MXPA02002265A - Compuestos enatiomericamente enriquecidos que tienen enlace (s) fotodesdoblable (s) y metodos relacionados a los mismos. - Google Patents
Compuestos enatiomericamente enriquecidos que tienen enlace (s) fotodesdoblable (s) y metodos relacionados a los mismos.Info
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Abstract
La presente invencion proporciona un compuesto que tiene la formula (I) o (II); en donde R1 se selecciona de halogeno y porciones organicas; R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrogeno y porciones organicas que tienen una masa mayor a 15 Daltones, en donde R2 y R3 juntos pueden formar un grupo carbonilo o pueden unirse juntos dentro de una estructura ciclica: Z es un atomo valente (n+1) que excluye carbono en donde n es un numero entero mayor a 0; R4 se selecciona independientemente de porciones organicas, hidrogeno y halogeno que tiene una masa mayor a 15 Daltones, con la provision de que al menos uno de R4 (principalmente R4a) es una porcion organica que tiene una masa mayor a 100 Daltones; R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halogeno o una porcion organica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1, 2, 3 y 4; en donde si R2= R3=H, entonces R1no es CO2(H o CH3) en donde Z(R4)n es ya sea de -NH(CO)- CH(iBu)-NH(CO)-(CH2Ph o O-t-Bu), y R4 no es CH2CO2t-Bu cuando Z es OH; y en donde si los compuestos de ambas formulas (I) y (II) se encuentran presentes en una mezcla; la proporcion molar de la formula (I): formuIa (II) en la mezcla es diferente a 50:50. Los compuestos son utiles como etiquetas, incluyendo etiquetas detectables por espectrometria de masa.
Description
COMPUESTOS ENATIOMÉRICAMENTE ENRIQUECIDOS QUE TIENEN ENLACE(S) FOTODESDOBLABLE(S) Y MÉTODOS RELACIONADOS A LOS MISMOS
La presente invención se refiere generalmente a compuestos tr ' enantioméricamente enriquecidos, específicamente compuestos enatioméricamente enriquecidos que tienen uno o más enlaces desdoblables, asf como también métodos que se relacionan a los mismos, incluyendo métodos sintéticos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Aunque la etiquetación de fluorescencia y radiomarcado de ADN se utiliza ampliamente para propósitos de detección en biología molecular y genéticas, el número de etiquetas es demasiado pequeño para ** ? la multiplexación de nivel elevado y no es adecuada para la rápida adquisición de datos, a gran escala. Una nueva clase de etiquetas, comprendida de etiquetas de espectrometría de masa desdoblable, de molécula pequeña (CMSTs), se ha desarrollado y utilizado en aplicaciones de medición de expresión genética y genotipación de polimorfismo de nucleótido único (SNP) (ver, por ejemplo, un aspecto de la Publicación Internacional de PCT Nos. WO 99/05319; WO 97/27331 ; WO 97/27327 y WO 97/27325. El sistema se basa en la unión covalente de CMSTs a los oligonucleótidos con un enlazador, tal como enlazador fotodesdoblable. Cada etiqueta tiene una masa diferente que es específica para una secuencia de oligonucleótido designada. La identificación de los alelos o
secuencias expresadas presentes se determina, por ejemplo, por desdoblamiento fotolítico de tos oligonucleótidos y la detección simultánea con un espectrómetro de masa cuádruple único estándar utilizando ionización química de presión atmosférica (APCl). La presente invención proporciona etiquetas ventajosas, incluyendo etiquetas detectables por espectrometría de masa, y métodos » de su uso, como se describe de manera más completa en la presente.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos enantioméricamente enriquecidos que tienen enlaces fotodesdoblables, y métodos para preparar moléculas marcadas con etiquetas fotodesdoblables enantioméricaménte enriquecidas. La presente invención proporciona ventajas que incluyen la habilidad para obte*ner un producto distinto único en aquellos casos en donde existe una necesidad de aislar los miembros de una pluralidad de moléculas etiquetada estructuralmente similares, asi como también ventajas relacionadas adicionales como se describe de manera más completa en la presente. En un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto que tiene la fórmula (I) b (II):
(I) (p)
en donde R1 se selecciona de halógeno y porciones orgánicas; R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrógeno y porciones orgánicas que tienen una masa mayor a 15 Daltones, en donde R2 y R3 juntos pueden formar un grupo carbonilo o pueden unirse juntos dentro de una estructura cíclica: Z es un átomo valente (n+1) que excluye carbono en donde n es un número entero mayor a 0; R4 se selecciona independientemente de porciones orgánicas, hidrógeno y halógeno que tiene una masa mayor a 15 Daltones, con fa provisión de que aí menos uno de R4 (principalmente R4a) es una porción orgánica que tiene una masa mayor a 100 Daltones; R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; en donde si R2= R3=H, entonces R1 no es CO2(H o CH3) en donde Z(R4)n es ya sea de -NH(CO)-CH(¡Bu)-NH(CO)-(CH2Ph o O-f-Bu), y R1 no es CH2CO2í-Bu cuando Z es OH; y en donde si los compuestos de ambas formulas (I) y (II) se encuentran presentes en una mezcla; la proporción molar de la fórmula (l):fórmula (ll) en la mezcla es diferente a 50:50. < En varias modalidades de la invención, Z es nitrógeno; R4a es detectable por espectrometría de masa; R2 y R3 son cada uno hidrógeno;
R1 comprende material biológico sintético o natural (por ejemplo, ácido nucleico, proteína o sacárido); y/o R4a tiene una masa menor a 10,000 Daltones y una fórmula molecular de C1.500N0-100O0-100S0 -?oPo-?oHaFßld en donde la suma de a, ß y d es suficiente para satisfacer las valencias de otra manera no satisfechas de los átomos de C, N, O, P y S. En todavía otra modalidad, R4a tiene la fórmula T2-(J-T3-)P-; en donde T2 es una porción orgánica formada de carbono y uno o más de hidrógeno, fluoruro, yodo, oxígeno, nitrógeno, azufre y fósforo; que tiene una masa de 15 a 500 Daltones. T3 es una porción orgánica formada de carbono y uno o más de hidrógeno, fluoruro, yodo, oxígeno, nitrógeno, azufre y fósforo, que tiene una masa de 50 a 1000 Daltones; J es un enlace directo o un grupo funcional seleccionado de amida, éster, amina, sulfuro, éter, tioéster, disulfuro, tioéter, urea, tiourea, carbamato, tiocarbamato, base de Schiff, base Schiff reducida, ¡mina, oxima, hidrazona, fosfato, fosfonato, fosforamida, fosfonamida, sulfonato, sulfonamida o enlace de carbono-carbono; p es un número entero que varía desde 1 a 50, y cuando n es mayor a 1 , cada T3 y J se seleccionan independientemente. En otra modalidad, R4a tiene una fórmula que comprende:
en donde G es (CH2)?-ß en donde un hidrógeno en uno y solamente uno de los grupos CH2 de cada G se reemplaza con -(CH2)w-
Amida-T4; T2 y T4 son porciones orgánicas de la fórmula C?-2d 0-9?0-9So -3Po-3HaFpld en donde la suma de a, ß y d es suficiente para satisfacer las valencias de otro modo no satisfechas de los átomos de C, N, O, S y P. O O li 11 -N-C- — C-N— ¿10 ¿10 La amida es *" ; R10 es hidrógeno o alquilo C1.10, es una número entero que varía de 0 a 4; y n es un número entero que varía de 1 a 50 de manera que cuando n es mayor a 1 , G, c, Amida, R1 y T4 se seleccionan independientemente. La invención proporciona además una composición que comprende compuestos de las fórmulas (I) y/o (II) en donde la proporción molar de la fórmula (l):fórmula (II) en las composiciones se encuentran dentro del rango de 95:5 a 100 o dentro del rango de 5:95 a 0: 100. La invención proporciona además un proceso * para proporcionar un compuesto enántioméricamente enriquecido que comprende contactar un compuesto de ia fórmula:
en donde Z se selecciona de oxígeno, nitrógeno y azufre; en donde R6 es hidrógeno cuando Z es oxígeno o azufre, y cuando Z es nitrógeno entonces R6 se selecciona de hidrógeno e hidrocarburo de C?-C22 y dos grupos R6 se unen a Z; R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500
Daltones, m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica, y el enlace representado tanto por una línea rayada como sólida representa ya sea un enlace doble o sencillo; con un agente seleccionado de (a) una enzima; (b) una enzima y un adyuvante de la fórmula H2N-C(=O)-CHR8-NH-R9, en donde R8 es una porción orgánica y R9 es un grupo protector amino; (c) un ácido quiral; (d) una amina quiral; (e) hidrógeno y un catalizador de hidrogenación quiral; y (f) un medio de separación de cristal mecánico; para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula:
En una modalidad del proceso arriba identificado, el compuesto a accionarse en el proceso tiene la fórmula:
en donde R en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa de menos de 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica; y el compuesto se contacta con una enzima para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula:
En otra modalidad del proceso arriba identificado, el compuesto a accionarse en el proceso tiene la fórmula:
en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica, y compuesto se contacta con una enzima y un adyuvante de ia fórmula H2N-C(=O)-CHR8-NH-R9, en donde R8 es una porción orgánica y R9 es un grupo protector amino; para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula:
En otra modalidad del proceso arriba identificado, el
compuesto a accionarse en el proceso tiene la fórmula:
en donde R8 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica; y el compuesto se contacta con un ácido quiral, para proporcionar una sal enantioméricamente enriquecida de la fórmula:
Quiral En otra modalidad del proceso arriba identificado, el compuesto a accionarse en el proceso tiene la fórmula:
en donde R en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o Una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; y el compuesto se contacta con una amina quiral, para proporcionar una sal enantioméricamente enriquecida de la fórmula:
Amina
En otra modalidad del proceso arriba identificado, el compuesto a accionarse en el proceso tiene la fórmula:
en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; y el compuesto se contacta con hidrógeno en la presencia de un catalizador de hidrogenación quiral, para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula:
En otro aspecto, la invención proporciona compuestos de la fórmula
(V) (VI) en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2. ,3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica; Z es SH; o NR8 en donde R8 es ya sea hidrógeno o un grupo protector amina; y en donde si los compuestos tanto de la fórmula (V) como (VI) se presentan en una mezcla, la proporción molar de la fórmula (V):fórmula (VI) en la mezcla es diferente a 50:50. En otro aspecto, la invención proporciona compuestos .de la fórmula
(VII) (vpi) en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2. ,3 y 4; R11 es una porción funcional que incluye una fosforamidita ó porción de H-fosfonato; R12 es una porción orgánica que tiene una masa de 15-10,000 Daltones; y en donde si los compuestos tanto de la fórmula (Vil) como (VIII) se encuentran presentes en una
mezcla, la proporción molar de lá fórmula (Vll):fórmula (VIH) en la mezcla es diferente a 50:50. En una modalidad, en los compuestos arriba descritos, la porción de fosforamidita de R1 tiene la fórmula -O-P(OR13)(N(R14)2) en donde cada uno de R13 y R14 se selecciona independientemente de un grupo alquilo o un grupo alquilo substituido que tiene uno o más substituyentes seleccionados de halógeno y ciano; y dos grupos R14 pueden unirse juntos para formar un grupo heterocicloalquilo con el nitrógeno de la fosforamidita. En otra modalidad, la porción de H-fosfonato de R11 comprende la fórmula -O-P(=O)(H)(O-+HN(R15)3) y R15 es independientemente un grupo alquilo
Estos y otros aspectos y modalidades de la presente invención serán aparentes en la referencia a la siguiente descripción detallada. Para este fin, se establecen varias referencias en la presente que describen en más detalles ciertos procedimientos, compuestos y/o composiciones, y se incorporan en la presente para referencia en su totalidad. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona etiquetas adecuadas para acoplarse a ácidos nucleicos u otras moléculas de interés. Cuando se acoplan a ADN, las etiquetas proporcionan un medio para lograr un sistema de genotipación de rendimiento elevado. Preferentemente, el enlazador entre la etiqueta y la molécula de interés debe desdoblarse completamente bajo condiciones que no causan la fragmentación de la etiqueta. Además, la etiqueta preferentemente produce un valor máximo
por oligonucleótido inyectado, y da señal óptima en términos de corriente de ion. También, la etiqueta es preferentemente estable a condiciones PCR, HPLC, y otras manipulaciones utilizadas en formatos de análisis.
Los reactivos para introducir etiquetas a una molécula de interés debe proceder reproduciblemente y en i buena producción. En un planteamiento preferido para satisfacer estos objetivos, una estructura modular se desarrolló, la cual permite que los componentes CMST se perfeccionen independientemente. Los componentes de una CMST preferentemente incluyen un enlazador fotolábil, un aumentador de sensibilidad de espectrometría de masa (MSSE), y una unidad de masa variable (VMU), todos conectados juntos a través de un andamio. La presente invención proporciona moléculas etiquetadas de interés, precursores para moléculas etiquetadas de interés, y métodos para generar las moléculas etiquetadas y los precursores a las mismas, en donde la etiqueta es enantioméricamente enriquecida. Al utilizar precursores enantioméricamente enriquecidos, la purificación del producto de reacción del precursor y la molécula de interés, con objeto de proporcionar moléculas etiquetadas purificadas de interés, se facilita. De esta manera, la presente invención proporciona un compuesto que tiene la fórmula (I) o (II):
a) en donde R1 se selecciona de halógeno y porciones orgánicas; R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrógeno y porciones orgánicas que tienen una masa mayor a 15 Daltones, en donde R2 y R3 juntos pueden formar un grupo carbonilo o pueden unirse juntos dentro de una estructura cíclica: Z es un átomo valente (n+1 ) que excluye carbono en donde n es un número entero mayor a 0; R4 se selecciona independientemente de porciones orgánicas, hidrógeno y halógeno que tiene una masa mayox a 15 Daltones, con la provisión de que al menos uno de R4 es una porción orgánica que tiene una masa mayor a 1 00 Daltones; R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4. El compuesto de la invención se enriquece enantioméricamente, de manera que si los compuestos de ambas fórmulas (I) y (II) se presentan en una mezcla; la proporción molar de la fórmula (l):fórmula (II) en la mezcla es diferente a 50:50. El compuesto de la invención incluye un grupo 2-nitrofenilo, en la posición 1 del anillo de fenilo, un grupo metilo substituido, en donde el átomo de carbono de grupo metilo se referirá en la presente como ya sea C1 o el átomo de carbono bencílico. Además del grupo 2-nitrofenilo, el
átomo C1 se une directamente a un átomo de hidrógeno (no mostrado), un átomo de carbono (referido en la presente como C2) y un átomo sin carbono. En virtud del grupo 2-nitrofenilo, los compuestos de la invención son fotodesdoblables. Es decir, los compuestos de la invención responderán al contacto con cierta radiación electromagnética al experimentar una reacción de desdoblamiento mediante lo cual el átomo Z substituido se separa de C1 como se muestra en las siguientes estructuras, en donde "^y^f indica un enlace que es fotolíticamente inestable.
Debido a que C1 se une directamente a solamente un átomo que no es un átomo de hidrógeno o de carbono, los compuestos de la invención experimentan una reacción de fotodesdoblamiento selectivo. Es decir, el enlace C1 -Z puede desdoblarse selectivamente por condiciones fotolíticas apropiadas, dejando a los otros enlaces C1 largamente si no completamente intactos. Este desdoblamiento selectivo puede ocurrir siempre que Z no sea un átomo de carbono. En modalidades preferidas, Z se selecciona de oxígeno, nitrógeno y azufre. Cada uno de oxígeno, nitrógeno y azufre es un átomo preferido para la posición Z. Las condiciones fotolíticas que permiten el desdoblamiento
selectivo del enlace C1 -Z sdn grandemente inafectadas por otra substitución en el anillo de 2-nitrofenilo. De acuerdo con lo anterior, cualquiera o más de los átomos de hidrógeno del anillo de fenilo puede reemplazarse con un número igual de grupos Rd. De acuerdo con lo anterior, los compuestos de la invención pueden tener un número Cm") de grupos R5, en donde m es un número entero seleccionado de 0, 1 , 2, 3 y 4. La química de fotodesdoblamiento deseada se grandemente ¡ndependientemente de la naturaleza del grupo Rd, de manera que R5 puede ser un grupo inorgánico, por ejemplo, halógeno, o un grupo orgánico. Típicamente, un grupo R5 orgánico no es demasiado largo, y de acuerdo con lo anterior tiene menos de aproximadamente 500 Daltones. Los grupos R5 preferidos se seleccionan de grupos hidrocarburo C?-C22. En los compuestos preferidos de la invención, m es igual a cero, de manera que el anillo de 2-nitrofenilo tiene cuatro substituyentes de hidrógeno. Después de experimentar una reacción de fotodesdoblamiento, el residuo que contiene Z resultante que se deriva de un compuesto de la ¡nvención se referirá en la presente como una etiqueta. La etiqueta es, o ¡ncluye una porción detectable, en donde este término se refiere a una porción que puede detectares, y preferentemente caracterizarse, por un método analítico. Los métodos analíticos representativos incluyen métodos potenciométricos o espectro-métricos. Los métodos espectrométricos representativos incluyen espectrometría de masa, espectrometría infrarroja, espectrometría ultravioleta y espectrometría fluorescente. Un método pontenciométrico representativo es
amperometría potencioestática. Con objeto de proporcionar una etiqueta eficaz, al menos un grupo R4 es una porción orgánica que tiene una masa mayor a 100 Daltones. Este grupo R4 se referirá en la presente como el primer grupo R4 (o R4a). El que las etiquetas deberían tener masas mayores a 100 Daltones es deseable por un número de razones. Cuando las etiquetas tienen masas menores a 100 Daltones, puede ser difícil identificar las etiquetas. Por ejemplo, cuando las etiquetas se identifican y caracterizan por espectrometría de masa, las etiquetas del peso molecular menor a 100 Daltones puede ser difícil de distinguir del ruido de fondo inherente en la operación de un espectrómetro de masa. Además, la presente invención proporciona composiciones que contiene un número de compuestos no idénticos de la invención, en donde los compuestos no idénticos contienen etiquetas no idénticas que pueden distinguirse entre sí por un método analítico. Con objeto de distinguir un número de etiquetas no idénticas, las etiquetas deben ser suficientemente diferentes entre sí que el método analítico puede detectar la diferencia. Con objeto de obtener un número adecuado de etiquetas que son distintas por, por ejemplo, potenciometría, las etiquetas deben contener un número de átomos que pueden unirse juntos en maneras no idénticas que son analíticamente distintas. Cuando las etiquetas tienen una masa de menos de 1 00 Daltones, existe un número indebidamente limitante de etiquetas analíticamente distintas. De acuerdo con lo anterior, para permitir la variabilidad suficiente en estructura, y para permitir la detección fácil y eficaz, las
etiquetas deben tener masas en exceso de 100 Daltones. Siempre que el primer grupo R4 tenga una masa en exceso de 100 Daltones, la identidad del otro grupo R4 en un compuesto de la ¡nvención puede seleccionarse para lograr una o más metas. Por ejemplo, un segundo o más grupos R4 (por ejemplo, R4b, R4c, etc) puede impartir información que complementa la información derivada del primer grupo R4. En este caso, un segundo o más grupos R4 también preferentemente tiene una masa de al menos 100 Daltones. Sin embargo, en otros casos, puede ser deseable que el segundo o más grupos R4 no satisfagan más el estado de valencia insatisfecho de otro modo de C1 , no interfieren con la reacción de fotodesdoblamiento o detección de la etiqueta, y puede ser sintéticamente fácil de formar. En este último caso, el segundo o más grupos R4 puede ser hidrógeno o grupos hidrocarburo simples. En una modalidad preferida, el segundo o más grupos R4, si está(n) presente(s), es/son hidrógeno. En los compuestos de la invención, R1 se selecciona de halógeno y porciones orgánicas, mientras que R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrógeno y porciones orgánicas que tienen una masa mayor a 15 Daltones. Como se establece arriba, los compuestos de la invención incluyen una porción detectable en donde la detección, y opcionalmente la caracterización de la porción detectable proporciona información acerca del compuesto de la invención. En una modalidad, el grupo R1 contiene fa característica del compuesto acerca del cual se desea la información. Por ejemplo, R1 puede incluir material biológico de un individuo, y la etiqueta es característica de ese individuo y/o el material
biológico específico. Como otro ejemplo, el grupo R1 puede contener un ácido nucleico sintético particular, péptido o secuencia de sacárido, que se identifica únicamente por la etiqueta. En otra modalidad, R1 es un grupo químico reactivo que puede experimentar una reacción química mediante la cual el material biológicamente derivado puede enlazarse de manera fotodesdoblable a una etiqueta. Por ejemplo, R1 puede ser un átomo de halógeno que puede desplazarse en una reacción química por material biológico o derivarse de material biológico. Los grupos R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrógeno y porciones orgánicas que tienen una masa mayor a 15 Daltones. Típicamente, R2 y R3 se seleccionan con una vista a su impacto en la química seleccionada para unir R1 a C1 , y/o para su impacto en la reacción de fotodesdoblamiento mediante lo cual la etiqueta se separada de C1 . Cuando cada uno de R2 y R3 es hidrógeno, entonces no R2 *ni R3 impactan adversamente la reacción de fotodesdoblamiento, y típicamente son compatibles con cualquier química utilizada para acoplar R1 a C1 . De acuerdo con lo anterior, R2 y R3 son preferentemente hidrógeno. Sin embargo, R2 y R3 podrían ser grupos diferentes a hidrógeno. Por ejemplo, R2 y R3 juntos pueden formar un grupo carbonilo con C1 . Alternativamente, R1 y R2 pueden, junto con C1 , formar una estructura cíclica. Como otra alternativa, ya sea de R2 o R3 puede ser una porción orgánica de masa mayor a 15 Daltones, por ejemplo, un grupo hidrocarburo C?-C22. Típicamente, los grupos hidrocarburo no interfieren con la reacción de fotodesdoblamiento deseado, y no interfieren con la química de acoplamiento R1/C1 .
Otra característica de un cpmpuesto de la invención es que el átomo C1 es quiral. Como se observa a partir de las fórmulas (I) y (II), la naturaleza de los substituyentes en C1 necesariamente requiere que C1 sea qu?ral. Además, si los compuestos de las fórmulas (I) y (II) se encuentran en mezcla, la proporción molar de los compuestos de la fórmula (I) a los compuestos de la fórmula (II) es diferente a 50:50. En una modalidad preferida de la invención, los compuestos de la fórmula (I) no se encuentran en mezcla con los compuestos de la fórmula (II), y viceversa. Además, en el caso en que los compuestos de la fórmula (I) se encuentran en mezcla con los compuestos de la fórmula (II), la proporción molar de los compuestos de la fórmula (I) a los compuestos de la fórmula (II) se encuentra preferentemente en exceso de 95:5, o 96:4, o 97:3, o 98:2 o 99:1 , o en exceso de 99.5:0.5, o viceversa (es decir, la proporción molar de los compuestos de la fórmula (II) a los compuestos de la fórmula (I) es preferentemente en exceso de 95:5, o 96:4, o 97:3, o 98:2 o 99: 1 , o en exceso de 99.5:0.5). Debido a que los compuestos de las fórmulas (l) o (II) ya sea se encuentran o no, o solamente se encuentran mínimamente, en mezcla con los compuestos de la fórmulas (II) o (I), respectivamente, las separaciones cromatográficas que incluyen los compuestos de las fórmula (!) o (II) son mucho más fáciles y eficaces que si cantidades significativas de los compuestos de las fórmulas (I) y (II) estuvieran en mezcla entre sí. La presente invención proporcionar composiciones que contienen una pluralidad de compuestos de las fórmulas (I) o (li) que, debido a su constitución isomérica, pueden separarse de manera más fácil uno de otro
que de otro modo sería el caso. Esta habilidad aumentada para distinguir compuestos etiquetados de manera diferente permite la formación de composiciones que podrían de otra manera no caracterizarse. Por ejemplo, aunque dos compuestos de la fórmula (I) pueden ser diferentes en virtud de grupos R1 ligeramente diferentes, estos dos compuestos (compuestos IA y IB) pueden no ser eficazmente separables si se encuentran en mezcla con compuestos de la fórmula (II) que tiene la substitución idéntica alrededor de C1 (compuestos HA y HB). Esto es debido que el tiempo de elución de cromatografía del compuesto IA puede sobreponer aquel del compuesto IIB y/o el tiempo de elución del compuesto IB puede sobreponer aquel del compuesto HA. De acuerdo con lo anterior, los compuestos IA y IIB pueden no resolverse fácilmente entre sí, debido a la interferencia de los compuestos HA y HB. La presente invención dirige este problema al proporcionar compuestos de la fórmula (I) libres de, o eficazmente libres de, compuestos de la fórmula (II). . En otro aspecto, la presente invención se dirige a un proceso para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido utilizando un agente específico. Más específicamente, el proceso actúa en un compuesto de la fórmula:
en donde Z se selecciona de oxígeno, nitrógeno y azufre; en donde R6 es hidrógeno cuando Z es oxígeno o azufre, y cuando Z es nitrógeno
entonces Rß se selecciona de hidrógeno e hidrocarburo de CÍ-022 y dos grupos Rß se unen a Z; R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones, m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica, y el enlace representado tanto por una línea rayada como sólida representa ya sea un enlace doble o sencillo. El proceso inventivo contacta un compuesto como se identifica arriba con un agente. El agente se selecciona de (a) una enzima; (b) una enzima y un adyuvante de la fórmula H2N-C(=O)-CHR8-NH-R9, en donde R8 es una porción orgánica y R9 es un grupo protector amino; (c) un ácido quiral; (d) una amina quiral; (e) hidrógeno y - un catalizador de hidrogenación quiral; y (f) un medio de separación de cristal mecánico. El compuesto se contacta con el agente para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula
Además de las técnicas específicas descritas en la presente para prepara compuestos que tienen enlaces fotolábiles a etiquetas enantioméricamente enriquecidas, otras técnica adecuadas pueden encontrarse en las siguientes referencias: Asymmetric Catalysis in Organic Synthesis, R. Noyori, John Wiley & Sons, Nueva York, NY, 1994; Asymmetric Synthetic Methodology, D,J. Agér and M. B. East, CRC Press, Boca Ratón, FL, 1995; Asymmetric Synthesis, R.A. Aitken and S.N. Kilenyi,
Eds. Blackie Academic & Profesional, Glasglow, R.U., 1992; Asymmetric Synthesis, J. Morrison, . Ed. , Academic Press, Orlando, FL. (serie, incluyendo los volúmenes emitidos en 1984 y 1985); Asymmetric Synthesis, R.G. Proctor, Oxford University Press, Nueva York, NH, 1996; Asymmetric Synthesis: Construction of Chiral Molecules using Amino Acids, G.M. Coppola and H.F. Schuster, John Wiley & Sons, Nueva York, NY, 1987; Catalytic Asymmetric Synthesis, I. Ojima, Ed., VHC Publishers, Nueva York, NY, 1993; Chiral Auxiliaries and Ligands in Asymmetric Synthesis, J. Seyden-Penne, John Wiley & Sons, Nueva York, NY, 1995; Chiral Separations; Applications and Technology, S. , Ahuja, Ed., American Chemical Society, Washington, D.C. , 1996; Chirality in Industry l & II, A.N. Collins, G.N. Sheldrake and J. Crosby, Eds. , John Wiley & Sons, Nueva York, NY, 1995 y 1997; Chirotechnologu: Industrial Synthesis of Optically Active Compunds, R.A. Sheldon, Marcel Dekkar, Nueva Yorkm NY 1993; y Enantiomers, Racemates and Resolutions, J. Jacques, A. Collet, and S.H. Wilen, John Wiley & Sons, Nueva York, NY, 1981 . Los presentes compuestos y composiciones, y métodos para su preparación, pueden utilizarse para proporcionar moléculas objetivo en donde la etiqueta tanto se enriquece óptimamente como se enlaza fotodesdoblablemente a la molécula. Las moléculas con etiquetas fotodesdoblablemente unidas, que pueden proporcionarse en forma ópticamente enriquecida de acuerdo a la presente invención, así como también métodos que pueden practicarse con compuestos y composiciones de la presente invención, se establecen en, por ejemplo, Publicaciones de PCT Internacional Nos. WO 99/05319; WO 97/27331 ; WO 97/27327; WO
97/27325; y WO 95/04160. De esta manera, los compuestos de la presente invención pueden substituirse para los compuestos etiquetados descritos en estas cuatro publicaciones, así como también otros métodos y análisis en donde las moléculas que tienen etiquetas fotodesdoblablemente enlazadas se utilizan. Los siguientes ejemplos se establecen como un medio para ilustrar la presente invención y no se construyen como una limitación a la misma. EJEMPLOS En los siguientes ejemplos, y al menos que se observe de otra manera, los reactivos químicos y reagentes fueron del grado comercial estándar, obtenidos de casas de suministro comerciales tales como Aldrich (Milwaukee, Wl; www.sigma-aldrich.com), Fluka (una división de Aldrich) y Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, NH; http://www.lancaster.co.uk). EJEMPLO 1 RESOLUCIÓN CON DTTA ÁCIDO QUIRAL El éster de metilo de ácido (+)-3-amino-3-(2- nitrofeniI)propiónico (24.6 g, 1 10 mmol) y el ácido di-p-toluoil-D-tartárico de ácido quiral (DTTA, 42.4 g, 1 10 mmol) se tomaron en 500 mL de metanol al calentar a 67°C. La solución resultante se enfrió a 56°C con la sal de éster de metilo de ácido 3-amino-3-(2-nitrofenil)propiónico y DTTA. La mezcla se dejo enfriar a temperatura ambiente (21 °C) y agitó durante 16 horas. Los cristales que se formaron se recolectaron por filtración dando un sólido blanco que se enriquece en un enantiómero (46% de exceso enantiomérico, e.e.). Una cristalización en metanol resultó en 12 g
de material con una pureza diastereomérica de 88%. EJEMPLO 2 RESOLUCIÓN CON ÁCIDO CANFÁNICO (-) DE ÁCIDO QUIRAL El ácido (+)-3-amino-3-(2-nitrofenil)propiónico (172 Ng, 0.82 mmol) y el (-)-canfánico de ácido quiral (165 mg, 0.83 mmol, Fluka) se tomaron en 5 mL de metanol al calentar a reflujo. La solución resultante se enfrió a temperatura ambiente (21 °C). Los cristales que se formaron se recolectaron por filtración dando un sólido blanco (105 mg, 31 % de producción). En análisis por cromatografía de líquido de presión elevada quiral (cHPLC, Chirobiotic T columna a 5°C, 75% de regulador de 20 mM de acetato de amonio, pH 4.5 y 25% de EtOH, detector a 215 nm) indicaron que el producto fue enantioméricamente puro. EJEMPLO 3 HIDRÓLISIS SELECTIVA CON ENZIMA El éster de metilo de ácido (+)-3-amino-3-(2-nitrofenil)propiónico (60 g, 270 mmol) se disolvió en regulador de fosfato (50 mM, 500 mL) y ajustó a pH 7. Después la Enzima Amano PS (6 g, 10% en peso Enzima Amano (Milton Keynes, R.U.; Lombard IL, USA; www.amano-enzyme.co.hp)) como una mezcla en regulador de fosfato (100 mL) se agregó a la solución, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (21 °C) por 24 horas. En la terminación, el precipitado de aminoácido se filtró y el filtrado acuoso se removió antes de que el sólido se enjuague con diclorometano (DCM, 2 x 10 mL). El sólido se disuelve en HCL acuoso (6 M, 150 mL) pero un precipitado desconocido fino, el cual se filtró, aún permanece. La mezcla acuosa resultante se
extrajo con DCM ante de que el sólido §e precipitará al ajustar el pH a 7. Esto da el aminoácido deseado (23 g, 90% de producción). El filtrado inicial se basificó a pH 8 y extrajo primero con los lavados de DCM recolectados arriba; y después con DCM fresco. Las capas orgánicas se combinaron, secaron y evaporaron para dar el éster de etilo amino (23 g, 80% de producción). La rotación óptica de la sal HCl de éster de etilo en metanol dio un aD de 127.55° (c=1 , 20°C, 589 nm). El exceso enañtiomérico (e.e.) tanto del aminoácido como del éster de etilo amino se determinó por cHPLC y ambos estuvieron en exceso de 98% enatioméricamente puro. * EJEMPLO 4 SÍNTESIS DE MOLÉCULA REACTIVA PARA SUMINISTRAR ETIQUETA
ÓPTICAMENTE ENRIQUECIDA A LA MOLÉCULA DE INTERÉS * Las etiquetas descritas en la presente se conjugan preferentemente con una molécula de interés a través de un enlace fotolábil. Un enlace fotolábil se presenta dentro de un grupo o-nitrobencilo (ver, por ejemplo, (a) Greenberg, M.M.; Gilmore, J.L. J. Org.
Chem. 1994, 59, 746-753; (b) Yoo, D.J; Greenberg, M.M. J. Org. Chem.
1995, 60, 3358-3364; y (c) Venkatesan, H.; Greenberg, M.M. J. Org. Chem 1996, 61 , 525-529). La reacción de fotoredox intramolecular en un grupo o-nitrobencilo (ver, por ejemplo, Pillai, V.N.R. Synthesis 1980, 1 -26) permite que la etiqueta se desdoble del oligonucleótido rápidamente bajo condiciones neutrales (seis segundos de exposición con una lámpara de
254 nm Hg) y sin fragmentación. De acuerdo con lo anterior, la vía sintética comienza
(Esquema 1 ) con esterificación del eniazador fotosensible de ácido 3- amino-3-(2-nitrofenil)própiónico, (ANP, i , ver, por ejemplo, Brown, B.B: Wagner, D.S., Geysen, H.M. , Molecular Diversity 1995, 1 , 4-12; y (b) Rodebaugh, R.; Fraser-Reid; B.; Geysen, H.M. Tetrahedron Letters 1997, 38, 7653-7656) para dar el hidrocloruro de éster de etilo (2) en 84% de producción. Esto se sigue por la transformación enzimática de 2 para proporcionar el éster de etilo como un isómero único, que facilita la purificación de HPLC en la etapa de conjugación de oligonucleótido. El hidrocloruro de éster de etilo se disuelve en agua y se ajusta pH neutral con pH con 2N HCl. La enzima de esteraza PS Amano se agrega a una mezcla de regulador de fosfato. Después de la terminación de la reacción, un levantamiento básico removió el sub-producto de ANP hidrolizado (4), y el éster de etilo de isómero único (3, >99% e.e.) se recuperó (92% de material disponible). Esquema 1
La lisina proporcionó un andamio muy adecuado para el planteamiento modular a la síntesis de las etiquetas. Los dos grupos de ácido carboxílico y amina presentes en la lisina proporcionaron manejos para químicas de péptido robusto con enlaces de amida resultantes entre los componentes de etiqueta. Los péptidos tienen una conducta predecible en espectrometría de masa y también son relativamente
estables a 254 nm de luz. Como se observa en el Esquema 2, el acoplamiento de 3 con a-BOC-e-Alloc-lisina (5), utilizando EDAC1 hidrocloruro de (1 -[3-(Dimetilamino)propil]-3-etil-carbodiimida, obtenido de Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wl) y 1 -hidroxibenzotriazola (HOBT), dio la lisina ANP protegida (6). El retiro de BOC con HCl proporcionó el éster e-Alloc-lisina (7) como un sólido blanco en 81 % de producción de 3. Los aromáticos perfluorinados pueden utilizarse como etiqueta electrofóricas para propósitos analíticos en espectrometría de masa de modo de ion negativo (ver, por ejemplo, (a) Abdel-Baky, S.; Klempier, N.; Giese, R.W. Tetrahedron 1990, 46, 5859; (b) Abdel-Baky, S.; Allam, K.; Giese, R.W. Anal. C jem.1993, 65, 498-499; (c) Trainor, T; Giese, R.W., Vouros, P. Journal of Chromatography 1988, 452, 369-376; y (d) Saha, M. ; Saha, J; Giese, R.W. Journal of Chromatography 1993, 641 , 400-404). Nuestra estrategia inicial para un candidato MSSE, el componente de ionización de la etiqueta, consiste de unir varios ácidos carboxílicos altamente fluorinados, deficientes en electrón a un andamio representativo y medir la corriente iónica relativa con APCl de modo de ion negativo. La fragmentación ocurrió, dando múltiples valores máximos junto con una señal baja. Los aumentadores para el régimen de ionización opuesto se exploraron entonces. Las etiquetas se hicieron incorporando estructuras de píridilo, prolinilo y piperidinilo como MSSE y se probaron en APCl de modo positivo. Por todos los criterios, una etiqueta que utiliza ácido N- metil isonipecótico (INA) da excelente resultados. El hidrocloruro de INA se acopló a 7, utilizando EDAC y trietilamina, para dar estructura Alloc-protegida cruda 8, que se
desprotegió con dietilamina, trifenilfosfina y acetato de paladio. La estructura de núcleo resultante (9) se cristalizó de la mezcla de reacción y se recuperó por filtración en 95% de producción como un sólido amarillo. Esquema 2
Para proporcionar un conjunto largo de etiquetas detectables con pesos moleculares distintos, la estructura de núcleo 9, se derivó con un conjunto de 45 ácidos carboxílicos referidos como unidades de masa variables (VMUs). Las masas de las VMUs se espaciaron en un mínimo de 4 a.m.u. aparte, para minimizar la sobreposición isotópica entre las etiquetas. Los pesos moleculares de las VMUs variaron desde 90-298 a.m.u. Las VMUs preferidas no tienen las siguientes propiedades o características: (1 ) funcionalidades incompatibles con la secuencia sintética, tales como esteres; (2) elementos con múltiples isótopos (Cl, Br, S); (3) funcionalidades que pueden conducir a competir los fotoprocesos (yoduros, acil y aril-fenonas); (4) ácidos racémicos; y (5) falta de
disponibilidad comercial. VMUs se acoplaron a 9, utilizando HATU y N-metil morfolina. Después de la purificación por cromatografía de columna, el éster de etilo CMST (10) se recuperó en producciones variables. Para la etapa final, la formación del éster activo se logró utilizando una transesterificación catalizada base de trifluoroacetato de tetrafluorofenilo (TFP TFA, ver, por ejemplo, Green, M.; Berman, J. Tetrahedron Letters 1990, 31 , 5851 -5852; TFP TFA se preparó de una manera similar a trifluoroacetato de pentafluorofenilo, y se utilizó debido a que el protón en el anillo de tetrafluorofenil actúa como una verificación NMR de diagnóstico) y 11 , que resulta en el éster TFP CMST (12) en producciones variables. El éster activo de tetraflurofenilo se eligió debido a los productos laterales removidos fácilmente y la compatibilidad y estabilidad relativa hacia las condiciones de conjugación de oligonucleótidos. Los « esteres de TFP CMST se conjugaron con oligonucleótidos con parte posterior de 5'-aminohexilo (obtenidos de TriLink Biotechnology, San Diego, CA) de acuerdo con el método de Lukhtanov ef al., (ver, por ejemplo, Lukhtanov, E.A. ; Kutyavin, I.V., Gamper, H.B. ; Meyer, R.B. Jr. Bioconjug. Chem. 1995, 4, 418-426). Esquema 3
El número de etiquetas si expandió además por el uso incremental de un derivado de tirósina que funcionó como un ajustador de masa grueso (GMA, y más específicamente N-Boc-O-etil-L-tirosina, que puede ordenarse comercialmente de Bachem California (Torrance, CA) o prepararse por alquilación de N-Boc-L-Tirosina-Ome con yodoetano y carbonato de cesio en 86% de producción, seguido por hidrólisis con NaOH en cuantitativo) que incrementa el peso molecular de la etiqueta desdoblada por 191 a.m.u. y permite que el conjunto de VMUs se re-utilice para etiquetas de peso molecular más elevado. GMA se acopló a la estructura de núcleo 9 como se muestra en el Esquema 4. Después del levantamiento básico, la estructura GMA protegida con BOC se aisló por filtración. La desprotección con TFA dio como resultado la estructura de núcleo de monómero GMA (13, n=1 ) en producción cuantitativa. VMUs se acoplan en la misma manera que antes, resultando en conjuntos adicionales de etiquetas (14). El uso de cuatro unidades del ajustador de masa, un total de casi 200 etiquetas puede sintetizarse. Esquema 4a
a (a) EDAC, HOBT, THF; (b) TFA, DCM; (c) VMU, HATU, NMM; (d) 1 N NaOH, THF; (e) TFP, TFA, DIEA, DMF
A partir de lo anterior, se apreciará que, aunque las modalidades específicas de la invención se han descrito en la presente para propósitos de ilustración, varias modificaciones pueden hacerse sin desviarse del espíritu y alcance de la invención. De acuerdo con lo anterior, la invención no se limita excepto como por las reivindicaciones anexas.
Claims (1)
- REIVINDICACIONES Un compuesto que tiene la fórmula (I) o (II): en donde R1 se selecciona de halógeno y porciones orgánicas; R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrógeno y porciones orgánicas que tienen una masa mayor a 15 Daltones, en donde R2 y R3 juntos pueden formar un grupo carbonilo o pueden unirse juntos dentro de una estructura cíclica: Z es un átomo valente (n+1 ) que excluye carbono en donde, n es un número entero mayor a 0; R4 se selecciona independientemente de porciones orgánicas, hidrógeno y halógeno que tiene una masa mayor a 15 Daltones, con la provisión de que al menos uno de R4 (principalmente R a) es una porción orgánica que tiene una masa mayor a 100 Daltones; R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; en donde si R2= R3=H, entonces R1 no es CO2(H o CH3) en donde Z(R4)n es ya sea de -NH(CO)-CH(iBu)-NH(CO)-(CH2Ph o O-f-Bu), y R1 no es CH2CO2f-Bu cuando Z es OH; y en donde si los compuestos de ambas formulas (I) y (II) se encuentran presentes en una mezcla; la proporción molar de la fórmula (l):fórmula (II) en la mezcla es diferente a 50:50. 2. Un compuesto según la reivindicación 1 , caracterizado porque Z es nitrógeno. 3. Un compuesto según la reivindicación 1 , caracterizado porque R4a es detectable por espectrometría de masa. 4. Un compuesto según la reivindicación 1 , caracterizado porque R4 tiene una masa menor a 10,000 Daltones y una fórmula molecular de C?-5ooNo-?ooOo-?ooSo -?oPo-?oHaFßld en donde la suma de a, ß y d es suficiente para satisfacer las valencias de otra manera no satisfechas de los átomos de C, N, O, P y S. 5. Un compuesto según la reivindicación 1 , caracterizado porque R4a tiene la fórmula T -(J-T3-)P-; en donde T2 es una porción orgánica formada de carbono y uno o más de hidrógeno, fluoruro, yodo, oxígeno, nitrógeno, azufre y fósforo; que tiene una masa de 15 a 500 Daltones; T3 es una porción orgánica formada de carbono y uno o más de hidrógeno, fluoruro, yodo, oxígeno, nitrógeno, azufre y fósforo, que tiene una masa de 50 a 1000 Daltones; J es un enlace directo o un grupo funcional seleccionado de amida, éster, amina, sulfuro, éter, tioéster, disulfuro, tioéter, urea, tiourea, carbamato, tiocarbamato, base de Schiff, base Schiff reducida, imina, oxima, hidrazona, fosfato, fosfonato, fosforamida, fosfonamida, sulfonato, sulfonamida o enlace de carbono-carbono; y p es un número entero que varía desde 1 a 50, y cuando n es mayor a 1 , cada T y J se seleccionan independientemente. Un compuesto según la reivindicación 1 , caracterizado porque R tiene una fórmula que comprende: en donde G es (CH2)?_ß en donde un hidrógeno en uno y solamente uno de los grupos CH2 de cada G se reemplaza con -(CH2)W-Amida-T4; T2 y T4 son porciones orgánicas de la fórmula CL5.5N0-9O0.9S0 -3Po-3HaFpld en donde la suma de a, ß y d es suficiente para satisfacer las valencias de otro modo no satisfechas de los átomos de C, N, O, S y P: O II -N-C- — C-N— 0 ¿10 Amida es R1 1 .10 R es hidrógeno o alquilo C .- .o, w es una número entero que varía de 0 a 4; y n es un número entero que varía de 1 a 50 de manera que cuando n es mayor a 1 , G, c, Amida, R1 y T4 se seleccionan independientemente. 7. Un compuesto según la reivindicación 1 , caracterizado porque R2 y R3 son cada uno hidrógeno. 8. Un compuesto según la reivindicación 1 , caracterizado porque R1 comprende material biológico natural o sintético. 9. Un compuesto según la reivindicación 8, caracterizado porque R1 comprende ácido nucleico, proteína o sacárido. 10. Una composición que comprende los compuestos de la reivindicación 1 , caracterizada porque la proporción molar de la fórmula(l):fórmula (II) se encuentra dentro del rango de 95:5 a 100:0 o dentro del rango de 5:95 a 0: 100. 11 . Un proceso para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido que comprende contactar un compuesto de la fórmula: en donde Z se selecciona de oxígeno, nitrógeno y azufre; en donde Rß es hidrógeno cuando Z es oxígeno o azufre, y cuando Z es nitrógeno entonces Rß se selecciona de hidrógeno e hidrocarburo de C?-C22 y dos grupos Rß se unen a Z; R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones, m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica, y el enlace representado tanto por una línea rayada como sólida representa ya sea un enlace doble o sencillo; con un agente seleccionado de (a) una enzima; (b) una enzima y un adyuvante de la fórmula H2N-C(=O)-CHR8-NH-R9, en donde R8 es una porción orgánica y R9 es un grupo protector amino; (c) un ácido quiral; (d) una amina quiral; (e) hidrógeno y un catalizador de hidrogenación quiral; y (f) un medio de separación de cristal mecánico; para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula: 12. El proceso según la reivindicación 1 1 , caracterizado porque un compuesto de la fórmula: en donde R en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa de menos de 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica; se contacta con una enzima para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula: 13. El proceso según la reivindicación 1 1 , caracterizado porque un compuesto de la fórmula: en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica; se contacta con una enzima y un adyuvante de la fórmula H2N-C(=O)-CHR8-NH-R9, en donde R8 es una porción orgánica y R9 es un grupo protector amino; para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula: 14. El proceso según la reivindicación 11 , caracterizado porque un compuesto de la fórmula: ' - 3J3 -en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica; se contacta con un ácido quiral, para proporcionar una sal enantioméricamente enriquecida de la fórmula: 15- El proceso según la reivindicación 1 1 , caracterizado porque un compuesto de la fórmula: en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; se contacta con una amina quiral, para proporcionar una sal enantioméricamente enriquecida de la fórmula: Amina Quiral 16. El proceso según la reivindicación 1 1 , caracterizado porque un compuesto de la fórmula: en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; se contacta con hidrógeno en la presencia de un catalizador de hidrogenación quiral, para proporcionar un compuesto enantioméricamente enriquecido de la fórmula: 17. Un compuesto que tiene la fórmula (V) o (VI): (V) (VI) en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se - 4p -selecciona de 0, 1 , 2. ,3 y 4; R7 es hidrógeno o una porción orgánica; Z es SH; o NR8 en donde R8 es ya sea hidrógeno o un grupo protector amina; y en donde si los compuestos tanto de la fórmula (V) como (VI) se presentan en una mezcla, la proporción molar de la fórmula (V):fórmula (VI) en la mezcla es diferente a 50:50. 18. Un compuesto que tierie la fórmula (Vil) o (VIII): (VII) (VIH) en donde R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o « una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2. ,3 y 4; R11 es una porción funcional que incluye una fosforamidita o porción de H-fosfonato; R12 es una porción orgánica que tiene una masa de 15-10,000 Daltones; y en donde si los compuestos tanto de la fórmula (Vil) como (VIH) se encuentran presentes en una mezcla, la proporción molar de la fórmula (Vll):fórmula (VIH) en la mezcla es diferente a 50:50. 19. El compuesto según la reivindicación 18, caracterizado porque la porción de fosforamidita de R11 tiene la fórmula -O- P(OR13)(N(R14)2) én donde cada uno de R13 y R14 se selecciona independientemente de un grupo alquilo o un grupo alquilo substituido que tiene uno o más substituyentes seleccionados de halógeno y ciano; y dos grupos R14 pueden unirse juntos para formar un grupo heterocicloalquilo con el nitrógeno de la fosforamidita. 20. El compuesto según la reivindicación 18, caracterizado porque la porción de H-fosfonato de R11 comprende la fórmula -O-P(=O)(H)(O-+HN(R15)3) y R1 d es independientemente un grupo alquilo C .-ß. " 42 " \ r / ~ i " RESUMEN La presente invención proporciona un compuesto que tiene la fórmula (I) o (II); en donde R1 se selecciona de halógeno y porciones orgánicas; R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrógeno y porciones orgánicas que tienen una masa mayor a 15 Daltones, en donde R2 y R3 juntos pueden formar un grupo carbonilo o pueden unirse juntos dentro de una estructura cíclica: Z es un átomo valente (n+1 ) que excluye carbono en donde n es un número entero mayor a 0; R4 se selecciona independientemente de porciones orgánicas, hidrógeno y halógeno que tiene una masa mayor a 15 Daltones, con la provisión de que al menos uno de R4 (principalmente R a) es una porción orgánica que tiene una masa mayor a 100 Daltones; R5 en cada ocurrencia es independientemente ya sea halógeno o una porción orgánica que tiene una masa menor a 500 Daltones; m se selecciona de 0, 1 , 2, 3 y 4; en donde si R2= R3=H, entonces R1 no es CO2(H o CH3) en donde Z(R4)n es ya sea de -NH(CO)-CH(iBu)-NH(CO)-(CH2Ph o O-f-Bu), y R4 no es CH2CO2f-Bu cuando Z es OH; y en donde si los compuestos de ambas formulas (I) y (II) se encuentran presentes en una mezcla; la proporción molar de la fórmula (l):fórmula (II) en la mezcla es diferente a 50:50. Los compuestos son útiles como etiquetas, incluyendo etiquetas detectables por espectrometría de masa.
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