CN1473026A

CN1473026A - 母马的宫腔镜授精系统

Info

Publication number: CN1473026A
Application number: CNA018185584A
Authority: CN
Inventors: 利・H・莫里斯; 利·H·莫里斯; R・艾伦; 威廉·R·艾伦; ・C・林赛; 阿利森·C·林赛
Original assignee: XY LLC
Current assignee: XY LLC
Priority date: 2000-10-05
Filing date: 2001-01-24
Publication date: 2004-02-04
Also published as: AR029030A1; GB2383543A; JP2008093483A; MXPA03002710A; BR0114442A; AU3651701A; AU2001236517A2; GB2383543B; CA2424115A1; JP2004510423A; GB0309041D0; NZ537680A; WO2002028311A1; NZ525667A

Abstract

本发明提供通过人工授精繁殖哺乳动物的方法，在具体实施方式中，本发明意在采用少量精子授精以及通过宫腔镜授精技术繁殖哺乳动物。本发明具体涉及实际上关于以下方面的实施方式：新鲜的或贮存的精子、处理或加工过的精子、附着在子宫输卵管结合部附近的表面之下的精子、用来建立授精样本的适宜于宫腔镜授精的介质、用于授精的适宜于宫腔镜的体积、采用附睾精子的宫腔镜技术、用于宫腔镜授精的起泡或起沫授精以及宫腔镜授精中所用的分类的和冷冻的精子。所公开的实施方式可以针对哺乳动物物种，特别是马科、牛科和猪科动物，以及根据本发明任一公开的实施方式所繁殖的动物。

Description

母马的宫腔镜授精系统

本申请主张60/238,294号美国临时申请的权利及任何可要求的优先权，在此引用该申请以作参考。

技术领域

本发明通常涉及哺乳动物的授精领域。具体而言，本发明涉及实现授精的系统，当采用例如流式细胞仪等方法将精子分类处理或加工精子之后，尤其可用所述系统来实现授精。更具体而言，本发明可涉及通过宫腔镜授精技术，采用少于传统的人工授精的精子数量实现授精的系统。本发明尤其适用于为马科、牛科和猪科动物授精的系统。此外，本发明还特别可用来对哺乳动物的后代进行性别选择。

背景技术

多种形式的人工授精(AI)技术已经在改善哺乳动物的妊娠率和后代繁殖方面获得了成功。传统的人工授精形式包括各种体内授精技术，如常规的子宫内人工授精技术，或者更具体而言，包括通过宫颈的人工授精技术。自然授精的剂量一般较大。例如，对于某些物种，参与自然授精的精子数可达约2×10⁹到20×10⁹个精子。相比之下，对于同样的物利，常规的人工授精技术需要约200×10⁶到500×10⁶个精子。这个精子数量仍可认为是巨大的，特别是用某些方法处理精子之后。鉴于传统技术达到可接受的妊娠数量需要巨大数目的精子，为了发展繁殖技术，人们已经在寻求其他授精技术，以便采用更少量的精子进行授精。在题为“用少量精细胞对哺乳动物进行性别特异性授精”的WO 99/33956号PCT公开文本中具体讨论了低剂量授精。Morris等(2000)提出了宫腔镜授精方法，并在一定程度上对此方法进行了讨论，在此引用供参考。

首先应当指出，本申请所提及的所有参考文献，包括本文未提及的附加参考文献，均列在本书面文本的末尾，所有这些参考文献均应被认为是以参考的方式进行引用。

采用流式细胞仪的高速精子分类方法已经被成功地用于生产哺乳动物后代的繁殖技术，所述哺乳动物的例子有马、牛、羊、兔、猪和人。该技术实际上还可用于其他一些物种。人们已经开发出了一些技术来改善或改变哺乳动物的妊娠及后代繁殖，这些技术尤其涉及精子的处理和授精技术。

如Pickett等人(1989)所指出的，在提高人工授精的成功率方面，一个内在的制约因素可能是如何采用少量的精子实现授精。Pickett等人认为，在传统的母马人工授精技术中，最小推荐剂量实际上仍需高达500×10⁶个极具活力的精子。有些分类技术的分选速率较低，每秒钟约可分选700个精子，这样，达到人工授精所需精子的上述推荐剂量将需要数天的时间。这种方法不但不可行，而且会显著降低精子的活力。因此，本领域的技术人员希望采用低剂量授精技术，以便实际上减少获得满意的受孕率所需的精子数量。

此外，人们所认为的低剂量授精通常不能获得满意的受孕率。例如，如果低剂量授精能够达到采用传统的人工授精技术获得的大的样本容量、范围和百分比的繁殖率，则可以认为该繁殖率是可接受的或在统计学上具有可比性。因此，本领域的技术人员希望采用低剂量授精技术，以便实际上减少获得满意的受孕率所需的精子数量。

无论是希望实现低剂量授精，还是希望从总体上提高人工授精的繁殖率，均需要进一步综合考虑人工授精程序的效率以及所得的妊娠数量。传统的人工授精方法采用了多个程序性步骤，例如，在母马繁殖中使母马同步发情；授精剂量的制备，更具体地说，采用增量剂进行稀释(Kenny等，1975)和使精子再悬浮(例如，采用TALP或HEPES缓冲的Tyrode介质)，通过密度或粘度梯度来离心分离样本(采用PERCOLL等)；评估存活性或活动性；以及授精程序的细节。传统的授精方法包括超声技术和直肠导向技术。Vasquez等(1998)和Manning等(1998)还进行了母马的宫腔镜授精。然而，采用上述的传统人工授精方法以及Vasquez等和Manning等的方法仅取得了部分成功。具体来说，与传统的人工授精方法相比，上述两篇参考文献均未获得统计学上可比性的受孕率。具体而言，Vasquez等和Manning等的参考文献分别显示，采用3.8×10⁶个精子的受孕率为33％和采用1.0×10⁶个精子的受孕率为22％，与所涉及物种的传统人工授精相比，可以认为其受孕率没有统计学上的可比性。迄今为止，为了获得有效的人工授精的方法，人们尽管已经进行了前期的和实质性的尝试，但长期以来，在繁殖技术方面尚未取得满意的结果，人们仍然需要对哺乳动物进行宫腔镜授精的有效方法。此外，如上所述，为了获得可接受数量的有效妊娠，传统技术需要大量的精子，有鉴于此，当前的繁殖技术仍然需要采用有效的、低剂量的宫腔镜授精技术。

此外，如Vasquez等人(2000)的参考文献所述，他们对猪进行了深度子宫内授精。然而，授精采用了约20×10⁷个精子，这个数目可以说是巨大的。然而，Vasquez等人(2000)可能已经认识到需要一种授精方法，以便解决采用较少量的精子授精的繁殖技术中存在的问题，其中较少量的精子可以是，例如，由当前的精子分类技术所导致的，但是，人们对这一需要期盼已久却仍未取得满意结果。

因此，如Vasquez等(1998)、Vasquez等(2000)和Manning等(1998)的参考文献所阐述的，本领域的技术人员尚无法解决上述问题，即人们尚不能提供这样一种授精技术，该技术可实际上使哺乳动物获得高的受孕率和高的繁殖率，并可采用低的授精剂量获得高的受孕率，人们也不能提供一种授精技术，具体来说是宫腔镜授精技术，来解决效率问题。

关于授精方法的一个重要的程序性步骤通常是，确定含有所需数量的存活的且有活动性的精子的授精剂量，以便实际上获得高的受孕率。在传统的人工授精，例如，在Grφndahl等(1996)的参考文献中以及在宫腔镜授精法中，单独采用例如PERCOLL(Sigma Chemical Co.，密苏里州圣路易斯市)或结合使用其他物质来建立密度或粘度梯度，以便进行活性精子的选择。然而迄今为止，在分离存活的且活动的精子方面所做的实质性努力尚不能具体满足上述需要，即需要这样一种授精技术，该技术实际上可获得高的受孕率，并可采用低的授精剂量获得高的受孕率，还需要能够解决效率问题的授精技术，特别是关于宫腔镜授精技术的效率问题。

关于授精方法的第二个实际问题通常是，确定含有所需数量的存活的且活动的精子的授精剂量，从而实际上可获得高的受孕率，而无须专门进行如上所述的活动性试验。密度和粘度梯度的引入会使精子处于紧张状态，这会实际上减少来自特定样本的存活的且活动的精子的实际数量。迄今为止，在分离存活的且活动的精子方面所做的实质性努力尚不能具体满足上述需要，即需要这样一种授精技术，该技术实际上可获得高的受孕率，并可采用低的授精剂量获得高的受孕率，还需要能够解决效率问题的授精技术，特别是关于宫腔镜授精技术的效率问题。事实上，此前关于尝试采用密度或粘度梯度的教导事实上不同于本发明的方法，因为前者有可能减少来自特定样本的存活的且活动的精子的总量，而本发明方法所提供的授精技术较易获得具有活性且剂量低的授精样本。

关于授精方法的第三个实际问题通常是，针对特定的授精技术确定适宜的体积。如上所述，人们已经认识到，实际上需要获得较高的受孕率。同样如上所述，人们还认识到，实际上需要采用低剂量的精子来获得较高的受孕率。可以根据特定的授精技术来确定授精的剂量体积。然而，所述剂量体积应当含有所需数量的精子，以便实际上获得较高的受孕率。人们已经就适当的授精技术的开发进行了一些实质性的尝试，即试图采用适当的精子数量——实际上授精技术需要一定体积的精子——从而获得实际上可接受的受孕率。针对特定的授精技术，为了获得实际上更高的受孕率，可以确定适宜的授精剂量体积，然而，如Vasquez等和Manning等所报道的受孕率所显示的，上述确定适宜的授精剂量体积的方法尚不能用于宫腔镜的授精技术。

此外，如上所述，可以在授精之前处理精子样本。例如，传统的人工授精可采用增量剂来稀释(Kenny等，1975)和再悬浮精子。然而，所用的特定介质可能与授精方法本身不相容。样本介质的不相容会导致附着到动物体内的精子数量或剂量体积较少，或者导致受孕率低下。此外，在人工授精中，所附着的精子剂量的形式或具体的附着方法均会进一步影响所附着的用于受孕的精子数量。然而迄今为止，在选择授精介质方面所做的实质性努力尚不能具体满足上述需要，即需要这样一种授精技术，该技术实际上可获得高的受孕率，并可采用低的授精剂量获得高的受孕率，还需要能够解决效率问题的授精技术，特别是关于宫腔镜授精技术的效率问题。

另外，授精的时机也是需要考虑的因素。对于例如精子活性、寿命以及哺乳动物发情周期的时机来说，授精时机是一个重要因素。如果获取精子样本的地点(即雄性哺乳动物所在地)与最终进行人工授精的地点相距较远，则有可能发生具体矛盾。传统的人工授精方法在授精之前的保存精子样本方面做了努力，以便使授精时机与发情周期相协调。然而迄今为止，在控制授精时机方面所做的实质性努力尚不能具体满足上述需要，而且也可能没有理解以下问题，即需要这样一种授精技术，该技术实际上可获得高的受孕率，并可采用低的授精剂量获得高的受孕率，还需要能够解决效率问题的授精技术，特别是关于宫腔镜授精技术的效率问题。

精子样本的来源对于授精结果也是重要的。从附睾获取的精子样本(从睾丸的附睾获得的精子样本；小管从容纳有成熟的精子的睾丸后部伸出，这些小管缠绕成团，然后与单螺旋管连接，该单螺旋管与输精管相连)对于授精时机和精子的活性具有内在的优点。然而迄今为止，在精子来源、精子活性和授精时机方面所做的实质性努力尚不能具体满足上述需要，而且也可能没有理解以下问题，即需要这样一种授精技术，该技术实际上可获得高的受孕率，并可采用低的授精剂量获得高的受孕率，还需要能够解决效率问题的授精技术，特别是关于宫腔镜授精技术的效率问题。

发明内容

本发明者们认识到了关于传统的人工授精方法的实际问题。于是，本发明的实施方式提供通过人工授精来繁殖哺乳动物，所述人工授精方法弥补了此前的授精技术和系统的不足。根据具体的实施方式，本发明可包括：实际上可以获得高的受孕率的繁殖哺乳动物的方法；与传统的人工授精结果相比，具有统计学上的可比性的受孕率；以及采用低的精子剂量所获得的实际上高的受孕率。更具体而言，本发明的实施方式可通过宫腔镜授精技术来繁殖哺乳动物。此外，本发明可包括特别是针对如马科、牛科和猪科等哺乳动物的实施方式。因此，甚至可以认为，本发明的实施方式的改进之处在于克服了此前人工授精中存在的困难。

因此，本发明的一个目的是采用有效的方法来繁殖哺乳动物。因此，本发明的一个目标是提供繁殖哺乳动物的人工授精技术，与传统的人工授精及其他授精技术相比，本发明的授精剂量可以采用较少量的精子，同时，本发明的特定实施方式保持了至少在统计学上可比性的受孕成功率。

本发明的另一目的是采用人工授精方法来繁殖哺乳动物，所述方法采用较少量的精子实际上可获得高的受孕率，所述较少量的精子由例如精子分类等繁殖技术所产生。因此，本发明的一个目标是提供繁殖哺乳动物的人工授精技术，与传统的人工授精及其他授精技术相比，本发明的人工授精技术采用较小剂量的精子获得了统计学上可比性的受孕成功率。

此外，本发明的一个目的是采用人工授精方法来繁殖哺乳动物，所述方法优化了人工授精中所涉及的步骤。为此，本发明的一个目标是提供用来繁殖哺乳动物的人工授精技术，特别是采用低剂量授精并且实际上获得高的受孕率的人工授精技术，该技术优化了发情周期时机的确定步骤、精子的来源、活性、寿命和处理步骤、授精剂量的介质和体积以及授精时机的确定等步骤。

根据优选的实施方式，本发明另外的目的是通过宫腔镜授精来繁殖哺乳动物。因此，本发明的一个目标是提供繁殖哺乳动物的人工授精技术，所述技术可以采用适当的模式或方式来完成授精剂量的植入、导引授精剂量到达附着位置以及授精剂量在适当位置的附着，从而实现如前所述的其他目标和目的。根据本发明的具体实施方式，为了优化受孕率，作为优选的实施方式，可以进行水泡授精和气泡或泡沫授精。本发明的一个具体目标是提供繁殖哺乳动物的人工授精技术，该技术采用包括电视内窥镜的导管来导引并附着授精剂量。

此外，根据特定的实施方式，本发明的一个目的是提供采用人工授精方法繁殖不同哺乳动物物种的方法。因此，本发明的一个目标是提供针对例如马科、牛科和猪科等哺乳动物的人工授精技术。本发明进一步的目标是提供各种哺乳动物物种的人工授精技术，该技术进一步采用含有少量精子的授精剂量并且实际上可获得高的受孕率，具体而言，相对于传统的人工授精，本发明的受孕率具有统计学上的可比性。

在本说明书的其他部分以及权利要求书中公开了本发明的其他目标。此外，上述的目的或目标可以独立于其他实施方式中的其他目的或目标，也可与其他实施方式中的其他目的或目标相互依存。

附图说明

图1是根据本发明的一个实施方式的光学元件、套管、导管和注射器的局部分解图及透视示意图。

图2是一种雌性哺乳动物生殖器官的示意图，具体而言，该图描绘了根据本发明的一个实施方式的人工授精方法。

图3是本发明的隐蔽插入授精的实施方式的放大示意图。

具体实施方式

本发明的基本概念可有多种表现形式。本发明的概念可包括人工授精繁殖哺乳动物所用的原料、元件、装置、设备和方法。此外，尽管在本发明的一个优选的实施方式中，其具体目的是通过人工授精繁殖马，但是，应当将本发明广义的概念理解为，本发明公开了所有哺乳动物的繁殖方法，而且如本文所指出的，本发明的优选实施方式的目的还在于繁殖其他物种如牛科和猪科哺乳动物。

应当理解，本发明包括多个方面，根据本申请的不同需求，可以对这些方面进行组合。本发明打算包括繁殖哺乳动物的多个实施方式及其组合。本发明涉及完成所述各个方面的方法和装置。此外，尽管本发明公开了一些方法和装置，但是应当理解，可以对这些方法和装置进行变化。重要的是应当理解，如目前及此后所提出的权利要求所述，本发明包括了前述所有方面中的单独或相互结合的方面。

于是，本发明的一个实施方式可提供从有关的雄性物种采集精细胞的方法。根据一个实施方式，精细胞采自一匹或多匹种马。根据该实施方式，可以从至少一头已知具有可接受的生殖能力的种马采集精液，而在优选实施方式中，可以采用市售的人造阴道来从上述种马采集精液。可以采用例如由Animal Reproduction Systems生产的人造阴道，所述人造阴道上串联一胶质过滤器，而在优选的实施方式中，在整个采集过程中隔日交替使用所述人造阴道。完成采集之后，测定去除胶质的精液的体积、精子活性和精子浓度。根据另一个优选的实施方式，可从其他雄性哺乳动物，特别是牛科、马科和猪科哺乳动物采集精细胞。本发明的一个可选择的实施方式可从雄性哺乳动物睾丸的附睾采集附睾精细胞。采用附睾精细胞的可选择的实施方式可被包括在本文所公开的单独或相互组合的所有其他实施方式中。此外，本发明具体的实施方式提供了宫腔镜授精样本，所述样本包括贮存元件、所述贮存元件所响应的导管装置以及所述贮存元件中容纳的大量附睾精细胞。

收集精子后，就可建立用于雌性物种授精的人工授精样本。根据本发明的一个实施方式，与哺乳动物自然授精的剂量相比，该样本具有少量精子。对于特定的繁殖技术来说，该样本可具有少量的精子，而根据优选的实施方式，为了得到特定性别的精子而对精子进行分离，从而得到了数量较少的精子。根据本发明的一个优选实施方式，可用烟酸己可碱(Hoechst)33342来为精子染色，然后采用市售的SX MoFlo^精子分类器，根据DNA含量的不同而将精子分为携带X和Y染色体的群体。

此外，可以制备一定体积的人工授精样本，根据优选的实施方式，所述体积为从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。本发明的一个实施方式意在确定相应于宫腔镜授精的体积，一个授精样本的体积优选自由下述体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。此外，本发明意在提供宫腔镜授精样本，所述样本包括贮存元件、所述贮存元件所响应的导管装置以及所述贮存元件中容纳的适应于宫腔镜授精体积的精子。容纳在所述贮存元件中的宫腔镜授精相应体积的精子可包括选自由下述体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

其次，根据本发明的优选实施方式，可以将人工授精样本置于导管或导管系统中。根据可选择的实施方式，样本可被置于贮存元件，或被置于响应导管或导管系统的其他的样本容纳元件。应当理解，导管或导管系统是指为了注入或取出液体而插入导管、血管、通道或体腔的任何装置、系统或方法，而根据优选的实施方式，注入或取出液体时可对所述贮存元件或所述样本容纳元件产生响应，或保持通道的畅通。

优选地，导管或导管系统可与导向元件连接使用，以便为人工授精过程进行导向，如下文所更具体地描述的，在优选的实施方式中，导向元件为光学元件或装置，而在更优选的实施方式中，导向元件为照明元件。优选的实施方式可采用闪烁的照明元件。然而，也可以采用手动导向。根据本发明的优选实施方式，以及如图1所示，可以优选采用6mL的一次性注射器4将授精样本吸入马的GIFT导管2(Cook VeterinaryProducts，澳大利亚布里斯班市)中，所述一次性注射器4与所述导管的末端8的注射口6相连接。装有样本的导管可被拽入一管中，或者，所述的管优选为外部的聚丙烯套管10，该套管10可响应光学元件12，根据优选的实施方式，所述装有样本的导管经过Pentax EPM3000电视内窥镜(潘太克斯英国有限公司，英国白金汉郡斯劳市(Pentax UK Ltd.，Slough，Buks.，UK))的工作通道。

于是，可以确定适于人工授精的状况、时机或持续时间。根据本发明的优选实施方式，可以确定雌性哺乳动物的发情时机。根据本发明的优选实施方式，可以通过诱导发情来确定发情的时机，而且对于多匹母马的情形，甚至可以使同步发情。发情可被定义为雌性哺乳动物能够怀孕的状态，而发情周期可被定义为雌性哺乳动物的内分泌和生殖系统的相关现象，实际上就是从一个发情期开始到下一个发情期开始之间的阶段。根据一个优选的实施方式，可以诱导发情，而且对于多匹雌性哺乳动物的情形，可以使发情同步化，其方法是给雌性哺乳动物施用例如结合孕激素等物质，对于母马优选施用烯丙孕素，而且优选口服10ml，实际上连续施用10天，随后，实际上在第11天，肌肉注射250μg氯前列醇。此外，在授精时，可以诱导雌性哺乳动物排卵。可以诱导排卵，在优选的实施方式中，诱导方法是施用3000免疫单位的人绒毛膜促性腺激素(hCG，Chorulon，Intervet，Inc.，荷兰Millsboro)，优选在授精时或授精前约0到8小时通过静脉施用。在优选的实施方式中，甚至可以通过施用从约2000到约5000免疫单位的人绒毛膜促性腺激素来诱导排卵。

在优选的实施方式中，通过每天施用一种合成的结合孕激素烯丙孕素(0.044mg/kg口服，Regumate；Hoechst Roussel Vet，美国新泽西州沃伦市(Warren))，连续施用10天，可以使发情周期同步。在优选的实施方式中，可以在第11天施用前列腺素类似物，即氯前列醇(250μgEstrumate，肌肉注射；拜尔公司农药部，美国堪萨斯州肖尼米申市(Shawnee Mission))，以便诱导黄体溶解。

可以确定雌性哺乳动物适于授精的大致时间。可检测卵子，在优选的实施方式中，采用超声波扫描法检查卵子，优选每两天检测一次卵子，直到测得卵泡出现，而且，根据优选的实施方式，直到检测得到最大的卵泡，其直径优选≥30mm。可以优选在排卵之前对雌性哺乳动物进行检测，直到检测到优选≥35mm的一个卵泡。在一个实施方式中，雌性哺乳动物的授精可以是，在诱导发情或同步发情的同一天、在诱导排卵或同步排卵的同一天，或者在诱导发情和授精或同步发情的同一天。

其次，根据本发明的具体实施方式，可将导向元件插入雌性哺乳动物的阴道中，而优选的实施方式中，可将光学元件12插入到雌性哺乳动物的阴道中。此外，可将导管2插入雌性哺乳动物的体内，而在优选的实施方式中，可将贮存元件插入雌性哺乳动物体内。可先后或同时插入光学元件12和导管2。

如图2所示，可导引导向元件或光学元件12和导管2通过雌性哺乳动物的阴道20。根据一个实施方式，可以手动导引光学元件12和导管2。事实上，可以在没有光学元件12时手动导引导管2。然而，为了准确地找到子宫输卵管结合部(UTJ)，以便从实质上提高受孕率，并且特别是从实质上提高采用少量精子实施人工授精方法的总体效率，需要更为精确的导引方法。在优选的实施方式中，可导引光学元件或内窥镜，优选柔性内窥镜通过宫颈22并向前推进通过宫腔24，在优选的实施方式中，内窥镜的长为1.6m，外径为12mm，或在另外的实施方式中，向前推进通过雌性哺乳动物的宫角。采用电视内窥镜的附加优点有，在授精过程中无须直肠导向，而这在过去本领域的技术人员是需要的。

然后可以确定雌性哺乳动物的子宫输卵管结合部(UTJ)30的位置，优选采用光学元件12以光学手段定位。然后可将导管2置于临近或在子宫输卵管结合部附近。根据优选的实施方式，在视觉控制下，可将内窥镜沿着子宫角26进入同侧的含有排卵前的卵泡28的卵巢。优选地，导引内窥镜的端头接近所述子宫输卵管结合部，在优选的实施方式中，接近的距离为距所述子宫输卵管结合部约3-5cm之内，在优选的实施方式中，接近的距离为距所述子宫输卵管结合部的乳突32约3-5cm之内。

然后，可将至少部分人工授精样本从导管2中挤出。根据优选的实施方式，可将后接装有精子悬浮液的内部GIFT导管2的所述外部套管10从内窥镜的工作通道挤出，直到GIFT导管的端头触到子宫输卵管结合部，在优选的实施方式中，GIFT导管的端头触到乳突。根据本发明可选择的实施方式，在将人工授精样本从导管挤出的过程中，可以吸入一部分或至少一部分授精样本，从而实际上制得吸入样本。应当理解，这种吸入的样本包括起沫或起泡的样本。所述吸入样本不但使得在接近子宫输卵管结合部的表面可具有较好的粘附力，而且可进一步提高受孕率。此外，本发明的一个实施方式提供了宫腔镜授精元件，所述元件包括雌性哺乳动物的子宫、包含在所述子宫内的多个精细胞以及一定体积的吸入介质，所述介质包围着精细胞或其中散布有精细胞，而且所述精细胞可对该介质发生响应。应当理解，这些可选择的实施方式不但是关于本发明的单个或相互结合的所有实施方式的公开，而且应当理解，它们是如上所述的公开。

可将少量精子附着在子宫输卵管结合部附近。根据优选的实施方式，可以压下注射器4的活塞来附着样本，在特定的实施方式中，将少量(优选约100μl)的样本优选挤出到乳突的表面上。可以从雌性哺乳动物的子宫中抽出导向元件和导管2，在优选的实施方式中，可以抽出光学元件12和导管2。根据优选的实施方式，可将过滤的空气引入雌性哺乳动物的子宫，以便使器械易于通过宫腔。此外，根据优选的实施方式，可将过滤的空气排出子宫，优选在取出光学元件12和导管2的同时排出空气。

在一个优选的实施方式中，可以用容纳一定数量精子的导管2的定位来完成少量精子的定位。所述的精子数量优选自：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

随后，可以进行雌性哺乳动物的卵子授精，而后由授精卵繁殖哺乳动物的后代。与传统的子宫体人工授精方法相比，根据本发明优选的实施方式的授精的成功率可具有统计学上的可比性。统计学上可比性的成功率被定义为：对于任何特定的物种，授精率至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，而采用传统的人工授精方法实际上达到了至少约90％的成功率。此外，考察累积的授精样本发现，本发明的成功率与传统的子宫体人工授精方法具有统计学上的可比性，累积的授精大于约100、大于约500以及大于约1000。从统计学的角度来看，成功率可进一步具有置信度至少约为95％(实际上表述为P≥约0.05)的至少一个置信水平，因此与传统的人工授精实际上具有统计学上的可比性。此外，对于不同数量范围的精子，对于马实际上为例如1×10⁶、5×10⁶或10×10⁶个精子，本发明的成功率事实上可具有相同的P值。此外，可以根据样本容量来表述成功水平或成功率，于是在优选的实施方式中，本发明前述的任何成功率均大于至少约80％的推定的计算值(β)。另外，在优选的实施方式中，给定经过性别分类的种马精子的具体授精剂量，本发明甚至采用少量精子也可获得上述成功率，而且常常可以达到至少约90％的授精率，这是对一个物种进行传统的人工授精所得到的授精率。另外，根据本发明的具体实施方式，甚至对于例如牛科、马科和猪科等哺乳动物均可获得前述成功率。

考虑到例如精子的成活性、寿命和活动性，本发明可采用新鲜精子建立人工授精样本。术语“新鲜精子”可被广义地定义为那些未经处理、加工或以任何方式保存，以至精子的成活性、寿命和/或活动性受到损害的精子。所述处理、加工或保存通常可包括，例如，精子的分类、精子的冷冻及随后的解冻、精子的稀释和再悬浮，以及通常的活动性和存活性试验或分离，所述的分离尤其指Percoll梯度处理。根据本发明的实施方式，甚至当例如所采集的精液质量不高时，仍然可以采用少量的新鲜精子进行授精。

本发明可选择的实施方式可广义地提供授精精子的处理、加工和保存。本发明的可选择的实施方式可提供，例如，对所采集的更有可能授精的精细胞进行选择。根据本发明的一个实施方式，在选择所需的精细胞或更有可能授精的精细胞时，选择过程可包括将所采集的活力较强的精子进行浓缩。另外的实施方式可提供通过密度梯度离心分离精子的步骤，优选的实施方式采用Percoll梯度来离心分离精子。一个实际上优选的实施方式可使用90∶45％的Percoll梯度。一个另外的实施方式可包括将浓度限制在小于起始浓度的约两倍。应当理解，Percoll梯度的应用包括在处理精子之前或之后采用Percoll梯度，而且具体地说，实际上是在分类之前或之后采用Percoll梯度。因此，根据此处的实施方式，可以对“新鲜精子”采用Percoll梯度。可以采用由所需的或所选定的精细胞建立的样本来建立人工授精样本，从而实际上提高授精率，其中至少部分原因在于，样本的存活比例实际上较高。如上文中所更具体地描述的，在进行根据本发明的Percoll梯度方法时，可以结合采用置于用来附着精子的导管内的少量精子。

此外，可以通过建立具有适于宫腔镜的介质的样本来建立人工授精样本，从而实际上提高授精率和授精方法的效率。更具体而言，本发明的一个实施方式可建立人工授精样本，在优选的实施方式中，与自然授精剂量相比，所述人工授精样本具有少量精子，而且，该实施方式可确定适于人工授精样本的、实际上未经附加处理的介质，所述介质例如增量剂，在优选的实施方式中，所述介质为脱脂乳介质，例如优选作为稀释介质的EZ-Mixin CST(Animal Reproduction Systems，加利福尼亚州奇诺市(Chino))。根据本发明的优选实施方式，可以稀释为不大于2∶1的比例、不大于5∶1的比例和不大于10∶1的比例，从而实际上得到至少与宫腔镜相应的体积或具有适当浓度的介质。此外，本发明的实施方式可提供增量剂的应用，实际上在精子处理后提供第二增量剂，并且实际上与如前所述的第一增量剂相结合，以便建立采用了适于宫腔镜的介质的样本。可用第二增量剂来再悬浮处理后的精子样本，更具体而言，提供了采用适于宫腔镜的介质的样本。根据优选的实施方式，所述介质或第二增量剂可包括TALP介质、HEPES缓冲的Tyrode介质以及Androhep介质。根据本发明优选的实施方式，可以采用一种或结合采用多种介质稀释来实际上得到至少适于宫腔镜的体积或具有适当浓度的介质，所述介质的例子有脱脂乳介质如EZ-Mixin CST、TALP介质、HEPES缓冲的Tyrode介质以及Androhep介质。

本发明的一个另外的实施方式也可提供人工授精的样本，方法是采用适于宫腔镜的、且其粘度与导管相协调的一种或多种介质。所述粘度可以，例如，实际上有利于样本的挤出和附着步骤的进行。此外，根据本发明实际上优选的实施方式，采用一种或多种适宜的介质可建立人工授精样本，所述人工授精样本的粘度优选大于所述哺乳动物血液的大致粘度，或者大于其盐水溶液的大致粘度。此外，另外的实施方式可提供适宜的介质，大约在哺乳动物的平均体温下，所述介质的粘度大于约100厘泊、大于约300厘泊、大于约1000厘泊、大于约3000厘泊、大于约6000厘泊。

此外，本发明的一个实施方式可提供宫腔镜授精的样本，所述样本包括贮存元件、响应所述贮存元件的导管系统、包含在所述贮存元件中的多个精细胞；适宜于宫腔镜的介质，所述介质容纳在所述贮存元件中，所述精细胞对所述贮存元件发生响应。根据另外的实施方式，与自然授精中通常所包含的精细胞数量相比，授精容器可包括数量较少的精细胞，在所述授精容器中，所述贮存元件容纳有多个精细胞。

根据本发明可以改变授精试样或精细胞样本的特性，根据优选的实施方式，确定所述雌性哺乳动物的发情时间，然后大约在所述发情时间改变所述授精试样的特性，从而建立人工授精样本。在可选择的实施方式中，在前述确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的大致时间，可以改变样本的特性。本发明还可提供开始改变授精试样特性的时间，所述时间选自：距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约24小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约12小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约8小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约3小时之内以及距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约1小时之内。所述的改变可由样本的制备、精子的分类、精子的解冻等步骤组成。

本发明的一个具体的实施方式可确定适宜于宫腔镜检的介质和精子浓度，以便选择更适合授精的精子。具体而言，本发明的一个实际上优选的实施方式可通过离心分离制备精液。所述精液可被稀释为，例如，100×10⁶个精子/ml，增量剂优选商品脱脂乳(EZ-Mixin CST，AnimalReproduction Systems，加利福尼亚州奇诺市)。如果需要，将该精子悬浮液优选在室温(20-25℃)下避光保存6小时，从而模拟精子分类所需的大致时间。然后可通过90∶45％的Percoll(Sigma Chemical Co.，美国明尼苏达州圣路易斯市)不连续密度梯度将精子悬浮液离心分离，目的是再浓缩精细胞，以便实际上选出精子的高活性部分。可用HEPES缓冲的Tyrode介质(Grφndahl等，1996)以1∶1(v/v)的比例稀释所述90％的Percoll，从而得到45％的溶液。优选地，在一个15mL离心管中，可优选将1mL 45％的Percoll小心地铺展在优选1mL 90％的Percoll的顶部。优选地，可将1mL的精子悬浮液(100×10⁶个精子/ml，增量剂为EZ-Mixin，CST)铺展在Percoll层的顶部，而且可使离心管在800xg下优选离心12分钟。离心分离后，完全去除上清液，然后将颗粒优选在600μl HEPES缓冲的Tyrode介质中再悬浮。根据一个实施方式，可以采用Densimeter(534B MOD-1，Animal Reproduction Systems，加利福尼亚州奇诺市)测定精子浓度，而且可以计算出含有5百万个精子的实际体积(实际上优选约100μl)，并准备用来授精。

根据本发明广义的方面，其中的一个实施方式可使导管定位在雌性哺乳动物的子宫输卵管结合部附近，从而将导管插入到子宫输卵管结合部附近的表面之下。可以挤出至少一部分样本，或使样本附着在子宫输卵管结合部附近的所述表面之下。

根据本发明的一个实施方式，可以采集雄性哺乳动物的精细胞，利用所采集的至少一些精细胞建立人工授精样本，并将人工授精样本置于一导管之内。如上所述，可以确定雌性哺乳动物适于授精时间。如图2所示，可以将光学元件12和导管2插入阴道，并引导其通过阴道。可以采用光学元件12以光学手段确定子宫输卵管结合部的位置。

如图3所示，可以将导管插入子宫输卵管结合部30附近的表面34之下。可以将至少一部分所述人工授精样本挤出到子宫输卵管结合部附近的所述表面之下，于是由隐蔽在两个层之间的样本形成“水泡”。可以在子宫输卵管结合部30附近的表面34之下附着至少一部分所述人工授精样本。表面34可包括子宫内膜、子宫的其他部位或子宫内衬。根据一个优选的实施方式，插入导管时不刺穿子宫的特定部位，而且，根据一个实施方式，不刺穿子宫的具有血管的部位。根据一个具体的实施方式，不应被刺穿的子宫的血管部位可包括，例如子宫的子宫系膜部位、子宫肌层部位或其他血管部位。随后，可以从雌性哺乳动物体内抽出光学元件和导管，可以发生雌性哺乳动物卵子的授精，随后可以期望由授精卵繁殖哺乳动物的后代。

本发明的一个实施方式还可提供实际上相应的授精导管，所述授精导管具有导向元件或套管、响应所述导向元件的贮存元件、挤出元件以及位于所述贮存元件前部的多孔穿刺头36，或者，在优选的实施方式中，所述导向元件为电视内窥镜，或者，在优选的实施方式中，所述挤出元件为响应所述贮存元件的注射器。所述导管还可包括一个穿刺厚度的控制元件，如调节元件活在所述穿刺头36上位于头附近的挡。本发明的一个授精导管的实施方式如图3所示。

如前所述，根据上述的在子宫输卵管结合部附近的表面之下挤出和附着样本的授精方法，可以进行多个步骤来繁殖哺乳动物。可将少量精子置于导管2中，在优选的实施方式中，精子的数量优选自：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。此外，可以根据本发明的优选实施方式使卵子授精，其中，授精的成功率与常规的子宫体人工授精方法相比具有统计学上的可比性。统计学上可比性的成功率如前述定义。

此外，可以从雄性哺乳动物采集精细胞，在本发明可选择的实施方式中，哺乳动物包括牛科、马科或猪科动物。根据本发明可选择的实施方式，如前所述，精细胞可选自所采集的更适于授精的细胞。

于是，根据本发明的实施方式，可以提供授精容器元件，所述授精容器元件优选包括多孔底面、与所述多孔底面相邻的多孔罩面、位于多孔底面和多孔罩面之间的基本上隐蔽的体积和来自雄性哺乳动物的精细胞，在具体的实施方式中，所述多孔底面为子宫内衬，或者，根据优选的实施方式，所述子宫内衬为子宫的非血管部位，例如子宫系膜或子宫肌层，在具体的实施方式中，所述多孔罩面为子宫内膜或子宫内衬，在优选的实施方式中，所述隐蔽的体积位于子宫输卵管结合部附近。优选的实施方式还可采用相对于自然授精少量的精子，所述精子被容纳在所述体积之内，与所述体积相邻的精子发射元件可以使精子通过。可以采集、选择一定授精体积的精子，所述精子甚至可能来自附睾，或前述其他任何限定的精子。精子发射元件可包括如图3所示的子宫内膜表面的开口，或可以简单地通过扩散等途径进行精子的传播。

此外，本发明可包括其他实际上独立的步骤，而且可以认为这些独立的步骤仍然在本发明的范围之内。这些独立的步骤可包括通过性别特征将精子分类，从而建立经过性别分类的人工授精样本，在优选的实施方式中，与所述哺乳动物的自然授精剂量相比，具有少量的精子可包括建立低剂量的、经过性别分类的人工授精样本。此外，在具体的实施方式中，可以将精子保存或冷冻，随后再解冻，所述精子来自特别是例如马科、牛科和猪科动物等各种哺乳动物。授精样本可以任何方式处理或吸入，可以将所述授精样本附着在子宫输卵管结合部的隐窝或褶皱内，还可以某种方式保存精子，以便进行随后的授精。可以进一步在室温下冷却授精试样或授精样本来建立授精试样或授精样本，所述授精试样或授精样本具有适宜于宫腔镜的体积，而且采用了适宜的介质。优选通过Percoll梯度在200g下离心分离约5分钟，以及在800g下离心分离约10分钟。根据一个优选的实施方式，可以将更具有活力的精子浓缩至小于起始浓度的约2倍。具体而言，本发明所表达的广义和狭义的概念应被理解为适用于其他哺乳动物，包括马科、牛科和猪科动物。最后，可以进一步认为，部分目的在于繁殖哺乳动物后代的本发明公开了关于动物的实施方式，所述动物的繁殖采用了前述任何要求权利的方法。

根据本发明的实施方式，精子分类可具体包括如下步骤：采集雄性哺乳动物精细胞、根据性别特异性将精细胞分类、建立经过分类的且具有性别特异性的人工授精样本、将经过分类的且具有性别特异性的人工授精样本置于导管内；本发明在此所公开的其他各个方面中，繁殖哺乳动物的方法应当包括上述步骤。

由前文所述容易理解，本发明的基本概念可以有多种体现形式。本发明包括授精技术以及适合于进行授精的装置。在本申请中，所公开的授精技术既可作为采用所述各种装置而得到的部分结果，也可作为所采用的必要步骤。它们只是采用所需的所述装置的必然结果。此外，本发明尽管公开了某些装置，但是应当理解，这些装置即满足了特定方法的需要，也可做多种形式的变化。如前所述，重要的是应当理解，本公开文本包括了上述所有方面。

本申请所包含的讨论意在进行基本的描述。读者应当清楚，不可能对所有的实施方式做详尽的描述，文中隐含了许多可选择的实施方式。本文也许未就本发明的一般特点做充分解释，也没有明确地说明每一特征如何能够实际上代表更广义的功能，或每一元件如何能够实际上代表大量的可选择的或等同的元件。同样，这都隐含在本公开文本中。当采用基于设备的术语描述本发明时，设备的每一元件均隐含地执行一个功能。不但设备权利要求不仅仅是用来描述设备的，而且，可以采用方法或过程权利要求来阐述本发明的功能及每一元件的作用。本发明的描述和术语均不打算限制权利要求的范围，该完整的专利申请将包括所述权利要求。

还应当理解，可以进行多种变化而不背离本发明的实质。这些变化也隐含在本说明书中，它们均在本发明的范围内。

此外，还可以多种方式得到本发明和权利要求的各个不同元件。应当理解，本公开文本包括每一个这样的变化，只要它们是任何设备、方法或过程实施方式中的变化，或者甚至仅仅是其中某些元件的变化。具体而言，应当理解，当涉及到本发明元件的公开时，每一元件的措辞可用等价的设备术语或方法术语来表述——即使仅其功能或结果是相同的。应当认为，对每一要素或功能的描述包括了这种等价的、广义的或甚至更为通行的术语。当希望将本发明所定义的隐含的广义范围明确的表述出来时，可以将上述术语用其他表达方式来替代。

仅举一例来说明，应当理解，所有的功能均可被表述为实现该功能的方法，或者表述为具有该功能的元件。类似地，应当理解，所公开的每一个有形的元件均包括该有形元件所执行的功能的公开。关于该后一方面，仅举一例来说明，对于“挤出元件”的公开，应当将其理解为其包括了“挤出”动作的公开——不论是否对此有明确的表述；反之，当仅仅公开了“挤出”的动作时，应当将此公开理解为包括对“挤出元件”以及甚至“挤出方式”的公开。应当理解，本说明书明确地包含了上述变化或可选择的术语。

本文以参见的方式引用本发明申请所提及的任何法令、条例、规定或准则，以及本发明申请所提及的发明、出版物或其他参考文献。此外，关于所用的每一术语，应当理解，除非其在本申请中的用法与普通辞书的解释不一致，否则应当将其解释为，其为普通字典中所收录的每一术语及其全部定义、替代术语以及同义词，例如《Random House Webster’sUnabridged Dictionary》第二版中所包括的每一术语及其全部定义、替代术语以及同义词，在此引用该字典供参考。然而，关于上述每一术语及其全部定义、替代术语以及同义词，当参考文献中所包括的这类信息或表述被认为不符合该发明/这些发明的授权条件时，应当明确认为，本申请人(们)没有作这类表述。

于是，应当理解，申请人(们)至少有理由要求如下权利：i)本文所公开和描述的每一授精装置，ii)所公开和描述的相关方法，iii)每一所述装置和方法的类似的、等同的以及甚至是隐含的变化，iv)完成所公开和描述的功能的替代设计，v)完成所公开和描述的每一隐含功能的替代设计和方法，vi)作为个别或独立发明的每一特征、组成部分和步骤，vii)被所公开的各种系统或组成部分所改善的用途，viii)由所述系统或组成部分所得到的产物，ix)基本上如上文所描述的方法和设备，参见任何附带的实施例，和x)所公开的每一元件的各种组合和变换。

此外，当使用转接短语“包括”时，根据对权利要求的通常解释，该短语被用来主张此处的“开放式”权利要求。因此，除非上下文另有要求，否则应当理解，“包括”一词或其变化形式“包含”、“含有”或“具有”，均意味着涵盖了所述的单个或多个元件或步骤，但并不排除任何其他的单个或多个元件或步骤。这类词语应当取其最广义形式的解释，从而给予申请人法律所允许的最大范围。

还应当指出，在本说明书及权利要求中，所用的短语“至少一个”并不表示其他未采用“至少一个”这种表述的说明或权利要求就不能还包括一个或多个类似的要素。更具体而言，“至少一个”这种表述并非意在用来将“开放式”权利要求转变为“封闭式”权利要求，所述“开放式”权利要求本质上包括具有未主张的附加元件或步骤的设备或方法，而所述“封闭式”权利要求则不包括具有附加元件或步骤的设备或方法。因此，当使用转接短语“包括”时，根据对权利要求的通常解释，该短语被用来主张此处的“开放式”权利要求。

I.专利文献

文献号	日期	姓名/国家	大类	小类	申请日
文献号	日期	姓名/国家	大类	小类	申请日	5,135,759	08/04/92	Johnson	424	561	04/26/91
6,071,689	06/06/00	Seidel等	435	2	0l/29/98	5,135,759	08/04/92	Johnson	424	561	04/26/91
6,071,689	06/06/00	Seidel等	435	2	0l/29/98	60/238,294	05/10/00	Morris等			05/10/00
WO 98/34094	06/08/98	新西兰				60/238,294	05/10/00	Morris等			05/10/00
WO 98/34094	06/08/98	新西兰				WO 99/33956	08/07/99	美国
WO 99/38883	05/08/99	美国				WO 99/33956	08/07/99	美国
WO 99/38883	05/08/99	美国				WO 99/42810	26/08/99	美国
WO 00/06193	10/02/00	美国				WO 99/42810	26/08/99	美国

II.其他文献(包括作者、标题、日期、相应的页码等)

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	Buchanan，B.R.等，“采用未做性别分离或经过性别分离的少量精子使母马授精(Insemination of Mares with Low Numbers of Either Unsexed or SexedSpermatozoa)”，Theriogenology，Vol.53，pp 1333-1344，(2000)
Caslick，E.A.，“外阴或外阴阴道口及其与纯种母马生殖健康的关系(The Vulva andthe Vulvo-vaginal Orifice and its Relation to Genital Health of the ThoroughbredMare)”，Cornell Veterinarian，Vol.27，1937，pp.178-187
	Cran，D.G.等，“用流式细胞仪分类或未分类的精液在宫内低剂量授精繁殖羔羊(Production of Lambs by Low Does Intrauterine Insemination with FlowCytometrically Sorted and Unsorted Semen)”，Theriogenology，Vol.47，pp.267，(Abstract)，(1977)
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	Johnson，L.A.，“猪的性别预选进展(Advances in Gender Preselection in Swine)”Journal of Reproduction and Fertility Supplement，Vol.52，pp.255-266(1997)
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Claims

1.繁殖哺乳动物的方法，其包括如下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.选择用来授精的所需精子；

c.确定用于人工授精的适宜于宫腔镜授精的体积；

d.采用所述的用来授精的所需精子，并在所述的授精试样中采用适宜于宫腔镜的介质，以便建立具有所述的适宜于宫腔镜授精的体积的授精试样；

e.暂时基本上保持所述授精试样中的所述精细胞的一个特征；

f.确定所述哺乳动物雌性物种的发情时间；

g.大约在所述发情时间改变所述授精试样的一种特性，以便建立人工授精样本；

h.将所述人工授精样本置于导管之内；

i.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

j.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

k.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

l.导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的阴道；

m.用光学手段确定所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部；

n.将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近；

o.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本，使所述样本位于所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的表面之下；

p.将至少一部分所述人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近；

q.从所述哺乳动物雌性物种体内抽出所述光学元件和所述导管；

r.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

s.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

2.如权利要求1所述的繁殖哺乳动物的方法，其中使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率。

3.如权利要求2所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括将少量精子置于所述导管之内的步骤。

4.如权利要求3所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置以下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

5.如权利要求4所述的繁殖哺乳动物的方法，其中授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，其中，统计学上的P值大于或等于至少约0.05，

与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，其中，所述传统的子宫体人工授精方法采用了具有5亿个马精子的样本，统计学上的P值大于或等于至少约0.05，

与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，其中，统计学上的β值大于或等于至少约80％，

与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，其中，统计学上的P值大于或等于至少约0.05，同时统计学上的β值大于或等于至少约80％。

6.如权利要求4所述的繁殖哺乳动物的方法，其中，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率的步骤包括，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有选自由如下成功率组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

7.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

8.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

9.如权利要求8所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的步骤包括，将所述导管插入到所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的表面之下；其中从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本，使所述样本位于所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的表面之下的步骤包括，从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本，使所述样本位于所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的表面之下；以及其中将至少一部分吸入的人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的步骤包括，使至少一部分所述人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的表面之下。

10.如权利要求8所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用所述的用于授精的所需精子，并在所述的授精试样中采用适宜于宫腔镜的介质，以便建立具有所述的适宜于宫腔镜授精的体积的授精试样的步骤包括，采用新鲜精子来建立人工授精样本。

11.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将至少一部分所述吸入的人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的步骤包括，将至少一部分所述吸入的人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种体内的所述子宫输卵管结合部的隐窝之内。

12.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用所述的用于授精的所需精子，并在所述的授精试样中采用适宜于宫腔镜的介质，以便建立具有所述的适宜于宫腔镜授精的体积的授精试样的步骤包括，稀释所述精细胞。

13.如权利要求12所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的稀释所述精细胞的步骤包括，采用脱脂乳介质、TALP介质、HEPES缓冲的Tyrode介质以及Androhep介质，按选自由下述比例组成的组中的比例稀释所述精细胞的步骤：稀释为不大于2∶1的比例、不大于5∶1的比例和不大于10∶1的比例。

14.如权利要求13所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用所述的用于授精的所需精子，并在所述的授精试样中采用适宜于宫腔镜的介质，以便建立具有所述的适宜于宫腔镜授精的体积的授精试样的步骤还包括，大约在室温下冷却所述授精试样。

15.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的选择用来授精的所需精子的步骤包括，将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩。

16.如权利要求15所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，通过Percoll梯度离心分离所述精子。

17.如权利要求16所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的通过Percoll梯度离心分离所述精子的步骤包括采用90∶45％的Percoll梯度的步骤。

18.如权利要求17所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的通过Percoll梯度离心分离所述精子的步骤还包括以下步骤：

a.在约200g下通过所述Percoll梯度离心分离所述精子约5分钟；和

b.在约800g下通过所述Percoll梯度离心分离所述精子约10分钟。

19.如权利要求17所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，将所述精子的浓度限制在约小于起始浓度的两倍。

20.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的建立授精试样的步骤包括建立具有一定体积的授精试样的步骤，所述的体积选自由以下体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

21.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中确定所述哺乳动物雌性物种的发情时间的步骤包括，诱导所述哺乳动物雌性物种发情。

22.如权利要求21所述的繁殖哺乳动物的方法，其中诱导所述哺乳动物雌性物种发情的步骤包括，诱导多头所述哺乳动物雌性物种同步发情。

23.如权利要求21或22所述的繁殖哺乳动物的方法，其中诱导所述哺乳动物雌性物种发情的步骤包括以下步骤：

a.每日给所述哺乳动物雌性物种施用结合孕激素约10天；和

b.在完成每日给所述哺乳动物雌性物种施用结合孕激素约10天的第10天，给所述哺乳动物雌性物种施用至少一次氯前列醇。

24.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括，在所确定的所述哺乳动物雌性物种适于授精的大致时间，开始进行：大约在所述的发情时间，改变所述授精试样的一种特性，以便建立人工授精样本的步骤。

25.如权利要求24所述的繁殖哺乳动物的方法，其中在所确定的所述哺乳动物雌性物种适于授精的大致时间，开始进行：大约在所述的发情时间，改变所述授精试样的一种特性，以便建立人工授精样本的步骤；该步骤包括，在选自由下列时间组成的组的时间内，开始进行改变所述授精试样的特性的步骤，所述的时间为：距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约24小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约12小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约8小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约3小时之内以及距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约1小时之内。

26.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的阴道的步骤包括以下步骤：

a.导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫颈；

b.导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫腔；

c.导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫角。

27.如权利要求26所述的繁殖哺乳动物的方法，其中导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫颈的步骤包括，手动导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫颈；其中导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫腔的步骤包括，手动导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫腔。

28.如权利要求26所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括在所述光学元件附近插入照明元件的步骤。

29.如权利要求28所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括使所述照明元件闪烁的步骤。

30.如权利要求29所述的繁殖哺乳动物的方法，其中导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫角的步骤包括，用光学方法导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫角。

31.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括确定所述哺乳动物雌性物种的优势卵泡的步骤。

32.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括观察尺寸至少约为35mm的排卵前的卵泡的步骤。

33.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的步骤包括以下步骤：

a.将所述导管定位在距所述子宫输卵管结合部约3到5cm之内；以及然后

b.使所述导管与所述子宫输卵管结合部接触。

34.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括将过滤的空气引入所述哺乳动物雌性物种的子宫的步骤。

35.如权利要求34所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括将空气从所述哺乳动物雌性物种的子宫排出的步骤。

36.如权利要求6所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括使从所述导管挤出的至少一部分人工授精样本吸入，从而制造吸入的授精样本的步骤。

37.繁殖哺乳动物的方法，其包括如下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.建立精子数量少于所述哺乳动物的自然授精剂量的人工授精样本；

c.将所述人工授精样本置于导管之内；

d.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

e.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

f.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

g.导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的阴道；

h.用光学手段确定所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部；

i.将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种体内的子宫输卵管结合部附近；

j.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本；

k.将少量精子附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近；

l.从所述哺乳动物雌性物种体内抽出所述光学元件和所述导管；

m.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精，与传统的子宫体人工授精方法相比，授精的成功率具有统计学上的可比性；和

n.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

38.如权利要求37所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

39.如权利要求38所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

40.如权利要求38所述的繁殖哺乳动物的方法，其中，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率的步骤包括，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有选自由如下成功率组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

41.如权利要求40所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

42.如权利要求40所述的繁殖哺乳动物的方法，其中从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

43.如权利要求42所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近的步骤包括，将所述导管插入到所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近的表面之下；其中从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本，使所述样本位于所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近的表面之下的步骤包括，从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本，使所述样本位于所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近的表面之下；以及其中将至少一部分吸入的人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的步骤包括，使至少一部分所述人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近的表面之下。

44.如权利要求42所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用所述的用于授精的所需精子，并在所述的授精试样中采用适宜于宫腔镜的介质，以便建立具有所述的适宜于宫腔镜授精的体积的授精试样的步骤包括，采用新鲜精子来建立人工授精样本。

45.如权利要求40所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括从所采集的精细胞中选择更适合授精的精细胞的步骤。

46.如权利要求45所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的选择用来授精的所需精子的步骤包括，将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩。

47.如权利要求46所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，通过Percoll梯度离心分离所述精子。

48.如权利要求47所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的通过Percoll梯度离心分离所述精子的步骤包括，采用90∶45％的Percoll梯度。

49.如权利要求46所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，将所述精子的所述浓度限制在约小于起始浓度的两倍。

50.如权利要求40所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采集哺乳动物雄性物种的精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

51.如权利要求42所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的建立授精试样的步骤包括，建立具有一定体积的授精试样的步骤，所述的体积选自由以下体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

52.如权利要求40所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采集哺乳动物雄性物种的精细胞的步骤包括，从哺乳动物雄性物种采集附睾精细胞。

53.如权利要求42所述的繁殖哺乳动物的方法，其中建立精子数量少于所述哺乳动物自然授精剂量的人工授精样本的步骤包括，采用适宜于宫腔镜的介质来建立人工授精样本。

54.如权利要求53所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用适宜于宫腔镜的介质来建立人工授精样本的步骤包括，采用脱脂乳介质。

55.如权利要求53所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用适宜于宫腔镜的介质来建立人工授精样本的步骤包括，采用选自由TALP介质、HEPES缓冲的Tyrode介质以及Androhep介质组成的组中的介质。

56.如权利要求53所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用适宜于宫腔镜的介质来建立人工授精样本的步骤包括，采用粘度适应于导管的介质。

57.如权利要求40所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括将从所述导管挤出的至少一部分人工授精样本吸入，从而制造吸入的授精样本的步骤。

58.如权利要求40、97、134、147、155、180、194、212或225所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括根据性别特性分选所述精细胞的步骤，而且，其中建立精子数量少于所述哺乳动物自然授精剂量的人工授精样本的步骤包括，建立精子数量少于所述哺乳动物自然授精剂量的、经过性别选择的人工授精样本。

59.如权利要求58所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采集哺乳动物雄性物种的精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

60.如权利要求58所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括冷冻所述精细胞的步骤。

61.如权利要求60所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采集哺乳动物雄性物种的精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

62.如权利要求40、97、134、147、155、180、194、212或225所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括冷冻所述精细胞的步骤。

63.如权利要求62所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采集哺乳动物雄性物种的精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

64.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147或134所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将至少一部分所述吸入的人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的步骤包括，将至少一部分所述吸入的人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种体内的所述子宫输卵管结合部的隐窝之内。

65.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147或134所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括促使所述精子附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的步骤。

66.如权利要求65所述的繁殖哺乳动物的方法，其中促使所述精子附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的步骤包括，由所述人工授精试样的至少一部分产生泡沫。

67.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147或134所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括由所述人工授精试样的至少一部分产生泡沫的步骤。

68.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用所述的用于授精的所需精子，并在所述的授精试样中采用适宜于宫腔镜的介质，以便建立具有所述的适宜于宫腔镜授精的体积的授精试样的步骤包括，稀释所述精细胞。

69.如权利要求68所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的稀释所述精细胞的步骤包括，采用脱脂乳介质、TALP介质、HEPES缓冲的Tyrode介质以及Androhep介质，按选自由下述比例组成的组中的比例稀释所述精细胞的步骤：稀释为不大于2∶1的比例、不大于5∶1的比例和不大于10∶1的比例。

70.如权利要求69所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用所述的用于授精的所需精子，并在所述的授精试样中采用适宜于宫腔镜的介质，以便建立具有所述的适宜于宫腔镜授精的体积的授精试样的步骤包括，在大约室温下冷却所述授精试样。

71.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括从所采集的精细胞中选择更有可能授精的精细胞的步骤。

72.如权利要求71所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的选择用来授精的所需精子的步骤包括，将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩。

73.如权利要求72所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，通过Percoll梯度离心分离所述精子。

74.如权利要求73所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的通过Percoll梯度离心分离所述精子的步骤包括采用90∶45％的Percoll梯度的步骤。

75.如权利要求72或74所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的通过Percoll梯度离心分离所述精子的步骤还包括以下步骤：

b.在约800g下通过所述Percoll梯度离心分离所述精子约10分钟。

76.如权利要求72所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，将所述精子的所述浓度限制在约小于起始浓度的两倍。

77.如权利要求72所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的建立授精试样的步骤包括建立具有一定体积的授精试样的步骤，所述的体积选自由以下体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

78.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其中确定所述哺乳动物雌性物种的发情时间的步骤包括，诱导所述哺乳动物雌性物种发情。

79.如权利要求78所述的繁殖哺乳动物的方法，其中诱导所述哺乳动物雌性物种发情的步骤包括如下步骤：

a.每日给所述哺乳动物雌性物种施用结合孕激素约10天；和

80.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括，在所确定的所述哺乳动物雌性物种适于授精的大致时间，开始进行：大约在所述的发情时间，改变所述授精试样的一种特性，以便建立人工授精样本的步骤。

81.如权利要求80所述的繁殖哺乳动物的方法，其中在所确定的所述哺乳动物雌性物种适于授精的大致时间，开始进行：大约在所述的发情时间，改变所述授精试样的一种特性，以便建立人工授精样本的步骤包括，在选自由下列时间组成的组的时间内，开始进行改变所述授精试样的特性的步骤，所述的时间为：距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约24小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约12小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约8小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约3小时之内以及距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约1小时之内。

82.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其中导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的阴道的步骤包括以下步骤：

83.如权利要求82所述的繁殖哺乳动物的方法，其中导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫颈的步骤包括，手动导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫颈的步骤；其中导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫腔的步骤包括，手动导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫腔。

84.如权利要求82所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括在所述光学元件附近插入照明元件的步骤。

85.如权利要求84所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括使所述照明元件闪烁的步骤。

86.如权利要求85所述的繁殖哺乳动物的方法，其中导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫角的步骤包括，用光学方法导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的宫角。

87.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括确定所述哺乳动物雌性物种的优势卵泡的步骤。

88.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括观察尺寸至少约为35mm的排卵前的卵泡的步骤。

89.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述导管定位在靠近所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部的步骤包括以下步骤：

b.使所述导管与所述子宫输卵管结合部接触。

90.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括将过滤的空气引入所述哺乳动物雌性物种的子宫的步骤。

91.如权利要求90所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括将空气从所述哺乳动物雌性物种的所述子宫排出的步骤。

92.如权利要求40、294、235、225、212、204、194、180、155、147、134或97所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括将从所述导管挤出的至少一部分人工授精样本吸入，从而制造吸入的授精样本的步骤。

93.繁殖哺乳动物的方法，其包括如下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.采用至少一些所述精细胞建立人工授精样本；

c.将所述人工授精样本置于导管之内；

d.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

e.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

f.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

i.将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的表面之下；

j.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本，使所述样本位于所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的表面之下；

k.将至少一部分所述人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近；

m.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

n.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

94.如权利要求93所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括，将少量精子置于所述导管之内。

95.如权利要求94所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

96.如权利要求95所述的繁殖哺乳动物的方法，其中，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率的步骤包括，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：

97.如权利要求95所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有选自由如下成功率组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

98.如权利要求97所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

99.如权利要求97所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

100.如权利要求93所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括从所采集的精细胞中选择更有可能授精的精细胞的步骤。

101.如权利要求100所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的选择用来授精的所需精子的步骤包括，将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩。

102.如权利要求101所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，通过Percoll梯度离心分离所述精子。

103.如权利要求102所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的通过Percoll梯度离心分离所述精子的步骤包括采用90∶45％的Percoll梯度的步骤。

104.如权利要求101所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，将所述精子的所述浓度限制在约小于起始浓度的两倍。

105.如权利要求93所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采集哺乳动物雄性物种的精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

106.如权利要求93所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的建立授精试样的步骤包括建立具有一定体积的授精试样的步骤，所述的体积选自由以下体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

107.如权利要求93所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采集哺乳动物雄性物种的精细胞的步骤包括，从哺乳动物雄性物种采集附睾精细胞。

108.如权利要求93所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近的表面之下的步骤包括，刺穿所述哺乳动物雌性物种的子宫内膜表面。

109.如权利要求108所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近的表面之下的步骤还包括，避免刺穿所述哺乳动物雌性物种的子宫血管部分。

110.如权利要求93所述的繁殖哺乳动物的方法，其中刺穿所述哺乳动物雌性物种的子宫内膜表面的步骤包括，采用所述导管的步骤。

111.如权利要求110所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括，控制所述导管刺穿所述哺乳动物雌性物种的所述子宫内膜表面的深度。

112.如权利要求111所述的繁殖哺乳动物的方法，其中控制所述导管刺穿所述哺乳动物雌性物种的所述子宫内膜表面的深度包括，采用所述导管。

113.一种授精容器元件，其包括：

a.多孔底面；

b.与所述多孔底面相邻的多孔罩面；

c.位于所述多孔底面和所述多孔罩面之间的基本上隐蔽的体积；

d.置于所述基本上隐蔽的体积内的来自雄性哺乳动物的精细胞；和

e.与所述基本上隐蔽的体积相邻的、可使所述精细胞通过的精子发射元件。

114.如权利要求113所述的授精容器元件，其中，所述的置于所述基本上隐蔽的体积内的来自雄性哺乳动物的精细胞具有少于自然授精中通常所具有的精细胞的数目。

115.如权利要求114所述的授精容器元件，其中，所述的少于自然授精中通常所具有的精细胞的数目选自由下列数目组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

116.如权利要求115所述的授精容器元件，其中所述精细胞包括来自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

117.如权利要求113所述的授精容器元件，其中，所述的置于所述基本上隐蔽的体积内的来自雄性哺乳动物的精细胞包括选自所采集的更有可能授精的精细胞。

118.如权利要求117所述的授精容器元件，其中，所述的选自所采集的更有可能授精的精细胞包括，选自采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活力的精细胞。

119.如权利要求113所述的授精容器元件，其中，所述的置于所述基本上隐蔽的体积内的来自雄性哺乳动物的精细胞包括新鲜精细胞。

120.如权利要求113所述的授精容器元件，其中，所述的置于所述基本上隐蔽的体积内的来自雄性哺乳动物的精细胞具有一定的授精体积，其中，所述的授精体积选自由如下体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

121.如权利要求113所述的授精容器元件，其中，所述的置于所述基本上隐蔽的体积内的来自雄性哺乳动物的精细胞包括，来自哺乳动物雄性物种的附睾精细胞。

122.如权利要求115所述的授精容器元件，其中，所述的置于所述基本上隐蔽的体积内的来自雄性哺乳动物的精细胞包括，来自哺乳动物雄性物种的经过性别选择的精细胞。

123.如权利要求122所述的授精容器元件，其中，所述的来自哺乳动物雄性物种的经过性别选择的精细胞包括，选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

124.如权利要求115所述的授精容器元件，其中，所述的位于所述多孔底面和所述多孔罩面之间的基本上隐蔽的体积位于所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近。

125.如权利要求124所述的授精容器元件，其中，所述的与所述多孔底面相邻的多孔罩面包括所述哺乳动物雌性物种的子宫内膜表面。

126.如权利要求125所述的授精容器元件，其中，所述的多孔底面包括所述哺乳动物雌性物种的子宫血管部分。

127.如权利要求115所述的授精容器元件，其中，与所述基本上隐蔽的体积相邻的、可使所述精细胞通过的精子发射元件包括，在所述哺乳动物雌性物种的子宫内膜表面上的开口。

128.一种授精导管，其包括：

a.导引元件；

b.响应所述导引元件的贮存元件；

c.被所述贮存元件响应的挤出元件；和

d.位于所述贮存元件前部的多孔穿刺头。

129.如权利要求128所述的授精导管，其还包括位于靠近所述多孔穿刺头附近的穿刺深度控制元件。

130.繁殖哺乳动物的方法，其包括以下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.从所采集的精细胞中选择更有可能授精的精细胞；

c.采用所述用于授精的所需精细胞来建立人工授精样本；

d.将所述人工授精样本置于导管之内；

e.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

f.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

g.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

h.导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的所述阴道；

i.用光学手段确定所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部；

j.将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近；

k.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本，使所述样本位于所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近的表面之下；

l.将至少一部分所述人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近；

m.从所述哺乳动物雌性物种体内抽出所述光学元件和所述导管；

n.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

o.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

131.如权利要求130所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括将少量精子置于所述导管之内的步骤。

132.如权利要求131所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

133.如权利要求132所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

134.如权利要求132所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

135.如权利要求134所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

136.如权利要求134所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

137.如权利要求134所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的选择用来授精的所需精子的步骤包括，将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩。

138.如权利要求137所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，通过Percoll梯度离心分离所述精子。

l39.如权利要求138所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的通过Percoll梯度离心分离所述精子的步骤包括采用90∶45％的Percoll梯度的步骤。

140.如权利要求137或139所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的通过Percoll梯度离心分离所述精子的步骤还包括以下步骤：

b.在约800g下通过所述Percoll梯度离心分离所述精子约10分钟。

141.如权利要求137所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将采自所述哺乳动物雄性物种的更具有活性的精子浓缩的步骤包括，将所述精子的所述浓度限制在约小于起始浓度的两倍。

142.如权利要求137所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的建立授精试样的步骤包括建立具有一定体积的授精试样的步骤，所述的体积选自由以下体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

143.繁殖哺乳动物的方法，其包括如下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.采用新鲜精子建立人工授精样本；

c.将所述人工授精样本置于导管之内；

d.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

e.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

f.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

i.将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近；

j.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本；

m.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

n.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

144.如权利要求143所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括，将少量精子置于所述导管之内。

145.如权利要求144所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的将少量精子置于所述导管之内的步骤包括，放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

146.如权利要求145所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

147.如权利要求145所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

148.如权利要求147所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

149.如权利要求147所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

150.如权利要求143所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采集哺乳动物雄性物种的精细胞的步骤包括，从哺乳动物雄性物种采集附睾精细胞。

151.繁殖哺乳动物的方法，其包括如下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.采用适宜于宫腔镜的介质建立人工授精样本；

c.将所述人工授精样本置于导管之内；

d.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

e.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

f.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

j.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本；

m.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

n.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

152.如权利要求151所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括将少量精子置于所述导管之内的步骤。

153.如权利要求152所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

154.如权利要求153所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

155.如权利要求153所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

156.如权利要求155所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

157.如权利要求155所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

158.如权利要求151所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采用适宜于宫腔镜的介质来建立人工授精样本的步骤包括采用脱脂乳介质的步骤。

159.如权利要求151所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用适宜于宫腔镜的介质来建立人工授精样本的步骤包括，采用选自由TALP介质、HEPES缓冲的Tyrode介质以及Androhep介质组成的组中的介质。

160.如权利要求151所述的繁殖哺乳动物的方法，其中采用适宜于宫腔镜的介质来建立人工授精样本的步骤包括，采用粘度适应于导管的介质。

161.如权利要求160所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采用粘度适应于导管的介质的步骤包括，采用一种介质来建立人工授精样本，所得人工授精样本的粘度大于所述哺乳动物的血液的大致粘度。

162.如权利要求161所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采用粘度适应于导管的介质的步骤还包括，采用一种介质来建立人工授精样本，所得人工授精样本的粘度大于所述盐水溶液的大致粘度。

163.如权利要求161所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的采用粘度适应于导管的介质的步骤还包括，采用选自如下介质组成的组中的介质的步骤：大约在哺乳动物的平均体温下，粘度大于约100厘泊的介质、粘度大于约300厘泊的介质、粘度大于约1000厘泊的介质、粘度大于约3000厘泊的介质和粘度大于约6000厘泊的介质。

164.一种宫腔镜授精样本，其包括：

a.贮存元件；

b.被所述贮存元件响应的导管系统；

c.容纳在所述贮存元件内的多个精细胞；和

d.容纳在所述贮存元件内的、并被所述精细胞响应的适宜于宫腔镜的介质。

165.如权利要求164所述的授精容器元件，其中，所述的容纳在所述贮存元件内的多个精细胞包括少于自然授精中通常所具有的精细胞数量。

166.如权利要求165所述的授精容器元件，其中，所述的少于自然授精中通常所具有的精细胞的数目选自由下列数目组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

167.如权利要求166所述的授精容器元件，其中所述精细胞包括来自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

168.如权利要求166所述的授精容器元件，其中容纳在所述贮存元件内的多个精细胞包括来自哺乳动物雄性物种的、经过性别选择的精细胞。

169.如权利要求168所述的授精容器元件，其中来自哺乳动物雄性物种的、经过性别选择的精细胞包括，选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

170.如权利要求164所述的宫腔镜授精样本，其中，容纳在所述贮存元件内的、并被所述精细胞响应的适宜于宫腔镜的介质包括脱脂乳介质。

171.如权利要求164所述的宫腔镜授精样本，其中，容纳在所述贮存元件内的、并被所述精细胞响应的适宜于宫腔镜的介质包括，选自由TALP介质、HEPES缓冲的Tyrode介质以及Androhep介质组成的组中的介质。

172.如权利要求164所述的宫腔镜授精样本，其中，容纳在所述贮存元件内的、并被所述精细胞响应的适宜于宫腔镜的介质包括粘度适应于导管的介质。

173.如权利要求172所述的宫腔镜授精样本，其中，所述的粘度适应于导管的介质包括，用该介质所建立人工授精样本的粘度大于所述哺乳动物的血液的大致粘度的介质。

174.如权利要求173所述的宫腔镜授精样本，其中，所述的粘度适应于导管的介质包括，用该介质所建立的人工授精样本的粘度大于盐水溶液的大致粘度的介质。

175.如权利要求172所述的宫腔镜授精样本，其中，所述的粘度适应于导管的介质包括选自如下介质组成的组：大约在哺乳动物的平均体温下，粘度大于约100厘泊的介质、粘度大于约300厘泊的介质、粘度大于约1000厘泊的介质、粘度大于约3000厘泊的介质和粘度大于约6000厘泊的介质。

176.繁殖哺乳动物的方法，其包括以下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.确定用于人工授精的适宜于宫腔镜授精的体积；

c.采用所述的适宜于宫腔镜授精的体积来建立人工授精样本；

d.将所述人工授精样本置于导管之内；

e.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

f.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

g.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

h.导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的阴道；

k.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本；

n.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

o.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

177.如权利要求176所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括将少量精子置于所述导管之内的步骤。

178.如权利要求177所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

179.如权利要求178所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

180.如权利要求178所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

181.如权利要求180所述的繁殖哺乳动物的方法，其中从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

182.如权利要求180所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的建立授精试样的步骤包括建立具有一定体积的授精试样的步骤，所述的体积选自由以下体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

183.一种宫腔镜授精样本，其包括：

a.贮存元件；

b.被所述贮存元件响应的导管系统；和

c.容纳在所述贮存元件内的适宜于宫腔镜的体积的精子。

184.如权利要求183所述的授精容器元件，其中，容纳在所述贮存元件内的适宜于宫腔镜的体积的精子包括少于自然授精中通常所具有的精细胞数量。

185.如权利要求184所述的授精容器元件，其中，所述的少于自然授精中通常所具有的精细胞的数目选自由下列数目组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

186.如权利要求185所述的授精容器元件，其中所述精细胞包括选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

187.如权利要求183所述的授精容器元件，其中容纳在所述贮存元件内的精子的适宜于宫腔镜的体积包括选自由以下体积组成的组：从约30μl到150μl之间、小于约500μl、约230μl和约100μl。

188.如权利要求183或187所述的授精容器元件，其中容纳在所述贮存元件内的适宜于宫腔镜的体积的精子包括来自哺乳动物雄性物种的、经过性别选择的精细胞。

189.如权利要求188所述的授精容器元件，其中来自哺乳动物雄性物种的、经过性别选择的精细胞包括，选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

190.繁殖哺乳动物的方法，其包括以下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.暂时实际上保持授精试样中的所述精细胞的一种特性；

c.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

d.大约在所述发情时间改变所述授精试样的一种特性以便建立人工授精样本；

e.将所述人工授精样本置于导管之内；

f.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

g.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

k.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本；

n.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

o.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

191.如权利要求190所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括将少量精子置于所述导管之内的步骤。

192.如权利要求191所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

193.如权利要求192所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

194.如权利要求192所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

195.如权利要求194所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

196.如权利要求194所述的繁殖哺乳动物的方法，其中从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

197.如权利要求190、194或196所述的繁殖哺乳动物的方法，所述方法包括，在所确定的所述哺乳动物雌性物种适于授精的大致时间，开始进行：大约在所述的发情时间，改变所述授精试样的一种特性，以便建立人工授精样本的步骤。

198.如权利要求197所述的繁殖哺乳动物的方法，其中在所确定的所述哺乳动物雌性物种适于授精的大致时间，开始进行：大约在所述的发情时间，改变所述授精试样的一种特性，以便建立人工授精样本的步骤包括，在选自由下列时间组成的组的时间内，开始进行改变所述授精试样的步骤，所述的时间为：距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约24小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约12小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约8小时之内、距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约3小时之内以及距离所确定的所述哺乳动物雌性物种适合授精的时间约1小时之内。

199.如权利要求190或194所述的繁殖哺乳动物的方法，其中暂时实际上保持授精试样中的所述精细胞的一种特性的步骤包括，冷冻所述精细胞的步骤；其中大约在所述发情时间改变所述授精试样的一种特性以便建立人工授精样本的步骤包括，大约在所述发情时间使所述授精试样解冻。

200.繁殖哺乳动物的方法，其包括以下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.根据性别特异性的特征将所述精细胞分类；

c.建立经过分类的、具有性别特异性的人工授精样本；

d.将所述经过分类的、具有性别特异性的人工授精样本置于导管之内；

e.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

f.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

g.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

k.从所述导管中挤出至少一部分所述经过分类的、具有性别特异性的人工授精样本；

l.将至少一部分所述经过分类的、具有性别特异性的人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的子宫输卵管结合部附近；

n.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

o.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

201.如权利要求200所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括将少量精子置于所述导管之内的步骤。

202.如权利要求201所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

203.如权利要求202所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

204.如权利要求202所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

205.如权利要求204所述的繁殖哺乳动物的方法，其中从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

206.如权利要求204所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括冷冻所述精细胞的步骤。

207.如权利要求206所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

208.繁殖哺乳动物的方法，其包括如下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的附睾精细胞；

b.建立人工授精样本；

c.将所述人工授精样本置于导管之内；

d.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

e.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

f.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

j.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本；

m.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精，与传统的人工授精方法相比，所述卵子授精具有统计学上可比性的成功率；和

n.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

209.如权利要求208所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括将少量精子置于所述导管之内的步骤。

210.如权利要求209所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

211.如权利要求210所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

212.如权利要求210所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

213.如权利要求212所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

214.如权利要求212所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

215.一种宫腔镜授精样本，其包括：

a.贮存元件；

b.被所述贮存元件响应的导管系统；和

c.容纳在所述贮存元件内的多个附睾精细胞。

216.如权利要求215所述的授精容器元件，其中，容纳在所述贮存元件内的多个附睾精细胞包括少于自然授精中通常所具有的精细胞数量。

217.如权利要求216所述的授精容器元件，其中，所述的少于自然授精中通常所具有的精细胞的数目选自由下列数目组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

218.如权利要求217所述的授精容器元件，其中所述精细胞包括来自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

219.如权利要求217所述的授精容器元件，其中容纳在所述贮存元件内的多个附睾精细胞包括来自哺乳动物雄性物种的、经过性别选择的精细胞。

220.如权利要求219所述的授精容器元件，其中所述的来自哺乳动物雄性物种的、经过性别选择的精细胞包括选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

221.繁殖哺乳动物的方法，其包括如下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的附睾精细胞；

b.建立人工授精样本；

c.将所述人工授精样本置于导管之内；

d.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

e.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

f.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

g.导引所述光学元件和所述导管通过所述哺乳动物雌性物种的所述阴道；

i.将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近；

j.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本；

k.吸入至少一部分从所述导管挤出的所述人工授精样本以便建立吸入的人工授精样本；

l.将至少一部分所述人工授精样本附着在所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近；

n.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

o.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

222.如权利要求221所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管之内的步骤包括将少量精子置于所述导管之内的步骤。

223.如权利要求222所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

224.如权利要求223所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

225.如权利要求223所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

226.如权利要求225所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

227.如权利要求225所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

228.一种宫腔镜授精元件，其包括：

a.哺乳动物雌性物种的子宫；

b.容纳在所述子宫中的多个精细胞；和

c.吸入的一定体积的介质，所述介质包围着所述精细胞，所述精细胞对所述介质发生响应。

229.如权利要求228所述的授精容器元件，其中，容纳在所述子宫内的多个精细胞包括少于自然授精中通常所具有的精细胞数量。

230.如权利要求229所述的授精容器元件，其中，所述的少于自然授精中通常所具有的精细胞的数目选自由下列数目组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

231.如权利要求230所述的授精容器元件，其中所述精细胞包括选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

232.如权利要求230所述的授精容器元件，其中容纳在所述子宫内的多个精细胞包括来自哺乳动物雄性物种的、经过性别选择的精细胞。

233.如权利要求232所述的授精容器元件，其中所述的来自哺乳动物雄性物种的、经过性别选择的精细胞包括选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种的精细胞。

234.繁殖哺乳动物的方法，其包括如下步骤：

a.采集公猪的精细胞；

b.建立精子数少于所述公猪自然授精剂量的人工授精样本；

c.将所述人工授精样本置于导管之内；

d.确定母猪适于授精的时机；

e.将一光学元件插入所述母猪的阴道内；

f.将所述导管插入所述母猪的阴道内；

g.导引所述光学元件和所述导管通过所述母猪的阴道；

h.用光学手段确定所述母猪体内的子宫输卵管结合部；

i.将所述导管定位在所述母猪的子宫输卵管结合部附近；

j.从所述导管中排出至少一部分所述人工授精样本；

k.将至少一部分所述人工授精样本附着在所述母猪体内的子宫输卵管结合部附近；

l.从所述母猪体内抽出所述光学元件和所述导管；

m.使所述母猪的卵子授精；和

n.由所述授精卵繁殖猪的后代。

235.如权利要求234所述的繁殖哺乳动物的方法，其中使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率。

236.如权利要求235所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括根据性别特征将所述精细胞分类的步骤，而且，其中建立精子数少于所述哺乳动物自然授精剂量的人工授精样本的步骤包括，建立精子数少于所述哺乳动物自然授精剂量的、经过性别选择的人工授精样本。

237.如权利要求236所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括冷冻所述精细胞的步骤。

238.如权利要求235所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括冷冻所述精细胞的步骤。

239.繁殖哺乳动物的方法，其包括以下步骤：

a.采集哺乳动物雄性物种的精细胞；

b.冷冻至少一些所述精细胞以便建立冷冻的授精样本；

c.解冻至少一些所述冻结的授精样本以便建立人工授精样本；

d.将所述人工授精样本置于导管之内；

e.确定所述哺乳动物雌性物种适于授精的时间；

f.将一光学元件插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

g.将所述导管插入所述哺乳动物雌性物种的阴道内；

j.将所述导管定位在所述哺乳动物雌性物种的所述子宫输卵管结合部附近；

k.从所述导管中挤出至少一部分所述人工授精样本；

n.使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精；和

o.由所述授精卵繁殖哺乳动物的后代。

240.如权利要求239所述的繁殖哺乳动物的方法，其中使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率。

241.如权利要求239或240所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将所述人工授精样本置于导管内的步骤包括将少量精子置于所述导管内。

242.如权利要求241所述的繁殖哺乳动物的方法，其中将少量精子置于所述导管之内的步骤包括放置如下数量的精子的步骤，所述数量选自由如下数量组成的组：少于约1千万个精子、少于约5百万个精子、少于约2百万个精子、少于约1百万个精子、少于约50万个精子以及少于约10万个精子。

243.如权利要求242所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

244.如权利要求242所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率选自如下组成的组：至少约为75％的成功率、至少约为65％的成功率、至少约为60％的成功率、至少约为50％的成功率、至少约为45％的成功率，以及该物种的传统的人工授精成功率的至少约90％。

245.如权利要求244所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的授精步骤包括，与传统的子宫体人工授精方法的成功率相比，使所述哺乳动物雌性物种的卵子授精的步骤具有统计学上可比性的成功率，该成功率由如下条件组成的组确定：

246.如权利要求244所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

247.如权利要求244所述的繁殖哺乳动物的方法，其还包括根据性别特征将所述精细胞分类的步骤，而且，其中建立精子数少于所述哺乳动物自然授精剂量的人工授精样本的步骤包括，建立精子数少于所述哺乳动物自然授精剂量的、经过性别选择的人工授精样本。

248.如权利要求247所述的繁殖哺乳动物的方法，其中所述的从哺乳动物雄性物种采集精细胞的步骤包括，从选自由牛科、马科或猪科动物组成的组中的哺乳动物雄性物种采集精细胞。

249.采用前述任一项权利要求所述的方法所繁殖的动物。