DE3884798T2

DE3884798T2 - Tripeptide von N-3-4-Methoxyfumaryl-L-2,3-diamino-propansäure und Methode zu deren Herstellung.

Info

Publication number: DE3884798T2
Application number: DE88112455T
Authority: DE
Inventors: Ryszard Andruszkiewicz; Edward Borowski; Jerzy Borowski; Henryk Chmara; Slawomir Milewski; Maria Zaremba
Original assignee: POLITECHNIKA GDANSKA DANZIG GD
Current assignee: BTG International Ltd
Priority date: 1984-10-16
Filing date: 1988-08-01
Publication date: 1994-05-11
Anticipated expiration: 2008-08-02
Also published as: US4923965A; PL250068A1; EP0353317B1; DE3884798D1; EP0353317A1; PL144744B1

Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Tripeptide der N³-4- Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel
worin R ein Wasserstoffatom ist, wenn R&sub1; einen Dipeptidrest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin- oder Norvalinrest enthält, oder R und R&sub1; die gleiche Bedeutung haben und für einen Monoaminomonocarboxylaminosäure-Rest stehen, wie solche von Alanin, Methionin, Valin, Leucin oder Norvalin, oder R ein Dipeptidrest ist, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin-, Norvalin-, Lysin-, Ornithin-, Sarcosin-, 2,4-Diaminobutansäure- und 2,3-Diaminopropansäure-Rest enthält, und R&sub1; eine Hydroxylgruppe ist, und ein Verfahren ihrer Darstellung.
Das Verfahren der Darstellung beinhaltet das Überführen von N²-tert-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure in einen aktiven Ester, der zur Acylierung eines Dipeptids verwendet wird, oder von N²-tert-Butoxycarbonyl,N³-4- methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure in einen aktiven Ester, der zur Acylierung der Aminosäure verwendet wird, wonach die Aminoschutzgruppe entfernt wird, und letztere mit einem aktiven Ester der N-geschützten Aminosäure acyliert wird, oder N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure wird mit einem aktiven Ester des N-geschützten Dipeptids acyliert, und der Schutz der Aminogruppe wird von dem erhaltenen N-geschützten Tripeptid in einem polaren organischen Lösungsmittelmedium oder in einem Gemisch desselben mit Wasser entfernt, während das Endprodukt in Form eines Salzes durch Kristallisation isoliert wird oder in eine freie Säure überführt wird.

Tripeptide von N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure und das Verfahren ihrer Darstellung

Gegenstand dieser vorliegenden Erfindung sind Tripeptide der N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel
worin R ein Wasserstoffatom ist, wenn R&sub1; einen Dipeptidrest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin- oder Norvalin-Rest enthält, oder R und R&sub1; die gleiche Bedeutung haben und für einen Monoaminomonocarboxylaminosäure-Reste stehen, wie diejenigen von Alanin, Methionin, Valin, Leucin und Norvalin, oder R einen Dipeptidrest darstellt, der Alanin-, Methionin-, Valin-, Norvalin-, Lysin-, Ornithin-, Sarcosin-, 2,4-Diaminobutansäure- und 2,3-Diaminopropansäure-Reste enthält, und R&sub1; eine Hydroxylgruppe ist, und das Verfahren ihrer Darstellung.
Bis jetzt sind Dipeptide bekannt, die Derivate von L-2,3- Diaminopropansäure enthalten, und das Verfahren ihrer Darstellung beinhaltet die Acylierung von N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3- diaminopropansäure mit einem aktiven Ester einer N-geschützten Aminosäure. Die Reaktion findet in einem organischen Lösungsmittelmedium bei Raumtemperatur statt (R. Andruszkiewicz, H. Chmara, S. Milewski und E. Borowski, J. Med. Chem. 30, 17-15- 1719 (1987)).
Auf der anderen Seite sind Tripeptide, die eine hohe antifungale Wirkung zeigen und Derivate von L-2,3-Diaminopropansäure enthalten, nicht bekannt. Der Kern der vorliegenden Erfindung sind Tripeptide der N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel
worin R ein Wasserstoffatom ist, wenn R&sub1; einen Dipeptidrest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin- oder Norvalin-Rest enthält, oder R und R&sub1; die gleiche Bedeutung haben und für den Aminorest der Monoaminomonocarboxylaminosäure stehen, wie denjenigen von Alanin, Methionin, Valin, Leucin Norvalin, oder R einen Dipeptidrest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin-, Norvalin-, Lysin-, Ornithin-, Sarcosin-, 2,4-Diaminobutansäure- und 2,3-Diaminopropansäure-Rest enthält, und R&sub1; eine Hydroxygruppe bedeutet.
Entsprechend dieser vorliegenden Erfindung beinhaltet das Verfahren der Darstellung von Tripeptiden der N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel
worin R ein Wasserstoffatom ist und R&sub1; einen Dipeptid-Rest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin- oder Norvalinrest enthält, die Umwandlung von N²-tert-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure in einen aktiven Ester, der zur Acylierung des Dipeptids in einem polaren organischen Lösungsmittel oder in einer Mischung desselben mit Wasser verwendet wird, während das Endprodukt in Form eines Salzes durch Kristallisation isoliert oder in eine freie Säure überführt wird.
N-Hydroxysuccinimid ist das Mittel zur Aktivierung von N²tert-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure.
Tetrahydrofuran oder ein Gemisch aus einem aliphatischen Monohydroxyalkohol mit einer C1-C5-Kettenlänge und Wasser wird als organisches Lösungsmittel verwendet.
Entsprechend der vorliegenden Erfindung beinhaltet das Verfahren der Darstellung von Tripeptiden der N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel
worin R&sub1; und R Monoaminomonocarboxylaminosäuren-Reste, wie diejenigen von Alanin, Methionin, Valin, Leucin oder Norvalin darstellen, die Umwandlung von N²-tert-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure in einen aktiven Ester, der zur Acylierung der Monoaminomonocarboxylaminosäure verwendet wird, wonach der Schutz der Aminogruppe entfernt wird, und letztere mit einem aktiven Ester einer N-geschützten Monoaminomonocarboxylaminosäure in einem polaren organischen Lösungsmittel oder in einem Gemisch desselben mit Wasser acyliert wird, während das Endprodukt in Form eines Salzes durch Kristallisation isoliert und möglicherweise in eine freie Säure überführt wird.
N-Hydroxysuccinimid ist ein Mittel zur Aktivierung der N²tert-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure und der N-geschützten Monoaminocarboxylaminosäure.
Tetrahydrofuran oder ein Gemisch aus einem aliphatischen Monohydroxyalkohol mit einer C1-C5-Kettenlänge und Wasser wird als organisches Lösungsmittel verwendet.
Entsprechend der vorliegenden Erfindung beinhaltet das Verfahren der Darstellung von Tripeptiden der N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-Diaminopropansäure der allgemeinen Formel
worin R den Dipeptidrest darstellt, der den Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin-, Norvalin-, Lysin-, Ornithin-, Sarcosin-, 2,4-Diaminobutansäure- und 2,3-Diaminopropansäure-Rest enthält, und R&sub1; eine Hydroxylgruppe bedeutet, das Acylieren von N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure mit einem aktiven Ester eines N-geschützten Dipeptids in einem polaren organischen Lösungsmittel oder in einem Gemisch desselben mit Wasser, wonach der Schutz der Aminogruppe von dem so erhaltenen Tripeptid entfernt wird, und das Endprodukt in Form eines Salzes durch Kristallisation isoliert und möglicherweise in eine freie Säure überführt wird. N-Hydroxysuccinimid dient als Mittel zur Aktivierung der N-geschützten Monoaminomonocarboxylaminosäure. Tetrahydrofuran oder ein Gemisch aus einem aliphatischen Monohydroxyalkohol mit einer C1-C5-Kettenlänge und Wasser wird als polares organisches Lösungsmittel verwendet. Die fraglichen Verbindungen zeigen eine antimikrobielle Wirkung, besonders eine antifungale Wirkung gegenüber pathogenen Pilzen, wie Candida albicans, Cryptococcus neoformans und Aspergillus Spp., während ihr wesentlicher Vorteil in der beobachteten niedrigen Häufigkeit des Auftretens spontaner Mutanten, Microorganismen, die gegen die Wirkung der Tripeptide resistent sind, im Vergleich zu Mutanten, die gegen die Wirkung der Dipeptide resistent sind, besteht.
Es wird angenommen, daß obiges mit dem Unterschied in der Spezifizität der Wirkung der sogenannten Permeasen zu tun hat, die die Peptide zu den Zellen der Mikroorganismen transportieren.
Die antifungale Wirkung wurde anhand des Beispiels der N²- L-Methionyl-L-norvalyl-N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure während in vitro- und in vivo-Tests, durchgeführt an experimentell infizierten Maus-Modellen, beurteilt. Die in vitro-Wirksamkeit wurde anhand des Verfahrens der seriellen, parallelen Verdünnungen auf festem YNB-Medium und auf YNB w/o + AN-Medium beurteilt, worin die Abkürzung AN bedeutet: 200 mg Natriumglutamat, 10 mg L-Histidin, 20 mg DL-Methionin, 20 mg DL-Tryptophan, 10 g Glucose und 15 g Agar-Agar pro Liter des YNB-Mediums. Die Anwendung des in solcher Weise modifizierten Mediums wurde notwendig, durch das bekannte Phänomen der niedrigen biologischen Aktivität in Medien, die Ammoniumsulfat als Stickstoffquelle enthalten.
Bei der Beurteilung der Aktivität wurden die Wertebereiche der minimalen inhibitorischen Konzentrationen, das Wachstum der Stämme (MIC in mg/Liter), die kummulativen Prozentwerte der durch eine bestimmte durchschnittliche geometrische Konzentration des MIC-Wertes (GMIC) behinderten Stämmen, die Werte der Konzentrationen, die das Wachstum von 50 und 90% der getesteten Stämme (MIC&sub5;&sub0; und MIC&sub9;&sub0;) behinderten, dargestellt durch die Spezies Candida albicans (n=50), andere Spezies des Genus Candida, Candida spp. (n=117) und der vollständige Genus Candida (n=167), berücksichtigt.
167 Stämme des Genus Candida wurden von stationären Patienten frisch isoliert.
Die unten dargestellte Tabelle zeigt die Aktivität der N²- (L-Methionyl-L-norvayl),N³-(4-methoxyfumaroyl)-L-2,5-diaminopropansäure für 167 von Patienten isolierten Stämmen des Genus Candida. Tabelle Spezies Nummer der stämme Substrat MIC-Wert Bereich C. albicans Candida spp. Gesamt
Für einen der ausgewählten Stämme von Candida albicans ATCC 26278 betrug die minimale inhibitorische Konzentration, MIC, 0,4 mg/Liter im Falle der N²-(L-Methionyl-L-norvalyl),N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure und 0,02 mg/Liter für N²-(L-Lysyl-L-norvalyl),N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure.
Die Derivate zeigen eine hohe therapeutische Wirksamkeit. Die therapeutische Wirksamkeit wurde anhand des Beispiels von N²-(L-Methionyl-L-norvalyl),N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure (Met-Nva-FMP) bewertet.
Während der in Vivo-Tests wurde das Modell der ausgebreiteten Candidiosis mit der Schweizer Maus angewendet. Die Mäuse wurden intravenös mit dem Stamm Candida albicans 162 infiziert. Die Infektionsdosis betrug 2·10&sup7; cfu pro 1 mg Körpergewicht. Die therapeutische Wirksamkeit wurde durch mathe-matisches Bestimmen der Schutzdosen PD&sub5;&sub0; (Heildosen CD&sub5;&sub0;) und durch die quantitative mykologische Bewertung der Nieren der mit der experimentellen Candidiasis infizierten Schweizer Mäuse bewertet.
Als Beispiel wurde eine Schutzdosis PD&sub5;&sub0; von 0,374 mg/kg für das Met-Nva-FMP-Tripeptid für 5 bis 9 Tage der Beobachtung bestimmt, während die Heildosen, CD&sub5;&sub0;, bestimmt für 9 und 16 Tage der Beobachtung 0,499 beziehungsweise 1,062 mg/kg betrugen.
Die quantitative Bewertung der Nieren der Mäuse, die infiziert und mit einer Dosis von 10·CD&sub5;&sub0; g, d. h. 4,99 mg/kg des Met-Nva-FMP-Tripeptids geheilt wurden, zeigte, daß die Anzahl der Zellen von Candida albicans am 6. Tag verglichen mit einer Kontrollgruppe deutlich reduziert war.
Tripeptide der N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropionsäure und das Verfahren ihrer Darstellung werden durch die unten bereitgestellten Beispiele illustriert.

Beispiel I

a) 2,065 g (5 mM) N-Hydroxysuccinimidester von N²-t-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure in 10 ml Tetrahydrofuran werden zu einer Lösung von 1,1 g (5 mM) L- Methionyl-L-alanin und 0,42 g (5 mM) Natriumhydrogencarbonat in 15 ml Wasser unter intensivem Rühren gegeben und für 6 Stunden stehengelassen. Dann wird das Lösungsmittel eingedampft, der Rückstand in 10 ml Wasser gelöst und mit 1N Salzsäure auf pH=2 angesäuert, und das Reaktionsprodukt wird mehrmals mit Ethylacetat aufgenommen. Die organische Schicht wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird aus Ethylacetat und Hexan kristallisiert. Dies ergibt 2,27 g N²-t-Butoxycarbonyl,N³-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropanoyl-L-inethionyl-L-alanin mit einem Schmelzpunkt von 108-110ºC, was einer Menge von 88% der theoretischen Ausbeute entspricht.
b) 1,056 g (2 mM) N²-t-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropanoyl-L-methionyl-L-alanin werden in 10 ml 4N Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst und für 5 Stunden stehengelassen. Dann werden die Lösungsmittel eingedampft, und der Rückstand wird aus einer Mischung von Methanol und Ethylether kristallisiert. 0,863 g N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropanoyl-L-methionyl-L-anilin mit einem Schmelzpunkt von 178-180ºC wird erhalten, was 99% der theoretischen Ausbeute entspricht. MIC=0,1 ug/ml.

Beispiele II bis VII

Die folgenden Derivate der L-2,3-Diaminopropansäure der Tripeptidstruktur wurden genau wie in Beispiel I, wie in der Tabelle unten dargestellt, erhalten. Tabelle 1 Beispiel Name des Derivats Massenion

Beispiel VIII

a) 2,065 g (5 mM) N-Hydroxysuccinimidester von N²-t-Butoxycarbonyl,N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure in 10 ml Tetrahydrofuran werden unter intensivem Mischen zu einer gekühlten Lösung von 0,74 g (5 mM) L-Methionin und von 0,42 g (5 mM) Natriumhydrogencarbonat in 10 ml Wasser gegeben und für 10 Stunden stehengelassen. Dann wird das Lösungsmittel eingedampft, der Rückstand mit 10 ml Wasser gelöst und mit 1N Salzsäure auf einen pH-Wert von 2 angesäuert, und das Reaktionsprodukt wird mehrere Male mit Ethylacetat extrahiert.
Die organische Schicht wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird aus Ethylacetat und Hexan kristallisiert.
1,96 g N²-t-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3- diaminopropanoyl-L-methionin mit einem Schmelzpunkt von 84-86ºC werden erhalten, was 89% der theoretischen Ausbeute entspricht.
b) 0,89 g (2 mM) N²-t-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl- L-2,3-diaminopropanoyl-L-methionin wird in 10 ml 4N Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst und für 3 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann werden die Lösungsmittel eingedampft und der Rückstand aus einer Mischung von Methanol und Ethylether kristallisiert. 0,714 g N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropanoyl-L-methionin-Hydrochlorid mit einem Schmelzpunkt von 184-186ºC wird erhalten, was 94% der theoretischen Ausbeute entspricht.
c) 0,381 g (1 mM) N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropanoyl-L-methionin-Hydrochlorid wird in 10 ml Methanol gelöst, auf eine Temperatur von 0ºC abgekühlt, und 0,3 ml Triethylamin wird hinzugegeben. 0,346 g (1 mM) N-Hydroxysuccinimidester von N-t-Butoxycarbonyl-L-methionin, gelöst in 10 ml Tetrahydrofuran, wird unter intensivem Rühren zur Lösung gegeben, und die Reaktionsmischung wird 5 Stunden stehengelassen. Das weitere Verfahren ist das gleiche wie in Beispiel I. 0,485 g von N²-(N- t-Butoxycarbonyl-L-methionyl),N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropanoyl-L-methionin mit einem Schmelzpunkt von 148-150ºC wird erhalten, was 84% der theoretischen Ausbeute entspricht.
d) 0,298 g (0,5 mM) N²-(N-t-Butoxycarbonyl-L-methionyl),- N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropanoyl-L-methionin wird in 10 ml 4N Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst und für 4 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach werden die Lösungsmittel eingedampft und der Rückstand wird aus einer Mischung von Methanol und Ethylether kristallisiert. 0,246 g N²-L- Methionyl,-N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropanoyl-L- methionin-Hydrochlorid mit einem Schmelzpunkt von 205-207ºC wird erhalten, was 96% der theoretischen Ausbeute entspricht.
Die MIC entspricht 0,8 ug/ml.

Beispiele IX-XIV

Genau wie in Beispiel VIII wurden die folgenden, in Tabelle 2 dargestellten Derivate der L-2,3-Diaminopropionsäure mit Tripeptidstruktur erhalten. Tabelle 2 Beispiel Name der Derivate Massenion

Beispiel XVI

a) 0,7 ml Triethylamin und 1,27 g (5 mM) N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure-Hydrochlorid, gelöst in 5 ml Wasser, wird zu einer gekühlten Lösung von 1,57 g (5 mM) N-Hydroxysuccinimidester von N-tert-Butoxycarbonyl-L-norvalin in 20 ml Tetrahydrofuran unter intensivem Mischen gegeben. Das Ganze wird 4 Stunden gemischt, und das Lösungsmittel wird eingedampft. Der Rückstand wird in 10 ml Wasser gelöst. 1N-Salzsäure wird hinzugegeben bis ein pH-Wert von 2 ,erhalten wird, und das Reaktionsprodukt wird mehrere Male mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird eingedampft. Das Produkt wird aus einer Mischung aus Ethylacetat und Hexan kristallisiert.
1,7 g N²-t-Butoxycarbonyl-L-norvalyl,N³-4-methoxyfumaroyl- L-2,3-diaminopropansäure mit einem Schmelzpunkt von 68-70ºC wird erhalten, was 83% der theoretischen Ausbeute entspricht.
b) 0,83 g (2 mM) von N²-t-Butoxycarbonyl-L-norvalyl,N³-4- methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure wird in 10 ml 4N- Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst und für 4 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand aus einer Mischung von Methanol und Ethylether kristallisiert.
0,65 g N²-L-Norvalyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure-Hydrochlorid mit einem Schmelzpunkt von 188-190ºC wird erhalten, was 93% der theoretischen Ausbeute entspricht.
c) 0,3 ml Triethylamin und 0,351 g (1 mM) N²-L-Norvalyl,- N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure-Hydrochlorid, gelöst in 10 ml Wasser, werden zu einer gekühlten Lösung von 0,346 g (1 mM) N-Hydroxysuccinimidester von N-t-Butoxycarbonyl- L-methionin in 10 ml Tetrahydrofuran gegeben. Das Ganze wird für 4-6 Stunden gemischt, und das Lösungsmittel wird eingedampft. Der Rückstand wird in 10 ml Wasser gelöst. 1N-Salzsäure wird hinzugegeben, bis ein pH von 2 erhalten wird, und das Reaktionsprodukt wird mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird eingedampft. Das Produkt wird aus einer Mischung von Ethylether und Cyclohexan kristallisiert.
0,415 g N²-(N-t-Butoxycarbonyl-L-methionyl-L-norvalyl),N³- 4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure mit einem Schmelzpunkt von 118-120ºC wird erhalten, was 76% der theoretischen Ausbeute entspricht.
d) 0,273 g (0,5 mM) N²-(N-t-Butoxycarbonyl-L-methionyl-L- norvalyl),N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure wird in 5 ml 4N-Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst und bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck eingedampft, und der Rückstand wird aus einer Mischung von Methanol und Ethylether kristallisiert.
0,23 g N²-L-methionyl-L-norvalyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L- 2,3-diaminopropan-Hydrochlorid mit einem Schmelzpunkt von 190-192ºC wird erhalten, was 95% der theoretischen Ausbeute entspricht. Die MIC ist 0,8 ug/ml.

Beispiele XVII-XXV

Genau wie in Beispiel XV wurden die folgenden in der Tabelle unten dargestellten Derivate der L-2,3-Diaminopropansäure mit Tripeptidstruktur erhalten.
Beispiel Name des Derivats Massenion m/z
XVII N²-L-Methionyl-L-alanyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure- Hydrochlorid 418
XVIII N²-Sarcosyl-L-norvalyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure- Hydrochlorid 404
XIX N²-L-Leucyl-L-alanyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure- Hydrochlorid 400
XX N²-L-Valyl-L-methionyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure- Hydrochlorid 446
XXI N²-L-Norvalyl-L-norvalyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure- Hydrochlorid 414
XXII N²-L-Lysyl-L-norvalyl-N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure- Dihydrochlorid 443
XXIII N²-L-Ornithyl-L-norvalyl-N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure- Diydrochlorid 429
XXIV N²-L-2,4-Diaminobutanoyl-L-norvalyl- N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure-Dihydrochlorid 415
XXV N²-L-2,3-Diaminopropanoyl-L-norvalyl- N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure-Dihydrochlorid 401

Claims

1. Tripeptide der N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel

worin R für ein Wasserstoffatom steht, wenn R&sub1; einen Dipeptid-Rest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin- oder Norvalin-Rest enthält, oder R und R&sub1; die gleiche Bedeutung haben und stehen für einen Monoaminomonocarboxylaminosäure-Rest, beispielsweise diejenigen von Alanin, Methionin, Valin, Leucin und Norvalin, oder R einen Dipeptid-Rest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin-, Norvalin-, Lysin-, Ornithin-, Sarcosin-, 2,4-Diaminobutansäure- und 2,3-Diaminopropansäure-Rest enthält und R&sub1; eine Hydroxylgruppe bedeutet.

2. Verfahren zur Herstellung von Tripeptiden der N³-4- Methoxyfumaroyl-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel

worin R für Wasserstoff steht und R&sub1; einen Dipeptidrest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin- oder Norvalinrest enthält, dadurch gekennzeichnet, daß die N²-tert-Butoxycarbonyl,N³- 4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure in einen aktiven Ester überführt wird, der für die Acylierung eines Dipeptids in einem polaren organischen Lösungsmittel oder in einem Gemisch desselben mit Wasser verwendet wird, während das Endprodukt in Form eines Salzes durch Kristallisation isoliert oder in eine freie Säure überführt wird.

3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß N-Hydroxysuccinimid als Agens zur Aktivierung der N²tert-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure verwendet wird.

4. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß Tetrahydrofuran oder ein Gemisch aus einem aliphatischen Monohydroxyalkohol mit einer C&sub1;-C&sub5;-Kettenlänge und Wasser als polares organisches Lösungsmittel verwendet wird.

5. Verfahren zur Herstellung von Tripeptiden der N³-4- Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel

worin R und R&sub1; Monoaminomonocarboxylaminosäure-Reste, beispielsweise diejenigen von Alanin, Methionin, Valin, Leucin oder Norvalin, darstellen, dadurch gekennzeichnet, daß N²-tert-Butoxycarbonyl,N³-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure in einen aktiven Ester überführt wird, der für die Acylierung der Monoaminomonocarboxylaminosäure verwendet wird, daß die Aminoschutzgruppe dann entfernt wird und die Aminogurppe mit einem aktiven Ester der N-geschützten Monoaminomonocarboxylaminosäure in einem polaren organischen Lösungsmittel oder in einem Gemisch desselben mit Wasser acyliert wird, während das Endprodukt in Form eines Salzes durch Kristallisation isoliert und gegebenenfalls in eine freie Säure überführt wird.

6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß N-Hydroxysuccinimid als Agens zur Aktivierung der N²tert-Butoxycarbonyl,N³-4-methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure und der N²-geschützten Monoaminomonocarboxylaminosäure verwendet wird.

7. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß Tetrahydrofuran oder ein Gemisch aus einem aliphatischen Monohydroxyalkohol mit einer C&sub1;-C&sub5;-Kettenlänge und Wasser als polares organisches Lösungsmittel verwendet wird.

8. Verfahren zur Herstellung von Tripeptiden der N³-4- Methoxyfumaroyl-L-2,3-diaminopropansäure der allgemeinen Formel

worin R einen Dipeptidrest darstellt, der einen Alanin-, Methionin-, Valin-, Leucin-, Norvalin-, Lysin-, Ornithin-, Sarcosin-, 2,4-Diaminobutansäure- oder 2,3-Diaminopropansäure-Rest enthält, und R&sub1; eine Hydroxylgruppe bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß N³-4-Methoxyfumaroyl-L-2,3- diaminopropansäure mit einem aktiven Ester eines N-geschützen Dipeptids in einem polaren organischen Lösungsmittel oder in einem Gemisch desselben mit Wasser acyliert wird, daß danach die Aminoschutzgruppe aus dem dabei erhaltenen Tripeptid entfernt wird, während das Endprodukt in Form eines Salzes durch Kristallisation isoliert und gegebenenfalls in eine freie Säure überführt wird.

9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß N-Hydroxysuccinimid als Agens zur Aktivierung der N- geschützten Monoaminomonocarboxylaminosäure verwendet wird.

10. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß Tetrahydrofuran oder ein Gemisch aus einem aliphatischen Monohydroxyalkohol mit einer C&sub1;-C&sub5;-Kettenlänge und Wasser als polares organisches Lösungsmittel verwendet wird.