Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

ES2602585T3 - Vectores de baculovirus que comprenden secuencias de codificación repetidas con sesgos de codones diferenciales - Google Patents

Vectores de baculovirus que comprenden secuencias de codificación repetidas con sesgos de codones diferenciales Download PDF

Info

Publication number
ES2602585T3
ES2602585T3 ES08779058.0T ES08779058T ES2602585T3 ES 2602585 T3 ES2602585 T3 ES 2602585T3 ES 08779058 T ES08779058 T ES 08779058T ES 2602585 T3 ES2602585 T3 ES 2602585T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
amino acid
sequences
sequence
rep52
rep
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES08779058.0T
Other languages
English (en)
Inventor
Andrew Christian Bakker
Wilhelmus Theodorus Johannes Hermens
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Uniqure IP BV
Original Assignee
Uniqure IP BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Uniqure IP BV filed Critical Uniqure IP BV
Application granted granted Critical
Publication of ES2602585T3 publication Critical patent/ES2602585T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/14011—Baculoviridae
    • C12N2710/14041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/14044—Chimeric viral vector comprising heterologous viral elements for production of another viral vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/14011—Baculoviridae
    • C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
    • C12N2710/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/50—Vectors for producing vectors

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Una célula de insecto que comprende una primera secuencia de nucleótidos que codifica una primera secuencia de aminoácidos y una segunda secuencia de nucleótidos que codifica una segunda secuencia de aminoácidos, en la que: (a) la primera y la segunda secuencias de nucleótidos están cada una unida operativamente a secuencias de control de la expresión para la expresión en una célula de insecto; (b) la primera y la segunda secuencias de aminoácidos comprenden una secuencia de aminoácidos común de la cual al menos 100 aminoácidos tienen una identidad de aminoácidos de al menos un 90 % entre la primera y la segunda secuencias de aminoácidos; (c) las secuencias de nucleótidos que codifican la secuencia de aminoácidos común en la primera y la segunda secuencias de aminoácidos son menos del 90% idénticas; (d) el uso de codones de la primera secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos común está adaptado al uso de codones de la célula huésped de insecto; (e) la primera secuencia de nucleótidos codifica la secuencia de aminoácidos de una proteína Rep52 o 40 de parvovirus y la segunda secuencia de nucleótidos codifica la secuencia de aminoácidos de una proteína Rep78 o 68 de parvovirus; y (f) las secuencias de aminoácidos comunes comprenden las secuencias de aminoácidos del segundo aminoácido más C-terminal de la proteína Rep52 o 40 de parvovirus.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
realizaciones se utilizará la secuencia de nucleótidos que codifica una proteína Rep52 o 40 de parvovirus como primera secuencia de nucleótidos y la secuencia de nucleótidos que codifica una proteína Rep78 o 68 de parvovirus como segunda secuencia de nucleótidos, pero la inversa de estas realizaciones se incluye expresamente en la invención. La secuencia de aminoácidos común codificada por la primera y segunda secuencias de nucleótidos comprenden o consisten en las secuencias de aminoácidos de al menos el segundo aminoácido al aminoácido más C-terminal de una proteína Rep52 o 40 de parvovirus. Preferentemente, las secuencias de aminoácidos comunes comprenden o consisten en el primer aminoácido al aminoácido más C-terminal de la proteína Rep52 o 40 de parvovirus. Las identidades de aminoácidos entre las secuencias de aminoácidos comunes de parvovirus son como se han definido anteriormente para las secuencias de aminoácidos comunes. Preferentemente, en la célula de insecto, las proteínas Rep de parvovirus son proteínas Rep de virus adenoasociados (VAA). Más preferentemente, las proteínas Rep de parvovirus codificadas en la primera y segunda secuencias de nucleótidos son del mismo serotipo.
Una secuencia de nucleótidos que codifica proteínas Rep de parvovirus, se entiende, en el presente documento, como una secuencia de nucleótidos que codifica las proteínas Rep no estructurales que son necesarias y suficientes para la producción de vectores de parvovirus en las células de insectos, tales como las proteínas Rep78 o Rep68, y Rep52 o Rep40. La secuencia de nucleótidos de parvovirus animales es, preferentemente, de un dependovirus, más preferentemente de virus adenoasociado (VAA) de ser humano o de simio y, lo más preferentemente, de un VAA que normalmente infecta a los seres humanos (por ejemplo, los serotipos 1, 2, 3A, 3B, 4, 5 y 6) o primates (por ejemplo, los serotipos 1 y 4). Un ejemplo de una secuencia de nucleótidos que codifica las proteínas Rep de parvovirus animales se da en la SEQ ID No.7, que representa una parte del genoma de la secuencia de serotipo 2 de VAA que codifica las proteínas Rep. La secuencia de codificación de Rep78 comprende los nucleótidos 11 a 1876 y la secuencia de codificación de Rep52 comprende los nucleótidos 683 -1876, también representados por separado en la SEQ ID No. 1 y 5. Se entiende que los pesos moleculares exactos de las proteínas Rep78 y Rep52, así como las posiciones exactas de los codones de iniciación de la traducción pueden diferir entre diferentes parvovirus. Sin embargo, el experto sabrá cómo identificar la posición correspondiente en la secuencia de nucleótidos de otros parvovirus distintos de VAA-2.
Una (primera) secuencia de nucleótidos que codifica una proteína Rep52 de parvovirus puede, por tanto, definirse como una secuencia de nucleótidos:
a) que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 50, 60, 70, 80, 88, 89, 90, 95, 97, 98, o 99 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO. 6; b) que tiene al menos 50, 60, 70, 80, 81, 82, 85, 90, 95, 97, 98, o 99 % de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos de una cualquiera de las SEQ ID NO de 1 -. 5 y 10; c) la cadena complementaria de la que se hibrida a una secuencia de molécula de ácido nucleico de (a) o (b); d) secuencias de nucleótidos cuya secuencia difiere de la secuencia de una molécula de ácido nucleico de (c) debido a la degeneración del código genético.
Una (segunda) secuencia de nucleótidos que codifica una proteína Rep78 de parvovirus puede, por tanto, definirse como una secuencia de nucleótidos:
a) que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 50, 60, 70, 80, 88, 89, 90, 95, 97, 98, o 99 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO. 8; b) que tiene al menos 50, 60, 70, 80, 81, 82, 85, 90, 95, 97, 98, o 99 % de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótidos de las posiciones 11-1876 de la SEQ ID NO de 7; c) la cadena complementaria de la que se hibrida a una secuencia de molécula de ácido nucleico de (a) o (b); d) secuencias de nucleótidos cuya secuencia difiere de la secuencia de una molécula de ácido nucleico de (c) debido a la degeneración del código genético.
Preferentemente, la secuencia de nucleótidos codifica las proteínas Rep de parvovirus humanos que son necesarias y suficientes para la producción de vectores de parvovirus en células de insecto.
Las diversas modificaciones de la primera y segunda secuencia de nucleótidos de codificación como se ha definido anteriormente, incluyendo, por ejemplo, las secuencias de parvovirus de tipo silvestre, para la expresión apropiada en células de insectos se consigue mediante la aplicación de técnicas de ingeniería genética bien conocidas, tales como se describe en, por ejemplo, Sambrook y Russell (2001) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3ª edición), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York. El experto en la técnica conoce varias modificaciones adicionales de las regiones de codificación que podrían aumentar el rendimiento de las proteínas que codifican. Estás modificaciones están dentro del ámbito de la presente invención.
En las células de insecto de la invención. La primera y segunda secuencias de nucleótidos son, preferentemente, parte de una construcción de ácido nucleico. La célula de insecto puede comprender dos construcciones de ácido nucleico distintas, una para cada una de las primera y segunda secuencias de nucleótidos, o de la célula de insecto puede comprender un solo tipo de construcción de ácido nucleico que comprende tanto la primera como la segunda secuencias de nucleótidos.
7
imagen6
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Una célula de insecto preferida de acuerdo con la invención es una célula de insecto para la producción de vectores de parvovirus recombinantes. Esta célula de insecto comprende adicionalmente, además de la "primera" y la "segunda" secuencias de nucleótidos o la primera y la segunda secuencias de nucleótidos de las construcciones de ácido nucleico:
a) una tercera secuencia de nucleótidos que comprende al menos una secuencia de nucleótidos de repetición terminal invertida (secuencia ITR) de parvovirus; y b) una cuarta secuencia de nucleótidos que comprende las secuencias de codificación de la proteína Cap de parvovirus unida operativamente a secuencias de control de la expresión para la expresión en una célula de insecto.
En el contexto de la invención se entiende que "al menos una secuencia de nucleótidos ITR de parvovirus" significa una secuencia palindrómica, que comprende secuencias principalmente complementarias y dispuestas simétricamente, también denominada regiones "A", "B" y "C". La ITR funciona como un origen de replicación, un sitio que tiene un papel "cis" en la replicación, es decir, es un sitio de reconocimiento para proteínas de replicación que actúan en trans, tales como, por ejemplo, Rep 78 (o Rep68) que reconocen el palíndromo y secuencias específicas internas del palíndromo. Una excepción a la simetría de la secuencia ITR es la región "D" de la ITR. Es única (no tiene una complementaria dentro de una ITR). La realización de muescas en el ADN monocatenario se produce en la unión entre las regiones A y D. Es la región en la que se inicia una nueva síntesis de ADN. La región D normalmente se encuentra a un lado del palíndromo y proporciona direccionalidad de la etapa de replicación del ácido nucleico. Un parvovirus que se replica en una célula de mamífero tiene típicamente dos secuencias ITR. Sin embargo, es posible diseñar una ITR de modo que los sitios de unión estén en ambas hebras de las regiones A y las regiones D están situadas simétricamente, una a cada lado del palíndromo. En un molde de ADN circular de doble cadena (por ejemplo, un plásmido), la replicación de ácidos nucleicos asistida por Rep78 o Rep68 procede en ambas direcciones y una sola ITR es suficiente para la replicación del parvovirus de un vector circular. Por lo tanto, una secuencia de nucleótidos ITR se puede utilizar en el contexto de la presente invención. Preferentemente, sin embargo, se utilizan dos u otro número par de ITR regulares. Lo más preferentemente, se utilizan dos secuencias ITR. Una ITR de parvovirus preferente es una ITR de VAA. Por razones de seguridad, puede ser deseable construir un vector de parvovirus recombinante (VAAr) que no es capaz de propagarse adicionalmente después de la introducción inicial en una célula en presencia de un segundo VAA. Tal mecanismo de seguridad para limitar la propagación de vectores indeseable en un receptor puede proporcionarse mediante el uso de VAAr con una ITR quimérica como se describe en el documento US2003148506.
El número de construcciones de ácido nucleico empleadas en la célula de insecto para la producción del vector de parvovirus recombinante (VAAr) no es limitante en la invención. Por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, o más construcciones distintas se pueden emplear para producir VAAr en células de insecto de acuerdo con los procedimientos de la presente invención. Si se emplean cinco construcciones, una construcción codifica VP 1 de VAA, otra construcción codifica VP2 de VAA, otra construcción más codifica VP3 de VAA, todavía otra construcción más codifica la proteína Rep como se ha definido anteriormente y una construcción final comprende al menos una ITR de VAA. Si se utilizan menos de cinco construcciones, las construcciones pueden comprender varias combinaciones de la al menos una ITR de VAA y las secuencias de codificación de VP1, VP2, VP3, y la proteína Rep.
Preferentemente, se utilizan dos, tres o cuatro construcciones. Si se utilizan dos construcciones, preferentemente la célula de insecto comprende: (A) una primera construcción de ácido nucleico para la expresión de las proteínas Rep como se ha definido anteriormente, construcción que comprende además la cuarta secuencia de nucleótidos como se define en (b) anteriormente (que comprende las secuencias de codificación de la proteína Cap de parvovirus unidas operativamente a al menos una secuencia de control de la expresión para la expresión en una célula de insecto; véase también más adelante); y (B) una tercera construcción de ácido nucleico que comprende la tercera secuencia de nucleótidos como se ha definido en (a) anterior (que comprende al menos una secuencia de nucleótidos de ITR de parvovirus/VAA). Si se utilizan tres construcciones, se usa, preferentemente, la misma configuración que se usa para dos construcciones, excepto porque se usan construcciones separadas para la expresión de las proteínas de la cápside y para la expresión de las proteínas Rep. Si se utilizan cuatro construcciones, se usa, preferentemente, la misma configuración que se usa para tres construcciones, excepto porque se usan construcciones separadas para la expresión de las proteínas Rep78/68 y para la expresión de las proteínas Rep 52/40. Las secuencias de cada construcción pueden estar en cualquier orden una respecto a la otra. Por ejemplo, si una construcción comprende ITR y un ORF que comprende secuencias de nucleótidos que codifican proteínas de la cápside VP, el ORF de VP puede estar ubicado en la construcción de manera que, tras la replicación del ADN entre las secuencias ITR, el ORF de VP está replicado o no replicado. Para otro ejemplo, las secuencias de codificación y/o el ORF de Rep que comprenden las secuencias de nucleótidos que codifican proteínas de la cápside VP pueden estar en cualquier orden en una construcción. Se entiende que también las construcciones de ácido nucleico tercera, cuarta y más son, preferentemente, vectores compatibles con una célula de insecto, preferentemente vectores de baculovirus como se ha descrito anteriormente. Como alternativa, en la célula de insecto de la invención, una o más de la primera secuencia de nucleótidos, la tercera secuencia de nucleótido, la cuarta secuencia de nucleótidos, y la quinta secuencia de nucleótidos y otras secuencias de nucleótidos opcionales pueden estar integradas de forma estable en el genoma de la célula de insecto. Un experto en la técnica sabe cómo introducir de manera estable una secuencia de nucleótidos en el genoma de insecto y cómo identificar una célula
9
imagen7
imagen8
imagen9
imagen10
imagen11
15
25
35
45
55
Figura 2 Relación de las copias genómicas del gen ORF 1629 y el gen Rep en las muestras de baculovirus tomadas en diferentes pases de la construcción de baculovirus Bac.FBDSLR (Urabe y col., 2002, Hum Gene Ther. 13(16):1935-43). Las copias genómicas se midieron por QPCR. Figura 3 Relación de las copias genómicas del gen ORF 1629 y el gen Rep en las muestras de baculovirus tomadas en diferentes pases de la construcción de baculovirus pVD183 de la invención. Las copias genómicas se midieron por QPCR. Figura 4. Producción de VAAr con BacVD183. La caída de la producción se debe a una reducción en la cantidad de baculovirus presentes. Figura 5 ORF QPCR en los pases de Bac.VD183. Figura 6. Transferencia de tipo Western para la expresión de varios pases de Bac.VD183. "88" indica la construcción Bac.VD88, que se denomina REP-ACG/PSC en el documento WO2007/148971, que se utiliza en el presente documento como control. La cantidad de expresión de Rep se relaciona con la concentración de Bac.VD183. Figura 7. Q-PCR sobre volumen celular bruto (CLB) de producciones de VAAr1 utilizando tres construcciones diferentes para las proteínas Rep: VD88, VD183 y VD189. 5: 1: 1 se refiere a la relación de los diferentes baculovirus utilizados en la producción, 5 se refiere a Bac.VD88, Bac.VD183, o Bac.VD189, el primer 1 se refiere a Bac.VD84 (que contiene el gen de la cápside de VAA1) y el segundo 1 se refiere al baculovirus que contiene la construcción de ITR, Bac.VD43. Figura 8. Los CLB de la producción de tres VAAr1 diferentes se purificaron en una columna de Llama específica para la cápside de VAA y en los lotes purificados se midieron las copias genómicas y las partículas de VAAr totales. La división de las partículas de VAAr totales por el número de Q-PCR da lugar a la relación total mencionada anteriormente. 5:1:1 se refiere a la relación de los diferentes baculovirus utilizados en la producción, 5 se refiere a Bac.VD88, Bac.VD183, o Bac.VD189, el primer 1 se refiere a Bac.VD84 (que contiene el gen de la cápside de VAA1) y el segundo 1 se refiere al baculovirus que contiene la construcción de ITR, Bac.VD43. Figura 9. Transferencia de tipo Western de Rep. Se tomaron muestras a varios pases del baculovirus Bac.VD88
o Bac.VD189 y se realizó una transferencia de tipo Western. La cantidad de Rep52 respecto a la cantidad de Rep78 es consistentemente superior para Bac.VD189. Figura 10. Transferencia de tipo Western de Rep. Se tomaron muestras a varios pases del baculovirus Bac.VD183 y se realizó amplificación y transferencia de tipo Western de Rep. La cantidad de Rep52 con respecto a la cantidad de Rep78 es mucho más alta para Bac.VD183 que para Bac.VD189 y Bac.VD88.
Ejemplos
1. Ejemplo 1
1.1. Materiales y procedimientos
1.1.1 Construcción del plásmido de baculovirus
pFBDSLR (Urabe y col., 2002, mencionado anteriormente) es un vector de expresión pFastBacDual (Invitrogen) que comprende 2 casetes de expresión separados para las proteínas Rep78 y Rep52 de VAA2, de modo que la expresión de las proteínas Rep52 está dirigida por el promotor Polh y la expresión de la proteína Rep78 a partir del promotor ΔIE. Esta construcción se ha subclonado en pPSC10, un plásmido que es compatible con el GenExpress BaculoKIT (Protein Sciences Corporation).
La secuencia de codificación de Rep52 de tipo salvaje en el casete de expresión de Rep 52 se reemplaza con el la secuencia de codificación de Rep52 optimizada por codones de la SEQ ID NO. 2 para producir pPSC10Rep-52CD.
La secuencia de codificación de Rep52 de tipo salvaje en el casete de expresión de Rep 78 de pPSC10Rep-52CD se reemplaza con la secuencia de codificación de Rep52 optimizada por AT de la SEQ ID NO. 3 para producir pPSC10Rep-52CD/78AT.
La secuencia de codificación de Rep52 de tipo salvaje en el casete de expresión de Rep 78 de pPSC10Rep-52CD se reemplaza con la secuencia de codificación de Rep52 optimizada por GC de la SEQ ID NO. 4 para producir pPSC10Rep-52CD/78GC.
1.1.2 Producción de baculovirus recombinante
Los baculovirus recombinantes derivados del virus de de la polihedrosis nuclear múltiple de Autographa californica (AcMNPV) se producen utilizando el GenExpress BaculoKIT (Protein Sciences Corporation). La transfección se lleva a cabo de la siguiente manera: En un tubo de 14 ml de fondo redondo se mezclan 200 µl de medio GRACE con 6 µl de cellfectine (Invitrogen) y en un tubo eppendorf, 200 µl de medio GRACE se mezclan con 50 µl de ADN viral (Protein Sciences) y 2 µg del plásmido de transferencia (REP). El contenido del tubo de eppendorf se añade al tubo y se mezcla cuidadosamente. Después de un período de incubación de 30 minutos a temperatura ambiente se añaden 1.300 µl de GRACE a la mezcla de transfección. Las células de insecto en un matraz T25 se lavan con medio GRACE y se añade la mezcla de transfección gota a gota a la capa de células. Después de una incubación de 6 horas a 28 ºC se añade suero SF900II suplementado con 10 % de SFB cuidadosamente y el matraz T25 se introdujo en una estufa de 28 ºC durante 5 días, después de lo cual se cosecha el baculovirus recombinante.
15 10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
1.2 Resultados
El rendimiento de pPSC10Rep-52CD, pPSC10Rep-52CD/78AT and pPSC10Rep-52CD/78GC pPSC10Rep recién diseñados se compara con las construcciones pFBDSLR de Rep originales de de Urabe y col., (2002, mencionado anteriormente). Las cuatro construcciones se pasan en serie hasta el paso 5. Se realizan experimentos de producción de VAA1 recombinante usando las construcciones de Rep de los pases 2, 3, 4 y 5 en combinación con un baculovirus que contiene un casete de expresión de mamífero de un gen indicador entre de las ITR de VAA (VAA-LPL) y un baculovirus que contiene un casete de expresión de células de insecto para el VAA1-Cap (VAA-cap) de los pases respectivos 2, 3, 4 y 5. Los baculovirus recombinantes de VAA-LPL y VAA-Cap, tal como se utilizan en el presente documento, se describen en el documento WO2007/046703. Se determinan los rendimientos de producción de VAA1-LPL mediante QPCR. El baculovirus original diseñado por Urabe y col., 2002 (REP/Bac-to-Bac original) se traduce en una disminución rápida de la producción de VAA en 5 pases. Sin embargo, el baculovirus con las unidades de expresión de REP de pPSC10Rep-52CD, pPSC10Rep-52CD/78AT y pPSC10Rep-52CD/s 78GC da lugar a la producción de VAA estable durante al menos 5 pases. Por lo tanto, los rendimientos de producción reproducibles de VAA-LPL en varios pases (por ejemplo, de 2 a 5), solo se obtienen usando baculovirus que contienen las construcciones pPSC10Rep-52CD, pPSC10Rep-52CD/78AT y pPSC10Rep-52CD/78GC.
2. Ejemplo 2
Previamente se ha descrito que los vectores de expresión de baculovirus que contiene de 2 casetes de expresión separados para las proteínas Rep78 and Rep52 de VAA son genéticamente inestables en los baculovirus (véase, por ejemplo, el documento WO2007/148971 y Kohlbrenner y col., 2005, Mol Ther-12(6):1217-25). Ahora, los inventores han establecido la aplicación de la optimización del uso de codones (con respecto al uso de codones del virus de la polihedrosis nuclear múltiple por Autographa californica (AcMNPV) de solo la secuencia de codificación de Rep52 y no la secuencia de codificación de Rep78 a fin de introducir cambios suficiente entre las partes anteriormente idénticas de las secuencias de codificación de Rep52 y Rep78 para reducir los acontecimientos de recombinación. A continuación, demostraron que realmente este era el caso.
2.1 Clonación
Un plásmido que contiene los casetes de expresión doble de Rep originales en el plásmido pPSC10, pVD42 de Protein Sciences Corporation se modificó. pVD42 contiene el gen de rep78 dirigido por el promotor deltaE1 y el gen de rep52 dirigido por el promotor PolH, como en la construcción pFBDSLR original (Urabe y col., 2002, Hum Gene Ther. 13(16):1935-43). La secuencia de codificación de rep52 en pVD42 se sustituyó por una secuencia de codificación de rep52 sintética cuyo uso de codones se adaptó al uso de codones del virus de la polihedrosis nuclear múltiple de Autographa california (AcMNPV) (véase la Tabla 2; y http://www.kazusa.or.jp/codon/cgibin/showcodon.cgi?species=46015). Esta secuencia de codificación de rep52 de VAA2 optimizada por codones se representa en la SEQ ID NO: 10. En la figura 1 se muestra un mapa físico del plásmido pVD183 resultante, que comprende el la secuencia de codificación de rep52 de VAA2 optimizada por codones dirigida desde el promotor Polh y la secuencia de codificación de rep78 del VAA2 dirigida desde el promotor deltaE1.
2.2 Resultados
Los inventores han realizado un clon de baculovirus recombinante del plásmido pVD183 y se pasó el baculovirus 10 veces para analizar su estabilidad genética. Los inventores analizaron la estabilidad genética de la construcción mediante QPCR en el genoma del baculovirus y el gen de Rep52 mediante transferencia de tipo Western y mediante la eficiencia de producción del VAAr del baculovirus. Al mismo tiempo, el baculovirus Bac.VD42 original se hizo pasar al pase 7 para la comparación. Los datos anteriores sobre la estabilidad del Bac.VD42(o Bac.FBDSLR) también se mencionan en el documento WO2007/148971 (denominado REPBac-to-Bac original).
2.2.1 QPCR
Estabilidad medida mediante QPCR en los genomas de baculovirus. El número de copias de un gen que es esencial para la replicación de baculovirus y que se utiliza para la producción de BacVD183 a partir de pVD183 mediante recombinación en ORF1629 y ORF603 entre el pVD183 y el esqueleto del baculovirus de Protein Sciences. El ORF 1629 (ORF) se ha medido mediante QPCR y el número de copias de los genes Rep también se ha medido mediante QPCR. La relación entre estos 2 genes debe permanecer igual durante los pases posteriores del baculovirus. La figura 2 muestra para la comparación que Bac.FBDSLR es más bien inestable. Figura 3 muestra que Bac.VD183 es significativamente más estable. Los inventores observaron que la eficiencia de los 2 conjuntos de cebadores utilizados en la QPCR no es necesariamente igual, por lo tanto, se puede obtener una relación diferente de 1. Sin embargo, un indicador más importante de la estabilidad es que la relación debe permanecer relativamente constante durante múltiples pases. El pase 3 del Bac.FBDSLR ya es subóptimo, dado que la relación es de aproximadamente 0,25 y solo empeora. Bac.VD183 también comienza alrededor de 0,3 pero fluctúa alrededor de esa relación, lo que indica que hay una situación estable. Las deleciones en el genoma de baculovirus da lugar a un baculovirus que crece más rápido que los baculovirus que tiene un genoma de longitud completa, por lo tanto, cuando se produce una deleción, esos clones crecerán más que los demás. Las variaciones en el procedimiento de QPCR pueden dar lugar a las fluctuaciones observadas en la Figura 3.
16 10
15
20
25
30
35
40
2.2.2 Producción de VAAr
La Figura 4 muestra la producción de VAAr con la construcción Bac.VD183 estable. La caída en la producción en los pases más altos se debe a una reducción en la cantidad de baculovirus utilizados en la producción de VAAr (véase la Figura 5). La figura 5 muestra la QPCR en el ORF de Bac.VD183, que está directamente relacionado con la cantidad de baculovirus presentes en la muestra. La cantidad de baculovirus utilizados en la producción de VAAr se correlaciona con la cantidad de VAAr producido.
2.2.3 Transferencia de tipo Western de Rep
La Figura 6 muestra la expresión de la proteína Rep durante los pases de Bac.VD183 analizada mediante transferencia de tipo Western.
3. Ejemplo 3
El efecto del nivel de expresión de Rep52 se determinó en dos parámetros de producción de VAAr. En particular, el efecto del nivel de expresión relativo de Rep52 en comparación con el nivel de expresión de Rep78 en 1) el nivel de producción de VAAr como se expresa en las copias del genoma por ml de volumen celular bruto (g/m de CLB); y 2) la relación entre los viriones de VAAr totales y los viriones de VAAr completos (los viriones de VAAr completos son viriones que comprenden una copia del genoma de VAAr). Estos parámetros se compararon para tres diferentes construcciones de Rep de VAAr diferentes que dan lugar cada una a diferentes niveles de expresión de Rep52 y en proporción diferente entre los niveles de Rep52 y Rep78. Las tres construcciones fueron pVD88 (denominados REP-ACG/PSC en el documento WO2007/148971), pVD183 (descrito en el Ejemplo 2 en el presente documento anteriormente) y pVD189 (véase más adelante).
3.1 Construcción de pVD189
La construcción pVD88 se volvió a diseñar mediante la eliminación de 9 secuencias de ATG entre el inicio de la traducción de los genes de Rep78 y Rep 52 y cambiando el codón de iniciación de la traducción ACG de Rep78 a CTG. Véase la secuencia siguiente. Baseclear (Leiden, Países Bajos) sintetizó el nuevo gen y lo clonó en pVD88 reemplazando el gen Rep existente para obtener pVD189. La secuencia de nucleótidos de la secuencia de codificación de Rep en pVD189 se representa en la SEQ ID NO: 11.
3.2 Producción de VAAr
Los baculovirus se realizaron con las construcciones de VD88, VD183, y VD189 y estos se utilizaron para la producción de VAAr1. La comparación de las construcciones VD88, VD183 y VD189 en la producción de VAAr dio lugar a una producción de VAAr (copias del genoma) mejor, medida mediante Q-PCR en el volumen celular bruto (CLB). La Figura 7 muestra que la construcción de Rep estándar VD88, que da como resultado una cantidad menor de Rep52 (Figura 9) da como resultado aproximadamente 4 x 1010 de GC/ml medidos en el CLB. VD189 que conduce a una cantidad de Rep52 ligeramente mayor (Figura 9) dio como resultado una producción de VAAr medida en el CLB de aproximadamente 6 x 1010 de GC/ml. VD183 que conduce a una cantidad de Rep52 claramente mayor (Figura 10) dio como resultado una producción de VAAr medida en el CLB de aproximadamente 6 x 1010 de GC/ml.
Un parámetro de calidad muy importante es la relación total: completos del lote de VAAr. La Figura 8 muestra que la mejor relación de totales (viriones): completos (viriones) se obtiene con la construcción VD183 que muestra la cantidad de Rep52 más alta respecto a la cantidad de Rep78 en comparación con las construcciones Bac.VD189 y Bac.VD88 en la Figura 9.
3.2 Construcciones adicionales
Se construyen y se analizan siguientes construcciones, y parte de la invención:
Construcciones Promotor(es) Codones de iniciación y secuencias de codificación
1) VD88
PolH ACG-78---------------ATG-52------------*
2) VD189
PolH CTG-78-atg ATG-52 eliminado------------*
3) VD183
delta E1 ATG-78---------------------------------* +
PolH
ATG--52---SEQ ID NO: 10-----------*
4) VD196
PolH CTG-78---------------ATG-52------------*
5) VD197
PolH ACG -78-atg ATG-52 eliminado------------*
17
imagen12

Claims (1)

  1. imagen1
    imagen2
ES08779058.0T 2007-07-26 2008-07-25 Vectores de baculovirus que comprenden secuencias de codificación repetidas con sesgos de codones diferenciales Active ES2602585T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US95208107P 2007-07-26 2007-07-26
US952081P 2007-07-26
EP07113257 2007-07-26
EP07113257 2007-07-26
PCT/NL2008/050512 WO2009014445A2 (en) 2007-07-26 2008-07-25 Baculoviral vectors comprising repeated coding sequences with differential codon biases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2602585T3 true ES2602585T3 (es) 2017-02-21

Family

ID=38753583

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES08779058.0T Active ES2602585T3 (es) 2007-07-26 2008-07-25 Vectores de baculovirus que comprenden secuencias de codificación repetidas con sesgos de codones diferenciales

Country Status (20)

Country Link
US (5) US8697417B2 (es)
EP (3) EP3093345B8 (es)
JP (2) JP5634262B2 (es)
KR (1) KR101597695B1 (es)
CN (1) CN101868547B (es)
AU (1) AU2008279883B2 (es)
BR (1) BRPI0814459B1 (es)
CA (1) CA2694406C (es)
DK (2) DK3093345T3 (es)
EA (1) EA022169B1 (es)
ES (1) ES2602585T3 (es)
HK (1) HK1143185A1 (es)
HU (1) HUE029744T2 (es)
IL (1) IL203535A (es)
MX (1) MX2010000944A (es)
NZ (1) NZ582881A (es)
PL (2) PL2173888T3 (es)
PT (1) PT2173888T (es)
SI (2) SI2173888T1 (es)
WO (1) WO2009014445A2 (es)

Families Citing this family (92)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3093345B8 (en) * 2007-07-26 2019-07-24 UniQure IP B.V. Baculoviral vectors comprising repeated coding sequences with differential codon biases
GB0911870D0 (en) 2009-07-08 2009-08-19 Ucl Business Plc Optimised coding sequence and promoter
EP3792348A3 (en) 2010-03-11 2021-06-23 uniQure IP B.V. Mutated rep encoding sequences for use in aav production
WO2011122950A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Amsterdam Molecular Therapeutics (Amt) Ip B.V. Monomeric duplex aav vectors
IT1400425B1 (it) 2010-06-08 2013-05-31 Amsterdam Molecular Therapeutics Bv Modified snrnas for use in therapy.
US20140155469A1 (en) 2011-04-19 2014-06-05 The Research Foundation Of State University Of New York Adeno-associated-virus rep sequences, vectors and viruses
GB201210357D0 (en) 2012-06-12 2012-07-25 Ucl Business Plc Factor VIII sequences
EP3060669A1 (en) 2013-10-24 2016-08-31 uniQure IP B.V. Aav-5 pseudotyped vector for gene therapy for neurological diseases
KR102572449B1 (ko) 2014-03-10 2023-08-31 유니큐어 아이피 비.브이. 곤충 세포에서 생산된 더욱 향상된 aav 벡터
WO2015191508A1 (en) 2014-06-09 2015-12-17 Voyager Therapeutics, Inc. Chimeric capsids
RU2020109343A (ru) 2014-11-05 2020-03-17 Вояджер Терапьютикс, Инк. Полинуклеотиды aadc для лечения болезни паркинсона
GB201420139D0 (en) 2014-11-12 2014-12-24 Ucl Business Plc Factor IX gene therapy
RU2719192C2 (ru) 2014-11-14 2020-04-17 Вояджер Терапьютикс, Инк. Модулирующие полинуклеотиды
CA2967367C (en) 2014-11-14 2023-05-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als)
EP4219742A1 (en) 2014-11-28 2023-08-02 uniQure IP B.V. Dna impurities in a composition comprising a parvoviral virion
EP3230441A4 (en) 2014-12-12 2018-10-03 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the production of scaav
PL3237618T3 (pl) 2014-12-24 2019-09-30 Uniqure Ip B.V. Supresja genu huntingtyny indukowana rnai
AU2017254652B2 (en) 2016-04-21 2022-12-01 Virovek, Inc. AAV production in insect cells, methods and compositions therefor
WO2017189964A2 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
WO2017189959A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
CN109831916B (zh) 2016-05-18 2023-07-21 沃雅戈治疗公司 治疗亨廷顿氏舞蹈病的组合物和方法
CA3024448A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Voyager Therapeutics, Inc. Modulatory polynucleotides
KR20230161535A (ko) 2016-07-26 2023-11-27 바이오마린 파머수티컬 인크. 신규 아데노-관련 바이러스 캡시드 단백질
AU2017315679B2 (en) 2016-08-23 2023-12-14 Akouos, Inc. Compositions and methods for treating non-age-associated hearing impairment in a human subject
WO2018044933A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 The Regents Of The University Of California Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same
CA3045551A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Uniqure Ip B.V. Immunoadsorption
JP2020518259A (ja) 2017-05-05 2020-06-25 ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッドＶｏｙａｇｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． ハンチントン病治療組成物および方法
AU2018261790B2 (en) 2017-05-05 2024-10-03 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS)
JOP20190269A1 (ar) 2017-06-15 2019-11-20 Voyager Therapeutics Inc بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون
IL271957B2 (en) 2017-07-10 2024-02-01 Uniqure Ip Bv Means and methods for AAV-based gene therapy
US11497576B2 (en) 2017-07-17 2022-11-15 Voyager Therapeutics, Inc. Trajectory array guide system
EP3662060A2 (en) 2017-08-03 2020-06-10 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for delivery of aav
US20200237799A1 (en) 2017-10-16 2020-07-30 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als)
CN111479924B (zh) 2017-10-16 2024-06-14 沃雅戈治疗公司 肌萎缩性侧索硬化症(als)的治疗
AU2018394287B2 (en) 2017-12-29 2024-09-26 Uniqure Ip B.V. Modified viral vectors and methods of making and using the same
HUE062774T2 (hu) 2018-01-17 2023-12-28 Meiragtx Uk Ii Ltd Módosított rAAV kapszidfehérje génterápiához
EP3793616A1 (en) 2018-05-15 2021-03-24 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for delivery of aav
US12060567B2 (en) 2018-06-13 2024-08-13 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered untranslated regions (UTR) for AAV production
US20210254103A1 (en) 2018-07-02 2021-08-19 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord
SG11202100704PA (en) 2018-07-24 2021-02-25 Voyager Therapeutics Inc Systems and methods for producing gene therapy formulations
US10842885B2 (en) 2018-08-20 2020-11-24 Ucl Business Ltd Factor IX encoding nucleotides
CA3112007A1 (en) 2018-09-12 2020-03-19 Uniqure Ip B.V. Rnai induced c9orf72 suppression for the treatment of als/ftd
WO2020061418A1 (en) * 2018-09-20 2020-03-26 Tallgrass Biologics L.L.C. Treatment and control of colony collapse disorder
CN109295172A (zh) * 2018-09-26 2019-02-01 浙江海洋大学 大黄鱼清道夫受体家族基因的密码子偏好性分析方法
US20210395776A1 (en) 2018-09-28 2021-12-23 Voyager Therapeutics, Inc. Frataxin expression constructs having engineered promoters and methods of use thereof
TW202035689A (zh) 2018-10-04 2020-10-01 美商航海家醫療公司 測量病毒載體粒子的效價及強度之方法
CA3115248A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acid constructs encoding aav production proteins
WO2020077165A1 (en) 2018-10-12 2020-04-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for delivery of aav
CA3116701A1 (en) 2018-10-15 2020-04-23 Voyager Therapeutics, Inc. Expression vectors for large-scale production of raav in the baculovirus/sf9 system
WO2020104480A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Uniqure Biopharma B.V. Adeno-associated virus vectors for expressing fviii mimetics and uses thereof
WO2020104435A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Uniqure Ip B.V. A companion diagnostic to monitor the effects of gene therapy
US20200199625A1 (en) 2018-11-19 2020-06-25 Uniqure Ip B.V. RNAi induced reduction of ataxin-3 for the treatment of Spinocerebellar ataxia type 3
WO2020104469A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Uniqure Ip B.V. Method and means to deliver mirna to target cells
MX2021008542A (es) 2019-01-18 2021-11-12 Voyager Therapeutics Inc Métodos y sistemas para la producción de partículas de aav.
EP3962536A1 (en) 2019-04-29 2022-03-09 Voyager Therapeutics, Inc. Systems and methods for producing baculoviral infected insect cells (biics) in bioreactors
KR20220081971A (ko) 2019-07-15 2022-06-16 메이라지티엑스 유케이 Ii 리미티드 관절염 질환 치료용 변형된 aav 캡시드 단백질
US20220290182A1 (en) 2019-08-09 2022-09-15 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
EP4022070A1 (en) 2019-08-26 2022-07-06 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
WO2021041375A1 (en) * 2019-08-26 2021-03-04 Rootpath Genomics, Inc. Compositions and methods for producing adeno-associated viral vectors
EP4031148A1 (en) 2019-09-16 2022-07-27 uniQure IP B.V. Targeting misspliced transcripts in genetic disorders
IL295747A (en) 2020-02-21 2022-10-01 Akouos Inc Preparations and methods for the treatment of hearing impairment that is not related to age in humans
WO2021195491A2 (en) * 2020-03-26 2021-09-30 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Inducible promoter for viral vector production
JP2023519502A (ja) 2020-04-02 2023-05-11 ユニキュアー バイオファーマ ビー．ブイ． Ａａｖ生成のための二重二官能基ベクター
CN115867647A (zh) 2020-04-02 2023-03-28 优尼科生物制药有限公司 新型细胞系
CA3174872A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Sander Jan Hendrik Van Deventer Gene constructs for silencing angiopoietin-like 3 (angptl3) and uses thereof
BR112022020753A2 (pt) 2020-04-15 2022-12-20 Voyager Therapeutics Inc Compostos de ligação a tau
CN117120619A (zh) 2020-07-27 2023-11-24 沃雅戈治疗公司 用于治疗与葡萄糖神经酰胺酶β缺陷相关的神经病症的组合物和方法
WO2022026410A2 (en) 2020-07-27 2022-02-03 Voyager Therapeutics, Inc Compositions and methods for the treatment of niemann-pick type c1 disease
EP4192514A1 (en) 2020-08-06 2023-06-14 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
WO2022187548A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
US20240141377A1 (en) 2021-03-03 2024-05-02 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
CN115427561B (zh) 2021-03-09 2024-06-04 辉大(上海)生物科技有限公司 工程化CRISPR/Cas13系统及其用途
WO2022214635A1 (en) 2021-04-08 2022-10-13 Stichting Vu Nucleic acid molecules for compensation of stxbp1 haploinsufficiency and their use in the treatment of stxbp1-related disorders
CA3219847A1 (en) 2021-06-02 2022-12-08 Sander Jan Hendrik Van Deventer Adeno-associated virus vectors modified to bind high-density lipoprotein
EP4347798A2 (en) 2021-06-02 2024-04-10 uniQure biopharma B.V. Insect cell production of parvoviral vectors with modified capsid proteins
EP4359525A1 (en) 2021-06-21 2024-05-01 uniQure biopharma B.V. Gene constructs for silencing alpha-synuclein and uses thereof
WO2022268811A1 (en) 2021-06-21 2022-12-29 Uniqure Biopharma B.V. Improved lysis procedures
WO2023283962A1 (en) 2021-07-16 2023-01-19 Huigene Therapeutics Co., Ltd. Modified aav capsid for gene therapy and methods thereof
EP4392434A1 (en) 2021-08-26 2024-07-03 uniQure biopharma B.V. Insect cell-produced high potency aav vectors with cns-tropism
WO2023091949A2 (en) 2021-11-17 2023-05-25 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of neurological disorders related to glucosylceramidase beta deficiency
WO2023147374A2 (en) 2022-01-25 2023-08-03 Voyager Therapeutics, Inc. Baculovirus expression system
CN114703203B (zh) * 2022-02-11 2024-08-06 上海渤因生物科技有限公司 杆状病毒载体及其用途
WO2023198745A1 (en) 2022-04-12 2023-10-19 Uniqure Biopharma B.V. Nucleic acid regulation of apoe
WO2023198702A1 (en) 2022-04-12 2023-10-19 Uniqure Biopharma B.V. Nucleic acid regulation of c9orf72
WO2023198662A1 (en) 2022-04-12 2023-10-19 Uniqure Biopharma B.V. Novel systems for nucleic acid regulation
WO2023198663A1 (en) 2022-04-12 2023-10-19 Uniqure Biopharma B.V. Nucleic acid regulation of snca
WO2023240236A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of spinal muscular atrophy related disorders
WO2024054983A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
WO2024163012A1 (en) 2023-02-02 2024-08-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of neurological disorders related to glucosylceramidase beta deficiency
WO2024218190A1 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Uniqure Biopharma B.V. Generation of adeno-associated virus capsid libraries for insect cells
WO2024218192A1 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Uniqure Biopharma B.V. Novel neurotropic adeno-associated virus capsids with detargeting of peripheral organs
WO2024218204A1 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Uniqure Biopharma B.V. Gene delivery vehicles comprising rna and antibodies

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4745051A (en) 1983-05-27 1988-05-17 The Texas A&M University System Method for producing a recombinant baculovirus expression vector
US5871974A (en) * 1990-09-28 1999-02-16 Ixsys Inc. Surface expression libraries of heteromeric receptors
NZ308772A (en) 1995-05-17 1999-04-29 Du Pont Recombinant baculovirus insecticides
FR2774699B1 (fr) 1997-11-17 2003-10-03 Rhone Poulenc Rorer Sa Methode de reduction des evenements de recombinaison homologue
US6103526A (en) 1998-10-08 2000-08-15 Protein Sciences Corporation Spodoptera frugiperda single cell suspension cell line in serum-free media, methods of producing and using
WO2001000220A2 (en) 1999-06-24 2001-01-04 The University Of British Columbia Lipoprotein lipase (lpl) variant therapeutics
KR20020059370A (ko) * 1999-08-20 2002-07-12 추후보정 융합 라이브러리의 제작 및 사용을 위한 방법 및 조성물
WO2001068888A2 (en) * 2000-03-14 2001-09-20 Neurologix, Inc. Production of chimeric capsid vectors
US20030129203A1 (en) * 2001-08-27 2003-07-10 Nautilus Biotech S.A. Mutant recombinant adeno-associated viruses
US6723551B2 (en) 2001-11-09 2004-04-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Production of adeno-associated virus in insect cells
EP1572893B1 (en) 2001-11-09 2009-01-07 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY of the DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Production of adeno-associated virus in insect cells
CA2369985A1 (en) * 2002-01-18 2003-07-18 Duke University Generation of recombinant adeno-associated viral vectors by a complete adenovirus-mediated approach
US20040063188A1 (en) * 2002-02-14 2004-04-01 Novavax, Inc. Kit for treating gastrointestinal tract
WO2003074714A1 (en) 2002-03-05 2003-09-12 Stichting Voor De Technische Wetenschappen Baculovirus expression system
DE10260805A1 (de) 2002-12-23 2004-07-22 Geneart Gmbh Verfahren und Vorrichtung zum Optimieren einer Nucleotidsequenz zur Expression eines Proteins
US20070275449A1 (en) * 2003-10-15 2007-11-29 Vector Gene Technology Company Ltd. Method for Large-Scale Production, Isolation, Purification and the Uses of Multi-Type Recombinant Adeno-Associated Virus Vectors
WO2005072364A2 (en) 2004-01-27 2005-08-11 University Of Florida A modified baculovirus expression system for production of pseudotyped raav vector
DK1776460T3 (da) 2004-08-03 2010-04-12 Geneart Ag Fremgangsmåde til modulering af genekspression ved ændring af CpG-indholdet
DK1945779T3 (da) 2005-10-20 2013-06-03 Uniqure Ip Bv Forbedrede AAV vektorer frembragt i insektceller
EP1981548A4 (en) * 2006-01-20 2010-03-24 Univ North Carolina ENHANCED PRODUCTION OF INFECTIOUS VECTORS OF PARVOVIRUS IN INSECT CELLS
US8512981B2 (en) 2006-06-21 2013-08-20 Amsterdam Molecular Therapeutics B.V. Vectors with modified initiation codon for the translation of AAV-Rep78 useful for production of AAV
EP3093345B8 (en) * 2007-07-26 2019-07-24 UniQure IP B.V. Baculoviral vectors comprising repeated coding sequences with differential codon biases

Also Published As

Publication number Publication date
HUE029744T2 (en) 2017-04-28
EP2173888B1 (en) 2016-08-17
US11306291B2 (en) 2022-04-19
US20190203183A1 (en) 2019-07-04
US8697417B2 (en) 2014-04-15
CN101868547A (zh) 2010-10-20
DK2173888T3 (en) 2016-11-28
EP3561063A1 (en) 2019-10-30
US20140186926A1 (en) 2014-07-03
SI3093345T1 (sl) 2019-08-30
EA022169B1 (ru) 2015-11-30
PL2173888T3 (pl) 2017-02-28
KR101597695B1 (ko) 2016-02-25
CN101868547B (zh) 2016-03-16
US10190098B2 (en) 2019-01-29
JP5634262B2 (ja) 2014-12-03
KR20100065284A (ko) 2010-06-16
CA2694406A1 (en) 2009-01-29
JP2014239686A (ja) 2014-12-25
PT2173888T (pt) 2016-11-17
AU2008279883A1 (en) 2009-01-29
US9580691B2 (en) 2017-02-28
EP2173888A2 (en) 2010-04-14
WO2009014445A2 (en) 2009-01-29
EA201070184A1 (ru) 2010-08-30
EP3093345B1 (en) 2019-04-24
DK3093345T3 (da) 2019-06-24
BRPI0814459A2 (pt) 2014-10-21
MX2010000944A (es) 2010-08-31
BRPI0814459B1 (pt) 2023-01-24
IL203535A0 (en) 2011-07-31
AU2008279883B2 (en) 2013-12-05
JP2010534472A (ja) 2010-11-11
WO2009014445A3 (en) 2009-04-30
HK1143185A1 (zh) 2010-12-24
EP3093345A1 (en) 2016-11-16
EP3093345B8 (en) 2019-07-24
SI2173888T1 (sl) 2017-01-31
US20100261254A1 (en) 2010-10-14
IL203535A (en) 2016-02-29
CA2694406C (en) 2019-03-26
US20220251520A1 (en) 2022-08-11
PL3093345T3 (pl) 2020-03-31
US20160032254A1 (en) 2016-02-04
NZ582881A (en) 2012-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2602585T3 (es) Vectores de baculovirus que comprenden secuencias de codificación repetidas con sesgos de codones diferenciales
CN111183225B (zh) 在昆虫细胞中改进的aav衣壳产生
JP6366581B2 (ja) 改変されたアデノ随伴ウイルスベクター組成物
ES2785223T3 (es) Células de insecto para la producción de vectores de AAV
WO2022067935A1 (zh) 腺相关病毒突变体及其应用
ES2410133T3 (es) Vectores de VAA mejorados producidos en células de insecto.
ES2467156T3 (es) Una biblioteca de genes estructurales modificados o de partículas modificadas de cápside útiles para la identificación de clones virales con tropismo celular deseado
TWI802584B (zh) 具有經修飾之磷脂酶區域的腺相關病毒(aav)
JP2022107646A (ja) アデノ随伴ウイルス（ａａｖ）キャプシドタンパク質の変異体
EA035747B1 (ru) Днк-примеси в композиции, содержащей парвовирусный вирион
Yuan et al. Establishment of a rescue system for an autonomous parvovirus mink enteritis virus
ES2734355T3 (es) Vectores de baculovirus que comprenden secuencias de codificación repetidas con sesgos de codones diferenciales
KR102725731B1 (ko) 곤충 세포에서의 개선된 ａａｖ 캡시드 생산
ES2575990T3 (es) Vectores con codón de iniciación modificado para la traducción de aav-rep78 para la producción de aav en las células de insectos
WO2011112090A2 (en) Method for identifying variant rep protein encoding nucleic acids