m, 1H), 0,49 (m, 1H).
[0490] Ejemplo 36. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 21aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1a,3,4,5,6,9,10,17b,18,18a,19,20,21, 21a-tetradecahidro-1 H,8H-7,10-metanodiciclopopa[13,14:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0491] Paso 1. Preparación de 36-1: A una solución de yoduro de trimetilsulfoxonio (72 mg, 0,32 mmol) en DMSO/THF (1: 1, 2 mL) se le añadió hidruro de sodio (60%, 12 mg, 0,32 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió gota a gota el macrociclo 1-5 (103 mg, 0,16 mmol) en t Hf (3 ml). La mezcla se calentó a 65°C y se agitó durante 16 h. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con EtOAc/H2O, se extrajo con EtOAc, se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 0-25%/hexanos) para dar 36-1(27 mg) como un residuo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado
para C36H51N4O7: 651,38; encontrado: 651,52.
[0492] Paso 2. Preparación de 36-2: A una solución de 36-1(26 mg, 0,04 mmol) en DCM (1 ml) se añadió TMSOTf (0,036 ml, 0,2 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se pipeteó en agitación con 1 N NaOH (2 ml). Después de 10 minutos, la mezcla se diluyó con DCM y se acidificó a pH 3 con HCl acuoso 1N. Después de la extracción de la capa acuosa con DCM, los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 0-10%/MeOH) para dar 36-2 (24 mg) como un residuo que se usó sin más purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H43N4O7: 595,31; encontrado: 595,43.
[0493] Paso 3. Preparación del Ejemplo 36: A una solución de 36-2 (24 mg, 0,041 mmol), Intermedio A10 (16 mg, 0,053 mmol), TBTU (19 mg, 0,06 mmol) y DMAP (8 mg, 0,06 mmol) en DCM (2 ml) se añadió DIPEA (0,021 ml, 0,12 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Se agregaron intermedios adicionales A10 (16 mg, 0,053 mmol), TBTU (19 mg, 0,06 mmol), DMAP (8 mg, 0,06 mmol) y DIPEA (0,021 mL, 0,12 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La reacción se inactivó con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con una solución sat. NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró al vacío. El material bruto se purificó por HPLC de fase inversa (Gemini, 45-85% MeCN/H2O 0,1% TFA) y se liofilizó para dar el Ejemplo 36 (3 mg) como una sal TFA. Tiempo de HPLC analítico: 9,06 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F2N6O9S: 845,37; encontrado: 845,43. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 69,31 (s, 1H), 7,72 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,20 - 7,17 (m, 2H), 5,60 - 5,82 (m, 2H), 5,51 (s, 1H), 4,72 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,26 - 4,22 (dd, J = 11,6, 4 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,78 (m, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,27 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 1,68 (m, 3H), 1,59 (m, 2H), 1,54 - 1,15 (m, 11H), 1,09 (s, 9H), 0,95 - 0,86 (m, 8H), 0,47 (m, 1H).
[0494] Ejemplo 37. Preparación de (1R, 4S, 4aR, 8S, 11S, 12S, 13R, 25aR)-8-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-12-etilo-17-metoxi-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-1,4:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecina-11-carboxamida.
Paso 1. Preparación del Ejemplo 37: A una solución de 13-6 (76 mg, 0,12 mmol), Intermedio A10 (44 mg, 0,14 mmol), HAt U (55 mg, 0,14 mmol) y DMAP (21 mg, 0,18 mmol) se añadió en DMF (2 ml) DIPEA (0,11 ml, 0,6 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Se añadió el Intermedio adicional A10 (44 mg, 0,14 mmol), HATU (55 mg, 0,14 mmol), DMAP (21 mg, 0,18 mmol), seguido de DIPEA (0,11 ml, 0,6 mmol) y la reacción se agitó a 40°C. Durante 50 h. La reacción se inactivó con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con una solución sat. NaHCO3 acuoso, salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró al vacío. El material bruto se purificó por HPLC de fase inversa (Gemini, 45-85% MeCN4-hO 0,1% TFA) y se liofilizó para dar el Ejemplo 37 (30 mg) en forma de una sal TFA. Tiempo de HPLC analítico: 9,44 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C44H61F2N6O9S: 887,42; encontrado: 887,50. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 69,24 (s, 1H), 7,76 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,12 (m, 1H), 5,95 - 5,66 (m, 2H), 5,43 (s, 1H), 4,51 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,41 (s, 1H), 4,20 - 4,10 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,94 - 2,88 (m, 1H), 2,73 - 2,63 (m, 2H), 2,11 (br, 2H), 2,02 - 0,83 (m, 41H).
[0496] Ejemplo 38. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-9-metilo-5-(1-metilciclopentilo)-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida
[0497] Paso 1. Preparación de 38-1: la amina 18-2 (192 mg, 0,487 mmol) se trató con BEP (246 mg, 0,898 mmol), intermedio D14 (278 mg, 0,898 mmol), EtOAc (9 ml), NMP (1 ml) y DIPeA (0,42 ml, 2,4 mmol), luego se calienta a 50°C. Después de 1 h, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó sucesivamente con una solución sat. NaHCO3 acuoso y salmuera, luego se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (15% a 35% de EtOAc/Hex) para proporcionar la amida 38-1(264 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H50ClN4O7: 685,34; encontrado: 685,82.
[0498] Paso 2. Preparación de 38-2: la amida 38-1 (264 mg, 0,385 mmol) se trató con viniltrifluoroborato de potasio (82 mg, 0,615 mmol), Pd(dppf)C^DCM (33 mg, 0,041 mmol), EtOH (4,0 ml) y TEA (0,086 ml, 0,62 mmol), luego se calienta a reflujo. Después de 55 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con H2O y salmuera. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (15% a 30% de EtOAc/Hex) para proporcionar quinoxalina de vinilo 38-2 (168 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H53N4O7 : 677,39; encontrado: 677,38.
[0499] Pasos 3 y 4, Preparación de 38-3: quinoxalina de vinilo 38-2 (225 mg, 0,332 mmol) se suspendió en DCE (66 ml) y se trató con catalizador Zhan 1B (42 mg, 0,067 mmol, Strem). La suspensión se desgasificó con N2 burbujeante durante 28 minutos, luego se calentó a reflujo durante 90 minutos. La mezcla de reacción se filtró luego sobre Celite y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (15% a 30% de AcOEt/Hex) para proporcionar el macrociclo deseado (168 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49N4O7: 649,36; encontrado : 649,33). El macrociclo se disolvió en EtOH (25 ml) y EtOAc (5 ml) y se trató con Pd/C (10% en peso de Pd, 95 mg). El hidrógeno procedente de un globo se burbujeó a través de la suspensión durante 1 min. La reacción se agitó bajo una atmósfera de H2 durante 1,5 h adicionales. Una vez completada, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a vacío para proporcionar el macrociclo 38-3 deseado que se llevó a cabo sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H51N4O7 : 651,38; encontrado: 651,42.
[0500] Paso 5. Preparación de 38-4: se disolvió 38-3 sin purificar de la etapa anterior en DCM (10 ml) y se trató con TMSOTf (0,23 ml, 1,3 mmol). Después de agitarse a temperatura ambiente durante 1 h 15 min, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se volvió a disolver en DCM y se pipeteó en NaOH acuoso 1M. La mezcla se agitó durante 1 min, luego se acidificó a pH ~ 1-2 con HCl acuoso al 10%. La capa acuosa se extrajo tres veces
con DCM y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El material bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0% a 20% de MeOH/EtOAc) para proporcionar ácido carboxílico 38-4 (131 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H43N4O7 : 595,31; encontrado: 595,29.
[0501] Paso 6. Preparación del Ejemplo 38: el ácido carboxílico 38-4 (131 mg, 0,220 mmol) y el Intermedio A10 (81 mg, 0,264 mmol) se trataron con TBTU (85 mg, 0,264 mmol), DMAP (32 mg, 0,264 mmol), DCM (2,6 ml) y DIPEA (0,38 ml, 2,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 h, luego se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó por HPLC para proporcionar el Ejemplo 38 (74 mg) con una pureza de aproximadamente el 90% en forma de una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,93 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C41H55F2N6O9S: 845,37; encontrado: 845,57. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 69,12 (s, 1H), 7,77 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 9,0 Hz, 2,7 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 2 ,8 Hz, 1H), 5,81 (td, J = 55,9, 6,6 Hz, 1H), 5,59 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,50 (s, 1H), 4,40 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,18 (dd, J = 11,9 Hz, 3,9 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,74 (m, 1H), 2,97-2,90 (m, 1H), 2,85-2,75 (m, 2H), 2,01 (m, 2H), 1,85-1,41 (m, 21H), 1,12 (s, 3H), 1,08 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 0,96 (m, 2H), 0,91 (t, J = 4,3 Hz, 2H), 0,70 (m, 1H), 0,48 (m, 1H).
[0502] Ejemplo 39. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-11-etilo-16-metoxi-3a-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0503] Paso 1. Preparación de 39-1: Se disolvió éter de quinoxalina 1-1 (588,7 mg, 1,159 mmol) en TFA (5 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El TFA se eliminó a vacío para dar la sal de TFA de 39-1 (631,2 mg) en forma de un polvo incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C16H19ClN3O4: 352,1; encontrado: 352,1.
[0504] Paso 2. Preparación de 39-2: la sal de TFA de 39-1 (631,2 mg, 1,159 mmol) se disolvió en ChteCh/MeOH (3 ml/3 ml). A la solución se le añadió una solución de TMSCHN2 (hexano 2 M, 3 ml, 5,177 mmol) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 30 minutos para producir una suspensión que se filtró a través de un embudo de vidrio fritado para eliminar los sólidos. El filtrado se concentró a vacío para proporcionar un residuo que se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 100%) para producir éster metílico 39-2 (213,0 mg) en forma de cristales incoloros. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C17H21ClN3O4: 366,1; encontrado: 366,1.
[0505] Paso 3. Preparación de 39-3: el compuesto intermedio D7 (191,2 mg, 0,587 mmol) y el éster metílico 39-2 (414,1 mg, 1,132 mmol) se trataron con HATU (860,0 mg, 2,264 mmol) y DIPEA (0,59 ml), 3,396 mmol) en DMF (8 ml) a temperatura ambiente durante 4 h. La reacción se detuvo con H2O (50 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml tres veces). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. Después de la eliminación del agente de secado por filtración, el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 20% en hexanos) para dar la amida deseada 39-3 (573,9 mg) como un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+Na]+ calculado para C33H49ClN4NaO7: 695,3; encontrado: 695,3.
[0506] Paso 4. Preparación de 39-4: amida 39-3 (573,9 mg, 0,8524 mmol), trifluorovinilborato de potasio (171,3 mg, 1,279 mmol) y PdChdppPC^Ch (62,4 mg, 0,085 mmol) se trataron con Et3N (0,18) mL, 1,279 mmol) en EtOH (8 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno y se calienta a reflujo suavemente durante 30 min. La reacción se diluyó con PhMe (30 ml) y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 20% en hexanos) para dar la quinoxalina de vinilodeseada 39-4 (542,0 mg, 0,8152 mmol) como una espuma naranja. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H52N4NaO7: 687,4; encontrado: 687,3.
[0507] Paso 5. Preparación de 39-5: la quinoxalina de vinilo 39-4 (542,0 mg, 0,8152 mmol) se trató con catalizador Zhan 1b (59,8 mg, 0,08 mmol, Strem) en DCE (41 ml). La mezcla se calentó a 80°C durante 1 h. Se añadió catalizador Zhan 1 b adicional (59,8 mg, 0,08 mmol, Strem) y la mezcla se calentó a 80°C durante 30 min adicionales. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 20% en hexanos) para producir el macrociclo 39-5 (401,0 mg, 0,6297 mmol) como un aceite naranja. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C35H49N4O7 : 637,4; encontrado: 637,3.
[0508] Paso 6. Preparación de 39-6: el macrociclo 39-5 (401,0 mg, 0,6297 mmol) se recogió en 1,4-dioxano (15 ml) y se trató con Pd/C (10% en peso de Pd, 200,0 mg) y MgO (200,0 mg) se agitaron bajo una atmósfera de hidrógeno. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite (5 g) usando EtOAc (80 ml). El disolvente se eliminó al vacío para dar el macrociclo 39-6 (425,3 mg) como un aceite naranja pálido. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H51N4O7: 639,4; encontrado: 639,3.
[0509] Paso 7. Preparación de 39-7: el macrociclo 39-6 (74,8 mg, 0,110 mmol) se trató con una solución acuosa de LiOH acuosa 2 M (1,6 mL, 3,15 mmol) en MeOH/THF (4 mL/4 mL) a temperatura ambiente durante 8 h, 50°C durante 2 h y luego a 60°C durante 3 h. La mezcla se enfrió a 0°C usando un baño de agua con hielo. A la mezcla se le añadió salmuera (30 ml). La totalidad se extrajo con CH2Cl2 (30 ml tres veces). La capa orgánica se lavó con salmuera (30 ml) y se secó sobre Na2SO4 anhidro. Después de eliminar el agente de secado por filtración, el disolvente se eliminó al vacío para dar ácido carboxílico 39-7 (370,6 mg, 0,5932 mmol) en forma de un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H49N4O7: 625,4; encontrado: 625,3.
[0510] Paso 8. Preparación del Ejemplo 39: El ácido carboxílico 39-7 (100,0 mg, 0,1601 mmol) y el Intermedio A10 (73,2 mg, 0,2401 mmol) fueron tratados con HATU (91,3 mg, 0,2401 mmol) y DIPEA (0,14 mL, 0,8005 mmol) en DMF (3 ml) a temperatura ambiente durante 5 h. La reacción se detuvo con H2O (30 ml) y se extrajo con EtOAc (30 ml tres veces). La capa orgánica se lavó con salmuera (30 ml) y se secó sobre Na2SO4 anhidro. Después de eliminar el agente de secado por filtración, el disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 25 a 100% en hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron al vacío y el residuo se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de fluido supercrítico (DAICEL Chiralpak IC 10x250 mm, 18,9 ml/min, MeOH al 35%, 15 atm, 40°C) para dar el Ejemplo 39 (80,5 mg, 0,0920 mmol, 57%) como un polvo incoloro. Tiempo de HPLC analítico: 9,35 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C43H61F2N6O9S: 875,4; encontrado: 875,4. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) ó 7,81 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,24 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,74-6,30 (m, 3H), 4,73 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,40-4,60 (m, 1H), 4,22 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,61 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,16-3,30 (m, 1H), 2,50-2,77 (m, 2H), 2,20-0,60 (m, 21H), 1,35 (s, 3H) 1,12 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,02 (s, 9H).
[0511] Ejemplo 40. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-11-etilo-16-metoxi-3a-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10-carboxamida
[0512] El Ejemplo 40 se preparó de manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo al Intermedio A9 por el Intermedio A10 en el Paso 8, El Ejemplo 40 se aisló (70,9 mg) con una pureza de aproximadamente el 92%. Tiempo de HPLC analítico: 9,24 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 861,4; encontrado: 861,4. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 57,80 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,23 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,60-6,10 (m, 3H), 4,69 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,39 (dd, J = 12,0, 6,0 Hz, 1H), 4,2 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,03 -4,10 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,12-3,28 (m, 1H), 2,89-3,05 (m, 1H), 2,50-2,76 (m, 2H), 2,30-0,80 (m, 19H), 1,36 (s, 3H) 1,25 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,04 (s, 9H).
[0513] Ejemplo 41. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-2-(2,2-difluoroetilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-11 -etilo-16-metoxi-3a-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0514] El Ejemplo 41 se preparó de manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo al Intermedio A8 por el Intermedio A10 en el Paso 8, El Ejemplo 41 se aisló (4,3 mg) con una pureza de aproximadamente el 92%. Tiempo de HPLC analítico: 9,36 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H59F2N6O9S: 889,4; encontrado: 889,5, 1H RMN (300 MHz, CD3COCD3) 57,83 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 7,19-7,30 (m, 1H), 5,74-6,30 (m, 3H), 4,70 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,19 (dd, J = 12,0, 6,0 Hz, 1H), 4,24 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 12,0, 9,6 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,10-3,26 (m, 1H), 2,56-2,80 (m, 2H), 2,30-0,80 (m, 25H), 1,54 (s, 3H), 1,42 (s, 3H), 1,12 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,06 (s, 9H).
[0515] Ejemplo 42 y Ejemplo 43. Preparación de (1aS, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aS)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-1 a-etilo-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida y 1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1 R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-1 aetilo-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida
[0516] Paso 1. Preparación de 43-1: a una solución de la mezcla intermedia D15 (281 mg, 0,81 mmol) y el intermedio 18-2 (290 mg, 0,74 mmol) en MeCN (3,7 ml) se añadió HATU (308 mg, 0,81 mmol) seguido de DiPeA (640 mL, 3,68 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 17 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar 43-1 (121 mg, mezcla diasteromérica 1:1) como Un aceite incoloro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H52ClN4O7: 687,3; encontrado: 687,5,
[0517] Paso 2. Preparación de 43-2: A una solución de mezcla diastereomérica 43-1 (121 mg, 176 mmol), TEA (38 ml, 264 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (35,4 mg, 264 mmol) en EtOH (Se añadieron 0,88 ml) de PdCl2(dppf)(14,4 mg, 17,6 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó con argón durante 10 minutos y se calentó a 78°C. Después de 25 minutos, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar 43-2 (105 mg, mezcla diastereomérica 1:1) como un aceite amarillo. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H55N4O7: 679,4; encontrado: 679,5,
[0518] Paso 3. Preparación de 43-3: A una solución de mezcla diastereomérica 43-2 (105 mg, 155 mmol) en DCE (31 ml) se añadió catalizador Zhan 1B (11,3 mg, 15,5 mmol, Strem) y el La mezcla de reacción se desgasificó durante 10 minutos con argón. La mezcla de reacción se calentó luego a 100°C. Después de 15 minutos, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar 43-3 (52,3 mg, mezcla diastereomérica 1:1) en forma de un aceite amarillo claro. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H51N4O7 : 651,4; encontrado: 651,5,
[0519] Paso 4. Preparación de 43-4: A una solución de mezcla diastereomérica 43-3 (52 mg, 80 mmol) en etanol (0,4 mL) se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 9 mg, 8 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente. Después de 45 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (1 ml) y se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 X 1 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar 43-4 (49 mg, mezcla diastereomérica 1:1), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H52N4O7 : 653,4; encontrado: 653,6.
[0520] Paso 5: Preparación de 43-5: a una solución de mezcla diastereomérica 43-4 (49 mg, 67 mmol) en DCM (0,5 ml) se añadió TMSOTf (60 ml, 0,34 mmol) a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. Después de 3 h, la mezcla de reacción se añadió lentamente a una solución acuosa de NaOH 0,25 N (preenfriada a 0°C, 1 ml). La mezcla resultante se diluyó con una solución acuosa de 1 N HCl (5 ml) y se extrajo con DCM (3 X 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron para proporcionar 43-5 (71 mg, mezcla diastereomérica 1:1) en forma de un sólido color canela, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C32H45N4O7: 597,3; encontrado: 597,5,
[0521] Paso 6: Preparación de los Ejemplos 42 y 43: a una solución de mezcla diastereomérica 43-5 (71 mg, ~ 67 mmol) e Intermedio A10 (54 mg, 178 mmol) en MeCN (1,00 ml) se añadió HATU (69 mg, 178 mmol) seguido de DIPEA (155 ml, 0,89 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100% acetato de etilo/hexanos). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se repurificaron mediante HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110A, MeCN al 50-100%/H2O, modificador de ácido trifluoroacético al 0,1%) y se liofilizaron para proporcionar el Ejemplo 42 (10 mg) y el Ejemplo 43 (10 mg) como polvos blancos. Ejemplo 42: Tiempo de HPLC analítico: 9,04 min. [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,6. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 8,98 (s, 1H), 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,20 - 7,13 (m, 2H), 5,70 (td, J = 55,8, 6,4 Hz, 1H) 5,65 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,44 (br s, 1H), 4,55 - 4,42 (m, 1H), 4,20 - 4,03 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,17 - 3,08 (m, 1H), 2,85 - 2,72 (m, 1H), 2,71 - 2,59 (m, 1H), 2,18 - 2,06 (m, 1H), 2,03 - 1,83 (m, 4H), 1,80 - 1,53 (m, 5H), 1,50 (br s, 3H), 1,46 (s, 3H), 1,40 - 1,31 (m, 1H), 1,33 - 1,09 (m, 5H), 1,06 (s, 9H), 1,05 - 0,95 (m, 6H), 0,92 - 0,73 (m, 3H). Ejemplo 43: Tiempo de HPLC analítico: 9,17 min. [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,4; encontrado: 847,6. 1H Rm N (400 MHz, CD3OD) ó 9,03 (s, 1H), 7,68 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,14 - 7,09 (m, 2H), 5,68 (td, Jh-f = 55,5, 6,7 Hz, 1H), 5,59 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,12 (s, 1H), 4,08 (dd, J = 12,1, 4,3 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,90 - 2,79 (m, 1H), 2,79 - 2,70 (m, 1H), 2,66 - 2,56 (m, 1H), 2,43 - 2,31 (m, 1H), 1,95 - 1,85 (m, 2H), 1,75 -1,62 (m, 1H), 1,61 - 1,42 (m, 5H), 1,44 (br s, 3H) 1,40 (s, 3H), 1,34 - 1,02 (m, 8H), 1,00 (s, 9H), 0,99 - 0,89 (m, 5H), 0,85 - 0,74 (m, 3H).
[0522] Ejemplo 44. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-1a,9-dimetilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0523] Paso 1. Preparación de 44-1: se agregaron HATU (544 mg, 1,43 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,83 ml, 4,76 mmol) a una mezcla de 18-2 (429 mg, 1,09 mmol) y un producto intermedio. Mezcla D6 (395 mg, 1,33 mmol) en 12 mL de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante la noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos) para producir 44-1 (545 mg; mezcla 1:1 de diastereoisómeros) como Blanco sólido. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H50ClN4O7: 673,33; encontrado: 673,47.
[0524] Paso 2. Preparación de 44-2: Pd(dppf)Ch^CH2Cb (74 mg, 0,091 mmol, Strem) se agregó a una mezcla desoxigenada de 44-1 (542 mg, 0,805 mmol), vinilflorifluoroborato (168 mg, 1,25 mmol) y trietilamina (0,170 ml, 1,21 mmol) en 9 ml de EtOH a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 78°C bajo argón durante 75 minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, se agregaron 6 ml de tolueno y la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-35% en hexanos) para producir 44-2 (438 mg; mezcla 1:1 de diestereómeros) como una película amarilla. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C37H53N4O7 : 665,38; encontrado: 665,55,
[0525] Paso 3. Preparación de 44-3 y 44-4: Una mezcla diastereomérica 44-2 (437 mg, 0,658 mmol) y Zhan 1B catalizador (81 mg, 0,072 mmol, Strem) en 131 ml de DCE se desoxigenó bajo argón durante 25 minutos. La mezcla se calentó luego a 95°C durante 50 minutos. Se añadieron 7 mg adicionales de catalizador Zhan 1B y la mezcla de reacción se calentó a 95°C durante 10 minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-40% en hexanos) para producir diastereoisómeros individuales 44-3 (143 mg, componente de elución temprana) como una película de color amarillo claro y 44-4 (118 mg, componente de elución tardía) como un sólido amarillo claro. Elución temprana 44-3: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49N4O7 : 637,35; encontrado: 637,45, Elución tardía
44-4: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H49N4O7 : 637,35; encontrado: 637,59.
[0526] Paso 4. Preparación de 44-5: Se añadió paladio sobre carbono (10% en peso de Pd, 48 mg, 0,045 mmol) a una solución de 44-3 (143 mg, 0,225 mmol) en 6 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó durante 90 minutos. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró al vacío para producir 44-5 (130 mg) como una película sólida marrón, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H51N4O7 : 639,37; encontrado: 639,53.
[0527] Paso 5. Preparación de 44-6: Se añadió gota a gota TMSOTf (0,53 ml, 2,91 mmol) a una solución de 44-5 (130 mg, 1,27 mmol) en 3,8 ml de diclorometano bajo argón a temperatura ambiente. Después de una hora, se agregaron 0,22 ml adicionales de TMSOTf. Después de una hora adicional, se agregaron 0,20 mL de TMSOTf. Después de 40 minutos, se añadieron 0,25 ml de TMSOTf. Después de una hora, la mezcla de reacción se recogió en 10 ml de diclorometano y se detuvo mediante la adición de 20 ml de HCl acuoso 1 N con agitación. Las capas se separaron y la acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir 44-6 (113 mg) en forma de un sólido blanquecino, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C31H43N4O7 : 583,31; encontrado: 583,45,
[0528] Paso 6. Preparación del Ejemplo 44: HATU (53 mg, 0,139 mmol) y DIPEA (0,080 mL, 0,459 mmol) se agregaron a una mezcla de 44-6 (51 mg, 0,088 mmol) e Intermedio A10 (49 mg, 0,161 mmol) en 1,5 mL de MeCN bajo argón. Después de agitarse durante toda la noche, se agregaron 13 mg adicionales de Intermedio A10. Después de una hora, la mezcla de reacción se recogió en 15 ml de acetato de etilo y se vertió en 20 ml de HCl acuoso 1N. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-40% en hexanos) para dar el Ejemplo 44 (41 mg) en forma de un sólido blanquecino. Tiempo de HPLC analítico: 8,86 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C46H55F2N6O9S: 833,36; encontrado: 833,51. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 7,79 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,28-7,21 (m, 2H), 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,81 (td, Jh-f = 56 Hz, J = 6,4 Hz, 1H), 5,73-5,70 (m, 1H), 4,56 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,26-4,16 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,05-2,91 (m, 1H), 2,90 2,82 (m, 1H), 2,77-2,68 (m, 1H), 2,06-1,94 (m, 2H), 1,88-1,74 (m, 1H), 1,72-1,58 (m, 3H), 1,58-1,44 (m, 4H), 1,53 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,43-1,36 (m, 1H), 1,12-1,02 (m, 2H), 1,09 (s, 9H), 1,07 (d, J = 4 Hz, 3H), 1,00-0,94 (m, 2H), 0,92 0,84 (m, 3H), 0,16-0,11 (m, 1H).
[0529] Ejemplo 45, Preparación de (1aS, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aS)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-1a,9-dimetilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0530] El Ejemplo 45 se preparó de manera similar al Ejemplo 44, sustituyendo la elución tardía 44-4 por elución temprana 44-3 en el paso 4, El Ejemplo 45 se aisló (23 mg) como un sólido blanquecino. Tiempo de HPLC analítico: 8,92 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C46H55F2N6O9S: 833,36; encontrado: 833,54. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,25-7,19 (m, 2H), 6,55 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,78 (td, Jh-f = 61 Hz, J = 6Hz, 1H), 5,52-5,48 (m, 1H), 4,58 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,17-4,10 (m, 1H), 4,04 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,22-3,14 (m, 1H), 2,88-2,80 (m, 1H), 2,78-2,66 (m, 1H), 2,08- 1,90 (m, 2H), 1,76-1,64 (m, 1H), 1,63-1,50 (m, 7H), 1,51 (s, 3H), 1,47-1,36 (m, 2H), 1,46 (s, 3H), 1,18- 1,06 (m, 1H), 1,12 (s, 9H), 1,07 (m, 3H), 1,00-0,80 (m, 4H), 0,10-0,04 (m, 1H).
[0531] Ejemplos 46 y 47. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-18,18-difluoro-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,
10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida y (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-18-fluoro-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0532] Paso 1. Preparación de 46-1: Una mezcla de Intermedio B1 (627 mg, 2,08 mmol), Intermedio E3 (548 mg, 1,91 mmol) y carbonato de cesio (744 mg, 2,28 mmol) en 7 mL de DMF se agitó a 85°C bajo argón durante 36 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en 30 ml de agua y la acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos) para dar 46-1 (891 mg) como un sólido blanco. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C27H36F2N3O6 : 536,25; encontrado: 536,35.
[0533] Paso 2. Preparación de 46-2: Se disolvió quinoxalina 46-1 (478 mg, 0,893 mmol) en 4,2 ml de acetato de tere-butilo y 1,1 ml de diclorometano a temperatura ambiente. Se añadió gota a gota MeSO3H (0,30 ml, 4,67 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se transfirió a una mezcla agitada de EtOAc (20 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a vacío hasta proporcionar amina 46-2 como una película sólida amarilla (346 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C22H28F2N3O4 : 436,20; encontrado: 436,29.
[0534] Paso 3. Preparación de 46-3: HATU (396 mg, 1,04 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,57 ml, 3,29 mmol) se
agregaron a una mezcla de 46-2 (345 mg, 0,793 mmol) y el producto intermedio D11. (260 mg, 0,965 mmol) en 9 ml de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante la noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-40% en hexanos) para dar 46-3 (545 mg) como una película sólida transparente. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49F2N4O7 : 687,35; encontrado: 687,57.
[0535] Paso 4. Preparación de 46-4: se desoxigenó con argón una mezcla de 46-3 (480 mg, 0,699 mmol) y catalizador Zhan 1B (61 mg, 0,083 mmol, Strem) en 140 ml de DCE con argón durante 18 minutos. La mezcla se calentó luego a 95°C durante 70 minutos. Se agregaron 20 mg adicionales de catalizador Zhan 1B y la mezcla se agitó a 95°C durante una hora. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-35% en hexanos) para producir una mezcla inseparable de 46-4 (mayor) y aproximadamente un 15% de 47-1 (menor; 233 mg en total) como Un sólido blanquecino. Componente principal 46-4: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H45F2N4O7 : 665,38; encontrado: 665,50. Componente menor 47-1: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H44FN4O7 : 639,31; encontrado: 639,49.
[0536] Paso 5. Preparación de la mezcla de 46-5 y 47-2: Se añadió paladio sobre carbono (10% en peso de Pd, 70 mg, 0,066 mmol) a una solución de la mezcla de 46-4 y 47-1(232 mg, 0,353 mmol) del paso anterior en 9 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó durante 7 h. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El filtrado se concentró al vacío para producir una mezcla de 46-5 (principal) y 47-2 (menor; 216 mg en total) como un sólido blanquecino, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Componente principal 46-5: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H47F2N4O7 : 661,33; encontrado: 661,52. Componente menor 47-2: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H48FN4O7 : 643,34; encontrado: 643,57.
[0537] Paso 6. Preparación de la mezcla de 46-6 y 47-3: se añadió gota a gota TMSOTf (0,35 ml, 1,90 mmol) a una solución de una mezcla de 46-5 y 47-2 (215 mg, 0,326 mmol) del paso anterior en 6,5 ml de diclorometano bajo argón a temperatura ambiente. Después de 1 h, se añadieron 0,18 ml adicionales de TMSOTf. Después de una hora adicional, se añadieron 0,30 ml de TMSOTf. Después de 2 h, se añadieron 0,18 ml de TMSOTf. Después de 1 h, se añadieron 0,18 ml adicionales de TMSOTf. Después de 45 minutos, la mezcla de reacción se recogió en 25 ml de diclorometano y se detuvo mediante la adición de 30 ml de HCl acuoso 1 N con agitación. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 40 ml). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir una mezcla inseparable de 46-6 (mayor) y 47-3 (menor; 187 mg en total), que se usó en el siguiente paso sin purificación adicional. Componente principal 46-6: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C30H39F2N4O7 : 605,27; encontrado: 605,44. Componente menor 47-3: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C30H39FN4O7 : 587,28; encontrado: 587,38.
[0538] Paso 7. Preparación del Ejemplo 46 y del Ejemplo 47: HATU (160 mg, 0,421 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,25 mL, 1,44 mmol) se agregaron a una mezcla de 46-6 y 47-3 (150 mg, 0,248 mmol) del paso anterior e Intermedio A10 (150 mg, 0,496 mmol) en 6,5 ml de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 30 ml de acetato de etilo y se vertió en 30 ml de HCl acuoso 1N. La capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) y HPLC prep de fase inversa (50-100% de acetonitrilo en agua, con 0,1% de tampón de ácido trifluoroacético) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo. 46 (107 mg) como un sólido amarillo claro y la sal del ácido trifluoroacético de la mezcla 1:1 de diastereómeros del Ejemplo 47 (12 mg) como un sólido amarillo claro. Ejemplo 46: Tiempo de HPLC analítico: 8,60 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H51F4N6O9S: 855,33; encontrado: 855,63. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 69,23 (s, 1H), 7,94 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,78 (td, J h-f = 66 Hz, J = 6,8 Hz, 1H), 5,68-5,66 (m, 1H), 4,57 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,35 (s, 1H), 4,22-4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,72-3,66 (m, 1H), 2,86-2,76 (m, 1H), 2,64-2,48 (m, 1H), 2,11-1,94 (m, 3H), 1,86-1,74 (m, 3H), 1,73-1,62 (m, 1H), 1,58-1,54 (m, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,49-1,44 (m, 1H), 1,42-1,38 (m, 1H), 1,11-1,04 (m, 4H), 1,09 (s, 9H), 1,02-0,94 (m, 2H), 0,93-0,86 (m, 2H), 0,78-0,66 (m, 1H), 0,54-0,46 (m, 1H). Ejemplo 47 (mezcla 1:1 de diastereoisómeros): HPLC analítica Tiempo de Tiempo: 8,45 min. Lc Ms -ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H52F3N6O9S: 837,34; encontrado: 837,63. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 69,13 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,27 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,99-5,43 (m, 1H), 5,79 (td, J h-f = 55 Hz, J = 6,8 Hz, 1H), 5,53-5,50 (m, 1H), 4,57-4,44 (m, 2H), 4,11 (s, 1H), 4,35 (s, 1H), 4,22-4,13 (dd, J = 12,4, 4 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,83-3,79 (m, 1H), 2,94-2,80 (m, 2H), 2,28-2,14 (m, 1H), 2,06-1,96 (m, 2H), 1,88-1,69 (m, 4H), 1,58-1,54 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,44 -1,36 (m, 1H), 1,32-1,26 (m, 1H), 1,14-1,04 (m, 4H), 1,10 (s, 9H), 1,02-0,86 (m, 4H), 0,74-0,64 (m, 1H), 0,58-0,48 (m, 1H).
[0539] Ejemplo 48. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-{(1R, 2S)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-etenilciclopropilo}-14-metoxi-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0540] Paso 1: Preparación del Ejemplo 48: A una suspensión de ácido 18-7 (9,7 mg, 0,017 mmol) e Intermedio A1 (13 mg, 0,049 mmol) en MeCN (0,4 mL) se añadió DIp Ea (40 mL, 0,23). mmol). A la solución resultante se le añadió HATU (12,5 mg, 0,033 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se diluyó con EtOAc (2 ml), HCl acuoso 0,2 M (1 ml) y salmuera (1 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 2 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto que se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió en 1 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 50% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 48 como un sólido amorfo blanco (8,4 mg). Tiempo de HPLC analítico: 8,52 min. LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calc. para C39H53N6O9S: 781,4; encontrado: 781,2. 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 9,91 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,73 (s, 1H), 5,86 - 5,72 (m, 1H), 5,57 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 5,48 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,27 - 5,15 (m, 1H), 5,15 - 5,07 (m, 1H), 4,48 - 4,35 (m, 3H), 4,12 (dd, J = 11,8, 4,1 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,81 -3,71 (m, 1H), 2,98 - 2,75 (m, 4H), 2,16 - 2,09 (m, 1H), 1,94 (dd, J = 8,2, 5,8 Hz, 1H), 1,87 - 1,24 (m, 9H), 1,17 (d, J = 7,4 Hz), 3H), 1,09 (s, 9H), 1,04 - 0,91 (m, 5H), 0,75 - 0,65 (m, 1H), 0,52 - 0,42 (m, J = 6,0 Hz, 1H).
[0541] Ejemplo 49. Preparación de (1aS, 2aR, 6 S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-15-metoxi-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopopa[4',5']ciclopenta[1',2':18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0542] Paso 1: Preparación del Ejemplo 49: A una suspensión de ácido 33-4(30 mg, 0,049 mmol) e Intermedio A10 (31 mg, 0,10 mmol) en MeCN (700 mL) se añadió DIPEA (70 mL, 0,40). mmol). Se añadió HATU (32 mg, 0,084 mmol) a la solución resultante, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. Luego se agregó una porción adicional del Intermedio A10 ( 6 mg, 0,02 mmol). La reacción se agitó durante 30 minutos adicionales y luego se diluyó con EtOAc (30 ml), HCl acuoso 0,2 M (15 ml) y salmuera (15 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se adsorbió en 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 50% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 49 en forma de un sólido amorfo blanco (30,5 mg). Tiempo de HPLC analítico: 9,15 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,2.
1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 9,86 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,18 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,14 - 5,71 (m, 1H), 5,61 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,42 - 4,31 (m, 2H), 4,12 (dd, J = 11,6, 4,0 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,00 - 2,63 (m, 4H), 2,25 -2,16 (m, 1H), 2,09 - 1,90 (m, 4H), 1,81 - 0,95 (m, 26H), 0,92 - 0,75 (m, 3H), 0,57 - 0,45 (m, 1H), 0,44 - 0,36 (m, 1H).
[0543] Ejemplo 50. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-9-(cianometilo)-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0544] El Ejemplo 50 se preparó de manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio B8 por el Intermedio B4 en la Paso 1, El Ejemplo 50 se purificó por HPLC de fase inversa (columna Gemini, 58-98% de ACN/H2O 0,1% de TFA) y liofilizado para proporcionar un sólido (5 mg) como una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,29 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H51F2N7O9S: 844,94; encontrado: 844,58. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,71 (s, 1H), 7,79 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,22 (m, 2H), 6,25 (m, 1H), 6,08 - 5,80 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,29 (m, 2H), 4,13 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,65 (m, 1H), 3,06 - 2,83 (m, 4H), 2,55 (m, 1H), 2,14 - 1,47 (m, 17H), 1,03 (s, 9H), 0,92 (m, 4H), 0,65 (m, 1H), 0,45 - 0,43 (m, 1H).
[0545] Ejemplo 51. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-N-{(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-etilciclopropilo}-11-etilo-16-metoxi-3a-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0546] El Ejemplo 51 se preparó de manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo al Intermedio A3 por el Intermedio A10 en el paso 8, El Ejemplo 51 se aisló (12,3 mg) con una pureza de aproximadamente el 96,5%. Tiempo de HPLC analítico: 9,38 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C43H63N6O9S: 839,4; encontrado: 839,5, 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 57,60 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,98-7,08 (m, 2H), 6,53 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,57-5,83 (m, 2H), 4,52 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,24 (dd, J = 10,8, 6,0 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,82 (dd, J = 10,8, 2,4 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,93-3,10 (m, 1H), 2,80-2,90 (m, 2H), 2,30-2,58 (m, 2H), 0,60-2,10 (m, 32H), 0,84 (s, 9H).
[0547] Ejemplo 52. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-11-etilo-N-[(1R, 2S)-2-(2-fluoroetilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-16-metoxi-3a-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-10-carboxamida.
[0548] El Ejemplo 52 se preparó de manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo al Intermedio A6 por el Intermedio A10 en el paso 8, El Ejemplo 52 se aisló (12,3 mg) con una pureza de aproximadamente 96,5%. Tiempo de HPLC analítico: 8,60 min. Tiempo de HPLC analítico: 9,31 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C44H64FN6O9S: 871,4; encontrado: 871,5, 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 57,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,20-7,30 (m, 2H), 6,73 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,75-6,02 (m, 2H), 4,74 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,54 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,36-4,49 (m, 1H), 4,23 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,04 (dd, J = 12,0, 2,4 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,28-3,16 (m, 1H), 2,50-2,70 (m, 2H), 2,30-0,80 (m, 35H), 1,04 (s, 9H).
[0549] Ejemplo 53. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0550] El Ejemplo 53 se preparó de manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo al Intermedio E4 por el Intermedio E3 en el Paso 1 y al Intermedio A9 por el Intermedio A10 en el Paso 7. El Ejemplo 53 se aisló (8,8 mg) como un sólido blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H48F4N6O8S: 825,32; encontrado: 825,75, 1H RMN (400 MHz, CDCh) 510,13 (s, 1H), 8,15 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,91 - 7,74 (m, 2H), 7,69 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,47 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,48 (t, J = 10,3 Hz, 2H), 4,36 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,12 (dd, J = 12,1, 3,6 Hz, 1H), 3,70 -3,59 (m, 1H), 3,08 - 2,75 (m, 1H), 2,58 - 2,38 (m, 1H), 2,14 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 1,95 - 1,67 (m, 4H), 1,47 (tt, J = 13,9, 7,1 Hz, 4H), 1,35 (s, 2H), 1,20 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,15 - 0,64 (m, 19H), 0,51 (q, J = 6,4 Hz, 1H).
[0551] Ejemplo 54. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-{(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-etilciclopropilo}-9-etilo-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0552] El Ejemplo 54 se preparó de manera similar al Ejemplo 53 reemplazando el Intermedio A9 con el Intermedio A3. El ejemplo 54 se aisló (10,0 mg) como un sólido blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H52F2N6O8S: 803,35; encontrado: 803,79. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 59,88 (s, 1H), 8,12 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,88 - 7,69 (m, 2H), 7,66 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6 , 6 8 (s, 1H), 5,95 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,46 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,45 (dd, J = 13,8, 9,7 Hz, 2H), 4,09 (dd, J = 12,0, 3,6 Hz, 2H), 3,71 -3,57 (m, 1H), 2,53 (dd, J = 21,4, 14,6 Hz, 1H), 1,85 - 1,39 (m, 10H), 1,38 -0,96 (m, 20H), 1,01 (dd, J = 17,2, 9,5 Hz, 3H), 1,04 - 0,78 (m, 6 H), 0,70 (s, 1H), 0,49 (dd, J = 12,7, 6,3 Hz, 1H).
[0553] Ejemplo 55, Preparación de (1aR, 5S, 8 S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoflo}ciclopropilo]-9-etilo-3,6-dioxo-14-(2,2,2-trifluoroetoxi)-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0554] El Intermedio 55-1 se preparó siguiendo los Pasos 1 a 6 del Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio E2 por el Intermedio E1 en el Paso 1 , LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H49N4O7 : 625,36 ; encontrado: 625,25,
[0555] Paso 1. Preparación de 55-2, Quinoxalinol 55-1(24 mg, 0,038 mmol) se suspendió en DMF (2 ml) y se trató con Cs2CO3 (63 mg, 0,19 mmol) y 2,2,2-trifluoroetilo trifluorometanosulfonato (0,055 ml, 0,38 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h, luego se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se lavó con H2O y salmuera, se secó sobre MgSO4 , se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 55-2, que se continuó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H50F3N4O7 : 707,36; encontrado: 707,38.
[0556] Paso 2. Preparación de 55-3, El trifluoroetilo éter 55-2 (0,038 mmol teórico) se trató con DCM (4 ml) y TMSOTf (0,14 ml, 0,77 mmol) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la reacción se detuvo mediante la adición de NaOH 1 M (2 ml). Después de agitarse vigorosamente durante 5 minutos, la mezcla se vertió en un embudo de separación seguido de HCl al 10% (20 ml). La capa acuosa se extrajo 3x con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar 55-3, que se llevó a cabo sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H42F3N4O7 : 651,30; encontrado: 651,18.
[0557] Paso 3. Preparación del Ejemplo 55, El ácido carboxílico 55-3 (0,038 mmol teórico) se trató con el intermedio A10 (23 mg, 0,077 mmol), TBTU (25 mg, 0,077 mmol), DMAP (9 mg, 0,077 mmol).), DCM (1 ml) y DIPEA (0,134 ml, 0,768 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h, luego se concentró a presión reducida y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar el Ejemplo 55 en forma de una sal TFA (7 mg, 18% en 3 etapas). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H54F5N6O9S: 901,36; encontrado: 902,08. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,18 (s, 1H), 7,86 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,02 -5,63 (m, 2H), 4,76 - 4,62 (m, 2H), 4,56 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,39 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,15 (dt, J = 17,2, 8,6 Hz, 1H), 3,74 (dd, J = 6,7, 2,8 Hz, 1H), 3,05 - 2,89 (m, 1H), 2,82 (td, J = 13,2, 4,2 Hz, 1H), 2,65 - 2,50 (m, 1H), 2,02 (d, J = 10,4 Hz, 2H), 1,78 (dt, J = 23,5, 10,7 Hz, 3H), 1,68 - 1,26 (m, 14H), 1,22 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,10 (s, 9H), 0,97 (d, J = 2,5 Hz, 2H), 0,95 - 0,84 (m, 2H), 0,71 (s, 1H), 0,51 (t, J = 9,8 Hz, 1H).
[0558] Ejemplo 56. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R, 24aR)-7-terc-butilo-11-etilo-N-[(1R, 2R)-2-etilo-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-16-metoxi-3a-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanociclopenta[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-10-carboxamida
[0559] El Ejemplo 56 se preparó de manera similar al Ejemplo 39, sustituyendo al Intermedio A9 por el Intermedio A3 en el Paso 8. Se aisló el Ejemplo 56 (8,8 mg, 0,0103 mmol, 53,7%). Tiempo de HPLC analítico: 9,56 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C44H65N6O9S: 853,45; encontrado: 853,5, 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 57,81 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,20-7,30 (m, 2H), 6,73 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,76-6,01 (m, 2H), 4,75 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 12,0, 6,0 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,00-4,08 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,50-2,78 (m, 3H), 0,80-2,30 (m, 30H), 1,54 (s, 3H), 1,35 (s, 3H), 1,05 (s, 9H).
[0560] Ejemplo 57. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(2,2-difluoroetilo)ciclopropilo]-15-metoxi-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1 H,9H-8,11-metanociclopopa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0561] Paso 1. Preparación del Ejemplo 57. A una suspensión de ácido 33-4 (14,9 mg, 0,0245 mmol) y clorhidrato de amina A-7 (16,3 mg, 0,0535 mmol) en MeCN (500 mL) se añadió DIPEA. (40 ml, 0,23 mmol). Se añadió HATU (15,5 mg, 0,0408 mmol) a la solución resultante y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 h. La reacción se diluyó luego con EtOAc (2 ml), HCl acuoso 0,2 M (1,5 ml) y salmuera (1,5 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (4 x 1,5 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se concentró en 1,5 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 40% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 57. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. Para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,0. 1H RMN (300 MHz, CDCls) ó 10,00 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,07 - 5,57 (m, 2H), 5,26 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,50 - 4,29 (m, 3H), 4,12 (dd, J = 11,7, 3,9 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,00 - 2,62 (m, 4H), 2,34 - 0,96 (m, 33H), 0,95 - 0,78 (m, 1H), 0,51 (dd, J = 13,0, 7,9 Hz, 1H), 0,39 (d, J = 4,2 Hz, 1H).
[0562] Ejemplo 58. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-2-(2,2-difluoroetilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-15-metoxi-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopopa[4',5']ciclopenta[1',2':18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida
[0563] Paso 1. Preparación del Ejemplo 58. A una suspensión de ácido 33-4 (14,5 mg, 0,0238 mmol) y clorhidrato de amina A-8 (16,0 mg, 0,0502 mmol) en MeCN (500 mL) se añadió DIPEA. (40 ml, 0,23 mmol). Se añadió HATU (15,5 mg, 0,0408 mmol) a la solución resultante y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 h. La reacción se diluyó luego con EtOAc (2 ml), HCl acuoso 0,2 M (1,5 ml) y salmuera (1,5 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (4 x 1,5 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se concentró en 1,5 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 40% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 58. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. Para C43H59F2N6O9S: 873,4; encontrado: 873,3. 1H RMN (300 MHz, CDCla) ó 9,72 (s, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1,2,7 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,12 - 5,54 (m, 2H), 5,25 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,50 - 4,30 (m, 3H), 4,13 (dd, J = 11,7, 4,2 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,03 - 2,65 (m, 4H), 2,34 - 0,97 (m, 33H), 0,94 - 0,76 (m, 3H), 0,60 - 0,45 (m, 1H), 0,45 - 0,34 (m, 1H).
[0564] Ejemplo 59. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-10-etilo-19,19-difluoro-15-metoxi-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopopa[4',5']ciclopenta[1',2':18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0565] Paso 1. Preparación de 59-1, Una solución de Intermedio D16 (0,50 g, 1,6 mmol) en DMF (7 ml) se trató posteriormente con COMU (0,80 g, 1,9 mmol), DIPEA (1,2 ml, 6,7 mmol) e Intermedio 17-2 (0,65 g, 1,3 mmol) y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se detuvo con una solución de ácido cítrico 1 M (5 ml) y se extrajo con EA. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (15-100% EA/hex) para proporcionar 59-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C40H55F2N4O7 : 741,88; encontrado: 741,51.
[0566] Paso 2. Preparación de 59-2, Una solución de 59-1 (0,51 g, 0,69 mmol) en DCE (140 ml) se rocía con argón durante 30 minutos antes de la adición del catalizador Zhan 1B (0,051 g, 0,07 mmol). La reacción se calentó a 85°C durante 45 min, y se añadió otra porción de catalizador Zhan 1B. Después de 30 minutos adicionales, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en gel de sílice (5-100% de EA/hex) para producir 59-2, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H51F2N4O7 : 713,83; encontrado: 713,54.
[0567] Paso 3. Preparación de 59-3, Una solución de 59-2 se recogió en EtOH (8 ml). Se añadió Pd/C (0,072 g, 10% p/p) y la atmósfera se reemplazó con H2. Después de 1 h, se añadió catalizador adicional. Después de 4 h, se añadió EA y catalizador adicional. Después de 3 h adicionales, la reacción se filtró, se concentró al vacío y el residuo se recogió en EtOH (8 ml) y se trató con 0,5 g de Pd/C (10% p/p) y la atmósfera se reemplazó con H2. La reacción se agitó durante la noche, y luego se procesó nuevamente como se describió anteriormente para producir 59-3 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H53F2N4O7 : 715,85; encontrado: 715,52.
[0568] Paso 4. Preparación de 59-4, Una solución de 59-3 (0,40 g, 0,56 mmol) en DCM (1,5 ml) se trató con 2,5 ml de TFA a temperatura ambiente. Después de 1,5 h, la reacción se concentró al vacío. El residuo se recogió en EA, se lavó con NaHCO3 acuoso saturado, salmuera y luego se secó sobre MgSO4 anhidro. La concentración al vacío produjo 59-4 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H45F2N4O7: 659,74; encontrado: 659,56.
[0569] Paso 5. Preparación del Ejemplo 59: una solución de 59-4 (0,20 g, 0,30 mmol) en DMF (2 ml) se trató posteriormente con HATU (0,21 g, 0,55 mmol), DIPEA (0,27 ml, 1,5 mmol), DMAP (0,056 g, 0,46 mmol) y el
compuesto intermedio A9 (0,13 g, 0,46 mmol) y se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se purifica por HPLC preparativa para producir la sal de TFA del Ejemplo 59. Tiempo de HPLC analítico: 9,20 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H55F4N6O9S: 895,98; encontrado: 895,60. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,31 (s, 1H); 7,94 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,32 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H); 7,21 (d, J = 2,4Hz, 1H); 5,98 (brs, 1H); 5,85 (td, Jh-f = 55,2Hz, J = 6Hz, 1H); 4,94 (d, J = 7,6Hz, 1H); 4,58 (d, J = 7,2Hz, 1H); 4,35 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 4,33 (br s, 1H); 4,18 (dd, J = 12, 3,6 Hz, 1H); 3,97 (br s, 3H); 2,98 (m, 1H); 2,64-2,41 (m, 2H); 2,22 (m, 1H); 2,15-1,92 (m, 4H); 1,84-1,22 (m, 14H); 1,18 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,14-0,98 (m, 2H); 1,08 (s, 9H); 0,60-0,48 (m, 2H).
[0570] Ejemplo 60. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-9-propilo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0571] Paso 1. Preparación de 60-1: A una solución de Intermedio B5 (160 mg, 0,590 mmol) e Intermedio E3 (194 mg, 0,590 mmol) en MeCN (2,95 mL) se añadió carbonato de cesio (192 mg, 0,590). mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 24 h, la mezcla de reacción se filtró luego a través de una capa de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar quinina alcalina sustituida 60-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C29H40F2N3O6 : 564,28; encontrado: 564,44.
[0572] Paso 2. Preparación de 60-2: A una solución 60-1 (193 mg, 0,343 mmol) en acetato de tere-butilo (1,36 mL) se le añadió una solución de ácido metanosulfónico (111 mL, 1,72 mmol) en diclorometano. (0,34 ml) y la reacción se agitó a ta. Después de 2 h, la mezcla de reacción se diluyó con una solución saturada de bicarbonato de sodio (20 ml) y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 X 20 ml). Los compuestos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a vacío para proporcionar clorhidrato de amina 60-2, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C24H32F2N3O4 : 464,23; encontrado: 464,35,
[0573] Paso 3. Preparación de 60-3: A una solución de 60-2 (133 mg, 0,289 mmol) e Intermedio D11 (133 mg, 0,412 mmol) en MeCN (1,7 mL) se añadió HATU (157 mg, 0,412). mmol) seguido de DIPEA (298 mL, 1,72 mmol) a temperatura ambiente y atmósfera de argón. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar la amida 60-3, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H53F2N4O7 : 715,38; encontrado: 715,55,
[0574] Paso 4. Preparación de 60-4: A una solución de 60-3 (188 mg, 264 mmol) en DCE (52,8 mL) se añadió catalizador Zhan 1B (19,4 mg, 26,4 mmol) y la mezcla de reacción se desgasificó. Durante 10 minutos con argón. La mezcla de reaccion luego se calentó a 100°C. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para obtener el macrociclo 60-4, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49F2N4O7 : 687,35; encontrado: 687,54.
[0575] Paso 5. Preparación de 60-5: A una solución de macrociclo 60-4 (119 mg, 173 mmol) en etanol (1,0 ml) se le añadió Pd/C (10% en peso, 18,4 mg, 17,3 mmol) a bajo una atmósfera de argón. El recipiente de reacción se evacuó y se volvió a llenar con 1 atm de gas de hidrógeno (3 X) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente. Después de 1 h, la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite con lavados con acetato de etilo (3 X 2 ml). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el macrociclo 60-5, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H51F2N4O7 : 689,36; encontrado: 689,56.
[0576] Paso 6. Preparación de 60-6: A una solución de 60-5 (150 mg, 218 pmol) en DCM (1,1 ml) se añadió TMSOTf (197 pl, 1,09 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 2 h, la mezcla de reacción se transfirió a una solución de solución de NaOH 0,5 N (5 ml) previamente enfriada a 0°C. La mezcla resultante se acidificó con una solución de 1N HCl a pH = 2 y se extrajo con diclorometano (3 X 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a vacío para proporcionar ácido carboxílico 60-6, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H43F2N4O7 : 633,30; encontrado: 633,49.
[0577] Paso 7. Preparación del Ejemplo 60: A una solución de 60-6 (100 mg, 158 pmol) e Intermedio A9 (69,0 mg, 237 pmol) en MeCN (790 mL) se agregó HATU (91,5 mg, 237 mmol) seguido de DIPEA (137 pl, 790 pmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 3 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se purificó por HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110Á, MeCN al 5-100%/H2O, modificador de ácido trifluoroacético al 0,1%) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 60 en forma de sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,89 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F4N6O9S: 869,35; encontrado: 859,66. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,29 (br s, 1H), 7,94 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,19 (brs, 1H), 5,87 (brs, 1H), 5,84 (td, Jh-f = 55,8Hz, J = 5,4Hz, 1H), 4,56 (d, J = 6,9Hz, 1H), 4,40 (d, J = 12,6Hz, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,17 (dd, J = 11,9, 3,4 Hz, 1H), 3,96 (br s, 4H), 3,68 (br s, 1H), 3,01 - 2,91 (m, 1H), 2,71 - 2,61 (m, 1H), 2,61 - 2,43 (m, 1H), 2,02 (br s, 4H), 1,88 - 1,59 (m, 4H), 1,59 - 1,35 (m, 4H), 1,33 - 1,20 (m, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,04 - 0,95 (app t, J = 7,0 Hz, 5H), 0,79 - 0,65 (m, 1H), 0,49 (d, J = 6,5 Hz, 1H).
[0578] Ejemplo 61. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-10-etilo-19,19-difluoro-15-metoxi-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1 H,9H-8,11-
metanociclopopa[4’,5’]ciclopentata[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0579] El Ejemplo 61 se preparó de manera similar al Ejemplo 59, sustituyendo al Intermedio A10 por el Intermedio A9 en el Paso 5, Se aisló la sal de TFA del Ejemplo 61. Tiempo de HPLC analítico: 9,28 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C43H57F4N6O9S: 909,38; encontrado: 909,59. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,28 (s, 1H); 7,95 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,33 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H); 7,23 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 6,0 (br s, 1H); 5,83 (br s, 1H); 5,83 (td, Jh-f = 55 Hz, J = 6 Hz, 1H); 4,94 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 4,61 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 4,34 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 4,32 (br s, 1H); 4,18 (m, 1H); 3,97 (s, 3H); 2,63-2,47 (m, 2H); 2,28-2,17 (m, 1H); 2,12-1,96 (m, 4H); 1,83-1,26 (m, 14H); 1,53 (s, 3H); 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,08 (s, 9H); 0,94-0,88 (m, 2H); 0,62-0,48 (m, 2H).
[0580] Ejemplo 62. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-19,19-difluoro-15-metoxi-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopropa[4',5']ciclopenta[1',2':18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida
[0581] Paso 1. Preparación del Ejemplo 62-1: HATU (214 mg, 0,563 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,30 ml, 1,72 mmol) se agregaron a una mezcla de 46-2 (186 mg, 0,428 mmol) e Intermedio D16 (157 mg, 0,508 mmol) en 10 ml de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante la noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos) para producir el Intermedio 62-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C39H53F2N4O7: 727,38; encontrado: 727,51.
[0582] Paso 2. Preparación de 62-2: se desoxigenó con argón una mezcla de 62-1 (275 mg, 0,378 mmol) y catalizador Zhan 1B (34 mg, 0,046 mmol, Strem) en 75 ml de DCE con argón durante 17 minutos. La mezcla se calentó luego a reflujo durante 80 minutos. Se añadieron 8 mg adicionales de catalizador Zhan 1B y la mezcla se agitó a reflujo durante veinte minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-25% en hexanos) para producir el intermedio 62-2, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H49F2N4O7: 699,35;
encontrado: 669,50.
[0583] Paso 3. Preparación de la mezcla de 62-3: Se añadió paladio sobre carbono (10% en peso de Pd, 60 mg, 0,057 mmol) a una solución de 62-2 (207 mg, 0,297 mmol) en 7 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla se agitó durante la noche. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El filtrado se concentró al vacío para producir el intermedio 62-3, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H51F2N4O7 : 701,36; encontrado: 701,65,
[0584] Paso 4. Preparación de 62-4: Se añadió lentamente TFA (1,6 ml, 20,9 mmol) a una solución de 62-3 (202 mg, 0,289 mmol) en 4,5 ml de diclorometano. Después de 3,5 horas, la mezcla se concentró a presión reducida hasta casi sequedad. El residuo resultante se recogió en 30 ml de acetato de etilo, se lavó con 20 ml de agua, 20 ml de solución sat. NaHCO3 (aq), y se separa. Las capas acuosas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 30 ml de salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir el intermedio 62-4, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C33H43F2N4O7: 645,30; encontrado: 645,53.
[0585] Paso 5. Preparación del Ejemplo 62: HATU (113 mg, 0,297 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,17 mL, 0,978 mmol) se agregaron a una mezcla de 62-4 (120 mg, 0,186 mmol) e Intermedio A9 (110 mg, 0,379 mmol) en 6 ml de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 30 ml de acetato de etilo y se lavó con 20 ml de HCl acuoso 1N. La capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera al 50%, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) y HPLC prep de fase inversa (50-100% de ace-tonitrilo en agua, con un 0,1% de tampón de ácido trifluoroacético) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo. 62. Tiempo de HPLC analítico: 9,03 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H53F4N6O9S: 881,35; encontrado: 881,57. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): ó 9,27 (s, 1H), 7,94 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,84 (td, Jh-f = 56 Hz, J = 6,8 Hz, 1H), 5,75 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,35 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,22-4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,01-2,94 (m, 1H), 2,81-2,72 (m, 1H), 2,66-2,40 (m, 1H), 2,36-2,28 (m, 1H), 2,10-1,94 (m, 4H), 1,82-1,72 (m, 2H), 1,70-1,22 (m, 10H), 1,14-1,02 (m, 7H), 1,10 (s, 9H), 0,61 0,49 (m, 2H).
[0586] Ejemplo 63. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-14-metoxi-1a-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida
[0587] Paso 1. Preparación de 63-1: se combinó clorhidrato de amina 17-2 (500 mg, 1,03 mmol) con la mezcla intermedia D17 (378,5 mg, 1,34 mmol), DIPEA (1,8 ml, 10,3 mmol) y DMF (3 mL). Luego se añadió HATU (587,1 mg, 1,55 mmol) a la mezcla de reacción, que se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reacción se diluyó luego con agua (20 ml) y 1N HCl (10,5 ml) y se recogió en cloruro de metileno (20 ml). Los compuestos orgánicos se separaron y la capa acuosa se extrajo tres veces con cloruro de metileno (10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo crudo se purificó luego por cromatografía en gel de sílice para dar 63-1 como una mezcla diastereoisómera 1:1. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H53F2N4O7 : 715,4; encontrado: 715,4.
[0588] Paso 2. Preparación de 63-2 y 63-3: se disolvieron la mezcla diastereomérica 63-1 (496 mg, 0,695 mmol) y el catalizador Zhan 1B (53,8 mg, 0,0695 mmol, Strem) en 140 ml de DCE anhidro y Sparged con N2 durante 30 minutos. La mezcla se calentó luego a 100°C durante 90 minutos, y se añadió una porción adicional de catalizador Zhan 1B (54 mg, 0,695 mmol, Strem). La reacción se enfrió luego a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0% a 40% de acetato de etilo en hexanos) para producir diastereoisómeros individuales 63-2 (fracción de elución temprana) y 63-3 (fracción de elución tardía). Fracción de elución temprana: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49F2N4O7 : 687,4; encontrado: 687,2. Fracción de elución tardía: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49F2N4O7 : 687,4; encontrado: 687,3. Paso 3.
[0589] Preparación de 63-4: se añadió paladio sobre carbono (10% p/p, 155 mg) a una solución de 63-2 (155 mg, 0,226 mmol) en un etanol (3 ml). La mezcla se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 1 hora y luego se filtró a través de un tapón de Celite y se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida para producir 63-4, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H51F2N4O7 : 689,4; encontrado: 689,3.
[0590] Paso 6. Preparación de 63-5: se disolvió el compuesto intermedio 63-4 (153,5 mg, 0,222 mmol) en una mezcla de 1:1 de TFA: DCM (6 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró luego al vacío para dar 63-5, que se usó en la etapa posterior sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C32H44N4O7 : 633,3; encontrado: 633,2.
[0591] Paso 7. Preparación del Ejemplo 63: HATU (99,2 mg, 0,261 mmol) y DIPEA (271 mL, 2,1 mmol) se agregaron a una mezcla de 63-5 (140,5 mg, 0,222 mmol) y A10 (100 mg, 0,316 mmol) en 1 ml de DMF. Después de agitarse durante la noche a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua, se acidificó a pH 1 con HCl acuoso 1 N y se extrajo tres veces con cloruro de metileno (15 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (5 - 100% de acetonitrilo en agua, con 0,1% de tampón de ácido trifluoroacético) para proporcionar el Ejemplo 63. Tiempo de Retención de HPLC analítica: 8,951 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F4N6O9S: 883,4; encontrado: 883,2. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 57,96 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,80 (td, J = 55,8, 6,7 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,26 - 4,14 (m, 2H), 4,01 -3,91 (m, 3H), 2,65 - 2,47 (m, 2H), 2,11 - 1,85 (m, 5H), 1,84 - 1,61 (m, 3H), 1,61 - 1,46 (m, 10H), 1,46 - 1,32 (m, 3H), 1,33 - 1,17 (m, 4H), 1,09 (d, J = 15,9 Hz, 10H), 1,04 - 0,95 (m, 1H), 0,94 - 0,84 (m, 2H), 0,21 - 0,12 (m, 1H).
[0592] Ejemplo 64. Preparación de (1aS, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aS)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-14-metoxi-1a-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida
[0593] El Ejemplo 64 se preparó de manera similar al Ejemplo 63, sustituyendo eluido tardío 63-3 por elución temprana 63-2 en el Paso 3. Luego se aisló el Ejemplo 64. Tiempo de HPLC analítico: 8,535 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 883,4; encontrado: 883,3. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 57,97 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,45 - 7,16 (m, 2H), 5,97 - 5,52 (m, 2H), 4,74 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,50 - 4,16 (m, 1H), 4,06 -3,86 (m, 5H), 2,77 - 2,57 (m, 1H), 2,51 - 2,18 (m, 2H), 2,16 - 1,86 (m, 5H), 1,75 - 1,32 (m, 16H), 1,33 - 1,03 (m, 14H), 1,02 - 0,76 (m, 2H), 0,42 - -0,09 (m, 1H).
[0594] Ejemplo 65, Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-9-propilo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida
[0595] Paso 1. Preparación del Ejemplo 65: A una solución de 60-6 (52 mg, 82 pmol) e Intermedio A10 (37,5 mg, 123 pmol) en MeCN (411 pL) se añadió HATU (47,5 mg, 123 pmol) seguido de DIPEA (73 ml, 411 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 20 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se purificó por HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18110A, 5 - 100% de MeCN/H _ {2} O, 0,1% de modificador de ácido trifluoroacético) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 65 como una sal de TFA. Tiempo de HPLC analítico: 8,99 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F4N6O9S: 883,36; encontrado: 883,60. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,26 (s, 1H), 7,95 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,89 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 5,81 (td, Jh-f = 55,5 Hz, J = 6,5 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,17 (dd, J = 12,2, 3,8 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,73 -3,66 (m, 1H), 2,73 - 2,64 (m, 1H), 2,63 - 2,45 (m, 1H), 2,01 (br s, 3H), 1,85 - 1,62 (m, 4H), 1,62 - 1,53 (m, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,48 - 1,22 (m, 5H), 1,08 (s, 9H), 1,01 (app t, J = 7,3 Hz, 4H), 0,94 - 0,87 (m, 2H), 0,80 - 0,69 (m, 1H), 0,50 (d, J = 7,1 Hz, 1H).
[0596] Ejemplo 66. Preparación de (4aR, 8S, 11S, 12S, 13R, 25aR)-8-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-12-etilo-17-metoxi-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-10,13-metanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecina-11-carboxamida.
[0597] Paso 1. Preparación de 66-1 y 66-2, A una solución de Intermedio 70-3 (283 mg, 0,42 mmol) en CH2Cl2 (5 ml) se agregó TMSOTf (380 ml, 2,1 mmol). Después de agitarse durante 2 h, la mezcla de reacción se vertió en agitación 1 N NaOH (12 ml). La mezcla se transfirió a un embudo de separación, se acidificó a pH 3 con 1N HCl, se extrajo con CH2Cl2 , se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0-10% Me-OH/EtOAc) para producir una mezcla de 66-1 y 66-2, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H47N4O7: 623,34; encontrado: 623,66.
[0598] Paso 2. Preparación de 66-3 y 66-4, A una solución de 66-1 y 66-2 (58 mg, 0,09 mmol), intermedio A9 (32
mg, 0,11 mmol), TBTU (42 mg, 0,13 mmol) y DMAP (16 mg, 0,14 mmol) en DMF (3 mL) se añadió DIPEA (47 |j|, 0,27 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 23 h. La reacción se inactivó con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con una solución sat. NaHCÜ3 , salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El material bruto se purificó por HPLC de fase inversa (Gemini, 30-85% de ACN/H2O 0,1% de TFA) y se liofilizó para dar la sal de TFA de la mezcla de los Intermedios 66-3 y 66-4, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,39; encontrado: 859,65,
[0599] Paso 3. Preparación del Ejemplo 66: A 66-3 y 66-4 (5 mg, 0,005 mmol) que se recogió en EtOH (2 ml) y se trató con Pd/C (10%, 5 mg). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOAc y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (MeOH al 0-10%/EtOAc) y se liofilizó para dar el compuesto original. Tiempo de HPLC analítico: 9,15 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C42H59F2N6O9S: 862,01; encontrado: 862,37. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 57,94 - 7,73 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 6,87 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 6,05 (m, 2H), 4,83 - 4,74 (m, 1H), 4,70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4,52 - 4,28 (m, 2H), 4,16 (m, 2H), 4,05 - 3,86 (m, 4H), 3,86 - 3,45 (m, 4H), 3,22 - 3,00 (m, 1H), 2,89 (s, 1H), 2,77 - 2,55 (m, 1H), 2,25 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 2,09 - 0,81 (m, 35H).
[0600] Ejemplo 67. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2S)-2-(2,2-difluoroetilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0601] El Ejemplo 67 se preparó de forma similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio A8 por el Intermedio A10 en el Paso 8, La sal de TFA del Ejemplo 67 se aisló. Tiempo de HPLC analítico: 8,85 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,99; encontrado: 847,64. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,00 (s, 1H); 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,23 (dd, J = 9,2,2,4Hz, 1H); 7,15 (d, J = 2,4Hz, 1H); 5,89 (tt, Jh-f = 54Hz, J = 4,4Hz, 1H); 5,89 (brs, 1H) ; 4,61 (d, J = 7,2Hz, 1H); 4,39 (br s, 1H); 4,37 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 4,16 (dd, J = 9,2 Hz, 7,2 Hz, 1H); 3,92 (s, 3H); 3,78 -3,72 (m, 1H); 3,10-2,88 (m, 1H); 2,86-2,74 (td, J = 12, 4,4 Hz, 1H); 2,62-2,53 (m, 1H); 2,18-2,04 (m, 1H); 1,88-1,46 (m, 14H); 1,53 (s, 3H); 1,28-1,20 (m, 4H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,96 (m, 2H); 0,96-0,86 (m, 2H); 0,78-0,67 (m, 1H); 0,54 0,47 (m, 1H).
[0602] Ejemplo 68. Preparación de (4aR, 8S, 11S, 12S, 13R, 25aS)-8-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-21,21-difluoro-17-metoxi-12-metilo-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-10,13-metanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecina-11 -carboxamida
[0603] Paso 1. Preparación de 68-1 y 68-2 (mezcla): se añadió TMSOTf (0,6 ml, 3,3 mmol) a una solución de intermedio 62-3 (424 mg, 0,606 mmol) en 7 ml de Diclorometano a temperatura ambiente. Después de 1 hora, se agregaron 0,2 mL adicionales de TMSOTf. Después de un total de tres horas, la mezcla de reacción se concentró para producir una mezcla de 68-1 y 68-2 isómeros, que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C33H43F2N4O7: 645,30; encontrado: 645,49.
[0604] Paso 2. Preparación de 68-3 y 68-4 (mezcla): HATU (209 mg, 0,550 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,25 ml, 1,43 mmol) se agregaron a la mezcla de 68-1 y 68- 2 de la etapa anterior (176 mg, 0,273 mmol) y el Intermedio A9 (161 mg, 0,555 mmol) en 4 ml de acetonitrilo y 2 ml de DMF bajo argón. Después de una hora, se agregaron 100 mg adicionales de Intermedio A9. Después de dos horas, la mezcla de reacción se recogió en 30 ml de acetato de etilo y se lavó con 20 ml de HCl acuoso 1N. La capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera al 50%, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) y HPLC prep de fase inversa (50-100% de acetonitrilo en agua, con 0,1% de tampón de ácido trifluoroacético) para producir las sales de ácido trifluoroacético de una mezcla de 68-3 y 68-4, LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C41H53F4N6O9S: 881,35; encontrado: 881,50.
[0605] Paso 3. Preparación del Ejemplo 68: Se añadió paladio sobre carbono (10% en peso de Pd, 2 mg, 0,0019 mmol) a una solución de la mezcla de 68-3 y 68-4 de la etapa anterior (4,5 mg, 0,0045 mmol) en 1 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla se agitó durante dos horas. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El filtrado se concentró al vacío para dar el Ejemplo 68. Tiempo de HPLC analítico: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H55F4N6O9S: 883,36; encontrado: 883,64. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): ó 7,94 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 7,34-7,30 (m, 2H), 6,13 (td, Jh-f = 57 Hz, J = 6,8 Hz, 1H), 5,88-5,84 (m, 1H), 4,62 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,38-4,30 (m, 2H), 4,20-4,05 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 2,87-2,76 (m, 2H), 2,34-2,16 (m, 2H), 1,92-1,54 (m, 6H), 1,46-1,36 (m, 3H), 1,34-1,12 (m, 8H), 1,20 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 1,08-0,96 (m, 4H), 1,04 (s, 9H), 0,93-0,78 (m, 4H).
[0606] Ejemplo 69. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-14-etoxi-9-etilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a
tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida
[0607] Paso 1. Preparación de 69-2, Se suspendió quinoxalinol 55-1 (54 mg, 0,086 mmol) en ACN (2 ml) y se trató con Cs2CO3 (84 mg, 0,259 mmol) y bromoetano (0,032 ml, 0,432 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se filtró y el material bruto se purificó por cromatografía flash en columna para proporcionar 69-2, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H52N4O7 : 652,38; encontrado: 653,41.
[0608] Paso 2. Preparación de 69-3, El intermedio 69-2 (0,086 mmol teórico) se trató con DCM (10 ml) y TMSOTf (1,0 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la reacción fue completa determinada por LCMS. La reacción se concentró a presión reducida para proporcionar 69-3, que se llevó a cabo sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H44N4O7 : 596,32; encontrado: 597,38.
[0609] Paso 3. Preparación del Ejemplo 69. El ácido carboxílico 69-3 (0,0,086 mmol teórico) se trató con A10 intermedio (40 mg, 0,130 mmol), TBTU (47 mg, 0,147 mmol), DMAP (18). mg, 0,147 mmol), DCM (3 ml) y DIPEA (0,075 ml, 0,432 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h, luego se concentró a presión reducida y se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar el Ejemplo 69 en forma de una sal de TFA. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H56F2N6O9S: 846,38; encontrado: 847,75,
[0610] Ejemplo 70. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo]-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-10-etilo-15-metoxi-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopropa[4',5']ciclopenta[1',2':18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida
[0611] Paso 1. Preparación de 70-1: A una solución de 1-2 (575 mg, 1,41 mmol), D12 (410 mg, 1,26 mmol) y HATU (696 mg, 1,80 mmol) en DMF (12 ml) se añadió DIPEA (1,0 ml, 5,64 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de agitarse durante 2 h, se añadió a la reacción HATU adicional (350 mg, 0,92 mmol) y DIPEA (0,5 ml, 2,8 mmol) y la mezcla se agitó durante 14 h. La reacción se detuvo con una solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (10-30% de AcOEt/hexanos) para producir el intermedio 70-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C3sH54ClN4O7: 713,37; encontrado: 713,95,
[0612] Paso 2. Preparación de 70-2: A una solución de 70-1 (542 mg, 0,76 mmol), TEA (0,16 ml, 1,14 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (153 mg, 1,14 mmol) en EtOH (10 ml) Se añadió PdC¡2(dppf)(62 mg, 0,08 mmol). La reacción se desgasificó con N2 durante 10 min y se calentó a 80°C durante 1 h. La reacción se detuvo con una solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 0-20%/hexanos) para dar el intermedio 70-2, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C40H57N4O7 : 705,42; encontrado: 705,05,
[0613] Pasos 3 y 4. Preparación de 70-3: a una solución de 70-2 (470 mg, 0,66 mmol) en DCE (100 ml) se añadió catalizador Zhan 1B (49 mg, 0,07 mmol) y la reacción se desgasificó durante 30 minutos con N2. La reacción se calentó a 100°C durante 1 h, se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para dar el producto (358 mg; LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H53N4O7 : 677,39; encontrado: 677,52) que se recogió en EtoH (6 ml) y EtOAc (2 ml) y se trataron con Pd/C (10%, 350 mg). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOAc y se concentró (358 mg intermedio 70-3) que se usó
posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C38H55N4O7: 679,41; encontrado: 679,44.
[0614] Paso 5. Preparación de 70-4: A una solución de 70-3 (100 mg, 0,15 mmol) en DCM (1 ml) se añadió TFA (1 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con H2O, se basificó a pH 7 con una solución sat. de NaHCO3, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró para dar un residuo del intermedio 70-4 que se usó posteriormente sin purificación adicional LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C34H47N4O7 : 623,34; encontrado: 623,44.
[0615] Paso 6. Preparación del Ejemplo 70: A una solución de 70-4 (94 mg, 0,15 mmol), intermedio A9 (65 mg, 0,22 mmol), TBTU (87 mg, 0,27 mmol) y DMAP (27 mg, Se añadieron 0,22 mmoles) en Dc M (3 ml) DIPEA (0,13 ml, 0,75 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se inactivó con agua, se diluyó con EtOAc, se lavó con una solución sat. NaHCO3, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El material bruto se purificó mediante HPLC de fase inversa (Gemini, 30-85% de ACN/H2O 0,1% de TFA) y se liofilizó para dar el Ejemplo 70 (23 mg) como una sal de TFA.
Tiempo de HPlC analítico: 9,32 min.LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C42H57F2N6O9S: 859,39; encontrado: 859,54. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,31 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,26 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,09 - 5,68 (m, 2H), 5,51 (s, 1H), 5,07 - 4,97 (m, 1H), 4,70 - 4,55 (m, 1H), 4,42 - 4,29 (m, 2H), 4,22 (dd, J = 12,0, 4,1 Hz, 1H), 3,96 (s, 2H), 3,75 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 3,02 (m, 2H), 2,93 - 2,67 (m, 1H), 2,56 (m, 1H), 2,13 -1,04 (m, 30H), 1,00 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 0,90 (m, 3H), 0,65 - 0,46 (m, 2H).
[0616] Ejemplo 71, Preparación de (4aR, 8S, 11S, 12S, 13R, 25aR)-8-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-17-metoxi-12-metilo-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-1,3:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecina-11-carboxamida y
[0617] Paso 1: A una solución de amina 18-2 (315 mg, 0,80 mmol), DIPEA (350 ml, 2,0 mmol) y una mezcla 1:1 de ácidos D19 (270 mg, 0,80 mmol) en MeCN (8 Se agregó HATU (400 mg, 1,05 mmol). La solución resultante se agitó durante 2,5 h a temperatura ambiente, momento en el que se diluyó con EtOAc (50 ml) y HCl acuoso 0,2 N (30 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. La purificación por cromatografía en gel de sílice (10% a 30% de EtOAc en hexanos) proporcionó 474 mg de un aceite incoloro que se usó directamente en la siguiente etapa.
[0618] Paso 2: Una suspensión del producto del paso 1 (474 mg, ca. 0,65 mmol), PdCh(dppf)^CH2Ch (40 mg, 0,049 mmol) y vinilflorifluoroborato de potasio (189 mg, 1,41 mmol) en EtOH (8 ml) se rociaron con Ar durante varios minutos y se añadió Et3N (200 ml, 1,4 mmol). La mezcla resultante se calentó bajo Ar a 75°C mediante un baño de aceite. Después de agitarse durante 2, 25 h, la mezcla de reacción se enfrió a ta y se diluyó con EtOAc (35 ml) y salmuera medio saturada (20 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. La purificación por cromatografía en gel de sílice proporcionó un aceite amarillo que se usó directamente en la siguiente etapa.
[0619] Paso 3: Una solución del producto del Paso 3 (395 mg, 0,56 mmol) en 1,2-DCE (180 ml) se roció con Ar durante 10 min. Luego se añadió catalizador de metátesis Zhan 1B (61 mg, 0,083 mmol) como una solución en DCE (4 ml) y la solución resultante se calentó a 85°C. Después de agitarse 1,75 h, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró sobre gel de sílice (5 g) y se purificó por cromatografía en gel de sílice (10 a 15 a 25% de AcOEt en hexanos) para proporcionar 116 mg de un producto de elución rápida y 84 mg de un producto de elución lenta.
[0620] Paso 4-5 (diastereómero de elución rápida): el producto de elución rápida del Paso 3 se disolvió en EtOAc: EtOH 1:1 (4 ml). Se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 45 mg) y el recipiente de reacción se purgó dos veces con 1 atm de H2. La mezcla de reacción se agitó durante 2,5 h bajo 1 atm de H2 y luego se filtró a través de celite con EtOAc para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 (1 ml) y se trató con TFA (2 ml). Después de agitarse durante 2 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se repartió entre EtOAc (15 ml) y NaHCO3 acuoso saturado al 15% (10 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con salmuera (10 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró para proporcionar 71-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H47N4O7 : 623,3; encontrado: 623,2.
[0621] Paso 4-5 (diastereómero de elución lenta): el producto de elución lenta del Paso 3 se disolvió en EtOAc (1 ml) y EtOH (7 ml). Se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 85 mg) y el recipiente de reacción se purgó dos veces con 1 atm de H2. La mezcla de reacción se agitó durante 3 h bajo 1 atm de H2 y luego se filtró a través de celite con EtOAc para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 (1 ml) y se trató con TFA (2 ml). Después de agitarse durante 2 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se repartió entre EtOAc (15 ml) y NaHCO3 acuoso saturado al 15% (10 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con salmuera (10 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró para proporcionar 71-2, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C34H47N4O7: 623,3; encontrado: 623,2.
[0622] Paso 6: Preparación del Ejemplo 71: A una suspensión de ácido 71-1 (49 mg, 0,079 mmol) y clorhidrato de amina A9 (41 mg, 0,14 mmol) en MeCN (1 ml) se añadió DIPEA (100 ml, 0,57 mmol). Se añadió hAt U (45 mg, 0,12 mmol) a la solución resultante, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14,5 h. La reacción se diluyó luego con EtOAc (20 ml), HCl acuoso 0,2 M (10 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se disolvió en CH2Cl2 y se concentró en 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (4% a 45% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 71, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. Para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,1. 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 10,13 (s, 1H), 7,81 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,19 (dd, J = 9,1, 2,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 5,97 (td, J = 55,5, 6,9 Hz, 1H), 5,59 - 5,45 (m, 2H), 4,96 (dd, J = 14,4, 6,2 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,13 (dt, J = 12,0, 7,7 Hz, 2H), 3,93 (s, 3H), 2,99 - 2,63 (m, 4H), 2,40 - 2,23 (m, 2H), 2,15 - 0,83 (m, 34H).
[0623] Ejemplo 72. Preparación de (4aS, 8S, 11S, 12S, 13R, 25aS)-8-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-17-metoxi-12-metilo-6,9-dioxo-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-hexadecahidro-1H,11H-1,3:10,13-dimetanoquinoxalino[2,3-k][1,10,3,6]benzodioxadiazaciclononadecina-11-carboxamida.
[0624] Paso 1: Preparación del Ejemplo 72: A una suspensión de ácido 71-2 (49 mg, 0,079 mmol) y clorhidrato de amina A9 (38 mg, 0,13 mmol) en MeCN (1 ml) se añadió DIPEA (100 ml, 0,57 mmol). Se añadió HATU (41 mg, 0,11 mmol) a la solución resultante, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14,5 h. La reacción se diluyó luego con EtOAc (20 ml), HCl acuoso 0,2 M (10 ml) y salmuera (10 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se disolvió en CH2G 2 y se concentró en 2 g de gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice (4% a 45% de acetona en hexanos) proporcionó un residuo amorfo que se liofilizó en agua y MeCN para proporcionar el Ejemplo 72. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H57F2N6O9S: 859,4; encontrado: 859,0. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 59,72 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 7,86 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,25 - 7,17 (m, 2H), 5,98 - 5,88 (m, 1H), 5,69 (td, J = 55,4, 6,9 Hz, 1H), 4,81 - 4,69 (m, 1H), 4,68 - 4,56 (m, 2H), 4,33 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,35 (dd, J = 9,7, 7,0 Hz, 1H), 3,24 -3,13 (m, 1H), 2,97 - 2,87 (m, 1H), 2,87 - 2,72 (m, 2H), 2,57 - 2,45 (m, 1H), 2,38 - 2,28 (m, 1H), 2,17 - 0,71 (m, 34H).
[0625] Ejemplo 73. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-9-etilo-14-metoxi-N-[(1R, 2R)-2-metilo-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0626] El Ejemplo 73 se preparó de manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio A11 por el Intermedio A10 en el Paso 8, La sal de TFA del Ejemplo 73 se aisló. Tiempo de HPLC analítico: 8,72 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C40H57N6O9S: 797,98; encontrado: 797,54. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 58,84 (s, 1H); 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,22 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H); 7,13 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 5,87 (d, J = 3,2 Hz, 1H); 4,57 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 4,39 (br s, 1H); 4,37 (br d, J = 10 Hz, 1H); 4,15 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H); 3,92 (s, 3H); 3,74 (m, 1H); 3,10-2,88 (m, 1H); 2,80 (td, J = 12,4, 4 Hz, 1H); 2,58 (m, 1H); 1,89-1,66 (m, 3H); 1,66-1,38 (m, 11H); 1,52 (s, 3H); 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,16 (d, J = 6 Hz, 3H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,84 (m, 4H); 0,78-0,66 (m, 1H); 0,55-0,20 (m, 1H).
[0627] Ejemplo 74. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-fluorociclopropilo) sulfamoil carbamoílo}ciclopropilo] 9 etilo 14 metoxi 3,6 dioxo 1,1a 3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxiamida.
[0628] El Ejemplo 74 se preparó de manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio A12 por el Intermedio A10 en el Paso 8, La sal de TFA del Ejemplo 74 se aisló. Tiempo de HPLC analítico: 8,81 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C39H52F3N6O9S: 837,35; encontrado: 837,54. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,26 (s, 1H); 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,22 (dd, J = 9,2,2,4Hz, 1H); 7,14 (d, J = 2,4Hz, 1H); 5,89 (d, J = 3,6Hz, 1H); 5,82 (td, Jh-f = 56Hz, J = 6,4Hz, 1H); 4,56, (d, J = 7,2 Hz, 1H); 4,39 (s, 1H); 4,38 (d, J = 12 Hz, 1H); 4,16 (dd, J = 12, 7,2 Hz, 1H); 3,92 (s, 3H); 3,78 -3,72 (m, 1H); 3,10-2,89 (m, 1H); 2,80 (td, J = 12, 4 Hz, 1H); 2,63-2,54 (m, 1H); 2,02 (m, 2H); 1,95-1,66 (m, 3H); 1,66-1,36 (m, 9H); 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,14-1,04 (m, 2H); 1,09 (s, 9H); 1,04-0,92 (m, 2H); 0,78-0,68 (m, 1H); 0,57-0,46 (m, 1H).
[0629] Ejemplo 75, Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-1-{[(1-clorociclopropilo) sulfo-nilo]carbamoílo}-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0630] El Ejemplo 75 se preparó de manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio A13 por el Intermedio A10 en el Paso 8, La sal de TFA del Ejemplo 75 se aisló. Tiempo de HPLC analítico: 8,89 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C39H52CF2N6O9S: 853,32; encontrado: 853,94. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,24 (s, 1H); 7,79 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,22 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H); 7,13 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 5,88 (d, J = 3,2 Hz, 1H); 5,84 (td, Jh-f = 55,6 Hz, J = 6,8 Hz, 1H); 4,57 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 4,39 (brs, 1H); 4,38 (d, J = 12 Hz, 1H); 4,16 (dd, J = 12, 7,2 Hz, 1H); 3,92 (s, 3H); 3,77-3,73 (m, 1H); 3,00-2,88 (m, 1H); 2,86-2,75 (m, 1H); 2,64-2,54 (m, 1H); 2,10-1,90 (m, 4H); 1,90-1,37 (m, 12H); 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,10 (s, 9H); 1,02-0,96 (m, 2H); 0,78-0,64 (m, 1H); 0,56-0,45 (m, 1H).
[0631] Ejemplo 76. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-18,18-difluoro-14-metoxi-1a,9-dimetilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0632] Paso 1. Preparación de 76-1: HATU (502 mg, 1,32 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,70 mL, 4,02 mmol) se agregaron a una mezcla de 46-2 (434 mg, 0,998 mmol) y el Producto Intermedio D17 (350 mg, 1,24 mmol) en 16 ml de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-25% en hexanos) para dar 76-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H51F2N4O7: 701,36; encontrado: 701,57.
[0633] Paso 2. Preparación de 76-2 y 76-3: una mezcla diastereomérica 76-1 (550 mg, 0,786 mmol) y Zhan 1B catalizador (69 mg, 0,094 mmol, Strem) en 157 ml de DCE se desoxigenó bajo argón durante 25 minutos. La mezcla se calentó luego a reflujo durante 90 minutos. Se añadieron 35 mg adicionales de catalizador Zhan 1B y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 45 minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-35% en hexanos) para producir diastereoisómeros individuales 76-2 (componente de elución temprana) como una película sólida blanca y 76-3 (componente de elución tardía) como una película sólida marrón. Elución temprana 76 2: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H47F2N4O7 : 673,33; encontrado: 673,45, Elución tardía 76-3: LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H47F2N4O7 : 673,33; encontrado: 673,47.
[0634] Paso 3. Preparación de 76-4: Se añadió paladio sobre carbono (10% en peso de Pd, 51 mg, 0,048 mmol) a una solución de 76-2 (175 mg, 0,260 mmol) en 9 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó con etanol. El filtrado se concentró al vacío hasta un rendimiento 76-4, que se usó en el siguiente paso sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H49F2N4O7 : 675,35; encontrado: 675,53.
[0635] Paso 4: Preparación de 76-5: Se añadió lentamente TFA (1,2 ml, 15,6 mmol) a una solución de 76-4 (155 mg, 0,230 mmol) en 3,4 ml de diclorometano. Después de 4 horas, la mezcla se concentró a presión reducida hasta casi sequedad. El residuo resultante se recogió en 25 ml de acetato de etilo, se lavó con 15 ml de agua, 15 ml de
solución sat. NaHCÜ3 (aq), y se separó. Las capas acuosas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 30 ml de salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir 76-5, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H41 F2N4O7 : 619,29; encontrado: 619,44.
[0636] Paso 5. Preparación del Ejemplo 76: HATU (160 mg, 0,421 mmol) y DIPEA (0,20 mL, 1,15 mmol) se agregaron a una mezcla de 76-5 (140 mg, 0,226 mmol) e Intermedio A10 (139 mg, 0,457 mmol) en 7,5 mL de MeCN bajo argón. Después de agitarse durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 30 ml de acetato de etilo y se lavó con 20 ml de HCl acuoso 1N. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-45% en hexanos) y HPLC prep de fase inversa (50-100% de acetonitrilo en agua, con 0,1% de tampón de ácido trifluoroacético) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo 76 (Tiempo de HPLC analítico: 8,80 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C40H53F4N6O9S: 869,35; encontrado: 869,59. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 9,19 (s, 1H), 7,94 (d, J = 9,2Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 9,2,2,8Hz, 1H), 7,27 (d, J = 2,8Hz, 1H), 5,78 (td, Jh-f = 56Hz, J = 7,2Hz, 1H), 5,76-5,74 (m, 1H), 4,56 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,27-4,19 (m, 1H), 4,22 (s, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,76-2,70 (m, 1H), 2,62-2,43 (m, 1H), 2,14-1,94 (m, 3H), 1,90-1,80 (m, 1H), 1,80-1,62 (m, 3H), 1,56-1,52 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,41-1,36 (m, 1H), 1,27-1,18 (m, 1H), 1,11 (s, 9H), 1,09-1,04 (m, 5H), 1,03-0,94 (m, 2H), 0,87-0,81 (m, 3H), 0,17-0,12 (m, 1H).
[0637] Ejemplo 77. Preparación de (1aS, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aS)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-18,18-difluoro-14-metoxi-1 a,9-dimetilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0638] El Ejemplo 77 se preparó de una manera similar al Ejemplo 76, sustituyendo la elución tardía de 76-3 por elución temprana 76-2 en el paso 3. Luego se aisló el Ejemplo 76. Tiempo de HPLC analítico: 8,46 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F4N6O9S: 869,35; encontrado: 869,53. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 7,95 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,58-6,54 (m, 1H), 5,75 (td, Jh-f = 55 Hz, J = 6,8 Hz, 1H), 5,54-5,50 (m, 1H), 4,65 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,26-4,18 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,92-2,71 (m, 1H), 2,50 1,94 (m, 6H), 1,68-1,57 (m, 2H), 1,56-1,52 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,50-1,47 (m, 1H), 1,46-1,38 (m, 3H), 1,44 (s, 3H), 1,27-1,18 (m, 2H), 1,17-1,01 (m, 3H), 1,09 (s, 9H), 0,94-0,82 (m, 4H), 0,17-0,12 (m, 1H).
[0639] Ejemplo 78. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 19E, 22aR)-5-terc-butilo-14-ciano-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,17,17a,18,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0640] Pasos 1-4. Intermedio 78-4 se preparó de manera similar al Intermedio 17-4, utilizando E6 en lugar de E3.
[0641] Paso 5: A una solución de 78-4 (90 mg, 0,135 mmol) en EtOH (0,7 mL) se le añadió NaBH4 (21 mg, 0,54 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de celite y se concentró para dar el intermedio 78-5, que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H45F2N5O6 : 669,76; encontrado: 669,73.
[0642] Pasos 6 y 7: Preparación del Ejemplo 78: A una solución de 78-5 (35 mg, 0,31 mmol) en DCM (0,4 ml), se añadió TFA (0,2 ml) y la mezcla se agitó a 20°C. durante 3 h. Los disolventes se eliminaron al vacío para proporcionar un residuo que se usó posteriormente sin purificación adicional. A una suspensión de este residuo (33 mg, 0,05 mmol) e Intermedio A10 (27 mg, 0,1 mmol) en DCM (0,3 mL) se añadió TBTU (26 mg, 0,08 mmol) y DIPEA (35 mL, 0,2 mmol) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se purificó directamente por HPLC de fase inversa (columna Gemini 5u C18110A, 50-100% ACN/H2O TFA al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar la sal TFA del Ejemplo 78. Tiempo de HPLC analítico: 7,994 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C40H49F4N7O8S: 863,92; encontrado: 864,20. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,35 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 7,18 (dd, 1H), 6,64 (d, 1H), 6,01-5,82 (m, 2H), 5,41 (m, 2H), 4,57 - 4,07 (m, 5H), 3,52 (m, 1H), 2,55-2,28 (m, 2H), 2,06 - 1,98 (m, 2H), 1,85 (m, 1H), 1,69 - 1,37 (m, 9H), 1,33 (m, 2H), 1,06-0,87 (m, 16H), 0,70 (m, 2H)., 0,49 (m, 1H).
[0643] Ejemplo 79. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-15-cloro-N-[(1R, 2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoílo]-2-(difluorometilo)ciclopropilo]-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopropa[4',5']ciclopenta[1',2':18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9
carboxamida.
[0644] Paso 1. Preparación de 79-1, Se suspendió sulfonilo quinoxalina E5 (920 mg, 3,32 mmol) en MeCN (17 ml), luego se trató con el intermedio B1 (1,00 g, 3,32 mmol) y Cs2CO3. Después de 17 h, la mezcla de reacción se filtró sobre celite y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en columna de sílice (10% a 30% de EtOAc/Hex) para proporcionar el éter 79-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M-Boc+2H]+ calculado para C18H22CbN3O3: 398,10; encontrado: 398,12.
[0645] Paso 2. Preparación de 79-2, Se disolvió carbamato de ferc-butilo 79-1 (513 mg, 1,03 mmol) en DCM (10 ml) y se trató con HCl (4,0 ml en dioxano, 5 ml, 20 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h, luego se concentró a presión reducida para proporcionar clorhidrato de amina 79-2, que se llevó a cabo sin purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C1sH22ChN3O3: 398,10; encontrado: 398,16.
[0646] Paso 3. Preparación de 79-3, El clorhidrato de amina 79-2 (1,03 mmol teórico) y el intermedio D12 (336 mg, 1,04 mmol) se combinaron y se trataron con BEP (285 mg, 1,04 mmol), EtOAc (9 ml), Nm P (1 ml) y DIPEA (0,90 ml, 5,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50°C durante 3 h, luego se enfrió a temperatura ambiente. Después de 15 h adicionales, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, luego se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó por cromatografía en columna de sílice (10% a 25% de EtOAc/Hex) para proporcionar la amida 79-3, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49CbN4O6: 703,30; encontrado: 703,91.
[0647] Paso 4. Preparación de 79-4, La cloro quinoxalina 79-3 (541 mg, 0,769 mmol) se trató con vinilotrifluoroborato de potasio (154 mg, 1,15 mmol), aducto de diclorometano Pd(dppf)Cl2 (63 mg, 0,077 mmol), EtOH (8 ml) y trietilamina (0,16 ml, 1,15 mmol). La mezcla agitada se calentó a reflujo durante 1 h, luego se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. La solución orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, luego se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se purificó por cromatografía en columna de sílice (10% a 30% de AcOEt/Hex) para proporcionar quinoxalina de vinilo 79-4, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C3sH52ClN4O6: 695,36; encontrado: 695,10.
[0648] Paso 5. Preparación de 79-5, La quinoxalina de vinilo 79-4(390 mg, 0,561 mmol) se trató con DCE (112 ml) y catalizador Zhan-B (38 mg, 0,0561 mmol). La mezcla agitada se desgasificó con N2 burbujeante durante 25 minutos, luego se calentó a reflujo bajo una atmósfera de Ar. Después de 1,5 h, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se purificó por cromatografía en columna de sílice (10% a 30% de AcOEt/Hex) para proporcionar el macrociclo 79-5, lCmS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calculado para C36H4sClN4O6: 667,33; encontrado: 667,86.
[0649] Paso 6. Preparación de 79-6. El macrociclo 79-5 (198 mg, 0,297 mmol) se trató con EtOAc (100 ml) y 5% de Rh/alúmina (100 mg). Se burbujeó gas H2 a través de la solución durante 1 minuto y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de H2. Después de 45 minutos, se añadió más 5% de Rh/alúmina (200 mg). De nuevo, se burbujeó gas H2 a través de la solución durante 1 minuto y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de H2. Después de otras 1 h, la mezcla de reacción se filtró sobre celite y se concentró a presión reducida. El material (79-6) se continuó sin purificación. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H50ClN4O6: 669,34; encontrado: 669,63.
[0650] Paso 7. Preparación de 79-7, El macrociclo 79-6 (0,297 mmol teórico) se trató con DCM (10 ml) y TFA (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 h, luego se concentró a presión reducida. El residuo crudo se disolvió en EtOAc y la solución orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado y ácido cítrico 1M. Se añadió salmuera después del lavado con ácido cítrico para romper la emulsión que se formó. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en columna de sílice (100% de EtOAc) para proporcionar 79-7 impuro que se llevó a cabo sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C32H42ClN4O6: 613,28; encontrado: 613,22.
[0651] Paso 8. Preparación del Ejemplo 79. El ácido carboxílico 79-7 (0,264 mmol teórico) se trató con el intermedio A9 (156 mg, 0,537 mmol), TBTU (170 mg, 0,528 mmol), DMAP (65 mg, 0,528 mmol).), DCM (2 ml) y DIPEA (0,23 ml, 1,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 19 h, luego se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar el Ejemplo 79 en forma de una sal TFA. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H52CF2N6O8S: 849,32; encontrado: 849,16. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,17 (s, 1H), 7,86 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,77 (t, J = 3,5 Hz, 1H), 7,55 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1H), 5,84 (td, J = 55,7, 6,7 Hz, 1H), 5,62 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,98 (t, J = 10,6 Hz, 1H), 4,53 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 4,42 - 4,26 (m, 2H), 4,19 (dd, J = 12,0, 3,9 Hz, 1H), 3,34 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 2,99 (tt, J = 8,2, 4,8 Hz, 2H), 2,78 (ddt, J = 21,6, 14,2, 5,7 Hz, 2H), 2,28-2,12 (m, 1H), 2,08-1,16 (m, 19H), 1,16-0,96 (m, 17H), 0,58 (dd, J = 8,3, 4,1 Hz, 1H), 0,55 - 0,44 (m, 1H).
[0652] Ejemplo 80. Preparación de (3aR, 7S, 10S, 11S, 12R)-1-acetilo-7-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-16-metoxi-11-metilo-5,8-dioxo-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadecahidro-10H-9,12-metanopirrolo[2',3':18, 19][1,10,3,6]dioxadiacazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-10- carboxamida
[0653] Paso 1. Preparación de 80-1: se disolvieron en DMF (10 ml) la amina 18-2 (195 mg, 0,495 mmol) y el Intermedio D18 (192,8 mg, 0,544 mmol). Se añadió DIPEA (430 ml, 2,48 mmol) seguido de HATU (207 mg, 0,544 mmol) a temperatura ambiente. Después de 1,5 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo bruto se purificó directamente mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar 80-1 (relación diastereomérica 2:1 favoreciendo la deseada). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H53ClN5O8: 730,3; encontrado: 730,48.
[0654] Paso 2. Preparación de 80-2: una mezcla heterogénea agitada de 80-1 (314 mg, 0,431 mmol), PdCl2(dppf)^CH2Cl2 (35,2 mg, 0,043 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (86,6 mg, 0,646 mmol) en EtOH (2,2 ml) se roció con argón durante 15 min. Se añadió trietilamina (320 ml, 2,3 mmol) y la mezcla se calentó a 80°C. Después de 40 minutos, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con tolueno (5 ml). La mezcla resultante se concentró y el residuo bruto se purificó directamente mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 0-100%/hexanos) para proporcionar 80-2 (relación diastereomérica 2:1 favoreciendo la deseada). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C39H56N5O8: 722,4; encontrado: 722,54.
[0655] Paso 3. Preparación de 80-3: 80-2 (228 mg, 0,320 mmol) se disolvió en DCE (64 ml) y la solución se roció con Ar durante 15 min. Se añadió catalizador Zhan 1B (23 mg, 0,032 mmol) y la solución resultante se agitó a 100°C bajo Ar. Después de 45 minutos, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró al vacío y se purificó directamente por cromatografía en gel de sílice (0-100% de acetato de etilo/hexanos) para proporcionar 80-3 (relación diastereomérica 5: 2 favoreciendo el deseado). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H52N5O8: 694,37; encontrado: 694,53.
[0656] Paso 4: Preparación de 80-4: se disolvió olefina 80-3 (164 mg, 0,237 mmol) en etanol (1,19 ml) y el recipiente de reacción se purgó con Ar. Se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 25 mg) en una sola porción y el recipiente de reacción se purgó tres veces con H2. La reacción se agitó a temperatura ambiente bajo 1 atm de H2 durante 2 h y se diluyó con acetato de etilo (10 ml). La mezcla resultante se filtró a través de una capa de Celite y se concentró para proporcionar un residuo bruto de 80-4 (relación diastereomérica 5:2 que favorece el deseado) que se usó sin purificación adicional (LCMS-ESI+ (m/z): [M H]+ calc. para C37H64N6O8 : 696,39; encontrado: 696,56.
[0657] Paso 5. Preparación de 80-5: A una solución de 80-4 (164 mg, 240 mmol) en DCM (1,2 mL) se añadió TFA
(0,45 mL) a temperatura ambiente. Después de 7 h, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y la mezcla resultante se extrajo con una solución acuosa 1 N de hidróxido de sodio (40 ml). La capa acuosa luego se acidificó lentamente a pH = 3 con ácido clorhídrico concentrado y se extrajo con acetato de etilo (2 X 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío. El residuo se secó azeotrópicamente con tolueno (3 X 5 ml) para proporcionar 80-5 (relación diastereomérica 5:2 que favorece la deseada) que se usó sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H46N6O8 : 640,33; encontrado: 640,48.
[0658] Paso 6. Preparación del Ejemplo 80: A una solución de 80-5 (140 mg, 219 mmol) e Intermedio A10 (133 mg, 438 mmol) en MeCN (1,1 mL) se añadió HATU (169 mg, 438 mmol) seguido de DIPEA (190 ml, 1,09 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Después de 15 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se purificó por HPLC preparativa (columna Gemini 5u C18 110A, 5 - 100% MeCN/H2O, 0,1% de modificador de ácido trifluoroacético) y se liofilizó para proporcionar el Ejemplo 80 (5:2 diastereoisómero relación que favorece la deseada) como una sal de TFA sólida de color amarillo claro. Tiempo de HPLC analítico: 7,91 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H58F2N7O10S: 890,39; encontrado: 890,64. 1H RMN (400 MHz, CD3OD, diastereómero menor indicado por *) 59,18 (s, 1H), 9,14 (s, 1H *), 7,78 (br d, J = 9,0 Hz, 1H, 1H *), 7,21 (br d, J = 9,0 Hz, 1H, 1H *), 7,18 (br s, 1H, 1H *), 5,80 (br td, Jh-f = 55,8 Hz, J = 6,8 Hz, 1H, 1H *), 5,64 (br s, 1H, 1H *), 5,23 (d, J = 4,7 Hz, 1H *), 5,15 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 6,7 Hz, 1H, 1H *), 4,46 (d, J = 12,1 Hz, 1H *), 4,41 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,30 -4,22 (m, 1H, 1H *), 4,22 - 4,07 (m, 1H, 1H *), 4,02 -3,79 (m, 1H, 1H *)3,92 (br s, 3H, 3H *), 3,73 -3,52 (m, 2H, 2H *), 3,05 - 2,68 (m, 3H, 3H *), 2,40 - 2,21 (m, 1H, 1H *), 2,13 - 1,94 (m, 4H, 4H *), 1,83 (s, 2H, 2H *), 1,75 - 1,20 (m, 12H, 12H *), 1,12 (s, 9H *), 1,10 (s, 9H), 1,06 (br d, J = 7,3 Hz, 3H, 3H *), 0,92-0,85 (m, 4H, 4H *).
[0659] Ejemplo 81. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-19,19-difluoro-15-metoxi-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1 H,9H-8,11-metanociclopropa[4’,5’]ciclopentata[1 ’,2’:18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0660] El Ejemplo 81 se preparó de manera similar al Ejemplo 62, sustituyendo al Intermedio A10 por el Intermedio A9 en el Paso 5, Se aisló el Ejemplo 81. Tiempo de HPLC analítico: 9,36 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H55F4N6O9S: 895,36; encontrado: 895,59. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 59,23 (s, 1H), 7,93 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 8,8,2,4Hz, 1H), 7,26 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,80 (td, Jh-f = 56Hz, J = 6,8Hz, 1H), 5,73 (d, J = 3,2Hz, 1H), 4,94 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,22-4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,79-2,71 (m, 1H), 2,61-2,52 (m, 1H), 2,26-2,16 (m, 1H), 2,08-1,92 (m, 4H), 1,82-1,64 (m, 3H), 1,60-1,54 (m, 3H), 1,53-1,46 (m, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,44-1,26 (m, 5H), 1,08 (s, 9H), 1,07-0,98 (m, 4H), 0,94-0,84 (m, 3H), 0,60-0,48 (m, 2H).
[0661] Ejemplo 82. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-19,19-difluoro-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1 H,9H-8,11-metanociclopropa[4’,5’]ciclopent[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida
[0662] El intermedio 82-1 se preparó de manera similar al intermedio 46-2, sustituyendo el intermedio E3 con E4 en el Paso 1, LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calc. para C26H34#F2N3O6: 506,25; encontrado: 506,59.
[0663] El Ejemplo 82 se preparó de manera similar al Ejemplo 62, sustituyendo al Intermedio 82-1 por el Intermedio 46-2 en el Paso 1, Se aisló el Ejemplo 82. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H52F4N6O8S: 864,35; encontrado: 865,43. 1H RMN (400 MHz, cdCla) ó 9,82 (s, 1H), 7,89 - 7,72 (m, 2H), 7,67 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,12 -5,65 (m, 2H), 5,34 (d, J = 8 , 6 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,45 (t, J = 9,3 Hz, 2H), 4,27 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 11,9, 3,9 Hz, 1H), 2,77 - 2,64 (m, 2H), 2,27 - 2,12 (m, 1H), 2,13 - 1,86 (m, 4H), 1,82 - 1,19 (m, 15H), 1,18 -0,98 (m, 13H), 0,89 - 0,77 (m, 2H), 0,53 (dd, J = 13,3, 8,1 Hz, 1H), 0,43 (d, J = 4,2 Hz, 1H).
[0664] Ejemplo 83. Preparación de (1aR, 5S, 8 S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-3,6-dioxo-14-(trifluorometoxi)-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0665] Paso 1. Preparación de 83-1: HATU (3,06 g, 8,05 mmol) se añadió lentamente a una solución de ácido 3,3-difluoro-2-oxopent-4-enoico (1,03 g, 6,86 mmol) en 10 mL de DMF. Luego se añadió una mezcla de 4-(trifluorometoxi)benceno-1,2-diamina (1,29 g, 6,71 mmol) y DIPEA (1,4 ml, 8,05 mmol) en 12 ml de DMF. Después de agitarse durante la noche, la mezcla de reacción se vertió en 175 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (4 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera al 50%, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 0-25% en hexanos) para producir el intermedio 83-1, el producto de elución tardía. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C12H8F5N2O2: 307,04; encontrado: 307,29.
[0666] Paso 2. Preparación de 83-2: una solución de 83-1 (924 mg, 3,01 mmol) en 2 ml de DMF se trató con POCb (0,56 ml, 6,04 mmol) y se calentó a 80°C durante 2,5 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con 25 ml de EtOAc y se añadió lentamente a 20 ml de agua con agitación vigorosa. Las capas se separaron y la acuosa se extrajo con acetato de etilo. Los compuestos orgánicos combinados se lavaron posteriormente con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a presión reducida para dar el intermedio 83-2, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C12H7CF5N2O: 324,01; encontrado: 324,13.
[0667] Paso 3. Preparación de 83-3: se añadió CS2CO3 (606 mg, 1,86 mmol) a una mezcla de intermedio 83-2 (460 mg, 1,54 mmol) e intermedio B4 (564 mg, 1,79 mmol) en 12 ml de DMF a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 85°C durante la noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se vertió en 50 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (4 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 90 ml de salmuera al 50%, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos) para dar 83-3, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C28H35F5N3O6 : 604,24; encontrado: 604,20. Paso 4.
[0668] Preparación de 83-4: Se disolvió quinoxalina éter 83-3 (290 mg, 0,647 mmol) en 4,1 ml de acetato de tercbutilo y 1,1 ml de diclorometano a temperatura ambiente. Se añadió gota a gota MeSO3H (0,25 ml, 3,88 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se transfirió a una mezcla agitada de EtOAc (20 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar la amina 83-4, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C23H27F5N3O4 : 504,18; encontrado: 504,31.
[0669] Paso 5. Preparación de 83-5: HATU (260 mg, 0,684 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,40 ml, 2,30 mmol) se agregaron a una mezcla de 83-4 (258 mg, 0,512 mmol) y el producto intermedio D11 (177 mg, 0,657 mmol) en 7 ml de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-20% en hexanos) para dar 83-5, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H48F5N4O7 : 755,34; encontrado: 755,49.
[0670] Paso 6. Preparación de 83-6: Se desoxigenó con argón una mezcla de 83-5 (215 mg, 0,285 mmol) y catalizador Zhan 1B (29 mg, 0,040 mmol, Strem) en 60 ml de DCE con argón durante 15 minutos. La mezcla se calentó luego a reflujo durante 90 minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-40% en hexanos) para dar 83-6. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C35H44F5N4O7 : 727,31; encontrado: 727,43.
[0671] Paso 7. Preparación de 83-7: Se añadió paladio sobre carbono (10% en peso de Pd, 40 mg, 0,038 mmol) a una solución de 83-6 (129 mg, 0,178 mmol) en 9 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la reacción se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó con etanol. El filtrado se concentró al vacío para producir un residuo, que se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos) para dar 83-7, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H46F5N4O7: 729,32; encontrado: 729,45,
[0672] Paso 8, Preparación de 83-8: se añadió lentamente TFA (0,62 ml, 8,09 mmol) a una solución de 83-7 (79 mg, 0,109 mmol) en 1,8 ml de diclorometano. Después de 4 horas, la mezcla se concentró a presión reducida hasta casi sequedad. El residuo resultante se recogió en 10 ml de acetato de etilo, se lavó con 8 ml de agua, 8 ml de solución sat. NaHCO3 (aq), y se separa. Las capas acuosas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 10 ml de salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir 83-8, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H38F5N4O7 : 673,26; encontrado: 673,10.
[0673] Paso 9. Preparación del Ejemplo 83: HATU (84 mg, 0,221 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,095 mL, 0,547 mmol) se agregaron a una mezcla de 83-8 (72 mg, 0,107 mmol) e Intermedio A10 (66 mg, 0,217 mmol) en 4 ml de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 20 ml de acetato de etilo y se lavó con 10 ml de HCl acuoso 1N. La capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera al 50%, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) y HPLC prep de fase inversa (50-100% de acetonitrilo en agua, con un 0,1% de tampón de ácido trifluoroacético) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo 83. Tiempo de HPLC analítico: 9,12 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H50F7N6O9S: 923,32; encontrado: 923,10. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): ó 9,26 (s, 1H), 8,01-7,91 (m, 2H), 7,78-7,63 (m, 1H), 5,95 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,83 (td, Jh-f = 61 Hz, J = 6,0 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,35 (s, 1H), 4,22-4,11 (m, 1H), 3,72-3,66 (m, 1H), 2,71-2,49 (m, 2H), 2,18-1,94 (m, 3H), 1,90-1,75 (m, 3H), 1,74-1,62 (m, 2H), 1,60-1,48 (m, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,50-1,24 (m, 4H), 1,22-1,18 (m, 2H), 1,08 (s, 9H), 1,07-0,84 (m, 5H), 0,81-0,64 (m, 1H), 0,54-0,44 (m, 1H).
[0674] Ejemplo 84. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 19E, 22aR)-5-terc-butilo-14-ciano-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-dodecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0675] Paso 1: Preparación del Ejemplo 84. El Ejemplo de crudo 78 (8,7 mg, 0,01 mmol) se redisolvió en ACN (0,3 ml) y se trató con DDQ (3,4 mg, 0,015 mmol). Después de 10 minutos, la solución se purificó directamente mediante HPLC de fase inversa (columna Gemini 5u C18 110Á, 50-100% ACN/H2O 0,1% de TFA) y se liofilizó para proporcionar la sal de TFA del Ejemplo 84. Tiempo de HPLC analítico: 8,385 minutos. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H47F4N7O8S: 861,90; encontrado: 862,89. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,21 (s, 1H), 8,25 (d, 1H), 8,20 (d, 1H),,7,91 (dd, 1H), 6,32 (m, 2H), 5,97-5,61 (m, 2H), 4,82 (m, 1H), 4,58 - 4,13 (m, 4H), 3,71-3,49 (m, 3H), 2,61 (m, 2H), 2,23 (m, 1H), 2,00 - 1,80 (m, 3H), 1,56 - 1,20 (m, 10H), 1,20 (m, 3H), 1,07 (m, 8H), 0,98-0,82 (m, 3H)., 0,55 (m, 1H).
[0676] Ejemplo 85, Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-14-(difluorometoxi)-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0677] El Ejemplo 85 se preparó de manera similar al Ejemplo 83, utilizando el intermedio E7 en lugar de 83-2 en el paso 3. Tiempo de HPLC analítico: 8,725 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H50F6N6O9S: 904,92; encontrado: 905,16. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,23 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,76 (d, 1H),,7,62 (dd, 1H), 7,03 (dd, 1H), 5,94-5,65 (m, 3H), 4,57 - 4,14 (m, 4H), 3,66 (m, 1H), 2,57 (m, 2H), 2,01 - 1,97 (m, 3H), 1,82 - 1,77 (m, 3H), 1,64 (m, 1H), 1,57 - 1,33 (m, 10H), 1,20 (m, 3H), 1,06-0,87 (m, 12H), 0,87 (m, 2H), 0,48 (m, 1H).
[0678] Ejemplo 86. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-15-fluoro-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1 H,9H-8,11-metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0679] Paso 1. Preparación de 86-1: A una solución de E8 (1,5 g, 5,75 mmol) y B1 (1,9 g, 6,34 mmol) en MeCN (50 mL) se añadió Cs2CO3 (3,09 g, 9,49 mmol). Después de agitarse a temperatura ambiente durante 60 h, la mezcla de reacción se filtró sobre celite y se concentró. El residuo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 5-35%/hexanos) para producir el producto 86-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C23H30CFN3O5 - Boc: 482,13; encontrado: 382,04.
[0680] Paso 2. Preparación de 86-2: A una solución de 86-1 (747 mg, 1,55 mmol) en CH2Cl2 (5 ml) se le agrega HCl (5 ml, 4 M en dioxano) y se deja agitar durante 3 minutos. h. La mezcla de reacción se concentró para dar un residuo
que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C18H23CI2FN3O3 - HCl: 382,13; encontrado: 382,08.
[0681] Paso 3. Preparación de 86-3: A una solución de 86-2 (397 mg, 0,95 mmol), D12 (308 mg, 0,95 mmol) y BEP (312 mg, 1,14 mmol) en EtOAc (9 ml) y se añadió NMP (1 ml) a DIPEA (0,7 ml, 3,8 mmol) y la reacción se agitó a 50°C durante la noche. La reacción se detuvo con una solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El producto bruto se purificó mediante gel de sílice para dar 86-3, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C36H49CFN4O6 : 687,33; encontrado: 687,44.
[0682] Paso 4. Preparación de 86-4: A una solución de 86-3 (266 mg, 0,39 mmol), TEA (0,08 mL, 0,58 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (78 mg, 0,58 mmol) en EtOH (8 ml) se añadió PdCb(dppf) (32 mg, 0,04 mmol). La reacción se desgasificó con N2 durante 10 min y se calentó a 75°C durante 1 h. La reacción se detuvo con una solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc, se lavó posteriormente con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 0-25%/hexanos) para dar 86-4, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C38H62FN4O6 : 679,39; encontrado: 679,52.
[0683] Pasos 5 y 6, Preparación de 86-5: A una solución de 86-4 (262 mg, 0,38 mmol) en DCE (50 ml) se añadió catalizador Zhan 1B (28 mg, 0,04 mmol) y la reacción se desgasifica durante 25 minutos con N2. La reacción se calentó a 100°C durante 1 h, se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 0-30%/hexanos) para dar un producto de olefina (182 mg; LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calculado para C36H48FN4O6 : 651,36; encontrado: 651,38) que se recogió en EtOH (5 ml) y EtOAc (1 ml) y se trató con Pd/C (10%, 55 mg). La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1,25 h. La reacción se filtró sobre Celite, se lavó con EtOAc y se concentró para dar 86-5 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H50FN4O6 : 653,37; encontrado: 653,46.
[0684] Paso 7. Preparación de 86-6: A una solución de 86-5 (182 mg, 0,28 mmol) en DCM (3 ml) se añadió TFA (3 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con H2O, se basificó a pH 7 con una solución sat. La solución de NaHCO3, se lavó con solución de ácido cítrico 1 M, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró para dar un residuo de 86-6 que se usó posteriormente sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C32H42FN4O6 : 597,31; encontrado: 597,15,
[0685] Paso 8, Preparación del Ejemplo 86: A una solución de 86-6 (24 mg, 0,04 mmol), intermedio A10 (18 mg, 0,06 mmol), TBTU (23 mg, 0,07 mmol) y DMAP (7 mg, 0,06 mmol) en DMF (3 ml) se añadió DIPEA (35 ml, 0,20 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se agregó un intermedio adicional A10 (18 mg, 0,06 mmol), TBTU (23 mg, 0,07 mmol), DMAP (7 mg, 0,06 mmol) y DIPEA (35 ml, 0,20 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. El material bruto se purificó por HPLC de fase inversa (Gemini, 30-85% de ACN/H2O 0,1% de TFA) y se liofilizó para dar el Ejemplo 86 como una sal de TFA. Tiempo de Hp LC analítico: 9,25 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C41H54F3N6O8S: 847,37; encontrado: 847,18. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,18 (s, 1H), 8,13 - 7,84 (m, 2H), 7,59 - 7,21 (m, 2H), 6,07 - 5,58 (m, 2H), 5,00 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,45 - 4,27 (m, 2H), 4,20 (dd, J = 12,0, 4,0 Hz, 1H), 3,11 - 2,94 (m, 3H), 2,92 - 2,70 (m, 4H), 2,32 -2,14 (m, 1H), 2,10 - 1,94 (m, 2H), 1,86 (m, 1H), 1,77 (d, J = 14,5 Hz, 1H), 1,74 - 1,21 (m, 15H), 1,21 - 1,01 (m, 10H), 1,00 - 0,84 (m, 2H), 0,60 (m, 1H), 0,53 (m, 1H).
[0686] Ejemplo 87. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-14-ciano-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0687] Pasos 1 y 2, Preparación del Ejemplo 87. A una solución del Ejemplo 84 (100 mg, 0,11 mmol) en EtOAc (3
mL) se añadió Pd/C (10% en peso de Pd, 30 mg). El recipiente de reacción se purgó dos veces con H2 y se agitó a temperatura ambiente bajo 1 atm de H2 durante 6 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de celite y se concentró. La reacción redujo el anillo de quinoxalina. El material bruto se redisolvió en ACN (5 ml) y se trató con DDQ (34 mg, 0,15 mmol). Después de 1 h, la solución se purificó directamente mediante HPLC de fase inversa (columna Gemini 5u C18 110Á, 50-100% ACN/H2O TFA al 0,1%) y se liofilizó para proporcionar la sal TFA del Ejemplo 87. Tiempo de HPLC analítico: 8,463 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C40H49F4N7O8S: 863,92; encontrado: 864,18. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) ó 9,24 (s, 1H), 8,27 (d, 1H), 8,20 (d, 1H),,7,91 (dd, 1H), 5,93-5,82 (m, 3H), 4,88 (m, 1H), 4,58 - 4,13 (m, 5H), 3,71-3,49 (m, 3H), 2,59 (m, 2H), 2,03 - 1,96 (m, 3H), 1,82 - 1,77 (m, 3H), 1,65 - 1,35 (m, 11H), 1,20 (m, 3H), 1,06-0,87 (m, 8H), 0,71 (m, 2H), 0,48 (m, 1H).
[0688] Ejemplo 88. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-14-cloro-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-18,18-difluoro-9-metilo-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida
[0689] Paso 1. Preparación de 88-1: Se añadió HATU (4,56 g, 12 mmol) lentamente a una solución de ácido 3,3-difluoro-2-oxopent-4-enoico (1,52 g, 10,1 mmol) en 14 mL de DMF. Luego se añadió una mezcla de 4-clorobenceno-1,2-diamina (1,43 g, 10 mmol) y DIPEA (2,1 ml, 12 mmol) en 20 ml de DMF. Después de agitarse durante una noche, la mezcla de reacción se vertió en 30 ml de HCl acuoso 1 N y se extrajo con acetato de etilo (5 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 0-45% en hexanos)
para producir el intermedio 88-1 como el producto de elución tardía. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): ó 12,1 (s, 1H), 7,99 (m, 1H), 7,61-7,58 (m, 1H), 7,33-7,31 (m, 1H), 6,61-6,48 (m, 1H), 5,96 -5,90 (m, 1H), 5,67-5,63 (m, 1H).
[0690] Paso 2. Preparación de 88-2: Una solución de intermedio 88-1 (648 mg, 2,53 mmol) en 2 ml de DMF se trató con POCla (0,49 ml, 5,26 mmol) y se calentó a 80°C durante 3 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con 20 ml de EtOAc y se añadió lentamente a 15 ml de agua con agitación vigorosa. Las capas se separaron y la acuosa se extrajo con acetato de etilo. Los compuestos orgánicos combinados se lavaron posteriormente con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a presión reducida para dar el intermedio 88-2, 1H RMN (400 MHz, CDCb) ó 8,184 (d, J = 1,6Hz, 1H), 8,01 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,82 (dd, J = 9,4, 2 Hz, 1H), 6,56-6,43 (m, 1H), 5,88 (m, 1H), 5,70 (d, J = 10,8 Hz, 1H).
[0691] Paso 3. Preparación de 88-3: se añadió Cs2CO3 (660 mg, 2,03 mmol) a una mezcla de intermedio 88-2 (425 mg, 1,54 mmol) e intermedio B1 (570 mg, 1,89 mmol) en 9 ml de DMF a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 85°C durante la noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se vertió en 40 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (4 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 75 ml de salmuera al 50%, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 0-20% en hexanos) para dar 88-3, LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calculado para C26H33CF2N3O6 : 540,20; encontrado: 540,12.
[0692] Paso 4. Preparación de 88-4: Se disolvió quinoxalina éter 88-3 (458 mg, 0,848 mmol) en 4,2 ml de acetato de tere-butilo y 1,2 ml de diclorometano a temperatura ambiente. Se añadió gota a gota MeSO3H (0,30 ml, 4,67 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se transfirió a una mezcla agitada de EtOAc (20 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar la amina 88-4 en forma de una película sólida amarilla LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C21H25CF2N3O3 : 440,15; encontrado: 440,29.
[0693] Paso 5. Preparación de 88-5: se agregaron HATU (360 mg, 0,947 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,51 ml, 2,91 mmol) a una mezcla de 88-4 (320 mg, 0,727 mmol) e Intermedio D11. (237 mg, 0,880 mmol) en 10 ml de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante la noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-20% en hexanos) para dar 88-5, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C35H46CF2N4O6 : 691,30; encontrado: 691,50.
[0694] Paso 6. Preparación de 88-6: Se desoxigenó con argón una mezcla de 88-5 (390 mg, 0,564 mmol) y catalizador Zhan 1B (55 mg, 0,075 mmol, Strem) en 100 ml de DCE con argón durante 15 minutos. La mezcla se calentó luego a reflujo durante 110 minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-25% en hexanos) para proporcionar 88-6. LCMS-eSi+ (m/z): [M+H]+ calculado para C33H42CF2N4O6 : 663,27; encontrado: 663,33.
[0695] Paso 7. Preparación de la mezcla de 88-7: Se añadió rodio sobre alúmina (5% en peso de Rh, 31 mg, 0,015 mmol) a una solución de 88-6 (90 mg, 0,136 mmol) en 9 ml de etanol. La atmósfera se reemplazó con hidrógeno y la mezcla se agitó durante la noche. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El análisis LC/MS indicó que quedaba aproximadamente un 60% del material de partida. Una solución del residuo en 8 ml de etanol se volvió a someter a condiciones de hidrogenación utilizando 25 mg de rodio sobre alúmina (5% en peso de Rh) durante la noche. La reacción se filtró sobre Celite, lavando con etanol. El filtrado se concentró al vacío para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 0-30% en hexanos) para producir 88-7, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C33H44CF2N4O6 : 665,28; encontrado: 665,48.
[0696] Paso 8. Preparación de 88-8: Se añadió lentamente TFA (0,45 ml, 5,86 mmol) a una solución de 88-7 (52 mg, 0,078 mmol) en 2 ml de diclorometano. Después de 3 horas, la mezcla se concentró a presión reducida hasta casi sequedad. El residuo resultante se recogió en 10 ml de acetato de etilo, se lavó con 8 ml de agua, 8 ml de solución sat. NaHCO3 (aq), y se separa. Las capas acuosas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 10 ml de salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para producir 88-8, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C29H36CF2N4O6 : 609,22; encontrado: 609,42.
[0697] Paso 9. Preparación del Ejemplo 88: HATU (58 mg, 0,153 mmol, Oakwood) y DIPEA (0,065 mL, 0,374 mmol) se agregaron a una mezcla de 88-8 (45 mg, 0,074 mmol) e Intermedio A10 (49 mg, 0,161 mmol) en 2,5 mL de acetonitrilo bajo argón. Después de agitarse durante una noche, la mezcla de reacción se recogió en 15 ml de acetato de etilo y se lavó con 10 ml de HCl acuoso 1N. La capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera al 50%, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50% en hexanos) y HPLC prep de fase inversa (50-100% de acetonitrilo en agua, con un 0,1% de tampón de
ácido trifluoroacético) para producir la sal del ácido trifluoroacético del Ejemplo. 88. Tiempo de HPLC analítico: 8,92 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C3bH48CIF4N6ObS: 859,28; encontrado: 859,42. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 69,23 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,81 (td, Jh-f = 56 Hz, J = 6,0 Hz, 1H), 5,69-5,66 (m, 1H), 4,56 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,22-4,16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 3,71-3,66 (m, 1H), 2,83-2,76 (m, 1H), 2,61-2,48 (m, 1H), 2,11-1,94 (m, 4H), 1,88-1,72 (m, 4H), 1,71-1,62 (m, 1H), 1,58-1,54 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,50-1,36 (m, 2H), 1,09 (s, 9H), 1,08-1,01 (m, 3H), 1,01-0,94 (m, 2H), 0,93-0,86 (m, 2H), 0,80-0,68 (m, 1H), 0,52-0,46 (m, 1H).
[0698] Ejemplo 89. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 19E, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-dodecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0699] Paso 1. Preparación de 89-1: 17-4 (95 mg, 0,14 mmol) en 0,4 ml de DCM se trató con 0,4 ml de TFA y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con 5 ml de DCM y luego se trató con agua y bicarbonato de sodio saturado a pH 6,5, Las capas se separaron y la fase orgánica se lavó una vez más con agua, luego se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para dar 89-1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C31H39F2N4O7 : 617,3; encontrado: 616,7.
[0700] Paso 2. Preparación del Ejemplo 89: Una mezcla de 89-1 del paso 1 (41 mg, 0,066 mmol), Intermedio A10 (24 mg, 0,079 mmol), HATU (30 mg, 0,079 mmol) y DIPEA (Se agitaron 0,057 ml, 0,33 mmol) en DMF (0,4 ml) a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyó con 2 N HCl (1 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. La mezcla de producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (acetonitrilo al 10-99% en agua, con tampón de ácido trifluoroacético al 0,1%) para dar el Ejemplo 89. Tiempo de retardo de HPLC analítica: 8,65 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H51F4N6O9S: 867,3; encontrado: 866,9. 1H RMN (400 MHz, CDCb) 69,890 (s, 1H), 7,98 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,75 (br s, 1H), 6,30 - 5,93 (m, 2H), 5,92 (td, Jh-f = 52 Hz, J = 6,8 Hz, 1H), 5,47 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,07 (dd, J = 11,6, 3,2 Hz, 1H), 3,98 -3,94 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,57 (m, 1H), 2,60 - 2,48 (m, 2H), 2,20 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1,80 (m, 1H), 1,63 (m, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,56 - 1,36 (m, 2H), 1,26 (m, 1H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz), 3H), 1,09 (s, 9H), 1,03-0,93 (m, 2H), 0,85 (m, 2H), 0,76 (m, 1H), 0,53 (m, 1H).
[0701] Ejemplo 90. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-9-etilo-18-fluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10
metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0702] La purificación adicional de una síntesis del compuesto 17 por HPLC preparativa de fase inversa (60-88% de acetonitrilo en agua, con 0,1% de tampón de ácido trifluoroacético) permitió el aislamiento del ejemplo 93 como un producto secundario secundario. Tiempo de HPLC analítico: 8,64 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H54F3N6O9S: 851,4; encontrado: 851,4. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 59,93 (brs, 1H), 7,88 (d, J = 9,1Hz, 1H), 7,22 (d, J = 2,4Hz, 1H), 7,06 (d, J = 2,4Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,91 (td, Jh-f = 136 Hz, J = 8 Hz, 1H), 5,81 (td, Jh-f = 52 Hz, J = 8 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,07 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,72 (m, 1H), 2,59 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,06 (m, 4H), 1,88 (m, 1H), 1,78 (m, 1H), 1,71 -1,52 (m, 4H), 1,48 (s, 3H), 1,48 - 1,41 (m, 2H), 1,23 (m, 2H) 1,21 (t, J = 8,0 Hz, 3H), 1,08 (s, 9H), 1,05 - 0,90 (m, 2H), 0,84 (m, 2H), 0,66 (m, 1H), 0,48 (m, 1H).
[0703] Ejemplo 91. Preparación de (1aR, 5S, 8 S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-{(1R, 2S)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-etenilciclopropilo}-9-etilo-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0704] El Ejemplo 91 se preparó de manera similar al Ejemplo 1, sustituyendo al Intermedio A1 por el Intermedio A10 en el Paso 8 , La sal de TFA del Ejemplo 91 se aisló. Tiempo de HPLC analítico: 8,72 min. LCMS-ESI+ (m/z):
[M+H]+ calc. para C40H55N6O9S: 795,96; encontrado: 795,94. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 59,03 (s, 1H); 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,24 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H); 7,16 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 5,90 (d, J = 3,6 Hz, 1H); 5,68 (m, 1H); 5,25 (d, J = 17,2 Hz, 1,6 Hz, 1H); 5,10 (d, J = 11,2, 1,6 Hz, 1H); 4,57 (d, J = 6 , 8 Hz, 1H); 4,39 (br s, 1H); 4,37 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 4,16 (dd, J = 12,8, 4,4 Hz, 1H); 3,93 (s, 3H); 3,77-3,72 (m, 1H); 3,02-2,88 (m, 1H): 2,86-2,75 (m, 1H); 2,64-2,54 (m, 1H); 2,18 (q, J = 8 , 8 Hz, 1H): 1,90-1,66 (m, 4H); 1,66-1,40 (m, 6 H); 1,38-1,32 (m, 1H); 1,30-1,20 (m, 5H); 1,10 (s, 9H); 1,14-1,02 (m, 2H); 0,77-0,68 (m, 1H); 0,54-0,45 (m, 1H).'
[0705] Ejemplo 92. Preparación de (1aR, 5S, 8 S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-{(1R, 2S)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoilo)-2-etenilciclopropilo}-9-etilo-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxiamida.
[0706] El Ejemplo 92 se preparó de manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo al Intermedio A1 por el Intermedio A10 en el Paso 7. Se aisló el Ejemplo 92. Tiempo de HPLC analítico: 8,75 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C40H53F2N6O9S: 831,36; encontrado: 831,25, 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 59,98 (s, 1H), 7,96 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,40 - 7,19 (m, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,91 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 5,86 - 5,64 (m, 1H), 5,34 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 4,53-4,26 (m, 2H), 4,15-4,02 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,73 -3,57 (m, 1H), 2,97 - 2,81 (m, 1H), 2,64 - 2,37 (m, 2H), 2,21 - 2,06 (m, 1H), 2,06 - 1,88 (m, 2H), 1,88 - 1,55 (m, 4H), 1,55 - 1,12 (m, 10H), 1,07 (s, 9H), 1,02 - 0,78 (m, 5H), 0,78 - 0,61 (m, 1H), 0,47 (q, J = 7,3,6,2 Hz, 1H).
[0707] Ejemplo 93. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-9-etilo-N-[(2R)-2-etilo-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoflo}ciclopropilo]-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradeca hidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxiamida.
[0708] El Ejemplo 93 se preparó de manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo al Intermedio A4 por el Intermedio A10 en el Paso 7. El Ejemplo 93 se aisló. Tiempo de HPLC analítico: 8,03 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C41H57F2N6O9S: 847,39; encontrado: 846,99. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 57,95 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,41 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,82 (m, 2H), 4,47 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 4,35 (dd, J = 35,7, 10,7 Hz, 2H), 4,07 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,63 (m, 1H), 2,50 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,78 (m, 3H), 1,64 (m, 4H), 1,48 (m, 6H), 1,19 (m, 4H), 1,07 (s, 9H), 1,05 - 0,88 (m, 4H), 0,88 - 0,75 (m, 1H), 0,67 (m, 1H), 0,47 (m, 1H).
[0709] Ejemplo 94. Preparación de (1aR, 5S, 8S, 9S, 10R, 22aR)-5-terc-butilo-N-[(2R)-1-[(ciclopropilsulfonilo)carbamoílo)-2-(difluorometilo))ciclopropilo]-9-etilo-18,18-difluoro-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1, 10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11, 12-b]quinoxalina-8-carboxamida.
[0710] El Ejemplo 94 se preparó de manera similar al Ejemplo 17, sustituyendo al Intermedio A9 por el Intermedio A10 en el Paso 7. El Ejemplo 94 se aisló. Tiempo de HPLC analítico: 8,71 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C39H51F4N6O9S: 855,34; encontrado: 855,26. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 10,22 (s, 1H), 8,02 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 12Hz, 1H), 7,12 (s, 1H), 5,95 (td, JHF = 52Hz, J = 8Hz, 1H), 5,50 (d, J = 9,7Hz, 1H), 4,53 (d, J = 6,4Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 26,4, 10,7 Hz, 2H), 4,13 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,68 (m, 1H), 2,91 (m, 1H), 2,57 (m, 3H), 2,13 (m, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,73 (m, 3H), 1,50 (m, 3H), 1,33 (m, 3H), 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,13 (s, 9H), 1,00 -0,95 (m, 4H), 0,95 - 0,85 (m, 1H), 0,69 (m, 1H), 0,51 (m, 1H).
[0711] Ejemplo 95, Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-15-ciano-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-19,19-difluoro-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1 H,9H-8,11-metanociclopropa[4’,5’]cidopenta[1’,2’:18,19][1,10,3,6]dioxadiazacidononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0712] El Intermedio 95-1 se preparó de manera similar al Intermedio 46-2, sustituyendo a E6 por el Intermedio E3 en el Paso 1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C27H33F2N4O5 : 531,24; encontrado: 531,2.
[0713] El Ejemplo 95 se preparó de manera similar al Ejemplo 62, sustituyendo al Intermedio 95-1 por el Intermedio 46-2 en el Paso 1 y sustituyendo al Intermedio A10 por el Intermedio A9 en el Paso 5, se aisló el Ejemplo 95, Tiempo de HPLC analítico: 8,86 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H52F4N7O8S: 890,35; encontrado: 889,94. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 59,34 (s, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,69 (s, 1H), 5,38 (m, 1H), 5.29 (m, 3H), 5,02 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,10 -3,97 (m, 2H), 3,84 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 3,74 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 2,42 - 2,29 (m, 1H), 2,10 (s, 1H), 1,87 - 1,72 (m, 1H), 1,69 - 1,48 (m, 4H), 1,38 (d, J = 14,8 Hz, 2H), 1.30 - 1,08 (m, 4H), 0,99 (s, 5H), 0,89 (m, 3H), 0,69 (s, 10H), 0,64 (m, 1H), 0,43 (s, 1H), 0,11 (m, 1H), 0,01 (m, 1H).
[0714] Ejemplo 96. Preparación de (1aS, 2aR, 6S, 9S, 10S, 11R, 21E, 24aR, 24bS)-6-terc-butilo-15-cloro-N-[(1R, 2R)-2-(difluorometilo)-1 -{[(1 -metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-10-metilo-4,7,18-trioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,20,23, 24,24a,24b-tetradecahidro-1H,9H,18H-8,11-metanociclopropa[4’,5’]ciclopenta[1 ’,2’:18,19][1,10,3,6,12]dioxatriazaciclonona decino[11, 12-b]quinazolina-9-carboxamida.
[0715] El Ejemplo 96 se preparó de manera similar al Ejemplo 89, sustituyendo al intermedio 96-1 por el intermedio 17-4 en la Paso 1 , El Intermedio 96-1 se preparó de manera similar al intermedio 17-4 del Ejemplo 17, sustituyendo a E9 para E3 y B 1 para B4 en el Paso 1 , y sustituyendo al intermedio D16 por el intermedio D 11 en el Paso 3. Se aisló el ejemplo 96. Tiempo de HPLC analítico: 9,18 min. LCMS-ESI+ (m /z): [M+H]+ calc. para C41H52CF2N6O9S: 877,32; encontrado: 877,61. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) ó 9,76 (s, 1H), 8,03 (d, J = 8 , 6 Hz, 1H), 7,39 (m, 1H), 7,27 (m, 1H), 6,80 (s, 1H), 5,92 (m, 1H), 5,87 - 5,73 (m, 1H), 5,68 (m, 1H), 5,64 - 5,51 (m, 1H), 5,21 (m, 1H), 4,93 (m, 2H), 4,52 - 4,32 (m, 3H), 4,15 -3,94 (m, 2H), 2,86 - 2,71 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 2,15 (m, 2H), 2,10 - 2,02 (m, 1H), 2,02 - 1,84 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 1,61 (s, 3H), 1,50 (m, 4H), 1,42 - 1,17 (m, 6 H), 1,17 - 0,92 (m, 10H), 0,92 - 0,78 (m, 2H), 0,51 - 0,37 (m, 1H).
[0716] Ejemplo 97. Preparación de (1aS, 2aR, 6 S, 9S, 10S, 11R, 23aR, 23bS)-6-terc-butilo-15-ciano-N-[(2R)-2-(difluorometilo)-1-{[(1-metilciclopropilo)sulfonilo]carbamoílo}ciclopropilo]-10-metilo-4,7-dioxo-1a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-hexadecahidro-1H,9H-8,11-metanociclopropa[4',5']ciclopenta[1',2':18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalina-9-carboxamida.
[0717] El intermedio 97-1 se preparo de manera similar al intermedio 79-5, sustituyendo E2 por E5 en el Paso 1, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C43H55N4O7: 739,41; encontrado: 739,31.
[0718] Paso 1. Preparación de 97-2, Se disolvió olefina macrocíclica 97-1 (0,84 g, 1,14 mmol) en 114 ml de etanol y 114 ml de acetato de etilo. Después de la desgasificación con argón, se agregaron 0,84 g de Pd/C Degussa al 5% y la mezcla se hidrogenó durante 4 horas a 1 atm. La filtración a través de celite, la concentración y la cromatografía en gel de sílice (40% - 60% de acetato de etilo en gradiente de hexanos) proporcionó el intermedio 97-2, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C36H51N4O7 : 651,38; encontrado: 651,32.
[0719] Paso 2. Preparación de 97-3, Una solución helada de macrociclo fenol 97-2 (0,47 g, 0,73 mmol) y trietilamina (0,81 ml, 5,81 mmol) en 3 ml de DCM se trató con una solución de anhídrido trifluorometanosulfónico, 1 M en cloruro de metileno (0,18 ml, 1,09 mmol) gota a gota. Después de agitarse durante 2 horas, la reacción se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se
concentró. La cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo del 5% al 50% en hexanos dio 97-3 como el primer pico de elución (55 mg). LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C37H50F3N4O9S: 783,33; encontrado: 782,96.
[0720] Paso 3. Preparación de 97-4, Se desgasificó una mezcla de triflato de macrociclo 97-3 (408 mg, 0,52 mmol), tetrakis (trifenilfosfina)paladio (30,11 mg, 0,03 mmol), cianuro de zinc, 98% (61,21 mg, 0,52 mmol) en 2,6 ml de DMF para 10 minutos. La reacción se calentó a 80°C durante 1 hora. Se agregaron 60 mg adicionales de tetrakis (trifenilfosfina)paladio y 120 mg de cianuro de zinc y se continuó calentando durante 30 minutos. La reacción se detuvo con una solución saturada de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo al 5% -70% en hexanos para dar el intermedio 97-4, LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C37H50N5O6 : 660,38; encontrado: 660,10.
[0721] Paso 4. Preparación de 97-5, Una solución de 97-4 (290 mg, 0,44 mmol) en 1 ml de DCM se trató con 0,5 ml de TFA y se agitó durante la noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo al 10% -70% en hexanos para dar el intermedio 97-5 (216 mg) como un sólido blanco. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calculado para C33H42N5O6 : 604,31; encontrado: 604,00.
[0722] Paso 5. Preparación del Ejemplo 97. Una mezcla de 97-5 (50 mg, 0,08 mmol), HATU (37,79 mg, 0,1 mmol), en 0,3 ml de DMF se agitó durante 5 minutos, luego se añadieron A10 (50 mg, 0,08 mmol) y DIPEA (0,06 ml, 0,33 mmol). Después de 45 minutos a temperatura ambiente, la reacción fue incompleta (LCMS). Se añadieron otros 20 mg de A10 y se agitó durante 2 horas. Se añadieron 2 ml de 1 N HCl y la mezcla se extrajo con DCM. El producto bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice utilizando un gradiente de acetato de etilo del 30% al 65% en hexanos. Las fracciones del producto combinado contenían algo de DMF residual. Se añadió agua, lo que generó un precipitado (14 mg). El filtrado se extrajo con acetato de etilo y los extractos se combinaron con el precipitado. La solución resultante se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró y se secó a presión reducida para dar el Ejemplo 97. Tiempo de HPLC analítico: 9,06 min. LCMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ calc. para C42H54F2N7O8S: 854,98; encontrado: 853,88. 1H RMN (400 MHz, CDCb) 59,77 (br s, 1H), 8,05 (m, 1H), 7,93 (m, 1H), 7,62 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,08 (m, 1H), 6 - 5,65 (m, 1H), 5,56 (m, 1H), 5,17 (m, 1H), 4,90 (m, 1H), 4,38 (m, 2H), 4,22 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 2,70 (m, 5H), 2,28 - 2,08 (m, 1H), 2,04 - 1,30 (m, 12H), 1,29 - 1,09 (m, 9H), 1,08 -0,96 (m, 4H), 0,85 - 0,67 (m, 3H), 0,43 (m, 1H), 0,34 (m, 1H), 0,19 - 0,03 (m, 1H).
[0723] Los siguientes compuestos pueden prepararse con los métodos sintéticos de esta descripción, o por medios generalmente bien conocidos en la técnica:
en donde V es una estructura de fórmula:
y en donde E y G se definen como anteriormente.
Actividad biológica
Expresión y purificación de la generación de proteasas NS3 de los genotipos 1a, 2a y 3 de los plásmidos de expresión de proteasa NS3
[0724] La secuencia de codificación del genotipo 1b (cepa con-1) del dominio de la proteasa NS3 del VHC se amplificó por PCR a partir de un plásmido que codifica el replicón I389luc-ubi-neo/NS3-3'/ET (Reblikon, Mainz, Alemania). El cebador 5'-PCR se diseñó para codificar una etiqueta de hexahistidina K3 n-terminal e insertar un sitio de escisión de la proteasa del virus del Grabado del Tabaco (rTEV) recombinante en marco en la secuencia codificante de NS3. El fragmento de ADN resultante se clonó en el vector de expresión de la proteína pET28
(Invitrogen, Carlsbad, CA) produciendo el p28-N6H-Tev-NS3 (181) 1b.
[0725] Las secuencias codificantes para el genotipo 3 del dominio de la proteasa del VHC se amplificaron mediante TA-PCR utilizando un kit Titan One Tube TA-PCR (Roche, Indianapolis, IN) y ARN extraído de suero humano positivo para el VHC (BBI Diagnostics, MA) utilizando un kit de virus QIAmp UltraSens (Qiagen, Valencia, CA). Los cebadores de 5'-PCR se diseñaron para codificar etiquetas de hexahistidina n-terminales e insertar sitios de escisión de proteasa rTEV en el marco en las secuencias codificantes de la proteasa NS3. Los fragmentos de ADN resultantes se clonaron en pET28 produciendo los vectores de expresión p28-N6H-Tev-NS3 (181) 1a y p28-N6H-Tev-NS3 (181)3, respectivamente.
Expresión de la proteína proteasa NS3
[0726] Las bacterias BL21AI (Invitrogen, Carlsbad, CA) se transformaron con los vectores de expresión NS3 del genotipo 1b o 3 y se utilizaron para inocular un recipiente de fermentación de 20 L (Sartorius BBI System Inc., Bethlehem, PA), que contiene 18 L de medio 2YT reciente suplementado con 50 mg/ml de kanamicina. Cuando las densidades celulares alcanzaron un OD600 de 1, la temperatura de los cultivos se redujo de 37°C a 28°C y la inducción se inició inmediatamente mediante la adición de ZnSO430 mM, Concentraciones finales de L-arabinosa 14 mM e Isopropilo p-D-tiogalactosido 1 mM (IPTG). Las células se recogieron por centrifugación cuatro horas después de la inducción y se almacenaron como gránulos congelados a -80°C antes de la purificación de la proteína NS3.
Purificación De Proteasas NS3
Purificación de la proteasa NS3 del genotipo 1b
[0727] Los gránulos celulares se descongelaron y se resuspendieron a 10 ml/g células en un tampón de lisis que contenía tris 50 mM, pH 7,6, NaCl 300 mM, 0,1% 3 - [(3-colamidopropilo)dimetilamonio]-1-propanosulfonato (CHAPS), 5 % de glicerol y p-mer-captoetanol 2 mM. Las suspensiones celulares se sometieron a sonicación, se filtraron a través de una gasa y se pasaron tres veces a través de un microfluidizador a 18.000 libras/In2 Los lisados resultantes se centrifugaron a 15500 rpm durante 45 minutos y los sobrenadantes se cargaron en una columna HisTrap HP (GE Lifesciences) previamente equilibrada con cinco volúmenes de tampón A (50 mM tris pH 7,6, NaCl 300 mM, CHAPS al 0,1%, 5 % de glicerol, p-mercaptoetanol 2 mM, imidazol-HCl 50 mM). Las proteínas se eluyeron con un gradiente de 0-100% de tampón de Ni A más 500 mM de imidazol-HCl y las fracciones se recogieron y se agruparon. El grupo HisTrap se diluyó 1:10 con tampón SP-A (tris 50 mM pH 7,0, glicerol al 10%, ditiotreitol 2 mM (DTT)) y se cargó en una columna HiTrap SP-HP (GE Lifesciences) equilibrada con tampón SP-A. La proteasa NS3 se eluyó con un gradiente de tampón s P-B al 0-100% (tampón SP-A más NaCl 1 M). Los grupos concentrados de fracciones de SP que contenían NS3 se dividieron en partes alícuotas, se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80°C.
Purificación de la proteasa NS3 del genotipo 3
[0728] Los gránulos bacterianos recogidos de la expresión de la proteasa NS3 del VHC del genotipo 3 se homogeneizaron en tampón de lisis (tris 25 mM, pH 7,5 que contenía NaCl 150 mM y fenilmetanosulfonil fluoruro (PMSF)) y se pasaron a través de un microfluidizador a 18,000 libras/en 2, Los lisados celulares homogeneizados se centrifugaron a 30.000 X g durante 30 minutos a 4°C. Los sedimentos de P1 resultantes se lavaron con tampón de lavado I (tris 25 mM, pH 7,5 que contenía CHAPS al 1%) seguido de centrifugación a 10.000 X g durante 30 minutos a 4°C. Los gránulos de P2 resultantes se lavaron con tampón de lavado II (tampón CAPS 50 mM, pH 10,8, que contiene 2 M NaCl y urea 2 M) seguido de centrifugación a 30.000 3 g durante minutos a 4°C. Los gránulos de P3 resultantes se resuspendieron en tampón de solubilización (20 ml de 25 mM). tris, pH 7,5 que contiene 150 mM de NaCl y 8 M de urea) y se incuba a 4°C durante una hora. Las proteínas solubilizadas se pasaron a través de un filtro de 0,45 micrones. Las concentraciones de proteína se midieron y las soluciones se ajustaron a DTT 40 mM, se incubaron durante 30 minutos a 4°C y luego se diluyeron rápidamente en tampón de replegamiento (tris 25 mM, pH 8,5, guanidina-HCl 0,8 M, L-arginina 0,4 M, ZnSO410 mM) mientras que se agita. Las soluciones de proteínas se incubaron a 4°C durante la noche para permitir el replegamiento. Las proteasas replegadas se centrifugaron a 30.000 X g durante 10 minutos para eliminar los precipitados residuales. Las concentraciones finales de proteína se midieron y las proteasas NS3 se dividieron en alícuotas, se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80°C.
Determinación de Ki para la proteasa NS3 de los genotipos 1b y 3a.
[0729] El dominio de proteasa NS3 purificada (aminoácidos 1-181) del virus de genotipo 1b y 3a se generó como anteriormente. El sustrato depsipeptídico fluorogénico inactivado internamente Ac-DED (Edans)-EEAbuy[COO]ASK(Dabcilo)-NH2 y un péptido sintético que contiene los residuos del núcleo hidrófobo del cofactor de proteína nS4A (KKGSWIVGRIILSGr Kk ; péptido Ns4a ) se obtuvieron de Anaspec, Inc. (San José, CA). Otros productos químicos y productos bioquímicos fueron de grado reactivo o mejor y se compraron a proveedores estándar.
[0730] Las reacciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente en un tampón que consistía en HEPES 50 mM, glicerol al 40%, Triton X-100 al 0,05%, DTT 10 mM y DMSO al 10%. Las soluciones finales del ensayo contenían 50 pM de proteasa de genotipo 1b de NS3 o 200 pM de proteasa de genotipo 3a, péptido de NS4A 20 pM y sustrato de 4 mM (genotipo 1b) o sustrato de 2 pM (genotipo 3a). Las concentraciones de inhibidor variaron de 100 nM a 5 pM en diluciones triples, y se incluyeron controles sin inhibidores.
[0731] Las diluciones de los compuestos se realizaron en DMSO a 20 X concentración final. Las mezclas de reacción se prepararon en placas de ensayo de 96 pocillos. Una solución de enzima y péptido NS4A en el tampón de ensayo (25 pl de volumen con ambos reactivos a 4 X concentración final) se mezcló con 45 pl de tampón de ensayo y 5 pl de inhibidor o DMSO, y se incubó previamente a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se inició mediante la adición de 25 pl de solución de sustrato a 4 X concentración final. Las placas se mezclaron vigorosamente durante 5-10 segundos y se dejó que las reacciones transcurrieran durante 90 minutos. la fluorescencia se midió cada 30 s entre 90 y 120 minutos de tiempo de reacción utilizando un lector de placas multimodo Tecan InfiniTe M1000 o PerkinElmer Envision con una longitud de onda de excitación de 340 nm y una longitud de onda de emisión de 490 nm.
[0732] Las tasas se calcularon a partir de las curvas de progreso en estado estable, en el marco de tiempo de 90 120 minutos después de la adición del sustrato. Para determinar la Ki, las tasas se representaron en función de la concentración del inhibidor y los datos se ajustaron a la ecuación 1 (Morrison, JF, Biochimica et Biophysica Acta 1969, 185, 269-286) para calcular Kiapp utilizando GraphPad Prism 5, Fracción activa de la enzima se determinó mediante la titulación del sitio activo con inhibidores potentes conocidos. Ki se calculó a partir de Kiapp/(1 [[S]/Km]). Los resultados de Ki para compuestos representativos para los genotipos 1b y 3a (Ki 1B y Ki 3A, respectivamente) se presentan en la Tabla 1,
Evaluación de la actividad anti-VHC basada en células:
[0733] La potencia antiviral (CE50) se determinó tanto en líneas celulares de replicón subgenómico de VHC subgenómicas como en células de replicón de VHC transfectadas transitoriamente. El término media concentración máxima efectiva (CE50) se refiere a la concentración de un medicamento que induce una respuesta a mitad de camino entre la línea de base y el máximo después del tiempo de exposición especificado a continuación.
[0734] Se establecieron replicones subgenómicos del VHC subgenómicos para los genotipos 1a, 1b, 2a, 3a y 4a en células derivadas de Huh-7 según lo descrito por Lohmann et al. (Lohmann V, Korner F, Koch J, et al. Replicación de hepatitis subgenómica ARN del virus C en una línea celular de hepatoma (Science 1999; 285: 119-3). Cada línea celular estable contiene un replicón bicistrónico de VHC que codifica un gen informador de luciferasa de Renilla humanizado (hRLuc) fusionado con un gen seleccionable de resistencia a neomicina, seguido de un IRES de EMCV y la región de codificación NS3-NS5B del VHC. La selección de células que expresan constitutivamente el replicón del VHC se logró en presencia del antibiótico de selección, neomicina (G418). La actividad de la luciferasa se midió como un marcador para los niveles de replicación intracelular del VHC.
[0735] El genotipo 1a replicón estable se derivó de la cepa H77 VHC y contenía mutaciones adaptativas P1496L y S2204I. El replicón estable del genotipo 1b se derivó de la cepa Con1 VHC y contenía las mutaciones adaptativas E1202G, T1280I y K1846T. El replicón estable del genotipo 2a se derivó de la cepa JFH-1 VHC y no requirió mutaciones adaptativas. El genotipo 3a replicón estable se derivó de la cepa S52 VHC y contenía las mutaciones adaptativas P1121L, A1198T y S2210I (equivalente a S2204I en el genotipo 1). El replicón estable de genotipo 4a se derivó de la cepa ED43 VHC y contenía mutaciones adaptativas Q1691R y S2204I. Todas las líneas celulares de replicón se propagaron en células derivadas de Huh-7 y se mantuvieron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS) y 0,5 mg/ml de G418.
[0736] Se establecieron replicones de VHC transfectados transitoriamente para las variantes resistentes a los inhibidores de la proteasa genotipo 1a, 1b, 3a y NS3/4a D168A en el genotipo 1b o R155K en el genotipo 1a. Los replicones transfectados transitorios también son replicones subgenómicos biscistrónicos pero no contienen el marcador seleccionable de neomicina presente en los replicones estables. Estos replicones codifican el IRES de poliovirus seguido del gen informador hRLuc, el IRES de EMCV y, finalmente, la región de codificación NS3-NS5B del VHC. Los genones 1a (H77) y 1b (Con1) de tipo salvaje se derivaron de la misma cepa y contenían las mismas mutaciones adaptativas que se enumeraron anteriormente. El replicón transitorio del genotipo 3a se derivó de la cepa S52 VHC como anteriormente, pero contenía mutaciones adaptativas ligeramente diferentes P1112L, K1615E y S2210I. Específicamente, la mutación adaptativa secundaria A1198T (A166T) en el dominio de proteasa del
genotipo estable 3a replicón se reemplazó con K1615E (K583E) en la helicasa NS3, sin efecto en la eficiencia de la replicación. La eliminación de A166T ubicada en el dominio de proteasa minimiza el impacto de esta variante en los inhibidores dirigidos al dominio de proteasa y representa un dominio de proteasa más cercano al tipo salvaje para el genotipo 3a. Los replicones resistentes que codifican mutaciones del inhibidor de la proteasa NS3/4 se introdujeron en el gen NS3 de tipo salvaje 1b o 1a mediante mutagénesis dirigida. Los ARN transcritos in vitro de todos los replicones transitorios se transfectaron en líneas celulares derivadas de Huh-7 sin tratamiento previo mediante electroporación. La actividad de la luciferasa se midió como un marcador para los niveles de replicación intracelular del VHC
[0737] Para realizar ensayos de CE50, se dispensaron células de cada replicón de VHC en placas de 384 pocillos. Los compuestos se disolvieron en DMSO a una concentración de 10 mM y se diluyeron en DMSO utilizando un instrumento de pipeteo automático. Se añadieron directamente a las células compuestos triples diluidos en serie utilizando un instrumento automatizado. El DMSO se usó como control negativo (solvente, sin inhibición) y una combinación de tres inhibidores de VHC que incluyen un inhibidor de proteasa; se usaron un inhibidor de NS5A y un inhibidor de nucleósidos en concentraciones >100 x CE50 como control positivo (inhibición del 100%). Setenta y dos horas después, las células se lisaron y la actividad de luciferasa de Renilla se cuantificó según lo recomendado por el fabricante (Promega-Madison, WI). Se realizó una regresión no lineal para calcular los valores de CE50.
Los resultados se muestran en las Tablas 1 y 2:
Tabla 1: Valores de actividad biológica para líneas celulares de replicación de VHC subgenónicas estables
Tabla 2: Valores de actividad biológica para líneas celulares de replicón de VHC transfectadas transitorias
[0738] Los datos en las Tablas 1 y 2 representan un promedio en el tiempo de cada análisis para cada compuesto. Para ciertos compuestos, se han realizado múltiples ensayos a lo largo de la vida del proyecto. Por lo tanto, los datos reportados en las Tablas 1 y 2 incluyen los datos reportados en el documento de prioridad, así como los datos generados en el período intermedio.
Composiciones farmacéuticas
[0739] Lo siguiente ilustra formas farmacéuticas representativas, que contienen un compuesto de Fórmula IV (excepto uno cualquiera de IVa-IVh) ("Compuesto X"), para uso terapéutico o profiláctico en humanos.
(i) Tableta 1 mg/tableta
Compuesto x = 100,0
Lactosa 77,5
Povidona 15,0
Croscarmelosa de sodio 12,0
Celulosa microcristalina 92,5
Estearato de magnesio 3.0
300.0
(ii) Tableta 2 mg/tableta
Compuesto X = 20,0
Celulosa microcristalina 410,0
Almidón 50,0
Glicolato de almidón sódico 15,0
Estearato de magnesio 5.0
500.0
(iii) Cápsula mg/cápsula
Compuesto X = 10,0
Dióxido de silicio coloidal 1,5
Lactosa 465,5
Almidón pregelatinizado 120,0
Estearato de magnesio 3.0
600.0
(iv) Inyección (1 mg/ml) mg/ml
Compuesto X = (forma de ácido libre) 1,0
Fosfato de sodio dibásico 12,0
Fosfato de sodio monobásico 0,7
Cloruro de sodio 4,5
Agua para inyección q.s. ad 1 mL
[0740] Las formulaciones anteriores pueden obtenerse mediante procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica farmacéutica.
[0741] El uso de los términos "un" y "una" y "el" y "la" y referencias similares en el contexto de esta divulgación (especialmente en el contexto de las reivindicaciones) se deben interpretar en el sentido de abarcar tanto el singular como el plural, a menos que se indique lo contrario en el presente documento o sea claramente contradicho por el contexto. Todos los métodos descritos en este documento pueden realizarse en cualquier orden adecuado, a menos que se indique lo contrario en este documento o el contexto lo contradiga claramente.
[0742] El uso de valores numéricos individuales se establece como aproximaciones como si los valores estuvieran precedidos por la palabra "aproximadamente" o "alrededor de". De manera similar, los valores numéricos en los diversos rangos especificados en esta solicitud, a menos que se indique expresamente lo contrario, se presentan como aproximaciones, como si los valores mínimo y máximo dentro de los rangos establecidos estuvieran precedidos por la palabra "aproximadamente" o "alrededor de". De esta manera, las variaciones por encima y por debajo de los rangos indicados se pueden usar para lograr sustancialmente los mismos resultados que los valores dentro de los rangos. Como se usa en este documento, los términos "alrededor de" y "aproximadamente" cuando se refieren a un valor numérico tendrán sus significados simples y ordinarios para una persona con experiencia ordinaria en la técnica con la cual el tema divulgado está más estrechamente relacionado o la técnica es relevante para el rango o elemento en cuestión. La cantidad de ampliación desde el límite numérico estricto depende de muchos factores. Por ejemplo, algunos de los factores que pueden considerarse incluyen la criticidad del elemento y/o el efecto que tendrá una cantidad determinada de variación en el desempeño del tema reivindicado, así como otras consideraciones conocidas por los expertos en la técnica. Como se usa en el presente documento, el uso de diferentes cantidades de dígitos significativos para diferentes valores numéricos no pretende limitar la forma en que el uso de las palabras "aproximadamente" o "alrededor de" servirá para ampliar un valor o rango numérico particular. Por lo tanto, como cuestión general, "aproximadamente" o "alrededor de" amplía el valor numérico. Además, la divulgación de los rangos se entiende como un rango continuo que incluye cada valor entre los valores mínimo y máximo más la ampliación del rango permitido por el uso del término "aproximadamente" o "alrededor de". Por lo tanto, la recitación de los rangos de valores en este documento simplemente pretende servir como un método abreviado para referirse individualmente a cada valor separado que cae dentro del rango, a menos que se indique lo contrario en este documento, y cada valor separado se incorpora a la especificación como si se hubiera recitado individualmente en este documento.
Claims (25)
1. Un compuesto de fórmula (IV):
o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde:
J es alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6 , en donde el alquilo C1-C4 o carbociclilo C3-C6 está opcionalmente sustituido con 1-4 halógeno, -OH, arilo o ciano;
© es carbociclileno C3-C5 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbociclileno C3-C5 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4 , haloalquilo C1-C3 , halógeno, -OH o ciano, o © es carbociclileno bicíclico C5-C8 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, o carbociclileno C3-C6 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbocloro C3-C6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4 o haloalquilo C1-C3 ;
L es alquileno C3-C6 , alquenileno C3-C6 o -(CH2)3-ciclopropileno, opcionalmente sustituido con 1-4 halógeno, -OH o ciano;
Q es alquilo C2-C4 o carbociclilo C3-C6 opcionalmente sustituido con alquilo C1-C3 , halógeno, -OH o ciano;
E es alquilo C1-C3 o alquenilo C2-C3 , opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos;
W es H, -OH, -O(C1C3) alquilo, -O(C1-C3) haloalquilo, halógeno o ciano; y
Z2a es H o alquilo C1-C3.
2. El compuesto de la reivindicación 1, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que J es alquilo C1-C3.
3. El compuesto de la reivindicación 1, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que J es metilo o etilo.
4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde s es carbociclileno C3-C6 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV. a través de dos carbonos adyacentes, en donde dicho carbocicleno C3-C6 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4 o haloalquilo C1-C3.
5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde s es carbociclileno C3-C6 que está unido a L y al resto del compuesto de Fórmula IV. a través de dos carbonos adyacentes, en donde el carbocicleno C3-C6 está opcionalmente sustituido con metilo, etilo o trifluorometilo.
6. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que s es ciclopropileno.
7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde s es carbociclileno bicíclico con puente C6-C8 o carbociclileno bicíclico fusionado C6-C8 que está unido a L y hasta el resto del compuesto de Fórmula IV a través de dos carbonos adyacentes.
8. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde L es alquileno C3-C6 , sustituido con 1-4 halógenos.
9. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde L es alquileno C5 , sustituido con dos halógenos.
10. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que L es alquileno C3-C6.
11. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que L es alquileno C5,
12. El compuesto de la reivindicación 8 o la reivindicación 9, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que los halógenos son cada uno flúor.
13. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que Q es f-butilo o carbociclilo C5-C6.
14. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que Q es f-butilo.
15. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde E es alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con 1-3 átomos de halógeno.
16. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que E es difluorometilo.
17. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde W es hidrógeno, -O(C1-C3)alquilo, halógeno o ciano.
18. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que W es metoxi.
19. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que Z2a es hidrógeno o metilo.
20. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o un estereoisómero, o una mezcla de estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que Z2a es metilo.
21. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-20, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
22. La composición farmacéutica de la reivindicación 21, que comprende además al menos un agente terapéutico adicional.
23. La composición farmacéutica de la reivindicación 22, en la que dicho agente terapéutico adicional es un interferón, un análogo de ribavirina, un inhibidor de NS5a, un inhibidor de NS4b, un inhibidor de proteasa NS3, un inhibidor de NS5b, un inhibidor de alfa-glucosidasa 1, un hepatoprotector, un no inhibidor de nucleósidos del VHC u otro fárma
24. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia médica.
25. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el profiláctico o tratamiento terapéutico de una infección por el virus de la hepatitis C.
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