DE19950020A1

DE19950020A1 - Use of compositions containing inhibitors of desmosome degradation to prevent skin-flaking during prophylactic or cosmetic treatment of dry skin

Info

Publication number: DE19950020A1
Application number: DE19950020A
Authority: DE
Inventors: Andrea Saettler; Albrecht Weiss; Kordula Schlotmann; Thomas Foerster
Original assignee: Henkel AG and Co KGaA
Current assignee: Henkel AG and Co KGaA
Priority date: 1999-10-16
Filing date: 1999-10-16
Publication date: 2001-04-19
Also published as: AU1022501A; EP1221948A2; WO2001028536A3; WO2001028536A2

Abstract

Use is claimed in the topical prophylactic or cosmetic treatment of dry skin of a composition which contains a skin-compatible carrier and an inhibitor for desmosome-degrading proteinases.

Description

Die Lehre der Erfindung betrifft Zusammensetzungen zur pflegenden Behandlung der Haut, die spezielle bioaktive Komponenten enthalten.The teaching of the invention relates to compositions for the care treatment of Skin that contain special bioactive components.

Hautpflegemittel sind Produkte zur Reinigung und Pflege der Haut, welche die Aufgabe haben, die Haut schonend zu reinigen, geschmeidig zu halten und die Hornschicht der Haut in ihrem natürlichen Regenerationsvermögen zu unterstützen. Da die Haut kein iso liertes Organ ist, sondern mit anderen Gewebeschichten in Funktion und Aufbau verbun den ist, sind die Anforderungen an die Zusammensetzung eines Hautpflegemittels sehr komplex.Skin care products are products for cleaning and care of the skin that do the job have to gently cleanse the skin, keep it supple and the horny layer of the To support skin in its natural regenerative capacity. Since the skin is not iso organ, but is connected to other tissue layers in terms of function and structure is, the requirements for the composition of a skin care product are very high complex.

Ein besonderes Anforderungsprofil ergibt sich für Pflegemittel zur Behandlung der trockenen Haut. Hierzu werden Produkte eingesetzt, die einen hohen Anteil an Pflege komponenten enthalten, beispielsweise natürliche Fette, Öle, Wachse und verschiedene rückfettende und wasserbindende Bestandteile, die auf die Haut einen glättenden Effekt haben. In jüngster Zeit werden zur Behandlung trockener Haut vermehrt bioaktive Komponenten eingesetzt. Unter dem Begriff werden Substanzen zusammengefaßt, die in Stoffwechselprozesse des Organismus eingreifen, z. B. indem sie relevante Enzyme des Stoffwechsels aktivieren oder inhibieren. Obgleich die Entstehung trockener Haut inten siv untersucht wird (K. Kitamura, K. Yamada, A. Ito und M. Fukuda J. Soc. Cosm. Chem. Japan 1995, 29 (2), 133-145), ist über die biochemischen Prozesse der trockenen Haut und die daran beteiligten Enzyme bisher nur wenig bekannt.There is a special requirement profile for care products for the treatment of dry skin. For this, products are used that have a high proportion of care contain components such as natural fats, oils, waxes and various lipid-replenishing and water-binding components that have a smoothing effect on the skin to have. Recently, bioactive treatments for dry skin have increased Components used. The term summarizes substances that are in Interfering with metabolic processes of the organism, e.g. B. by relevant enzymes of the Activate or inhibit metabolism. Although the formation of dry skin is intense siv is investigated (K. Kitamura, K. Yamada, A. Ito and M. Fukuda J. Soc. Cosm. Chem. Japan 1995, 29 (2), 133-145), is about the biochemical processes of dry skin and the enzymes involved in it are so far little known.

Gesunde Haut wird durch ein Fließgleichgewicht, welches die mittlere Schichtdicke der Haut aufrecht erhält, ständig erneuert. Die Zellen der Hornschicht (Stratum corneum) an der Hautoberfläche werden abgeschuppt, während aus dem Stratum basale neue Zellen nachgeliefert werden. Für den Abschuppungsprozeß (Desquamation) müssen die Protein strukturen (Desmosomen), die für die Kohäsion der Zellen verantwortlich sind, aufgelöst werden (A. Lundström, T. Egelrud, J. Invest. Dermatol. 1988, 91, 340-343 und 1990, 94, 216-220; idem, Arch. Dermatol. Res. 1990, 282, 234-237). Der Abbau der Desmosomen erfolgt über im Stratum corneum enthaltene Proteasen, von denen zwei näher charak terisiert wurden. Es handelt sich hierbei um Serin-Proteasen vom Chymotrypsin- und Trypsin-Typ (T. Egelrud et al., Acta Derm. Venereol. 1991, 71, 471-474; JP 8068791 A2).Healthy skin is characterized by a steady state, which is the average layer thickness of the Skin maintained, constantly renewed. The cells of the stratum corneum The skin surface is desquamated, while new basal cells emerge from the stratum be delivered later. For the desquamation process, the protein structures (desmosomes), which are responsible for the cohesion of the cells (A. Lundström, T. Egelrud, J. Invest. Dermatol. 1988, 91, 340-343 and 1990, 94, 216-220; idem, Arch. Dermatol. Res. 1990, 282, 234-237). The breakdown of the desmosomes takes place via proteases contained in the stratum corneum, two of which are more closely charak were terized. These are serine proteases from chymotrypsin and Trypsin type (T. Egelrud et al., Acta Derm. Venereol. 1991, 71, 471-474; JP 8068791 A2).

Trockene Haut zeichnet sich durch vermehrte Desmosomenstrukturen in den obersten Schichten des Stratum corneum (EP 0633765) und auch durch eine verstärkte Abschup pung von Keratinozyten in der Epidermis aus. Zur Behandlung der trockenen Haut wurden daher beispielsweise Proteasen als bioaktive Komponenten in Hautpflegemitteln verwendet, welche die vermehrten Desmosomenstrukturen schneller abbauen (WO 95/07688, EP 0 633 765, EP 0 719 132, EP 0 719 133, EP 0 719 134). Auch der Einsatz von Dicarbonsäuren führt zu einem beschleunigten Abbau der Desmosomenstrukturen (JP 10175844).Dry skin is characterized by increased desmosome structures in the uppermost Layers of the stratum corneum (EP 0633765) and also due to an increased deposition of keratinocytes in the epidermis. To treat dry skin Proteases, for example, were therefore used as bioactive components in skin care products used, which break down the increased desmosome structures faster (WO 95/07688, EP 0 633 765, EP 0 719 132, EP 0 719 133, EP 0 719 134). The use too of dicarboxylic acids leads to an accelerated breakdown of the desmosome structures (JP 10175844).

Protease-Inhibitoren werden dagegen zur Behandlung von Hauterkrankungen und bei krankhaft beschleunigter Bildung von Zellen der Epidermis eingesetzt (JP 9025212, JP 9025214, US 5290762, EP 0 532 465). Der Protease-Inhibitor trans-4-(Aminomethyl)- cyclohexancarbonsäure (Tranexamsäure, t-AMCHA; vgl. JP 9175986) hemmt den soge nannten tissue-type-Plasminogen-Aktivator (t-PA), eine Protease, die an der Fibrinolyse beteiligt ist und nur dann in der Oberhaut vorkommt, wenn bereits ein entzündliches Hautbild vorliegt (J. Koyama et al., "The mechanism of desquamation in the stratum corneum and its relevance to skin care", Symposium paper No. 9, 19^th IFSCC Congress, Sidney 1996).Protease inhibitors, on the other hand, are used for the treatment of skin diseases and for the pathologically accelerated formation of cells of the epidermis (JP 9025212, JP 9025214, US 5290762, EP 0 532 465). The protease inhibitor trans-4- (aminomethyl) cyclohexanecarboxylic acid (tranexamic acid, t-AMCHA; see JP 9175986) inhibits the so-called tissue-type plasminogen activator (t-PA), a protease that participates in fibrinolysis and only occurs in the epidermis if there is already an inflammatory complexion (J. Koyama et al., "The mechanism of desquamation in the stratum corneum and its relevance to skin care", Symposium paper No. 9, 19 ^th IFSCC Congress , Sidney 1996).

Die derzeit eingesetzten Komponenten in Pflegemitteln zur Behandlung der trockenen Haut können die Stoffwechselprozesse noch nicht zufriedenstellend beeinflussen. Beispielsweise hemmen zahlreiche Wirkstoffe nicht spezifisch die an der Abschuppungs reaktion beteiligten Proteasen. Aufgabe war es, die Abschuppung der Keratinozyten durch gezielt wirkende bioaktive Komponenten zu reduzieren, welche die am Desmosomenab bau beteiligten Proteasen hemmen, und auf diese Weise ein deutlich verbessertes Hautbild zu erreichen.The components currently used in care products for the treatment of dry Skin cannot yet influence the metabolic processes satisfactorily. For example, numerous active ingredients do not specifically inhibit desquamation proteases involved in the reaction. The task was to desquamate the keratinocytes to reduce targeted bioactive components that affect the desmosomes inhibit proteases involved in construction, and in this way a significantly improved complexion to reach.

Überraschenderweise wurde nun eine Gruppe von Inhibitoren gefunden, welche die an der Abschuppungsreaktion der Haut beteiligten Proteasen hemmen und die Keratinozyten länger im Zeliverbund halten. Als bioaktive Komponenten in Hautpflegemitteln redu zieren sie den bei trockener Haut abnorm verstärkten Abschuppungsprozeß und norma lisieren so das Erscheinungsbild der Haut. Ebenso wird bei gereizter und aus diesem Grund stark abschuppender Haut ein Hautschutz erreicht.Surprisingly, a group of inhibitors has now been found which Inhibit the desquamation reaction of the proteases involved in the skin and the keratinocytes hold longer in the cell network. As bioactive components in skin care products redu adorn the desquamation process and norma, which is abnormally increased when the skin is dry so the appearance of the skin. Likewise, irritated and from this Skin protection achieved due to severely flaking skin.

Gegenstand der Erfindung ist daher die Verwendung einer Zusammensetzung, die in einem auf der Haut verteilbaren, physiologisch verträglichen Träger mindestens einen Inhibitor für die am Desmosomen-Abbau beteiligten Proteinasen, enthält zur Hemmung des Abbaus von Desmosomenstrukturen bei topischer prophylaktischer und/oder kosmetischer Behandlung trockener Haut. Wasserlösliche Inhibitoren mit einem Molekulargewicht kleiner als 5000 g/mol können im Sinne der Erfindung bevorzugt sein, wobei unter Wasserlöslichkeit eine minimale Löslichkeit des Inhibitors von 0,001 Gew.-% in Wasser bei 25°C verstanden wird. Unter Inhibition oder Hemmung im Sinne der Erfindung wird die Aktivitätsabnahme (Defition der Enzymaktivität, vgl. Stichwort "Enzyme" in: CD Römpp Chemie Lexikon, Version 1.0, Stuttgart, New York: Georg Thieme Verlag 1995) des entsprechenden, aus der Haut isolierten Enzyms oder eines geeigneten Modellenzyms in Anwesenheit des Inhibitors oder eines Gemisches von Inhibitoren im in-vitro-Test und/oder die verminderte Abschuppung von Keratinozyten an Hautbiopsien in Anwesenheit des Inhibitors oder eines Gemisches von Inhibitoren verstanden. Der Inhibitor oder das Gemisch von Inhibitoren kann in einer Konzentration von 0.001-20.0 Gew.-%, vorzugsweise 0.1-5 Gew.-% in den Zusammensetzungen enthalten sein. Der physiologisch verträgliche Träger kann beispielsweise eine O/W oder eine W/O-Emulsion, eine Gel-Grundlage oder eine geeignete wässrige oder alkoholische Lösung sein.The invention therefore relates to the use of a composition which is in a physiologically compatible carrier which can be distributed on the skin, at least one Inhibitor for the proteinases involved in desmosome degradation, contains for inhibition the breakdown of desmosome structures in topical prophylactic and / or cosmetic treatment of dry skin. Water soluble inhibitors with one Molecular weight less than 5000 g / mol can be preferred in the sense of the invention, where under water solubility a minimal solubility of the inhibitor of 0.001% by weight in water at 25 ° C is understood. Under inhibition or inhibition in For the purposes of the invention, the decrease in activity (definition of enzyme activity, cf. Keyword "Enzyme" in: CD Römpp Chemie Lexikon, Version 1.0, Stuttgart, New York: Georg Thieme Verlag 1995) of the corresponding enzyme isolated from the skin or a suitable model enzyme in the presence of the inhibitor or a mixture of Inhibitors in the in vitro test and / or the reduced desquamation of keratinocytes Skin biopsies in the presence of the inhibitor or a mixture of inhibitors Roger that. The inhibitor or the mixture of inhibitors can be in one concentration from 0.001-20.0% by weight, preferably 0.1-5% by weight in the compositions be included. The physiologically compatible carrier can be, for example, an O / W or a W / O emulsion, a gel base or a suitable aqueous or alcoholic Solution.

Die Verwendung einer Zusammensetzung, die dadurch gekennzeichnet ist, daß min destens ein Inhibitor enthalten ist, der die am Desmosomen-Abbau beteiligten Serin-Pro teinasen hemmt, ist bevorzugt. Diese Proteinasen enthalten im aktiven Zentrum einen für die Katalyse essentiellen L-Serin-Rest. Als Inhibitoren im Sinne der Erfindung eignen sich Substanzen, die den L-Serin-Rest modifizieren und/oder die Substratspaltungsstelle durch Wechselwirkung mit dem L-Serin-Rest bzw. mit Aminosäuren aus der Umgebung blockieren und/oder über die Änderung der Tertiärstruktur des Enzyms dessen Inaktivierung bewirken. Als Hemmwirkung im Sinne der Erfindung wird, wie bereits für den allgemeinen Fall erläutert, eine Aktivitätsabnahme der Serin-Proteinasen in Anwesenheit des Inhibitors im in-vitro-Test und/oder die verminderte Abschuppung von Keratinozyten an Hautbiopsien in Anwesenheit des Inhibitors bezeichnet.The use of a composition which is characterized in that min at least one inhibitor is included, which is the Serin-Pro involved in the desmosome breakdown inhibiting teinases is preferred. These proteinases contain one for in the active center catalysis essential L-serine residue. Suitable as inhibitors in the sense of the invention substances that modify the L-serine residue and / or the substrate cleavage site through interaction with the L-serine residue or with amino acids from the environment block and / or via the change in the tertiary structure of the enzyme thereof Effect inactivation. As an inhibitory effect in the sense of the invention, as already for explained the general case, a decrease in the activity of serine proteinases in Presence of the inhibitor in the in vitro test and / or the reduced desquamation of Keratinocytes referred to skin biopsies in the presence of the inhibitor.

Besonders bevorzugt ist weiterhin die Verwendung einer Zusammensetzung, die dadurch gekennzeichnet ist, daß mindestens ein Inhibitor enthalten ist, der die am Desmosomen- Abbau beteiligten Trypsin- oder Chymotrypsin-ähnlichen Serin-Proteinasen hemmt. Trypsin ist eine Endopeptidase, die im Dünndarm aus der vom Pankreas gebildeten Vor stufe Trypsinogen durch Abspaltung eines Hexapeptids entsteht. Kennzeichnend für diese Serin-Proteinase ist ein negativ geladener L-Aspartat-Rest in der Substrat-Bindungs tasche, der die Spezifität des Enzyms mitbestimmt. Trypsin spaltet Peptidketten spezifisch auf der Carboxy-Seite der basischen Aminosäuren L-Lysin und L-Arginin. Chymotrypsin entsteht im Pankreas aus inaktiven Vorstufen, sogenannten Zymogenen, durch Einwirkung von Trypsin. Chymotrypsin spaltet Proteine, Peptide, Aminosäureester und Amide spezifisch an der Carboxy-Gruppe hydrophober Aminosäuren. Beide Enzym- Typen sind am Abbau von Proteinstrukturen (Desmosomen) beteiligt, welche für die Kohäsion der Hornzellen in der Haut verantwortlich sind. Als Hemmwirkung im Sinne der Erfindung wird, wie bereits für den allgemeinen Fall erläutert, eine Aktivitätsabnahme der Trypsin- oder Chymotrypsin-ähnlichen Serin-Proteinasen in Anwesenheit des Inhi bitors im in-vitro-Test und/oder die verminderte Abschuppung von Keratinozyten an Hautbiopsien in Anwesenheit des Inhibitors bezeichnet.It is also particularly preferred to use a composition which thereby is characterized in that it contains at least one inhibitor which Degradation inhibits trypsin or chymotrypsin-like serine proteinases. Trypsin is an endopeptidase that originates in the small intestine from the pre-formed by the pancreas stage trypsinogen is formed by cleavage of a hexapeptide. Characteristic of this Serine proteinase is a negatively charged L-aspartate residue in the substrate binding pocket that helps determine the specificity of the enzyme. Trypsin specifically cleaves peptide chains on the carboxy side of the basic amino acids L-lysine and L-arginine. Chymotrypsin arises in the pancreas from inactive precursors, so-called zymogens Exposure to trypsin. Chymotrypsin cleaves proteins, peptides, amino acid esters and Amides specific to the carboxy group of hydrophobic amino acids. Both enzyme Types are involved in the breakdown of protein structures (desmosomes), which are responsible for the Cohesion of the horny cells in the skin are responsible. As an inhibitory effect in the sense As already explained for the general case, the invention becomes a decrease in activity the trypsin or chymotrypsin-like serine proteinases in the presence of the Inhi bitors in the in vitro test and / or the reduced desquamation of keratinocytes Skin biopsies referred to in the presence of the inhibitor.

Die erfindungsgemäße Verwendung einer Zusammensetzung, die dadurch gekennzeichnet ist, daß als Inhibitor Borsäure oder deren Derivate enthalten sind, ist besonders bevorzugt (Beispiele 1 und 2). Zu den erfindungsgemäß verwendbaren Derivaten gehören Ester und Salze der Borsäure sowie C₁-C₅-Alkyl- oder Aryl-substituierte Borsäure-Derivate, wie beispielsweise Phenylboronsäure und/oder deren Mono- oder Diester mit C₁-C₅-Alkylresten. Die Verwendung von Borsäureacetat oder Phenylboronsäureacetat kann im Sinne der Erfindung bevorzugt sein. Borsäure und Phenylboronsäure wirken schwach antiseptisch. In enzymhaltigen Waschmitteln ist Phenylboronsäure als Inhibitor für proteolytische Enzyme bekannt, um deren Lagerstabilität zu erhöhen. Die Verwendung von Phenylboronsäure, C₆H₅B(OH)₂, als Aktivitätsregulator für α-Chymotrypsin in Gewebekulturen wurde in JP 08157800 gelehrt. Insbesondere Phenylboronsäure erwies sich im in-vitro-Test (Beispiel 1) in sehr geringen Konzentrationen (0,1%) als äußerst wirkungsvoller Inhibitor von Chymotrypsin, einem Enzym, das am Desmosomenabbau beteiligt ist. Auch im Abschuppungstest an Haut- Biopsien erwiesen sich Borsäure und Phenylboronsäwe (Beispiele 7 und 8) als Inhibitoren und sind daher zur Hemmung des Abbaus von Desmosomenstrukturen bei topischer Behandlung der trockenen Haut besonders geeignet.The use according to the invention of a composition which is characterized in that boric acid or its derivatives are present as an inhibitor is particularly preferred (Examples 1 and 2). The derivatives which can be used according to the invention include esters and salts of boric acid and C ₁ -C ₅ -alkyl- or aryl-substituted boric acid derivatives, such as, for example, phenylboronic acid and / or their mono- or diesters with C ₁ -C ₅ -alkyl radicals. The use of boric acid acetate or phenylboronic acid acetate can be preferred for the purposes of the invention. Boric acid and phenylboronic acid have a weak antiseptic effect. In detergents containing enzymes, phenylboronic acid is known as an inhibitor of proteolytic enzymes in order to increase their storage stability. The use of phenylboronic acid, C ₆ H ₅ B (OH) ₂ , as an activity regulator for α-chymotrypsin in tissue cultures was taught in JP 08157800. In particular, phenylboronic acid in the in vitro test (Example 1) in very low concentrations (0.1%) proved to be an extremely effective inhibitor of chymotrypsin, an enzyme which is involved in the breakdown of desmosomes. Boric acid and phenylboronic acid (Examples 7 and 8) also proved to be inhibitors in the peeling test on skin biopsies and are therefore particularly suitable for inhibiting the breakdown of desmosome structures with topical treatment of dry skin.

Ebenso bevorzugt ist die erfindungsgemäße Verwendung einer Zusammensetzung, die dadurch gekennzeichnet ist, daß als Inhibitor 4-(2-Aminoethyl)phenylsulfonylfluorid ent halten ist. Zwei Ausführungsformen dieses Inhibitors sind unter dem Handelsnamen Pefabloc® und Pefabloc® SC bekannt. Die Substanz wird als nicht-toxischer, irreversibler und effektiver Inhibitor von Serin-Proteasen beschrieben (C. Dentan et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1996, 1299, 353-357). Insbesondere wegen seiner geringen Toxizität ist 4-(2-Aminoethyl)phenylsulfonylfluorid zur Hemmung des Abbaus von Desmosomen- Strukturen in trockener Haut geeignet. Eine signifikante Hemmung von Trypsin und Chymotrypsin wurde in in-vitro-Tests bereits mit 0,02 bzw. 0,05% des Inhibitors beobachtet, eine nahezu vollständige Hemmung tritt bei Verwendung von 0,5% ein (Beispiel 3). Dies entspricht dem Ergebnis des Desquamationstest an Hautbiopsien, bei dem 0,5% des Inhibitors die Abschuppung der Korneozyten um ca. 90% reduziert (Beispiel 9).Likewise preferred is the use according to the invention of a composition which characterized in that 4- (2-aminoethyl) phenylsulfonyl fluoride ent as inhibitor hold is. Two embodiments of this inhibitor are under the trade name Pefabloc® and Pefabloc® SC known. The substance is said to be non-toxic, irreversible and effective inhibitor of serine proteases (C. Dentan et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1996, 1299, 353-357). Especially because of its low toxicity 4- (2-aminoethyl) phenylsulfonyl fluoride to inhibit the breakdown of desmosome Structures suitable for dry skin. Significant inhibition of trypsin and Chymotrypsin has already been tested in vitro with 0.02 and 0.05% of the inhibitor observed, almost complete inhibition occurs when using 0.5% (Example 3). This corresponds to the result of the desquamation test on skin biopsies, at the 0.5% of the inhibitor reduces the desquamation of the corneocytes by approx. 90% (Example 9).

Bevorzugt ist auch die erfindungsgemäße Verwendung einer Zusammensetzung, die als Inhibitor das Pentapeptid Glycin-Prolin-Phenylalanin-Prolin-Leucin (GPFPL) oder ein Derivat davon enthält. Das Pentapeptid ist als Inhibitor für Serin-Proteinasen bekannt. Beansprucht im Sinne der erfindungsgemäßen Verwendung sind u. a. endgruppengeschützte Derivate dieser Pentapeptidsequenz, Polypeptide, Proteine und andere chemische Derivate, die diese Pentapeptidsequenz enthalten, die eine inhibitorische Wirkung in den umseitig beschriebenen Tests aufweisen. Eine deutliche Hemmung von Chymotrypsin (27%) wurde in in-vitro-Tests bei Verwendung von 0.33 Gew.-% N-CBZ-Gly-Pro-Phe-Pro-Leu (N-CBZ=N-Benzyloxycarbonyl) beobachtet (Beispiel 4). Bei Verwendung von 0,5% N-CBZ-GPFPL kann die Desquamation der Haut um die Hälfte reduziert werden (Beispiel 10).The use according to the invention of a composition which is used as Inhibitor of the pentapeptide glycine-proline-phenylalanine-proline-leucine (GPFPL) or a Derivative thereof contains. The pentapeptide is known to be an inhibitor of serine proteinases. Claims in the sense of the use according to the invention include: a. End group protected derivatives of this pentapeptide sequence, polypeptides, proteins and other chemical derivatives containing this pentapeptide sequence, the one have inhibitory effects in the tests described overleaf. A clear one Inhibition of chymotrypsin (27%) has been demonstrated in in vitro tests using 0.33% by weight of N-CBZ-Gly-Pro-Phe-Pro-Leu (N-CBZ = N-benzyloxycarbonyl) was observed (Example 4). When using 0.5% N-CBZ-GPFPL, the desquamation of the Skin can be reduced by half (example 10).

Bevorzugt ist auch die erfindungsgemäße Verwendung einer Zusammensetzung, die als Inhibitor Rosmarinsäure enthält. Rosmarinsäure ist für seine entzündungshemmende, cytostatische und antivirale Wirkung bekannt. In der Kosmetik werden Rosmarinextrakte als Badezusatz und als Additiv in Haarpflegeprodukten eingesetzt. In Hautpflegeprodukten werden Rosmarinextrakte zusammen mit anderen Wirkstoffen als synergistisch wirkende Antioxidantien-Kombination eingesetzt. Zu den erfindungsgemäß verwendbaren Derivaten gehören Ester und Salze der Rosmarinsäure sowie C₁-C₅-Alkyl- oder Arylester. Eine nahezu vollständige Hemmung von Trypsin wurde in in-vitro-Tests bei Verwendung von 0.05% Rosmarinsäure beobachtet (Beispiel 5). Bei Verwendung von 1,0% Rosmarinsäure kann die Desquamation der Haut um nahezu 70% reduziert werden (Beispiel 11).The use according to the invention of a composition which contains rosemary acid as an inhibitor is also preferred. Rosemary acid is known for its anti-inflammatory, cytostatic and antiviral effects. In cosmetics, rosemary extracts are used as a bath additive and as an additive in hair care products. In skin care products, rosemary extracts are used together with other active ingredients as a synergistic combination of antioxidants. The derivatives which can be used according to the invention include esters and salts of rosmarinic acid and C ₁ -C ₅ -alkyl or aryl esters. Almost complete inhibition of trypsin was observed in in vitro tests using 0.05% rosemic acid (Example 5). When using 1.0% rosemary acid, the desquamation of the skin can be reduced by almost 70% (Example 11).

Bevorzugt ist auch die erfindungsgemäße Verwendung einer Zusammensetzung, die als Inhibitor das aus Leguminosesamen nach einem besonderen Verfahren gewonnene Elhibin® (Pentapharm AG) enthält. Elhibin® hemmt Leukozytenelastase und Fibroblastenelastase, die an Entzündungs- und Alterungsprozessen der Haut beteiligt sind. Der Wirkstoff wird in Hautkosmetika eingesetzt, um das generelle Aussehen der Haut zu verbessern. Im in-vitro-Tests hemmt Elhibin® bereits in einer Konzentration von 0.5% sowohl Trypsin als auch Chymotrypsin nahezu vollständig (Beispiel 6). Im Desquamationstest an Hautbiopsien wird die Abschuppung der Korneozyten bei Verwen dung von 1,0% Elhibin® um mehr als 90% reduziert (Beispiel 12).The use according to the invention of a composition which is used as Inhibitor that obtained from legume seeds by a special process Elhibin® (Pentapharm AG) contains. Elhibin® inhibits leukocyte elastase and Fibroblast elastase, which are involved in inflammatory and aging processes of the skin. The active ingredient is used in skin cosmetics to improve the general appearance of the skin improve. In in vitro tests, Elhibin® inhibits at a concentration of 0.5% both trypsin and chymotrypsin almost completely (example 6). in the Desquamation test on skin biopsies is the desquamation of the corneocytes at Verwen of 1.0% Elhibin® reduced by more than 90% (Example 12).

Physiologically acceptable carriers

Die Inhibitor-Wirkstoffe sind in den für kosmetische Rezepturen üblichen, physiologisch veträglichen Trägern enthalten. Neben Wasser und physiologisch geeigneten Lösungs mitteln können u. a. pflegende Bestandteile, Öle, Wachse, Fette, rückfettende Substanzen, Verdickungsmittel, Emulgatoren, als Sonnenschutzfilter geeignete Substanzen und Duft stoffe enthalten sein. Die Zusammensetzung kann je nach Anforderung als wäßrige oder alkoholische Lösung, als Gel, Öl, W/O- oder O/W-Emulsion formuliert werden. Im Sinne der Erfindung können die Inhibitoren auch in Körperreinigungsmitteln wie z. B. Seifen, Shampoos, Duschbädern u. ä. verwendet werden, da sie die durch Detergentien induzierte Abschuppung reduzieren. Für geeignete Formulierungs-Grundlagen sei an dieser Stelle auf die in der Kosmetik üblichen Rezepturen verwiesen (K. Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, 2. Aufl., Hüthig Buch Verlag, Heidelberg 1989, Seite 424- 437, 442-451, 456-465). The inhibitor active ingredients are physiological in those customary for cosmetic formulations compatible carriers included. In addition to water and physiologically suitable solutions can u. a. nourishing ingredients, oils, waxes, fats, lipid-replenishing substances, Thickeners, emulsifiers, substances and fragrances suitable as sun protection filters substances are included. Depending on requirements, the composition can be aqueous or alcoholic solution, formulated as a gel, oil, W / O or O / W emulsion. For the purpose of According to the invention, the inhibitors can also be used in personal cleansers such as B. soaps, Shampoos, shower baths and. Ä. Are used because they are those induced by detergents Reduce desquamation. For suitable formulation basics here referred to the recipes common in cosmetics (K. Schrader, Basics and Recipes for cosmetics, 2nd edition, Hüthig Buch Verlag, Heidelberg 1989, page 424- 437, 442-451, 456-465).

Nourishing ingredients

Für die erfindungsgemäße Verwendung der Zusammensetzung zur topischen, prophy laktischen und/oder kosmetischen Behandlung der trockenen Haut kann ein hoher Anteil an pflegenden Substanzen vorteilhaft sein. Gemäß einer bevorzugten Verwendungsform enthalten die Zusammensetzungen neben den in vielen Fällen ebenfalls Pflegewirkung aufweisenden tierischen und/oder pflanzlichen Fetten und Ölen noch weitere Pflegekomponenten. Dem Fachmann ist eine Vielzahl pflegender Wirkstoffe bekannt, die für diesen Zweck verwendet werden können. Hierzu zählen unter anderem:For the inventive use of the composition for topical, prophy lactic and / or cosmetic treatment of dry skin can be a high percentage of beneficial substances. According to a preferred form of use In many cases, the compositions also contain care effects animal and / or vegetable fats and oils containing still more Care components. A large number of caring active ingredients are known to the person skilled in the art which can be used for this purpose. These include:

Fatty alcohols with 8 to 22 carbon atoms

Die eingesetzten Fettalkohole können gesättigt oder ungesättigt und linear oder ver zweigt sein. Einsetzbar im Sinne der Erfindung sind beispielsweise Decanol, Octanol, Octenol, Dodecenol, Decenol, Octadienol, Dodecadienol, Decadienol, Oleylalkohol, Erucaalkohol, Ricinolalkohol, Stearylalkohol, Isostearylalkohol, Cetylalkohol, Laurylalkohol, Myristylalkohol, Arachidylalkohol, Caprylalkohol, Caprinalkohol, Linoleylalkohol, Linolenylalkohol und Behenylalkohol, sowie deren Guerbetalkohole, wobei diese Aufzählung beispielhaften und nicht limitierenden Charakter haben soll. Die Fettalkohole stammen bevorzugt von natürlichen Fettsäuren ab, wobei üblicherweise von einer Gewinnung aus den Estern der Fettsäuren durch Reduktion ausgegangen werden kann. Erfindungsgemäß einsetzbar sind ebenfalls Fettalkohol schnitte, die durch Reduktion natürlich vorkommender Fette und Öle, wie z. B. Rin dertalg, Erdnußöl, Rüböl, Baumwollsaatöl, Sojaöl, Sonnenblumenöl, Palmkernöl, Leinöl, Rizinusöl, Maisöl, Rapsöl, Sesamöl, Kakaobutter und Kokosfett entstehen.The fatty alcohols used can be saturated or unsaturated and linear or ver be branches. For example, decanol, octanol, Octenol, dodecenol, decenol, octadienol, dodecadienol, decadienol, oleyl alcohol, Erucalcohol, ricinol alcohol, stearyl alcohol, isostearyl alcohol, cetyl alcohol, Lauryl alcohol, myristyl alcohol, arachidyl alcohol, caprylic alcohol, capric alcohol, Linoleyl alcohol, linolenyl alcohol and behenyl alcohol, and their Guerbet alcohols, this list is intended to be exemplary and not limiting. The fatty alcohols are preferably derived from natural fatty acids, whereby usually obtained from the esters of fatty acids by reduction can be assumed. Fatty alcohol can also be used according to the invention cuts made by reducing naturally occurring fats and oils, e.g. B. Rin dertalg, peanut oil, rape oil, cottonseed oil, soybean oil, sunflower oil, palm kernel oil, Linseed oil, castor oil, corn oil, rapeseed oil, sesame oil, cocoa butter and coconut fat are created.

Animal and vegetable protein hydrolyzates

Hierzu zählen insbesondere Elastin-, Kollagen-, Keratin-, Milcheiweiß-, Sojaprotein-, Seidenprotein-, Haferprotein-, Erbsenprotein-, Mandelprotein- und Weizenproteinhydrolysate, deren Kondensationsprodukte mit Fettsäuren sowie quaternisierte Proteinhydrolysate
These include, in particular, elastin, collagen, keratin, milk protein, soy protein, silk protein, oat protein, pea protein, almond protein and wheat protein hydrolyzates, their condensation products with fatty acids and quaternized protein hydrolyzates

- Vitamin and vitamin precursors such as tocopherols, vitamin A, niacic acid and niacin acid amide, other vitamins of the B complex, vitamin F and especially biotin. Pan are also preferred within this group of care ingredients thenol, its derivatives, especially the esters and ethers of panthenol and cationically derivatized panthenols. Individual representatives are, for example, the pan thenol triacetate, the panthenol monoethyl ether and its monoacetate and katio African panthenol derivatives.
Mono-, di- and oligosaccharides such as glucose, galactose, fructose, Mannose, fructose and lactose.
- Plant extracts, which are usually produced by extracting the entire plant, but in some cases also exclusively from flowers and / or leaves of the plant. With regard to the plant extracts which can be used according to the invention, reference is made in particular to the extracts which are listed in the table beginning on page 44 of the 3rd edition of the Guide to the Declaration of Ingredients for Cosmetics, published by the Industrieverband Körperpflege- und Waschmittel eV (IKW), Frankfurt. According to the invention, the extracts from oak bark, nettle, witch hazel, hops, chamomile, burdock root, horsetail, hawthorn, linden flowers, almond, aloe vera, spruce needle, horse chestnut, sandalwood, juniper, coconut, mango, apricot, lime, wheat, kiwi , Melon, orange, grapefruit, sage, rosmann, birch, mallow, cuckoo flower, quendel, yarrow, thyme, lemon balm, squirrel, coltsfoot, marshmallow, meristem, ginseng and ginger root preferred. The extracts from almond, aloe vera, coconut, mango, apricot, lime, wheat, kiwi and melon are particularly preferred. Mixtures of several, in particular two, different plant extracts can also be present in the agents according to the invention.
Water, alcohols and mixtures thereof can be used as extractants for the production of the plant extracts mentioned. Among the alcohols, lower alcohols such as ethanol and isopropanol, but in particular more valuable alcohols such as ethylene glycol, propylene glycol and butylene glycol, are preferred both as the sole extracting agent and in a mixture with water.

Die Pflanzenextrakte können erfindungsgemäß sowohl in reiner als auch in verdünnter Form eingesetzt werden.
According to the invention, the plant extracts can be used both in pure and in diluted form.

- honey extracts obtained in an analogous manner to the plant extracts and usually contain 1-10% by weight, in particular 3-5% by weight, of active substance.
- ceramides
Phospholipids, for example soy lecithin, egg lecithin and cephalins,
- paraffin and silicone oils; the latter include a. Dialkyl and alkylarylsiloxanes such as for example dimethylpolysiloxane and methylphenylpolysiloxane, and their alkoxylated and quaternized analogs.
- Fatty acid and fatty alcohol esters, especially the monoesters of fatty acids with alcohol fetch with 3 to 24 carbon atoms. This group of substances are the products the esterification of fatty acids with 8 to 24 carbon atoms such as, for example, Capron acid, caprylic acid, 2-ethylhexanoic acid, capric acid, lauric acid, isotridecanoic acid, Myristic acid, palmitic acid, palmoleic acid, stearic acid, isostearic acid, oleic acid, Elaidic acid, petroselinic acid, linoleic acid, linolenic acid, elaeostearic acid, Arachic acid, gadoleic acid, behenic acid and erucic acid and their technical Mixtures, e.g. B. in the pressure splitting of natural fats and oils, in the Reduction of aldehydes from Roelen's oxosynthesis or dimerization of unsaturated fatty acids, with alcohols such as Isopro pyl alcohol, capron alcohol, caprylic alcohol, 2-ethylhexyl alcohol, capric alcohol, Lauryl alcohol, isotridecyl alcohol, myristyl alcohol, cetyl alcohol, palmoleyl alcohol, Stearyl alcohol, isostearyl alcohol, oleyl alcohol, elaidyl alcohol, petroselinyl alcohol, Linolyl alcohol, Linolenyl alcohol, Elaeostearyl alcohol, Arachyl alcohol, Gadoleylal alcohol, behenyl alcohol, erucyl alcohol and brassidyl alcohol and their technical Mixtures, e.g. B. in the high pressure hydrogenation of technical methyl esters Base of fats and oils or aldehydes from Roelen's oxosynthesis as well arise as a monomer fraction in the dimerization of unsaturated fatty alcohols.

Checking the inhibitory effect

Die hemmende Wirkung der Protease-Inhibitoren wurde sowohl in vitro an geeigneten Modellenzymen als auch an Biopsien menschlicher Haut nachgewiesen.The inhibitory effect of protease inhibitors has been demonstrated both in vitro at appropriate Model enzymes and biopsies of human skin have been demonstrated.

1. Inhibitory effect on a serine protease (in vitro)

Da die hauteigenen, am Desmosomenabbau beteiligten Proteasen nicht in ausreichender Menge zur Verfügung standen, dienten die Serin-Proteasen Trypsin und Chymotrypsin (Sigma) aus Rinderpankreas als Modellenzym, um die Hemmwirkung der erfindungs gemäß verwendeten Inhibitoren Phenylboronsäure, Borsäure, N-CBZ-Gly-Pro-Phe-Pro- Leu, Pefabloc® und Pefabloc® SC (Boehringer Mannheim), Rosmarinsäure und Elhibin® zu testen. Als Referenz wurde das als t-PA-Inhibitor (tissue-type plasminogen activator) bekannte t-AMCHA [trans-4(Aminomethyl)-cyclohexancarbonsäure] verwendet.Because the skin's own proteases, which are involved in the desmosome breakdown, are not sufficient The serine proteases trypsin and chymotrypsin were used (Sigma) from bovine pancreas as a model enzyme to the inhibitory effect of the Invention according to the inhibitors used phenylboronic acid, boric acid, N-CBZ-Gly-Pro-Phe-Pro Leu, Pefabloc® and Pefabloc® SC (Boehringer Mannheim), rosemary acid and Elhibin® to test. As a reference, this was used as a t-PA inhibitor (tissue-type plasminogen activator) known t-AMCHA [trans-4 (aminomethyl) cyclohexane carboxylic acid] used.

execution

Der Nachweis der Chymotrypsin-Enzymaktivität erfolgt mit einer Modifikation analog zu den Angaben im Sigma Quality Control Test Procedure-Datenblatt für Chymotrypsin. Bei Ansätzen ohne Inhibitor wurden 1,42 mL Reagens A (80 mM Tris/HCl-Puffer, pH = 7,8; 25°C) zum Testansatz zugegeben. Bei Ansätzen mit Inhibitor wurden 1,32 mL Reagens A zum Testansatz zugegeben sowie 0,1 mL einer Lösung des entsprechenden Inhibitors in Reagens A (Konzentrationsreihe). Die Enzymaktivität wurde durch Umsetzung des Sub strates N-Benzoyl-L-Tyrosinethylester (BTEE) zu N-Benzoyl-L-Tyrosin und Ethanol spektrophotometrisch bestimmt. Die Absorption des proteolytisch abgespaltenen N-Benzoyl-L-Tyrosins wurde bei 256 nm gemessen.The detection of the chymotrypsin enzyme activity takes place with a modification analogous to the information in the Sigma Quality Control Test Procedure data sheet for chymotrypsin. At Batches without inhibitor were 1.42 ml of reagent A (80 mM Tris / HCl buffer, pH = 7.8; 25 ° C) added to the test batch. When starting with an inhibitor, 1.32 ml of reagent A added to the test mixture and 0.1 mL of a solution of the corresponding inhibitor in Reagent A (concentration series). The enzyme activity was determined by reacting the sub strate N-benzoyl-L-tyrosine ethyl ester (BTEE) to N-benzoyl-L-tyrosine and ethanol determined spectrophotometrically. The absorption of the proteolytically cleaved N-benzoyl-L-tyrosine was measured at 256 nm.

Auch der Nachweis der Trypsin-Enzymaktivität erfolgt mit einer Modifikation analog zu den Angaben im Sigma Quality Control Test Procedure-Datenblatt für Trypsin. Anstelle von Aprotinin (Reagens F) wurden hier die erfindungsgemäßen Inhibitoren eingesetzt. The detection of trypsin enzyme activity is also carried out with a modification analogous to the information in the Sigma Quality Control Test Procedure data sheet for trypsin. Instead of aprotinin (reagent F) the inhibitors according to the invention were used here.

Hierfür wurde eine Konzentrationsreihe der Inhibitoren in Reagens E angesetzt. Die Enzymaktivität wurde durch Umsetzung des Substrates Nα-Benzoyl-DL-Arginin-p- Nitroanilin (BAPNA) zu Nα-Benzoyl-DL-Arginin und p-Nitroanilin spektrophoto metrisch bestimmt. Die Absorption des proteolytisch abgespaltenen p-Nitroanilins wurde bei 405 nm gemessen.A series of concentrations of the inhibitors in reagent E was set up for this. The Enzyme activity was determined by reacting the substrate Nα-benzoyl-DL-arginine-p- Nitroaniline (BAPNA) to Nα-Benzoyl-DL-Arginine and p-Nitroaniline Spectrophoto determined metrically. The absorption of the proteolytically cleaved p-nitroaniline was measured at 405 nm.

Die Reaktionskinetiken wurden je 5 Minuten bei 25°C detektiert, wobei der lineare An stieg der Absorption (A) pro Zeiteinheit (t) ein Maß für die Aktivität des Enzyms (ΔA/Δt) ist. Die Aktivität des Enzyms in Abwesenheit eines Proteinase-Inhibitors, (ΔA₁/Δt₁), wurde auf 100% gesetzt. Unter analogen Bedingungen wurden die Aktivitäten in Gegen wart eines Inhibitors (ΔA₂/Δt₂) bestimmt. Die Hemmwirkung oder Minderung der Enzymaktivität entspricht dann: 100% - (ΔA₂/Δt₂)/(ΔA₁/Δt₁)%.The reaction kinetics were detected for 5 minutes at 25 ° C., the linear increase in absorption (A) per unit time (t) being a measure of the activity of the enzyme (ΔA / Δt). The activity of the enzyme in the absence of a proteinase inhibitor, (ΔA ₁ / Δt ₁ ) was set to 100%. The activities in the presence of an inhibitor (ΔA ₂ / Δt ₂ ) were determined under analogous conditions. The inhibitory effect or reduction of the enzyme activity then corresponds to: 100% - (ΔA ₂ / Δt ₂ ) / (ΔA ₁ / Δt ₁ )%.

Hemmwirkung auf die Trypsin- bzw. Chymotrypsin-Aktiviät Inhibitory effect on trypsin or chymotrypsin activity

Beispiel 1 example 1

Phenylboronsäure als Inhibitor im Enzymtest Phenylboronic acid as an inhibitor in the enzyme test

Durch Phenylboronsäure wird die Aktivität von Trypsin im gewählten Konzentrationsbe reich nur mäßig beeinträchtigt. Hingegen wird eine deutliche, konzentrationsabhängige Hemmung von Chymotrypsin beobachtet. Phenylboronic acid reduces the activity of trypsin in the chosen concentration range rich only moderately affected. In contrast, a clear, concentration-dependent Inhibition of chymotrypsin was observed.

Beispiel 2 Example 2

Borsäure als Inhibitor im Enzymtest Boric acid as an inhibitor in the enzyme test

Die Hemmwirkung von Borsäure auf Trypsin und Chymotrypsin ist im getesteten Kon zentrationsbereich nur schwach. Chymotrypsin wird bei geringerer Borsäure-Konzentra tion stärker gehemmt als Trypsin.The inhibitory effect of boric acid on trypsin and chymotrypsin is in the tested con center of concentration only weak. Chymotrypsin is at a lower boric acid concentration tion more inhibited than trypsin.

Beispiel 3 Example 3

4-(2-Aminoethyl)phenylsulfonylfluorid (Pefabloc® SC) als Inhibitor im Enzymtest 4- (2-aminoethyl) phenylsulfonyl fluoride (Pefabloc® SC) as an inhibitor in the enzyme test

Pefabloc® SC zeigt im getesteten Konzentrationsbereich eine starke, konzentrationsab hängige Hemmung von Trypsin und Chymotrypsin. Pefabloc® SC shows a strong, low concentration in the tested concentration range pending inhibition of trypsin and chymotrypsin.

Beispiel 4 Example 4

Pentapeptidsequenz GPFPL als Inhibitor im Enzymtest Pentapeptide sequence GPFPL as an inhibitor in the enzyme test

Die Trypsin-Aktivität wird durch GPFPL im gewählten Konzentrationsbereich nicht be einträchtigt. Bei einer Konzentration des Inhibitors von 0,33 Gew.-% wird eine spezifische Hemmung (27%) von Chymotrypsin nachgewiesen.The trypsin activity is not affected by GPFPL in the selected concentration range impaired. With a concentration of the inhibitor of 0.33% by weight, a specific Inhibition (27%) of chymotrypsin demonstrated.

Beispiel 5 Example 5

Rosmarinsäure als Inhibitor im Enzymtest Rosemary acid as an inhibitor in the enzyme test

Rosmarinsäure zeigt eine starke, konzentrationsabhängige Hemmung von Trypsin. Die Hemmung von Chymotrypsin ist bei den untersuchbaren, niedrigen Inhibitor-Konzentra tionen gering. Rosemary acid shows a strong, concentration-dependent inhibition of trypsin. The Inhibition of chymotrypsin is at the investigable, low inhibitor concentration ions low.

Beispiel 6 Example 6

Elhibin® als Inhibitor im Enzymtest Elhibin® as an inhibitor in the enzyme test

Sowohl Trypsin als auch Chymotrypsin werden durch Elhibin® gleichermaßen stark im getesteten Konzentrationsbereich gehemmt.Both trypsin and chymotrypsin are equally strong in Elhibin® tested concentration range inhibited.

Assessment of the tests

Eine spezifische Hemmung der Chymotrypsin-Aktivität wurde für niedrige Konzentra tionen des Pentapeptids GPFPL beobachtet. Borsäure zeigt im getesteten Konzentrations bereich eine schwache Hemmung beider Enzyme, Phenylboronsäure zeigt bereits in ge ringer Konzentration (0,1%) eine schwache Hemmung von Trypsin und eine starke Hemmung von Chymotrypsin. Eine nahezu vollständige Hemmung beider Enzyme tritt auch mit Elhibin® (0,5%) ein. Geringe Konzentrationen Rosmarinsäure (0,05%) sind ein äußerst effektiver Inhibitor für Trypsin. Als effektiver Inhibitor beider Enzyme hat sich auch Pefabloc® erwiesen, wobei im untersuchten Konzentrationsbereich Trypsin stärker gehemmt wird als Chymotrypsin. A specific inhibition of chymotrypsin activity was found for low concentrations ions of the pentapeptide GPFPL observed. Boric acid shows in the tested concentration weak inhibition of both enzymes, phenylboronic acid already shows in ge low concentration (0.1%) a weak inhibition of trypsin and a strong one Inhibition of chymotrypsin. Almost complete inhibition of both enzymes occurs also with Elhibin® (0.5%). Low concentrations of rosemary acid (0.05%) are a extremely effective inhibitor for trypsin. Has proven to be an effective inhibitor of both enzymes Pefabloc® has also been proven, with trypsin being stronger in the concentration range examined is inhibited as chymotrypsin.

2. Tests of the inhibitors on skin biopsies

Der Einfluß der Protease-Inhibitoren Phenylboronsäure, Borsäure, des Pentapeptids N- CBZ-Gly-Pro-Phe-Pro-Leu, Rosmarinsäure und Elhibin® auf die Desquamation des Stratum corneum wurde an Haut-Biopsien untersucht.The influence of the protease inhibitors phenylboronic acid, boric acid, of the pentapeptide N- CBZ-Gly-Pro-Phe-Pro-Leu, rosemary acid and Elhibin® on the desquamation of the Stratum corneum was examined on skin biopsies.

Aus frischen Humanhautexplantaten (aus Mammareduktion) wurden 8 mm²-große Haut stücke ausgestanzt und mit einer Mischung aus Detergentien (Na-Dodecylsulfat, N,N- Dimethyldodecylaminoxid) in Abwesenheit und in Gegenwart der Inhibitoren behandelt. Unter dem Einfluß der Detergentien wird eine verstärkte Abschuppung (Desquamation) der Hornschicht (Stratum corneum) künstlich induziert, also die Ausbildung trockener Haut im Versuch nachgeahmt. Die Anzahl abgeschuppter Hornzellen (Korneozyten) wurde unter dem Mikroskop in einer Schilling-Zählkammer bestimmt. Eine Verringerung der Korneozytenzahl weist auf eine hemmende Wirkung der getesteten potentiellen Inhi bitoren hin.8 mm ² skin pieces were punched out of fresh human skin explants (from breast reduction) and treated with a mixture of detergents (Na-dodecyl sulfate, N, N-dimethyldodecylamine oxide) in the absence and in the presence of the inhibitors. Under the influence of detergents, increased desquamation of the horny layer (stratum corneum) is artificially induced, ie the formation of dry skin is mimicked in the experiment. The number of desquamated horn cells (corneocytes) was determined under the microscope in a Schilling counting chamber. A reduction in the number of corneocytes indicates an inhibitory effect of the potential inhibitors tested.

execution

Die Inhibitoren wurden in den entsprechenden Konzentrationen (vgl. Tabellen der Bei spiele 7-12) im Inkubationspuffer angesetzt. Dieser bestand aus 0,1 M TRIS-HCl-Puffer (pH 8) mit 0,1 Gew.-% Na-Azid und den Detergenzien Na-Dodecylsulfat (0,2 mM) und N,N-Dimethyldodecylaminoxid (8 mM) sowie EDTA (5 mM). Diese Inkubationspuffer lösungen mit variierender Konzentration des Inhibitors werden nachfolgend als Testlö sungen bezeichnet.The inhibitors were in the appropriate concentrations (cf. tables of Bei games 7-12) in the incubation buffer. This consisted of 0.1 M TRIS-HCl buffer (pH 8) with 0.1% by weight Na azide and the detergents Na dodecyl sulfate (0.2 mM) and N, N-dimethyldodecylamine oxide (8 mM) and EDTA (5 mM). This incubation buffer Solutions with varying concentrations of the inhibitor are subsequently called test solutions sung.

Es wurden zwei Arten von Blindkontrollen durchgeführt, eine Positiv- und eine Negativ kontrolle. Für die sogenannte Positivkontrolle wurde nur der Inkubationspuffer verwen det, d. h. ohne Zusatz der Inhibitoren. Für die sogenannte Negativkontrolle wurde eine 5 mM Lösung von EDTA in TRIS-HCl-Puffer eingesetzt, d. h. ohne Zusatz der Detergentien. Two types of blind controls were carried out, a positive and a negative control. Only the incubation buffer was used for the so-called positive control det, d. H. without adding the inhibitors. For the so-called negative control, a 5 mM EDTA solution in TRIS-HCl buffer used, d. H. without adding the Detergents.

Pro Reaktionsansatz wurden 0,5 mL der jeweiligen Testlösung oder des für die Blindkon trollen verwendeten Puffergemisches in verschließbaren Reaktionsgefäßen vorgelegt. Alle Ansätze wurden in vierfacher Ausfertigung durchgeführt, um die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zu gewährleisten.For each reaction batch, 0.5 mL of the respective test solution or that for the blind con trolls used buffer mixture presented in sealable reaction vessels. All Approaches were carried out in four copies to ensure the reproducibility of the To ensure results.

Die Humanhaut wurde nach der Explantation in einer trockenen, sterilen Petrischale auf Kühlakkus transportiert. Nach Entfernung des Unterhautfett- und des Bindegewebes wur den mit Hilfe von sterilen Stanzen 8 mm²-große Hautstücke präpariert. Diese wurden 15- 20 min in steriler, physiologischer NaCl (0,9%) gewaschen, zu den Reaktionsansätzen gegeben (1 Hautstück/Reaktionsansatz) und 44 Stunden bei 37°C inkubiert.After explantation, the human skin was transported in a dry, sterile petri dish on cold packs. After removal of the subcutaneous fat and connective tissue, 8 mm ² pieces of skin were prepared using sterile punches. These were washed in sterile, physiological NaCl (0.9%) for 15-20 min, added to the reaction batches (1 skin piece / reaction batch) and incubated at 37 ° C. for 44 hours.

Nach Beendigung der Inkubationsphase wurden die Reaktionsgefäße 30 Sekunden auf einem Vortex-Mixer geschüttelt, um noch lose anhaftende Korneozyten von den Haut stücken abzulösen. Die Hautstücke wurden entnommen und die verbleibende Dispersion wurde 8 Minuten bei 11.000 U/min zentrifugiert, um die Korneozyten zu isolieren. Der detergenshaltige Überstand (0,4 mL) wurde verworfen und der Rückstand mit 0,4 ml Aqua dest. gewaschen. Nach nochmaligem Zentrifugieren wurde der Überstand (0.4 mL) wiederum verworfen, das verbleibende Zellpellet in 0,4 mL Aqua dest. aufgenommen und die abgelösten Korneozyten in einer Schillingzählkammer unter einem Lichtmikroskop ausgezählt.After the incubation phase had ended, the reaction vessels were opened for 30 seconds a vortex mixer to shake loose corneocytes from the skin peel off pieces. The skin pieces were removed and the remaining dispersion was centrifuged at 11,000 rpm for 8 minutes to isolate the corneocytes. The Detergent-containing supernatant (0.4 mL) was discarded and the residue with 0.4 ml Aqua dest. washed. After centrifuging again, the supernatant (0.4 mL) again discarded, the remaining cell pellet in 0.4 mL distilled water. added and the detached corneocytes in a Schilling counting chamber under a light microscope counted.

Nachfolgende Tabellen geben eine Zusammenstellung über die Anzahl abgelöster Korneozyten:
The following tables provide a summary of the number of corneocytes detached:

- after treatment of the skin biopsies with a detergent mixture in the absence the inhibitors (positive control)
- after treatment of the skin biopsies with a buffer solution in the absence of Detergents and inhibitors (negative control)
- After treatment of the skin biopsies with a detergent mixture, which the Contains inhibitors in varying concentrations.

Example 7 Phenylboronic acid as an inhibitor in the desquamation test

Phenylboronsäure wurde in verschiedenen Konzentrationen als Desquamationsinhibitor getestet. Der Korneozytenwert der Positivkontrolle wurde auf 100% gesetzt.
Phenylboronic acid was tested in various concentrations as a desquamation inhibitor. The corneocyte count of the positive control was set to 100%.

In einer Konzentration von 0,1% kann Phenylboronsäure die Abschuppung der Korneo zyten siginifikant reduzieren.In a concentration of 0.1%, phenylboronic acid can desquamate the corneo Significantly reduce the number of cells.

Example 8 Boric acid as an inhibitor in the desquamation test

Borsäure wurde in verschiedenen Konzentrationen als Desquamationsinhibitor getestet. Der Korneozytenwert der Positivkontrolle wurde auf 100% gesetzt.
Boric acid was tested in various concentrations as a desquamation inhibitor. The corneocyte count of the positive control was set to 100%.

In einer Konzentration von 0,2% vermag Borsäure die Abschuppung der Korneozyten zu halbieren. At a concentration of 0.2%, boric acid is able to desquamate the corneocytes cut in half.

Example 9 Pefabloc® SC as an inhibitor in the desquamation test

4-(2-Aminoethyl)phenylsulfonylfluorid (Pefabloc® SC) wurde in verschiedenen Konzen trationen als Desquamationsinhibitor getestet. Der Korneozytenwert der Positivkontrolle wurde auf 100% gesetzt.
4- (2-Aminoethyl) phenylsulfonyl fluoride (Pefabloc® SC) was tested in various concentrations as a desquamation inhibitor. The corneocyte count of the positive control was set to 100%.

Bei Verwendung von 0,5% Pefabloc® SC wird die Abschuppung um nahezu 90% redu ziert.When using 0.5% Pefabloc® SC, the desquamation is reduced by almost 90% graces.

Example 10 Z-GPFPL as an inhibitor in the desquamation test

Das Pentapeptid N-CBZ-Gly-Pro-Phe-Pro-Leu (GPFPL) wurde in verschiedenen Kon zentrationen als Desquamationsinhibitor getestet. Der Korneozytenwert der Positivkon trolle wurde auf 100% gesetzt.
The pentapeptide N-CBZ-Gly-Pro-Phe-Pro-Leu (GPFPL) was tested in various concentrations as a desquamation inhibitor. The corneocyte count of the positive control was set to 100%.

Bei Verwendung von 0,5% des Pentapeptids wird die Abschuppung um die Hälfte reduziert. When using 0.5% of the pentapeptide, the desquamation is halved reduced.

Example 11 Rosmarinic acid as an inhibitor in the desquamation test

Rosmarinsäure wurde in verschiedenen Konzentrationen als Desquamaticnsinhibitor ge testet. Der Korneozytenwert der Positivkontrolle wurde auf 100% gesetzt.
Rosmaric acid was tested in various concentrations as a desquamatic inhibitor. The corneocyte count of the positive control was set to 100%.

Auch Rosmarinsäure bewirkt eine konzentrationsabhängige Reduktion der Korneozyten abschuppung. Bei Verwendung von 1,0% Rosmarinsäure kann die Abschuppung auf 33,8% reduziert werden.Rosemary acid also causes a concentration-dependent reduction in corneocytes desquamation. When using 1.0% rosemary acid, desquamation can occur 33.8% can be reduced.

Example 12 Elhibin® as an inhibitor in the desquamation test

Elhibin® wurde in verschiedenen Konzentrationen als Desquamationsinhibitor getestet. Der Korneozytenwert der Positivkontrolle wurde auf 100% gesetzt.
Elhibin® was tested in various concentrations as a desquamation inhibitor. The corneocyte count of the positive control was set to 100%.

Elhibin® wirkt auch in geringer Konzentration als starker Desquamationsinhibitor und zeigt bezüglich der Korneozytenabschuppung im untersuchten Konzentrationsbereich ein schwach konzentrationsabhängiges Profil. Elhibin® also acts as a strong desquamation inhibitor in low concentrations shows with regard to the corneocyte desquamation in the examined concentration range weakly concentration-dependent profile.

Assessment of the tests

Die durch die Detergenzienmischung verursachte Desquamation der Humanhaut kann durch Phenylboronsäure, Borsäure, das Pentapeptid Z-Gly-Pro-Phe-Pro-Leu, Rosmarin säure und Elhibin® drastisch reduziert werden. Dabei zeigten sich konzentrationsab hängige Effekte, d. h. mit Zunahme der Inhibitorkonzentration nimmt die Korneozyten- Abschuppung ab. The desquamation of the human skin caused by the detergent mixture can by phenylboronic acid, boric acid, the pentapeptide Z-Gly-Pro-Phe-Pro-Leu, rosemary acid and Elhibin® can be drastically reduced. Thereby showed concentration-dependent pending effects, d. H. as the inhibitor concentration increases, the corneocyte Desquamation.

Formulation examples according to the invention

Alle nachfolgenden Mengenangaben beziehen sich auf Gew.-% der handelsüblichen Substanzen oder Substanzgemische.All of the following quantities refer to% by weight of the commercially available Substances or mixtures of substances.

1. Aqueous liposome angel

4,0% Phospholipid (z. B. Sternprime® N10)
6,0% Ethanol
0,2% Konservierungsmittel (z. B. Phenonip®)
0,5% vernetztes Polyacrylat (z. B. Carbopol® ETD 2020)
0,2% Inhibitor*
ad 100% H₂ 4.0% phospholipid (e.g. Sternprime® N10)
6.0% ethanol
0.2% preservative (e.g. Phenonip®)
0.5% cross-linked polyacrylate (e.g. Carbopol® ETD 2020)
0.2% inhibitor *
ad 100% H ₂

O (dest.)
O (dest.)

* Das Liposomengel wurde mit N-CBZ-GPFPL, Pefabloc®, Pefabloc® SC, Phenylboronsäure, Borsäure, Rosmarinsäure und Elhibin® (0,2 Gew.-%) als Inhibitor formuliert.* The liposome gel was treated with N-CBZ-GPFPL, Pefabloc®, Pefabloc® SC, phenylboronic acid, boric acid, Rosmaric acid and Elhibin® (0.2 wt .-%) formulated as an inhibitor.

Das Lecithin wurde oberhalb seiner Hauptphasenumwandlungstemperatur durch Einspritzen einer 40%-igen ethanolischen Stammlösung in Wasser (ca. 50-60°C) disper giert. Nach Abkühlen der Dispersion auf ca. 40°C wurde der Inhibitor und die kalte Polyacrylat-Quellung zugegeben. Anschließend wurde mit 10%-iger NaOH-Lösung auf pH = 7 neutralisiert.The lecithin was passed through above its main phase transition temperature Inject a 40% ethanolic stock solution into water (approx. 50-60 ° C) yaws. After cooling the dispersion to about 40 ° C, the inhibitor and the cold Polyacrylate swelling added. Then was with 10% NaOH solution pH = 7 neutralized.

Gegebenenfalls können weitere wasser- oder öllösliche Wirkstoffe (Vitamin E, Panthenol, Sonnenschutzfilter, etc.) auf bekannte Weise eingearbeitet werden. If necessary, other water- or oil-soluble active ingredients (vitamin E, panthenol, Sun protection filters, etc.) can be incorporated in a known manner.

2. Oil-in-water PIT cream

8,0% Dicaprylylether (z. B. Cetiol® OE)
8,0% Dioctylcyclohexan (z. B. Cetiol® S)
4,0% Cetearylakohol (z. B. Lanette® O)
3,0% Ceteareth-20 (z. B. Eumulgin® B2)
1,5% Glycerylpalmitat (z. B. Monomuls® 60-35C)
0,5% Silikonöl (z. B. Baysilon® M 350)
1,0% Vitamin E
5,0% Glycerin
0,3% Konservierungsmittel (z. B. Phenonip®)
0,2% Inhibitor*
ad 100% H₂ 8.0% dicaprylyl ether (e.g. Cetiol® OE)
8.0% dioctylcyclohexane (e.g. Cetiol® S)
4.0% cetearyl alcohol (e.g. Lanette® O)
3.0% ceteareth-20 (e.g. Eumulgin® B2)
1.5% glyceryl palmitate (e.g. Monomuls® 60-35C)
0.5% silicone oil (e.g. Baysilon® M 350)
1.0% vitamin E.
5.0% glycerin
0.3% preservative (e.g. Phenonip®)
0.2% inhibitor *
ad 100% H ₂

O (dest.)
O (dest.)

* Die Öl-in-Wasser-PIT-Creme wurde mit N-CBZ-GPFPL, Pefabloc®, Pefabloc® SC, Phenylboronsäure, Borsäure, Rosmarinsäure und Elhibin® (0,2 Gew.-%) als Inhibitor formuliert.* The oil-in-water PIT cream was treated with N-CBZ-GPFPL, Pefabloc®, Pefabloc® SC, phenylboronic acid, Boric acid, rosmaric acid and Elhibin® (0.2 wt .-%) formulated as an inhibitor.

Zuerst wurde ein Emulsionskonzentrat nach dem Phaseninversionsverfahren (PIT) herge stellt (T. Förster in Surfactants in Cosmetics, Hrsg.: M. M. Rieger und L. D. Rhein, Marcel Dekker, New York 1997, Bd. 2, S. 105-125, "Principles of emulsion formation") liegt zwischen 70 und 84°C. Das heiße Emulsionskonzentrat wurde abgekühlt und der Inhibitor bei 40°C in Form einer 5%-igen wäßrigen Lösung zugegeben. First, an emulsion concentrate was prepared by the phase inversion method (PIT) (T. Förster in Surfactants in Cosmetics, ed .: M. M. Rieger and L. D. Rhein, Marcel Dekker, New York 1997, Vol. 2, pp. 105-125, "Principles of emulsion formation") lies between 70 and 84 ° C. The hot emulsion concentrate was cooled and the Inhibitor added at 40 ° C in the form of a 5% aqueous solution.

3. Water-in-oil emulsion

8,0% Dicaprylylether (z. B. Cetiol® OE)
8,0% Decyloleat (z. B. Cetiol® V)
3,5% hydriertes Rizinusöl-Ethoxylat (z. B. Dehymuls® HRE 7)
0,7% MgSO₄ 8.0% dicaprylyl ether (e.g. Cetiol® OE)
8.0% decyl oleate (e.g. Cetiol® V)
3.5% hydrogenated castor oil ethoxylate (e.g. Dehymuls® HRE 7)
0.7% MgSO ₄

. 7H₂ , 7H ₂

O (z. B. Veegum®)
1,0% Vitamin E
5,0% Glycerin
0,3% Konservierungsmittel (z. B. Phenonip®)
0,2% Inhibitor*
ad 100% H₂ O (e.g. Veegum®)
1.0% vitamin E.
5.0% glycerin
0.3% preservative (e.g. Phenonip®)
0.2% inhibitor *
ad 100% H ₂

O (dest.)
O (dest.)

* Die Wasser-in-Öl-Emulsion wurde mit N-CBZ-GPFPL, Pefabloc®, Pefabloc® SC, Phenylboronsäure, Borsäure, Rosmarinsäure und Elhibin® (0,2 Gew.-%) als Inhibitor formuliert.* The water-in-oil emulsion was treated with N-CBZ-GPFPL, Pefabloc®, Pefabloc® SC, phenylboronic acid, Boric acid, rosmaric acid and Elhibin® (0.2 wt .-%) formulated as an inhibitor.

Die Ölbestandteile wurden zusammen mit dem Emulgator auf 40°C erwärmt und die wäßrige Lösung der weiteren Inhaltsstoffe unter Rühren zugegeben. The oil components were heated together with the emulsifier to 40 ° C and the aqueous solution of the other ingredients added with stirring.

attachment List of trademarks of the raw materials used

1) Sternprime® N10
Hydriertes Soja-Lecithin
Hersteller: Nattermann
2) Phenonip®:
Phenoxyethanol, Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Butylparaben
Hersteller: Nipa Laboratorien GmbH
3) Carbopol® ETD 2020
Acrylat/C₁₀ 1) Sternprime® N10
Hydrogenated soy lecithin
Manufacturer: Nattermann
2) Phenonip®:
Phenoxyethanol, methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben
Manufacturer: Nipa Laboratorien GmbH
3) Carbopol® ETD 2020
Acrylate / C ₁₀

-C₃₀ -C ₃₀

-Alkylacrylat-Copolymer
Hersteller: Goodrich
4) Cetiol® OE
Dicaprylylether
Hersteller: Henkel KGaA
5) Cetiol® S
Dioctylcyclohexan
Hersteller: Henkel KGaA
6) Lanette® O
Cetearylalkohol
Hersteller: Henkel KGaA
7) Eumulgin® B2
Cetheareth-20
Hersteller: Henkel KGaA
8) Monomuls® 60-35C
Hydrierte Palmölglyceride
Hersteller: Henkel KGaA
9) Baysilon® M 350
Silicone, Viskosität 350 cP
Hersteller: Bayer AG
10) Cetiol® V
Decyloleat
Hersteller: Henkel KGaA
11) Dehymuls® HRE 7
PEG-Hydriertes Rizinusöl+7-EO
Hersteller: Henkel KGaA
12) Veegum®
Magnesiumaluminiumsilikat
Hersteller: Vanderbilt
13) Pefabloc®
4-(2-Aminoethyl)phenylsulfonylfluorid
Hersteller: Boehringer Mannheim
14) Pefabloc® SC
4-(2-Aminoethyl)phenylsulfonylfluorid mit speziellem Protector
Hersteller: Boehringer Mannheim
15) Texapon® N 70
Natriumlaurethsulfat
Hersteller: Henkel KGaA
16) Akypo-Soft® KA 250 BVC
Natrium-PEG-6-cocamidcarboxylat
Hersteller: Kao Chemicals
17) Plantacare® 1200 UP
Laurylglucosid
Hersteller: Henkel KGaA
18) Cetiol® HE
PEG-7-Glycerylcocoat
Hersteller: Henkel KGaA
19) Eumulgin® HRE 455
Ricinusölpolyglycolether, gehärtet
Hersteller: Henkel KGaA
20) Arlypon® F
Laureth-2
Hersteller: Henkel KGaA
21) Conditioner® P7
Quaternium-7
Hersteller: Sigma-Alkyl acrylate copolymer
Manufacturer: Goodrich
4) Cetiol® OE
Dicaprylyl ether
Manufacturer: Henkel KGaA
5) Cetiol® S
Dioctylcyclohexane
Manufacturer: Henkel KGaA
6) Lanette® O
Cetearyl alcohol
Manufacturer: Henkel KGaA
7) Eumulgin® B2
Cetheareth-20
Manufacturer: Henkel KGaA
8) Monomuls® 60-35C
Hydrogenated palm oil glycerides
Manufacturer: Henkel KGaA
9) Baysilon® M 350
Silicones, viscosity 350 cP
Manufacturer: Bayer AG
10) Cetiol® V
Decyl oleate
Manufacturer: Henkel KGaA
11) Dehymuls® HRE 7
PEG-hydrogenated castor oil + 7-EO
Manufacturer: Henkel KGaA
12) Veegum®
Magnesium aluminum silicate
Manufacturer: Vanderbilt
13) Pefabloc®
4- (2-aminoethyl) phenylsulfonyl fluoride
Manufacturer: Boehringer Mannheim
14) Pefabloc® SC
4- (2-aminoethyl) phenylsulfonyl fluoride with special protector
Manufacturer: Boehringer Mannheim
15) Texapon® N 70
Sodium laureth sulfate
Manufacturer: Henkel KGaA
16) Akypo-Soft® KA 250 BVC
Sodium PEG-6 cocamide carboxylate
Manufacturer: Kao Chemicals
17) Plantacare® 1200 UP
Lauryl glucoside
Manufacturer: Henkel KGaA
18) Cetiol® HE
PEG-7 glyceryl cocoate
Manufacturer: Henkel KGaA
19) Eumulgin® HRE 455
Castor oil polyglycol ether, hardened
Manufacturer: Henkel KGaA
20) Arlypon® F
Laureth-2
Manufacturer: Henkel KGaA
21) Conditioner® P7
Quaternium-7
Manufacturer: Sigma

Claims

1. Use of a composition which is in a skin-distributable, physiologically acceptable carrier at least one inhibitor for the am Desmosome breakdown contains proteinases involved to inhibit the breakdown of Desmosome structures in topically prophylactic and / or cosmetic Treatment of dry skin.

2. Use according to claim 1, characterized in that the composition Contains at least one inhibitor that contains the serine involved in the desmosome breakdown Inhibits proteinases.

3. Use according to claim 2, characterized in that the composition contains at least one inhibitor that is involved in the degradation of desmosomes Trypsin or chymotrypsin-like serine proteinase type proteinases inhibits.

4. Use according to one of claims 1 to 3, characterized in that the zu composition as an inhibitor contains boric acid and / or its derivatives.

5. Use according to one of claims 1 to 3, characterized in that the zu composition as an inhibitor contains 4- (2-aminoethyl) phenylsulfonyl fluoride.

6. Use according to one of claims 1 to 3, characterized in that the zu composition as an inhibitor a chemical compound containing the Pentapep tide sequence contains glycine-proline-phenylalanine-proline-leucine (GPFPL).

7. Use according to one of claims 1 to 3, characterized in that the zu composition as an inhibitor contains rosemary acid and / or its derivatives.

8. Use according to one of claims 1 to 3, characterized in that the zu composition as an inhibitor the active ingredient obtained from legume seeds Elhibin® contains.

9. Use according to one of claims 1 to 8, characterized in that the In hibitors in a concentration of approx. 0.001-20% by weight in the composition are included.