MX2010011878A - Composiciones de cobinacion para tratar la enfermedad de alzheimer y trastornos relacionados con zonisamida y acamprosato. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones y procedimientos para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y enfermedades relacionadas. Más particularmente, la invención se refiere a terapias combinadas que modulan la función sináptica para tratar dicha enfermedad.

Description

COMPOSICIONES DE COMBINACIÓN PARA TRATAR LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER Y TRASTORNOS RELACIONADOS CON ZONISAMIDA Y ACAMPROSATO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones y procedimientos para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer (EA) y trastornos relacionados.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La EA es el prototipo de demencia cortical que se caracteriza por un déficit de memoria junto con disfasia (trastorno del lenguaje en el que existe un deterioro del habla y de la comprensión del habla), dispraxia (incapacidad para coordinar y realizar ciertos movimientos y gestos intencionados en ausencia de alteraciones motoras o sensoriales) y agnosia (capacidad para reconocer objetos, personas, sonidos, formas u olores) atribuible a la afectación de áreas de asociación corticales. También pueden estar implicados síntomas especiales, tales como paraparesia espástica (debilidad que afecta a las extremidades inferiores) (1-4).

La incidencia de la enfermedad de Alzheimer aumenta espectacularmente con la edad. La EA es, en la actualidad, la causa más habitual de demencia. Clínicamente se caracteriza por una disminución global de la función cognitiva que progresa lentamente y deja a los pacientes terminales confinados a la cama, incontinentes y dependientes de custodia. La muerte se produce, de media, 9 años después del diagnóstico (5).

La tasa de incidencia de la EA aumenta espectacularmente con la edad. Las proyecciones sobre la población de las Naciones Unidas estiman que el número de personas mayores de 80 años se acercará a los 370 millones en el año 2050. Actualmente, se ha estimado que el 50 % de las personas mayores de 85 años están afectadas por EA. Por tanto, más de 100 millones de personas de todo el mundo sufrirán demencia en 50 años. El gran número de personas que requiere atención constante y otros servicios afectará gravemente a los recursos médicos, monetarios y humanos (6).

La alteración de la memoria es la primera característica de la enfermedad e implica a la memoria episódica (memoria para los acontecimientos del día de hoy). La memoria semántica (memoria para los significados verbales y visuales) se ve afectada en etapas posteriores de la enfermedad. Por el contrario, la memoria de trabajo (memoria a corito plazo que afecta a las estructuras y procesos usados para el almacenamiento temporal y la manipulación de la información) y la memoria de procedimientos (memoria inconsciente que es la memoria a largo plazo de capacidades y procedimientos) se conservan hasta tarde. A medida que la enfermedad progresa aparecen las características adicionales de alteración del lenguaje, déficit visuales, preceptúales y espaciales, agnosias y apraxias.

El cuadro clásico de la enfermedad de Alzheimer es lo bastante característico como para permitir la identificación en aproximadamente el 80 % de los casos (7). No obstante, hay heterogeneidad clínica y esto no solo es importante para el tratamiento clínico sino que proporciona más implicaciones de los tratamientos médicos específicos para formas funcionalmente diferentes. (8).

El rasgos característico patológico de la EA incluye placas amiloides que contienen beta amiloide (Abeta), ovillos neurofibrilares (ONF) que contienen disfunción y pérdida de Tau, neuronal y sináptica (9-11) Durante la última década se han propuesto dos hipótesis principales sobre la causa de la EA: La "hipótesis de la cascada amiloide", que afirma que el proceso neurodegenerativo es una serie de acontecimientos desencadenados por el procesamiento anormal de la proteína precursora amiloide (APP) (12) y la "hipótesis de la degeneración del citoesqueleto neuronal" (13), que propone que los acontecimientos desencadenantes son los cambios en el citoesqueleto. La teoría más aceptada que explica la progresión de la EA sigue siendo la hipótesis de la cascada amiloide (14-16) y los investigadores sobre la EA se han centrado principalmente sobre la determinación del mecanismo subyacente a la toxicidad asociada con las proteínas Abeta. Por el contrario, la proteína Tau ha recibido mucha menos atención de la industria farmacéutica que la amiloide, por motivos tanto fundamentales como prácticos. Además, los cambios de densidad sináptica son la lesión patológica que se correlaciona mejor con la alteración cognitiva que los otros dos. Los estudios han revelado que la patología amiloide parece progresar de un modo específico de neurotransmisor, de modo que los terminales colinérgicos parecen más vulnerables, seguidos por los terminales glutamatérgicos y, por último, los terminales GABAérgicos (1 1 ).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN El propósito de la presente invención es proporcionar nuevos enfoques terapéuticos para tratar la EA y trastornos relacionados.

Los autores de la presente invención han identificado una vía molecular que está implicada en la génesis de la EA y ofrece nuevas dianas para el desarrollo de nuevos tratamientos para atenuar la EA y los trastornos relacionados, particularmente para el desarrollo de terapias de combinación usando moléculas nuevas o existentes previamente usadas en otras indicaciones. Más particularmente, los autores de la presente invención han identificado varios fármacos que, solos o en combinación(ciones), pueden afectar de forma eficaz a dicha vía y representan una terapia nueva y eficaz para el tratamiento de la EA y trastornos relacionados.

Por tanto, la invención proporciona nuevas composiciones y procedimientos para tratar la EA y los trastornos relacionados.

Más particularmente, la invención se refiere a composiciones adecuadas para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno seleccionado en un sujeto que lo necesite, donde dichas composiciones comprenden un fármaco que inhibe la respuesta de estrés celular.

Otro objeto de la presente invención se refiere a composiciones adecuadas para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno seleccionado en un sujeto que lo necesite, donde dichas composiciones comprenden una combinación de al menos dos fármacos que inhiben la respuesta de estrés celular., para administración combinada, por separado o secuencial.

Más preferentemente el fármaco o fármacos que inhiben la respuesta de estrés celular se unen o modulan la actividad de una proteína codificada por un gen seleccionado de ABAT, ABI1, ABL1, AD0RA2A, AD0RA2B, AKT, AMPK, ANKRA, APBA1, ARHGAP26, ATG5, BASSOON, BDNF, BECLIN1, BIN1, canales BK (KCNMA1, KCNMB1), CACNA1C, CACNA2D3, CACNA2D4, CADPS2, CALCINEURINA, CALMODULINA, CASK, CASR, CAST, CBL, CDC2, CDC42, CDC42BPB, CDC42EP3, CDH13, CDH2, CDK5, CITRON, CNGB3, CORTACTIN, CRAM, CREB, CRMP, CTNNB1, DAB1, DCC, DEPDC2, DHFR, DLG2, DYN1, DYN3, EDNRA, ENDOPHILIN, EPHA3, EPHBR, EPHEXIN, EPHRINA, EPHRINB, ERBB4, ERK1, ERK2, FES, FYN, GABBR1, GABBR2, GABRA2, GABRG2, GAT1, GLRA1, GEPHYRIN, GIPC1, GIPC2, GLUD1, GRANUPHILIN, GRIA2, GRIA3, GRID1, GRID2, GRIK1, GRIK2, GRIN2B, GRIN3A, GRIP, GRM3, GRM5, GRM6, GRM7, GRM8, HOMER, HTR1B, HTR1D, KALIRIN, KCNA2, KCHIP1, KCHIP2.2, KCND2,, KCNJ3, KCNJ12, KTN1, KYNU, LYN, MAML3, MINT1, MUCI, MUNC13, MUNC18A, MY06, MYOL, NAV1, NBEA, NCAM1, NCK1, NCK2, NETRIN1, NFKB1, NGEF, NGF, NGFR, NIL 16, NLGN1, NOC2, NOS1, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NPC1, NPC2, NPIST, NRG3, NRP1, NRP2, NRX3, NTF3, NTF5, NWASP, OPCML, OPRK1, PAK6, PAK7, PAR1, PARK2, PDE11A, PDE3A/3B, PDE4A/4B/4D, P13K, PIAS1, PICALM, PICK1, PIP5K, PKA, PKCA, PLD2, PLEXA1, PP1C, PPFIBP1, PRKG1, PSD95, PTN, PTPRF, PYK2, RAB3B, RABPHILIN, RAC1, RAP1, RAS, RASGRF2, RBPJ, REELIN, RGNEF, RHOA, RHOG, RIM2, RIMS1, RIMS2, ROB02, ROCK2, RPH3AL, SACM1L, SAPAP, SCN1A, SCN1B, SEC24D, SEMA3A, SEMA3C, SEMA3E, SEMA4C, SIAH1A, SLC12A1, SLC12A2, SLC12A5, SLC1A2, SLC6A1, SLC6A18, SLC9A1, SLIT1, SNAP25, SORBS2, SRC, SRGAP3, STX2, STXBP6, SUM1 , SV2C, SYNAPTOJANIN, SYNTAXIN1A, SYT12, TACE, TBR1 , TRIO, TRKB, TROMBINA, TSPO, UBE2A, ULK4, UNC 13C, UNC5C, VAMP2, VAMP5, VELI, VINCULIN, WASPIP, WAVE, WWOX, YAP y YES1.

Ejemplos específicos y preferidos de dichos fármacos incluyen, sin limitaciones, compuestos seleccionados de acamprosato, alendronato, alfentanil, amiloride, amlodipine, argatroban, aztreonam, baclofen, buclizine, bumetanide, buprenorfina, lidocaína, chlorzoxazone, cilostazol, cinacalcet, dasatinib, desirudin, dyphylline, eletriptan, ergotamine, flunitrazepam, fosphenytoin, ¡matinib, ketotifen, milrinone, nitroprusside, pegaptanib, pentazocina, fenobarbital, fenformin, pregabalin, propiltiouracilo, sulfisoxazol, tadalafil, temazepam, terbinafme, tiagabine, topiramato, triamtereno, vidarabina y zonisamida, o una combinación de los mismos.

En una forma de realización concreta, las composiciones de la presente invención comprenden además al menos un fármaco que modula angiogénesis para el uso combinado, por separado o secuencial.

Como alternativa o. de manera adicional, las composiciones de la presente invención pueden comprender además al menos un fármaco que modula la función sináptica para el uso combinado, por separado o secuencial.

Normalmente, las composiciones de la presente invención comprenden además un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Otro objeto de la presente invención reside en un procedimiento de producir un fármaco para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, en donde el procedimiento comprende una etapa de someter a ensayo un fármaco candidato para determinar la actividad sobre la respuesta de estrés celular y seleccionar los fármacos candidatos que mejoran la función sináptica.

La invención también se refiere a un procedimiento para producir una composición para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, en donde el procedimiento comprende preparar una combinación de un fármaco que inhibe la respuesta de estrés ceular y un fármaco que modula la angiogénesis o la función sináptica, y formular dicha combinación de fármacos para la administración simultánea, por separado o secuencial a un sujeto que lo necesite.

La invención se refiere además a un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, en donde el procedimiento comprende administrar de forma simultánea, por separado o secuencialmente a un sujeto que lo necesite un fármaco o una combinación de fármacos que mejora la función sináptica.

La invención se refiere además a un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, en donde el procedimiento comprende administrar de forma simultánea, por separado o secuencialmente a un sujeto que lo necesite un fármaco que modula la función sináptica y un fármaco que modula la angiogénesis y/o un fármaco que modula la respuesta a estrés celular.

La invención se refiere además al uso de un fármaco que mejora la función sináptica para la fabricación de un medicamento para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado.

La invención además se refiere al uso de una combinación de al menos dos fármacos que inhiben la respuesta de estrés celular para la fabricación de un medicamento para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, en donde dichos al menos dos fármacos se administran juntos, por separado o secuencialmente.

Tal como se trata en la presente solicitud, las terapias anteriores y las terapias de combinación proporcionan nuevos y eficaces enfoques para tratar la EA en sujetos humanos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1 : efecto de fármacos seleccionados sobre el crecimiento de neuritas en cultivo de neuronas corticales primarias de rata intoxicada con beta-amiloide. 00: p < 0,01 ; 00000: p< 0,00001 ; significativamente diferente del vehículo. **:p < 0,05; *** p < 0,0001 ; significativamente diferente de Abeta25-35. Prueba bilateral t de Student.

Figura 2: efecto de fármacos de Fenformina sobre el crecimiento de neuritas en cultivo de neuronas corticales primarias de rata intoxicada con beta-amiloide. 00: p < 0,01 ; 00000: p< 0,00001 ; significativamente diferente del vehículo. **:p < 0,05; *** p < 0,0001 ; significativamente diferente de Abeta25-35. Prueba bilateral t de Student.

La ?ß25-35 20 µ? produce una intoxicación significativa, por encima del 25%, en comparación con las neuronas tratadas con vehículo (Fig. 2A y B, en rojo). Esta intoxicación se previene con eficacia con BDNF a 10 ng/ml, que se considera un control positivo para neuroprotección. Esta intoxicación también se previene significativamente mediante Acamprosato (Fig. 1A) o Zonisamida (Fig 1 B) y Fenformina (Fig. 2) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona nuevos enfoques terapéuticos para tratar la EA o trastornos relacionados. La invención da a conocer nuevos usos de fármacos o combinaciones de fármacos que permiten una corrección eficaz de dichas enfermedades y que pueden usarse para el tratamiento de pacientes.

El término "trastorno relacionado con la AE" designa enfermedad de Alzheimer (EA), demencia senil de tipo EA (DSTEA), enfermedad de Parkinson, demencia de cuerpos de Lewis, demencia vascular, alteración cognitiva leva (Mel), alteración de la memoria asociada con la edad (AMAE) y problemas asociados con el envejecimiento, parkinsonismo postencefalitis, ALS y síndrome de Down.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, "tratamiento" de un trastorno incluye la terapia, la prevención, la profilaxis, el retraso o la reducción de los síntomas provocados por el trastorno. El término tratamiento incluye, en particular, el control de la progresión de la enfermedad y de los síntomas asociados.

El término "aliviar", en referencia a la función sináptica, incluye cualquier incremento en la función sináptica en comparación con la función existente en el sujeto. Dicho alivio puede incluir una restauración, es decir, a niveles normales, o un incremento menor, que son aún suficientes para mejorar la afección del paciente, por ejemplo de 5-25 %, que es suficiente para mejorar la afección del paciente. Un alivio tal se puede evaluar o verificar usando pruebas biológicas conocidas, tal como se describen en la sección experimental.

Asimismo, con la designación de compuestos específicos dentro del contexto de la presente invención se pretende incluir no sólo las moléculas específicamente citadas, sino también cualquier sal, hidrato, éster, éter, isómeros, racemato, conjugados o profármacos de los mismos.

El término "combinación" designa un tratamiento en el que al menos dos o más fármacos se administran de manera conjunta a un sujeto para producir un efecto biológico. En una terapia combinada de acuerdo con la presente invención, los al menos dos fármacos pueden administrarse juntos o por separado, al mismo tiempo o secuencialmente. Asimismo, los al menos dos fármacos pueden administrarse a través de diferentes vías y protocolos. Como resultado, aunque pueden formularse juntos, los fármacos o una combinación también se pueden formular por separado.

Tal como se ha tratado en párrafos anteriores, la invención se refiere a composiciones y procedimientos para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado en un sujeto que lo necesite, usando un fármaco o una combinación de fármacos que inhibe la respuesta de estrés celular.

Medíante una integración exhaustiva de los datos experimentales que cubren los resultados de estudios de biología celular, experimentos de perfiles y estudios de asociación genética, que describen diferentes aspectos de la enfermedad de Alzheimer y vínculos existentes en la señalización celular y las vías funcionales, los autores de la presente invención han descubierto que la respuesta de estrés celular representa un mecanismo importante que está alterado en los sujetos con EA. Los genes localizados en dicha red funcional e implicados en la enfermedad de Alzheimer se seleccionaron mediante los criterios siguientes: 1 ) interacción directa con los genes causantes responsables de casos familiares de la enfermedad de Alzheimer (APP, ApoE, presenilinas, proteína tau), 2) parejas funcionales de los genes seleccionados mediante el criterio (1 ), 3) parejas funcionales más cercanas de los genes seleccionados mediante el criterio (2), A través de este procedimiento, los autores de la presente invención pudieron establecer que la red responsable de la respuesta al estrés celular es una red funcional fundamental afectada en la enfermedad de Alzheimer.

Los autores de la presente invención han establecido más específicamente que la pérdida sináptica es un es un rasgo fundamental funcionalmente relevante de la enfermedad de Alzheimer, que conduce en último término a declive cognitivo progresivo, pérdida de memoria y demencia. De forma importante, la pérdida sináptica correalciona mejor con la patología de Alzheimer caracterizada con déficit cognitivo, comparada con otros marcadores de lesión celular específicos de EA manifestados en el desarrollo de haces neurofibrilares o en la deposición de las placas amiloides. Consecuentemente, la organización sináptica y la plasticidad sináptica representa un objetivo importante para intervanciones terapéuticas en el contexto de la enfermedad de Alzheimer.

La proteína APP se transporta axonalmente y se procesa en terminales presinápticos, conduciendo a acumulación alta de Abeta en sinápsis. Los oligomeros de Abeta42 así como las placas amiloides por si mismas son importantes para inhibir la potenciación a largo plazo y son principalmente responsables del daño de la memoria en pacientes de EA.

El procedimiento de integración de datos de los autores de la presente invención reveló un grupo de genes, que están implicados en la distorsión sináptica en EA y que se pueden separar formalmente en tres grupos funcionales: proteínas que participan en la organización de la densidad postsináptica ("PSD") y la transmisión de la señal nerviosa correcta en la membrana postsináptica; proteínas que aseguran la liberación de neurotransmisores; y proteínas implicadas en crecimiento axonal y maduración del desarrollo de la maquinaria sináptica.

En una realización particular, la presente invención se refiere así a composiciones y procedimientos que usan fármacos que mejoran la actividad de proteínas implicadas en densidad postsináptica.

La parte aferente de las sinápsis excitadoras -Densidad Postsináptica- se compone de una red estrechamente integrada de peoteínas de armazón y receptores de neurotransmosires que sirven un amplio intervalo de funciones corgnitivas, incluyendo formación de memoria y aprendizaje.

Entre los genes identificados por el análisis de los autores de la presente invención, el gen DLG2 codifica proteína de familia MAGUK que crea e interfiere entre receptores unidos a membrana arracimados, moléculas de adhesión celuar y citoesqueleto basado en actina. Los autores de la presente invenciíon han identificado un gran grupo de glutamato y de receptotes de factor de crecimiento, que interaccionan directamente con la proteína DLG2 o con el complejo de proteínas DLG2/PSD95 en sinápsis excitadoras -a saber, receptores ErbB4 y TrkB procesados y funcionalmente regulados por presenilina (17-18), receptores ionotrópicos de kainato (GRIK2) y tipos de NMDA (GRIN3A, GRIN2B), receptores de glutamato de tipo delta (GRID1 , GRID2), receptores de glutamato y receptores de glutamato metobotrópicos acoplados a proteínas G (GRM3, GRM7 y GRM9). También, los autores de la presente invención identificaron varioas proteínas efectoras/moduladoras que están implicadas en la señalización más adelante en la cadena de señalización de los receptores sinápticos -citrón, una proteína efectora Rho/Rac, RASGRF2 enlazando a receptores AMPA para activación de kinasas RAS/ERK, PARK2 y kinasa YES1.

Otros genes funcionalmente importantes relevantes en EA revelados por el análisis de los autores de la presente invención incluyen ?-Neurexina (NXR3) presináptica y neuroliginl (NLGN1 ) postsináptica que forman complejo funcional implicado en la corregulación dinámica de las membranas pre- y postsinápticas en sinapsis excitadoras.

En general, la población de proteínas PSD implicadas potencialmente en enfermedad de Alzheimer se enriquece por receptores que participan en la organización de sinopsis glutamatérgicas excitadoras; sólo se detectaron unos pocos receptores neuronales inhibidores -GABA(A) y GABA(B)- por nuestro rastreo de extracción de datos.

En otra realización particular, la presente invención se refiere a composiciones y procedimientos que usan fármacos que mejoran la actividad de proteínas implicadas en la regulación de liberación de neurotransmisores, preferentemente en la membrana presináptica.

La liberación de neurotransmisores en una zona restringida y altamente especializada de la membrana plasmática presináptica se activa por potencial de acción y se controla por acciones combinadas y opuestas de canales Cav selectivos de calcio, dependientes de voltaje (moduladores positivos de liberación de neurotransmisores) y de canales de axiK, canales de potasio sensibles a gran conductancia, voltaje y calcio (moduladores negativos de la liberación de neurotransmisores). Ambos tipos de canales se seleccionaron por el análisis de los autores de la presente invención como objetivos terapéuticos pertinentes para el tratamiento de enfermedad de Alzheimer. Adicionalmente, la liberación de neurotransmisores en la membrana presináptica pudo modularse por aplicación simultánea de fármacos influyendo en la actividad de la kinasa PRKG1 y/o de los receptores GABA/B) presinápticos.

El análisis de los autores de la presente invención reveló también un grupo de proteínas implicadas en organización estructural de maquinaria de liberación de neurotransmisores, responsable de maduración, acoplamiento y fusióin de vesócula sináptica con las proteínas que componen una zona activa -las proteínas STX2 y STXBP6 participan en la fusión de vesículas sinápticas, proteína BIN1 , proteína RAB3B, proteína UNC13C esenciales para la maduración y para el cebado de las vesículas sinápticas y proteínas de formación de armazón RINS1/2. Las proteínas identificadas por el annálisis de los autores de la presente invención representan tanto proteínas estructurales, implicadas directamente en exocitosis/endocitosis y reciclaje de vesículas sinápticas, y sus moduladores dependientes de actividas funcional.

En otra realización particular, la presente invención se refiere a composiciones y procedimientos que usan fármacos que mejoran la actividad de proteínas implicadas en la regulación de crecimiento y guía axonales.

Las proteínas participan en regulación del crecimiento y guía axonales permitiendo a las células precursoras neuronales y a los axones migrar hacia destinos apropiados para segurar la localización y la conectividad correctas; están implicadas también en la maduración del desarrollo de sinápsis recientemente establecidas así como en la degradación de axones y sinápsis en la enfermedad de Alzheimer. Estos procesos desempeñan un papel fundamental para la ejecución de las funciones cognitivas y parecen ser extremadamente vulnerables al efecto tóxico de las deposiciones Abeta.

Las etapas consecutivas del crecimiento y guía axonales se controlan estrechamente por acciones combinadas de Netrinas, Semaforinas, Efrinas DLL y moléculas Slits extracelulares o sujetas a la membrana y sus receptores funcionales respectivos, la mayoría de los receptores de crecimiento axonales están estrechamente conectados con su capacidad para modular diferencialmente la actividad de GTPasas pequeñas.RhoA, Rac1 y Cdc42, con la GTPasa de RhoA siendo principalmente responsable de la retracción de neuritas y el colapso del crecimiento de los conos (19).

Entre los genes seleccionados, el receptor de Netrina de guía del axón DCC está implicado tanto en atracción como en repulsión, mientras el receptor de netrina UNC5C posee más bien actividad de repulsión de neuronas (20); las semaforinas y las efrinas median el colapso de conos en crecimiento y la repulsión en el sistema nervioso durante el desarrollo y desempeñan un papel importante en la plasticidad sináptica en el SNC adulto (21-25). Las proteínas de Slits están implicadas simultáneamente en la repulsión y ramificación de axones, dos procesos estrechamente relacionados, y medulan la actividad de los receptores de netrina (26). Finalmente, el receptor de Notch parece afectar a la guía de axones a través tanto de la ruta ABL1/DAB1/TRIO dependiente de RBPJ como de la ABL1/DAB1/TRIO independiente de RBPJ controlando organización del citoesqueleto de actina (27).

En la presente invención, los autores de la presente invención proponen composiciones novedosas, que se pueden usar para aliviar la función sináptica alterada en la enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades neurogenerativas. En una realización particular, las composiciones y procedimientos de esta invención usan fármacos que mejoran la función sináptica por su interacción con o por su modulación de un gen o proteína como se enumera anteriormente.

Más específicamente, las composiciones de la presente invención comprenden un fármaco o fármacos que inhiben la respuesta de estrés celular través de la unión a, o modulación de la actividad de una proteína codificada por un gen seleccionado de ABAT, ABI1 , ABL1 , ADORA2A, ADORA2B, AKT, AMPK, ANKRA, APBA1 , ARHGAP26, ATG5, BASSOON, BDNF, BECLIN1 , BIN1 , canales BK (KCNMA1 , KCNMB1 ), CACNA1 C, CACNA2D3, CACNA2D4, CADPS2, CALCINEURINA, CALMODULINA, CASK, CASR, CAST, CBL, CDC2, CDC42, CDC42BPB, CDC42EP3, CDHI 3, CDH2, CDK5, CITRON, CNGB3, CORTACTIN, CRAM, CREB, CRMP, CTNNB1, DAB1, DCC, DEPDC2, DHFR, DLG2, DYN1, DYN3, EDNRA, ENDOPHILIN, EPHA3, EPHBR, EPHEXIN, EPHRINA, EPHRINB, ERBB4, ERK1, ERK2, FES, FYN, GABBR1, GABBR2, GABRA2, GABRG2, GAT1, GLRA1, GEPHYRIN, GIPC1, GIPC2, GLUD1, GRANUPHILIN, GRIA2, GRIA3, GRID1, GRID2, GRIK1, GRIK2, GRIN2B, GRIN3A, GRIP, GRM3, GRM5, GRM6, GRM7, GRM8, HOMER, HTR1B, HTR1D, KALIRIN, KCNA2, KCHIP1, KCHIP2.2, KCND2, KCNJ3, KCNJ12, KTN1, KYNU, LYN, MAML3, MINT1, MUCI, MUNC 13, MUNC 18 A, MY06, MYOL, NAV1, NBEA, NCAM1, NCK1, NCK2, NETRIN1, NFKB1, NGEF, NGF, NGFR, NIL16, NLGN1, NOC2, NOS1, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NPC1, NPC2, NPIST, NRG3, NRP1, NRP2, NRX3, NTF3, NTF5, NWASP, OPCML, OPRK1, PAK6, PAK7, PAR1, PARK2, PDE11A, PDE3A/3B, PDE4A/4B/4D, P13K, PIAS1, PICALM, PICK1, PIP5K, PKA, PKCA, PLD2, PLEXA1 , PP1C, PPFIBP1, PRKG1, PSD95, PTN, PTPRF, PYK2, RAB3B, RABPHILIN, RAC1, RAP1, RAS, RASGRF2, RBPJ, REELIN, RGNEF, RHOA, RHOG, RIM2, RIMS1, RIMS2, R0B02, R0CK2, RPH3AL, SACM1L, SAPAP, SCN1A, SCN1B, SEC24D, SEMA3A, SEMA3C, SEMA3E, SEMA4C, SIAH1A, SLC12A1, SLC12A2, SLC12A5, SLC1A2, SLC6A1 , SLC6A18, SLC9A1, SLIT1, SNAP25, S0RBS2, SRC, SRGAP3, STX2, STXBP6, SUM1, SV2C, SYNAPTOJANIN, SYNTAXINIA, SYT12, TACE, TBR1, TRIO, TRKB, TROMBINA, TSPO, UBE2A, ULK4, UNC13C, UNC5C, VAMP2, VAMP5, VELI, VINCULIN, WASPIP, WAVE, WWOX. YAP y YES1.

Las secuencias de todos los genes y proteínas indicados anteriormente están disponibles en genotecas y se pueden aislar mediante técnicas conocidas en la técnica. Además, la actividad de estos genes y proteínas se puede evaluar mediante técnicas conocidas per se en la técnica, tal como se trata en la sección experimental.

La invención describe además fármacos que se pueden usar para modular estos genes y proteínas diana. La invención divulga la identificación y la actividad de fármacos concretos que, bien solos pero, preferentemente en combinación(ones), modulan la vía anterior y pueden usarse para tratar dichas enfermedades. En particular, los autores de la presente invención han identificado moléculas pequeñas que ya existen en la literatura pero usados para tratar enfermedades distintas en sujetos humanos.

A este respecto, en una forma de realización más preferida, las composiciones de la presente invención comprenden al menos un inhibidor de ABAT (preferentemente, vigabatrina); y/o un inhibidor de ABL1 (preferentemente imatinib); y/o un modulador de AD0RA2B (preferentemente difilina); y/o un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y/o un inhibidor de CACNA1 C (preferentemente amlodipina); y/o un inhibidor de CACNA2D3 (preferentemente pregabalina); y/o un modulador de CASR (preferentemente cinacalcet) ; y/o un modulador de CNGB3 (preferentemente amiloride), y/o un inhibidor de DHFR (preferentemente triamtereno), y/o un inhibidor de EPHA3 (preferentemente dasatinib), y/o antagonista de receptor de endotelina EDNRA (preferentemente sulfísoxazol), y/o un modulador de GABBR2 y receptores glutamatérgicos (preferentemente seleccionados de baclofeno y acamprosato), y/o un modulador de GABRA2 (preferentemente seleccionado de fenobarbital y aztreonam), y/o un antagonista de GRIK1 (preferentemente, topiramato), y/o un modulador de GRIN2B y GRIN3A (preferentemente, acamprosato), y/o un modulador de HTR1 B y HTR1 D (preferentemente seleccionado de ergotamina yd eletriptano), y/o un antagonista de KCND2 (preferentemente, lidocaína), y/o un modulador de KCNMA1 (preferentemente, clorzoxazona), y/o un modulador de NOS1 (preferentemente seleccionado de ketotifeno y propiltiouracilo), y/o un inhibidor de NRP2 (preferentemente, pegaptanib), y/o un modulador de OPCML (preferentemente, alfentanil), y/o un modulador de OPRK1 (preferentemente seleccionado de buprenorfina y pentazocina), y/o un inhibidor de receptor de trombina PAR1 (preferentemente, argatroban), y/o un inhibidor de fosfodiesterasas PDE11 A y PDE4A, PDE5A (preferentemente, tadalafilo), y/o un inhibidor de fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A/4B y un activador de canales BK (preferentemente, cilostazol), y/o un inhibidor de PDE4D (preferentemente, milrinone), y/o un activador de PRKG1 (preferentemente seleccionado de nitroprusside, tadalafilo y cilostazol), y/o un modulador de RHOA (preferentemente seleccionados de alendronato y terbinafme), y/o un inhibidor de canal de sodio SCN1A y un activador de canales BK (preferentemente, zonisamida), y/o un inhibidor de SCN1A/B (preferentemente, fosfenitoin), y/o un inhibidor de SLC6A1 (preferentemente, tiagabine), y/o un modulador de SLC9A1 (preferentemente, buclizina), y/o un inhibidor de SLC 12AI (preferentemente, bumetanide), y/o un inhibidor de TROMBINA (preferentemente, desirudin), y/o un modulador de TSPO (preferentemente seleccionado de flunitrazepam y temazepam), y/o un inhibidor de YES1 (preferentemente, dasatinib).

Tal como se ha tratado en párrafos anteriores, la invención propone particularmente diseñar terapias de combinación para abordar los mecanismos de la EA y trastornos relacionados. A este respecto, más adelante se dan a conocer ejemplos de dianas y combinaciones de fármacos más preferidos.

Más preferentemente la composición de la invención comprende al menos una de las siguientes combinaciones de fármacos, para administración combinada, por separado o secuencial: un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un inhibidor de los canales de sodio SCNIA y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida), un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un modulador de receptores GABAérgicos y glutamatérgicos (preferentemente acamprosato), un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un antagonista de receptor de endotelina EDNRA (preferentemente sulfixoxazol), un modulador de los receptores GABAérgicos y glutamatérgicos (preferentemente acamprosato) y un antagonista de receptor de endotelina EDNRA (preferentemente sulfixoxazol), un inhibidor del canal de sodio SCN1A y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida) y un antagonista de receptor de endotelina EDNRA (preferentemente sulfixoxazol), un modulador de los receptores GABAérgicos y glutamatérgicos (preferentemente acamprosato) y un inhibidor de fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A/4B y un activador de canales BK (preferiblemente cilostazol), un inhibidor del canal de sodio SCN1A y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida) y un modulador de receptor de adenosina ADORA2B (preferentemente difilina), un inhibidor del canal de sodio SCN1A y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida) y un inhibidor de receptor de trombina PAR1 (preferentemente argatroban), un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un modulador del receptor de adenosina ADORA2B (preferentemente difilina), un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un inhibidor de fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A 4B y un activador de canales BK (preferiblemente cilostazol), un inhibidor de fosfodiesterasa PDE11A y PDE4A, PDE5A (preferentemente tadalafilo) y un inhibidor de fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A/4B y un activador de canales BK (preferiblemente cilostazol), o - un inhibidor del canal de sodio SCN1A y un activador de canales de BK (preferiblemente Zonisamida) y un un inhibidor de fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A/4B y un activador de canales BK (preferiblemente cilostazol).

Ejemplos más preferidos de composiciones de la presente invención comprenden un compuesto seleccionado de acamprosato, alendronato, alfentanil, amiloride, amlodipine, argatroban, aztreonam, baclofen, buclizine, bumetanide, buprenorfina, lidocaína, chlorzoxazone, cilostazol, cinacalcet, dasatinib, desirudin, dyphylline, eletriptan, ergotamine, flunitrazepam, fosphenytoin, imatinib, ketotifen, milrinone, nitroprusside, pegaptanib, pentazocina, fenformin, fenobarbital,pregabalin, propiltiouracilo, sulfisoxazol, tadalafil, temazepam, terbinafme, tiagabine, topiramato, triamtereno, vidarabina y zonisamida, o una combinación de los mismos.

Los ejemplos más preferidos de las terapias de combinación de esta invención comprendne el uso combinado de al menos los siguientes compuestos: - fenformina y zonisamida, - fenformina y acamprosato, - fenformina y sulfisoxazol, - acamprosato y sulfisoxazol, - zonisamida y sulfisoxazol, - acamprosato y cilostazol, - acamprosato y zonisamida, - acamprosato y cilostazol, - zonisamida y difilina, - zonisamida y argatroban, - fenformina y difilina - fenformina y cilostazol, - tadalafil y citoltazol, o - zonisamida y cilostazol.

Las composiciones más preferidas de esta invención comprenden al menos un compuesto escogido del grupo constituido por zonisamida, difilina, tadalafil, argatroban, acamprosato, cinacalcet, terbinafina, cilostazol, baclofen, fenformina, amlodipina y sulfisoxazol, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para administración simultánea, por separado o secuencial.

En una forma de realización más preferida, las composiciones de la invención comprenden una combinación de al menos dos compuestos escogidos del grupo constituido por zonisamida, difilina, tadalafil, argatroban, acamprosato, cinacalcet, terbinafina, cilostazol, baclofen, fenformina, amlodipina y sulfisoxazol, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para administración simultánea, por separado o secuencial.

En otra forma de realización, la composición de acuerdo con la invención comprende una combinación de al menos dos compuestos escogidos del grupo constituido por zonisamida, difilina, tadalafil, argatroban, acamprosato, cinacalcet, terbinafina, cilostazol, baclofen, fenformina, amlodipina y sulfisoxazol, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, en la que dicha composición alivia la función sináptica alterada en trastornos neurodegenerativos seleccionados del grupo constituido por la enfermedad de Alzheimer (EA), la enfermedad de Parkinson (EP), esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y esclerosis múltiple (EM).

En otra forma de realización preferida, la composición de la invencióin comprende una combinación de al menos dos compuestos escogidos del grupo constituido por acamprosato, cilostazol, metimazol, fenformina, prilocaína, tadalafilo, terbinafina, zonisamida y rifabutina, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para tratar la enfermedad de Alzheimer (EA).

Preferentemente la composición para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno seleccionado en un sujeto que lo necesite, comprende al menos uno de las siguientes combinaciones de fármacos para administración combinada, por separado o secuencial: - fenformina y zonisamida, - fenformina y acamprosato, - fenformina y sulfisoxazol, - acamprosato y sulfisoxazol, - zonisamida y sulfisoxazol, - acamprosato y cilostazol, - acamprosato y zonisamida, - acamprosato y cilostazol, - zonisamida y difilina, - zonisamida y argatroban, - fenformina y difilina - fenformina y cilostazol, - tadalafil y citoltazol, o - zonisamida y cilostazol.

En la forma de realización más preferida, la composición de acuerdo con la invención comprende al menos zonisamida y acamprosato, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para administración simultánea, por separado o secuencial.

En otra forma de realización preferida, la composición de la invención comprende al menos zonisamida y/o acamprosato, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado.

En otra forma de realización, la composición de la invención comprende al menos un fármaco que modula la función sináptica para el uso combinado, por separado o secuencial.

Preferentemente el fármaco adicional que inhibe la respuesta de estrés celular se selecciona de un inhibidor de un inhibidor de ABAT (preferentemente, vigabatrina); y/o un inhibidor de ABL1 (preferentemente imatinib); y/o un modulador de AD0RA2B (preferentemente difilina); y/o un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y/o un inhibidor de CACNA1C (preferentemente amlodipina); y/o un inhibidor de CACNA2D3 (preferentemente pregabalina); y/o un modulador de CASR (preferentemente cinacalcet) ; y/o un modulador de CNGB3 (preferentemente amiloride), y/o un inhibidor de DHFR (preferentemente triamtereno), y/o un inhibidor de EPHA3 (preferentemente dasatinib), y/o antagonista de receptor de endotelina EDNRA (preferentemente sulfísoxazol), y/o un modulador de GABBR2 y receptores glutamatérgicos (preferentemente seleccionados de baclofeno y acamprosato), y/o un modulador de GABRA2 (preferentemente seleccionado de fenobarbital y aztreonam), y/o un antagonista de GRIK1 (preferentemente, topiramato), y/o un modulador de GRIN2B y GRIN3A (preferentemente, acamprosato), y/o un modulador de HTR1 B y HTR1 D (preferentemente seleccionado de ergotamina yd eletriptano), y/o un antagonista de KCND2 (preferentemente, lidocaína), y/o un modulador de KCNMA1 (preferentemente, clorzoxazona), y/o un modulador de NOS1 (preferentemente seleccionado de ketotifeno y propiltiouracilo), y/o un inhibidor de NRP2 (preferentemente, pegaptanib), y/o un modulador de OPCML (preferentemente, alfentanil), y/o un modulador de OPRK1 (preferentemente seleccionado de buprenorfina y pentazocina), y/o un inhibidor de receptor de trombina PAR1 (preferentemente, argatroban), y/o un inhibidor de fosfodiesterasas PDE11 A y PDE4A, PDE5A (preferentemente, tadalafilo), y/o un inhibidor de fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A 4B y un activador de canales BK (preferentemente, cilostazol), y/o un inhibidor de PDE4D (preferentemente, milrinone), y/o un activador de PRKG1 (preferentemente seleccionado de nitroprusside, tadalafilo y cilostazol), y/o un modulador de RHOA (preferentemente seleccionados de alendronato y terbinafme), y/o un inhibidor de canal de sodio SCN1A y un activador de canales BK (preferentemente, zonisamida), y/o un inhibidor de SCN1A/B (preferentemente, fosfenitoin), y/o un inhibidor de SLC6A1 (preferentemente, tiagabine), y/o un modulador de SLC9A1 (preferentemente, buclizina), y/o un inhibidor de SLC 12AI (preferentemente, bumetanide), y/o un inhibidor de TROMBINA (preferentemente, desirudin), y/o un modulador de TSPO (preferentemente seleccionado de flunitrazepam y temazepam), y/o un inhibidor de YES1 (preferentemente, dasatinib).

En otras formas de realización, dicho fármaco adicional que inhibe la respuesta de estrés celular se selecciona del fármaco o fármacos que se unen o modulan la actividad de una proteína codificada por un gen seleccionado de: ABAT, ABI1, ABL1, ADORA2A, ADORA2B, AKT, AMPK, ANKRA, APBA1, ARHGAP26, ATG5, BASSOON, BDNF, BECLIN1, BIN1, canales BK (KCNMA1, KCNMB1), CACNA1C, CACNA2D3, CACNA2D4, CADPS2, CALCINEURINA, CALMODULINA, CASK, CASR, CAST, CBL, CDC2, CDC42, CDC42BPB, CDC42EP3, CDHI 3, CDH2, CDK5, CITRON, CNGB3, CORTACTIN, CRAM, CREB, CRMP, CTNNB1, DAB1, DCC, DEPDC2, DHFR, DLG2, DYN1, DYN3, EDNRA, ENDOPHILIN, EPHA3, EPHBR, EPHEXIN, EPHRINA, EPHRINB, ERBB4, ERK1, ERK2, FES, FYN, GABBR1, GABBR2, GABRA2, GABRG2, GAT1, GLRA1, GEPHYRIN, GIPC1, GIPC2, GLUD1, GRANUPHILIN, GRIA2, GRIA3, GRID1, GRID2, GRIK1, GRIK2, GRIN2B, GRIN3A, GRIP, GRM3, GRM5, GRM6, GRM7, GRM8, HOMER, HTR1B, HTR1D, KALIRIN, KCNA2, KCHIP1, KCHIP2.2, KCND2, KCNJ3, KCNJ12, KTN1, KYNU, LYN, MAML3, MINT1, MUCI, MUNC 13, MUNC 18 A, MY06, MYOL, NAV1, NBEA, NCAM1, NCK1, NCK2, NETRIN1, NFKB1, NGEF, NGF, NGFR, NIL16, NLGN1, NOC2, NOS1, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NPC1, NPC2, NPIST, NRG3, NRP1, NRP2, NRX3, NTF3, NTF5, NWASP, OPCML, OPRK1, PAK6, PAK7, PAR1, PARK2, PDE11A, PDE3A/3B, PDE4A/4B/4D, P13K, PIAS1, PICALM, PICK1, PIP5K, PKA, PKCA, PLD2, PLEXA1, PP1C, PPFIBP1, PRKG1, PSD95, PTN, PTPRF, PYK2, RAB3B, RABPHILIN, RAC1, RAP1, RAS, RASGRF2, RBPJ, REELIN, RGNEF, RHOA, RHOG, RIM2, RIMS1, RIMS2, R0B02, R0CK2, RPH3AL, SACM1L, SAPAP, SCN1A, SCN1B, SEC24D, SEMA3A, SEMA3C, SEMA3E, SEMA4C, SIAH1A, SLC12A1, SLC12A2, SLC12A5, SLC1A2, SLC6A1 , SLC6A18, SLC9A1 , SLIT1, SNAP25, S0RBS2, SRC, SRGAP3, STX2, STXBP6, SUM1, SV2C, SYNAPTOJANIN, SYNTAXINIA, SYT12, TACE, TBR1, TRIO, TRKB, TROMBINA, TSPO, UBE2A, ULK4, UNC13C, UNC5C, VAMP2, VAMP5, VELI, VINCULIN, WASPIP, WAVE, WWOX, YAP y YES1.

Los autores de la presente invención han establecido que los fármacos y combinaciones de fármacos anteriores proporcionan un mejor efecto biológico sinérgico que conduce a una corrección o normalización eficaz o una alteración de la regulación funcional que produce EA y trastornos relacionados.

Los compuestos citados con anterioridad se enumeran en la tabla 1 siguiente, junto con su número CAS. Tal como se ha tratado anteriormente, debe entenderse que la invención abarca el uso de los compuestos anteriores, así como cualquier sal, hidrato, éster, éter, isómeros, racemato, conjugados o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los profármacos se pueden preparar (p. ej., mediante acoplamiento del fármaco a un vehículo adecuado) para ofrecer un control mejor sobre los parámetros farmacocinéticos del tratamiento.

Tabla 1 NOMBRE DEL FARMACO NÚMERO CAS Acam prosato 77337-76-9 Alendronato 66376-36-1 Alientan i I 71195-36-1 Amiloride 2016-88-8 Amilodipine 88150-42-9 Argatroban 74863-84-6 Aztreonam 78110-38-0 Baclofen 1134-47-0 Balsalazide 80573-04-2 Buclizine 82-95-1 Bumetanide 28395-03-1 Buprenorfina 52485-79-7 Lidocaina 137-58-6 Clorzoxazona 95-25-0 Cilostazol 73963-72-1 Cinaclacet 226256-56-0 NOMBRE DEL FARMACO NUMERO CAS Dasatinib 302962-49-8 Desirudin 120903-53-5 Difilina 479-18-5 Eletriptan 143322-58-1 Ergotamina 113-15-5 Flinirazepam 1622-62-4 Fosfenitoina 93390-81-9 Imatinib 152459-95-5 Ketotifen 34580-14-8 Milrinona 78415-72-2 Nitroprusside 15078-28-1 Pegaptanib 222716-86-1 Pentazocina 359-83-1 Fenobarbital 50-06-6 Fenformina 114-86-3 Pregabalina 148553-50-8 Propiltiouracilo 51-52-5 Sulfisoxazol 127-69-5 Tadalafil 171596-29-5 Temazepam 846-50-4 Terbinafine 91161-71-6 Tiagabina 115103-54-3 Topiramato 97240-79-4 Triamtereno 396-01-0 Vigabatrin 60643-86-9 Zonisamida 68291-97-4 Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de ácido farmacéuticamente aceptables, sales de adición de base farmacéuticamente aceptables, sales metálicas farmacéuticamente aceptables, sales de amonio y de amonio alquilados. Las sales de adición de ácido incluyen sales de ácidos inorgánicos, así como ácidos orgánicos. Ejemplos representativos de ácidos inorgánicos adecuados incluyen ácidos clorhídrico bromhídrico, yodhídrico, fosfórico, sulfúrico, nítrico y similares. Ejemplos representativos de ácidos orgánicos adecuados incluyen los ácidos fórmico, acético, tricloroacético, trifluoroacético, propiónico, benzoico, cinnámico, cítrico, fumárico, glicólico, láctico, maleico, málico, malónico, mandélico, oxálico, pícrico, pirúvico, salicílico, succínico, metanosulfónico etanosulfónico, tartárico, ascórbico, pamoico, bismetilensalicílico, etanodisulfónico, glucónico, citracónico, aspártico, esteárico, palmítíco, EDTA, glicólico, p-aminobenzoico, glutámico, bencenosulfónico, o-toluenosulfónico, sulfatos, nitratos, fosfatos, percloratos, boratos, acetatos, benzoatos, hidroxinaftoatos, glicerofosfatos, cetoglutaratos y similares. Ejemplos adicionales de sales de adición de ácido inorgánico u orgánico farmacéuticamente aceptable se enumeran en, por ejemplo, J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2, QUE se incorpora en la presente memoria por referencia. Ejemplos de sales de metales incluyen sales de litio, sodio, potasio, magnesio y similares. Ejemplos de sales de amonio y de amonio alquilado incluyen sales de amonio, metilamonio, dimetilamonio, trimetilamonio, etilamonio, hidroxietilamonio, dietilamonio, butilamonio, tetrametilamonio y similares. Ejemplos de bases orgánicos incluyen lisina, arginina, guanidina, dietanolamina, clona y similares.

La terapia de acuerdo con la invención se puede realizar sola o como combinación de fármacos y/o junto con cualquier otra terapia, dirigida a la misma vía o que tienen distintos modos de acción. Se puede proporcionar en el domicilio, la consulta del médico, una clínica, el departamento ambulatorio de un hospital o un hospital, de modo que el médico pueda observar estrechamente los efectos de la terapia y realizar los ajustes que sean necesarios.

En una forma de realización concreta, las composiciones de la presente invención comprenden además al menos un fármaco que modula la angiogénesis, preferentemente que incrementa la angiogénesis, para el uso combinado, por separado o secuencial. Más preferentemente, dicho al menos un fármaco que modula la angiogénesis se selecciona de albuterol, alendronato, ambrisentan, ácido aminocapoico, balsalazida, becaplermin, cabergolina, clopidogrel, desirudina, dihidroergotamina, eplerenona, fenoldopam, acetato de fludrocortisona, gemfibrozilo, hesperetina, leflunomida, L-histidina, liotironina, marimastat, meloxicam, mepacrina, metazolamida, metimazol, montelukast, netilmicina, nitroglicerina, fenilbutirato, pirimetamina, sunitinib, tietilperazina, tirofibán, topotecán, vidarabina y warfarina (véase la tabla 2 a continuación).

Tabla 2 NOMBRE DEL FÁRMACO NUMERO CAS Albuterol 18559-94-9 Alendronato 66376-36-1 Ambrisentán 177036-94-1 Acido aminocaproico 60-32-2 Argatrobán 74863-84-6 Balsalazida 80573-04-2 Beclapermin 165101-51-9 Carbegolina 81409-90-7 Clopidogrel 113665-84-2 Desirudina 120993-53-5 Dihidroergotamina 6190-39-2 Eplerenona 107724-20-9 Fenoldopam 67227-57-0 Fludrocortisona 127-31-1 Gemfibrozilo 25812-30-0 Hesperetina 520-33-2 Leflunomida 75706-12-6 L-histidina 71-00-1 Liotironina 6893-02-3 Marimastat 154039-60-8 Meloxicam 71125-38-7 Mepacrina 83-89-6 Metazolamida 554-57-4 Metimazol 60-56-0 Montelukast 158966-92-8 Netilmicina 56391-56-1 Nitroglicerina 55-63-0 Pirimetamina 58-4-0 Fenilbutirato de sodio 1716-12-7 Sunitinib 557795-19-4 Tietilperacina 1420-55-9 Tirofibán 144494-65-5 Topotecán 119413-54-6 Vidarabina 24356-66-9 Warfarina 81-81-2 Como alternativa o además de la forma de realización precedente, las composiciones de la presente invención pueden comprender además al menos un fármaco que modula la respuesta a estrés celular, preferentemente que mejora la función sináptica para el uso combinado, por separado o secuencial. Los fármacos más preferidos que modulan la función sináptica se seleccionan de arabitol, manitol, metaraminol, omeprazol, prilocaína, capamicina, rifabutina, tioguanina y trehalosa (véase tabla 3 a continuación).

Tabla 3 En una forma de realización concreta, la invención se refiere a una composición que comprende un fármaco que incrementa la angiogénesis, un fármaco que atenúa la función sináptica y un fármaco que inhibe la respuesta de estrés celular, para administración simultánea, por separado o secuencial.

Las composiciones de la invención comprenden típicamente uno o varios vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables. La duración de la terapia depende de la fase de la enfermedad que se esté tratando, la combinación usada, la edad y la concición del paciente, y de cómo el paciente responde al tratamiento.

La dosificación, frecuencia y modo de administración de cada componente de la combinación se puede controlar de forma independiente. Por ejemplo, se puede administrar un fármaco por vía oral, mientras que el segundo fármaco se puede administrar por vía intramuscular. La terapia de combinación se puede administrar en ciclos de terapia y descanso, que incluyen periodos de descanso de modo que el cuerpo del paciente tenga la posibilidad de recuperarse de cualquiera de los efectos secundarios todavía sin predecir. Los fármacos también se pueden formular juntos de modo que una administración libere todos los fármacos.

La administración de cada fármaco de la combinación puede ser por cualquier medio adecuado que tenga como resultado una concentración del fármaco que, combinada con el otro componente, sea capaz de corregir el funcionamiento de las vías implicadas en la EA.

Cuando es posible administrar los ingredientes activos de la combinación en forme del químico puro, es preferible presentarlos como una composición farmacéutica, también denominada en este contexto formulación farmacéutica. Las posibles composiciones incluyen las adecuadas para administración oral, rectal, tópica (incluidas transdérmica, bucal y sublingual) o parenteral (incluidas subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica).

Más habitualmente, estas formulaciones farmacéuticas se prescriben al paciente en "paquetes para el paciente" que contienen una serie de unidades de dosificación u otros medios para administración de dosis unitarias medidas para usar durante un periodo de tratamiento distinto en un envase único, normalmente un envase blíster. Los paquetes para el paciente tienen una ventaja sobre las prescripciones tradicionales, en las que un farmacéutico divide un suministro para un paciente de un producto farmacéutico de un suministro global, en que el paciente siempre tiene acceso a la ficha técnica contenida en el paquete para el paciente, que normalmente no está disponible en las prescripciones tradicionales. Se ha demostrado que la inclusión de una ficha técnica mejora el cumplimiento del paciente con las instrucciones del médico. Por tanto, la invención además incluye una formulación farmacéutica, como se ha descrito antes en la presente memoria, en combinación con material de acondicionamiento adecuado para dichas formulaciones. En dicho envase para paciente, el uso destinado de una formulación para el tratamiento de combinación se puede deducir mediante instrucciones, instalaciones, condiciones, adaptaciones y/u otros medios auxiliares usando la formulación más adecuada para el tratamiento. Dichas medidas convierten un envase para paciente en específicamente adecuado para, y adaptado para, usar para el tratamiento con la combinación de la presente invención.

El fármaco puede estar contenido en cualquier cantidad adecuada y cualquier sustancia vehículoa adecuada y puede estar presente en una cantidad de 1 -99 % en peso del peso total de la composición. La composición puede proporcionarse en una forma de dosificación que sea adecuada para la vía de administración oral, parenteral (p. ej., intravenosa, intramuscular), rectal, cutánea, nasal, vaginal, inhalado, cutánea (parche) y ocular. Por tanto, la composición puede estar en forma de, por ejemplo comprimidos, cápsulas, pildoras, polvos, granulados, suspensiones, emulsiones, soluciones, geles, incluidos hidrogeles, pastas, ungüentos, cremas, yesos, vendajes, dispositivos de liberación osmótica, supositorios, enemas, inyectables, implantes, aerosoles o aerosoles.

Las composiciones farmacéuticas pueden formularse de acuerdo con la práctica farmacéutica convencional (véase, p. ej., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000 y Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. 1. Swarbrick y J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York).

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden formularse para liberar el fármaco activo sustancialmente inmediatamente tras la administración o en cualquier momento o periodo de tiempo predeterminado tras la administración.

Las formulaciones de liberación controlada incluyen (i) formulaciones que crean una concentración sustancialmente constante del fármaco dentro del cuerpo durante un periodo de tiempo extendido; (ii) formulaciones que después de un periodo de demora predeterminado crean una concentración sustancialmente constante del fármaco dentro del cuerpo durante un periodo de tiempo extendido; (¡ii) formulaciones que sostienen la acción del fármaco durante un periodo de tiempo predeterminado manteniendo un nivel de fármaco eficaz relativamente constante en el cuerpo, con minimización concomitante de efectos secundarios indeseables asociados con fluctuaciones a nivel plasmático de la sustancia farmacológica activa; (iv) formulaciones que localizan la acción del fármaco mediante, p. ej., colocación espacial de una composición de liberación controlada adyacente a o en el tejido u órgano enfermo; y (v) formulaciones dirigidas a la acción del fármaco mediante el uso de vehículos o derivados químicos para liberar el fármaco en un tipo de célula diana concreto.

Especialmente se prefiere la administración de fármacos en forma de una formulación de liberación controlada en los casos en los que el fármaco, bien solo o en combinación, tiene (i) un estrecho índice terapéutico (Es decir, la diferencia entre la concentración en plasma que da lugar a efectos secundarios dañinos o reacciones tóxicas y la concentración en plasma que producir un efecto terapéutico es pequeña; en general, el índice terapéutico, IT, se define como la proporción entre la mediana de la dosis letal (DL50) y la mediana de la dosis efectiva (DE50)); (II) un margen de absorción estrecho en el tracto gastrointestinal; o (iii) una semivida biológica muy corta de modo que durante un día se requiere dosificación frecuente con el fin de mantener el nivel plasmático en un nivel terapéutico.

Se puede ejercer una serie de estrategias con el fin de obtener liberación controlada en la que la velocidad de liberación supera a la velocidad del metabolismo del fármaco en cuestión. La liberación controlada se puede obtener mediante la selección adecuada de varios parámetros e ingredientes de formulación, incluidas, por ejemplo, varios tipos de composiciones y revestimientos de liberación controlada. Por tanto, el fármaco se formula con excipientes adecuados en una composición farmacéutica que, tras la administración, libera el fármaco de forma controlada (composiciones en comprimido o cápsula de una o múltiples unidades, soluciones de aceite, suspensiones, emulsiones, microcápsulas, microesferas, nanopartículas, parches y liposomas).

Formas de dosificación sólida para uso oral Las formulaciones para uso oral incluyen comprimidos que contienen el(los) ingrediente(s) activo(s) en una mezcla con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes o cargas inertes (p. ej., sacarosa, celulosa microcristalina, almidones, incluidos almidón de patata, carbonato cálcico, cloruro sódico, fosfato . cálcico, sulfato cálcico o fosfato sódico); agentes de granulación y disgregantes (p. ej., derivados de celulosa, incluidas celulosa microcristalina, almidones, incluidos almidón de patata, croscarmelosa sódica, alginatos o ácido algínico); agentes aglutinantes (p. ej., goma arábiga, ácido algínico, alginato sódico, gelatina, almidón, almidón pregelatinizado, celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, etilcelulosa, polivinilpirrolidona o polietilenglicol; y agentes lubricantes, deslizantes y antiadhesivos (p. ej., ácido esteárico, sílices o talco). Otros excipientes farmacéuticamente aceptables pueden ser colorantes, agentes aromatizantes, plastificantes, humectantes, agentes tampón y similares.

Los comprimidos pueden estar sin recubrir o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas, opcionalmente para retrasar la disgregación y absorción en el tracto gastrointestinal y, de este modo, proporcionar una acción sostenida durante un periodo de tiempo largo. El revestimiento puede adaptarse para liberar la sustancia farmacológica activa en un patrón predeterminado (p. ej., para conseguir una formulación de liberación controlada) o pueden adaptarse para no liberar la sustancia farmacológica activa hasta después de haber pasado el estómago (revestimiento entérico). El revestimiento puede ser un revestimiento de azúcar, un revestimiento pelicular (p. ej., basado en hidroxipropilmetilcelulosa, metilcelulosa, metilhidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, carboximetilcelulosa, copolímeros de acrilato, polietilenglicoles y/o polivinilpirrolidona) o un revestimiento entérico (p. ej., basado en copolímero de ácido metacrílico, acetato ftalato de celulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulosa, acetato ftalato de polivinilo, goma shellac y/o etilcelulosa). Se puede usar un material de retraso de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo.

Las composiciones sólidas pueden incluir un revestimiento adaptado para proteger la composición de cambios químicos ¡ndeseados (p. ej., degradación química antes de la liberación de la sustancia farmacológica activa). El revestimiento puede aplicarse sobre la forma de dosificación sólida de un modo similar al descrito en Encyclopedia of Pharmaceutical Technology.

Varios fármacos se pueden mezclar en el comprimido o se pueden dividir. Por ejemplo, el primer fármaco está contenido en el interior del comprimido y el segundo fármaco está fuera, de modo que una porción sustancial del segundo fármaco se libera antes de la liberación del primer fármaco.

Las formulaciones para uso oral también se pueden presentar en forma de comprimidos masticables o en forma de cápsulas de gelatina dura, en los que el ingrediente activo está mezclado con un diluyente sólido inerte (p. ej., almidón de maíz, celulosa microcristalina, carbonato cálcico, fosfato calcico o caolín) o como cápsulas de gelatina blanda, en las que el ingrediente activo está mezclado con agua o con un medio oleoso, por ejemplo parafina líquida o aceite de oliva. Los polvos y granulados se pueden preparar usando los ingredientes mencionados en lo que antes en comprimidos y cápsulas de un modo convencional.

Se pueden construir composiciones de liberación controlada para uso oral para, por ejemplo, liberar el fármaco activo mediante el control de la disolución y/o la difusión de la sustancia farmacológica.

La disolución o difusión de liberación controlada se puede conseguir mediante el revestimiento adecuado de una formulación en comprimido, cápsula, pastilla o granulado de fármacos o mediante la incorporación del fármaco en una matriz adecuada. Un revestimiento de liberación controlada puede incluir una o más de las sustancias de revestimiento mencionadas en lo que antecede y/o, por ejemplo, goma shellac, cera de abeja, cera de glucosa, cera de ricino, cera carnauba, alcohol estearílico, monoestearato de glicerilo, diesterato de glicerilo, palmitoestearato de glicerol, etilcelulosa, resinas acrílicas, ácido dl-poliláctico, acetato butirato de celulosa, cloruro de polivinilo, acetato de polivinilo, pirrolidona de vinilo, polietileno, polimetacrilato, metilmetacrilato, 2-hidroximetacrilato, hidrogeles de metacrilato, 1 ,3-butilenglicol, metacrilato de etllenglicol y/o polietilenglicoles. En una formulación de matriz de liberación controlada, el material de la matriz también puede incluir, por ejemplo, metilcelulosa hidratada, cera de carnauba y alcohol estearílico, carbopol 934, silicona, triestearato de glicerilo, acrilato de metilo-metacrilato de metilo, cloruro de polivinilo, polietileno y/o fluorocarbono hidrogenado.

Una composición de liberación controlada que contiene uno o más de los fármacos de las combinaciones reivindicadas también puede estar en forma de un comprimido o cápsula flotante (es decir, un comprimido o cápsula que, tras la administración oral, flota encima del contenido gástrico durante un periodo de tiempo determinado). Una composición de comprimido flotante del (de los) fármaco(s) se pueden preparar mediante granulación de una mezcla del(los) fármaco(s) con excipientes y 20-75 % p/p de hidrocoloides, tales como hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa o hidroxipropilmetilcelulosa. A continuación, los gránulos obtenidos se pueden comprimir para formas comprimidos. Tras el contacto con el jugo gástrico, el comprimido forma una barrera en gel impermeable al agua alrededor de su superficie. Esta barrera en gel toma parte en el mantenimiento de una densidad inferior a uno, de modo que se permite que el comprimido permanezca flotando en el jugo gástrico.

Líquidos para administración oral Polvos, polvos dispersables o gránulos adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua son formas de dosificación conveniente para administración oral. La formulación en forma de suspensión proporciona el ingrediente activo en una mezcla con un agente de dispersión o humectación, agente de suspensión y uno o más conservantes. Agentes se suspensión adecuados son, por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, alginato sódico y similares.

Composiciones parenterales La composición farmacéutica también se puede administrar por vía parenteral mediante inyección, infusión o implantación (intravenosa, intramuscular, subcutánea o similar) en formas de dosificación, formulaciones o mediante dispositivos de liberación adecuados o implantes que contienen vehículos y adyuvantes no tóxicos farmacéuticamente aceptables. La formulación y preparación de dichas composiciones son bien conocidas para los expertos en la técnica de la formulación farmacéutica.

Las composiciones para uso parenteral se pueden proporcionar en formas de dosificación unitaria (p. ej., en ampollas de una única dosis) o en viales que contienen varias dosis y en los que se puede añadir un conservante adecuado (véase más adelante). La composición puede estar en forma de una solución, una suspensión, una emulsión, un dispositivo de infusión o un dispositivo de liberación para implantar, o se puede presentar en forma de un polvo seco para reconstituir con agua u otro vehículo adecuado antes de usar. Aparte del(los) ingrediente(s) activo(s), la composición puede incluir vehículos y/o excipientes adecuados parenteralmente aceptables. El(los) fármaco(s) activo(s) se pueden incorporar en microesferas, microcápsulas, nanopartículas, liposomas o similares para liberación controlada. La composición puede incluir agentes de suspensión, solubilización, estabilización, de ajuste de pH y/o agentes de dispersión.

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden estar en forma adecuada para inyección estéril. Para preparar dicha composición, el(los) fármaco(s) activo(s) adecuado(s) se disuelven o suspenden en un vehículo líquido parenteralmente aceptable. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden usar están agua, agua ajustada hasta un pH adecuado mediante la adición de una cantidad adecuada de ácido clorhídrico, hidróxido sódico o un tampón adecuado, 1-3-butanodiol, solución de Ringer y solución de cloruro sódico ¡sotónico. La formulación acuosa puede también contener uno o más conservantes (p. ej., p-hidroxibenzoato de metilo, etilo o n-propilo). En los casos en los que uno de los fármacos es poco o ligeramente soluble en agua se puede añadir una disolución de potenciación o un agente solubilizante, o el disolvente puede incluir 10-60 % p/p de propilenglicol o similares.

Las composiciones parenterales de liberación controlada pueden estar en forma de suspensiones acuosas, microesferas, microcápsulas, microesferas magnéticas, soluciones oleosas, suspensiones oleosas o emulsiones. Como alternativa, el(los) fármaco(s) activo(s) pueden incorporarse en vehículos biocompatibles, liposomas, nanopartículas, implantes o dispositivos de infusión. Materiales para usar en la preparación de microesferas y/o microcápsulas son, por ejemplo, polímeros biodegradables/bioerosionables tales como poligalactina, poli(cianoacrilato de isobutilo), poli(2-hidroxietil-L-glutamina). Vehículos biocompatibles que se pueden usar al formular una formulación parenteral de liberación controlada son hidratos de carbono (p. ej., dextranos), proteínas (p. ej., albúmina), lipoproteínas o anticuerpos. Materiales para usar en implantes pueden ser no biodegradables (p. ej., polidimetilsiloxano) o biodegradables (p. ej., poli(caprolactona), poli(ácido glicólico) o poli(ortoésteres)).

Composiciones rectales Para aplicación rectal, formas de dosificación adecuadas para una composición incluyen supositorios (de tipo emulsión o suspensión) y cápsulas de gelatina rectal (soluciones o suspensiones). En una formulación de supositorio típica, el(los) fármaco(s) activo(s) se combinan con una base de supositorio adecuada farmacéuticamente aceptable, tal como manteca de cacao, ácidos grasos esterificados, gelatina glicerinada y varias bases hidrosolubles o dispersables como polietilenglicoles. Se pueden incorporar varios aditivos, potenciadores o tensioactivos.

Composiciones percutáneas v tópicas Las composiciones farmacéuticas pueden también administrarse tópicamente sobre la piel para absorción percutánea en formas de dosificación o formulaciones que contienen vehículos y excipientes farmacéuticos convencionalmente no tóxicos, incluidas microesferas y liposomas. Las formulaciones incluyen cremas, ungüentos, lociones, linimentos, geles, hidrogeles, soluciones, suspensiones, barras, aerosoles, pastas, yesos y otros tipos de sistemas de liberación transdérmica del fármaco. Los vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables puede incluir agentes emulsionantes, antioxidantes, agentes tampón, conservantes, humectantes, potenciadores de la penetración, agentes quelantes, agentes formadores de gel, bases de ungüento, perfumes y agentes protectores de piel.

Los agentes emulsionantes pueden ser gomas naturales (p. e¡., goma arábiga o goma de tragacanto) Los conservantes, humectantes, potenciadores de la penetración pueden ser parabenes, tales como p-hidroxibenzoato de metilo o propilo, y cloruro de benzalconio, glicerina, propilenglicol, urea etc.

Las composiciones farmacéuticas descritas en párrafos anteriores para administración tópica sobre la piel pueden también usarse en relación con la administración tópica o cerca de la parte del cuerpo que se va a tratar. Las composiciones se pueden adaptar para aplicación directa o para aplicación por medio de dispositivos de liberación de fármaco especiales, tales como vendajes o, como alternativa, yesos, compresas, esponjas, tiras u otras formas de material flexible adecuado.

Dosificaciones v duración del tratamiento Debe entenderse que los fármacos de la combinación se pueden administrar de forma concomitante, bien en la misma o en diferente formulación farmacéutica, o secuencialmente. Si hay administración secuencial, el retraso en la administración del segundo (o adicional) ingrediente activo no debe ser tal que se pierdan los beneficios del efecto eficaz de la combinación de los ingredientes activos. Un requisito mínimo para una combinación de acuerdo con esta descripción es que la combinación debe estar destinada al uso combinado con el beneficio del efecto eficaz de la combinación de los ingredientes activos. El uso pretendido de una combinación se puede deducir mediante instalaciones, condiciones, adaptaciones y/u otros medios auxiliares usando la combinación de acuerdo con la invención.

Aunque los fármacos activos de la presente invención se pueden administrar en dosis divididas, por ejemplo dos o tres veces al día, se prefiere una única dosis diaria de cada fármaco en la combinación, siendo más preferida una única dosis diaria de todos los fármacos en una única composición farmacéutica (forma de dosificación unitaria).

La expresión "forma de dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente pequeñas (tales como cápsulas, comprimidos o cilindros de jeringuilla cargados) adecuados como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, de modo que cada unidad contiene una cantidad predeterminada de material o materiales activos calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con un vehículo farmacéutico requerido.

La administración puede ser de una a varias veces al día durante varios días a varios años e, incluso, puede ser durante toda la vida del paciente. En la mayoría de los casos estará indicada la administración crónica, o al menos repetida periódicamente a largo plazo.

Adicionalmente, la información farmacogenómica (el efecto del genotipo sobre el perfil farmacocinético, farmacodinámico o de eficacia de una sustancia terapéutica) sobre un paciente concreto puede afectar a la dosificación usada.

Excepto cuando se responde a casos de enfermedad de EA especialmente deteriorantes, en donde se pueden requerir dosificaciones más altas, la dosificación referida de cada fármaco en la combinación normalmente residirá dentro del intervalo de dosis no superiores a la prescrita normalmente para el tratamiento de mantenimiento a largo plazo o cuando se ha demostrado que son seguras en estudios clínicos de tamaño grande de fase 3.

Por ejemplo, la dosificación más preferida corresponderá a cantidades del 1 % hasta el 10 % de las normalmente prescritas para el tratamiento de mantenimiento a largo plazo. Por ejemplo: dasatinib por vía oral de aproximadamente 1 a 10 mg al día y acamprosato por vía oral de aproximadamente 7 a 70 mg tres veces al día, aztreonam por vía oral de aproximadamente 20 a 1400 mg al día en 4 dosis divididas y rifabutina por vía oral de aproximadamente 0,3 a 3 mg al día, - clorzoxazona por vía oral de aproximadamente 5 a 50 mg 3 ó 4 veces al día y tadalafil por vía oral de aproximadamente 0,05 a 0,5 mg al día. clorzoxazona por vía oral de aproximadamente 5 a 50 mg 3 ó 4 veces al día y cilostazol por vía oral de aproximadamente 1 a 10 mg al día. clorzoxazona por vía oral de aproximadamente 5 a 50 mg 3 ó 4 veces al día y terbinafina por vía oral de aproximadamente 2,5 a 25 mg al día. clorzoxazona por vía oral de aproximadamente 5 a 50 mg 3 ó 4 veces al día y dasatinib por vía oral de aproximadamente 1 a 10 mg al día. dasatinib por vía oral de aproximadamente 1 a 10 mg al día y terbinafina por vía oral de aproximadamente 2,5 a 25 mg una o dos veces al día - cinacalcet por vía oral de aproximadamente 0,3 a 3 mg por día y acamprosato por vía oral de aproximadamente 7 a 70 mg tres veces al día, aztreonam por vía oral de aproximadamente 20 a 1400 mg al día en 4 dosis divididas y vigabatrina por vía oral de aproximadamente 20 a 200 mg una vez o dos veces al día, topiramato por vía oral de aproximadamente 2 a 60 mg por día y difilina por vía oral de aproximadamente 6 a 60 mg por día en dos o tres dosis divididas.

Debe entenderse que la cantidad del fármaco administrado en realidad deberá determinarla un médico a la luz de circunstancias relevantes, incluida la afección o afecciones a tratar, la composición exacta que se va a administrar, la edad, el peso y la respuesta de cada paciente individual y la gravedad de los síntomas del paciente y la vía de administración elegida. Por tanto, con los intervalos de dosificación anteriores se pretende dar unas directrices generales y un soporte para las enseñanzas de la presente memoria, pero no están destinados a limitar el alcance de la invención.

Los ejemplos siguientes se ofrecen a modo de ilustración y no como limitación.

Ejemplos Validación del fármaco usando ensayos in vitro Los ensayos in vitro son una potente herramienta para mejorar los fármacos y sus combinaciones que actúan sobre las vías implicadas en la EA. Los fármacos de la presente invención, y sus combinaciones, se optimizan mediante la acción en ensayos in vitro específicos adaptados de acuerdo con la red de EA identificada en la presente invención. Posteriormente, estas moléculas o sus combinaciones podrían analizarse en un modelo in vivo de EA.

Estos ensayos in vitro se inicial con el estudio del nivel de expresión del gen de APP, seguido por los ensayos del potencial neuroprotector de los fármacos sobre las células expuestos al efecto tóxico de la proteína Abeta. Los fármacos en las vías implicadas podrían analizarse individualmente, seguido por ensayos de su acción en combinación. En la etapa posterior, las combinaciones más eficaces que actúan sobre las dianas en vías individuales se combinan y someten a ensayo en los ensayos neuroprotectores.

En la EA, la proteína forma agregados de láminas ß de la proteína Abeta fibrilar (amiloide). El cambio conformacional de la forma soluble a fibrilar parece ser un acontecimiento espontáneo que aumenta con las concentraciones crecientes de Abeta, por lo que cualquier producción de mayores cantidades de Abeta con respecto a lo normal (o la producción de formas más grandes, menos solubles de Abeta) tenderá a incrementar la formación de placas. Una vez que la placa Abeta ha comenzado a formarse, otras moléculas pueden interaccionar con la placa naciente para producir, al final, la placa madura con sus áreas asociadas de muerte celular neuronal. Considerando este hecho, los inventores han dado prioridad a los ensayos de los efectos de los fármacos sobre la viabilidad de las células expuestas a la proteína ß amiloide.

Cultivo de células Neuronas corticales primarias de rata se cultivan tal como han descrito Singer et al., 1999. Brevemente, mediante dislocación cervical se sacrifica a las ratas hembra preñadas de 15 días de gestación (ratas Wistar Janvier) y se extraen los fetos de útero. Se retira la corteza y se coloca en medio helado de Leibovitz (L15; Invitrogen) que contiene 1 % de Penicilina-estreptomicina (PS¡ Invitrogen) y 1 % de seroalbúmina bovina (BSA; Sigma). La corteza se disocia mediante tripsinización durante 20 min a 37 °C (Tripsina EDTA IX; Invitrogen) diluidas en PBS sin calcio y sin magnesio. La reacción se detiene mediante la adición de medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM; Invitrogen) que contiene ADNasa I de grado II (0,1 mg/ml Roche Diagnostic) y 10 % de suero bovino fetal (FCS; Invitrogen).

Después, las células se disocian mecánicamente mediante 3 pases a través de una pipeta de 10 mi. Después, las células se centrifugan a 180 x g 10 min a 10 °C. Se desecha el sobrenadante y las células del sedimento se resuspenden en un medio de cultivo definido constituido por Neurobasal (Invitrogen) suplementado con B27 (2 %; Invitrogen), L-glutamina (0,2 mM;lnvitrogen), 1 % de solución PS y 10 ng/ml de factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF, Pan Biotech). Las células viables se cuentan en un citómetro de NEubauer usando el ensayo de exclusión con azul tripán. Las células se siembran a una densidad de 30.000 células/pocilio en placas de 96 pocilios (los pocilios se pre-revisten con poli-L-lisina (10 µg ml; sigma) y se cultivan a 37 °C en una atmósfera de aire humidificado (95 %)/C02 (5 %).

Tras 6 días de cultivo, las células se incuban con fármacos (5 concentraciones). Tras 1 hora, las células se intoxican con 20 µ? del ß-amiloide (25-35; Sigma) en medio definido sin BDNF pero junto con los fármacos. Las neuronas corticales se intoxican durante 2 días. El BDNF (10 ng/ml) se usa como control positivo (neuroprotector). Se realizan dos cultivos independientes por afección, 6 pocilios por afección.

Cuantificación de la longitud de las neuritas Las células se fijan con una solución fría de etanol (95 %) y ácido acético (5 %) durante 10 minutos. Después de permeabilizar con saponina al 0,1 %, las células se bloquean durante dos horas con PBS que contiene suero de cabra al 10 %. Las células se incuban después con anticuerpo monoclonal dirigido contra el microtúbulo asociado a proteína 2 (MAP-2; Sigma). Este anticuerpo revela específicamente cuerpos celulares y neuritas. El anticuerpo secundario usado es un IgG de cabra antimurino Alexa Fluor 488 (sonda molecular). Los núcleos de neuronas se revelan mediante un colorante fluorescente (solución Hoechst, SIGMA). Se toman 20 fotografías por pocilio, usando un InCell AnalyzerTM 1000 (GE Healthcare) con un aumento de 20x. Todas las imágenes se toman en las mismas condiciones. La longitud de las neuritas se cuantifica usando el programa informático Developer (GE Healthcare).

Resuitados Los resultados presentados en la Figura 1 se extraen de dos cultivos independientes, 6 pocilios por afección. Todos los valores se expresan en forma de la media ± e.e.m.. Con los datos brutos se realiza un análisis con la prueba bilateral t de Student. Los resultados se expresan en porcentaje de viabilidad celular en comparación con el control (vehículo).

Los fármacos se incuban con neuronas corticales primarias de rata una hora antes de la intoxicación con ?ß25-35 20µ? de 2 días de duración (40).

Dos días después de esta incubación se cuantifica la longitud de la red de neuritas, lo que refleja el crecimiento axonal de las células. Los inventores han observado que 3 fármacos ejercen claramente un efecto protector contra esta intoxicación por A ß25-35 (Fig. 1 y Fig. 2).

Ensayos in vivo Los compuestos y sus combinaciones activas en los ensayos in vitro se han analizado en un modelo in vivo de enfermedad de Alzheimer. La sobreexpresión de los transgenes de la proteína precursora de beta amiloide (APP) humana mutante ligada con la enfermedad de Alzheimer ha sido el medio más fiable de estimular el depósito de Abeta en los cerebros de ratones transgénicos que sirvieron como modelos de enfermedad EA en numerosos estudios. A medida que envejecen, estos ratones con APP mutante desarrollan una patología amiloide sólida y otras características similares a la EA, incluidos disminución de la densidad sináptica, gliosis reactiva y algunos déficit cognitivos. Muchos modelos de ratones con APP mutante muestran pocas pruebas de pérdida neuronal franca y patología de ovillos neurofibrilares (ONF). Los ratones hemicigotos para este transgen BRI-Abeta42 son viables y fértiles con un ciclo de vida normal. El ARNm de BRI-Abeta42 transgénico se expresa en un patrón característico de, promotor de la proteína prión de ratón; mayores niveles de expresión del transgen se detectan el las células del gránulo cerebelar y el hipocampo, seguidos por la corteza, el puente troncocenfálico, el tálamo y el mesencéfalo. En la proteína de fusión transgénica, Abetal -42 se condensa con el extremo C de a proteína BRI en el sitio de escisión de tipo furina, de modo que la escisión tiene como resultado una eficiente secreción de Abetal -42 en la luz del espacio extracelular. Por tanto, estos ratones expresan de forma específica la isoforma de Abetal -42. Los ratones BRI-Abeta42 hemocigóticos acumulan beta amiloide insoluble en detergente con la edad y desarrollan placas nucleadas en el cerebelo ya a los 3 meses de edad. El desarrollo de patología del prosencéfalo se produce más tarde, las placas Abeta extracelulares no están presentes de forma consistente en el hipocampo y las cortezas entorina/piriforme hasta los 12 meses de edad Los depósitos de beta amiloide (placas nucleadas) se pueden observar ya a los 3 meses en la capa molecular del cerebelo de ratones transgénicos y se convierte en más pronunciado con la edad; se observan placas extracelulares ocasionales en las cortezas entorina/piriforme y el hipocampo a los 6 meses de edad, pero no se encuentran de forma consistente hasta > 12 meses de edad. Los ratones más viejos muestran una patología más extendida con placas nucleadas y difusas en el cerebelo, la corteza, el hipocampo y el bulbo olfatorio. Las placas amiloides extracelulares muestran densos núcleos amiloides con fibrillas irradiantes; muchos haces de neuronas distróficas se observan en la periferia de estas placas. La gliosis reactiva se asocia con las placas.

Tratamientos farmacológicos Los ratones Tg (Pmp-ITM2B /APP695*42) AI2E me transgénicos (31 ) se han obtenido en Jackson Laboratory (http://jaxmice.jax.org/strain/007002.html). Los ratones con los niveles en plasma más elevados de Abeta42, línea BRI-Abeta42A (12e), se han mantenido en un fondo mixto con B6C3. Los ratones transgénicos machos adultos tienen acceso libre a alimento y agua. De acuerdo con un protocolo aprobado por el Institutional Animal Care and Use Committee, se han pesado a los ratones y se inyectó i.p. o alimentaron a la fuerza una vez al día durante de 10 a 20 semanas consecutivas con una solución control (placebo) o fármacos PXT, preparados a dosis diferentes.

Análisis de la supervivencia Las tasas de supervivencia se han analizado usando procedimientos de Kaplan- Meier. Se han usado procedimientos de Holm-Sidak (post hoc) para todos los ensayos pareados de comparación múltiple. Las muertes extrañas se censuran. Todas las comparaciones se han realizado entre carnadas para limitar cualquier efecto potencialmente confuso a partir de diferencias básicas en las cepas.

Ensayos conductuales Los ensayos conductuales se diseñaron y realizaron de acuerdo con los procedimientos publicados por varios autores (32-35).

Aprendizaje y memoria espacial en el laberinto de Morris Water (MWM) Este experimento se realiza en una piscina circular, de 90 cm de diámetro, hecha de plástico blanco y llena con agua de color lechoso. Una plataforma de escape de 8 cm de diámetro, hecha de plástico transparente, se sumergió 0,5 cm debajo del nivel de agua. Se proporcionan pistas visuales mediante diferentes formas geométricas impresas en letras de tamaño A4 y se colocan en las 4 paredes adyacentes (la distancia desde la piscina era de 50 a 70 cm). En cada ratón se realizaron cuatro ensayos diariamente (intervalo de 5 a 7 minutos entre ensayos, un total de 16 ensayos) durante 4 días. Cada ensayo se realizó desde uno de cuatro puntos de partida diferentes. El movimiento de los ratones se monitoriza usando Videotrack Software (View Point). Se ha determinado el tiempo necesario para colocar la plataforma de escape (latencia de escape; hasta 60 segundos). Después de colocar la plataforma, se permitió al ratón sentarse en ella durante 15 segundos. Los ratones que no encontraron la plataforma en 60 segundos fueron guiados a ella y se les dejó estar en ella durante 15 segundos. En el registro se introdujo una latencia de 60 segundos para este caso. Se realizó la media de los cuatro ensayos al día para el análisis estadístico, excepto por el primer ensayo el día 1. El día 9 (5 días después del último entrenamiento), los ratones se han sometido a un ensayo sonda de 60 segundos en el que se retira la plataforma y se deja que los ratones la busquen. El tiempo que cada animal tarda en cada cuadrante se registra (tiempo de búsqueda por cuadrante). Se han usado varios grupos de ratones macho a 3, 7, 10 y 12 meses.

Unos pocos ratones han mostrado un comportamiento de inmovilidad (p. ej., se quedan inmóviles en el agua y rechazan nadar) que interfirió considerablemente en el ensayo; se excluyó a estos animales del análisis de datos.

Todos los ensayos conductuales se realizan en un ambiente tranquillo y con reducción de luz.

Ensayo de la memoria de trabajo en el laberinto con agua de brazos radiales Esta medida sensible basada en la cognición de la memoria de trabajo se ha obtenido con ayuda del aparato constituido por una piscina llena de agua de 100 cm de diámetro (también usada para el laberinto de agua de Morris y las tareas de reconocimiento de plataforma) equipada con un inserto de aluminio para crear seis brazos de nado distribuidos radialmente. Los ensayos constan de cinco ensayos de 1 minuto por sesión diaria, durante 9-12 días consecutivos. Al principio de cada sesión, se coloca una plataforma transparente sumergida en el extremo de uno de los seis brazos (seleccionado al azar, cambiado a diario). Para cada uno de los primeros cuatro ensayos de adquisición, se introduce al animal en uno de los brazos que no contienen la plataforma (secuencia aleatorizada) y se les deja buscar la plataforma. Durante el ensayo de 60 s, cada vez que el animal entra en otro brazo que no contiene la plataforma, se le devuelve suavemente a su lugar de partida y se registra un error. Después del cuarto ensayo, se deja descansar al animal durante 30 minutos, seguido por un quinto ensayo (retención), que se inicia en el último brazo de nado que contiene la plataforma. El número de errores (elecciones incorrectas del brazo) y la latencia de escape (tiempo para llegar hasta la plataforma, máximo 60 s) se registran para cada ensayo.

Aprendizaje y memoria de referencia espacial en el ensayo de la plataforma circular Este ensayo de tareas basado en la cognición se realiza con la ayuda del aparato constituido por una plataforma circular de 69 cm que tiene 16 orificios de "escape" espaciados de forma equidistante alrededor de la circunferencia. Se instala un refugio de escape debajo de uno de los agujeros y rodeando a la plataforma una cortina negra, sobre la cual se colocan varias pistas visuales. El animal se coloca en el centro de la plataforma al principio de un único ensayo de 5 minutos y se presentan estímulos de aversión (luces brillantes, aire con ventilador). Se registra el número total de errores (husmeos en los agujeros sin escape) y la latencia del escape (tiempo hasta alcanzar el agujero de escape).

Capacidad de reconocimiento en el ensayo de reconocimiento de la plataforma Esta tarea de búsqueda basada en la cognición evalúa la capacidad de reconocimiento y de identificación de objetos. El objeto diana consiste en una plataforma circular de 9 cm de diámetro equipada con una enseña negra de 10 cm x 40 cm, que se coloca a 0,8 cm por encima de la superficie del agua en una piscina circular de 100 cm de diámetro. El ensayo consta de cuatro ensayos de 60 s al día en cada uno de cuatro días consecutivos. Cada día, el objeto diana se coloca en un cuadrante diferente de la piscina para cada ensayo y el animal se libera en el mismo lugar a lo largo de la circunferencia de la piscina para los cuatro ensayos. La latencia total (máximo 60 s) se registra para cada ensayo.

Examen de Irwin modificado Se usa un filtro exhaustivo, modificado de Irwin, para determinar si alguno de los ratones exhibía deteriores fisiológicos, conductuales o sensorimotores relacionado con su genotipo. Para explorar las capacidades motoras, la coordinación y la fuerza muscular, los ratones se colocan en un alambre tensado entre dos columnas de 30 cm de altura y se evalúa su capacidad para mantener el equilibrio sobre el alambre. Además, se determina su capacidad para agarrarse y colgarse del alambre con las cuatro patas durante al menos 5 segundos y de volver a escalar al alambre.

Cuantificación del depósito amiloide vascular Para cuantificar la angiopatía amiloide cerebral (AAC), secciones de 5 µ?? incluidas en parafina a intervalos de 30 µ?t? a través de las leptomeninges de la corteza cerebelar o parietal se someten a inmunotinción con anticuerpo Ab9 biotinilado (anti-?ß?-?T, 1 :500) durante la noche a 4 °C (n= 5-7 ratones por genotipo en cada grupo de edad, n= 6 secciones por ratón). Los vasos sanguíneos cargados positivamente se evalúan visualmente usando el sistema de puntuación modificada de Vonsattel (36). La puntuación de la gravedad de AAC se calcula multiplicando el número de vasos AAC con el grado de gravedad de la AAC.

Histología: Inmunohistoquímica e Inmunofluorescencia Ratones Tg y WT de 3 a 12 meses de vida se anestesian y perfunden transcardialmente de modo secuencial con un 0,9 % de NaCI y un 4 % de paraformaldehído en 0,1 mol/l de solución salina tamponada con fosfato (PBS) (pH 7,4) o un 10 % de formalina y un 4 % de paraformaldehído en 0,1 mol/l de PBS (pH 7,4). Se extraen los cerebros y las médulas espinales y se almacenan en paraformaldehído al 4 %. Algunas muestras se incluyen en parafina y se cortan en un microtomo de deslizamiento a un espesor de 10 µ??.

Se cortan criosecciones (14 µp?) en un crioestat y se montan en portas recubiertos con aluminio— cromo. La peroxidasa endógena se inactiva tratando la sección con metanol que contiene un 0,3 % de H202 durante 30 minutos. Las secciones se bloquean en un 10 % de suero de caballo. Se usan anticuerpos primarios y se incuban durante la noche a 4 °C en presencia de un 1 % de suero de caballo. Todos los anticuerpos biotinilados o acoplados a fluoresceína, rojo Texas y AMCA, fluorocromos, kit ABC y 3.3'-diaminobenc¡dina como cromógeno para la actividad peroxidasa proceden de Vector Laboratories La incubación con el anticuerpo secundario se realiza a temperatura ambiente durante 1 hora. Todas las etapas de lavado (3-10 minutos) y la dilución del anticuerpo se realizan usando solución salina tamponadas con fosfato (0,1 ml/l de PBS, Ph 7,4) o solución salina tamponada con Tris (0,01 mol/l de Tris, 0,15 mol/l de NaCI, pH 7,4). La incubación con el complejo ABC y la detección con 3,3'-diaminobencidina se llevan a cabo de acuerdo con el manual del fabricante. Se realiza contratinción con hematoxilina de acuerdo con procedimientos convencionales. Para cada determinación se usa un mínimo de tres ratones por genotipo, edad y sexo (37).

Preparación de extractos cerebrales Los cerebros se extraen rápidamente en hielo entre 90 y 120 minutos después de la última inyección y se congelan hasta -80 °C. El hemisferio cerebral derecho de cada ratón se pesa después de congelar. El análisis de la masa del hemisferio por mediana de la desviación absoluta permite a los inventores excluir las muestras con más de 4 desviaciones absolutas con respecto al resto del grupo. Los hemisferios cerebrales se homogeinizan y los lisados cerebrales que contienen la proteína total se preparan de acuerdo con las instrucciones del fabricante para los kit de ensayo enzimático (R&D Systems, Inc.). En resumen, las cortezas cerebrales se homogeinizan en 800 µ? de tampón de extracción 1x con bajo contenido en sales (kit de R&D) y se incuban en hielo durante 10 min. Los homogeneizados se centrifugan a 13.000 g durante 15 min a 4 °C. La concentración de proteínas en cada muestra se estima de acuerdo con un ensayo derivado de biuret (Pierce). Los niveles de APP, ?ß40 y ?ß42 se miden mediante inmunotransferencia de tipo western y técnicas de ELISA de tipo sándwich, respectivamente, como se ha descrito (28). De forma adicional, las actividades de las a-, ß- y ?-secretasas se pueden medir en los mismos extractos.

Ensayo de los niveles de APP total en extractos de corteza cerebral de ratón Una cantidad de extractos cerebrales con igual proteína se carga en cada gel, 30 µg por calle por muestra. Cada gen contenía ocho tratamientos: control; fármaco 1 dosis de 7,5 mg/kg; y fármaco 2 en varias dosis. Para minimizar la variación intra-gel, cada gel contenía tres grupos de todos los grupos de tratamiento. Cada transferencia se sonda con anticuerpo 22C1 1. Asimismo, cada transferencia se sonda con el anticuerpo de ß-actina pata la normalización de la eficiencia de la transferencia. La intensidad de la señal de la banda de APP se normaliza con la de la ß-actina. Se cargan dos "controles" de muestra en cada gel/transferencia para someter a ensayo la variación de una transferencia a otra. El análisis de tras transferencias se realiza de dos formas: Por transferencia (n= 3) para analizar la variación de un gel a otro; y transferencias combinadas (n = 9 ó 10) como se ha descrito (38-39). El análisis por transferencia con n= 3 muestra la misma tendencia que el análisis final con n= 9 ó 10. Se presentan los resultados del análisis combinado.

ELISA de tipo sándwich de ?ß Para los ELISAS de ?ß en el cerebro, se determinan los niveles de ?ß en el prosencéfalo y el romboencéfalo de forma independiente, el bulbo olfatorio se excluye del análisis. Para el análisis de ?ß en plasma se obtiene sangre en tubos revestidos con EDTA tras punción cardíaca. Las muestras de sangre se centrifugan a 3000 rpm durante 10 min a 4 °C y el plasma se alícuota y almacena a -80 °C hasta que se usa. Los niveles de ?ß se determinan mediante ELISA de tipo sándwich terminal específico usando Ab9 (ab anti-?ß? -16) como el Ab de captura para ?ß40, 13.1.1-HRP (Ab anti-AB35-40) como Ab de detección para ?ß40, 2.1.3 (Ab anti-Ap35-42) como Ab de captura para ?ß42 y Ab9-HRP como Ab de detección para ?ß42 (n = 5-7 ratones por genotipo en cada grupo de edad) Los niveles de ?ß se normalizan a los resultados previos usando los mismos grupos de ratones como controles internos para minimizar la potencial variabilidad del ELISA, como se ha descrito (28).

Transferencia de tipo western Muestras de prosencéfalo ultracongelado se homgeneizan en tampón de ensayo de radioinmunoprecipitación (RIPA) Boston BioProducts, Worcester, MA) con 1 % de mezcla de inhibidor de la proteasa (Roche). EL homogeneizado se centrifuga a 100.000 x g durante 1 hora a 4 °C. La concentración de proteínas en los sobrenadantes se determina usando el ensayo proteico BCA (Pierce). Las muestras de proteína (20 µg) se pasan a geles Bis-Tris 12 % XT o geles Bis-Tris 4-12 % XT (Bio-Rad, Hercules, CA) y se transfieren a membranas de nitrocelulosa de 0,2 µ??. Las transferencias se someten a microondas durante 2 min en PBS 0.1 M dos veces y se sondan con Ab 82E1 (anti-?ß-?ß, 1 :1000; IBL, Gunma, Japón) y 20 aminoácidos en C terminal anti-APP (1;1000) como se ha descrito (28). 1000; IBL, Gunma, Japan) and anti-APP C-terminal 20 amino acids (1 : 1000) as described (41 ). Las transferencias se extraen y se vuelven a sondar con anti^-actina (1 :1000; Sigma) como control de carga. La intensidad relativa de la banda se mide usando el software ImageJ. Cuantificación del depósito amiloide parenqu ¡matosos Hemicerebros se fijan en inmersión en 10 % de formalina y se procesan para incluir en parafina. Las secciones de tejido cerebral (5 µ??) se inmunotiñeron con anticuerpo (Ab) anti-?ß total. Las secciones se someten a contratinción con hematoxilina. Seis secciones por cerebro desde el hipocampo, la corteza piriforme (bregma, -1 ,70 a -2,80 mm), o cerebelo (paraflóclulo, cruz ansiforme y lóbulos simples; bregma -5,40 a -6,36 mm) se usan para cuantificación (n = 5-7 ratones por genotipo en cada grupo de edad). La carga de la placa de ?ß se determina usando el software MetaMorph (Molecular Devices, Palo Alto, CA). Para la cuantificación de las placas nucleadas se tiñen secciones seriadas de las analizadas para la carga de ?ß con tioflavina S (TioS) y se cuenta el número de placas positivas pata TioS en el hipocampo, corteza entorina/piriforme o el cerebelo. Todos los análisis anteriores se realizan de forma enmascarada.

Análisis estadístico de los datos in vivo.

Los resultados de todos los experimentos se analizan con STATISTICA 8.0 (Statsoft).

Los niveles de ?ß, la carga de la placa amiloide y la gravedad de AAC se analizó usando un ANOVA con el ensayo post hoc de comparación múltiple de Holm-Sidak o dos pruebas t de Student. Si el conjunto de datos no cumple las suposiciones del ensayo parámetrico, se realiza bien el ensayo de Kruskal-Wallis, seguido por la comparación múltiple post hoc de Duna o la prueba de suma de rangos de ann-Whitney. Para analizar si los niveles de ?ß en los ratones bitransgénicos eran consistentes con una suma aditiva de los niveles de ?ß en los hermanos transgénicos se usa un ensayo de regresión lineal múltiple sin intersección. Todas las comparaciones se realizan entre hermanos de carnada.

La modelización de la respuesta al fármaco se realiza excluyendo las muestras control (0 mg/kg). La DE50 corresponde a la dosis requerida (mg/kg) para inducir un 50 % de la respuesta máxima inducida por fármaco en los experimentos. Se calcula usando el modelo de ecuación de Hill para el log de la DE50.

Bibliografía Crook R., Verkkoniemi A, y col. (1998). A variant of Alzheimer's disease with spastic paraparesis and unusual plaques due to deletion of exon 9 ofpresenilin 1. Nat Med. 4(4): 452-5.

Houlden H., Baker M., y col. (2000). Variant Alzheimer's disease with spastic paraparesis and cotton wool plaques is caused by PS-1 mutations that lead to exceptionally high amyloid-beta concentrations. Ann Neural. 48(5): 806-8.

Kwok J.B., Taddei K., y col. (1997). Two novel (M233T and R278T) presenilin-1 mutations in early-onset Alzheimer's disease pedigrees and preliminary evidence for association of presenilin-1 mutations with a novel phenotype. Neurarepart. 8(6): 1537-42.

Verkkoniemi A, Kalimo H., y col. (2001 ). Variant Alzheimer disease with spastic paraparesis: neuropathological phenotype. J Neurapathal Exp Neural. 60(5): 483-92.

Citrón M. (2004). Strategies for disease modification in Alzheimer's disease. Nat Rev Neurasci. 5(9): 677-85.

Suh Y.H. y Checler F. (2002). Amyloid precursor protein, presenilins, and alpha-synuclein: molecular pathogenesis and pharmacological applications in Alzheimer's disease. Pharmacal Rev. 54(3): 469-525.

Blacker D., Albert M.S., y col. (1994). Reliability and validity ofNINCDS-ADRDA criteria for Alzheimer's disease. The National Institute of Mental Health Genetics Initiative. Arch Neural. 51(12): 1198-204.

Rossor M.N., Fox N.C., y col. (1996). Clinical features of sporadic and familial Alzheimer's disease. Neuradegeneratian. 5(4): 393-7.

Glenner G.G., Wong C.W., y col. (1984). The amyloid deposits in Alzheimer's disease: their nature and pathogenesis. Appl Pathal. 2(6): 357-69.

Ballatore C, Lee V.M., y col. (2007). Tau-mediated neurodegeneration in Alzheimer's disease and related disorders. Nat Rev Neurasci. 8(9): 663-72.

Bell K.F. y Claudio Cuello A (2006). Altered synaptic function in Alzheimer's disease. Eur J Pharmacal. 545(1 ): 1 1-21.

Hardy J.A. y Higgins G.A. (1992). Alzheimer's disease: the amyioid cascade hypothesis. Science. 256(5054): 184-5.

Braak H. y Braak E. (1991 ). Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neurapathol. 82(4): 239-59.

Golde T.E. (2005). The Abeta hypothesis: leading us to rationally-designed therapeutic strategies for the treatment or prevention of Alzheimer disease. Brain Pathol. 15(1 ): 84-7. Hardy land Seikoe D.l (2002). The amyioid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics. Science. 297(5580): 353-6.

Seikoe D.J. (2000). The genetics and molecular pathology of Alzheimer's disease: roles of 10 amyioid and the presenilins. Neural Clin. 18(4): 903-22.

Huang Y.Z., Won S. y col. (2000). Regulation of neuregulin signaling by PSD-95 interacting with ErbB4 at CNS synapses. Neuron. 26(2): 443-55.

Naruse S., Thinakaran G. y col. (1998). Effects of PSI deficiency on membrane protein trafficking in neurons. Neuron. 21(5):1213-21.

Leeuwen F.N., Kain H. E. y col. (1997). The guanine nucleotide exchange factor Tiaml affects neuronal morphology; opposing roles for the small GTPases Rae and Rho. J Cell Biol. 139(3):797-807.

Guan K.L. y Rao Y. (2003). Signalling mechanisms mediating neuronal responses to guidance cues. Nat Rev Neurosci. 4(12): 941-56.

Comeau M. R., Johnson R. y col. (1998). A poxvirus-encoded semaphorin induces cytokine production from monocytes and binds to a novel cellular semaphorin receptor, VESPR. Immunity. 8(4): 473-82.

Hall K.T., Boumsell L y col. (1996). Human CDIOO, a novel leukocyte semaphorin that promotes B-cell aggregation and differentiation. Proc Nati Acad Sci US A. 93(21 ): 11780-5.

Kolodkin A.L., Matthes D. J. y col. (1993). The semaphorin genes encode a family of transmembrane and secreted growth cone guidance molecules. Cell. 75(7): 1389-99.

Luo Y., Shepherd L y col. (1995). A family of molecules related to collapsin in the embryonic chick nervous system. Neuron. 14(6): 1131-40.

Messersmith E.K., Leonardo E.D. y col. (1995). Semaphorin III can function as a selective chemorepellent to pattern sensory projections in the spinal cord. Neuron. 14(5): 949-59.

Brose K. y Tessier-Lavigne M. (2000). Slit proteins: key regulators of axon guidance, axonal branching, and cell migration. Curr Opin Neurobiol. 10(1): 95-102.

Le Gall M., De Mattei C y col. (2008). Molecular separation of two signaling pathways for the receptor Notch. Dev Biol. 313(2): 556-67.

Lahiri D.K. y col. (2007) Experimental Alzheimer's Disease Drug Posiphen[(Phenserine] Lowers Amyloid-betaPeptide Levéis in Cell Culture and Mice. Journal of Pharmacology and experimental therapeutics 320: 386-396.

PJ. Mitchell y col. (2007) A quantitative method for analysis of in vitro neurite outgrowth. Journal of Neuroscience Methods 164 350-362 Sang Tae KIM y col. (2006) Neuroprotective Effect of Some Plant Extracts in Cultured CT105-lnduced PC12 Cells. Biol. Pharm. Bull. 29(10) 2021—2024 McGowan E. y col. (2005) ?ß42 Is Essential for Parenchymal and Vascular Amyloid Deposition in Mice. Neuron 47: 191-199.

Leighty R.E. y col. (2008) Use of artificial neural networks to determine cognitive ¡mpairment and therapeutic effectiveness in Alzheimer's transgenic mice. Journal of Neuroscience Methods 167: 358-366 Ashe KH (2001 ) Learning and memory in transgenic mice modelling Alzheimer's disease. Learning and Memory 8: 301-308.

Carlson GA y col. (1997) Genetic modification of the phenotypes produced by amyioid precursor protein overexpression in transgenic mice. Human Molecular Genetics 6:1951-1959.

Hsiao K y col. (1996) Correlative memory déficits, Abeta elevation, and amyioid plaques in transgenic mice. Science 274: 99-102.

Greenberg S.M. y Vonsattel J.P. (1997) Diagnosis of cerebral amyioid angiopathy.

Sensitivity and specificity of cortical biopsy. Stroke 28(7): 1418-22 Schindowski K. y col. (2006) Alzheimer's Disease-Like Tau Neuropathology Leads to Memory Déficits and Loss of Functional Synapses in a Novel Mutated Tau Transgenic Mouse without Any Motor Déficits. Am J Pathol. 169: 599-616.

Lahiri DK y col. (2004) Dietary supplementation with melatonin reduces levéis of amyioid beta-peptides in the murine cerebral cortex. Journal of Pineal Research 36:224-231.

Basha MR y col. . (2005) The fetal basis of amyloidogenesis: exposure to lead and latent overexpression of amyioid precursor protein and beta-amyloid in the aging brain. Journal of Neuroscince 25: 823-829.

Singer C, Figueroa-Masot X., Batchelor R. y Dorsa D. Mitogen-activated protein kinase pathway mediates estrogen neuroprotection after glutamate toxicity in primary cortical neurons. J. Neuroscience, 1999, 19(7):2455-2463.

Claims (20)

REIVINDICACIONES

1. Una composición caracterizada porque comprende una combinación de al menos dos compuestos escogidos del grupo constituido por zonisamida, difilina, tadalafilo, argatroban, acamprosato, cinacalcet, terbinafina, cilostazol, baclofeno, fenformina, amlodipina y sulfisoxazol, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para administración simultánea, por separado o secuencial.

2. Una composición caracterizada porque comprende una combinación de al menos dos compuestos escogidos del grupo constituido por zonisamida, difilina, tadalafilo, argatroban, acamprosato, cinacalcet, terbinafina, cilostazol, baclofeno, fenformina, amlodipina y sulfisozol, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, en donde dicha composición mejora la función sináptica alterada en trastornos neurodegenerativos seleccionados del grupo constituido por la enfermedad de Alzheimer (EA), la enfermedad de Parkinson (EP), la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y la esclerosis múltiple (EM).

3. La composición de la reivindicación 1 , caracterizada porque comprende una combinación de al menos dos compuestos escogidos del grupo constituido por zonisamida, difilina, tadalafilo, argatroban, acamprosato, cinacalcet, terbinafina, cilostazol, baclofeno, fenformina, amlodipina y sulfisozol, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para tratar la enfermedad de Alzheimer (EA).

4. Una composición caracterizada porque comprende al menos una de las siguientes combinaciones de fármacos, para administración combinada, por separado o secuencial: - un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un inhibidor del canal de sodio SCN1 A y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida), - un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un modulador de los receptores GABAérgicos y glutamatérgicos (preferentemente acamprosato), - un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un antagonista del receptor de endotelona EDNRA (preferentemente sulfixosazol), - un modulador de los receptores GABAérgicos y glutamatérgicos (preferentemente acamprosato) y un antagonista del receptor de endotelina EDNRA (preferentemente sulfixosazol), - un inhibidor de los canales de sodio SCN1A y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida) y un antagonista de los receptores de endotelona EDNRA (preferentemente sulfixosazol), - un modulador de los receptores GABAérgicos y glutamatérgicos (preferentemente acamprosato) y un inhibidor de las fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A/4B y un activador de los canales de BK (preferentemente cilostazol), - un inhibidor del canal de sodio SCN1A y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida) y un modulador del receptor de adenosina ADORA2B (preferentemente difilina), - un inhibidor del canal de sodio SCN1A y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida) y un inhibidor del receptor de trombina PAR1 (preferentemente argatroban), - un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un modulador del receptor de adenosina ADORA2B (preferentemente difilina), - un modulador de AMPK (preferentemente fenformina) y un inhibidor de las fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4a/4B y un activador de los canales de BK (preferentemente cilostazol), - un inhibidor de las fosfodiesterasas PDE11A y PDE4A, PDE5A (preferentemente tadalafilo) y un inhibidor de las fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A/4B y un activador de los canales de BK (preferentemente cilostazol), - un inhibidor del canal de sodio SCN1A y un activador de los canales de BK (preferentemente zonisamida) y un inhibidor de las fosfodiesterasas PDE3A/3B y PDE4A/4B y un activador de los canales de BK (preferentemente cilostazol).

5. La composición de la reivindicación 1 para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado en un sujeto que lo necesite, caracterizada porque dicha composición comprende al menos uno de las siguientes combinaciones de fármacos para administración combinada, por separado o secuencial: - fenformina y zonisamida, - fenformina y acamprosato, - fenformina y sulfisoxazol, - acamprosato y sulfisoxazol, - zonisamida y sulfisoxazol, - acamprosato y cilostazol, - acamprosato y zonisamida, - acamprosato y cilostazol, - zonisamida y difilina, - zonisamida y argatroban, - fenformina y difilina - fenformina y cilostazol, - tadalafilo y cilostazol, o -zonisamida y cilostazol,

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque dicha composición además comprende al menos un fármaco que modula la función sináptica, para administración combinada, por separada o secuencial.

7. La composición de la reivindicación 6, caracterizada porque dicho al menos un fármaco que modula la función sináptica se selecciona de un inhibidor de ABAT (preferentemente, vigabatrina); y/o un inhibidor de ABL1 (preferentemente imatinib); y/o un inhibidor de CACNA2D3 (preferentemente pregabalina); y/o un modulador de CASR (preferentemente cinacalcet) ; y/o un modulador de CNGB3 (preferentemente amiloride), y/o un inhibidor de DHFR (preferentemente triamtereno), y/o un inhibidor de EPHA3 (preferentemente dasatinib), y/o un modulador de GABRA2 (preferentemente seleccionado de fenobarbital y aztreonam), y/o un antagonista de GRIK1 (preferentemente, topiramato), y/o un modulador de HTR1 B y HTR1 D (preferentemente seleccionado de ergotamina yd eletriptano), y/o un antagonista de KCND2 (preferentemente, Iidocaína), y/o un modulador de KCNMA1 (preferentemente, clorzoxazona), y/o un modulador de NOS1 (preferentemente seleccionado de ketotifeno y propiltiouracilo), y/o un inhibidor de NRP2 (preferentemente, pegaptanib), y/o un modulador de OPCML (preferentemente, alfentanil), y/o un modulador de OPRK1 (preferentemente seleccionado de buprenorfina y pentazocina), y/o un inhibidor de PDE4D (preferentemente, milrinone), y/o un activador de PRKG1 (preferentemente seleccionado de nitroprusside), y/o un modulador de RHOA (preferentemente alendronato), y/o un inhibidor de SCN1A/B (preferentemente, fosfenitoin), y/o un inhibidor de SLC6A1 (preferentemente, tiagabine), y/o un modulador de SLC9A1 (preferentemente, buclizina), y/o un inhibidor de SLC12AI (preferentemente, bumetanide), y/o un inhibidor de TROMBINA (preferentemente, desirudin), y/o un modulador de TSPO (preferentemente seleccionado de flunitrazepam y temazepam), y/o un inhibidor de YES1 (preferentemente, dasatinib).

8. La composición de la reivindicación 6, caracterizada porque dicho al menos un fármaco que modula la función sináptica se selecciona del fármaco o fármacos que se unen o modulan la actividad de una proteína codificada por un gen seleccionado de ABAT, ABI1, ABL1, AD0RA2A, AD0RA2B, AKT, AMPK, ANKRA, APBA1, ARHGAP26, ATG5, BASSOON, BDNF, BECLIN1, BIN1, canales BK (KCNMA1, KCNMB1), CACNA1C, CACNA2D3, CACNA2D4, CADPS2, CALCINEURINA, CALMODULINA, CASK, CASR, CAST, CBL, CDC2, CDC42, CDC42BPB, CDC42EP3, CDH13, CDH2, CDK5, CITRON, CNGB3, CORTACTIN, CRAM, CREB, CRMP, CTNNB1, DAB1, DCC, DEPDC2, DHFR, DLG2, DYN1, DYN3, ENDOPHILIN, EDNRA, EPHA3, EPHBR, EPHEXIN, EPHRINA, EPHRINB, ERBB4, ERK1, ERK2, FES, FYN, GABBR1, GABBR2, GABRA2, GABRG2, GAT1, GLRA1, GEPHYRIN, GIPC1, GIPC2, GLUD1, GRANUPHILIN, GRIA2, GRIA3, GRID1, GRID2, GRIK1, GRIK2, GRIN2B, GRIN3A, GRIP, GRM3, GRM5, GRM6, GRM7, GRM8, HOMER, HTR1B, HTR1D, KALIRIN, KCNA2, KCHIP1, KCHIP2.2, KCND2,, KCNJ3, KCNJ12, KTN1, KYNU, LYN, MAML3, MINT1, MUCI, MUNC13, MUNC18A, MY06, MYOL, NAV1, NBEA, NCAM1, NCK1, NCK2, NETRIN1, NFKB1, NGEF, NGF, NGFR, NIL16, NLGN1, NOC2, NOS1, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, ÑPC1, NPC2, NPIST, NRG3, NRP1, NRP2, NRX3, NTF3, NTF5, NWASP, OPCML, OPRK1, PAK6, PAK7, PAR1, PARK2, PDE11A, PDE3A/3B, PDE4A/4B/4D, P13K, PIAS1, PICALM, PICK1, PIP5K, PKA, PKCA, PLD2, PLEXA1, PP1C, PPFIBP1, PRKG1, PSD95, PTN, PTPRF, PYK2, RAB3B, RABPHILIN, RAC1, RAP1, RAS, RASGRF2, RBPJ, REELIN, RGNEF, RHOA, RHOG, RIM2, RIMS1, RIMS2, ROB02, ROCK2, RPH3AL, SACM1L, SAPAP, SCN1A, SCN1B, SEC24D, SEMA3A, SEMA3C, SEMA3E, SEMA4C, SIAH1A, SLC12A1, SLC12A2, SLC12A5, SLC1A2, SLC6A1, SLC6A18, SLC9A1, SLIT1, SNAP25, SORBS2, SRC, SRGAP3, STX2, STXBP6, SUM1 , SV2C, SYNAPTOJANIN, SYNTAXIN1A, SYT12, TACE, TBR1 , TRIO, TRKB, TROMBINA, TSPO, UBE2A, ULK4, UNC13C, UNC5C, VAMP2, VA P5, VELI, VINCULIN, WASPIP, WAVE, WWOX, YAP y YES1.

9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque dicha composición además comprende al menos un fármaco que modula la angiogénesis, para administración combinada, por separado o secuencial.

10. La composición de la reivindicación 9, caracterizada porque dicho al menos un fármaco que modula la angiogénesis se selecciona del grupo constituido por albuterol, alendronato, ambrisentan, ácido aminocaproico, balsalazida, becaplermin, cabergolina, clopidogrel, dihidroergotamina, eplerenona, fenoldopam, acetato de fludrocortisona, gemfibrozilo, hesperetina, leflunomida, L-histidina, liotironina, marimastat, meloxicam, mepacrina, metazolamida, metimazol, montelukast, netilmicina, nitroglicerina, butirato de fenilo, pirimetamina, sunitinib, tietilperazina, tirofibán, topotecán, vidarabina y warfarina.

11. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque dicha composición comprende además al menos un fármaco que modula la respuesta de estrés celular para el uso combinado, por separado o secuencial.

12. La composición de la reivindicación 11 , caracterizada porque dicho al menos un fármaco que modula la respuesta de estrés celular se selecciona del grupo constituido por arabitol, manitol, metaraminol, omeprazol, prilocaína, rapamicina, rifabutina, tioguanina y trehalosa.

13. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

14. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque dicha composición se administra repetidamente al sujeto.

15. Un procedimiento para producir un fármaco para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, caracterizado porque el procedimiento comprende una etapa de someter a ensayo un fármaco candidato para determinar la actividad de la función sináptica y seleccionar fármacos candidatos que mejoran la función sináptica.

16. El procedimiento de la reivindicación 15, caracterizado porque comprende determinar si dicho fármaco candidato se une a, o modula, la actividad de un gen o proteína tal como se ha definido en la reivindicación 8.

17. Un procedimiento para producir una composición para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, caracterizado porque el procedimiento comprende preparar una combinación de un fármaco que modula la función sináptica y un fármaco que modula la angiogénesis o la respuesta de estrés celular, para la administración simultánea, por separado o secuencial a un sujeto que lo necesite.

18. Un procedimiento para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, caracterizado porque el procedimiento comprende administrar de forma simultánea, por separado o secuencialmente a un sujeto que lo necesite un fármaco que modula la función sináptica y un fármaco que modula la angiogénesis o la respuesta de estrés celular.

19. Una composición caracterizada porque comprende al menos zonisamida y/o acamprosato, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para administración simultánea, por separado o secuencial.

20. Una composición caracterizado porque comprende al menos zonisamida y/o acamprosato, o sales o profármacos o derivados o formulaciones de liberación sostenida de los mismos, para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado.