CN105188715B

CN105188715B - Mir-145的锁定核酸抑制剂及其用途

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Publication number: CN105188715B
Application number: CN201480015816.XA
Authority: CN
Inventors: A.G.塞托; E.V.罗伊; K.H.鲁宾逊; C.M.多尔比; T.G.赫林格; R.蒙哥马利
Original assignee: Meter La Gen Medical Treatment Limited-Liability Co
Current assignee: Meter La Gen Medical Treatment Limited-Liability Co
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-13
Publication date: 2018-12-25
Anticipated expiration: 2034-03-13
Also published as: EP2968396A4; CN105188715A; EP2968396A1; JP2016518820A; EP2968396B1; WO2014151835A1; CA2902623A1; JP6410791B2; US9752143B2; US20160010091A1

Abstract

本发明提供了具有作为miR‑145抑制剂的化学基序的寡核苷酸。可以使用寡核苷酸来治疗和预防状况，其通过抑制有此需要的受试者的细胞中的miR‑145的表达或活性进行。提供的方法包括在有此需要的受试者中治疗或预防肺动脉高血压、新血管内膜形成、再狭窄或高血压，其通过对受试者施用miR‑145表达或活性抑制剂进行。还公开了包含miR‑145抑制剂的药物组合物和试剂盒。

Description

MIR-145的锁定核酸抑制剂及其用途

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发明领域

一般而言，本发明涉及具有作为miR-145抑制剂的化学基序的寡核苷酸。在对受试者施用时，本发明的寡核苷酸可以具有效力、投递效率、靶物特异性、稳定性、和/或毒性的优点。寡核苷酸可以用于通过在抑制有此需要的受试者的细胞中的miR-145的表达或活性来治疗和预防状况。提供的方法包括通过对受试者施用miR-145表达或活性抑制剂在有此需要的受试者中治疗或预防肺动脉高血压、高血压、新血管内膜形成或再狭窄。

发明背景

微小RNA(miRNA)是一类小的，内源的且非编码的RNA，其能够通过靶向特定的信使RNA(mRNA)并诱导其降解或翻译阻止来负调节基因表达(Ambros,2004；Bartel,2009)。新近的研究已经将mRNA降解定义为miRNA:mRNA靶物的主要机械论效应(Guo等,2010)。几项新近的研究已经评估miRNA在血管炎症中及在血管病理学形成中的直接作用(Kartha andSubramanian,2010；Urbich等,2008)。

显示了miR-145在血管壁中丰富表达(Cheng等,2009)。在人染色体5(Lio等,2010)上及在小鼠染色体18上以编码miR-143和miR-145两者的长pri-miRNA转录miR-145，这受保守的SRF结合位点调节(Xin等,2009)。miR-145对血管壁的定位证明了与外膜成纤维细胞和内皮细胞相比平滑肌层中的较高表达(Cheng等,2009)。出于此原因，认为miR-145是一种平滑肌细胞表型标志物和调控物，能够经由其靶基因KLF-5及其下游信号传导分子心肌素(myocardin)调节平滑肌细胞(SMC)成熟和增殖及血管新生内膜损伤形成(Cheng等,2009；Elia等,2009)。

已经显示了TGF-β超家族内的激动剂经由Smad依赖性途径激活miR-143/145簇(Davis-Dusenbery等,2011；Long等,2011)。此外，对miR-145、miR-143和miR-143/145敲除(ko,-/-)小鼠的分析显示了大动脉和其它周围动脉的薄得显著的平滑肌层，其是由于通过破坏肌动蛋白细丝诱导的缩小的SMC大小所致(Elia等,2009)。这导致miR-145-/-小鼠中的中度系统性低血压和响应损伤的新血管内膜形成的缺乏(Xin等,2009)。此外，从单一和双重ko动物分离的血管平滑肌细胞(VSMC)显示了超增殖活性和较高的向血小板衍生的生长因子(PDGF)(一种用于VSMC的已知化学引诱物)迁移的能力(Elia等,2009；Xin等,2009)。此外，对miR-143(145)ko小鼠的血管系统的药理学分析揭示了对血管压力刺激物的减弱响应(Elia等,2009；Xin等,2009)。总之，这些发现显示了miR-145ko和miR-143/145双重ko小鼠中的VSMC的去分化表型。

还在从与对照相比在BMPR2基因中具有突变的肺动脉高血压(PAH)患者获得的肺组织和分离的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)中评估了miR-145的前体和成熟形式。所有PAH形式共同的主要组织病理学特征之一是表达平滑肌特异性α-肌动蛋白(SMA)的细胞在周围肺动脉中的积累。这包括新内膜中出现SMA阳性细胞和SMA阳性细胞对通常缺乏平滑肌的毛细血管前肺细动脉的延伸(Mandegar等,2004)。造成PA的此远端部分的肌化的细胞过程是不清楚的，但是这些观察提示了PASMC在形成PAH中的中心作用。

因而，miR-145(在血管重塑中具有作用)代表一种治疗靶物，即开发与异常平滑肌细胞增殖(诸如在新血管内膜形成、再狭窄(restensosis)、高血压、系统性高血压和PAH中)有关的状况的有效治疗。然而，靶向miR-145的基于反义的治疗剂的投递可以提出几种挑战。对miR-145的结合亲和力和特异性、细胞摄取的效率、和核酸酶抗性是基于寡核苷酸的治疗剂的投递和活性中的所有因素。例如，在将寡核苷酸导入完整细胞中时，它们通常受到核酸酶攻击和降解，导致活性的丧失。如此，有用的反义治疗剂应当对胞外和胞内核酸酶具有良好的抗性，以及能够穿过细胞膜。

如此，需要用于稳定且有效的基于寡核苷酸的miR-145抑制剂的改善的化学修饰。本发明满足此需要，并且还提供相关优点。

发明概述

本发明部分基于如下的发现：具有特定化学样式(pattern)或基序(motif)的靶向miR-145的寡核苷酸(诸如miR-145的反义物)在对受试者施用时具有增加的效力、投递效率、靶物特异性、稳定性、和/或改善的毒性概况(profile)。本文中提供了具有改善针对miR-145的反义物，或miR-145的antimiR(即antimiR-145)的投递、稳定性、效力、特异性和/或毒性概况的潜力的特定化学样式或基序。针对miR-145的反义物的化学样式或基序可以改善antimiR-145的投递、稳定性、效力、特异性和/或毒性概况，如此在治疗背景中有效靶向miR-145功能。如此，本发明提供了用于治疗多种与miR-145表达或活性有关的疾病(诸如与平滑肌组织有关的疾病或状况)的新治疗剂。

因而，本发明提供了包含与miR-145的种子区互补的序列的寡核苷酸，其中序列包含至少3个锁定核酸(LNA)，并且寡核苷酸包含至少一个非锁定核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸的序列包含至少4、5或6个LNA。

寡核苷酸与第二寡核苷酸相比可以具有升高的体内效力，所述第二寡核苷酸包含相同的序列和LNA组成而不同的LNA基序。在一些实施方案中，寡核苷酸与第二寡核苷酸相比具有升高的肺效力。

在一些实施方案中，寡核苷酸相对于盐水对照提高细胞中的miR-145靶基因的表达，并且表达的升高具有的p-值<0.05。在一些实施方案中，相对于盐水对照，寡核苷酸提高组织中的miR-145靶基因表达，并且表达升高具有的p-值<0.05。在其它实施方案中，相对于盐水对照，用寡核苷酸处理的细胞具有miR-145靶基因表达的大于1.0倍数变化，并且倍数变化具有的p-值<0.05。在一些实施方案中，相对于盐水对照，用寡核苷酸处理的组织具有miR-145靶基因表达的大于1.0倍数变化，并且倍数变化具有的p-值<0.05。表达的倍数变化可以是至少约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、或约1.5倍。miR-145靶基因可以是Klf4、Klf5、Lrrc71、Nedd4l、Igf1r、Sec1412、Megf6、Fmod、Ankrd12、Golga1、Gpbp1、Hist3h2a、Rapgef2、或Sned1。

寡核苷酸可以包含在5’端、3’端、或5’和3’端两者的LNA。在一些实施方案中，寡核苷酸包含不超过3个连续的LNA。

在一些实施方案中，寡核苷酸包含16聚体，其中16聚体由16个核苷酸组成。16聚体可以包含与miR-145的种子区互补的序列。在一些实施方案中，16聚体包含至少9个LNA。在一些实施方案中，16聚体从5’端至3’端具有16聚体的1、5、6、9、10、11、13、15、和16位；1、2、6、8、10、11、13、15、和16位；1、5、6、8、10、11、13、14、和16位；1、3、4、5、6、8、10、13、和16位；1、3、4、7、8、10、12、14、和16位；1、2、6、7、10、11、12、14、和16位；1、3、5、7、9、11、13、15、和16位；1、4、5、7、9、10、12、14、和16位；或1、5、6、8、10、11、13、15、和16位处的LNA。16聚体可以与miR-145的核苷酸序列基本上互补。在一些实施方案中，16聚体与miR-145完全互补。

寡核苷酸可以包含至少一个非锁定核苷酸，其是2’脱氧基、2’O-烷基或2’卤素。在一些实施方案中，所有非锁定核苷酸是2’脱氧基。寡核苷酸还可以包含至少一个具有2’至4’亚甲基桥的LNA。在一些实施方案中，寡核苷酸具有5’帽结构、3’帽结构、或5’和3’帽结构。

寡核苷酸还可以包含一个或多个硫代磷酸酯连接。在一个实施方案中，寡核苷酸是完全硫代磷酸酯连接的。在又一些实施方案中，寡核苷酸具有1至3个磷酸酯连接。在一些实施方案中，寡核苷酸包含悬垂的亲脂基团。寡核苷酸的长度可以是约15至50个核苷酸。

本发明的另一个方面是药物组合物，其包含有效量的本文中描述的寡核苷酸或其药学可接受盐，以及药学可接受载体或稀释剂。药学可接受载体可以包含胶体分散系统、大分子复合物、纳米胶囊、纳米颗粒、微球、珠、水包油乳剂、胶束、混合胶束或脂质体。在一些实施方案中，药学可接受载体或稀释剂基本上由盐水组成。

在另一个方面，本发明提供了用于使用本文中公开的寡核苷酸的方法。在一个实施方案中，提供了用于降低或抑制细胞中的miR-145的活性的方法，其包括使细胞与本文中公开的寡核苷酸接触。在一些实施方案中，细胞是平滑肌细胞。在又一个实施方案中，细胞是肺或心脏细胞。还提供了用于抑制平滑肌细胞增殖的方法，其包括使平滑肌细胞与本文中公开的寡核苷酸接触。细胞可以是哺乳动物细胞。细胞可以是体内或离体的。

本发明还提供了用于预防或治疗受试者中的肺动脉高血压(PAH)的方法，其包括对受试者施用包含本文中公开的寡核苷酸的药物组合物。PAH可以是特发性肺动脉高血压(PAH)、遗传性或家族性PAH、或继发性肺高血压。继发性肺高血压可以来自肺栓子、肺气肿、肺纤维化、或先天性心脏病。受试者可以具有编码骨形态发生蛋白2型受体的基因中的突变。在一些实施方案中，受试者诊断有或有风险形成肺高血压或肺动脉高血压(PAH)。受试者可以是哺乳动物，诸如人。

本发明还提供了用于抑制或治疗受试者中的再狭窄或新血管内膜形成的方法，其包括对受试者施用包含本文中公开的寡核苷酸的药物组合物。本文中还提供了用于治疗或预防受试者中的高血压的方法，其包括对所述受试者施用包含本文中公开的寡核苷酸的药物组合物。在一些实施方案中，高血压是系统性高血压。受试者可以是哺乳动物，诸如人。

可以经由各种路径(包括皮下、静脉内、动脉内、鼻、口服或经由肺路径(例如经由通过鼻或口的吸入))对受试者施用药物组合物。在一些实施方案中，通过胃肠外施用或者通过对心脏组织直接注射施用药物组合物，诸如用于抑制、预防或治疗新血管内膜形成或再狭窄。在其它实施方案中，通过胃肠外施用或者通过对肺组织直接注射施用药物组合物，诸如用于治疗或预防PAH。在一个实施方案中，通过经由肺投递装置的吸入路径施用药物组合物。在此类实施方案中，药物组合物配制为干粉末或液体气溶胶。在一些实施方案中，通过胃肠外施用来施用药物组合物以治疗或预防高血压。

本发明的另一个方面是试剂盒，其包含如本文中描述的寡核苷酸和施用装置。在一个实施方案中，试剂盒用于治疗或预防肺动脉高血压。施用装置可以设计用于肺投递，诸如吸入器、喷雾器、吹入器、点滴器、和气雾器。在其它实施方案中，施用装置可以设计用于静脉内或动脉内投递，诸如导管。任选地，可以配制药物组合物以在施用装置中贮存。试剂盒可以进一步包含用于对受试者(例如人)施用药物组合物，诸如以治疗或预防PAH，抑制或治疗再狭窄或新血管内膜形成，或治疗或预防高血压的用法说明。

附图简述

图1：给49至52天龄的Sprague-Dawley大鼠注射25mg/kg皮下剂量的来自表1的antimiR-145化合物。在注射后48小时收集组织。通过总的肺RNA中的实时PCR测量(A)Klf4、(B)Klf5、(C)Lrrc71、(D)Nedd4l、(E)Igf1r、(F)Sec1412、(G)Megf6、(H)Fmod、(I)Ankrd12、(J)Golga1、(K)Gpbp1、(L)Hist3h2a、(M)Rapgef2、和(N)Sned1的指定mRNA水平。结果以相对于经盐水处理的动物的倍数变化值显示。

图2：雷达图(Radar plot)，代表9种miR-145基因靶物及其相对于盐水的去阻抑(derepression)倍数变化。M-11318显示了显示的所有9种基因的最大面积，该面积代表积累倍数变化值。M-11319是第二大的面积。以黑线显示的对照寡核苷酸M-10591与活性化合物相比具有更小的靶物去阻抑活性。

图3：用微阵列序型分析(profiling)对经M-11318处理的肺总RNA和经盐水处理的肺总RNA进行全基因组序型分析。在比较经M-11318处理的肺总RNA与经盐水处理的总RNA时，含有miR-145种子的基因在上调基因标签(gene signature)中富集(对于差异表达，p-值<0.01)。使用超几何分布函数计算富集的p-值。此结果指示M-11318引发对miR-145特异性的基因靶物去阻抑。

图4：给49至52天龄的Sprague-Dawley大鼠注射5、10、或25mg/kg皮下剂量的M-11318。在注射后48小时收集组织。通过在总肺RNA中的实时PCR测量指定的mRNA。结果以相对于经盐水处理的动物的倍数变化值显示。实时PCR结果提示了KLF5靶物去阻抑对M-11318处理是剂量响应的。

图5：给49至52天龄的Sprague-Dawley大鼠注射5、10、或25mg/kg皮下剂量的M-11318或M-11319。在注射后48小时收集组织。通过在总肺RNA中的实时PCR测量指定的mRNA。结果以相对于经盐水处理的动物的倍数变化值显示。实时PCR结果提示了Nedd4l靶物去阻抑对M-11318和M-11319处理是剂量响应的。

图6：(A)将16周龄时的自发性高血压(SHR)大鼠经受每周四次25mg/kg皮下剂量的antimiR。在18周时，在饮用水中施用L-NG-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)(50mg/L)，任意给予2周以在脉搏波速度(PWV)测量中创建治疗窗(therapeutic window)。在研究结束时，此时大鼠为20周龄，测量末端脉搏波速度、beta指数、和血压。研究中包括培哚普利(Perindopril)(一种ACE抑制剂)作为一种用于高血压的护理标准的基准(benchmark)。antimiR-145(M-10934)显示了脉搏波速度(B)、beta指数(C)、和均值系统压力(D)的统计学显著降低。重要地，两种其它对照antimiR(对照1和对照2)用此剂量和方案没有显示相似的益处，由此显示此治疗效果的microRNA特异性。(B-D)。这些结果共同证明了miR-145抑制在高血压的大鼠SHR/L-NAME中具有治疗益处。antimiR-145降低系统性血压和动脉硬化的指数。

发明详述

本发明部分基于如下的发现：靶向miR-145的寡核苷酸的特定化学样式或基序在对受试者施用时可以改善寡核苷酸的效力、投递效率、靶物特异性、稳定性、和/或毒性。在一些实施方案中，寡核苷酸能够以特异性方式抑制miR-145的表达或丰度。具有特定化学样式或基序的寡核苷酸包含与miR-145互补(诸如与miR-145的种子区互补)的序列。寡核苷酸可以是miR-145抑制剂，或antimiR-145。

miR-145在鼠染色体18和人染色体5上的基因间区中与miR-143一起定位成簇。miR-145和miR-143(它们彼此没有同源性)以单一转录物共转录。miR-145的pre-miRNA序列被加工成成熟序列和星号(star)(即次要)序列。星号序列是从茎环结构的另一条臂加工的。下文给出了小鼠和人miR-145的pre-miRNA(例如茎-环结构)、成熟、和星号序列：

人成熟miR-145(SEQ ID NO:1)

5’-GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU-3’

人miR-145*(SEQ ID NO:2)

5’-GGAUUCCUGGAAAUACUGUUCU-3’

人pre-miR-145(SEQ ID NO:3)

5’-CACCUUGUCCUCACGGUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCUUAGAUGCUAAGAUGGGGAUUCCUGGAAAUACUGUUCUUGAGGUCAUGGUU-3’小鼠成熟miR-145(SEQ ID NO:4)

5’-GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU-3’

小鼠miR-145*(SEQ ID NO:5)

5’-AUUCCUGGAAAUACUGUUCUUG-3’

小鼠pre-miR-145(SEQ ID NO:6)

5’-CUCACGGUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCUUGGAUGCUAAGAUGGGGAUUCCUGGAAAUACUGUUCUUGAG-3’

上述序列可以是核糖核酸序列或脱氧核糖序列或两种的组合(即包含核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸两者的核酸)。应当理解，包含本文中描述的任何一种序列的核酸会具有替换尿苷碱基的胸苷碱基(对于DNA序列)和替换胸苷碱基的尿苷碱基(对于RNA序列)。

包含与miR-145互补的序列且具有特定化学修饰或基线的寡核苷酸与具有相同核苷酸序列但不同化学样式或基序的寡核苷酸相比可以具有升高的体内效力。例如，第一和第二寡核苷酸各具有靶向miR-145的相同核苷酸序列，包括与miR-145的种子区互补的序列。第一寡核苷酸具有与第二寡核苷酸不同的化学基序或样式。第一和第二寡核苷酸两者能够降低miR-145的表达或丰度。然而，具有第一化学基序的第一寡核苷酸与具有不同化学基序的第二寡核苷酸具有更高的体内效力，如通过miR-145靶物的去阻抑量测量的。miR-145靶物可以是Klf4、Klf5、Lrrc71、Nedd4l、Igf1r、Sec1412、Megf6、Fmod、Ankrd12、Golga1、Gpbp1、Hist3h2a、Rapgef2、或Sned1。

在一些实施方案中，相对于盐水对照，寡核苷酸提高细胞或组织中的miR-145靶基因的表达，并且表达升高具有的p-值<0.05。在一些实施方案中，表达升高具有的p-值<0.01。在其它实施方案中，相对于盐水对照，用寡核苷酸处理的细胞或组织具有miR-145靶基因的表达的大于1.0倍变化，并且倍数变化具有的p-值<0.05。在一些实施方案中，倍数变化具有的p-值<0.01。表达的倍数变化可以是至少约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、或约1.5倍。miR-145靶基因可以是Klf4、Klf5、Lrrc71、Nedd4l、Igf1r、Sec1412、Megf6、Fmod、Ankrd12、Golga1、Gpbp1、Hist3h2a、Rapgef2、或Sned1。

可以在体外和/或体内测定寡核苷酸在降低miR-145的表达或丰度中的活性。例如，在体外测定对miR-145活性的抑制时，可以使用双重萤光素酶测定法测定活性。双重萤光素酶测定法(如以商品化产品PsiCHECK^TM(Promega)例示)牵涉可检测蛋白质(例如花虫萤光素酶)的基因的3’UTR中放置miR识别位点。与miR-145共表达构建体，使得可以通过信号变化测定抑制剂活性。可以在同一质粒上包含编码可检测蛋白质(例如萤火虫萤光素酶)的第二种基因，并且测定信号比率作为候选寡核苷酸的antimiR-145活性的指示。寡核苷酸在约50nM或更小，或在其它实施方案中，约40nM或更小、约20nM或更小、或约10nM或更小的浓度时显著抑制此类活性，如在双重萤光素酶测定法中测定的。例如，寡核苷酸可以具有约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、或约20nM或更小的抑制miR-145活性的IC50，如在双重萤光素酶测定法中测定的。

或者/另外，可以在合适的小鼠或大鼠模型中测定寡核苷酸在降低miR-145的表达或丰度中的活性，其中is observed在寡核苷酸剂量，诸如约50mg/kg或更小，约25mg/kg或更小，约10mg/kg或更小或约5mg/kg或更小的剂量时观察到对miR-145表达的抑制(例如达至少约50％)。在一些实施方案中，在动物模型中测定寡核苷酸的活性，诸如记载于WO2008/016924，其描述在此通过提及收录。例如，寡核苷酸可以展现出对miR-145的至少50％抑制，诸如在约50mg/kg或更小，约25mg/kg或更小，约10mg/kg或更小或约5mg/kg或更小的剂量。在此类实施方案中，可以对小鼠静脉内或皮下给药寡核苷酸，并且可以在盐水中配制寡核苷酸。

也可以在合适的小鼠或大鼠模型中测定寡核苷酸的体内效力。寡核苷酸可以展现出至少约50％miR-145靶物去阻抑，诸如在50mg/kg或更小，25mg/kg或更小，10mg/kg或更小或5mg/kg或更小的剂量。在一些实施方案中，也可以在合适的小鼠或大鼠模型中测定相对于盐水对照的细胞或组织中miR-145靶基因的升高的表达或倍数变化。寡核苷酸可以展现出miR-145靶物表达的至少约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、或约1.5倍增加，诸如在50mg/kg或更小，25mg/kg或更小，10mg/kg或更小或5mg/kg或更小的剂量。细胞或组织中的miR-145靶物的表达增加或倍数变化的p-值可以是<0.05或<0.01。miR-145靶物可以是Klf4、Klf5、Lrrc71、Nedd4l、Igf1r、Sec1412、Megf6、Fmod、Ankrd12、Golga1、Gpbp1、Hist3h2a、Rapgef2、或Sned1。

在此类实施方案中，可以对小鼠静脉内或皮下给药寡核苷酸，并且可以在盐水中配制寡核苷酸。具有特定LNA/DNA样式的寡核苷酸与具有相同核苷酸序列但不同LNA/DNA样式的寡核苷酸相比在特定组织(诸如肺)中可以具有升高的体内效力。在一些实施方案中，相对于盐水对照，具有特定LNA/DNA样式的寡核苷酸提高细胞或组织中的miR-145靶基因的表达。在又一些实施方案中，相对于用盐水对照处理的细胞，用具有特定LNA/DNA样式的寡核苷酸处理的细胞具有miR-145靶基因表达的大于1.0倍变化。

在这些或其它实施方案中，本发明的寡核苷酸在施用后可以是稳定的，在施用后在循环和/或靶器官中可检出至少3周、至少4周、至少5周、或至少6周或更多。如此，本发明的寡核苷酸可以提供不太频繁的施用、较低的剂量、和/或治疗效果的较长持续时间。

一般地，寡核苷酸的长度及锁定核苷酸的数目和位置使得寡核苷酸降低miR-145表达或丰度。在一些实施方案中，寡核苷酸的长度及锁定核苷酸的数目和位置使得寡核苷酸在体外萤光素酶测定法中在约50nM或更小的寡核苷酸浓度，或者在合适的小鼠或大鼠模型(各如描述)中在约50mg/kg或更小，或约25mg/kg或更小的剂量降低miR-145表达或丰度。在一些实施方案中，寡核苷酸的长度及锁定核苷酸的数目和位置使得寡核苷酸在合适的小鼠或大鼠模型(诸如本文中描述)中在约50mg/kg或更小，或约25mg/kg或更小的剂量时降低miR-145活性，如通过靶物去阻抑测定的。

本发明的寡核苷酸含有一个或多个锁定核酸(LNA)残基，或“锁定核苷酸”。例如LNA记载于美国专利No.6,268,490、6,316,198、6,403,566、6,770,748、6,998,484、6,670,461、和7,034,133，在此通过提及将它们全部完整收录。LNA是经修饰的核苷酸或核糖核苷酸，其在核糖糖模块的2’和4’碳之间含有的额外桥，从而产生“锁定”构象，和/或双环结构。在一个实施方案中，寡核苷酸含有一个或多个具有以下述结构A显示的结构的LNA。或者或另外，寡核苷酸可以含有一个或多个具有以下述结构B显示的结构的LNA。或者或另外，寡核苷酸含有一个或多个具有以下述结构C显示的结构的LNA。

可以在本发明寡核苷酸中掺入的其它合适的锁定核苷酸包括那些记载于美国专利No.6,403,566和6,833,361(在此通过提及将它们两者完整收录)的。

在例示性的实施方案中，例如锁定核苷酸具有2’至4’的亚甲基桥，如结构A中所示。在其它实施方式中，桥包含亚甲基或乙烯基基团，其可以是取代的，并且其可以或不可以具有位于2’位的醚连接。

寡核苷酸可以包含、组成基本上为(consist essentially of)、或组成为：针对miR-145的反义序列。在一个实施方案中，寡核苷酸包含针对miR-145的反义序列。例如，寡核苷酸可以包含与成熟miR-145序列至少部分互补，例如与人成熟miR-145序列至少约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％互补的序列。在一个实施方案中，反义寡核苷酸包含与成熟miR-145序列100％互补的序列。

在某些实施方案中，寡核苷酸包含与miR-145的核苷酸序列完全互补的核苷酸序列。在具体的实施方案中，寡核苷酸包含，组成基本上为，或组成为与miR-145互补的核苷酸序列。在此背景中，“组成基本上为”包括在5’和3’端的任一或两者上的核苷酸(例如一个或两个)的任选添加，只要额外的核苷酸在双重萤光素酶测定法或小鼠模型中基本上不影响(如通过不超过约20％的IC50增加限定)寡核苷酸对靶miRNA活性的抑制。

寡核苷酸可以包含，组成基本上为，或组成为包含与miR-145种子区互补的序列的针对miR-145的反义序列。种子区是跨越碱基2-8的miRNA的5’部分，即对于人成熟miR-145为5’-UCCAGUUU-3’(SEQ ID NO:7)。与miR-145种子区互补的序列可以与miR-145种子区基本上或完全互补，其中基本上互补的序列可以具有1至4个错配(例如1或2个错配)。

寡核苷酸一般具有设计为靶向成熟miR-145的核苷酸序列。在这些或其它实施方案中，寡核苷酸还或备选可以设计为靶向miR-145的pre-miRNA或pri-miRNA形式。在某些实施方案中，寡核苷酸可以设计为具有相对于完全互补的(成熟的)miR-145序列含有1至5个(例如1、2、3、或4个)错配的序列。在某些实施方案中，例如，此类反义序列可以掺入含有茎和环部分的shRNA或其它RNA结构中。

寡核苷酸的长度可以是约8至约20个核苷酸，长度约15至约50个核苷酸，长度约18至约50个核苷酸，长度约10至约18个核苷酸，或长度约11至约16个核苷酸。在一些实施方案中的寡核苷酸的长度是约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、或约18个核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸的长度是至少约16个核苷酸。

一般地，LNA的数目和位置使得寡核苷酸降低miR-145活性。在一个实施方案中，LNA的位置和数目使得寡核苷酸与具有不同LNA数目和/或位置的寡核苷酸相比具有升高的体内效力。在一些实施方案中，LNA的数目和位置使得寡核苷酸相对于盐水对照提高细胞或组织中的miR-145靶基因的表达。在又一些实施方案中，LNA的数目和位置使得用寡核苷酸处理的细胞相对于用盐水对照处理的细胞具有miR-145靶基因表达的大于1.0倍变化。

在某些实施方案中，寡核苷酸不含具有超过4个、或超过3个连续LNA的核苷酸区段。例如，寡核苷酸包含不超过3个连续的LNA。在这些或其它实施方案中，寡核苷酸可以包含与miR-145种子区基本上或完全互补的区域或序列，其中该区域或序列包含至少1、2、3、4、5、或6个锁定核酸(LNA)。

寡核苷酸一般含有至少5、至少7、或至少9个LNA。在多个实施方案中，寡核苷酸不是完全由LNA构成。在一些实施方案中，寡核苷酸包含LNA和非锁定核苷酸的混合物。例如，寡核苷酸可以含有至少5或至少7或至少9个锁定核苷酸，和至少一个非锁定核苷酸。在多个实施方案中，寡核苷酸含有至少9个锁定核苷酸。例如，寡核苷酸可以含有至少9个锁定核苷酸和至少7个非锁定核苷酸。

本发明的寡核苷酸可以包含至少5个LNA、在序列的5’端的LNA、在序列的3’端的LNA、或其任何组合。在一个实施方案中，寡核苷酸包含至少5个LNA、在序列的5’端的LNA、在序列的3’端的LNA、或其任何组合，其中3个或更少的核苷酸是连续的LNA。例如，寡核苷酸包含不超过3个连续的LNA。寡核苷酸可以包含具有至少5个LNA、在5’端的LNA、在3’端的LNA、且不超过3个连续LNA的序列。寡核苷酸可以包含具有至少5个LNA、在5’端的LNA、在3’端的LNA、且不超过3个连续LNA的序列，其中该序列的长度是至少16个核苷酸。

在一些实施方案中，寡核苷酸包含16聚体，其中16聚体由16个核苷酸组成。在一些实施方案中，16聚体包含与miR-145种子区互补的序列。16聚体可以包含至少9个LNA。在一些实施方案中，16聚体含有9个LNA和7个非锁定核苷酸。在一些实施方案中，从16聚体的5’端至3’端，16聚体的1、5、6、9、10、11、13、15、和16位；1、2、6、8、10、11、13、15、和16位；1、5、6、8、10、11、13、14、和16位；1、3、4、5、6、8、10、13、和16位；1、3、4、7、8、10、12、14、和16位；1、2、6、7、10、11、12、14、和16位；1、3、5、7、9、11、13、15、和16位；1、4、5、7、9、10、12、14、和16位；or1、5、6、8、10、11、13、15、和16位是LNA。16聚体可以与miR-145基本上或完全互补，其中基本上互补的序列可以具有1至4个错配(例如1或2个错配)。在一些实施方案中，寡核苷酸选自表1，诸如M-10934、M-11239、M-11241、M-11242、M-11244、M-11318、M-11319、M-11320、或M-11321。

对于非锁定核苷酸，就2’羟基而言，核苷酸可以含有2’修饰。例如，2’修饰可以是2’脱氧基。在反义寡核苷酸中掺入2’-修饰的核苷酸可以提高寡核苷酸对核酸酶的抗性及其与互补RNA的热稳定性两者。在2’位的各种修饰可以独立选自如下那些修饰，该修饰提供升高的核酸酶敏感性，而不损害与RNA靶物或细胞机器的分子相互作用。此类修饰可以基于其在升高的体外或体内效力选择。本文中描述了用于测定升高的miR-145抑制的效力(例如IC50)的例示性方法，包括双重萤光素酶测定法和体内miR-145表达或靶物去阻抑。

在一些实施方案中，2’修饰可以独立选自O-烷基(其可以是取代的)、卤素、和脱氧基(H)。在某些实施方案中，非锁定核苷酸的基本上所有或所有核苷酸2’位可以是修饰的，例如如独立选自O-烷基(例如O-甲基)、卤素(例如氟)、脱氧基(H)、和氨基。例如，2’修饰可以各自独立选自O-甲基和氟。在例示性的实施方案中，嘌呤核苷酸各自具有2’OMe，而嘧啶核苷酸各自具有2’-F。在某些实施方案中，1至约5个2’位，或约1至约3个2’位保持未修饰(例如作为2’羟基)。

根据本发明的2’修饰还包括小碳氢化合物取代基。碳氢化合物取代基包括烷基、烯基、炔基、和烷氧基烷基，其中烷基(包括烷氧基的烷基部分)、烯基和炔基可以是取代的或未取代的。烷基、烯基和炔基可以是C1至C10烷基、烯基或炔基，诸如C1、C2、或C3。碳氢化合物取代基可以包含1或2或3个非碳原子，其可以独立选自N、O、和/或S。2’修饰可以进一步包含烷基、烯基、和炔基，如O-烷基、O-烯基、和O-炔基。

根据本发明的例示性2’修饰包括2’-O-烷基(C1-3烷基，诸如2’OMe或2’OEt)、2’-O-甲氧基乙基(2’-O-MOE)、2’-O-氨基丙基(2’-O-AP)、2’-O-二甲基氨基乙基(2’-O-DMAOE)、2’-O-二甲基氨基丙基(2’-O-DMAP)、2’-O-二甲基氨基乙基氧基乙基(2’-O-DMAEOE)、或2’-O-N-甲基乙酰氨基(2’-O-NMA)取代。

在某些实施方案中，寡核苷酸含有至少一个2’-卤素修饰(例如替换2’羟基)，诸如2’-氟、2’-氯、2’-溴、和2’-碘。在一些实施方案中，2’卤素修饰是氟。寡核苷酸可以含有1至约5个2’-卤素修饰(例如氟)，或1至约3个2’-卤素修饰(例如氟)。在一些实施方案中，寡核苷酸含有非锁定位置处的所有2’-氟核苷酸，或在所有非锁定嘧啶核苷酸上的2’-氟。在某些实施方案中，2’-氟基团独立是二甲基化、三甲基化、或未甲基化的。

寡核苷酸可以具有一个或多个2’-脱氧基修饰(例如对于2’羟基为H)，并且在一些实施方案中，含有非锁定位置处的2至约10个2’-脱氧基修饰，或者含有所有非锁定位置处的2’脱氧基。

在例示性的实施方案中，寡核苷酸含有在非锁定位置处修饰为2’OMe的2’位。或者，非锁定嘌呤核苷酸在2’位修饰为2’OMe，非锁定嘧啶核苷酸在2’位修饰为2’-氟。

某些实施方案中，寡核苷酸进一步包含至少一个末端修饰或“帽”。帽可以是5’和/或3’帽结构。术语“帽”或“帽端”包括在寡核苷酸任一末端(就末端核糖核苷酸而言)的化学修饰，并且包括在5’端上最后两个核苷酸与3’端上最后两个核苷酸之间连接处的修饰。如本文中描述的帽结构可以增加寡核苷酸对外切核酸酶的抗性，而不损害与miRNA靶物(即miR-145)或细胞机器的分子相互作用。这类修饰可以基于其升高的体外或体内效力来选择。帽可以存在于5’端(5’帽)或3’端(3’帽)，或者可以存在于这两端上。在某些实施方案中，5’和/或3’帽独立选自单磷酸硫代磷酸酯、无碱基残基(模块)、硫代磷酸酯连接、4’-硫基核苷酸、碳环核苷酸、二硫代磷酸酯连接、反向核苷酸或反向无碱基模块(2’-3’或3’-3’)、单磷酸二硫代磷酸酯及膦酸甲酯模块。当硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯连接为帽结构的一部分时，其通常定位于5’端上的两个末端核苷酸与3’端上两个末端核苷酸之间。

在某些实施方案中，寡核苷酸具有至少一个末端单磷酸硫代磷酸酯。单磷酸硫代磷酸酯可以通过抑制外切核酸酶的作用来支持较高的效力。单磷酸硫代磷酸酯可以在寡核苷酸的5’和/或3’端处。单磷酸硫代磷酸酯通过以下结构定义，其中B为碱基，并且R为如上文所描述的2’修饰：

5’单磷酸硫代磷酸酯

3’单磷酸硫代磷酸酯

在帽结构可以支持锁定核苷酸化学的情况中，帽结构可以掺入LNA中，如本文中描述的。

在一些实施方案中，硫代磷酸酯连接可以在诸如5’和3’端上的最后两个核苷酸之间(例如，作为帽子结构的一部分)，或作为与磷酸二酯键交替存在。在这些或其它实施方案中，寡核苷酸可以在5’和3’端的任一或两者处含有至少一个末端无碱基残基。无碱基模块不含公认的嘌呤或嘧啶核苷酸碱基，诸如腺苷、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶或胸腺嘧啶。如此，这类无碱基部分在1’位处缺乏核苷酸碱基或具有其它非核苷酸碱基化学基团。例如，无碱基核苷酸可以是反向无碱基核苷酸，例如，其中反向无碱基亚磷酰胺是经由5’亚酰胺(amidite)(替代3’亚酰胺)偶联，产生5’-5’磷酸酯键。以下显示了多核苷酸的5’和3’端的反向无碱基核苷的结构。

寡核苷酸可以含有一个或多个硫代磷酸酯连接。硫代磷酸酯连接已经用于使寡核苷酸对核酸酶切割更有抗性。例如，多核苷酸可以是部分硫代磷酸酯连接的，例如，硫代磷酸酯连接可以与磷酸二酯连接交替。然而，在某些实施方案中，寡核苷酸是完全硫代磷酸酯连接的。在其它实施方案中，寡核苷酸具有约1个至5个或约1个至约3个磷酸酯连接。

在一些实施方案中，核苷酸具有一个或多个经羧酰氨基(carboxamido)修饰的碱基，如PCT/US11/59588(其通过提及在此收录)中描述，包含关于用杂环取代基进行的其中所公开的所有例示性嘧啶羧酰氨基修饰。

通过固相合成的寡核苷酸(包括经修饰的多核苷酸)合成是公知的，并且综述于New Chemical Methods for Synthesizing Polynucleotides。Caruthers MH,BeaucageSL,Efcavitch JW,Fisher EF,Matteucci MD,Stabinsky Y.Nucleic AcidsSymp.Ser.1980；(7):215-23。

可以将寡核苷酸掺入多种大分子装配体或组合物中。此类供投递用的复合物可以包含经配制用于投递至患者的多种脂质体、纳米粒子和胶束。复合物可以包括一个或多个促融性(fusogenic)或亲脂性分子以起始细胞膜穿透。这些分子记载于例如美国专利No.7,404,969和美国专利No.7,202,227，其通过全文引用的方式并入本文中。或者，寡核苷酸可以进一步包含悬垂的亲油基团以辅助细胞投递，诸如WO 2010/129672(其通过提及并入本文)中记载的基团。

本发明还提供了用于将本文中公开的寡核苷酸投递至细胞(例如作为本文中描述的组合物或配制剂的部分)以降低或抑制细胞中的miR-145活性的方法。细胞可以是平滑肌细胞。本文中还提供了用于抑制平滑肌细胞增殖的方法，其包括使平滑肌细胞与本文中公开的寡核苷酸接触。细胞可以是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，细胞是肺或心脏细胞。细胞可以是体内或离体的。

本文中还提供了用于在受试者中治疗状况、减缓状况或预防状况进展的方法，其包括施用包含本文中公开的寡核苷酸的药物组合物。方法一般包括对受试者施用寡核苷酸或包含寡核苷酸的组合物。术语“受试者”或“患者”指任何脊椎动物，包括但不限于人和其它灵长类(例如黑猩猩和其它猿和猴物种)、耕作动物(farm animals)(例如牛、绵羊、猪、山羊和马)、家养哺乳动物(例如犬和猫)、实验室动物(例如啮齿类，诸如小鼠、大鼠、和豚鼠)、禽类(例如家养、野生和游戏禽类，诸如鸡、火鸡和其它鹑鸡类禽类、鸭、鹅等)。在一些实施方案中，受试者是哺乳动物。在其它实施方案中，受试者是人。

受试者可以具有与/由miR-145表达有关、介导、或导致的状况，诸如新血管内膜形成或再狭窄。miR-145是平滑肌组织中富含的，并且可以调节平滑肌增殖。在一个实施方案中，用于抑制或降低新血管内膜形成或再狭窄(诸如在血管损伤后)的方法包括对有此需要的受试者施用寡核苷酸或包含寡核苷酸的组合物。

在另一个实施方案中，状况是肺动脉高血压(PAH)。在一个实施方案中，本发明提供了在有此需要的受试者中治疗或预防肺高血压(特别是PAH)的方法，其包括对受试者施用miR-145表达和/或活性抑制剂。在肺中的肺动脉变得狭窄、阻塞或损伤，引起动脉压升高时产生肺高血压。右心室上增强的工作负荷对心肌引起张力，并且可以导致心力衰竭。PAH的症状包括但不限于呼吸短促(最初在锻炼时并且最终在休息时)、疲劳、头晕或昏厥发作(fainting spells)、胸部压力(chest pressure)或疼痛、下肢(踝和腿)及腹部肿胀、皮肤和嘴唇青色(bluish color to skin and lips)、和空转脉冲(racing pulse)或心悸(heart palpitation)。优选地，与不接受治疗的受试者相比，在施用miR-145抑制剂后的患有PAH的受试者中，一种或多种前述症状是改善或消除的，或者PAH的形成是延迟的。在一些实施方案中，受试者中的右心室收缩压在施用miR-145抑制剂后是降低的。

可以用本发明的方法治疗的肺高血压形式包括但不限于特发性PAH、遗传性或家族性PAH、和继发性肺高血压(例如源自肺栓子、肺气肿、肺纤维化、和先天性心脏病的高血压)。PAH的家族性或遗传性形式已经与某些基因中的突变联系起来。例如，70％具有PAH的可遗传形式的患者具有编码骨形态发生蛋白(BMP)2型受体(BMPR2)的基因中的突变(Morrell等,2001)。如此，在一些实施方案中，要用本发明的方法治疗的受试者有风险形成PAH。在一个实施方案中，有风险的受试者(例如人)具有编码BMPR2的基因中的突变。

在另一个实施方案中，状况是高血压，包括系统性高血压。高血压可以是任何类型，包括原发性或本质性(essential)高血压、继发性高血压、恶性高血压、孤立性收缩期高血压、或抗性高血压。原发性高血压是最常见的类型，并且似乎没有可鉴定的原因。继发性高血压一般由可逆的因素引起。在一些实施方案中，继发性高血压由肾损伤、肿瘤、肾上腺过度活性、甲状腺功能障碍、主动脉收缩、妊娠相关状况、睡眠呼吸暂停、药物、食物、或饮料引起。恶性高血压是最重度的形式，并且可以是进行性的。在一些病例中，恶性高血压可以导致心力衰竭、肾损伤或脑出血、或死亡。一般地，恶性高血压由癌症或恶性引起。孤立性收缩期高血压是在收缩血压一贯高于160mm Hg，并且舒张血压低于90mm Hg时，并且可以来自年龄相关的动脉弹性丧失，其可以是由于动脉硬化所致。在血液不能降低到低于140/99mmHg(尽管有三重药物方案)时，高血压通常分型为抗性高血压。

在一个实施方案中，本发明提供了用于在有此需要的受试者中治疗或预防高血压(诸如原发性高血压、继发性高血压、恶性高血压、孤立性收缩期高血压、或抗性高血压的方法，其包括对受试者施用miR-145表达和/或活性的抑制剂。

本发明进一步提供了包含本文中公开的寡核苷酸的药物组合物。在涵盖临床应用的情况中，会以适合于意图应用的形式制备药物组合物。一般地，这将必需制备基本上没有热原及可以对人或动物有害的其它杂质的组合物。

在一个实施方案中，药物组合物包含有效剂量的miR-145抑制剂和药学可接受载体。例如，药物组合物包含有效剂量或量的本发明的寡核苷酸或其药学可接受盐，和药学可接受载体或稀释剂。寡核苷酸可以选自表1，诸如M-10934、M-11239、M-11241、M-11242、M-11244、M-11318、M-11319、M-11320或M-11321。

“有效剂量”指足以实现有益或期望的临床结果的量。本文中公开的寡核苷酸的有效剂量可以是约0.001mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约2.5mg/kg至约50mg/kg、或约5mg/kg至约25mg/kg。认为多少会是有效剂量的精确测定可以基于对每名患者个别的因素，包括其体格、年龄、肺动脉高血压的类型和严重性、和寡核苷酸的性质(例如熔解温度、LNA含量等)。因此，根据本公开内容及本领域中的知识，本领域普通技术人员可以容易确定剂量。在一些实施方案中，方法包括一天1、2、3、4、5、或6次施用有效剂量的药物组合物。在一些实施方案中，一周1、2、3、4、或5施用。在其它实施方案中，两周或每月施用。

胶体分散系统(诸如大分子复合物、纳米胶囊、纳米颗粒、微球、珠、和基于脂质的系统，包括水包油乳剂、胶束、混合的胶束、和脂质体)可以用作miR-145功能的寡核苷酸抑制剂的投递媒介物。在某些实施方案中，miR-145抑制剂配制用于肺投递。如本文中使用的，“肺投递”或“呼吸系统投递”指通过经由口或鼻吸入并进入肺中对受试者投递miR-145抑制剂。例如，miR-145抑制剂可以配制为鼻烟(snuff)、气溶胶、用于喷雾器的溶液、或用于吹入的微细粉末。在miR-145抑制剂配制为干粉末的实施方案中，活性化合物的颗粒可以具有小于50微米，优选小于10微米，诸如1和5微米之间或2和5微米之间的直径。

一般会期望采用合适的盐和缓冲液以使投递媒介物变得稳定并容许靶细胞吸收。本发明的水性组合物包含溶解或分散于药学可接受载体或水性介质中的有效量的包含抑制剂多核苷酸的投递媒介物(例如脂质体或其它复合物或表达载体)。短语“药学可接受”或“药理学可接受”是指当向动物或人给予时不产生不利的、过敏的或其它不想要反应的分子实体及组合物。如本文中所使用，“药学可接受载体”包括对于在配制药物，诸如适合于向人施用的药物中使用可接受的溶剂、缓冲液、溶液、分散介质、涂层材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等。这类介质和药剂用于药学活性物质的用途是本领域中公知的。除非任何常规介质或药剂与本发明的活性成分不相容，涵盖其在治疗性组合物中的使用。补充性活性成分也可以掺入组合物中，只要它们不使组合物的寡核苷酸失活。

本发明的活性组合物可以包含典型的药物制剂。可以经由任何常见的路径施用根据本发明的这些组合物，只要经由所述路径可达到靶组织。这包括口服、鼻、或含服。或者，可以通过皮内、皮下、肌肉内、腹膜内、动脉内或静脉内注射施用。在一些实施方案中，将药物组合物直接注入肺或心脏组织中。

在某些实施方案中，通过吸入施用包含miR-145抑制剂的药物组合物。也可以通过导管系统或分离冠状(coronary)/肺循环的系统施用包含miR-145抑制剂的药物组合物以将治疗剂投递至心脏和肺。用于将治疗剂投递至心脏和冠状血管系统的各种导管系统是本领域中已知的。适合于在本发明中使用的基于导管的投递方法或冠状分离方法的一些非限制性例子披露于美国专利No.6,416,510；美国专利No.6,716,196；美国专利No.6,953,466，WO 2005/082440，WO 2006/089340，美国专利公开文本No.2007/0203445，美国专利公开文本No.2006/0148742及美国专利公开文本No.2007/0060907，它们通过提及全部完整收入本文。此类组合物通常会以药学可接受组合物施用，如本文中描述的。

也可以胃肠外或腹膜内施用活性化合物。举例而言，可以在适当地混合有表面活性剂(诸如羟丙基纤维素)的水中制备呈游离碱或药理学可接受盐的活性化合物的溶液。也可以在甘油、液态聚乙二醇和其混合物中以及在油中制备分散体。在贮存和使用的普通条件下，这些制剂通常含有防腐剂以防止微生物生长。

适合于注射使用、导管投递或吸入投递的药学形式包括例如无菌水性溶液或分散体以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散体(例如气溶胶、喷雾器溶液)的无菌粉末。一般地，这些制剂是无菌的并且在存在容易的注射能力或烟雾化/雾化的程度上流动。制剂在制造和贮存条件下应当是稳定的，并且应当针对微生物(如细菌和真菌)的污染作用提供防腐。适当的溶剂或分散介质可以含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)、其合适的混合物，和植物油。可以例如通过使用涂层材料(如卵磷脂)，在分散体的情况下通过维持需要的粒度及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯(parabens)、氯丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞等)来防止微生物的作用。在许多情况下，会优选包括例如糖或氯化钠的等张剂。可以通过在组合物中使用吸收延迟剂(例如，单硬脂酸铝和明胶)来延长可注射组合物的吸收。

可以通过在想要时与任何其它成分(例如如上文列举)一起将合适量的活性化合物掺入溶剂中，接着过滤灭菌制备无菌可注射溶液。一般地，通过将各种经灭菌的活性成份掺入含有基础分散介质及期望的其它成分(例如如上文列举)的无菌媒介物中制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分及来自其先前无菌过滤溶液的任何别的期望成分的粉末。在一些实施方案中，可以例如经由吹入器或吸入装置对受试者直接施用无菌粉末(即不在稀释剂中重建)。

本发明的组合物一般可以以中性或盐形式配制。药学可接受盐包括例如源自无机酸(例如盐酸或磷酸)或有机酸(例如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等)的酸加成盐(与蛋白质的游离氨基基团形成)。与蛋白质的游离羧酸基团形成的盐也可以源自无机碱(例如氢氧化钠、钾、铵、钙或铁)或有机碱(例如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因(procaine)等)。

在配制后，溶液优选以与剂量配制剂相容的方式并且以治疗有效的此类量施用。可以以多种剂量形式(诸如可注射溶液、药物释放胶囊、单位剂量吸入器等)容易地施用配制剂。例如，对于在水性溶液中的胃肠外施用，溶液一般经适当地缓冲并且首先使流体稀释剂例如用足够的盐水或葡萄糖变成等张的。例如，可以使用这类水性溶液以静脉内、肌肉内、皮下、动脉内和腹膜内施用。优化地，采用本领域技术人员已知的无菌水性介质，尤其根据本公开内容。举例而言，可将单剂溶解于1ml等张NaCl溶液中，并且添加到1000ml皮下灌注术流体中或注射于提出的输注部位(参见例如“Remington’s PharmaceuticalSciences”第15版,第1035-1038和1570-1580页)。根据治疗受试者的状况，必然会发生一些剂量变化。在任何情况下，负责施用的人员将决定适合于个体受试者的剂量。此外，对于人施用，制剂应当满足FDA生物制剂标准局(FDA Office of Biologics standards)要求的无菌性、致热原性、总体安全性和纯度标准。

组合物或配制剂可以采用多种治疗性寡核苷酸，包括本文中描述的至少一种。例如，组合物或配制剂可以采用本文中描述的至少2、3、4、或5种miR-145抑制剂。在另一个实施方案中，本发明的寡核苷酸可以与其它治疗形式一起使用。也可以通过同时使细胞与超过一种独特的组合物或配制剂接触实现组合。或者，可以序贯地实施组合。

在本发明的一个实施方案中，与其它治疗形式组合使用antimiR-145。联合疗法的例子包括任何前述的。可以用包含这两种药剂的单一组合物或药理学配制剂，或者同时用两种独特的组合物或配制剂实现组合，其中一种组合物包含antimiR-145和一种或多种其它药剂。或者，使用antimiR-145的疗法在施用其它药剂之前或之后可以有范围为几分钟至几周的时间间隔。在对细胞分开应用其它药剂和antimiR-145的实施方案中，一般会确保有效的时间段在每次投递时间之间不能终止，从而药剂和antimiR-145仍会能对细胞施加有利组合的影响。在此类情况中，涵盖的是通常会使细胞与这两种形式在彼此的约12-24小时内，彼此的约6-12小时内，或仅约12小时的延迟时间内接触。然后，在一些情况中，可以期望显著延长治疗的时间段，其中各次施用之间经过几天(2、3、4、5、6或7)至几周(1、2、3、4、5、6、7或8)。

在一个实施方案中，会期望antimiR-145或其它药剂的超过一次施用。在这点上，可以采用各种组合。举例而言，在antimiR-145是“A”而另一种药剂是“B”的情况中，提供基于3和4次总施用的下述排列作为例子：A/B/A，B/A/B，B/B/A，A/A/B，B/A/A，A/B/B，B/B/B/A，B/B/A/B，A/A/B/B，A/B/A/B，A/B/B/A，B/B/A/A，B/A/B/A，B/A/A/B，B/B/B/A，A/A/A/B，B/A/A/A，A/B/A/A，A/A/B/A，A/B/B/B，B/A/B/B，B/B/A/B。同样涵盖其它组合。下文提供了其它药剂和疗法的特定例子。

在本发明的一个实施方案中，在有此需要的受试者中抑制、预防或治疗再狭窄或新血管内膜形成的方法包括对受试者施用miR-145抑制剂，诸如如本文中描述的antimiR-145，和抑制再狭窄或新血管内膜形成的另一种药剂。心脏病专家已经尝试许多方法来降低再狭窄的风险。支架术(stenting)变得更平常，代替气囊血管成形术。在支架术规程期间，相对于动脉壁运用金属网格(支架)，使动脉血运重建。其它方法包括局部放射疗法和使用涂布到支架网格上的免疫抑制药物。在一个实施方案中，施用不同miR-145抑制剂的组合，诸如如本文中描述的antimiR-145，和miR-145的小分子抑制剂。如此，联合疗法的例子包括任何前述疗法。

在本发明的一个实施方案中，用于在有此需要的受试者中抑制、预防、或治疗高血压的方法包括对受试者施用miR-145抑制剂，诸如如本文中描述的antimiR-145，和抑制、预防或治疗高血压的第二药剂。在一个实施方案中，施用不同miR-145抑制剂的组合，诸如如本文中描述的antimiR-145，和miR-145的小分子抑制剂。

在本发明的一个实施方案中，用于在有此需要的受试者中抑制、预防、或治疗PAH的方法包括对受试者施用miR-145抑制剂，诸如如本文中描述的antimiR-145，和抑制、预防或治疗PAH的第二药剂。在一个实施方案中，施用不同miR-145抑制剂的组合，诸如如本文中描述的antimiR-145，和miR-145的小分子抑制剂。

在一个实施方案中，用于抑制、预防、或治疗PAH的第二或别的药剂是miR-204激动剂。人miR-204-5p序列是5’-UUCCCUUUGUCAUCCUAUGCCU-3’(SEQ ID NO:8)。人miR-204-3p序列是5’-GCUGGGAAGGCAAAGGGACGU-3’(SEQ ID NO:9)。miR-204激动剂可以是包含成熟miR-204序列的多核苷酸。在一些实施方案中，多核苷酸包含miR-204的pri-miRNA或pre-miRNA序列的序列。包含成熟miR-204、pre-miR-204、或pri-miR-204序列的多核苷酸可以是单链或双链的。在一个实施方案中，miR-204激动剂可以是长度约15至约50个核苷酸，长度约18至约30个核苷酸，长度约20至约25个核苷酸，或长度约10至约14个核苷酸。miR-204激动剂可以与miR-204的成熟、pri-miRNA或pre-miRNA序列是至少约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、或约100％相同。在一个实施方案中，miR-204激动剂具有SEQ ID NO:15或16的序列。作为多核苷酸的miR204激动剂可以含有一个或多个化学修饰，诸如锁定核酸、肽核酸、糖修饰，诸如2’-O-烷基(例如2’-O-甲基、2’-O-甲氧基乙基)、2’-氟、和4’硫代修饰，和主链修饰，诸如一个或多个硫代磷酸酯、吗啉代、或膦酰羧酸酯(phosphonocarboxylate)连接。在一个实施方案中，包含miR-204序列的多核苷酸与胆固醇缀合。包含miR-204序列的多核苷酸可以从载体在体内表达和/或与启动子可操作连接，诸如上文描述。

在另一个实施方案中，miR-204激动剂可以是与miR-204不同的药剂，其作用为提高、补充、或替换miR-204的功能。例如，抑制PDGF、内皮缩血管肽-1、血管紧张素II、和STAT3表达或活性的药剂可以与miR-145抑制剂组合使用以治疗、预防或阻止PAH。可以以多肽、肽、小有机分子、编码感兴趣多肽的核酸等形式投递药剂。多肽可以是核酸的任何翻译产物，无论大小和糖基化如何。药剂也可以为简单药物、肽、肽片段、DNA、RNA、核酶或核酸和肽或肽片段的工程化杂合物、或每种的衍生物形式。

用于抑制、治疗、预防或阻止PAH、新血管内膜形成或再狭窄、或高血压的组合还可以包含antimiR-145和血管扩张剂(血管扩张药)(诸如但不限于依前列醇(epoprostenol))。可以与antimiR-145一起使用的其它药剂包括但不限于内皮缩血管肽受体拮抗剂，诸如波生坦(bosentan)、西他生坦(sitaxentan)、和安立生坦(ambriesentan)；磷酸二酯酶抑制剂，诸如磷酸二酯酶5型抑制剂，西地那非(sildenafil)和他达拉非(tadalafil)；钙通道阻断剂，诸如氨氯地平(amlodipine)、地尔硫卓(diltiazem)、和硝苯地平(nifedipine)；前列腺素，诸如曲罗尼尔(treprostinil)、伊洛前列素(iloprost)和贝前列素(beraprost)；硝酸异山梨酯(isosorbide dinitrate)；和鸟苷酸环化酶活化剂，诸如cinaciguat和利奥西呱(riociguat)。

也可以使用抗凝血剂或阻断或抑制凝血酶的化合物，诸如华法林和基于三肽基序D-Phe-Pro-Arg的化合物；例如LY287045等。许多化合物(诸如伊诺加群(inogatran)和美拉加群(melagatran))是本领域中已知的，并且也可以使用。对于非限制性例子，见美国专利No.6,326,386；6,232,315；6,201,006；6,174,855；6,060,451；及5,985,833等。

可以与antimiR-145一起使用的别的药剂包括血管紧张肽转化酶抑制剂；烟碱受体激动剂；提高一氧化氮浓度的药剂(抗血管发生剂)；TGF-β受体激动剂；和死亡域受体配体。

也可以与miR-145抑制剂组合使用以治疗、预防或阻止PAH的血管紧张肽转化酶抑制剂(ACE-I)包括但不限于卡托普利(captopril)、贝那普利(benazepril)、依那普利(enalapril)、福辛普利(fosinopril)、赖诺普利(lisinopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(Ramipril)、咪达普利(imidapril)、培哚普利(perindopril)、特丁胺(erbumine)、和群多普利(trandolapril)。也可以替换ACE抑制剂或与ACE抑制剂一起使用ACE受体阻断剂，并且这些包括但不限于氯沙坦(losartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、坎地沙坦(candesartan)、环庚塞(cilexetil)、和缬沙坦(valsartan)。

烟碱受体激动剂(例如烟碱(S-3-(1-甲基-2-吡咯烷基)吡啶)和实质上特异性结合烟碱受体并且提供药理学效果的其它化合物)也可以与antimiR-145组合使用，诸如以治疗、预防或阻止PAH。烟碱受体激动剂涵盖天然存在的化合物(包括但不限于小分子、多肽、肽等，诸如天然存在的植物生物碱)、内源配体(例如从天然来源纯化，重组生成，或合成的，并且进一步包含此类内源配体的衍生物和变体)，和合成生成的化合物(例如小分子，肽等)。术语“烟碱”进一步包含烟碱的任何药理学可接受衍生物或代谢物，其展现出与烟碱相似的药物治疗特性。此类衍生物、代谢物、和代谢物的衍生物是本领域中已知的，并且包括但不必然限于可替宁(cotinine)、降可替宁(norcotinine)、降烟碱(nornicotine)、烟碱N-氧化物、可替宁N-氧化物、3-羟基可替宁和5-羟基可替宁或其药学可接受盐。

antimiR-145也可以与一种或多种提高一氧化氮的药剂一起使用以治疗、预防或阻止PAH。一氧化氮促进剂的例子包括但不限于S-亚硝基青霉胺(S-nitrosopenicillamine)、硝普钠(sodium nitroprusside)、N-乙基-2-(1-乙基-2-羟基-2亚硝基肼基)乙胺(NOC 12)等。细胞因子(诸如γ-干扰素、肿瘤坏死因子、IL-1、IL-2和内毒素)也可以由于其对酶(一氧化氮合酶)的影响而调控一氧化氮的生成。通过细胞因子增加NO合酶的可诱导形式，并且组成形式似乎通过细胞因子减少。已经发现了HMG-CoA还原酶抑制剂上调内皮细胞NOS活性，如由Liao等的美国专利No.6,147,109描述的。可以以蛋白质或自其衍生的活性片段，或者以用于表达的DNA构建体利用任何一氧化氮合酶形式。

也可以与antimiR-145组合使用具有抗血管发生效应的药剂，诸如以治疗、预防或阻止PAH、新血管内膜形成、再狭窄、或高血压。这些包括但不限于抗血管发生多肽：血管他丁(angiostatin)；内皮他丁(endostatin)；和抗血管发生抗凝血酶III等，并且进一步包含其功能活性变体和衍生物。其它抗血管发生剂包括基质金属蛋白酶的抑制剂，例如氨磷汀(amifostine)、WR-1065；马立马司他(marimastat)、primomastat、a-1抗胰蛋白酶；鞘氨醇等。

TGF-β受体激动剂也是感兴趣的。TGF-β受体I型和II型介导TGF-β的大多数活性。配体包括TGF-β，及其模拟物和生物学活性衍生物。

与antimiR-14一起使用(例如以治疗、预防或阻止PAH)的感兴趣的其它药剂包括死亡域受体配体，其是结合包含死亡域或其同系物或直向同系物的哺乳动物细胞表面受体的化合物，通常是多肽化合物，并且通过结合，因此将凋亡信号投递至细胞。通过这些受体触发的胞内蛋白相互作用可以归于死亡域的结合相互作用，所述死亡域与TNF-R1的C端附近的约80个氨基酸的域同源，并且负责信号传导细胞毒性。TNF受体死亡域家族包括TNF-R1、Fas(CD95)、TRAMP(wsI/Apo-3/DR-3)、TRAIL-R1(DR-4)和TRAIL-R2(DR-5、TRICK2、KILLER)。死亡域配体包括通过结合特定死亡域受体调节细胞增殖和分化的蛋白质。这些配体包括TNF家族，例如TNF、淋巴毒素、CD30配体、4-1BB配体、CD40配体、CD27配体、和TRAIL(TNF相关的凋亡诱导配体)、及其同系物和类似物。

雷帕霉素(rapamycin)类似物(诸如他克莫司(tacrolimus)(FK-506)、西罗莫司(sirolimus)和依维莫司(everolimus))(其通常用作免疫抑制剂，但是新近发现还展现出血管平滑肌细胞的增殖)也可以与antimiR-145组合使用。c-myc(一种对于细胞复制进展重要的蛋白质)的反义敲低是抑制动脉壁中的细胞增殖的另一种方法，并且可以与miR-145抑制剂组合使用。

在一个实施方案中，抗血小板剂的共价或非共价附着也是感兴趣的，包括GPIIb/IIIa抑制剂，例如RheoPro，其可以与miR-145抑制剂组合使用。治疗或疗法(诸如氧疗)也可以与antimiR-145的施用组合使用。

本发明还包括试剂盒，该试剂盒包含本文中描述的antimiR-145和施用装置。在某些实施方案中，施用装置是设计为经由鼻或口将miR-145抑制剂投递至肺(诸如以治疗或预防PAH)的装置。例如，适合于肺投递的施用装置包括但不限于点滴器、拭子、烟雾器、吹入器、喷雾器、吸入器(例如基于气溶胶的计量剂量吸入器)、干粉末分散装置、和其它肺投递装置，包括手工激活的、气体推进的、声波驱动的、等。在一些实施方案中，antimiR-145配制为施用装置内含有的粉末。在其它实施方案中，antimiR-145配制为施用装置内含有的液体气溶胶。在一个具体的实施方案中，施用装置是吸入器。在要静脉内或动脉内投递antimiR-145的实施方案中，试剂盒可以包含导管其它类似的合适施用装置。试剂盒可以进一步包含用于对受试者施用有效剂量的antimiR-145以抑制、治疗或预防肺高血压、新血管内膜形成、再狭窄、和/或高血压的用法说明。在一些实施方案中，试剂盒包含一种或多种别的药剂或疗法，诸如上文描述。

通过下述附加的实施例进一步例示本发明，该实施例不应理解为限制的。本领域技术人员根据本公开内容应当理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对公开的具体实施方式进行多种变化而仍能获得相似或类似的结果。

实施例

实施例1：AntimiR-145化合物的体内效力。

为了优化靶向肺中的miR-145的化合物，使用肺中miR-145的直接mRNA靶物的去阻抑作为体内功能性的读出实施体内筛选。

在大鼠中测试总共9种不同antimiR设计，如表1中描绘：

表2：符号的描述

脱氧A	a
		脱氧G	g
脱氧C	c
		脱氧T	t
lna A	A
		lnaG	G
lna C	C
		lna T	T

在Sprague-Dawley大鼠中对表1中的9种antimiR化合物测定靶物去阻抑。以25mg/kg剂量的来自表1的antimiR化合物皮下注射49至52天龄的Sprague-Dawley大鼠。使用盐水和具有相似LNA和DNA百分比(9/7)的寡核苷酸作为对照。设计寡核苷酸对照分子号M-10591以靶向秀丽隐杆线虫(C.elegans)特异性miRNA，并且用作化学对照。在注射后48小时收集肺组织。通过在总肺RNA中的实时PCR测量Klf4、Klf5、Lrrc71、Nedd4l、Igf1r、Sec1412、Megf6、Fmod、Ankrd12、Golga1、Gpbp1、Hist3h2a、Rapgef2、和Sned1的mRNA。在图1中以相对于经盐水处理的动物的倍数变化值显示结果。

来自这些实验的结果显示了M-11318具有最高的效力，接着是M-11319、M-11321和M-11239。M-11244和M-11320具有相似的效力，并且比M-11239具有更低的效力。最后，在9种化合物中，M-10934、M-11242、和M-11241具有最低的效力。

图2中描绘了雷达图，其代表9种miR-145基因靶物及其相对于盐水的去阻抑倍数变化。M-11318显示了所有9种基因的最大面积，该面积代表积累倍数变化值。M-11319是第二大的面积。以黑线显示的对照寡核苷酸M-10591与活性化合物相比具有更小的靶物去阻抑活性。

实施例2：AntimiR-145化合物的MiR-145特异性。

用25mg/kg剂量的盐水或M-11318皮下注射49至52天龄的Sprague-Dawley大鼠。用微阵列序型分析对来自经M-11318处理的大鼠和经盐水处理的大鼠的肺的总RNA进行全基因组序型分析。在比较经M-11318处理的大鼠的肺的总RNA与来自经盐水处理的大鼠的肺的总RNA时，含有miR-145种子的基因在上调基因标签中富集(对于差异表达，p-值<0.01)。使用超几何分布函数计算富集的p-值(图3)。此结果指示M-11318引发对miR-145特异性的基因靶物去阻抑。

实施例3：通过AntimiR-145化合物M-11318的剂量依赖性靶物去阻抑。

用25mg/kg剂量的盐水、25mg/kg剂量的M-10591、25mg/kg剂量的M-10934或5mg/kg、10mg/kg、或25mg/kg剂量的M-11318皮下注射49至52天龄的Sprague-Dawley大鼠。在注射后72小时收集肺组织。通过实时PCR测量总肺RNA中的Klf5的mRNA。图4中以相对于经盐水处理的动物的倍数变化值显示结果。实时PCR结果指示了KLF5靶物去阻抑对M-11318处理是剂量响应的。

实施例4：通过AntimiR-145化合物M-11318和M-11319的剂量依赖性靶物去阻抑。

用25mg/kg剂量的盐水，25mg/kg剂量的M-10591；25mg/kg剂量的M-10934；5mg/kg，10mg/kg，或25mg/kg剂量的M-11318；或5mg/kg，10mg/kg，或25mg/kg剂量的M-11319皮下注射49至52天龄的Sprague-Dawley大鼠。在注射后48小时收集肺组织。通过实时PCR测量总肺RNA中的Nedd4l的mRNA。图5中以相对于经盐水处理的动物的倍数变化值显示结果。实时PCR结果指示了Nedd4l靶物去阻抑对M-11318和M-11319处理是剂量响应的。

实施例5：AntimiR-145降低系统性血压和动脉硬化的指数。

将16周龄时的自发性高血压(SHR)大鼠经受每周四次25mg/kg皮下剂量的antimiR。在18周时，在饮用水中施用L-NG-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)(50mg/L)，任意给予2周以在脉搏波速度(PWV)测量中创建治疗窗。在研究结束时，此时大鼠为20周龄，测量末端脉搏波速度、beta指数、和血压(图6A)。研究中包括培哚普利(一种ACE抑制剂)作为一种用于高血压的护理标准的基准。

antimiR-145(M-10934)显示了脉搏波速度(图6B)、beta指数(图6C)、和均值系统压力(图6D)的统计学显著降低。重要地，两种其它对照antimiR(对照1和对照2)用此剂量和方案没有显示相似的益处，由此显示此治疗效果的microRNA特异性。(图6B-6D)。这些结果共同证明了miR-145抑制在高血压的大鼠SHR/L-NAME中具有治疗益处。

本文中讨论和引用的所有出版物、专利和专利申请通过提及完整收入本文。应当理解，公开的发明不限于描述的特定方法、方案和材料，因为这些可以变化。还应当理解，本文中使用的术语是仅为了描述具体的实施方案，而不意图限制本发明的范围，其仅会限于所附的权利要求书。

本领域技术人员会认可或仅仅使用常规方法能够确认本文中描述的发明的具体实施方案的许多等同方案。所附权利要求书意图涵盖此类等同方案。

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Claims

1.一种寡核苷酸，其包含与miR-145的种子区互补的序列，其中所述种子区是5’-UCCAGUUU-3’(SEQ ID NO:7)，其中所述寡核苷酸由16个核苷酸组成，其中从5’端至3’端，所述寡核苷酸含有位于序列1，6，11，13和15位点的锁定核酸(LNA)，且其中所述寡核苷酸包含至少一个非锁定核苷酸。

2.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含在3’端的LNA或在5’和3’端的LNA。

3.权利要求1-2中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含不超过3个连续的LNA。

4.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少9个LNA。

5.权利要求4的寡核苷酸，其中从所述寡核苷酸的5’端至3’端，5、9、10和16位是LNA。

6.权利要求4的寡核苷酸，其中从所述寡核苷酸的5’端至3’端，2、8、10和16位是LNA。

7.权利要求1的寡核苷酸，其中至少一个所述非锁定核苷酸是2’脱氧基。

8.权利要求7的寡核苷酸，其中所有所述非锁定核苷酸是2’脱氧基。

9.权利要求1的寡核苷酸，其中至少一个非锁定核苷酸是2’O-烷基或2’卤素。

10.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸具有5’帽结构、3’帽结构、或5’和3’帽结构。

11.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含一个或多个硫代磷酸酯连接。

12.权利要求11的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是完全硫代磷酸酯连接的。

13.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸具有1至3个磷酸酯连接。

14.权利要求1的寡核苷酸，其进一步包含悬垂的亲脂基团。

15.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸与miR-145的核苷酸序列基本上互补。

16.权利要求15的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸与miR-145完全互补。

17.权利要求1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸相对于盐水对照提高细胞中的miR-145靶基因的表达，并且表达的升高具有的p-值<0.05。

18.权利要求1的寡核苷酸，其中相对于盐水对照，用所述寡核苷酸处理的细胞具有miR-145靶基因表达的大于1.0倍数变化，并且所述倍数变化具有的p-值<0.05。

19.权利要求17-18中任一项的寡核苷酸，其中所述表达的倍数变化是至少1.1、1.2、1.3、1.4、或1.5倍。

20.权利要求17-18中任一项的寡核苷酸，其中所述miR-145靶基因是Klf4、Klf5、Lrrc71、Nedd4l、Igf1r、Sec1412、Megf6、Fmod、Ankrd12、Golga1、Gpbp1、Hist3h2a、Rapgef2、或Sned1。

21.一种药物组合物，其包含有效量的权利要求1的寡核苷酸或其药学可接受盐，以及药学可接受载体或稀释剂。

22.权利要求21的药物组合物，其中所述药学可接受载体包含胶体分散系统、大分子复合物、纳米胶囊、纳米颗粒、微球、珠、水包油乳剂、胶束、混合胶束或脂质体。

23.权利要求21的药物组合物，其中所述药学可接受载体或稀释剂基本上由盐水组成。

24.含有权利要求1的寡核苷酸的药物组合物在制备用于降低或抑制细胞中的miR-145的活性的药物中的用途。

25.权利要求24的用途，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

26.权利要求24或25的用途，其中所述细胞是平滑肌细胞。

27.权利要求24或25的用途，其中所述细胞是肺或心脏细胞。

28.权利要求24或25的用途，其中所述细胞是体内或离体的。

29.含有权利要求1的寡核苷酸的药物组合物在制备用于抑制平滑肌细胞中平滑肌细胞增殖的药物中的用途。

30.权利要求29的用途，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

31.权利要求29或30的用途，其中所述细胞是肺或心脏细胞。

32.权利要求29或30的用途，其中所述细胞是体内或离体的。

33.包含权利要求1的寡核苷酸的药物组合物在制造用于预防或治疗受试者中的肺动脉高血压(PAH)的药物中的用途。

34.权利要求33的用途，其中所述肺动脉高血压是特发性肺动脉高血压、遗传性或家族性PAH、或继发性肺高血压。

35.权利要求34的用途，其中所述继发性肺高血压来自肺栓子、肺气肿、肺纤维化、或先天性心脏病。

36.权利要求33-35中任一项的用途，其中所述受试者是哺乳动物。

37.权利要求36的用途，其中所述哺乳动物是人。

38.权利要求37的用途，其中所述人具有编码骨形态发生蛋白2型受体的基因中的突变。

39.权利要求33的用途，其中通过胃肠外施用或者通过对肺组织直接注射施用所述药物组合物。

40.权利要求33的用途，其中通过施用的吸入路径对所述受试者施用所述药物组合物。

41.权利要求40的用途，其中将所述药物组合物配制为干粉末。

42.权利要求40的用途，其中将所述药物组合物配制为液体气溶胶。

43.包含权利要求1的寡核苷酸的药物组合物在制造用于抑制或治疗受试者中的再狭窄或新血管内膜形成的药物中的用途。

44.权利要求43的用途，其中所述受试者是哺乳动物。

45.权利要求44的用途，其中所述哺乳动物是人。

46.权利要求43的用途，其中通过胃肠外施用或者通过对心脏组织直接注射施用所述药物组合物。

47.权利要求39或46的用途，其中所述胃肠外施用是静脉内、皮下、腹膜内、或肌肉内。

48.权利要求33或43的用途，其中通过口服、经皮、持续释放、受控释放、延迟释放、栓剂、导管、或舌下施用来施用所述药物组合物。

49.权利要求33或43的用途，其中以25mg/kg或更少的剂量投递所述寡核苷酸。

50.权利要求47的用途，其中将所述寡核苷酸在盐水中配制，并且皮下施用。

51.包含权利要求1的寡核苷酸的药物组合物在制造用于治疗或预防受试者中的高血压的药物中的用途。

52.权利要求51的用途，其中所述受试者是哺乳动物。

53.权利要求52的用途，其中所述哺乳动物是人。

54.权利要求51-53中任一项的用途，其中通过胃肠外施用来施用所述药物组合物。

55.权利要求54的用途，其中所述胃肠外施用是静脉内、皮下、腹膜内、或肌肉内。

56.权利要求51的用途，其中通过口服、经皮、持续释放、受控释放、延迟释放、栓剂、导管、或舌下施用来施用所述药物组合物。

57.权利要求51的用途，其中以25mg/kg或更少的剂量投递所述寡核苷酸。

58.权利要求51的用途，其中将所述寡核苷酸在盐水中配制，并且皮下施用。

59.一种用于治疗或预防肺动脉高血压的试剂盒，其包含权利要求1的寡核苷酸和施用装置。

60.权利要求59的试剂盒，其中所述寡核苷酸配制为所述施用装置内含有的粉末。

61.权利要求59的试剂盒，其中所述寡核苷酸配制为所述施用装置内含有的液体气溶胶。

62.权利要求59-61中任一项的试剂盒，其中所述施用装置是吸入器。

63.权利要求24、29、33、43或51中任一项所述的用途，其中所述寡核苷酸相比于含有相同序列和LNA组合以及不同LNA基序(motif)的第二寡核苷酸而言在体内具有增加的效能。