CN101041693A

CN101041693A - 一种新型降血糖多肽及其应用

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Publication number: CN101041693A
Application number: CN 200710026759
Authority: CN
Inventors: 肖拥军; 曹春来; 陈晓静
Original assignee: ZHUHAI LIANBANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: ZHUHAI LIANBANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2007-02-06
Filing date: 2007-02-06
Publication date: 2007-09-26
Anticipated expiration: 2027-02-06
Also published as: CN101041693B

Abstract

本发明涉及人胰高血糖素样肽－1(GLP－1)类似物，具体本发明涉及GLP－1改构多肽，该多肽在体内有促进胰岛素分泌，降低血糖的作用，可用于治疗II型糖尿病。本发明提供的一组GLP－1类似物多肽序列，该多肽具有式I的通式：HX₁EGTFTSDX₂SSYLEGQAAKX₃FIX₄WLVKGR(式I)，其中，X₁：Ala，Gly或Val，X₂：Val，Leu或Ala，X₃：Leu或Ser，X₄：Glu或Asn。体内试验证明，本发明多肽在体内半衰期更长，能刺激胰岛素的产生，降低血糖值，优于天然GLP－1的功效。

Description

一种新型降血糖多肽及其应用

技术领域

本发明涉及人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，具体本发明涉及GLP-1改构多肽，该多肽在体内有促进胰岛素分泌，降低血糖的作用，可用于治疗II型糖尿病。

背景技术

根据国际糖尿病联盟(IDE)2006年的《Diabetes Atlas》中报告，糖尿病已经在全球蔓延。目前糖尿病侵袭全球2.46亿人，占全球人口的5.9％，而患者总人数中接近80％是在发展中国家，其中印度4090万，中国3980万。报告中预测，未来二十年内如不采取任何措施，患糖尿病的患者将增加到3.8亿人口。全世界糖尿病的流行及治疗糖尿病新药的飞速发展，将使糖尿病药物的市场每年增长16％，达到2006年的200亿美元。糖尿病患者主要分为胰岛素依赖型糖尿病(I型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(II型糖尿病)两种，其中II型糖尿病占糖尿病总数的90％以上。II型糖尿病的防治是糖尿病研究的一个重点。由于糖尿病的发病机制仍不十分明确，目前主要通过长期用药以降低血糖，控制并发症。世界上治疗II型糖尿病以磺酰脲类药物为主，辅以双胍类、α-糖苷酶抑制剂等药物。但是，由于磺酰脲类药物的副作用大，长期使用会因为胰岛素过度分泌而导致胰岛β细胞衰竭，服用此类药物的糖尿病人中，每年有10％的病人会因治疗失效而改用胰岛素等其他类药物。自1984年美国波士顿总医院发现人的肠道内存在一类促进胰岛素分泌的多肽(统称GLP-1)以来，多肽就成了新一代治疗II型糖尿病药物的开发热点。

GLP-1(7-36)是前胰高血糖素原第7位开始至第36位止的氨基酸片段，为30个氨基酸组成的多肽，氨基酸序列为如下：His·Ala·Glu·Gly·Thr·Phe·Thr·Ser·Asp·Val·Ser·Ser·Tyr·Leu·Glu·Gly·Gln·Ala·Ala·Lys·Glu·Phe·Ile·Ala·Trp·Leu·Val·Lys·Gly·Arg。

GLP-1(7-36)通过复杂的机制控制血糖，其中包括对胰岛素和胰高血糖素(glucagon)的分泌，胃的排空及外周的胰岛素敏感性调节。另外现在的动物实验表明，GLP-1能够抑制β细胞的凋亡，刺激β细胞的生长和分化，促进β细胞的转化，因而能够解决β细胞功能紊乱的问题，为II型糖尿病的治疗提供了崭新的途径。同世界上已经问世的糖尿病药物相比，GLP-1具有4大突破性优点：一是能促进胰岛β细胞的增生，在一定程度上对糖尿病具有治疗作用。也就是说，它能够根治糖尿病，而现有药物只能控制病情，不能治本。二是安全性更高，其促胰岛素分泌的作用依赖于血糖水平，血糖低时药物就不会起作用，从而避免了胰岛素过度分泌导致的低血糖发生，可以安全使用。三是对使用磺酰脲类药物无效的患者，GLP-1仍然有效。四是能减少肠胃蠕动，延缓胃排空，帮助减轻体重。GLP-1对人体不会产生抗体，能改善周边组织的胰岛素受体敏感性，有助于治疗胰岛素抗性。同时抑制胰高血糖素的分泌，改善患者的糖化血红蛋白、果糖胺等中长期生化指标。针对其减肥功效的研究也在广泛开展中。

GLP-1具有用于治疗II型糖尿病良好的性质，但是其在体内很短的半衰期(约为2分钟)限制了其直接用药的可能。研究表明GLP-1在体内降解主要是在二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase IV，DPP-IV)和中性肽链内切酶(neutralendopeptide，NEP)24.11的迅速降解。DPP-IV在主要是剪切N端Ala⁸和Glu⁹之间的肽键，可以使GLP-1丧失大多数的活性。NEP 24.11在体内可以水解芳香族氨基或者疏水性氨基酸的氨基端的肽键，在GLP-1种存在6个位点：Asp¹⁵-Val¹⁶，Ser¹⁸-Tyr¹⁹，Tyr¹⁹-Leu²⁰，Glu²⁷-Phe²⁸，Phe²⁸-Ile²⁹和Trp³¹-Leu³²。现今以GLP-1为基础的研发策略主要有两个方面：一是开发DDP-IV酶的抑制剂，以期减慢体内产生的GLP-1的降解；二是对GLP-1多肽序列进行氨基酸替换，获得GLP-1类似物，用PEG，亲脂性长链等对GLP-1进行氨基酸修饰，以获得GLP-1更长的半衰期。

这些研究发现，GLP(7-15)(Exendin1-9)在结构和组成上具有很高的保守性，通过分析Ala替代His⁷、Gly¹⁰、Phe¹²、Thr¹³和Asp¹⁵对受体亲和能力和腺苷酰基环化酶的激活能力的降低程度，这些氨基酸在对受体的结合和激活发挥重要作用。同样的试验也证实Phe²⁸和Ile²⁹在受体结合和激活上发挥作用，另外经过圆二色谱分析这两个氨基酸在维持多肽的二级结构有着更重要的贡献，从而有利于多肽与受体的结合。GLP-1(7-34)和GLP-1(7-35)能够降低与受体的亲和能力，而GLP-1(7-33)、GLP-1(7-22)和GLP-1(7-20)则不表现出生物活性。

同时，采用Gly替代Ala8，可以抵抗DDP-IV的降解，但是Gly⁸-GLP-1(7-36)的促胰岛素分泌和降血糖作用比GLP-1(7-36)大为降低，有的将GLP-1(7-37)的AA⁸置换成D-型氨基酸，如D-Ala⁸-GLP-1，D-Glu⁹-GLP-1，结果促胰岛素分泌作用都远远低于GLP-1(7-36)。另外，在GLP-1的C末端加上EXENDIN-4(31-39)的肽链，可以恢复到GLP-1(7-36)的活性水平，同时可以抵抗DDP-IV的降解作用。GLP-1(7-37)，GLP-1(7-36)的N-末端的His之外加1个或几个氨基酸残基或者除去两个氨基酸残基，则无促胰岛素分泌作用，如GLP-1(1-37)，GLP-1(6-37)，GLP-1(8-37)都没有促胰岛素分泌作用。可见之前开展的诸多研究都没有获得比GLP-1(7-36)大为提高的降糖作用和稳定性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型GLP-1类似物，该多肽在体内有比GLP-1更长的半衰期，有优于GLP-1的促进胰岛素分泌，降低血糖的作用，可以用于治疗II型糖尿病。

本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：

通过对GLP-1(7-36)的类似物或者变构体的分析，我们发现很多多肽序列的变化都是基于多肽的同源性或者氨基酸的性质相似进行变化，而没有从多肽序列的二级结构上进行分析。本发明就是从二级结构开始进行多肽的初步筛选，然后采用体内降糖效果和促胰岛素产生的效果来评价本发明设计的GLP-1类似物的生物活性，以获得有实际应用的序列。

本发明对影响GLP-1稳定性的最主要的因素之DDP-IV的主要作用位点进行了修饰，即GLP-1的Ala⁸的羧基端氨基酸；同时对于NEP 24.11的酶切位点的修饰，也进行了相关的研究分析，主要是在GLP-1(12-15)。通过prodictprotein蛋白质结构预测软件、Vector NTI DNA和蛋白序列分析软件等生物信息学工具，对GLP-1类似多肽序列进行筛选分析。依据二级结构相似的原则，获得一组GLP-1类似物多肽序列。

本发明提供的一组GLP-1类似物多肽序列，该多肽具有式I的通式：

....，....1....，....2....，....3

HX₁EGTFTSDX₂SSYLEGQAAKX₃FIX₄WLVKGR (式I)

X₁：Ala，Gly或Val

X₂：Val，Leu或Ala

X₃：Leu或Ser

X₄：Glu或Asn

我们采用正常大鼠为试验模型，以母体GLP-1(7-36)为阳性对照，鉴定本发明多肽在体内的稳定性和降糖、促进胰岛素生成的效果。体内试验证明，本发明多肽在体内半衰期更长，能刺激胰岛素的产生，降低血糖值，优于天然GLP-1的功效。

附图说明

图1是实施例三多肽降血糖作用的图示(一)；

图2是实施例三多肽降血糖作用的图示(二)；

图3是实施例四大鼠经过禁食后降血糖作用的图示；

图4是实施例五大鼠经过禁食后促胰岛素分泌作用的图示；

图5是实施例六大鼠未禁食时降血糖作用的图示；

图6是实施例七大鼠未禁食时促胰岛素分泌作用的图示。

具体实施方式

实施例1：

本发明对影响GLP-1稳定性的最主要的因素DDP-IV的主要作用位点进行了修饰，即GLP-1的Ala⁸的羧基端氨基酸；同时对于NEP 24.11的酶切位点的修饰，也进行了相关的研究分析，主要是在GLP-1(12-15)。通过prodictprotein蛋白质结构预测软件、Vector NTI DNA和蛋白序列分析软件等生物信息学工具，对GLP-1类似多肽序列进行筛选分析。依据二级结构相似的原则，获得一组GLP-1类似物多肽序列。

初筛GLP-1类似物列举如下：

SEQ NO 1

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 2

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI WLVKGR

SEQ NO 3

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 4

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 5

HAEGTFTSD SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 6

HAEGTFTSD SSYLEGQAAK

FI WLVKGR

SEQ NO 7

HAEGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 8

HAEGTFTSD

SSYLEGQAAK FI

WLVKGR

SEQ NO 9

HAEGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 10

HAEGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 11

HAEGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 12

HAEGTFTSD

SSYLEGQAAK FI WLVKGR

SEQ NO 13

H EGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 14

H

EGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 15

H

EGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI WLVKGR

SEQ NO 16

H

EGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI WLVKGR

SEQ NO 17

H EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 18

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK FI

WLVKGR

SEQ NO 19

H EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 20

H EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 21

H EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 22

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 23

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 24

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 25

H

EGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 26

H

EGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI WLVKGR

SEQ NO 27

H

EGTFTSDVSSYLEGQAAK FI

WLVKGR

SEQ NO 28

H EGTFTSDVSSYLEGQAAK

FI WLVKGR

SEQ NO 29

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 30

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 31

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 32

H

EGTFTSD SSYLEGQAAK FI

WLVKGR

SEQ NO 33

H EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 34

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 35

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

SEQ NO 36

H

EGTFTSD

SSYLEGQAAK

FI

WLVKGR

通过软件分析获得序列：SEQ NO 2、SEQ NO 5、SEQ NO 6、SEQ NO 7、SEQ NO 8、SEQ NO 17、SEQ NO 18和SEQ NO 33与GLP-1(7-36)在二级结构上有很大的相似性。

实施例2：化学合成多肽

采用固相合成法合成本发明多肽之一，序列为：HGEGTFTSDLSSYLEGQAAKLFIEWLVKGR-NH₂(SEQ NO 17)，其它多肽序列合成方法类似。

合成工艺

采用Fmoc合成法，选择Rink-Amide-MBHA Resin(购于南开和成公司)进行合成。合成步骤如下：

17种带侧链保护基的Fmoc-氨基酸原料——固相合成——脱侧链保护基——HPLC纯化——冷冻干燥——GLP类似物

1.氨基酸单体

氨基酸名称	来源
氨基酸名称	来源	Fmoc-L-Ala-OH	Synpep.Inc

Fmoc-L-Arg(Pme)-OHFmoc-L-Asn(Trt)-OHFmoc-L-Asp(OtBu)-OHFmoc-L-Gln(Trt)-OHFmoc-L-Glu(OtBu)-OHFmoc-L-Gly-OHFmoc-L-His(Trt)-OHFmoc-L-Ile-OHFmoc-L-Leu-OHFmoc-L-Lys(Trt)-OHFmoc-L-Phe-OHFmoc-L-Ser(tBu)-OHFmoc-L-Thr(tBu)-OHFmoc-L-Trp-OHFmoc-L-Tyr(tBu)-OHFmoc-L-Val-OH

Synpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.IncSynpep.Inc

2.固相合成的过程

采用HBTU/HOBt法活化氨基酸，按照序列连接到氨基树脂上，共进行30步合成。

(1)仪器设备：

Applied Biosystem多肽合成仪，433A型

(2)试剂：

名称	规格
名称	规格	NMPDMFDCMPIPHBTU	多肽合成级多肽合成级分析纯分析纯多肽合成级

HOBTDIEA

多肽合成级多肽合成级

其中：DMF＝N，N-二甲基甲酰胺

DIEA＝N，N-二异丙基乙胺

NMP＝N-甲基吡咯烷酮

HOBT＝1-羟基苯并三唑

HBTU＝2苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯

(3)操作

以1mmole规模为例，称取树脂2克(树脂装载率为0.5mmole/g)，倒入多肽合成仪反应器内，按照GLP类似物的氨基酸序列从C-端向N-端称取4mmole相应的带保护基氨基酸，并排列在合成仪中。在室温条件下，按照电脑程序自动进行完成30步合成反应。

合成结束后，得到带侧链保护基的多肽树脂。取出多肽树脂，放入真空干燥器中干燥2小时后称重。

3.脱保护基及沉淀：

(1)仪器设备

磁力搅拌仪

(2)试剂

名称	规格
名称	规格	水三氟乙酸甲基苯基硫醚乙二硫醇苯酚乙醚	超纯水多肽合成级分析纯分析纯分析纯分析纯

(3)操作

将带保护基的GLP类似物多肽树脂置入带塞的三角烧瓶中，加入裂解试剂如下表：

试剂	用量(mL)
试剂	用量(mL)	水三氟乙酸甲基苯基硫醚乙二硫醇苯酚	2.541.252.51.252.5

恒温在25℃条件下，搅拌反应4小时；过滤、收集滤液，树脂用少量三氟乙酸洗涤，过滤合并入收集液。在搅拌下，滴加500mL冰乙醚(-10℃)，得到白色沉淀，过滤，用少量冰乙醚洗涤粗品，并将粗品放入真空干燥器中干燥过夜。

4.HPLC纯化

(1)仪器设备

名称	型号及厂家
名称	型号及厂家	旋转蒸发仪分析型HPLC制备型HPLC	R-205 BUCHI2695 WATERSSD-2 VARIAN

(2)试剂

名称	规格
名称	规格	乙腈三氟乙酸乙酸超纯水	HPLC级HPLC级HPLC级

(3)纯化

通过HPLC反相纯化制备得到GLP类似物纯品三氟乙酸盐溶液(纯度＞95％)。

①色谱柱：

50mm*250mm Kromasil RP-18 10μm 100A制备色谱柱

②流动相：

A：0.1％三氟乙酸水溶液

B：0.1％三氟乙酸乙腈溶液

③上样溶液：

将多肽粗品(纯度约40～50％)用：0.1％三氟乙酸水溶液配成浓度为8.0mg/ml(按粗品计算)的溶液，并通过0.22μm滤膜过滤。

④洗脱条件：

采用线性梯度洗脱，流速为120ml/min，紫外280nm检测，洗脱梯度

如下表：

时间(min)	流动相B
时间(min)	流动相B	0-55-4040-4545-60	18％18％-30％30％-60％60％

⑤样品收集：

在25-35分钟期间，按照60ml/瓶分布收集洗脱主峰，并对各个样品液进行分析检测。合并所有纯度大于95％的样品液。

(4)换盐

将纯化好的样品液通过HPLC反相换盐制备得到GLP类似物纯品乙酸盐溶液(纯度＞95％)。

①色谱柱：

50mm*250mm Kromasil RP-18 10μm 100A制备色谱柱

②流动相：

A：0.5％乙酸水溶液

B：0.5％乙酸乙腈溶液

③上样溶液：

向多肽纯溶液加入等体积超纯水。

④洗脱条件：

采用线性梯度洗脱，流速为120ml/min，紫外280nm检测，洗脱梯度如下表：

时间(min)	流动相B
时间(min)	流动相B	0-5	15％

5-20

15％-30％

⑤样品收集：

收集所有洗脱主峰溶液。

⑥除去乙腈：

将多肽溶液倒入圆底烧瓶，25℃，-0.099Mpa条件下旋转蒸发，除去所有乙腈，剩余液体通过0.22μm滤膜过滤，留待冷冻干燥。

5.冷冻干燥

(1)仪器设备

设备	型号
设备	型号	真空冷冻干燥机	GT-1

(2)操作

将GLP类似物醋酸水溶液倒入真空冷冻干燥机样品盘内，按照电脑程序进行冻干，得到所需化合物。

实施例3：多肽降血糖作用的研究试验

试验材料：

1、样品：

SEQ NO 2：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKLFINWLVKGR-NH2

SEQ NO 5：HAEGTFTSDLSSYLEGQAAKLFIEWLVKGR-NH2

SEQ NO 6：HAEGTFTSDLSSYLEGQAAKLFINWLVKGR-NH2

SEQ NO 7：HAEGTFTSDLSSYLEGQAAKSFIEWLVKGR-NH2

SEQ NO 8：HAEGTFTSDLSSYLEGQAAKSFINWLVKGR-NH2

SEQ NO 17：HGEGTFTSDLSSYLEGQAAKLFIEWLVKGR-NH2

SEQ NO 18：HGEGTFTSDLSSYLEGQAAKLFINWLVKGR-NH2

SEQ NO 33：HVEGTFTSDASSYLEGQAAKLFIEWLVKGR-NH2

GLP-1(7-36)为阳性对照：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH2

2、动物：Wistar大鼠，体重280～300g，雄性，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供。

3、试剂：①血糖试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司；②胰岛素(INS)放射免疫分析药盒，北京市福瑞生物工程公司。

4、仪器：①GF-D800型半自动生化分析仪，山东高密彩虹分析仪器有限公司；

②FJ-2008自动免疫计数器，西安国营二六二厂。

试验方法：

1、剂量设计：各受试药品的剂量为大鼠皮下注射70μg·kg^-1，腹腔注射20％葡萄糖3.5ml·kg^-1。

2、配药：取葡萄糖35g，加蒸馏水至175ml，即20％，加热灭菌，备用。取受试药和GLP-1(7-36)样品5mg，加生理盐水2ml溶解混均，即2.5mg/ml；取0.1ml受试药溶液加生理盐水至3.57ml，即70μg/ml(备用，临用前配制)。

3、取大鼠20只，分为10组：空白对照组、阳性对照组和8个多肽试验组。给药前先眼眶采血，皮下注射上述配制的受试药物1ml·kg^-1，空白对照组皮下注射等体积的生理盐水，随即腹腔注射20％葡萄糖3.5ml·kg^-1。分别于给药后10min、20min、30min、45min、60min眼眶采血，将所采血3000转/分离心10min，取血清，终点法测血糖。

结果：如图一和图二所示，各试验多肽都有一定的降血糖作用，其中以SEQ NO 17多肽的作用最为明显。

实施例4：体内降血糖作用(禁食)

试验样品：

序列为SEQ NO 17：HGEGTFTSDLSSYLEGQAAKLFIEWLVKGR-NH₂，

GLP-1(7-36)为阳性对照：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH2

试验方法：

取大鼠24只，均分3组：空白对照组、试验组和阳性对照组，禁食不禁水16小时，给药前先眼眶采血，皮下注射上述配制的受试药物1ml·kg^-1，对照组皮下注射等体积的生理盐水，随即腹腔注射20％葡萄糖3.5ml·kg^-1。分别于给药后10min、20min、30min、45min、60min眼眶采血，将所采血3000转/分离心10min，取血清，终点法测血糖。

结果：在腹腔注射葡萄糖后，相对于空白试验组，阳性对照和样品实验组都能明显的降低大鼠体内的血糖浓度；样品组与阳性对照组在降血糖的作用的效果相当，而且结果中还能反映出样品在大鼠的体内半衰期相对阳性对照略长。

实施例5：体内促胰岛素分泌作用(禁食)

实施例4所述血糖测定的方法获得上清血清，再采用放免的方法测定血清中的胰岛素含量。

结果：胰岛素在体内产生的过程比较复杂，同时受到血糖浓度，胰岛细胞和药物等方面的影响，但是在实验的前期(10min)，阳性对照和样品实验组都出现了胰岛素的高水平的分泌，分别达到92.13μU/ml和84.15μU/ml，而同样条件下，空白试验组胰岛素的分泌为67.13μU/ml。结果显示样品组能促进大鼠体内胰岛素的分泌。

实施例6：体内降血糖作用

操作如实施例4，只是实验前实验动物不需要禁食，直接眼眶取血。实验中，样品组和阳性对照实验组相对空白试验组均能降低体内的血糖浓度；样品组在30min到45分钟内，血糖浓度几乎回复到了给药前的水平，揭示在此试验过程中比阳性对照组更具有稳定性和长效性。

实施例7：体内促胰岛素分泌作用

实施例6所述血糖测定的方法获得上清血清，再采用放免的方法测定血清中的胰岛素含量。实验中，样品组的血液中的胰岛素水平明显高于空白对照组，特别是在10min的时候，两个组别的胰岛素水平相差达到81μU/ml；在注射的30分钟内，样品组血液中的胰岛素浓度相对于空白试验组都维持较高的水平。实验揭示样品能有效地促进体内胰岛素的产生。

序列表

<110>珠海联邦制药股份有限公司

<120>一种新型降血糖多肽及其应用

<160>1

<210>1

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：降血糖多肽

<220>

<221>(2)

<223>Xaa＝Ala或Gly或Val

<220>

<221>(10)

<223>Xaa＝Val或Leu或Ala

<220>

<221>(21)

<223>Xaa＝Leu或Ser

<220>

<221>(24)

<223>Xaa＝Glu或Asn

<400>1

His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Val Lys Gly Arg

20 25 30

Claims

1、一种新型降血糖多肽，其具有如下结构：

....，....1....，....2....，....3

HX₁EGTFTSDX₂SSYLEGQAAKX₃FIX₄WLVKGR

X₁：Ala，Gly或Val

X₂：Val，Leu或Ala

X₃：Leu或Ser

X₄：Glu或Asn。

2、如权利要求1所述的新型降血糖多肽，其特征在于：其中所述的X₁为Ala。

3、如权利要求1所述的新型降血糖多肽，其特征在于：其中所述的X₁为Gly。

4、如权利要求1所述的新型降血糖多肽，其特征在于：其中所述的X₁为Val。

5、如权利要求2所述的新型降血糖多肽，其特征在于：其中所述X₂是Val或Leu。

6、如权利要求3所述的新型降血糖多肽，其特征在于：其中所述X₂是Leu。

7、如权利要求4所述的新型降血糖多肽，其特征在于：其中所述X₂是Ala。

8、如权利要求1-7任一条所述的新型降血糖多肽，其特征在于：其肽链被进行延长修饰。

9、如权利要求1-7任一条所述的新型降血糖多肽，其特征在于：该多肽采用PEG，脂肪酸长链及其它亲脂性分子进行氨基酸修饰。

10、一种药物组合，其含有如权利要求1-9任一项所述的新型降血糖多肽。

11、如权利要求10所述的药物组合物，其还含有药学上可接受的稀释剂，赋形剂或载体。

12、权利要求1-9任一项所述的新型降血糖多肽用于制备治疗糖尿病的药物。

13、如权利要求12所述的糖尿病为II型糖尿。