CN107981327A - 一种兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂及其制备方法 - Google Patents
一种兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂及其制备方法。在虫草、灵芝、酵母、曲霉等属的药食用真菌发酵过程中，添加黄精、枸杞、桂圆、红枣、文蛤提取物，发酵结束后经均质、喷雾干燥后制得发酵型复方制剂，可进一步开发咀嚼片、颗粒剂、胶囊剂等产品形式。该复方制剂气味香甜、口感好、活性高，兼具良好的缓解疲劳与免疫调节效果。
Description
技术领域
本发明属于保健食品领域，具体涉及一种兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂及其制备方法。
背景技术
随着生活方式的改变和发展，疲劳与免疫失调成为现代人群众普遍存在的情况。紧张的生活节奏以及较大的生活压力往往带来不同程度的生理性疲劳，如短期睡眠缺乏、运动强度及压力过大等导致的。但若生理性疲劳发生未及时消除，往往导致过度劳累，进而引发机体内分泌变紊乱，免疫功能紊乱，甚至出现体内器质性病变，威胁人类身心健康。此外，免疫系统在人体健康维护方面发挥举足轻重的作用。大量科研数据表明，癌症、过敏、肿瘤等一系列疾病的发生、发展、逆转均与机体自身的免疫功能息息相关。
不仅如此，随着人们对健康生活的需求逐渐增加，营养补充与干预成为缓解疲劳、免疫功能调节，以及防止早衰等的有效策略。中草药中含有许多功效成分，例如多糖、有机酸类、蛋白质等，但因为植物存在细胞壁，所以难以释放出其细胞内部的有效成分，造成药效发挥慢，使用剂量大等问题。利用微生物发酵作用，可以部分解决这些问题。早在古代，我国就已经开始将微生物应用于中药炮制以达到提高药效、改变药性和降低毒性等目的。但是，传统的中药发酵仅限于自然界的菌种，存在菌种不纯等现象。利用现代生物技术理论与技术，可以进一步有目的、以功能为导向的选用特定微生物菌种。在营养基质中加入一种或多种具有活性成分的药食原料，通过不同菌种的接种，如药用真菌，使发酵的作用从原来由营养基质单向供给微生物生长代谢，转换为应用菌种内在酶系使药性基质的成分分解、变化、并产生新的成分。借由双相发酵机制，形成活性更高、效果更好的复合活性物质。
面向社会中对缓解疲劳、免疫调节健康制品的普遍需求，可借助中医药研究基础进行复方产品的开发。我国传统中药中蕴含多种丰富的具有抗疲劳、免疫调节、抗氧化等功能的原料。如黄精、枸杞、红枣、桂圆等。黄精是中医传统补中益气药，《本草纲目》认为其“得坤土之精，为补养中宫之胜品”，属药食两用中药，服用安全。枸杞味甘质润，长于补肾、滋阴、益精、养血、益气等功效。现代科学研究证实了枸杞可以增强免疫功能、防治癌症、抗衰老、降低胆固醇，对人体健康起极其有益的作用。龙眼性温味甘，益心脾，补气血，具有良好有滋养补益作用。这些原料的互相搭配同样具有免疫调节、缓解体力疲劳等优越的功效，在古方中即有使用的记载。此外，海洋来源的软体动物，如文蛤，牡蛎等，其富含蛋白、多糖、氨基酸等活性物质，具有良好的缓解疲劳、增强免疫的效果。为现代健康制品的开发提供了依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂及其制备方法。
本发明所采取的技术方案包括如下步骤：(1)药食用真菌种子液制备；(2)将制备得到的药食用真菌种子液接种至发酵液中发酵；(3)在药食用真菌发酵一定时间后，加入质量分数0.5-20％的黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物，继续发酵12-72h；(4)向药食用真菌发酵液中加入质量分数1-20％的文蛤提取物，继续发酵2-8h，得到复方原浆；(5)将经过步骤(4)处理后的原浆均质后，喷雾干燥得到发酵型复方制剂粉末。
作为本发明进一步的方案：药食用真菌包括但不限于蛹虫草、蝉花、蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被孢霉、灵芝、黑曲霉、米曲霉、啤酒酵母、酿酒酵母中的一种或几种。
本发明中各药食用真菌种子液的制备方法如下：
(1)蛹虫草、蝉花、蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被孢霉等虫草菌种子液的制备：将保存的各虫草菌种在斜面培养基中活化，25-30℃条件下培养5-9天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的虫草斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，即得到各类虫草菌种子液。
(2)灵芝种子液的制备：将保存的灵芝菌种在斜面培养基中活化，25-30℃条件下培养5-9天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的灵芝斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，即得到灵芝种子液。
(3)啤酒酵母、酿酒酵母种子液的制备：将保存的酵母菌种在斜面培养基中活化，25-30℃条件下培养2-4天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的酵母斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，即得到啤酒酵母或酿酒酵母种子液。
(4)黑曲霉、米由霉种子液的制备：将保存的黑曲霉或米由霉菌种在斜面培养基中活化，30℃条件下培养4-6天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的黑曲霉或米由霉斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，即为黑曲霉或米曲霉种子液。
本发明中使用的各药食用真菌培养基如下：
(1)各类虫草菌(蛹虫草、蝉花、蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被孢霉)种子斜面培养基配方为，葡萄糖3％，蛋白胨1％，磷酸二氢钾0.2％，无水硫酸镁0.1％，维生素B1 0.01％，自然pH，121℃高压蒸汽灭菌20min。发酵培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基；
(2)灵芝种子斜面培养基包括葡萄糖5％，蛋白胨1％，酵母膏1％，无水硫酸镁0.075％，磷酸二氢钾0.2％，自然pH，121℃高压蒸汽灭菌20min。发酵培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基；
(3)啤酒酵母种子斜面培养基为麦汁培养基，麦芽经粉碎、糖化后，过滤后煮沸去除沉淀，冷却后得到12-15波美度麦汁，pH为5.1-5.5，121℃高压蒸汽灭菌20min。发酵培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基；
(4)酿酒酵母种子斜面培养基为YPD培养基，葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母粉1％，琼脂2％，蒸馏水配制，自然pH值，121℃高压蒸汽灭菌20min。发酵培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基；
(5)黑曲霉、米曲霉种子斜面培养基为马铃薯培养基，马铃薯200g，加水500mL后煮沸30min，用纱布过滤取汁液，加入葡萄糖20g，琼脂15～20克，加水至1000mL，自然pH，121℃高压蒸汽灭菌20min。发酵培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基。
作为本发明进一步的方案：将制备得到的药食用真菌种子液接种至发酵液中发酵的具体方法为：
(1)灵芝、蛹虫草、蝉花、蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被孢霉的发酵：将制得的孢子悬液以1×107个/mL的接种量截至发酵培养基中，发酵培养2-8天；
(2)啤酒酵母、酿酒酵母：将制得的孢子悬液以1×107个/mL的接种量截至发酵培养基中，发酵培养0.5-4天；
(3)黑曲霉、米由霉发酵：将制得的孢子悬液以1×107个/mL的接种量截至发酵培养基中，发酵培养2-6天；
作为本发明进一步的方案：黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物制备方法具体为，四种原料配比不限，可分开提取，也可任意组合混合提取。新鲜物料先经粉碎、均质，干性原料在粉碎机中打碎，过40目筛。按照料液比1:3-1:10加入去离子水，60-100℃重复提取2次，合并上清液，喷雾干燥，得到提取物。
作为本发明进一步的方案：文蛤提取物为采用酶法辅助提取所得。文蛤软体通过加入水及蛋白酶得到文蛤酶解液，灭酶处理后离心取上清，喷雾干燥得到文蛤提取物。蛋白酶包括但不限于胰蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或几种，用量100-1000U/mL。
本发明的有益效果是：本发明的发酵型复方制剂，无毒副作用，气味香，味微甜，口感好；富含人体易吸收的蛋白、多糖、氨基酸、维生素及微量元素；活性成分含量高，具有良好的缓解疲劳以及免疫调节的作用。
具体实施方式
以下实施例用于更好的理解上述技术方案，但本发明的保护范围不限于下述实施例。
实施例1发酵型复方制剂的制备
一、发酵型复方制剂组合1
1、蝉花种子液的制备：将保存的蝉花菌种在斜面培养基中活化，30℃条件下培养5天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的蝉花斜面孢子用无菌水清洗，倒入事先经过灭菌的生理盐水中，其中预先装有数十粒玻璃珠，振荡充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，得到蝉花种子液。
2、黄精提取物的制备：黄精干物质在粉碎机中打碎，过40目筛，按照料液比1:10加入去离子水，100℃重复提取2次，合并上清液，喷雾干燥，得到黄精提取物。
3、枸杞、桂圆、红枣提取物的制备：三类原料的鲜果去壳、去核后按照1:1:1粉碎打浆混合，按照料液比1:3加入去离子水，60℃重复提取2次，合并上清液，喷雾干燥，得到枸杞、桂圆、红枣提取物。
3、文蛤提取物的制备：文蛤软体匀浆后按料液比1:2加入水混匀，按照100U/mL加入酸性蛋白酶40℃酶解5h得到文蛤酶解液，灭酶处理后离心取上清，喷雾干燥得到文蛤提取物。
4、蝉花的发酵：将制得的蝉花孢子悬液以1×107个/mL的接种量接种至发酵培养基中，发酵培养6天后，依次加入10％的黄精提取物和10％的枸杞、桂圆、红枣提取物，继续发酵8天，再加入20％的文蛤提取物，继续发酵8h。发酵结束后，均质处理，喷雾干燥得到复方制剂组合1。
二、发酵型复方制剂组合2
1、灵芝种子液的制备：将保存的灵芝菌种在斜面培养基中活化，30℃条件下培养6天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的灵芝斜面孢子用无菌水清洗，倒入事先经过灭菌的生理盐水中，其中预先装有数十粒玻璃珠，振荡充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，得到灵芝种子液。
2、黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物的制备：四种原料干物质按照2:2:1:1比例混合粉碎，过40目筛并振荡混合，按照料液比1:10加入去离子水，100℃重复提取2次，合并上清液，喷雾干燥，得到黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物。
3、文蛤提取物的制备：文蛤软体匀浆后按料液比1:4加入水混匀，按照200U/mL加入复合蛋白酶45℃酶解4h得到文蛤酶解液，灭酶处理后离心取上清，喷雾干燥得到文蛤提取物。
4、灵芝的发酵：将制得的灵芝孢子悬液以1×107个/mL的接种量接种至发酵培养基中，发酵培养7天后，加入10％的黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物，继续发酵5天，再加入10％的文蛤提取物，继续发酵4h。发酵结束后，均质处理，喷雾干燥得到复方制剂组合2。
三、发酵型复方制剂组合2
1、啤酒酵母种子液的制备：将保存的啤酒酵母菌种在14波美度的麦汁斜面培养基中活化，28℃条件下培养2天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的啤酒酵母斜面孢子用无菌水清洗，倒入事先经过灭菌的生理盐水中，其中预先装有数十粒玻璃珠，振荡充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，得到啤酒酵母种子液。
2、黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物的制备：四种原料干物质按照1:1:1:2比例混合粉碎，过40目筛并振荡混合，按照料液比1:6加入去离子水，100℃重复提取2次，合并上清液，喷雾干燥，得到黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物。
3、文蛤提取的制备：文蛤软体匀浆后按料液比1:8加入水混匀，按照1000U/mL加入碱性蛋白酶38℃酶解6h得到文蛤酶解液，灭酶处理后离心取上清，喷雾干燥得到文蛤提取物。
4、啤酒酵母的发酵：将制得的啤酒酵母孢子悬液以1×107个/mL的接种量接种至发酵培养基中，发酵培养3天后，加入10％的黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物，继续发酵36h，再加入5％的文蛤提取物，继续发酵4h。发酵结束后，均质处理，喷雾干燥得到复方制剂组合3。
四、发酵型复方制剂组合4
1、米曲霉种子液的制备：将保存的米曲霉菌种在斜面培养基中活化，30℃条件下培养4天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的米曲霉斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，得到米曲霉种子液。
2、黄精、枸杞提取物的制备：黄精和枸杞干物质在粉碎机中打碎，过40目筛，按照料液比1:3加入去离子水，100℃重复提取2次，合并上清液，喷雾干燥，得到黄精、枸杞提取物。
3、桂圆、红枣提取物的制备：两类原料的鲜果去壳、去核后按照1:3粉碎打浆混合，按照料液比1:4加入去离子水，80℃重复提取2次，合并上清液，喷雾干燥，得到枸杞、桂圆、红枣提取物。
4、文蛤提取的制备：文蛤软体匀浆后按料液比1:6加入水混匀，按照500U/mL加入木瓜蛋白酶45℃酶解3h得到文蛤酶解液，灭酶处理后离心取上清，喷雾干燥得到文蛤提取物。
5、米曲霉的发酵：将制得的米曲霉孢子悬液以1×107个/mL的接种量接种至发酵培养基中，发酵培养4天后，加入2％的黄精、枸杞提取物和4％的桂圆、红枣提取物，继续发酵72h，再加入15％的文蛤提取物，继续发酵5h。发酵结束后，均质处理，喷雾干燥得到复方制剂组合4。
实施例2发酵型复方制剂缓解疲劳功能评价
以6周龄雄性ICR小鼠120只为测试对象，测试其用药前后负重游泳时间，血清尿素氮、血乳酸、肝糖原4项指标。
(1)以实施例1中发酵型复方制剂组合1、组合2、组合3、组合4为考察药物，按照剂量0.3g/(kg·d)剂量分别灌胃给药，给药体积20mL/kg。空白对照组灌以相同体积的生理盐水。指标测定如以下步骤：
1)负重游泳时间：每组各取6只小鼠，末次给药30min后，将尾根部负荷5％体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳，水深不少于30cm，水温25℃±1℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间。若受试样品组负责游泳时间明显长于对照组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。
2)血清尿素氮：每组各取6只小鼠，末次给药30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后采血(不加抗凝剂)，置4℃冰箱约30h，血凝固后离心，取血清备用。采用试剂盒测定血清尿素。若受试样品组血清尿素明显低于对照组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。
3)血乳酸测定：每组各取6只小鼠，末次给药30min后采血20μL，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。游泳后立即采血20μL,休息20min后再采血20μL。采用试剂盒测定血乳酸含量。以三个时间点血乳酸曲线下面积来判断，任一试验组的面积小于对照组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。
4)肝糖原测定：每组各取6只小鼠，末次给药后30min处死动物，解刨去肝脏，生理盐水漂洗后用滤纸吸干，存于-80℃冰箱备用。采用试剂盒测定肝糖原含量。若受试样品组肝糖原含量明显高于对照组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。
实验结果如表1：
表1发酵型复方制剂缓解疲劳实验结果
(注：与空白对照组相比，*P<0.05,**P<0.01)
由表1数据可得，喂食本发明的4种发酵型复方制剂均可以显著延长小鼠负重游泳时间，降低运动后血液尿素氮水平，增加肝糖原水平，且在游泳0min、游泳10min、游泳后休息20min这三个时间点的乳酸曲线下面积与空白对照组相比显著降低，说明本发明复方制剂具有良好的缓解疲劳效果。
实施例3发酵型复方制剂的免疫调节功能评价
选用昆明小鼠60只，周龄为6～8周，体质量18～22g，雌雄各半。待小鼠适应性饲养3天后随机分为6组，分别为空白对照组、模型组、复方制剂组合1实验组、复方制剂组合2实验组、复方制剂组合3实验组、复方制剂组合4实验组，每组10只，雌雄各半。除空白对照组外，其余各组连续3天腹腔注射80mg/kg的环磷酰胺制备免疫抑制小鼠模型。空白对照组给予相应体积的生理盐水，各实验组剂量为0.3g/(kg·d)，每天给药一次，连续灌胃7天。
末次给药24h后采血，处死后立即分离出脾脏及胸腺，用预冷生理盐水漂洗干净，滤纸吸干水分，称质量，以脾脏或胸腺(mg)和体重(g)的比值表示脾脏或胸腺指数。同时用ELISA试剂盒测定血清中TNF-α含量。
实验结果如表2：
表2发酵型复方制剂的免疫调节实验结果
| 组别 | 胸腺指数(mg/g) | 脾脏指数(mg/g) | TNF-α(pg/m L) |
| 空白对照组 | 2.50±0.21 | 4.31±0.37 | 110.81±9.93 |
| 模型组 | 1.09±0.18## | 2.79±0.24## | 55.56±7.85## |
| 组合1 | 2.13±0.14** | 4.14±0.16** | 102.77±5.62** |
| 组合2 | 2.39±0.13** | 4.15±0.28** | 109.14±3.01** |
| 组合3 | 1.88±0.20* | 3.98±0.35** | 98.01±5.27** |
| 组合4 | 1.72±0.16* | 3.17±0.19** | 96.68±3.28** |
(注：与空白对照组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01)
由表2数据可得，与空白对照组相比，模型组小鼠的胸腺指数、脾脏指数以及细胞因子TNF-α均显著降低。当给予本发明发酵型复方制剂后，各实验组小鼠的胸腺指数、脾脏指数以及细胞因子TNF-α均有不同程度的提升。说明本发明发酵型复方制剂具有良好的免疫调节作用。
实施例4兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂咀嚼片的制备
将复方制剂组合1获得的发酵型复方制剂粉末，与预胶化淀粉、微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅放入搅拌机中搅拌均匀，加入5％-15％的食用酒精搅拌制成软料，放入颗粒机用20目筛制粒，将制得的颗粒进行烘干，待颗粒干燥后放入整理机整粒，根据200mg片重要求，用压片机进行压片并包装即得咀嚼片。
实施例5兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂胶囊剂的制备
采用胶囊填充机将复方制剂组合1获得的发酵型复方制剂粉末进行装填，包装并干燥贮藏。
Claims (8)
1.一种兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂的制备方法，其特征在于包含以下步骤：
(1)药食用真菌种子液制备；
(2)将制备得到的药食用真菌种子液接种至发酵液中发酵；
(3)在药食用真菌发酵一定时间后，加入质量分数0.5-20％的黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物，继续发酵12-72h；
(4)向药食用真菌发酵液中加入质量分数1-20％的文蛤提取物，继续发酵2-8h，得到复方原浆；
(5)将经过步骤(4)处理后的原浆均质后，喷雾干燥得到发酵型复方制剂粉末。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的药食用真菌包括但不限于蛹虫草、蝉花、蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被孢霉、灵芝、黑曲霉、米曲霉、啤酒酵母、酿酒酵母中的一种或几种，具体方法为：
(1)蛹虫草、蝉花、蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被孢霉等虫草菌种子液的制备：将保存的各虫草菌种在斜面培养基中活化，25-30℃条件下培养5-9天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的虫草斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，即得到各类虫草菌种子液；
(2)灵芝种子液的制备：将保存的灵芝菌种在斜面培养基中活化，25-30℃条件下培养5-9天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的灵芝斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，即得到灵芝种子液；
(3)啤酒酵母、酿酒酵母种子液的制备：将保存的酵母菌种在斜面培养基中活化，25-30℃条件下培养2-4天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的酵母斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，即得到啤酒酵母或酿酒酵母种子液；
(4)黑曲霉、米由霉种子液的制备：将保存的黑曲霉或米由霉菌种在斜面培养基中活化，30℃条件下培养4-6天后转接一次作为发酵用种子，将经斜面上制好的黑曲霉或米由霉斜面孢子用无菌生理盐水清洗与重悬，利用预先灭菌处理的数十粒玻璃珠充分打散孢子，制成1×108个/mL的孢子悬液，即为黑曲霉或米曲霉种子液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的方法(1)中各类虫草菌种子斜面培养基为葡萄糖3％，蛋白胨1％，磷酸二氢钾0.2％，无水硫酸镁0.1％，维生素B1 0.01％，自然pH，121℃高压蒸汽灭菌20min；发酵培养基配方为斜面培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基；所述的方法(2)中灵芝种子斜面培养基为葡萄糖5％，蛋白胨1％，酵母膏1％，无水硫酸镁0.075％，磷酸二氢钾0.2％，自然pH，121℃高压蒸汽灭菌20min；发酵培养基配方为斜面培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基；所述的方法(3)中啤酒酵母种子种子斜面培养基为麦汁培养基，麦芽经粉碎、糖化后，过滤后煮沸去除沉淀，冷却后得到12-15波美度麦汁，pH为5.1-5.5，121℃高压蒸汽灭菌20min；发酵培养基配方为斜面培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基；所述的方法(3)中酿酒酵母种子培养基为YPD培养基，葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母粉1％，琼脂2％，蒸馏水配制，自然pH值，121℃高压蒸汽灭菌20min；发酵培养基配方为斜面培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基；所述的方法(4)中种子斜面培养基为马铃薯培养基，马铃薯200g，加水500mL后煮沸30min，用纱布过滤取汁液，加入葡萄糖20g，琼脂15～20克，加水至1000mL，自然pH，121℃高压蒸汽灭菌20min；发酵培养基配方为斜面培养基配方中去掉琼脂，其他成分同斜面培养基。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中将制备得到的药食用真菌种子液接种至发酵液中发酵的具体方法为：
(1)灵芝、蛹虫草、蝉花、蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被孢霉的发酵：将制得的孢子悬液以1×107个/mL的接种量接种至发酵培养基中，发酵培养2-8天；
(2)啤酒酵母、酿酒酵母：将制得的孢子悬液以1×107个/mL的接种量接种至发酵培养基中，发酵培养0.5-4天；
(3)黑曲霉、米由霉发酵：将制得的孢子悬液以1×107个/mL的接种量接种至发酵培养基中，发酵培养2-6天。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的黄精、枸杞、桂圆、红枣提取物制备方法具体为，四种原料配比不限，可分开提取，也可任意组合混合提取；新鲜物料先经粉碎、均质，干性原料在粉碎机中打碎，过40目筛，按照料液比1:3-1:10加入去离子水，60-100℃重复提取2次，合并上清液，喷雾干燥，得到提取物。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的文蛤提取物为采用酶法辅助提取所得；具体为，文蛤软体匀浆后通过加入水及蛋白酶得到文蛤酶解液，灭酶处理后离心取上清，喷雾干燥得到文蛤提取物。
7.根据权利要求6所述，蛋白酶包括但不限于胰蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或几种，用量100-1000U/mL。
8.根据权利要求1所述一种兼具缓解疲劳与免疫调节作用的发酵型复方制剂及其制备方法，其特征在于，可制成包括但不限于咀嚼片、颗粒剂、混悬剂、胶囊剂等形式产品。
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